KR101225463B1 - 인터류킨-4 수용체에 결합하는 항체 - Google Patents

인터류킨-4 수용체에 결합하는 항체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 IL-4 수용체에 결합하는 항체, 이러한 항체의 단편, 뮤테인 및 유도체, 이러한 항체, 단편, 뮤테인 및 유도체를 암호화하는 핵산, 및 이러한 항체, 단편, 뮤테인, 유도체 및 핵산의 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이다. 인터류킨-4에 의해 유도된 의학 질환의 치료방법은 이러한 질환을 앓고 있는 환자에게 IL-4 수용체 결합 항체, 또는 IL-4 수용체 결합 단편, IL-4 수용체 결합 항체의 뮤테인 또는 유도체를 투여함을 포함한다. 본 발명에 제시된 특정 항체에는 사람 모노클로날 항체가 포함된다. 특정 항체는 IL-4-유도된 및 IL-13-유도된 생물학적 활성을 모두 억제한다.
Figure R1020067008369
인터류킨-4 수용체에 결합하는 항체, 인터류킨-4 수용체, 인터류킨-4, 인터류킨-13, IL-4가 관여하는 질환

Description

인터류킨-4 수용체에 결합하는 항체{Antibodies that bind interleukin-4 receptor}
관련출원에 대한 설명
본 출원은 2003년 11월 7일에 출원된 미국 가특허 출원 제60/518,166호를 우선권으로 주장한다.
B 세포 자극 인자 또는 BSF-1로 이미 알려져 있는 인터류킨-4(IL-4)는 본래 표면 면역글로불린에 대해 지시된 항체의 낮은 농도에 대한 반응으로 B 세포의 증식을 자극하는 능력을 특징으로 한다. IL-4는 T 세포, 비만 세포, 과립구, 거대핵세포 및 적혈구의 성장 공동자극을 비롯하여 매우 광범위한 스펙트럼의 생물 활성이 있는 것으로 밝혀져 있다. 또한, IL-4는 여러 IL-2 및 IL-3에 의존적인 세포주의 증식을 자극하고, 휴지기 B 세포의 II형 주조직적합 복합체 분자 발현을 유도하며, 자극된 B 세포에 의한 IgE 및 IgG1 동종형(isotype)의 분비를 증진시킨다. IL-4는 TH2 세포에 의해 분비된 사이토킨의 하나이고 TH2형 면역반응과 관련이 있다.
쥐 및 사람의 IL-4는 IL-4 cDNA의 클로닝 및 뉴클레오타이드 서열과 암호화된 아미노산 서열의 결정을 포함하여 동정되고 특성화되었다[참조: Yokota et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5894; Noma et al., 1986, Nature 319: 640; Grabstein et al., 1986, J. Exp. Med. 163: 1405; 및 미국 특허 5,017,691 참조].
IL-4는 특정한 세포 표면 수용체에 결합하여 각종 면역 작동세포(effector cell)와 같은 세포에 생물학적 시그널을 전달한다. IL-4 수용체는 문헌[Mosley et al., 1989, Cell 59: 335-48(쥐 IL- 4R); Idzerda et al., 1990, J. Exp. Med. 171: 861-73(사람 IL-4R); 및 미국 특허 5,599,905]에 기술되어 있으며, DNA 및 아미노산 서열 정보도 게재되어 있다. 이들 문헌에 기술된 IL-4 수용체는 때로 IL-4R 알파로 지칭된다.
일부 세포 종류에서는 IL-4R 알파와 관련이 있으며 다중서브유닛 IL-4 수용체 복합체의 성분으로서 다른 단백질이 보고되어 있다. 이러한 서브유닛의 하나는 IL-2R 감마 c로도 알려진 IL-2R 감마이다. IL-4R 복합체에 대한 논의는 문헌[Sato et al., 1994, Current Opinion in Cell Biology, 6: 174-79]을 참고한다. IL-4R 알파는 또한 특정 다중서브유닛 IL-13 수용체 복합체의 성분인 것으로 보고되어 있다[Zurawski et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 13869; de Vries, 1998, J. Allergy Clin. Immunol. 102: 165; 및 Callard et al., 1996, Immunology Today, 17: 108 참조].
IL-4는 다양한 질환, 예컨대 알러지 및 천식에 연루되어 있다.
발명의 개요
본 발명은 IL-4R 알파에 결합하는 신규 IL-4R 길항제, 구체적으로 항체 및 항체 유도체에 관한 방법 및 조성물을 제공한다.
하나의 관점으로서, 본 발명은 경쇄 가변 도메인이 오로지 S28T, S30N, S30G, S31N, S32D, S32N, A52T, S54Y, T57P, T57S, G93D, S94H, S94R, P96A, P97G 및 T99M으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환 및 임의로 E1D, L4M, S7T, G9A, K40R, F50Y, S68F, S77T, V86I, K105R, V106L 및 E107D로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환에 의해서만 서열번호 4와 상이한 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 중쇄 가변 도메인이 오로지 N58S, Y101W, F102Y, D103T, D103N, D103P, Y104H, Y104N, Y104W 및 Y104R로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 치환, 및 경우에 따라 Q6E, H13Q, G24A, R86S 및 M90T로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환에 의해서만 서열번호 16과 상이한 아미노산 서열을 포함하고, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다. 하나의 양태에서, 경쇄 CDR1은 서열번호 6의 잔기 24-35, 서열번호 8의 잔기 24-35, 서열번호 10의 잔기 24-35, 서열번호 12의 잔기 24-35 및 서열번호 14의 잔기 24-35로 이루어진 그룹 중에서 선택된 서열을 포함하고; 경쇄 CDR2는 서열번호 4의 잔기 51-57, 서열번호 6의 잔기 51-57, 서열번호 10의 잔기 51-57 및 서열번호 12의 잔기 51-57로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하며; 경쇄 CDR3은 서열번호 4의 잔기 90-99, 서열번호 6의 잔기 90-99, 서열번호 8의 잔기 90-99 및 서열번호 14의 잔기 90-99로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고; 중쇄 CDR1은 서열번호 16의 서열 잔기 31-15를 포함하고; 중쇄 CDR2는 서열번호 16의 잔기 50-65 및 서열번호 18의 잔기 50-65로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고/하거나 중쇄 CDR3은 서열번호 16의 잔기 98-104, 서열번호 18의 잔기 98-104, 서열번호 20의 잔기 98-104, 서열번호 22의 잔기 98-104, 서열번호 24의 잔기 98-104, 서열번호 26의 잔기 98-104, 서열번호 30의 잔기 98-104 및 서열번호 34의 잔기 98-104로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 경쇄 FR1은 서열번호 4의 잔기 1-23, 서열번호 10의 잔기 1-23, 서열번호 12의 잔기 1-23 및 서열번호 14의 잔기 1-23으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고, 경쇄 FR2는 서열번호 4의 잔기 36-50 및 서열번호 14의 잔기 36-50으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하며, 경쇄 FR3은 서열번호 4의 잔기 58-89, 서열번호 10의 잔기 58-89 및 서열번호 12의 잔기 58-89로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하며, 경쇄 FR4는 서열번호 4의 잔기 100-109, 서열번호 8의 잔기 100-109, 및 서열번호 12의 잔기 100-109로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고, 중쇄 FR1은 서열번호 16의 잔기 1-30 및 서열번호 42의 잔기 1-30으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고, 중쇄 FR2는 서열번호 16의 잔기 1-30의 서열을 포함하고, 중쇄 FR3은 서열번호 16의 잔기 66-97, 서열번호 18의 잔기 66-97, 및 서열번호 42의 잔기 66-97로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고/하거나, 중쇄 FR4는 서열번호 16의 잔기 105-115의 서열을 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하지만, 서열번호 4의 서열 을 포함하지 않는 경쇄 가변 도메인 및/또는 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하지만 서열번호 16의 서열은 포함하지 않는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 85% 동일한 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 85% 동일한 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 15개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하지만, 서열번호 4의 서열을 포함하지 않는 경쇄 가변 도메인 및/또는 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 15개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하지만, 서열번호 16의 서열을 포함하지 않는 중쇄 가변 도메인을 포함하는, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 20개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 20개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 25개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 25개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상 기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 35개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 35개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 50개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 50개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 75개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 75개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 4, 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 100개의 연속적 아미노산의 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열의 적어도 100개의 연속적 아미노산의 서열을 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및/또는 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 80% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하지만, 서열번호 4의 경쇄 가변 도메인 서열과 서열번호 16의 중쇄 가변 도메인 서열 둘다를 포함하지는 않으며, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다. 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 85% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다. 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오 타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 98% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 중간정도의 엄격한(stringent) 조건 하에서 서열 번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열의 상보체에 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 및/또는 중간정도의 엄격한 조건 하에서 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열의 상보체에 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하되, 서열번호 4의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 16의 중쇄 가변 도메인 서열을 함께 포함하지는 않으며, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 3, 5, 7, 9, 11 및 13으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열의 상보체에 엄격한 조건 하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하고/하거나, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 61로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오타이드 서열의 상보체에 엄격한 조건 하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 경쇄 가변 영역이 서열번호 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, IL-4 수용체 알파에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
다른 관점에서, 본 발명은 항체의 중쇄 가변 영역이 서열번호 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, IL-4 수용체 알파에 결합하는 분리된 항체를 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 L2H1, L3H1, L4H1, L5H1, L1H2, L1H3, L1H4, L1H5, L1H6, L1H7, L1H8, L1H9, L1H10, L1H11, L2H4, L2H12, L2H13, L2H14, L6H1, L2H2, L2H3, L2H6, L2H7, L2H8, L2H9, L2H10 및 L2H11로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체를 제공한다.
다른 관점에서, 본 발명은 사람, 사람화 또는 키메라 항체를 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 모노클로날 항체를 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 IgD, IgE, IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 및 힌지 영역에 H쇄내 이황화 결합 항체를 형성하는 경향을 경감시키는 적어도 하나의 돌연변이를 보유하는 IgG4로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체를 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체의 IL-4 수용체 결합 부분을 함유하는 분리된 폴리펩타이드를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 폴리펩타이드는 Fab, F(ab')2, scFv, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody) 또는 테트라바디(tetrabody)를 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체의 경쇄, 본 발명에 따른 항체의 중쇄 또는 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산을 제공한다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 분리된 핵산을 함유하는 벡터 를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 벡터는 발현 벡터이다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 핵산을 함유하는 분리된 세포를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 세포는 하이브리도마이다. 다른 양태에서, 상기 세포는 형질전환된(transgenic) 세포이다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체를 함유하는 세포를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 세포는 하이브리도마이다. 다른 관점에서, 상기 세포는 형질전환된 세포이다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩타이드를 함유하는 세포를 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 세포는 형질전환된 세포이다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명의 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 및 당해 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를, 당해 세포가 상기 경쇄 및 중쇄를 발현하도록 하고 상기 경쇄 및 중쇄가 당해 항체로 어셈블리(assembly)되도록 하는 조건하에 배양하는 단계 및 항체를 세포로부터 분리시키는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체의 제조 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 세포는 하이브리도마이다. 다른 양태에서, 세포는 형질전환된 세포이다.
다른 관점에서, 본 발명은 IL-4 수용체 알파를 발현하는 세포와 본 발명의 항체 또는 본 발명의 폴리펩타이드를, 상기 항체 또는 상기 폴리펩타이드가 상기 IL-4 수용체 알파에 결합될 수 있도록 하는 조건하에서 접촉시킴을 포함하는, IL-4 수용체의 억제 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 세포는 사람 세포이다. 다른 양태에서, 상기 사람 세포는 사람내에 존재한다.
다른 관점에서, 본 발명은 검체의 질환을 치료하기에 유효한 양의 본 발명의 항체 또는 본 발명의 폴리펩타이드를 상기 검체에게 투여하는 것을 포함하여, 상기 검체의 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 질환은 염증성 또는 암성 질환이다. 다른 관점에서, 상기 염증성 또는 암성 질환은 면역학적 질환이다. 다른 관점에서, 상기 질환은 천식, 패혈성 관절염, 포진성 피부염, 만성 특발성 두드러기, 궤양성 결장염, 피부경화증, 비대흉터, 위플병(Whipple's Disease), 양성 전립선 과다형성증, IL-4 수용체가 관여하는 폐 질환, IL-4 수용체-매개된 상피 장벽 파괴가 관여하는 질환, IL-4 수용체가 관여하는 소화계 질환, 약물에 대한 알러지 반응, 가와사키병, 겸상적혈구증, 척-스트라우스 증후군, 그레이브스병, 자간전증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 림프증식 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, 배럿 식도, 자가면역 포도막염, 결핵, 낭성 섬유증, 알러지성 기관지폐 진균증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 블레오마이신 유도성 폐병증 및 섬유증, 방사선 유도성 폐섬유증, 폐포 단백증, 성인 호흡곤란 증후군, 사르코이드증, 과다 IgE 증후군, 특발성 과다호산구증가 증후군, 자가면역 수포병, 심상성 천포창, 수포성 유천포창, 중증근무력증, 만성피로증후군 또는 신장증이다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 본 발명에 따른 폴리펩타이드와 부형제, 희석제 또는 완충제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
도 1a 내지 도 1c는 사람 IL-4 수용체 알파 cDNA의 암호 영역의 뉴클레오타 이드 서열을 나타낸 것이다. 이러한 cDNA에 의해 암호화된 아미노산 서열도 함께 제시했다. cDNA 클론은 사람 T 세포주 T22 유래의 cDNA 라이브러리에서 분리되었다. 암호화된 단백질은 PCT 공보 WO 01/92340 A3에 상세히 논의된 바와 같이 (N 말단에서 C 말단 방향으로) N 말단 시그널 펩타이드, 그 다음에 세포외 도메인, 경막 영역(밑줄친 부분) 및 세포질 도메인을 포함한다. 이러한 도 1a 내지 1c의 뉴클레오타이드 서열 및 아미노산 서열은 각각 서열번호 1과 서열번호 2에도 제시했다.
도 2a 내지 도 2d는 경쇄 가변 영역 L1(서열번호 3), L2(서열번호 5), L3(서열번호 7), L4(서열번호 9), L5(서열번호 11) 및 L6(서열번호 13)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 중쇄 가변 영역 H1(서열번호 15), H2(서열번호 17), H3(서열번호 19), H4(서열번호 21), H5(서열번호 23), H6(서열번호 25), H7(서열번호 27), H8(서열번호 29), H9(서열번호 31), H10(서열번호 33), H11(서열번호 35), H12(서열번호 37), H13(서열번호 39), H14(서열번호 41), H15(서열번호 43), H16(서열번호 45), H17(서열번호 47), H18(서열번호 49), H19(서열번호 51), H20(서열번호 53), H21(서열번호 55), H22(서열번호 57), H23(서열번호 59) 및 H24(서열번호 61)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 나타낸 것이다. 이러한 서열들은 1문자 뉴클레오타이드 약어로 나타냈다. 각 서열마다 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역에 상응하는 서열은 볼드체로 표시하고, L1 및 H1은 밑줄로 표시했다. FR1, FR2, FR3 및 FR4에 상응하는 서열은 표시되지 않은 부분이다.
도 3은 경쇄 가변 영역 L1(서열번호 4), L2(서열번호 6), L3(서열번호 8), L4(서열번호 10), L5(서열번호 12) 및 L6(서열번호 14)의 아미노산 서열 및 중쇄 가변 영역 H1(서열번호 16), H2(서열번호 18), H3(서열번호 20), H4(서열번호 22), H5(서열번호 24), H6(서열번호 26), H7(서열번호 28), H8(서열번호 30), H9(서열번호 32), H10(서열번호 34), H11(서열번호 36), H12(서열번호 38), H13(서열번호 40), H14(서열번호 42), H15(서열번호 44), H16(서열번호 46), H17(서열번호 48), H18(서열번호 50), H19(서열번호 52), H20(서열번호 54), H21(서열번호 56), H22(서열번호 58), H23(서열번호 60) 및 H24(서열번호 62)의 아미노산 서열을 나타낸 것이다. 이러한 L1 및 H1 가변 영역의 서열들은 1문자 아미노산 약어로 나타냈다. 다른 경쇄 및 중쇄 가변 서열은 L1 또는 H1과 동일한 잔기는 대시(dash)로 표시하고, L1 또는 H1과 상이한 잔기에는 적당한 1문자 아미노산 약어로 나타냈다. 각 서열마다 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역에 상응하는 서열은 볼드체로 나타내고 L1 및 H1에는 밑줄을 그었다. FR1, FR2, FR3 및 FR4에 상응하는 서열은 아무 표시도 하지 않은 부분이다.
본 발명은 IL-4R-매개된 특정 질환을 치료하고 생체내 인터류킨-4(IL-4) 및 인터류킨-13(IL-13)의 생물학적 활성을 억제하는 방법을 포함하여 항-IL-4 수용체(IL-4R) 항체에 관한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은, 예컨대 항-IL-4R 항체, 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 및 본 발명에 따른 항체, 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하거나 발현하는 세포, 및 약제학적 조성물을 포함하며, 이의 구체예는 이하에 제시되어진다.
폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열은 표준 1문자 또는 3문자 약어를 사용하여 제시했다. 별다른 표시가 없는 한, 폴리펩타이드 서열은 좌측이 아미노 말단이고, 우측이 카르복시 말단이며, 일본쇄 핵산 서열 및 이본쇄 핵산 서열의 상부 가닥은 좌측이 5' 말단이고, 우측이 3' 말단이다. 특정 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 또한 참조 서열과 상이한 점을 설명하여 기술될 수도 있다. 예를 들어, "서열번호 4와 S28T에서 상이한 폴리펩타이드 서열"은 서열번호 4의 위치 28에 존재하는 세린 잔기가 트레오닌 잔기로 치환된 것을 제외하고는 서열번호 4와 동일한 폴리펩타이드 서열을 나타낸다.
특정 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열은 각각 도 2와 도 3에 제시했고, 여기서 이들 서열에 L1("경쇄 가변 영역 1"), H1("중쇄 가변 영역 1") 등을 표시했다. 도 3의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체는 경쇄 및 중쇄 가변 영역들의 명칭을 조합하여 표시했다. 예컨대, "L4H7"은 L4의 경쇄 가변 서열과 H7의 중쇄 가변 서열을 포함하는 항체를 나타낸다.
"경쇄 가변 도메인(또는 영역)", "중쇄 가변 도메인(또는 영역)", "CDR1, 2 및 3" 및 "FR1, 2, 3 및 4"는 카벳(Kabat et al. in Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991)의 방안에 따라 표시했다.
두 폴리뉴클레오타이드 또는 두 폴리펩타이드 서열의 "동일성 백분율"은 GAP 컴퓨터 프로그램(GCG Wisconsin 패키지의 일부, 버젼 10.3(Accelrys, San Diego, CA))에 이의 디폴트 변수를 사용하여 서열을 비교함으로써 분석한다.
생물학적 분자(예, 폴리펩타이드, 항체 또는 핵산)는 다른 생물 분자, 세포 파편 및 다른 물질이 표준 실험 프로토콜(예, 결합 또는 하이브리드화 검정)에 사용할 수 있을 정도로 충분히 유리되었다면, "분리된" 또는 "실질적으로 정제된" 것이다. 폴리펩타이드, 항체 및 핵산을 실질적으로 정제하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
"펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"이란 용어는 펩타이드 결합에 의해 서로 결합된 2종 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 의미하는 것으로서, 본 명세서에 전체에 상호교환적으로 사용했다.
"폴리뉴클레오타이드", "올리고뉴클레오타이드" 및 "핵산"이란 용어는 DNA 분자(예, cDNA 또는 게놈 DNA), RNA 분자(예, mRNA), 뉴클레오타이드 유사체를 사용하여 제조한 DNA 또는 RNA 유사체(예컨대, 펩타이드 핵산 및 비-천연의 뉴클레오타이드 유사체) 및 이의 하이브리드를 포함하는 것으로서, 본 명세서 전반에 걸쳐 호환 사용했다. 핵산 분자는 일본쇄 또는 이본쇄일 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 본 발명의 항체, 또는 이의 단편, 유도체, 뮤테인 또는 변이체를 암호화하는 연속적 오픈리딩프레임(open reading frame)을 함유한다.
2개의 일본쇄 핵산 분자는 이들 서열이 갭(gap)의 도입 및 각 서열의 5' 또는 3' 말단에 쌍을 이루지 않는 뉴클레오타이드의 존재 없이 한 서열의 모든 뉴클레오타이드가 다른 서열의 상보적 뉴클레오타이드로서 서로 마주보고 역평행 배향으로 정렬될 수 있다면 서로에 대한 "상보체"이다. 소정 뉴클레오타이드 서열에 "상보성"인 핵산 분자는 중간정도의 엄격한 조건 하에서 소정의 뉴클레오타이드 서열에 하이브리드화할 수 있을 정도로 소정의 뉴클레오타이드 서열에 충분히 상보적인 분자이다. 즉, 핵산은 상보체가 아니어도 다른 핵산에 상보적일 수 있다.
"벡터"는 여기에 결합된 다른 핵산을 세포내로 도입시키는데 사용될 수 있다. 핵산이다. 벡터의 한가지 종류는 추가 핵산 분절이 연결될 수 있는 선형 또는 원형 이본쇄 DNA 분자를 의미하는 "플라스미드"이다. 벡터의 다른 종류는 추가 DNA 분절이 바이러스 게놈으로 도입될 수 있는 바이러스 벡터(예컨대, 복제 결함성 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스(adeno-associated virus))이다. 특정 벡터는 도입되어지는 숙주 세포내에서 자율 복제할 수 있다(예컨대, 세균의 복제 오리진을 함유하는 세균 벡터 및 에피솜성 포유동물 벡터). 다른 벡터(예컨대, 비-에피솜성 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입시 숙주 세포의 게놈으로 통합되어, 숙주 게놈과 함께 복제된다. "발현 벡터"는 선택된 폴리뉴클레오타이드의 발현을 지시할 수 있는 벡터 종류이다.
조절 서열이 뉴클레오타이드 서열의 발현(예컨대, 발현의 수준, 시간 또는 위치)에 영향을 미친다면, 그 뉴클레오타이드 서열은 조절 서열에 "작동적으로 결합된" 것이다. "조절 서열"은 핵산의 발현(예, 발현의 수준, 시간 또는 위치)에 영향을 미치는 핵산이다. 이러한 조절 서열은, 예컨대 조절된 핵산에 직접적으로 효과를 발휘하거나, 또는 하나 이상의 폴리펩타이드(예, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩타이드)의 작용을 통해 효과를 발휘할 수도 있다. 조절 서열의 예에는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 조절 인자(예, 폴리아데닐화 시그널)가 있다. 조절 서열의 다른 예에 대해서는 문헌[예컨대, Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23: 3605-06]에 설명되어 있다.
"숙주 세포"는 핵산, 예를 들어, 본 발명의 핵산의 발현에 사용될 수 있는 세포이다. 숙주 세포는 이. 콜라이(E. coli)와 같은 원핵생물, 또는 진핵생물, 예를 들어, 단세포화된 진핵생물(예, 효모 또는 다른 진균), 식물 세포(예, 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예, 사람 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 래트 세포, 마우스 세포 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마일 수 있다. 숙주 세포의 예에는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23: 175 참조), L 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 이의 유도체, 예컨대 무혈청 배지에서 성장하는 Veggie CHO 및 관련 세포주(Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28: 31 참조) 또는 DHFR이 결손된 CHO 균주 DX-B11(Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-20 참조), HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CV1 유래의 CV1/EBNA 세포주(ATCC CCL 70)(McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821), 사람 배아 신장 세포, 예컨대 293, 293 EBNA 또는 MSR 293, 사람 표피 A431 세포, 사람 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 정상 배수체 세포, 1차 조직의 시험관내 배양으로부터 유래되는 세포 계통, 1차 체외이식편, HL-60, U937, HaK 또는 Jurkat 세포일 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포는 폴리펩타이드-암호화 핵산으로 형질전환 또는 형질감염된 후에 숙주 세포에서 발현될 수 있는 배양된 세포이다. "재조합 숙주 세포"란 표현은 발현될 핵산으로 형질전환 또는 형질감염된 숙주 세포를 나타내기 위해 사용할 수 있다. 또한, 숙주 세포는 핵산을 포함하지만, 조절 서열이 상기 핵산과 작동적으로 연결되도록 숙주 세포에 도입되지 않는다면 목적하는 수준으로 이 핵산을 발현하지 않는 세포일 수 있다. 숙주 세포란 용어는 특정 검체 세포를 의미할 뿐만 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 의미하는 것으로 이해된다. 이러한 자손은 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에 임의의 변형이 일어날 수 있기 때문에 사실상 모세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에 사용된 용어의 범위에는 여전히 포함된다.
"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종 유래의 항체와 동일하거나, 상동성이거나 또는 그 항체에서 유래되는 것이거나 또는 특정 항체 부류(class) 또는 하위부류(subclass)에 속하고, 나머지는 다른 종 유래의 항체와 동일하거나, 상동성이거나 또는 그 항체(들)에서 유래되는 것이거나 또는 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 것인 항체이다. 또한, 목적하는 생물 활성(즉, IL-4 수용체에 특이적으로 결합하는 능력)을 나타내는 상기 항체의 단편도 포함된다(미국 특허 4,816,567 및 Morrison, 1985, Science 229:1202-07 참조).
