ES2845556T3

ES2845556T3 - Aceite que contiene ácidos grasos poliinsaturados estable oxidativamente

Info

Publication number: ES2845556T3
Application number: ES12787152T
Authority: ES
Inventors: Michael Stefanski; Kristine Sheila Crawford; Tang Xuejun
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2011-11-01
Filing date: 2012-11-01
Publication date: 2021-07-27
Anticipated expiration: 2032-11-01
Also published as: KR20200117039A; PL2773216T3; RU2619755C2; RU2738127C2; RU2014122165A; RU2017116173A3; AU2018204154B2; AR090072A1; JP2018070887A; EP3777547A1; PH12019501057A1; AU2012333227A1; KR20140088599A; JP7343105B2; CA2854178A1; EP2773216A1; KR20220059969A; TWI612901B; AU2016204866A1; EP2773216B1

Abstract

Un aceite que comprende (i) al menos 30% en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces; (ii) al menos un primer antioxidante; y (iii) menos de 150 ppm de lecitina, en donde el al menos un primer antioxidante es un tocoferol, el aceite comprende tocoferol en una cantidad que varía de 900 ppm a 3400 ppm, en donde dicho aceite comprende además menos de 750 ppm de un segundo antioxidante elegido de un derivado de ácido ascórbico, y en donde dicho aceite y/o dicho al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces se obtiene a partir de microalgas.

Description

DESCRIPCIÓN

Aceite que contiene ácidos grasos poliinsaturados estable oxidativamente

La invención se refiere a un aceite que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces.

REFERENCIA A SOLICITUDES RELACIONADAS

Los aceites que contienen ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) se pueden oxidar y enranciarse durante el almacenamiento. Esto da como resultado sabores y olores desagradables en el aceite, así como en los productos en los que se incorporan estos aceites. Un PUFA con 4 o más dobles enlaces C-C puede ser menos estable oxidativamente que un PUFA con menos dobles enlaces. Por otra parte, la presencia de metales, tales como hierro, puede incrementar la velocidad a la que se oxida un aceite que contiene PUFA.

Los expertos en la técnica han intentado disminuir la oxidación de un aceite que contiene PUFA al emplear diversos medios incluyendo incorporar derivados de ácido ascórbico, tales como palmitato de ascorbilo en combinación con lecitina. Sin embargo, sigue habiendo una necesidad de aceites que contienen PUFA más estables oxidativamente.

El documento US 2007/0003686 A1 se refiere a una composición grasa sólida que incluye un aceite que tiene grasa saturada y un aceite microbiano que tiene un ácido graso poliinsaturado de cadena larga y un emulsionante. La composición grasa sólida puede tener altos niveles de ácido graso poliinsaturado de cadena larga y bajas cantidades de emulsionantes.

Se ha descubierto ahora que combinar derivados de ácido ascórbico, tales como palmitato de ascorbilo, con lecitina incrementa la oxidación de un aceite que comprende 30% de al menos un PUFA que tiene 4 o más dobles enlaces carbono-carbono. Según esto, las siguientes realizaciones de la presente invención se proporcionan en la presente. Las realizaciones descritas en la presente se pueden combinar o subdividir adecuadamente para dar subcombinaciones adecuadas para comprender, consistir en o consistir esencialmente en realizaciones adicionales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 7b, 7c, 8e y 8f.

La Figura 2 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 7d, 7e y 8b.

La Figura 3 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 7f, 7g y 8c.

La Figura 4 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 7h, 7i y 7j.

La Figura 5 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 7c, 7k y 8a.

La Figura 6 es una gráfica que representa la concentración de hierro (ppb) contenida en aceites sustancialmente libres de lecitina (ejemplos 7a, 7c, 7h, 8a-c y 8f) frente a un aceite que contiene tocoferol, palmitato de ascorbilo y lecitina mezclados (ejemplo 7b).

La Figura 7 es una gráfica que representa el índice sensorial de aroma a pescado a lo largo del tiempo de aceites según los ejemplos 7a, 8d y 7m.

Se divulga en la presente un aceite según la invención, que comprende (i) al menos 30% en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces; (ii) al menos un primer antioxidante; y (iii) menos de 150 ppm de lecitina, en donde el al menos un primer antioxidante es un tocoferol, el aceite comprende tocoferol en una cantidad que varía de 900 ppm a 3400 ppm, en donde dicho aceite comprende además menos de 750 ppm de un segundo antioxidante elegido de un derivado de ácido ascórbico, y en donde dicho aceite y/o dicho al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces se obtiene a partir de microalgas.

Según se usa en la presente, el % en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces se expresa con respecto al peso sumado de los ácidos grasos totales en el aceite.

Según se usa en la presente, el % en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados se refiere al porcentaje en peso de la suma de todos los ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces presentes en el aceite.

Según se usa en la presente, el % en peso de un ácido graso específico o cualquier combinación de ácidos grasos específicos se expresa con respecto al peso sumado de los ácidos grasos totales en el aceite.

El término "esencialmente libre" cuando se usa para describir la lecitina significa menos de o igual a aproximadamente 150 ppm, aproximadamente 15 ppm, aproximadamente 10 ppm, aproximadamente 5 ppm, aproximadamente 1 ppm y aproximadamente 0 ppm.

El término "esencialmente libre" cuando se usa para describir un derivado de ácido ascórbico significa menos de o igual a aproximadamente 3 ppm, a aproximadamente 2,5 ppm, a aproximadamente 2 ppm, a aproximadamente 1,5 ppm, a aproximadamente 1 ppm, a aproximadamente 0,5 ppm, a aproximadamente 0.

El término "libre de" cuando se usa para describir lecitina o un derivado de ácido ascórbico significa que no hay cantidades detectables presentes.

El término "lecitina" cuando se usa en la presente incluye, por ejemplo, lecitina de girasol, lecitina de soja, lecitina de huevo y sus mezclas. En una realización, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 1200 ppm de lecitina, menos de aproximadamente 1000 ppm de lecitina, menos de 750 ppm de lecitina, menos de aproximadamente 500 ppm de lecitina, menos de aproximadamente 250 ppm de lecitina o menos de aproximadamente 200 ppm de lecitina. En una realización, el aceite descrito en la presente está libre de lecitina. En otra realización, el aceite descrito en la presente está esencialmente libre de lecitina.

En otra realización, el aceite descrito en la presente tiene un contenido de hierro de menos de aproximadamente 30 ppb o más particularmente menos de o igual a aproximadamente 25 ppb, 20 ppb, 15 ppb, 10 ppb, 5 ppb, 1 ppb, 0,5 ppb o 0,2 ppb. En otra realización, el contenido de hierro es 0 ppb.

El término "antioxidante" cuando se usa en la presente incluye, por ejemplo, derivados de ácido ascórbico, tocoferol, extracto de té verde y/o sus mezclas.

Según la invención, el al menos un primer antioxidante es tocoferol. Según la invención, el segundo antioxidante se elige de derivados de ácido ascórbico.

El término "derivado de ácido ascórbico" cuando se usa en la presente incluye, por ejemplo, ácido ascórbico, palmitato de ascorbilo, estearato de ascorbilo y/o sus mezclas. En una realización, el derivado de ácido ascórbico es palmitato de ascorbilo.

En una realización adicional, el derivado de ácido ascórbico está presente en el aceite descrito en la presente en una cantidad que varía de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 50 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 250 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 300 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 400 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 750 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 250 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 300 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 400 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 750 ppm, de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 750 ppm, de aproximadamente 250 ppm a 400 ppm, de aproximadamente 250 ppm a aproximadamente 300 ppm, de aproximadamente 300 ppm a aproximadamente 400 ppm. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 750 ppm de derivado de ácido ascórbico, menos de aproximadamente 400 ppm de derivado de ácido ascórbico, menos de aproximadamente 300 ppm de derivado de ácido ascórbico, menos de aproximadamente 250 ppm de derivado de ácido ascórbico, o menos de aproximadamente 50 ppm de derivado de ácido ascórbico. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente está esencialmente libre de un derivado de ácido ascórbico. En otra realización, el aceite descrito en la presente está esencialmente libre de palmitato de ascorbilo. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 250 ppm de derivado de ácido ascórbico. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo. En otra realización, el aceite descrito en la presente está libre de derivado de ácido ascórbico. En una realización adicional, el aceite está libre de palmitato de ascorbilo.

En una realización, el aceite descrito en la presente está esencialmente libre de un derivado de ácido ascórbico y esencialmente libre de lecitina. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente está esencialmente libre de palmitato de ascorbilo y esencialmente libre de lecitina. En otra realización, el aceite está libre de un derivado de ácido ascórbico y libre de lecitina. En otra realización más, el aceite está libre de palmitato de ascorbilo y libre de lecitina.

El al menos un primer antioxidante es un tocoferol. En otra realización, el al menos un primer antioxidante es un tocoferol añadido. En una realización adicional más, el al menos un primer antioxidante es un tocoferol mixto. En otra realización, el al menos un primer antioxidante es dl-a-tocoferol, d-a-tocoferol, p-tocoferol, Y-tocoferol, 5-tocoferol, a-tocotrienol, p-tocotrienol, y- tocotrienol y 5-tocotrienol, o una de sus mezclas.

En otra realización, por el término ''tocoferol'' se entiende cualquier isómero de tocoferol (o su mezcla), incluyendo pero no limitado a dl-a-tocoferol (es decir, tocoferol sintético), d-a-tocoferol (es decir, tocoferol natural), p-, y-, y 5-tocoferol dl-a-tocoferol y a-tocotrienol, p- tocotrienol, Y-tocotrienol y 5-tocotrienol.

