DK169714B1

DK169714B1 - Olieholdig præparation og fremgangsmåde til fremstilling heraf

Info

Publication number: DK169714B1
Application number: DK073293A
Authority: DK
Inventors: Kozo Niwa; Emiyo Niwa
Original assignee: Emiyo Niwa
Priority date: 1992-06-22
Filing date: 1993-06-21
Publication date: 1995-01-23
Also published as: DK73293A; SE9302141D0; DK73293D0; IT1266950B1; NO932282L; NL9301083A; GB2268185A; ITTO930448A1; FR2692442B1; IS4038A; FR2692442A1; AU656681B2; JPH069421A; BE1006911A3; SE512781C2; IS1657B; CA2098893C; TW269630B; KR940000113A; ES2049189A1

Description

i DK 169714 B1

OLIEHOLDIG PRÆPARATION OG FREMGANGSMÅDE TIL FREMSTILLING HERAF

5

BAGGRUND FOR OPFINDELSEN

1. Opfindelsens område 10 Nærværende opfindelse vedrører en olieholdig præparation og en fremgangsmåde til fremstilling heraf, og specielt en olieholdig præparation indeholdende, som effektive komponenter, stoffer, der undertrykker dannelsen af reaktivt oxygen og lipidperoxid i det menneskelige legeme. I det 15 følgende vil disse stoffer blive refereret til som antioxidant stof fer.

2. Teknikkens stade 20 For nylig er opmærksomheden blevet henledt på antioxidant-stoffer, som udviser glimrende effekter, når de bliver anvendt til at forebygge og behandle forskellige inflammationer og vanskeligt helbredelige sygdomme såsom kronisk artroreumatisme, tromboflebitis, progressiv systemisk scle- 25 rodermi, Buerger's sygdom, Raynaud's sygdom, vanskeligt behandlelig dermatoulcus og lignende, forårsaget af destruktion af cellulær organisation på grund af reaktivt oxygen og lipidperoxid, dannet i det menneskelige legeme.

30 Det er blevet afklaret ifølge et studium udført af nærværende opfindere, at de ovenanførte antioxidantstoffer omfatter lavmolekylære stoffer såsom flavoner, polypheno-ler, tanniner, tocopheroler, vitamin B^ og lignende indeholdt i en plantevækst, og ved at indtage dem oralt som 35 medicin eller som helsekost bliver dannelsen af ovennævnte reaktive oxygen og lipidperoxid i legemet undertrykket (se DK 169714 B1 2

Journal of Japan Pharmacist Association, nr. 39, bind 12, supplement, "Bio-availability of SOD (Superoxide Dismutase) and crude drug", pp. 1097-1119, publiceret 1. december 1987).

5

Tidligere har præparationer indeholdende sådanne antioxi-dantstoffer, nemlig et plantefødemiddel ifølge japansk patent no. 1366268 og en antioxidantsammensætning beskrevet i Niwa’s japanske ikke-behandlede offentligt tilgængelige pa-10 tentansøgning nr. 63-79834 været kendt.

Plantefødemidlet ifølge nr. 1366268 kan opnås ved at blande pulver af grøn the med pulver af bagt upoleret ris og soya-bønnepulver; ved at tilsætte en lille mængde af kojisvamp 15 til blandingen; derefter nedsænke denne pulverblanding i en blanding af sesamolie og soyabønneolie i omkring 4 dage for at ekstrahere effektive komponenter; ved at fjerne bundfald ved centrifugering; og ved at indelukke den tilbageblevne olieholdige substans i en kapsel lavet af gelatine eller 20 lignende.

Antioxidantsammensætningen i no. 63-79834 er opnået ved mild opvarmning af plantefrø eller kim heraf uden at bevirke svidning; ved efterfølgende at brygge disse opvarmede 25 plantematerialer ved tilsætning af en mikroorganisme; og ved hertil at tilsætte en planteolie fra en plante, der også blev mildt opvarmet. Valgfrit bliver vitamin C, vitamin C derivater eller en plantevækst indeholdende disse tilsat til sammensætningen.

