如本文所用，術語「C
1
-C
6
烷基」係指1至6個碳原子之直鏈或分支鏈、單價飽和脂族鏈，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、第三丁基及其類似基團。 同樣，術語「C
1
-C
3
烷基」包括甲基、乙基、異丙基及其類似基團。 如本文所用，術語「C
1
-C
6
鹵烷基」係指經一或多個可相同或不同之鹵素原子取代之C
1
-C
6
烷基部分。實例包括三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、3,3,3-三氟丙基、4-氯丁基及其類似基團。 同樣，術語「C
1
-C
3
鹵烷基」包括三氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基、3,3,3-三氟丙基及其類似基團。 如本文所用，術語「C
1
-C
3
硫代鹵烷基」係指經由硫原子鍵聯之C
1
-C
3
鹵烷基部分。 如本文所用，術語「C
3
-C
4
環烷基」係指環丙基或環丁基。 如本文所用，術語「C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基-」係指經由C
1
-C
2
烷基鏈鍵聯之C
3
-C
4
環烷基。 如本文所用，術語「C
2
-C
6
烯基」係指具有2至6個碳原子及一個雙鍵之直鏈或分支鏈烯基鏈，例如乙烯基、丙-1-烯基、丁-2-烯基及其類似基團。 如本文所用，術語「C
2
-C
6
鹵烯基」係指經一或多個可相同或不同之鹵原子取代之C
2
-C
6
烯基部分。 如本文所用，術語「C
2
-C
6
炔基」係指具有2至6個碳原子及一個三鍵之直鏈或分支鏈炔基鏈，例如乙炔基、丙-2-炔基、丁-3-炔基及其類似基團。 如本文所用，術語「C
2
-C
6
鹵炔基」係指經一或多個可相同或不同之鹵原子取代之C
2
-C
6
炔基部分。 如本文所用，術語「鹵基」係指氯、溴、碘或氟原子。 如本文所用，術語「C
1
-C
3
烷氧基」係指具有1至3個連接至氧原子之碳原子的直鏈或分支鏈烷基鏈，例如乙氧基、丙氧基、第三丁氧基及其類似基團。 如本文所用，術語「C
1
-C
3
鹵烷氧基」係指經一或多個可相同或不同之鹵素原子取代之C
1
-C
3
烷氧基部分。實例包括三氟甲氧基、2-氟乙氧基、3-氟丙氧基、3,3,3-三氟丙氧基、4-氯丁氧基及其類似基團。 如本文所用，術語「控制」係指減少害蟲或寄生蟲的數目、消除害蟲或寄生蟲及/或預防進一步害蟲或寄生蟲感染。 如本文所用，術語「治療」係指限制、減緩、遏止或逆轉存在之症狀或疾病之進展或嚴重程度。 如本文所用，術語「預防」係指避免動物中之症狀或疾病發展。 如本文所用，術語「動物」可指哺乳動物及非哺乳動物，諸如禽類或魚類。在哺乳動物的情況下，其可為人類或非人類哺乳動物。非人類哺乳動物包括(但不限於)家畜動物及伴侶動物。家畜動物包括(但不限於)牛、駱駝、豬、綿羊、山羊及馬。伴侶動物包括(但不限於)狗、貓及兔。 如本文所用，術語「害蟲」包括(但不限於)動物及植物害蟲。術語涵蓋害蟲之生命週期中之所有階段。 「寄生蟲」為存活於宿主動物之中或之上且藉由以宿主動物為代價得到養分而受益之害蟲。「內部寄生蟲」為存活於宿主動物體之中的寄生蟲。「外部寄生蟲」為存活於宿主動物之上的寄生蟲。外部寄生蟲包括(但不限於)壁虱、昆蟲及甲殼動物(例如海虱)。壁虱(或蜱蟎目)亞綱包含蜱及蟎。蜱包括(但不限於)以下屬之成員：扇頭蜱屬(
Rhipicephalus
)，例如微小扇頭蜱(
Rhipicaphalus microplus
)(牛蜱)及血紅扇頭蜱(
Rhipicephalus sanguineus
)；花蜱屬(
Amblyomma
)；矩頭蟬屬(
Dermacentor
)；血蜱屬(
Haemaphysalis
)；璃眼蜱屬(
Hyalomma
)；硬蜱屬(
Ixodes
)；扇革蜱屬(
Rhipicentor
)；巨肢蜱屬(
Margaropus
)；銳緣蜱屬(
Argas
)；耳蜱屬(
Otobius
)；及鈍緣蜱屬(
Ornithodoros
)。蟎包括(但不限於)以下屬之成員：皮蟎屬(
Chorioptes
)，例如牛皮蟎(
Chorioptes bovis
)；癢蟎屬(
Psoroptes
)，例如羊癢蟎(
Psoroptes ovis
)；姬螯蟎屬(
Cheyletiella
)；皮刺蟎屬(
Dermanyssus
)，例如雞皮刺蟎(
Dermanyssus gallinae
)；禽刺蟎屬(
Ortnithonyssus
)；蠕形蟎屬(
Demodex
)，例如犬蠕形蟎(
Demodex canis
)；疥蟎屬(
Sarcoptes
)，例如疥蟎(
Sarcoptes scabiei
)；及瘡蟎屬(
Psorergates
)。昆蟲包括(但不限於)以下目之成員：蚤目(Siphonaptera)、雙翅目(Diptera)、毛虱目(Phthiraptera)、鱗翅目(Lepidoptera)、鞘翅目(Coleoptera)及同翅目(Homoptera)。蚤目綱之成員包括(但不限於)貓櫛首蚤(
Ctenocephalides felis
)及犬櫛首蚤(
Ctenocephalides canis
)。雙翅目綱之成員包括(但不限於)家蠅屬(
Musca spp
)；膚蠅，例如大馬胃蠅(
Gasterophilus intestinalis
)及羊鼻蠅(
Oestrus ovis
)；螫蠅；馬蠅，例如麻虻屬(
Haematopota spp .
)及虻屬(
Tabunus spp
)；黑角蠅(
haematobia
)，例如騷擾角蠅(
haematobia irritans
)；螫蠅屬(
Stomoxys
)；綠蠅屬(
Lucilia
)；蠓；及蚊子。毛虱目綱之成員包括(但不限於)吸血虱及羽虱，例如羊毛虱(
Bovicola Ovis
)及牛羽虱(
Bovicola Bovis
)。 如本文所用，術語「有效量」係指本發明化合物或其鹽之量或劑量，其在向動物之單一或多個劑量投與後在動物之中或之上提供所需效應。 有效量可輕易地由作為熟習此項技術者之主治診斷醫師藉由使用已知技術且藉由觀察在類似情況下得到之結果確定。在確定有效量中，主治診斷醫師考慮多個因素，其包括(但不限於)：哺乳動物之種類；其尺寸、年齡及一般健康狀況；待控制之寄生蟲及感染程度；所涉及之特定疾病或病症；涉及程度或疾病或病症之嚴重程度；個體之反應；所投與之特定化合物；投與模式；所投與之製劑之生物可用性特徵；所選擇之劑量方案；伴隨藥療之使用；及其他相關情況。 本發明化合物可藉由任何具有所需效應之途徑向動物投與，包括(但不限於)局部、經口、非經腸及皮下。局部投與為較佳的。適合於局部投與之調配物包括例如溶液、乳液及懸浮液且可採取傾倒、沾染、噴灑、噴射或浸漬的形式。在替代方案中，本發明化合物可藉助於耳標或套環投與。 本發明化合物之鹽形式包括醫藥學上可接受之鹽及獸醫學可接受之鹽。醫藥學上及獸醫學可接受之鹽及其常用製備方法為此項技術中所熟知的。參見例如Gould, P.L., 「Salt selection for basic drugs,」
International Journal of Pharmaceutics
, 33: 201-217 (1986)；Bastin, R.J.等人「Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities,」
Organic Process Research and Development
, 4: 427-435 (2000)；及Berge, S.M.等人, 「Pharmaceutical Salts,」
Journal of Pharmaceutical Sciences
, 66: 1-19, (1977)。熟習合成技術者應瞭解，本發明化合物使用一般熟習此項技術者熟知之技術及條件可輕易地轉化為鹽(諸如鹽酸鹽)且可以鹽形式分離。另外，熟習合成技術者應瞭解，本發明化合物可輕易地轉化為對應游離鹼且可以對應游離鹼形式自對應鹽分離。 如一般熟習此項技術者應瞭解，式I化合物含有立體對稱中心，其以星號指示於以下結構中：
本發明涵蓋外消旋體及個別對映異構體兩者。具有較佳立體化學之化合物陳述於下文。 較佳式I化合物或其鹽包括具有以下特徵中之一或多者之化合物： a) Y為直接鍵； b) X為O； c) X為S； d) R
3
為甲基； e) Q
1
為N； f) Q
2
為CR
5
且R
5
為H、C
1
-C
3
烷基、C
1
-C
3
烷氧基C(O)-或(C
1
-C
3
烷氧基)
2
CH-； g) Q
2
為CR
5
且R
5
為H、C
1
-C
3
烷基或(C
1
-C
3
烷氧基)
2
CH-； h) Q
2
為CR
5
且R
5
為H或C
1
-C
3
烷基； i) Q
2
為CR
5
且R
5
為H、甲基或(CH
3
CH
2
O)
2
CH-； j) Q
2
為CR
5
且R
5
為H或甲基； k) Q
2
為CR
5
且R
5
為H； l) Q
1
為N，Q
2
為CR
5
且R
5
為H、甲基或(CH
3
CH
2
O)
2
CH-； m) Q
1
為N、Q
2
為CR
5
且R
5
為H或甲基； n) R
4
為2-吡啶；或視情況經C
1
-C
3
烷氧基或鹵基取代之2-嘧啶； o) R
4
為2-吡啶；或視情況經C
1
-C
3
烷氧基取代之2-嘧啶； p) R
4
為2-吡啶或2-嘧啶； q) R
4
為2-嘧啶； r) R
1
為H；C
1
-C
6
鹵烷基；視情況經CN或Si(CH
3
)
3
取代之C
1
-C
6
烷基；C
3
-C
6
炔基；C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基，其中C
3
-C
4
環烷基視情況經1或2個鹵原子取代；氧雜環丁-3-基-CH
2
-；或視情況經鹵基取代之苯甲基； s) R
1
為H；C
1
-C
6
鹵烷基；視情況經CN或Si(CH
3
)
3
取代之C
1
-C
6
烷基；C
3
-C
6
炔基；或C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基-，其中C
3
-C
4
環烷基視情況經1或2個鹵原子取代； t) R
1
為C
1
-C
6
鹵烷基；C
1
-C
6
烷基；C
3
-C
6
炔基；C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基-，其中C
3
-C
4
環烷基視情況經1或2個鹵原子取代； u) R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-、2,2-二氟環丙基-CH
2
、2,2-二氯環丙基-CH
2
-、H、CH
3
-、(CH
3
)
3
SiCH
2
-、CH
3
CH
2
或CN-CH
2
-； v) R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-、2,2-二氟環丙基-CH
2
-或2,2-二氯環丙基-CH
2
-； w) R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-、2,2-二氟環丙基-CH
2
-、H、CH
3
、(CH
3
)
3
SiCH
2
-或CH
3
CH
2
-； x) R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-或2,2-二氟環丙基-CH
2
-； x) R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-或FCH
2
CH
2
CH
2
-； y) R
1
為CH≡C-CH
2
-、環丙基-CH
2
-、H或CH
3
； z) R
1
為CH≡C-CH
2
-或環丙基-CH
2
-； aa) R
1
為環丙基-CH
2
-； bb) R
2
為苯基、3-吡啶或4-吡啶，其經一個或兩個選自以下之取代基取代：C
1
-C
3
鹵烷基、C
1
-C
3
鹵烷氧基、鹵基、CN或C(S)NH
2
，其限制條件為取代基不在與鍵結至
基團之碳鄰接之任一碳上； cc) R
2
為苯基、3-吡啶或4-吡啶，其經一個或兩個選自以下之取代基取代：C
1
-C
3
鹵烷基、C
1
-C
3
鹵烷氧基、鹵基或CN，其限制條件為取代基不在與鍵結至
基團之碳鄰接之任一碳上； dd) R
2
為苯基或3-吡啶，其經一個或兩個選自以下之取代基取代：C
1
-C
3
鹵烷基、C
1
-C
3
鹵烷氧基、鹵基或CN，其限制條件為取代基不在與鍵結至
基團之碳鄰接之任一碳上； ee) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基、5-三氟甲基吡啶-3-基、3-溴-5-三氟甲基苯基、3-氰基-5-三氟甲基-苯基或2,6-雙(三氟甲基)吡啶-4-基； ff) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基、5-三氟甲基吡啶-3-基、3-溴-5-三氟甲基苯基或3-氰基-5-三氟甲基-苯基； gg) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基或5-三氟甲基吡啶-3-基； hh) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基、5-三氟甲基吡啶-3-基或3-氰基-5-三氟甲基苯基； ii) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基或5-三氟甲基吡啶-3-基； jj) R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基。 較佳本發明化合物為式II'化合物：
