ES2251164T3 - Adyuvantes para uso en vacunas. - Google Patents
Adyuvantes para uso en vacunas.Info
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Abstract
Una composición de vacuna que comprende desde aproximadamente el 0, 25% v/v hasta aproximadamente el 12, 5% v/v de una lecitina, desde aproximadamente el 1% v/v hasta aproximadamente el 23% v/v de un aceite, desde aproximadamente el 1, 5% v/v hasta aproximadamente el 3, 4% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico y un antígeno.
Description
Adyuvantes para uso en vacunas.
Esta invención se refiere a adyuvantes
inmunológicos. Particularmente, la invención se refiere a adyuvantes
que comprenden una emulsión de aceite en agua y un tensioactivo. Los
adyuvantes de la invención son útiles en una variedad de
formulaciones de vacunas que incluyen las vacunas que comprenden
componentes bacterianos o virales
La generación de inmunidad frente a organismos
infecciosos es una herramienta útil en el control de enfermedades. A
estos antígenos que inducen inmunidad frente a la infección se les
conoce como inmunógenos. El anticuerpo de protección que incluyen
puede colaborar con otras defensas naturales para inhibir el
procedimiento infeccioso, o pueden neutralizar productos dañinos del
organismo infeccioso tales como toxinas.
Una forma efectiva de mejorar la respuesta del
anticuerpo es con la utilización de un adyuvante. De esta forma, en
la vacuna se incluye un adyuvante como un aditivo o un vehículo para
mejorar la respuesta al antígeno. Un adyuvante puede funcionar con
mecanismos diferentes que incluyen: (1) la captura del antígeno en
el organismo para ocasionar su administración lenta, (2) la
atracción de células del sistema inmunológico a la zona de la
infección, (3) la estimulación de células del sistema inmunológico
para que proliferen y se activen y (4) la mejora de la dispersión
del antígeno en el organismo receptor.
Como adyuvantes se han utilizado varios agentes
con propiedades químicas diversas, incluyendo emulsiones de agua en
aceite y de aceite en agua, sales minerales, polinucleótidos y
sustancias naturales. En la patente de Estados Unidos número
5.084.269 se describe un adyuvante conocido con el nombre comercial
de AMPHIGEN^{TM}. El adyuvante AMPHIGEN^{TM} consiste en
lecitina desaceitada disuelta en un aceite, normalmente parafina
líquida ligera. En las vacunas, el AMPHIGEN^{TM} se dispersa en
una suspensión o disolución acuosa del antígeno inmunizante como una
emulsión de aceite en agua.
Según la anterior patente de Estados Unidos
número 5.084.269, se observaron problemas cuando se utilizaba el
adyuvante AMPHIGEN^{TM}. Por ejemplo, la lecitina en el
AMPHIGEN^{TM} no es suficiente para producir una emulsión estable
del aceite, originando de este modo unas aglutinaciones de aceite en
los tejidos sobre los que se ha inyectado. Los animales no pueden
metabolizar o eliminar el aceite mineral. Como consecuencia de esto,
el aceite se convierte en una fuente de inflamaciones crónicas
severas y de cicatrices. La emulsificación del AMPHIGEN^{TM}
directamente sobre la preparación del antígeno conlleva el riesgo de
dañar el antígeno. Por otra parte, si no se consigue formar la
emulsión deseada, el antígeno válido se tiene que desechar.
Por lo tanto, es muy deseable un adyuvante útil
en la vacunas para animales, incluyendo a las personas, que sea
efectivo y que resuelva los problemas anteriores.
La invención se refiere a un adyuvante útil para
la mejora de la respuesta inmunológica de un animal a un antígeno.
Particularmente, la invención se refiere a un adyuvante que es capaz
de formar una emulsión de aceite en agua en una vacuna. La invención
también se refiere a un adyuvante que, cuando se utiliza en una
vacuna, genera inflamaciones y cicatrices mínimas en la zona de
vacunación. La invención también se refiere a la formulación de una
vacuna que contiene un adyuvante de la invención. Finalmente, la
invención se refiere a un procedimiento de utilización de un
adyuvante de la invención en la vacuna.
En una forma de realización, el adyuvante de la
invención comprende una lecitina, un aceite y un tensioactivo
anfifílico capaz de emulsificar el adyuvante, por ejemplo un
tensioactivo Tween o Span. En otro aspecto preferente, el
tensioactivo es Tween 80, Tween 85, Span 80 o Span 85.
En otra forma de realización, el adyuvante de la
invención comprende una lecitina, un aceite y dos tensioactivos
anfifílicos capaces de emulsificar el adyuvante o la composición de
la vacuna que contiene el adyuvante. En un aspecto preferente, uno
de los dos tensioactivos se encuentra principalmente en la fase
acuosa, por ejemplo, el Tween 80, y el otro tensioactivo se
encuentra principalmente en la fase de aceite, por ejemplo el Span
80.
Una lecitina es una fosfatida. Las preparaciones
en crudo de la lecitina pueden incluir triglicéridos. Para los
propósitos de la presente invención, la lecitina abarca las
preparaciones purificadas y en crudo. En un aspecto preferente la
lecitina se encuentra desaceitada.
Los aceites apropiados incluyen aceites
minerales, por ejemplo aceite mineral ligero DRAKEOL^{TM}.
En otra forma de realización, el adyuvante de la
invención contiene una disolución portadora acuosa, por ejemplo una
disolución reguladora fisiológicamente aceptable, agua o una
disolución salina.
En una forma de realización preferente, el
adyuvante de la invención contiene una lecitina, un aceite mineral,
dos tensioactivos anfifílicos y una disolución portadora acuosa (por
ejemplo, salina).
La figura 1 presenta un gráfico que muestra la
distribución de los tamaños de gotitas de una emulsión preparada tal
como se ha descrito anteriormente. Las líneas (a) y (b) muestran que
aproximadamente el 94% de las gotitas tienen un diámetro de 1 \mum
o inferior.
La invención se refiere a un adyuvante útil para
la mejora de la respuesta inmune al antígeno. Particularmente, la
invención se refiere a un adyuvante aceitoso que es capaz de
emulsificar una formulación de vacuna. Además, la invención se
refiere a un adyuvante que, cuando se utiliza en una formulación de
vacuna, es capaz de evitar sustancialmente la inflamación o las
cicatrices en la zona de inyección, típicas de vacunas que contienen
aceites minerales. Los adyuvantes de la invención contienen una
lecitina, un aceite y un tensioactivo anfifílico capaz de
emulsificar al adyuvante o a la composición de la vacuna que
contiene el adyuvante.
La invención se basa en parte en el
descubrimiento de que añadiendo desde aproximadamente el 1,5% v/v
(es decir, 1,5% en volumen por volumen de concentración obtenida
por, por ejemplo, mezclando 98,5 volúmenes de la vacuna que
comprende el adyuvante con 1,5 volúmenes del tensioactivo
anfifílico) hasta el 3,5% v/v de un tensioactivo anfifílico a una
vacuna que contiene un adyuvante, tal como el que se describe en la
patente de Estados Unidos número 5.084.269, es efectivo para
emulsificar suficientemente la composición de una vacuna formulada
con dicho adyuvante y para minimizar la irritación en la zona de la
inyección del animal vacunado.
En una forma de realización, el adyuvante de la
invención contiene una lecitina, un aceite y un tensioactivo
anfifílico. En una forma de realización, el adyuvante de la
invención contiene una lecitina, un aceite y un tensioactivo
anfifílico capaz de emulsificar una composición de la vacuna
formulada con un adyuvante de la invención. En otra forma de
realización preferente, se utilizan dos tensioactivos anfifílicos en
un adyuvante de la invención, por ejemplo un tensioactivo Tween y un
Span.
Un adyuvante preferente, referido aquí como
"adyuvante número 1", comprende aproximadamente el 2% v/v de
lecitina, aproximadamente el 18% v/v de aceite mineral,
aproximadamente el 8% v/v de tensioactivo (por ejemplo,
aproximadamente el 5,6% v/v de Tween 80 y aproximadamente el 2,4%
v/v de Span 80) y el volumen restante será una disolución salina. En
un aspecto preferente, la composición de la vacuna se formula
comprendiendo un antígeno a una concentración de aproximadamente el
75% v/v y un adyuvante, preferentemente el adyuvante número 1, a una
concentración de aproximadamente el 25% v/v de la composición de la
vacuna. Todas las concentraciones que se indican aquí en porcentaje
se indican en volumen por volumen, a menos que el contexto indique
lo contrario.
Los tensioactivos útiles para el adyuvante de la
invención son anfifílicos y aceptables para su utilización médica o
veterinaria. Los expertos en la materia pueden determinar si un
tensioactivo determinado es aceptable para su utilización médica o
veterinaria. Un tensioactivo es anfifílico si una parte de la
molécula de tensioactivo es hidrofílica y otra parte es hidrofóbica.
