JP2000072686A - 活性酸素消去剤およびこれを含有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 活性酸素消去能および抗酸化能が非常に高
く、且つ人体に対する副作用が少なく、安全性の高い活
性酸素消去剤を提供すること、ならびにこれを含有する
組成物（食品、飼料または化粧品）を提供すること。 【解決手段】 クルミ科ペカン属に属する植物の種子ま
たは種子殻抽出物を含有する活性酸素消去剤ならびに該
活性酸素消去剤を含有する食品、飼料または化粧品。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、活性酸素消去剤お
よびこれを含有する組成物に関し、詳しくはクルミ科ペ
カン属に属する植物の種子または種子殻の抽出物を含有
する活性酸素消去剤並びにこの活性酸素消去剤を含有す
る組成物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】酸素は生体にとって代謝によるエネルギ
ーの産生等生命の維持には必須な物質であるが、生体内
外での諸反応系、すなわち一部の免疫反応や紫外線・放
射線照射等により反応性に富んだ活性酸素種（スーパー
オキサイドアニオン：O₂ ^- 、過酸化水素：H₂O₂、ヒドロ
キシルラジカル：OH・、一重項酸素：¹O₂ 等）を産生す
る。これらの活性酸素種は、例えばある免疫反応におい
ては侵入した細菌等の異物を不活性化することには役に
立つ一方で、生体成分と反応して脂質の過酸化、蛋白質
や核酸の変性を引き起こし、種々の疾病や老化の促進の
原因となることが知られている。特に皮膚は、身体の最
外層にあるために、紫外線や放射線等の外部要因により
発生する活性酸素種の影響を受け易く、これらが皮膚で
過剰に産生すると、ラジカル反応による過酸化脂質の生
成やシミ、ソバカス等の皮膚の異常な色素の産生が増強
されることが知られている。

【０００３】生体内で種々の原因により生じたO₂ ^- は、
スーパーオキサイドディスムターゼ（以下ＳＯＤと略記
する）によりH₂O₂に変換され、さらにH₂O₂はカタラーゼ
やグルタチオンペルオキシダーゼの作用によって水と酸
素とに分解される。これらの酵素に加えて生体内にはビ
タミンＣやビタミンＥ等の食品由来の抗酸化物質が存在
し、これらが生体内のラジカル反応や酸化反応を抑制す
るネットワークを形成して活性酸素による諸障害の防御
にあたると考えられている。しかし、周囲ならびに生体
内の環境の変化、例えば細菌やウイルス等による感染、
食物の摂取状態や栄養状態の変化、紫外線の過剰な照
射、周囲から受ける種々のストレスおよび加齢・老化等
により上記のネットワークのバランスが崩れると、生体
内で産生される活性酸素の代謝バランスが崩れ、結果と
して過酸化脂質量の増加、皮膚炎、シミ、シワ、湿疹、
ソバカス等の美容上の障害となる諸症状が現れ、さらに
は関節リウマチ、動脈硬化、糖尿病、肝炎、腎炎や癌等
の疾病が引き起こされることが知られている。

【０００４】また、我々が摂取する食品や食品添加物に
ついても、紫外線や放射線の作用により発生する活性酸
素による酸化や通常の酸化によって、それらに含まれて
いる脂質その他の成分の過酸化や変性が起こり、それら
酸化、変性物の摂取は健康上好ましくないことは周知の
ことである。さらに、化粧品、皮膚外用剤に配合される
ことがある不飽和脂質を含む天然油脂や界面活性剤の中
には、紫外線等の作用によって酸化を受け易いものがあ
ることが知られており、結果として変色や異臭の発生等
の好ましくない現象が起こることが多い。このような酸
化を受け易い化粧品基剤の使用によって、前述の諸原因
によって皮膚に生ずる脂質過酸化物の量が増大し、上記
の美容上の障害となる諸症状が増幅されることは容易に
推測されることである。

【０００５】これら酸化を受け易い天然油脂としては、
アーモンド油、オリーブ油、ホホバ油やスクワレン等の
不飽和系の油脂、また酸化を受け易い界面活性剤として
は、モノオレイン酸グリセリンやトリオレイン酸ポリオ
キシエチレンソルビタン等の不飽和系の界面活性剤が挙
げられる。従来、化粧品、食品、食品添加物および飼料
に添加されている抗酸化剤としては、ジブチルヒドロキ
シトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール
（ＢＨＡ）、エトキシキン等の合成抗酸化剤の他、アス
コルビン酸やビタミンＥ等の天然抗酸化剤がある。上記
の合成抗酸化剤は、抗酸化効果は優れているが、発癌性
等の安全性に問題があるものがあり、その使用について
は制限されているものもある。一方、上記の天然由来の
抗酸化剤は、安全性については評価されるものの、抗酸
化効果は合成抗酸化剤よりもかなり劣るという欠点があ
る。

【０００６】近年、上記諸事象の改善・予防のために、
活性酸素消去効果や抗酸化効果を有する物質もしくは組
成物の香粧品科学的、食品科学的また薬学的見地からの
探索が活発に行われ、その結果、かなりの数の活性酸素
消去剤や抗酸化剤が知られるようになった。例えば、特
公平４−３４９６９号公報では、オウゴンに含まれるフ
ラボノイド成分であるバイカレインを含有する活性酸素
消去剤が、特開平３−２２７９３８号公報では、クロー
ブ油またはその成分であるデハイドロジオイゲノールか
ら成る活性酸素消去剤が、特開平５−２７１０６３号公
報では、アスパラサス・リネアリス抽出物を有効成分と
する活性酸素消去・除去剤が、また特開平７−６９９１
２号公報では、胡桃殻抽出物を有効成分とする活性酸素
消去剤等が提案されている。

