KR20180038020A - 항-angptl８ 항체 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 ANGPTL8에 결합하는 항체 및 이를 사용하는 방법을 제공한다. 특정 양태에 따르면, 본 발명의 항체는 높은 친화도로 인간 ANGPTL8에 결합한다. 본 발명의 항체는 완전 인간 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 다양한 질환 또는 장애의 치료에 유용하다.

Description

항-ANGPTL８ 항체 및 이의 용도

본 발명은 안지오포이에틴-유사 단백질(ANGPTL) 8에 특이적으로 결합하는 항체, 및 이의 항원-결합 단편, 이들 항체를 포함하는 조성물 및 이의 사용방법에 관한 것이다.

ANGPTL8(대안적으로 TD26, RIFL, 리파신, C19orf80 및 베타트로핀이라고도 함)은 트리글리세라이드(TG) 및 글루코스 대사 둘 다에 관여하는 새로 인정된 ANGPTL 패밀리 멤버이다. 이는 주로 간 및 지방 조직에서 발현되는 순환 단백질이다. ANGPTL3 및 ANGPTL4와는 달리, ANGPTL8은 C-말단에 피브리노겐 유사 도메인이 결핍되지만, 다른 ANGPTL 패밀리 멤버와 마찬가지로 N-말단 이중-코일 도메인(coiled-coil domain)을 함유한다. 계통발생 분석에서 ANGPTL8이 ANGPTL3 및 ANGPTL4와 공통 조상을 공유하는 것으로 드러났다(Fu, Z. et. al., (2013), Biochem. Biophys. Res. Commun. 430:1126-1131).

ANGPTL8의 간 과발현은 고중성지방혈증(hypertriglyceridemia)과 관련되는 반면, Angptl8의 불활성화는 혈장 TG 수준의 감소를 야기한다(Quagliarini, F. et. al. (2012), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109(48):19751-19756; Wang, Y. et. al. (2013), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110:16109-16114). ANGPTL8이 지질 조절에 관여한다는 합의에도 불구하고, 이러한 과정을 전담하는 메카니즘은 여전히 논쟁중이다. 한 가지 제안된 메카니즘은 ANGPTL8이 지단백 리파제(LPL) 활성을 억제하여, 감소된 트리글리세라이드 가수분해 및 제거를 초래한다는 것이다(Zhang, R. et.al., (2012), Biochem. Biophys. Res. Commun. 424:786-792).

ANGPTL8은 또한 마우스에서 베타 세포 증식 및 베타 세포 질량에 있어서 역할을 하는 것으로 보고되었으며, 여기서 인슐린 내성은 인슐린 수용체 길항제, S961에 의해 유도되었다(Yi, P. et. al. (2013), Cell 153:747-758). 그러나, 후속 연구에서 ANGPTL8이 베타 세포 기능, 또는 인슐린 내성에 대한 베타 세포 성장 반응에 필요하지 않은 것으로 드러났다. 더욱이, ANGPTL8의 과발현은 베타 세포 영역을 증가시키거나 혈당 조절을 개선시키지 못한다(Gusarova, V. et. al. (2014) Cell 159:691-696).

ANGPTL8의 간 과발현이 고중성지방혈증과 관련되기 때문에 그리고 Angptl8의 불활성화가 혈장 트리글리세라이드 수준의 감소를 초래하기 때문에, ANGPTL8의 억제제 또는 길항제가 고중성지방혈증과 같지만 이에 제한되지 않는 증가된 수준의 트리글리세라이드를 부분적으로 특징으로 하는 질환을 치료하는데 효과적인 것으로 판명될 수 있다.

Zhang은 리파신에 대한 단클론 항체가, 야생형 마우스에 복강내 주사되는 경우, 혈청 트리글리세라이드 수준을 감소시켰다고 보고하였다(Zhang, R. (2015), Endocrine Society's 97^th Annual Meeting, Presentation No. OR13-6, March 5-8, San Diego, CA). 그러나, 고중성지방혈증을 포함한 증가된 수준의 트리글리세라이드를 특징으로 하는 질환 또는 병태를 치료하기 위해 임상 현장에서 사용될 수 있는 ANGPTL8에 특이적인 어떠한 완전 인간 항체도 지금까지 기재된 바 없다.

따라서, 고중성지방혈증 및 증가된 트리글리세라이드 및 지질 수준과 관련된 기타의 장애 또는 병태를 앓고 있는 환자를 치료하기 위해 본원에 기재된 항체와 같은 ANGPTL8의 신규한 길항제가 당업계에서 요구되고 있다.

본 발명은 안지오포이에틴-유사 단백질 8(ANGPTL8)에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 본 발명의 한 가지 측면은 ANGPTL8에 결합/상호작용함으로써 이러한 결합 및/또는 상호작용이 포유동물에서 트리글리세라이드 수준의 저하를 초래하는 인간 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 ANGTPL8, 특히, 인간 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고, 이의 적어도 하나의 활성을 중화, 억제, 차단, 폐지, 감소, 또는 방해하는 완전 인간 단클론 항체(mAbs) 및 이의 항원-결합 단편을 제공한다(GenBank 수탁 번호 NP_061157.3의 아미노산 22-198 및 서열번호 340의 아미노산 1-177 참조). 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 중화, 억제, 차단, 폐지, 감소 또는 방해되는 ANGPTL8의 활성은 LPL 활성의 억제, 또는 생체내 트리글리세라이드 수준의 저하 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 중화 또는 억제하는 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 다음의 특성들 중 하나 이상을 나타낸다:

a) 완전 인간 단클론 항체이거나;

b) 서열번호 337로 정의된 바와 같은 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역에서 선형 에피토프에 특이적으로 결합하거나;

c) 서열번호 337로 정의된 바와 같은 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역에서 선형 에피토프에 결합하지 않거나;

d) 서열번호 338의 인간 ANGPTL3 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역에, 또는 서열번호 339의 인간 ANGPTL4 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역에 결합하지 않거나;

e) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정되는 바와 같이 약 150pM 미만의 K_D로 25℃에서 인간 ANGPTL8에 결합하고 약 90pM 미만의 K_D로 25℃에서 원숭이 ANGPTL8에 결합하거나;

f) 약 10mg/kg의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 트리글리세라이드 수준을 약 68%(최대)까지 낮추거나;

g) 약 5mg/kg 내지 약 25mg/kg 범위의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 약 7일 내지 21일에 이르는 기간 동안 트리글리세라이드 수준을 낮추거나;

h) 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306, 314 및 330으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하거나;

i) 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하거나;

j) 기준 항체(reference antibody)와 교차-경쟁하며, 여기서, 기준 항체는 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 hANGPTL8의 표적화된 활성(예를 들면, ANGPTL8의 LPL 억제 활성)에 직접적으로 관련되는 hANGPTL8의 에피토프에 결합함으로써 hANGPTL8의 활성을 중화, 억제, 차단, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 hANGPTL8의 표적화된 활성에 직접적으로 관련되지 않는 hANGPTL8의 에피토프에 결합함으로써 hANGPTL8의 활성을 중화, 억제, 차단, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있지만, 이에 결합하는 항체 또는 단편은 항체-항원 접촉 표면과는 상이한 부위에서 입체적 중첩(steric overlap)에 의해 또는 알로스테릭 효과(allosteric effect)에 의해 hANGPTL8의 표적화된 활성을 억제, 차단, 폐지, 감소 또는 방해할 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 hANGPTL8(즉, 비-차단 항체)의 표적화된 활성(예를 들면, LPL 활성 억제 등)에 직접적으로 관련되지 않는 hANGPTL8의 에피토프에 결합하지만, 항체 또는 이의 단편은, 항체 또는 이의 단편의 부재하에서의 트리글리세라이드 수준의 저하에 비해, 생체내에서 트리글리세라이드 수준의 감소를 초래한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 서열번호 340(서열번호 337로도 나타냄)의 잔기 1-39에서 N-말단 영역 내에 위치한 에피토프에 결합하는 단리된 항-hANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 특징으로 한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 서열번호 340(서열번호 337로도 나타냄)의 잔기 1-39에서 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역 내에 위치한 에피토프에는 결합하지만 hANGPTL3(서열번호 338)의 N-말단 이중-코일 영역, 또는 hANGPTL4(서열번호 339)의 N-말단 이중-코일 영역에는 결합하지 않는 단리된 항체 또는 항체의 항원-결합 단편을 제공한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 서열번호 340(서열번호 337로도 나타냄)의 아미노산 잔기 1-39에 의해 정의된 인간 ANGPTL8의 영역의 바깥(즉, 서열번호 340의 아미노산 잔기 40-177)에 위치한 에피토프에 결합하고, hANGPTL8의 적어도 하나의 활성을 중화, 억제, 폐지, 감소 또는 방해하는 단리된 항-hANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 특징으로 한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 인간 ANGPTL8(서열번호 340의 아미노산 잔기 1-177; 또한 GenBank 수탁 번호 NP_061157.3의 아미노산 잔기 22-198 참조)에 결합하지만, 인간 ANGPTL3(서열번호 343에 나타낸 핵산 서열에 의해 암호화된 서열번호 342의 아미노산 서열), 또는 인간 ANGPTL4(서열번호 345에 나타낸 핵산 서열에 의해 암호화된 서열번호 344의 아미노산 서열)와 같은 관련 단백질과는 교차 반응하지 않는 단리된 항-hANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 특징으로 한다.

본 발명의 항체는 전장일 수 있거나(예를 들면, IgG1 또는 IgG4 항체) 항원-결합부(예를 들면, Fab, F(ab')₂ 또는 scFv 단편) 만을 포함할 수 있고, 기능성에 영향을 미치도록, 예를 들면, 숙주에서의 지속성(persistence)을 증가시키거나 잔류 효과기 기능을 없애도록 변형될 수 있다(Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933). 특정 양태에서, 항체는 이특이성일 수 있다.

본 발명의 예시적인 항-ANGPTL8 항체가 본원의 표 1 및 2에 열거되어 있다. 표 1은 예시적인 항-ANGPTL8 항체의 중쇄 가변 영역(HCVRs), 경쇄 가변 영역(LCVRs), 중쇄 상보 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 경쇄 상보 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 식별자를 제시한다. 표 2는 예시적인 항-ANGPTL8 항체의 HCVRs, LCVRs, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 핵산 서열 식별자를 제시한다.

본 발명은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCVR를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열과 쌍을 이루는 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열 중의 어느 것을 포함하는 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/250, 266/250, 274/250, 282/250, 290/250, 306/250, 314/322, 및 330/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 66/74, 162/170, 194/202 및 314/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 162/170의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 항원-결합 단편은 (a) 표 1에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역(HCVR) 서열 중의 어느 하나 내에 함유된 세 개의 중쇄 상보 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 (b) 표 1에 제시된 바와 같은 경쇄 가변 영역(LCVR) 서열 중의 어느 하나 내에 함유된 세 개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 항원-결합 단편은 다음을 포함한다:

(a) 서열번호 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308, 316 및 332로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;

(b) 서열번호 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 270, 278, 286, 294, 302, 310, 318, 및 334로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;

(c) 서열번호 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312, 320 및 336으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인;

(d) 서열번호 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252 및 324로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인;

(e) 서열번호 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 및 326으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인; 및

(f) 서열번호 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256 및 328로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR1 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1(HCDR1)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR2 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2(HCDR2)를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR1 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1(LCDR1)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR2 아미노산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2(LCDR2)를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 중의 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 서열 중의 어느 것과 쌍을 이룬 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열 중의 어느 것을 포함하는 HCDR3 및 LCDR3 아미노산 서열 쌍(HCDR3/LCDR3)을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 양태에 따르면, 본 발명은 표 1에 열거된 예시적인 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것 내에 함유된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 양태에서, HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍은 서열번호 72/80(예를 들면, H4H15321P), 168/176(예를 들면, H4H15341P), 200/208(예를 들면, H4H15345P), 및 320/328(예를 들면, H4H15367P2)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍은 서열번호 168/176(예를 들면, H4H15341P)이다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 예시적인 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것 내에 함유된 6개 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 양태에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 서열번호 68-70-72-76-78-80(예를 들면, H4H15321P); 164-166-168-172-174-176(예를 들면, H4H15341P); 196-198-200-204-206-208(예를 들면, H4H15345P); 316-318-320-324-326-328(예를 들면, H4H15367P2)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 양태에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 서열번호 164-166-168-172-174-176(예를 들면, H4H15341P)이다.

관련 양태에서, 본 발명은 표 1에 열거된 예시적인 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것에 의해 정의된 바와 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 6개 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 예를 들면, 본 발명은 서열번호 66/74(예를 들면, H4H15321P), 162/170(예를 들면, H4H15341P); 194/202(예를 들면, H4H15345P); 314/322(예를 들면, H415367P2)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트를 포함하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 동정하기 위한 방법 및 기술은 당업계에 널리 공지되어 있으며 본원에 개시된 특정 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 동정하는데 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하는데 사용될 수 있는 예시적인 규약은, 예를 들면, Kabat 정의, Chothia 정의, 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적인 측면에서, Kabat 정의는 서열 변동성에 기초하고, Chothia 정의는 구조적 루프 영억의 위치에 기초하고, AbM 정의는 Kabat와 Chothia 방법 사이의 절충이다. 예를 들면, 문헌[Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest", National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol . Biol . 273:927-948 (1997); and Martin et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 86:9268-9272 (1989)]을 참조한다. 공용 데이터베이스가 또한 항체 내의 CDR 서열을 확인하는데 이용 가능하다.

본 발명은 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다. 몇몇 양태에서, 바람직하지 않은 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변형, 또는, 예를 들면, 항체 의존적 세포성 세포독성(ADCC) 기능을 증가시키기 위해 올리고당 쇄 상에 존재하는 프럭토스 잔기가 없는 항체가 유용할 수 있다(참조; Shield et al. (2002) JBC 277:26733). 또 다른 용도에서, 보체 의존 세포독성(CDC)을 변형시키기 위해 갈락토실화의 변형이 이루어질 수 있다.

본 발명은 또한 ANGPTL8로의 특이 결합을 위해 HCVR의 CDR 및 LCVR의 CDR을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 경쟁하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR 및 LCVR 각각은 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8로의 결합을 위해 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/250, 266/250, 274/250, 282/250, 290/250, 306/250, 314/322, 및 330/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 기준 항체와 경쟁하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 HCVR의 CDR 및 LCVR의 CDR을 포함하는 기준 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 ANGPTL8 상의 동일 에피토프에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 HCVR 및 LCVR 각각은 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.

하나의 양태에서, 본 발명은 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/250, 266/250, 274/250, 282/250, 290/250, 306/250, 314/322, 및 330/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 기준 항체와 ANGPTL8 상의 동일 에피토프에 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

하나의 양태에서, ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체는 재조합에 의해 생산된 인간 단클론 항체이다.

하나의 양태에서, ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체는 표 1에 밝혀진 아미노산 서열로부터 선택되는 HCVR 및/또는 LCVR 서열을 갖는 재조합에 의해 생산된 인간 단클론 항체이다.

하나의 양태에서, ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체는 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/250, 266/250, 274/250, 282/250, 290/250, 306/250, 314/322, 및 330/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR /LCVR 아미노산 서열 쌍을 갖는 재조합에 의해 생산된 인간 단클론 항체이다.

하나의 양태에서, 본 발명은 ANGPTL8 활성을 중화시키는 완전 인간 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이의 단편은 다음의 특성들 중의 하나 이상을 나타낸다: (i) 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306, 314 및 330으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함하거나; (ii) 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하거나; (iii) 서열번호 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312, 320 및 336로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및 서열번호 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256 및 328로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함하거나; (iv) 서열번호 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308, 316 및 332로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR1 도메인; 서열번호 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 270, 278, 286, 294, 302, 310, 318, 및 334로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR2 도메인; 서열번호 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252 및 324로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR1 도메인; 및 서열번호 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 및 326으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR2 도메인을 포함하거나; (v) 서열번호 337에 의해 정의된 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역에 특이적으로 결합하거나; vi) 서열번호 337에 의해 정의된 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역에 특이적으로 결합하지 않거나; vii) 서열번호 338의 인간 ANGPTL3 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역 또는 서열번호 339의 인간 ANGPTL4 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역에 결합하지 않거나; viii) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정하여 약 150pM 미만의 K_D로 25℃에서 인간 ANGPTL8에 결합하고 약 90pM 미만의 K_D로 25℃에서 원숭이 ANGPTL8에 결합하거나; ix) 약 10mg/kg의 용량으로 피하 주사되는 경우 포유동물에서 약 68%(최대)까지 트리글리세라이드 수준을 낮추거나; x) 약 5mg/kg 내지 약 25mg/kg 범위의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 약 7일 내지 21일에 이르는 기간 동안 트리글리세라이드 수준을 낮추거나; xi) 기준 항체와 교차-경쟁하며, 여기서, 기준 항체는 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열을 포함한다.

제2 측면에서, 본 발명은 또한 항-ANGPTL8 항체 또는 이의 부분을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 예를 들면, 본 발명은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공하고; 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCVR 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자 표 2에 열거된 LCVR 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR1 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR1 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR2 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR2 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR3 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR1 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR1 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR2 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR2 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 특정 양태에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR3 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 HCVR를 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기서, HCVR는 세 개의 CDR의 세트(즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3)를 포함하고, HCDR1-HCDR2-HCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 열거된 예시적인 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것에 의해 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 LCVR를 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기서, LCVR는 세 개의 CDR의 세트(즉, LCDR1-LCDR2-LCDR3)을 포함하고, LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 열거된 예시적인 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것에 의해 정의된 바와 같다.

본 발명은 또한 HCVR과 LCVR 둘 다를 암호화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기서 HCVR은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열 중의 어느 것의 아미노산 서열을 포함하고 LCVR은 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCVR 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열, 및 표 2에 열거된 LCVR 핵산 서열 중의 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 이의 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 서열을 포함한다. 특정 양태에서 본 발명의 이러한 측면에 따르면, 핵산 분자는 HCVR 및 LCVR을 암호화하며, 여기서 HCVR 및 LCVR은 둘 다 표 1에 열거된 동일한 항-ANGPTL8 항체로부터 유도된다.

