BR112020018691A2 - Anticorpos anti-pfrh5 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos - Google Patents

Anticorpos anti-pfrh5 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos Download PDF

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Abstract

a presente invenção inclui anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam especificamente ao homólogo 5 da proteína de ligação do reticulócito do plasmodium falciparum (pfrh5), composições dos mesmos e métodos de preparação de tais anticorpos, fragmentos e composições. método e composições para tratar, prevenir ou diagnosticar infecção por plasmodium falciparum e malária também fazem parte da presente invenção.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTI- CORPOS ANTI-PFRH5 E FRAGMENTOS DE LIGAÇÃO AO ANTÍ- GENO DOS MESMOS".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] O presente pedido reivindica o benefício disposto no título 35 do U.S.C $ 119(e) do pedido de patente provisório nº U.S. 62/648.259, de- positado em 26 de março de 2018, que é incorporado no presente documen- to em sua totalidade.
REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIA
[0002] O presente pedido incorpora, a título de referência, a lista- gem de sequência enviada em forma legível por computador como o arquivo 10437WO01-Sequence, criado em 22 de março de 2019 e que contém 122.791 bytes.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0003] A presente invenção refere-se, em parte, a anticorpos e a fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à PÍRH5 assim como a métodos para uso dos mesmos para tratar ou prevenir infecções por Plasmodium falciparum.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0004] A invasão de eritrócitos do hospedeiro é uma etapa essen- cial do ciclo de vida do Plasmodium falciparum e da patologia da malá- ria. Vários fármacos antimaláricos têm como alvo os estágios assexu- ados do sangue; no entanto, sua eficácia é ameaçada pelo apareci- mento de cepas resistentes aos fármacos (Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Economics of Malaria Drugs in an Age of Resistance. National Academies Press (EUA). 254 a 266 (2004). PMID:25009879; e Wright et a/., Structure of malaria invasion protein RH5 with erythro- cyte basigin e blocking antibodies, Nature: 515: 427 a 430 (2014). PMID: 25132548). Além disso, os fármacos antimaláricos apresentam diferentes propriedades farmacocinéticas. Alguns fármacos antimalári- cos, tais como artemisinina e quinina, são eliminados rapidamente dentro de um ciclo de vida do parasita. Por outro lado, os fármacos antimaláricos hidrofóbicos e lipofílicos são eliminados lentamente, po- rém são caracterizados por diferentes taxas de absorção dependendo da quantidade de gordura dietética consumida (Arrow et al.).
[0005] O homólogo 5 da proteína de ligação a reticulócitos do Plasmodium falciparum (PÍRH5) é um membro da superfamília de |i- gantes de eritrócitos denominado de proteínas semelhantes a reticuló- citos (RBLs). O PfRH5 que se liga aos eritrócitos é provavelmente es- sencial para o crescimento do parasita no estágio sanguíneo e está implicado no tropismo de espécies da invasão dos eritrócitos. As evi- dências sugerem que um receptor para PÍRHB5 nos eritrócitos é o antí- geno do grupo sanguíneo Ok, basigina (BSG; CD147).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] A presente invenção fornece uma proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) que (i) se liga especificamente ao mesmo epitopo no Ho- mólogo 5 da Proteína de Ligação do Reticulócito do Plasmodium falci- parum (PÍRH5) como; ou (ii) compete pela ligação ao polipeptídeo PÍRH5 com: um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende (a) uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma imunoglobulina de cadeia le- ve que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma imunoglobu- lina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306. Por exemplo, em uma modalidade da in- venção, a proteína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 (por exemplo,
anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreen- de (i) uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (ii) uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou
306. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, a proteína de |li- gação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreende: (a) uma região variável de imuno- globulina de cadeia pesada que compreende uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos 90% da identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306. Em uma modalidade da in- venção, a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreende (a) uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 de uma imunoglobulina de cadeia pesada que compre- ende uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou
354 e pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende a CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306 e pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306. A pre- sente invenção também inclui uma proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mes- mo) que compreende: uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende uma CDR-H1 que compreende uma sequência de ami- noácidos: G Y S FT S Y W (SEQ ID NO: 4); uma CDR-H2 que com- preende a sequência de aminoácidos: | Y P G D S D T (SEQ ID NO: 6); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: A R QDITGTTGFDY(SEQID NO: 8); ou uma CDR-H1 que compre- ende a sequência de aminoácidos: GF TF S S Y A (SEQ ID NO: 20); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IS YD G S N K (SEQ ID NO: 22); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AMKERLFGVVSYYGMDV (SEQID NO: 24); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G GS ISSSSYY(SEQID NO: 36); uma CDR-H2 que compreende a se- quência de aminoácidos: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 38); e uma CDR- H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARQDREALF D Y (SEQ ID NO: 40); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F RF D D Y A (SEQ ID NO: 52); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | NW N S G G K (SEQ ID
NO: 54); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: AKDRGIAARLLSRDAFD M (SEQ ID NO: 56); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: SF TFSSY G (SEQ ID NO: 68); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S Y D G S N K (SEQ ID NO: 70); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AREVRRYYYYGMD V (SEQ ID NO: 72); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F TF D D Y A (SEQ ID NO: 84); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S W NS G D | (SEQ ID NO: 86); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: AMKDTLSGTGTTWYYFD Y(SEQID NO: 88); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFTFSSY G (SEQ ID NO: 100); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S Y D G S N K (SEQ ID NO: 102); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AQDGSSAIYYFYG M D V (SEQ ID NO: 104); ou uma CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácidos: G FT FS SY G(SEQ ID NO: 116); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: I W YDGSN K (SEQ ID NO: 118); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AR GEHYYGSGPFDP(SEQID NO: 120); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GG SIS S F GY Y(SEQID NO: 132); uma CDR-H2 que compreende a se- quência de aminoácidos: | Y Y S G S | (SEQ ID NO: 134); e uma CDR- H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARE RDYGDY F D Y (SEQ ID NO: 136); ou uma CDR-H1 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: G F TF S S Y G (SEQ ID NO: 148); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | W Y D G S N K (SEQ ID NO: 150); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de amino- ácidos: ARDQDYYGSGSSYGMD V (SEQ ID NO: 152); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GF TF
S T Y G (SEQ ID NO: 164); uma CDR-H2 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: | W Y D G T N K (SEQ ID NO: 166); e uma CDR- H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARDPSGGDH YYYYGMD V (SEQ ID NO: 168); ou uma CDR-H1 que compreen- de a sequência de aminoácidos: GF TF S S Y G (SEQ ID NO: 180); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: ISFDE R N K (SEQ ID NO: 182); e uma CDR-H3 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: AS EVGYSFGHDAFDI(SEQID NO: 184); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F T FNNYA (SEQ ID NO: 196); uma CDR-H2 que compreende a se- quência de aminoácidos: | S G S G D S T (SEQ ID NO: 198); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKDQGLY YYGSGSFD Y(SEQ ID NO: 200); ou uma CDR-H1 que compre- ende a sequência de aminoácidos: GF AF S D S A (SEQ ID NO: 212); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | R NKANRF AT (SEQ ID NO: 214); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARHGHDTLTEGYGMDV(SEQ ID NO: 216); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de ami- noácidos: G G TF SS YT(SEQID NO: 228); uma CDR-H2 que com- preende a sequência de aminoácidos: | I PL Y G T A (SEQ ID NO: 230); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: À STLELRAFDAFDI(SEQID NO: 232); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G G S 1S S G G Y Y (SEQ ID NO: 236); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoáci- dos: I Y Y S G S T (SEQ ID NO: 238); e uma CDR-H3 que compreen- de a sequência de aminoácidos: ARAP PYNW FD Y(SEQID NO: 240); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFTFSDYY(SEQID NO: 244); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S N S G N T Q (SEQ ID NO: 246); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: TREGLEY
SSSEPFDY(SEQID NO: 248); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G Y TF T AY Y (SEQ ID NO: 252); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: INPNNGD T (SEQ ID NO: 254); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARDDLAAAGIGWFDS(SEQID NO: 256); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GF TF D D Y A (SEQ ID NO: 260); uma CDR-H2 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: I S W NS E S | (SEQ ID NO: 262); e uma CDR- H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKAPYSGTY FEYFRH(SEQ ID NO: 264); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F TF S S Y G (SEQ ID NO: 268); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IS YDGSN K (SEQ ID NO: 270); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKD D W NYDAFbD I(SEQID NO: 272); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GGSISSS G Y Y (SEQ ID NO: 276); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 278); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARVDYGSGSSFDY (SEQ ID NO: 280); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G Y TF T S Y G (SEQ ID NO: 284); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S G F NG R T (SEQ ID NO: 286); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: ARDGLEKLGD Y(SEQ ID NO: 288); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GF TF SNS G(SEQID NO: 292); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoáci- dos: I W HD GS Y K(SEQ ID NO: 294); e uma CDR-H3 que compre- ende a sequência de aminoácidos: ARDDYYASGTSVDV (SEQ ID NO: 296); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G Y TF T G Y Y (SEQ ID NO: 300); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: I N PN SG GT (SEQID
NO: 302); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: ARE EVDDFWSGYLD Y(SEQID NO: 304); ou uma CDR- H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFAVNGDY (SEQ ID NO: 316); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | Y S S G N T (SEQ ID NO: 318); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARDFPPMSGADY (SEQ ID NO: 320); ou uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G Y TL TELS (SEQ ID NO: 324); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: F D P E H G KI (SEQ ID NO: 326); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: ATFYNWNSYYFGMD V(SEQID NO: 328); ou um CDR- H1 que compreende as sequência de aminoácidos: GFTFSSYA (SEQ ID NO: 332); um CDR-H2 que compreende a sequência de ami- noácidos: V S G S A D | T (SEQ ID NO: 334); e um CDR-H3 que com- preende a sequência de aminoácidos: AKDKVYNWNYGIYYG M D V (SEQ ID NO: 336); ou um CDR-H1 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: GG SI SS SS YY(SEQID NO: 340); um CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 342); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoá- cidos: ARQGRWERENFD Y(SEQ ID NO: 344); ou um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: D E SF S D Y Y (SEQ ID NO: 348); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoáci- dos: I TH S G S T (SEQ ID NO: 350); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AR G GD Y GG LLD Y(SEQ ID NO: 352); e/ou uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QS | R NY (SEQ ID NO: 12); um CDR-L2 que compreende a se- quência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 14); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQ S YS TP FT (SEQID NO: 16); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci-
dos: QD | NR D (SEQ ID NO: 28); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: D A S (SEQ ID NO: 30); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QY KNLP YT(SEQID NO: 32); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QR1G SS (SEQID NO: 44); um CDR-L2 que compreende a se- quência de aminoácidos: Y A S (SEQ ID NO: 46); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: H QS S TL P T (SEQ ID NO: 48); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QD V S S Y (SEQ ID NO: 60); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 62); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QH LN TYP Y T(SEQ ID NO: 64); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QD | S N Y (SEQ ID NO: 76); um CDR-L2 que compreende a se- quência de aminoácidos: D A S (SEQ ID NO: 78); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y NNLPLT(SEQID NO: 80); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QG 1 S S Y (SEQ ID NO: 92); um CDR-L2 que compreende a se- quência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 94); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QVNSYPLT(SEQID NO: 96); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: Q D IN N Y (SEQ ID NO: 108); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 110); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: LQYNSYHPT (SEQ ID NO: 112); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S N Y (SEQ ID NO: 124); um CDR-L2 que com- preende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 126); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQS YS SP L T (SEQ ID NO: 128); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S V S S N (SEQ ID NO: 140); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 142); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y NN W P LT (SEQ ID NO: 144); ou um CDR-L1 que compreende a se- quência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 156); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 158); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QSYSTPLT(SEQID NO: 160); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q D | S N Y (SEQ ID NO: 172); um CDR- L2 que compreende a sequência de aminoácidos: D A S (SEQ ID NO: 174); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QYDNIPIT(SEQ ID NO: 176); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q D | S N Y (SEQ ID NO: 188); um CDR- L2 que compreende a sequência de aminoácidos: D A S (SEQ ID NO: 190); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QYDNFPLT(SEQID NO: 192); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 204); um CDR- L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 206); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QSYSTPFT(SEQID NO: 208); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR- L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QSYSTPPIT(SEQID NO: 224); ou um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S VS S S Y (SEQ ID NO: 308); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 310); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QQ Y GS S P W T (SEQ ID NO: 312). Em uma modalidade da invenção, a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreende (1) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GY SFT
S Y W (SEQ ID NO: 4); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácido: | Y P G D S D T (SEQ ID NO: 6); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARQDITGTTGFDY (SEQ ID NO: 8); e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: Q S | R N Y (SEQ ID NO: 12); uma CDR-L2 que compre- ende a sequência de aminoácido: A A S (SEQ ID NO: 14); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: QQS YS TP F T (SEQ ID NO: 16); (2) a região variável de imunoglobulina de ca- deia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácido: GF TF SS YA (SEQ ID NO: 20); uma CDR- H2 que compreende a sequência de aminoácido: IS YDGSNK (SEQ ID NO: 22); uma CDR-H3 que compreende a sequência de ami- noácido: AKERLFGVVSYYGMD V(SEQID NO: 24); e a regi- ão variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: QD INRD (SEQ ID NO: 28); uma CDR-L2 que compreende a sequência de ami- noácido: D A S (SEQ ID NO: 30); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q Y KNLP Y T(SEQ ID NO: 32); (3) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GG SIS S SS Y Y(SEQID NO: 36); uma CDR-H2 que compreende a sequên- cia de aminoácido: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 38); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARQDREALFDY (SEQ ID NO: 40); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de ami- noácido: QR 1 G S S (SEQ ID NO: 44); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: Y A S (SEQ ID NO: 46); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: H QS S TL P T (SEQ ID NO: 48); (4) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de ami- noácido: GF RF DD YA (SEQ ID NO: 52); uma CDR-H2 que com- preende a sequência de aminoácido: | N W N S G G K (SEQ ID NO: 54); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: A K DRGIAARLLSRDAF DM (SEQ ID NO: 56); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: Q D VS S Y (SEQ ID NO: 60); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: AA S (SEQ ID NO: 62); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: QH LN T Y P Y T (SEQ ID NO: 64); (5) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: SF TFSSY G(SEQ ID NO: 68); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoáci- do: IS YDG SNK (SEQ ID NO: 70); e uma CDR-H3 que compreen- de a sequência de aminoácido: ARE VRRYYYYGMDV(SEQID NO: 72); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoá- cido: QD | S N Y (SEQ ID NO: 76); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: D A S (SEQ ID NO: 78); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q Y NNLPLT(SEQID NO: 80); (6) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoá- cido: GFTFDDYA(SEQID NO: 84); uma CDR-H2 que compreen- de a sequência de aminoácido: 1 S W NS G D | (SEQ ID NO: 86); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: AKDTL SGTGTTWYYFDY(SEQID NO: 88); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: Q G | S S Y (SEQ ID NO: 92); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: AA S (SEQ ID NO: 94); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q VNSYPLT(SEQID NO: 96); (7) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GF TF SS Y G (SEQ ID NO: 100); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoáci- do: IS YDGSNK(SEQ ID NO: 102); e uma CDR-H3 que compre- ende a sequência de aminoácido: AQDGSSAIYYFYGMDV (SEQ ID NO: 104); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: Q D | N N Y (SEQ ID NO: 108); uma CDR-L2 que com- preende a sequência de aminoácido: A A S (SEQ ID NO: 110); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: LQYNSYH P T (SEQ ID NO: 112); (8) a região variável de imunoglobulina de ca- deia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácido: GF TF SS Y G(SEQ ID NO: 116); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácido: I W YDGSN K (SEQ ID NO: 118); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARGE HY YGSGPFDP(SEQID NO: 120) eare- gião variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: QS ISNY (SEQ ID NO: 124); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: A A S (SEQ ID NO: 126); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q S Y S SP L T (SEQ ID NO: 128); (9) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreen- de: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GG S ISSFGYY(SEQID NO: 132); uma CDR-H2 que compreende a se- quência de aminoácido: | Y Y S G S | (SEQ ID NO: 134); e uma CDR- H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARE RDYGDYF D Y (SEQ ID NO: 136); e a região variável de imunoglobulina de ca- deia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequên- cia de aminoácido: Q S V S S N (SEQ ID NO: 140); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: G A S (SEQ ID NO: 142); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q Y N N W P LT (SEQ ID NO: 144); (10) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GF TF S S Y G (SEQ ID NO: 148); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácido: I W YDGSN K (SEQ ID NO: 150); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARDQDYYGSGSSYGMD V(SEQ ID NO: 152); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácido: QS ISS Y (SEQ ID NO: 156); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: A A S (SEQ ID NO: 158); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q S Y S TP L T (SEQ ID NO: 160); (11) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que com- preende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácido: GFTFSTYG(SEQID NO: 164); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácido: | W Y D GT N K (SEQ ID NO: 166); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ARDPSGG DHYYYYGMD V(SEQ ID NO: 168); e a região variável de imu- noglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que com- preende a sequência de aminoácido: Q D | S N Y (SEQ ID NO: 172); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácido: D A S (SEQ ID NO: 174); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácido: Q Q Y D NI P 1 T (SEQ ID NO: 176); (12) a região variá- vel de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR- H1 que compreende a sequência de aminoácido: GFTFSSYG (SEQ ID NO: 180); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácido: | SF D E R N K (SEQ ID NO: 182); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácido: ASEVGYSFGHDAF D | (SEQ ID NO: 184); e uma região variável de imunoglobulina de ca-
deia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q D | S N Y (SEQ ID NO: 188); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: D A S (SEQ ID NO: 190); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y D N F PL T(SEQ ID NO: 192); (13) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F TF N NY A (SEQ ID NO: 196); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IS GS GDS T (SEQ ID NO: 198); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKD QGLYYYGSGSFD Y(SEQID NO: 200); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: QS ISS Y (SEQ ID NO: 204); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 206); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q S Y S TP F T (SEQ ID NO: 208); (14) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que com- preende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFAFSDSA(SEQ ID NO: 212); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: I RNKANRFAT (SEQID NO: 214); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AR H G H DTLTEGYGMD V(SEQID NO: 216); e a região variável de imu- noglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compre- ende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QQ S YSTPPIT(SEQID NO: 224); (15) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GG TF SSYT(SEQID NO: 228); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IIPLYGTA(SEQID NO: 230); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AS TLELRAFDAFDI(SEQID NO: 232); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que com- preende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S1SSY(SEQID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que com- preende a sequência de aminoácidos: QQ S YS TP P1IT(SEQID NO: 224); (16) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de ami- noácidos: G G S 18 S G G Y Y (SEQ ID NO: 236); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 238); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: À RAPPYNWFD Y(SEQID NO: 240); e a região variável de imuno- globulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compreen- de a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QQ S YSTPPIT(SEQID NO: 224); (17) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GF TFSDVY Y(SEQID NO: 244); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: ISNSGNT Q(SEQ ID NO: 246); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos:s TRE GLEYSSSEPFDY(SEQID NO: 248); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoáci- dos: QS 1 S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQ S YS TPPIT (SEQ ID NO: 224); (18) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G Y TF T A Y Y (SEQ ID NO: 252); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: I N PNNG DT (SEQID NO: 254); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoáci- dos: ARDDLAAAGIGW FDS (SEQID NO: 256); e a região va- riável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S IS S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q S Y S TP P1T(SEQID NO: 224); (19) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFTFDDY A (SEQ ID NO: 260); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | S W NS E S | (SEQ ID NO: 262); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKAPYSGTYFEYF R H (SEQ ID NO: 264); e a região variável de imunoglobulina de ca- deia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que com- preende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQS YS TP P 1 T (SEQ ID NO: 224); (20) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácidos: GF TF SS Y G (SEQ ID NO: 268); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IS YDGSN K (SEQ ID NO: 270); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AKD D WNYDAF DI(SEQID NO: 272); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR- L1 que compreende a sequência de aminoácidos: QS | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q S Y S TP P1T (SEQ ID NO: 224); (21) uma re- gião variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GG SIS S S GY Y (SEQ ID NO: 276); um CDR-H2 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: | Y Y S G S T (SEQ ID NO: 278); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARVDYGSGSSF D Y (SEQ ID NO: 280); e a região variável de imunoglobulina de ca- deia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que com- preende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQS YS TP P 1 T (SEQ ID NO: 224); (22) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácidos: G Y TF TS Y G (SEQ ID NO: 284); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: IS GFNGR T (SEQ ID NO: 286); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: AR D GLE KL G D Y (SEQ ID NO: 288); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR- L1 que compreende a sequência de aminoácidos: QS | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q S Y S TP P1T(SEQID NO: 224); (23) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GFTFSNS G (SEQ ID NO: 292); um CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | W H D G S Y K (SEQ ID NO: 294); e um CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARDDYYASGTSVD V (SEQ ID NO: 296); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: um CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S | S S Y (SEQ ID NO: 220); um CDR-L2 que compre- ende a sequência de aminoácidos: A A S (SEQ ID NO: 222); e um CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQS YS TP
P 1 T (SEQ ID NO: 224); (24) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: um CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácidos: G Y TF T G Y Y (SEQ ID NO: 300); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: INPN SG G T (SEQ ID NO: 302); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARE EVDDFWSGYLD Y(SEQID NO: 304); e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreen- de: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: Q S V S SS Y (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y GS S P W T (SEQ ID NO: 312); (25) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pe- sada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: G F A V N G D Y (SEQ ID NO: 316); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: | Y S S G NT (SEQ ID NO: 318); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: À RDFPPMSGAD Y(SEQ ID NO: 320); e a região variável de imu- noglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que com- preende a sequência de aminoácidos: Q S VS S S Y (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G À S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y GS S P W T (SEQ ID NO: 312); (26) a região va- riável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos: GY TLTEL S (SEQ ID NO: 324); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: F D P E H G KI (SEQ ID NO: 326); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ATFYNWNSYYFGM D V (SEQ ID NO: 328); e a região variável de imunoglobulina de ca- deia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequên- cia de aminoácidos: Q S VS S S Y (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q QYGSSPWT (SEQ ID NO: 312); (27) a região variável de imuno- globulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que com- preende a sequência de aminoácidos: G FTF SS YA (SEQ ID NO: 332); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: V S GSADIT(SEQID NO: 334); e uma CDR-H3 que compreende a se- quência de aminoácidos: AKDKVYNWNYGIYYGMDV(SEQ ID NO: 336); e a região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoá- cidos: QS VS S S Y (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreen- de a sequência de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: QQYGSSP W T (SEQ ID NO: 312); (28) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a se- quência de aminoácidos: GG SI SS SS Y Y(SEQID NO: 340); uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos: I Y YS GST (SEQ ID NO: 342); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: ARQGRWERENFD Y(SEQ ID NO: 344); e a re- gião variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos: QSVSSSY (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G A S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compre- ende a sequência de aminoácidos: Q Q Y G S S P W T (SEQ ID NO: 312); e/ou (29) a região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 que compreende a sequência de ami- noácidos: D E SF S D Y Y (SEQ ID NO: 348); uma CDR-H2 que com- preende a sequência de aminoácidos: | TH S G S T (SEQ ID NO: 350); e uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos: À RGGDYGGLLD Y(SEQ ID NO: 352); e a região variável de imu-
noglobulina de cadeia leve que compreende: uma CDR-L1 que com- preende a sequência de aminoácidos: Q S VS S S Y (SEQ ID NO: 308); uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos: G À S (SEQ ID NO: 310); e uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos: Q Q Y GS S P W T (SEQ ID NO: 312). Por exemplo, em uma modalidade da invenção, a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreende (a) uma imunoglobulina de cadeia pesada que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende a se- quência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306. Em uma moda- lidade da invenção, a proteína de ligação ao antígeno é multiespecífica (por exemplo, biespecífica, multiparatópica ou biparatópica).
[0007] Em uma modalidade da invenção, a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) compreende uma ou mais dentre as seguintes proprieda- des: Inibe o crescimento de Plasmodium falciparum em hemácias hu- manas; Inibe o crescimento da cepa de Plasmodium falciparum D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.ll ou RF7 em he- mácias humanas; Bloqueia a ligação do polipeptídeo PÍRH5 ao poli- peptídeo de basigina; por exemplo, a uma concentração de cerca de 6,67 micromolar, causa a inibição máxima do crescimento (por exem- plo, in vitro) do Plasmodium falciparum (por exemplo, cepa FCR- 1/FVO) em soro humano ou de macaco Aotus inativado por calor (por exemplo, medido pela atividade da lactato desidrogenase do parasita (LDH)) em cerca de 1 a 10% (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 92 ou 10%) (em relação aos eritrócitos não infectados) superior ao soro hu-
mano não inativado por calor ou por soro de macaco Aotus, respeciti- vamente; quando exposto à dita proteína de ligação ao antígeno, não induz mutação de PfRH5 no Plasmodium falciparum (por exemplo, ce- pa 3D7), por exemplo, in vitro após cerca de 45 dias de aumento gra- dual da concentração de anticorpo, por exemplo, de cerca de 1XECs5o a cerca de 110XECso; e/ou se liga à PÍRH5 sem os resíduos amino- terminal M1-Y139 e incluindo os resíduos K140-Q526, porém sem K247-L295 e que tem as mutações T216A e T299A, por exemplo, em que a proteína de ligação ao antígeno compreende uma sequência de aminoácidos conforme apresentado no presente documento.
[0008] A presente invenção também inclui um complexo que com- preende uma proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) ligada a um polipep- tídeo homólogo 5 (PÍRH5) da proteína de ligação a reticulócitos de Plasmodium Falciparum. Por exemplo, a PÍRH5 está na superfície de uma célula como Plasmodium Falciparum (por exemplo, merozoítos de Plasmodium Falciparum), por exemplo, no corpo de um sujeito (por exemplo, um ser humano). Em uma modalidade da invenção, a PÍRH5 está na superfície de um Plasmodium Falciparum, por exemplo, um merozoíto em uma hemácia.
[0009] A presente invenção também fornece um método para pro- duzir uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) apresenta- do no presente documento ou cadeia de imunoglobulina da mesma que compreende: (a) introduzir um ou mais polinucleotídeos que codi- ficam uma cadeia de imunoglobulina da dita proteína de ligação ao an- tígeno em uma célula hospedeira (por exemplo, uma célula de ovário de hamster chinês); (b) cultivar a célula hospedeira em condições fa- voráveis à expressão do polinucleotídeo; e (c) opcionalmente, isolar a proteína de ligação ao antígeno ou cadeia de imunoglobulina da célula hospedeira e/ou meio no qual a célula hospedeira é cultivada. Uma proteína de ligação ao antígeno ou cadeia de imunoglobulina que é um produto de tal método também faz parte da presente invenção.
[0010] Uma tira de teste de detecção de antígeno imunocromato- gráfica de fluxo lateral que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-Pf(RH5 apresentada no presente documento (por exem- plo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) é parte da presente invenção. Métodos para detectar Plasmodium falciparum em uma amostra de sangue de um sujeito e/ou do corpo de um sujeito, com o uso da tira de teste, também são parte da presente invenção.
[0011] Um polipeptídeo que compreende: (a) CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina de uma cadeia de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; ou (b) CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 da região variável da cadeia leve de imunoglobulina de uma cadeia de imunoglobulina que compreende a sequência de ami- noácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306 também é parte da presente in- venção. Os polinucleotídeos (por exemplo, DNA ou RNA) que codifi- cam esse polipeptídeo também fazem parte da presente invenção jun- to de um vetor que compreende o polinucleotídeo.