30

Som plantefrø bliver frø anvendt, der indeholder antioxidant s toffer såsom ovenomtalte flavoner, polyphenoler, tanniner, tocopheroler, vitamin B1 og lignende, inklusive ris, hvede, byg, soyabønne, adzukibønne, majs, hatomugi (byg-35 gryn), ærter. Som planteolie anvendes sesamolie, soyabønneolie, olie fra bomuldsfrø, majsolie, farvetidselolie, pri- DK 169714 B1 3 mula- olie, risklidolie, rapsolie, olivenolie og lignende.

Plantefødemidlet ifølge nr. 1366268 er imidlertid fattigt på indhold af antioxidantaktivitet, på grund af dets be-5 handlingsmetode af det rå plantemateriale.

Antioxidantsammensætningen ifølge Niwa nr. 63-79834 fjernede et sådant problem ved bemærkelsesværdigt at øge aktiviteten af antioxidantstoffer ved mild opvarmning af det rå 10 plantemateriale uden at bevirke svidning med lang infrarød bestråling, og modvirkede dermed inaktivering af antioxidantstoffer på grund af høj temperatur, ved at frisætte og omdanne det rå materiale til de lavmolekylære effektive komponenter, og ved at brygge det på denne måde varmebe-15 handlede materiale, for at bevirke yderligere frisætning og omdannelse til de lavmolekylære effektive stoffer.

Ifølge studiet udført af nærværende opfindere er det imidlertid blevet tydeliggjort siden da, at omend ovennævnte 20 antioxidantstoffer bemærkelsesværdigt undertrykker dannelsen af det reaktive oxygen og lipidperoxid i reagensglas, så er antioxidantaktiviteten ikke tilstrækkeligt udvist i det menneskelige legeme.

25 Det antages, at for at tillade antioxidantstoffer at trænge ind i celler, der lider af en sygdom såsom en inflammatorisk reaktion eller lignende på grund af reaktivt oxygen og lipidperoxidase, er det nødvendigt at passere gennem cellemembranen, der danner overfladen af cellerne. Den menneske-30 lige cellemembran er imidlertid rig på olie og fedtstofkomponenter, og derfor har den en sådan egenskab, at kun olieholdige stoffer tillades passage, således at ovennævnte an-tioxidantsammensætning, der har et lavt indhold af olieholdige stoffer, har en ringe evne til at passere gennem cel-35 lemembranen og trænge ind i cellens indre.

DK 169714 Bl 4 Nærværende opfindere har derfor gentaget studier for at forbedre antioxidantsammenætningens evne til at penetrere cellemembranen, og samtidigt foretaget yderligere forbedringer i valget af plantearter som råmateriale og i be-5 handlingsmetoden for dette. Som følge heraf er en olieholdig præparation blevet opnået, i hvilken aktiviteten af antioxidant stof ferne som effektive komponenter er høj, og penetrationsevnen ind i det indre af den celle, der lider af en sygdom, er høj, og hermed er nærværende opfindelse fuld-10 endt.

REDEGØRELSE FOR OPFINDELSEN

Det er et mål for nærværende opfindelse at tilvejebringe en 15 olieholdig præparation og en fremgangsmåde til fremstilling heraf, i hvilken aktiviteten af antioxidantstoffer som effektive komponenter er høj, og hvor penetrationsevnen ind i det indre af cellen i en sygdomslokalisation er høj.

20 Fremgangsmåden til fremstilling af den olieholdige præpara tion ifølge nærværende opfindelse omfatter: at opvarme riskim og/eller hvedekim og soyabønne ved en temperatur, der ikke overstiger 100° C; tilsætte koji til det opvarmede materiale; brygge blandingen; derefter pulverisere blandin-25 gen; og tilsætte den opnåede puveriserede blanding til en olieblanding, omfattende en olie opnået fra sesam, der var opvarmet ved en temperatur, der ikke overstiger 100°C, og en olie opnået fra rå sesam, hvori forholdet af olieblandingen til en total mængde af den pulveriserede blanding og 30 olieblandingen er 60 til 95% på vægtbasis.

