ES2204969T3 - Derivados de ciclodextrina y metodos de preparacion de los mismos. - Google Patents
Derivados de ciclodextrina y metodos de preparacion de los mismos.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A DERIVADOS DE CICLODEXTRINA Y A METODOS DE PREPARACION DE LOS MISMOS, TENIENDO DICHOS DERIVADOS DE CICLODEXTRINA AL MENOS UNO, PERO NO MAS, DE GRUPOS N-1 ALQUILO "SUPERIORES", Y AL MENOS UNO, PERO NO MAS, DE GRUPOS N-1 SULFATO, DONDE EL NUMERO TOTAL COMBINADO DE GRUPOS ALQUILO "SUPERIORES" Y DE GRUPOS SULFATO NO EXCEDE DE N, Y DONDE, ADEMAS, N ES EL NUMERO DE GRUPOS HIDROXILO DE LA CICLODEXTRINA A PARTIR DEL CUAL SE OBTUVO EL DERIVADO EN CUESTION. LOS GRUPOS ALQUILO "SUPERIORES" SON LIPIDOS Y, ESPECIALMENTE, CADENAS CARBONADAS ALIFATICAS O AROMATICAS, ESPECIALMENTE CADENAS CARBONADAS LINEALES, QUE TIENEN LA ESTRUCTURA GENERAL - O - C(=O) (CH{SUB,2}{SUB,N} - CH{SUB,3}, DONDE N ES UN NUMERO ENTRE 6 Y 24, Y/O - OC(=O) - (CH{SUB,2}){SUB,M} - CH = CH - (CH{SUB,2}){SUB,M} - CH{SUB,3}, DONDE M ES AL MENOS 6. LOS GRUPOS SULFATO DESCRITOS TIENEN LA FORMULA - OSO{SUB,3}R, DONDE R PUEDE SER H, NA, K, LI, NH{SUB,4} Y/O OTROS ATOMOS/MOLECULAS FORMADORES DE CATIONES MONOVALENTES. LOS DERIVADOS CD SE OBTIENEN MEDIANTE UNA REACCION EN DOS ETAPAS EN LA QUE LA CICLODEXTRINA SE PONE EN CONTACTO CON ACOILCLORURO, SEGUIDO DE SULFONACION DEL COMPLEJO SO{SUB,3}.
Description
Derivados de ciclodextrina y métodos de
preparación de los mismos.
La presente invención se refiere a una nueva
familia de derivados de ciclodextrina y, en particular, a una nueva
familia de derivados de ciclodextrina que tienen tanto grupos
alquilo "superiores" como grupos sulfato, que son útiles, entre
otras cosas, para aplicaciones biofarmacéuticas, y a métodos de
preparación de los mismos.
Las ciclodextrinas (CDs) son una familia bien
conocida de moléculas cristalinas no higroscópicas que constan de
una cadena de seis, siete u ocho unidades de glucopiranosa que
están unidas entre sí por sus extremos terminales. Debido a razones
estéricas, las ciclodextrinas forman una estructura cíclica de
macroanillos de forma toroidal, que tienen una cavidad axial
interna. La superficie externa de estas moléculas es hidrófila. La
cavidad interna de estas moléculas es de naturaleza apolar.
Las ciclodextrinas se ha utilizado para diversos
propósitos, y una utilización de las mismas particularmente
importante ha sido como portadores de moléculas de fármacos y
antígenos, que pueden alojarse en su cavidad interna.
Entre los inconvenientes de las ciclodextrinas
está el hecho de que tienen varias propiedades físicas, químicas y
fisicoquímicas (tales como solubilidad) que, aunque apropiadas para
la utilización a la que se destinan, no son apropiadas para su
utilización con otras moléculas y/o para otras utilizaciones.
Se han realizado varias modificaciones químicas
y/o enzimáticas de la molécula de CD para proporcionar CDs que
tengan propiedades físicas, químicas y fisicoquímicas deseadas, y
obtener los correspondientes derivados de CD.
En dichos derivados de CD, por lo menos uno de
los grupos hidroxilo libres de la molécula de CD (hay tres de tales
grupos hidroxilo libres en cada una de las unidades de
glucopiranosa de la molécula de CD) ha sido modificado. Dicha
modificación se lleva a cabo sustituyendo el átomo de hidrógeno del
grupo hidroxilo, o el grupo hidroxilo completo, con uno de una gran
variedad de grupos sustituyentes. De esta manera, dependiendo del
número y del tipo de sustituciones realizadas, pueden obtenerse
derivados de CD que poseen ciertas propiedades fisicoquímicas
específicas deseadas para la utilización a la que se destinan.
En relación con la utilización de derivados de CD
como portadores de moléculas de fármacos y antígenos, hay que
señalar que la formación de complejos de una molécula de fármaco o
de un antígeno con un derivado de CD puede proporcionar ventajas
significativas en lo referente a la mejora de la biodisponibilidad y
de la estabilidad de la molécula de fármaco. En tales casos, las
mejoras en la asociación entre el derivado de CD y la molécula de
fármaco pueden proporcionar mejoras concomitantes en la
biodisponibilidad y/o la estabilización de la molécula de
fármaco.
Por desgracia, la fabricación de tales derivados
de CD puede ser a menudo difícil y/o implicar la utilización de
procedimientos que son difíciles, costosos e incluso peligrosos,
especialmente a escala industrial.
Un problema adicional con los derivados de CD es
que, como en el caso de las CDs convencionales, poseen propiedades
físicas, químicas y fisicoquímicas (tales como su forma, que puede
afectar al ajuste de la molécula huésped en la cavidad axial
interna) específicas que, aunque las hacen adecuadas para los
propósitos específicos a los que se destinan, limitan su uso
adicional para otros propósitos.
Por consiguiente, es obvio que sigue existiendo
la necesidad de encontrar derivados de ciclodextrina que posean
propiedades fisicoquímicas que permitan una amplia gama de
utilizaciones para diversos propósitos. Puede apreciarse, además,
que sigue existiendo la necesidad de encontrar un método fácil,
seguro y barato para la preparación de dichos derivados de CD a
escala industrial.
Es un objeto principal de la presente invención
proporcionar derivados de CD que son capaces de formar complejos
con una amplia variedad de moléculas huésped, especialmente
moléculas de fármacos y antígenos, y que poseen propiedades
fisicoquímicas adecuadas para una amplia variedad de
propósitos.
Es otro objeto principal de la presente invención
proporcionar derivados de CD que son capaces de formar complejos
con moléculas huésped particulares, y especialmente con moléculas
de fármaco y antígenos particulares, y que poseen ciertas
propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para el propósito
específico para el que se destinan.
En otro aspecto de la presente invención, es un
objeto principal de la presente memoria proporcionar métodos
simples, fáciles y baratos de preparación de las composiciones de
derivados de CD que tienen propiedades fisicoquímicas que permiten
una amplia gama de utilizaciones para diversos propósitos, y para la
preparación de derivados de CD que poseen propiedades
fisicoquímicas específicas particularmente adecuadas para la
molécula(s) huésped(es) particular(es) a cuyo
transporte se destinan.
En otro aspecto adicional de la presente
invención, es un objeto de la presente memoria la utilización de
dichos derivados de CD preparados, y de composiciones de los
mismos, para una amplia variedad de utilizaciones, incluidas, entre
otros, propósitos médicos, tales como la preparación de vacunas y/o
adyuvantes para vacunas.
De acuerdo con la propuesta de la presente
invención, se describen en la presente memoria derivados de CD y
composiciones de los mismos que son capaces de formar complejos con
una amplia variedad de moléculas huésped, y especialmente con
moléculas de fármacos y antígenos, que son capaces de estabilizar y
reducir la reactividad y/o la movilidad de la molécula (tal como
una molécula de fármaco) alojada en los mismos, y que poseen
propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para una amplia
variedad de utilizaciones.
Además, de acuerdo con la propuesta de la
presente invención, se describen en la presente memoria derivados
de CD y composiciones de los mismos que son capaces de formar
complejos con una amplia variedad de moléculas huésped, y
especialmente con moléculas de fármacos y antígenos particulares,
que son capaces de estabilizar y reducir la reactividad y/o la
movilidad de la molécula particular (tal como una molécula de
fármaco) alojada en los mismos, y que poseen ciertas propiedades
fisicoquímicas que son adecuadas para el propósito específico para
el que se destinan.
La presente invención proporciona un derivado de
ciclodextrina, caracterizado porque está sustituido con por lo
menos una cadena de hidrocarburo lineal de por lo menos ocho átomos
de carbono y por lo menos uno, pero no más de siete grupos sulfato,
con la salvedad de que el derivado de ciclodextrina no es un
compuesto de fórmula I
en la
que:
M es un catión aceptable desde el punto de vista
farmacéutico
p es 1 ó 2
q es n/2 cuando p es 2, y q es n cuando p es
1;
R se selecciona a partir del grupo formado por
alquilo inferior C_{1}-C_{12}, cicloalquilo
C_{3}-C_{12} y arilo o heteroarilo
opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente a partir de halógeno, alquilo
inferior C_{1}-C_{12} o alcoxi
C_{1}-C_{12}; y
n es un número entero de 6-8, que
representa \alpha-ciclodextrina (n = 6),
\beta-ciclodextrina (n = 7),
\gamma-ciclodextrina (n = 8).
Si se desea, los nuevos derivados de
ciclodextrina pueden caracterizarse adicionalmente porque tienen por
lo menos un grupo hidroxilo libre.
En una realización particular, los nuevos
derivados de ciclodextrina se caracterizan por tener por lo menos
uno, pero no más de N-7 grupos alquilo
"superiores" y/o por lo menos uno, pero no más de
N-7 grupos sulfato, donde N es el número total de
grupos hidroxilo de la ciclodextrina de la que se obtuvo el
derivado.
En otra realización particular, los nuevos
derivados de ciclodextrina tienen por lo menos uno, pero no más de
trece grupos sulfato.
En otra realización particular adicional, los
nuevos derivados de ciclodextrina están caracterizados, además,
porque los grupos alquilo "superiores" son lípidos. En este
sentido, los grupos alquilo "superiores" pueden ser cadenas
carbonadas alifáticas tales como cadenas carbonadas lineales cuya
estructura general es
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}-CH_{3}, en la que
n es por lo menos 6, y
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
en la que m es por lo menos 6. También se describen las cadenas
carbonadas lineales en las que n es entre 6 y 24. También se
describen las cadenas carbonadas lineales en las que n es entre 6 y
16.
En particular, se describen las cadenas
carbonadas lineales en las que n puede ser 6 (octanoiloxi), 8
(decanoiloxi), 10 (dodecanoiloxi,
-OC(=O)-(CH_{2})_{10}CH_{3}, también denominado en la
presente memoria como lauroiloxi), 12 (tetradecanoiloxi, también
conocido como miristoiloxi), 14 (hexadecanoiloxi, también conocido
como palmitoiloxi) y 16 (octadecanoiloxi, tales como estearoiloxi)
Además, se describe en la presente memoria el
-OC(=O)-(CH_{2})_{7}-CH=CH-(CH_{2})_{7}-CH_{3}
(oleoiloxi).
