JP2014501261A - 複素環化合物およびそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
全身性エリテマトーデス(SLE)、重症筋無力症、リウマチ性関節炎、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、ならびに自己免疫性溶血性貧血、過敏症のすべての形態を含むアレルギー性状態等の自己免疫疾患を含むが、これらに限定されない、一般的炎症、関節炎、リウマチ性疾患、骨関節炎、炎症性腸障害、炎症性眼障害、炎症性または不安定性膀胱障害、乾癬、炎症性要素を有する皮膚疾患、慢性炎症性状態の治療のための置換二環式ヘテロアリールおよびそれらを含有する組成物。本発明は、白血病、例えば、急性骨髄性白血病(AML)、骨髄異形成症候群(MDS)、骨髄増殖性疾患(MPD)、慢性骨髄性白血病(CML)、T細胞急性リンパ芽球性白血病(T−ALL)、B細胞急性リンパ芽球性白血病(B−ALL)、非ホジキンリンパ腫(NHL)、B細胞リンパ腫、および乳癌等の固形腫瘍を含むが、これらに限定されないp110活性により媒介されるか、p110活性に依存するか、またはp110活性に関連する癌を治療するための方法も可能にする。
【選択図】なし
【選択図】なし
Description
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる2010年12月23日出願の米国仮出願第61/426,789号の利益を主張する。
本発明は、概して、ホスファチジルイノシトール3−キナーゼ(PI3K)酵素に関し、より具体的には、PI3K活性の選択的阻害剤およびそのような物質の使用方法に関する。
3’−リン酸化ホスホイノシチドを介するシグナル伝達は、様々な細胞プロセス、例えば、悪性形質転換、成長因子シグナル伝達、炎症、および免疫に関連付けられている(概説については、Rameh et al.,J.Biol Chem,274:8347−8350(1999)を参照のこと)。これらのリン酸化シグナル伝達産物の生成に関与する酵素であるホスファチジルイノシトール3−キナーゼ(PI3キナーゼ、PI3K)は、元来、ウイルス性癌タンパク質、ならびにホスファチジルイノシトール(PI)をリン酸化する成長因子受容体チロシンキナーゼおよびイノシトール環の3’−ヒドロキシルにおけるそのリン酸化誘導体に関連する活性として同定された(Panayotou et al.,Trends Cell Biol 2:358−60(1992))。
PI3キナーゼ活性化の一次産物であるホスファチジルイノシトール−3,4,5−三リン酸塩(PIP3)のレベルは、様々な刺激物で細胞を処理するときに増加する。これは、成長因子の大部分、ならびに多くの炎症性刺激、ホルモン、神経伝達物質、および抗原に対する受容体を介するシグナル伝達を含み、したがって、PI3Kの活性化は、最も優勢でなくとも、哺乳類細胞表面受容体活性化に関連する1つのシグナル変換事象を表す(Cantley,Science 296:1655−1657(2002)、Vanhaesebroeck et al.Annu.Rev.Biochem,70:535−602(2001))。したがって、PI3キナーゼ活性化は、細胞成長、遊走、分化、およびアポトーシスを含む幅広い細胞応答に関与する(Parker et al.,Current Biology,5:577−99(1995)、Yao et al.,Science,267:2003−05(1995))。PI3キナーゼ活性化後に生成されるリン酸化脂質の下流標的は、完全には特徴付けられていないが、プレクストリン相同(PH)ドメイン含有およびFYVEフィンガードメイン含有タンパク質が様々なホスファチジルイノシトール脂質に結合するときに活性化されることが知られている(Sternmark et al.,J Cell Sci,112:4175−83(1999)、Lemmon et al.,Trends Cell Biol,7:237−42(1997))。PHドメインを含有するPI3Kエフェクターの2つの群、すなわちTECファミリーのチロシンキナーゼのメンバーおよびAGCファミリーのセリン/トレオニンキナーゼのメンバーが、免疫細胞シグナル伝達との関連において研究されている。PtdIns(3,4,5)P3に対して明らかな選択性を有するPHドメインを含有するTecファミリーのメンバーには、Tec、Btk、Itk、およびEtkが含まれる。PHのPIP3への結合は、Tecファミリーメンバーのチロシンキナーゼ活性にとって重要である(Schaeffer and Schwartzberg,Curr.Opin.Immunol.12:282−288(2000))。PI3Kによって制御されるAGCファミリーメンバーには、ホスホイノシチド依存性キナーゼ(PDK1)、AKT(PKBとも呼ばれる)、ならびにタンパク質キナーゼC(PKC)およびS6キナーゼのある特定のアイソフォームが含まれる。AKTには3つのアイソフォームが存在し、AKTの活性化は、PI3K依存性増殖および生存シグナルに強く関連している。AKTの活性化は、PDK1によるリン酸化に依存し、PDK1は、それを膜に動員する3−ホスホイノシチド選択的PHドメインも有し、膜ではそれがAKTと相互作用する。他の重要なPDK1基質は、PKCおよびS6キナーゼである(Deane and Fruman,Annu.Rev.Immunol.22_563−598(2004))。生体外で、タンパク質キナーゼC(PKC)のいくつかのアイソフォームは、PIP3によって直接活性化される(Burgering et al.,Nature,376:599−602(1995))。
現在、PI3キナーゼ酵素ファミリーは、それらの基質特異性に基づいて3つのクラスに分類されている。クラスIのPI3Kは、ホスファチジルイノシトール(PI)、ホスファチジルイノシトール−4−リン酸塩、およびホスファチジルイノシトール−4,5−重リン酸塩(PIP2)をリン酸化して、それぞれ、ホスファチジルイノシトール−3−リン酸塩(PIP)、ホスファチジルイノシトール−3,4−重リン酸塩、およびホスファチジルイノシトール−3,4,5−三リン酸塩を産生することができる。クラスIIのPI3KはPIおよびホスファチジルイノシトール−4−リン酸塩をリン酸化するが、クラスIIIのPI3Kは、PIのみをリン酸化することができる。
PI3キナーゼの最初の精製および分子クローニングにより、それがp85およびp110サブユニットからなるヘテロ二量体であることが明らかになった(Otsu et al.,Cell,65:91−104(1991)、Hiles et al.,Cell,70:419−29(1992))。それ以来、4つのはっきりと異なるクラスIのPI3Kが同定されており、PI3Kα、β、δ、およびγと命名され、それぞれ、はっきりと異なる110kDa触媒サブユニットおよび制御サブユニットからなる。より具体的には、触媒サブユニットのうちの3つ、すなわち、p110α、p110β、およびp110δがそれぞれ、同一の制御サブユニットp85と相互作用する一方で、p110γは、はっきりと異なる制御サブユニットp101と相互作用する。以下に記載されるように、ヒト細胞および組織におけるこれらのPI3Kのそれぞれの発現パターンもはっきり異なる。近年、PI3キナーゼの一般的な細胞機能についての豊富な情報が蓄積されているが、個々のアイソフォームが果たす役割は完全には理解されていない。
ウシp110αのクローニングが記載されている。このタンパク質は、サッカロマイセス・セレビシエタンパク質、すなわち、液胞タンパク質プロセシングに関与するタンパク質であるVps34pに関連するものとして同定された。組換えp110α産物が、p85αと会合して、トランスフェクトされたCOS−1細胞においてPI3K活性をもたらすことも示された。Hiles et al.,Cell,70,419−29(1992)を参照されたい。
p110βと命名された第2のヒトp110アイソフォームのクローニングが、Hu et al.,Mol Cell Biol,13:7677−88(1993)に記載されている。p110β mRNAが、多数のヒトおよびマウス組織、ならびにヒト臍静脈内皮細胞、ジャーカットヒト白血病T細胞、293ヒト胚腎臓細胞、マウス3T3線維芽細胞、ヒーラ細胞、およびNBT2ラット膀胱癌細胞で発見されているため、このアイソフォームは、細胞中のp85と会合し、かつ遍在的に発現するとされる。そのような幅広い発現は、このアイソフォームがシグナル伝達経路において広範囲に重要であることを示唆する。
PI3キナーゼのp110δアイソフォームの同定は、Chantry et al.,J Biol Chem,272:19236−41(1997)に記載されている。ヒトp110δアイソフォームが組織限定的な様式で発現されることが観察された。これは、リンパ球およびリンパ組織において高レベルで発現され、免疫系におけるPI3キナーゼ媒介シグナル伝達において重要な役割を果たすことが示されている(Al−Alwan etl al.JI 178:2328−2335(2007)、Okkenhaug et al JI,177:5122−5128(2006)、Lee et al.PNAS,103:1289−1294(2006))。P110δが乳腺細胞、メラニン細胞、および内皮細胞においてより低いレベルで発現されることも示されており(Vogt et al.Virology,344:131−138(2006))、それ以来、乳癌細胞への選択的遊走特性の付与に関与するとされている(Sawyer et al.Cancer Res.63:1667−1675(2003))。P110δアイソフォームに関する詳細は、米国特許第5,858,753号、同第5,822,910号、および同第5,985,589号で見出すこともできる。Vanhaesebroeck et al.,Proc Nat.Acad Sci USA,94:4330−5(1997)、および国際公開第WO97/46688号も参照されたい。
PI3Kα、β、およびδサブタイプのそれぞれにおいて、p85サブユニットは、そのSH2ドメインの標的タンパク質中のリン酸化チロシン残基(適切な配列関係において存在する)との相互作用によってPI3キナーゼを形質膜に局在化させるように作用する(Rameh et al.,Cell,83:821−30(1995))。3つの遺伝子によってコードされるp85の5つのアイソフォーム(p85α、p85β、p55γ、p55α、およびp50α)が同定されている。Pik3r1遺伝子の代替転写物は、p85α、p55α、およびp50αタンパク質をコードする(Deane and Fruman,Annu.Rev.Immunol.22:563−598(2004))。p85αが遍在的に発現される一方で、p85βは、脳およびリンパ組織で主に見出される(Volinia et al.,Oncogene,7:789−93(1992))。p85サブユニットのPI3キナーゼp110α、β、またはδ触媒サブユニットとの会合は、これらの酵素の触媒活性および安定性に必要とされるようである。加えて、Rasタンパク質の結合も、PI3キナーゼ活性を上方制御する。
p110γのクローニングは、酵素のPI3Kファミリー内のさらなる複雑性を明らかにした(Stoyanov et al.,Science,269:690−93(1995))。p110γアイソフォームは、p110αおよびp110βに密接に関連するが(触媒ドメインにおいて45〜48%の同一性)、言及されたように、標的化サブユニットとしてp85を使用しない。代わりに、p110γは、ヘテロ三量体Gタンパク質のβγサブユニットにも結合するp101制御サブユニットに結合する。PI3Kγに対するp101制御サブユニットは、元来、ブタにおいてクローニングされ、その後、ヒトオルソログが同定された(Krugmann et al.,J Biol Chem,274:17152−8(1999))。p101のN末端領域とp110γのN末端領域との間の相互作用が、Gβγを介してPI3Kγを活性化することが知られている。近年、p101相同体である、p110γに結合するp84またはp87PIKAP(87kDaのPI3Kγアダプタータンパク質)が同定されている(Voigt et al.JBC,281:9977−9986(2006)、Suire et al.Curr.Biol.15:566−570(2005))。p87PIKAPは、p110γおよびGβγに結合する領域においてp101と相同であり、Gタンパク質共役型受容体のp110γ下流の活性化も媒介する。p101とは異なり、p87PIKAPは、心臓において高度に発現され、PI3Kγ心臓機能に極めて重要であり得る。
構成的に活性なPI3Kポリペプチドは、国際公開第WO96/25488号に記載されている。この刊行物は、インターSH2(iSH2)領域として知られるp85の102残基フラグメントがリンカー領域を介してマウスp110のN末端に融合されるキメラ融合タンパク質の調製を開示する。p85のiSH2ドメインは、外見上、無傷p85に匹敵する様式でPI3K活性を活性化することができる(Klippel et al.,Mol Cell Biol,14:2675−85(1994))。
したがって、PI3キナーゼを、それらのアミノ酸同一性またはそれらの活性によって定義することができる。この増大する遺伝子ファミリーのさらなるメンバーには、サッカロマイセス・セレビシエのVps34TOR1およびTOR2を含むより遠縁の脂質およびタンパク質キナーゼ(ならびにFRAPおよびmTOR等のそれらの哺乳類相同体)、血管拡張性失調症遺伝子産物(ATR)、ならびにDNA依存性タンパク質キナーゼ(DNA−PK)の触媒サブユニットが含まれる。概説は、Hunter,Cell,83:1−4(1995)を参照されたい。
PI3キナーゼは、白血球活性化のいくつかの側面にも関与する。p85関連PI3キナーゼ活性が、抗原に応答したT細胞の活性化にとって重要な共刺激分子であるCD28の細胞質ドメインと物理的に関連することが示されている(Pages et al.,Nature,369:327−29(1994);Rudd,Immunity,4:527−34(1996))。CD28を介するT細胞の活性化は、抗原による活性化の閾値を低下させ、増殖応答の規模および持続期間を増加させる。これらの影響は、重要なT細胞成長因子であるインターロイキン−2(IL2)を含むいくつかの遺伝子の転写の増加に関連している(Fraser et al.,Science,251:313−16(1991))。もはやPI3キナーゼと相互作用することができないといったCD28の変異は、IL2産生の開始不全につながり、T細胞活性化におけるPI3キナーゼの重要な役割を示唆する。
酵素ファミリーの個々のメンバーに対する特異的阻害剤は、それぞれの酵素の機能を解読するための非常に貴重なツールを提供する。2つの化合物、すなわちLY294002およびウォルトマンニンは、PI3キナーゼ阻害剤として広く使用されている。しかしながら、これらの化合物は、クラスIのPI3キナーゼの4つのメンバーを識別しないため、非特異的PI3K阻害剤である。例えば、様々なクラスIのPI3キナーゼのそれぞれに対するウォルトマンニンのIC50値は、1〜10nMの範囲内である。同様に、これらのPI3キナーゼのそれぞれに対するLY294002のIC50値は、約1μMである(Fruman et al.,Ann Rev Biochem,67:481−507(1998))。したがって、個々のクラスIのPI3キナーゼの役割を研究する際のこれらの化合物の実用性は限定される。
ウォルトマンニンを用いた研究に基づいて、PI3キナーゼの機能がGタンパク質共役型受容体を介する白血球シグナル伝達のいくつかの側面にも必要とされることが証明されている(Thelen et al.,Proc Natl Acad Sci USA,91:4960−64(1994))。さらに、ウォルトマンニンおよびLY294002が好中球遊走およびスーパーオキシド放出をブロックすることが示されている。しかしながら、これらの化合物がPI3Kの様々なアイソフォームを識別しないため、どの特定のPI3Kアイソフォームまたは複数のPI3Kアイソフォームがこれらの現象に関与し、かつ一般にどの機能を異なるクラスIのPI3K酵素が正常組織および罹患組織の両方において果たすかは、これらの研究からは依然として不明なままである。大部分の組織におけるいくつかのPI3Kアイソフォームの共発現は、最近まで、それぞれの酵素の活性を分離するための試みを混乱させてきた。
様々なPI3Kアイソザイムの活性の分離は、アイソフォーム特異的ノックアウトおよびキナーゼデッドノックインマウスの研究を可能にした遺伝子操作されたマウスの開発、ならびに異なるアイソフォームのうちのいくつかに対してより選択的な阻害剤の開発により進歩している。P110αおよびp110βノックアウトマウスが生成されており、双方ともに胚性致死であり、これらのマウスからp110αおよびβの発現および機能に関する情報はほとんど得ることができない(Bi et al.Mamm.Genome,13:169−172(2002)、Bi et al.J.Biol.Chem.274:10963−10968(1999))。最近になって、キナーゼ活性を損なうが、変異体p110αキナーゼ発現を保存するATP結合ポケット(p110αD933A)のDFGモチーフにおける単一点変異を有するp110αキナーゼデッドノックインマウスが生成された。ノックアウトマウスとは対照的に、ノックインアプローチは、シグナル伝達複合体化学量論性、足場機能を保存し、小分子アプローチをノックアウトマウスよりも現実的に模倣する。p110αノックアウトマウスと同様に、p110αD933Aホモ接合型マウスは、胚性致死である。しかしながら、ヘテロ接合型マウスは、生存可能かつ増殖可能であるが、インスリンの重要な調節因子であるインスリン受容体基質(IRS)タンパク質、インスリン様成長因子−1、およびレプチン作用を介する極度に鈍化したシグナル伝達を示す。これらのホルモンへの応答不全は、高インスリン血、耐糖能障害、過食症、体脂肪蓄積の増加、およびヘテロ接合体における全体的な成長低下につながる(Foukas,et al.Nature,441:366−370(2006))。これらの研究は、インスリンおよびレプチンシグナル伝達であるIGF−1における、他のアイソフォームによって置換されない中間体として、p110αの明確な重複しない役割を明らかにした。我々は、このアイソフォームの機能をさらに理解するために、p110βキナーゼデッドノックインマウスの説明を待たなければならない(マウスは作製されているが、依然として公開されていない;Vanhaesebroeck)。
P110γノックアウトおよびキナーゼデッドノックインマウスの両方が生成されており、全体的に、先天性免疫系の細胞の遊走における一次欠陥およびT細胞の胸腺発達における欠陥を有する同様かつ軽度の表現型を示す(Li et al.Science,287:1046−1049(2000)、Sasaki et al.Science,287:1040−1046(2000)、Patrucco et al.Cell,118:375−387(2004))。
P110γノックアウトおよびキナーゼデッドノックインマウスの両方が生成されており、全体的に、先天性免疫系の細胞の遊走における一次欠陥およびT細胞の胸腺発達における欠陥を有する同様かつ軽度の表現型を示す(Li et al.Science,287:1046−1049(2000)、Sasaki et al.Science,287:1040−1046(2000)、Patrucco et al.Cell,118:375−387(2004))。
p110γと同様に、PI3Kδノックアウトおよびキナーゼデッドノックインマウスが作製されており、生存可能であり、軽度で同様の表現型を有する。p110δD910A変異ノックインマウスは、辺縁帯B細胞およびCD5+B1細胞がほぼ検出不可能なB細胞発生および機能、ならびにB細胞およびT細胞抗原受容体シグナル伝達におけるδの重要な役割を実証した(Clayton et al.J.Exp.Med.196:753−763(2002)、Okkenhaug et al.Science,297:1031−1034(2002))。p110δD910Aマウスは、広範囲にわたって研究されており、免疫系においてδが果たす様々な役割を解明している。T細胞依存性およびT細胞非依存性免疫応答は、p110δD910Aにおいて極度に弱まり、TH1(INF−γ)およびTH2サイトカイン(IL−4、IL−5)の分泌が損なわれる(Okkenhaug et al.J.Immunol.177:5122−5128(2006))。近年p110δにおける変異を有するヒト患者についても説明されている。以前は原因不明であった原発性B細胞免疫不全およびγ−低グロブリン血症を有する台湾人男児は、p110δのエクソン24中のコドン1021においてm.3256GからAへの単一塩基対置換を呈した。この変異は、p110δタンパク質の高度に保存された触媒ドメインに位置するコドン1021においてミスセンスアミノ酸置換(EからK)をもたらした。この患者は、他の特定された変異は有さず、この患者の表現型は、研究されている限りでは、マウスにおけるp110δ欠損と一致している(Jou et al.Int.J.Immunogenet.33:361−369(2006))。
