EA012801B1 - Самобуферирующиеся композиции белков - Google Patents

Самобуферирующиеся композиции белков Download PDF

Info

Publication number
EA012801B1
EA012801B1 EA200800050A EA200800050A EA012801B1 EA 012801 B1 EA012801 B1 EA 012801B1 EA 200800050 A EA200800050 A EA 200800050A EA 200800050 A EA200800050 A EA 200800050A EA 012801 B1 EA012801 B1 EA 012801B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
protein
proteins
buffer
composition according
buffering
Prior art date
Application number
EA200800050A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200800050A1 (ru
Inventor
Ятин Р. Гокарн
Ева Крас
Ричард Луис мл. Реммель
Дэвид Н. Бремс
Сьюзан Ирен Хершенсон
Original Assignee
Эмджен Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37570999&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA012801(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Эмджен Инк. filed Critical Эмджен Инк.
Publication of EA200800050A1 publication Critical patent/EA200800050A1/ru
Publication of EA012801B1 publication Critical patent/EA012801B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Данное изобретение описывает, обеспечивает, среди прочего, препараты самобуферирующихся белков. В частности, данное изобретение обеспечивает препараты фармацевтических самобуферирующихся белков, которые подходят для ветеринарии и медицинского применения у людей. Самобуферирующиеся белковые композиции в значительной мере свободны от других буферирующих агентов, стабильно поддерживают рН в течение протяженных периодов времени, участвуя в доставке и хранении белков для ветеринарии и применения для лечения людей. Данное изобретение дополнительно обеспечивает способы разработки, производства и применения препарата. В дополнение к другим преимуществам препараты не имеют недостатков, связанных с традиционно используемыми в последних белковых препаратах буферирующими агентами для фармацевтического применения. Данное изобретение в этом и другом отношениях может быть продуктивно применено к широкому ряду белков и особенно применимо для получения и использования самобуферирующихся препаратов фармацевтических белков для ветеринарии и медицинского применения, в частности преимущественно для лечения заболеваний у людей.

Description

Ссылка на родственные заявки
Заявка на данное изобретение является частичным продолжением и испрашивает полный приоритет предварительной заявки США с серийным номером 60/690582 от 14 июня 2005 г., которая полностью включена в данный документ в виде ссылки.
Область техники
Данное изобретение касается композиции белков, особенно фармацевтических белков. В частности, оно касается самобуферирующихся композиций биофармацевтических белков и способов приготовления, производства и применения данных композиций. Также оно касается композиций фармацевтических белков, применяющихся в ветеринарии и/или в медицине и касающихся их способов.
Уровень техники
Многие аспекты процессов фармацевтического производства являются рН-чувствительными, т.е. зависимыми от значения рН. Поддержание соответствующего значения рН конечного фармацевтического продукта является критичным по отношению к его стабильности, эффективности и сроку хранения, и значение рН является важным фактором в разработке композиций для введения, которые будут как приемлемыми, так и безопасными и эффективными. Для поддержания значения рН в фармацевтических процессах используется один или более буферирующих агентов. Для фармацевтического применения доступен ряд буферирующих агентов. Буфер или буферы для данного изобретения должны быть эффективными при требуемом рН. Они должны также обеспечивать достаточную буферную емкость для сохранения требуемого значения рН в течение необходимого периода времени. Хороший буфер для фармацевтической композиции должен также удовлетворять большинству других требований:
должен быть в достаточной степени растворимым;
не должен образовывать нежелательных (вредных) комплексов с ионами металлов, быть токсичным или обладать чрезмерной проницаемостью, солюбилизироваться или абсорбироваться на мембранах или других поверхностях;
не должен взаимодействовать с другими компонентами композиции таким образом, чтобы снижалась их доступность или эффективность;
должен быть стабильным и эффективным, сохраняя значение рН в пределах условий, которым он будет подвергаться во время приготовления и хранения продукта;
не должен быть подверженным окислению или другим реакциям, происходящим в его среде, таким как те, что случаются при производстве композиции, в которой он осуществляет буферирующее действие.
Если он перенесен или включен в состав конечного продукта, буферирующий агент должен быть безопасен для введения, совместим с другими компонентами композиции в пределах срока хранения продукта и быть приемлемым для введения потребителю.
Несмотря на то что существует много буферов общего применения, только ограниченное количество подходит для биологических целей, и из них только несколько применимы для фармацевтического производства и препаратов. В результате зачастую сложно найти буфер, который не только эффективен в поддержании необходимого уровня рН, но также будет удовлетворять другим требованиям для данного фармацевтического процесса, препарата или продукта.
Задача подбора подходящего буфера для фармацевтического применения может быть особенно сложна в отношении фармацевтических белков. Конформация и активность белков критически зависят от значения рН. Белки чувствительны к ряду рН-чувствительных реакций, которые разрушительно воздействуют на их эффективность обычно намного в большей степени, чем на низкомолекулярные лекарственные вещества. Например, стоит упомянуть только несколько ярких примеров: боковая цепь амидов аспарагина и глутамина дезаминируется при низком значении рН (менее чем 4,0), при нейтральном значении и высоком значении рН (более чем 6,0). Остатки аспарагиновой кислоты стимулируют гидролиз смежных пептидных связей при низком значении рН. Стабильность и расположение дисульфидных связей в значительной степени зависят от рН, особенно в случае наличия тиолов. Растворимость, флокуляция, агрегация, осаждение и образование волокон критически зависят от значения рН. Кристаллическая структура, важная для некоторых фармацевтических композиций, также критически зависит от значения рН. рН является также важным фактором в поверхностной адсорбции многих фармацевтических пептидов и белков.
Более того, в фармацевтических композициях не могут быть использованы буферирующие агенты, катализирующие реакции, которые инактивируют/разрушают один или более других ингредиентов. Буферы для фармацевтического применения не должны иметь только буферную емкость, необходимую для сохранения правильного значения рН, но они также не должны оказывать слишком сильное буферирующее действие, чтобы их введение разрушительно влияло на физиологический уровень рН реципиента. Буферы для фармацевтических композиций также должны быть совместимы с обычно сложными способами приготовления. Например, буферы, которые сублимируются или испаряются, такие как ацетат и имидазол, обычно ненадежны для поддержания рН во время лиофилизации и в восстановленном продукте лиофилизации. Другие буферы, которые кристаллизуются из аморфной фазы белков, такой как фосфат натрия, не могут быть надежны для поддержания рН в процессах, требующих замораживания.
- 1 012801
Буферы, применяемые для поддержания рН в фармацевтических целевых продуктах, должны быть не только эффективными в поддержании рН, но и также быть безопасными и приемлемыми для введения субъекту. Например, некоторые полезные в иных отношениях буферы, такие как цитрат при низкой и высокой концентрации и ацетат при высокой концентрации, обладают нежелательной болезненностью при парентеральном введении.
Было установлено, что некоторые буферы применимы в приготовлении фармацевтических белков, такие как ацетат, сукцинат, цитрат, гистидин (имидазол), фосфат и трис. Все они имеют ограничения в применении и недостатки. Все они, будучи дополнительным ингредиентом в композиции, имеют присущие им недостатки, которые осложняют процесс производства, привносят риск разрушительного воздействия на другие ингредиенты, стабильность, срок хранения и приемлемость для потребителя.
Следовательно, существует потребность в дополнительных и улучшенных способах поддержания рН в производстве и приготовлении фармацевтических веществ и в фармацевтических композициях, особенно в производстве и приготовлении биофармацевтических белков и биофармацевтических белковых композиций.
Краткое описание изобретения
Таким образом, среди различных объектов и аспектов изобретения предложены в конкретных предпочтительных воплощениях белковые композиции, содержащие белок, которые забуферены самим белком, которые не требуют дополнительных буферирующих агентов для поддержания требуемого рН и в которых белок является в значительной степени единственным буферирующим агентом (т.е. другие ингредиенты, если таковые имеются, не являются, по существу, буферирующими агентами в композиции).
В этой связи среди различных объектов и аспектов изобретения можно выделить обеспечение в конкретных предпочтительных воплощениях самобуферирующиеся композиции белка, особенно фармацевтического белка, характеризующегося тем, что концентрация белка композиции обеспечивает требуемую буферную емкость.
Дополнительно среди различных объектов и аспектов изобретения можно выделить обеспечение в конкретных, особенно предпочтительных воплощениях самобуферирующихся композиций белка, особенно композиций фармацевтического белка, в которых общая концентрация соли составляет менее чем 150 мМ.
Дополнительно среди различных объектов и аспектов изобретения можно выделить обеспечение в конкретных, особенно предпочтительных воплощениях самобуферирующихся композиций белка, особенно композиций фармацевтического белка, которые дополнительно содержат один или более полиолов и/или один или более поверхностно-активных веществ.
Также дополнительно среди различных объектов и аспектов изобретения можно выделить обеспечение в конкретных, особенно предпочтительных воплощениях самобуферирующихся композиций белка, особенно композиций фармацевтического белка, в которых общая концентрация соли составляет менее чем 150 мМ, которые дополнительно содержат один или более эксципиентов, включая, но не ограничиваясь этим, фармацевтически приемлемые соли; осмотические агенты; поверхностно-активные вещества, полиолы, антиоксиданты; антибиотики; антимикотики; наполнители; лиопротекторы; противовспенивающие агенты; хелатирующие агенты; консерванты, красители и анальгетики.
Дополнительно среди различных объектов и аспектов изобретения можно выделить обеспечение в конкретных, особенно предпочтительных воплощениях самобуферирующихся композиций белка, особенно композиций фармацевтического белка, которые содержат в дополнение к белку один или более фармацевтически активных агентов.
Различные дополнительные аспекты и воплощения данного изобретения иллюстративно описаны в следующих параграфах. Данное изобретение описано со ссылкой на каждый из представленных пунктов как отдельно, так и/или объединенных в любой комбинации.
1. Композиция в соответствии с любыми из следующих пунктов, где композиция была допущена для фармацевтического применения национальной или международной организацией, уполномоченной законом предоставлять такое разрешение, предпочтительно Европейским агентством для оценки медицинских продуктов, Министерством здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии, Государственным управлением лекарственных средств Китая, Управлением по контролю над пищевыми продуктами, медикаментами США или связанными с ними в этой сфере инстанциями, особенно предпочтительно Управлением по контролю над пищевыми продуктами, медикаментами США или связанными с ним в этой сфере инстанциями.
2. Композиция в соответствии с любыми из предшествующего и последующих пунктов, где композиция производится в соответствии с надлежащей практикой производства, применимой для производства фармацевтических препаратов для применения человеком.
3. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, содержащая белок, где белок имеет буферную емкость на единицу объема на единицу рН по меньшей мере приблизительно 2,0, или 3,0, или 4,0, или 5,0, или 6,5, или 8,0, или 10,0, или 15,0, или 20,0, или 30,0, или 40,0, или 50,0, или 75,0, или 100, или 125, или 150, или 200, или 250, или 300, или 350, или 400, или 500 мМ в буфере ацетата натрия в очищенной воде в пределах значения рН от 4,0 до 5,0 или рН от 5,0 до 5,5, пред
- 2 012801 почтительно, как определено в соответствии со способами, описанными в примерах 1 и 2, особенно предпочтительно по меньшей мере 2,0 мМ, особенно, в частности, предпочтительно по меньшей мере 3,0 мМ, особенно предпочтительно по меньшей мере 4,0 мМ или по меньшей мере 5,0 мМ, особенно предпочтительно по меньшей мере 7,5 мМ, особенно предпочтительно по меньшей мере 10 мМ, предпочтительно по меньшей мере 20 мМ.
4. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, исключая буферную емкость белка, где буферная емкость на единицу объема на единицу рН композиции равна или менее чем та, что соответствует 1,0, или 1,5, или 2,0, или 3,0, или 4,0, или 5,0 мМ буфера ацетата натрия в очищенной воде в пределах значения рН от 4,0 до 5,0 или от 5,0 до 5,5, предпочтительно, как определено в соответствии со способами, описанными в примерах 1 и 2, особенно предпочтительно менее чем та, что соответствует 1,0 мМ, особенно, в частности, предпочтительно менее чем та, что соответствует 2,0 мМ, особенно предпочтительно менее чем та, что соответствует 2,5 мМ, особенно предпочтительно менее чем та, что соответствует 3,0 мМ, предпочтительно менее чем та, что соответствует 5,0 мМ.
5. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, содержащая белок, где в пределах ±1 единицы рН от рН композиции буферная емкость белка равна по меньшей мере приблизительно 1,00, или 1,50, или 1,63, или 2,00, или 3,00, или 4,00, или 5,00, или 6,50, или 8,00, или 10,0, или 15,0, или 20,0, или 30,0, или 40,0, или 50,0, или 75,0, или 100, или 125, или 150, или 200, или 250, или 300, или 350, или 400, или 500, или 700, или 1000 мэкв/л-рН, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 1,00, особенно предпочтительно 1,50, особенно предпочтительно 1,63, весьма предпочтительно 2,00, наиболее предпочтительно 3,00, весьма предпочтительно 5,0 особенно предпочтительно 10,0, особенно предпочтительно 20,0.
6. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, содержащая белок, где в пределах ±1 единицы рН от рН композиции, исключая буферную емкость белка, буферная емкость на единицу объема на единицу рН композиции равна или менее, чем та, что соответствует 0,5, или 1,0, или 1,5, или 2,0, или 3,0, или 4,0, или 5,0, или 6,50, или 8,00, или 10,0, или 20,0, или 25,0 мМ буфера ацетата натрия в очищенной воде в пределах значения рН от 4,0 до 5,0 или от 5,0 до 5,5, особенно предпочтительно, как определено в соответствии с примером 1 и/или 2.
7. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где в пределах ±1 единицы рН от требуемого значения рН белок обеспечивает по меньшей мере приблизительно 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99 или 99,5% буферной емкости композиции, предпочтительно по меньшей мере 75%, особенно предпочтительно по меньшей мере приблизительно 85%, особенно предпочтительно по меньшей мере приблизительно 90%, весьма предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95%, наиболее предпочтительно по меньшей мере приблизительно 99% буферной емкости композиции.
8. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где концентрация белка находится между приблизительно 20 и 400, или 20 и 300, или 20 и 250, или 20 и 200, или 20 и 150 мг/мл, предпочтительно между приблизительно 20 и 400 мг/мл, особенно предпочтительно между приблизительно 20 и 250, особенно предпочтительно между приблизительно 20 и 150 мг/мл.
9. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где уровень рН, поддерживаемый за счет буферирующего действия белка, находится между приблизительно 3,5 и 8,0, или 4,0 и 6,0, или 4,0 и 5,5, или 4,0 и 5,0, предпочтительно между приблизительно 3,5 и 8,0, особенно предпочтительно между приблизительно 4,0 и 5,5.
10. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где концентрация соли менее чем 150, или 125, или 100, или 75, или 50, или 25 мМ, предпочтительно 150 мМ, особенно предпочтительно 125 мМ, особенно предпочтительно 100 мМ, весьма предпочтительно 75 мМ, особенно предпочтительно 50 мМ, предпочтительно 25 мМ.
11. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, дополнительно содержащая одну или более фармацевтически приемлемых солей; полиолы; поверхностноактивные вещества; осмотические агенты; агенты тоничности; антиоксиданты; антибиотики; антимикотики; наполнители; лиопротекторы; противовспенивающие агенты; хелатирующие агенты; консерванты, красители и анальгетики; или дополнительные фармацевтические агенты.
12. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, содержащая один или более фармацевтически приемлемых полиолов (в количестве, которое гипотонично, изотонично или гипертонично, предпочтительно приблизительно изотонично, особенно предпочтительно изотонично), особенно предпочтительно один или более из сорбита, маннита, сахарозы, трегалозы или глицерина, особенно предпочтительно приблизительно 5% сорбита, 5% маннита, 9% сахарозы, 9% трегалозы или 2,5% глицерина, весьма предпочтительно в этой связи 5% сорбита, 5% маннита, 9% сахарозы, 9% трегалозы или 2,5% глицерина.
13. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество, предпочтительно одно или более из полисорбата 20, полисорбата 80, других эфиров жирных кислот сорбита, полиэтоксилатов и полоксамера 188, особен
- 3 012801 но предпочтительно полисорбата 20 или полисорбата 80, предпочтительно приблизительно от 0,001 до 0,1% полисорбата 20 или полисорбата 80, очень предпочтительно приблизительно от 0,002 до 0,02% полисорбата 20 или полисорбата 80, особенно от 0,002 до 0,02% полисорбата 20 или полисорбата 80.
14. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок представляет собой фармацевтический агент и композиция представляет стерильный состав, подходящий для лечения людей или животных.
15. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок представляет собой фармацевтический агент, эффективный в лечении заболевания, и его стерильную композицию, подходящую для введения субъекту для лечения данного заболевания.
16. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок не вызывает значительный негативный антигенный ответ после введения субъекту.
17. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок не вызывает значительного негативного иммунного ответа на введение субъекту.
18. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок является человеческим белком.
19. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок является гуманизированным.
20. Способ в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок представляет собой антитело, предпочтительно 1дА, Ι§Ό, 1дЕ, 1дС или 1дМ, особенно предпочтительно 1дС. весьма предпочтительно 1дС1, 1дС2, 1дС3 или 1дС4, особенно 1дС2.
21. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок включает ЕаЬ фрагмент, ЕаЬ2 фрагмент, ЕаЬ3 фрагмент, Ес фрагмент, зсЕу фрагмент, Ьщ-8сЕу(8) фрагмент, мини-тело, диатело, триатело, тетратело, Унн домен, У-ΝΛΡ домен, Ун домен, Уь домен, 1д верблюда, 1д ΝΛΕ или пептитело, или вариант, производное, или модификация любых из предшествующих.
22. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок включает Ес фрагмент или его часть, или производное либо вариант Ес фрагмента или его часть.
23. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок включает первый связывающий участок пары родственных связывающих участков, где первый участок связывает специфично второй участок.
24. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих и последующих пунктов, где белок включает (а) Ес фрагмент или его часть или производное варианта Ес фрагмента или его части и (Ь) первый связывающий участок пары родственных связывающих участков.
25. Композиция в соответствии с любыми из пп.1, 5, 7, 9, 11, 13, или 14, где белок выбирают из группы, состоящей из белков, которые специфически связываются с одним или более СЭ-белков, семейством белков НЕЕ рецепторов, молекулами клеточной адгезии, факторами роста, факторами роста нервов, факторами роста фибробластов, трансформирующих факторов роста (ТСЕ), инсулиноподобными факторами роста, остеостимулирующими факторами, инсулинами и инсулинсвязанными белками, коагуляционными и коагуляционносвязанными белками, колониестимулирующими факторами (С8Е§), другими кровяными и сывороточными белками группы антигенов крови; рецепторами, рецепторсвязанными белками, рецепторами к гормону роста, Т-клеточными рецепторами; нейроторфическими факторами, нейротрофинами, релаксинами, интерферонами, интерлейкинами, вирусными антигенами, липопротеинами, интегринами, ревматоидными факторами, иммунотоксинами, поверхностными мембранными белками, транспортными белками, хоминг-рецепторами, адрессинами, регуляторными белками и иммуноадгезинами.
26. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, где белок выбирают из группы, состоящей из белков, специфически связывающих ОРСЬ, белков, специфически связывающих миостатин, белков, специфически связывающих 1Ь-4-рецептор, белков, специфически связывающих 1Ш1-Е1, белков, специфически связывающих Апд2, белков, специфически связывающих NСЕ, белков, специфически связывающих СО22, белков, специфически связывающих 1СЕ-1-рецептор, белков, специфически связывающих В7ЕР-1, белков, специфически связывающих ΙΡΝ-гамма, белков, специфически связывающих ТАЕЬ-Ι, факторов стволовых клеток, Е11-3 лигандов и 1Ь-17 рецепторов.
27. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, где белок выбирают из группы, состоящей из белков, которые специфически связывают один или более белков из СО3, СЭ4, СЭ8, СЭ19, СП20, СП34; НЕЕ2, НЕЕ3, НЕЕ4, рецептора ЕСЕ; ЬЕА-Ι, Мо1, р150,95, УЪА-4, 1САМ-1, УСАМ, альфа ν/бета 3 интегрина; фактора роста сосудистого эндотелия (УЕСЕ); гормона роста, тиреоидстимулирующего гормона, фолликулстимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, релизинг-фактора гормона роста, паратиреоидного гормона, мюллеровой ингибирующей субстанции, человеческого макрофагального белка воспаления (М1Р-1-альфа), эритропоэтина (ЕРО), NСЕ-бета, тромбоцитарного фактора роста (РОСЕ), аЕСЕ, ЬЕСЕ, эпидермального фактора роста (ЕСЕ), ТСЕ-альфа, ТСЕбета1, ТСЕ-бета2, ТСЕ-бета3, ТСЕ-бета4, ТСЕ-бета5, 1СЕ-1, 1СЕ-11, дес(1-3)-1СЕ-1 (1СЕ-1 мозга), инсулина, А-цепи инсулина, В-цепи инсулина, проинсулина, белков, связывающих инсулиноподобный фактор роста; таких как, среди других, фактор УШ, тканевый фактор, фактор фон Виллебрандта, белка С, альфа
- 4 012801
1-антитрипсин, активатор плазминогена, такой как урокиназа и активатор тканевого плазминогена (1РА), бомбазин, тромбин, и тромбопоэтин; М-СЗЕ, СМ-С8Р, С-С8Р, альбумина, 1дЕ, Дк2/Д13 рецептора, рецептора ожирения (ОВ), нейротрофического фактора костного происхождения (ΒΌΝΕ), ΝΤ-3, ΝΤ-4, ΝΤ-5, ΝΤ-6); А-цепи релаксина, В-цепи релаксина, прорелаксина; интерферона-альфа, -бета и -гамма; 1Ь-1 - 1Ь-10; антигена оболочки вируса СПИД; кальцитонина, глюкагона, атриального натрийуретического фактора, сурфактанта легких, фактора некроза опухоли -альфа и -бета, энкефалиназы, ΡΑΝΤΕ8, мышиного гонадотропинсвязанного пептида, ДНКазы, ингибина и активина; белка А или Ό, костного морфогенетического белка (ВМР), супероксиддисмутазы, стимулятора гемолиза (ΌΑΕ).
28. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, где белок выбирают из группы, состоящей из актиммунна (интерферон-гамма-1Ь), активазы (алтеплаза), альдуразма (ларонидаза), амевива (алефацепт), авонекса (интерферон-бета-1Ь), ВепеЕ1Х (нонаког-альфа), беромун (тазонермин), беатсерон (интерферон-бета-1Ь), ВЕХХАК (тозитумомаб), те-тропина (томатропин), биоклата или ΚΕΟΌΜΒΙΝΑΤΕ (рекомбинант), СЕКЕ2МЕ (имиглуцераза), ΕΝΒΚΕΕ (этанерцепт), Ергех (эпоэтин-альфа), ЕРОСЕ^процита (эпоэтин-альфа), ЕАВКА2УМЕ (агальзидаза-бета), фастуртека/элитека ЕЕПБК (расбуриказа), ЕОКЛЕО (терипаратид), СΕNОΤКОΡIN (соматропин), С1исаСеп (глюкагон), глюкагон (глюкагон, рДНК происхождения), СОНАБ-Е (фоллитропин-альфа), КОСΕNΑΤΕ Ε8 (октоког-альфа), НЕКСЕРПУ (трастуцумаб), НυМΑΤКОΡΕ (8ОМΑΤОΤКОΡIN), НИМ1КА (адалимумаб), инсулина в растворе, INΕΕКСΕN® (интерферон-альфакон-1), ΚΙΝΗΚΗΤ® (анакинра), Кодепа1е Е8 (антигемофилический фактор), ЬЕИКГИ (ЗАКСК.АМОЗПМ рекомбинантный человеческий гранулоцитмакрофагальный колониестимулирующий фактор (гйиСМ-СЗЕ)), САМРАТН (алемтуцумаб), КIΤυXΑN® (ритуксимаб), ТОКаке (тенектеплаза), МΥ^ОΤΑКС (гемтуцумаб озогамицин), NΑΤКΕСОК (несиритид), АКАНЕЗР (дарбопоэтин-альфа), NΕυ^Α8ΤΑ (пегфилграстим), НЕИМЕСА (опрелвекин), НЕиРОСЕЫ (филграстим), МОКПиКОРГЫ СΑКΤКI^СΕ8 (соматотропин), МОУОЗЕУЕИ (эптакогальфа), NυΤКОΡIN Ар (соматропин), Опсакрат (пегаспаргаза), ОЭТАК (денилейкин дефтитокс), ОКΤн0с^ОNΕ ОКЛ (муромонаб-Со3), ОУЮКЕЕ (хориогонадотропин-альфа), РЕСА8У8 (пегинтерферональфа-2а), РКОВЕиКЕН (альдеслейкин), РиЬМОХУМЕ (дорназа-альфа), Ке1ауаке (Ретеплаза), КЕВЕΤΡΌΝ комбинированная терапия, содержащая КЕВЕТОЬ® (рибавирин) и ΙΝΤΡΌΝ® А (интерферональфа-2Ь), КЕВ1Е (интерферон-бета-1а), КЕЕАСТО (антигемофилический фактор), КЕЕЕиПАК (лепирудин), КЕМ1САЭЕ (инфликсимаб), КЕОРКО (абциксимаб) КОЕЕКОП®-А (интерферон-альфа-2а), 81МЕЕЕСТ (баасиликсимаб), 8ОМАУЕКЛ' (пегивизомант), 8УПАС18® (паливицумаб), 81етЬеп (анцестим, фактор стволовой клетки), ΤНΥКΌСΕN, INΤКОN® А (интерферон-альфа-2Ь), ΡΕС-INΤКОN® (пегинтерферон-альфа-2Ь), Х1СК1З® (активированный дротрекогин-альфа), ХОЬАГК® (омалицумаб), ХЕПАРАХ® (даклицумаб) и ХЕУАЕ-ΙΝ® (ибритумомаб тиуксетан).
29. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, где белок является АЬ-йСО22, или его фрагментом, или вариантом, производным или модификацией АЬНСЭ22 или их фрагментом; АЬ-ЫЬ4К или его фрагментом, или вариантом, производным или модификацией АЬ-ЫЬ4К или его фрагментом; АЬ-йОРСЬ или его фрагментом, или вариантом, производным или модификацией АЬ-йОРСЬ или его фрагментом, или АЬ-йВ7КР1, или его фрагментом, или вариантом, производным или модификацией АЬ-йВ7КР1 или его фрагментом.
30. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, где белок представляет собой АЬ-йСЭ22, или АЬ-й1Ь4К, или АЬ-йОРСЬ, или АЬ-йВ7КР1.
31. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, содержащая белок и растворитель, белок, имеющий буферную емкость на единицу объема на единицу рН, равную, по меньшей мере, той, что соответствует 4,0 мМ ацетата натрия в воде в пределах значения рН от 4,0 до 5,0 или рН от 5,0 до 5,5, особенно, как определено способами, описанными в примерах 1 и 2, где буферная емкость на единицу объема композиции, исключая белок, равна или менее, чем та, что соответствует 2,0 мМ раствору ацетата натрия в воде в пределах этих же значений, предпочтительно определенных таким же образом.
32. Композиция в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, содержащая белок и растворитель, где при значении рН композиции буферная емкость белка равна по меньшей мере 1,63 мэкв/л для изменения рН композиции на плюс или минус 1 единицы рН, где буферная емкость композиции, исключая белок, равна или менее чем 0,81 мэкв/л при значении рН композиции для изменения рН на плюс или минус 1 единицы рН.
33. Лиофилизат, который после восстановления обеспечивает композицию в соответствии с любыми предшествующими или последующими пунктами.
34. Набор, содержащий в одном или более контейнеров композицию или лиофилизат, в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, и инструкции по их использованию.
35. Способ получения композиции или лиофилизата в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, включающий удаление остаточного буфера с использованием противоиона.
36. Способ получения композиции или лиофилизата в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, включающий удаление остаточного буфера с использованием одного или
- 5 012801 более из следующих в присутствии противоиона: хроматографию, диализ и/или тангенциальную (вдоль потока) проточную фильтрацию.
37. Способ получения композиции или лиофилизата в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, включающий удаление остаточного буфера с использованием тангенциальной (вдоль потока) проточной фильтрации.
38. Способ получения композиции или лиофилизата в соответствии с любыми из предшествующих или последующих пунктов, включающий стадию диализа против раствора при значении рН ниже композиции, и, если необходимо, доводя рН впоследствии добавлением разбавленной кислоты или разбавленного основания.
39. Способ лечения субъекта, включающий введение субъекту в количестве и путем, эффективным для лечения, композиции в соответствии с любыми из предшествующих пунктов, включая восстановленный лиофилизат.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 отображает данные по титрованию и буферной емкости как функции концентрации для стандартных буферов ацетата натрия в пределах рН от 4,0 до 5,0. Панель А является графиком, который отображает изменение рН в процессе титрования кислотой нескольких различных концентраций стандартного буфера ацетата натрия, как описано в примере 1; рН указан на вертикальной оси. Количество кислоты, добавляемой к каждому раствору, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах НС1, добавляемых на 1 мл раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации ацетата отображены во вкладке. Панель В является графиком, который отображает буферную емкость ацетатных буферов в пределах кислых значений рН, как определено из данных по титрованию, отображенных на панели А, как описано в примере 1. Буферная емкость показана на вертикальной оси в виде микроэквивалентов кислоты на 1 мл буферного раствора на единицу изменения рН (мкэкв/мл-рН).
Концентрация ацетата показана на горизонтальной оси (в мМ).
Фиг. 2 отображает данные по титрованию и буферной емкости как функции концентрации для стандартных буферов ацетата натрия в пределах рН от 4,0 до 5,0. Панель А является графиком, который отображает изменение рН в процессе титрования основанием нескольких различных концентраций стандартного буфера ацетата натрия, как описано в примере 2; рН указано на вертикальной оси. Количество основания, добавляемого к каждому раствору, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах №1ОН. добавляемых на 1 мл раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации ацетата отображены во вкладке. Панель В является графиком, который отображает буферную емкость ацетатных буферов в пределах основных значений рН, как определено из данных по титрованию, отображенных на панели А, как описано в примере 2. Буферная емкость показана на вертикальной оси в виде микроэквивалентов основания на 1 мл буферного раствора на единицу изменения рН (мкэкв/мл-рН). Концентрация ацетата показана на горизонтальной оси (в мМ).
Фиг. 3 отображает измерение концентрации ацетата в стандартных ацетатных буферах, как описано в примере 3. График демонстрирует стандартную кривую для измерений с областью пика на вертикальной оси и концентрацией ацетата, отображенной на горизонтальной оси. Номинальные и измеренные количества ацетата в растворах, используемых для эмпирического измерения буферной емкости, приведены в таблице ниже графика.
Фиг. 4 является графиком, который отображает изменение рН в процессе титрования кислотой нескольких различных концентраций АЬ-йОРСЬ в пределах значений рН от 4,0 до 5,0, как описано в примере 4; рН указано на вертикальной оси. Количество кислоты, добавляемой к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах НС1, добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации АЬ-йОРСЬ отображены во вкладке.
Фиг. 5 является графиком, который отображает изменение рН в процессе титрования основанием нескольких различных концентраций АЬ-йОРСЬ в пределах значений рН от 5,0 до 6,0, как описано в примере 5; рН указано на вертикальной оси. Количество основания, добавляемого к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах ЫаОН, добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации АЬ-йОРСЬ отображены во вкладке.
Фиг. 6 отображает остаточные количества ацетата в растворах АЬ-йОРСЬ, используемых для определения буферной емкости. График демонстрирует стандартную кривую, используемую для измерений ацетата, как описано в примере 6. Номинальные и экспериментальные концентрации ацетата в растворах приведены в таблице ниже графика.
Фиг. 7 является графиком, который отображает буферную емкость АЬ-йОРСЬ плюс или минус остаточный ацетат в интервале рН от 4,0 до 5,0. Данные были получены, как описано в примере 7. Верхняя линия демонстрирует буферную емкость АЬ-йОРСЬ, приведенную для остаточного ацетата. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах кислоты на 1 мл раствора АЬ-йОРСЬ на еди
- 6 012801 ницу рН (мкэкв/мл-рН). Горизонтальная ось демонстрирует концентрацию АЬ-ЬОРСЬ (в мг/мл). Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 1, показаны как горизонтальные линии. Концентрации буферов отображены выше линий.
Фиг. 8 является графиком, который отображает буферную емкость АЬ-ЮРСЬ плюс или минус остаточный ацетат в основном интервале рН от 5,0 до 6,0. Данные были получены, как описано в примере 8. Верхняя линия демонстрирует буферную емкость ЛЬ-ЮРСЬ с остаточным ацетатом. Нижняя линия демонстрирует буферную емкость ЛЬ-ЮРСЬ, приведенную для остаточного ацетата. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах основания на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН). Горизонтальная ось демонстрирует концентрацию АЬ-ЮРСЬ (в мг/мл). Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 2, показаны как горизонтальные линии. Концентрации ацетата отображены выше каждой линии.
Фиг. 9 отображает, на паре диаграмм, рН и АЬ-ЮРСЬ стабильность в самобуферирующихся и обычных буферируемых композициях. Панель А отображает стабильность самобуферирующегося АЬ-ЮРСЬ, АЬ-ЮРСЬ. приготовленного в ацетатном буфере, и АЬ-ЮРСЬ. приготовленного в глутамате, как функцию времени хранения при 4°С в течение периода времени 6 месяцев. Вертикальная ось демонстрирует стабильность АЬ-ЮРСЬ в виде процентного содержания АЬ-ЮРСЬ мономера, измеренного с помощью 8Е-ВЭЖХ. Время хранения отображено на горизонтальной оси. Панель В отображает рН этих же трех композиций, измеренное в течение этого же периода времени. Определения стабильности белка и измерения рН описаны в примере 9.
Фиг. 10 отображает кривые титрования и буферные емкости для нескольких концентраций самобуферирующихся композиций АЬ-11В7ИР1 в пределах значений рН от 4,0 до 5,0. Панель А демонстрирует данные по титрованию; рН обозначен на вертикальной оси. Количество кислоты, добавляемой к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах НС1, добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации АЬ-11В7РР1 отображены во вкладке. Панель В отображает буферные емкости композиций АЬ-11В7РР1. Верхняя линия показывает буферные емкости для композиций, включающих вклад остаточного ацетата. Нижняя линия показывает буферные емкости для композиций после вычитания вклада остаточного ацетата на основе измерений 8Е-НРЬС, как описано в примере 3. Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для двух наборов данных. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах кислоты на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН). Концентрация АЪ-ЬВ7КР1 показана на горизонтальной оси в мг/мл. Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 1, показаны как пунктирные горизонтальные линии. Концентрации ацетатного буфера отображены ниже каждой линии. Результаты были получены, как описано в примере 10.
Фиг. 11 отображает кривые титрования и буферные емкости для нескольких концентраций самобуферирующихся композиций АЪ-йВ7ΚР1 в пределах значений рН от 5,0 до 6,0. Панели А демонстрирует данные титрования. рН обозначен на вертикальной оси. Количество кислоты, добавляемой к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах ЫаОН, добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации АЪ-йВ7ΚР1 отображены во вкладке. Панель В отображает буферные емкости композиций АЬ-ЬВ7КР1. Верхняя линия показывает буферные емкости для композиций, содержащих остаточный ацетат. Нижняя линия показывает буферные емкости для композиций, доведенных для исключения вклада остаточного ацетата. Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для двух наборов данных. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах основания на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН). Концентрация АЪ-йВ7ΚР1 показана на горизонтальной оси (в мг/мл). Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 2, показаны как пунктирные горизонтальные линии. Концентрации ацетатного буфера отображены ниже каждой линии. Результаты были получены, как описано в примере 11.
Фиг. 12 отображает стабильность АЬ-11В7К.Р1 в самобуферирующихся и обычно буферируемых композициях при 4 и 29°С. Панель А отображает стабильность самобуферирующегося АЪ-11В7ΒР1. АЪ-йВ7ΚР1, приготовленного в ацетатном буфере, и АЪ-йВ7ΚР1, приготовленного в глутамате, как функцию времени хранения при 4°С в течение периода времени 6 месяцев. Вертикальная ось демонстрирует АЪ-11В7ΒР1 мономер в образцах, оцененных с помощью 8Е-ВЭЖХ. Время отображено на горизонтальной оси. Панели В отображает стабильность этих же трех композиций как функцию хранения при 29°С в течение этого же периода времени. Оси в панели В являются такими же, как в панели А. Определения стабильности белка с помощью НРЬС-8Е описаны в примере 12.
Фиг. 13 отображает рН стабильность самобуферирующихся композиций АЬ-ЬВ7КР1 при 4 и 29°С. Вертикальная ось отображает рН. Время, в неделях, показано на горизонтальной оси. Температуры наборов данных показаны на вкладке. Данные были получены, как описано в примере 13.
Фиг. 14 отображает буферную емкость самобуферирующихся композиций АЬ-ЮО22 как функцию концентрации АЬ-ЬСО22 в пределах значений рН от 4,0 до 6,0. Панель А отображает буферные емкости
- 7 012801 самобуферирующихся композиций ЛЬ-11С.П22 как функцию концентрации ЛЬ-11С.П22 в пределах значений рН от 4,0 до 5,0. Панель В отображает буферные емкости самобуферирующихся композиций ЛЬ-11С.П22 как функцию концентрации в пределах значений рН от 5,0 до 6,0. На обеих панелях вертикальная ось отображает буферную емкость в микроэквивалентах основания на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН) и горизонтальная ось отображает концентрации ЛЬ-11С.П22 (в мг/мл). Для сравнения, буферная емкость 10 мМ ацетата натрия, как описано в примере 1, показана в обеих панелях пунктирной горизонтальной линией. Результаты, показанные на фигуре, были получены и описаны в примере 14.
Фиг. 15 отображает кривые титрования и буферные емкости для нескольких концентраций самобуферирующихся композиций ЛЬ-ЫЬ4К. в пределах значений рН от 4,0 до 5,0. Панель А демонстрирует данные по титрованию; рН обозначен на вертикальной оси. Количество кислоты, добавляемой к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах НС1, добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации ЛЬ-ЫЬ4К. отображены во вкладке. Панель В отображает буферные емкости композиций ЛЬ-ЫЬ4К. как функцию концентрации. Линейная линия тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображена для данного набора данных. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах основания на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН). Концентрация ЛЬ-ЫЬ4К. показана на горизонтальной оси (в мг/мл). Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 1, показаны как пунктирные горизонтальные линии. Концентрации ацетатного буфера отображены выше каждой линии. Результаты были получены, как описано в примере 15.
Фиг. 16 отображает кривые титрования и буферные емкости для нескольких концентраций самобуферирующихся композиций ЛЬ-ЫЬ4К. в пределах значений рН от 5,0 до 6,0. Панель А демонстрирует данные по титрованию; рН обозначен на вертикальной оси. Количество основания, добавляемого к растворам, показано на горизонтальной оси в микроэквивалентах №1ОН. добавляемых на 1 мл буферного раствора (мкэкв/мл). Линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображены для каждого набора данных. Концентрации ЛЬ-ЫЬ4К. отображены во вкладке. Панель В отображает буферные емкости ЛЬ-ЫЬ4К. как функцию концентрации. Линейная линия тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, отображена для данного набора данных. Вертикальная ось показывает буферную емкость в микроэквивалентах основания на 1 мл буферного раствора на единицу рН (мкэкв/мл-рН). Концентрация ЛЬ-ЫЬ4К. показана на горизонтальной оси (в мг/мл). Буферные емкости различных концентраций стандартных ацетатных буферов, как описано в примере 2, показаны как пунктирные горизонтальные линии. Концентрации ацетатного буфера отображены выше каждой линии. Результаты были получены, как описано в примере 16.
Фиг. 17 отображает ЛЬ-ЫЬ4К. и рН стабильность в ацетатно-буферируемых и самобуферирующихся композициях ЛЬ-ЫЬ4К. при 37°С как функцию времени. Панель А является гистиограммой, демонстрирующей стабильность ЛЬ-ЫЬ4К. в течение четырех недель при 37°С. Вертикальная ось демонстрирует стабильность (в процентах) мономерного ЛЬ-ЫЬ4В, как определено с помощью БЕ-ВЭЖХ. Горизонтальные оси демонстрируют время хранения (в неделях). Вставка отражает данные для ацетатных и самобуферирующихся композиций. Панель В отображает рН стабильность этих же композиций для этих же условий и периодов времени. Данные для ацетатных и самобуферирующихся композиций представлены во вкладке. Данные были получены, как описано в примере 17.
Глоссарий.
Значения, приписываемые различным терминам и выражениям (фразам), используемым в данном документе, иллюстративно объяснены ниже.
Используемое в данном документе единственное число означает по меньшей мере один; один или более чем один.
Примерно, если иначе явно не определено в данном документе, обозначает 20%. Например, примерно 100% здесь подразумевает от 80 до 120%, примерно 5% подразумевает от 4 до 6%, примерно 0,3% подразумевает от 0,24 до 0,36% и примерно 60% подразумевает от 48 до 72% (но не от 40 до 80%).
Термин агонист(ы) подразумевает в данном документе молекулу, отличную от соответствующего стимулирующего лиганда, но имеющую тот же стимулирующий эффект, например (несмотря на то, что агонисты действуют и по другим механизмам), для гормона, который стимулирует активность за счет связывания с соответствующим рецептором к гормону и стимулирует его активность.
Термин антагонист(ы) подразумевает в данном документе молекулу, отличную от соответствующего стимулирующего лиганда, но имеющую противоположный эффект. Например (несмотря на то, что антагонисты действуют и по другим механизмам), один тип антагониста гормона, стимулирующего активность за счет связывания с соответствующим рецептором гормона, является химическим веществом, отличным от гормона, и связывает рецептор гормона, но не стимулирует активность, вызываемую связыванием с гормоном, и за счет этого действия ингибирует эффекторную активность гормона.
Термин антитело(а) используется в данном документе в соответствии с его обычным значением в области биохимии и биотехнологии.
- 8 012801
Среди антител в пределах значения данного термина в данном документе имеются те, что выделены из биологических источников, включая моноклональные и поликлональные антитела, антитела, полученные с помощью технологий рекомбинантных ДНК (также называемые в данном документе рекомбинантными антителами), включая те, что получены способами, включающими активирование эндогенного гена, и те, что включают экспрессию экзогенной экспрессионной конструкции, включая антитела, полученные в клеточной культуре, и те, что получены в трансгенных растениях и животных, и антитела, полученные способами, включающими химический синтез, включая пептидный синтез и полусинтез. Также в пределы объема данного термина, используемого в данном документе, исключая случаи, когда явно указано иначе, включены химерные антитела и, среди других, гибридные антитела.
Прототипным антителом является тетрамерный гликопротеин, состоящий из двух идентичных димеров легкая цепь-тяжелая цепь, связанных между собой дисульфидными связями. Существует 2 типа легких цепей у позвоночных: каппа и лямбда. Каждая легкая цепь состоит из постоянного участка и вариабельного участка. Две легкие цепи отличаются последовательностями постоянного участка. Существует пять типов тяжелых цепей позвоночных: альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка и трех постоянных участков. Пять типов тяжелых цепей определяют пять классов антител позвоночных (изотипы): 1дА, 1дО, 1дЕ, 1дС и 1дМ. Каждый изотип образован, соответственно, (а) двумя альфа, дельта, эпсилон, гамма или мю тяжелыми цепями и (Ь) двумя каппа или двумя лямбда легкими цепями. Тяжелые цепи в каждом классе ассоциированы с обоими типами легких цепей; но две легкие цепи в данной молекуле, обе, являются каппа или лямбда. Ι§Ό, 1дЕ и 1дС в основном существуют как свободные гетеротетрамерные гликопротеины. 1дА и 1дМ в основном встречаются в комплексах, содержащих несколько гетеротетрамеров 1дА или несколько 1дМ, связанных с полипептидом цепи I. Некоторые изотипы позвоночных классифицируются на подклассы, отличающиеся один от другого различиями в последовательностях постоянного участка. Существует четыре человеческих подкласса 1дС. 1д61, 1д62, 1дС3 и 1дС4 и два подкласса 1дА, 1дА1 и 1дА2, например. Все из данных и других, неспецифично описанных выше, включены в значение термина антитело(а) в данном документе.
Термин антитело(а) дополнительно включает варианты аминокислотной последовательности любых из предшествовавших, как описано далее где-либо в данном документе.
Термин производное от антитела в данном документе подразумевает любой белок, полученный из антитела, и любой белок, имеющий строение как у антитела. Данный термин включает в своем значении белки, получаемые с использованием всего антитела или его частей, те, что содержат все или часть антитела, и те, что созданы полностью или частично на основе всего или части антитела. Производные от антитела белки включают, но не ограничиваясь ими, фрагменты Ес, ЕаЬ и ЕаЬ2 и содержащие их же белки, фрагменты УН домена и У|. домена и содержащие их же белки, другие белки, которые содержат вариабельный и/или постоянный участок антитела, полностью или частично, 8сЕу(§) интрабоди (интратела), максибоди (макситела), мини-боди (мини-тела), диабоди (дитела), варианты аминокислотных последовательностей предшествующих, и ряд других таких молекул, включая, но не ограничиваясь другими, описанными где-либо в данном документе.
Термин связанный с антителом используемый в данном документе, подразумевает любой белок или миметик, похожий по структуре, функции или строению на антитело, или любую часть антитела. Среди белков, связанных с антителом, присутствуют производные от антитела белки, как описано выше. Следует отметить, что термины производное от антитела и связанный с антителом в значительной степени перекрываются; оба термина применимы ко многим таким белкам. Примерами связанных с антителом белков без внесения ограничения в этом отношении являются рербЬоб1е§ апб тесербЬоб1е8, другие примеры связанных с антителом белков, описанных где-либо в данном документе.
Термин полипептиды антител, используемый в данном документе, за исключением случаев, когда иначе определено, подразумевает полипептид, который является частью антитела, такой как, например, легкая цепь полипептида, тяжелая цепь полипептида и I цепь полипептида, включая среди других фрагменты, производные и их варианты, и связанные с ними полипептиды.
Термин приблизительно, если иначе не определено, подразумевает то же, что и «примерно».
Термин связывающие участки подразумевает часть молекулы или комплекса молекул, которые специфически связываются с частью другой молекулы или комплекса молекул. Связывающий участок может быть таким же или отличным от части молекулы или комплекса молекул, с которыми он связан. Связывающий участок может быть молекулой в целом или также комплексом молекул.
Термин связывается специфически используется в данном документе в соответствии с его обычным значением в данной области и обозначает, если иначе не определено, что связь сильнее с конкретными участками, чем, в общем, с другими участками, что она сильнее, чем неспецифическое связывание, которое может случиться с широким рядом участков, и что связывание является селективным для конкретных участков и не является столь же сильным для других. В экстремальном случае специфического связывания очень сильное связывание наблюдается с единственным типом участка, и не существует неспецифического связывания с любым другим участком.
Термин совместное введение подразумевает введение двух или более агентов в связи друг с другом, включая одновременное и/или последовательное введение.
- 9 012801
Термин родственный(е) в данном документе подразумевает комплементарные, подходящие друг другу, соответствующие, как, например, два фрагмента рυζζ1е (картинки-загадки), подходящие один к другому как цилиндрический механизм замка и ключа, открывающего его, субстрат-связывающего сайта фермента и субстрат фермента, и мишень, и мишень-связывающий белок, который с ней специфически связывается.
Термин родственные связывающие участки в данном документе подразумевает связывающиеся участки, которые специфически связываются один с другим. Обычно, но не всегда, этот термин подразумевает пару связывающихся участков, которые связываются специфически один с другим. Участки, ответственные за высокоселективное связывание специфического лиганда и рецептора лиганда, обеспечивают наглядный пример родственных связывающихся участков. Другой пример обеспечен участком, связывающим антиген и антитело.
Термин композиция подразумевает любую композицию, содержащую один или более составнляющих компонентов, например состав.
Термин состоящий из является синонимом термина содержащий (см. ниже).