[0012] A presente invenção também fornece uma célula hospedei- ra (por exemplo, uma célula de ovário de hamster chinês) que com- preende a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) ou uma cadeia de imu- noglobulina ou um polipeptídeo ou polinucleotídeo ou vetor que é apresentado no presente documento.
[0013] A presente invenção também fornece uma composição ou kit que compreende uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dentre as proteínas de ligação ao antígeno anti-PíRH5 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) apresentadas no pre- sente documento, opcionalmente em associação com outro agente terapêutico (por exemplo, um medicamento antiparasitário, cloroquina, atovaquona, proguanil, artemeter, lumefantrina, mefloquina, quinina, quinidina, doxiciclina (opcionalmente em combinação com quinina), clindamicina, uma vacina, uma vacina antimalárica ou RTS,S/AS01). A presente invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 apresen- tada no presente documento e um carreador farmaceuticamente acei- tável e, opcionalmente, um outro agente terapêutico.
[0014] A presente invenção também fornece um vaso ou dispositi- vo de injeção (por exemplo, um autoinjetor ou seringa pré-cheia) que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) ou composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) apresen- tada no presente documento.
[0015] A presente invenção fornece um método para tratar ou pre- venir infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária) em um sujeito (por exemplo, um ser humano) com necessidade do mes- mo, que compreende administrar (por exemplo, por via parenteral) uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfFRH5 discutida no presente documento opcional- mente associada a um outro agente terapêutico. Em uma modalidade da invenção, o sujeito é diagnosticado como portador de uma infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária) antes do início do tratamento. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, o sujeito é diagnosticado com o uso de uma tira de teste de fluxo lateral, confor- me apresentado no presente documento. Em uma modalidade da in-
venção, o sujeito não é infectado com Plasmodium falciparum, porém recebe uma quantidade terapeuticamente eficaz da proteína de ligação ao antígeno anti-PíRHB5 profilaticamente, isto é, de modo a prevenir tal infecção.
[0016] A presente invenção também fornece um método para di- agnosticar a infecção por Plasmodium falciparum em um sujeito que compreende colocar uma proteína de ligação ao antígeno anti-PÍíRH5 da presente invenção em contato com uma amostra (por exemplo, sangue) do dito sujeito e, caso seja detectado um complexo entre a proteína de ligação ao antígeno e o polipeptídeo PÍRH5 na amostra, determinar que o sujeito está infectado com Plasmodium falciparum. Por exemplo, o dito complexo pode ser formado em uma tira de teste de fluxo lateral, conforme apresentado no presente documento, que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 da pre- sente invenção e o polipeptídeo PÍRH5 (da amostra do sujeito).
[0017] A presente invenção fornece um método para administrar uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anti- corpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) apresentada no presente documento ao corpo de um sujeito (por exemplo, um ser hu- mano) que compreende injetar a proteína de ligação ao antígeno no corpo do sujeito, opcionalmente associado a um outro agente terapêu- tico, por exemplo, por via subcutânea, intravenosa ou intramuscular.
[0018] A presente invenção também abrange qualquer polipeptí- deo ou polinucleotídeo de imunoglobulina apresentado no presente documento, por exemplo, que compreende qualquer sequência de aminoácidos apresentada em um membro selecionado a partir do gru- po que consiste na SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 130, 132, 134, 136, 138,
140, 142, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 226, 228, 230, 232, 234, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 e 360; ou um polinucleotídeo que compreende qualquer sequência de nucleotídeos apresentada em um membro se- lecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO: 1,3, 5,7, 9, 11,13, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357 e 359.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0019] A Figura 1 mostra os alinhamentos da sequência de PfRHS5 correspondentes para cada anticorpo PfRH5-específico após 45 dias de aumentos graduais na pressão anticorpo (1 x EC5so a 110 x EC50).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0020] O Plasmodium falciparum é um protozoário parasita, uma das espécies de Plasmodium que causam a malária em humanos, que pode ser transmitida pela fêmea do mosquito Anopheles. A malária causada por essa espécie (que pode ser denominada de “falciparum malaria”) é uma forma altamente perigosa de malária, com uma eleva- da taxa de complicações e mortalidade. Consultar, por exemplo, Gar- dner et al., Genome sequence of the human malaria parasite Plasmo- dium falciparum, Nature 419(6906): 498 a 511 (2002). O Plasmodium falciparum inclui qualquer cepa do mesmo que exibe sensibilidade a uma proteína de ligação ao antígeno da presente invenção, por exem- plo, D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.ll ou RF7. “Infecção por Plasmodium falciparum ” refere-se à invasão e à multipli- cação de Plasmodium falciparum no corpo de um sujeito. A presente invenção fornece várias proteínas de ligação ao antígeno que são efi- cazes para o tratamento ou profilaxia da infecção por Plasmodium fal- ciparum.
[0021] Uma "proteína de ligação ao antígeno" anti-PfRH5 é um único polipeptídeo (por exemplo, um ScFv (fragmento variável de ca- deia única)) ou complexo de mais de um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo IgG tetramérico) que se liga especificamente ao polipep- tídeo PÍRH5, para exemplo, um anticorpo anti-PfRH5 ou fragmento de ligação ao antígeno, seja monoespecífico ou multiespecífico (por exemplo, biespecífico) ou monovalente ou multivalente (por exemplo, bivalente). Uma proteína de ligação ao antígeno monovalente tem um único domínio de ligação ao antígeno, ao passo que uma proteína de ligação ao antígeno bivalente tem dois domínios de ligação ao antíge- no.
[0022] Basigina (BSG, indutor de metaloproteinase de matriz ex- tracelular, EMMPRIN, CD147) é um polipeptídeo que é um alvo nos eritrócitos aos quais a P(RH5 se liga. Em uma modalidade da inven- ção, a sequência de aminoácidos da basigina é apresentada no núme- ro de acesso Uniprot Q54A51. Consultar, por exemplo, Crosnier et al., Basigin is a receptor essential for erythrocyte invasion by Plasmodium falciparum, Nature. 2011 Nov 9; 480(7378): 534 a 7. Em uma modali-
dade da invenção, uma proteína de ligação ao antígeno da presente invenção bloqueia a ligação entre P(RH5 e BSG. HOMÓLOGO 5 DA PROTEÍNA DE LIGAÇÃO A RETICULÓCITOS PLASMODIUM FALCIPARUM (PFRH5)
[0023] O homólogo 5 da proteína de ligação a reticulócitos do Plasmodium falciparum (PÍRH5) é um membro da superfamília de |i- gantes de eritrócitos denominado de proteínas semelhantes a reticuló- citos (RBLs). As evidências sugerem que a PIRH5 é essencial para o crescimento em estágio sanguíneo de uma infecção por Plasmodium falciparum. O PÍRH5 se liga aos eritrócitos e está implicado no tropis- mo de espécies da invasão dos eritrócitos. Consultar, por exemplo, Bustamante et a/., Vaccine. 2 de janeiro de 2013; 31(2): 373 a 379.
[0024] Em uma modalidade da invenção, a PÍRH5 compreende a sequência de aminoácidos: MIRIKKKLIL —TIIYIHLFIL NRLSFENAIK KTKNQENNLT LLPIKSTEEE
KDDIKNGKDI KKEIDNDKEN IKTNNAKDHS TYIKSYLNTN VNDGLKYLFI PSHNSFIKKY SVFNQINDGM LLNEKNDVKN NEDYKNVDYK NVNFLQYHFK ELSNYNIANS IDILQEKEGH LDFVIIPHYT FLDYYKHLSY NSIYHKSSTY GKCIAVDAFI KKINETYDKV KSKCNDIKND LIATIKKLEH PYDINNKNDD SYRYDISEEI DDKSEETDDE TEEVEDSIQD TDSNHTPSNK KKNDLMNRTF KKMMDEYNTK KKKLIKCIKN HENDFNKICM DMKNYGTNLF EQLSCYNNNF CNTNGIRYHY DEYIHKLILS VKSKNLNKDL SDMTNILQOS ELLLTNLNKK MGSYIYIDTI KFIHKEMKHI FNRIEYHTKI INDKTKIIQD KIKLNIWRTF
QKDELLKRIL DMSNEYSLFI TSDHLRQMLY NTFYSKEKHL NNIFHHLIYV LQMKFNDVPI KMEYFQTYKK NKPLTOQ (SEQ ID NO: 361)
[0025] O polipeptídeo “PI(RH5ANL.6his” (Pf(RH5 (K140-0526; del M1-Y139; del K247-L295; T216A; T299A)) que não tem os resíduos N- terminais 1 a 139 tampouco os resíduos 247 a 295 e tem mutações T216A e T299A, assim como uma tag de Hiss C-terminal é parte da presente invenção junto dos polinucleotídeos que codificam o polipeptí- deo. Em uma modalidade da invenção, o polipeptídeo PIRH5ANL.6his compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 362:
KNVNFLQYHFKELSNYNIANSIDILQEKEGHLDFVIIPHYTFLDYYKHLS YNSIYHKSSTYGKYIAVDAFIKKINEAYDKVKSKCNDIKNDLIATIKKLE HPYDINNMNRAFKKMMDEYNTKKKKLIKCIKNHENDFNKICMDMKNY GTNLFEQLSCYNNNFCNTNGIRYHYDEYIHKLILSVKSKNLNKDLSDM TNILQQSELLLTNLNKKMGSYIYIDTIKFIHKEMKHIFNRIEYHTKIINDKT KIIQDKIKLNIWRTFQKDELLKRILDMSNEYSLFITSDHLRQMLYNTFYS
KEKHLNNIFHHLIYVLQMKFNDVPIKMEYFQTYKKNKPLTQHHHHHH (SEQ ID NO: 362). Em uma modalidade da invenção, o polipeptídeo está em uma forma cristalizada ou não cristalizada.
ANTICORPOS E FRAGMENTOS DE LIGAÇÃO A ANTÍGENO
[0026] A presente invenção fornece proteínas de ligação ao antí- geno, tais como anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que se ligam especificamente à proteína PÍRH5 ou a um fra- gmento antigênico da mesma. As cadeias de imunoglobulina da pre- sente invenção são descritas no presente documento no Exemplo 1 na Tabela 1-1.
[0027] O termo "anticorpo", conforme usado no presente documen- to, refere-se a moléculas de imunoglobulina que compreendem quatro cadeias polipeptídicas, duas cadeias pesadas (HCs) e duas cadeias le- ves (LCs) interligadas por ligações dissulfeto (ou seja, "moléculas de an- ticorpo completo"), assim como multímeros (por exemplo, IgM) - por exemplo, —H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2. Cada cadeia pesada (HC) compreende uma região variável de cadeia pesada (“HCVR” ou “VW”) (por exemplo, SEQ ID
NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354) e uma região constante de cadeia pesada (compreendida de domínios CH1, CH2 e CH3). Cada cadeia leve (LC) é composta por uma região variável de cadeia leve ("LCVR ou "V.") (por exemplo, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306) e uma região constante de cadeia leve (CL). As regiões Vx e V. podem ser subdivididas adicionalmente em regiões de hipervariabilidade, denominadas de regiões determinantes de com- plementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais con- servadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada Vx e V. é com- posta por três CDRs e quatro FRs, dispostas da extremidade amino até a extremidade carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Em determinadas modalidades da invenção, as FR do anticorpo (ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) podem ser idênticas às sequências da linhagem germinativa humana ou podem ser modificadas natural ou artificialmente.
[0028] Tipicamente, os domínios variáveis de tanto da cadeia de imunoglobulina pesada quanto da cadeia de imunoglobulina leve com- preendem três regiões hipervariáveis, também denominadas de regi- ões determinantes de complementaridade (CDRs), localizadas dentro de regiões estruturantes relativamente conservadas (FR). De modo geral, da extremidade N à extremidade C, os domínios variáveis de cadeia leve e pesada compreendem FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. Em uma modalidade da invenção, a atribuição de ami- noácidos a cada domínio está de acordo com as definições de Se- quences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al/.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5º edição; Publicação NIH nº 91 a 3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1 a 75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6.609 a 6.616; Chothia, et al/., (1987) J Mol.
Biol. 196:901 a 917 ou Chothia, et a/., (1989) Nature 342:878 a 883.
[0029] A presente invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antí- geno dos mesmos, assim como composições monoclonais que com- preendem uma pluralidade de proteínas de ligação ao antígeno mono- clonais isoladas. O termo "anticorpo monoclonal", conforme usado no presente documento, refere-se a uma população de anticorpos subs- tancialmente homogêneos, isto é, as moléculas de anticorpo que com- preendem a população são idênticas na sequência de aminoácidos, com exceção de possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em pequenas quantidades. Uma "pluralidade" de tais anticorpos monoclonais e fragmentos em uma composição refere-se a uma concentração de anticorpos e fragmentos idênticos (isto é, con- forme discutido acima, na sequência de aminoácidos, com exceção de possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades menores) que está acima do que normalmente ocorre- ria na natureza, por exemplo, no sangue de um organismo hospedeiro, tal como um camundongo ou um humano.
[0030] Em uma modalidade da invenção, uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, o anticorpo ou fragmento de li- gação ao antígeno compreende um domínio constante de cadeia pe- sada, por exemplo, do tipo IgA (por exemplo, IgA1 ou IgA2), I1gD, IgE, IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) ou IgM. Em uma modali- dade da invenção, uma proteína de ligação ao antígeno, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, compreende um domí- nio constante de cadeia leve, por exemplo, do tipo kappa ou lambda.
[0031] O termo proteína de ligação ao antígeno "humano", tal co- mo um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, conforme usa- do no presente documento, inclui anticorpos e fragmentos com regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina de linha germinativa humana em uma célula humana ou enxertada em uma célula humana, por exemplo, uma célula de camundongo. Con- sultar, por exemplo, os documentos nº US8502018, nº US6596541 ou nº US5789215. Os mAbs humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese sítio-específica aleatória in vitro ou por mutação so- mática in vivo), por exemplo, nas CDRs e, em particular, na CDR3. No entanto, os termos "anticorpo humano”, conforme usado no presente documento, não se destinam a incluir mAbs nas quais as sequências de CDR derivadas da linhagem germinativa de outra espécie de mamí- fero (por exemplo, camundongo) foram enxertadas em sequências FR humanas. O termo inclui anticorpos produzidos de maneira recombi- nante em um mamífero não humano ou em células de um mamífero não humano. O termo não está destinado a incluir anticorpos isolados ou gerados em um sujeito humano.
[0032] A presente invenção inclui proteínas quiméricas de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpos e fragmentos de liga- ção ao antígeno dos mesmos e métodos de uso dos mesmos. Con- forme usado no presente documento, um "anticorpo quimérico" é um anticorpo que tem o domínio variável de um primeiro anticorpo e o domínio constante de um segundo anticorpo, em que o primeiro e o segundo anticorpos são de espécies diferentes. (consultar, por exem- plo, o documento nº US4816567; e Morrison et a/l., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 81: 6.851 a 6.855).
[0033] O termo proteínas de ligação ao antígeno “recombinantes”, tais como anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mes- mos, refere-se a tais moléculas criadas, expressas, isoladas ou obti- das por tecnologias ou métodos conhecidos na técnica como tecnolo- gia de DNA recombinante que inclui, por exemplo, splicing de DNA e expressão transgênica. O termo se refere a anticorpos expressos em um mamífero não humano (incluindo mamíferos não humanos trans- gênicos não humanos, por exemplo, camundongos transgênicos) ou em um sistema de expressão de células (por exemplo, células CHO) ou isolados de uma biblioteca de combinação de anticorpos humanos recombinantes.
[0034] Proteínas de ligação ao antígeno anti-PfíRH5, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno, revelados no presente documento, também podem ser produzidas em um sistema de expres- são de E. coliT7. Nessa modalidade, os ácidos nucleicos que codifi- cam as moléculas de imunoglobulina de anticorpo anti-PíRH5 da in- venção (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P?2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P?2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P?2, H1H29214P2; ou H1H29215P2) podem ser inseridos em um plasmídeo à base de pET e expressos no sistema E. coliT7. Por exemplo, a pre- sente invenção inclui métodos para expressar um anticorpo ou frag- mento de ligação ao antígeno do mesmo ou cadeia de imunoglobulina do mesmo em uma célula hospedeira (por exemplo, célula hospedeira bacteriana, tal como E. coli, tal como BL21 ou BL21DE3) que compre- ende a expressão de T7 RNA polimerase na célula que também inclui um polinucleotídeo que codifica uma cadeia de imunoglobulina que está operacionalmente ligada a um promotor T7. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, uma célula hospedeira bacteriana, tal como uma E. coli, inclui um polinucleotídeo que codifica o gene da T7 RNA polimerase ligada de maneira operacional a um promotor lace a expressão da polimerase e a cadeia é induzida por incubação da célu-
la hospedeira com IPTG (isopropil-beta-D-tiogalactopiranosídeo). Con- sultar os documentos nº US4952496 e nº US5693489 ou Studier e Moffatt, Use of bacteriophage T7 RNA polimerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol. 5 de maio de 1986; 189(1): 113 a 130.
[0035] Há diversos métodos por meio dos quais é possível produ- zir anticorpos recombinantes que são conhecidos na técnica. Um exemplo de um método para produção recombinante de anticorpos é revelado no documento nº US4816567.
[0036] A transformação pode ocorrer por meio de qualquer método conhecido para a introdução de polinucleotídeos em uma célula hos- pedeira. Os métodos para a introdução de polinucleotídeos heterólo- gos em células de mamíferos são bem conhecidos na técnica e inclu- em transfecção mediada por dextrano, precipitação de fosfato de cál- cio, transfecção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, eletro- poração, encapsulação do polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) em lipossomas, injeção biolística e direta microinjeção do DNA nos nú- cleos. Além disso, as moléculas de ácido nucleico podem ser introdu- zidas em células de mamíferos por vetores virais. Os métodos de transformação de células são bem conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, as Patentes nº U.S. 4.399.216; nº U.S. 4.912.040; nº U.S.
4.740.461 e nº U.S. 4.959.455.
[0037] Os polinucleotídeos que codificam as imunoglobulinas apresentadas no presente documento (por exemplo, que compreende uma sequência de nucleotídeos apresentada na SEQ ID NO: 1,3,5,7, 9, 11, 13, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189,
193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357 e 359) que estão em um vetor e/ou são ligados de maneira operacional a uma sequência de controle de expressão ligada a uma sequência de controle de expres- são, tal como uma forma de promotor da presente invenção. Um pro- motor pode ser, por exemplo, um promotor do CMV (por exemplo, promotor imediato precoce maior (MIE) do citomegalovírus humano (CMV) ou um promotor do SV40 (por exemplo, promotor precoce de SV40). Um vetor pode ser um plasmídeo (por exemplo, um plasmídeo circular ou um plasmídeo linearizado) ou um vetor viral que pode ser mantido ectopicamente em uma célula hospedeira ou integrado em um cromossomo hospedeiro. Essas células hospedeiras são parte da pre- sente invenção.
[0038] Um polinucleotídeo está “ligado de maneira operacional" quando é colocado em uma relação funcional com outra sequência de ácidos nucleicos. Por exemplo, um promotor ou intensificador está li- gado de maneira operacional a uma sequência de codificação, caso afete a transcrição da sequência. De modo geral, porém não sempre, "ligado de maneira operacional" significa que as sequências de DNA que são ligadas são contíguas e, no caso de um líder secretor, contí- guas e em fase de leitura. No entanto, os intensificadores não preci- sam ser contíguos.
[0039] Desse modo, a presente invenção inclui métodos recombi- nantes para produzir uma proteína de ligação ao antígeno anti-PíRHS5, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção, ou uma cadeia de imunoglobulina do mesmo,
que compreende (i) introduzir um ou mais polinucleotídeos (por exem- plo, incluindo a sequência de nucleotídeos em qualquer um ou mais de SEQ ID NOs: 1, 9, 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113, 121, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 193, 201, 209, 217, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 305, 313, 321, 329, 337, 345 e/ou 353) que codifica cadeias de imunoglobulinas leve e/ou pesa- das, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2, por exemplo, em que o polinucleotídeo está em um vetor; e/ou integrado em um cromossomo da célula hospedeira e/ou está ligado de maneira operacional a um promotor; (ii) cultivar a célula hospedeira (por exemplo, CHO ou Pichia ou Pichia pastoris) sob con- dições favoráveis à expressão do polinucleotídeo e, (iii) opcionalmen- te, isolar a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento) ou cadeia da célula hospedeira e/ou meio em que a célula hospedeira é cultivada.
Durante a produção de uma proteína de liga- ção ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) que compreende mais de uma cadeia de imuno- globulina, por exemplo, um anticorpo que compreende duas cadeias pesadas de imunoglobulina e duas cadeias leves de imunoglobulina, a coexpressão das cadeias em uma única célula hospedeira causa as- sociação das cadeias, por exemplo, na célula ou na superfície da célu- la ou fora da célula, caso tais cadeias sejam secretadas, de modo a formar a proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno). Os métodos da presente invenção incluem aqueles em que apenas uma cadeia pesada de imunoglobuli- na ou apenas uma cadeia leve de imunoglobulina, ou as duas (por exemplo, qualquer uma dentre as discutidas no presente documento, incluindo fragmentos maduros e/ou domínios variáveis das mesmas), são expressas em uma célula. Essas cadeias simples são úteis, por exemplo, como intermediários na expressão de um anticorpo ou frag- mento de ligação ao antígeno do mesmo que inclui essa cadeia. Por exemplo, a presente invenção também inclui proteínas de ligação ao antígeno anti-PfíRHS5, tais como anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que compreendem uma imunoglobulina de ca- deia pesada (ou domínio variável da mesma ou que compreende as CDRs das mesmas) codificada por um polinucleotídeo que compreen- de as sequências de nucleotídeos apresentadas na SEQ ID NO: 1 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 313, 321, 329, 337, 345 ou 353 e uma imunoglobulina de cadeia leve (ou domínio variável da mesma ou que compreende as CDRs das mesmas) codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada na SEQ ID NO:, 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217 ou 305, que são o produto de tais métodos de produção e, opcionalmente, os métodos de purificação apresentados no presente documento. Por exemplo, em uma modali- dade da invenção, o produto do método é uma proteína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 que é um anticorpo ou fragmento que compreen- de um Vw que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354 e um V. que compreende a sequência de aminoáci- dos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
[0040] Em uma modalidade da invenção, um método para produzir uma proteína de ligação ao antígeno anti-PíRHS5, por exemplo, anti- corpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inclui um méto-
do para purificar a proteína de ligação ao antígeno, por exemplo, por cromatografia em coluna, precipitação e/ou filtração. O produto de tal método também é parte da presente invenção.
[0041] As células hospedeiras eucarióticas e procarióticas, incluin- do células de mamíferos, podem ser usadas como hospedeiras para a expressão de uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo). Essas células hospedeiras são bem conhecidas na técnica e muitas estão disponíveis junto à American Type Culture Collection (ATCC). Essas células hospedeiras incluem, inter alia, as células de ovário de hamster chinês (CHO), NSO, células SP2, células HeLa, células de rim de hamster bebê (BHK), células de rim de macaco (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por exemplo, Hep G2), células ABSA49, células 3T3, células HEK-293 e várias outras linhagens celula- res. As células hospedeiras de mamíferos incluem células humanas, de camundongo, de rato, de cachorro, de macaco, de porco, de cabra, de bovino, de cavalo e de hamster. Outras linhas de células que po- dem ser usadas são as linhas de células de insetos (por exemplo, Spodoptera frugiperda ou Trichoplusia ni), células de anfíbios, células bacterianas, células vegetais e células fúngicas. As células fúngicas incluem células fúngicas filamentosas e de levedura incluindo, por exemplo, Pichia, Pichia pastoris, Pichia finlandica, Pichia trehalophila, Pichia koclamae, Pichia membranaefaciens, Pichia minuta (Ogataea minuta, Pichia lindneri), Pichia opuntiae, Pichia thermotolerans, Pichia Salictaria, Pichia quercuum, Pichia pijperi, Pichia stiptis, Pichia metha- nolica, Pichia sp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, Kluyveromyces sp., Kluyveromyces lactis, Candida albicans, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, Fusarium sp., Fusarium gramineum, Fusarium venenatum, Physcomitrella pa-
tens e Neurospora crassa. A presente invenção incluir uma célula hos- pedeira isolada (por exemplo, uma célula CHO) que compreende uma proteína de ligação ao antígeno, tal como H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P?2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P?2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2; ou uma ou mais polinu- cleotídeos que codificam uma cadeia ou cadeias de imunoglobulina dos mesmos.
[0042] A presente invenção também inclui uma célula Plasmodium falciparum que expressa a PÍRH5 que é ligado por uma proteína de ligação ao antígeno da presente invenção, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P?2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P?2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2, por exemplo, em que a célula está no corpo de um sujeito ou está in vitro.
[0043] O termo “se liga especificamente" refere-se às proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, mAbs) com uma afinidade de liga- ção a um antígeno, tais como a proteína PÍRH5 (por exemplo, PIRH5ANL.6his), expresso como Kp, de pelo menos cerca de 10º M (por exemplo, qualquer Kp apresentado na Tabela 5-1 ou 5-2 no pre- sente documento), conforme medido pelo ensaio de interferometria de biocamada livre de identificador em tempo real, por exemplo, a 25 ºC ou 37 ºC, por exemplo, um biossensor Octet& HTX ou por ressonância de plasmon de superfície, por exemplo, BIACORETY, ou por ELISA
(ensaio de imunoadsorção ligado à enzima). A presente invenção in- clui proteínas de ligação ao antígeno que se ligam especificamente à proteína PÍRH5. Em uma modalidade da invenção, uma proteína de ligação ao antígeno compreende um Ka, Ka e/ou t12, conforme apre- sentado na Tabela 5-1 ou 5-2 no presente documento.
[0044] Os termos "porção de ligação ao antígeno" de um anticor- po, "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo, e semelhan- tes, conforme usado no presente documento, incluem qualquer poli- peptídeo de ocorrência natural, enzimaticamente obtenível, sintético ou submetido à engenharia genética ou glicoproteína que se liga es- pecificamente a um antígeno para formar um complexo. Os exemplos não limitativos de fragmentos de ligação ao antígeno incluem: (i) frag- mentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (ii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas Fv de cadeia única (scFv); (vi) fragmentos dAb e (vii) peptídeos limitados FR3-CDR3-FR4 (por exemplo, que compreende um FR3, FR4 e CDR-H3 ou CDR-L3, conforme apresentado no pre- sente documento). Outras moléculas submetidas à engenharia, tais como anticorpos domínio-específicos, anticorpos de domínio único, anticorpos de domínio deletado, anticorpos quiméricos, anticorpos en- xertados com CDR, dia-anticorpo, tria-anticorpos, tetra-anticorpos, mi- nianticorpos e imunofarmacêuticos modulares e pequenos (SMIPs) também são abrangidos dentro da expressão "fragmento de ligação ao antígeno”, conforme usado no presente documento. Em uma modali- dade da invenção, o fragmento de ligação ao antígeno compreende três ou mais dentre H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2;
ou H1H29215P2 (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3; e/ou CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3).