El aceite descrito en la presente comprende tocoferol en una cantidad que varía de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 3400 ppm. El aceite puede comprender de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 1700 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 1400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 1700 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 2400 ppm o de aproximadamente 2400 ppm a aproximadamente 3400 ppm. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 3400 ppm de tocoferol, menos de aproximadamente 2400 ppm de tocoferol, menos de aproximadamente 2000 ppm de tocoferol, menos de aproximadamente 1700 ppm de tocoferol, menos de aproximadamente 1400 ppm de tocoferol o menos de aproximadamente 900 ppm de tocoferol. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 900 ppm de tocoferol, al menos aproximadamente 1400 ppm de tocoferol, al menos aproximadamente 1700 ppm de tocoferol, al menos aproximadamente 2000 ppm de tocoferol, al menos aproximadamente 2400 ppm de tocoferol o al menos aproximadamente 3400 ppm de tocoferol. En una realización, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 1400 ppm de tocoferol, aproximadamente 1700 ppm de tocoferol o aproximadamente 2400 ppm de tocoferol.

El término "tocoferol añadido" cuando se usa en la presente incluye isómeros y derivados de tocoferol que se añaden a un aceite descrito en la presente. Tocoferoles añadidos incluyen, por ejemplo, a-tocoferol, dl-a-tocoferol, d-a-tocoferol, p-tocoferol, Y-tocoferol , 5-tocoferol, a-tocotrienol, p-tocotrienol, Y-tocotrienol, 5-tocotrienol, D-a-tocoferol, D-p- tocoferol, D-Y-tocoferol, D-5-tocoferol y/o sus mezclas.

En una realización adicional, el aceite descrito en la presente puede comprender un tocoferol añadido que varía de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 2500 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 1500 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 900 ppm de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 800 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 500 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 2500 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 1500 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 900 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 800 ppm, de aproximadamente 300 ppm a aproximadamente 700 ppm, de aproximadamente 800 ppm a aproximadamente 2500 ppm, de aproximadamente 800 ppm a aproximadamente 1500 ppm, de aproximadamente 800 ppm a aproximadamente 900 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 2500 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 1500 ppm o de aproximadamente 1500 ppm a aproximadamente 2500 ppm. En otra realización más, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 2500 ppm de tocoferol añadido, menos de aproximadamente 1500 ppm de tocoferol añadido, menos de aproximadamente 900 ppm de tocoferol añadido, menos de aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido o menos de aproximadamente 500 ppm de tocoferol añadido. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 500 ppm de tocoferol añadido, aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido o aproximadamente 1500 ppm de tocoferol añadido.

En una realización, el tocoferol se elige de a-tocoferol, dl-a-tocoferol, d-a-tocoferol, p-tocoferol, Y-tocoferol, 5-tocoferol, a-tocotrienol, p-tocotrienol, Y-tocotrienol , 5-tocotrienol, D-a-tocoferol, D-p-tocoferol, D-Y-tocoferol, D-5-tocoferol y/o sus mezclas.

El término "tocoferol mixto" cuando se usa en la presente incluye mezclas de isómeros y derivados de tocoferoles añadidos, incluyendo, por ejemplo, mezclas de dl-a-tocoferol, d-a-tocoferol, p-tocoferol, Y-tocoferol, 5-tocoferol, a-tocotrienol, p-tocotrienol, Y-tocotrienol, 5-tocotrienol, D-a-tocoferol, D-p-tocoferol, D-Y-tocoferol y D-5-tocoferol.

En una realización, el tocoferol mixto es una mezcla de D-a-tocoferol, D-p-tocoferol, D-Y-tocoferol y D-5-tocoferol. En otra realización, el tocoferol mixto es una mezcla de aproximadamente 9 a aproximadamente 20% de D-a-tocoferol, de aproximadamente 1 a aproximadamente 4% de D-p-tocoferol, de aproximadamente 50 a aproximadamente 65% de D-Y-tocoferol y de aproximadamente 20 a aproximadamente 35% de D-5-tocoferol. En otra realización más, el tocoferol mixto es un tocoferol mixto natural.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende tocoferol mixto en una cantidad que varía de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 1700 ppm, de aproximadamente 900 ppm a aproximadamente 1400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 1400 ppm a aproximadamente 1700 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 2400 ppm, de aproximadamente 1700 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 3400 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 2400 ppm o de aproximadamente 2400 ppm a aproximadamente 3400 ppm. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 3400 ppm de tocoferol mixto, menos de aproximadamente 2400 ppm de tocoferol mixto, menos de aproximadamente 2000 ppm de tocoferol mixto, menos de aproximadamente 1700 ppm de tocoferol mixto, menos de aproximadamente 1400 ppm de tocoferol mixto o menos de aproximadamente 900 ppm de tocoferol mixto. En una realización, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 1400 ppm de tocoferol mixto, aproximadamente 1700 ppm de tocoferol mixto o aproximadamente 2400 ppm de tocoferol mixto.

Los aceites descritos en la presente pueden contener además tocoferoles naturales, en la forma de, por ejemplo, tocotrienoles que produce el microorganismo durante la fermentación y que finalmente están contenidos en el aceite crudo. La cantidad de tocoferoles naturales contenida en el aceite crudo puede variar, por ejemplo, de aproximadamente 25 ppm a aproximadamente 500 ppm de tocotrienoles.

El término "extracto de té verde" incluye, por ejemplo, extractos de té verde que contienen, por ejemplo, compuestos polifenólicos (es decir, catequinas). Ejemplos de compuestos polifenólicos que pueden estar presentes en extractos de té verde incluyen galato de epigalocatequina 25 (EGCG), epigalocatequina (EGC), galato de epicatequina (ECG), epicatequina (EC) y una de sus mezclas. En una realización, el extracto de té verde contiene al menos un compuesto polifenólico en una cantidad de aproximadamente 1% a aproximadamente 90%, de aproximadamente 5% a aproximadamente 85%, de aproximadamente 10% a aproximadamente 80%, de aproximadamente 15% a aproximadamente 75%, de aproximadamente 20% a aproximadamente 70%, de aproximadamente 25% a aproximadamente 65%, de aproximadamente 30% a aproximadamente 60%, de aproximadamente 35% a aproximadamente 55% o de aproximadamente 40% a aproximadamente 50% en peso del extracto de té verde, excluyendo vehículos.

El término "reactivo saborizante" incluye, por ejemplo, extracto de romero y vainilla. El extracto de romero se puede extraer de, por ejemplo, Rosmarinus officinalis. Por ejemplo, el extracto de romero puede ser orgánico. El extracto de romero se puede obtener al secar hojas de romero, que pertenece a la familia Perilla, pulverizar las hojas secadas y someter el material pulverizado resultante a extracción con agua, agua caliente, hexano, etanol, acetona, acetato de etilo o una mezcla de cualesquiera de estos disolventes. Ejemplos de componentes encontrados en el extracto de romero incluyen ácido cafeico, carnosol, ácido carnósico, ácido metoxicarnósico, ácido rosmarínico, rosmanol, rosmaridifenol, rosmaridiquinona y/o sus mezclas. También están disponibles comercialmente numerosos extractos de romero, y uno cualquiera o más se pueden usar en la presente invención. Extractos de romero adecuados están disponibles comercialmente de, por ejemplo, Kalsec (Kalamazoo, MI, EE. UU. de A.) bajo el nombre comercial de Herbalox®; Vitiva (Markovci, Eslovenia) bajo el nombre comercial Inolens®; Naturex (Aviñón, Francia) bajo el nombre comercial StabileEnhance®; y Ecom Food Industries Corporation (Ontario, Canadá) bajo el código de producto NR 3401.

En una realización, el reactivo saborizante es extracto de romero. En otra realización, el extracto de romero se extrae de Rosmarinus officinalis.

En otra realización más, el aceite descrito en la presente puede comprender extracto de romero en una cantidad que varía de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 3000 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 750 ppm, de aproximadamente 0 ppm a aproximadamente 500 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de 50 ppm a aproximadamente 7.500 ppm, de aproximadamente 50 ppm a aproximadamente 10.000 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 4000 ppm, de aproximadamente 500 a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 3000 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 500 ppm a aproximadamente 750 ppm, de aproximadamente 750 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de aproximadamente 750 ppm a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 750 ppm a aproximadamente 3000 ppm, de aproximadamente 750 ppm a aproximadamente 2000 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 5000 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 2000 ppm a 3000 ppm, de aproximadamente 3000 ppm a aproximadamente 3500 ppm, de aproximadamente 3500 ppm a aproximadamente 5000 ppm. En otra realización más, el aceite descrito en la presente comprende menos de aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, menos de aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero, menos de aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero, menos de aproximadamente 200 ppm de extracto de romero, menos de aproximadamente 750 ppm de extracto de romero, o menos de aproximadamente 500 ppm de extracto de romero. En otra realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero, aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero o aproximadamente 2000 ppm de extracto de romero.

En una realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 1700 de tocoferol mixto y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina. En otra realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina. En otra realización más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero y aproximadamente 1400 ppm de tocoferol mixto, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero y aproximadamente 500 ppm de tocoferol añadido, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2000 ppm de extracto de romero y aproximadamente 2400 ppm de tocoferol mixto, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En otra realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2000 ppm de extracto de romero y aproximadamente 1500 ppm de tocoferol añadido, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 1700 de tocoferol mixto y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté esencialmente libre de lecitina.

En una realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 1700 de tocoferol mixto y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina. En otra realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido, y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina. En otra realización más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero y aproximadamente 1400 ppm de tocoferol mixto, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 3500 ppm de extracto de romero y aproximadamente 500 ppm de tocoferol añadido, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2000 ppm de extracto de romero y aproximadamente 2400 ppm de tocoferol mixto, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En otra realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2000 ppm de extracto de romero y aproximadamente 1500 ppm de tocoferol añadido, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina y palmitato de ascorbilo. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 1700 de tocoferol mixto y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 5000 ppm de extracto de romero, aproximadamente 800 ppm de tocoferol añadido y aproximadamente 250 ppm de palmitato de ascorbilo, con la condición de que el aceite esté libre de lecitina.

Una realización se dirige a un aceite que comprende al menos aproximadamente 30% en peso de contenido de ácidos grasos en el aceite, de al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces carbono-carbono; al menos un primer antioxidante; y medios para mejorar la estabilidad oxidativa.