【０００７】さらに、活性酸素消去効果を有する成分を
配合した化粧料や食品も提案されており、特開平５−３
２５５６号公報では、活性酸素除去作用を有するイチョ
ウ抽出物にさらにＳＯＤを添加した皮膚外用剤が、特開
平５−３１６９６３号公報では、ウラジロガシおよび／
またはシラカシの抽出成分を有効成分とする化粧料およ
び食品が、特開平６−６５０４３号公報では、活性酸素
除去作用を有するマイカイカ、モッカおよびイクリニン
から選ばれる植物の抽出物の１種または２種以上ならび
にＳＯＤを含有することを特徴とする皮膚外用剤が、特
開平６−１８３９８７号公報では、高い活性酸素除去作
用および過酸化脂質生成抑制効果を有するペラルゴニウ
ム属植物抽出物を有効成分とする過酸化脂質生成抑制剤
およびこれを有効成分とする組成物（化粧品、食品、医
薬品）が、また特開平７−２１３２５１号公報では、カ
カオ豆から抽出した抗酸化物質を添加した健康飲食品等
が提案されている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、活性
酸素消去能および抗酸化能が非常に高く、且つ人体に対
する副作用が少なく、安全性の高い活性酸素消去剤を提
供すること、ならびにこれを含有する組成物（食品、飼
料または化粧品）を提供することである。本発明者ら
は、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、食用と
して用いられているクルミ科ペカン属の植物の種子また
は種子殻を水、熱水、メタノール、エタノール、プロパ
ノール、アセトン等の有機溶媒およびこれらの混合溶媒
で抽出して得られる抽出物に非常に強い活性酸素消去能
および抗酸化能があること、また該抽出物は安全性が高
いことを見出して本発明を完成した。

【０００９】

【課題を解決するための手段】すなわち、請求項１記載
の本発明は、クルミ科（Juglandaceae) ペカン属（Cary
a)に属する植物の種子または種子殻抽出物を含有する活
性酸素消去剤である。請求項２記載の本発明は、請求項
１記載の抽出物が、水、メタノール、エタノール、ｎ−
プロパノール、iso −プロパノールおよびアセトンの中
から選ばれる１種または２種以上の混合溶媒で抽出され
たものである請求項１記載の活性酸素消去剤である。請
求項３記載の本発明は、請求項１記載の活性酸素消去剤
を含有する食品、飼料または化粧品である。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下において、本発明を詳細に説
明する。本発明で使用するクルミ科ペカン属の植物は、
主として北米から中米に分布しており、その種子の胚部
は古来食用とされ、種子自体をペカンナッツもしくはピ
ーカンナッツと呼称されている。本発明の活性酸素消去
剤は、当該クルミ科ペカン属植物の種子もしくは種子殻
を水、熱水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノー
ル、iso −プロパノール、アセトン等の有機溶媒の単
独、またはこれらの水や有機溶媒の混合溶媒、混合溶媒
においては好ましくは上記有機溶媒の含水物で抽出して
得られる抽出物を有効成分とするものである。

【００１１】抽出方法は特に限定されるものではなく、
常法に従って行えばよい。以下に、好ましい抽出方法に
ついて説明する。抽出溶媒の使用量は特に限定されるも
のではなく、通常は使用するペカンナッツもしくはその
殻の重量の５〜１００倍量とすればよい。抽出温度につ
いては、水もしくは熱水を抽出溶媒とする場合には、約
２０℃〜１２０℃で行えばよい。有機溶媒もしくは含水
有機溶媒を抽出溶媒とする場合には、特に限定されるも
のではないが、好ましくは室温下、特に好ましくは２０
℃〜３０℃の温度下で抽出する。また、抽出時間につい
ては、水もしくは熱水抽出の場合は、５〜６０分程度で
よいが、有機溶媒もしくは含水有機溶媒による抽出の場
合には、２４〜９６時間が適当である。抽出を行った
後、濾紙や脱脂綿等を用いた自然濾過、減圧濾過等の手
段によって各抽出溶媒可溶部を得、次いで減圧濃縮等の
手段により溶媒を留去し、さらに必要に応じて凍結乾燥
や噴霧乾燥を行うことにより本発明の有効成分を得る。

【００１２】こうして得られる本発明の有効成分は、極
めて高い活性酸素消去効果および抗酸化効果を有し、且
つ安全性が高く、加熱等の加工手段を加えても、その効
果は失われることなく安定であるので、本発明の有効成
分を含有させることにより安定、且つ有用な活性酸素消
去剤もしくは抗酸化剤を得ることができる。また、本発
明の活性酸素消去剤もしくは抗酸化剤は、前記有効成分
そのものを食品や化粧品等の組成物に配合するか、また
は予め該有効成分を製剤化したものを前記組成物に配合
して、活性酸素消去効果および抗酸化効果を賦与して前
記組成物の商品価値を高めることが可能である。

