JPS5813523A - 抗腫瘍作用を有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本実、！！３−は、ヒト尿中から精製した酸性プロテア
ーゼを有効成分とする抗腫瘍作用を有する１薬組成物６
二関する。

従来より、極めて多くの抗腫傷薬が開発されて来た。こ
れらの抗腫傷薬は大別して次の２種に分類される。すな
わち、第１はいわゆる細胞毒であり、その作用−二より
直接ｃ’−瘍の増殖を抑制するものである。第２は、免
疫賦活作用を有するもので、宿主の免疫防禦機能を賦活
し、異物である腫瘍の増殖を間接的Ｃ：抑制するもので
ある。しかしながら、前者６二属する薬物は　ｍ瘍細胞
１＝対する選択毒性が充分でなく、生体の正常細胞Ｃ二
対しても毒作用′を発現するため、その使用総量にはか
なり制限が設けられている。一方、後者の免疫賦活剤は
副作用発現の頻度が少なく、安全性の高いものが多いが
０本来、腫瘍は患者の正常−鞠より派生したものである
ため、免疫防禦機能、にようては。

異物として充分認識されず、充分な抗腫瘍作用は得にく
いとｔｌう本質的な間層を有す、る。゛これらの観点か
ら１本発明者らは充分な抗腫瘍作用を有し、安全性も高
い医薬を・提供すべく、ヒ、ト由来の蛋白性物質につい
て多年１＝わたり研究を行った結果、ヒト尿中から精製
した酸性プロテアーゼに抗腫瘍作用を見出し０本発明を
完成させた。。

本発明の有効成分である酸性プロテアーゼ幌公知の酵素
であり、〔エテリントンら（Ｅｔｈｅｒ　ｉｎｇｔｏｎ
　）　。

バイオケミ力　エト　バイオフィジカ　アクタ（Ｂｉｏ
−ｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃ
ｔｓ　）　２　Ｂ　６巻、９２頁。

１９７１年〕蛋白質を精製する場合に用いる一般的方法
９例えば塩析法、無機吸着体による吸着クロマトグラフ
ィー、イオン交換樹脂によるイオン交換クロマトグラ２
ィフ０分子ふるい効果を有するゲルクロマトグラフィー
などを適宜組み合わせることによりヒト尿から採取する
ことができる。

例えば、ヒト尿をセイファーら（８ｅｉｊｆｆｅｒｓ　
）の方法〔ア、〆リカン　ジャーナル　オブ　フィジオ
Ｃ７！＞　−（Ａｍｅｒ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、　）　２０
６巻、１１０６頁。

１９６４年〕に準じ、α１Ｍ酢酸緩鈎液（ｐＨ５，５）
にて平衡化したＤｍＡｇ−セルロースカラムを通過させ
ることＣ：より、酸性“プロテアーゼを吸着させたのち
、ａｇＭの塩化す）９ウムを含む同緩衝液にて溶出する
。溶出液を鏝縮後、１９％の生理食塩水に膨潤せしめた
セファデックスＧ−１００によるゲルクロマトグラフィ
ーにてさら１：精製し。

酸処理を行うことにより本発明の酸性プロテアーゼを得
ることができる。

零法Ｃ二より得た酸性プロテアーゼは、セフアゾ１゜ ックスＧ−１ｏｎゲルクロマトグラフィーによる分析の
結果１分子量！５２０００−５８０００であり。

アンフオライン等電点電気泳動法による等電点は１〜Ｓ
であり極大吸収２７８ｎｍ、ニンヒドリン反応陽性、水
に易溶、エーテルクロロホルムに不溶である。以下、こ
の酸性プロテアーゼの有効性。

毒性、用法および用量（：ついて説明する。

実験例、ｔ　−ヒト乳癌細胞ＭＸ−１およびマウス白血
病細胞Ｌ１２１０の培養増殖におよ ぼす影響 培養可能なヒト乳癌細胞ＭＸ−１およびマウス白血病細
胞Ｌ　１’２１０を１０”７ｍ１（７）細胞濃度で。

１０％仔牛血清添加イーグル培地および被検・化合物の
希釈液を添加し、５％炭酸ガス下５７℃で４ｓ時間培養
後、生細胞数をトリパンブルー染色法により測定した。

結果は次式により増殖抑制率を計算し、第１表に示した
。

以上の結果か、ら明かなように酸性プロテアーゼは低一
度で腫瘍細胞の増殖を抑制した。

実験例２　ヌードマウス砿：移植したヒト乳癌細胞ＭＸ
−１の増殖におよぼす彰轡 ヌードマウ、ｘ（ＢＡＬＢ／Ｃ系、　　ｎｕ／ｎｕ　）
　ｇ：　”Ｃ継代されたヒト乳癌細胞Ｍ　Ｘ　−１２ｍ
ｍ角を、１群５匹の同系ヌードマウス背部皮下に一植２
週後より、被検物質を１日２回１８日間静□脈内投与し
た。被検物質投与１８日目（壬腫瘍を摘出し、その重量
を測定した。結果を第２表に示した。