"CDR 이식된 항체"는 특정 종이나 동종형의 항체에서 유래하는 하나 이상의 CDR과, 상기와 동일하거나 상이한 종 또는 동종형의 다른 항체의 주쇄(framework)를 함유하는 항체이다.
"다중특이적 항체"는 하나 이상의 항원에 존재하는 하나 이상의 에피토프를 인식하는 항체이다. 이러한 종류의 항체의 하위부류는 동일하거나 상이한 항원에 존재하는 2개의 별개의 에피토프를 인식하는 "이중특이적 항체"이다.
폴리펩타이드(예, 항체)의 "변이체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 폴리펩타이드 서열에 대한 아미노산 서열 내에 삽입되거나, 결실되고/되거나 치환된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 변이체에는 융합 단백질이 포함된다.
폴리펩타이드의 "유도체"는 삽입, 결실 또는 치환 변이체와 상이한 몇몇 방식으로 화학적으로 변형된, 예컨대 다른 화학 잔기에의 접합을 통해 변형된 폴리펩타이드(예컨대, 항체)이다. "항체"란 용어는 다른 표현이 없는 한, 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 함유하는 항체 외에, 당해 항체의 유도체, 변이체, 단편 및 뮤테인(mutein)도 포함하며, 이의 예는 하기에 기술한다.
IL-4 수용체와 관련이 없는 폴리펩타이드에 분자가 결합하는 것보다 적어도 10배 이상의 친화성으로 IL-4 수용체 또는 이의 단편에 결합한다면, 당해 분자(예컨대, 항체)는 "IL-4 수용체에 특이적으로 결합"하는 것이다.
"항원 결합 도메인" 또는 "항원 결합 영역"은 항원과 상호작용하여 항체에 상기 항원에 대한 특이성 및 친화성을 부여하는 아미노산 잔기(또는 다른 잔기)를 함유하는 항체 분자의 부분이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 분자의 부분이다. 에피토프는 분자의 비연속적 부분(예컨대, 폴리펩타이드인 경우, 폴리펩타이드의 서열에서 서로 연속하지 않은 것이지만 당해 분자의 범주에서 함께 항체에 의해 결합되는 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다.
증상
하나의 관점에서, 본 발명은 병, 장애, 질환 또는 질병의 치료, 예방, 치유, 경감 또는 완화 방법을 제공한다. 본 발명에 따라 치료되는 질환 중에는 천식, 패혈성/반응성 관절염, 포진성 피부염, 만성 특발성 두드러기, 피부경화증, 비대흉터, 위플병(Whipple's Disease), 양성 전립선 과다형성증, IL-4가 관여하는 폐 질환, IL-4- 유도된 상피 장벽 파괴가 관여하는 질환, IL-4가 관여하는 소화계 질환, 예컨대 염증성 장 질환 및 위장관의 다른 염증성 질환, 약물에 대한 알러지 반응, 가와사키병, 겸상적혈구증(예컨대, 겸상적혈구위기), 척-스트라우스(Churg-Strauss) 증후군, 그레이브스병, 자간전증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 림프증식 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, 배럿 식도, 자가면역 포도막염, 결핵 및 섬유증이 있으며, 이하에 더 상세히 기술된다. IL-4R 길항제는 또한 알러지 면역요법의 보조제로서 및 백신 보조제로서도 사용된다.
이러한 질환의 치료에 적합한 항체의 예에 대하여 이하에 설명되며, 그 예에는 IL-4R에 결합하여, IL-4의 결합을 억제하는 항체가 있다. 특히 유용한 항체는 IL-13의 IL-13 수용체(IL-13R)에 대한 결합을 억제하기도 한다. 본 발명의 구체적인 양태에는 신규 항체 및 항체 유도체, 단편, 뮤테인 및 변이체, 폴리펩타이드 핵산 분자, 세포, 이들의 제조방법, IL-4Rα 억제 방법 및 검체의 치료 방법이 있으며, 그 예는 이하에 기술된다.
하나의 관점에서, 본 발명은 항-IL-4Rα 항체를 검체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 검체는 IL-4Rα의 활성에 의해 직접 또는 간접적으로 유발, 유도, 매개, 강화, 악화되거나, 또는 다르게 영향을 받는 질환(예, 질병, 감염, 손상, 병 또는 질환)을 앓거나 발생 위험성이 있는 검체이다. 이러한 질환에는 예컨대 IL-4 및/또는 IL-13에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 유발, 유도, 매개, 강화, 악화되거나 또는 다르게 영향을 받는 질환이 포함된다. 기타 인자 또는 사이토킨도 또한 이러한 질환들에 관여할 수 있다.
IL-4의 생물학적 활성은 인터류킨-4 수용체(IL-4R)로 불리는 특정 세포 표면 수용체에 대한 결합을 통해 매개된다. IL-4 유도 질환에는 세포에 존재하는 자연 IL-4 수용체에 IL-4가 결합되어 나타나는 생물학적 반응에 의해 발생하는 질환, 또는 IL-4가 IL-4 수용체에 결합되지 않게 함으로써 억제 또는 억제될 수 있는 질환이 포함된다. 치료될 수 있는 질환에는 IL-4의 이상 발현 또는 IL-4R 또는 IL-13R의 하나 이상의 성분의 이상 발현(예컨대, 특정 조직이나 세포 종류에서의 과발현, 과오발현, 또는 특정 발달 단계에서의 과오발현), 또는 IL-4 생산에 대한 이상 숙주 반응을 특징으로 하는 의학적 질환이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다. 또 다른 예에는 IL-4-유도된 항체 생산 또는 특정 세포 종류의 증식이나 유입이 관여하는 질환이 있다. IL-4-유도된 질환에는 IL-4가 IL-4 수용체의 상향조절을 유도하거나 또는 질병에 관여하는 다른 단백질(예컨대, 다른 사이토킨)의 생산을 증가시키는 질환이 있다.
이러한 의학적 질환을 앓는 사람 검체를 비롯한 포유동물의 치료 방법은 항-IL-4R 항체 또는 이의 유도체를 포유동물에게 투여하거나 또는 예를 들어, 생체외 과정에서와 같이 상기 포유동물의 IL-4R을 상기 항체 또는 유도체와 접촉시키는 것을 포함한다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 질환은 2001년 5월 1일에 출원된 USSN 09/847,816 등에 설명되어 있으며, 이 출원의 관련 명세서는 본 발명에 참고인용되었다. 이러한 질환에는 천식, 패혈성/반응성 관절염, 포진성 피부염, 두드러기(특히, 만성 특발성 두드러기), 궤양, 위염, 점막염, 궤양성 결장염, 크론병, 염증성 장 질환, IL-4가 관여하는 다른 소화계 질환(예, 위장관 일부의 IL-4 유도 염증), IL-4 유도 장벽 파괴가 관여하는 질환(예, 폐 또는 위장관의 상피 장벽 기능의 감소를 특징으로 하는 질환), 피부경화증, 비대흉터, 위플병(Whipple's Disease), 양성 전립선 과다형성증, IL-4 유도 폐 질환(예컨대, 이하에 기술된 것), 약물에 대한 알러지 반응, 가와사키병, 겸상적혈구증 또는 위기, 척-스트라우스 증후군, 그레이브스병, 자간전증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 림프증식 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, 배럿 식도, 자가면역 포도막염, 결핵, 섬유증, 심상성 천포창 또는 유사천포창(자가면역 수포병), 및 중증근무력증(자가면역근육병)이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
또한, 항-IL-4R 항체 및 이의 유도체는 알러지 면역요법에 대한 보조제로서 및 백신 보조제로서도 사용된다. 따라서, 항-IL-4R 항체는 알러지 면역요법 치료에 보조제로서 사용될 수 있다. 또 다른 용도로서, 항-IL-4R 항체는 암 백신 및 감염성 병의 백신에 대한 보조제와 같은 백신 보조제로서 사용된다. IL-4 보조제의 사용은, 특히 TH1 반응에 대한 면역반응을 유도할 경우에 당해 병의 치료 또는 예방에 유익할 수 있다.
패혈성/반응성 관절염
항-IL-4R 항체는 반응 관절염 또는 세균 관절염으로도 알려져 있는 패혈성 관절염의 치료에 이용될 수 있다. 패혈성 관절염은 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis), 예르시니아(Yersinia)(예컨대 와이. 엔테로콜리티카(Y. enterocolitica)), 살모넬라(Salmonella)(예, 에스. 엔테리티디스(S. enteritidis)), 시겔라(Shigella) 및 캄필로박터(Campylobacter)와 같은 미생물 감염에 의해 유발(초래 또는 후속 발생)될 수 있다. 에스. 아우레우스는 대다수의 사례의 원인이 되는 패혈성 관절염의 주요 사람 병원균인 것으로 보고되어 있다.
IL-4 반응 및 IL-4 의존적 Th2 반응은 패혈성 관절염을 촉진시키는 역할을 한다. 항-IL-4R 항체는 패혈성 관절염이 있거나 패혈성 관절염의 발생 위험이 있는 환자에서 IL-4를 억제하며 Th2 반응을 억제하기 위해 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
IL-4는 세균의 제거를 억제하여 관절내 세균 부하량 및 세균 지속을 증가시킨다. 따라서, 항-IL-4R 항체는 반응 관절염과 관련이 있는 세균의 제거를 돕는데 사용되어, 관절 팽창과 같은 임상 징후를 감소시킬 수 있다. 항-IL-4R 항체는 패혈성 관절염이 있는 사람 검체에게 투여되어 IL-4-매개된 관절 염증을 감소시킬 수 있다. 하나의 시도로서, 길항제를 관절, 예컨대 무릎의 윤활액으로 주사한다.
항-IL-4R 항체의 사용은 TH2 반응을 억제하고 감염에 대항한 TH1 반응을 촉진시켜 패혈성 관절염을 앓는(패혈성 관절염의 위험이 있는) 검체에게 유익할 수 있다. TH2 사이토킨은 관절에서의 세균 지속에 도움이 될 수 있는 반면, TH1 반응은 세균을 제거하는 역할을 한다.
항체는 전술한 바와 같은 세균이나 다른 미생물로 감염된 검체에게 투여되어 패혈성 관절염의 발생을 예방할 수 있다. 항체는, 예컨대 전술한 감염의 진단 후, 패혈성 관절염의 임상 증후군이 발생하기 전에 투여될 수 있다.
위플병
트로페리마 위펠리(Tropheryma whippelli)는 장의 지방이상증 및 지질용해 육아종증으로도 알려져 있는 위플병의 원인균이다. 이 병은 지방변증, 흔히 전신 림프절병증, 관절염, 열 및 기침을 특징으로 한다. 또한, 위플병 환자에서는, 공장 고유판에 다량의 "포말" 대식세포, 및 전자현미경에서 작은막대 모양으로 나타나는 과요오드산-쉬프 양성 입자를 함유하는 림프절이 보고되어 있다(Steadman's Medical Dictionary, 26th Edition, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1995).
항-IL-4R 항체의 사용은 환자의 면역반응의 TH1 및 TH2 성분 사이의 정상적인 균형을 복원시킴으로써, 위플병을 앓는(또는 발생 위험이 있는) 검체에게 유익할 수 있다. IL-4(TH2형 사이토킨)의 생산 증가 및 특정 TH1형 사이토킨 수준의 감소는 위플병과 관련이 있다. TH2 사이토킨은 세균 지속에 도움을 줄 수 있는 반면, TH1 반응은 원인균을 제거하는 역할을 한다. IL-4R 길항제는 검체가 위플병의 임상 증후군을 나타내는지의 여부에 관계없이 티. 위펠리(T. whippelii)로 감염된 검체에게 투여될 수 있다.
포진성 피부염
듀링(Duhring)병으로도 알려져 있는 포진성 피부염은 수포성 피부 환부, 피부 IgA 침착물 및 가려움을 특징으로 하는 만성 피부 질환이다. 환자는 Th2 면역반응에 의해 매개되는 글루텐 민감성 창자병증을 동반한 면역수포성 피부 질환을 갖는다. 항-IL-4R 항체는 IL-4 및 Th2 반응을 억제하기 위해 본 발명에 따라 투여되어 현존 병변의 치유를 촉진하고 신체 외부 표면의 수포 형성을 감소 또는 예방할 수 있다.
비대흉터
본 발명에 따라, 항-IL-4R 항체는 비대흉터가 있거나 발생하기 쉬운 검체에게 투여한다. 본 발명에 따른 한 방법으로서, 항-IL-4R 항체를 화상이 있는 검체에게 투여한다. 화상 및 다른 손상에 대한 면역반응은 비대흉터의 발병기전에 역할을 하는 것으로 생각된다. IL-4를 비롯한 TH2형 사이토킨의 생산 증가 및 특정 TH1형 사이토킨의 농도 감소는 비대흉터가 있는 화상 환자에서 보고된 바 있다. 따라서, 항-IL-4R 항체의 사용은 TH2형 면역반응을 억제함으로써 비대흉터가 있는(또는 발생 위험이 있는) 검체에게 유익할 수 있다.
두드러기
두드러기, 특히 이의 만성 형태, 예를 들어, 만성 특발성 두드러기(CIU)는 본 발명에 따른 항-IL-4R 항체로 치료될 수 있다. CIU 환자는 IL-4의 혈청 농도가 대조군보다 높아서, 주로 TH2형 사이토킨의 프로파일(profile)을 나타낼 수 있다. 비만 세포 및 Th2형 T 세포는 만성 두드러기에서 주요 작동세포로서 연루되어 있다. IL-4는 비만세포 증식을 자극한다. 비만세포 탈과립화는 히스타민 방출을 유도하고, 이어서 홍반, 호산구증가증, 피부 홍조 및 가려움을 유도한다. 항-IL-4R 항체의 투여는 IL-4를 억제하고 TH2형 반응을 감소시켜 검체의 두드러기 제어를 돕는다.
궤양성 결장염; 다른 위장관 장애
IL-4는 궤양성 결장염의 발병기전에 연루되어 있다. 상기 장애를 앓는 환자의 결장 점막에는 주로 IL-4를 비롯한 Th2형 사이토킨이 존재한다. 항-IL-4R 항체를 이용하여 TH2 반응을 억제시키는 것은 상기 질환을 경감시킬 수 있다.
궤양성 결장염 이외에, 다른 위장관 또는 소화계 질환도 항-IL-4R 항체로 치료할 수 있다. 이러한 질환의 예에는 염증성 장 질환(IBD), IBD의 일종인 궤양성 결장염 및 크론병, 위염, 궤양 및 점막 염증이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
IL-4가 관여하는 모든 위장 질환은 본 발명에 따른 항-IL-4R 항체로 치료할 수 있다. 예를 들어, 위장관 부분의 IL-4 유도 염증을 수반하는 질환은 항-IL-4R 항체로 치료할 수 있다. 이의 특정 양태는 위장관의 만성 염증성 질환의 치료에 관한 것이다.
다른 양태는 IL-4 유도 장벽 파괴가 관여하는 질환, 예컨대 위장관의 적어도 일부에서의 상피 장벽 기능의 감소를 특징으로 하는 질환에 관한 것이다. 이러한 질환은 예컨대 IL-4에 의해 직접 또는 간접적으로 유도되는 상피 손상을 수반할 수 있다.
장의 상피는 내강과 점막하층 사이에 비교적 불투과성인 장벽을 형성한다. 상피 장벽의 파괴는 염증성 장 질환과 같은 질환과 관련이 있다[전문이 본원에 참고인용된 논문, Youakim, A. and M. Ahdieh, Am. J. Physio. 276 (Gastrointest. Liver Physio. 39): G1279-G1288, 1999 참조]. 손상 또는 "누설" 장벽은 항원이 장벽을 통과할 수 있게 하고, 이는 위장 조직에 추가 손상을 유발할 수 있는 면역반응을 유인한다. 이러한 면역반응은 예컨대 호중구 또는 T 세포의 보충을 포함할 수 있다. 따라서, 항-IL-4R 항체의 투여는 면역반응의 바람직하지 않은 자극을 억제할 수 있다.
폐 질환
본원에서는 IL-4-유도된 폐 질환의 치료 방법도 제공한다. 이러한 질환에는 만성 섬유성 폐 질환을 비롯한 폐 섬유증, 폐내의 IL-4 유도성 섬유아세포 증식 또는 콜라겐 축적을 특징으로 하는 질환, TH2형 면역반응이 관여하는 폐 질환, 폐의 장벽 기능 감소(예컨대, 상피의 IL-4 유도 손상이 원인인)를 특징으로 하는 질환, 또는 IL-4가 염증 반응에 관여하는 질환(예, 천식)이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
낭성 섬유증은 점액 과잉생산 및 만성 감염 발생을 특징으로 한다. IL-4 및 Th2 반응의 억제는 점액 생산을 감소시키고 알러지성 기관지폐 아스퍼질루스증(ABPA)과 같은 감염의 제어를 돕는다.
알러지성 기관지폐 진균증은 Th2 면역반응이 지배적인 낭성 섬유증 또는 천식 환자에서 주로 일어난다. IL-4 및 Th2 반응의 억제는 이러한 감염의 제거 및 제어를 돕는다.
만성 폐쇄성 폐 질환은 점액 과다분비 및 섬유증과 관련이 있다. IL-4 및 Th2 반응의 억제는 점막 생산 및 섬유증 발생을 감소시켜 호흡기 기능을 개선시키고 병의 진행을 지연시킨다.
블레오마이신 유도성 폐병증 및 섬유증 및 방사선 유도성 폐 섬유증은 Th2의 유입에 의해 소견이 나타나는 폐의 섬유증, 이후 섬유증 발생을 매개하는 IL-4를 생산하는 CD4+ 세포 및 대식세포를 특징으로 하는 질환이다. IL-4 및 Th2 반응의 억제는 이러한 질환의 발생을 감소 또는 방지할 것이다.
폐포 단백증은 계면활성제 제거의 중단을 특징으로 한다. IL-4는 계면활성제 산물을 증가시킨다. 항-IL-4R 항체의 사용은 계면활성제 생산을 감소시키고 전체 폐 세척의 필요성을 감소시킨다.
성인 호흡 곤란 증후군(ARDS)은 다양한 요인이 원인일 수 있으며, 그 중 하나는 독성 화학물질에 대한 노출이다. ARDS에 민감한 환자 집단 중 하나는 인공호흡기를 사용하는 중환자이다. ARDS는 이러한 환자들에게 흔히 일어나는 합병증이다. 항-IL-4R 항체 치료는 염증 및 부착 분자를 감소시켜 ARDS를 경감시킬 수 있다. 하지만, 이러한 본 발명에 따른 상기 검체의 치료 방법은 상기 특정 작용 기작에 의한 것만은 아니다. 항-IL-4R 항체는 ARDS의 예방이나 치료에 사용될 수 있다.
사르코이드증은 육아종 병변을 특징으로 한다. 사르코이드증, 특히 폐 사르코이드증을 치료하기 위한 항-IL-4R 항체의 사용은 본 발명에 포함된다.
IL-4 유도 장벽 파괴가 관여하는 질환(예, 폐의 상피 장벽 기능의 저하를 특징으로 하는 질환)은 항-IL-4R 항체로 치료할 수 있다. 폐의 상피 장벽에 대한 손상은 IL-4에 의해 직간접적으로 유도될 수 있다. 폐의 상피는 폐내강 함유물이 점막밑으로 유입되지 않게 하는 선택적 장벽으로서 작용한다. 손상된 또는 "누출" 장벽은 항원이 장벽을 통과하게 하고, 결과적으로 폐 조직에 추가 손상을 유발할 수 있는 면역반응을 유도한다. 이러한 면역반응은 예컨대 식도 또는 비만 세포의 보충을 포함할 수 있다. 이와 같은 바람직하지 않은 면역반응의 자극을 억제하기 위하여 항-IL-4R 항체를 투여할 수 있다.
항-IL-4R 항체는 폐 상피의 치유를 촉진하여, 장벽 기능을 복원시키는데 사용할 수 있다. 항-IL-4R 항체는 예컨대 천식환자의 폐 상피의 치유를 촉진시키는데 사용할 수 있다. 또는, 폐 상피에 대한 IL-4 유도 손상을 예방하기 위한 예방 목적으로 길항제를 투여할 수 있다.
결핵
TH2형 면역반응은 결핵(TB) 환자의 조직 손상(예, 폐 조직의 괴사) 유발에 관여하는 것과 관련이 있다. IL-4의 상승 농도는 TB와 관련이 있다. IL-4 생산은 특히 공동 결핵 환자(즉, 흉부 방사선사진과 같은 기술로 검출/가시화될 수 있는 발달성 폐 공동을 보유한 TB 환자)에서 상승될 수 있다.
항-IL-4R 항체는 TH2형 면역반응을 억제하여 TB 환자(특히 공동 TB 환자)에게 유익할 수 있다. 본 발명에 따른 상기 검체의 치료 방법은 상기 특정 기작에 의해서만 이루어지는 것은 아니다. 항-IL-4R 항체는 면역반응의 TH1 및 TH2 성분 사이의 바람직한 균형을 복원시키고 환자의 IL-4 유도 조직 손상을 감소시키는 양으로 투여한다.
척-스트라우스 증후군
알러지 육아종 혈관염으로도 알려진 질병인 척-스트라우스 증후군은 천식이나 알러지의 병력이 있는 환자의 혈관 염증 및 호산구증가증을 특징으로 한다. 항-IL-4R 항체는 이러한 증후군이 있는 검체의 염증을 경감시키기 위해 투여할 수 있다. TH2형 면역반응을 억제하고 호산구증가증을 퇴치하기 위한 항-IL-4R 항체의 사용은 상기 검체에게 유익할 것이다.
자간전증
자간전증은 임신 후기의 임신중독증이다. 이 질환은 임신 3기 동안 일반적으로 부종과 단백뇨를 수반한 혈압의 급상승을 특징으로 한다.
상승된 TH1형 및 TH2형 면역반응은 이러한 질환에 역할을 할 수 있다. 본 발명에 제시된 방법은 발달성 자간전증을 보유한 임산부에게 항-IL-4R 항체를 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-4R 항체는 IL-4 농도(또는 총괄적으로 TH2형 사이토킨의 농도)를 임신 동안 정상으로 간주되는 농도로 감소시키기에 충분한 양 및 기간 동안 투여한다. 일반적으로, 항-IL-4R 항체는 임신 기간 동안 반복 투여한다.
피부경화증
항-IL-4R 항체는 본 발명에 따라 피부경화증 검체에게 투여한다. 이러한 항체는 상기 환자의 섬유아세포에 의한 IL-4 유도 콜라겐 합성을 감소시킨다. 이러한 항체는 피부 및 폐 조직 뿐만 아니라, 피부경화증 환자에서 섬유증이 일어나는 다른 조직의 섬유증을 예방 또는 감소시키고, 상기 조직의 콜라겐 합성을 억제하며, 피부경화증 관련 폐 질환을 치료하는데 사용할 수 있다.
양성 전립선 과다형성증
양성 전립선 비대라고도 알려진 양성 전립선 과다형성증(BPH)은 항-IL-4R 항체에 의해 치료될 수 있다. 특정 작용 기작으로 국함됨이 없이, 항-IL-4R 항체의 투여는 IL-4-유도된 염증을 억제하거나, TH2형 면역반응을 억제하여 BPH 검체에게 유익할 수 있다.
그레이브스병
갑상선자극호르몬 수용체에 대해 지시된 항체는 갑상선기능항진증을 특징으로 하는 질환인 그레이브스병의 중요한 역할을 한다. 그레이브스병 환자에서의 사이토킨 생산에 대한 연구는 TH2형 사이토킨 반응으로의 편향을 보여준다. TH2형 면역반응을 억제하고 항체 생산을 억제하기 위한 항-IL-4R 항체의 사용은 그레이브스병 환자에게 유익할 것이다.
겸상적혈구증
겸상적혈구증 환자는 일반적으로 위기(crisis)라는 급성 악화 기간을 간헐적으로 나타내며, 이러한 위기는 빈혈 또는 혈관폐쇄로 분류된다. 항-IL-4R 항체는 겸상적혈구 위기의 치료 또는 예방, 특히 면역반응이 TH2형 반응쪽으로 편향된 검체 또는 IL-4 농도가 상승된 검체에 유용한 것을 발견했다. 겸상적혈구증(특히 겸상적혈구 위기)은 감염성 질환, 특히 세균 감염에 대한 민감성 증가와 관련이 있다. 겸상적혈구증 환자에게 항-IL-4R 항체의 투여하는 것은 환자가 감염성 질환에 대한 면역반응을 일으키는 것을 도울 수 있다.
쇼그렌 증후군
쇼그렌 증후군 또는 건조 증후군으로 알려져 있는 자가면역 질환은 일반적으로 결합 조직의 질환, 예컨대 류마티스성 관절염, 낭창, 피부경화증 또는 다발근육염과 함께 안구 건조증 및 구강 건조증을 나타낸다. 환자의 대부분은 중년기(또는 노년기) 여성이다. 쇼그렌 증후군은 샘(예, 눈물샘 및 침샘) 및 신체의 다른 조직의 염증 질병이다. 이 증후군은 일반적으로 자가항체 생산과 관련이 있다.
