CN112088166A - 抗PfRH5抗体和其抗原结合片段 - Google Patents

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Abstract

本发明包含与恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)特异性结合的抗体和其抗原结合片段、所述抗体和所述抗原结合片段的组合物以及制备此类抗体、片段和组合物的方法。用于治疗、预防或诊断恶性疟原虫感染和疟疾的方法和组合物也是本发明的一部分。

Description

抗PfRH5抗体和其抗原结合片段
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C§119(e)要求于2018年3月26日提交的美国临时专利申请第62/648,259号的权益，所述美国临时专利申请通过全文引用的方式并入本文中。
对序列表的参考
本申请将以计算机可读形式提交的序列表10437WO01-Sequence并入，其创建于2019年3月22日，含有122,791字节。
技术领域
本发明部分涉及与PfRH5特异性结合的抗体及其抗原结合片段，以及涉及其用于治疗或预防恶性疟原虫感染的方法。
背景技术
侵袭宿主红细胞是恶性疟原虫生命周期和疟疾病理学的重要步骤。多种抗疟药物针对无性血液阶段，然而，其效力受到抗药性菌株出现的威胁(Arrow等人,《拯救生命，争取时间：抗药性时代疟疾药物的经济性(Saving Lives,Buying Time:Economics of MalariaDrugs in an Age of Resistance)》,国家学术出版社(美国)(National Academies Press(US)),254-266(2004),PMID:25009879；和Wright等人,“具有红细胞basigin和阻断抗体的疟疾侵袭蛋白RH5的结构(Structure of malaria invasion protein RH5 witherythrocyte basigin and blocking antibodies)”,《自然(Nature)》,515:427-430,(2014),PMID:25132548)。此外，抗疟药物表现出不同的药代动力学特性。一些抗疟药物(如青蒿素和奎宁)可以在一个寄生虫生命周期内被快速清除。在另一方面，疏水性和亲脂性抗疟药物排除缓慢，但它们的特点是吸收速率不同，这取决于摄入的膳食脂肪量(Arrow等人)。
恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)是红细胞配体超级家族(其被称为网织红细胞结合样蛋白(RBL))的成员。PfRH5与红细胞结合，可能是寄生虫血液阶段生长所必需的，并与红细胞侵袭的物种取向有关。有证据表明红细胞上PfRH5的一种受体是Ok血型抗原，即basigin(BSG；CD147)。
发明内容
本发明提供了一种抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，其(i)与恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)多肽上的相同表位特异性结合作为抗体或其抗原结合片段；或(ii)与抗体或其抗原结合片段竞争与PfRH5多肽结合，所述抗体或其抗原结合片段包括
(a)重链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354；和/或(b)轻链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306。例如，在本发明的一个实施例中，所述抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括(i)(a)重链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354；和/或(ii)轻链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306。例如，在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括：(a)重链免疫球蛋白可变区，其包括与SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或(b)轻链免疫球蛋白可变区，其包括与SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括(a)重链免疫球蛋白，其包括包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示并且与SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的所述氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或(b)轻链免疫球蛋白，其包括包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示并且与SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。本发明还包含抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，其包括：重链免疫球蛋白，所述重链免疫球蛋白包括CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y S F T S Y W(SEQ IDNO:4)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y P G D S D T(SEQ ID NO:6)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R Q D I T G T T G F D Y(SEQ ID NO:8)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y A(SEQ ID NO:20)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G S N K(SEQ ID NO:22)；以及CDR-H3，所述所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K E R L F G V V S Y Y G M D V(SEQ ID NO:24)；以及CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S S Y Y(SEQ ID NO:36)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S T(SEQ ID NO:38)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R Q D R E A L F D Y(SEQ ID NO:40)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F R F D D Y A(SEQ ID NO:52)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N W N S G G K(SEQ ID NO:54)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：AK D R G I A A R L L S R D A F D M(SEQ ID NO:56)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：S F T F S S Y G(SEQ ID NO:68)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：IS Y D G S N K(SEQ ID NO:70)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E V RR Y Y Y Y G M D V(SEQ ID NO:72)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T FD D Y A(SEQ ID NO:84)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S W N S G D I(SEQID NO:86)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D T L S G T G T T W Y Y F DY(SEQ ID NO:88)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ IDNO:100)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G S N K(SEQ ID NO:102)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A Q D G S S A I Y Y F Y G M D V(SEQ IDNO:104)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:116)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G S N K(SEQ ID NO:118)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R G E H Y Y G S G P F D P(SEQ ID NO:120)；或者CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S F G Y Y(SEQ ID NO:132)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S I(SEQ ID NO:134)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E R D Y G D Y F D Y(SEQ ID NO:136)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:148)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G S N K(SEQ ID NO:150)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V(SEQ ID NO:152)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S T Y G(SEQ ID NO:164)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G T N K(SEQ ID NO:166)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V(SEQ ID NO:168)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:180)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S F D E R N K(SEQ ID NO:182)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A SE V G Y S F G H D A F D I(SEQ ID NO:184)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F N N Y A(SEQ ID NO:196)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S G SG D S T(SEQ ID NO:198)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D Q G L YY Y G S G S F D Y(SEQ ID NO:200)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F AF S D S A(SEQ ID NO:212)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I R N K A N R FA T(SEQ ID NO:214)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R H G H D T L T E GY G M D V(SEQ ID NO:216)；CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G T F S S Y T(SEQ ID NO:228)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I I P L Y G T A(SEQ IDNO:230)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A S T L E L R A F D A F D I(SEQ ID NO:232)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S G G Y Y(SEQID NO:236)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S T(SEQ ID NO:238)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R A P P Y N W F D Y(SEQ ID NO:240)；CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S D Y Y(SEQ ID NO:244)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S N S G N T Q(SEQ ID NO:246)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：T R E G L E Y S S S E P F D Y(SEQ ID NO:248)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T F T A Y Y(SEQ ID NO:252)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N P N N G D T(SEQ ID NO:254)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D D L A A A G I G W F D S(SEQ ID NO:256)；CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F D D Y A(SEQ ID NO:260)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：IS W N S E S I(SEQ ID NO:262)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K A PY S G T Y F E Y F R H(SEQ ID NO:264)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：GF T F S S Y G(SEQ ID NO:268)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G SN K(SEQ ID NO:270)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D D W N Y D AF D I(SEQ ID NO:272)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S G YY(SEQ ID NO:276)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S T(SEQ ID NO:278)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R V D Y G S G S S F D Y(SEQ IDNO:280)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T F T S Y G(SEQ ID NO:284)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S G F N G R T(SEQ ID NO:286)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D G L E K L G D Y(SEQ ID NO:288)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S N S G(SEQ ID NO:292)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W H D G S Y K(SEQ ID NO:294)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D D Y Y A S G T S V D V(SEQ ID NO:296)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T F T G Y Y(SEQ ID NO:300)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N P N S G G T(SEQ ID NO:302)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E E V D D F W S G Y L D Y(SEQ ID NO:304)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F A V N G D Y(SEQ ID NO:316)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y S S G N T(SEQ ID NO:318)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A RD F P P M S G A D Y(SEQ ID NO:320)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G YT L T E L S(SEQ ID NO:324)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：F D P E H G KI(SEQ ID NO:326)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A T F Y N W N S Y YF G M D V(SEQ ID NO:328)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S YA(SEQ ID NO:332)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：V S G S A D I T(SEQ IDNO:334)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D K V Y N W N Y G I Y Y GM D V(SEQ ID NO:336)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S S YY(SEQ ID NO:340)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S T(SEQ ID NO:342)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：R Q G R W E R E N F D Y(SEQ IDNO:344)；或CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：D E S F S D Y Y(SEQ ID NO:348)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I T H S G S T(SEQ ID NO:350)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R G G D Y G G L L D Y(SEQ ID NO:352)；和/或轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I R N Y(SEQ ID NO:12)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQID NO:14)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P F T(SEQ IDNO:16)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I N R D(SEQ ID NO:28)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:30)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y K N L P Y T(SEQ ID NO:32)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q R I G S S(SEQ ID NO:44)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：Y A S(SEQ ID NO:46)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：H Q S S T L P T(SEQ IDNO:48)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D V S S Y(SEQ ID NO:60)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:62)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q H L N T Y P Y T(SEQ ID NO:64)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I S N Y(SEQ ID NO:76)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:78)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y N N L P L T(SEQID NO:80)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q G I S S Y(SEQ ID NO:92)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:94)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q V N S Y P L T(SEQ ID NO:96)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I N N Y(SEQ ID NO:108)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：AA S(SEQ ID NO:110)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：L Q Y N S Y H P T(SEQ ID NO:112)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S N Y(SEQ ID NO:124)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:126)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S S P L T(SEQ ID NO:128)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S N(SEQ ID NO:140)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:142)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y N N WP L T(SEQ ID NO:144)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ IDNO:156)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:158)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P L T(SEQ ID NO:160)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I S N Y(SEQ ID NO:172)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:174)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q YD N I P I T(SEQ ID NO:176)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I S N Y(SEQ ID NO:188)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:190)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y D N F P L T(SEQ ID NO:192)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:204)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:206)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P F T(SEQ ID NO:208)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q SI S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；或CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S S Y(SEQ ID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)。在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括(1)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y S F T S Y W(SEQ IDNO:4)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y P G D S D T(SEQ ID NO:6)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R Q D I T G T T G F D Y(SEQ ID NO:8)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I R N Y(SEQ ID NO:12)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:14)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P F T(SEQ ID NO:16)；(2)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y A(SEQ ID NO:20)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G S N K(SEQ ID NO:22)；CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K E R L F G V V S Y Y G M D V(SEQ ID NO:24)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I NR D(SEQ ID NO:28)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:30)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y K N L P Y T(SEQ ID NO:32)；(3)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S S Y Y(SEQ ID NO:36)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：IY Y S G S T(SEQ ID NO:38)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R Q D R EA L F D Y(SEQ ID NO:40)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q R I G S S(SEQ ID NO:44)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：Y A S(SEQ ID NO:46)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：H Q S S T L P T(SEQ ID NO:48)；(4)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F R F D D Y A(SEQ IDNO:52)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N W N S G G K(SEQ ID NO:54)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D R G I A A R L L S R D A F D M(SEQID NO:56)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D V S S Y(SEQ ID NO:60)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:62)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q HL N T Y P Y T(SEQ ID NO:64)；(5)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：S F T F S S Y G(SEQ ID NO:68)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G S N K(SEQ ID NO:70)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E V R R Y Y Y Y G M D V(SEQ ID NO:72)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I S N Y(SEQ ID NO:76)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:78)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y N N L P L T(SEQID NO:80)；(6)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F D D Y A(SEQ ID NO:84)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S W N S G D I(SEQ ID NO:86)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D T L S G T G T T W Y Y F D Y(SEQ ID NO:88)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q G I SS Y(SEQ ID NO:92)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:94)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q V N S Y P L T(SEQ ID NO:96)；(7)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:100)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S YD G S N K(SEQ ID NO:102)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A Q D G S SA I Y Y F Y G M D V(SEQ ID NO:104)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I N N Y(SEQ ID NO:108)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:110)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：L Q Y N S Y H P T(SEQ ID NO:112)；(8)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T FS S Y G(SEQ ID NO:116)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G S N K(SEQ ID NO:118)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R G E H Y Y G S G PF D P(SEQ ID NO:120)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S N Y(SEQ ID NO:124)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:126)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S S P L T(SEQ ID