【００１３】製剤化の例として、錠剤、カプセル剤、散
剤または顆粒剤の場合は、上記有効成分を澱粉、乳糖や
マニトール等の賦型剤、カルボキシメチルセルロースや
ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロ
ースやカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊
剤、タルクやステアリン酸マグネシウム等の潤沢剤、そ
の他必要に応じて湿潤剤、着色料や香料等を適宜組み合
わせて処方することにより製剤化することができる。ま
た、液剤としては、水性もしくは油性の乳濁剤やシロッ
プ剤にすればよく、単シロップ、ソルビトール、メチル
セルロースやカルボキシメチルセルロースナトリウム等
の懸濁化剤、卵黄レシチン、ソルビタンモノ脂肪酸エス
テル、ラウロマクロゴールやヒマシ油等の乳化剤、その
他必要に応じて防腐剤、保存剤や安定化剤等を適宜配合
して製剤化することができる。軟膏の場合は、ワセリ
ン、パラフィン、シリコン、プラスチベース、植物油や
ロウ類等の疎水性基剤、精製ラノリン、カルボキシビニ
ルポリマー、プロピレングリコールや１，３−ブタンジ
オール等の親水性基剤、ポリエタノールアミン等の乳化
剤等を適宜配合して製剤化することができる。

【００１４】本発明の組成物の内、食品の形態としては
種々のものを挙げることができ、例えば味噌、醤油、マ
ヨネーズ等の調味料、サラダオイル等の食用油に添加・
混合する他、各種調理食品；デザート類、氷菓、飴、チ
ューインガムや果汁等の菓子・飲料等を挙げることがで
きる。これらの食品には、使用目的に応じた任意の成分
を用いることができる。例えば氷菓や飲料の場合は、果
汁、甘味料、酸味料、着色料や香料等を適宜配合するこ
とができる。本発明の有効成分の食品への添加量は、そ
の形態により適宜変えればよいが、例えば、味噌、醤
油、マヨネーズ等の調味料およびサラダオイル等の食用
油には全体の０．０３〜２重量％、その他の食品の場合
には０．０２〜２重量％とするのが好ましい。

【００１５】本発明の組成物の内、飼料の形態としては
種々のものを挙げることができ、例えば家畜・家禽・魚
類用の粉状、練り製品状またはペレット状の配合飼料を
挙げることができる。これらの飼料には、使用目的に応
じた任意の成分を用いることができ、例えば練り製品状
の飼料の場合は、着色料や香料等を適宜配合することが
できる。本発明の有効成分の飼料への添加量は、その形
態により適宜変えればよいが、一般的に全体の０．０２
〜２重量％とするのが好ましい。

【００１６】本発明の組成物の内、化粧品の形態として
は種々のものを挙げることができ、例えばローション、
乳液、クリームをはじめとして洗顔料、パック料、メー
キャップ化粧料、頭髪化粧料、***化粧料、爪用化粧
料、浴剤や制汗剤等が挙げられる。これらの化粧品に
は、使用目的に応じた任意の成分を用いることができ、
例えばクリームの場合は、ワセリン、パラフィン、スク
ワラン等の疎水性基剤、ラノリン、プロピレングリコー
ル、１，３−ブタンジオール等の親水性基剤、脂肪酸モ
ノグリセライド類、ソルビタン脂肪酸エステル類等の乳
化剤、防腐剤、顔料、香料、その他必要に応じて栄養
剤、保湿剤、美白剤および紫外線吸収剤等を常法に従っ
て適宜配合することができる。同様に、その他の製品に
ついても、その種類に応じた必要成分を適宜配合するこ
とができる。本発明の有効成分の化粧品への添加量は、
その形態により適宜変えればよいが、化粧品全体の約
０．０２〜２重量％とするのが好ましい。

【００１７】以上のように、本発明の活性酸素消去剤
は、食品、飼料、化粧品等の組成物に添加して使用する
ことが可能であり、これら組成物に活性酸素消去効果や
抗酸化効果を賦与し、これら組成物の安定性を図ると共
に、それら組成物の摂取者もしくは使用者に対しても、
活性酸素や過酸化脂質による諸障害から保護することが
可能で、極めて有用である。

【００１８】

【実施例】次に、本発明を実施例などにより詳しく説明
するが、本発明はこれらによって制限されるものではな
い。 製造例１ ペカンナッツの食用部を除去して得た種子殻を粉砕し、
その粉砕物１００ｇに５０％含水エタノール５００ｍｌ
（ミリリットル、以下同じ）を加えて室温下で４８時間
静置して抽出した。得られた含水エタノール可溶部を濾
紙濾過後、４０℃下で減圧濃縮してエタノールおよび水
を留去し、さらに凍結乾燥して目的とする有効成分（褐
色の粉体７．２ｇ、収率７．２％）を得た。

【００１９】製造例２ ペカンナッツをそのまま粉砕し、その粉砕物１００ｇに
５０容量％含水エタノール５００ｍｌを加えて室温下で
４８時間静置して抽出した。得られた含水エタノール可
溶部を濾紙濾過後、４０℃下で減圧濃縮してエタノール
および水を留去し、さらに凍結乾燥して目的とする有効
成分（褐色の粉体７．４ｇ、収率７．４％）を得た。

【００２０】製造例３ 製造例１と同様にして得た種子殻粉砕物１００ｇに蒸留
水５００ｍｌを加えて１１０℃下で１０分間加熱抽出を
行った。室温まで冷却後、水可溶部を濾紙濾過後、５０
℃下で減圧濃縮して水を留去し、さらに凍結乾燥して目
的とする有効成分（淡褐色の粉体６．５ｇ、収率６．５
％）を得た。

