NL193398C

NL193398C - Anti-oxiderende oliesamenstelling en werkwijze voor de bereiding daarvan.

Info

Publication number: NL193398C
Application number: NL9301083A
Authority: NL
Inventors: Kozo Niwa; Emiyo Niwa
Original assignee: Emiyo Niwa
Priority date: 1992-06-22
Filing date: 1993-06-22
Publication date: 1999-09-06
Also published as: DK73293A; SE9302141D0; DK73293D0; IT1266950B1; NO932282L; NL9301083A; GB2268185A; ITTO930448A1; FR2692442B1; IS4038A; FR2692442A1; AU656681B2; JPH069421A; BE1006911A3; SE512781C2; IS1657B; CA2098893C; TW269630B; KR940000113A; ES2049189A1

Description

1 193398

Anti-oxiderende oliesamenstelling en werkwijze voor de bereiding daarvan

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op oliesamenstelling verkregen door het bij een temperatuur niet hoger dan 100°C verhitten van een ruw graanmateriaal dat rijstkiemen en/of tarwekiemen en sojabonen 5 omvat, het toevoegen van koji (aspergillus orizae) en het fermenteren van het verhit geweest zijnde materiaal, het verwerken van het gefermenteerde materiaal tot een poeder en het toevoegen van het tot poeder verwerkte materiaal aan een oliemengsel omvattende een pastaolie verkregen uit sesam verhit bij een temperatuur niet hoger dan 100°C.

Een dergelijke samenstelling is bekend uit GB 2.195.889 A. Deze literatuurplaats beschrijft een anti-10 oxiderende samenstelling verkregen door het met micro-organismen fermenteren van plantenzaden, granen en/of kiemen daarvan en het toevoegen van een olie die is verkregen door het verhitten van planten.

Anti-oxidantia die een uitstekende werking hebben als ze gebruikt worden bij de preventie en de behandeling van verscheidene ontstekingen en chronische ziekten zoals chronische arthro-reuma, tromboplebitis, voortschrijdende systemische sclerema, de ziekte van Buerger, de ziekte van Raynaud, 15 hardnekkige huidzweren en dergelijke, die veroorzaakt worden door de vernietiging van de cellulaire organisatie door reactieve zuurstof en lipideperoxiden die in het menselijk lichaam worden geproduceerd, zijn recent in de belangstelling gekomen.

Door onderzoek is opgehelderd dat anti-oxidantia met een laag moleculegewicht zoals flavonoïden, polyfenolen, tanninen, tocoferolen, vitamine B1 en dergelijke aanwezig zijn in planten, en dat door deze 20 oraal als geneesmiddel of gezondheidsvoedsel toe te dienen, de productie van bovengenoemde reactieve zuurstof in lipideperoxide in het lichaam wordt onderdrukt (zie Journal of Japan Pharmacist Association,

Nr. 39, Vol. 12, Supplement, ’’Bioavailability of SOD (Superoxide Dismutase) and crude drug”, biz. 1097-1199, gepubliceerd op 1 december 1987).

Het Japanse octrooi 1.366.268 beschrijft een plantaardig voedingsmiddel dat wordt verkregen door 25 poeder van groene thee te mengen met poeder van gebakken ongepelde rijst en sojabonenpoeder, waarbij een geringe hoeveelheid kojischimmel aan het mengsel wordt toegevoegd, welk mengsel vervolgens gedurende ongeveer 4 dagen in een mengsel van sesamolie en sojabonenolie wordt gehouden om de effectieve bestanddelen te extraheren, waarna de precipitaten verwijderd worden door centrifugatie, en de overblijvende olieachtige verbinding wordt opgesloten in een capsule van gelatine of iets dergelijks.

30 Het plantaardig voedingsmiddel van het Japanse octrooi 1.366.268 heeft echter een lage anti-oxiderende activiteit, hetgeen wordt veroorzaakt door de wijze waarop het ruwe plantaardige materiaal wordt verwerkt.