NO:128)；(9)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S F G Y Y(SEQ ID NO:132)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S I(SEQ ID NO:134)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E R D Y G D Y F D Y(SEQ IDNO:136)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S N(SEQ ID NO:140)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:142)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q YN N W P L T(SEQ ID NO:144)；(10)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:148)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G S N K(SEQ ID NO:150)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V(SEQ ID NO:152)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:156)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:158)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T PL T(SEQ ID NO:160)；(11)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S T Y G(SEQ ID NO:164)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W Y D G T N K(SEQ ID NO:166)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V(SEQ ID NO:168)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D I S N Y(SEQ ID NO:172)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:174)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y D N I P I T(SEQID NO:176)；(12)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQ ID NO:180)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S F D E R N K(SEQ ID NO:182)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A S E V G Y S F G H D A F D I(SEQ ID NO:184)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q D IS N Y(SEQ ID NO:188)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：D A S(SEQ ID NO:190)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y D N F P L T(SEQ ID NO:192)；(13)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F N N Y A(SEQ ID NO:196)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S G S G D S T(SEQ ID NO:198)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D Q G L Y Y Y G S G S F D Y(SEQ ID NO:200)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S SY(SEQ ID NO:204)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:206)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P F T(SEQ ID NO:208)；(14)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F A F S D S A(SEQ ID NO:212)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I RN K A N R F A T(SEQ ID NO:214)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R HG H D T L T E G Y G M D V(SEQ ID NO:216)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ IDNO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(15)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G T F S S Y T(SEQ ID NO:228)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I I P LY G T A(SEQ ID NO:230)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A S T L E L RA F D A F D I(SEQ ID NO:232)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(16)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S IS S G G Y Y(SEQ ID NO:236)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y Y S G S T(SEQ ID NO:238)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R A P P Y N W F D Y(SEQ ID NO:240)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(17)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S D Y Y(SEQID NO:244)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S N S G N T Q(SEQ ID NO:246)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：T R E G L E Y S S S E P F D Y(SEQ ID NO:248)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：AA S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(18)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T F T A Y Y(SEQID NO:252)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N P N N G D T(SEQ ID NO:254)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D D L A A A G I G W F D S(SEQ ID NO:256)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(19)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F D D Y A(SEQID NO:260)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S W N S E S I(SEQ ID NO:262)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K A P Y S G T Y F E Y F R H(SEQ ID NO:264)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(20)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y G(SEQID NO:268)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S Y D G S N K(SEQ ID NO:270)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D D W N Y D A F D I(SEQ IDNO:272)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q SY S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(21)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S G Y Y(SEQ ID NO:276)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I YY S G S T(SEQ ID NO:278)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R V D Y GS G S S F D Y(SEQ ID NO:280)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(22)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T FT S Y G(SEQ ID NO:284)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I S G F N G R T(SEQ ID NO:286)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D G L E K L G D Y(SEQ ID NO:288)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q S Y S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(23)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S N S G(SEQ IDNO:292)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I W H D G S Y K(SEQ ID NO:294)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D D Y Y A S G T S V D V(SEQ ID NO:296)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S I S S Y(SEQ ID NO:220)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：A A S(SEQ ID NO:222)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q SY S T P P I T(SEQ ID NO:224)；(24)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T F T G Y Y(SEQ ID NO:300)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I N P N S G G T(SEQ ID NO:302)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R E E V D D F W S G Y L D Y(SEQ ID NO:304)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S S Y(SEQ ID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S SP W T(SEQ ID NO:312)；(25)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F A V N G D Y(SEQ ID NO:316)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I Y S S G N T(SEQ ID NO:318)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R D F P P M S G A D Y(SEQ ID NO:320)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：QS V S S S Y(SEQ ID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ IDNO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)；(26)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G Y T L T E L S(SEQ ID NO:324)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：F D P E H G K I(SEQ ID NO:326)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A T F Y N W N S Y Y F G M D V(SEQ ID NO:328)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S SY(SEQ ID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)；(27)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G F T F S S Y A(SEQ ID NO:332)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：V SG S A D I T(SEQ ID NO:334)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A K D K VY N W N Y G I Y Y G M D V(SEQ ID NO:336)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S S Y(SEQID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)；(28)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：G G S I S S S S Y Y(SEQ ID NO:340)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I YY S G S T(SEQ ID NO:342)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R Q G R WE R E N F D Y(SEQ ID NO:344)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S S Y(SEQ ID NO:308)；CDR-L，所述CDR-L包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)；和/或(29)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：CDR-H1，所述CDR-H1包括以下氨基酸序列：D E S FS D Y Y(SEQ ID NO:348)；CDR-H2，所述CDR-H2包括以下氨基酸序列：I T H S G S T(SEQID NO:350)；以及CDR-H3，所述CDR-H3包括以下氨基酸序列：A R G G D Y G G L L D Y(SEQ ID NO:352)；以及包括轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：CDR-L1，所述CDR-L1包括以下氨基酸序列：Q S V S S S Y(SEQ ID NO:308)；CDR-L2，所述CDR-L2包括以下氨基酸序列：G A S(SEQ ID NO:310)；以及CDR-L3，所述CDR-L3包括以下氨基酸序列：Q Q Y G S S P W T(SEQ ID NO:312)。例如，在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括(a)重链免疫球蛋白，所述重链免疫球蛋白包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列和/或(b)轻链免疫球蛋白，所述轻链免疫球蛋白包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列。在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白是多特异性的(例如双特异性的、多互补位的或双互补位的)。
在本发明的一个实施例中，所述抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)包括下列性质中的一种或多种：抑制人红细胞中恶性疟原虫的生长；抑制人红细胞中恶性疟原虫菌株D10、Dd2、7G8、W2-mef、3D7、HB3、FCR-1/FVO、Cam3.II或RF7的生长；阻断PfRH5多肽与basigin多肽的结合；例如，在约6.67微摩尔的浓度下，引起恶性疟原虫(例如，菌株FCR-1/FVO)对热灭活的人血清或夜猴血清的最大生长抑制(例如，按寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性测定)(例如，体外)分别比其对非热灭活的人血清或夜猴血清的最大生长抑制高约1-10％(例如，1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％)(相对于未感染的红细胞)；当暴露于所述抗原结合蛋白时，不会在恶性疟原虫(例如，菌株3D7)中诱导PfRH5突变(例如，在体外，在逐渐增加抗体浓度约45天后(例如，从约1XEC50到约110XEC50))；和/或与缺少氨基末端残基M1-Y139并包含残基K140-Q526但缺少K247-L295并具有例如突变T216A和T299A的PfRH5结合，其中所述抗原结合蛋白包括如本文所示的氨基酸序列。
本发明还包含一种复合物，其包括与恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)多肽结合的抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)。例如，PfRH5在例如受试者(例如，人)体内的细胞(如恶性疟原虫(例如，恶性疟原虫的裂殖子))的表面上。在本发明的一个实施例中，PfRH5位于恶性疟原虫(例如，红细胞中的裂殖子)的表面。
本发明还提供了一种用于制备本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)或其免疫球蛋白链的方法，所述方法包括：(a)将编码所述抗原结合蛋白的免疫球蛋白链的一种或多种多核苷酸引入宿主细胞(例如，中国仓鼠卵巢细胞)；(b)在有利于所述多核苷酸表达的条件下培养所述宿主细胞；(c)任选地，从所述宿主细胞和/或所述宿主细胞生长的培养基中分离所述抗原结合蛋白或免疫球蛋白链。作为这种方法的产物的抗原结合蛋白或免疫球蛋白链也构成本发明的一部分。
一种包括本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)的侧流免疫层析抗原检测试纸条是本发明的一部分。用于使用所述试纸条检测来自受试者和/或受试者身体的血液样品中的恶性疟原虫的方法也是本发明的一部分。
一种多肽，其包括：(a)免疫球蛋白链的免疫球蛋白重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述免疫球蛋白链包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列；或(b)免疫球蛋白链的免疫球蛋白轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述免疫球蛋白链包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列，所述多肽也构成本发明的一部分。编码这种多肽的多核苷酸(例如，DNA或RNA)也与包括所述多核苷酸的载体一起构成本发明的一部分。
本发明还提供了宿主细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞)，其包括本文所示的抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)或免疫球蛋白链或多肽或多核苷酸或载体。
本发明还提供了一种组合物或试剂盒，其包括本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)中的一种或多种(例如，1、2、3或4种)，所述组合物或试剂盒任选地与另外的治疗剂(例如，抗寄生虫药物、氯喹、阿托伐醌、氯胍、蒿甲醚、苯芴醇、甲氟喹、奎宁、奎尼丁、多西环素(任选地与奎宁组合)、克林霉素、疫苗、抗疟疾疫苗或RTS,S/AS01)联合。本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白和药学上可接受的载体，以及任选的另外的治疗剂。
本发明还提供了一种容器或注射装置(例如，自动注射器或预充式注射器)，其包括本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)或组合物(例如，药物组合物)。
本发明提供了一种治疗或预防有需要的受试者(例如，人)的恶性疟原虫感染(例如，疟疾)的方法，所述方法包括施用(例如，以肠胃外方式)治疗有效量的任选地与另外的治疗剂联合的本文所述的抗PfFRH5抗原结合蛋白。在本发明的一个实施例中，所述受试者在开始治疗前被诊断为患有恶性疟原虫感染(例如，疟疾)。例如，在本发明的一个实施例中，使用本文所示的侧流试纸条来诊断所述受试者。在本发明的一个实施例中，所述受试者没有被恶性疟原虫感染，但是预防性地向其施用治疗有效量的抗PfRH5抗原结合蛋白，即，以预防这种感染。
本发明还提供了一种用于诊断受试者的恶性疟原虫感染的方法，所述方法包括将本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白与来自所述受试者的样品(例如，血液)接触，并且如果在所述样品中检测到所述抗原结合蛋白与PfRH5多肽之间的复合物，则确定所述受试者感染了恶性疟原虫。例如，所述复合物可以在如本文所示的侧流试纸条上形成，所述试纸条包括本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白和PfRH5多肽(来自受试者的样品)。
本发明提供了一种用于向所受试者(例如人)体内施用本文所示的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如抗体或其抗原结合片段)的方法，所述方法包括例如以皮下方式、静脉内方式或肌内方式将所述抗原结合蛋白注射到所述受试者体内，任选地与另一种治疗剂联合。
本发明还包括本文所示的任何免疫球蛋白多肽或多核苷酸，所述免疫球蛋白多肽或多核苷酸例如包括选自由以下组成的组的成员中所示的任何氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、18、20、22、24、26、28、30、34、36、38、40、42、44、46、50、52、54、56、58、60、62、66、68、70、72、74、76、78、82、84、86、88、90、92、94、98、100、102、104、106、108、110、114、116、118、120、122、124、126、130、132、134、136、138、140、142、146、148、150、152、154、156、158、162、164、166、168、170、172、174、178、180、182、184、186、188、190、194、196、198、200、202、204、206、210、212、214、216、218、220、222、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、314、316、318、320、322、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358和360；或多核苷酸，所述包括选自由以下组成的组的成员中所示的任何核苷酸序列：SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、33、35、37、39、41、43、45、49、51、53、55、57、59、61、65、67、69、71、73、75、77、81、83、85、87、89、91、93、97、99、101、103、105、107、109、113、115、117、119、121、123、125、129、131、133、135、137、139、141、145、147、149、151、153、155、157、161、163、165、167、169、171、173、177、179、181、183、185、187、189、193、195、197、199、201、203、205、209、211、213、215、217、219、221、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357和359。
附图说明
图1示出了在抗体压力(1×EC50到110×EC50)逐渐增加45天后与每个PfRH5特异性抗体对应的PfRH5的序列比对。
具体实施方式
恶性疟原虫是一种原生动物寄生虫，是导致人类疟疾的疟原虫之一，疟疾可通过雌性按蚊传播。由此物种引起的疟疾(可能称为“恶性疟疾”)是高度危险的疟疾形式，其并发症和死亡率很高。参见例如，Gardner等人,“人类疟疾寄生虫恶性疟原虫的基因组序列(Genome sequence of the human malaria parasite Plasmodium falciparum)”,《自然(Nature),419(6906):498–511(2002)。恶性疟原虫包含对本发明的抗原结合蛋白表现出敏感性的任何菌株，例如，D10、Dd2、7G8、W2-mef、3D7、HB3、FCR-1/FVO、Cam3.II或RF7。“恶性疟原虫感染”是指恶性疟原虫在受试者体内的侵袭和繁殖。本发明提供了有效治疗或预防恶性疟原虫感染的各种抗原结合蛋白。
抗PfRH5“抗原结合蛋白”是与PfRH5多肽(例如，抗PfRH5抗体或抗原结合片段(无论是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性)或是单价的或多价的(例如，二价))特异性结合的单个多肽(例如，ScFv(单链可变片段))或多于一种多肽的复合物(例如，四聚体IgG抗体)。单价抗原结合蛋白具有单个抗原结合结构域，而二价抗原结合蛋白具有两个抗原结合结构域。
Basigin(BSG，细胞外基质金属蛋白酶诱导物，EMMPRIN，CD147)是多肽，其是PfRH5与之结合的红细胞上的靶标。在本发明的一个实施例中，basigin的氨基酸序列在Uniprot登记号Q54A51中示出。参见例如，Crosnier等人,“Basigin是恶性疟原虫侵袭红细胞所必需的受体(Basigin is a receptor essential for erythrocyte invasion by Plasmodiumfalciparum)”,《自然》,2011年11月9日；480(7378):534-7。在本发明的一个实施例中，本发明的抗原结合蛋白阻断PfRH5与BSG之间的结合。
恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)
恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)是称为网织红细胞结合样蛋白(RBL)的红细胞配体超家族的成员。有证据表明，PfRH5对于恶性疟原虫感染的血液阶段生长至关重要。PfRH5结合红细胞，并且与红细胞侵袭的物种嗜性有关。参见例如，Bustamante等人,《疫苗(Vaccine.)》,2013年1月2日；31(2):373-379。
在本发明的一个实施例中，PfRH5包括以下氨基酸序列：
MIRIKKKLIL TIIYIHLFIL NRLSFENAIK KTKNQENNLT LLPIKSTEEE KDDIKNGKDIKKEIDNDKEN IKTNNAKDHS TYIKSYLNTN VNDGLKYLFI PSHNSFIKKY SVFNQINDGM LLNEKNDVKNNEDYKNVDYK NVNFLQYHFK ELSNYNIANS IDILQEKEGH LDFVIIPHYT FLDYYKHLSY NSIYHKSSTYGKCIAVDAFI KKINETYDKV KSKCNDIKND LIATIKKLEH PYDINNKNDD SYRYDISEEI DDKSEETDDETEEVEDSIQD TDSNHTPSNK KKNDLMNRTF KKMMDEYNTK KKKLIKCIKN HENDFNKICM DMKNYGTNLFEQLSCYNNNF CNTNGIRYHY DEYIHKLILS VKSKNLNKDL SDMTNILQQS ELLLTNLNKK MGSYIYIDTIKFIHKEMKHI FNRIEYHTKI INDKTKIIQD KIKLNIWRTF QKDELLKRIL DMSNEYSLFI TSDHLRQMLYNTFYSKEKHL NNIFHHLIYV LQMKFNDVPI KMEYFQTYKK NKPLTQ(SEQ ID NO:361)
缺少N末端残基1-139和残基247-295且具有突变T216A和T299A以及C末端His6标签的多肽“PfRH5ΔNL.6his”(PfRH5(K140-Q526；del M1-Y139；del K247-L295；T216A；T299A))与编码所述多肽的多核苷酸一起构成本发明的一部分。在本发明的一个实施例中，PfRH5ΔNL.6his多肽包括SEQ ID NO:362中所示的氨基酸序列：
KNVNFLQYHFKELSNYNIANSIDILQEKEGHLDFVIIPHYTFLDYYKHLSYNSIYHKSSTYGKYIAVDAFIKKINEAYDKVKSKCNDIKNDLIATIKKLEHPYDINNMNRAFKKMMDEYNTKKKKLIKCIKNHENDFNKICMDMKNYGTNLFEQLSCYNNNFCNTNGIRYHYDEYIHKLILSVKSKNLNKDLSDMTNILQQSELLLTNLNKKMGSYIYIDTIKFIHKEMKHIFNRIEYHTKIINDKTKIIQDKIKLNIWRTFQKDELLKRILDMSNEYSLFITSDHLRQMLYNTFYSKEKHLNNIFHHLIYVLQMKFNDVPIKMEYFQTYKKNKPLTQHHHHHH
(SEQ ID NO:362)。在本发明的一个实施例中，多肽处于结晶形式或非结晶形式。
抗体和抗原结合片段
本发明提供了与PfRH5蛋白或其抗原片段特异性结合的抗原结合蛋白，如抗体和其抗原结合片段。本发明的免疫球蛋白链在本文实例1的表1-1中描述。
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其包括四个多肽链、通过二硫键(即，“完整抗体分子”)互连的两个重链(HC)和两个轻链(LC)及其多聚体(例如IgM)-例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2。每条重链(HC)包括重链可变区(“HCVR”或“VH”)(例如，SEQ IDNO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354)和重链恒定区(包含结构域CH1、CH2和CH3)。每条轻链(LC)包含轻链可变区(“LCVR”或“VL”)(例如，SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306)和轻链恒定区(CL)。可以将VH区域和VL区域进一步细分为称作互补性决定区(CDR)的高变区，其散布着称作构架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL包括自氨基端至羧基端按以下顺序排列的三个CDR及四个FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的某些实施例中，抗体(或其抗原结合片段)的FR与人种系序列相同，或者是天然或人工修饰的。
通常，重免疫球蛋白链和轻免疫球蛋白链的可变结构域都包括三个高变区(也称为互补性决定区(CDR))，其位于相对保守的框架区(FR)内。通常，从N末端到C末端，轻链可变结构域和重链可变结构域均包括FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。在本发明的一个实施例中，将氨基酸分配给每个结构域是根据以下文献中的定义进行的：《免疫学目的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》,Kabat等人；国立卫生研究院(National Institutes of Health),贝塞斯达,马里兰州；第5版；NIH出版号91-3242,(1991)；Kabat,(1978),《蛋白质化学(Adv.Prot.Chem.)》,32:1-75；Kabat等人,(1977),《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》,252:6609-6616；Chothia等人,《分子生物学杂志(JMol.Biol.)》(1987),196:901-917或Chothia等人,(1989),《自然》,342:878-883。
本发明包含单克隆抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段)，以及包括多种分离的单克隆抗原结合蛋白的单克隆组合物。如本文所用，术语“单克隆抗体”指一群基本上同质的抗体，即除了可能存在少量的可能自然发生的突变，包括所述群体的抗体分子的氨基酸序列相同。此类单克隆抗体和片段在组合物中的“多个”是指相同(即，如上所述，在氨基酸序列上，除了可能以少量存在的可能自然发生的突变之外)抗体和片段的浓度高于自然界中正常存在的浓度，例如，在如小鼠或人的宿主生物的血液中的浓度。