X為O或S； R
1
為H；C
1
-C
6
鹵烷基；視情況經CN或-Si(CH
3
)
3
取代之C
1
-C
6
烷基；C
3
-C
6
炔基；C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基，其中C
3
-C
4
環烷基視情況經1或2個鹵原子取代；氧雜環丁-3-基-CH
2
-；或視情況經鹵基取代之苯甲基； R
2
為苯基、3-吡啶或4-吡啶，其經一個或兩個選自以下之取代基取代：C
1
-C
3
鹵烷基、C
1
-C
3
鹵烷氧基、鹵基、CN或C(S)NH
2
，其限制條件為取代基不在與鍵結至
基團之碳鄰接之任一碳上； R
4
為2-吡啶；或視情況經C
1
-C
3
烷氧基或鹵基取代之2-嘧啶； R
5
為H、C
1
-C
3
烷基、C
1
-C
3
烷氧基C(O)-或(C
1
-C
3
烷氧基)
2
CH-，或其鹽。 較佳本發明化合物為式II化合物：
其中： R
1
為C
1
-C
6
鹵烷基；C
1
-C
6
烷基；C
3
-C
6
炔基；或C
3
-C
4
環烷基-C
1
-C
2
烷基-，其中C
3
-C
4
環烷基視情況經1或2個鹵原子取代； R
2
為苯基或3-吡啶，其經一個或兩個選自以下之取代基取代：C
1
-C
3
鹵烷基、C
1
-C
3
鹵烷氧基、鹵基或CN，其限制條件為取代基不在與鍵結至
基團之碳鄰接之任一碳上； R
4
為2-吡啶；或視情況經C
1
-C
3
烷氧基取代之2-嘧啶； R
5
為H或C
1
-C
3
烷基，或其鹽。 尤其較佳的本發明化合物為式II'a或IIa之化合物：
其中X、R
1
、R
2
、R
4
及R
5
如分別關於式II'或式II所定義；或其鹽。 較佳式I、II'及II'a之化合物或其鹽包括如下之彼等：其中R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-、2,2-二氟環丙基-CH
2
-、2,2-二氯環丙基-CH
2
-、H、CH
3
、(CH
3
)
3
SiCH
2
-、CH
3
CH
2
-或CN-CH
2
-；R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基、5-三氟甲基吡啶-3-基、3-溴-5-三氟甲基苯基、3-氰基-5-三氟甲基苯基或2,6-雙(三氟甲基)吡啶-4-基；R
4
為視情況經C
1
-C
3
烷氧基取代之2-吡啶或2-嘧啶；且R
5
為H、甲基或(CH
3
CH
2
O)
2
CH-。 較佳式I、II'、II、II'a及IIa之化合物或其鹽包括如下之彼等：其中R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-、2,2-二氟環丙基-CH
2
-或2,2-二氯環丙基-CH
2
-；R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基或5-三氟甲基吡啶-3-基；R
4
為視情況經C
1
-C
3
烷氧基取代之2-吡啶或2-嘧啶且R
5
為H或甲基。 更佳式I、II'、II、II'a及IIa之化合物或其鹽包括如下之彼等：R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
CH
2
-或2,2-二氟環丙基-CH
2
-；R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3,5-二氯苯基、3-三氟甲氧基苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基甲基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基或5-三氟甲基吡啶-3-基；R
4
為視情況經C
1
-C
3
烷氧基取代之2-吡啶或2-嘧啶；且R
5
為H或甲基。 更佳式I、II'、II、II'a及IIa之化合物或其鹽包括如下之彼等：R
1
為環丙基-CH
2
-、正丙基、CH≡C-CH
2
-、CF
3
CH
2
CH
2
-、FCH
2
CH
2
-或FCH
2
CH
2
CH
2
-；R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基或5-三氟甲基吡啶-3-基；R
4
為2-吡啶或2-嘧啶；且R
5
為H或甲基。 更佳式I、II'及II'a之化合物或其鹽包括如下之彼等：其中R
1
為CH≡C-CH
2
-、環丙基-CH
2
-、H或CH
3
；R
2
為3,5-雙(三氟甲基)苯基、3-氯-5-三氟甲基苯基、3-氰基苯基、3-氯-5-三氟甲氧基苯基、5-三氟甲基吡啶-3-基或3-氰基-5-三氟甲基苯基；R
4
為2-吡啶或2-嘧啶；且R
5
為H、甲基或(CH
3
CH
2
O)
2
CH-。 較佳本發明化合物為N-(環丙基甲基)-N-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。尤其較佳之化合物為N-(環丙基甲基)-N-[(1S)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。另一較佳之本發明化合物為
N
-丙-2-炔基-
N
-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。尤其較佳之化合物為
N
-丙-2-炔基-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。另一較佳本發明化合物為
N
-甲基-
N
-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。尤其較佳之化合物為
N
-甲基-
N
-[(1S)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺，或其鹽。 本發明化合物可用於控制寄生蟲。特定言之，其適用於控制動物上之外部寄生蟲。在一個實施例中，本發明化合物可用於控制牛身上之蜱。在一替代實施例中，本發明化合物可用於控制綿羊身上之蜱。在另一替代實施例中，本發明化合物可用於控制綿羊身上之虱。在另一替代實施例中，本發明化合物可用於控制狗或貓身上之蜱。在另一替代實施例中，本發明化合物可用於控制狗或貓身上之跳蚤。在另一替代實施例中，本發明化合物可用於控制狗或貓身上之虱。 本發明化合物亦可用於預防及/或治療疾病，例如藉由外部寄生蟲傳播之原蟲、細菌及病毒性疾病。特定言之，其可用於預防及/或治療焦蟲病、邊蟲病及萊姆病(lyme disease)。 本發明化合物可單獨或與一或多種針對寄生蟲或害蟲具活性之其他化合物組合使用，包括阿福拉納(afoxolaner)、弗拉拉納(fluralaner)、洛替拉納(lotilaner)、蘇洛拉納(surolaner)、阿苯達唑(albendazole)、坎苯達唑(cambendazole)、芬苯達唑(fenbendazole)、氟苯達唑(flubendazole)、甲苯達唑(mebendazole)、奧芬達唑(oxfendazole)、對苯達唑(parabendazole)、噻苯達唑(tiabendazole)、三氯苯咪唑(triclabendazole)、三亞蟎(amitraz)、得米地曲(demiditraz)、氯舒隆(clorsulon)、氯氰碘柳胺(closantel)、羥氯紮胺(oxyclonazide)、碘醚柳胺(rafoxanide)、賽酚寧(cyphenothrin)、氟氯苯菊酯(flumethrin)、百滅寧(permethrin)、賽滅淨(cyromazine)、德曲安特(derquantel)、雙胺酚泰(diamphenetide)、地昔尼爾(dicyclanil)、呋蟲胺(dinotefuran)、吡蟲啉(imidacloprid)、烯啶蟲胺(nitenpyram)、噻蟲嗪(thiamethoxam)、阿巴汀(abamectin)、多拉克汀(doramectin)、因滅汀(emamectin)、依立諾克汀(eprinomectin)、伊維克汀(ivermectin)、莫昔克汀(moxidectin)、司拉克汀(selamectin)、米爾貝黴素肟(milbemycin oxime)、艾默德斯(emodepside)、依西太爾(epsiprantel)、費普尼(fipronil)、啶蜱脲(fluazuron)、福薩豐(fluhexafon)、因得克(indoxacarb)、左旋咪唑(levamisol)、祿芬隆(lufenuron)、氰氟蟲胺(metaflumizone)、美賜平(methoprene)、莫尼特爾(monepantel)、莫侖太(morantel)、氯硝柳胺(niclosamide)、硝異硫氰二苯醚(nitroscanate)、硝羥碘苄腈(nitroxynil)、諾伐隆(novaluron)、奧克太爾(oxantel)、吡喹酮(praziquantel)、噻嘧啶(pyrantel)、派瑞樂(pyriprole)、百利普芬(pyriproxyfen)、維吉黴素(sisapronil)、賜諾殺(spinosad)、斯平托蘭(spinetoram)及三氟苯嘧啶(triflumezopyrim)。 式I、II'、II、II'a及IIa之化合物可由一般熟習此項技術者遵循技術識別的技術及程序製備。更特定言之，式I、II'、II、II'a及IIa之化合物可如下文闡述之流程、方法及實例中所闡述製備。熟習此項技術者將認識到，以下流程中之個別步驟可變化以得到式I、II'、II、II'a及IIa之化合物。試劑及起始物質為一般技術者容易獲得的。除非另外規定，否則所有取代基為如先前所定義。 為清楚起見，在以下流程中，未指定某些立體對稱中心且已消除某些取代基，且並不意欲以任何方式限制流程之教示。此外，個別對映異構體可由一般熟習此項技術者在合成本發明化合物或醫藥學上可接受之鹽中之任何方便的時刻藉由諸如選擇性結晶技術或對掌性層析之方法分離或分解(參見例如J. Jacques,等人, 「
Enantiomers , Racemates , and Resolutions
」, John Wiley and Sons, Inc., 1981，以及E.L. Eliel及S.H. Wilen, 「
Stereochemistry of Organic Compounds
」, Wiley-Interscience, 1994)。
縮寫及符號
AcOH：乙酸 aq.：水溶液 br：寬峰 d：二重峰 DCC：N,N'-二環己基碳化二亞胺 DIPEA：二異丙基乙胺 DMF：N,N-二甲基甲醯胺 DMSO：二甲亞碸
ee
：對映異構過量 eq.：當量 ES：電噴霧電離 EtOAc：乙酸乙酯 HATU：1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-***并[4,5-b]吡錠3-氧化物六氟磷酸鹽 HOBt：1-羥基苯并***水合物 HPLC：高效液相層析
i
PrOH：異丙醇
J
：偶合常數 LCMS：液相層析質譜法
m / z
：質荷比 M：莫耳濃度 m：多重峰 MeOH：甲醇 NMR：核磁共振 q：四重峰 r.t.：室溫 R
t
：滯留時間 s：單重峰 sat.：飽和 T：溫度 t：三重峰 T3P：丙基膦酸酐 THF：四氫呋喃 wt.：重量 δ：化學位移 λ：波長 式I'化合物可如以下流程所說明地製備，其中R
1
、R
2
、R
3
、R
4
、Q
1
、Q
2
及Y如先前所定義。
流程 1 式(a)之唑化合物與式(b)之羧酸反應以形成式I化合物。舉例而言，式(a)之唑、式(b)之羧酸、適合之偶合試劑(諸如T3P
®
、HATU、DCC或HOBt)、適合之鹼(諸如三乙胺或DIPEA)於適合溶劑(諸如乙酸乙酯或DMF)中之混合物在約0至100℃範圍內之溫度下混合，得到式I化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 式(b)之羧酸為可商購的或可藉由熟習此項技術者已知之方法合成。 必需的式(a)之唑化合物可如以下流程中所說明地製備，其中R
1
、R
3
、R
4
、Q
1
、Q
2
及Y如先前所述且LG為適合之離去基。
流程 2 式(c)之胺與式(d)之經取代唑反應以形成式(a)化合物。舉例而言，式(d)之唑、式(c)之胺、適合之鹼(諸如K
2
CO
3
、NaH或DIPEA)於適合溶劑(諸如乙腈或DMF)中之混合物在約20至120℃範圍內之溫度下混合，得到式(a)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 或者，式(d)之經取代唑與氨反應以形成式(e)化合物。舉例而言，氨於適合溶劑(諸如甲醇)中之溶液及式(d)之經取代唑在密封管中在約0至25℃範圍內之溫度下混合，得到式(e)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如濕磨)純化。 適合溶劑(諸如K
2
CO
3