Термин содержащий подразумевает включающий, без дополнительного ограничения, лимитирования или исключения того, что еще может или не может быть включено. Например, композиция, содержащая х и у, подразумевает любую композицию, которая содержит х и у, и не имеет значение, что еще она содержит. Подобным образом, способ, включающий х, является любым способом, в котором используется х, не имеет значения, что еще включено в этот способ.
Термин концентрация используется в данном документе с его хорошо известным значением в данной области для обозначения количества вещества в данном количестве смеси, содержащей вещество, обычно выраженном как соотношение. Например, концентрация раствора, например белка в растворе, может быть выражена многими способами, например (но не ограничиваясь этим):
(A) процент по массе (ί) = масса растворенного вещества на 100 единиц объема растворителя;
(B) процент по массе (ίί) = масса растворенного вещества на 100 единиц всей массы;
(C) процент по массе (ίίί) = масса растворенного вещества на 100 единиц массы растворителя;
(Ό) процент по массе = масса растворенного вещества на 100 массовых единиц раствора;
(Е) мольная концентрация = моли растворенного вещества на общее количество молей всех компонентов;
(Е) молярность = моли растворенного вещества на 1 л раствора (а именно, растворенное вещество плюс растворитель);
(О) моляльность = моли растворенного вещества на 1 кг растворителя и (Н) объемная моляльность = моли растворенного вещества на 1 л растворителя.
Термин контрольные участки используется в данном документе в соответствии с его хорошо известным значением в данной области и, исключая те случаи, когда определено иначе, относится к участкам в ДНК или белках, которые ответственны за контролирование одной или более функций или активностей белка. Например, участок, контролирующий экспрессию по сравнению с контролем генной экспрессии, подразумевает участки в ДНК, которые необходимы для правильной транскрипции и которые участвуют в регулировании, во время транскрипции того, насколько она эффективно идет, когда она остановится и т. п.
Термин бе ηονο используется в данном документе в соответствии с его хорошо известным значением в данной области для обозначения чего-то, что сделано из нового. Например, бе ηονο аминокислотная последовательность является той, что не является производным обычно встречающейся аминокислотной последовательности, хотя, такая бе ηονο последовательность может иметь сходство с естественно встречающейся последовательностью. Аминокислотные последовательности бе ηονο могут быть получены, например, созданием а ртюп, комбинаторными способами, селекционными способами. Они могут быть получены, например, с помощью химического синтеза, с помощью полусинтеза и рядом технологий рекомбинантных ДНК, каждая из которых хорошо известна специалистам в данной области.
Термин негативный, вредный подразумевает, при использовании в данном документе, вредоносные. Для иллюстрации, вредоносные процессы включают, например, вредные эффекты заболеваний и негативные побочные эффекты лечения.
Термин производное(ые) используется в данном документе для обозначения происходящих из, в веществе, форме или строении, такой как, например, полипептид, который имеет в своей основе, но отличается от полипептида сравнения, например, изменениями в его аминокислотной последовательности, за счет связи с другим полипептидом или за счет ковалентной модификации.
Термин заболевание(я) - это патология, состояние, которое вредно влияет на здоровье субъекта.
Термин нарушение(я) - состояние, которое негативно, вредоносно воздействует на здоровье.
Термин дисфункция, используемый в данном документе, подразумевает нарушение, болезнь или вредоносный эффект в ином случае нормального процесса.
Термин эффективное количество в основном подразумевает количество, которое обеспечивает желаемый местный или системный эффект. Например, эффективное количество является количеством, достаточным для стимуляции полезного или желаемого клинического результата. Эффективное количе
- 10 012801 ство может быть обеспечено сразу и целиком в однократном введении и частями, которые обеспечивают эффективное количество в нескольких введениях. Точное определение того, что может рассматриваться как эффективное количество, может быть основано на факторах, индивидуальных для каждого субъекта, включая их размер, возраст, повреждение и/или заболевание, которое подвергается лечению, количество времени, прошедшего со времени возникновения повреждения или возникновения заболевания. Квалифицированный специалист в данной области способен определить эффективное количество для данного объекта, основываясь на этих расчетах, которые обычны в данной сфере. Используемый здесь термин эффективная доза подразумевает то же, что и эффективное количество.
Термин эффективный путь в основном подразумевает путь, который обеспечивает доставку агента в желаемый отдел, систему или место. Например, эффективным путем является тот, посредством которого агент может быть введен для обеспечения в желаемом месте действия количества агента, достаточного для стимуляции положительного или желаемого клинического результата.
Термин эндогенный (например, эндогенный ген) используется здесь по отношению, например, к генам и другим аспектам ДНК, таким как контролирующие участки, которые обычно присутствуют в геноме и организме, если не определено иначе.
Термин экзогенный (например, экзогенный ген), если не определено иначе, используется здесь в основном для обозначения, например, ДНК внешнего источника, например как ДНК, введенная в клетку и инкорпорированная в ее геном.
Термин РВ8 подразумевает эмбриональную телячью сыворотку.
Термин состав(ы) подразумевает комбинацию по меньшей мере одного активного ингредиента с одним или более другими ингредиентами для одного или более конкретных применений, таких как хранение, дальнейшее приготовление, продажа и/или введение субъекту, таких как, например, введение субъекту специфического агента в специфическом количестве за счет специфического пути для лечения конкретного заболевания.
Термин фрагмент(ы) в данном документе подразумевает часть большего вещества, например часть белка; например полипептид, состоящий из последовательности, меньшей, чем полная аминокислотная последовательность большего полипептида.
Используемый здесь термин включает фрагменты, образованные терминальной делецией, и фрагменты образованные внутренней делецией, включая те, в которых две или более непоследовательных частей полипептида соединены вместе для образования меньшего полипептида, который является фрагментом исходного.
Гибридный белок(и) в данном документе подразумевает белок, образованный слиянием всех или части двух полипептидов, которые могут быть либо одинаковыми, либо отличными. Обычные гибридные белки получают с помощью технологий рекомбинантных ДНК, сшивая конец к концу нуклеотиды, кодирующие два (или более) полипептида.
Генно-инженерный в данном документе подразумевает получаемый с использованием спланированного процесса генетической модификации, например с помощью технологии рекомбинантной ДНК, классических методов генетической манипуляции, химических способов, комбинации всех трех или других способов.
Термин «гомолог(и)» подразумевает в данном документе наличие гомологии с другим веществом, например белок, который является гомологом другого белка. Гомологичный - значит, сходный по структуре и функции.
Термин ионизация подразумевает в данном документе изменение суммарного заряда на молекуле по меньшей мере на 1, включая потерю или приобретение заряда, например ионизация уксусной кислоты в растворе с низким значением рН, от НОАс до ОАс- и Н+.
Коэффициент к в данном документе обозначает коэффициент равновесия в соответствии с его стандартным значением в химии.
Обозначение ка в данном документе подразумевает константу диссоциации, в частности водорода в молекуле, в соответствии с его стандартным значением в химии, как, например, константа диссоциации кислого водорода уксусной кислоты.
Обозначение кд в данном документе подразумевает константу диссоциации пары химических веществ (или участков) в соответствии с его стандартным значением в химии.
Термин набор подразумевает совокупность предметов, используемых совместно для заданной цели или целей.
Термин лиганд(ы) в данном документе подразумевает молекулу, которая селективно и стехиометрически связывается с одним или более конкретных сайтов на одной или более молекулах. Связывание обычно нековалентно, но может быть также ковалентным. Очень небольшое количество примеров, среди многих других, представлены (а) антигенами, которые обычно связываются нековалентно со связывающими сайтами родственных антител; (Ь) гормонами, которые обычно связываются с рецепторами к гормону, нековалентно; (с) лектинами, которые связывают специфические сахара, нековалентно; (д) биотинами, которые связываются с множеством сайтов на авидине и других авидиноподобных белках, нековалентно; (е) антагонистами гормона, который связывается с рецепторами к гормону и ингибирует их ак
- 11 012801 тивность и/или соответствующего гормона; и (ί) агонистами гормона, которые сходным образом связываются с рецепторами к гормону, но стимулирует их активность.
Термин лигандсвязывающий участок(и) в данном документе подразумевает молекулу, которая связывается с лигандом, обычно частью большей молекулы, которая связывает лиганд или молекулу, являющуюся его производным.
Термин лигандсвязывающий белок(и) в данном документе подразумевает белок, который связывается с лигандом.
Термин участок(и) лиганда в данном документе подразумевает молекулу, которая связывается с лигандсвязывающей молекулой в основном таким же образом, как с соответствующим лигандом. Участком лиганда может быть целый лиганд или его часть, полученная из лиганда или синтезированная бе ηονο. Обычно, однако, участок лиганда относится более или менее исключительно к его части, которая связывается с соответствующими лигандсвязывающими молекулами. Участок лиганда не должен содержать, и данный термин в основном не подразумевает, структурные характеристики, отличные от тех, что необходимы для связывания с лигандом.
Термин мэкв в данном документе подразумевает миллиэквивалент(ы).
Термин мкэкв в данном документе подразумевает микроэквивалент(ы).
Термин миметик(и) в данном документе подразумевает химическое вещество со структурными или функциональными характеристиками другого, в основном не связанного с ним, химического вещества. Например, один тип миметика гормона представляет органическая молекула непептидной природы, которая связывается с соответствующим рецептором таким же образом, как с соответствующим гормоном.
Термин мМ подразумевает миллимолярный; 10-3 моль/л.
Термины модифицированные белки, модифицированные полипептиды или модифицированные фрагменты в данном документе подразумевают белок или полипептид либо фрагмент белка или полипептида, содержащий химический участок, структуру, отличную от той, что имеется у 20 встречающихся в природе аминокислот, которые формируют природно-встречающиеся белки. Модификации наиболее часто ковалентно связаны, но могут быть также связаны нековалентно с белком или другим полипептидом, например фрагментом белка.
Термин участок(и) в данном документе подразумевает молекулу, которая имеет определенную структуру и/или функцию без внешних компонентов. Например, в большинстве случаев только малая часть лигандсвязывающего белка отвечает за связывание с лигандом. Эта часть белка, кодированная прерывисто или непрерывно, является примером лигандсвязывающего участка.
Термин естественно встречающийся подразумевает встречающийся в природе, без вмешательства человека.
Термин искусственное происхождение подразумевает не встречающееся в природе или, если это встречается в природе, то не в естественном состоянии, окружении, обстоятельствах и т.п.
Термин РВ8 подразумевает физиологический раствор с фосфатным буфером.
Термин рерЕЬоЛез (пептид-антитело), пептитело, относится к молекуле, содержащей домен Ес антитела (например, домены СН2 и СН3 антител), который исключает домены СН1, Съ, УН и У|. антител, так же как и ЕаЬ и Е(аЬ)2, где домен Ес с одним или более петидами, предпочтительно с фармакологически активным пептидом, особенно предпочтительно с беспорядочно образованным фармакологически активным пептидом. Получение в основном описано в публикации РСТ ^О00/24782, с датой публикации 4 мая 2000 года, которая полностью включена в данный документ в виде ссылки, особенно, что касается структуры, синтеза, свойств и применения рерЕЬоЛез.
Термин пептид(ы) в данном документе подразумевает то же, что и полипептид; часто, но необязательно, он используется в связи с относительно коротким полипептидом,
Термин рН используется в соответствии с его хорошо известным и универсальным следующим определением:
рН=-1од[Н3О+].
Термин фармацевтический, используемый в данном документе, подразумевает приемлемый для использования у человеческих и нечеловеческих субъектов для их лечения, особенно для лечения людей, и разрешенный к применению регулирующими инстанциями, уполномоченными для регулирования его применения, как, например, Управление по контролю над пищевыми продуктами, медикаментами в США, Европейское агенство для оценки медицинских продуктов, Японское министерство здравоохранения или другая регулирующая инстанция из тех, что приведены в документе В. Ν§, ΌΡΕΌδ: ЕНОМ ΌΙ8СОУЕКУ ТО АРРКОУАЬ, ^11еу-Ь188 (НоЬокеп, N1) (2004), который полностью включен в данный документ в виде ссылки, особенно из тех, что являются регулирующими инстанциями, имеющими отношение к утверждению лекарств, особенно, как приведено в главе 7. Используемая здесь фраза где композиция была разрешена для фармацевтического применения инстанцией, имеющей законные основания для выдачи такого разрешения подразумевает учреждение, или институт, или нечто подобное, законно установленное и наделенное обязанностями и полномочиями для регулирования и утверждения применения лекарств для применения человеком, и в некоторых случаях, у субъектов, отличных от людей. Утвер
- 12 012801 ждение любым таким агенством где-либо соответствует этому требованию.
Необязательно для регулирующей инстанции находиться в той стране, в которой, например, происходит нарушение. Пример таких учреждений включает Управление по контролю над пищевыми продуктами, медикаментами США и другие агенства, приведенные в данном документе выше.
Используемый здесь термин фармацевтический также может касаться продукта, производимого в соответствии с надлежащей практикой производства, такой как та, что описана, среди прочих, в главе 9 и главе 10 документа К. Ν§, ΌΚυΟδ: РКОМ ΌΙδΟΟνΕΚΥ ТО АРРКОУЛЬ, ^йеу-Ь188 (НоЬокеп, N1) (2004), который полностью включен в данный документ в виде ссылки, особенно в частях, относящихся к надлежащей практике производства для препаратов фармацевтических белков, в частности, как установлено в главах 9 и 10.
Термин фармацевтически приемлемый используется в данном документе в соответствии с его хорошо известным значением в данной сфере для обозначения вещества, приемлемого для медицинского и ветеринарного использования, предпочтительно для медицинского применения человеком, особенно разрешенного для такого применения Управлением по контролю над пищевыми продуктами, медикаментами США или другой инстанцией, как описано выше, имеющей отношение к термину фармацевтический.
Термин полипептиды - см. «белки».
Термин предшественник(и) используется в данном документе в соответствии с его хорошо известным значением в данной области для обозначения вещества, из которого получается другое вещество. Например, предшественником белка является белок, который претерпевает процессинг, такой как протеолитическое расщепление или модификация, за счет которого образуется другой белокпредшественник (который пройдет дальнейший процессинг) или зрелый белок.
Термин белок(и) в данном документе подразумевает полипептид или комплекс полипептидов в соответствии с его хорошо известным значением в данной области. Используемый здесь термин белок(и) включает полипептиды как с прямой, так и с разветвленной цепью. Этот термин включает немодифицированные и модифицированные полипептиды, включая те модификации, которые встречаются и не встречаются в природе. Такие модификации включают химические модификации концов, пептидного скелета (остова) и боковых аминокислотных цепей; заместителей аминокислот, делеции и вставки и включение необычных аминокислот и их участков, только некоторые из таких модификаций. Этот термин также включает инженерные полипептиды и их комплексы, такие как, но не ограничиваясь ими, любой полипептид или комплекс полипептидов, которые были намеренно структурно изменены, например, с помощью технологий рекомбинантных ДНК, химического синтеза и/или ковалентной модификации, включая намеренное изменение аминокислотной последовательности и/или посттрансляционные модификации.
Термин протонирование подразумевает присоединение по меньшей мере одного водорода.
Термин самобуферирующийся подразумевает способность вещества, например фармацевтического белка, противостоять изменению рН, удовлетворительного для конкретной заявки, в отсутствие других буферов.
Термин полу-де ηονο в данном документе подразумевает (а) частично созданный в соответствии с конкретным источником и полученный из предшественника и (Ь) частично созданный без ссылки на конкретный источник (например, тот, что разработан только с помощью общих принципов и не основан на конкретном источнике). Например, полипептид, полученный продуцированием первого пептида экспрессионной системой бактерии, продуцированием второго пептида химическим синтезом и затем сшиванием двух пептидов вместе для получения полипептида.
Термин полусинтез в данном документе подразумевает комбинацию химических и нехимических способов синтеза.
Термин субъект подразумевает позвоночное, такое как млекопитающее, например человек. Млекопитающие включают, но не ограничиваясь, людей, сельскохозяйственных животных, животных, используемых в спорте, и домашних животных. Субъекты, нуждающиеся в лечении способами и/или композициями настоящего изобретения, включают те, что страдают от нарушения, дисфункции или заболевания или их побочных эффектов, или от побочного эффекта, возникшего от лечения данных состояний.
Термин по существу используется в данном документе в соответствии с его очевидным и обычным определением для обозначения большей степени или уровня. Например, по существу завершенный значит завершенный в большей степени. Для дальнейшей иллюстрации по существу свободный от остатков подразумевает в большей степени свободный от остатков, по большому счету свободный от остатков. Требуется ли точность в цифрах, зависит от контекста, по существу при использовании в данном документе подразумевает по меньшей мере 80% или более, конкретно 90% или более, очень конкретно 95% или более.
Термин терапевтически эффективный используется в данном документе в соответствии с его хорошо известным значением в данной области для обозначения того вещества, которое приводит к улучшению течения болезни или состояния субъекта, или того, которое так или иначе достигает терапевтической цели, включая, например, снижение уровня развития заболевания, даже если состояние субъекта,
- 13 012801 тем не менее, продолжает ухудшаться.
Термин терапевтически эффективное количество в основном используется для обозначения количества агента, которое охватывает те количества, что приводят к улучшению выраженности расстройства. Например, эффективные противоопухолевые терапевтические агенты удлиняют продолжительность жизни субъекта, ингибируют рост быстро пролиферирующих клеток, связанных с опухолью, или вызывают регрессию опухоли. Терапии, являющиеся терапевтически эффективными в пределах значения данного термина, используемого в данном документе, включают терапии, которые улучшают качество жизни субъекта, даже если они не улучшают как таковой исход болезни.
Термины лечить, лечение или терапия широко используются в связи с изобретением и каждый такой термин охватывает, среди прочих, предотвращение, улучшение, ингибирование или выздоровление от расстройства, дисфункции, заболевания или разрушительного процесса, включая те, что препятствуют и/или являются результатом терапии.
Термин вариант(ы) в данном документе подразумевает встречающаяся в природе или синтезированная версия, например, белка, который структурно отличен от оригинального белка, но сопоставим по структуре и/или функции, например аллельный вариант, паралог или гомолог белка.
Описание изобретения
Данное изобретение обеспечивает, во-первых, препараты самобуферирующихся белков, особенно препараты биофармацевтических белков, способы производства препаратов и способы использования препаратов, среди прочего. Любой белок, который обеспечивает достаточную буферную емкость в пределах требуемого значения рН в концентрации, подходящей для его надлежащего использования, может быть получен в виде препарата самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением. Данное изобретение может быть практически использовано с рядом белков, включая как встречающиеся в природе, так и инженерные белки, особенно биофармацевтические белки, как это обсуждается далее.
Применение белков, особенно биофармацевтических белков, используемых в самобуферирующихся композициях, особенно фармацевтически приемлемых композициях, не было известно до описания данного изобретения в данном документе. Влияние белков на регулирование физиологического значения рН в течение некоторого времени исследовалось. Однако до настоящего времени не было известно, что белки, особенно биофармацевтические белки, могут иметь достаточную буферную емкость для сохранения препарата в пределах желательного интервала рН без дополнительных буферирующих агентов.
Биофармацевтические белки для использования в США готовят в виде буферированных растворов, небуферированных растворов, аморфных или кристаллических суспензий и лиофилизатов.
Большинство препаратов буферированных растворов использует обычный буферирующий агент. Два белка, Пульмозим® и Гумилин®, получают в виде растворов без обычных буферирующих агентов. Ни один из этих белков не обеспечивает значительной самобуферирующей способности в препаратах.
Пульмозим® имеет молекулярную массу примерно 37000 Да и содержит 5 остатков гистидина, 22 остатка аспарагиновой кислоты и 12 остатков глутаминовой кислоты из своих 260 аминокислот. Буферирующая способность белка в пределах 0,5 единицы рН значения рН 6,3 определяется в значительной степени содержанием гистидина. На основе этого верхний предел самобуферирующей способности препарата определяется эффективной концентрацией остатков гистидина, 0,15 мМ. Молярная концентрация аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты в препарате составляет 0,9 мМ. Общая молярная концентрация всех аминокислот вместе, таким образом, при данной концентрации препарата не много больше 1 мМ.
Гумулин® получают в концентрации 3,5 г/мл. Он имеет молекулярную массу, равную примерно 6000 Да и содержит 2 остатка аспарагиновой кислоты, 8 остатков глутаминовой кислоты и 2 гистидина. Ни одна из этих трех аминокислот не является особенно эффективным буфером при рН препарата от 7,0 до 7,8. При этой концентрации молярная концентрация гистидинов, чье значение рКа является ближайшим к рН препарата, составляет 1,16 мМ.
Биофармацевтические лиофилизаты восстанавливают перед использованием, получая растворы и суспензии. Большинство лиофилизатов содержит обычные буферы, которые поддерживают необходимое значение рН восстановленных препаратов. Ряд других, в которых концентрация белка ниже или значение рН должно быть ниже (меньше 3) или выше (больше чем 9,5), эффективно незабуферены.
Таким образом, буферирование достигается при производстве настоящих препаратов белков использованием обычных буферирующих агентов. Способность самих белков буферировать препараты фармацевтических белков не была полностью воспринята и не применялась для производства белковых препаратов.
Определение буферной емкости белка обычно важно для разработки самобуферирующихся белковых препаратов в соответствии с данным изобретением. Соответствующие способы измерения буферной емкости и определения буферной емкости белков описаны ниже. Для получения пригодных для сравнения данных буферная емкость белка должна быть выражена в единицах сравнения и/или соотноситься со стандартным буфером. Соответственно, следующий раздел описывает рН показатели и стандарты, удовлетворяющие этим требованиям, в соответствии с данным изобретением.
- 14 012801
1. Буферирование.
Широко применяемое определение буферирования соответствует противостоянию изменению рН композиции в процессе добавления кислоты или основания. Буферную емкость, таким образом, определяют как способность композиции противостоять изменению рн.
Обычно буферную емкость выражают в терминах количества сильной кислоты или основания, необходимых для изменения рн композиции заданного количества. Ван Слик обеспечил наиболее широко используемую количественную меру буферной емкости, в соответствии с которой, для раствора, буферная емкость выражается в количестве сильной кислоты или основания, необходимого для изменения рн 1 л раствора на одну единицу рН в стандартных условиях температуры и давления. В соответствии с этим, например, буферная емкость 1 л 5 мМ раствора НОАс, 5 мМ №ОАс, рН 4,76 в чистой воде составляет 4,09х10-3 моль одновалентного сильного основания (а именно, 4,09х10-3 эквивалентов основания), которая может быть посчитана следующим образом.
Уравнение Хендерсона-Хассельбальха для раствора рН=1од{[5 мМ]КаОАс/[5 мМ] НОАс)+4,7 б
Соответственно, концентрация X одновалентного сильного основания, необходимого для увеличения рН этого буфера от 4,76 до 5,76, равна
5,76=1од([5 мМ+ X мМ]ЫаОАс/[5 мМ-Х мМ]НОАс}+4,7 6
Таким образом,
1,00=1од{[5 мм
10,0=[5 мМ + X
10,0=(5 мМ + X + X мМ] НаОАс/[5 мМ -X мМ]НОАс}, мМ] МаОАс/[5 мМ-Х мМ]НОАс, мМ) / ( 5 мМ - X мМ), мМ - 10Х мМ=5 мМ + X мМг
ИХ мМ=45 мМ,
Х=4,09 мМ, что для 1 л составляет (4,09х10‘3 моль/л) (1 л ) (1 эквивалент/моль)=4,09χ 10'3эквивалентов
Таким образом, в соответствии с этим показателем буферная емкость 1 л 10 мМ ацетатного буфера, содержащего 5 мМ №1ОАс и 5 мМ НОАС при рН 4,76 в чистой воде, составляет 4,09х10-3 эквивалентов основания на 1 л на единицу рН. Выражая другими способами, буферная емкость раствора составляет: 4,09 мэкв/л-рН, 0,409 мэкв/100 мкл-рН и 4,09 нмоль/мкл-рН.