在本发明的一个实施例中，抗PfRH5抗原结合蛋白，例如，抗体或抗原结合片段，包括重链恒定结构域，例如，IgA型(例如，IgA1或IgA2)、IgD型、IgE型、IgG型(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)或IgM型。在本发明的一个实施例中，抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)包括例如κ或λ型的轻链恒定结构域。
如本文所用，术语“人”抗原结合蛋白(如抗体或抗原结合片段)包含抗体和片段，所述抗体和片段具有衍生自人类细胞中或移植到非人类细胞中(例如，小鼠细胞中)的人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。参见例如，US8502018、US6596541或US5789215。本发明的人mAb可以包含并非由例如CDR区中(并且特别是CDR3区中)的人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包含其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如，小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人FR序列上的mAb。所述术语包含在非人类哺乳动物或非人类哺乳动物细胞中重组产生的抗体。所述术语不旨在包含从人类受试者中分离或产生的抗体。
本发明包含抗PfRH5嵌合抗原结合蛋白(例如抗体和其抗原结合片段)和其使用方法。如本文所用，“嵌合抗体”是具有来自第一抗体的可变结构域和来自第二抗体的恒定结构域的抗体，其中第一抗体和第二抗体来自不同物种。(参见例如，US4816567；以及Morrison等人,(1984),《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,81:6851-6855)。
术语“重组”抗原结合蛋白(如抗体或其抗原结合片段)是指通过本领域已知为重组DNA技术的技术或方法(包含例如DNA剪接和转基因表达)而产生、表达、分离或获得的分子。所述术语包含在非人类哺乳动物(包含转基因非人类哺乳动物，例如，转基因小鼠)或细胞(例如，CHO细胞)表达***中表达或从重组组合人抗体文库分离的抗体。
本文公开的重组抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体和抗原结合片段)也可以在大肠杆菌(E.coli)/T7表达***中产生。在此实施例中，编码本发明的抗PfRH5抗体免疫球蛋白分子的核酸(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2)可以被***基于pET的质粒中，并且可以在大肠杆菌/T7***中表达。例如，本发明包含用于在细胞中包括表达T7 RNA聚合酶并且还包含编码与T7启动子可操作连接的免疫球蛋白链的多核苷酸的宿主细胞(例如，细菌宿主细胞，如大肠杆菌，如BL21或BL21DE3)中表达抗体或其抗原结合片段或其免疫球蛋白链的方法。例如，在本发明的一个实施例中，细菌宿主细胞(如大肠杆菌(E.Coli))包含编码可操作地连接到lac启动子的T7 RNA聚合酶基因的多核苷酸，并且聚合酶和链的表达是通过用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷)对宿主细胞进行温育而诱导的。参见US4952496和US5693489或Studier和Moffatt,“使用噬菌体T7 RNA聚合酶指导克隆基因的选择性高水平表达(Useof bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expressionof cloned genes)”,《分子生物学杂志》,1986年5月5日；189(1):113-30。
本领域具有几种已知的产生重组抗体的方法。在US4816567中公开了用于重组产生抗体的方法的一个实例。
可以通过任何用于将多核苷酸引入宿主细胞的已知方法进行转化。将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞的方法是本领域公知的，并且包含葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、多烯介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将一种或多种多核苷酸包封在脂质体中、生物弹射以及直接将DNA显微注射到细胞核中。另外，可以通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞。转化细胞的方法是本领域公知的。参见例如，美国专利第4,399,216号；第4,912,040号；第4,740,461号和第4,959,455号。
编码本文所示的免疫球蛋白的多核苷酸(例如，包括SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、33、35、37、39、41、43、45、49、51、53、55、57、59、61、65、67、69、71、73、75、77、81、83、85、87、89、91、93、97、99、101、103、105、107、109、113、115、117、119、121、123、125、129、131、133、135、137、139、141、145、147、149、151、153、155、157、161、163、165、167、169、171、173、177、179、181、183、185、187、189、193、195、197、199、201、203、205、209、211、213、215、217、219、221、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301、303、305、307、309、313、315、317、319、321、323、325、327、329、331、333、335、337、339、341、343、345、347、349、351、353、355、357和359中所示的核苷酸序列)处于载体中和/或与表达控制序列(如启动子)可操作地连接，其构成本发明的一部分。启动子可以是例如，CMV启动子(例如，人巨细胞病毒(CMV)主要立即早期(MIE)启动子或小鼠CMV启动子)或SV40启动子(例如，SV40早期启动子)。载体可以是可以异位维持在宿主细胞中或结合入宿主染色体的质粒(例如，环状质粒或线性化质粒)或病毒载体。此类宿主细胞构成本发明的一部分。
当多核苷酸被放置为与另一个核酸序列成功能关系时，其是“可操作地连接的”。例如，如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接。“可操作地连接”通常但不总是意指被连接的DNA序列是连续的，并且在分泌前导的情况下是连续的并且处于读数相中。然而，增强子不一定必须是连续的。
因此，本发明包含用于制备抗PfRH5抗原结合蛋白(如本发明的抗体或其抗原结合片段)或其免疫球蛋白链的重组方法，所述方法包括(i)引入编码抗原结合蛋白(例如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2)的轻免疫球蛋白链和/或重免疫球蛋白链的一种或多种多核苷酸(例如，包含SEQ ID NO:1、9、17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、97、105、113、121、129、137、145、153、161、169、177、185、193、201、209、217、225、233、241、249、257、265、273、281、289、297、305、313、321、329、337、345和/或353中任何一个或多个中的核苷酸序列)，，例如，其中所述多核苷酸处于载体中；和/或整合到宿主细胞染色体中和/或与启动子可操作地连接；(ii)在有利于多核苷酸表达的条件下培养宿主细胞(例如CHO或毕赤酵母或巴斯德毕赤酵母)，以及(iii)任选地，从宿主细胞和/或宿主细胞在其中生长的培养基中分离抗原结合蛋白(例如，抗体或片段)或链。当制备包括一个以上免疫球蛋白链的抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，包括两个重免疫球蛋白链和两个轻免疫球蛋白链的抗体)时，如果此类链被分泌出来，则在单个宿主细胞中的共表达所述链会导致链在例如细胞中、细胞表面或细胞外缔合，从而形成抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)。本发明的方法包含其中仅在细胞中表达重免疫球蛋白链或轻免疫球蛋白链或两者(例如，本文讨论的任何那些，包含其成熟片段和/或可变结构域)的方法。此类单链可以例如用作包含此类链的表达抗体或抗原结合片段的中间体。例如，本发明还包含抗PfRH5抗原结合蛋白(如抗体和其抗原结合片段)，所述抗原结合蛋白包括由包括SEQ ID NO:1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、233、241、249、257、265、273、281、289、297、313、321、329、337、345或353中所示的核苷酸序列的多核苷酸编码的重链免疫球蛋白(或其可变结构域或包括其CDR)以及由SEQ ID NO:9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217或305中所示的核苷酸序列编码的轻链免疫球蛋白(或其可变结构域或包括其CDR)，所述抗原结合蛋白是此类产生方法以及任选地本文所示的纯化方法的产物。例如，在本发明的一个实施例中，所述方法的产物是抗PfRH5抗原结合蛋白，其是包括VH和VL的抗体或片段，所述VH包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列，并且所述VL包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示氨基酸序列。
在本发明的一个实施例中，制备抗PfRH5抗原结合蛋白，例如，抗体或其抗原结合片段的方法包含纯化抗原结合蛋白的方法，例如，通过柱色谱法、沉淀法和/或过滤。此类方法的产物也构成本发明的一部分。
包含哺乳动物细胞在内的真核宿主细胞和原核宿主细胞可以用作用于抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)的表达的宿主。此类宿主细胞是本领域公知的，并且许多可从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)获得。这些宿主细胞尤其包含中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、小仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、A549细胞、3T3细胞、HEK-293细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包含人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。可以使用的其它细胞系是昆虫细胞系(例如，草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)或粉纹夜蛾(Trichoplusia ni))、两栖细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。真菌细胞包含酵母和丝状真菌细胞，所述丝状真菌细胞包含例如，毕赤酵母(Pichia)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichiatrehalophila)、科克拉马毕赤酵母(Pichia koclamae)、膜醭毕赤酵母(Pichiamembranaefaciens)、微小毕赤酵母(Pichia minuta)(甲醇诱导型酵母(Ogataea minuta)、林氏毕赤酵母(Pichia lindneri))、仙人掌毕赤酵母(Pichia opuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、松栎毕赤酵母(Pichiaguercuum)、皮杰普毕赤酵母(Pichia pijperi)、树干毕赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母菌(Pichia sp.)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、酵母菌(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母菌(Kluyveromyces sp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(trichoderma reesei)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、镰刀菌(Fusarium sp.)、禾谷镰刀菌(Fusariumgramineum)、镰孢霉(Fusarium venenatum)、小立碗藓(Physcomitrella patens)以及粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。本发明包含分离的宿主细胞(例如，CHO细胞)，其包括抗原结合蛋白，如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2；或编码免疫球蛋白链或其多条链的一种或多种多核苷酸。
本发明还包含表达PfRH5的恶性疟原虫细胞，所述PfRH5通过本发明的抗原结合蛋白(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)结合，例如，其中细胞处于受试者体内或在体外。
术语“特异性结合”是指具有与抗原(如PfRH5蛋白质(例如，PfRH5ΔNL.6his))的结合亲和力、以KD表示、如例如通过在25℃或37℃下进行的实时无标记生物层干涉测定(例如，
Figure BDA0002753245770000351
HTX生物传感器)或通过表面等离子体共振(例如，BIACORETM)或通过ELISA(酶联免疫吸附试验)测量为至少约10-8M(例如，本文表5-1或5-2中所示的任何KD)的抗原结合蛋白(例如，mAb)。本发明包含与PfRH5蛋白特异性结合的抗原结合蛋白。在本发明的一个实施例中，抗原结合蛋白包括如本文表5-1或5-2所示的Ka、Kd和/或t1/2。
如本文所用，术语抗体或抗原结合蛋白的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”等包含任何特异性结合抗原以形成复合物的天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白。抗原结合片段的非限制性实例包含：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段以及(vii)受约束的FR3-CDR3-FR4肽(例如，包括本文所示的FR3、FR4和CDR-H3或CDR-L3)。如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、以及小型模块化免疫药物(SMIP)等其它经过工程化分子也涵盖在本文所用的表达“抗原结合片段”内。在本发明的一个实施例中，抗原结合片段包括以下的三个或更多个CDR：H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2(例如，CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；和/或CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)。
在本发明的一个实施例中，抗体的抗原结合片段包括至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，并且通常包括至少一个与一个或多个框架序列相邻或在框内的CDR。在具有与VL结构域相关的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可替代地，抗体的抗原结合片段可以含有单体VH或VL结构域。
在某些实施例中，抗体的抗原结合片段可以含有至少一个与至少一个恒定结构域共价连接的可变结构域。可以在本发明的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包含：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；以及(xiv)VL-CL。在可变区和恒定区的任何构型(包含上文所列出的任何示例性构型)中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链或连接子区域连接。铰链区可以由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明的抗体的抗原结合片段可以包括上文所列出的任何可变结构域和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其它多聚体)，其彼此非共价缔合和/或与一个或多个单体VH或VL结构域共价缔合(例如，通过一个或多个二硫键)。
抗原结合蛋白(例如，抗体和抗原结合片段)可以是单特异性或多特异性的(例如，双特异性的)。多特异性抗原结合蛋白将在本文中进一步进行讨论。
在本发明的一个实施例中，本发明的抗原结合蛋白(例如，抗体或抗体片段)可以缀合到部分，如治疗部分(“免疫缀合物”)，如抗疟药物、第二抗PfRH5抗体或可用于治疗恶性疟原虫感染的任何其它治疗性部分。参见例如以下描述。
本发明还提供了一种复合物，所述复合物包括本文讨论的与和抗PfRH5抗体或片段特异性结合的PfRH5多肽或其抗原片段和/或第二抗体或抗原结合片段(例如，可检测地标记的第二抗体)复合的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)。在本发明的一个实施例中，复合物处于受试者体外(例如，固定在固体基质上)或处于受试者体内。在本发明的一个实施例案中，PfRH5被固定到固体基质(例如，侧流试纸条)上或在如恶性疟原虫等细胞的表面上。与不溶性基质材料(例如，玻璃或多糖(如琼脂糖或琼脂糖凝胶)，例如，珠粒或其它颗粒)共价连接的固定化抗PfRH5抗体和其抗原结合片段也是本发明的一部分；任选地，其中固定化抗体与PfRH5或其抗原片段或第二抗体或其片段复合。
“分离的”抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸和载体至少部分不含来自产生其的细胞或细胞培养物中的其它生物分子。此类生物分子包含核酸、蛋白质、其它抗体或抗原结合片段、脂质、碳水化合物或其它物质，如细胞碎片和生长培养基。分离的抗原结合蛋白可以进一步至少部分地不含表达***组分(如来自宿主细胞或其生长培养基的生物分子)。通常，术语“分离的”不是指完全不存在此类生物分子，也不是指不存在水、缓冲液或盐或指包含抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)的药物制剂的组分。
本发明包含抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)，所述抗原结合蛋白与本发明的抗原结合蛋白(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2)与相同的表位结合。例如，本发明包含与缺少氨基酸M1-Y139并且包含残基K140-Q526但缺少K247-L295并且具有突变T216A和T299A(任选地，包含HisX6标签)的PfRH5变体表位(例如，PfRH5ΔNL.6his)结合的抗原结合蛋白。
术语“表位”是指与抗原结合蛋白的特定抗原结合位点(例如，称为互补位的抗体分子的可变区)相互作用的抗原决定簇(例如，在PfRH5多肽上)。单个抗原可以具有一个以上表位。因此，不同的抗体可以与抗原上的不同区域结合并且可以具有不同的生物效应。术语“表位”还可以指B和/或T细胞对其应答的抗原上的位点和/或与抗体结合的抗原区域。表位可以定义为结构性或功能性的。功能性表位通常是结构表位的子集，并且具有直接有助于相互作用的亲和力的那些残基。表位可以是线性或构象的，即，由非线性氨基酸构成。在某些实施例中，表位可以包含决定簇，所述决定簇是分子(如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基)的化学活性表面基团，并且在某些实施例中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。
用于确定抗原结合蛋白(例如，抗体或片段或多肽)的表位的方法包含丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke,(2004),《分子生物学方法(Methods Mol.Biol.)》,248:443-63)、肽裂解分析、晶体学研究和NMR分析。另外，可以采用如抗原的表位切除、表位提取及化学修饰等方法(Tomer,(2000),《蛋白质科学(Prot.Sci.)》,9:487-496)。可以用于鉴定与抗原结合蛋白(例如，抗体或片段或多肽)相互作用的多肽内氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测氢/氘交换。参见例如，Ehring,(1999),《分析化学(Analytical Biochemistry)》,267:252-259；Engen和Smith,(2001),《分析化学》,73:256A-265A。
本发明包含与本发明的抗原结合蛋白(例如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2)竞争与PfRH5(例如，如本文所讨论的变体PfRH5表位)结合的抗原结合蛋白。如本文所用，术语“竞争物”是指与抗原(例如，PfRH5或PfRH5ΔNL.6his)结合并且抑制或阻断另一种抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)与抗原的结合的抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)。这一术语还包含两个方向上的两个抗原结合蛋白(例如，抗体)之间的竞争，即，结合并且阻断第二抗体结合的第一抗体，反之亦然。在某些实施例中，第一抗原结合蛋白(例如，抗体)和第二抗原结合蛋白(例如，抗体)可以与相同的表位结合。可替代地，第一抗原结合蛋白和第二抗原结合蛋白(例如，抗体)可以与不同但例如重叠的表位结合，其中一个的结合例如通过空间位阻抑制或阻断第二抗体的结合。抗原结合蛋白(例如，抗体)之间的竞争可以通过本领域已知的方法来测量，例如，通过实时无标记生物层干涉测定法。在本发明的一个实施例中，第一抗PfRH5抗原结合蛋白与第二抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体)之间的竞争是通过以下确定的：测量固定化第一抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，最初未与PfRH5结合的抗体)与PfRH5蛋白结合或与其与第二抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体)复合的片段结合的能力。相对于未复合的PfRH5蛋白，第一抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体)与复合PfRH5蛋白结合的能力降低，表明第一抗PfRH5抗原结合蛋白和第二抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体)竞争。竞争程度可以表示为结合中减少的百分比。此类竞争可以利用实时无标记生物层干涉测定法(例如在Octet RED384生物传感器(Pall ForteBio公司(PallForteBio Corp.)上)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)或通过表面等离振子共振(SPR)进行测量。
可以在Octet RED384生物传感器(Pall ForteBio公司)上使用实时无标记生物层干涉测定法确定抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，单克隆抗体(mAb))之间的结合竞争。例如，要确定两种抗PfRH5单克隆抗体之间的竞争，可以先通过将尖端浸入抗PfRH5 mAb(以下称为“mAb1”)溶液中将抗PfRH5 mAb捕获到抗hFc抗体涂覆的Octet生物传感器尖端上(PallForteBio公司，#18-5060)。作为阻断的阳性对照，然后可以用已知的阻断同种型对照mAb(随后称为“阻断mAb”)使捕获抗体的生物传感器尖端饱和(通过浸入阻断mAb的溶液中)。为确定mAb2是否与mAb1竞争，可以随后将生物传感器尖端浸入已预温育一段时间的PfRH5多肽和第二种抗PfRH5 mAb(以下称为“mAb2”)的复合溶液中，并且可以确定mAb1与PfRH5多肽的结合。在实验的每个步骤之间，都可以在缓冲液中洗涤生物传感器尖端。可以在实验过程中监控实时结合反应，并且可以记录每个步骤结束时的结合反应。
在本发明的一个实施例中，竞争测定法是在生物传感器平台(例如Octet HTX)上进行的，其中一种抗体与已经与传感器尖端结合的PfRH5多肽结合/复合，并且然后对第二种抗体与PfRH5的结合进行评估。可以评估第二抗体与预先复合的PfRH5多肽结合的能力，并且如果检测到结合力降低(例如，相对于未与第一抗体复合的PfRH5)或检测到第二抗体不存在结合力，则确定第一抗体和第二抗体竞争PfRH5多肽结合。在本发明的一个实施例中，所述测定在25℃和约7(例如7.4)的pH下进行，例如在缓冲液(例如，HEPES)、盐(例如，NaCl)、EDTA、表面活性剂(例如，Tween-20)和/或非特异性蛋白质(例如，牛血清白蛋白)的存在下进行。在本发明的一个实施例中，在竞争测定中评估与PfRH5变体(例如，PfRH5ΔNL.6his)的结合，例如，其中所述变体是缺少氨基酸M1-Y139并且包含残基K140-Q526但是缺少K247-L295并且具有突变T216A和T299A(任选地，包含HisX6标签)的PfRH5。HisX6或His6标签是包含HHHHHH(SEQ ID NO:365)的标签。
通常，以某种方式修饰的本发明的抗体或抗原结合片段保留特异性结合PfRH5的能力，例如，当以摩尔为基础表达所述活性时，保留其PfRH5结合活性的至少10％(与亲本抗体相比时)。优选地，本发明的抗体或抗原结合片段保留亲本抗体的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更多的PfRH5结合亲和力。本发明的抗体或抗原结合片段还旨在可以包含基本上不改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。
本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白可以包括免疫球蛋白链的变体，其氨基酸和核苷酸序列在本文中被明确示出。
多肽的“变体”(如免疫球蛋白链(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2VH、VL、HC或LC))是指包括与本文所示的参考氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346、354、10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306)至少约70-99.9％(例如，70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同或相似的氨基酸序列的多肽；当通过BLAST算法执行比较时，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：3；查询范围内的最大匹配数：0；BLOSUM 62矩阵；空位罚分：存在11；扩展1；条件组成得分矩阵调整)。
多核苷酸的“变体”是指包括与本文所示的参考核苷酸序列(例如，SEQ ID NO:1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、233、241、249、257、265、273、281、289、297、313、321、329、337、345、353、9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217或305)至少约70-99.9％(例如70％、72％、74％、75％、76％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％)相同的核苷酸序列的多核苷酸；当通过BLAST算法执行比较时，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：28；查询范围内的最大匹配数：0；匹配/不匹配分数：1、-2；空位罚分：线性)。
在本发明的一个实施例中，抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，本发明的抗体及其抗原结合片段)包含：重链免疫球蛋白可变区，其与免疫球蛋白重链的氨基酸序列具有至少70％(例如80％、85％、90％、95％、99％)的氨基酸序列同一性，所述免疫球蛋白重链的氨基酸序列在本文中例如在SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中示出；和/或轻链免疫球蛋白可变区，其与免疫球蛋白轻链具有至少70％(例如80％、85％、90％、95％、99％)的氨基酸序列同一性，所述免疫球蛋白轻链的氨基酸序列在本文中例如在SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中示出。
另外，本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白可以包含包括本文所示的氨基酸序列的变体免疫球蛋白多肽(除一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)突变(如例如，错义突变(例如，保守取代)、无义突变、缺失或***)外)。例如，本发明包含抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含免疫球蛋白轻链变体，所述免疫球蛋白轻链变体包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的但具有此类突变中的一个或多个和/或免疫球蛋白重链变体的氨基酸序列，所述免疫球蛋白重链变体包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的但具有此类突变中的一个或一个的氨基酸序列。在本发明的一个实施例中，抗PfRH5抗原结合蛋白包含免疫球蛋白轻链变体，所述免疫球蛋白轻链变体包括CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其中此类CDR的一个或多个(例如，1或2或3个)相对于本文具体示出的序列具有此类突变(例如，保守取代)中的一个或多个，和/或包含免疫球蛋白重链变体，所述免疫球蛋白重链变体包括CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，其中此类CDR的一个或多个(例如，1或2或3个)相对于本文具体示出的序列具有此类突变(例如，保守取代)中的一个或多个。
本发明进一步提供了变体抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)，其包括本文所示的与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％的序列同一性或相似性的一个或多个变体CDR(例如，CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3中的任何一个或多个)。
本发明的实施例还包含抗PfRH5抗体和其抗原结合片段，其包括变体免疫球蛋白VH和VL；或HC和LC，其包括与本文具体所示的对应的VH、VL、HC或LC的氨基酸序列具有70％或更高(例如80％、85％、90％、95％、97％或99％)的整体氨基酸序列同一性或相似性的氨基酸序列，但其中此类免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3不是变体，并且包括本文所示的氨基酸序列。因此，在此类实施例中，此类抗原结合蛋白内的CDR本身不是变体。
“保守修饰的变体”或“保守取代”是指其中多肽中的氨基酸被具有相似特征(例如，电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、骨架构造和刚性等)的其它氨基酸取代一次或多次的变体。在不显著破坏抗体或片段的生物活性的情况下可以经常进行这种改变。本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代基本上不会改变生物学活性(参见，例如，Watson等人,(1987),《基因的分子生物学(Molecular Biology of the Gene)》,Benjamin/Cummings出版公司(Benjamin/Cummings Pub.Co.),第224页,(第4版))。另外，结构或功能上相似的氨基酸的取代不太可能显著破坏生物活性。本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白可以包含具有本文所示的氨基酸序列但具有一个或多个保守修饰的变体的免疫球蛋白链。
具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包含1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂肪族羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守替代是在Gonnet等人,(1992),《科学(Science)》,256:1443 45中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化。
在本发明的一个实施例中，本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，包含包括本文所示的氨基酸序列变体的免疫球蛋白链)表现出以下功能特性中的一种或多种：
·抑制人红细胞中恶性疟原虫的体外或体内生长(例如如按照寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性所测定的(例如，相对于未感染的红细胞以约51％到约69％或高达100％的速率(例如，当将抗PfRH5抗原结合蛋白与细胞一起温育96小时时)，其中抗原结合蛋白是H1H29100P、H1H29104P、H1H29127P、H1H29143P或此类蛋白中的两种的任何组合(参见例如，表2-1)。
·抑制体外或体内恶性疟原虫菌株3D7或7G8在人红细胞中的生长(例如，如例如在存在氯喹磷酸酯(CQ)的情况下(例如，在约4.81nM或6.58nM的浓度下)例如以在不存在CQ的情况下约34％到61％的速率、在4.81nM CQ存在的情况下约32％到51％的速率或者在存在6.58nM Cq的情况下约20％到75％的速率通过寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性所测定的)。
·与PfRH5多肽或其抗原性片段(例如，PfRH5ΔNL.6his)结合，其KD在25℃下为约4.72pM到约1.67nM和/或在37℃下为约1.10pM到约1.10nM，如本文的表5-1和5-2中所示。
·抑制体外或体内恶性疟原虫菌株D10、Dd2、7G8、W2-mef、3D7、HB3、FCR-1/FVO、Cam3.II或RF7在人红细胞中的生长，例如，如例如在如表4-2所示的速率时约666.67nM的浓度下相对于未感染的红细胞通过寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性所测定的。
·阻断PfRH5多肽(例如，PfRH5ΔNL.6his，例如，在约0.5nM或2.0nM的浓度下)与basigin多肽的结合(例如，约1％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％阻断)，例如，阻断PfRH5与和固体基质(例如，ELISA板)结合的basisin的结合，其中抗PfRH5抗原结合蛋白以约100nM存在。例如，其中basigin是其氨基酸Thr25-His205，例如，用C末端接头DIEGRMD(SEQ ID NO:363)表达，随后是人IgG1的一部分(Pro100-Lys330)和6X组氨酸标签。
