KR20080093500A - 노루오줌 추출물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 노루오줌 추출물이 함유되어 피부 노화를 방지하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따라면, 노루오줌 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시키고 뛰어난 항산화 효과를 발휘하여 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시켜 피부 노화를 방지한다.

노루오줌, 피부, 노화, 주름, 탄력, 콜라겐, 인테그린

Description

노루오줌 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물 {COSMETIC COMPOSITIONS FOR PREVENTING SKIN AGING COMPRISING EXTRACT ASTILBE CHINENSIS VAR. DAVIDII}

본 발명은 노루오줌 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 노루오줌 추출물이 함유되어 피부 세포의 증식을 촉진시키고, 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며, 인테그린의 발현을 증진시키고, 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선을 통해 피부 노화를 효과적으로 방지하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 가장 큰 기관으로서 전체 인체 부피의 약 16%를 차지하고 있고 외부환경과 직접 접해 있으면서 인체 안으로 침입하려는 치명적인 많은 유해인자, 예를 들면, 온도, 습도 및 자외선 등으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다. 그러나, 나이가 들어감에 따라 각종 오염물질, 강한 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등으로 인해 피부 세포들이 손상을 입게 되고, 세포 증식이 제대로 이루어지지 않게 되어 피부에 주름, 탄력 손실 및 각질화 등이 발생한다.

피부의 노화는 크게 내인적 노화(intrinsic aging)와 외인적 노화(extrinsic aging)로 대별된다(Cosmetics & Toiletories, 111:31-37(1996)). 내인적 노화는 나이가 들어감에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현상으로 임상학적으로 탄력이 감소하고, 피부결이 거칠어지며, 깊은 주름이 생기며 색소가 침착되는 특징이 있다(Arch Dermatol., 130:87-95(1994)). 외인적 노화는 자외선, 활성 산소종(reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 말한다. 이러한 요인들에 의해 피부의 노화가 급속히 진행되며, 그 결과 피부 표면에 거친 주름이 생성되고 탄력이 현저히 감소하게 된다.

현재, 피부의 노화 기작을 규명하기 위한 여러 연구들이 진행되어 여러 가지 피부 노화의 원인들이 밝혀졌다. 피부가 온도의 변화, 습도의 저하 또는 바람 등에 의해 건조하게 되면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 생리 활성이 저하되어 노화가 촉진된다. 또한, 유해 활성산소종 또는 자유 라디칼에 피부가 노출되면 체내의 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 피부를 구성하는 여러 단백질들의 변형을 유발하게 된다.

한편, 피부 진피의 대부분(피부 전체 건조 중량의 약 70-80%)을 차지하는 콜라겐과 신축성이 큰 엘라스틴 단백질은 섬유아세포에서 생성되는 주요 단백질로 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다(Journal of the american academy of dermatology, 21:610-613(1989)). 콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다. 콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데 이들 중에서, 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV이다. 콜라겐 타입 I과 III는 진피층의 세포간질의 구성성분을 이루고 콜라겐 타입 IV는 DEJ (Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다. 콜라겐 타입 II는 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 피부세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다. 피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부 노화가 가속화된다. 또한 콜라게네이즈의 발현량과 활성 역시 피부 노화를 가속화시키는 주요 요인이다.

주름 생성 및 피부 탄력의 저하는 진피층 내의 매트릭스 구조를 형성하고 있는 콜라겐 및 엘라스틴 등의 양뿐만 아니라 상기 성분의 조직화된 상태 또는 매트릭스와 피부 세포 간의 상호 작용 정도에 의해서도 영향을 받는다.

또한, 피부 세포에 존재하는 막 단백질의 한 종류인 인테그린은 피부 세포간 접착 및 세포-단백질 간의 상호 작용에 중요한 역할을 하며, 결과적으로 피부 탄력에 영향을 미친다. 인테그린의 발현 정도가 세포 접착 정도, 즉 피부 탄력과 연관되어 있다는 것이 보고되어 있는데, UV-A 및 UV-B 조사를 통해 노화가 유도된 섬유아세포 표면의 인테그린의 발현 정도를 측정하면 조사된 세포의 인테그린 발현 정도가 조사되지 않은 세포의 인테그린 발현 정도보다 떨어진다고 보고되고 있다(Laetitia Moreau, Cosmetics ＆Toiletries, 118(1):75-84 2003).