GB 2.195.889 A beschrijft een anti-oxiderende samenstelling met verhoogde activiteit die wordt verkregen door plantenzaden, granen of kiemen daarvan zachtjes te verhitten zodat ze niet verbranden, aan het verhitte plantenmateriaal een micro-organisme toe te voegen om het te fermenteren, en aan het gefermen-35 teerde materiaal een plantaardige olie toe te voegen die is verkregen van een plant die ook zachtjes was verhit. Eventueel worden vitamine C, vitamine C-derivaten of een plant die deze bevat aan de samenstelling toegevoegd. Als plantenzaad wordt een zaad gebruikt dat anti-oxidantia bevat, zoals bovengenoemde flavonoïden, polyfenolen, tanninen, tocoferolen, vitamine B1 en dergelijke, waaronder rijst, tarwe, gerst, sojabonen, azukibonen (Phascolus radiatus L, var. typicus Prain), maïs, parelgerst (hatomugi) (Coix 40 Lacryma-jobi var. muyen Stapf L), erwten. Als plantaardige olie wordt sesamolie, sojabonenolie, katoen-zaadolie, maïsolie, saffloerolie, sleutelbloemolie, rijstzemelolie, koolzaadolie, olijfolie en dergelijke gebruikt.

Er is echter gebleken dat, hoewel bovengenoemde anti-oxiderende samenstelling de productie van reactieve zuurstof en lipideperoxide in vitro aanmerkelijk onderdrukt, deze anti-oxiderende activiteiten in het menselijk lichaam niet voldoende optreden.

45 Gevonden is nu dat door in een anti-oxiderende samenstelling volgens GB 2.195.899 A naast de olie die verkregen is uit verhit plantenmateriaal, een olie op te nemen die uit ruwe sesam is verkregen, en een bepaalde verhouding tussen oliemengsel en oliesamenstelling toe te passen, een oliesamenstelling wordt verkregen die een verrassend hoge anti-oxiderende activiteit en een hoog cel-binnendringend vermogen heeft.

50 Aldus voorziet de uitvinding in een oliesamenstelling als in de aanhef omschreven, met het kenmerk, dat het oliemengsel verder een olie omvat die is verkregen uit ruwe sesam, en de verhouding van het oliemengsel tot de totale hoeveelheid van het tot poeder verwerkt materiaal en het oliemengsel 60 tot 95 gew.% is.

Als grondstof die anti-oxidantia in grote hoeveelheden bevat, kunnen naast rijstkiemen, tarwekiemen en 55 sojabonen de in GB 2.195.899 A beschreven plantensoorten worden genoemd, dat wil zeggen gerst, azukibonen, maïs, parelgerst (hatomugi), erwten en dergelijke. Naast rijstkiemen, tarwekiemen en sojabonen zijn met name rijstzemelen, parelgerst-(hatomugi) en tarwe geschikt. Daarom kan het ruwe graanmateriaal 193398 2 ten minste één materiaal gekozen uit rijstzemelen, parelgerst (hatomugi) en tarwe bevatten naast de rijstkiemen en/ot tarwekiemen. De hoeveelheid van de kiemen (rijstkiemen en/of tarwekiemen) in het ruwe graan materiaal dient ten minste meer dan of gelijk aan 1 gew.% te zijn.

De anti-oxidantia die aanwezig zijn in het hierboven beschreven ruwe graanmateriaal vormen samen met 5 andere verbindingen een gecompliceerde macromoleculaire polymeerstructuur. In dit macromolecule hebben de anti-oxidantia geen activiteit, zodat het nodig is om de bindingen die het macromolecuul bijeen houden te breken door middel van zacht verhitten of iets dergelijks, waardoor anti-oxidantia met een laag molecuulge-wicht worden vrijgemaakt. Als de verwarmingstemperatuur echter te hoog is, worden de anti-oxidantia met een laag molecuulgewicht gedeactiveerd, zodat het nodig is om bij het kiezen van de verwarmingsom-10 standigheden met dit feit rekening te houden.

Om hiermee rekening te houden is het nodig dat het ruwe tarwemateriaal verhit wordt bij een temperatuur die niet hoger is dan 100°C, waarbij langzaam en gedurende een voldoende tijd wordt verhit. In detail wordt het ruwe graanmateriaal in een vat gebracht dat uit keramisch materiaal zoals aardewerk of iets dergelijks vervaardigd is dat straalt met infrarode stralen uit het verroodgebied, die bij voorkeur een 15 golflengte hebben van 5 tot 14 pm, terwijl het verwarmen wordt uitgevoerd onder langzaam roeren waarbij de temperatuur op ongeveer 90 tot 96°C wordt gehouden.