Eftersom råmaterialet righoldigt indeholder antioxidant-stofferne, kan i tilgift til omtalte riskim, hvedekim og soyabønne anvendes plantearter beskrevet i Japanese Un-35 examined Patent Application Laid-open no. 63-79834, det vil sige byg, adzukibønne, majs, hatomugi (byggryn), ærter og DK 169714 B1 5 lignende. Ifølge studiet udført af nærværende opfindere er riskim, hvedekim og soyabønne imidlertid de mest foretrukne råmaterialer.

5 Sideløbende med riskim, hvedekim og soyabønne kan opføres risklid, hatomugi (byggryn), og hvede. Som et råmateriale kan derfor inkluderes mindst et af risklid, hatomugi (byggryn) og hvede sammen med riskim og/eller hvedekim. I alle tilfælde er forholdet mellem kimen (riskim og/eller hvede-10 kim) i kornråmaterialet fortrinsvis mindst mere end eller lig med 1% på vægtbasis.

Antioxidantstofferne i ovenanførte kornråmateriale danner en kompliceret makromolekylær polymer sammen med andre 15 stoffer, og har derfor ingen aktivitet som det er, og det er således nøvendigt at bryde makromolekylebindingerne ved hjælp af mild opvarmning eller lignende og således frisætte lavmolekylære antioxidantstoffer. Hvis opvarmningstemperaturen imidlertid er for høj, bliver de lavmolekylære anti-20 oxidantstoffer inaktiveret, og det er derfor nødvendigt at udvælge en opvarmningsbetingelse, der tager dette faktum i betragtning.

For at tilfredsstille en sådan betingelse er det nødvendigt 25 langsomt at opvarme kornråmaterialet ved en temperatur, der ikke overstiger 100°C, og at opvarme i et tilstrækkeligt tidsrum. Mere detaljeret anbringes kornråmaterialet i et kar lavet af keramisk materiale såsom lertøj eller lignende, bestråles med lange infrarøde stråler, fortrinsvis med 30 bølgelænger af 4 til 14 pm, og opvarming foretages, medens der langsomt omrøres, og temperaturen holdes på omkring 90 til 96°C.

Opvarmningstiden varierer afhængigt af typen af kornsort,

35 således at den ikke kan defineres vilkårligt. Den er imidlertid fortrinsvis omkring 30 minutter til 3 timer. I

DK 169714 B1 6 øvrigt er opvarmningsmetoden ikke begrænset til ovenanførte metode, forudsat at antioxidantstofferne i kområmaterialet bliver tilstrækkeligt frisat som lavmolekylære stoffer, medens inaktivering heraf bliver undgået.

5

Efter varmebehandling som beskrevet i det foregående, tilsættes koji (aspergillus orizae) til råmaterialet for at brygge det. Brygningsbetingelserne er fortrinsvis ved 20 til 36°C i omkring 2 til 6 dage. Når brygningen udføres med 10 anvendelse af en gæringstank, er 2 til 3 timer tilstrækkeligt. Denne brygning bliver foretaget for yderligere at fremme frisætteisen og omdannelsen til lavmolekylære stoffer fra antioxidantstofferne i kornråmaterialet, og igennem dette brygningstrin bliver aktiviteten af antioxi-15 dantstofferne bemærkelsesværdigt forøget sammenlignet med råmaterialer, der kun er udsat for varmebehandling.

Dernæst bliver det bryggede materiale malet til et fint pulver. Formaling kan udføres ved anvendelse af en kommer-20 cielt tilgængelig mølle. Nogle mølletyper genererer imidlertid en høj temperatur under anvendelsen og inaktiverer derfor antioxidantstofferne. Det er derfor fordelagtigt at anvende dem, der ikke generere en høj temperatur under anvendelse. En stenmølle kan for eksempel anvendes.

