JP4785365B2 - ワクチンにおいて使用するためのアジュバント - Google Patents
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Description
ン及び界面活性剤を含んで成るアジュバントに関する。本発明のアジュバントは、種々のワクチン配合物、たとえば細菌又はウイルス成分を含んで成るワクチンにおいて有用である。
もう1つの態様においては、本発明のアジュバントは、レシチン、油、及びアジュバント、又はアジュバントを含むワクチン組成物を乳化できる2種の両親媒性界面活性剤を含んで成る。好ましい観点においては、2種の界面活性剤の1つ、たとえばTween80が主として水性相に見出され、そしてほかの界面活性剤、たとえばSpan80は主として油相に見出される。
適切な油は、鉱油、たとえばDRAKEOL(TM)軽鉱油を包含する。さらなる態様においては、本発明のアジュバントは、キャリヤー水溶液、たとえば生理学的に許容できる緩衝液、水又は塩溶液を含む。
好ましい態様においては、本発明のアジュバントは、レシチン、鉱油、2種の両親媒性界面活性剤及びキャリヤー水溶液(たとえば塩溶液)を含む。
本発明のアジュバントのために有用な界面活性剤は、両親媒性であり、そして獣医又は医学的使用のために許容できる。特定の界面活性剤が、医学的又は獣医学的使用のために許容できるか否かは、当業者により決定され得る。界面活性剤は、その界面活性剤分子の一部が疎水性であり、そして一部が親水性である場合、両親媒性である。本発明のアジュバントに使用され得る界面活性剤を記載するアメリカ特許第5,690,942号;第5,376,369号;第4,933,179号;及び第4,606,918号を参照のこと。
両親媒性界面活性剤の他に、本発明のアジュバントは、レシチン及び油を含む。もう1つの観点においては、本発明のアジュバントは水性キャリアー溶液を含む。
当業者において知られているいずれかのレシチンが、本発明のアジュバントのために使用される。レシチンは、ホスファチドの混合に言及する。粗抽出物として供給される場合、レシチンはまた、トリグリセリドを含むことができる。レシチンは植物又は生物起源のものであり得る。
本発明のアジュバントは、好ましくは、ワクチン組成物へのアジュバントの配合の後の濃度の約2倍〜約10倍、より好ましくは約2倍〜約8倍、より好ましくは約3倍〜約6倍、そして最も好ましくは約4倍である濃度で供給される。
本発明のアジュバントは、ワクチン配合物の抗原に対する免疫応答を増強するために使用され得る。本発明のアジュバントは、いずれかの細菌、又はいずれかのウィルスに由来する抗原と共に使用され得るが、但し前記抗原は破壊も又は変性もされない。抗原の例は、エリシペロトリックス・ルヒシオパチアエ抗原、ボルデテラ・ブロンキセプチカ抗原、パステウレラ・ムルトシダの毒素原性株の抗原、新生児下痢を引き起こすエスシェリシア・コリ株の抗原、アクチノバシラス・プレウロプネウモニア抗原、パステウレラ・ハエモリチカ抗原、又は上記のいずれかの組み合わせを包含するが、但しそれだけには限定されない。本発明のアジュバントはまた、アメリカ特許第5,616,328号及び第5,084,269号に記載される抗原を含むワクチン組成物においても有用である。
本発明のアジュバントは、動物を免疫するためにワクチン配合物に使用され得る。1つの態様においては、ワクチン配合物は、本発明のアジュバント及び抗原を含む。ワクチン配合物における個々の成分の最適割合は、当業者によく知られている技法により決定され得る。
注射のためには、ワクチン調製物は、水溶性、好ましくは生理学的に適合する。緩衝液、たとえばハンクス溶液、リンガー溶液、リン酸緩衝溶液又はいずれか他の生理学的塩緩衝液において配合され得る。前記溶液は、配合剤、たとえば懸濁、安定及び/又は分散剤を含むことができる。地方では、タンパク質は、使用の前適切なビークル、たとえば無菌性の発熱物質を含まない水による構成のために、粉末形で存在することができる。
有効用量は、最初に、インビトロアッセイから推定される。たとえば、用量は、当業者によく知られている技法を用いて、免疫応答の誘発を達成するために動物モデルにおいて決定され得る。当業者は、本明細書に記載される結果に基づいて、すべての動物種への投与を容易に最適化され得る。投与量及び期間は、個々に調節され得る。たとえば、ワクチンとして使用される場合、本発明のワクチン配合物は、1〜36週間、約1〜3用量、投与され得る。