En otra realización particular adicional, los
nuevos derivados de ciclodextrina están caracterizados, además,
porque los grupos sulfato tienen la fórmula general -OSO_{3}R, en
la que R se selecciona a partir del grupo formado por átomos y/o
moléculas que forman cationes monovalentes. Ejemplos de miembros de
dicho grupo incluyen H, Na, K, Li y NH_{4}. Las realizaciones
específicas incluyen derivados de ciclodextrina caracterizados por
los grupos sulfato -OSO_{3}H y -OSO_{3}Na.
En otro aspecto de la propuesta de la presente
invención, se describen en la presente memoria métodos fáciles,
seguros y baratos de preparación de derivados de CD, incluidos los
derivados de CD de la presente invención.
En particular, se describen en la presente
memoria métodos de preparación de las composiciones de derivados de
CD que tienen propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para su
utilización con una amplia variedad de moléculas huésped con las
que pueden asociarse, así como métodos de preparación de derivados
de CD y composiciones de los mismos que poseen propiedades
fisicoquímicas específicas particularmente adecuadas para la
molécula huésped a cuyo transporte se destinan.
En este sentido, se describe en la presente
memoria un procedimiento para la preparación de derivados de
ciclodextrina y composiciones de los mismos, caracterizado por las
etapas de poner en contacto una ciclodextrina tanto con
cloruro(s) de acilo como con complejo(s) de
sulfonación SO_{3}-.
Los cloruros de acilo preferidos son cloruro de
octanoílo, cloruro de decanoílo, cloruro de dodecanoílo (cloruro de
lauroílo), cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo),
cloruro de hexadecanoílo (cloruro de palmitoílo) y cloruro de
octadecanoílo (cloruro de estearoílo y cloruro de oleoílo).
Los complejos de sulfonación SO_{3}- preferidos
son HClSO_{3} (ácido clorosulfónico),
SO_{3}-piridina,
SO_{3}-2-metilpiridina,
SO_{3}-2,6-dimetilpiridina,
SO_{3}-dimetilformamida,
SO_{3}-trimetilamina,
SO_{3}-trietilamina,
SO_{3}-dimetilanilina,
SO_{3}-N-etilmorfolina,
SO_{3}-dietilanilina y
SO_{3}-dioxano.
Preferiblemente, la ciclodextrina se pone en
contacto con el cloruro(s) de acilo, mediante lo que se
forma un derivado de L-CD, antes de ponerla en
contacto con el complejo(s) de sulfonación SO_{3}-.
El método se caracteriza además porque
aproximadamente 1 mol de ciclodextrina se pone en contacto con por
lo menos aproximadamente 1 mol, pero no más de aproximadamente
N-1 moles, del cloruro(s) de acilo, y con por
lo menos aproximadamente 1 mol, pero no más de aproximadamente
N-1 moles, del complejo(s) de sulfonación
SO_{3}-, en el que el número total combinado de moles de cloruro
de acilo y de complejo de sulfonación SO_{3}- no es superior a N,
y donde N es el número total de grupos hidroxilo de la
ciclodextrina con la que se han puesto en contacto.
Preferiblemente, dicho contacto se realiza en
presencia de disolvente(s) orgánico(s).
En una realización preferida, la ciclodextrina se
pone en contacto con el cloruro(s) de acilo durante
aproximadamente 6 horas a aproximadamente 60ºC.
En otra realización preferida, la ciclodextrina
se pone en contacto con el complejo(s) de sulfonación
SO_{3}- durante por lo menos una hora a temperatura ambiente.
En otra realización, el método se caracteriza,
además, por la eliminación del disolvente(s)
orgánico(s) de los derivados de CD así obtenidos. En este
sentido, se prefiere que dicha eliminación de disolvente(s)
orgánico(s) de los derivados de CD incluya diálisis o
ultrafiltración de los derivados de CD así obtenidos.
En una realización adicional, el método se
caracteriza, además, por diálisis o ultrafiltración de los
derivados de CD en presencia de un detergente no dializable,
mediante la que se separan o extraen los derivados de CD del
\hbox{disolvente(s)} orgánico(s) utilizado
para la preparación (síntesis) de los mismos.
En una realización adicional, el método se
caracteriza, además, por la liofilización de los derivados de CD
separados o extraídos del disolvente(s) orgánico(s),
mediante lo que se obtiene un producto seco de derivado de CD.
En otro aspecto de la presente invención, se
describen en la presente memoria métodos de preparación de
composiciones ricas en derivados de CD que tienen números y tipos
específicos de grupos sulfato y alquilo "superiores", para que
sean capaces de formar complejos con moléculas huésped
particulares, y especialmente con moléculas de fármacos y antígenos
particulares, que son capaces de estabilizar y reducir la
reactividad y/o la movilidad de la molécula particular (tal como una
molécula de fármaco) que transportan, y que poseen ciertas
propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para el propósito
específico para el que se destinan.
En particular, se describen en la presente
memoria métodos de preparación de composiciones ricas en derivados
de CD que tienen un número particular de grupos sulfato y de grupos
alquilo "superiores" por cada derivado de CD, caracterizados
por las etapas de poner en contacto aproximadamente 1 mol de
ciclodextrina con aproximadamente 1 mol de cloruro(s) de
acilo por cada grupo alquilo "superior" deseado por cada
derivado de CD preparado de esa manera, y con aproximadamente 1 mol
de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- por cada grupo
sulfato deseado por cada derivado de CD preparado de esa manera, en
el que el número total combinado de moles de cloruro(s) de
acilo y de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- no es
superior a N, y donde N es el número total de grupos hidroxilo de
la ciclodextrina con la que se han puesto en contacto.
De esta manera, se forman composiciones ricas en
derivados de CD que tienen números específicos de grupos sulfato y
grupos alquilo "superiores" por cada molécula de derivado de
CD, que tienen propiedades fisicoquímicas particularmente adecuadas
para su utilización con molécula(s) huésped
específica(s) a cuya asociación se destinan.
En una realización, se describen en la presente
memoria métodos de preparación de derivados de CD que tienen mayor
solubilidad en agua, menor solubilidad en disolventes apolares y
una menor capacidad de unirse a superficies hidrófobas. En este
sentido, se prefiere que el cloruro(s) de acilo sea cloruro
de octanoílo, cloruro de decanoílo, cloruro de dodecanoílo (cloruro
de lauroílo) y/o cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo).
Más preferiblemente en este sentido, el cloruro(s) de acilo
es cloruro de octanoílo, cloruro de decanoílo y/o cloruro de
dodecanoílo (cloruro de lauroílo). Lo más preferible, en este
sentido, es que el cloruro(s) de acilo sea cloruro de
octanoílo y/o cloruro de decanoílo.
En otra realización adicional, se describen en la
presente memoria métodos de preparación de derivados de CD que
tienen menor solubilidad en agua, mayor solubilidad en disolventes
apolares y una mayor capacidad de unirse a superficies hidrófobas.
En este sentido, se prefiere que el cloruro(s) de acilo sea
cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo), cloruro de
tetradecanoílo (cloruro de miristoílo), cloruro de hexadecanoílo
(cloruro de palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de
estearoílo y cloruro de oleoílo). Más preferiblemente, en este
sentido, el cloruro(s) de acilo es cloruro de tetradecanoílo
(cloruro de miristoílo), cloruro de hexadecanoílo (cloruro de
palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de estearoílo y
cloruro de oleoílo). Lo más preferible en este sentido, es que el
cloruro(s) de acilo sea cloruro de hexadecanoílo (cloruro de
palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de estearoílo y
cloruro de oleoílo).
En otra realización, el método se caracteriza,
además, por diálisis o ultrafiltración de los derivados de CD así
obtenidos, en presencia de cationes monovalentes que pueden ser
H^{+}, K^{+}, Li^{+}, Na^{+} y/o NH_{4}^{+}, mediante lo
cual se obtienen derivados de CD que tienen grupos sulfato que
incluyen átomos/moléculas de dichos cationes.
En otra realización adicional, la diálisis o
ultrafiltración de los derivados de CD así obtenidos se realiza en
presencia de H^{+} y/o NH_{4}^{+}, mediante lo cual se
obtienen derivados de CD que tienen mayor solubilidad en agua y una
mayor solubilidad en disolventes apolares.
En otra realización adicional, la diálisis o
ultrafiltración de los derivados de CD así obtenidos se realiza en
presencia de K^{+} y/o Na^{+}, mediante lo cual se obtienen
derivados de CD que tienen menor solubilidad en agua y menor
solubilidad en disolventes apolares.
En otro aspecto adicional de la presente
invención, se describen en la presente memoria utilizaciones de
dichos derivados de CD preparados, que incluyen, entre otras cosas,
utilizaciones para propósitos médicos.
La presente invención también proporciona una
composición de vacuna que comprende un derivado de ciclodextrina que
está sustituido con por lo menos una cadena de hidrocarburo lineal
de por lo menos ocho átomos de carbono y por lo menos un grupo
sulfato.
También se proporciona la utilización de un
derivado de ciclodextrina que está sustituido con por lo menos una
cadena de hidrocarburo lineal de por lo menos ocho átomos de
carbono y por lo menos un grupo sulfato, para la preparación de una
composición de un adyuvante o de una vacuna.
La naturaleza y el fundamento de la propuesta de
la presente invención, así como los objetos y las ventajas de la
misma, se apreciarán y comprenderán mejor con referencia a la
siguiente descripción, leída junto con las figuras adjuntas.
La presente invención se refiere a nuestro
descubrimiento de una familia de derivados de CD que tienen grupos
alquilo "superiores" y grupos sulfato, y a composiciones de
los mismos que tienen propiedades fisicoquímicas deseadas.
La presente invención se refiere, además, a
nuestro descubrimiento de un método simple y fácil para la
preparación segura de una familia de derivados de CD en los que
varios (o todos) de los grupos hidroxilo (y/o porciones de los
mismos) de la molécula de CD están sustituidos con grupos alquilo
"superiores" y con grupos sulfato, para proporcionar derivados
de CD que tienen propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para
una amplia variedad de utilizaciones.
Además, como se examina extensamente más
adelante, hemos descubierto que, utilizando el método de la presente
memoria, y: (1) variando la cantidad (relaciones) de los diversos
materiales de partida utilizados; y/o (2) variando el
cloruro(s) de acilo utilizado; y/o (3) variando el catión o
cationes empleados en la solución acuosa utilizada para la diálisis
o ultrafiltración en la práctica del método de la presente
invención, pueden obtenerse diferentes composiciones de los
derivados de CD, que tienen mayores o menores cantidades de (son
ricas en) ciertos derivados de CD que tienen propiedades
fisicoquímicas específicas que son particularmente adecuadas para
su utilización con moléculas particulares y/o para una utilización
o utilizaciones particulares.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el
término "grupos alquilo superiores" se refiere a cadenas de
hidrocarburo lineales de por lo menos ocho átomos de carbono.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el
término "grupos sulfato" se refiere a grupos que tienen la
fórmula general -OSO_{3}R, en la que R se selecciona a partir del
grupo formado por átomos y/o moléculas que forman cationes
monovalentes. Ejemplos de miembros de dicho grupo son H, Na, K, Li y
NH_{4}.
Tal como se utiliza en la presente memoria, el
término "grupos hidroxilo" se refiere a grupos que tienen la
fórmula -OH.