25

Dernæst bliver olien tilberedt ved i et passende forhold at blande en olie indvundet fra opvarmet sesam (i det følgende refereret til som sesampastaolien) med en olie indvundet fra rå sesam, og ovennævnte fine pulver tilsættes til olie-30 blandingen. Sesampastaolien er en olie, der fremkommer ved at male og presse rå sesam, efter at det er opvarmet langsomt i et tilstrækkeligt tidsrum ved en temperatur, der ikke overstiger 100°C. Det fine faste indhold dannet ved formalningen af sesam forbliver imidlertid som det er, 35 således at udseendet får en pastatilstand. Denne sesam-pastaolie indeholder i rigt mål de lavmolekylære antioxi- DK 169714 B1 7 dantstoffer, og ved at anvende den er det muligt at opnå den olieholdige præparation, der har en høj aktivitet af antioxidantforbindelsen.

5 Denne sesampastaolie har imidlertid en høj viscositet, og størrelsen af en oliemikrodråbe er også stor, således at den præparation, i hvilken kun sesampastaolien bliver tilsat til ovennævnte fine pulver, har en ringe penetrerende evne ind i det indre af celler i et sygdomsområde. Når se- 10 samolie indvundet fra rå sesam imidlertid tilsættes til sesampastaolien, kan størrelsen af mikrodråben være lille, og den penetrerende evne ind i det indre af celler i et sygdomsområde er forbedret.

15 Den olie, der opsamles fra rå sesam, er en olie, der er indvundet ved at male det rå sesam, som det er, og presse det og fjerne fast indhold, og den er kommercielt tilgænglig som en almindelig sesamolie. Eftersom blandingsforholdet mellem sesampastaolien og den almindelige sesamolie er 20 forskellig og også afhængende af mængden af det fine pulver, der skal tilsættes, kan forholdet ikke ukritisk defineres. Det er fortrinsvis 1 til 3 vægtdele af den alminde-lie sesamolie i forhold til 1 vægtdel af sesampastaolien.

25 Forholdet mellem olieblandingen og det fine pulver, der tilsættes hertil, er et sådant, at den blandede olie bliver 60 til 95 % på vægtbasis i forhold til en total mængde af begge. Hvis olieblandingen er mindre end 60% på vægtbasis, bliver evnen til at passere gennem cellemembranen ringe. På 30 den anden side, hvis oliblandingen overstiger 95% på vægtbasis, bliver koncentrationen af antioxidantstoffer som de effektive komponenter lille, således at effekten med hensyn til undertrykkelse af det reaktive oxygen og lipidperoxid også formindskes.

Den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse, 35 DK 169714 B1 8 som indtages oralt, kan fremstilles ved at tilsætte det fine pulver til olieblandingen og indeslutte det i en gelatinekapsel eller lignende, så snart olieblandingen er tilberedt. Materialeblandingen kan imidlertid modnes fortrins-5 vis ved 20 til 35°C i omkring 3 til 30 dage, eller mere fordelagtigt ved 28 til 30°C i omkring 1 uge før indkapsling.

Ved at anvende modningsbehandlingen bliver frisætteisen og 10 omdannelsen af antioxidantstoffer til lavmolekylære stof fer yderligere fremmet på grund af det koji, som resterer i det fine pulver, og antioxidantstofferne optages godt i olieblandingen, således at aktiviteten og den osmotiske evne af de reaktive stoffer ind i det indre af cellen yder-15 ligere er forbedrede.

Den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse kan også inkludere et råmateriale af korn omfattende riskim eller hvedekim og soyabønne og valgfrit mindst en af risk-20 lid, hatomugi (byggryn) eller hvede, som laves til et fint pulver som det er, uden opvarmning og brygning, og tilsættes til olieblandingen sammen med det ovenanførte opvarmede og bryggede fine pulver.

25 I det fine pulver af kornråmaterialet, som ikke er opvarmet og brygget, er antioxidantstofferne som den effektive komponent ikke frisat og omdannet til lavmolekylære stoffer. Når det imidlertid tilsættes til olieblandingen sammen med det opvarmede og bryggede fine pulver, foregår frisætningen 30 og omdannelsen af antioxidantstoffer til lavmolekylære stoffer gradvis selv efter indkapsling, på grund af det koji som forbliver i det bryggede fine pulver, således at der er en sådan fordel, at effekten med hensyn til undertrykkelse af dannelsen af det reaktive oxygen og lipid-35 peroxid bliver vedligeholdt i en lang periode.