或DIPEA)中之式(e)之經取代唑、式(f)化合物、適合之鹼(諸如乙腈或DMF)在約20至120℃範圍內之溫度下混合，得到式(a)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 式(c)之胺及式(f)化合物為可商購的或可藉由熟習此項技術者已知之方法合成。 必需的式(d)之唑化合物可如以下流程中所說明地製備，其中R
3
、R
4
、R
5
、Q
1
、Q
2
及Y如先前所述，LG為適合之離去基。
流程 3 式(h)之醯胺與
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛(g)反應以形成式(i)化合物，其隨後與肼(j)在酸性條件下反應以形成式(d)化合物。舉例而言，式(h)化合物及式(g)之
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛在回流下於適合溶劑(諸如CH
2
Cl
2
)中反應，得到式(i)化合物。在移除溶劑後，式(i)化合物與經取代肼(j)在約20至100℃範圍內之溫度下於適合溶劑(諸如1,4-二噁烷、乙酸或此類溶劑之混合物)中反應，得到式(d)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 或者，式(k)之羧酸衍生物與式(l)之胺及適合之鹼(諸如三乙胺或DIPEA)在約0至120℃範圍內之溫度下於適合溶劑(諸如甲苯)中反應。所得化合物(m)可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。所得式(m)之醯胺及五氯化磷在室溫下於適合溶劑(諸如CH
2
Cl
2
)中反應且接著在0℃下將三甲基矽烷基疊氮化物添加至混合物且在室溫下攪拌混合物，得到式(d)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 式(g)之
N , N
-二甲醯胺縮醛、式(h)之醯胺、式(k)之羧酸衍生物及式(j)之肼為可商購的且可藉由熟習此項技術者已知之方法合成。 式I''化合物可如以下流程中所說明地製備，其中R
1
、R
2
、R
3
、R
4
、R
5
及Y如先前所定義。
流程 4 式(n)之醯胺與式(g)之
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛反應以形成式(o)化合物，其隨後與式(j)之經取代肼在酸性條件下反應以形成式I''化合物。舉例而言，式(n)化合物及式(g)
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛在回流下於適合溶劑(諸如CH
2
Cl
2
)中反應，得到式(o)化合物。在移除溶劑後，式(o)化合物與式(j)之經取代肼在約20至100℃範圍內之溫度下於適合溶劑(諸如1,4-二噁烷、乙酸或此類溶劑之混合物)中反應。所得式I''化合物可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 必需的式(n)之醯胺可如以下流程中所說明地製備，其中R
1
、R
2
、R
3
及Y如先前所述。
流程 5 式(p)之胺基醯胺與式(b)之羧酸反應以形成式(n)化合物。舉例而言，式(p)之胺基醯胺、羧酸(b)、適合之偶合試劑(諸如T3P
®
、HATU、DCC或HOBt)、適合之鹼(諸如三乙胺或DIPEA)於適合溶劑(諸如乙酸乙酯或DMF)中之混合物在約0至100℃範圍內之溫度下混合，得到式(n)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。 或者，式(q)之氨基酸與亞硫醯氯在室溫下於適合溶劑(諸如MeOH)中反應，得到式(r)之胺基酯。所得胺基酯(r)與醛或酮、適合還原劑(諸如三乙醯氧基硼氫化鈉)、脫水劑(諸如Na
2
SO
4
)在室溫下於適合溶劑(諸如乙酸)中反應，得到式(s)化合物。所得式(s)之胺基酯接著與式(b)之羧酸、適合之偶合試劑(諸如T3P
®
)、適合之鹼(諸如DIPEA)在約90℃下於適合溶劑(諸如乙酸乙酯)中反應，得到式(t)之醯胺基酯，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。式(t)之所得醯胺基酯與氮化鎂在密封管中在約80℃下於適合溶劑(諸如MeOH)中反應，得到式(n)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析或萃取)純化。 式(b)及(q)之化合物為可商購的。必需的式(p)之胺基醯胺化合物為可商購的或可如以下流程中所說明地製備，其中R
1
、R
3
及Y如先前所述且LG為適合之離去基。 式(c)及(h)之化合物為可商購的。
流程 6 式(c)之胺與式(h)之醯胺反應以形成式(p)化合物。舉例而言，式(c)之胺、式(h)之醯胺、適合之鹼(諸如K
2
CO
3
或DIPEA)於適合溶劑(諸如乙腈或DMF)中之混合物在25-80℃下混合，得到式(p)化合物，其可接著經分離且在必要及需要時使用此項技術中熟知之技術(諸如層析)純化。
流程 7 式(q)之鹽酸脒與式(r)之酸反應以形成式(t)化合物，其隨後與式(j)之經取代肼在酸性條件下反應以形成式I''化合物。
製備 1 2 -[ 5 -( 1 - 溴乙基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 1 - 基 ] 吡啶
向2-溴丙醯胺(2.28 g)於CH
2
Cl
2
(50 mL)中之溶液中添加
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛(3.00 mL)且在回流下攪拌1小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH(15 mL/15 mL)中，添加2-肼基吡啶(1.80 g)且在90℃下攪拌2小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與CH
2
Cl
2
之間。分離各層，用CH
2
Cl
2
萃取水相三次，經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到2-[5-(1-溴乙基)-1,2,4-***-1-基]吡啶(2.82 g，74%)。LCMS (方法2): R
t
1.31 min,
m/z
(ES+) = 253 [M(
79
Br)+H]
+
及255 [M(
81
Br)+H]
+
。
製備 2 2 -[ 5 -( 1 - 溴乙基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 1 - 基 ] 嘧啶
向2-溴丙醯胺(2.5 g)於CH
2
Cl
2
(30 mL)中之溶液中添加
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛(3.3 mL)且在回流下攪拌1.5小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH(15 mL/15 mL)中，添加2-肼基嘧啶(2.2 g)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮且將殘餘物分配於水與EtOAc之間。分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)洗滌有機相，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到2-[5-(1-溴乙基)-1,2,4-***-1-基]嘧啶(2.0g，48%)。LCMS (方法4): R
t
0.55 min,
m/z
(ES+) = 254 [M(
79
Br)+H]
+
及256 [M(
81
Br)+H]
+
。
製備 3 N -( 環丙基甲基 )- 1 -[ 2 -( 2 - 吡啶基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙胺
向2-[5-(1-溴乙基)-1,2,4-***-1-基]吡啶(12.2 g)及K
2
CO
3
(20.1 g)於DMF (100 mL)中之懸浮液中添加環丙烷甲胺(8.29 mL)且在80℃下攪拌混合物2小時。將混合物冷卻至室溫且經由Celite
®
過濾，用EtOAc洗滌。在減壓下濃縮濾液且將殘餘物分配於水與EtOAc之間。分離各層且用EtOAc萃取水層兩次。經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(11.4 g，97%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm -0.09-0.11 (2H, m), 0.36-0.47 (2H, m), 0.83-1.03 (1H, m), 1.59 (3H, d,
J
6.6 Hz), 2.29 (1H, dd,
J
11.9, 7.5 Hz), 2.50 (1H, dd,
J
11.7, 6.6 Hz), 4.96 (1H, q,
J
6.8 Hz), 7.31-7.38 (1H, m), 7.90-7.93 (2H, m), 7.97 (1H, s), 8.52 (1H, dt,
J
4.7, 1.3 Hz)。 表1中所闡述之製備
4 - 19
之化合物基本上地係如製備3中所述加以製備。
表 1 製備 20 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙胺
添加氨(7 M於MeOH中，15 mL)至2-[5-(1-溴乙基)-1,2,4-***-1-基]嘧啶(1.14 g)且在室溫下攪拌24小時。在減壓下濃縮，得到1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙胺(1.27 g，61%純度，90%)。LCMS (方法5): R
t
0.35 min,
m/z
(ES+) = 191 [M+H]
+
。
製備 21 甲烷磺酸 ( 2 , 2 - 二氟環丙基 ) 甲酯
在0℃下將甲磺醯氯(600 μL)添加至三乙胺(1.4 mL)及(2,2-二氟環丙基)甲醇(677 mg)於CH
2
Cl
2
(10 mL)中之混合物中且攪拌2小時。升溫至室溫且攪拌隔夜。分配於水與CH
2
Cl
2
之間，分離各層，用CH
2
Cl
2
萃取水相兩次，經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾且在減壓下濃縮，得到甲烷磺酸(2,2-二氟環丙基)甲酯(1.17 g，86%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 1.27-1.35 (1 H, m), 1.63 (1 H, tdd,
J
11.4, 8.2, 4.9 Hz), 1.97-2.14 (1 H, m), 3.04 (3 H, s), 4.18-4.38 (2 H, m)。
製備 22 N -[( 2 , 2 - 二氟環丙基 ) 甲基 ]- 1 -[ 2 -( 2 - 吡啶基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙胺
在0℃下將氨(在MeOH中飽和，1.8 mL)添加至密封管中之2-[5-(1-溴乙基)-1,2,4-***-1-基]吡啶(1.80 g)且攪拌1小時。允許升溫至室溫且攪拌隔夜。在減壓下濃縮且在戊烷中濕磨殘餘物，得到1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(1.10 g，82%)。LCMS (方法8): R
t
2.51 min,
m/z
(ES+) = 190 [M+H]
+
。 將甲烷磺酸(2,2-二氟環丙基)甲酯(500 mg)添加至1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(660 mg)及K
2
CO
3
(1.11 g)於DMF (5.0 mL)中之混合物中且在室溫下攪拌隔夜。用水稀釋且用EtOAc萃取三次。用NaCl (飽和水溶液)洗滌有機萃取物，經Na
2
SO
4
乾燥，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-[(2,2-二氟環丙基)甲基]-1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(250 mg，32%)。LCMS (方法7): R
t
1.66 min,
m/z
(ES+) = 280 [M+H]
+
。
製備 23 2 - 溴 - N - 嘧啶 - 2 - 基 - 丙醯胺
將2-胺基嘧啶(1.72 g)及三乙胺(1.85 mL)添加至含2-溴丙醯氯(900 μL)之甲苯(30 mL)且在回流下攪拌2小時。冷卻至室溫且分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到2-溴-N-嘧啶-2-基-丙醯胺(750 mg，40%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 1.64 (3 H, d,
J
6.7 Hz), 5.03 (1 H, q,
J
6.7 Hz), 7.20 (1 H, t,
J
4.8 Hz), 8.67 (2 H, d,
J
4.9 Hz), 10.42 (1 H, s)。
製備 24 2 -[ 5 -( 1 - 溴乙基 ) 四唑 - 1 - 基 ] 嘧啶