[0045] Um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo compreenderá, em uma modalidade da invenção, pelo menos um do- mínio variável. O domínio variável pode ter de qualquer tamanho ou composição de aminoácidos e pode compreender geralmente pelo menos uma CDR que é adjacente ou em está sintonia com uma ou mais sequências estruturais. Nos fragmentos de ligação ao antígeno que têm um domínio Vx associado a um domínio V., os domínios Vx e V. podem estar situados um em relação ao outro em qualquer disposi- ção adequada. Por exemplo, a região variável pode ser dimérica e po- de conter dímeros Vn - Vu, Vu - VL ou V. - V.. Alternativamente, o fra- gmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode conter um domí- nio de Vx ou Vi monomérico.
[0046] Em determinadas modalidades, um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode conter pelo menos um domínio va- riável ligado de maneira covalente a pelo menos um domínio constan- te. As configurações exemplificativas não limitativas de domínios vari- áveis e constantes que podem ser encontradas dentro de um fragmen- to de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente invenção inclu- em: (i) Vi-Cn1; (ii) Vi-Cn2; (iii) Vi-CH3; (iv) VA-CH1-CH2; (v) Va-Cn1- CH2-Cn3; (vi) Va-CH2-Cn3; (vii) V4-Cr; (viii) Vl-CnH1; (ix) Vl-Cn2; (x) V.- CH3; (xi) VI-CH1-Cn2; (xii) VI-CH1-CH2-CnH3; (xili) Vi-CH2-CH3; e (xiv) VL-C1. Em qualquer configuração de domínios varieis e constantes, incluindo qualquer uma das configurações exemplificativas listadas acima, os domínios variável e constante podem ser ligados diretamen- te entre si ou podem ser ligados por uma região ligadora ou região de dobradiça completa ou parcial. Uma região de dobradiça pode consistir em pelo menos 2 (por exemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 ou mais) aminoá- cidos que resultam em uma ligação flexível ou semiflexível entre variá-
veis adjacentes e/ou domínios constantes em uma molécula de poli- peptídeo. Ademais, um fragmento de ligação ao antígeno de um anti- corpo da presente invenção pode compreender um homodímero ou heterodímero (ou outro multímero) de qualquer uma dentre as configu- rações de domínio variável e constante listadas acima em associação não covalente entre si e/ou a um ou mais domínios de monoméricos VHr ou V. (por exemplo, por ligação (ou ligações) de dissulfeto).
[0047] As proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, anticor- pos e fragmentos de ligação ao antígeno) podem ser monoespeciíficas ou multiespecíficas (por exemplo, biespecíficas). As proteínas de liga- ção ao antígeno multiespecíficas são discutidas mais adiante no pre- sente documento.
[0048] Em uma modalidade da invenção, as proteínas de ligação ao antígeno da presente invenção (por exemplo, um anticorpo ou fra- gmento de anticorpo) podem ser conjugadas a uma fração, tal como uma fração terapêutica ("imunoconjugado"), tal como um medicamento antimalárico, um segundo anticorpo anti-PíRH5, ou qualquer outra porção terapêutica útil para o tratamento de uma infecção por Plasmo- dium falciparum. Consultar, por exemplo, a seguir.
[0049] A presente invenção também fornece um complexo que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, discutido no presente documento complexado com o polipeptídeo PÍRH5 ou um fragmento antigênico do mesmo e/ou com um anticorpo secundário ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, anticorpo secundário identificado de maneira detectável) que se liga especifica- mente ao anticorpo ou fragmento anti-PfRH5. Em uma modalidade da invenção, o complexo é in vitro (por exemplo, é imobilizado em um substrato sólido) ou está no corpo de um sujeito. Em uma modalidade da invenção, a PIRH5 é imobilizada em um substrato sólido (por exemplo, uma tira de teste de fluxo lateral) ou está na superfície de uma célula, tal como Plasmodium falciparum. Os anticorpos anti- PÍRHS5 imobilizados e fragmentos de ligação ao antígeno do mesmo que são ligados de maneira covalente a um material de matriz insolú- vel (por exemplo, vidro ou polissacarídeo como agarose ou sefarose, por exemplo, uma microesfera ou outra partícula do mesmo) também são parte da presente invenção; opcionalmente, em que o anticorpo imobilizado é complexado com PÍRH5 ou fragmento antigênico do mesmo ou um anticorpo secundário ou fragmento do mesmo.
[0050] As proteínas de ligação ao antígeno "isoladas" (por exem- plo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos), polipeptídeos, polinucleotídeos e vetores, são pelo menos parcialmen- te livres de outras moléculas biológicas das células ou cultura de célu- las a partir das quais são produzidas. Tais moléculas biológicas inclu- em ácidos nucleicos, proteínas, outros anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno, lipídios, carbo-hidratos ou outro material, tais co- mo detritos celulares e meio de crescimento. Uma proteína de ligação ao antígeno isolada pode ainda estar pelo menos parcialmente livre de componentes do sistema de expressão, tais como moléculas biológi- cas de uma célula hospedeira ou do meio de crescimento desta. De modo geral, o termo "isolado" não se refere a uma ausência completa de tais moléculas biológicas ou a uma ausência de água, tampões ou sais ou a componentes de uma formulação farmacêutica que inclui as proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpos ou fragmen- tos de ligação ao antígeno).
[0051] A presente invenção inclui proteínas de ligação ao antíge- no, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação aos mesmos, que se ligam ao mesmo epitopo como uma proteína de ligação ao an- tígeno da presente invenção (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P;
H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P?2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2). Por exemplo, a presen- te invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno que se ligam a um epitopo variante de PÍRH5 (por exemplo, P(RH5ANL.6his) sem os aminoácidos M1-Y139 e incluindo os resíduos K140-Q526, porém sem K247-L295 e que tem as mutações T216A e T299A (opcionalmente, incluindo uma tag de HisX6).
[0052] O termo "epitopo" refere-se a um determinante antigênico (por exemplo, no polipeptídeo PÍRH5) que interage com um sítio de ligação ao antígeno específico de uma proteína de ligação ao antíge- no, por exemplo, uma região variável de uma molécula de anticorpo, conhecida como parátopo. Um único antígeno pode ter mais de um epitopo. Desse modo, diferentes anticorpos podem se ligar a diferen- tes áreas de um antígeno e podem ter diferentes efeitos biológicos. O termo "epitopo" também pode se referir a um sítio em um antígeno ao qual as células B e/ou T respondem e/ou a uma região de um antígeno que está ligada por um anticorpo. Os epitopos podem ser definidos como estruturais ou funcionais. Os epitopos funcionais são geralmente um subconjunto dos epitopos estruturais e têm aqueles resíduos que contribuem diretamente para a afinidade da interação. Os epitopos po- dem ser lineares ou conformacionais, isto é, composto de aminoácidos não lineares. Em determinadas modalidades, os epitopos podem inclu- ir determinantes que são agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas, tais como aminoácidos, cadeias laterais de açú- car, grupos fosforila ou grupos sulfonila e, em determinadas modalida- des, podem ter características estruturais tridimensionais específicas e/ou características de carga específica.
[0053] Os métodos para determinar o epitopo de uma proteína de ligação ao antígeno, por exemplo, anticorpo ou fragmento ou polipep- tídeo, incluem análise de mutação por varredura de analina, análise por blot de peptídeo (Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443 a 63), análise por clivagem de peptídeo, estudos cristalográficos e análi- se por RMN. Adicionalmente, podem ser empregados métodos, tais como excisão de epitopos, extração de epitopo e modificação química de antígenos (Tomer (2000) Prot. Sci. 9: 487 a 496). Outro método que pode ser usado para identificar os aminoácidos dentro de um polipep- tídeo com o qual uma proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento ou polipeptídeo) interage é troca de hidrogê- nio/deutério detectado por espectrometria de massa. Consultar, por exemplo, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252 a 259; Engen e Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A a 265A.
[0054] A presente invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno que compete pela ligação à PÍRH5, por exemplo, um epitopo de PÍRHS5 variante, conforme discutido no presente documento, com uma proteína de ligação ao antígeno, com uma proteína de ligação ao antí- geno da presente invenção, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2, H1H29214P2; ou H1H29215P2. O termo "compete", con- forme usado no presente documento, refere-se a uma proteína de |li- gação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) que se liga a um antígeno (por exemplo, PÍRH5 ou PÍRHS5ANL.6his) e inibe ou bloqueia a ligação de outro antígeno proteína de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) ao antígeno. O termo também inclui a compe-
tição entre duas proteínas de ligação ao antígeno, por exemplo, anti- corpos, em ambas as orientações, isto é, um primeiro anticorpo que se liga e bloqueie a ligação do segundo anticorpo e vice-versa.
Em de- terminadas modalidades, a primeira proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo) e a segunda proteína de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo) pode se ligar ao mesmo epitopo.
Alternativa- mente, a primeira segunda proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpos) pode se ligar a diferentes epitopos, porém, por exemplo, em sobreposição, em que a ligação de um inibe ou bloqueia a ligação do segundo anticorpo, por exemplo, por meio de impedimen- to estérico.
A composição entre proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpos) pode ser medida por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, por um ensaio de interferometria de biocamada livre de identificador tempo real.
Em uma modalidade da invenção, a competição entre uma primeira e uma segunda proteína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 (por exemplo, anticorpo) é determinada medindo- se a capacidade de uma primeira proteína de ligação ao antígeno anti- PÍRHS5 imobilizada (por exemplo, anticorpo) (não inicialmente comple- xado com a proteína PÍRH5) para se ligar à proteína PÍRH5 ou um fra- gmento da mesma complexada com uma segunda proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo). Uma redução na ca- pacidade da primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo) para se ligar à proteína PÍRH5 complexada, em relação à proteína PÍRH5 não complexada, indica que a primeira e se- gunda proteínas de ligação ao antígeno anti-PfíRHS5 (por exemplo, anti- corpos) competem.
O grau de competição pode ser expresso como uma porcentagem da redução na ligação.
Tal composição pode ser medida com o uso de um ensaio de interferometria de biocamada livre de identificador tempo real, por exemplo, em um biossensor Octet RED384 (Pall ForteBio Corp.), ELISA (ensaios de imunoadsorção liga-
do à enzima) ou SPR (ressonância de plasmon de superfície).
[0055] A competição de ligação entre proteínas de ligação ao antí- geno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpos monoclonais (mAbs)) po- dem ser determinados com o uso de um ensaio de interferometria de biocamada livre de identificador tempo real em um biossensor Octet RED384 (Pall ForteBio Corp.). Por exemplo, a fim de determinar a competição entre dois anticorpos monoclonais anti-PfRH5, o mAb anti- PÍRHS5 pode ser capturado primeiramente em pontas de biossensores Octet revestidas com anticorpo anti-hFc (Pall ForteBio Corp., nº 18- 5060) submergindo-se as pontas em uma solução de mAb anti-PfRH5 (posteriormente denominado de "mMAb1"). Como um controle positivo para o bloqueio, as pontas do biossensor capturado por anticorpo po- dem ser, então, saturadas com um mAb de controle de isotipo de blo- queio conhecido (denominado subsequentemente de "mAb de blo- queio") imergindo-se em uma solução de mAb de bloqueio. A fim de determinar se o MAb2 compete com o mAb1, as pontas do biossensor podem ser subsequentemente imersas em uma solução complexada de polipeptídeo PÍRH5, e um segundo mAb anti-PfRH5 (subsequen- temente denominado de "mAb2"), que foi pré-incubado por um período de tempo, e a ligação de mAb1 ao polipeptídeo PÍRH5 podem ser de- terminadas. As pontas do biossensor podem ser lavadas em tampão entre cada etapa do experimento. A resposta de ligação em tempo real pode ser monitorada durante o curso do experimento e a resposta de ligação no final de cada etapa pode ser registrada.
[0056] Em uma modalidade da invenção, o ensaio de competição é conduzido em uma plataforma de biossensor (por exemplo, Octet HTX), em que um anticorpo é ligado/complexado ao polipeptídeo PÍRHS5 que foi ligado a uma ponta do sensor, e a ligação de um se- gundo anticorpo à PÍRHS5 é, então, avaliada. A capacidade que o se- gundo anticorpo tem para se ligar ao polipeptídeo PÍRH5 pré-comple-
xado pode ser avaliada e, caso seja detectada a ligação reduzida (por exemplo, em relação à PÍRH5 não complexada com um primeiro anti- corpo) ou uma ausência de ligação do segundo anticorpo, então, o primeiro e segundo anticorpos são determinados para competir pela ligação ao polipeptídeo PÍRH5. Em uma modalidade da invenção, o ensaio é conduzido a 25 ºC e pH cerca de 7, por exemplo, 7,4, por exemplo, na presença do tampão (por exemplo, HEPES), sal (por exemplo, NaCl), EDTA, tensoativo (por exemplo, Tween-20) e/ou uma proteína não específica (por exemplo, albumina bovina sérica). Em uma modalidade da invenção, a ligação a uma variante de PfRH5 (por exemplo, PIRH5ANL.6his) é avaliada no ensaio de competição, por exemplo, em que a variante é PÍRH5 sem os aminoácidos M1-Y139 e incluindo os resíduos K140-Q526, porém sem K247-L295 e que tem as mutações T216A e T299A (opcionalmente, incluindo uma tag de HisX6). Uma tag de HisX6 ou de His; é uma tag que inclui HHHHHH (SEQ ID NO: 365).
[0057] Normalmente, um anticorpo ou fragmento de ligação ao an- tígeno da invenção que é modificado de alguma forma retém a capaci- dade de se ligar especificamente à PÍRH5, por exemplo, retém pelo menos 10% de sua atividade de ligação à PÍRH5 (quando comparado ao anticorpo parental) quando essa atividade é expressa em uma base molar. De preferência, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antí- geno da invenção retém pelo menos 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 100% ou mais de afinidade de ligação à PÍRH5 como o anticorpo parental. Além disso, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antíge- no da invenção está destinado a incluir substituições conservativas ou não conservativas de aminoácidos (denominadas de "variantes con- servativas" ou "variantes conservadas de função" do anticorpo) que não alteram substancialmente sua atividade biológica.
[0058] As proteínas de ligação ao antígeno anti-PíRH5 da presen-
te invenção podem compreender variantes das cadeias de imunoglo- bulina cujas sequências de aminoácidos e nucleotídeos são especifi- camente apresentadas no presente documento.
[0059] Uma “variante" de um polipeptídeo, tal como uma cadeia de imunoglobulina (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2 Vu, V., HC ou LC), refere-se a um poli- peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 70 a 99,9% (por exemplo, 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9%) idêntica ou semelhante a uma sequência de aminoácidos indicadas no presente documento (por exemplo, SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346, 354, 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306); quando a comparação é realizada por um algoritmo BLAST em que os parâme- tros do algoritmo são selecionados para gerar o maior pareamento en- tre as respectivas sequências em todo o comprimento das respectivas sequências de referência (por exemplo, limiar esperado: 10; tamanho da palavra: 3; pareamentos máximos em uma faixa de consulta: O; BLOSUM 62 matriz; custos de lacuna: existência 11, extensão 1; ajus- te de matriz de pontuação de composição condicional).
[0060] Uma “variante" de um polinucleotídeo refere-se a um poli- nucleotídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos cerca de 70 a 99,9% (por exemplo, 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9%) idêntico a uma sequência de nucleotídeos menciona-
da que é apresentada no presente documento (por exemplo, SEQ ID NO: 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 233, 241, 249, 257, 265, 273, 281, 289, 297, 313, 321, 329, 337, 345, 353, 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217 ou 305); quando a comparação é realizada por um algoritmo BLAST em que os parâmetros do algoritmo são selecionados para fornecer o maior pareamento entre as sequências respectivas ao longo de todo o comprimento das respectivas sequência de referência (por exemplo, limiar esperado: 10; tamanho de palavra: 28; máximo de pareamentos em uma faixa de consulta: 0; pontuações de pareamento/mau parea- mento: 1, -2; custos de lacuna: linear).
[0061] As proteínas de ligação ao antígeno anti-PíRH5, por exem- plo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos da presente invenção, em uma modalidade da invenção, incluem uma re- gião variável de imunoglobulina de cadeia pesada com pelo menos 70% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) de identidade de se- quência de aminoácidos com aquela de uma cadeia pesada de imuno- globulina cuja sequência de aminoácidos é apresentada no presente documento, por exemplo, na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou uma região variá- vel de imunoglobulina de cadeia leve que tem pelo menos 70% (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) de identidade de sequência de aminoácidos com uma cadeia leve de imunoglobulina cuja sequência de aminoácidos é apresentada no presente documento, por exemplo, em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
[0062] Além disso, uma proteína de ligação ao antígeno anti- PÍRHS da presente invenção pode incluir um polipeptídeo de imuno- globulina variante que compreende uma sequência de aminoácidos que é apresentada no presente documento, com exceção de uma ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações, tais como, por exemplo, mutações de sentido trocado (por exemplo, substituições conservativas), mutações sem sentido, deleções ou inserções. Por exemplo, a presente invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno que incluem uma variante da cadeia leve de imunoglobulina que com- preende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306 po- rém que tem uma ou mais dessas mutações e/ou uma variante da ca- deia pesada de imunoglobulina que compreende a sequência de ami- noácidos apresentada na SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354, porém que tem uma ou mais dessas mutações. Em uma modalidade da invenção, uma proteí- na de ligação ao antígeno anti-PfRH5 inclui uma variante de cadeia leve de imunoglobulina que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 em que uma ou mais (por exemplo, 1 ou 2 ou 3) dentre tais CDRs tem uma ou mais dessas mutações (por exemplo, substituições conservati- vas) em relação a uma sequência que é especificamente apresentada no presente documento e/ou uma variante de cadeia pesada de imu- noglobulina que compreende CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 em que um ou mais (por exemplo, 1 ou 2 ou 3) de tais CDRs têm uma ou mais dessas mutações (por exemplo, substituições conservativas) em rela- ção a uma sequência que é especificamente apresentada no presente documento.
[0063] A invenção fornece, também, proteínas de ligação ao antí- geno anti-PíRH5 variantes, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que compreende uma ou mais CDRs variantes (por exemplo, qualquer uma ou mais dentre a CDR- L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3) que são apre-
sentadas no presente documento com pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% ou 99,9% de identidade de sequência ou semelhança.
[0064] As modalidades da presente invenção também incluem an- ticorpos anti-PfRH5 e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que compreendem imunoglobulina variante Vus e Vis; ou HCs e LCs, que compreende uma sequência de aminoácidos que têm 70% ou mais (por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% ou 99%) de identidade ou semelhança geral de sequência de aminoácidos em relação à se- quência de aminoácidos da Vus, Vis, HCs ou LCs correspondentes apresentadas especificamente no presente documento, porém em que a CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de tais imunoglobulinas não são variantes e compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas no presente documento. Desse modo, em tais modalidades, as CDRs em tais proteínas de ligação ao antígeno não são, por si só, variantes.
[0065] Uma "variante modificada de maneira conservativa" ou uma "substituição conservativa" refere-se a uma variante em que há uma ou mais substituições de aminoácidos em um polipeptídeo com outros aminoácidos com características semelhantes (por exemplo, carga, tamanho da cadeia lateral, hidrofobicidade/hidrofilicidade, conformação e rigidez de da cadeia principal etc.). Essas alterações podem ser fei- tas frequentemente sem interromper significativamente a atividade bio- lógica do anticorpo ou fragmento. As pessoas versadas nessa técnica reconhecem que, de modo geral, substituições de aminoácidos sim- ples em regiões não essenciais de um polipeptídeo não alteram subs- tancialmente a atividade biológica (consultar, por exemplo, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4º edição)). Além disso, as substituições de aminoá- cidos estrutural ou funcionalmente semelhantes têm menos probabili-
dade de romper significativamente a atividade biológica. As proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRH5 da presente invenção podem incluir cadeias de imunoglobulina que têm uma sequência de aminoácidos apresentado no presente documento, porém que tem uma ou mais va- riações modificadas de maneira conservativa.
[0066] Exemplos de grupos de aminoácidos que têm cadeias late- rais com propriedades químicas semelhantes incluem 1) cadeias late- rais alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadeias laterais de hidroxila alifáticas: serina e treonina; 3) cadeias laterais que contêm amina: asparagina e glutamina; 4) cadeias laterais aromáticas: fenilalanina, tirosina, e triptofano; 5) cadeias laterais básicas: lisina, arginina e histidina; 6) cadeias laterais ácidas: aspartato e glutamato e 7) cadeias laterais que contêm enxofre: cisteína e metionina. Os gru- pos preferências de substituição de aminoácidos conservativas são: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina- valina, glutamato-aspartato e asparagina-glutamina. Alternativamente, uma substituição conservativa é qualquer mudança que tem um valor positivo na matriz com probabilidade logarítmica PAM250 em Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443 45.
[0067] Em uma modalidade da invenção, uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 da presente invenção, por exemplo, que com- preende uma cadeia de imunoglobulina que compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos apresentada no presente documen- to, exibe uma ou mais dentre as seguintes propriedades funcionais:
[0068] e Inibe o crescimento in vitro ou in vivo de Plasmodium fal- ciparum em hemácias humanas, por exemplo, conforme medido pela atividade da lactato desidrogenase (LDH) do parasita (por exemplo, a uma taxa de cerca de 51 a cerca de 69% ou até 100% (por exemplo, quando a proteína de ligação ao antígeno anti-PfíRH5 é incubada com as células por 96 horas) em relação às hemácias não infectadas), por exemplo, em que a proteína de ligação ao antígeno é H1H29100P, H1H29104P, H1H29127P, H1H29143P ou qualquer combinação de dois de tais proteínas (consultar, por exemplo, Tabela 2-1).
[0069] e Inibe o crescimento da cepa de Plasmodium falciparum 3D7 ou 7G8 in vitro ou in vivo em hemácias humanas, por exemplo, conforme medido pela atividade do parasita lactato desidrogenase (LDH), por exemplo, na presença de fosfato de cloroquina (CQ) (por exemplo, em uma concentração de cerca de 4,81 nM ou 6,58 nM), por exemplo, a uma taxa de cerca de 34 a 61% na ausência de CQ, cerca de 32 a 51% na presença de CQ 4,81 nM ou cerca de 20% a 75% na presença de CQ 6,58 nM.
[0070] e Liga-se ao polipeptídeo PÍRH5 ou um fragmento antigêni- co do mesmo, por exemplo, PIRH5ANL.6his, com uma Kp de cerca de 4,72 pM a cerca de 1,67 nM a 25 ºC e/ou de cerca de 1,10 pM a cerca de 1,10 nM a 37 ºC, por exemplo, conforme apresentado nas Tabelas 5-1 e 5-2 no presente documento.
[0071] e Inibe o crescimento in vitro ou in vivo da cepa de Plasmo- dium falciparum D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.ll ou RF7 em hemácias humanas, por exemplo, conforme medi- do pela atividade de lactato desidrogenase (LDH) do parasita, por exemplo, a uma concentração de cerca de 666,67 nM a uma taxa con- forme apresentado na Tabela 4-2 em relação às hemácias não infec- tadas.
[0072] e Bloqueia a ligação do polipeptídeo PÍRH5 (por exemplo, PIRHS5ANL.6his, por exemplo, a uma concentração de cerca de 0,5 nM ou 2,0 nM) ao polipeptídeo de basigina (por exemplo, por cerca de 1%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ou 100%), por exemplo, a ligação de PfRH5 à base que está ligada a uma matriz sólida (por exemplo, uma placa de ELISA) em que a proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 está presente em cerca de 100 nM.
Por exemplo, em que a basigina era os aminoácidos Thr25-His205 da mesma, por exemplo, expressos com um conector C-terminal, DIE- GRMD (SEQ ID NO: 363), seguido por uma porção da IgG1 humana (Pro100-Lys330) e uma tag de histidina 6X.
[0073] e Liga-se ao mesmo epitopo que H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P?2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P?2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2, por exemplo, se liga à PÍRHS5 que carece dos resíduos amino-terminais M1-Y139 e inclui os resíduos K140-Q526, porém carece de K247-L295 e tem as mutações T216A e T299A (PÍRH5ANL.6his), por exemplo, incluindo adicional- mente a tag de hexa-histidina C-terminal, por exemplo, conforme medido por ressonância de plasmon de superfície.
[0074] e Compete com H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P?2, H1H29214P2; ou H1H29215P2 para se ligar ao polipeptídeo PÍRH5, por exemplo, PIRH5ANL.6his.
[0075] A presente invenção inclui um primata não humano (NHP) (por exemplo, macaco, tal como um macaco Aotus) cujo corpo inclui uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anti- corpo ou fragmento de ligação ao antígeno), tal como H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2;
H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2. Por exemplo, o primata não humano pode ter recebido por injeção a proteína de ligação ao antígeno ou po- de ter sido submetido à engenharia para expressar a proteína. Em uma modalidade da invenção, o primata não humano é Aotus nancy- maae. Em uma modalidade da invenção, o primata não humano (por exemplo, macaco) é infectado com Plasmodium falciparum (por exem- plo, cepa 3D7).
[0076] A presente invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno anti-PfíRH5 "neutralizantes" ou "antagonistas", por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, que incluem moléculas que ini- bem uma atividade de Pf(RH5 em qualquer grau detectável. Por exem- plo, uma proteína neutralizante de ligação ao antígeno anti-PfíRH5 po- de inibir o crescimento do Plasmodium falciparum e/ou bloquear a li- gação PIRH5/BSG.
[0077] “H1H29089P”; “H1H29094P”; “H1H29100P”; “H1H29104P”; “H1H29106P”; “H1H29109P”; “H1H29125P”; “H1H29127P”; “H1H29131P”; “H1H29134P”; “H1H29138P”; “H1H29141P”; “H1H29143P”; “H1H29146P2”; “H1H29147P2”, H1H29149P2”; “H1H29151P2"; “H1H29163P2”; “H1H29166P2"; “H1H29171P2”;, “H1H29179P2"; “H1H29183P2”; “H1H29187P2"; “H1H29192P2”; “H1H29196P2"; “H1H29198P2”; “H1H29207P2"; “H1H29209P2”; “H1H29214P2”; ou “H1H29215P2” referem-se a proteínas de ligação ao antígeno, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antí- geno dos mesmos (incluindo proteínas de ligação ao antígeno multies- pecíficas) que compreendem uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina (Vx; ou uma variante da mesma) e uma região variável de cadeia leve de imunoglobulina (V.; ou uma variante da mesma) que são apresentados no presente documento na Tabela 1-1; ou que com- preendem uma Vrx que compreende as CDRs da mesma (CDR-H1 (ou uma variante da mesma), CDR-H2 (ou uma variante da mesma) e CDR-H3 (ou uma variante da mesma)) e/ou uma V. que compreende as CDRs das mesmas (CDR-L1 (ou uma variante da mesma), CDR-L2 (ou uma variante da mesma) e CDR-L3 (ou uma variante da mesma)), por exemplo, em que as cadeias de imunoglobulina, regiões variáveis e/ou CDRs compreendem as sequências de aminoácidos específicas descritas a seguir. Em uma modalidade da invenção, a Vu está ligada a uma cadeia de imunoglobulina pesada constante (por exemplo, uma IgG, tal como IgG1 ou IgG4) e/ou uma V. está ligada a uma cadeia de imunoglobulina leve constante (por exemplo, kappa ou lambda).