El método de la presente invención puede
utilizarse con ciclodextrinas que comprenden seis unidades de
glucopiranosa (\alpha-ciclodextrinas), siete
unidades de glucopiranosa (\beta-ciclodextrinas)
y/u ocho unidades de glucopiranosa
(\gamma-ciclodextrinas), para producir derivados
de ciclodextrina que contienen el mismo número de unidades de
glucopiranosa.
El método de la presente invención para la
preparación de los derivados de CD de la presente invención es una
reacción en dos etapas, simple, fácil y segura, que comprende: (1)
primero, poner en contacto una ciclodextrina con un cloruro de
acilo, o con más de uno, para formar derivados lipídicos de CD
(L-CD); y (2) segundo, poner en contacto los
derivados lipídicos de CD formados con un complejo de sulfonación
SO_{3}-, o con más de uno, para formar los derivados
sulfolipídicos de CD (SL-CD) de la presente
invención.
Las dos etapas implicadas en la síntesis de los
derivados de CD de la presente invención se consideran reacciones
al azar, que dan lugar a una colección de diferentes derivados de
CD que varían en el contenido de grupos sulfato y grupos alquilo
"superiores" y, por consiguiente, en la estructura y
propiedades fisicoquímicas que poseen.
En la primera etapa de este procedimiento,
aproximadamente 1 mol de ciclodextrina se pone en contacto con por
lo menos aproximadamente 1 mol, pero no más de aproximadamente
N-1 moles, de cloruro(s) de acilo, en el que
el número total combinado de moles de cloruro(s) de acilo y
complejo(s) de sulfonación SO_{3}- no es superior a N, y
donde N es el número total de grupos hidroxilo de la ciclodextrina
con la que se han puesto en contacto.
En esta etapa, la ciclodextrina se pone en
contacto con el cloruro(s) de acilo durante aproximadamente
6 horas a aproximadamente 60ºC. Si se desea, la ciclodextrina puede
ponerse en contacto, además, con el cloruro(s) de acilo
durante aproximadamente otras 18 horas a temperatura ambiente.
En la segunda etapa de este procedimiento,
aproximadamente 1 mol de ciclodextrina se pone en contacto con de
aproximadamente 1 mol a aproximadamente N-1 moles de
complejo(s) de sulfonación SO_{3}-, en el que el número
total combinado de moles de cloruro(s) de acilo y
complejo(s) de sulfonación SO_{3}- no es superior a N, y
donde N es el número total de grupos hidroxilo de la ciclodextrina
con la que se han puesto en contacto.
En esta etapa, la ciclodextrina se pone en
contacto con el complejo(s) de sulfonación SO_{3}- durante
por lo menos una hora a temperatura ambiente. Si se desea, dicho
contacto puede prolongarse hasta 24 horas (o más).
En relación con lo anterior, hay que señalar que
el rendimiento del procedimiento a temperatura ambiente significa
que la temperatura no es crítica para el procedimiento. Esta
característica permite que el procedimiento se lleve a cabo en una
amplia gama de temperaturas y en una amplia gama de condiciones,
con el ahorro concomitante.
En este sentido, se contempla en la presente
memoria que las temperaturas ambiente no inferiores a
aproximadamente 10ºC sean aceptables. Serían preferibles
temperaturas no inferiores a aproximadamente 15ºC. Serían más
preferibles temperaturas no inferiores a aproximadamente 18ºC. Las
más preferibles serían temperaturas no inferiores a aproximadamente
22ºC.
Asimismo, en este sentido, serían aceptables
temperaturas ambiente no superiores a aproximadamente 50ºC. Serían
preferibles temperaturas no superiores a aproximadamente 40ºC.
Serían más preferibles temperaturas no superiores a aproximadamente
25ºC. Las más preferibles serían temperaturas no superiores a
aproximadamente 22ºC.
Las dos etapas de la presente invención se
realizan en presencia de disolvente(s) orgánico(s) en
el que se solubiliza la ciclodextrina a partir de la que se
preparan los derivados. Se prefiere, en este sentido, una mezcla de
dimetilformamida anhidra y piridina anhidra y/o una mezcla de
N-metilpirrolidinona anhidra y piridina anhidra.
El derivado(s) de CD que se
produce(n) haciendo uso del método de la presente invención
se extrae de los disolventes orgánicos. Se prefiere que dicha
extracción de los derivados de CD a partir de los disolventes
incluya la diálisis o ultrafiltración de los derivados de CD así
obtenidos. En este sentido, hay que señalar que en dichos
procedimientos pueden emplearse cationes monovalentes. Estos
cationes monovalentes son, preferiblemente, K^{+}, Li^{+},
H^{+}, Na^{+} y NH_{4}^{+}.
Hay que señalar, asimismo, que dicha diálisis o
ultrafiltración puede realizarse en presencia de un detergente no
dializable, transfiriéndose así los derivados de CD de los
disolventes orgánicos utilizados para la síntesis a soluciones
acuosas, para su posterior utilización. Ejemplos de dichos
detergentes no dializables son TWEEN 80 y TRITON
X-100.
Los productos de CD de los que se ha eliminado el
disolvente pueden entonces liofilizarse, si se desea un producto
seco de derivado de CD. Para ello, puede emplearse cualquier
procedimiento de liofilización, bien conocido para los expertos en
la materia, que es útil para la obtención de productos secos a
partir de soluciones acuosas. A este respecto, hay que señalar que
dicha liofilización se realiza, preferiblemente, a temperatura
ambiente, a una presión interna de menos de 0,1 mbar y con un
dispositivo de condensación en frío a menos de -25ºC.
Como se ha señalado anteriormente, en la práctica
del método de la presente invención, la producción de ciertos
derivados de CD puede aumentarse y/o disminuirse a voluntad: (1)
variando las cantidades (relaciones) de los materiales de partida;
y/o (2) variando los tipos de materiales de partida; y/o (3)
variando los tipos de cationes en la solución acuosa utilizada para
la diálisis o la ultrafiltración.
Variando la cantidad (relaciones) de los
materiales de partida mediante el aumento de la cantidad de
complejo(s) de sulfonación SO_{3}- y/o mediante la
disminución de la cantidad de cloruro(s) de acilo empleados
en el procedimiento de la presente invención, pueden obtenerse
derivados de CD que tienen más grupos sulfato en comparación con
grupos alquilo "superiores". A la inversa, disminuyendo la
cantidad de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- y/o
aumentando la cantidad de cloruro(s) de acilo empleados en el
procedimiento de la presente invención, pueden obtenerse derivados
de CD que tienen más grupos alquilo "superiores" que grupos
sulfato.
Para ilustrar este punto, utilizando cinco moles
de complejo de sulfonación SO_{3}- (tal como ácido
clorosulfónico) y 3 moles de cloruro de acilo (tal como cloruro de
lauroílo) se obtendrá una composición que es rica en derivados de CD
que tienen 5 grupos sulfato y 3 grupos alquilo "superiores".
De modo similar, utilizando 5 moles de complejo de sulfonación
SO_{3}- (tal como ácido clorosulfónico) y 11 moles de cloruro de
acilo (tal como cloruro de lauroílo) se obtendrá una composición
rica en derivados de CD que tienen 5 grupos sulfato y 11 grupos
alquilo "superiores".
Variando el cloruro(s) de acilo empleado
en el procedimiento de la presente invención se obtienen derivados
de CD que tienen diferentes grupos alquilo "superiores" que
poseen propiedades fisicoquímicas específicas deseadas que son
particularmente adecuadas para su utilización con moléculas
particulares y/o para una utilización o utilizaciones particulares.
Por ejemplo, el cloruro de octanoílo proporcionará grupos alquilo de
fórmula -OC(=O)-(CH_{2})_{6}-CH_{3},
el cloruro de decanoílo proporcionará grupos alquilo de fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{8}-CH_{3}, el cloruro
de dodecanoílo proporcionará grupos alquilo de fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{10}CH_{3}, el cloruro de
tetradecanoílo proporcionará grupos alquilo de fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{12}-CH_{3}, el
cloruro de hexadecanoílo proporcionará grupos alquilo de fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{14}-CH_{3} y el
cloruro de octadecanoílo proporcionará grupos alquilo de fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{16}-CH_{3} o
-OC(=O)-(CH_{2})_{7}-CH=CH-(CH_{2})_{7}-CH_{3}.
Variando el tipo de catión o cationes empleados
en la solución acuosa utilizada para la diálisis o ultrafiltración
en el procedimiento de la presente invención mediante la
utilización de H^{+}, K^{+}, Na^{+}, NH_{4}^{+} y/o
Li^{+}, se obtienen derivados de CD que tienen diferentes grupos
sulfato (-OSO_{3}H, -OSO_{3}K, -OSO_{3}Na, -OSO_{3}NH_{4}
y -OSO_{3}Li, respectivamente) que poseen propiedades
fisicoquímicas específicas deseadas, que son particularmente
adecuadas para su utilización con moléculas particulares y/o para
una utilización o utilizaciones particulares.
De modo similar al descrito anteriormente, la
producción de ciertos derivados de CD puede disminuirse/aumentarse
a voluntad, de modo que la composición así obtenida contenga mayores
o menores cantidades de (sea rica en) ciertos derivados de CD que
tienen propiedades fisicoquímicas específicas que son
particularmente adecuadas para su utilización con moléculas
particulares y/o para una utilización o utilizaciones
particulares.
Esto se basa en nuestro descubrimiento, que se
examinará extensamente más adelante, de que las propiedades
fisicoquímicas de los derivados de CD preparados según el método de
la presente invención dependen de la relación de los grupos
sulfato, grupos alquilo "superiores" y grupos hidroxilo
presentes, el tipo de ion de carga opuesta de los grupos sulfato y
el tipo de grupos alquilo "superiores" del derivado de CD. El
carácter hidrófobo del grupo alquilo "superior" es
particularmente destacable en este sentido.
La propiedades fisicoquímicas de los derivados de
CD de la presente invención que pueden ajustarse incluyen, entre
otras, la solubilidad en disolventes acuosos (agua) y no acuosos
(apolares), la capacidad de formar micelas y micelas mixtas con
otros compuestos, la capacidad de adsorberse en superficies
hidrófobas y la actividad superficial/tensioactividad.
La producción de composiciones ricas en derivados
de CD de mayor solubilidad (o de solubilidad aumentada) en agua
puede aumentarse:
- (1)
- aumentando la cantidad de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- empleado(s) en el método de la presente invención y/o disminuyendo la cantidad de cloruro(s) de acilo empleado en el método de la presente invención, para proporcionar derivados de CD que tienen números más elevados de grupos sulfato en comparación con el número de grupos alquilo "superiores" presentes; y/o
- (2)
- empleando cloruro de octanoílo, cloruro de decanoílo, cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo) y/o cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo) como reactivo(s) de cloruro de acilo; y/o
- (3)
- seleccionando H^{+} y/o NH_{4}^{+} como ion de carga opuesta para los grupos sulfato, bien con diálisis y/o con ultrafiltración, con lo que se obtiene el derivado de CD así producido con los grupos sulfato -OSO_{3}H y -OSO_{3}NH_{4}, respectivamente.