DK 169714 B1 9 På den anden side, i den oliepræparation, i hvilken kun det opvarmede og bryggede fine pulver bliver anvendt, på grund af enzymreaktioner og lignende, som kontinuerligt fortsætter selv efter indkapsling, bliver antioxidantstofferne som 5 de effektive komponenter, gradvis nedbrudt, således at den effektive periode er kort sammenlignet med en præparation, i hvilken det ubehandlede fine pulver tilsættes.

I det tilfælde, hvor den tilsatte mængde af ubehandlet fint 10 pulver imidlertid er for stor, falder aktiviteten af den effektive komponent. Derfor er det fordelagtigt, at det u-behandlede fine pulver er omkring 0.5 til 1 vægtdel baseret på 1 vægtdel af det opvarmede og bryggede fine pulver. I øvrigt er olieblandingen også i dette tilfælde, hvor 2 15 typer af fint pulver inkluderes, 60 til 95% på vægtbasis i forhold til den totale mængde.

I den på denne måde frembragte olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse er både aktiviteten af anti-20 oxidantstofferne og den osmotiske kraft ind i det indre af cellen høj, og som også klarlagt fra resultater af kliniske undersøgelser som beskrevet i det følgende, udviser den bemærkelsesværdige effekter mod forskellige inflammationer og vanskeligt helbredelige sygdomme, for hvilke den terapeu-25 tiske effekt har været utilstrækkelig med konventionelle antiinflammatoriske midler.

Den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse kan indkapsles med gelatine eller lignende og indtages 30 oralt som medicin. I tilgift hertil, i tilfælde af abnormal pigmentation såsom dermatitis, chloroasma, fregner og lignende, eller rynker og lignende, kan den olieholdige præparation direkte påføres på et angrebet område. Foruden til dermatitis og lignende kan nærværende olieholdige præpara-35 tion også anvendes til fremskredne sygdomme og svært helbredelige sygdomme såsom kronisk artroreumatisme, trombo- DK 169714 B1 10 flebitis, progressiv systemisk sclerodermi, Buerger's sygdom, Raynaud's sygdom, vanskeligt behandelig dermatoulcus og lignende. Præparationen ifølge opfindelsen har også effekter på behandling og forebyggelse af andre forskellige 5 forureningsbetingede sygdomme, forbrændinger, ydre sår, træthed, tømmermænd, forstoppelse og lignende.

I tilgift har den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse ingen sideeffekter på grund af anvendelsen af 10 kun korn, koji og sesam som råmaterialer, således at den er mulig at indtage oralt som en helsekost for at vedligeholde og forbedre helbredet. Det er unødvendigt at bemærke, at når en præparation fremstilles, er det valgfrit at tilføje ekstra medicin eller ingredienser, der er brugbare for hel-15 bredet, såsom forskellige vitaminer, mineraler og lignende, og aromastoffer, smagsstoffer, farvestoffer og lignende.

Eksempel på fremstilling 20 Hver del af riskim, soyabønne, risklid, hatomugi (byggryn) og hvede blev overført til et kar lavet af keramisk materiale bestrålet med lange infrarøde stråler med en bølgelængde af 4 til 14 pm, og opvarmet til 90 til 96eC i 3 timer under langsom omrøring for ikke at bevirke svidning.

25 Dernæst blev koji tilsat som 3% af en total mængde for at brygge ved 36 til 40°C i 72 timer, og så blev det bryggede materiale malet til et fint pulver med anvendelse af en stenmølle. Yderligere blev ovennævnte fem kornråmaterialer, som ikke blev opvarmet og brygget, malet med en stenmølle 30 for at få et fint pulver i samme mængde. På den anden side blev sesam opvarmet på samme måde som ovenanførte kornmaterialer, og efter at det var malet med en stenmølle, blev det presset for at få en sesampastaolie.