【００２１】上記の各製造例により得られた有効成分の
赤外線吸収スペクトルは以下の通りであった。なお、本
スペクトル測定装置は日本分光株式会社製ＩＲ−８１０
型、試料調製法はＫＢｒ法により行った。 製造例１により得られた有効成分の吸収ピーク ３４００〜３３００（ｂｒｏａｄ）、２９２５、１６１
５、１４５０、１０４０、８３０ｃｍ^-1 製造例２により得られた有効成分の吸収ピーク ３４００〜３３００（ｂｒｏａｄ）、１６１５、１５５
０、１４５０、１３５０、１２００、８４０ｃｍ^-1 製造例３により得られた有効成分の吸収ピーク ３４００〜３３００（ｂｒｏａｄ）、１６１５、１４５
０、１３５０、１２００、１０４０、８３０ｃｍ^-1

【００２２】試験例１ スーパーオキサイド（O₂ ^- ) 消
去試験 本発明の有効成分のO₂ ^- 消去効果を C.Beauchampらの方
法（Analytycal Biochemistry, vol.44, pp.276-287(19
71))を１部改変したニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢ
Ｔ）還元法により調べた。本法はヒポキサンチン（ＨＰ
Ｘ）にキサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）を作用させた
ときに生ずるO₂ ^- が、ＮＢＴを還元して暗青色のホルマ
ザンを生成することを利用した方法である。本系にO₂ ^-
消去効果を有する物質（検体＝本発明の有効成分）が存
在すると、生成するホルマザンの量が減少するので、有
効成分無添加時のホルマザン生成量に対する有効成分添
加時のホルマザン生成量からホルマザン生成阻害率を求
め、本発明の有効成分のO₂ ^- 消去率とした。また、本法
において、検体がＸＯＤの酵素作用を阻害する効果を有
する場合には、O₂ ^- 消去効果を有しない場合でも、O₂ ^-
消去率が見かけ上高くなってしまうので、本発明の有効
成分がＸＯＤの阻害効果ではなく、O₂ ^- 消去効果を有し
ていることを確認するために、本有効成分のＸＯＤ阻害
率についても検討した。

【００２３】＜O₂ ^- 消去率の測定方法＞５０ｍＭ（ミリ
モル濃度、以下同じ）炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１
０．２）２．４ｍｌに、３ｍＭ ＨＰＸ水溶液０．１ｍ
ｌ、０．７５ｍＭ ＮＢＴ水溶液０．１ｍｌ、３ｍＭ
ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）水溶液０．１ｍｌ
および０．１５％ウシ血清アルブミン水溶液０．１ｍｌ
から成る溶液に検体溶液（各製造例で得た本発明の有効
成分０．３重量％を含む５０％含水エタノール溶液）を
反応液中の有効成分の最終濃度が後記第１表に示す濃度
になるように加えた混合液をキュベット（吸収波長測定
セル）に取り、精製水で０．０５Ｕ（酵素単位）に希釈
したＸＯＤ溶液０．１ｍｌを添加して反応を開始し、開
始３分後の５６０ｎｍにおける吸光度（Ａ）を分光光度
計（日本分光株式会社製、ＵＶＤＥＣ４３０Ｂ）で測定
し、ホルマザン生成量を求めた。対照として、検体溶液
の代わりに同量の５０％含水エタノールを加えた混合液
を用いて同様に吸光度（Ｂ）を測定した。さらに、検体
混合液のブランクとして、検体混合液に、加熱失活させ
たＸＯＤ溶液を添加した反応液についても同様に吸光度
（Ｃ）を測定し、次式１より本発明の有効成分のO₂ ^- 消
去率を計算した。

【００２４】

【数１】

【００２５】＜ＸＯＤ阻害率の測定方法＞上記O₂ ^- 消去
率測定方法中の０．７５ｍＭ ＮＢＴ水溶液の代わりに
精製水０．１ｍｌを加えた混合液を用い、上記方法と同
様にＸＯＤ溶液を添加して３分後の２９０ｎｍにおける
吸光度（Ｘ）を測定して、ＨＰＸがＸＯＤにより酸化さ
れて生じる尿酸の生成量を求めた。対照として、検体溶
液の代わりに同量の５０％含水エチルアルコールを加え
た混合液を用いて同様に２９０ｎｍにおける吸光度
（Ｙ）を測定した。さらに、検体混合液のブランクとし
て、検体混合液に加熱失活させたＸＯＤ溶液を添加した
反応液についても同様に吸光度（Ｚ）を測定し、次式２
より本発明の有効成分のＸＯＤの阻害率を計算した。以
上の結果を第１表に示した。

【００２６】

【数２】

【００２７】

【表１】

【００２８】第１表から判るように、本発明の有効成分
は、いずれの製造法によって得た検体であっても、ＸＯ
Ｄの酵素作用を殆ど阻害することなく、非常に高いO₂ ^-
消去効果を示すことは明らかである。

【００２９】試験例２ ヒドロキシルラジカル（ＯＨ
・）消去試験 本発明の有効成分のＯＨ・消去効果を、B.Halliwell ら
のデオキシリボース法（Analytical Biochemistry, vo
l.165, pp.215-219(1987)) を１部改変した方法により
調べた。本法は、フェントン試薬（過酸化水素と鉄〔I
I〕塩とを混合した酸化呈色試薬）より発生するＯＨ・
とデオキシリボースとの反応により生じるマロンジアル
デヒド（ＭＤＡ）を、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）と
反応させることにより赤色反応物を生成させ、この生成
量を５３２ｎｍにおける吸光度（ＴＢＡ値）を測定する
ことによって求めるものである。この系にＯＨ・消去効
果を有する物質（検体＝本発明の有効成分）が存在する
と、ＭＤＡの生成量が減少し、従ってＴＢＡ値が減少す
るので、本発明の有効成分無添加時のＴＢＡ値に対する
本発明の有効成分添加時のＴＢＡ値から、ＭＤＡ生成阻
害率を求め、本発明の有効成分のＯＨ・消去率とした。