アイソフォーム選択的小分子化合物が開発されており、すべてのクラスIのPI3キナーゼアイソフォームに対する効果は様々である(Ito et al.J.Pharm.Exp.Therapeut.,321:1−8(2007))。p110αにおける変異がいくつかの固形腫瘍において同定されているため、αに対する阻害剤が望ましく、例えば、αの増幅変異は、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、および乳癌の50%と関連しており、活性化変異は、腸癌の50%超および乳癌の25%において説明されている(Hennessy et al.Nature Reviews,4:988−1004(2005))。山之内製薬は、αおよびδを等効力で阻害し、かつそれぞれ、βおよびγに対するよりも8倍および28倍選択的な化合物YM−024を開発している(Ito et al.J.Pharm.Exp.Therapeut.,321:1−8(2007))。
P110βは、塞栓形成に関与しており(Jackson et al.Nature Med.11:507−514(2005))、このアイソフォームに対して特異的な小分子阻害剤は、凝固障害を含む適応症用に考慮される(TGX−221:βに対して0.007μM、δに対するよりも14倍選択的であり、γおよびαに対するよりも500倍超選択的である)(Ito et al.J.Pharm.Exp.Therapeut.,321:1−8(2007))。
p110γに対する選択的な化合物が、いくつかのグループによって自己免疫疾患用の免疫抑制剤として開発されている(Rueckle et al.Nature Reviews,5:903−918(2006))。注目すべきことに、AS605240が、リウマチ性関節炎のマウスモデルにおいて効果的であり(Camps et al.Nature Medicine,11:936−943(2005))全身性エリテマトーデスのモデルにおいて疾患の発症を遅延させる(Barber et al.Nature Medicine,11:933−935(205))ことが示されている。
δ選択的阻害剤も近年説明されている。最も選択的な化合物は、キナゾリノンプリン阻害剤(PIK39およびIC87114)を含む。IC87114は、高ナノモル範囲(3桁)でp110δを阻害し、p110αに対するよりも100倍超の選択性を有し、p110βに対するよりも52倍選択的であるが、p110γと比しては選択性を欠く(約8倍)。これは、試験されたいかなるタンパク質キナーゼに対しても活性を示さない(Knight et al.Cell,125:733−747(2006))。δ選択的化合物または遺伝子操作されたマウス(p110δD910A)を用いて、B細胞およびT細胞活性化において重要や役割を果たすことに加えて、δは、好中球遊走および刺激された好中球の呼吸バーストにも部分的に関与し、抗原IgE媒介マスト細胞脱顆粒の部分的なブロックにつながることが示された(Condliffe et al.Blood,106:1432−1440(2005)、Ali et al.Nature,431:1007−1011(2002))。したがって、p110δは、自己免疫疾患およびアレルギーを含むが、これらに限定されない異常な炎症状態に関与することでも知られている多くの重要な炎症応答の重要な調節因子として浮上している。この概念を支援するために、遺伝的手段および薬理学的物質の両方を用いた研究から得られたp110δ標的検証データが増えている。したがって、δ選択的化合物IC87114およびp110δD910Aマウスを用いて、Aliら(Nature,431:1007−1011(2002))は、δがアレルギー性疾患を有するマウスモデルにおいて重要な役割を果たすことを実証している。機能するδの不在下で、受身皮膚アナフィラキシー(PCA)が著しく減少し、これはアレルゲンIgE誘発性のマスト細胞活性化および脱顆粒の減少に起因し得る。加えて、IC87114でのδの阻害が、オボアルブミン誘発性気道炎症性の喘息を用いたマウスモデルにおける炎症および疾患を著しく改善することが示されている(Lee et al.FASEB,20:455−465(2006)。化合物を利用したこれらのデータは、異なるグループにより、アレルギー性気道炎症を有する同一のモデルを用いて、p110δD910A変異体マウスにおいて裏付けられた(Nashed et al.Eur.J.Immunol.37:416−424(2007))。
炎症および自己免疫設定におけるPI3Kδ機能のさらなる特徴付けが必要とされている。さらに、PI3Kδに対する我々の理解は、細胞中でのその制御サブユニットおよび他のタンパク質の両方とのp110δの構造的相互作用のさらなる詳細を必要とする。アイソザイムp110α(インスリンシグナル伝達)およびβ(血小板活性化)の活性に関連した可能性のある毒性を回避するために、より強力で選択的または特異的なPI3Kδ阻害剤も依然として必要とされている。特に、選択的または特異的なPI3Kδ阻害剤は、このアイソザイムの役割をさらに探求し、かつアイソザイムの活性を調節するためのより優れた医薬品を開発するのに望ましい。
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本発明の一態様は、構造:
を有する化合物、またはその任意の薬学的に許容される塩に関し、式中、
X1は、C(R10)またはNであり、
Yは、N(R8)、OまたはSであり、
nは、0、1、2、もしくは3であり、
R1は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはS原子を含有することはなく、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された、直接結合、C1−4アルキル結合、OC1−2アルキル結合、C1−2アルキルO結合、またはO結合された、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環または8、9、10、もしくは11員の二環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によってさらに置換されており、
R2は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRaから選択され、
R3は、H、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、またはC1−4ハロアルキルから選択され、
R4は、独立して、各出現例において、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、C1−4ハロアルキル、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはなく、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、
R5は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、またはハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC1−6アルキルであるか、あるいは両方のR5基は、共に、ハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC3−6スピロアルキルを形成し、
R6は、H、ハロ、NHR9、またはOHであり、
R7は、H、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、−NRaC2−6アルキルORa、およびC1−6アルキルから選択され、C1−6アルキルは、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換され、このC1−6アルキルは、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、0もしくは1個の飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によってさらに置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルおよびC1−4ハロアルキルから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR8は、共に、−C=N−架橋を形成し、この炭素原子は、H、ハロ、シアノ、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によって置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR9は、−N=C−架橋を共に形成し、この炭素原子は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRaによって置換されており、
R8は、HまたはC1−6アルキルであり、
R9は、H、C1−6アルキル、またはC1−4ハロアルキルであり、
R10は、H、ハロ、C1−3アルキル、C1−3ハロアルキル、またはシアノであり、
R11は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Rb、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択されるか、あるいはR11は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されており、
Raは、独立して、各出現例において、HまたはRbであり、
Rbは、独立して、各出現例において、フェニル、ベンジル、またはC1−6アルキルであり、そのフェニル、ベンジル、およびC1−6アルキルは、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されている。
X1は、C(R10)またはNであり、
Yは、N(R8)、OまたはSであり、
nは、0、1、2、もしくは3であり、
R1は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはS原子を含有することはなく、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された、直接結合、C1−4アルキル結合、OC1−2アルキル結合、C1−2アルキルO結合、またはO結合された、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環または8、9、10、もしくは11員の二環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によってさらに置換されており、
R2は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRaから選択され、
R3は、H、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、またはC1−4ハロアルキルから選択され、
R4は、独立して、各出現例において、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、C1−4ハロアルキル、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはなく、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、
R5は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、またはハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC1−6アルキルであるか、あるいは両方のR5基は、共に、ハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC3−6スピロアルキルを形成し、
R6は、H、ハロ、NHR9、またはOHであり、
R7は、H、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、−NRaC2−6アルキルORa、およびC1−6アルキルから選択され、C1−6アルキルは、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換され、このC1−6アルキルは、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、0もしくは1個の飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によってさらに置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルおよびC1−4ハロアルキルから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR8は、共に、−C=N−架橋を形成し、この炭素原子は、H、ハロ、シアノ、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によって置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR9は、−N=C−架橋を共に形成し、この炭素原子は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRaによって置換されており、
R8は、HまたはC1−6アルキルであり、
R9は、H、C1−6アルキル、またはC1−4ハロアルキルであり、
R10は、H、ハロ、C1−3アルキル、C1−3ハロアルキル、またはシアノであり、
R11は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Rb、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択されるか、あるいはR11は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されており、
Raは、独立して、各出現例において、HまたはRbであり、
Rbは、独立して、各出現例において、フェニル、ベンジル、またはC1−6アルキルであり、そのフェニル、ベンジル、およびC1−6アルキルは、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、X1は、Nである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、Yは、N(R8)である。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはS原子を含有することはなく、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された、直接結合された飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環または8、9、10、もしくは11員の二環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によってさらに置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはS原子を含有することはなく、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された、直接結合された不飽和の6員の単環式環である。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、フェニル、ピリジル、またはピリミジニルであり、これらはすべて、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRaおよび−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたフェニルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、フェニル、ピリジル、またはピリミジニルであり、これらはすべて、ハロ、C1−6アルキル、およびC1−4ハロアルキルから独立して選択される1、2、もしくは3個の置換基によって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R1は、ハロ、C1−6アルキル、およびC1−4ハロアルキルから独立して選択される1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたフェニルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R2は、Hである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R3は、Hおよびハロから選択される。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R5は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、およびC1−4ハロアルキルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、一方のR5はHであり、他方のR5はC1−6アルキルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、一方のR5はHであり、他方のR5はメチルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、一方のR5はHであり、他方のR5は(R)−メチルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、一方のR5はHであり、他方のR5は(S)−メチルである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R6は、NHR9である。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R7は、シアノである。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R7およびR8は、共に、−C=N−架橋を形成し、この炭素原子は、H、ハロ、シアノ、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によって置換されており、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R7およびR9は、共に、−N=C−架橋を形成し、この炭素原子は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRaによって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R7およびR9は、共に、−N=C−架橋を形成し、この炭素原子は、Hまたはハロによって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R11は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、およびシアノから選択される。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R11は、独立して、各出現例において、H、ハロ、およびC1−6アルキルから選択される。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R11は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、この環の利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、この環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されている。
別の実施形態では、上記および下記の実施形態と関連して、R11は、フェニルである。
本発明の別の態様は、PI3K媒介状態または障害を治療する方法に関する。
ある特定の実施形態において、PI3K媒介状態または障害は、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患から選択される。他の実施形態では、PI3K媒介状態または障害は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、深部静脈血栓症、脳卒中、心筋梗塞症、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓溶解疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、および冠動脈疾患から選択される。さらに他の実施形態では、PI3K媒介状態または障害は、癌、結腸癌、神経膠芽腫、子宮内膜癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、細胞リンパ腫、リンパ増殖障害、小細胞肺癌、扁平上皮肺癌、神経膠腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、および白血病から選択される。さらに別の実施形態では、PI3K媒介状態または障害は、2型糖尿病から選択される。さらに他の実施形態では、PI3K媒介状態または障害は、呼吸器系疾患、気管支炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患から選択される。ある実施形態では、対象は、ヒトである。
本発明の別の態様は、上記の実施形態のうちのいずれかに従う化合物を投与するステップを含む、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、または自己免疫疾患の治療に関する。