[0078] Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno da pre- sente invenção compreendem cadeias de imunoglobulina, incluindo as sequências de aminoácidos apresentadas no presente documento as- sim como as modificações celulares e pós-tradução in vitro feitas no anticorpo ou fragmento. Por exemplo, a presente invenção inclui anti- corpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que se ligam especificamente à PÍRH5 que compreende as sequências de aminoá- cidos de cadeia pesada e/ou leve apresentadas no presente documen- to (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3), assim como anticorpos e fragmentos em que um ou mais resíduos de aminoácidos são glicosilados, um ou mais resíduos de Asn são desamidados, um ou mais resíduos (por exemplo, Met, Trp e/ou His) são oxidados, a GIn N-terminal é piroglutamato (pyroE) e/ou a Lisina C-terminal está ausente.
[0079] A presente invenção fornece um recipiente (por exemplo, um frasco de plástico ou vidro, por exemplo, com uma tampa ou uma coluna de cromatografia, agulha de orifício oco ou um cilindro de se- ringa) que compreende uma proteína de ligação ao antígeno anti-
PÍRHS5 da presente invenção, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P?2; H1H29147P?2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P?2.
[0080] A presente invenção também fornece um dispositivo de in- jeção que compreende uma ou mais proteínas de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno) que se ligam especificamente a PÍRH5, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2, ou uma composição farmacêutica dos mesmos. O dispositivo de injeção pode ser embalado em um kit. Um dispositivo de injeção é um dispositivo que introduz uma substância no corpo de um sujeito por meio de uma via parenteral, por exemplo, in- tramuscular, subcutânea ou intravenosa. Por exemplo, um dispositivo de injeção pode ser uma seringa (por exemplo, pré-carregada com a composição farmacêutica, tal como um autoinjetor) que, por exemplo, inclui um cilindro ou cilindro para conter o fluido a ser injetado (por exemplo, que compreende o anticorpo ou fragmento ou uma composi- ção farmacêutica do mesmo), uma agulha para perfurar a pele e/ou vasos sanguíneos para injeção do fluido; e um êmbolo para empurrar o fluido para fora do cilindro e através do orifício da agulha.
[0081] A presente invenção fornece, também, métodos para admi- nistrar uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 da presente invenção, por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2, a um sujeito, que compreende introduzir a proteína de ligação ao antígeno no corpo do sujeito (por exemplo, um ser huma- no), por exemplo, por via parenteral. Por exemplo, o método compre- ende perfurar o corpo do sujeito com uma agulha de uma seringa e injetar a proteína de ligação ao antígeno no corpo do sujeito, por exemplo, na veia, artéria, no tumor, no tecido muscular ou no tecido subcutâneo do sujeito.
PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANOS
[0082] Os métodos para gerar anticorpos humanos em camun- dongos transgênicos são conhecidos na técnica. Quaisquer métodos conhecidos podem ser usados no contexto da presente invenção para produzir anticorpos humanos que se ligam especificamente a PÍRHS5. Um imunogênio que compreende qualquer um dentre o seguinte pode ser usado para gerar anticorpos que se ligam especificamente a PÍRHS5. Em determinadas modalidades da invenção, os anticorpos da invenção são obtidos de camundongos imunizados com um compri- mento total, PIRH5 nativo, ou com um vírus vivo atenuado ou inativa- do, ou com DNA que codifica a proteína ou fragmento do mesmo. Al- ternativamente, a proteína PÍRH5 ou um fragmento da mesma pode ser produzido com o uso de técnicas bioquímicas padrão e pode ser modificada e usada como imunogênio. Em uma modalidade da inven-
ção, o imunogênio é uma proteína PÍRH5 produzida de maneira re- combinante ou um fragmento da mesma. Em determinadas modalida- des da invenção, o imunogênio pode ser uma vacina polipeptídica de PÍRHS5. Em determinadas modalidades, uma ou mais injeções de re- forço podem ser administradas. Em determinadas modalidades, o imunogênio pode ser um polipeptídeo PfRH5 recombinante expresso na E. coli ou em quaisquer outras células eucarióticas ou de mamífero, tais como células de ovário de hamster chinês (CHO).
[0083] Com o uso da tecnologia VELOCIMMUNEPO (consultar, por exemplo, o documento nº U.S. 6.596.541, Regeneron Pharmaceuti- cals, VELOCIMMUNEO), os anticorpos quiméricos de alta afinidade com PÍRH5 podem ser isolados inicialmente tendo regiões humanas variáveis e regiões constantes de camundongo. A tecnologia VELO- CIMMUNEPO envolve a geração de um camundongo transgênico com um genoma que compreende regiões variáveis humanas de cadeia pesada e leve ligadas de maneira operacional aos loci da região cons- tante de camundongo de modo que o camundongo produza um anti- corpo que compreenda uma região variável humana e uma região constante de camundongo em resposta ao estímulo antigênico. O DNA que codifica as regiões variáveis das cadeias pesada e leve do anti- corpo é isolado e ligado de maneira operacional ao DNA que codifica as regiões constantes de cadeia pesada e leve humanas. Em seguida, o DNA é expresso em uma célula com capacidade para expressar o anticorpo totalmente humano.
[0084] De modo geral, um camundongo VELOCIMMUNEOPO é desa- fiado com o antígeno de interesse, e as células linfáticas (como células B) são recuperadas dos camundongos que expressam anticorpos. As células linfáticas podem ser fundidas com uma linhagem celular de mi- eloma para preparar linhagens celulares de hibridoma imortal, e essas linhagens celulares de hibridoma são triadas e selecionadas para iden-
tificar linhagens celulares de hibridoma que produzem anticorpos es- pecíficos para o antígeno de interesse. O DNA que codifica as regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve pode ser isolado e ligado a regiões constantes isotípicas desejáveis da cadeia pesada e da ca- deia leve. Tal proteína de anticorpo pode ser produzida em uma célula, tal como uma célula CHO. Alternativamente, o DNA que codifica os anticorpos quiméricos de antígeno específico ou os domínios variáveis das cadeias leve e pesada pode ser isolado diretamente dos linfócitos específicos de antígeno.
[0085] Os anticorpos de interesse também podem ser isolados de células B de camundongo. Em suma, os esplenócitos são colhidos de cada camundongo, e as células B são classificadas (conforme descrito em no documento nº U.S. 2007/0280945A1, por exemplo) por FACS com o uso do antígeno de interesse como o reagente de classificação que se liga e identifica anticorpos reativos (células B antígeno- positivas). Vários métodos de identificação e classificação de células B antígeno-positivas, assim como a construção de cassetes de expres- são de genes de imunoglobulina por PCR para a preparação de célu- las que expressam anticorpos recombinantes, são bem conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, o documento nº WO20141460741, a Patente nº U.S. 7884054B2 e Liao, et al. junho de 2009. High- Throughput Isolation of Immunoglobulin Genes from Single Human B Cells and Expression as Monoclonal Antibodies. J Virol Methods 158(1-2):171 a 179.
[0086] Inicialmente, são isolados os anticorpos quiméricos de alta afinidade que têm uma região variável humana e uma região constante de camundongos. Os anticorpos são caracterizados e selecionados para características desejáveis, incluindo afinidade, seletividade, epi- topo etc. As regiões constantes de camundongo são substituídas por uma região constante humana desejada para gerar o anticorpo com-
pletamente humano da invenção, por exemplo, IgG1 ou IgG4 do tipo selvagem ou modificada. Embora a região constante selecionada pos- sa variar de acordo com o uso específico, características de ligação ao antígeno de alta afinidade e de especificidade-alvo permanecem na região variável.
ANTICORPOS ANTI-PFRH5 QUE COMPREENDEM VARIANTES FC
[0087] De acordo com determinadas modalidades da determinada invenção, são fornecidas proteínas de ligação ao antígeno anti-PÍíRHS5, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem um domínio Fc que compreende uma ou mais muta- ções que, por exemplo, intensificam ou diminuem a ligação do anticor- po ao receptor FCRN, por exemplo, no pH ácido, em comparação ao PH neutro. Por exemplo, a presente invenção inclui anticorpos anti- PÍRHS5 que compreendem uma mutação na região CH2 ou CrH3 do do- mínio Fc, em que a mutação (ou mutações) aumenta a afinidade do domínio de Fc ao FcRn em um ambiente ácido (por exemplo, em um endossomo em que o pH varia de cerca de 5,5 a cerca de 6,0). Tais mutações podem resultar em um aumento na meia-vida sérica do anti- corpo quando administradas a um animal. Exemplos não limitativos de tais modificações do Fc incluem, por exemplo, uma modificação na posição 250 (por exemplo, E ou Q); 250 e 428 (por exemplo, L ou F); 252 (por exemplo, L/Y/F/W ou T), 254 (por exemplo, S ou T), e 256 (por exemplo, S/R/Q/E/D ou T); ou uma modificação na posição 428 e/ou 433 (por exemplo, H/L/R/S/P/Q ou K) e/ou 434 (por exemplo, A, W, H, F ou Y [N434A, N434W, N434H, N434F ou N434Y]); ou uma modificação na posição 250 e/ou 428; ou uma modificação na posição 307 ou 308 (por exemplo, 308F, V308F) e 434. Em uma modalidade, a modificação compreende uma modificação 428L (por exemplo, M428L) and 4348 (por exemplo, N434S); uma modificação 428L, 259| (por exemplo, V2591) e 308F (por exemplo, V308F); uma modificação 433K
(por exemplo, H433K) e uma modificação 434 (por exemplo, 434Y); modificação 252, 254 e 256 (por exemplo, 252Y, 254T e 256E) modifi- cação; uma modificação 250Q e 428L (por exemplo, T250Q e M428L); e uma modificação 307 e/ou 308 (por exemplo, 308F ou 308P). Ainda em outra modalidade, a modificação compreende uma modificação de 265A (por exemplo, D265A) e/ou 297A (por exemplo, N297A).
[0088] Por exemplo, a presente invenção inclui proteínas de liga- ção ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno, que compreendem um domínio Fc que com- preende um ou mais pares ou grupos de mutações selecionadas a partir do grupo que consiste em: 250Q e 248L (por exemplo, T250Q e M248L); 252Y, 254T e 256E (por exemplo, M252Y, S254T e T256E); 428L e 4348 (por exemplo, M428L e N434S); 2571l e 3111 (por exem- plo, P2571 e 03111); 2571 e 434H (por exemplo, P2571| e N434H); 376V e 434H (por exemplo, D376V e N434H); 307A, 380A e 434A (por exemplo, T307A, ES80A e N434A); e 433K e 434F (por exemplo, H433K e N434F).
[0089] As proteínas de ligação ao antígeno anti-PíRH5, por exem- plo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que compreendem uma Vr e/ou V., conforme apresentado no presente do- cumento, que compreendem quaisquer combinações possíveis das mutações do domínio Fc anteriores, são contempladas pelo escopo da presente invenção.
[0090] A presente invenção também inclui proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRHS5, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno que compreende um Vn apresentado no presente documento e uma região constante de cadeia pesada quimérica (Cx), em que a região quimérica CH compreende segmentos derivados das regiões Ch de mais de um isotipo de imunoglobulina. Por exemplo, os anticorpos da invenção podem compreender uma região quimérica Cy que compre-
ende parte ou todo o domínio Cx2 derivado de uma molécula de IgG1 humana, I9gG2 humana ou molécula IgG4 humana, combinada com parte ou com todo o domínio Cx3 derivado de uma molécula de I19G1 humana, IgG2 humana ou de IgG4 humana. De acordo com determi- nadas modalidades, os anticorpos da invenção compreendem uma região quimérica Ch que contém uma região de dobradiça quimérica. Por exemplo, uma dobradiça quimérica pode compreender uma se- quência de aminoácidos "de dobradiça superior" (resíduos de aminoá- cido das posições 216 a 227 de acordo com a numeração EU) deriva- da de uma região de dobradiça de IgG1 humana, uma IgG2 humana ou uma IgG4 humana, combinada com uma sequência de “dobradiça inferior” (resíduos de aminoácidos das posições 228 a 236 de acordo com a numeração EU) derivada de uma região de dobradiça de I9G1 humana, uma IgG2 humana ou uma IgG4 humana. De acordo com determinadas modalidades, a região de dobradiça quimérica compre- ende resíduos de aminoácidos derivados de uma articulação superior de IgG1 humana ou de uma articulação superior de IgG4 humana e resíduos de aminoácido derivados de uma articulação inferior de I9G2 humana. Um anticorpo que compreende uma região quimérica Cu, conforme descrito no presente documento, em determinadas modali- dades, pode exibir funções efetoras de Fc sem afetar adversamente as propriedades terapêuticas ou farmacocinéticas do anticorpo. (Consul- tar, por exemplo, o documento nº WO2014/022540).
PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A ANTÍGENO MULTIESPECÍFICAS
[0091] A presente invenção inclui proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpos e fragmentos de ligação ao antí- geno dos mesmos, assim como métodos de uso dos mesmos e méto- dos de produção de tais proteínas de ligação ao antígeno. O termo proteínas de ligação ao antígeno "anti-PfRH5", por exemplo, anticor- pos ou fragmentos de ligação ao antígeno, inclui moléculas multiespe-
cíficas (por exemplo, biespecíficas ou biparatópicas) que incluem pelo menos um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga especi- ficamente à P(RH5 (por exemplo, um domínio de ligação do antígeno de H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2) e pelo menos um se- gundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno dife- rente ou a um epitopo em PÍRHB5 que é diferente daquele do primeiro domínio de ligação ao antígeno (por exemplo, CD3, CD16, BSG (basi- gin), EXP1, MSP1, MSP2, MSPMSP3, MSP4, MSP5, MSP6, MSP7, MSP9, MSP10 GLURP, Sera, RAMA, SEA, AMA1, MTRAP, PTRAMP, ASP, RH1, RH2a, RH2b, RH4, RAP1, RAP2, RAP3, RhopH1, RhopH2, RhopH3, EMA175, EMA140 e/ou EBA1I81). Em uma modalidade da invenção, o primeiro e o segundo epitopos se sobrepõem. Em outra modalidade da invenção, o primeiro e o segundo epitopos não se so- brepõem.
[0092] Em uma modalidade da invenção, uma proteína multiespe- cífica de ligação ao antígeno se liga à PÍRH5 e a um antígeno que causa a ativação das células imunes, tais como células T citotóxicas, células NK, fagócitos mononucleares ou neutrófilos, por exemplo, CD3 ou CD16.
[0093] “H1H29089P”; “H1H29094P”; “H1H29100P”; “H1H29104P”; “H1H29106P”; “H1H29109P”; “H1H29125P”; “H1H29127P”; “H1H29131P”; “H1H29134P”; “H1H29138P”; “H1H29141P”; “H1H29143P”; “H1H29146P2”; “H1H29147P2”; “H1H29149P2”; “H1H29151P2”"; “H1H29163P2”"; “H1H29166P2”; “H1H29171P2”;
“H1H29179P2"; “H1H29183P2”"; “H1H29187P2”; “H1H29192P2”; “H1H29196P2"; “H1H29198P2”; “H1H29207P2”; “H1H29214P2"”; ou “H1H29215P2” inclui moléculas multiespecíficas, por exemplo, anticor- pos ou fragmentos de ligação a anticorpo, que incluem as HCDRs e LCDRs, Vx e Vi ou HC e LC da H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P?2; H1H29147P?2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2, respectivamente (incluindo variantes dos mesmos, conforme apresentado no presente documento) e um ou mais domínios de ligação ao antígeno que se ligam a um epitopo dife- rente.
[0094] Em uma modalidade da invenção, um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente à PfRH5, que pode ser incluí- da em uma molécula multiespecífica, compreende:
[0095] (1)
[0096] (i) uma sequência de domínio variável de cadeia pesada que compreende CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma cadeia pesada de imunoglobulina selecionada a partir de: H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P?2; H1H29147P?2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P2, e
[0097] (ii) uma sequência de domínio variável de cadeia leve que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma cadeia pesada de imunoglobulina selecionada a partir de: H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P?2; H1H29147P?2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P?2, respectivamente;
[0098] ou
[0099] (2)
[00100] (i) uma sequência de domínio variável de cadeia pesada (VH) selecionada a partir de: H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P2; e
[00101] (ii) uma sequência de domínio variável de cadeia leve (V.) selecionada a partir de: H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P?2, respectivamente;
[00102] eumoumais domínios de ligação ao antígeno que se ligam a um epitopo diferente.
[00103] Em uma modalidade da invenção, o anticorpo multiespeciífi- co ou fragmento inclui mais de duas especificidades de ligação dife- rentes (por exemplo, uma molécula triespecífica), por exemplo, um ou mais domínios de ligação ao antígeno adicionais que são iguais ou di- ferentes do primeiro e/ou segundo domínio de ligação ao antígeno.
[00104] Em uma modalidade da invenção, um fragmento de ligação ao antígeno biespecífico compreende um primeiro scFv (por exemplo, que compreende Vw e V. de H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P2) que tem especificidade de ligação a um primeiro epito- po (por exemplo, PÍRH5) e um segundo scFv que tem especificidade de ligação para um segundo epitopo diferente. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, o primeiro e o segundo scFv são amarrados com um conector, por exemplo, um ligante de peptídeo (por exemplo, um conector de GS, tal como (GGGGS), (SEQ ID NO: 364) em que n é, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10). Outros fragmentos de ligação ao antígeno biespecíficos incluem um F(ab)> de um anticorpo de IgG biespecífico que compreende as CDRs de cadeia pesada e le- ve de H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P?2; H1H29198P2;
H1H29207P2 H1H29209P2; H1H29214P2; e H1H29215P2 e de outro anticorpo que se liga a um epitopo diferente.
IMUNOCONJUGADOS
[00105] A invenção abrange proteínas de ligação ao antígeno anti- PÍRHS5, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno, conjugados a outra fração, por exemplo, uma porção química terapêu- tica (um "imunoconjugado"), tal como um toxoide (por exemplo, toxoide da difteria ou toxoide do tétano) ou um medicamento antiparasitário para tratar a infecção por Plasmodium falciparum. Em uma modalidade da invenção, um anticorpo ou fragmento anti-PfRH5 é conjugado a qualquer um dos outros agentes terapêuticos apresentados no presen- te documento. Conforme usado no presente documento, o termo "imu- noconjugado" refere-se a uma proteína de ligação ao antígeno, por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, que está ligado química ou biologicamente a outra molécula.
MÉTODOS TERAPÊUTICOS
[00106] A presente invenção fornece métodos para tratar ou preve- nir infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malária) admi- nistrando-se uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2) a um sujeito (por exemplo, um ser humano) com necessidade de tal tratamento ou prevenção. A “malária” é uma doença frequentemente transmitida pela picada de uma fêmea de mosquito infectada (por exemplo, mosquitos Anopheles), causada pela infecção de um hospedeiro com o parasita Plasmodium falci- parum. O termo “infecção Plasmodium falciparum” refere-se à invasão do corpo de um sujeito com Plasmodium falciparum e abrange malária.
[00107] Uma dose eficaz ou terapeuticamente eficaz da proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), para tratar ou prevenir uma infecção por Plasmodium falciparum refere-se à quantidade do anticorpo ou fragmento suficiente para aliviar um ou mais sinais e/ou sintomas da infecção no sujeito tratado, seja indicando-se a regressão ou elimina- ção de tais sinais e/ou sintomas ou inibindo-se a progressão de tais sinais e/ou sintomas. A quantidade da dose pode variar dependendo da idade e do tamanho de um sujeito que será submetido à adminis- tração, da doença-alvo, das afecções, da rota de administração e se- melhantes. Em uma modalidade da invenção, uma dose eficaz ou te- rapeuticamente eficaz de proteína de ligação ao antígeno anti-PÍRHS, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mes- mo, da presente invenção, para tratar ou prevenir infecção por Plas- modium falciparum, por exemplo, em um sujeito humano adulto, é de cerca de 1 mg/kg a 150 mg/kg. Dependendo da gravidade da inven- ção, a frequência e duração do tratamento podem ser ajustadas. Em determinadas modalidades, a proteína de ligação ao antígeno da pre- sente invenção pode ser administrada em uma dose inicial, seguida por uma ou mais doses secundárias. Em determinadas modalidades, a dose inicial pode ser seguida pela administração de uma segunda ou uma pluralidade de dose subsequentes de proteína de ligação ao antí- geno em uma quantidade que pode ser aproximadamente igual ou in- ferior à da dose inicial, em que as doses subsequentes são separadas por pelo menos 1 dia a 3 dias; pelo menos uma semana, pelo menos 2 semanas; pelo menos 3 semanas; pelo menos 4 semanas; pelo menos semanas; pelo menos 6 semanas; pelo menos 7 semanas; pelo me- nos 8 semanas; pelo menos 9 semanas; pelo menos 10 semanas; pelo menos 12 semanas; ou pelo menos 14 semanas.
[00108] Conforme usado no presente documento, o termo "sujeito" refere-se a um mamífero (por exemplo, rato, camundongo, gato, ca- chorro, vaca, ovelha, cavalo, cabra, coelho), de preferência, um ser humano, por exemplo, com necessidade de prevenção e/ou tratamen- to contra uma infecção por Plasmodium falciparum. Um sujeito pode ter uma infecção por Plasmodium falciparum ou pode ter predisposição a desenvolver uma infecção por Plasmodium falciparum ou pode cor- rer risco elevado de desenvolver tal infecção. Os indivíduos predispos- tos a desenvolver uma infecção por Plasmodium falciparum ou os indi- víduos que correm risco elevado de contrair uma infecção por Plasmo- dium falciparum, incluem aqueles indivíduos com sistemas imunológi- cos comprometidos, por exemplo, devido a uma doença autoimune, aquelas pessoas que recebem terapia imunossupressora, aquelas pessoas afetadas pela síndrome da imunodeficiência humana (HIV) ou pela síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), determinadas formas de anemia que depletam ou destroem células brancas, aquelas pessoas que recebem radiação ou quimioterapia ou aquelas pessoas que sofrem de um distúrbio inflamatório. Além disso, indivíduos extre- mamente jovens ou idosos podem ter predisposição. Qualquer pessoa que entre em contato ou que se aproxime de mosquitos, especialmen-
te nos trópicos, América do Sul, América Central, África, Sudeste Asiá- tico e região do Mediterrâneo Oriental, tem um risco aumentado de desenvolver infecção por Plasmodium falciparum.
[00109] “Tratar” ou “tratamento” significa administrar uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou frag- mento de ligação ao antígeno da presente invenção (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), a um sujeito que tem infecção por Plasmodium falciparum, de modo que um ou mais sinais ou sintomas da invenção no sujeito sejam reduzidos ou eliminados, por exemplo, em que o Plasmodium falciparum é reduzido ou substan- cialmente eliminado (por exemplo, completamente eliminado) do corpo do sujeito.
[00110] Os sinais e sintomas de infecção por Plasmodium falci- parum incluem:
[00111] e Anemia;
[00112] e Sangue nas fezes;
[00113] e Calafrios, febre, sudorese;
[00114] e Coma;
[00115] e Convulsões;
[00116] e Dorde cabeça;
[00117] elcterícia;
[00118] e Dormuscular;
[00119] e Náusea e vômito;
[00120] e Aumento do baço;
[00121] elcterícia;
[00122] e Aumento do fígado;
[00123] e Aumento da frequência respiratória;
[00124] e Plasmodium falciparum na corrente sanguínea, no fígado ou eritrócitos;
[00125] e Anemia;
[00126] e Hemólise;
[00127] e Hemoglobina livre na corrente sanguínea;
[00128] e Hemoglobinúria;
[00129] e Insuficiência renal aguda;
[00130] e Síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS);
[00131] e Pressão sanguínea baixa;
[00132] e Acidose metabólica; e
[00133] e Hipoglicemia.
[00134] A presente invenção também abrange administrar profilati- camente uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exem- plo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da pre- sente invenção (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), a um sujeito que está em risco (por exemplo, predis- posto ou um risco elevado) de infecção por Plasmodium falciparum de modo a impedir tal infecção. "Prevenir" ou "prevenção" significa admi- nistrar uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção, a um sujeito que não está infectado com Plasmodium falciparum, de modo que a manifestação da infecção no corpo de um sujeito tenha probabilidade inibida ou diminuída ou gravidade diminuída, caso a in- fecção ocorra.
COMBINAÇÕES E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
[00135] A presente invenção fornece composições que incluem pro- teínas de ligação ao antígeno anti-PíRH5 e um ou mais ingredientes; assim como métodos de uso dos mesmos e métodos de preparação de tais composições.
[00136] Para preparar composições farmacêuticas das proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, os anticorpos e fragmen- tos de ligação ao antígeno dos mesmos (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), a proteína de ligação ao antígeno é misturada com um carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitá- vel. Consultar, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences e U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984); Hardman, et al. (2001) Goodman e Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, Nova lorque, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science e Practice of Pharma- cy, Lippincott, Williams, e Wilkins, New York, N.Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et a/. (edições) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner e Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity e Safety, Marcel Dekker,
Inc., New York, N.Y. Em uma modalidade da invenção, a composição farmacêutica é estéril. Essas composições fazem parte da presente invenção.
[00137] As composições farmacêuticas da presente invenção inclu- em transportadores, diluentes, excipientes e/ou estabilizantes farma- ceuticamente aceitáveis, tais como, por exemplo, água, agentes de tamponamento, agentes estabilizadores, conservantes, isotonificantes, detergentes não iônicos, antioxidantes e/ou outros aditivos diversos.
[00138] O escopo da presente invenção inclui composições desse- cadas, por exemplo, liofiizadas, que compreendem uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), ou uma composição farmacêutica da mesma que inclui um carreador farmaceuticamente aceitável, porém carece substancialmente de água.
[00139] Em uma outra modalidade da invenção, um outro agente terapêutico que é administrado a um sujeito associado a uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou frag- mento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P?2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2;
H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), descrito no presente documento é administrado ao su- jeito em conformidade com Physicians' Desk Reference 2003 (Thom- son Healthcare; 57º edição (1º de novembro de 2002)).
[00140] O modo de administração de uma proteína de ligação ao antígeno ou composição da mesma pode variar. As vias de adminis- tração incluem oral, retal, transmucosa, intestinal, parenteral; intra- muscular, subcutânea, intradérmica, intramedular, intratecal, intraven- tricular direta, intravenosa, intraperitoneal, intranasal, intraocular, ina- lação, insuflação, tópica, cutânea, transdérmica ou intra-arterial.
[00141] A presente invenção fornece métodos para a administração de uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anti- corpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P?2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P?2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2) a um sujeito que compreende introduzir a proteína ou uma composição farmacêutica ou combinação das mesmas no corpo do sujeito. Por exemplo, o método compreende perfurar o corpo do sujeito com uma agulha de uma seringa e injetar a proteína de ligação ao antígeno ou uma composição farmacêutica ou combinação das mesmas no corpo do sujeito, por exemplo, na veia, artéria, tumor, músculo tecido ou subcutâneo do sujeito.
[00142] A presente invenção fornece um recipiente (por exemplo, um frasco de plástico ou vidro, por exemplo, com uma tampa ou uma coluna de cromatografia, agulha de orifício oco ou um cilindro de se- ringa) que compreende qualquer uma das proteínas de ligação ao an-
tígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpos ou antígeno de ligação ao fragmentos do mesmo (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P?2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2) ou uma composição farmacêutica que compreende um carreador farmaceuti- camente aceitável ou uma combinação dos mesmos.
