KR20200135435A

KR20200135435A - 항-PfRH5 항체 및 이의 항원 결합 단편

Info

Publication number: KR20200135435A
Application number: KR1020207030068A
Authority: KR
Inventors: 리사 퍼셀
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2018-03-26
Filing date: 2019-03-22
Publication date: 2020-12-02
Also published as: MX2020009851A; CL2020002449A1; JP7382950B2; US11667701B2; CA3094981A1; CN112088166A; IL277296A; US20210024625A1; EA202092281A1; PH12020500662A1; US20230365668A1; BR112020018691A2; EP3774893A1; WO2019190931A1; MA52175A; AU2019241978A1; SG11202008848XA; JP2021519086A; CO2020012638A2

Abstract

본 발명은 플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편, 이의 조성물 및 이러한 항체, 단편 및 조성물을 제조하는 방법을 포함한다. 플라스모듐 팔시파룸 감염 및 말라리아를 치료하거나 예방하거나 진단하기 위한 방법 및 조성물은 또한 본 발명의 일부이다.

Description

항-PfRH5 항체 및 이의 항원 결합 단편

관련 출원의 교차 참조

본 출원은 35 U.S.C § 119(e) 하에 2018년 3월 26일자에 출원된 미국 임시 출원 제62/648,259호의 이익을 주장하며, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.

서열 목록 참조

본 출원은 2019년 3월 22일에 생성되고 122,791 바이트를 함유하는 파일 10437WO01-Sequence로 컴퓨터 판독 가능한 형태로 제출된 서열 목록을 원용에 의해 포함한다.

기술분야

본 발명은 부분적으로 PfRH5에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum) 감염을 치료하거나 예방하기 위한 이의 사용 방법에 관한 것이다.

숙주 적혈구의 침습은 플라스모듐 팔시파룸 생활 주기 및 말라리아 병리학의 필수 단계이다. 다수의 항말라리아 약물은 무성 혈액기를 표적화하지만, 이의 효율은 약물 내성 균주의 출현에 의해 위협을 받는다(문헌[Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Economics of Malaria Drugs in an Age of Resistance. National Academies Press (US). 254-266 (2004). PMID:25009879]; 및 문헌[Wright et al., Structure of malaria invasion protein RH5 with erythrocyte basigin and blocking antibodies, Nature: 515: 427-430 (2014). PMID: 25132548]). 더욱이, 항말라리아 약물은 상이한 약물동태학적 특성을 나타낸다. 아르테미시닌 및 퀴닌과 같은 일부 항말라리아 약물은 하나의 기생충 생활 주기 내에 신속히 청소된다. 다른 한편, 소수성 항말라리아 약물 및 친유성 항말라리아 약물은 천천히 제거되지만, 소모된 식이 지방의 양에 따라 상이한 흡수율을 특징으로 한다(상기 Arrow 등의 문헌).

플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5: Plasmodium falciparum Reticulocyte Binding Protein Homologue 5)는 망상적혈구 결합 유사 단백질(RBL: Reticulocyte Binding Like protein)이라 칭해지는 적혈구 리간드의 슈퍼 패밀리의 구성원이다. PfRH5는 적혈구에 결합하고, 아마도 기생충의 혈액기 성장에 필수적이고, 적혈구 침습의 종 트로피즘에 연루된다. 적혈구 상의 PfRH5에 대한 수용체가 Ok 혈액형 항원인 바시긴(BSG; CD147)이라는 것을 증거가 제안한다.

본 발명은 (i) 플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5) 상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하거나; (ii) 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 PfRH5 폴리펩타이드에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 제공하는데, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 (a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (ii) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 (a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 (a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열 및 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열 및 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함한다. 본 발명은 또한 G Y S F T S Y W(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y P G D S D T(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q D I T G T T G F D Y(서열 번호 8)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y A(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K E R L F G V V S Y Y G M D V(서열 번호 24)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G S I S S S S Y Y(서열 번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q D R E A L F D Y(서열 번호 40)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F R F D D Y A(서열 번호 52)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N W N S G G K(서열 번호 54)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D R G I A A R L L S R D A F D M(서열 번호 56)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 S F T F S S Y G(서열 번호 68)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 70)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E V R R Y Y Y Y G M D V(서열 번호 72)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F D D Y A(서열 번호 84)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S W N S G D I(서열 번호 86)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D T L S G T G T T W Y Y F D Y(서열 번호 88)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y G(서열 번호 100)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 102)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A Q D G S S A I Y Y F Y G M D V(서열 번호 104)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y G(서열 번호 116)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G S N K(서열 번호 118)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R G E H Y Y G S G P F D P(서열 번호 120)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G S I S S F G Y Y(서열 번호 132)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S I(서열 번호 134)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E R D Y G D Y F D Y(서열 번호 136)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y G(서열 번호 148)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G S N K(서열 번호 150)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V(서열 번호 152)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S T Y G(서열 번호 164)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G T N K(서열 번호 166)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V(서열 번호 168)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y G(서열 번호 180)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S F D E R N K(서열 번호 182)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A S E V G Y S F G H D A F D I(서열 번호 184)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F N N Y A(서열 번호 196)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S G S G D S T(서열 번호 198)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D Q G L Y Y Y G S G S F D Y(서열 번호 200)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F A F S D S A(서열 번호 212)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I R N K A N R F A T(서열 번호 214)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R H G H D T L T E G Y G M D V(서열 번호 216)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G T F S S Y T(서열 번호 228)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I I P L Y G T A(서열 번호 230)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A S T L E L R A F D A F D I(서열 번호 232)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G S I S S G G Y Y(서열 번호 236)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 238)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R A P P Y N W F D Y(서열 번호 240)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S D Y Y(서열 번호 244)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S N S G N T Q(서열 번호 246)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 T R E G L E Y S S S E P F D Y(서열 번호 248)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G Y T F T A Y Y(서열 번호 252)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N P N N G D T(서열 번호 254)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D D L A A A G I G W F D S(서열 번호 256)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F D D Y A(서열 번호 260)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S W N S E S I(서열 번호 262)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K A P Y S G T Y F E Y F R H(서열 번호 264)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y G(서열 번호 268)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 270)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D D W N Y D A F D I(서열 번호 272)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G S I S S S G Y Y(서열 번호 276)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 278)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R V D Y G S G S S F D Y(서열 번호 280)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G Y T F T S Y G(서열 번호 284)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S G F N G R T(서열 번호 286)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D G L E K L G D Y(서열 번호 288)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S N S G(서열 번호 292)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W H D G S Y K(서열 번호 294)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D D Y Y A S G T S V D V(서열 번호 296)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G Y T F T G Y Y(서열 번호 300)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N P N S G G T(서열 번호 302)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E E V D D F W S G Y L D Y(서열 번호 304)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F A V N G D Y(서열 번호 316)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y S S G N T(서열 번호 318)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; A R D F P P M S G A D Y(서열 번호 320)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G Y T L T E L S(서열 번호 324)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; F D P E H G K I(서열 번호 326)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A T F Y N W N S Y Y F G M D V(서열 번호 328)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G F T F S S Y A(서열 번호 332)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; V S G S A D I T(서열 번호 334)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D K V Y N W N Y G I Y Y G M D V(서열 번호 336)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 G G S I S S S S Y Y(서열 번호 340)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 342)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q G R W E R E N F D Y(서열 번호 344)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3; 또는 D E S F S D Y Y(서열 번호 348)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I T H S G S T(서열 번호 350)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R G G D Y G G L L D Y(서열 번호 352)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 Q S I R N Y(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P F T(서열 번호 16)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D I N R D(서열 번호 28)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 30)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y K N L P Y T(서열 번호 32)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q R I G S S(서열 번호 44)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; Y A S(서열 번호 46)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 H Q S S T L P T(서열 번호 48)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D V S S Y(서열 번호 60)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 62)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q H L N T Y P Y T(서열 번호 64)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D I S N Y(서열 번호 76)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 78)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y N N L P L T(서열 번호 80)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q G I S S Y(서열 번호 92)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 94)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q V N S Y P L T(서열 번호 96)를 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D I N N Y(서열 번호 108)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 110)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 L Q Y N S Y H P T(서열 번호 112)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S I S N Y(서열 번호 124)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 126)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S S P L T(서열 번호 128)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S V S S N(서열 번호 140)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 142)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y N N W P L T(서열 번호 144)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S I S S Y(서열 번호 156)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 158)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P L T(서열 번호 160)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D I S N Y(서열 번호 172)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 174)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y D N I P I T(서열 번호 176)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q D I S N Y(서열 번호 188)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 190)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y D N F P L T(서열 번호 192)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S I S S Y(서열 번호 204)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 206)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P F T(서열 번호 208)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 (1) G Y S F T S Y W(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y P G D S D T(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q D I T G T T G F D Y(서열 번호 8)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I R N Y(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P F T(서열 번호 16)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (2) G F T F S S Y A(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; A K E R L F G V V S Y Y G M D V(서열 번호 24)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D I N R D(서열 번호 28)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 30)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y K N L P Y T(서열 번호 32)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (3) G G S I S S S S Y Y(서열 번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q D R E A L F D Y(서열 번호 40)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q R I G S S(서열 번호 44)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; Y A S(서열 번호 46)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 및 H Q S S T L P T(서열 번호 48)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (4) G F R F D D Y A(서열 번호 52)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N W N S G G K(서열 번호 54)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D R G I A A R L L S R D A F D M(서열 번호 56)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D V S S Y(서열 번호 60)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 62)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q H L N T Y P Y T(서열 번호 64)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (5) S F T F S S Y G(서열 번호 68)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 70)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E V R R Y Y Y Y G M D V(서열 번호 72)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D I S N Y(서열 번호 76)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 78)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y N N L P L T(서열 번호 80)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (6) G F T F D D Y A(서열 번호 84)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S W N S G D I(서열 번호 86)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D T L S G T G T T W Y Y F D Y(서열 번호 88)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q G I S S Y(서열 번호 92)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 94)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q V N S Y P L T(서열 번호 96)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (7) G F T F S S Y G(서열 번호 100)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 102)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A Q D G S S A I Y Y F Y G M D V(서열 번호 104)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D I N N Y(서열 번호 108)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 110)의 L Q Y N S Y H P T(서열 번호 112)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (8) G F T F S S Y G(서열 번호 116)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G S N K(서열 번호 118)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R G E H Y Y G S G P F D P(서열 번호 120)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S N Y(서열 번호 124)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 126)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S S P L T(서열 번호 128)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (9) G G S I S S F G Y Y(서열 번호 132)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S I(서열 번호 134)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E R D Y G D Y F D Y(서열 번호 136)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S N(서열 번호 140)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 142)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y N N W P L T(서열 번호 144)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (10) G F T F S S Y G(서열 번호 148)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G S N K(서열 번호 150)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V(서열 번호 152)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 156)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 158)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P L T(서열 번호 160)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (11) G F T F S T Y G(서열 번호 164)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W Y D G T N K(서열 번호 166)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V(서열 번호 168)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D I S N Y(서열 번호 172)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 174)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y D N I P I T(서열 번호 176)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (12) G F T F S S Y G(서열 번호 180)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S F D E R N K(서열 번호 182)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A S E V G Y S F G H D A F D I(서열 번호 184)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q D I S N Y(서열 번호 188)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; D A S(서열 번호 190)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y D N F P L T(서열 번호 192)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (13) G F T F N N Y A(서열 번호 196)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S G S G D S T(서열 번호 198)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D Q G L Y Y Y G S G S F D Y(서열 번호 200)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 204)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 206)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P F T(서열 번호 208)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (14) G F A F S D S A(서열 번호 212)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I R N K A N R F A T(서열 번호 214)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R H G H D T L T E G Y G M D V(서열 번호 216)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (15) G G T F S S Y T(서열 번호 228)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I I P L Y G T A(서열 번호 230)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A S T L E L R A F D A F D I(서열 번호 232)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (16) G G S I S S G G Y Y(서열 번호 236)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 238)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R A P P Y N W F D Y(서열 번호 240)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (17) G F T F S D Y Y(서열 번호 244)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S N S G N T Q(서열 번호 246)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 T R E G L E Y S S S E P F D Y(서열 번호 248)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (18) G Y T F T A Y Y(서열 번호 252)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N P N N G D T(서열 번호 254)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D D L A A A G I G W F D S(서열 번호 256)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (19) G F T F D D Y A(서열 번호 260)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S W N S E S I(서열 번호 262)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K A P Y S G T Y F E Y F R H(서열 번호 264)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (20) G F T F S S Y G(서열 번호 268)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S Y D G S N K(서열 번호 270)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D D W N Y D A F D I(서열 번호 272)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (21) G G S I S S S G Y Y(서열 번호 276)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 278)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R V D Y G S G S S F D Y(서열 번호 280)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (22) G Y T F T S Y G(서열 번호 284)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I S G F N G R T(서열 번호 286)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D G L E K L G D Y(서열 번호 288)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (23) G F T F S N S G(서열 번호 292)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I W H D G S Y K(서열 번호 294)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D D Y Y A S G T S V D V(서열 번호 296)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S I S S Y(서열 번호 220)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; A A S(서열 번호 222)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q S Y S T P P I T(서열 번호 224)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (24) G Y T F T G Y Y(서열 번호 300)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I N P N S G G T(서열 번호 302)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R E E V D D F W S G Y L D Y(서열 번호 304)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (25) G F A V N G D Y(서열 번호 316)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y S S G N T(서열 번호 318)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R D F P P M S G A D Y(서열 번호 320)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (26) G Y T L T E L S(서열 번호 324)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; F D P E H G K I(서열 번호 326)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A T F Y N W N S Y Y F G M D V(서열 번호 328)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (27) G F T F S S Y A(서열 번호 332)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; V S G S A D I T(서열 번호 334)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A K D K V Y N W N Y G I Y Y G M D V(서열 번호 336)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; (28) G G S I S S S S Y Y(서열 번호 340)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I Y Y S G S T(서열 번호 342)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R Q G R W E R E N F D Y(서열 번호 344)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (29) D E S F S D Y Y(서열 번호 348)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; I T H S G S T(서열 번호 350)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 A R G G D Y G G L L D Y(서열 번호 352)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및 Q S V S S S Y(서열 번호 308)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; G A S(서열 번호 310)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 Q Q Y G S S P W T(서열 번호 312)의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 (a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 다중특이적(예를 들어, 이중특이적, 다중파라토프성 또는 이중파라토프성)이다.

본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)은 인간 적혈구에서 플라스모듐 팔시파룸의 성장을 저해하는 특성; 인간 적혈구에서 플라스모듐 팔시파룸 균주 D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.II 또는 RF7의 성장을 저해하는 특성; 바시긴 폴리펩타이드(basigin polypeptide)에 대한 PfRH5 폴리펩타이드의 결합을 차단하는 특성; 예를 들어 약 6.67 마이크로몰의 농도에서 (예를 들어, 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH: lactate dehydrogenase) 활성에 의해 측정될 때) (비감염된 적혈구에 비해) 각각 열 활성화된 인간 또는 아오투스(Aotus) 원숭이 혈청보다 약 1% 내지 10%(예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10%) 높은 열 불활성화된 인간 또는 아오투스 원숭이 혈청에서 플라스모듐 팔시파룸(예를 들어, 균주 FCR-1/FVO)의 (예를 들어, 시험관내) 최대 성장 저해를 야기하는 특성; 상기 항원 결합 단백질에 노출될 때 예를 들어 시험관내 예를 들어 약 1XEC₅₀로부터 약 110XEC₅₀로 점진적으로 증가하는 항체 농도의 약 45일 후 플라스모듐 팔시파룸(예를 들어, 균주 3D7)에서 PfRH5의 돌연변이를 유도하지 않는 특성; 및/또는 아미노 말단 잔기 M1-Y139가 결여되고 잔기 K140-Q526을 포함하지만, K247-L295가 결여되고 돌연변이 T216A 및 T299A를 갖는 PfRH5에 결합하는 특성 중 하나 이상을 포함하는데, 예를 들어 여기서 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5) 폴리펩타이드에 결합된 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 포함하는 복합체를 포함한다. 예를 들어, PfRH5는 예를 들어 대상체(예를 들어, 인간)의 신체에서 플라스모듐 팔시파룸(예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸의 낭충)과 같은 세포의 표면 상에 있다. 본 발명의 실시형태에서, PfRH5는 적혈구에서의 낭충과 같이 플라스모듐 팔시파룸의 표면 상에 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하는 방법으로서, (a) 상기 항원 결합 단백질의 면역글로불린 사슬을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포(예를 들어, 중국 햄스터 난소 세포)로 도입하는 단계; (b) 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호되는 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (c) 선택적으로 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장하는 배지로부터 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬을 단리시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 이러한 방법의 산물인 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬은 또한 본 발명의 일부를 형성한다.

본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 포함하는 측면 유동 면역-크로마토그래피 항원-검출 시험 스트립은 본 발명의 일부이다. 시험 스트립을 사용하여 대상체 및/또는 대상체의 신체로부터의 혈액 샘플에서 플라스모듐 팔시파룸을 검출하는 방법은 또한 본 발명의 일부이다.

(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 면역글로불린 중쇄 가변 영역의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 (b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 면역글로불린 경쇄 가변 영역의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 폴리펩타이드는 또한 본 발명의 일부를 형성한다. 이러한 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, DNA 또는 RNA)는 또한 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터와 함께 본 발명의 일부를 형성한다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 또는 면역글로불린 사슬 또는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포(예를 들어, 중국 햄스터 난소 세포)를 제공한다.

본 발명은 또한 1종 이상(예를 들어, 1종, 2종, 3종 또는 4종)의 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 선택적으로 추가의 치료제(예를 들어, 항기생충 약물, 클로로퀸, 아토바퀀, 프로구아닐, 아르테메터, 루메판트린, 메플로퀸, 퀴닌, 퀴니딘, 독시사이클린(선택적으로 퀴닌과 조합됨), 클린다마이신, 백신, 항말라리아 백신 또는 RTS,S/AS01)과 회합하여 포함하는 조성물 또는 키트를 제공한다. 본 발명은 또한 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 선택적으로 추가의 치료제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 또는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함하는 용기 또는 주사 장치(예를 들어, 오토인젝터 또는 프리필드 주사기)를 제공한다.

본 발명은 플라스모듐 팔시파룸 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예를 들어, 인간)에서 플라스모듐 팔시파룸 감염(예를 들어, 말라리아)을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 선택적으로 추가의 치료제와 회합된 치료학적 유효량의 본원에 기술된 항-PfFRH5 항원 결합 단백질을 (예를 들어, 예방학적으로) 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명의 실시형태에서, 대상체는 치료의 개시 전에 플라스모듐 팔시파룸 감염(예를 들어, 말라리아)을 겪는 것으로 진단된다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 대상체는 본원에 기재된 바와 같은 측면 유동 시험 스트립을 사용하여 진단된다. 본 발명의 실시형태에서, 대상체는 플라스모듐 팔시파룸으로 감염되지 않지만, 치료학적 유효량의 항-PfRH5 항원 결합 단백질이 예방학적으로 투여되는데, 즉 이러한 감염을 예방하도록 투여된다.

본 발명은 또한 대상체에서 플라스모듐 팔시파룸 감염을 진단하는 방법으로서, 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질을 상기 대상체로부터의 샘플(예를 들어, 혈액)과 접촉시키는 단계 및 샘플에서의 항원 결합 단백질과 PfRH5 폴리펩타이드 사이의 복합체가 검출되면, 대상체가 플라스모듐 팔시파룸으로 감염되는지를 결정하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 상기 복합체는 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 (대상체의 샘플로부터의) PfRH5 폴리펩타이드를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 측면 유동 시험 스트립에서 형성될 수 있다.

본 발명은 대상체(예를 들어, 인간)의 신체에 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 투여하는 방법으로서, 선택적으로 추가의 치료제와 회합된 항원 결합 단백질을 대상체의 신체로 예를 들어 피하로, 정맥내로 또는 근육내로 주사하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 예를 들어 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 및 360으로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원에 기재된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 본원에 기재된 임의의 면역글로불린 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드; 또는 서열 번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357 및 359로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원에 기재된 임의의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.

도 1은 점진적으로 증가하는 항체 압력(1 x EC₅₀ 내지 110 x EC₅₀)의 45일 후 각각의 PfRH5 특이적 항체에 상응하는 PfRH5의 서열 정렬을 보여준다.

플라스모듐 팔시파룸은 암컷 아노펠레스(Anopheles) 모기에 의해 전파될 수 있는 인간에서 말라리아를 야기하는 플라스모듐 종들 중 하나인 원생동물 기생충이다. 이 종에 의해 야기된 말라리아("팔시파룸 말라리아"로 칭해질 수 있음)는 높은 합병증률 및 높은 사망률로 말라리아의 매우 해로운 형태이다. 예를 들어, 문헌[Gardner et al., Genome sequence of the human malaria parasite Plasmodium falciparum, Nature 419(6906): 498―511 (2002)]을 참조한다. 플라스모듐 팔시파룸은 본 발명의 항원 결합 단백질에 감수성을 나타내는 임의의 이의 균주, 예를 들어 D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.II 또는 RF7을 포함한다. "플라스모듐 팔시파룸 감염"은 대상체의 신체에서의 플라스모듐 팔시파룸의 침습 및 조작을 지칭한다. 본 발명은 플라스모듐 팔시파룸 감염의 치료 또는 예방에 효과적인 다양한 항원 결합 단백질을 제공한다.