본 발명은 또한 항-ANGPTL8 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 예를 들면, 본 발명은 상기한 핵산 분자, 즉, 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 서열 중의 어느 것을 암호화하는 핵산 분자 중의 어느 것을 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 또한, 벡터가 도입된 숙주 세포, 뿐만 아니라 숙주 세포를 항체 또는 항체 단편의 생산을 가능케 하는 조건하에서 배양하고, 이렇게 하여 생산된 항체 및 항체 단편을 회수함으로써 항체 또는 이의 부분을 제조하는 방법이 본 발명의 범위내에 포함된다.

하나의 양태에서, ANGPTL8에 특이적으로 결합하고/하거나 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 억제하는 단리된 항체는 표 2에서 발견되는 핵산 서열로부터 선택된 핵산 서열에 의해 암호화되는 HCVR 및/또는 LCVR를 갖는 재조합에 의해 생산된 인간 단클론 항체이다.

하나의 양태에서, 본 발명은 인간 ANGPTL8에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 제공하며, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (a) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보 결정 영역(CDR); 및 (b) 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 인간 ANGPTL8에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자를 제공하며, 여기서, 항체 또는 항원-결합 단편은 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR 및 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 LCVR을 포함한다.

제3 측면에서, 본 발명은 ANGPTL8에 특이적으로 결합하는 재조합 인간 단클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

하나의 양태에서, 본 발명은 표 1에서 발견되는 항-ANGPTL8 항체 중의 어느 것의 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로부터 선택된 인간 ANGPTL8에 특이적인 적어도 하나의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

관련된 측면에서, 본 발명은 항-ANGPTL8 항체와 제2 치료제의 조합인 조성물을 특징으로 한다. 하나의 양태에서, 제2 치료제는 항-ANGPTL8 항체와 유리하게 배합되는 임의의 제제이다.

하나의 양태에서, 제2 치료제는 고중성지방혈증과 같은 높은 트리글리세라이드 수준을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 앓고 있는 환자에서 트리글리세라이드를 낮추거나 적어도 하나의 증상을 감소시킬 수 있는 임의의 제제일 수 있다.

특정 양태에서, 제2 치료제는, 본 발명의 항체 또는 항체의 항원-결합 단편과 관련된 가능한 부작용(들)이 발생한다면 이러한 부작용(들)을 상쇄시키거나 감소시키는데 도움을 주는 제제일 수 있다.

제2 치료제는 소분자 약물, 단백질/폴리펩타이드, 항체, 핵산 분자, 예를 들면, 안티-센스 분자, 또는 siRNA일 수 있다. 제2 치료제는 합성 또는 천연 유도될 수 있다.

또한, 본 발명의 항체 및 약제학적으로 허용되는 조성물은 다른 병용 요법에서 사용될 수 있으며, 즉, 항체 및 약제학적으로 허용되는 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료법 또는 의료 시술과 동시에, 전에 또는 후에 투여될 수 있음을 인지할 것이다. 병용 섭생에서 사용하기 위한 치료법(치료제 또는 시술)의 특정 병용은 목적하는 치료제 및/또는 시술의 적합성 및 달성하고자 하는 목적하는 치료 효과를 고려할 것이다. 또한, 사용되는 치료법은 동일한 장애에 대해 목적하는 효과를 달성할 수 있거나(예를 들면, 항체는 동일한 장애를 치료하는데 사용되는 또 다른 제제와 동시에 투여될 수 있다), 상이한 효과를 달성할 수 있음(예를 들면, 임의의 부작용의 조절)을 인지할 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 특정 질환, 또는 병태를 치료하거나 예방하기 위해 정상적으로 투여되는 추가의 치료제는 치료되는 질환 또는 병태에 적합하다.

관련 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 제2 치료제, 예를 들면, (1) 3-하이드록시-3-메틸글루타릴-코엔자임 A (HMG-CoA) 리덕타제 억제제, 예를 들면, 세리바스타틴, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 피타바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴 등; (2) 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제; (3) 지단백 이화작용을 증가시키는 니아신; (4) TG 수준, 저밀도 지단백 (LDL) 수준을 감소시키고 고밀도 지단백 (HDL) 수준을 향상시키는 피브레이트 또는 양친매성 카복실산; 및 (5) 22-하이드록시콜레스테롤과 같은 콜레스테롤 제거에서 역할을 하는 LXR 전사 인자의 활성제, 또는 에제티미브 + 심바스타틴과 같은 고정 배합물; 담즙 수지를 갖는 스타틴(예를 들면, 콜레스티라민, 콜레스티폴, 콜레세벨람), 니아신 + 스타틴의 고정 배합물(예를 들면, 로바스타틴을 갖는 니아신); 또는 오메가-3-지방산 에틸 에스테르(예를 들면, omacor)와 같은 지질 저하제의 배합물인 조성물을 특징으로 한다.

게다가, 제2 치료제는 ANGPTL8의 하나 이상의 다른 억제제 뿐만 아니라 지질 대사, 특히, 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드 항상성에 관여하는 ANGPTL3, ANGPTL4, ANGPTL5, ANGPTL6, 아포지단백 C-III(APOC3) 및 프로단백질 전환효소 서브틸리신/케신 타입 9(PCSK9)와 같은 다른 분자의 억제제일 수 있다. 이러한 분자의 억제제는 이러한 분자에 특이적으로 결합하여 이들의 활성을 차단하는 소분자, 안티센스 분자 및 항체를 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 항-ANGPTL8 항체가 당뇨병(예를 들면, 타입 2 당뇨병)과 같은 질환을 치료하는데 사용되는 경우, 이들 항체는 현재 이용 가능한 하기 당뇨병 치료제 중의 하나 이상과 조합하여 사용될 수 있다. 이들은 다음을 포함한다: 인슐린, 인슐린 유사체(아래 참조), 비구아니드(메트포르민), 설포닐우레아(예를 들면, 글리부리드, 글리피지드), PPAR 감마 효능제(예를 들면, 피오글리타존, 로시글리타존), 알파 글루코시다제 억제제(예를 들면, 아카보스, 보글리보스), 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 효능제(예를 들면, BYETTA®(엑세나타이드), TRULICITY™(둘라글루타이드), VICTOZA®(리라글루타이드), Lyxumia®(릭시세나타이드), Tanzeum™(알비글루타이드)), 디펩티딜 펩티다제 IV(DPP-4) 억제제(예를 들면, 삭사글립틴(ONGLYZA®), 시탈립틴(JANUVIA®), 및 빌다글립틴(GALVUS®)), 나트륨-글루코스 공동-수송체 2 (SGLT2) 억제제(예를 들면, INVOKANA™(카나글리플로진), FORXIGA®(다파글리플로진), 엠파글리플로진, 이프라글리플로진, 토포글리플로진), SYMLIN®(프람린타이드), 글루카곤 수용체 길항제(예를 들면, 제US8545847호에 기재된 바와 같음), 및 글루카곤 길항제.

특정 관련 양태에서, 조성물은 비-설포닐우레아 분비촉진제, 속효성(예를 들면, 리스프로, 아스파르트, 글루리신) 및 지속성(예를 들면, 디터머 인슐린, 디글루덱 인슐린, 또는 글라진 인슐린을 포함한 인슐린 유사체, 엑센딘-4 폴리펩타이드, 베타 3 아드레날린수용체 효능제, 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제, LDL-콜레스테롤 길항제, 콜레스테릴 에스테르 수송 단백질 길항제(예를 들면, 토르세트라핍, 아나세트라핍, 달세트라핍, 또는 에바세트라핍), 엔도텔린 수용체 길항제, 성장 호르몬 길항제, 인슐린 증감제, 아밀린 모방체 또는 효능제, 칸나비노이드 수용체 길항제, 글루카곤-유사 펩타이드-1 수용체 효능제, 멜라노코르틴, 멜라닌-응집 호르몬 수용체 효능제, SNRI, 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21) 모방체(예를 들면, 제US20110002845호 및 제US20080261236호 참조), 섬유아세포 성장 인자 수용체 1c(FGFR1c) 효능제(예를 들면, 제US20110150901호 참조), 아미노구아니딘과 같지만 이에 제한되지 않는 최종 당화 산물(advanced glycation end product) 형성의 억제제, 및 단백질 티로신 포스파타제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제2 제제를 포함할 수 있다.

관련 양태에서, 제2 치료제는 필요에 따라 기저 질환을 수반하는 증상들을 개선 및/또는 감소시키도록 Cox-2 억제제 등과 같은 비-스테로이드성 소염 약물(NSAIDS)을 포함하는 소염제, 진통제와 같은 하나 이상의 다른 치료제일 수 있다.

제4 측면에서, 본 발명은 표 1에 나타낸 바와 같은 본 발명의 항체 중의 하나 이상, 또는 이러한 항체 중의 하나 이상을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 환자에서 ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성을 중화, 억제, 차단, 폐지, 감소 또는 방해하는 방법을 제공하며, 여기서, ANGPTL8과 관련된 적어도 하나의 활성이 감소되거나 약화된다.

하나의 양태에서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 항-hANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 치료학적 유효량의 약제학적 조성물 및, 임의로 상기한 바와 같은 하나 이상의 추가의 치료제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는 치료방법을 제공한다.

재5 측면에서, 본 발명은 ANGPTL8 억제제/길항제를 투여함을 포함하여, ANGPTL8의 증가된 발현 및/또는 활성과 부분적으로 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 ANGPTL8 억제제/길항제는 ANGPTL8에 특이적인 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 하나의 양태에서, ANGPTL8에 특이적인 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 1로부터의 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR 및 표 1로부터의 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 LCVR을 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 치료 가능한 질환 또는 장애는, 항-hANGPTL8 항체 치료를 하지 않은 경우(예를 들면, ANGPTL8-매개된 질환 또는 장애)와 비교하여, ANGPTL8 활성을 제거, 억제, 감소 또는 달리 방해함으로써 질환과 관련된 적어도 하나의 증상이 개선, 개량, 억제 또는 예방되거나 중증도 또는 발병 빈도가 감소되는 임의의 질환 또는 병태이다. 본 발명의 방법에 의해 치료 가능한 질환 또는 장애의 예는, 예를 들면, 감소된 LPL 활성 및/또는 LPL 결핍, 변형된 ApoC2, ApoE 결핍, 증가된 ApoB, 초저밀도 지단백(VLDL)의 증가된 생산 및/또는 감소된 제거, 특정 약물 치료(예를 들면, 글루코코르티코이드 치료-유도된 이상지질혈증), 임의의 유전적 소인, 식이, 생활 양식 등에 의해 유발되는 고지질혈증, 고지단백혈증 및 죽상경화성 이상지질혈증, 당뇨병성 이상지질혈증을 포함한 이상지질혈증, TG > 1000mg/dL인 중증 고중성지방혈증 및 관련 급성 췌장염을 포함한 고중성지방혈증, 고콜레스테롤혈증, 킬로미크론혈증, 혼합 이상지질혈증(비만, 대사 증후군, 당뇨병 등), 지방이상증, 지방위축증 등과 같은 지질 대사를 수반하는 것들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 방법은 또한 죽상경화증, 동맥류, 고혈압, 협심증, 뇌졸중, 뇌혈관 질환, 울혈성 심부전, 관상 동맥 질환, 심근 경색, 말초 혈관 질환 등과 같은 심혈관 질환 또는 장애; 비알콜성 지방간염(NASH); 급성 췌장염; 당뇨병과 같은 혈당 장애; 비만 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 중성지방혈증, 고중성지방혈증, 고지질혈증, 고지단백혈증, 및/또는 이상지질혈증과 관련되거나 이로부터 야기되는 질환 또는 장애를 예방 또는 치료할 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 대사 증후군 관련 이상지질혈증, 비만을 치료하는데, 또는 체중 증가를 방지하기 위해, 또는 정상 체중을 유지하기 위해 사용될 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명은 표 1로부터의 인간 ANGPTL8에 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 혈중 트리글리세라이드 수준이 낮아지도록 또는 병태 또는 질환이 매개되거나 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되도록 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 혈중 트리글리세라이드 수준을 낮추거나, 높은 혈중 트리글리세라이드 수준과 관련되거나 부분적으로 특징으로 하는 병태 또는 질환, 또는 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하는 방법을 제공한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 고중성지방혈증, 또는 고중성지방혈증과 관련된 적어도 하나의 증상을 치료하기 위해 단독으로 또는 제2 또는 제3 치료제와 조합하여 사용될 수 있거나, 고중성지방혈증을 획득할 위험이 있는 환자, 예를 들면, 고중성지방혈증, 예를 들면 가족성 고중성지방혈증 또는 가족성 이상베타지단백혈증이 발병할 유전적 소인을 갖는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.

다른 병태들이 환자로 하여금 높은 수준의 트리글리세라이드를 갖는 성향을 갖게 할 수 있다. 예를 들면, 베타 차단제, 피임약, 이뇨제, 스테로이드, 또는 타목시펜의 사용과 같은 특정 약물이 트리글리세라이드의 증가된 수준을 야기할 수 있으며, 그리하여 죽상경화증, 뇌졸중, 심장마비, 및 기타 심장 병태와 같은 높은 수준의 트리글리세라이드와 관련된 병태 또는 합병증을 발병할 환자의 기능성을 증가시킬 수 있다.

또한, 비만, 잘 조절되지 않은 당뇨병, 갑상선 기능 저하증, 신장 질환, 또는 알콜 소비를 포함한 특정의 다른 병태가 높은 수준의 트리글리세라이드를 야기할 수 있다.

하나의 양태에서, 항체는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 질환 또는 장애의 개시를 예방하는데, 또는 이러한 질환 또는 장애의 발병 가능성을 예방하는데, 또는 질환 또는 장애의 중증도, 또는 질환 또는 장애와 관련된 적어도 하나의 증상을 완화시키는데 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 단독으로 사용될 수 있거나, 고중성지방혈증과 같지만 이에 제한되지 않는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 질환 또는 병태를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 표준 치료로 알려진 다른 제제 또는 방법과 보조 치료로서 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 이러한 표준 치료는 체액 투여, 또는 혈중 트리글리세라이드, 또는 지질을 낮추거나 체중 감소에 유용한 기타의 약제학적 제제의 투여를 포함할 수 있다.

하나의 양태에서, 본원에 기재된 항체의 사용은 정상 수준의 트리글리세라이드를 달성하여, 높은 트리글리세라이드 수준을 특징으로 하는 질환의 하나 이상의 증상 또는 질환과 관련된 장기 합병증을 개선시키거나 예방하는 효과적인 수단일 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 증가된 수준의 트리글리세라이드를 부분적으로 특징으로 하는 임의의 질환 또는 장애를 치료하는데 사용하기 위한 약제의 제조에 사용될 수 있다.

본 발명의 항체는 급성 환경에서 단기 치료법으로서 사용될 수 있거나, 만성 치료법으로서 장기 사용이 고려될 수 있다.

다른 양태들은 다음의 상세한 설명의 검토로 자명해질 것이다.

도 1은 단일 피하 용량의 H4H15341P가 투여된 인간화 ANGPTL8 마우스에서의 혈청 트리글리세라이드 및 총 콜레스테롤 농도의 평균 +/- SEM을 보여준다. 투여되는 용량은 연구 0일째에 1, 5, 10, 또는 25mg/kg이었다. 통계적 비교는 대조 Ab로부터의 차의 2방향 ANOVA로 수행하였다, ^*p<0.05, ^**p<0.01, ^***p<0.001, ^****p<0.0001
도 2는 1, 5, 10, 또는 25mg/kg의 용량에서 H4H15341P의 1회 피하 용량의 투여 후 순환 항-인간 항체의 수준을 보여준다.
도 3은 대조 항체와 비교하여 ANGPTL8 마우스에서 혈청 지단백 리파제(LPL) 및 간 리파제에 대한 H4H15341P mAb의 효과를 보여준다. 통계는 비쌍체 스튜던트(student's) t-검정에 의해 수행하였다; ^**p<0.01
도 4는 ANGPTL8 마우스에서 지질 내성 시험(lipid tolerance test)에서의 mAb H4H15341P의 효과를 보여준다. H4H15341P mAb의 투여를 대조 항체에 비해 급성 지방 부하 후 트리글리세라이드 수준의 감소에 대해 평가하였다. 통계는 본페로니 사후-검정으로 2방향 ANOVA에 의해 수행하였다; ^****p<0.0001

본 발명을 설명하기 전에, 방법 및 조건은 변할 수 있기 때문에 본 발명이 기재된 특정 방법 및 실험 조건에 제한되지 않는 것으로 이해해야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 본 발명의 범위가 첨부된 청구항에 의해서만 제한되기 때문에 단지 특정 양태를 설명하기 위한 것이지 제한하고자 함은 아니라는 것을 이해해야 한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분양의 통상의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 사용되는 용어 "약"은, 특정의 언급된 수치와 관련하여 사용되는 경우, 값이 언급된 값에서 기껏해야 1%까지 변할 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 사용되는 바와 같이, 표현 "약 100"은 99와 101 및 이들 사이의 모든 값(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.

본원에 기재된 바와 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료들이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 이하에서 설명된다. 본 명세서에서 언급된 모든 특허, 출원 또는 비-특허 간행물은 전문이 본원에 참고로 포함된다.

정의

"안지오포이에틴-유사 단백질 8" 또는 "ANGPTL8"은 안지오포이에틴 계열의 단백질의 구성원이며, 때로는 TD26, RIFL, 리파신(Lipasin), C19orf80 및 베타트로핀(Betatrophin)이라고도 한다. "ANGPTL8"은, 본원에서 사용되는 바와 같이, 서열번호 340의 아미노산 잔기 1-177에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 인간 ANGPTL8을 가리킨다. 신호 서열을 포함한 전장 인간 ANGPTL8 아미노산 서열은 또한 GenBank 수탁 번호 NP_061157.3에서 찾아볼 수 있는 반면, 인간 ANGPTL8을 암호화하는 전장 핵산 서열은 GenBank 수탁 번호 NM_018687.6에서 찾아볼 수 있다. 인간 ANGPTL8의 N-말단 이중-코일 도메인은 서열번호 340의 아미노산 잔기 1-39에 걸쳐 있으며 서열번호 337로도 묘사된다. 본원의 단백질, 폴리펩타이드 및 단백질 단편에 대한 모든 언급은, 비-인간 종으로부터의 것으로 특별히 명시되지 않는 한 개별 단백질, 폴리펩타이드 및 단백질 단편의 인간 버젼을 가리키는 것으로 의도된다. 따라서, 표현 "ANGPTL8"은, 비-인간 종으로부터의 것, 예를 들면, "마우스 ANGPTL8", "원숭이 ANGPTL8" 등으로 명시되지 않는 한, 인간 ANGPTL8을 의미한다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 안지오포이에틴-유사 단백질 3" 또는 "hANGPTL3"은 서열번호 343에 나타낸 핵산 서열 및 서열번호 342의 아미노산 서열을 갖는 ANGPTL3, 또는 이의 생물학적 활성 단편을 가리킨다. 인간 ANGPTL3의 N-말단 이중-코일 도메인은 서열번호 338로 나타내어진다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 안지오포이에틴-유사 단백질 4" 또는 "hANGPTL4"는 서열번호 345에 나타낸 핵산 서열 및 서열번호 344의 아미노산 서열을 갖는 ANGPTL4, 또는 이의 생물학적 활성 단편을 가리킨다. 인간 ANGPTL4의 N-말단 이중-코일 도메인은 서열번호 339로 나타내어진다.