[00143] A presente invenção inclui combinações que incluem uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo da presente invenção (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P?2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), associ- ado a um ou mais outros agentes terapêuticos. A proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 e o outro agente terapêutico podem estar em uma única composição ou em composições separadas. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, o outro agente terapêutico é um agente terapêutico antiparasitário ou antimalárico. Em uma modalida- de da invenção, o outro agente terapêutico é cloroquina, atovaquona e/ou proguanil, artemeter e/ou lumefantrina, mefloquina, quinina, qui- nidina, doxiciclina (opcionalmente em combinação com quinina) e/ou clindamicina (opcionalmente em combinação com quinina). Em uma modalidade da invenção, o outro agente terapêutico é uma vacina, tal como uma vacina antimalárica, por exemplo, RTS,S/AS01 (vendida como Mosquirix). São parte da presente invenção métodos para tratar ou prevenir infecção por Plasmodium falciparum em um sujeito com necessidade do tratamento ou prevenção administrando-se H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2 em associação com um agente terapêutico adicional.
[00144] A presente invenção inclui uma combinação que compre- ende duas ou mais (por exemplo, 2, 3 ou 4) dentre as proteínas de |i- gação ao antígeno da presente invenção (por exemplo, anticorpo ou proteína de ligação ao antígeno) associadas entre si. Por exemplo, ca- so H1H29089P seja Abi; caso H1H29094P seja Ab2; caso H1H29100P seja Ab3; caso H1H29104P seja Ab4; caso H1H29106P seja Ab5; caso H1H29109P seja Ab6; caso H1H29125P seja Ab7; ca- so H1H29127P seja Ab8; caso H1H29131P seja Ab9; caso H1H29134P seja Ab1I0; caso H1H29138P seja Ab11; caso H1H29141P seja Ab12; caso H1H29143P seja Ab13; caso H1H29146P2 seja Ab14; caso H1H29147P2 seja Ab15; caso H1H29149P2 seja Ab16; caso H1H29151P2 seja Ab1i7; caso H1H29163P2 seja Ab18; caso H1H29166P2 seja Ab19; caso H1H29171P2 seja Ab20; caso H1H29179P2 seja Ab21; caso H1H29183P2 seja Ab22; caso H1H2918/P2 seja Ab23; caso H1H29192P2 seja Ab24; caso H1H29196P2 seja Ab25; caso H1H29198P2 seja Ab26; caso H1H29207P2 seja Ab27; caso H1H29214P2 seja Ab28; caso H1H29215P2 seja Ab29 e caso
H1H29209P seja Ab30, então, tais composições da presente invenção incluem combinações que incluem as proteínas de ligação ao antígeno a seguir da invenção (por exemplo, anticorpos e/ou proteínas de liga- ção ao antígeno) associadas entre si: Ab1& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab3B& Ab4& AD5& AD5& ADE Ab2 AbI8 —Ab7 Ab23 —AbI3S —Ab29 Ab2O AbI2 Ab28 Ab21 Ab1I& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab4& Ab4& Ab5& ADb5S& ADB& Ab3 —AbIO ABB AbMM Abl4 Ab5 —Ab21 AbIS Ab2O —Ab22 Ab1I& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab4& Ab4& ADbS& AD6B& ADOBE Ab4 Ab2O —Ab9 Ab25 —AbIS Ab6S Ab22 AbIl4 Ab7 Ab23 Ab1& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab4& Ab4& AD5& ADB& ADLB& Ab5 —Ab21I ADIO AD26 AbIGS Ab7 Ab238 AbIS ADB Ab Ab1I& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab4& Ab4& Ab5& ADB& ADB& Ab6 Ab22 AbI1T Ab27 AbI7 AbB Ab24 —AbIGS Ab9 — Ab25 Ab1& AbI& Ab2& Ab2& Ab3& Ab4& Ab4& AD5& ADB& ADLB& Ab7 Ab23 —Ab12 Ab28 AbIS Ab9 Ab25 —Abi7 AbIO AbLZ6 Ab1I& AbI& Ab2& Ab2& AD3& Ab4& Ab4& AD5& ADB& ADE AbB —Ab24 AbIS Ab2O AbIO AbIO Ab26 ADbIS AbI1I Abo7 Ab1& AbI& Ab2& ADb3& Ab3& Ab4& Ab4& AD5& ADB& ADLB& Abe —Ab25 AbIM Ab4 —Ab2O Abll Ab27 AbIO AbI2 Ab2B Ab1I& AbI& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab4& ADb5S& ADB& ADB& AbI1O Ab26 AbIS Ab5 Ab21 Ab12 Ab28 AL2O AbI3 —Ab29 Ab1I& AbI& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab4& AD5S& ADB& Ab7T& Ab11 Ab27 ADIGS ABB Ab22 AbI3S Ab2O Ab21 AbI4 AbDB Ab1& AbI& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab5& AD5& ADB& Ab7T& Ab1I2 Ab2B AbI7 Ab7 Ab233 Abl4 ABB Ab22 —AbIS Ab9 Ab1& AbI& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab5& AD5& ADB& AbT& Ab13 —Ab29O Ab18 Ab8 Ab24 —AbIS Ab7 Ab23 —AbIG AbIO Ab1& Ab2& Ab2& ADb3& Ab3& Ab41& Ab5& AD5& ADB& Ab7T& Abi4 Ab3 AbIS ADO Ab25 AbIG AbB Ab24 —AbI7 AbI Ab1& Ab2& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab5& AD5S& ADB& AbD7T& AbIS —Ab4 Ab20 AbIO —Ab26 AbiI7 —Ab9 Ab25 —AbI8 AbÍi2 Ab1& Ab2& Ab2& ADb3& Ab3& Ab4& Ab5& AD5& ADB& Ab7T& AbI6 Ab5 —Ab21I AbIT Ab27 AbIB8 AbIO AD26 AbIO ADIS Ab1I& Ab2& Ab2& Ab3& Ab3& Ab4& Ab5S& ADS& ADB& Ab7T& Abi7 Ab6 Ab22 Ab12 Ab28 AbIS Ab Ab27 Ab2O Abi4
Abr& ADB& ADB& Ab9& ADIO AbIO AbIT Abl2 AbI3 AbIS AbIS SADIO AbD6 Ab & & & & & & AbIz Ab2o Ab2B AbIS AbI4 —Ab26 Ab7r& ADB& ADB& ADO& AbI6 AbI1T Abr Ab233 ADIO AbIIt AbIT Abl2 AbIS AbIS & & & & & & Ab7& ADbB& ADB& AD9& anpig Abl2 AD24 AbIO AbIS Abo7 Abiz Abl2 Ab28 Ab AbIO AbIIT AbIT Abl2 AbI3 AbIS Ab7& ADB& ADB& ADI& & & & & & z& AbI8 —ADIS Ab2O Ab2S aplo ADIS Ab25 Ab2O AbIG Ab2B Ab7& ADB& AD9& AP9I& aApIO ADIT AbIT AbI2 AbIS ADIS AbIO ADI4 AbIO ADD & & & & z & Ab7& ALbB& AbO& AbDa& ADZO AbIM ABB AD21 AbI7Z Ab2O Ab20 —ADIS AbIT Ab2” ApIO AbIT AbIT ADbI2 AbI3 AbIA Ab7& ADB& ADO& Abo& *& & & & & & Ab21 ADIG ADI? ADog Ab21 AbIS Abr Ab22 AbIS AbIS Ab7& ALbB& AbO& Aba& ADIO ADIT ADI AbI2 AbIS AbIA Ab22 AbI7z AbIS Ab & & & & & & Ab22 AbIG Ab28 Ab233 AbIO AIG Abr& ADB& ADI& AbIO Ab23 ADIS ADIA & AbIO AbIT ADI AbI2 ADbIS Abl4 an & & & & & & Ab7& ADB& ADOBE Ab23 —AbI7Z Ab2O Ab24 ACO —Abi7 Ab24 AbIS ADIS —AbDIO & AbIO AbIT AbI2 AbI2 ADbIS Aba Ab7& ADB& ADI apo & & & & & & Ab25 —AD2O AbIG Ab24 AbIS AbIS Ab25 Ab21 ADIB Ab1O Ab7& ADB& ADI& & AbIO AbIT AbI2 Abl2 AbIS Aba Ab26 ADI ABIT apig & & & & & & Ab25 —AbIS AbI4 Ab26 Ab22 AbIO Ab7& ADbB& ADI& apo Ab27 Ab22 ADIB & AbIO AbIT AbI2 AbI2 AbIS Aba aba & & & & & & Ab7& ADB& AbO& Ab26 Ab2O AbIS Ab27 Ab23 —Ab2O Ab28 —Ab23 AbIO apio & AbIO AbII Abi2 Abl2 ADbIS AbI4 AB7T& ADB& ADORA, & & & & & & Ab29 —Ab24 —Ab20 Ab27r Ab21 AbIG6 Ab28 Ab24 —Ab21 AbI1O ADB& ADB& ADI& AbIO AbI1T Abl2 AbI2 AbI3 —Abi4 AO ARS ADA Au & & & & & & Ab28 Ab22 Abiz Ab2O Ab25 Ab
AbI4 AbIS ADIGS Abiz ADbIB AbIO AD2O Ab22 Ab23 —Ab26 & & & & & & & & & & Ab23 Ab21 Ab2O Ab2O Ab21 Ab23 ADb2X6 Ab23B Ab29 Abo9 AbI4 AbIS ADIG Abiz ADbIB AbIlo AD2O Ab22 Ab24 —Abo7 & & & & & & & & & & Ab24 Ab22 Ab21 Ab21 Ab22 Ab24 Abr Ab2M Ab25 Ab2OB AbI4 AbIS ADIG Abiz ADbIB AbIlo AD2O Ab22 Ab24 —Abo7 & & & & & & & & & & Ab25 —Ab23 Ab22 Ab22 Ab23 Ab25 Ab2B8 Ab25 Ab26 Ab2o AbI4 AbIS ADIGS Abiz ADbIB AbIS AD2O Ab22 Ab24 —Ab2B & & & & & & & & & & Ab28 —Ab24 Ab23B Ab23 AD2M AbD6 AD2O Ab2D6 Ab27 Ab2O AbI4 ADIS AbIGS Abiz ADIBS AbIO AD2I Ab22 ADM ADI& & & & & & & & & & Ab3O Ab27 = AB2S ABM AB24 Ab2S AB27 AB22 AB2T ABB ., AbI4 AbIS ADIGS Abiz ADbIB AbIlo ADb21 Ab22 Ab24 —AbSO & & & & & & & & & Ab28 Ab26 Ab25 Ab25 Ab26 Ab28 Ab28 Ab28 Ab2O no AbI4 AbIS ADIGS Abiz ADIBS AbIS Ab21 Ab22 ADS & & & & & & & & & AbA& Ab2O Abr Ab2%6 Ab%6 Abr Ab Ab2M Ab2oo Abas —APb3O AbIS AbIS ADIGS Abiz AbIBS Ab2OO Ab21 Ab33 Abs —APbSE& & & & & & & & & & Ab3O AbI6 Ab28 Abr Abr Ab28 Ab21 Ab25S ADM ADI nho AbIS AbIS5 ADIS AbiIz AbIBS AbXO Ab21 Abroa abas —AbSO & & & & & & & & & AbT& AbIT Ab2O Ab2B Ab28 Ab2O Ab22 ADbZXG ADb2S5 ADS pao AbIS ADIG AbIG AbIz AbIO ADBZXO ADI Ab23 Ab npgg & & & & & & & & & Ab3O AbIB8 Abiz Ab2O Ab29 ALb2O Ab23 Ab27 Ab26 Ab2O Ab9 & AbIS AbIS AbI7z AbIS AbIO ADO Ab21 Ab ADS pao & & & & & & & & & AbI19 AbIBS AbIS Ablo Ab21I Ab2M4 Ab2B8 Abr Ab27 AbIO & Ab15 Ab1I6 Ab17 Ab1I8 Ab19 Ab20 Ab21 Ab23 Ab26 Ab3O & & & & & & & & & Ab2O AbIS AbIO Ab2O Ab22 Ab25 Ab2O Ab28 AbZB Ab11 AbIB3 ADIS Abiz AbIO Ab21 Ab23 Ab25 Ab27 Ab2O & & & & & & & & & & AD3O —AD3O AD3O Ab3O AD3O Ab3O ADO AXO AD3O Ab3O Ab1I2 Abl4 ADIG AbI8 Ab2O Ab22 Ab24 Ab26 Ab2B & & & & & & & & & Ab3O Ab3O AD3O Ab3O AD3O Ab3O AD3O Ab3O AD3O
[00145] Em uma modalidade da invenção, a composição compre- ende duas ou mais proteínas de ligação ao antígeno não competido- ras. A competição cruzada entre os anticorpos anti-PíRH5 da presente invenção é resumida abaixo na Tabela 6-1.
[00146] O termo “associado a" indica que os componentes, uma proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção, junto do outro agente, como cloroquina, podem ser formulados em uma única com- posição, por exemplo, para entrega simultânea ou formulada separa- damente em duas ou mais composições (por exemplo, um kit que in- clui cada componente). Cada componente pode ser administrado a um sujeito quando o outro componente não for administrado; por exemplo, cada administração pode ser fornecida não simultaneamente (por exemplo, separadamente ou sequencialmente) em intervalos durante um determinado período de tempo. Além disso, os componentes sepa- rados podem ser administrados a um sujeito pela mesma via ou por uma via diferente.
TESTE E DIAGNÓSTICO
[00147] O diagnóstico precoce da malária é útil para obter um resul- tado clínico positivo. A presente invenção fornece métodos para o tra- tamento de infecção por Plasmodium falciparum (por exemplo, malá- ria), em um sujeito, que compreende diagnosticar a infecção no sujeito e, caso o sujeito seja diagnosticado como tendo a infecção, adminis- trar uma quantidade terapeuticamente eficaz da proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, ao sujeito. Consultar, por exemplo, Moody, Rapid Diag- nostic Tests for Malaria Parasites, Clinical Microbiology Reviews 15(1): 66 a 78 (2002).
[00148] A infecção por Plasmodium falciparum pode ser diagnosti- cada microscopicamente (por exemplo, microscopia de fluorescência).
Por exemplo, Plasmodium falciparum pode ser identificado examinan- do-se, sob o microscópio, uma gota de sangue de um sujeito, por exemplo, espalhada como um "esfregaço de sangue" em uma lâmina de microscópio (por exemplo, esfregaço espesso ou esfregaço de sangue fino). Antes do exame, a amostra pode ser marcada (por exemplo, com marcação Giemsa). A presente invenção inclui métodos para o tratamento de infecção por Plasmodium falciparum (conforme discutido no presente documento), em que a infecção é diagnosticada microscopicamente.
[00149] Em uma modalidade da invenção, a presença de Plasmodi- um falciparum em uma amostra do sujeito é detectada pela detecção da lactato desidrogenase do Plasmodium falciparum. Caso a LDH seja detectada em uma amostra de teste acima da de uma amostra de con- trole de uma amostra não infectada conhecida, então, a amostra de teste é determinada como contendo Plasmodium falciparum. Consul- tar, por exemplo, Miura, H. Zhou, A. Diouf, SE. Moretz, MP. Fay, LH. Miller, LB. Martin, MA. Pierce, RD. Ellis, GED. Mullen, CA. Long. Anti- Apical-Membrane-Antigen-1 antibody is more effective than anti-42- kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1 antibody in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as determined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963 a 968 (2009). PMID: PMC2708396.
[00150] A presença de ácidos nucléicos de Plasmodium falciparum também pode ser detectada, por exemplo, com o uso de uma reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar, por exemplo, os genes 18S rRNA de subunidade pequena e/ou de circunsporozoítos (CS).
[00151] A infecção por Plasmodium falciparum também pode ser diagnosticada pela detecção de antígenos do parasita no corpo de um sujeito. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, o antígeno é detectado de maneira imunogênica, por exemplo, com o uso de um teste de diagnóstico rápido. Consultar, por exemplo, Van der Palen et al. Test characteristics of two rapid antigen detection tests (SD FK50 and SD FK60) for the diagnosis of malaria in returned travelers, Malar- ia Journal 8:90 (2009); ou a Patente nº U.S. 5712170.
[00152] As proteínas de ligação ao antígeno anti-PfRH5, por exem- plo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno do presente in- vento (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2), pode ser usado para detectar e/ou medir PfRH5 (por exemplo, uma célula de Plasmodium falciparum que inclui a proteína PÍRH5) em uma amostra (por exemplo, um fluido cor- poral, como sangue). Os ensaios exemplificativos para PÍRH5 podem incluir, por exemplo, o contato da amostra com uma proteína de liga- ção ao antígeno anti-PfRH5 da invenção, em que, por exemplo, a pro- teína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 é identificada com um identifi- cador detectável ou molécula repórter. Caso a proteína de ligação ao antígeno anti-Pf(RH5 complexada com PÍRH5 seja detectada, isso indi- ca a presença de PÍRH5 na amostra e/ou a presença de Plasmodium falciparum na amostra e no corpo do sujeito.
[00153] Por exemplo, a presente invenção inclui métodos para de- tectar o polipeptídeo PfRH5 ou uma célula que inclua tal polipeptídeo (por exemplo, Plasmodium falciparum) com o uso de um teste de de- tecção de antígeno “imunocromoatográfico” de fluxo lateral. Tais testes de fluxo lateral se baseiam na captura de proteínas de ligação ao antí- geno marcadas de forma detectável (por exemplo, anticorpos e frag- mentos de ligação ao antígeno dos mesmos) para produzir uma banda visível em uma tira de substrato. Com os testes de diagnóstico de ma-
lária por Plasmodium falciparum, a proteína de ligação ao antígeno identificada primeiramente se liga ao antígeno do parasita, PÍRH5, e o complexo resultante é capturado na tira por uma faixa de proteína de ligação ao antígeno ligada, formando uma linha visível (linha de teste). Uma linha de controle fornece informações sobre a integridade do con- jugado anticorpo-identificador, porém não confirma a capacidade de detectar o antígeno do parasita.
[00154] A presente invenção fornece uma tira de teste de fluxo late- ral para detectar a presença de PÍRH5 (por exemplo, uma célula de Plasmodium falciparum) em uma amostra que compreende um subs- trato (por exemplo, nitrocelulose) que inclui as seguintes regiões dis- postas lateralmente ao longo do substrato:
[00155] (i) um local para introdução de uma amostra (zona de amostra);
[00156] (ii) um bloco de conjugado inclui uma primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P?2; H1H29163P2; H1H29166P2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P2; ou H1H29215P2) que é identificada de maneira detectável, por exemplo, com um corante, porém não imobili- zada ao substrato;
[00157] (ii) uma linha de teste que contém uma segunda proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 que não é identificada de maneira detectável e não compete significativamente com a primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PíRHS5 pela ligação à PIRH5, porém é imobilizada no substrato; e
[00158] (iv) uma linha de controle que contém uma proteína secun- dária de ligação ao antígeno, imobilizada no substrato, que se liga à primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (por exemplo, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno ou proteína A).
[00159] Em uma modalidade da invenção:
[00160] (i)uma vez que uma amostra que contém o líquido é colo- cada no bloco de amostra, a amostra (e qualquer polipeptídeo PÍRH5 contido na mesma) se difunde, por ação capilar, no substrato, para o bloco de conjugação, em seguida, para a linha de teste e, em seguida, para a linha de controle;
[00161] (ii) o polipeptídeo PIRH5 que atinge o bloco de conjugado forma um complexo com a primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PíRHB5 identificada de maneira detectável, e o complexo se difun- de ainda mais na linha de teste na qual um complexo adicional é for- mado com a segunda proteína de ligação ao antígeno anti-PfRH5 (o que forma um complexo triplo em que a PÍRH5 que é ligada pelas di- tas primeira e segunda proteínas de ligação ao antígeno e é imobiliza- da dentro da linha de teste);
[00162] (ii) qualquer excesso da primeira proteína de ligação ao antígeno anti-PíRH5 que não se imobilize na linha de teste continua a se difundir na linha de controle e se liga à proteína secundária de liga- ção ao antígeno, desse modo, tornando-se imobilizada na linha de controle; e/ou
[00163] (iv) um teste positivo, que indica a presença de PÍRH5 na amostra, é indicado pela presença do identificador detectável na linha de teste; um teste negativo, que indica a falta de níveis detectáveis de PÍRHS5 na amostra, é indicado pela ausência do identificador detectá- vel na linha de teste; e o rótulo detectável na linha de controle indica que o sistema de teste está operando corretamente.
[00164] Em uma modalidade da invenção, o identificador detectável é um corante (por exemplo, azul índigo), uma enzima, uma ferritina, uma micropartícula/microesfera ou nanopartícula/microesfera colorida ou fluorescente ou um metal coloide (por exemplo, outro, corante de selênio (por exemplo, em um lipossoma) ou prata, por exemplo, uma partícula coloidal da mesma). Em uma modalidade da invenção, o identificador detectável é visualmente detectável.
[00165] Em uma modalidade da invenção, o substrato é um material insolúvel capaz de suportar o fluxo de fluido, por exemplo, papel de filtro de fibra de vidro; materiais poliméricos naturais, materiais à base de celulose, papel de filtro, papel cromatográfico, nitrocelulose, acetato de celulose, poli(cloreto de vinila), poliacrilamida ou dextrano reticula- do.
[00166] A presente invenção também fornece um método para de- terminar se uma amostra (por exemplo, fluido corporal, como, por exemplo, sangue) contém PIRH5 (por exemplo, uma célula que con- tém PIRH5, como Plasmodium falciparum) que compreende colocar a zona de amostra de um dispositivo de fluxo lateral, conforme apresen- tado no presente documento, em contato com a amostra, aguardar o fluxo capilar transportar a amostra através do substrato para a linha de controle, opcionalmente, aguardar durante um período de tempo e ob- servar as linhas de teste e controle, em que a presença do identifica- dor detectável na linha de teste indica que a amostra continha PÍRHS5 e que presença do identificador detectável na linha de controle indica que a tira de teste de fluxo lateral está funcionando corretamente. À ausência de identificador detectável na linha de teste com a presença do identificador detectável na linha de controle indica a ausência de PÍRHS5 na amostra. Em uma modalidade da invenção, o método com- preende, também, tratar o sujeito, de quem a amostra foi retirada, com uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de ligação ao an- tígeno anti-PfRH5 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno), caso o teste indique a presença de PÍRH5 na amostra e in- dique que a tira de teste de fluxo está funcionando corretamente.
EXEMPLOS
[00167] Os exemplos a seguir são apresentados de modo a forne- cer às pessoas versadas na técnica uma revelação e descrição com- pletas de como produzir e usar os métodos e composições da inven- ção e não devem a limitar o escopo do que os inventores consideram sua invenção. Houve tentativas de garantir precisão em relação aos números usados (por exemplo, quantidades, temperatura etc.), porém, alguns erros e desvios experimentais devem ser considerados. Salvo quando indicado de outro modo, as partes são partes em peso, o peso molecular é o peso molecular médio, a temperatura está em graus Centígrados, a temperatura é cerca de 25 ºC, e a pressão está em pressão atmosférica ou próxima da mesma. EXEMPLO 1: GERAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANOS QUE SE LI- GAM À PFRH5
[00168] Os anticorpos humanos para P. falciparum RH5 (PÍRH5) foram gerados em um camundongo VELOCIMMUNEGO que compreende DNA que codifica as regiões variáveis da cadeia pesada e leve kapa da imunoglobulina humana. Os camundongos foram imunizados com a pro- teína RH5 recombinante (PIRH5ANL). Alguns camundongos foram imu- nizados com a proteína P(RH5 recombinante (PIRHS5ANL.6his) segui- do por um reforço de merozoítos de P. falciparum isolados da cepa 3D7. A resposta imune de anticorpo foi monitorada por um imunoen- saio PfRH5-específico. Quando uma resposta imune desejada foi al- cançada, os esplenócitos foram colhidos e os anticorpos isolados dire- tamente de células B de camundongo antígeno-positivas sem fusão com células de mieloma, conforme descrito na patente nº U.S. 7582298, incorporada especificamente no presente documento a título de referência em sua totalidade. Com o uso desse método, diversos anticorpos humanos anti-pfRHB5 (isto é, anticorpos que possuem domí- nios humanos variáveis e domínios constantes humanos) foram obti-
dos; anticorpos exemplificativos gerados dessa maneira foram deno- minados —H1H29089P; H1H29094P; H1H29100P; H1H29104P; H1H29106P; H1H29109P; H1H29125P; H1H29127P; H1H29131P; H1H29134P; H1H29138P; H1H29141P; H1H29143P; H1H29146P2; H1H29147P2; H1H29149P2; H1H29151P2; H1H29163P2; H1H29166P?2; H1H29171P2; H1H29179P2; H1H29183P2; H1H29187P2; H1H29192P2; H1H29196P2; H1H29198P2; H1H29207P2; H1H29209P2; H1H29214P?2; e H1H29215P2.
[00169] As propriedades biológicas dos anticorpos exemplificativos gerados em conformidade com os métodos desse Exemplo são descri- tas detalhadamente nos Exemplos apresentados abaixo. As sequên- cias das cadeias de imunoglobulina do anticorpo são apresentadas a seguir.
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* Os números correspondentes à Vu, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, V., CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 referem-se às SEQ ID NOs apresentadas no presente documento. “PEP” refere-se a uma sequência de aminoácidos; "DNA!" refere-se a uma sequência de nucleotídeos.
[00170] As sequências de imunoglobulina e suas SEQ ID NOs cor- respondentes que estão resumidas na Tabela 1-1 são apresentadas a seguir. As sequências abaixo também estão em uma Listagem de Se- quências que é incorporada ao presente documento a título de refe- rência.