El índice de p-anisidina (p-AV) se determina según AOCS Official Method Cd 18-90. En una realización, el aceite descrito en la presente tiene un p-AV de menos de aproximadamente 40; menos de aproximadamente 30; o menos de aproximadamente 20.

El índice de peróxido (PV) se determina según the AOCS Official Method Cd 8-53. En una realización, el aceite descrito en la presente tiene un PV menor de aproximadamente 20 meq/kg; menor de aproximadamente 10 meq/kg; o menor de aproximadamente 5 meq/kg.

Los índices de Rancimat se determinan mediante la prueba estándar para la estabilidad de aceites, usando un aparato de Rancimat que funciona a 90°C, con el flujo de aire graduado a 10 l/hora (AOCS Cd 12b-92). En una realización, el aceite descrito en la presente tiene un índice de RANCIMAT de menos de o igual a aproximadamente 3, a aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7, aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamente 11, aproximadamente 12, aproximadamente 13, aproximadamente 14, aproximadamente 15, aproximadamente 16, aproximadamente 17, aproximadamente 18, aproximadamente 19 con almacenamiento adecuado. En una realización, el índice de Rancimat se determina después de aproximadamente 3 meses, aproximadamente 5 meses, aproximadamente 6 meses, aproximadamente 7 meses u 8 meses de almacenamiento adecuado. Un experto en la técnica entenderá a qué condiciones almacenar los aceites descritos en la presente. En una realización, el aceite descrito en la presente se almacena a temperatura ambiente (25°C) en bolsas de nailon/papel metalizado/PE polietileno de baja densidad envasadas al vacío y a continuación termoselladas bajo N2 (Heritage Packaging) o recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica (Elemental Container Inc.)

Los índices sensoriales de aroma (olor) marino/a pescado y compuestos aromáticos (sabor) marinos/de pescado se determinaron según el método que se describe en Sensory Evaluation Techniques. Meilgaard y cols., CRC Press; 4 edición (13 de diciembre de 2006). Un grupo de 8 - 18 expertos prueba (o huele) una muestra. Cada una de estas personas determina el índice de la muestra. Posteriormente, todos los índices se promedian aritméticamente y el resultado se redondea al alza o la baja hasta el número siguiente. Se espera que un índice de > 1,5 de aroma a pescado/marino y > 2,5 de compuestos aromáticos de pescado/marinos sea percibible por la población general.

En una realización, el aceite descrito en la presente tiene un índice sensorial de aroma a pescado de menos de 1,5 después de aproximadamente 3 meses, después de aproximadamente 4 meses, después de aproximadamente 5 meses, después de aproximadamente 6 meses, después de aproximadamente 7 meses, después de aproximadamente 8 meses o después de aproximadamente 9 meses de almacenamiento adecuado. En otra realización, el aceite descrito en la presente tiene un índice de aroma a pescado de menos de 1,5 en un período elegido de 0-3 meses, a los 0-4 meses, a los 0-5 meses, a los 0-6 meses, a los 0-7 meses, a los 0-8 meses o a los 0 9 meses. En una realización, el almacenamiento adecuado se realiza a temperatura ambiente (25°C) en bolsas de nailon/papel metalizado/PE polietileno de baja densidad envasadas al vacío y a continuación termoselladas bajo N2 o recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica.

En una realización, el aceite descrito en la presente tiene un índice sensorial de compuestos aromáticos de pescado de menos de 2,5 después de aproximadamente 3 meses, después de aproximadamente 4 meses, después de aproximadamente 5 meses, después de aproximadamente 6 meses, después de aproximadamente 7 meses, después de aproximadamente 8 meses o después de aproximadamente 9 meses de almacenamiento adecuado. En otra realización, el aceite descrito en la presente tiene un índice de aroma a pescado de menos de 1,5 en un período elegido de 0-3 meses, a los 0-4 meses, a los 0-5 meses, a los 0-6 meses, a los 0-7 meses, a los 0-8 meses o a los 0 9 meses. En una realización, el almacenamiento adecuado se realiza a temperatura ambiente (25°C) en bolsas de nailon/papel metalizado/PE polietileno de baja densidad envasadas al vacío y a continuación termoselladas bajo N2 o recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica.

En una realización, el al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono se elige de ácido docosahexaenoico ("DHA"), ácido eicosapentaenoico ("EPA"), ácido araquidónico ("ARA"), ácido docosapentaenoico omega-3 ("DPA n-3") y ácido docosapentaenoico omega-6 ("DPA n-6"). En algunas realizaciones, el aceite comprende PUFAs omega-3. En realizaciones adicionales, los PUFAs omega-3 se eligen de DHA, EPA, DPAn-3 y sus mezclas.

En algunas de las realizaciones, el aceite se caracteriza por al menos uno de los siguientes ácidos grasos (o sus ésteres), expresados como % en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. Las realizaciones descritas en la presente pueden comprender además aproximadamente 3% o menos de otros ácidos grasos o sus ésteres.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 30% en peso, al menos aproximadamente 35% en peso, al menos aproximadamente 40% en peso, al menos aproximadamente 45% en peso o al menos aproximadamente 50% en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 60% en peso, de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 50% en peso, de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 40% en peso, de aproximadamente 40% en peso a aproximadamente 60% en peso o de aproximadamente 40% en peso a aproximadamente 50% en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 30% en peso, al menos aproximadamente 35% en peso, al menos aproximadamente 40% en peso, al menos aproximadamente 45% en peso o al menos aproximadamente 50% en peso de DHA. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 60% en peso, de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 50% en peso, de aproximadamente 30% en peso a aproximadamente 40% en peso, de aproximadamente 40% en peso a aproximadamente 60% en peso o de aproximadamente 40% en peso a aproximadamente 50% en peso de DHA.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 35% en peso de DHA+EPA, al menos aproximadamente 40% en peso, al menos aproximadamente 45% en peso, al menos aproximadamente 50% en peso de DHA+EPA, en donde dicho aceite comprende menos de aproximadamente 80% en peso, menos de aproximadamente 70% en peso o menos de aproximadamente 60% en peso de DHA+ EPA.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 35%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 45% o al menos aproximadamente 50%, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 30% a aproximadamente 60%, de aproximadamente 30% a aproximadamente 50%, de aproximadamente 30% a aproximadamente 40%, de aproximadamente 40% a aproximadamente 60% o de aproximadamente 40% a aproximadamente 50%, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces.

En una realización, el aceite descrito en la presente comprende al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 35%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 45% o al menos aproximadamente 50%, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de DHA. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 30% a aproximadamente 60%, de aproximadamente 30% a aproximadamente 50%, de aproximadamente 30% a aproximadamente 40%, de aproximadamente 40% a aproximadamente 60% o de aproximadamente 40% a aproximadamente 50%, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de DHA.

En otra realización, el aceite comprende menos de aproximadamente 80%, menos de aproximadamente 70% o menos de aproximadamente 60%, en peso del ácido graso total, de al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono.

La potencia de DHA y EPA se determina según AOCS Official Method Ce 1b-89. En una realización, el aceite descrito en la presente comprende desde aproximadamente 200 mg de DHA/g de aceite, desde aproximadamente 300 mg de DHA/g de aceite, desde aproximadamente 350 mg de DHA/g de aceite, desde aproximadamente 400 mg de DHA/g de aceite o desde aproximadamente 500 mg de DHA/g de aceite. En otra realización, el aceite descrito en la presente comprende desde aproximadamente 120 mg de EPA/g de aceite o desde aproximadamente 130 mg de EPA/g de aceite. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 200 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 600 mg de DHA/g de aceite, de aproximadamente 200 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 500 mg de DHA/g de aceite, de aproximadamente 200 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 400 mg de DHA/g de aceite, de aproximadamente 300 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 600 mg de DHA/g de aceite, de aproximadamente 300 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 500 mg de DHA/g de aceite o de aproximadamente 300 mg de DHA/g de aceite a aproximadamente 400 mg de DHA/g de aceite. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 100 mg de EPA/g de aceite a aproximadamente 250 mg de EPA/g de aceite. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende de aproximadamente 400 mg de DHA EPA/g de aceite o de aproximadamente 500 mg de DHA+EPA/g de aceite.

En una realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2% o menos de ARA, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 3% o menos de EPA, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 18% o menos o de aproximadamente 12% a aproximadamente 18%, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de DPA n-6. En otra realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 10% o menos, en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, de otros ácidos grasos.

En algunas realizaciones, el aceite está sustancialmente libre de EPA. Según se usa en la presente, el término "sustancialmente libre de EPA" se puede referir a un aceite en el que el EPA es menos de aproximadamente 3% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de aproximadamente 2% en peso de EPA del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 1% en peso de EPA del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 0,5% en peso de EPA del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 0,2% en peso de EPA del contenido total de ácidos grasos del aceite, o menos de aproximadamente 0,01% en peso de EPA del contenido total de ácidos grasos del aceite. En algunas realizaciones, el aceite no tiene una cantidad detectable de EPA usando técnicas conocidas en la especialidad. En algunas realizaciones, el aceite no tiene EPA.

En algunas realizaciones, el aceite también puede estar sustancialmente libre de ARA. En algunas realizaciones, el ARA es menos de aproximadamente 3% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. En algunas realizaciones, el ARA comprende menos de aproximadamente 2% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 1% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 0,5% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite, menos de aproximadamente 0,2% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite o menos de aproximadamente 0,01% en peso del contenido total de ácidos grasos del aceite. En algunas realizaciones, el aceite no tiene una cantidad detectable de ARA.

En una realización, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 2% en peso o menos de ARA. En una realización adicional, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 3% en peso o menos de EPA. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente comprende aproximadamente 18% en peso o menos o de aproximadamente 12% en peso a aproximadamente 18% en peso de DPA n-6. En otra realización adicional más, el aceite descrito en la presente puede comprender aproximadamente 10% en peso o menos de otros ácidos grasos.