【００３０】＜ＯＨ・消去率の測定方法＞２００ｍＭ
リン酸二水素カリウム−水酸化カリウム緩衝液（ｐＨ
７．４）０．２ｍｌ、２８ｍＭ デオキシリボース水溶
液 ０．２ｍｌ、１ｍＭ 塩化第二鉄水溶液 ０．２ｍ
ｌ、１ｍＭ アスコルビン酸水溶液 ０．２ｍｌ、１．
０４ｍＭ ＥＤＴＡ水溶液 ０．２ｍｌ、精製水 ０．
６ｍｌ、１０ｍＭ Ｈ₂ ０₂０．２ｍｌおよび検体溶液
（製造例１で得た本発明の有効成分ならびに陽性対照と
して用いたマニトールの最終濃度が２００ｐｐｍとなる
ように水で希釈した溶液）０．２ｍｌからなる混合液
を、３７℃下１時間反応させた後、２０％トリクロル酢
酸水溶液２ｍｌおよび０．６７％ＴＢＡ水溶液１ｍｌを
加え、沸騰水浴中で１０分間加熱した。該溶液を室温ま
で放冷後、５３２ｎｍにおける吸光度（Ｅ）を分光光度
計（日本分光株式会社製、ＵＶＤＥＣ ４３０Ｂ）で測
定し、ＴＢＡ値を求めた。検体混合液のブランクとし
て、１０ｍＭ Ｈ₂ Ｏ₂ の代わりに精製水を加えた混合
液を用いて同様に吸光度（Ｆ）、対照として検体溶液の
代わりに精製水を加えた場合の吸光度（Ｇ）、また対照
のブランクとして検体溶液の代わりに精製水を加え、且
つ１０ｍＭ Ｈ₂ Ｏ₂ の代わりに精製水を加えた場合の
吸光度（Ｈ）を測定して、式３により本発明の有効成分
ならびに陽性対照のＯＨ・消去率を計算した。以上の結
果を第２表に示した。

【００３１】

【数３】

【００３２】

【表２】

【００３３】第２表から判るように、本発明の有効成分
は、非常に高いＯＨ・消去効果を有することが明らかで
ある。

【００３４】試験例３ 脂質の過酸化抑制試験 本発明の有効成分の脂質の過酸化抑制効果を A. Jitoe
らの方法(Journal ofAgricultural and Food Chemistr
y, vol.40, pp.1337-1340(1992))に従い、脂質としてリ
ノール酸を用いて、チオシアン酸法により調べた。本法
はリノール酸の過酸化物により、第一鉄イオンが第二鉄
イオンに酸化されることを利用し、生成した第二鉄イオ
ンをチオシアン錯塩として比色する方法である。

【００３５】＜脂質過酸化抑制率の測定方法＞９９．５
％エタノール４ｍｌ、９９．５％エタノールに溶解した
２．５３重量％リノール酸溶液４．１０４ｍｌ、５０ｍ
Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）８ｍｌおよび蒸留水
３．８９６ｍｌに、製造例１および２で得た検体を各々
４ｍｇを各々添加した反応混合液をスクリューキャップ
付きの５０ｍｌ容量のバイアル中に入れ、スクリューキ
ャップを施した後、暗黒下４０℃にセットした恒温器中
に放置した。なお、陽性対照として、本発明の有効成分
の代わりにジブチルヒドロキシトルエンおよびα−トコ
フェロールをそれぞれ４ｍｇ添加した反応混合液を用意
した。実験開始８日後、各反応液０．１ｍｌに、７５％
含水エタノール９．７ｍｌおよび３０％チオシアン酸ア
ンモニウム水溶液０．１ｍｌを加えた。これに３．５％
塩酸水に溶解した０．０２Ｍ 塩化第一鉄溶液０．１ｍ
ｌを加えて、正確に３分後の５００ｎｍにおける吸光度
（Ｉ）を測定した。さらに、ブランクとして、本発明の
有効成分または陽性対照を添加しない場合の吸光度
（Ｊ）を測定して、次式４より各成分の脂質過酸化抑制
率を計算した。以上の実験結果を第３表に示した。

【００３６】

【数４】

【００３７】

【表３】

【００３８】第３表から判るように、本発明の有効成分
は非常に強い脂質過酸化抑制作用を有することは明らか
である。

【００３９】比較例 本発明の有効成分は、クルミ科ペカン属に属する植物の
種子もしくは種子殻の抽出物である。一方、前述の如く
クルミ科のオニグルミ、マンシュウグルミ等の胡桃殻の
抽出物が活性酸素消去効果を示すことが明らかとされて
いる（特開平７−６９９１２号公報）。そこで、クルミ
（Walnut; ウォルナッツ）の抽出物と本発明のペカンナ
ッツの殻の抽出物について、それらの収率、O₂ ^- 消去率
および成分の差異の有無について検討した。