35 Dernæst blev 28.1 dele på vægtbasis af sesampastaolien blandet med 48.9 dele på vægtbasis af en kommercielt til- DK 169714 B1 11 gængelig sesamolie; til denne blanding blev tilsat 11.5 dele på vægtbasis af det ubehandlede fine pulver; og den opnåede blanding blev omrørt homogent. Den opnåede blanding blev modnet ved 28°C i 1 uge og derefter indkapslet i ge-5 latine for at få en olieholdig præparation.

Effekt af opfindelsen [I] In vitro afprøvning 10 (1) Som en in vitro afprøvning af evnen til at trænge ind til og penetrere olieholdige steder blev den olieholdige præparation ifølge fremstillingseksemplet tilsat til et TBA (thiobarbitursyre) reaktionssystem, i hvilket en olieagtig umættet fedtsyre (decosahexaensyre) blev reageret med 15 reaktivt oxygen, frembragt ved ultraviolette stråler, og dannede lipidperoxid, og graden af undertrykkelse af dannelse af lipidperoxid blev målt.

Til 0.1 cc af decosahexaensyre fortyndet 100 gange blev 20 tilsat 1.8 mg/ml af prøven af den olieholdige præparation ifølge opfindelsen, og det dannede lipidperoxid blev målt med TBA reaktionen. I TBA reaktionen blev blandet 0.2 ml af 7% natriumdodecylsulfat, 2 ml af 0.1 N HC1, og 0.3 ml af phosphorwolframsyre; 1.8 mg/ml af prøven blev tilsat til 25 blandingen; 1 ml af et reagens blev tilsat i hvilket 0.67% TBA var blandet med eddikesyre i forholdet 1:1; og målingen blev udført med anslag ved 515 nm og emission ved 553 nm ved anvendelse af et fluorescensspektrofotometer.

30 Som sammenlignende eksempler blev anvendt plantenæringsmid-let ifølge japansk patent no. 1366268 (sammenlignende eksempel 1) og antioxidantsammensætningen beskrevet i j apansk ikke-behandlet offentligt tilgængelig patentansøgning nr. 63-79834 (sammenlignende eksempel 2), og målinger blev ud-35 ført på samme måde. Resultater er vist i tabel 1.

12 DK 169714 B1

Tabel 1 5 Prøve Gennemsnit (6 minutters værdi)

Kontrol 461 ± 62 10 (UV+) ·£· jfe tfe

Olieholdig præparation ifølge 121 ± 13 nærværende opfindelse (1.8 mg/ml)

icH

15 Sammenlignende eksempel 1 271 ± 34 (1.8 mg/ml) *

Sammenlignende eksempel 2 358 ± 45 (1.8 mg/ml) 20 UV+: ultraviolet bestråling «il· : 0.01 < P < 0.05 (i forhold til kontrol) : P < 0.01 (i forhold til kontrol) 25 : P < 0.0001 (i forhold til kontrol)

Afprøvningsresultater 30

Selvom enhver af prøverne signifikant undertrykkede dannelsen af lipidperoxid (TBA reaktive stoffer) fra den umættede fedtsyre (decosahexaensyre) med bestråling af ultraviolette stråler (^2), undertrykte specielt den olieholdige præ-35 paration ifølge nærværende opfindelse bemærkelsesværdigt denne dannelse (P < 0.0001). Dette resultat understøtter DK 169714 B1 13 det faktum, at den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse har en højere aktivitet af antioxidantstof-fet, og en større penetrationsevne ind i det indre af cellen, i hvilken en sygdom forekommer, sammenlignet med kon-5 ventionelle præparationer (Sammenlignende eksempel 1 og 2).

(2) Et [3,4- H^j-antioxidantstof blev fremstillet, i hvilket det lavmolekylære antioxidantstof indeholdt i den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse blev 3 10 mærket med en isotop ( H); det blev indført i et humant væv 3 i et reagensglas; og tælletallene (cpm) af [ H] bundet til dets cellemembran blev målt med en scintillationstæller; derved blev evnen til at trænge ind til cellemembranen afprøvet (mærket tritieret thymidin var 2 C^/mM).