次の例は、例示的であって、本発明を制限するものではない。
次の例は、油(「油‐レシチンアジュバント」)、通常鉱油(軽流動パラフィン)に溶解された、脱油化されたレシチンを含むアジュバントの家畜用ワクチンへの使用を記載する。油‐レシチンアジュバントを記載するアメリカ特許第5,084,269号を参照のこと。油‐レシチンアジュバントを用いるワクチン調製物は、水中油型エマルジョンである。
ワクチン配合物を乳化するために界面活性剤と組合して油‐レシチンアジュバント組成物が試験された。
次の例は、リン酸緩衝溶液に40%の油‐レシチン及び2%の合成界面活性剤、すなわちTween80及びSpan80(Van Water&Rogers,Omaha,Nebraska)を含むエマルジョンの使用を記載する。このアジュバントは無菌的に調製され、そして抗原から分離された。エマルジョンを、さらに乳化しないで、抗原調製物に添加した。合成界面活性剤は、粗い、比較的安定したエマルジョンとして油‐レシチンアジュバントが分散することを助けた。アジュバントエマルジョンを、水性抗原調製物に1:8の割合で添加し、油‐レシチンアジュバント含有率を40%から5%に、そして界面活性剤を2%から0.25%に減じた。
油‐レシチンアジュバント(5%(v/v))を、上記のようにして、但しワクチン組成物において8%の合計界面活性剤濃度でのTween80及びSpan80界面活性剤の助けを伴って、抗原性調製物において乳化した。そのエマルジョンは非常に微細で且つ安定していた。それは溶液とほとんど同じ透明度を有し、そしてそれは静置に基づいて、クリーム状にならなかった。最大の倍率(0.2ミクロンの解像度)での顕微鏡下で、ほとんどの液滴は見えないほど小さかった。従って、それはマイクロエマルジョンであった。
アジュバントとして許可できるほど滑らかで且つ十分に有用であるアジュバントエマルジョンを見出すための試みが行われた。20%の油‐レシチンアジュバントエマルジョンは40%の油‐レシチンアジュバントエマルジョンよりも容易に製造されるので、20%の油‐レシチンアジュバントが、それらの実験に使用された。5%の最終油濃度を製造するために1:4の割合でのワクチンへのその添加は、抗原のための用量体積の75%を残すであろう。予備実験は、滑らかな極微小エマルジョン(ほとんどの液滴は1ミクロン以下の直径を有した;図1を参照のこと)が20%の油並びに16%のTween80及びSpan80界面活性剤により調製され得ることを示した。
中間濃度の界面活性剤を有するアジュバントが使用される場合、注入部位の膨張が生じるかどうかを決定するために、ワクチン調製物を豚において試験した。5%の油‐レシチンアジュバント、及び0.25%又は4%のいずれかの界面活性剤を含むワクチン調製物は、注入部位で豚において膨張を引き起こさなかった。Alゲルが10%の濃度でワクチン調製物に添加される場合、0.25%の界面活性剤を有する調製物は重度の注入部位膨張を引き起こし、ところが4%の界面活性剤を有する調製物はほとんど膨張をもたらさなかった。
予防接種に続いて動物においてAlゲルと反応せず、そして反応性を導かないアジュバントを見出すためにアッセイを実施した。5%の油‐レシチンアジュバント及び2%の界面活性剤を有する予防接種調製物をもたらす、8%の界面活性剤を含む20%油‐レシチンアジュバントが、Alゲルとのインビトロ反応性、及び予防接種部位での組織の刺激の両者を回避するために十分であることが決定された。界面活性剤濃度とアジュバント力との関係の証拠はほとんど明白ではない。ワクチン中の4%の界面活性剤は、たとえばE.コリK99に対するアグルチニンの誘発、及びP.ムルトシダTypsDの毒素に対する抗毒素の中和において過度であることが、時として示された。
中間濃度の界面活性剤を有する、例4に記載されるようなアジュバントを、ボルデテラ・ブロンキセプチカ及び毒性パステウレラ・ムルトシダの抗原を含む萎縮性鼻炎ワクチンに使用した。ボルデテラ・ブロンキセプチカ−パステウレラ・ムルトシダ・バクテリン−トキソイド ワクチンを、B.ブロンキセプチカ細胞及びP.ムルトシダのトキソイドから製造した。
萎縮性鼻炎(atrophic rhinitis)ワクチンの最少免疫化用量を決定するための試験は、中間濃度の界面活性剤を有する油−レシチンアジュバントのアジュバント特性を示した。妊娠した雌豚を、4週間隔で2度2mLの用量に予防接種した。それら、2回目の投与の約2週間後、分娩した。