·与H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2与同一个表位结合，例如，与缺少氨基末端残基M1-Y139并且包含残基K140-Q526但缺少K247-L295并且具有突变T216A和T299A(PfRH5ΔNL.6his)的PfRH5结合，例如，进一步包含C末端六组氨酸标签(例如，如通过表面等离子体共振测量的)。
·与H1H29089PH1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2、H1H29214P2；或H1H29215P2竞争与PfRH5多肽(例如，PfRH5ΔNL.6his)结合。
本发明包含一种其身体包含抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)，如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2的非人灵长类动物(NHP)(例如，猴子，如夜猴)。例如，非人灵长类动物可能已经注射了抗原结合蛋白，或者可以被工程化为表达蛋白。在本发明的一个实施例中，所述非人灵长类动物是秘鲁夜猴(Aotus nancymaae)。在本发明的一个实施例中，所述非人灵长类动物(例如，猴子)感染了恶性疟原虫(例如，菌株3D7)。
本发明包含“中和”或“拮抗剂”抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)，其包含以任何可检测的程度抑制PfRH5活性的分子。例如，中和的抗PfRH5抗原结合蛋白可以抑制恶性疟原虫的生长和/或阻断PfRH5/BSG结合。
“H1H29089P”；“H1H29094P”；“H1H29100P”；“H1H29104P”；“H1H29106P”；“H1H29109P”；“H1H29125P”；“H1H29127P”；“H1H29131P”；“H1H29134P”；“H1H29138P”；“H1H29141P”；“H1H29143P”；“H1H29146P2”；“H1H29147P2”；“H1H29149P2”；“H1H29151P2”；“H1H29163P2”；“H1H29166P2”；“H1H29171P2”；“H1H29179P2”；“H1H29183P2”；“H1H29187P2”；“H1H29192P2”；“H1H29196P2”；“H1H29198P2”；“H1H29207P2”；“H1H29209P2”；“H1H29214P2”；或“H1H29215P2”是指抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段(包含多特异性抗原结合蛋白))，其包括表1-1中所示的免疫球蛋白重链可变区(VH；或其变体)和免疫球蛋白轻链可变区(VL；或其变体)；或所述抗原结合蛋白包括VH，所述VH包括其CDR(CDR-H1(或其变体)、CDR-H2(或其变体)和CDR-H3(或其变体))；和/或包括VL，所述VL包括其CDR(CDR-L1(或其变体)、CDR-L2(或其变体)和CDR-L3(或其变体))，例如，其中免疫球蛋白链、可变区和/或CDR包括如下所述的特定氨基酸序列。在本发明的一个实施例中，VH连接到恒定重免疫球蛋白链(例如，IgG，如IgG1或IgG4)和/或VL连接到恒定轻免疫球蛋白链(例如，κ或λ)。
本发明的抗体和抗原结合片段包括免疫球蛋白链，所述免疫球蛋白链包含本文所示的氨基酸序列以及对抗体或片段的细胞和体外翻译后修饰。例如，本发明包含与PfRH5特异性结合的抗体和其抗原结合片段，所述PfRH5包括本文所示的重链氨基酸序列和/或轻链氨基酸序列(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3)以及抗体和片段，其中一个或多个氨基酸残基被糖基化、一个或多个Asn残基被脱去酰胺基、一个或多个残基(例如，Met、Trp和/或His)被氧化、N末端Gln是焦谷氨酸(pyroE)和/或C末端的赖氨酸缺失。
本发明提供了包括本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的容器(例如，例如具有盖或色谱柱、空心针或注射器筒的塑料或玻璃小瓶)。
本发明还提供了一种注射装置，所述注射装置包括一个或多个与PfRH5特异性结合的抗原结合蛋白(例如抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)或其药物组合物。注射装置可以包装成试剂盒。注射装置是通过肠胃外途径(例如，肌肉内、皮下或静脉内)将物质引入受试者体内的装置。例如，注射装置可以是注射器(例如，预先填充有药物组合物，如自动注射器)，所述注射器例如包含用于保持要注射的流体(例如，包括抗体或其片段或药物组合物)的圆筒或针筒、用于将皮肤和/或血管穿刺以注射液体的针头；以及用于将流体推出圆筒并通过针孔的柱塞。
本发明进一步提供了用于向受试者施用本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的方法，所述方法包括例如通过不经肠道的方式将抗原结合蛋白引入受试者(例如，人)体内。例如，所述方法包括用注射器的针刺穿受试者的身体，并且将抗原结合蛋白注射到受试者的体内，例如，注射到受试者的静脉、动脉、肿瘤、肌肉组织或皮下组织。
人抗体的制备
在转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域已知的。可将任何此类已知方法用于本发明中用于制备与PfRH5特异性结合的人抗体的语境。包括以下任何一种的免疫原可以用于产生与PfRH5特异性结合的抗体。在本发明的某些实施例中，本发明的抗体从用全长天然PfRH5、或减毒或灭活的活病毒、或编码蛋白质或其片段的DNA免疫的小鼠获得。可替代地，可以使用标准的生物化学技术产生PfRH5蛋白或其片段，并且对其进行修饰并且用作免疫原。在本发明的一个实施例中，免疫原是一种重组产生的PfRH5蛋白或其片段。在本发明的某些实施例中，免疫原可以是PfRH5多肽疫苗。在某些实施例中，可以施用一种或多种加强注射。在某些实施例中，免疫原可以是在大肠杆菌或在任何其它真核或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞)中表达的重组PfRH5多肽。
使用
Figure BDA0002753245770000491
技术(参见例如，US 6,596,541，再生元制药公司(Regeneron Pharmaceuticals)，
Figure BDA0002753245770000492
)，可以初步分离具有人可变区和小鼠恒定区的PfRH5高亲和力嵌合抗体。
Figure BDA0002753245770000493
技术涉及具有基因组的转基因小鼠的产生，所述基因组包括可操作地连接到内源性小鼠恒定区基因座的人重链可变区和人轻链可变区，从而使小鼠响应于抗原性刺激而产生包括人可变区和小鼠恒定区的抗体。编码抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA被分离，并且可操作连接到编码人重链恒定区和人轻链恒定区的DNA。然后DNA在能够表达完全人抗体的细胞中表达。
通常，用目标抗原攻击
Figure BDA0002753245770000501
小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)。可以将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，并且对此类杂交瘤细胞系进行筛选和选择以鉴定产生对目标抗原具有特异性的抗体的杂交瘤细胞系。编码可变区重链和轻链可变区的DNA可以被分离并且连接到重链和轻链的所需同型恒定区。此类抗体蛋白可以在如CHO细胞等细胞中产生。可替代地，编码抗原特异性嵌合抗体或轻链可变结构域和重链可变结构域的DNA可以直接从抗原特异性淋巴细胞分离。
目标抗体也可以从小鼠B细胞中分离。简而言之，从每只小鼠中收获脾细胞，并且使用目标抗原作为结合并且鉴定反应性抗体(抗原阳性B细胞)的分选试剂通过FACS分选B细胞(如例如US 2007/0280945A1中所描述的)。鉴定和分选抗原阳性B细胞以及通过PCR构建免疫球蛋白基因表达盒以制备表达重组抗体的细胞的各种方法是本领域公知的。参见例如，WO 20141460741、美国专利第7884054B2号；以及Liao等人,2009年6月,“从单个人B细胞高通量分离免疫球蛋白基因并且将其表达为单克隆抗体(High-Throughput Isolation ofImmunoglobulin Genes from Single Human B Cells and Expression as MonoclonalAntibodies)”,《病毒学方法杂志(J Virol Methods)》,158(1-2):171-9。
最初，分离出具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。表征并选择抗体以获得所需特性，包含亲和力、选择性、表位等。将小鼠恒定区替换为所需的人恒定区以产生本发明的完全人抗体，例如野生型或修饰的IgG1或IgG4。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
包括Fc变体的抗PfRH5抗体
根据本发明的某些实施例，提供了抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)，其包括Fc结构域，所述Fc结构域包括一个或多个突变，所述一个或多个突变增强或减少抗体与FcRn受体例如在酸性pH下(如与中性pH相比)的结合。例如，本发明包含在Fc结构域的CH2区或CH3区中包括突变的抗PfRH5抗体，其中一个或多个突变增加Fc结构域在酸性环境中(例如，在pH范围为约5.5到约6.0的核内体中)对FcRn的亲和力。当施用于动物时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期增加。此类Fc修饰的非限制性实例包含例如位置250(例如，E或Q)处的修饰；位置250和428(例如，L或F)处的修饰；位置252(例如，L/Y/F/W或T)、254(例如，S或T)和256(例如，S/R/Q/E/D或T)处的修饰；或428和/或433(例如，H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如，A、W、H、F或Y[N434A、N434W、N434H、N434F或N434Y]处的修饰；或位置250和/或428处的修饰；或位置307或308(例如，308F、V308F)和434处的修饰。在一个实施例中，修饰包括428L(例如，M428L)和434S(例如，N434S)修饰；428L、259I(例如，V259I)和308F(例如，V308F)修饰；433K(例如，H433K)和434(例如，434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L(例如，T250Q和M428L)修饰；以及307和/或308(例如，308F或308P)修饰。在又另一个实施例中，修饰包括265A(例如，D265A)和/或297A(例如，N297A)修饰。
例如，本发明包含包括Fc结构域的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)，所述Fc结构域选自由以下组成的组的一对或多对突变或一组或多组突变：250Q和248L(例如，T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如，M428L和N434S)；257I和311I(例如，P257I和Q311I)；257I和434H(例如，P257I和N434H)；376V和434H(例如，D376V和N434H)；307A、380A和434A(例如，T307A、E380A和N434A)；以及433K和434F(例如，H433K和N434F)。
设想了包括本文所示的包括前述Fc结构域突变的任何可能的组合的VH和/或VL的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段)均涵盖在本发明的范围内。
本发明还包含抗PfRH5抗原结合蛋白、抗体或抗原结合片段，其包括本文所示的VH和嵌合重链恒定(CH)区，其中所述嵌合CH区包括衍生自多于一种的免疫球蛋白同种型的CH区的区段。例如，本发明的抗体可以包括嵌合CH区，其包括衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4分子、与衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4分子的CH3结构域的一部分或全部结合的CH2结构域的一部分或全部。根据某些实施例，本发明的抗体包括具有嵌合铰链区的嵌合CH区。例如，嵌合铰链可以包括衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“上铰链”氨基酸序列(根据EU编号来自位置216到227位的氨基酸残基)，其与衍生自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“下铰链”序列(根据EU编号来自位置228到236位的氨基酸残基)相结合。根据某些实施例，嵌合铰链区包括衍生自人IgG1或人IgG4上铰链的氨基酸残基和衍生自人IgG2下铰链的氨基酸残基。在某些实施例中，包括本文所述的嵌合CH区的抗体可以表现出不会不利地影响抗体的治疗或药代动力学特性的经过修饰的Fc效应子功能(参见例如，WO2014/022540)。
多特异性抗原结合蛋白
本发明包含抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段)以及其使用方法和制备此类抗原结合蛋白的方法。术语“抗PfRH5”抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)包含多特异性(例如，双特异性或双互补位)分子，所述多特异性分子包含至少一个与PfRH5(例如，来自H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2的抗原结合结构域)特异性结合的第一抗原结合结构域以及至少一个第二抗原结合结构域，所述至少一个第二抗原结合结构域与不同的抗原或与第一抗原结合结构域(例如，CD3、CD16、BSG(basigin)、EXP1、MSP1、MSP2、MSPMSP3、MSP4、MSP5、MSP6、MSP7、MSP9、MSP10GLURP、Sera、RAMA、SEA、AMA1、MTRAP、PTRAMP、ASP、RH1、RH2a、RH2b、RH4、RAP1、RAP2、RAP3、RhopH1、RhopH2、RhopH3、EMA175、EMA140和/或EBA181)的PfRH5中的表位不同的PfRH5中的表位结合。在本发明的一个实施例中，第一表位和第二表位重叠。在本发明的另一个实施例中，第一表位和第二表位不重叠。
在本发明的一个实施例中，多特异性抗原结合蛋白与PfRH5和使得免疫细胞(如细胞毒性T细胞、NK细胞、单核吞噬细胞或嗜中性粒细胞，例如，CD3或CD16)活化的抗原结合。
“H1H29089P”；“H1H29094P”；“H1H29100P”；“H1H29104P”；“H1H29106P”；“H1H29109P”；“H1H29125P”；“H1H29127P”；“H1H29131P”；“H1H29134P”；“H1H29138P”；“H1H29141P”；“H1H29143P”；“H1H29146P2”；“H1H29147P2”；“H1H29149P2”；“H1H29151P2”；“H1H29163P2”；“H1H29166P2”；“H1H29171P2”；“H1H29179P2”；“H1H29183P2”；“H1H29187P2”；“H1H29192P2”；“H1H29196P2”；“H1H29198P2”；“H1H29207P2”；“H1H29214P2”；或“H1H29215P2”包含多特异性分子(例如，抗体或抗原结合片段)，其分别包含H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2的HCDR和LCDR、VH和VL或HC和LC(包含本文所示的其变体)和与不同表位结合的一个或多个抗原结合结构域。
在本发明的一个实施例中，与PfRH5特异性结合的抗原结合结构域可以包含在多特异性分子中，所述抗原结合结构域分别包括：
(1)
(i)重链可变结构域序列，其包括选自以下的免疫球蛋白重链的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2；以及
(ii)轻链可变结构域序列，其包括选自以下的免疫球蛋白重链的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2；
或者分别包括
(2)
(i)选自以下的重链可变结构域(VH)序列：H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2；以及
(ii)选自以下的轻链可变结构域(VL)序列：H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2；
以及包括与不同表位结合的一个或多个抗原结合结构域。
在本发明的一个实施例中，多特异性抗体或片段包含两种以上不同的结合特异性(例如，三特异性分子)，例如，一个或多个另外的与第一抗原结合结构域和/或第二抗原结合结构域相同或不同的抗原结合结构域。
在本发明的一个实施例中，双特异性抗原结合片段包括对第一表位(例如，PfRH5)具有结合特异性的第一scFv(例如，包括H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2的VH和VL)和对第二不同表位具有结合特异性的第二scFv。例如，在本发明的一个实施例中，第一scFv和第二scFv与接头(例如肽接头(例如，GS接头，如(GGGGS)n(SEQ ID NO:364)))拴系在一起，其中n为例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。其它双特异性抗原结合片段包含双特异性IgG抗体的F(ab)2，其包括H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；和H1H29215P2以及另一种与不同表位结合的抗体的重链CDR和轻链CDR。
免疫缀合物
本发明涵盖与另一部分(例如，治疗部分(“免疫缀合物”)，如类毒素(例如，白喉类毒素或破伤风类毒素)或用于治疗恶性疟原虫感染的抗寄生虫药物)缀合的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)。在本发明的一个实施例中，将抗PfRH5抗体或片段与本文所示的任何另外的治疗剂缀合。如本文所用，术语“免疫缀合物”是指与另一个分子化学或生物学连接的抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)。
治疗方法
本发明提供通过向需要此类治疗或预防的受试者(例如，人)施用治疗有效量的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)来治疗或预防恶性疟原虫感染(例如，疟疾)的方法。“疟疾”是一种疾病，经常通过受感染的雌性蚊子(例如，按蚊)叮咬传播，由宿主感染寄生虫恶性疟原虫引起。术语“恶性疟原虫感染”是指恶性疟原虫侵袭受试者的身体并且涵盖疟疾。
用于治疗或预防恶性疟原虫感染的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)有效或治疗有效剂量指的是足以减轻所治疗受试者的一种或多种感染的体征和/或症状的抗体或片段的量，无论所述减轻是通过诱导此类体征和/或症状的消退或消失完成的还是通过抑制此类体征和/或症状的进展完成的。剂量可以根据待施用药剂的受试者的年龄和体型、目标疾病、病状、施用途径等而变化。在本发明的一个实施例中，用于治疗或预防恶性疟原虫感染(例如，在成人受试者中)的本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)的有效或治疗有效剂量为约1mg/kg到150mg/kg。根据感染的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。在某些实施例中，本发明的抗原结合蛋白可以以初始剂量和随后的一个或多个二次剂量来施用。在某些实施例中，可以在初始剂量之后施用第二或多个后续剂量的抗原结合蛋白，所述第二或多个后续剂量的抗原结合蛋白的量可以近似于或小于初始剂量的量，其中后续剂量至少间隔1天到3天；至少一周、至少2周；至少3周；至少4周；至少5周；至少6周；至少7周；至少8周；至少9周；至少10周；至少12周；或至少14周。
如本文所用，术语“受试者”是指需要预防和/或治疗恶性疟原虫感染的哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、猫、狗、牛、绵羊、马、山羊、兔子)，优选地例如人。受试者可能患有恶性疟原虫感染或易患恶性疟原虫感染或处于发展成此类感染的高风险中。易患恶性疟原虫感染的受试者或罹患恶性疟原虫感染的风险较高的受试者包含例如由于自身免疫性疾病导致的免疫***受损的受试者、接受免疫抑制疗法的人、患有人类免疫缺陷症综合征(HIV)或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、某些形式的会耗尽或破坏白细胞的贫血的人、接受放射或化学疗法的人或患有炎性病症的人。另外，年龄极小或高龄的受试者可能会易患此病。任何与蚊子接触或接近的人均容易患上恶性疟原虫感染，尤其是在热带地区、南美、中美洲、非洲、东南亚和东地中海地区。
“治疗”是指向患有恶性疟原虫感染的受试者施用本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)，从而减轻或消除受试者的感染的一种或多种体征或症状，例如，其中恶性疟原虫从受试者体内减少或基本上消除(例如，完全消除)。
恶性疟原虫感染的体征和症状包含：
·贫血；
·便血；
·发冷、发烧、出汗；
·昏迷；
·抽搐；
·头痛；
·黄疸；
·肌肉疼痛；
·恶心和呕吐；
·脾脏肿大；
·黄疸；
·肝脏肿大；
·呼吸频率增加；
·血液、肝脏或红细胞中的恶性疟原虫；
·贫血；
·溶血；
·血流中游离血红蛋白；
·血红蛋白尿；
·急性肾功能衰竭；
·急性呼吸窘迫综合征(ARDS)；
·低血压；
·代谢性酸中毒；以及
·低血糖症。
本发明还涵盖向处于恶性疟原虫感染风险(例如，易处于恶性疟原虫感染风险或高风险)的受试者预防性地施用本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)，以预防此类感染。“预防(prevent、preventing)”意指向未感染恶性疟原虫的受试者施用抗PfRH5抗原结合蛋白(例如本发明的抗体或抗原结合片段)，使得如果确实发生感染受试者体内感染的表现受到抑制或可能性降低或严重性降低。
组合和药物组合物
本发明提供了包含抗PfRH5抗原结合蛋白和一种或多种成分的组合物以及其使用方法和制备此类组合物的方法。
为制备抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段)(H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的药物组合物，将抗原结合蛋白与药学上可接受的载剂或赋形剂混合。参见例如，《雷明顿药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》和《美国药典：国家处方集(U.S.Pharmacopeia:National Formulary)》,麦克出版公司(Mack PublishingCompany),伊斯顿,宾夕法尼亚州,(1984)；Hardman等人,(2001),《古德曼,吉尔曼治疗学的药理学基础(Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics)》,麦格劳希尔出版公司(McGraw-Hill),纽约市,纽约州；Gennaro,(2000),《雷明顿：药学的科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)》,利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司(Lippincott,Williams,and Wilkins),纽约市,纽约州；Avis等人(编著),(1993),《药物剂型：胃肠外用药(Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications)》,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker),纽约；Lieberman等人(编著),(1990),《药物剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets)》,马塞尔·德克尔公司,纽约；Lieberman等人(编著),(1990),《药物剂型：分散***(Pharmaceutical Dosage Forms:DisperseSystems),马塞尔德克尔公司,纽约；Weiner和Kotkoskie,(2000),《赋形剂毒性和安全性(Excipient Toxicity and Safety)》,马塞尔德克尔公司,纽约。在本发明的一个实施例中，药物组合物是无菌的。此类组合物是本发明的一部分。
本发明的药物组合物包含药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂和/或稳定剂，例如，水、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子型去污剂、抗氧化剂和/或其它杂添加剂。
本发明的范围包含干燥的(例如，冻干的)组合物，所述组合物包括抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)，或其包含药学上可接受的载剂但基本上没有水的药物组合物。
在本发明的另一个实施例中，将与本文公开的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)(例如H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)联合施用的另外的治疗剂按照《医师桌上手册(Physicians'Desk Reference),2003,(Thomson Healthcare；第57版(2002年11月1日)施用于受试者。
抗原结合蛋白或其组合物的施用方式可以变化。施用途径包含口服、直肠、透粘膜、肠、肠胃外；肌内、皮下、真皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、透皮或动脉内。
本发明提供用于向受试者施用抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的方法，所述方法包括将蛋白质或其药物组合物或其组合引入受试者体内。例如，所述方法包括用注射器的针刺穿受试者的身体，并且将抗原结合蛋白或药物组合物或其组合注射到受试者的体内，例如，注射到受试者的静脉、动脉、肿瘤、肌肉组织或皮下组织内。
本发明提供了一种容器(例如，塑料或玻璃小瓶，例如，具有盖或色谱柱、空心针或注射器筒)，所述容器包括所述抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)中的任何一种或包括药学上可接受的载剂或其组合的药物组合物。
本发明包含与一种或多种另外的治疗剂联合的本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的组合。抗PfRH5抗原结合蛋白和其它治疗剂可以处于单个组合物中或处于分开的组合物中。例如，在本发明的一个实施例中，所述另外的治疗剂是抗寄生虫或抗疟疾治疗剂。在本发明的一个实施例中，另外的治疗剂是氯喹、阿托伐醌和/或氯胍、蒿甲醚和/或苯芴醇、甲氟喹、奎宁、奎尼丁、多西环素(任选地与奎宁组合)和/或克林霉素(任选地与奎宁组合)。在本发明的一个实施例中，所述另外的治疗剂是疫苗，如抗疟疾疫苗，例如RTS、S/AS01(以Mosquirix出售)。用于通过与另外的治疗剂联合施用H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2来治疗或预防需要治疗或预防的受试者的恶性疟原虫感染的方法是本发明的一部分。
本发明包含包括彼此联合的本发明的两种或更多种(例如，2、3或4)抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合蛋白)的组合。例如，如果H1H29089P是Ab1；如果H1H29094P是Ab2；如果H1H29100P是Ab3；如果H1H29104P是Ab4；如果H1H29106P是Ab5；如果H1H29109P是Ab6；如果H1H29125P是Ab7；如果H1H29127P是Ab8；如果H1H29131P是Ab9；如果H1H29134P是Ab10；如果H1H29138P是Ab11；如果H1H29141P是Ab12；如果H1H29143P是Ab13；如果H1H29146P2是Ab14；如果H1H29147P2是Ab15；如果H1H29149P2是Ab16；如果H1H29151P2是Ab17；如果H1H29163P2是Ab18；如果H1H29166P2是Ab19；如果H1H29171P2是Ab20；如果H1H29179P2是Ab21；如果H1H29183P2是Ab22；如果H1H29187P2是Ab23；如果H1H29192P2是Ab24；如果H1H29196P2是Ab25；如果H1H29198P2是Ab26；如果H1H29207P2是Ab27；如果H1H29214P2是Ab28；如果H1H29215P2是Ab29，并且如果H1H29209P是Ab30，则本发明的此类组合物包括包含以下彼此联合的本发明的抗原结合蛋白(例如，抗体和/或抗原结合蛋白)的组合：
Figure BDA0002753245770000641
Figure BDA0002753245770000651
Figure BDA0002753245770000661
在本发明的一个实施例中，组合物包括两种或更多种非竞争性抗原结合蛋白。表6-1总结了本发明的抗PfRH5抗体之间的交叉竞争。
术语“联合”表示可以将本发明的组分、抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)与另一种试剂(如氯喹)一起配制为单个组合物例如以进行同时递送，或分别配制成两种或更多种组合物(例如，包含每种组分的试剂盒)。可以在与施用其它组分不同的时间将每种组分施用于受试者；例如，每次施用可以在给定的时间间隔内非同时(例如，分别或按照顺序)给予。此外，不同的组分可以通过相同或不同的途径施用于受试者。
测试和诊断
疟疾的早期诊断有助于获得积极的临床结果。本发明提供了用于治疗受试者的恶性疟原虫感染(例如，疟疾)的方法，所述方法包括诊断受试者的感染，并且如果受试者被诊断为具有感染，则向受试者施用治疗有效量的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)。参见例如，Moody,“疟疾寄生虫的快速诊断测试(Rapid Diagnostic Tests forMalaria Parasites)”,《临床微生物学评论(Clinical Microbiology Reviews)》,15(1):66–78(2002)。
恶性疟原虫感染可以通过显微镜(例如，荧光显微镜)诊断。例如，恶性疟原虫可以通过在显微镜下检查例如以“血涂片”的形式散布在显微镜载玻片上(例如，厚血膜或薄血膜)的一滴受试者的血液来鉴定。在检查之前，可以对样本进行染色(例如，用Giemsa染色剂)。本发明包含用于治疗恶性疟原虫感染的方法(如本文所讨论的)，其中所述感染是通过显微镜诊断的。
在本发明的一个实施例中，通过检测恶性疟原虫乳酸脱氢酶来检测来自受试者的样品中恶性疟原虫的存在。如果在测试样品中检测到LDH高于已知的未感染样品的对照样品的LDH，则确定所述测试样品中含有恶性疟原虫。参见例如，Miura、H.Zhou、A.Diouf、SE.Moretz、MP.Fay、LH.Miller、LB.Martin、MA.Pierce、RD.Ellis、GED.Mullen、CA.Long,“如通过外生长抑制测定所确定的，抗顶膜抗原1抗体在抑制恶性疟原虫生长方面比抗42千道尔顿裂殖子表面蛋白1抗体更有效(Anti-Apical-Membrane-Antigen-1antibody ismore effective than anti-42-kilodalton-Merozoite-Surface-Protein-1antibody ininhibiting Plasmodium falciparum growth,as determined by the in vitro growthinhibition assay)”,《临床与疫苗免疫学(Clin Vaccine Immunol.)》,16,963-968(2009),PMID:PMC2708396。
恶性疟原虫核酸的存在也可以通过用于检测例如小亚基18S rRNA和/或环子孢子(CS)基因的聚合酶链反应(PCR)来检测。
恶性疟原虫感染也可以通过检测受试者体内的寄生虫抗原来诊断。例如，在本发明的一个实施例中，抗原是例如通过快速诊断测试按照免疫原性进行检测的。参见例如Van derPalen等人,“用于诊断回程旅行者的疟疾的两种快速抗原检测测试(SD FK50和SD FK60)的测试特征(Test characteristics of two rapid antigen detection tests(SD FK50and SD FK60)for the diagnosis of malaria in returned travelers)”,《疟疾杂志(Malaria Journal)》,8:90(2009)；或美国专利第5712170号。
本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或其抗原结合片段)(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)可以用于检测和/或测量样品(例如，体液(如血液))中的PfRH5(例如，包含PfRH5蛋白的恶性疟原虫细胞)。PfRH5的示例性测定可以包含例如使样品与本发明的抗PfRH5抗原结合蛋白接触，其中，例如，抗PfRH5抗原结合蛋白标记有可检测的标记物或报道分子。如果检测到与PfRH5复合的抗PfRH5抗原结合蛋白，则表明样品中存在PfRH5和/或样品和受试者体内存在恶性疟原虫。
例如，本发明包含使用侧流“免疫色谱”抗原检测测试来检测PfRH5多肽或包含此类多肽(例如，恶性疟原虫)的细胞的方法。此类侧流测试依赖于捕获可检测地标记的抗原结合蛋白(例如，抗体和其抗原结合片段)以在基质条上产生可见带。通过恶性疟原虫疟疾诊断测试，标记的抗原结合蛋白首先与寄生虫抗原PfRH5结合，然后所形成的复合物被一条结合的抗原结合蛋白带捕获在条带上，从而形成一条可见线(测试线)。对照线提供有关抗体-标记缀合物完整性的信息，但不能确认检测寄生虫抗原的能力。
本发明提供了一种用于检测包括基质(例如，硝化纤维素)的样品中PfRH5(例如，恶性疟原虫细胞)的存在的侧流试纸条，所述基质包含以下跨基质侧向分布的区域：
(i)引入样品的地点(spot)(样品区)；
(ii)包含第一抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；或H1H29215P2)的缀合物垫，所述第一抗PfRH5抗原结合蛋白被可检测地标记为具有例如染料，但未固定在基质上；
(iii)含有第二抗PfRH5抗原结合蛋白的测试线，所述第二抗PfRH5抗原结合蛋白未被可检测地标记，并且不显著地与第一抗PfRH5抗原结合蛋白竞争与PfRH5结合，但是被固定在基质上；以及
(iv)含有固定在基质上的第二抗原结合蛋白的对照线，所述第二抗原结合蛋白与第一抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段或蛋白-A)结合。
在本发明的一个实施例中：
(i)一旦将含液体的样品放在样品垫上，样品(以及其中含有的任何PfRH5多肽)就会通过毛细作用在整个基质上扩散到结合垫上，然后扩散到测试线中，并且然后扩散到对照线中；
(ii)到达缀合物垫的PfRH5多肽与可检测地标记的第一抗PfRH5抗原结合蛋白形成复合物，并且所述复合物进一步扩散到测试线中，其中与第二抗PfRH5抗原结合蛋白形成另外的复合物(从而形成三元复合物，其中PfRH5通过所述第一抗原结合蛋白和第二抗原结合蛋白结合并且被固定在测试线内)；