A la inversa, la producción de composiciones
ricas en derivados de CD de menor solubilidad (o de solubilidad
disminuida) en agua puede aumentarse:
- (1)
- disminuyendo la cantidad de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- empleado(s) en el método de la presente invención y/o aumentando la cantidad de cloruro(s) de acilo empleado en el método de la presente invención, para proporcionar derivados de CD que tienen números menores de grupos sulfato en comparación con el número de grupos alquilo "superiores" presentes; y/o
- (2)
- empleando cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo), cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo), cloruro de hexadecanoílo (cloruro de palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de estearoílo y cloruro de oleoílo), como reactivo(s) de cloruro de acilo; y/o
- (3)
- seleccionando K^{+} y/o Na^{+} como ion de carga opuesta para los grupos sulfato bien con diálisis y/o con ultrafiltración, con lo que se obtiene el derivado de CD así producido con los grupos sulfato -OSO_{3}K y -OSO_{3}Na, respectivamente.
La producción de composiciones ricas en derivados
de CD de mayor solubilidad (o de solubilidad aumentada) en
disolventes apolares (tales como cloroformo, éter
metil-ter-butílico, diclorometano,
hexadecano y aceite mineral) puede aumentarse:
- (1)
- disminuyendo la cantidad de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- empleado(s) en el método de la presente invención y/o aumentando la cantidad de cloruro(s) de acilo empleado en el método de la presente invención; y/o
- (2)
- empleando cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo), cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo) cloruro de hexadecanoílo (cloruro de palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de estearoílo y cloruro de oleoílo), como reactivo(s) de cloruro de acilo; y/o
- (3)
- seleccionando H^{+} y/o NH_{4}^{+} como ion de carga opuesta para los grupos sulfato, bien con diálisis y/o con ultrafiltración, con lo que se obtiene el derivado de CD así producido con grupos sulfato -OSO_{3}H y -OSO_{3}NH_{4}, respectivamente.
A la inversa, la producción de composiciones
ricas en derivados de CD que tienen menor solubilidad (o
solubilidad disminuida) en disolventes apolares puede
obtenerse:
- (1)
- aumentando la cantidad de complejo(s) de sulfonación SO_{3}- empleado(s) en el método de la presente invención y/o disminuyendo la cantidad de cloruro(s) de acilo empleado en el método de la presente invención; y/o
- (2)
- empleando cloruro de octanoílo, cloruro de decanoílo, cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo) y/o cloruro de tetradecanoílo (cloruro de miristoílo), como reactivo(s) de cloruro de acilo; y/o
- (3)
- empleando K^{+} y/o Na^{+} como ion de carga opuesta para los grupos sulfato, bien con diálisis y/o con ultrafiltración, con lo que se obtiene el derivado de CD así producido con los grupos sulfato -OSO_{3}K y -OSO_{3}Na, respectivamente.
La producción de composiciones ricas en derivados
de CD que tienen una mayor capacidad (o una capacidad aumentada)
para formar micelas puede obtenerse aumentando la cantidad de
complejo(s) de sulfonación SO_{3}- empleado(s) en el
método de la presente invención y aumentando la cantidad de
cloruro(s) de acilo.
A la inversa, la producción de composiciones que
son ricas en derivados de CD que tienen una menor capacidad (o una
capacidad disminuida) para formar micelas puede obtenerse
disminuyendo la cantidad de complejo(s) de sulfonación
SO_{3}- empleado en el método de la presente invención y
disminuyendo la cantidad de cloruro(s) de acilo.
La producción de composiciones que son ricas en
derivados de CD que tienen una mayor actividad
superficial/tensioactividad (o una actividad
superficial/tensioactividad aumentada) puede obtenerse aumentando la
cantidad de tanto el complejo(s) de sulfonación SO_{3}-
utilizado(s) y la cantidad de cloruro(s) de acilo
empleados en el procedimiento de la presente invención.
A la inversa, la producción de composiciones que
son ricas en derivados de CD que tienen una menor actividad
superficial/tensioactividad (o una actividad
superficial/tensioactividad disminuida) puede obtenerse disminuyendo
la cantidad de tanto el complejo(s) de sulfonación SO_{3}-
empleado(s) y la cantidad de cloruro(s) de acilo
empleados en el procedimiento de la presente invención.
La producción de composiciones ricas en derivados
de CD que tienen una mayor capacidad (o una capacidad aumentada) de
unirse a superficies hidrófobas puede obtenerse empleando cloruro
de dodecanoílo (cloruro de lauroílo), cloruro de tetradecanoílo
(cloruro de miristoílo), cloruro de hexadecanoílo (cloruro de
palmitoílo) y/o cloruro de octadecanoílo (cloruro de estearoílo y
cloruro de oleoílo) como reactivo(s) de cloruro de
acilo.
A la inversa, la producción de composiciones
ricas en derivados de CD que tienen una menor capacidad (o una
capacidad disminuida) de unirse a superficies hidrófobas puede
obtenerse empleando cloruro de octanoílo, cloruro de decanoílo,
cloruro de dodecanoílo (cloruro de lauroílo) y/o cloruro de
tetradecanoílo (cloruro de miristoílo) como reactivo(s) de
cloruro de acilo.
Utilizando los métodos de la presente invención,
pueden obtenerse composiciones de los nuevos derivados de
ciclodextrina.
Los nuevos derivados de ciclodextrina
proporcionados por el procedimiento de la presente invención pueden
ser derivados de ciclodextrinas que comprenden seis unidades de
glucopiranosa (\alpha-ciclodextrinas), siete
unidades de glucopiranosa (\beta-ciclodextrinas)
u ocho unidades de glucopiranosa
(\gamma-ciclodextrinas).
Las propiedades fisicoquímicas de los derivados
de CD de la presente invención dependen del número (y relación) de
grupos sulfato y (a) grupos alquilo "superiores" (y, en menor
medida, del número de grupos hidroxilo) presentes, así como de la
naturaleza del ion de carga opuesta de los grupos sulfato y del tipo
y la naturaleza de los grupos alquilo "superiores".
Los nuevos derivados de ciclodextrina de la
presente composición tienen tanto grupos sulfato como grupos
alquilo "superiores" (y, si se desea, grupos hidroxilo) que
están unidos covalentemente a la molécula de CD. En particular, en
los nuevos derivados de ciclodextrina de la presente invención,
dichos grupos sustituyen a varios de los grupos hidroxilo libres
presentes en la molécula convencional de CD de la que se obtuvo el
derivado. Dichas composiciones de los derivados de CD tienen
propiedades fisicoquímicas que son adecuadas para una amplia
variedad de utilizaciones.
En los derivados de CD producidos según los
métodos de la presente invención, los grupos alquilo
"superiores" son grupos lipídicos. En este sentido, los grupos
lipídicos preferidos son cadenas carbonadas alifáticas, tales como
cadenas carbonadas lineales cuya estructura general es
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}-CH_{3}, donde n es
por lo menos 6 y
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
donde m es por lo menos 6. Son preferidas las cadenas carbonadas
lineales en las que n es entre 6 y 24. Son también preferidas las
cadenas carbonadas lineales en las que n es entre 6 y 16.
En particular, los grupos alquilo
"superiores" pueden ser cadenas carbonadas lineales en las que
n es 6 (cloruro de octanoílo), 8 (cloruro de decanoílo), 10 (cloruro
de dodecanoílo, -OC(=O)-(CH_{2})_{10}CH_{3}, también
denominado en la presente memoria cloruro de lauroílo), 12 (cloruro
de tetradecanoílo, también denominado cloruro de miristoílo), 14
(cloruro de hexadecanoílo, también denominado cloruro de palmitoílo)
y 16 (cloruro de octadecanoílo, tal como cloruro de estearoílo) Es
más, se describe en la presente memoria el
-OC(=O)-(CH_{2})_{7}-CH=CH-(CH_{2})_{7}-CH_{3}
(cloruro de oleoílo).
En los derivados de CD producidos según los
métodos de la presente invención, los grupos sulfato son grupos
hidrófilos. Los grupos sulfato preferidos son los que tienen la
fórmula general -OSO_{3}R, en la que R se selecciona a partir de
(el grupo formado por) átomos y/o moléculas que forman cationes
monovalentes. Ejemplos de dichos átomos/moléculas son H, Na, K, Li
y NH_{4}. Grupos sulfato particularmente preferidos son
-OSO_{3}H y -OSO_{3}Na.
Si se desea, los nuevos derivados de
ciclodextrina pueden tener, además, grupos hidroxilo libres que
tienen la fórmula -OH. Sin embargo, hay que señalar que, si se
desea, los derivados de CD descritos en la presente memoria pueden
carecer de grupos hidroxilo.
Otros derivados de CD descritos en la presente
memoria no tienen más de N-7 de dichos grupos
alquilo "superiores", donde N es el número total de grupos
hidroxilo de la ciclodextrina de la que se obtuvo el derivado.
Otros derivados de CD descritos en la presente
memoria no tienen más de siete de dichos grupos sulfato.
Otros derivados de CD de la presente invención
tienen un total de grupos sulfato y alquilo "superiores" de
entre 4 y N-7, donde N es el número total de grupos
hidroxilo de la ciclodextrina de la que se obtuvo el derivado.
Generalmente, los nuevos derivados de
ciclodextrina se caracterizan, además, porque tienen por lo menos
uno, pero no más de trece grupos sulfato.
En el caso en que los derivados de CD descritos
en la presente memoria tengan grupos hidroxilo, puede estar
presente por lo menos uno, pero no más de N-2, de
dichos grupos hidroxilo, donde N es el número total de grupos
hidroxilo de la ciclodextrina de la que se obtuvo el derivado.
Otros derivados de CD descritos en la presente memoria no tienen
más de N-4 de dichos grupos hidroxilo, donde N es el
número total de grupos hidroxilo de la ciclodextrina de la que se
obtuvo el derivado.
En otro aspecto de la presente invención, se
proporcionan derivados de CD que tienen relaciones de grupos
sulfato a grupos alquilo "superiores" que proporcionan el
derivado de CD con propiedades fisicoquímicas que son especialmente
adecuadas (optimizadas) para un propósito o utilización
particular.
En este sentido, se han sintetizado muchos
diferentes derivados de CD de la presente invención según los
métodos de la presente invención, para proporcionar derivados de CD
que tienen propiedades fisicoquímicas específicas. Dependiendo del
perfil de la forma farmacéutica y de las propiedades fisicoquímicas
y biológicas de la molécula de fármaco con la que van a formar
complejos y a la que alojarán, diferentes derivados de CD
demuestran distinta eficacia, con posibles ventajas en ciertos
casos.
Se proporcionan derivados de CD en la presente
memoria que tienen propiedades fisicoquímicas tales como, entre
otras, solubilidad en disolventes acuosos y no acuosos, capacidad
de formar micelas, capacidad de formar micelas mixtas con otros
compuestos, capacidad de adsorberse en superficies hidrófobas y
actividad superficial/tensioactividad específica.
En particular, se proporcionan derivados de CD
que tienen mayor solubilidad en agua, en los que está aumentada la
relación de grupos sulfato presentes a grupos alquilo
"superiores" presentes. Esto puede conseguirse, por ejemplo,
cuando los grupos sulfato son -OSO_{3}H y -OSO_{3}NH_{4}, y/o
cuando los grupos alquilo "superiores" son
\hbox{-OC(=O)-(CH _{2} ) _{n} } CH_{3}, donde n
es 6-12, como se ha examinado anteriormente con
detalle.