항-PfRH5 "항원 결합 단백질"은, 단일특이적 또는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적)이든 또는 1가 또는 다가(예를 들어, 이가)이든, PfRH5 폴리펩타이드, 예를 들어 항-PfRH5 항체 또는 항원 결합 단편에 특이적으로 결합하는 단일 폴리펩타이드(예를 들어, ScFv(단쇄 가변 단편)) 또는 하나 초과의 폴리펩타이드의 복합체(예를 들어, 사합체성 IgG 항체)이다. 1가 항원 결합 단백질은 단일 항원 결합 도메인을 갖는 한편, 2가 항원 결합 단백질은 2개의 항원 결합 도메인을 갖는다.

바시긴(BSG, 세포외 기질 금속단백분해효소 유도제, EMMPRIN, CD147)은 PfRH5가 결합하는 적혈구 상의 표적인 폴리펩타이드이다. 본 발명의 실시형태에서, 바시긴의 아미노산 서열은 Uniprot 수탁 번호 Q54A51에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Crosnier et al., Basigin is a receptor essential for erythrocyte invasion by Plasmodium falciparum, Nature. 2011 Nov 9; 480(7378): 534-7]을 참조한다. 본 발명의 실시형태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 PfRH5와 BSG 사이의 결합을 차단한다.

플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5)

플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5)는 망상적혈구 결합 유사 단백질(RBL)이라 칭해지는 적혈구 리간드의 슈퍼 패밀리의 구성원이다. PfRH5가 플라스모듐 팔시파룸 감염의 혈액기 성장에 필수적이라는 것을 증거가 제시한다. PfRH5는 적혈구에 결합하고, 적혈구 침습의 종 트로피즘에 연루된다. 예를 들어, 문헌[Bustamante et al., Vaccine. 2013 Jan 2; 31(2): 373―379]을 참조한다.

본 발명의 실시형태에서, PfRH5는 하기 아미노산 서열을 포함한다:

MIRIKKKLIL TIIYIHLFIL NRLSFENAIK KTKNQENNLT LLPIKSTEEE KDDIKNGKDI

KKEIDNDKEN IKTNNAKDHS TYIKSYLNTN VNDGLKYLFI PSHNSFIKKY SVFNQINDGM

LLNEKNDVKN NEDYKNVDYK NVNFLQYHFK ELSNYNIANS IDILQEKEGH LDFVIIPHYT

FLDYYKHLSY NSIYHKSSTY GKCIAVDAFI KKINETYDKV KSKCNDIKND LIATIKKLEH

PYDINNKNDD SYRYDISEEI DDKSEETDDE TEEVEDSIQD TDSNHTPSNK KKNDLMNRTF

KKMMDEYNTK KKKLIKCIKN HENDFNKICM DMKNYGTNLF EQLSCYNNNF CNTNGIRYHY

DEYIHKLILS VKSKNLNKDL SDMTNILQQS ELLLTNLNKK MGSYIYIDTI KFIHKEMKHI

FNRIEYHTKI INDKTKIIQD KIKLNIWRTF QKDELLKRIL DMSNEYSLFI TSDHLRQMLY

NTFYSKEKHL NNIFHHLIYV LQMKFNDVPI KMEYFQTYKK NKPLTQ

(서열 번호 361)

N 말단 잔기 1번 내지 139번 및 잔기 247번 내지 295번이 결여되고, 돌연변이 T216A 및 T299A, 및 C 말단 His₆ 태그를 갖는 폴리펩타이드 "PfRH5ΔNL.6his"(PfRH5(K140-Q526; del M1-Y139; del K247-L295; T216A; T299A))는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드와 함께 본 발명의 일부를 형성한다. 본 발명의 실시형태에서, PfRH5ΔNL.6his 폴리펩타이드는 서열 번호 362에 기재된 아미노산 서열을 포함한다:

KNVNFLQYHFKELSNYNIANSIDILQEKEGHLDFVIIPHYTFLDYYKHLSYNSIYHKSSTYGKYIAVDAFIKKINEAYDKVKSKCNDIKNDLIATIKKLEHPYDINNMNRAFKKMMDEYNTKKKKLIKCIKNHENDFNKICMDMKNYGTNLFEQLSCYNNNFCNTNGIRYHYDEYIHKLILSVKSKNLNKDLSDMTNILQQSELLLTNLNKKMGSYIYIDTIKFIHKEMKHIFNRIEYHTKIINDKTKIIQDKIKLNIWRTFQKDELLKRILDMSNEYSLFITSDHLRQMLYNTFYSKEKHLNNIFHHLIYVLQMKFNDVPIKMEYFQTYKKNKPLTQHHHHHH

(서열 번호 362). 본 발명의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 결정화된 형태 또는 비결정화된 형태이다.

항체 및 항원 결합 단편

본 발명은 PfRH5 단백질 또는 이의 항원 단편에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 단편과 같은 항원 결합 단백질을 제공한다. 본 발명의 면역글로불린 사슬은 본원에서 실시예 1에 표 1-1에 기재되어 있다.

용어 "항체"는, 본원에 사용된 바와 같이, 이황화 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)인 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 면역글로불린 분자(즉, "완전 항체 분자"), 및 이의 다합체(예를 들어, IgM), 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2를 지칭한다. 각각의 중쇄(HC)는 중쇄 가변 영역("HCVR" 또는 "V_H")(예를 들어, 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어짐)을 포함한다. 각각의 경쇄(LC)는 경쇄 가변 영역("LCVR 또는 "V_L")(예를 들어, 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 이루어진다. V_H 영역 및 V_L 영역은, 프레임워크 영역(FR: framework region)이라고 명명되는 보다 보존된 영역이 개재된, 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)이라고 명명되는 초가변 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 아미노 말단에서 카복시 말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다. 본 발명의 소정의 실시형태에서, 항체(또는 이의 항원 결합 단편)의 FR은 인간 생식선 서열과 동일하거나, 자연적으로 또는 인위적으로 변형된다.

전형적으로, 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존된 프레임워크 영역(FR) 내에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)이라고도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. 일반적으로, N 말단에서 C 말단으로, 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 각각의 도메인에 대한 아미노산의 정렬은 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991)]; 문헌[Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75]; 문헌[Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616]; 문헌[Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917] 또는 문헌[Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883]의 정의에 따른다.

본 발명은 항체 및 이의 항원 결합 단편과 같은 단일클론 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 및 복수의 단리된 단일클론 항원 결합 단백질을 포함하는 단일클론 조성물을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균일한 항체의 집단을 지칭하고, 즉 그 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 조성물에서의 "복수"의 이러한 단일클론 항체 및 단편은 예를 들어 마우스 또는 인간과 같은 숙주 유기체에서의 혈액에서 자연에서 보통 발생하는 농도보다 높은 동일한(즉, 상기 기재된 바대로, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일한) 항체 및 단편의 농도를 지칭한다.

본 발명의 실시형태에서, 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 IgA(예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4) 또는 IgM의 유형의 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어 카파 또는 람다 유형의 경쇄 불변 도메인을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은, 용어 "인간" 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 항원 결합 단편은, 인간 세포에서든 또는 비인간 세포, 예를 들어 마우스 세포로 그래프팅되든, 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체 및 단편을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제US8502018호, 미국 특허 제US6596541호 또는 미국 특허 제US5789215호를 참조한다. 본 발명의 인간 mAb는 예를 들어 CDR, 특히 CDR3에서 인간 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이생성 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "인간 항체"는 다른 포유류 종(예를 들어, 마우스)의 생식선에서 유래된 CDR 서열이 인간 FR 서열에 그래프팅된 mAb를 포함하도록 의도되지 않는다. 상기 용어는 비인간 포유류에서 또는 비인간 포유류의 세포에서 재조합적으로 생산된 항체를 포함한다. 상기 용어는 인간 대상체로부터 단리되거나 인간 대상체에서 생성된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다.

본 발명은 항-PfRH5 키메라 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 이의 사용 방법을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "키메라 항체"는 제1 항체로부터의 가변 도메인 및 제2 항체로부터의 불변 도메인을 갖는 항체이고, 여기서 제1 항체 및 제2 항체는 상이한 종 유래이다. (예를 들어, 미국 특허 제US4816567호; 및 문헌[Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855]을 참조한다).

용어 "재조합" 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어 DNA 스플라이싱 및 형질전환 발현을 포함하는 재조합 DNA 기술로서 당해 분야에 공지된 기술 또는 방법에 의해 생성되거나 발현되거나 단리되거나 수득된 분자를 지칭한다. 상기 용어는 비인간 포유류(형질전환 비인간 포유류, 예를 들어 형질전환 마우스를 포함) 또는 세포(예를 들어, CHO 세포) 발현 시스템에서 발현되거나 재조합 복합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체를 포함한다.

본원에 개시된 재조합 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 항원 결합 단편은 E. 콜라이/T7 발현 시스템에서 또한 생산될 수 있다. 이 실시형태에서, 본 발명의 항-PfRH5 항체 면역글로불린 분자(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)를 암호화하는 핵산은 pET 기반 플라스미드로 삽입되고, E. 콜라이/T7 시스템에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 숙주 세포(예를 들어, E. 콜라이, 예컨대 BL21 또는 BL21DE3과 같은 박테리아 숙주 세포)에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역글로불린 사슬을 발현시키는 방법으로서, T7 프로모터에 작동 가능하게 연결된 면역글로불린 사슬을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 또한 포함하는 세포에서 T7 RNA 중합효소를 발현시키는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, E. 콜라이와 같은 박테리아 숙주 세포는 lac 프로모터에 작동 가능하게 연결된 T7 RNA 중합효소 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 중합효소 및 사슬의 발현은 숙주 세포와 IPTG(이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노사이드)의 항온처리에 의해 유도된다. 미국 특허 제US4952496호 및 미국 특허 제US5693489호 또는 문헌[Studier & Moffatt, Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol. 1986 May 5;189(1): 113-30]을 참조한다.

당해 분야에 공지된 재조합 항체를 생산하기 위한 여러 방법이 있다. 항체의 재조합 생산을 위한 방법의 하나의 예는 미국 특허 제US4816567호에 개시되어 있다.

형질전환은 숙주 세포로 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의할 수 있다. 포유류 세포로 이종성 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 덱스트란 매개된 형질주입, 인산칼슘 침전, 폴리브렌 매개된 형질주입, 원형질체 융합, 전기천공, 리포솜에서의 폴리뉴클레오타이드(들)의 캡슐화, 입자사출총(biolistic) 주사 및 핵으로의 DNA의 직접 미량주사를 포함한다. 또한, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유류 세포로 도입될 수 있다. 세포를 형질전환하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호 및 제4,959,455호를 참조한다.

벡터에 있고/있거나 프로모터와 같은 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결된 (예를 들어, 서열 번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357 및 359에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는) 본원에 기재된 면역글로불린을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 본 발명의 일부를 형성한다. 프로모터는 예를 들어 CMV 프로모터(예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스(CMV: cytomegalovirus) 주요 즉시 초기(MIE: major immediate-early) 프로모터 또는 마우스 CMV 프로모터) 또는 SV40 프로모터(예를 들어, SV40 초기 프로모터)일 수 있다. 벡터는 숙주 세포에서 이소성으로 유지되거나 숙주 염색체로 통합될 수 있는 플라스미드(예를 들어, 원형 플라스미드 또는 선형화 플라스미드) 또는 바이러스 벡터일 수 있다. 이러한 숙주 세포는 본 발명의 일부를 형성한다.

폴리뉴클레오타이드는 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 있을 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치면 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결"된 항상은 아니지만 연결된 DNA 서열이 인접하고, 분비 리더의 경우 인접하며 리딩 상에 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접할 필요는 없다.

따라서, 본 발명은 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하기 위한 재조합 방법으로서, (i) 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2와 같은 항원 결합 단백질의 면역글로불린 경쇄 및/또는 면역글로불린 중쇄를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 서열 번호 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113, 121, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 305, 313, 321, 329, 337, 345 및/또는 353의 임의의 하나 이상에서의 뉴클레오타이드 서열을 포함)를 도입하는 단계(예를 들어, 여기서 폴리뉴클레오타이드는 벡터에 있고/있거나, 숙주 세포 염색체로 통합되고/되거나, 프로모터에 작동 가능하게 연결됨); (ii) 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호되는 조건 하에 숙주 세포(예를 들어, CHO 또는 피치아 또는 피치아 파스토리스)를 배양하는 단계 및 (iii) 선택적으로 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장하는 배지로부터 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 단편) 또는 사슬을 단리시키는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 1개 초과의 면역글로불린 사슬을 포함하는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편), 예를 들어 2개의 중쇄 면역글로불린 및 2개의 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체를 제조하는 경우, 단일 숙주 세포 내에서 이 사슬의 동시발현은 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)을 형성하도록 예를 들어 이러한 사슬이 분비되면 세포 밖에서 또는 세포 표면 상에서 또는 세포 내에서 사슬의 회합을 초래한다. 본 발명의 방법은 오직 중쇄 면역글로불린 또는 오직 경쇄 면역글로불린 또는 둘 다(예를 들어, 성숙 단편 및/또는 이의 가변 도메인을 포함하여 본원에 기재된 것들 중 임의의 것)가 세포에서 발현되는 것들을 포함한다. 이러한 단쇄는 예를 들어 이러한 사슬을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 발현에서 중간체로서 유용하다. 예를 들어, 본 발명은 또한 이러한 제조 방법 및 선택적으로 본원에 기재된 정제 방법의 생성물인 서열 번호 1 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 313, 321, 329, 337, 345 또는 353에 기재된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 중쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함) 및 서열 번호 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217 또는 305에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함)을 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 상기 방법의 생성물은 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 V_H 및 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 V_L을 포함하는 항체 또는 단편인 항-PfRH5 항원 결합 단백질이다.

본 발명의 실시형태에서, 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법은 예를 들어 칼럼 크로마토그래피, 침전, 및/또는 여과에 의해 항원 결합 단백질을 정제하는 방법을 포함한다. 이러한 방법의 생성물은 또한 본 발명의 일부를 형성한다.

포유류 세포를 포함하는 진핵생물 및 원핵생물 숙주 세포는 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 발현을 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 이러한 숙주 세포는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 미국 배양 협회(ATCC: American Type Culture Collection)로부터 입수 가능하다. 이 숙주 세포는 특히 중국 햄스터 난소(CHO: Chinese hamster ovary) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장(BHK: baby hamster kidney) 세포, 원숭이 신장 세포(COS: monkey kidney cell), 인간 간세포 암종 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포, HEK-293 세포 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 포유류 숙주 세포는 인간, 마우스, 래트, 개, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 세포주는 곤충 세포주(예를 들어, 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 또는 트리초풀시아 니(Trichoplusia ni)), 양서류 세포, 박테리아 세포, 식물 세포 및 진균 세포이다. 진균 세포는 예를 들어 피치아(Pichia), 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 피치아 핀란디카(Pichia finlandica), 피치아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피치아 코클라마에(Pichia koclamae), 피치아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피치아 미누타(Pichia minuta)(오가타에아 미누타(Ogataea minuta), 피치아 린드네리(Pichia lindneri)), 피치아 오푼티아에(Pichia opuntiae), 피치아 써모톨러란스(Pichia thermotolerans), 피치아 살릭타리아(Pichia salictaria), 피치아 구에르쿰(Pichia guercuum), 피치아 피페리(Pichia pijperi), 피치아 스티프티스(Pichia stiptis), 피치아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피치아 종(Pichia sp.), 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 종(Saccharomyces sp.), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스 종(Kluyveromyces sp.), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae), 트리초데르마 레세이(Trichoderma reesei), 크리소스포륨 루크노웬스(Chrysosporium lucknowense), 푸사륨 종(Fusarium sp.), 푸사륨 그라미늄(Fusarium gramineum), 푸사륨 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)를 포함하는 효모 및 사상균 세포를 포함한다. 본 발명은 항원 결합 단백질, 예컨대 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2; 또는 이의 면역글로불린 사슬 또는 사슬들을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포)를 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2에 의해 결합된 PfRH5를 발현하는 플라스모듐 팔시파룸 세포를 포함하고, 예를 들어 여기서 세포는 대상체의 신체에 있거나 시험관내 있다.

용어 "특이적으로 결합한다"는 예를 들어 25℃ 또는 37℃에서의 실시간 무표지 생체층 간섭계법 검정, 예를 들어 Octet® HTX biosensor에 의해 또는 표면 플라스몬 공명, 예를 들어 BIACORE™에 의해 또는 ELISA(효소 결합 면역흡착 검정)에 의해 측정될 때 적어도 약 10^-8 M의 K_D(예를 들어, 본원에서 표 5-1 또는 표 5-2에 기재된 임의의 K_D)로 표현된 항원, 예컨대 PfRH5 단백질(예를 들어, PfRH5ΔNL.6his)에 결합 친화도를 갖는 항원 결합 단백질(예를 들어, mAb)을 지칭한다. 본 발명은 PfRH5 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 본원에서 표 5-1 또는 표 5-2에 기재된 바와 같은 K_a, K_d 및/또는 t_1/2를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은, 항체 또는 항원 결합 단백질의 용어 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 천연 발생하거나, 효소적으로 수득 가능하거나, 합성되거나, 유전적으로 조작된 임의의 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항원 결합 단편의 비제한적인 예는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')₂ 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 단편 및 (vii) 구속된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 FR3, FR4 및 CDR-H3 또는 CDR-L3을 포함)를 포함한다. 다른 조작된 분자, 예컨대 도메인 특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인 결실 항체, 키메라 항체, CDR 그래프팅 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디 및 소형 모듈식 면역약제(SMIP: small modular immunopharmaceuticals)는 또한 본원에 사용된 바와 같은 "항원 결합 단편"의 표현 내에 포함된다. 본 발명의 실시형태에서, 항원 결합 단편은 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2의 3개 이상의 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 및/또는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함한다.

항체의 항원 결합 단편은 본 발명의 실시형태에서 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성을 가질 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나 하나 이상의 프레임워크 서열과 프레임에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 회합된 V_H 도메인을 갖는 항원 결합 단편에서, V_H 도메인 및 V_L 도메인은 서로에 대해 임의의 적합한 배열로 배치될 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이합체성이고, V_H - V_H, V_H - V_L 또는 V_L - V_L 이합체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 단량체성 V_H 도메인 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

특정 실시형태에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 내에 확인될 수 있는 가변 도메인 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적인 구성은 (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L-C_L을 포함한다. 상기 나열된 임의의 예시적인 구성을 비롯한 가변 도메인 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 도메인 및 불변 도메인은 서로에 직접 연결될 수 있거나, 완전 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 적어도 2개(예를 들어, 5개, 10개, 15개, 20개, 40개, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있고, 이는 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 도메인 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성 연결 또는 반가요성 연결을 초래한다. 게다가, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편은 서로 및/또는 하나 이상의 단량체성 V_H 도메인 또는 V_L 도메인과 (예를 들어, 이황화 결합(들)에 의해) 비공유 결합된 상기 나열된 임의의 가변 도메인 및 불변 도메인 구성의 동종이합체 또는 이종이합체(또는 다른 다합체)를 포함할 수 있다.

항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 및 항원 결합 단편)은 단일특이적 또는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적)일 수 있다. 다중특이적 항원 결합 단백질은 본원에 추가로 기재되어 있다.

본 발명의 실시형태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)은 모이어티, 예컨대 치료학적 모이어티("면역접합체"), 예컨대 항말라리아 약물, 제2 항-PfRH5 항체, 또는 플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하는 데 유용한 임의의 다른 치료학적 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, 하기를 참조한다.

본 발명은 또한 PfRH5 폴리펩타이드 또는 이의 항원성 단편 및/또는 항-PfRH5 항체 또는 단편에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 검출 가능하게 표지된 2차 항체)과 복합체화된 본원에 기재된 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 복합체를 제공한다. 본 발명의 실시형태에서, 복합체는 시험관내 있거나(예를 들어, 고체 기질에 부동화됨), 대상체의 신체에 있다. 본 발명의 실시형태에서, PfRH5는 고체 기질(예를 들어, 측면 유동 시험 스트립)에 부동화되거나, 플라스모듐 팔시파룸과 같은 세포의 표면에 부동화된다. 불용성 매트릭스 물질(예를 들어, 유리 또는 폴리사카라이드, 예컨대 아가로스 또는 세파로스, 예를 들어 비드 또는 이의 다른 입자)에 공유 결합된 부동화된 항-PfRH5 항체 및 이의 항원 결합 단편은 또한 본 발명의 일부이고, 선택적으로 여기서 부동화된 항체는 PfRH5 또는 이의 항원성 단편 또는 2차 항체 또는 이의 단편과 복합체화된다.

"단리된" 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편), 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 및 벡터는 세포 또는 이것이 생산된 세포 배양물로부터의 다른 생물학적 분자를 적어도 부분적으로 함유하지 않는다. 이러한 생물학적 분자는 핵산, 단백질, 다른 항체 또는 항원 결합 단편, 지질, 탄수화물 또는 다른 재료, 예컨대 세포 부스러기 및 성장 배지를 포함한다. 단리된 항원 결합 단백질은 숙주 세포로부터의 생물학적 분자와 같은 발현 시스템 성분 또는 이의 성장 배지를 적어도 부분적으로 추가로 함유하지 않을 수 있다. 일반적으로, 용어 "단리된"은 이러한 생물학적 분자의 완전한 부재 또는 물, 완충액 또는 염의 부재 또는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)을 포함하는 약제학적 제제의 성분을 지칭하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명은 본 발명의 항원 결합 단백질(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)과 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 아미노산 M1-Y139가 결여되고 잔기 K140-Q526을 포함하지만 K247-L295가 결여되고 돌연변이 T216A 및 T299A(선택적으로 HisX6 태그를 포함)를 갖는 PfRH5 변이체 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질(예를 들어, PfRH5ΔNL.6his)을 포함한다.

