PT1228052E - Compostos amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico, suas composições farmacêuticas e a sua utilização como anticonvulsivos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS AMINO-ALQUILCICLO-HEXANO 1-CÍCLICO, SUAS COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E SUA UTILIZAÇÃO COMO ΑΝΤΙCONVULSIVOS" A presente invenção refere-se aos compostos amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico seleccionados do grupo que consiste na fórmula R5 R*

R2 R3 em que R* é - (CH2) n- (CRêR7) m-NR8R9 em que n+m = 0, 1, ou 2 em que R1 até R7 são independentemente seleccionados do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C), sendo pelo menos R1, R4 e R5 são alquilo de cadeia curta, e em que R8 e R9 juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)X-, em que x é 2 a 5, inclusive, e enantiómeros, isómeros ópticos, hidratos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, bem como suas composições farmacêuticas, e a sua preparação e utilização como anticonvulsivos para o tratamento de convulsões ou ataques num animal vivo.

De particular interesse são os compostos da fórmula mencionada, em que R1 até R5 são metilo, aqueles em que x é 4 ou 1 5, e em particular o composto N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

No documento WO 99/01416, dos presentes requerentes, publicado a 14 de Janeiro 1999, foram divulgados compostos da fórmula mencionada mas em que R8 e R9 foram seleccionados entre hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C), suas composições farmacêuticas, e sua utilização como antagonistas do receptor NMDA. Foi agora descoberto que os compostos da fórmula mencionada em que R8 e R9 juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)x-, em que x é 2 - 5, inclusive, e especialmente N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, para além das suas propriedades como antagonistas de NMDA, apresentam um elevado grau perfeitamente imprevisível de actividade anticonvulsiva no modelo de kíndling, enquanto que outros antagonistas de NMDA, apesar de terem propriedades de antagonismo-NMDA mais elevadas, não são activos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO O que se acredita estar compreendido na presente invenção pode ser resumido, inter alia, no seguinte:

Um composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico do grupo que consiste na fórmula 2

X R1ÍJ^\X^Ub'R4 R2 R3 em que R* é - (CH2) n-(CR6R7)m-NR8R9 em que n+m = 0, 1, ou 2 em que R1 até R7 são independentemente seleccionados do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C), sendo pelo menos R1, R4 e R5 alquilo de cadeia curta, e em que R8 e R9 juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)X-, em que x é 2 a 5, inclusive, e enantiómeros, isómeros ópticos, hidratos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

Um composto em que R1 até R5 são metilo; um composto em que x é 4 ou 5; e um composto seleccionado do grupo que consiste de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

Além disso, uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade efectiva do tal composto em combinação com um ou mais diluentes, excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis; uma composição farmacêutica em que a quantidade efectiva é uma quantidade efectiva de anticonvulsivo; 3 uma composição farmacêutica em que R1 até R5 são metilo; uma composição farmacêutica em que x é 4 ou 5; e o composto e consiste de e isómeros farmaceuticamente uma composição farmacêutica em que seleccionado do grupo que N- (1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, ópticos, enantiómeros, hidratos e sais aceitáveis destes.

Além disso, a utilização de um amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico seleccionado do grupo que consiste daqueles da fórmula

X R4 R2 R3 em que R* é - (CH2) n- (CR6R7) m-NR8R9 em que n+m = 0, 1, ou 2 em que R1 até R7 são independentemente seleccionados do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C), sendo pelo menos R1, R4 e R5 alquilo de cadeia curta, e em que R8 e R9 juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)X-, em que x é 2 a 5, inclusive, e, isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, na produção de um medicamento para tratar um animal vivo, para atenuar convulsões ou ataques; 4 uma utilização em que R1 a R5 são metilo; uma utilização em que x é 4 ou 5; uma utilização em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

Adicionalmente, um método para produzir este composto que compreende o passo de fazer reagir o amino-alquilciclo-hexano 1-livre correspondente com (1) um ómega-halo alquil nitrilo e ciclizar o composto N-(ómega-cianoalquilo) resultante no composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico correspondente ou com (2) um composto alfa,ómega-di-halo alquilo.