(iii)任何未固定在测试线上的过量的第一抗PfRH5抗原结合蛋白继续扩散到对照线中并且与第二抗原结合蛋白结合，从而被固定在对照线中；和/或
(iv)表明样品中存在PfRH5的阳性测试通过检测线中存在可检测标记指示；(iv)表明样品中缺少可检测水平的PfRH5的阴性测试通过试验线中没有可检测标记指示；并且对照线中的可检测标记表明测试***工作正常。
在本发明的一个实施例中，可检测标记是染料(例如，靛蓝)、酶、铁蛋白、荧光或有色的微粒/珠粒或纳米颗粒/珠粒或胶体金属(例如金、硒染料(例如，在脂质体中)或银(例如，其胶体颗粒)中。在本发明的一个实施例中，可检测标记是视觉可检测的。
在本发明的一个实施例中，所述基质是能够支撑流体流动的不溶性材料，例如玻璃纤维滤纸；天然聚合物材料、纤维素基材料、滤纸、色谱纸、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚丙烯酰胺或交联葡聚糖。
本发明还提供了一种用于确定样品(例如体液，如例如血液)是否含有PfRH5(例如，含有PfRH5(如恶性疟原虫)的细胞)的方法，所述方法包括将本文所示的侧流装置的样品区域与样品接触，等待毛细管流将样品带过基质到达对照线，任选地等待一段时间并且观察测试线和对照线，其中，检测线中存在可检测标记表明样品含有PfRH5，并且对照线中的可检测标记表明侧流试纸条正常工作。测试线上没有可检测标记并且对照线上存在可检测标记表明样品中没有PfRH5。在本发明的一个实施例中，所述方法进一步包括在测试表明样品中存在PfRH5且流动试纸条功能正常的情况下用治疗有效量的抗PfRH5抗原结合蛋白(例如，抗体或抗原结合片段)对样本提取自的受试者进行治疗。
实例
提出以下实例以向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是其发明的范围。已经努力确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，室温是约25℃，并且压力为大气压或接近大气压。
实例1：与PfRH5结合的人抗体的产生
在包括编码人免疫球蛋白重链可变区和κ轻链可变区的DNA的
Figure BDA0002753245770000711
小鼠中产生了针对恶性疟原虫RH5(PfRH5)的人抗体。用重组RH5蛋白(PfRH5ΔNL)对小鼠进行免疫。用重组PfRH5蛋白(PfRH5ΔNL.6his)对一些小鼠进行免疫，然后用从菌株3D7分离的恶性疟原虫裂殖子的增强子免疫。通过PfRH5特异性免疫测定对抗体免疫应答进行监测。如美国专利7582298所述，当获得所需的免疫应答时，收获脾细胞，并直接从抗原阳性的小鼠B细胞中分离抗体，而不与骨髓瘤细胞融合，所述专利特此通过引用以其全文并入本文。使用这种方法，获得了几种完全人抗PfRH5抗体(即，具有人可变结构域和人恒定结构域的抗体)；以这种方式产生的示例性抗体被命名为H1H29089P；H1H29094P；H1H29100P；H1H29104P；H1H29106P；H1H29109P；H1H29125P；H1H29127P；H1H29131P；H1H29134P；H1H29138P；H1H29141P；H1H29143P；H1H29146P2；H1H29147P2；H1H29149P2；H1H29151P2；H1H29163P2；H1H29166P2；H1H29171P2；H1H29179P2；H1H29183P2；H1H29187P2；H1H29192P2；H1H29196P2；H1H29198P2；H1H29207P2；H1H29209P2；H1H29214P2；以及H1H29215P2。
根据此实例的方法产生的示例性抗体的生物学特性在以下所示的实例中进行了详细描述。抗体免疫球蛋白链的序列如下所示。
表1-1：本发明的免疫球蛋白链序列*
Figure BDA0002753245770000721
*与VH、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、VL、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3对应的编号指本文所示的SEQ ID NO。“PEP”指氨基酸序列；“DNA”是指核苷酸序列。
以下示出了表1-1中总结的免疫球蛋白序列及其对应的SEQ ID NO。以下序列也在序列表中，所述序列表通过引用并入本文。
SEQ ID NO:1
GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATA
CAGCTTTACCAGTTACTGGATCGTCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTG
GTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTAC
CTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACAAGATATAACTGGAACTACGGGGTT
TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:2
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIVWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAY
LQWSSLKASDTAMYYCARQDITGTTGFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:3
GGA TAC AGC TTT ACC AGT TAC TGG；
SEQ ID NO:4
G Y S F T S Y W；
SEQ ID NO:5
ATC TAT CCT GGT GAC TCT GAT ACC；
SEQ ID NO:6
I Y P G D S D T；
SEQ ID NO:7
GCG AGA CAA GAT ATA ACT GGA ACT ACG GGG TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:8
A R Q D I T G T T G F D Y；
SEQ ID NO:9
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGGAACTATTTGAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTATTTCTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGA；
SEQ ID NO:10
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYFCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKR；
SEQ ID NO:11
CAG AGC ATT AGG AAC TAT；
SEQ ID NO:12
Q S I R N Y；
SEQ ID NO:13
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:14
A A S；
SEQ ID NO:15
CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT；
SEQ ID NO:16
Q Q S Y S T P F T；
SEQ ID NO:17
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGCGACTCTCCTGTTCAGGCACTGGATT
CACCTTCAGTAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAATGGGTGGCACTTATATCATATG
ATGGAAGTAATAAATATTATGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCT
CTGCAAATGAACAGCCTGAAAACTGAGGACACGGCGATATATTACTGTGCGAAAGAGAGGCTTTTTGGAGTGGTCTCTTA
TTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:18
QVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCSGTGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVALISYDGSNKYYGDSVKGRFTVSRDNSKNTLS
LQMNSLKTEDTAIYYCAKERLFGVVSYYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:19
GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GCC；
SEQ ID NO:20
G F T F S S Y A；
SEQ ID NO:21
ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:22
I S Y D G S N K；
SEQ ID NO:23
GCG AAA GAG AGG CTT TTT GGA GTG GTC TCT TAT TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:24
A K E R L F G V V S Y Y G M D V；
SEQ ID NO:25
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA
GGACATTAATAGGGATCTAAATTGGTATCAGCAGAAATCAGGGAAAGGCCCCAAACTCCTGATCTACGATGCATCCAATT
TGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAATAGATTTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGACTGCAGCCT
GAAGATATTGCAACATATTTCTGTCAACAGTATAAAAATCTCCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGA；
SEQ ID NO:26
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRDLNWYQQKSGKGPKLLIYDASNLETGVPSRFSGNRFGTDFTFTISRLQP
EDIATYFCQQYKNLPYTFGQGTKLEIKR；
SEQ ID NO:27
CAG GAC ATT AAT AGG GAT；
SEQ ID NO:28
Q D I N R D；
SEQ ID NO:29
GAT GCA TCC；
SEQ ID NO:30
D A S；
SEQ ID NO:31
CAA CAG TAT AAA AAT CTC CCG TAC ACT；
SEQ ID NO:32
Q Q Y K N L P Y T；
SEQ ID NO:33
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGATTATCT
ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAGGACAGGGAGGCCCTCTTTGA
CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:34
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGIIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF
SLKLSSVTAADTAVYYCARQDREALFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:35
GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC；
SEQ ID NO:36
G G S I S S S S Y Y；
SEQ ID NO:37
ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC；
SEQ ID NO:38
I Y Y S G S T；
SEQ ID NO:39
GCG AGA CAG GAC AGG GAG GCC CTC TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:40
A R Q D R E A L F D Y；
SEQ ID NO:41
GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGACTTTCAGTCTGTGACTCCAAAGGAGAAAGTCACCATCACCTGCCGGGCCAGTCA
GCGCATTGGTAGTAGCTTACACTGGTACCAGCAGAAACCAGATCAGTCTCCAAAGCTCCTCATCAAGTATGCTTCCCAGT
CCTTCTCAGGGGTCCCCTCGAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACCCTCACCATCAATAGCCTGGAAGCT
GAAGATGCTGCAACGTATTACTGTCATCAGAGTAGTACTTTACCCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGA；
SEQ ID NO:42
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQRIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEA
EDAATYYCHQSSTLPTFGQGTRLEIKR；
SEQ ID NO:43
CAG CGC ATT GGT AGT AGC；
SEQ ID NO:44
Q R I G S S；
SEQ ID NO:45
TAT GCT TCC；
SEQ ID NO:46
Y A S；
SEQ ID NO:47
CAT CAG AGT AGT ACT TTA CCC ACC；
SEQ ID NO:48
H Q S S T L P T；
SEQ ID NO:49
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CAGGTTTGACGATTATGCCATGCACTGGGTCCGACAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCAGGTATTAATTGGA
ATAGTGGTGGCAAAGGCTATGCGGACTCTGTGCAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTTTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAACTGAGGACACGGCCTTGTATTATTGTGCAAAAGATAGGGGTATAGCAGCTCGTCTTCT
CTCTCGTGATGCTTTTGATATGTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA；
SEQ ID NO:50
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFRFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGINWNSGGKGYADSVQGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRTEDTALYYCAKDRGIAARLLSRDAFDMWGQGTMVTVSS；
SEQ ID NO:51
GGA TTC AGG TTT GAC GAT TAT GCC；
SEQ ID NO:52
G F R F D D Y A；
SEQ ID NO:53
ATT AAT TGG AAT AGT GGT GGC AAA；
SEQ ID NO:54
I N W N S G G K；
SEQ ID NO:55
GCA AAA GAT AGG GGT ATA GCA GCT CGT CTT CTC TCT CGT GAT GCT TTT GAT ATG；
SEQ ID NO:56
A K D R G I A A R L L S R D A F D M；
SEQ ID NO:57
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCTGGGCCAGTCA
GGACGTTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAATCCCCTAAGCTCCTAATCTTTGCTGCATCCACTT
TGCAAGGTGGGATCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCGGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACACCTTAATACTTACCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGA；
SEQ ID NO:58
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQDVSSYLAWYQQKPGKSPKLLIFAASTLQGGIPSRFSGSGSGTEFTLTISSLRP
EDFATYYCQHLNTYPYTFGQGTKLEIKR；
SEQ ID NO:59
CAG GAC GTT AGC AGT TAT；
SEQ ID NO:60
Q D V S S Y；
SEQ ID NO:61
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:62
A A S；
SEQ ID NO:63
CAA CAC CTT AAT ACT TAC CCG TAC ACT；
SEQ ID NO:64
Q H L N T Y P Y T；
SEQ ID NO:65
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGTCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTTCATT
CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATAAGTTATG
ATGGAAGTAATAAATACTATGGAGACTTCGTGAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATGTATTATTGTGCGAGAGAAGTTCGTCGCTACTATTATTACGG
TATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:66
QVQLVESGGGVVQSGRSLRLSCAASSFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVISYDGSNKYYGDFVRGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAMYYCAREVRRYYYYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:67
TCA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:68
S F T F S S Y G；
SEQ ID NO:69
ATA AGT TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:70
I S Y D G S N K；
SEQ ID NO:71
GCG AGA GAA GTT CGT CGC TAC TAT TAT TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:72
A R E V R R Y Y Y Y G M D V；
SEQ ID NO:73
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA
GGACATTAGTAATTATTTAAATTGGTATCTGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCCGATGCATCCAATT
TGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATAATAATCTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:74
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYLQKPGKAPKLLISDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP
EDIATYYCQQYNNLPLTFGGGTKVEIKR；
SEQ ID NO:75
CAG GAC ATT AGT AAT TAT；
SEQ ID NO:76
Q D I S N Y；
SEQ ID NO:77
GAT GCA TCC；
SEQ ID NO:78
D A S；
SEQ ID NO:79
CAA CAG TAT AAT AAT CTC CCG CTC ACT；
SEQ ID NO:80
Q Q Y N N L P L T；
SEQ ID NO:81
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGA
ATAGTGGTGACATAGACTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGATACCCTCTCAGGGACTGGAACTAC
GTGGTACTATTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:82
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAVSGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSGDIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKDTLSGTGTTWYYFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:83
GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC；
SEQ ID NO:84
G F T F D D Y A；
SEQ ID NO:85
ATT AGT TGG AAT AGT GGT GAC ATA；
SEQ ID NO:86
I S W N S G D I；
SEQ ID NO:87
GCA AAA GAT ACC CTC TCA GGG ACT GGA ACT ACG TGG TAC TAT TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:88
A K D T L S G T G T T W Y Y F D Y；
SEQ ID NO:89
GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCTGGGCCAGTCA
GGGTATTAGCAGTTATTTAATCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGGTGAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:90
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGISSYLIWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQP
EDFATYYCQQVNSYPLTFGGGTKVEIKR；
SEQ ID NO:91
CAG GGT ATT AGC AGT TAT；
SEQ ID NO:92
Q G I S S Y；
SEQ ID NO:93
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:94
A A S；
SEQ ID NO:95
CAA CAG GTG AAT AGT TAC CCT CTC ACT；
SEQ ID NO:96
Q Q V N S Y P L T；
SEQ ID NO:97
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTAGTTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGATGGCAGTTATATCATATG
ATGGAAGTAATAAATATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTTT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGACCTGAAGACACGGCTGTATATTACTGTGCGCAAGATGGCAGCTCGGCGATTTACTATTT
CTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:98
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLF
LQMNSLRPEDTAVYYCAQDGSSAIYYFYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:99
GGA TTC ACC TTC AGT AGT TAT GGC；
SEQ ID NO:100
G F T F S S Y G；
SEQ ID NO:101
ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:102
I S Y D G S N K；
SEQ ID NO:103
GCG CAA GAT GGC AGC TCG GCG ATT TAC TAT TTC TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:104
A Q D G S S A I Y Y F Y G M D V；
SEQ ID NO:105
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTATAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCA
GGACATCAACAATTATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCTTCAGTATAATAGTTACCATCCCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:106
DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCLQYNSYHPTFGQGTKLEIKR；
SEQ ID NO:107
CAG GAC ATC AAC AAT TAT；
SEQ ID NO:108
Q D I N N Y；
SEQ ID NO:109
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:110
A A S；
SEQ ID NO:111
CTT CAG TAT AAT AGT TAC CAT CCC ACT；
SEQ ID NO:112
L Q Y N S Y H P T；
SEQ ID NO:113
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT
CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGCTATATGGTATG
ATGGAAGTAATAAATATTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAGAGGGGAACATTACTATGGTTCGGGGCC
GTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:114
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAVYFCARGEHYYGSGPFDPWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:115
GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:116
G F T F S S Y G；
SEQ ID NO:117
ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:118
I W Y D G S N K；
SEQ ID NO:119
GCG AGA GGG GAA CAT TAC TAT GGT TCG GGG CCG TTC GAC CCC；
SEQ ID NO:120
A R G E H Y Y G S G P F D P；
SEQ ID NO:121
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTTTGCTGCATCCAGTT
TACAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTTCCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:122
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIFAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSSPLTFGGGTKVEIKR；
SEQ ID NO:123
CAG AGC ATT AGC AAC TAT；
SEQ ID NO:124
Q S I S N Y；
SEQ ID NO:125
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:126
A A S；
SEQ ID NO:127
CAA CAG AGT TAC AGT TCC CCG CTC ACT；
SEQ ID NO:128
Q Q S Y S S P L T；
SEQ ID NO:129
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCAGGTGG
CTCCATCAGCAGTTTTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCT
ATTACAGTGGGAGCATCGACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAATTACCATATCAGTCGACACGTCTAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAAGGGACTACGGTGACTACTT
TGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:130
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSIDYNPSLKSRITISVDTSKNQF
SLKLSSVTAADTAVYYCARERDYGDYFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:131
GGT GGC TCC ATC AGC AGT TTT GGT TAC TAC；
SEQ ID NO:132
G G S I S S F G Y Y；
SEQ ID NO:133
ATC TAT TAC AGT GGG AGC ATC；
SEQ ID NO:134
I Y Y S G S I；
SEQ ID NO:135
GCG AGA GAA AGG GAC TAC GGT GAC TAC TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:136
A R E R D Y G D Y F D Y；
SEQ ID NO:137
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTCTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCA
GGGCCACTGGTGTCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGTTTGCAGTCT
GAGGATTTTGCAGTTTATTCCTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:138
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQS
EDFAVYSCQQYNNWPLTFGGGTKVEIKR；
SEQ ID NO:139
CAG AGT GTT AGC AGC AAC；
SEQ ID NO:140
Q S V S S N；
SEQ ID NO:141
GGT GCA TCC；
SEQ ID NO:142
G A S；
SEQ ID NO:143
CAG CAG TAT AAT AAC TGG CCT CTC ACT；
SEQ ID NO:144
Q Q Y N N W P L T；
SEQ ID NO:145
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT
CACCTTCAGTAGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATGGTATG
ATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCAGGATTACTATGGTTCGGGGAG
TTCCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:146
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGIHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAVYYCARDQDYYGSGSSYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:147
GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:148
G F T F S S Y G；
SEQ ID NO:149
ATA TGG TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:150
I W Y D G S N K；
SEQ ID NO:151
GCG AGA GAT CAG GAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TCC TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:152
A R D Q D Y Y G S G S S Y G M D V；
SEQ ID NO:153
GACATCCAGATGACCCAGTCGCCAGCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCTCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:154
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTKLEIKR；
SEQ ID NO:155
CAG AGC ATT AGC AGC TAT；
SEQ ID NO:156
Q S I S S Y；
SEQ ID NO:157
