상기한 바와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 백화사설초 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 백화사설초 추출물은 전체 조성물의 총중량을 기준으로 0.0001중량% 내지는 10중량%로 함유되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 백화사설초 추출물은 백화사설초를 분쇄하는 단계(a); 상기 단계(a)의 분쇄물을 탄소수 1~4개의 무수, 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 아세톤, 에칠아세테이트, 디에칠에테르, 벤젠, 클로로포름, 또는 헥산으로 구성되는 추출용매 가운데 1종 이상 선택하여 냉침 또는 온침하여 추출하는 단계(b); 및 상기 단계(b)의 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 적정온도로 감압 농축하는 단계(c)에 의하여 얻어지는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 화장용 세정제 이외의 피부에 적용되는 모든 화장료 조성물 또는 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 백화사설초 추출물을 함유하고 주름 개선 기능을 가지는 것을 특징으로 한다.본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은, 백화사설초 추출물을 함유하고 콜라겐 생합성 촉진 기능을 가지는 것을 특징으로 한다.본 발명에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 항염증 기능을 나타내어 피부활력을 증가시키는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명의 구성에 대하여 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 야생 또는 재배된 백화사설초를 무수 또는 함수의 저급 알코올, 아세톤에서 1차 추출한 후 에칠아세테이트, 디에칠에테르, 벤젠, 클로로포름, 헥산 등의 저극성 용매로 재추출하여 활성성분의 함량을 증대시키고 불순물을 제거하여 안정도가 향상됨과 동시에 효능이 극대화된 추출물을 피부 외용제, 예컨대 가용화기술을 이용한 유연화장수에서부터 유화기술을 응용한 영양화장수, 크림, 에센스 등에 첨가하는 것이다.
본 발명을 좀더 상세히 설명하면 다음과 같다. 백화사설초를 자연건조 또는 어떠한 방법으로든 잘게 분쇄하고 분쇄물 건조중량에 대해 추출 용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 1,3-부틸렌 글리콜,노말 프로판올, 이소 프로판올, 노말 부탄올 등의 극성용매와 이것들의 혼합용매를 5~20배 부피량을 가하여 침적 추출하여 여과한 후 여액을 감압농축한다. 농축액에 물을 가하여 분산시킨 후 분산액에 동량의 에칠아세테이트, 클로로포름, 디에칠에테르 등의 저극성 유기용매를 가하고 진탕한다. 유기층을 분리한 후 감압농축하여 활성이 우수한 추출물을 얻는다. 추출방법으로는 냉침과 페르콜레이션의 경우는 12~96 시간 정도, 또는 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 에칠아세테이트 또는 디에칠에테르를 용매로 하여 4~25℃ 상온에서 3~20일 방치 숙성시켜서 유효성분을 추출할 수도 있다. 온침의 경우는 사용하는 용매 등의 종류와 온도에 따라서 상이하나 적당한 것은 용매의 환류 온도에 가까운 온도로 5~24시간 정도를 행하는 것이 좋다.
상기와 같이 얻어진 백화사설초 추출물은 일반적으로 극성용매로 1차 추출한 것에 비해 매우 강력한 항노화를 나타내며 피부 외용 연고나 로션 등의 피부 외용제로 제조되어 사람의 피부에 도포되었을 때 피부 항산화효과가 매우 우수하다. 또한 어떠한 부작용도 유발하지 않아서 백화사설초 추출물이 안전하고 효과가 뛰어난 피부 항노화 억제제임을 알 수 있다.
상기와 같이 제조된 백화사설초 추출물은 조성물의 총중량을 기준으로 0.0001~10중량%, 바람직하게는 0.0005~5.0중량%가 적당하다. 0.0001중량% 이하의 농도에서는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없었고, 10.0중량% 농도 이상에서는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않았다.
본 발명에 따른 조성물은 화장품학 및 피부과학적으로 허용가능한 매질 및/또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 폼의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.
하기에서 실시예, 실험예 및 제조예를 통하여 본 발명을 더 구체적으로 설명한다. 그러나 아래의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 여기에 한정되지 않음을 밝혀둔다.
또한 하기의 실시예를 통하여 본 발명의 조성물의 제조방법을 더욱 상세히 설명하도록 한다.
<실시예 1>
백화사설초를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 세말화한 백화사설초 가루 100g을 50% 에탄올 수용액 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4~15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 에칠아세테이트 1리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 상층(에칠아세테이트층)을 취한다. 하층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 에칠아세테이트로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 건조중량 18.2g을 얻었다.
<실시예 2>
백화사설초를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분쇄한 백화사설초 가루 100g을 에탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4~15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 60℃로 감압 농축한다. 이를 물 50㎖에 분산한 후 에틸 아세테이트 300㎖로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결 건조하여 건조중량 19.4g을 얻었다.
<실시예 3>
백화사설초를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 세말화한 백화사설초 가루100g을 노말 부탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4~15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 80℃로 감압 농축한다. 이를 물 50㎖에 분산한 후 에틸 디클로로 메탄 300㎖로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결 건조하여 건조중량 16.8g을 얻었다.