En algunas realizaciones, el aceite está sustancialmente libre de EPA. Según se usa en la presente, el término "sustancialmente libre de EPA" se puede referir a un aceite en el que el EPA es menos de aproximadamente 3% en peso. En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de aproximadamente 2% en peso de EPA, menos de aproximadamente 1% en peso de EPA, menos de aproximadamente 0,5% en peso de EPA, menos de aproximadamente 0,2% en peso de EPA o menos de aproximadamente 0,01% en peso de EPA. En algunas realizaciones, el aceite no tiene una cantidad detectable de EPA usando técnicas conocidas en la especialidad. En algunas realizaciones, el aceite no tiene EPA.

En algunas realizaciones, el aceite también puede estar sustancialmente libre de ARA. En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de aproximadamente 3% en peso de ARA. En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de 2% en peso de ARA, menos de aproximadamente 1% en peso, menos de aproximadamente 0,5% en peso, menos de aproximadamente 0,2% en peso o menos de aproximadamente 0,01% en peso de ARA. En algunas realizaciones, el aceite no tiene una cantidad detectable de ARA.

El aceite descrito en la presente se puede usar en cualquier aplicación, en la que estos aceites sean necesarios. El aceite se puede usar, por ejemplo, en productos alimenticios (incluyendo bebidas y complementos dietéticos), piensos y/o productos de cuidado personal. Estos productos pueden estar, por ejemplo, en cualquier forma, tal como un líquido, una emulsión, un gel y/o un sólido. Estos productos pueden se productos listos para usar (listos para consumir) así como productos que se necesitan procesar adicionalmente (por ejemplo mediante dilución, disolución, calentamiento, etc.). En una realización, el aceite divulgado en la presente es un aceite comestible. En otra realización, el aceite divulgado en la presente es un aceite comestible que se usa en productos alimenticios. Productos alimenticios ejemplares incluyen, pero no se limitan a, barras nutritivas, complementos dietéticos, barras de granola, productos horneados (p. ej., panes, panecillos, galletas, galletas saladas, pasteles de frutas o bizcochos), pastas, condimentos, aderezos para ensaladas, mezclas para sopas, aperitivos, zumos de frutas procesados, salsas, condimentos, jarabes, bebidas, polvos secos para bebidas y mermeladas o gelatinas.

En una realización adicional, el aceite descrito en la presente es orgánico. El término "orgánico" según se usa en la presente incluye, por ejemplo, los estándares fijados por the U.S. Department of Agriculture (USDA) y la Unión Europea (UE) para incluir este término en el etiquetado de productos alimenticios. Los estándares de la Ue se indican, por ejemplo, en la Regulación EC 834/2007 y en los EE. UU. se indican los estándares del USDA, por ejemplo, en the National Organic Program Regulation en 7 C.F.R., Parte 205.

En una realización adicional más, el aceite descrito aquí es natural. El término "natural" según se usa en la presente incluye, por ejemplo, usar este término en el etiquetado de productos alimenticios asociado con productos alimenticios que no contienen color añadido, sabores artificiales o sustancias sintéticas.

El al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono se puede obtener de diversas fuentes incluyendo, por ejemplo, animales acuáticos, tales como peces, mamíferos marinos y crustáceos (tales como krill y otros eufáusidos); fuentes animales incluyendo, por ejemplo, tejidos de animales que incluyen, por ejemplo, cerebro, hígado y ojos y productos animales que incluyen, por ejemplo, huevos y leche; microalgas; plantas; y/o semillas. En una realización, el aceite se obtiene de peces, microalgas, plantas o semillas.

En una realización, el al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono se obtiene de microalgas. En otra realización, las microalgas son del orden Thraustochytriales. El orden Thraustochytriales, incluye, por ejemplo, el género Thraustochytrium (especies incluyen arudimentale, aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum, multirudimentale, pachydermum, proliferum, roseum, striatum), el género Schizochytrium (especies incluyen aggregatum, limnaceum, mangrovei, minutum, octosporum), el género Ulkenia (especies incluyen amoeboidea, kerguelensis, minuta, profunda, radiate, sailens, sarkariana, schizochytrops, visurgensis, yorkensis), el género Aurantiacochytrium; el género Oblongichytrium, el género Sicyoidochytium, el género Parientichytrium, el género Botryochytrium, y sus combinaciones. Para los propósitos de esta invención, se considerará que las especies descritas dentro de Ulkenia son miembros del género Schizochytrium. En otra realización más, las microalgas son Thraustochytrium sp. En una realización adicional más, las microalgas son Schizochytrium sp. En una realización adicional más, las microalgas se eligen de Thraustochytrium sp. y Schizochytrium sp.

En otra realización, el al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono se obtiene a partir de plantas, desarrolladas bien en fermentación en cultivo o bien en plantas cosechadas, incluyendo, por ejemplo, cereales (tales como maíz criollo, cebada, trigo, arroz, sorgo, mijo perla, maíz, centeno y avena); habas; habas de soja; pimientos; lechuga; guisantes; especies de Brassica, tales como, col, brócoli, coliflor, coles de Bruselas, colza y rábano; zanahoria; remolachas; berenjena; espinaca; pepino; calabacín; melones; cantalupo; girasoles; cártamo; canola; lino; cacahuete; mostaza; colza; garbanzo; lenteja; clavo blanco; oliva; palma; borraja; onagra; linaza; y tabaco. En una realización, el aceite descrito en la presente es un aceite crudo. En otra realización, el aceite descrito en la presente es un aceite refinado. En una realización adicional más, el aceite descrito en la presente es un aceite final. Un "aceite crudo" es un aceite que se extrae de la biomasa de un microorganismo sin procesamiento adicional. Un "aceite refinado" es un aceite que se obtiene al tratar un aceite crudo con procesamiento estándar de refinado, blanqueo y/o desodorización. Véase, p. ej., la Patente de EE. UU. N° 5.130.242. Un "aceite final" es un aceite refinado que se combina adicionalmente con un aceite vegetal. En algunas realizaciones, un aceite final es un aceite refinado que se ha combinado con un aceite vegetal elegido de triglicéridos de cadena media (MCTs), aceite de canola, aceite de palma y aceite de girasol. En algunas realizaciones, el aceite de girasol es aceite de girasol con alto contenido de ácido oleico. En otras realizaciones, el aceite de girasol es orgánico. En otras realizaciones más, el aceite de girasol con alto contenido de ácido oleico es orgánico.

Una realización se dirige a un método para mejorar la estabilidad oxidativa de un aceite, que comprende añadir una cantidad eficaz de al menos un primer antioxidante a un aceite que comprende al menos 30%, en peso de contenido de ácidos grasos en el aceite, de al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces

Los aceites microbianos descritos en la presente se pueden recuperar de microalgas mediante cualesquiera medios adecuados conocidos por los expertos en la especialidad. Por ejemplo, los aceites se pueden recuperar al extraer con técnicas tales como las descritas, por ejemplo, en las Publicaciones Internacionales N° WO 2001/053512, WO 2001/051598, WO 2001/076715 y WO 2001/076385; las Publicaciones de EE. UU. N22007/0004678 y 2005/012739; y la Patente de EE. UU. N° 6.399.803. Procedimientos para el tratamiento enzimático de biomasa para la recuperación de lípidos se divulgan en la Publicación Internacional N° WO 2003/09628; la Publicación de EE. UU. N°.2005/0170479; la Publicación de Patente EP 0776356 y la Patente de EE. UU. N° 5.928.696.

En algunas realizaciones, el aceite descrito en la presente se obtiene a través de las siguientes etapas: generar biomasa al fermentar microalgas capaces de producir aceite que contiene al menos un PUFA C18-22 que tiene 4 dobles enlaces carbono-carbono; recoger la biomasa; secar por pulverización la biomasa; extraer aceite de la biomasa; refinar el aceite (para retirar ácidos grasos libres y fosfolípidos); blanquear el aceite (para retirar cualesquiera compuestos polares y metales prooxidantes restantes, y para descomponer productos de oxidación de lípidos); filtrar el aceite en frío (para retirar cualesquiera grasas, ceras y sólidos insolubles restantes); desodorizar el aceite (opcionalmente bajo vacío y, por ejemplo, en un desodorizador de separación por arrastre de vapor en contracorriente con columna de relleno); añadir un antioxidante al aceite; y cualquiera de sus combinaciones. En algunas realizaciones, después de un crecimiento controlado a lo largo de un período preestablecido, el cultivo se recoge mediante centrifugación y a continuación se pasteuriza y se seca por pulverización. En ciertas realizaciones, la biomasa secada se barre con nitrógeno y se envasa antes de almacenarse congelada a -20°C. En ciertas realizaciones, el aceite se extrae de la biomasa secada al mezclar la biomasa con n-hexano o isohexano en un procedimiento discontinuo que rompe las células y permite que el aceite y el residuo celular se separen. En ciertas realizaciones, el disolvente se retira a continuación. En una realización, el aceite descrito en la presente se almacena a temperatura ambiente (25°C) en bolsas de nailon/papel metalizado/PE polietileno de baja densidad envasadas al vacío y a continuación termoselladas bajo N2 en un Multivac Modelo AGV (Multivac Sepp Haggenmüller GmbH & Co. KG). En otra realización, los aceites descritos en la presente se almacenan a temperatura ambiente (25°C) en recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica.

Dependiendo el uso final del aceite descrito en la presente, el aceite puede comprender ingredientes adicionales, que pueden ser útiles para el producto final y/o para el procedimiento de producción del producto final. Estos ingredientes adicionales pueden incluir, por ejemplo, colorantes, fragancias, cargas, sabores, emulsionantes no lecitínicos, estabilizantes y otros materiales lipófilos.

EJEMPLOS

Materiales. El extracto de romero usado en los ejemplos 3-15 está disponible, por ejemplo, de Ecom Foods Industries Corporation (Ontario, Canadá). El aceite de girasol con alto contenido de ácido oleico usado en los ejemplos 3-15 está disponible, por ejemplo, de Humko oils (Memphis, TN) bajo el nombre comercial TriSun®. TAP1010 Sun está disponible de Vitablend (Wolvega, Países Bajos). La lecitina de soja usada en los ejemplos posteriores está disponible, por ejemplo, de Archer Daniels Midland Co. (Decatur, IL) bajo el nombre comercial Yelkin® Gold. El palmitato de ascorbilo usado en los ejemplos posteriores está disponible, por ejemplo, de DSM, Nutritional Products (Basilea, Suiza).