Las patentes de Estados Unidos números 5.690.942, 5.376.369,
4.933.179 y 4.606.918 describen tensioactivos que se pueden utilizar
en el adyuvante de la invención. Los ejemplos de tensioactivos
útiles en el adyuvante de la invención incluyen, aunque no se
encuentran limitados a éstos, un tensioactivo Tween y un
tensioactivo Span. Los tensioactivos Tween y Span incluyen, aunque
no se encuentran limitados a éstos, monolaureato (Tween 20, Tween
21, Span 20), monopalmitato (Tween 40, Span 40), monoestearato
(Tween 60, Tween 61, Span 60), triestearato (Tween 65, Span 65),
monooleato (Tween 80, Tween 81, Span 80) y trioleato (Tween 85, Span
85). En una forma de realización preferente se utiliza Tween 80,
Tween 85, Span 80 o Span 85.
Son propiedades preferentes del tensioactivo el
que el tensioactivo útil en el adyuvante de la invención sea
anfifílico y tenga un valor del balance
hidrofílico-lipofílico (BHL) que sea al menos la
mitad de la suma de los valores del BHL de todos los otros
componentes del adyuvante. Más preferentemente, el tensioactivo
tiene un valor del BHL que se encuentra en el intervalo que oscila
entre la mitad y el doble de la suma de los valores del BHL de todos
los otros componentes del adyuvante. Más preferentemente, el
tensioactivo tiene un valor del BHL que es aproximadamente el mismo
que el de la suma de los valores del BHL de todos los otros
componentes del adyuvante. Los valores del BHL de los tensioactivos,
lecitinas, aceites y otras disoluciones portadoras son fácilmente
localizables o, si es necesario, se pueden determinar por medio de
procedimientos de experimentación. Por ejemplo, véanse las patentes
de Estados Unidos números 4.504.275 y 4.261.925 y las referencias
proporcionadas en ellas.
Los tensioactivos anfifílicos útiles en el
adyuvante de la invención tienen valores del BHL que oscilan entre
aproximadamente 2 y aproximadamente 20, preferentemente desde
aproximadamente 3 y aproximadamente 17. Los procedimientos para
determinar la valor del BHL de los tensioactivos particulares son
conocidos en la técnica. Véase por ejemplo las patentes de Estados
Unidos números 5.603.951, 4.933.179 y 4.606.918, las cuales
describen tensioactivos que tienen unos valores determinados del
BHL.
La concentración de un tensioactivo en la
composición de una vacuna formulada con el adyuvante de la invención
se encuentra en el intervalo que oscila entre aproximadamente el
1,5% y el 3,5% v/v, más preferentemente entre aproximadamente el
1,5% y el 3% v/v, aún más preferentemente entre aproximadamente el
1,5% y el 2,5% v/v y la mayor preferencia es de aproximadamente el
2% v/v. Cuando se utiliza más de un tensioactivo, la suma de las
concentraciones de todos los tensioactivos utilizados en la
composición de la vacuna formulada con el adyuvante de la invención
también se encuentra en el intervalo que oscila entre
aproximadamente el 1,5% y el 3,5% v/v, más preferentemente entre
aproximadamente el 1,5% y el 3% v/v, aún más preferentemente entre
aproximadamente el 1,5% y el 2,5% v/v y la mayor preferencia es de
aproximadamente el 2% v/v.
La concentración de un tensioactivo en el
adyuvante de la invención también depende de la concentración a la
que el adyuvante se utiliza en la composición de la vacuna. Por
ejemplo, la composición de la vacuna se puede formular con el
adyuvante de la invención de tal forma que aproximadamente el 25%
del volumen de la composición de la vacuna es de adyuvante ("25%
de adyuvante") y el resto, aproximadamente el 75%, corresponde a
otros componentes, como por ejemplo la composición del antígeno. En
un aspecto, la concentración del tensioactivo en el 25% de adyuvante
se encuentra en el intervalo que oscila entre aproximadamente el 6%
y el 14% v/v. Más preferentemente, la concentración del tensioactivo
en el 25% de adyuvante se encuentra en el intervalo que oscila entre
aproximadamente el 6% y el 12% v/v. Aún más preferentemente, la
concentración del tensioactivo en el 25% de adyuvante se encuentra
en el intervalo que oscila entre aproximadamente el 6% y el 10% v/v
y la mayor preferencia es de aproximadamente el 8% v/v.
La concentración del tensioactivo en el adyuvante
de la invención depende de diferentes factores. Por ejemplo, a mayor
concentración de aceite en el adyuvante, se requiere más
tensioactivo para emulsificar la composición de la vacuna formulada
con el tensioactivo de la invención. Otro factor útil para
determinar la concentración de un tensioactivo es la concentración
de la lecitina. A mayor concentración de la lecitina en el
adyuvante, se necesitará menos tensioactivo para su
emulsificación.
Cuando el adyuvante de la invención se utiliza en
la composición de una vacuna a una concentración menor del 25% v/v,
la concentración de los componentes del adyuvante en el adyuvante se
tiene que incrementar en consecuencia. El portador acuoso es una
excepción puesto que el portador siempre comprende el volumen que no
ocupan los otros componentes. De esta forma, si la concentración de
todos componentes se incrementa, excepto la del portador, la
concentración del portador en el adyuvante disminuirá y viceversa.
Por ejemplo, cuando se utiliza el adyuvante a una concentración de
aproximadamente el 12,5% v/v en la composición de una vacuna, la
concentración de los componentes en el adyuvante será
aproximadamente el doble de la concentración de los componentes en
un 25% de adyuvante. De forma similar, cuando el adyuvante de la
invención se utiliza en la composición de una vacuna a una
concentración que se encuentra por encima del 25% v/v, la
concentración de los componentes en el adyuvante tiene que disminuir
en consecuencia, por ejemplo, cuando el adyuvante se utiliza a una
concentración de aproximadamente el 50% v/v en la composición de una
vacuna, la concentración de los componentes en el adyuvante es
aproximadamente la mitad de la concentración de los componentes en
un 25% de adyuvante.
Según una forma de realización se pueden utilizar
dos tensioactivos anfifílicos en el adyuvante de la invención.
Preferentemente, los dos tensioactivos incluirían un tensioactivo
que estaría más concentrado en la fase acuosa que en la fase de
aceite del adyuvante ("tensioactivo hidrofílico") y un
tensioactivo que estaría más concentrado en la fase de aceite que en
la fase acuosa del adyuvante ("tensioactivo lipofílico"). Por
ejemplo, el Tween 80 se concentraría más en la fase acuosa y el Span
80 se concentraría más en la fase de aceite. Un tensioactivo
hidrofílico preferente tiene un valor del BHL que se encuentra en el
intervalo que oscila entre aproximadamente 9 y aproximadamente 20 y
un tensioactivo lipofílico preferente tiene un valor del BHL que se
encuentra en el intervalo que oscila entre aproximadamente 2 y
aproximadamente 9. Véanse las patentes de Estados Unidos números
5.603.951, 4.933.179 y 4.606.918, las cuales describen tensioactivos
que tienen unos valores del BHL que se encuentran en ambos
intervalos útiles para el adyuvante de la invención.
Cuando dos tensioactivos se utilizan en el
adyuvante de la invención, la concentración total de ambos
tensioactivos combinados en la composición de una vacuna formulada
con el adyuvante de la invención se encuentra en el intervalo que
oscila entre aproximadamente el 1,5% y el 3,5% v/v, más
preferentemente entre aproximadamente el 1,5% y aproximadamente el
3% v/v, aún más preferentemente entre aproximadamente el 1,5% y
aproximadamente el 2,5% v/v y la mayor preferencia es de
aproximadamente el 2% v/v. La concentración de cada uno de los dos
tensioactivos que se utilizan en el adyuvante de la invención puede
diferir entre ellos. Por ejemplo, cuando se utiliza un tensioactivo
hidrofílico y un tensioactivo lipofílico, por ejemplo Tween 80 y
Span 80, la concentración de Tween 80 puede encontrarse entre
aproximadamente 1,2X y aproximadamente 5X, más preferentemente entre
aproximadamente 1,5X y aproximadamente 4X, más preferentemente entre
aproximadamente 1,8X y aproximadamente 3X, aún más preferentemente
entre aproximadamente 2X y aproximadamente 2,5X y la mayor
preferencia es de aproximadamente 2,3X, tan alta como la
concentración de Span 80, preferentemente cuando se utiliza en un
adyuvante con unas concentraciones de aceite y lecitina tales como
en el adyuvante número 1.
La concentración del tensioactivo hidrofílico que
se utiliza en el adyuvante de la invención depende, en parte, del
tamaño de la fase acuosa, y la concentración del tensioactivo
lipofílico depende, en parte, del tamaño de la fase oleosa. En una
forma de realización, el adyuvante de la invención que contiene una
fase acuosa del 80% v/v y una fase oleosa del 20% v/v, puede
contener un tensioactivo hidrofílico en una concentración de hasta
aproximadamente 4 veces superior (es decir, 80/20) la concentración
del tensioactivo lipofílico o, por ejemplo, de hasta aproximadamente
el doble.