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:158
A A S；
SEQ ID NO:159
CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CTC ACT；
SEQ ID NO:160
Q Q S Y S T P L T；
SEQ ID NO:161
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT
CACCTTCAGTACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATG
ATGGAACTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGATCAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACCCCTCAGGTGGGGACCACTACTA
TTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:162
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMISLRAEDTAVYYCARDPSGGDHYYYYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:163
GGA TTC ACC TTC AGT ACC TAT GGC；
SEQ ID NO:164
G F T F S T Y G；
SEQ ID NO:165
ATA TGG TAT GAT GGA ACT AAT AAA；
SEQ ID NO:166
I W Y D G T N K；
SEQ ID NO:167
GCG AGA GAC CCC TCA GGT GGG GAC CAC TAC TAT TAC TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:168
A R D P S G G D H Y Y Y Y G M D V；
SEQ ID NO:169
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAATCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA
GGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTCCGATGCATCCGATT
TGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATTTTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATATACCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAA
ACGA；
SEQ ID NO:170
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPNLLISDASDLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP
EDFATYYCQQYDNIPITFGQGTRLEIKR；
SEQ ID NO:171
CAG GAC ATT AGC AAC TAT；
SEQ ID NO:172
Q D I S N Y；
SEQ ID NO:173
GAT GCA TCC；
SEQ ID NO:174
D A S；
SEQ ID NO:175
CAA CAG TAT GAT AAT ATA CCG ATC ACC；
SEQ ID NO:176
Q Q Y D N I P I T；
SEQ ID NO:177
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGACATTTATATCATTTG
ATGAAAGGAATAAATACTATGCAGACTCCGTTAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTATGTATTACTGTGCGAGCGAAGTCGGGTACAGTTTTGGTCATGA
TGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA；
SEQ ID NO:178
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVTFISFDERNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAMYYCASEVGYSFGHDAFDIWGQGTMVTVSS；
SEQ ID NO:179
GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:180
G F T F S S Y G；
SEQ ID NO:181
ATA TCA TTT GAT GAAAGG AAT AAA；
SEQ ID NO:182
I S F D E R N K；
SEQ ID NO:183
GCG AGC GAA GTC GGG TAC AGT TTT GGT CAT GAT GCT TTT GAT ATC；
SEQ ID NO:184
A S E V G Y S F G H D A F D I；
SEQ ID NO:185
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCA
GGACATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAGAAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTACGATGCATCCAATT
TGGAAACAGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCT
GAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATTTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:186
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQKKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQP
EDIATYYCQQYDNFPLTFGGGTKVEIKR；
SEQ ID NO:187
CAG GAC ATT AGC AAC TAT；
SEQ ID NO:188
Q D I S N Y；
SEQ ID NO:189
GAT GCA TCC；
SEQ ID NO:190
D A S；
SEQ ID NO:191
CAA CAG TAT GAT AAT TTC CCG CTC ACT；
SEQ ID NO:192
Q Q Y D N F P L T；
SEQ ID NO:193
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTAACAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAGGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTA
GTGGTGATAGCACATACTACTCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCAGGGCCTGTATTACTATGGTTC
GGGGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:194
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYAMSWVRQAPGRGLEWVSAISGSGDSTYYSDSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAKDQGLYYYGSGSFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:195
GGA TTC ACC TTT AAC AAC TAT GCC；
SEQ ID NO:196
G F T F N N Y A；
SEQ ID NO:197
ATT AGT GGT AGT GGT GAT AGC ACA；
SEQ ID NO:198
I S G S G D S T；
SEQ ID NO:199
GCG AAA GAT CAG GGC CTG TAT TAC TAT GGT TCG GGG AGT TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:200
A K D Q G L Y Y Y G S G S F D Y；
SEQ ID NO:201
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCCAAGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATATCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCC
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAA
ACGA；
SEQ ID NO:202
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIQAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDITLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPFTFGPGTKVDIKR；
SEQ ID NO:203
CAG AGC ATT AGC AGC TAT；
SEQ ID NO:204
Q S I S S Y；
SEQ ID NO:205
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:206
A A S；
SEQ ID NO:207
CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCA TTC ACT；
SEQ ID NO:208
Q Q S Y S T P F T；
SEQ ID NO:209
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGCAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTT
TGCCTTCAGCGACTCTGCTATATACTGGGTCCGCCAGGCTTCCGGGAAAGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGCATTAGAAACA
AAGCTAATAGGTTCGCGACAGCATATGGTGCGTCGGTGAAAGGCAGGTTCAGCATACACAGAGATGATTCAAAGAACACG
GCGTATCTACAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCCAGACATGGACACGATACTTTGAC
TGAGGGCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:210
EVQLVESGGGLVQPGGSLQLSCAASGFAFSDSAIYWVRQASGKGLEWVGRIRNKANRFATAYGASVKGRFSIHRDDSKNT
AYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGHDTLTEGYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:211
GGG TTT GCC TTC AGC GAC TCT GCT；
SEQ ID NO:212
G F A F S D S A；
SEQ ID NO:213
ATT AGAAAC AAA GCT AAT AGG TTC GCG ACA；
SEQ ID NO:214
I R N K A N R F A T；
SEQ ID NO:215
GCC AGA CAT GGA CAC GAT ACT TTG ACT GAG GGC TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:216
A R H G H D T L T E G Y G M D V；
轻链#1-SEQ ID NO:217
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCA
GAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTT
TGCAAAGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCT
GAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGAT
TAAA；
轻链#1-SEQ ID NO:218
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP
EDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK；
SEQ ID NO:219
CAG AGC ATT AGC AGC TAT；
SEQ ID NO:220
Q S I S S Y；
SEQ ID NO:221
GCT GCA TCC；
SEQ ID NO:222
A A S；
SEQ ID NO:223
CAA CAG AGT TAC AGT ACC CCT CCG ATC ACC；
SEQ ID NO:224
Q Q S Y S T P P I T；
SEQ ID NO:225
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTAAAGAACCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGG
CACCTTCAGCAGTTATACTATCAACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTC
TCTATGGAACAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGCCAGAGTCACGATTTCCACGGACGAATCCACGAACACAGCCTAC
ATGGAACTGAGCAACCTGAGATTTGAAGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGTACACTGGAACTACGGGCTTTTGATGC
CTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA；
SEQ ID NO:226
QVQLVQSGAEVKNPGSSVKVSCKASGGTFSSYTINWVRQAPGQGLEWMGGIIPLYGTANYAQKFQARVTISTDESTNTAY
MELSNLRFEDTAVYFCASTLELRAFDAFDIWGQGTMVTVSS；
SEQ ID NO:227
GGA GGC ACC TTC AGC AGT TAT ACT；
SEQ ID NO:228
G G T F S S Y T；
SEQ ID NO:229
ATC ATC CCT CTC TAT GGA ACA GCA；
SEQ ID NO:230
I I P L Y G T A；
SEQ ID NO:231
GCG AGT ACA CTG GAA CTA CGG GCT TTT GAT GCC TTT GAT ATC；
SEQ ID NO:232
A S T L E L R A F D A F D I；
SEQ ID NO:233
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAACTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCT
ATTACAGTGGAAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGGGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGCTCCTCCTTATAACTGGTTTGA
CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:234
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWNWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF
SLKLGSVTAADTAVYYCARAPPYNWFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:235
GGT GGC TCC ATC AGC AGT GGT GGT TAC TAC；
SEQ ID NO:236
G G S I S S G G Y Y；
SEQ ID NO:237
ATC TAT TAC AGT GGA AGC ACC；
SEQ ID NO:238
I Y Y S G S T；
SEQ ID NO:239
GCG CGA GCT CCT CCT TAT AAC TGG TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:240
A R A P P Y N W F D Y；
SEQ ID NO:241
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTGACTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTTTCATACATTAGTAATA
GTGGTAATACCCAATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGGGACAATGCCAAGAACTCCCTGTTT
CTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGAGAGAGGGACTCGAATATAGCAGCTCGGA
GCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:242
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWVRQAPGKGLEWVSYISNSGNTQYYADSVKGRFTISRDNAKNSLF
LQMNSLRAEDTAVYYCTREGLEYSSSEPFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:243
GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAC TAC；
SEQ ID NO:244
G F T F S D Y Y；
SEQ ID NO:245
ATT AGT AAT AGT GGT AAT ACC CAA；
SEQ ID NO:246
I S N S G N T Q；
SEQ ID NO:247
ACG AGA GAG GGA CTC GAA TAT AGC AGC TCG GAG CCC TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:248
T R E G L E Y S S S E P F D Y；
SEQ ID NO:249
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGACTTCTGGATA
CACCTTCACCGCCTACTACATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTA
ACAATGGTGACACAAACTATGCACTGAGGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACATGTCCATCAACACAGCCTAC
ATGGAGCTGCGCGGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGATGATCTAGCAGCAGCGGGTATCGG
CTGGTTCGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:250
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTAYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGDTNYALRFQGRVTMTRDMSINTAY
MELRGLRSDDTAVYYCARDDLAAAGIGWFDSWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:251
GGA TAC ACC TTC ACC GCC TAC TAC；
SEQ ID NO:252
G Y T F T A Y Y；
SEQ ID NO:253
ATC AAC CCT AAC AAT GGT GAC ACA；
SEQ ID NO:254
I N P N N G D T；
SEQ ID NO:255
GCG AGA GAT GAT CTA GCA GCA GCG GGT ATC GGC TGG TTC GAC TCC；
SEQ ID NO:256
A R D D L A A A G I G W F D S；
SEQ ID NO:257
GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGCTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATT
CACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGAATTAGTTGGA
ATAGTGAAAGTATAGGCTATGCGGACTCTGTGAGGGGCCGATTCACCATTTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTAT
CTCCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGTGCAAAAGCCCCGTATAGTGGGACCTACTTCGA
ATACTTCCGCCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:258
EVQLVESGGGLLQPGRSLRLSCVASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSESIGYADSVRGRFTISRDNAKNSLY
LQMNSLRAEDTALYYCAKAPYSGTYFEYFRHWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:259
GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT GCC；
SEQ ID NO:260
G F T F D D Y A；
SEQ ID NO:261
ATT AGT TGG AAT AGT GAA AGT ATA；
SEQ ID NO:262
I S W N S E S I；
SEQ ID NO:263
GCA AAA GCC CCG TAT AGT GGG ACC TAC TTC GAA TAC TTC CGC CAC；
SEQ ID NO:264
A K A P Y S G T Y F E Y F R H；
SEQ ID NO:265
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATG
ATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATGACTGGAACTACGACGCCTTTGA
TATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA；
SEQ ID NO:266
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAKDDWNYDAFDIWGQGTMVTVSS；
SEQ ID NO:267
GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:268
G F T F S S Y G；
SEQ ID NO:269
ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAT AAA；
SEQ ID NO:270
I S Y D G S N K；
SEQ ID NO:271
GCG AAA GAT GAC TGG AAC TAC GAC GCC TTT GAT ATC；
SEQ ID NO:272
A K D D W N Y D A F D I；
SEQ ID NO:273
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAGGGGCCTGGAGTGGATTGGATACATCT
ATTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGAACTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGGACTATGGTTCGGGGAGTTC
GTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:274
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGRGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF
SLKLNSVTAADTAVYYCARVDYGSGSSFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:275
GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT GGT TAC TAC；
SEQ ID NO:276
G G S I S S S G Y Y；
SEQ ID NO:277
ATC TAT TAC AGT GGG AGC ACC；
SEQ ID NO:278
I Y Y S G S T；
SEQ ID NO:279
GCG AGA GTG GAC TAT GGT TCG GGG AGT TCG TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:280
A R V D Y G S G S S F D Y；
SEQ ID NO:281
CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGACCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTA
CACCTTTACCAGCTATGGCATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGCTGGGATGGATCAGCGGTT
TCAATGGTAGAACAGACTATACAGAGAAGCTCCAGGACAGAATCACCATGACCACAGACAGATCCTCGAGCACAGCCTAC
ATGGAACTGAGGAGCCTGAGATATGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGACTGGAAAAACTTGGTGACTA
CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:282
QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWLGWISGFNGRTDYTEKLQDRITMTTDRSSSTAY
MELRSLRYDDTAVYYCARDGLEKLGDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:283
GGT TAC ACC TTT ACC AGC TAT GGC；
SEQ ID NO:284
G Y T F T S Y G；
SEQ ID NO:285
ATC AGC GGT TTC AAT GGT AGA ACA；
SEQ ID NO:286
I S G F N G R T；
SEQ ID NO:287
GCG AGA GAT GGA CTG GAA AAA CTT GGT GAC TAC；
SEQ ID NO:288
A R D G L E K L G D Y；
SEQ ID NO:289
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCGGGGAGGTTCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATT
CACCTTCAGTAACTCTGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGGAATATGGCATG
ATGGAAGTTATAAATATTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCTAAGAACACGCTGTTT
CTGCAAATGAACAGCCTGCGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTATTGTGCGAGAGATGATTACTATGCTTCGGGGACCAG
CGTGGACGTATGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:290
QVQLVESGGGVVQPGRFLRLSCAASGFTFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAGIWHDGSYKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLF
LQMNSLRAEDTAVYYCARDDYYASGTSVDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:291
GGA TTC ACC TTC AGT AAC TCT GGC；
SEQ ID NO:292
G F T F S N S G；
SEQ ID NO:293
ATA TGG CAT GAT GGA AGT TAT AAA；
SEQ ID NO:294
I W H D G S Y K；
SEQ ID NO:295
GCG AGA GAT GAT TAC TAT GCT TCG GGG ACC AGC GTG GAC GTA；
SEQ ID NO:296
A R D D Y Y A S G T S V D V；
SEQ ID NO:297
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAGGGTCTCCTGCATGGCCTCTGGATA
CACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTA
ACAGTGGTGGCACAAAATATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTAC
ATGGAGCTGAGCAGACTGAGATCTGACGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAGAGAAGAAGTCGACGATTTTTGGAGTGG
TTACCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:298
QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCMASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAY
MELSRLRSDDTAVYYCAREEVDDFWSGYLDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:299
GGA TAC ACC TTC ACC GGC TAC TAT；
SEQ ID NO:300
G Y T F T G Y Y；
SEQ ID NO:301
ATC AAC CCT AAC AGT GGT GGC ACA；
SEQ ID NO:302
I N P N S G G T；
SEQ ID NO:303
GCG AGA GAA GAA GTC GAC GAT TTT TGG AGT GGT TAC CTT GAC TAC；
SEQ ID NO:304
A R E E V D D F W S G Y L D Y；
轻链#2-SEQ ID NO:305
GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA
GAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA
GCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAG
CCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAAT
CAAA；
轻链#2-SEQ ID NO:306
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLE
PEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK；
SEQ ID NO:307
CAG AGT GTT AGC AGC AGC TAC；
SEQ ID NO:308
Q S V S S S Y；
SEQ ID NO:309
GGT GCA TCC；
SEQ ID NO:310
G A S；
SEQ ID NO:311
CAG CAG TAT GGT AGC TCA CCT TGG ACG；
SEQ ID NO:312
Q Q Y G S S P W T；
SEQ ID NO:313
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGACTTGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTT
CGCCGTCAATGGCGACTATTTTAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCTCAGTTATTTATAGCA
GTGGTAACACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGACACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTT
CAAATGAGCAGCCTAAGACCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACTTCCCTCCAATGTCTGGTGCGGACTA
CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:314
EVQLVESGGDLVQPGGSLRLSCAASGFAVNGDYFSWVRQAPGKGLEWISVIYSSGNTYYADSVKGRFTISRHNSKNTLYL
QMSSLRPEDTAVYYCARDFPPMSGADYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:315
GGG TTC GCC GTC AAT GGC GAC TAT；
SEQ ID NO:316
G F A V N G D Y；
SEQ ID NO:317
ATT TAT AGC AGT GGT AAC ACA；
SEQ ID NO:318
I Y S S G N T；
SEQ ID NO:319