[00171] SEQIDNO:1
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGG GGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTAC CAGTTACTGGATCGTCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCC TGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGAT ACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGT CCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCG GACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACAAGATATAACTGGAACT ACGGGGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTC CTCA;
[00172] SEQIDNO:2
EVQLVOSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIVWVRQMPGKGLE WMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAM YYCARQDITGTTGFDYWGQGTLVTVSS;
[00173] SEQIDNO:3 GGA TAC AGC TTT ACC AGT TAC TGG;
[00174] SEQIDNO:4 GYSFTSYW;
[00175] SEQIDNO:5 ATC TAT CCT GGT GAC TCT GAT ACC;
[00176] SEQIDNO:6 IYPGDSDT;
[00177] SEQIDNO:7 GCG AGA CAA GAT ATA ACT GGA ACT ACG GGG TTT GAC TAC;
[00178] SEQIDNO:8 ARQDITGTTGFDY,;
[00179] SEQIDNO:9
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAG GAACTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATC AAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT CAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTATTTCTGTCAACAG AGTTACAGTACCCCATTCACTTTCEGGCCCTGGGACCAAAGTGGAT ATCAAACGA;
[00180] SEQID NO: 10
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLI YAASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQOSYSTP FTFGPGTKVDIKR;
[00181] SEQIDNO: 11 CAG AGC ATT AGG AAC TAT;
[00182] SEQIDNO:12 QSIRNY;
[00183] SEQIDNO:13 GCT GCA TCC;
[00184] SEQIDNO: 14 AAS;
[00185] SEQIDNO:15 CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT;
[00186] SEQIDNO:16
QQSYSTPFT;
[00187] SEQIDNO:17
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTTCAGGCACTGGATTCACCTTCA GTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGA CTGGAATGGGTGGCACTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATATT ATGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTCTCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACTGAGG ACACGGCGATATATTACTGTGCGAAAGAGAGGCTTTTTGGAGTGG TCTCTTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCA CCGTCTCCTCA;
[00188] SEQIDNO:18
QVQALVESGGDVVQPGRSLRLSCSGTGFTFSSYAMHWVRQAPGKGL EWVALISYDGSNKYYGDSVKGRFTVSRDNSKNTLSLQMNSLKTEDT AIYYCAKERLFGVVSYYGMDVWGQGTTVTVSS;
[00189] “SEQIDNO:19 GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GCC;
[00190] SEQID NO: 20 GFTFSSYA;
[00191] SEQIDNO:21 ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00192] SEQID NO: 22 ISYDGSNK;
[00193] SEQIDNO:23
GCG AAA GAG AGG CTT TTT GGA GTG GTC TCT TAT TAC GGT ATG GAC GTC;
[00194] SEQIDNO: 24 AKERLFGVVSYYGMDYV,;
[00195] SEQIDNO:25
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCOTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAAT AGGGATCTAAATTGGTATCAGCAGAAATCAGGGAAAGGCCCCAAA CTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCA AGGTTCAGTGGAAATAGATTTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGACTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTTCTGTCAACAGTA TAAAAATCTCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGAT CAA ACGA;
[00196] SEQIDNO:26
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRDLNWYQQKSGKGPKLL IYDASNLETGVPSRFSGNRFGTDFTFTISRLQPEDIATYFCQQYKNLP YTFGOQGTKLEIKR;
[00197] SEQIDNO:27 CAG GAC ATT AAT AGG GAT;
[00198] SEQIDNO:28 QDINRD;
[00199] SEQIDNO:29 GAT GCA TCC;
[00200] — SEQ ID NO: 30 DAS;
[00201] SEQIDNO:31 CAA CAG TAT AAA AAT CTC CCG TAC ACT;
[00202] SEQIDNO:32 QQYKNLPYT;
[00203] SEQIDNO:33
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC GGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAG CAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGA AGGGCCTGGAGTGGATTGGGATTATCTATTATAGTGGGAGCACCT ACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCCGTAGACA CGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCG CAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAGGACAGGGAGGCC CTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
[00204] SEQID NO: 34
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKG LEWIGIIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVY YCARQDREALFDYWGQGTLVTVSS;
[00205] SEQIDNO:35 GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC;
[00206] SEQIDNO:36 GGSISSSSYY;
[00207] SEQIDNO:37 ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;
[00208] SEQIDNO:38 IYYSGST;
[00209] —SEQID NO: 39 GCG AGA CAG GAC AGG GAG GCC CTC TTT GAC TAC;
[00210] SEQID NO: 40 ARQDREALFDY;
[00211] SEQIDNO:41
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAA AGGAGAAAGTCACCATCACCTGCCGGGCCAGTCAGCGCATTGGT AGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGATCAGTCTCCAAAG CTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGTCCTTCTCAGGGGTCCCCTCG AGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCCTCACCATC AATAGCCTGGAAGCTGAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCATCAG AGTAGTACTTTACCCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATT AAACGA;
[00212] SEQIDNO: 42
EIVLTASPDFQSVTPKEKVTITCRASQRIGSSLHWYQQKPDQASPKLLI KYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHQSSTLP TFGQGTRLEIKR;
[00213] SEQIDNO:43 CAG CGC ATT GGT AGT AGC;
[00214] SEQIDNO: 44 QRIGSS;
[00215] SEQIDNO:45 TAT GCT TCC;
[00216] SEQIDNO:46 YAS;
[00217] SEQIDNO: 47 CAT CAG AGT AGT ACT TTA CCC ACC;
[00218] SEQIDNO:48 HQOSSTLPT;
[00219] SEQID NO: 49
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTACAGCCTG GCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGGTTTG ACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAAGCTCCAGGGAAGGGC CTGGAATGGGTCTCAGGTATTAATTGGAATAGTGGTGGCAAAGGC TATGCGGACTCTGTGCAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAC GCCAAGAACTCCCTTTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAG GACACGGCCTTGTATTATTGTGCAAAAGATAGGGGTATAGCAGCT CGTCTTCTCTCTCGTGATGCTTTTGATATGTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCTTCA;
[00220] SEQIDNO: 50
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFRFDDYAMHWVRQAPGKGL EWVSGINWNSGGKGYADSVQGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRTEDT ALYYCAKDRGIAARLLSRDAFDMWGQGTMVTVSS;
[00221] SEQIDNO:51 GGA TTC AGG TTT GAC GAT TAT GCC;
[00222] SEQID NO: 52 GFRFDDYA;
[00223] SEQIDNO:53 ATT AAT TGG AAT AGT GGT GGC AAA;
[00224] SEQID NO: 54 INWNSGGK,;
[00225] SEQIDNO:55
GCA AAA GAT AGG GGT ATA GCA GCT CGT CTT CTC TCOT CGT GAT GCT TTT GAT ATG;
[00226] SEQIDNO: 56 AKDRGIAARLLSRDAFDM;
[00227] SEQIDNO:57
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCOTTCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCTGGGCCAGTCAGGACGTTAG CAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAATCCCCTAA GCTCCTAATCTTTGCTGCATCCACTTTGCAAGGTGGGATCCCATC AAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAAT CAGCAGCCTGCGGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACA CCTTAATACTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGA GATCAAACGA;
[00228] SEQIDNO:58
DIQLTASPSFLSASVGDRVTITOWASQDVSSYLAWYQQKPGKSPKLL IFAASTLOGGIPSRFSGSGSGTEFTLTISSLRPEDFATYYCQHLNTYPY TFGQGTKLEIKR;
[00229] SEQIDNO:59 CAG GAC GTT AGC AGT TAT;
[00230] SEQID NO: 60 QDVSSY,;
[00231] SEQIDNO:61 GCT GCA TCC;
[00232] SEQIDNO: 62 AAS;
[00233] SEQIDNO:63 CAA CAC CTT AAT ACT TAC CCG TAC ACT;
[00234] SEQID NO: 64 QHLNTYPYT;
[00235] SEQIDNO:65
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGTCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTTCATTCACCTTCA GTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGTTATAAGTTATGATGGAAGTAATAAATACT ATGGAGACTTCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCTATGTATTATTGTGCGAGAGAAGTTCGTCGCTACTATT ATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTC TCCTCA;
[00236] SEQIDNO:66
QVQALVESGGGVVASGRSLRLSCAASSFTFSSYGMHWVROQOSPGKGL EWVAVISYDGSNKYYGDFVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA MYYCAREVRRYYYYGMDVWGQGTTVTVSS;
[00237] SEQIDNO:67 TCA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;
[00238] SEQIDNO:68 SFTFSSYG;
[00239] “SEQIDNO:69 ATA AGT TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00240] — SEQIDNO:70 ISYDGSNK;
[00241] SEQIDNO:71
GCG AGA GAA GTT CGT CGC TAC TAT TAT TAC GGT ATG GAC GTC;
[00242] SEQIDNO:72 AREVRRYYYYGMDYV;
[00243] SEQIDNO:73
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGT AATTATTTAAATTGGTATCTGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGC TCCTGATCTCCGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAA GGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGT ATAATAATCTCCCGCTCACTTTCEGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGA TCAAACGA;
[00244] —SEQIDNO: 74
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYLQKPGKAPKLLI SDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYNNLPL TFGGGTKVEIKR;
[00245] —SEQIDNO:75 CAG GAC ATT AGT AAT TAT;
[00246] SEQIDNO:76 QDISNY;
[00247] —SEQIDNO:77 GAT GCA TCC;
[00248] SEQIDNO:78 DAS;
[00249] —SEQIDNO:79 CAA CAG TAT AAT AAT CTC CCG CTC ACT;
[00250] —SEQID NO: 80 QQYNNLPLT;
[00251] SEQIDNO: 81
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGG CAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGATTCACCTTTGA TGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCC TGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAGTGGTGACATAGACT ATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACG CCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGG ACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATACCCTCTCAGGGACTG GAACTACGTGGTACTATTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGG TCACCGTCTCCTCA;
[00252] —SEQID NO: 82
EVOLVESGGGLVQPGRSLRLSCAVSGFTFDDYAMHWVRQAPGKGL EWVSGISWNSGDIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTA LYYCAKDTLSGTGTTWYYFDYWGQGTLVTVSS;
[00253] SEQID NO: 383 GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC;
[00254] —SEQID NO: 84 GFTFDDYA;
[00255] —SEQID NO: 85 ATT AGT TGG AAT AGT GGT GAC ATA;
[00256] SEQID NO: 86 ISWNSGDI;
[00257] SEQIDNO:87
GCA AAA GAT ACC CTC TCA GGG ACT GGA ACT ACG TGG TAC TAT TTT GAC TAC;
[00258] SEQID NO: 388 AKDTLSGTGTTWYYFDY,
[00259] —SEQID NO: 89
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCOTTCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCTGGGCCAGTCAGGGTATTAG CAGTTATTTAATCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATC AAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAAT CAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACA GGTGAATAGTTACCCTCTCACTTTCEGGCGGAGGGACCAAGGTGG AGATCAA ACGA;
[00260] — SEQ ID NO: 90
DIQLTOSPSFLSASVGDRVTITOWASQGISSYLIWYQQKPGKAPKLLIY AASTLOSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLOPEDFATYYCQQVNSYPL TFGGGTKVEIKR;
[00261] SEQIDNO: 91 CAG GGT ATT AGC AGT TAT;
[00262] SEQIDNO: 92 QGISSY;
[00263] SEQIDNO:93 GCT GCA TCC;
[00264] SEQID NO: 94 AAS;
[00265] “SEQIDNO:95 CAA CAG GTG AAT AGT TAC CCT CTC ACT;
[00266] SEQIDNO: 96 QQVNSYPLT;
[00267] SEQIDNO:97
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCA GTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGA CTGGAGTGGATGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATATT ATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGACCTGAAG ACACGGCTGTATATTACTGTGCGCAAGATGGCAGCTCGGCGATTT ACTATTTCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCA CCGTCTCCTCA;
[00268] SEQIDNO: 98
QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGL EWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRPEDTA VYYCAQDGSSAIYYFYGMDVWGOQGTTVTVSS;
[00269] “SEQID NO: 99 GGA TTC ACC TTC AGT AGT TAT GGC;
[00270] SEQID NO: 100 GFTFSSYG;
[00271] SEQIDNO: 101 ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00272] SEQIDNO: 102 ISYDGSNK;
[00273] SEQIDNO: 103
GCG CAA GAT GGC AGC TCG GCG ATT TAC TAT TTC TAC GGT ATG GAC GTC;
[00274] —SEQID NO: 104 AQDGSSAIYYFYGMDV;
[00275] —SEQID NO: 105
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTATA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGACATCAA CAATTATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATC AAAGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT CAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCTTCA GTATAATAGTTACCATCCCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGA GATCAAACGA;
[00276] SEQIDNO: 106
DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLI YAASSLOSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYNSYH PTFGQGTKLEIKR;
[00277] SEQIDNO: 107 CAG GAC ATC AAC AAT TAT;
[00278] SEQIDNO:108 QDINNY;
[00279] SEQIDNO: 109 GCT GCA TCC;
[00280] SEQIDNO: 110 AAS;
[00281] SEQIDNO: 111 CTT CAG TAT AAT AGT TAC CAT CCC ACT;
[00282] SEQIDNO: 112 LQYNSYHPT;
[00283] SEQIDNO:113
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCA GTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGCTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATAT TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAGAGGGGAACATTACTATGGT TCGGGGCCGTTEGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT CTCCTCA;
[00284] SEQIDNO: 114
QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGL EWVAAIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDT AVYFCARGEHYYGSGPFDPWGOQGTLVTVSS;
[00285] SEQIDNO:115 GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;
[00286] SEQIDNO:116
GFTFSSYG;
[00287] SEQIDNO: 117 ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00288] SEQIDNO:118 IWYDGSNK;
[00289] —“SEQIDNO: 119
GCG AGA GGG GAA CAT TAC TAT GGT TCG GGG CCG TTC GAC CCC;
[00290] “SEQID NO: 120 ARGEHYYGSGPFDP;
[00291] SEQIDNO: 121
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCOTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAG CAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCTCCTGATCTTTGCTGCATCCAGTTTACAAAGTGGGGTCCCATC AAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT CAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAG AGTTACAGTTCCCCGCTCACTTTCEGGCGGAGGGACCAAGGTGGA GATCAAACGA;
[00292] SEQID NO: 122
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLI FAASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSSP LTFGGGTKVEIKR;
[00293] SEQIDNO: 123 CAG AGC ATT AGC AAC TAT;
[00294] “SEQIDNO: 124 QSISNY,;
[00295] —“SEQID NO: 125 GCT GCA TCC;
[00296] SEQID NO: 126
AAS;
[00297] SEQIDNO: 127 CAA CAG AGT TAC AGT TCC CCG CTC ACT;
[00298] SEQIDNO: 128 QQSYSSPLT;
[00299] —SEQID NO: 129
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGCCAGGACTGGTGAAGCCTTC ACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCAGGTGGCTCCATCAG CAGTTTTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAA GGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCATCG ACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAATTACCATATCAGTCGACA CGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCG CGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAAGGGACTACGGT GACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCC TCA;
[00300] — SEQ ID NO: 130
QVALQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFGYYWSWIRQHPGKGL EWIGYIYYSGSIDYNPSLKSRITISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARERDYGDYFDYWGQGTLVTVSS;
[00301] “SEQIDNO: 131 GGT GGC TCC ATC AGC AGT TTT GGT TAC TAC;
[00302] SEQID NO: 132 GGSISSFGYY;
[00303] “SEQIDNO: 133 ATC TAT TAC AGT GGG AGC ATC;
[00304] SEQID NO: 134
IYYSGSI
[00305] SEQID NO: 135 GCG AGA GAA AGG GAC TAC GGT GAC TAC TTT GAC TAC;
[00306] SEQIDNO: 136
ARERDYGDYFDY;
[00307] SEQIDNO: 137
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTCTCTCCA GGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAG CAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCA GGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTGTCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCAC CATCAGCAGTTTGCAGTCTGAGGATTTTGCAGTTTATTCCTGTCAG CAGTATAATAACTGGCCTCTCACTTTCEGGCGGAGGGACCAAGGTG GAGATCAAACGA;
[00308] SEQIDNO: 138
EIVMTOSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRL LIYGASTRATGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLOSEDFAVYSCQQYNN WPLTFGGGTKVEIKR;
[00309] —SEQID NO: 139 CAG AGT GTT AGC AGC AAC;
[00310] SEQID NO: 140 QSVSSN;
[00311] SEQIDNO: 141 GGT GCA TCC;
[00312] SEQIDNO: 142 GAS;
[00313] SEQIDNO: 143 CAG CAG TAT AAT AAC TGG CCT CTC ACT;
[00314] SEQIDNO: 144 QQYNNWPLT;
[00315] SEQIDNO: 145
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCA GTAGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCACTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATAC TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCAGGATTACTATGGT TCGGGGAGTTCCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA;
[00316] SEQID NO: 146
QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGIHWVRQAPGKGLE WVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAV YYCARDQDYYGSGSSYGMDVWGQGTTVTVSS;
[00317] SEQIDNO: 147 GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;
[00318] SEQID NO: 148 GFTFSSYG;
[00319] “SEQID NO: 149 ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00320] “SEQID NO: 150 IWYDGSNK;
[00321] SEQIDNO:151
GCG AGA GAT CAG GAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TCC TAC GGT ATG GAC GTC;
[00322] SEQIDNO: 152 ARDQDYYGSGSSYGMDYV,;
[00323] SEQIDNO:153
GACATCCAGATGACCCAGTCGCCAGCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAG CAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATC AAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT CAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAG AGTTACAGTACCCCTCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAG ATCAAACGA;
[00324] SEQIDNO: 154
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKRLI YAASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLAQPEDFATYYCQQSYSTP LTFGQGTKLEIKR;
[00325] SEQIDNO:155 CAG AGC ATT AGC AGC TAT;
[00326] SEQIDNO:156 QSISSY;
[00327] SEQIDNO:157 GCT GCA TCC;
[00328] SEQIDNO:158 AAS;
[00329] SEQIDNO: 159 CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CTC ACT;
[00330] SEQIDNO: 160 QQSYSTPLT;
[00331] SEQIDNO: 161
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCA GTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAACTAATAAATAC TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGATCAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACCCCTCAGGTGGGGA CCACTACTATTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA;
[00332] SEQIDNO: 162
QVQALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGL EWVAVIWYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMISLRAEDTA VYYCARDPSGGDHYYYYGMDVWGQGTTVTVSS;
[00333] “SEQIDNO: 163 GGA TTC ACC TTC AGT ACC TAT GGC;
[00334] “SEQID NO: 164 GFTFSTYG;
[00335] SEQID NO: 165 ATA TGG TAT GAT GGA ACT AAT AAA;
[00336] SEQIDNO: 166 IWYDGTNK;
[00337] SEQIDNO: 167
GCG AGA GAC CCC TCA GGT GGG GAC CAC TAC TAT TAC TAC GGT ATG GAC GTC;
[00338] SEQIDNO: 168 ARDPSGGDHYYYYGMDV,
[00339] “SEQID NO: 169
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCOTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAATCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGC AACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCCCCTAAC CTCCTGATCTCCGATGCATCCGATTTGGAAACAGGGGTCCCATCA AGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATC AGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACATATTACTGTCAACAGT ATGATAATATACCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGA TTAAACGA;
[00340] —SEQID NO: 170
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPNLLI SDASDLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLOPEDFATYYCQQYDNIPI TFGQGTRLEIKR;
[00341] SEQIDNO: 171 CAG GAC ATT AGC AAC TAT;
[00342] SEQID NO: 172 QDISNY;
[00343] SEQIDNO: 173 GAT GCA TCC;
[00344] SEQID NO: 174 DAS;
[00345] —SEQID NO: 175 CAA CAG TAT GAT AAT ATA CCG ATC ACC;
[00346] SEQIDNO: 176 QQYDNIPIT;
[00347] —SEQIDNO: 177
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCA GTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGACATTTATATCATTTGATGAAAGGAATAAATACT ATGCAGACTCCGTTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGG ACACGGCTATGTATTACTGTGCGAGCGAAGTCGGGTACAGTTTTG GTCATGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCG TCTCTTCA;
[00348] SEQIDNO: 178
QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGL EWVTFISFDERNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA MYYCASEVGYSFGHDAFDIWGQGTMVTVSS;
[00349] —SEQID NO: 179 GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;
[00350] SEQID NO: 180 GFTFSSYG;
[00351] “SEQIDNO: 181 ATA TCA TTT GAT GAA AGG AAT AAA;
[00352] SEQID NO: 182 ISFDERNK;
[00353] SEQIDNO: 183
GCG AGC GAA GTC GGG TAC AGT TTT GGT CAT GAT GCT TTT GAT ATC;
[00354] SEQID NO: 184
ASEVGYSFGHDAFDI
[00355] —SEQIDNO: 185
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAG CAACTATTTAAATTGGTATCAGAAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAA CTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCGTCA AGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATC AGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAG TATGATAATTTCCCGCTCACTTTCEGGCGGAGGGACCAAGGTGGAG ATCAAACGA;
[00356] SEQIDNO: 186 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQKKPGKAPKLL]
YDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNFPL TFGGGTKVEIKR;
[00357] SEQIDNO: 187 CAG GAC ATT AGC AAC TAT;
[00358] SEQIDNO: 188 QDISNY;
[00359] SEQ ID NO: 189 GAT GCA TCC;
[00360] SEQ ID NO: 190 DAS;
[00361] “SEQIDNO: 191 CAA CAG TAT GAT AAT TTC CCG CTC ACT;
[00362] “SEQID NO: 192 QQYDNFPLT;
[00363] SEQIDNO: 193
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG GGGGGTCCCTGAGACTCTCCOTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTA ACAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAGGGGGÇ CTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGATAGCACATAC TACTCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCAGGGCCTGTATTAC TATGGTTCGGGGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGT CACCGTCTCCTCA;
[00364] “SEQID NO: 194
EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYAMSWVRQAPGRGL EWVSAISGSGDSTYYSDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA VYYCAKDQGLYYYGSGSFDYWGQGTLVTVSS;
[00365] —SEQID NO: 195 GGA TTC ACC TTT AAC AAC TAT GCC;
[00366] SEQIDNO: 196 GFTFNNYA;
[00367] SEQIDNO: 197 ATT AGT GGT AGT GGT GAT AGC ACA;
[00368] SEQIDNO: 198 ISGSGDST;
[00369] —SEQID NO: 199
GCG AAA GAT CAG GGC CTG TAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TTT GAC TAC;
[00370] SEQID NO: 200 AKDQGLYYYGSGSFDY,
[00371] SEQIDNO: 201
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAG CAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCTCCTGATCCAAGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATC AAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATATCACTCTCACCAT CAGCAGTCTGCAACCCGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACA GAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGA TATCAAACGA;
[00372] SEQIDNO: 202
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLI QAASSLOSGVPSRFSGSGSGTDITLTISSLAPEDFATYYCQQSYSTP FTFGPGTKVDIKR;
[00373] SEQIDNO:203 CAG AGC ATT AGC AGC TAT;
[00374] SEQID NO: 204 QSISSY;
[00375] SEQIDNO: 205 GCT GCA TCC;
[00376] SEQIDNO: 206 AAS;
[00377] SEQIDNO: 207 CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT;
[00378] SEQIDNO: 208 QQSYSTPFT;
[00379] SEQIDNO: 209
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTG GGGGGTCCCTGCAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTTGCCTTCA GCGACTCTGCTATATACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGG CTGGAGTGGGTTGGCCGCATTAGAAACAAAGCTAATAGGTTCGCG ACAGCATATGGTGCGTCGGTGAAAGGCAGGTTCAGCATACACAGA GATGATTCAAAGAACACGGCGTATCTACAAATGAACAGCCTGAAA ACCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCCAGACATGGACACGA TACTTTGACTGAGGGCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGA CCACGGTCACCGTCTCCTCA;
[00380] SEQIDNO:210 EVQLVESGGGLVQPGGSLQLSCAASGFAFSDSAIlYWVRQASGKGLE
WVGRIRNKANRFATAYGASVKGRFSIHRDDSKNTAYLQMNSLKTEDT AVYYCARHGHDTLTEGYGMDVWGOQGTTVTVSS;
[00381] “SEQIDNO:211 GGG TTT GCC TTC AGC GAC TCT GCT;
[00382] SEQIDNO:212 GFAFSDSA;
[00383] SEQIDNO:213 ATT AGA AAC AAA GCT AAT AGG TTC GCG ACA;
[00384] SEQIDNO:214 IRNKANRFAT;
[00385] SEQIDNO:215
GCC AGA CAT GGA CAC GAT ACT TTG ACT GAG GGC TAC GGT ATG GAC GTC;
[00386] SEQIDNO:216 ARHGHDTLTEGYGMDYV;
[00387] Cadeialevenº1-SEQID NO: 217
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTA GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAG CAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA GCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCGTC AAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAT CAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAG AGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTG GAGATTAAA;
[00388] Cadeialeve nº1-SEQID NO: 218
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLI YAASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLAQPEDFATYYCQQSYSTP PITFGQGTRLEIK;
[00389] “SEQIDNO:219 CAG AGC ATT AGC AGC TAT;
[00390] SEQID NO: 220 QSISSY;
[00391] SEQIDNO:221 GCT GCA TCC;
[00392] SEQID NO: 222 AAS;
[00393] SEQIDNO:223 CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CCG ATC ACC;
[00394] SEQIDNO: 224 QQSYSTPPIT;
[00395] “SEQIDNO:225
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTAAAGAACCCTGG GTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCA GCAGTTATACTATCAACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTCTCTATGGAACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGCCAGAGTCACGATTTCCACGGACGAA TCCACGAACACAGCCTACATGGAACTGAGCAACCTGAGATTTGAA GACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGTACACTGGAACTACGGGCT TTTGATGCCTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTC TCTTCA;
[00396] SEQIDNO: 226
QVQALVASGAEVKNPGSSVKVSCKASGGTFSSYTINWVRQAPGQGLE WMGGIIPLYGTANYAQKFQARVTISTDESTNTAYMELSNLRFEDTAVY FCASTLELRAFDAFDIWGQGTMVTVSS;
[00397] SEQIDNO:227 GGA GGC ACC TTC AGC AGT TAT ACT;
[00398] SEQIDNO: 228 GGTFSSYT;
[00399] SEQID NO: 229 ATC ATC CCT CTC TAT GGA ACA GCA;
[00400] — SEQ ID NO: 230 IIPLYGTA;
[00401] SEQIDNO:231
GCG AGT ACA CTG GAA CTA CGG GCT TTT GAT GCC TTT GAT ATC;
[00402] —SEQID NO: 232 ASTLELRAFDAFDI;
[00403] “SEQID NO: 233
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC ACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAG CAGTGGTGGTTACTACTGGAACTGGATCCGCCAGCACCCAGGGA AGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGAAGCACCT ACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACA CGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGGGCTCTGTGACTGCCG CGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGCTCCTCCTTATAACT GGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
[00404] “SEQID NO: 234
QVALQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWNWIRQHPGKG LEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLGSVTAADTAV YYCARAPPYNWFDYWGOQGTLVTVSS;
[00405] —SEQID NO: 235 GGT GGC TCC ATC AGC AGT GGT GGT TAC TAC;
[00406] SEQID NO: 236 GGSISSGGYY;
[00407] SEQID NO: 237 ATC TAT TAC AGT GGA AGC ACC;
[00408] SEQID NO: 238 IYYSGST;
[00409] —“SEQID NO: 239 GCG CGA GCT CCT CCT TAT AAC TGG TTT GAC TAC;
[00410] SEQID NO: 240 ARAPPYNWFDY,;
[00411] SEQIDNO: 241
