WO2013064068A1 - 噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用 Download PDF

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WO2013064068A1
WO2013064068A1 PCT/CN2012/083830 CN2012083830W WO2013064068A1 WO 2013064068 A1 WO2013064068 A1 WO 2013064068A1 CN 2012083830 W CN2012083830 W CN 2012083830W WO 2013064068 A1 WO2013064068 A1 WO 2013064068A1
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phenyl
pyrimidin
group
substituted
hydroxy
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PCT/CN2012/083830
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安晓霞
别平彦
刘俊
杨午立
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上海希迈医药科技有限公司
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/048—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being five-membered

Definitions

  • the present invention relates to a pyrimidine derivative, a preparation method and application thereof, and more particularly to a thienopyrimidine and furanopyrimidine derivative having an epidermal growth factor receptor EGFR and/or an angiogenic factor receptor VEGFR inhibitory activity.
  • the invention, the preparation method thereof and the application thereof in medicine belong to the technical field of medicinal chemistry. Background technique
  • Tumor is one of the most serious diseases that threaten human health. Its treatment mainly includes radiotherapy, chemotherapy and surgery. In recent years, with the development of cell biology and oncology, the chemical treatment of tumors has undergone tremendous changes. Conventional chemotherapeutic drugs are gradually rejected due to non-specific blockade of cell division, which also causes normal cell death while killing tumor cells. At the same time, key node proteins in abnormally activated signaling pathways in tumor cells are targeted. It has been found that high-efficiency, low-toxicity and specific small-molecule inhibitors have become an important direction for the research and development of anti-tumor drugs. Receptor tyrosine kinase (RTK), which is aberrantly expressed in tumors, has become a hot spot in anti-tumor drug research because it plays a key role in tumor development, invasion and metastasis, and chemotherapy resistance.
  • RTK Receptor tyrosine kinase
  • Epidermal growth factor receptor also known as HER1 or cerbBl
  • HER1 or cerbBl is a member of the HER family, the most widely expressed tyrosine kinase in human cancers.
  • the EGFR structure consists of three regions: the extracellular region, the transmembrane region, and the intracellular region.
  • the amino terminal of the extracellular domain consists of 622 amino acids, with two cysteine-rich segments forming a ligand binding region; the transmembrane region is single (X-helix; the intracellular region includes the kinase region and has many tyrosine The terminal end of the carboxyl group of the acid phosphorylation site.
  • Tyrosine kinase transports the gamma phosphate of ATP to the tyrosine residue. After binding to the ligand, homologous or heterodimerization of EGFR occurs. The ⁇ region is tightly linked.
  • the phosphorylation of the tyrosine phosphorylation site at the carboxyl terminal tail RTK creates a binding site for the enzyme and the linker protein (Y992, Y1068, Y1086, Y1148 and Y11730). It can initiate intracellular signaling reactions. These signals form different cellular responses, including proliferation, differentiation, adhesion and angiogenesis, metastasis, and inhibition of apoptosis.
  • EGFR is expressed in non-small cell lung cancer, prostate cancer, breast cancer, colorectal cancer, head and neck cancer, gastric cancer, ovarian cancer, and pancreatic cancer.
  • EGFR activation triggers complex signaling reactions.
  • EGFR proliferates and overexpresses, leading to the loss of control of downstream signaling leading to the formation of various tumors.
  • Mutations in the ATP-binding site in EGFR affect the RTK activity of the receptor and interfere with the formation of tumorigenic signals.
  • EGFR is also closely associated with tumor progression and poor prognosis.
  • Gefitinib also known as ZD1839 or Iressa
  • Erlotinib is a standard regimen for the treatment of ineffective second- or third-line treatments for advanced NSCLC.
  • an object of the present invention is to provide a thienopyrimidine and furan pyrimidine derivative having epidermal growth factor receptor EGFR and/or angiogenic factor receptor VEGFR inhibitory activity, and preparation thereof Method and its application in medicine.
  • a compound of formula V, or a tautomer, racemate, enantiomer, diastereomer, pharmaceutically acceptable salt thereof or pharmaceutically acceptable Accepted solvate is provided.
  • R is selected from: hydrogen, d- alkyl or substituted alkyl of 6, d- 6 alkyl group (preferably an alkyl group of 3 ⁇ 4- 6), C 3 - 6 cycloalkyl group (preferably C 4 - 6 cycloalkyl group), C 2 - 6 alkene group (preferably C 3 - 6 alkene group) or a substituted alkene group, an aryl group an acyl group or a substituted aryl group, a sulfonyl group, an amide group or a substituted amide group, a reverse amide group or a substituted reverse amide group, an alkoxy group of - 8 ;
  • R 3 is hydrogen, C 6 alkyl or substituted -6 alkyl
  • Z is nitrogen or CH
  • Ar is selected from the group consisting of: C 6 _ 2 .
  • Q is , X is oxygen or sulfur, R 2 is hydrogen or d- 6 alkyl or substituted
  • Ar 2 is selected from the group consisting of: an aryl group of C 6 -20 or a substituted C 6 _ 2 . Aryl, or C 4 _ 2 . Heteroaryl or substituted C 4 _ 2 . Miscellaneous Base.
  • the compound of formula V is a compound of formula I, formula II, formula III or formula IV:
  • X is oxygen or sulfur;
  • Z is nitrogen or carbon;
  • R is hydrogen, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or a substituted alkyl group, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms, and 2 to 6 Any one of an olefin acyl group or a substituted olefin acyl group of a carbon atom, an aryl acyl group or a substituted aryl acyl group, a sulfonyl group, an amide group or a substituted amide group, a reverse amide group or a substituted reverse amide group;
  • Ar 1 is phenyl, 2 or 3-fluoro substituted phenyl, 2 or 3-trifluoromethyl substituted phenyl, 2 or 3-chloro substituted phenyl, 2 or 3-nitryl substituted phenyl, 2- or 3 a -C 3 alkyl substituted phenyl, thienyl, 3-C 3 alkyl substituted thienyl, furyl, 3-C 3 alkyl substituted furanyl, 2 or 3-pyridyl;
  • R is hydrogen, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or a substituted alkyl group, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and a cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms.
  • Ar is phenyl, 2 or 3-fluoro substituted phenyl, 2 or 3-trifluoromethyl substituted phenyl, 2 or 3-chloro substituted phenyl, 2 or 3-nitryl substituted phenyl, 2- or 3- Any one of d- 3 alkyl substituted phenyl groups; Any one of a phenyl group, a halogen-substituted phenyl group, a d- 6 alkyl-substituted phenyl group, a biphenyl group, a halogen-substituted biphenyl group, and a naphthyl group.
  • the substituted alkyl group is a substituted d- 6 alkyl group
  • the substituted olefin acyl group is a substituted C 3 -6 olefin acyl group
  • the aryl acyl group is C 6 - 2 .
  • An aryl acyl group, the substituted aryl acyl group is a substituted C 6 -20 aryl acyl group
  • the sulfonyl group is a sulfonyl group of d- 15
  • the amide group is an amide group of d- 15
  • the substituted amide group is the substituted amide group of C i5 .
  • the substituted alkyl group, substituted olefin acyl group, substituted aryl acyl group, substituted amide group or substituted reverse amide group, substituted aryl group, or substituted heteroaryl group means substituents selected from the group consisting of: fluoro, chloro, bromo, iodo, cyano, hydroxy, d- 6 alkyl, C 3 - 6 cycloalkyl, d- 6 alkoxy, amino, d_ 6 alkoxycarbonyl group , nitro, amino, acyl, amide, sulfonyl, d- 6 haloalkyl.
  • the substituted amide group or substituted reverse amide group refers to a substituent-substituted amide group or a substituted reverse amide group selected from the group consisting of: the substituent is bonded to N in the amide group to form Morpholine, pyrrole, piperazine or piperidine, optionally substituted with a substituent selected from the group consisting of d- 6 alkyl, d- 6 alkoxy.
  • the compound of the formula V is any one of the compounds listed in Table 1.
  • the pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, inorganic acid salts such as hydrochlorides, hydrobromides, nitrates, sulfates, phosphates, and the like; organic acid salts such as formate, acetic acid Salt, propionate, benzoate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, citrate, etc.; alkyl sulfonate, such as methyl sulfonate, ethyl sulfonate Salts and the like; aryl sulfonates such as besylate, p-toluenesulfonate and the like.
  • inorganic acid salts such as hydrochlorides, hydrobromides, nitrates, sulfates, phosphates, and the like
  • organic acid salts such as formate, acetic acid Salt, propionate, benzoate, maleate, fumarate, succinate, tartrate, citrate, etc.
  • the pharmaceutically acceptable solvate includes, without limitation, a solvate of the compound with water, ethanol, isopropanol, diethyl ether, acetone or the like.
  • R 5 -Q- is Or, R 5 is F, Cl, Br, I;
  • R, Z, R 3 , RX, R 2 , Ar and Ar 2 are as described in the first aspect.
  • the invention provides a method for preparing a thienopyrimidine and a furanopyrimidine derivative represented by the formula I, which comprises the following step 3 or steps 1 and 3 or steps 2 and 3 or steps 1 to 3:
  • the preparation method of the thienopyrimidine and furanopyrimidine derivatives represented by the formula of the present invention includes the following Step 5 or Steps 2 and 5 or Steps 4 and 5 or Steps 2 and 4 and 5:
  • the present invention provides a process for the preparation of a thienopyrimidine and a furanopyrimidine derivative represented by the general formula III, which comprises the following step 7 or steps 1 and 7 or steps 6 and 7 or steps 1 and 6 and 7:
  • the method for preparing a thienopyrimidine and a furanopyrimidine derivative represented by the formula IV provided by the present invention comprises the following Step 8 or Steps 4 and 8 or Steps 6 and 8 or Steps 4 and 6 and 8:
  • the thienopyrimidine and the furanopyrimidine derivative represented by the above formula ⁇ can also be obtained by hydrogenating a thienopyrimidine represented by the formula I and a furand pyrimidine derivative.
  • thienopyrimidine and the furanopyrimidine derivative represented by the above formula IV can also be obtained by hydrogenating a thienopyrimidine represented by the formula III and a furanopyrimidine derivative.
  • a compound of formula V, or a tautomer, racemate, enantiomer, diastereomer, pharmaceutically acceptable salt thereof or pharmaceutically acceptable The use of solvates.
  • the thienopyrimidine and furanopyrimidine derivatives of the present invention have inhibitory activities against epidermal growth factor receptor (EGFR) and/or angiogenic factor receptor (VEGFR), and thus, the thiophene of the present invention
  • EGFR epidermal growth factor receptor
  • VEGFR angiogenic factor receptor
  • Any one or a mixture of solvates may be used to prepare tyrosine kinase inhibitors, particularly for the preparation of EGFR and/or VEGFR inhibitors.
  • the inhibitor may be applied to the preparation of a medicament for preventing or treating a disease associated with the epidermal growth factor receptor EGFR and/or the angiogenic factor receptor VEGFR, and in particular, for the preparation of a prophylactic or therapeutic agent with epidermal growth factor Receptor EGFR and/or angiogenic factor receptor VEGFR-associated cells with abnormal proliferation, morphological changes, hyperkinesia, angiogenesis, and tumor metastasis.
  • the inhibitors are useful for the preparation of a medicament for the treatment or prevention of tumor growth and metastasis associated with the epidermal growth factor receptor EGFR and/or the angiogenic factor receptor VEGFR.
  • the active ingredient of the inhibitor is preferably a compound shown in Table 1 or a tautomer, a racemate, an enantiomer, a diastereomer, or a pharmaceutically acceptable compound of the indicated compound. Any one or a mixture of the accepted salts, pharmaceutically acceptable solvates.
  • a tyrosine kinase inhibitor the compound of the formula V according to the first aspect, or a tautomer thereof, a racemate, an enantiomer, a diastereomer
  • a mixture of any one or a mixture of an isomer, a pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutically acceptable solvate is prepared.
  • the tyrosine kinase inhibitor refers to an EGFR and/or VEGFR inhibitor.
  • the use of the tyrosine kinase inhibitor of the fourth aspect for the preparation of:
  • a drug that prevents or treats abnormal cell proliferation, morphological changes, hyperkinesia, angiogenesis, and metastatic disease associated with the epidermal growth factor receptor EGFR and/or the angiogenic factor receptor VEGFR;
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier, and a compound of the formula V according to the first aspect, or a tautomer thereof, a racemate, an enantiomer A diastereomer, a pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutically acceptable solvate.
  • the pharmaceutically acceptable salt includes, without limitation, a mineral acid salt such as a hydrochloride, a hydrobromide salt, a nitrate salt, a sulfate salt, a phosphate salt or the like; an organic acid salt such as formic acid.
  • a mineral acid salt such as a hydrochloride, a hydrobromide salt, a nitrate salt, a sulfate salt, a phosphate salt or the like
  • an organic acid salt such as formic acid.
  • a salt an acetate, a propionate, a benzoate, a maleate, a fumarate, a succinate, a tartrate, a citrate, etc.
  • an alkylsulfonate such as a methylsulfonate, Ethyl sulfonate or the like
  • aryl sulfonate such as benzenesulfonate, p-toluenesulfonate and the like.
  • the pharmaceutically acceptable solvate includes, without limitation, a solvate of the compound with water, ethanol, isopropanol, diethyl ether, acetone or the like.
  • the thienopyrimidine and furanopyrimidine derivatives provided by the present invention have novel structures, have obvious EGFR inhibitory activity, and some compounds have significant inhibitory activity against VEGFR, and are expected to be developed as tyrosine.
  • Kinase EGFR or/and VEGFR inhibitors for the prevention or treatment of abnormal cell proliferation, morphological changes, hyperkinesia, and angiogenesis associated with epidermal growth factor receptor EGFR and/or angiogenic factor receptor VEGFR Or a drug for tumor metastasis-related diseases, especially for the preparation of a drug for treating or preventing tumor growth and metastasis associated with the epidermal growth factor receptor EGFR and/or the angiogenic factor receptor VEGFR, for the development of novel low drug resistance Or tyrosine kinase inhibitor drugs that can alleviate the resistance of early inhibitors provide new development directions and approaches, and have broad application prospects and medicinal value. detailed description
  • d- 6 means having 1 to 6 carbon atoms
  • C 3 - 6 means having 3 to 6 carbon atoms
  • C 2 - 6 Means having 2 to 6 carbon atoms
  • C 2 - 8 means having 2 to 8 carbon atoms.
  • Alkyl means a chain-saturated organic functional group containing only carbon and hydrogen atoms, including branched and linear alkyl groups such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, and iso- Butyl, sec-butyl, tert-butyl and the like.
  • Cycloalkyl means a cyclic organic functional group containing two atoms of carbon and hydrogen, such as cyclopropyl, cyclobutane and the like.
  • Aryl means a hydrocarbyl moiety containing one or more aromatic rings.
  • the aryl group in the invention preferably has 6 to 20 carbon atoms, and examples of the aryl moiety include a phenyl group, a phenylene group, a naphthyl group, a naphthylene group, an anthracenyl group, an anthracenyl group and a phenanthryl group.
  • Heteroaryl means a moiety which contains one or more aromatic rings having at least one hetero atom (e.g., N, 0 or S).
  • the heteroaryl group in the present invention preferably has 4 to 20 carbon atoms, and examples of the heteroaryl group include furyl, furanyl, fluorenyl, pyrrolyl, thienyl, oxazolyl, imidazolyl, thiazolyl, pyridyl, Pyrimidinyl, quinazolinyl, quinolyl, isoquinolyl and fluorenyl.
  • Amido means a functional group having an amide bond -CONH-.
  • Reverse amide group means a functional group having a reverse amide bond -NHCO-.
  • alkoxy means a group formed by linking an alkyl group to an oxygen atom, such as a methoxy group, Ethoxylate and the like.
  • Amino means NH 2 -.
  • Amine refers to one or more Cw.
  • a hydrocarbyl-substituted amino group such as (CH 3 ) 2 N -, (CH 3 CH 2 ) 2 N- (CH 3 )(CH 3 CH 2 )N-CH 3 NH -, CH 3 CH 2 NH-, and the like.
  • an alkyl group, a cycloalkyl group, an olefin acyl group, an aryl group, a heteroaryl group, an aryl acyl group, an amide group or a reverse amide group includes both substituted and unsubstituted moieties.
  • Possible substituents on an alkyl, cycloalkyl, olefin acyl, aryl, heteroaryl, aryl acyl, amide or reverse amide group include, but are not limited to: fluorine, chlorine, bromine, iodine, nitrile, hydroxy , d- 6 alkyl, C 3 -6 cycloalkyl, d- 6 alkoxy, amino, d- 6 alkoxy, nitro, amino, acyl, Amido group, sulfonyl group.
  • the compound of the formula V of the present invention can be produced by the following method, however, the conditions of the method, such as the reactant, the solvent, the base, the amount of the compound used, the reaction temperature, the time required for the reaction, and the like are not limited to the following explanations.
  • the compounds of the present invention may also be conveniently prepared by combining various synthetic methods described in the specification or known in the art, and such combinations are readily made by those skilled in the art to which the present invention pertains.
  • the process comprises the step of a condensation reaction of a compound of formula VI with a compound of formula VII to obtain a compound of formula V.
  • R 4 , R 5 -Q -, R, Z, R 3 , RX, R 2 , Ar and Ar 2 are as defined above.
  • the reaction is carried out in an inert solvent at a temperature of from 10 ° C to a reflux temperature (e.g., 100 ° C) for 0.1 to 72 hours.
  • solvents include, but are not limited to: acetone, methanol, ethanol, ethyl acetate, dichloromethane, chloroform, tetrahydrofuran, N,N-dimethylformamide, diethyl ether, acetonitrile or a mixture of two or more .
  • compositions of the present invention comprise a safe and effective amount of a compound of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Compound of the invention means a compound of formula V (including a compound of formula I, formula ⁇ , formula m or formula IV), or a tautomer thereof, a racemate, an enantiomer, a diastereomer A pharmaceutically acceptable salt or a pharmaceutically acceptable solvate.
  • the compound of the present invention has an inhibitory activity against epidermal growth factor receptor (EGFR) and/or vascular growth factor receptor (VEGFR)
  • the compound of the present invention and a pharmaceutical composition containing the compound of the present invention as a main active ingredient can be used for the preparation of prophylaxis or A medicament for treating a disease associated with the epidermal growth factor receptor EGFR and/or the angiogenic factor receptor VEGFR.
  • a safe and effective amount of a compound of the invention is included in the pharmaceutical compositions of the invention, wherein "safe and effective amount” means that the amount of the compound is sufficient to significantly improve the condition without causing serious side effects.