특정 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 제2 ANGPTL8 길항제와 같은 모이어티("면역접합체"), 또는 증가된 트리글리세라이드 수준에 의해 부분적으로 유발되는 질환 또는 병태를 치료하는데 유용한 기타의 치료 모이어티에 접합될 수 있다.

본원에서 사용되는 표현 "항-ANGPTL8 항체"는 단일 특이성을 갖는 1가 항체 뿐만 아니라 ANGPTL8에 결합하는 제1 아암 및 제2 (표적) 항원에 결합하는 제2 아암을 포함하는 이특이성 항체 둘 다를 포함하며, 여기서 항-ANGPTL8 아암은 본원의 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 또는 CDR 서열 중의 어느 것을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 특정 항원(예를 들면, ANGPTL8)에 특이적으로 결합하거나 이와 상호작용하는 적어도 하나의 상보 결정 영역(CDR)을 포함하는 임의의 항원-결합 분자 또는 분자 복합체를 의미한다. 용어 "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 두 개의 중쇄(H) 및 두 개의 경쇄(L)인 네 개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자, 뿐만 아니라 이의 다합체(예를 들면, IgM)를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 V_H로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 세 개의 도메인, C_H1, C_H2 및 C_H3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 V_L로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인(C_L1)을 포함한다. V_H 및 V_L 영역은 골격 영역(FR)으로 불리는 더욱 보존된 영역과 교차배치된 상보 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변 영역으로 더욱 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 다음의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단으로 배열된 세 개의 CDR 및 네 개의 FR로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 양태에서, 항-ANGPTL8 항체(또는 이의 항원-결합부)의 FR은 인간 생식계열 서열과 동일할 수 있거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열은 둘 이상의 CDR의 사이드-바이-사이드 분석(side-by-side analysis)에 기초하여 정의될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 또한 완전 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합부", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원과 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는, 자연 발생적, 효소에 의해 수득 가능한, 합성적 또는 유전적으로 조작된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 단백질가수분해 소화 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 수반하는 재조합 유전 공학 기술과 같은 적합한 표준 기술을 사용하여 완전 항체 분자로부터 유도될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되고/되거나, 예를 들면, 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들면, 파지-항체 라이브러리 포함)로부터 용이하게 이용 가능하거나, 합성될 수 있다. 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적당한 배열로 정렬하거나 코돈을 도입하거나 시스테인 잔기를 생성하거나 아미노산 등을 변형, 부가 또는 결실시키기 위해 DNA를 화학적으로 또는, 예를 들면, 분자 생물학 기술을 사용하여 서열화 및 조작될 수 있다.

항원-결합 단편의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편; (ii)　F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일쇄 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역(예를 들면, CDR3 펩타이드와 같은 단리된 상보 결정 영역(CDR)), 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드를 모방하는 아미노산 잔기로 구성된 최소 인식 단위. 도메인-특이 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들면, 1가 나노바비, 2가 나노바디 등), 소형 모듈 면역약제(SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인과 같은 기타 조작된 분자들이 또한 본원에서 사용되는 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.

항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성의 도메인일 수 있으며 일반적으로 하나 이상의 골격 서열에 인접하거나 이와 틀을 이루는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 관련된 V_H 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, V_H 및 V_L 도메인은 임의의 적당한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이합체성이고 V_H-V_H, V_H-V_L 또는 V_L-V_L 이합체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

특정 양태에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견할 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적이고 예시적인 구성은 다음을 포함한다: (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L-C_L. 상기 열거된 예시적인 구성 중의 어느 것을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 및 불변 도메인은 서로에게 직접 결합될 수 있거나 완전 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 결합될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성 또는 반-가요성 결합을 야기하는 적어도 2개(예를 들면, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상) 아미노산으로 이루어질 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로 및/또는 (예를 들면, 디설파이드 결합(들)에 의해) 하나 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인과 비-공유 결합된 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 구성 중의 어느 것의 당종-이합체 또는 이종-이합체(또는 기타 다합체)를 포함할 수 있다.

완전 항체 분자와 마찬가지로, 항원-결합 단편은 단일특이성 또는 다중특이성(예를 들면, 이특이성)일 수 있다. 항체의 다중특이성 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 두 개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시적인 이특이성 항체 포맷을 포함한 임의의 다중특이성 항체 포맷은 당업계에서 이용 가능한 일상적인 기술을 사용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기에 적합할 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 비-자연 발생적 인간 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 용어는 비-인간 포유동물에서, 또는 비-인간 포유동물의 세포에서 재조합에 의해 생산되는 항체를 포함한다. 용어는 인간 대상체로부터 단리되거나 생성된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명의 항체는, 몇몇 양태에서, 재조합 인간 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체(아래 추가로 기재됨), 재조합, 조합적 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(아래 추가로 기재됨), 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자 이식된 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들면, 문헌 참조; Taylor et al. (1992) Nucl.AcidsRes.20:6287-6295) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱함을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체와 같은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 특정 양태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이생성(또는, 인간 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용되는 경우, 생체내 신체 돌연변이생성)에 적용되며, 따라서, 재조합 항체의 V_H 및 V_L 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 V_H 및 V_L 서열과 관련되지만, 생체내 인간 항체 생식계열 레파터리 내에는 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.

인간 항체는 힌지 이종성과 관련된 두 개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150-160kDa의 안정한 네 개 쇄 작제물을 포함하며, 여기서 이합체는 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 함께 결합된다. 제2 형태에서, 이합체는 쇄간 디설파이드 결합을 통해 연결되지 않으며 공유결합된 경쇄 및 중쇄로 이루어진 약 75-80kDa의 분자가 형성된다(반-항체). 이러한 형태는 친화성 정제 후에도 분리하기가 매우 어렵다.

다양한 무손상(intact) IgG 동형에서 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 동형과 관련된 구조적 차이로 인한 것이지만 이에 제한되지 않는다. 인간 IgG4 힌지의 힌지 영역에서의 단일 아미노산 치환이 제2 형태의 출현을 전형적으로 인간 IgG1 힌지를 사용하여 관찰된 수준으로 상당히 감소시킬 수 있다(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105). 본 발명은, 예를 들면, 생산시, 목적하는 항체 형태의 산출을 개선시키는데 바람직할 수 있는 힌지, C_H2 또는 C_H3 영역에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함한다.

본 발명의 항체는 단리된 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 "단리된 항체"는 이의 자연적인 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 확인되고 분리 및/또는 회수되는 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 성분으로부터, 또는 항체가 자연적으로 존재하거나 자연적으로 생산되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체가 본 발명의 목적을 위해 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포 내의 원위치(in situ) 항체를 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 분리 단계에 적용된 항체이다. 특정 양태에 따르면, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.

본원에 개시된 항-ANGPTL8 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 골격 및/또는 CDR 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을, 예를 들면, 공개 항체 서열 데이터베이스로부터 이용 가능한 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 일단 수득되면, 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편을 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 개선되거나 증진된 길항성 또는 효능성 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등과 같은 하나 이상의 목적하는 특성에 대해 용이하게 시험할 수 있다. 이러한 일반적인 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명 내에 포함된다.

본 발명은 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중의 어느 것의 변이체를 포함하는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 본원의 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중의 어느 것에 비해, 예를 들면, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 갖는 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "차단 항체" 또는 "중화 항체"(또는 "ANGPTL8 활성을 중화시키는 항체")는 ANGPTL8로의 결합 및/또는 상호작용이 ANGPTL8의 적어도 하나의 생물학적 활성의 억제를 초래하는 항체를 가리키는 것으로 의도된다. 예를 들면, 본 발명의 항체는 ANGPTL8의 지단백 리파제 억제 활성을 억제시킬 수 있거나, 이는 ANGPTL8의 LPL 억제 활성의 억제를 통한 것 이외의 메카니즘을 통해 혈장 트리글리세라이드를 낮출 수 있다. ANGPTL8의 생물학적 활성의 이러한 억제는 당업계에 공지된 몇 가지 표준 시험관내 또는 생체내 검정 중의 하나 이상에 의해 ANGPTL8 생물학적 활성의 하나 이상의 지표(indicator)를 측정함으로써 평가할 수 있다. 대안적인 활성은 본 발명의 항체와 관련된 트리글리세라이드 저하 활성이다.

본원에서 사용되는 용어 "표면 플라스몬 공명", 또는 "SPR"은, 예를 들면 BIACORE™ 시스템(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.), 또는 MASS-1 시스템(Sierra Sensors, Hamburg, Germany and Greenville, RI)을 사용하여 바이어센서 기질 내의 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 생체분자 상호작용의 분석을 가능케 하는 광학 현상을 가리킨다.

본원에서 사용되는 용어 "K_D"는 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 가리키는 것으로 의도된다.

용어 "에피토프"는 파라토프로 알려진 항체 분자의 가변 영역에서 특이 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정인자를 가리킨다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체가 항원 상의 상이한 부위에 결합할 수 있으며 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 형태적 또는 선형일 수 있다. 형태적 에피토프는 선형 폴리펩타이드 쇄의 상이한 세그먼트로부터 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 생산된다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 쇄에서 인접한 아미노산 잔기에 의해 생산된 것이다. 특정 상황에서, 에피토프는 항원 ㅅ상의 당류, 포스포릴 그룹, 또는 설포닐 그룹의 모이어티를 포함한다.

용어 "실질적 동일성(substantial identity)" 또는 "실질적으로 동일한(substantially identical)"은, 핵산 또는 이의 단편에 대해 언급되는 경우, 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실로 다른 핵산(또는 이의 상보성 가닥)과 최적으로 정렬될 때, 뉴클레오티드 서열 동일성이 아래에 논의된 바와 같은 FASTA, BLAST 또는 Gap와 같은 서열 동일성의 널리 알려진 알고리즘에 의해 측정하여 뉴클레오티드 염기의 적어도 약 95%, 보다 바람직하게는 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99%임을 나타낸다. 기준 핵산 분자에 대해 실질적 동일성을 갖는 핵산 분자는, 특정 경우에, 기준 핵산 분자에 의해 암호화되는 폴리펩타이드와 동일하거나 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 암호화할 수 있다.

폴리펩타이드에 적용되는 바와 같이, 용어 "실질적 유사성(substantial similarity)" 또는 "실질적으로 유사한(substantially similar)"은 두 개의 펩타이드 서열이, 기본 갭 가중치(default gap weights)를 사용하는 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해서와 같이 최적으로 정렬되는 경우, 적어도 95% 서열 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유함을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환별로 다르다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예를 들면, 전하 또는 소수성)을 지닌 측쇄(R 그룹)를 갖는 다른 아미노산 잔기로 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 둘 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우, 서열 동일성 퍼센트 또는 유사성 정도는 치환의 보존적 성질을 보정하기 위해 상향 조절될 수 있다. 이러한 조절을 수행하기 위한 수단은 당업계의 숙련가들에게 널리 공지되어 있다. 예를 들면, 본원에 참고로 포함된 문헌[Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331]을 참조한다. 유사한 화학적 특성을 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 그룹의 예를 (1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹은 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존적 대체는 문헌[참조; Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-1445]에 개시된 PAM250 로그-우도 행렬에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다. "적당한 보존적" 대체는 PAM250 로그-우드 행렬에서 음수가 아닌 값을 갖는 임의의 변화이다.

폴리펩타이드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존적 아미노산 치환을 포함한 각종 치환, 결실 및 기타 변형에 할당된 유사성의 측정치를 사용하여 유사한 서열과 매칭시킨다. 예를 들면, GCG 소프트웨어는 기본 파라미터를 사용하여 다른 생물 종으로부터의 상동성 폴리펩타이드와 같은 밀접하게 관련된 폴리펩타이드 간의 또는 야생형 단백질 및 이의 돌연변이 단백질 간의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 판정하는데 사용될 수 있는 GAP 및 BESTFIT과 같은 프로그램을 담고 있다. 예를 들면, GCG 버전 6.1 참조. 폴리펩타이드 서열은 또한 기본 또는 권장 파라미터를 갖는 FASTA를 사용하여 비교할 수 있다; GCG 버전 6.1. FASTA(예를 들면, FASTA2 및 FASTA3)의 프로그램은 질의 및 검색 서열 간의 최상의 중복 영역의 정렬 및 서열 동일성 퍼센트를 제공한다(Pearson (2000) supra). 본 발명의 서열을 다른 유기체로부터의 다수의 서열을 함유하는 데이터베이스와 비교하는 경우 또 다른 바람직한 알고리즘은 기본 파라미터를 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예를 들면, 문헌[Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 410 and (1997) NucleicAcidsRes. 25:3389 402]을 참조하며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.

어구 "치료학적 유효량"이란 투여되어 목적하는 효과를 야기하는 양을 의미한다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 좌우될 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업계의 숙련가가 확인할 수 있을 것이다(예를 들면, 문헌 참조; Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).

본원에서 사용되는 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 유익한 또는 목적하는 임상 결과를 수득하기 위한 접근책을 가리킨다. 본 발명의 하나의 양태에서, 유익한 또는 목적하는 임상 결과는 혈중 트리글리세라이드 수준의 개선, 또는 고중성지방혈증 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 증가된 수준의 트리글리세라이드와 관련되거나 이로부터 야기되는 하나 이상의 병태, 질환 또는 증상의 개선을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

pH-의존적 결합

본 발명은 pH-의존적 결합 특성을 갖는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다. 예를 들면, 본 발명의 항-ANGPTL8 항체는 중성 pH에 비해 산성 pH에서 ANGPTL8에 대해 감소된 결합을 나타낼 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 항-ANGPTL8 항체는 중성 pH에 비해 산성 pH에서 ANGPTL8에 대해 증진된 결합을 나타낼 수 있다. 표현 "산성 pH"는 약 6.2 미만, 예를 들면, 약 6.0, 5.95, 5,9, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0, 또는 그 미만의 pH 값을 포함한다. 본원에서 사용되는 표현 "중성 pH"는 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 의미한다. 표현 "중성 pH"는 약 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, 및 7.4의 pH 값을 포함한다.

특정 경우에, "중성 pH에 비해 산성 pH에서 ANGPTL8에 대해 감소된 결합"은 산성 pH에서 ANGPTL8에 대한 항체 결합의 K_D 값 대 중성 pH에서 ANGPTL8에 대한 항체 결합의 K_D 값(또는 이의 반대)의 비의 측면에서 표현된다. 예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 만약 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 3.0 이상의 산성/중성 K_D 비를 나타낸다면 본 발명의 목적을 위해 "중성 pH에 비해 산성 pH에서 ANGPTL8에 대해 감소된 결합"을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 특정의 예시적인 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 산성/중성 K_D 비는 약 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 11.0, 11.5, 12.0, 12.5, 13.0, 13.5, 14.0, 14.5, 15.0, 20.0. 25.0, 30.0, 40.0, 50.0, 60.0, 70.0, 100.0 또는 그 이상일 수 있다.

pH-의존적 결합 특성을 갖는 항체는, 예를 들면, 중성 pH에 비해 산성 pH에서 특정 항원에 대한 감소된(또는 증가된) 결합에 대해 항체 집단을 스크리닝함으로써 수득될 수 있다. 게다가, 아미노산 수준에서 항원-결합 도메인의 변형은 pH-의존적 특징을 갖는 항체를 생산할 수 있다. 예를 들면, (예를 들면, CDR 내의) 항원-결합 도메인의 하나 이상의 아미노산을 히스티딘 잔기로 치환함으로써, 중성 pH에 비해 산성 pH에서 감소된 항원-결합을 갖는 항체가 수득될 수 있다.

Fc 변이체를 포함하는 항- ANGPTL8 항체

본 발명의 특정 양태에 따르면, 예를 들면, 중성 pH에 비해 산성 pH에서 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 증진시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-ANGPTL8 항체가 제공된다. 예를 들면, 본 발명은 Fc 도메인의 C_H2 또는 C_H3 영역에 돌연변이를 포함하는 항-ANGPTL8 항체를 포함하며, 여기서 돌연변이(들)는 산성 환경에서(예를 들면, pH가 약 5.5 내지 약 6.0에 이르는 엔도솜에서) FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시킨다. 이러한 돌연변이는, 동물에게 투여되는 경우, 항체의 혈청 반감기의 증가를 초래할 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비제한적인 예는, 예를 들면, 위치 250(예를 들면, E 또는 Q); 250 및 428(예를 들면, L 또는 F); 252(예를 들면, L/Y/F/W 또는 T), 254(예를 들면, S 또는 T), 및 256(예를 들면, S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 위치 428 및/또는 433(예를 들면, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434(예를 들면, A, W, H, F 또는 Y[N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y])에서의 변형; 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 위치 307 또는 308(예를 들면, 308F, V308F), 및 434에서의 변형을 포함한다. 하나의 양태에서, 변형은 428L(예를 들면, M428L) 및 434S(예를 들면, N434S) 변형; 428L, 259I(예를 들면, V259I), 및 308F(예를 들면, V308F) 변형; 433K(예를 들면, H433K) 및 434(예를 들면, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예를 들면, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예를 들면, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예를 들면, 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 양태에서, 변형은 265A(예를 들면, D265A) 및/또는 297A(예를 들면, N297A) 변형을 포함한다.

예를 들면, 본 발명은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다: 250Q 및 248L(예를 들면, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예를 들면, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예를 들면, M428L 및 N434S); 257I 및 311I(예를 들면, P257I 및 Q311I); 257I 및 434H(예를 들면, P257I 및 N434H); 376V 및 434H(예를 들면, D376V 및 N434H); 307A, 380A 및 434A(예를 들면, T307A, E380A 및 N434A); 및 433K 및 434F(예를 들면, H433K 및 N434F). 상기 Fc 도메인 돌연변이, 및 본원에 개시된 항체 가변 도메인 내의 기타 돌연변이의 모든 가능한 조합이 본 발명의 범위내에 고려된다.