MÉTODOS- QUÍMICA

Os materiais iniciais para a preparação dos compostos da presente invenção são conhecidos na técnica. No documento WO99/01416, PCT/EP98/04026 anteriormente publicado, dos presentes requerentes estão divulgados vários compostos 1- amino -alquilciclo-hexilamina. Chama-se a atenção, por exemplo, para o Composto 5 na página 9, e para os vários exemplos deste ao longo da publicação. Os compostos iniciais para a presente invenção têm a fórmula acima apresentada mas em que tanto R8 como R9 são hidrogénio. De particular interesse como material inicial é um composto seleccionado do grupo que consiste em 1-amino-l,3,5-trimetilciclo-hexano, 1-amino- 1 (trans),3(trans),5-trimetilciclo-hexano, 1-amino-l(cis),3(cis),5-trimetilciclo-hexano, 1-amino-l,3,3,5-tetrametilciclo-hexano, 5 1-amino-l,3,3,5,5-pentametilciclo-hexano, 1-amino-l,3,5,5-tetrametil-3-etilciclo-hexano, 1-amino-l,5,5-trimetil-3,3-dietilciclo-hexano, 1-amino-l,5,5-trimetil-cis-3-etilciclo-hexano, 1-amino-(IS,5S)cis-3-etil-l,5,5-trimetilciclo-hexano, 1-amino-l,5,5-trimetil-trans-3-etilciclo-hexano, 1-amino-(lR,5S)trans-3-etil-l,5,5-trimetilciclo-hexano, l-amino-l-etil-3,3,5,5-tetrametilciclo-hexano, e l-amino-l-propil-3,3,5,5-tetrametilciclo-hexano, e sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos mencionados. Os compostos da presente invenção são preparados a partir destes com o passo adicional de conversão ou compostos de amina livre, de um modo preferido, na forma de um sal de adição de ácidos, tal como o cloridrato ou semelhante, num processo de ciclização de dois passos envolvendo um composto intermediário N-cianoalquilo e a sua ciclização para produzir o composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico desejado, em que o grupo 1-amino está na forma de um grupo cíclico, tal como pirrolidina ou piperidina ou semelhante, cujos compostos são os elementos essenciais da presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Os seguintes pormenores adicionais e exemplos detalhados são fornecidos apenas a título ilustrativo, e não devem ser interpretados como limitantes.

EXEMPLOS

Os compostos 1-amino-alquil ciclo-hexano, em que o grupo 1-amina é cíclico, ou seja, em que R8 e R9 juntos representam 6 alquileno de cadeia curta -((¾)x- em que x é 2 a 5, inclusive, apresentando por isso o grupo 1-amino -NR8 R9 na forma de uma amina ciclica, são preparados da seguinte maneira:

Preparação de N-(3-Cianopropil)-1,3,3,5,5-pentametil-ciclo-hexilamina

Uma mistura de cloridrato de 1,3,3,5,5-pentametil-ciclo- hexilamina (2,06 9' 10 mmol) , 4-bromobutironitrilo (1,55 g, 10,5 mmol) e carbonato de sódio (3,18g, 30 mmol) em tetrahidrofurano (50 mL) foi submetida a durante 85 h, foi depois vertida em água (100 mL) e extraída com éter (3*30 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução salina (20 mL) e secas sobre K2CO3. A solução foi filtrada e evaporada e o produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica, eluindo com hexano-éter (10:1), (6:1), (4:1) para se obter o produto (1,86 g, 86%) como um óleo incolor.

Espectro de RMP: (CDC13, TMS) δ:0,87 (6H, s, c-Hex 3,5-CH3); 1,06 (3H, s, c-Hex I-CH3) 1,18 (6H, s, 3,5-CH3); 0,9-1,6 (7H, m, protões do anel c-Hex e NH) ; 1,75 (2H, m, -CH2-) ; 2,43 (2H, t, J=7 Hz, CH2N) e 2,66 ppm. (2H, t, J=7 Hz, CH2CN) .

Preparação de MRZ 2/705, denominado: cloridrato de N-(1,3, 3,5,5-Pentametil ciclo-hexil)pirrolidina N-(3-Cianopropil)-1,3,3,5,5-pentametil ciclo-hexilamina (1,2 g, 5,1 mmol) em etanol (120 mL) e HC1 conc. (4 mL) foi hidrogenada sobre 10% Pd/C (250 mg) a 7 bar durante 40 h (após 7 24 h foi adicionada uma porção adicional de catalisador (260 mg) . O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de celite e o solvente foi evaporado. O residuo foi tratado com acetonitrilo, os sólidos removidos por filtração e o filtrado evaporado. O produto bruto foi cristalizado de éter para se obter cloridrato de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina (0,67 g, 49%) com p.f. 156-158 °C.