  • the pharmaceutical compositions contain from 1 to 2000 mg of the compound of the invention per agent, more preferably from 10 to 200 mg of the compound of the invention per agent.
  • the "one dose” is a capsule or a tablet.
  • a “pharmaceutically acceptable carrier” can be one or more compatible solid or liquid fillers or gel materials which are suitable for human use and which must be of sufficient purity and of sufficiently low toxicity.
  • composition capable of intermixing with the compounds of the invention and with each other without significantly reducing the efficacy of the compound.
  • pharmaceutically acceptable carriers are cellulose and its derivatives (such as sodium carboxymethylcellulose, sodium ethylcellulose, cellulose acetate, etc.), gelatin, talc, solid lubricants (such as stearic acid).
  • magnesium stearate magnesium stearate
  • calcium sulfate vegetable oils (such as soybean oil, sesame oil, peanut oil, olive oil, etc.), polyols (such as propylene glycol, glycerin, mannitol, sorbitol, etc.), emulsifiers (such as Tween®), moist Wet agents (such as sodium lauryl sulfate), colorants, flavoring agents, stabilizers, antioxidants, preservatives, pyrogen-free water, and the like.
  • vegetable oils such as soybean oil, sesame oil, peanut oil, olive oil, etc.
  • polyols such as propylene glycol, glycerin, mannitol, sorbitol, etc.
  • emulsifiers such as Tween®
  • moist Wet agents such as sodium lauryl sulfate
  • colorants such as sodium lauryl sulfate
  • flavoring agents such as pepperminophen®
  • the mode of administration of the compound or pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and representative modes of administration include, but are not limited to, oral, nasal inhalation, rectal, and parenteral (intravenous, intramuscular, or subcutaneous).
  • Solid dosage forms for oral administration include capsules, tablets, pills, powders, and granules.
  • Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups or elixirs.
  • the liquid dosage form may contain inert diluents conventionally employed in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers, for example, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, propylene glycol, 1 , 3-butanediol, dimethylformamide and oils, especially cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil or a mixture of these substances.
  • inert diluents conventionally employed in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers, for example, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, propylene glycol, 1 , 3-butanediol, dimethyl
  • compositions may contain adjuvants such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening agents, flavoring agents and perfumes.
  • the suspension may contain suspending agents, for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum methoxide and agar or mixtures of these and the like.
  • suspending agents for example, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol and sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum methoxide and agar or mixtures of these and the like.
  • compositions for parenteral injection may comprise a physiologically acceptable sterile aqueous or nonaqueous solution, dispersion, suspension or emulsion, and sterile powder for reconstitution into sterile injectable solutions or dispersions.
  • Suitable aqueous and nonaqueous vehicles, diluents, solvents or vehicles include water, ethanol, polyols and suitable mixtures thereof.
  • the compounds of the invention may be administered alone or in combination with other pharmaceutically acceptable compounds such as cisplatin.
  • a pharmaceutical composition When a pharmaceutical composition is used, a safe and effective amount of a compound of the invention is applied to a mammal (e.g., a human) in need of treatment wherein the dosage is a pharmaceutically effective effective dosage, for a 60 kg body weight,
  • the dose to be administered is usually from 1 to 2000 mg, preferably from 20 to 500 mg. Of course, specific doses should also consider factors such as the route of administration, the health of the patient, etc., which are within the skill of the skilled physician.
  • the structures of the compounds prepared in the following examples were determined by nuclear magnetic resonance (HNMR) and mass spectrometry (MS).
  • the 1H NMR shift ( ⁇ ) is given in parts per million (ppm).
  • the 1H NMR measurement was performed on a Bruker AVANCE-400 nuclear magnetic apparatus, and the solvent was deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), deuterated chloroform (CDC1 3 ), internal standard was tetramethylsilane (TMS), and the chemical shift was to give 10-6 as a unit.
  • DMSO-d 6 dimethyl sulfoxide
  • CDC1 3 deuterated chloroform
  • TMS tetramethylsilane
  • the MS was measured using a FINNIGAN LCQAd (ESI) mass spectrometer (manufacturer: Therm, model: Finnigan LCQ advantage MAX).
  • ESI FINNIGAN LCQAd
  • IC 5 The value was determined using a NovoStar plate reader (BMG, Germany).
  • the thin layer of silica gel is made of Yantai Yellow Sea HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • Silica gel column chromatography was carried out using Yantai Huanghai silica gel 200 ⁇ 300 mesh silica gel as a carrier.
  • the HPLC test was performed using an Agilent 1200 DAD high pressure liquid chromatograph (Sunfire C18 150 x 4.6 mm column) and a Waters 2695-2996 high pressure liquid chromatograph (Gimini C 18 150 x 4.6 mm column).
  • the microwave reaction was performed using a CEM Discover-S Model 908860 microwave reactor.
  • the argon atmosphere means that the reaction flask is connected to an argon balloon having a volume of about 1 liter.
  • the hydrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a hydrogen balloon of about 1 L volume.
  • the solution in the reaction means an aqueous solution.
  • the invention is further illustrated below in conjunction with specific embodiments. It is to be understood that the examples are merely illustrative of the invention and are not intended to limit the scope of the invention. Various modifications and alterations of the present invention will be apparent to those skilled in the ⁇ RTIgt; The experimental methods in the following examples which do not specify the specific conditions are usually in accordance with conventional conditions or according to the conditions recommended by the manufacturer. Unless otherwise stated, percentages and parts are by weight and parts by weight. -1 and compound II -1
  • the first step is a first step:
  • P-carboxyphenyl boronic acid pinacol ester (lg, 4.03 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 ml, 0.16 mol) at room temperature N-ethylpiperazine (0.6 ml, 4.8 mmol) was added to N,N-dimethylformamide (1 ml, 13.0 mmol), and 1-ethyl-(3-dimethylaminopropyl group was added sequentially.
  • Carbodiimide hydrochloride (0.93 g, 4.8 mmol), N-hydroxybenzotriazole (0.66 g, 4.8 mmol), triethylamine (0.84 ml, 6.04 mmol), stirred at room temperature until TLC The reaction was completed, and 10 ml of water was added to the reaction mixture, and the mixture was stirred for 30 minutes, extracted with dichloromethane (50 ml*3), and washed with saturated sodium chloride (50 ml*2).
  • 6-bromo-4-chlorothiophene [2,3-d]pyrimidine was prepared according to the method described in WO 2007/059257.
  • Lithium tetrahydroaluminum (27.3 mg, 0.718 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (8 ml, 98.63 mmol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound I-I (140 mg, 0.287 mmol) of tetrahydrofuran (10 ml, 0.123mol), the reaction was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 50 ° C until the reaction was completed by TLC. The reaction was cooled to room temperature. 20 ml of water was added to the reaction mixture, and extracted with ethyl acetate (100 ml*3). The mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride (100 ml?).
  • the first step is a first step:
  • Lithium tetrahydrogenate (100 mg, 2.640 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound I-2 (500 mg, 1.056 mmol) of tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the solution was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 50 ° C until the reaction was completed by TLC.
  • the first step is a first step:
  • the p-carboxyphenylboronic acid pinacol ester (3 g, 12.10 mmol) was dissolved in dichloromethane (27 ml, at room temperature).
  • Lithium tetrahydrogenate (90 mg, 2.369 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound 1-3 (250 mg, 0.474 mmol) of tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the solution was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 50 ° C until the reaction was completed by TLC.
  • the first step is a first step:
  • the p-carboxyphenyl boronic acid pinacol ester (3 g, 12.10 mmol) was dissolved in dichloromethane (27 ml, 0.422 mol) and N,N-dimethylformamide (9 ml, 0.116 mol) at room temperature, and N-hydroxyl was added.
  • Lithium tetrahydroaluminum (90 mg, 2.369 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (10 ml) were stirred and stirred at room temperature, and a solution of compound 1-4 (250 mg, 0.496 mmol) in tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise at room temperature.
  • the reaction was stirred for 1 hour, and the temperature was raised to 50 ° C until the reaction was completed by TLC.
  • the first step is a first step:
  • P-carboxyphenyl boronic acid pinacol ester (0.894 g, 4.8 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 ml, at room temperature).
  • N-Boc piperazine (lg, 4.03 mmol) was added to N,N-dimethylformamide (1 ml, 17.78 mmol), and 1-ethyl-(3-dimethylaminopropyl) was added sequentially.
  • Carboxylideneimide hydrochloride (0.93 g, 4.8 mmol), N-hydroxybenzotriazole (0.66 g, 4.8 mmol), triethylamine (0.84 ml, 6.04 mmol), stirred at room temperature until TLC The reaction of the starting material was monitored.
  • Lithium tetrahydroaluminum (51.5 mg, 1.355 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (25, 0.308 mol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound 1-5 (500 mg, 0.451 mmol) of tetrahydrofuran (25 ml, 0.308 mol) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the solution was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 50 ° C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC.
  • the mixture was cooled to room temperature, and 20 ml of water was added to the reaction mixture, and ethyl acetate (50 ml*3) was used for extraction.
  • the morpholine (5 ml, 57.405 mmol) was dissolved in dichloromethane (40 ml), and N,N-diisopropylethylamine (9.5 ml, 57.405 mmol)
  • the triphosgene (6g, 20.69mmol) in 30ml) was slowly added dropwise. The temperature of the addition process was kept at 0 ⁇ 3 °C for 1 hour.
  • Tetrahydropyrrole 600 mg, 8.436 mmol was dissolved in 15 ml of dichloromethane, and N,N-diisopropylethylamine (1.4 ml, 8.436 mmol) was added in an ice bath at 0 ° C and dissolved in dichloromethane.
  • the triphosgene 801mg, 2.70mmol) in (5ml) was slowly added dropwise. The temperature of the addition process was kept at 0 ⁇ 3°C for 1 hour.
  • N-Boc piperazine (1.57g, was added to the ice bath at 0°C.
  • Tetrahydropyrrolyl piperazinyl urea (370 mg, 2.022 mmol) and 4-formylbenzeneboronic acid (334 mg, 2.224 mmol) were dissolved in 10 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of methanol, and acetic acid solution (0.5 ml, 8.75 mmol) was added and stirred at room temperature. After reacting for 1 hour, sodium triacetoxyborohydride (1. lg, 5.055 mmol) was added, and the mixture was heated to 60 ° C. The reaction was stirred until the reaction was completed by TLC. Yield: (4-Benzyl-piperazin-1-yl)-tetrahydropyrrole-1-yl-methanone-boronic acid (210 mg), Yield: 33%.
  • Tetramethoxypiperidine 500 mg, 4.314 mmol was dissolved in 10 ml of dichloromethane.
  • N,N-diisopropylethylamine (0.72 ml, 4.314 mmol)
  • the triphosgene (412mg, 1.389mmol) in dichloromethane (5ml) was slowly added dropwise.
  • the temperature of the addition process was kept at 0 ⁇ 3 °C for 1 hour.
  • N-Boc piperazine was added to the ice bath at 0 °C. 809 mg, 4.341 mmol) and N,N-diisopropylethylamine (0.72 ml, 4.341 mmol).
  • the compound ⁇ -5 (100 mg, 0.225 mmol) was dissolved in N,N-dimethylformamide (5 ml) at room temperature, and 4-bromocrotonic acid (37.2 mg, 0.225 mmol) and N-(3-di) were added.
  • Methylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (43.0 mg, 0.225 mmol). The reaction was stirred at room temperature until the reaction was completed by TLC, and concentrated under reduced pressure.
  • the first step is a first step:
  • the first step is a first step:
  • N-Ethylpiperazine (1 g, 8.77 mmol) was dissolved in 15 ml of dichloromethane, and N,N-diisopropylethylamine (1.5 ml, 8.77 mmol) was added in an ice bath at 0 ° C, dissolved in The triphosgene (833mg, 2.81mmol) in dichloromethane (10ml) was slowly added dropwise, the temperature of the addition process was kept at 0 ⁇ 3 °C, the reaction was carried out for 1 hour, and the mixture was added at 0 °C in an ice bath.
  • N-Boc piperazine (1.63 g, 8.77 mmol), EtOAc, EtOAc (EtOAc:EtOAc.
  • N-Ethyl piperazinyl piperazine urea (1 g, 4.40 mmol) and 4-formylbenzeneboronic acid (729 mg, 4.86 mmol) were dissolved in 10 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of methanol, and acetic acid solution (0.7 ml, 12.67 mmol) was added.
  • the reaction was stirred at room temperature for 1.5 hours, sodium triacetoxyborohydride (2.33 g, l l mmol) was added, and the mixture was warmed to 60 ° C. The reaction was stirred until the reaction was completed by TLC, and concentrated under reduced pressure.
  • 6-bromo-4-chlorothiophene [ 3,2-d] pyrimidine was prepared according to the method described in WO 2009/007421.
  • Lithium tetrahydroaluminum (75 mg, 1.95 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (5 ml, 61.27 mmol) were stirred and stirred at room temperature, and (4-ethyl-piperazin-1-yl)- ⁇ 4-[ 4-(2-Hydroxy-1-phenyl-ethylamino)-thieno[3,2,d]pyrimidin-6-yl]-phenylmethanone (370 mg, 0.78 mmol) in tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol
  • the solution was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 55 ° C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC.
  • Lithium tetrahydroaluminum (20.14 mg, 0.53 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (5 ml, 61.27 mmol) were stirred and stirred at room temperature, and a solution of the compound ⁇ -2 in tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise to the reaction mixture, and the mixture was stirred at room temperature. After 1 hour, the temperature was raised to 55 °C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC.
  • Lithium tetrahydroaluminum (54 mg, 1.423 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) were stirred and stirred at room temperature, and a solution of the compound ⁇ -3 OOO mg, 0.57 mmol) in tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the reaction was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 55 ° C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC.
  • Lithium tetrahydroaluminum (41.8 mg, 1.1 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound III-4 (220 mg, 0.44 mmol) of tetrahydrofuran (10 ml, 0.123) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the first step is a first step:
  • 6-bromo-4-chlorofuran [ 3,2-d ] pyrimidine is based on the preparation of 6-bromo-4-chlorothiophene [ 3,2-d ] pyrimidine and WO 2008/073785.
  • Lithium tetrahydrogen aluminum (75 mg, 1.95 mmol) and 5 mL of anhydrous tetrahydrofuran were mixed and stirred at room temperature to the reaction.
  • a solution of compound III-5 (355 mg, 0.75 mmol) in tetrahydrofuran (10 mL, 0.123 mol) was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and then warmed to 55 ° C until the reaction was completed by TLC. 20 ml of water was added to the reaction mixture, which was extracted with ethyl acetate (50 ml*2), and then washed with saturated sodium chloride (50 ml*3) and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the first step is a first step:
  • Lithium tetrahydroaluminum (20.14 mg, 0.53 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (5 ml, 61.27 mmol) were stirred and stirred at room temperature, and the compound III-6 (90 mg, 0.19 mmol) of tetrahydrofuran (10 ml, 0.123 mol) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the solution was stirred at room temperature for 1 hour, and the temperature was raised to 55 ° C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC. 20 ml of water was added to the reaction mixture under ice bath at 0 ° C, extracted with ethyl acetate (40 ml * 2 ), and then saturated.
  • the first step is a first step:
  • Lithium tetrahydrogenate 60 mg, 1.578 mmol
  • 10 mL of anhydrous tetrahydrofuran 10 mL
  • a solution of compound III-7 290 mg, 0.567 mmol
  • the reaction was carried out at 55 ° C until the reaction of the starting material was completely monitored by TLC.
  • the p-carboxyphenylboronic acid pinacol ester (2.8 g, 11.3 mmol) was dissolved in dichloromethane (27 ml, 0.422 mol), hydrazine, dimethyl-dimethylformamide (9 ml, 0.116 mol), and added -Boc-3-methylpiperazine (2.9 g, 14.52 mmol), followed by 1-ethyl-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride ( 2.79 g, 14.55 mmol).
  • N-hydroxybenzotriazole (1.98 g, 14.66 mmol), triethylamine (2.5 ml, 17.99 mmol), stirred at room temperature until the reaction was completed by TLC, 30 ml of water was added to the reaction mixture, and stirred for 30 minutes.
  • Dichloromethane (100 ml * 3 ) was extracted and washed with a saturated sodium chloride solution (100 ml * 2 ). The organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give: g, white solid), yield 85.4%.
  • Lithium tetrahydroaluminum (132 mg, 3.479 mmol) and anhydrous tetrahydrofuran (30 ml, 0.369 mol) were stirred and stirred at room temperature, and -(4-(4-(2-hydroxy-1-phenylethylamine)) was added dropwise to the reaction mixture.
  • the first step is a first step:
  • the hydrazine-methylpiperazine (1.5 g, 10 mmol) was dissolved in 15 ml of dichloromethane, and N,N-diisopropylethylamine (1.65 ml, 10 mmol) was added to the ice bath at 0 ° C, which was dissolved in two The triphosgene (950mg, 3.2mmol) in methyl chloride (10ml) was slowly added dropwise. The temperature of the addition process was kept at 0 ⁇ 3 °C for 1 hour. N-Boc piperazine was added to the ice bath at 0 °C (1.9).
  • N-methylpiperazinylpiperazine urea (2.3 g, 10.85 mmol) and 4-formylbenzeneboronic acid (1.9 g, 11.93 mmol) were dissolved in 20 ml of tetrahydrofuran and 10 ml of methanol, and a solution of acetic acid (1.2 ml, 21.72 mmol) was added.
  • the reaction was stirred at room temperature for 1.5 hours, sodium triacetoxyborohydride (5.8 g, 27.12 mmol) was added, and the mixture was warmed to 60 ° C. The reaction was stirred until the reaction was completed by TLC, concentrated under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography.
  • the first step is a first step:
  • the first step is a first step:
  • 6-bromo-4-chloro-2-methyl-thiophene [3,2-d]pyrimidine can be produced by the methods described in WO 2009/007421 and WO2008/058285.
  • 6-Bromo-4-chloro-2-methyl-thiophene [3,2-d]pyrimidine (830 mg, 3.15 mmol) and L-phenylglycinol (648 mg, 4.725 mmol) were dissolved in N, N at room temperature - dimethylformamide (10 ml), triethylamine (1.1 ml, 7.875 mol) was added dropwise, heated to 55 ° C, reacted for 24 hours, allowed to cool, added 40 ml of ice water, filtered under reduced pressure, filter cake The mixture was slurried with 10 ml of water, filtered under reduced pressure, and then filtered with 10 ml of n-hexane and filtered under reduced pressure to give: 2-(6-bromo-2-methyl-thiophene[3,2-d]pyrimidine-4-amino 2 -Phenyl-ethanol (780 mg, pale yellow solid), Yield: 71%.