콜라겐 합성 촉진물질로 종래에는 레티노인산(retinoic acid), 표피성장인자(Epidermal growth factor: EGF), TGF(trans- forming growth factor, 발암증식 인자 Cardinale G. et al., Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974), 동물 태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(betulinic acid(JP8-208424)), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등이 알려져 있다. 특히 표피성장인자는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 세포증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손 시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 상처치유 효과가 우수하다. 또한 레티놀은 콜라겐 합성과 분해억제에 매우 효과적으로 작용하여 피부 주름 개선 효과를 발휘하는 것으로 미국 특허 제4,603,146호 및 제4,877,805호 등에 제시되어 있다.

그러나 레티노인산의 경우 불안정하고, 피부 적용 시 자극, 발적 등의 안정성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다.

따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성능 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제의 개발이 절실히 요망되고 있다.

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 피부에 자극 없이 안정하게 적용될 수 있으며, 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시키고 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시켜 피부 노화를 방지할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 노루오줌 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 노루오줌 추출물은 ⅰ) 피부 세포의 증식 촉진, ⅱ) 콜라겐의 합성 촉진, ⅲ) 콜라게네이즈의 억제, ⅳ) 인테그린 발현 증진, ⅴ) 항산화 작용, 또는 ⅵ) 이들의 조합의 작용을 나타내는 유효성분으로 함유된다. 이때, 상기 노루오줌 추출물은 조성물 총 중량에 대해서 0.001중량% ~ 20.0중량%로 함유되는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르면, 노루오줌 추출물은 피부 자극이 없이 안정하며, 피부에 침투되어 피부 세포의 증식 촉진, 콜라겐의 합성 촉진, 콜라게네이즈의 억제, 인테그린 발현 증진, 및 항산화 작용 등의 효과를 가져 피부의 주름과 탄력을 개선하여 피부 노화를 효과적으로 방지하고 건강한 피부를 유지시킨다.

이하 본 발명을 상세히 설명하다.

본 발명자들은 천연에서 자생하는 동식물들을 대상으로 피부 노화 효능 물질을 탐색하는 연구를 수행하였고, 그 결과 노루오줌 추출물이 피부 세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성 촉진 및 분해 억제, 인테그린의 발현 증진 및 항산화 효능이 뛰어난 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

노루오줌(Astilbe chinensis var. davidii)은 범의귀과에 속하는 여러해살이풀로서 전국의 산골짜기에서 흔히 볼 수 있고 높이는 30~70cm이고 긴 갈색털이 있으며, 근경은 굵고 옆으로 짧게 뻗는다. 잎은 3개씩 2~3회 갈라지며, 작은 잎은 타원형, 길이 3~8cm 나비 2~4cm, 종이처럼 얇고 가장자리에 겹톱니 또는 결각상의 톱니가 있고 잎자루가 길다. 꽃은 7~8월에 피고 홍자색, 줄기끝의 원추꽃차례에 길 이 30cm 정도로서 많은 꽃이 달리고, 화축에는 갈색 털이 많고, 꽃받침은 5개로 갈라지고 갈라진 조각은 달걀모양이며 꽃잎은 5개로서 선형이고 수술은 10개이며 암술대는 2개이고 삭과는 길이 3~4mm이다. 이러한 노루오줌의 전초(全草)를 소승마(小升麻) Astilbes Herba라하고 뿌리는 적승마(赤升麻) Astilbe Radix라고 해서 약용에 이용되는데 혈액순환을 좋게 하고, 어혈(瘀血)을 풀어주며, 열을 내리고, 독을 풀어주며, 경련을 멎게 하고, 통증을 멎게 하는 효능이 있어서 과로로 오는 병, 근육과 뼈마디가 시리고 아픈 증상, 타박상, 관절통, 수술 후 통증, 뱀에게 물린 독을 푸는 데 사용한다(한국의 약용식물, 교학사, 2000, p204, 배기환저). 민간에서는 적승마(赤升麻)라 불리는 이것의 근경을 해열, 진통, 소염 등에 사용하였고 소승마(赤小麻)라고 불리는 땅 위에서 자라는 부분은 해열, 진해 작용이 있으므로 감기로 인한 열, 기침, 두통과 몸살 기운이 있을 때 처방하고 사용되었다. 현재 보고된 바에 의하면 전초에는 시안화수소산, 꽃에는 케르세틴 그리고 근경에는 베르게닌과 탄닌 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 이 속(屬)에 속하는 식물로는 그 밖에 진퍼리노루오줌(A. divaricata), 숙은노루오줌(A. koreana), 외잎승마(A. simplicifolia) 등이 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 위와 같은 노루오줌 추출물을 함유하는 것이면 본 발명에 포함한다. 이때, 노루오줌 추출물은 피부 노화를 방지하는 유효성분으로 함유된다. 상기 노루오줌 추출물은 노루오줌의 뿌리를 추출용매를 사용하여 추출한 것이 바람직하다. 노루오줌 추출물은 당업계에서 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 아세톤, (c) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름, 및 (f) 1,3-부틸렌글리콜로 이루어진 군중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 혼합 추출 용매를 이용하여 추출, 수득할 수 있다.