En adición al tensioactivo anfifílico, el
adyuvante de la invención contiene una lecitina y un aceite. En otro
aspecto, el adyuvante de la invención contiene una disolución
portadora acuosa.
Cualquiera de las lecitinas conocidas en la
técnica es útil para su utilización en el adyuvante de la invención.
La lecitina se refiere a una mezcla de fosfatidas. Cuando la
lecitina se presenta en crudo puede contener triglicéridos. Las
lecitinas pueden tener origen animal o vegetal. Adicionalmente, las
lecitinas se pueden sintetizar. Las patentes de Estados Unidos
números 5.690.942, 5.597.602 y 5.084.269 describen ejemplos de
lecitinas. En una forma de realización preferente, los contenidos de
triglicéridos presentes en la lecitina que se utiliza en el
adyuvante de la invención son menores en comparación con su fuente
natural, es decir, la lecitina se encuentra desaceitada. Para
desaceitar una lecitina existen varios procedimientos conocidos en
la técnica, por ejemplo, la patente de Estados Unidos número
5.597.602 describe varios de ellos.
La concentración de una lecitina en la
composición de una vacuna formulada con el adyuvante de la invención
se encuentra en el intervalo que oscila entre aproximadamente el
0,25% y aproximadamente el 12,5% v/v, más preferentemente entre
aproximadamente el 0,5% y aproximadamente el 10% v/v, más
preferentemente entre aproximadamente el 0,5% y aproximadamente el
7,5% v/v, más preferentemente entre aproximadamente el 0,5% y
aproximadamente el 5% v/v, más preferentemente entre aproximadamente
el 0,5% y aproximadamente el 2,5% v/v y la mayor preferencia se
encuentra entre aproximadamente el 0,5% y aproximadamente el 1,25%
v/v.
La concentración de una lecitina en un 25% de
adyuvante es de la menos aproximadamente el 1% v/v, preferentemente
al menos aproximadamente el 2% v/v. En otro aspecto, la
concentración de lecitina en un 25% de adyuvante es desde
aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 50% v/v, más
preferentemente desde aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el
40% v/v, más preferentemente desde aproximadamente el 2% hasta
aproximadamente el 30% v/v, más preferentemente desde
aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el 20% v/v, más
preferentemente desde aproximadamente el 2% hasta aproximadamente el
10% v/v y la más preferente es desde aproximadamente el 2% hasta
aproximadamente el 5% v/v. La concentración de una lecitina en el
adyuvante de la invención con una concentración mayor o menor se
determina de la forma que se ha expuesto anteriormente.
El adyuvante de la invención contiene un aceite,
por ejemplo uno de los aceites que se describe en las patentes de
Estados Unidos números 5.814.321 y 5.084.269. En un aspecto
preferente, el adyuvante de la invención contiene un aceite mineral,
por ejemplo DRAKEOL^{TM}. En otro aspecto, se utiliza una mezcla
de aceites. El aceite se puede proporcionar para la preparación del
adyuvante de la invención como aceite puro o como una mezcla que
contiene el aceite y otro componente, por ejemplo la lecitina.
La concentración de un aceite en la composición
de una vacuna formulada con el adyuvante de la invención es desde
aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 23% v/v, más
preferentemente desde aproximadamente el 1,5% hasta aproximadamente
el 20% v/v, más preferentemente desde aproximadamente el 2,5% hasta
aproximadamente el 15% v/v, más preferentemente desde
aproximadamente el 3,5% hasta aproximadamente el 10% v/v, más
preferentemente desde aproximadamente el 3,5% hasta aproximadamente
el 7,5% v/v, más preferentemente desde aproximadamente el 4% hasta
aproximadamente el 6% v/v, y la más preferente es aproximadamente
el
4,5%.
4,5%.
La concentración de un aceite en un 25% de
adyuvante es al menos aproximadamente un 5% v/v, preferentemente al
menos aproximadamente un 8% v/v y más preferentemente al menos
aproximadamente un 12% v/v. En otro aspecto, la concentración de
aceite en un 25% de adyuvante es desde aproximadamente el 4% hasta
aproximadamente el 92% v/v, más preferentemente desde
aproximadamente el 6% hasta aproximadamente el 80% v/v, más
preferentemente desde aproximadamente el 10% hasta aproximadamente
el 60% v/v, más preferentemente desde aproximadamente el 14% hasta
aproximadamente el 40% v/v, más preferentemente desde
aproximadamente el 14% hasta aproximadamente el 30% v/v, más
preferente desde aproximadamente el 16% hasta aproximadamente el 24%
v/v, y la más preferente es aproximadamente el 18% v/v. La
concentración de un aceite en el adyuvante de la invención con una
mayor o menor concentración se determina de la forma descrita
anteriormente.
En otra forma de realización, se utiliza un
portador acuoso en el adyuvante de la invención, por ejemplo una
disolución salina (por ejemplo, fosfato regulador salino),
tris-HCl, citrato-fosfato regulador,
reguladores Hepes, otros reguladores farmacéuticamente aceptables
conocidos en la técnica o agua. El pH del portador es
preferentemente fisiológicamente aceptable, por ejemplo se encuentra
entre 6 y 8, más preferentemente alrededor de 7. El portador acuoso
utilizado en el adyuvante de la invención preferentemente ocupa el
volumen que no necesitan los otros
componentes.
componentes.
El adyuvante de la invención se proporciona
preferentemente a una concentración que se encuentra entre
aproximadamente 2X hasta aproximadamente 10X de la concentración
después de la formulación del adyuvante en la composición de una
vacuna, más preferentemente se encuentra entre aproximadamente 2X y
aproximadamente 8X, más preferentemente entre aproximadamente 3X y
aproximadamente 6X y la concentración más preferente es de
aproximadamente 4X.
Los adyuvantes de la invención se pueden utilizar
para mejorar la respuesta inmune a un antígeno de la formulación de
una vacuna. Los adyuvantes de la invención se pueden utilizar con
antígenos derivados de cualquier bacteria o de cualquier virus,
siempre que se garantice que el antígeno no quede destruido o
desnaturalizado. Los ejemplos de antígenos incluyen, aunque no se
encuentran limitados a éstos: antígenos de Erysipelothrix
rhusiopathiae, antígenos de Bordetella bronchiseptica,
antígenos o toxinas extraídos de la Pasteurella multocida,
antígenos de cepas de Eschericia coli que originan la diarrea
neonatal, antígenos de Actinobacillus pleuropneumoniae,
antígenos de Pasteurella haemolytica, o cualquier combinación
de los antígenos anteriores. Los adyuvantes de la invención son
también útiles en las composiciones de vacunas que contienen uno de
los antígenos descritos en las patentes de Estados Unidos números
5.616.328 y 5.084.269.
En una forma de realización preferente, el
adyuvante de la invención se utiliza en la formulación de una vacuna
que contiene un antígeno obtenido a partir de al fase líquida de un
cultivo de Erysipeolthrix rhusiopathiae ("E.
rhusiopathiae"). En un aspecto preferente, un cultivo de
E. rhusiopathiae se inactiva añadiendo formalina (0,5% de
concentración final), a continuación se incuba durante 24 horas a
37ºC y se eliminan las células, por ejemplo, por centrifugación o
por filtración. En una forma de realización preferente, el cultivo
flotante se concentra aproximadamente 10 veces y se añade gel de
hidróxido de aluminio (preferentemente REHYDRAGEL^{TM}) al
flotante concentrado hasta una concentración final de
aproximadamente el 30% v/v para estabilizar el antígeno. En otra
forma de realización preferente, a los antígenos se añade como
conservante una sustancia desinfectante (aproximadamente el 0,01%
v/v de concentración final) (Dimportex, España, importado por
Flavine Inc., Klosters, New Jersey) con EDTA (aproximadamente el
0,07% v/v de concentración final). En otra forma de realización
preferente, la composición de la vacuna se formula comprendiendo el
antígeno y el adyuvante de la invención (por ejemplo, el adyuvante
número 1) junto con el adyuvante que comprende, por ejemplo,
aproximadamente el 25% v/v de la composición de la vacuna.
El adyuvante de la invención se puede utilizar en
la formulación de una vacuna para inmunizar a un animal. En una
forma de realización, la formulación de la vacuna contiene el
adyuvante de la invención y un antígeno. La relación óptima de cada
componente en la formulación de la vacuna se puede determinar por
técnicas que conocen bien los expertos en la materia.