  • T-PBS PBS containing 0.1% Tween-20 in potassium free
  • reaction buffer 50 mmol/L HEPES H 7.4, 50 mmol/L MgCl 2 , 0.5 mmol/L MnCl 2 , 0.2 mmol/L Na 3 V0 4 , 1 mmol/L DTT.
  • the ATP solution was 50 ⁇ M, and the final concentration was 5 mol/L.
  • the above screening compound obtained was confirmed to have inhibitory activity EGFR or VEGFR (compound 10 "5 M for inhibition of EGFR receptor tyrosine kinase or VEGFR 50%>) formulated as a concentration gradient, for IC 5. Evaluation The ic 5 value of the inhibitory protein tyrosine kinase at the molecular level of each compound was calculated by a four-parameter method, and the results are shown in Table 1.
  • the receptor VEGFR has a good inhibitory effect, and some compounds have a good inhibitory effect on the epidermal growth factor receptor EGFR and the angiogenesis factor receptor VEGFR; and the compound activity of the [3,2-d]pyrimidine skeleton It is obviously superior to the activity of the compound having a [2,3-d]pyrimidine skeleton; the order of the substituent activity on the piperazine ring can be roughly arranged as follows: cyclopropyl>methyl>2-hydroxyethyl>ethyl>Urea; EGFR inhibitory activity of most compounds with a [3,2-d]pyrimidine skeleton is comparable to or better than the control drug Gefitinib Gefitinib, especially compounds III-9 and IV-3, the half-inhibitory concentration IC 5 .

Abstract

本发明公开了一种噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。所述的衍生物是具有式V所示的结构。本发明提供的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物具有明显的EGFR抑制活性，而且部分化合物对VEGFR也具有明显抑制活性，可望开发为酪氨酸激酶EGFR或/和VEGFR抑制剂，用于制备预防或治疗与表皮生长因子受体EGFR和/或血管生长因子受体VEGFR相关疾病的药物，为发展新型具有低耐药性或能缓解早期抑制剂耐药性的酪氨酸激酶抑制剂药物提供了新的发展方向和途径，具有广阔的应用前景和药用价值。

Description

噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物、 其制备方法及其在医药上的应用 技术领域
本发明涉及并嘧啶类衍生物及其制备方法和应用， 具体说， 是涉及一种具有表皮 生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR抑制活性的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧 啶类衍生物、 其制备方法及其在医药上的应用， 属于药物化学技术领域。 背景技术
肿瘤是威胁人类健康的最严重疾病之一， 其治疗主要包括放疗、化疗和手术治疗。 近年来随着细胞生物学和肿瘤药理学的发展， 肿瘤的化学药物治疗发生了巨大改变。传 统的化学治疗药物由于非特异性地阻断细胞***从而在杀死肿瘤细胞的同时也引起正 常细胞死亡而逐渐遭到摒弃， 同时， 以肿瘤细胞中异常激活的信号通路中的关键节点蛋 白作为靶点， 发现高效、 低毒、 特异性强的小分子抑制剂已成为当今抗肿瘤药物研究开 发的重要方向。 在肿瘤中异常表达激活的受体酪氨酸激酶 (RTK)由于在肿瘤发生发展、 侵袭转移、 化疗抗性等各个环节均发挥关键作用已成为抗肿瘤药物研究的热点。
表皮生长因子受体 (EGFR, epidermal growth factor receptor，又称 HER1或 cerbBl ) 是人类癌症中表达最广泛的酪氨酸激酶 HER家族成员。 EGFR结构包括三个区域： 胞 外区、 跨膜区和胞内区。 胞外区的氨基终端由 622个氨基酸组成， 有形成配体结合区的 2个富含半胱氨酸段； 跨膜区是个单一的 (X螺旋； 胞内区包括激酶区和有许多酪氨酸磷 酸化位点的羧基终端尾部。酪氨酸激酶（RTK)是把 ATP的 γ磷酸盐转运到酪氨酸残基。 在与配体结合后， EGFR发生同源或异源二聚体化而使 ΤΚ区域形成紧密连接。 在羧基 终端尾部 RTK介导酪氨酸磷酸化位点进行磷酸化， 创造了酶和联接子蛋白的结合位点 (Y992, Y1068, Y1086, Y1148和 Y11730 ), 从而能开始细胞内信号传导反应。 这些 信号传导形成不同的细胞反应， 包括增殖、分化、粘附和血管形成， 转移以及抑制凋亡。
研究表明， EGFR在非小细胞肺癌、 ***癌、 乳癌、 大肠癌、 头颈癌、 胃癌、 卵巢癌、 和胰腺癌中都有表达， EGFR活化引发复杂信号传导反应。 在不同类型的实体 瘤中， EGFR有增殖和过度表达， 导致下游信号传导失控而引起各种肿瘤的形成。 EGFR 中 ATP结合位点的突变影响受体的 RTK活性， 干扰致瘤信号的形成， 同时， EGFR还 与肿瘤的进展和预后差密切相关。
由于 EGFR和 VEGFR在致瘤中的独特作用， 其单克隆抗体和小分子抑制剂已经 成为靶向性抗肿瘤药物研发的热点。 目前， 已经有数个靶向 EGFR或 VEGFR的抑制剂 上市， 近 20个候选药物处在临床各个研发阶段。 其中， 吉非替尼和埃罗替尼代表上市 较早的靶向 EGFR的小分子抑制剂。 吉非替尼 (； Gefitinib, 又称 ZD1839或 Iressa)作为三 线单一治疗药物用于晚期非小细胞肺癌 （non small cell lung cancer, NSCLC) 。 埃罗替 尼 (Erlotinib,又称 OSI774或 Tarceva)作为标准方案治疗无效的晚期 NSCLC的二线或三 线治疗药物。
然而， 随着这些药物的临床应用， 人们发现并非所有高表达 EGFR患者都能对这 些药物有效， 某些初始对吉非替尼 （Gefitinib) 有治疗反应的肿瘤在治疗几个月后又出 现疾病进展。这些结果表明， 目前使用的 EGFR抑制剂抗肿瘤药物具有天然或继发性耐 药现象， 因此， 发展新型具有低耐药性或能缓解早期抑制剂耐药性的药物已经成为酪氨 酸激酶抑制剂的新发展方向。 发明内容
针对现有技术所存在的上述问题， 本发明的目的是提供一种具有表皮生长因子受 体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR抑制活性的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生 物、 其制备方法及其在医药上的应用。 本发明的第一方面， 提供一种式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构 体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，
Figure imgf000003_0001
式中， R选自： 氢、 d-6的烷基或取代的烷基、 d-6的烷基酰基（较佳为¾-6的烷基 酰基）、 C3-6的环烷基酰基 （较佳为 C4-6的环烷基酰基）、 C2-6的烯烃酰基 （较佳为 C3-6 的烯烃酰基） 或取代的烯烃酰基、 芳基酰基或取代的芳基酰基、 磺酰基、 酰胺基或取代 的酰胺基、 逆向酰胺基或取代的逆向酰胺基、 -8的烷氧基酰基；
R3为氢、 C 6的烷基或取代的 -6的烷基；
Z为氮或 CH;
R1为 -CH2-或 -C(=0)-;
Ar选自： C6_2。的芳基或取代的 C6_2。的芳基， 或 C4_2。的杂芳基或取代的 C4_2。的杂芳
¾：
Q为
Figure imgf000003_0002
， X为氧或硫， R2为氢或 d-6烷基或取代的
Ci~6焼基；
Ar2选自： C6-20的芳基或取代的 C6_2。的芳基， 或 C4_2。的杂芳基或取代的 C4_2。的杂芳 基。
在另一优选例中， 式 V化合物是具有通式 I、 通式 II、 通式 III或通式 IV的化合物:
Figure imgf000004_0001
上述通式中：
X为氧或硫； Z为氮或碳；
R为氢、 含 1〜6个碳原子的烷基或取代的烷基、 含 1〜6个碳原子的烷基酰基、 含 3〜6个碳原子的环烷基酰基、 含 2〜6个碳原子的烯烃酰基或取代的烯烃酰基、 芳基酰基 或取代的芳基酰基、 磺酰基、 酰胺基或取代的酰胺基、 逆向酰胺基或取代的逆向酰胺基 中的任意一种；
Ar1为苯基、 2或 3-氟取代苯基、 2或 3-三氟甲基取代苯基、 2或 3-氯取代苯基、 2 或 3-腈基取代苯基、 2-或 3-C 3烷基取代苯基、 噻吩基、 3-C 3烷基取代的噻吩基、 呋 喃基、 3-C 3烷基取代的呋喃基、 2或 3-吡啶基中的任意一种；
为苯基、 卤素取代的苯基、 d-6烷基取代的苯基、联苯基、 卤素取代的联苯基、 萘基、 吡啶基、 噻吩基、 卤素取代的噻吩基、 d-3烷基取代的噻吩基、 呋喃基、 卤素取 代的呋喃基、 d-3烷基取代的呋喃基中的任意一种。
进一步， 通式中： X为氧或硫； Z为氮； Ar1为苯基； Ar2为苯基； R为氢、 含 1〜6 个碳原子的烷基或取代的烷基、含 1〜6个碳原子的烷基酰基、含 3〜6个碳原子的环烷基 酰基、 含 2〜6个碳原子的烯烃酰基或取代的烯烃酰基、 芳基酰基或取代的芳基酰基、磺 酰基、 酰胺基或取代的酰胺基、 逆向酰胺基或取代的逆向酰胺基中的任意一种。
在另一优选例中， R为氢、 含 1〜6个碳原子的烷基或取代的烷基、 含 1〜6个碳原 子的烷基酰基、含 3〜6个碳原子的环烷基酰基、含 2〜6个碳原子的烯烃酰基或取代的烯 烃酰基、 酰胺基或取代的酰胺基中的任意一种；
Ar为苯基、 2或 3-氟取代苯基、 2或 3-三氟甲基取代苯基、 2或 3-氯取代苯基、 2 或 3-腈基取代苯基、 2-或 3-d-3烷基取代苯基中的任意一种； 为苯基、 卤素取代的苯基、 d-6烷基取代的苯基、 联苯基、 卤素取代的联苯基、 萘基中的任意一种。
在另一优选例中所述取代的烷基为取代的 d-6的烷基、 所述取代的烯烃酰基为取 代的 C3-6烯烃酰基， 所述芳基酰基为 C6-2。的芳基酰基， 所述取代的芳基酰基为取代的 C6-20的芳基酰基、 所述磺酰基为 d-15的磺酰基、 所述酰胺基为 d-15的酰胺基， 所述取 代的酰胺基为取代的 C i5的酰胺基。
在另一优选例中， 所述取代的烷基、 取代的烯烃酰基、 取代的芳基酰基、 取代的酰 胺基或取代的逆向酰胺基、 取代的芳基， 或取代的杂芳基是指具有选自下组的取代基： 氟、 氯、 溴、 碘、 腈基、 羟基、 d-6烷基、 C3-6环烷基、 d-6烷氧基、 胺基、 d_6烷氧酰 基、 硝基、 氨基、 酰基、 酰胺基、 磺酰基、 d-6卤代烷基。
在另一优选例中， 所述取代的酰胺基或取代的逆向酰胺基是指选自下组的取代基取 代的酰胺基或取代的逆向酰胺基： 该取代基与酰胺基中的 N连接形成吗啉、 吡咯、 哌嗪 或哌啶， 所述吗啉、 吡咯、 哌嗪或哌啶任选地被选自下组的取代基取代： d-6烷基、 d-6 烷氧基。
在另一优选例中， 所述式 V化合物为表 1中所列的化合物中任一个。
表 1
Figure imgf000005_0001
S 2- {6-[4-(4-乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯 基] -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基 } -2-苯
1 基 -乙醇
Figure imgf000006_0001
、N^ 人 S 2- {6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯 基] -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基 } -2-苯 基 -乙醇
^ =/。H 0-2-{6-[4-(4-环丙基甲基 -哌嗪 -1-基甲 基) -苯基] -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨 基}-2-苯基 -乙醇
~ f S 、
O
^ =/0H S 2-(6- {4-[4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1 -基 甲基] -苯基 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨 基}-2-苯基 -乙醇 -2-苯基 -2-[6-(4-哌嗪 -1-基甲基-苯基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基] -乙醇
,。h -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1- 基) -吗啉 -4-基) -甲酮
o~<。 。H -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1- 基) -吡咯 -1-基 -甲酮
0(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1- 基 )-(4-甲氧基 -哌啶 -1-基) -甲酮
八 N
二甲基氨基 - 1 -(4- {4-[4-(2-羟基 - 1 - 苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6- 基] -苄基 哌嗪 -1-基) -丁基 -2-烯 -1-酮
0(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1- 基) -哌啶 -1-基) -甲酮
0(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) - 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-
^= 人 基) -N-乙基 -哌嗪 -1-基) -甲酮
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
所述的药学上可接受的盐非限制性地包括： 无机酸盐， 如盐酸盐、 氢溴酸盐、 硝 酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐等； 有机酸盐， 如甲酸盐、 乙酸盐、 丙酸盐、 苯甲酸盐、 马来酸 盐、 富马酸盐、 琥珀酸盐、 酒石酸盐、 柠檬酸盐等； 烷基磺酸盐， 如甲基磺酸盐、 乙基 磺酸盐等； 芳基磺酸盐， 如苯磺酸盐、 对甲苯磺酸盐等。
所述的药学上可接受的溶剂合物非限制性地包括所述的化合物与水、 乙醇、 异丙 醇、 ***、 丙酮等的溶剂合物。 本发明的第二方面， 提供式 V化合物的制备方法， 包括： 式 VI化 VII 化合物反应获得式 V化合物的步骤，
Figure imgf000009_0002
VI V
各式中， 4为羟基或 -6烷
R5-Q-为
Figure imgf000009_0003
或 ， R5为 F、 Cl、 Br、 I；
R、 Z、 R3、 R X、 R2、 Ar和 Ar2的定义如第一方面所述。
本发明提供的通式 I表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物的制备方法， 包括 如下步骤③或步骤①和③或步骤②和③或步骤①〜③：
Figure imgf000010_0001
本发明提供的通式 Π表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物的制备方法， 包括 如下步骤⑤或步骤②和⑤或步骤④和⑤或步骤②及④和⑤：
Figure imgf000010_0002
本发明提供的通式 III表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物的制备方法， 包括 如下步骤⑦或步骤①和⑦或步骤⑥和⑦或步骤①及⑥和⑦：
Figure imgf000010_0003
本发明提供的通式 IV表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物的制备方法， 包括 如下步骤⑧或步骤④和⑧或步骤⑥和⑧或步骤④及⑥和⑧：
Figure imgf000011_0001
进一步， 所述的通式 Π表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物还可以由通式 I 表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物进行氢化反应而得。
进一步， 所述的通式 IV表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物还可以由通式 III 表示的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物进行氢化反应而得。 本发明的第三方面， 提供式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、对映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物的用途。
因研究表明本发明所述的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物具有表皮生长因子受 体 （EGFR)和 /或血管生长因子受体 （VEGFR) 的抑制活性， 因此， 本发明所述的噻吩 并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物或所述衍生物的互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非 对映异构体、 药学上可接受的盐、 药学上可接受的溶剂合物中的任意一种或几种的混合 物， 可应用于制备酪氨酸激酶抑制剂， 尤其可应用于制备 EGFR和 /或 VEGFR抑制剂。
进一步说， 所述的抑制剂可应用于制备预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 / 或血管生长因子受体 VEGFR相关疾病的药物， 具体说， 可应用于制备预防或治疗与表 皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关的细胞异常增殖、形态变化、 运动功能亢进、 血管新生及肿瘤转移疾病的药物。
更进一步说， 所述的抑制剂可应用于制备治疗或预防与表皮生长因子受体 EGFR 和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关的肿瘤生长和转移的药物。
更进一步说， 所述抑制剂的活性成分优选表 1 中所示化合物或所示化合物的互变 异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐、 药学上可接受的 溶剂合物中的任意一种或几种的混合物。 本发明的第四方面，提供一种酪氨酸激酶抑制剂， 由第一方面所述的式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上 可接受的溶剂合物中的任意一种或几种的混合物制备得到。 所述酪氨酸激酶抑制剂是指 EGFR和 /或 VEGFR抑制剂。 本发明的第五方面， 提供第四方面所述的酪氨酸激酶抑制剂的用途， 用于制备：
(i) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关疾 病的药物；
(ii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的细胞异常增殖、 形态变化、 运动功能亢进、 血管新生及肿瘤转移疾病的药物； 或
(iii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的肿瘤生长和转移的药物。 本发明的第六方面， 提供一种药物组合物， 包含药学上可接受的载体， 和 第一方面所述的式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映 异构体、 药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物。 本发明中， 所述的药学上可接受的盐非限制性地包括： 无机酸盐， 如盐酸盐、 氢 溴酸盐、 硝酸盐、 硫酸盐、 磷酸盐等； 有机酸盐， 如甲酸盐、 乙酸盐、 丙酸盐、 苯甲酸 盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 琥珀酸盐、 酒石酸盐、 柠檬酸盐等； 烷基磺酸盐， 如甲基磺 酸盐、 乙基磺酸盐等； 芳基磺酸盐， 如苯磺酸盐、 对甲苯磺酸盐等。
所述的药学上可接受的溶剂合物非限制性地包括所述的化合物与水、 乙醇、 异丙 醇、 ***、 丙酮等的溶剂合物。 与现有技术相比， 本发明提供的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物的结构新颖， 具有明显的 EGFR抑制活性， 而且部分化合物对 VEGFR也具有明显抑制活性， 可望开发 为酪氨酸激酶 EGFR或 /和 VEGFR抑制剂， 用于制备预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关的细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进 等相关疾病及与血管新生或肿瘤转移相关疾病的药物，尤其可望用于制备治疗或预防与 表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关的肿瘤生长和转移的药物， 为发展新型具有低耐药性或能缓解早期抑制剂耐药性的酪氨酸激酶抑制剂药物提供了 新的发展方向和途径， 具有广阔的应用前景和药用价值。 具体实施方式
术语
如本文所用， "d-6"指具有 1〜6个碳原子， 同理， "C3-6"指具有 3〜6个碳原子； "C2-6" 指具有 2〜6个碳原子； "C2-8"指具有 2〜8个碳原子。
"烷基"是指仅含有碳、 氢两种原子的链状饱和的有机官能团， 包括支链和直链烷 基， 如甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基等。
"环烷基"是指含有碳、 氢两种原子的环状有机官能团， 如环丙基、 环丁烷等。 "酰基"是指具有 -C (=0) -的官能团。
"烷基酰基"是指烷基与 -C (=0) -相连形成的基团， d-6的烷基酰基是指^-6的烷 基与 -C (=0 ) -相连形成的基团。
"环烷基酰基"是指含有碳、 氢两种原子的环状有机官能团与 -C (=0) -相连形成的 基团。 C3-6的环烷基酰基是指 C3-6的环烷基与 -C (=0) -相连形成的基团
"烯烃酰基"是指含有 C=C的由碳、氢两种原子构成的不饱和有机官能团与 -C (=0 )
-相连形成的基团。 C2-6的烯烃酰基是指具有 2〜6个碳原子的含有 C=C的由碳、氢两种原 子构成的不饱和有机官能团与 -C (=0) -相连形成的基团。
"芳基"表示包含一个或多个芳环的烃基部分。 本发明中芳基优选具有 6〜20个碳原 子， 芳基部分的例子包括苯基、 亚苯基、 萘基、 亚萘基、 芘基、 蒽基和菲基。
"杂芳基"是指表示包含一个或多个具有至少一个杂原子 (例如 N， 0或 S)的芳环的 部分。 本发明中杂芳基优选具有 4〜20个碳原子， 杂芳基的例子包括呋喃基、 亚呋喃基、 芴基、 吡咯基、 噻吩基、 噁唑基、 咪唑基、 噻唑基、 吡啶基、 嘧啶基、 喹唑啉基、 喹啉 基、 异喹啉基和吲哚基。
"芳基酰基"是指芳基与 -C (=0) -相连形成的基团， 较佳为具有 6〜20个碳原子的 芳基与 -C (=0 ) -相连形成的基团。
"磺酰基"是指磺酸失去羟基后的功能团， 可以写为 R'-S(=0)2-， 如 R'为甲基、 乙 基、 苯基、 对甲苯基等。
"酰胺基"是指具有酰胺键 -CONH-的功能团。 "逆向酰胺基"是指具有逆向酰胺键 -NHCO-的功能团。
"烷氧基酰基"是指 -C (=0 ) -与烷氧基上的氧相连形成的基团， 烷氧基是指烷基与 氧原子连结后的生成基团， 如甲氧基、 乙氧基等。 C2-8的烷氧基酰基是指 C2-8的烷氧基 与 -C (=0) -相连形成的基团。
"氨基"是指 NH2-。
"胺基" 是指一个或多个 Cw。烃基取代的氨基， 如 (CH3)2N -、 (CH3CH2)2N- (CH3)(CH3CH2)N- CH3NH -、 CH3CH2NH-等。
本发明中， 烷基、 环烷基、 烯烃酰基、 芳基、 杂芳基、 芳基酰基、 酰胺基或逆向酰 胺基同时包括取代的和未取代的部分。 烷基、 环烷基、 烯烃酰基、 芳基、 杂芳基、 芳基 酰基、 酰胺基或逆向酰胺基上可能的取代基包括， 但不限于： 氟、 氯、 溴、 碘、 腈基、 羟基、 d-6烷基、 C3-6环烷基、 d-6烷氧基、 胺基、 d_6烷氧酰基、 硝基、 氨基、 酰基、 酰胺基、 磺酰基。 制备方法
本发明式 V化合物可通过如下的方法制得，然而该方法的条件，例如反应物、溶剂、 碱、 所用化合物的量、 反应温度、 反应所需时间等不限于下面的解释。 本发明化合物还 可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得， 这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。
所述方法包括式 VI化合物与式 VII化合物发生縮合反应获得式 V化合物的步骤。
Figure imgf000014_0001