EJEMPLO 1

Preparación de aceite crudo de alta calidad que contiene al menos 30% de al menos un PUFA que tiene al menos 4 dobles enlaces carbono-carbono. Una Shizochytrium sp. depositada bajo el N° de Registro del ATCC PTA-10208 (en lo sucesivo denominada "PTA-10208") se desarrolló a través de ciclos de fermentación individuales, según se describe posteriormente. Medios y condiciones de cultivo típicos se indican en la Tabla 1.

En cultivos alimentados con carbono (glucosa) y nitrógeno con 1000 ppm de Cl- a 22,5°C a pH 7,0 con 20% de oxígeno disuelto durante la alimentación con nitrógeno y 10% de oxígeno disuelto posteriormente, PTA-10208 producía un peso celular en seco de 95 g/l después de 200 horas de cultivo en un volumen de fermentador de 10 l. El rendimiento de lípidos era 53,7 g/l; el rendimiento de omega-3 era 37 g/l; el rendimiento de EPA era 14,3 g/l; y el rendimiento de DHA era 21 g/l. El contenido de ácidos grasos era 57% en peso; el contenido de EPA era 27,7% de FAME; y el contenido de DHA era 39,1% de FAME. La productividad de lípidos era 6,4 g/l/día y la productividad de omega-3 era 4,4 g/l/día bajo estas condiciones, con 1,7 g/l/día de productividad de EPA y 2,5 g/l/día de productividad de DHA.

En cultivos alimentados con carbono (glucosa) y nitrógeno con 1000 ppm de Cl- a 22,5°C a pH 7,5 con 20% de oxígeno disuelto durante la alimentación con nitrógeno y 10% de oxígeno disuelto posteriormente, PTA-10208 producía un peso celular en seco de 56 g/l después de 139 horas de cultivo en un volumen de fermentador de 10 l. El rendimiento de lípidos era 53 g/l; el rendimiento de omega-3 era 34 g/l; el rendimiento de EPA era 11,5 g/l; y el rendimiento de DHA era 22 g/l. El contenido de ácidos grasos era 58% en peso; el contenido de EPA era 21,7% de FAME; y el contenido de DHA era 41,7% de FAME. La productividad de lípidos era 9,2 g/l/día y la productividad de omega-3 era 5,9 g/l/día bajo estas condiciones, con una productividad de EPA de 2 g/l/día y una productividad de DHA de 3,8 g/l/día.

En cultivos alimentados con carbono (glucosa) y nitrógeno con 1000 ppm de Cl- a 22,5°C a pH 7,0 con 20% de oxígeno disuelto durante la alimentación con nitrógeno y 10% de oxígeno disuelto posteriormente, PTA-10208 producía un peso celular en seco de 93,8 g/l después de 167 horas de cultivo en un volumen de fermentador de 2000 l. El rendimiento de lípidos era 47,2 g/l; el rendimiento de omega-3 era 33,1 g/l; el rendimiento de EPA era 10,5 g/l; y el rendimiento de DHA era 20,4 g/l. El contenido de ácidos grasos era 50,6% en peso; el contenido de EPA era 23% de FAME; y el contenido de DHA era 42,6% de FAME. La productividad de lípidos era 6,8 g/l/día, y la productividad de omega-3 era 4,7 g/l/día bajo estas condiciones, con una productividad de EPA de 1,5 g/l/día y una productividad de DHA de 2,9 g/l/día DHA.

En cultivos alimentados con carbono (glucosa) y nitrógeno con 1000 ppm de Cl- a 22,5°C a pH 7,0 con 20% de oxígeno disuelto durante la alimentación con nitrógeno y 10% de oxígeno disuelto posteriormente, PTA-10208 producía un peso celular en seco de 105 g/l después de 168 horas de cultivo en un volumen de fermentador de 2000 l. El rendimiento de lípidos era 46,4 g/l; el rendimiento de omega-3 era 33 g/l; el rendimiento de EPA era 10,7 g/l; y el rendimiento de DHA era 20,3 g/l. El contenido de ácidos grasos era 43,9% en peso; el contenido de EPA era 24% de FAME; y el contenido de DHA era 43,7% de FAME. La productividad de lípidos era 6,6 g/l/día, y la productividad de omega-3 era 4,7 g/l/día bajo estas condiciones, con una productividad de EPA de 1,5 g/l/día y una productividad de DHA de 2,9 g/l/día.

En cultivos alimentados con carbono (glucosa) y nitrógeno con 1000 ppm de Cl- a 22,5°C a pH 7,0 con 20% de oxígeno disuelto durante la alimentación con nitrógeno y 10% de oxígeno disuelto posteriormente, PTA-10208 producía un peso celular en seco de 64,8 g/l después de 168 horas de cultivo en un volumen de fermentador de 2000 l. El rendimiento de lípidos era 38,7 g/l; el rendimiento de omega-3 era 29,9 g/l; el rendimiento de EPA era 8,5 g/l; y el rendimiento de DHA era 16,7 g/l. El contenido de ácidos grasos era 59,6% en peso; el contenido de EPA era 23% de FAME; y el contenido de DHA era 42,3% de FAME. La productividad de lípidos era 5,53 g/l/día, y la productividad de omega-3 era 3,8 g/l/día bajo estas condiciones, con una productividad de EPA de 1,2 g/l/día y una productividad de DHA de 2,3 g/l/día.

Tabla 1: Medios de Contención y Condiciones de Cultivo Típicos de PTA-10208

EJEMPLO 2

Perfil de Ácidos Grasos de PTA-10208. Dos muestras de la biomasa producida según el Ejemplo 1 (Muestra de PTA-10208 n° 1 y Muestra de PTA-10208 n° 2) se analizaron con respecto al contenido de aceite crudo total mediante extracción con disolvente, las clases de lípidos se determinaron mediante cromatografía de líquidos de alta resolución/detección por dispersión de luz evaporativa (HPLC/ELSD), el triacilglicerol (TAG) se analizó mediante HPLC/espectrometría de masas (HPLC/MS) y los perfiles de ácidos grasos (FA) se determinaron mediante cromatografía de gases con detección por ionización a la llama (GC-FID). El contenido de lípidos crudos de cada biomasa liofilizada se determinó usando trituración en disolvente con hexano y se comparó con la suma de FAME (mg/g) generada mediante transesterificación directa y los ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME) resultantes se cuantificaron mediante análisis por GC/FID. Los FAs en el lípido crudo extraído también se cuantificaron mediante transesterificación y se cuantificaron usando análisis por GC/FID de los FAME resultantes. El porcentaje en peso de todos los lípidos neutros (NL) y los ácidos grasos libres (FFA) se determinó en el lípido crudo extraído usando HPLC en fase normal con ELSD e identificación por ionización química a presión atmosférica-MS (APCI-MS). El método separa y cuantifica ésteres esterólicos (SE), TAG, FFAs, 1,3-diacilgliceroles (1,3-DAG), esteroles, 1,2-diacilgliceroles (1,2-DAG) y monoacilgliceroles (MAG). Los resultados se muestran en las Tablas 2 y 3.

El TAG y los fosfolípidos (PL) se aislaron del aceite crudo extraído (Muestra de PTA-10208 n° 1 y Muestra de PTA-10208 n° 2). El TAG se aisló usando cromatografía de desarrollo rápido a baja presión y el PL se aisló usando extracción en fase sólida (SPE). La identidad de cada fracción aislada se confirmó mediante cromatografía en capa fina (TLC). Los perfiles de ácidos grasos de las fracciones de TAG y PL aisladas se determinaron como FAME después de la transesterificación directa usando GC-FID. Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Se aislaron clases de lípidos individuales de una muestra de aceite crudo extraído de PTA-10208 (Muestra de PTA-10208 n° 3) usando HPLC normal con identificación por ELSD y APCI-MS.

Procedimientos Experimentales.

Extracción de Aceite Crudo - Se extrajo aceite crudo de muestras de biomasa liofilizada usando trituración en disolvente. Por ejemplo, se pesaron aproximadamente 3 gramos de biomasa en un tubo sueco. Se añadieron tres cojinetes de bolas y 30 ml de hexano al tubo sueco, que se selló con un tapón de neopreno y se puso en un agitador durante 2 horas. La suspensión resultante se filtró usando un embudo de Buchner y papel de filtro Whatman. El líquido filtrado se recogió, el disolvente se retiró bajo vacío, y la cantidad de lípido crudo restante se determinó gravimétricamente.

Análisis de Ácidos Grasos - Las muestras de biomasa, lípido crudo extraído y clases de lípidos aisladas se analizaron con respecto a la composición de ácidos grasos como FAME. Brevemente, la biomasa liofilizada y las clases de lípido aisladas se pesaron directamente en tubos de ensayo con cierre roscado, mientras que muestras del aceite crudo se disolvían en hexano para dar una concentración de aproximadamente 2 mg/ml. Se añadieron a cada tubo tolueno, que contenía patrón interno, y HCl 1,5 N en metanol. Los tubos se sometieron a turbulencia, a continuación se cerraron y se calentaron hasta 100°C durante 2 horas. Los tubos se dejaron enfriar y se añadió NaCl saturado en agua. Los tubos se sometieron de nuevo a turbulencia y se centrifugaron para permitir que las capas se separaran. A continuación, una porción de la capa orgánica se puso en un vial de GC y se analizó mediante GC-FID. FAME se cuantificó usando una curva de calibración de 3 puntos generada usando Nu-Check-Prep GLC Reference Standard (NuCheck, Elysian, MN). Los ácidos grasos presentes en el extracto se expresaron como mg/g y como un porcentaje en peso. El contenido de grasa de las muestras se estimó suponiendo una respuesta igual al patrón interno cuando se analizaban mediante GC-FID.