본 발명은 또한 키메라 중쇄 불변(C_H) 영역을 포함하는 항-ANGPTL8 항체를 포함하며, 여기서, 키메라 C_H 영역은 하나 이상의 면역글로불린 동형의 C_H 영역으로부터 유도된 세그먼트를 포함한다. 예를 들면, 본 발명의 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유도된 C_H3 도메인 중의 일부 또는 전부와 조합된 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유도된 C_H2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 C_H 영역을 포함할 수 있다. 특정 양태에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 C_H 영역을 포함한다. 예를 들면, 키메라 힌지는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유도된 "하부 힌지" 서열(EU 넘버링에 따라 위치 228 내지 236의 아미노산 잔기)과 조합된 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유도된 "상부 힌지" 아미노산 서열(EU 넘버링에 따라 위치 216 내지 227의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 양태에 따르면, 키메라 힌지 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 상부 힌지로부터 유도된 아미노산 잔기 및 인간 IgG2 하부 힌지로부터 유도된 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 키메라 C_H 영역을 포함하는 항체는, 특정 양태에서, 항체의 치료적 또는 약동학적 특성에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 효과기 기능을 나타낼 수 있다. (예를 들면, 2013년 2월 1일자로 출원된 U.S. 가특허원 제61/759,578호 참조, 이의 기재내용은 전문이 참고로 포함된다).

항체의 생물학적 특성

본 발명은 높은 친화도로 ANGPTL8에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 예를 들어 본원의 실시예 3 및 4에 정의된 바와 같은 검정 포맷, 또는 실질적으로 유사한 검정으로 마우스 IgG2a Fc C-말단 융합을 갖는 재조합 ANGPTL8 단백질을 사용하여 25℃에서, 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명(SPR)으로 측정하여 약 150nM 미만의 K_D로 인간 또는 원숭이 ANGPTL8에 결합하는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다. 특정 양태에 따르면, 예를 들어 본원의 실시예 3 및 4에 정의된 바와 같은 검정 포맷, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여 표면 플라스몬 공명으로 측정하여 약 9nM 미만, 또는 약 50nM 미만, 약 3nM 미만, 약 2nM 미만, 약 1nM 미만, 약 900pM 미만, 약 500pM 미만, 약 300pM 미만, 약 150pM 미만, 또는 약 90pM 미만의 K_D로 25℃ 또는 37℃에서 인간 또는 원숭이 ANGPTL8에 결합하는 항-ANGPTL8 항체가 제공된다.

본 발명은 또한 예를 들어 본원의 실시예 3에 정의된 바와 같은 검정 포맷, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여 25℃ 또는 37℃에서 표면 플라스몬 공명으로 측정하여 약 100분 초과의 해리 반감기(t½)로 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역으로부터 유도된 서열번호 337의 펩타이드에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 양태에 따르면, 예를 들어 본원의 실시예 3에 정의된 바와 같은 검정 포맷, 또는 실질적으로 유사한 검정을 사용하여 표면 플라스몬 공명으로 측정하여 약 110분 이상, 약 120분 초과, 약 130분 초과, 약 200분 초과, 약 300분 초과, 약 400분 초과, 약 500분 초과, 또는 그 이상의 t½로 25℃에서 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역으로부터 유도된 펩타이드에 결합하는 항-ANGPTL8 항체가 제공된다.

본 발명은 또한 약 0.1mg/kg, 또는 약 1mg/kg, 또는 약 10mg/kg, 또는 약 25mg/kg, 또는 약 50mg/kg, 또는 약 100mg/kg의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 트리글리세라이드를 약 20%까지, 또는 약 30%까지, 또는 약 40%까지, 또는 약 50%까지, 또는 약 60%까지 낮추는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 혈장 트리글리세라이드 저하에 대한 본 발명의 항체의 효과는 투여 후 적어도 7일 내지 투여 후 약 3주, 또는 4주 또는 그 이상까지 지속될 수 있다.

본 발명의 항체는 서열번호 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 266, 274, 282, 290, 298, 306, 314 및 330로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR); 및 서열번호 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 및 322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하거나; 기준 항체와 교차-경쟁할 수 있으며, 여기서, 기준 항체는 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 항체는 서열번호 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/250, 266/250, 274/250, 282/250, 290/250, 306/250, 314/322, 및 330/322로 이루어진 그룹으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함할 수 있다.

본 발명의 항체는

(a) 서열번호 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 268, 276, 284, 292, 300, 308, 316 및 332로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;

(b) 서열번호 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 270, 278, 286, 294, 302, 310, 318, 및 334로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;

(c) 서열번호 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 272, 280, 288, 296, 304, 312, 320 및 336으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인;

(d) 서열번호 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252 및 324로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인;

(e) 서열번호 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 및 326으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인; 및

(f) 서열번호 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256 및 328로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함할 수 있다.

본 발명의 항체는 상기한 생물학적 특징들 중의 하나 이상, 또는 이의 조합을 가질 수 있다. 본 발명의 항체의 생물학적 특징의 상기한 목록이 모든 것을 망라하는 것으로 의도되지는 않는다. 본 발명의 항체의 다른 생물학적 특징들은 본원의 작용 실시예를 포함한 본 기재내용의 검토로부터 당업계의 통상의 숙련가들에게 자명할 것이다.

에피토프 맵핑 및 관련 기술

본 발명의 항체가 결합하는 에피토프는 ANGPTL8 단백질의 3개 이상(예를 들면, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상)의 아미노산의 단일 연속 서열로 이루어질 수 있다. 대안적으로, 에피토프는 ANGPTL8의 다수의 비-연속 아미노산(또는 아미노산 서열)로 이루어질 수 있다.

당업계의 통상의 숙련가에게 공지된 다양한 기술들이 항체가 폴리펩타이드 또는 단백질 내에서 "하나 이상의 아미노산과 상호작용"하는지를 결정하는데 사용될 수 있다. 예시적인 기술은, 예를 들면, 문헌[Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)]에 기재된 것과 같은 일반적인 교차-차단 검정, 알라닌 주사 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석(Reineke, 2004, Methods Mol Biol 248:443-463), 및 펩타이드 절단 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 사용될 수 있다(Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496). 항체와 상호작용하는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 동정하는데 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분석법으로 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적인 용어에서, 수소/중수소 교환법은 관심 단백질을 중수소-표지화한 다음 항체를 중수소-표지화된 단백질에 결합시킴을 포함한다. 그후, 단백질/항체 복합체를 물로 옮겨 수소-중수소 교환이 (중수소-표지된 채로 있는) 항체에 의해 보호된 잔기를 제외한 모든 잔기에서 일어나도록 한다. 항체의 해리 후, 표적 단백질을 프로테아제 절단 및 질량 분광법 분석에 적용하며, 이에 의해 항체와 상호작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기가 드러난다. 예를 들면, 문헌[Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A]을 참조한다.

본 발명은 추가로, 본원에 기재된 특정의 예시적인 항체(예를 들면, 본원의 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 중의 어느 것을 포함하는 항체) 중의 어느 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 본원에 기재된 특정의 예시적인 항체(예를 들면, 본원의 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 중의 어느 것을 포함하는 항체) 중의 어느 것과 ANGPTL8로의 결합을 위해 경쟁하는 항-ANGPTL8 항체를 포함한다.

당업계에 공지되고 본원에 예시된 일반적인 방법들을 사용하여 항체가 기준 항-ANGPTL8 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 항-ANGPTL8 항체와 결합을 위해 경쟁하는지를 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들면, 시험 항체가 본 발명의 기준 항-ANGPTL8 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 알아내기 위해, 기준 항체를 ANGPTL8 단백질에 결합되도록 한다. 그후, 시험 항체가 ANGPTL8 분자에 결합하는 능력을 평가한다. 시험 항체가 기준 항-ANGPTL8 항체와 포화 결합 후 ANGPTL8에 결합할 수 있다면, 시험 항체가 기준 항-ANGPTL8 항체와는 상이한 에피토프에 결합한다고 결론내릴 수 있다. 다른 한편으로, 시험 항체가 기준 항-ANGPTL8 항체와 포화 결합 후 ANGPTL8에 결합할 수 없다면, 시험 항체는 본 발명의 기준 항-ANGPTL8 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 그후 시험 항체의 결합의 관찰된 결여가 사실상 기준 항체와 동일한 에피토프로의 결합으로 인한 것인지 또는 입체 차단(또는 다른 현상)이 관찰된 결합의 결여의 원인인지를 확인하기 위해 추가의 일반적인 실험(예를 들면, 펩타이드 돌연변이 및 결합 분석)을 수행할 수 있다. 이러한 종류의 실험은 ELISA, RIA, Biacore, 유동 세포분석법 또는 당업계에서 이용 가능한 기타의 정량적 또는 정성적 항체-결합 검정을 사용하여 수행할 수 있다. 본 발명의 특정 양태에 따라, 예를 들면, 1, 5, 10, 20 또는 100배 과량의 하나의 항체가 경쟁 결합 검정으로 측정하여 적어도 50%, 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%까지 다른 항체의 결합을 억제한다면 두 개의 항체는 동일한(또는 중첩하는) 에피토프에 결합한다(문헌 참조; 예를 들면, Junghansetal., Cancer Res. 1990:50:1495-1502). 대안적으로, 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 없애는 항원에서의 필수적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소시키거나 없앤다면 두 개의 항체는 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 여겨진다. 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 없애는 아미노산 돌연변이의 하위세트만이 다른 항체의 결합을 감소시키거나 없앤다면 두 개의 항체는 "중첩 에피토프"를 갖는 것으로 여겨진다.

항체가 기준 항-ANGPTL8 항체와 결합을 위해 경쟁하는지(또는 결합을 위해 교차-경쟁하는지) 알아내기 위해, 상기한 결합 방법을 두 가지 방향으로 수행한다: 첫번째 방향에서, 기준 항체를 포화 조건하에서 ANGPTL8 2 단백질에 결합되도록 한 다음 ANGPTL8 분자에 대한 시험 항체의 결합을 평가한다. 두번째 방향에서, 시험 항체를 포화 조건하에서 ANGPTL8 분자에 결합되도록 한 다음 ANGPTL8 분자에 대한 기준 항체의 결합을 평가한다. 두 가지 방향 모두에서, 제1 (포화) 항체만이 ANGPTL8 분자에 결합할 수 있다면, 시험 항체와 기준 항체는 ANGPTL8에 결합을 위해 경쟁하는 것으로 결론지어진다. 당업계의 통상의 숙련가에 의해 인지되는 바와 같이, 기준 항체와 결합을 위해 경쟁하는 항체는 반드시 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합하지 않을 수 있지만, 중접 또는 인접 에피토프에 결합함으로써 기준 항체의 결합을 입체 차단할 수 있다.

인간 항체의 제조

본 발명의 항-ANGPTL8 항체는 완전 인간(비-자연 발생) 항체일 수 있다. 완전 인간 단클론 항체를 포함한 단클론 항체를 생성하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 이러한 공지된 방법들이 인간 ANGPTL8에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 만들기 위해 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다.

VELOCIMMUNE® 기술(예를 들면, US 6,596,541 참조, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE®) 또는 단클론 항체를 생성하기 위한 기타의 공지된 방법을 사용하여, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 알레르겐에 대한 고친화도 키메라 항체를 초기에 분리한다. VELOCIMMUNE® 기술은 마우스가 항원 자극에 반응하여 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생산하도록 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동적으로 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 유전자이식 마우스의 생성을 수반한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 분리하고 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동적으로 연결한다. 그후, DNA를 완전 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현시킨다.

일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스를 관심 항원으로 시험감염(challenge)시키고, 항체를 발현하는 마우스로부터 림프 세포(예를 들면 B-세포)를 회수한다. 림프 세포를 골수종 세포주와 융합시켜 불멸 하이브리도마 세포주를 제조할 수 있으며, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선별하여 관심 항원에 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 동정한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 분리하고 중쇄 및 경쇄의 목적하는 동형 불변 영역에 연결시킬 수 있다. 이러한 항체 단백질은 CHO 세포와 같은 세포에서 생산할 수 있다. 대안적으로, 항원-특이 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA를 항원-특이 림프구로부터 직접 분리할 수 있다.

아래 실험 부분에 기재된 바와 같이, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 단리된 고친화도 키메라 항체를 친화성, 선택성, 에피토프 등을 포함한 목적하는 특성들에 대해 특성화하고 선택한다. 그후, 마우스 불변 영역을 목적하는 인간 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 완전 인간 항체, 예를 들면 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성한다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다양할 수 있지만, 고친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특징은 가변 영역에 남아 있다.

일반적으로, 본 발명의 항체는 전형적으로 고체 상에 또는 용액 상에 고정화된 항원에 결합시켜 측정하는 경우 약 10^-12 내지 약 10^-9 M의 K_D를 갖는 매우 높은 친화도를 갖는다.

생물학적 동등성

본 발명의 항-ANGPTL8 항체 및 항체 단편은 기재된 항체와는 다르지만 인간 ANGPTL8에 결합할 수 있는 능력을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 단백질을 포함한다. 이러한 변이체 항체 및 항체 단편은 모 서열(parent sequence)과 비교하는 경우 아미노산의 하나 이상의 부가, 결실, 또는 치환을 포함하지만, 기재된 항체와 본질적으로 동등한 생물학적 활성을 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명의 항-ANGPTL8 항체-암호화된 DNA 서열은 개시된 서열과 비교하는 경우 뉴클레오티드의 하나 이상의 부가, 결실, 또는 치환을 포함하지만, 본 발명의 항-ANGPTL8 항체 또는 항체 단편에 본질적으로 생물학적으로 동등한(bioequivalent) 항-ANGPTL8 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함한다. 이러한 변이체 아미노산 및 DNA 서열의 예는 상기 논의되어 있다.

두 개의 항원-결합 단백질, 또는 항체는, 예를 들면, 이들이 유사한 실험 조건하에서 동일한 몰 용량에서 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여되는 경우 흡수율 및 흡수 정도가 유의적인 차이를 보이지 않는 약제학적 등가물 또는 약제학적 대체물이라면 생물학적으로 동등한 것으로 간주된다. 일부 항체는 이들이 흡수 정도에서는 동등하지만 흡수율에서는 동등하지 않다면 등가물 또는 약제학적 대체물로 간주될 것이며, 흡수율에 있어서의 이러한 차이가 의도적이고 표시(labeling)에 반영되며 예를 들어 만성 사용시 유효 체내 약물 농도의 달성에 필수적이지 않고 연구되는 특정 의약품에 대해 의학적으로 무의미한 것으로 간주되기 때문에 생물학적으로 동등한 것으로 간주될 수 있다.

하나의 양태에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 이들의 안전성, 순도, 및 효능에 있어서 임상적으로 의미있는 차이가 없다면 생물학적으로 동등하다.

하나의 양태에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 환자가 기준 제품과 생물학적 제품 간에 1회 이상 스위칭되어도 이러한 스위칭 없는 연속 치료법에 비해 면역원성에 있어서의 임상적으로 유의적인 변화, 또는 감소된 효능을 포함한 부작용 위험의 증가가 예상되지 않는다면 생물학적으로 동등하다.

하나의 양태에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 이들 둘 다가 사용 조건 또는 조건들에 대한 공통의 작용 메카니즘 또는 메카니즘들에 의해 이러한 메카니즘이 알려져 있는 정도로 작용한다면 생물학적으로 동등하다.

생물학적 동등성(bioequivalence)은 생체내 및 시험관내 방법으로 입증될 수 있다. 생물학적 동등성 척도는, 예를 들면, (a) 항체 또는 이의 대사산물의 농도가 시간의 함수로서 혈액, 혈장, 혈청, 또는 다른 생물학적 체액 내에서 측정되는 인간 또는 다른 포유동물에서의 생체내 시험; (b) 인간 생체내 생체이용효율 데이터와 상관성이 있고 이를 합리적으로 예측하는 시험관내 시험; (c) 항체(또는 이의 표적)의 적합한 급성 약리학적 효과가 시간의 함수로서 측정되는 인간 또는 다른 포유동물에서의 생체내 시험; 및 (d) 항체의 안전성, 효능, 또는 생체이용효율 또는 생물학적 동등성을 확립하는 잘-조절된 임상 시험을 포함한다.

본 발명의 항-ANGPTL8 항체의 생물학적으로 동등한 변이체는, 예를 들면, 잔기 또는 서열의 다양한 치환을 수행하거나 생물학적 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열을 결실시킴으로써 작제될 수 있다. 예를 들면, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기는 복원시 불필요하거나 부정확한 분자내 디설파이드 브릿지의 형성을 방지하기 위해 결실되거나 다른 아미노산으로 대체될 수 있다. 다른 맥락에서, 생물학적으로 등가인 항체는 항체의 당화 특성을 변형시키는 아미노산 변화를 포함하는 항-ANGPTL8 항체 변이체를 포함할 수 있으며, 예를 들면, 돌연변이 스위치가 당화를 없애거나 제거한다.

다중특이성 항체

본 발명의 항체는 단일특이성 또는 다중특이성(예를 들면, 이특이성)일 수 있다. 다중특이성 항체는 하나의 표적 폴리펩타이드의 상이한 에피토프에 특이적일 수 있거나 하나 이상의 표적 폴리펩타이드에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Tuttet al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kuferet al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244]을 참조한다. 본 발명의 항-ANGPTL8 항체는 다른 기능성 분자, 예를 들면, 다른 펩타이드 또는 단백질에 결합되거나 공동-발현될 수 있다. 예를 들면, 항체 또는 이의 단편은 다른 항체 또는 항체 단편과 같은 하나 이상의 다른 분자 독립체(entities)에 기능적으로 연결되어 (예를 들면, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 결합 등에 의해) 제2 결합 특이성을 갖는 이특이성 또는 다중특이성 항체를 생산할 수 있다.