본 발명에서 상기 노루오줌 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 것이면 본 발명에 포함한다. 또한, 본 발명에서 상기 노루오줌 추출물은 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다.

구체적으로, 본 발명에 사용되는 노루오줌 추출물은 추출 용매에 의한 추출물을 그대로 사용하거나, 추출한 후 정제 과정, 예를 들어 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막 등의 분리막을 막 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등의 정제 과정을 추가적으로 실시하여 사용할 수 있다. 아울러, 상기 노루오줌 추출물은 감압 증류 및 동결 건조(또는 분무 건조 등) 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조된 다음, 조성물에 그대로 함유되거나, 또는 용매에 희석되어 함유될 수 있다.

상기 노루오줌 추출물은, 바람직하게는 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.001중량% ~ 20.0중량%로 함유된다. 이때, 노루오줌 추출물이 0.001중량% 미만으로 함유된 경우에는 세포 증식 촉진, 콜라겐 합성 촉진, 콜라겐 분해 억제, 인테그린 발현 증진, 항산화 효과 등의 피부 노화 방지 효과가 미미하며, 20.0 중량%를 초과하여 투입할 경우에는 초과 투입에 따른 상승효과가 적고 경제적으로 바람직하지 않 을 수 있다. 더욱 바람직하게는, 상기 노루오줌 추출물은 조성물 총 중량에 대해 0.01중량% ~ 10.0중량%로 함유된 것이 좋으며, 더더욱 바람직하게는 0.1중량% ~ 5.0중량%로 함유된 것이 좋다. 더욱 바람직하기로는 본 발명의 화장료 조성물이 상기 추출물들을 0.01 내지 10.0 중량%, 더더욱 바람직하게는 0.1-5.0 중량%를 포함하는 것이 좋다.

본 발명에 따르면, 상기 노루오줌 추출물은 피부 세포의 증식 촉진 작용, 콜라겐의 합성 촉진 작용, 콜라게네이즈의 억제 작용, 인테그린의 발현 증진 작용, 뛰어난 항산화 작용 등을 나타내어 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시켜 피부 노화를 방지한다. 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 노루오줌 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 일반적인 제형, 예를 들어 유화 제형이나 가용화 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등을 예로 들 수 있으며, 가용화 제형으로는 유연화장수를 예로 들 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡 슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 노루오줌 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등을 들 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도, 패취, 분무제 등의 제형을 포함한다.

이상에서 설명한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 노루오줌 추출물에 의해 피부의 주름과 탄력의 개선을 통해 피부 노화를 효과적으로 방지한다. 구체적으로 본 발명에 따르면, 상기 노루오줌 추출물은 피부 세포의 증식 촉진 작용, 콜라겐의 합성 촉진 작용, 콜라게네이즈의 억제 작용, 인테그린의 발현 증진 작용, 뛰어난 항산화 작용 등을 나타내어 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시켜 피부 노화를 방지한다. 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 하기의 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위해 제공되는 것으로서, 본 발명의 기술적 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[ 제조예 ]

< 노루오줌 추출물의 제조 >

노루오줌의 근경을 깨끗이 씻어 잘 말린 후 작은 조각으로 파쇄하고 에틸알코올 및 물이 7:3으로 섞여 있는 수용액에 침전시켜 5일간 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 다시 와트만 5번 여과지로 여과한 후, 회전 감압증발기로 건조하여, 건조 중량 47g/㎏을 얻었다. 건조된 노루오줌 추출 파우더를 50% 1,3-부틸렌 글리콜에 용해하여 다음과 같이 사용하였다.