항-IL-4R 항체는 이러한 검체의 염증 반응(예컨대, 눈물샘을 비롯한 샘의 염증)을 경감시키기 위해 투여할 수 있다. 항-IL-4R 항체는 TH2형 면역반응을 억제하여 쇼그렌 증후군 환자에게 유익할 수 있다. 그러나, 본 발명에 따른 검체의 치료방법은 상기 특정 작용 기작에 의해 제한되지 않는다.
자가면역 림프증식 증후군
자가면역 림프증식 증후군의 증상에는 림프증식 및 자가항체 생산이 포함된다. 보고에 따르면, 이 증후군의 환자는 아폽토시스(apoptosis)의 유전적 결핍증이 있다. 항-IL-4R 항체는 TH2형 면역반응을 억제하여 상기 증후군의 검체에게 유익할 수 있다. 그러나, 본 발명에 따른 상기 검체의 치료방법은 상기 특정 작용 기작에 의해 제한되지 않는다.
자가면역 용혈성 빈혈
과량의 IL-4 분비 및 TH1형 사이토킨의 결핍은 자가면역 용혈성 빈혈의 발병에 기여하는 관련인자이다. 항-IL-4R 항체는 본 발명에 따라 투여되어 자가항체 생산 감소 및 면역반응의 TH1 및 TH2 성분 사이의 더욱 정상적인 균형 복원을 통해 상기 환자에게 유익할 것이다.
자가면역 포도막염
포도막염은 포도막(일반적으로, 함께 간주되는 홍채, 섬모체 및 맥락막을 포함한다)의 염증을 수반한다. 과량의 IL-4 분비는 상기 시력을 위협하는 염증 안구 질병의 발병에 역할하는 하는 것으로서 연관이 있다. 본 발명에 따르면, 항-IL-4R 항체는 포도막염을 앓고 있거나 또는 포도막염의 발생 위험성이 있는 검체에게 투여된다. 하나의 양태에서, 항-IL-4R 항체는 자가면역 포도막망막염이 있는 개체에게 투여된다.
가와사키병
점막피부 림프절 증후군으로도 알려진 가와사키병(KD)은 주로 어린 아동이 걸리는 병이다. 이 병은 입술 및 구강 안의 점막내 특정 변화 및 압통성 림프선 비대를 특징으로 한다. 증상에는 열, 결막염, 입술 염증 및 구강 점막 염증, 경부 샘의 팽창 및 손과 발 전체의 발진과 이로부터 유도되는 손과 발 피부의 경화, 팽창 및 박피가 포함된다. 가와사키병(KD)에 걸린 아동에서는 동맥의 염증(혈관염)이 발생할 수 있다. 혈관계에 미치는 상기 질병의 영향을 인해, KD는 아동의 후천적 심장병의 주요 원인으로 보고되어 있다.
항-IL-4R 항체는 가와사키병을 앓는 검체에게 투여될 수 있다. IL-4 과다 분비 및 TH1형 사이토킨의 결핍은 상기 질병의 발병에 기여한다.
배럿 식도
배럿 식도는 식도의 하부에 위치하는 상피 조직 세포의 변경(자극에 따른)을 특징으로 하는 질환이다. 위 내용물의 식도로의 빈번한 역류는 시간이 지남에 따라 배럿 식도를 유도할 수 있다. 배럿 식도 환자는 식도암(예, 샘암종)의 발생 위험이 있다. 특정 작용 기작으로 국한됨이 없이, 항-IL-4R 항체의 투여는 TH2형 면역반응을 억제하여 배럿 식도 검체에게 유익할 수 있다. 하나의 양태에서, 항-IL-4R 항체는 배럿 식도로의 진행을 억제하기 위하여 식도염 검체에게 투여된다.
신장증
신장 증후군으로도 알려진 신장증은 비-염증성이고 비-악성인 신장 질환이다. 미세변화 신장증으로 알려진 질환에서 사구체 손상(사구체 내장 상피 세포의 구조 변화로 일어나는 것으로 생각된다)은 단백뇨를 포함하는 이상을 초래한다. TH2형 면역반응(특히 TH2형 사이토킨 IL-4 및 IL-13의 분비)은 미세 변화 신장증의 발병에 관여하는 것으로서 연관이 있다.
다른 증상
본 발명에 따라 치료될 수 있는 다른 질환의 예는 다음과 같다. 항-IL-4R 항체는 과다 IgE 생산, 특발성 과다호산구증가 증후군, 약물에 대한 알러지 반응, 자가면역 수포병(예, 심상성 천포창 또는 수포성 유천포창), 중증근무력증(자가면역 근육병), 및 만성피로증후군의 치료 또는 예방에 이용될 수 있다. 항-IL-4R 항체는 GVHD의 치료에 이용될 수 있고, 다른 치료제와 병용하여 GVHD를 치료하는 구체적 방법에 대해서는 하기에 설명한다. 또한, 항-IL-4R 항체는 디클로페낙(비스테로이드성 소염 약물)과 같은 약물에 의해 유도된 간독성의 치료 또는 예방을 위해 사용된다.
항-IL-4R 항체는 알러지 면역요법 치료에 대한 보조제로서 이용될 수 있다. 또한, 항-IL-4R 항체는 암 백신 및 감염성 질환 백신의 보조제와 같은 백신 보조제로서 사용된다. 항-IL-4R 항체의 사용은 특히 유리한 TH1형 면역반응이 백신을 투여하고자 하는 질환의 예방 또는 치료에 유익한 경우 바람직하다. 항-IL-4R 항체는 항체 매개성 면역반응의 감소 및/또는 T 세포 매개성 면역의 촉진이 바람직한 경우에 이용할 수 있다.
항-IL-4R 항체
하나의 관점에서, 본 발명은 IL-4 수용체 알파, 예컨대 사람 IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체, 및 이의 단편, 유도체, 뮤테인 및 변이체를 제공한다.
본 발명에 따라 이용될 수 있는 항-IL-4R 항체는 IL-4의 생물학적 활성을 억제하는 항체를 포함한다. 이러한 생물학적 활성의 예에는 다른 수용체 성분(예, IL-2R 감마 또는 IL-13R 알파)과의 연합, 시그널링 분자(예, IL-4 또는 IL-13) 결합(단독 결합 또는 다량체성 수용체 복합체의 일부로서 결합) 및 시그널 분자 결합에 대한 반응으로서 시그널의 전달을 포함한다.
다른 항-IL-4R 항체는 IL-4R의 상이한 도메인 또는 에피토프에 결합하거나 다른 작용 기작을 통해 작용할 수 있다. 그 예에는 IL-4의 IL-4R에 대한 결합을 방해하거나 또는 시그널 전달(signal transduction)을 억제하는 항체가 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 작용 부위는 예컨대 세포내(예컨대, 세포내 시그널링 캐스캐이드(signaling cascade)의 방해) 또는 세포외일 수 있다. 항체는 본 발명에서의 용도를 위해 IL-4 유도 활성을 완전히 억제할 필요는 없다. 오히려, IL-4의 특정 활성을 감소시키는 항체가 본 발명에 또한 사용될 수 있다.
특정 병의 치료에 있어서 항-IL-4R 항체의 특정 작용 기작에 대한 전술한 설명들은 예시적인 설명일 뿐이며, 본 발명의 방법이 이에 제한되는 것은 아니다. 항-IL-4R 항체가 질병을 경감시키는 작용 기작은 전술한 설명에 제한되지 않는다.
항-IL-4R 항체는 면역반응 또는 염증반응에 관여하는 IL-4-매개된 세포 유입을 억제할 수 있다. 항체는 예컨대 특정 세포 종류의 증식, 활성화, 이동, 유입 또는 축적을 감소시키거나, 특정 세포 종류에 직접적으로 또는 간접적으로 기인하는 생물학적 반응을 억제하여 작용할 수 있다. 특정 세포 종류의 예는 섬유아세포, 비만 세포 및 호산구이다.
전술한 바와 같이, 일부 질환은 TH2형 면역반응을 억제하여 치료할 수 있다. IL-4R은 TH2 반응과 관련이 있고 2형의 T-헬퍼 세포(TH2 세포)에 의해 분비되는 사이토킨의 하나이다. 항-IL-4R 항체는 TH2형 면역반응을 감소시키기 위해 투여할 수 있다. IL-4R 항체는 TH2 세포의 증식을 감소시키거나, TH2 반응을 억제하거나, 면역반응을 TH1 반응쪽으로 편향시키거나, 또는 TH1형 반응을 선호한다고 말할 수 있다. 또한, IL-5, IL-10 또는 IL-13과 같은 다른 TH2형 사이토킨(들)의 길항제도 이러한 사이토킨의 상승된 수준을 수반하는 질환이 있는 검체에게 투여할 수 있다. 이러한 사이토킨의 검체, 예컨대 검체 혈청 내의 함량 측정 방법은 공지되어 있다.
본 발명의 하나의 양태는 IL-4-매개된 상피 장벽 파괴가 관여하는 질환이 있거나, 이러한 질환의 발생 위험이 있는 검체에게 항-IL-4R 항체를 투여하는 것을 포함하여, IL-4-유도된 상피 손상을 억제하는 방법에 관한 것이다.
본 명세서에 제시된 특정 양태의 방법들은 위장관이나 폐 상피의 IL-4 유도 손상을 억제하기 위해 항-IL-4R 항체를 투여하는 것을 포함한다. 이러한 방법들은 상피 손상을 예방하거나 또는 상피 장벽 기능을 복원(즉, 상피 복원이나 치유 촉진)시키는데 이용될 수 있다. 상피의 IL-4 유도 손상을 억제하는 항-IL-4R 항체의 능력은 본 명세서에 기술된 적당한 다수의 분석법 중 어느 하나로 확인할 수 있다.
감염과 관련이 있거나(후속되는) 모든 염증은 항-IL-4R 항체로 치료할 수 있다. 이러한 항체의 투여는, 예를 들어 위장관의 미생물 감염에 의해 일어나는 염증성 반응의 임의의 IL-4-유도된 성분을 억제할 수 있다.
2종 이상의 항체 또는 항체 유도체의 조합, 또는 항체 또는 항체 유도체와 하나 이상의 다른 IL-4, IL-13, IL-4R 및/또는 IL-13R 길항제[참조: 전문이 본원에 참고인용된 미국 특허 제5,559,905호, 제5,840,869호, 제5,856,296호, 제5,767,065호, 제5,717,072호, 제6,391,581호, 제5,710,023호, Idzerda et al., 1990, J. Exp. Med. 171: 861-73 및 Mosley et al., 1989, Cell 59: 335-48]의 병용도 본 발명의 방법 및 조성물에 이용될 수 있다.
올리고뉴클레오타이드-지시된 부위적 돌연변이유발법을 이용하여 요구되는 치환, 결실 또는 삽입에 따라 변경된 특정 코돈을 갖는 변경 유전자를 제공할 수 있다. 이러한 변경을 제공하는 기술의 예는 문헌[Walder et aL, 1986, Gene 42: 133; Bauer et al. 1985, Gene 37: 73; Craik, BioTechniques, January 1985, 12-19; Smith et al., 1981, Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press; 및 미국 특허 4,518,584 및 4,737,462]에 기술되어 있다. 이러한 방법 및 기타 다른 방법을 사용하여 예컨대 IL-4R에 대한 증가된 친화성, 강화된 친화성(avidity) 또는 특이성이 비유도체화 항체에 비해 증가된 항-IL-4R 항체 유도체 등을 제조할 수 있다.
본 발명의 범위에 속하는 항-IL-4R 항체의 다른 유도체에는 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 이종 폴리펩타이드가 융합되어 있는 재조합 융합 단백질의 발현 등을 통해 수득되는, 다른 단백질 또는 폴리펩타이드와 항-IL-4R 항체 또는 이의 단편과의 공유 또는 응집 접합체가 있다. 예를 들어, 접합된 펩타이드는 효모 알파 인자 리더와 같은 이종 시그널(또는 리더) 폴리펩타이드이거나, 또는 에피토프 태그와 같은 펩타이드일 수 있다. 항-IL-4R 항체 함유 융합 단백질은 항-IL-4R 항체의 정제 또는 동정을 용이하게 하기 위해 첨가된 펩타이드(예컨대, 폴리-His)를 함유할 수 있다. 또한, 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드는 문헌[Hopp et al., Bio/Technology 6 : 1204, 1988 및 미국 특허 5,011,912]에 기술된 바와 같은 FLAG 펩타이드 Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK)(서열번호 69)에 결합될 수도 있다. FLAG 펩타이드는 고도 항원성이며, 특정 모노클로날 항체(mAb)에 의해 가역적으로 결합된 에피토프를 제공하여, 발현된 재조합 단백질을 신속하게 분석하고 용이하게 정제할 수 있게 해준다. 소정의 폴리펩타이드에 FLAG 펩타이드가 융합된 융합 단백질의 제조에 유용한 시약은 시중에서 입수할 수 있다(Sigma, St.Louis, MO).
하나 이상의 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 함유하는 올리고머는 IL-4R 길항제로서 이용될 수 있다. 올리고머는 공유 결합되거나 비공유 결합된 이량체, 삼량체 또는 그 이상의 올리고머 형태일 수 있다. 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 2개 이상 포함하는 올리고머도 사용 가능할 것으로 생각되는데, 한 예로는 동종이량체가 있다. 다른 올리고머에는 이종이량체, 이종삼량체 등이 있다.
하나의 양태는 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드로 융합된 펩타이드 잔기 사이에 공유 또는 비공유 상호작용을 통해 결합되는 다수의 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 함유하는 올리고머에 관한 것이다. 이러한 펩타이드는 펩타이드 링커(스페이서) 또는 올리고머화를 촉진하는 성질을 갖는 펩타이드일 수 있다. 이하에 더 상세히 설명되는 바와 같이, 부착된 IL-4R 폴리펩타이드의 올리고머화를 촉진할 수 있는 펩타이드 중에는 류신 지퍼(leucin zipper) 및 항체 유래의 특정 폴리펩타이드들이 있다.
특정 양태에서, 올리고머는 2 내지 4개의 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 포함한다. 이러한 올리고머의 항-IL-4R 항체 잔기는 전술한 임의의 형태, 예컨대 변이체 또는 단편일 수 있다. 이러한 올리고머는 IL-4R 결합 활성을 갖는 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 함유하는 것이 바람직하다.
하나의 양태에서, 올리고머는 면역글로불린 유래의 폴리펩타이드를 사용하여 제조한다. 항체 유래 폴리펩타이드의 다양한 부분에 융합된 특정 이종 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질의 제조는 문헌[참조: Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88: 10535; Byrn et al., 1990, Nature 344: 677; 및 Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19. 1-10.19. 11.]에 기술되어 있다.
본 발명의 다른 하나의 양태는 항-IL-4R 항체의 IL-4R 결합 단편을 항체의 Fc 영역에 융합시켜 제조한, 2개의 융합 단백질을 함유하는 이량체에 관한 것이다. 이러한 이량체는 예컨대 융합 단백질을 암호화하는 유전자 융합체를 적당한 발현 벡터에 삽입한 뒤, 이러한 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포에서 상기 유전자 융합체를 발현시킨 다음, 발현된 융합 단백질을 항체 분자와 같이 어셈블리시켜 Fc 잔기 사이에 쇄간 이황화 결합을 형성시킴으로써 이량체를 수득하여 제조할 수 있다.
본 명세서에 사용된 "Fc 폴리펩타이드"란 용어에는 항체의 Fc 영역에서 유래하는 폴리펩타이드의 천연 형태 및 뮤테인 형태가 포함된다. 또한, 이량체화를 촉진하는 힌지(hinge) 영역을 함유하는 상기 폴리펩타이드의 절두 형태도 포함된다. Fc 잔기를 함유하는 융합 단백질(및 이로부터 형성된 올리고머)은 단백질 A 또는 단백질 G 컬럼 상에서의 친화성 크로마토그래피에 의한 정제를 용이하게 한다는 장점을 제공한다.
PCT 출원 WO 93/10151(본원에 참고인용됨)에 기술된 적합한 Fc 폴리펩타이드 중 하나는 사람 IgG1 항체의 Fc 영역의 N-말단 힌지 영역에서부터 천연 C-말단까지에 해당하는 단일쇄 폴리펩타이드이다. 또 다른 유용한 Fc 폴리펩타이드는 미국 특허 5,457,035 및 문헌[Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001]에 기술된 Fc 뮤테인이다. 이 뮤테인의 아미노산 서열은 아미노산 19가 Leu에서 Ala으로, 아미노산 20이 Leu에서 Glu으로, 아미노산 22가 Gly에서 Ala으로 변화된 것을 제외하고는 WO 93/10151에 제시된 천연 Fc 서열과 동일하다. 이 뮤테인은 Fc 수용체에 대해 감소된 친화성을 나타낸다.
다른 양태에서, 항-IL-4R 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분은 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분로 치환될 수 있다.
또는, 올리고머는 펩타이드 링커(스페이서 펩타이드)의 존재 여부에 관계없이 다수의 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 함유하는 융합 단백질이다. 적당한 펩타이드 링커에는 미국 특허 4,751,180 및 4,935,233에 기술된 것이 있다.
올리고머성 항-IL-4R 항체 유도체를 제조하는 다른 방법으로서 류신 지퍼를 사용하는 방법이 있다. 류신 지퍼 도메인은 이 도메인이 존재하는 단백질의 올리고머화를 촉진하는 펩타이드이다. 류신 지퍼는 본래 여러 DNA 결합 단백질에서 동정되었고(Landschulz et al., 1988, Science 240:1759), 그 이후로 다양한 여러 단백질에서 발견되었다. 공지된 류신 지퍼 중에는 천연 펩타이드 및 이의 이량체화 또는 삼량체화된 유도체들이 있다. 가용성 올리고머 단백질의 생산에 적합한 류신 지퍼 도메인의 예는 PCT 출원 WO 94/10308에 기술되어 있고, 폐 계면활성 단백질 D(SPD) 유래의 류신 지퍼는 본원에 참고인용된 문헌[Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344;191]에 기술되어 있다. 융합되는 이종 단백질의 안정된 삼량체화를 허용하는 변형된 류신 지퍼의 사용에 대해서는 문헌[Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78]에 기술되어 있다. 하나의 접근법으로서, 류신 지퍼 펩타이드에 융합된 항-IL-4R 항체 단편 또는 유도체를 함유하는 재조합 융합 단백질을 적당한 숙주 세포에서 발현시키고, 형성된 가용성 올리고머 항-IL-4R 항체 단편 또는 유도체를 배양 상청액에서 회수한다.
본 명세서에 기술된 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드 및 융합 단백질은 다양한 종래의 기술 중 임의의 기술로 제조할 수 있다. 예를 들어, 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드는 이를 천연적으로 발현하는 세포로부터 정제하거나 또는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 재조합 발현 시스템으로부터 생산할 수도 있다.
당업계에 공지된 임의의 발현 시스템은 본 발명의 재조합 폴리펩타이드를 제조하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포는 목적하는 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA를 함유하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된다. 사용될 수 있는 숙주 세포 중에는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포가 있다. 원핵생물은 이. 콜라이 또는 바실러스와 같은 그램 음성 또는 그램 양성 유기체를 포함한다. 고등 진핵생물 세포에는 곤충 세포 및 포유동물 기원의 확립된 세포주가 있다. 적당한 포유동물 숙주 세포주의 예에는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23: 175), L 세포, 293 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, BHK(ATCC CTL 10) 세포주 및 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CVI 유래의 CVI/EBNA 세포주(ATCC CCL70)가 있으며, 이에 대해서는 문헌[McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821]에 기술되어 있다. 세균, 진균, 효모 및 포유동물 세포 숙주에 사용하기에 적당한 클로닝 및 발현 벡터에 대해서는 문헌[Pouwels et al., Cloning Vectors : A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985]에 기술되어 있다.
형질전환된 세포는 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드의 발현을 촉진하는 조건 하에서 배양하고, 폴리펩타이드를 통상적인 단백질 정제 과정을 통해 회수한다. 이러한 정제 과정 중 하나는 예를 들면 IL-4R 전체 또는 일부(예, 세포외 도메인)가 결합되어 있는 매트릭스에서의 친화성 크로마토그래피를 사용하는 것이다. 본 발명에서 사용되는 것으로 의도되는 폴리펩타이드에는 오염성 내재 불순물이 실질적으로 없는, 실질적으로 동종의 재조합 포유동물 항-IL-4R 항체 폴리펩타이드가 포함된다.
하나의 관점으로서, 본 발명은 IL-4 수용체에 대한 IL-4의 결합을 방해하는 항체를 제공한다. 본 명세서에서 차단 항체로 언급하기도 하는 상기 항체는 IL-4R 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체에 대하여 생성될 수 있고, IL-4 수용체에 대한 IL-4의 결합을 방해하는 성능에 대한 통상의 분석법으로 선별할 수 있다. 적당한 분석법의 예에는 IL-4R을 발현하는 세포에 대한 IL-4의 결합을 억제하는 능력에 대하여 항체를 시험하는 분석법, 또는 세포 표면 IL-4 수용체에 대한 IL-4의 결합시 나타나는 생물학적 또는 세포 반응을 감소시키는 능력에 대하여 항체를 시험하는 분석법이 있다.
IL-4R 알파는 특정 다중서브유닛 IL-13 수용체 복합체의 성분인 것으로 보고되었다(Zurawski et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 13869; de Vries, 1998, J. Allergy Clin. Immunol. 102: 165; 및 Callard et al., 1996, Immunology Today, 17: 108, 각각 본원에 참고인용되었다). 따라서, 하나의 양태에서 항체는 IL-4는 물론 IL-13의 세포에의 결합을 차단하는 항체이다. 이러한 항체는 IL-4 유도성 생물학적 활성을 억제할 뿐만 아니라 IL-13 유도성 활성을 억제하며, 따라서 이러한 사이토킨 중 어느 하나 또는 둘 모두에 의해 유도되는 질환의 치료에 이용될 수 있다. 이러한 질환의 예에는 IgE 매개 질환, 천식, 알러지 질환, 알러지 비염 및 아토피 피부염을 비롯한 피부염이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
IL-4R 알파에 결합하는 항체는 IL-4R 알파 함유 IL-13 수용체 복합체에 대한 IL-13의 결합을 방해하는지를 측정하기 위해 다양한 통상의 분석법으로 선별할 수 있다. 항체는 결합 분석법 등으로 선별하거나 IL-13 유도성 생물학적 활성을 억제하는 능력에 대한 시험으로 선별할 수 있다. 적당한 분석법의 예는 이하 실시예 2에 설명된다.
IL-4R 알파에 특이적인 항체는 당업계에 공지된 임의의 기술로 제조할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Monoclonal Antibodies, Hybridomas : A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al.(eds.), Plenum Press, New York (1980); 및 Antibodies : A Laboratory Manual, Harlow and Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(1988)]을 참조한다.
본 발명에 따른 항체의 항원-결합 단편은 통상의 기술로 제조할 수 있다. 이러한 단편의 예에는 Fab 및 F(ab')2 단편이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 또한, 유전자 조작 기술로 제조한 항체 단편 및 유도체도 사용 가능하다. 특별한 다른 언급이 없는 한, 본 명세서에 사용된 "항체" 및 "모노클로날 항체"란 용어는 전항체(whole antibody) 및 항원 결합 단편 및/또는 이의 유도체를 모두 포함한다.
또 다른 양태는 쥐 모노클로날 항체의 사람화 형태와 같은 키메라 항체가 있다. 이러한 사람화 항체는 공지의 기술로 제조할 수 있고, 사람에게 투여시 감소된 면역원성을 나타내는 장점을 제공한다. 하나의 양태에서, 사람화 모노클로날 항체는 쥐 항체의 가변 도메인(또는 이의 항원 결합 부위 전체 또는 일부) 및 사람 항체 유래의 불변 도메인을 포함한다. 또는, 사람화 항체 단편은 쥐 모노클로날 항체의 항원 결합 부위 및 사람 항체 유래의 가변 도메인 단편(항원 결합 부위가 없다)을 함유할 수 있다. 키메라 항체 및 추가 조작된 모노클로날 항체의 제조 방법에는 문헌[Riechmann et al, 1988, Nature 332: 323, Liu et al., 1987, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84 : 3439, Larrick et al., 1989, Bio/Technology 7: 934, 및 Winter et al., 1993, TIPS 14: 139]에 기술된 방법들이 있다. 하나의 양태에서, 키메라 항체는 CDR 이식된 항체이다.
사람을 제외한 동물에서 사람 및 부분 사람 항체를 제조하기 위한 방법들이 개발되어 왔다. 그 예로서, 하나 이상의 내인성 면역글로불린 유전자를 다양한 수단으로 불활성화시킨 마우스가 제조되었다. 사람 면역글로불린 유전자를 마우스에 도입시켜 이러한 불활성화된 마우스 유전자를 대체시켰다. 하나의 양태로서, 사람이 아닌 동물, 예컨대 형질전환된 마우스를 IL-4R 폴리펩타이드로 면역화시켜, IL-4R 폴리펩타이드에 대해 지시된 항체가 상기 동물에서 생산되게 한다. 적당한 면역원의 한 예는 서열번호 2에 제시된 단백질의 세포외 도메인을 함유하는 폴리펩타이드와 같은 가용성 사람 IL-4R; 또는 서열번호 2에 제시된 단백질의 다른 면역원성 단편이다.