Такой же расчет приводит к следующей буферной емкости для других концентраций этого ацетатного буфера при рН 4,16. 2 мМ ацетатный буфер, как указан выше, имеет буферную емкость, равную 0,818 мэкв/л-рН. При 4 мМ буферная емкость составляет 1,636 мэкв/л-рН. Буферная емкость при 5 мМ составляет 2,045 мэкв/л-рН. При 7,5 мМ буферная емкость составляет 3,068 мэкв/л-рН. При 10 мМ ацетатный буфер имеет буферную емкость, равную 4,091 мэкв/л-рН. При 15 мМ его буферная емкость составляет 6,136 мэкв/л-рН.
Следует отметить, что раствор ацетатного буфера при рКа уксусной кислоты (рН 4,76) эквимолярен уксусной кислоте и ацетатному основанию (т.е. при рКа кислота и основание присутствуют в равных количествах). В результате стойкость к изменению рН (буферная емкость) ацетатного буфера при рКа уксусной кислоты одинакова для добавления кислоты и основания. Равновесие кислоты и основания является основной характеристикой буферирующих агентов в буферах при рН, равном их рКа.
При любом другом рН буфер будет содержать различные количества форм кислоты и основания и, следовательно, его стойкость к изменению (т.е. его буферная емкость) после добавления кислоты не будет такой же, как стойкость к изменению после добавления основания. В результате предпочтительно определять емкость таких буферов в терминах: (ί) количество кислоты, необходимое для снижения рН на одну единицу, и (ίί) количество основания, необходимое для увеличения рН на одну единицу.
Разделение в буфере между формами кислоты и основания в данной композиции, как, например, стандарт рН, может быть посчитано при любом рН и концентрации буфера с использованием методик, приведенных выше в описании буферной емкости 10 мМ №1ОАс при рН 4,76 плюс или минус (содержащем эквимолярные количества уксусной кислоты и ацетата натрия). И результаты могут быть использованы для определения буферной емкости стандарта, используемого для сравнения.
Таким образом, например, разделение уксусной кислоты на уксусную кислоту и основание ацетата в растворе при рН 5,0 может быть легко посчитано с использованием вышеупомянутых методик и, исходя из этого, буферная емкость может быть посчитана как для добавления раствора основания, так и кислоты. Посчитанная таким образом теоретическая буферная емкость 10 мМ буфера ацетата натрия в пределах рН от 5,0 до 5,5 составляет приблизительно 2,1 мМ на 0,5 единицы рН и 4,2 мМ на единицу рН. Выражая другими способами, буферная емкость буфера, теоретически, составляет примерно 4,2 мэкв/мл буферного раствора на единицу изменения рН. Сходным образом, теоретическая буферная емкость 10 мМ буфера ацетата натрия в пределах рН от 4,0 до 5,0 составляет 4,9 мМ и, выражая другими спосо
- 15 012801 бами, 4,9 мэкв/мл буфера на единицу изменения рН в пределах данного интервала рН.
Хотя такие подсчеты зачастую являются довольно полезными во многих случаях, предпочтительны эмпирические стандарты и определения. Среди особенно предпочтительных эмпирических стандартов имеются буферы ацетата натрия в пределах рН от 4,0 до 5,0 и от 5,0 до 5,5, как приведено в примерах 1 и
2. Особенно предпочтительны буферы ацетата натрия, в соответствии с которыми общая концентрация ацетата составляет, в частности, 10 мМ, предпочтительно 5 мМ, особенно 4 мМ, среди других, как установлено где-либо в данном описании. Ацетатные буферы при рН 5,0 более стойки к изменению рН после добавления кислоты, чем после добавления основания, как обсуждалась выше. В предпочтительном эмпирическом стандарте буферной емкости буферная емкость стандартного ацетатного буфера как таковая определяется как (ί) угловой коэффициент линии регрессии наименьших квадратов, посчитанный для данных тирования основанием для буфера в пределах рН от 5,0 до рН 5,5, и (и) угловой коэффициент линии регрессии наименьших квадратов, посчитанный для данных тирования кислотой для буфера в пределах рН от 5,0 до рН 4,0.
Получение стандартных ацетатных буферов и определение их буферных емкостей описаны в примерах 1-3. Следует понимать, что множество подобных способов может быть использовано для установления стандартов буферной емкости с использованием других подходящих буферирующих агентов. В измерении буферной емкости композиции самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением часто удобно выражать буферную емкость в терминах концентрации стандартного буфера при этом же значении рН, имеющем ту же буферную емкость. При использовании стандарта, не находящегося в рКа буферирующего агента, такого как буфер ацетата натрия первоначально при рН 5,0, в соответствии с изобретением самобуферирующая композиция определена как имеющая буферную емкость, равную или большую имеющейся у стандарта, если даже ее буферная емкость по мере титрования или ее буферная емкость после титрования кислотой (или обе) равны или превосходят соответствующую буферную емкость стандарта.
Следует также понимать, что рН композиций самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением не будет находиться в зоне рКа самобуферирующегося белка или любого заместителя на основе кислоты. Действительно, белки являются полипротонными соединениями, как описывается в данном документе, часто имеющими несколько заместителей, каждый с небольшим отличием в рКа, которая вносит вклад в его буферную емкость в заданном интервале рН. Соответственно, буферная емкость препаратов самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением предпочтительно определяется эмпирически как титрованием кислотой, так и титрованием основанием в пределах заданного интервала изменения рН от желаемого значения рН композиции. В предпочтительных воплощениях в этой связи буферная емкость определяется титрованием кислотой и отдельно основанием по изменению соответственно плюс и минус 1 единицы рН от исходного значения рН препарата. В особенно предпочтительных воплощениях данные титрования собирают для изменения в значении рН плюс или минус 0,5 единицы рН. Как описано в примерах, буферная емкость является угловым коэффициентом линии регрессии наименьших квадратов для данных рН как функции эквивалентов кислоты или основания, добавленного к композиции в пределах интервала титрования.
а. Эмпирические измерения и стандарты буферной емкости.
В конкретных предпочтительных воплощениях данного изобретения мерой буферной емкости является эмпирический стандарт. Среди предпочтительных эмпирических стандартов в этой связи имеются конкретный объем водного раствора при определенной температуре, содержащего определенный буферирующий агент при определенной концентрации и/или никаких других компонентов, кроме воды, или один или более других определенных компонентов, каждый в определенной концентрации.
Особенно предпочтительным конкретным стандартом для определения буферной емкости в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения является 10 мМ ацетат натрия рН 5,00 в чистой воде, свободной от других составляющих при 21°С в равновесии с окружающим воздухом при 1 атм, как описано в примерах 1 и 2, предпочтительно выраженный в эквивалентах на единицу объема на единицу рН, например мкэкв/мл-рН. Буферная емкость стандарта должна быть оценена эмпирически, как описано в примерах 1-3 и, как далее обсуждается, где-либо в данном документе.
Особенно предпочтительным конкретным стандартом для определения буферной емкости в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения является 10 мМ ацетат натрия рН 4,76 в чистой воде, свободной от других составляющих при 21°С в равновесии с окружающим воздухом при 1 атм, как описано в примерах 1 и 2, предпочтительно выраженный в эквивалентах на единицу объема на единицу рН, например мкэкв/мл-рН. Буферная емкость стандарта должна быть оценена эмпирически, как описано в примерах 1-3, и, как далее обсуждается, где-либо в данном документе.
В соответствии с уравнением Хендерсона-Хассельбальха, как отмечено выше, посчитанная буферная емкость в пределах рН 4,76 плюс или минус 1 единица рН составляет 4,09 мкэкв/млл-рН. Для использования в качестве стандартов приемлем ряд других буферов в других пределах рН в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения в этой связи. В этой
- 16 012801 связи особенно предпочтительны буферы сравнения, которые хорошо известны и обычно применяются для анализов в аналитической химии. Ряд таких буферирующих агентов представлен в руководствах по аналитической химии и в монографиях по точному определению рН и буферной емкости.
Также применимы в данном изобретении в этой связи биологические буферы, которые описаны, среди прочих других источников, в ΤΕΙΤΖ ТЕХТВООК ОЕ СЬЮТСАЕ СНЕМ18ТКУ, 3гб Еб., Вшйк апб Λ51ι\νοο6. ебк., XV.В. Баипбегк Сотрат·. РЫ1абе1рЫа, РА (1999), в частности, в табл. от 50-13 до 50-16, которые полностью включены в данный документ в виде ссылки в отношении буферирующих агентов и буферов и их применения в качестве стандартов рН и/или буферной емкости в соответствии с данным изобретением в этом отношении; ТНЕ ТООЬБ ОЕ В1ОСНЕМ18ТКУ, Теггапсе О. Сοοре^, ίοΐιη ^ί^ά-δοη^ №\ν ΥοιΈ ΝΥ (1977), конкретно в главе 1, с. 1-35, которая полностью включена в данный документ в качестве ссылки в отношении буферирующих агентов и буферов и их применения в соответствии с данным изобретением; наиболее конкретно в табл. 1-3, 1-4 и 1-5 и тексте, связанном с ними, и ΡΚΌΊΈΙΝ РυΚIЕIСАΤIОN РКЖС1РЬЕ8 ΑΝΏ РЕАСТ1СЕ, 3гб Еб., ΕοΙκ'Π К. Ботрек, 8ргт§ег-Уег1аё, Ν'ν ΥοιΈ ΝΥ (1994), конкретно на с. 160-164, особенно в табл. 6.4 и 6.5 и тексте, связанном с ними, и конкретно на с. 160-164, главе 12, разделе 3, с. 324-333, особенно в табл. 12-4 и 12-5 и тексте, связанном с ними, и во всем приложении С: Вийеге £ογ Ике ίη Рго1ет Сйеткйу, которые полностью включены в данный документ в виде ссылки в отношении буферирующих агентов и буферов и их применения, в этой связи в соответствии с данным изобретением.
Ввиду того что некоторые растворенные газы в воде взаимодействуют с ОН- и/или Н3О+, однако эмпирически определенная буферная емкость может немного отличаться от теоретического значения. Таким образом, определение стандарта требует того, чтобы раствор находился в равновесии с атмосферой при давлении 1 атм. Кроме того, стандарт буфера должен быть изолирован от контакта и контактировать только с материалами, которые не изменяют его компонентов или его буферной емкости, например, такими, что закисляют, защелачивают или привносят другие реагенты, которые могут изменить эффективную концентрацию или активность ацетатного буфера любым образом, который бы изменил его буферную емкость. При наличии обоих следующих факторов: атмосферного выравнивания и инертности контейнера буферная емкость стандарта будет соизмерима напрямую и линейно с его объемом. Соответственно, буферная емкость 100 мл составит 1/10 от буферной емкости 1 л и буферная емкость 10 мл составит 1/100 от буферной емкости 1 л. Соответственно, объем стандарта может быть для удобства изменен и затем обратно нормализован до 1 л, если это требуется.
Может быть, не всегда удобно получать вышеуказанный 10 мМ ацетатный буфер с буферной емкостью для применения в данной области. Однако ряд других стандартов буферной емкости может быть приготовлен и использован так же, как ацетатный буфер с применением ряда других буферирующих агентов. Только обеспечив то, что стандарты буферов получают должным образом, позволяет их откалибровать против ацетатного буферирующего стандарта, описанного выше, и затем использовать в данной области. Результаты, полученные с помощью таких альтернативных стандартов, могут быть затем выражены в единицах вышеуказанного ацетатного стандарта без значительного отклонения или ошибки. Буферная емкость таких альтернативных стандартов может быть также откалибрована подсчетом. Для того чтобы сделать это, буферная емкость альтернативного стандарта определяется непосредственно и выражается в миллиэквивалентах на единицу объема на единицу рН. Определения, основанные на альтернативном стандарте, могут быть затем нормализованы по отношению к ацетатному стандарту с применением соотношения между буферным емкостями, выраженными в миллиэквивалентах на единицу объема на единицу рН альтернативного или ацетатного стандартов.
Используя такие способы, которые обычно применяются в метрологии для обратного соотнесения стандартов в данной области со стандартом сравнения, ацетатный буфер, описанный выше, позволяет обеспечивать портативный, масштабируемый, надежный и точный буфер сравнения для определения буферной емкости любой композиции, которая может быть легко сравнима с разрозненными значениями, полученными для других композиций с применением сходных способов.
Ь. Приготовление стандартов буферной емкости.
Стандарты буферной емкости могут быть получены с применением хорошо известных методов аналитической химии. См., например, ΑΝΑΒ-ΥΠί-ΆΡ СНΕМI8ΤΚУ, 3гб Еб., Ωουβίοκ Α. 81<οοβ анб ΩοηοΗ М. ХУекЬ Ней, Ктейай анб ^ίηκΐοη, №\ν ΥογΚ (1979), особенно глава 9 (с. 186-226), глава 10 (с. 227-233), и методы, описанные на с. 583-588; ТЕП2 ТЕХТВООК ОЕ СЬЮТСАЬ СНЕМ18ЮТ5 3гб Еб., ВаШк аЫ Αкйνοοб, ебк., ХУ.В. Баивбегк ^тра^, РЫ1абе1рЫа, РА (1999), в частности, глава 1 относительно общих лабораторных методик получения и калибровки буферов и табл. От 50-13 до 50-16; ТНЕ ТООБ8 ОЕ В1ОСНЕМ18ТКУ, Теггаисе О. Сοοре^, ίοΐιη \V^1еу&8οηк. №\ν ΥοιΈ ΝΥ (1977), в частности, глава 1,
с. 1-35 и табл. 1-3, 1-4 и 1-5 и текст, имеющий к ним отношение; РЕОТЕШ ΡυΚIЕIСΑΤIОN РЕШСЧРБЕБ АХИ РЕАСТ1СЕ, 3гб Еб., ЕοЬе^ι К. Бторек, 8ргтдег-Уег1ад, №\ν ΥοιΈ ΝΥ (1994), в частности, с. 160-164, особенно табл. 6.4 и 6.5, текст, имеющий к ним отношение, глава 12, раздел 3, с. 324-333, особенно табл. 12-4 и 12-5, текст, имеющий к ним отношение; и все приложение С: Вийегк £ογ Ике ίη РгоЕет Сйеткйу; апб ЕЕМШОТОХ ТНЕ БСГЕИСЕ .ΛΝΙ) РЕАСТ1СЕ ОЕ РНАЕМАСУ, 21к‘ Еб., Веппаег е1 а1. Ебйпгк, ирр^той, ХУПНатк&ХУПктк, РЫ1абе1рЫа, РА (2005), особенно в частях, имеющих отношение к
- 17 012801 буферирующим агентам, буферам, буферной емкости и т.п.; каждый из которых полностью включен в данное описание в виде ссылки в отношении применения буферов и стандартов буферной емкости в соответствии с данным изобретением в этой связи.
Вода, используемая для приготовления стандартов буферной емкости, должна быть высоко очищена и быть предпочтительно водой типа I, такой как вода марки тййЦ или трижды дистиллированная вода. Реагенты буфера должны быть чистыми и, в частности, свободными от любого вещества, могущего изменить рН или буферную емкость стандартного раствора, например реагенты марки РеГегепсе (Стандарт) или АС8 Веадеп! (ЧДА), подходящие для применения в необходимых аналитических химических анализах, как описано в вышеуказанных ссылках, в частности процитированных выше ΊΈΊΤΖ и КЕМГЫСТОЫ, которые в данном описании включены полностью в виде ссылки, особенно в частях, соответствующих воде и реагентам аналитического качества.
Точные композиции буферных реагентов должны быть хорошо известны. Молекулярная масса буферных реагентов должна быть точно известна для каждого буферного реагента. Молекулярные массы должны быть для конкретного реагента, который будет использоваться, и должны включать массу аддуктов, таких как гидраты, присутствующие в реагенте. Эффективное количество доноров водорода или акцепторов водорода на молекулу должно быть точно известно для каждого реагента, содержащего смесь таких форм. Концентрации жидких буферных реагентов должны быть точно известны, предпочтительно в молях/объем и в молях/массу (например, моль/л и моль/г или кг). Гигроскопичные агенты должны быть высушены для удаления влаги для того, чтобы реагент мог быть точно взвешен.
Вообще говоря, информация, предоставляемая хорошо известными поставщиками реагентов и реагентов сравнения (стандартов), в достаточной степени точная для приготовления стандартов буферной емкости, как описано выше. И хорошо известные стандартные методики, обычно применяемые в аналитической химии, могут быть использованы для высушивания гигроскопичных реагентов для того, чтобы они могли быть точно взвешены.
Как там описано, хорошо известные и обычно применяемые методы аналитической химии могут быть применены для получения и калибровки растворов кислоты и основания, таких как 1н. НС1 и 1н. №1ОН (названы только два), для титрования стандартов буферной емкости, так же как растворов образцовых белковых растворов, для определения буферной емкости. Следует заметить, что получение растворов №1ОН для титрования должно быть осуществлено для устранения неточностей, возникающих от взаимодействия определенных растворенных газов с основными растворами, и эффектов изменения рН при их растворении. См., например, 8коод и ХУеЧ (1979) и другие источники, цитированные выше, относительно приготовления и калибровки буферов и буферных стандартов, которые в данном описании включены полностью в виде ссылки, особенно в частях касающихся получения стандартных растворов для титрования, как обсуждалось выше.
с. Эмпирическая оценка буферной емкости.
Титрование стандартов и образцов для определения буферной емкости может быть осуществлено с применением хорошо известных обычных способов. Титрования могут быть проведены в ручном режиме. Они могут быть также проведены с использованием автоматического титратора. Широкий ряд автотитраторов, подходящих для использования в этой связи, являются коммерчески доступными от многих поставщиков. Способы, подходящие для применения в данном изобретении, в этой связи такие же, как те, что описаны в источниках, цитированных выше относительно получения и калибровки буферных стандартов, каждый из которых в данном описании включен полностью в виде ссылки, особенно в частях касающихся титрования известных и неизвестных растворов для определения буферной емкости.
2. Буферирование белками и буферная емкость белка.
а. Определение равновесия водорода белка и буферной емкости.
Белки в любом случае содержат много кислых и основных компонентов. В результате равновесие между ионами водорода белков очень сложное. Действительно, полное описание равновесия ионов водорода белков в заданном окружении является недостижимым для современных теоретических и вычислительных методов. Таким образом, предпочтительны эмпирические измерения буферных емкостей белков. Методы, разработанные для точной эмпирической оценки равновесия ионов водорода белков, которые могут быть обычно применены квалифицированным в этой области специалистом, хорошо налажены для оценки буферных свойств белков, участвующих в создании препаратов самобуферирующихся белков в соответствии с данным изобретением. Таким образом, кривые титрования рН белков могут быть определены в соответствии с данным изобретением с помощью хорошо известных способов, таких как те, что описаны и приведены в качестве примера с помощью исследований рН титрования ТапГогй и сотрудниками по рибонуклеазе. См. публикации С. ТапГогй Нуйгодеп 1оп Тйтайоп Ситуек оГ РтоШпк, ίη Т. 8йей1оу5ку (ей.), ЕЬЕСТВОСНЕМ18ТКУ ΙΝ ВЮЬОСУ ΆΝΏ МЕП1СПХЕ, ,1о1т \\'11е\&8опА Хем Уотк, 1955, гл. 13; С. ТапГогй апй ΙΌ. Наиепйеш, 1. Ат. Сйет. 8ос. 78, 5287 (1956), С. ТапГогй, РНУ81САЬ СНЕМ18ТВУ ОР МАСВОМОЬЕСиЬЕ8, .1о1т \\'11е\&8опА Хете Уотк, 1961, особенно с. 554-567, каждая из которых в данном описании включена полностью в виде ссылки, особенно в разделах титрования ионов водорода белков и определения буферирующего действия и буферной емкости белков.
- 18 012801
Однако настоящее изобретение не требует таких точных определений, как те, что описаны в вышеуказанных источниках. Скорее, буферирующие свойства и буферная емкость белков в соответствии с данным изобретением могут быть определены с использованием методов, описанных в стандартных руководствах по аналитической химии и биохимии, как, например, 8коод (1979), Соорег (1977) и 8соре§ (1994), цитированные выше, каждое из которых в данном описании включено полностью в виде ссылки, особенно относительно эмпирического определения кривых титрования.
Определение кривых титрования и буферной емкости в соответствии с данным изобретением подробно описано для множества ацетатных буферов и ряда фармацевтических белков в примерах ниже. Таким образом, кривые рН титрования белков могут быть определены эмпирически в соответствии с такими методами, как описано в вышеуказанных источниках, в пределах конкретных ограниченных пределов рН, представляющих интерес в рамках данного препарата. Во многих отношениях эти методы такие же, как те, что используются в аналитической химии для титрования малых молекул, таких, как ацетатные буферы (как показано в примерах). Немного большее внимание должно быть уделено обращению с белками для сохранения конформации и функции, необходимых для эффективного препарата.
Титрование белков может быть проведено в ручном режиме или с использованием автоматических титраторов. Оборудование для ручного титрования и автотитраторы легко доступны от большого количества поставщиков. Методы, подходящие для определения кривых рН титрования и буферной емкости белков, приведены в примерах в качестве сравнения с титрованием ацетатных стандартов буферной емкости и титрованием нескольких различных терапевтических белков в пределах определенных интервалов рН. Эти методы могут быть применены для определения водородной ионизации и буферной емкости любого другого белка в соответствии с данным изобретением.
Особым аспектом данного изобретения является определение буферной емкости белков как функции концентрации в растворе. В предпочтительном методе в этой связи растворы конкретного белка готовят в ступенчатых сериях концентраций. Кривая титрования рН определена для белка при каждой концентрации в пределах интересующего интервала рН. Предпочтительно кривые титрования определены для интересующего интервала рН. Предпочтительно кривые титрования определяют для интересующего интервала с применением как основного, так и кислотного титрования. Эти данные в конкретных предпочтительных воплощениях нанесены на график эквивалентов кислоты или основания, добавленных против измеренных значений рН каждого раствора. Обычно интервал, равный примерно от 0,5 до 1,0 единицы рН, данные титрования для каждой концентрации в большой степени соответствуют прямой линии, предпочтительно определенной регрессионным анализом наименьших квадратов. В предпочтительных воплощениях в этой связи буферная емкость белка при каждой концентрации приравнена к угловому коэффициенту регрессионной линии, выраженная в единицах на 1 мл на единицу рН (или ее долях). Также в данном изобретении применимо взаимоотношение между буферной емкостью белка и его концентрацией. В конкретных воплощениях эта связь определяется регрессионным анализом наименьших квадратов наиболее прямой линии, соответствующей данным буферной емкости, определенных в соответствии с вышеуказанным, нанесенным на график буферной емкости против концентрации белка.
Эмпирические данные буферной емкости белков в соответствии с данным изобретением предпочтительно соотнесены с буферной емкостью стандартного ацетатного буфера. Эти данные, в частности, предпочтительными воплощениями данного изобретения в этой связи, буферной емкости данного белка при данной концентрации в данном препарате, определенном выше, приравнены к концентрации стандартного ацетатного буфера имеющего такую же буферную емкость.
В то время как эмпирические определения, описанные в данном документе, являются в основном главнейшим аспектом создания самобуферирующихся композиций в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения, теоретические и вычислительные методы также могут быть продуктивно применены для осуществления разработки, производства и применения таких композиций (в связи с эмпирическими определениями), как описано ниже.
Ь. Предсказание равновесия ионов водорода белка и буферной емкости.
Ионизация водорода в белках является сложной, но может быть разбита, в общем, на интервалы рН, определяемые ионизируемыми водородами боковых цепей аминокислот и терминальных амино и карбоксильных групп. Значение рКа концевых карбоксилов в полипептидах обычно составляет около 3,1. Значение рКа кислотных водородов боковых цепей аспарагиновой и глутаминовой кислоты составляет около 4,4. Значение рКа гистидина в полипептидах составляет около 6,0. Значение рКа водородной ионизации терминальной аминогруппы обычно составляет около 7,5. Сульфгидрил имеет значение рКа около 8,5. Гидроксил тирозина и амин лизина, оба, имеют значения рКа около 10. Значение рКа аргинина обычно составляет около 12.