용어 "에피토프"는 파라토프(paratope)로 공지된 항체 분자의 가변 영역과 같은 항원 결합 단백질의 특정 항원 결합 부위와 상호작용하는 (예를 들어, PfRH5 폴리펩타이드 상의) 항원 결정부위를 지칭한다. 단일 항원은 하나 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 영역에 결합할 수 있고, 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 용어 "에피토프"는 또한 B 세포 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위 및/또는 항체에 의해 결합된 항원의 영역을 지칭할 수 있다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 정의될 수 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 하위집단이며, 상호작용의 친화도에 직접적으로 기여하는 잔기를 갖는다. 에피토프는 선형적 또는 입체구조적일 수 있고, 즉 비선형 아미노산으로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설포닐기와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹화인 결정부위를 포함할 수 있고, 소정의 실시형태에서, 특정 3차원 구조 특징 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다.

항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드의 에피토프를 결정하는 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석(문헌[Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63]), 펩타이드 절단 분석, 결정학 연구 및 NMR 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법을 사용할 수 있다(문헌[Tomer (2000) Prot. Sci. 9: 487-496]). 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드)이 상호작용하는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 확인하기 위해 사용될 수 있는 다른 방법은 질량 분석법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 예를 들어, 문헌[Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259]; 문헌[Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A]을 참조한다.

본 발명은 PfRH5, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 변이체 PfRH5 에피토프에 대한 결합에 대해 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2와 경쟁하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "경쟁한다"는 항원(예를 들어, PfRH5 또는 PfRH5ΔNL.6his)에 결합하고, 항원에 대한 다른 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 결합을 저해하고 차단하는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 지칭한다. 상기 용어는 또한 배열 둘 다에서의 항체, 즉 제2 항체에 결합하고 이의 결합을 차단하는 제1 항체 및 그 반대상황의 것과 같은 2개의 항원 결합 단백질 사이의 경쟁을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제1 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체) 및 제2 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)은 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 제1 항원 결합 단백질 및 제2 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)은 상이하지만 예를 들어 중첩하는 에피토프에 결합할 수 있고, 여기서 하나의 결합은 예를 들어 입체 장애를 통해 제2 항체의 결합을 저해하거나 차단한다. 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체) 사이의 경쟁은 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어 실시간 무표지 생체층 간섭계법 검정에 의해 측정될 수 있다. 본 발명의 실시형태에서, 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 제2 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체) 사이의 경쟁은 제2 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)과 복합체화된 PfRH5 단백질 또는 이의 단편에 결합하는 (PfRH5 단백질과 초기에 복합체화되지 않은) 부동화된 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)의 능력을 측정하여 결정된다. 비복합체화된 PfRH5 단백질에 비해 복합체화된 PfRH5 단백질에 결합하는 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)의 능력의 감소는 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 제2 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)이 경쟁한다는 것을 나타낸다. 경쟁의 정도는 결합의 감소의 백분율로 표현될 수 있다. 이러한 경쟁은 예를 들어 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.)에서의 실시간 무표지 생체층 간섭계법 검정, ELISA(효소 결합 면역흡착 검정) 또는 SPR(표면 플라스몬 공명)을 사용하여 측정될 수 있다.

항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 단일클론 항체 (mAb)) 사이의 결합 경쟁은 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.)에서의 실시간 무표지 생체층 간섭계법 검정을 이용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 2개의 항-PfRH5 단일클론 항체 사이의 경쟁을 결정하기 위해, 항-hFc 항체 코팅된 Octet 바이오센서 선단(Pall ForteBio Corp., 18-5060호)을 항-PfRH5 mAb(이하에 "mAb1"이라 칭함)의 용액에 침지하여 항-PfRH5 mAb는 이 선단에 처음 포획될 수 있다. 차단을 위한 양성 대조군으로서, 항체 포획된 바이오센서 선단은 이후 차단 mAb의 용액으로 침지하여 공지된 차단 아이소타입 대조군 mAb(이하에 "차단 mAb"라 칭해짐)로 포화될 수 있다. mAb2가 mAb1과 경쟁하는지를 결정하기 위해, 바이오센서 선단은 이후 후속하여 소정의 기간 동안 예비항온처리된 PfRH5 폴리펩타이드 및 제2 항-PfRH5 mAb(이하에 "mAb2"라 칭함)의 복합체화된 용액에 침지될 수 있고, PfRH5 폴리펩타이드에 대한 mAb1의 결합이 결정될 수 있다. 실험의 모든 단계 사이에서 바이오센서 선단을 완충제에서 세척할 수 있다. 실험 과정 동안 실시간 결합 반응은 모니터링되고, 모든 단계의 종료 시에 결합 반응은 기록될 수 있다.

본 발명의 실시형태에서, 경쟁 검정은 바이오센서 플랫폼(예를 들어, Octet HTX)에 수행되고, 여기서 하나의 항체는 센서 선단에 결합된 PfRH5 폴리펩타이드에 결합되고/복합체화되고, PfRH5에 대한 제2 항체의 결합이 이후 평가된다. 예비 복합체화된 PfRH5 폴리펩타이드에 결합하는 제2 항체의 능력이 평가될 수 있고, (예를 들어, 제1 항체와 복합체화되지 않은 PfRH5에 대한) 제2 항체의 결합의 감소 또는 제2 항체의 결합의 부재가 검출되면, 제1 항체 및 제2 항체는 PfRH5 폴리펩타이드 결합에 경쟁하는지가 결정된다. 본 발명의 실시형태에서, 검정은 예를 들어 완충액(예를 들어, HEPES), 염(예를 들어, NaCl), EDTA, 계면활성제(예를 들어, Tween-20) 및/또는 비특이적 단백질(예를 들어, 소 혈청 알부민)의 존재 하에 25℃ 및 pH 약 7, 예를 들어 7.4에서 수행된다. 본 발명의 실시형태에서, PfRH5 변이체(예를 들어, PfRH5ΔNL.6his)에 대한 결합은 경쟁 검정에서 평가되고, 예를 들어 여기서 변이체는 아미노산 M1-Y139가 결여되고 잔기 K140-Q526을 포함하지만 K247-L295가 결여되고 돌연변이 T216A 및 T299A(선택적으로 HisX6 태그를 포함)를 갖는 PfRH5이다. HisX6 또는 His₆ 태그는 HHHHHH(서열 번호 365)를 포함하는 태그이다.

전형적으로, 여러 방식으로 변형된 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 PfRH5에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하고, 예를 들어 이의 PfRH5 결합 활성이 몰 기준으로 표현될 때 (모 항체와 비교할 때) 이 활성의 적어도 10%를 보유한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 모 항체로서 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 이상의 PfRH5 결합 친화도를 보유한다. 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 이의 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환(항체의 "보존적 변이체" 또는 "기능 보존된 변이체"라 칭해짐)을 포함할 수 있음이 또한 의도된다.

본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 아미노산 서열 및 뉴클레오타이드 서열이 본원에 구체적으로 기재된 면역글로불린 사슬의 변이체를 포함할 수 있다.

면역글로불린 사슬(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2 V_H, V_L, HC 또는 LC)과 같은 폴리펩타이드의 "변이체"는 비교가 BLAST 알고리즘에 의해 수행될 때 본원에 기재된 기준 아미노산 서열(예를 들어, 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346, 354, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306)과 적어도 약 70% 내지 99.9%(예를 들어, 70%, 72%, 74%, 75%, 76%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%) 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭하고; 여기서 알고리즘의 매개변수는 각각의 기준 서열(예를 들어, 예상 한계치: 10; 워드 크기: 3; 쿼리 범위의 최대 일치: 0; BLOSUM 62 행렬; 갭 비용: 존재 11, 연장 1; 추가 조성 점수 행렬 조정)의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열 사이의 가장 큰 일치를 제공하도록 선택된다.

폴리뉴클레오타이드의 "변이체"는 비교가 BLAST 알고리즘에 의해 수행될 때 본원에 기재된 기준 뉴클레오타이드 서열(예를 들어, 서열 번호 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 313, 321, 329, 337, 345, 353, 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217 또는 305)과 적어도 약 70% 내지 99.9%(예를 들어, 70%, 72%, 74%, 75%, 76%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%) 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 지칭하고; 여기서 알고리즘의 매개변수는 각각의 기준 서열(예를 들어, 예상 한계치: 10; 워드 크기: 28; 쿼리 범위의 최대 일치: 0; 일치/비일치 점수: 1, -2; 갭 비용: 선형)의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열 사이의 가장 큰 일치를 제공하도록 선택된다.

본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편은 본 발명의 실시형태에서 아미노산 서열이 본원에, 예를 들어 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 면역글로불린 중쇄와 적어도 70%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 아미노산 서열이 본원에, 예를 들어 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 면역글로불린 경쇄와 적어도 70%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.

또한, 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 예를 들어 미스센스 돌연변이(예를 들어, 보존적 치환), 비센스 돌연변이, 결실 또는 삽입과 같은 1개 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개)의 돌연변이를 제외한 본원에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 변이체 면역글로불린 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하지만 하나 이상의 이러한 돌연변이를 갖는 면역글로불린 경쇄 변이체 및/또는 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하지만 하나 이상의 이러한 돌연변이를 갖는 면역글로불린 중쇄 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 1개 이상(예를 들어, 1개 또는 2개 또는 3개)의 이러한 CDR이 본원에 구체적으로 기재된 서열에 비해 하나 이상의 이러한 돌연변이(예를 들어, 보존적 치환)를 갖는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 변이체 및/또는 1개 이상(예를 들어, 1개 또는 2개 또는 3개)의 이러한 CDR이 본원에 구체적으로 기재된 서열에 비해 하나 이상의 이러한 돌연변이(예를 들어, 보존적 치환)를 갖는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 변이체를 포함한다.

본 발명은 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9%의 서열 동일성 또는 유사성으로 본원에 기재된 하나 이상의 변이체 CDR(예를 들어, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3 중 임의의 하나 이상)을 포함하는 변이체 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 이의 항체 또는 항원 결합 단편을 추가로 제공한다.

본 발명의 실시형태는 또한 본원에 구체적으로 기재된 상응하는 V_H, V_L, HC 또는 LC의 아미노산 서열과 70% 이상(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99%)의 전체 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이체 면역글로불린 V_H 및 V_L; 또는 HC 및 LC를 포함하는 항-PfRH5 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하지만, 여기서 이러한 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3은 변이체가 아니고 본원에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 이러한 실시형태에서, 이러한 항원 결합 단백질 내의 CDR은 자체가 변이체가 아니다.

"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 폴리펩타이드에서의 아미노산이 유사한 특징(예를 들어, 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 골격 구성 및 경질성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 1회 이상 치환된 변이체를 지칭한다. 이러한 변화는 항체 또는 단편의 생물학적 활성을 상당히 파괴하지 않으면서 흔히 제조될 수 있다. 당업자는 일반적으로 폴리펩타이드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 실질적으로 생물학적 활성을 변경하지 않는다는 것을 인식한다(예를 들어, 문헌[Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4^th Ed.)]을 참조한다). 또한, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 상당히 덜 파괴할 것이다. 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 아미노산 서열을 갖지만 하나 이상의 보존적으로 변형된 변이를 갖는 면역글로불린 사슬을 포함할 수 있다.

유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 군의 예는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-히드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 군은 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존적 대체는 문헌[Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443 45]에 개시된 PAM250 로그 유사-행렬에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다.

본 발명의 실시형태에서, 예를 들어 본원에 기재된 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 면역글로불린 사슬을 포함하는 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 하기 기능적 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 예를 들어, 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성에 의해 측정될 때 ((예를 들어, 항-PfRH5 항원 결합 단백질이 96시간 동안 세포와 항온처리될 때) 비감염된 적혈구에 비해 예를 들어 약 51 내지 약 69%, 또는 100% 이하의 속도로) 인간 적혈구에서 플라스모듐 팔시파룸의 시험관내 또는 생체내 성장을 저해하는 특성(예를 들어, 여기서 항원 결합 단백질은 H1H29100P, H1H29104P, H1H29127P, H1H29143P 또는 이러한 단백질의 2개의 임의의 이들의 조합임)(예를 들어, 표 2-1 참조).

ㆍ 예를 들어, 클로로퀸 포스페이트(CQ)의 존재 하에 (예를 들어, 약 4.81nM 또는 6.58 nM의 농도에서) 예를 들어, CQ의 부재 하에 약 34% 내지 61%, 4.81 nM CQ의 존재 하에 약 32% 내지 51% 또는 6.58 nM CQ의 존재 하에 약 20% 내지 75%의 속도에서 예를 들어 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성에 의해 측정될 때 인간 적혈구에서 시험관내 또는 생체내 플라스모듐 팔시파룸 균주 3D7 또는 7G8의 성장을 저해하는 특성.

ㆍ 예를 들어, 본원에서 표 5-1 및 표 5-2에 기재된 것처럼 25℃에서 약 4.72 pM 내지 약 1.67 nM 및/또는 37℃에서 약 1.10 pM 내지 약 1.10 nM의 K_D로 PfRH5 폴리펩타이드 또는 이의 항원 단편, 예를 들어 PfRH5ΔNL.6his에 결합하는 특성.

ㆍ 비감염된 적혈구에 비해 표 4-2에 기재된 바와 같은 속도에서 예를 들어 약 666.67 nM의 농도에서 예를 들어 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성에 의해 측정될 때 인간 적혈구에서 시험관내 또는 생체내 플라스모듐 팔시파룸 균주 D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.II 또는 RF7의 성장을 저해하는 특성.

ㆍ 바시긴 폴리펩타이드에 대한 PfRH5 폴리펩타이드(예를 들어, 약 0.5nM 또는 2.0nM의 농도에서의 예를 들어 PfRH5ΔNL.6his)의 결합을 차단하는(예를 들어, 약 1%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100%만큼), 예를 들어 고체 매트릭스(예를 들어, ELISA 플레이트)에 결합된 바시긴에 대한 PfRH5의 결합을 차단하는 특성(여기서, 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 약 100 nM으로 존재함). 예를 들어, 여기서 바시긴은 예를 들어 C 말단 링커, DIEGRMD(서열 번호 363), 이어서 인간 IgG1의 일부(Pro100-Lys330) 및 6X 히스티딘 태그와 발현된 이의 아미노산 Thr25-His205이었다.

ㆍ 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정될 때 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2와 동일한 에피토프에 결합하고, 예를 들어 아미노 말단 잔기 M1-Y139가 결여되고 잔기 K140-Q526을 포함하지만 K247-L295가 결여되고 돌연변이 T216A 및 T299A를 갖고, 예를 들어 C 말단 헥사히스티딘 태그를 추가로 포함하는 PfRH5(PfRH5ΔNL.6his)에 결합하는 특성.

ㆍ PfRH5 폴리펩타이드, 예를 들어 PfRH5ΔNL.6his에 대한 결합에 대해 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2;H1H29209P2, H1H29214P2; 또는 H1H29215P2와 경쟁하는 특성.

본 발명은 신체가 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편), 예컨대 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2를 포함하는 비인간 영장류(NHP: non-human primate)(예를 들어, 아오투스 원숭이와 같은 원숭이)를 포함한다. 예를 들어, 비인간 영장류는 항원 결합 단백질이 주사될 수 있거나, 단백질을 발현하도록 조작될 수 있다. 본 발명의 실시형태에서, 비인간 영장류는 아오투스 난사이마아에(Aotus nancymaae)이다. 본 발명의 실시형태에서, 비인간 영장류(예를 들어, 원숭이)는 플라스모듐 팔시파룸(예를 들어, 균주 3D7)으로 감염된다.

본 발명은 임의의 검출 가능한 정도로 PfRH5의 활성을 저해하는 분자를 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 "중화시키는 것" 또는 "길항시키는 것"을 포함한다. 예를 들어, 항-PfRH5 항원 결합 단백질을 중화시키는 것은 라스모듐 팔시파룸 성장을 저해하고/하거나, PfRH5/BSG 결합을 차단할 수 있다.

"H1H29089P"; "H1H29094P"; "H1H29100P"; "H1H29104P"; "H1H29106P"; "H1H29109P"; "H1H29125P"; "H1H29127P"; "H1H29131P"; "H1H29134P"; "H1H29138P"; "H1H29141P"; "H1H29143P"; "H1H29146P2"; "H1H29147P2"; H1H29149P2"; "H1H29151P2"; "H1H29163P2"; "H1H29166P2"; "H1H29171P2"; "H1H29179P2"; "H1H29183P2"; "H1H29187P2"; "H1H29192P2"; "H1H29196P2"; "H1H29198P2"; "H1H29207P2"; "H1H29209P2"; "H1H29214P2"; 또는 "H1H29215P2"는 본원에서 표 1-1에 기재되거나; 이의 CDR을 포함하는 V_H(CDR-H1(또는 이의 변이체), CDR-H2(또는 이의 변이체) 및 CDR-H3(또는 이의 변이체)) 및/또는 이의 CDR을 포함하는 V_L(CDR-L1(또는 이의 변이체), CDR-L2(또는 이의 변이체) 및 CDR-L3(또는 이의 변이체))을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역(V_H; 또는 이의 변이체) 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역(V_L; 또는 이의 변이체)을 포함하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편(다중특이적 항원 결합 단백질을 포함)을 지칭하고, 예를 들어 여기서 면역글로불린 사슬, 가변 영역 및/또는 CDR은 하기에 기재된 특정 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, V_H는 불변 중쇄 면역글로불린 사슬(예를 들어, IgG1 또는 IgG4와 같은 IgG)에 연결되고/되거나, V_L은 불변 경쇄 면역글로불린 사슬(예를 들어, 카파 또는 람다)에 연결된다.

본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 본원에 기재된 아미노산 서열, 및 항체 또는 단편에 대한 세포내 및 시험관내 번역 후 변형을 포함하는 면역글로불린 사슬을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본원에 기재된 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3)을 포함하는 PfRH5에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 하나 이상의 아미노산 잔기가 글리코실화되고/되거나, 하나 이상의 Asn 잔기가 탈아미드화되고/되거나, 하나 이상의 잔기(예를 들어, Met, Trp 및/또는 His)가 산화되고/되거나, N 말단 Gln이 피로글루타메이트(pyroE)이고/이거나, C 말단 리신이 소실된 항체 및 단편을 포함한다.

본 발명은 본 발명의 항- PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2를 포함하는 용기(예를 들어, 플라스틱 또는 유리 바이알과 함께 예를 들어 캡 또는 크로마토그래피 칼럼, 중공 보어 니들 또는 주사기 실린더)를 제공한다.

본 발명은 또한 PfRH5에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편), 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2, 또는 이의 약제학적 조성물을 포함하는 주사 장치를 제공한다. 주사 장치는 키트로 패키징될 수 있다. 주사 장치는 비경구 경로, 예를 들어 근육내, 피하 또는 정맥내를 통해 대상체의 신체로 물질을 도입하는 장치이다. 예를 들어, 주사 장치는 예를 들어 주사되는 유체(예를 들어, 항체 또는 단편 또는 이의 약제학적 조성물을 포함)를 보유하기 위한 실린더 또는 배럴, 유체의 주사를 위해 피부 및/또는 혈관을 뚫기 위한 바늘침; 및 유체를 실린더로부터 바늘침 보어를 통해 밀기 위한 플런저를 포함하는 주사기(예를 들어, 오토인젝터와 같이 약제학적 조성물로 프리필드됨)일 수 있다.

본 발명은 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2를 대상체에게 투여하는 방법으로서, 항원 결합 단백질을 대상체(예를 들어, 인간)의 신체에 예를 들어 비경구로 도입하는 단계를 포함하는 방법을 추가로 제공한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기의 침으로 대상체의 신체를 뚫고, 항원 결합 단백질을 대상체의 신체에, 예를 들어 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하조직에 주사하는 단계를 포함한다.

인간 항체의 제조

형질전환 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. PfRH5에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조하기 위해 임의의 이러한 공지된 방법이 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다. 다음 중 어느 하나를 포함하는 면역원이 PfRH5에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항체는 전장, 자연적 PfRH5로 면역화되거나, 생 약독화된 또는 불활성화된 바이러스로 면역화되거나, 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA로 면역화된 마우스로부터 수득된다. 대안적으로, PfRH5 단백질 또는 이의 단편은 표준 생화학 기술을 사용하여 제조되고 변형되고 면역원으로 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시형태에서, 면역원은 재조합으로 제조된 PfRH5 단백질 또는 이의 단편이다. 본 발명의 소정의 실시형태에서, 면역원은 PfRH5 폴리펩타이드 백신일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 부스터 주사가 투여될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 면역원은 이. 콜라이 또는 임의의 다른 진핵생물 또는 포유류 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 발현되는 재조합 PfRH5 폴리펩타이드일 수 있다.

VELOCIMMUNE® 기술(예를 들어, 미국 특허 US 제6,596,541호, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE® 참조)을 사용하여, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 PfRH5에 대한 고친화도 키메라 항체가 초기에 단리될 수 있다. VELOCIMMUNE® 기술은 마우스가 항원의 자극에 반응하여 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생산하도록 내인성 마우스 불변 영역 유전자위에 작동 가능하게 연결된 인간 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 형질전환 마우스의 생성을 수반한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되고 인간 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동 가능하게 연결된다. 이후, DNA는 완전 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.