사람 또는 부분적 사람 항체를 생산하는 방법 및 생산을 위한 형질전환된 동물의 사용에 대해서는 본 명세서에 참고인용된 미국 특허 5,814,318; 5,569,825 및 5,545,806에 기술되어 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 IL-4 수용체에 결합하는 모노클로날 항체를 제공한다. 모노클로날 항체는 면역화 스케줄의 완료 후 형질전환된 동물에서 수득되는 불멸화된 비장 세포 등을 이용하는, 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 비장 세포는 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생산하는 방법 등의 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 불멸화될 수 있다. 하이브리도마 생산 융합 방법에 유용한 골수종 세포는 항체 생산성이 아니고, 융합 효율이 높으며, 목적한 융합된 세포(하이브리도마)의 성장만을 오로지 지지하는 특정 선택 배지에서 성장할 수 없게 하는 효소 결핍성이 있는 것이 바람직하다. 마우스 융합에 사용할 수 있는 적당한 세포주의 예에는 Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 및 S194/5XX0 Bul 이 있고; 래트 융합에 사용되는 세포주의 예에는 R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F 및 4B210 이 있다. 세포 융합에 유용한 다른 세포주에는 U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 및 UC729-6이 있다.
하나의 양태에서, 하이브리도마 세포주는 동물(예, 사람 면역글로불린 서열을 보유한 형질전환된 동물)을 IL-4R 면역원으로 면역시키는 단계; 면역화된 동물로부터 비장 세포를 수거하는 단계; 수거된 비장 세포를 골수종 세포주에 융합시켜 하이브리도마 세포를 수득하는 단계; 이러한 하이브리도마 세포로부터 하이브리도마 세포주를 확립시키는 단계; 및 IL-4R 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 동정하는 단계에 의해 제조한다. 이러한 하이브리도마 세포주 및 이로부터 생산된 항-IL-4R 모노클로날 항체는 본 발명에 포함되는 것이다.
하이브리도마 세포주에 의해 분비된 모노클로날 항체는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 정제할 수 있다. 하이브리도마 또는 mAb는 IL-4 및/또는 IL-13 유도 활성을 차단하는 능력과 같은 특정 능력을 갖는 mAb를 동정하기 위해 추가 스크리닝될 수 있다. 이러한 스크리닝의 예는 실시예 2, 3 및 4에 제공되어 있다.
사람 IL-4에 대해 지시된 항체(예컨대 모노클로날 항체)의 제조방법, 차단 항체를 동정하는 분석법 및 항-IL-4 항체의 사람화된 또는 유전자 조작된 유도체를 제조하는 방법에 대한 다른 예는 본원에 참고인용된 미국 특허 5,041,381, 5,863,537, 5,928,904 및 5,676,940에 기술되어 있다. IL-4 길항제로서 이용될 수 있는 항체의 또 다른 예는 본원에 참고인용된 WO 91/09059에 설명되어 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 IL-4R에 결합하는 사람 항체를 제공한다. 본 발명의 하나의 양태에서, IL-4R 알파에 대해 생성되고 형질전환된 마우스의 사용을 포함하는 기술로 생산된 사람 항체는 세포에의 IL-4 결합 및 또한 IL-13의 결합도 차단한다. 이러한 항체는 IL-4 길항제이며, IL-13 길항제로도 작용한다.
본 발명의 항체는 당업계에 공지된 임의의 불변 영역을 함유할 수 있다. 경쇄 불변 영역은 예컨대 카파형 또는 람다형 경쇄 불변 영역, 예를 들면, 사람 카파형 또는 람다형 경쇄 불변 영역일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 예컨대 알파-, 델타-, 입실론-, 감마- 또는 뮤형 중쇄 불변 영역, 예를 들면, 사람 알파-, 델타-, 입실론-, 감마- 또는 뮤형 중쇄 불변 영역일 수 있다. 하나의 양태에서, 경쇄 또는 중쇄 불변 영역은 자연 발생의 불변 영역의 단편, 유도체, 변이체 또는 뮤테인이다.
IL-4R에 대해 지시된 항체는 시험관내 또는 생체내에서 IL-4R 폴리펩타이드의 존재를 검출하는 분석법 등에 사용될 수 있다. 또한, 상기 항체는 면역친화성 크로마토그래피에 의해 IL-4R 단백질을 정제하는데 사용될 수도 있다. 추가로 IL-4R에 IL-4의 결합을 차단할 수도 있는 상기 항체는 이러한 결합으로 나타나는 생물학적 활성을 억제하는데 사용할 수 있다. 차단 항체는 본 발명의 방법에 유용하다. 이러한 항체는 IL-4 길항제로서 작용하여 임의의 IL-4-유도된 질환, 예컨대 천식 및 알러지(예, 알러지 비염), 접촉 피부염 및 아토피성 피부염 등을 치료하는데 이용될 수 있다. 하나의 양태에서, 형질전환된 마우스의 면역화를 수반하는 방법에 의해 생성된 사람 항-IL-4R 모노클로날 항체는 전술한 질환의 치료에 이용된다.
항체는 시험관내 방법에서 이용되거나, 또는 IL-4-유도된 생물학적 활성을 억제하기 위해 생체내 투여될 수도 있다. 따라서, 그 예가 전술한 바와 같은 세포 표면의 IL-4 수용체와 IL-4의 상호작용에 의해 유발되거나 악화되는(직접 또는 간접적으로) 질환이 치료될 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명은 IL-4 및/또는 IL-13 차단 항체를 이를 필요로 하는 포유동물에게 IL-4 및/또는 IL-13-유도된 생물학적 활성을 감소시키기에 효과적인 양으로 생체내 투여하는 것을 포함하는 치료방법을 제공한다.
본 발명의 항체에는 IL-4의 생물학적 활성을 억제하고 또한 IL-13의 생물학적 활성을 억제하기도 하는 부분적 사람 및 완전 사람 모노클로날 항체가 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 하나의 양태는 세포에의 IL-4의 결합을 적어도 부분적으로 차단하고, 세포에의 IL-13의 결합을 적어도 부분적으로 차단하는 사람 모노클로날 항체에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항체는 형질전환된 마우스를 IL-4 수용체 면역원으로 면역화시켜 생산한다. 다른 양태에서, 면역원은 사람 IL-4 수용체 폴리펩타이드이다. 본원에서는 이와 같이 면역화된 마우스에서 유래하고 IL-4R에 결합하는 모노클로날 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주가 제공된다.
이러한 사람 항체, 부분 사람 항체 또는 사람화된 항체가 특히 인체로의 투여를 수반하는 적용 등과 같은 다수의 적용에 적합하기는 하지만, 다른 종류의 항체도 다른 적용에 적합할 수도 있다. 본 발명의 비-사람 항체는 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 염소, 당나귀 또는 비-사람 영장류(예컨대 원숭이(예, 게잡이 원숭이 또는 붉은털 원숭이) 또는 유인원(예, 침팬지)) 유래의 항체일 수 있다. 본 발명의 비-사람 항체는, 예컨대 시험관내 및 세포 배양물 기반 용도 또는 본 발명의 항체에 대한 면역반응이 일어나지 않거나 거의 일어나지 않고, 차단될 수 있거나, 중요하지 않거나, 또는 필요로 되는 임의의 다른 적용들에 사용될 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명의 비-사람 항체는 사람을 제외한 검체에게 투여된다. 다른 양태에서, 비-사람 항체는 사람을 제외한 검체에서 면역반응을 유발하지 않는다. 다른 양태에서, 비-사람 항체는 사람을 제외한 검체와 동일한 종 유래의 항체인 것으로서, 예컨대 본 발명의 마우스 항체는 마우스에게 투여된다. 특정 종 유래의 항체는 예컨대 그 종의 동물을 원하는 면역원(예컨대, 가용성 IL-4 수용체 폴리펩타이드)으로 면역시키거나, 또는 그 종의 항체 생산용 합성 시스템(예컨대, 특정 종의 항체를 생산하는 세균 또는 파지 디스플레이 기반 시스템)을 사용하거나, 또는 예컨대 항체의 불변 영역을 다른 종 유래의 불변 영역으로 치환시켜 한 종 유래의 항체를 다른 종 유래의 항체로 전환시키거나, 또는 다른 종 유래의 항체 서열에 더욱 유사하도록 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 치환시켜 제조할 수 있다. 하나의 양태에서, 항체는 2 이상의 다른 종의 항체들로부터 유래되는 아미노산 서열을 포함한 키메라 항체이다.
다른 관점에서, 본 발명은 L1 내지 L6으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 경쇄 가변 영역 및/또는 H1 내지 H24로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 중쇄 가변 영역을 함유하는 항체, 및 이의 단편, 유도체, 뮤테인 및 변이체를 제공한다(도 2 및 도 3 참조). 이러한 항체는 "LxHy"라는 명명법을 사용하여 나타낼 수 있는데, 여기서 x는 경쇄 가변 영역의 수에 해당하고 y는 중쇄 가변 영역의 수에 해당하는 것으로서, 도 3에 표시된 바와 같다. 예컨대, L4H17은 도 3에 제시된 바와 같은 L4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과 H17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 보유한 항체를 의미한다. 또한, 도 2 및 도 3은 각 가변 도메인 서열의 CDR 및 주쇄 영역의 위치도 나타내고 있다. 본 발명의 항체에는 예컨대 L2H1, L3H1, L4H1, L5H1, L1H2, L1H3, L1H4, L1H5, L1H6, L1H7, L1H8, L1H9, L1H10, L1H11, L2H4, L2H12, L2H13, L2H14, L6H1, L2H2, L2H3, L2H6, L2H7, L2H8, L2H9, L2H10 및 L2H11이 포함된다. 또한, 사람 항체 가변 서열과 같은 추가 항체 가변 서열도 사용될 수 있다[예컨대, Sblattero et al, 1998, Immunotechnology 3 : 271-78, de Haard et al., 1999, J. Biol. Chem. 274: 18218-30 참조].
하나의 양태에서, 본 발명은 L2 내지 L6의 서열 중 어느 하나가 L1의 서열과 상이한 1개 이상의 잔기에서만 L1의 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 함유하는 항체를 제공한다(예컨대, 상기 항체의 서열은 잔기(들) 1, 4, 7 등에서 L1의 서열과 상이하다). 다른 양태에서, 상기 경쇄 가변 도메인의 서열은 L1의 서열과 상이한 위치에 L2 내지 L6 중 어느 하나의 서열 중 임의의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 함유한다(예컨대, 상기 서열은 잔기(들) E1D, L4M, S7T 등을 함유한다). 다른 양태에서, 상기 서열은 적어도 하나의 CDR(예컨대, CDR1, CDR2 또는 CDR3)에서 L1의 서열과 상이하다. 다른 양태에서, 상기 서열은 적어도 하나의 FR(예컨대, FR1, FR2, FR3 또는 FR4)에서 L1 서열과 상이하다. 다른 양태에서, 본 발명은 H2 내지 H24의 서열 중 어느 하나가 H1의 서열과 상이한 1개 이상의 잔기에서만 H1의 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 함유하는 항체를 제공한다(예컨대, 상기 항체의 서열은 잔기(들) 6, 13, 24 등에서 H1의 서열과 상이하다). 다른 양태에서, 상기 중쇄 가변 도메인의 서열은 H1의 서열과 상이한 위치에 H2 내지 H24 중 어느 하나의 서열 중 적어도 하나의 아미노산 잔기를 함유한다(예컨대, 상기 서열은 잔기(들) Q6E, H13Q, G24A 등을 함유한다). 다른 양태에서, 상기 서열은 적어도 하나의 CDR(예컨대, CDR2 또는 CDR3)에서 H1의 서열과 상이하다. 다른 양태에서, 상기 서열은 적어도 하나의 FR(예컨대, FR1 또는 FR3)에서 H1 서열과 상이하다.
다른 양태에서, 본 발명은 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해, 서열번호 6의 잔기 24 내지 35(여기서, 잔기 8의 N은 S로 치환되지 않는다); 서열번호 8의 잔기 24 내지 35(여기서, 잔기 5의 T는 S로 치환되지 않고/않거나, 잔기 7의 N은 S로 치환되지 않고/않거나, 잔기 9의 D는 S로 치환되지 않는다); 서열번호 10의 잔기 24 내지 35(여기서, 잔기 9의 D는 S로 치환되지 않는다); 서열번호 12의 잔기 24 내지 35(여기서, 잔기 7의 N은 S로 치환되지 않고/않거나 잔기 9의 N은 S로 치환되지 않는다); 및 서열번호 14의 잔기 24 내지 35(여기서, 잔기 7의 G는 S로 치환되지 않는다)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 6의 잔기 51 내지 57(여기서, 잔기 7의 P는 T로 치환되지 않는다); 서열번호 10의 잔기 51 내지 57(여기서, 잔기 7의 S는 T로 치환되지 않는다); 및 서열번호 12의 잔기 51 내지 57(여기서, 잔기 2의 T는 A로 치환되지 않고/않거나 잔기 4의 Y는 S로 치환되지 않는다)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 CDR2 ; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 6의 잔기 90 내지 99(여기서, 잔기 4의 D는 G로 치환되지 않고, 잔기 5의 H는 S로 치환되지 않고, 잔기 7의 A는 P로 치환되지 않고/않거나, 잔기 8의 G는 P로 치환되지 않는다); 서열번호 8의 잔기 90 내지 99(여기서, 잔기 5의 R은 S로 치환되지 않는다); 및 서열번호 14의 잔기 90 내지 99(여기서, 잔기 10의 M은 T로 치환되지 않는다)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 CDR3; 3개 이하의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 18의 잔기 50 내지 65(여기서, 잔기 9의 S는 N으로 치환되지 않는다)의 서열과 상이한 중쇄 CDR2 ; 및 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 18의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 6의 T는 D로 치환되지 않고/않거나, 잔기 7의 H는 Y로 치환되지 않는다); 서열번호 20의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 4의 W는 Y로 치환되지 않고/않거나, 잔기 5의 Y는 F로 치환되지 않고/않거나, 잔기 6의 N는 D로 치환되지 않고/않거나, 잔기 7의 N은 Y로 치환되지 않는다); 서열번호 22의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 6의 P는 D로 치환되지 않고/않거나 잔기 7의 W는 Y로 치환되지 않는다); 서열번호 24의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 6의 T는 D로 치환되지 않고/않거나 잔기 7의 R은 Y로 치환되지 않는다); 서열번호 26의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 5의 T는 F로 치환되지 않는다); 서열번호 30의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 4의 W는 Y로 치환되지 않는다); 및 서열번호 34의 잔기 98 내지 104(여기서, 잔기 4의 W는 Y로 치환되지 않고/않거나, 잔기 5의 Y는 F로 치환되지 않는다)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 중쇄 CDR3으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, IL-4 수용체 알파에 결합하는 항체를 제공한다.
다른 양태에서, 항체는 IL-4 수용체에 대한 IL-4의 결합을 억제한다. 다른 양태에서, 항체는 IL-13 수용체에 대한 IL-13의 결합을 억제한다. 다른 양태에서, 항체는 IL-4 수용체에 대한 IL-4의 결합을 억제하고, IL-13 수용체에 대한 IL-13의 결합을 억제한다. 다른 양태에서, 항체는 IL-4 수용체 알파에 특이적으로 결합한다.
다른 양태에서, 항체는 2 또는 3개의 상기 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)을 함유한다.
다른 양태에서, 항체는 2개 또는 3개의 상기 중쇄 상보성 결정 영역을 함유한다.
다른 양태에서, 항체는 추가로 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 4의 잔기 1-23; 서열번호 10의 잔기 1-23; 서열번호 12의 잔기 1-23; 및 서열번호 14의 잔기 1-23으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 주쇄 분절(FR) 1; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 4의 잔기 36-50; 서열번호 6의 잔기 36-50; 및 서열번호 14의 잔기 36-50으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 FR2; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 4의 잔기 58-89; 서열번호 10의 잔기 58-89; 및 서열번호 12의 잔기 58-89로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 FR3; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 4의 잔기 100-109; 서열번호 8의 잔기 100-109; 및 서열번호 12의 잔기 100-109로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 경쇄 FR4; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 16의 잔기 1-30; 및 서열번호 42의 잔기 1-30으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 중쇄 FR1; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 16의 잔기 36-49 서열과 상이한 중쇄 FR2; 3개 이하, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 잔기들의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 16의 잔기 66-97; 서열번호 18의 잔기 66-97; 및 서열번호 42의 잔기 66-97로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 상이한 중쇄 FR3; 3개 이하의 아미노산 잔기의 삽입, 결실 또는 치환에 의해 서열번호 16의 잔기 105-115 서열과 상이한 중쇄 FR4 로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열을 포함하는 골격 분절(FR)을 포함한다.
다른 양태에서, 항체는 서열번호 6, 8, 10, 12 및 14로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 80, 85, 90, 95 또는 100% 동일하지만, 서열번호 4의 서열을 포함하지 않는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 양태에서, 항체는 서열번호 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 및 62로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 서열과 적어도 80, 85, 90, 95 또는 100% 동일하지만 서열번호 16의 서열을 포함하지 않는 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 IL-4 수용체 알파에 결합하는, 상기 항체의 단편을 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H1; L2H1과 교차-반응성인 항체; L2H1과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H1과 경쟁하는 항체; L2H1의 생물학적 활성을 보유하는 항체 및 L2H1의 항원 결합 단편(예컨대, 재조합 수단에 의해 유도된 단편)으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H1의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H1의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제는 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H1과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H1과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
소정 항체의 상보성 결정 영역(CDR)은 문헌[Kabat et al., in Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991]에 기술된 시스템을 사용하여 동정할 수 있다. 본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H1의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H1의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, L2H1의 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H1의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 16의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
L2H1 경쇄의 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. 중쇄 L2H1의 가변 도메인에 대한 DNA 서열은 서열번호 15로 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시했다. 본 발명의 항체에는 경쇄에 서열번호 6을 함유하는 항체, 및 추가적으로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 16을 함유하는 항체가 포함되지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L3H1; L3H1과 교차-반응성인 항체; L3H1과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L3H1과 경쟁하는 항체; L3H1의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L3H1의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L3H1의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L3H1과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L3H1과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L3H1 유래의 IgG4 항체도 본 발명에서 제공된다. 다른 양태는 L3H1 유래의 IgM 항체에 관한 것이다. 항체의 하위부류 또는 동종형을 전환(변경)시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예컨대 목적하는 서브클래스를 부여하는 항체 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 DNA가 모 항체의 해당 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 DNA 대신에 치환되도록 하는 재조합 DNA 기술을 포함한다.
L3H1의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 7에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시했다. L3H1 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 15에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 8의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 16의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L3H1의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L3H1의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 8의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L3H1의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 16의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L4H1; L4H1과 교차-반응성인 항체; L4H1과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L4H1과 경쟁하는 항체; L4H1의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L4H1의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L4H1의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L4H1과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L4H1과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L4H1의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 9에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시했다. L4H1의 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 15에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 10의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 16의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L4H1의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L4H1의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 10의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L4H1의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 16의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 99-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L5H1; L5H1과 교차-반응성인 항체; L5H1과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L5H1과 경쟁하는 항체; L5H1의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L5H1의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L5H1의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L5H1과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L5H1과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L5H1의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 11에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시했다. L5H1 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 15에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 12의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 16의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L5H1의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L5H1의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 12의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L5H1의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 16의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H2; L1H2와 교차-반응성인 항체; L1H2와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H2와 경쟁하는 항체; L1H2의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H2의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H2의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H2와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H2와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H2의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H2 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 17에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 18의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H2의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H2의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H2의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 18의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H3; L1H3과 교차-반응성인 항체; L1H3과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H3과 경쟁하는 항체; L1H3의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H3의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H3의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H3과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H3과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H3의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H3 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 19에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 20의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H3의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H3의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H3의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 20의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H4; L1H4와 교차-반응성인 항체; L1H4와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H4와 경쟁하는 항체; L1H4의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H4의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H4의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H4와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H4와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H4의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H4 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 21에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 22에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 22의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H4의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H4의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H4의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 22의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H5; L1H5와 교차-반응성인 항체; L1H5와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H5과 경쟁하는 항체; L1H5의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H5의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H5의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H5와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H5와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H5의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H5 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 23에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 24에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 24의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H5의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H5의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H5의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 24의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H6; L1H6과 교차-반응성인 항체; L1H6과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H6과 경쟁하는 항체; L1H6의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H6의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H6의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H6과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H6과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H6의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H6 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 25에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 26에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 26의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H6의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H6의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H6의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 26의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H7; L1H7과 교차-반응성인 항체; L1H7과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H7과 경쟁하는 항체; L1H7의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H7의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H7의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H7과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H7과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H7의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H7 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 27에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 28에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 28의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H7의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H7의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H7의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 28의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H8; L1H8과 교차-반응성인 항체; L1H8과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H8과 경쟁하는 항체; L1H8의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H8의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H8의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H8과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H8과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H8의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H8 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 29에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 30에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 30의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H8의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H8의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H8의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 30의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H9; L1H9와 교차-반응성인 항체; L1H9와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H9와 경쟁하는 항체; L1H9의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H9의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H9의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H9와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H9와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H9의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H9 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 31에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 32에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 32의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H9의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H9의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H9의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 32의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H10; L1H10과 교차-반응성인 항체; L1H10과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H10과 경쟁하는 항체; L1H10의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H10의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H10의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H10과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H10과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H10의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H10 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 33에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 34에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 34의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H10의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H10의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H10의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 34의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L1H11; L1H11과 교차-반응성인 항체; L1H11과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L1H11과 경쟁하는 항체; L1H11의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L1H11의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L1H11의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L1H11과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L1H11과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L1H11의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 3에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시했다. L1H11 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 35에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 36에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 4의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 36의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L1H11의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L1H11의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 4의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L1H11의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 36의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H4; L2H4와 교차-반응성인 항체; L2H4와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H4와 경쟁하는 항체; L2H4의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H4의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H4의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H4와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H4와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H4의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H4 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 21에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 22에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 22의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H4의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H4의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H4의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 22의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H12; L2H12와 교차-반응성인 항체; L2H12와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H12와 경쟁하는 항체; L2H12의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H12의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H12의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H12와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H12와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H12의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H12 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 37에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 38에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 38의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H12의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H12의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H12의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 38의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H13; L2H13과 교차-반응성인 항체; L2H13과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H13과 경쟁하는 항체; L2H13의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H13의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H13의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H13과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H13과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H13의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H13 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 39에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 40에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 40의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H13의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H13의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H13의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 40의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H14; L2H14와 교차-반응성인 항체; L2H14와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H14와 경쟁하는 항체; L2H14의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H14의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H14의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H14와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H14와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H14의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H14 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 41에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 42의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H14의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H14의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H14의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 42의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L6H1; L6H1과 교차-반응성인 항체; L6H1과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L6H1과 경쟁하는 항체; L6H1의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L6H1의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L6H1의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L6H1과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L6H1과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L6H1의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 13에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시했다. L6H1 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 15에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 14의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 16의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L6H1의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L6H1의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 14의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L6H1의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 16의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H2; L2H2와 교차-반응성인 항체; L2H2와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H2와 경쟁하는 항체; L2H2의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H2의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H2의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H2와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H2와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H2의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H2 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 17에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 18의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H2의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H2의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H2의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 18의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H3; L2H3과 교차-반응성인 항체; L2H3과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H3과 경쟁하는 항체; L2H3의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H3의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H3의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H3과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H3과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H3의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H3 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 19에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 20의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H3의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H3의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H3의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 20의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H6; L2H6과 교차-반응성인 항체; L2H6과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H6과 경쟁하는 항체; L2H6의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H6의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H6의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H6과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H6과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H6의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H6 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 25에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 26에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 26의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H6의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H6의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H6의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 26의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H7; L2H7과 교차-반응성인 항체; L2H7과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H7과 경쟁하는 항체; L2H7의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H7의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H7의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H7과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H7과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H7의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H7 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 27에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 28에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 28의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H7의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H7의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H7의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 28의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H8; L2H8과 교차-반응성인 항체; L2H8과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H8과 경쟁하는 항체; L2H8의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H8의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H8의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H8과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H8과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H8의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H8 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 29에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 30에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 30의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H8의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H8의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H8의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 30의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H9; L2H9와 교차-반응성인 항체; L2H9와 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H9와 경쟁하는 항체; L2H9의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H9의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H9의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H9와 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H9와 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H9의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H9 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 31에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 32에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 32의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H9의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H9의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H9의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 32의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H10; L2H10과 교차-반응성인 항체; L2H10과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H10과 경쟁하는 항체; L2H10의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H10의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H10의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H10과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H10과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H10의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H10 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 33에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 34에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 34의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H10의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H10의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H10의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 34의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 특정 항체는 L2H11; L2H11과 교차-반응성인 항체; L2H11과 동일한 에피토프에 결합하는 항체; 사람 IL-4R을 발현하는 세포에의 결합에 대해 L2H11과 경쟁하는 항체; L2H11의 생물학적 활성을 보유하는 항체; 및 전술한 임의의 항체들의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체이다. 하나의 양태에서, 항체는 사람 IL-4R에 대한 L2H11의 결합 친화성과 실질적으로 동등한 사람 IL-4R에 대한 결합 친화성을 보유한다. 이러한 임의의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 역시 본 발명에 의해 제공된다.