Конформационный фолдинг обычно разделяет большие полипептиды и белки в полярных растворителях на выставленные, доступные для растворителя участки и более или менее полярное ядро, которые имеют небольшой контакт или не имеют контакта с окружающей средой. Фолдинг образует множество пространств между этими двумя крайними. Более того, микроокружение вокруг данной боковой цепи аминокислоты в белке обычно подвергается действию одного или более из следующих эффектов: растворение; связывание с ионами; хелатирование; комплексообразование; ассоциация с кофакторами и
- 19 012801 посттрансляционными модификациями; можно назвать только несколько возможностей. Каждая из них может влиять на рКа ионизации данной аминокислоты в белке. Значения рКа для конкретных остатков в конкретном белке, таким образом, могут сильно отличаться от того значения, что свойственно свободной аминокислоте.
Действительно, изменение значений рКа за счет микроокружений аминокислот в белках было использовано для изучения фолдинга белков и перераспределения заряда конкретных аминокислот в фолдированных белках. Кривые титрования белка, описанные ТапГогб и другими, сложные с множеством общих черт. Обычно только некоторые из ионизуемых протонов принимаются во внимание для кривых титрования. Другие сравнительно располагаются в ядре и недоступны для растворителя. Значения рКа индивидуальных боковых цепей того же типа, что могут быть идентифицированы в некоторых случаях, могут быть отличны одно от другого. Тем не менее, будучи явно отличными, их рКа в основном близки тем, что имеются у свободной аминокислоты.
Сильнейшее буферирующее действие белков в основном не наблюдается в изоэлектрической точке, как может быть ошибочно предположено. Действительно, буферирование зависит от водородов боковой цепи аминокислоты и терминальных водородов и, следовательно, наблюдается в пределах охватывающих рКа ионизуемых водородов в свободных аминокислотах, как описано выше. Наиболее важным из этого для создания композиций препаратов белков, особенно конкретных фармацевтических белков, которые более растворимы и/или более стабильны, среди прочих, при слабокислых рН (рН от 4,0 до 6,0), является буферирующее действие, которое наблюдается в интервале рКа карбоксильного водорода аминокислот аспарагиновой и глутаминовой кислот; рН составляет от 4,0 до 5,5, особенно примерно 4,5.
Существует ряд способов, применимых для оценки буферной емкости данного белка в данном растворе при заданном рН. Способы варьируют от высокотехничных и сложных компьютерных моделей до тех, что могут быть осуществимы с помощью калькулятора. Ни один из данных способов не является целостным или полностью точным; но они могут в некоторых случаях обеспечивать приемлемые оценки.
Например, потенциально применимая идея буферной емкости в некоторых случаях может быть подсчитана для белка в растворе, основываясь на его аминокислотном составе, значениях рКа (в интересующем растворителе) концевых амино и карбоксильных группах и донорах и акцепторах водорода боковой цепи аминокислоты, концентрации белка и рН раствора.
Например, потенциально применимая оценка буферной емкости белка при рН в интервале рКа водорода боковой карбоксильной группы глутаминовой кислоты (как свободной аминокислоты) может быть получена из молекулярного веса белка и числа остатков глутаминовой кислоты. Деление первого на последнее обеспечивает массу на эквивалент глутаминовой кислоты и, следовательно, массу на эквивалент ионизуемого водорода при рКа глутаминовой кислоты. Ввиду того что боковые карбоксильные группы глутаминовой и аспарагиновой кислот имеют почти такие же значения рКа, результаты таких подсчетов для обеих должны быть сложены вместе для получения оценки буферной емкости в пределах около обеих рКа. Оцененная буферная емкость раствора белка при рКа может быть посчитана, исходя из концентрации белка в растворе и внутреннего фактора только что обеспеченного, а именно масса на эквивалент ионизуемого водорода. Деление концентрации на массу, на эквивалент приводит к оценке буферной емкости в единицах экв/объем. Такие оценки часто будут слишком высокими, так как некоторые остатки обычно отделены в участках белка, недоступных для растворителя, и, следовательно, не делают вклад в его настоящую буферную емкость. Может быть возможным в определенных случаях понимать влияние отделения на буферную емкость. Например, фракционный коэффициент, который отражает теоретические или эмпирические оценки отделения, может быть применен для доведения первоначальных расчетов.
Такие подсчеты в основном будут иметь меньшее использование и менее точное, чем эмпирические определения буферной емкости белка, в соответствии с методами, описанными где-либо в данном документе. Но они могут быть также применимы для обеспечения грубых максимальных оценок буферной емкости белков в растворе.
3. Белки.
Данное изобретение, описанное здесь, может быть воплощено с любым белком, который обеспечивает достаточную буферную емкость в желаемом интервале рН в пределах параметров концентрации белка и подобных, необходимых для желаемого препарата. Среди предпочтительных белков в этой связи находятся фармацевтические белки для ветеринарии и/или терапевтического использования человеком, особенно белки для терапевтического использования человеком. Также среди предпочтительных белков имеются белки, которые растворимы в водных растворах, особенно те, что растворимы при сравнительно высоких концентрациях, и те, что стабильны в течение долгих периодов времени. Дополнительно среди предпочтительных белков имеются те, что имеют относительно высокое количество аминокислот, доступных для растворителя, с константами ионизации водорода боковой цепи, близкой к рН требуемого буферирующего раствора.
Далее среди предпочтительных белков имеются белки для фармацевтических препаратов, которые не индуцируют высокоразрушительный антигенный ответ, следующий за введением субъекту. Предпочтительными в этой связи белками для ветеринарии и/или терапии людей являются, особенно касается
- 20 012801 последних, гуманизированные и человеческие белки.
Далее, среди предпочтительных белков данного изобретения имеются белки, которые селективно связываются с определенными мишенями, включая лигандсвязывающие белки и белки лиганды. Антигенсвязывающие белки, полученные из них белки и белки, связанные с ними, находятся в этой связи среди особенно предпочтительных воплощений данного изобретения. Высокопредпочтительными белками данного изобретения в этой связи являются антитела и белки, производные от антител или включающие антитела, в общем или частично включающие, можно назвать только несколько таких агентов: моноклональные антитела, поликлональные антитела, генно-инженерные антитела, гибридные антитела, биспецифические антитела, одноцепочечные антитела, генетически измененные антитела, включая антитела с одной или более замещенной аминокислотой, вставки и/или делеции (мутантные антитела), химерные антитела, производные антител, фрагменты антител, которые могут быть любыми из вышеуказанных и также могут быть сходным образом созданы с помощью генной инженерии или быть их модифицированными производными, слитыми белками, содержащими антитело или фрагмент, являющийся производным антитела или фрагмента антитела, который может быть любым из вышеупомянутых или их модификацией, или производным и химически модифицированными антителами, фрагментами антитела, слитыми белками антитела и подобными, включая все вышеуказанные.
а. Антитела, производные антител и белки, имеющие отношение к антителам, и подобные.
Среди особенно предпочтительных белков в соответствии с данным изобретением имеются полипептиды антител, такие как тяжелая и легкая цепь полипептидов, которые имеют сходную аминокислотную последовательность, что встречаются и образуют природные антитела, такие как те, что присутствуют в сыворотке и антисыворотке, включая такие полипептиды и белки, выделенные из природных источников, так же как и те, что приготовлены с помощью технологии гибридом, с помощью активации эндогенного гена (гомологичной или негомологичной рекомбинацией, например), экспрессией экзогенного гена под контролем эндогенного участка транскрипционного контроля, экспрессией экзогенной экспрессионной конструкции, с помощью полусинтеза и синтеза бе ηονο, можно назвать некоторые методики, обычно применяемые для получения антител и полипептидов, связанных с антителами, и белки, которые могут быть использованы для получения полипептидов антител и белков в соответствии с данным изобретением.
Включенными в число полипептидов, связанных с антителами, и белками являются те, что в общем или частично имеют бе ηονο аминокислотную последовательность, те что содержат все или одну, или много частей антитела (т.е. непрерывную цепь аминокислот, имеющую ту же последовательность, что и любой из четырех или более остатков в аминокислотной последовательности природно-встречающегося полипептида антитела), те, что имеют аминокислотную последовательность, соответствующую в некоторой степени природно-встречающемуся антителу, но отличаются от него в другом, те, что имеют одинаковые, но отличающиеся аминокислотные последовательности как имеющийся в природе аналог или последовательность, но отличаются от аналога одной или более посттрансляционными модификациями, и те, что содержат частично из любых вышеуказанных (частично или полностью), связанные с одним или более полипептидными участками, которые могут быть производными или иметь отношение ко второму, отличному полипептиду антитела, или могут быть производными любого другого полипептида или белка, имеющегося в природе, напоминающий его, но отличный, имеющую полу-бе ηονο аминокислотную последовательность и/или последовательность бе ηονο, среди прочих. Такие гибриды в основном обозначены в данном описании как слитые полипептиды и/или слитые белки.
Далее, среди предпочтительных белков в соответствии с данным изобретением здесь описаны модифицированные белки в соответствии со всем вышеуказанным. Включенными среди таких модифицированных белков имеются белки, модифицированные химически с помощью нековалентной связи, ковалентной связи или обеих: ковалентной и нековалентной связей. Также включенными являются все вышеуказанные, дополнительно содержащие одну или более посттрансляционных модификаций, которые могут быть синтезированы клеточными системами модификации или модификациями, введенными извне ферментными и/или химическими методами, или введенными другими путями.
Среди предпочтительных белков данного изобретения в этой связи имеются ЕаЬ фрагмент(ы), такие как те, что получают разрезанием обычного димерного (ЪН)2 антитела конкретной протеазой, которая оставляет легкую цепь интактной при разрезании тяжелых цепей между вариабельным участком и смежным постоянным участком поверх дисульфидных связей, которые удерживают тяжелые цепи вместе. Такое расщепление приводит к образованию одного Ес фрагмента, содержащего оставшиеся части тяжелых цепей связанными вместе, и два димерных фрагмента ЕаЬ, каждый содержащий интактную легкую цепь и вариабельный участок тяжелой цепи. Фрагменты ЕаЬ также могут быть получены с помощью других методик, которые не требуют выделения природного антитела и/или расщепления протеазой.
Также предпочтительными являются фрагменты ЕаЬ2, такие как те, что продуцируются во многом таким же образом, как фрагменты ЕаЬ с использованием протеазы, которая разрезает между и ниже дисульфидных связей. В результате два фрагмента ЕаЬ удерживаются вместе с помощью дисульфидных связей и высвобождаются как единый ЕаЬ2 фрагмент. Фрагменты ЕаЬ2 могут быть получены с помощью множества методик, включая те, что не требуют выделения интактного антитела или разрезания протеа
- 21 012801 зой, имеющей требуемую специфичность. Более того, моно- и биспецифические фрагменты ЕаЬ2 могут быть в настоящее время получены с помощью ряда обычных методик.
Также среди предпочтительных белков в этой связи имеются ЕаЬ3 фрагменты, которые являются фрагментами антитела, произведенными с помощью генной инженерии, в которых три фрагмента ЕаЬ связаны друг с другом. Фрагменты ЕаЬ3 могут быть моно-, би- или триспецифичными. Они могут быть получены различными путями, хорошо известными квалифицированным специалистам в области техники.
Среди других предпочтительных белков данного изобретения в этой связи имеются Ес фрагменты, такие как те, что получают разрезанием протеазой сходным образом, используемым для получения или ЕаЬ фрагментов, или ЕаЬ2 фрагментов. Однако для получения Ес фрагментов скорее выделяют фрагменты, входящие в состав димерной тяжелой цепи, чем фрагменты, входящие в состав легкой цепи. Фрагменты Ес, не имеющие антигенобъединяющих участков, но содержащие эффекторные участки, играющие роль в физиологических процессах с участием антител. Фрагменты Ес могут быть получены с помощью ряда обычных методик хорошо известными и применяемыми квалифицированными специалистами в данной области для этой цели.
Среди других предпочтительных белков данного изобретения в этой связи имеются одноцепочечные вариабельные фрагменты (бсЕу(б)). 8сЕу(б) являются слитыми белками, получаемыми сшивкой вариабельных участков тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. Тяжелая и легкая цепи в зсЕу обычно связаны с помощью короткого серинового, глицинового линкера. 8сЕу(б) имеют ту же специфичность, что и антитела, производными которых они являются. Изначально, полученные посредством фагового дисплея 8сЕу(б) могут быть в настоящее время получены с помощью ряда хорошо известных методик.
Также предпочтительными являются В18-8сЕу(б), которые являются слитыми белками двух 8сЕу(б). В18-8сЕу(8) могут быть моно- или биспецифичными. Ряд способов хорошо известен и может быть применен в создании В18-8сЕу(8) в соответствии с данным изобретением.
Также предпочтительными в соответствии с данным изобретением в этой связи являются минитела; моно- и биспецифические диатела; моно-, би- и триспецифические триатела; моно-, би-, три- и тетраспецифические тетратела; домены ν|ιΗ; домены ν-ΝΛΡ; домены νΗ; домены V,.; 1д верблюда; 1д ΝΆΚ.8 и другие.
Также среди предпочтительных воплощений в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения в этом и других отношениях являются белки, содержащие один или более участков СИВ, и/или СИВ-производных, и/или СИВ-связанных участков антитела либо один или более участков ЕВ, и/или ЕВ-производных, и/или ЕВ-связанных участков антитела. В этой связи СИВ подразумевает комплементарно определяющий участок; т.е. гипервариабельный участок легкой или тяжелой цепи антитела, обычно примерно от 9 до 12 аминокислот в длину, который обычно является важной частью антигенспецифического связывающего участка антитела. ЕВ в этой связи подразумевает основной участок антитела; т.е. участок, состоящий из примерно от 15 до 20 аминокислот, который разделяет участки СИВб в антигенспецифическом связывающем участке антитела. Термины производные СИВ и СИВ-связанные и термины производные ЕВ и ЕВ-связанные имеют те же значения, что и СИВ и ЕВ соответственно, как представлено выше в разделе Глоссарий для терминов производных антител и связанных с антителами, так же как и для термина антитело.
Относительно антител, производных антител и связанных с антителами белков в соответствии с вышеуказанным с другими аспектами данного изобретения, описанными в данном изобретении, см., например, Рто1еш Еидшеепид: Рпис1р1е8 аиЛ РтасЛсе, ЛсГГгсу Ь. С1е1аиЛ аиЛ СЛатез 8. Сга1к, еЛб. ^Леу-Ыбб, 1пс., №\ν Уотк (1996), особенно в данном источнике Ке11еу, ВоЬеЛ Е., Еидшеепид ТЛегареиЛс ЛпЛЬоЛ1е8, глава 15, с. 399-434 и НоШидет, Р. & НиЛзои, Р., ЕидшеетеЛ аиЛЬоЛу ГтадшеШб аиЛ (Не пае оГ 81ид1е Лошашб, №Шге Вю1есЛио1оду, 8ер1ешЬег 2005, 1126-1136, каждый из которых включен в данное описание полностью в виде ссылки, особенно в частях, имеющих отношение к структуре и генноинженерному производству антител, особенно биофармацевтических антител, и белков производных антител и связанных с антителами, особенно фармацевтических белков производных антител и связанных с антителами в соответствии с данным изобретением, описанным в данном документе. Что касается всех описанных выше, особенно предпочтительными в данном изобретении являются человеческие, гуманизированные и другие белки, которые не вызывают значительных вредоносных иммунных ответов при введении человеку. Также предпочтительными в данном изобретении являются белки в соответствии со всем указанным выше, которые также не обусловливают значительных вредоносных иммунных реакций при введении субъектам, отличным от людей.
Среди очень предпочтительных белков в соответствии с данным изобретением в этой связи являются слитые-белки, содержащие антитела, и/или белки, связанные с антителами, полипептиды или фрагменты, или подобные, включая все из тех, что описаны выше. Среди очень предпочтительных слитых белков данного изобретения в этой связи имеются слитые белки, содержащие антитело или белок, производное антитела или фрагмент, такой как тот, что описан выше, и лигандсвязывающий участок, такой как иллюстративно описан в данном документе.
- 22 012801
b. Белки, связывающиеся с мишенью.
Также среди предпочтительных белков данного изобретения в этой связи имеются антитела и другие типы белков, связывающихся с мишенью, и связанные с ними или их производными лиганды белков, и белки их производные и связанные с ними.
Среди особенно предпочтительных лигандсвязывающих белков в этой связи имеются белки, которые связывают сигнальные и эффекторные белки и связанные с ними белки или их производные.
Среди таких связывающих белков, включая антитела, включая белки их производные и связанные с ними, имеются те, что связывают один или более из следующих, сами по себе или в любой комбинации:
(ί) СЭ белки, включая, но не ограничиваясь указанными, СЭ3. СЭ4. СЭ8. СЭ19. СЭ20 и СЭ34;
(ίί) белки семейства рецептора НЕК, включая, например, НЕК2, НЕК3, НЕК4 и рецептор ЕСЕ;
(ΐϊϊ) молекулы клеточной адгезии, например ЬЕЛ-Ι, Мо1, р150, 95, УЪА-4, 1САМ-1, УСАМ и альфа ν/бета 3 интегрин;
(ίν) факторы роста, включая, но не ограничиваясь указанными, например, фактор роста эндотелия сосудов (УЕСЕ); гормон роста, тироидстимулирующий гормон, фолликулостимулирующий гормон, лютеинизирующий гормон, релизинг-фактор гормона роста, паратиреоидный гормон, мюллероваингибирующая субстанция, человеческий макрофагальный белок воспаления (ΜΙΡ-1-альфа), эритропоэтин (ЕРО), фактор роста нервов, такой как ΝΟΕ-бета, тромбоцитарный фактор роста (РИСЕ), факторы роста фибробластов, включая, например, аЕСЕ и ЬЕСЕ, эпидермальный фактор роста (ЕСЕ), трансформирующие факторы роста (ТСЕ), включая, среди прочих, ТСЕ-альфа и ТСЕ-бета, включая ТСЕ-бета1, ТСЕ-бета2, ТСЕ-бета3, ТСЕ-бета4 или ТСЕ-бета5, инсулиноподобные факторы роста-Ι и -II (1СЕ-1 и 1СЕ-11), дес(1-3)-1СЕ-1 (ветвь 1СЕ-1) и остеоиндуктивные факторы;
(ν) инсулины и инсулиносвязанные белки, включая, но не ограничиваясь указанными, инсулин, инсулиновую А-цепь, инсулиновую В-цепь, проинсулин и белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста;
(νί) коагуляционные и связанные с коагуляцией белки, такие как, среди прочих, фактор VIII, тканевой фактор, фактор фон Виллебранда, белок С, альфа-1-антитрипсин, активаторы плазминогена, такие как урокиназа и тканевой активатор плазминогена (ΐ-ΡΑ), бомбазин, тромбин и тромбопоэтин;
(νίί) колониестимулирующие факторы (С8Е§), включая следующие, среди прочих, М-С8Е, СМ-С8Е и С-С8Е;
(νίίί) другие белки крови и сыворотки, включая, но не ограничиваясь ими, альбумин, !§Е и антигены группы крови;
(ίχ) рецепторы и рецепторсвязанные белки, включая, например, ПК2/П13 рецептор, рецептор ожирения (ОВ), рецепторы гормона роста и Т-клеточные рецепторы;
(х) нейротрофические факторы, включая, но не ограничиваясь указанными, нейротрофический фактор костного происхождения (ΒΌΝΡ) и нейротрофин-3, -4, -5 или -6 (ΝΓ-3, N4-4, №Г-5 или ΝΓ-6);
(χί) А-цепь релаксина, В-цепь релаксина и прорелаксин;
(χίί) интерфероны, включая, например, интерферон-альфа, -бета и -гамма;
(χίίί) интерлейкины (ΖΗδ), например, от [Ц-1 до [Ц-10;
(χίν) вирусные антигены, включая, но не ограничиваясь, антиген оболочки вируса СПИДа;
(χν) липопротеины, кальцитонин, глюкагон, атриальный натрийуретический фактор, сурфактант легких, фактор некроза опухоли -альфа и -бета, энкефалиназа, ΡΑΝΓΈ8 (регулируемый обычно активацией экспрессируемых и секретируемых Т-клеток), мышиный гонадотропинсвязанный пептид, ДНКаза, ингибин и активин;
(χνί) интегрин, белок А или Ό, ревматоидные факторы, иммунотоксины, морфогенетический белок кости (ВМР), супероксиддисмутаза, белки поверхностной мембраны, комплементзависимый стимулятор гемолиза(ОАЕ), оболочка вируса СПИДа, транспортные белки, хоминг рецепторы, адрессины, регуляторные белки, иммуноадгезины, антитела и (χνίί) биологически активные фрагменты или варианты любых из вышеуказанных.
Что касается всех вышеупомянутых, особенно предпочтительными являются те, что являются эффективными терапевтическими агентами, особенно те, что проявляют терапевтический эффект связыванием с мишенью, особенно с мишенью из тех, что приведены выше, включая мишени-производные, связанные с ними мишени и их модификации.
c. Конкретные иллюстративные белки.
Среди конкретных иллюстративных белков имеются конкретные антитела и белки, связанные с антителами, включая пептитела, такие как, например, те, что приведены сразу ниже и где-либо в данном документе: специфические антитела ОРСЬ и пептитела и подобные (также называемые специфическими антителами ΡΑ.ΝΚΕ, пептителами и подобными), включая полностью гуманизированные и человеческие антитела, особенно полностью гуманизированные моноклональные антитела, включая, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные в международной публикации XVО 03/002713, которая включена в данный документ полностью как касающаяся специфических антител ОРСЬ и белков, связанных с антителами, особенно тех, что имеют последовательности, представленные в ней, особенно, но не ограничиваясь ими, тех, что упомянуты в ней: 9Н7; 18В2; 2Ό8; 2Е11; 16Е1 и 22В3, включая специфические антитела
- 23 012801
ОРСЬ, имеющие либо легкую цепь 8ЕР Ш ΝΌ: 2, как представлено в публикации на фиг. 2, и/или тяжелую цепь 8ЕР ΙΌ NО:4, как представлено в публикации на фиг. 4, каждая из которых индивидуально и специфически включена полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации.
Кислотное и основное титрования специфического антитела ОРСЬ (АЬ-йОРСЬ) в пределах интервала рН от 4,5 до 5,0 и от 5,0 до 5,5 описаны в примерах ниже. Подсчет буферной емкости АЬ-йОРСЬ в этих интервалах рН также описан в примерах ниже.
Агенты, связывающиеся с миостатином, или пептитела, включая миостатин-специфические пептитела, особенно те, что описаны в заявке США 2004/0181033, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки, особенно в разделах, относящихся к миостатин-специфическим пептителам, включая, но не ограничиваясь ими, пептитела семейства тΤN8-19, включая эти 8ЕР ΙΌ ΝΌ8: 305-351, включая ΤΝ8-19-1 через ΤΝ8-19-40, ΤΝ8-19 соп1 и ΤΝ8-19 соп2; пептитела семейства тЬ2 8ЕР ΙΌ NО8: 357-383; семейство тЬ15 8ЕР ΙΌ NО8: 384-409; семейство тЬ17 8ЕР ΙΌ NО8: 410-438; семейство тЬ20 8ЕО ΙΌ ΝΌ8: 439-446; семейство тЬ21 8ЕО ΙΌ ΝΌ8: 447-452; семейство тЬ24 8ЕО ΙΌ ΝΌ8: 453-454 и 8ЕР ΙΌ ΝΌ8: 615-631, каждое из которых индивидуально и специфически включено полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации.
Специфические антитела к рецептору ΙΕ-4. особенно те, что ингибируют активности, вызванные связыванием ЕЬ-4 и/или ЬС-13 с рецептором, включая те, что описаны в международной заявке XVО 2005/047331, международной публикации РСТ/и82004/03742, которая включена полностью в данный документ в качестве ссылки, особенно в разделах, относящихся к специфическим антителам к Ш-4 рецептору, особенно такие антитела, которые описаны в ней, особенно и без ограничения, те, что обозначены здесь: Ь1Н1; Ь1Н2; Ь1Н3; Ь1Н4; Ь1Н5; Ь1Н6; Ь1Н7; Ь1Н8; Ь1Н9; Ь1Н10; Ь1Н11; Ь2Н1; Ь2Н2; Ь2Н3; Ь2Н4; Ь2Н5; Ь2Н6; Ь2Н7; Ь2Н8; Ь2Н9; Ь2Н10; Ь2Н11; Ь2Н12; Ь213; Ь2Н14; Ь3Н1; Ь4Н1; Ь5Н1; Ь6Н1, каждое из которых индивидуально и специфически включено полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации. Кислотное и основное титрования в пределах интервала рН от 4,5 до 5,0 и от 5,0 до 5,5 и подсчет буферной емкости в этом пределе специфического антитела Ш-4 (АЬ-ЫЬ4К) описаны в примерах ниже.