本発明の別の態様は、上記または下記の実施形態のうちのいずれかに従う化合物を投与するステップを含む、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患および自己免疫疾患、炎症性腸障害、炎症性眼障害、炎症性または不安定性膀胱障害、炎症性要素を有する皮膚疾患、慢性炎症性状態、自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス(SLE)、重症筋無力症、リウマチ性関節炎、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、ならびに自己免疫性溶血性貧血、アレルギー性状態および過敏症の治療に関する。
本発明の別の態様は、上記または下記の実施形態のうちのいずれかに従う化合物を投与するステップを含む、p110δ活性により媒介されるか、p110δ活性に依存するか、またはp110δ活性に関連する癌の治療に関する。
本発明の別の態様は、上記または下記の実施形態のうちのいずれかに従う化合物を投与するステップを含む、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、T細胞急性リンパ芽球性白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、B細胞リンパ腫、固形腫瘍および乳癌から選択される癌の治療に関する。
本発明の別の態様は、上記の実施形態のいずれかに従う化合物および薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物に関する。
本発明の別の態様は、上記実施形態のいずれかに従う化合物の薬剤としての使用に関する。
本発明の別の態様は、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患の治療用の薬剤の製造における上記の実施形態のうちのいずれかに従う化合物の使用に関する。
本発明の化合物は、概して、いくつかの不斉中心を有することができ、典型的には、ラセミ混合物の形態で示される。本発明は、ラセミ混合物、部分的ラセミ混合物、ならびに別個の鏡像異性体およびジアステレオマーを包含することが意図される。
別途指示されない限り、以下の定義が、本明細書および特許請求の範囲で見られる用語に適用される。
「Cα−βアルキル」は、分枝、循状、もしくは線状関係にあるか、またはこれら3つの任意の組み合わせの、最小α個の炭素原子および最大β個の炭素原子を含むアルキル基を意味し、αおよびβは、整数を表す。本項に記載のアルキル基は、1個もしくは2個の二重または三重結合も含有し得る。C1−6アルキルの例として、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。
「Cα−βアルキル」は、分枝、循状、もしくは線状関係にあるか、またはこれら3つの任意の組み合わせの、最小α個の炭素原子および最大β個の炭素原子を含むアルキル基を意味し、αおよびβは、整数を表す。本項に記載のアルキル基は、1個もしくは2個の二重または三重結合も含有し得る。C1−6アルキルの例として、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。
「ベンゾ基」は、単独または組み合わせで、二価のラジカルC4H4=を意味し、そのうちの1つの表現は、−CH=CH−CH=CH−であり、別の環に隣接して結合されるときに、ベンゼン様の環、例えば、テトラヒドロナフタレン、インドール等を形成する。
「オキソ」および「チオキソ」という用語は、それぞれ、基=O(カルボニルにおいて見られるような)および=S(チオカルボニルにおいて見られるような)を表す。
「ハロ」または「ハロゲン」は、F、Cl、Br、およびIから選択されるハロゲン原子を意味する。
「CV−Wハロアルキル」は、アルキル鎖に結合される任意の数(少なくとも1個)の水素原子が、F、Cl、Br、またはIによって置換される、上述のアルキル基である。
「複素環」は、少なくとも1個の炭素原子、ならびにN、O、およびSから選択される少なくとも1個の他の原子を含む環を意味する。特許請求の範囲で見られ得る複素環の例として、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。
「利用可能な窒素原子」は、複素環の一部であり、2個の一重結合(例えば、ピペリジン)によって結合され、例えば、HまたはCH3による置換に利用可能な外部結合を残す窒素原子である。
「薬学的に許容される塩」は、従来の手段によって調製される塩を意味し、当業者に周知である。「薬理学的に許容される塩」には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸等を含むが、これらに限定されない無機酸および有機酸の塩基性塩が含まれる。本発明の化合物がカルボキシ基等の酸性官能基を含む場合、カルボキシ基に好適な薬学的に許容されるカチオン対は、当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第4級アンモニウムカチオン等を含む。「薬理学的に許容される塩」のさらなる例については、以下およびBerge et al.,J.Pharm.Sci.66:1(1977)を参照されたい。
「飽和、部分飽和、もしくは不飽和」は、水素で飽和された置換基、水素で全く飽和されていない置換基、および水素で部分的に飽和された置換基を含む。
「脱離基」は、概して、アミン、チオール、またはアルコール求核試薬等の求核試薬によって容易に置換可能な基を指す。そのような脱離基は、当該技術分野で周知である。そのような脱離基の例には、N−ヒドロキシコハク酸イミド、N−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ハロゲン化物、トリフレート、トシレート等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい脱離基は、必要に応じて、本明細書に示される。
「保護基」は、概して、カルボキシ、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト等の選択された反応基が、求核、求電子、酸化、還元等の望ましくない反応を受けないようにするために使用される、当技術分野で周知の基を指す。好ましい保護基は、必要に応じて、本明細書に示される。アミノ保護基の例として、アラルキル、置換アラルキル、シクロアルケニルアルキルおよび置換シクロアルケニルアルキル、アリル、置換アリル、アシル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、シリル等が挙げられるが、これらに限定されない。アラルキルの例として、ベンジル、オルトメチルベンジル、トリチル、およびベンズヒドリル(これらはハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、アシルアミノ、アシル等と任意で置換されてもよい)、ならびにホスホニウム塩およびアンモニウム塩等の塩が挙げられるが、これらに限定されない。アリール基の例として、フェニル、ナフチル、インダニル、アントラセニル、9−(9−フェニルフルオレニル)、フェナントレニル、デュレニル等が挙げられる。シクロアルケニルアルキルまたは置換シクロアルキレニルアルキルラジカルは、好ましくは6〜10個の炭素原子を有し、その例として、メチルシクロヘキセニル等が挙げられるが、これに限定されない。好適なアシル、アルコキシカルボニル、およびアラルコキシカルボニル基には、ベンジルオキシカルボニル、t−ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ベンゾイル、置換ベンゾイル、ブチリル、アセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタロイル等が含まれる。保護基の混合物を用いて、同一のアミノ基を保護することができ、例えば、第1級アミノ基を、アラルキル基およびアラルコキシカルボニル基の両方で保護することができる。アミノ保護基は、それらが結合した窒素と共に複素環、例えば、1,2−ビス(メチレン)ベンゼン、フタルイミジル、スクシンイミジル、マレイミジル等を形成することもでき、そこでは、これらの複素環基は、隣接アリール環およびシクロアルキル環をさらに含むことができる。加えて、複素環基は、ニトロフタルイミジル等のように、一置換、二置換、または三置換されていてもよい。塩酸塩、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の付加塩の形成を介して、アミノ基を、酸化等の望ましくない反応に対しても保護することができる。アミノ保護基の多くは、カルボキシ基、ヒドロキシ基、およびメルカプト基の保護にも好適である。例えば、アラルキル基である。アルキル基は、tert−ブチル等の、ヒドロキシ基およびメルカプト基の保護にも好適な基である。
シリル保護基は、1個以上のアルキル基、アリール基、およびアラルキル基によって任意で置換されるシリコン原子である。好適なシリル保護基には、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、tert−ブチルジメチルシリル、ジメチルフェニルシリル、1,2−ビス(ジメチルシリル)ベンゼン、1,2−ビス(ジメチルシリル)エタン、およびジフェニルメチルシリルが含まれるが、これらに限定されない。アミノ基のシリル化は、モノシリルアミノ基またはジシリルアミノ基を提供する。アミノアルコール化合物のシリル化は、N,N,O−トリシリル誘導体をもたらすことができる。シリルエテール官能基からのシリル官能基の除去は、別々の反応ステップとして、またはアルコール基との反応中に原位置でのいずれかで、例えば、金属水酸化物またはフッ化アンモニウム試薬での処理によって容易に達成される。好適なシリル化剤は、例えば、塩化トリメチルシリル、塩化tert−ブチル−ジメチルシリル、塩化フェニルジメチルシリル、塩化ジフェニルメチルシリル、またはイミダゾールもしくはDMFとのそれらの組み合わせ産物である。アミンのシリル化およびシリル保護基の除去の方法は、当業者に周知である。これらのアミン誘導体を対応するアミノ酸、アミノ酸アミド、またはアミノ酸エステルから調製する方法も、アミノ酸/アミノ酸エステルまたはアミノアルコール化学を含む有機化学の当業者に周知である。
保護基は、分子の残りの部分に影響を及ぼさない条件下で除去される。これらの方法は、当技術分野で周知であり、酸加水分解、水素化分解等を含む。好ましい方法は、保護基の除去、例えば、アルコール、酢酸等、またはそれらの混合物等の好適な溶媒系中でパラジウム炭素を利用した水素化分解によるベンジルオキシカルボニル基の除去を含む。ジオキサンまたは塩化メチレン等の好適な溶媒系中でHClまたはトリフルオロ酢酸等の無機酸または有機酸を利用して、t−ブトキシカルボニル保護基を除去することができる。結果として得られるアミノ塩を容易に中和して、遊離アミンを得ることができる。メチル、エチル、ベンジル、tert−ブチル、4−メトキシフェニルメチル等のカルボキシ保護基は、当業者に周知の加水分解および水素化分解条件下で除去することができる。
本発明の化合物が、環式および非環式のアミジン基およびグアニジン基、ヘテロ原子置換ヘテロアリール基(Y’=O、S、NR)等の互変異性形態で存在し得る基を含有してもよいことに留意されたく、それらは、以下の例に示されており、
1つの形態が本明細書で命名され、記載され、表示され、かつ/または特許請求されているが、すべての互変異性形態が、そのような命名、記載、表示、および/または特許請求の範囲に本質的に含まれることが意図される。
本発明の化合物のプロドラッグも本発明によって企図される。プロドラッグは、加水分解、代謝等の生体内の生理作用を介して、患者へのプロドラッグの投与後に本発明の化合物に化学修飾される活性または不活性化合物である。プロドラッグの作製および使用に関与する適合性および技術は、当業者に周知である。エステル類を含むプロドラッグの概説は、Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165(1988)およびBundgaard Design of Prodrugs,Elsevier(1985)を参照されたい。マスクされたカルボン酸アニオンの例には、アルキル(例えば、メチル、エチル)、シクロアルキル(例えば、シクロヘキシル)、アラルキル(例えば、ベンジル、p−メトキシベンジル)、およびアルキルカルボニルオキシアルキル(例えば、ピバロイルオキシメチル)等の様々なエステルが挙げられる。アミンは、アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体としてマスクされているおり、エステラーゼによって生体内で切断され、遊離薬物およびホルムアルデヒドを放出する(Bungaard J.Med.Chem.2503(1989))。また、イミダゾール、イミド、インドール等の酸性NH基を含有する薬物は、N−アシルオキシメチル基でマスクされている(Bundgaard Design of Prodrugs,Elsevier(1985))。ヒドロキシ基は、エステルおよびエーテルとしてマスクされている。欧州特許第039,051号(Sloan and Little,4/11/81)は、マンニッヒ塩基ヒドロキサム酸プロドラッグ、それらの調製、およびそれらの使用を開示している。
本明細書および特許請求の範囲は、「・・・および・・・から選択される」ならびに「は、・・・または・・・である」という言い回しを用いた種類のリストを含有する(マーカッシュグループと称されることもある)。この言い回しが本出願で使用されるとき、別途明記されない限り、そのグループを、全体として、またはその任意の単一のメンバーとして、またはその任意のサブグループとして含むものとする。この言い回しの使用は、単に簡略化目的にすぎず、必要に応じた個々の要素またはサブグループの除去を限定することを決して意図していない。
本発明には、同位体標識化合物も含まれ、これらは本明細書で列挙されるものと同一であるが、1個以上の原子が自然界で通常見出される原子重量または質量数とは異なる原子重量または質量数を有する原子によって置換されるという事実のために異なる。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例には、2H、3H、13C、14C、15N、16O、17O、31P、32P、35S、18F、および36Cl等の水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、および塩素の同位体が挙げられる。
他の原子の前述の同位体および/または他の原子の他の同位体を含有する本発明の化合物は、本発明の範囲内である。本発明のある特定の同位体標識化合物、例えば、3Hおよび14C等の放射性同位体が組み込まれる化合物は、薬物および/または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム同位体、すなわち、3H同位体、および炭素−14同位体、すなわち、14C同位体は、それらの調製および検出し易さから特に好ましい。さらに、重水素、すなわち、2H等のより重い同位体による置換は、例えば、生体内半減期の増加または必要用量の減少等のより優れた代謝安定性に起因するある特定の治療上の利点をもたらすことができるため、場合によっては好ましくあり得る。本発明の同位体標識化合物は、概して、非同位体標識試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識試薬を用いることによって調製することができる。
実験
概要
以下で使用する試薬および溶媒は商業的供給源から入手することができる。1H−NMRスペクトルは、Bruker(商標)400MHzおよび500MHzのNMR分光計上で記録した。有意なピークを、多重度(sは一重項、dは二重項、tは三重項、qは四重項、mは多重項、br sは広域一重項)、Hertz(Hz)単位のカップリング定数(複数を含む)、およびプロトンの数の順に一覧にする。質量分析結果を、質量電荷比、続いて、それぞれのイオンの相対存在量として報告する(括弧内)。エレクトロスプレイイオン化(ESI)質量分析を、Agilent(商標)1100シリーズLC/MSDエレクトロスプレイ質量分光計で行った。送達溶媒として0.1%のギ酸を有するアセトニトリル:水を用いて、すべての化合物を正のESIモードで分析することができた。逆相分析HPLCを、固定相としてAgilent(商標)1200シリーズをAgilent Eclipse XDB−C18 5μmカラム(4.6×150mm)上で使用し、かつ0.1%のTFAを有するアセトニトリル:水で溶出して実行した。逆相半分取HPLCを、固定相としてAgilent(商標)1100シリーズをPhenomenex Gemini(商標)10μm C18カラム(250×21.20mm)上で使用し、かつ0.1%のTFAを有するアセトニトリル:水で溶出して実行した。キラル化合物を、イソプロパノール/ヘキサン勾配、ADカラムを用いて精製する。キラリティーの割当は、生化学的データに基づく。
以下で使用する試薬および溶媒は商業的供給源から入手することができる。1H−NMRスペクトルは、Bruker(商標)400MHzおよび500MHzのNMR分光計上で記録した。有意なピークを、多重度(sは一重項、dは二重項、tは三重項、qは四重項、mは多重項、br sは広域一重項)、Hertz(Hz)単位のカップリング定数(複数を含む)、およびプロトンの数の順に一覧にする。質量分析結果を、質量電荷比、続いて、それぞれのイオンの相対存在量として報告する(括弧内)。エレクトロスプレイイオン化(ESI)質量分析を、Agilent(商標)1100シリーズLC/MSDエレクトロスプレイ質量分光計で行った。送達溶媒として0.1%のギ酸を有するアセトニトリル:水を用いて、すべての化合物を正のESIモードで分析することができた。逆相分析HPLCを、固定相としてAgilent(商標)1200シリーズをAgilent Eclipse XDB−C18 5μmカラム(4.6×150mm)上で使用し、かつ0.1%のTFAを有するアセトニトリル:水で溶出して実行した。逆相半分取HPLCを、固定相としてAgilent(商標)1100シリーズをPhenomenex Gemini(商標)10μm C18カラム(250×21.20mm)上で使用し、かつ0.1%のTFAを有するアセトニトリル:水で溶出して実行した。キラル化合物を、イソプロパノール/ヘキサン勾配、ADカラムを用いて精製する。キラリティーの割当は、生化学的データに基づく。
実施例1:
N−((2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−イル)メチル)−9H−プリン−6−アミンの調製
N−((2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−イル)メチル)−9H−プリン−6−アミンの調製
2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−カルボニトリル
EtOAc(8.4mL)中の3−(3’−フルオロフェニル)−3−オキソプロパンニトリル(454mg、2.8mol)および4−アミノピリジン−3−カルボキシアルデヒド(340mg、2.8mmol)の混合物にピペリジン(22μL、0.22mmol)を添加し、混合物を還流下で加熱した。生成物をLCMSによって検出し、その時点で、15mLのDCMを冷却した粗混合物に添加した。白色の沈殿物を濾過して副生成物を除去し、溶出剤としてEtOAc/ヘキサン(0〜50%)を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって濾液を精製して、2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−カルボニトリルを得た。LC−MS(ESI)m/z250[M+H]+。
(2−(3−フルオロフェニル)−1,5−ナフチリジン−3−イル)メタンアミン
−78°Cの1mLのDCM中の2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−カルボニトリル(120mg、0.48mmol)の溶液にDIBAL−H(DCM中1M、1.92mL、1.92mmol)を10分間にわたって滴加した。反応混合物を室温になるまで緩徐に加熱した。2時間後、1NのHCl、その後、酢酸カリウムを添加した。混合物をEtOAcで抽出し、合わせた有機層を飽和NaHCO3、ブラインで洗浄し、濃縮して、粗生成物を得た。溶出剤としてEtOAc/ヘキサン(0〜50%)を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を精製して、(2−(3−フルオロフェニル)−1,5−ナフチリジン−3−イル)メタンアミンを得た。LC−MS(ESI)m/z254[M+H]+。
N−((2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−イル)メチル)−9H−プリン−6−アミン
1−ブタノール(3mL)中の6−クロロプリン(15mg、0.095mmol、1.2当量)、1−(2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−イル)エタンアミン(20mg、0.079mmol)、およびDIEA(0.0313mL、0.180mmol)の混合物を100℃で一晩撹拌した。混合物を室温になるまで冷却し、EtOAc(5mL)で希釈し、水(3mL×1)ブライン(3mL×1)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC、続いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、N−((2−(3−フルオロフェニル)−1,6−ナフチリジン−3−イル)メチル)−9H−プリン−6−アミンを得た。LC−MS(ESI)m/z372[M+H]+。
