UA119581C2 - ТОЗИЛАТНА СІЛЬ N-[3-[(4aR,7aS)-2-АМІНО-6-(5-ФТОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)-4,4a,5,7-ТЕТРАГІДРОПІРОЛ[3,4-d][1,3]ТІАЗИН-7a-ІЛ]-4-ФТОРФЕНІЛ]-5-МЕТОКСИПІРАЗИН-2-КАРБОКСАМІДУ - Google Patents

ТОЗИЛАТНА СІЛЬ N-[3-[(4aR,7aS)-2-АМІНО-6-(5-ФТОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)-4,4a,5,7-ТЕТРАГІДРОПІРОЛ[3,4-d][1,3]ТІАЗИН-7a-ІЛ]-4-ФТОРФЕНІЛ]-5-МЕТОКСИПІРАЗИН-2-КАРБОКСАМІДУ Download PDF

Info

Publication number
UA119581C2
UA119581C2 UAA201707108A UAA201707108A UA119581C2 UA 119581 C2 UA119581 C2 UA 119581C2 UA A201707108 A UAA201707108 A UA A201707108A UA A201707108 A UAA201707108 A UA A201707108A UA 119581 C2 UA119581 C2 UA 119581C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
fluorophenyl
mixture
solution
mmol
amino
Prior art date
Application number
UAA201707108A
Other languages
English (en)
Inventor
Дейвід Ендрю Коутс
Дэйвид Эндрю Коутс
Крейг Даніель Вулфейнджел
Крейг Даниель Вулфейнджел
Original Assignee
Елі Ліллі Енд Компані
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Елі Ліллі Енд Компані, Эли Лилли Энд Компани filed Critical Елі Ліллі Енд Компані
Publication of UA119581C2 publication Critical patent/UA119581C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Abstract

Цим винаходом запропонована тозилатна сіль N-[3-[(4aR,7aS)-2-aаміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропірол[3,4-d][1,3]тіазин-7а-іл]-4-фторфеніл]-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду.