GCG AGA GAC TTC CCT CCA ATG TCT GGT GCG GAC TAC；
SEQ ID NO:320
A R D F P P M S G A D Y；
SEQ ID NO:321
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTTTCCGGATA
CACCCTCACTGAATTGTCCATGCACTGGGTGCGACAGGCTCCTGGAAAAGGGCTTGAATGGATGGGAGGTTTTGATCCTG
AACATGGTAAAATAATCTACGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCGAGGACACATCTACAGACACAGCCTAC
ATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTGCAACATTTTATAACTGGAACTCCTACTACTT
CGGTATGGACGTCTGGGGCCACGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:322
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLTELSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEHGKIIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAY
MELSSLRSEDTAVYYCATFYNWNSYYFGMDVWGHGTTVTVSS；
SEQ ID NO:323
GGA TAC ACC CTC ACT GAA TTG TCC；
SEQ ID NO:324
G Y T L T E L S；
SEQ ID NO:325
TTT GAT CCT GAA CAT GGT AAA ATA；
SEQ ID NO:326
F D P E H G K I；
SEQ ID NO:327
GCA ACA TTT TAT AAC TGG AAC TCC TAC TAC TTC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:328
A T F Y N W N S Y Y F G M D V；
SEQ ID NO:329
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATT
CACCTTTAGCAGCTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCTCAGCTGTTAGTGGAA
GTGCTGATATCACAAACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAACACACGCTGTAT
CTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAGGATAAAGTGTATAACTGGAACTACGG
GATCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:330
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSAVSGSADITNYADSVKGRFTISRDNSKHTLY
LQMNSLRAEDTAVYYCAKDKVYNWNYGIYYGMDVWGQGTTVTVSS；
SEQ ID NO:331
GGA TTC ACC TTT AGC AGC TAT GCC；
SEQ ID NO:332
G F T F S S Y A；
SEQ ID NO:333
GTT AGT GGA AGT GCT GAT ATC ACA；
SEQ ID NO:334
V S G S A D I T；
SEQ ID NO:335
GCG AAG GAT AAA GTG TAT AAC TGG AAC TAC GGG ATC TAC TAC GGT ATG GAC GTC；
SEQ ID NO:336
A K D K V Y N W N Y G I Y Y G M D V；
SEQ ID NO:337
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGACTAGAGTGGATTGGGAGTATCT
ATTATAGTGGGAGCACCTACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACAAGGGAGGTGGGAGCGAGAAAA
CTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:338
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF
SLKLSSVTAADTAVYYCARQGRWERENFDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:339
GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGT AGT TAC TAC；
SEQ ID NO:340
G G S I S S S S Y Y；
SEQ ID NO:341
ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC；
SEQ ID NO:342
I Y Y S G S T；
SEQ ID NO:343
GCG AGA CAA GGG AGG TGG GAG CGA GAA AAC TTT GAC TAC；
SEQ ID NO:344
A R Q G R W E R E N F D Y；
SEQ ID NO:345
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTATTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGATGA
GTCCTTCAGTGATTACTACTGGACCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATTACTCATA
GTGGAAGTACCCACTACAACCCGTCCCTCAAGAGCCGAGTCACCCTGTCAGTTGACACGTCCAAGAACCACTTCTCCCTG
AGCCTCAACTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTATTTATTACTGTGCGAGAGGCGGTGACTACGGTGGTTTACTTGACTA
CTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQ ID NO:346
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVSDESFSDYYWTWIRQPPGKGLEWIGEITHSGSTHYNPSLKSRVTLSVDTSKNHFSL
SLNSVTAADTAIYYCARGGDYGGLLDYWGQGTLVTVSS；
SEQ ID NO:347
GAT GAG TCC TTC AGT GAT TAC TAC；
SEQ ID NO:348
D E S F S D Y Y；
SEQ ID NO:349
ATT ACT CAT AGT GGA AGT ACC；
SEQ ID NO:350
I T H S G S T；
SEQ ID NO:351
GCG AGA GGC GGT GAC TAC GGT GGT TTA CTT GAC TAC；
SEQ ID NO:352
A R G G D Y G G L L D Y；
SEQ ID NO:353
CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGG
CTCCATCAGCAGTAGGAGTCACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCT
ATTATAGTGGGAGCACCTATTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTC
TCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGACTTGGCTGGTACGCAGAGGAGGC
TTTTGAAATCTGGGGTCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA；
SEQ ID NO:354
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSRSHYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQF
SLKLSSVTAADTAVYYCARLGWYAEEAFEIWGQGTMVTVSS；
SEQ ID NO:355
GGT GGC TCC ATC AGC AGT AGG AGT CAC TAC；
SEQ ID NO:356
G G S I S S R S H Y；
SEQ ID NO:357
ATC TAT TAT AGT GGG AGC ACC；
SEQ ID NO:358
I Y Y S G S T；
SEQ ID NO:359
GCG AGA CTT GGC TGG TAC GCA GAG GAG GCT TTT GAA ATC；
SEQ ID NO:360
A R L G W Y A E E A F E I
实例2：用于评估抗PfRH5抗体抑制恶性疟原虫寄生虫对人红细胞的体外侵袭和其生长的能力的生长抑制测定。
在此实例中，对本发明的一组四种PfRH5特异性mAb单独测试，并且在标准生长抑制测定将其与一种恶性疟原虫菌株(Dd2)组合测试。
实验程序
在测定开始前20-24小时，将恶性疟原虫菌株Dd2(BEI Resources公司(BEIResources))在3-5％血细胞比容和1-2％寄生虫血症下首先按照标准方案与5％山梨醇同步。在0.4-0.7％的起始寄生虫血症和2％的血细胞比容下制备受感染的人红细胞。将受感染的红细胞与PfRH5特异性抗体或对照抗体组合，以666.67nM的浓度开始，并且对每种抗体或抗体组合进行1:5的连续稀释。使用的所有抗体都是人IgG1。寄生虫生长40-48小时，直到达到***期(一个完整的生命周期)。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。通过测定寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性来确定最终的寄生虫血症(Miura、H.Zhou、A.Diouf、SE.Moretz、MP.Fay、LH.Miller、LB.Martin、MA.Pierce、RD.Ellis、GED.Mullen、CA.Long,“如通过外生长抑制测定所确定的，抗顶膜抗原1抗体在抑制恶性疟原虫生长方面比抗42千道尔顿裂殖子表面蛋白1抗体更有效”,(《临床与疫苗免疫学》,16,963-968(2009),PMID:PMC2708396)。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。
结果总结和结论
在如上所述的实验室适应菌株中，在体外生长抑制测定中产生并测试了PfRH5特异性抗体。表2-1示出了PfRH5特异性抗体子集和PfRH5特异性抗体组合的最大生长抑制百分比。单个抗体和抗体组合显示出相似的最大生长抑制百分比，范围约为51-69％。
表2-1：恶性疟原虫菌株Dd2抗PfRH5抗体的最大生长抑制活性总结。*
Figure BDA0002753245770001181
*相对于未感染的人红细胞抗PfRH5抗体的最大生长抑制。在0.4-0.7％的寄生虫血症下，对感染恶性疟原虫(成熟滋养体或早期***体)的红细胞进行生长抑制测定。将抗体与受感染的红细胞组合在一起。使寄生虫生长40-48小时(时间取决于寄生虫菌株)，直到达到***期。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。洗涤后立即测量寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。生长抑制测定中的一项有代表性的测定的结果如上所示。
实例3：用于评估抗PfRH5抗体与氯喹组合抑制恶性疟原虫寄生虫对人红细胞的体外侵袭和其生长的能力的生长抑制测定。
在此实例中，对本发明的四种PfRH5特异性mAb的子集单独测试，并将其与在采用两个实验室菌株的标准生长抑制测定的常用的抗疟药物氯喹(CQ)组合测试。恶性疟原虫寄生虫的一个菌株3D7对氯喹敏感，而株系7G8对这种药物有抗药性。
实验程序
在测定开始前20-24小时，将每个恶性疟原虫菌株(BEI Resources公司)在3-5％血细胞比容和1-2％寄生虫血症下首先按照标准方案与5％山梨醇同步。在0.4-0.7％的起始寄生虫血症和2％的血细胞比容下制备受感染的人红细胞。将受感染的红细胞与PfRH5特异性抗体或对照抗体组合，以666.67nM的浓度开始，并在两个浓度4.91或6.58nM中的一个下对每种IgG1抗体和氯喹进行1:5的连续稀释。这两个浓度是根据具有敏感的3D7菌株的氯喹的IC25(4.91nM)和IC50(6.58nM)进行选择的。寄生虫生长40-48小时，直到达到***期(一个完整的生命周期)。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。通过测定寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性来确定最终的寄生虫血症。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。
结果总结和结论
表3-1显示了每种抗体单用和抗体/氯喹组合的最大生长抑制百分比。将氯喹与PfRH5特异性抗体组合进一步增加了在3D7菌株中单独通过抗体单用获得的最大生长抑制百分比。抗体单用的最大生长抑制率为约34％到61％，而在mAb中加入4.81nM CQ具有相似的最大生长抑制(32％到51％)。向mAb中加入6.58nM的CQ使生长抑制范围增加了至少20％，达到59％到75％。另一方面，单个抗体和抗体/药物组合显示出与7G8菌株相似的最大生长抑制百分比(mAb单用：47-51％；mAb+4.81nM CQ：44-53％；mAb+6.58nM CQ：30-52％)。
表3-1：来自各种恶性疟原虫菌株的抗PfRH5抗体的最大生长抑制活性总结。*
Figure BDA0002753245770001191
*相对于未感染的人红细胞抗PfRH5抗体的最大生长抑制。在0.4-0.7％的寄生虫血症下，对感染恶性疟原虫(成熟滋养体或早期***体)的红细胞进行生长抑制测定。将抗体与受感染的红细胞组合在一起。使寄生虫生长40-48小时(取决于寄生虫菌株)，直到达到***期。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。洗涤后立即测量寄生虫乳酸脱氢酶活性。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。生长抑制测定中的一项有代表性的测定的结果如上所示。
实例4：用于评估抗PfRH5抗体抑制恶性疟原虫寄生虫对人红细胞的体外侵袭和其生长的能力的生长抑制测定。
在此实例中，在标准生长抑制测定中对本发明的一组30个PfRH5特异性mAb抗许多普通实验室菌株(对各种抗疟药物敏感和耐药)和多药耐药临床株系进行了测试。
实验程序
在测定开始前20-24小时，将每个恶性疟原虫菌株(BEI Resources公司)在3-5％血细胞比容和1-2％寄生虫血症下首先按照标准方案与5％山梨醇同步。在0.4-0.7％的起始寄生虫血症和2％的血细胞比容下制备受感染的人红细胞。将受感染的红细胞与PfRH5特异性抗体或对照IgG1抗体组合，以666.67nM的浓度开始，并且对每种抗体进行1:5的连续稀释。寄生虫生长40-48小时，直到达到***期(一个完整的生命周期)。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。通过测定寄生虫乳酸脱氢酶活性(LDH)(Miura等人,《临床和疫苗免疫学》,16:963-968(2009),PMID:PMC2708396)来确定最终的寄生虫血症。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。
结果总结和结论
表4-1示出了在666.67nM下测试的30种PfRH5特异性mAb中的每一种的最大生长抑制百分比。应用几种抗体使得所有实验室适应和临床的恶性疟原虫菌株的生长下降。
表4-1：来自各种恶性疟原虫菌株的抗PfRH5抗体的最大生长抑制活性总结。*
Figure BDA0002753245770001211
*相对于未感染的人红细胞抗PfRH5抗体的最大生长抑制。在0.4-0.7％的寄生虫血症下，对感染恶性疟原虫(成熟滋养体或早期***体)的红细胞进行生长抑制测定。将抗体与受感染的红细胞组合在一起。使寄生虫生长40-48小时(取决于寄生虫菌株)，直到达到***期。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。洗涤后立即测量寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。每个恶性疟原虫菌株的生长抑制测定的一个代表性测定的结果如上所示。
实例5：在25℃和37℃下与PfRH5ΔNL.his结合的抗PfRH5单克隆抗体的Biacore结合动力学。
在此实例中确定了本发明的各种抗PfRH5抗体的结合动力学。
使用基于实时表面等离子体共振的Biacore T200生物传感器测定了与纯化的抗PfRH5单克隆抗体结合的不同PfRH5试剂的平衡解离常数(KD)。所有结合研究均在25℃和37℃下在10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂Tween-20、pH为7.4的(HBS-ET)运行缓冲液中进行。首先通过与山羊抗人Fcγ特异性多克隆抗体(杰克逊免疫研究实验室(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，目录号：109-005-098)或兔抗小鼠Fc特异性多克隆抗体(通用医疗公司(GE Healthcare)，目录号：BR100838)进行氨偶联对BiacoreCM4传感器芯片表面进行衍生化，以捕获抗PfRH5 IgG1单克隆抗体。对去除氨基末端M1-Y139并包含残基K140-Q526但缺少K247-L295和T216A并且T299A用C末端六组氨酸标签(PfRH5ΔNL.6his)表达的重组PfRH5进行结合研究。首先在HBS-ET运行缓冲液中制备不同浓度的PfRH5ΔNL.6his(3.125-50nM；2倍连续稀释或0.48-60nM；5倍连续稀释)，并以50μL/分钟的流速在抗人Fcγ或抗小鼠Fc捕获的抗PfRH5单克隆抗体表面上注射四分钟，同时在HBS-ET运行缓冲液中监测单克隆抗体结合的PfRH5试剂的解离十分钟。缔合率(ka)常数和解离率(kd)常数通过使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时结合传感图拟合到具有质量传输限制的1:1结合模型来确定。结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)是根据动力学速率如下计算的：
Figure BDA0002753245770001221
并且
Figure BDA0002753245770001222
表5-1至5-2分别示出了在25℃和37℃下PfRH5ΔNL.6his与本发明的不同抗PfRH5单克隆抗体结合的动力学参数。
在25℃下，本发明的所有抗PfRH5单克隆抗体均与PfRH5ΔNL.6his结合，其KD值范围为4.72pM到1.67nM，如表5-1所示。如表5-2所示，在37℃时，本发明的所有抗PfRH5单克隆抗体均与PfRH5ΔNL.6his结合，其KD值范围为1.10pM到1.10nM。
表5-1：在25℃下PfRH5ΔNL.6his与抗PfRH5单克隆抗体结合的动力学参数。
Figure BDA0002753245770001231
*表示在当前实验条件下没有观察到PfRH5ΔNL.6his的解离，并且在拟合数据时手动将kd值固定在1.00E-05。
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
NB表示未结合。
表5-2：在37℃下PfRH5ΔNL.6his与抗PfRH5单克隆抗体结合的动力学参数。
Figure BDA0002753245770001241
*表示在当前实验条件下没有观察到PfRH5ΔNL.6his的解离，并且在拟合数据时手动将kd值固定在1.00E-05。
$表示在当前实验条件下没有观察到结合。
#表示在当前实验条件下观察到结合，但动力学值与表不符合。
IC表示不确定。
NB表示未结合。
实例6：不同抗PfRH5单克隆抗体之间的Octet交叉竞争。
在Octet HTX生物传感器平台(Pall ForteBio公司)上，使用实时、无标记生物层干涉测定法测定了一组抗PfRH5单克隆抗体之间的结合竞争。
实验是在平板以1000rpm的速度摇动下在25℃下在10mM HEPES、150mM NaCl、3mMEDTA、0.05％v/v表面活性剂Tween-20和1mg/mL BSA、pH为7.4的(HBS-EBT)缓冲液中进行的。为了评估两种抗体是否能够相互竞争与除去氨基末端M1-Y139并包含残基K140-Q526但缺少K247-L295和T216A并且T299A用C末端六组氨酸标签表达(PfRH5ΔNL.6his；SEQ ID:362)的重组PfRH5上其各自的表位结合，首先通过将生物传感器尖端浸没在含有20μg/mLPfRH5ΔNL.6his的孔中60秒将约1.4-2.0nm的PfRH5ΔNL.6his捕获到抗Penta-His抗体涂覆的Octet生物传感器尖端(Fortebio公司，#18-5122)上。然后通过浸入含有50μg/mL mAb-1溶液的孔中3分钟用第一种抗PfRH5单克隆抗体(随后称为mAb-1)使抗原捕获的生物传感器尖端饱和。使用的抗体是IgG1。然后将生物传感器尖端浸入含有50μg/mL第二种抗PfRH5单克隆抗体(随后称为mAb-2)溶液的孔中3分钟。在实验的每一步之间将生物传感器的尖端在HBS-ETB缓冲液中清洗。在整个实验过程中对实时结合反应进行监测，并记录每个步骤结束时的结合反应。比较了mAb-2与预先与mAb-1复合的PfRH5ΔNL.6his的结合反应，并测定了不同抗PfRH5单克隆抗体的竞争/非竞争行为，如表6-1所示。
表6-1：抗PfRH5单克隆抗体之间的交叉竞争。
Figure BDA0002753245770001261
Figure BDA0002753245770001271
Figure BDA0002753245770001281
实例7：用于评估抗PfRH5抗体压力后产生的寄生虫的多循环生长抑制测定。
恶性疟原虫RH5特异性抗体在多个复制周期中抑制对人红细胞测定的侵袭，并且不诱导PfRH5基因的突变。对宿主红细胞的侵袭是恶性疟原虫生命周期和疟疾病理学的一个重要步骤。多种抗疟药针对无性血液阶段，然而，它们的效力受到抗药性菌株出现的威胁(Arrow等人,《拯救生命，争取时间：抗药性时代疟疾药物的经济性(Saving Lives,BuyingTime:Economics of Malaria Drugs in an Age of Resistance)》,国家学术出版社(美国),254-266(2004)；Blasco等人,“抗疟药物耐药性：将恶性疟原虫寄生虫生物学与临床联系起来(Antimalarial drug resistance:linking Plasmodium falciparum parasitebiology to the clinic)”,《自然医学(Nature Medicine)》,23,917-928(2017))。此外，抗疟药物表现出不同的药代动力学特性。一些抗疟药物(如青蒿素和奎宁)可以在一个寄生虫生命周期内被快速清除。另一方面，疏水性和亲脂性抗疟疾药物排除缓慢，但它们的特征在于吸收率不同，具体取决于所消耗的饮食脂肪量(Arrow等人,《拯救生命，争取时间：抗药性时代疟疾药物的经济性(Arrow et al.,Saving Lives,Buying Time:Economics ofMalaria Drugs in an Age of Resistance)》,国家学术出版社(美国),254-266(2004))。
用多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb)靶向网织红细胞结合蛋白同源物5(RH5)蛋白在体外有效地阻断了几种恶性疟原虫菌株对人红细胞的寄生虫侵袭(Wright等人,“具有红细胞碱性蛋白和阻断抗体的疟疾侵袭蛋白RH5的结构”,《自然》,515,427-430(2014)；Galaway等人,“P113是一种与恶性疟原虫RH5的N末端结合的裂殖子表面蛋白(P113 is amerozoite surface protein that binds the N-terminus of Plasmodium falciparumRH5)”,《自然通讯(Nature Communications)》,8,14333(2017))。用单一抗体或抗体混合物靶向RH5蛋白对于在同一靶标上产生相反的选择压力可能是必需的。此外，抗体可以弥补普通抗疟药物的短半衰期。
最后，疟原虫寄生虫已经发展出逃逸试图阻止寄生虫的发育(如基因多态性)的宿主免疫应答的方法。这种遗传多样性通常是免疫压力的结果(Renia和Goh,《疟疾寄生虫：重大逃逸(Malaria Parasites:The Great Escape)》,《免疫学前沿(Front Immunol.)》,7,463(2016),PMC5098170)。对300多株恶性疟原虫临床分离株或实验室菌株的全基因组测序仅在可能的mAb表位中鉴定出15个非同义的PfRH5 SNP，证明了这种蛋白的保守性和重要性。对蛋白质保守区域的免疫压力可能会限制寄生虫发展逃逸机制的能力(Bustamante等人，“全长重组恶性疟原虫PfRH5蛋白诱导对常见的PfRH5基因变体有效的抑制性抗体(A full-length recombinant Plasmodium falciparum PfRH5 protein induces inhibitoryantibodies that are effective across common PfRH5 genetic variants)”,《疫苗(Vaccine)》,31,373-9(2013))。
在此实例中，在用恶性疟原虫(3D7)的一个菌株进行的逃逸突变测定中，单独测试了本发明的一组四(4)个RH5特异性mAb，每个单克隆抗体具有hIgG1。
使用的单克隆抗体为H1H29089P、H1H29100P、H1H29147P2、H1H29187P2和REGN1932。
实验程序(包含对相关细胞系、蛋白质、试剂、仪器类型和模型的描述)：使恶性疟原虫菌株3D7(BEI Resources公司)在4％血细胞比容和0.5％寄生虫血症的下按照标准方案生长。将受感染的红细胞与浓度与上述恶性疟原虫菌株的IC50值对应的PfRH5特异性或对照抗体组合。将抗体浓度每7-14天逐渐增加，直到最终浓度相当于其各自IC50值的110倍。将含有抗体的生长培养基每48小时更新一次，并且每周向培养物中加入新鲜血液。
通过受感染红细胞的Trizol裂解每周提取寄生虫RNA，并在每周通过Qiagen RNeasy试剂盒纯化。逆转录是用高容量cDNA逆转录试剂盒(应用生物***公司(AppliedBiosystems))完成的。使用PfRH5特异性引物对RH5基因进行扩增。在1.5％琼脂糖凝胶上对PCR产物进行分析，并克隆到TOPO TA克隆载体(生命技术公司(Life Technologies))中。RH5的测序是用M13正向和反向测序引物实现的。
结果总结和结论。几个小组已经报告了靶向网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)蛋白将在体外有效地阻断恶性疟原虫对人红细胞的寄生虫侵袭。与同种型对照抗体压力相比，逐渐增加对恶性疟原虫3D7寄生虫的PfRH5特异性抗体压力不会导致PfRH5多态性。表7-1示出了在抗体压力逐渐增加(1×Ec50到110×EC50)45天后每个样品相对于所有其它测序样品的PfRH5序列同一性分数百分比。所有序列始终是100％相同的。图1示出了在抗体压力(1×EC50到110×EC50)逐渐增加45天后与每个PfRH5特异性抗体对应的PfRH5的序列比对显示核苷酸水平的序列没有差异。
表7-1：抗体压力逐渐增加45天后(1×EC50到110×EC50)每个样品相对于所有其它测序样品的PfRH5序列同一性分数百分比。
Figure BDA0002753245770001311
实例8：用于评估抗PfRH5抗体在血清存在下抑制恶性疟原虫寄生虫对人红细胞的体外侵袭和其生长的能力的生长抑制测定。
恶性疟原虫RH5特异性抗体在存在血清的情况下，在基于pLDH的生长抑制测定中抑制对人红细胞的侵袭。
一个小组表明裂殖子表面的补体活化使寄生虫侵入红细胞的能力增强(Biryukov等人，“补体和抗体介导的对疟疾寄生虫对红细胞的侵袭和其生长的增强(Complement andAntibody-mediated Enhancement of Red Blood Cell Invasion and Growth ofMalaria Parasites)”,《E生物医学(E BioMedicine)》,9,207-216(2016))。然而，其它研究表明，与补体非活性血清相比，补体活性血清的存在导致寄生虫生长减少或相当(Boyle等人,“人抗体固定补体以抑制恶性疟原虫对红细胞的侵袭，并与抗疟疾保护有关(Humanantibodies fix complement to inhibit Plasmodium falciparum invasion oferythrocytes and are associated with protection against malaria)”,《免疫(Immunity)》,42,580-90(2015)；Chulay等人,“猴免疫血清对体外恶性疟原虫生长的抑制(Inhibition of in vitro growth of Plasmodium falciparum by immune serum frommonkeys)”,《传染病杂志(J Infect Dis.)》,144,270-278)。此外，在所有接种人类裂殖子抗原(或任何疟疾抗原)的病例中，没有抗体依赖性寄生虫血症增加病例的记录。
在此实例中，在用一种恶性疟原虫(FCR-1/FVO)菌株进行的标准生长抑制测定中，对本发明的一组四(4)种RH5特异性mAb(每一种都具有hIgG1(以H1H前缀表示)或hIgG4(以H4H前缀表示))单独进行测试和与夜猴正常血清(ANS)、夜猴属热灭活血清(AHIS)、人正常血清(HNS)或人热灭活血清(HHIS)组合进行测试。
所用的单克隆抗体为H1H29089P、H1H29100P、H1H29147P2、H1H29187P2、H4H29089P、H4H29100P、H4H29147P2、H4H29187P2、REGN1932(抗Fel d1(人IgG1))和REGN1945(抗Fel d1(人IgG4))。
实验程序(包含对相关细胞系、蛋白质、试剂、仪器类型和型号的描述)。在测定开始前20-24小时，将恶性疟原虫菌株FCR-1/FVO(BEI Resources公司)在3-5％血细胞比容和1-2％寄生虫血症下首先按照标准方案与5％右旋糖酐同步。在0.4-0.7％的起始寄生虫血症和2％的血细胞比容下制备受感染的人红细胞。在存在10％夜猴属正常血清、夜猴属热灭活血清、人正常血清或人热灭活血清的情况下，将受感染的红细胞与RH5特异性或对照抗体以6.67μM浓度组合。寄生虫生长40-48小时，直到达到***期(一个完整的生命周期)。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。通过测量寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性来确定最终的寄生虫血症(Miura等人，“如通过外生长抑制测定所确定的，抗顶膜抗原1抗体在抑制恶性疟原虫生长方面比抗42千道尔顿裂殖子表面蛋白1抗体更有效”,(《临床与疫苗免疫学》,16,963-968(2009))。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。
结果总结和结论。靶向网织红细胞结合蛋白同源物5(RH5)蛋白有效地阻断恶性疟原虫对人红细胞的体外寄生虫侵袭。关于补体在裂殖子侵袭红细胞中的作用，已经发表了相互矛盾的发现。在如上所述的恶性疟原虫菌株中的生长抑制测定中，在夜猴属血清或人血清的存在下，在体外产生了RH5特异性抗体，并在体外对其进行了测试。表8-1显示了具有活性或非活性血清补体的每种RH5特异性抗体(hIgG1和hIgG4两种形式)的最大生长抑制百分比。单个抗体和活性或非活性血清组合显示出相似的最大生长抑制百分比，范围约为67-86％。
表8-1：在存在10％夜猴属血清或人血清的情况下抗PfRH5抗体的最大生长抑制活性总结。
Figure BDA0002753245770001331
抗PfRH5抗体相对于未感染的人红细胞的最大生长抑制。在0.4-0.7％的寄生虫血症下，对感染恶性疟原虫(成熟滋养体或早期***体)的红细胞进行生长抑制测定。将抗体和血清与受感染的红细胞组合。使寄生虫生长40-48小时(时间取决于寄生虫菌株)，直到达到***期。用三次冷PBS洗涤停止寄生虫生长。洗涤后立即测量寄生虫乳酸脱氢酶(LDH)活性。相对于未感染的红细胞表达了生长抑制百分比。生长抑制测定的一个代表性测定的结果如上所示。ANS：夜猴正常血清，AHIS：夜猴属热灭活血清，HNS：正常人血清，HHIS：人热灭活血清。
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本文引用的所有参考文献均以引用的方式并入，如同每个单独的出版物、数据库条目(例如，Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利被具体且单独地指出通过引用并入。申请人意图通过引用将这一并入声明与每一个单独的出版物、数据库条目(例如，Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利相关联，即使这样的引用不直接与通过引用并入的专用声明相邻。在说明书中包含专门的引用并入声明(如果有)不会以任何方式削弱所述通过引用并入的总体声明。本文引用的参考文献并不意味着承认这一参考文献是相关的现有技术，也不构成对这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。
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Figure IDA0002753245810000321
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Figure IDA0002753245810000361
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Figure IDA0002753245810000431
Figure IDA0002753245810000441
Figure IDA0002753245810000451
Figure IDA0002753245810000461
Figure IDA0002753245810000471
Figure IDA0002753245810000481
Figure IDA0002753245810000491
Figure IDA0002753245810000501
Figure IDA0002753245810000511
Figure IDA0002753245810000521
Figure IDA0002753245810000531
Figure IDA0002753245810000541
Figure IDA0002753245810000551
Figure IDA0002753245810000561
Figure IDA0002753245810000571
Figure IDA0002753245810000581
Figure IDA0002753245810000591
Figure IDA0002753245810000601
Figure IDA0002753245810000611
Figure IDA0002753245810000621
Figure IDA0002753245810000631
Figure IDA0002753245810000641