일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스는 관심 항원으로 시험감염되고, 항체를 발현하는 마우스로부터 림프 세포(예컨대, B-세포)가 회수된다. 림프 세포는 불멸 하이브리도마 세포주를 제조하기 위해 골수종 세포주와 융합될 수 있으며, 이러한 하이브리도마 세포주는 관심 항원에 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 확인하기 위해 스크리닝되고 선택된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되거나, 중쇄 및 경쇄의 원하는 아이소타입 불변 영역에 연결될 수 있다. 이러한 항체 단백질은 CHO 세포와 같은 세포에서 제조될 수 있다. 대안적으로, 항원 특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA는 항원 특이적 림프구로부터 직접 단리될 수 있다.

관심 항체는 또한 마우스 B-세포로부터 또한 단리될 수 있다. 간단히 말하면, 각각의 마우스로부터 비장세포를 수확하고, 관심 항원을 반응성 항체(항원 양성 B 세포)에 결합하고 이를 확인하는 분류 시약으로 사용하여 (예를 들어, 미국 특허출원공개 US 제2007/0280945A1호에 기재된 바대로) B 세포를 FACS에 의해 분류한다. 항원 양성 B 세포를 확인하고 분류하고, 재조합 항체를 발현하는 세포의 제조를 위해 PCR에 의해 면역글로불린 유전자 발현 카세트를 작제하기 위한 다양한 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 국제공개 WO20141460741호, 미국 특허 제7884054B2호, 및 문헌[Liao, et al. June 2009. High-Throughput Isolation of Immunoglobulin Genes from Single Human B Cells and Expression as Monoclonal Antibodies. J Virol Methods 158(1-2):171-9]을 참조한다.

처음에, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 고친화도 키메라 항체가 단리된다. 항체는 친화도, 선택성, 에피토프 등을 포함하는 원하는 특징에 대해 규명되고 선택된다. 마우스 불변 영역은 본 발명의 완전 인간 항체, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성하기 위해 원하는 인간 불변 영역으로 대체된다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 달라질 수 있지만, 고친화도 항원 결합 및 표적 특이성 특징은 가변 영역 내에 있는다.

Fc 변이체를 포함하는 항-PfRH5 항체

본 발명의 소정의 실시형태에 따르면, 예를 들어 중성 pH와 비교하여 산성 pH에서, 예를 들어 FcRn 수용체와의 항체 결합을 향상시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 본 발명은 Fc 도메인의 C_H2 또는 C_H3 영역에서 돌연변이를 포함하는 항-PfRH5 항체를 포함하며, 여기서 돌연변이(들)는 산성 환경에서(예를 들어, pH가 약 5.5 내지 약 6.0의 범위인 엔도좀에서) FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시킨다. 이러한 돌연변이는 동물에게 투여될 때 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비제한적인 예는 예를 들어 250번 위치(예를 들어, E 또는 Q); 250번 및 428번 위치(예를 들어, L 또는 F); 252번 위치(예를 들어, L/Y/F/W 또는 T), 254번 위치(예를 들어, S 또는 T) 및 256번 위치(예를 들어, S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 428번 및/또는 433번 위치(예를 들어, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434번 위치(예를 들어, A, W, H, F 또는 Y[N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y])에서의 변형; 또는 250번 및/또는 428번 위치에서의 변형; 또는 307번 또는 308번(예를 들어, 308F, V308F) 및 434번 위치에서의 변형을 포함한다. 일 실시형태에서, 상기 변형은 428L(예를 들어, M428L) 및 434S(예를 들어, N434S) 변형; 428L, 259I(예를 들어, V259I) 및 308F(예를 들어, V308F) 변형; 433K(예를 들어, H433K) 및 434(예를 들어, 434Y) 변형; 252, 254 및 256(예를 들어, 252Y, 254T 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예를 들어, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예를 들어, 308F 또는 308P)을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 변형은 265A(예를 들어, D265A) 및/또는 297A(예를 들어, N297A) 변형을 포함한다.

예를 들어, 본 발명은, 250Q 및 248L(예를 들어, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예를 들어, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예를 들어, M428L 및 N434S); 257I 및 311I(예를 들어, P257I 및 Q311I); 257I 및 434H(예를 들어, P257I 및 N434H); 376V 및 434H(예를 들어, D376V 및 N434H); 307A, 380A 및 434A(예를 들어, T307A, E380A 및 N434A); 및 433K 및 434F(예를 들어, H433K 및 N434F)로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 군을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.

상기 Fc 도메인 돌연변이의 임의의 가능한 조합을 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 V_H 및/또는 V_L을 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편은 본 발명의 범위 내에 고려된다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 V_H 및 키메라 중쇄 불변(C_H) 영역을 포함하는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 키메라 C_H 영역은 하나 초과의 면역글로불린 아이소타입의 C_H 영역으로부터 유래된 분절을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유래된 C_H3 도메인의 일부 또는 전부와 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유래된 C_H2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 C_H 영역을 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 C_H 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "하부 힌지" 서열(EU 넘버링에 따른 228번 내지 236번 위치의 아미노산 잔기)과 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "상부 힌지" 아미노산 서열(EU 넘버링에 따른 216번 내지 227번 위치의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에 따르면, 키메라 힌지 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 상부 힌지로부터 유래된 아미노산 잔기 및 인간 IgG2 하부 힌지로부터 유래된 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 키메라 C_H 영역을 포함하는 항체는 소정의 실시형태에서 항체의 치료학적 특성 또는 약물동태학적 특성에 역효과를 미치지 않으면서 변형된 Fc 효과기 기능을 나타낼 수 있다. (예를 들어, 국제공개 WO2014/022540호를 참조한다).

다중특이적 항원 결합 단백질

본 발명은 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 이를 사용하는 방법 및 이러한 항원 결합 단백질을 제조하는 방법을 포함한다. 용어 "항-PfRH5" 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편은 PfRH5에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제1 항원 결합 도메인(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2로부터의 항원 결합 도메인) 및 상이한 항원 또는 제1 항원 결합 도메인과 상이한 PfRH5에서의 에피토프에 결합하는 적어도 하나의 제2 항원 결합 도메인(예를 들어, CD3, CD16, BSG (바시긴), EXP1, MSP1, MSP2, MSPMSP3, MSP4, MSP5, MSP6, MSP7, MSP9, MSP10 GLURP, Sera, RAMA, SEA, AMA1, MTRAP, PTRAMP, ASP, RH1, RH2a, RH2b, RH4, RAP1, RAP2, RAP3, RhopH1, RhopH2, RhopH3, EMA175, EMA140 및/또는 EBA181)을 포함하는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적 또는 이중파라토프성) 분자를 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 제1 에피토프 및 제2 에피토프는 중첩한다. 본 발명의 다른 실시형태에서, 제1 에피토프 및 제2 에피토프는 중첩하지 않는다.

본 발명의 실시형태에서, 다중특이적 항원 결합 단백질은 PfRH5에 결합하고, 세포독성 T 세포, NK 세포, 단핵 식세포 또는 호중구, 예를 들어 CD3 또는 CD16과 같은 면역 세포의 활성화를 야기하는 항원에 결합한다.

"H1H29089P"; "H1H29094P"; "H1H29100P"; "H1H29104P"; "H1H29106P"; "H1H29109P"; "H1H29125P"; "H1H29127P"; "H1H29131P"; "H1H29134P"; "H1H29138P"; "H1H29141P"; "H1H29143P"; "H1H29146P2"; "H1H29147P2"; "H1H29149P2"; "H1H29151P2"; "H1H29163P2"; "H1H29166P2"; "H1H29171P2"; "H1H29179P2"; "H1H29183P2"; "H1H29187P2"; "H1H29192P2"; "H1H29196P2"; "H1H29198P2"; "H1H29207P2"; "H1H29214P2"; 또는 "H1H29215P2"는 각각 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2(본원에 기재된 바와 같은 이의 변이체를 포함) 및 상이한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 항원 결합 도메인의 HCDR 및 LCDR, V_H 및 V_L, 또는 HC 및 LC를 포함하는 다중특이적 분자, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.

본 발명의 실시형태에서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는 PfRH5에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:

(1) 각각

(i) H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2로부터 선택된 면역글로불린 중쇄로부터의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열, 및

(ii) H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2로부터 선택된 면역글로불린 중쇄로부터의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;

또는,

(2) 각각

(i) H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2로부터 선택된 중쇄 가변 도메인(V_H) 서열; 및

(ii) H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2로부터 선택된 경쇄 가변 도메인(V_L) 서열;

및 상이한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 항원 결합 도메인.

본 발명의 실시형태에서, 다중특이적 항체 또는 단편은 2개 초과의 상이한 결합 특이성(예를 들어, 삼중특이적 분자), 예를 들어 제1 항원 결합 도메인 및/또는 제2 항원 결합 도메인과 동일하거나 상이한 하나 이상의 추가의 항원 결합 도메인을 포함한다.

본 발명의 일 실시형태에서, 이중특이적 항원 결합 단편은 제1 에피토프(예를 들어, PfRH5)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 scFv(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2의 V_H 및 V_L을 포함) 및 제2의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 scFv를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 제1 scFv 및 제2 scFv는 링커, 예를 들어 펩타이드 링커(예를 들어, (GGGGS)_n(서열 번호 364)과 같은 GS 링커, 상기 식에서 n은 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10임)로 테터링된다. 다른 이중특이적 항원 결합 단편은 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2 H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 이중특이적 IgG 항체 및 상이한 에피토프에 결합하는 다른 항체의 F(ab)₂를 포함한다.

면역접합체

본 발명은 플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하기 위한 다른 모이어티, 예를 들어 치료학적 모이어티("면역접합체"), 예컨대 톡소이드(예를 들어, 디프테리아 톡소이드 또는 파상풍 톡소이드) 또는 항기생충 약물에 접합된 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 실시형태에서, 항-PfRH5 항체 또는 단편은 본원에 기재된 임의의 추가의 치료제에 접합된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역접합체"는 다른 분자에 화학적으로 또는 생물학적으로 연결된 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다.

치료학적 방법

본 발명은 치료학적 유효량의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 플라스모듐 팔시파룸 감염(예를 들어, 말라리아)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예를 들어, 인간)에게 투여하여 플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. "말라리아"는 기생충 플라스모듐 팔시파룸을 갖는 숙주의 감염에 의해 생긴 감염된 암컷 모기(예를 들어, 아노펠레스(Anopheles) 모기)의 자상에 의해 자주 전파되는 질환이다. 용어 "플라스모듐 팔시파룸 감염"은 플라스모듐 팔시파룸을 갖는 대상체의 신체의 침습을 지칭하고, 말라리아를 포함한다.

플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하거나 예방하기 위한 유효량 또는 치료학적 유효량의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)은, 감염의 하나 이상의 징후 및/또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하든 또는 이러한 징후 및/또는 증상의 진행을 저해하든, 치료된 대상체에서 이러한 징후 및/또는 증상을 완화하기에 충분한 항체 또는 단편의 양을 지칭한다. 용량 양은 투여되는 대상체의 연령 및 체격, 표적 질환, 병태, 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 실시형태에서, 예를 들어 성인 인간 대상체에서 플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하거나 예방하기 위한 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 유효량 또는 치료학적 유효량은 약 1 mg/kg 내지 150 mg/kg이다. 치료의 빈도 및 기간은 감염의 중증도에 따라 조정될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 초기 용량, 이어서 하나 이상의 2차 용량에서 투여될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 초기 용량에 이어서 이 초기 용량의 양과 대략 동일하거나 그보다 적을 수 있는 양의 제2 후속 용량 또는 복수의 후속 용량의 항원 결합 단백질이 투여될 수 있으며, 여기서 후속 용량은 적어도 1일 내지 3일; 적어도 1주, 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주에 의해 분리된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 예를 들어 플라스모듐 팔시파룸 감염의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 프유류(예를 들어, 래트, 마우스, 고양이, 개, 소, 양, 말, 염소, 토끼), 바람직하게는 인간을 지칭한다. 대상체는 플라스모듐 팔시파룸 감염을 가지거나, 플라스모듐 팔시파룸 감염을 발생시킬 소인이 있거나, 이러한 감염을 발생시킬 위험이 증가될 수 있다. 플라스모듐 팔시파룸 감염을 발생시킬 소인이 있는 대상체 또는 플라스모듐 팔시파룸 감염에 걸릴 위험이 증가될 수 있는 대상체는 예를 들어 자가면역 질환 때문에 손상된 면역계를 갖는 대상체, 면역억제 치료를 받는 사람, 인간 면역결핍 증후군(HIV: human immunodeficiency syndrome) 또는 후천성 면역 결핍 증후군(AIDS: acquired immune deficiency syndrome), 백혈구를 결핍시키거나 파괴시키는 소정의 형태의 빈혈로 고통받는 사람, 방사선 또는 화학요법을 받는 사람 또는 염증성 장애로 고통받는 사람을 포함한다. 추가적으로, 매우 어리거나 고령인 대상체는 소인이 있을 수 있다. 특히 열대지역, 남아메리카, 중앙아메리카, 아프리카, 동남아시아 및 동쪽 지중해 지역에 모기와 접촉하거나 모기에 근접한 어떤 사람은 플라스모듐 팔시파룸 감염을 발생시킬 위험이 증가한다.

"치료한다" 또는 "치료하는"은 대상체에서의 감염의 하나 이상의 징후 또는 증상이 감소되거나 제거되도록 플라스모듐 팔시파룸 감염을 갖는 대상체에게 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 투여하는 것을 의미하고, 예를 들어 여기서 플라스모듐 팔시파룸은 대상체의 신체로부터 감소되거나 실질적으로 제거된다(예를 들어, 완전히 제거된다).

플라스모듐 팔시파룸 감염의 징후 및 증상은 하기를 포함한다:

ㆍ 빈혈;

ㆍ 혈변;

ㆍ 냉기, 열, 발한;

ㆍ 혼수;

ㆍ 경련;

ㆍ 두통;

ㆍ 황달;

ㆍ 근육통;

ㆍ 구역 및 구토;

ㆍ 비장 비대;

ㆍ 황달;

ㆍ 간 비대;

ㆍ 호흡수 증가;

ㆍ 혈류, 간 또는 적혈구에서의 플라스모듐 팔시파룸;

ㆍ 빈혈;

ㆍ 용혈;

ㆍ 혈중 유리 헤모글로빈;

ㆍ 헤모글로빈뇨증;

ㆍ 급성 신부전;

ㆍ 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS);

ㆍ 저혈압;

ㆍ 대사성 산증; 및

ㆍ 저혈당증.

본 발명은 또한 플라스모듐 팔시파룸 감염을 예방하도록 이러한 감염의 위험이 있는(예를 들어, 이러한 감염의 소인이 있거나 위험이 상승된) 대상체에게 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 예방학적으로 투여하는 것을 포함한다. "예방한다" 또는 "예방하는"은 감염이 발생하는 경우 대상체의 신체에서의 감염의 표출이 저해되거나 가능성이 감소되거나 중증도가 감소되도록 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 플라스모듐 팔시파룸으로 감염되지 않은 대상체에게 투여하는 것을 의미한다.

조합 및 약제학적 조성물

본 발명은 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 성분을 포함하는 조성물; 및 이를 사용하는 방법 및 이러한 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)의 약제학적 조성물을 제조하기 위해, 항원 결합 단백질은 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합된다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984)]; 문헌[Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.]; 문헌[Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.]; 문헌[Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.]을 참조한다. 본 발명의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 무균이다. 이러한 조성물은 본 발명의 일부이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어 물, 완충제, 안정화제, 보존제, 등장화제, 비이온성 계면활성제, 항산화제 및/또는 다른 기타 첨가제와 같은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 및/또는 안정화제를 포함한다.

본 발명의 범위는 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 포함하는 건조된, 예를 들어 동결 건조된, 조성물, 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하지만 실질적으로 물이 결여된 이의 약제학적 조성물을 포함한다.

본 발명의 추가의 실시형태에서, 본원에 개시된 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)과 회합되어 대상체에게 투여된 추가의 치료제는 문헌[Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57^th edition (Nov. 1, 2002)]에 따라 대상체에게 투여된다.

항원 결합 단백질 또는 이의 조성물의 투여 방식은 변할 수 있다. 투여 경로는 경구, 직장, 점막경유, 장내, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 초내, 직접 심실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 눈내, 흡입, 통기법, 국소, 피부, 경피 또는 동맥내를 포함한다.

본 발명은 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 대상체에게 투여하는 방법으로서, 대상체의 신체에 단백질 또는 이의 약제학적 조성물 또는 조합을 도입하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기의 침으로 대상체의 신체를 뚫고, 항원 결합 단백질 또는 이의 약제학적 조성물 또는 조합을 대상체의 신체에, 예를 들어 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하조직에 주사하는 단계를 포함한다.

본 발명은 임의의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 이의 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2) 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물 또는 이의 조합을 포함하는 용기(예를 들어, 플라스틱 또는 유리 바이알과 함께 예를 들어 캡 또는 크로마토그래피 칼럼, 중공 보어 니들 또는 주사기 실린더)를 제공한다.

본 발명은 하나 이상의 추가의 치료제와 회합된 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 포함하는 조합을 포함한다. 항-PfRH5 항원 결합 단백질 및 추가의 치료제는 단일의 조성물 또는 별개의 조성물에 있을 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 추가의 치료제는 항기생충 치료제 또는 항말라리아 치료제이다. 본 발명의 실시형태에서, 추가의 치료제는 클로로퀸, 아토바퀀 및/또는 프로구아닐, 아르테메터 및/또는 루메판트린, 메플로퀸, 퀴닌, 퀴니딘, 독시사이클린(선택적으로 퀴닌과 조합됨) 및/또는 클린다마이신(선택적으로 퀴닌과 조합됨)이다. 본 발명의 실시형태에서, 추가의 치료제는 항말라리아 백신, 예를 들어 RTS,S/AS01(Mosquirix로서 판매됨)과 같은 백신이다. 추가의 치료제와 회합된 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2를 투여하여 플라스모듐 팔시파룸 감염 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 상기 감염을 치료하거나 예방하는 방법은 본 발명의 일부이다.

본 발명은 본 발명의 2종 이상(예를 들어, 2종, 3종 또는 4종)의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단백질)을 서로 회합하여 포함하는 조합을 포함한다. 예를 들어, H1H29089P가 Ab1인 경우; H1H29094P가 Ab2인 경우; H1H29100P가 Ab3인 경우; H1H29104P가 Ab4인 경우; H1H29106P가 Ab5인 경우; H1H29109P가 Ab6인 경우; H1H29125P가 Ab7인 경우; H1H29127P가 Ab8인 경우; H1H29131P가 Ab9인 경우; H1H29134P가 Ab10인 경우; H1H29138P가 Ab11인 경우; H1H29141P가 Ab12인 경우; H1H29143P가 Ab13인 경우; H1H29146P2가 Ab14인 경우; H1H29147P2가 Ab15인 경우; H1H29149P2가 Ab16인 경우; H1H29151P2가 Ab17인 경우; H1H29163P2가 Ab18인 경우; H1H29166P2가 Ab19인 경우; H1H29171P2가 Ab20인 경우; H1H29179P2가 Ab21인 경우; H1H29183P2가 Ab22인 경우; H1H29187P2가 Ab23인 경우; H1H29192P2가 Ab24인 경우; H1H29196P2가 Ab25인 경우; H1H29198P2가 Ab26인 경우; H1H29207P2가 Ab27인 경우; H1H29214P2가 Ab28인 경우; H1H29215P2가 Ab29인 경우 그리고 H1H29209P가 Ab30인 경우, 본 발명의 이러한 조성물은 본 발명의 하기의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 및/또는 항원 결합 단백질)을 서로 회합하여 포함하는 조합을 포함한다:

본 발명의 실시형태에서, 상기 조성물은 2종 이상의 비경쟁 항원 결합 단백질을 포함한다. 본 발명의 항-PfRH5 항체 사이의 교차경쟁은 하기 표 6-1에 요약되어 있다.

용어 "회합(association)된"은 본 발명의 -PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 성분이 다른 물질, 예컨대 클로로퀸과 함께 예를 들어 동시 전달을 위해 단일 조성물로 제제화될 수 있거나, 2종 이상의 조성물(예를 들어, 각각의 성분을 포함하는 키트)로 별개로 제제화될 수 있다는 것을 나타낸다. 각각의 성분은 다른 성분이 투여될 때와 다른 시간에 대상체에게 투여될 수 있고, 예를 들어 각각의 투여는 주어진 기간에 걸쳐 간격으로 비동시적으로(예를 들어, 별개로 또는 순차적으로) 주어질 수 있다. 게다가, 별개의 성분은 동일한 경로 또는 상이한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

시험 및 진단

초기 말라리아 진단은 양성 임상 결과를 얻는 데 도움이 된다. 본 발명은 대상체에서 플라스모듐 팔시파룸 감염(예를 들어, 말라리아)을 치료하는 방법으로서, 대상체에서 이 감염을 진단하는 단계 및 대상체가 감염을 갖는 것으로 결정되면 치료학적 유효량의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 문헌[Moody, Rapid Diagnostic Tests for Malaria Parasites, Clinical Microbiology Reviews 15(1): 66―78 (2002)]을 참조한다.