各式中， R4、 R5-Q -、 R、 Z、 R3、 R X、 R2、 Ar和 Ar2的定义如前所述。
通常， 反应是在惰性溶剂中， 在一 10°C至回流温度 (如 100°C)下， 反应 0.1-72小时。 代表性的溶剂包括 (但并不限于)： 丙酮、 甲醇、 乙醇、 乙酸乙酯、 二氯甲烷、 氯仿、 四氢呋喃、 N，N-二甲基甲酰胺、 ***、 乙腈或两种以上的混合溶剂。 药物组合物
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可接受的载 体。
"本发明化合物"是指式 V化合物 （包括式 I、 式 π、 式 m或式 IV化合物）、 或 其互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上可 接受的溶剂合物。
由于本发明化合物具有表皮生长因子受体 （EGFR ) 和 /或血管生长因子受体 (VEGFR) 的抑制活性， 因此本发明化合物以及含有本发明化合物为主要活性成分的 药物组合物可用于制备预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关疾病的药物。
本发明的药物组合物中包含安全有效量的本发明化合物， 其中 "安全有效量"指的 是： 化合物的量足以明显改善病情， 而不至于产生严重的副作用。 通常， 药物组合物含 有 l-2000mg本发明化合物 /剂， 更佳地， 含有 10-200mg本发明化合物 /剂。 较佳地， 所 述的 "一剂" 为一个胶囊或药片。 "药学上可以接受的载体"可以为一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质， 它们适合于人使用， 而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。 "相容性"在此指的是组 合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和， 而不明显降低化合物的药 效。 药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物 (如羧甲基纤维素钠、 乙基纤 维素钠、 纤维素乙酸酯等)、 明胶、 滑石、 固体润滑剂 (如硬脂酸、 硬脂酸镁)、 硫酸钙、 植物油 (如豆油、 芝麻油、 花生油、 橄榄油等)、 多元醇 (如丙二醇、 甘油、 甘露醇、 山梨 醇等)、 乳化剂 (如吐温 ®)、 润湿剂 (如十二烷基硫酸钠)、 着色剂、 调味剂、 稳定剂、 抗 氧化剂、 防腐剂、 无热原水等。 施用方法
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制， 代表性的施用方式包括 (但 并不限于)： 口服、 鼻吸入、 直肠和肠胃外 (静脉内、 肌肉内或皮下)。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗粒剂。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、 溶液、 悬浮液、 糖浆或酊剂。 除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂， 增溶剂和乳化剂， 例知， 乙醇、 异丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 丙二醇、 1，3-丁二醇、 二甲基甲酰胺以及油， 特别是棉籽油、 花生油、 玉米胚油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油或 这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外， 组合物也可包含助剂， 如润湿剂、 乳化剂和悬浮剂、 甜味 剂、 矫味剂和香料。
除了活性化合物外， 悬浮液可包含悬浮剂， 例如， 乙氧基化异十八烷醇、 聚氧乙烯 山梨醇和脱水山梨醇酯、 微晶纤维素、 甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬 浮液或乳液， 和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和 非水载体、 稀释剂、 溶剂或赋形剂包括水、 乙醇、 多元醇及其适宜的混合物。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物 (如顺铂)联合给药。 使用药物组合物时， 是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物 (如人)， 其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量， 对于 60kg体重的人而言， 日给 药剂量通常为 l〜2000mg， 优选 20〜500mg。 当然， 具体剂量还应考虑给药途径、 病人 健康状况等因素， 这些都是熟练医师技能范围之内的。 下述实施例中所制得的化合物的结构是通过核磁共振 ^HNMR) 和质谱 （MS ) 予 以确定。 1HNMR 位移 （δ ) 以百万分之一 （ppm ) 的单位给出。 1HNMR 的测定是用 BrukerAVANCE-400核磁仪，测定的溶剂为氘代二甲亚砜（DMSO-d6)，氘代氯仿 (CDC13)， 内标为四甲基硅烷 （TMS )， 化学位移是以 10—6作为单位给出。
MS的测定是用 FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪 (生产商： Therm,型号： Finnigan LCQ advantage MAX)。
IC5。值的测定是用 NovoStar酶标仪 (德国 BMG公司）。
薄层硅胶是使用烟台黄海 HSGF254或青岛 GF254硅胶板。
硅胶柱层析是使用烟台黄海硅胶 200〜300目硅胶为载体。
HPLC测试是使用安捷伦 1200DAD高压液相色谱仪 (Sunfire C18 150x4.6mm色谱柱) 和 Waters 2695-2996高压液相色谱仪 (Gimini C 18 150x4.6mm色谱柱）。
微波反应是使用 CEM Discover-S 908860型微波反应器。
另外， 以下实施例中无特殊说明， 反应均在氮气氛下进行。
氩气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氩气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约 1L容积的氢气气球。
以下实施例中无特殊说明， 反应中的溶液是指水溶液。 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。在阅读了本发明记载的内容之后， 本领域技术人员可以对 本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范 围。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件， 或按照制造厂商所 建议的条件。 除非另外说明， 否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。 -1及化合物 II -1
Figure imgf000016_0001
II -1
第一步：
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯（lg， 4.03mmol )溶解于二氯甲烷（10ml， 0.16mol ) 和 N，N-二甲基甲酰胺 （lml， 13.0mmol) 中， 加入 N-乙基哌嗪 （0.6ml， 4.8mmol)， 并 依次加入 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐 （0.93g， 4.8mmol)， N-羟基苯 并三氮唑 （0.66g， 4.8mmol)， 三乙胺 （0.84ml， 6.04mmol)， 室温搅拌反应直至 TLC监 测原料反应完全， 向反应液中加入 10ml水， 搅拌 30分钟， 用二氯甲烷（50ml*3)萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （50ml*2)洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得 到: (4-乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 ( 1.4g， 淡黄色固体）， 直接用于下一步反应。
第二步：
其中 6-溴 -4-氯噻吩 [2，3-d] 嘧啶按照专利 WO 2007/059257所述方法制备。
室温下将化合物 6-溴 -4-氯噻吩 [2，3-d]嘧啶 （lg， 4.0mmol)和 L-苯甘氨醇 （lg，
7.2mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（20ml， 0.259mol)中， 滴加 1ml三乙胺（363mg， 7.19mmol), 室温搅拌直至 TLC监测原料反应完全， 加入 200ml水， 减压抽滤， 滤饼用 水洗涤 （100ml*2) 得到： 化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 （1.3g， 淡黄色固体）， 产率： 93%。
MSm/z(ESI):351[M+l]。
1HNMR (400MHz, DMSO-d6): 8.24 (s， 1H)， 8.16 (d， J=8.1Hz， 1H)， 8.02 (s，lH)， 7.38-7.40 (m， 2H)， 7.23-7.32 (m， 2H)， 7,20-7.22(m, 1H)， 5.39(m, 1H)， 4.98(t， J=8.1Hz，lH)，
Figure imgf000017_0001
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (500mg， 1.43mmol) 和 (4-乙基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 （982mg， 2.86mmol)溶解于 N，N-二甲基甲酰胺（ 15ml， 0.194mol)，依次加入四三苯基膦钯（ 164mg， 0.143mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L, 2.8ml), 氮气保护， 加热至 80°C直至 TLC监测原料 反应完全， 自然冷却至室温加入水 （100ml*3)洗涤， 用乙酸乙酯 （250ml*l)萃取， 有 机相用饱和食盐水 （100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓 縮， 得到： (S)- (4-乙基 -哌嗪 -1-基) -{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] - 苯基 甲酮（ 1 -1) (440mg， 淡黄色固体）， 产率： 63%。
MS m/z(ESI): 487[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.30 (d,2H)， 8.19 (d, 1H), 7.79(d, 2H), 7.51-7.20(m,7H), 5.46(m， 1H), 5.01(t，，1H)， 3.75(m, 2H), 3.55(m, 4H)， 2.35(m, 6H)， 0.99(t， J=8.0Hz，3H)。
第四步：
室温下将四氢铝锂 （27.3mg， 0.718mmol) 和无水四氢呋喃 （8ml， 98.63mmol) 混合搅拌， 向反应液中滴加化合物 I -I (140mg， 0.287mmol) 的四氢呋喃 （10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温， 向反应液中加入 20ml水， 用乙酸乙酯（100ml*3 )萃取， 再用饱和氯 化钠溶液 （100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶 柱色谱法纯化所得残留物，得到： -2-{6-[4-(4-乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [2，3-d] 嘧啶—4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇（Π -1) ( 15mg， 淡黄色固体）， 产率： 11.0%。
MS m/z(ESI): 473[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.23-8.18 (m,3H) , 7.66(d, 2H), 7.42-7.23(m,7H), 5.44(m， 1H), 5.03(t,，1H)， 3.76(m, 2H), 3.55(m, 6H)， 2.4 l(m, 6H)， 0.98(t，，3H)。
实施例 2: 制备化合物 I -2及化合物 II -2
Figure imgf000018_0001
第一步:
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯 （3g， 12.10mmol ) 溶解于二氯甲烷 （27ml， 0.422mol)和 N，N-二甲基甲酰胺（9ml， 0.116mol)中，加入 N-甲基哌嗪（ 1.45g， 14.5mmol)， 并依次加入 1-乙基 - (3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 （2.79g， 14.4mmol) , N-羟 基苯并三氮唑 （1.98g， 12.9mmol ) , 三乙胺 （2.5ml， 17.99mmol)， 室温搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 向反应液中加入 30ml水，搅拌 30分钟，用二氯甲烷（ 100ml*3 ) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （100ml*2 ) 洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压 浓縮， 得到： （4-甲基 -哌嗪 -1-基) - [4- (4，4，5，5_四甲基 _ [ 1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) - 苯基] -甲酮 （1.5g， 白色固体）， 产率： 37.6%。
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺） -2-苯基 1-乙醇（lOOmg , 0.2857mmol)和（4-甲基-哌嗪-l-基）- [4- (4, 4, 5, 5_四甲基 - [ 1, 3, 2]二氧硼戊环 -2-基） - 苯基] -甲酮 （188mg， 0.5714mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （4ml， 51.7mmol), 依 次加入四三苯基膦钯 （33mg， 0.0286mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 0.6ml), 氮气保护， 加热至 80°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入水 （100ml*3 ) 洗涤， 用 乙酸乙酯 （250ml* l )萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2 )洗涤， 得到的有机相用无 水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： f¾)-{4-[4-(2- 羟基 -1-苯基-乙胺)—噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苯基 }-(4-甲基 -哌嗪 -1-基) -甲酮（ I -2) (71mg, 白色固体）， 产率： 52.6%。
Figure imgf000019_0001
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.30 (d,2H)， 8.19 (d， 1H)， 7.75(d, 2H), 7.51-7.21(m,7H), 5.46(m， 1H), 5.02(t,，1H)， 3.75(m, 2H), 3.55(m, 4H)， 2.35(m, 4H)， 2.19(s，3H)。
第三步：
室温下将四氢铝锂 （lOOmg, 2.640mmol) 和无水四氢呋喃 （10ml， 0.123mol) 混 合搅拌， 向反应液中滴加化合物 I -2 (500mg， 1.056mmol)的四氢呋喃（10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却 至室温， 向反应液中加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （100ml*3)萃取， 再用饱和氯化钠溶液 (100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物， 得到： (S) -2-{6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基] -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4- 基氨基 2-苯基 -乙醇（II -2) (42mg， 淡黄色固体）， 产率： 8.7%。
MS m/z(ESI): 460[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.30 (d,2H)， 8.19 (d， 1H)， 7.75(d, 2H), 7.51-7.21(m,7H),
5.46(m， 1H)， 5.02(t,，1H)， 3.75(m, 2H), 3.55(m, 6H)， 2.35(m, 4H)， 2.19(s，3H)。
实施例 3: 制备化合物 I -3及化合物 II -3
第二步
Figure imgf000019_0002
第一步：
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯 （3g， 12.10mmol) 溶解于二氯甲烷 （27ml，
0.422mol) 和 N，N-二甲基甲酰胺 （9ml， 0.116mol) 中， 加入 1-环丙基甲基哌嗪 （2.3g， 14.9mmol)， 并依次加入 1_乙基 _ (3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 （2.79g， 14.4mmol)， N-羟基苯并三氮唑 （1.98g， 12.9mmol), 三乙胺 （2.5ml， 17.99mmol), 室 温搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 向反应液中加入 30ml水， 搅拌 30分钟， 用二 氯甲烷 （100ml*3) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （100ml*2)洗涤， 有机相用无水硫酸镁 干燥，过滤，减压浓縮，得到： (4-环丙基羰基 -哌嗪 -1-基) -[4- (4， 4， 5， 5-四甲基 -[1， 3, 2] 二氧硼戊环 -2-基) -苯基] -甲酮 （3.5g， 白色固体）， 产率 61.4%， 用做下一步反应。 第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (500mg， 1.43mmol) 和 (4-环丙基羰基 -哌嗪 -1-基） -[4-(4， 4， 5， 5-四甲基 -[1， 3, 2]二氧硼戊环 _2_基） -苯 基] -甲酮 （1.099g， 2.86mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （ 15ml， 0.194mol)， 依次 加入四三苯基膦钯 （164mg， 0.143mmol), 碳酸钠溶液 (lmol/L， 2.8ml), 氮气保护， 加 热至 80°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入水 （100ml*3) 洗涤， 用乙 酸乙酯 （250ml*l)萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2)洗涤， 得到的有机相用无水 硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （ -(4-环丙基 甲基 -哌嗪 -1-基) -{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苯基 } -甲酮（ I -3) (300mg, 淡黄色固体）， 产率： 60%。
MS m/z (ESI): 528[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.44m,2H), 8.26(s,lH), 7.75(d,2H), 7.52-7.28(m,7H), 5.48(m，lH)， 5.20(t,lH), 3.87(m,lH), 3.68(s,2H), 3.09(m, 8H)， 1.23(m,lH), 0.68(m,2H), 0.44(m，2H)。
第三步：
室温下将四氢铝锂 （90mg， 2.369mmol)和无水四氢呋喃 （10ml， 0.123mol)混合 搅拌， 向反应液中滴加化合物 1 -3 (250mg， 0.474mmol)的四氢呋喃（10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却 至室温， 向反应液中加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （100ml*3)萃取， 再用饱和氯化钠溶液 (100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物， 得到： (S) -2-{6-[4-(4-环丙基甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基] -噻吩并 [2，3-d] 嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇（Π-3) (42mg， 类白色固体）， 产率： 4.3%。
MS m/z (ESI): 500[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.43(m,2H), 8.26(s,lH), 7.75(d,2H), 7.52-7.28(m,7H),
5.48(m，lH)， 5.20(t,lH), 3.87(m,lH),3.68(s,2H), 3.09(m, 10H), 1.23(m,lH), 0.68(m，2H)，
Figure imgf000020_0001
实施例 4: 制备化合物 I -4及化合物 II -4
第一步：
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯（3g， 12.10mmol)溶解于二氯甲烷（27ml， 0.422mol) 和 N，N-二甲基甲酰胺 （9ml， 0.116mol) 中， 加入 N-羟乙基哌嗪 （2g， 15.36mmol), 并 依次加入 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 （2.79g， 14.4mmol)， N-羟基 苯并三氮唑 （1.98g， 12.9mmol), 三乙胺 （2.5ml， 17.99mmol)， 室温搅拌反应直至 TLC 监测原料反应完全， 向反应液中加入 30ml水， 搅拌 30分钟， 用二氯甲烷 （100ml*3) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （100ml*2) 洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压 浓縮， 得到： （4-羟乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4， 4， 5， 5-四甲基 -[1， 3， 2]二氧硼戊环 -2-基) - 苯基] -甲酮 （3.0g， 白色固体）， 产率 68.8%， 用做下一步反应。
Figure imgf000021_0001
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (500mg， 1.43mmol) 和（4-羟乙基 -哌嗪 -1-基） - [4- (4， 4， 5， 5-四甲基 - [ 1， 3, 2]二氧硼戊环 _2_基） -苯基] -甲 酮 （1.029g， 2.86mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （15ml， 0.194mol), 依次加入四 三苯基膦钯 （164mg， 0.143mmol), 碳酸钠溶液 (lmol/L， 2.8ml), 氮气保护， 加热至 80 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入水 （100ml*3) 洗涤， 用乙酸乙酯 ( 250ml* 1)萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2)洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁 干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （ - [4-(2-羟基-乙基) - 哌嗪 -1-基] -{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)- 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苯基 } -甲酮（ I -4) (300mg, 淡黄色固体）， 产率： 41.7%。
MS m/z(ESI): 504[M+l
1HNMR(400Hz， DMSO-d6) ： 8.37-8.27(m,3H), 7.77(d,2H), 7.51-7.22(m,7H), 5.45(m，lH)， 5.14(t,lH), 4.46(m，lH)， 3.75(m,2H), 3.61(m,2H), 3.49(m,2H), 3.36(m,4H), 2.43(m,4H
第三步：