본 발명은 면역글로불린의 하나의 아암은 인간 ANGPTL8에 결합하고, 면역글로불린의 다른 아암은 제2 항원에 특이적인 이특이성 항체를 포함한다. ANGPTL8-결합 아암은 본원의 표 1에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 또는 CDR 아미노산 서열 중의 어느 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 이특이성 항체 포맷은 제1 면역글로불린 (Ig) C_H3 도메인 및 제2 Ig C_H3 도메인의 사용을 포함하며, 여기서, 제1 및 제2 Ig C_H3 도메인은 적어도 하나의 아미노산에 의해 서로 상이하며, 적어도 하나의 아미노산 차이가 아미노산 차이가 없는 이특이성 항체에 비해 단백질 A에 대한 이특이성 항체의 결합을 감소시킨다. 하나의 양태에서, 제1 Ig C_H3 도메인은 단백질 A에 결합하고 제2 Ig C_H3 도메인은 H95R 변형(IMGT 엑손 넘버링에 의해; EU 넘버링에 의해서는 H435R)과 같은 단백질 A 결합을 감소시키거나 폐지하는 돌연변이를 함유한다. 제2 C_H3은 Y96F 변형(IMGT에 의해; EU에 의해서는 Y436F)를 추가로 포함할 수 있다. 제2 C_H3 내에서 발견될 수 있는 추가의 변형은 다음을 포함한다: IgG1 항체의 경우에 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I(IMGT에 의해; EU에 의해서는 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체의 경우에 N44S, K52N, 및 V82I(IMGT; EU에 의해서는 N384S, K392N, 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우에 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I(IMGT에 의해; EU에 의해서는 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I). 상기한 이특이성 항체 포맷에 대한 변형은 본 발명의 범위내에 고려된다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 또 다른 예시적인 이특이성 포맷은, 제한됨이 없이, 예를 들면, scFv-기반 또는 디아바디 이특이성 포맷, IgG-scFv 융합, 이중 가변 도메인(DVD)-Ig, 콰드로마(Quadroma), 놉스-인투-홀스(knobs-into-holes), 공통 경쇄(예를 들면, 놉스-인투 홀스를 갖는 공통 경쇄 등), CrossMab, CrossFab, (SEED)바디, 류신 지퍼, 듀오바디, IgG1/IgG2, 이중 작용성 Fab (DAF)-IgG, 및 Mab² 이특이성 포맷을 포함한다(예를 들면, 상기 포맷의 검토를 위한 문헌 참조; Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11, 및 이에 인용된 참고문헌). 이특이성 항체는 또한 펩타이드/핵산 접합을 사용하여 작제될 수 있으며, 예를 들면, 여기서 직교 화학 반응성을 갖는 비자연 아미노산이 부위-특이 항체-올리고뉴클레오티드 접합체를 생성하는데 사용되며, 그후 이는 정의된 조성, 원자가 및 기하학적 구조를 갖는 다합체성 복합체로 자가조립된다(예를 들면, 문헌 참조; Kazane et al., J. Am. Chem . Soc. [Epub: Dec. 4, 2012]).

치료 제형 및 투여

본 발명은 본 발명의 항-ANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 개선된 수송, 전달, 내성 등을 제공하는 적합한 담체, 부형제 및 기타 제제로 제형화된다. 모든 제약 화학자에게 알려진 제형집(formulary)에서 다수의 적합한 제형들을 찾아볼 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack PublishingCompany,Easton, PA. 이러한 제형은, 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질 (양이온성 또는 음이온성) 함유 소포(예를 들면, LIPOFECTIN™, Life Technologies, Carlsbad, CA), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 및 카보왁스를 함유하는 반고체 혼합물을 포함한다. 또한, 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참고한다.

환자에게 투여되는 항체의 용량은 환자의 연령 및 신장, 표적 질환, 병태, 투여 경로 등에 따라 다를 수 있다. 바람직한 용량은 전형적으로 체중 또는 체표면적에 따라 계산된다. 성인 환자에서는, 본 발명의 항체를 정상적으로 약 0.01 내지 약 20mg/체중 kg, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3mg/체중 kg의 단일 용량으로 정맥내 투여하는 것이 유리할 수 있다. 병태의 중증도에 따라, 치료의 빈도 및 지속시간을 조절할 수 있다. 항-ANGPTL8 항체를 투여하기 위한 유효 투여량 및 스케쥴은 경험적으로 결정될 수 있다; 예를 들면, 환자 진행을 주기적 평가에 의해 모니터링할 수 있으며, 이에 따라 용량을 조절할 수 있다. 게다가, 용량의 종간 크기조정(interspecies scaling)은 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들면, 문헌 참조; Mordenti et al., 1991, Pharmaceut . Res. 8:1351).

다양한 전달 시스템, 예를 들면, 리포솜으로의 캡슐화, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 돌연변이 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개 세포내이입(예를 들면, 문헌 참조; Wuetal.,1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)이 공지되어 있으며 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 도입 방법은 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외, 및 경구 경로를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 조성물은 통상의 경로에 의해, 예를 들면 주입 또는 농축괴 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 내벽(예를 들면, 구강 점막, 직장 점막 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며 다른 생물학적으로 활성인 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 표준 바늘 및 시린지로 피하 또는 정맥내 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치(pen delivery device)가 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는데 용이하게 이용된다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용 가능하거나 일회용일 수 있다. 재사용 가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 함유하는 교체 가능한 카트리지를 사용한다. 　일단 카트리지 내의 모든 약제학적 조성물이 투여되어 카트리지가 비어 있으면, 비어 있는 카트리지가 용이하게 폐기되고 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 교체될 수 있다. 그후 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에는, 교체 가능한 카트리지가 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내에 저장소에 보유된 약제학적 조성물로 미리 채워진다. 　일단 저장소에 약제학적 조성물이 비워지면, 전체 장치를 폐기한다.

수많은 재사용 가능한 펜 및 주가주사기 전달 장치가 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 사용된다. 예는 몇 가지만 들자면 AUTOPEN™(Owen Mumford,Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, 및 OPTICLIK™(Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 사용되는 일회용 펜 전달 장치의 예는 몇 가지만 들자면 SOLOSTAR™ 펜(Sanofi-Aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™(Eli Lilly), SURECLICK™ 자기주사기(Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN(Dey, L.P.), 및 HUMIRA™ 펜(Abbott Labs, Abbott Park IL)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

특정 상황에서, 약제학적 조성물은 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 하나의 양태에서, 펌프가 사용될 수 있다(참조; Langer, supra;Sefton,1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). 또 다른 양태에서, 중합체성 물질이 사용될 수 있다; 예를 들면, 문헌 참조; Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. 또 다른 양태에서, 제어 방출 시스템은 조성물의 표적 근처에 배치되어, 전신 용량의 단지 일부만을 필요로 할 수 있다(예를 들면, 문헌 참조; Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra,vol.2, pp. 115-138). 다른 제어 방출 시스템이 문헌[참조; Langer, 1990, Science 249:1527-1533]에 의한 검토에 논의되어 있다.

주사 가능한 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 투여형을 포함할 수 있다. 이러한 주사 가능한 제제는 공개적으로 알려진 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들면, 주사 가능한 제제는, 예를 들면, 상기한 항체 또는 이의 염을 주사에 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 오일성 매질에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로는, 예를 들면, 생리 식염수, 글루코스 및 기타 보조제를 함유하는 등장성 용액 등이 있으며, 이는 알콜(예를 들면, 에탄올), 폴리알콜(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예를 들면, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소화 피마자유의 폴리옥시에틸렌 (50mol) 부가물)] 등과 같은 적합한 가용화제와 조합하여 사용될 수 있다. 오일성 매질로는, 예를 들면, 호마유, 대두유 등이 사용되며, 이는 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등과 같은 가용화제와 조합하여 사용될 수 있다. 이렇게 하여 제조된 주사용제는 바람직하게는 적절한 앰플에 충전된다.

유리하게는, 상기한 경구 또는 비경구 사용을 위한 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량에 맞는 적합한 단위 용량의 투여형으로 제조된다. 이러한 단위 용량의 투여형은, 예를 들면, 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰플), 좌제 등을 포함한다. 함유된 상기 항체의 양은 일반적으로 단위 용량으로 투여형당 약 5 내지 약 500mg이다; 특히 주사용제의 형태에서, 상기 항체가 약 5 내지 약 100mg으로 및 다른 투여형에 대해 약 10 내지 약 250mg으로 함유되는 것이 바람직하다.

면역접합체

본 발명은 혈중 트리글리세라이드 또는 지질 수준을 감소시킬 수 있는 제제와 같은 치료 모이어티("면역접합체")에 접합된 인간 항-ANGPTL8 단클론 항체를 포함한다. 항-ANGPTL8 항체에 접합될 수 있는 치료 모이어티의 타입은 치료하고자 하는 병태 및 달성하고자 하는 목적하는 치료 효과를 고려할 것이다. 예를 들면, 고중성지방혈증, 또는 혈중 트리글리세라이드를 낮추고/낮추거나 정상적인 혈중 트리글리세라이드 수준을 유지하는 것이 바람직한 기타의 병태를 치료하기 위해, 제제가 ANGPTL8 항체에 접합될 수 있다. 대안적으로, 목적하는 치료 효과가 고중성지방혈증, 또는 높거나 조절되지 않는 혈중 트리글리세라이드 수준으로부터 야기되는 기타 병태와 관련된 후유증 또는 증상을 치료하는 것이라면, 병태의 후유증 또는 증상을 치료하는데 적합한 제제를 접합시키는 것이 유리할 수 있다. 면역접합체를 형성하는데 적합한 제제의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들면, 제WO 05/103081호를 참조한다.

항체의 치료학적 용도

본 발명의 항체는, 예를 들면, 고중성지방혈증을 앓고 있는 환자에서 혈중 트리글리세라이드 수준을 낮추고 또한 ANGPTL8의 활성을 억제시키는 것이 유리한 광범위한 병태 및 장애를 치료하는데 유용하다. 따라서, 항체는 예를 들면 현재의 치료와 관련된 원치않는 부작용 중의 하나 이상을 감소시키거나 제거하면서 내분비계, 중추 신경계, 말초 신경계, 심혈관계, 폐기관계, 및 위장관계의 질환 또는 병태 또는 관련 증상 또는 후유증을 예방, 치료, 또는 완화시키는데 사용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 항체는, 예를 들면, 감소된 LPL 활성 및/또는 LPL 결핍, 변형된 ApoC2, ApoE 결핍, 증가된 ApoB, 초저밀도 지단백(VLDL)의 증가된 생산 및/또는 감소된 제거, 특정 약물 치료(예를 들면, 글루코코르티코이드 치료-유도된 이상지질혈증), 임의의 유전적 소인, 식이, 생활 양식 등에 의해 유발되는 고지질혈증, 고지단백혈증 및 죽상경화성 이상지질혈증, 당뇨병성 이상지질혈증을 포함한 이상지질혈증, TG > 1000mg/dL인 중증 고중성지방혈증 및 관련 급성 췌장염을 포함한 고중성지방혈증, 고콜레스테롤혈증, 킬로미크론혈증, 혼합 이상지질혈증(비만, 대사 증후군, 당뇨병 등), 지방이상증, 지방위축증 등과 같은 지질 대사를 수반하는 것들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 질환 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 방법은 또한 죽상경화증, 동맥류, 고혈압, 협심증, 뇌졸중, 뇌혈관 질환, 울혈성 심부전, 관상 동맥 질환, 심근 경색, 말초 혈관 질환 등과 같은 심혈관 질환 또는 장애; 급성 췌장염; 비알콜성 지방간염(NASH); 당뇨병(예를 들면, 타입 II 당뇨병)과 같은 혈당 장애; 비만 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 중성지방혈증, 고중성지방혈증, 고지질혈증, 고지단백혈증, 및/또는 이상지질혈증과 관련되거나 이로부터 야기되는 질환 또는 장애를 예방 또는 치료할 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 대사 증후군 관련 이상지질혈증, 비만을 치료하는데, 또는 체중 증가를 방지하기 위해, 또는 정상 체중을 유지하기 위해 사용될 수 있다.

하나의 양태에서, 본 발명은 표 1로부터의 인간 ANGPTL8에 특이적인 하나 이상의 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 혈중 트리글리세라이드 수준이 낮아지도록 또는 병태 또는 질환이 매개되거나 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되도록 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 혈중 트리글리세라이드 수준을 낮추거나, 높은 혈중 트리글리세라이드 수준과 관련되거나 부분적으로 특징으로 하는 병태 또는 질환, 또는 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하는 방법을 제공한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 적어도 하나의 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 고중성지방혈증, 또는 고중성지방혈증과 관련된 적어도 하나의 증상을 치료하기 위해 단독으로 또는 제2 또는 제3 치료제와 조합하여 사용될 수 있거나, 고중성지방혈증을 획득할 위험이 있는 환자, 예를 들면, 고중성지방혈증, 예를 들면 가족성 고중성지방혈증 또는 가족성 이상베타지단백혈증이 발병할 유전적 소인을 갖는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.

다른 병태들이 환자로 하여금 높은 수준의 트리글리세라이드를 갖는 성향을 갖게 할 수 있다. 예를 들면, 베타 차단제, 피임약, 이뇨제, 스테로이드, 또는 타목시펜의 사용과 같은 특정 약물이 트리글리세라이드의 증가된 수준을 야기할 수 있으며, 그리하여 죽상경화증, 뇌졸중, 심장마비, 및 기타 심장 병태와 같은 높은 수준의 트리글리세라이드와 관련된 병태 또는 합병증을 발병할 환자의 기능성을 증가시킬 수 있다.

또한, 비만, 잘 조절되지 않는 당뇨병, 갑상선 기능 저하증, 신장 질환, 또는 알콜 소비를 포함한 특정의 다른 병태가 높은 수준의 트리글리세라이드를 야기할 수 있다.

하나의 양태에서, 항체는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 질환 또는 장애의 개시를 예방하는데, 또는 이러한 질환 또는 장애의 발병 가능성을 예방하는데, 또는 질환 또는 장애의 중증도, 또는 질환 또는 장애와 관련된 적어도 하나의 증상을 완화시키는데 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 단독으로 사용될 수 있거나, 고중성지방혈증과 같지만 이에 제한되지 않는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 질환 또는 병태를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 표준 치료로 알려진 다른 제제 또는 방법과 보조 치료로서 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 이러한 표준 치료는 체액 투여, 또는 혈중 트리글리세라이드, 또는 지질을 낮추거나 체중 감소에 유용한 기타의 약제학적 제제의 투여를 포함할 수 있다.

하나의 양태에서, 본원에 기재된 항체의 사용은 정상 수준의 트리글리세라이드를 달성하여, 높은 트리글리세라이드 수준을 특징으로 하는 질환의 하나 이상의 증상 또는 질환과 관련된 장기 합병증을 개선시키거나 예방하는 효과적인 수단일 수 있다.

본 발명의 항체는 (단기 사용을 위해) 급성 환경에서, 또는 장기 (만성) 사용으로 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

병용 요법

병용 요법은 본 발명의 항-ANGPTL8 항체, 및 본 발명의 항체 또는 본 발명의 항체의 생물학적 활성 단편과 유리하게 조합될 수 있는 추가의 치료제를 포함할 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 항체가 고중성지방혈증과 같은 증가된 트리글리세라이드 수준을 부분적으로 특징으로 하는 질환 또는 병태를 치료하는데 사용하기 위해 고려되는 경우, 트리글리세라이드 수준을 더욱 낮추거나 높은 혈중 트리글리세라이드 수준을 특징으로 하는 질환 또는 병태를 앓고 있는 환자에서 적어도 하나의 증상을 감소시키는 것을 돕기 위해 제2 치료제가 사용될 수 있다. 이러한 제2 치료제는, 예를 들면, 다른 ANGPTL8 길항제(예를 들면, 다른 상이한 항-ANGPTL8 항체 또는 ANGPTL8의 소분자 억제제)로부터 선택될 수 있거나, 중성지방혈증, 또는 증가된 혈중 트리글리세라이드 수준과 관련되거나 이로부터 야기되는 다른 질환 또는 병태를 치료하는데 유용한 다른 치료 모이어티, 또는 증가된 및/또는 비조절된 혈중 트리글리세라이드 수준과 관련된 장기 합병증을 치료하는데 유용한 제제를 포함할 수 있다.

관련 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 (1) 세리바스타틴, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 피타바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴 등과 같은 3-하이드록시-3-메틸글루타릴-코엔자임 A (HMG-CoA) 리덕타제 억제제; (2) 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제; (3) 지단백 이화작용을 증가시키는 니아신; (4) 저밀도 지단백 (LDL) 수준을 감소시키고, 고밀도 지단백(HDL) 및 TG 수준을 개선시키며, 비-치명적 심장 마비의 횟수를 감소시키는 피브레이트 또는 양친매성 카복실산; 및 (5) 22-하이드록시콜레스테롤, 또는 에제티밉 + 심바스타틴과 같은 고정 배합물과 같이 콜레스테롤 제거에 있어서 역할을 하는 LXR 전사 인자의 활성제; 담즙 수지(예를 들면, 콜레스티라민, 콜레스티폴, 콜레세벨람)를 갖는 스타틴, 니아신 + 스타틴의 고정 배합물(예를 들면, 로바스타틴을 갖는 니아신); 또는 오메가-3-지방산 에텔 에스테르(예를 들면, 오마코르(omacor))와 같은 다른 지질 저하제와 같은 제2 치료제의 조합인 조성물을 특징으로 한다.

또한, 제2 치료제는 글루카곤의 다른 억제제/길항제 또는 글루카곤 수용체의 억제제/길항제, 뿐만 아니라 ANGPTL8의 다른 억제제와 같은 다른 분자의 억제제, 뿐만 아니라 지질 대사, 특히, 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드 항상성에 관여하는 ANGPTL3, ANGPTL4, ANGPTL5, ANGPTL6, 아포지단백 C-III(APOC3이라고도 함; 예를 들면, 제US8530439호, 제US7750141호, 제US7598227호에 기재된 APOC3의 억제제 및 또한 ISIS-APOCIIIRx라고도 언급되는 폴라네소르센(volanesorsen) 및 프로단백질 전환효소 서브틸리신/케신 타입 9(PCSK9)와 같은 다른 분자의 억제제 중의 하나 이상일 수 있다. 이러한 분자의 억제제는 이러한 분자에 특이적으로 결합하여 이들의 활성을 차단하는 소 분자, 안티센스 분자 및 항체를 포함한다.