実施例2:4−アミノ−6−((7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)−キノキサリン−6−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルの調製
6−クロロ−7−ニトロキノキサリン
H2O(5.48mL、47.8mmol)中の4−クロロ−5−ニトロベンゼン−1,2−ジアミン(5.6g、29.9mmol)およびオキサルアルデヒド30%を150mLのEtOH中で合わせた。懸濁を緩やかに加熱還流した。1時間時点で、溶液を室温になるまで冷却し、橙色の沈殿物を濾紙を通して濾去した。固体を真空ライン上で一晩乾燥させて、茶色の固体として6−クロロ−7−ニトロキノキサリンを得た。1H NMR(500MHz、DMSO−d6)δppm9.07〜9.22(2H、m)、8.89(1H、s)、8.56(1H、s)。TLC(50%EtOAc/ヘキサン6−クロロ−7−ニトロキノキサリン、Rf値=0.54)。
6−メチル−7−ニトロキノキサリン
6−クロロ−7−ニトロキノキサリン(1.03g、4.91mmol)、2,4,6−トリメチル−1,3,5,2,4,6−トリオキサトリボリナン(0.684mL、4.91mmol)、および炭酸カリウム(2.038g、14.74mmol)を15mLの10%1,4−ジオキサン水溶液中で合わせた。懸濁液をN2で約2分間スパージした後に、ジクロロ1,1’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセンパラジウム(ii)(0.401g、0.491mmol)を添加した。溶液を2時間加熱還流した後、室温になるまで冷却し、その後、EtOAcで希釈した。その有機物をH2O、続いて、ブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥させた後、真空下で濃縮した。得られた残渣を、10%EtOAc/ヘキサン〜50%EtOAc/ヘキサンの勾配で溶出する40gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、薄茶色の固体として6−メチル−7−ニトロキノキサリンを得た。1H NMR(500MHz、DMSO−d6)δppm9.03〜9.12(2H、m)、8.71(1H、s)、8.23(1H、s)、2.70(3H、s)。TLC(50%EtOAc/ヘキサン生成物のRf値=0.44)
7−メチルキノキサリン−6−アミン
6−メチル−7−ニトロキノキサリン(0.62g、3.28mmol)および塩化スズ(ii)二水和物(3.70g、16.39mmol)を100mLのEtOAc中で合わせて橙色の懸濁液を形成し、これを加熱還流した。2時間後、懸濁液を室温になるまで冷却し、飽和NaHCO3(ガス発生)で希釈し、懸濁液を10分間撹拌し、橙色から黄色への色の変化が見られた。懸濁液を分配し、その水層をEtOAcで洗浄した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、その後、真空下で濃縮して、黄色の固体として7−メチルキノキサリン−6−アミンを得た。1H NMR(500MHz、DMSO−d6)δppm8.56(1H、d、J=2.0Hz)、8.43(1H、d、J=2.0Hz)、7.64(1H、d、J=1.0Hz)、7.01(1H、s)、5.85(2H、br.s.)、2.31(3H、d、J=1.0Hz)。TLC(DCM生成物のRf値=0.10)
6−ヨード−7−メチルキノキサリン
7−メチルキノキサリン−6−アミン(1.4g、8.79mmol)を10mLのH2Oと合わせ、これに塩酸(1.759mL、21.11mmol)を添加した。その後、懸濁液を氷浴中で冷却した後に、5mLのH2O中の亜硝酸ナトリウム(0.637g、9.23mmol)の溶液を5分間にわたって滴加した。溶液を約0℃で30分間撹拌し、その後、添加漏斗に移し、40mLのCHCl3および10mLのH2O中のヨウ化カリウム(2.92g、17.59mmol)の活発に撹拌した溶液に20分間にわたって滴加した。懸濁液を室温で24時間撹拌した後、飽和NaHCO3およびDCMで希釈した。その層を分配し、その有機物をNa2S2O3で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、その後、10分の1の体積になるまで真空下で濃縮した。シリカゲルを溶液に添加し、真空下で濃縮した。得られた残渣を、100%ヘキサン〜40%EtOAc/ヘキサンの勾配で溶出する80gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。純生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、白色の固体として6−ヨード−7−メチルキノキサリンを得た。1H NMR(500MHz、DMSO−d6)δppm8.94(1H、d、J=1.7Hz)、8.88(1H、d、J=2.0Hz)、8.62(1H、s)、8.05(1H、d、J=1.0Hz)、2.61(3H、d、J=1.0Hz)、LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値271.0、TLC(20%EtOAc/ヘキサン生成物のRf値=0.30)
6−メチル−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン
炭酸カリウム(0.768g、5.55mmol)、6−ヨード−7−メチルキノキサリン(0.500g、1.851mmol)、および2−(メチルスルホニル)フェニルボロン酸(0.555g、2.78mmol)を10mLの1,4−ジオキサンおよび3mLのH2O中で合わせた。溶液をN2でスパージした後に、Pd(PPh3)2Cl2DCM(0.146g、0.185mmol)を添加した。溶液を50℃になるまで4時間加熱した。LCMSで判断したとき、一部の出発物質は残ったままであった。さらなる2−(メチルスルホニル)フェニルボロン酸(0.250g)およびPd(PPh3)2Cl2DCM(0.1g)を添加した。溶液を50℃で一晩加熱した。翌日、溶液を室温になるまで冷却し、その後、H2Oで希釈し、生成物をDCM、続いて、20%のiPrOH/DCMで抽出した。その有機物をMgSO4上で乾燥させ、その後、真空下で濃縮して、茶色の油を得た。その茶色の油を、50%ヘキサン/EtOAc〜EtOAcの勾配で溶出する40gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、ピンク色の固体として6−メチル−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリンを得た。LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値299.2
6−(ブロモメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン
6−ヨード−7−メチルキノキサリン(0.352g、1.18mmol)、および1,3−ジブロモ−5,5−ジメチルイミダゾリドン−2,4−ジオン(0.202g、0.708mmol)を四塩化炭素(10.8mL、112mmol)中で合わせた。これに、ペルオキシ安息香酸無水物(25%のH2O)(0.029g、0.118mmol)を添加し、懸濁液を一晩加熱還流した。翌日、懸濁液を室温になるまで冷却し、溶媒を真空下で除去した。得られた残渣を、50%EtOAc/ヘキサン〜100%EtOAcの勾配で溶出する40gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、薄茶色の発泡体として6−(ブロモメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリンを得た。LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値377.0。
6−(アジドメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン
N2下において氷浴中で冷却した10mLの無水DMF中で、6−(ブロモメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン(0.366g、0.970mmol)およびアジ化ナトリウム(0.069g、1.1mmol)を合わせた。30分間後、溶液をH2Oで希釈し、白色の沈殿物が溶液から析出した。その沈殿物を濾過して、75mgの黄色がかった固体を得た。濾液をブラインで希釈し、DCM、続いて、10%のiPrOH/DCMで抽出した。その有機物をNa2SO4上で乾燥させ、その後、真空下で濃縮して、黄色の膜を得た。粗生成物を、100%ヘキサン〜100%EtOAcの勾配で溶出する40gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、薄茶色の固体として6−(アジドメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリンを得た。LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値340.2。
(7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン−6−イル)メタンアミン
10mLのTHF中の6−(アジドメチル)−7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン(0.248g、0.731mmol)を、トリフェニルホスフィン(0.211g、0.804mmol)および水(0.039g、2.192mmol)と合わせた。その後、溶液を室温で一晩撹拌した。この時点で、0.5mLのH2Oを添加し、結果として得られた溶液を75℃になるまで6時間加熱した。溶液を室温になるまで冷却し、その後、真空下で濃縮した。得られた残渣をEt2OおよびH2O中に溶解した。これに、1mLの2N HClを添加した。その層を分配し、水層をEt2Oで洗浄し、4NのNaOH(pH約14)で塩基性にした。その後、生成物を5%のiPrOH/DCMで抽出した。その有機物をMgSO4上で乾燥させ、続いて、真空下で濃縮して、薄茶色の発泡体として(7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン−6−イル)メタンアミンを得た。LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値314.2。
4−アミノ−6−((7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン−6−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリル
4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(0.049g、0.32mmol)、N−エチル−N−イソプロピルプロパン−2−アミン(0.147mL、0.862mmol)、および(7−(2−(メチルスルホニル)−フェニル)キノキサリン−6−イル)メタンアミン(0.090g、0.29mmol)を、1mLのn−ブタノール中で合わせた。その後、溶液を120℃で3.5時間加熱した後、室温になるまで冷却し、その後、真空下で濃縮した。得られた残渣を、50%ヘキサン/EtOAcから100%EtOAc、その後、4%MeOH/0.2%NH4OH(水中約28%)/DCM〜8%MeOH/0.4%NH4OH(水中約28%)/DCMの勾配で溶出する40gのCombiFlash(商標)カラム上で精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、薄茶色の固体を得た。固体を5%のMeOH/DCMで溶出する12gのCombiFlash(商標)カラム上で再精製(乾燥装填)した。生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、オフホワイトの固体として4−アミノ−6−((7−(2−(メチルスルホニル)フェニル)キノキサリン−6−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルを得た。1H NMR(400MHz、DMSO−d6)δppm8.96〜8.97(1H、m)、8.94〜8.96(1H、m)、8.15(1H、dd、J=7.9、1.3Hz)、8.00(1H、s)、7.95(1H、t、J=5.9Hz)、7.92(1H、s)、7.88(1H、s)、7.81〜7.86(1H、m)、7.76(1H、td、J=7.7、1.4Hz)、7.52(1H、dd、J=7.4、1.2Hz)、7.28(2H、br.s.)、4.29〜4.53(2H、m)、2.99(3H、s)、LCMS−ESI(POS)、M/Z、M+1:実測値432.1。
実施例3:
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
tert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメート
EtOH(26.5mL、454mmol)中のtert−ブチル3−オキソ−4−(ピリジン−2−イル)ブタン−2−イルカルバメート(0.600g、2.27mmol)の撹拌溶液に、水酸化カリウム(0.382g、6.81mmol)および2−アミノ−3−ホルミルピリジン(0.277g、2.27mmol)を添加した。反応物を室温で5分間撹拌し、その後、90℃で2時間加熱した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、真空中で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー(1:0〜0:1のヘキサン:EtOAc)によって精製して、tert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメートを得た。
1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エタンアミン
DCM(1.5mL)中のtert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル−カルバメート(45mg、0.13mmol)の撹拌溶液に、TFA(99μL、1.3mmol)を添加した。反応物を室温で4時間撹拌した。この時点で、反応物をDCM(40mL)とブライン(10mL)との間に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エタンアミンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=251.0(M+1)。
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
n−ブタノール(1.5mL)中の1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エタンアミン(30mg、0.12mmol)、4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(18.5mg、0.120mmol)の撹拌溶液に、ヒューニッヒ塩基(41.7μL、0.240mmol)を添加した。反応物を120℃で4時間撹拌した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、逆相HPLC(10%〜60%のアセトニトリル:水の勾配)によって精製して、4−アミノ−6−(((1S,1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリルのラセミ混合物を得た。1H NMR(400MHz、クロロホルム−d)δppm9.18(1H、dd、J=4.3、2.0Hz)、8.83(1H、ddd、J=4.9、2.0、1.0Hz)、8.23〜8.28(2H、m)、8.05(1H、s)、7.90(1H、td、J=7.7、1.8Hz)、7.66(1H、dt、J=7.8、1.2Hz)、7.55(1H、dd、J=8.1、4.2Hz)、7.42(1H、ddd、J=7.6、4.9、1.2Hz)、7.15〜7.26(1H、m)、6.06(1H、t、J=7.1Hz)、5.25〜5.39(2H、m)、1.56(3H、d、J=6.7Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=369.2(M+1)。
実施例4:
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
tert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメート
EtOH(8.84mL、151mmol)中のtert−ブチル3−オキソ−4−(ピリジン−2−イル)ブタン−2−イルカルバメート(0.20g、0.76mmol)および4−アミノニコチンアルデヒド(0.092g、0.76mmol)の撹拌溶液に、水酸化カリウム(0.127g、2.27mmol)を添加した。反応を2時間加熱還流した。この時間後、反応物を真空中で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー(1:0〜0:1のヘキサン:EtOAc)によって精製して、tert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメートを得た。
1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エタンアミン
DCM(1.5mL)中のtert−ブチル1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチル−カルバメート(30mg、0.086mmol)の撹拌溶液に、TFA(66.0μL、0.856mmol)を添加した。反応物を室温で4時間撹拌した。この時間後、反応物をDCM(40mL)とブライン(10mL)との間に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エタンアミンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=251.0(M+1)。
4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリル
ブタノール(1.5mL)中の1−(3−(ピリジン−2−イル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エタンアミン(15mg、0.060mmol)の撹拌溶液に、4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(9.26mg、0.060mmol)およびN−エチル−N−イソプロピルプロパン−2−アミン(20.9μL、0.120mmol)を添加した。反応物を120℃で2時間加熱した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却した。結果として得られた沈殿物を濾過し、ヘキサンで洗浄して、ラセミ化合物の4−アミノ−6−(((1S、1R)−1−(3−(2−ピリジニル)−1,6−ナフチリジン−2−イル)エチル)アミノ)−5−ピリミジンカルボニトリルを得た。1H NMR(400MHz、クロロホルム−d)δppm9.33(1H、s)、8.83(2H、d、J=5.9Hz)、8.33(1H、s)、8.14(1H、s)、8.02(1H、d、J=5.9Hz)、7.93(1H、td、J=7.7、1.8Hz)、7.64(2H、d、J=7.8Hz)、7.44(1H、ddd、J=7.6、4.9、1.0Hz)、6.15(1H、m)、5.28(2H、bs)、1.38〜1.43(3H、m)。質量スペクトル(ESI)m/e=251.0。質量スペクトル(ESI)m/e=369.2(M+1)。
実施例5:
4−アミノ−6−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリル
4−アミノ−6−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリル
3−メチル−1,8−ナフチリジン−2,4−ジオール
THF(20mL)中の2−アミノニコチン酸メチル(1.3g、8.5mmol)およびプロピオン酸メチル(20.1mL、214mmol)の撹拌溶液に、ナトリウムtert−ブトキシド(2.05g、21.4mmol)を1分間にわたって分割して添加した。反応物を室温で40分間および100℃で4時間撹拌した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、真空中で蒸発させた。結果として得られた固体を水(20mL)中に溶解し、1.0MのHCl水溶液でpH7に中和した。結果として得られた固体を濾過し、真空下で一晩乾燥させて、黄褐色の固体として3−メチル−1,8−ナフチリジン−2,4−ジオールを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=177.2(M+1)。