Método de HPLC/ELSD/MS -

Instrumento Agilent 1100 HPLC, Alltech 3300 ELSD, Agilent 1100 MSD

Columna Phenomenex Luna Silica, 250 x 4,6 mm, tamaño de partícula 5 gm con Columna de Seguridad

Fase Móvil A - 99,5% de Hexanos (Omnisolv); 0,4% de Alcohol isopropílico (Omnisolv); 0,1% de Ácido Acético

B - 99,9% de Etanol (Omnisolv, Etanol:IPA 95:5); 0,1% de Ácido Acético

Gradiente

Temp. Columna 30°C

Caudal 1,5 ml/min

Volumen de Inyección 5 gl

Detección por ELSD Temperatura 35°C, Flujo de gas 1,2 l/min

MSD Intervalo de Masa 200 - 1200, Fragmentador 225 V;

Temperatura del Gas de Secado 350°C; Temperatura del Vaporizador 325°C; Voltaje del Capilar 3500 V; Corriente en Corona 10 gA

Extracción en Fase Sólida - las fracciones de PL se separaron del lípido crudo mediante extracción en fase sólida (SPE) usando cartuchos de aminopropilo de 2 g (Biotage, Uppsala, Suecia) colocados en un aparato Vac Elut (Varian Inc, Palo Alto, EE. UU. de A.). El cartucho se acondicionó con 15 ml de hexano y ~60 mg de cada muestra se disolvieron en 1 ml de CHC^hy se aplicaron al cartucho. La columna se lavó con 15 ml de CHCl3:alcohol isopropílico 2:1 para eluir todos los lípidos neutros, que se descartaron. A continuación, los ácidos grasos se eluyeron con 15 ml de ácido acético (HOAc) al 2% en éter, que se descartaron. La porción de PL se eluyó con 15 ml de metanol:cloroformo 6:1, que se recogieron, se secaron bajo nitrógeno y se pesaron

Cromatografía de desarrollo rápido - La cromatografía de desarrollo rápido se usó para separar las clases de lípidos presentes en el aceite crudo. Aproximadamente 200 mg de aceite crudo disueltos en hexano se inyectaron en la parte superior de la columna. El sistema cromatográfico utilizaba Silica Gel 60 (EMD Chemical, Gibbstown, NJ) con fase móvil compuesta por éter de petróleo y acetato de etilo en 5 ml/min (Tablas 6-7) o 3 ml/min (Tablas 8-13). Se usó un gradiente por etapas para eluir selectivamente cada clase de lípido de la columna. El gradiente de fase móvil empezaba a partir de 100% de éter de petróleo y finalizaba con 50% de acetato de etilo. Las fracciones se recogieron en tubos de ensayo de 10 ml usando un colector de fracciones de lecho grande Gilson FC 204 (Gilson, Inc., Middleton, WI). Cada tubo se analizó mediante cromatografía en capa fina (TLC) y los tubos que contenían clases de lípidos individuales (según se juzgaba por puntos simples sobre la placa de TLC con factor de retención (Rf) esperado) se reunieron, se concentraron hasta sequedad y se pesaron. A continuación, el contenido total de las fracciones se determinó gravimétricamente.

Análisis por TLC - La cromatografía en capa fina se efectuó sobre placas de gel de sílice. Las placas se eluyeron usando un sistema de disolventes que consistía en éter de petróleo:éter etílico:ácido acético (80:20:1) y se visualizaron usando vapor de yodo. A continuación, los valores de Rf de cada punto se compararon con valores presentados en la bibliografía para cada clase de lípido.

Análisis de fracciones de TAGy PL - Las fracciones de TAG y PL aisladas se analizaron con respecto a la composición de ácidos grasos como ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME). Las fracciones de TAG se disolvieron en hexano para dar una concentración de aproximadamente 1-2 mg/ml. Partes alícuotas de 1 ml de las soluciones se concentraron hasta sequedad bajo nitrógeno. Se añadieron a cada tubo tolueno, que contenía patrón interno, y HCl 1,5 N en metanol. Los tubos se sometieron a turbulencia, a continuación se cerraron y se calentaron hasta 100°C durante 2 horas. Se añadieron patrón interno y HCl-metanol directamente a los tubos que contenían la fracción de PL y se calentaron. Los tubos se dejaron enfriar, y se añadió NaCl saturado en agua. Los tubos se sometieron de nuevo a turbulencia y se centrifugaron para permitir que las capas se separaran. A continuación, una porción de la capa orgánica se puso en un vial de GC y se analizó mediante GC-FID. Los FAMEs se cuantificaron usando una curva de calibración de 3 puntos generada usando Nu-Check-Prep GLC 502B Reference Standard (NuCheck, Elysian, MN). Los ácidos grasos presentes en el extracto se expresaron como mg/g y como un % de FAME.

Muestra de PTA-10208 n° 1. El perfil de ácidos grasos de la biomasa y el lípido crudo extraído para la Muestra de PTA-10208 n° 1 se determinó usando GC/FID. Los FAs de la biomasa se transesterificaron in situ al pesar 28,6 mg de biomasa directamente en un tubo de FAME, mientras se preparaba una muestra del lípido crudo extraído al pesar 55,0 mg de lípido crudo en un matraz volumétrico de 50 ml y transferir 1 ml a un tubo de FAME separado. Se determinó que el contenido de lípido crudo estimado de la biomasa era 53,2% (como SUMA de FAME) usando GC con detección de FID, mientras que se extraía 52,0% (peso/peso) de lípido de la biomasa seca, dando una recuperación de 97,8% de lípido total. Se determinó que el lípido crudo era 91,9% de ácidos grasos (como SUMA de FAME) usando GC/FID. Los ácidos grasos principales contenidos en el lípido crudo eran C16:0 (182,5 mg/g), C20:5 n-3 (186,8 mg/g) y C22:6 n-3 (423,1 mg/g).

El perfil de clases de lípidos del lípido crudo extraído se determinó al pesar 55,0 mg de lípido crudo en un matraz volumétrico de 50 ml y transferir una parte alícuota a un vial de HPLC para el análisis por HPLC/ELSD/MS. Según el análisis por HPLC/ELSD/MS, el lípido crudo contenía 0,2% de ésteres esterólicos (SE), 95,1% de TAG, 0,4% de esteroles y 0,5% de 1,2-diacilglicerol (DAG). 5% de la fracción de TAG incluía un pico que se eluía directamente después del pico de TAG, pero no daba un espectro de masas reconocible.

El TAG aislado procedente de esta muestra según se determina mediante cromatografía de desarrollo rápido constituía aproximadamente 92,4% del aceite crudo. No se detectaba PL por peso o TLC después del aislamiento por SPE. Los principales ácidos grasos (>50 mg/g) contenidos en el TAG eran C16:0 (189 mg/g), C20:5 n-3 (197 mg/g) y C22:6 n-3 (441 mg/g).

Muestra de PTA-10208 n° 2. El perfil de ácidos grasos de la biomasa y el lípido crudo extraído para la Muestra de PTA-10208 n° 2 se determinó usando GC/FID. Los FAs en la biomasa se transesterificaron in situ al pesar 32,0 mg de biomasa directamente en un tubo de FAME, mientras se preparaba una muestra del lípido crudo extraído al pesar 60,1 mg de lípido crudo en un matraz volumétrico de 50 ml y transferir 1 ml a un tubo de FAME separado. Se determinó que el contenido estimado de lípido crudo de la biomasa era 52,4% (como SUMA de FAME) usando GC con detección por FID, mientras se extraía 48,0% (peso/peso) de la biomasa seca, dando una recuperación de 91,7% de lípido total. Se determinó que el lípido crudo era 95,3% de ácidos grasos (como SUMA de FAME) usando GC/FID. Los principales ácidos grasos contenidos en el lípido crudo eran C16:0 (217,5 mg/g), C20:5 n-3 (169,3 mg/g) y C22:6 n-3 (444,1 mg/g).

El perfil de clases de lípidos del lípido crudo extraído se determinó al pesar 60,1 mg de lípido crudo en un matraz volumétrico de 50 ml y transferir una parte alícuota a un vial de HPLC para el análisis por HPLC/ELSD/MS. Según el análisis por HPLC/ELSD/MS, el lípido crudo contenía 0,2% de SE, 95,7% de TAG, 0,3% de esteroles y 0,7% de 1,2-DAG. 5,1% de la fracción de TAG incluía un pico que se eluía directamente después del pico de TAG, pero no daba un espectro de masas reconocible.

El TAG aislado procedente de esta muestra constituía aproximadamente 93,9% del aceite crudo. No se detectaba PL por peso o TLC después del aislamiento por SPE. Los principales ácidos grasos (>50 mg/g) contenidos en el TAG eran C16:0 (218 mg/g), C20:5 n-3 (167 mg/g) y C22:6 n-3 (430 mg/g).

Muestra de PTA-10208 n° 3. Una muestra de aceite crudo procedente del microorganismo depositado bajo el N° de Registro del ATCC PTA-10208 (Muestra PTA-10208 n° 3) se analizó usando HPLC/ELSD/MS. Se recuperaba un total de 98,38% de lípidos, con la fracción de ésteres esterólicos (SE) representando 0,32%, la fracción de TAG representando 96,13%, la fracción de 1,3-diacilglicerol (DAG) representando 0,22%, la fracción de 1,2-DAG representando 0,78% y la fracción de esteroles representando 0,93%.

Tabla 2: Perfiles de Ácidos Grasos de Biomasas y Lípidos Crudos Extraídos de PTA-10208 (mg/g)

Tabla 3: Perfiles de Ácidos Grasos de Biomasas y Lípidos Crudos Extraídos de PTA-10208 (%)

Tabla 4: Perfiles de Ácidos Grasos de TAG Aislado de PTA-10208

EJEMPLO 3

Un aceite crudo se puede obtener según los procedimientos indicados en los ejemplos 1 y 2. Un aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. Un aceite refinado se puede combinar adicionalmente con aceite de girasol con alto contenido de ácido oleico ("HOSO") para alcanzar un aceite final con un contenido combinado de DHA EPA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite. Características típicas de un aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 13.

