ES2486715T9

ES2486715T9 - Pirimidinonas como inhibidores de PI3K

Info

Publication number: ES2486715T9
Application number: ES10729035.5T
Authority: ES
Inventors: Yun-Long Li; Brian W. Metcalf; Andrew P. Combs
Original assignee: Incyte Corp
Current assignee: Incyte Corp
Priority date: 2009-06-29
Filing date: 2010-06-28
Publication date: 2015-09-22
Anticipated expiration: 2030-06-28
Also published as: US9975907B2; CR20110686A; DK2448938T5; US20200123176A1; TW201602113A; US20140121222A1; BRPI1015135B1; AU2010273816A1; AU2010273816B2; CN102482278B; PE20120493A1; DK2448938T3; CL2011003346A1; ME01838B; WO2011008487A1; BRPI1015135A2; US8940752B2; PL2448938T3; EA201270100A1; RS53494B1

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

imagen7

imagen8

imagen9

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

imagen10

imagen11

En algunas realizaciones de compuestos de fórmulas IId, RA es heteroarilo bicíclico opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes independientemente seleccionados de -(alquil C1-4)r-Cy1, halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C26, alquinilo C2-6, haloalquilo C1-6, halosulfanilo, CN, NO2, ORa1, SRa1, C(O)Rb1, C(O)NRc1Rd1, C(O)ORa1, OC(O)Rb1 , OC(O)NRc1Rd1, C(=NRe)NRc1Rd1, NRc1C(=NRe)NRc1Rd1, NRc1Rd1, NRc1C(O)Rb1, NRc1C(O)ORa1, NRc1C(O)NRc1Rd1 , NRc1S(O)Rb1, NRc1S(O)2Rb1, NRc1S(O)2NRc1Rd1, S(O)Rb1, S(O)NRc1Rd1, S(O)2Rb1 y S(O)2NRc1Rd1 .

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, RB está seleccionado de H y alquilo C1-6.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, RB es H.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R2a es H, halógeno, OH, CN, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6, en el que el alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6 está opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, haloalquilo C1-6, halosulfanilo, CN, NO2, ORa2, SRa2, C(O)Rb2, C(O)NRc2Rd2, C(O)ORa2 ,

NRc2Rd2

OC(O)Rb2 , OC(O)NRc2Rd2 , C(=NRe)NRc2Rd2 , NRc2C(=NRe)NRc2Rd2 , , NRc2C(O)Rb2 , NRc2C(O)ORa2 , NRc2C(O)NRc2Rd2 , NRc2S(O)Rb2 , NRc2S(O)2Rb2 , NRc2S(O)2NRc2Rd2 , S(O)Rb2 , S(O)NRc2Rd2 , S(O)2Rb2 y S(O)2NRc2Rd2 .

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R2a es halógeno, OH, CN, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6, en el que el alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6 está opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, haloalquilo C1-6, halosulfanilo, CN, NO2, ORa2, SRa2, C(O)Rb2, C(O)NRc2Rd2, C(O)ORa2 ,

NRc2Rd2

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R2a es H, halógeno, OH, CN, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-6 o alquinilo C2-6.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R2a es alquilo C1-6.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R2a es metilo o etilo.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R3 es halógeno, CN, NO2, ORa3 , SRa3 , C(O)Rb3 , NRc3Rd3

C(O)NRc3Rd3 , C(O)ORa3 , , NRc3C(O)Rb3 , NRc3S(O)2Rb3 , NRc3S(O)2NRc3Rd3 , S(O)2NRc3Rd3 , alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, arilo, cicloalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, cicloalquilalquilo y heterocicloalquilalquilo, en el que el alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, arilo, cicloalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, cicloalquilalquilo o heterocicloalquilalquilo está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CN, ORa3, SRa3, C(O)Rb3, C(O)NRc3Rd3, C(O)ORa3, OC(O)Rb3, OC(O)NRc3Rd3, NRc3Rd3 , NRc3C(O)Rb3 , NRc3C(O)NRc3Rd3 , NRc3C(O)ORa3 , C(=NRe)NRc3Rd3 , NRc3C(=NRe)NRc3Rd3 , S(O)Rb3 , S(O)NRc3Rd3 , S(O)2Rb3, NRc3S(O)2Rb3, NRc3S(O)2NRc3Rd3 y S(O)2NRc3Rd3 .

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R3 es H, halógeno, CN, NO2, ORa3 , SRa3 , C(O)Rb3 , C(O)NRc3Rd3, C(O)ORa3, NRc3Rd3, NRc3C(O)Rb3, NRc3S(O)2Rb3, S(O)2NRc3Rd3 o alquilo C1-6, en el que el alquilo C1-6 está opcionalmente sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, CN, ORa3, SRa3, C(O)Rb3, C(O)NRc3Rd3, C(O)ORa3, OC(O)Rb3, OC(O)NRc3Rd3, NRc3Rd3, NRc3C(O)Rb3, NRc3C(O)NRc3Rd3 , NRc3C(O)ORa3 , C(=NRe)NRc3Rd3 , NRc3C(=NRe)NRc3Rd3 , S(O)Rb3 , S(O)NRc3Rd3 , S(O)2Rb3 , NRc3S(O)2Rb3 y

11

E10729035

14-09-2015

S(O)2NRc3Rd3 .

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R3 es H o alquilo C1-6.

5 En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R3 es alquilo C1-6.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R3 es metilo.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R4 está seleccionado de H, halógeno, alquilo C1-6 o

10 haloalquilo C1-6.

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IId, R4 es H.

En algunas realizaciones, los compuestos de la invención tienen la fórmula IIe:

15

20

imagen12

En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IIe, R1 es según cualquiera de las realizaciones previamente 25 citadas para R1.

En algunas realizaciones, los compuestos de la invención tienen la fórmula IIf:

30

35

imagen13

40 En algunas realizaciones de compuestos de fórmula IIf, RA es según cualquiera de las realizaciones previamente citadas para RA.

45

50

55

imagen14

en los que R8 y R9 están independientemente seleccionados de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halógeno, CN, ORa5 ,

60 SRa5 , C(O)Rb5 , C(O)NRc5Rd5 , C(O)ORa5 , OC(O)Rb5 , OC(O)NRc5Rd5 , NRc5Rd5 , NRc5C(O)Rb5 , NRc5C(O)NRc5Rd5 , NRc5C(O)ORa5 , C(=NRf)NRc5Rd5 , NRc5C(=NRf)NRc5Rd5 , S(O)Rb5 , S(O)NRc5Rd5 , S(O)2Rb5 , NRc5S(O)2Rb5 , NRc5S(O)2NRc5Rd5 y S(O)2Rc5Rd5 .