De verwarmingstijd varieert afhankelijk van de soorten granen, zodat deze niet zonder meer gesteld kan worden, maar deze is bij voorkeur van ongeveer 30 min. tot 3 uur. Overigens is de verwarmingswerkwijze niet beperkt tot de bovengenoemde werkwijze, onder het voorbehoud dat de anti-oxidantia in het ruwe 20 graanmateriaal voldoende worden vrijgemaakt in de vorm van laag moleculaire verbindingen, terwijl de deactivering daarvan wordt voorkomen.

Na de bovenbeschreven warmtebehandeling wordt koji (Aspergillus orizae) aan het ruwe materiaal toegevoegd om het te fermenteren. Het fermenteren wordt bij voorkeur uitgevoerd bij 20 tot 36° gedurende ongeveer 2 tot 6 dagen. Als het fermenteren wordt uitgevoerd in een fermentator, is ongeveer 2 tot 3 uur 25 voldoende. Het fermenteren wordt uitgevoerd om het vrijmaken en omzetten in verbindingen met een laag molecuulgewicht van de anti-oxidantia in het ruwe graanmateriaal te bevorderen, en door deze fermentatie-stap kan de activiteit van de anti-oxiderende samenstelling aanzienlijk verhoogd worden in vergelijking met ruw materiaal dat alleen onderworpen is aan warmtebehandeling.

Vervolgens wordt het gefermenteerde materiaal gemalen om het om te zetten in een fijn poeder. Het 30 malen kan worden uitgevoerd met een commercieel verkrijgbare maalinrichting. Sommige typen maalinrichtingen genereren echter hoge temperaturen gedurende het gebruik, waardoor de anti-oxidantia worden gedeactiveerd. Het heeft derhalve de voorkeur om die maalinrichtingen te gebruiken waarbij geen hoge temperatuur wordt gegenereerd bij gebruik. Een steenmolen kan bijvoorbeeld worden gebruikt.

Vervolgens wordt de olie bereid door het mengen van een olie die verkregen is uit hete wasem (waarna 35 hierna verwezen zal worden als sesampastaolie) met een olie verkregen uit ruwe sesam, in een geschikte verhouding, en het bovengenoemde fijne poeder wordt aan het oliemengsel toegevoegd. De sesampastaolie is een olie die verkregen wordt door ruwe sesam te verhitten bij een temperatuur van niet boven 100°C, langzaam en gedurende voldoende tijd, en het te malen en uit te persen, maar de fijne vaste bestanddelen die gevormd worden door het malen van de sesam blijven zoals ze zijn, zodat het product er uitziet als een 40 pasta. Deze sesampastaolie bevat de laagmoleculaire anti-oxidantia in hoge concentratie, en door het te gebruiken is het mogelijk om de oliesamenstelling met een hoge activiteit van de anti-oxidantia te verkrijgen.

Deze sesampastaolie heeft echter een hoge viscositeit, en de grootte van een oliedruppel is ook groot, zodat de samenstelling waarin alleen de sesampastaolie gemengd wordt met het bovenbeschreven fijne poeder een slecht doordringend vermogen in de binnenkanten van cellen in een ziek gedeelte heeft. Als 45 sesamolie verkregen uit ruwe sesam aan de sesampastaolie wordt toegevoegd, kan de druppelgrootte klein zijn, en het doordringend vermogen in de binnenkanten van de cellen in een ziek gedeelte wordt verbeterd.

De olie die gewonnen wordt uit ruwe sesam is een olie die verkregen wordt door ruwe sesam te malen en uit te persen, en de vaste bestanddelen te verwijderen, en deze is commercieel verkrijgbaar als een gewone sesamolie. Omdat de mengverhouding van de sesampastaolie tot de gewone sesamolie ook 50 verschilt afhankelijk van de hoeveelheid toe te voegen fijn poeder kan deze niet voor alle gevallen worden gedefinieerd. De mengverhouding is bij voorkeur 1 tot 3 gew. delen van de gewone sesamolie per gew. deel sesampastaolie. De verhouding van het oliemengsel tot het fijne poeder dat daaraan wordt toegevoegd is zodanig dat de gemengde olie 60 tot 95 gew.% van het totaal van beide uitmaakt. Als het oliemengsel minder dan 60 gew.% uitmaakt, is het vermogen om door de celmembraan te passeren klein. Aan de 55 andere kant, als het oliemengsel meer dan 95 gew.% uitmaakt, is de concentratie anti-oxidantia als effectieve verbindingen laag, zodat het effect van het onderdrukken van de productie van reactieve zuurstof en een lipideperoxyde ook daalt.