Специфические антитела к рецептору 1 интерлейкина 1 (Ю-КГ'), пептитела и связанные с ними белки и подобные, включая, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные в международной публикации ИЗ 2004/097712А1, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки в разделах, относящихся к белкам специфически связывающимся с Ю-К!, моноклональным антителам, в частности, особенно и без ограничения, те что обозначены здесь: 15СА, 26Е5, 27Е2, 24Е12 и 10Н7, каждая из которых индивидуально и специфически включена полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в ранее упомянутой публикации заявки США.
Специфические антитела к Апд2 и пептитела и связанные с ними белки и подобные, включая, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные в международной публикации νΌ 03/057134 и заявке США И82003/0229023, каждая из которых включена полностью в данный документ в виде ссылки особенно в разделах, относящихся к специфическим антителам к Апд2 и пептителам и подобным, тем последовательностям, описанным здесь и включая, но не ограничиваясь: Μ(Ν); Ε1(Ν) νΤ; Ε·1(Ν) 1К νΤ; 2χΜ(Ν); 2χΜ(Ν) νΤ; СоЫ^), ϋθπ4(Ν) 1К νΤ, 2χСоη4(N) 1К; Ь1(С); Ь1(С) 1К; 2хЬ1(С); Соп4(С); Соп4(С) К; 2хСоп4(С) 1К; СоМ-ЫСЮ; Соп4-Ь1(С); ΤΝ-12-9(Ν); Ό17(Ν); ΤΝ8-8(Ν); ΤΝ8-14(Ν); Соп1(Н), также включая препараты антител к аиб-Апд2 и такие, как те, что описаны в международной публикации νΌ 2003/030833, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки, особенно АЬ526; АЬ528; АЬ531; АЬ533; АЬ535; АЬ536; АЬ537; АЬ540; АЬ543; АЬ544; АЬ545; АЬ546; А551; АЬ553; АЬ555; АЬ558; АЬ559; АЬ565; АЬЕ1АЬЕО; АЬЕЕ; АЬЕ.1; АЬЕК; АЬСЮ4; АЬСС1Е8; АЬН1С12; АЫА1; АЬ1Е; АЬ1АЬ1Р и АЬ1Р, в их различных перестановках, как описано в них, каждая из которых индивидуально и специфически включена полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации.
Специфические антитела к NСΕ, включая, в частности, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные в заявке США И82005/0074821, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки, особенно в отношении специфических антител к NСΕ и связанных с ними белков, в этой связи, включая, в частности, но не ограничиваясь ими, антитела, специфические к NСΕ, обозначенные там 4Ό4, 4С6, 6Н9, 7Н2, 14Ό10 и 14Ό11, каждая из которых индивидуально и специфически включена полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации.
Специфические антитела к СЬ22 и связанные с ними белки, такие как те, что описаны в заявке США 5789554, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки относительно специфических антител к СЬ22 и связанных с ними белков, особенно человеческих специфических антител к СЭ22, такие как, но не ограничиваясь ими, гуманизированные и полностью человеческие антитела, включая, но не ограничиваясь ими, гуманизированные и полностью человеческие моноклональные антитела, особенно включая, но не ограничиваясь ими, человеческие специфические ΙβΟ к СЭ22, такие как, например, димер человеческо-мышиной моноклональной йЬЬ2 гамма-цепи дисульфидно связанной с
- 24 012801 человеческо-мышиной моноклональной йЬЬ2 каппа-цепью, включая, но не ограничиваясь ими, например, человеческие специфические ΓΌ22 полностью гуманизированные антитела в ЕргаШгитаЬ, регистрационный номер СА8 501423-23-0. Иллюстрациями данного изобретения являются кислотное и основное титрования специфического СО22-антитела (АЬ-йСО22) в пределах интервала рН от 4,5 до 5,0 и от 5,0 до 5,5, описаны в примерах ниже. Подсчет буферной емкости АЬ-11СЭ22 в этих интервалах рН также описан в примерах ниже.
Специфические антитела к 1СЕ-1 рецептору и связанные с ними белки, такие как те, что описаны в международной заявке РСТ/и82005/046493, которая включена полностью в данный документ в качестве ссылки относительно специфических антител к 1СЕ-1 рецептору и связанных с ними белков, включая, но не ограничиваясь ими, специфические антитела к 1СЕ-1, обозначенные там, как Ь1Н1, Ь2Н2, Ь3Н3, Ь4Н4, Ь5Н5, Ь6Н6, Ь7Н7, Ь8Н8, Ь9Н9, Ь10Н10, Б11Н13 Ь12Н12, Ь13Н13, Ь14Н14, Ь15Н15, Ь16Н16, Ь17Н17,
Ь18Н18, Ь19Н19, Ь20Н20, Ь21Н21, Ь22Н22, Ь23Н23, Ь24Н24, Ь25Н25, Ь26Н26, Ь27Н27, Ь28Н28,
Ь29Н29, Ь30Н30, Ь31Н31, Ь32Н32, Ь33Н33, Ь34Н34, Ь35Н35, Ь36Н36, Ь37Н37, Ь38Н38, Ь39Н39,
Ь40Н40, Ь41Н41, Ь42Н42, Ь43Н43, Ь44Н44, Ь45Н45, Ь46Н46, Ь47Н47, Ь48Н48, Ь49Н49, Ь50Н50,
Ь51Н51 и Ь52Н52, каждое из которых индивидуально и специфически включено полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной международной заявке.
Специфические антитела к белку 1, связанному с В-7 (В7КР-1, который также обозначают в литературе как В7Н2, 1СО8Ь, В7й и СЭ275), особенно специфические В7КР полностью человеческие моноклональные антитела 1дС2, особенно специфические В7КР полностью человеческие моноклональные антитела 1дС2, которые связываются с эпитопом первого иммуноглобулинподобного домена В7КР-1, особенно те, что ингибируют взаимодействие В7КР-1 с его природным рецептором, 1СО8, в частности, на активированных Т-клетках, особенно во всех указанных случаях, тех, что описаны в предварительной заявке США № 60/700265, внесенной в реестр 18 июля 2005 г., которая включена полностью в данный документ в виде ссылки относительно таких антител, включая, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные здесь следующим образом:
16Н (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 1 и 8ЕО ΙΌ NО: 7 соответственно);
5Ό (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 2 и 8ЕО ΙΌ NО: 9 соответственно);
2Н (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 3 и 8ЕО ΙΌ NО: 10 соответственно);
43Н (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 6 и 8ЕО ΙΌ NО: 14 соответственно);
41Н (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 5 и 8ЕО ΙΌ NО: 13 соответственно) и
15Н (имеющие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи 8Еф ΙΌ NО: 4 и 8ЕО ΙΌ NО: 12 соответственно), каждое из которых индивидуально и специфически включено полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной в предварительной заявке США.
Кислотное и основное титрования и определение буферной емкости специфического антитела к В7КР-1 представлены в примерах ниже.
Специфические антитела к ЕС-15 пептитела и связанные с ними белки, такие как, в частности, гуманизированные моноклональные антитела, особенно антитела, такие как те, что описаны в заявках США И82003/0138421; И82003/023586; И82004/0071702, каждая из которых включена полностью в данный документ в виде ссылки относительно специфических антител к ГС-15 и связанных с ними белков, включая пептитела, включая особенно, например, но не ограничиваясь ими, антитела НиМах ЬС-15 и связанные с ними белки, такие как, например, 146В7.
Специфические антитела к ΙΓΝ-гамма, особенно человеческие анти-ТЕ^гамма специфические антитела, особенно полностью человеческие анти-Ш^гамма антитела, такие как, например, те, что описаны в заявке США И82005/0004353, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки относительно специфических антител к ΙΓΝ-гамма, особенно, например, антитела, обозначенные там 1118; 1118*; 1119; 1121 и 1121*, каждое из которых индивидуально и специфически включено полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации заявки США.
Специфические антитела к ТАЬЬ-1 и другим специфическим антителам к белкам, связывающим ТАТЬ, такие как те, что описаны в заявке США 2003/0195156, которая включена полностью в данный документ в виде ссылки относительно белков, связывающих ТАЕЕ-1, особенно молекулы табл. 4 и 5В, каждая из которых индивидуально и специфически включена полностью в данный документ в виде ссылки, как описано в указанной публикации заявки США.
Фактор(ы) стволовых клеток (8СЕ) и связанные с ними белки, такие как те, что описаны в патентах США № 6204363 и 6207802, каждый из которых включен полностью в данный документ в виде ссылки в отношении факторов стволовых клеток и связанных с ними белков, особенно, например, фактор стволовых клеток 8ТЕМСЕN (ТМ).
- 25 012801
Р1(3-лиганды (РЙЗЬ) и связанные с ними белки, такие как те, что описаны в патенте США № 6632424, который включен в данное описание в виде ссылки относительно РРЗ-лигандов и связанных с ними белков.
Рецепторы 1Ь-17 и связанные с ними белки (1Ь-17К), такие как те, что описаны в патенте США № 6072033, который включен в данное описание в виде ссылки относительно РРЗ-лигандов и связанных с ними белков.
Е1апегеер1. также называемый ЕтЬге1, и связанные с ними белки.
Асйттипе (интерферон-гамма-1Ь), Леваке (алтеплаза), Л1дигахте (ларонидаза), Атеν^νе (алефацепт), Лсопех (интерферон-бета-1а), ВепеР1Х (нонаког-альфа), Веготип (тазонермин), Веакегоп (интерферон-бета-1Ь), ВЕХХАК (тозитумомаб), Тес-Тгорт (соматропин), В1ос1а1е ог ΚΕΟΟΜΒΙΝΑΤΕ (рекомбинант), 'ΕΚΕΖΜΕ (имиглуцераза), ΕΝΒΒΕΕ (этанерцепт), Ергех (эпоэтин-альфа), ΕΡΟΟΕΝ/ΡιόηΙ (эпоэтин-альфа), ΡΑΒΚΑΖΥΜΕ (агальзидаза-бета), Ра8ΐшΐес/Ε1^ΐек ΕΕΙΤΕΚ (разбуриказа) , ΡΟΚΤΕΟ (терипаратид), ΟΕΝΟΤΚΟΡΙΝ (соматропин), 61иса0еп (глюкаген), О1исадоп (глюкагон, рДНК ог1д1п), 6ΟΝΑΕ-Ρ (фоллитропин-альфа), ΚΟΟΕΝΑΤΕ Р§ (октоког-альфа), ΗΕΚ'ΕΡΤΙΝ (трастуцумаб), ΗυΜΑΤΚΟΡΕ (соматропин), ΗυΜΙΚΑ (адалимумаб), инсулин в растворе, ΙΝΕΕΚΟΕΝ® (интерферон альфкон-1), ΚΙΝΕΚΕΤ® (анакинра), Кодепа1е Р8 (антигемофелический фактор), ΕΕυΚΙΝ (саграмостин рекомбинантный человеческий гранулоцито-макрофагальный колониестимулирующий фактор со1опу (^йи^Μ-СδΡ)), 'ΑΜΡΑΤΗ (алемтуцумаб), ΚΙΤυΧΑΝ® (ритуксимаб), ΤΝΙΚ-ι^ (тенектеплаза), ΜΥΕΟΤΑΚΟ (гемтуцумаб озогамицин), ΝΑΤΚΕ'ΟΚ (несиритид), ΑΚΑΝΕδΡ (дарбепоэтин-альфа), ΝΕυΕΑδΤΑ (пегфилграстим), ΝΕυΜΕΟΑ (опрелвекин), ΝΕυΡΟΟΕΝ (филграстим), ΝΟΚΟΙΤΚΟΡΙΝ 'ΑΚΤΚΙΌΟΕδ (соматропин), ΝΟνΟδΕνΕΝ (эптаког-альфа), ΝυΤΚΟΡΙΝ ΑΟ (соматропин), Οηса8ра^ (пегаспаргаза), ΟΝΤΑΚ (денилейкин дифтитокс), ΟΚΤΗΟΡΈΟΝΕ ОКТ (муромонаб-СО3), ΟνΙΩΚΕΕ (хориогонадотропин-альфа), ΡΕΟΑδΥδ (пегинтерферон-альфа-2а), ΡΒΟΕΕυΚΙΝ (Альдеслейкин), ΡυΕΜΟΖΥΜΕ (дорназа-альфа), КеНсаке (Ретеплаза), ΚΕΒΕΤΚΟΝ комбинированная терапия, содержащая ΒΕΒΕΤΟΕ® (рибавирин) и ΙΝΤΚΟΝ® А (интерферон-альфа-2Ь), ΚΕΒΙΕ (интерферон-бета-1а), ΚΕΡΑСΤΟ (антигемофилический фактор), ΚΕΡ^υ^ΑN (лепирудин), ΚΕΜΙ'ΑΌΕ (инфликсимаб), ΚΕΟΡΚΟ (абциксимаб) ΚΟΕΕΚΟN®-Л (интерферон-альфа-2а), δΙΜυΕΕί,’Τ (баасиликсимаб), δΟΜΑνΕΚΤ (пегивизомант), δΥΝΑΟΙδ® (паливицумаб), δΐетЬеη (анцестим фактор стволовых клеток), ΤΗΥΚΟΟΕΝ, ΙΝΤΚΟΝ® А (интерферон-альфа2Ь), ΡΕΟ-ΙΝΤΚΟΝ® (пегинтерферон-альфа-2Ь), ΧΙΟΚΙδ® (дротрекогин-альфа активированный),
ΧΟΕΑΙΚ® (омализумаб), ΖΕΝΑΡΑΧ® (даклизумаб), ΖΕνΑΕΙΝ® (ибритумомаб тиуксетан).
д. Варьирование последовательности.
Особенно предпочтительные белки в связи со всеми указанными выше и последующими включают те, что содержат участки, которые на 70% или больше, особенно на 80% или больше, более особенно на 90% или больше, еще более особенно на 95% или больше, особенно на 97% или больше, более конкретно на 98% или больше, еще более конкретно на 99% или больше идентичны по аминокислотной последовательности сравнения связывающего белка, как показано выше, особенно фармацевтического связывающего белка, такого как ОепВапк, или другой последовательности сравнения белка сравнения.
Идентичность в этой связи может быть определена с применением ряда хорошо известного и легко доступного программного обеспечения для определения аминокислотной последовательности. Предпочтительное программное обеспечение включает то, что используют алгоритмы δт^ΐЬ-^аΐе^таη, использующие удовлетворительный раствор в проблеме поиска и подбора последовательностей. Также могут быть применены другие алгоритмы, особенно где скорость является важным фактором. Обычно применяемые программы для подбора и гомологического соответствия ДНК, РНК и полипептидов, которые могут быть использованы в этой связи, включают ΡΑδΤΑ, ΤΡΑδΤΑ, ВЕ-ΑδΤΝ, Β^ΑδΤΡ, ВЕ-ΑδΤΧ, ΤΒ^ΑδΤN, ΡΚΟδΚ'Η, ВЕ-ΑΖΕ и ΜΡδΚ'Η, последняя представляет собой внедрение алгоритма δт^ι11-\Vаιе^таη для осуществления на множестве параллельно действующих процессоров ΜηδΡηΓ.
Программы ВЕ-ΑδΤΝ, ВБ-ΑδΤΧ и ВЕ-ΑδΤΡ находятся среди предпочтительных программ для таких определений: первая для сравнения полинуклеотидных последовательностей и две последние - для сравнения полипептидных последовательностей; ВЕ-ΑδΤΧ предназначена для сравнения полипептидных последовательностей из всех трех рамок считывания полинуклеотидной последовательности и ВЕ-ΑδΤΡ для одной полипептидной последовательности.
ВЕ-ΑδΤ обеспечивает пользователю ряд определяемых параметров, которые вводятся до осуществления сравнения. Некоторые из них более наглядны, чем другие в графических интерфейсах пользователей, такие как те, что обеспечиваются NСΒI ВЕ-ΑδΤ и другими программами подбора последовательно сти, доступ к которым может быть осуществлен через Интернет. Параметры и их значения устанавливаются и объясняются на сервисных сайтах в Интернете и объясняются и устанавливаются в конкретных деталях в ряду легко доступных текстов, включая, но не ограничиваясь ими, ΒIΟINΕΟΚΜΑΤIСδ: δΕΟΕΕΝ'Ε ΑΝΏ ΟΕΝΟΜΕ ΑΝΑΕΥδΙδ, 2пд Εά., Найд №. Μοиηΐ, Со1д δρπιιρ НагЬог ЬаЬогаЮгу Ρκδδ, Со1д δρππ§ ШтЬог, Νονν Уогк (2004), особенно главы 3, 4, 5 и 6, относительно сравнения последовательностей белка и нуклеиновой кислоты в общем и относительно сравнений ВЕ-ΑδΤ и поисков, в частности; δΕΟυΕΝ'Ε ΑΝΑΕΥδΙδ ΙΝ Α ΝυΤδΗΕΕΕ: Α ΟυΙΌΕ ΤΟ 'ΟΜΜΟΝ ΤΟΟΕδ ΑΝΌ 8соП
- 26 012801
Магке1 апб Оаггу1 Ьеоп, О'КеШу&Аххос1а!ех, [0218] 8еЬах1оро1, Са11£огша (2003), особенно глава 7, относительно ВЬА8Т, в частности, каждая из которых включена в данный документ полностью в виде ссылки, особенно в разделах, касающихся сравнения нуклеотидной и полипептидной последовательностей и определения степени идентичности, схожести, гомологии и/или подобного, особенно относительно сравнения оцениваемой последовательности и последовательности сравнения для подсчета степени (процента) идентичности между ними.
В предпочтительных воплощениях данного изобретения в этой связи соотносимость последовательностей определяется как оценка идентичности в процентах, выдаваемых одним или другим из ранее упомянутых сравнительных поисков ВЬА8Т с е=10 и со всеми другими параметрами, установленными со значениями по умолчанию на сервере ЫСВ1, как показано в 8ЕОиЕЖ.’Е ΆΝΆΒΥ8Ι8 ΙΝ А ХЕТ8НЕЕЕ: А ОиГОЕ ТО ^ΜΜΟΝ ТООЬ8 ΑΝΏ ΌΑΤΑΒΑ8Ε8, 8со11 Магке1 апб Оаггу1 Ьеоп, ОКеШу&Аххос1а!ех, 8еЬах!оро1, СаШогша (2003), с. 47-51, которые включены полностью в данное описание в виде ссылки, и во всех конкретных значениях предпочтительных установок для параметров настоящего изобретения для сравнения последовательностей с применением ВЬА8Т, такие как те, что имеются в NСВI ВЬА8Т.
Следующие источники обеспечивают дополнительную информацию по сравнению последовательности в этой связи и в других. ΟυΙΌΕ ТО НυΜΑN 6ΕNΟΜΕ СОМРиТШО, Еб. Майш 1. В1хйор, Асабеш1с Ргехх, Нагсоий Вгасе&Сотрапу РиЬНхйегх, №\ν Υο^к (1994), который включен в данное описание полностью в виде ссылки в связи с вышесказанным, особенно в разделах, относящихся к определению идентичности и/или гомологии аминокислотной или полинуклеотидной последовательностей, особенно в главе 7. Программы ВЬА8Т описаны в А1!хсйи1 е! а1., Вакс Ьоса1 АНдптеп! Кехеагсй Тоо1, 1. Мо1. Вю1. 215: 403-410 (1990), которые включены в данное описание полностью в виде ссылки. Дополнительная информация, касающаяся анализа последовательности и гомологии и определений идентичности, обеспечена среди многих других хорошо известных легко доступных источников для квалифицированных специалистов в этой области: NυС^ΕIС АСГО АХО РКОТЕШ 8Ε^υΕNСΕ ΑNΑ^Υ8I8: А РРАСТ1САЕ АРРКОАСН, Ебх. М.1. В1хйор апб С.1. Катетдх, ΙΡΡ Ргехх, Ох£огб, иК (1987); РКОТЕПХ 8Т'РЕСТ'иИЕ: А РРАСТ1САЕ АРРКОАСН, Еб. Т.Е. Сге^Ыоп, ΙΡΡ Ргехх, Ох£огб, иК (1989); ЭооШИе, К.Е.: 8еагсЫпд ΙΙιΐΌΐίβΙι хедиепсе ба!аЬахех, Ме1Епх. 183: 99-110 (1990); Меуегх апб МШег: Орйта1 аНдптегИх т 1шеаг храсе, Сотри!. АррНса. ш Вю8с1 4: 11-17 (1988); №еб1етап апб ^ипхсй: А депега1 тебюб арр11саЬ1е !о 111е хеагсй £ог хипбапиех т атто ааб хедиепсе о£ 1\\ό рго!ешх, 1. Мо1. Вю1. 48: 443-453 (1970) апб 8тб11 апб \Уа1егтап 1беп!ШсаЕоп о£ соттоп то1еси1аг хиЬхедиепсех, 1. Мо1. Вю1. 147: 1950 е! хед. (1981), каждый из которых включен в данное описание полностью в виде ссылки со ссылкой на предшествующие, особенно в частях, относящихся к сравнению последовательности и идентичности и определений гомологии.
Особенно предпочтительные воплощения в этой связи имеют от 50 до 150% активности ранее упомянутого белка сравнения, особенно высоко предпочтительные воплощения в этой связи имеют от 60 до 125% активности белка сравнения, еще более предпочтительные воплощения имеют от 75 до 110% активности белка сравнения, еще более предпочтительные воплощения имеют от 85 до 125% активности сравнения, еще более в высокой степени предпочтительные воплощения имеют от 90 до 110% активности сравнения.
4. Препараты.
Многие реагенты и методы, традиционно применяемые для производства фармацевтических белков, могут быть использованы для производства самобуферирующихся белковых композиций в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения. Однако в самобуферирующихся белковых композициях в соответствии с данным изобретением буферирование обеспечивается, по существу, полностью самим белком, а не буферирующим агентом, как в случае с традиционными препаратами. Более того, самобуферирующиеся белковые препараты в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения, по существу, свободны от таких буферирующих агентов.
Во многих других аспектах, однако, композиции самобуферирующегося белка в соответствии с различными аспектами и воплощениями данного изобретения могут быть получены с применением реагентов и способов, традиционно применяемых для производства белков, в частности реагенты и способы, применяемые для производства фармацевтических препаратов, включая фармацевтические препараты для ветеринарии и применения человеком, особенно те реагенты и способы, подходящие для производства белковых фармацевтических препаратов для ветеринарии и особенно для применения человеком.
В соответствии с этим многие методы и ингредиенты могут быть использованы для получения и применения фармацевтических препаратов, которые хорошо известны и обычны в соответствующих областях, могут быть использованы в разработке, создании и применении самобуферирующихся белковых препаратов в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения, с которыми оно связано. Такие методы и ингредиенты описаны, можно назвать только нескольких легко доступных в этой связи источников, в КЕМШОТОК ТНЕ 8СIΕNСΕ АХО РКАСТ1СЕ ОЕ РНΑКΜΑСΥ, 21х! Еб.; Вегшдег е! а1. ЕбИогх, Ырршсой, ^1Шатх&^11ктх, [0226] РЫ1абе1рЫа, РА (2005);
- 27 012801 .ΛΝδΕΙ.'δ РНАКМАСЕиТ1САЬ ΌΘ8Α6Ε ΡΟΚΜδ ΑΝΌ ΌΚυΟ ΏΕΜνΕΚΥ δΥδΤΕΜδ, 8411 Εά., А11еп е1 а1., ΕάίΐοΓδ, Ырртсой, А1Шат8&А11кш8, РЫМе1рЫа, РА (2005); апб РНΑΚΜΑСΕυТIСΑ^ 1ΌΚΜΕΊ АТЮ\ ΟΡ ΡΕΡΤΙΌΕ8 ΑN^ ΡΚΟΤΕΙΝ8, §уеп Ргок)аег апб Ьаг8 Ноудаагб, ΕάίΐοΓδ, СПС Рге§8, Воса ПаЮп. Р1огИа (2000), каждый из которых включен в данное описание полностью в виде ссылки, особенно в разделах, относящихся к обычным ингредиентам и способам, которые могут быть использованы в самобуферирующихся препаратах белков в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения, имеющими к нему отношение.