15

De samme undersøgelser blev også udført for Sammenlignende eksempel 1 og 2. Resultater er vist i tabel 2. Som vist i tabel 2, havde den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse den højeste affinitet til cellemembraner i 20 forhold til Sammenlignende eksempel 1 og 2.

Tabel 2 5 14 DK 169714 B1

Prøve cpm indbygget

Kontrol 15643 cpm / 10^ celler 3 10 Olieholdig præparation ifølge 56372 cpm / 10 celler nærværende opfindelse (1.8 mg/ml) 3

Sammenlignende eksempel 1 33451 cpm / 10 celler (1.8 mg/ml) 15 3

Sammenlignende eksempel 2 30567 cpm / 10 celler (1.8 mg/ml) 20 (3) Den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse blev udsat for ultralydsbehandling og tilsat til et system, der dannede reaktivt oxygen (neutrophiler og xan-thin-xanthinoxidase), således at en omdannet koncentration 25 i det levende væv blev 1.6 mg/ml; og tre typer af reaktivt oxygen f ^2^2 ) blev målt for at sammenligne med tilfældet uden tilsætning (kontrol). Den omdannede koncentration i levende væv er en mængde, der antages at forefindes i blod, når en almindelig indtagelsesmængde pr. dag (9 30 gi tilfældet af den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse) bliver absorberet ind i et levende legeme.

Målemetoderne for de tre typer af reaktivt oxygen er som 35 følger.

DK 169714 B1 15

For 02~ blev metoden anvendt, i hvilken mængden af reduktion af ferricytochrom C på grund af O2 blev målt ved en bølgelængde af 550 nm med et spektrofotometer fra Beckman, og konverteret til mængden af O2-.

5

For Η2θ2,. afhængigt af det faktum at H202 nedsætter fluorescensen dannet af scopoletin ved tilstedeværelse af peroxidase, ved at anvende scopoletin og peroxidase blev graden af formindskelse af fluorescens målt ved anvendelse af 10 et fluorescensspektrofotometer fra Hitachi Ltd. med anslag ved 370 nm og emission ved 460 nm.

For OH* under anvendelse af princippet at alfa-ketomethiol-butansyre (KMB) reagerer med OH* under dannelse af ethylen-15 gas, blev metoden anvendt, i hvilken ethylengas blev kvan-titeret med en gaschromatograf fra Hitachi Ltd., for på denne måde at konvertere det dannede ethylengas til OH*. De samme undersøgelser blev også udført for Sammenlignende eksempel 1 og 2. Resultater er vist i tabel 3.

20

Tabel 3 16 DK 169714 B1

Reaktivt oxygen 5

Prøve 02" H202 OH'

Kontrol 1.532 nmol 485 pmol 854 pmol 10 Olieholdig præparation 0.589 nmol 161 pmol 283 pmol ifølge nærværende opfindelse (1.8 mg/ml)

Sammenlignende eksempel 1 1.285 nmol 403 pmol 707 pmol 15 (1.8 mg/ml)

Sammenlignende eksempel 2 0.231 nmol 538 pmol 108 pmol (1.8 mg/ml) 20

Antioxidanteffekten af den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse var lidt mindre end den i Sammenlig-25 nende eksempel 2, imidlertid var den viste antioxidantef-fekt større end i Sammenlignende eksempel 1. Imidlertid, som vist i ovennævnte tabeller 1 og 2, har Sammenlignende eksempel 2 et lavere indhold af olieagtige stoffer, således at det har ringe evne til at trænge ind til cellen, i hvil-30 ken en sygdom forekommer.

Derfor, når det vurderes som en helhed, er den olieholdige præparation ifølge nærværende opfindelse, i hvilken anti-oxidanteffekten er høj, og penetrationsevnen ind i det 35 indre af cellen i et sygdomsområde er højest, mest fremragende som et antioxidantmiddel.