3 193398

De oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding, die oraal wordt toegediend, kan bereid worden door het fijne poeder aan het oliemengsel toe te voegen door het geheel zodra het oliemengsel bereid is op te sluiten in een gelatinecapsule of iets dergelijks. Men kan het materiaalmengsel voor het insluiten echter bij voorkeur gedurende ongeveer 3 tot 30 dagen bij 20 tot 35°C, meer bij voorkeur bij 28 tot 30°C gedurende 5 ongeveer 1 week, laten rijpen.

Door het mengsel te laten rijpen wordt het vrijmaken en omzetten in laag moleculaire verbindingen van de anti-oxidantia verder bevorderd, omdat de koji achterblijft in het fijne poeder, en de anti-oxidantia hechten zich goed aan het oliemengsel, zodat de activiteit en het osmotisch vermogen naar de binnenzijde van de cellen van de reactieve verbindingen verder wordt verbeterd.

10 De oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding kan ook een ruw graanmateriaal omvatten, bestaande uit rijstkiemen of tarwekiemen en sojabonen, en eventueel ten minste één product gekozen uit rijstzemelen, parelgerst of tarwe, dat als zodanig vermalen wordt tot een fijn poeder zonder het te verhitten en te fermenteren, en samen met het hierboven beschreven fijne poeder dat verhit en gefermenteerd is aan het oliemengsel wordt toegevoegd.

15 In het fijne poeder van het ruwe graanmateriaal dat niet verhit en gefermenteerd is, zijn de anti-oxidantia als effectieve verbindingen niet vrijgemaakt en omgezet in verbindingen met een laag molecuulgewicht. Als het aan het oliemengsel wordt toegevoegd samen met fijn poeder dat verhit en gefermenteerd is, zet het vrijkomen en omzetten in verbindingen met een laag molecuulgewicht van de anti-oxidantia zich echter zelfs na inkapselen voort, als gevolg van het feit dat de koji in het gefermenteerde fijne poeder is achtergebleven, 20 zodat er het voordeel optreedt dat het effect van het onderdrukken van de productie van reactieve-zuurstof of lipideperoxyde gedurende een lange periode wordt behouden.

In tegenstelling daarmee worden in de oliesamenstelling waarin alleen verhit en gefermenteerd fijn poeder wordt gebruikt, als gevolg van enzymreacties en dergelijke, die voortdurend doorgaan, zelfs na inkapselen, de anti-oxiderende samenstellingen als effectieve bestanddelen geleidelijk ontleed, zodat de 25 effectieve periode kort is in vergelijking met de samenstelling waarin het niet behandelde fijne poeder wordt toegevoegd.

Als echter de hoeveelheid niet behandeld fijn poeder te groot is, daalt de activiteit van het effectieve bestanddeel. Daarom heeft het de voorkeur dat het niet behandelde fijne poeder ongeveer 0,5 tot 1 gew. deel uitmaakt per gew. deel van het verwarmde en gefermenteerde fijne poeder. Overigens is ook als twee 30 typen fijn poeder worden opgenomen, de hoeveelheid van het oliemengsel 60 tot 95 gew.% van de totale hoeveelheid van poeder en oliemengsel.

In de zo verkregen oliesamenstelling volgens de onderhavige uitvinding, zijn zowel de activiteit van de anti-oxidantia als het osmotisch vermogen om in de cellen te kunnen komen hoog, en, zoals ook blijkt uit de resultaten van de klinische testen die hierna zullen worden beschreven, vertoont het verrassende effecten 35 tegen verscheidene ontstekingen en chronische ziekten, waarbij conventionele ontstekingswerende middelen onvoldoende therapeutisch effect hebben kunnen verkrijgen.

De oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding kan opgenomen worden in gelatinecapsules of iets dergelijks, en oraal als geneesmiddel worden toegediend. Bovendien kan, in geval van abnormale pigmentatie zoals dermatitis, chloasma, sproeten en dergelijke of rimpels en dergelijke, de olie direct op een 40 aangedaan gedeelte worden aangebracht. Behalve bij dermatitis en dergelijke kan de oliesamenstelling gebruikt worden bij verouderingsverschijnselen en chronische ziekten zoals chronische arthroreuma, thromoplebitis, voortschrijdende systemische sclerema, de ziekte van Buerger, de ziekte van Raynaud, hardnekkige huidulcers en dergelijke. De samenstelling van de uitvinding kan ook worden gebruikt bij de behandeling en prementie van verscheidene andere door vervuiling veroorzaakte ziekten, brandwonden, 45 oppervlakkige wonden, vermoeidheid, nadelige gevolgen van overmatig alcoholgebruik, constipatie en dergelijke.