En algunas realizaciones, R8 y R9 están independientemente seleccionados de H, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, 65 NRc5Rd5, NRc5C(O)Rb5, NRc5C(O)NRc5Rd5, NRc5C(O)ORa5, NRc5C(=NRf)Rc5Rd5, NRc5S(O)2Rb5 y NRc5S(O)2NRc5Rd5 .

12

imagen15

imagen16

imagen17

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

Otros agentes de resolución adecuados para los procedimientos de cristalización fraccionada incluyen formas estereoisoméricamente puras de α-metilbencilamina (por ejemplo, formas S y R, o formas diastereoméricamente puras), 2-fenilglicinol, norefedrina, efedrina, N-metilefedrina, ciclohexiletilamina, 1,2-diaminociclohexano y similares.

La resolución de mezclas racémicas también puede llevarse a cabo por elución sobre una columna empaquetada con un agente de resolución ópticamente activo (por ejemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). La composición del disolvente de elución adecuado puede determinarse por un experto en la materia.

Los compuestos de la invención también incluyen formas tautómeras. Las formas tautómeras resultan del intercambio de un enlace sencillo con un doble enlace adyacente junto con la migración concomitante de un protón. Las formas tautómeras incluyen tautómeros prototrópicos que son estados de protonación isoméricos que tienen la misma fórmula empírica y carga total. Tautómeros prototrópicos de ejemplo incluyen pares cetona -enol, pares amida -ácido imídico, pares lactama -lactima, pares enamina -imina y formas anulares en las que un protón puede ocupar dos o más posiciones de un sistema heterocíclico, por ejemplo, 1H-y 3H-imidazol, 1H-, 2H-y 4H-1,2,4triazol, 1H-y 2H-isoindol, y 1H-y 2H-pirazol. Las formas tautómeras pueden estar en equilibrio o bloquearse estéricamente en una forma por sustitución apropiada. Por ejemplo, la purina incluye las formas tautómeras 9H y 7H:

imagen18

Los compuestos de la invención pueden incluir tanto las formas tautómeras 9H como 7H.

Los compuestos de la invención también pueden incluir todos los isótopos de átomos que se producen en los productos intermedios o compuestos finales. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números másicos. Por ejemplo, isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio.

El término “compuesto”, como se usa en el presente documento, pretende incluir todos los estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e isótopos de las estructuras representadas. Los compuestos identificados en el presente documento por nombre o estructura como una forma tautómera particular pretenden incluir otras formas tautómeras, a menos que se especifique de otro modo.

Todos los compuestos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden encontrarse junto con otras sustancias tales como agua y disolventes (por ejemplo, hidratos y solvatos) o pueden aislarse.

En algunas realizaciones, los compuestos de la invención, o sales de los mismos, se aíslan sustancialmente. Por “sustancialmente aislado” se indica que el compuesto se separa al menos parcialmente o sustancialmente del entorno en el que se formó o detectó. La separación parcial puede incluir, por ejemplo, una composición enriquecida en los compuestos de la invención. La separación sustancial puede incluir composiciones que contienen al menos aproximadamente el 50 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 70 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 %, al menos aproximadamente el 95 %, al menos aproximadamente el 97 %, o al menos aproximadamente el 99 % en peso de los compuestos de la invención, o sal de los mismos. Procedimientos para aislar compuestos y sus sales son rutinarios en la materia.

El término “farmacéuticamente aceptable” se emplea en el presente documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que están dentro del alcance del criterio médico sensato, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable.

La expresión “temperatura ambiente”, como se usa en el presente documento, se entiende en la materia y se refiere generalmente a una temperatura, por ejemplo, una temperatura de reacción que es aproximadamente la temperatura de la habitación en la que la reacción se lleva a cabo, por ejemplo, una temperatura de aproximadamente 20 ºC a aproximadamente 30 ºC.

La presente invención también incluye sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento. Como se usa en el presente documento, “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a derivados de los compuestos desvelados en los que el compuesto parental se modifica convirtiendo un resto de ácido o base existente en su forma de sal. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos minerales u orgánicos de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención incluyen las sales no tóxicas convencionales del compuesto parental formado, por ejemplo, de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto parental que contiene un resto básico o ácido por procedimientos químicos convencionales. Generalmente, tales sales pueden prepararse haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente

16 E10729035

14-09-2015

orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, alcoholes (por ejemplo, metanol, etanol, iso-propanol o butanol) o acetonitrilo (ACN). Listas de sales adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ª ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, pág. 1418 y Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada uno de los cuales se incorpora en el presente

5 documento por referencia en su totalidad.

Síntesis

Los compuestos de la invención, que incluye sales de los mismos, pueden prepararse usando técnicas de síntesis 10 orgánica conocidas y pueden sintetizarse según cualquiera de las numerosas posibles rutas de síntesis.

Las reacciones para preparar los compuestos de la invención pueden llevarse a cabo en disolventes adecuados que pueden seleccionarse fácilmente por un experto en la materia de la síntesis orgánica. Disolventes adecuados pueden ser sustancialmente no reactivos con los materiales de partida (reactantes), los productos intermedios o

15 productos a las temperaturas a las que las reacciones se llevan a cabo, por ejemplo, temperaturas que pueden oscilar de la temperatura de congelación del disolvente a la temperatura de ebullición del disolvente. Una reacción dada puede llevarse a cabo en un disolvente o una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo de la etapa de reacción particular, disolventes adecuados para una etapa de reacción particular pueden seleccionarse por el experto.

20 La preparación de compuestos de la invención puede implicar la protección y desprotección de diversos grupos químicos. La necesidad de protección y desprotección, y la selección de grupos protectores apropiados, puede determinarse fácilmente por un experto en la materia. La química de grupos protectores puede encontrarse, por ejemplo, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª ed., Wiley & Sons, Inc., New

25 York (1999), que se incorpora en el presente documento por referencia en su totalidad.

Las reacciones pueden monitorizarse según cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de producto puede monitorizarse por medios espectroscópicos tales como espectroscopía de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, 1H o 13C), espectroscopía infrarroja, espectrofotometría (por ejemplo,

30 UV-visible), espectrometría de masas, o por procedimientos cromatográficos tales como cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o cromatografía en capa fina (CCF).

Procedimientos sintéticos de ejemplo para preparar los compuestos de la invención se proporcionan en los siguientes esquemas. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden prepararse por el procedimiento de 35 síntesis general mostrado en el Esquema 1. Los compuestos de heteroarilo de fórmula 1 pueden reaccionar con 4halo-3-oxo-pentanoatos 2 en presencia de ácido polifosfórico (PPA) proporcionando los compuestos de fórmula 3 mediante una reacción de ciclocondensación. Éstos pueden someterse a reacción de halogenación bajo condiciones adecuadas, proporcionando compuestos halogenados 4. Los compuestos de fórmula 4 pueden transformarse en los compuestos de fórmula 5 mediante cualquier variación de una secuencia de etapas. X1 puede sustituirse con tanto

40 una azida, una amina como un grupo heterocíclico mediante un desplazamiento SN2 y eventualmente transformarse en el grupo R1. X2 puede convertirse en un resto cíclico deseado (Cy) mediante cualquiera de las reacciones de acoplamiento cruzado convencionales conocidas para un experto en la materia, por ejemplo, usando derivados de ácido borónico del resto cíclico deseado.