[ 실험예 1]

< 피부 세포 증식 효과 실험 >

노루오줌 추출물이 피부 세포 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여 인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이어서, 상기 제조예의 노루오줌 추출물이 최종 농도 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 노루오줌 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5 mg/㎖)을 각각 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 DMSO 용액을 가하여 20분 동안 진탕 시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과를 하기 [표 1]에 나타내었다.

노루오줌 추출물(%)	흡광도(570nm)	세포증식효과(%)
대조군	0.581	-
0.01	0.655	12.7
0.05	0.723	24.4
0.1	0.834	43.5
0.5	0.964	65.9
1.0	1.027	76.8

상기 [표 1]에서 나타낸 바와 같이, 노루오줌 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 노루오줌 추출물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 섬유아세포 증식 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

[ 실험예 2]

< 콜라겐 합성 증진 효과 실험 >

인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 상기 제조예의 노루오줌 추출물이 최종 농도 0.01, 0.05 및 0.10%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 측정된 양은 ng/2x10⁴ 세포로 환산하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타나 있다.

노루오줌 추출물(%)	콜라겐 합성량(ng/2 x 104)
대조군	102
0.01	119
0.05	148
0.10	192

상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 노루오줌 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 노루오줌 추출물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 콜라겐 합성량을 보임을 알 수 있었다. 그리고 노루오줌 추출물의 농도가 증가함에 따라 향상된 합성량을 보여 노루오줌 추출물은 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 3]

< 콜라게네이즈 억제 효과 실험 >

노루오줌 추출물의 콜라게네이즈 생성 억제능을 알아보고자 다음과 같이 측정하였다.

실험은 2.5 %의 우태아 혈청이 함유된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 함유된 96웰 평판배양기 (96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 2x10⁴ 세포/웰(well)이 되도록 넣고, 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그리고 제조예의 노루오줌 추출물을 농도별로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채위하였다. 채위한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게네이즈 측정기구 (미국 아머샴파마샤 사. Catalog #: RPN 2610)를 이용하여 콜라게네이즈 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게네이즈 항체가 균일하게 도포된 96-웰 평판 (96-well plate)에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 평판 (96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시켰다. 반응액의 색깔은 노란색을 띄었으며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다. 노란색을 띈 96-웰 평판 (96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하고 콜라게네이즈의 합성 정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군의 채위된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 이와 같이, 세포에서의 콜라게네이즈 발현의 저해를 측정한 결과 in vitro 에서 실험군은 하기 [표 3]에 보인 바와 같이 콜라게네이즈 발현을 저해함을 확인하였다. 발현 저해능은 비처리군(대조군)의 합성능을 100으로 하여 대비한 것이다.

노루오줌 추출물(%)	콜라게네이즈 발현 정도(%)
대조군	100
0.01	85
0.05	75
0.10	69

상기 [표 3]에 나타난 바와 같이, 세포에서의 콜라게네이즈 발현 저해를 측정한 결과 노루오줌 추출물은 콜라네이즈의 발현을 억제함을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 4]

< 인테그린 β1 발현 증진 효과 실험 >

인체 정상 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 x 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 상기 제조예의 노루오줌 추출물이 최종 농도 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 노루오줌 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, EIA(Enzyme immnoassay)법에 따라 인테그린 β1의 발현 정도를 측정하였다(MK008 키트, Takara, 일본). 구체적으로, 원심분리로 세포를 회수하고 세포추출액을 제조한 후 항-인테그린 β1 항체가 코팅되어있는 웰에 상기 세포추출액을 처리하였다. 이차 항체를 첨가하고 4℃에서 45분간 반응시킨 후 OPD(ο-Phenylenediamine-HCl)로 검출하였다. 염색되어있는 OPD를 OPD 용해액으로 용해한 후 530nm에서 엘라이자 리더로 흡광도를 측정하여 평가하였다. 그 결과를 하기 [표 4]에 나타내었다.