Tabla 13: Características de un Aceite Final con un contenido combinado de DHA EPA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite

Otros ingredientes contenidos en el aceite incluyen 1200 ppm de lecitina de girasol; 2000 ppm de extracto de romero; 2000 ppm de tocoferoles mixtos; y 300 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 2000 ppm de tocoferol mixto proceden de 1700 ppm de tocoferoles añadidos (incluyen 1100 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70, y de los tocoferoles mixtos contenidos en los 3000 ppm de TAP 1010 Sun que se añadían al aceite. TAP1010 Sun proporcionaba 300 ppm de palmitato de ascorbilo, 300 ppm de tocoferoles mixtos y 1200 ppm de lecitina de girasol.

EJEMPLO 4

Aceite Final que Contiene Lecitina de Girasol, Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se puede obtener según los procedimientos indicados en los ejemplos 1 y 2. Un aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. Un aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido combinado de DHA EPA de al menos aproximadamente 500 mg/g de aceite. Características típicas del aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 14.

Tabla 14: Características de un Aceite Final con Contenido Combinado de DHA EPA de al menos aproximadamente 500 mg/g de aceite

Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 1600 ppm de lecitina de girasol; 2000 ppm de extracto de romero; 2400 ppm de tocoferoles mixtos; y 400 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 2400 ppm de tocoferol mixto proceden de 2000 ppm de tocoferoles añadidos (lo que incluye 900 ppm que se añadían en el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70, y de los tocoferoles mixtos contenidos en los 4000 ppm de TAP 1010 Sun que se añadían al aceite. TAP1010 Sun proporcionaba 400 ppm de palmitato de ascorbilo, 400 ppm de tocoferoles mixtos y 1600 ppm de lecitina de girasol.

EJEMPLO 5

Aceite Final que Contiene Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se obtiene según los procedimientos indicados en los ejemplos 1 y 2. Un aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. Un aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido combinado de DHA EPA de al menos aproximadamente 500 mg/g de aceite. Las características del aceite final según este ejemplo son similares a las características indicadas en la Tabla 14.

Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 3000 ppm de extracto de romero; 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 250 ppm de palmitato de ascorbilo.

EJEMPLO 6

Se compararon la potencia; el aroma (olor) a pescado/marino y los compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos de los aceites finales según los ejemplos 4 y 5. Los resultados de esta comparación se indican en la Tabla 15.

La potencia se obtuvo a través del siguiente protocolo AOCS Ce 1 b-89 (modificado). Los índices sensoriales de aroma (olor) a pescado/marino y compuestos aromáticos (sabor) se determinaron según el método que se describe en Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard y cols., CRC Press; 4a edición (13 de diciembre de 2006). Un grupo de 8 -18 personas experimentadas probaba y/u olía una muestra de los aceites finales según los ejemplos 4 y 5. Cada una de estas personas determinaba el índice de la muestra. Posteriormente, todos los índices se promediaron aritméticamente y el resultado se redondeó ascendentemente o descendentemente hasta el número siguiente. Se espera que un índice de > 1,5 de aroma a pescado/marino y > 2,5 de compuestos aromáticos de pescado/marinos sea percibido por la población general.

Los aceites finales de cada uno de los ejemplos 4a-d y 5 se envasaron en recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica de 100 g (Elemental Container Inc., número de pieza MC 12532) con tapones de polímero natural de 25 mm (Elemental Container Inc., número de pieza 024PLUG) y se almacenaron a 25°C.

Tabla 15

EJEMPLO 7

Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. Un aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 350 mg/g de aceite. Características típicas del aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 16.

Tabla 16: Características del Aceite Final con un Contenido de DHA de al menos aproximadamente 350 mg/g

Ejemplo 7a. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 900 ppm de tocoferoles mixtos que se añadían durante el procesamiento aguas arriba. Los tocoferoles mixtos están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7b. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 900 ppm de tocoferoles mixtos que se añadían durante el procesamiento aguas arriba; 400 ppm de palmitato de ascorbilo; y 2800 ppm de lecitina de soja. Los tocoferoles mixtos están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7c. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 900 ppm de tocoferoles mixtos que se añadían durante el procesamiento aguas arriba; 750 ppm de palmitato de ascorbilo; y 2800 ppm de lecitina de soja. Los tocoferoles mixtos están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7d. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 3500 ppm de extracto de romero; 1400 ppm de tocoferoles mixtos; y 50 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), están disponible, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7e. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 3500 ppm de extracto de romero; 1400 ppm de tocoferoles mixtos; y 750 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 1400 ppm de tocoferoles mixtos incluyen 900 ppm que se añaden aguas arriba, que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7f. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 3500 ppm de extracto de romero; 3400 ppm de tocoferoles mixtos; y 50 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7g. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 3500 ppm de extracto de romero; 3400 ppm de tocoferoles mixtos; y 750 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba) están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 7h. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 500 ppm de extracto de romero.

Ejemplo 7i. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 500 ppm de extracto de romero; 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 50 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 7j. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 500 ppm de extracto de romero; 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70 ; y 750 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 7k. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 500 ppm de extracto de romero; 3400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 50 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 7L. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 500 ppm de extracto de romero; 3400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 750 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 7m. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2800 ppm de lecitina de soja; 2000 ppm de extracto de romero; 2400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 400 ppm de palmitato de ascorbilo.

EJEMPLO 8

Aceite Final que Contiene Extracto de Romero y Tocoferoles Mixtos. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos en, por ejemplo, los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 350 mg/g de aceite. Las características de este aceite son similares a las características indicadas en la Tabla 16.

Ejemplo 8a. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 3400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 500 ppm de extracto de romero. La Tabla 17 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 17

Ejemplo 8b. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 1400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 3500 ppm de extracto de romero. La Tabla 18 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 18

Ejemplo 8c. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 3400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 3500 ppm de extracto de romero. La Tabla 19 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 19

Ejemplo 8d. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 2000 ppm de extracto de romero. La Tabla 20 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 20

Ejemplo 8e. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 0 ppm de extracto de romero. La Tabla 21 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo, lecitina o extracto de romero.

Tabla 21

Ejemplo 8f. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 900 ppm de tocoferoles mixtos (que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 2000 ppm de extracto de romero. Tabla 22 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 22

Ejemplo 8g. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 2000 ppm de extracto de romero. La Tabla 23 resume el aceite según este ejemplo que no contiene palmitato de ascorbilo o lecitina.

Tabla 23

EJEMPLO 9

Tabla

Tabla 24b

Tabla 24c

Los índices de Rancimat se determinaron mediante la prueba estándar para estabilidad del aceite, usando un aparato de Rancimat que funcionaba a 90°C, con flujo de aire graduado a 10 l/hora (AOCS Cd 12b-92). La potencia se obtuvo a través del siguiente protocolo AOCS Ce 1b-89(modificado). Los índices sensoriales del aroma (olor) a pescado/marino y los compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos se determinaron según el método que se describe en Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard y cols., CRC Press; 4a edición (13 de diciembre de 2006). Un grupo de 8 - 18 expertos probaba (u olía) una muestra de los aceites finales según los ejemplos 7a-m y 8a-g. Cada una de estas personas determinaba el índice de la muestra. Posteriormente, todos los índices se promediaban aritméticamente y el resultado se redondeaba al alza o la baja hasta el número siguiente. Se espera que un índice de > 1,5 de aroma a pescado/marino y > 2,5 de compuestos aromáticos de pescado/marinos sea percibible por la población general.

Los aceites finales de los ejemplos 7a-m y 8a-g se envasaron en bolsas de nailon/papel metalizado/PE polietileno de baja densidad envasadas al vacío y a continuación termoselladas bajo N2 en un Model AGV Multivac. (Multivac Sepp Haggenmüller GmbH & Co. KG) y se almacenaron a 25°C.

EJEMPLO 10

Aceite Final que Contiene Lecitina de Girasol, Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 350 mg/g de aceite. Características típicas del aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 25.

Tabla 25: Características de un Aceite Final con Contenido de DHA de al menos aproximadamente 350 mg/g de aceite

Ejemplos 10a-10e. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 1600 ppm de lecitina de girasol; 2000 ppm de extracto de romero; 2400 ppm de tocoferoles mixtos; y 400 ppm de palmitato de ascorbilo. Los 2400 ppm de tocoferoles mixtos procedían de 2000 ppm de tocoferoles añadidos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70, y de los tocoferoles mixtos contenidos en los 4000 ppm de TAP 1010 Sun que se añadían al aceite. TAP1010 Sun proporcionaba 400 ppm de palmitato de ascorbilo, 400 ppm de tocoferoles mixtos y 1600 ppm de lecitina de girasol.

EJEMPLO 11

Aceite Final que Contiene Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite. Las características del aceite final según este ejemplo son similares a las características indicadas en la Tabla 26.

Ejemplos 11a-b. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 3000 ppm de extracto de romero; 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 250 ppm de palmitato de ascorbilo.

EJEMPLO 12

Se compararon la potencia; el aroma (olor) a pescado/marino y los compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos de los aceites finales según los ejemplos 10a-e y 11a-b. Los resultados de esta comparación se indican en la Tabla 27.

La potencia se obtuvo a través del siguiente protocolo AOCS Ce 1b-89 (modificado). Los índices sensoriales del aroma (olor) a pescado/marino y los compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos se determinaron según el método que se describe en Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard y cols., CRC Press; 4a edición (13 de diciembre de 2006). Un grupo de 8 - 18 expertos probaba y/u olía una muestra de los aceites finales según los ejemplos 10a-e y 11a-b. Cada una de estas personas determinaba el índice de la muestra. Posteriormente, todos los índices se promediaban aritméticamente y el resultado se redondeaba al alza o la baja hasta el número siguiente. Se espera que un índice de > 1,5 de aroma a pescado/marino y > 2,5 de compuestos aromáticos de pescado/marinos sea percibible por la población general.