45 Esquema 1

imagen19

Como se muestra en el Esquema 2, las pirido[1,2-a]pirimidin-4-onas de la invención pueden prepararse por ciclocondensación de aminopirimidinas 6 con un β-cetoéster 2. La halogenación de las piridopiridinonas 7 resultantes bajo condiciones adecuadas (tales como NBS o bromo) proporciona compuestos de fórmula 8. Los últimos pueden transformarse en los compuestos de fórmula 9 mediante una sustitución SN2 de X1 con un heterociclo R1 seguido de

60 una reacción de acoplamiento de X2 con el resto L-A (tal como un acoplamiento de Negishi de reactivo de organocinc; un acoplamiento de Suzuki o Stille de un ácido arilborónico o arilestaño, respectivamente). Alternativamente, X1 puede sustituirse con tanto una amina como una azida que puede reducirse a amina. La amina pueden entonces someterse a reacción de acoplamiento con un resto R1 dando los compuestos de fórmula 9.

65

17

imagen20

imagen21

imagen22

imagen23

imagen24

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe y metilcelulosa. Las formulaciones pueden incluir adicionalmente: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio y aceite mineral; agentes humectantes; emulsionantes y agentes de suspensión; conservantes tales como metil-y propilhidroxi-benzoatos; edulcorantes; y aromatizantes. Las composiciones de la invención pueden formularse de manera que se proporcione liberación rápida, sostenida o retardada del principio activo después de la administración al paciente empleando procedimientos conocidos en la técnica.

Las composiciones pueden formularse en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación de aproximadamente 5 a aproximadamente 1000 mg (1 g), más normalmente aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mg, de principio activo. El término “formas de dosificación unitaria” se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado.

En algunas realizaciones, los compuestos o composiciones de la invención contienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 50 mg del principio activo. Un experto habitual en la materia apreciará que esto incluye compuestos o composiciones que contienen aproximadamente 5 a aproximadamente 10, aproximadamente 10 a aproximadamente 15, aproximadamente 15 a aproximadamente 20, aproximadamente 20 a aproximadamente 25, aproximadamente 25 a aproximadamente 30, aproximadamente 30 a aproximadamente 35, aproximadamente 35 a aproximadamente 40, aproximadamente 40 a aproximadamente 45, o aproximadamente 45 a aproximadamente 50 mg del principio activo.

En algunas realizaciones, los compuestos o composiciones de la invención contienen de aproximadamente 50 a aproximadamente 500 mg del principio activo. Un experto habitual en la materia apreciará que esto incluye compuestos o composiciones que contienen aproximadamente 50 a aproximadamente 100, aproximadamente 100 a aproximadamente 150, aproximadamente 150 a aproximadamente 200, aproximadamente 200 a aproximadamente 250, aproximadamente 250 a aproximadamente 300, aproximadamente 350 a aproximadamente 400, o aproximadamente 450 a aproximadamente 500 mg del principio activo

En algunas realizaciones, los compuestos o composiciones de la invención contienen de aproximadamente 500 a aproximadamente 1000 mg del principio activo. Un experto habitual en la materia apreciará que esto incluye compuestos o composiciones que contienen aproximadamente 500 a aproximadamente 550, aproximadamente 550 a aproximadamente 600, aproximadamente 600 a aproximadamente 650, aproximadamente 650 a aproximadamente 700, aproximadamente 700 a aproximadamente 750, aproximadamente 750 a aproximadamente 800, aproximadamente 800 a aproximadamente 850, aproximadamente 850 a aproximadamente 900, aproximadamente 900 a aproximadamente 950, o aproximadamente 950 a aproximadamente 1000 mg del principio activo.

El compuesto activo puede ser eficaz con respecto a un amplio intervalo de dosificación y se administra generalmente en una cantidad farmacéuticamente eficaz. Se entenderá, sin embargo, que la cantidad del compuesto en realidad administrado se determinará normalmente por un médico, según las circunstancias relevantes, que incluyen la afección que va a tratarse, la vía de administración elegida, el compuesto administrado real, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.

Para preparar composiciones sólidas tales como comprimidos, el principio activo principal se mezcla con un excipiente farmacéutico para formar una composición de preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se refiere a estas composiciones de preformulación como homogéneas, el principio activo se dispersa normalmente uniformemente en toda la composición de manera que la composición pueda subdividirse fácilmente en formas de dosificación unitaria igualmente eficaces tales como comprimidos, píldoras y cápsulas. Esta preformulación sólida se subdivide entonces en formas de dosificación unitaria del tipo descrito anteriormente que contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1000 mg del principio activo de la presente invención.

Los comprimidos o píldoras de la presente invención pueden recubrirse o combinarse de otro modo para proporcionar una forma de dosificación que proporciona la ventaja de acción prolongada. Por ejemplo, el comprimido

o píldora puede comprender un componente de dosificación interna y uno de dosificación externa, estando el último en forma de una envoltura sobre el primero. Los dos componentes pueden separarse por una capa entérica que sirve para resistir a la disgregación en el estómago y permitir que el componente interno pase intacto al duodeno o sea de liberación retardada. Puede usarse una variedad de materiales para tales capas o recubrimientos entéricos, incluyendo tales materiales varios ácidos poliméricos y mezclas de ácidos poliméricos con materiales tales como Shellac, alcohol cetílico y acetato de celulosa.

Las formas líquidas en las que los compuestos y composiciones de la presente invención pueden incorporarse para administración por vía oral o por inyección incluyen disoluciones acuosas, jarabes adecuadamente aromatizados, suspensiones acuosas o de aceite y emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o aceite de cacahuete, además de elixires y vehículos farmacéuticos similares.

23

imagen25

imagen26

imagen27

imagen28

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

6,85 (1H, d a, J = 6,9 Hz), 5,13 (1H, m), 2,81 (3H, s), 1,72 (2H, m), 0,65 (3 H, t, J = 7,2 Hz) ppm.

Ejemplo de referencia 3. 3-(5-Fluoropiridin-3-il)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2a]pirimidin-4-ona

imagen29

Etapa 1. 2-(1-Aminopropil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

A una disolución con agitación de 2-(1-azidopropil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (3,10 g, 8,40 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml) y agua (6,06 ml) se añadió una disolución 1,0 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,1 mmoles) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. A la mezcla se añadió EtOAc y la mezcla se extrajo dos veces con HCl 1 N. Los extractos combinados se neutralizaron con bicarbonato sódico sólido y se extrajeron con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. El residuo se usó directamente en la siguiente etapa (2,58 g, 89,5 %). CL-EM calculada para C12H15IN3O (M+H)+: m/z = 344,0; hallada: 344,2.