室温下将四氢铝锂 （90mg， 2.369mmol) 和无水四氢呋喃 （10ml) 混合搅拌， 向 反应液中滴加化合物 1 -4 (250mg， 0.496mmol) 的四氢呋喃 （10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温， 向反应液中加入 20ml水，用乙酸乙酯（100ml*3)萃取，再用饱和氯化钠溶液（ 100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留 物， 得到： (S) -2-(6 -[4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基甲基] -苯基 }』塞吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨 基}-2-苯基 -乙醇（Π- 4) (48mg， 类白色固体）， 产率： 4.3%。
MS m/z (ESI): 490[M+1]。
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.37-8.29(m,3H), 7.77(d,2H), 7.51-7.22(m,7H): 5.45(m，lH)， 5.14(t,lH), 4.46(m，lH)， 3.75(m,2H), 3.68(s,2H), 3.61(m,2H), 3.49(m,2H) 3.36(m,4H),2.43(m,4H)o
实施例 5: 制备化合物 I -5及化合物 II -5
Figure imgf000022_0001
第一步：
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯 （0.894g， 4.8mmol) 溶解于二氯甲烷 （10ml，
0.156mol)和 N，N-二甲基甲酰胺（lml， 17.78mmol)中，加入 N-Boc哌嗪（lg， 4.03mmol)， 并依次加入 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（0.93g， 4.8mmol)， N-羟基 苯并三氮唑 （0.66g， 4.8mmol)， 三乙胺 （0.84ml， 6.04mmol)， 室温搅拌反应直至 TLC 监测原料反应完全， 向反应液中加入 30ml水， 搅拌 30分钟， 用二氯甲烷 （100ml*3) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （100ml*2) 洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压 浓縮，得到： 4- [4- (4, 4， 5， 5-四甲基 -[1， 3, 2]双氧硼 2_yl)苯酰-] -哌嗪 -1-叔丁酯（ 1.6g， 白色固体）， 产率 95.4%。
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (500mg， 1.428mmol) 和 4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]双氧硼 2_yl)苯酰-] -哌嗪 -1-叔丁酯 （ 1.189g， 2.857mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （20ml， 0.65mol)， 依次加入四三苯基膦钯 (161.8mg， 0.14mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 2.5ml), 氮气保护， 加热至 85°C直至 TLC 监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗涤，用乙酸乙酯 （100ml*2) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3)洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓 縮，用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到粗产物（380mg，淡黄色固体），产率： 47.6%。 MSm/z(ESI):560[M+l]。 第三步：
室温下将上述产物 （168mg， 0.3mmol)溶解于二氯甲烷（8ml， 0.125mol) 中， 加 入三氟乙酸 （0.45ml， 0.6mmol)， 室温下搅拌至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用 饱和碳酸氢钠溶液稀释中和，用二氯甲烷萃取（50ml*3 )有机层用饱和食盐水（50ml*3 ) 洗涤， 减压浓縮， 刮大板， 得到： -{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) - 噻吩并 〔2，3-d〕 嘧啶 -6-基] -苯基 哌嗪 -1-基 -甲酮 -5) ( 50mg， 白色固体）， 产率： 36%。
MS m/z(ESI): 460[M+l
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 8.40(m，lH)， 8.24(m,2H), 7.79(d,2H), 7.45(m,4H), 7.21(m,3H), 5.45(m,lH), 5.04(t，lH)， 3.55(s,2H), 2.74(m,4H), 2.39(m，4H)。
第四步：
室温下将四氢铝锂 （51.5mg， 1.355mmol) 和无水四氢呋喃 （25， 0.308mol) 混合 搅拌， 向反应液中滴加化合物 1 -5 (500mg， 0.451mmol)的四氢呋喃 (25ml, 0.308mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却 至室温， 向反应液中加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （50ml*3 ) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 ( 100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物， 得到： -2-苯基 -2-[6-(4-哌嗪 -1-基甲基-苯基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4- 基氨基] -乙醇（Π -5) ( lOOmg, 白色固体）， 产率： 20.7%
MS m/z(ESI): 446[M+l
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 8.41(m，lH)， 8.26(m,2H), 7.78(d,2H), 7.46(m,4H), 7.22(m,3H), 5.48(m，lH)， 5.06(t，lH)， 3.84(m,2H), 3.57(s,2H), 2.76(m,4H), 2.40(m，4H)。
6: 制备化合物 II -6
Figure imgf000023_0001
第一步：
将吗啉 （5ml， 57.405mmol) 溶解于 40ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加入 N，N-二 异丙基乙胺（9.5ml，57.405mmol)，将溶解于二氯甲烷（30ml)中的三光气（6g，20.69mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0 ±3 °C， 反应 1小时， 0°C冰浴下加入 N-Boc哌嗪 ( 11.8mg， 63.15mmol) 和 N，N-二异丙基乙胺 （9.5ml， 57.405mmol)， 室温下搅拌反应 直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 将粗品溶 解于 30ml二氯甲烷中， 加入三氟乙酸（14ml， 18.7mmol)室温下搅拌反应直至 TLC监 测原料反应完全，减压浓縮，加入饱和碳酸钠溶液（50ml*3 )洗涤，用二氯甲烷（50ml*6) 萃取， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 吗啉基哌嗪基脲 （877mg， 淡黄色固体）， 产率： 6%， MS m/z(ESI): 200[M+1]。
第二步：
将吗啉基哌嗪基脲 （500mg， 2.51mmol ) 禾 B 4-甲酰苯硼酸 （396mg， 2.64mmol ) 溶解于 20ml四氢呋喃中， 加入醋酸溶液 （0.5ml， 8.75mmol)， 室温搅拌反应 1小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （798mg， 3.77mmol)， 升温至 60 °C搅拌反应直至 TLC监测原 料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （4-苄基 -哌嗪 -1-基) - 吗啉 -1-基-甲酮-硼酸 （330mg， 浅黄色固体）， 产率： 23%， MS m/z(ESI): 334[M+1]。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (189mg， 0.540mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪小基) -吗啉小基 -甲酮 -硼酸 （150mg， 045mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲 酰胺（20ml， 0.65mol)，依次加入四三苯基膦钯（52mg， 0.045mmol)，碳酸钠溶液 (lmol/L， 3ml),氮气保护，加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml 水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 0(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) -吗啉 -4-基) -甲酮（II - 6) ( 15mg， 白色固体）， 产率： 6%。
MS m/z(ESI): 559[M+l] o
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.28-8.20(m,3H), 7.69(d,2H), 7.46-7.23(m,7H), 5.45(m，lH)， 5.05(t，lH)， 3.76(m,2H), 3.55(m,6H), 3.25-3.08(m,8H), 2,39(m, 4H)。
实施例 7: 制备化合物 II -7
Figure imgf000024_0001
第一步: 将四氢吡咯 （600mg， 8.436mmol) 溶解于 15ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加入 N，N-二异丙基乙胺（1.4ml， 8.436mmol)，将溶解于二氯甲烷（5ml)中的三光气（801mg， 2.70mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0±3°C， 反应 1小时， 0°C冰浴下加入 N-Boc哌嗪 (1.57g, 8.436mmol) 和 N，N-二异丙基乙胺 (1.4ml, 8.436mmol)， 室温下 搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 将粗品溶解于 20ml二氯甲烷中， 加入三氟乙酸 (10ml, 0.135mol) 室温下搅拌反应直至 TLC 监测原料反应完全， 减压浓縮， 加入饱 和碳酸钠溶液 （50ml*3) 洗涤， 用二氯甲烷 （50ml*5) 萃取， 减压浓縮， 用硅胶柱色 谱法纯化所得残留物， 得到： 四氢吡咯基哌嗪基脲（376mg， 淡黄色固体）， 产率： 24%。
MSm/z(ESI): 184[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 3.23(t,5H), 3.05(t,4H), 2.64(t,4H), 1.72(m, 4H)o 第二步：
将四氢吡咯基哌嗪基脲（370mg， 2.022mmol)和 4-甲酰苯硼酸（334mg， 2.224mmol) 溶解于 10ml四氢呋喃和 10ml甲醇中， 加入醋酸溶液（0.5ml， 8.75mmol)， 室温搅拌反 应 1 小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （l.lg， 5.055mmol)， 升温至 60°C搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （4-苄基- 哌嗪 -1-基) -四氢吡咯 -1-基 -甲酮 -硼酸 （210mg)， 产率： 33%。
Figure imgf000025_0001
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 7.99(s,2H), 7.74(d,2H), 7.25(d,2H), 3.47(s,2H)， 3.23(m,4H), 3.16(m,4H), 2.33(m,4H), 1.72(m，4H)。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (317mg， 0.906mmol) 和 (4-苄基-哌嗪小基)-四氢吡咯小基 -甲酮 -硼酸 （200mg， 0.604mmol) 溶解于 N， N-二 甲基甲酰胺 （5ml， 65mmol)， 依次加入四三苯基膦钯 （70mg， 0.0604mmol), 碳酸钠 溶液 (lmol/L， lml), 氮气保护， 加热至 85°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至 室温加入 100ml水洗涤， 用二氯甲烷（3*100ml)萃取， 有机相用饱和食盐水（100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： (S) -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌 嗪小基) -吡咯小基 -甲酮（Π- 7) (67mg， 白色固体）， 产率： 20% o
MSm/z(ESI):543[M+l]。
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.28-8.19(m,3H), 7.69(d,2H), 7.46-7.23(m,7H),
5.45(m，lH)， 5.05(t，lH)， 3.76(m,2H), 3.53(s,2H), 3.25-3.08(m,8H), 2,39(m, 4H)， 1.74(s, 4H)。
实施例 8: 制备化合物 II -8
第一步： 将四甲氧基哌啶 （500mg， 4.314mmol) 溶解于 10ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加 入 N，N-二异丙基乙胺 （0.72ml， 4.314mmol)， 将溶解于二氯甲烷 （5ml ) 中的三光气 ( 412mg， 1.389mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0 ± 3 °C， 反应 1 小时， 0 °C冰浴下加入 N-Boc 哌嗪 （809mg， 4.341mmol ) 和 N，N-二异丙基乙胺 （0.72ml， 4.341mmol)， 室温下搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 将粗品溶解于 20ml二氯甲烷中， 加入三氟乙酸 （10ml， 0.135mol) 室温下搅拌反应直至 TLC监测原 料反应完全， 减压浓縮， 加入饱和碳酸钠溶液 （50ml*3 ) 洗涤， 用二氯甲烷 （50ml*5 ) 萃取， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 4-甲氧基哌啶基哌嗪基脲 ( 414mg， 淡黄色固体）， 产率： 42%, MS m/z(ESI): 228[M+1]。
Figure imgf000026_0001
第二步：
将 4-甲氧基哌啶基哌嗪基脲 （414mg， 1.824mmol) 和 4-甲酰苯硼酸 （287mg， 1.915mmol)溶解于 5ml四氢呋喃和 5ml甲醇中， 加入醋酸溶液（0.2ml， 3.5mmol)， 室 温搅拌反应 1小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （580mg， 2.726mmol)， 升温至 60 °C搅拌 反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： (4-苄基 -哌嗪 -1-基) -4-甲氧基哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸（251mg， 浅黄色固体）， 产率： 38.1%， MS m/z(ESI): 362[M+1]。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (181mg， 0.520mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪 -1-基) -4-甲氧基哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸 （125mg， 0.346mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （20ml， 0.65mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （40mg， 0.035mmol)， 碳 酸钠溶液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷 却至室温加入 100ml水洗涤，用乙酸乙酯（ 100ml*2 )萃取，有机相用饱和食盐水（50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) -(4-甲氧基 -哌啶小基) -甲酮（Π - 8) ( 36mg， 淡黄色固体）， 产率： 17.7%。 MS m/z(ESI): 587[M+l] o
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.31-8.19(m,3H), 7.67(d,2H), 7.46-7.44(m,4H) 7.35-7.22(m,3H), 5.46(m，lH)， 5.06(t，lH)， 3.77(m,2H), 3.52(s,2H), 3.35(m, 7H), 3.20(s,3H) 2.89(m,2H), 2.44(m,4H), 1.81 (m ,2H) , 1.35 (m，2H)。
-9
Figure imgf000027_0001
室温下将化合物 Π -5 (lOOmg, 0.225mmol)溶解于 N，N-二甲基甲酰胺 （5ml) 中， 加入 4-溴代巴豆酸 （37.2mg， 0.225mmol) 和 N-(3-二甲氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺盐酸 盐 （43.0mg， 0.225mmol)， 室温搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 加 入四氢呋喃 (30ml， 0.37mol)和二甲胺 （0.5ml， 3.66mmol), 室温搅拌反应直至 TLC监 测原料反应完全， 加入乙酸乙酯 （200ml* l ) 萃取， 有机层用水 （50ml*3 ) 洗， 有机相 用无水硫酸镁干燥， 抽滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： -4- 二甲基氨基 -1-(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 - 1-基) -丁基 -2-烯小酮（Π - 9) (40mg， 灰白色固体）， 产率： 32%。
MS m/z(ESI):557[M+l]。
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.36-8.30(m,3H), 7.74(d,2H),7.53-7.29(m, 7H), 6.87(d,lH), 6.64(dd， 1H)， 5.52(m,lH), 5.12(t, 1H)， 3.83(m, 2H), 3.60(s,2H), 3.58(m,6H), 2.60(s,6H), 2.45(m, 4H)。
实施例 10: 制备化合物 II -10
Figure imgf000027_0002
第一步：
将哌啶 （lg， 11.752mmol)溶解于 20ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加入 N，N-二异 丙基乙胺（2ml， 11.752mmol),将溶解于二氯甲烷（ 10ml)中的三光气（ l.lg， 3.761mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0 ±3 °C， 反应 1小时， 0°C冰浴下加入 N-Boc哌嗪 (2.2g, 11.752mmol)和 N，N-二异丙基乙胺（2ml， 11.752mmol), 室温下搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 将粗品溶解于二氯甲烷（30ml) 中， 加入三氟乙酸 (20ml, 0.27mol) 室温下搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 加入饱和 碳酸钠溶液 （50ml*3 )洗涤， 用二氯甲烷 （50ml*5 )萃取， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物， 得到： 哌啶基哌嗪基脲 （1.25g， 淡黄色固体）， 产率： 36%。
MS m/z(ESI): 198[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 3.59(brs, 1H), 3.09(m,8H), 2.78(m, 4H), 1.48(m，6H)。 第二步：
将哌啶基哌嗪基脲 （1.25g， 6.336mmol) 禾 B 4-甲酰苯硼酸 （1.05g， 6.969mmol) 溶解于 15ml四氢呋喃和 15ml甲醇中， 加入醋酸溶液 （0.7ml， 12.67mmol)， 室温搅拌 反应 1.5小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （3.36g， 15.84mmol)， 升温至 60°C搅拌反应 直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （4- 苄基 -哌嗪 -1-基) -哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸 （1.25g， 浅黄色固体）， 产率： 60%。
MS m/z(ESI): 332[M+1]。
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 7.97 ( s,2H ) ,7.74(d,2H), 7.25(d,2H), 3.47(s,2H),
3.09(m.8H), 2.33(m, 4H)， 1.45(m，6H)。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (317mg， 0.906mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪小基) -哌啶小基 -甲酮 -硼酸 （200mg， 0.604mmol) 溶解于 N， N-二甲基 甲酰胺 ( 10ml, 0.325mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （70mg， 0.0604mmol)， 碳酸钠溶 液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室 温加入 100ml水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4 -[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 小基) -哌啶小基) -甲酮（Π - 10) ( 67mg， 类白色固体）， 产率： 20%。
MS m/z(ESI): 557[M+l] o
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.28(m, 3H), 7.68(d, 2H), 7.44(d, 4H)， 7.31-7.24(m, 3H), 5.45(m，lH)， 5.06(t，lH)， 3.80(m, 2H), 3.54(s,2H), 3.12(m, 8H)， 2.39(m, 4H)， 1.19(m, 6H)。
实施例 11: 制备化合物 II -11
第一步：
将 N-乙基哌嗪（lg， 8.77mmol)溶解于 15ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加入 N，N- 二异丙基乙胺 （1.5ml， 8.77mmol)， 将溶解于二氯甲烷 （10ml) 中的三光气 （833mg， 2.81mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0 ±3 °C， 反应 1小时， 0°C冰浴下加入 N-Boc哌嗪 （1.63g， 8.77mmol) 禾 B N，N-二异丙基乙胺 （1.5ml， 8.77mmol), 室温下搅 拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 将粗品溶解于二氯甲烷 （30ml) 中， 加入三氟乙酸 （10ml， 0.135mol) 室温下搅拌反应直至 TLC 监测原料反应完全， 减压 浓縮， 加入饱和碳酸钠溶液 （50ml*3 ) 洗涤， 用二氯甲烷 （50ml*5 ) 萃取， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： N-乙基哌嗪基哌嗪脲 （lg， 淡黄色液体）， 产 率： 34.97%, MS m/z(ESI): 227[M+1]。
Figure imgf000029_0001
第二步：