노루오줌 추출물(%)	흡광도(570nm)
0.01	0.592
0.05	0.614
0.10	0.650
0.50	0.736
1.00	0.841

상기 [표 4]에 나타난 바와 같이, 노루오줌 추출물은 농도 의존적으로 세포의 접착에 중요한 작용을 수행하는 인테그린 β1의 합성을 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 5]

< 항산화 효과 실험 >

노루오줌 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여, 다음과 같이 자유라디칼 소거활성 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)을 실시하였다.

자유라디칼 소거활성 실험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299-303(1993))의 방법을 변형한 것으로써, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, 시그마사) 시약을 사용하였다.DPPH 용액(Blank인 경우는 에탄올) 150 ㎕에 상기 추출물을 다양한 농도로 제작하여, 이들을 각각 150 ㎕ 첨가하여 혼합하고, 실온에서 30분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하는 실험군을 설정하였으며, 이에 대한 대조군으로는 정제수를 이용한 경우로 설정하였다. 상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 [표 5]에 나타내었다.

노루오줌 추출물(%)	자유라디칼 소거효과(%)
0.01	18.5
0.05	30.1
0.10	48.6
0.50	69.8
1.00	86.2

상기 [표 5]에 나타낸 바와 같이, 노루오줌 추출물은 자유라디칼 소거능력이 매우 탁월하다는 것을 확인할 수 있었다.

[ 실시예 ]

노루오줌 추출물을 함유하는 화장료의 피부 주름 및 탄력 개선 효과에 대한 임상 시험을 실시하기 위해 하기 [표 6]과 같은 성분과 함량으로 화장료 조성물을 제조하였다. 구체적인 제조방법은 다음과 같다.

1) 하기 [표 6]에 나타낸 성분 1-6을 혼합, 교반하면서 70℃로 가온하여 유상 용액을 만들었다.

2) 정제수에 7-8, 10-11을 넣어 교반하면서 70℃로 가온하여 수상 용액을 만들었다.

3) 상기 2)의 수상 용액에 유상 용액인 1)과 원료 9를 혼합한 후, 유화시켜 냉각하였다.

4) 상기 3)에 원료 13, 14를 첨가하여 혼합하고 30℃까지 냉각시켜 제조하였다.

[ 비교예 ]

노루오줌 추출물을 함유시키지 않은 것을 제외하고는 상기 실시예와 동일하게 조성하였다. 본 비교예의 구체적인 성분과 함량은 하기 [표 6]과 같다.

성 분	함량(중량%)
	실시예	비교예
1. 바셀린	7.0	7.0
2. 유동파라핀	5.0	5.0
3. 밀납	2.0	2.0
4. 폴리솔베이트-60	2.0	2.0
5. 솔비탄세스퀴올레이트	2.5	2.5
6. 스쿠알란	3.0	3.0
7. 프로필렌글리콜	6.0	6.0
8. 글리세린	4.0	4.0
9. 트리에탄올아민	0.5	0.5
10. 카르복시비닐폴리머	0.5	0.5
11. 토코페롤아세테이트	0.1	0.1
12. 정제수	To 100	To 100
13. 노루오줌 추출물	2.0	2.0
14. 향, 방부제	미량	미량

[ 실험예 6]

< 피부 주름 개선 효과 실험 >

본 발명에 따라서 노루오줌 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 주름 개선 효과를 알아보고자 건강한 35세에서 50세의 여성 20명을 대상으로 측정하였다.

먼저 A와 B 두 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예를, B 그룹에는 비교예의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 3개월간 도포하게 하였다. 3개월 후 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다.

피험자의 설문은 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선, 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며, 그 결과를 하기 [표 7]에 나타내었다.

또한, 주름의 영상분석을 위해, 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후의 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다. 영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전에 대한 주름 밀도에 대한 감소율로 계산하여 하기 [표 8]에 나타내었다.

시료	개선 없음	약간의 개선	중등도의 개선	상당한 개선
실시예	1	1	4	4
비교예	7		-	-

시료	주름 밀도 감소율(%)
실시예	45
비교예	10

상기 [표 7] 및 [표 8]에 나타난 바와 같이, 노루오줌 추출물을 함유한 실시예의 경우, 비교예에 비해 피부 주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.