Etapa 2. 3-Yodo-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

Una mezcla de 6-bromo-9H-purina (1,65 g, 0,008270 moles), 2-(1-aminopropil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2a]pirimidin-4-ona (2,58 g, 0,00752 moles) y N,N-diisopropiletilamina (1,571 ml, 0,009022 moles) en etanol (60 ml) se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante la noche. La mezcla se concentró y el residuo resultante se purificó sobre gel de sílice, eluyendo con 0 al 10 % de metanol en cloruro de metileno, proporcionando el producto deseado (2,86 g, 82,5 %). CL-EM calculada para C17H17IN7O (M+H)+: m/z = 462,1; hallada: 462,2. RMN 1H (DMSO-d6, 300 MHz) δ 8,31 (2H, m), 8,19 (1H, s), 8,15 (1H, s), 7,69 (1H, dd, J = 8,7 y 6,9 Hz), 7,44 (1H, d, J = 8,7 Hz), 6,99 (1H, d, J = 6,9 Hz), 5,69 (1H, m), 2,89 (3H, s), 1,91 (2H, m), 0,95 (3H, t, J = 7,2 Hz) ppm.

Etapa 3. 3-(5-Fluoropiridin-3-il)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

A una mezcla de 3-yodo-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (0,030 g, 0,065 mmoles) y ácido (5-fluoropiridin-3-il)borónico (Combi-Blocks, 11,0 mg, 0,0780 mmoles) en 1,4-dioxano (0,5 ml) se añadió una disolución 1 M de carbonato sódico (8,27 mg, 0,0780 mmoles) en agua (0,077 ml) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (3,76 mg, 0,00325 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 100 ºC durante la noche. Después de enfriarse a ta, la mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. El residuo se purificó sobre RP-HPLC a condiciones de pH 10 (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,15 % de NH4OH) proporcionando el producto deseado. CL-EM calculada para C22H20FN8O (M+H)+: m/z = 431,2; hallada: 431,3.

Ejemplo de referencia 4. 3-(3-Fluorofenil)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4ona

imagen30

A una mezcla de 3-yodo-6-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)propil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (del Ejemplo de referencia 3, Etapa 2; 0,030 g, 0,065 mmoles) y ácido (3-fluorofenil)borónico (Aldrich, 10,9 mg, 0,0780 mmoles) en 1,4-dioxano (0,5 ml) se añadió una disolución 1 M de carbonato sódico (8,27 mg, 0,0780 mmoles) en agua (0,077 ml) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (3,76 mg, 0,00325 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 100 ºC

28

imagen31

imagen32

imagen33

imagen34

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

mezcla se extrajo dos veces con HCl 1 N. Los extractos combinados se neutralizaron con bicarbonato sódico sólido y se extrajeron con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. El residuo se usó directamente en la siguiente etapa (36 mg, 92,7 %). CL-EM calculada para C15H14F2N3OS (M+H)+: m/z = 322,1; hallada: 322,3.

Etapa 3. 6-(3,5-Difluorofenil)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

Una mezcla de 6-bromo-9H-purina (0,01258 g, 0,006320 mmoles), 7-(1-aminoetil)-6-(3,5-difluorofenil)-3-metil-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,017 g, 0,053 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,011 ml, 0,006329 mmoles) en etanol (0,4 ml) se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó sobre RP-HPLC a pH 2 proporcionando el producto como una sal de TFA. LCMS calculada para C20H16F2N7OS (M+H)+: m/z = 440,1; hallada: 440,3. RMN 1H (DMSO-d6, 300 MHz) para la sal de TFA: δ 8,55 (1H, m), 8,39 (2H, m), 7,29 (1H, m), 7,15-7,11 (3H, m), 5,17 (1H, m), 2,64 (3H, d, J = 1,2 Hz), 1,42 (3H, d, J = 6,9 Hz) ppm.

Ejemplo 13. 7-{1-[(2-Amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-(3,5-difluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin5-ona

imagen35

na mezcla de 2-amino-6-bromopurina (0,01436 g, 0,006712 mmoles), 7-(1-aminoetil)-6-(3,5-difluorofenil)-3-metil-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (del Ejemplo 12, Etapa 2; 0,018 g, 0,056 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,01171 ml, 0,006722 mmoles) en etanol (0,4 ml) se sometió a reflujo bajo nitrógeno durante la noche. La mezcla se evaporó y el residuo resultante se purificó sobre RP-HPLC a pH 2 proporcionando el producto como una sal de TFA. CL-EM calculada para C20H17F2N8OS (M+H)+: m/z = 455,1; hallada: 455,3. RMN 1H (DMSO-d6, 300 MHz) para la sal de TFA: δ 8,74 (1H, m), 8,16 (1 H, s), 7,26-7,06 (6H, m), 5,16 (1H, m), 2,66 (3H, d, J = 1,2 Hz), 1,36 (3H, d, J = 6,9 Hz) ppm.

Ejemplo 14. 3-Metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-6-piridin-2-il-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen36

Etapa 1. 7-(1-Azidoetil)-3-metil-6-piridin-2-il-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

Una mezcla de 2-(tributilestannil)piridina (Aldrich, 0,176 g, 0,382 mmoles), 7-(1-azidoetil)-6-bromo-3-metil-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (del Ejemplo 8, Etapa 3; 0,10 g, 0,318 mmoles) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,0184 g, 0,0159 mmoles) en 1,4-dioxano (0,5 ml) se calentó a 65 ºC durante la noche. Después de enfriarse y extinguirse con cloruro de amonio saturado, la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron a sequedad. El residuo se purificó sobre gel de sílice, eluyendo con 0 al 100 % de EtOAc en hexano, proporcionando el producto deseado (13 mg, 13 %). CL-EM calculada para C14H13N6OS (M+H)+: m/z = 313,1; hallada: 313,0.

Etapa 2. 7-(1-Aminoetil)-3-metil-6-piridin-2-il-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

A una disolución con agitación de 7-(1-azidoetil)-3-metil-6-piridin-2-il-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,012 g, 0,039 mmoles) en tetrahidrofurano (0,1 ml) y agua (0,0285 ml) se añadió 1,0 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,047 mmoles) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. A la mezcla se añadió EtOAc y la mezcla se extrajo dos veces con HCl 1 N. Los extractos combinados se neutralizaron con bicarbonato sódico sólido y se extrajeron con cloruro de metileno. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. El residuo se usó directamente en la siguiente etapa. CL-EM calculada para C14H15N4OS (M+H)+: m/z = 287,1; hallada: 287,0.