L2H11의 생물학적 활성의 한 예는 IL-4 길항제 및 또한 IL-13 길항제로서 작용하는 능력이다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체는 L2H11과 실질적으로 동등한 IL-4 차단 활성을 지니고; L2H11과 실질적으로 동등한 IL-13 차단 활성을 지닌다. 이러한 활성은 적당한 임의의 통상적인 분석법(예컨대, 실시예 2에 설명된 CD23 발현 분석법으로 측정)으로 측정할 수 있다.
L2H11의 경쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 5에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시했다. L2H11 중쇄 가변 도메인의 DNA 서열은 서열번호 35에 제시했고, 암호화된 아미노산 서열은 서열번호 36에 제시했다. 본 발명의 항체는 경쇄에 서열번호 6의 잔기 1 내지 109를 함유하는 항체; 및 추가로 또는 대안적으로 중쇄에 서열번호 36의 잔기 1 내지 115를 함유하는 항체를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 항체의 특정 양태는 이의 경쇄 가변 도메인에, L2H11의 경쇄에서 발견되는 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역을 함유한다. L2H11의 CDR은 실시예 5에 논의되어 있다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는, 경쇄 가변 도메인 내에 서열번호 6의 아미노산 잔기 24-35; 잔기 51-57; 및 잔기 90-99의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 특정 항체는 중쇄 가변 도메인 내에 L2H11의 중쇄에서 발견되는 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 제공되는 항체 중에는 중쇄 가변 도메인에, 서열번호 36의 잔기 31-35; 잔기 50-65; 및 잔기 98-104의 서열을 1개 내지 3개 모두 함유하는 항체가 포함된다.
핵산
하나의 관점에서, 본 발명은 분리된 핵산 분자를 제공한다. 이 핵산에는 예컨대 본 발명의 항체, 또는 이의 단편, 유도체, 뮤테인 또는 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 하이브리드화 프로브로서 사용하기에 충분한 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 동정, 분석, 돌연변이 또는 증폭시키기 위한 PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머, 폴리뉴클레오타이드의 발현을 억제하기 위한 안티센스 핵산, 및 전술한 서열들의 상보적 서열이 포함된다. 이러한 핵산의 길이는 어떠한 길이라도 될 수 있다. 이러한 핵산은 길이가 예컨대 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1,000, 1,500, 3,000, 5,000개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드일 수 있고/있거나 하나 이상의 추가 서열, 예컨대 조절 서열을 포함할 수 있으며/있거나, 벡터와 같은 더 큰 핵산의 일부분일 수 있다. 핵산은 일본쇄 또는 이본쇄일 수 있고, RNA 및/또는 DNA 뉴클레오타이드, 및 이의 인공 변이체(예, 펩타이드 핵산)를 포함할 수 있다.
항체 폴리펩타이드(예컨대, 중쇄 또는 경쇄, 가변 도메인만 또는 전체)를 암호화하는 DNA는 IL-4R로 면역화된 마우스의 B-세포에서 분리할 수 있다. DNA의 분리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)과 같은 통상의 과정에 따라 분리할 수 있다. 공지된 기술의 다른 예로는 파지 디스플레이(phage display)가 있고, 이에 따라 항체의 유도체가 제조될 수 있다. 하나의 접근법으로서, 당해 항체의 성분인 폴리펩타이드는 임의의 적당한 재조합 발현 시스템에서 발현되고, 발현된 폴리펩타이드는 어셈블리하여 항체 분자를 형성하게 한다.
도 2는 도 3에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열을 제공한다. 유전자 암호의 축퇴성으로 인하여, 도 3에 제시된 각 폴리펩타이드 서열은 수많은 다른 핵산 서열에 의해서도 암호화된다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 각각의 항체를 암호화하는 각각의 축퇴성 뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
또한, 본 발명은 특정 하이브리드화 조건 하에서 다른 핵산(예컨대, 도 2의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산)에 하이브리드화하는 핵산을 제공한다. 핵산 하이브리드화 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6]에 기술되어 있다. 본 명세서에 정의된 바와 같이, 중간정도의 엄격한 하이브리드화 조건은 5X 염화나트륨/구연산나트륨(SSC), 0.5% SDS, 1.0mM EDTA(pH 8.0)를 함유하는 예비세척액, 약 50% 포름아미드, 6X SSC의 하이브리드화 완충액 및 55℃의 하이브리드화 온도(또는 다른 유사 하이브리드화 용액으로서, 약 50% 포름아미드를 함유하는 용액과 하이브리드화 온도 42℃) 및 0.5X SSC, 0.1% SDS에서 60℃의 세척 조건을 이용한다. 엄격한 하이브리드화 조건은 45℃에서 6X SSC를 이용하고, 그 다음 68℃에서 0.1X SSC, 0.2% SDS로의 1회 이상의 세척을 이용한다. 또한, 당업자는 이러한 하이브리드화 및/또는 세척 조건을 조작하여, 서로 적어도 65, 60, 75, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 전형적으로 서로 하이브리드된 상태를 유지하도록 하이브리드화의 엄격성을 증가 또는 감소시킬 수 있다. 하이브리드화 조건의 선택에 영향을 미치는 기본 변수 및 적당한 조건을 고안하기 위한 지침은 문헌[Sambrook, Fritsch, and Maniatis (1989, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., chapters 9 and 11; 및 Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4)]에 설명되어 있으며, 당업자라면 DNA의 길이 및/또는 염기 조성 등에 기초하여 쉽게 결정할 수 있다.
핵산에 돌연변이를 통한 변화를 도입시켜, 암호화되는 폴리펩타이드(예, 항체)의 아미노산 서열에 변화를 유도할 수 있다. 돌연변이는 표준 방법, 예컨대 부위-지시된 돌연변이유발 및 PCR 매개된 돌연변이유발을 통해 도입할 수 있다. 또는, 돌연변이는 포화 돌연변이유발법 등을 이용하여 암호 서열 전체 또는 일부에 무작위로 도입할 수 있고, 결과적으로 수득되는 돌연변이체를 생물학적 활성에 대해 선별하여 활성(예컨대, IL-4 수용체에 대한 결합)을 보유하는 돌연변이체를 동정할 수 있다. 돌연변이유발 후, 암호화된 단백질은 재조합 방식으로 발현되고, 수득되는 단백질의 활성을 측정할 수 있다. 돌연변이는 암호화되는 펩타이드의 생물학적 활성에 큰 변화를 일으킴이 없이 핵산에 도입될 수 있다. 예를 들어, 비필수 아미노산 잔기에 아미노산 치환을 유도하는 뉴클레오타이드 치환을 제공할 수 있다. 하나의 양태에서, 도 2에 제시된 뉴클레오타이드 서열, 또는 이의 바람직한 단편, 변이체 또는 유도체는 도 3에 제시된 아미노산 잔기에서 2개 이상의 서열이 상이한 잔기가 되도록 하나 이상의 결실 또는 치환을 포함하는 아미노산 서열을 암호하도록 변이된다. 다른 양태에서, 돌연변이유발은 도 3에 제시된 하나 이상의 아미노산 잔기에 인접하게 아미노산을 삽입하여, 2개 이상의 서열이 상이한 잔기를 제공한다. 또는, 돌연변이는 암호화된 폴리펩타이드의 생물학적 활성(예, IL-4 수용체의 결합, IL-4 및/또는 IL-13의 억제 등)을 선택적으로 변화시키는 핵산에 도입될 수 있다. 예를 들어, 이러한 돌연변이는 생물학적 활성을 정량적 또는 정성적으로 변화시킬 수 있다. 정량적 변화의 예에는 활성의 증가, 감소 또는 제거를 포함한다. 정성적 변화의 예에는 항체의 항원 특이성의 변화를 포함한다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명의 핵산 서열을 검출하기 위한 프라이머 또는 하이브리드화 프로브로서 사용하기에 적합한 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 핵산 분자는 본 발명의 전장 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열의 일부만을 포함할 수 있으며, 그 예로는 프로브 또는 프라이머로서 사용될 수 있는 단편 또는 본 발명의 폴리펩타이드의 활성부(예컨대, IL-4 수용체 결합 부분)를 암호화하는 단편이 있다.
본 발명의 핵산 서열을 기초로 하는 프로브는 상기 핵산 또는 유사 핵산, 예컨대 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 전사체를 검출하는데 사용할 수 있다. 이러한 프로브는 표지 그룹, 예컨대 방사성동위원소, 형광 화합물, 효소 또는 효소 보조인자 등을 포함할 수 있다. 이러한 프로브는 상기 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 동정에 사용할 수 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩타이드 또는 이의 일부분을 암호화하는 핵산을 함유하는 벡터를 제공한다. 벡터의 예에는 플라스미드, 바이러스 벡터, 비에피솜성 포유동물 벡터 및 발현 벡터, 예컨대 재조합 발현 벡터가 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 본 발명의 핵산을 숙주 세포에서 이 핵산을 발현시키기에 적합한 형태로 함유할 수 있다. 이러한 재조합 발현 벡터는 발현에 사용할 숙주 세포에 따라 선택되고, 발현될 핵산 서열에 작동적으로 결합되는 하나 이상의 조절 서열을 포함한다. 조절 서열에는 다양한 종류의 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열의 구성형적 발현을 유도하는 서열(예컨대, SV40 초기 유전자 인핸서, 라우스 육종 바이러스 프로모터 및 사이토메갈로바이러스 프로모터), 특정 숙주 세포에서만 뉴클레오타이드 서열의 발현을 유도하는 서열(예컨대, 조직 특이적 조절 서열; 이는 본원에 전문이 참고인용된 문헌[참조: Voss et al., 1986, Trends Biochem. Sci. 11: 287, Maniatis et al., 1987, Science 236: 1237]에 설명되어 있다), 및 특정 치료 또는 질환에 반응하여 뉴클레오타이드 서열의 유도성 발현을 유도하는 서열(예컨대, 포유동물 세포의 메탈로티오닌 프로모터 및 원핵생물과 진핵생물 시스템 모두에 존재하는 tet-반응성 및/또는 스트렙토마이신 반응성 프로모터)(상기 문헌 참조)이 있다. 당업자는, 발현 벡터의 설계가 형질전환될 숙주 세포의 선택, 목적하는 단백질의 발현 농도 등과 같은 요인에 의존할 수 있음을 잘 알고 있을 것이다. 본 발명의 발현 벡터는 숙주 세포에 도입 시, 본 명세서에 기술된 핵산에 의해 암호화되는 융합 단백질 또는 펩타이드를 비롯한 단백질 또는 펩타이드를 생산할 수 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 본 발명의 재조합 발현 벡터가 도입된 숙주 세포를 제공한다. 숙주 세포는 임의의 원핵생물 세포(예컨대, 이. 콜라이) 또는 진핵생물 세포(예컨대, 효모, 곤충 또는 포유동물 세포(예, CHO 세포))일 수 있다. 벡터 DNA는 통상의 형질전환 또는 형질감염 방법을 통해 원핵생물 또는 진핵생물 세포로 도입될 수 있다. 포유동물 세포의 안정된 형질감염 시, 사용된 형질감염법 및 발현 벡터에 따라서 세포의 적은 비율만이 이종 DNA를 자신의 게놈에 통합시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 통합체의 동정 및 선별을 위하여, 일반적으로 당해 유전자와 함께 선택성 마커(예컨대, 항생제 내성)를 암호화하는 유전자를 숙주 세포에 도입시킨다. 바람직한 선택성 마커에는 G418, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여하는 것이 있다. 도입된 핵산으로 안정되게 형질감염된 세포는 어떤 다른 방법보다 약물 선택을 통해 동정할 수 있다(예컨대, 선택성 마커 유전자가 도입된 세포는 생존하는 반면, 그렇지 않은 세포는 사멸한다).
항체의 유도체, 단편 및 뮤테인
IL-4R에 대해 지시된 항체의 유도체는 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법으로 제조하고, 목적한 성질에 대해 선별할 수 있다. 이러한 방법들 중 특정 방법은 당해 항체의 폴리펩타이드 쇄(또는 이의 일부)를 암호화하는 DNA를 분리하는 단계, 및 재조합 DNA법으로 상기 DNA를 조작하는 단계를 수반한다. 이 DNA는 관심대상의 다른 DNA와 융합할 수 있거나, 예컨대 하나 이상의 아미노산 잔기를 첨가, 결실 또는 치환되도록 (예컨대 돌연변이유발이나 다른 통상의 방법을 통해) 변경될 수 있다.
하나의 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체의 항원-결합 단편을 제공한다. 이러한 단편은 전적으로 항체-유래의 서열로 이루어질 수 있거나 추가의 서열을 포함할 수 있다. 항원-결합 단편의 예에는 Fab 및 F(ab')2가 포함된다. 다른 예는 문헌[참조: Lunde et al., 2002, Biochem. Soc. Trans. 30:500-06]에 제공되어 있다.
단일쇄 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인(Fv 영역) 단편을 아미노산 가교(짧은 펩타이드 링커)를 통해 결합시켜 제조하여 단일 폴리펩타이드 쇄로서 수득할 t 있다. 이러한 일본쇄 Fvs(scFvs)는 2개의 가변 도메인 폴리펩타이드(VL 및 VH)를 암호화하는 DNA 사이에 펩타이드 링커를 암호화하는 DNA를 융합시켜 제조하고 있다. 수득되는 폴리펩타이드는 스스로 폴딩하여 항원 결합 단량체를 형성할 수도 있고, 또는 두 가변 도메인 사이의 유연한 링커의 길이에 따라 다량체(예컨대, 이량체, 삼량체 또는 사량체)를 형성할 수 있다(Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10: 423; Kortt et aL, 2001, Biomol. Eng. 18: 95-108). 다른 VL 및 VH 함유 폴리펩타이드를 결합시켜 다른 에피토프에 결합하는 다량체성 scFv를 제조할 수 있다(Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18: 31- 40). 단일쇄 항체를 제조하기 위해 개발된 방법들은 문헌[참조: 미국 특허 제4,946,778호; Bird, 1988, Science 242: 423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879; Ward et al., 1989, Nature 334: 544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol Biol. 178: 379-87]에 기술된 것을 포함한다. (가변 도메인 조합물 L2H1, L3H1, L4H1, L5H1, L1 H2, L1H3, L1H4, L1H5, L1H6, L1H7, L1H8, L1H9, L1H10, L1H11, L2H4, L2H12, L2H13, L2H14, L6H1, L2H2, L2H3, L2H6, L2H7, L2H8, L2H9, L2H10 및 L2H11을 포함하는 scFv를 포함하나 이에 제한되지 않는) 본 명세서에 제공된 항체로부터 유래된 단일쇄 항체도 본 발명에 포함된다.
관심대상의 항체로부터 다른 하위부류 또는 동종형의 항체를 유도하는 방법, 즉 하위부류 전환법은 공지되어 있다. 즉, 예컨대 IgG 항체가 IgM 항체로부터 유도될 수도 있고, 그 반대일 수도 있다. 이러한 방법은 소정 항체(모 항체)의 항원 결합성을 보유하지만, 모 항체와 상이한 항체 동종형 또는 서브클래스와 관련된 생물학적 성질을 나타내는 신규 항체의 제조를 가능하게 한다. 재조합 DNA법도 이용될 수 있다. 이 방법에는 특정 항체 폴리펩타이드를 암호화하는 클로닝된 DNA, 예컨대 목적한 아이오타입의 항체의 불변 도메인을 암호화하는 DNA가 이용될 수 있다[참조: Lantto et al., 2002, Methods Mol. Bioi. 178: 303-16].
따라서, 본 발명의 항체에는 예컨대 목적한 동종형(예컨대, IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE 및 IgD)을 보유한 가변 도메인 조합물 L2H1, L3H1, L4H1, L5H1, L1 H2, L1 H3, L1 H4, L1 H5, L1H6, L1H7, L1H8, L1H9, L1H10, L1H11, L2H4, L2H12, L2H13, L2H14, L6H1, L2H2, L2H3, L2H6, L2H7, L2H8, L2H9, L2H10 및 L2H11을 함유하는 항체뿐만 아니라 이의 Fab 또는 F(ab')2 단편도 포함된다. 더욱이, IgG4가 바람직한 경우, 본원에 참고인용된 문헌[Bloom et al., 1997, Protein Science 6: 407]에 기술된 바와 같이, IgG4 항체에서 이질성(heterogeneity)을 유도할 수 있는 H 쇄내 이황화 결합의 형성 경향을 감소시키기 위하여 힌지 영역에 점 돌연변이(CPSCP → CPPCP)를 도입시키는 것이 바람직할 수도 있다.
더욱이, 다른 특성(즉, 결합하는 항체에 대한 친화성이 변화된)의 항체를 유도하는 기술도 공지되어 있다. 이러한 기술 중 하나는 쇄 셔플링(chain shuffling)이라 불리는 방법으로서, 사상 박테리오파지의 표면에 면역글로불린 가변 도메인 유전자 목록을 디스플레이하는 것을 수반하며, 종종 파지 디스플레이라도 불린다. 쇄 셔플링은 문헌[Marks et al, 1992, BioTechnology, 10: 779]에 기술된 바와 같이 합텐 2-페닐옥사졸-5-온에 대한 친화성이 큰 항체의 제조에 사용되었다.
항체 결합 부위의 중심에 상보성 결정 영역(CDR)의 분자 진화는 친화성이 증가된 항체, 예컨대 문헌[Schier et al., 1996, J. Mol. Biol. 263: 551]에 기술된 바와 같이 c-erbB-2에 대한 친화성이 증가된 항체를 분리하는 데에도 사용되었다. 따라서, 이러한 방법은 IL-4R에 대한 항체의 제조에도 유용할 것이다.
특정 양태에서, 본 발명의 항체는 IL-4R에 대한 결합 친화성(Ka)이 적어도 1 x 108인 것이다. 다른 양태에서, 이 항체는 적어도 1 x 109, 적어도 1 x 1010 또는 적어도 1 x 1011의 Ka를 나타낸다.
또한, 본 발명은 2개의 다른 항원 결합 부위 또는 영역을 통해서, 예컨대 IL-4R의 2개의 상이한 에피토프, 또는 IL-4R의 에피토프와 IL-13R의 에피토프를 보유하는 다중특이적 항체, 예를 들어, 이중특이적 항체를 포함한다. 더욱이, 본 명세서에 개시된 이중특이적 항체는 본 명세서에 기술된 하나의 항체 유래의 항원 결합 부위와 본 명세서에 기술된 다른 항체 유래의 제2 항원 결합 영역을 함유할 수 있다. 또는, 이중특이적 항체는 본 명세서에 기술된 하나의 항체 유래의 항원 결합 부위와 당업계 공지된(또는 공지의 방법으로 제조할 수 있는) 다른 IL-4R 항체 유래의 제2 항원 결합 부위를 함유할 수 있다.
이중특이적 항체를 제조하는 수많은 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 2001년 4월 20일에 출원된 미국 특허 출원 09/839,632(본원에 참고인용됨)에도 논의되어 있다. 이러한 방법에는 밀스타인 등(Milstein et al., 1983, Nature 305:537) 및 다른 문헌[미국 특허 4,474,893 및 미국 특허 6,106,833)에 기술된 바와 같은 하이브리드-하이브리도마의 사용 및 항체 단편의 화학적 커플링(Brennan et al., 1985, Science 229: 81; Glennie et al., 1987, J. Immunol. 139: 2367; 미국 특허 6,010,902)이 있다. 또한, 이중특이적 항체는 류신 지퍼 잔기(즉, 주로 이종이량체를 형성하는 Fos 및 Jun 단백질 유래; Kostelny et al., 1992, J.Immunol. 148; 1547)를 이용하는 재조합 수단을 통해 또는 미국 특허 5,582,996에 기술된 바와 같은 다른 락 앤 키(lock and key) 상호작용성 도메인 구조를 이용하여 제조할 수 있다. 또 다른 유용한 기술로는, 문헌[Kortt et al., 1997, 상기문헌설명 참조; 미국 특허 5,959,083 및 미국 특허 5,807,706]에 기술된 방법들이 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 항체의 유도체를 제공한다. 유도체화된 항체는 특정 용도에서의 반감기 증가와 같은, 바람직한 특성을 항체에 부여하는 임의의 분자 또는 물질을 포함할 수 있다. 유도체화된 항체는 예컨대 검출가능한(또는 표지성) 잔기(예컨대, 방사성, 발색성, 항원성 또는 효소 분자, 검출가능한 비드(예, 자기 비드 또는 금 비드) 또는 다른 분자에 결합하는 분자(비오틴)), 치료 또는 진단 잔기(예컨대, 방사성, 세포독성 또는 약제학적 활성 잔기) 또는 특정 용도(예컨대, 사람과 같은 검체로의 투여 용도, 또는 다른 생체내 또는 시험관내 용도)를 위한 항체의 적합성을 증가시키는 분자를 포함할 수 있다. 항체의 유도체화에 사용될 수 있는 분자의 예는 알부민(예컨대, 사람 혈청 알부민) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 항체의 알부민 결합 유도체 및 페길화(PEGylation) 유도체는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 하나의 양태에서, 항체는 트란스티레틴(TTR) 또는 TTR 변이체에 접합되거나 다르게 결합될 수 있다. TTR 또는 TTR 변이체는 덱스트란, 폴리(n-비닐 피롤리돈), 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올 및 폴리비닐 알콜로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학 약품 등으로 화학적으로 변형될 수 있다(미국 특허 출원번호 20030195154).
치료 방법 및 항체 투여
본 명세서에 제시된 방법은 항-IL-4R 항체를 검체에게 투여하여, 특정 질환에 관여하는 IL-4-유도된 생물학적 반응을 감소시키는 것을 포함한다. 특정 양태에서, 본 발명의 방법은 내인성 IL-4R을 항-IL-4R 항체와 생체외 과정 등에서 접촉시키는 것을 수반한다.
치료방법은 질환의 하나 이상의 증후군의 경감 또는 예방 또는 중증도 감소 등을 포함한다. 항체는 실용적인 치료제를 구성하기 위하여 반드시 완전한 "치유"를 초래하거나 병의 모든 증상 또는 소견을 근절시키는 것일 필요는 없다. 당업계에서 인지되는 바와 같이, 치료제로서 사용되는 약물은 소정의 병의 상태의 중증도를 감소시킬 수 있는 것으로서, 유용한 치료제로서 간주되기 위해 질병의 모든 징후를 소멸시키는 것일 필요는 없다. 본 발명의 하나의 양태는 특정 질환의 중증도를 반영하는 지표의 기준선을 초과하여 지속적인 개선을 유도하기에 충분한 양과 시간 동안 IL-4R 길항제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 세포에 대한 IL-4 및 IL-13 모두의 결합을 억제하는 항체를 제공한다. 사람에 있어서 IL-4 유도 및 IL-13 유도 활성을 억제하는 방법은 상기 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 따라서, IL-4 또는 IL-13에 의해 유도된 질환 또는 두 사이토킨 모두에 의해 유도된 질환이 치료될 수 있다.
당업계에서 이해되는 바와 같이, 항체는 징후에 적당한 방식으로 검체에게 투여한다. 항체는 비경구, 국소 또는 흡입을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 적당한 방식으로 투여할 수 있다. 주사인 경우, 항체는 예를 들면, 동맥내, 정맥내, 근육내, 병변내, 복강내 또는 피하 경로를 통해 일시 주사 또는 연속 주입에 의해 투여할 수 있다. 이식체로부터 지속 방출 및 경피 전달과 같이 질병 부위 또는 손상 부위 등에서의 국소 투여도 의도된다. 흡입에 의해 전달에는 예컨대 비강 또는 구강 흡입, 분무기(nebulizer) 사용, 에어로졸 형태의 길항제의 흡입 등이 있다. 다른 대안예에는 점안제; 경구 제제, 예컨대 환제, 시럽제, 로젠지제 또는 츄잉검; 및 국소 제제, 예컨대 로션, 젤, 스프레이 및 연고가 있다.
생체외 과정에서의 항-IL-4R 항체의 사용도 제공한다. 예를 들어, 환자의 혈액이나 다른 체액을 IL-4R에 결합하는 항체와 생체외에서 접촉시킬 수 있다. 항체는 적당한 불용성 매트릭스 또는 고체 지지체 물질에 결합될 수 있다.
항체는 적어도 하나의 항-IL-4R 항체 및 생리적 허용성 담체, 부형제 또는 희석제와 같은 하나 이상의 추가 성분을 함유하는 조성물 형태로 투여하는 것이 유리하다. 본 발명은 본 명세서에 제시된 방법에 유용한 항-IL-4R 항체의 유효량을 함유하는 상기 조성물을 제공한다.
이러한 조성물은 항-IL-4R 항체를 본 명세서에 기술된 임의의 형태로 함유한다. 항체는 전항체이거나 이의 항원 결합 단편 또는 조작된 유도체일 수 있다.