플라스모듐 팔시파룸 감염은 미시적으로(예를 들어, 형광 현미경 관찰) 진단될 수 있다. 예를 들어, 예를 들어 현미경 슬라이드 상의 "혈액 도말"(예를 들어, 두꺼운 혈액 필름 또는 얇은 혈액 필름)로서 확산된 대상체의 혈액의 방울을 현미경 하에 조사하여 플라스모듐 팔시파룸이 확인될 수 있다. 시편은 검사 전에 (예를 들어, 김자액(Giemsa) 염색으로) 오염될 수 있다. 본 발명은 (본원에 기술된 바와 같은) 플라스모듐 팔시파룸 감염의 치료 방법을 포함하고, 여기서 감염은 미시적으로 진단된다.

본 발명의 실시형태에서, 플라스모듐 팔시파룸 락테이트 탈수소효소를 검출하여 대상체로부터의 샘플에서의 플라스모듐 팔시파룸의 존재가 검출된다. 공지된 비감염된 샘플의 대조군 샘플보다 높게 LDH가 시험 샘플에서 검출되면, 시험 샘플은 플라스모듐 팔시파룸을 함유하는 것으로 결정된다. 예를 들어, 문헌[Miura, H. Zhou, A. Diouf, SE. Moretz, MP. Fay, LH. Miller, LB. Martin, MA. Pierce, RD. Ellis, GED. Mullen, CA. Long. Anti-Apical-Membrane-Antigen-1 antibody is more effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1 antibody in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as determined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963-968 (2009). PMID: PMC2708396]을 참조한다.

플라스모듐 팔시파룸 핵산의 존재는 예를 들어 소형-아단위 18S rRNA 및/또는 포자소체(circumsporozoite: CS) 유전자를 검출하도록 예를 들어 중합효소 연쇄 반응(PCR: polymerase chain reaction)을 사용하여 또한 검출될 수 있다.

플라스모듐 팔시파룸 감염은 대상체의 신체에서 기생충의 항원의 검출에 의해 또한 진단될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 실시형태에서, 항원은 예를 들어 신속한 진단 시험을 사용하여 면역학적으로 검출된다. 예를 들어, 문헌[Van der Palen et al. Test characteristics of two rapid antigen detection tests (SD FK50 and SD FK60) for the diagnosis of malaria in returned travelers, Malaria Journal 8:90 (2009)]; 또는 미국 특허 제5712170호를 참조한다.

본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)은 샘플(예를 들어, 혈액과 같은 체액)에서 PfRH5(예를 들어, PfRH5 단백질을 포함하는 플라스모듐 팔시파룸 세포)를 검출하고/하거나 측정하도록 사용될 수 있다. PfRH5에 예시적인 검정은 예를 들어 샘플을 본 발명의 항-PfRH5 항원 결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 예를 들어 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지된다. PfRH5와 복합체화된 항-PfRH5 항원 결합 단백질이 검출되면, 이것은 샘플에서의 PfRH5의 존재 및/또는 샘플에서의 및 대상체의 신체에서의 플라스모듐 팔시파룸의 존재를 나타낸다.

예를 들어, 본 발명은 측면 유동 '면역-크로마토그래피' 항원-검출 시험을 사용하여 PfRH5 폴리펩타이드 또는 이러한 폴리펩타이드(예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸)를 포함하는 세포를 검출하는 방법을 포함한다. 이러한 측면 유동 시험은 기질의 스트립에서 가시적인 밴드를 제조하도록 검출 가능하게 표지된 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 및 이의 항원 결합 단편)의 포획에 의존한다. 플라스모듐 팔시파룸 말라리아 진단 시험에 의해, 표지된 항원 결합 단백질은 처음에 기생충 항원인 PfRH5에 결합하고, 생성된 복합체는 결합된 항원 결합 단백질의 밴드에 의해 스트립에 포획되어 가시적인 선(시험 선)을 형성한다. 대조군 선은 항체-표지 접합체의 온전함에 대한 정보를 주지만, 기생충 항원을 검출하는 능력을 확인하지 않는다.

본 발명은 기질에 걸쳐 측면으로 배열된 하기 영역을 포함하는 기질(예를 들어, 니트로셀룰로스)을 포함하는 샘플에서 PfRH5(예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸 세포)의 존재를 검출하기 위한 측면 유동 시험 스트립을 제공한다:

(i) 샘플의 도입을 위한 스팟(샘플 구역);

(ii) 예를 들어 염료로 검출 가능하게 표지되지만 기질에 부동화되지 않은 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 또는 H1H29215P2)을 포함하는 접합체 패드;

(iii) 검출 가능하게 표지되지 않고, PfRH5에 대한 결합에 대해 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질과 상당히 경쟁하지 않지만, 기질에 부동화된 제2 항-PfRH5 항원 결합 단백질을 함유하는 시험 선; 및

(iv) 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질에 결합하는 기질에 부동화된 2차 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편 또는 단백질-A)을 함유하는 대조군 선.

본 발명의 실시형태에서,

(i) 액체 함유 샘플이 샘플 패드에 배치되면, 샘플(및 내부에 함유된 임의의 PfRH5 폴리펩타이드)은 모세관 작용에 의해 기질에 걸쳐 접합 패드로 확산하고, 이후 시험 선으로 확산하고 이후 대조군 선으로 확산하고/하거나;

(ii) 접합체 패드에 도달하는 PfRH5 폴리펩타이드는 검출 가능하게 표지된 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질과 복합체를 형성하고, 복합체는 시험 선으로 더 멀리 확산하고, 여기서 추가의 복합체가 제2 항-PfRH5 항원 결합 단백질과 형성(삼중 복합체를 형성, 여기서 PfRH5는 상기 제1 항원 결합 단백질 및 제2 항원 결합 단백질에 의해 결합되고, 시험 선 내에 부동화됨)되고/되거나;

(iii) 시험 선에서 부동화하지 않은 임의의 과량의 제1 항-PfRH5 항원 결합 단백질은 계속해서 대조군 선으로 확산하고, 2차 항원 결합 단백질에 결합하여 대조군 선에서 부동화되고/되거나;

(iv) 샘플에서 PfRH5의 존재를 나타내는 양성 시험은 시험 선에서 검출 가능한 표지의 존재에 의해 표시되고; 샘플에서 PfRH5의 검출 가능한 수준의 결여를 나타내는 음성 시험은 시험 선에서 검출 가능한 표지의 부재에 의해 표시되고; 대조군 선에서의 검출 가능한 표지는 시험 시스템이 적절히 작동한다는 것을 나타낸다.

본 발명의 실시형태에서, 검출 가능한 표지는 염료(예를 들어, 인디고 블루), 효소, 페리틴, 형광 또는 유색 마이크로입자/비드 또는 나노입자/비드 또는 콜로이드 금속(예를 들어, 금, 셀레늄 염료(예를 들어, 리포솜에서) 또는 은, 예를 들어 이의 콜로이드성 입자)이다. 본 발명의 실시형태에서, 검출 가능한 표지는 시각적으로 검출 가능하다.

본 발명의 실시형태에서, 기질은 유체 흐름을 지지할 수 있는 불용성 재료, 예를 들어 유리 섬유 필터 페이퍼; 천연 중합체성 재료, 셀룰로스계 재료, 필터 페이퍼, 크로마토그래피 페이퍼, 니트로셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐 클로라이드), 폴리아크릴아미드 또는 가교결합된 덱스트란이다.

본 발명은 또한 샘플(예를 들어, 혈액과 같은 체액 등)이 PfRH5(예를 들어, 플라스모듐 팔시파룸과 같은 PfRH5를 함유하는 세포)를 함유하는지를 결정하는 방법으로서, 본원에 기재된 바와 같은 측면 유동 장치의 샘플 구역을 샘플과 접촉시키는 단계, 모세관 흐름이 샘플을 기질에 걸쳐 대조군 선으로 운반하는 것을 기다리는 단계, 선택적으로 일정 기간 기다리는 단계 및 시험 선 및 대조군 선을 관찰하는 단계이되, 시험 선에서의 검출 가능한 표지의 존재는 샘플이 PfRH5를 함유한다는 것을 나타내고, 대조군 선에서의 검출 가능한 표지의 존재는 측면 유동 시험 스트립이 정확하게 작용한다는 것을 나타내는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 대조군 선에서의 검출 가능한 표지의 존재와 함께 시험 선에서의 검출 가능한 표지의 부재는 샘플로부터의 PfRH5의 부재를 나타낸다. 본 발명의 실시형태에서, 상기 방법은 시험이 샘플에서 PfRH5의 존재를 나타내고, 유동 시험 스트립이 정확히 기능하면 샘플이 취해진 대상체를 치료학적 유효량의 항-PfRH5 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)로 치료하는 단계를 추가로 포함한다.

실시예

하기 실시예는 당업자에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시되며, 본 발명자들이 그들의 발명으로 간주하는 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도 등)의 측면에서 정확성을 보장하려고 노력하였지만, 일부 실험적 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 명시하지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 실온은 약 25℃이고, 압력은 대기압이거나 그 부근이다.

실시예 1 : PfRH5에 결합하는 인간 항체의 생성

P. 팔시파룸 RH5 (PfRH5)에 대한 인간 항체는 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스에 생성되었다. 마우스는 재조합 RH5 단백질(PfRH5ΔNL)로 면역되었다. 일부 마우스를 재조합 PfRH5 단백질(PfRH5ΔNL.6his)로 면역화한 후, 균주 3D7로부터 단리된 P. 팔시파룸 낭충을 부스팅하였다. 항체 면역 반응을 PfRH5 특이적 면역검정에 의해 모니터링하였다. 요망되는 면역 반응이 달성되었을 때, 비장세포를 단리하고, 항체를 미국 특허 제7582298호에 기재된 바와 같이 골수종 세포로의 융합 없이 항원-양성 마우스 B 세포로부터 직접적으로 단리하였으며, 상기 문헌은 그 전문이 원용에 의해 본 명세서에 구체적으로 포함된다. 이러한 방법을 사용하여, 여러 완전 인간 항-PfRH5 항체(즉, 인간 가변 도메인 및 인간 불변 도메인을 보유하는 항체)를 수득하고; 이러한 방식으로 생성된 예시적인 항체는 H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; 및 H1H29215P2로 지칭된다.

이 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항체의 생물학적 특성은 하기 제시된 실시예에서 상세히 기술된다. 항체 면역글로불린 사슬의 서열은 하기 기재된다.

표 1-1에 요약된 면역글로불린 서열 및 이의 상응하는 서열 번호는 하기에 기재되어 있다. 하기에서 서열은 또한 본원에 인용되어 포함된 서열 목록에 있다.

서열 번호 1

GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATA

CAGCTTTACCAGTTACTGGATCGTCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTG

GTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTAC

CTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACAAGATATAACTGGAACTACGGGGTT

TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 2

EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIVWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAY

LQWSSLKASDTAMYYCARQDITGTTGFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 3

GGA TAC AGC TTT ACC AGT TAC TGG;

서열 번호 4

G Y S F T S Y W;

서열 번호 5

ATC TAT CCT GGT GAC TCT GAT ACC;

서열 번호 6

I Y P G D S D T;

서열 번호 7

GCG AGA CAA GAT ATA ACT GGA ACT ACG GGG TTT GAC TAC;

서열 번호 8

A R Q D I T G T T G F D Y;

서열 번호 9

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA

GAGCATTAGGAACTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT

TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT

GAAGATTTTGCAACTTATTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAA

ACGA;

서열 번호 10

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYFCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKR;

서열 번호 11

CAG AGC ATT AGG AAC TAT;

서열 번호 12

Q S I R N Y;

서열 번호 13

GCT GCA TCC;

서열 번호 14

A A S;

서열 번호 15

CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT;

서열 번호 16

Q Q S Y S T P F T;

서열 번호 17

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTTCAGGCACTGGATT

CACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAATGGGTGGCACTTATATCATATG

ATGGAAGTAATAAATATTATGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCT

CTGCAAATGAACAGCCTGAAAACTGAGGACACGGCGATATATTACTGTGCGAAAGAGAGGCTTTTTGGAGTGGTCTCTTA

TTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 18

QVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCSGTGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVALISYDGSNKYYGDSVKGRFTVSRDNSKNTLS

LQMNSLKTEDTAIYYCAKERLFGVVSYYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 19

GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GCC;

서열 번호 20

G F T F S S Y A;

서열 번호 21

ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 22

I S Y D G S N K;

서열 번호 23

GCG AAA GAG AGG CTT TTT GGA GTG GTC TCT TAT TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 24

A K E R L F G V V S Y Y G M D V;

서열 번호 25

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA

GGACATTAATAGGGATCTAAATTGGTATCAGCAGAAATCAGGGAAAGGCCCCAAACTCCTGATCTACGATGCATCCAATT

TGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAATAGATTTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGACTGCAGCCT

GAAGATATTGCAACATATTTCTGTCAACAGTATAAAAATCTCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 26

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRDLNWYQQKSGKGPKLLIYDASNLETGVPSRFSGNRFGTDFTFTISRLQP

EDIATYFCQQYKNLPYTFGQGTKLEIKR;

서열 번호 27

CAG GAC ATT AAT AGG GAT;

서열 번호 28

Q D I N R D;

서열 번호 29

GAT GCA TCC;

서열 번호 30

D A S;

서열 번호 31

CAA CAG TAT AAA AAT CTC CCG TAC ACT;

서열 번호 32

Q Q Y K N L P Y T;

서열 번호 33

CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG

CTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGATTATCT

ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAGGACAGGGAGGCCCTCTTTGA

CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 34

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGIIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF

SLKLSSVTAADTAVYYCARQDREALFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 35

GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC;

서열 번호 36

G G S I S S S S Y Y;

서열 번호 37

ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;

서열 번호 38

I Y Y S G S T;

서열 번호 39

GCG AGA CAG GAC AGG GAG GCC CTC TTT GAC TAC;

서열 번호 40

A R Q D R E A L F D Y;

서열 번호 41

GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGCCGGGCCAGTCA

GCGCATTGGTAGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGATCAGTCTCCAAAGCTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGT

CCTTCTCAGGGGTCCCCTCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCCTCACCATCAATAGCCTGGAAGCT

GAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCATCAGAGTAGTACTTTACCCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACG

A;

서열 번호 42

EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQRIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEA

EDAATYYCHQSSTLPTFGQGTRLEIKR;

서열 번호 43

CAG CGC ATT GGT AGT AGC;

서열 번호 44

Q R I G S S;

서열 번호 45

TAT GCT TCC;

서열 번호 46

Y A S;

서열 번호 47

CAT CAG AGT AGT ACT TTA CCC ACC;

서열 번호 48

H Q S S T L P T;

서열 번호 49

GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CAGGTTTGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCAGGTATTAATTGGA

ATAGTGGTGGCAAAGGCTATGCGGACTCTGTGCAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTTTAT

CTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTATTGTGCAAAAGATAGGGGTATAGCAGCTCGTCTTCT

CTCTCGTGATGCTTTTGATATGTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;

서열 번호 50

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFRFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSGGKGYADSVQGRFTISRDNAKNSLY

LQMNSLRTEDTALYYCAKDRGIAARLLSRDAFDMWGQGTMVTVSS;

서열 번호 51

GGA TTC AGG TTT GAC GAT TAT GCC;

서열 번호 52

G F R F D D Y A;

서열 번호 53

ATT AAT TGG AAT AGT GGT GGC AAA;

서열 번호 54

I N W N S G G K;

서열 번호 55

GCA AAA GAT AGG GGT ATA GCA GCT CGT CTT CTC TCT CGT GAT GCT TTT GAT ATG;

서열 번호 56

A K D R G I A A R L L S R D A F D M;

서열 번호 57

GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCTGGGCCAGTCA

GGACGTTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAATCCCCTAAGCTCCTAATCTTTGCTGCATCCACTT

TGCAAGGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCGGCCT

GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACACCTTAATACTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 58

DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQDVSSYLAWYQQKPGKSPKLLIFAASTLQGGIPSRFSGSGSGTEFTLTISSLRP

EDFATYYCQHLNTYPYTFGQGTKLEIKR;

서열 번호 59

CAG GAC GTT AGC AGT TAT;

서열 번호 60

Q D V S S Y;

서열 번호 61

GCT GCA TCC;

서열 번호 62

A A S;

서열 번호 63

CAA CAC CTT AAT ACT TAC CCG TAC ACT;

서열 번호 64

Q H L N T Y P Y T;

서열 번호 65

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGTCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTTCATT

CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATAAGTTATG

ATGGAAGTAATAAATACTATGGAGACTTCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATGTATTATTGTGCGAGAGAAGTTCGTCGCTACTATTATTACGG

TATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 66

QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASSFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVISYDGSNKYYGDFVRGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAMYYCAREVRRYYYYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 67

TCA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;

서열 번호 68

S F T F S S Y G;

서열 번호 69

ATA AGT TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 70

I S Y D G S N K;

서열 번호 71

GCG AGA GAA GTT CGT CGC TAC TAT TAT TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 72

A R E V R R Y Y Y Y G M D V;

서열 번호 73

GGACATTAGTAATTATTTAAATTGGTATCTGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCCGATGCATCCAATT

TGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT

GAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATAATAATCTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 74

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYLQKPGKAPKLLISDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP

EDIATYYCQQYNNLPLTFGGGTKVEIKR;

서열 번호 75

CAG GAC ATT AGT AAT TAT;

서열 번호 76

Q D I S N Y;

서열 번호 77

GAT GCA TCC;

서열 번호 78

D A S;

서열 번호 79

CAA CAG TAT AAT AAT CTC CCG CTC ACT;

서열 번호 80

Q Q Y N N L P L T;

서열 번호 81

GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGATT

CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGA

ATAGTGGTGACATAGACTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT

CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATACCCTCTCAGGGACTGGAACTAC

GTGGTACTATTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 82

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAVSGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGDIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLY

LQMNSLRAEDTALYYCAKDTLSGTGTTWYYFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 83

GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC;

서열 번호 84

G F T F D D Y A;

서열 번호 85

ATT AGT TGG AAT AGT GGT GAC ATA;

서열 번호 86

I S W N S G D I;

서열 번호 87

GCA AAA GAT ACC CTC TCA GGG ACT GGA ACT ACG TGG TAC TAT TTT GAC TAC;

서열 번호 88

A K D T L S G T G T T W Y Y F D Y;

서열 번호 89

GGGTATTAGCAGTTATTTAATCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTT

TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCT

GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGGTGAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 90

DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGISSYLIWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQP

EDFATYYCQQVNSYPLTFGGGTKVEIKR;

서열 번호 91

CAG GGT ATT AGC AGT TAT;

서열 번호 92

Q G I S S Y;

서열 번호 93

GCT GCA TCC;

서열 번호 94

A A S;

서열 번호 95

CAA CAG GTG AAT AGT TAC CCT CTC ACT;

서열 번호 96

Q Q V N S Y P L T;

서열 번호 97

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CACCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGATGGCAGTTATATCATATG

ATGGAAGTAATAAATATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTTT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGACCTGAAGACACGGCTGTATATTACTGTGCGCAAGATGGCAGCTCGGCGATTTACTATTT

CTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 98

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLF

LQMNSLRPEDTAVYYCAQDGSSAIYYFYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 99

GGA TTC ACC TTC AGT AGT TAT GGC;

서열 번호 100

G F T F S S Y G;

서열 번호 101

ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 102

I S Y D G S N K;

서열 번호 103

GCG CAA GAT GGC AGC TCG GCG ATT TAC TAT TTC TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 104

A Q D G S S A I Y Y F Y G M D V;

서열 번호 105

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTATAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCA

GGACATCAACAATTATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT

TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT

GAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCTTCAGTATAATAGTTACCATCCCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 106

DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYYCLQYNSYHPTFGQGTKLEIKR;

서열 번호 107

CAG GAC ATC AAC AAT TAT;

서열 번호 108

Q D I N N Y;

서열 번호 109

GCT GCA TCC;

서열 번호 110

A A S;

서열 번호 111

CTT CAG TAT AAT AGT TAC CAT CCC ACT;

서열 번호 112

L Q Y N S Y H P T;

서열 번호 113

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT

CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGCTATATGGTATG

ATGGAAGTAATAAATATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAGAGGGGAACATTACTATGGTTCGGGGCC

GTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 114

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAVYFCARGEHYYGSGPFDPWGQGTLVTVSS;

서열 번호 115

GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;

서열 번호 116

G F T F S S Y G;

서열 번호 117

ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 118

I W Y D G S N K;

서열 번호 119

GCG AGA GGG GAA CAT TAC TAT GGT TCG GGG CCG TTC GAC CCC;

서열 번호 120

A R G E H Y Y G S G P F D P;

서열 번호 121

GAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTTTGCTGCATCCAGTT

TACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT

GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTTCCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 122

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIFAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYYCQQSYSSPLTFGGGTKVEIKR;

서열 번호 123

CAG AGC ATT AGC AAC TAT;

서열 번호 124

Q S I S N Y;

서열 번호 125

GCT GCA TCC;

서열 번호 126

A A S;

서열 번호 127

CAA CAG AGT TAC AGT TCC CCG CTC ACT;

서열 번호 128

Q Q S Y S S P L T;

서열 번호 129

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCAGGTGG

CTCCATCAGCAGTTTTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCT

ATTACAGTGGGAGCATCGACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAATTACCATATCAGTCGACACGTCTAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAAGGGACTACGGTGACTACTT

TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 130

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSIDYNPSLKSRITISVDTSKNQF

SLKLSSVTAADTAVYYCARERDYGDYFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 131