<실시예 4>
백화사설초를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 세말화한 백화사설초 가루 100g을 에탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4~15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 건조중량 20.9g을 얻었다.
<실시예 5>
백화사설초를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 세말화한 백화사설초 가루 100g을 디에칠에테르 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4~15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 건조중량 21.2g을 얻었다.
백화사설초 추출물에 대하여 피부 개선 및/또는 활성화효과를 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 백화사설초 추출물이 주름개선효과, 콜라겐 생합성 촉진효과, 항염증효과를 갖는다는 것은 하기 실험에 의하여 나타내었다.
<실험예 1: 주름개선효과>
백화사설초 추출물의 주름개선효과로서는 피부 세포(skin cell) 증식효과를 보기위해 인체 정상 섬유아세포(Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(Well)에 1x104세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 24시간 배양한다. 배양후 상기에서 제조한 실시예 1 내지 5 의 백화사설초 추출물을 최종 농도 500㎍/㎖ 되도록 조정한 혈청이 없는 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 3-(4,5-디메틸씨아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움(MTT : (3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium : 5㎎/㎖) 10㎕씩 첨가하고 4시간 방치 후, 배지 부분을 버린다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭사이드용액을 가하여 마이크로 플레이트 리더로 570㎚ 에서의 흡광도를 측정하였다.
상기 과정을 실시하여 하기 수학식 1로부터 세포증식효과를 구해 그 결과를 표 1 에 나타내었다. 세포증식효과(%)={(추출물처리시의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도}x100
시료(500㎍/㎖) |
흡광도(570㎚) |
세포증식효과(%) |
대조군 |
0.320 ±0.008 |
- |
실시예 1 |
0.584 ±0.012 |
82.5% |
실시예 2 |
0.564 ±0.003 |
76.2% |
실시예 3 |
0.557 ±0.003 |
74.1% |
실시예 4 |
0.481 ±0.008 |
50.3% |
실시예 5 |
0.495 ±0.015 |
54.7% |
상기 표 1에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따라 백화사설초 추출물이 첨가된 인체 정상 섬유아세포에서 세포증식효과가 우수함을 알 수 있다.
<실험예 2: 콜라겐 생합성 촉진효과>
백화사설초 추출물의 콜라겐 생합성 촉진효과를 알아보기 위해, 인체 정상 섬유아세포를 96-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고(2x10 세포/웰) 디엠이엠 배지에서 24시간 배양한다. 배양 후 상기에서 제조한 실시예 1 내지 5 의 백화사설초 추출물을 500㎍/㎖의 농도로 준비하여 혈청이 함유되지 않은 디엠이엠 배지와 함께 넣고 48시간 배양한다. 배양 마지막 24시간전에 아스코르빅산 50㎍/㎖을 첨가하여 콜라겐 합성을 촉진시킨다. 배양 후 각 웰을 세척하고 혈청이 함유되지 않은 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 배양 후 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 타입 아이 씨-펩타이드(PICP, Type I C-Peptide)양을 키트(Kit, Takara, Kyoto, Japan)를 이용하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였으며 PICP 양은 ng/2x104세포로 환산하여 콜라겐의 합성 효과를 하기 표 2 에 나타내었다.
시료(500㎍/㎖) |
콜라겐 합성량(ng/2x104) |
대조군 |
149 |
실시예 1 |
288 |
실시예 2 |
272 |
실시예 3 |
269 |
실시예 4 |
249 |
실시예 5 |
251 |
콜라겐은 피부의 결합조직의 대부분을 차지하는 생체물질로서 피부의 탄력과 관계가 있으며 노화와 더불어 그 양이 감소한다. 따라서 콜라겐의 생합성 양을 증가시키면 피부의 탄력성을 증가시킬 수 있다.
<실험예 3: 항염증효과>
백화사설초 추출물의 항염증효과를 알아보기 위하여 쥐 20마리를 각 5마리씩 상기에서 제조한 실시예 1 내지 5 의 백화사설초 추출물 1.0중량%를 처리하는 시료군과 인도메타신(Indomethacin) 1.0중량%를 처리하는 비교군, 그리고 아라키돈산만을 처리하는 대조군으로 나누어 실험을 실시하여 쥐 귀두께의 평균치를 측정하였다. 먼저 백화사설초 추출물을 처리하는 시료군과 인도메타신을 처리하는 비교군은 시료를 20㎕/ear로 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하였으며, 아라키돈산만을 처리하는 대조군은 1일 1회 4일간 용매인 동량의 에탄올만 도포하였다. 마지막 도포 1시간 후 모든 군에 아라키돈산을 2㎎/ear로 도포하여 인위적으로 쥐 귀에 부종을 유도하고, 1시간 후 귀의 부종 정도를 마이크로미터를 사용하여 시료군과 비교군, 그리고 대조군의 쥐 귀를 3회씩 반복하여 측정하여 귀두께의 변화를 기록하였다. 항염증효과는 아라키돈산만을 처리한 대조군을 기준으로 부종억제정도로 판정하였다(수학식 2 참조).