第２表 酸性プロテアーゼは低用量で明らかな抗腫瘍作用を承し
た。

実験例＆　白血病細胞Ｐ３８Ｂを移植したマウスＣ二お
ける延命効果 一群５匹のＢ　Ｄ　Ｐ、雄マウスの腹腔内Ｃ二白血病細
胞ｐｓｉｓ　　１０”個を移植し、翌日より動物が死亡
するまで１日２回、被検物質を静脈内投与した。

被検物質の延命効果を次式より算出し、百分率で表した
。

結果を第３表に示す。

第３表 ＊危険率５％以下で対照−二比し、推計学的５；有意本
実験においても、酸性プロテアーイは明らかな抗腫瘍作
用を示した。

実験例４．急性毒性試験 体重２０−２５１のｄｄＹ系雄マクスを１群１０匹とし
、生理食塩水に溶解した酸性プロテアーゼ２　ｇ／ｋｇ
を静脈内または腹腔内にそれぞれ投与した後、１週間に
わたって症状を観察したが、何ら異常を認めなかった。

以上の実験例で明らかなようＣ二１本発明の主成分であ
る酸性プロテアーゼは９強力な抗腫瘍作用−を有し、そ
の用量は、急性毒性実験の結果から。

充分安全な用量である。また、ヒト由来の蛋白質である
ためＩｎ、抗原性４＝起因するアナフィラキシーシ欝ツ
タなどの重篤な副作用を招来する危険性も少ないと考え
られ、諸１の腫瘍に対し、）臨床上極めて有用な薬剤と
考えられる。

本発明。治療剤７□常注射−・・８７．静脈内。

動脈内、皮下、筋肉内および腫瘍局所などに投与される
が、経口剤、吸入側、直腸用坐割として用いることもで
きる。酸性プロテアーゼの成人の治５００　ｍｇである
が、症状あるいは用法に応じて適宜増減することができ
る。

本酸性プロテアーゼは任意、慣用製薬用担体あるいは賦
形剤とともに慣用の方法で医薬用製剤に調製することが
できる。

注射剤としては用時溶ジして用いる凍結乾燥製剤、吸入
剤としては凍結乾燥剤、直腸内投与剤としては直腸用画
側とするのが好ましい。

次Ｃ二本発明の実施例を示す。

実施例−１ 酸性プロテアーゼ１００ｍｇを１量ｍｔの生理食塩水に
溶解し、メンブレンフィルターを用いて無菌的にｒ遇す
る。Ｐ波を滅菌したガラス容器に１゜ｍｌずつ充填して
凍結乾燥し、、これを密栓して凍結乾燥粉末製剤とする
。

実施例−２ 凍結乾燥した酸性プロテアーゼ１００ｇ、乳糖す一７ｇ
およびステアリン酸マグネシウム３ｇをそれぞれ秤量し
たのち均−Ｃ：混合する。これをＮｏ、　２のゼラチン
カプセルｉ”−２００ｍｇずつ充填したのち腸溶皮膜を
施し、腸溶カプセル剤とする。

特許出願人　　持ｌｌ１ＩＩ薬株式会社手続補正書 ３、　、　、　ｔ、　、　ＫｍＷＩｔｆ’１Ｍｋ’；４
ｉｆ＆に８１１１１１４％事件−との関係　特許出願人 ０量か　１　　名） □ ５、補正命令の日付 「自　発」 ６、補正の対象 χ補正の内容 （υ　特許請求の範−を胴紙のとシ〕補正する。

臼）゛明細書菖１頁第８行の「から精、製した」を削除
する。

―）　岡菖２頁纂１０行の「から精製した」を特徴する 特許請求の範囲 ｒｋ）尿中酸性プａテアーゼを有効成分′とする、抗腫
瘍作用を有する医薬組成物、」 手続補正書 昭和５７年３月　９日 、　　抗腫瘍作用を有する医薬組成物 ３、補正する者 事件との関係　特許□出願人 り補正の内容 （１）　　＠ＭＡ＠１ＩＥ２頁第１４行〜嬉１７行の「
酵素であり、【エテリントンら−−−−−１９’１１年
〕」を次のと＊）補正する。

「酵素であるが（ｉ＃ｘキーら（Ｍｌｒｓｋｙ　ａｔａ
４）、ジャーナル　オプ　り讐エカｋ　インベステイグ
ーｖ　ｗ　ｙ　（Ｊ、　Ｃｊｌｍ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　
）！　１巻、＄１８貞、１９４８年〕、従来、履修に対
する治療剤としては用−られたことがなか０九。

ζ０＠性グレテアー七は」 働　同１１４１１ｇＸ行の「溶である。」を次のと訃珈
補正する。

「涛である。また、ζｏ＠性１−テアー４＆ｔ。

ｐＨ７，０以下の酸性領域にて、へ毫ダ四ビｙＫ対して
高−氷解活性を示すが、ベプスーｔｙｋよって着用に抑
制される性質を有する。また、この酸性プ四テアーゼは
ＰＨ７，０以下の酸性領域にて安定、ｐＨ１０以上のア
ルカ９性にて不安定である。」

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒト尿中から精製した酸性プロテアーゼを有効成分とす
   る抗腫瘍作用を有する医薬組成物。