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGG AGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAG TGACTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGC TGGAATGGGTTTCATACATTAGTAATAGTGGTAATACCCAATACTA CGCAGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGGGACAATG CCAAGAACTCCCTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAGG ACACGGCCGTTTATTACTGTACGAGAGAGGGACTCGAATATAGCA GCTCGGAGCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC GTCTCCTCA;
[00412] SEQID NO: 242
QVQALVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWVRQAPGKGL EWVSYISNSGNTQYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTA VYYCTREGLEYSSSEPFDYWGQGTLVTVSS;
[00413] SEQID NO: 243 GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAC TAC;
[00414] SEQID NO: 244 GFTFSDYY,
[00415] SEQID NO: 245 ATT AGT AAT AGT GGT AAT ACC CAA;
[00416] SEQID NO: 246 ISNSGNTOQO;
[00417] SEQID NO: 247
ACG AGA GAG GGA CTC GAA TAT AGC AGC TCG GAG CCC TTT GAC TAC;
[00418] SEQID NO: 248 TREGLEYSSSEPFDY,
[00419] SEQID NO: 249
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGG GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGACTTCTGGATACACCTTCAC CGCCTACTACATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGC TTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAATGGTGACACAAACT ATGCACTGAGGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACATG TCCATCAACACAGCCTACATGGAGCTGCGCGGGCTGAGATCTGA CGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGATGATCTAGCAGCAGC GGGTATCGGCTGGTTCGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCA CCGTCTCCTCA;
[00420] —“SEQID NO: 250
QVALVASGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTAYYIHWVRQAPGQGLE WMGWINPNNGDTNYALRFQGRVTMTRDMSINTAYMELRGLRSDDT AVYYCARDDLAAAGIGWFDSWGQGTLVTVSS;
[00421] SEQIDNO:251 GGA TAC ACC TTC ACC GCC TAC TAC;
[00422] SEQID NO: 252 GYTFTAYY,;
[00423] SEQID NO: 253 ATC AAC CCT AAC AAT GGT GAC ACA;
[00424] “SEQID NO: 254 INPNNGDT;
[00425] SEQID NO: 255
GCG AGA GAT GAT CTA GCA GCA GCG GGT ATC GGC TGG TTC GAC TCC;
[00426] SEQID NO: 256 ARDDLAAAGIGWFDS,;
[00427] SEQIDNO: 257
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGCTACAGCCTGG CAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTTGA TGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCC TGGAGTGGGTCTCAGGAATTAGTTGGAATAGTGAAAGTATAGGCT ATGCGGACTCTGTGAGGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACG CCAAGAACTCCCTGTATCTCCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGG ACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGCCCCGTATAGTGGGACCT ACTTCGAATACTTCCGCCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACC GTCTCCTCA;
[00428] SEQID NO: 258
EVOLVESGGGLLQPGRSLRLSCVASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGL EWVSGISWNSESIGYADSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTA LYYCAKAPYSGTYFEYFRHWGQGTLVTVSS;
[00429] “SEQID NO: 259 GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC;
[00430] “SEQID NO: 260 GFTFDDYA;
[00431] SEQID NO: 261 ATT AGT TGG AAT AGT GAA AGT ATA;
[00432] “SEQID NO: 262 ISWNSESI;
[00433] “SEQID NO: 263
GCA AAA GCC CCG TAT AGT GGG ACC TAC TTC GAA TAC TTC CGC CAC;
[00434] “SEQID NO: 264 AKAPYSGTYFEYFRH;
[00435] —SEQID NO: 265
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTG GGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCA GTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACT ATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATT CCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGG ACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATGACTGGAACTACGACG CCTTTGATATCETGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA;
[00436] SEQID NO: 266
QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGL EWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTA VYYCAKDDWNYDAFDIWGQGTMVTVSS;
[00437] SEQID NO: 267 GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC;
[00438] SEQID NO: 268 GFTFSSYG;
[00439] “SEQID NO: 269 ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA;
[00440] —SEQID NO: 270 ISYDGSNK;
[00441] SEQIDNO:271 GCG AAA GAT GAC TGG AAC TAC GAC GCC TTT GAT ATC;
[00442] —“SEQID NO: 272
AKDDWNYDAFDI
[00443] SEQID NO: 273
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC ACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAG CAGTAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGA GGGGCCTGGAGTGGATTGGATACATCTATTACAGTGGGAGCACCT ACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACA CGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAACTCTGTGACTGCCG CGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGGACTATGGTTCG GGGAGTTCGTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT CTCCTCA;
[00444] —“SEQID NO: 274
QVALQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGRG LEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAV YYCARVDYGSGSSFDYWGQGTLVTVSS;
[00445] —SEQID NO: 275 GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT GGT TAC TAC;
[00446] SEQID NO: 276 GGSISSSGYY,
[00447] —SEQID NO: 277 ATC TAT TAC AGT GGG AGC ACC;
[00448] SEQID NO: 278 IYYSGST;
[00449] —“SEQID NO: 279 GCG AGA GTG GAC TAT GGT TCG GGG AGT TCG TTT GAC TAC;
[00450] —SEQID NO: 280 ARVDYGSGSSFDY,
[00451] SEQID NO: 281
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGACCTGAGGTGAAGAAGCCTGG GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTAC CAGCTATGGCATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGC TTGAGTGGCTGGGATGGATCAGCGGTTTCAATGGTAGAACAGACT ATACAGAGAAGCTCCAGGACAGAATCACCATGACCACAGACAGAT CCTCGAGCACAGCCTACATGGAACTGAGGAGCCTGAGATATGAC GACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGACTGGAAAAACTT GGTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
[00452] —SEQID NO: 282
QVALVASGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLE WLGWISGFNGRTDYTEKLQDRITMTTDRSSSTAYMELRSLRYDDTAV YYCARDGLEKLGDYWGQGTLVTVSS;
[00453] “SEQID NO: 283 GGT TAC ACC TTT ACC AGC TAT GGC;
[00454] —“SEQID NO: 284 GYTFTSYG;
[00455] —SEQID NO: 285 ATC AGC GGT TTC AAT GGT AGA ACA;
[00456] SEQID NO: 286 ISGFNGRT;
[00457] —SEQID NO: 287 GCG AGA GAT GGA CTG GAA AAA CTT GGT GAC TAC;
[00458] SEQID NO: 288 ARDGLEKLGDY,
[00459] —“SEQID NO: 289
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCGG GGAGGTTCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCA GTAACTCTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGGAATATGGCATGATGGAAGTTATAAATAT TATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAAT TCTAAGAACACGCTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAG GACACGGCTGTATATTATTGTGCGAGAGATGATTACTATGCTTCG GGGACCAGCGTGGACGTATGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCG TCTCCTCA;
[00460] “SEQID NO: 290
QVALVESGGGVVQPGRFLRLSCAASGFTFSNSGMHWVRQAPGKGL EWVAGIWHDGSYKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDT AVYYCARDDYYASGTSVDVWGQGTTVTVSS;
[00461] SEQID NO: 291
GGA TTC ACC TTC AGT AAC TCT GGC;
[00462] SEQID NO: 292 GFTFSNSG;
[00463] SEQID NO: 293 ATA TGG CAT GAT GGA AGT TAT AAA;
[00464] SEQID NO: 294 INHDGSYK;
[00465] —SEQID NO: 295
GCG AGA GAT GAT TAC TAT GCT TCG GGG ACC AGC GTG GAC GTA;
[00466] SEQID NO: 296 ARDDYYASGTSVDV,;
[00467] SEQIDNO: 297
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG GGCCTCAGTGAGGGTCTCCTGCATGGCCTCTGGATACACCTTCAC CGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGC TTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAAAT ATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACG TCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGACTGAGATCTGAC GACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGAAGAAGTCGACGATTTT TGGAGTGGTTACCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC CGTCTCCTCA;
[00468] SEQID NO: 298
QVQALVASGAEVKKPGASVRVSCMASGYTFTGYYMHWVRQAPGQOG LEWMGWINPNSGGTKYAQKFAQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDD TAVYYCAREEVDDFWSGYLDYWGQGTLVTVSS;
[00469] — SEQ ID NO: 299 GGA TAC ACC TTC ACC GGC TAC TAT;
[00470] SEQIDNO: 300 GYTFTGYY;
[00471] SEQIDNO: 301 ATC AAC CCT AAC AGT GGT GGC ACA;
[00472] SEQID NO: 302 INPNSGGT;
[00473] SEQIDNO: 303
GCG AGA GAA GAA GTC GAC GAT TTT TGG AGT GGT TAC CTT GAC TAC;
[00474] SEQID NO: 304 AREEVDDFWSGYLDY;
[00475] —Cadeialeve nº 2-SEQ ID NO: 305
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCA GGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAG CAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTC CCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCT CACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTG TCAGCAGTATGGTAGCTCACCTTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAA GGTGGAAATCAAA;
[00476] Cadeialeve nº 2-SEQ ID NO: 306
EIVLTASPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRL LIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSS PWTFGQGTKVEIK;
[00477] SEQIDNO: 307 CAG AGT GTT AGC AGC AGC TAC;
[00478] SEQIDNO: 308 QSVSSSY;
[00479] SEQIDNO: 309 GGT GCA TCC;
[00480] SEQID NO: 310 GAS;
[00481] SEQIDNO:311 CAG CAG TAT GGT AGC TCA CCT TGG ACG;
[00482] SEQID NO: 312 QQYGSSPWT;
[00483] “SEQIDNO:313
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGACTTGGTCCAGCCGG GGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCGCCGTC AATGGCGACTATTTTAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGG GCTGGAGTGGATCTCAGTTATTTATAGCA GTGGTAACACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCA TCTCCAGACACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAGCAG CCTAAGACCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACTT CCCTCCAATGTCTGGTGCGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGG TCACCGTCTCCTCA;
[00484] “SEQID NO: 314
EVOLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFAVNGDYFSWVRQAPGKGL EWISVIYSSGNTYYADSVKGRFTISRHNSKNTLYLQMSSLRPEDTAVY YCARDFPPMSGADYWGQGTLVTVSS;
[00485] —SEQIDNO:315 GGG TTC GCC GTC AAT GGC GAC TAT;
[00486] SEQIDNO:316 GFAVNGDY,;
[00487] SEQID NO: 317 ATT TAT AGC AGT GGT AAC ACA;
[00488] SEQIDNO:318 IYSSGNT;
[00489] “SEQIDNO:319 GCG AGA GAC TTC CCT CCA ATG TCT GGT GCG GAC TAC;
[00490] “SEQID NO: 320 ARDFPPMSGADY;
[00491] SEQIDNO:321
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGG GGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTTTCCGGATACACCCTCAC TGAATTGTCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCTGGAAAAGGGC TTGAATGGATGGGAGGTTTTGATCCTGAACATGGTAAAATAATCTA CGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCGAGGACACAT CTACAGACACAGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGAGG ACACGGCCGTCTATTACTGTGCAACATTTTATAACTGGAACTCCTA CTACTTCGGTATGGACGTCTGGGGCCACGGGACCACGGTCACCG TCTCCTCA;
[00492] SEQID NO: 322
QVALVASGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGL EWMGGFDPEHGKIIYAQGKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDT AVYYCATFYNWNSYYFGMDVWGHGTTVTVSS;
[00493] SEQID NO: 323 GGA TAC ACC CTC ACT GAA TTG TCC;
[00494] “SEQID NO: 324 GYTLTELS,;
[00495] —“SEQID NO: 325 TTT GAT CCT GAA CAT GGT AAA ATA;
[00496] SEQID NO: 326 FDPEHGKI;
[00497] SEQID NO: 327
GCA ACA TTT TAT AAC TGG AAC TCC TAC TAC TTC GGT ATG GAC GTC;
[00498] SEQID NO: 328 ATFYNWNSYYFGMDYV,;
[00499] “SEQID NO: 329
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTG GGGGGTCCCTGAGACTCTCCOTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTA GCAGCTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGA CTGGAGTGGGTCTCAGCTGTTAGTGGAAGTGCTGATATCACAAAC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAAT TCCAAACACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAG GACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAGGATAAAGTGTATAACTGG AACTACGGGATCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGAC CACGGTCACCGTCTCCTCA;
[00500] —SEQID NO: 330
EVOLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGL EWVSAVSGSADITNYADSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTA VYYCAKDKVYNWNYGIYYGMDVWGQGTTVTVSS;
[00501] —“SEQID NO: 331 GGA TTC ACC TTT AGC AGC TAT GCC;
[00502] —SEQID NO: 332 GFTFSSYA;
[00503] —“SEQID NO: 333 GTT AGT GGA AGT GCT GAT ATC ACA;
[00504] —“SEQID NO: 334 VSGSADIT;
[00505] —SEQID NO: 335
GCG AAG GAT AAA GTG TAT AAC TGG AAC TAC GGG ATC TAC TAC GGT ATG GAC GTC;
[00506] SEQID NO: 336 AKDKVYNWNYGIYYGMDV,
[00507] —SEQID NO: 337
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTC GGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAG CAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGA AGGGACTAGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGCACCT ACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACA CGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCG CAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGAGGTGGGAG CGAGAAAACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT CTCCTCA;
[00508] SEQID NO: 338
QLQALQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKG LEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV YYCARQGRWERENFDYWGOGTLVTVSS;
[00509] —SEQID NO: 339 GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC;
[00510] SEQID NO: 340 GGSISSSSYY,;
[00511] SEQID NO: 341 ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;
[00512] SEQID NO: 342 IYYSGST;
[00513] “SEQID NO: 343 GCG AGA CAA GGG AGG TGG GAG CGA GAA AAC TTT GAC TAC;
[00514] SEQID NO: 344 ARQGRWERENFDY,;
[00515] —SEQID NO: 345
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTATTGAAGCCTTC GGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGATGAGTCCTTCAG TGATTACTACTGGACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGC TGGAGTGGATTGGGGAAATTACTCATAGTGGAAGTACCCACTACA ACCCGTCCCTCAAGAGCCGAGTCACCCTGTCAGTTGACACGTCCA AGAACCACTTCTCCCTGAGCCTCAACTCTGTGACCGCCGCGGACA CGGCTATTTATTACTGTGCGAGAGGCGGTGACTACGGTGGTTTAC TTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA;
[00516] SEQID NO: 346
QVALQQWGAGLLKPSETLSLTCAVSDESFSDYYWTWIRQPPGKGLE WIGEITHSGSTHYNPSLKSRVTLSVDTSKNHFSLSLNSVTAADTAIYY CARGGDYGGLLDYWGQGTLVTVSS;
[00517] —SEQID NO: 347 GAT GAG TCC TTC AGT GAT TAC TAC;
[00518] “SEQID NO: 348 DESFSDYY,
[00519] “SEQID NO: 349 ATT ACT CAT AGT GGA AGT ACC;
[00520] —SEQID NO: 350 ITHSGST;
[00521] —“SEQID NO: 351 GCG AGA GGC GGT GAC TAC GGT GGT TTA CTT GAC TAC;
[00522] —SEQID NO: 352 ARGGDYGGLLDY,;
[00523] —“SEQID NO: 353
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTC GGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAG CAGTAGGAGTCACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGCACCT ATTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACA CGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCG CAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACTTGGCTGGTACGCAG AGGAGGCTTTTGAAATCTGGGGTCAAGGGACAATGGTCACCGTCT CTTCA;
[00524] —SEQID NO: 354
QLQALQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSRSHYWGWIRQPPGKG LEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAV YYCARLGWYAEEAFEIWGQGTMVTVSS;
[00525] —“SEQID NO: 355
GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGG AGT CAC TAC;
[00526] SEQID NO: 356 GGSISSRSHY;
[00527] —SEQIDNO:357 ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC;
[00528] SEQIDNO:358 IYYSGST;
[00529] — SEQID NO: 359 GCG AGA CTT GGC TGG TAC GCA GAG GAG GCT TTT GAA ATC;
[00530] —SEQID NO: 360
ARLGWYAEEAFEI EXEMPLO 2: ENSAIO DE INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO PARA AVA- LIAR A CAPACIDADE DOS ANTICORPOS ANTI-PFRH5 PARA INI- BIR A INVASÃO IN VITRO DE HEMÁCIAS HUMANAS E O CRESCI- MENTO DE PARASITAS P. FALCIPARUM.
[00531] Nesse exemplo, um conjunto de quatro mAbs PÍRH5-espe- cíficos da invenção foi testado isoladamente e em combinação em um ensaio de inibição de crescimento padrão com uma cepa de Plasmo- dium falciparum (Dd2).
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
[00532] A cepa de P.falciparum, Dd2 (BEI Resources) foi sincroni- zada pela primeira vez com D-sorbitol a 5% seguindo os protocolos padrão com hematócrito a 3 a 5% e parasitemia de 1 a 2%, 20 a 24 horas antes do início do ensaio. Os eritrócitos humanos infectados fo- ram preparados com uma parasitemia inicial de 0,4 a 0,7% e 2% de hematócrito. Os eritrócitos infectados foram combinados com anticor- pos PÍRH5-específicos ou de controle, começando em uma concentra- ção de 666,67 nM com diluição em série 1:5 para cada anticorpo ou combinação de anticorpos. Todos os anticorpos usados eram IgG1 humana. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas até que o estágio de esquizontes fosse atingido (um ciclo de vida completo). O crescimento do parasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A parasitemia final foi determinada medindo-se a atividade da lac- tato desidrogenase (LDH) do parasita (Miura, H. Zhou, A. Diouf, SE. Moretz, MP. Fay, LH. Miller, LB. Martin, MA. Pierce, RD. Ellis, GED. Mullen, CA. Long. Anti-Apical-Membrane-Antigen-1 antibody is more effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1 antibody in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as determined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963 a 968 (2009). PMID: PMC2708396). A inibição percentual do crescimento é expressa em relação aos eritrócitos não infectados.
SUMÁRIO DE RESULTADOS E CONCLUSÕES
[00533] Os anticorpos PÍRH5-específicos foram produzidos e testa- dos in vitro em um ensaio de inibição de crescimento na cepa adapta- da em laboratório, conforme descrito acima. A Tabela 2-1 mostra a ini- bição percentual máxima do crescimento para um subconjunto de anti- corpos PÍRH5-específicos e combinações de anticorpos PIRH5- específicos. Os anticorpos individuais e combinações de anticorpos exibiram inibição de crescimento máximo percentual semelhante, vari- ando de aproximadamente 51 a 69%. TABELA 2-1. SUMÁRIO DA ATIVIDADE MÁXIMA DE INIBIÇÃO DO CRESCIMENTO DE ANTICORPOS CONTRA PFRH5 DE PLASMO- DIUM FALCIPARUM CEPA Dd?2.* Inibição máxima de
Inibição máxima de crescimento (%) H1H29100P + H1H29143P 68,70 H1H29100P + H1H29104P 54,04 H1H29143P + H1H29104P 58,54 H1H29100P 65,73 H1H29104P 54,12 H1H29127P 56,87 H1H29143P 56,00 anticorpo de controle negativo de IgG1 humana |-0,93 específico para antígeno de alergia a gatos - Fel d1 *Inibição máxima do crescimento de anticorpos contra Pf(RH5 em rela- ção às hemácias humanas não infectadas. O ensaio de inibição do crescimento foi realizado em hemácias do sangue infectadas com P. falciparum (trofozoíta maduro ou esquizonte precoce) com 0,4 a 0,7% de parasitemia. Os anticorpos foram combinados com as hemácias infectadas. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas (o tempo depende da cepa do parasita) até que o estágio de esquizontes fosse alcançado. O crescimento do parasita foi interrompido com três lava- gens de PBS frio. A atividade da lactato desidrogenase (LDH) do para- sita foi medida imediatamente após as lavagens. A inibição percentual do crescimento foi expressa em relação aos eritrócitos não infectados. Os resultados de um ensaio representativo do ensaio de inibição do crescimento são mostrados acima.
EXEMPLO 3: ENSAIO DE INIBIÇÃO DO CRESCIMENTO PARA AVA- LIAR A CAPACIDADE DOS ANTICORPOS ANTI-PFRH5 PARA INI-
BIR A INVASÃO IN VITRO DE HEMÁCIAS HUMANAS E O CRESCI- MENTO DE PARASITAS P. FALCIPARUM EM COMBINAÇÃO COM CLOROQUINA.
[00534] Nesse exemplo, um subconjunto de quatro mAbs PÍRH5- específicos da invenção foi testado isoladamente e em combinação com a cloroquina (CQ), um medicamento antimalárico comumente usado em um ensaio de inibição de crescimento padrão com duas ce- pas de laboratório. Uma cepa do parasita Plasmodium falciparum, 3D7, é suscetível à cloroquina, ao passo que a cepa 7G8 é resistente ao medicamento.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
[00535] “Cada cepa de P.falciparum (BEI Resources) foi sincroniza- da pela primeira vez com D-sorbitol a 5% seguindo os protocolos pa- drão com hematócrito a 3 a 5% e parasitemia a 1 a 2%, 20 a 24 horas antes do início do ensaio. Os eritrócitos humanos infectados foram preparados com uma parasitemia inicial de 0,4 a 0,7% e 2% de hema- tócrito. Os eritrócitos infectados foram combinados com anticorpos PIRH5-específicos ou de controle começando em uma concentração de 666,67 nM com diluição em série de 1:5 para cada anticorpo I9gG1 e cloroquina em uma dentre duas concentrações, 4,91 ou 6,58 nM. As duas concentrações foram selecionadas com base na IC25, 4,91 nM e IC5o, 6,58 NM, da cloroquina com a cepa 3D7 suscetível. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas até que o estágio de esquizontes fosse atingido (um ciclo de vida completo). O crescimento do parasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A parasitemia final foi determinada medindo-se a atividade da lactato desidrogenase (LDH) do parasita. A inibição percentual do crescimento foi expressa em re- lação aos eritrócitos não infectados.
SUMÁRIO DOS RESULTADOS E CONCLUSÕES
[00536] A Tabela3a1 mostra a inibição máxima do crescimento percentual para cada anticorpo isoladamente e combinação anticor- po/cloroquina. A combinação de cloroquina com anticorpos PÍRH5- específicos aumentou ainda mais a porcentagem de inibição máxima do crescimento obtida com os anticorpos isolados na cepa 3D7. A ini- bição máxima do crescimento com o anticorpo isoladamente foi de aproximadamente 34 a 61%, ao passo que a adição de 4,81 nM CQ ao mAb teve inibição máxima do crescimento semelhante (32 a 51%). À adição de 6,58 nM de CQ ao mAb aumentou a faixa de inibição do crescimento em pelo menos 20% a 59 a 75%. Por outro lado, os anti- corpos individuais e combinações de anticorpo/fármaco exibiram inibi- ção de crescimento máximo percentual semelhante com a cepa 7G8 (mMAb isoladamente: 47 a 51%; mAb + 4,81 nM de CQ: 44 a 53%; mAb + 6,58 nM de CQ: 30 a 52%). TABELA 3-1. SUMÁRIO DA ATIVIDADE MÁXIMA DE INIBIÇÃO DO CRESCIMENTO DE ANTICORPOS CONTRA PFRH5 DE VÁRIAS CEPAS DE PLASMODIUM FALCIPARUM.* N/A - EEE 4,81 nM - Eb
EN 6,58 nM
Fosfato de Cloroquina — |mAb 3D7 7G8 *Inibição máxima do crescimento de anticorpos contra Pf(RH5 em rela- ção às hemácias humanas não infectadas. O ensaio de inibição do crescimento foi realizado em hemácias do sangue infectadas com P. falciparum (trofozoíta maduro ou esquizonte precoce) com 0,4 a 0,7% de parasitemia. Os anticorpos foram combinados com as hemácias infectadas. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas (dependente da cepa do parasita) até o estágio de esquizontes. O crescimento do pa- rasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A atividade da lac- tato desidrogenase do parasita foi medida imediatamente após as lava- gens. A inibição percentual do crescimento foi expressa em relação aos eritrócitos não infectados. Os resultados de um ensaio representa- tivo do ensaio de inibição do crescimento são mostrados acima. EXEMPLO 4: ENSAIO DE INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO PARA AVA- LIAR A CAPACIDADE DOS ANTICORPOS ANTI-PFRH5 PARA INI- BIR A INVASÃO IN VITRO DE HEMÁCIAS HUMANAS E O CRESCI- MENTO DE PARASITAS P. FALCIPARUM.
[00537] Nesse exemplo, um conjunto de 30 mAbs PÍRH5-especifi- cos da invenção foi testado em um ensaio de inibição de crescimento padrão em relação a uma série de cepas comuns de laboratório (tanto suscetíveis quanto resistentes a vários fármacos antimaláricos) e |i- nhas clínicas multirresistentes.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
[00538] Cada cepa P.falciparum (Recursos BEI) foi sincronizada pela primeira vez com D-sorbitol a 5% seguindo os protocolos padrão com hematócrito de 3 a 5% e parasitemia de 1 a 2% 20 a 24 horas an- tes do início do ensaio. Os eritrócitos humanos infectados foram pre-
parados com uma parasitemia inicial de 0,4 a 0,7% e 2% de hemató- crito. Os eritrócitos infectados foram combinados com anticorpos de IgG1 PIRH5-específicos ou de controle começando em uma concen- tração de 666,67 nM com diluição em série a 1:5 para cada anticorpo. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas até que o estágio de esquizontes fosse atingido (um ciclo de vida completo). O crescimento do parasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A parasi- temia final foi determinada medindo-se a atividade da lactato desidro- genase (LDH) do parasita (Miura et al, Clin Vaccine Immunol. 16: 963 a 968 (2009). PMID: PMC2708396). A inibição percentual do cresci- mento foi expressa em relação aos eritrócitos não infectados.
SUMÁRIO DOS RESULTADOS E CONCLUSÕES
[00539] A Tabela4-1 mostra a inibição máxima do crescimento per- centual para cada um dos 30 mAbs PÍRH5-específicos testados a 666,67 nM. A aplicação de vários anticorpos resultou na diminuição do crescimento em todas as cepas de P. falciparum adaptadas em labora- tório e clínicas.
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EXEMPLO 5: CINÉTICA DE LIGAÇÃO BIACORE DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-PFRH5 QUE SE LIGAM AO PIRH5ANL.HIS A 25ºCE37ºC.
[00540] A cinética de ligação dos vários anticorpos anti-PíRH5 da presente invenção foi determinada nesse exemplo.
[00541] As constantes de dissociação de equilíbrio (Kp) para dife- rentes reagentes PÍRH5 que se ligam a anticorpos monoclionais anti- PÍRH5 purificados foram determinadas com o uso de um biossensor Biacore T200 com base em ressonância de plasmon de superfície em tempo real. Todos os estudos de ligação foram realizados em tampão HEPES 10 mM, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM e tensoativo Tween-20 0,05% em v/v, pH 7,4 (HBS-ET) a 25 ºC e 37 ºC. A superfície do chip sensor Biacore CM4 foi primeiro derivatizada por acoplamento de amina com o anticorpo policlonal Fcey-específico anti-humano de cabra (Jackson ImmunoResearch Laboratories, nº de catálogo 109-005-098) ou anticorpo policlonal Fc-específico anticamundongo de coelho (GE Heal- thcare nº de catálogo BR100838) para capturar anticorpos monoclonais de IgG1 anti-PfRH5. Os estudos de ligação foram realizados em PÍRH5 recombinante removendo o terminal amino M1-Y139 e incluindo os resí- duos K140-Q526, porém sem K247-L295 e T216A e T299A expresso com uma tag de hexa-histidina C-terminal (PIRHSANL.6his). Diferentes concentrações de P(RH5ANL.6his (3,125 a 50 nM; diluição em série de 2 vezes ou 0,48 a 60 nM; diluição em série de 5 vezes) foram pre- paradas primeiramente em tampão de execução HBS-ET e foram inje- tadas sobre superfície de anticorpo monoclonal Fcy anti-humano ou Fc anticamundongo capturado anti-PíRH5 por quatro minutos em uma taxa de fluxo de 50 ul/minuto, ao passo que a dissociação do reagente PÍRHB5 ligado a anticorpo monoclional foi monitorada por dez minutos em tampão de execução de HBS-ET. As constantes de taxa de asso- ciação (ka) e a taxa de dissociação (ki) foram determinadas ajustando-
se os sensogramas de ligação em tempo real a um modelo de ligação 1:1 com limitação de transporte de massa com o uso do software de ajuste à curva Scrubber 2.0c. As constantes de equilíbrio de dissocia- ção de ligação (Kp) e meias vidas dissociativas (t/2) foram calculadas a partir das constantes de taxa de cinética como: kd no Kp (M) = ka e te (min) = 6o-ki
[00542] Parâmetros cinéticos para o PIRH5ANL.6his que se liga a diferentes anticorpos monoclonais anti-PfRH5 da invenção a 25 ºC e 37 ºC são mostrados nas Tabelas 5-1 a 5-2, respectivamente.