A la inversa, pueden obtenerse derivados de CD
que tienen menor solubilidad en agua cuando se disminuye la
relación de grupos sulfato presentes a grupos alquilo
"superiores" presentes. Esto puede conseguirse, por ejemplo,
cuando los grupos sulfato son -OSO_{3}K y -OSO_{3}Na, y/o
cuando los grupos alquilo "superiores" son
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}CH_{3}, donde n es
12-18 y/o
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
donde m es por lo menos 6, como se ha examinado anteriormente con
detalle.
Para ilustrar el efecto de las relaciones se
citan los siguientes ejemplos: los derivados de CD que tienen 2
grupos sulfato y 10 grupos alquilo "superiores" son más
hidrosolubles que los derivados de CD que tienen 2 grupos sulfato y
11 o más grupos alquilo "superiores", pero son menos
hidrosolubles que los derivados de CD que tienen 2 grupos sulfato y
9 o menos grupos alquilo "superiores". De modo similar, los
derivados de CD que tienen 2 grupos sulfato y 10 grupos alquilo
"superiores" serán más hidrosolubles que los derivados de CD
que tengan 1 grupo sulfato y 10 grupos alquilo "superiores"
pero menos hidrosolubles que los derivados de CD que tengan 3
grupos sulfato y 10 grupos alquilo "superiores".
Se obtienen derivados de CD que tienen mayor
solubilidad en disolventes apolares (tales como cloroformo, éter
metil-ter-butílico, diclorometano,
hexadecano y aceite mineral) cuando se aumenta la relación de
grupos sulfato presentes a grupos alquilo "superiores"
presentes. Esto puede conseguirse, por ejemplo, cuando los grupos
sulfato son -OSO_{3}H y -OSO_{3}NH_{4} y/o cuando los grupos
alquilo "superiores" son
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}CH_{3}, donde n es
12-18 y/o
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
donde m es por lo menos 6, como se haexaminado anteriormente con
detalle.
A la inversa, se obtienen derivados de CD que
tienen una menor solubilidad en disolventes apolares cuando se
disminuye la relación de grupos sulfato presentes a grupos alquilo
"superiores" presentes. Esto puede conseguirse, por ejemplo,
cuando los grupos sulfato son -OSO_{3}K y -OSO_{3}Na y/o cuando
los grupos alquilo "superiores" son
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}CH_{3}, donde n es
6-12, como se ha examinado anteriormente con
detalle.
Se obtienen derivados de CD que tienen una mayor
capacidad para formar micelas cuando se aumenta el número de grupos
sulfato presentes y el número de grupos hidrófobos (es decir,
alquilo "superiores") presentes.
A la inversa, se obtienen derivados de CD que
tienen una menor capacidad para formar micelas cuando se disminuye
el número grupos sulfato presentes y el número de grupos hidrófobos
(es decir, grupos alquilo "superiores") presentes.
En relación con lo anterior, los derivados de CD
de la presente invención pueden formar grandes micelas mixtas con
otros compuestos. Por ejemplo, un derivado de CD con una relación
sulfato/lauroílo de 1,4 grupos sulfato a 7,7 grupos lauroílo por
cada molécula de derivado de CD forma grandes micelas mixtas con
TWEEN 80 (MERCK), que no atraviesan las membranas de
ultrafiltración, con un umbral discriminatorio tan elevado como
100.000 daltons. El tamaño de las micelas mixtas con otros
compuestos depende de la relación de los grupos hidrófilos (es
decir, sulfato) y grupos hidrófobos (es decir, grupos alquilo
"superiores"), de la hidrofobicidad de los grupos hidrófobos y
de las características fisicoquímicas de la molécula a la que se
van a asociar.
Se proporcionan derivados de CD que tienen una
mayor actividad superficial/tensioactividad cuando se aumenta el
número total de grupos sulfato presentes y/o el número total de
grupos hidrófobos (es decir, grupos alquilo "superiores")
presentes y/o cuando se aumenta el número total de grupos sulfato
presentes y grupos alquilo "superiores" presentes.
Se proporcionan derivados de CD que tienen una
menor actividad superficial/tensioactividad cuando se disminuye el
número total de grupos sulfato y/o cuando se disminuye el número
total de grupos hidrófobos (es decir, grupos alquilo
"superiores") presentes y/o cuando se disminuye el número total
de grupos sulfato presentes y grupos alquilo "superiores"
presentes.
Como ilustración de lo anterior, los derivados de
CD de la presente invención pueden unirse a superficies hidrófobas
(por ejemplo, los derivados de CD de la presente invención con una
relación (por cada derivado de CD) de grupos sulfato a grupos
lauroílo de 1,4 grupos sulfato a 7,7 grupos lauroílo por cada
molécula de derivado de CD que se une a gotitas de una emulsión de
escualeno en agua.
Se obtienen derivados de CD que tienen una mayor
capacidad de unirse a superficies hidrófobas cuando los grupos
alquilo "superiores" proporcionados por los grupos alquilo
"superiores" son -OC(=O)-(CH_{2})_{n}CH_{3}, donde
n es 12-18 y/o
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
donde m es por lo menos 6, como se ha examinado anteriormente con
detalle.
A la inversa, se obtienen derivados de CD que
tienen una menor capacidad de unirse a superficies hidrófobas
cuando los grupos alquilo "superiores" son
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}CH_{3}, donde n es
6-12, como se ha examinado anteriormente con
detalle.
Utilizando los métodos de la presente invención,
pueden obtenerse composiciones de los nuevos derivados de
ciclodextrina que pueden utilizarse como tales, sin separase de los
otros derivados de CD que se han producidos y con los que están
presentes.
Sin embargo, si se desea y/o es necesario,
algunos de los derivados de CD producidos por la utilización del
método de la presente invención pueden, después, separase y
purificarse del resto de los derivados de CD producidos, para la
utilización subsiguiente de los mismos, utilizando métodos clásicos
bien conocidos en la materia, tales como cromatografía de
intercambio iónico, cromatografía en fase inversa, cristalización a
partir de soluciones, etc.
Los derivados de CD descritos en la presente
memoria proporcionan, cuando forman complejos con una molécula (tal
como una molécula de fármaco o antígeno), una biodisponibilidad
mejorada de la molécula liberada de formulaciones sólidas y/o
semisólidas y/o líquidas. También proporcionan una estabilidad
mejorada y un período de validez mejorado. Es más, reducen los
efectos secundarios (toxicidad) de la molécula huésped que alojan.
Finalmente, hacen posible la provisión de polvos uniformes fáciles
de manejar (incluso de líquidos) y soluciones acuosas inyectables
(de fármacos escasamente solubles).
Los nuevos derivados de CD de la presente
invención pueden utilizarse para los mismo propósitos para los que
se emplean actualmente de forma convencional las CDs y otros
derivados de CD. En particular, se contempla en la presente memoria
que los derivados de CD de la presente invención puedan utilizarse
para propósitos médicos, como portadores de moléculas de fármacos y
antígenos.
En este sentido, los derivados de CD de la
presente invención pueden emplearse, utilizando protocolos y en
condiciones bien conocidas por los expertos en la materia, para
formar complejos con moléculas de fármacos y/o antígenos (que son
bien conocidos por los expertos en la materia para usos médicos)
para producir composiciones terapéuticas y/o profilácticas, tales
como vacunas y otras composiciones terapéuticas y/o profilácticas,
que pueden después utilizarse como tales para propósitos
médicos.
Un ejemplo de dicho uso médico es la utilización
de los derivados de CD (y composiciones de los mismos) en
adyuvantes. Los adyuvantes adecuados incluyen aquellos
habitualmente denominados emulsiones de aceite en agua (incluidas
las de escualeno en agua, aceite mineral en agua y aceite de soja
en agua).
Una vez descritas las realizaciones preferidas de
los derivados de CD de la presente invención y los métodos para la
producción de los mismos, se hace referencia a continuación a los
siguientes ejemplos, que sólo pretenden ser ilustrativos de la
presente memoria.
Para la síntesis de las ciclodextrinas de la
presente invención, tal como se describen en éste y en los
siguientes ejemplos, se tomaron las máximas precauciones para
evitar poner en contacto los diferentes materiales de partida con
agua.
Se eliminó el agua de muestras de 4 gramos de
\beta-CD (ACROS) por calentamiento de las
muestras de 4 gramos durante 4 horas a 120ºC.
Se eliminó el agua de una mezcla 1:1 (v/v) de
dimetilformamida anhidra (JANSSEN CHEMICA) y piridina anhidra
(JANSSEN CHEMICA), añadiendo a la misma tamices moleculares (2A, de
MERCK, Darmstadt, Alemania) e incubando la mezcla en un recipiente
cerrado durante por lo menos 48 horas a temperatura ambiente. La
mezcla anhidra de dimetilformamida/piridina se separó a
continuación de los tamices moleculares por decantación de la
mezcla anhidra en un recipiente seco.
Las muestras correspondientes de 4 gramos de la
CD seca se solubilizaron en muestras correspondientes de 50 ml de
mezcla anhidra de dimetilformamida/piridina.
Después se añadió cloruro de lauroílo (MERCK,
ALEMANIA) a las respectivas muestras de CD solubilizadas, en las
cantidades presentadas más adelante en la Tabla 1 y las mezclas de
reacción se incubaron durante seis horas a 60ºC, seguido por
incubación durante 18 horas a temperaturas entre 15 y 22ºC
(temperatura ambiente). De esta manera se obtuvieron soluciones de
L-CD.
Se añadió ácido clorosulfónico (MERCK, ALEMANIA),
en las cantidades presentadas más adelante en la Tabla 1, a las
muestras respectivas de mezcla anhidra de dimetilformamida/piridina
preparadas como se ha descrito anteriormente. Después se añadieron
estas mezclas respectivas a las respectivas soluciones de
L-CD, como se expone en la Tabla 1. Las mezclas de
reacción así obtenidas se incubaron después durante 24 horas a una
temperatura entre 15 y 22ºC (temperatura ambiente).
Tras la incubación, los disolventes se eliminaron
parcialmente de las mezclas de reacción por evaporación a baja
presión (200 milibares) durante 1-2 horas a 60ºC.
Los disolventes se eliminaron adicionalmente por diálisis a fondo,
utilizando una membrana de celulosa regenerada con un umbral
discriminatorio entre 1.000 y 10.000 daltons (SPECTRA/POR) frente a
solución salina isotónica tamponada con fosfato (PBS compuesta de,
por litro de agua: 8 g de cloruro de sodio, 0,2 g de cloruro de
potasio y 1,15 g de hidrogenofosfato disódico, que tiene un pH de
7,3) y después frente a agua ultrapura hasta que no se detectó
disolvente en el filtrado. La relación de volumen de dializado (PBS
o agua ultrapura) y el residuo utilizado en la diálisis se mantuvo a
>10:1 (v/v). El procedimiento de diálisis se realizó durante por
lo menos 10 días, sustituyendo el dializado por lo menos una vez al
día. Se obtuvieron productos secos por liofilización del residuo a
temperatura ambiente, a una presión interna de menos de 0,1 mbar y
con un dispositivo de condensación en frío a menos de -25ºC.