하나의 양태에서, 본 발명의 항-ANGPTL3 항체가 당뇨병(예를 들면, 타입 2 당뇨병)과 같은 질환을 치료하는데 사용되는 경우, 이들 항체는 현재 이용 가능한 하기 당뇨병 치료제 중의 하나 이상과 조합하여 사용될 수 있다. 이들은 다음을 포함한다: 인슐린, 인슐린 유사체(아래 참조), 비구아니드(메트포르민), 설포닐우레아(예를 들면, 글리부리드, 글리피지드), PPAR 감마 효능제(예를 들면, 피오글리타존, 로시글리타존), 알파 글루코시다제 억제제(예를 들면, 아카보스, 보글리보스), 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 수용체 효능제(예를 들면, BYETTA®(엑세나타이드), TRULICITY™(둘라글루타이드), VICTOZA®(리라글루타이드), LYXUMIA®(릭시세나타이드), TANZEUM™(알비글루타이드), 또는 상기한 것 중의 어느 것의 유사체), 디펩티딜 펩티다제 IV(DPP-4) 억제제(예를 들면, 삭사글립틴(ONGLYZA®), 시탈립틴(JANUVIA®), 및 빌다글립틴(GALVUS®)), 나트륨-글루코스 공동-수송체 2 (SGLT2) 억제제(예를 들면, INVOKANA™(카나글리플로진), FORXIGA®(다파글리플로진), 엠파글리플로진, 이프라글리플로진, 토포글리플로진), SYMLIN®(프람린타이드), 글루카곤 수용체 길항제(예를 들면, 제US8545847호에 기재된 바와 같음), 및 글루카곤 길항제.

특정 관련 양태에서, 조성물은 비-설포닐우레아 분비촉진제, 속효성(예를 들면, 리스프로, 아스파르트, 글루리신) 및 지속성(예를 들면, 디터머 인슐린, 디글루덱 인슐린, 또는 글라진 인슐린을 포함한 인슐린 유사체, 엑센딘-4 폴리펩타이드, 베타 3 아드레날린수용체 효능제, 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제, LDL-콜레스테롤 길항제, 콜레스테릴 에스테르 수송 단백질 길항제(예를 들면, 토르세트라핍, 아나세트라핍, 달세트라핍, 또는 에바세트라핍), 엔도텔린 수용체 길항제, 성장 호르몬 길항제, 인슐린 증감제, 아밀린 모방체 또는 효능제, 칸나비노이드 수용체 길항제, 글루카곤-유사 펩타이드-1 수용체 효능제, 멜라노코르틴, 멜라닌-응집 호르몬 수용체 효능제, SNRI, 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21) 모방체(예를 들면, 제US20110002845호 및 제US20080261236호 참조), 섬유아세포 성장 인자 수용체 1c(FGFR1c) 효능제(예를 들면, 제US20110150901호 참조), 아미노구아니딘과 같지만 이에 제한되지 않는 최종 당화 산물 형성의 억제제, 및 단백질 티로신 포스파타제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제2 제제를 포함할 수 있다.

관련 양태에서, 제2 치료제는 필요에 따라 기저 질환을 수반하는 증상들을 개선 및/또는 감소시키도록 Cox-2 억제제 등과 같은 비-스테로이드성 소염 약물(NSAIDS)을 포함하는 소염제, 진통제와 같은 하나 이상의 다른 치료제일 수 있다.

추가의 치료학적 활성 성분(들)은 본 발명의 항-ANGPTL8 항체의 투여 전, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 이러한 투여 섭생은 제2 치료학적 활성 성분과 "병용한" 항-ANGPTL8 항체의 투여로 간주된다.

투여 섭생

본 발명의 특정 양태에 따르면, 다중 용량의 항-ANGPTL8 항체(또는 항-ANGPTL8 항체 및 본원에 언급된 추가의 치료학적 활성제의 조합을 포함하는 약제학적 조성물)는 정의된 시간 경과에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 측면에 따르는 방법은 다중 용량의 본 발명의 항-ANGPTL8 항체룰 대상체에게 연속 투여함을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "연속 투여(sequentially administering)"는 각 용량의 항-ANGPTL8 항체를 상이한 시점에, 예를 들면, 소정의 간격(예를 들면, 수 시간, 일, 주 또는 개월)을 두고 상이한 날짜에 대상체에게 투여함을 의미한다. 본 발명은 단일 초기 용량의 항-ANGPTL8 항체에 이어 하나 이상의 2차 용량의 항-ANGPTL8 항체, 및 임의로 이에 이어 하나 이상의 3차 용량의 항-ANGPTL8 항체를 환자에게 연속 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.

용어 "초기 용량(initial dose)", "2차 용량(secondary dose)", 및 "3차 용량(tertiary dose)"은 본 발명의 항-ANGPTL8 항체의 투여의 시간 순서를 가리킨다. 따라서, "초기 용량" 치료 섭생의 시작시에 투여되는 용량("베이스라인 용량"이라고도 함); "2차 용량"은 초기 용량 이후에 투여되는 용량이고; "3차 용량"은 2차 용량 이후에 투여되는 용량이다. 초기, 2차, 및 3차 용량은 모두 동일한 양의 항-ANGPTL8 항체를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도 측면에서는 서로 상이할 수 있다. 그러나, 특정 양태에서, 초기, 2차, 및/또는 3차 용량에 함유된 항-ANGPTL8 항체의 양은 치료 과정 동안 서로 다르다(예를 들면, 경우에 따라 상향 또는 하향 조절됨). 특정 양태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 또는 5회) 용량이 "부하 용량"으로서 치료 섭생의 시작시에 투여된 다음 후속 용량이 덜 빈번하게 기초하여 투여된다(예를 들면, "유지 용량").

본 발명의 특정의 예시적인 양태에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 바로 앞의 용량 이후 1 내지 26(예를 들면, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½, 또는 그 이상) 주 후에 투여된다. 본원에서 사용되는 어구 "바로 앞의 용량(the immediately preceding dose)"은, 다중 투여의 순서에서, 개입 용량(intervening dose)이 없는 순서로 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항-ANGPTL8 항체의 용량을 의미한다.

본 발명의 이러한 측면에 따르는 방법은 임의 횟수의 2차 및/또는 3차 용량의 항-ANGPTL8 항체를 환자에게 투여함을 포함할 수 있다. 예를 들면, 특정 양태에서, 단지 단일 2차 용량이 환자에게 투여된다. 또 다른 양태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상) 2차 용량이 환자에게 투여된다. 마찬가지로, 특정 양태에서, 단지 단일 3차 용량이 환자에게 투여된다. 또 다른 양태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상) 3차 용량이 환자에게 투여된다. 투여 섭생은 특정 대상체의 생애에 걸쳐, 또는 이러한 치료가 더 이상 치료학적으로 필요하지 않거나 유리하지 않을 때까지 무기한으로 수행될 수 있다.

다중 2차 용량을 수반하는 양태에서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 2차 용량은 바로 앞의 용량 후 1 내지 2주 또는 1 내지 2개월 후에 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, 다중 3차 용량을 수반하는 양태에서, 각각의 3차 용량은 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 3차 용량은 바로 앞의 용량 후 2 내지 12주 후에 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 양태에서, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 섭생의 과정에 걸쳐 변할 수 있다. 투여 빈도는 또한 임상 실험 후 개별 환자의 요구에 따라 담당의에 의해 치료 과정 동안 조절될 수 있다.

항체의 진단적 용도

본 발명의 항-ANGPTL8 항체는 또한 샘플에서, 예를 들면, 진단 목적으로 ANGPTL8을 검출 및/또는 측정하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 항-ANGPTL8 항체, 또는 이의 단편은 ANGPTL8의 이상 발현(예를 들면, 과발현, 저발현, 발현 부족 등)을 특징으로 하는 병태 또는 질환을 진단하는데 사용될 수 있다. ANGPTL8의 예시적인 진단 검정은, 예를 들면, 환자로부터 수득된 샘플을 본 발명의 항-ANGPTL8 항체와 접촉시킴을 포함할 수 있으며, 여기서 항-ANGPTL8 항체는 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나 포획 리간드로서 사용되어 환자 샘플로부터 ANGPTL8 단백질을 선택적으로 분리한다. 대안적으로, 비표지된 항-ANGPTL8 항체가 자체 검출 가능하게 표지된 이차 항체와 함께 진단 용도에 사용될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 ³H, ¹⁴C, ³²P, ³⁵S, 또는 ¹²⁵I와 같은 방사성 동위원소; 플루오레세인 이소티오시아네이트, 또는 로다민과 같은 형광성 또는 화학발광성 모이어티; 또는 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 서양고추냉이 퍼옥시다제, 또는 루시퍼라제와 같은 효소일 수 있다.

샘플 중의 ANGPTL8을 검출 또는 측정하는데 사용될 수 있는 구체적인 예시적 검정은 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 방사면역검정(RIA), 및 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 포함한다.

본 발명에 따르는 ANGPTL8 진단 검정에 사용될 수 있는 샘플은 정상적인 또는 병리적 상태하에서 검출 가능한 양의 ANGPTL8 단백질, 또는 이의 단편을 함유하는 환자로부터 입수 가능한 임의의 조직 또는 체액 샘플을 포함한다. 일반적으로, 건강한 환자(비정상적인 ANGPTL8 수준 또는 활성과 관련된 질환 또는 병태에 걸리지 않은 환자)로부터 수득된 특정 샘플 중의 ANGPTL8 수준을 측정하여 ANGPTL8의 베이스라인 또는 표준 수준을 초기에 확립할 것이다. ANGPTL8의 이러한 베이스라인 수준을 ANGPTL8 관련 질환 또는 병태, 또는 이러한 질환 또는 병태와 관련된 증상을 갖는 것으로 의심되는 개인으로부터 수득된 샘플에서 측정한 ANGPTL8의 수준과 비교할 수 있다.

실시예

본 발명을 기술하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 방법 및 실험 조건에 제한되지 않으며 이러한 방법 및 조건은 변할 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 제한되기 때문에, 본원에서 사용되는 용어는 단지 특정 양태를 기술하기 위한 목적이며, 제한하는 것으로 의도되는 것은 아님을 이해해야 한다. 사용된 수치들(예를 들면, 양, 온도 등)에 대해 정확성을 보장하기 위한 노력들이 이루어져 왔으나 약간의 실험 오차 및 편차를 고려해야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 부근에서의 압력이다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 사용되는 용어 "약"은, 특정의 언급된 수치와 관련하여 사용되는 경우, 값이 언급된 값으로부터 기껏해야 1%까지 변할 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 본원에서 사용되는 표현 "약 100"은 99 및 101과 그 사이의 모든 값들(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.

본원에 기재된 바와 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 이하에서는 바람직한 방법 및 재료가 기술된다. 본원에 언급된 모든 간행물은 전문이 본원에 참고로 포함된다.

실시예 1. 항 - ANGPTL8 항체의 생성

항-ANGPTL8 항체는 VELOCIMMUNE^® 마우스(즉, 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 조작된 마우스)를 C-말단 마우스 IgG2a 태그(서열번호 340 참조)로 발현된 재조합 인간 ANGPTL8을 포함하는 면역원으로 면역화함으로써 수득하였다. 항체 면역 반응을 ANGPTL8-특이 면역검정에 의해 모니터링하였다. 목적하는 면역 반응이 달성된 경우, 전문이 본원에 참고로 포함된 US 제2007/0280945A1호에 기재된 바와 같이 항원-양성 B 세포로부터 수 개의 완전 인간 항-ANGPTL8 항체가 생성되었다.

당해 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항-ANGPTL8 항체의 특정의 생물학적 특성이 아래 제시된 실시예 세트에 상세하게 기재되어 있다.

실시예 2. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 핵산 서열

표 1은 본 발명의 선택된 항-ANGPTL8 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR의 아미노산 서열 식별자를 제시한다. 상응하는 핵산 서열 식별자가 표 2에 제시되어 있다.

항체는 전형적으로 다음의 명명법에 따라 본원에서 지칭된다: 표 1 및 2에 나타낸 바와 같이 Fc 접두사(예를 들면, "H1H", "H1M", "H2M", "H4H" 등)에 이어 숫자 식별자(예를 들면, "15321", "15341", "15350" 등)에 이어 "P" 또는 "N" 접미사. 따라서, 이러한 명명법에 따르면, 항체를 본원에서, 예를 들면, "H4H15321P" 등이라고 할 수 있다. 본원에서 사용되는 항체 명칭에서 접두사 H4H는 항체의 특정 Fc 영역 동형을 나타낸다. 예를 들면, "H4H" 항체는 인간 IgG4 Fc를 갖고, "H1M" 항체는 마우스 IgG1 Fc를 갖고, "H2M" 항체는 마우스 IgG2 Fc를 갖는다(모든 가변 영역은 항체 명칭에서 처음 'H'로 나타내어진 바와 같이 완전 인간이다). 당업계의 통상의 숙련가에 의해 인지되는 바와 같이, 특정의 Fc 동형을 갖는 항체는 상이한 Fc 동형을 갖는 항체로 전환될 수 있지만(예를 들면, 마우스 IgG1 Fc를 갖는 항체는 인간 IgG4를 갖는 항체로 전환될 수 있는 등), 어떠한 경우에든, (CDR을 포함한) 가변 도메인 - 표 1 및 2에 나타낸 숫자 식별자에 의해 나타내어짐 - 은 동일한 채로 있을 것이며, 결합 특성은 Fc 도메인의 성질과는 관계없이 동일하거나 실질적으로 유사할 것으로 예상된다.

실시예 3: ANGPTL8 , ANGPTL3 , 및 ANGPTL4 펩타이드로의 ANGPTL8 항체 결합에 대한 해리 속도 상수(k _d )의 표면 플라스몬 공명( SPR ) 측정

ANGPTL3[WO 2012/174178 A1; Lee et al. (2009) JBC, 284:13735-13745] 및 ANGPTL4[Desai et al. (2007) PNAS, 104:11766-11771]의 N-말단 이중-코일 영역으로의 항체 결합이 ANGPTL 단백질의 LPL 억제 활성을 차단한다는 것은 이미 입증되었다. 당해 실험에서는, ANGPTL8에 대한 항체를 ANGPTL8의 N-말단 영역으로부터의 펩타이드로의 결합에 대해 시험하였다.

인간 ANGPTL8 펩타이드(hANGPTL8 펩타이드, 서열번호 337)로의 ANGPTL8 항체 결합에 대한 해리 속도 상수를 실시간 표면 플라스몬 공명 기반 MASS-1 바이오센서 플랫폼을 사용하여 구하였다. 검정은, ANGPTL8 항체를 센서 표면 상에 포획하고 펩타이드를 항체 표면에 걸쳐 주사하는 포맷을 사용하였다. 인간 ANGPTL3(hANGPTL3 펩타이드, 서열번호 338) 및 인간 ANGPTL4(hANGPTL4 펩타이드, 서열번호 339)의 N-말단 이중-코일 영역으로부터의 펩타이드가 또한 대조군으로서 포함되었다. 또한, ANGPTL4 펩타이드에 결합하는 대조 항체(제US2011/0159015A1호로부터의 H4H268P) 및 음성 동형 대조 항체가 포함되었다. 모든 결합 연구는 25℃에서 10mM HEPES pH 7.4, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20(HBS-ET 시험 완충액) 중에서 수행하였다. HCA 센서 표면을 아민 커플링을 통해 단클론 마우스 항-인간 Fc 항체(GE, # BR-1008-39)로 유도체화하고, 이 표면에 대략 1000RU의 각각의 ANGPTL8 항체 또는 대조 항체를 포획시켰다. 펩타이드 스톡 용액을 HBS-ET 시험 완충액에서 500nM로 되도록 희석시키고 30μL/분의 유량에서 4분 동안 항체-포획된 표면 상에 주사한 다음 HBS-ET 시험 완충액 중에서 10분간 결합 펩타이드를 해리시켰다.

포획된 ANGPTL8 항체로의 펩타이드 결합의 결합 상(association phase)은 1:1 결합 모델에 맞출 수 없다; 따라서, 해리 속도 상수(k _d ) 값만을 Scrubber 2.0c 곡선-맞춤 소프트웨어를 사용하여 실시간 결합 센서그램을 피팅함으로써 계산하였다. 해리 반감기(t½)는 k _d 로부터 다음과 같이 계산하였다:

t½ (분) =

포획된 ANGPTL8 항체, 대조 ANGPTL4 항체, 및 동형 대조 항체로의 ANGPTL8, ANGPTL3, 및 ANGPTL4 N-말단 영역 펩타이드 결합에 대한 결합 파라미터가 표 3 내지 5에 나타나 있다.

결과:

이러한 실험 조건하에서, 블랭크 항-hFc 표면에 대한 500nM의 hANGPTL8, hANGPTL3, 또는 hANGPTL4 펩타이드에 의해 나타나는 최대 비특이 결합 신호는 3 RU이었다. 따라서, 3 RU 비특이 백그라운드보다 3배 높은 시그널을 갖는 결합 상호작용(즉, ≥9RU)이 특이 결합 상호작용으로 간주되었다. 이러한 기준에 기초하여, 9 RU 미만의 항체-펩타이드 결합 신호가 비결합으로 간주되었다(표 1에서 NB).

이러한 결합 연구로부터 ANGPTL8 항체 H4H15321P, H4H15367P2, 및 H4H15345P가 N-말단 영역 ANGPTL8 펩타이드(서열번호 337)에 특이적으로 결합하는 것으로 나타났다. ANGPTL8 항체 중의 어느 것도 hANGPTL3(서열번호 338) 또는 hANGPTL4(서열번호 339) N-말단 영역 펩타이드에 결합되지 않았다.

실시예 4: 표면 플라스몬 공명( SPR )에 의한 전장 인간 및 원숭이 ANGPTL8 단백질로의 H4H15341P 결합에 대한 동력학적 결합 파라미터의 측정

전장 인간 및 시노몰구스 원숭이 ANGPTL8 단백질로의 ANGPTL8 항체 H4H15341P 결합에 대한 평형 해리 상수(K_D)를 실시간 표면 플라스몬 공명-기반 MASS-1 바이오센서 플랫폼을 사용하여 구하였다. 검정을 위해 H4H15341P를 인간 또는 원숭이 ANGPTL8 단백질이 고정되어 있는 센서 표면 위에 주사하였다. 모든 결합 연구는 25℃에서 10mM HEPES pH 7.4, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20 (HBS-ET 시험 완충액) 중에서 수행하였다. HCA 센서 표면을 먼저 이에 염소 항-마우스 IgG2a 다클론 항체(Southern Biotech, # 1080-01)를 아민 커플링함으로써 유도체화한 다음 C-말단 마우스 IgG2a Fc 태그(hANGPTL8-mFc; 서열번호 340)로 발현된 대략 30 RU(결합 단위)의 인간 ANGPTL8 또는 C-말단 마우스 IgG2a Fc 태그(MfANGPTL8-mFc; 서열번호 341)로 발현된 원숭이 ANGPTL8을 포획하였다. 상이한 농도의 ANGPTL8 mAb를 먼저 HBS-ET 시험 완충액(300nM - 1.23nM; 3배 연속 희석)에서 제조한 다음 30μL/분의 유량에서 4분간 ANGPTL8-mFc 포획된 표면 상에 주사한 다음 결합된 mAb를 10분간 HBS-ET 시험 완충액 중에서 해리시켰다.