向2-溴-N-嘧啶-2-基-丙醯胺(304 mg)於CH
2
Cl
2
(6.5 mL)中之溶液中添加五氯化磷(360 mg)且在室溫下攪拌5小時。冷卻至0℃，添加三甲基矽烷基疊氮化物(280 μL)，升溫至室溫且攪拌隔夜。分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與CH
2
Cl
2
之間，分離各層且用水洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到2-[5-(1-溴乙基)四唑-1-基]嘧啶(333 mg，38%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 2.20 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 6.16-6.22 (1 H, m), 7.57 (1 H, t,
J
4.9 Hz), 9.00 (2 H, dd,
J
4.9, 1.1 Hz)。
製備 25 N -( 環丙基甲基 )- 1 -( 1 - 嘧啶 - 2 - 基四唑 - 5 - 基 ) 乙胺
向2-[5-(1-溴乙基)四唑-1-基]嘧啶(120 mg)於乙腈(2.0 mL)中之溶液中添加K
2
CO
3
(213 mg)及環丙基甲胺(90 μL)且在回流下攪拌3.5小時且在室溫下攪拌5天。在減壓下濃縮，將殘餘物分配於水與EtOAc之間，分離各層且用EtOAc萃取水相。經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-1-(1-嘧啶-2-基四唑-5-基)乙胺(34 mg，29%)。LCMS (方法5): R
t
0.56 min,
m/z
(ES+) = 246 [M+H]
+
。
實例 1 N -( 環丙基甲基 )- N - [ 1 -[ 2 -( 2 - 吡啶基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向
N
-(環丙基甲基)-1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(10.4 g)及DIPEA (24.6 mL)於EtOAc (415 mL)中之溶液中添加3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(12.1 g)且在室溫下攪拌混合物10分鐘。添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，45.7 mL)且在室溫下攪拌隔夜。將混合物分配於水與EtOAc之間，分離各層且依序用水、NaHCO
3
(飽和水溶液)及NH
4
Cl (飽和水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-
N
-[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(17.2 g，83%)。LCMS (方法2): R
t
1.86 min,
m/z
(ES+) = 484 [M+H]
+
。 表2中所闡述之實例
2 - 32
及
50 - 60
的化合物可基本上如實例1中所述地製備。
表 2 實例 33 N -( 環丙基甲基 )- N - [ 1 -( 1 - 嘧啶 - 2 - 基四唑 - 5 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向
N
-(環丙基甲基)-1-(1-嘧啶-2-基四唑-5-基)乙胺(30 mg)及DIPEA (73 μL)於EtOAc (1.5 mL)中之溶液中添加3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(43 mg)及T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，130 μL)且在室溫下攪拌2.5小時。分配於水與EtOAc之間，分離各層且依序用水、NaHCO
3
(飽和水溶液)及NH
4
Cl (飽和水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-
N
-[1-(1-嘧啶-2-基四唑-5-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(32 mg，54%)。LCMS (方法2): R
t
1.76 min,
m/z
(ES+) = 486 [M+H]
+
。
製備 26 2 -( 丙 - 2 - 炔基胺基 ) 丙醯胺
將K
2
CO
3
(55 g)及炔丙基胺(17 mL)添加至含2-溴丙醯胺(20.2 g)之乙腈(320 mL)且在80℃下攪拌3.5小時且在室溫下攪拌隔夜。在減壓下濃縮，將殘餘物分配於水與EtOAc之間，分離各層且用EtOAc萃取水相兩次。經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾且在減壓下濃縮，得到2-(丙-2-炔基胺基)丙醯胺(15.7 g，93%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 1.36 (3 H, d,
J
7.0 Hz), 1.58 (1 H, br s), 2.23 (1 H, t,
J
2.4 Hz), 3.34 (1 H, dd,
J
17.1, 2.4 Hz), 3.41 (1 H, q,
J
7.0 Hz), 3.49 (1 H, dd,
J
17.1, 2.5 Hz), 5.39 (1 H, br s), 6.93 (1 H, br s)。
製備 27 2 -( 環丙基甲基胺基 ) 丙醯胺
將K
2
CO
3
(1.45 g)及環丙基甲胺(560 μL)添加至2-溴丙醯胺(490 mg)及乙腈(8 mL)中且在80℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。將殘餘物分配於水與EtOAc之間，分離各層且用EtOAc萃取水相兩次。經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾且在減壓下濃縮，得到2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(351 mg，77%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 0.06-0.23 (2 H, m), 0.44-0.58 (2 H, m), 0.83-1.02 (1 H, m), 1.36 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 1.73 (1 H, br s), 2.42 (1 H, dd,
J
12.4, 6.9 Hz), 2.55 (1 H, dd,
J
12.1, 6.6 Hz), 3.24 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 5.39 (1 H, br s), 7.18 (1 H, br s)。
製備 28 2 -( 三甲基矽烷基甲胺基 ) 丙醯胺
將K
2
CO
3
(628 mg)及(胺基甲基)三甲基矽烷(341 mg)添加至含2-溴丙醯胺(456 mg)之乙腈(5 mL)且在回流下攪拌隔夜。冷卻至室溫，過濾，用乙腈洗滌且在減壓下乾燥所得固體，得到2-(三甲基矽烷基甲胺基)丙醯胺(512 mg，98%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 0.05 (9 H, s), 1.31 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 3.09 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 5.63 (1H, br s), 7.04 (1 H, br s)。
製備 29 2 -( 甲胺基 ) 丙醯胺
將K
2
CO
3
(4.15 g)及甲胺(2 M於THF中，10 mL)添加至含2-溴丙醯胺(1.53 g)之乙腈(30 mL)且在80℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，過濾，用MeOH洗滌且在減壓下乾燥所得固體，得到2-(甲胺基)丙醯胺(792 mg，77%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d6
) δ ppm 1.08 (3 H, d,
J
6.9 Hz) 1.83 (1 H, br s) 2.18 (3 H, s) 2.77 - 2.90 (1 H, m) 6.92 (1 H, br s) 7.23 (1 H, br s)。
製備 30 N -( 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 )- N - 丙 - 2 - 炔基 - 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向2-(丙-2-炔基胺基)丙醯胺(24.0 g)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(58.9 g)於EtOAc (528 mL)中之溶液中添加DIPEA (73.7 g)。冷卻至0℃且逐滴添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，170 mL)。升溫至室溫且攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)及NaOH (1 M水溶液)洗滌有機相。經Na
2
SO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由用戊烷濕磨而純化殘餘物，得到
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-N-丙-2-炔基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(50 g，72%)。LCMS (方法7): R
t
2.17 min,
m/z
(ES+) = 367 [M+H]
+
。 表3中所闡述之製劑
31 - 40
之化合物可基本上如製備
30
中所述地製備。
表 3 製備 41 N -( 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 )- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向2-胺基丙醯胺(661 mg)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(387 mg)於DMF (7 mL)中之溶液中添加DIPEA (587 mg)。添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，1.79 mL)且在室溫下攪拌隔夜。在減壓下濃縮，分配於水與EtOAc之間，分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)及NaCl (飽和水溶液)洗滌有機相。經Na
2
SO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮，得到
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(387 mg，79%)。LCMS (方法4): R
t
1.27 min,
m/z
(ES-) = 327 [M-H]
-
。
製備 42 N -[( 1S )- 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向L-丙胺醯胺(263 mg)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(250 mg)於DMF (4 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.5 mL)。添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，1.0 mL)且在室溫下攪拌隔夜。在減壓下濃縮，分配於水與EtOAc之間，分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)及NaCl (飽和水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(299 mg，94%)。LCMS (方法4): R
t
1.26 min,
m/z
(ES+) = 329 [M+H]
+
。
製備 43 3 - 胺基 - 2 - 甲基 - 丙酸甲酯
向3-胺基-2-甲基-丙酸(87%純度，1.15 g)於MeOH (10 mL)中之溶液中添加亞硫醯氯(1.41 mL)且在室溫下攪拌隔夜。蒸發溶劑，得到3-胺基-2-甲基-丙酸甲酯(1.13 g，100%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 1.35 (3 H, d,