Etapa 3. 3-Metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-6-piridin-2-il-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

33

imagen37

imagen38

imagen39

imagen40

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

cromatografía en sílice se obtuvieron 2,1 g de producto en bruto. Este producto en bruto se purificó adicionalmente por HPLC de fase inversa preparativa usando 0,1 % de TFA en agua y acetonitrilo como fases móviles a una velocidad de flujo de 60 ml/min sobre una columna SunFire C18, 5 µM, 30 x 100 mm. Se obtuvo sal de ácido trifluoroacético de (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona pura (sal de ácido trifluoroacético) (1,86 g, 3,47 mmoles, rendimiento del 45,8 %) como un sólido blanco después de la liofilización CL-EM calculada para C20H17FN7OS (M+H)+ para la base libre: m/z 422,1; hallada: 422,0). RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,03 (s a, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,21 (m, 3H), 7,09 (s, 1H), 5,23 (m, 1H), 2,65 (d, J = 1,3 Hz, 3H), 1,43 (d, J = 7,0 Hz, 3H). RMN 13C (125 MHz, DMSO-d6) δ 164,0, 162,1 (JCF = 244,9 Hz), 160,5, 160,3, 150,9, 147,6, 147,5, 144,4, 135,9, 135,9, 130,2 (JCF = 8,3 Hz), 126,9, 117,4 (JCF = 22,6 Hz), 116,1, 114,8 (JCF = 21,5 Hz), 111,1, 107,8, 48,5, 19,6, 18,0. La HPLC analítica de fase inversa mostró pureza al 99,8 % del área. Se realizó análisis de HPLC quiral sobre columna Chiralcel OJ-H, 4,6 x 250 mm, 5 micrómetros, usando 60 % de etanol/40 % de hexanos como eluyente a una velocidad de flujo de 0,5 ml/min. El pico para el enantiómero deseado (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona se observó a un tiempo de retención de 21,171 min (99,1 % del área). El pico secundario para el enantiómero no deseado (R)-7-(1(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona se observó a un tiempo de retención de 13,358 min (0,9 % del área). El exceso enantiomérico del enantiómero deseado fue del 98,2 %.

Ejemplo 15A. (S)-7-(1-(9H-Purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen41

Una mezcla de (S)-7-(1-aminoetil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (108,2 g, 357 mmoles), 6cloropurina (71,73 g, 464,1 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (74,6 ml, 428,4 mmoles) en 1-butanol (952 ml) se desgasificó con nitrógeno burbujeando durante 5 minutos. La mezcla de reacción se calentó a 105 ºC bajo nitrógeno durante 15 horas, momento en el que la HPLC indicó que la amina se había consumido. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente antes de tratarse con agua (200 ml) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se concentró a presión reducida dando un residuo aceitoso y el residuo se trató con CH2Cl2 (1000 ml) dando una disolución transparente parduzco. La disolución resultante se lavó con disolución acuosa al 2,5 % de carbonato sódico (Na2CO3, 250 ml x 2) y la fase orgánica se concentró a presión reducida proporcionando el producto deseado en bruto como un sólido parduzco. La disolución del producto deseado en bruto en CH2Cl2 se absorbió sobre gel de sílice (300 g) y el gel de sílice secado se cargó sobre una columna ultrarrápida. La columna ultrarrápida se eluyó con CH2Cl2 puro y una mezcla de CH2Cl2, MeOH y NH4OH acuoso (2000:10:5) proporcionando el producto deseado puro. Las fracciones que contenían el producto deseado puro se combinaron y se concentraron a presión reducida. El sólido amarillento resultante (90,3 g) se disolvió en una mezcla de CH2Cl2 y metanol (500 : 50 ml). La disolución resultante se trató con acetato de etilo (900 ml) y la mezcla resultante se destiló hasta que la temperatura interna de la disolución alcanzó 68 ºC. Entonces, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y posteriormente a 0 -5 ºC durante 1 hora. Los sólidos se recogieron por filtración, se lavaron con acetato de etilo frío (100 ml) y se secaron durante la noche sobre el filtro a vacío proporcionando (S)-7-(1-(9H-purin-6-ilamino)etil)-6-(3-fluorofenil)-3-metil-5Htiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (89,5 g, rendimiento del 59,4 %, 99,4 % de ee) como un sólido amarillento claro. CL-EM calculada para C20H17FN7OS (M+H)+ para la base libre: m/z 422,1; hallada: 422,0; RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,40 (s, 1H), 7,99 (s a, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,21-7,12 (m, 3H), 6,8 (m, 1H), 6,42 (s, 1H), 5,52 (s a, 1H), 2,79 (d, J = 1,3 Hz, 3H), 1,43 (d, J = 7,0 Hz, 3H).

Ejemplo 16. Cristalografía de rayos X de (S)-2-hidroxi-2-fenilacetato de (S)-1-(6-bromo-3-metil-5-oxo-5Htiazolo[3,2-a]pirimidin-7-il)etanaminio (del Ejemplo 15, Etapa 5)

imagen42

Con el fin de determinar la estereoquímica absoluta del producto del Ejemplo 15, Etapa 5, una muestra se sublimó a aproximadamente 105 ºC proporcionando agujas incoloras adecuadas para el análisis de la estructura cristalina por rayos X. El estudio determinó la configuración absoluta de la amina que lleva carbono (C-8) como S.

RECOGIDA DE DATOS: Sistema Bruker SMART APEX-II CCD, radiación MoKalpha, tubo de foco convencional, potencia del ánodo = 50 kV x 42 mA, distancia cristal a placa = 5,0 cm, 512 x 512 píxeles/marco, centro del haz = (256,13, 253,14), marcos totales = 1081, oscilación/marco = 0,50º, exposición/marco = 300,1 s/marco, integración SAINT, hkl mín/máx = (-4, 7, -14, 14, -31, 35), entrada de datos a shelx = 11285, datos únicos = 3870, intervalo dos

38

imagen43

imagen44

imagen45

imagen46

E10729035

14-09-2015

Tabla A4. Coordenadas del hidrógeno (x 10^4) y parámetros de desplazamiento isotrópico (A^2 x 10^3)

imagen47

30

35

40

45

50

55

60

43

imagen48

imagen49

imagen50

imagen51

E10729035

14-09-2015

HPLC (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA) dando el producto como una sal de TFA. CL-EM calculada para C17H15N8OS2 (M+H)+ m/z = 411,1; hallada: 411,0.