Espectro de RMP: (DMSO-D6, TMS) δ:0,97 (6H, s, 3,5-CH3); 1,11 (6H, s, 3,5-CH3); 0,8 - 1,4 (2H, ciclo-hexano 4-CH2) 1,41 (3H, s, 1-CH3); 1,69 (4H, m, ciclo-hexano 2,6-CH2); 1,84 (4H, m, pirrolidina 3,4-CH2); 3,20 (4H, m, pirrolidina 2,5-CH2); 10,9 ppm (1H, br s, HN*).

Análise Elementar: Ci5H29N*HC1*0,5H20) :

Detectado (%) C 67,7; H 11,5; N 5,5 Calculado (%) C 67,0; H 11,6; N 5,2

Os compostos amino 1-cíclicos adicionais são preparados da mesma maneira, começando a partir da ciclo-hexilamina alquil-substituida seleccionada, habitualmente na forma de um sal de adição de ácido, tal como cloridrato, e do ω-bromo-alquilnitrilo seleccionado, tal como 4-bromobutironitrilo, 3-bromopropionitrilo, 2-bromoacetonitrilo, e 5-bromovaleronitrilo, no modo da preparação anterior, primeiro para produzir o composto Ν-ω-cianoalquil-alquilciclohexilamina seleccionado, e depois para ciclizar o composto Ν-ω-cianoalquil-alquilciclo-hexilamina no composto de amina cíclica de N-(alquilciclohexilo) resultante, nomeadamente, a pirrolidina, piperidina ou outros compostos de amina cíclica, em que o átomo de azoto e R8 e R9 juntos formam a unidade de amina cíclica, R8 e R9 juntos representam um alquileno de cadeia curta da fórmula -(CH2)x- em que x é 2 a 5, inclusive.

Desta maneira, o cloridrato de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)piperidina ou outro sal de adição de ácido e vários outros ciclo-hexanos substituídos com alquilo de cadeia curta que têm um grupo 1-pirrolidino ou 1-piperidino ou outro grupo amino 1-cíclico são preparados de acordo com a invenção, dependendo dos materiais iniciais ω-bromoalquilnitrilo e ciclo-hexilamina alquil-substituída seleccionados para a reacçâo. 0 método envolvido pode portanto ser descrito apropriadamente como o passo de fazer reagir o amino-aiquilciclo-hexano 1-livre correspondente com um ómega-haloalquilnitrilo e ciclizar o composto N-(ómega-cianoalquilo) resultante no composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico correspondente. 0 halogénio é, de um modo preferido, bromo, e a amina inicial é, de um modo preferido, feita reagir na forma de um seu sal de adição de ácido, tal como o cloridrato. Começando dos materiais iniciais preferidos como determinado anteriormente, são deste modo prontamente preparados os seguintes compostos: N-(1,3, 5-trimetilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-[1 (trans),3 (trans),5-trimetilciclo-hexil]pirrolidina ou piperidina, N-[1(cis) , 3(cis),5-trimetilciclo-hexil]pirrolidina ou piperidina, N-(1,3,3,5-tetrametilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-(1,3, 3, 5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, 9 Ν-(1,3, 5, 5-tetrametil-3-etilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-(1,5,5-trimetil-3,3-dietilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-(1,5,5-trimetil-cis-3-etilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-[(IS, 5S)cis-3-etil-l,5,5-trimetil-ciclo-hexil]pirrolidina ou piperidina, N-(1,5, 5-trimetil-trans-3-etilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, N-[(IR, 5S)trans-3-etil-l,5,5-trimetil-ciclo-hexil]pirrolidina ou piperidina, N-(l-etil-3,3, 5,5-tetrametilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, e N-(l-propil-3,3,5,5-tetrametilciclo-hexil)pirrolidina ou piperidina, e sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos anteriores. R1 até R7 podem deste modo ser, por exemplo, metilo, etilo, propilo, ou uma combinação destes grupos alquilo de cadeia curta e, como referido anteriormente, pelo menos R1, R4, e R5 são, de um modo preferido, um destes grupos e, adicionalmente, de um modo muito preferido, compostos têm R1 até R5 como metilo.