A continuación se determinaron las composiciones
químicas de los derivados de CD obtenidos, midiendo el contenido de
ciclodextrina, el contenido de sulfato unido, el contenido de
lípidos totales, el contenido de lípidos libres y el contenido de
lípidos unidos (que se calcula restando el contenido de lípidos
libres del contenido de lípidos totales), como se describe en
Hilgers et al., VACCINE 12, 653-660
(1994).
La composición de derivados de CD se expresó como
la media del número de grupos sulfato unidos por cada molécula de
derivados de ciclodextrina producida y la media del número grupos
lipídicos unidos por cada molécula de derivados de ciclodextrina
producida.
La composición de la media de los números de
grupos sulfato unidos y de los grupos lipídicos unidos por cada
molécula de derivados de ciclodextrina producida se resume en la
Tabla 1.
(Tabla pasa a página
siguiente)
^{1} La media de la relación de sulfato se
expresa como la media del número de grupos sulfato unidos por cada
molécula de ciclodextrina.
^{2} La media de la relación de lípidos se
expresa como la media del número de grupos lipídicos unidos por
cada molécula de ciclodextrina.
A partir de los resultados presentados en la
Tabla 1, puede calcularse la distribución precisa de los diferentes
derivados de CD de la presente invención presentes en las diversas
soluciones preparadas utilizando el método de la presente invención,
mediante la fórmula:
% de derivado de
ciclodextrina producido = P(X) \cdot P(Y) \cdot
100
en la que P(X) = \frac{e^{-(\text{media
de la relación de sulfato})}\cdot (\text{media de la relación de
sulfato})^{X}}{X!}
en la que X = número real de grupos sulfato por
cada molécula de CD y
en la que e = el valor de la base del logaritmo
neperiano (ln)
y
en la que, cuando la media de la relación de
lípidos es \leq N/2 y N es el número total de grupos hidroxilo
por cada molécula de ciclodextrina de la que se obtuvieron los
derivados,
P(Y) =
\frac{e^{-(\text{media de la relación de
lípidos})}\cdot(\text{media de la relación de
lípidos})^{Y}}{Y!}
en la que Y = número real de grupos lipídicos por
cada molécula de CD
y
en la que e = el valor de la base del logaritmo
neperiano (ln)
o, cuando la media de la relación de lípidos es
>N/2 y N es el número total de grupos hidroxilo por cada
molécula de ciclodextrina de la que se obtuvieron los derivados
P(Y) =
\frac{e^{-(\text{N-media de la relación de
lípidos})}\cdot(\text{N-media de la relación de
lípidos})^{(N-Y)}}{(N-Y)!}
en la que Y = número real de grupos lipídicos por
cada molécula de CD
y
en la que e = el valor de la base del logaritmo
neperiano (ln); y
en la que N = el número total de grupos hidroxilo
por cada molécula de ciclodextrina de la que se obtuvieron los
derivados.
De este modo, la distribución precisa de los
diferentes derivados de CD de la presente invención presentes en
las respectivas soluciones preparadas utilizando el método de la
presente invención, como se ha descrito anteriormente en este
Ejemplo, se presenta a continuación en las Tablas
2-21:
(Tabla pasa a página
siguiente)
Se preparó una composición de derivados de CD (y
se determinaron las composiciones químicas de los mismos) de la
misma manera descrita anteriormente en el Ejemplo 1, pero con las
siguientes salvedades: (1) la mezcla de dimetilformamida anhidra
/piridina anhidra fue una mezcla 4:3 (v/v) de dimetilformamida
anhidra (4 partes) y piridina anhidra (3 partes); (2) las muestras
respectivas de 280 gramos de la CD seca se solubilizaron en las
muestras respectivas de 2000 ml de la mezcla anhidra de
dimetilformamida/piridina; y (3) las cantidades de cloruro de
lauroílo y ácido clorosulfónico se cambiaron para obtener las
cantidades presentadas a continuación en la Tabla 22:
^{1} La media de la relación de sulfatos se
expresa como la media del número de grupos sulfato unidos por cada
molécula de ciclodextrina.
^{2} La media de la relación de lípidos se
expresa como la media del número de grupos lipídicos unidos por
cada molécula de ciclodextrina.
La distribución precisa de los diferentes
derivados de CD de la presente invención presentes en las
respectivas soluciones preparadas utilizando el método de la
presente invención, como se ha descrito anteriormente en este
Ejemplo, se determinó utilizando la misma fórmula, como se ha
descrito anteriormente en el Ejemplo 1, y los resultados se
presentan a continuación en las Tablas 23-25:
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Se preparó una composición de derivados de CD (y
se determinaron las composiciones químicas de los mismos) de la
misma manera descrita anteriormente en el Ejemplo 1, pero con las
siguientes salvedades: (1) se utilizó
N-metilpirrolidinona como disolvente, en lugar de
dimetilformamida; (2) la mezcla de
N-metilpirrolidinona anhidra/piridinaanhidra fue
una mezcla 5:2 (v/v) de N-metilpirrolidinona anhidra
(5 partes) y piridina anhidra (2 partes); (3) las muestras
respectivas de 280 gramos de la CD seca se solubilizaron en las
muestras respectivas de 2000 ml de la mezcla anhidra de
N-metilpirrolidinona/piridina; y (4) las cantidades
de cloruro de lauroílo y ácido clorosulfónico se cambiaron para
obtener las cantidades presentadas a continuación en la Tabla
26:
^{1} La media de la relación de sulfatos se
expresa como la media del número de grupos sulfato unidos por cada
molécula de ciclodextrina.
^{2} La media de la relación de lípidos se
expresa como la media del número de grupos lipídicos unidos por
cada molécula de ciclodextrina.
La distribución precisa de los diferentes
derivados de CD de la presente invención presentes en las
respectivas soluciones preparadas utilizando el método de la
presente invención, como se ha descrito anteriormente en este
Ejemplo, se determinó utilizando la misma fórmula descrita
anteriormente en el Ejemplo 1, y los resultados se presentan a
continuación en las Tablas 27-29:
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Se preparó una composición de derivados de CD (y
se determinaron las composiciones químicas de los mismos) de la
misma manera descrita anteriormente en el Ejemplo 1, pero con las
siguientes salvedades: (1) se utilizó
N-metilpirrolidinona como disolvente, en lugar de
dimetilformamida; (2) la mezcla de
N-metilpirrolidinona anhidra/piridina anhidra fue
una mezcla 6:1 (v/v) de N-metilpirrolidinona anhidra
(6 partes) y piridina anhidra (1 parte); (3) las muestras
respectivas de 10 gramos de la CD seca se solubilizaron en las
muestras respectivas de 35 ml de la mezcla anhidra de
N-metilpirrolidinona/piridina; y (4) la cantidades
de cloruro de lauroílo y ácido clorosulfónico se cambiaron para
obtener las cantidades presentadas a continuación en la Tabla
30:
^{1} La media de la relación de sulfatos se
expresa como la media del número de grupos sulfato unidos por cada
molécula de ciclodextrina.
^{2} La media de la relación de lípidos se
expresa como la media del número de grupos lipídicos unidos por
cada molécula de ciclodextrina.
La distribución precisa de los diferentes
derivados de CD de la presente invención presentes en las
respectivas soluciones preparadas utilizando el método de la
presente invención, como se ha descrito anteriormente en este
Ejemplo, se determinó utilizando la misma fórmula descrita
anteriormente en el Ejemplo 1, y los resultados se presentan a
continuación en las Tablas 31-32:
(Tabla pasa a página
siguiente)
Se eliminó el agua de muestras de 310 gramos de
\beta-CD (ACROS) por calentamiento de las
muestras de 310 gramos durante 4 horas a 120ºC, dando lugar a
aproximadamente 280 gramos de CD seca.
Se eliminó el agua de una mezcla 5:2 (v/v) de
N-metilpirrolidinona anhidra (5 partes) y piridina
anhidra (2 partes) añadiendo a la misma tamices moleculares (2A, de
MERCK, Darmstadt, Alemania) e incubando la mezcla en un recipiente
cerrado durante por lo menos 48 horas a temperatura ambiente. La
mezcla anhidra de N-metilpirrolidinona/piridina se
separó a continuación de los tamices moleculares por decantación de
la mezcla anhidra en un recipiente seco.
Después se solubilizaron las respectivas muestras
de 280 gramos de CD seca en las muestras respectivas de 2000 ml de
la mezcla anhidra de
N-metilpirrolidinona/piridina.
Después se añadió cloruro de lauroílo a las
muestras respectivas de CD solubilizada en las cantidades
presentadas más adelante en la Tabla 33, y las mezclas de reacción
se incubaron durante seis horas a 60ºC, seguido por incubación
durante 18 horas a temperaturas entre 15 y 22ºC (temperatura
ambiente). De este modo se obtienen las soluciones de
L-CD.
Se añadió ácido clorosulfónico, en las cantidades
presentadas más adelante en la Tabla 33, a las muestras respectivas
de la mezcla anhidra de
N-metilpirrolidinona/piridina que se preparó como se
ha descrito anteriormente. Estas mezclas respectivas se añadieron a
continuación a las respectivas soluciones de L-CD,
como se muestra asimismo en la Tabla 33. Las mezclas de reacción
así obtenidas se incubaron después durante 24 horas a temperatura
entre 15 y 22ºC (temperatura ambiente).
Tras la incubación, los disolventes se eliminaron
de las mezclas de reacción añadiendo a las mismas (por gramo de CD
en la mezcla de reacción) 5 gramos de TWEEN 80 (ICI) y 5 gramos de
agua ultrapura. Después, se añadieron dos partes (v/v) de agua
ultrapura a las mezclas respectivas, y las mezclas se ultrafiltraron
después con una membrana de ultrafiltración de celulosa regenerada,
con un umbral discriminatorio de 10 kD (kilodalton) (HOECHST) hasta
recuperar el volumen original.
El procedimiento de adición de dos partes (v/v)
de agua ultrapura al residuo recuperado, seguido por
ultrafiltración, se repitió después doce veces para asegurar que la
concentración de disolvente se encontraba dentro de los niveles
aceptables.
De esta manera, se obtuvieron soluciones acuosas
de los derivados de CD más TWEEN 80 en agua ultrapura.
Las composiciones químicas de los derivados de CD
obtenidos se determinaron a continuación como se ha descrito
anteriormente en el Ejemplo 1 y se resumen a continuación en la
Tabla 33:
^{1} La media de la relación de sulfatos se
expresa como la media del número de grupos sulfato unidos por cada
molécula de ciclodextrina.
^{2} La media de la relación de lípidos se
expresa como la media del número de grupos lipídicos unidos por
cada molécula de ciclodextrina.
La distribución precisa de los diferentes
derivados de CD de la presente invención presentes en las
respectivas soluciones preparadas utilizando el método de la
presente invención, como se ha descrito anteriormente en este
Ejemplo, se determinó utilizando la misma fórmula descrita
anteriormente en el Ejemplo 1, y los resultados se presentan a
continuación en las Tablas 34-36:
\newpage
Una muestra de 4,5 gramos de
\beta-ciclodextrina (ACROS) se solubilizó en 100
ml de una mezcla 1:1 (v/v) de dimetilformamida anhidra (JANSSEN
CHEMICA) y piridina anhidra (JANSSEN CHEMICA); después se eliminó
el agua de la solución añadiendo a la misma tamices moleculares
(2A, de MERCK, Darmstadt, Alemania) e incubando la mezcla en un
recipiente cerrado durante por lo menos 48 horas a temperatura
ambiente. Después se separó la mezcla anhidra de los tamices
moleculares por decantación de la mezcla anhidra en un recipiente
seco.