[ 실험예 7]

< 피부 탄력 효과 실험 >

본 발명에 따라서 노루오줌 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 탄력 증진 효과를 알아보고자 다음과 같이 측정하였다.

온도 24~26℃, 습도 75%의 조건에서 20세 이상의 건강한 여성 20명(평균연령 37세)을 A와 B 두 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예를, B 그룹에는 비교예의 제형을 눈가를 중심으로 하루 2회씩(아침 및 저녁) 12주간 도포하게 한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer MPA580, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 피부 탄력 정도를 측정하였다. 그 결과는 하기 [표 9]와 같다. 결과는 cutometer MPA580의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 나타냈으며, R8 값은 피부 점탄성(Vicoelasticity)의 성질로서 값이 클수록 피부 탄력 효과가 우수함을 의미한다.

시료	피부 탄력 효과
실시예	0.67
비교예	0.29

상기 [표 9]에 나타난 바와 같이, 노루오줌 추출물을 함유한 실시예가 비교예에 비해 피부 탄력 효과가 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 8]

< 제형 안정성 실험 >

본 발명에 따라서 노루오줌 추출물을 함유한 화장료에 대한 제형 안정성을 알아보고자 하기와 같은 방법으로 실시하였다.

먼저, 화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 실시예 및 비교예에 따른 화장료 조성물을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하였다. 그 결과는 하기 [표 10]과 같다. 이때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.

< 등급 >

0 : 변화 없음

1 : 극히 조금 분리(변색)

2 : 조금 분리(변색)

3 : 조금 심하게 분리(변색)

4 :심하게 분리(변색)

5 : 극히 심하게 분리(변색)

구 분	제형의 안정성
	실시예		비교예
	45℃	4℃	45℃	4℃
변색	0.5	0	0	0
변취	0.3	0	0	0
분리	0	0	0	0

상기 [표 10]에 나타낸 바와 같이, 실시예 및 비교예에 화장료 조성물은 45℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정하였고, 이는 노루오줌 추출물이 제형 내에서 안정한 상태로 존재함을 나타낸다.

이하에서는, 이상의 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명에 따라서 노루오줌 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제형예를 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[ 제형예 1]

< 유연화장수(스킨로션) >

하기 [표 11]에 보인 성분과 함량으로 통상의 방법에 따라 유연화장수를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
노루오줌 추출물	0.5
1,3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향, 방부제	미량
정제수	To 100

[ 제형예 2]

< 영양화장수( 밀크로션 ) >

하기 [표 12]에 보인 성분과 함량으로 통상의 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
노루오줌 추출물	1.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에이치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	To 100

[ 제형예 3]

< 영양크림 >

하기 [표 13]에 보인 성분과 함량으로 통상의 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
노루오줌 추출물	2.0
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타오인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	To 100

[ 제형예 4]

< 마사지크림 >

하기 [표 14]에 보인 성분과 함량으로 통상의 방법에 따라 마사지크림을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
노루오줌 추출물	0.5
프로필렌글리콜	6.0
글리세린0	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐 폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	To 100

[ 제형예 5]

< 팩 >

하기 [표 15]에 보인 성분과 함량으로 통상의 방법에 따라 팩을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
노루오줌 추출물	1.0
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에이치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	To 100

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 노루오줌 추출물을 함유 하여 피부 노화를 방지하는 효과를 갖는다. 구체적으로, 노루오줌 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 인테그린의 발현을 증진시키고 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시켜 피부 노화를 방지한다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 피부에 자극이 없는 안전한 물질로서, 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제 등의 제형으로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (5)

1. 노루오줌 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,

   상기 노루오줌 추출물은 조성물 총 중량에 대해 0.001 ~ 20.0중량%로 함유된 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,

   상기 노루오줌 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름 및 1,3-부틸렌글리콜로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 혼합 용매에 의해 추출된 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,

   상기 노루오줌 추출물은 ⅰ) 피부 세포의 증식 촉진, ⅱ) 콜라겐의 합성 촉진, ⅲ) 콜라게네이즈의 억제, ⅳ) 인테그린의 발현 증진, ⅴ) 항산화 작용, 또는 ⅵ) 이들의 조합의 작용을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,

   상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.