J
7.3 Hz), 2.95-3.36 (3 H, m), 3.80 (3 H, s), 8.46 (2 H, br s)。
製備 44 3 -[[ 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯基 ]-( 環丙基甲基 ) 胺基 ]- 2 - 甲基 - 丙酸甲酯
將3-胺基-2-甲基-丙酸甲酯(1.13 g)添加至環丙烷羧醛(867 μL)及Na
2
SO
4
(13.8 g)於AcOH (10 mL)中之混合物中且在室溫下攪拌20分鐘。添加NaBH(OAc)
3
(6.16 g)且攪拌4小時。分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，用NaOH (2 M水溶液)將水相之pH調節至＞10，分離各層，用NaCl (飽和水溶液)洗滌有機相，經Na
2
SO
4
乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到3-(環丙基甲基胺基)-2-甲基-丙酸甲酯。將殘餘物及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(3.73 g)溶解於EtOAc (30 mL)中，添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，11.7 mL)及DIPEA (7.56 mL)且在90℃下攪拌3小時。分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層且用EtOAc萃取水相三次。經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到3-[[3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯基]-(環丙基甲基)胺基]-2-甲基-丙酸甲酯(100 mg，2%)。LCMS (方法1): R
t
2.75 min,
m/z
(ES+) = 412 [M+H]
+
。
製備 45 N -( 3 - 胺基 - 2 - 甲基 - 3 - 側氧基 - 丙基 )- N -( 環丙基甲基 )- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
在0℃下向3-[[3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯基]-(環丙基甲基)胺基]-2-甲基-丙酸甲酯(100 mg)於MeOH (2.3 mL)中之溶液中添加Mg
3
N
2
(123 mg)且在密封管中攪拌1小時。加熱至80℃且攪拌4天。分配於水與CHCl
3
之間，分離各層，用HCl (2 M水溶液)洗滌有機相，用CHCl
3
萃取水相三次，經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾且在減壓下濃縮，得到
N
-(3-胺基-2-甲基-3-側氧基-丙基)-
N
-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(55 mg，57%)。LCMS (方法1): R
t
2.42 min,
m/z
(ES+) = 397 [M+H]
+
。
製備 46 [( 1R )- 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 ] 4 - 甲基苯磺酸酯
在0℃下將對甲苯磺醯氯(154 g)及DIPEA (113 mL)添加至含(R)-(+)-乳醯胺(48.1 g)之CH
2
Cl
2
(1.3 L)，升溫至室溫且攪拌3天。在減壓下濃縮，分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且將殘餘物溶解於CH
2
Cl
2
中。添加戊烷，過濾沈澱且再次分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮，得到[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(69.7 g，48%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ ppm 1.31 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 2.43 (3 H, s), 4.70 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 7.29 (1 H, br s), 7.43-7.54 (2 H, m), 7.80-7.85 (2 H, m)。
製備 47 ( 2S )- 2 -( 丙 - 2 - 炔基胺基 ) 丙醯胺
在乙腈(10 mL)中混合炔丙基胺(240 μL)、[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(493 mg)及K
2
CO
3
(790 mg)且在30℃下攪拌3天。經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到(2
S
)-2-(丙-2-炔基胺基)丙醯胺(49 mg，21%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 1.37 (3 H, d,
J
7.3 Hz,), 1.75 (1 H, br s), 2.24 (1 H, t,
J
2.6 Hz), 3.36 (1 H, dd,
J
17.2, 2.6 Hz), 3.42 (1 H, q,
J
6.9 Hz) 3.49 (1 H, dd,
J
17.2, 2.6 Hz), 5.48 (1 H, br s), 6.95 (1 H, br s)。
製備 48 ( 2S )- 2 -( 環丙基甲基胺基 ) 丙醯胺
在乙腈(700 mL)中混合環丙基甲胺(44 mL)、[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(69.3 g)及K
2
CO
3
(107 g)且在30℃下攪拌6小時。冷卻至室溫，經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。在減壓下濃縮濾液且藉由層析純化殘餘物，得到(2S)-2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(29.7 g，81%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 0.09-0.18 (2 H, m), 0.44-0.57 (2 H, m), 0.87-0.98 (1 H, m), 1.35 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 1.60 (1 H, br s), 2.40 (1 H, dd,
J
12.1, 7.3 Hz), 2.54 (1 H, dd,
J
12.1, 6.6 Hz), 3.21 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 5.31 (1 H, br s), 7.14 (1 H, br s)。
製備 49 ( 2S )- 2 -( 甲胺基 ) 丙醯胺
在乙腈(1 mL)中混合甲胺(2 M於THF中，1.0 mL)、[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(243 mg)及K
2
CO
3
(419 mg)且在室溫下攪拌3天。經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。在減壓下濃縮濾液，得到(2
S
)-2-(甲胺基)丙醯胺(50% w，46 mg，22%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d6
) δ ppm 1.09 (3 H, d,
J
6.94 Hz), 1.84 (1 H, br s), 2.19 (3 H, s), 2.86 (1 H, q,
J
6.81 Hz), 6.94 (1 H, br s), 7.25 (1 H, br s)。
製備 50 N - [( 1S )- 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 ]- N - 丙 - 2 - 炔基 - 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向DIPEA (200 μL)及(2S)-2-(丙-2-炔基胺基)丙醯胺(49 mg)於EtOAc (1.0 mL)中之溶液中添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，350 μL)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(120 mg)且在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用水、NH
4
Cl (飽和水溶液)及NaOH (1 M水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-N-丙-2-炔基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(58 mg，38%)。LCMS: (方法4) R
t
1.48 min,
m/z
(ES-) 365 [M-H]
-
。
製備 51 N - [( 1S )- 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 ]- N -( 環丙基甲基 )- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向DIPEA (109 mL)及(2S)-2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(29.5 g)於EtOAc (590 mL)中之溶液中添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，185 mL)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(64.3 g)且在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用水、NH
4
Cl (飽和水溶液)及NaOH (1 M水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由自CH
2
Cl
2
及戊烷沈澱而純化殘餘物，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-N-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(49.1 g，62%)。LCMS: (方法4) R
t
1.61 min,
m/z
(ES+) 383 [M+H]
+
。 表4中所闡述之製備
52
之化合物可基本上如製備
51
中所述地製備。
表 4 製備 53 N -[( 1S )- 2 - 胺基 - 1 - 甲基 - 2 - 側氧基 - 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
將3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(900 mg)及T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，4.2 mL)添加至L -丙胺醯胺(1.25 g)及DIPEA (1.9 mL)於DMF (15 mL)中之混合物中。在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，洗滌有機相NaHCO
3
(飽和水溶液)及NaCl (飽和水溶液)。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(1.05 g，92%)。LCMS: (方法4) R
t
1.27 min,
m/z
(ES+) 329 [M+H]
+
。 表5中所闡述之製備
54
之化合物可基本上如製備
53
中所述地製備。
表 5 實例 34 3 - 氰基 - N -( 環丙基甲基 )- N -[ 1 -[ 5 - 甲基 - 2 -( 2 - 吡啶基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙基 ] 苯甲醯胺
向
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-3-氰基-N-(環丙基甲基)苯甲醯胺(108 mg)於CH
2
Cl
2