Ejemplo 22. Sal de ácido trifluoroacético de 6-(4-fluorofenil)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen52

Etapa 1. 7-(1-Azidoetil)-6-(4-fluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen53

A una mezcla de 7-(1-azidoetil)-6-bromo-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,10 g, 0,32 mmoles) y ácido

25 4-fluorofenilborónico (53 mg, 0,38 mmoles) en 1,4-dioxano (2 ml) se añadió una disolución 1 M de carbonato sódico en agua (0,38 ml, 0,38 mmoles) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (18 mg, 0,016 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 100 ºC durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre MgSO4 y se concentró. La mezcla en bruto se purificó sobre gel de sílice, eluyendo con 0 al 40 % de EtOAc en hexano, dando el producto deseado (69 mg, 66 %). CL-EM calculada para C15H13FN5OS (M+H)+: m/z= 330,1; hallada: 330,0.

Etapa 2. 7-(1-Aminoetil)-6-(4-fluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen18

A una disolución con agitación de 7-(1-azidoetil)-6-(4-fluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,062 g, 0,19 mmoles) en tetrahidrofurano (0,6 ml) y agua (0,14 ml) se añadió 1,00 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,226 ml, 0,226 mmoles) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A la mezcla se añadió acetato de etilo y entonces la mezcla se extrajo dos veces con HCl 1 N. Los extractos combinados se neutralizaron con bicarbonato sódico sólido y se extrajeron con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas

45 se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se concentraron a presión reducida. El residuo se usó directamente en la siguiente etapa. CL-EM calculada para C15H15FN3OS (M+H)+: m/z= 304,1; hallada: 304,1.

Etapa 3. Sal de ácido trifluoroacético de 6-(4-fluorofenil)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H-[1,3]tiazolo[3,2

a]pirimidin-5-ona

imagen54

Una mezcla de 6-bromo-9H-purina (0,076 g, 0,38 mmoles), 7-(1-aminoetil)-6-(4-fluorofenil)-3-metil-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,058 g, 0,19 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,066 ml, 0,38 mmoles) en etanol (0,6 ml) se calentó a reflujo bajo nitrógeno durante la noche La mezcla se evaporó y el residuo resultante se purificó sobre RP-HPLC (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA) dando el producto como una sal de TFA. CL-EM calculada para C20H17FN7OS (M+H)+: m/z = 422,1; hallada: 422,1.

Ejemplo 23. 7-{1-[(2-Amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-(3,5-difluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin

48

imagen55

imagen56

imagen57

imagen58

E10729035

14-09-2015

imagen59

Etapa 1. 7-(1-Azidoetil)-6-fenil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen18

20 A una mezcla de 7-(1-azidoetil)-6-bromo-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,34 g, 1,1 mmoles) y ácido fenilborónico (0,16 g, 1,4 mmoles) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadió una disolución 1 N de carbonato sódico en agua (1,5 ml, 1,5 mmoles) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (0,065 g, 0,057 mmoles). La mezcla se agitó a 100 ºC durante la noche. Después de enfriarse, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se concentró y se purificó sobre gel de sílice (0-50 % de acetato de etilo/hexanos) dando el

25 producto deseado (0,23 g, 68 %). CL-EM calculada para C14H12N5OS (M+H)+: m/z = 298,1; hallada: 298,0.

Etapa 2. 7-(1-Aminoetil)-6-fenil-5H-[1,3]tiazolo[3,1-a]pirimidin-5-ona

imagen18

A una disolución con agitación de 7-(1-azidoetil)-6-fenil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,23 g, 0,77 mmoles) en

35 tetrahidrofurano (5 ml) y agua (1 ml) se añadió 1,00 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,93 ml, 0,93 mmoles) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A la mezcla se añadió acetato de etilo y la mezcla se extrajo con disolución acuosa de HCl 1 N (tres veces). El extracto combinado se neutralizó con NaHCO3 sólido y se extrajo con diclorometano (dos veces). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró dando el compuesto deseado (0,13 g, 62 %). CL-EM calculada para

40 C14H14N3OS (M+H)+: m/z = 272,1; hallada: 272,0.

Etapa 3. 7-{1-[(2-Amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-fenil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

45

50

imagen60

Una mezcla de 7-(1-aminoetil)-6-fenil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,025 g, 0,092 mmoles), 2-amino-6bromopurina (0,035 g, 0,16 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,029 ml, 0,16 mmoles) en etanol (0,5 ml) se calentó a 110 ºC durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se purificó sobre CL preparativa-EM (columna XBridge

55 C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,15 % de NH4OH) dando el producto deseado. CL-EM calculada para C19H17N8OS (M+H)+: m/z = 405,1; hallada: 405,1. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 80,1 (1H, d, J= 4,8 Hz), 7,65 (1H, s), 7,55 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,47 (2H, m), 7,40 (3H, m), 6,79 (1H, s a), 5,48 (2H, s a), 5,13 (1H, m), 1,29 (3H, d, J= 6,8 Hz) ppm.

60 Ejemplo 28. 6-(3-Fluorofenil)-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

65

53

imagen61

imagen62

imagen63

imagen64

E10729035

14-09-2015

imagen65

10 Una mezcla de 7-(1-aminoetil)-6-(2-fluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,040 g, 0,13 mmoles), 2-amino-6-bromopurina (0,056 g, 0,26 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,046 ml, 0,26 mmoles) en etanol (0,5 ml) se calentó a 110 ºC durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se purificó sobre CL preparativa-EM (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA) dando el producto

15 deseado como una mezcla diastereoisomérica (sales de TFA). CL-EM calculada para C20H18FN8OS (M+H)+: m/z = 437,1; hallada: 437,1. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,77 (1H, s a), 8,14 (1H, m), 7,45 (2H, m), 7,28 (4H, m), 7,14 (1H, m), 5,13 (1H, m), 2,65 (3H, s), 1,42 (1,5H, d, J= 6,8 Hz), 1,28 (1,5H, d, J= 6,8 Hz) ppm. RMN 19F (DMSO-d6, 376,3 MHz) δ -113,8, -114 ppm.

20 Ejemplo 34. Sal de ácido trifluoroacético de 7-{1-[(2-amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-(2,3-difluorofenil)-3metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

25

30

imagen66

Etapa 1. 7-(1-Azidoetil)-6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen67

40 A una mezcla de 7-(1-azidoetil)-6-bromo-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,12 g, 0,38 mmoles) y ácido (2,3-difluorofenil)borónico (0,072 g, 0,46 mmoles) en 1,4-dioxano (3 ml) se añadió una disolución 1 N de carbonato sódico en agua (0,57 ml, 0,57 mmoles) y dicloro(bis{di-terc-butil[4-(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio (0,014 g, 0,019 mmoles). La mezcla se agitó a 100 ºC durante la noche. Después de enfriarse, la mezcla se diluyó con acetato

45 de etilo, se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, se concentró y se purificó sobre gel de sílice (0-30 % de acetato de etilo/hexano) dando el producto deseado (83 mg). CL-EM calculada para C15H12F2N5OS (M+H)+: m/z = 348,1; hallada: 348,0.