Дополнительные способы и ингредиенты, которые могут быть полезными в этой связи, описаны, среди прочих, в υδ 6171586; АО 2005/044854; υδ 6288030; υδ 6267958; АО 2004/055164; υδ 4597966; υδ 2003/0138417; υδ 6252055; υδ 5608038; υδ 6875432; υδ 2004/0197324; АО 02/096457; υδ 5945098; υδ 5237054; υδ 6485932; υδ 6821515; υδ 5792838; υδ 5654403; υδ 5908826; ΕΡ 0804163 и АО 2005/063291, каждая из которых включена в данное описание полностью в виде ссылки, особенно в разделах, относящихся к фармацевтически приемлемым самобуферирующим белковым композициям, в соответствии с данным изобретением.
Различные специфические аспекты данных ингредиентов и специфических типов препаратов далее описаны ниже с помощью иллюстрации. Описание, обеспеченное таким образом, не является исчерпывающим для способов и композиций, возможных для самобуферирующихся белковых препаратов в соответствии с различными аспектами и воплощениями данного изобретения, которые также являются во всяком случае исключительными.
В предпочтительных воплощениях ряда аспектов данного изобретения препараты самобуферирующихся белков включают белок и носитель, которые также могут быть отнесены к данному описанию различным образом, так как случай может быть один или более из: носитель, первичный носитель, разбавитель, первичный разбавитель, первичный носитель, растворитель и/или первичный растворитель. В наиболее широком смысле носителем может быть газ, жидкость или твердое вещество, чтобы подходил фазе композиции и/или его применению(ям). В некоторых воплощениях данного изобретения в этой связи носителем является твердое вещество, такое как порошок, в котором может быть диспергирован белок. В предпочтительных воплощениях в этой связи носителем является жидкость, особенно жидкость, в которой самобуферирующий белок является в высокой степени растворимым, особенно в концентрациях, которые обеспечивают желательную буферную емкость. Жидкие носители могут быть органическими или неорганическими. Предпочтительно они являются водными, наиболее предпочтительно, что они в большой степени или полностью состоят из чистой воды.
Следует оценивать то, что препараты для фармацевтического применения в соответствии с различными аспектами и воплощениями данного изобретения должны быть совместимы с процессами и условиями, к которым они будут применены, такие как, например, методики стерилизации (в основном применяемые до смешения с активным агентом) и условия хранения.
Почти всегда препараты в соответствии с множеством аспектов и воплощений данного изобретения содержат дополнительные ингредиенты, включая, но не ограничиваясь, в любом случае эксципиенты и другие фармацевтические агенты. Тем не менее, следует понимать, что препараты в соответствии с данным изобретением являются самобуферирующими препаратами, в которых буферная емкость обеспечивается, по существу или полностью, с помощью самого первичного белка, как описано в данном документе. Препараты в соответствии с различными аспектами и воплощениями данного изобретения могут содержать, среди прочих, эксципиенты, как описано ниже, включая, но не ограничиваясь, ингредиенты для модификации, поддержания или сохранения, например, осмоляльности, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, тоничности, запаха, стерильности, стабильности, уровня диссоциации или высвобождения, адсорбции или проникновения препаратов, и/или первичного полипептида, и/или белка.
Препараты, конечно, зависят, например, от конкретно используемого белка, других активных агентов, таких как другие фармацевтические препараты, которые следует включить в препарат, предполагаемого пути введения, способа введения, дозировки, частоты дозировки и, среди прочих, формата доставки.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают композиции, содержащие белок, предпочтительно фармацевтический белок и растворитель, белок, имеющий буферную емкость на единицу объема по меньшей мере приблизительно 2,0, или 3,0, или 4,0, или 5,0, или 6,50, или 8,00, или 10,0, или 15,0, или 20,0, или 30,0, или 40,0, или 50,0, или 75,0, или 100, или 125, или 150, или 200, или 250, или 300, или 350, или 400, или 500, или 700, или 1,000, или 1,500, или 2,000, или 2,500, или 3,000, или 4,000, или 5,000 мМ буфера ацетата натрия, как определено в пределах интервала рН от 4,0 до 5,0 рН или от 5,0 до 5,5, как описано в примере 1 или 2 и где-либо в данном документе.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка, где, помимо буферной емкости белка, буферная емкость композиции на единицу объема равна или меньше, чем та, что соответствует 1,0, или 1,5, или 2,0, или 3,0, или 4,0, или 5,0 мМ буфера ацетата натрия, как определено в пределах интервала рН от 4,0 до 5,0 или рН от 5,0 до 5,5, как описано в примере 1 или 2 и где-либо в данном документе.
- 28 012801
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка, содержащие белок и растворитель, где при рН композиции буферная емкость белка по меньшей мере равна приблизительно 1,00 или 1,50, или 1,63, или 2,00, или 3,00, или 4,00, или 5,00, или 6,50, или 8,00, или 10,0, или 15,0, или 20,0, или 30,0, или 40,0, или 50,0, или 75,0, или 100, или 125, или 150, или 200, или 250, или 300, или 350, или 400, или 500, или 700, или 1,000, или 1,500, или 2,000, или 2,500, или 3,000, или 4,000, или 5,000 мэкв/л и на изменение рН, равное одной рН единице.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка, содержащие белок и растворитель, где при рН композиции, где, помимо буферной емкости белка, буферная емкость композиции на единицу объема равна или меньше, чем та, что соответствует 0,50, или 1,00, или 1,50, или 2,00, или 3,00, или 4,00, или 5,00, или 6,50, или 8,00, или 10,0, или 20,0, или 25,0 мМ ацетатного буфера, как определено в пределах рН от 4,0 до 5,0 или рН от 5,0 до 5,5, как описано в примере 1 или 2 и где-либо в данном документе.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, где при желательном рН белок обеспечивает по меньшей мере приблизительно 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99 или 99,5% буферной емкости композиции.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка, содержащие белок и растворитель, А, где концентрация белка находится между, приблизительно: 20 и 400, или 20 и 300, или 20 и 250, или 20 и 200, или 20 и 150 мг/мл.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, где рН, поддерживаемое буферирующим действием белка, соответствует рН приблизительно между 3,5 и 8,0, или 4,0 и 6,0, или 4,0 и 5,5, или 4,5 и 5,5.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, где концентрация соли менее чем 150, или 125, или 100, или 75, или 50, или 25 мМ.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, и дополнительно содержащие одну или более фармацевтически приемлемую соль; осмотические уравновешивающие агенты (агенты тоничности); антиоксиданты; антибиотики; антимикотики; агенты-наполнители; лиопротекторы; противовспенивающие агенты; хелатирующие агенты; консерванты; красители; анальгетики или дополнительные фармацевтические агенты.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, и дополнительно содержащие один или более фармацевтически приемлемых полиолов в количестве, которое гипотонично, изотонично или гипертонично, предпочтительно приблизительно изотонично, особенно предпочтительно изотонично, особенно предпочтительно какой-либо один или более из сорбита, маннита, сахарозы, трегалозы или глицерина, особенно предпочтительно приблизительно 5% сорбита, 5% маннита, 9% сахарозы, 9% трегалозы или 2,5% глицерина, весьма в этой связи 5% сорбита, 5% маннита, 9% сахарозы, 9% трегалозы или 2,5% глицерина.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель и дополнительно содержащие одно или более фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество, предпочтительно одно или более из полисорбата 20, полисорбата 80, других эфиров жирных кислот сорбита, полиэтоксилаты и полоксамер 188, особенно предпочтительно полисорбат 20 или полисорбат 80, предпочтительно приблизительно от 0,001 до 0,1% полисорбата 20 или полисорбата 80, очень предпочтительно приблизительно от 0,002 до 0,02% полисорбата 20 или полисорбата 80, особенно от 0,002 до 0,02% полисорбата 20 или полисорбата 80.
Препараты в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений в различных аспектах данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка и растворителя, содержащие белок и растворитель, где белок является фармацевтическим агентом и композиция является его стерильным препаратом, подходящим для лечения животных или людей.
- 29 012801
Также среди препаратов в соответствии с различными аспектами и воплощениями данного изобретения здесь описаны лиофилизированные композиции в соответствии с указанным выше, особенно лиофилизированные композиции, которые при восстановлении обеспечивают препарат, как описано выше и где-либо в данном документе.
а. Эксципиенты и другие дополнительные ингредиенты.
Как обсуждалось выше, конкретные воплощения в соответствии с аспектами данного изобретения обеспечивают самобуферирующиеся белковые композиции, особенно композиции фармацевтического белка, которые содержат, в дополнение к белку, особенно фармацевтическому белку, один или более эксципиентов, таких как те, что иллюстративно описаны в этом разделе и где-либо в данном документе. Эксципиенты могут быть использованы в данном изобретении в этой связи для широкого ряда целей, например для доведения физических, химических или биологических свойств препаратов, например регулировки вязкости, или процессов данного изобретения для улучшения эффективности, или для стабилизации таких препаратов и процессов от разрушения и порчи, например, из-за вредных воздействий, происходящих во время производства, транспортировки, хранения, приготовления перед использованием, введения и далее. Доступен ряд разъяснений, касающихся стабилизации и получения материалов и методов, применимых в этой связи, например, Агакама е! а1. 8ο1\νηΐ 1п1егас1юп8 ίη ркагшасеиНса1 ΓοπηιιЫюпз, Ркагш Кез. 8(3): 285-91 (1991); Кепбпск е! а1. Рку81са1 81аЬ111/а1юп ο£ рго1еш8 ίη а^иеοи8 δοϊυίίοη, ίη КАТЮНЬ ΏΕ8ΙΟΝ ОЕ 8ТАВЬЕ ΡΚΟΤΕΙΝ ΙΌΚΜ1.Ί.ΛΤΙΟΧ8: ТНЕОКУ .ΆΝΙ) РКАСТ1СЕ, Сагреп1ег апб Машину, ебз. Ркагшасеи11са1 ΒιοΑ'οΙιηοΙοπν. 13: 61-84 (2002) и Каηбο1рк е! а1. 8шΐасίаηί-р^οίет пНегас1юп8, Ркагш ΒίοΐβοΒηοΙ. 13: 159-75 (2002), каждое из которых включено в данное описание полностью в виде ссылки, особенно в разделах, относящихся к эксципиентам и процессам для самобуферирующихся белковых препаратов в соответствии с настоящим изобретением, особенно в отношении белковых фармацевтических продуктов и процессов для применения в ветеринарии и/или лечении людей.
Различные эксципиенты, применимые в данном изобретении, представлены в табл. 1 и далее описаны ниже.
Таблица 1
Типы эксципиентов и их функции
Тип Функции
Жидкости Лиофилизаты
Агенты Обеспечивают Стабилизаторы
тоничности/стабилизаторы ИЗОТОНИЧНОСТЬ включают крио и
препарату, подходящую лиопротекторы
для инъекционного Примеры включают
введения полиспирты, сахара и
Примеры включают полимеры
полиспирты, соли и Криопротекторы
аминокислоты защищают белки от
Помогают воздействия
сохранять белок в замораживания
более компактном Лиопротекторы
состоянии (полиспирты) стабилизируют белки в
Минимизируют заморожено-высушенном
электростатические, белок-белковые взаимодействия в растворе (соли) состоянии
Агенты-наполнители Не применяются Применяются для усиления измельченности и для предотвращения выброса Обеспечивают структурное противодействие лио структуре Примеры включают маннит и глицин
Поверхностно- Предотвращают Применяются когда
активные вещества контролируют имеет место агрегация
агрегацию, образование Могут служить для
частиц и поверхностную уменьшения времени
адсорбцию лекарства восстановления
Примеры включают Примеры включают
полисорбат 20 и 80 полисорбат 20 и 80
Антиоксиданты Контролируют Обычно не
окисление белка применяются, молекулярные реакции в лиофилизированной таблетке в значительной степени отложены
- 30 012801
Ионы Определенный ион Могут быть
металлов/Хелатирующие металла входит в включены, если
агенты состав жидкого определенный ион
препарата только как металла включен только
ко-фактор как ко-фактор
Двухв алентные Хелатирующие
катионы, такие как агенты в основном не
цинк и магний нужны в
применяются в лиофилизированных
препаратах суспензий препаратах
Хелатирующие
агенты используются для ингибирования
реакций,
катализируемых ионами
тяжелых металлов
Консерванты Особенно важны Только ДЛЯ
для препаратов, препаратов, содержащих
содержащих множество множество доз
доз Обеспечивает в
Защищают от препаратах защиту от
микробного роста микробного роста
Пример: Обычно включены в
бензиловый спирт восстанавливающий
разбавитель (например,
бактериостатическая вода для инъекций)
ΐ. Соли.
Соли могут быть использованы в соответствии с конкретными из предпочтительных воплощений данного изобретения, например для регулировки ионной силы и/или изотоничности самобуферирующегося препарата и/или для улучшения растворимости и/или физической стабильности самобуферирующегося белка или другого ингредиента композиции самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением.
Как хорошо известно, ионы могут стабилизировать природное состояние белков за счет связывания с заряженными участками на поверхности белка и за счет экранирования заряженных и полярных групп в белке и уменьшения силы электростатических взаимодействий, взаимодействий притяжения и отталкивания. Ионы также могут стабилизировать денатурированное состояние белка за счет связывания, в частности, с денатурированными пептидными связями (-СО\Н) белка. Более того, ионное взаимодействие с заряженными и полярными группами в белках также может уменьшать внутримолекулярные электростатические взаимодействия и, таким образом, предотвращать или снижать агрегацию и нерастворимость белков.
Виды ионов значительно различаются по своему действию на белки. Была разработана систематизация ионов и их эффектов на белки, которая может быть использована в получении композиций самобуферирующегося белка в соответствии с данным изобретением. Одним примером служит ряд Гофмейстера, который выстраивает ионные и полярные неионные растворы по их эффекту на конформационную стабильность белков в растворе. Стабилизирующие растворы называются космотропы. Дестабилизирующие растворы называются хаотропы. Космотропы обычно используются при высоких концентрациях (например, >1 молярный раствор сульфата аммония) для осаждения белков из раствора (высаливание). Хаотропы обычно используются для протезирования и/или для солюбилизации белков (всаливания). Относительная эффективность ионов во всаливании и высаливании определяет их положение в ряду Гофмейстера.
В дополнение к их пользе и недостаткам (как обсуждалось выше) соли также эффективны в снижении вязкости белковых препаратов и могут быть использованы в данном изобретении для этой цели.
Для сохранения изотоничности в парентеральном препарате в соответствии с предпочтительными воплощениями данного изобретения, улучшения растворимости белка и/или стабильности, улучшения вязкостных характеристик, избежания разрушительных эффектов соли на стабильность белка и агрегацию и предотвращения разложения белка, вызванного солью, концентрация соли в композициях самобуферирующегося белка в соответствии с различными предпочтительными воплощениями данного изобретения менее чем 150 мМ (в отношении моновалентных ионов) и 150 мэкв/л для многовалентных ионов. В этой связи в конкретных, особенно предпочтительных воплощениях данного изобретения общая концентрация соли равна примерно от 75 до примерно 140 мэкв/л.
ΐΐ. Аминокислоты.
Свободные аминокислоты могут быть использованы в белковых препаратах в соответствии с различными предпочтительными воплощениями данного изобретения как, к примеру, в нескольких наполнителях, стабилизаторах и антиоксидантах. Однако аминокислоты, входящие в состав препаратов самобуферирующегося белка, в соответствии с данным изобретением не обеспечивают буферирующего действия. По этой причине те, что имеют значительную буферную емкость либо не применяются, не приме
- 31 012801 няются при любом рН, в районе которого они имеют значительную буферную емкость, или используются при низкой концентрации таким образом, что в результате буферная емкость в препарате незначительна. Это является особым случаем для гистидина и других аминокислот, которые обычно используются в качестве буферов в фармацевтических препаратах.
В силу сказанного лизин, пролин, серин и аланин могут быть использованы для стабилизации белков в препарате. Глицин применим в лиофилизации для обеспечения правильной структуры таблетки и свойств. В результате он является обычным ингредиентом в лиофилизированных препаратах и восстановленных лиофилизатах, например Ыеитеда ®, Оепойорт® и Нита1горе®. Аргинин может быть применим для ингибирования агрегации белка, в обоих, как жидких, так и лиофилизированных препаратах, таких как Лейуаке®, Луопех® и ЕпЬге1® жидкие препараты. Метионин применим в качестве антиоксиданта.
ϊϊΐ. Полиспирты.
Полиспирты включают сахара, например маннит, сахароза и сорбит, и многоатомные спирты, такие как, например, глицерин и пропиленгликоль, и для целей обсуждения в данном документе - полиэтиленгликоль (ПЭГ) и связанные с ним вещества. Полиспирты являются космотропами. Они являются эффективными стабилизирующими агентами как в жидких, так и в лиофилизированных препаратах для защиты белков от физических и химических процессов разрушения. Полиспирты также применимы для регулировки тоничности препаратов.
Среди полиспиртов, применяемых в данном изобретении в этой связи, имеется маннит, обычно используемый для обеспечения структурной стабильности таблетки в лиофилизированных препаратах, таких как, например, Беикте®, ЕпЬге1®-Ьуо, и Ве&кегоп®. Он обеспечивает структурную стабильность таблетки. Он в основном используется с лиопротекторами, например сахарозой. Сорбит и сахароза находятся среди предпочтительных агентов для регулировки тоничности и в качестве стабилизаторов для защиты от перепадов замораживания-оттаивания во время транспортировки или получения массы во время процесса производства. Восстанавливающие сахара (которые содержат свободные альдегидные или кетонные группы), такие как глюкоза и лактоза, могут гликировать остатки лизина и аргинина на поверхности.
Следовательно, они в основном не находятся среди предпочтительных полиспиртов для использования в соответствии с данным изобретением. Кроме того, сахара, которые образуют такие реактивные формы, как сахароза, которые гидролизуются до фруктозы и глюкозы в кислых условиях и, следовательно, вызывают гликирование, также не находятся в этой связи среди предпочтительных аминокислот данного изобретения. ПЭГ применим для стабилизации белков и в качестве криопротектора и может быть использован в этой связи в данном изобретении, как это осуществлено в К.ееотЬта1е®.
ίν. Поверхностно-активные вещества.
Молекулы белка подвержены адсорбции к поверхностям и денатурации и последующей агрегации на границах воздух-жидкость, твердое вещество-жидкость и жидкость-жидкость. Эти эффекты обычно обратно пропорциональны концентрации белка. Эти вредные взаимодействия в основном, обратно пропорциональны концентрации белка и обычно усугубляются физическим встряхиванием, таким как то, что происходит при транспортировке и обращении с продуктом.
Поверхностно-активные вещества обычно применяются для предотвращения, минимизации или снижения поверхностной адсорбции. Применимые поверхностно-активные вещества в этом изобретении в этой связи включают полисорбат 20, полисорбат 80, другие эфиры жирных кислот полиэтоксилатов сорбита и полоксамера 188. Поверхностно-активные вещества также обычно используются для контролирования конформационной стабильности. Применение поверхностно-активных веществ в этой связи является белок-специфичным, так как любое конкретное поверхностно-активное вещество обычно стабилизирует одни белки и дестабилизирует другие.
Полисорбаты подвержены разрушению окислением и часто при транспортировке образуют достаточные количества пероксидов для стимуляции окисления боковых цепей белка, особенно метионина. Следовательно, полисорбат нужно использовать осторожно и при использовании, следует применять наименьшую эффективную концентрацию. В этой связи полисорбаты иллюстрируют основное правило, что эксципиенты должны быть использованы при наименьших эффективных концентрациях.
ν. Антиоксиданты.
Ряд процессов может привести к вредному окислению белков в фармацевтических препаратах. В некоторой степени вредное окисление белков может быть предотвращено в фармацевтических препаратах за счет сохранения определенных уровней кислорода в окружающей среде и избегания воздействия света. Эксципиенты-антиоксиданты могут быть использованы также для предотвращения окислительного разложения белков. Среди применимых антиоксидантов в этой связи имеются восстанавливающие агенты, бескислородные акцепторы радикалов и хелатирующие агенты. Антиоксиданты для применения в терапевтических белковых препаратах в соответствии с данным изобретением являются предпочтительно водорастворимыми и сохраняют свою активность на протяжении срока хранения продукта. ЭДТА является предпочтительным антиоксидантом в соответствии с данным изобретением в этой связи и мо
- 32 012801 жет быть использован в данном изобретении во многом таким же образом, что и в препаратах кислого фактора роста фибробластов и в продуктах, таких как КтегеЛ® и Оп!ак®. Антиоксиданты могут разрушать белки. Например, восстанавливающие агенты, такие как глютатион, в частности, могут разрушать внутримолекулярные дисульфидные связи. Таким образом, антиоксиданты для применения в данном изобретении выбирают, среди других вещей, для устранения или достаточного уменьшения возможности произвольного разрушения белков в препарате.
νί. Ионы металлов.
Препараты в соответствии с данным изобретением могут включать ионы металлов, которые являются кофакторами белка и которые необходимы для образования белковых координационных комплексов, такие как цинк, необходимый для образования определенных суспензий инсулина. Ионы металлов могут также ингибировать некоторые процессы, которые разрушают белки. Однако ионы металлов также могут катализировать физические и химические процессы, которые разрушают белки.
Ионы магния (10-120 мМ) могут быть использованы для ингибирования изомеризации аспарагиновой кислоты в изоаспарагиновую кислоту. Ионы Са2+ (до 100 мМ) могут повышать стабильность человеческой дезоксирибонуклеазы (гЮ№§е, Ри1тохутс®). Мд2+, Мп2+ и Ζη2+, однако могут дестабилизировать гН-ДНКазу. Сходным образом, Са2+ и §г2+ могут стабилизировать фактор УШ, он может быть дестабилизирован Мд2+, Мп2+ и Ζη2+, Си2+ и Ее2+ и его агрегация может быть усилена действием ионов А13+.
νίί. Консерванты.
Консерванты необходимы при разработке парентеральных препаратов, содержащих множество доз, которые содержат более чем один экстракт в одном контейнере. Их первичной функцией является ингибирование микробного роста и обеспечение стерильности продукта на протяжении срока хранения или периода использования лекарственного продукта. Обычно используемые консерванты включают бензиловый спирт, фенол и м-крезол. Несмотря на то что консерванты имеют длительную историю применения с синтетическими парентеральными препаратами, разработка белковых препаратов, включающая консерванты может быть сложной. Консерванты почти всегда оказывают дестабилизирующий эффект (аггрегацию) на белки, и это стало основным фактором, лимитирующим их применение в белковых препаратах, содержащих множество доз. До настоящего времени большинство белковых лекарств производилось только для однократного применения. Однако, когда возможны препараты, содержащие множество доз, они имеют дополнительное преимущество в обеспечении удобства использования пациентом и повышенную конкурентоспособность. Хорошим примером служит гормон человеческого роста (ЬСН), где разработка сохраняемых препаратов привела к коммерциализации более удобной многоразовой инъекционной формы. По меньшей мере четыре таких устройства, содержащих сохраняемые препараты ЬСН, в настоящее время доступны на рынке. ШгДЛгорт® (жидкий, Νονο Шг^кк), МПгорт Ар® (жидкий, СепеШесЬ) & Сепойорш (лиофилизированный - двухкамерный картридж, РЬагтааа & Ир)оЬп) содержат фенол, в то время как 8ота1горе® (Е11 ЬШу) готовят с использованием м-крезола.