Description

Цей винахід стосується солі толуолсульфокислоти (тозилатної солі) М-ІЗ-К4авВ, 7авб5)-2- аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4|11,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду, фармацевтичних композицій, що містять цю тозилатну сіль, способів застосування вказаної тозилатної солі для лікування фізіологічних розладів та проміжних хімічних сполук і способів, придатних для синтезу цієї сполуки.
Цей винахід стосується лікування хвороби Альцгеймера та інших захворювань і розладів, при яких у патологічних процесах бере участь В-амілоїдний (Абеїа) пептид, який є нейротоксичним і високоагрегаційним пептидним сегментом білка-попередника амілоїду (АРР).
Хвороба Альцгеймера являє собою руйнівний нейродегенеративний розлад, яким уражено мільйони пацієнтів у всьому світі. Приймаючи до уваги, що наявні у продажу схвалені лікарські засоби забезпечують лише тимчасові симптоматичні поліпшення для пацієнта, існує значна незадовільнена потреба в лікуванні хвороби Альцгеймера.
Хвороба Альцгеймера характеризується утворенням, агрегацією і осадженням бета- амілоїдного білка в головному мозку. Було показано, що повне або часткове інгібування р- секретази (фермент, який розщеплює ДВ-сайт білка-попередника амілоїду; ВАСЕ) вчиняє істотний вплив на обумовлені бляшками і залежні від бляшок патології на мишачих моделях, що дозволяє висунути припущення про те, що навіть незначне зниження рівня В-амілоїдного пептиду може призвести до довготривалого значного зниження навантаження бляшками і синаптичних дефіцитів із забезпеченням тим самим значних терапевтичних переваг, зокрема, при лікуванні хвороби Альцгеймера.
У патенті США Мо 8,841,293 розкриті деякі інгібітори ВАСЕ для лікування розладів, опосередкованих В-амілоїдним пептидом, таких як хвороба Альцгеймера, і, зокрема, розкритий, наприклад, інгібітор ВАСЕ М-(3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід і відповідна хлористоводнева сіль.
Бажаними є нові форми /М-ІЗ-К4аВ,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду, які забезпечили б покращену стабільність у твердому стані і хімічну стабільність для розширеного використання для приготування та виробництва фармацевтичних композицій. Відповідно, цим
Зо винаходом запропонована тозилатна сіль М-ІЗ-К(4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-941(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду.
Крім того, цим винаходом запропонована згадана тозилатна сіль М-ІЗ-(4анв,7ав5)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду у кристалічній формі. Цим винаходом також запропонована згадана тозилатна сіль М-ІЗ-КавВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,0" в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,6", 13,87 і 18,57, з допуском на кути дифракції 0,27.
Цим винаходом також запропонований спосіб лікування хвороби Альцгеймера у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду. Цим винаходом також запропонований спосіб лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу
Альцгеймера у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-ІЗ-К4ав, 7аб5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду. Цим винаходом також запропонований спосіб інгібування ВАСЕ у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-ІЗ-К4ав,7ав)-2- аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4|11,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду. Цим винаходом також запропонований спосіб інгібування
ВАСЕ-опосередкованого розщеплення білка-попередника амілоїду у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-|З3-
К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-411И1,3)гіазин-7а-іл|-4- фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду. Крім того, цим винаходом запропонований спосіб інгібування продукування бета-амілоїдного пептиду, що включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-І3-(4ав, 7аб5)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду. бо Крім того, цим винаходом запропонована тозилатна сіль М-ІЗ-К4ан,7ав5)-2-аміно-6-(5-
фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду для застосування в терапії, зокрема, для лікування хвороби
Альцгеймера або для лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу
Альцгеймера. Навіть більше того, цим винаходом запропоноване використання тозилатної солі
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4101,3)гіазин-7а-ілі|- 4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду для виготовлення лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера або для лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера.
Крім того, цим винаходом запропонований спосіб лікування хвороби Альцгеймера у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості тозилатної солі М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,07 в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,6", 13,87 ї 18,57, з допуском на кути дифракції 0,27. Цим винаходом також запропонована тозилатна сіль М-|3-
К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а, 5,7-тетрагідропіролІЗ3,4-4101,3)гіазин-7а-ілі|-4- фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,07 в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,6", 13,87 і 18,5", з допуском на кути дифракції 0,27, для застосування в терапії, зокрема, для лікування хвороби Альцгеймера або для лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера. Крім того, цим винаходом запропонована тозилатна сіль М-ІЗ-К4анв,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин- 2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролІ3,4-4|11,3|гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2- карбоксаміду, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,07 в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,67, 13,87 ії 18,57, з допуском на кути дифракції 0,2", для виготовлення лікарського засобу для лікування хвороби Альцгеймера або для лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера.
Далі, цим винаходом запропонована фармацевтична композиція, що містить згадану
Зо тозилатну сіль М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду з одним або декількома фармацевтично прийнятним(-ими) носієм(-ями), розчинником(-ами) або наповнювачем(-ами).
Цей винахід також охоплює нові проміжні хімічні сполуки і способи синтезу згаданої тозилатної солі М-ІЗ3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-411И1,3|гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду.
Помірне когнітивне порушення визначається як потенційна продромальна фаза деменції, обумовленої хворобою Альцгеймера, на основі клінічних проявів і прогресування захворювання у пацієнтів, які проявляють помірне когнітивне порушення, у деменцію при хворобі Альцгеймера з перебігом часу. (Могттів, еї а!., Агойп. Меигої., 58, 397-405 (2001); Реїегзеп, вї а!., Атсп. Меишгої., 56, 303-308 (1999)). Термін "запобігання прогресуванню помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера" охоплює уповільнення, припинення або звертання прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера у пацієнта.
У значенні, вживаному у цьому описі, терміни "лікування" або "лікувати" означають стримування, уповільнення, зупинку або звертання прогресування або тяжкості існуючого симптому або розладу.
У значенні, вживаному у цьому описі, термін "пацієнт" означає людину.
Термін "інгібування продукування рДВ-амілоїдного пептиду" означає зниження рівнів В- амілоїдного пептиду у пацієнта іп мімо.
У значенні, вживаному у цьому описі, термін "ефективна кількість" означає кількість або дозу сполуки за цим винаходом або її фармацевтично прийнятної солі, яка, при одноразовому або багаторазовому введенні пацієнту, забезпечує бажаний вплив на пацієнта при діагностуванні або лікуванні.
Ефективна кількість може бути легко визначена лікарем, який ставить діагноз, як фахівцем в цій галузі шляхом використання відомих методик і вивчення результатів, одержаних за аналогічних обставин. При визначенні ефективної кількості для пацієнта лікарем, який ставить діагноз, до уваги приймається низка факторів, в тому числі, але не обмежуючись ними: біологічний вид пацієнта; його розмір, вік і загальний стан здоров'я; конкретне наявне захворювання або розлад; ступінь ураження або тяжкість захворювання чи розладу; реакція індивідуального пацієнта; конкретна введена сполука; спосіб введення; характеристики 60 біодоступності введеного препарату; вибрана схема приймання лікарського засобу;
використання супутнього лікарського засобу; та інші відповідні обставини.
Сполуки за цим винаходом є в цілому ефективними в широкому діапазоні доз. Наприклад, добові дози зазвичай знаходяться в діапазоні від приблизно 0,01 мг/кг до приблизно 20 мг/кг ваги тіла. У деяких випадках рівні доз нижче нижньої межі вищевказаного діапазону можуть бути більш ніж достатніми, тоді як в інших випадках можуть бути використані ще більш високі дози з прийнятними побічними ефектами, і, відповідно, вищевказаний діапазон доз не призначений для обмеження обсягу цього винаходу будь-яким чином.
Сполукам за цим винаходом за варіантом, якому віддають перевагу, надають форму фармацевтичних композицій, які вводять будь-яким шляхом, який робить вказану сполуку біодоступною, у тому числі пероральним або парентеральним шляхами. За варіантом, якому віддають найбільшу перевагу, такі композиції призначені для перорального або черезшкірного введення, причому особлива перевага віддається пероральному введенню. Такі фармацевтичні композиції і способи їх одержання є добре відомими в цій галузі. (Дивись, наприклад,
Ветіпдіоюоп: Те Зсієпсе апа Ргасіїсе ої Рнаптасу (О.В. Тгоу, Еайог, 2151 Еайоп, І ірріпсоїї,
Матв 8 УМІКіпв, 2006).
Згадана тозилатна сіль М-(3-К4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду Є придатною, зокрема, для способів лікування за цим винаходом, але деяким формам віддається перевага. Далі наведений опис таких форм. Слід розуміти, що ці переваги є застосовними для фармацевтичних композицій, методів лікування, а також нових сполук за цим винаходом.
Особливу перевагу віддають кристалічній тозилатній солі М-ІЗ-(4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,07 в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,6", 13,87 і 18,5", з допуском на кути дифракції 0,27.
Фахівцю в цій галузі буде зрозуміло, що М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід може існувати в таутомерних формах, як показано на Схемі А. У разі будь-якого посилання в цьому описі на один з конкретних таутомерів М-(3-(4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-
Зо 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду слід розуміти, що ним охоплюються обидві таутомерні форми, і всі їх суміші.
СхемаА -М - 5 ко - ще
Е М й -59- кн; хм «кн
М
М са М 4 М ду чи і нНзасо М З
На додаток до цього, деякі проміжні хімічні сполуки, описані в наведених нижче схемах, можуть містити одну або декілька азотзахисних груп. Замінювана захисна група може бути однаковою або різною в кожному випадку, залежно від конкретних умов реакції і конкретного перетворення, яке має бути здійснено. Умови захисту і відщеплення захисних груп добре відомі фахівцю, і описані в літературі (дивись, наприклад, "сСгеепе5 Ргоїесіїме Сгоцр5 іп Огдапіс
Зупіпезів", ЕоиИп Еайіоп, Бу Реїег С.М. М/шв апа Тнеодога М. Стеепе, доп Уміеу апа 5опв, Іпс. 2007).
Деякі стереохімічні центри в наведених нижче схемах були залишені невизначеними, і деякі замісники були усунені заради ясності, що не є призначеним для будь-якого обмеження змісту цих схем. Крім того, окремі ізомери, енантіомери або діастереоїзомери можуть бути відокремлені або розділені пересічним фахівцем в цій галузі в будь-який придатний момент часу у процесі синтезу сполук за цим винаходом такими методами, як селективна кристалізація або хіральна хроматографія (дивись, наприклад, у. Уасдиев, еї аїЇ.,, "Епапітегв5, Касетаїгїев5, апа
Кезоїшіопе", Уопп Уміеу апа Зопв5, Іпс., 1981, та Е.І. Еїе! апа 5.Н. Уміеп, "Зегеоспетівігу ої
Огдапіс Сотроипав", М/Іеу-Іпіегзсіепсе, 1994). Позначення "ізомер 1" і "їізомер 2" означають сполуки, які елююються при застосуванні хіральної хроматографії першою та другою, відповідно, і, якщо хіральна хроматографія ініціюється на початку синтезу, те ж саме позначення застосовується до подальших проміжних хімічних сполук і прикладів.
Деякі абревіатури означають те, що наведено нижче: "ацетонітрил" означає АСМ; "АРР" означає білок-попередник амілоїда; "С5Е" означає цереброспінальну рідину; "ОСМ" означає дихлорметан; "БІРЕА" означає діізопропілетиламін, М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін або М, М- діізопропілетиламін; "ОМЕМ" означає модифіковане за способом Дульбекко середовище Ігла; "ОМЕ" означає диметилформамід; "ОМ5О" означає диметилсульфоксид; "ЕОСІ" означає 1-(3- диметиламінопропіл)-3З-етилкарбодіїміду гідрохлорид; "ее" означає енантіомерний надлишок; "ЕЮАс" означає етилацетат; "Ех" означає приклад; "Е12" означає середовище Нат Е12; "ЕВ5" означає ембріональну бичачу сироватку; "БКЕТ" означає флуоресцентне резонансне перенесення енергії; "НЕК" означає лінію клітин нирок людського зародку; "НОАс" означає оцтову кислоту; "НОВ означає /1-гідроксибензотриазол гідрат; "НРІС" означає високоефективну рідинну хроматографію; "ІСво" означає концентрацію агента, що спричинює 50 95 максимальної реакції інгібування, можливої для цього агента; "хв" означає хвилину або хвилини; "МТВЕ" означає метил-трет-бутиловий ефір; "РОАРР" означає тромбоцитарний білок- попередник амілоїда; "Ргер" означає препаративну методику; "КЕИ" означає відносну одиницю флуоресценції; "ЗСХ" означає сильний катіонний обмін; "Ки" означає час утримування; і "ТНЕ" означає тетрагідрофуран.
Фахівцю у цій галузі зрозуміло, що терміни "тозилат", "толуолсульфокислота", "п- толуолсульфокислота" і "4-метилбензилсульфокислота" означають сполуку наведеної нижче структури: 02:55:50 он
По суті, фахівцю у цій галузі зрозуміло, що посилання у цьому описі на будь- яку з наведених нижче назв: "тозилатна сіль М-(3-К4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІЗ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду"; "М-І3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід; толуолсульфокислота"; "М-І3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід; п-толуолсульфокислота"; і "М-І3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід; 4-метилбензолсульфокислота"; означає сіль наведеної нижче структури: ще в -0-
Х М мен, о Е су 0-550 он зом
Коо) .
Згадану тозилатну сіль М-(3-К4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду можна одержати із застосуванням різноманітних методів, відомих в цій галузі, деякі з яких проілюстровані наведеними нижче Препаративними методиками та Прикладами. Крім того, вільну основу і відповідну хлористоводневу сіль М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2- іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ|З,4-4)111,3|гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2- карбоксаміду пересічний фахівець у цій галузі техніки може одержати за описом, наведеним у патенті США Мо 8,841,293. Специфічні стадії синтезу для кожного з описаних шляхів можуть комбінуватись різними способами або поєднуватись зі стадіями з різних препаративних методик для одержання сполук за цим винаходом. Продукти кожної стадії можуть виділятись традиційними методами, добре відомими в цій галузі, в тому числі екстракцією, випарюванням, осадженням, хроматографією, фільтрацією, розтиранням або кристалізацією. Реактиви і вихідні матеріали є легкодоступними будь-якому фахівцю у цій галузі.
Препаративна методика 1 2-Бром-1-(5-бром-2-фторфеніл)етанон
ЕЕ жо со і
Вг
М-бромсукцинімід (984 г, 5,53 моль) порціями додають до розчину 1-(5-бром-2- фторфеніл)етанону (1000 г, 4,6 моль) і п-толуолсульфокислоти (1315 г, 7,64 моль) в ОСМ (7 л) при температурі 35 "С. Суміш перемішують, і нагрівають до температури 40 "С протягом 4 год.
Суміш охолоджують до температури 24 С, і додають 795 розчин МанНСОз (5 л). Шари розділяють, і органічний шар промивають 10 95 розчином Маг5Оз (5 л) і водою (5 л). Органічний шар концентрують до 2-3 об'ємів, і одержують вказану в заголовку сполуку, яку використовують без подальшого очищення.
Альтернативна Препаративна методика 1 1-(5-Бром-2-фторфеніл)етанон (80 г, 0,37 моль) розчиняють в ОСМ (800 мл), і охолоджують до температури 10 "С. Повільно, протягом 5 год., додають бром (63 г, 0,39 моль). Через 30 хв. додають додаткову кількість брому (3,5 г, 0,06 моль). Через 30 хв. суміш нагрівають до кімнатної температури, і органічний шар промивають сумішшю водного розчину Масі (500 мл) і водного розчину Мансоз (400 мл). Органічний шар послідовно промивають водним розчином МансСоз (400 мл), водним розчином Манзоз (2х400 мл) і водним розчином Масі. Органічний шар сушать (Ма2505), і концентрують до одержання залишку. Одержаний залишок розчиняють в суміші ОСМ (100 мл) і петролейного ефіру (500 мл). Одержаний розчин охолоджують до температури -50 С протягом 0,5 год., тверду речовину відфільтровують, і одержують вказану в заголовку сполуку (84 г, 77 ув). "Н ЯМР (СОСІз) б 4,46 (а, 2Н), 7,07 (ай, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 8,02 (ай, 1Н).
Препаративна методика 2 2--Аліл(бензил)аміно!|-1-(5-бром-2-фторфеніл)етанон
ЕЕ ОО ро с
Ве 2-Бром-1-(5-бром-2-фторфенілуетанон (25,1 г, 84,8 ммоль) додають до розчину М- бензилпроп-2-ен-1-аміну (15,0 г, 102 ммоль) в толуолі (200 мл) і ОІРЕА (59 мл, 338 ммоль) при кімнатній температурі. Суміш дезоксигенують шляхом перемішування при кімнатній температурі протягом 10 хв. з одночасним підповерхневим барботуванням азоту крізь цю суміш. Реакційну суміш нагрівають до температури 40 "С, перемішують протягом 2,5 год., після чого додають додаткову кількість М-бензилпроп-2-ен-1-аміну (2,0 г, 13,6 ммоль). Реакційну суміш перемішують при температурі 40 "С протягом 4,5 год., після чого охолоджують до кімнатної температури.
Зо Матеріал використовують без подальшого очищення. Для одержання вказаної в заголовку сполуки розчин розкладають на складові частини високоефективною рідинною хроматографією із застосуванням таких параметрів: колонка для рідинної хроматографії: М/агег Асдийу ОКга
Паша Спготаїодгарну (ОРІ СУ) С 82,1х100 мм, 1,7 мкм; рухома фаза А: 0,1 95 (об'ємн.) розчин
ТЕА у воді ж 0,2 95 розчин АСМ (об'ємн.), одержаний шляхом додавання ТРЕА (4 мл) і АСМ (10 мл) у воду (4 л), рухома фаза В: 0,1 95 розчин ТЕА в АСМ, одержаний шляхом додавання ТЕА (4 мл) в АСМ (4 л). Градієнт: 95 А - від 95 95 до 53,1 95 протягом 10 хв. при швидкості потоку 0,85 мл/хв., температура колонки: 45 "С. Кі-6,43 хв. (УФ)
Препаративна методика З
Б-Аліл-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-1-(4-метоксифеніл)метил-3,За,4,6-тетрагідропіроліЗ,4- сізоксазол у (в) - М
Вг
До розчину 2-бром-1-(5-бром-2-фторфеніл)етанону (1363 г, 4,61 моль) в толуолі (10 л)
додають діаліламін (537 г, 5,53 моль) і ОІРЕА (2381 г, 18,42 моль). Суміш перемішують протягом 4 год. при температурі 40 "С, і одержують 1-(5-бром-2-фторфеніл)-2-(діаліламін)етанон, який не виділяють. До суміші, яка містить неочищений 1-(5-бром-2-фторфеніл)-2-(діаліламіно)етанон, додають М-(4-метоксибензил)гідроксиламін (847 г, 5,53 моль) і ізопропоксид титану(ІМ) (1965 г, 6,91 моль). Вказану суміш перемішують при температурі 90 "С протягом 2 год. Суміш охолоджують до температури 20 "С, і додають 50 95 розчин моногідрату лимонної кислоти (4 л) і насичений розчин МагбОз (4 л). Шари розділяють, і водний шар екстрагують МТВЕ (5 л).