[00543] A 25ºC, todos os anticorpos monoclonais anti-PíRH5 da invenção se ligaram a P(RHS5ANL.6his com valores Ko em uma faixa de 4,72 pM a 1,67 nM, conforme mostrado na Tabela 5-1. A 37 ºC, to- dos os anticorpos monoclionais anti-PfRH5 da invenção se ligaram a PIRH5ANL.6his com valores de Ko em uma faixa de 1,10 pM a 1,10 NM, conforme mostrado na Tabela 5-2.
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EXEMPLO 6: COMPETIÇÃO CRUZADA DE OCTETO ENTRE DIFE- RENTES ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-PFRHB5.
[00544] A competição de ligação entre um painel de anticorpos mo- noclonais anti-PfRH5 foi determinada com o uso de um ensaio de in- terferometria de biocamada livre de identificador tempo real na plata- forma de biossensor Octet HTX (Pall ForteBio Corp.).
[00545] O experimento foi realizado a 25 ºC em HEPES 10 mM, NaCl 150 mM, EDTA 3 mM, tensoativo Tween-20 a 0,05% em v/v e tampão BSA a 1 mg/ml, pH 7,4 (HBS-EBT) com agitação da placa à velocidade de 1.000 rpm. A fim de avaliar se dois anticorpos têm capacidade para competir entre si pela ligação aos seus respectivos epitopos no PÍRH5 recombinante removendo o M1-Y139 na extremidade amino e incluindo os resíduos K140-Q526, porém sem K247-L295 e T216A e T299A ex- pressos com uma tag de hexa-histidina C-terminal (PIRHSANL.6his; SEQ ID: 362), cerca de 14 a 2,0 nm de PÍRHSANL.6his foram capturados primeiramente em pontas de biossensores Octet revestidas com anti- corpo anti-Penta-His (Fortebio Inc, nº 18-5122) submergindo-se as pontas do biossensor por 60 segundos em poços que contêm 20 ug/ml de solução de PIRH5ANL.6his. As pontas do biossensor capturado com antígeno foram então saturadas com um primeiro anticorpo mo- noclonal anti-PfRH5 (posteriormente denominado de mAb-1) por imer- são em poços que contêm 50 pg/ml de solução de mAb-1 por 3 minu- tos. Os anticorpos usados foram IgG1. As pontas do biossensor foram subsequentemente imersas em poços que contiveram solução de 50 pg/ml do segundo anticorpo monoclonal anti-PfRH5 (subsequentemen- te denominado de mAb-2) durante 3 minutos. As pontas do biossensor foram lavadas em tampão HBS-ETB entre cada etapa do experimento. A resposta de ligação em tempo real foi monitorada durante todo o curso do experimento e a resposta de ligação no final de cada etapa foi registrada. A resposta da ligação do mAb-2 a PIRHS5ANL.6his pré-
complexado com mAb-1 foi comparada, e o comportamento competiti- vo/não competitivo de diferentes anticorpos monoclonais anti-PfRH5 foi determinado conforme mostrado na Tabela 6-1.
TABELA 6-1. COMPETIÇÃO CRUZADA ENTRE ANTICORPOS MO- NOCLONAIS ANTI-PFRHS5.
Cm e CS me O a e mo e
H1H29214P2 H1H29089P H1H29214P2 H1H29149P2 H1H29100P H1H29209P2 H1H29179P2 H1H29089P H1H29089P H1H29149P2 H1H29100P H1H29209P2 H1H29179P2 H1H29214P2 H1H29138P H1H29094P H1H29198P2 H1H29151P2 EXEMPLO 7: ENSAIO DE INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO COM MÚL-
TIPLOS CICLOS PARA AVALIAR OS PARASITAS RESULTANTES APÓS A PRESSÃO DO ANTICORPO ANTI-PFRH5.
[00546] Os anticorpos específicos para Plasmodium falciparum RHB5 inibem a invasão do ensaio de hemácias humanas ao longo de vários ciclos de replicação e não induzem mutações no gene PfRHS5. A invasão de eritrócitos do hospedeiro é uma etapa essencial do ciclo de vida do Plasmodium falciparum (P. falciparum) e da patolo-
gia da malária. Vários fármacos antimaláricos têm como alvo os está- gios assexuados do sangue; no entanto, sua eficácia é ameaçada pelo aparecimento de cepas resistentes aos fármacos (Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Economics of Malaria Drugs in an Age of Resis- tance. National Acamies Press (EUA). 254 a 266 (2004); Blasco et al., Antimalarial drug resistance: linking Plasmodium falciparum parasite biology to the clinic. Nature Medicine. 23, 917 a 928 (2017)). Além dis- so, os fármacos antimaláricos apresentam diferentes propriedades farmacocinéticas. Alguns fármacos antimaláricos, tais como artemisi- nina e quinina, são eliminados rapidamente dentro de um ciclo de vida do parasita. Por outro lado, os fármacos antimaláricos hidrofóbicos e lipofílicos são eliminados lentamente, porém são caracterizados por diferentes taxas de absorção dependendo da quantidade de gordura dietética consumida (Arrow et al., Saving Lives, Buying Time: Econo- mics of Malaria Drugs in an Age of Resistance. National Acamies Press (EUA). 254 a 266 (2004)).
[00547] Ter como alvo a proteína homóloga da proteína de ligação ao reticulócito 5 (RH5) com anticorpos policlonais (pAb) e monoclonais (mMAb) bloqueia com eficiência a invasão do parasita de várias cepas de P. falciparum em eritrócitos humanos in vitro (Wright et a/., Structu- re of malaria invasion protein RH5 with erythrocyte basigin and blo- cking antibodies. Nature. 515, 427 a 430 (2014); Galaway et al., P113 is a merozoite surface protein that binds the N-terminus of Plasmodium falciparum RH5. Nature Communications. 8, 14333 (2017)). Ter como alvo a proteína RH5 com um único anticorpo ou coquetel de anticorpos pode ser necessário para gerar pressões de seleção opostas no mes- mo alvo. Além disso, os anticorpos podem compensar a meia-vida cur- ta dos fármacos antimaláricos comuns.
[00548] Por fim, o parasita Plasmodium desenvolveu formas de es- capar da resposta imune do hospedeiro que tenta bloquear o desen-
volvimento do parasita, como polimorfismos genéticos. Essa diversi- dade genética geralmente é resultado da pressão imunológica (Renia e Goh, Malaria Parasites: The Great Escape. Front Immunol. 7, 463 (2016). PMC5098170). O sequenciamento do genoma completo de mais de 300 isolados clínicos de P. falciparum ou cepas de laboratório identificou apenas 15 SNPs de PÍRH5 não sinônimos dentro dos epi- topos de mAb possíveis, demonstrando a natureza conservada e a im- portância da proteína. A pressão imune nas regiões conservadas de uma proteína pode limitar a capacidade do parasita de desenvolver mecanismos de escape ((Bustamante et a/., A full-length recombinant Plasmodium falciparum PÍRH5 protein induces inhibitory antibodies that are effective across common PÍRHB5 genetic variants, Vaccine, 31, 373 a 379 (2013)).
[00549] “Nesse exemplo, um conjunto de quatro (4) mAbs RH5- específico, cada um com hlgG1, da invenção foi testado isoladamente em um ensaio de mutante de escape com uma cepa de Plasmodium falciparum (3D7).
[00550] Os anticorpos monoclonais usados foram H1H29089P, H1H29100P, H1H29147P2, H1H29187P2 e REGN1932.
[00551] — Procedimento Experimental (inclui a descrição de |i- nhagens celulares, proteínas, reagentes e tipo e modelo de ins- trumento relevantes): A cepa de P. falciparum, 3D7 (Recursos BEI) foi cultivada seguindo protocolos padrão em hematócrito a 4% e para- sitemia a 0,5%. Os eritrócitos infectados foram combinados com anti- corpos de controle ou PfRH5-específico a uma concentração corres- pondente ao seu respectivo valor de IC5so na cepa de P. falciparum descrito acima. A do anticorpo concentração foi gradualmente aumen- tada a cada 7 a 14 dias, até uma concentração final correspondente a 110X seus respectivos valores de ICso. O meio de crescimento que contém o anticorpo foi atualizado a cada 48 horas e sangue fresco foi adicionado à cultura semanalmente.
[00552] — Semanalmente, o RNA do parasita foi extraído por lise por Trizol de hemácias infectadas e purificado pelo kit Qiagen RNeasy. À transcrição reversa foi concluída com o Kit de Transcrição Reversa de CDNA de Alta Capacidade (Applied Biosystems). A amplificação do gene RHB5 foi realizada com o uso de iniciadores PÍRH5-específicos. Os produtos de PCR foram analisados em gel de agarose 1,5% e clo- nados no vetor de clonagem TOPO TA (Life Technologies). O sequen- ciamento de RH5 foi obtido com os iniciadores de sequenciamento di- reto e reverso M13.
[00553] Sumário dos Resultados e Conclusões. Vários grupos relataram que ter como alvo a proteína homóloga da proteína de liga- ção a reticulócitos 5 (PÍRH5) bloqueia eficientemente a invasão do pa- rasita de eritrócitos humanos in vitro com P. falciparum. O aumento gradual da pressão do anticorpo PÍRH5-específico sobre os parasitas 3D7 do P. falciparum não resultou em polimorfismos de PfRH5 em comparação à pressão de anticorpo de controle de isotipo. A Tabela 7- 1 mostra a porcentagem de pontuações de identidade de sequência de PÍRH5 de cada amostra em relação a todas as outras amostras se- quenciadas após 45 dias de aumentos graduais na pressão anticorpo (1 x EC5so a 110 x EC5o). Todas as sequências são 100% idênticas. À Figura 1 mostra os alinhamentos das sequências de PÍRHS corres- pondentes para cada anticorpo PÍRH5-específico após 45 dias de au- mentos graduais na pressão do anticorpo (1 x EC5so a 110 x EC5o) sem mostrar diferenças nas sequências a nível do nucleotídeo. TABELA 7-1. PORCENTAGEM DAS PONTUAÇÕES DE IDENTIDADE DE SEQUÊNCIA DE PFRH5 DE CADA AMOSTRA EM RELAÇÃO A TODAS AS AMOSTRAS SEQUENCIADAS APÓS 45 DIAS DE AU- MENTOS GRADUAIS NA PRESSÃO DE ANTICORPO (1 X ECs5o À 110 X ECs50).
oe Sm e Ei de referên- cia (3D7) de referência GD7) EXEMPLO 8: ENSAIO DE INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO PARA AVALI- AR A CAPACIDADE DOS ANTICORPOS ANTI-PFRH5 PARA INIBIR À
INVASÃO IN VITRO DE HEMÁCIAS HUMANAS E O CRESCIMENTO DE PARASITAS P. FALCIPARUM NA PRESENÇA DE SORO.
[00554] Os anticorpos específicos do Plasmodium falciparum RH5 inibem a invasão de hemácias humanas em um ensaio de inibição de crescimento com base em pLDH na presença de soro.
[00555] “Um grupo sugeriu que a ativação do complemento na su- perfície do merozoíto aumenta a capacidade do parasita de invadir as hemácias do sangue (Biryukov et al, Complement and Antibody- mediated Enhancement of Red Blood Cell Invasion and Growth of Ma- laria Parasites. EBioMedicine. 9, 207 a 216 (2016)). No entanto, outros estudos indicam que a presença de soro ativo do complemento resulta no crescimento reduzido ou comparável do parasita em comparação ao soro inativo do complemento (Boyle et al, Human antibodies fix complement to inhibit Plasmodium falciparum invasion of erythrocytes and are associated with protection against malaria. Immunity. 42, 580 a 590 (2015); Chulay et al., Inhibition of in vitro growth of Plasmodium falciparum by immune serum from monkeys. J Infect Dis. 144, 270 a 278). Além disso, em todos os casos de vacinação de antígenos de merozoíto em humanos (ou qualquer antígeno da malária), não há ca-
sos documentados de aumentos de parasitemia dependentes de anti- corpos.
[00556] “Nesse exemplo, um conjunto de quatro (4) mAbs RH5- específicos (cada um com hlgG1 (designado com um prefixo H1H) ou hIlgG4 (designado com um prefixo H4H)) da invenção foi testado isola- damente e em combinação com soro normal de macaco Aotus (ANS), soro Aotus inativado por calor (AHIS), soro humano normal (HNS) ou soro humano inativado por calor (HHIS) em um ensaio de inibição de crescimento padrão com uma cepa de Plasmodium falciparum (FCR- 1/FVO).
[00557] Os anticorpos monoclonais utilizados foram H1H29089P, H1H29100P, H1H29147P2, H1H29187P2, H4H29089P, H4H29100P, H4H29147P2, H4H29187P2, REGN1932 (anti-Fel d1 (I9G1 humana) e REGN1945 (anti-Fel d1 (I9G4 humana).
[00558] “Procedimento Experimental (inclui a descrição de |i- nhagens celulares, proteínas, reagentes e tipo e modelo de ins- trumento relevantes). A cepa do P. falciparum, FOCR-1/FVO (Recur- sos BEI) foi sincronizada primeiramente com 5% de D-sortibol seguin- do protocolos padrão com 3 a 5% de hematócrito e 1 a 2% de parasi- temia 20 a 24 horas antes do início do ensaio. Os eritrócitos humanos infectados foram preparados com uma parasitemia inicial de 04 a 0,7% e 2% de hematócrito. Os eritrócitos infectados foram combinados com anticorpos RH5-específico ou de controle, a uma concentração de 6,67 UM na presença de soro Aotus normal a 10%, soro Aotus inativa- do por calor, soro humano normal ou soro humano inativado por calor. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas até que o estágio de esquizontes fosse atingido (um ciclo de vida completo). O crescimento do parasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A parasi- temia final foi determinada medindo-se a atividade da lactato desidro- genase (LDH) do parasita (Miura et a/., Anti-Apical-Membrane-Antigen-
1 anticorpo is more effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface- Protein-1 anticorpo in inhibiting Plasmodium falciparum growth, as de- termined by the in vitro growth inhibition assay. Clin Vaccine Immunol. 16, 963 a 968 (2009)). A inibição percentual do crescimento é expres- sa em relação aos eritrócitos não infectados.
[00559] Sumário dos resultados e conclusões. Ter como alvo a proteína homóloga da proteína de ligação a reticulócitos 5 (RH5) blo- queia com eficiência a invasão do parasita de eritrócitos humanos in vitro com P. falciparum. Constatações conflitantes foram publicadas sobre a função do complemento na invasão das hemácias por merozo- tos. Os anticorpos RH5-específico foram produzidos e testados na presença de Aotus ou soros humanos in vitro em um ensaio de inibi- ção de crescimento em uma cepa de P. falciparum, conforme descrito acima. A Tabela 8-1 mostra a inibição do crescimento percentual má- ximo para cada anticorpo específico de RH5 (formatos hlgG1 e hlgG4) com complemento sérico ativo ou inativo. Os anticorpos individuais e combinações de soro ativo ou inativo exibiram inibição de crescimento máximo percentual semelhante, variando de aproximadamente 67 a 86%.
1] + IT = x =
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[00560] Inibição máxima do crescimento de anticorpos contra PfRH5 em relação às hemácias humanas não infectadas. O ensaio de inibição do crescimento foi realizado em hemácias do sangue infectadas com P. falci- parum (trofozoíta maduro ou esquizonte precoce) com 0,4 a 0,7% de parasi- temia. Os anticorpos e soros foram combinados com as hemácias infecta- das. Os parasitas foram cultivados por 40 a 48 horas (o tempo depende da cepa do parasita) até que o estágio de esquizontes fosse alcançado. O cres- cimento do parasita foi interrompido com três lavagens de PBS frio. A ativi- dade da lactato desidrogenase (LDH) do parasita foi medida imediatamente após as lavagens. A inibição percentual do crescimento é expressa em rela- ção aos eritrócitos não infectados. Os resultados de um ensaio representati- vo do ensaio de inibição do crescimento são mostrados acima. ANS: Soro normal de macaco Aotus, AHIS: Soro de Aotus inativado por calor, HNS: Soro humano normal, HHIS: Soro humano inativado por calor.
[00561] Todas as referências citadas no presente documento são incorporadas a título de referência como se cada publicação individual, entrada de banco de dados (por exemplo, sequências do Genbank ou entradas do GenelD), pedido de patente ou patente, fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada a título de referência. Com essa declaração de incorporação a título de referência, as Re- querentes referem-se a cada publicação individual, entrada de banco de dados (por exemplo, sequências do Genbank ou entradas do Ge- nelD), pedido de patente ou patente, mesmo se tal citação não for imediatamente adjacente a uma declaração dedicada de incorporação a título de referência. A inclusão de declarações dedicadas de incorpo- ração a título de referência, caso haja, dentro do presente relatório des- critivo não enfraquece de forma alguma essa declaração geral de incor- poração a título de referência. A citação das referências contidas no pre- sente documento não deve ser uma admissão de que a referência é uma técnica anterior pertinente tampouco constitui qualquer admissão quanto ao conteúdo ou data dessas publicações ou documentos.

Claims (31)

REIVINDICAÇÕES
1. Proteína de ligação ao antígeno caracterizada pelo fato de que (i) se liga especificamente ao mesmo epítopo no polipeptí- deo de homólogo 5 de proteína de ligação a reticulócitos de Plasmodi- um Falciparum (PÍRH5) como uma proteína de ligação ao antígeno de referência; ou (ii) compete pela ligação ao polipeptídeo PÍRH5 com uma proteína de ligação ao antígeno de referência em que a proteína de ligação ao antígeno de referência compreende: (a) uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma imunoglobulina de cadeia pesa- da que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
2. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com a reivin- dicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou
(ii) uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
3. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo fato de que compre- ende: (a) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesa- da compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de ami- noácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
4. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que compre- ende: (a) uma imunoglobulina de cadeia pesada compreendendo a CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma imunoglobulina de cadeia pe- sada compreendendo uma sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354 e pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210,
226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 de uma imunoglobulina de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306 e pelo menos 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
5. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que compre- ende uma imunoglobulina de cadeia pesada que compreende: uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 4; uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 6; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8; ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 20; uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 22; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 24; ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 36; uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 38; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 40;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 52;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 54; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 56;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 68;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 70; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 72;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 84;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 86; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 88;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 100;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 102; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 104;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 116;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 118; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 120;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 132;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 134; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 136;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 148;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 150; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 152;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 164;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 166; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 168;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 180;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 182; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 184;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 196;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 198; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 200;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 212;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 214; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 216;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 228;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 230; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 232;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 236;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 238; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 240;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 244;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 246; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 248;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 252;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 254; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 256;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 260;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 262; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 264;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 268;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 270; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 272;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 276;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 278; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 280;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 284;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 286; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 288;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 292;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 294; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 296;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 300;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 302; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 304;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 316;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 318; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 320;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 324;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 326; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 328;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 332;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 334; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 336;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 340;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 342; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 344;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 348;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 350; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 352;
ou uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 356;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 358; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 360;
e/ou uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 12;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 14; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 16;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 28;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 30; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 32;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 44;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 46; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 48;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 60;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 62; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 64;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 76;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 78; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 80;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 92;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 94; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 96;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 108;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 110; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 112;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 124;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 126; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 128;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 140;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 142; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 144;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 156;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 158; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 160;
ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 172;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 174; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 176; ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 188; uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 190; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 192; ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 204; uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 206; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 208; ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220; uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224; ou uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308; uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312.
6. Anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mes-
mo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracteri- zado pelo fato de que compreende
(1)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 4;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 6; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 12;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 14; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 16;
(2)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 20;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 22;
uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 24; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 28;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 30; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 32;
(3)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 36;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 38; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 40; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 44;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 46; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 48;
(4)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 52;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 54; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 56; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 60;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 62; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 64;
(5)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 68;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 70; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 72; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 76;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 78; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 80;
(6)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 84;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 86; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 88; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 92;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 94; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 96;
(7)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 100;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 102; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 104; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 108;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 110; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 112;
(8)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 116;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 118; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 120; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 124;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 126; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 128;
(9)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 132;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 134; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 136; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 140;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 142; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 144;
(10)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 148;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 150; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 152; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 156;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 158; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 160;
(11)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 164;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 166; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 168; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 172;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 174; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 176;
(12)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 180;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 182; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 184; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 188;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 190; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 192;
(13)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 196;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 198; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 200; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 204;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 206; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 208;
(14)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 212;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 214; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 216; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(15)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 228;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 230; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 232; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(16)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 236;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 238; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 240; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(17)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 244;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 246; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 248; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(18)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 252;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 254; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 256; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(19)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 260;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 262; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 264; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(20)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 268;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 270; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 272; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(21)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 276;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 278; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 280; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(22)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 284;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 286; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 288; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(23)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 292;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 294; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 296; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 220;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 222; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 224;
(24)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 300;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 302; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 304; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312;
(25)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 316;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 318; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 320; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312;
(26)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 324;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 326; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 328; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312;
(27)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 332;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 334; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 336; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312;
(28)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 340;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 342; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 344; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312;
(29)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 348;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 350; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 352; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312 e/ou
(30)
uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesada que compreende:
uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 356;
uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 358; e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 360; e uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende:
uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 308;
uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 310; e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 312.
7. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) uma região variável de imunoglobulina de cadeia pesa- da que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) uma região variável de imunoglobulina de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306.
8. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que é um an- ticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
9. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que é multi- específica.
10. Proteína de ligação ao antígeno, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais das seguintes propriedades: elnibe o crescimento de Plasmodium falciparum em glóbu- los vermelhos humanos; elnibe o crescimento de estirpe de Plasmodium falciparum D10, Dd2, 7G8, W2-mef, 3D7, HB3, FCR-1/FVO, Cam3.ll ou RF7 em glóbulos vermelhos humanos;
eLiga-se ao polipeptídeo PÍRH5 ou a um fragmento antigê- nico do mesmo com um Kp de cerca de 4,72 pM a cerca de 1,67 nM à “ºC e/ou de cerca de 1,10 pM a cerca de 1,10 nM a 37 ºC quando medido por ressonância plasmônica de superfície; eBloqueia a ligação do polipeptídeo PÍRH5 ao polipeptídeo de basigina; eLiga-se a PÍRH5 sem os resíduos do terminal amino M1- Y139 e incluindo os resíduos K140-Q526 mas sem K247-L295 e tendo as mutações T216A e T299A; e/ou eCausa inibição máxima do crescimento de Plasmodium falciparum em soro humano ou de macaco Aotus inativado pelo calor que é cerca de 1 a 10% maior que o soro de soro de macaco Aotus ou humano não inativado pelo calor, respectivamente; eQuando exposta à dita proteína de ligação ao antígeno, não induz mutação de PfRH5 em Plasmodium falciparum.
11. Complexo caracterizado pelo fato de que compreende uma proteína de ligação ao antígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ligada a um polipeptídeo homólogo 5 da proteína de ligação a reticulócito de Plasmodium falciparum (PÍRHS5).
12. Método para produzir uma proteína de ligação ao antí- geno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou uma cadeia de imunoglobulina da mesma caracterizado pelo fato de que compreende: (a) introduzir um ou mais polinucleotídeos que codificam uma cadeia de imunoglobulina da dita proteína de ligação ao antígeno em uma célula hospedeira; (b) cultivar a célula hospedeira em condições favoráveis à expressão do polinucleotídeo; e (c) opcionalmente, isolar a proteína de ligação ao antígeno ou cadeia de imunoglobulina da célula hospedeira e/ou do meio no qual a célula hospedeira é cultivada.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracteriza- do pelo fato de que a célula hospedeira é uma célula de ovário de hamster chinês.
14. Proteína de ligação ao antígeno ou cadeia de imuno- globulina, caracterizada pelo fato de que é um produto do método, como definido em qualquer uma das reivindicações 12 a 13.
15. Tira de teste de detecção de antígeno imunocromato- gráfica de fluxo lateral, caracterizada pelo fato de que compreende uma proteína de ligação ao antígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14.
16. Polipeptídeo caracterizado pelo fato de que compreen- de: (a) CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 de uma região variável de cadeia pesada de imunoglobulina de uma cadeia de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 234, 242, 250, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 314, 322, 330, 338, 346 ou 354; e/ou (b) CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 da região variável da ca- deia leve de imunoglobulina de uma cadeia de imunoglobulina que compreende a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218 ou 306; Ou, que compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 356.
17. Polinucleotídeo caracterizado pelo fato de que codifica o polipeptídeo, como definido na reivindicação 16.
18. Vetor caracterizado pelo fato de que compreende o po- linucleotídeo, como definido na reivindicação 17.
19. Célula hospedeira caracterizada pelo fato de que com- preende a proteína de ligação ao antígeno ou cadeia de imunoglobuli- na ou polipeptídeo ou polinucleotídeo ou vetor, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, 14 e 16 a 18.
20. Composição ou kit caracterizado pelo fato de que com- preende uma ou mais das proteínas de ligação ao antígenocomo defi- nidas em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14, opcionalmente em associação com outro agente terapêutico.
21. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende a proteína de ligação ao antígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14, e um carreador farma- ceuticamente aceitável, opcionalmente, em associação com outro agente terapêutico.
22. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 e 21, caracterizado pelo fato de que está em associ- ação com um agente terapêutico adicional que é um medicamento an- tiparasitário ou uma vacina.
23. Composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado pelo fato de que o agente tera- pêutico adicional é um membro selecionado do grupo que consiste em: cloroquina, atovaquona, proguanil, artemeter, lumefantrina, mefloqui- na, quinina, quinidina, doxiciclina (opcionalmente em combinação com quinina), clindamicina, uma vacina, uma vacina antimalárica e RTS,S/ASO01.
24. Recipiente ou dispositivo de injeção caracterizado pelo fato de que compreende a proteína de ligação ao antígeno ou compo- sição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, 14 e a 23.
25. Método para tratar ou prevenir infecção por Plasmodium falciparum em um sujeito com necessidade do mesmo caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de proteína de ligação ao antígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14, opcionalmente em asso- ciação com um agente terapêutico adicional.
26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracteriza- do pelo fato de que o sujeito tem malária ou está em alto risco de con- trair ou predisposto a contrair malária.
27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 25 a 26, caracterizado pelo fato de que, antes da administração da proteína de ligação ao antígeno, o sujeito é diagnosticado como tendo uma infecção por Plasmodium falciparum.
28. Método para diagnosticar infecção por Plasmodium fal- ciparum em um sujeito caracterizado pelo fato de que compreende co- locar uma proteína de ligação ao antígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14, em contato com uma amostra do dito sujeito e, se um complexo entre a proteína de ligação ao antígeno e um polipeptídeo PfRH5 na amostra for detectado, determinar que o sujeito está infectado com Plasmodium falciparum.
29. Método, de acordo com a reivindicação 28, caracteriza- do pelo fato de que o dito complexo é formado em uma tira de teste de fluxo lateral que compreende a proteína de ligação ao antígeno e o polipeptídeo PÍRHB5.
30. Método para administrar uma proteína de ligação ao an- tígeno, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 e 14, caracterizado pelo fato de que compreende injetar a proteína de ligação ao antígeno no corpo do sujeito, opcionalmente em associação com um agente terapêutico adicional.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracteriza- do pelo fato de que a proteína de ligação ao antígeno é injetada no corpo do sujeito por via subcutânea, intravenosa ou intramuscular.
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