【００４０】（１）抽出物の収率 ペカンナッツの食用部を除去して得た殻およびクルミの
食用部を除去して得た殻を別々に粉砕し、それぞれの粉
砕物を得た。ペカンナッツの殻の粉砕物を２つに分け、
１００ｇずつ１Ｌ容のエルレンマイヤーフラスコに入
れ、１つには５０％含水エタノール、あと１つには蒸留
水をそれぞれ５００ｍｌ加えた。クルミの殻の粉砕物に
ついても全く同様に２分して、１００ｇずつ１Ｌ容のエ
ルレンマイヤーフラスコに入れ、１つには５０％含水エ
タノール、あと１つには蒸留水をそれぞれ５００ｍｌ加
えた。５０％含水エタノールを加えた各粉砕物について
は、室温下で４８時間放置した後、濾過して残渣を除い
て得られたエキスを４０℃下減圧濃縮後、１晩凍結乾燥
してペカンナッツの殻の５０％含水エタノールエキスお
よびクルミの殻の５０％含水エタノールエキスを得た。
蒸留水を加えた各粉砕物については、１１０℃下で３０
分間加熱抽出した後、濾過して残渣を除いて得られたエ
キスを４０℃下減圧濃縮後、１晩凍結乾燥してペカンナ
ッツの殻の熱水エキスおよびクルミの殻の熱水エキスを
得た。各エキスの各殻粉砕物に対する収率は第４表に示
す通りである。

【００４１】

【表４】

【００４２】第４表より、両溶剤による抽出においては
ペカンナッツの殻のエキスの方がクルミの殻のエキスよ
りも２．７〜３倍も収率が高いことが判る。 （２）各エキスのO₂ ^- 消去活性 上記（１）で得た各エキスのO₂ ^- 消去活性を前記のニト
ロブルーテトラゾリウム還元法により検定し、各々のエ
キスのＥＤ₅₀値（検体を加えない場合の吸光度から求め
られるO₂ ^- 産生率を１００％としたときの、O₂ ^- 消去活
性を５０％とするに必要な検体の濃度）を求めて、各エ
キスの該活性の強さを比較した。各エキスのＥＤ₅₀値は
第５表に示す通りである。

【００４３】

【表５】

【００４４】第５表に示したように、検体のO₂ ^- 消去活
性の強さを示すＥＤ₅₀値から判断して、ペカンナッツの
殻のエキスの方がクルミの殻のエキスよりＥＤ₅₀値が
３．２〜４．４倍低く、遙に強いO₂ ^- 消去活性を有する
ことが明らかである。

【００４５】（３）各エキスの成分 製造例３で得たペカンナッツの殻の熱水エキスおよび同
例に準じて製造したクルミの殻の熱水エキスについて、
それらの成分に違いが有るか否かを薄層クロマトグラフ
法（ＴＬＣ法）と活性炭吸着法により検討した。 ＴＬＣ法 ＴＬＣの測定条件は以下に示す通りである。 薄層プレート：Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４
（MERCK 社製） 展開溶媒：１−ブタノール：酢酸：水＝６：３：１ 展開：１次 展開距離：１２ｃｍ 試料濃度：３００ｐｐｍ 塗布量：５μｌ／スポット 検出：ＵＶ（２５４ｎｍおよび３０２ｎｍ）およびヨー
ド発色

【００４６】ペカンナッツ殻とクルミ殻の熱水エキスの
上記ＴＬＣ法による結果は、第６表に示す通りである。

【００４７】

【表６】

【００４８】表に示したように、ペカンナッツ殻の熱水
エキスは３つの成分に分かれ、一方クルミ殻の熱水エキ
スは２つの成分に分かれた。各Ｒｆ値の相違から、これ
らエキスの成分は互いに異なる成分であると判断され
る。

【００４９】活性炭吸着法 ペカンナッツ殻の熱水エキスとクルミ殻の熱水エキスを
同じ濃度（０．３％〔重量／容量〕）となるように水に
溶解し、これらの溶液に各エキスの２倍（重量）の活性
炭（活性炭素（粉末））（未処理）：ナカライテスク社
製）を加えて、室温下で４時間攪拌した。その後、各処
理液を濾紙（５Ｃタイプ：東洋濾紙社製）を用いて濾過
し、ろ液を減圧濃縮した後、凍結乾燥した。得られた各
ろ液の凍結乾燥物をそれぞれ０．３％（重量／容量）と
なるように水に溶解し、各溶液のO₂ ^- 消去活性を測定し
た。なお、対照としては、前記の活性炭処理前の水溶液
（０．３％〔重量／容量〕）を用いた。各溶液のO₂ ^- 消
去活性の測定結果は、第７表に示す通りである。

【００５０】

【表７】

【００５１】表から明かなように、ペカンナッツ殻の熱
水エキスの活性炭処理後のろ液の凍結乾燥物のO₂ ^- 消去
率は、対照と比較して変化は殆ど見られないが、クルミ
殻の熱水エキスの活性炭処理後のろ液の凍結乾燥物のO₂
^- 消去率は、対照に比べて減少している。したがって、
ペカンナッツ殻の熱水エキスのO₂ ^- 消去活性成分は、活
性炭処理によって該活性を失う成分ではないのに対し
て、クルミ殻の熱水エキスのO₂ ^- 消去活性成分は、活性
炭処理によって該活性を失うことから、これらエキスの
O₂ ^- 消去活性成分は異なった成分であると判断される。

【００５２】試験例４ 本発明の有効成分の安全性試験として、単回経口投与に
よる急性毒性試験（ラット）、変異原性試験（ネズミチ
フス菌(Salmonella typhimurium) TA 98、TA 100、TA 1
535 、TA 1537 および大腸菌(Escherchia coli) ＷＰ２
uvraを用いるエームス試験）、皮膚感作性試験（モルモ
ットおよびヒトパッチテスト）、皮膚一次刺激性試験
（モルモット）および光毒性試験（モルモット）を実施
した。