La formulación de una vacuna se puede administrar
a un sujeto en sí misma o en forma de composición farmacéutica o
terapéutica. Las composiciones farmacéuticas que comprenden el
adyuvante de la invención y un antígeno se pueden obtener por medio
de procedimientos convencionales de mezclado, disolución,
granulación, levigación, emulsificación, encapsulación, entrampación
o liofilización. Las composiciones farmacéuticamente aceptables se
pueden formular de forma convencional utilizando uno o más
portadores, diluyentes, excipientes o auxiliares fisiológicamente
aceptables que facilitan los procedimientos de los antígenos de la
invención en preparaciones que se pueden utilizar farmacéuticamente.
La formulación adecuada depende de la vía de administración que se
elija. A efectos de esta aplicación, "portador fisiológicamente
aceptable" abarca los portadores que son aceptables para su
administración en humanos o animales con relativamente pocos efectos
adversos (en relación con la condición que se trata), así como
diluyentes, excipientes o auxiliares que son asimismo
aceptables.
Las formulaciones sistemáticas incluyen aquellas
que se designan para su administración por inyección, por ejemplo
por inyección subcutánea, intradérmica, intramuscular o
intraperitoneal.
Para la inyección, las preparaciones de vacunas
se pueden formular en disolución acuosa, preferentemente en
reguladores fisiológicamente compatibles tales como la disolución de
Hanks's, la disolución de Ringer's, el regulador de fosfato salino o
cualquier otro regulador salino fisiológico. La disolución puede
contener agentes en su formulación tales como agentes de suspensión,
estabilización y/o dispersión. Alternativamente, antes de su
utilización, las proteínas se pueden encontrar en forma de polvo
para constituirse con un medio apropiado, por ejemplo, agua
esterilizada libre de pirógenos.
La determinación de la cantidad efectiva de la
formulación de la vacuna para su administración se encuentra dentro
de los límites de los expertos en la materia, especialmente teniendo
en cuenta la divulgación detallada expuesta en este documento.
La dosis efectiva se puede estimar inicialmente a
partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, la dosis se puede
formular en modelos de animales para lograr la inducción de una
respuesta inmune utilizando técnicas que son bien conocidas en la
técnica. Un experto en la materia puede optimizar la administración
para todas las especies de animales basándose en los resultados
descritos en este documento. La cantidad de dosis y su intervalo de
aplicación se puede ajustar individualmente. Por ejemplo, cuando se
utiliza como vacuna, las formulaciones de las vacunas de la
invención se pueden administrar desde aproximadamente 1 dosis hasta
aproximadamente 3 dosis durante un periodo de semanas de 1 a 36.
Preferentemente, se administran 1 ó 2 dosis en intervalos de
aproximadamente entre 3 semanas y 4 meses y se pueden llevar a cabo
vacunaciones suplementarias periódicamente a partir de entonces.
Puede haber protocolos alternativos apropiados para animales
individuales. Una dosis apropiada es una cantidad de formulación de
vacuna que, cuando se administra tal como se ha descrito
anteriormente, es capaz de alcanzar una respuesta inmune en un
animal inmunizado suficiente para proteger al animal de una
infección durante al menos entre 4 y 12 meses. Generalmente, la
cantidad de antígeno presente en una dosis varía desde
aproximadamente 1 pg hasta aproximadamente 100 mg por kg de huésped,
típicamente desde aproximadamente 10 pg hasta aproximadamente 1 mg y
preferentemente desde aproximadamente 100 pg hasta aproximadamente 1
\mug. El intervalo apropiado de dosis variará según la vía de
inyección y el tamaño del paciente, pero el intervalo se encontrará
típicamente entre aproximadamente 0,1 mL y aproximadamente 5 mL.
Habiendo descrito la invención, a continuación se
proporcionan los siguientes ejemplos con motivos ilustrativos y no
limitativos.
El siguiente ejemplo describe la utilización de
un adyuvante que contiene lecitina desaceitada disuelta en aceite
("adyuvante de aceite-lecitina"), normalmente
aceite mineral (parafina líquida ligera) en vacunas veterinarias.
Véase la patente de Estados Unidos número 5.084.269, la cual
describe un adyuvante de aceite-lecitina. Una
preparación de vacuna que utiliza un adyuvante de
aceite-lecitina es una emulsión de aceite en
agua.
Todos los porcentajes de concentraciones que se
proporcionan en estos ejemplos se expresan en volumen por volumen, a
menos que se indique lo contrario. Los valores de porcentaje, a
menos que se indique lo contrario, de un adyuvante de
aceite-lecitina se refieren a la concentración de
una mezcla de lecitina (10% de la mezcla) y a un transportador de
aceite (DRAKEOL^{TM}) (90% de la mezcla) en un portador acuoso
(fase continua). Por ejemplo, un 20% de adyuvante de
aceite-lecitina contiene un 2% v/v de lecitina
(Central Soya, Fort Wayne, Indiana), 18% v/v de DRAKEOL^{TM} 5
(Penreco, Karns City, Pennsylvania) y 80% v/v de disolución salina
(con el contenido de la disolución salina reducido si se añaden
otros componentes, como por ejemplo tensioactivos). Los valores de
porcentaje de un adyuvante de aceite-lecitina en la
composición de una vacuna, es decir, a continuación de la dilución
de una disolución de adyuvante con una disolución de antígeno, se
refieren a la concentración de una mezcla de lecitina (10% de
mezcla) y un aceite portador (DRAKEOL^{TM}) (90% de mezcla) en la
preparación de la vacuna que comprende el adyuvante y una disolución
que contiene un antígeno, a menos que el contexto indique lo
contrario. En todos casos en los que el tensioactivo se añade a la
composición del adyuvante, los valores de porcentaje de una
concentración de tensioactivo se refieren a la concentración total
de todos los tensioactivos añadidos en el adyuvante o en la
preparación de la vacuna, a menos que el contexto indique lo
contrario.
Cuando se utiliza un adyuvante de
aceite-lecitina como adyuvante en las formulaciones
de una vacuna, se encuentra que éste no emulsifica las preparaciones
acuosas sin la adición de tensioactivos adicionales puesto que la
lecitina y el adyuvante de aceite-lecitina no bastan
para llevar a cabo la emulsificación. Por lo tanto, las vacunas que
se sintetizan utilizando un adyuvante de
aceite-lecitina que se dispersa inadecuadamente
forman una bolsa de aceite mineral principalmente en los tejidos de
la zona de inyección. El animal sobre el que ha inyectado este
aceite no lo puede metabolizar o eliminar y por lo tanto permanece
en la zona de inyección siendo una fuente de inflamaciones crónicas
severas y también se dejan cicatrices.
También se determinó que la adición de
tensioactivos a la formulación de una vacuna que comprende un
adyuvante de aceite-lecitina y un antígeno, con el
fin de emulsificar la formulación, no era una solución adecuada. Los
problemas que se encontraron cuando se añadía el aceite y los
tensioactivos a la formulación de la vacuna antes de emulsificarla
fueron que el antígeno se podía dañar y, si no se conseguía una
emulsión apropiada, la formulación se echaría a perder y esto
incluiría al antígeno.
Con el fin de emulsificar las formulaciones de
las vacunas, se probaron diferentes composiciones de adyuvantes que
comprendían un adyuvante de aceite-lecitina en
combinación con tensioactivos.
El siguiente ejemplo describe la utilización de
una emulsión que contiene un 40% de aceite-lecitina
y un 2% de tensioactivo sintético, es decir, Tween 80 y Span 80 (Van
Water & Rogers, Omaha, Nebraska) en un regulador fosfato salino.
Este adyuvante se prepara asépticamente y se separa del antígeno. La
emulsión se añade a la preparación de antígeno sin emulsificación
adicional. Los tensioactivos sintéticos favorecen la dispersión del
adyuvante de aceite-lecitina para formar una
emulsión relativamente estable. La emulsión de adyuvante se añade a
la preparación de antígeno acuosa con una proporción de uno en ocho,
disminuyendo el contenido de adyuvante de
aceite-lecitina de un 40% a un 5% y los
tensioactivos de una concentración del 2% a una del 0,25%.
El adyuvante se utilizó en varias vacunas. Se
encontró que puesto que la emulsión no era muy estable, las gotitas
de aceite tienden a fusionarse y a separarse en forma de bolsita de
aceite permanente e irritable en los tejidos en los que se inyectó.
Otro problema que se observó con este adyuvante fue que se agrega
con gel de Al. Varias vacunas contienen gel de Al por varias
razones, por ejemplo, como adyuvante, para estabilizar un antígeno o
para enlazarse con endotoxinas. El adyuvante de
aceite-lecitina conlleva una carga negativa que
ocasiona que se enlace al gel de Al cargado positivamente para
formar agregados. Estos agregados es difícil que pasen a través de
una aguja hipodérmica e irritan los tejidos sobre los que se
inyectan.
Se emulsificó un adyuvante de
aceite-lecitina (5% v/v) en una preparación de
antígeno con la ayuda de los tensioactivos Tween 80 y Span 80, como
en el ejemplo anterior, pero con una concentración del tensioactivo
del 8% en la composición de la vacuna. La emulsión fue estable y muy
fina. Tubo casi la claridad de una disolución y no formó crema.