Procedimento Alternativo

Os mesmos compostos podem ser preparados por fazer reagir o amino-alquilciclo-hexano 1-livre correspondente e o composto alfa,ómega-di-haloalquilo seleccionado, e. g., 1,3-dibromopropano, 1,4-dibromobutano, ou 1,5-dibromopentano, de acordo com o seguinte exemplo representativo: 10

Cloridrato de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo- hexil)pirrolidina

Cloridrato de 1,3,3, 5,5-pentametilciclo-hexilamina (12 g, 58,3 mmol), carbonato de potássio (48,4 g, 350 mmol) e 1.4- dibromobutano (7,32 mL, 61,3 mmol) foram submetidas a refluxo em acetonitrilo (250 mL) durante 60 h. Após arrefecimento até a.t.a., a mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado com éter dietilico (600 mL) . O filtrado foi concentrado in vacuo por evaporação rotativa e o resíduo foi submetido a uma destilação fraccionada a pressão reduzida (11 mm/Hg) . A fracção a 129 °C foi recolhida para se obter um óleo incolor (8,95 g). Este foi dissolvido em éter dietilico (120 mL) e foi adicionada uma solução de HC1 a 2,7 M em éter dietilico (30 mL). O precipitado resultante foi removido por filtração, lavado com éter dietilico (3*30 mL) e seco in vacuo sobre NaOH, para se obter cloridrato de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina (12,9 g, 68%) com p.f. 158 °C. Espectro de RMP: (DMS0-d6, TMS) d: 0,97 (6H, s, 3.5- CH3); 1,11 (6H, s, 3,5-CH3); 0,8 - 1,4 (2H, ciclo-hexano 4-CH2) 1,41 (3H, s, 1-CH3) ; 1,69 (4H, m, ciclo-hexano 2,6-CH2); 1,84 (4H, m, pirrolidina 3,4-CH2); 3,20 (4H, m, pirrolidina 2.5- CH2); 10,9 ppm (1H, br s, NH+) .

Análise elementar (Ci5H29N*HC1*H20)

Detectado (%) C 65,0; H 11,7; N 5,0 Calculado (%) C 64,8; H 11,6; N 5,0 11

RESULTADOS FARMACOLÓGICOS A. As seguintes Tabelas 1 e 2 apresentam resultados farmacológicos com o composto MRZ 2/705 da presente invenção. As

Tabelas apresentam o seguinte: TABELA 1 MRZ 2/ MES ED50 mg/kg i.p TI Tract TI Rot. Min I.ct- hality mg/kg i.p. 705 9, 55 (4,3-21,1) 3,9 5,4 > 50 TABELA 1

Efeito de MRZ 2/705 em convulsões induzidas por choque eléctrico máximo (MES). Os valores são ED5oS em mg/kg (os limites de confiança de 95% são apresentados entre parêntesis). O indice terapêutico (TI) foi também calculado como o ED50 para a inibição da deterioração do reflexo de fracção (Tract.), ou falência no rotarod (Rot.) dividido pelo ED5o para as convulsões induzidas pelo MES ou induzidas por convulsões. TABELA 2 MRZ MK-801 Ki SEM PATCH-CLAMP SEM TOX Glut SEM (μΜ) IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) 705 7,14 1,7 25, 40 4,1 12,32 1,19 12 TABELA 2

Efeito de MRZ 2/705 na ligação de [3H]- ( + )-MK-801, correntes induzidas por NMDA em ensaios de Patch-Clamp, e toxicidade do glutamato em neurónios corticais em cultura. Os valores Ki de ligação são médias +SEM de 3-5 ensaios e foram determinados de acordo com a relação de Cheng-Prusoff com um Kd para MK-801 de 4,6 nM. Os IC5oS (+SEM) nos ensaios de Patch-Clamp e toxicidade do glutamato foram determinados a partir de dados de, pelo menos, 3 concentrações, produzindo entre 15 e 85% de inibição e, pelo menos, 5 células/p040 por concentração. B. Actividade anticonvulsiva de MRZ 2/705 no modelo de kindling da amígdala.