将 N-乙基哌嗪基哌嗪脲 （lg， 4.40mmol) 和 4-甲酰苯硼酸 （729mg， 4.86mmol) 溶解于 10ml四氢呋喃和 10ml甲醇中， 加入醋酸溶液 （0.7ml， 12.67mmol)， 室温搅拌 反应 1.5小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （2.33g， l lmmol), 升温至 60 °C搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （4-苄基- 哌嗪 -1-基) -N-乙基哌嗪 -1-基-甲酮-硼酸（125mg，浅黄色固体），产率： 8.0%， MS m/z(ESI): 361 [M+1]。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [2，3-d]嘧啶 -4-基胺 )-2-苯基 1-乙醇（181.8mg， 0.520mmol)和 (4-苄基 -哌嗪小基) -N-乙基哌嗪小基-甲酮-硼酸 （ 125mg， 0.346mmol ) 溶 解于 N， N-二甲基甲酰胺（20ml， 0.65mol)，依次加入四三苯基膦钯（40mg， 0.035mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然 冷却至室温加入 100ml 水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 ( 50ml*3 )洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物，得到： ¾H4 -[4-P-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] - 苄基 哌嗪小基) -N-乙基 -哌嗪小基) -甲酮（Π - 11) ( 120mg， 白色固体）， 产率： 59%。
MS m/z(ESI): 587[M+l] o
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 8.38(m,2H), 8.27(s,lH), 7.70(d,2H), 7.47(m,4H), 7.26(m,3H), 5.45(m，lH)， 5.13(t,lH), 3.80(m,2H), 3.60(s,2H), 3.40-3.05(m,14H), 2.43(m,4H)
Figure imgf000030_0001
实施例 12: 制备化合物 ΙΠ-1及化合物 IV-1
Figure imgf000030_0002
第一步：
其中 6-溴 -4-氯噻吩 [ 3，2-d] 嘧啶按照专利 WO 2009/007421所述方法制备。
室温下将化合物 6-溴 -4-氯噻吩 [3，2-d]嘧啶（2g， 8.01mmol)和 L-苯甘氨醇（ 1.65g， 12.02mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（25ml， 0.32mol)中，滴加 2.8ml三乙胺（2.03g， 20.025mmol)， 加热至 60°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温， 加入 100ml 水洗涤， 用二氯甲烷 （3* 100ml)萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2 )洗涤， 得到的 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得到： 化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4- 基胺) -2-苯基 1-乙醇 （1.7g， 淡黄色固体）， 产率： 61%。
MSm/z (ESI): 351 [M+l] o
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.39( s,lH ), 8.230 (d， 1H), 7.60(d, 1H), 7.46(m, 2H), 7.24
(m， 3H), 5.48(m， 1H)， 5.03(t,lH), 3.78(m，2H)。
第二步：
其中 (4-乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) -苯基]-甲酮的 制备方法同实施例 1的第一步。
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (1.2g， 3.43mmol) 和 (4-乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 （2.36g， 6.86mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（36ml， 0.465mol)，依次加入四三苯基膦钯（0.4g， 0.343mmol) , 碳酸钠溶液 (lmol/L, 7ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反 应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗涤， 用二氯甲烷 （3* 100ml) 萃取， 有机相用 饱和食盐水 （100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得 至 IJ : (S)- (4-乙基 -哌嗪 -1-基 )-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲 酮 (III- 1) ( 500mg， 黄色固体） 产率： 30% o MSm/z (ESI):487[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.42 ( s,lH)， 8.22 (d， 1H)， 7.89(d, 2H), 7.85(s, 1H)， 7.82 (m, 4H), 7.20-7.46(m,3H), 5.48(m, 1H), 5.00(t,lH), 3.83(m,2H), 3.40(m,4H), 2.45(m, 4H), 2.27(q, 2H), 0.99(t， 3H)。
第三步：
室温下将四氢铝锂 （75mg， 1.95mmol)和无水四氢呋喃 （5ml， 61.27mmol) 混合 搅拌， 向反应液中滴加 (4-乙基 -哌嗪 -1-基 )-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2，d] 嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮 （370mg， 0.78mmol) 的四氢呋喃 （ 10ml， 0.123mol) 溶液， 室 温搅拌反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下向反应液 中加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （50ml*2) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （50ml*3 ) 洗涤， 无水硫酸钠干燥。减压蒸出溶剂后用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到： S 2-{6-[4-(4- 乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇 (IV-1) ( 17mg， 淡 黄色固体）， 产率： 18.4%。
MSm/z (ESI):473[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37 ( s，lH)， 8.19 (d， 1H), 7.82(d, 2H), 7.79(s, 1H), 7.82
(m， 4H)， 7.20-7.46(m,3H), 5.47(m, 1H)， 5.00(t，lH)， 3.83(m,2H), 3.52(s,2H),2.40(brs, 8H)， 2.27(q, 2H), 0.98(t， 3H)。
实施例 13: 制备化合物 ΙΠ-2及化合物 IV-2
Figure imgf000031_0001
第一步：
(4-甲基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮的制备 方法同实施例 2的第一步。
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (200mg， 0.57mmol) 和 (4-甲基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) -苯基] -甲酮 （226mg， 0.684mmol)溶解于 N，N-二甲基甲酰胺（10ml，0.13mol)，依次加入四三苯基膦钯（66mg， 0.057mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L, 0.5ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料 反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗涤， 用二氯甲烷 （3* 100ml) 萃取， 有机相 用饱和食盐水 （100ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得至 IJ : 0{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 }-(4-甲基 -哌嗪 -1-基) - 甲酮 (III- 2) ( lOOmg, 黄色固体）， 产率： 37%
MS m/z (ESI):473[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.41 ( s,lH) , 8.30 (d, 1H), 7.87(d, 2H), 7.84(s, 1H), 7.50 (m， 4H)， 7.27-7.39(m,3H), 5.49(m， 1H), 5.10(t,lH), 3.83(s,2H),3.65-3.60(m, 4H)， 2.40(m, 4H), 2.25(s, 3H)。
第二步：
室温下将四氢铝锂 （20.14mg， 0.53mmol) 和无水四氢呋喃 （5ml， 61.27mmol) 混合搅拌， 向反应液中滴加化合物 ΙΠ-2的四氢呋喃 （10ml， 0.123mol)溶液， 室温搅拌 反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下向反应液中加入 20ml 水， 用乙酸乙酯 （50ml*2) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （50ml*3 ) 洗涤， 无水硫 酸钠干燥， 减压蒸出溶剂后用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （ -2-{6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 2-苯基 -乙醇 (IV- 2) ( 30mg， 淡黄色 固体）， 产率： 31%。
MSm/z (ESI):458[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.42 ( s,lH) , 8.31 (d, 1H), 7.87(d, 2H), 7.85(s, 1H), 7.50 (m， 4H)， 7.27-7.39(m,3H), 5.49(m， 1H), 5.10(t,lH), 3.78(m,2H), 3.63(s,2H),2.84-2.62(m, 4H)， 2.45(s, 3H), 2.52-2.56(m, 4H)。
实施例 14: 制备化合物 ΙΠ-3及化合物 IV-3
Figure imgf000032_0001
第一步: 其中，（4-环丙基羰基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] - 甲酮的制备方法同实施例 3的第一步。
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (600mg， 1.72mmol) 和 (4-环丙基羰基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) -苯基] -甲酮 ( 892mg， 2.32mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （10ml， 0.13mol)， 依次加入四三苯 基膦钯 （lOOmg, 0.086mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L, 2mL), 氮气保护， 加热至 85 °C直 至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗涤，用二氯甲烷（3*100ml) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2)洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮，用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到： - (4-环丙羰基 -哌嗪 -1-基 M4-[4-(2- 羟基 -1-苯基-乙胺) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮 (III-3) ( 862mg， 黄色固体）， 产 率： 95%。
MSm/z (ESI):528 [M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.39( s,lH), 8,17 (d, 1H), 7.84-7.78(m, 3H), 7.47-7.43(m, 4H)， 7.34-7.22(m,3H), 5.46(m， 1H), 5.00(t，lH)， 3.80-3.76 (m,2H), 3.61-3.50 (m， 8H)， 2.0(m, 1H), 0.70(m,4H) o
第二步:
室温下将四氢铝锂 （54mg， 1.423mmol)和无水四氢呋喃 （10ml， 0.123mol)混合 搅拌， 向反应液中滴加化合物 ΙΠ-3 OOOmg, 0.57mmol) 的四氢呋喃 （10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下 向反应液中加入 100ml水，用乙酸乙酯（100ml*2)萃取，再用饱和氯化钠溶液（50ml*3 ) 洗涤， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （ -2-{6-[4-(4-环丙基甲基 -哌嗪 -1-基甲 基) -苯基]—噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇 (IV-3) ( 5mg， 白色固体）， 产率： 1.76%。
MS m/z(ESI): 499[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.39( s,lH), 8,17 (d, 1H), 7.84-7.78(m, 3H), 7.47-7.43(m,
4H)， 7.34-7.22(m,3H), 5.46(m， 1H), 5.00(t，lH)， 3.81-3.76(m,2H), 3.55(brs,2H),2.50(m, 10H)
0.90(m， lH)，0.5(m，4H)。
实施例 15 : 制备化合物 ΙΠ-4及化合物 IV-4
H
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
第一步：
其中，（4-羟乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[ 1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 的制备方法同实施例 4的第一步。
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (340mg， 0.97mmol) 和 (4-羟乙基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[ 1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 （454mg， 1.26mmol )溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（ 10ml， 0.13mol )，依次加入四三苯基膦钯（ 112mg， 0.097mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L, lml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反 应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗涤， 用二氯甲烷 （3* 100ml ) 萃取， 有机相用 饱和食盐水 （100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用 硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： (S)- [4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基 ]- {4-[4-(2-羟基 -1- 苯基-乙胺) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮 (EI- 4) ( 45mg， 黄色固体）， 产率： 9.2%。
MS m/z (ESI):503 [M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.43 ( s, lH )， 8.21 (d, 1H)， 7.92 (m， 3H), 7.43(m, 4H)， 7.26(m,3H), 5.49(m， 1H)， 5.02(t，lH)， 3.83(m,4H), 3.56(s,2H), 3.10-3.01 (m, 6H)， 2.78(m, 第二步：
室温下将四氢铝锂 （41.8mg， l . lmmol) 和无水四氢呋喃 （10ml， 0.123mol ) 混合 搅拌， 向反应液中滴加化合物 III-4 ( 220mg， 0.44mmol) 的四氢呋喃 （10ml， 0.123mol ) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下 向反应液中加入 100ml水，用乙酸乙酯（100ml*2 )萃取，再用饱和氯化钠溶液（50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： f^-2-(6- {4-[4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基甲基]-苯基 噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基 氨基 2-苯基 -乙醇 CIV-4) ( 30mg， 淡黄色固体）， 产率： 14%。
MS m/z(ESI): 490[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37 ( s，lH ) , 8.20 (d, 1H), 7.90 (m, 3H), 7.45(m, 4H), 7.25(m,3H), 5.48(m， 1H)， 5.01(t，lH)， 3.85(m,4H), 3.58(s,2H), 3.10(m, 8H)， 2.80(m, 2H)。
实施例 16: 制备化合物 ΙΠ-5及化合物 IV-5
Figure imgf000035_0001
IV-5
第一步：
其中 6-溴 -4-氯呋喃 [ 3，2-d ] 嘧啶的合成参照 6-溴 -4-氯噻吩 [ 3，2-d ] 嘧啶及 WO2008/073785所述的制备方法。
室温下将化合物 6-溴 -4-氯呋喃 [3，2-d]嘧啶（lg， 4.29mmol)和 L-苯甘氨醇（0.83g， 6.06mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （25ml， 0.32mol) 中， 滴加 1.5ml三乙胺， 加 热至 60°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温， 加入 100ml水洗涤， 用二氯 甲烷 （3*80ml)萃取， 有机相用饱和食盐水 （80ml*2)洗涤， 得到的有机相用无水硫酸 镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得到： 2-(6-溴 -呋喃 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 （0.7g， 淡黄色固体）， 产率： 49%， MSm/z (ESI): 335[M+1] , 直接用于下一步反应。
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -呋喃 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (1.2g， 3.59mmol) 和 (4-乙基 -哌嗪 -1-基) -[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基)-苯基] -甲酮 （2.36g， 6.86mmol)溶解于 36ml N，N-二甲基甲酰胺，依次加入四三苯基膦钯（0.41g，0.359mmol)， 碳酸钠溶液 (lMol/L， 7ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然 冷却至室温加入 80ml水洗涤，用二氯甲烷（3*80ml)萃取，有机相用饱和食盐水（80ml*2) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得到： （4-乙基 -哌嗪 -1- 基) -{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-呋喃并 [3，2，d]嘧啶 -6-基] -苯基 } -甲酮 (ΙΠ- 5) (475mg， 黄色固体）， 产率： 28%。
MS m/z (ESI):472[M+l] o
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.40 ( s,lH)， 8.22 (d, 1H), 7.89(d, 2H), 7.48(s, 1H), 7.82 (m， 4H)， 7.20-7.46(m,3H), 5.48(m， 1H)， 5.01(t，lH)， 3.83(m,2H), 3.40(m,4H), 2.45(m, 4H)， 2.27(q, 2H), 1.03(t, 3H)。
第三步：
室温下将四氢铝锂 （75mg， 1.95mmol) 和 5mL无水四氢呋喃混合搅拌， 向反应 液中滴加化合物 III- 5 ( 355mg， 0.75mmol) 的四氢呋喃 （10mL， 0.123mol)溶液， 室温 搅拌反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下向反应液中 加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （50ml*2) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （50ml*3 ) 洗涤， 无 水硫酸钠干燥。 减压蒸出溶剂后用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （ -2-{6-[4-(4- 乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇 (IV-5) ( 48mg， 淡 黄色固体）， 产率： 14%。
MS m/z (ESI):458[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.38 ( s,lH)， 8.20 (d, 1H), 7.82(d, 2H), 7.47(s, 1H), 7.82 (m， 4H)， 7.23-7.47(m,3H), 5.46(m， 1H)， 5.01(t，lH)， 3.83(m,2H), 3.52(s,2H),2.40(brs, 8H)， 2.28(q, 2H), 0.99(t， 3H)。
实施例 17: 制备化合物 ΙΠ-6及化合物 IV-6
Figure imgf000036_0001
第一步:
室温下将化合物 2-(6-溴 -呋喃 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (198mg， 0.59mmol) 和 (4-甲基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) -苯基] -甲酮 （226mg， 0.684mmol ) 溶解于 10mL N， N-二甲基甲酰胺， 依次加入四三苯基膦钯 （66mg， 0.057mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L, 0.5ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料 反应完全， 自然冷却至室温加入 90ml水洗涤， 用二氯甲烷 （3*80ml) 萃取， 有机相用 饱和食盐水（80ml*2 )洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得到： 0-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 }-(4-甲基 -哌嗪 -1-基) -甲酮 (ΙΠ-6) ( 95mg， 黄色固体） 产率： 35.8%。
MS m/z (ESI):458[M+l
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.43 ( s,lH) , 8.30 (d, 1H), 7.88(d, 2H), 7.48(s, 1H), 7.50 (m， 4H)， 7.27-7.41(m,3H), 5.50(m， 1H), 5.03(t,lH), 3.83(s,2H),3.65-3.60(m, 4H)， 2.40(m, 4H)，2.27(s，3H)。
第二步:
室温下将四氢铝锂 （20.14mg， 0.53mmol ) 和无水四氢呋喃 （5ml， 61.27mmol ) 混合搅拌，向反应液中滴加化合物 III-6 ( 90mg， 0.19mmol)的四氢呋喃（10ml， 0.123mol) 溶液， 室温搅拌反应 1小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下 向反应液中加入 20ml水， 用乙酸乙酯 （40ml*2 )萃取， 再用饱和氯化钠溶液（40ml*3 ) 洗涤， 无水硫酸钠干燥。 减压蒸出溶剂后用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： -2- {6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基 -乙醇 (IV -6) ( 25mg， 淡黄色固体）， 产率： 28.7%。
MS m/z (ESI):444[M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.43 ( s, lH ) , 8.32 (d, 1H), 7.87(d, 2H), 7.49(s, 1H), 7.50 (m， 4H)， 7.27-7.39(m,3H), 5.49(m， 1H), 5.11(t,lH), 3.78(m,2H), 3.63(s,2H),2.84-2.62(m, 4H)， 2.47(s, 3H), 2.52-2.56(m, 4H)。
-7及化合物 IV-7
Figure imgf000037_0001
第一步:
室温下将化合物 2-(6-溴 -呋喃 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (290mg， 0.868mmol) 和 (4-环丙基羰基 -哌嗪 -1-基 )-[4-(4，4，5，5-四甲基 -[ 1，3，2]二氧硼戊环 -2-基) -苯基] -甲酮 ( 445mg， 1.16mmol )溶解于 5mL N，N-二甲基甲酰胺中，依次加入四三苯基膦钯（50mg， 0.043mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 2mL) , 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反 应完全， 自然冷却至室温加入 80mL水洗涤， 用二氯甲烷 （3 *80mL ) 萃取， 有机相用 饱和食盐水 （80ml*2 )洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅 胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： (S)- (4-环丙羰基 -哌嗪 -1-基 M4-[4-(2-羟基 -1-苯基- 乙胺) -呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮 (ΙΠ- 7) ( 350mg， 黄色固体）， 产率： 79%。
MS m/z (ESI):512 [M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.41 ( s，lH)， 8.19 (d, 1H), 7.86-7.75(m, 3H), 7.49-7.40(m,
4H)， 7.36-7.22(m,3H), 5.48(m， 1H), 5.01 (t，lH)， 3.80-3.78 (m,2H), 3.67-3.52 (m, 8H)， 2.01(m:
Figure imgf000037_0002
第二步:
室温下将四氢铝锂 （60mg， 1.578mmol ) 和 l OmL无水四氢呋喃混合搅拌， 向反 应液中滴加化合物 III-7 ( 290mg， 0.567mmol ) 的 10mL四氢呋喃溶液， 室温搅拌反应 1 小时， 升温至 55 °C反应直至 TLC监测原料反应完全， 0°C冰浴下向反应液中加入 80ml 水， 用乙酸乙酯 （90ml*2 ) 萃取， 再用饱和氯化钠溶液 （60ml*3 )洗涤， 用硅胶柱色谱 法纯化所得残留物， 得到： -2- {6-[4-(4-环丙甲基 -哌嗪 -1-甲基) -苯基] -呋喃并 [3，2-d]嘧 啶 -4-氨基 }-2-苯基 -乙醇 (IV- 7) ( 75mg， 白色固体）， 产率： 27.4%。
MS m/z(ESI): 484[M+1]。 1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37 ( s,lH), 8.17 (d, 1H), 7.83-7.78(m, 3H), 7.47-7.43(m 4H)， 7.34-7.19(m, 3H), 5.45(m， 1H), 5.02(t，lH)， 3.81-3.76(m,2H), 3.56(brs,2H), 2.59(m: 10H), 2.02(m, lH),0.68(m, 4H)。
实施例 19: 制备化合物 ΙΠ-8
Figure imgf000038_0001
第一步：
室温下将对羧基苯硼酸频哪醇酯 （2.8g， 11.3mmol ) 溶解于二氯甲烷 （27ml， 0.422mol) 禾 Β Ν,Ν-二甲基甲酰胺 （9ml， 0.116mol) 中， 加入 l-Boc-3-甲基哌嗪 （2.9g， 14.52mmol ) , 依次加入 1-乙基 -(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 （ 2.79g， 14.55mmol)， N-羟基苯并三氮唑 （1.98g， 14.66mmol)， 三乙胺 （2.5ml， 17.99mmol) , 室温搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 向反应液中加入 30ml水， 搅拌 30分钟， 用二氯甲烷 （100ml*3 )萃取， 再用饱和氯化钠溶液（100ml*2 )洗涤， 有机相用无水硫 酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 得到： 苯硼酸频哪醇酯 （4.1g， 白色固体）， 产率 85.4%。
MS m/z(ESI):431 [M+l]。
1HNMR(400Hz , DMSO-d6)： 7.79(d,2H), 7.43(d,2H), 3.79(m,3H), 3.36(m, 4H)， 1.52(s,9H), 1.40(s,12H), 1.18(d，3H)。
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (700mg， 2.0mmol) 和上一步所得的苯硼酸频哪醇酯（1290mg， 3.0mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（ 10ml， 0.129mol ) , 依次加入四三苯基膦钯 （115mg， O. lmmol) , 碳酸钠溶液 (lmol/L， 2ml), 氮气保护，加热至 80°C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入水（100ml*3 ) 洗涤， 用乙酸乙酯 （250ml*l ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2)洗涤， 得到的有 机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： -4-(4-(4-(-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯甲酰 )-3-甲基哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 (ΙΠ-8) (900mg， 淡黄色固体）， 产率： 78%
MS m/z(ESI): 574[M+l
1HNMR(400Hz , DMSO-d6)： 8.39(s,lH), 8.24(d,lH), 7.92(m, 3H), 7.54(d,2H), 7.45(d,2H), 7.25(m, 3H), 5.46(m,lH), 4.99(t,lH), 3.82(m,2H), 3.20-2.90(m,7H), 1.42(s,9H), 1.16(d，3H)。
实施例 20: 制备化合物 ΙΠ-9
Figure imgf000039_0001
室温下将 -4-(4-(4-(-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯甲酰 )-3-甲基哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 (ΙΠ-8) ( 900mg， 1.57mmol) 溶解于二氯甲烷 ( 10ml, 0.156mol) 中， 加 入三氟乙酸 （2.4ml， 31.4mmol)， 室温下搅拌至 TLC 监测原料反应完全， 减压浓縮， 用饱和碳酸氢钠溶液稀释中和，用二氯甲烷萃取（50ml*3 )有机层用饱和食盐水（50ml*3 ) 洗涤， 减压浓縮， 刮大板， 得到： ¾H4- K-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯 基) (2-甲基哌嗪 -1-基)甲酮 (ΙΠ-9) ( 550mg， 白色固体）， 产率： 74%。
MS m/z(ESI): 474[M+l]。
1HNMR(400Hz , DMSO-d6)： 8.44(s,lH), 8.32(d,lH), 8.00(m， 3H), 7.65(d,2H), 7.49(d,2H), 7.34(m,3H), 5.51(m，lH)， 5.06(t，lH)， 3.84(m,2H), 3.44-3.08(m,7H), 1.41(d，3H)。
实施例 21 : 制备化合物化 IV-8
Figure imgf000039_0002
室温下将四氢铝锂 （132mg， 3.479mmol) 和无水四氢呋喃 （30ml， 0.369mol) 混 合搅拌， 向反应液中滴加 -(4-(4-(-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯基 )(2-甲 基哌嗪 -1-基）甲酮 (III-9) ( 550mg， 1.16mmol) 的四氢呋喃 （30ml， 0.369mol) 溶液， 室 温搅拌反应 1小时， 升温至 50°C反应直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温， 向反应液中加入 20ml水，用乙酸乙酯（100ml*3 )萃取，再用饱和氯化钠溶液（ 100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留 物， 得到： (S) -2- {6-[4-(2-甲基 -哌嗪 -1 -甲基) -苯基] -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-氨基 2-苯基 -乙醇 (IV- 8) ( 142mg, 类白色固体）， 产率： 26.7%。
MS m/z (ESI): 460[M+1]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37(s, lH), 8.34(d, lH), 7.83(m, 3H), 7.47(m,4H), 7.25(m, 3H), 5.44(m， 1H), 5.14(t, lH), 3.78(m,2H), 3.56(brs,2H), 3.44-3.08(m,7H), 1.32(d，3H)。
实施例 22: 制备化合物化 IV-9
Figure imgf000040_0001
其中，（4-苄基 -哌嗪 -1-基) -四氢吡咯 -1-基 -甲酮 -硼酸的制备方法同实施例 7中所述。 室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (174mg， 0.497mmol) 和 (4-苄基-哌嗪小基)-四氢吡咯小基 -甲酮 -硼酸 （105mg， 0.331mmol) 溶解于 N， N-二 甲基甲酰胺 （5ml， 65mmol)， 依次加入四三苯基膦钯 （38mg， 0.033mmol ) , 碳酸钠溶 液 (lmol/L， lml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室 温加入 100ml水洗涤， 用二氯甲烷 （3 * 100ml ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （100ml*2 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) -吡咯 -1-基 -甲酮 (IV- 9) ( 7mg， 白色固体）， 产率： 3.9% o
MS m/z(ESI): 543[M+l ]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.36(s, lH), 8.15(d，lH)， 7.83-7.77(m,3H), 7.47-7.42(m, 4H)， 7.24-7.21(m, 3H),5.44(m, 1H), 4.97(t, 1H), 3.75(m,2H), 3.54(s, 2H), 3.25-3.17(m, 8H)， 2.40-2.38(m,4H), 1.75(m，4H)。
实施例 23 : 制备化合物化 IV-10
Figure imgf000040_0002
其中， （4-苄基 -哌嗪 -1-基) -4-甲氧基哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸的制备方法同实施例 8中 所述。
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (181mg， 0.520mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪 -1-基) -4-甲氧基哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸 （125mg， 0.346mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺 （20ml， 0.65mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （40mg， 0.035mmol)， 碳 酸钠溶液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷 却至室温加入 100ml水洗涤，用乙酸乙酯（ 100ml*2 )萃取，有机相用饱和食盐水（50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) -(4-甲氧基 -哌啶 -1-基) -甲酮 (IV-10) (28mg， 白色固体）， 产率： 13.8%。
MS m/z (ESI): 587[M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37 ( s，lH ) ,8,18 (d, 1H), 7.84-7.79(m, 3H), 7.47-7.44 (m， 4H)， 7.32-7.22(m,3H), 5.45(m， 1H), 4.99(t，lH)， 3.81-3.72(m,2H), 3.52(s,2H), 3.37(s,lH), 3.35(s, 3H), 3.14(m, 4H)， 2.90(m,2H), 2.40(m,4H), 1.80(m, 2H), 1.36(m, 4H)。
实施例 24 : 制备化合物化 IV-11
Figure imgf000041_0001
其中， （4-苄基 -哌嗪 -1-基) -吗啉 -1-基 -甲酮 -硼酸的制备方法同实施例 6中所述。 室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (189mg， 0.540mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪小基) -吗啉小基 -甲酮 -硼酸 （150mg， 045mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲 酰胺（20ml， 0.65mol)，依次加入四三苯基膦钯（52mg， 0.045mmol)，碳酸钠溶液 (lmol/L， 3ml),氮气保护，加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml 水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 0(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 } -哌嗪 -1-基) -吗啉 -4-基) -甲酮 (IV-11) (25mg， 白色固体）， 产率： 14%。
MS m/z (ESI): 559[M+l]。
1HNMR(400Hz ， DMSO-d6) ： 8.37(s,lH), 8.21(d, 1H)，
7.84-7.79(m,3H),7.45-7.41(m,4H), 7.29-7.22(m,3H), 5.42(m,lH), 5.00(t， 1H), 3.78(m, 2H), 3.53(m. 6H)， 3.20-3.10(m, 8H)， 2.41-2.39(m, 4H)。 实施例 25: 制备化合物化 IV-12
Figure imgf000042_0001
其中 (4-苄基 -哌嗪 -1-基) -哌啶 -1-基 -甲酮 -硼酸的制备方法同实施例 10中所述。 室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (317mg， 0.906mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪小基) -哌啶小基 -甲酮 -硼酸 （200mg， 0.604mmol) 溶解于 N， N-二甲基 甲酰胺 ( 10ml, 0.325mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （70mg， 0.0604mmol)， 碳酸钠溶 液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室 温加入 100ml水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 小基) -哌啶小基) -甲酮 (IV- 12) ( 25mg， 类白色固体）， 产率： 7.5%。
MS m/z(ESI): 557[M+l] o
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.37(s,lH), 8.16(d,lH), 7.84-7.78(m, 3H), 7.47-7.22(m, 7H),5.45(m,lH), 4.97(t, 1H), 3.7(m,2H), 3.55(s, 2H), 3.11(m，8H)， 2.39(m,4H), 1.49(m, 6H)。
实施例 26: 制备化合物化 IV-13
Figure imgf000042_0002
其中 (4-苄基 -哌嗪 -1-基) -N-乙基哌嗪 -1-基-甲酮-硼酸制备方法同实施例 11中所述。 室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺 )-2-苯基 1-乙醇（181.8mg， 0.520mmol)和 (4-苄基 -哌嗪小基) -N-乙基哌嗪小基-甲酮-硼酸 （ 125mg， 0.346mmol ) 溶 解于 N， N-二甲基甲酰胺（20ml， 0.65mol)，依次加入四三苯基膦钯（40mg， 0.035mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然 冷却至室温加入 100ml 水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 ( 50ml*3 )洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法 纯化所得残留物，得到： ¾H4 -[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] - 苄基 哌嗪 -1-基) -N-乙基 -哌嗪 -1-基) -甲酮 (IV- 13) ( HOmg, 白色固体）， 产率： 54%。 MS m/z(ESI): 587[M+l] o
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.38(s,lH), 8.22(m,lH), 7.85(m,3H), 7.50(m,4H), 7.31(m: 3H), 5.47(m,lH), 5.00(m，lH)， 3.78(m,2H), 3.59(s,2H), 3.40-2.95(m,14H), 2.43(m,4H) 1.25(m,3H) o
实施例 27: 制备化合物化 IV-14
Figure imgf000043_0001
IV-14
第一步：
将 Ν-甲基哌嗪（1.5g， lOmmol)溶解于 15ml二氯甲烷中， 在 0°C冰浴下加入 N，N- 二异丙基乙胺 （1.65ml， lOmmol), 将溶解于二氯甲烷 （10ml) 中的三光气 （950mg， 3.2mmol) 缓慢滴加进去， 滴加过程温度保持在 0 ±3 °C， 反应 1 小时， 0°C冰浴下加入 N-Boc哌嗪 （1.9g， lOmmol) 和 N，N-二异丙基乙胺 （1.65ml， lOmmol), 室温下搅拌反 应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 将粗品溶解于二氯甲烷 （30ml) 中， 加入 三氟乙酸 （10ml， 0.135mol) 室温下搅拌反应直至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 加入饱和碳酸钠溶液 （50ml*3 )洗涤， 用二氯甲烷 （50ml*5 ) 萃取， 减压浓縮， 用硅胶 柱色谱法纯化所得残留物， 得到： N-甲基哌嗪基哌嗪脲 （2.3g， 淡黄色液体）， 产率： 50%。
MS m/z(ESI): 213[M+1]。
第二步：
将 N-甲基哌嗪基哌嗪脲（2.3g， 10.85mmol)和 4-甲酰苯硼酸 （1.9g， 11.93mmol) 溶解于 20ml四氢呋喃和 10ml甲醇中， 加入醋酸溶液 （1.2ml， 21.72mmol)， 室温搅拌 反应 1.5小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （5.8g， 27.12mmol)， 升温至 60°C搅拌反应直 至 TLC监测原料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： （4-苄 基 -哌嗪 -1-基) -N-甲基哌嗪 -1-基 -甲酮 -硼酸（l.lg， 白色固体），产率： 50%， MS m/z(ESI): 347[M+1]。 室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (195mg， 0.75mmol) 和 (4-苄基 -哌嗪小基) -N-甲基哌嗪小基 -甲酮 -硼酸 （174mg， 0.5mmol) 溶解于 N， N-二 甲基甲酰胺 （20ml， 0.65mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （58mg， 0.05mmol)， 碳酸钠溶 液 (lmol/L， 3ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室 温加入 100ml水洗涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： ¾H4 -[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 小基) -N-甲基 -哌嗪小基) -甲酮 (IV- 14) (28mg， 白色固体）， 产率： 10%。
MS m/z(ESI): 572[M+l] o
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 8.38(s,lH), 8.30(d,lH), 7.80(m,3H), 7.44(m,4H), 7.24(m,3H), 5.45(m，lH)， 5.10(m,lH), 3.78(m,2H), 3.60(s,2H), 3.52-3.18(m, 12H), 2.42(m，4H)，2.38(s，3H)。
实施例 28 : 制备化合物化 IV-15
Figure imgf000044_0001
第一步：
将 N-Boc哌嗪（5g， 26.8mmol)和 4-甲酰苯硼酸（2.68g， 17.9mmol)溶解于 15ml 四氢呋喃和 15ml甲醇中， 加入醋酸溶液 （6ml， 43.44mmol)， 室温搅拌反应 1.5小时， 加入三乙酰氧基硼氢化钠 （9.49g， 44.7mmol)， 升温至 60°C搅拌反应直至 TLC监测原 料反应完全， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 4-苄基 -哌嗪 -1-羧酸 叔丁酯 -硼酸 4.98g， 白色固体）， 产率： 87.4%， MS m/z(ESI): 321 [M+1] , 直接用于下 一步反应。
第二步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-基胺) -2-苯基 1-乙醇 (lg， 2.856mmol)和
4-苄基 -哌嗪 -1-羧酸叔丁酯 -硼酸（1.83g， 5.714mmol)溶解于 N， N-二甲基甲酰胺（30ml， 0.975mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （323mg， 0.28mmol)， 碳酸钠溶液 (lmol/L， 5ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至室温加入 100ml水洗 涤， 用乙酸乙酯 （100ml*2 ) 萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机 相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： 4-(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基 -乙基氨基-噻吩并 [3，2-d]-苄基 } -哌嗪 -1-羰基 -哌嗪 -1-羧酸叔丁 酉旨 ( l . l g, 白色固体）， 产率： 70.6%， MS m/z(ESI): 546[M+l