2,4−ジクロロ−3−メチル−1,8−ナフチリジン
オキシ塩化リン(4.34mL、46.5mmol)中の3−メチル−1,8−ナフチリジン−2,4−ジオール(0.82g、4.6mmol)の撹拌懸濁液を120℃で3時間加熱した。この時間後、反応物を室温まで冷却させ、真空中で蒸発させた。結果として得られた残渣をNa2CO3水溶液で慎重に塩基性化してpH10超にした。結果として得られた固体を濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、2,4−ジクロロ−3−メチル−1,8−ナフチリジンを得た。1H NMR(400MHz、クロロホルム−d)δppm9.11(1H、dd、J=4.3、2.0Hz)、8.57(1H、dd、J=8.4、2.0Hz)、7.60(1H、dd、J=8.3、4.2Hz)、2.72(3H、s)
3−メチル−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン
トルエン:水(4mL:1.5mL)中の2、4−ジクロロ−3−メチル−1,8−ナフチリジン(250mg、1.17mmol)の撹拌溶液に、Pd(PPh3)4(136mg、0.120mmol)、フェニルボロン酸(286mg、2.35mmol)、およびNa2CO3(373mg、3.52mmol)を添加し、反応物を16時間加熱還流した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、EtOAc(100mL)と水(50mL)との間に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。カラムクロマトグラフィー(1:0〜1:1のヘキサン:EtOAc)により、3−メチル−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=297.1(M+1)。
3−(ブロモメチル)−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン
CCl4(8mL)中の3−メチル−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン(250mg、0.84mmol)の撹拌溶液に、n−ブロモスクシンイミド(165mg、0.930mmol)および過酸化ベンゾイル(20.4mg、0.0840mmol)を添加した。反応物を8時間加熱還流した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、DCM(100mL)とNaHCO3(50mL、飽和水溶液)との間に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させ、3−(ブロモメチル)−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=375.0[M+1(79Br)]および377.0[M+1(81Br)]。
2−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチル)イソインドリン−1,3−ジオン
DMF(5mL)中の3−(ブロモメチル)−2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン(300mg、0.800mmol)の撹拌溶液にフタルイミドカリウム(148mg、0.800mmol)を添加し、反応物を室温で1時間撹拌した。この時間後、反応物をEtOAc(100mL)と水(50mL)との間に分配した。分離した有機層をLiCl(30mL、1.0Mの水溶液)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。カラムクロマトグラフィー(1:0〜1:1のヘキサン:EtOAc)により、2−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチル)イソインドリン−1,3−ジオンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=442.0(M+1)。
(2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メタンアミン
EtOH(2.4mL)中の2−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチル)イソ−インドリン−1,3−ジオン(30mg、0.068mmol)の撹拌溶液に、ヒドラジン(21.3μL、0.680mmol)を添加した。反応物を70℃で45分間加熱した。この時点で、反応物を真空中で蒸発させ、EtOAc(50mL)と水(20mL)との間に分配した。分離した有機層をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、(2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メタンアミンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=312.2(M+1)。
4−アミノ−6−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリル
ブタノール(1.5mL)中の(2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メタンアミン(15mg、0.048mmol)の撹拌溶液に、ヒューニッヒ塩基(12.6μL、0.0720mmol)および4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(8.19mg、0.0530mmol)を添加した。反応物を110℃で2時間および50℃で一晩加熱した。この時間後、反応物を室温になるまで冷却し、逆相HPLC(10%〜60%のアセトニトリル:水の勾配)によって精製して、4−アミノ−6−((2,4−ジフェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)メチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリルを得た。1H NMR(400MHz、クロロホルム−d)δppm9.13(1H、br.s.)、7.80〜7.92(2H、m)、7.67(2H、d、J=5.9Hz)、7.52〜7.61(3H、m)、7.45〜7.51(3H、m)、7.32〜7.43(3H、m)、5.72(2H、br.s.)、5.15(1H、br.s.)、4.79(2H、d、J=5.3Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=430.0(M+1)。
実施例6:
3−エチル−2−フェニル−1,8−ナフチリジン
EtOH(100mL)中の2−アミノニコチンアルデヒド(3.00g、24.6mmol)およびブチロフェノン(3.64g、1.00当量)の混合物を、EtOH(15mL)中のKOH(200mg、0.140当量)で液滴処理した。結果として得られた反応混合物を90℃で一晩加熱した。溶媒を除去し、残渣をエチルEt2Oで処理し、表題化合物として白色の結晶物質を得た。1H−NMR(400Hz、CDCl3)δppm1.27(3H、t、J=8.0Hz)、2.94(2H、q、J=8.0Hz)、7.46〜7.54(4H、m)、7.66〜7.69(2H、m)、8.14(1H、s)、8.27(1H、d、J=8.0Hz)、9.13(1H、d、J=4.0Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=235(M+1)。
1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エタノン
3−エチル−2−フェニル−1,8−ナフチリジン(1.50g、6.40mmol)を、氷浴中に浸し、かつ効率的な機械的撹拌器、温度計、および滴下漏斗を装備した三つ口フラスコ内に設置した。活発に撹拌しながら硫酸(0.79当量、0.29mL)を添加した。その後、酢酸(2.5当量、0.92mL)、無水酢酸(1.5当量、0.90mL)、および最後にCrO3(1.3当量、0.85g)を、反応混合物の温度を20〜30℃に維持する速度で少量ずつ添加した。24時間撹拌し続けた。この時点で、20mLの水およびNa2CO3固体を緩徐に添加し、生成物をEtOAc(3×20mL)で抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、MgSO4上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキサン、1:1〜1/0)によって精製して、白色の固体として1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エタノンを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=249(M+1)。
(S,E)−2−メチル−N−(1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エチリデン)プロパン−2−スルフィンアミド
N2下のTHF(4mL)中の1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エタノン(150mg、0.6mmol)の溶液に、テトラエトキシチタニウム(0.25mL、2.0当量)を添加した。その後、固体(s)−(−)−2−メチルプロパン−2−スルフィンアミド(73mg、1.0当量)を添加し、反応物を還流下で一晩加熱した。室温になるまで冷却した後、反応混合物をNaHCO3溶液で処理し、EtOAc(20mL)で希釈した。混合物を10分間撹拌し、Celite(商標)を通して濾過した。その有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキサン、1:1〜1/0)によって精製して白色の固体として(S,E)−2−メチル−N−(1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エチリデン)プロパン−2−スルフィンアミドを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=352(M+1)。
1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エタンアミン
THF(5mL)中の(S,E)−2−メチル−N−(1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エチリデン)−プロパン−2−スルフィンアミド(100mg、0.29mmol)の溶液に、NaBH4(32.3mg、3.00当量)を0℃で添加した。室温になるまで加温した後、反応混合物をH2Oで反応停止処理し、EtOAc(5mL×2)で抽出した。合わせた混合物をH2O、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH、20/1)によって精製して、淡黄色の固体として(S)−2−メチル−N−(1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エチル)プロパン−2−スルフィンアミドを得て、これをMeOH(2mL)中に溶解し、ジオキサン(2mL)中の4MのHClで1時間処理した。反応混合物を濃縮して、黄色の固体を得て、そのままの状態で次のステップで使用した。
4−アミノ−6−(1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エチルアミノ)ピリミジン−5−カルボニトリル
n−BuOH(2mL)中の1−(2−フェニル−1,8−ナフチリジン−3−イル)エタンアミン(50mg、0.20mmol)、4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(31mg、1.0当量)、およびヒューニッヒ塩基(42μL、1.2当量)の混合物を120℃で2時間撹拌した。室温になるまで冷却した後、反応混合物を逆相HPLC(10〜50%のMeCN/H2O/0.1%TFA)によって精製し、TFA塩として白色の粉末を得た。1H−NMR(400Hz、CD3OD)δppm1.63(3H、d、J=8.0Hz)、5.81(1H、q、J=8.0Hz)、7.57〜7.60(3H、m)、7.77〜7.79(2H、m)、7.95〜7.97(1H、m)、8.02(1H、s)、8.86(1H、s)、8.91(1H、d、J=8.0Hz)、9.24(1H、d、J=4.0Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=368(M+1)。
実施例7:
(S)−tert−ブチル3−オキソ−4−フェニルブタン−2−イルカルバメート
THF(10mL)中の(S)−tert−ブチル1−(メトキシ(メチル)アミノ)−1−オキソプロパン−2−イル−カルバメート(1.16g、5mmol)の溶液を−15℃になるまで冷却し、塩化イソプロピルマグネシウム(2.0M、2.4mL、0.95当量)を緩徐に加えた。透明な溶液が得られた後、室温で一晩撹拌しながら塩化ベンジルマグネシウム(1.0M、4.99mL、1.0当量)を滴加した。反応混合物をNH4Cl溶液で反応停止処理し、EtOAc(10mL×2)で抽出した。合わせた有機層をH2O、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、白色の固体、(S)−tert−ブチル3−オキソ−4−フェニル−ブタン−2−イルカルバメートを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=264(M+1)。
(S)−tert−ブチル3−オキソ−4−(ピリジン−2−イル)ブタン−2−イルカルバメート
THF(450mL)中のtert−ブチル1−(メトキシ(メチル)アミノ)−1−オキソプロパン−2−イルカルバメート(50.0g、215mmol)を−40℃になるまで冷却し(ドライアイス/アセトニトリル)、塩化イソプロピルマグネシウム(2.0M、102.2mL、0.95当量)を緩徐に加えた。透明な溶液が得られた後(−20℃で透明になり、−40℃で再び乳白色になった)、ブロモ(ピリジン−2−イルメチル)マグネシウム溶液(調製については以下を参照のこと)をカニューレを用いて液加した後、室温になるまで一晩加温した。反応混合物をNH4Cl溶液で反応停止処理し、EtOAc(500mL×2)で抽出した。合わせた有機層をH2O、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、高真空下で濃縮して、黄褐色の油として(S)−tert−ブチル3−オキソ−4−(ピリジン−2−イル)ブタン−2−イルカルバメートを得た。小規模の反応物をCombiflash(商標)(EtOAc/ヘキサン、最大1/3)によって精製して、赤色の油を得た。質量スペクトル(ESI)m/e=265(M+1)。
ブロモ(ピリジン−2−イルメチル)マグネシウム
THF(300mL)中のピコリン(31.9mL、1.5当量)の溶液に、窒素下で、MeLi(202mL、1.6M、1.5当量)を−40℃で滴加した。反応混合物を−20℃になるまで加温させ、10分間撹拌した。その後、これを−40℃になるまで冷却し、臭化マグネシウム(59.4g、1.5当量)を3回に分割して添加した。反応混合物を室温になるまで加温させ、30分間撹拌して、ブロモ(ピリジン−2−イルメチル)マグネシウムを得た。
THF(300mL)中のピコリン(31.9mL、1.5当量)の溶液に、窒素下で、MeLi(202mL、1.6M、1.5当量)を−40℃で滴加した。反応混合物を−20℃になるまで加温させ、10分間撹拌した。その後、これを−40℃になるまで冷却し、臭化マグネシウム(59.4g、1.5当量)を3回に分割して添加した。反応混合物を室温になるまで加温させ、30分間撹拌して、ブロモ(ピリジン−2−イルメチル)マグネシウムを得た。
2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸
EtOH(2mL)および水(2mL)中のtert−ブチル3−オキソ−4−フェニルブタン−2−イルカルバメート(533mg、1.0当量)、KOH(341mg、3.00当量)、および1H−ピロロ[2,3−b]ピリジン−2,3−ジオン(300mg、2.00当量)を85℃で一晩加熱した。室温になるまで冷却した後、反応物の体積を2mLに減少させ、Et2Oで2回抽出した。濾液を濃縮HClで酸性化してpH3〜4にし、混合物をDCM(5mL×3)で抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、黄色の発泡体として2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸を得た。質量スペクトル(ESI)m/e=394(M+1)。
tert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメート
DMF(2mL)中の2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸(200mg、0.51mmol)の溶液に、HATU(387mg、2.0当量)、メタンアミン(0.51mL、2.0当量)、およびN−エチル−N−イソプロピルプロパン−2−アミン(0.18mL、2.0当量)を添加した。結果として得られた混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を部分的に除去し、EtOAc(5mL)と水(5mL)との間に分配した。その水層をEtOAc(5mL×2)で抽出した。合わせた有機物を水(2mL×2)、0.5NのNaOH(2mL×3)、ブライン(5mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させた。溶媒の減圧下での除去、その後、Combiflash(商標)精製(20/1のDCM/MeOH)により、白色の固体としてtert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメートを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=407(M+1)。
2−(1−(6−アミノ−5−シアノピリミジン−4−イルアミノ)エチル)−N−メチル−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−4−カルボキサミド
tert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−フェニル−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチル−カルバメート(29mg、0.071mmol)にジオキサン(4M)中のHCl(1mL、4.00mmol)を添加し、結果として得られた均質な混合物を室温で1.5時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、高真空下で2時間乾燥させた。この時点で、固体をDMF(1mL)中に溶解した。4−アミノ−6−クロロ−ピリミジン−5−カルボニトリル(11mg、1.0当量)およびヒューニッヒ塩基(0.05mL、4.0当量)を90℃で添加した。室温になるまで冷却した後、反応混合物を逆相HPLC(最大50%のMeCN/H2O/0.1%TFA)に供して、TFA塩として白色の粉末を得た。1H−NMR(500Hz、CD3OD)δppm1.56(3H、d、J=5.0Hz)、2.69(3H、s)、5.66(1H、q、J=5.0Hz)、7.44〜7.59(5H、m)、7.81(1H、dd、J=10.0、5.0Hz)、8.07(1H、s)、8.49(1H、d、J=10.0Hz)、9.16(1H、d、J=5.0Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=425(M+1)。
2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸
EtOH(15mL)中の(S)−tert−ブチル3−オキソ−4−(ピリジン−2−イル)ブタン−2−イルカルバメート(396mg、1.50mmol)、2−オキソ−2−(2−ピバラミドピリジン−3−イル)酢酸エチル(Zong,R.et.al.,J.Org.Chem.2008,73,4334−4337に従って調製した)(417mg、1.0当量)およびKOH(337mg、4.0当量)の混合物を、88℃になるまで加熱した。室温になるまで冷却した後、溶媒を除去し、水(5mL)を添加した。この水層をDCMで洗浄し、濃縮HClで酸性化してpH3〜4にした。混合物をDCM(5mL×3)で抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、黄色の発泡体として2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸を得た。質量スペクトル(ESI)m/e=395(M+1)。
tert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメート
DMF(5mL)中の2−(1−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)エチル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−4−カルボン酸(500mg、1.30mmol)の溶液に、PyBop(990mg、1.50当量)、THF(2.0M)中のメタンアミン(1.3mL、2.0当量)、およびN−エチル−N−イソプロピルプロパン−2−アミン(0.45mL、2.0当量)を添加した。結果として得られた混合物を室温で一晩撹拌した。この時点で、混合物を水(10mL)とEtOAc(15mL)との間に分配した。この水層をEtOAc(5mL×2)で抽出した。合わせた有機物を水(10mL×2)、0.5NのNaOH(5mL×2)、水(5mL×2)、ブライン(5mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させた。溶媒の除去、その後、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH、20/1)により、黄色の固体、tert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメートを得た。質量スペクトル(ESI)m/e=408(M+1)。
2−(1−(6−アミノ−5−シアノピリミジン−4−イルアミノ)エチル)−N−メチル−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−4−カルボキサミド
tert−ブチル1−(4−(メチルカルバモイル)−3−(ピリジン−2−イル)−1,8−ナフチリジン−2−イル)エチルカルバメート(440mg、1.1mmol)に、1,4−ジオキサン(2mL、7.3当量)中の4N HClを添加した。結果として得られた混合物を室温で30分間撹拌した。反応混合物をEt2O(5mL)で希釈した。白色の固体を濾過し、Et2Oで洗浄し、真空下で乾燥させた。質量スペクトル(ESI)m/e=308(M+1)。DMF(3mL)中のアミンHCl塩の溶液に、4−アミノ−6−クロロピリミジン−5−カルボニトリル(167mg、1.00当量)およびDIEA(0.75mL、4.0当量)を添加した。結果として得られた混合物を105℃になるまで2時間加熱した。室温になるまで冷却した後、EtOAc(10mL)を添加し、混合物を水(3×3mL)、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させた。溶媒を除去し、残渣を逆相HPLC(10%〜50%のMeCN/H2O/0.1%TFA)によって精製して、白色の粉末としてTFA塩を得た。1H−NMR(400Hz、CD3OD)δppm1.59(3H、d、J=8.0Hz)、2.71(3H、s)、5.66(1H、m)、7.49−7.52(1H、m)、7.68(1H、d、J=8.0Hz)、7.76(1H、dd、J=8.0、4.0Hz)、7.97(1H、t、J=8.0Hz)、8.43(1H、d、J=8.0Hz)、8.72(1H、d、J=4.0Hz)、9.16(1H、d、J=4.0Hz)。質量スペクトル(ESI)m/e=426(M+1)。
生物学的アッセイ
PI3Kの組換え発現
ポリHisタグでN末端標識されたPI3kα、β、およびδの全長p110サブユニットを、sf9昆虫細胞中、バキュロウイルス発現ベクターでp85と共発現させた。P110/p85ヘテロ二量体を、Ni−NTA、Q−HP、Superdex−100クロマトグラフィーによって順次精製した。精製したα、β、およびδアイソザイムを、20mMのトリス、pH8、0.2MのNaCl、50%のグリセロール、5mMのDTT、2mMのコール酸ナトリウム中に−20℃で保存した。ポリHisタグでN末端標識された切断PI3Kγ、残基114〜1102を、Hi5昆虫細胞中、バキュロウイルスで発現させた。γアイソザイムをNi−NTA、Superdex−200、Q−HPクロマトグラフィーによって順次精製した。γアイソザイムを、NaH2PO4、pH8、0.2MのNaCl、1%のエチレングリコール、2mMのβ−メルカプトエタノール中に−80℃で冷凍保存した。
ポリHisタグでN末端標識されたPI3kα、β、およびδの全長p110サブユニットを、sf9昆虫細胞中、バキュロウイルス発現ベクターでp85と共発現させた。P110/p85ヘテロ二量体を、Ni−NTA、Q−HP、Superdex−100クロマトグラフィーによって順次精製した。精製したα、β、およびδアイソザイムを、20mMのトリス、pH8、0.2MのNaCl、50%のグリセロール、5mMのDTT、2mMのコール酸ナトリウム中に−20℃で保存した。ポリHisタグでN末端標識された切断PI3Kγ、残基114〜1102を、Hi5昆虫細胞中、バキュロウイルスで発現させた。γアイソザイムをNi−NTA、Superdex−200、Q−HPクロマトグラフィーによって順次精製した。γアイソザイムを、NaH2PO4、pH8、0.2MのNaCl、1%のエチレングリコール、2mMのβ−メルカプトエタノール中に−80℃で冷凍保存した。
生体内酵素アッセイ
アッセイを、白色のポリプロピレンプレート(Costar3355)中に上記の最終濃度を有する25μLの構成成分中で行った。ホスファチジルイノシトールホスホアクセプターPtdIns(4,5)P2 P4508は、Echelon Biosciences製のものであった。αおよびγアイソザイムのATPase活性は、これらの条件下ではPtdIns(4,5)P2によってさほど刺激されず、したがって、これらのアイソザイムのアッセイから除外した。試験化合物をジメチルスルホキシド中に溶解し、3倍連続希釈で希釈した。DMSO(1μL)中の化合物を試験ウェルごとに添加し、化合物を含有しない反応物と比較した阻害を、酵素ありおよび酵素なしで決定した。室温でのアッセイインキュベーション後、反応を停止させ、残留ATPを、製造業者の指示に従って等体積の市販のATP生物発光キット(Perkin Elmer EasyLite)を添加して決定し、AnalystGT照度計を用いて検出した。
アッセイを、白色のポリプロピレンプレート(Costar3355)中に上記の最終濃度を有する25μLの構成成分中で行った。ホスファチジルイノシトールホスホアクセプターPtdIns(4,5)P2 P4508は、Echelon Biosciences製のものであった。αおよびγアイソザイムのATPase活性は、これらの条件下ではPtdIns(4,5)P2によってさほど刺激されず、したがって、これらのアイソザイムのアッセイから除外した。試験化合物をジメチルスルホキシド中に溶解し、3倍連続希釈で希釈した。DMSO(1μL)中の化合物を試験ウェルごとに添加し、化合物を含有しない反応物と比較した阻害を、酵素ありおよび酵素なしで決定した。室温でのアッセイインキュベーション後、反応を停止させ、残留ATPを、製造業者の指示に従って等体積の市販のATP生物発光キット(Perkin Elmer EasyLite)を添加して決定し、AnalystGT照度計を用いて検出した。
抗IgMによるヒトB細胞増殖刺激
ヒトB細胞の単離:
PBMCをLeukopacまたはヒト新鮮血から単離する。ヒトB細胞を、MiltenyiプロトコルおよびB細胞単離キットIIを用いて単離する。ヒトB細胞をAutoMacsカラムを用いて精製した。
ヒトB細胞の単離:
PBMCをLeukopacまたはヒト新鮮血から単離する。ヒトB細胞を、MiltenyiプロトコルおよびB細胞単離キットIIを用いて単離する。ヒトB細胞をAutoMacsカラムを用いて精製した。
ヒトB細胞の活性化
96ウェルの平底プレートを使用し、50000/ウェルの精製されたB細胞をB細胞増殖培地(DMEM+5%のFCS、10mMのHepes、50μMの2−メルカプトエタノール)中にプレートし、150μLの培地は、250ng/mLのCD40L−LZ組換えタンパク質(Amgen)および2μg/mLの抗ヒトIgM抗体(Jackson ImmunoReseach Lab.番号109−006−129)を含有し、PI3K阻害剤を含有する50μLのB細胞培地と混合され、37℃のインキュベータで72時間インキュベートする。72時間後、B細胞を0.5〜1μCi/ウェルの3Hチミジンで一晩(約18時間)パルス標識し、TOMハーベスターを用いて細胞を回収する。
96ウェルの平底プレートを使用し、50000/ウェルの精製されたB細胞をB細胞増殖培地(DMEM+5%のFCS、10mMのHepes、50μMの2−メルカプトエタノール)中にプレートし、150μLの培地は、250ng/mLのCD40L−LZ組換えタンパク質(Amgen)および2μg/mLの抗ヒトIgM抗体(Jackson ImmunoReseach Lab.番号109−006−129)を含有し、PI3K阻害剤を含有する50μLのB細胞培地と混合され、37℃のインキュベータで72時間インキュベートする。72時間後、B細胞を0.5〜1μCi/ウェルの3Hチミジンで一晩(約18時間)パルス標識し、TOMハーベスターを用いて細胞を回収する。
IL−4により刺激されるヒトB細胞増殖
ヒトB細胞の単離:
ヒトPBMCをLeukopacまたはヒト新鮮血から単離する。ヒトB細胞を、Miltenyiプロトコル−B細胞単離キットを用いて単離する。ヒトB細胞をAutoMacsカラムを用いて精製した。
ヒトB細胞の単離:
ヒトPBMCをLeukopacまたはヒト新鮮血から単離する。ヒトB細胞を、Miltenyiプロトコル−B細胞単離キットを用いて単離する。ヒトB細胞をAutoMacsカラムを用いて精製した。
ヒトB細胞の活性化
96ウェル平底プレートを使用し、50000/ウェルの精製されたB細胞をB細胞増殖培地(DMEM+5%のFCS、50μMの2−メルカプトエタノール、10mMのHepes)中にプレートする。培地(150μL)は、250ng/mLのCD40L−LZ組換えタンパク質(Amgen)および10ng/mLのIL−4(R&D System、番号204−IL−025)を含有し、化合物を含有する50 150μLのB細胞培地と混合され、37℃のインキュベータで72時間インキュベートする。72時間後、B細胞を0.5−1μCi/ウェルの3Hチミジンで一晩(約18時間)パルス標識し、TOMハーベスターを用いて細胞を回収する。
96ウェル平底プレートを使用し、50000/ウェルの精製されたB細胞をB細胞増殖培地(DMEM+5%のFCS、50μMの2−メルカプトエタノール、10mMのHepes)中にプレートする。培地(150μL)は、250ng/mLのCD40L−LZ組換えタンパク質(Amgen)および10ng/mLのIL−4(R&D System、番号204−IL−025)を含有し、化合物を含有する50 150μLのB細胞培地と混合され、37℃のインキュベータで72時間インキュベートする。72時間後、B細胞を0.5−1μCi/ウェルの3Hチミジンで一晩(約18時間)パルス標識し、TOMハーベスターを用いて細胞を回収する。
特異的なT抗原(破傷風トキソイド)によって誘発されたヒトPBMC増殖アッセイ
ヒトPBMCを冷凍ストックから調製するか、またはFicoll勾配を用いてヒト新鮮血液から精製する。96ウェルの丸底プレートを使用し、2×105PBMC/ウェルを培養培地(RPMI1640+10%のFCS、50uMの2−メルカプトエタノール、10mmのHepes)にプレートする。IC50決定のために、PI3K阻害剤を10μMから0.001μMまで半対数増加で3重に試験した。T細胞特異的抗原である破傷風トキソイド(University of Massachusetts Lab)を1μg/mLで添加し、37℃のインキュベータで6日間インキュベートした。IL2 ELISAアッセイのために上清を6日間後に回収し、その後、細胞を3H−チミジンで約18時間パルスして、増殖を測定する。
ヒトPBMCを冷凍ストックから調製するか、またはFicoll勾配を用いてヒト新鮮血液から精製する。96ウェルの丸底プレートを使用し、2×105PBMC/ウェルを培養培地(RPMI1640+10%のFCS、50uMの2−メルカプトエタノール、10mmのHepes)にプレートする。IC50決定のために、PI3K阻害剤を10μMから0.001μMまで半対数増加で3重に試験した。T細胞特異的抗原である破傷風トキソイド(University of Massachusetts Lab)を1μg/mLで添加し、37℃のインキュベータで6日間インキュベートした。IL2 ELISAアッセイのために上清を6日間後に回収し、その後、細胞を3H−チミジンで約18時間パルスして、増殖を測定する。
クラスIaおよびクラスIIIのPI3Kの阻害検出のためのGFPアッセイ
AKT1(PKBa)は、***促進因子(IGF−1、PDGF、インスリン、トロンビン、NGF等)によって活性化されたクラスIaのPI3Kによって制御される。***促進刺激に応答して、AKT1は、サイトゾルから形質膜に移行する。フォークヘッド(FKHRL1)は、AKT1の基質である。それは、AKT(生存/成長)によってリン酸化されると細胞質性になる。AKTの阻害(停止/アポトーシス)は核へのフォークヘッド移行をもたらす。
FYVEドメインは、PI(3)Pに結合する。その大部分は、クラスIIIのPI3Kの構成作用によって生成される。
AKT1(PKBa)は、***促進因子(IGF−1、PDGF、インスリン、トロンビン、NGF等)によって活性化されたクラスIaのPI3Kによって制御される。***促進刺激に応答して、AKT1は、サイトゾルから形質膜に移行する。フォークヘッド(FKHRL1)は、AKT1の基質である。それは、AKT(生存/成長)によってリン酸化されると細胞質性になる。AKTの阻害(停止/アポトーシス)は核へのフォークヘッド移行をもたらす。
FYVEドメインは、PI(3)Pに結合する。その大部分は、クラスIIIのPI3Kの構成作用によって生成される。
AKT膜ラッフリングアッセイ(CHO−IR−AKT1−EGFP細胞/GE Healthcare)
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。10ng/mLのインスリンを添加する。10分間後に室温で固定し、撮像する。
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。10ng/mLのインスリンを添加する。10分間後に室温で固定し、撮像する。
フォークヘッド移行アッセイ(MDA MB468フォークヘッド−DiversaGFP細胞)
細胞を成長培地中において化合物で1時間処理する。固定し、撮像する。
細胞を成長培地中において化合物で1時間処理する。固定し、撮像する。
クラスIIIのPI(3)Pアッセイ(U2OS EGFP−2XFYVE細胞/GE Healthcare)
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。固定し、撮像する。
細胞をアッセイ緩衝液で洗浄する。アッセイ緩衝液中の化合物で1時間処理する。固定し、撮像する。
3つすべてのアッセイ用の対照は、10uMのワートマニンである:
AKTは細胞質性である。
フォークヘッドは核性である。
PI(3)Pをエンドソームから枯渇させる。
AKTは細胞質性である。
フォークヘッドは核性である。
PI(3)Pをエンドソームから枯渇させる。
バイオマーカーアッセイ:CD69またはB7.2(CD86)発現のB細胞受容体刺激
ヘパリン化ヒト全血を10μg/mLの抗IgD(Southern Biotech、番号9030−01)で刺激した。その後、90μLの刺激された血液を、96ウェルプレートのウェルごとにアリコートし、IMDM+10%FBS(Gibco)中で希釈した10μLの様々な濃度のブロッキング化合物(10〜0.0003μM)で処理した。試料を37℃で4時間(CD69発現の場合)から6時間(B7.2発現の場合)、一緒にインキュベートした。処理された血液(50μL)を、それぞれ10μLのCD45−PerCP(BD Biosciences、番号347464)、CD19−FITC(BD Biosciences、番号340719)、およびCD69−PE(BD Biosciences、番号341652)で抗体染色するために、96ウェルのディープウェルプレート(Nunc)に移した。第2の50μLの処理された血液を、それぞれ10μLのCD19−FITC(BD Biosciences、番号340719)およびCD86−PeCy5(BD Biosciences、番号555666)で抗体染色するために、第2の96ウェルのディープウェルプレートに移した。すべての染色を室温の暗所で15〜30分間行った。その後、血液を溶解し、450μLのFACS溶解溶液(BD Biosciences、番号349202)を用いて室温で15分間固定した。その後、試料をPBS+2%FBS中で2回洗浄した後、FACS分析した。試料を、CD45/CD19二重陽性細胞(CD69染色の場合)、またはCD19陽性細胞(CD86染色の場合)のいずれかにゲートした。
ヘパリン化ヒト全血を10μg/mLの抗IgD(Southern Biotech、番号9030−01)で刺激した。その後、90μLの刺激された血液を、96ウェルプレートのウェルごとにアリコートし、IMDM+10%FBS(Gibco)中で希釈した10μLの様々な濃度のブロッキング化合物(10〜0.0003μM)で処理した。試料を37℃で4時間(CD69発現の場合)から6時間(B7.2発現の場合)、一緒にインキュベートした。処理された血液(50μL)を、それぞれ10μLのCD45−PerCP(BD Biosciences、番号347464)、CD19−FITC(BD Biosciences、番号340719)、およびCD69−PE(BD Biosciences、番号341652)で抗体染色するために、96ウェルのディープウェルプレート(Nunc)に移した。第2の50μLの処理された血液を、それぞれ10μLのCD19−FITC(BD Biosciences、番号340719)およびCD86−PeCy5(BD Biosciences、番号555666)で抗体染色するために、第2の96ウェルのディープウェルプレートに移した。すべての染色を室温の暗所で15〜30分間行った。その後、血液を溶解し、450μLのFACS溶解溶液(BD Biosciences、番号349202)を用いて室温で15分間固定した。その後、試料をPBS+2%FBS中で2回洗浄した後、FACS分析した。試料を、CD45/CD19二重陽性細胞(CD69染色の場合)、またはCD19陽性細胞(CD86染色の場合)のいずれかにゲートした。
γカウンタースクリーニング:ホスホAKT発現のためのヒト単球の刺激
ヒト単球細胞株THP−1をRPMI+10%FBS(Gibco)中に維持した。刺激の前日、細胞をトリパンブルー排除を用いて血球計で計数し、1×106細胞/mL培地濃度で懸濁した。その後、100μLの細胞を含む培地(1×105細胞)を、4−96ウェルのディープウェルディッシュ(Nunc)のウェルごとにアリコートし、8個の異なる化合物を試験した。細胞を一晩静置した後、様々な濃度(10〜0.0003μM)のブロッキング化合物で処理した。培地(12μL)中で希釈した化合物を、細胞に37℃で10分間添加した。ヒトMCP−1(12μL、R&D Diagnostics、番号279−MC)を培地中に希釈し、それぞれのウェルに50ng/mLの最終濃度で添加した。刺激を室温で2分間続けた。予温したFACS Phosflow溶解/固定緩衝液(37℃のもの1mL)(BD Biosciences、番号558049)をそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを37℃でさらに10〜15分間インキュベートした。プレートを1500rpmで10分間回転させ、上清を吸引除去し、1mLの氷冷90%MeOHを激しく振盪しながらそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを−70℃で一晩または氷上で30分間のいずれかでインキュベートし、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS+2%FBS(Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。1:100のウサギpAKT(50μL、Cell Signaling、番号4058L)を、振盪しながらそれぞれの試料に室温で1時間添加した。細胞を洗浄し、1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。二次抗体である1:500のヤギ抗ウサギAlexa647(50μL、Invitrogen、番号A21245)を、振盪しながら室温で30分間添加した。その後、細胞を緩衝液中で1回洗浄し、FACS分析のために150μLの緩衝液中に懸濁させた。フローサイトメータ上に走らせる前に、細胞をピペッティングによって十分に分散させる必要がある。細胞をLSR II(Becton Dickinson)上に走らせ、前方および側方散乱にゲートして、単球集団におけるpAKTの発現レベルを決定した。