동력학적 결합(k _a ) 및 해리(k _d ) 속도 상수는 Scrubber 2.0c 곡선-맞춤 소프트웨어를 사용하여 질량 수송 제한을 갖는 1:1 결합 모델에 실시간 결합 센서그램을 피팅시킴으로써 구하였다. 결합 해리 평형 상수(K_D) 및 해리 반감기(t½)는 동력학적 속도 상수로부터 다음과 같이 계산하였다:

K_D (M) =

, 및 t½ (분) =

25℃에서 hANGPTL8-mFc 및 MfANGPTL8-mFc로의 항-ANGPTL8 mAb 결합에 대한 결합 동력학적 파라미터가 표 6에 나타나 있다.

결과:

인간 및 원숭이 ANGPTL8 단백질 둘 다에 결합된 항체 H4H15341은 센서 표면 상에 고정화되었으며 기록된 해리 단계 동안 측정 가능한 해리를 나타내지 않았다. 결합 친화도의 추정치를 수득하기 위해 해리 속도 상수, k_d를 실험 조건하에서 검출 상한치로 고정하였다, 1.0E-05 1/s. hANGPTL8-mFc 및 MfANGPTL8-mFc로의 H4H15341P 결합의 평형 해리 상수(K_D) 값은 각각 117pM 및 86pM 이하로 추정되었다.

실시예 5: 바이오-층 간섭법( BLI )에 의한 인간 및 원숭이 ANGPTL8 결합 특이성의 결정

인간 및 원숭이 ANGPTL8 단백질에 대한 ANGPTL8 항체의 결합을 Octet HTX 바이오센서 플랫폼을 갖는 바이오-층 간섭계(ForteBio, A Division of Pall Life Sciences)를 사용하여 조사하였다. 모든 실험은 1000rpm에서 교반되는 반응 멀티웰 플레이트로 25℃에서 10mM HEPES pH 7.4, 150mM NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 1mg/ml BSA 중에서 수행하였다. 항-mFc(AMC) Octet 바이오센서를 10㎍/mL의 각 단백질을 함유하는 웰에 4분 동안 침지시킴으로써, C-말단 마우스 IgG2a Fc 태그(hANGPTL8-mFc; 서열번호 340)로 생산된 대략 1.6nm의 인간 ANGPTL8 또는 C-말단 마우스 IgG2a Fc 태그(MfANGPTL8-mFc; 서열번호 341)로 생산된 시노몰구스 원숭이 ANGPTL8을 항-mFc(AMC) Octet 바이오센서에 포획시켰다. 동일 조건하에서 동일한 mFc 태그(hLDLR-mFc)를 갖는 음성 대조군 단백질을 또한 AMC 센서에 커플링시켰다. 그후, 네 개의 센서 모두(세 개는 단백질-결합된 것, 하나는 블랭크)를 100nM의 상이한 ANGPTL8 단클론 항체 또는 동형 대조군을 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켰다. 4분 결합 단계 후 관찰된 결합 신호가 표 7에 나타나 있다.

결과:

당해 연구에서 시험된 25개 ANGPTL8 mAbs 중에서, 24개 항체는 무관한 대조군 센서 팁에서의 최대 결합 신호(0.03nm; 이 값은 백그라운드의 배수(fold)로서 결합 신호를 계산하는데 사용되었다)보다 더 높은 결합 신호를 나타내었다. 24개 인간 ANGPTL8 결합제 중에서, 20개는 원숭이 ANGPTL8 단백질에 대해 양성 결합을 나타내었다. 원숭이 ANGPTL8 단백질에 결합하지 않은 4개 항체는 또한 백그라운드 결합 신호의 1-2배 값으로 인간 ANGPTL8 단백질에 대해 낮은 결합 신호를 나타내었다. 인간 ANGPTL8 단백질에 결합하는 24개 항체에 대해, 4개 항체(H4H15362P2, H4H15321P, H4H15330P, H4H15367P2)는 백그라운드보다 10배 높은 결합 신호를 나타내었다. 또 다른 그룹의 12개 항체는 백그라운드보다 5-10배 높은 결합 신호를 나타내었다. 나머지 항체들은 백그라운드 수준보다 1-5배 높은 결합 신호로 인간 ANGPTL8 단백질에 결합하였다.

실시예 6: 인간화 ANGPTL8 마우스에서 순환 트리글리세라이드 수준에 대한 IgG4 항- hANGPTL8 항체의 생체내 효과

혈청 트리글리세라이드(TG) 수준에 대한 항-hANGPTL8 항체의 효과를 인간화 ANGPTL8 마우스에서 알아보았다. 마우스를 실험 7일 전에 예비채혈하고 시험된 각각의 항체에 대해 5마리 마우스를 그룹으로 하였다. 항체를 연구 0일째에 피하 주사에 의해 10mg/kg 용량(무관한 특이성을 갖는 항-hANGPTL8 및 동형-대응 (hIgG4) 대조군)으로 투여하였다. 마우스를 항체 주사 후 연속 일자에 채혈(비공복)하고 TG 수준을 ADVIA® 1800 혈청 화학 분석기(Siemens)에 의해 혈청에서 측정하였다. 모든 시험된 항체에 대해 각 시점에 대한 평균을 계산하였다. 혈청 TG 농도의 (평균±SEM)로서 표현된 결과가 표 8 내지 13에 나타나 있다.

순환 항-hANGPTL8(혈청 Ab)의 수준을 또한 표준 ELISA 검정을 사용하여 측정하였다. 간략하게, 플레이트를 염소 항-인간 Fc 항체(Sigma-Aldrich)로 코팅하여 혈청 Ab를 포획하였다. 그후, 혈청을 플레이트에 가하고 포획된 항체를 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 접합된 염소 항-인간 IgG 항체(Sigma-Aldrich)를 사용하여 화학발광에 의해 검출하였다. (평균±SEM)으로 표현된 결과가 표 14 내지 19에 나타나 있다.

대조군: 동형-대응 대조 Ab를 제공받은 마우스

결과:

순환 TG 수준에 대한 hANGPTL8로의 25 mAbs의 효과를 인간화 ANGPTL8 마우스에서 시험하였다. 항체 H4H15341P는 (대조군 mAb에 비해) 투여 후 순환 TG의 유의적인 감소(평균 68%까지)를 야기하였다.

실시예 7: 인간화 ANGPTL8 마우스에서 hANGPTL8 항체 H4H15341P의 용량 반응

혈청 트리글리세라이드(TG)에 대한 상이한 용량의 hANGPTL8 mAb, H4H15341P의 효과를 인간화 ANGPTL8 마우스에서 평가하였다. 마우스를 실험 7일전에 예비채혈하고 시험된 각 용량에 대해 각각 5마리 마우스를 그룹으로 두었다. 연구 0일째에 단일-용량 피하 주사에 의해 H4H15341P를 1, 5, 10 및 25mg/kg으로 투여하고 무관한 특이성을 갖는 동형-대응 (hIgG4) 대조군을 10mg/kg로 투여하였다. 마우스를 항체 주사후 2, 7, 14 및 21일에 채혈(비공복)하고 TG 수준을 ADVIA® 1800 화학 시스템(Siemens)에 의해 혈청에서 측정하였다. 각 시점에 대해 평균을 계산하였다. 혈청 TG 농도의 (평균±SEM)로서 표현된 결과가 도 1에 나타나 있다.

순환 항-인간 항체(혈청 Ab)의 수준을 표준 ELISA 검정을 사용하여 측정하였다. 간략하게, 플레이트를 염소 항-인간 Fc 항체(Sigma-Aldrich)로 코팅하여 혈청 Ab를 포획하였다. 그후, 혈청을 플레이트에 가하고 포획된 항체를 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 접합된 염소 항-인간 IgG 항체(Sigma-Aldrich)를 사용하여 화학발광에 의해 검출하였다. (평균±SEM)으로 표현된 결과가 도 2에 나타나 있다.

대조 Ab는 동형-대응 대조 Ab를 제공받은 마우스를 가리킨다.

결과:

순환 TG 및 콜레스테롤 수준에 대한 4가지 상이한 용량의 H4H15341P(항-hANGPTL8)의 효과를 인간화 ANGPTL8 마우스에서 시험하였다. H4H15341P는 혈청 TG의 용량-의존적이고 지속적이며 유의적인 감소를 야기하였으며(평균 66%까지, 대조군 mAb에 비해) 5mg/kg이 최저 유효량이다. 총 콜레스테롤 수준에 대한 효과는 관찰되지 않았다.

실시예 8. 인간화 ANGPTL8 마우스에서 hANGPTL8 mAb 치료 후의 지단백 리파제 (LPL) 활성의 평가

LPL 활성에 대한 hANGPTL8 mAb(H4H15341P) 투여의 효과를 인간화 ANGPTL8 마우스에서 평가하였다. 마우스를 실험 7일 전에 예비-채혈하고 시험된 각각의 mAb에 대해 각각 5마리 마우스를 그룹으로 두었다. H4H15341P 및 대조 Ab를 연구 0일째에 단일-용량 피하 주사에 의해 10mg/kg로 투여하였다. 연구 4일째에, 마우스에게 꼬리 정맥을 통해 250U/kg으로 정맥내 주사에 의해 헤파린을 복용시켰으며 이는 혈관 내피 표면을 통해 LPL을 방출시킨다. 5분 후 마우스를 안구뒤 부비강으로부터 채혈하고 포스트-헤파린 혈장을 수집하고 분별하여 헤파린-세파로스 크로마토그래피를 사용하여 간 리파제로부터 LPL을 분리하였다. 포스트-헤파린 혈장을 0.25M NaCl, 20% 글리세롤, 1% BSA, 10mM 인산나트륨, pH 6.5로 평형화된 GE Akta Prime에 의해 제어되는 1.0-ml 헤파린-세파로스 HiTrap 컬럼(GE Healthcare) 상에 부하하였다. 컬럼을 10ml의 평형 완충액으로 세척하고 30ml NaCl 구배(20% 글리세롤, 1% BSA, 10mM 인산 나트륨, pH 6.5 중의 0.25-1.5M)로 용출시켰다. 생성된 분획을 간 리파제에 의해 혼수(pool)시키고 LPL 피크 및 리파제 활성을 Invitrogen Enzchek 리파제 기질(cat#E33955)을 사용하여 분석하였다. 동력학적 반응을 482nm 여기/518nm 방출에서 Molecular Devices SpectraMax i3 플레이트 판독기 상에서 판독하였다. 상대 형광 단위(RFU)(평균±SEM)로서 표현된 결과가 도 3에 나타나 있다. 대조 Ab는 동형-대응 음성 대조 Ab를 제공받은 마우스를 가리킨다.

결과

결과는 인간화 ANGPTL8 마우스로의 H4H15341P(항-hANGPTL8)의 투여가 LPL 활성의 유의적인 증가를 초래하며 간 리파제 활성에는 영향을 미치지 않음을 보여주었다.

실시예 9. hANGPTL8 mAb H4H15341P 로 처리된 인간화 ANGPTL8 마우스에서의 지질 내성 시험

트리글리세라이드 제거(clearance)에 대한 mAb H4H15341P로의 ANGPTL8 억제의 효과를 급성 지방 부하(acute fat loading)에 의해 평가하였다. 인간화 ANGPTL8 마우스를 실험 8일 전에 예비-채혈하고 시험된 각각의 mAb에 대해 각각 6마리 마우스를 그룹으로 두었다. H4H15341P 및 동형-대응 대조 Ab를 연구 0일째에 단일-용량 피하 주사에 의해 10mg/kg으로 투여하였다. 연구 4일째에 마우스를 2.5 ㎕/체중 g의 20% 인트라리피드(Baxter Healthcare, IL)의 정맥내 투여 후 4시간 동안 공복시켰다. 차후의 시점에서 꼬리 정맥으로부터 수집된 혈액에서 TG 수준을 평가하였다. TG 농도의 (평균±SEM)로서 표현된 결과가 도 4에 나타나 있다. 대조 Ab는 동형-대응 음성 대조 Ab를 제공받은 마우스를 가리킨다.

결과

인간화 ANGPTL8 마우스로의 H4H15341P(항-hANGPTL8)의 투여는 대조 항체에 비해 급성 지방 부하 후 유의적으로 더 낮은 TG 수준을 야기한다. 이러한 데이터는 H4H15341P가, ANGPTL8을 차단함으로써, 순환으로부터 가속된 TG 제거를 촉진시킴을 시사한다.

실시예 10. 안지오포이에틴 -유사 단백질 8에 대한 HiSense 선형 에피토프 맵핑

HiSense 선형 펩타이드를 사용하는 Pepscan 분석을 사용하여 항체 H4H15341P 및 H4H15367P2에 대한 선형 에피토프를 확립하였다. 연구를 Pepscan Presto BV, (Zuidersluisweg 2, 8243RC Lelystad, The Netherlands)에서 수행하였다. 모든 Pepscan 데이터는 사내 개발되고 PostgreSQL 저장 백-앤드를 기반으로 한 전매 데이터베이스 응용프로그램인 소프트웨어 패키지 Peplab™에 저장된다.

펩타이드의 합성

표적 분자의 에피토프를 재작제하기 위해, 펩타이드의 라이브러리를 합성하였다. 아미노 관능화된 폴리프로필렌 지지체는 전매 친수성 중합체 제형으로 그라프팅시킨 다음 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)와 N하이드록시벤조트리아졸(HOBt)을 사용하여 t-부틸옥시카보닐-헥사메틸렌디아민(BocHMDA)과 반응시키고, 이어서 트리플루오로아세트산(TFA)을 사용하여 Boc-그룹을 절단함으로써 수득하였다. 표준 Fmoc 펩타이드 합성을 사용하여, 맞춤 개질된 JANUS 액체 취급 스테이션(Perkin Elmer)에 의해 아미노-관능화 고체 지지체 상에서 펩타이드를 합성하였다.

어레이로의 안지오포이에틴-유사 단백질 8의 커플링

표적 단백질을 양성 대조군으로서 미니-카드 상에 커플링시켰다. 안지오포이에틴-유사 단백질 8(hANGPTL8-mFc)을 어레이에 커플링시키기 위해, 두 개의 가교결합제를 사용하였다 - m-말레이미도벤조일-N하이드록시석신이미드 에스테르(MBS) 및 글루타르알데히드(GDA). MBS의 경우 40㎕의 hANGPTL8-mFc를 1㎕의 MBS(2 mg/ml)와 혼합하고, 실온에서 45분 동안 배양한 다음 링커 모티프 CGGCGG(서열번호 346)를 함유하는 위치에서 어레이에 적용하였다. GDA 연결을 위해, 인산염 완충액(pH 5.0) 중의 0.05% GDA를 어레이에 적용하고, 실온에서 4시간 동안 배양한 다음 인산염 완충액 pH 8.0 중의 5 또는 20㎍/ml 농도에서 hANGPTL8-mFc를 Gly만을 함유하는 위치에서 어레이에 가하여 유리 N 말단에 커플링되도록 하였다.

ELISA 스크리닝

각각의 합성된 펩타이드로의 항체의 결합을 PEPSCAN-기반 ELISA에서 시험하였다. 펩타이드 어레이를 일차 항체 용액과 배양하였다(4℃에서 밤새). 세척 후, 펩타이드 어레이를 25℃에서 1시간 동안 1/1000 희석도의 적합한 항체 퍼옥시다제 접합체(염소 항-인간 HRP 접합체, Southern Biotech, catalog no. 2010-05)와 배양하였다. 세척 후, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 20㎕/ml의 3% H₂O₂를 가하였다. 1시간 후, 발색을 측정하였다. 발색은 전하 결합 소자(CCD) - 카메라 및 영상 처리 시스템으로 정량하였다.

스크리닝 상세

항체 결합은 항체의 농도 및 ELISA 완충액 중의 경쟁 단백질의 양과 성질을 포함한 인자들의 조합에 따라 좌우된다. 또한, 예비-코팅 조건(실험 샘플과 배양 전 펩타이드 어레이의 특정 처리)이 결합에 영향을 미친다. 이러한 상세는 다음과 같이 요약된다:

표지 희석 샘플 완충액 예비-컨디셔닝

H4H15341P 1㎍/ml 100% SQ 100% SQ

H4H15367P2 1㎍/ml 100% SQ 100% SQ

음성 동형 대조군 1㎍/ml 100% SQ 100% SQ

Pepscan 완충액 및 예비컨디셔닝(SQ)에 대해, 숫자는 경쟁 단백질(말 혈청 및 난백 알부민의 조합)의 상대적인 양을 나타낸다.

데이터 처리

CCD 카메라로부터 수득된 값들은 표준 96-웰 플레이트 ELISA-판독기와 유사하게 0 내지 3000mAU에 이른다. 결과를 정량하고 Peplab 데이터베이스에 저장하였다. 가끔, 웰은 공기-방울을 함유하여 거짓-양성 값을 초래하며, 카드를 수동으로 검사하여 공기-방울에 의해 야기된 값들은 0으로 스코어링한다.

합성 품질 관리

합성된 펩타이드의 품질을 확인하기 위해, 별도의 양성 및 음성 대조군 펩타이드 세트를 동시에 합성하였다. 이들을 항체 57.9로 스크리닝하였다(Posthumus, et al. 1990 J Virol 64:3304-3309).

결과

펩타이드의 설계

다음의 펩타이드 세트를 표적 서열로 합성하였다:

인간 ANGPTL8, 성숙 서열, NP_061157.3으로부터의 아미노산 22-198

1 APMGGPELAQ HEELTLLFHG TLQLGQALNG VYRTTEGRLT KARNSLGLYG 50

51 RTIELLGQEV SRGRDAAQEL RASLLETQME EDILQLQAEA TAEVLGEVAQ 100

101 AQKVLRDSVQ RLEVQLRSAW LGPAYREFEV LKAHADKQSH ILWALTGHVQ 150

151 RQRREMVAQQ HRLRQIQERL HTAALPA 177 (서열번호 347)

항체를 ANGPTL8의 전체 서열을 커버하는 일련의 15-mer 펩타이드 결합에 대해 시험하였으며, 각각의 펩타이드는 다음으로부터 하나의 아미노산으로 상쇄된다. 미세 에피토프 분석을 위해 일련의 시험된 펩타이드 내에 이중 알라닌("AA") 치환이 또한 포함되었다.