中間濃度の界面活性剤を有する例4に記載されるアジュバントを、E.ルヒシオパチアエ抗原を含む丹毒(eryspelas)ワクチンに使用した。ワクチンへの使用のための抗原は、0.5%のホルマリンにより少なくとも24時間、不活性化されたE.ルヒシオパチアエ培養物から製造された。不活性化された培養物を、遠心分離により澄明にし、そして分子濾過により約10倍に濃縮した。前記濃縮物を、AlゲルREHYDRAGEL(TM)を添加し、30%の濃度にすることによって安定した。予備吸着された濃縮物は、個々のmlの用量が、不活性化での培養物の光学密度(OD)から計算される場合に少なくとも3.2の不透明単位(opacity unit)(OU)を含むような量で、ワクチンに含まれた、(OUは、mL当りのOU値を付与するために最終濃度因子により掛け算される。)
9週で攻撃されたグループに使用されるワクチンは、すでに12ヶ月経過していた。その結果は、保護抗原が都合よく安定化されたことを確認するものである。
本発明は、本発明の単一の観点の例示として意図される例示された態様により制限されず、そして機能的に同等であるアジュバントは本発明の範囲内である。実際、本明細書に記載される種々の変法は、前叙の記載及び添加図面から当業者に明らかになるであろう。そのような変法は、本発明の請求内にある。
本明細書に引用されるすべての出版物は、完全に引用により組み込まれる。
Claims (11)
- 0.25%〜12.5%(v/v)のレシチン、1%〜23%(v/v)の鉱油、1.5%〜3.5%(v/v)の少なくとも1つの両親媒性界面活性剤、及び抗原を含んで成るワクチン組成物。
- 前記レシチンが脱油化されている請求項1記載のワクチン組成物。
- 水性キャリアーをさらに含んで成る請求項1記載のワクチン組成物。
- 前記抗原が、エリシペロトリックス・ルヒシオパチアエ(Erysipetothrix rhusiopathiae)抗原、ボルデテラ・ブロンキセプチカ(Bordetella bronchiseptica)抗原、パステウレラ・ムルトシダ(Pasteurella multocida)抗原、新生児下痢を引き起こすエスシェリシア・コリ(Eschericia coli)株の抗原、アクチノバシラス・プレウロプネウモニア(Actinobacillus pleuropneumonia)抗原、パステウレラ・ハエモリチカ(Pasteurella haemolytica)抗原、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される請求項1記載のワクチン組成物。
- 2種の両親媒性界面活性剤が使用される請求項1記載のワクチン組成物。
- 1種の親水性界面活性剤及び1種の親油性界面活性剤が使用される請求項5記載のワクチン組成物。
- 前記レシチンが0.5%(v/v)の濃度で存在し、そして前記両親媒性界面活性剤が2%(v/v)の濃度で存在する請求項5記載のワクチン組成物。
- 水性キャリヤーをさらに含んで成る請求項5記載のワクチン組成物。
- アジュバントがワクチン組成物配合される際に、0.25%〜12.5%(v/v)のレシチン、1%〜23%(v/v)の鉱油、及び1.5%〜2.5%(v/v)の少なくとも1種の両親媒性界面活性剤を含んでなるアジュバント組成物。
- 抗原組成物に、請求項9記載のアジュバント組成物を添加することを含んで成るワクチン組成物の製造方法。
- 前記抗原が、エリシペトロリックス・ルヒシオパチアエ(Erysipetothrix rhusiopathiae)抗原、ボルデテラ・ブロンキセプチカ(Bordetella bronchiseptica)抗原、パステウレラ・ムルトシダ(Pasteurella multocida) 抗原、新生児下痢を引き起こすエスシェリシア・コリ(Eschericia coli)株の抗原、アクチノバシラス・プレウロプネウモニア(Actinobacillus pleuropneumonia)抗原、パステウレラ・ハエモリチカ(Pasteurella haemolytica)抗原、及びそれらの組み合わせから成る群から選択される請求項10記載の方法。
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