DK 169714 B1 17 II Kliniske undersøgelser

Den terapeutiske effekt blev undersøgt på 96 patienter med 5 autoimmunsygdomme, kollagensygdomme såsom kronisk arthro- reumatisme, hæmastenose, nephritis, hapatocirrhose, chloasma, fregner og lignende, som hidtil har været resistent overfor eller er blevet forværret efter behandling med et hvilket som helst af ikke-steroide antiflogistiske lægemid-10 ler, steroider og antioxidantsammensætningen i Sammenlignende eksempel 2. Resultaterne er vist i tabel 4.

18 DK 169714 Bl

Tabel 4 Prøve 5 Olieholdig Sammenlignende Sammenlignende præparation eksempel 1 eksempel 2 ifølge nær- (1.8 mg/ml) (1.8 mg/ml) værende opfindelse 10 (1.8 mg/ml)

Sygdom

Kronisk 13/18 (72%) 0/7 (0%) 4/14 (28%) arthroreu-15 matisme

Angitis 3/5 (60%) 0/3 (0%) 1/4 (25%)

Progressiv 9/12 (75%) 2/10 (20%) 6/12 (50%) 20 systemisk sklero-dermi

Dermato- 6/8 (75%) 2/12 (16%) 6/13 (46%) 25 myocitis

Trombo- 2/3 (66%) 0/4 (0%) 1/5 (20%) flebitis 30 Buerger's 6/8 (75%) 0/3 (0%) 3/6 (50%) sygdom

Raynaud's 10/12 (83%) 3/8 (37%) 7/12 (58%) sygdom 35 varices 8/11 (72%) 4/9 (44%) 11/15 (73%) cruris

Vanskeligt 3/5 (60%) 1/5 (20%) 2/6 (33%) 40 helbredelig dermatoulcus

Chloasma 11/14 (78%) 4/12 (33%) 17/25 (68%) fregner 45 50

Claims

1. Olieholdig præparation, kendetegnet ved, at være opnået ved at opvarme riskim og/eller hvedekim og soy abønne ved en temperatur ikke overstigende 100®C, ved at lave det opvarmede materiale til et fint pulver, ved at tilsætte koji til det pulveriserede materiale og brygge det 10 pulveriserede materiale, og ved at tilsætte det på denne måde bryggede materiale til en olieblanding indeholdende en pastaolie indvundet fra sesam opvarmet ved en temperatur ikke overstigende 100°C, og en olie indvundet fra rå sesam, hvori et forhold af omtalte olieblanding til en total mæng-15 de af det fine pulver og olieblandingen er 60 til 95% på vægtbasis.

2. Olieholdig præparation ifølge krav 1, kende tegnet ved, at den yderligere omfatter et kornrå- 20 materiale indeholdende riskim og/eller hvedekim og soya-bønne lavet til et fint pulver uden opvarmning og brygning.

3. Olieholdig præparation ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at nævnte opvarmede eller 25 ikke-opvarmede kornråmateriale omfatter, foruden riskim og/eller hvedekim og soyabønne, mindst en af risklid, hato-mugi (byggryn) eller hvede.

4. Olieholdig præparation ifølge krav 1 eller 2, 30 kendetegnet ved, at den er indkapslet for oral indtagelse som en medicin eller helsekost.

5. Fremgangsmåde til at fremstille en olieholdig præparation ifølge krav 1, 2 eller 3, kendetegnet 35 ved, at det opvarmede kornråmateriale er opvarmet med lange infrarøde stråler, der har en bølgelængde af 4 til 14 DK 169714 B1 μπι.

6. Fremgangsmåde til at fremstille en olieholdig præparation ifølge krav 1, 2 eller 3, kendetegnet 5 ved, at kornråmaterialet er brygget ved 20 til 36°C i 2 til 6 dage efter behandling med varme.

7. Fremgangsmåde til at fremstille en olieholdig præparation ifølge krav 1, 2 eller 3, kendetegnet 10 ved, at det fine pulver er tilsat til olieblandingen, således at den modnes ved 20 til 35°C i 3 til 30 dage.