GGT GGC TCC ATC AGC AGT TTT GGT TAC TAC;

서열 번호 132

G G S I S S F G Y Y;

서열 번호 133

ATC TAT TAC AGT GGG AGC ATC;

서열 번호 134

I Y Y S G S I;

서열 번호 135

GCG AGA GAA AGG GAC TAC GGT GAC TAC TTT GAC TAC;

서열 번호 136

A R E R D Y G D Y F D Y;

서열 번호 137

GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTCTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA

GAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCA

GGGCCACTGGTGTCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGTTTGCAGTCT

GAGGATTTTGCAGTTTATTCCTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 138

EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQS

EDFAVYSCQQYNNWPLTFGGGTKVEIKR;

서열 번호 139

CAG AGT GTT AGC AGC AAC;

서열 번호 140

Q S V S S N;

서열 번호 141

GGT GCA TCC;

서열 번호 142

G A S;

서열 번호 143

CAG CAG TAT AAT AAC TGG CCT CTC ACT;

서열 번호 144

Q Q Y N N W P L T;

서열 번호 145

CACCTTCAGTAGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATGGTATG

ATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCAGGATTACTATGGTTCGGGGAG

TTCCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 146

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGIHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAVYYCARDQDYYGSGSSYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 147

GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;

서열 번호 148

G F T F S S Y G;

서열 번호 149

ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 150

I W Y D G S N K;

서열 번호 151

GCG AGA GAT CAG GAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TCC TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 152

A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V;

서열 번호 153

GACATCCAGATGACCCAGTCGCCAGCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA

GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT

GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 154

DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTKLEIKR;

서열 번호 155

CAG AGC ATT AGC AGC TAT;

서열 번호 156

Q S I S S Y;

서열 번호 157

GCT GCA TCC;

서열 번호 158

A A S;

서열 번호 159

CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CTC ACT;

서열 번호 160

Q Q S Y S T P L T;

서열 번호 161

CACCTTCAGTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATG

ATGGAACTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGATCAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACCCCTCAGGTGGGGACCACTACTA

TTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 162

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMISLRAEDTAVYYCARDPSGGDHYYYYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 163

GGA TTC ACC TTC AGT ACC TAT GGC;

서열 번호 164

G F T F S T Y G;

서열 번호 165

ATA TGG TAT GAT GGA ACT AAT AAA;

서열 번호 166

I W Y D G T N K;

서열 번호 167

GCG AGA GAC CCC TCA GGT GGG GAC CAC TAC TAT TAC TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 168

A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V;

서열 번호 169

GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA

GGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCCGATGCATCCGATT

GAAGATTTTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATATACCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAA

ACGA;

서열 번호 170

DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPNLLISDASDLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP

EDFATYYCQQYDNIPITFGQGTRLEIKR;

서열 번호 171

CAG GAC ATT AGC AAC TAT;

서열 번호 172

Q D I S N Y;

서열 번호 173

GAT GCA TCC;

서열 번호 174

D A S;

서열 번호 175

CAA CAG TAT GAT AAT ATA CCG ATC ACC;

서열 번호 176

Q Q Y D N I P I T;

서열 번호 177

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACATTTATATCATTTG

ATGAAAGGAATAAATACTATGCAGACTCCGTTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTATGTATTACTGTGCGAGCGAAGTCGGGTACAGTTTTGGTCATGA

TGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;

서열 번호 178

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVTFISFDERNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAMYYCASEVGYSFGHDAFDIWGQGTMVTVSS;

서열 번호 179

GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;

서열 번호 180

G F T F S S Y G;

서열 번호 181

ATA TCA TTT GAT GAA AGG AAT AAA;

서열 번호 182

I S F D E R N K;

서열 번호 183

GCG AGC GAA GTC GGG TAC AGT TTT GGT CAT GAT GCT TTT GAT ATC;

서열 번호 184

A S E V G Y S F G H D A F D I;

서열 번호 185

GGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGAAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGATGCATCCAATT

TGGAAACAGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT

GAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATTTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA

ACGA;

서열 번호 186

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQKKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP

EDIATYYCQQYDNFPLTFGGGTKVEIKR;

서열 번호 187

CAG GAC ATT AGC AAC TAT;

서열 번호 188

Q D I S N Y;

서열 번호 189

GAT GCA TCC;

서열 번호 190

D A S;

서열 번호 191

CAA CAG TAT GAT AAT TTC CCG CTC ACT;

서열 번호 192

Q Q Y D N F P L T;

서열 번호 193

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CACCTTTAACAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAGGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTA

GTGGTGATAGCACATACTACTCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCAGGGCCTGTATTACTATGGTTC

GGGGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 194

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYAMSWVRQAPGRGLEWVSAISGSGDSTYYSDSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAVYYCAKDQGLYYYGSGSFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 195

GGA TTC ACC TTT AAC AAC TAT GCC;

서열 번호 196

G F T F N N Y A;

서열 번호 197

ATT AGT GGT AGT GGT GAT AGC ACA;

서열 번호 198

I S G S G D S T;

서열 번호 199

GCG AAA GAT CAG GGC CTG TAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TTT GAC TAC;

서열 번호 200

A K D Q G L Y Y Y G S G S F D Y;

서열 번호 201

GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCAAGCTGCATCCAGTT

TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATATCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCC

GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAA

ACGA;

서열 번호 202

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIQAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDITLTISSLQP

EDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKR;

서열 번호 203

CAG AGC ATT AGC AGC TAT;

서열 번호 204

Q S I S S Y;

서열 번호 205

GCT GCA TCC;

서열 번호 206

A A S;

서열 번호 207

CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT;

서열 번호 208

Q Q S Y S T P F T;

서열 번호 209

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGCAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTT

TGCCTTCAGCGACTCTGCTATATACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGCATTAGAAACA

AAGCTAATAGGTTCGCGACAGCATATGGTGCGTCGGTGAAAGGCAGGTTCAGCATACACAGAGATGATTCAAAGAACACG

GCGTATCTACAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCCAGACATGGACACGATACTTTGAC

TGAGGGCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 210

EVQLVESGGGLVQPGGSLQLSCAASGFAFSDSAIYWVRQASGKGLEWVGRIRNKANRFATAYGASVKGRFSIHRDDSKNT

AYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGHDTLTEGYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 211

GGG TTT GCC TTC AGC GAC TCT GCT;

서열 번호 212

G F A F S D S A;

서열 번호 213

ATT AGA AAC AAA GCT AAT AGG TTC GCG ACA;

서열 번호 214

I R N K A N R F A T;

서열 번호 215

GCC AGA CAT GGA CAC GAT ACT TTG ACT GAG GGC TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 216

A R H G H D T L T E G Y G M D V;

경쇄 #1- 서열 번호 217

GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT

TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT

GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT

TAAA;

경쇄 #1-서열 번호 218

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK;

서열 번호 219

CAG AGC ATT AGC AGC TAT;

서열 번호 220

Q S I S S Y;

서열 번호 221

GCT GCA TCC;

서열 번호 222

A A S;

서열 번호 223

CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CCG ATC ACC;

서열 번호 224

Q Q S Y S T P P I T;

서열 번호 225

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTAAAGAACCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGG

CACCTTCAGCAGTTATACTATCAACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTC

TCTATGGAACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGCCAGAGTCACGATTTCCACGGACGAATCCACGAACACAGCCTAC

ATGGAACTGAGCAACCTGAGATTTGAAGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGTACACTGGAACTACGGGCTTTTGATGC

CTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;

서열 번호 226

QVQLVQSGAEVKNPGSSVKVSCKASGGTFSSYTINWVRQAPGQGLEWMGGIIPLYGTANYAQKFQARVTISTDESTNTAY

MELSNLRFEDTAVYFCASTLELRAFDAFDIWGQGTMVTVSS;

서열 번호 227

GGA GGC ACC TTC AGC AGT TAT ACT;

서열 번호 228

G G T F S S Y T;

서열 번호 229

ATC ATC CCT CTC TAT GGA ACA GCA;

서열 번호 230

I I P L Y G T A;

서열 번호 231

GCG AGT ACA CTG GAA CTA CGG GCT TTT GAT GCC TTT GAT ATC;

서열 번호 232

A S T L E L R A F D A F D I;

서열 번호 233

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG

CTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAACTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCT

ATTACAGTGGAAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGGGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGCTCCTCCTTATAACTGGTTTGA

CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 234

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWNWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF

SLKLGSVTAADTAVYYCARAPPYNWFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 235

GGT GGC TCC ATC AGC AGT GGT GGT TAC TAC;

서열 번호 236

G G S I S S G G Y Y;

서열 번호 237

ATC TAT TAC AGT GGA AGC ACC;

서열 번호 238

I Y Y S G S T;

서열 번호 239

GCG CGA GCT CCT CCT TAT AAC TGG TTT GAC TAC;

서열 번호 240

A R A P P Y N W F D Y;

서열 번호 241

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CACCTTCAGTGACTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTTTCATACATTAGTAATA

GTGGTAATACCCAATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGGGACAATGCCAAGAACTCCCTGTTT

CTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGAGAGAGGGACTCGAATATAGCAGCTCGGA

GCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 242

QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWVRQAPGKGLEWVSYISNSGNTQYYADSVKGRFTISRDNAKNSLF

LQMNSLRAEDTAVYYCTREGLEYSSSEPFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 243

GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAC TAC;

서열 번호 244

G F T F S D Y Y;

서열 번호 245

ATT AGT AAT AGT GGT AAT ACC CAA;

서열 번호 246

I S N S G N T Q;

서열 번호 247

ACG AGA GAG GGA CTC GAA TAT AGC AGC TCG GAG CCC TTT GAC TAC;

서열 번호 248

T R E G L E Y S S S E P F D Y;

서열 번호 249

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGACTTCTGGATA

CACCTTCACCGCCTACTACATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTA

ACAATGGTGACACAAACTATGCACTGAGGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACATGTCCATCAACACAGCCTAC

ATGGAGCTGCGCGGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGATGATCTAGCAGCAGCGGGTATCGG

CTGGTTCGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 250

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTAYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGDTNYALRFQGRVTMTRDMSINTAY

MELRGLRSDDTAVYYCARDDLAAAGIGWFDSWGQGTLVTVSS;

서열 번호 251

GGA TAC ACC TTC ACC GCC TAC TAC;

서열 번호 252

G Y T F T A Y Y;

서열 번호 253

ATC AAC CCT AAC AAT GGT GAC ACA;

서열 번호 254

I N P N N G D T;

서열 번호 255

GCG AGA GAT GAT CTA GCA GCA GCG GGT ATC GGC TGG TTC GAC TCC;

서열 번호 256

A R D D L A A A G I G W F D S;

서열 번호 257

GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGCTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATT

CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGAATTAGTTGGA

ATAGTGAAAGTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAGGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT

CTCCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGCCCCGTATAGTGGGACCTACTTCGA

ATACTTCCGCCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 258

EVQLVESGGGLLQPGRSLRLSCVASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSESIGYADSVRGRFTISRDNAKNSLY

LQMNSLRAEDTALYYCAKAPYSGTYFEYFRHWGQGTLVTVSS;

서열 번호 259

GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC;

서열 번호 260

G F T F D D Y A;

서열 번호 261

ATT AGT TGG AAT AGT GAA AGT ATA;

서열 번호 262

I S W N S E S I;

서열 번호 263

GCA AAA GCC CCG TAT AGT GGG ACC TAC TTC GAA TAC TTC CGC CAC;

서열 번호 264

A K A P Y S G T Y F E Y F R H;

서열 번호 265

CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATG

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATGACTGGAACTACGACGCCTTTGA

TATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;

서열 번호 266

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAVYYCAKDDWNYDAFDIWGQGTMVTVSS;

서열 번호 267

GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;

서열 번호 268

G F T F S S Y G;

서열 번호 269

ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;

서열 번호 270

I S Y D G S N K;

서열 번호 271

GCG AAA GAT GAC TGG AAC TAC GAC GCC TTT GAT ATC;

서열 번호 272

A K D D W N Y D A F D I;

서열 번호 273

CTCCATCAGCAGTAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAGGGGCCTGGAGTGGATTGGATACATCT

ATTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGAACTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGGACTATGGTTCGGGGAGTTC

GTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 274

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGRGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF

SLKLNSVTAADTAVYYCARVDYGSGSSFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 275

GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT GGT TAC TAC;

서열 번호 276

G G S I S S S G Y Y;

서열 번호 277

ATC TAT TAC AGT GGG AGC ACC;

서열 번호 278

I Y Y S G S T;

서열 번호 279

GCG AGA GTG GAC TAT GGT TCG GGG AGT TCG TTT GAC TAC;

서열 번호 280

A R V D Y G S G S S F D Y;

서열 번호 281

CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGACCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTA

CACCTTTACCAGCTATGGCATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGCTGGGATGGATCAGCGGTT

TCAATGGTAGAACAGACTATACAGAGAAGCTCCAGGACAGAATCACCATGACCACAGACAGATCCTCGAGCACAGCCTAC

ATGGAACTGAGGAGCCTGAGATATGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGACTGGAAAAACTTGGTGACTA

CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 282

QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWLGWISGFNGRTDYTEKLQDRITMTTDRSSSTAY

MELRSLRYDDTAVYYCARDGLEKLGDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 283

GGT TAC ACC TTT ACC AGC TAT GGC;

서열 번호 284

G Y T F T S Y G;

서열 번호 285

ATC AGC GGT TTC AAT GGT AGA ACA;

서열 번호 286

I S G F N G R T;

서열 번호 287

GCG AGA GAT GGA CTG GAA AAA CTT GGT GAC TAC;

서열 번호 288

A R D G L E K L G D Y;

서열 번호 289

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCGGGGAGGTTCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT

CACCTTCAGTAACTCTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGGAATATGGCATG

ATGGAAGTTATAAATATTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCTAAGAACACGCTGTTT

CTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTATTGTGCGAGAGATGATTACTATGCTTCGGGGACCAG

CGTGGACGTATGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 290

QVQLVESGGGVVQPGRFLRLSCAASGFTFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAGIWHDGSYKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLF

LQMNSLRAEDTAVYYCARDDYYASGTSVDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 291

GGA TTC ACC TTC AGT AAC TCT GGC;

서열 번호 292

G F T F S N S G;

서열 번호 293

ATA TGG CAT GAT GGA AGT TAT AAA;

서열 번호 294

I W H D G S Y K;

서열 번호 295

GCG AGA GAT GAT TAC TAT GCT TCG GGG ACC AGC GTG GAC GTA;

서열 번호 296

A R D D Y Y A S G T S V D V;

서열 번호 297

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAGGGTCTCCTGCATGGCCTCTGGATA

CACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTA

ACAGTGGTGGCACAAAATATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTAC

ATGGAGCTGAGCAGACTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGAAGAAGTCGACGATTTTTGGAGTGG

TTACCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 298

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCMASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAY

MELSRLRSDDTAVYYCAREEVDDFWSGYLDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 299

GGA TAC ACC TTC ACC GGC TAC TAT;

서열 번호 300

G Y T F T G Y Y;

서열 번호 301

ATC AAC CCT AAC AGT GGT GGC ACA;

서열 번호 302

I N P N S G G T;

서열 번호 303

GCG AGA GAA GAA GTC GAC GAT TTT TGG AGT GGT TAC CTT GAC TAC;

서열 번호 304

A R E E V D D F W S G Y L D Y;

경쇄 #2-서열 번호 305

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA

GAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA

GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAG

CCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAAT

CAAA;

경쇄 #2-서열 번호 306

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLE

PEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK;

서열 번호 307

CAG AGT GTT AGC AGC AGC TAC;

서열 번호 308

Q S V S S S Y;

서열 번호 309

GGT GCA TCC;

서열 번호 310

G A S;

서열 번호 311

CAG CAG TAT GGT AGC TCA CCT TGG ACG;

서열 번호 312

Q Q Y G S S P W T;

서열 번호 313

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGACTTGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTT

CGCCGTCAATGGCGACTATTTTAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCTCAGTTATTTATAGCA

GTGGTAACACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGACACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTT

CAAATGAGCAGCCTAAGACCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACTTCCCTCCAATGTCTGGTGCGGACTA

CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 314

EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFAVNGDYFSWVRQAPGKGLEWISVIYSSGNTYYADSVKGRFTISRHNSKNTLYL

QMSSLRPEDTAVYYCARDFPPMSGADYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 315

GGG TTC GCC GTC AAT GGC GAC TAT;

서열 번호 316

G F A V N G D Y;

서열 번호 317

ATT TAT AGC AGT GGT AAC ACA;

서열 번호 318

I Y S S G N T;

서열 번호 319

GCG AGA GAC TTC CCT CCA ATG TCT GGT GCG GAC TAC;

서열 번호 320

A R D F P P M S G A D Y;

서열 번호 321

CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTTTCCGGATA

CACCCTCACTGAATTGTCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCTGGAAAAGGGCTTGAATGGATGGGAGGTTTTGATCCTG

AACATGGTAAAATAATCTACGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCGAGGACACATCTACAGACACAGCCTAC

ATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTGCAACATTTTATAACTGGAACTCCTACTACTT

CGGTATGGACGTCTGGGGCCACGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 322

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEHGKIIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAY

MELSSLRSEDTAVYYCATFYNWNSYYFGMDVWGHGTTVTVSS;

서열 번호 323

GGA TAC ACC CTC ACT GAA TTG TCC;

서열 번호 324

G Y T L T E L S;

서열 번호 325

TTT GAT CCT GAA CAT GGT AAA ATA;

서열 번호 326

F D P E H G K I;

서열 번호 327

GCA ACA TTT TAT AAC TGG AAC TCC TAC TAC TTC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 328

A T F Y N W N S Y Y F G M D V;

서열 번호 329

GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT

CACCTTTAGCAGCTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCTCAGCTGTTAGTGGAA

GTGCTGATATCACAAACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAACACACGCTGTAT

CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAGGATAAAGTGTATAACTGGAACTACGG

GATCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 330

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSAVSGSADITNYADSVKGRFTISRDNSKHTLY

LQMNSLRAEDTAVYYCAKDKVYNWNYGIYYGMDVWGQGTTVTVSS;

서열 번호 331

GGA TTC ACC TTT AGC AGC TAT GCC;

서열 번호 332

G F T F S S Y A;

서열 번호 333

GTT AGT GGA AGT GCT GAT ATC ACA;

서열 번호 334

V S G S A D I T;

서열 번호 335

GCG AAG GAT AAA GTG TAT AAC TGG AAC TAC GGG ATC TAC TAC GGT ATG GAC GTC;

서열 번호 336

A K D K V Y N W N Y G I Y Y G M D V;

서열 번호 337

CTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGACTAGAGTGGATTGGGAGTATCT

ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGAGGTGGGAGCGAGAAAA

CTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 338

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF

SLKLSSVTAADTAVYYCARQGRWERENFDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 339

GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC;

서열 번호 340

G G S I S S S S Y Y;

서열 번호 341

ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;

서열 번호 342

I Y Y S G S T;

서열 번호 343

GCG AGA CAA GGG AGG TGG GAG CGA GAA AAC TTT GAC TAC;

서열 번호 344

A R Q G R W E R E N F D Y;

서열 번호 345

CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTATTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGATGA

GTCCTTCAGTGATTACTACTGGACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATTACTCATA

GTGGAAGTACCCACTACAACCCGTCCCTCAAGAGCCGAGTCACCCTGTCAGTTGACACGTCCAAGAACCACTTCTCCCTG

AGCCTCAACTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTATTTATTACTGTGCGAGAGGCGGTGACTACGGTGGTTTACTTGACTA

CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;

서열 번호 346

QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVSDESFSDYYWTWIRQPPGKGLEWIGEITHSGSTHYNPSLKSRVTLSVDTSKNHFSL

SLNSVTAADTAIYYCARGGDYGGLLDYWGQGTLVTVSS;

서열 번호 347

GAT GAG TCC TTC AGT GAT TAC TAC;

서열 번호 348

D E S F S D Y Y;

서열 번호 349

ATT ACT CAT AGT GGA AGT ACC;

서열 번호 350

I T H S G S T;

서열 번호 351

GCG AGA GGC GGT GAC TAC GGT GGT TTA CTT GAC TAC;

서열 번호 352

A R G G D Y G G L L D Y;

서열 번호 353

CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG

CTCCATCAGCAGTAGGAGTCACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCT

ATTATAGTGGGAGCACCTATTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC

TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACTTGGCTGGTACGCAGAGGAGGC

TTTTGAAATCTGGGGTCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;

서열 번호 354

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSRSHYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF

SLKLSSVTAADTAVYYCARLGWYAEEAFEIWGQGTMVTVSS;

서열 번호 355

GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGG AGT CAC TAC;

서열 번호 356

G G S I S S R S H Y;

서열 번호 357

ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;

서열 번호 358

I Y Y S G S T;

서열 번호 359

GCG AGA CTT GGC TGG TAC GCA GAG GAG GCT TTT GAA ATC;

서열 번호 360

A R L G W Y A E E A F E I

실시예 2 : P. 팔시파룸 기생충의 인간 적혈구의 시험관내 침습 및 성장을 저해하는 항-PfRH5 항체의 능력을 평가하기 위한 성장 저해 검정.

이 실시예에서, 본 발명의 네가지의 PfRH5 특이적 mAb의 세트는 플라스모듐 팔시파룸의 하나의 균주(Dd2)로 단독으로 시험되고, 표준 성장 저해 검정과 조합되어 시험되었다.