Cuando se observó con el microscopio con el máximo número de
aumentos (resolución de 0,2 micrómetros), la mayoría de las gotitas
eran demasiado pequeñas para verse. Por lo tanto, era una
microemulsión. Este adyuvante, cuando se utilizó en la formulación
de una vacuna, se encontró que se encontraba virtualmente libre de
reactividad en la zona de inyección y, cuando se añadió gel de Al,
no se encontró ninguna agregación de aceite y gel. Como consecuencia
de su alto contenido en tensioactivos, este adyuvante es fácil de
emulsificar, aparentemente presenta buena apariencia, es estable, no
reacciona con el gel de Al y se encuentra virtualmente libre de
efectos irritantes en al zona de vacunación. A pesar de todas estas
ventajas, esta emulsión tiene una potencia ligeramente menor como
adyuvante en comparación con la emulsión del ejemplo anterior,
realizada con una menor concentración de tensio-
activos.
activos.
Con este ejemplo se intentó encontrar una
emulsión de adyuvante que fuera aceptablemente fina y completamente
potente como adyuvante. En estos experimentos se utilizó una
emulsión de adyuvante al 20% de aceite-lecitina,
puesto que se descubrió que era más fácil de hacer que una emulsión
de adyuvante al 40% de aceite-lecitina. Se añadió a
las vacunas con una proporción de uno a cuatro con el fin de obtener
una concentración final de aceite del 5%, dejando un 75% del volumen
de dosificación para los antígenos. Los experimentos preliminares
mostraron que una emulsión submicrónica fina (la mayoría de las
gotitas tenían un diámetro de menos de un micrómetro, véase la
figura 1) se podía preparar con un 20% de aceite y un 16% de
tensioactivos Tween 80 y Span 80.
Para los ensayos se prepararon dos emulsiones.
Una conteniendo un 20% de adyuvante de
aceite-lecitina y un 16% de tensioactivos Tween 80 y
Span 80. Se diluyó con una proporción de uno a cuatro para obtener
una emulsión que comprendía un 5% de adyuvante de
aceite-lecitina y un 4% de tensioactivos en la
preparación de la vacuna. La otra emulsión se preparó con un 40% de
adyuvante de aceite-lecitina y un 2% de
tensioactivos Tween 80 y Span 80. Se diluyó con una relación de uno
a ocho para obtener una emulsión con un 5% de adyuvante de
aceite-lecitina y un 0,25% de tensioactivos.
A varias muestras de cada emulsión se le añadió
un gel (REHYDRAGEL^{TM} de Reheis, Berkeley Heights, New Jersey)
con una concentración del 10%. En la emulsión con un 0,25% de
tensioactivos, el aceite y el gel de Al se agregaron y se separaron
para formar una capa gruesa en lo alto de la columna líquida
(descremación). Por el contrario, en la emulsión con un 4% de
tensioactivos no hubo ni agregación ni descremación. Con un 4% de
tensioactivos, el gel de Al se sedimentó en el fondo del tubo
dejando dispersas las gotitas de aceite y el fluido flotan-
te.
te.
Se probaron en cerdos varias preparaciones de
vacunas para determinar si se producían inflamaciones en la zona de
inyección cuando se utilizaba un adyuvante con una concentración
media de tensioactivo. Las preparaciones de vacunas que contenían un
5% de adyuvante de aceite-lecitina y bien un 0.25% o
un 4% de tensioactivos no originaban ninguna inflamación en la zona
de inyección de los cerdos. Cuando el gel de Al se añadía a la
preparación de la vacuna a una concentración del 10%, la preparación
con un 0,25% de tensioactivos originaba inflamaciones severas en las
zonas de inyección, mientras que la vacuna con un 4% de
tensioactivos apenas generaba inflama-
ción.
ción.
Se llevaron a cabo experimentos con el fin de
determinar el intervalo de concentraciones de tensioactivos que eran
efectivas para evitar la agregación con el gel de Al y las
inflamaciones en las zonas de infección. Se observó que, cuando se
utilizaba una concentración de tensioactivo del 1,5% en la vacuna se
producía poca agregación de aceite y de gel de Al. La agregación era
mucho mayor a menores concentraciones de tensioactivo. No se
producía agregación ni con el 2% ni con el 4% de concentraciones de
tensioactivos. Las inflamaciones inducidas en los cerdos por medio
de las preparaciones de vacunas que contenían un 0,5% o menos de
tensioactivos eran mayores a las 2 y 4 semanas después de la
vacunación que las que se produjeron con preparaciones con el 1% o
más de tensioactivos. A las 6 semanas después de la vacunación era
evidente que el mínimo necesario de tensioactivos para evitar las
inflamaciones crónicas era el 1,5%.
Los ensayos se llevaron a cabo para encontrar un
adyuvante que no reaccione con el gel de Al y que no tenga
reactividad en el animal después de la vacunación. Un adyuvante de
aceite-lecitina al 20% que contiene un 8% de
tensioactivos, que resultó en la preparación de una vacuna con un
adyuvante de aceite-lecitina al 5% y un 2% de
tensioactivo, se determinó que era suficiente para evitar la
reactividad in vitro con gel de Al y la irritación de los
tejidos en la zona de vacunación. Fue mucho menos clara la evidencia
de una relación entre la concentración de tensioactivo y el poder
adyuvante. Hubo indicaciones ocasionales de que un 4% de
tensioactivos en la vacuna era excesivo, por ejemplo, en la
inducción de aglutinina a E. coli K99 y en la antitoxina
neutralizante de la toxina de la P. multocida del tipo D.
De este modo, se determinó que la concentración
óptima de los tensioactivos era del 8% en un adyuvante de
aceite-lecitina al 20%, que resultaba en un 2% de
tensioactivos en la composición de la vacuna. Esto proporcionaba una
razonablemente fácil emulsificación y una buena estabilidad en
almacenamiento en frío. En las vacunas con un adyuvante de
aceite-lecitina al 5% y 2% de tensioactivos era
ideal tanto para el poder del adyuvante como para la falta de
irritabilidad en los tejidos en los que se inyectaba.
Se determinó el tamaño de las gotitas en la
emulsión submicrónica de un adyuvante de
aceite-lecitina al 20% con un 8% de tensioactivos.
El 8% de tensioactivos consistió en un 5,6% de Tween 80 en la fase
acuosa y un 2,4% de Span 80 en la fase de aceite. El tamaño de
aproximadamente el 94% de las gotitas fue inferior a 1 micrómetro de
diámetro, véase la figura 1.
A partir de 200 mL de disolución de
aceite-lecitina esterilizada y filtrada (10% de
lecitina en aceite mineral DRAKEOL^{TM}), Tween 80 (56 mL) y Span
80 (24 mL) esterilizados en autoclave y fosfato regulador salino
(720 mL) (Dulbecco PBS) se obtuvo un acopio de 1000 mL de un
adyuvante de aceite-lecitina al 20% con un 8% de
tensioactivos. Las disoluciones de lecitina-aceite y
de Span 80 se combinaron y se mezclaron en un tanque esterilizado
durante al menos 1 hora a temperatura ambiente, hasta que la
emulsificación fue completa. La disolución salina y el Tween 80 se
combinaron y se mezclaron en un tanque esterilizado durante al menos
1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de aceite se emulsificó en
la mezcla acuosa utilizando un emulsificador. La emulsificación
continuó por medio de recirculación hasta que todos los adyuvantes
se añadieron a la disolución salina. A continuación, la emulsión
pasó dos veces a través de un homogeneizador a temperatura ambiente.
El adyuvante se almacenó a una temperatura entre 2 y 8ºC.
El adyuvante de la invención, tal como se
describe en el ejemplo 4, con una concentración media de
tensioactivos se utilizó en una vacuna contra la rinitis atrófica
que contenía antígenos de Bordetella bronchiseptica y
toxígeno de Pasteurella multocida. Se preparó una vacuna de
bacterina-toxoide de Bordetella
bronchiseptica-Pasteurella multocida a partir de
células de B. bronchiseptica y del toxoide de la P.
multocida.
Las células de B. bronchiseptica, cepa
2-9 NADL, se prepararon tal como se describe en las
patentes de Estados Unidos números 5.019.388 y 4.888.169, excepto
que al final del ciclo de crecimiento los cultivos se mezclaron
homogéneamente y se añadió una disolución de formalina a una
concentración final del 0,6%. Dentro de los 20 minutos siguientes a
la adición de la formalina, se añadió una disolución de
glutaraldehído al 25% para obtener una disolución final a una
concentración del 0,6%. El cultivo se sometió a agitación durante un
periodo de 24 a 48 horas a
37 \pm 2ºC para completar la inactivación y la destoxificación. (Véase la tabla 1). A continuación, los fluidos cultivados se enfriaron a 15ºC o a una temperatura inferior para procesarlos. Los cultivos inactivados que no se procesaron inmediatamente se almacenaron a una temperatura entre 2 y 8ºC hasta 14 días. A continuación de la inactivación, las bacterias se separaron del fluido de cultivo por centrifugación. El flotante se eliminó y las células se volvieron a poner en suspensión en fosfato regulador salino en aproximadamente una décima parte del volumen original. La suspensión concatenada se almacenó a una temperatura entre 2 y 8ºC. El tratamiento de B. bronchiseptica con dos aldehídos inactiva la endotoxina y la exotoxina, obviando otros tratamientos por seguridad.