Los aceites finales de cada uno de los ejemplos 10a-d y 11a se envasaron en recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica de 100 g (Elemental Container Inc., número de pieza MC 12532) con tapones de polímero natural de 25 mm (Elemental Container Inc., número de pieza 024PLUG) y se almacenaron a 25°C.

Los aceites finales de cada uno de los ejemplos 10e y 11b se envasaron en bolsas de nailon-papel metalizado de 300 g con revestimiento de polietileno de baja densidad (LDPE) (fabricadas por Heritage Packaging) y se almacenaron a temperatura ambiente (25°C).

Tabla 27

EJEMPLO 13

Aceite Final que Contiene Lecitina de Girasol, Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite. Características típicas del aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 28.

Tabla 28: Características de Un Aceite Final con Contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite

Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2000 ppm de extracto de romero; 2400 ppm de tocoferoles mixtos; 400 ppm de palmitato de ascorbilo; y 1600 ppm lecitina de girasol. Los 2400 ppm de tocoferol mixto proceden de los 2000 ppm de tocoferoles añadidos (incluyen 900 ppm que se añadían aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70, y de los tocoferoles mixtos contenidos en los 4000 ppm de TAP 1010 Sun que se añadían al aceite. TAP1010 Sun proporcionaba 400 ppm de palmitato de ascorbilo, 400 ppm de tocoferoles mixtos y 1600 ppm de lecitina de girasol.

EJEMPLO 14

Aceite Final que Contiene Extracto de Romero, Tocoferoles Mixtos y Palmitato de Ascorbilo. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO ^{91/007498, WO 94/08467,}Wo ^{03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a}través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite. Las características del aceite final según este ejemplo son similares a las características indicadas en la Tabla 28.

Ejemplo 14a. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2000 ppm de extracto de romero; 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 250 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 14b y 14c. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 3000 ppm de extracto de romero; 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 250 ppm de palmitato de ascorbilo.

Ejemplo 14d. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 5000 ppm de extracto de romero; 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70; y 250 ppm de palmitato de ascorbilo.

EJEMPLO 15

Aceite Final que Contiene Extracto de Romero Orgánico y Tocoferoles Mixtos. Un aceite crudo se puede obtener a partir de Schizochytrium sp a través de los procedimientos descritos, por ejemplo, en los documentos WO 91/007498, WO 94/08467, WO 03/105606 y WO2011/153246. El aceite crudo se puede procesar adicionalmente a través de refinado, blanqueo y desodorización para obtener aceites refinados. El aceite refinado se puede combinar adicionalmente con HOSO orgánico, que está disponible, por ejemplo, de Adams Vegetables Oils, Inc, (Arbuckle, California) para alcanzar un aceite final con un contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite. Características típicas del aceite final según este ejemplo se indican en la Tabla 29.

Tabla 29: Características de un Aceite Final con Contenido de DHA de al menos aproximadamente 400 mg/g de aceite

Ejemplo 15a. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 750 ppm de extracto de romero, que está disponible, por ejemplo, de Vitiva (Markovic, Eslovenia) bajo el nombre comercial Inolens® 4 organic y Naturex (Aviñón, Francia) bajo el nombre comercial organic StabilEnhance® OSR-4; y 1700 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían durante el procesamiento aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

Ejemplo 15b. Otros ingredientes contenidos en el aceite final incluyen 2000 ppm de extracto de romero, que está disponible, por ejemplo, de Vitiva (Markovic, Eslovenia) bajo el nombre comercial Inolens® 4 organic y Naturex (Aviñón, Francia) bajo el nombre comercial organic StabilEnhance® OSR-4; y 2400 ppm de tocoferoles mixtos (incluyen 900 ppm que se añadían aguas arriba), que están disponibles, por ejemplo, de Vitablend (Wolvega, Países Bajos) bajo el nombre comercial Tocoblend™ L70.

EJEMPLO 16

Se compararon la potencia; el aroma (olor) a pescado/marino y los compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos de los aceites finales según los ejemplos 13, 14 y 15. Los resultados de esta comparación se indican en la Tabla 30.

La potencia se obtuvo a través del siguiente protocolo AOCS Ce 1b-89(modificado). Los índices sensoriales de aroma (olor) a pescado/marino y compuestos aromáticos (sabor) de pescado/marinos se determinaron según el método que se describe en Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard y cols., CRC Press; 4a edición (13 de diciembre de 2006). Un grupo de 8 - 18 expertos probaba y/u olía una muestra de los aceites según los ejemplos 13, 14 y 15. Cada una de estas personas determinaba el índice de la muestra. Posteriormente, todos los índices se promediaban aritméticamente y el resultado se redondeaba al alza o la baja hasta el número siguiente. Se espera que un índice de > 1,5 de aroma a pescado/marino y > 2,5 de compuestos aromáticos de pescado/marinos sea percibible por la población general.

Los aceites finales de cada uno de los ejemplos 13 y 14a-d se envasaron en bolsas de nailon-papel metalizado termoselladas de 300 g con revestimiento de polietileno de baja densidad (LDPE) (fabricadas por Heritage Packaging) y se almacenaron a 25 °C.

Los aceites finales de cada uno de los ejemplos 15a-b se envasaron en recipientes de aluminio revestidos con resina epoxifenólica de 100 g (Elemental Container Inc., número de pieza MC 12532) con tapones de polímero natural de 25 mm (Elemental Container Inc., número de pieza 024PLUG) y se almacenaron a 25 °C.

Tabla 30

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un aceite que comprende

(i) al menos 30% en peso de uno o más ácidos grasos poliinsaturados que tienen al menos 4 dobles enlaces;

(ii) al menos un primer antioxidante; y

(iii) menos de 150 ppm de lecitina,

en donde el al menos un primer antioxidante es un tocoferol, el aceite comprende tocoferol en una cantidad que varía de 900 ppm a 3400 ppm, en donde dicho aceite comprende además menos de 750 ppm de un segundo antioxidante elegido de un derivado de ácido ascórbico, y en donde dicho aceite y/o dicho al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces se obtiene a partir de microalgas.

2. El aceite según la reivindicación 1, en donde dicho aceite comprende menos de 30 ppb de hierro.

3. El aceite según la reivindicación 1 o 2, en donde dicho aceite comprende además un reactivo saborizante.

4. El aceite según la reivindicación 3, en donde dicho reactivo saborizante es extracto de romero.

5. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite está

(a) esencialmente libre de un segundo antioxidante elegido de un derivado de ácido ascórbico; o

(b) libre de un segundo antioxidante elegido de un derivado de ácido ascórbico.

6. El aceite según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el derivado de ácido ascórbico está presente en una cantidad que varía de 50 ppm a 400 ppm.

7. El aceite según la reivindicación 6, en donde el derivado de ácido ascórbico está presente en una cantidad que varía de 100 ppm a 300 ppm.

8. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho segundo antioxidante es palmitato de ascorbilo.

9. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite tiene un índice sensorial de aroma a pescado, según se determina de acuerdo con el método descrito en Sensory Evaluation Techniques, Meilgaard y cols., CRC Press; 4a edición (13 de diciembre de 2006), de menos de 1,5.

10. El aceite según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho aceite tiene

(c) un índice sensorial de compuestos aromáticos de pescado de menos de 2,5;

(d) un POV menor de 5, por ejemplo, menor de 2, por ejemplo, menor de 1; y/o

(e) un AnV menor de 20, por ejemplo, menor de 10.

11. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho al menos un primer antioxidante es (f) un tocoferol mixto; y/o

(g) un tocoferol añadido.

12. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite es un aceite orgánico y/o un aceite natural.

13. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicha microalga es Thraustochytriales.

14. El aceite según la reivindicación 13, en donde dicha microalga se elige de Thraustochytrium sp., Schizochytrium sp. y sus combinaciones.

15. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite es un aceite comestible.

16. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces se elige de DHA, EPA, DPA n-3 y sus mezclas.

17. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho al menos un ácido graso poliinsaturado que tiene al menos 4 dobles enlaces se elige de DPA n-6 y ARA

18. Uso de un aceite según cualquier reivindicación precedente, para preparar un producto alimenticio.

19. Uso de un aceite según cualquier reivindicación precedente, como un aditivo para un producto alimenticio.

20. Procedimiento para preparar un producto alimenticio, que comprende incorporar el aceite según cualquier reivindicación precedente a dicho producto alimenticio.

21. Un aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende al menos 35% en peso, al menos 40% en peso, al menos 45% en peso, al menos 50% en peso de DHA, en donde dicho aceite comprende menos de 80% en peso, menos de 70% en peso o menos de 60% en peso de DHA.

22. Un aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende al menos 35% en peso, al menos 40% en peso, al menos 45% en peso, al menos 50% en peso de DHA+EPA, en donde dicho aceite comprende menos de 80% en peso, menos de 70% en peso o menos de 60% en peso de DHA+EPA.

23. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite tiene

(h) un índice de Rancimat que es menor de 19;

(i) un índice de aroma a pescado de menos de 1,5 en un período elegido de 0-3 meses, a los 0-4 meses, a los 0-5 meses, a los 0-6 meses, a los 0-7 meses, a los 0-8 meses o a los 0-9 meses; y/o

(j) un índice de compuestos aromáticos de pescado de menos de 2,5 en un período elegido de 0-3 meses, a los 0-4 meses, a los 0-5 meses, a los 0-6 meses, a los 0-7 meses, a los 0-8 meses o a los 0-9 meses.

24. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende menos de 10 ppm de lecitina.

25. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende tocoferol en una cantidad que varía de 1000 ppm a 3000 ppm.

26. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende un tocoferol añadido que varía de 300 ppm a 1000 ppm.

27. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dicho aceite comprende extracto de romero que varía de 1500 ppm a 5000 ppm.

28. El aceite según cualquier reivindicación precedente, en donde dichos uno o más ácidos grasos poliinsaturados incluyen ácido docosahexaenoico ("DHA"), ácido eicosapentaenoico ("EPA"), ácido araquidónico ("ARA"), ácido docosapentaenoico omega-3 ("DPA n-3") y/o ácido docosapentaenoico omega-6 ("DPA n-6").