Bovendien gaat het gebruik van de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding niet gepaard met bijwerkingen, omdat alleen graan, koji en sesam als uitgangsmateriaal wordt gebruikt, zodat het mogelijk is om de samenstelling als gezondheidsvoedsel te gebruiken voor het onderhouden en vergroten van de 50 gezondheid. Het is niet nodig om te zeggen dat het bij het bereiden van een samenstelling eventueel mogelijk is om andere geneesmiddelen of bestanddelen die bruikbaar zijn bij de gezondheid, zoals verscheidene vitaminen, mineralen en dergelijke toe te voegen, evenals geurstoffen, smaakstoffen, kleurstoffen en dergelijke.

55 Voorbeeld

Van rijstkiemen, sojabonen, rijstzemelen, hatomugi {parelgerst) en tarwe werd van elk één deel in een vat gebracht dat vervaardigd was uit aardewerk en infraroodstralen uit het verrodegebied emitteerde met een 193398 4 golflengte van 4 tot 14 pm, en er werd gedurende 3 uur onder zachtjes roeren om geen verbranding te veroorzaken verhit bij 90 tot 96°C. Vervolgens werd koji toegevoegd in een hoeveelheid van 3% van de totale hoeveelheid, en er werd gedurende 72 uur bij 36 tot 40°C gefermenteerd, waarna het gefermenteerde materiaal verwerkt werd tot een fijn poeder met behulp van een steenmolen. Bovendien werden bovenge-5 noemde vijf soorten graanmaterialen in ruwe vorm, in niet verwarmde en gefermenteerde toestand met een steenmolen gemalen om eenzelfde hoeveelheid fijn poeder te verkrijgen. Verder werd sesam verhit op dezelfde wijze als de bovengenoemde materialen, en nadat het met een steenmolen gemalen was, uitgeperst om een sesampastaolie te verkrijgen.

Vervolgens werd 28,1 gew. delen sesampastaolie gemengd met 48,9 gew. delen van een commercieel 10 verkrijgbare sesamolie, aan welk mengsel 11,5 gew. delen van het verhitte en gefermenteerde fijne poeder en 11,5 gew. delen van het niet behandelde fijne poeder werden toegevoegd, en het resulterend mengsel werd homogeen geroerd. Men liet het mengsel gedurende één week bij 28°C rijpen, om een oliesamen-stelling te verkrijgen, die vervolgens in gelatinecapsules werd gebracht.

Effect van de uitvinding 15 [I] In vitro-test 1. Voor een in vitro-test van het vermogen om op olieachtige plekken aan te komen en daarin door te dringen, werd de oliesamenstelling van de uitvinding toegevoegd aan een TBA (thiobarbituurzuur) reactie-systeem, waarin een olieachtig onverzadigd vetzuur, decosahexacenzuur (C21H31COOM), reageerde met reactieve zuurstof die door ultraviolette straling was gegenereerd, waardoor lipideperoxyde ontstond, en de 20 mate van onderdrukken van de productie van lipideperoxyde werd bepaald.

Aan 0,1 ml decosahexaeenzuur dat 100 keer werd verdund met ethanol, werd 1,8 mg/ml van het testmonster van de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding toegevoegd, en de hoeveelheid geproduceerd lipideperoxyde werd bepaald met de TBA-reactie. Bij de TBA-reactie werd 0,2 ml 7% natriumdodecylsulfaat, 2 ml 0,1 N HCI, en 0,3 ml fosforwolfraamzuur (H3[P(W,010)4].14H20) gemengd, t.5 waarna 1,8 mg/ml van het testmonster werd toegevoegd aan het mengsel, waarna 1 ml van een reagens waarin 0,67% TBA gemengd was met azijnzuur in een verhouding van 1:1 werd toegevoegd, en de bepaling werd uitgevoerd met excitatie bij 515 nm en emissie bij 553 nm onder toepassing van een fluorescentie-spectrofotometer.