실험 절차

P. 팔시파룸 균주인 Dd2(BEI Resources)는 검정의 시작 전 20시간 내지 24시간에 3% 내지 5% 헤마토크리트 및 1% 내지 2% 기생충혈증에서의 표준 프로토콜 후 5% D-소르비톨과 처음에 동시 발생하였다. 감염된 인간 적혈구는 0.4% 내지 0.7% 및 2% 헤마토크리트의 출발 기생충혈증에서 준비되었다. 감염된 적혈구는 각각의 항체 또는 항체 조합에 대해 1:5 연속 희석으로 666.67 nM의 농도에서 시작하여 PfRH5 특이적 항체 또는 대조군 항체와 조합되었다. 사용된 모든 항체는 인간 IgG1이었다. 분열체 단계가 도달할 때까지(하나의 완전한 생활 주기) 기생충은 40시간 내지 48시간 동안 성장하였다. 차가운 PBS로 3회 세척하여 기생충 성장을 중단하였다. 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성을 측정하여 최종 기생출혈증을 결정하였다(문헌[Miura, H. Zhou, A. Diouf, SE. Moretz, MP. Fay, LH. Miller, LB. Martin, MA. Pierce, RD. Ellis, GED. Mullen, CA. Long. Anti-Apical-Membrane-Antigen-1 antibody is more effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1 antibody in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as determined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963-968 (2009). PMID: PMC2708396]). 성장 저해 백분율은 비감염된 적혈구에 대비하여 표현된다.

결과 요약 및 결론

PfRH5 특이적 항체가 제조되고, 상기 기재된 바대로 실험실 적응된 균주에서 성장 저해 검정에서 시험관내 시험되었다. 표 2-1은 PfRH5 특이적 항체 및 PfRH5 특이적 항체 조합의 하위집단에 대한 최대 성장 저해 백분율을 보여준다. 개별 항체 및 항체 조합은 대략 51% 내지 69%의 범위의 유사한 최대 성장 저해 백분율을 나타냈다.

실시예 3 : 클로로퀸과 조합된 P. 팔시파룸 기생충의 인간 적혈구의 시험관내 침습 및 성장을 저해하는 항-PfRH5 항체의 능력을 평가하기 위한 성장 저해 검정.

이 실시예에서, 본 발명의 네가지의 PfRH5 특이적 mAb의 하위집단은 2개의 실험실 균주로 표준 성장 저해 검정에서 단독으로 시험되고, 흔히 사용된 항말라리아 약물인 클로로퀸(CQ)과 조합되어 시험되었다. 플라스모듐 팔시파룸 기생충의 하나의 균주인 3D7은 클로로퀸에 감수성인 반면, 균주 7G8은 약물에 내성이다.

실험 절차

각각의 P. 팔시파룸 균주(BEI Resources)는 검정의 시작 전 20시간 내지 24시간에 3% 내지 5% 헤마토크리트 및 1% 내지 2% 기생충혈증에서의 표준 프로토콜 후 5% D-소르비톨과 처음에 동시 발생하였다. 감염된 인간 적혈구는 0.4% 내지 0.7% 및 2% 헤마토크리트의 출발 기생충혈증에서 준비되었다. 감염된 적혈구는 4.91 또는 6.58 nM의 2가지의 농도 중 하나에서의 각각의 IgG1 항체 및 클로로퀸에 대해 1:5 연속 희석으로 666.67 nM의 농도에서 시작하여 PfRH5 특이적 항체 또는 대조군 항체와 조합되었다. 2가지의 농도는 감수성 3D7 균주로 클로로퀸의 IC₂₅, 4.91 nM 및 IC₅₀, 6.58 nM에 기초하여 선택되었다. 분열체 단계가 도달할 때까지(하나의 완전한 생활 주기) 기생충은 40시간 내지 48시간 동안 성장하였다. 차가운 PBS로 3회 세척하여 기생충 성장을 중단하였다. 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성을 측정하여 최종 기생출혈증을 결정하였다. 성장 저해 백분율은 비감염된 적혈구에 대비하여 표현되었다.

결과 요약 및 결론

표 3-1은 각각의 항체 단독 및 항체/클로로퀸 조합에 대한 최대 성장 저해 백분율을 보여준다. 클로로퀸과 PfRH5 특이적 항체의 조합은 3D7 균주에서 항체 단독으로 얻은 최대 성장 저해 백분율을 더 증가시켰다. 항체 단독에 의한 최대 성장 저해는 대략 34% 내지 61%인 반면, mAb에 대한 4.81 nM CQ의 첨가는 유사한 최대 성장 저해(32% 내지 51%)를 가졌다. mAb에 대한 6.58 nM의 CQ의 첨가는 적어도 20% 내지 59% 내지 75%로 성장 저해의 범위를 증가시켰다. 다른 한편, 개별 항체 및 항체/약물 조합은 7G8 균주에 의한 유사한 최대 성장 저해 백분율을 나타냈다(mAb 단독: 47% 내지 51%; mAb + 4.81 nM CQ: 44% 내지 53%; mAb + 6.58 nM CQ: 30% 내지 52%).

실시예 4 : P. 팔시파룸 기생충의 인간 적혈구의 시험관내 침습 및 성장을 저해하는 항-PfRH5 항체의 능력을 평가하기 위한 성장 저해 검정.

이 실시예에서, 본 발명의 30개의 PfRH5 특이적 mAb의 세트는 다수의 흔한 실험실 균주(다양한 항말라리아 약물에 감수성이면서 내성임) 및 다중약물 내성 임상 라인에 대해 표준 성장 저해 검정에서 시험되었다.

실험 절차

각각의 P. 팔시파룸 균주(BEI Resources)는 검정의 시작 전 20시간 내지 24시간에 3% 내지 5% 헤마토크리트 및 1% 내지 2% 기생충혈증에서의 표준 프로토콜 후 5% D-소르비톨과 처음에 동시 발생하였다. 감염된 인간 적혈구는 0.4% 내지 0.7% 및 2% 헤마토크리트의 출발 기생충혈증에서 준비되었다. 감염된 적혈구는 각각의 항체에 대해 1:5 연속 희석으로 666.67 nM의 농도에서 시작하여 PfRH5 특이적 항체 또는 대조군 IgG1 항체와 조합되었다. 분열체 단계가 도달할 때까지(하나의 완전한 생활 주기) 기생충은 40시간 내지 48시간 동안 성장하였다. 차가운 PBS로 3회 세척하여 기생충 성장을 중단하였다. 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성을 측정하여 최종 기생출혈증을 결정하였다(문헌[Miura et al, Clin Vaccine Immunol. 16: 963-968 (2009). PMID: PMC2708396]). 성장 저해 백분율은 비감염된 적혈구에 대비하여 표현되었다.

결과 요약 및 결론

표 4-1은 666.67 nM에서 시험된 30개의 PfRH5 특이적 mAb의 각각에 대한 최대 성장 저해 백분율을 보여준다. 여러 항체의 적용은 모든 시험된 실험실 적응된 P. 팔시파룸 균주 및 임상 P. 팔시파룸 균주에서 성장을 감소시켰다.

실시예 5 : 25℃ 및 37℃에서 PfRH5ΔNL.his에 결합하는 항-PfRH5 단일클론 항체의 Biacore 결합 동역학.

본 발명의 다양한 항-PfRH5 항체의 결합 동역학은 이 실시예에서 결정되었다.

정제된 항-PfRH5 단일클론 항체에 결합하는 상이한 PfRH5 시약에 대한 평형 해리 상수(K_D)는 실시간 표면 플라즈몬 공명 기반 Biacore T200 바이오센서를 사용하여 결정되었다. 25℃ 및 37℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA 및 0.05% v/v Surfactant Tween-20, pH 7.4(HBS-ET) 전개 완충액에서 모든 결합 연구를 수행하였다. 항-PfRH5 IgG1 단일클론 항체를 포획하도록 염소 항인간 Fcγ 특이적 다중클론 항체((Jackson ImmunoResearch Laboratories, 카탈로그 109-005-098호) 또는 토끼 항마우스 Fc 특이적 다중클론 항체(GE Healthcare 카탈로그 BR100838호)와 아민 커플링함으로써 Biacore CM4 센서 칩 표면을 처음에 유도체화하였다. 결합 연구는 아미노 말단 M1-Y139를 제거하고 잔기 K140-Q526을 포함하지만 K247-L295가 결여되고, T216A 및 T299A가 C 말단 헥사히스티딘 태그와 발현된 재조합 PfRH5(PfRH5ΔNL.6his)에서 수행되었다. 상이한 농도의 PfRH5ΔNL.6his(3.125 내지 50 nM; 2배 연속 희석 또는 0.48 내지 60 nM; 5배 연속 희석)은 처음에 HBS-ET 전개 완충액에서 준비되고, 50 μL/분의 유속에서 4분 동안 항인간 Fcγ 또는 항마우스 Fc 포획된 항-PfRH5 단일클론 항체 표면 위로 주입되는 한편, 단일클론 항체 결합된 PfRH5 시약의 해리는 HBS-ET 전개 완충액에서 10분 동안 모니터링되었다. Scrubber 2.0c 곡선 적합 소프트웨어를 사용하여 실시간 결합 센서그램을 질량 이송 제한으로 1:1 결합 모델에 적합화하여 결합 속도(k _a ) 상수 및 해리 속도(k _d ) 상수를 측정하였다. 결합 해리 평형 상수(k_D) 및 해리 반감기(t½)는 역학 속도로부터 다음과 같이 계산되었다:

25℃ 및 37℃에서 본 발명의 상이한 항-PfRH5 단일클론 항체에 대한 PfRH5ΔNL.6his 결합의 동역학 매개변수는 각각 표 5-1 내지 표 5-2에 기재되어 있다.

25℃에서, 본 발명의 모든 항-PfRH5 단일클론 항체는 표 5-1에 기재된 것처럼 4.72 pM 내지 1.67 nM의 범위의 K_D 값으로 PfRH5ΔNL.6his에 결합하였다. 37℃에서, 본 발명의 모든 항-PfRH5 단일클론 항체는 표 5-2에 기재된 것처럼 1.10 pM 내지 1.10 nM의 범위의 K_D 값으로 PfRH5ΔNL.6his에 결합하였다.

실시예 6 : 상이한 항-PfRH5 단일클론 항체 사이의 Octet 교차-경쟁.

항-PfRH5 단일클론 항체의 패널 사이의 결합 경쟁은 Octet HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp.)에서의 실시간 무표지 생체층 간섭계법 검정을 사용하여 결정되었다.

1000 rpm의 속도에서 플레이트를 쉐이킹하면서 25℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v Surfactant Tween-20 및 1 mg/mL BSA, pH 7.4(HBS-EBT) 완충액에서 실험을 수행하였다. 2개의 항체가 아미노 말단 M1-Y139를 제거하고 잔기 K140-Q526을 포함하지만 K247-L295가 결여되고 T216A 및 T299A가 C 말단 헥사히스티딘 태그와 발현된 재조합 PfRH5(PfRH5ΔNL.6his; 서열번호 362)에서 이의 각각의 에피토프에 대한 결합에 대해 서로 경쟁할 수 있는지를 평가하기 위해, 60초 동안 바이오센서 선단을 PfRH5ΔNL.6his의 20 μg/mL 용액을 함유하는 웰에서 액침하여 대략 1.4 내지 2.0 nM의 PfRH5ΔNL.6his를 처음에 항-펜타-His 항체 코팅된 Octet 바이오센서 선단(Fortebio Inc, # 18-5122)에 포획하였다. 이후, 항원 포획된 바이오센서 선단을 3분 동안 mAb-1의 50 μg/mL 용액을 함유하는 웰에 침지하여 제1 항-PfRH5 단일클론 항체(이하에 mAb-1이라 칭함)로 포화되었다. 사용된 항체는 IgG1이었다. 이후, 후속하여 바이오센서 선단을 3분 동안 제2 항-PfRH5 단일클론 항체(이하에 mAb-2라 칭함)의 50 μg/mL 용액을 함유하는 웰로 침지하였다. 실험의 모든 단계 사이에서 상기 바이오센서 선단을 HBS-ETB 완충제에서 세척하였다. 전체 실험 과정 동안 실시간 결합 반응은 모니터링되고 모든 단계의 종료 시에 결합 반응은 기록되었다. mAb-1과 예비 복합체화된 PfRH5ΔNL.6his에 대한 mAb-2 결합의 반응은 비교되고, 상이한 항-PfRH5 단일클론 항체의 경쟁적/비경쟁적 거동은 표 6-1에 기재된 것처럼 결정되었다.

실시예 7 : 항-PfRH5 항체 압력 후 생성된 기생충을 평가하기 위한 다중주기 성장 저해 검정.

플라스모듐 팔시파룸 RH5 특이적 항체는 다수의 복제 주기에 걸쳐 인간 적혈구 검정의 침습을 저해하고, PfRH5 유전자에서 돌연변이를 유도하지 않는다. 숙주 적혈구의 침습은 라스모듐 팔시파룸(P. 팔시파룸) 생활 주기 및 말라리아 병리학의 필수 단계이다. 다수의 항말라리아 약물은 무성 혈액기를 표적화하지만, 이의 효율은 약물 내성 균주의 출현에 의해 위협을 받는다(문헌[Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Economics of Malaria Drugs in an Age of Resistance. National Acamies Press (US). 254-266 (2004)]; 문헌[Blasco et al., Antimalarial drug resistance: linking Plasmodium falciparum parasite biology to the clinic. Nature Medicine. 23, 917-928 (2017)]). 더욱이, 항말라리아 약물은 상이한 약물동태학적 특성을 나타낸다. 아르테미시닌 및 퀴닌과 같은 일부 항말라리아 약물은 하나의 기생충 생활 주기 내에 신속히 청소된다. 다른 한편, 소수성 항말라리아 약물 및 친유성 항말라리아 약물은 천천히 제거되지만, 소모된 식이 지방의 양에 따라 상이한 흡수율을 특징으로 한다(문헌[Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Economics of Malaria Drugs in an Age of Resistance. National Acamies Press (US). 254-266 (2004)]).

다중클론 항체(pAb) 및 단일클론 항체(mAb)에 의한 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(RH5) 단백질의 표적화는 시험관내 인간 적혈구로의 여러 P. 팔시파룸 균주의 기생충 침습을 효율적으로 차단한다(문헌[Wright et al., Structure of malaria invasion protein RH5 with erythrocyte basigin and blocking antibodies. Nature. 515, 427-430 (2014)]; 문헌[Galaway et al., P113 is a merozoite surface protein that binds the N-terminus of Plasmodium falciparum RH5. Nature Communications. 8, 14333 (2017)]). 단일 항체 또는 항체 칵테일에 의한 RH5 단백질의 표적화는 동일한 표적에서 반대의 선택 압력을 생성할 필요가 있을 수 있다. 또한, 항체는 흔한 항말라리아 약물의 짧은 반감기를 보상해야 한다.

마지막으로, 플라스모듐 기생충은 유전자 다형과 같은 기생충 발생을 차단하려고 노력하는 숙주 면역 반응을 회피하는 방식을 개발하였다. 이 유전적 다양성은 대개 면역 압력의 결과이다(문헌[Renia & Goh, Malaria Parasites: The Great Escape. Front Immunol. 7, 463 (2016). PMC5098170]). 300개 초과의 P. 팔시파룸 임상 단리물 또는 실험실 균주의 전장 게놈 서열분석은 가능한 mAb 에피토프 내에 불과 15개의 비동의 PfRH5 SNP를 확인하여서, 단백질의 보존된 성질 및 중요성을 입증한다. 단백질의 보존된 영역에서의 면역 압력은 회피 기전을 발생시키는 기생충의 능력을 제한할 수 있다(문헌[Bustamante et al., A full-length recombinant Plasmodium falciparum PfRH5 protein induces inhibitory antibodies that are effective across common PfRH5 genetic variants, Vaccine, 31, 373-9 (2013)]).

이 실시예에서, 각각 hIgG1을 갖는 본 발명의 네(4)가지의 RH5 특이적 mAb의 세트는 플라스모듐 팔시파룸의 하나의 균주(3D7)로 회피 돌연변이체 검정에서 단독으로 시험되었다.

사용된 단일클론 항체는 H1H29089P, H1H29100P, H1H29147P2, H1H29187P2 및 REGN1932이었다.

실험 절차(관련 세포주, 단백질, 시약 및 장치 유형 및 모델의 설명을 포함): P. 팔시파룸 균주인 3D7(BEI Resources)은 4% 헤마토크리트 및 0.5% 기생충혈증에서 표준 프로토콜에 따라 성장하였다. 감염된 적혈구는 상기 기재된 P. 팔시파룸 균주에서 이의 각각의 IC₅₀값에 상응하는 농도에서 PfRH5 특이적 항체 또는 대조군 항체와 조합되었다. 항체 농도는 이의 각각의 IC₅₀ 값의 110배에 상응하는 최종 농도까지 7일 내지 14일마다 점진적으로 증가하였다. 항체를 함유하는 성장 배지는 48시간마다 교체되고, 새로운 혈액은 주마다 배양물에 첨가되었다.

매주, 기생충 RNA는 감염된 적혈구의 Trizol 용리에 의해 추출되고, Qiagen RNeasy 키트에 의해 정제되었다. 역전사는 High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Applied Biosystems)로 완료되었다. RH5 유전자의 증폭은 PfRH5 특이적 프라이머를 사용하여 수행되었다. PCR 산물은 1.5% 아가로스 겔에서 분석되고, TOPO TA 클로닝 벡터(Life Technologies)로 클로닝되었다. RH5의 서열분석은 M13 정방향 및 역방향 서열분석 프라이머로 달성되었다.

결과 요약 및 결론. 여러 그룹은 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5) 단백질의 표적화가 P. 팔시파룸에 의한 시험관내 인간 적혈구의 기생충 침습을 효율적으로 차단할 것이라는 것을 보고하였다. P. 팔시파룸 3D7 기생충에 대한 점진적으로 증가하는 PfRH5 특이적 항체 압력은 아이소타입 대조군 항체 압력과 비교하여 PfRH5 다형을 생성하지 않았다. 표 7-1은 항체 압력(1 x EC₅₀ 내지 110 x EC₅₀)에서 점진적 증가의 45일 후 모든 다른 서열분석된 샘플에 비해 각각의 샘플의 PfRH5 서열 동일성 백분율 점수를 보여준다. 모든 서열은 내내 100% 동일하다. 도 1은 항체 압력(1 x EC₅₀ 내지 110 x EC₅₀)에서 점진적 증가의 45일 후 각각의 PfRH5 특이적 항체에 상응하는 PfRH5의 서열 정렬을 나타내어, 뉴클레오타이드 수준에서 서열 차이가 없음을 보여준다.

실시예 8 : 혈청의 존재 하에 P. 팔시파룸 기생충의 인간 적혈구의 시험관내 침습 및 성장을 저해하는 항-PfRH5 항체의 능력을 평가하기 위한 성장 저해 검정.

플라스모듐 팔시파룸 RH5 특이적 항체는 혈청의 존재 하에 pLDH 기반 성장 저해 검정에서 인간 적혈구의 침습을 저해한다.

하나의 그룹은 낭충 표면에서의 보체 활성화가 적혈구를 침습하는 기생충의 능력을 향상시킨다는 것을 제안한다(문헌[Biryukov et al., Complement and Antibody-mediated Enhancement of Red Blood Cell Invasion and Growth of Malaria Parasites. EBioMedicine. 9, 207-216 (2016)]). 그러나, 다른 연구는 보체 활성 혈청의 존재가 보체 불활성 혈청과 비교하여 감소되거나 필적하는 기생충 성장을 발생시킨다는 것을 나타낸다(문헌[Boyle et al, Human antibodies fix complement to inhibit Plasmodium falciparum invasion of erythrocytes and are associated with protection against malaria. Immunity. 42, 580-90 (2015)]; 문헌[Chulay et al., Inhibition of in vitro growth of Plasmodium falciparum by immune serum from monkeys. J Infect Dis. 144, 270-278]). 또한, 인간에서의 낭충 항원(또는 임의의 말라리아 항원)의 백신접종의 모든 경우에, 기생충혈증에서 항체 의존적 증가의 기록된 사례가 없다.

이 실시예에서, 본 발명의 네(4)가지의 RH5 특이적 mAb(각각 hIgG1(H1H 접두사로 지칭됨) 또는 hIgG4(H4H 접두사로 지칭됨)를 가짐)의 세트는 플라스모듐 팔시파룸의 하나의 균주(FCR-1/FVO)로 표준 성장 저해 검정에서 단독으로 시험되고, 아오투스 원숭이 정상 혈청(ANS), 아오투스 열 불활성화된 혈청(AHIS), 인간 정상 혈청(HNS) 또는 인간 열 불활성화된 혈청(HHIS)과 조합되어 시험되었다.

사용된 단일클론 항체는 H1H29089P, H1H29100P, H1H29147P2, H1H29187P2, H4H29089P, H4H29100P, H4H29147P2, H4H29187P2, REGN1932(항-Fel d1(인간 IgG1)) 및 REGN1945(항-Fel d1(인간 IgG4))이었다.