37 \pm 2ºC para completar la inactivación y la destoxificación. (Véase la tabla 1). A continuación, los fluidos cultivados se enfriaron a 15ºC o a una temperatura inferior para procesarlos. Los cultivos inactivados que no se procesaron inmediatamente se almacenaron a una temperatura entre 2 y 8ºC hasta 14 días. A continuación de la inactivación, las bacterias se separaron del fluido de cultivo por centrifugación. El flotante se eliminó y las células se volvieron a poner en suspensión en fosfato regulador salino en aproximadamente una décima parte del volumen original. La suspensión concatenada se almacenó a una temperatura entre 2 y 8ºC. El tratamiento de B. bronchiseptica con dos aldehídos inactiva la endotoxina y la exotoxina, obviando otros tratamientos por seguridad.
El toxoide de P. multocida se preparó de
dos formas diferentes, tal como se describe en las patentes de
Estados Unidos números 5.536.496 y 5.695.769. Según una de las
formas, la toxina se toxoidiza dentro de las células de las
bacterias con la adición de formaldehído al cultivo; el toxoide se
encuentra dentro de las células. Según la otra forma, se
desestabilizan mecánicamente las células vivas y se extrae la
toxina. La toxina se toxoidiza exponiéndola a un elevado pH, tal
como se describe en la patente de Estados Unidos número 5.536.496.
Ambas formas del toxoide se tratan con gel de Al con el fin de
controlar las endotoxinas libres por un procedimiento patentado, tal
como se describe en la patente de Estados Unidos número 5.616.328.
(Véase la tabla 1). Cuando se utilizan las dos formas de toxoide de
Pasteurella aparece un efecto sinérgico que resulta en
respuestas de antitoxinas que exceden con mucho la suma de las
respuestas de cada forma cuando se utilizan por separado, tal como
se describe en la patente de Estados Unidos número 5.695.769.
| Antígeno | Inactivador | Concentración | Intervalo de la | Tiempo |
| temperatura deseada | (mín/máx) | |||
| B. bronchiseptica | Formalina | 0,6% | 37 \pm 2ºC | 14-48 horas |
| glutaraldehído | 0,6% | |||
| Células de P. multocida | Formalina | 0,4% | 37 \pm 2ºC | 5 días |
| enlazadas al toxoide | ||||
| Células de P. multocida | NaOH 5 N | PH 10 \pm 2 | 37 \pm 2ºC | 1 a 6 horas |
| libres de toxoide |
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió el adyuvante descrito en el ejemplo 4
para obtener una concentración del 5% de adyuvante de
aceite-lecitina y una concentración del 2% de
tensioactivos en la formulación de la vacuna.
Para determinar la dosis mínima de inmunización
de la vacuna de rinitis atrófica, ya demostradas las propiedades del
adyuvante de aceite-lecitina con un medio de
concentración de tensioactivos, se puede llevar a cabo una prueba.
Se vacunaron varias cerdas preñadas con dos dosis de 2 mL en un
intervalo de 4 semanas. Ellas parieron aproximadamente 2 semanas
después de la segunda dosis. Cuando los cerdos tuvieron un mes de
vida, se inyectaron en su cuerpo cultivos virulentos de B.
bronchiseptica y P. multocida de manera secuencial. Los
cerdos nacidos de 7 cerdas, a los que se les vacunó únicamente con
un placebo, desarrollaron rinitis atrófica severa. Las camadas de
las 7 cerdas a las que se vacunó con unas dosis completa de los
antígenos quedaron fuertemente protegidas por medio de los
anticuerpos maternos que aún se encontraban en circulación. Las
cerdas a las que se administraron vacunas que contenían 1/2 ó 1/8 de
dosis de antígenos no proporcionaron a sus camadas suficiente
protección.
El adyuvante descrito en el ejemplo 4 con una
concentración media de tensioactivos se utilizó para preparar una
vacuna contra la erisipela que contenía antígenos de E.
rhusiopathiae. Los antígenos que se utilizaron en la vacuna se
obtuvieron a partir de cultivos de E. rhusiopathiae
inactivados por medio de formalina al 0,5% durante al menos 24
horas. Los cultivos inactivados se clarearon por centrifugación y se
concentraron hasta aproximadamente diez veces más por medio de
filtración molecular. Los concentrados se estabilizaron por medio de
la adición de gel de Al, es decir, REHYDRAGEL^{TM}, al 30% de
concentración. Los concentrados preabsorbidos se incluyeron en la
vacuna a una concentración tal que cada 2 mL de dosis contenían al
menos 3,2 unidades de opacidad (UO) calculadas a partir de la
densidad óptica (DO) del cultivo en su estado de inactivación. (La
DO se multiplica por el factor de concentración final para dar un
valor en UO por mL).
Para determinar la eficacia de una vacuna que
contiene el adyuvante de aceite-lecitina con un
medio de concentración de tensioactivos se llevó a cabo una
vacunación contra la erisipela. El adyuvante, tal como se ha
descrito en el ejemplo 4, se añadió a una concentración final del
25% v/v, proporcionando una concentración final de
lecitina-aceite del 5%. Como conservante se añadió
timerosal (0,01% en peso por volumen) con EDTA (0,07 en peso
por
volumen).
volumen).
Las vacunas que se sintetizaron con esta fórmula
se probaron dos veces para estudiar su eficacia en cerdos. En cada
caso los cerdos se vacunaron con dos dosis intramusculares (IM) de 2
mL, una dosis se administró aproximadamente a las 3 semanas del
destete y la segunda dosis se administró 3 semanas después. Los
controles recibieron como placebo una disolución reguladora de
fosfato salina. La inmunidad se probó con la administración IM de
E. rhusiopathiae virulenta a aproximadamente las 9 semanas de
edad en un estudio y en otro estudio a los 6 meses de edad. Tal como
aparece en la tabla 2, la protección por la vacunación fue del 100%
a las 9 semanas y del 75% a los 6 meses (es decir, a la edad de su
sacrificio). Estos resultados indicaron que la vacuna proporciona
suficiente protección contra la erisipela durante el periodo de
crianza.
La vacuna que se administró al grupo al que se
probó su inmunidad a las 9 semanas llevaba sintetizada
aproximadamente 12 meses. Los resultados confirman que el antígeno
protector se estabilizó correctamente.
| Edad de prueba | Controles (protegidos/probados) | Vacunados (protegidos/probados) |
| 9 semanas | 0/10 | 19/19 |
| 6 meses | 0/10 | 15/20 |
- Nota:
- el cerdo 20 del grupo de animales probados a las 9 semanas se excluyó. El animal era muy nervioso y forcejeaba tan violentamente durante las pruebas que no se pudo determinar su temperatura en reposo. Cuando acabaron las pruebas este cerdo permanecía completamente sano.
Claims (11)
1. Una composición de vacuna que comprende desde
aproximadamente el 0,25% v/v hasta aproximadamente el 12,5% v/v de
una lecitina, desde aproximadamente el 1% v/v hasta aproximadamente
el 23% v/v de un aceite, desde aproximadamente el 1,5% v/v hasta
aproximadamente el 3,4% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico y
un antígeno.
2. La composición de la vacuna de la
reivindicación 1, en la que dicho aceite es un aceite mineral y en
la que dicha lecitina se encuentra desaceitada.
3. La composición de la vacuna de la
reivindicación 1, que además comprende un portador acuoso.
4. La composición de la vacuna de la
reivindicación 1, en la que dicho antígeno se selecciona del grupo
constituido por antígenos de Erysipelothrix rhusiopathiae,
antígenos de Bordetella bronchiseptica, antígenos de
Pasteurella multocida, antígenos de cepas de Eschericia
coli que originan la diarrea neonatal, antígenos de
Actinobacillus pleuropneumoniae, antígenos de Pasteurella
haemolytica y sus combinaciones.
5. La composición de la vacuna de la
reivindicación 1, en la que se usan dos tensioactivos
anfifílicos,
6. La composición de la vacuna de la
reivindicación 5, en la que se usan un tensioactivo hidrofílico y un
tensioactivo lipofílico.
7. La composición de la vacuna de la
reivindicación 5, en la que dicha lecitina se encuentra a una
concentración de aproximadamente el 0,5% v/v, en la que dicho aceite
se encuentra a una concentración de aproximadamente el 4,5% v/v y en
la que dichos tensioactivos anfifílicos se encuentran a una
concentración de aproximadamente el 2% v/v.