第三步：
将 4-(4- {4-[4-(2-羟基 -1 -苯基 -乙基氨基-噻吩并 [3，2-d]-苄基 } -哌嗪 -1 -羰基 -哌嗪 -1- 羧酸叔丁酯 （1.09g， 2mmol ) 溶解于四氢呋喃中， 加入三氟乙酸 （3ml， 40mmol)， 室 温搅拌 2小时， 用 400ml乙酸乙酯萃取， 有机相用饱和食盐水洗涤（100ml*2)， 得到的 有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物， 得到： (S)-2-苯基 -2-[6-(4-哌嗪 - 1 -基甲基-苯基)—噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基] -乙醇（ IV _15) ( 700mg， 淡黄色固体）， 产率： 78.6%。
MS m/z(ESI): 446[M+l
1HNMR(400Hz , DMSO-d6)： 8.39(s, lH), 8.18(d，lH)， 7.80(m, 3H), 7.43(m,4H),
7.27(m,2H), 7.22(m, lH), 5.45(m，lH)， 5.00(m，lH)， 3.83(m,2H), 3.51(s,2H), 2.71(m,4H), 2.27(m,4H
施例 29 : 制备化合物化 IV-16
Figure imgf000045_0001
IV-16
第一步：
室温下将 1-环丙甲酰基哌嗪 （2.37g， 15.37mmol ) 和对甲酰苯硼酸 （1.92g， 12.81mmol) 溶解于二氯甲烷中 （40ml)， 室温搅拌 1 小时， 再向里加入氰基硼氢化钠 ( 1.77g， 28.18mmol)， 室温搅拌至 TLC监测反应完全， 加水 20ml， 用二氯甲烷萃取， 再用饱和食盐水洗涤 2次， 有机相用无水硫酸镁干燥， 减压浓縮， 得到： （4-苄基硼酸- 哌嗪 -1-基) -环丙基-甲酮， （1.6g， 白色固体）， 产率： 43.4%， 直接用于下一步反应。
第二步： 其中 6-溴 -4-氯 -2-甲基 -噻吩 [3，2-d]嘧啶可参考专利 WO 2009/007421 及 WO2008/058285所述方法制备。
室温下将 6-溴 -4-氯 -2-甲基 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 （830mg， 3.15mmol) 禾卩 L-苯甘氨醇 ( 648mg， 4.725mmol) 溶解于 N， N-二甲基甲酰胺中 （10ml)， 滴加三乙胺 （l.lml, 7.875mol)， 加热至 55 °C， 反应 24小时， 自然冷却， 加入 40ml冰水， 减压抽滤， 滤饼 用 10ml水打浆后减压抽滤， 再用 10ml正己烷打浆， 减压抽滤， 得到： 2-(6-溴 -2-甲基- 噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-氨基 2-苯基 -乙醇 （780mg， 淡黄色固体）， 产率： 71%。
MS m/z (ESI):365[M+l]。
1HNMR(400Hz, DMSO-d6): 8.12(d, 1H)， 7.46(m, 3H), 7.29-7.19(m, 3H), 5.45(m， 1H) 4.98(t，lH)， 3,75(m, 2H), 2.38(s, 3H)。
第三步：
室温下将化合物 2-(6-溴 -2-甲基 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-氨基) -2-苯基 -乙醇 （364mg， l .Ommol)和 (4-苄基硼酸 -哌嗪 -1-基)-环丙基 -甲酮 （576mg， 2.0mmol)溶解于 N， N-二甲 基甲酰胺 （10ml， 0.325mol)， 依次加入四三苯基膦钯 （70mg， 0.0604mmol), 碳酸钠 溶液 (lmol/L， 2ml), 氮气保护， 加热至 85 °C直至 TLC监测原料反应完全， 自然冷却至 室温加入 100ml水洗涤， 用乙酸乙酯（100ml*2)萃取， 有机相用饱和食盐水 （50ml*3 ) 洗涤， 得到的有机相用无水硫酸镁干燥， 过滤， 减压浓縮， 用硅胶柱色谱法纯化所得残 留物， 得到： O环丙基 -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -2-甲基 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯 基 哌嗪 -1—基) -甲酮 (IV- 16) ( HOmg, 白色固体）， 产率： 21%。
MS m/z(ESI): 528[M+l]。
1HNMR(400Hz， DMSO-d6)： 8.05(d，lH)， 7.81(d,2H), 7.70(s,lH), 7.46(m,5H), 7.31-7.21(m, 3H), 5.52(m, 1H), 4.99(m， 1H), 3.80(m, 2H), 3.68(s, 2H), 3.56(m, 4H)， 2.52(s, 3H), 2.4 l(m, 4H)， 1.96(m,lH), 0.73(m, 4H)。
生物学评价
1.受体酪氨酸激酶 EGFR、 VEGFR分子水平酶活抑制初步评价
(1) 酶反应底物 PolyCGlu, Tyr)4: l 用无钾离子的 PBSClOmM 磷酸钠缓冲液， 150mmol/L NaCl， pH=7.2〜7.4)稀释成 2(^g/ml、 125μ1/孔包被酶标板，置 37°C反应 12〜16 小时， 弃去孔中液体， 洗板， 用 200μ1/孔的 T-PBS (；含 0.1% Tween-20的无钾离子的 PBS) 洗板三次， 每次 5分钟； 于 37°C烘箱中干燥酶标板 1〜2小时。
(2) 每孔加入用反应缓冲液 (50 mmol/L HEPES H 7.4， 50 mmol/L MgCl2， 0.5 mmol/L MnCl2， 0.2 mmol/L Na3V04， 1 mmol/L DTT)稀释的 ATP溶液 50μΙ^， 终浓度 5 mol/L。每孔中加入 1 μΐ的化合物溶液 (；1% DMSO溶解， 终浓度为 l(^mol/L)， 再加入 50μ1用反应缓冲液稀释的 c-Met酪氨酸激酶蛋白； 置 37°C摇床 (lOOrpm)反应 1小时； 每 次实验设无 ATP对照孔两孔及相应 DMSO溶剂对照孔 (阴性对照孔)； 弃去孔中液体， T-PBS洗板三次。
(3) 加入抗体 PY99 ΙΟΟμΙ/孔（抗体用含 BSA 5mg/ml 的 T-PBS 稀释， 浓度为 0.4μ§/ηι1), 37°C摇床反应 0.5小时； 弃去孔中液体， T-PBS洗板三次。
(4) 加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗 ΙΟΟμΙ/孔 (抗体用含 BSA 5mg/ml 的 T-PBS稀释， 浓度为 0.5 g/ml)， 37°C摇床反应 0.5小时， 弃去孔中液体， T-PBS洗板三 次。
(5) 加入 2mg/ml的 OPD显色液 ΙΟΟμΙ/孔 (用含有 0.03%Η2Ο2的 0.1M柠檬酸一柠 檬酸钠缓冲液 (ρΗ=5.4)稀释)， 25 °C避光反应 1〜10分钟； （OPD溶解时需用超声， 显色液 需现配现用）。
(6) 加入 2mol/L H2S04 5(^l/孔中止反应， 用可调波长式微孔板酶标仪 VERSAmax 读数， 波长为 490nm。
(7) 样品的抑制率通过下列公式求得：
化合物 OD值 -无酶对照孔 OD值
的抑制率 （％) 0 x 100
阴性对照孔 OD值 -无酶对照孔 OD值
测试结果见表 2所示。
2、 受体酪氨酸激酶 EGFR、 VEGFR酶活抑制 IC50评价实验
将上述筛选得到的明确具有 EGFR或 VEGFR酶活抑制作用的化合物 (化合物在 10"5M对受体酪氨酸激酶 EGFR或 VEGFR的抑制率>50 %)配成梯度浓度，进行 IC5。 评 价。用四参数法计算各化合物分子水平抑制蛋白酪氨酸激酶的 ic5。值，结果见表 1所示。
表 2实施例化合物对酪氨酸激酶 EGFR和 VEGFR的酶活抑制实验结果
10μΜ抑制率 (％) IC50值 (μΜ)
化合物
EGFR VEGFR EGFR VEGFR
1 -1 86 50 0.9 〉5
1 -2 73 20 > 1 一
1 -3 79 22 > 1 一
1 -4 56 18 〉5 一
1 -5 77 21 > 1 一
II -1 90 43 0.7 一
II -2 83 14 > 1 一
II -3 81 30 > 1 一
II -4 86 53 0.6 一
II -5 90 46 0.6 一 II -6 76 29 > 1 一
II -7 77 35 > 1 一
II -8 83 42 > 1 一
II -9 68 36 〉5 一
II -10 76 23 > 1 一
II -11 87 18 > 1 一
ΙΠ- 1 91 61 0.3 0.6
ΙΠ- 2 91 79 0.6 0.7
ΙΠ- 3 91 84 0.4 0.5
ΙΠ- 4 97 82 0.6 > 1
ΙΠ- 5 98 87 0.4 0.4
ΙΠ- 6 90 86 0.4 0.5
ΙΠ- 7 92 85 0.3 0.4
ΙΠ- 8 97 76 0.5 0.4
ΙΠ- 9 92 83 0.1 > 1
IV- 1 92 69 0.3 0.7
IV- 2 93 87 0.3 0.8
IV- 3 98 84 0.2 0.6
IV- 4 91 87 0.3 > 1
IV- 5 95 67 0.5 0.4
IV- 6 87 54 0.4 > 1
IV- 7 89 65 0.5 > 1
IV- 8 89 64 0.5 > 1
IV- 9 45 23 〉10 〉10
IV- 10 34 47 〉10 〉10
IV- 11 89 87 0.7 0.6
IV- 12 21 46 一 〉10
IV- 13 18 34 一 〉10
IV- 14 49 27 〉10 〉10
IV- 15 53 29 〉10 〉10
IV- 16 55 35 〉10 〉10
Gefetinib 67.4 Gefetinib AEE788 (Ο.ΙμΜ) 0.38 0.003 由表 2可见： 本发明所述的噻吩并嘧啶和呋喃并嘧啶类衍生物中大部分化合物对 表皮生长因子受体 EGFR具有明显的抑制活性，部分化合物对血管生成因子受体 VEGFR 具有良好的抑制作用，还有部分化合物并对表皮生长因子受体 EGFR和血管生成因子受 体 VEGFR均具有良好的抑制作用； 且具有并 [3，2-d]嘧啶骨架的化合物活性明显优于具 有并 [2，3-d]嘧啶骨架的化合物活性； 哌嗪环上的取代基活性优劣顺序大致可以排列为： 环丙基 > 甲基 > 2-羟乙基 > 乙基 > 脲； 具有并 [3，2-d]嘧啶骨架的大部分化合物的 EGFR抑制活性与对照药物吉非替尼 Gefitinib相当或更好， 尤其是化合物 III-9和 IV-3， 其半数抑制浓度 IC5。值分别为 193nM和 118nM， 比阳性对照药物吉非替尼好， 值得进 一步开发； 化合物 III- 2， ΙΠ-3, 111-8， IV- 1， IV- 2， IV- 3， IV- 11 还具有明显 VEGFR 抑制活性， 其半数抑制浓度 IC5。低于 1微摩尔， 具有药用前景。

Claims

权 利 要 求
1. 一种式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 药 学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，
Figure imgf000050_0001
式中， R选自： 氢、 d-6的烷基或取代的烷基、 d-6的烷基酰基、 C3-6的环烷基酰基、 C2-6的烯烃酰基或取代的烯烃酰基、 芳基酰基或取代的芳基酰基、 磺酰基、 酰胺基或取 代的酰胺基、 逆向酰胺基或取代的逆向酰胺基、 c2-8的烷氧基酰基；
R3为氢、 d-6的烷基或取代的^-6的烷基；
Z为氮或 CH;
R1为 -CH2-或 -C(=0)-;
Ar选自： C6_2。的芳基或取代的 C6_2。的芳基， 或 C4_2。的杂芳基或取代的 C4_2。的杂芳 基；
Q为 ― 'N R2
Figure imgf000050_0002
X为氧或硫， R2为氢或 d-6烷基或取代的
Cl-6院基；
Ar2选自： C6_2。的芳基或取代的 C6_2。的芳基， 或 C4_2。的杂芳基或取代的 C4_2。的杂芳 基。
在 为：
Figure imgf000050_0003
上述通式中：
X为氧或硫； Z为氮或碳；
R为氢、 含 1〜6个碳原子的烷基或取代的烷基、 含 1〜6个碳原子的烷基酰基、 含 3〜6个碳原子的环烷基酰基、 含 2〜6个碳原子的烯烃酰基或取代的烯烃酰基、 芳基酰基 或取代的芳基酰基、 磺酰基、 酰胺基或取代的酰胺基、 逆向酰胺基或取代的逆向酰胺基 中的任意一种；
Ar1为苯基、 2或 3-氟取代苯基、 2或 3-三氟甲基取代苯基、 2或 3-氯取代苯基、 2 或 3-腈基取代苯基、
2-或 3-C 3烷基取代苯基、 噻吩基、 3-C 3烷基取代的噻吩基、 呋 喃基、 3-C 3烷基取代的呋喃基、 2或 3-吡啶基中的任意一种；
Ar2为苯基、 卤素取代的苯基、 d-6烷基取代的苯基、联苯基、 卤素取代的联苯基、 萘基、 吡啶基、 噻吩基、 卤素取代的噻吩基、 d-3烷基取代的噻吩基、 呋喃基、 卤素取 代的呋喃基、 d-3烷基取代的呋喃基中的任意一种。
3. 如权利要求 1所述的式 V化合物， 其特征在于， R为氢、 含 1〜6个碳原子的烷 基或取代的烷基、 含 1〜6个碳原子的烷基酰基、 含 3〜6个碳原子的环烷基酰基、 含 2〜6 个碳原子的烯烃酰基或取代的烯烃酰基、 酰胺基或取代的酰胺基中的任意一种；
Ar1为苯基、 2或 3-氟取代苯基、 2或 3-三氟甲基取代苯基、 2或 3-氯取代苯基、 2 或 3-腈基取代苯基、 2-或 3-d-3烷基取代苯基中的任意一种；
八 为苯基、 卤素取代的苯基、 d-6烷基取代的苯基、 联苯基、 卤素取代的联苯基、 萘基中的任意一种。
4. 如权利要求 1所述的式 V化合物， 其特征在于， 所述式 V化合物为：
0(4-乙基 -哌嗪 -1-基 )- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮、
0- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基]-苯基 (4-甲基 -哌嗪 -1-基) - 甲酮、
(S)-(A-环丙基甲基 -哌嗪 -1-基)- {4-[4-(2-羟基 - 1 -苯基-乙胺) -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6- 基] -苯基 }-甲酮、
f¾H4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基] - {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6- 基] -苯基 }-甲酮、
- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苯基 哌嗪 -1-基-甲酮、 0-2- {6-[4-(4-乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
(S -2- {6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
(S -2- {6-[4-(4-环丙基甲基 -哌嗪 -1 -基甲基) -苯基] -噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基 2- 苯基-乙醇、 (S)-2-(6- {4-[4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基甲基] -苯基 噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨 基}-2-苯基-乙醇、
苯基 -2-[6-(4-哌嗪 -1-基甲基-苯基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -4-基氨基]-乙醇、 -(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 吗啉 -4-基)-甲酮、
-(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 吡咯 -1-基-甲酮、
-(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 } -哌嗪 -1- 基 )-(4-甲氧基 -哌啶 -1-基)-甲酮、
二甲基氨基 -1 -(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄 基 哌嗪- i -基) -丁基 -2—烯- i -酮、
-(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 哌啶 -1-基)-甲酮、
-(4- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 } -哌嗪 -1- 基) -N-乙基 -哌嗪 -1-基)-甲酮、
(S)- (4-乙基 -哌嗪 -1-基 )- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲酮、
- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 }-(4-甲基 -哌嗪 -1-基) - 甲酮、
-(4-环丙羰基 -哌嗪 -1-基) - {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] - 苯基 甲酮、
f¾H4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 -1-基] - {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6- 基] -苯基 }-甲酮、
0(4-乙基 -哌嗪 -1-基) - {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -呋喃 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 甲 酮、
- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺)-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 }-(4-甲基 -哌嗪 -1-基) - 甲酮、
-(4-环丙羰基 -哌嗪 -1-基 )- {4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -6-基 ]- 苯基 甲酮、
0-4-(4-(4-(-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯甲酰 )-3-甲基哌嗪 -1-羧酸叔 丁酯、
0(4-(4-(-2-羟基 -1-苯乙胺) -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基)苯基) (2-甲基哌嗪 -1-基)甲酮、 0-2-{6-[4-(4-乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
-2-{6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
-2-{6-[4-(4-环丙基甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基] -噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2- 苯基-乙醇、
(S)-2-(6- {4-[4-(2-羟基-乙基) -哌嗪 - 1 -基甲基] -苯基 噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨 基}-2-苯基-乙醇、
-2-{6-[4-(4-乙基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
-2-{6-[4-(4-甲基 -哌嗪 -1-基甲基) -苯基]-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基 }-2-苯基-乙 醇、
-2-{6-[4-(4-环丙甲基 -哌嗪 -1-甲基) -苯基]-呋喃并 [3，2-d]嘧啶 -4-氨基 2-苯基-乙 醇、
0-2-{6-[4-(2-甲基 -哌嗪 -1-甲基)-苯基] -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -4-氨基 2-苯基-乙醇、 -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 吡咯 -1-基-甲酮、
(S)-(A- {4-[4-(2-羟基 - 1 -苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 - 1 - 基 )-(4-甲氧基 -哌啶 -1-基)-甲酮、
f¾H4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 吗啉—4-基)—甲酮、
-(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 -1-基) - 哌啶 -1-基)-甲酮、
(S)-(A- {4-[4-(2-羟基 - 1 -苯基-乙基氨基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苄基 哌嗪 - 1 - 基) -N-乙基 -哌嗪 -1-基)-甲酮、
-(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-噻吩并 [2，3-d]嘧啶 -6-基] -苄基 } -哌嗪 -1- 基) 甲基-哌嗪小基)—甲酮、
苯基 -2-[6-(4-哌嗪 -1-基甲基-苯基)-噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氨基]-乙醇、 或 O环丙基 -(4-{4-[4-(2-羟基 -1-苯基-乙胺) -2-甲基 -噻吩 [3，2-d]嘧啶 -6-基] -苯基 哌嗪 -1- 基) -甲酮。
5. 如权利要求 1〜4中任一项所述的式 V化合物或其药学上可接受的盐，其特征在 于， 所述药学上可接受的盐为无机盐、 有机盐或其组合， 所述无机酸盐为盐酸盐、 氢溴 酸盐、 硝酸盐、 硫酸盐、 或磷酸盐中的任意一种或几种； 所述有机盐为烷基磺酸盐、 芳 基磺酸盐、 甲酸盐、 乙酸盐、 丙酸盐、 苯甲酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 琥珀酸盐、 酒 石酸盐、 或柠檬酸盐中的任意一种或几种。
6. 如权利要求 1〜4中任一项所述的式 V化合物或其药学上可接受的溶剂合物，其 特征在于， 所述药学上可接受的溶剂合物是指式 V化合物与水、 乙醇、 异丙醇、 ***、 丙酮中的任意一种或几种溶剂形成的溶剂合物。
7. —种式 V化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括式 VI化合物与式 VII 化合物反应获得式 V化合物的步骤，
Figure imgf000054_0001
VI VI] V 4为羟基或 C1-C6烷氧基;
Figure imgf000054_0002
， R5为 F、 Cl、 Br、 I；
R、 Z、 R3、 R X、 R2、 Ar和 Ar2的定义如权利要求 1中所述。
8. 如权利要求 7所述的方法， 其特征在于， 所述方法包括如下步骤③或步骤①和
\：/：一 ③或步骤②和③或步骤①〜③：
Figure imgf000054_0003
或者所述方法包括如下步骤⑤或步骤②和⑤或步骤④和⑤或步骤②及④和⑤:
Figure imgf000055_0001
或者所述方法包括如下步骤⑦或步骤①和⑦或步骤⑥和⑦或步骤①及⑥和⑦:
Figure imgf000055_0002
:
Figure imgf000055_0003
各式中， R、 Z、 Ar1和 Ar2的定义如权利要求 2所述。
9. 一种权利要求 1〜4任一项所述的式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对 映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物的用途， 其特 征在于， 用于制备酪氨酸激酶抑制剂， 较佳地， 用于制备 EGFR和 /或 VEGFR抑制剂。
10. 如权利要求 9 所述的用途， 其特征在于， 所述用于制备酪氨酸激酶抑制剂是 指用于制备：
(i) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关疾 病的药物；
(ii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的细胞异常增殖、 形态变化、 运动功能亢进、 血管新生及肿瘤转移疾病的药物； 或 (iii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的肿瘤生长和转移的药物。
11. 一种酪氨酸激酶抑制剂， 其特征在于， 由权利要求 1〜4任一项所述的式 V化 合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或 药学上可接受的溶剂合物中的任意一种或几种的混合物制备得到。
12. 如权利要求 11所述的酪氨酸激酶抑制剂， 其特征在于， 所述酪氨酸激酶抑制 剂是指 EGFR和 /或 VEGFR抑制剂。
13. 如权利要求 11或 12所述的酪氨酸激酶抑制剂的用途，其特征在于，用于制备：
(i) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关疾 病的药物；
(ii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的细胞异常增殖、 形态变化、 运动功能亢进、 血管新生及肿瘤转移疾病的药物； 或
(iii) 预防或治疗与表皮生长因子受体 EGFR和 /或血管生长因子受体 VEGFR相关 的肿瘤生长和转移的药物。
14. 一种药物组合物， 其特征在于， 所述组合物包含药学上可接受的载体， 和 权利要求 1〜4任一项所述的式 V化合物、 或其互变异构体、 外消旋体、 对映异构 体、 非对映异构体、 药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物。
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