Органічний екстракт промивають водою (5 л), фільтрують через діатомову землю, і концентрують досуха. До залишку додають ЕАс (10 л) і щавлеву кислоту (580 г), тверду речовину відфільтровують, і додають до 1н розчину Маон (13 л). Додають МТВЕ (5 л), і суміш фільтрують через діатомову землю. Шари розділяють, і органічний шар концентрують до 2 об'ємів. Додають гептан (З л), і розчин охолоджують до температури 10 "С. Одержану тверду речовину відфільтровують, і одержують вказану в заголовку сполуку (1330 г, 64 95). "Н ЯМР(400
МГц, СОСІ») 6 2,51-2,49 (т, ЗН), 3,09-3,04 (т, ЗН), 3,78-3,41 (т, 6Н), 4,01 (т, 1Н), 5,24-5,01 (т, 2Н), 5,89-5,85 (т, 1Н), 6,82-6,80 (т, 2Н), 7,51-7,13 (т, ЗН), 7,63-7,62 (т, 1Н), 7,65-7,64 (т, 1Н).
Препаративна методика 4
Споріднений (Заг,баз)-5-бензил-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-1-(4-метоксифеніл)метилі|-
З,За,4,6-тетрагідропіроліІЗ,4-с|ізоксазол, щавлева кислота (9) по Хо рен м о о
Ой
Е
/ що:
Вг
До розчину 2-(аліл(бензил)аміно|-1-(5-бром-2-фторфеніл)етанону при температурі 40 "С додають спочатку М-(4-метоксифеніл)метил|ігідроксиламін (15,5 г, 101 ммоль), а потім ізопропоксид титану (ІМ) (50,3 мл, 169 ммоль). Суміш дезоксигенують шляхом барботування азоту через систему протягом 5 хв. Суміш нагрівають до температури 90 "С з перемішуванням протягом 2 год. Реакційну суміш промивають розчином лимонної кислоти (36 г, 186 ммоль) у воді (36 г), і перемішують протягом 30 хв. при кімнатній температурі. Додають насичений розчин карбонату натрію (100 г, 939 ммоль) у воді, і рН доводять до приблизно 9. Суміш розбавляють водою і толуолом за потребою для відокремлення шарів. Толуоловий шар промивають спочатку розчином НОСІЇ у воді (5,1 мл 5н НС), розбавленим водою (200 мл), а потім водою (200 мл).
Толуоловий шар концентрують, і одержують густе масло. Одержане масло розчиняють в ЕЮАсС
Зо (375 мл), і краплями з перемішуванням при кімнатній температурі додають розчин щавлевої кислоти (15,4 г, 169 ммоль), розчиненої в ЕІОАс (375 мл). Одержану суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 2 діб, фільтрують, і відфільтрований осад продукту промивають
ЕАс (250 мл). Тверду речовину сушать протягом ночі іп масио при температурі 40 "С, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (41,7 г, 84 Об).
ЕБЗ/М5 (т/2): 498 (М.Н).
Препаративна методика 5
Споріднений М-ІЗ-КЗав,баз5)-5-бензил-1-((4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,6- тетрагідропірол|З,4-с|ізоксазол-ба-іл|-4-фторфеніл|-2,2,2-трифторацетамід
М |;
М
ОХ
МН об св
Споріднений (Заг,баз)-5-бензил-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-1-(4-метоксифеніл)метилі|-
З,За,4,6-тетрагідропіроліІЗ,4-с|ізоксазол, щавлеву кислоту (23,6 г, 40,2 ммоль) додають до суміші
ОСМ (400 мл) і 5н водного розчину Маон (200 мл). Суміш перемішують протягом 10 хв., після чого шари розділяють. Органічний шар концентрують, і одержують споріднений (Зак,баз)-5- бензил-ба-5-бром-2-фторфеніл)-1-(4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,б-тетрагідропіроліЗ,4- сізоксазол (20,0 г, 40,2 ммоль). Цей матеріал додають до диметилсульфоксиду (360 мл), 2,2,2-
трифторацетаміду (7,8 г, 68 ммоль), йодиду натрію (10,3 г, 68,6 ммоль), карбонату калію (9,54 г, 68,3 ммоль), (1К,2К)-М,М'-диметил-1,2-циклогександіаміну (4,7 г, 32 ммоль) і йодиду міді(І) (1,53 г, 8,03 ммоль). Суміш дезоксигенують шляхом барботування азоту через систему протягом 10 хв. Суміш нагрівають до температури 115 "С, перемішують протягом 5,5 год., і охолоджують до кімнатної температури. Додають ЕЮАс (250 мл) і воду (200 мл), і одержану суміш перемішують протягом 10-15 хв. Шари розділяють, і водний шар піддають зворотному екстрагуванню ЕЮАс (200 мл). Об'єднані органічні шари промивають спочатку водним розчином (20 95 (мас.), 100 мл) хлориду амонію і потім водним розчином (20 95 (мас.), 100 мл) хлориду літію і водою (100 мл).
Органічний шар сушать над сульфатом магнію, фільтрують, концентрують досуха, і одержують вказану в заголовку неочищену сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (23,6 г, 111 95).
ЕБ/М5 (т/2): 530 (М--Н).
Препаративна методика 6
Споріднений 3-(ЗаР,баб5)-5-бензил-1-(4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,б6-тетрагідропіроліЗ,4- сізоксазол-ба-іл|-4-фторанілін
М Де)
М
/
Одно» мн»
Споріднений М-ІЗ-КЗав,баз5)-5-бензил-1-((4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,6- тетрагідропірол|З,4-с|ізоксазол-ба-іл|-4-фторфеніл|-2,2,2-трифторацетамід (21,0 г, 39,7 ммоль) додають в метанол (250 мл), 5н водний розчин Маон (105 мл) і етанол (105 мл), і одержану суміш нагрівають до температури 50 "С протягом 2 год. Реакційну суміш концентрують при зниженому тиску при температурі 35-40 "С для видалення метанолу і етанолу. Матеріал розчиняють в суміші МТВЕ (320 мл) і води (300 мл). Шари розділяють, органічний шар промивають спочатку водою (100 мл), потім сумішшю води (400 мл) і 12н водного розчину НСІ (3,5 мл). Водний шар додають у суміш МТВЕ (400 мл), води (100 мл) і 5н водного розчину МаОН (25 мл), і шари розділяють. Водний шар промивають МТВЕ (100 мл). Органічні шари об'єднують, сушать над сульфатом магнію, фільтрують, концентрують іп масо, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (9,8 г, 57 95). ЕБ/М5 (т/2): 435 (МАН).
Препаративна методика 7
Споріднений М-3-К(ЗаВ,баб5)-5-бензил-1-((4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,6- тетрагідропірол|З,4-с|ізоксазол-ба-іл|-4-фторфеніл|ацетамід
М |;
М
/
ОД»
МН зо ої.
Споріднений 3-(ЗаР,баб5)-5-бензил-1-(4-метоксифеніл)метил|-3,За,4,б6-тетрагідропіроліЗ,4- сізоксазол-ба-іл|-4-фторанілін (9,4 г, 22 ммоль) додають в ОСМ (110 мл), 4- диметиламінопіридин (0,08 г, 0,65 ммоль) та триетиламін (6,1 мл, 43 ммоль), і реакційну суміш охолоджують до температури 0 "С. До одержаного розчину краплями додають оцтовий ангідрид (3,4 г, 33 ммоль). Реакційну суміш нагрівають до кімнатної температури, і перемішують протягом 2 год. До реакційної суміші додають воду (140 мл), і одержану суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 10 хв. Шари розділяють, і водний шар промивають ЮОСМ (100 мл).
Об'єднані органічні шари сушать над сульфатом магнію, фільтрують, концентрують, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (10,1 г, 100 Об).
ЕБЗ/М5 (ітп/2): 477 (М.Н).
Препаративна методика 8
Б-Аліл-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-3,За,4,6-тетрагідро-1Н-піроліЗ3,4-с|ізоксазолу гідрохлорид
М (9)
ОД
Й Неї
Вг
До розчину 5-аліл-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-1-(4-метоксифеніл)метил-3,За, 4,6- тетрагідропіроліЗ3,4-с|ізоксазолу (1990 г, 4,45 моль) в ОСМ (12 л) краплями додають ТРА (4 л, 52,9 моль) зі швидкістю, яка забезпечує підтримання температуру нижче 35 "С. Після закінчення додавання суміш нагрівають до температури 33-43 "С, і перемішують протягом 6 год. Розчин
Маон (20 95, 10 л) добавляють зі швидкістю, яка забезпечує підтримання температури нижче 35 "С. Шари розділяють, і органічний шар промивають водою (б л). Розчин концентрують, додають етанол (16 л), і одержану суміш фільтрують через діатомову землю. Фільтрат концентрують, і додають Е(Ас (10 л). Додають 4 М розчин НСІ в ЕОАсС (8 л), одержану тверду речовину відфільтровують, сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку (1385 г, 85,6 95).
ЕЗ/М5 (т/з): 327 1 (МН)
Препаративна методика 9
П-Аліл-4-аміно-4-(5-бром-2-фторфеніл)піролідин-3-іл)їіметанол он о ш-- Мн,
Е
Вг
До розчину /5-аліл-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-3,За,4,6-тетрагідро-1 Н-піроліЗ,4-с|ізоксазолу гідрохлориду (1400 г, 3,85 моль) в ОСМ (7 л) додають насичений водний розчин карбонату натрію для досягнення рН»9. Шари розділяють, і органічний екстракт концентрують до 1,5 об'єму. Додають НОАс (1,38 л), і розчин концентрують до 2 л. Додають НОАсС (7 л) і порошок цинку (2,5 кг, 38,5 моль), суміш нагрівають до температури 40-50 "С, і перемішують протягом З год. Додають ЕЮАс (9,8 л), і суміш фільтрують через діатомову землю. Відфільтрований осад промивають Ес (4 л). Фільтрат відокремлюють, і до об'єднаних органічних речовин додають воду (7 л). Гідроксид амонію додають для досягнення рН29. Шари розділяють, і органічний шар концентрують до 2 л. Додають етанол (2,8 л), і розчин концентрують до 2 л. Додають етанол (19 л), суміш фільтрують через діатомову землю, і одержують розчин вказаної в заголовку сполуки в етанолі, який використовують без подальшого очищення.
Препаративна методика 10 ((35,48)-1-Аліл-3-(5-бром-2-фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-3-іл|амоній; (25,35)-4- гідрокси-2,3-біс|((4-метилбензоїл)окси|-4-оксобутаноат
М оттго о іФ) 0) ІФ)
Вг
До розчину (|1-аліл-4-аміно-4-(5-бром-2-фторфеніл)піролідин-З-іл|метанолу (1264 г, 3,85 ммоль) в етанолі (21 л) додають ди-п-толуоїл-і! -винної кислоти моногідрат (1,04 кг, 2,69 моль).
Суміш нагрівають до температури 65-75 "С, і перемішують протягом З год. Суміш охолоджують до температури 5-10 "С, додають затравний кристал ((35,4К)-1-аліл-3-(5-бром-2-фторфеніл)-4- (гідроксиметил)піролідин-3-іл|Іамонію; (25,35)-4-гідрокси-2,3-біс|(4-метілбензоїл)окси|-4- оксобутаноату (1,0 г), ії одержану суміш перемішують протягом З год. Тверду речовину відфільтровують, і відфільтрований осад промивають холодним етанолом (1,4 л).
Відфільтрований осад сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини білого кольору. Хіральний кількісний аналіз другого елюйованого ізомеру: Колонка: ІС
СпігаІрак, 4,6 мм"250 мм"5 мкм; елюент: 90 95 гексан (0,3 95 діетиламіну):10 956 етанол (0,3 95 діетиламіну); швидкість потоку 1,0 мл/хв. при УФ 270 нм, підтверджує енантіомерно збагачений (99 95 ее) енантіомер з Еч-7,4 хв., (1050 г, 38 95). "Н ЯМР (400 МГц, СОзОбБ) 6 2,40 (5, 6Н), 3,05-
3,04 (т, 1Н), 3,57-3,31 (т, ЗН), 3,66-3,58 (т, 4Н), 3,75-3,74 (т, 2Н), 5,38-5,36 (т, 1Н), 5,50-5,46 (т, 1Н), 5,88 (5, 2Н), 5,97-5,91 (т, 1Н), 7,10-7,05 (т, 1Н), 7,29 (а, 9У-8,0 Гц, 4Н), 7,53-7,51 (т, 1Н), 7,80-7,78 (т, 1Н), 8,01 (а, 9-8,0 Гц, 4Н).
Препаративна методика 11
Споріднений /- 1-ІЗ-(35,48)-3-аміно-4-«(гідроксиметил)піролідин-3-іл|І-А-фторфеніл|пропан-2- он, ди-толуолсульфокислота он
НМ
Мн
Е 2 8: н ото чи он 281 ох. ото
Споріднений М-3-К(ЗаВ,баб5)-5-бензил-1-((4-метоксифеніл)метилі-3,За,4,6- тетрагідропірол|З,4-с|ізоксазол-ба-іл|-4-фторфеніл|ацетамід (5,0 г, 11,0 ммоль) додають до води (75 мл), 10 9о паладію на деревному вугіллі (2,5 г, 23 ммоль), п-толуолсульфокислоти (5,0 г, 26 ммоль) та етанолу (75 мл), і одержану суміш гідрогенізують в атмосфері водню при 50 фунт/дюйм? (0,34 МПа) при кімнатній температурі протягом 20 год. Суміш фільтрують через діатомову землю, і шар промивають спочатку етанолом (100 мл), потім ОСМ (100 мл). Фільтрат концентрують, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів з кількісним виходом неочищеного матеріалу (8,1 г, »100 95). Матеріал використовують безпосередньо без додаткового очищення. ЕБ/М5 (Іп/27): 268 (МНН).
Препаративна методика 12 (38,45)-1-Аліл-4-аміно-4-(5-бром-2-фторфеніл)піролідин-3-ілуметанол он
М
-е/ мн,
Е
Ве
ТІн розчин НСІ (500 мл, 500 ммоль) додають до розчину |((35,4К)-1-аліл-3-(5-бром-2- фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-3-ілІіамонію; (25, 35)-4-гідрокси-2,3-біс|(4- метилбензоїл)окси|-4-оксобутаноату (100 г, 139, ммоль) в ЕАс (500 мл), який має температуру 0 "С. Суміш перемішують протягом 1 год. Водний шар відокремлюють, і рн доводять до 8 за допомогою їн розчину МаоОН. Водний шар екстрагують ЕАс (350 млхг).
Органічні шари об'єднують, промивають водою (500 мл), концентрують, і одержують вказану в заголовку сполуку (40 г, 87 95). Хіральний кількісний аналіз другого елюйованого ізомеру:
Колонка: ІС СпПігаІрак, 4,6 мм"250 мм"5 мкм; елюент: 90 95 гексан (0,3 95 діетиламіну):10 95 етанол (0,395 дієтиламіну); швидкість потоку 1,0 мл/хв. при УФ 270 нм, підтверджує енантіомерно збагачений (99,7 95 ее) енантіомер з Кі-7,4 хв. "Н ЯМР(400 МГц, СОСІ») б 2,78- 2,70 (т, 5Н), 3,16-3,00 (т, ЗН), 3,87-3,75 (т, 1Н), 3,90-3,84 (т, 1Н), 5,24-5,11 (т, 2Н), 5,91-5,687 (т, 1Н), 6,95-6,91 (т, 1Н), 7,35-7,32 (т, 1Н), 7,67-7,65 (т, 1Н).
Препаративна методика 13
Споріднений М-І3-(35,48)-3-аміно-1-(5-фторпіримідин-2-іл)-4-(гідроксиметил)піролідин-З-іл|- 4-фторфеніл|іацетамід он
М
-0 ка М мн.
Е
Мн о.
Споріднену 1-ІЗ-(35,48)-3-аміно-4-(гідроксиметил)піролідин-З-іл|-4А-фторфеніл|пропан-2-он,
ди-толуолсульфокислоту (7,5 г, 12,3 ммоль) додають до АСМ (75 мл). Додають 2-хлор-5- фторпіримідин (2,44 г, 18,4 ммоль) та ОІРЕА (7,5 мл, 43 ммоль), і суміш нагрівають до температури 70 "С протягом 20 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, і концентрують. Додають воду (50 мл), і суміш перемішують протягом 1 год. у вигляді суспензії.
Суміш фільтрують, сушать при кімнатній температурі у вакуумі, і одержують вказану в заголовку сполуки у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (3,0 г). Залишок водного розчину екстрагують хлороформом (З3х20 мл), сушать над сульфатом натрію, концентрують досуха, сушать у вакуумі, і одержують додаткову кількість вказаної в заголовку сполуки (1,8 г) із загальним виходом неочищеного продукту (4,8 г, 110 ув). ЕБ/М5 (іт/2): 364 (МН).
Препаративна методика 14
М-((35,48)-1-Аліл-3-(5-бром-2-фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-3- ілукарбамотіоїл)/бензамід он 5 Юю6ЕФ«0
М
-ШВ/7 бо
Е н н
Вг
Бензоїлізотіоціанат (15,0 г, 91,9 ммоль) додають до маючого температуру 0 "С розчину (38,45)-1-аліл-4-аміно-4-(5-бром-2-фторфеніл)піролідин-3-іл)метанолу (30 г, 91,1 ммоль) в ТНЕ (400 мл). Розчин нагрівають до температури 25 "С, і перемішують протягом 1 год. з одержанням розчину вказаної в заголовку сполуки в ТНЕ, який використовують без подальшого очищення.
Препаративна методика 15
М-(4аВ,7ав5)-6-Аліл-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролцІ|3,4-4111,3)гіазин-2- іл)бензаміду, дигідрохлорид
М 5 6) - шо
Є н
Вг 2НОЇ
Трифенілфосфін (36,8 г, 140,3 ммоль) додають до розчину М-((35,4Н8)-1-аліл-3-(5-бром-2- фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-3-ілукарбамотіоїл/бензаміду (91,1 ммоль) у ТНЕ (400 мл). Додають розчин ди-трет-бутилазодікарбоксилату (31,6 г, 137,2 ммоль) в ТНЕ (100 мл).
Суміш перемішують при температурі 20-30 "С протягом 2 год. Суміш концентрують, і додають
МТВЕ (400 мл). Розчин фільтрують через діатомову землю, і відфільтрований осад промивають
МТВЕ (130 мл). Фільтрати об'єднують, і додають їн розчин НСІ в ЕІЮАс (200 мл). Суміш перемішують протягом 2 год., після чого концентрують до 500 мл. Додають МТВЕ (320 мл), розчин фільтрують, і промивають гептаном (130 мл). Тверду речовину суспендують в ЕЮАсС
Зо (650 мл), і перемішують при температурі 50-60 "С протягом 2 год. Гарячу суспензію фільтрують, і тверду речовину промивають ЕЮАс (130 мл), і гептаном (130 мл). Тверду речовину сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді дигідрохлоридної солі (40 г, 80 95, 99,5 9о ев).
Хіральний кількісний аналіз першого елюйованого ізомеру: Колонка: ІС СпПігаІрак, 4,6 мм"250 мм"5 мкм; елюент: 85905 гексан (0,195 дієтиламіну):15 9 ізопропіловий спирт (0,1 95 діетиламіну); швидкість потоку 1,0 мл/хв. при УФ 282 нм, підтверджує енантіомерно збагачений (99,5 95 ее) енантіомер з Ке-12,5 хв.
Препаративна методика 16
М-К4анв,7ав5)-6-Аліл-7а-(2-фтор-5-(2,2,2-трифторацетил)аміно|фенілі/|-4 4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-411,3|гіазин-2-іл|сензамід
М З (6)
Е Н
Мн обов 15 95 розчин карбонату натрію (440 мл) додають до розчину дигідрохлориду М-((4айВ,7ав5)-6- аліл-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4111,3)гіазин-2-іл)бензаміда (495 г,
717,88 ммоль) в ЕАс (3 л) і воді (784 мл). Суміш перемішують протягом 1-2 год. Шари розділяють, органічний шар фільтрують через силікагель (40 г), і промивають ЕЮАс (600 мл).
Фільтрат концентрують досуха, і одержують М-(4авВ,7ав5)-6-аліл-7а-(5-бром-2-фторфеніл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-2-іл)бензаміда. До розчину М-((4аВ,7ав5)-6-аліл-7а-(5- бром-2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-941(11,3|гіазин-2-іл)бензаміда (341 г, 494,54 ммоль) в ОМ5О (525 мл) і 1,4-діоксані (1,025 л) додають трифторацетамід (136,7 г, 1,21 моль),
Ма! (182,5 г, 1,22 моль), 4 А молекулярні сита (342 г) і К»СОз (170,9 г, 1,24 моль). До одержаної реакційної суміші додають розчин транс-М,М'-диметилциклогексану (81,6 г, 573,66 ммоль) і йодиду міді (27,3 г, 143,34 ммоль) в ОМ5О (500 мл). Суміш перемішують протягом 5 хв. Суміш нагрівають до температури 100 "С, перемішують протягом 8 год., і охолоджують до температури 24 "С. Додають воду (5,9 л) і ОСМ (5,9 л), суміш фільтрують, і шари розділяють. Органічний шар промивають водою (5,9 л), і одержують вказану в заголовку сполуку в розчині ОСМ, який використовують без подальшого очищення.
Препаративна методика 17
Споріднений М-(4ав,7а5)-7а-5-(ацетамідо)-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-411,3|гіазин-2-іл|сензамід
М 5 в - їх А
М МТМ
Е н | Ї
Мн о.
До спорідненого М-І3-(35,48)-3-аміно-1-(5-фторпіримідин-2-іл)-4-(гідроксиметил)піролідин-3- іл|І-4-фторфенілІацетаміду (4,1 г, 11,0 ммоль) додають ТНЕ (30 мл). Суміш охолоджують на льодяній бані до температури 0 "С, і додають бензоїлізотіоціанат (1,50 мл, 11,0 ммоль). Далі суміші дозволяють нагріватися до кімнатної температури протягом 30 хв. Додають 1,1- карбонілдіїмідазол (1,9 г, 11,0 ммоль), і суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 2 год. Потім суміш нагрівають до температури 55 "С, і додатково перемішують протягом 18 год.
Додають воду (50 мл), і суміш екстрагують ЕТОАс (50 мл). Водний шар екстрагують додатковою кількістю ЕТОАс (25 мл), і концентрують насухо. Неочищений залишок очищають із застосуванням колонкової флеш-хроматографії на силікагелі з елююванням спочатку сумішшю 50 96 ОСМ в ЕЮАсС, а потім 100 95 ЕОАс. Відповідні фракції концентрують, сушать у вакуумі, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді рацемічної суміші цис-ізомерів (1,33 г, 26 Об).
ЕЗ/М5 (іт/з): 509 (М'-Н).
Зо Препаративна методика 18
М-(4аВ,7ав5)-6-Аліл-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролц|З3,4-4111,3)гіазин-2- іл)бензаміду, гідрохлорид 2 в) -- Кс
Е н
МН во
До розчину М-К4ав,7ав5)-6-аліл-7а-(2-фтор-5-(2,2,2-трифторацетил)аміно|феніл|-4, 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-2-іл|рензаміду в ОСМ (250 г, 494,4 ммоль) додають Ммаон (28,7 г) і воду (2,7 л), і суміш перемішують при температурі 24 "С протягом 68 год. Додають Тн розчин
НОЇ (3,5 л) для досягнення рН 1-3. Шари розділяють, і водний шар промивають ОСМ (680 мл).
До водного шару додають спочатку ОСМ (4 л), потім 21 95 розчин гідроксиду амонію з досягненням рН 8-10. Шари розділяють, органічні екстракти об'єднують, фільтрують через силікагель (170 г), і промивають ОСМ (1,4 л). Розчинник концентрують досуха, і розбавляють