8. La composición de la vacuna de la
reivindicación 5 que además comprende un portador acuoso.
9. Una composición de adyuvante que comprende
desde aproximadamente el 0,25% hasta aproximadamente el 12,5% v/v de
una lecitina, desde aproximadamente el 1% v/v hasta aproximadamente
el 23% v/v de un aceite, desde aproximadamente el 1,5% v/v hasta
aproximadamente el 3,5% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico
cuando dicho adyuvante se formula en la composición de la
vacuna.
10. Un procedimiento para sintetizar una
composición de vacuna que comprende la adición de la composición del
adyuvante de la reivindicación 9 a una composición de antígeno.
11. El procedimiento de la reivindicación 10, en
el que dicho antígeno se selecciona del grupo constituido por
antígenos de Erysipelothrix rhusiopathiae, antígenos de
Bordetella bronchiseptica, antígenos de Pasteurella
multocida, antígenos de cepas de Eschericia coli que
originan la diarrea neonatal, antígenos de Actinobacillus
pleuropneumoniae, antígenos de Pasteurella haemolytica y
sus combinaciones.
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|---|---|---|---|
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Families Citing this family (66)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU769539B2 (en) * | 1999-01-29 | 2004-01-29 | Zoetis Services Llc | Adjuvants for use in vaccines |
| US6676958B2 (en) * | 2001-06-19 | 2004-01-13 | Advanced Bioadjuvants, Llc | Adjuvant composition for mucosal and injection delivered vaccines |
| US7279163B1 (en) * | 2002-03-21 | 2007-10-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Water-in-oil emulsion vaccines |
| BR0313806A (pt) * | 2002-08-26 | 2005-07-05 | Pfizer Prod Inc | Vacinas para infecções nos sistemas respiratório e reprodutor em gado |
| EP1592444B1 (en) * | 2003-01-29 | 2008-05-14 | Pfizer Products Inc. | Canine vaccines against bordetella bronchiseptica |
| PL1613346T3 (pl) * | 2003-04-04 | 2013-03-29 | Zoetis Services Llc | Poddane mikrofluidyzacji emulsje typu olej w wodzie i kompozycje szczepionek |
| US8637047B2 (en) * | 2003-10-30 | 2014-01-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Erysipelothrix rhusiopathiae-haemophilus parasuis vaccine and methods of using the same |
| CN1323718C (zh) * | 2004-03-15 | 2007-07-04 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法 |
| FR2878746B1 (fr) * | 2004-12-02 | 2007-02-23 | Vetoquinol Sa Sa | Nouvelle composition pharmaceutique utilisable dans le domaine des vaccins |
| CN1320924C (zh) * | 2005-01-07 | 2007-06-13 | 邢为藩 | 一种自乳化疫苗佐剂及其制备方法 |
| EP2368569A3 (en) | 2006-01-18 | 2012-05-02 | University Of Chicago | Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins |
| PT2068918E (pt) | 2006-09-26 | 2012-08-06 | Infectious Disease Res Inst | Composição para vacina contendo adjuvante sintético |
| US20090181078A1 (en) * | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| CA2668417A1 (en) * | 2006-11-03 | 2008-05-15 | Alphavax, Inc. | Alphavirus and alphavirus replicon particle formulations and methods |
| US20090017064A1 (en) * | 2007-07-10 | 2009-01-15 | Wyeth | Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus |
| CN106310293A (zh) | 2007-09-27 | 2017-01-11 | 免疫疫苗技术有限公司 | 在包括连续疏水相的载体中的脂质体在体内输送多核苷酸中的应用 |
| US20100209452A1 (en) * | 2007-10-03 | 2010-08-19 | Immunovaccine Technologies, Inc | Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof |
| US9138470B2 (en) * | 2007-11-02 | 2015-09-22 | The Johns Hopkins University | Multi-component L2 vaccine for prevention of human papilloma virus infection |
| CN101428145B (zh) * | 2007-11-05 | 2013-01-02 | 北京生泰尔生物科技有限公司 | 新型疫苗佐剂 |
| CA2723918C (en) | 2008-06-05 | 2018-01-09 | Immunovaccine Technologies Inc. | Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance |
| KR101333852B1 (ko) | 2008-06-27 | 2013-11-27 | 조에티스 엘엘씨 | 신규한 면역증강 조성물 |
| AU2009302582A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | University Of Chicago | Compositions and methods related to bacterial Eap, Emp, and/or AdsA proteins |
| WO2011005341A2 (en) | 2009-04-03 | 2011-01-13 | University Of Chicago | Compositions and methods related to protein a (spa) variants |
| WO2011127032A1 (en) | 2010-04-05 | 2011-10-13 | University Of Chicago | Compositions and methods related to protein a (spa) antibodies as an enhancer of immune response |
| EP2437753B1 (en) | 2009-06-05 | 2016-08-31 | Infectious Disease Research Institute | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants and vaccine compositions containing them |
| US9849174B2 (en) | 2009-11-20 | 2017-12-26 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions related to immunogenic fibrils |
| WO2011063264A1 (en) | 2009-11-20 | 2011-05-26 | University Of Chicago | Methods and compositions related to immunogenic fibrils |
| WO2011100508A2 (en) | 2010-02-12 | 2011-08-18 | Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Methods and compositions related to glycoprotein-immunoglobulin fusions |
| WO2011112871A1 (en) | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Immune Design Corp. | Vaccines for pandemic influenza |
| AU2011247359A1 (en) | 2010-04-30 | 2012-11-15 | Telormedix Sa | Methods for inducing an immune response |
| WO2011134668A1 (en) | 2010-04-30 | 2011-11-03 | Telormedix Sa | Phospholipid drug analogs |
| US9050319B2 (en) | 2010-04-30 | 2015-06-09 | Telormedix, Sa | Phospholipid drug analogs |
| WO2012003474A2 (en) | 2010-07-02 | 2012-01-05 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to protein a (spa) variants |
| US9095540B2 (en) | 2010-09-09 | 2015-08-04 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens |
| WO2012042857A1 (ja) * | 2010-09-28 | 2012-04-05 | 共立製薬株式会社 | 粘膜アジュバント組成物 |
| CA2832307A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-18 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| WO2012149307A2 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-01 | Immune Design Corp. | Synthetic long peptide (slp)-based vaccines |
| US8945588B2 (en) | 2011-05-06 | 2015-02-03 | The University Of Chicago | Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides |
| CN103998058B (zh) | 2011-10-06 | 2021-11-05 | 免疫疫苗技术有限公司 | 包括激活或增加tlr2活性的佐剂的脂质体组合物及其应用 |
| GB201205237D0 (en) | 2012-03-26 | 2012-05-09 | Univ Edinburgh | Adjuvant |
| JP6670106B2 (ja) | 2012-04-26 | 2020-03-18 | ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ | ブドウ球菌コアグラーゼ抗原およびその使用方法 |
| BR112014028476A2 (pt) | 2012-05-16 | 2017-08-01 | Immune Design Corp | fragmento imunogênico de um polipeptídeo, polinucleotídeo isolado, composição farmacêutica imunogênica, métodos para tratar uma infecção, para gerar uma resposta imune em um sujeito, e para imunizar um sujeito |
| WO2014039978A2 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Szathmary Dr Susan | Vaccine to prevent mycoplasmal infection in waterfowl |
| EP2903987B1 (en) | 2012-10-01 | 2017-09-20 | Urogen Pharma Ltd. | Phospholipid drug analogs |
| WO2014172637A1 (en) | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Immune Design Corp. | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| LT3166634T (lt) | 2014-07-11 | 2021-11-10 | Zoetis Services Llc | Naujos vakcinos kompozicijos prieš kiaulių epideminės diarėjos virusą |
| AU2016225119B2 (en) | 2015-02-27 | 2021-06-03 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Porcine Epidemic Diarrhea Virus strains and immunogenic compositions therefrom |
| WO2017123201A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Zoetis Services Llc | Novel cross protective vaccine compositions for porcine epidemic diarrhea virus |
| BR112018069371A2 (pt) | 2016-03-21 | 2019-01-22 | South Dakota Board Of Regents | construção de ácido nucleico, vetor, vacina ou composição imunogênica, método de entrega de uma vacina, método de produção de uma construção de ácido nucleico e método para conferir imunidade contra um antígeno |
| US11246924B2 (en) | 2016-04-01 | 2022-02-15 | Duke University | Alpha-helical peptide nanofibers as a self-adjuvanting vaccine platform |