(3.0 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲基乙醯胺二甲基縮醛(88 μL)且在回流下攪拌1小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (1 mL/1mL)中，添加2-肼基吡啶(87 mg)且在90℃下攪拌2小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於水與EtOAc之間。分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)洗滌有機相。用EtOAc萃取合併之水相兩次，用NaCl (飽和水溶液)洗滌合併之有機萃取物，經MgSO
4
乾燥，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N
-[1-[5-甲基-2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯甲醯胺(104 mg，68%)。LCMS (方法3): R
t
2.66 min,
m/z
(ES+) = 387 [M+H]
+
。 表6中所闡述之實例
61
之化合物可基本上如實例
34
中所述地製備。
表 6 實例 35 N - 丙 - 2 - 炔基 - N -[ 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-N-丙-2-炔基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(5.00 g)於CH
2
Cl
2
(70 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲醯胺二甲基縮醛(2.8 mL)且在回流下攪拌2小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮物，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (80 mL/8 mL)中，添加2-肼基嘧啶(2.48 g)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間。分離各層，用EtOAc萃取水相三次，經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-丙-2-炔基-N-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(2.97 g，46%)。LCMS (方法2): R
t
1.52 min,
m/z
(ES+) = 469 [M+H]
+
。對掌性HPLC：管柱Chiralpak AD-H (250×4.6 mm)，庚烷/
i
PrOH/二乙胺 95:5:0.1，流動速率1 mL/min，室溫，λ 240 nm，R
t
13.8及16.6 min。 表7中所闡述之實例
36
之化合物可基本上如實例
35
中所述地製備。
表 7 實例 37 3 - 氯 - N -( 環丙基甲基 )- N - [ 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ] - 5 -( 三氟甲氧基 ) 苯甲醯胺
向
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-3-氯-
N
-(環丙基甲基)-5-(三氟甲氧基)-苯甲醯胺(106 mg)於CH
2
Cl
2
(5 mL)中之溶液中添加
N , N
-二甲醯胺二甲基縮醛(60 μL)且在回流下攪拌1小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (1.5 mL/1.5 mL)中，添加2-肼基嘧啶(48 mg)且在90℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與CH
2
Cl
2
之間。分離各層，用CH
2
Cl
2
萃取水相三次，經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到3-氯-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺(101 mg，59%)。LCMS (方法2): R
t
1.64 min,
m/z
(ES+) = 467 [M+H]
+
。 表8中所闡述之實例
38 - 45
及
62 - 69
的化合物可基本上如實例
37
中所述地製備。
表 8 實例 46 N - 丙 - 2 - 炔基 - N -[( 1S )- 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
向
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-丙-2-炔基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(58 mg)於CH
2
Cl
2
(0.7 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲醯胺二甲基縮醛(32 μL)且在回流下攪拌1小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (0.7 mL/0.7 mL)中，添加2-肼基嘧啶(23 mg)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間。分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-丙-2-炔基-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(38 mg，58%)。LCMS: (方法4) R
t
1.59 min,
m/z
(ES) 469 [M+H]
+
。對掌性HPLC：管柱Chiralpak AD-H (250×4.6 mm)，庚烷/
i
PrOH/二乙胺95:5:0.1，流動速率1 mL/min，室溫，λ 240 nm，R
t
14.1 min，
ee
＞99%。
實例 47 3 - 氰基 - N -( 環丙基甲基 )- N - [ 1 -[ 2 -( 2 - 吡啶基 )- 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙基 ] 苯硫代甲醯胺
(i) 3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯甲醯胺 向
N
-(環丙基甲基)-1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙胺(60 mg)及DIPEA (287 μL)於EtOAc (6 mL)中之溶液中添加3-氰基苯甲酸(81 mg)且在室溫下攪拌混合物10分鐘。添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，534 μL)且在室溫下攪拌隔夜。將混合物分配於水與EtOAc之間，分離各層且依序用水、NaHCO
3
(飽和水溶液)及NH
4
Cl (飽和水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯甲醯胺(160 mg，85%)。LCMS (方法1): R
t
2.32 min,
m/z
(ES+) = 373 [M+H]
+
。 (ii) 3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯硫代甲醯胺 向3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯甲醯胺(160 mg)於甲苯(10 mL)中之溶液中添加勞森試劑(Lawesson's reagent)(191 mg)且在回流下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物且用戊烷濕磨，得到3-氰基-
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-[2-(2-吡啶基)-1,2,4-***-3-基]乙基]苯硫代甲醯胺(145 mg，87%)。LCMS (方法1): R
t
2.58 min,
m/z
(ES+) = 389 [M+H]
+
。
實例 70 N -( 環丙基甲基 )- N -[( 1S )- 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯硫代甲醯胺
向
N
-(環丙基甲基)-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(100 mg)於甲苯(5 mL)中之溶液中添加勞森試劑(92 mg)且在回流下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物且用戊烷濕磨，得到
N
-(環丙基甲基)-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯硫代甲醯胺(61 mg，59%)。LCMS (方法4): R
t
2.19 min,
m/z
(ES+) = 501 [M+H]
+
。
實例 71 3 - 硫代胺甲醯基 - N - 甲基 - N - [ 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ] 苯甲醯胺
向3-氰基-
N
-甲基-
N
-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]苯甲醯胺(224 mg)於吡啶(2 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.1 mL)及硫化銨(40-48重量%水溶液，126 mg)且在50℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，將混合物分配於水與CH
2
Cl
2
之間，分離各層且經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到3-硫代胺甲醯基-
N
-甲基-
N
-[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]苯甲醯胺(62 mg，24%)。LCMS (方法4): R
t
0.41 min,
m/z
(ES+) = 368 [M+H]
+
。 表9中所闡述之實例
72
之化合物可基本上如實例
71
中所述地製備。
表 9 製備 55 2 -[[ 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯基 ] 胺基 ] 丙酸
向NaOH (1.74 g)於水(6.0 mL)及乙腈(2.0 mL)中之溶液中添加DL-丙胺酸(918 mg)。將混合物冷卻至0℃，添加3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯氯(2.0 mL)且在0℃下攪拌30分鐘。升溫至室溫且攪拌2小時。在減壓下濃縮，添加HCl (12 M水溶液，1.0 mL)且過濾所得固體。於真空中乾燥固體，得到2-[[3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯基]胺基]丙酸(3.00 g，54%)。LCMS (方法4): R
t
1.52 min,
m/z
(ES+) = 330 [M+H]
+
。
實例 73 N -[ 1 -[ 5 -( 二乙氧基甲基 )- 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ] 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
將
N , N
-二異丙胺(3.84 mL)添加至2,2-二乙氧基乙脒鹽酸鹽(1.33 g)、2-[[3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯基]胺基]丙酸(3.00 g)及HATU (3.05 g)於DMF (10 mL)中之混合物中。在室溫下攪拌3小時。添加2-肼基嘧啶(1.20 g)，接著添加AcOH (4.18 mL)且在80℃下攪拌1小時。冷卻至室溫且用EtOAc (50 mL)稀釋。依序用NaHCO
3
(飽和水溶液)及水洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾且在減壓下濃縮，得到
N
-[1-[5-(二乙氧基甲基)-2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基]乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(900 mg，23%)。LCMS (方法4): R
t
1.96 min,
m/z
(ES-) = 531 [M-H]
-
。 表10中所闡述之實例
74
之化合物可基本上如實例
73
中所述地製備。