КОДАс (4 л). При температурі нижче 25 "С додають ін розчин НСІ в ЕІОАс (700 мл), і суміш перемішують протягом 1 год. Суміш концентрують до приблизно 7-8 об'ємів, і додають ЕЮАДс (2,8 л). Одержаний осад відфільтровують, і промивають ЕТОАс (400 мл). Тверду речовину сушать, і одержують вказану в заголовку сполуки (246 г, 52 Об).
Препаративна методика 19
М-(4аВ,7ав5)-7а-(5-ацетамід-2-фторфеніл)-6-аліл-4 4а,5,7-тетрагідропіролцІ|3,4-4111,3)гіазин-2- іл)бензамід
З 8) шщ/ бе і н
МН оч.
До розчину гідрохлориду М-(4аВ,7а5)-6-аліл-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-2-іл)бензаміда (100 г, 0,153 моль) і триетиламіну (54,3 г, 0,535 моль) в ОСМ (800 мл) додають оцтовий ангідрид (23,5 г, 0,23 моль). Після перемішування протягом 1 год. при температурі 20-25 "С додають насичений розчин МансСоз (700 мл) і воду (600 мл). Шари розділяють, і одержують вказану в заголовку сполуку, яку використовують без додаткового очищення у вигляді розчину в ОСМ.
Препаративна методика 20
М-(4аВ,7ав5)-7а-(5-Ацетамід-2-фторфеніл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-41(11,3|гіазин-2- іл)бензамід ни З (0) сове
Е н
МН ої.
До розчину М-(4ав,7ав)-7а-(5-ацетамід-2-фторфеніл)-6-аліл-4 4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- 911,3 гіазин-2-іл)бензаміду в ОСМ (68,86 г, 0,153 моль) додають трифенілфосфін (4,0 г, 0,015 моль) і 1,3-диметилбарбітурову кислоту (15,2 г, 0,097 моль). Додають ацетат паладію (1,7 г, 7,7 ммоль), і суміш перемішують при температурі від 20 "С до 30 "С протягом 1 год. Додають 25 9о розчин гідроксиду амонію, і шари розділяють. Органічний шар промивають НОАс (3,0 екв. в 500 мл води), і значення рН доводять до 8-9 за допомогою 25 95 розчину гідроксиду амонію. Водний шар екстрагують ЮОСМ (2х500 мл). Органічні екстракти об'єднують, і концентрують до 3-4 об'ємів. Додають МТВЕ (1 л), і суміш фільтрують. Суміш концентрують, і додають гептан (1 л).
Одержаний твердий продукт відфільтровують, збирають, сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку (48 г, 76 Ус). "Н ЯМР (400 МГц, СОСІ») 6 2,15 (5, ЗН), 2,87-2,83 (т, 1Н), 3,43- 3,23 (т, 5Н), 3,70-3,67 (т, 1Н), 7,12-7,07 (т, 1Н), 7,28-7,27 (т, 1Н), 7,52-7,41 (т, 4Н), 7,79 (т, 1Н), 8,18-8,16 (т, 2Н), ЕБ/М5 (іт/г2): 413,1 (МАН).
Препаративна методика 21
М-(4аВ,7ав5)-7а-(5-ацетамід-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-2-ілубензамід
М м и ФО
Е Н
Мн о.
До розчину М-(4ав,7ав5)-7а-(5-ацетамід-2-фторфеніл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- «1,3 гіазин-2-іл/бензаміду (50 г, 121,22 ммоль) в ЮОМЕ (100 мл) додають 2-хлор-5-
Зо фторпіримідин (28,9 г, 218 ммоль) і карбонат калію (33,46 г, 242,1 ммоль). Суміш нагрівають до температури 80-85 "С протягом 8 год. Суміш охолоджують до температури 24 "С, фільтрують, і промивають ЮОМЕ (100 мл). Тверді речовини суспендують у воді (2 л), відфільтровують, і одержують вказану в заголовку сполуку (68,5 г, 98 95). Ї 0-М5: т/2-509,2 (МАН), "Н ЯМР (400
МГц, ає-ЮМ5О) б млн." 1,22 (І, 9У-7,28 Гц, 2 Н) 1,92-2,07 (т, 6 Н) 2,89-3,20 (т, 2 Н) 3,36-3,44 (т, 1 Н) 3,67 (її, 9У-9,54 Гц, 1 Н) 3,84 (бБг, 5., 1 Н) 4,16 (Бг, 5., 2 Н) 7,23 (Бг, 5., 2 Н) 7,35-7,61 (т, 8 Н) 7,77 (рі, 8., 2 Н) 7,85-8,18 (т, 4 Н) 8,48 (5, 4 Н) 10,15 (Бі, 5., 1 Н) 10,46-10,59 (т, 1 Н).
Препаративна методика 22 (4аВ,7а5)-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4-
ФІИ1,3)гіазин-2-амін
М З
- у-м -М мен,
Е мн.
До о розчину /М-(4аВ,7аб5)-7а-(5-ацетамід-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-2-іл)бензаміду (80 г, 157,3 ммоль) в метанолі (400 мл) додають гідроксид літію (8,6 г, 204,9 ммоль). Суміш нагрівають до температури 60-70 "С протягом 4 год.
Додають концентровану НСІ (132 г), ії одержану суміш перемішують при температурі 55 "С протягом 18 год. Суміш охолоджують до температури 30 "С, і концентрують для видалення метанолу. Додають воду, водний шар екстрагують ОСМ (Зх), і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді водного розчину (920 г), 5,6 905 від загальної маси якого становить вказана в заголовку сполука, яку використовують без подальшого очищення.
Альтернативна препаративна методика 22
До розчину (4ак,7авз)-7а-(2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-411,3)гіазин-2-аміну (45,8 г, 125,3 ммоль) в ТЕА (626 мл) додають сірчану кислоту (33,4 мл, 626,6 ммоль). Одержану суміш охолоджують до температури 0 "с, і перемішують протягом 20 хв. Додають димлячу азотну кислоту (6,2 мл, 144,1 ммоль), реакційну суміш нагрівають до температури 22 "С, і перемішують протягом З год. Реакційну суміш упарюють, додають МТВЕ (250 мл), і упарюють удруге. Залишок сушать у вакуумі до постійної маси, після чого розчиняють у воді (147 мл) і етанолі (885 мл), і дегазують шляхом барботування азоту протягом 15 хв. Розчин переносять в реактор високого тиску, і додають 10 95 пасту Ра/С типу 871. (6,6 г, 6,27 ммоль). Суміш розбавляють додатковою кількістю етанолу (700 мл), і витримують під підвищеним тиском водню (80 фунт/дюйм:? (0,552 МПа)) протягом 16 год. Реакційну суміш фільтрують, після чого додають другу порцію каталізатора, а саме 10 95 пасту Ра/С типу 871 (6,6 г, 6,27 ммоль), суміш витримують під підвищеним тиском водню (80 фунтів/дюйм, (0,552 МПа)), і перемішують протягом З діб в реакторі високого тиску. Реакційну суміш продувають азотом, і фільтрують через діатомову землю. Фільтрат упарюють, і залишок розподіляють між водою (200 мл) і ЕЮАс (200 мл). Водний шар відокремлюють, охолоджують до температури 5 "С, і нейтралізують гідроксидом амонію (15 95, мас.). Водний шар екстрагують
ЕЮАс (З3х150 мл). Органічні шари об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, упарюють при зниженому тиску, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини світло-коричневого кольору (47,7 г, 99 95 містять залишкову кількість ЕЮАс). ЕБ/М5
Коо) (т/2): 363 (М.Н).
Препаративна методика 23
Бензил-М-аліл-М-(2,2-диметоксиетил)карбамат іо)
ХХ (в) в! ей сгас
Розчин бензил-М-(2,2-диметоксиетил)карбамату (50 г, 208,9 ммоль) в толуолі (180 мл) обробляють твердим гідроксидом калію (51,6 г, 919,69 ммоль) в атмосфері азоту. Через 10 хв. додають бензилтриєетиламонію хлорид (0,8 г, 3,1 ммоль). Ще через 10 хв. краплями протягом 10 хв. додають розчин алілброміду (33 г, 272,8 ммоль) в толуолі (50 мл). Одержану суміш перемішують при температурі 50 "С протягом 48 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, і гасять водою. Органічний шар відокремлюють, промивають розсолом, сушать над сульфатом магнію, концентрують досуха, і одержують вказану в заголовку сполуку (44 г, 75 96). ЕБ/М5 (т/2): 280 (МАН).
Препаративна методика 24
Бензил-М-аліл-М-(2-оксоетил)карбамат 9) в) о Мини ог
Розчин бензил-М-аліл-М-(2,2-диметоксиетил)укарбамату (30 г, 107 ммоль) в мурашиній кислоті (36,8 мл, 860 ммоль) і воді (4,84 мл) перемішують при кімнатній температурі протягом ночі. Суміш концентрують, і розбавляють сумішшю гексани /ЕЇОАс (1:2) і водою. Органічний шар відокремлюють, промивають розсолом до досягнення рн-б, і сушать над сульфатом натрію.
Розчинник випарюють, і одержують вказану в заголовку сполуку (25 г, 99 95). ЕБ/М5 (т/лг): 234 (МАН).
Препаративна методика 25
Бензил-М-аліл-М-(2-гідроксіміноетилікарбамат о) оЇк угон з
Розчин бензил-М-аліл-М-(2-оксоетилукарбамату (25 г, 107 ммоль) в АСМ (150 мл) обробляють гідрохлоридом гідроксиламіну (9,68 г, 139 ммоль) і розчином тригідроацетату натрію (16 г, 117,9 ммоль) у воді (75 мл). Суміш перемішують при кімнатній температурі протягом ночі. АСМ випарюють, і водний розчин екстрагують ЕОАс. Органічний шар відокремлюють, сушать над сульфатом магнію, концентрують у вакуумі, і одержують вказану в заголовку сполуку (24 г, 90 90). ЕБ/М5 (ітп/2): 249 (М.Н).
Препаративна методика 26
Бензил-3,За,4,б-тетрагідропіролц|З3,4-с|ізоксазол-5-карбоксилат (о) же; в) М
Розчин бензил-М-аліл-М-(2-гідроксіїміноетилІкарбамату (24 г, 96,6 ммоль) в ОСМ (338 мл) протягом 10 хв. обробляють краплями водного розчину (5 95, (мас.)) гіпохлориту натрію (106,08 ммоль, 143,06 мл). Одержану суміш перемішують при кімнатній температурі протягом ночі.
Реакцію гасять 40 95 водним розчином бісульфіту натрію (7 г). Органічний шар відокремлюють, сушать над сульфатом магнію, і концентрують у вакуумі. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи 5 95 розчином Е(Ас в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (18 г, 75 95). ЕБ/М5 (т/з2): 247 (М.а-Н).
Препаративна методика 27
Бензил-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-3, За, 4,6-тетрагідро-1Н-піроліЗ,4-с|ізоксазол-5-карбоксилат (9;
Де о М б'є
Вг 1,6 М розчин н-бутиллітію (25,4 мл, 40,6 ммоль) в гексанах краплями додають до маючого температуру -78 "С розчину 4-бром-1-фтор-2-йодобензолу (12,22 г, 40,6 ммоль) в ТНЕ (60 мл), і
Зо одержують розчин жовтого кольору, який перемішують при температурі -78 "С протягом 15 хв.
До окремого маючого температуру -78 "С розчину бензил-3,3а,4,6-тетрагідропіроліцЗ,4- сізоксазол-5-карбоксилату (5 г, 20,3 ммоль) в ТНЕ (60 мл) додають ефірат трифториду бору (5,14 мл, 40,6 ммоль), і одержану суміш перемішують при температурі -78 "С протягом 5 хв. Цей розчин через канюлю додають до раніше приготовленої літійорганічної суміші, яка має температуру -78 "С. Об'єднану суміш перемішують протягом 30 хв. при температурі -78 "С.
Суміш гасять насиченим водним розчином хлориду амонію, і нагрівають до кімнатної температури. Суміш екстрагують ЕАс (Зх), органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, і розчинник видаляють у вакуумі. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 35 хв. градієнтом від 595 до 10095 ЕТОАс в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,27 г, 27 95). ЕБ/М5 (т/л): ("В/8'ВІ) 421/423 (МН).
Препаративна методика 28
Бензил-1-(бензоїлкарбамотіоїл)-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-3,За,4,б-тетрагідропіролі|З,4-
сізоксазол-5-карбоксилат о) я фСНи
М б'огн 6)
Вг
Бензоїлізотіоціанат (2,87 мл, 21,28 ммоль) краплями додають до розчину бензил-ба-(5- бром-2-фторфеніл)-3,За,4 б-тетрагідро-1Н-піроліІЗ,4-с|ізоксазол-5-карбоксилату (5,977 г, 142 5 ммоль) в ТНЕ (95 мл), і перемішують протягом ночі в атмосфері азоту. Розчинник видаляють іп масцо. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 30 хв. градієнтом від 5 95 до 100 95 ЕТОАс в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (6,05 г, 73 95). ЕБ/М5 (т/2): ("Вг/8'Вг) 584/586 (МН).
Препаративна методика 29
Бензил-3-(бензоїлкарбамотіоїламіно)-3-(5-бром-2-фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-1- карбоксилат он
У
М н
М Нн бог 5 (в)
Вг
Суміш бензил-1-(бензоїлкарбамотіоїл)-ба-(5-бром-2-фторфеніл)-3,За,4,6- тетрагідропіролц|З3,4-с|ізоксазол-5-карбоксилату (6,05 г, 10,4 ммоль) і цинку (пил, «10 мкм) (6,77 г, 103,5 ммоль) перемішують в НОАс (52 мл) при кімнатній температурі протягом ночі в атмосфері азоту. Реакційну суміш розбавляють ЕОАСс, і фільтрують через діатомову землю. Розчинник видаляють іп масо, і залишок розбавляють ЕТОАс, водою і насиченим водним розчином бікарбонату натрію. Суміш екстрагують ЕЮАс (Зх), органічні шари об'єднують, і сушать над сульфатом натрію, фільтрують, і розчинник видаляють іп масо. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 30 хв. градієнтом від 595 до 10095 ЕОАсС в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (5,222 г, 86 95). ЕБ/М5 (т/г2): (ВІ/8'Вг) 586/588 (МН).
Препаративна методика 30
Бензил-2-бензамід-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4, 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3)гіазин-6б- карбоксилат ук в 0 о) тс о х Й
Вг 1,1-карбонілдімідазол (2,87 г, 17,7 ммоль) додають до розчину бензил-3- (бензоїлкарбамотіоїламіно)-3-(5-бром-2-фторфеніл)-4-(гідроксиметил)піролідин-1-карбоксилату (5,198 г, 8,86 ммоль) в ТНЕ (52 мл). Одержану суміш перемішують протягом 1,5 год. при кімнатній температурі, після чого реакційну суміш нагрівають до кипіння та кип'ятять зі
Зо зворотним холодильником протягом ночі в атмосфері азоту. Реакційну суміш охолоджують, розбавляють водою, і екстрагують ЕТОАс (Зх). Органічні шари об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, і розчинник видаляють іп масо. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 30 хв. градієнтом від 595 до 10095 ЕОАсС в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,93 г, 58 96). ЕБ/М5 (т/лг2): (ВІ/Вг) 568/570 (МАН)
Препаративна методика 31
М-(7а-(5-Бром-2-фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піроліІЗ3,4-4111,3)гіазин-2-іл|рсензамід нм 5 о) де
Ен
Вг
Йодотриметилсилан (2,21 мл, 15,46 ммоль) краплями додають до маючого кімнатну температуру розчину бензил-2-бензамід-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4-
«1,3 гіазин-6-карбоксилату (2,93 г, 5,15 ммоль) в АСМ (44 мл). Реакційну суміш перемішують при кімнатній температурі протягом двох годин, і розчинник видаляють іп масо. Неочищений продукт очищають на колонці ЗСХ з використанням спочатку суміші (3:11) ОСМ:метанол, а потім суміші (2:11) ОСМ:7н розчин аміаку в метанолі, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,098 г, 94 96). ЕБ/М5 (т/г): ("Вг/8'Вг) 434/436 (МАН).
Препаративна методика 32 трет-Бутил-2-бензамід-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4111,3)гіазин-6- карбоксилат ук в 0 -ї-о ес
Ен
Вг
Ди-трет-бутилдікарбонат (1,16 г, 5,31 ммоль) і триетиламін (1,01 мл, 7,25 ммоль) додають до розчину М-І7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піролцІЗ3,4-411И1,3|гіазин-2-іл|бсензаміду (2,098 г, 4,83 ммоль) в ОСМ (48 мл). Реакційну суміш перемішують протягом 1 год. при кімнатній температурі в атмосфері азоту. Розчинник видаляють іп масио, і неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 30 хв. градієнтом від 595 до 10095 ЕОАсС в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,556 г, 99 95). ЕБ/М5 (т/з2): (ВІ/8'Вг) 534/536 (МН).
Препаративна методика 33 трет-Бутил-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-2-бензамід-4 4а,5,7-тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-6б- карбоксилат ук в о дико
Ен
НОМ
Розчин трет-бутил-2-бензамід-7а-(5-бром-2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- «1,3 гіазин-6-карбоксилату (2,556 г, 4,8 ммоль) і транс-М,М'-диметил-1 2-циклогександіаміну (150 мг, 1,1 ммоль) в етанолі (50 мл) обробляють азидом натрію (933 мг, 14,3 ммоль). Додають водний розчин натрієвої солі І -аскорбінової кислоти (0,66 М, 3,2 мл, 2,1 ммоль) і воду (1 мл), і верхню частину колби продувають азотом. Суміш обробляють водним розчином пентагідросульфату міді(І!) (0,33 М, 3,2 мл, 1,1 ммоль), і одержану суміш відразу ж нагрівають на заздалегідь розігрітій гарячій плиті при температурі 80 "С протягом 1,5 год. в атмосфері азоту. При нагріванні одержують однорідну суміш. Реакційну суміш охолоджують, розбавляють талою водою, і суміш екстрагують Е(Ас (Зх). Органічні екстракти об'єднують, і сушать над сульфатом натрію, фільтрують, розчинник видаляють іп масио, і одержують неочищений
Зо азидний продукт. Неочищений азидний продукт об'єднують з 10 95 паладієм на деревному вугіллі (1 г) в холодному етанолі (150 мл), і суміш продувають із застосуванням циклу вакуум/азот, а потім - вакуум/водень. Суміш перемішують при кімнатній температурі в атмосфері водню (30 фунтів/дюйм:? (0,207 МПа)) протягом 5 год. Реакційну суміш вентилюють, фільтрують через діатомову землю, і відфільтрований осад промивають ОСМ. Розчинник видаляють з фільтрату іп масо, неочищений продукт очищають на силікагелі з використанням 50 95 розчину ЕІОАс в ЮОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку (2,014 г, 89 95). ЕБ/М5 (т/2): 471 (МАН).
Препаративна методика 34
М-(7а-(5-Аміно-2-фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піроліІЗ,4-4111,3)гіазин-2-іл|сензамід цм 5 Е 7,0 жо
Ен
Н.М
ТЕА (10 мл) додають до розчину трет-бутил-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-2-бензамід-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-6-карбоксилату (2,013 г, 4,28 ммоль) в ОСМ (30 мл), і суміш перемішують при кімнатній температурі в атмосфері азоту протягом 4 год. Розчинник видаляють іп масио, і неочищений продукт очищають на колонці ЗСХ з використанням спочатку суміші (3:11) ОСМ:метанол, а потім суміші (2:11) ОСМ:7н розчин аміаку в метанолі, і одержують вказану в заголовку сполуку (1,555 г, 98 95). ЕБ/М5 (іт/2): 371 (МАН).
Препаративна методика 35
Рацемічний М-І/а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-2-іл|рензамід
М
- 5 юЖБЕ-45 ведених р
Ен
Б НЬМ
Розчин М-І/а-(5-аміно-2-фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піролц|3,4-4111,3|гіазин-2- іл|Сензаміду (705 мг, 1,90 ммоль), 5-фтор-2-хлорпіримідину (1,01 г, 7,61 ммоль) і БІРЕА (1,66 мл, 9,52 ммоль) нагрівають до кипіння в 1,4-діоксані (20 мл) та кип'ятять зі зворотним холодильником протягом 4 год. в атмосфері азоту. Реакційну суміш охолоджують, розбавляють водою, і екстрагують Е(ОАс (Зх). Органічні шари об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, розчинник видаляють іп масио, і одержують неочищений продукт. Неочищений продукт очищають на силікагелі, елююючи протягом 25 хв. градієнтом від 5 95 до 100 95 ЕТАсС в гексанах, і одержують вказану в заголовку сполуки (590 мг, 66 965). ЕБ/М5 (іп/2): 467 (МН).
Препаративна методика 36
М-К4анв,7ав5)-7а-(5-Аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІ3,4-411,3|гіазин-2-іл|бензамід, (ізомер 1) пдв ї;
Х М ра
Ен ном
Рацемічний М-І/а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІ3,4-411,3|гіазин-2-іл|Ібсензамід (1,694 г, 3,63 ммоль) очищають за допомогою хіральної ВЕРХ (колонка: СпПігаісеІ 0), 8х35 см, елюент: 9095 метанол (0,295 диметилетиламіну) і 10 95 АСМ, швидкість потоку 400 мл/хв. при УФ 280 нм). Кількісний аналіз першого елюйованого ізомеру (Колонка: СпПігаІсе! 0О-Н 0,46х15 см; елюент: 10:90 АСМ:метанол (з 0,295 диметилетиламіну); швидкість потоку: 0,6 мл/хв. при УФ 280 нм) підтверджує енантіомерно збагачений (99 95 ее) енантіомер з К-6,70 хв., (723 мг, 43 95). ЕБ/М5 (т/зг): 467 (МАН).
Препаративна методика 37
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-Бензамід-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролі|З3,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід, ізомер 1
М
- 5 7щ.«06 во й
Е н
Мн ой
МИ ЗОосна
Зо М-К4анв,7ав5)-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролі|З,4- 911,3 гіазин-2-іл|бензамід, ізомер 1 (0,361 г, 0,77 ммоль) розчиняють в суміші ОСМ (4 мл) і ОМЕ (0,5 мл). До вказаної суміші додають 5-метоксипіразин-2-карбонову кислоту (240 мг, 1,55 ммоль), НОВІ (210 мг, 1,55 ммоль) та ЕОСІ (300 мг, 1,55 ммоль), і одержану суміш перемішують протягом ночі при кімнатній температурі. Реакційний розчин завантажують безпосередньо на колонку, заповнену 12 г силікагелю, і очищають із застосуванням 40 г колонки, заповненої силікагелем, елююючи 0-100 95 градієнтом суміші Е(ОАс/гексани. Продукт розчиняють в ЕАс (200 мл), промивають 1н розчином Маон (2х50 мл) і розсолом (1х50 мл). Очищення на колонці з силікагелем повторюють, як описано вище, і одержують вказану в заголовку сполуку (350 мг, 74 95). ЕБ/М5 (Іп/2): 603 (МАН).
Препаративна методика 38
5-Аліл-ба-(2-фторфеніл)-3,За,4,6-тетрагідро-1Н-піроліІЗ,4-с|ізоксазол
М | 8) ш-К М
Е