Als vergelijkende voorbeelden werden op dezelfde wijze bepalingen uitgevoerd met het plantaardig 30 nutriënt van het Japanse octrooi 1.366.268 (vergelijkend voorbeeld 1) en de anti-oxidant samenstelling beschreven in de Japanse niet onderzochte ter inzage gelegde octrooiaanvrage 63-79834 (vergelijkend voorbeeld 2). Resultaten zijn weergegeven in tabel 1.

TABEL 1 35 -;-

Testmonster Gemiddelde (waarde na 6 minuten)

Controle (UV+) 461 ± 62 40 Oliesamenstelling volgens de uitvinding (1,8 mg/ml) 121 ±13 ***

Vergelijkend voorbeeld 1 (1,8 mg/ml) 271 ± 34 **

Vergelijkend voorbeeld 2 (1,8 mg/ml) 358 ± 45 * 45 UV+: ultraviolette straling *: 0,01 < P < 0,05 (v.s. controle) **: P < 0,01 (v.s. controle) ***: P < 0,0001 (v.s. controle)

Testresultaten 50 Hoewel elk van de onderzochte monsters de generering van het lipideperoxyde (met TBA reagerende verbindingen) uit het onverzadigde vetzuur (decosahexaanzuur) door bestraling met ultraviolette straling (102) onderdrukte, onderdrukte de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding deze generering aanzienlijk (P < 0,0001). Dit resultaat bevestigt het feit dat de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding een hogere activiteit wat betreft de anti-oxidantia heeft, en een hoger penetrerend vermogen naar 55 de binnenzijde van de cel waarin een ziekte plaatsvindt, dan de conventionele samenstellingen (vergelijkende voorbeelden 1 en 2).

2. Er werd een [3,4-3H2] anti-oxidantsamenstelling bereid waarin de anti-oxidantia met-een laag molecuulge- 5 193398 wicht die aanwezig zijn in de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding gemerkt werden met het isotoop (3H), in een testbuis werd gebracht die humaan weefsel bevatte, en de hoeveelheid (cpm) van [3H2] die aan de celmembraan daarvan gebonden was werd bepaald met een scintillatieteller, waarmee het vermogen om de celmembraan te bereiken werd onderzocht (gemerkt getritieerd thymidine was 2 Ci/mM).

5 Dezelfde proeven werden ook uitgevoerd voor de vergelijkende voorbeelden 1 en 2. De resultaten zijn weergegeven in tabel 2. Zoals blijkt uit tabel 2 had de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding de hoogste affiniteit voor de celmembraan in vergelijking met vergelijkende voorbeelden 1 en 2.

TABEL 2 10 -

Testmonster cpm incorporation

Controle 15643 cpm/103 cellen

Oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding (1,8 mg/ml) 56372 cpm/103 cellen 15 Vergelijkend voorbeeld 1 (1,8 mg/ml) 33451 cpm/103 cellen

Vergelijkend voorbeeld 2 (1,8 mg/ml) 30567 cpm/103 cellen 3. De oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding werd onderworpen aan een ultrasone behandeling 20 en toegevoegd aan een reactieve zuurstof genererend systeem (neutrofiele en xantine-xantine oxydase) zodat de naar een levend lichaam omgerekende concentratie 1,6 mg/ml werd, en de drie typen reactieve zuurstof (02', H202 en OH*) werden bepaald in vergelijking met de situatie als er niets was toegevoegd (controle). De concentratie omgerekend naar een levend lichaam is een hoeveelheid waarvan aangenomen wordt dat deze in het bloed aanwezig is wanneer een gebruikelijke dagelijkse dosis (9 g in geval van de 25 oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding) in een levend lichaam wordt opgenomen.

De bepalingsmethode voor de drie typen reactieve zuurstof zijn als volgt.

Voor de bepaling van 02' werd de hoeveelheid reductie van ferri-cytochroom C door 02' bepaald bij een golflengte van 550 nm met een Beekman spectrofotometer, en omgerekend tot de hoeveelheid 02\

Voor de bepaling van H202 werd gebruik gemaakt van het feit dat H202 de fluorescentie die door 30 scopoletine in aanwezigheid van peroxydase gegenereerd wordt vermindert, door gebruik te maken van scopoletine en peroxydase, waarbij de afname van de fluorescentie en scopoletine bepaald werd met een fluorescentiespectrofotometer van Hitachi Ltd. met een excitatie bij 370 nm en een emissie bij 460 nm.