【００５３】（１）単回経口投与による急性毒性試験 体重１８０ｇのウィスター系雄ラット５匹に、製造例２
で得た本発明の有効成分を２ｇ／Ｋｇ（体重）となるよ
うに経口投与し、引き続き２週間通常飼育したところ、
死亡率は０％であった。従って、本発明の有効成分の半
数致死量（ＬＤ₅₀）は２ｇ／Ｋｇ以上であり、毒性は極
めて低いと判定された。

【００５４】（２）変異原性試験 上記各菌を用いてエームス試験を行った。製造例２で得
た本発明の有効成分を各シャーレに２００μｇから５０
００μｇとなるように添加して試験をした結果、いずれ
の供試菌においても、代謝活性化系の有無にかかわらず
生育したコロニー数は、陰性対照（本発明の有効成分無
添加）の復帰突然変異コロニー数の２倍を越えなかった
ので、本発明の有効成分の変異原性は陰性であると判定
された。

【００５５】（３）感作性試験（モルモットに対するパ
ッチテスト） 体重３３０〜４００ｇのハートレー系の雌モルモット１
０匹の背部を剃毛し、製造例２で得た本発明の有効成分
を５重量％含むアセトン溶液２０μｌを塗布してアジュ
バントパッチテストを行ったところ、陽性率は０％であ
り、本発明の有効成分の感作性は極めて低いと判断され
た。

【００５６】（４）感作性試験（ヒトに対するパッチテ
スト） ２０〜５５歳の健康な男女３０人に、製造例２および製
造例３で得た本発明の有効成分を２重量％含むラノリン
溶液を用いて常法に従ってパッチテストを行ったとこ
ろ、３０人とも貼付部位には何らの刺激性も認められ
ず、ヒトの皮膚に対する刺激性は陰性と判断された。

【００５７】（５）皮膚一次刺激性試験 体重３３０〜４００ｇのハートレー系の雌モルモット５
匹の背部を剃毛し、製造例２で得た本発明の有効成分を
５重量％含む５０％含水エタノール溶液を各々２０μｌ
塗布し、２４時間および４８時間後に塗布部の皮膚の状
態を観察し、紅斑および浮腫の生成について評価した。
その結果、陽性率は０％であり、本発明の有効成分の皮
膚１次刺激性は極めて低いと判断された。

【００５８】（６）光毒性試験 体重３３０〜４００ｇのハートレー系の雌モルモット５
匹の背部を剃毛し、製造例２で得た本発明の有効成分を
１０％含む５０％含水エタノール溶液を各々２０μｌ塗
布した後、各々を照射光源（光源：東芝ＦＬ２０Ｓ・Ｂ
ＬＢ、５灯並列装置使用）から約１０ｃｍの距離を隔て
て固定し、長波長紫外線（ＵＶ−Ａ）を１時間照射し
た。照射後２４時間および４８時間後に塗布部の皮膚の
状態を観察し、紅斑および浮腫の生成について評価し
た。その結果、陽性率は０％であり、本発明の有効成分
の光毒性は極めて低いと判断された。

【００５９】以上の試験の結果から明らかなように、本
発明の有効成分であるクルミ科ペカン属に属する植物の
種子または種子殻の抽出物は、極めて高い活性酸素消去
効果および脂質過酸化抑制効果を有している。しかも、
このエキスの成分は、類縁植物たるクルミ属（Juglans)
に属するクルミの殻のエキスの活性酸素消去活性成分と
異なる成分であり、且つ安全性が高い。

【００６０】以下に、本発明の活性酸素消去剤ならびに
該有効成分を配合した食品、飼料および化粧品について
の実施例を示す。 実施例１ 錠剤 下記処方の成分を常法により混和し、６０メッシュの金
網を通して粒度を調整した後、打錠機を用いて錠剤１個
を製造した。

【００６１】

【表８】

【００６２】実施例２ カプセル剤 下記処方の成分を常法により良く混和し、６０メッシュ
の金網を通して粒度を調製した後、ゼラチンカプセルに
充填してカプセル剤１個を製造した。

【００６３】

【表９】

【００６４】実施例３ 散剤 下記処方の成分を常法により均一に混合し、散剤を１包
製造した。

【００６５】

【表１０】

【００６６】実施例４ 注射剤 下記処方の成分を常法に従い混和して濾過後、容器に充
填して密封した後、高圧蒸気滅菌を施して注射剤アンプ
ルを製造した。

【００６７】

【表１１】

【００６８】実施例５ ゲル軟膏剤 下記処方の成分を常法により均一に混合溶解して、ゲル
軟膏剤１０ｇを製造した。

【００６９】

【表１２】

【００７０】実施例６ マヨネーズ 下記処方のａ成分をミキサー中で充分に撹拌・混合後、
撹拌を続けつつｂ成分を徐々に加えて、マヨネーズ１０
０ｇを製造した。

【００７１】

【表１３】

【００７２】実施例７ マヨネーズ 市販のマヨネーズに製造例３で得たペカンナッツの殻の
熱水エキスを添加し、作成時および４８時間後のO₂ ^- 消
去活性の測定を行った。各濃度のエキスのO₂ ^-消去率を
第１４表に示す。

【００７３】

【表１４】

【００７４】実施例８ 飴 下記処方の成分のショ糖および水飴に適量の水を加え
て、常法により常圧下で１５０℃まで加熱し、冷却しつ
つ固化する前に残りの成分を加えて飴１個を製造した。