억제율(%) = (A-B)/Ax100
A : 대조군 쥐 귀의 두께변화
(아라키돈산 처리 후 귀의 두께 - 아라키돈산 처리 전 귀의 두께)
B : 시료군 또는 비교군 쥐 귀의 두께변화
(아라키돈산 처리 후 귀의 두께 - 아라키돈산 처리 전 귀의 두께)
상기 측정 결과는 하기 표 3 에 나타내었다.
국소적용에 의한 귀두께 및 염증 억제율 |
|
시료 |
농도(%) |
아라키돈산 처리전 귀두께(㎕) |
아라키돈산 처리후 귀두께(㎕) |
억제율(%) |
시료군 |
실시예 1 |
1.0 |
288 |
453 |
30.2 |
시료군 |
실시예 2 |
1.0 |
285 |
470 |
27.4 |
시료군 |
실시예 3 |
1.0 |
275 |
466 |
25.1 |
시료군 |
실시예 4 |
1.0 |
277 |
484 |
18.8 |
시료군 |
실시예 5 |
1.0 |
280 |
491 |
20.9 |
비교군 |
인도메타신 |
1.0 |
288 |
422 |
46.6 |
대조군 |
아라키돈산 |
2㎎/ear |
294 |
549 |
- |
상기 표 3 에서 보는 바와 같이, 본 발명에 의한 백화사설초 추출물은 염증억제효과를 보였다.
상기와 같은 화장품적 효능이 있는 백화사설초 추출물을 가용화제형과 유화제형에 각각 도입하여 아래와 같은 제형을 만드는 것을 예시함으로써 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 제조예에만 한정되는 것은 아니다.
<제조예 1-3: 유화 제형>
원료명 |
제조예1 |
제조예2 |
제조예3 |
1. 스테아린 산 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
2. 스테아릴 알콜 |
0.4 |
0.4 |
0.4 |
3. 글리세릴 모노스테아레이트 |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
4. 밀납 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
5. 폴리옥시에틸렌솔비탄모노라우린산에스테르 |
2.5 |
2.5 |
2.5 |
6. 파라옥시안식향산 메틸 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
7. 파라옥시안식향산 프로필 |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
8. 세틸에틸헥사노에이트 |
2 |
2 |
2 |
9. 트리글리세라이드 |
5 |
5 |
5 |
10. 사이클로메티콘 |
5 |
5 |
5 |
11. 증류수 |
to 100 |
to 100 |
to 100 |
12. 농글리세린 |
5 |
5 |
5 |
13. 트리에탄올아민 |
0.15 |
0.15 |
0.15 |
14. 폴리아크릴산 중합체 |
0.12 |
0.12 |
0.12 |
15. 색소 |
0.0001 |
0.0001 |
0.0001 |
16. 향 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
17. 백화사설초 추출물 |
0.0001 |
1 |
10 |
유화제형의 제조방법은 다음과 같다.
1) 1 내지 9 의 원료의 혼합물을 65~70℃로 가열하였다.
2) 10 의 원료를 상기 1) 의 혼합물에 투입하였다.
3) 11 내지 13 의 원료의 혼합물을 65~70℃로 가열하여 완전히 용해시켰다.
4) 65~70℃로 가열하면서 상기 2) 의 혼합물을 상기 3) 의 혼합물에 서서히 첨가하면서 rpm 8,000에서 2~3분간 유화시켰다.
5) 14 의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 4) 의 혼합물에 첨가하고 2분간 더 유화시켰다.
6) 15 내지 17 의 원료를 각각 평량한 후 상기 5) 의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.
7) 상기 6) 의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25~35℃로 냉각시켜, 유화제형을 제조하였다.
<제조예 4-6: 가용화 제형>
원료명 |
제조예4 |
제조예5 |
제조예6 |
1. 정제수 |
to 100 |
to 100 |
to 100 |
2. 농글리세린 |
3 |
3 |
3 |
3. 1,3-부틸렌글리콜 |
3 |
3 |
3 |
4. EDTA-2Na |
0.01 |
0.01 |
0.01 |
5. 색소 |
0.0002 |
0.0002 |
0.0002 |
6. 백화사설초 추출물 |
0.001 |
1 |
10 |
7. 알코올(95%) |
10 |
10 |
10 |
8. 파라옥시안식향산 메틸 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
9. 폴리옥시에틸렌하이드로제네이디트에스테르 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
10. 향 |
0.1 |
0.1 |
0.1 |
11. 사이클로메티콘 |
- |
- |
0.1 |
가용화 제형의 제조방법은 다음과 같다.
1) 2 내지 6의 원료를 상기 1의 정제수에 넣고 아직믹서를 이용하여 용해시켰다.
2) 8 내지 11의 원료를 상기 7의 알코올에 넣고 완전용해시켰다.
3) 상기 2)의 혼합물을 상기 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시켰다.
<실험예 4: 보존 안정성>
상기에서 제조한 제조예 1 내지 6 의 제형에 대하여 화장품으로서 보존 안정성을 평가하였다. 보존 안정성을 확인하기 위하여 온도별 변화에 따른 안정성을 조사하고, 그 결과를 하기 표 6 에 나타내었다.
상기 표 6의 결과로부터, 본 발명에 따른 제형은 보존 안정성이 우수함을 알 수 있었다.