조성물은 예컨대 완충제, 아스코르브산과 같은 산화방지제, 저분자량 폴리펩타이드(예컨대, 아미노산 10개 이하인 펩타이드), 단백질, 아미노산, 글루코스, 슈크로스 또는 덱스트린과 같은 탄수화물, EDTA와 같은 킬레이트제, 글루타치온 및 다른 안정화제 및 부형제와 함께 항체를 함유할 수 있다. 적당한 희석제의 예는 중성의 완충된 식염수 또는 동종의 혈청 알부민과 혼합된 식염수이다. 적당한 산업 기준에 따라, 벤질 알콜과 같은 보존제도 첨가될 수 있다. 조성물은 희석제로서 적당한 부형제 용액(예컨대, 슈크로스)을 사용하여 동결건조물로서 제조할 수 있다. 적당한 성분은 사용된 투약량 및 농도에서 수용체에게 비독성인 것이다. 약제에 사용될 수 있는 성분의 또 다른 예는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16thEd., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1980]에 설명되어 있다.
의사에게 유용한 키트에는 항-IL-4R 항체 및 본 명세서에서 논의된 임의의 질환을 치료하는데 사용된다는 표지 또는 기타 지침서를 포함한다. 이러한 키트는 1종 이상의 항-IL-4R 항체의 멸균 제제를 포함하며, 이는 전술한 바와 같은 조성물 형태일 수도 있고, 1개 이상의 바이알에 담겨서 제공될 수도 있다.
투약량 및 투여 횟수는 투여 경로, 사용된 특정 항체, 치료하고자 하는 질병의 성질 및 중증도, 질환이 급성인지 만성인지의 여부 및 검체의 체구 및 일반적 상태와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 적당한 투약량은 당업계에 공지된 과정에 따라 결정될 수 있는데, 그 방법의 예는 용량 상승식 연구를 수반할 수 있는 임상 시험이다.
항체는 예컨대 1회 투여로 또는 1회 이상의 투여로, 예컨대 일정 기간동안 일정 간격을 두고 투여할 수 있다. 특정 양태에서, 항체는 적어도 1개월 또는 그 이상의 기간 동안, 예컨대 1개월, 2개월 또는 3개월 동안 또는 심지어 무한정으로 투여한다. 만성 질환의 치료 시에는, 일반적으로 장기 치료가 가장 효과적이다. 하지만, 급성 질환의 치료 시에는 더 짧은 기간, 예컨대 1주 내지 6주 동안의 투여로도 충분할 수 있다. 일반적으로, 항체는 환자가 소정의 지표(들)의 기준선을 초과하여 의약 관련의 개선도를 나타낼 때까지 투여한다.
본 발명의 특정 양태는 항체를 1일당 검체 체중 kg 당 항체 약 1ng("1ng/kg/일") 내지 약 10mg/kg/일 범위, 더욱 바람직하게는 약 500ng/kg/일 내지 약 5mg/kg/일 범위, 가장 바람직하게는 약 5㎍/kg/일 내지 약 2mg/kg/일 범위의 투약량으로 검체에게 투여하는 것을 수반한다. 추가 양태에서, 항체는 IL-4 및/또는 IL-13 매개 질병, 질환 또는 장애, 예컨대 본 명세서에 개시된 의학적 질환을 치료하기 위하여 1주에 1회, 1주에 2회, 또는 1주에 3회 이상 성인에게 투여한다. 주사인 경우, 성인 용량당 항체의 유효량은 1 내지 20mg/㎡ 범위, 바람직하게는 약 5 내지 12mg/㎡ 범위일 수 있다. 또는 고정 용량(flat dose)이 투여될 수 있는데, 그 양은 5 내지 100mg/용량 범위일 수 있다. 고정 용량의 1가지 범위는 약 20 내지 30mg/용량 범위이다. 본 발명의 하나의 양태에서는 25mg/용량의 고정 용량이 주사를 통해 반복 투여된다. 주사 이외의 다른 투여 경로가 사용된다면, 용량은 표준 의술 관행에 따라 적당히 조정한다. 치료 섭생의 한 예는 약 20 내지 30mg 용량의 항-IL-4R 항체를 적어도 3주에 걸쳐서 1주에 1 내지 3회 주사하는 것을 포함할 수 있지만, 바람직한 개선 정도를 유도하기 위해 더 장기간의 치료가 필요할 수도 있다. 소아(4세 내지 17세)인 경우, 섭생의 한 예로서 0.4mg/kg의 피하 주사로, 최대 용량 25mg 이하의 항체가 1주당 2회 또는 3회 투여되는 것이 적당하다.
본 발명에서 제시되는 방법 중의 특정 양태는 0.5mg 내지 10mg 범위, 바람직하게는 3 내지 5mg 범위의 항-IL-4R 항체를 1주에 1회 또는 2회 피하 주사하는 것을 수반한다. 또 다른 양태는 3mg 이상의 항체를 1주에 1회씩 폐 투여(예컨대, 분무기를 이용하여)하는 것에 관한 것이다.
본 명세서에 제시된 치료 섭생의 예는 천식, 폐 사르코이드증, 미세 변화 신장증, 자가면역 포도막염, 겸상적혈구 위기, 척-스트라우스 증후군, 쇼그렌 증후군, 자가면역 림프증식 증후군, 자간전증, 자가면역 용혈성 빈혈, 배럿 식도, 그레이브스병, 가와사키병 및 공동 결핵을 치료하기 위해 항-IL-4R 항체를 1주에 1회씩 1.5 내지 3mg의 용량으로 피하 주사하는 것을 포함한다. 항-IL-4R 항체의 매주 투여는 바람직한 결과가 수득될 때까지, 예컨대 검체의 증상이 진정될 때까지 지속한다. 치료는 필요할 때 재개할 수도 있고, 또는 지속 용량을 투여할 수도 있다.
다른 양태에서, 항체는 치료되는 질환의 중증도를 반영하는 적어도 하나의 지표에서 개선, 바람직하게는 지속된 개선을 유도하기에 충분한 양과 시간 동안 검체에게 투여한다. 검체의 질병, 병 또는 질환의 중증도를 반영하는 각종 지표인자는 치료의 양과 시간이 충분한 지의 여부를 결정하기 위해 평가하는 것이 좋다. 이러한 지표에는 예컨대 해당 질환의 중증도, 증후군 또는 징후의 임상적으로 확인된 지표가 있다. 대부분의 경우에, 개선은 검체가 2 내지 4주 걸러 실시되는 적어도 2회의 평가시 개선을 나타낸다면 지속적인 것으로 간주한다. 개선의 정도는 징후 또는 증상에 근거하여 이러한 결정을 수행할 수 있고 검체에게 부과된 질문서, 예컨대 소정 질병에 대해 개발된 삶의 질 평가서 등을 이용할 수 있는 의사에 의해 결정되는 것이 일반적이다.
일 예로서, 양성 전립선 과다형성증을 치료하는 경우에, 항-IL-4R 항체는 흉터 퇴화 또는 완전 치유에 효과적인 양 및 시간 동안 검체에 투여한다. 지속 용량을 투여하거나 필요한 경우 치료를 재개해도 좋다.
IL-4의 상승된 수준은 전술한 바와 같은 다양한 질환과 관련이 있다. 소정 질환을 앓고 있는 검체는 IL-4 수준이 상승된 개체의 동정 또는 TH2형 면역반응의 상승이 있는 개체의 동정을 위해 선별하여, 항-IL-4R 항체에 의한 치료시 대부분 효과를 나타낼 수 있는 검체를 식별한다. 따라서, 본 발명에서 제시되는 치료 방법은 경우에 따라 검체의 IL-4 수준을 측정하는 제1 단계를 포함한다. IL-4 수준이 정상보다 높은 검체에게 항-IL-4R 항체를 투여할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 하나 이상의 TH2형 사이토킨에 대한 길항제 및/또는 항체를 투여하기에 앞서, 검체를 사전에 선별하여 검체의 TH2형 면역반응의 증가 여부를 측정할 수 있다.
검체의 IL-4(및 임의로 다른 TH2형 사이토킨)의 수준은 항-IL-4R 항체의 치료 동안 및/또는 치료 후에도 모니터하여 사이토킨의 수준 감소를 검출할 수 있다. 일부 질환에서, 상승된 IL-4 수준의 발생률 및 TH1형 및 TH2형 면역반응 사이의 균형은 질병 단계 또는 질병의 특정 형태와 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 검체의 혈청 등에서 IL-4 농도를 측정하고 TH2형 면역반응을 평가하기 위한 방법으로는 공지의 방법을 이용할 수 있다. 혈액 시료 중의 사이토킨 농도는 ELISA 또는 LUMINEX™ 복합 사이토킨 분석법(Luminex Corporation, 텍사스 오스틴 소재) 또는 DELFIA?(Perkin Elmer LifeSciences, Wallac Oy., Turku, Finland) 등을 통해 측정할 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물에 대한 특정 양태는 항-IL-4R 항체 및 또 다른 하나 이상의 IL-4R 길항제의 사용, 예를 들면 본 발명의 2종 이상의 항체 또는 항체 유도체, 또는 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 하나 이상의 다른 IL-4R 길항제의 사용을 수반한다. 다른 양태에서, 항-IL-4R 항체는 단독으로 투여하거나 또는 환자가 앓고 있는 질환의 치료에 유용한 다른 제제와 함께 투여하기도 한다. 이러한 제제의 예에는 단백질성 약물 및 비단백질성 약물이 있다. 다수의 치료제가 공동 투여되는 경우에, 투약량은 당업계에 알려진 바와 같이 조정될 수 있다. "공동 투여" 및 복합 치료는 동시 투여에만 제한되는 것이 아니고, 환자에게 적어도 하나의 다른 치료제를 투여하는 것을 수반하는 치료 과정 동안 IL-4R 항체를 적어도 1회 이상 투여하는 치료 섭생도 포함한다.
IL-4R 항체와 공동 투여될 수 있는 다른 제제의 예에는 치료되는 특정 질환에 따라 선택되어지는 다른 항체, 사이토킨 또는 사이토킨 수용체가 있다. 대안적으로, 전술한 특정 질환 중 하나를 치료하는데 유용한 비단백질성 약물은 IL-4R 길항제와 함께 공동 투여될 수 있다.
IgE 매개 질환의 치료 시에는, 항-IL-4R 항체를 IgE 길항제와 함께 투여할 수 있다. 한 예에는 항-IgE 항체, 예컨대 XOLAIR?(Genetech, 캘리포니아주 사우스샌프란시스코 소재)가 있다. 사람화된 항-IgE 모노클로날 항체는 예컨대 문헌[Presta et al., 1993, J. immunol. 151: 2623-32 및 Adelroth et al., 2000, J. Allergy Clin. Immunol. 106: 253-59]에 설명되어 있다.
항-IL-4R 항체는 IL-5 수용체에 대한 IL-5의 결합을 방해하는, 항-IL-5R 또는 항-IL-5 항체(예, 사람 또는 사람화 항-IL-5 또는 항-IL-5R 모노클로날 항체)와 같은 분자, 또는 가용성 사람 IL-5 수용체 폴리펩타이드와 같은 수용체에 대한 IL-5의 결합을 방해하는 분자일 수 있는 IL-5 길항제와 함께 공동 투여될 수 있다. IL-5는 알러지 반응을 매개하는 관여하는 것과 연관이 있다. 즉, IL-4R 및 IL-5의 길항제의 투여는 알러지 천식 등을 비롯한 알러지 반응의 치료에 유용할 것으로 생각된다.
IL-4R 항체와 함께 사용될 수 있는 제제의 또 다른 예에는 항-IL-4 항체, IL-4 뮤테인, IL-4R의 IL-4 결합 유도체(예컨대, 미국 특허 5,840,869; 5,599,905, 5,856,296, 5,767,065, 5,717,072, 6,391,581, 6,548,655, 6,472,179 및 5,844,099에 기술된 것), IL-13의 IL-13 결합 유도체, IL-4R 및 IL-13R의 IL-4 및/또는 IL-13 결합 키메라 유도체, IL-13 뮤테인 및 CD23의 길항제, 예컨대, 항-CD23 항체, 예컨대 IDEC-152™(IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA), 포스포디에스터라제 4 (예, ROFLUMILAST?, Byk Gulden Pharmaceuticals, Konstanz, Germany), 인테그린(예, R411™, Roche, Nutley, NJ), TIMs, Gob5, STAT6, 및 류코트리엔이 있다.
천식 치료 시, IL-4R 항체는 다른 천식억제 약물, 예컨대 흡입성 코르티코스테로이드, 베타 작동물질, 류코트리엔 길항제, 크산틴, 플루티카손, 살메테롤, 알부테롤, 비스테로이드제, 예컨대 크로몰린 등과 함께 공동 투여될 수 있다. IL-4R 항체는 알러지 반응의 치료를 위해 다른 항알러지 약물과 함께 공동 투여될 수 있다.
본 발명의 하나의 양태는 천식과 같은 질환의 치료를 위해 본 발명의 항체 또는 항체 유도체 및 플루티카손 및/또는 살메테롤을 공동 투여하는 것에 관한 것이다. 본 발명의 항체 또는 항체 유도체, 플루티카손 및 살메테롤을 함유하는 조성물은 본 발명에 포함된다. ADVAIR DISKUS?(GlaxoSmithKline, Research Triangle Park, NC)는 플루티카손 프로피오네이트와 살메테롤 지나포에이트를 함유한다. ADVAIR DISKUS? 및 상기 항체 또는 항체 유도체는 특정 질병, 장애, 손상 또는 질환의 치료 또는 예방에 효과적인 임의의 투여 경로로, 예컨대 천식 치료에 유용한 흡입을 통해 전달될 수 있다.
복합 치료의 다른 예는 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 IL-9 길항제를 천식이 있는 환자에게 공동 투여하는 것을 포함한다. IL-9 길항제로는 IL-9 수용체(예컨대, 이의 가용성 형태), 세포 표면 수용체에 대한 IL-9의 결합을 방해하는 항체(예컨대, IL-9 또는 IL-9 수용체 폴리펩타이드에 결합하는 항체) 또는 IL-9 유도성 생물학적 활성을 억제하는 다른 화합물과 같은 임의의 적합한 것을 이용할 수 있다. IL-9 수용체에는 본원에 참고인용된 WO 93/18047 및 미국 특허 5,789,237 및 5,962,269에 기술된 것이 포함된다.
복합 치료의 다른 양태에서, 궤양성 결장염을 치료하는 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 적어도 하나의 IL-1 길항제를 공동 투여하는 것을 포함한다. IL-1 길항제의 예에는 타입 I IL-1 수용체, 타입 II IL-1 수용체, IL-1 수용체 길항제(IL-1Ra), IL-1에 대해 지시된 길항제성(차단성) 항체 및 IL-1 수용체에 대해 지시된 길항제성 항체가 포함된다. 수용체로는 다양한 형태, 예컨대 단편, 변이체 및 융합체 등이 이용될 수 있으며, 그 예로는 본원에 참고인용된 미국 특허 5,350,683에 기술된 바와 같은 타입 II IL-1 수용체의 가용성 형태 등이 있다.
본 발명의 한가지 방법은 미세 변화 신장증이 있는 환자에게 이러한 질병의 중증도 감소 등의 목적으로 본 발명의 항체 또는 항체 유도체를 단독으로 투여하거나 IL-13 길항제와 함께 공동 투여하는 것을 포함한다.
본 발명에 제시된 또 다른 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 IL-13 길항제를 공동 투여하는 것을 포함하여 각종 알러지성 염증 질환을 치료하는 방법이다. 이러한 방법에 의해서 천식, 알러지 및 낭성 섬유증과 만성 폐쇄성 폐 질환과 같은 만성 폐 질환이 치료된다.
IL-13 수용체(바람직하게는 이의 가용성 형태), IL-13 수용체 길항제, IL-13 또는 IL-13R에 대해 지시된 항체, IL-13R에 대한 IL-13의 결합을 억제하는 다른 단백질 및 IL-13-매개된 시그널 전달을 억제하는 화합물을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 IL-13 길항제가 사용된다. IL-13 수용체 및 구성성분으로서 IL-13R 폴리펩타이드를 함유하는 이종이량체는 앞에서 설명한 바와 같다. IL-4R에 대해 유발되는 항체는 전술한 바와 같이 IL-13 길항제로도 작용하는 특성에 대한 선별로 수득할 수 있다.
상피 장벽 기능의 감소를 특징으로 하는 질환의 치료 또는 예방 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 하나 이상의 IL-13 길항제를 공동 투여하는 것을 포함한다. 이러한 질환에 대해서는 앞에서 기술한 바와 같다. 하나의 양태에서, 이러한 질환은 천식이다. 구체적인 양태는 IL-4 및 IL-13이 모두 장벽 기능 감소에 역할을 하여 폐의 상피 장벽 기능 또는 장의 상피 장벽 기능 감소를 수반하는 질환이 있는 환자에게 본 발명의 하나 이상의 항체 또는 항체 유도체와 하나 이상의 IL-13 길항제를 공동 투여하는 것에 관한 것이다. IL-13이 폐 및 장의 상피 장벽 기능에 미치는 부작용은 실시예 3에 기술되는 것과 같은 분석법으로 확인할 수 있다. 또한, 문헌[Zund et al., 1996, J.Biol.Chem. 271:7460-64]에 설명되어 있다.
본 발명에 제시된 또 다른 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 인터페론-γ(IFN-γ)를 폐 상피 장벽 기능의 감소를 수반하는 질환이 있는 환자에게 공동 투여하는 것을 포함한다. 선택적으로, 이러한 방법은 추가로 하나 이상의 IL-13 길항제를 상기 환자에게 공동 투여하는 것을 포함한다(즉, 본 발명의 항체 또는 항체 유도체, IFN-γ 및 IL-13 길항제의 공동 투여). 하나의 양태에서, 이러한 환자는 천식 환자이다. 본 발명의 항체 또는 항체 유도체, IFN-γ 및/또는 IL-13 길항제는 특정 질병, 질환, 질환 또는 손상의 치료 또는 예방에 효과적인 임의의 전달 방법을 통해, 예컨대 천식 치료시에는 흡입 또는 주사를 통해, 투여할 수 있다.
천식 치료를 위해 본 발명에서 제시되는 한가지 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 인터페론-γ를 천식이 있는 사람에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 천식 치료 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체, IFN-γ 및 IL-13 길항제를 천식이 있는 사람에게 공동 투여하는 것을 포함한다. 하나의 양태에서, IFN-γ는 IL-4 및 IL-13 모두의 길항제로서 작용하는 항체와 함께 천식 환자에게 공동 투여된다. 이러한 항체의 예는 본 명세서에 기술되어 있다.
본 발명의 단일 항체 또는 항체 유도체는 전술한 바와 같이 IL-4 길항제 및 IL-13 길항제로서 작용할 수 있다. 이러한 제제의 한 예로서, IL-4Rα에 대해 유발되는 일부 항체는 IL-4 및 IL-13 수용체 복합체의 결합의 방해할 수 있는데, 그 이유는 이러한 다중서브유닛 수용체 복합체(전술한 바와 같다)에 공유되는 IL-4Rα의 존재 때문이다. 따라서, 본 발명의 단일 항체 또는 항체 유도체는 장벽 기능의 감소를 억제하는 방법에 이용될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항체 유도체는 천식 및 알러지와 같은 알러지서 염증성 질환과 같은 질환의 치료를 위해 하나 이상의 류코트리엔 수용체 길항제와 함께 공동 투여될 수 있다. 류코트리엔 수용체 길항제의 예에는 몬테루카스트(montelukas; 예, SINGULAIR?, Merck & Co., 뉴저지 화이트하우스 소재), 프란루카스트(pranlukast; 예, ONON?, Ono Pharmaceuticals, 일본 오사카 소재) 및 자피르루카스트(zafirlukast; 예, ACCOLATE?, AstraZeneca, 델라웨어 윌밍턴 소재)가 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 5-리폭시게나제 억제제로서 작용하는 약물은 천식 치료를 위해 IL-4R 길항제와 함께 공동 투여될 수 있다.
본 발명에 제시된 방법은 척-스트라우스 증후군 환자에게 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 다음과 같은 하나 이상의 성분을 투여하는 것을 포함한다: IL-4R 길항제, IL-5 길항제, IL-13 길항제 및 IgE 길항제. 이러한 방법의 한 예는 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 IL-5 길항제를 척-스트라우스 증후군 환자에게 공동 투여하는 것을 수반한다. 다른 양태에서는, 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 IgE 길항제가 상기 환자에게 공동 투여된다. 또 다른 양태에서는 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 IL-13 길항제가 상기 환자에게 공동 투여된다.
호르몬 릴랙신은 피부경화증(전신 경화증), 특발성 폐 섬유증 또는 전술한 폐 섬유증을 수반하는 질환과 같은 폐 섬유증을 특징으로 하는 다른 모든 질환의 치료를 위해 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 함께 공동 투여될 수 있다. 재조합 사람 릴랙신은 사람의 치료용으로 바람직하다.
양성 전립선 과다형성증의 치료 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 하나 이상의 추가 항염증제를 공동 투여하는 것을 포함한다. 염증 억제제의 예에는 종양 괴사 인자(TNF) 길항제 및 IL-17 길항제가 있다.
IL-17 길항제로는 임의의 적당한 성분이 이용될 수 있으며, 그 예로는 IL-17 수용체(예, 이의 가용성 형태), IL-17 수용체 길항제, IL-17 또는 IL-17 수용체에 대해 지시된 항체, IL-17 수용체에 대한 IL-17의 결합을 방해하는 다른 단백질, 및 IL-17-매개된 시그널 전달을 억제하는 화합물이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. IL-17 수용체, 예컨대 이의 가용성 형태 및 이의 올리고머는 본 원에 참고인용된 WO 96/29408에 설명되어 있다. 또 다른 본 발명에서 제시되는 대체법은 양성 전립선 과다형성증 환자의 치료를 목적으로 IL-17 길항제를 투여하는 것을 포함한다.
이와 마찬가지로, 임의의 적당한 TNF 길항제도 사용될 수 있으며, 그 예에는 TNF 수용체(바람직하게는, 이의 가용성 형태), TNF 수용체를 함유하는(또는 TNF 수용체의 TNF 결합 부분을 함유하는) 융합 단백질, TNF 수용체 길항제, TNF 또는 TNF 수용체에 대해 지시된 항체, TNF 수용체에 대한 TNF의 결합을 방해하는 다른 단백질 및 TNF 매개 시그널 전달을 억제하는 화합물이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. TNF 억제제의 다른 예에는 약물 탈리도마이드 및 펜톡시필린이 있다. p75 또는 p80 TNF-R로 알려진 TNF 수용체 단백질이 바람직하게 사용된다. 바람직한 TNF 길항제는 이량체 형태의 가용성 사람 TNF 수용체(sTNF-R), 예컨대 TNF-R/Fc 융합 단백질의 이량체이다. 이러한 이량체의 하나는 에타너셉트(etanercept; ENBREL?, Immunex Corporation, 워싱턴주 시애틀 소재)이다. p75/p80 TNF-R, 및 이의 가용성 단편 및 다른 형태는 본원에 참고인용된 WO 91/03553에 기술되어 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 양태에서 본 발명의 항체 또는 항체 유도체는 바람직하지 않은 IL-4R-매개된 및 TNF-유도된 면역반응이 관여하는 임의의 질환, 예컨대 염증의 치료를 위해 TNF 길항제와 공동 투여된다. 본 발명에서 제시된 한가지 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 TNF 길항제를 염증성 장 질환, 크론병 또는 궤양성 결장염 환자에게 공동 투여하는 것을 포함한다. 다른 양태는 가와사키병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 포도막망막염, 자가면역 림프증식 증후군, 쇼그렌 증후군, 만성 피로 증후군 또는 디클로페낙과 같은 약물 유도성 간독성이 있는 환자에게 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 TNF 길항제를 공동 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 제시되는 또 다른 방법은 자간전증이 발전되고 있는 임신 여성에게 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 TNF 길항제를 공동 투여하는 것을 포함한다. 하나의 양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와 TNF 길항제의 투여는 임신 기간 동안 계속된다.
에타너셉트의 적당한 투약량은 치료되는 질병의 본성, 환자의 체구(예, 성인 또는 아동) 및 다른 당업계에서 자명한 요인에 따라 달라질 것이다. 본 발명에서 제시되는 방법의 하나의 양태에서, ENBREL?은 1 내지 25mg의 용량으로 피하 주사를 통해 주 2회로 투여된다. 소아 투약량의 하나의 양태는 0.4mg/kg이다. 본 발명에서 제시되는 특정 방법은 1 내지 25mg 용량으로 피하 주사되는 ENBREL?과 본 발명의 항체 또는 항체 유도체를 자가면역 림프증식 증후군 또는 쇼그렌 증후군 환자에게 공동 투여하는 것을 포함한다.