Introdução A substância MRZ 2/705 foi testada no modelo de kindling da amígdala em ratos. Neste modelo, animais implantados cronicamente com eléctrodos de estimulação e gravação na amígdala foram tornados mais susceptíveis a convulsões por estimulação eléctrica subconvulsiva inicialmente repetida (Goddard et al., 1969, Sato et. al., 1990). Uma vez desenvolvida uma sensibilidade aumentada, caracterizada por ataques motores generalizados, o animal diz-se estar totalmente estimulada. Para os processos de rastreio da substância foi determinada a corrente limiar individual que induz descargas posteriores no local de estimulação. 13

Materiais e Métodos

Animais

Foram adquiridos ratos fêmea Wistar com um peso corporal de 200-220 g (Harlan Windelmann Versuchstierzucht, Borchen, Alemanha), e foram depois mantidos sob condições ambientais controladas (24-25 °C, 50-60% de humidade, ciclos de 12 h dia/noite), com acesso livre à ração laboratorial padrão (Altromin 1324 dieta padrão) e água da torneira. Todos os ensaios foram realizados à mesma hora do dia, durante a manhã, para minimizar possíveis efeitos da variação circadiana. Durante o período de ensaios, os animais tinham um peso corporal entre 265 e 414 g. Estes animais foram previamente estimulados e utilizados para testar outros compostos. O período entre os estudos anteriores e os actuais foi suficientemente longo (pelo menos um mês) , de modo que houve tempo suficiente para uma lavagem completa do fármaco testado anteriormente.

Implantação de Eléctrodo

Para a implantação dos eléctrodos de kindling, os ratos foram anestesiados com hidrato de cloral (360 mg/kg, i/p.), a superfície cerebral foi exposta, e um eléctrodo bipolar foi implantado no hemisfério direito, apontado à amígdala basolateral, utilizando as seguintes coordenadas estereotáxicas, de acordo com o atlas de Paximos e Watson (1986): 2,2 mm caudal, 4,8 mm lateral, 8,5 mm ventral (todos respeitantes a bregma). Os eléctrodos consistiam de dois fios de aço inoxidável enrolados, revestidos com Teflon (250 ym de diâmetro), separados por 0,5 mm na ponta. Um parafuso, que serviu como eléctrodo de terra, foi colocado sobre o córtex parietal esquerdo. Os eléctrodos de 14 terra e bipolares foram ligados a tomadas, e o conjunto dos eléctrodos e os parafusos ancoradouros foram fixos no local com cola dentária carylic dentário, aplicado na superfície cerebral exposta. Após a cirurgia, os ratos foram tratados com antibióticos durante 1 semana, para prevenir infecção.

Processo e ensaios de kindling em animais totalmente estimulados.

Após um período de recuperação pós-operatório de duas semanas, foram feitas estimulações de corrente constante (500 μΑ, 1 mseg, pulsações de ondas quadradas monofásicas, 50 Hz durante 1 s) na amígdala uma vez por dia (cinco vezes por semana), até serem induzidos, pelo menos, 10 ataques sequenciais de estádio 5 totalmente estimulados. A gravidade do ataque (SS) foi classificada de acordo com Racine (1972): 1 imobilidade, fecho dos olhos, contracção da orelha, contracção dos bigodes, farejar, clómus facial; 2 oscilações da cabeça associadas com clómus facial mais grave; 3 clómus de um membro anterior; 3,5 clómus bilateral sem empinamento; 4 clómus bilateral acompanhado de empinamento; 4,5 ataques clónicos generalizados sem empinamento e queda (e. g.r devido a perda directa de equilíbrio); 5 empinamento e queda acompanhados por ataques clónicos generalizados. Nestes ratos totalmente estimulados, o limiar de descarga posterior (ADT) foi determinado pela administração de um conjunto de estimulações em intervalos de 1 min. Aumentando em passos de cerca de 20% em relação à corrente aplicada anteriormente. O limiar de descarga posterior foi definido como a intensidade mais baixa de corrente capaz de produzir descarga posterior com uma duração de, pelo menos, 5 s. A determinação do limiar de descarga posterior foi repetida duas 15 vezes para comprovar a reproductibilidade, antes dos animais serem utilizados para o teste do fármaco anticonvulsivo.