【００７５】

【表１５】

【００７６】実施例９ チューインガム 下記処方の成分を常法によりニーダーで練り、チューイ
ンガム１枚を製造した。

【００７７】

【表１６】

【００７８】実施例１０ 飲料 下記処方の成分を常法により撹拌し均一に混合後、濾過
した濾液を瓶詰めし、殺菌して飲料１瓶を製造した。

【００７９】

【表１７】

【００８０】実施例１１ 飲料 市販のオレンジジュースに製造例３で得たペカンナッツ
の殻の熱水エキスを添加し、作成時および４８時間後の
O₂ ^- 消去活性の測定を行った。各濃度のエキスのO₂ ^- 消
去率を第１８表に示す。

【００８１】

【表１８】

【００８２】実施例１２ スープ 市販のスープに製造例３で得たペカンナッツの殻の熱水
エキスを添加し、作成時および４８時間後のO₂ ^- 消去活
性の測定を行った。各濃度のエキスのO₂ ^- 消去率を第１
９表に示す。

【００８３】

【表１９】

【００８４】実施例１３ ペットフード 下記処方の成分に適量の水を加え、らいかい機にて混合
・らいかい後、常法によりペットフードの缶詰１缶を製
造した。

【００８５】

【表２０】

【００８６】実施例１４ 化粧水 下記処方の成分を常法により均一に混合して、化粧水１
００ｇを製造した。

【００８７】

【表２１】

【００８８】実施例１５ 乳液 下記処方のａ成分を７５℃に、ｂ成分を７３℃にそれぞ
れ加熱溶解し、ｂ成分をａ成分に撹拌しつつ徐々に加え
て乳化し、本発明の有効成分および香料を添加して均一
に混合して乳液１００ｇを製造した。

【００８９】

【表２２】

【００９０】実施例１６ 乳液 実施例１５における乳液（但し、香料を除いたもの）に
製造例１で得たペカンナッツの殻の５０％含水エタノー
ルエキスを添加し、作成時および４８時間後のO₂ ^- 消去
活性の測定を行った。各濃度のエキスのO₂ ^- 消去率を第
２３表に示す。

【００９１】

【表２３】

【００９２】実施例１７ クリーム 下記処方のａ成分を７３℃に、ｂ成分を７５℃にてそれ
ぞれ加熱融解し、ｂ成分をａ成分に撹拌しながら徐々に
加えて乳化し、５５℃まで冷却したところで本発明の有
効成分および香料を添加し、ホモジナイザーで均一に混
合してクリーム１００ｇを製造した。

【００９３】

【表２４】

【００９４】実施例１８ 浴用剤 下記処方の成分を常法により混合し、浴用剤１００ｇを
製造した。

【００９５】

【表２５】

【００９６】

【発明の効果】本発明によれば、特定の植物の種子また
は種子殻から極めて高い活性酸素消去効果および脂質過
酸化抑制効果を有し、且つ安全性の高い有効成分が容易
に得られる。このものを有効成分として含有する組成物
は、活性酸素や過酸化脂質によって引き起こされる種々
の疾病や美容上の障害となる諸症状の改善および予防を
図ることが可能である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ２３Ｌ 2/38 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｋ ４Ｂ０４７ Ａ６１Ｋ 7/00 Ｗ ４Ｃ０７６ 7/48 ４Ｃ０８３ 7/48 7/50 ４Ｃ０８８ 7/50 9/06 Ｇ 9/06 9/08 Ｆ 9/08 9/20 Ｄ 9/20 9/48 Ｃ 9/48 Ａ２３Ｇ 3/00 １０１ // Ａ２３Ｇ 3/00 １０１ 3/30 3/30 Ａ２３Ｌ 1/24 Ａ Ａ２３Ｌ 1/24 2/00 Ｆ Ｆターム(参考） 2B005 AA05 2B150 AA01 AA05 AA06 AA08 AB20 DD31 DD42 DD57 4B014 GB06 GB07 GB13 GG18 GK12 GP01 GP27 4B017 LC03 LG05 LP01 LP03 4B018 LB01 LB08 LB09 LE03 MD57 ME06 MF01 MF02 MF06 4B047 LB09 LE03 LG40 LP01 LP02 LP07 4C076 AA07 AA12 AA13 AA30 AA37 AA56 BB01 BB31 CC21 DD28C DD38A DD41C DD50F DD67A EE08A EE31A EE32A EE32B EE38A EE42H EE53E EE53F EE58A FF01 FF11 FF23 GG41 4C083 AA111 AA112 AB432 AC122 AC132 AC242 AC432 AC542 AD092 AD212 AD242 AD262 AD272 BB51 CC03 DD14 DD15 DD17 DD22 DD23 DD27 DD41 EE11 EE13 4C088 AB12 AC04 AC14 BA08 BA09 BA10 MA17 MA52 MA63 NA14 ZA89 ZC21 ZC61

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 クルミ科ペカン属に属する植物の種子ま
   たは種子殻抽出物を含有する活性酸素消去剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載の抽出物が、水、メタノー
   ル、エタノール、ｎ−プロパノール、iso −プロパノー
   ルおよびアセトンの中から選ばれる１種または２種以上
   の混合溶媒で抽出されたものである請求項１記載の活性
   酸素消去剤。
3. 【請求項３】 請求項１記載の活性酸素消去剤を含有す
   る食品、飼料または化粧品。