이식편대숙주병("GVHD")의 치료를 위해, 본 발명의 항체 또는 항체 유도체는 다음과 같은 제제 중 적어도 하나와 공동 투여된다: TNF 길항제, IL-1 길항제, 스테로이드 또는 코르티코스테로이드. 하나의 양태에서, TNF 억제제는 ENBREL?이다. 다른 양태에서, IL-1 길항제는 미국 특허 5,350,683에 기술된 바와 같은 타입 II IL-1 수용체의 가용성 형태이다. 다른 양태에서, GVHD는 골수 이식과 관련이 있다(예컨대 후속 발생한다). 본 발명의 항체 또는 항체 유도체는 이식된 세포, 조직 및/또는 동종항원에 대해 지향성인 면역반응을 억제하는 방법에 전술한 제제 중 적어도 하나와 함께 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 다수의 사이토킨 길항제 및/또는 다른 제제/약물은 특정 병의 치료를 위한 복합 치료(예컨대, 본 발명의 항체 또는 항체 유도체와의 공동 투여)에 유용하다. 이러한 길항제, 제제 또는 약물이 또한 상기 질병의 치료에 단일 제제로서도 유용하게 사용될 수 있음이 이해된다. 또한, 질병 치료를 위해 특정 사이토킨에 대한 길항제의 투여를 수반하는 방법의 개시는 다른 특별한 언급이 없는 한, 한 종류의 길항제의 투여 및 상기 사이토킨에 대한 2종 이상의 다른 길항제의 투여를 포괄한다는 것이 또한 이해된다.
실시예 1: 모노클로날 항체의 제조
본 실시예는 사람 IL-4 수용체를 인식하는 모노클로날 항체의 제조방법을 입증하기 위한 것이다.
IL-4 수용체 폴리펩타이드는 미국 특허 5,599,905(전문이 본원에 참고인용됨)에 기술된 방법과 같은 통상의 방법으로 모노클로날 항체를 생산하는데 면역원으로서 이용될 수 있다. 면역원으로서 폴리펩타이드의 다양한 형태, 예를 들어, 전장 단백질, 이의 단편, Fc 융합체와 같은 융합 단백질, 세포 표면에 재조합 단백질을 발현하는 세포 등이 이용될 수 있음이 인지된다.
이러한 방법의 한 예를 요약해보면, 완전 프로인트 보조제에 유화된 IL-4R 면역원을 10 내지 100㎕ 범위의 양으로 루이스(Lewis) 래트에게 피하 주사한다. 3주 후, 면역화된 동물을 불완전 프로인트 보조제에 유화된 추가 면역원으로 부스트(boost)시키고, 이후 매 3주마다 부스트시킨다. 혈청 시료는 돗트-블롯 분석, ELISA(효소 결합된 면역흡착 분석) 또는 IL-4R 발현 세포의 추출물에 대한 125I-IL-4의 결합 억제를 통한 검사를 위해 눈뒤 채혈이나 꼬리끝 절제로 주기적으로 채취한다. 적당한 항체 역가가 검출되면, 양성 동물에게 마지막으로 식염수 중의 항원을 정맥내 주사한다. 3 내지 4일 후, 동물을 희생시키고 비장세포를 수거하여 쥐의 골수종 세포주 AG8653과 융합시켰다. 수득되는 하이브리도마 세포주를, 미융합 세포, 골수종 하이브리드 및 비장세포 하이브리드의 증식을 억제하기 위해 HAT 선택 배지(하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘)내에서 다중 미세역가 평판에서 배양했다.
이렇게 수득된 하이브리도마 클론을 IL-4R과의 반응성을 통해 선별했다. 하이브리도마 상청액의 1차 선별에는 부분 정제된 125I-IL-4 수용체의 항체 포획(capture) 및 결합을 이용한다. 이러한 선별법에서 양성인 하이브리도마는 변형 항체 포획으로 검사하여 차단성 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 검출했다. 이에 따라, IL-4R을 발현하는 세포에 대한 125I-IL-4 결합을 억제할 수 있는 모노클로날 항체를 분비하는 하이브리도마가 검출된다. 이러한 하이브리도마를 누드 마우스의 복강으로 주사하여, 고농도(>1mg/ml)의 항-IL-4R 모노클로날 항체를 함유하는 복수를 수득했다. 이와 같이 수득된 모노클로날 항체는 황산암모늄 정제와 후속되는 젤 배제 크로마토그래피, 및/또는 단백질 G에 대한 항체의 결합에 근거하는 친화성 크로마토그래피를 통해 정제할 수 있다.
형질전환된 마우스에서 사람 항체를 생산하는 방법은 당업계에 개시되고 공지되어 있다[참조: Chen et al., 1993, Internat. Immunol. 5: 647-56; Chen et al., 1993, EMBO J. 12: 821-30; Choi et al., 1993, Nature Genetics 4: 117-23; Fishwild et al., 1996, Nature Biotech. 14: 845-51; Harding et al., 1995, Annals New York Acad. Sci.; Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-59; Lonberg, 1994, Handbook Exper.I Pharmacol. 113: 49-101; Lonberg et al., 1995, Internal Rev. Immunol. 13: 65-93; Morrison, S, 1994, Nature 368: 812-13; Neuberger, 1996, Nature Biotech. 14: 826; Taylor et al., 1992, Nuc. Acids Res. 20: 6287-95; Taylor et al., 1994, Internat. Immunol. 6: 579-91; Tomizuka et al, 1997, Nature Genetics 16: 133-43; Tomizuka et al., 2000, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 97: 722-27; Tuaillon et al., 1993, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90: 3720-24; Tuaillon et al., 1994, J. Immunol. 152: 2912-20; Russel et al., 2000, Infection and Immunity April 2000: 1820-26; Gallo et al., 2000, Eur. J. Immunol. 30: 534-40; Davis et al., 1999, Cancer Metastasis Rev. 18: 421-25; Green, 1999, J. Immunol. Methods 231: 11-23; Jakobovits, 1998, Advanced Drug Delivery Rev. 31: 33-42; Green et al., 1998, J. Exp. Med. 188: 483-95; Jakobovits, 1998, Exp. Opin. Invest. Drugs 7: 607-14; Tsuda et al., 1997, Genomics 42: 413-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15: 146-56; Jakobovits, 1996, Weir's Handbook of Experimental Immunology, The Integrated Immune System Vol. IV, 194.1-194.7; Mendez et al., 1995, Genomics 26: 294-307; Jakobovits, 1994, Current Biol. 4: 761-63; Arbones, 1994, Immunity 1: 247-60; Green et. al., 1994, Nature Genetics 7: 13-21; Jakobovits et al., 1993, Nature 362: 255-58; Jakobovits et al, 1993, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90: 2551-55].
실시예 2: 차단 활성을 측정하기 위한 분석법
본 실시예는 CD23의 IL-4 및/또는 IL-13 의존적 발현을 감소시키는 항체의 동정에 사용할 수 있는 분석법을 입증하기 위한 것이다. 본 분석법은 사람 B 세포상에서의 활성화 관련 표면 항원 CD23의 발현을 증진시키는 IL-4 및 IL-13의 특성에 기반을 둔 것이다.
사람 IL-4R(huIL-4R)에 대해 유발된 항체는 하이브리도마 상청액 또는 정제된 단백질의 형태로 검사한다. 항체는 배양물에 첨가하기에 앞서, 컷오프가 10kDa인 센트리콘 여과기(Amicon)를 사용한 원심분리에 의해 배양 배지(RPMI 1640 + 10% 열-불활성화된 태아 송아지 혈청)에 대하여 완충액 교환을 실시한다.
사람 말초 혈액 B 세포는 전술한 바와 같이 정제했다(Morris et al., 1999, J.Biol.Chem. 274:418-23). 배양 배지 중의 B 세포(3x105/웰)를 96웰 환저 미세역가 평판에 넣고, 제시된 최종 농도의 검사 항체와 30분 동안 실온에서 예비배양했다. 그 다음, 배양물에 재조합 사람 IL-4 또는 IL-13을 표시된 농도로 첨가하고, 세포 를 5% CO2의 습윤한 대기에서 37℃ 하에 20 내지 24시간 동안 배양했다. 배양 기간 종료시에 세포를 96웰 배양 평판에서 PBS + 0.02% NaN3로 1회 세척하고, 차단 완충액(PBS + NaN3 중의 2% 표준 토끼 혈청 + 1% 표준 염소 혈청)에 재현탁시켰다. 그 다음, 파이코에리트린(PE) 접합된 CD23 모노클로날 항체(mAb) 또는 PE 접합된 동종형 대조용 mAb(둘다 Pharmingen 제품)를 1:10의 최종 희석률로 세포에 첨가했다. 세포를 4℃에서 30분 동안 항온배양하고, PBS + NaN3로 3회 세척한 다음, CD23 발현에 대해 FacScan(Becton Dickinson)에서 분석했다.
음성 대조군으로서, 하이브리도마 성장 배지 또는 동종형이 일치하는 비차단 사람 항-hIL-4R 항체와 함께 배양한 세포를 포함시켰다. IL-4 및 IL-13에 의한 CD23 유도를 중화시키는 양성 대조군으로는 hIL-4 및 hIL-13의 결합 및 기능을 차단하는 것으로 이미 밝혀져 있는 항-huIL-4R 쥐 mAb(MAB 230, R&D Systems, 미네소타주 미네아폴리스 소재)를 사용했다.
실시예 3: 장벽 기능의 상실을 측정하는 분석법
본 실시예는 상피 조직에 IL-4 유도된 손상 및 상피 장벽 기능의 상실을 억제하는 IL-4 길항제의 특성을 평가하는 방법을 제공한다.
하나의 관점에서, 본 발명은 폐 상피 또는 장 상피를 비롯하여, 이에 국한되지 않는 상피에 IL-4 유도 손상을 억제하는 IL-4 길항제의 사용 방법을 제공한다. 상피 손상은 장벽 기능의 상실을 초래할 수 있다. 이러한 상피에 IL-4 유도 손상 및 상피 장벽 기능 상실을 억제하는 IL-4 길항제의 특성을 평가하는데 이용할 수 있는 방법의 예는 다음과 같으며, 이에 국한되는 것은 아니다.
시험관내 상피(상피 장벽) 모델을 제조하는데 이용할 수 있는 세포는 공지되어 있다. 예컨대 Calu-3 사람 폐 상피 세포는 장벽 기능 연구용으로 적당하다(Ahdieh et al., 2001, Am. J. Physiol. Cell Physiol. 281:C2029-38). 또 다른 적당한 세포주는 T84라는 사람 장 상피 세포주이다. T84 세포는 문헌[Madara et al., 1985, J. Cell Biol., 101: 2124-33, Madara et al., 1989, J. Clin. Invest. 83: 724-27, 및 Youakim et aL, 1999, Am. J. Physio. 276 (Gastrointest. Liver Physio. 39): G1279-88]에 기술된 바와 같이 투과성 지지체 상에 상피 세포 단층을 형성시키는 조건 하에서 배양된다. 이와 같이 생성된 상피 단층은 장 상피 장벽의 모방물이다.
이와 같이 배양된 단층을, 고유 상피와 손상된 상피를 구별할 수 있는 특성(예, 수동 상피통과 이온 흐름에 대한 저항성)에 대해 검사했다. 이러한 분석법의 하나는 방사능표지된 특정 화합물이 상피 단층을 통과할 수 있는지를 측정한다. 단층을 통한 방사능표지된 화합물의 누출은 장벽이 자연 상태보다 투과성임을 시사한다. 예를 들어, 만니톨 유동 분석은 단층을 따라 방사능표지된 만니톨(예, 3H 만니톨)의 이동을 평가하여 상피 손상을 검출하는데 사용될 수 있다(Madara and Stafford, 상기 문헌설명 참조).
상피 상태를 측정하는 다른 방법의 예로는 영상화법(예, Madara and Stafford 상기 문헌에 설명된 것) 및 상피통과 전기 저항 측정법(예, 상기 문헌 Youakin and Ahdieh에 설명된 것)이 있다.
전문이 본원에 참고인용된 미국 특허 제6,033,688호(이하, "688 특허")도 역시 장벽 투과성 연구에 이용될 수 있는 방법을 설명하고 있다(예컨대, 이 특허의 실시예 1 및 4에 설명되어 있다). 사람 기관 상피 세포는 상피통과 전기 저항을 나타내는 단층을 제공하는 조건 하에서 배양한다. 상피통과 저항(자연 장벽을 나타낸다)은 전압계로 측정한다. 상피 단층에 대한 물질이나 치료의 효과는 단층을 물질이나 치료에 노출시킨 다음, 어싱(Ussing) 챔버에서 이온 수송 활성을 측정하여 평가한다(컬럼 8, 40 내지 56행). 다른 종류의 세포, 예컨대 사람 낭성 섬유증 환자 유래의 기관지 상피 세포로부터 수득되는 단층을 이용하는 경우에도 유사한 방법을 실시할 수 있다('688 특허, 실시예 4, 컬럼 11).
즉, 상피 층의 장벽 기능에 대한 IL-4 유도 감소를 억제하는 물질이나 치료의 억제능은 상기 상피 세포를 IL-4와 상기물질이나 치료에 노출시키고, 상피 층의 상태를 분석한 다음, 이러한 상피 층의 상태를 상기 물질이나 치료의 부재 하에 IL-4에 노출시켰던 상피 층의 상태와 비교하여 평가할 수 있다. 상기 물질이나 치료에 노출되지 않은 상피 층 대비의 상기 물질이나 치료에 노출된 상피 층의 상태에 있어서의 개선은 상기 물질이나 치료가 상피 조직에 대한 IL-4 유도 손상 및 상피 장벽 기능의 상실을 억제한다는 것을 시사한다.
이러한 분석법의 하나에서, T84 세포의 단층을 전술한 바와 같이 장 상피 장벽의 시험관내 모델로서 사용했다. 분극된 상피 세포의 기저측면에 첨가된 IL-4는 치료 47 내지 72시간 내에 장벽 기능을 70%까지 감소시키는 것으로 관찰되었다. 세포외 도메인으로 이루어진 가용성 IL-4 수용체 폴리펩타이드를 IL-4와 동시에 첨가 했을 때, 상기 장벽 기능의 감소는 방지되었고, 장벽은 미처리(대조군) 세포와 동일한 수준으로 유지되었다.
또한, 폐 상피 장벽의 시험관내 모델로서 사용된 폐 상피 세포 유래의 단층을 이용하여 상기 분석을 실시했다. 분극된 폐 상피 세포의 기저측면에 첨가된 IL-4는 치료 48 내지 72시간 이내에 장벽 기능을 50%까지 감소시키는 것으로 관찰되었다. IL-4 수용체 폴리펩타이드를 IL-4와 동시에 첨가했을 때 상기 장벽 기능의 감소는 방지되었고, 장벽은 미처리(대조군) 세포와 동일 수준으로 유지되었다.
실시예 4: 결합 활성을 측정하기 위한 분석법
본 실시예는 항-IL-4R 항체의 결합 활성을 측정하는 방법을 제공한다.
항-huIL-4R(또는 이의 변이체, 유도체 또는 단편)은 고체상 클로라민-T 유사체(IODOGEN?, Pierce, 미주리주 세인트루이스 소재)를 사용하거나 다른 적당한 방사능표지법을 사용하여 약 3 x 1016 cpm/mmol의 비활성으로 125I로 방사능표지한다. 생체활성의 상실은 결합 억제 또는 다른 생물학적 억제 분석을 상응하는 미표지 단백질과 비교하여 평가한다. 또는, 방사능표지된 IL-4 결합의 항-huIL-4R(또는 이의 변이체 또는 단편)에 의한 억제를 측정할 수도 있다. IL-4R을 발현하는 세포에서의 평형 결합 분석은 실질적으로 문헌[Idzerda et al., 1990, J.Exp.Med. 171:3 861-73]에 기술된 바와 같이 96웰 미세역가 트레이에서 수행한다. 간략히 설명하면, 사람 IgG 0.5mg/ml과 5% 사람 혈청이 보충된 결합 배지(RPMI 1640, 2.5% BSA, 20mM HEPES, 0.02% 나트륨 아지드, pH7.2) 중의 방사능표지된 단백질의 연속 희석물을 세포(2.5x 106/웰)와 총 부피 150㎕로 4℃에서 2시간 동안 항온배양했다. 유리 및 결합된 방사능표지된 프로브를 프탈레이트-오일 분리 혼합물에서의 미량원심분리(microfugation)로 분리하고, 감마 계수기에서 계수했다. 억제 분석에는 잠재적 억제제의 존재 또는 부재하에 일정 농도 0.5nM의 방사능표지된 단백질을 사용했다. 비특이적 결합은 100배 과량의 미표지 단백질의 존재 하에 측정했다. 단일 부위 경쟁 억제 모델에 근거한 이론적 곡선은 문헌[Dower et al., 1984, J. Immunol. 132:751]에 기술된 데이터와 일치했다. 억제 백분율은 방정식 I(%) = [100 Ki(I)/[1+Ka(L)+Ki(I)]에 따라 계산했으며, 여기서 I는 억제제의 몰 농도이고, L은 방사능표지된 단백질의 몰 농도이며, Ki 및 Ka는 억제제와 단백질 각각의 친화성 상수이다.
또한, 염소 항-사람 Fa 폴리클로날 항체(또는 다른 적당한 항-사람 Fc 항체)를 통해 포획된 IL-4RFc 또는 대조용 Fc 단백질이 코팅된 96웰 미세역가 평판에서도 평형 결합 및 경쟁 억제 등온반응을 측정할 수 있다. 간략히 설명하면, 평판을 PBS 중의 항-사람 Fc 5㎍/ml와 4℃에서 배양하고, PBS로 2회 세척한 뒤, PBS/0.01% Tween 20 중의 IL-4R/Fc 또는 대조용 Fc 단백질과 4℃에서 약 12시간 동안 항온배양하고 PBS로 다시 2회 세척한다. 평형 결합 등온반응은 결합 배지 중에 125I 표지된 결합 단백질의 일련의 희석물을 이용하고 억제 분석은 전술한 바와 같은 미표지의 잠재적 경쟁 억제제의 존재 또는 부재 하에 0.5nM 125I 표지된 항-huIL-4R의 일정 농도를 이용한다. 4℃에서 2시간 후, 평판을 PBS로 2회 세척하고, 특이적 결합 단백질을 50mM 시트르산염(pH 3.0) 또는 SDS 처리로 방출시키고, 방출된 125I 표지된 항-huIL-4R을 감마 계수기로 측정했다. 데이터는 상기 기술한 Dower 등의 문헌에 설명된 바와 같이 처리했다.
또한, 결합 활성은 BIACORE? 바이오센서(BIAcore International AB, 스웨덴 웁살라 소재)를 사용하여 표면 플라스몬 공명법으로 평가할 수도 있다. 간략히 설명하면, 감마쇄 특이성인 염소-항-사람 IgG(또는 다른 적당한 감마쇄 특이적 항체; GHFC)를 제조자의 지시에 따른 표준 아민 결합 과정 및 시약을 사용하여 바이오센서 칩에 공유 결합시켰다. 항-huIL-4R 또는 대조용 항체를 고정된 GHFC 위에 주입하고, GHFC 코팅된 칩(음성 대조군) 및 항-huIL-4R 코팅된 칩 위에 다양한 양의 IL-4R을 각각 통과시켰다. 칩의 재생은 10㎕/분의 100mM 인산 10㎕ 펄스 1회로 실시했다. 모든 결합은 HBS(10mM HEPES, 0.15M NaCl, 3.4mM EDTA, 0.02% NaN3, 0.005% 계면활성제 P2O, pH 7.4)에서 수행했다.
실시예 5: IL-4 수용체 결합 항체
본 실시예는 huIL-4R에 결합하는 항체 및 항체 유도체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열 및 이를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
경쇄 가변 영역 L1 및 중쇄 가변 영역 H1을 함유하는 완전 사람 IgG4 항체는 본원에 전문이 참고인용된 WO 01/92340(2001.12.6 공개)의 실시예 8에 기술된 바와 같이 분리했다.
중쇄 H1의 가변 영역은 프라이머로서 다음과 같은 올리고뉴클레오타이드를 이용한 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)을 통해, 항체 L1H1을 생산하는 하이브리도마 세포주로부터 cDNA 클로닝을 이용하여 분리했다:
Figure 112006030334328-pct00001
증폭 산물을 pGem-T easy(Promega, 위스콘신 매디슨 소재)에 SalI/ApaI 단편으로서 삽입했다. 절단을 개선시키기 위해, 천연 H1 리더 서열을 VH3-30 리더 서열로 교체했다(Matsuda et al., 1993, Nature Genetics 3:88-94).
중쇄 가변 도메인 H1의 올리고뉴클레오타이드 기반 돌연변이유발을 사용하여 도 3에 도시한 중쇄 가변 도메인 서열 H2-H14를 제조했다. 이러한 중쇄 가변 도메인 서열은 각각 경쇄 가변 도메인 서열 L1과 함께 IL-4 수용체 알파에 결합하는 것이 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)을 통해 확인되었다.
천연 사람 경쇄 가변 유전자는 사람 B 세포로부터 PCR로 수득하여, 가변 영역 cDNA 유전자 라이브러리의 제조에 사용했다. 이 유전자의 선별은 중쇄 가변 영역 H1과 함께 사람 IL-4 수용체에 대한 결합 여부를 조사하여 실시했다. 경쇄 가변 영역 L2-L6은 이 방법에 의해 확인되었다. 이들의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 각각 도 2와 3에 제시했으며, 각 쇄의 CDR 영역은 진하게 표시하고 L1은 밑줄로 표시했다. 주쇄(FR) 영역도 표시했다.
사람 카파 불변 영역을 클로닝하기 위해 사람 카파 경쇄를 발현하는 쥐 하이브리도마 세포주로부터 RNeasy 소형 키트(Qiagen, 캘리포니아 발렌시아 소재)를 이용하여 RNA를 분리했다. 이러한 RNA를 제1 쇄 cDNA 합성 키트(Amersham Pharmacia Biotech, 뉴저지 피스카타웨이 소재)를 사용하여 역전사시켰다. 이러한 cDNA로부터 프라이머로서 BswI/NotI 카세트를 사용하여 PCR로 사람 카파 경쇄 핵산을 증폭시켰다:
Figure 112006030334328-pct00002
수득된 사람 카파 경쇄 불변 영역에 경쇄 가변 영역 L1 및 L2를 각각 다음과 같이 결합시켰다: 경쇄 가변 영역 L1을 암호화하는 NheI/Bsi WI DNA 단편과 사람 카파 불변 영역 DNA 단편을 암호화하는 Bsi WI/Not I DNA 단편을 VkIII 리더 서열을 사용하여 pDC409 포유동물 발현 벡터(본원에 전문이 참고인용되는 Giri et al., 1994, EMBO J. 13:2822-30 및 미국 특허 6,642,358 참조)에 동시에 서브클로닝했다. VkIII 리더 서열은 프라이머로서 다음과 같은 올리고머뉴클레오타이드를 사용하고 코작(Kozak, 1989, J Cell Biol. 108:229-41) 및 VkIII A27(Straubinger et al., 1988, J Mol Biol. 199: 23-34) 리더 서열의 PCR 증폭을 통해 Sal I/Nhe I 카세트로서 작제되었다:
Figure 112006030334328-pct00003
천연 VkIII A27 리더에 존재하는 마지막 6개의 뉴클레오타이드를 NheI 부위를 암호화하는 뉴클레오타이드로 교체했다. 그 결과, 절단 부위에는 영향을 미치지 않으나, 트레오닌에서 글리신으로, 알라닌에서 세린으로 아미노산이 변화되었다.
각각의 중쇄 가변 영역 H1, H4 및 H14를 사람 IgG4 불변 영역에 다음과 같이 결합시켰다: 중쇄 가변 영역 H1을 암호화하는 Sal I/Apa I DNA 단편 및 사람 IgG4 불변 영역을 암호화하는 Apa I/Not I DNA 단편(서열번호 77)을, Nhe I 부위를 암호하도록 3' 말단이 변형된 VH5a 리더 서열을 사용하여 포유동물 발현 벡터 pDC409(Giri et al., 1994, EMBO J. 13: 2822-30에 기술됨)에 동시에 삽입시켰다:
Figure 112006030334328-pct00004
이러한 변화의 결과로서, 마지막 2개의 아미노산은 알라닌과 세린인 반면, 야생형 VH5a의 마지막 2개의 아미노산은 시스테인 및 알라닌이다. 이러한 H4-IgG4 암호 작제물에 부위-지시된 돌연변이유발을 수행하여 H12 및 H13 중쇄 가변 영역을 함유하는 작제물을 제조했다. H1-H14의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 각각 도 2와 3에 제시했고, 각 쇄의 CDR 영역은 진하게 표시하고 H1은 밑줄로 표시했다. 주쇄(FR) 영역도 표시했다.
가변 도메인 조합 L1H1, L1H2, L1H3, L1H4, L1H5, L1H6, L1H7, L1H8, L1H9, L1H10, L1H11, L2H1, L2H2, L2H3, L2H4, L2H5, L2H6, L2H7, L2H8, L2H9, L2H10, L2H11, L2H12, L2H13, L2H14, L3H1, L4H1, L5H1 및 L6H1을 함유하는 항체 및/또는 항체 유도체는 생화학적 결합 분석 및/또는 실시예 2의 방법을 사용하여 검사했고, 그 결과 IL-4 수용체에 결합하는 것으로 확인되었다.
실시예 6: 항체의 종 및 서열 특이성
본 실시예는 IL-4 수용체에 결합하는 항체의 종 및 서열 특이성을 측정하는 방법을 제공한다.