| US10662226B2 (en) | 2016-10-28 | 2020-05-26 | The Regents of the University of Caiifomia | Synthetic beta-amyloid peptides capable of forming stable antigenic oligomers |
| GB201703529D0 (en) | 2017-03-06 | 2017-04-19 | Cambridge Entpr Ltd | Vaccine composition |
| CN107027749B (zh) * | 2017-05-24 | 2021-04-09 | 浙江工业大学 | 一种复合乳化剂及其在复配毒死蜱农药中的应用 |
| ES2705378A1 (es) * | 2017-09-22 | 2019-03-22 | Decco Worldwide Post Harvest Holdings B V | Metodo para el tratamiento y control de fisiopatias de postcosecha de frutas mediante recubrimientos comestibles. |
| WO2019183500A1 (en) | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Hung Chiung Yu | Coccidioides antigens and methods of their use |
| EP3843782A1 (en) | 2018-08-29 | 2021-07-07 | Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) | Ebola vaccine compositions and methods of using same |
| US11208167B2 (en) | 2018-11-15 | 2021-12-28 | Kuat Innovations Llc | Bicycle rack with actuated arm |
| CN114315985A (zh) | 2020-09-29 | 2022-04-12 | 硕腾服务有限责任公司 | 减毒猪流行性腹泻病毒 |
| CN115216451A (zh) | 2021-04-16 | 2022-10-21 | 硕腾服务有限责任公司 | 伪狂犬病病毒疫苗 |
| TW202327646A (zh) | 2021-10-15 | 2023-07-16 | 美商輝瑞大藥廠 | Rna分子 |
| CN113907044A (zh) * | 2021-11-09 | 2022-01-11 | 福建省连江县刘氏兔业养殖场 | 一种抗病猪品系的培育方法及其应用 |
| WO2023111907A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | Pfizer Inc. | Polynucleotide compositions and uses thereof |
| WO2023144779A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Pfizer Inc. | Coronavirus antigen variants |
| WO2024089633A1 (en) | 2022-10-27 | 2024-05-02 | Pfizer Inc. | Rna molecules encoding rsv-f and vaccines containing them |
| WO2024089634A1 (en) | 2022-10-27 | 2024-05-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions against influenza and rsv |
Family Cites Families (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4070454A (en) * | 1973-05-04 | 1978-01-24 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Vaccines, the process for preparing the same and the applications thereof |
| AT350181B (de) * | 1977-05-04 | 1979-05-10 | Schuller Walter Dr | Verfahren zur herstellung einer mischvaccine |
| US4137115A (en) * | 1977-11-07 | 1979-01-30 | Patrick Lambert | Joining structure |
| US4237115A (en) * | 1977-11-23 | 1980-12-02 | Bactex, Inc. | Method of immunization against enterotoxogenic infection by Escherichia coli |
| US4261925A (en) | 1978-04-05 | 1981-04-14 | The Dow Chemical Company | Surfactants |
| US4504275A (en) | 1983-03-24 | 1985-03-12 | Imperial Chemical Industries Plc | Emulsifying agents |
| US4933179A (en) | 1983-08-22 | 1990-06-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Feline leukemia virus antigen vaccines |
| US4606918A (en) | 1983-08-22 | 1986-08-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US5338748A (en) | 1985-01-18 | 1994-08-16 | Cetylite Industries, Inc. | Sterilant composition |
| US5424323A (en) * | 1985-01-18 | 1995-06-13 | Cetylite Industries, Inc. | Sterilant composition |
| DE3517805A1 (de) * | 1985-05-17 | 1986-11-20 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Impfstoff zur immunisierung von schweinen gegen rhinitis atrophicans (schnueffelkrankheit) |
| US4803070A (en) * | 1986-04-15 | 1989-02-07 | Ribi Immunochem Research Inc. | Immunological emulsion adjuvants for polysaccharide vaccines |
| US4789544A (en) * | 1986-05-23 | 1988-12-06 | Midcon Labs. Inc. | Co-vaccination using non-O-carbohydrate side-chain gram-negative bacteria preparation |
| US5019388A (en) | 1986-10-14 | 1991-05-28 | Norden Laboratories Inc. | Bordetella bronchiseptica vaccine |
| US4888169A (en) | 1986-10-14 | 1989-12-19 | Norden Laboratories, Inc. | Bordetella Bronchiseptica vaccine |
| US5084269A (en) * | 1986-11-06 | 1992-01-28 | Kullenberg Fred W | Adjuvant for dose treatment with antigens |
| US5209929A (en) * | 1987-03-19 | 1993-05-11 | Washington State University Research Foundation | Immunization against Babesiosis using purified merozoite surface antigens of Basesia bigemina |
| US5376369A (en) | 1987-11-03 | 1994-12-27 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccine adjuvant |
| US5069901A (en) * | 1988-02-03 | 1991-12-03 | Jones Elaine V | Preparation of a recombinant subunit vaccine against pseudorabies infection |
| GB8822857D0 (en) * | 1988-09-29 | 1988-11-02 | Patralan Ltd | Pharmaceutical formulations |
| FR2649012B1 (fr) * | 1989-07-03 | 1991-10-25 | Seppic Sa | Emulsions multiphasiques injectables |
| US5223253A (en) * | 1989-09-28 | 1993-06-29 | American Home Products Corporation | Bovine vaccine compositions and method for preventing trichomonas infections using same |
| US5578308A (en) | 1990-02-12 | 1996-11-26 | Capiau; Carine | Glutaraldehyde and formalin detoxified bordetella toxin vaccine |
| JP3035712B2 (ja) * | 1990-02-12 | 2000-04-24 | スミスクライン ビーチャム バイオロジカルズ（エス ア） | 新規なワクチンおよびそのための方法 |
| AU657907B2 (en) * | 1990-05-29 | 1995-03-30 | Wyeth Holdings Corporation | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5695769A (en) | 1990-06-13 | 1997-12-09 | Pfizer Inc. | Pasteurella multocida toxoid vaccines |
| ES2136064T3 (es) * | 1990-06-13 | 1999-11-16 | Pfizer | Vacunas de toxoide de pasteurella multocida. |
| US5242686A (en) * | 1990-11-07 | 1993-09-07 | American Home Products Corporation | Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same |
| WO1993010216A1 (en) | 1991-11-15 | 1993-05-27 | Smithkline Beecham Corporation | Gram-negative bacterial vaccines |
| US5338543A (en) * | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5422277A (en) * | 1992-03-27 | 1995-06-06 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Cell fixative composition and method of staining cells without destroying the cell surface |
| DE4222153C2 (de) | 1992-07-06 | 1998-12-03 | Peter Siegfried | Verfahren zur Entölung von Rohlecithin |
| DK0626452T3 (da) * | 1993-05-17 | 2000-02-14 | Akzo Nobel Nv | Vaccine mod infektion af Streptococcus suis |
| WO1995011700A1 (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| AU679845B2 (en) * | 1994-02-18 | 1997-07-10 | Solidose L.L.C. | Inoculation of animals with dried, pelleted biological materials |
| DK53595A (da) * | 1994-05-13 | 1995-11-14 | Iberica Cyanamid | Rekombinante PRRSV-proteiner, diagnostiske kits og vaccine indeholdende sådanne rekombinante PRRSV-proteiner |
| ATE248603T1 (de) * | 1994-06-10 | 2003-09-15 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Reinigungsverfahren für von bordetella produziertem nekrotoxin |
| US5538733A (en) * | 1994-07-07 | 1996-07-23 | Willmar Poultry Company, Inc. | Method of priming an immune response in a one-day old animal |
| US5625038A (en) * | 1994-07-27 | 1997-04-29 | Henderson; Louise M. | Monoclonal antibodies specific for Erysipelothrix rhusiopathiae |
| US5603951A (en) | 1994-11-09 | 1997-02-18 | Hanmi Pharm. Ind. Co., Ltd. | Cyclosporin-containing soft capsule compositions |
| GB9620795D0 (en) | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5877298A (en) * | 1995-05-04 | 1999-03-02 | Connaught Lab | Acellular pertussis vaccines and methods of preparing thereof |
| US5718904A (en) * | 1995-06-02 | 1998-02-17 | American Home Products Corporation | Adjuvants for viral vaccines |
| US5690942A (en) * | 1995-06-02 | 1997-11-25 | American Home Products Corporation | Adjuvants for viral vaccines |
| US5814321A (en) | 1995-11-30 | 1998-09-29 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Oil adjuvant vaccine and method for preparing same |
| DK0835930T3 (da) | 1996-10-09 | 2001-06-18 | Akzo Nobel Nv | Europæiske vaccinestammer af porcint reproduktions- og respirationssyndrom-virus. (PRRSV) |
| ZA982870B (en) * | 1997-04-10 | 1998-10-09 | Akzo Nobel Nv | Live attenuated bacteria of the species actinobacillus pleuropneumoniae |
| US6517843B1 (en) * | 1999-08-31 | 2003-02-11 | Merial | Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2 |
| AU769539B2 (en) * | 1999-01-29 | 2004-01-29 | Zoetis Services Llc | Adjuvants for use in vaccines |
| US6585981B1 (en) | 2000-07-27 | 2003-07-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae |
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