表 10 實例 48 N -( 環丙基甲基 )- N - [ 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
(i) 2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺 將K
2
CO
3
(1.45 g)及環丙基甲胺(560 μL)添加至2-溴丙醯胺(490 mg)及乙腈(8 mL)中且在80℃下攪拌1小時。冷卻至室溫，經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。將殘餘物分配於水與EtOAc之間，分離各層且用EtOAc萃取水相兩次。經MgSO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾且在減壓下濃縮，得到2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(351 mg，77%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 0.06-0.23 (2 H, m), 0.44-0.58 (2 H, m), 0.83-1.02 (1 H, m), 1.36 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 1.73 (1 H, br s), 2.42 (1 H, dd,
J
12.4, 6.9 Hz), 2.55 (1 H, dd,
J
12.1, 6.6 Hz), 3.24 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 5.39 (1 H, br s), 7.18 (1 H, br s)。 (ii)
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-N-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 將T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，6.2 mL)及DIPEA (4 mL)添加至2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(990 mg)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(2.02 g)於EtOAc (20 mL)中之混合物中且在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用EtOAc萃取水相兩次。用NaCl (飽和水溶液)洗滌合併之有機萃取物，經Na
2
SO
4
乾燥，過濾，在減壓下濃縮。將殘餘物分配於NaOH (1 M水溶液)與CH
2
Cl
2
之間，分離各層，用CH
2
Cl
2
萃取水相三次，經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機萃取物，過濾，在減壓下濃縮，得到
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-N-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(2.37 g，78%)。LCMS: (方法2) R
t
1.52 min,
m/z
(ES-)=381 [M-H]
-
。 (iii)
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 向
N
-(2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基)-
N
-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(408 mg)於CH
2
Cl
2
(5 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲醯胺二甲基縮醛(220 μL)且在回流下攪拌1.5小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (6 mL/0.6 mL)中，添加2-肼基嘧啶(183 mg)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間。分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-
N -
[1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(173 mg，33%)。LCMS (方法5): Rt 2.16 min,
m/z
(ES+) = 485 [M+H]
+
。對掌性HPLC：管柱Chiralpak AD-H (250×4.6 mm)，庚烷/
i
PrOH/二乙胺95:5:0.1，流動速率1.3 mL/min，T=30℃，λ 240 nm，R
t
13.5及16.9 min。
實例 49 N -( 環丙基甲基 )- N -[( 1S )- 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
(i) [(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯 在0℃下將對甲苯磺醯氯(154 g)及DIPEA (113 mL)添加至含(R)-(+)-乳醯胺(48.1 g)之CH
2
Cl
2
(1.3 L)中，升溫至室溫且攪拌3天。在減壓下濃縮，分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且將殘餘物溶解於CH
2
Cl
2
中。添加戊烷，過濾沈澱且再次分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮，得到[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(69.7 g，48%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ ppm 1.31 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 2.43 (3 H, s), 4.70 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 7.29 (1 H, br s), 7.43-7.54 (2 H, m), 7.80-7.85 (2 H, m)。 (ii) (2
S
)-2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺 在乙腈(700 mL)中混合環丙基甲胺(44 mL)、[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(69.3 g)及K
2
CO
3
(107 g)且在30℃下攪拌6小時。冷卻至室溫，經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。在減壓下濃縮濾液且藉由層析純化殘餘物，得到(2S)-2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(29.7 g，81%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ ppm 0.09-0.18 (2 H, m), 0.44-0.57 (2 H, m), 0.87-0.98 (1 H, m), 1.35 (3 H, d,
J
6.9 Hz), 1.60 (1 H, br s), 2.40 (1 H, dd,
J
12.1, 7.3 Hz), 2.54 (1 H, dd,
J
12.1, 6.6 Hz), 3.21 (1 H, q,
J
6.9 Hz), 5.31 (1 H, br s), 7.14 (1 H, br s)。 (iii)
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 向DIPEA (109 mL)及(2
S
)-2-(環丙基甲基胺基)丙醯胺(29.5 g)於EtOAc (590 mL)中之溶液中添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，185 mL)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(64.3 mg)且在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用水、NH
4
Cl (飽和水溶液)及NaOH (1 M水溶液)洗滌有機相。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由自CH
2
Cl
2
及戊烷沈澱而純化殘餘物，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(49.1 g，62%)。LCMS: (方法4) R
t
1.61 min,
m/z
(ES+)=383 [M+H]
+
。 (iv)
N
-(環丙基甲基)-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 向
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-(環丙基甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(48.7 g)於CH
2
Cl
2
(490 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲醯胺二甲基縮醛(25.5 mL)且在回流下攪拌1小時 15分鐘。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (275 mL/275 mL)中，添加2-肼基嘧啶(16.9 g)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，且將殘餘物分配於水與EtOAc之間。經由Celite
®
過濾，分離各層，用NaHCO
3
(飽和水溶液)洗滌有機相，經MgSO
4
乾燥有機相，在減壓下濃縮且藉由層析及自二***及石油醚沈澱來純化殘餘物，得到
N
-(環丙基甲基)-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(29.7 g，48%)。LCMS: (方法4) R
t
1.79 min,
m/z
(ES)=485 [M+H]
+
。對掌性HPLC：管柱Chiralpak AD-H (250×4.6 mm)，庚烷/
i
PrOH/二乙胺95:5:0.1，流動速率1.3 mL/min，T=30℃，λ 240 nm，R
t
13.5 min，(R-對映異構體之R
t
16.9 min)，
ee
＞99%。
實例 75 N - 甲基 - N -[( 1S )- 1 -( 2 - 嘧啶 - 2 - 基 - 1 , 2 , 4 - *** - 3 - 基 ) 乙基 ]- 3 , 5 - 雙 ( 三氟甲基 ) 苯甲醯胺
(i) [(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯 將對甲苯磺醯氯(891 mg)及DIPEA (2.1 mL)添加至含(
R
)-(+)-乳醯胺(891 mg)之CH
2
Cl
2
(10 mL)中且在室溫下攪拌2天。在減壓下濃縮，分配於NaHCO
3
(飽和水溶液)與EtOAc之間，分離各層，經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化，得到[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(1.32 g，54%)。LCMS: (方法4) R
t
0.71 min,
m/z
(ES+)=244 [M+H]
+
。 (ii) (2
S
)-2-(甲胺基)丙醯胺 在乙腈(1 mL)中混合甲胺(2 M於THF中，1 mL)、[(1
R
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]4-甲基苯磺酸酯(243 mg)及K
2
CO
3
(419 mg)且在室溫下攪拌隔夜。經由Celite
®
過濾且用乙腈洗滌。在減壓下濃縮濾液，得到(2
S
)-2-(甲胺基)丙醯胺(50% w，46 mg，22%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d6
) δ ppm 1.09 (3 H, d,
J
6.94 Hz), 1.84 (1 H, br s), 2.19 (3 H, s), 2.86 (1 H, q,
J
6.81 Hz), 6.94 (1 H, br s), 7.25 (1 H, br s)。 (iii)
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-甲基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 向DIPEA (140 μL)及(2