Етап хімічної реакції в потоці: 343 мл циліндричний реактор з безшовної труби з нержавіючої сталі (00 (зовнішній діаметр)-1/8 дюйма, 3,175 мм) розміщують всередині термостату з гравітаційною конвекцією, і продувають толуолом при швидкості потоку 20 мл/хв. протягом 20 хв. Застосовують зворотний тиск азоту (720 фунт/дюйм: (4,96 МПа)), і температуру термостату з гравітаційною конвекцією встановлюють на рівні 210 "С. Після того як температура досягла рівня 210 "С, через реактор прокачують розчин 2-(діаліламін)-1--2-фторфеніл)етаноноксиму (480,51 г, 1,74 моль) в толуолі (5,81 л) при швидкості потоку 22,866 мл/хв. з використанням пари шприц-насосів високого тиску, які працюють в безперервному режимі для забезпечення часу перебування, який становить 15 хв. Після вичерпання всього концентрованого розчину, реактор промивають струменем толуолу при швидкості потоку 22,866 мл/хв. протягом 30 хв.
Температуру термостату з гравітаційною конвекцією встановлюють на рівні 25 "С, готовий розчин збирають, і концентрують під вакуумом. Розчинник випарюють, і залишок розчиняють в
ОСМ (2,5 л) ї воді (5 л). рН доводять до 1 за допомогою НСІ, водний шар відокремлюють і нейтралізують Маон для доведення рН до 10. Водний шар екстрагують МТВЕ (Зх2,5 л).
Органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, упарюють насухо, і одержують неочищену вказану в заголовку сполуку (248 г, 47 95), яку використовують без подальшого очищення. ЕБ/М5 (тп/2): 249 (МН).
Препаративна методика 39 1-Аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-3-іл|їметанол но цу МН»,
Е
До розчину 5-аліл-ба-(2-фторфеніл)-3,За,4,б-тетрагідро-1Н-піролІ|З,4-с|ізоксазолу (3559 г, 1,29 моль) в суміші метанолу (2,85 л) і насиченого водного розчину хлориду амонію (3,56 л) додають цинковий пил (590 г, 9 моль), і суміш нагрівають протягом 16 год. при температурі 70 "С. Реакційну суміш охолоджують до температури 60 "С, розбавляють за допомогою ТНЕ (2,85 л), і фільтрують в гарячому стані через діатомову землю. Фільтрат випарюють для видалення органічного розчинника, і водну суміш розбавляють водним розчином лимонної кислоти (10 95 (мас.)) (4 л) і ЕТАс (3,5 л). Органічний шар відокремлюють, і водний шар
Зо промивають ЕЮАс (2х2 л). Водний шар нейтралізують Маон (50 95 (мас.)) для доведення рН до 10, після чого екстрагують ЕАс (2х1,5 л). Органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, упарюють насухо, і одержують неочищену вказану в заголовку сполуку (299 г, 92 965). ЕБ/М5 (іт/з2): 251 (МН).
Препаративна методика 40
КЗА,45)-1-Аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-З3-іл|метанол; 2,3-біс((4- метилбензоїл)окси|бутандіоєва кислота он (од)
Мн. 9 я Ку -- (в) огтОон
До розчину (|(ЗК,45)-1-аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-З-іл|метанолу (225,9 г, 902 ммоль) в 1-метокси-2-пропанолі (1,13 л), заздалегідь нагрітого до температури 40 "С, додають розчин ди-п-толуоїл-ІЇ -винної кислоти (348,6 г, 884 ммоль) в 1-метокси-2-пропанолі (1,13 л).
Реакційну суміш охолоджують до температури 22 "С, і перемішують протягом 18 год. Тверду речовину білого кольору збирають шляхом фільтрації, і промивають 1-метокси-2-пропанолом
(600 мл). Зібрану тверду речовину сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку (183,01 г, 31,8 95). ЕБ/М5 (Іт/2): 251 (М.--Н).
Препаративна методика 41
КЗ, 45)-1-Аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-3-іл|метанол он
М Мн,
АГ зо дян
КЗА,45)-1-Аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-З3-іл|метанол; 2,3-біс((4- метилбензоїл)окси|бутандіоєву кислоту (211 г, 331 ммоль) розчиняють у воді (2,1 л) і ЕІОАс (2,3 л). Додають НС (35 95 (мас.)) для доведення рН до 1. Водний шар відокремлюють, рН доводять до 10 за допомогою Ммаон (50 9б(мас.)), і екстрагують ЕІЮАс (2х). рН водного шару доводять до 10 водним розчином Маон, і згаданий шар екстрагують МТВЕ (Зх) з одночасним підтриманням рН водного розчину на рівні рН-10. Органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, концентрують насухо, і одержують вказану в заголовку неочищену сполуку (73 г, 88 95, 94,8 9о еє). Продукт досліджують за допомогою хіральної хроматографії: Колонка
А5-Н, елюент: 10 95 ізопропіловий спирт, 2 95 ізопропіламін; швидкість потоку З мл/хв. при УФ 220 нм; тиск 100 бар (10 МПа) бар при температурі 35 "С, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді другого елюйованого ізомеру, Ке2,26 хв. ЕБ/М5 (Ітп/2): 251 (М.Н).
Препаративна методика 42
М-К4ав,7ав5)-6-Аліл-7а-(2-фторфеніл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ3,4-4111,3)гіазин-2-іл|Ісензамід м З 6) - ско
Е Н
Розчин |(ЗК,45)-1-аліл-4-аміно-4-(2-фторфеніл)піролідин-3-іл|метанолу (129,7 г, 414 ммоль) в ТНЕ (2,3 л) охолоджують при температурі 0 С в атмосфері азоту. Додають бензоїлізотіоціанат (61,5 мл, 456 ммоль), підтримуючи температуру нижче 5 "С. Реакційну суміш нагрівають до кімнатної температури протягом З год., додають 1,1'-карбонілдіїмідазол (87,4 г, 538,9 ммоль), і реакційну суміш перемішують при температурі 22 "С протягом 1 год. з подальшим нагріванням та витримуванням при температурі 70 "С протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджують до температури 22 "С, і розчинник випарюють. Залишок розподіляють в
КОДАс (1 л) і воді (1 л). Органічний шар відокремлюють, і водний шар екстрагують ЕІОАс (2х400 мл). Органічні шари об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, випарюють насухо, і одержують вказану в заголовку неочищену сполуку. Неочищений продукт очищають хроматографією на силікагелі, елююючи градієнтом ЕАС/ОСМ від 095 до 4095 ОСМ, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору (170 г, 99 95), що містить залишковий розчинник. Е5Б/М5 (пт/2): 396 (МАН).
Препаративна методика 43
М-К4анв,7ав5)-7а-(-2-Фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піролц|3,4-4111,3)гіазин-2-іл|рсензамід нм 5 що
ЕК ; Н
До розчину М-К(4ав,7а5)-6-аліл-7а-(2-фторфеніл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролІ|3,4-4121,3)гіазин-2- іл|сензаміду (178,21 г, 360 ммоль) в безводному 2-метилтетрагідрофурані (1,96 л) в атмосфері азоту додають 2-меркаптобензойну кислоту (122 г, 793 ммоль), біс(дибензиліденацетон)паладій (4,15 г, 7,21 ммоль) і 1,4-бісідифенілфосфіно)бутан (3,14 г, 7,21 ммоль). Розчин знегажують із застосуванням трьох циклів вакуум/азот, і потім реакційну суміш барботують азотом протягом 15 хв. Реакційну суміш нагрівають до температури 40 "С з одночасним барботуванням реакційної суміші азотом. При досягненні реакційною сумішшю температури 40 "с барботування припиняють, і реакційну суміш перемішують при температурі 40 "С протягом З год. у атмосфері азоту. Реакційну суміш охолоджують до температури 22 "С, і розбавляють водою (2 л). Додають розчин НСЇІ (5 М) для доведення рН до 1. Водний шар відокремлюють, і промивають додатковою кількістю ЕТОАс (2х800 мл). рН водного шару доводять до 10 за допомогою Ммаон (50 95 (мас.)), після чого екстрагують за допомогою ЕІЮАс (10 л). Водний шар промивають додатковою кількістю ЕОАс (2х750 мл). Органічні екстракти об'єднують, промивають розсолом, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, випарюють насухо, і одержують вказану в заголовку неочищену сполуку у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору (124,7 г, 97 95). ЕБ/М5 (тп/2): 356 (МАН).
Препаративна методика 44
М-К4анв,7ав5)-7а-(2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролі|3,4- «1,3 гіазин-2-іл|сензамід -М 5 0
Е М я до
Е н
Розчин М-К4авВ,7ав)-7а-(2-фторфеніл)-4а,5,6,7-тетрагідро-4Н-піроліІ3,4-41П1,3)гіазин-2- іл|ІСензаміду (124,7 г, 256 ммоль), ОІРЕА (67 мл), 5-фтор-2-хлорпіримідину (29,3 мл, 307 ммоль) в М-метилпіролідоні (997 мл) нагрівають до температури 100 "С протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджують до температури 22 "С, і виливають в охолоджену воду при температурі 10 "С (10 л), підтримуючи температуру нижче 15 "С. Тверду речовину блідо-кремового кольору відфільтровують, і промивають додатковою кількістю води. Вологу тверду речовину розчиняють в ЕОАс (2 л), і переносять в ділильну лійку. Додають водний розчин хлориду натрію (5 95 (мабс.), 1 л), органічний шар відокремлюють, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, і фільтрат упарюють при зниженому тиску. Продукт очищають хроматографією на силікагелі, елююючи градієнтом 0-40 96 ЕІОАс/ізогексан з одержанням вказаної в заголовку сполуки у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору (116 г, 70 95). ЕБ/М5 (т/2): 452 (МА-Н).
Препаративна методика 45 (4аВ,7а5)-7а-(2-Фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіроліЗ,4- аІ11,3)гіазин-2-амін ту. Г-
Е А--М в фе
КЕ
До суміші М-К4ав,7ав)-7а-(2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3|гіазин-2-іл|бсензаміду (158,6 г, 351,6 ммоль) в метанолі (1,6 л) додають гідроксид літію (9,26 г, 386 ммоль). Суміш гріють при температурі 70 "С протягом 4 год., після
Зо чого охолоджують до температури 22 "С. Реакційну суміш упарюють у вакуумі до одержання залишку жовтого кольору. Залишок розподіляють у воді (1 л), ії Е(ОАс (750 мл). Додають НСІ (5
М водний розчин) для доведення рН до 1. Водний шар відокремлюють, і органічний шар промивають ЕАс (2х200 мл). рН водного шару за допомогою водного розчину Маон (50 95 (мас.)) доводять до рнН-10, і екстрагують ЕОАсС (З3х1 л). Органічні екстракти об'єднують, сушать над сульфатом натрію, фільтрують, випарюють при зниженому тиску, і одержують вказану в заголовку неочищену сполуку у вигляді твердої речовини блідо-жовтого кольору (133,3 г, 99 Об, що містить 12 956 залишкового ЕЮАсС). ЕБ/М5 (іт/2): 348 (МАН).
Препаративна методика 46
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-Аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролц|3,4-4111,3)гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду гідрохлорид. --7У во НАС
Е А-М і: М мен, о Е
М
- М су нзсо М
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-бензамід-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролі|З3,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід, ізомер 1 (0,350 г, 0,58 ммоль)
розчиняють в ТНЕ (2 мл), після чого додають метанол (4 мл) і етанол (4 мл). До одержаної суміші додають гідрохлорид О-метилгідроксиламіну (495 мг, 5,81 ммоль) і піридин (470 мкл, 5,81 ммоль), і реакційну суміш нагрівають до температури 50 "С, і перемішують протягом ночі. До реакційної суміші додають силікагель (410 г), ії суміш концентрують. Зразок, висушений на силікагелі, завантажують у порожній картридж, і очищають шляхом елюювання 0-10 95 градієнтом 7н розчину аміаку в метанолі в ОСМ. Продукт очищають вдруге на колонці ЗСХ з використанням спочатку суміші (3:11) ОСМ:метанол, а потім суміші (21) ОСМ:7н розчин аміаку в метанолі. Продукт очищають в останній раз на силікагелі 0 90-10 9о градієнтом 7н розчину аміаку в метанолі в ОСМ, і одержують вільну основу вказаної в заголовку сполуки. Цей матеріал розчиняють в ОСМ (5 мл), і додають 1 М розчин НСІ в діетиловому ефірі (0,20 мл, 660 мкмоль).
Розчинник видаляють іп масцо, і одержують вказану в заголовку сполуку (71 мг, 23 95). ЕБ/М5 (т/2): 498 (М'-Н).
Порошкова рентгенографія (ХКО)
Порошкові рентгенограми кристалічних твердих речовин одержують за допомогою порошкового рентгенівського дифрактометру ВгиКег 04 Епаеамог, спорядженого джерелом
СиКа (Х-1,54060 А) і детектором Мапіес, що працює при 35 кВ і 50 мА. Зразок сканують у межах від 42 28 до 402 28 з величиною кроку, що дорівнює 0,009" 28, при швидкості сканування 0,5 с/крок, з 0,6 мм розходженням, фіксованим рівнем антирозсіювання 5,28 мм та 9,5 мм діафрагмами детектору. Сухим порошком наповнюють кварцовий тримач зразку, і одержують гладеньку поверхню, використовуючи предметне скло. Порошкові рентгенограми кристалічних форм збирають при температурі і відносній вологості навколишнього середовища. З кристалографії добре відомо, що, для будь-якої даної кристалічної форми, відносна інтенсивність дифракційних піків може змінюватись унаслідок переважної орієнтації, що є наслідком факторів, таких як морфологія і форма кристалу. Коли наявні впливи переважної орієнтації, інтенсивність піків змінюється, однак позиції характеристичних піків поліморфних модифікацій залишаються незмінними. Дивись, наприклад, Те Опіейа Зіаге5 Рпагтасореїа 523,
Маїйопа! Рогтиїагу 718, радез5 1843-1844, 1995. Крім того, в кристалографії також добре відомо, що для будь-якої даної кристалічної форми кутові положення піків можуть дещо змінюватись.
Наприклад, положення піків можуть зсуватись унаслідок змін температури або вологості, при
Зо яких аналізують зразок, зміщення зразку або присутності чи відсутності внутрішнього стандарту.
У цьому випадку змінність положення піків -0,2 28 буде враховувати потенційні зміни без перешкоджання ооднозначній ідентифікації вказаної кристалічної форми. Підтвердження кристалічної форми може бути здійснено на основі будь-якої унікальної комбінації відмінних піків (в градусах 26), зазвичай піків, які найбільш виступають. Порошкові рентгенограми кристалічної форми, зібрані при температурі і відносній вологості навколишнього середовища, коригуються на основі стандартних піків МІЗТ 675 при 8,8532 і 26,7742 2-тета.
Препаративна методика 47
Кристалічна Форма 2 М-(3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду (гідратована)
До розчину 5-метоксипіразин-2-карбонової кислоти (1,6 г, 10,2 ммоль) в АСМ (53 мл) і ОМЕ (848 мкл) додають оксалілхлорид (888 мкл, 10,2 ммоль). Через 15 хв. свіжоприготований розчин додають до розчину (4акК,7авз)-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІ3,4-411,3)гіазин-2-аміну (2,65 г, 7,3 ммоль) в суміші води (53 л) і етанолу (53 мл), заздалегідь нагрітій до температури 50 "С. Реакційну суміш перемішують при температурі "С протягом однієї години, охолоджують до температури 22 "С, і потім перемішують протягом ночі при цій температурі. Органічний розчинник випарюють у вакуумі, і водну суміш обробляють водним розчином Маон (50 95 (мас.)) для доведення рН до 10. Відокремлюють тверду речовину блідо-кремового кольору, і промивають її додатковою кількістю води. Тверду 50 речовину розбавляють ізопропіловим спиртом (2х), і розчинник випарюють. Неочищений продукт очищають хроматографією на силікагелі з використанням градієнту метанолу, насиченого аміаком (20)/ОСМ. Фракції, що містять бажаний продукт, об'єднують, розчинник випарюють, і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді твердої речовини не зовсім білого кольору (1,9 г, 52 95). ЕБ/М5 (ітп/7): 499 (МН).
Альтернативна методика одержання кристалічної Форми 2 М-ІЗ-К4ан,7ав5)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5, 7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду (гідратованої)
АСМ (500 мл) додають до ОМЕ (19,2 мл, 248,9 ммоль). До розчину ОМЕ/АСМ додають спочатку оксалілхлорид (39,3 г, 309,63 ммоль), потім 5-метоксипіразин-2-карбонову кислоту бо (46,0 г, 298,4 ммоль). В окремій колбі водний розчин (4аК,7аб5)-7а-(5-аміно-2-фторфеніл)-6-(5-
фторпіримідин-2-іл)-4,4а, 5,7-тетрагідропіроліцІЗ3,4-41(1,3Ігіазин-2-аміну (56,8 г, 156,75 ммоль) додають до АСМ (500 мл), ії рН доводять до 9 гідроксидом амонію (95 мл). Потім цю суміш нагрівають до температури 50-55 "С. Краплями додають розчин оксалілхлориду, і одержану суміш перемішують протягом З год. рН доводять до 8-9 гідроксидом амонію. Одержаний осад відфільтровують, промивають водою, сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку (123 г).
Тверду речовину суспендують в ацетоні (250 мл) протягом 1,5 год., і фільтрують. Вологий відфільтрований осад промивають ацетоном, і одержують вказану в заголовку сполуку (110 г з 90,5 95 чистоти за даними ВЕРХ). До вказаної твердої речовини додають ТНЕ (1 л) і активоване вугілля (9 г), і одержану суміш нагрівають до кипіння та кип'ятять зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш фільтрують через діатомову землю, і промивають ТНЕ (150 мл).
Органічний розчин концентрують до 10 об'ємів, і нагрівають до температури 60 "С. Додають воду (430 мл), і суміш перемішують при температурі 60 "С протягом 8 год. Суміш охолоджують до кімнатної температури, і перемішують протягом 10 год. Одержану тверду речовину відфільтровують, промивають ТНЕ/водою (7:6), сушать, і одержують вказану в заголовку сполуку (69 г, 88 95) І 0-М5: (т/7) 499 (МН), чистота: 98,3 95. "Н ЯМР (400 МГц, ОМ5О-4в) б млн." 2,99-3,07 (т, 2 Н) 3,07-3,14 (т, 1 Н) 3,58-3,67 (т, 1 Н) 3,68-3,76 (т, 1 Н) 3,76-3,84 (т, 1 Н) 4,02 (5, З Н) 4,07 (а, 9У-10,92 Гц, 1 Н) 6,08 (5, 2 Н) 7,19 (ад, 9У-11,98 Гц, 8,72 Гц, 1 Н) 7,78-7,89 (т, 2 Н) 8,41 (5, 1 Н) 8,44 (5, 2 Н) 8,88 (5, 1 Н) 10,60 (5, 1 Н).
Загальна методика одержання кристалічної Форми 2 М-ІЗ-К4авВ,7аз)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5, 7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду (гідратованої)
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ,4-4101,3)гіазин-7а- іл|- 4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід суспендують в ТНЕ при температурі приблизно 23 "С при концентрації приблизно 71 мг/мл розчинника. Одержану суспензію нагрівають при перемішуванні до розчинення, яке відбувається при температурі від приблизно 60 "С до приблизно 63 "С. До гарячого розчину додають воду для одержання співвідношення
ТНЕ:водний розчинник приблизно 95:5. Додають затравні кристали Форми 2 М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2- аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ3,4-4|11,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду (кількість становить приблизно 395 (мас.)). Одержану
Зо розбавлену суспензію витримують при температурі від приблизно 60 "С до приблизно 63 "С протягом приблизно 20 хв. з подальшим додаванням від приблизно 5,3 до приблизно 5,5 об'ємів води протягом приблизно від 2 год. до приблизно 4 год., і одержують співвідношення
ТНЕ:водний розчинник 69:31. Потім суспензію витримують при температурі від приблизно 60 "С до приблизно 63 "С протягом приблизно 30 хв., після чого охолоджують до температури приблизно 23 "С протягом приблизно 1 год., а потім перемішують протягом приблизно 8-12 год.
Після цього суспензію фільтрують, злегка промивають із застосуванням суміші ТНЕ:вода (35:65), сушать протягом приблизно 8-12 год. при зниженому тиску при температурі приблизно "С, і одержують бажану кристалічну Форму 2 М-ІЗ-К4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2- іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліІ|З,4-4)111,3|гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2- 40 карбоксаміду, яка є гідратованою.
Одержаний зразок кристалічної Форми 2 М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною з використанням джерела випромінювання СиКа, як такий, що має дифракційні піки (значення 2-тета), наведені нижче у
Таблиці 1. Зокрема, рентгенограма має пік при 11,82 у комбінації з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 18,62, 19,32 і 26,72, з допуском на кути дифракції 0,27.
Таблиця 1
Піки порошкової рентгенограми кристалічної Форми 2 (" 2-тета)-0,27 6 | щ.//777/7907777777117Ї17711111717171717171717171111111111901111111111111 8 | 77717171717171п2241 11111161 9 | 7777171717171717319 77777777 Га
Кристалічна Форма 2 М-(3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду являє собою стабільну кристалічну форму при кімнатній температурі і відносній вологості, яка становить більше ніж приблизно 15 95.