Etapa 2. 7-(1-Aminoetil)-6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

50

imagen18

A una disolución de 7-(1-azidoetil)-6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-4H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,083 g, 0,24 mmoles) en tetrahidrofurano (3 ml) se añadió 1,00 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,29 ml, 0,29 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se concentró dando el producto en bruto (0,076

60 g), que se usó directamente en la siguiente etapa. CL-EM calculada para C15H14F2N3OS (M+H)+: m/z = 322,1; hallada: 322,0.

Etapa 3. Sal de ácido trifluoroacético de 7-{1-[(2-amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

65

58

imagen68

imagen69

imagen70

imagen71

5

15

25

35

45

55

65 E10729035

14-09-2015

imagen72

Una mezcla de 7-(1-aminoetil)-6-(2-fluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,040 g, 0,13 mmoles), 6-bromo-9H-purina (0,052 g, 0,26 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,046 ml, 0,26 mmoles) en etanol (0,5 ml, 8 mmoles) se calentó a 110 ºC durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se purificó sobre CL preparativa-EM (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA) dando el producto deseado como una mezcla diastereoisomérica (sal de TFA). CL-EM calculada para C20H17FN7OS (M+H)+: m/z = 422,1; hallada: 422,1. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,50 (1H, s a), 8,40 (1H, s), 8,38 (1H, s), 7,50 (1H, m), 7,36-7,25 (3H, m), 7,10 (1H, s), 5,14 (1H, m), 2,64 (3H, s), 1,48 (1,5H, d, J = 6,8 Hz), 1,34 (1,5H, d, J = 6,8 Hz) ppm. RMN 19F (DMSO-d6, 376,3 MHz) δ -112, -114 ppm.

Ejemplo 41. Sal de ácido trifluoroacético de 6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen73

Una mezcla de 7-(1-aminoetil)-6-(2,3-difluorofenil)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (0,038 g, 0,12 mmoles), 6-bromo-9H-purina (0,047 g, 0,24 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,041 ml, 0,24 mmoles) en etanol (0,5 ml) se calentó a 110 ºC durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se purificó sobre CL prep-EM (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA), dando el producto deseado como una mezcla de dos diastereómeros (sal de TFA). CL-EM calculada para C20H16F2N7OS (M+H)+: m/z = 440,1; hallada: 440,0. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,38-8,34 (3H, m), 7,49-7,10 (4H, m), 5,12 (1H, m), 2,64 (3H, s), 1,50 (1,5H, d, J = 6,8 Hz), 1,36 (1,5H, d, J = 6,8 Hz) ppm. RMN 19F (DMSO-d6, 376,3 MHz) δ -137,8, -139,8, 140,0 ppm.

Ejemplo 42. Sal de ácido trifluoroacético de 6-(5-fluoropiridin-3-il)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

imagen74

Una mezcla de 7-(1-aminoetil)-6-(5-fluoropiridin-3-il)-3-metil-5H-[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona (9 mg, 0,03 mmoles), 6-bromo-9H-purina (8,8 mg, 0,044 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,010 ml, 0,059 mmoles) en etanol (0,3 ml) se calentó a 110 ºC durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se purificó sobre CL preparativa-EM (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA), dando el producto deseado como una sal de TFA. CL-EM calculada para C19H16FN8OS (M+H)+: m/z = 423,1; hallada: 423,1. RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,60 (1H, d, J = 2,8 Hz), 8,47 (1H, s), 8,35 (1H, s), 8,33 (1H, s), 7,82 (1H, d, J= 9,6 Hz), 7,12 (1H, s), 5,09 (1H, m), 2,64 (3H, s), 1,43 (3H, d, J= 6,8 Hz) ppm. RMN 19F (DMSO-d6, 376,3 MHz) δ -128 ppm.

Ejemplo 43. Sal de ácido trifluoroacético de 6-(2-clorofenil)-3-metil-7-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-5H[1,3]tiazolo[3,2-a]pirimidin-5-ona

63

imagen75

imagen76

imagen77

imagen78

E10729035

14-09-2015

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento del Ejemplo 8, Etapa 2, usando 6-metil-2-piridinamina como material de partida con un rendimiento del 58 %. CL-EM para C11H12BrN2O (M+H)+: m/z = 267,0, 269,0.

Etapa 2. 2-(1-Bromoetil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

imagen79

15 El compuesto deseado se preparó según el procedimiento del Ejemplo 8, Etapa 3, usando 2-(1-bromoetil)-6-metil4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona y N-yodosuccinimida como materiales de partida con un rendimiento del 98 %. CL-EM para C11H11BrIN2O (M+H)+: m/z = 392,7, 394,7.

Etapa 3. 2-(1-Azidoetil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

20

imagen80

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento del Ejemplo 8, Etapa 4, usando 2-(1-bromoetil)-3-yodo-6metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona como material de partida con un rendimiento del 99 %. CL-EM para C11H11IN5O (M+H)+; m/z = 356,0.

Etapa 4. 2-(1-Azidoetil)-6-metil-3-fenil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

imagen81

40 Una disolución de 2-(1-azidoetil)-3-yodo-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (100 mg, 0,28 mmoles) y ácido fenilborónico (48 mg, 0,39 mmoles) en 1,4-dioxano (2 ml) se trató con carbonato sódico (45 mg, 0,42 mmoles), agua (0,50 ml) y dicloro(bis {di-terc-butil[4-(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio (2,0 mg, 28 µmol), se desgasificó con nitrógeno durante 5 minutos y se calentó a 110 ºC durante 18 horas. La mezcla de reacción se purificó por RP-HPLC (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA, a la velocidad

45 de flujo de 30 ml/min). CL-EM para C17H16N5O (M+H)+: m/z = 306,1.

Etapa 5. Sal de ácido trifluoroacético de 6-metil-3-fenil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

Una disolución de 2-(1-azidoetil)-6-metil-3-fenil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (31 mg, 0,10 mmoles) en

50 tetrahidrofurano (1 ml) y agua (0,2 ml) se trató con 1 M de trimetilfosfina en tetrahidrofurano (0,20 ml, 0,20 mmoles) y se agitó a 20 ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera (2 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron con sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron dando un residuo en bruto. Esta amina intermedia se usó sin más purificación. Una disolución de la amina en etanol (1 ml) se trató con 6-bromo-9H-purina (31 mg, 0,16 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (24 ml, 0,14 mmoles) y luego

55 se calentó a 90 ºC durante 18 horas. La mezcla de reacción se purificó por RP-HPLC (columna XBridge C18, eluyendo con un gradiente de acetonitrilo/agua que contenía 0,05 % de TFA, a la velocidad de flujo de 30 ml/min). CL-EM para C22H20N7O (M+H)+: m/z = 398,1.