Em todos os ensaios, foram gravadas a duração do ataque e a duração da descarga posterior, para além da gravidade do ataque e do limiar de descarga posterior. A duração 1 do ataque (SD1) correspondeu ao periodo de tempo de ataques limbicos e/ou motores. A actividade dos ataques limbicos que ocorreu por vezes após a terminação de ataques secundários generalizados não foi incluida na duração do ataque. A duração 2 do ataque (SD2) correspondeu ao periodo de tempo desde a estimulação até ao término da fase de depressão postictal. A duração 1 da descarga posterior (ADD1) foi definida como o periodo do pico de maior amplitude (pelo menos, 1 Hz de frequência e duas vezes a amplitude de pré-estimulação) no electro-encefalograma (EEG) do eléctrodo BLA, incluindo o tempo de estimulação. Se o primeiro periodo de pico foi seguido directamente por picos com diferentes amplitudes, o tempo desde a estimulação até ao final dos picos de amplitude baixos e altos foi considerado como a duração 2 de descarga posterior (ADD2). As descargas posteriores secundárias que ocorreram algumas vezes após um periodo de EEG silencioso foram marcadas por um X em todos os protocolos.

Ensaios com o fármaco A substância MRZ 2/705 foi dissolvida em água destilada e administrada i.p. Por esse meio, o volume aplicado foi 3 mL/kg de peso corporal. As dosagens utilizadas nos ensaios foram 5, 10, e 20 mg/kg.

Os animais tiveram um período de adaptação ao ambiente laboratorial, e depois foi medida a temperatura corporal, e os animais foram colocados em gaiolas abertas para constante observação. Nos 15 e 30 minutos seguintes à administração do fármaco ou veículo foram determinadas as alterações no comportamento e a temperatura corporal. Os efeitos colaterais foram classificados durante a observação das gaiolas abertas e num campo aberto. Adicionalmente, os ratos foram submetidos ao teste de rotarod (polipropileno, barra revestida com espuma, 5 cm de diâmetro, 8 rpm). Considerou-se que os animais falhavam neste teste, quando caíam da barra a cada uma de três tentativas consecutivas de 1 min.

Os efeitos colaterais foram classificados como se segue: ataxia: 0= ausência, 1= ataxia ligeira nas patas traseiras, 2= ataxia mais pronunciada com arrastamento das patas traseiras, 3= maior aumento de ataxia e arrastamento das patas traseiras mais pronunciado, 4= ataxia acentuada e perda de equilíbrio durante locomoção para a frente, 5= ataxia muito acentuada com perda frequente de equilíbrio, e 6= perda permanente do reflexo de colocação directa; sedação: 0= ausência, 1= redução ligeira da locomoção para a frente, 2= locomoção reduzida com períodos de descanso entre períodos de locomoção, 3= locomoção reduzida com períodos de descanso mais frequentes, e 4= ausência de locomoção para a frente e o animal fica quieto com os olhos fechados; efeitos colaterais adicionais: 0= ausência, l=equívoco, 2= presente, e 3= intenso.

Os dados de significância estatística dos ataques foram calculados através do teste de Wilcoxon para amostras emparelhadas. 17

Resultados A substância MRZ 2/705 apresentou um efeito anticonvulsivo dependente da dose em ratos de amígdala estimulada.

Com as diferentes dosagens verificou-se um aumento médio do limiar de descarga posterior de 36% (5 mg/kg), 50% (10 mg/kg) e 95% (20 mg/kg), acima do limiar de controlo. Este aumento mostrou ser significativo após dosagens de 10 e 20 mg/kg (Fig.3) .

Para além do aumento do limiar de descarga posterior, a dosagem mais elevada testada (20 mg/kg) reduziu a gravidade do ataque, duração dos ataques motores, e duração da descarga de um modo significativo. Com dosagens mais baixas estes parâmetros do ataque permaneceram inalterados, ou foram apenas ligeiramente influenciados.

Com todas as três dosagens verificaram-se menos sinais de sedação. Verificou-se uma ataxia ligeira após dosagens de 10 e 20 mg/kg, mas não se observa qualquer insucesso na execussão do teste de rotarod.