Препаративна методика 48
Кристалічна Форма З М-(3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду
У тигель для термогравіметричного аналізу завантажують М-ІЗ-К(4ав,7аз)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5, 7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксамід, нагрівають до температури приблизно 170 "С, і витримують при температурі 170 "С протягом приблизно 5 хв. Суміш охолоджують до кімнатної температури, і одержують вказану в заголовку сполуку.
Альтернативна методика одержання кристалічної Форми З М-ІЗ-К4ан,7ав5)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5, 7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролІ|3,4-4101,3)гіазин-7а- іл|- 4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід (121 мг) об'єднують у колбі з АСМ (5 мл), і нагрівають на нагрітій до 90 "С плиті мішалки. Через приблизно 30 хв. більша частина твердої речовини розчиняється, утворюючи каламутний розчин. Додають кристали Форми 3, і зразок перемішують протягом приблизно 1 год. при температурі приблизно 90 "С. Нагрівання припиняють, і суміш перемішують до одержання твердої речовини яскраво-білого кольору.
Вказану тверду речовину відфільтровують під вакуумом, сушать спочатку в потоці повітря протягом приблизно 10 хв., потім при зниженому тиску при температурі приблизно 80 "С протягом приблизно 8-12 год., і одержують вказану в заголовку сполуку.
Одержаний зразок кристалічної Форми З М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-
Зо 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною з використанням джерела випромінювання СиКа, як такий, що має дифракційні піки (значення 2-тета), наведені нижче у
Таблиці 2. Зокрема, рентгенограма має пік при 15,72 у комбінації з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 18,12, 27,02 і 19,72, з допуском на кути дифракції 0,27.
Таблиця 2
Піки порошкової рентгенограми кристалічної Форми З
Пік Кут Відносна інтенсивність о 2-тета)-н0,227 (95 найінтенсивнішого піка) 6 ЇЇ 77771877 17777715 нин жиншннинни ж нннннншшш 9 | ло 11111111
Приклад 1
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-Аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролц|3,4-4111,3)гіазин-
Та-іл|І-4--фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід; толуолсульфокислота - 5
Б -м х М нн, о Е
АЙ М о-5-0 ре | н он
Зо7тм
Кристалічну Форму 2 гідратованого М-ІЗ-К4ав,7а5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду (149,15 мг) додають до етилацетату (2 мл). Зразок перемішують при 1000 об./хв. при температурі 80 "С. До перемішуваного розчину додають п-толуолсульфокислоту (70 мг, розчинені в етилацетаті (1 мл)), перемішування продовжують протягом ночі при температурі 80 "С, і одержують суспензію твердої речовини білого кольору, яку відокремлюють шляхом вакуумної фільтрації, і одержують вказану в заголовку сполуку.
Альтернативна методика А для М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіроліІЗ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду; толуолсульфокислоти
М-ІЗ3-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролІ|3,4-4101,3)гіазин-7а- іл|- 4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід (9,5 г, 19 ммоль) і п-толуолсульфокислоту (3,80 г, 19,8 ммоль) додають до суміші тетрагідрофурану (31 мл), води (7,9 мл) і 2-пропанолу (8,6 мл). Одержаний розчин нагрівають до температури 40 "С. До теплого розчину протягом приблизно З год. додають 2-пропанол (200,0 мл). Незабаром після початку додавання 2- пропанолу суміш засівають частиною вказаної в заголовку сполуки (500 мг, 0,75 ммоль). Після завершення додавання розчинника, суміш протягом 1-3 год. охолоджують до температури приблизно 20 "С. Суміш нагрівають від температури приблизно 20 "С до температури приблизно 55 "С протягом заданого періоду часу тривалістю 2 год. Температуру підтримують на рівні 55 "С протягом 1 год., після чого протягом приблизно 4 год. знижують до температури приблизно 20 "С. Суспензію перемішують протягом щонайменше 10 год. при температурі
Зо приблизно 20 "С. Суспензію фільтрують, і вологий відфільтрований осад промивають водою (57 мл). Продукт сушать іп масцо при температурі 45 "С протягом щонайменше 10 год., і одержують вказану в заголовку сполуку (10,4 г, 81 95). ЕБ/М5 (т/2): 500 (М--Н).
Альтернативна методика В для М-ІЗ-К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду; толуолсульфокислоти
Гідратований /-М-ІЗ-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіроліЗ 4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід (20,7 г) суспендують при 170 об./хв. в суміші (60:40) ТНЕ:НгО (85 мл) в 500 мл З3-горлій колбі з круглим дном, спорядженій барботером азоту, механічним двигуном/мішалкою ІКА-, приєднаним(-ою) до скляного валу, що має тефлонову бананоподібну лопать, і термопарою, з'єднаною з програмовним контролером температури У-КЕМУ. п-толуолсульфокислоти моногідрат (7,6 г, 1,03 екв.) розчиняють в суміші (60:40) ТНЕ:НгО (20 мл), і одержаний розчин увесь за один раз додають до перемішуваної суспензії М-І3-К4авВ,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролі|З3,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду при температурі 23 "С, що призводить до майже негайного одержання прозорого розчину краснувато-жовтувато- коричневого кольору. Частоту перемішування підвищують до 200 об./хв. протягом 15 хв., до розчину додають воду, і згаданий розчин засівають М-(3-(4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин- 2-іл)-4,4а,5,7-тетрагідропіролІ3,4-4|11,3|гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2- карбоксамідом; толуолсульфокислотою (750 мг, кількість затравних кристалів становить З 95 (мас.)). Після цього розчин додатково перемішують протягом 15 хв. при температурі 23 76.
Через 6 год. до суспензії додають воду (226 мл, загальна кількість розчиннику становить 353 мл, або 13,6 95 об'єму, кінцеве співвідношення розчинників ТНЕ:Н2О становить 17,5:82,5). Після цього суспензію перемішують протягом ночі (22 год.) при температурі 23 "С. Суспензію фільтрують під вакуумом, промивають сумішшю (15:85) ТНЕ:НгО (2х20 мл), після чого витримують під вакуумом протягом 20 хв., при цьому тріщини, які утворюються у вологому відфільтрованому осаді продукту, закривають шляхом ручного натискання. Вологу тверду речовину сушать при температурі 40 "С у вакуумі протягом приблизно 72 год., і одержують вказану в заголовку сполуку у вигляді кристалічної твердої речовини білого кольору (24,07 г, 90,0 905 (мас.)).
Кристалічна /- М-ІЗ-К(4аВ,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4 4а,5,7-тетрагідропіролі|З,4- «1,3 гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксамід; толуолсульфокислота характеризується порошковою рентгенограмою, одержаною з використанням джерела випромінювання СикКа, як така, що має піки дифракції (значення 2-тета), описані у наведеній нижче Таблиці 3, і, зокрема, як такий, що має пік при куті дифракції 2-тета 5,02 у поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,62, 13,82 ії 18,52, з допуском на кути дифракції 0,27.
Таблиця З
Піки порошкової рентгенограми кристалічної форми Прикладу 1
Пік Кут Відносна інтенсивність (90 найінтенсивнішого
С 2-тета)-0,27 піка) т00 е017777777775000011700000758
ПСИ ПО ОН ОО ПО
80177720 10000700
Було виявлено, що при відносній вологості нижче приблизно 15 95 присутньою є кристалічна форма 1 вільної основи М-І3-К4ав,7ав)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4а,5,6,7- тетрагідропіролц|З3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду, в той час як при відносній вологості вище приблизно 15 95, кількісну перевагу має кристалічна форма 2 М-
ІЗ-К4авВ,7а5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4а,5,6,7-тетрагідропіроліІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|-4-
фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду. Така фізична нестабільність є небажаною, особливо для фармацевтичної лікарської речовини або лікарського препарату, обидва з яких підпадають під дію регулятивних нормативних актів щодо твердотільних форм. На відміну від кристалічних форм вільної основи, тозилатна сіль має покращену фізичну стабільність в широкому діапазоні відносної вологості (5-95 90). Як така, згадана тозилатна сіль М-|З3-
К4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4а,5,6,7-тетрагідропіролцІЗ3,4-411И1,3)гіазин-7а-іл|-4- фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду по суті уникає фазових перетворень, залежних від вологості, які пов'язані з відповідними кристалічними формами вільної основи. Крім того, було встановлено, що тозилатна сіль М-ІЗ-К4ав,7а5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4а,5,6,7- тетрагідропіролцІ3,4-4111,3)гіазин-7а-іл|І-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду має суттєво меншу кількість розчинника, що утримується в кристалі (приблизно 1,3 95 в порівнянні з приблизно 7,7 95 розчинника, що утримується в разі хлористоводневої солі М-ІЗ-К4ав,7ав)-2- аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)-4а,5,6,7-тетрагідропіроліІ3,4-4|11,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду). Підвищена ймовірність фазових перетворень, яких може зазнати вільна основа при тривалому зберіганні, може привести до мінливості властивостей, таких як розчинність або швидкість розчинення, що може поставити під загрозу ефективність лікарського препарату. Це також створює додатковий ризик розпаду кристалічних(-ої) структур(і-и) на аморфну форму або накопичення дефектів і невпорядкованості, які можуть привести до хімічної нестабільності і зниження терміну придатності лікарського препарату.
Аналітичні методики іп міго
Для ферментативних і клітинних аналізів іп міго досліджувані сполуки готують в ОМ5О, і одержують 10 мМ маточний розчин. Перед проведенням ферментативних і цілоклітинних аналізів іп міго згаданий маточний розчин послідовно розбавляють ЮОМ5О, для одержання десятиточкової кривої розведення з кінцевою концентрацією сполук в межах від 10 мМ до 0,05
НМ в 96-лунковому планшеті з круглим дном.
Дослідження інгібування протеаз іп міїго:
Експресія людського ВАСЕ1
Людський ВАСЕ1 (номер депонування: АЕ190725) клонують з тотальної мозкової кДНК за допомогою КТ-РСК. Нуклеотидні послідовності, що відповідають амінокислотним послідовностям від Мо 1 до Мо 460, вставляють в кКДНК, що кодує поліпептид Ес-фрагменту людського ІдС:1 (Маззег, єї а!., Зсіеєпсе, 286, 735-741 (1999)). Цей злитий білок ВАСЕ1 (1-460) і людського Ес, названий ПиИВАСЕТ1: ЕС, вбудовують у вектор р.)В02. Людський ВАСЕ1 (1-460):Ес (пивВАСЕТ1:Ес) тимчасово експресується в клітинах НЕК293. 250 мкг кКДНК кожної генно- інженерної конструкції змішують з Ридепе 6, і додають до 1 л клітин НЕК293. Через чотири дні після трансфекції кондиціоновані середовища збирають для очищення.
Очищення пиВвВАСЕТ:Ес.
ПиВАСЕТ1:Ес очищають із застосуванням хроматографії з використанням сорбентів на основі протеїна А. Фермент зберігають при температурі -80 "С невеликими аліквотами.
ЕВЕТ-аналіз ВАСЕ1
Послідовні розведення досліджуваних сполук одержують так, як описано вище. Сполуки додатково розбавляють 20х в буфері КНгРО». Десять мкл кожного розведення додають в кожну лунку рядків від А до Н відповідного планшету чорного кольору для низького зв'язування білка, яка містить реакційну суміш (25 мкл 50 мМ розчину КНегРО», рН 4,6, 1 мМ розчин ТКІТОМ? Х- 100, 1 мг/мл бичачого сироваткового альбуміну і 15 мкМ розчин субстрату ЕКЕТ) (дивись Мапод, еї. аїЇ., У. МейгосНетівігу, 91(6) 1249-59 (2004)). Вміст добре перемішують на планшетному шейкері протягом 10 хв. Для ініціювання реакції на планшет, що містить субстрат і досліджувані сполуки, додають п'ятнадцять мкл 200 пМ розчину людського ВАСЕТ1 (1-460):Ес (дивись Маззег, еї аі.,, Зсієпсе, 286, 735-741 (1999)) в буфері КНгРО»х. Після нетривалого перемішування на планшетному шейкері, КЕРІ суміші в момент часу 0 записують при довжині хвилі збудження 355 нм і довжині хвилі емісії 460 нм. Реакційний планшет вкривають алюмінієвою фольгою, і витримують в темному зволожувальному термостаті при кімнатній температурі протягом періоду часу тривалістю від 16 год. до 24 год. КРИ в кінці інкубації реєструють з тими ж параметрами збудження і емісії, що були використані на момент часу 0. Різниця КЕРІ на момент часу 0 і в кінці інкубації є репрезентативною для активності ВАСЕ1 за умов обробки вказаними сполуками. Різниці КЕРІ наносять на графік у зіставленні з інгібувальною концентрацією, і криву підганяють із застосуванням чотирипараметричного логістичного рівняння для одержання значень ЕсСово та ІСво. (Дивись зЗіппа, еї аї., Маїиге, 402, 537-540 (2000)).
Сполуку, одержану за Препаративною методикою 46, випробовують по суті так, як описано вище, і вона демонструє ВАСЕ1 ІСво 0,615 нМ (0,101, п-5) |Середнє - ЗЕМ; БЕМ:-середня бо квадратична помилка середнього). Ці дані показують, що сполука, одержана за Препаративною методикою 46, інгібує активність очищеного рекомбінантного фермента ВАСЕЇ іп міїго.
Дослідження первинних РОАРР-нейронів
Підтверджувальне цілоклітинне дослідження також здійснюють на первинних культурах нейронів, одержаних з ембріонів трансгенних мишей лінії РОАРР. Первинні кортикальні нейрони одержують з 16-денних ембріонів лінії РОАРР, і культивують в 96-лункових планшетах (15х107 клітин/лунку в середовищі ОМЕМ/Е12 (1:1) плюс 10 95 ЕВ5). Після 2 діб іп міго культуральне середовище замінюють на безсироваткове середовище ОМЕМ/Е12 (1:11), що містить домішку
В27 і 2 мкМ (кінцева концентрація) розчин Ага-С (компанія бідта, С1768). На 5-у добу іп міго нейрони інкубують при температурі 37 "С протягом 24 год. у присутності/за відсутності інгібіторів (розведених в ОМ5О) в необхідній концентрації. Наприкінці інкубації кондиціоновані середовища аналізують на наявність активності бета-секретази, наприклад, за допомогою кількісного аналізу бета-амілоїдних пептидів. Загальну кількість бета-амілоїдних пептидів (Абеїа 1-х) визначають сендвіч-ЕГ ІЗА, використовуючи моноклональне антитіло 266, як іммобілізоване антитіло, а біотиніловане антитіло 306, як репортерне антитіло. Альтернативно бета-амілоїдні пептиди 1-40 та 1-42 визначають сендвіч-ЕГІЗА, використовуючи моноклональне антитіло 253, як іммобілізоване антитіло для бета-амілоїдного пептиду 1-40, і моноклональне антитіло 21212, як іммобілізоване антитіло для бета-амілоїдного пептиду 1-42. При проведенні ЕГІЗА як для бета-амілоїдного пептиду 1-40, так і для бета-амілоїдного пептиду 1-42, біотиніловане антитіло 306 використовують як репортерне антитіло. Концентрація бета-амілоїдного пептиду, вивільненого в кондиціоноване середовище після обробки сполукою, відповідає активності
ВАСЕЇ1 за таких умов. Накреслюють 10-точкову криву інгібування, і підганяють її за допомогою чотирипараметричного логістичного рівняння для визначення значень ЕСбзо та ІСво для ефекту зниження бета-амілоїдного пептиду. Сполуку, одержану за Препаративною методикою 46, випробовували по суті так, як описано вище, і вона продемонструвала наведену нижче активність щодо ефекту зниження бета-амілоїдного пептиду.
Таблиця 4
Сполука, одержана | ЕГІ5А бета-амілоїдного пептиду ЕПЗ5А бета-амілоїдного пептиду (1- за Препаративною (1-40) РОАРР-нейронів 42) РОАРР-нейронів методикою ІСво (НМ) ІСво (НМ)
Середнє-5ЕМ; ЗЕМ-середня квадратична помилка середнього
Ці дані показують, що сполука, одержана за Препаративною методикою 46, інгібує
Зо продукування бета-амілоїдного пептиду в інтактних клітинах.
Іп мімо інгібування бета-секретази
Декілька тваринних моделей, у тому числі моделі на мишах, морських свинках, собаках і мавпах, можуть бути використані для скринінгу щодо інгібування активності бета-секретази іп мімо після обробки сполуками. Тварини, яких використовують в цьому винаході, можуть бути тваринами дикого типу, трансгенними або з нокаутованим геном. Наприклад, підготовлені, як описано у Сатев еї аї., Маїшге 373, 523-527 (1995), моделі на мишах лінії РОАРР та інших нетрансгенних тваринах або тваринах з нокаутованим геном, можуть бути корисними для дослідження іп мімо інгібування продукування бета-амілоїдного пептиду та 5АРРБреїа в присутності інгібувальних сполук. Загалом, 2-12-місячним мишам лінії РОАРР, мишам з нокаутованим геном або нетрансгенним тваринам вводять сполуку в носіях, таких як кукурудзяна олія, циклодекстран, фосфатні буфери, РНАЕМАЗБОЇ МЕ? або інші придатні носії.
Через одну-двадцять чотири години після введення сполуки тварин вмертвлюють, і їх головний мозок, а також спинномозкову рідину і плазму, відокремлюють для кількісного аналізу фрагментів бета-амілоїдних пептидів, С99 і 5БАРР. (Дивись Мау, еї аї., дудоштаї ої Мешиго5сіепсе, 31, 16507-16516 (2011)).
Для здійснення стандартних іп мімо фармакологічних досліджень тваринам вводять різні концентрації сполуки, і порівнюють з контрольною групою, обробленою носієм в той самий час.
Для деяких досліджень у часовому перебігу від вибраних тварин, розпочинаючи з моменту часу
О, одержують тканини мозку, плазму або спинномозкову рідину для встановлення базового рівня. Сполуку або відповідний носій вводять тваринам інших груп, і вмертвлюють їх в різні моменти часу після введення дози. З вибраних тварин одержують мозкову тканину, плазму або спинномозкову рідину, і аналізують на присутність продуктів розщеплення АРР, у тому числі бета-амілоїдних пептидів, ЗАРРбеїа та інших фрагментів АРР, наприклад, шляхом досліджень із застосуванням специфічного сендвіч-ЕГІЗА. Наприкінці випробувального періоду тварин вмертвлюють, і тканини мозку, плазму або спинномозкову рідину належним чином досліджують на присутність бета-амілоїдних пептидів, С99 і 5АРРреїа. Тканини мозку АРР-трансгенних тварин також можуть бути досліджені на кількість бета-амілоїдних бляшок після обробки сполукою. Термін "пептид Абеїа 1-х" у значенні, вживаному у цьому описі, означає суму різновидів Абеїа, які починаються із залишку 1 і закінчуються С-кінцевим залишком, більшим ніж 28. Цей термін визначає більшість різновидів Абеїа, і його часто називають "загальним Абеїа".
У тварин (РОАРР або інші АРР-трансгенні або нетрансгенні миші), яким була введена інгібувальна сполука, може спостерігатись зниження рівня бета-амілоїдного білка або БАРРБеїа в тканинах мозку, плазмі або спинномозковій рідині і зменшення кількості бета-амілоїдних бляшок в тканині головного мозку, у порівнянні з обробленими носієм контрольними тваринами або контрольними тваринами нульового моменту часу. Для сполуки, одержаної за
Препаративною методикою 46, через З год. після введення пероральним шляхом дози (0,3 мг/кг, 1 мг/кг або З мг/кг) цієї сполуки, рівні пептиду Абреїа 1-х зменшуються приблизно на 31 95, 39 9б і 61 95 в гіпокампі головного мозку, і приблизно на 28 95, 42 9б і 64 95 в корі головного мозку, відповідно, в порівнянні з мишами, обробленими носієм.
Враховуючи активність сполуки, одержаної за Препаративною методикою 46, проти ферменту ВАСЕ іп мімо, ці впливи на зниження бета-амілоїдного білка відповідають інгібуванню
ВАСЕ іп оомімо, і додатково демонструють проникнення /М-І(3-К(4авВ,7ав5)-2-аміно-6-(5- фторпіримідин-2-іл)-4,4а,5, 7-тетрагідропіроліІЗ,4-4|1,3)гіазин-7а-іл|-4-фторфеніл|-5- метоксипіразин-2-карбоксаміду до ЦНС.