S
)-2-(甲胺基)丙醯胺(50%重量，46 mg)於DMF (1.3 mL)中之溶液中添加T3P
®
(在EtOAc中≥50重量%，320 μL)及3,5-雙(三氟甲基)苯甲酸(70 mg)且在室溫下攪拌隔夜。分配於水與EtOAc之間，分離各層，用EtOAc萃取水相一次，用NaCl (飽和水溶液)洗滌合併之有機萃取物。經MgSO
4
乾燥有機相，過濾，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-甲基-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(90重量%純度，82 mg，80%)。LCMS: (方法4) R
t
1.28 min,
m/z
(ES-)=341 [M-H]
-
。 (iv)
N -
甲基-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺 向
N
-[(1
S
)-2-胺基-1-甲基-2-側氧基-乙基]-
N
-(甲基)-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(90重量%純度，72 mg)於CH
2
Cl
2
(2 mL)中之溶液中添加
N , N -
二甲醯胺二甲基縮醛(38 μL)且在回流下攪拌1.5小時。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，將殘餘物溶解於1,4-二噁烷/AcOH (0.5 mL/0.5 mL)中，添加2-肼基嘧啶(25 mg)且在50℃下攪拌隔夜。冷卻至室溫，在減壓下濃縮，且將殘餘物分配於水與EtOAc之間。經由Celite
®
過濾，分離各層，用NaCl (飽和水溶液)洗滌有機相，經MgSO
4
乾燥有機相，在減壓下濃縮且藉由層析純化殘餘物，得到
N -
甲基-
N
-[(1
S
)-1-(2-嘧啶-2-基-1,2,4-***-3-基)乙基]-3,5-雙(三氟甲基)苯甲醯胺(41 mg，49%)。LCMS: (方法4) R
t
1.50 min,
m/z
(ES+)=445 [M+H]
+
。對掌性HPLC：管柱Diacel Chiralpak IC-3 (150×4.6 mm)，0.1% TFA於H
2
O中/0.1% TFA於MeCN中48:52，流動速率0.3 mL/min，T=25℃，λ 235 nm，R
t
16.4 min (
R
-對映異構體之R
t
15.4 min)，
ee
99.3%。
分析方法
樣品之分析在各情況下使用Waters Autopurification (HPLC/MS)系統或Agilent Autopurification (HPLC/MS)系統(具有反相管柱)，使用下文所述之方法中的一者進行。樣品藉由
m / z
及滯留時間或藉由使用Bruker Avance 400光譜儀之NMR光譜法表徵。
方法 1 ：
管柱：Xterra MS C18 5 µm×4.6 mm×50 mm 溶離劑：水(A)及乙腈(B) 流動速率：0.6 mL/min 梯度：
方法 2 ：
管柱：Xterra MS C18 5 µm×4.6 mm×50 mm 溶離劑：0.1%甲酸於水中(A)及0.1%甲酸於乙腈中(B) 流動速率：2 mL/min 梯度：
方法 3 ：
管柱：Bischoff SC-03-150 Daisogel SP-120-ODS-AP 5.0 µm ×3.0 mm ×150 mm 溶離劑：0.1%甲酸於水中(A)及0.1%甲酸於乙腈中(B) 流動速率：2 mL/min 梯度：
方法 4
： 管柱：Xterra MS C18，5 µm×4.6 mm×50 mm 溶離劑：0.1%甲酸於水中(A)及0.1%甲酸於乙腈中(B) 流動速率：2 mL/min 梯度：
方法 5
： 管柱：XBridge C18 5 µm×2.1 mm×50 mm 溶離劑：0.1%甲酸於水中(A)及0.1%甲酸於乙腈中(B) 流動速率：0.6 mL/min 梯度：
方法 6
： 管柱：XBridge C18 2.5 µm×2.1 mm×50 mm 溶離劑：0.5%氨於水中(A)及0.5%氨於乙腈中(B) 流動速率：0.6 mL/min 梯度：
方法 7 ：
管柱：BEH C18 1.7 µm×2.1 mm×50 mm 溶離劑：5 mM乙酸銨+0.1%甲酸於水中(A)及0.1%甲酸於乙腈中(B) 流動速率：0.55 mL/min 梯度：
方法 8
： 管柱：XBridge C18 3.5 µm×4.6 mm×50 mm 溶離劑：0.1%氨於水中(A)及0.1%氨於乙腈中(B) 流動速率：1.00 mL/min 梯度：
實例1至49之所有例示化合物展現以下中之一或多者：活體外貓蚤分析(分析A)中之32 ppm處之大於80%功效(EC
80
)；活體外澳大利亞綿羊青蠅分析(分析A)中之3.2 ppm處之大於80%功效(EC
80
)；或活體外犬蜱分析(分析A)中之10 ppm處之大於80%功效(EC
80
)。實例50至75之所有例示化合物展現以下中之一或多者：活體外貓蚤分析(分析B)中之10 ppm處之大於50%功效(EC
50
)；活體外澳大利亞綿羊青蠅分析(分析B)中之10 ppm處之大於50%功效(EC
50
)；或活體外犬蜱分析(分析B)中之20 ppm處之大於50%功效(EC
50
)。
針對貓櫛首蚤 ( Ctenocephalides felis )( 貓蚤 ) 之 活體外活性 - 分析 A
將混合成年跳蚤群體置於允許跳蚤經由人工飼養系統接近及餵飼經處理血液之適當地格式化96孔盤中。跳蚤經餵飼經處理血液24小時，其後記錄化合物效應。基於自餵飼系統回收之死跳蚤的數目測定殺蟲活性。在此測試中，以下實例顯示100 ppm處之大於80% (EC
80
)功效： 1至11、13至22、24至32及34至49。 在此測試中，實例18之化合物顯示10 ppm之EC
80
。
針對貓櫛首蚤 ( 貓蚤 ) 之 活體外活性 - 分析 B
將測試化合物添加至包含於人工餵飼容器中之有機牛血中。包括具有已知殺蟲活性之化合物以充當陽性對照。將來自實驗室群落之新出現的未餵飼成年跳蚤抽吸至各小瓶中。測試籠子使用人工餵飼裝置維持以允許攝取化合物。對跳蚤評估感染後48小時處的死亡率%。顯示正常移動及/或跳躍能力之跳蚤考慮為活的且不顯示移動之彼等評估為死的。在此測試中，以下實例顯示10 ppm處之大於50% (EC
50
)功效：50至61、63至73及75。 在此測試中，實例59之化合物顯示1.6 ppm之EC
50
。
針對銅綠蠅 ( Lucilia Cuprina )( 澳大利亞綿羊青蠅 ) 之 活體外活性 - 分析 A
新產出的青蠅卵用於接種含有待評估抗寄生蟲活性之測試物質的適當格式化微量盤。藉由連續稀釋測試各化合物以測定其最小功效劑量。將測試化合物嵌入允許該等卵完全發育為3齡幼蟲之基於瓊脂之營養培養基中。培育在28℃及60%相對濕度下持續4天。亦記錄卵孵化及隨後幼蟲發育以鑑別可能的生長調節活性。在此測試中，以下實例顯示32 ppm處之大於80% (EC
80
)功效：1至4、6至33、35至46、48及49。 在此測試中，實例41之化合物顯示1 ppm之EC
80
。
針對銅綠蠅 ( Lucilia Cuprina )( 澳大利亞綿羊青蠅 ) 之 活體外活性 - 分析 B
將牛血清中調配之化合物分配至閃爍。將牙科棉卷添加至各小瓶以吸收化合物溶液。將銅綠蠅幼蟲添加至各處理小瓶。小瓶經封端且在適當溫度、濕度及光/暗循環之環境室中保持24小時。評估僅在24小時進行，因為24小時之後的死幼蟲可能被其餘的活幼蟲吃掉。檢查小瓶之死亡率%。在此測試中，以下實例顯示10 ppm處之大於50% (EC
50
)功效：50、51、53、56至70、72及75。 在此測試中，實例59之化合物顯示0.77 ppm之EC
50
。
針對血紅扇頭蜱 ( Rhipicephalus sanguineus )( 犬蜱 ) 之 活體外活性 - 分析 A
藉由預塗佈微量盤在允許藉由與蜱接觸評估抗寄生蟲活性之化合物之連續稀釋下進行接觸測試。混合成年蜱群體接著分佈至該盤之各孔且在28℃及80%相對濕度下培育7天，在此期間監測測試化合物之效應。假若當成年蜱死亡時確認除蟎活性。在此測試中，以下實例顯示100 ppm處之大於80% (EC
80
)功效：1至4、6、9至15、19、20、24、26至32、34至43及47至49。 在此測試中，實例41之化合物顯示32 ppm之EC
80
。
針對血紅扇頭蜱 ( 犬蜱 ) 之 活體外活性 - 分析 B
測試化合物溶液用於塗佈玻璃小瓶之內壁，各小瓶在底部上含有濾紙。亦塗佈第二濾紙且置於小瓶之蓋中。使小瓶及蓋乾燥隔夜。各處理小瓶經蜱感染。藉由將小瓶保持於受控環境中而誘導蜱與殘餘物的接觸且在施用之後48小時與未處理玻璃小瓶及溶劑處理玻璃小瓶相比來進行評估。在此測試中，以下實例顯示20 ppm處之大於50% (EC
50
)功效：50、54、55、58至63、65、67至70及73至75。 在此測試中，實例59之化合物顯示14 ppm之EC
50
。
針對過飽的雌性微小扇頭蜱 ( Rhipicephalus microplus )( 牛蜱 ) 之活體外活性
藉由預塗佈6孔微量培養盤在待評估抗寄生蟲活性之化合物之連續稀釋下進行接觸測試。10隻過飽的耐有機磷Ultimo品系雌性蜱一式三份地分佈至各孔。接著在28℃及80%相對濕度下培育盤。基於死亡率、產卵及孵化的幼蟲在28天後進行評估。藉由如下雌性之數目顯示測試化合物之活性的示度： · 在產卵之前快速死亡， · 存活一段時間而不產卵， · 產卵，其中不形成胚胎， · 產卵，其中形成胚胎，未自該等胚胎中孵化幼蟲，及 · 產卵，其中形成胚胎，通常在26至27天內自該等胚胎中孵化幼蟲 在此測試中，以下實例顯示200 ppm處之大於80% (EC
80
)功效：1至4、6至12、14至25、35至41、44至46及48。
針對蒙古沙鼠 ( Mongolian gerbils / Meriones unguiculatus ) 之上的血紅扇頭蜱蛹之活體內活性 ( 噴施 )
在第0天，沙鼠藉由傾施以給定劑量之測試化合物處理。在第+1 (+2)天，動物經血紅扇頭蜱感染。蜱保留於動物上直至完全飽食。在感染之後7天，收集及計數完全過保之落下的蛹。將其保持直至換羽以亦評估測試化合物之生長調節活性。殺死(及生長調節)功效使用雅培公式(Abbott's formula)表示為相比於安慰劑處理組之蜱數目(及換羽蜱數目)減少：
n=活蜱數目，T=處理組，Co=對照/安慰劑組。 在此測試中，以下實例顯示32 mg/kg處之大於90% (EC
90
)功效：1、8至12、14、16、18至20、23、26、28、29、31、35、37、39至41、44、45、48及49。
針對兔之上的血紅扇頭蜱 ( 犬蜱 ) 之活體內活性
在第0天，兔藉由僅在其耳朵上噴施而用給定劑量之測試化合物處理。在第+1天，動物在其耳朵上經成年血紅扇頭蜱(性別比1:1)感染。藉由計數自動物回收之死蜱及活蜱之數目而在感染之後24小時、48小時及72小時進行功效評估。功效使用雅培公式表示為與安慰劑處理組之比較：
n=蜱數目，T=處理組，Co=對照/安慰劑組。 在此測試中，以下實例顯示60 mg/m
2
處之大於90% (EC
90
)功效：28、32、35、40、41及48。
針對小鼠之中的虱 ( 鋸型鱗虱 ( Polyplax serrata )) 之活體內活性 ( 局部 )
自然地經鋸型鱗虱感染之小鼠藉由傾施在第0天用調配之測試化合物處理。在第+4及+14天，藉由在雙筒望遠鏡下計數活虱的數目而評估功效。兩個時間點處之功效使用亨德森及蒂爾頓公式(Henderson & Tilton formula)表示為處理之前的相同小鼠上計數之虱數目，亦考慮用空調配物處理之小鼠(安慰劑組)上發現之虱數目之比較：
n=虱數目，T=處理組，Co=對照/安慰劑組。 在此測試中，以下實例顯示32 mg/kg處之大於90% (EC
90
)功效：1、7、10至12、15至21、24、25、27、28、30、35至41、48及49。
針對經牛之上的微小扇頭蜱 ( Rhipicephalus microplus )( 牛蜱 ) 之實驗蜱感染之化合物活性
進行研究以在傾於實驗感染牛上之形式投與時評估化合物針對牛蜱微小扇頭蜱(牛蜱)之治癒及預防活性。幼齡成年牛(大致80-250 kg，n=5/組)獨立地圈養於有屋頂的圍欄中，但暴露於環境條件。 在30天環境適應階段期間，所有動物在頸背側區以每次感染大致5000隻微小扇頭蜱(牛蜱)幼蟲每週感染三次。在環境適應階段結束時，動物用傾於各小牛之背線上之實驗調配物處理(第0天)。對於實驗調配物，化合物溶解於(例如)苯甲醇、碳酸伸丙酯及異丙醇中。劑量經設定以達成每公斤體重≤10 mg之點劑量。處理後，動物經微小扇頭蜱(牛蜱)-幼蟲之感染在每週兩次感染之頻率下繼續，直至研究結束。在處理後第1天開始，根據Holdsworth等人(W.A.A.V.P. guidelines for evaluating the efficacy of acaricides against ticks (Ixodidae) on ruminants, Vet Parasitol., 136(1):29-43(2005))每天自各動物收集過飽的成年雌性蜱。此設置允許評估治癒功效(功效起始)以及殘餘物保護。繼續動物感染及蜱之每日收集直至研究之第77天。