세트 1. 모방체: 선형. 타입: LIN

설명 하나의 잔기의 상쇄를 갖는 안지오포이에틴-유사 단백질 8의 표적 서열로부터 유도된 길이 15의 펩타이드

서열 (처음 10개)

APMGGPELAQHEELT (서열번호 348)

PMGGPELAQHEELTL (서열번호 349)

MGGPELAQHEELTLL (서열번호 350)

GGPELAQHEELTLLF (서열번호 351)

GPELAQHEELTLLFH (서열번호 352)

PELAQHEELTLLFHG (서열번호 353)

ELAQHEELTLLFHGT (서열번호 354)

LAQHEELTLLFHGTL (서열번호 355)

AQHEELTLLFHGTLQ (서열번호 356)

QHEELTLLFHGTLQL (서열번호 357)

세트 2. 모방체: 선형. 타입: LIN.AA

설명 세트 1의 펩타이드이지만, 위치 10 및 11의 잔기가 Ala로 대체됨. 원래의 Ala가 어느 위치에서 발생하는 경우, 이는 Gly로 대체된다. 이 세트에서 펩타이드의 순서는 무작위적이었다. 어레이 상의 실제 순서가 나타나 있다.

서열 (처음 10개)

TAEVLGEVAAGQKVL (서열번호 358)

VYRTTEGRLAAARNS (서열번호 359)

GVYRTTEGRAAKARN (서열번호 360)

VQRLEVQLRAGWLGP (서열번호 361)

LTGHVQRQRAAMVAQ (서열번호 362)

VLKAHADKQAAILWA (서열번호 363)

LRDSVQRLEAALRSA (서열번호 364)

RREMVAQQHAARQIQ (서열번호 365)

VSRGRDAAQAARASL (서열번호 366)

AYREFEVLKGAADKQ (서열번호 367)

스크리닝의 원 ELISA 결과를 제공하고 플롯팅(박스 플롯, 데이터는 나타내지 않음)하여 각 데이터세트를 서술하고 각 데이터세트 내에 평균 ELISA 신호, 분포, 및 이상치(outlier)를 나타내었다. 실험 조건(항체의 양, 차단 강도 등)에 따라, ELISA 데이터의 상이한 분포가 수득되었다.

항체 H4H15367P2

고 엄격 조건하에 시험되는 경우, 항체 H4H15367P2는 서열 1APMGGPELAQHEELT15(서열번호 348)로 구성된 단 하나의 선형 펩타이드에만 열렬히 결합되었다. 이 샘플을 동일한 조건하에서 두번 시험하였으며 되풀리해서 동일한결과가 산출되었다. 항체 H4H15367P2는 또한 양성 대조군으로서 어레이에 커플링된 안지오포이에틴-유사 단백질 8에 강하게 결합되었다. 흥미롭게도, GDA 커플링과 비교할 때 MBS를 사용하여 커플링된 표적 단백질에서 다소 더 약한 결합이 수득되었다.

항체 H4H15341P

고 엄격 조건하에 시험되는 경우, 항체 H4H15341P는 공통 서열 ₁₅₀QRQRREMVAQ₁₅₉(서열번호 368)을 함유하는 일련의 선형 펩타이드에 열렬히 결합되었다. 세트 1(원래의 선형 에피토프 모방체) 및 세트 2(이중 Ala 돌연변이체) 상에서 기록된 강도 프로파일의 비교는 잔기 R154, E155, 및 Q159가 항체 결합을 위해 필수적임을 나타낸다. 항체 H4H15341P는 또한 고정화에 관계없이 양성 대조군으로서 어레이에 커플링된 안지오포이에틴-유사 단백질 8에 강하게 결합되었다.

음성 동형 대조군

음성 동형 대조군은 어레이 상에 존재하는 어떠한 펩타이드에도 결합하지 않았다. 게다가, 양성 대조군으로서 어레이에 커플링된 안지오포이에틴-유사 단백질 8과 어떠한 검출 가능한 결합도 기록되지 않았다. 음성 동형 대조군을 Pepscan ELISA에서 사용된 염소 항-인간 이차 접합체로 추가로 시험하였다. 항체는 이러한 이차에 의해 인지될 수 있다.

결론

당해 연구를 위해 제공된 세 가지 항체를 HiSense 펩타이드 어레이에서 시험하였다. 두 개의 항체에 대해 잠정적인 선형 에피토프를 확립할 수 있었다. 반복된 배양에도 불구하고, 항체 음성 동형 대조군은 어레이에 결합하지 않았다. 이 연구에서 확인된 코어 잠정적 에피토프가 다음과 같이 열거된다:

항체 코어 에피토프

H4H15341P

(서열번호 368)

H4H15367P2

(서열번호 348)

음성 동형 대조군

따라서, 항체 H4H15341P 및 H4H15367P2는 각각 C- 및 N-말단 내의 별도의 선형 서열을 인지한다. MBS 커플링으로 항체 H4H15367P2에 대해 수득된 신호는 GDA 커플링에서보다 덜 하다는 사실은, 극한 N 말단에서의 이의 국지화와 함께, N 말단 아민 자체가 에피토프의 일부일 수 있음을 나타낸다. 또한, 항체 H4H15341P의 경우 이중 알라닌 돌연변이체가 결합에 매우 중요한 잔기를 정확히 찾아내는 역할을 하였다(위에 옅은 회색으로 명암을 넣은 잔기).

항체 H4H15341P는 안지오포이에틴-유사 단백질 8의 C-말단 영역을 표적으로 하는 반면, H4H15367P2는 바로 N-말단을 표적으로 한다. 항체 음성 동형 대조군은 어레이에 결합하지 않았다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> ANTI-ANGPTL8 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 0431.21PCT <150> 62/202,366 <151> 2015-08-07 <160> 368 <170> KopatentIn 3.0 <210> 1 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaattgggt gcgacaggcc 120 actggacaag ggcttgagtg gatggggtgg atgaacccta acggtgataa cacaggctat 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accggggaca cctccataag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaggga 300 atttgggggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 2 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys 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agtcaaaaat gaagaggtaa agaatatgtc acttgaactc 360 aactcaaaac ttgaaagcct cctagaagaa aaaattctac ttcaacaaaa agtgaaatat 420 ttagaagagc aactaactaa cttaattcaa aatcaacctg aaactccaga acacccagaa 480 gtaacttcac ttaaaacttt tgtagaaaaa caagataata gcatcaaaga ccttctccag 540 accgtggaag accaatataa acaattaaac caacagcata gtcaaataaa agaaatagaa 600 aatcagctca gaaggactag tattcaagaa cccacagaaa tttctctatc ttccaagcca 660 agagcaccaa gaactactcc ctttcttcag ttgaatgaaa taagaaatgt aaaacatgat 720 ggcattcctg ctgaatgtac caccatttat aacagaggtg aacatacaag tggcatgtat 780 gccatcagac ccagcaactc tcaagttttt catgtctact gtgatgttat atcaggtagt 840 ccatggacat taattcaaca tcgaatagat ggatcacaaa acttcaatga aacgtgggag 900 aactacaaat atggttttgg gaggcttgat ggagaatttt ggttgggcct agagaagata 960 tactccatag tgaagcaatc taattatgtt ttacgaattg agttggaaga ctggaaagac 1020 aacaaacatt atattgaata ttctttttac ttgggaaatc acgaaaccaa ctatacgcta 1080 catctagttg cgattactgg caatgtcccc aatgcaatcc cggaaaacaa agatttggtg 1140 ttttctactt gggatcacaa agcaaaagga 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tcagcatctg 420 caaagccagt ttggcctcct ggaccacaag cacctagacc atgaggtggc caagcctgcc 480 cgaagaaaga ggctgcccga gatggcccag ccagttgacc cggctcacaa tgtcagccgc 540 ctgcaccggc tgcccaggga ttgccaggag ctgttccagg ttggggagag gcagagtgga 600 ctatttgaaa tccagcctca ggggtctccg ccatttttgg tgaactgcaa gatgacctca 660 gatggaggct ggacagtaat tcagaggcgc cacgatggct cagtggactt caaccggccc 720 tgggaagcct acaaggcggg gtttggggat ccccacggcg agttctggct gggtctggag 780 aaggtgcata gcatcacggg ggaccgcaac agccgcctgg ccgtgcagct gcgggactgg 840 gatggcaacg ccgagttgct gcagttctcc gtgcacctgg gtggcgagga cacggcctat 900 agcctgcagc tcactgcacc cgtggccggc cagctgggcg ccaccaccgt cccacccagc 960 ggcctctccg tacccttctc cacttgggac caggatcacg acctccgcag ggacaagaac 1020 tgcgccaaga gcctctctgg aggctggtgg tttggcacct gcagccattc caacctcaac 1080 ggccagtact tccgctccat cccacagcag cggcagaagc ttaagaaggg aatcttctgg 1140 aagacctggc ggggccgcta ctacccgctg caggccacca ccatgttgat ccagcccatg 1200 gcagcagagg cagcctccta g 1221 <210> 346 <211> 6 <212> PRT <213> 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Claims (19)

1. 기준 항체(reference antibody)로서 ANGPTL8 상의 동일한 에피토프에 결합하고/하거나 ANGPTL8로의 결합을 위해 기준 항체와 경쟁하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 기준 항체는 각각 서열번호 164 / 166 / 168 / 172 / 174 / 176 또는 316 / 318 / 320 / 324 / 326 / 328의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 / HCDR2 / HCDR3 / LCDR1 / LCDR2 / LCDR3 도메인을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
2. 제1항에 있어서, 기준 항체가
   a) 서열번호 164 / 166 / 168 / 172 / 174 / 176의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 / HCDR2 / HCDR3 / LCDR1 / LCDR2 / LCDR3 도메인을 포함하고 서열번호 368로 정의된 바와 같은 에피토프에 특이적으로 결합하거나;
   b) 서열번호 316 / 318 / 320 / 324 / 326 / 328의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 / HCDR2 / HCDR3 / LCDR1 / LCDR2 / LCDR3 도메인을 포함하고 서열번호 348로 정의된 바와 같은 인간 ANGPTL8의 N-말단 영역에서 선형 에피토프에 특이적으로 결합하는, 항체.
3. 제1항에 있어서, 기준 항체가
   a) 완전 인간 단클론 항체이거나;
   b) 서열번호 338의 인간 ANGPTL3 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역에, 또는 서열번호 339의 인간 ANGPTL4 펩타이드의 N-말단 이중-코일 영역에 결합하지 않거나;
   c) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정되는 바와 같이 약 150pM 미만의 K_D로 25℃에서 인간 ANGPTL8에 결합하고 약 90pM 미만의 K_D로 25℃에서 원숭이 ANGPTL3에 결합하거나;
   d) 약 10mg/kg의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 트리글리세라이드 수준을 약 68%까지 낮추거나;
   e) 약 5mg/kg 내지 약 25mg/kg 범위의 용량으로 피하 투여되는 경우 포유동물에서 약 7일 내지 21일에 이르는 기간 동안 트리글리세라이드 수준을 낮추거나;
   f) 서열번호 162 또는 314의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하거나;
   g) 서열번호 170 또는 322의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하거나;
   h) 기준 항체와 교차-경쟁하며, 여기서, 기준 항체가 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 중의 어느 것으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 경쇄 가변 영역(LCVR) 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 재조합에 의해 생산된 인간 항체인, 항체.
5. 인간 ANGPTL8에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산 분자로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (a) 서열번호 162 또는 314에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보 결정 영역(CDR); 또는 (b) 서열번호 170 또는 322에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
6. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
7. ANGPTL8의 활성 억제를 필요로 하는 환자에서 ANGPTL8의 활성을 억제하는 방법으로서, 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 중의 하나 이상, 또는 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 중의 하나 이상을 포함하는 약제학적 조성물을 환자에게 투여함을 포함하고, 여기서 ANGPTL8의 적어도 하나의 활성이 감소되거나 약화되는, 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 투여가 상기 환자에서 혈중 트리글리세라이드 수준의 감소를 야기하는, 방법.
9. 증가된 수준의 ANGPTL8 활성과 부분적으로 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이, ANGPTL8 억제제/길항제를 투여함을 포함하고, 여기서 ANGPTL8 억제제/길항제는 ANGPTL8에 특이적인 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
10. 제9항에 있어서, ANGPTL8에 특이적인 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 162/170 또는 314/322에 제시된 바와 같은 HCVR/LCVR 서열을 포함하는, 방법.
11. 높은 혈중 트리글리세라이드 수준과 관련되거나, 이를 부분적으로 특징으로 하는 병태 또는 질환, 또는 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이, 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 제6항의 약제학적 조성물을, 혈중 트리글리세라이드 수준이 낮아지도록, 병태 또는 질환이 매개되도록, 또는 병태 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 빈도 또는 중증도에 있어서 완화 또는 감소되도록, 이를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하는, 방법.
12. 제11항에 있어서, 상기 병태 또는 질환이 고지질혈증, 고지단백혈증, 이상지질혈증(죽상경화성 이상지질혈증, 당뇨병성 이상지질혈증, 혼합 이상지질혈증), 고중성지방혈증, TG > 1000mg/dL인 중증 고중성지방혈증 및 관련 급성 췌장염, 고콜레스테롤혈증, 킬로미크론혈증, 비만, 대사 증후군, 당뇨병, 지방이상증; 변형된 ApoC2, ApoE 결핍, 증가된 ApoB, 초저밀도 지단백(VLDL)의 증가된 생산 및/또는 감소된 제거에 의해 야기되거나 유발되는 지방위축증; 비알콜성 지방간염(NASH), 특정 약물 치료(예를 들면. 글루코코르티코이드 치료-유도된 이상지질혈증), 및 증가된 트리글리세라이드 또는 지질을 야기하는 임의의 유전적 소인, 식이, 또는 생활 양식으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
13. 제11항에 있어서, 상기 병태 또는 질환이 죽상경화증, 동맥류, 고혈압, 협심증, 뇌졸중, 뇌혈관 질환, 울혈성 심부전, 관상 동맥 질환, 심근 경색, 및 말초 혈관 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 심혈관 질환 또는 장애인, 방법.
14. 제11항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 제2 치료제와 병용하여 환자에게 투여되는, 방법.
15. 제14항에 있어서, 상기 제2 치료제가 3-하이드록시-3-메틸글루타릴-코엔자임 A(HMG-CoA) 리덕타제 억제제; 아포지단백 C-III 억제제; 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제; 니아신; 피브레이트 또는 양친매성 카복실산; LXR 전사 인자의 활성제(예를 들면, 22-하이드록시콜레스테롤); 또는 고정 배합물(예를 들면, 에제티미브 + 심바스타틴); 담즙 수지를 갖는 스타틴(예를 들면, 콜레스티라민, 콜레스티폴, 콜레세벨람), 니아신 + 스타틴의 고정 배합물(예를 들면, 로바스타틴을 갖는 니아신); 및 기타 지질 저하제(예를 들면, 오메가-3-지방산 에틸 에스테르)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 HMG-CoA 리덕타제 억제제가 세리바스타틴, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 피타바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 및 프라바스타틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
17. 제14항에 있어서, 상기 제2 치료제가 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3), 안지오포이에틴-유사 단백질 4(ANGPTL4), 안지오포이에틴-유사 단백질 5(ANGPTL5), 안지오포이에틴-유사 단백질 6(ANGPTL6) 및 인간 프로단백질 전환효소 서브틸리신/케신 타입 9(PCSK9)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원-결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
18. 제14항에 있어서, 상기 제2 치료제가 인슐린, 인슐린 유사체, 비구아니드(메트포르민), 설포닐우레아(예를 들면, 글리부리드, 글리피지드), PPAR 감마 효능제(예를 들면, 피오글리타존, 로시글리타존), 알파 글루코시다제 억제제(예를 들면, 아카보스, 보글리보스), 글루카곤-유사 펩타이드 1(GLP-1) 효능제(예를 들면, BYETTA®(엑세나타이드), TRULICITY™(둘라글루타이드), VICTOZA®(리라글루타이드), LYXUMIA®(릭시세나타이드), TANZEUM™(알비글루타이드)), 또는 상기한 것들 중의 어느 것의 유사체, 디펩티딜 펩티다제 IV(DPP-4) 억제제(예를 들면, 삭사글립틴(ONGLYZA®), 시탈립틴(JANUVIA®), 및 빌다글립틴(GALVUS®)), 나트륨-글루코스 공동-수송체 2(SGLT2) 억제제(예를 들면, INVOKANA™(카나글리플로진), FORXIGA®(다파글리플로진), 엠파글리플로진, 이프라글리플로진, 토포글리플로진), SYMLIN®(프람린타이드), 글루카곤 수용체 길항제, 비-설포닐우레아 분비촉진제, 인슐린 유사체(예를 들면, 속효성 리스프로, 아스파르트, 글루리신 및 지속성 디터머 인슐린, 디글루덱 인슐린, 또는 글라진 인슐린), 엑센딘-4 폴리펩타이드, 베타 3 아드레날린수용체 효능제, 콜레스테롤 흡수 및/또는 담즙산 재흡수의 억제제, LDL-콜레스테롤 길항제, 콜레스테릴 에스테르 수송 단백질 길항제(예를 들면, 토르세트라핍, 아나세트라핍, 달세트라핍, 또는 에바세트라핍), 엔도텔린 수용체 길항제, 성장 호르몬 길항제, 인슐린 증감제, 아밀린 모방체 또는 효능제, 칸나비노이드 수용체 길항제, 멜라노코르틴, 멜라닌-응집 호르몬 수용체 효능제, SNRI, 섬유아세포 성장 인자 21(FGF21) 모방체, 섬유아세포 성장 인자 수용체 1c(FGFR1c) 효능제, 최종 당화 산물(advanced glycation end product) 형성의 억제제(예를 들면, 아미노구아니딘), 및 단백질 티로신 포스파타제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
19. 제14항에 있어서, 상기 제2 치료제가 진통제 또는 소염제인, 방법.

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