Después se añadieron 6,6 gramos de cloruro de
lauroílo (MERCK, ALEMANIA) a la muestra de CD solubilizada y las
mezclas de reacción se incubaron durante seis horas a 60ºC, seguido
por incubación durante 18 horas a temperaturas entre 15 y 22ºC
(temperatura ambiente). De esta manera, se obtuvieron soluciones de
L-CD. Después se añadieron 0,6 gramos de ácido
clorosulfónico (MERCK, ALEMANIA) a la muestra de 10 ml de la mezcla
anhidra de dimetilformamida/piridina, preparada como se ha descrito
anteriormente en el Ejemplo 1. Después se añadió esta mezcla a la
solución de L-CD. La mezcla de reacción así
obtenida se incubó a continuación durante 24 horas a una temperatura
entre 15 y 22ºC (temperatura ambiente).
Tras la incubación, se eliminaron parcialmente
los disolventes de las mezclas de reacción por evaporación a baja
presión (200 milibares) durante 1-2 horas a 60ºC.
Los disolventes se eliminaron adicionalmente por diálisis a fondo,
utilizando una membrana de celulosa regenerada, con un umbral
discriminatorio de 10.000 daltons (SPECTRA/POR) frente a solución
salina isotónica tamponada con fosfato (cuya composición se ha
descrito en detalle en el Ejemplo 1) y después frente a agua
ultrapura, hasta que no se detectó disolvente en el filtrado. La
relación de volumen de dializado (PBS o agua ultrapura) y del
residuo utilizado en la diálisis se mantuvo a >10:1 (v/v). El
procedimiento de diálisis se realizó durante por lo menos 10 días,
sustituyendo el dializado por lo menos una vez al día. Se
obtuvieron productos secos por liofilización del residuo a
temperatura ambiente, a una presión interna de menos de 0,1 mbar y
con un dispositivo de condensación en frío a menos de -25ºC.
A continuación se determinaron las composiciones
químicas de los derivados de CD obtenidos midiendo el contenido de
ciclodextrina, el contenido de sulfato unido, el contenido de
lípidos totales, el contenido de lípidos libres y el contenido de
lípidos unidos (calculado restando el contenido de lípidos libres
del contenido de lípidos totales), como se describen en Hilgers,
et al., VACCINE 12, en las páginas 653-660
(1994).
La composición de los derivados de CD se expresó
como la media del número grupos sulfato unidos por cada molécula de
derivados de ciclodextrina producida y la media del número grupos
lipídicos unidos por cada molécula de derivados de ciclodextrina
producida. En este sentido, la media calculada del número de grupos
lipídicos unidos se comprobó que era 7,35 grupos lipídicos
unidos/molécula de CD, y la media calculada del número de grupos
sulfato unidos se comprobó que era 1,4 grupos sulfato
unidos/molécula de CD.
Se preparó una solución al 1% (w/v) de derivados
de SL-CD disolviendo aproximadamente 1 gramo de los
derivados de CD obtenidos en un volumen mínimo de aproximadamente 20
ml de éter metil-ter-butílico
(MERCK), añadiendo (por cada gramo del derivado de CD añadido) 2 ml
de TWEEN 80 y evaporando el éter
metil-ter-butílico a temperatura
elevada (aproximadamente 60ºC) y baja presión (80 milibares), hasta
obtener una solución viscosa del derivado de SL-CD
en TWEEN 80.
Se añadieron lentamente 10 ml de agua por cada
gramo del derivado de SL-CD. Después, se añadieron
los volúmenes apropiados de PBS y escualeno (ALDRICH) o aceite de
soja o hexadecano (SIGMA) a las muestras respectivas. La mezcla se
emulsionó con un microfluidificador (MICROFLUIDICS Corp., USA)
hasta que no pudieron apreciarse gotas de aceite mayores que 2 ó 3
\mum con el microscopio (a 1000 aumentos). Las emulsiones, que
contenían, por ml, 10 mg de SL-CD, 20 mg de TWEEN 80
y 80 mg de escualeno, aceite de soja o hexadecano, se almacenaron
después a 4ºC hasta su utilización.
Las vacunas se prepararon mezclando un volumen de
antígeno con un volumen de adyuvante. Los antígenos se prepararon
tal como se describe en Vaccine 12, p. 653-660 y
Vaccine 12, p. 661-665 (1994). Se utilizaron dos
soluciones de diferentes antígenos: solución I, que incluía, por
ml: 10 \mug de virus de la gripe inactivado, cepa
MRC-11 (SOLVAY DUPHAR) y 1000 \mug de OVA
(SIGMA); y solución II, que incluía, por ml: 4,4 \mug/ml de virus
de la gripe inactivado, cepa A/Cerdo (SOLVAY DUPHAR), 4,0 \mug de
virus de la gripe inactivado, cepa MRC-11 (SOLVAY
DUPHAR), 2,0 \mug de virus de la gripe inactivado, cepa
X-79 (SOLVAY DUPHAR) y 10^{8} TCID_{50} de virus
de la pseudorrabia inactivado (SOLVAY DUPHAR).
Se inmunizaron ratones NMRI hembras de
8-10 semanas de edad (CHARLES RIVER, ALEMANIA), que
pesaban, cada uno, aproximadamente 20 gramos, inyectando en la
almohadilla plantar 0,025 ml de vacuna; y se midieron los títulos de
anticuerpos tres semanas después.
Los títulos de anticuerpos se expresaron como
medias geométricas (^{2}log \pm SEM). El análisis de los
títulos de anticuerpo se efectuó mediante pruebas normalizadas,
utilizando criterios para su validez, como se ha descrito
previamente en Vaccine 12, p. 653-660 (1994).
Se realizó la prueba de la t de Student para
analizar la significación estadística de los resultados y se
consideró significativa una P <0,05.
Las formulaciones de adyuvante se probaron en
ratones en dos experimentos independientes.
Los resultados de estos experimentos se resumen a
continuación en la Tabla 37:
n = número de ejemplares
SEM = media de la desviación típica
SLCD/S/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en escualeno en agua
SLCD/Aceite de soja/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en aceite de soja en agua.
Todas las emulsiones de derivado de
SL-CD/aceite/agua aumentan la respuesta humoral
contra el virus de la gripe, cepa MRC-11 y contra
OVA.
Se han analizado ejemplares de cerdos, de 8 a 10
semanas de edad, para comprobar la posible presencia de anticuerpos
contra los antígenos víricos en cuestión, y se han descartado los
ejemplares con títulos detectables de anticuerpos.
Los derivados de SL-CD de la
presente invención se sintetizaron como se ha descrito
anteriormente en el ejemplo 6.
A continuación, se obtuvo una emulsión de aceite
mineral en agua comercializada con el nombre SUVAXYN O/W EMULSION
(SOLVAY DUPHAR) y se prepararon formulaciones de derivados de
SL-CD en una emulsión de escualeno en agua, como se
ha descrito anteriormente en el Ejemplo 6.
También se prepararon vacunas que contenían las
formulaciones de adyuvante como se ha descrito anteriormente en el
Ejemplo 6.
A continuación se probó el efecto adyuvante de
las formulaciones de derivados de SL-CD en
escualeno en agua, de aceite mineral en agua, y sin adyuvante en
ejemplares de cerdos, utilizando el virus de la pseudorrabia
inactivado y el virus de la gripe inactivado, cepas
MRC-11 y A/Cerdo, como antígenos. Los animales se
inmunizaron dos veces (semana 0 y semana 3) y los títulos de
anticuerpo se midieron a las tres semanas (semana 6) tras la
segunda inyección.
Los resultados de estos experimentos se resumen a
continuación en la Tabla 38:
SEM = media de la desviación típica
SLCD/S/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en escualeno en agua.
Los títulos de anticuerpo contra PRV
(anti-PRV) aumentaron al utilizar emulsiones de
SL-derivados de CD en escualeno en agua
(SL-CD/escualeno/agua). Los títulos de anticuerpo
medidos fueron comparables a, o más elevados que, los obtenidos con
las emulsiones de aceite mineral en agua utilizadas en productos
comerciales. La respuesta de anticuerpos contra A/cerdo y contra
MRC-11 también aumentaron al utilizar formulaciones
de derivados de SL-CD en escualeno en agua
(SL-CD/S/W) y aceite mineral en agua.
Aparte del efecto adyuvante, otras propiedades
son importantes para la evaluación de una vacuna. Entre otras, una
reacción local es un aspecto importante, aceptándose asimismo, en
general, una cierta reacción en el sitio de la inyección en ciertas
especies de animales. La toxicidad local se analizó in vivo
siguiendo la hinchazón de las almohadillas plantares del ratón tras
la inyección de la vacuna, y demostró ser un método muy
sensible.
Los derivados de SL-CD de la
presente invención se sintetizaron como se ha descrito
anteriormente en el Ejemplo 6.
Se prepararon formulaciones de derivados de
SL-CD en emulsiones de aceite en agua de escualeno
en agua, de aceite de soja en agua y de hexadecano en agua, como se
ha descrito anteriormente en el Ejemplo 6.
También se prepararon vacunas que contenían las
formulaciones de adyuvante, como se ha descrito anteriormente en el
Ejemplo 6.
Se trataron grupos de seis ratones con 25 \mul
de vacuna por inyección subcutánea en la almohadilla plantar del
pie trasero izquierdo. La vacuna incluía un volumen de solución de
antígeno que contenía 10 \mug de MRC-11 y 1 mg de
ovoalbumina (OVA) por ml de PBS, y un volumen de adyuvante.
Se midió el grosor de las almohadillas plantares
un día antes y a diferentes intervalos tras la inyección,
utilizando un dispositivo semielectrónico especialmente
desarrollado para este efecto por la Universidad de Utrecht
(UTRECHT, Holanda). La precisión de este aparato es aproximadamente
0,02 mm.
La hinchazón se calculó restando el grosor de la
almohadilla antes del tratamiento del grosor de la almohadilla
después del tratamiento, y expresándose dicho grosor en unidades de
0,01 mm.
Los resultados se resumen a continuación en las
Tablas 39 y 40:
SL-CD/S/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en escualeno en agua
SLCD/Aceite de soja/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en aceite de soja en agua.
SL-CD/S/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en escualeno en agua
SLCD/Aceite de soja/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en aceite de soja en agua
SLCD/hexadecano/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en hexadecano en agua.
De las Tablas anteriores se deduce que la
reactogenicidad de las SL-CD incluidas en los
diferentes aceites fue muy débil o inexistente. Las emulsiones que
contenían SL-ciclodextrina en escualeno y
hexadecano provocaron cierta hinchazón durante uno o dos días tras
la inyección, mientras que la SL-ciclodextrina en
aceite de soja no provocó una respuesta apreciable.
La reactogenicidad, es decir, la toxicidad local
analizada en ratones, presenta efectos pronunciados dependiendo del
tipo de aceite.
Se sintetizaron derivados de
SL-CD de la presente invención como se ha descrito
anteriormente en el Ejemplo 6.