Claims (9)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Сполука, яка являє собою тозилатну сіль М-(3-К(4ав,7ав5)-2-аміно-6-(5-фторпіримідин-2-іл)- 4 4а,5,7-тетрагідропіроліІЗ 4-41(11,3|гіазин-7а-іл|-А-фторфеніл|-5-метоксипіразин-2-карбоксаміду.
2. Тозилатна сіль за п. 1, яка є кристалічною.
3. Тозилатна сіль за п. 1 або п. 2, яка характеризується значним піком в спектрі дифракції Зо рентгенівських променів, при куті дифракції 2-тета 5,07 в поєднанні з одним або декількома піками, вибраними з групи, яку складають 19,6", 13,87 і 18,5", з допуском на кути дифракції 0,27.
4. Спосіб лікування хвороби Альцгеймера у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки за будь-яким з пп. 1-3.
5. Спосіб лікування прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера у пацієнта, який включає введення пацієнту, який потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки за будь-яким з пп. 1-3.
6. Сполука за будь-яким з пп. 1-3 для застосування в терапії.
7. Сполука за будь-яким з пп. 1-3 для застосування в лікуванні хвороби Альцгеймера.
8. Сполука за будь-яким з пп. 1-3 для застосування при лікуванні прогресування помірного когнітивного порушення у хворобу Альцгеймера.
9. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким з пп. 1-3 з одним або декількома фармацевтично прийнятним(ими) носієм(ями), розчинником(ами) або наповнювачем(ами).
UAA201707108A 2015-01-30 2016-01-22 ТОЗИЛАТНА СІЛЬ N-[3-[(4aR,7aS)-2-АМІНО-6-(5-ФТОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)-4,4a,5,7-ТЕТРАГІДРОПІРОЛ[3,4-d][1,3]ТІАЗИН-7a-ІЛ]-4-ФТОРФЕНІЛ]-5-МЕТОКСИПІРАЗИН-2-КАРБОКСАМІДУ UA119581C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562109733P 2015-01-30 2015-01-30
PCT/US2016/014423 WO2016122968A1 (en) 2015-01-30 2016-01-22 Tosylate salt of n-[3-[(4ar,7as)-2-amino-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-7a-yl]-4-fluoro-phenyl]-5-methoxy-pyrazine-2-carboxamide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA119581C2 true UA119581C2 (uk) 2019-07-10