Ejemplo de referencia 50. Sal de ácido trifluoroacético de 2-{1-[(2-amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-6-metil-360 fenil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

65

68

imagen82

imagen83

imagen84

imagen85

E10729035

14-09-2015

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando ácido (4metilfenil)borónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), complejo de [1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1:1) (en lugar de dicloro(bis {di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y carbonato de potasio (en lugar de carbonato sódico en la Etapa 4). CL-EM para C23H22N7O (M+H)+: m/z = 412,1.

Ejemplo de referencia 65. Sal de ácido trifluoroacético de 3-(3-metoxifenil)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6ilamino)etil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

imagen86

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando ácido 3metoxifenilborónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), complejo de [1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1:1) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y carbonato de potasio (en lugar de carbonato sódico en la Etapa 4). CL-EM para C23H22N7O2 (M+H)+: m/z = 428,1.

Ejemplo de referencia 66. Sal de ácido trifluoroacético de 3-(2,3-difluorofenil)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6ilamino)etil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

imagen87

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando ácido (2,3difluorofenil)borónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), complejo de [1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1:1) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y carbonato de potasio (en lugar de carbonato sódico en la

45 Etapa 4). CL-EM para C22H18F2N7O (M+H)+: m/z = 434,2.

Ejemplo de referencia 67. Sal de ácido trifluoroacético de 3-(2,5-difluorofenil)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6ilamino)etil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

imagen88

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando ácido (2,5difluorofenil)borónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), complejo de [1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) con diclorometano (1:1) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y carbonato de potasio (en lugar de carbonato sódico en la Etapa 4). CL-EM para C22H18F2N7O (M+H)+: m/z = 434,1.

Ejemplo de referencia 68. Sal de ácido trifluoroacético de 3-(3,4-difluorofenil)-6-metil-2-[1-(9H-purin-6

73

imagen89

imagen90

imagen91

imagen92

E10729035

14-09-2015

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando 2-piridinamina (en lugar de 6-metil-2-piridinamina en la Etapa 1), N-bromosuccinimida (en lugar de N-yodosuccinimida en la Etapa 2), ácido (3,5-difluorofenil)borónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4-(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y 2-amino-6-bromopurina (en

5 lugar de 6-bromo-9H-purina en la Etapa 5). CL-EM para C21H17F2N8O (M+H)+: m/z = 435,0. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,98 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,82 -8,72 (s a, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,06 -8,00 (m, 1H), 7,76 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 7,0, 5,6 Hz, 1H), 7,30-7,07 (m, 5H), 5,32-5,22 (m, 1H), 1,42 (d, J= 6,7 Hz, 3H).

Ejemplo de referencia 81. Sal de ácido trifluoroacético de 3-(6-cloro-5-metilpiridin-3-il)-6-metil-2-[1-(9H-purin10 6-ilamino)etil]-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

15

20

imagen93

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando N-bromosuccinimida (en lugar de N-yodosuccinimida en la Etapa 2), ácido (6-cloro-5-metilpiridin-3-il)borónico (en lugar de ácido

25 fenilborónico en la Etapa 4) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4). CL-EM para C22H20ClN8O (M+H)+: m/z = 446,9. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,37 (s a, 2H), 8,26 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,71 (dd, J = 9,1, 7,0 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,21 -5,10 (m, 1H), 2,88 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,45 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

30 Ejemplo de referencia 82. Sal de ácido trifluoroacético de 2-{1-[(2-amino-9H-purin-6-il)amino]etil}-3-(6-cloro-5metilpiridin-3-il)-6-metil-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

35

40

imagen94

El compuesto deseado se preparó según el procedimiento de Ejemplo de referencia 49 usando N-bromosuccinimida

45 (en lugar de N-yodosuccinimida en la Etapa 2), ácido (6-cloro-5-metilpiridin-3-il)borónico (en lugar de ácido fenilborónico en la Etapa 4), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (en lugar de dicloro(bis{di-terc-butil[4(dimetilamino)fenil]fosforanil})paladio en la Etapa 4) y 2-amino-6-bromopurina (en lugar de 6-bromo-9H-purina en la Etapa 5). CL-EM para C22H21ClN9O (M+H)+: m/z = 462,0. RMN 1H (500 MHz, DMSO-d6): δ 8,74 (s a, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,79 -7,71 (m, 2H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,29 -7,14 (m, 2H), 7,03 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,23

50 5,16 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,43 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

Ejemplo de referencia 83. Sal de ácido trifluoroacético de 3-{6-metil-4-oxo-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-4Hpirido[1,2-a]pirimidin-3-il}benzonitrilo

55

60

imagen95

78

imagen96

imagen97

imagen98

imagen99

E10729035

14-09-2015

(continuación)

5

10

15

20

imagen100

* "+" =<50nM; "++" = 50-100 nM; "+++"= 100-500 nM; "++++" = >500 nM.

a. Resultados en esta columna fueron obtenidos por Assay A1, salvo ejemplos 15, 30 y 44 se usó A2. 25 b. Resultados en esta columna fueron obtenidos por Assay A3.

c. Resultados en esta columna fueron obtenidos por Assay A2.

30

Ejemplo B1: Ensayo de proliferación de linfocitos B

Para adquirir linfocitos B, CMSP humana se aislaron de la sangre periférica de donantes sin fármaco normales por

35 centrifugación en gradiente de densidad convencional en Ficoll-Hypaque (GE Healthcare, Piscataway, NJ) y se incubaron con microperlas anti-CD19 (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). Entonces, los linfocitos B se purificaron por inmunoselección positiva usando autoMacs (Miltenyi Biotech) según las instrucciones del fabricante.

Los linfocitos B purificados (2 x 105/pocillo/200 µl) se cultivaron en placas de unión ultra-baja de 96 pocillos (Corning,

40 Corning, NY) en RPMI 1640, 10 % de SBF y F(ab')2 de cabra anti-IgM humana (10 µg/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA), en presencia de diferente cantidad de compuestos de prueba, durante tres días. Entonces se añadió [3H]-timidina (1 µCi/pocillo) (PerkinElmer, Boston, MA) en PBS a los cultivos de linfocitos B durante 12 h adicionales antes de que la radiactividad incorporada se separara por filtración con agua a través de filtros GF/B (Packard Bioscience, Meriden, CT) y se midiera por recuento de centelleo líquido con un TopCount (Packard Bioscience). Los compuestos que

45 tienen un valor de CI50 de 10 µM o menos se consideran activos. Véase la Tabla 2 para datos relacionados con compuestos de la invención.

50

55

83

imagen101

imagen102

imagen103

imagen104

Claims

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

imagen7

imagen8