Conclusões

Nas presentes investigações, a substância MRZ 2/705 aumentar fortemente o limiar de descarga posterior em ratos completamente estimulados. Para além disso, com dosagens mais elevadas a substância teste reduziu significativamente a duração do ataque, duração da descarga e gravidade do ataque gravado na corrente ADT. Estes resultados apontam para o facto de MRZ 2/705 18 possuir um efeito anticonvulsivo potente com inibição do inicio do ataque, bem como da continuação do ataque.

No que diz respeito à previsibilidade do modelo de kindling quanto à eficácia de um fármaco em relação a ataques parciais complexos em humanos (SATO et al., 1990; Lõscher e Schmidt, 1994), os resultados prevêem uma actividade anticonvulsiva do MRZ 2/705 na epilepsia do lobo temporal. Para além disso, a substância não induz efeitos colaterais graves no comportamento mas doses testadas, e deste modo apresenta um perfil favorável no que diz respeito aos efeitos colaterais. A Figura 3 resume os dados de kindling com diferentes doses da substância teste MRZ 2/705. Os dados são valores médios ± SEM. Os gráficos individuais fornecem resultados sobre o limiar de descarga posterior (ADT), gravidade do ataque (SS), duração do ataque (SD), e duração da descarga posterior (ADD).

NOS DESENHOS A FIG. IA e FIG. 1B apresentam os valores obtidos para os efeitos das Tabelas 1 e 2 utilizando MRZ 2/705. A FIG. 2 apresenta os valores obtidos para vários compostos intimamente seleccionados mas de amino não cíclicos e MRZ 2/705, bem como padrões referência no teste de ligação especifica [3H]-MK-801 em função da concentração. A FIG. 3 resume os dados de kindling com diferentes doses da substância teste MRZ 2/705. 19

Os compostos da invenção encontram, desde modo, aplicação no tratamento de distúrbios de um animal vivo, especialmente um humano, tanto em indicações de NMDA e não NMDA, para além da sua excelente actividade como anticonvulsivo e antiepiléptico, especialmente como foi demonstrado no modelo de "kíndlíng". 0 método de tratamento de um animal vivo com um composto da invenção para alivio da doença seleccionada, especialmente convulsões ou ataques, faz-se através de qualquer via farmacêutica normalmente aceite, utilizando a dosagem seleccionada que é eficaz no alivio da doença particular, que se deseja aliviar. A utilização dos compostos da invenção na produção de um medicamento ou no tratamento de um animal vivo para o alívio doença seleccionada, especialmente convulsões ou ataques, é efectuada de modo habitual, compreendendo o passo de misturar uma quantidade eficaz de um composto da invenção com um diluente, excipiente, ou veículo farmaceuticamente aceitável, e o método de tratamento, composições farmacêuticas, e utilização de um composto da presente invenção na produção de um medicamento, estão todos de acordo com a divulgação da publicação anterior WO 99/01416 dos presentes requerentes para os compostos amino não 1-cíclicos relacionados, e sais de adição de ácido representativos, e os seus métodos de preparação são também divulgados na anterior publicação anterior dos presentes requerentes para os compostos amino-alquilciclo-hexano não 1-cíclicos correspondentes. AS composições farmacêuticas representativas preparadas por mistura do ingrediente activo com um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, adequado, incluem 20 comprimidos, cápsulas, soluções para injecção, formulações orais liquidas, formulações de aerossóis, formulações TDS, e formulações de nanopartículas, para deste modo produzir medicamentos para utilização oral, injectável, ou dérmica, também em acordo com os exemplos de composições farmacêuticas fornecidos na publicação anterior WO 99/01416 dos presentes requerentes para os compostos amino-alquilciclo-hexano não 1-cíclico correspondentes.

Uma composição farmacêutica típica é deste modo produzida pela mistura dos seguintes ingredientes numa formulação de comprimida, incorporando um ingrediente activo amino-ciclo-hexano 1-cíclico da invenção.

Formulação de comprimido

Uma formulação adequada para um comprimido contendo 10 miligramas de ingrediente activo é a seguinte:

Mg.

Ingrediente Activo 10

Lactose 63

Celulose Microcristalina 21

Talco 4

Estearato de Magnésio 1

Dióxido de silício coloidal 1

Deve ser entendido que a invenção não deve ser limitada aos exactos detalhes de operação, ou às exactas composições, métodos, processos, ou formas de realização apresentadas e descritas, visto que modificações óbvias e equivalentes serão 21 evidentes para um especialista na técnica, e a invenção portanto deve ser limitada apenas pelo âmbito pleno que pode ser legalmente concedido às reivindicações em anexo.