Family

ID=55275232

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201707108A UA119581C2 (uk) 2015-01-30 2016-01-22 ТОЗИЛАТНА СІЛЬ N-[3-[(4aR,7aS)-2-АМІНО-6-(5-ФТОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)-4,4a,5,7-ТЕТРАГІДРОПІРОЛ[3,4-d][1,3]ТІАЗИН-7a-ІЛ]-4-ФТОРФЕНІЛ]-5-МЕТОКСИПІРАЗИН-2-КАРБОКСАМІДУ

Country Status (41)

Country Link
US (1) US10080758B2 (uk)
EP (1) EP3250575B1 (uk)
JP (2) JP6723250B2 (uk)
KR (1) KR101950129B1 (uk)
CN (1) CN107108657B (uk)
AR (1) AR103406A1 (uk)
AU (1) AU2016211827B2 (uk)
BR (1) BR112017012149A2 (uk)
CA (1) CA2969475C (uk)
CL (1) CL2017001899A1 (uk)
CO (1) CO2017007810A2 (uk)
CR (1) CR20170287A (uk)
CY (1) CY1122548T1 (uk)
DK (1) DK3250575T3 (uk)
DO (1) DOP2017000159A (uk)
EA (1) EA031330B1 (uk)
EC (1) ECSP17048768A (uk)
ES (1) ES2768782T3 (uk)
GT (1) GT201700166A (uk)
HR (1) HRP20192240T1 (uk)
HU (1) HUE048029T2 (uk)
IL (1) IL252754A0 (uk)
LT (1) LT3250575T (uk)
MA (1) MA41420B1 (uk)
MD (1) MD3250575T2 (uk)
ME (1) ME03581B (uk)
MX (1) MX2017009713A (uk)
NZ (1) NZ732381A (uk)
PE (1) PE20171333A1 (uk)
PH (1) PH12017501356A1 (uk)
PL (1) PL3250575T3 (uk)
PT (1) PT3250575T (uk)
RS (1) RS59730B1 (uk)
SG (1) SG11201706038PA (uk)
SI (1) SI3250575T1 (uk)
SV (1) SV2017005478A (uk)
TN (1) TN2017000332A1 (uk)
TW (1) TWI574969B (uk)
UA (1) UA119581C2 (uk)
WO (1) WO2016122968A1 (uk)
ZA (1) ZA201703937B (uk)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR103406A1 (es) * 2015-01-30 2017-05-10 Lilly Co Eli Sal de tosilato
WO2019094608A1 (en) 2017-11-08 2019-05-16 Denali Therapeutics Inc. Anti-bace1 antibodies and methods of use thereof

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT401651B (de) * 1994-06-14 1996-11-25 Biochemie Gmbh 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(z)- hydroximinoacetamido)-3-n,n- dimethylcarbamoyloxymethyl-3-cephem-4-
NZ585671A (en) * 2007-12-07 2012-06-29 Pfizer Tosylate salt of trans-n-isobutyl-3-fluoro-3- [3-fluoro-4- (pyrrolidin-1-yl-methyl) -phenyl] cyclobut anecarboxamide
EP2233474B1 (en) * 2008-01-18 2015-08-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Condensed aminodihydrothiazine derivative
TWI593692B (zh) * 2013-03-12 2017-08-01 美國禮來大藥廠 四氫吡咯并噻嗪化合物
TWI570127B (zh) * 2014-09-15 2017-02-11 美國禮來大藥廠 結晶型N-[3-[(4aR,7aS)-2-胺基-6-(5-氟嘧啶-2-基)-4,4a,5,7-四氫吡咯并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-甲氧基-吡嗪-2-甲醯胺、其用途及醫藥組合物
AR103406A1 (es) * 2015-01-30 2017-05-10 Lilly Co Eli Sal de tosilato

Also Published As

Publication number Publication date
KR101950129B1 (ko) 2019-02-19
MA41420B1 (fr) 2020-02-28
ME03581B (me) 2020-07-20
ES2768782T3 (es) 2020-06-23
SI3250575T1 (sl) 2019-12-31
EA031330B1 (ru) 2018-12-28
DOP2017000159A (es) 2017-07-31
PL3250575T3 (pl) 2020-06-01
CA2969475A1 (en) 2016-08-04
AU2016211827B2 (en) 2018-04-26
CA2969475C (en) 2019-06-18
CN107108657A (zh) 2017-08-29
CL2017001899A1 (es) 2018-03-23
EP3250575B1 (en) 2019-11-20
GT201700166A (es) 2018-11-23
PT3250575T (pt) 2020-01-16
AU2016211827A1 (en) 2017-06-22
SV2017005478A (es) 2018-02-09
JP2019142902A (ja) 2019-08-29
RS59730B1 (sr) 2020-02-28
ZA201703937B (en) 2019-01-30
EA201791229A1 (ru) 2017-11-30
EP3250575A1 (en) 2017-12-06
BR112017012149A2 (pt) 2018-01-02
MX2017009713A (es) 2017-11-17
SG11201706038PA (en) 2017-08-30
JP6723250B2 (ja) 2020-07-15
NZ732381A (en) 2018-05-25
PE20171333A1 (es) 2017-09-13
ECSP17048768A (es) 2017-11-30
AR103406A1 (es) 2017-05-10
US20170368071A1 (en) 2017-12-28
TW201636354A (zh) 2016-10-16
TN2017000332A1 (en) 2019-01-16
JP2018503666A (ja) 2018-02-08
CO2017007810A2 (es) 2017-10-20
CR20170287A (es) 2017-07-20
PH12017501356A1 (en) 2017-12-11
KR20170097782A (ko) 2017-08-28
CY1122548T1 (el) 2021-01-27
HRP20192240T1 (hr) 2020-03-06
DK3250575T3 (da) 2020-01-20
TWI574969B (zh) 2017-03-21
MD3250575T2 (ro) 2020-03-31
HUE048029T2 (hu) 2020-05-28
CN107108657B (zh) 2021-10-08
LT3250575T (lt) 2020-02-10
US10080758B2 (en) 2018-09-25
WO2016122968A1 (en) 2016-08-04
IL252754A0 (en) 2017-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA031546B1 (ru) Селективные ингибиторы bace1
JP2006523219A (ja) プロテインキナーゼインヒビター
UA119581C2 (uk) ТОЗИЛАТНА СІЛЬ N-[3-[(4aR,7aS)-2-АМІНО-6-(5-ФТОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)-4,4a,5,7-ТЕТРАГІДРОПІРОЛ[3,4-d][1,3]ТІАЗИН-7a-ІЛ]-4-ФТОРФЕНІЛ]-5-МЕТОКСИПІРАЗИН-2-КАРБОКСАМІДУ
EP3592740B1 (en) Cyclic substituted imidazo[4,5-c]quinoline derivatives
EP3194408B1 (en) A tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-derivative as bace inhibitor
CA3108158C (en) 5-methyl-4-fluoro-thiazol-2-yl compounds
EP3271356B1 (en) Selective bace1 inhibitors