ヒト単球細胞株THP−1をRPMI+10%FBS(Gibco)中に維持した。刺激の前日、細胞をトリパンブルー排除を用いて血球計で計数し、1×106細胞/mL培地濃度で懸濁した。その後、100μLの細胞を含む培地(1×105細胞)を、4−96ウェルのディープウェルディッシュ(Nunc)のウェルごとにアリコートし、8個の異なる化合物を試験した。細胞を一晩静置した後、様々な濃度(10〜0.0003μM)のブロッキング化合物で処理した。培地(12μL)中で希釈した化合物を、細胞に37℃で10分間添加した。ヒトMCP−1(12μL、R&D Diagnostics、番号279−MC)を培地中に希釈し、それぞれのウェルに50ng/mLの最終濃度で添加した。刺激を室温で2分間続けた。予温したFACS Phosflow溶解/固定緩衝液(37℃のもの1mL)(BD Biosciences、番号558049)をそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを37℃でさらに10〜15分間インキュベートした。プレートを1500rpmで10分間回転させ、上清を吸引除去し、1mLの氷冷90%MeOHを激しく振盪しながらそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを−70℃で一晩または氷上で30分間のいずれかでインキュベートし、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS+2%FBS(Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。1:100のウサギpAKT(50μL、Cell Signaling、番号4058L)を、振盪しながらそれぞれの試料に室温で1時間添加した。細胞を洗浄し、1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。二次抗体である1:500のヤギ抗ウサギAlexa647(50μL、Invitrogen、番号A21245)を、振盪しながら室温で30分間添加した。その後、細胞を緩衝液中で1回洗浄し、FACS分析のために150μLの緩衝液中に懸濁させた。フローサイトメータ上に走らせる前に、細胞をピペッティングによって十分に分散させる必要がある。細胞をLSR II(Becton Dickinson)上に走らせ、前方および側方散乱にゲートして、単球集団におけるpAKTの発現レベルを決定した。
γカウンタースクリーニング:マウス骨髄におけるホスホAKT発現のための単球の刺激
マウス大腿を5匹の雌BALB/cマウス(Charles River Labs)から解離し、RPMI+10%FBS培地(Gibco)中に回収した。大腿の端部を切断し、かつ25ゲージ針を用いて1mLの培地でフラッシュすることによって、マウス骨髄を除去した。その後、骨髄を、21ゲージ針を用いて培地中に分散させた。培地体積を20mLまで増加させ、細胞をトリパンブルー排除を用いて血球計で計数した。その後、細胞懸濁液を7.5×106細胞/mLの培地まで増加させ、100μL(7.5×105細胞)を4−96ウェルのディープウェルディッシュ(Nunc)中のウェルごとにアリコートし、8個の異なる化合物を試験した。細胞を37℃で2時間静置した後、様々な濃度(10〜0.0003μM)のブロッキング化合物で処理した。培地(12μL)中で希釈した化合物を、骨髄細胞に37℃で10分間添加した。マウスMCP−1(12μL、R&D Diagnostics、番号479−JE)を培地中に希釈し、それぞれのウェルに50ng/mLの最終濃度で添加した。刺激を室温で2分間続けた。1mLの37℃に予温したFACS Phosflow溶解/固定緩衝液(BD Biosciences、番号558049)をそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを37℃でさらに10〜15分間インキュベートした。プレートを1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引除去し、1mLの氷冷90%MEOHを激しく振盪しながらそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを−70℃で一晩または氷上で30分間のいずれかでインキュベートし、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS+2%FBS(Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。その後、Fcブロック(2μL、BD Pharmingen、番号553140)をウェルごとに室温で10分間添加した。ブロック後、緩衝液中で希釈した50μLの一次抗体である、1:50のCD11b−Alexa488(BD Biosciences、番号557672)、1:50のCD64−PE(BD Biosciences、番号558455)、および1:100のウサギpAKT(Cell Signaling、番号4058L)を、振盪しながらそれぞれの試料に室温で1時間添加した。洗浄緩衝液を細胞に添加し、1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。二次抗体である1:500のヤギ抗ウサギAlexa647(50μL、Invitrogen、番号A21245)を、振盪しながら室温で30分間添加した。その後、細胞を緩衝液中で1回洗浄し、FACS分析のために100μLの緩衝液中に懸濁させた。細胞をLSR II(Becton Dickinson)上に走らせ、CD11b/CD64二重陽性細胞にゲートし、単球集団におけるpAKTの発現レベルを決定した。
マウス大腿を5匹の雌BALB/cマウス(Charles River Labs)から解離し、RPMI+10%FBS培地(Gibco)中に回収した。大腿の端部を切断し、かつ25ゲージ針を用いて1mLの培地でフラッシュすることによって、マウス骨髄を除去した。その後、骨髄を、21ゲージ針を用いて培地中に分散させた。培地体積を20mLまで増加させ、細胞をトリパンブルー排除を用いて血球計で計数した。その後、細胞懸濁液を7.5×106細胞/mLの培地まで増加させ、100μL(7.5×105細胞)を4−96ウェルのディープウェルディッシュ(Nunc)中のウェルごとにアリコートし、8個の異なる化合物を試験した。細胞を37℃で2時間静置した後、様々な濃度(10〜0.0003μM)のブロッキング化合物で処理した。培地(12μL)中で希釈した化合物を、骨髄細胞に37℃で10分間添加した。マウスMCP−1(12μL、R&D Diagnostics、番号479−JE)を培地中に希釈し、それぞれのウェルに50ng/mLの最終濃度で添加した。刺激を室温で2分間続けた。1mLの37℃に予温したFACS Phosflow溶解/固定緩衝液(BD Biosciences、番号558049)をそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを37℃でさらに10〜15分間インキュベートした。プレートを1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引除去し、1mLの氷冷90%MEOHを激しく振盪しながらそれぞれのウェルに添加した。その後、プレートを−70℃で一晩または氷上で30分間のいずれかでインキュベートし、抗体染色した。プレートを回転させ、PBS+2%FBS(Gibco)中で2回洗浄した。洗浄液を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。その後、Fcブロック(2μL、BD Pharmingen、番号553140)をウェルごとに室温で10分間添加した。ブロック後、緩衝液中で希釈した50μLの一次抗体である、1:50のCD11b−Alexa488(BD Biosciences、番号557672)、1:50のCD64−PE(BD Biosciences、番号558455)、および1:100のウサギpAKT(Cell Signaling、番号4058L)を、振盪しながらそれぞれの試料に室温で1時間添加した。洗浄緩衝液を細胞に添加し、1500rpmで10分間回転させた。上清を吸引し、細胞を残りの緩衝液中に懸濁させた。二次抗体である1:500のヤギ抗ウサギAlexa647(50μL、Invitrogen、番号A21245)を、振盪しながら室温で30分間添加した。その後、細胞を緩衝液中で1回洗浄し、FACS分析のために100μLの緩衝液中に懸濁させた。細胞をLSR II(Becton Dickinson)上に走らせ、CD11b/CD64二重陽性細胞にゲートし、単球集団におけるpAKTの発現レベルを決定した。
pAKT生体内アッセイ
抗IgM FITC(50ug/マウス)(Jackson Immuno Research,West Grove,PA)の静脈内注入(0.2mL)前に、ビヒクルおよび化合物を、強制飼養(Oral Gavage Needles Popper & Sons,New Hyde Park,NY)によって、マウス(トランスジェニック系統3751、10〜12週齢の雌、Amgen Inc,Thousand Oaks,CA)に15分間経口投与(0.2mL)する。45分後、マウスをCO2チャンバ内で屠殺する。血液を心臓穿刺(0.3mL)(1cc、25gシリンジ、Sherwood,St.Louis,MO)を介して採取し、15mLの円錐形バイアル(Nalge/Nunc International,Denmark)に移す。血液を6.0mLのBD Phosflow溶解/固定緩衝液(BD Bioscience,San Jose,CA)で即座に固定し、3回反転させ、37℃の水浴中に設置する。脾臓の半分を除去し、0.5mLのPBS(Invitrogen Corp,Grand Island,NY)を含有するエッペンドルフ管に移す。組織粉砕機(Pellet Pestle,Kimble/Kontes,Vineland,NJ)を用いて脾臓を破砕し、6.0mLのBD Phosflow溶解/固定緩衝液で即座に固定し、3回反転させ、37℃の水浴中に設置する。組織が回収された時点で、マウスを頸部脱臼させ、死骸を処分する。15分間後、15mLの円錐形バイアルを37℃の水浴から除去し、組織がさらに処理されるまで氷上に設置する。破砕された脾臓を、70μm細胞濾過器(BD Bioscience,Bedford,MA)を通して別の15mLの円錐形バイアル中に濾過し、9mLのPBSで洗浄する。脾細胞および血液を2,000rpmで10分間回転(冷却)させ、緩衝液を吸引する。細胞を2.0mLの冷(−20℃)90%メチルアルコール(Mallinckrodt Chemicals,Phillipsburg,NJ)中に再懸濁する。円錐形バイアルを急速に反転させながら、MeOHを緩徐に添加する。その後、FACS分析のために、細胞を染色することができるようになるまで組織を−20℃で保存する。
抗IgM FITC(50ug/マウス)(Jackson Immuno Research,West Grove,PA)の静脈内注入(0.2mL)前に、ビヒクルおよび化合物を、強制飼養(Oral Gavage Needles Popper & Sons,New Hyde Park,NY)によって、マウス(トランスジェニック系統3751、10〜12週齢の雌、Amgen Inc,Thousand Oaks,CA)に15分間経口投与(0.2mL)する。45分後、マウスをCO2チャンバ内で屠殺する。血液を心臓穿刺(0.3mL)(1cc、25gシリンジ、Sherwood,St.Louis,MO)を介して採取し、15mLの円錐形バイアル(Nalge/Nunc International,Denmark)に移す。血液を6.0mLのBD Phosflow溶解/固定緩衝液(BD Bioscience,San Jose,CA)で即座に固定し、3回反転させ、37℃の水浴中に設置する。脾臓の半分を除去し、0.5mLのPBS(Invitrogen Corp,Grand Island,NY)を含有するエッペンドルフ管に移す。組織粉砕機(Pellet Pestle,Kimble/Kontes,Vineland,NJ)を用いて脾臓を破砕し、6.0mLのBD Phosflow溶解/固定緩衝液で即座に固定し、3回反転させ、37℃の水浴中に設置する。組織が回収された時点で、マウスを頸部脱臼させ、死骸を処分する。15分間後、15mLの円錐形バイアルを37℃の水浴から除去し、組織がさらに処理されるまで氷上に設置する。破砕された脾臓を、70μm細胞濾過器(BD Bioscience,Bedford,MA)を通して別の15mLの円錐形バイアル中に濾過し、9mLのPBSで洗浄する。脾細胞および血液を2,000rpmで10分間回転(冷却)させ、緩衝液を吸引する。細胞を2.0mLの冷(−20℃)90%メチルアルコール(Mallinckrodt Chemicals,Phillipsburg,NJ)中に再懸濁する。円錐形バイアルを急速に反転させながら、MeOHを緩徐に添加する。その後、FACS分析のために、細胞を染色することができるようになるまで組織を−20℃で保存する。
複数回投与によるTNP免疫化
免疫化前の0日目に、血液を眼窩後出血によって7〜8週齢のBALB/c雌マウス(Charles River Labs)から回収した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管(Becton Dickinson)内で、10,000rpmで10分間回転させた。血清を回収し、Matrix管(Matrix Tech.Corp)中にアリコートし、ELISAが行われるまで−70℃で保存した。免疫化前に、および分子の寿命に基づいたその後の時間周期で、マウスに化合物を経口投与した。その後、マウスを、50μgのTNP−LPS(Biosearch Tech.、番号T−5065)、50μgのTNP−Ficoll(Biosearch Tech.、番号F−1300)、または100μgのTNP−KLH(Biosearch Tech.、番号T−5060)とPBS中の1%ミョウバン(Brenntag、番号3501)のいずれかで免疫化した。TNP−KLHおよびミョウバン溶液は、免疫化前に、混合物を10分間おきに1時間、3〜5回緩やかに反転させることによって調製した。5日目、最後の処理後に、マウスをCO2屠殺し、心臓穿刺した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管内で、10,000rpmで10分間回転させた。血清を回収し、Matrix管中にアリコートし、さらなる分析が行われるまで−70℃で保存した。その後、血清中のTNP特異的IgG1、IgG2a、IgG3、およびIgMレベルをELISAを用いて測定した。TNP−BSA(Biosearch Tech.、番号T−5050)を用いて、TNP特異的抗体を捕捉した。一晩TNP−BSA(10μg/mL)を用いて、384ウェルのELISAプレート(Corning Costar)を一晩コーティングした。その後、プレートを洗浄し、10%のBSA ELISAブロック溶液(KPL)を用いて1時間ブロックした。ブロック後、ELISAプレートを洗浄し、血清試料/標準物を連続的に希釈し、プレートに1時間結合させた。プレートを洗浄し、Ig−HRP複合体化二次抗体(ヤギ抗マウスIgG1、Southern Biotech、番号1070−05、ヤギ抗マウスIgG2a、Southern Biotech、番号1080−05、ヤギ抗マウスIgM、Southern Biotech、番号1020−05、ヤギ抗マウスIgG3、Southern Biotech、番号1100−05)を1:5000で希釈し、プレート上で1時間インキュベートした。TMBペルオキシダーゼ溶液(KPL製のSureBlue Reserve TMB)を用いて、抗体を可視化した。プレートを洗浄し、試料を、分析したIgに応じて、約5〜20分間、TMB溶液内で発現させた。反応を2M硫酸で停止させ、プレートを450nmのODで読み取った。
免疫化前の0日目に、血液を眼窩後出血によって7〜8週齢のBALB/c雌マウス(Charles River Labs)から回収した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管(Becton Dickinson)内で、10,000rpmで10分間回転させた。血清を回収し、Matrix管(Matrix Tech.Corp)中にアリコートし、ELISAが行われるまで−70℃で保存した。免疫化前に、および分子の寿命に基づいたその後の時間周期で、マウスに化合物を経口投与した。その後、マウスを、50μgのTNP−LPS(Biosearch Tech.、番号T−5065)、50μgのTNP−Ficoll(Biosearch Tech.、番号F−1300)、または100μgのTNP−KLH(Biosearch Tech.、番号T−5060)とPBS中の1%ミョウバン(Brenntag、番号3501)のいずれかで免疫化した。TNP−KLHおよびミョウバン溶液は、免疫化前に、混合物を10分間おきに1時間、3〜5回緩やかに反転させることによって調製した。5日目、最後の処理後に、マウスをCO2屠殺し、心臓穿刺した。血液を30分間凝固させ、血清マイクロテナー管内で、10,000rpmで10分間回転させた。血清を回収し、Matrix管中にアリコートし、さらなる分析が行われるまで−70℃で保存した。その後、血清中のTNP特異的IgG1、IgG2a、IgG3、およびIgMレベルをELISAを用いて測定した。TNP−BSA(Biosearch Tech.、番号T−5050)を用いて、TNP特異的抗体を捕捉した。一晩TNP−BSA(10μg/mL)を用いて、384ウェルのELISAプレート(Corning Costar)を一晩コーティングした。その後、プレートを洗浄し、10%のBSA ELISAブロック溶液(KPL)を用いて1時間ブロックした。ブロック後、ELISAプレートを洗浄し、血清試料/標準物を連続的に希釈し、プレートに1時間結合させた。プレートを洗浄し、Ig−HRP複合体化二次抗体(ヤギ抗マウスIgG1、Southern Biotech、番号1070−05、ヤギ抗マウスIgG2a、Southern Biotech、番号1080−05、ヤギ抗マウスIgM、Southern Biotech、番号1020−05、ヤギ抗マウスIgG3、Southern Biotech、番号1100−05)を1:5000で希釈し、プレート上で1時間インキュベートした。TMBペルオキシダーゼ溶液(KPL製のSureBlue Reserve TMB)を用いて、抗体を可視化した。プレートを洗浄し、試料を、分析したIgに応じて、約5〜20分間、TMB溶液内で発現させた。反応を2M硫酸で停止させ、プレートを450nmのODで読み取った。
リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患等のPI3Kδ媒介性疾患の治療のために、本発明の化合物を、従来の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する投与量単位製剤で、経口、非経口、吸入噴霧、直腸、または局所投与することができる。本明細書で使用される非経口という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、注入技術、または腹腔内が含まれる。
例えば、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患等の本明細書における疾患および障害の治療は、予防治療を必要とすると考えられる対象(すなわち、動物、好ましくは、哺乳動物、最も好ましくは、ヒト)への、本発明の化合物、その薬学的塩、またはそれらいずれかの薬学的組成物の予防的投与を含むことも意図される。
本発明の化合物および/または本発明の組成物でのPI3Kδ媒介性疾患、癌、および/または高血糖症の治療のための投与レジメンは、患者の疾患の種類、年齢、体重、性別、病状、状態の重症度、投与経路、および採用される特定の化合物を含む様々な要因に基づく。したがって、投与レジメンは大きく異なり得るが、標準の方法を用いて慣例的に決定することができる。1日当たり体重1キログラムにつき約0.01mg〜30mg、好ましくは、約0.1mg〜10mg/kg、より好ましくは、約0.25mg〜1mg/kg程度の投与量レベルが、本明細書に開示されるすべての使用方法に有用である。
本発明の薬学的に活性な化合物を、従来の調剤方法に従って加工し、ヒトおよび他の哺乳動物を含む患者に投与するための薬剤を生成することができる。
経口投与の場合、薬学的組成物は、例えば、カプセル、錠剤、懸濁液、または液体の形態であり得る。薬学的組成物は、好ましくは、所定量の活性成分を含有する投与量単位の形態で作製される。例えば、これらは、約1〜2000mg、好ましくは、約1〜500mg、より好ましくは、約5〜150mgの量の活性成分を含有し得る。ヒトまたは他の哺乳動物に好適な1日量は、患者の状態および他の要因によって大きく異なり得るが、この場合もやはり、慣例的な方法を用いて決定することができる。
活性成分を、生理食塩水、デキストロース、または水を含む好適な担体とともに、組成物として注入投与することもできる。1日当たりの非経口投与レジメンは、全体重の約0.1〜約30mg/kg、好ましくは約0.1〜約10mg/kg、より好ましくは約0.25mg〜1mg/kgである。
注入可能な調製物、例えば、注入可能な水性もしくは油性の滅菌懸濁液を、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いた既知の方法に従って製剤化することができる。注入可能な滅菌調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の注入可能な滅菌溶液または懸濁液、例えば、1,3−ブタンジオール中の溶液であってもよい。採用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌固定油が、従来、溶媒または懸濁媒体として採用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を採用してもよい。加えて、オレイン酸等の脂肪酸の注入剤の調製における使用が見出される。
薬物の直腸投与用の坐薬を、常温では固体であるが、直腸温では液体になり、したがって、直腸内で溶解して薬物を放出する、ココアバターおよびポリエチレングリコール等の好適な非刺激性賦形剤を薬物と混合することによって調製することができる。