실험 절차(관련 세포주, 단백질, 시약 및 장치 유형 및 모델의 설명을 포함). P. 팔시파룸 균주, FCR-1/FVO(BEI Resources)는 검정의 시작 전 20시간 내지 24시간에 3% 내지 5% 헤마토크리트 및 1% 내지 2% 기생충혈증에서의 표준 프로토콜 후 5% D-소르비톨과 처음에 동시 발생하였다. 감염된 인간 적혈구는 0.4% 내지 0.7% 및 2% 헤마토크리트의 출발 기생충혈증에서 준비되었다. 감염된 적혈구를 10% 아오투스 정상 혈청, 아오투스 열 불활성화된 혈청, 인간 정상 혈청 또는 인간 열 불활성화된 혈청의 존재 하에 6.67 μM의 농도에서 RH5 특이적 항체 또는 대조군 항체와 조합하였다. 분열체 단계가 도달할 때까지(하나의 완전한 생활 주기) 기생충은 40시간 내지 48시간 동안 성장하였다. 차가운 PBS로 3회 세척하여 기생충 성장을 중단하였다. 기생충 락테이트 탈수소효소(LDH) 활성을 측정하여 최종 기생충혈증을 결정하였다(문헌[Miura et al., Anti-Apical-Membrane-Antigen-1 antibody is more effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1 antibody in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as determined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963-968 (2009)]). 성장 저해 백분율은 비감염된 적혈구에 대비하여 표현된다.

결과 요약 및 결론. 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(RH5) 단백질의 표적화는 P. 팔시파룸에 의한 시험관내 인간 적혈구의 기생충 침습을 효율적으로 차단한다. 적혈구의 낭충 침습에서 보체의 작용에 대해 상충하는 발견이 공개되었다. RH5 특이적 항체가 제조되고, 상기 기재된 바대로 P. 팔시파룸 균주에서 성장 저해 검정에서 시험관내 아오투스 또는 인간 혈청의 존재 하에 시험되었다. 표 8-1은 활성 혈청 보체 또는 비활성 혈청 보체에 의한 각각의 RH5 특이적 항체(hIgG1 및 hIgG4 형식 둘 다)에 대한 최대 성장 저해 백분율을 보여준다. 개별 항체 및 활성 혈청 또는 비활성 혈청 조합은 대략 67% 내지 86%의 범위의 유사한 최대 성장 저해 백분율을 나타냈다.

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<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Purcell, Lisa <120> Anti-PfRH5 Antibodies and Antigen-Binding Fragments thereof <130> 10437WO01 <160> 365 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agttactgga tcgtctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacaagat 300 ataactggaa ctacggggtt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Val Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 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ataagttatg atggaagtaa taaatactat 180 ggagacttcg tgaggggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctatgt attattgtgc gagagaagtt 300 cgtcgctact attattacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 66 <211> 121 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ser Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Phe Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 67 tcattcacct tcagtagcta tggc 24 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Homo 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gggcgagtca ggacatcaac aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccttcag tataatagtt accatcccac ttttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa acga 324 <210> 106 <211> 108 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 106 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asn Ser Tyr His Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 107 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 107 caggacatca acaattat 18 <210> 108 <211> 6 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 108 Gln 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tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacatatta ctgtcaacag tatgataata taccgatcac cttcggccaa 300 gggacacgac tggagattaa acga 324 <210> 170 <211> 108 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 170 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Ile Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 171 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 171 caggacatta gcaactat 18 <210> 172 <211> 6 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 172 Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 1 5 <210> 173 <211> 9 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 173 gatgcatcc 9 <210> 174 <211> 3 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 174 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cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgccaga 300 catggacacg atactttgac tgagggctac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 210 <211> 125 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 210 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Gln Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Ala Ile Tyr Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Arg Asn Lys Ala Asn Arg Phe Ala Thr Ala Tyr Gly Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile His Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg His Gly His Asp Thr Leu Thr Glu Gly Tyr Gly Met 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 211 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 211 gggtttgcct tcagcgactc tgct 24 <210> 212 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 212 Gly Phe Ala Phe Ser Asp Ser Ala 1 5 <210> 213 <211> 30 <212> DNA <213> Homo 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attcaccatt tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctccaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagccccg 300 tatagtggga cctacttcga atacttccgc cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 258 <211> 122 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 258 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Glu Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Pro Tyr Ser Gly Thr Tyr Phe Glu Tyr Phe Arg His Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 259 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 259 ggattcacct ttgatgatta tgcc 24 <210> 260 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 260 Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 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ggcttgagtg gctgggatgg atcagcggtt tcaatggtag aacagactat 180 acagagaagc tccaggacag aatcaccatg accacagaca gatcctcgag cacagcctac 240 atggaactga ggagcctgag atatgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatgga 300 ctggaaaaac ttggtgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 282 <211> 118 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 282 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Gly Phe Asn Gly Arg Thr Asp Tyr Thr Glu Lys Leu 50 55 60 Gln Asp Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Tyr Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Leu Glu Lys Leu Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 283 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 283 ggttacacct ttaccagcta tggc 24 <210> 284 <211> 8 <212> PRT <213> Homo 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Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu 65 70 75 80 Ser Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Tyr Gly Gly Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 347 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 347 gatgagtcct tcagtgatta ctac 24 <210> 348 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 348 Asp Glu Ser Phe Ser Asp Tyr Tyr 1 5 <210> 349 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 349 attactcata gtggaagtac c 21 <210> 350 <211> 7 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 350 Ile Thr His Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 351 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 351 gcgagaggcg gtgactacgg tggtttactt gactac 36 <210> 352 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 352 Ala Arg Gly Gly Asp Tyr Gly Gly Leu Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 353 <211> 363 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 353 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cctcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtaggagtc actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctat 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagactt 300 ggctggtacg cagaggaggc ttttgaaatc tggggtcaag ggacaatggt caccgtctct 360 tca 363 <210> 354 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 354 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Arg 20 25 30 Ser His Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Gly Trp Tyr Ala Glu Glu Ala Phe Glu Ile Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 355 <211> 30 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 355 ggtggctcca tcagcagtag gagtcactac 30 <210> 356 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 356 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Arg Ser His Tyr 1 5 10 <210> 357 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 357 atctattata gtgggagcac c 21 <210> 358 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 358 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 359 <211> 39 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 359 gcgagacttg gctggtacgc agaggaggct tttgaaatc 39 <210> 360 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 360 Ala Arg Leu Gly Trp Tyr Ala Glu Glu Ala Phe Glu Ile 1 5 10 <210> 361 <211> 526 <212> PRT <213> Plasmodium falciparum <400> 361 Met Ile Arg Ile Lys Lys Lys Leu Ile Leu Thr Ile Ile Tyr Ile His 1 5 10 15 Leu Phe Ile Leu Asn Arg Leu Ser Phe Glu Asn Ala Ile Lys Lys Thr 20 25 30 Lys Asn Gln Glu Asn Asn Leu Thr Leu Leu Pro Ile Lys Ser Thr Glu 35 40 45 Glu Glu Lys Asp Asp Ile Lys Asn Gly Lys Asp Ile Lys Lys Glu Ile 50 55 60 Asp Asn Asp Lys Glu Asn Ile Lys Thr Asn Asn Ala Lys Asp His Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Ile Lys Ser Tyr Leu Asn Thr Asn Val Asn Asp Gly Leu Lys 85 90 95 Tyr Leu Phe Ile Pro Ser His Asn Ser Phe Ile Lys Lys Tyr Ser Val 100 105 110 Phe Asn Gln Ile Asn Asp Gly Met Leu Leu Asn Glu Lys Asn Asp Val 115 120 125 Lys Asn Asn Glu Asp Tyr Lys Asn Val Asp Tyr Lys Asn Val Asn Phe 130 135 140 Leu Gln Tyr His Phe Lys Glu Leu Ser Asn Tyr Asn Ile Ala Asn Ser 145 150 155 160 Ile Asp Ile Leu Gln Glu Lys Glu Gly His Leu Asp Phe Val Ile Ile 165 170 175 Pro His Tyr Thr Phe Leu Asp Tyr Tyr Lys His Leu Ser Tyr Asn Ser 180 185 190 Ile Tyr His Lys Ser Ser Thr Tyr Gly Lys Cys Ile Ala Val Asp Ala 195 200 205 Phe Ile Lys Lys Ile Asn Glu Thr Tyr Asp Lys Val Lys Ser Lys Cys 210 215 220 Asn Asp Ile Lys Asn Asp Leu Ile Ala Thr Ile Lys Lys Leu Glu His 225 230 235 240 Pro Tyr Asp Ile Asn Asn Lys Asn Asp Asp Ser Tyr Arg Tyr Asp Ile 245 250 255 Ser Glu Glu Ile Asp Asp Lys Ser Glu Glu Thr Asp Asp Glu Thr Glu 260 265 270 Glu Val Glu Asp Ser Ile Gln Asp Thr Asp Ser Asn His Thr Pro Ser 275 280 285 Asn Lys Lys Lys Asn Asp Leu Met Asn Arg Thr Phe Lys Lys Met Met 290 295 300 Asp Glu Tyr Asn Thr Lys Lys Lys Lys Leu Ile Lys Cys Ile Lys Asn 305 310 315 320 His Glu Asn Asp Phe Asn Lys Ile Cys Met Asp Met Lys Asn Tyr Gly 325 330 335 Thr Asn Leu Phe Glu Gln Leu Ser Cys Tyr Asn Asn Asn Phe Cys Asn 340 345 350 Thr Asn Gly Ile Arg Tyr His Tyr Asp Glu Tyr Ile His Lys Leu Ile 355 360 365 Leu Ser Val Lys Ser Lys Asn Leu Asn Lys Asp Leu Ser Asp Met Thr 370 375 380 Asn Ile Leu Gln Gln Ser Glu Leu Leu Leu Thr Asn Leu Asn Lys Lys 385 390 395 400 Met Gly Ser Tyr Ile Tyr Ile Asp Thr Ile Lys Phe Ile His Lys Glu 405 410 415 Met Lys His Ile Phe Asn Arg Ile Glu Tyr His Thr Lys Ile Ile Asn 420 425 430 Asp Lys Thr Lys Ile Ile Gln Asp Lys Ile Lys Leu Asn Ile Trp Arg 435 440 445 Thr Phe Gln Lys Asp Glu Leu Leu Lys Arg Ile Leu Asp Met Ser Asn 450 455 460 Glu Tyr Ser Leu Phe Ile Thr Ser Asp His Leu Arg Gln Met Leu Tyr 465 470 475 480 Asn Thr Phe Tyr Ser Lys Glu Lys His Leu Asn Asn Ile Phe His His 485 490 495 Leu Ile Tyr Val Leu Gln Met Lys Phe Asn Asp Val Pro Ile Lys Met 500 505 510 Glu Tyr Phe Gln Thr Tyr Lys Lys Asn Lys Pro Leu Thr Gln 515 520 525 <210> 362 <211> 344 <212> PRT <213> Plasmodium falciparum <400> 362 Lys Asn Val Asn Phe Leu Gln Tyr His Phe Lys Glu Leu Ser Asn Tyr 1 5 10 15 Asn Ile Ala Asn Ser Ile Asp Ile Leu Gln Glu Lys Glu Gly His Leu 20 25 30 Asp Phe Val Ile Ile Pro His Tyr Thr Phe Leu Asp Tyr Tyr Lys His 35 40 45 Leu Ser Tyr Asn Ser Ile Tyr His Lys Ser Ser Thr Tyr Gly Lys Tyr 50 55 60 Ile Ala Val Asp Ala Phe Ile Lys Lys Ile Asn Glu Ala Tyr Asp Lys 65 70 75 80 Val Lys Ser Lys Cys Asn Asp Ile Lys Asn Asp Leu Ile Ala Thr Ile 85 90 95 Lys Lys Leu Glu His Pro Tyr Asp Ile Asn Asn Met Asn Arg Ala Phe 100 105 110 Lys Lys Met Met Asp Glu Tyr Asn Thr Lys Lys Lys Lys Leu Ile Lys 115 120 125 Cys Ile Lys Asn His Glu Asn Asp Phe Asn Lys Ile Cys Met Asp Met 130 135 140 Lys Asn Tyr Gly Thr Asn Leu Phe Glu Gln Leu Ser Cys Tyr Asn Asn 145 150 155 160 Asn Phe Cys Asn Thr Asn Gly Ile Arg Tyr His Tyr Asp Glu Tyr Ile 165 170 175 His Lys Leu Ile Leu Ser Val Lys Ser Lys Asn Leu Asn Lys Asp Leu 180 185 190 Ser Asp Met Thr Asn Ile Leu Gln Gln Ser Glu Leu Leu Leu Thr Asn 195 200 205 Leu Asn Lys Lys Met Gly Ser Tyr Ile Tyr Ile Asp Thr Ile Lys Phe 210 215 220 Ile His Lys Glu Met Lys His Ile Phe Asn Arg Ile Glu Tyr His Thr 225 230 235 240 Lys Ile Ile Asn Asp Lys Thr Lys Ile Ile Gln Asp Lys Ile Lys Leu 245 250 255 Asn Ile Trp Arg Thr Phe Gln Lys Asp Glu Leu Leu Lys Arg Ile Leu 260 265 270 Asp Met Ser Asn Glu Tyr Ser Leu Phe Ile Thr Ser Asp His Leu Arg 275 280 285 Gln Met Leu Tyr Asn Thr Phe Tyr Ser Lys Glu Lys His Leu Asn Asn 290 295 300 Ile Phe His His Leu Ile Tyr Val Leu Gln Met Lys Phe Asn Asp Val 305 310 315 320 Pro Ile Lys Met Glu Tyr Phe Gln Thr Tyr Lys Lys Asn Lys Pro Leu 325 330 335 Thr Gln His His His His His His 340 <210> 363 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker sequence <400> 363 Asp Ile Glu Gly Arg Met Asp 1 5 <210> 364 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker sequence <400> 364 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 365 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HisX6 tag <400> 365 His His His His His His 1 5

Claims

항원 결합 단백질로서,
(i) 플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5: Plasmodium Falciparum reticulocyte binding protein homologue 5) 폴리펩타이드 상의 기준 항원 결합 단백질과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하거나;
(ii) 기준 항원 결합 단백질과 PfRH5 폴리펩타이드에 대한 결합에 경쟁하고,
기준 항원 결합 단백질은,
(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는
(b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항에 있어서,
(i) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
(ii) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항 또는 제2항에 있어서,
(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
(b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열 및 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는
(b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열 및 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 면역글로불린으로서,
서열 번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 54에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 56에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 68에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 72에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 84에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 86에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 88에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 116에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 118에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 132에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 134에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 148에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 152에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 164에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 166에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 180에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 182에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 184에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 196에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 198에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 200에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 212에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 214에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 216에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 228에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 230에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 232에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 236에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 238에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 240에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 244에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 246에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 248에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 252에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 254에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 256에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 260에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 262에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 264에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 268에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 270에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 272에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 276에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 278에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 280에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 284에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 286에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 288에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 292에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 294에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 296에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 300에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 302에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 304에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 316에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 318에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 320에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 324에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 326에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 328에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 332에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 334에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 336에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 340에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 342에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 344에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 348에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 350에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 352에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
또는
서열 번호 356에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 358에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 360에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린;
및/또는
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 46에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 48에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 62에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 64에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 76에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 78에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 80에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 108에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 110에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 112에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 124에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 126에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 142에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 156에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 158에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 160에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 172에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 174에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 176에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 188에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 190에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 192에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 204에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 206에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 208에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3;
또는
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
(1)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(2)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2;
서열 번호 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(3)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 46에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 48에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(4)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 54에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 56에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 62에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 64에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(5)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 68에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 70에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 72에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 76에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 78에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 80에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(6)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 84에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 86에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 88에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 92에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 94에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 96에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(7)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 100에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 102에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 104에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 108에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 110에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 112에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(8)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 116에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 118에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 124에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 126에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(9)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 132에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 134에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 142에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(10)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 148에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 150에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 152에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 156에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 158에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 160에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(11)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 164에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 166에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 172에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 174에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 176에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(12)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 180에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 182에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 184에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 188에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 190에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 192에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(13)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 196에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 198에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 200에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 204에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 206에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 208에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(14)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 212에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 214에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 216에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(15)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 228에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 230에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 232에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(16)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 236에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 238에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 240에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(17)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 244에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 246에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 248에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(18)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 252에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 254에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 256에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(19)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 260에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 262에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 264에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(20)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 268에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 270에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 272에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(21)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 276에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 278에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 280에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(22)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 284에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 286에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 288에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(23)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 292에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 294에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 296에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 220에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 222에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 224에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(24)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 300에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 302에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 304에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(25)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 316에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 318에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 320에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(26)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 324에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 326에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 328에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(27)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 332에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 334에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 336에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(28)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 340에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 342에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 344에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
(29)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 348에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 350에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 352에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역;
및/또는
(30)
중쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 356에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
서열 번호 358에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
서열 번호 360에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는, 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및
경쇄 면역글로불린 가변 영역으로서,
서열 번호 308에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
서열 번호 310에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
서열 번호 312에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는, 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역;
및/또는
(b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적인, 항원 결합 단백질.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
ㆍ 인간 적혈구에서 플라스모듐 팔시파룸의 성장을 저해하는 특성;
ㆍ 인간 적혈구에서 플라스모듐 팔시파룸 균주 D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.II 또는 RF7의 성장을 저해하는 특성;
ㆍ 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정될 때 25℃에서 약 4.72 pM 내지 약 1.67 nM 및/또는 37℃에서 약 1.10 pM 내지 약 1.10 nM의 K_D로 PfRH5 폴리펩타이드 또는 이의 항원 단편에 결합하는 특성;
ㆍ 바시긴 폴리펩타이드(basigin polypeptide)에 대한 PfRH5 폴리펩타이드의 결합을 차단하는 특성;
ㆍ 아미노 말단 잔기 M1-Y139가 결여되고 잔기 K140-Q526을 포함하지만, K247-L295가 결여되고 돌연변이 T216A 및 T299A를 갖는 PfRH5에 결합하는 특성; 및/또는
ㆍ 각각 열 활성화된 인간 또는 아오투스(Aotus) 원숭이 혈청보다 약 1% 내지 10% 높은 열 불활성화된 인간 또는 아오투스 원숭이 혈청에서 플라스모듐 팔시파룸의 최대 성장 저해를 야기하는 특성;
ㆍ 상기 항원 결합 단백질에 노출될 때 플라스모듐 팔시파룸에서 PfRH5의 돌연변이를 유도하지 않는 특성 중 하나 이상을 포함하는, 항원 결합 단백질.
플라스모듐 팔시파룸 망상적혈구 결합 단백질 동족체 5(PfRH5) 폴리펩타이드에 결합된 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 포함하는 복합체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하는 방법으로서,
(a) 상기 항원 결합 단백질의 면역글로불린 사슬을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포로 도입하는 단계;
(b) 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호되는 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
(c) 선택적으로 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장하는 배지로부터 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬을 단리시키는 단계를 포함하는, 방법.
제12항에 있어서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포인, 방법.
제12항 또는 제13항의 방법의 산물인 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬.
제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 포함하는 측면 유동 면역-크로마토그래피 항원-검출 시험 스트립.
폴리펩타이드로서,
(a) 서열 번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 또는 354에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 면역글로불린 중쇄 가변 영역의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 및/또는
(b) 서열 번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 또는 306에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 면역글로불린 경쇄 가변 영역의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
서열 번호 356에 기재된 아미노산 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오타이드.
제16항의 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
제17항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
제1항 내지 제10항, 제14항 및 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 또는 면역글로불린 사슬 또는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질의 하나 이상을 선택적으로 추가의 치료제와 회합하여 포함하는, 조성물 또는 키트.
제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 선택적으로 추가의 치료제와 회합하여 포함하는, 약제학적 조성물.
제20항 또는 제21항에 있어서, 항기생충 약물 또는 백신인 추가의 치료제와 회합된, 조성물 또는 키트.
제20항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제는 클로로퀸, 아토바퀀, 프로구아닐, 아르테메터, 루메판트린, 메플로퀸, 퀴닌, 퀴니딘, 독시사이클린(선택적으로 퀴닌과 조합됨), 클린다마이신, 백신, 항말라리아 백신 및 RTS,S/AS01로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원인, 조성물 또는 키트.
제1항 내지 제10항, 제14항 및 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 또는 조성물을 포함하는, 용기 또는 주사 장치.
플라스모듐 팔시파룸 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 플라스모듐 팔시파룸 감염을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 선택적으로 추가의 치료제와 회합된 치료학적 유효량의 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제25항에 있어서, 대상체는 말라리아를 갖거나, 말라리아에 걸릴 위험이 증가되거나, 말라리아에 걸릴 소인에 있는, 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 항원 결합 단백질을 투여하기 전에, 대상체는 플라스모듐 팔시파룸 감염을 갖는 것으로 진단되는, 방법.
대상체에서 플라스모듐 팔시파룸 감염을 진단하는 방법으로서, 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 상기 대상체로부터의 샘플과 접촉시키는 단계 및 샘플에서의 항원 결합 단백질과 PfRH5 폴리펩타이드 사이의 복합체가 검출되면, 대상체가 플라스모듐 팔시파룸으로 감염되는지를 결정하는 단계를 포함하는, 방법.
제28항에 있어서, 상기 복합체는 항원 결합 단백질 및 PfRH5 폴리펩타이드를 포함하는 측면 유동 시험 스트립에서 형성되는, 방법.
대상체의 신체에 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 투여하는 방법으로서, 항원 결합 단백질을 선택적으로 추가의 치료제와 회합하여 대상체의 신체로 주사하는 단계를 포함하는, 방법.
제30항에 있어서, 항원 결합 단백질은 대상체의 신체로 피하로, 정맥내로 또는 근육내로 주사되는, 방법.