REFERÊNCIAS

Goddard, G.V., D.C. Mclntyre, e C.K. Leech, 1969, "A permanent change in brain function resulting from daily stimulation", Exp. Neurol. 25:295-330. Lõscher, W. e D. Schmidt, 1994, "Strategies in antiepileptic drug development: Is rational drug design superior to random screening and structural variation?", Epilepsy Res. 17:95-134.

Racine, R.J., 1972, "Modification of seizure activity by electrical stimulation", II. Motor seizure Electroencephalograph. Clin. Neurophys. 32:295-299.

Sato, M., R.J. Racine, e D.C. Mclntyre, 1990, "Kindling: Basic mechanisms and clinicai validity", Electroencephalograph. Clin. Neurophys. 76:459-472 .

Ver também: Ebert e Lõscher, "Pathophysiology of the Kindling phenomenon: Implications for the development of new antiepileptic drugs", Neuroforum 3/99, p. 76.

Lisboa, 4 de Maio de 2007 22

Claims (17)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico seleccionado do grupo que consiste naqueles da fórmula X R1jJ|Nv/|^R4 R2 R3 em que R* é - (CH2) n- (CR6R7) m-NR8R9 em que n+m =0, 1, ou 2 em que R1 até R7 são independentemente seleccionados do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C) , sendo pelo menos R1, R4 e R5 alquilo de cadeia curta, e em que R e R juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)X-, em que x é 2 a 5, inclusive, e enantiómeros, isómeros ópticos, hidratos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
2. 2. Composto da reivindicação 1, em que R1 até R5 são metilo.
3. 3. Composto da reivindicação 1, em que x é 4 ou 5.
4. 4. Composto da reivindicação 2, em que x é 4 ou 5.
5. 5. Composto da reivindicação 1, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros 1 ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
6. 6. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto da reivindicação 1 em combinação com um ou mais diluentes, excipientes, ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
7. 7. Composição farmacêutica da reivindicação 6, em que a quantidade eficaz é uma quantidade anticonvulsiva eficaz.
8. 8. Composição farmacêutica da reivindicação 6, em que R1 até R5 são metilo.
9. 9. Composição farmacêutica da reivindicação 6, em que x é 4 ou 5.
10. 10. Composição farmacêutica da reivindicação 8, em que x é 4 ou 5.
11. 11. Composição farmacêutica da reivindicação 6, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste de N-(1,3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
12. 12. Utilização de um amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico seleccionado do grupo que consiste naqueles da fórmula 2 R5 R* X r1J^\/|LUr4 R2 R3 em que R* é - (CH2) n- (CR6R7) m-NR8R9 em que n+m =0, 1, ou 2 em que R1 até R7 são independentemente seleccionados do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo de cadeia curta (1-6C) , sendo pelo menos R1, R4 e R5 alquilo de cadeia curta, e em que R8 e R9 juntos representam alquileno de cadeia curta -(CH2)X-, em que x é 2 a 5, inclusive, e, isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos, e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, na produção de um medicamento para tratar um animal vivo na atenuação de convulsões ou ataques.
13. 13. Utilização da reivindicação 12, em que R1 até R5 são metilo.
14. 14. Utilização da reivindicação 12, em que x é 4 ou 5.
15. 15. Utilização da reivindicação 13, em que x é 4 ou 5.
16. 16. Utilização da reivindicação 12, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em N-(1, 3,3,5,5-pentametilciclo-hexil)pirrolidina, e isómeros ópticos, enantiómeros, hidratos e sais farmaceuticamente aceitáveis destes. 3
17. 17. Método para produzir um composto da reivindicação 1 que compreende o passo de fazer reagir o amino-alquilciclo-hexano 1-livre correspondente com (1) um ómega-halo alquil nitrilo e ciclizar o composto N-(ómega-cianoalquilo) resultante no composto amino-alquilciclo-hexano 1-cíclico correspondente ou com (2) um composto alfa,ómega-di-halo-alquilo. Lisboa, 4 de Maio de 2007 4