本発明の化合物の活性成分の好適な局所用量は、1日1〜4回、好ましくは、1日1回もしくは2回投与される0.1mg〜150mgである。局所投与の場合、活性成分は、製剤の約0.001重量%〜10重量%、例えば、製剤の約1重量%〜2重量%を含み得るが、製剤の最大10重量%、ただし好ましくは5重量%以下、より好ましくは0.1%〜1%を含んでもよい。
局所投与に好適な製剤には、皮膚への浸透に好適な液体または半液体調製物(例えば、塗布剤、ローション、軟膏、クリーム、もしくはペースト)および目、耳、または鼻への投与に好適な滴剤が含まれる。
投与のために、本発明の化合物は、通常、指示される投与経路に適切な1個以上のアジュバントと組み合わせられる。化合物を、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、滑石、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および/またはポリビニルアルコールと混合してもよく、従来の投与のために錠剤化またはカプセル化してもよい。あるいは、本発明の化合物を、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、トラガカントゴム、および/または様々な緩衝液中に溶解してもよい。他のアジュバントおよび投与様式は、薬学技術分野において周知である。担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリンもしくはジステアリン酸グリセリル等の時間遅延物質を単独で含むか、またはワックスもしくは当技術分野で周知の他の物質と共に含んでもよい。
薬学的組成物を、固体形態(顆粒、粉末、もしくは坐薬を含む)または液体形態(例えば、溶液、懸濁液、もしくはエマルジョン)で作製してもよい。薬学的組成物は、滅菌等の従来の製薬工程に供されてもよく、かつ/または保存料、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤等の従来のアジュバントを含有してもよい。
経口投与用の固体剤形は、カプセル、錠剤、丸剤、粉末、および顆粒を含み得る。そのような固体剤形において、活性化合物を、スクロース、ラクトース、またはデンプン等の少なくとも1つの不活性希釈剤と混合してもよい。そのような剤形は、通常の実践において見られるように、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤も含んでもよい。カプセル、錠剤、および丸剤の場合、剤形は、緩衝剤も含み得る。錠剤および丸剤は、腸溶コーティングでさらに調製することができる。
経口投与用の液体剤形は、水等の当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤を含有する、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤を含んでもよい。そのような組成物は、湿潤剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤等のアジュバントも含んでもよい。
本発明の化合物は、1個以上の不斉炭素原子を有することができ、したがって、光学異性体の形態で、ならびにそのラセミまたは非ラセミ混合物の形態で存在することができる。光学異性体を、従来のプロセスに従うラセミ混合物の分解によって、例えば、ジアステレオ異性体塩の形成によって、光学活性酸または塩基での処理によって得ることができる。適切な酸の例として、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、およびカンファースルホン酸があり、次いで、結晶化によるジアステレオ異性体の混合物の分離、続いて、これらの塩からの光学活性塩基の遊離が行われる。光学異性体分離の異なるプロセスは、鏡像異性体の分離を最大化するために最適に選択されたキラルクロマトグラフィーカラムの使用を含む。さらに別の利用可能な方法は、本発明の化合物を活性化形態の光学的に純粋な酸または光学的に純粋なイソシアン酸塩と反応させることによる、共有結合性ジアステレオ異性体分子の合成を含む。合成されたジアステレオ異性体を、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化、または昇華等の従来の手段を用いて分離し、その後、加水分解して、鏡像異性的に純粋な化合物を得ることができる。本発明の光学活性化合物を、同様に、活性出発物質を用いて得ることができる。これらの異性体は、遊離酸、遊離塩基、エステル、または塩の形態であってもよい。
同様に、本発明の化合物は、同一の分子式の化合物であるが、その中の原子が相互に対して異なって配置される異性体として存在してもよい。具体的には、本発明の化合物のアルキレン置換基は、通常および好ましくは、左から右に読まれるこれらの基のそれぞれの定義において示されるように分子中に配置および挿入される。しかしながら、ある特定の場合において、当業者であれば、これらの置換基が分子中の他の原子に対して逆配向にある本発明の化合物を調製することが可能であることを理解する。すなわち、挿入される置換基は、分子に逆配向で挿入されることを除いて上述の置換基と同一であってもよい。当業者であれば、本発明の化合物のこれらの異性体形態が本発明の範囲内に包含されるものと解釈されるべきであることを理解する。
本発明の化合物を、無機酸または有機酸由来の塩の形態で使用することができる。その塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、2−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、2−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、メシル酸塩、およびウンデカン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。また、塩基性窒素を含有する基を、塩化、臭化、およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル等のハロゲン化低級アルキル;硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル等の硫酸ジアルキル;塩化、臭化、およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリール等の長鎖ハロゲン化物;臭化ベンジルおよびフェネチル等のアラルキルハロゲン化物、ならびにその他等の作用物質で四級化することができる。それによって、水溶性もしくは油溶性または分散性の生成物が得られる。
薬学的に許容される酸付加塩を形成するために採用することのできる酸の例として、塩酸、硫酸、およびリン酸等の無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸等の有機酸が挙げられる。他の例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、もしくはマグネシウム等のアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属との塩、または有機塩基との塩が挙げられる。
本発明の化合物の代謝的に不安定なエステルまたはプロドラッグ形態を含む、カルボン酸含有基またはヒドロキシル含有基の薬学的に許容されるエステルも本発明の範囲に包含される。代謝的に不安定なエステルは、例えば、化合物の対応する非エステル化形態の血液レベルの上昇を引き起こし、有効性を延長することができるものである。プロドラッグ形態は、投与時は分子の活性形態ではないが、代謝、例えば、酵素的もしくは加水分解的切断等のある生体内活性または生体内変化後に治療的に活性になるものである。エステルを含むプロドラッグの一般的な考察については、Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165(1988)およびBundgaard Design of Prodrugs,Elsevier(1985)を参照されたい。マスクされたカルボン酸アニオンの例として、アルキル(例えば、メチル、エチル)、シクロアルキル(例えば、シクロヘキシル)、アラルキル(例えば、ベンジル、p−メトキシベンジル)、およびアルキルカルボニルオキシアルキル(例えば、ピバロイルオキシメチル)等の様々なエステルが挙げられる。アミンは、エステラーゼによって生体内で切断されて遊離薬物およびホルムアルデヒドを放出する、アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体としてマスクされている(Bungaard J.Med.Chem.2503(1989))。また、イミダゾール、イミド、インドール等の酸性NH基を含有する薬物は、N−アシルオキシメチル基でマスクされている(Bundgaard Design of Prodrugs,Elsevier(1985))。ヒドロキシ基は、エステルおよびエーテルとしてマスクされている。欧州特許第039,051号(Sloan and Little,4/11/81)は、マンニッヒ塩基ヒドロキサム酸プロドラッグ、それらの調製、およびそれらの使用を開示する。本発明の化合物のエステルは、例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルエステル、ならびに酸性部分とヒドロキシル含有部分との間に形成される他の好適なエステルを含み得る。代謝的に不安定なエステルは、例えば、メトキシメチル、エトキシメチル、イソ−プロポキシメチル、α−メトキシエチル、α−((C1−C4)アルキルオキシ)エチル等の基、例えば、メトキシエチル、エトキシエチル、プロポキシエチル、イソ−プロポキシエチル等;5−メチル−2−オキソ−1,3,ジオキソレン−4−イルメチル等の2−オキソ−1,3−ジオキソレン−4−イルメチル基;C1−C3アルキルチオメチル基、例えば、メチルチオメチル、エチルチオメチル、イソプロピルチオメチル等;アシルオキシメチル基、例えば、ピバロイルオキシメチル、α−アセトキシメチル等;エトキシカルボニル−1−メチル;またはα−アシルオキシ−α−置換メチル基、例えば、α−アセトキシエチルを含み得る。
さらに、本発明の化合物は、エタノール、N,N−ジメチル−ホルムアミド、水等の一般的な溶媒から結晶化することができる結晶性固体として存在してもよい。したがって、本発明の化合物の結晶形態は、親化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の多形体、溶媒和物、および/もしくは水和物として存在してもよい。そのような形態のすべてが同様に本発明の範囲内に入ると解釈されるものとする。
本発明の化合物を単独の活性医薬品として投与することができるが、それらを1個以上の本発明の化合物または他の作用物質と組み合わせて使用することもできる。組み合わせとして投与される場合、治療薬を、同時に、もしくは異なった時間に投与される別個の組成物として製剤化することができるか、または治療薬を単一の組成物として投与することができる。
前述は、本発明の例示説明にすぎず、本発明を開示される化合物に限定することは意図していない。当業者に明白な変形および変更は、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲および本質の範囲内であることが意図される。
前述の説明から、当業者は、本発明の本質的特徴を容易に確認することができ、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明に様々な変更および修正を加えて、本発明を様々な用途および条件に適合させることができる。
Claims (4)
- 構造:
X1は、C(R10)またはNであり、
Yは、N(R8)、OまたはSであり、
nは、0、1、2、もしくは3であり、
R1は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはS原子を含有することはなく、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された、直接結合、C1−4アルキル結合、OC1−2アルキル結合、C1−2アルキルO結合、またはO結合された、飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環または8、9、10、もしくは11員の二環式環であり、前記環の前記利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によってさらに置換されており、
R2は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRaから選択され、
R3は、H、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、またはC1−4ハロアルキルから選択され、
R4は、独立して、各出現例において、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、C1−4ハロアルキル、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはなく、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換された不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、
R5は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、またはハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC1−6アルキルであるか、あるいは両方のR5基は、共に、ハロ、シアノ、OH、OC1−4アルキル、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、OC1−4アルキル、NH2、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されたC3−6スピロアルキルを形成し、
R6は、H、ハロ、NHR9、またはOHであり、
R7は、H、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、−NRaC2−6アルキルORa、およびC1−6アルキルから選択され、前記C1−6アルキルは、ハロ、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換され、前記C1−6アルキルは、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない0もしくは1個の飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によってさらに置換されており、前記環の前記利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、前記環は、ハロ、ニトロ、シアノ、C1−4アルキル、OC1−4アルキル、OC1−4ハロアルキル、NHC1−4アルキル、N(C1−4アルキル)C1−4アルキル、およびC1−4ハロアルキルから独立して選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR8は、共に、−C=N−架橋を形成し、前記炭素原子は、H、ハロ、シアノ、またはN、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環によって置換されており、前記環の前記利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、前記環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されるか、あるいはR7およびR9は、共に、−N=C−架橋を形成し、前記炭素原子は、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、ORa、NRaRa、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRaによって置換されており、
R8は、HまたはC1−6アルキルであり、
R9は、H、C1−6アルキル、またはC1−4ハロアルキルであり、
R10は、H、ハロ、C1−3アルキル、C1−3ハロアルキル、またはシアノであり、
R11は、独立して、各出現例において、H、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Rb、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、−NRaC2−6アルキルORa、−NRaC2−6アルキルSO2Rb、−CH2C(=O)Ra、−CH2C(=O)ORa、−CH2C(=O)NRaRa、−CH2C(=NRa)NRaRa、−CH2ORa、−CH2OC(=O)Ra、−CH2OC(=O)NRaRa、−CH2OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−CH2OC2−6アルキルNRaRa、−CH2OC2−6アルキルORa、−CH2SRa、−CH2S(=O)Ra、−CH2S(=O)2Rb、−CH2S(=O)2NRaRa、−CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−CH2S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−CH2NRaRa、−CH2N(Ra)C(=O)Ra、−CH2N(Ra)C(=O)ORa、−CH2N(Ra)C(=O)NRaRa、−CH2N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−CH2N(Ra)S(=O)2Ra、−CH2N(Ra)S(=O)2NRaRa、−CH2NRaC2−6アルキルNRaRa、−CH2NRaC2−6アルキルORa、−CH2Rc、−C(=O)Rc、および−C(=O)N(Ra)Rcから選択されるか、あるいはR11は、N、O、およびSから選択される0、1、2、3、もしくは4個の原子を含有するが、1個より多いOまたはSを含有することはない飽和、部分飽和、もしくは不飽和の5、6、もしくは7員の単環式環であり、前記環の前記利用可能な炭素原子は、0、1、もしくは2個のオキソ基またはチオキソ基によって置換されており、前記環は、ハロ、C1−6アルキル、C1−4ハロアルキル、シアノ、ニトロ、−C(=O)Ra、−C(=O)ORa、−C(=O)NRaRa、−C(=NRa)NRaRa、−ORa、−OC(=O)Ra、−OC(=O)NRaRa、−OC(=O)N(Ra)S(=O)2Ra、−OC2−6アルキルNRaRa、−OC2−6アルキルORa、−SRa、−S(=O)Ra、−S(=O)2Ra、−S(=O)2NRaRa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)Ra、−S(=O)2N(Ra)C(=O)ORa、−S(=O)2N(Ra)C(=O)NRaRa、−NRaRa、−N(Ra)C(=O)Ra、−N(Ra)C(=O)ORa、−N(Ra)C(=O)NRaRa、−N(Ra)C(=NRa)NRaRa、−N(Ra)S(=O)2Ra、−N(Ra)S(=O)2NRaRa、−NRaC2−6アルキルNRaRa、および−NRaC2−6アルキルORaから選択される0、1、2、3、もしくは4個の置換基によって置換されており、
Raは、独立して、各出現例において、HまたはRbであり、
Rbは、独立して、各出現例において、フェニル、ベンジル、またはC1−6アルキルであり、前記フェニル、ベンジル、およびC1−6アルキルは、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OH、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換されており、
Rcは、N、O、およびSから選択される1、2、もしくは3個のヘテロ原子を含有する飽和もしくは部分飽和の4、5、もしくは6員環であり、前記環は、ハロ、C1−4アルキル、C1−3ハロアルキル、−OC1−4アルキル、−NH2、−NHC1−4アルキル、−N(C1−4アルキル)C1−4アルキルから選択される0、1、2、もしくは3個の置換基によって置換される、
化合物、またはその任意の薬学的に許容される塩。 - 請求項1に記載の化合物を投与するステップを含む、リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患および自己免疫疾患、炎症性腸障害、炎症性眼障害、炎症性または不安定性膀胱障害、炎症性要素を有する皮膚疾患、慢性炎症性状態、自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス(SLE)、重症筋無力症、リウマチ性関節炎、急性播種性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、シェーグレン症候群、ならびに自己免疫性溶血性貧血、アレルギー性状態および過敏症を治療する方法。
- 請求項1に記載の化合物を投与するステップを含む、p110δ活性により媒介されるか、p110δ活性に依存するか、またはp110δ活性に関連する癌を治療する方法。
- 請求項1に記載の化合物および薬学的に許容される希釈剤または担体を含む薬学的組成物。
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