Se prepararon formulaciones de derivados de
SL-CD en emulsiones de aceite en agua de escualeno
en agua, de aceite de soja en agua y de hexadecano en agua, como se
ha descrito anteriormente en el Ejemplo 6.
La estabilidad de las emulsiones se verificó
in vitro, exponiendo las formulaciones a una temperatura
elevada durante un período de tiempo fijo. En general, las
emulsiones son menos estables a altas temperaturas y se consideró
que la prueba a elevadas temperaturas era indicativa del
comportamiento a largo plazo a menores temperaturas.
La estabilidad de las emulsiones se determinó a
37ºC. Se incubaron partes alícuotas estériles de 5 ml de emulsión
que comprendía 0,01% (w/v) de tiomersal (SIGMA) a 37ºC y se
verificaron, cada día, la formación de gotas de aceite, la aparición
de una fase oleaginosa y otras modificaciones, mediante inspección
de las emulsiones a simple vista.
Los resultados se resumen a continuación en la
Tabla 41:
SLCD/S/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en escualeno en agua
SLCD/aceite de soja/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en aceite de soja en agua
SLCD/hexadecano/W = Derivado de
SL-ciclodextrina en hexadecano en agua
+ = emulsión homogénea blanca, sin gotas de
aceite visibles a simple vista
\pm = pequeñas gotas de aceite en la fase
líquida visibles a simple vista
\pm/+ = entre \pm y +.
Los derivados de SL-CD de la
presente invención tienen una notable estabilidad cuando se
incorporan en emulsiones oleaginosas de escualeno, aceite de soja y
hexadecano, permaneciendo estables durante más de 53 días a
37ºC.
Claims (20)
1. Derivado de ciclodextrina,
caracterizado porque está sustituido con por lo menos una
cadena de hidrocarburo lineal de por lo menos ocho átomos de carbono
y por lo menos uno, pero no más de siete grupos sulfato, con la
salvedad de que el derivado de ciclodextrina no es un compuesto de
fórmula I
en la
que:
M es un catión aceptable desde el punto de vista
farmacéutico
p es 1 ó 2
q es n/2 cuando p es 2, y q es n cuando p es
1;
R se selecciona a partir del grupo formado por
alquilo inferior C_{1}-C_{12}, cicloalquilo
C_{3}-C_{12} y arilo o heteroarilo
opcionalmente sustituido con 1-3 sustituyentes
seleccionados independientemente a partir de halógeno,
alquilo inferior C_{1}-C_{12} o alcoxi
C_{1}-C_{12}; y
n es un número entero de
6-8, que representa
\alpha-ciclodextrina (n = 6),
\beta-ciclodextrina (n = 7),
\gamma-ciclodextrina
(n = 8).
(n = 8).
2. Derivado de ciclodextrina según la
reivindicación 1, en el que el número de grupos hidroxilo de la
ciclodextrina de la que se obtuvo el derivado es dieciocho,
veintiuno o veinticuatro.
3. Derivado de ciclodextrina según la
reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizado además
porque las cadenas son cadenas carbonadas lineales que tienen una
fórmula general
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}-CH_{3}, en la que
n es por lo menos 6 y/o
-OC(=O)-(CH_{2})_{m}-CH=CH-(CH_{2})_{m}-CH_{3},
en la que m es por lo menos 6.
4. Derivado de ciclodextrina según la
reivindicación 3, caracterizado además porque las cadenas
son cadenas carbonadas lineales que tienen una fórmula general
-OC(=O)-(CH_{2})_{n}-CH_{3}, en la que
n es entre 6 y 24.
5. Derivado de ciclodextrina según la
reivindicación 3, caracterizado además porque las cadenas
son cadenas carbonadas lineales que tienen la fórmula
-OC(=O)-(CH_{2})_{10}CH_{3} o
-OC(=O)-(CH_{2})_{7}-CH=CH-(CH_{2})_{7}-CH_{3}.
6. Derivado de ciclodextrina según cualquiera de
las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque
los grupos sulfato son -OSO_{3}R, en el que R es un átomo y/o una
molécula que forma cationes monovalentes.
7. Derivado de ciclodextrina según la
reivindicación 6, caracterizado además porque R es H, Na, K,
Li y/o NH_{4}.
8. Derivado de ciclodextrina según cualquiera de
las reivindicaciones anteriores, caracterizado además porque
tiene por lo menos un grupo hidroxilo libre.
9. Derivado de ciclodextrina según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado además porque está
formando un complejo con antígenos.
10. Procedimiento para la preparación de
derivados de ciclodextrina según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 9, caracterizado por las etapas de poner en contacto una
ciclodextrina tanto con un cloruro de acilo como con un complejo de
sulfonación SO_{3}-.
\newpage
11. Procedimiento según la reivindicación 10,
caracterizado, además, porque se pone en contacto la
ciclodextrina con cloruro de acilo antes de ponerla en contacto con
complejo de sulfonación SO_{3}-.
12. Procedimiento según la reivindicación 10 o la
reivindicación 11, en el que la ciclodextrina se pone en contacto
con cloruro de acilo durante aproximadamente seis horas a
aproximadamente 60ºC.
13. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 12, en el que la ciclodextrina se pone en
contacto con por lo menos un mol, pero no más de N-1
moles, de cloruro de acilo, en el que el número total combinado de
moles de cloruro de acilo y complejo de sulfonación SO_{3}- no es
superior a N, y en el que N es el número total de grupos hidroxilo
de la ciclodextrina con la que se han puesto en contacto.
14. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 13, caracterizado además porque el
cloruro de acilo es cloruro de octanoílo, cloruro de decanoílo,
cloruro de dodecanoílo, cloruro de tetradecanoílo, cloruro de
hexadecanoílo, cloruro de octadecanoílo y/o cloruro de
oleoílo).
15. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 14, caracterizado, además, porque
los complejos de sulfonación SO_{3}- son
HClSO_{3}, SO_{3}-piridina,
SO_{3}-2-metilpiridina,
SO_{3}-2,6-dimetilpiridina,
SO_{3}-dimetilformamida,
SO_{3}-trimetilamina,
SO_{3}-trietilamina,
SO_{3}-dimetilanilina,
SO_{3}-N-etilmorfolina,
SO_{3}-dietilanilina y/o
SO_{3}-dioxano.
16. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 10 a 15, caracterizado, además por la
diálisis y/o ultrafiltración de los derivados de ciclodextrina
obtenidos en presencia de cationes monovalentes.
17. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el que los cationes monovalentes incluyen por lo menos uno de los
siguientes: H^{+}, Na^{+}, K^{+}, Li^{+} o
NH_{4}^{+}.
18. Procedimiento según la reivindicación 16 o la
reivindicación 17, en el que dicha diálisis y/o ultrafiltración de
los derivados de ciclodextrina obtenidos se realiza en presencia de
un detergente no dializable.
19. Composición de vacuna que comprende un
derivado de ciclodextrina que está sustituido con por lo menos una
cadena de hidrocarburo lineal de por lo menos ocho átomos de
carbono y por lo menos un grupo sulfato.
20. Utilización de un derivado de ciclodextrina
que está sustituido con por lo menos una cadena de hidrocarburo
lineal de por lo menos ocho átomos de carbono y por lo menos un
grupo sulfato, para la preparación de una composición de un
adyuvante o de una vacuna.
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| FR2825714B1 (fr) * | 2001-06-08 | 2005-03-25 | Seppic Sa | Nouvelle utilisation de complexes d'inclusion de cyclodestrine |
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| EP2062594A1 (en) * | 2007-11-21 | 2009-05-27 | Wyeth Farma, S.A. | Bluetongue virus vaccine and immunogenic compositions, methods of use and methods of producing same |
| US8192721B2 (en) * | 2007-12-13 | 2012-06-05 | Verrow Pharmaceuticals, Inc. | Compositions useful for reducing toxicity associated with gadolinium-based contrast agents |
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| EP3461496B1 (en) | 2009-06-22 | 2023-08-23 | Wyeth LLC | Compositions and methods for preparing staphylococcus aureus serotype 5 and 8 capsular polysaccharide conjugate immunogenic compositions |
| US20110110980A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-05-12 | Wyeth Llc | Heterlogous prime-boost immunization regimen |
| EP2397484A1 (en) | 2010-06-11 | 2011-12-21 | Immunovo B.V. | Trisaccharide derivates, and their use as adjuvants |
| RU2580620C2 (ru) | 2010-08-23 | 2016-04-10 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | СТАБИЛЬНЫЕ КОМПОЗИЦИИ АНТИГЕНОВ Neisseria meningitidis rLP2086 |
| PE20140173A1 (es) | 2010-09-10 | 2014-02-20 | Wyeth Llc | Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis |
| CN101972477B (zh) * | 2010-10-21 | 2012-09-26 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 磷酸锌疫苗佐剂 |
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| CN104013955B (zh) * | 2014-06-18 | 2016-02-24 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种不含表面活性剂的水包油乳液及其用途 |
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| SG11201906519RA (en) | 2017-01-31 | 2019-08-27 | Pfizer | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| CN106928378A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-07 | 中国药科大学 | 一种十二酰基‑β‑环糊精的制备方法和用于色氨酸手性拆分的聚砜膜的制备方法 |
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Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3565887A (en) * | 1968-05-15 | 1971-02-23 | Corn Products Co | Unsaturated and long chain esters of cyclodextrin |
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| US5760015A (en) * | 1988-01-19 | 1998-06-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Cyclodextrin compounds and methods of making and use thereof |
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| KR0166088B1 (ko) * | 1990-01-23 | 1999-01-15 | . | 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도 |
| EP0518930A4 (en) * | 1990-03-02 | 1993-09-15 | Australian Commercial Research & Development Limited | Cyclodextrin compositions and methods for pharmaceutical and industrial applications |
| FR2672496B3 (fr) * | 1990-07-18 | 1993-05-28 | Vacsyn France Sa | Compositions a base de substances hydrophobes, solubilisables dans un solvant aqueux, leur procede d'obtention, et leurs utilisations notamment dans le domaine pharmaceutique. |
| US5180716A (en) * | 1990-08-01 | 1993-01-19 | The Regents Of The University Of California | Cyclodextrin complexes for neuraxial administration of drugs |
| IT1242214B (it) * | 1990-11-13 | 1994-03-03 | Emo Chiellini | Derivati polifunzionali delle ciclodestrine |
| JP2556236B2 (ja) * | 1991-08-29 | 1996-11-20 | 田辺製薬株式会社 | β−シクロデキストリン誘導体のポリ硫酸エステル及びその製法 |
| CA2085827C (en) * | 1991-12-23 | 2003-10-14 | Lucas A. T. Hilgers | Adjuvant composition containing synthetic hydrophobic lipopolysaccharide |
| WO1993017711A1 (en) * | 1992-03-11 | 1993-09-16 | Australian Commercial Research & Development Limited | New cyclodextrins and new formulated drugs |
| DE4220734A1 (de) * | 1992-06-25 | 1994-01-05 | Puetter Medice Chem Pharm | Lipophile Cyclodextrinpolymere |
| US5464827A (en) * | 1994-06-20 | 1995-11-07 | American Home Products Corporation | Esterified polyanionic cyclodextrins as smooth muscle cell proliferation inhibitors |
| BE1008978A5 (fr) * | 1994-12-27 | 1996-10-01 | Solvay | Adjuvants pour vaccins. |
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