항-IL-4 수용체 항체의 종 및/또는 서열 특이성 평가에는 형광표지세포분리기(FACS) 결합 분석을 사용할 수 있다. IL-4 수용체의 세포외 도메인은 사이토킨 수용체 도메인(도메인 I) 및 피브로넥틴 III형 도메인(도메인 II)을 포함한다(Hage et al., 1999, Cell 97: 271-81). 사람 IL-4 수용체 도메인 I 및/또는 II, 쥐 IL-4 수용체 도메인 I 및/또는 II, 사람 및 쥐 IL-4 수용체 도메인 I 및 II의 조합물, 또는 사람 또는 쥐 IL-4 수용체 도메인 I 및/또는 II의 단편을 함유하는 작제물은 병아리 아비딘과 C-말단 인프레임 융합물로서 발현된다(쥐 IL-4 수용체 서열은 예컨대 문헌[Schulte et al., 1997, J. Exp. Med. 186: 1419-29, Wrighton et al., 1992, Growth Factors 6: 103-18, Harada et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87: 857-61, Mosley et al, 1989, Cell 59: 335-48]에 제시되어 있다). 이러한 융합 단백질 발현 벡터를 각각 293T 세포에 일시적으로 형질감염시켰다. 조건화된 배지를 정제 없이 합성 단백질의 공급원으로 사용했다. IL-4 수용체 작제물의 아비딘 태그는 비오틴 코팅된 비드를 이용하여 용액으로부터 포획했다. 융합 작제물의 아비딘 부의 검출에는 FITC 표지된 항아비딘 항체를 사용했다. 항-IL-4 수용체 항체를 비오틴 포획된 IL-4 수용체 작제물과 항온배양했다. 검출을 위한 제2 항체로서 FITC 표지된 마우스 F(ab')2 항-사람 IgG를 사용했다. 비드 항체 혼합물은 Becton Dickinson Bioscience FACScan(BD, 뉴저지 프랭클린 레이크스 소재) 상에서 FACS 분석으로 처리했다.
상기 방법을 이용하여 본 명세서에 기술된 여러 항-IL-4 수용체 항체가 사람 IL-4 수용체의 도메인 I 및 II를 포함하는 작제물에는 잘 결합하지만 쥐 IL-4 수용 체의 도메인 I 및 II를 포함하는 작제물에는 결합하지 않음이 밝혀졌다. 사람 IL-4 수용체의 도메인 I을 포함하는(도메인 II를 포함하지 않는) 작제물에는 항체가 약하게 결합했고, 사람 IL-4 수용체 도메인 II를 포함하는(도메인 I을 포함하지 않는) 작제물에는 전혀 결합하지 않았다. 또한, 사람 IL-4 수용체의 도메인 I과 쥐 IL-4 수용체의 도메인 II를 포함하는 작제물에도 항체가 잘 결합한다는 것이 밝혀졌다.
이상 설명한 실제 실시예 및 예상 실시예들은 제한하는 것이 아니며 본 발명의 특정 양태를 예시하는 것이다. 본원에 인용된 참고문헌들은 전문이 참고 인용되었다.
<110> IMMUNEX CORPORATION <120> Antibodies that bind interleukin-4 receptor <130> 3492-WO <150> US 60/518,166 <151> 2003-11-07 <160> 77 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 2475 <212> DNA <213> Homo sapien <220> <221> CDS <222> (1)..(2475) <400> 1 atg ggg tgg ctt tgc tct ggg ctc ctg ttc cct gtg agc tgc ctg gtc 48 Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val 1 5 10 15 ctg ctg cag gtg gca agc tct ggg aac atg aag gtc ttg cag gag ccc 96 Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro 20 25 30 acc tgc gtc tcc gac tac atg agc atc tct act tgc gag tgg aag atg 144 Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met 35 40 45 aat ggt ccc acc aat tgc agc acc gag ctc cgc ctg ttg tac cag ctg 192 Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu 50 55 60 gtt ttt ctg ctc tcc gaa gcc cac acg tgt atc cct gag aac aac gga 240 Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly 65 70 75 80 ggc gcg ggg tgc gtg tgc cac ctg ctc atg gat gac gtg gtc agt gcg 288 Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala 85 90 95 gat aac tat aca ctg gac ctg tgg gct ggg cag cag ctg ctg tgg aag 336 Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys 100 105 110 ggc tcc ttc aag ccc agc gag cat gtg aaa ccc agg gcc cca gga aac 384 Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn 115 120 125 ctg aca gtt cac acc aat gtc tcc gac act ctg ctg ctg acc tgg agc 432 Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser 130 135 140 aac ccg tat ccc cct gac aat tac ctg tat aat cat ctc acc tat gca 480 Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala 145 150 155 160 gtc aac att tgg agt gaa aac gac ccg gca gat ttc aga atc tat aac 528 Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn 165 170 175 gtg acc tac cta gaa ccc tcc ctc cgc atc gca gcc agc acc ctg aag 576 Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys 180 185 190 tct ggg att tcc tac agg gca cgg gtg 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gag gag aat ggg ggc ttt tgc cag cag gac atg ggg gag tca tgc ctt 1296 Glu Glu Asn Gly Gly Phe Cys Gln Gln Asp Met Gly Glu Ser Cys Leu 420 425 430 ctt cca cct tcg gga agt acg agt gct cac atg ccc tgg gat gag ttc 1344 Leu Pro Pro Ser Gly Ser Thr Ser Ala His Met Pro Trp Asp Glu Phe 435 440 445 cca agt gca ggg ccc aag gag gca cct ccc tgg ggc aag gag cag cct 1392 Pro Ser Ala Gly Pro Lys Glu Ala Pro Pro Trp Gly Lys Glu Gln Pro 450 455 460 ctc cac ctg gag cca agt cct cct gcc agc ccg acc cag agt cca gac 1440 Leu His Leu Glu Pro Ser Pro Pro Ala Ser Pro Thr Gln Ser Pro Asp 465 470 475 480 aac ctg act tgc aca gag acg ccc ctc gtc atc gca ggc aac cct gct 1488 Asn Leu Thr Cys Thr Glu Thr Pro Leu Val Ile Ala Gly Asn Pro Ala 485 490 495 tac cgc agc ttc agc aac tcc ctg agc cag tca ccg tgt ccc aga gag 1536 Tyr Arg Ser Phe Ser Asn Ser Leu Ser Gln Ser Pro Cys Pro Arg Glu 500 505 510 ctg ggt cca gac cca ctg ctg gcc aga cac ctg gag gaa gta gaa ccc 1584 Leu Gly Pro Asp Pro Leu Leu Ala Arg His Leu Glu Glu Val Glu Pro 515 520 525 gag atg ccc tgt gtc ccc cag ctc tct gag cca acc act gtg ccc caa 1632 Glu Met Pro Cys Val Pro Gln Leu Ser Glu Pro Thr Thr Val Pro Gln 530 535 540 cct gag cca gaa acc tgg gag cag atc ctc cgc cga aat gtc ctc cag 1680 Pro Glu Pro Glu Thr Trp Glu Gln Ile Leu Arg Arg Asn Val Leu Gln 545 550 555 560 cat ggg gca gct gca gcc ccc gtc tcg gcc ccc acc agt ggc tat cag 1728 His Gly Ala Ala Ala Ala Pro Val Ser Ala Pro Thr Ser Gly Tyr Gln 565 570 575 gag ttt gta cat gcg gtg gag cag ggt ggc acc cag gcc agt gcg gtg 1776 Glu Phe Val His Ala Val Glu Gln Gly Gly Thr Gln Ala Ser Ala Val 580 585 590 gtg ggc ttg ggt ccc cca gga gag gct ggt tac aag gcc ttc tca agc 1824 Val Gly Leu Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly Tyr Lys Ala Phe Ser Ser 595 600 605 ctg ctt gcc agc agt gct gtg tcc cca gag aaa tgt ggg ttt ggg gct 1872 Leu Leu Ala Ser Ser Ala Val Ser Pro Glu Lys Cys Gly Phe Gly Ala 610 615 620 agc agt ggg gaa gag ggg tat aag cct ttc caa gac ctc att cct ggc 1920 Ser Ser Gly Glu Glu Gly Tyr Lys Pro Phe Gln Asp Leu Ile Pro Gly 625 630 635 640 tgc cct ggg gac cct gcc cca gtc cct gtc ccc ttg ttc acc ttt gga 1968 Cys Pro Gly Asp Pro Ala Pro Val Pro Val Pro Leu Phe Thr Phe Gly 645 650 655 ctg gac agg gag cca cct cgc agt ccg cag agc tca cat ctc cca agc 2016 Leu Asp Arg Glu Pro Pro Arg Ser Pro Gln Ser Ser His Leu Pro Ser 660 665 670 agc tcc cca gag cac ctg ggt ctg gag ccg ggg gaa aag gta gag gac 2064 Ser Ser Pro Glu His Leu Gly Leu Glu Pro Gly Glu Lys Val Glu Asp 675 680 685 atg cca aag ccc cca ctt ccc cag gag cag gcc aca gac ccc ctt gtg 2112 Met Pro Lys Pro Pro Leu Pro Gln Glu Gln Ala Thr Asp Pro Leu Val 690 695 700 gac agc ctg ggc agt ggc att gtc tac tca gcc ctt acc tgc cac ctg 2160 Asp Ser Leu Gly Ser Gly Ile Val Tyr Ser Ala Leu Thr Cys His Leu 705 710 715 720 tgc ggc cac ctg aaa cag tgt cat ggc cag gag gat ggt ggc cag acc 2208 Cys Gly His Leu Lys Gln Cys His Gly Gln Glu Asp Gly Gly Gln Thr 725 730 735 cct gtc atg gcc agt cct tgc tgt ggc tgc tgc tgt gga gac agg tcc 2256 Pro Val Met Ala Ser Pro Cys Cys Gly Cys Cys Cys Gly Asp Arg Ser 740 745 750 tcg ccc cct aca acc ccc ctg agg gcc cca gac ccc tct cca ggt ggg 2304 Ser Pro Pro Thr Thr Pro Leu Arg Ala Pro Asp Pro Ser Pro Gly Gly 755 760 765 gtt cca ctg gag gcc agt ctg tgt ccg gcc tcc ctg gca ccc tcg ggc 2352 Val Pro Leu Glu Ala Ser Leu Cys Pro Ala Ser Leu Ala Pro Ser Gly 770 775 780 atc tca gag aag agt aaa tcc tca tca tcc ttc cat cct gcc cct ggc 2400 Ile Ser Glu Lys Ser Lys Ser Ser Ser Ser Phe His Pro Ala Pro Gly 785 790 795 800 aat gct cag agc tca agc cag acc ccc aaa atc gtg aac ttt gtc tcc 2448 Asn Ala Gln Ser Ser Ser Gln Thr Pro Lys Ile Val Asn Phe Val Ser 805 810 815 gtg gga ccc aca tac atg agg gtc tct 2475 Val Gly Pro Thr Tyr Met Arg Val Ser 820 825 <210> 2 <211> 825 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 2 Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro 20 25 30 Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met 35 40 45 Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu 50 55 60 Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly 65 70 75 80 Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala 85 90 95 Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys 100 105 110 Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn 115 120 125 Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser 130 135 140 Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala 145 150 155 160 Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn 165 170 175 Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys 180 185 190 Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr 195 200 205 Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser 210 215 220 Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His Leu Leu Leu Gly Val Ser Val Ser 225 230 235 240 Cys Ile Val Ile Leu Ala Val Cys Leu Leu Cys Tyr Val Ser Ile Thr 245 250 255 Lys Ile Lys Lys Glu Trp Trp Asp Gln Ile Pro Asn Pro Ala Arg Ser 260 265 270 Arg Leu Val Ala Ile Ile Ile Gln Asp Ala Gln Gly Ser Gln Trp Glu 275 280 285 Lys Arg Ser Arg Gly Gln Glu Pro Ala Lys Cys Pro His Trp Lys Asn 290 295 300 Cys Leu Thr Lys Leu Leu Pro Cys Phe Leu Glu His Asn Met Lys Arg 305 310 315 320 Asp Glu Asp Pro His Lys Ala Ala Lys Glu Met Pro Phe Gln Gly Ser 325 330 335 Gly Lys Ser Ala Trp Cys Pro Val Glu Ile Ser Lys Thr Val Leu Trp 340 345 350 Pro Glu Ser Ile Ser Val Val Arg Cys Val Glu Leu Phe Glu Ala Pro 355 360 365 Val Glu Cys Glu Glu Glu Glu Glu Val Glu Glu Glu Lys Gly Ser Phe 370 375 380 Cys Ala Ser Pro Glu Ser Ser Arg Asp Asp Phe Gln Glu Gly Arg Glu 385 390 395 400 Gly Ile Val Ala Arg Leu Thr Glu Ser Leu Phe Leu Asp Leu Leu Gly 405 410 415 Glu Glu Asn Gly Gly Phe Cys Gln Gln Asp Met Gly Glu Ser Cys Leu 420 425 430 Leu Pro Pro Ser Gly Ser Thr Ser Ala His Met Pro Trp Asp Glu Phe 435 440 445 Pro Ser Ala Gly Pro Lys Glu Ala Pro Pro Trp Gly Lys Glu Gln Pro 450 455 460 Leu His Leu Glu Pro Ser Pro Pro Ala Ser Pro Thr Gln Ser Pro Asp 465 470 475 480 Asn Leu Thr Cys Thr Glu Thr Pro Leu Val Ile Ala Gly Asn Pro Ala 485 490 495 Tyr Arg Ser Phe Ser Asn Ser Leu Ser Gln Ser Pro Cys Pro Arg Glu 500 505 510 Leu Gly Pro Asp Pro Leu Leu Ala Arg His Leu Glu Glu Val Glu Pro 515 520 525 Glu Met Pro Cys Val Pro Gln Leu Ser Glu Pro Thr Thr Val Pro Gln 530 535 540 Pro Glu Pro Glu Thr Trp Glu Gln Ile Leu Arg Arg Asn Val Leu Gln 545 550 555 560 His Gly Ala Ala Ala Ala Pro Val Ser Ala Pro Thr Ser Gly Tyr Gln 565 570 575 Glu Phe Val His Ala Val Glu Gln Gly Gly Thr Gln Ala Ser Ala Val 580 585 590 Val Gly Leu Gly Pro Pro Gly Glu Ala Gly Tyr Lys Ala Phe Ser Ser 595 600 605 Leu Leu Ala Ser Ser Ala Val Ser Pro Glu Lys Cys Gly Phe Gly Ala 610 615 620 Ser Ser Gly Glu Glu Gly Tyr Lys Pro Phe Gln Asp Leu Ile Pro Gly 625 630 635 640 Cys Pro Gly Asp Pro Ala Pro Val Pro Val Pro Leu Phe Thr Phe Gly 645 650 655 Leu Asp Arg Glu Pro Pro Arg Ser Pro Gln Ser Ser His Leu Pro Ser 660 665 670 Ser Ser Pro Glu His Leu Gly Leu Glu Pro Gly Glu Lys Val Glu Asp 675 680 685 Met Pro Lys Pro Pro Leu Pro Gln Glu Gln Ala Thr Asp Pro Leu Val 690 695 700 Asp Ser Leu Gly Ser Gly Ile Val Tyr Ser Ala Leu Thr Cys His Leu 705 710 715 720 Cys Gly His Leu Lys Gln Cys His Gly Gln Glu Asp Gly Gly Gln Thr 725 730 735 Pro Val Met Ala Ser Pro Cys Cys Gly Cys Cys Cys Gly Asp Arg Ser 740 745 750 Ser Pro Pro Thr Thr Pro Leu Arg Ala Pro Asp Pro Ser Pro Gly Gly 755 760 765 Val Pro Leu Glu Ala Ser Leu Cys Pro Ala Ser Leu Ala Pro Ser Gly 770 775 780 Ile Ser Glu Lys Ser Lys Ser Ser Ser Ser Phe His Pro Ala Pro Gly 785 790 795 800 Asn Ala Gln Ser Ser Ser Gln Thr Pro Lys Ile Val Asn Phe Val Ser 805 810 815 Val Gly Pro Thr Tyr Met Arg Val Ser 820 825 <210> 3 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 3 gaa att gtg ttg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt agc agc agc 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc ttt ggt gca tcc agc agg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt 192 Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca gtg tat tac tgt cag cag tat ggt agc tca cct 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 ccg tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa 327 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 4 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 5 gaa att gtg ttg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt agc aac agc 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt gca tcc agc agg gcc cct ggc atc cca gac agg ttc agt 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca gtg tat tac tgt cag cag tat gat cac tca gca 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala 85 90 95 ggg tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa 327 Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 6 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala 85 90 95 Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 7 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 7 gaa att gtg ttg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct ccg ggg 48 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag act gtt aac agc gac 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Asn Ser Asp 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa ccg ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt gca tcc agc agg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca gtc tat tac tgt cag cag tat ggt agg tca cct 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Pro 85 90 95 ccg tgg acg ttc ggc caa ggg acc aaa gtg gat atc aaa 327 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Asn Ser Asp 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 9 gaa att gtg atg acg cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt agc agc gac 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt gca tct agc agg gcc tct ggc atc cca gac agg ttc agt 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg ttt ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca ata tat tac tgt cag cag tat ggt agc tca cct 288 Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 ccg tgg acg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gaa atc aaa 327 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 10 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 11 gat att gtg ctg acc cag tct cca gcc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt aac agc aac 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Asn 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt aca tcc tac agg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt 192 Ile Tyr Gly Thr Ser Tyr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc acc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca gtg tat tac tgt cag cag tat ggt agc tca cca 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 ccg tgg acg ttc ggc caa ggg aca cga ctg gag att aaa 327 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 12 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Tyr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Light chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(327) <400> 13 gat att gtg ctg acg cag act cca gcc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt ggc agc agc 96 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser 20 25 30 tac tta gcc tgg tac cag cag aga cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 atc tat ggt gca tcc agc agg gcc act ggc atc ccg gac agg ttc agt 192 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acg atc agc aga ctg gag 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 cct gaa gat ttt gca gtg tat tat tgt cag cag tat gga agt tca cct 288 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 ccg tgg atg ttc ggc caa ggg acc aag gtg gag atc aaa 327 Pro Trp Met Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 14 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Met Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 15 gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta cat cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca ggc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca aac tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac atg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tac ttt gac tac tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 17 gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta cat cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca ggc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca agc tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg agt gcc gag gac atg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tac ttc acc cac tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val 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ctg aga gcc gag gac atg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tac ttc ccg tgg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 23 gag gtt cag ctg gtg cag tct ggg gga ggc ttg gta cat cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca ggc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca aac tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac atg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tac ttc acg agg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Thr Arg 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gac atg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tac ttc ccg tgg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> 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Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Trp Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 57 gag gtt cag ttg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca aac tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac acg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tgg ttc ccg tgg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Trp Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Trp Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 59 gag gtt cag ttg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca agc tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac acg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tgg tac ccg tgg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Trp Tyr Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 60 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 60 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Trp Tyr Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 61 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(345) <400> 61 gag gtt cag ttg gtg gag tct ggg gga ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc agt aga aat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 gct atg ttc tgg gtt cgc cag gct cca gga aaa ggt ctg gag tgg gta 144 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 tca ggt att ggt act ggt ggt gcc aca aac tat gca gac tcc gtg aag 192 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc ttg tat ctt 240 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac acg gct gtg tat tac tgt gca 288 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 aga ggg agg tac tgg tac ccg tgg tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc 336 Arg Gly Arg Tyr Trp Tyr Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 gtc tcc tca 345 Val Ser Ser 115 <210> 62 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Construct <400> 62 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn 20 25 30 Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Arg Tyr Trp Tyr Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 63 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 27A1 light chain variable region <400> 63 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 64 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 27A1 heavy chain variable region <400> 64 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Trp Phe Glu Gly Asn Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 5A1 light chain variable region <400> 65 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 66 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 5A1 heavy chain variable region <400> 66 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Arg Pro Met Val Arg Gly Val Ile Ile Asp Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 67 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 63 light chain variable region <400> 67 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 68 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 63 heavy chain variable region <400> 68 Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Phe Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Asn Arg Gly Phe Phe His Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 69 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 1B7 light chain variable region <400> 69 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Arg 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ile Ala Ser Ile Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 70 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> N is A or G <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> N is G or T <400> 70 gtcgacgccg ccaccatgga nttngggctg agctgg 36 <210> 71 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 71 cttgaccagg cagcccaggg c 21 <210> 72 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 72 atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc ttcatc 36 <210> 73 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 73 gtttaaacgc ggccgcggat cctaacactc tcccctgttg aagctcttt 49 <210> 74 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 74 gtcgacgccg ccaccatgga aaccccagcg cagcttctct tcctcctgct actctggctc 60 ccagataccg ctagcgaaat tgtgttgacg cagtctcca 99 <210> 75 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 75 tggagactgc gtcaacacaa tttcgctagc ggtatctggg agccagagta gcaggaggaa 60 gagaagctgc gctggggttt ccatggtggc ggcgtcgac 99 <210> 76 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primers <400> 76 atggggtcaa ccgccatcct tggcctcctc ctggctgttc tccaaggagt cgctagc 57 <210> 77 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

Claims (47)

  1. a. 경쇄 CDR1이 서열번호 6의 잔기 24 내지 35를 포함하고,
    b. 경쇄 CDR2가 서열번호 6의 잔기 51 내지 57를 포함하고,
    c. 경쇄 CDR3이 서열번호 6의 잔기 90 내지 99를 포함하는, 경쇄 가변 도메인 및
    서열번호 16, 18, 20, 22, 26, 28, 30, 32, 34, 38, 40 및 42로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는, IL-4 수용체에 결합하는 분리된 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    a) 경쇄 FR1이 서열번호 6의 잔기 1-23의 서열을 포함하거나,
    b) 경쇄 FR2가 서열번호 6의 잔기 36-50의 서열을 포함하거나,
    c) 경쇄 FR3이 서열번호 6의 잔기 58-89의 서열을 포함하거나,
    d) 경쇄 FR4가 서열번호 6의 잔기 100-109의 서열을 포함하는 항체.
  3. 제2항에 있어서,
    a) 경쇄 FR1이 서열번호 6의 잔기 1-23을 포함하고,
    b) 경쇄 FR2가 서열번호 6의 잔기 36-50을 포함하며,
    c) 경쇄 FR3이 서열번호 6의 잔기 58-89를 포함하고,
    d) 경쇄 FR4가 서열번호 6의 잔기 100-109를 포함하는 항체.
  4. 삭제
  5. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 사람 항체, 사람화 항체 또는 키메라 항체인 항체.
  6. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체인 항체.
  7. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, IgD, IgE, IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 및 힌지 영역내에 H쇄내 이황화 결합 항체를 형성하는 경향을 경감시키는 점 돌연변이 (CPSCP → CPPCP)를 보유하는 IgG4로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 항체.
  8. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 따른 항체의, Fab, F(ab')2, scFv, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody) 및 테트라바디(tetrabody)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 IL-4 수용체 결합 부분을 포함하는 분리된 폴리펩타이드.
  9. 삭제
  10. 제1항의 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 상보체를 포함하는 분리된 핵산.
  11. 제10항에 있어서, 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산.
  12. 제10항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
  13. 제12항에 있어서, 발현 벡터인 벡터.
  14. 제10항에 따른 핵산을 포함하는 분리된 세포.
  15. 제14항에 있어서, 하이브리도마인 분리된 세포.
  16. 제14항에 있어서, 형질전환된(transgenic) 세포인 분리된 세포.
  17. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 따른 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산 및 당해 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를, 당해 세포가 상기 경쇄 및 중쇄를 발현하도록 하고 상기 경쇄 및 중쇄가 당해 항체로 어셈블리(assembly)될 수 있도록 하는 조건하에 배양하는 단계 및 상기 항체를 당해 세포로부터 분리시키는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 따른 항체를 발현시키는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 세포가 하이브리도마인 방법.
  19. 제17항에 있어서, 세포가 형질전환된 세포인 방법.
  20. IL-4 수용체를 발현하는 세포와 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 따른 항체를, 당해 항체가 당해 IL-4 수용체에 결합되도록 하는 조건하에 접촉시킴을 포함하고, 여기서 당해 항체의 IL-4 수용체로의 결합이 IL-4 수용체를 통한 시그널 전달(signal transduction)을 억제하는, IL-4 수용체의 시험관내 억제 방법.
  21. IL-4 수용체 알파를 발현하는 세포와 제8항에 따른 폴리펩타이드를, 당해 폴리펩타이드가 당해 IL-4 수용체 알파에 결합되도록 하는 조건하에 접촉시킴을 포함하고, 여기서 당해 폴리펩타이드의 상기 IL-4 수용체로의 결합이 IL-4 수용체를 통한 시그널 전달을 억제하는, IL-4 수용체의 시험관내 억제 방법.
  22. 제20항에 있어서, 세포가 사람 세포인 방법.
  23. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 따른 항체와 부형제, 희석제 또는 완충제를 포함하는, 천식 치료용 약제학적 조성물.
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 제1항에 있어서, 쥐 IL-4 수용체에는 결합하지 않는 항체.
  30. 제1항에 있어서, 사람 IL-4 수용체의 도메인 I에 결합하는 항체.
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
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