Voor de bepaling van OH* werd gebruik gemaakt van het feit dat a-keto-methiol-butaanzuur (KMB) reageert met OH- onder vorming van etheengas, waarbij de werkwijze inhield dat de hoeveelheid etheengas 35 gekwantificeerd werd met een gaschromatogram gemaakt door een gaschromatograaf van Hitachi Ltd. en de hoeveelheid etheen teruggerekend werd naar de hoeveelheid OH*. Dezelfde proeven werden ook uitgevoerd voor de vergelijkende voorbeelden 1 en 2. De resultaten zijn weergegeven in tabel 3.

TABEL 3 40 -

Reactieve Zuurstof

Testmonster 02' H202 OH*

Controle 1,532 nmol 485 pmol 854 pmol 45 Oliesamenstelling van de uitvinding (1,8 0,589 nmol 161 pmol 283 pmol mg/ml)

Vergelijkend voorbeeld 1 (1,8 mg/ml) 1,285 nmol 403 pmol 707 pmol

Vergelijkend voorbeeld 2 (1,8 mg/ml) 0,231 nmol 538 pmol 108 pmol 50

Testresultaten:

De anti-oxiderende werking van de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding was iets minder dan die van vergelijkend voorbeeld 2, maar hoger dan die van vergelijkend voorbeeld 1. Zoals echter blijkt uit tabellen 1 en 2 bevat vergelijkend voorbeeld 2 een geringere hoeveelheid olieachtige verbindingen, zodat 55 het een slecht vermogen heeft om de cel te bereiken waarin de ziekte plaatsvindt.

Derhalve is, over het geheel bekeken, de oliesamenstelling van de onderhavige uitvinding, waarvan het anti-oxiderende werking hoog is en het vermogen om te penetreren naar de binnenzijde van de cel van een

Claims

193398 6 ziek gedeelte het hoogst is, het meest geschikt als anti-oxiderend middel. [II] Klinische proef Het therapeutische effect werd bestudeerd bij 96 patiënten met autoimmuunziekten collageenziekten zoals chronische arthroreuma, hemastenose, nefrititis, hepatocirrose, chloasma, sproeten en dergelijke, die 5 tot nu toe niet gereageerd hebben of verergerd werden bij gebruik van niet steroïde antiphlogistische geneesmiddelen, steroïden en de anti-oxidant samenstelling van vergelijkend voorbeeld 2. De resultaten zijn weergegeven in tabel 4. TABEL 4 10 - Testmonster Ziekte Oliesamen- Vergelijkend Vergelijkend stelling van de voorbeeld 1 voorbeeld 2 15 uitvinding (1,8mg/ml) (1,8mg/ml) (1,8 mg/ml) Chronische arthroreuma 13/18(72%) 0/7(0%) 4/14(28%) Angiitis 3/5 (60%) 0/3 (0%) 1/4 (25%)

20 Voortschrijdende systemische sclerema 9/12(75%) 2/10(20%) 6/12(50%) Dermatomyosytis 6/8(75%) 2/12(16%) 6/13(46%) Thromboplebitis 2/3 (66%) 0/4 (0%) 1/5 (20%) Ziekte van Buerger 6/8 (75%) 0/3 (0%) 3/6 (50%) Ziekte van Raynaud 10/12(83%) 3/8(37%) 7/12(58%)

25 Crus varicosis 8/11(72%) 4/9(44%) 11/15(73%) Hardnekkige huidulcers 3/5 (60%) 1/5 (20%) 2/6 (33%) Chloasma, sproeten 11/14(78%) 4/12(33%) 17/25(68%) De percentages slaan op het percentage patiënten dat herstelt. 30 Oliesamenstelling verkregen door het bij een temperatuur niet hoger dan 100°C verhitten van een ruw 35 graan materiaal dat rijstkiemen en/of tarwekiemen en sojabonen omvat, het toevoegen van koji (Aspergillus Orizae) en het fermenteren van het verhit geweest zijnde materiaal, het verwerken van het gefermenteerde materiaal tot een poeder, en het toevoegen van het tot poeder verwerkte materiaal aan een oliemengsel omvattende een pasta-olie verkregen uit sesam verhit bij een temperatuur niet hoger dan 100°C, met het kenmerk, dat het oliemengsel verder een olie bevat die is verkregen uit ruwe sesam, en de verhouding van 40 het oliemengsel tot de totale hoeveelheid van het tot poeder verwerkte materiaal en het oliemengsel 60 tot 95 gew.% is.