Figure IDA0002753245810000651
Figure IDA0002753245810000661
Figure IDA0002753245810000671
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Figure IDA0002753245810000691
Figure IDA0002753245810000701
Figure IDA0002753245810000711
Figure IDA0002753245810000721
Figure IDA0002753245810000731
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Figure IDA0002753245810000751

Claims (31)

1.一种抗原结合蛋白，其
(i)与恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)多肽上的相同表位特异性结合作为参考抗原结合蛋白；或
(ii)与参考抗原结合蛋白竞争与PfRH5多肽结合；
其中所述参考抗原结合蛋白包括：
(a)重链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354；和/或
(b)轻链免疫球蛋白，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306。
2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其包括：
(i)重链免疫球蛋白可变区，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的重链免疫球蛋白可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354；和/或
(ii)轻链免疫球蛋白可变区，其包括包含以下中所示的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306。
3.权利要求1到2中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括：
(a)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括与SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括与SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括：
(a)重链免疫球蛋白，其包括包含以下氨基酸序列的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3：SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示并且与SEQ IDNO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和/或
(b)轻链免疫球蛋白，其包括包含以下氨基酸序列的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示并且与SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括
重链免疫球蛋白，所述重链免疫球蛋白包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:86中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:104中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:134中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:150中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:166中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:182中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:200中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:212中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:214中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:216中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:228中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:230中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:232中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:236中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:238中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:240中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:244中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:246中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:248中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:252中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:254中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:256中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:260中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:262中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:264中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:268中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:270中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:272中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:276中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:278中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:284中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:286中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:288中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:292中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:294中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:296中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:300中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:302中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:304中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:316中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:318中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:320中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:324中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:326中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:328中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:332中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:334中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:336中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:340中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:342中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:344中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:348中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:350中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:352中所示的氨基酸序列；
或
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:356中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:358中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:360中所示的氨基酸序列；
和/或
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:44中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:110中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:128中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:144中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:156中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:160中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:174中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:192中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:208中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
或
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括
(1)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列；
(2)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列；
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:32中所示的氨基酸序列；
(3)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:38中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:40中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:44中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:46中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列；
(4)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:52中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:56中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:62中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:64中所示的氨基酸序列；
(5)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:70中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:72中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:76中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:78中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:80中所示的氨基酸序列；
(6)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:84中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:86中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:88中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:92中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:94中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:96中所示的氨基酸序列；
(7)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:104中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:110中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:112中所示的氨基酸序列；
(8)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:116中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:120中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:124中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:126中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:128中所示的氨基酸序列；
(9)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:132中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:134中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:136中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:140中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:142中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:144中所示的氨基酸序列；
(10)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:148中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:150中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:152中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:156中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:158中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:160中所示的氨基酸序列；
(11)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:164中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:166中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:168中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:172中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:174中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:176中所示的氨基酸序列；
(12)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:180中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:182中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:184中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:188中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:190中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:192中所示的氨基酸序列；
(13)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:196中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:198中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:200中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:204中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:206中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:208中所示的氨基酸序列；
(14)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:212中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:214中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:216中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(15)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:228中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:230中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:232中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(16)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:236中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:238中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:240中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(17)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:244中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:246中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:248中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(18)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:252中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:254中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:256中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(19)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:260中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:262中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:264中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(20)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:268中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:270中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:272中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(21)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:276中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:278中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:280中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(22)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:284中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:286中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:288中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(23)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:292中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:294中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:296中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:220中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:222中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:224中所示的氨基酸序列；
(24)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:300中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:302中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:304中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
(25)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:316中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:318中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:320中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
(26)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:324中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:326中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:328中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
(27)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:332中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:334中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:336中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
(28)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:340中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:342中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:344中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
(29)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:348中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:350中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:352中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列；
和/或
(30)
重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-H1，所述CDR-H1包括SEQ ID NO:356中所示的氨基酸序列；
CDR-H2，所述CDR-H2包括SEQ ID NO:358中所示的氨基酸序列；以及
CDR-H3，所述CDR-H3包括SEQ ID NO:360中所示的氨基酸序列；以及
轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括：
CDR-L1，所述CDR-L1包括SEQ ID NO:308中所示的氨基酸序列；
CDR-L2，所述CDR-L2包括SEQ ID NO:310中所示的氨基酸序列；以及
CDR-L3，所述CDR-L3包括SEQ ID NO:312中所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的抗原结合蛋白，其包括：
(a)重链免疫球蛋白可变区，所述重链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列；
和/或
(b)轻链免疫球蛋白可变区，所述轻链免疫球蛋白可变区包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1到7中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白为抗体或其抗原结合片段。
9.根据权利要求1到8中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白是多特异性的。
10.根据权利要求1到9中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包括以下性质中的一种或多种：
·抑制人红细胞中恶性疟原虫的生长；
·抑制人红细胞中恶性疟原虫菌株D10、Dd2、7G8、W2-mef、3D7、HB3、FCR-1/FVO、Cam3.II或RF7的生长；
·当通过表面等离子共振测量时，以25℃下约4.72pM到约1.67nM的KD和/或37℃下约1.10pM到约1.10nM的KD与PfRH5多肽或其抗原性片段结合；
·阻断PfRH5多肽与basigin多肽的结合；
·与缺少氨基末端残基M1-Y139并包含残基K140-Q526但缺少K247-L295且具有突变T216A和T299A的PfRH5结合；和/或
·使恶性疟原虫对热灭活的人血清或夜猴血清的最大生长抑制分别比对非热灭活的人或夜猴血清的最大生长抑制高约1-10％；
·当暴露于所述抗原结合蛋白时，不会在恶性疟原虫中诱导PfRH5突变。
11.一种复合物，其包括根据权利要求1到10中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白与恶性疟原虫网织红细胞结合蛋白同源物5(PfRH5)多肽结合。
12.一种用于制备根据权利要求1到10中任一项所述的抗原结合蛋白或其免疫球蛋白链的方法，所述方法包括：
(a)将编码所述抗原结合蛋白的免疫球蛋白链的一种或多种多核苷酸引入宿主细胞；
(b)在有利于所述多核苷酸表达的条件下培养所述宿主细胞；以及
(c)任选地，从所述宿主细胞和/或所述宿主细胞生长的培养基中分离所述抗原结合蛋白或免疫球蛋白链。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
14.一种抗原结合蛋白或免疫球蛋白链，所述抗原结合蛋白或免疫球蛋白链是根据权利要求12到13中任一项所述的方法的产物。
15.一种侧流免疫层析抗原检测试纸条，所述试纸条包括根据权利要求1到10和14中任一项所述的抗原结合蛋白。
16.一种多肽，其包括：
(a)免疫球蛋白链的免疫球蛋白重链可变区的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述免疫球蛋白链包括SEQ ID NO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、234、242、250、258、266、274、282、290、298、314、322、330、338、346或354中所示的氨基酸序列；和/或
(b)免疫球蛋白链的免疫球蛋白轻链可变区的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述免疫球蛋白链包括SEQ ID NO:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218或306中所示的氨基酸序列；
或者
包括SEQ ID NO:356中所示的所述氨基酸序列。
17.一种编码根据权利要求16所述的多肽的多核苷酸。
18.一种包括根据权利要求17所述的多核苷酸的载体。
19.一种包括根据权利要求1到10、14和16到18中任一项所述的抗原结合蛋白或免疫球蛋白链或多肽或多核苷酸或载体的宿主细胞。
20.一种包括根据权利要求1到10和14中任一项所述的抗原结合蛋白中的一种或多种的组合物或试剂盒，所述组合物或试剂盒任选地与另外的治疗剂联合。
21.一种包括根据权利要求1到10和14中任一项所述的抗原结合蛋白和药学上可接受的载体的药物组合物，所述药物组合物任选地与另外的治疗剂联合。
22.根据权利要求20到21中任一项所述的组合物或试剂盒，所述组合物或试剂盒与作为抗寄生虫药物或疫苗的另外的治疗剂联合。
23.根据权利要求20到22中任一项所述的组合物或试剂盒，其中所述另外的治疗剂是选自由以下组成的组的成员：氯喹、阿托伐醌、氯胍、蒿甲醚、苯芴醇、甲氟喹、奎宁、奎尼丁、多西环素(任选地与奎宁组合)、克林霉素、疫苗、抗疟疾疫苗和RTS,S/AS01。
24.一种包括根据权利要求1到10、14和20到23中任一项所述的抗原结合蛋白或组合物的容器或注射装置。
25.一种用于治疗或预防有需要的受试者的恶性疟原虫感染的方法，所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求1到10和14中任一项所述的任选地与另外的治疗剂联合的抗原结合蛋白。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述受试者患有疟疾或处于感染或易于感染疟疾的高风险中。
27.根据权利要求25到26中任一项所述的方法，其中，在施用所述抗原结合蛋白之前，所述受试者被诊断为患有恶性疟原虫感染。
28.一种用于诊断受试者的恶性疟原虫感染的方法，所述方法包括将根据权利要求1到10和14中任一项所述的抗原结合蛋白与来自所述受试者的样品接触，并且如果在所述样品中检测到所述抗原结合蛋白与PfRH5多肽之间的复合物，则确定所述受试者感染了恶性疟原虫。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述复合物在包括所述抗原结合蛋白和所述PfRH5多肽的侧流试纸条上形成。
30.一种用于向受试者体内施用根据权利要求1到10和14中任一项所述的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括将所述抗原结合蛋白注射到所述受试者体内，任选地与另外的治疗剂联合。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗原结合蛋白被以皮下方式、静脉内方式或肌内方式注射到所述受试者体内。
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