Некоторые аспекты следует рассматривать во время приготовления и разработки сохраняемых дозированных форм. Эффективная концентрация консерванта в лекарственном продукте должна быть оптимизирована. Это требует тестирования данного консерванта в дозированной форме с интервалами концентраций, которые присваивают антимикробную эффективность без компромисса со стабильностью белка. Например, три консерванта были успешно скринированы в разработке жидкого препарата для интерлейкин-1-рецептора (тип I) с использованием дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Консерванты были выстроены в ряд на основании их вклада в стабильность при концентрациях, обычно используемых в конкурентноспособных продуктах. Как можно ожидать, разработка жидких препаратов, содержащих консерванты, более сложная, чем лиофилизированных препаратов. Замороженовысушенные продукты могут быть лиофилизированы без консерванта и восстановлены с разбавителем, содержащим консервант, во время использования. Это укорачивает время контакта консерванта с белком, значительно минимизируя связанные с этим риски стабильности. В жидких препаратах эффективность консерванта и стабильность должны сохраняться в течение всего срока хранения продукта (примерно от 18 до 24 месяцев). Важным замечанием является то, что эффективность консерванта должна быть показана в конечном препарате, содержащем активное лекарство и все компоненты эксципиента.
Самобуферирующиеся белковые композиции в соответствии с данным изобретением, особенно препараты самобуферирующихся биофармацевтических белков, в основном должны быть разработаны для конкретных путей и способов введения, для определенных доз введения и частоты введения, для определенных терапий определенных заболеваний с интервалами биодоступности и персистенции, среди прочего.
Препараты, таким образом, могут быть разработаны в соответствии с данным изобретением для доставки любым подходящим путем, включая, но не ограничиваясь, пероральный, ауральный, офтальмологический, ректальный и вагинальный и парентеральный пути, включая внутривенную и внутриартериальную инъекцию, внутримышечную и подкожную инъекцию.
- 33 012801
b. Препараты для парентерального введения.
Препараты для парентерального введения могут быть в форме водных или неводных изотонических стерильных инъекционных растворов или суспензий. Эти растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков или гранул с использованием одного или более носителей или разбавителей, упомянутых для использования в препаратах для перорального введения, или за счет использования других подходящих диспергирующих или увлажняющих и суспендирующих агентов.
Когда предполагается парентеральное введение, терапевтические композиции для использования в этом изобретении могут быть в апирогенной форме, парентерально приемлемым водным раствором, содержащим желаемый белок в фармацевтически приемлемом носителе. Особенно предпочтительным носителем для парентерального введения является стерильная, чистая вода, в которой белок находится в форме стерильного, изотонического самобуферирующегося раствора.
Такие препараты могут также включать препарат желаемого белка в форме, среди других вещей, инъекционных микросфер, биоразлагаемых частиц, полимерных соединений (полимолочная кислота, полигликолевая кислота), гранулы или липосомы, включая те, что обеспечивают контролируемое или продолжительное высвобождение. Такие препараты могут быть введены с помощью, среди прочих, имплантируемых средств для высвобождения лекарства.
Препараты для парентерального введения также могут содержать вещества, которые регулируют вязкость, такие как карбоксиметилцеллюлоза, сорбит и декстран. Препараты могут также содержать ингредиенты, которые повышают растворимость желаемого белка или других ингредиентов и которые стабилизируют один или более таких ингредиентов, включая в некоторых случаях самобуферирующий белок.
c. Препараты для введения через легкие.
Фармацевтическая композиция в соответствии с определенными воплощениями данного изобретения может быть подходящей для ингаляционного введения. Для легочного введения фармацевтическая композиция может быть введена в форме аэрозоля или с помощью ингалятора, содержащего аэрозоль сухого порошка. Например, связующий агент может быть получен в форме сухого порошка для ингаляции. Ингаляционные растворы могут быть также приготовлены с пропеллентом для доставки аэрозоля. Еще в другом воплощении растворы могут быть диспергированы. Легочное введение дополнительно описано в заявке РСТ/И894/001875, в которой описывается легочное поступление химически модифицированных белков.
б. Препараты для перорального введения.
Для перорального введения фармацевтическая композиция может быть в форме, например, таблетки, капсулы, суспензии или жидкости. Фармацевтическую композицию предпочтительно получают в форме дозированной единицы, содержащей определенное количество активного ингредиента. Примерами таких дозированных единиц являются таблетки или капсулы. Препараты для перорального введения в соответствии с данным изобретением в этой связи могут быть приготовлены традиционно, где буферирование в препарате обеспечивается самобуферирующим белком, как описано где-либо в данном документе.
е. Препараты с контролируемым высвобождением.
Среди дополнительных препаратов, которые могут быть применены в данном изобретении, как описано в данном документе, являются препараты с продолжительной и контролируемой доставкой. Методики для получения таких препаратов с продолжительной и контролируемой доставкой, которые могут использоваться в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения, хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области. Среди них имеются способы доставки, которые используют липосомные носители, биоразлагаемые микрочастицы, пористые частицы и полупроницаемые полимерные матрицы, такие как те, что описаны в источниках РСТ/И893/00829; И8 3773919; ЕР 58481; 81бшап е! а1., Вюро1утег8, 22:547-556 (1983); Ьап§ег е! а1., 1. Вютеб. Ма!ег. Век., 15:167-277, (1981); Ьапдег е! а1., СЕеш. ТесЕ., 12:98-105 (1982); ЕР 133988; Еррйет е! а1., Ргос. Ыаб. Асаб. 8с1. (И8А), 82:3688-3692 (1985); ЕР 36676; ЕР 88046 и ЕР 143949, каждый из которых включен в данное описание полностью в виде ссылки, особенно в разделах, относящихся к самобуферирующим препаратам фармацевтического белка с продолжительной и контролируемой доставкой в соответствии с описываемым здесь изобретением.
£. Стерилизация.
Фармацевтическая композиция, используемая для применения ΐη у1уо, обычно должна быть стерильной. Это может быть достигнуто фильтрацией через стерильные фильтрационные мембраны. В случае, когда композиция лиофилизирована, стерилизация с применением этого метода может проводиться либо до, либо после лиофилизации и восстановления. Композиция для парентерального введения может храниться в лиофилизированной форме или в растворе. В дополнение, парентеральные композиции обычно помещаются в контейнеры, имеющие стерильный порт доступа, например пакет для внутривенных растворов или флакон с крышкой, которую можно пронзить иглой для подкожных инъекций.
- 34 012801
д. Хранение.
После изготовления фармацевтическая композиция может храниться в стерильных пробирках в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердом виде или дегидратированном состоянии или в виде лиофилизированного порошка. Такие препараты могут храниться либо в готовой к использованию форме, либо в форме (например, лиофилизированной), требующей восстановления перед применением.
й. Дополнительные фармацевтические агенты.
Самобуферирующиеся белковые композиции в соответствии с данным изобретением и особенно композиции самобуферирующихся фармацевтических белков могут содержать в дополнение к самобуферирующимся белкам композиции один или более дополнительный фармацевтический агент. Такие агенты могут быть также белками либо относиться к другим типам агентов. В числе этих агентов те, которые применяются для профилактики и лечения любого расстройства и заболевания. Такие агенты включают в себя, например, антибиотики и антимикотики. Они также включают агенты для лечения расстройств у человека, но не ограничиваясь ими, назовем хотя бы несколько, агенты для лечения воспалительных заболеваний, опухолей, расстройств метаболизма, неврологических и почечных расстройств. Агенты, которые могут быть использованы в данном изобретении в этой связи, также включают агенты, применимые для усиления действия самобуферирующихся композиций и/или предотвращения, улучшения или лечения любых нежелательных побочных эффектов самого применения.
ί. Способы получения препаратов самобуферирующихся белков.
Композиции в соответствии с данным изобретением могут быть получены с применением хорошо известных, общепринятых способов производства, приготовления и использования белков, особенно фармацевтических белков. В конкретных из предпочтительных воплощений ряда аспектов данного изобретения в этой связи способы получения композиций включают применение противоионов для удаления остаточных буферирующих агентов. В этом отношении термин противоион обозначает любой полярный или заряженный элемент, который вытесняет буфер из композиции в процессе ее получения. Противоионы, применимые в этой связи, включают, например, глицин, хлорид, сульфат и фосфат. Термин противоион в данном случае означает то же, что и вытесняющий ион.
Остаточные буферирующие агенты могут быть удалены в этой связи с помощью противоионов, используя ряд хорошо известных методов, включая, но не ограничиваясь ими, стандартные способы диализа и методы, основанные на высокоэффективной диффузии через мембрану, такой как метод диафильтрации тангенциального потока. Способы удаления остаточных буферов с применением противоиона в этой связи, в некоторых случаях, осуществляются с применением гель-фильтрации.
В конкретных, соответствующих предпочтительных воплощениях в этой связи композиции в соответствии с данным изобретением получают с помощью процесса, включающего диализ против раствора, не содержащего буфер, при значении рН ниже самобуферирующегося белка. В особо предпочтительных воплощениях данного изобретения в этой связи раствор, не содержащий буфера, содержит противоионы, особенно те, что облегчают удаление остаточного буфера и не влияют вредно на самобуферирующий белок или его препарат. В дополнительных, предпочтительных воплощениях в этой связи композициях в соответствии с данным изобретением после диализа рН препарата доводится до желаемого значения рН использованием разбавленной кислоты или разбавленного основания.
В конкретных, соответствующих предпочтительных воплощениях в этой связи композиции в соответствии с данным изобретением получают с помощью процесса, включающего диафильтрацию тангенциального потока против раствора, не содержащего буфер, при рН ниже значения рН препарата, содержащего самобуферирующий белок. В особо предпочтительных воплощениях в этой связи раствор, не содержащий буфер, включает противоионы, особенно те, что облегчают удаление остаточного буфера и не влияют вредно на самобуферирующий белок или его препарат. В дополнительных, предпочтительных воплощениях данного изобретения в этой связи после диафильтрации рН препарата доводится до желаемого значения рН использованием разбавленной кислоты или разбавленного основания.
5. Пути введения.
Препараты в соответствии с данным изобретением в различных воплощениях могут быть введены с помощью ряда подходящих способов, хорошо известных квалифицированным специалистам в области применения в отношении субъекта терапий. В воплощениях данного изобретения в этой связи один или более препарат, как описано где-либо в данном документе, вводятся через пищевод. В других воплощениях один или более препарат, как описано где-либо в данном документе, вводится парентерально. В различных воплощениях один или более препарат может быть введен через пищевод вместе с одним или более препаратом, вводимым парентерально.
Такие пути в ряду воплощений включают, но не ограничиваясь ими, введение композиций перорально, окулярно, через слизистые, поверхностно, ректально, через легкие, например с помощью ингаляционного спрея, и накожно. Следующие парентеральные пути введения также применимы в различных воплощениях данного изобретения: внутривенное введение, внутриартериальное введение, внутрисердечное введение, внутрипозвоночное введение, введение в полость позвоночного канала, внутрикостное введение, внутрисуставное введение, внутрикожное введение, интрадермальное введение, подкожное введение, внутрибрюшинное введение и/или внутримышечное введение. В некоторых воплощениях ис
- 35 012801 пользуются внутривенное введение, внутриартериальное введение, внутрикожное введение, интрадермальное введение, подкожное введение и/или внутримышечное введение. В некоторых воплощениях используются внутривенное введение, внутриартериальное введение, внутрикожное введение, подкожное введение и/или внутримышечное введение.
В конкретных воплощениях данного изобретения композиции вводят местно, например, с помощью интраокулярной инъекции для лечения окулярной неоваскуляризации, ретинопатии или старческой дистрофии желтого пятна.
6. Дозы.
Количество введенной композиции самобуферирующегося белка, режим дозирования для лечения болезненного состояния с помощью препарата зависит от ряда факторов, включая возраст, вес, пол и медицинское состояние субъекта, тип заболевания, выраженность заболевания, путь и частота введения, конкретный применяемый препарат. В частности, количество будет зависеть от вводимого терапевтического белка и совместно с ним любых других терапевтических агентов. Дозировки для препаратов могут быть определены в соответствии с данным изобретением с использованием хорошо разработанных обычных фармацевтических методик, используемых для этой цели.
7. Режимы дозирования.
Препараты данного изобретения могут быть введены в дозах и с помощью методик, хорошо известных квалифицированным специалистам в медицинской и ветеринарной областях, принимая во внимание такие факторы, как возраст, пол, вес и состояние конкретного пациента, и препарат, который будут вводить (например, твердое вещество или, наоборот, жидкое). Дозы для людей или других млекопитающих могут быть определены без лишних экспериментов со стороны квалифицированного специалиста из этого описания, документов, цитируемых здесь, и знания данной сферы.
В соответствии с различными воплощениями определенные дозы и схемы дозирования будут зависеть от множества факторов и могут варьировать в различных обстоятельствах.
Параметры, которые определяют оптимальную схему дозирования для введения, обычно будут включать некоторые из следующих: вылечиваемое заболевание и его стадия; род субъекта, его здоровье, пол, возраст, вес и уровень метаболизма; других применяемых терапий и предполагаемых потенциальных осложнений из истории субъекта или генотипа.
Оптимальная схема дозирования в данной ситуации также будет учитывать природу препарата, путь введения, уровень поступления после введения и скорость, при которой он будет вымываться как из места действия, так и из организма субъекта. В конечном итоге, определение оптимального дозирования предпочтительно обеспечит эффективную дозу, которая не ниже порога максимального положительного эффекта, не выше порога, при котором разрушительные эффекты, связанные с дозой активных агентов, превосходят преимущества увеличенной дозы.
Следует оценивать, что доза может быть введена вся сразу, частями или продолжительно в течение периода времени. Вся доза также может быть введена в одно место или разделена на части и введена в несколько мест. Более того, дозы могут оставаться одними и теми же во время лечения или могут варьировать.
В различных воплощениях препараты в соответствии с данным изобретением вводятся в первоначальной дозе и после этого поддерживаются дополнительными введениями. Препарат данного изобретения в некоторых воплощениях вводится первоначально одним способом и после этого вводится этим же способом или с помощью одного или более отличных способов. Дозировки применяемых введений могут регулироваться для сохранения при определенных значениях уровня активных агентов в данном субъекте. В некоторых воплощениях композиции вводят первоначально с помощью внутривенной инъекции и/или для поддержания их уровня в субъекте. В ряду воплощений используются другие формы введения.
Препараты данного изобретения могут быть введены с различной частотой и интервалами времени, которые обеспечивают доставку эффективной для лечения дозы. Дозы могут вводиться продолжительно, каждые несколько часов, один или более раз в день, каждый день, через день или несколько раз в неделю или менее часто. В некоторых воплощениях они вводятся в течение периодов, равных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более дням. В некоторых воплощениях они вводятся в течение периодов, равных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более месяцам. В ряду воплощений они вводятся в течение периодов, равных 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более годам. Подходящие режимы для первоначального введения и дополнительных доз для последовательных введений могут быть одинаковыми или могут варьировать.
Соответствующие режимы могут быть установлены квалифицированным специалистом из этого описания, цитируемых здесь документов и знания уровня техники. В основном протяженность терапий будет пропорциональна протяженности заболевания, эффективности использованных терапий и состояния и реакции субъекта, подвергавшегося лечению.
- 36 012801
8. Заболевания и терапии.
Композиции самобуферирующегося фармацевтического белка в соответствии с данным изобретением, в предпочтительных воплощениях, применимы для лечения субъектов, страдающих от широкого ряда расстройств и заболеваний. Как упоминалось где-либо в данном документе, данное изобретение обеспечивает, среди прочих, самобуферирующиеся композиции фармацевтических антител, фармацевтических белков, производных антител и фармацевтических белков, связанных с антителами, которые могут содержать функции Ес эффектора и связывающие домены, специфичные для широкого ряда мишеней, связанных болезнью, и которые применимы для лечения болезни. Эти белки и их самобуферирующиеся композиции описаны на протяжении данного описания, также как их применение в лечении различных расстройств и заболеваний, связанных с их мишенями. Способы применения композиций, включая способы получения, способы введения, дозы и способы дозирования, все иллюстративно представлены выше. Получение и введение любой конкретной композиции данного изобретения могут принадлежать лечению конкретного заболевания, используя хорошо известные обычные методики в данной области для того, чтобы это сделать, взятые в связи с руководством, обеспеченным настоящим описанием изобретения. Среди заболеваний в соответствии с различными аспектами и предпочтительными воплощениями данного изобретения имеются воспалительные процессы, опухоли, нарушения метаболизма неврологические и почечные, приведены только некоторые.
9. Упаковка и наборы.
Данное изобретение также обеспечивает наборы, содержащие препараты самобуферирующихся белков, особенно наборы, содержащие один или более контейнеров, препарат самобуферирующегося фармацевтического белка и инструкции по его использованию, особенно такие наборы, где препарат является фармацевтически приемлемым препаратом для использования человеком. Среди предпочтительных наборов находятся те, что содержат один или более контейнеров препарата самобуферирующегося белка данного изобретения и один или более отдельных документов, информацию, относящуюся к содержимому набора и/или применения его содержимого, особенно там, где белком является биофармацевтический белок, полученный для лечения заболевания человека.
В определенных аспектах данного изобретения в этой связи предпочтительные наборы включают наборы, как указано выше, дополнительно содержащие один или более отдельных или многокамерных шприцев (например, жидкостные шприцы и лиошприцы) для введения одного или более препарата самобуферирующегося белка данного изобретения. В определенных аспектах данного изобретения в этой связи определенные из особо предпочтительных наборов дополнительно содержат предварительно соединенные шприцы. В дополнительных, особо предпочтительных воплощениях в этой связи наборы содержат самобуферирующую фармацевтическую композицию для парентерального введения, запаянную в пробирке под частичным вакуумом в форме готовой для помещения в шприц и введения субъекту. В особо предпочтительных воплощениях в этой связи композиция находится в них под частичным вакуумом. Во всех этих и других отношениях в конкретных дополнительно предпочтительных воплощениях наборы содержат одну или более пробирку в соответствии с любым из ранее упомянутого, где каждая пробирка содержит однократную дозу для введения субъекту. Во всех этих и других отношениях данное изобретение дополнительно касается наборов, содержащих лиофилизаты, расположенные, как указано выше, которые при восстановлении обеспечивают композиции в соответствии с этим. В этой связи данное изобретение дополнительно обеспечивает в определенных из его предпочтительных воплощений наборы, которые содержат лиофилизат в соответствии с данным изобретением и стерильный разбавитель для восстановления лиофилизата.
Примеры
Настоящее изобретение дополнительно описано с помощью следующих иллюстративных, не ограниченных примеров.
Пример 1. Титрование кислотой и буферные емкости буферов ацетата натрия в интервале рН от 4,0 до 5,0.
Исходный раствор уксусной кислоты с известной концентрацией был получен с помощью разбавления сверхчистой ледяной уксусной кислоты в воде марки для ВЭЖХ и затем титрованием рН до необходимого значения с помощью ΝηΘΗ. Исходные растворы были уравновешены по атмосфере и по температуре 21°С. Стандарты объема были получены при концентрации, равной 1н. и разбавлены, при необходимости, водой марки для ВЭЖХ.
1, 2,5, 5, 7,5, 10 и 15 мМ буферы ацетата натрия были получены разбавлением исходного раствора водой марки для ВЭЖХ. Растворы титровали НС1; 0,2н. НС1 использовали для 1, 2,5 и 5 мМ растворов, 0,4н. НС1 использовали для 7,5 мМ раствора и 0,8н. НС1 использовали для 10 и 15 мМ растворов. Титрования осуществляли с использованием стандартных аналитических лабораторных методик. На фиг. 1 панель А показывает данные титрования и линейные линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, исходя из данных для каждого раствора. Угловой коэффициент линии тренда, вычисленного методом наименьших квадратов, вычисленный из каждого набора данных, был взят как буферная емкость соответствующего ацетатного буфера. Линейная зависимость буферной емкости от концентрации ацетатного буфера показана на фиг. 1, панели В.
- 37 012801
Пример 2. Титрования основанием и буферные емкости буферов ацетата натрия в интервале рН от 5,0 до 5,5.
Исходные растворы ацетатных буферов и растворы для титрования были получены, как описано в примере 1. Растворы титровали, как описано в примере 1, исключая то, что растворы титровали в интервале рН от 5,0 до 5,5 и титрования были осуществлены с использованием №ОН вместо НС1. 0,2н. ΝαΟΗ использовали для титрования 1, 2,5, и 5 мМ растворов и использовался раствор 0,4н. №1ОН для растворов 7,5, 10 и 15 мМ. Результаты титрований показаны на фиг. 2А. Линейная зависимость буферной емкости от концентрации ацетатного буфера показана на фиг. 2В.
Пример 3. Определение ацетата с помощью ВЭЖХ.
Ацетат был определен в образцах ацетатного буфера с использованием 8Е-ВЭЖХ. Стандартная кривая для пиковых областей как функция концентрации ацетата была определена с помощью анализа ацетата в буферах, имеющих известную концентрацию ацетата. Количество ацетата в тестовых образцах было интерполировано из стандартной кривой. Стандартная кривая показана на фиг. 3. Номинальное и измеренное количество ацетата в тестовых буферах приведено в таблице ниже стандартной кривой на фигуре.
Пример 4. Титрования кислотой препарата АЬ-ЮРСЬ в интервале рН от 4,0 до 5,0.
Масса АЬ-ЕОРСЬ в 10 мМ ацетате (условное значение), 5% сорбит, рН 5,0 диафильтровали против 5,25% сорбита, рН 3,2 (доведено с помощью НС1) в системе ЬАБ8САЬЕ ТЕЕ® (МЕЕроге) с многоколлекторной кассетой, с применением 3 МЕЕроге РеШсои ХЬ 50 регенерированных целлюлозных ультрафильтрационных мембран. Диафильтрационный раствор меняли от 8 до 10 раз в течение курса диафильтрации для каждого препарата.
После диафильтрации рН полученного раствора, свободного от буфера, измеряли и доводили до рН 5,0 с применением 0,05н. НС1 или 0,05н. №1ОН. 1, 10, 30, 60, 90 и 110 мг/мл растворы получали для титрования разбавлением. Уровень рН каждого разбавления доводили до рН 5,0 с помощью №ОН или НС1, если необходимо. Титрования осуществляли, как описано в предшествующих примерах: 0,2н. НС1 использовали для титрования 1, 10 и 30 мг/мл растворов; 0,4н. НС1 использовали для титрования 60 мг/мл раствора; 0,8н. НС1 использовали для титрования 90 и 110 мг/мл растворов.
Результаты титрований описаны на фиг. 4. Линия регрессии наименьших квадратов показана для набора данных для каждой концентрации. Буферная емкость была взята как угловой коэффициент линии регрессии для каждой концентрации.
Пример 5. Титрования основанием препарата АЬ-ЕОРСЬ в интервале рН от 5,0 до 6,0.
1, 10, 30, 60, 90 и 110 мг/мл растворы АЬ-ЕОРСЬ получали для титрования, как описано в примере 4. Титрования основанием проводили с помощью №1ОН. как описано в предшествующих примерах. 0,2н. №1ОН использовали для титрования 1, 10, 30 и 60 мг/мл растворов и 0,4н. №1ОН использовали для 90 и 110 мг/мл растворов.
Результаты титрований отображены на графике фиг. 5.
Линейные регрессионные линии показаны для данных для каждой концентрации. Буферная емкость была взята как угловой коэффициент линии регрессии для каждой концентрации.
Пример 6. Уровни остаточного ацетата в препаратах самобуферирующегося АЬ-ЕОРСЬ.
Количество остаточного ацетата в препаратах АЬ-ЕОРСЬ определяли с применением методов, описанных в примере 3. Результаты графически отображены на фиг. 6, которая демонстрирует стандартную кривую, касающуюся измерений ВЭЖХ относительно концентраций ацетата, ниже графика - таблица результатов определений, сделанных на препаратах АЬ-ЕОРСЬ при различных концентрациях. Концентрации АЬ-ЕОРСЬ показаны слева (Условно) и измеренная концентрация ацетата в каждой концентрации АЬ-ЕОРСЬ показана справа.
Пример 7. Буферная емкость препаратов АЬ-ЕОРСЬ плюс или минус остаточный ацетат в интервале рН от 4,0 до 5,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-ЕОРСЬ были получены и оттитрованы НС1, как описано в предшествующих примерах. В дополнение к этому данные были доведены путем вычитания вклада остаточного ацетатного буфера, основываясь на определении содержания ацетата с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано, например, в примере 3. Буферные емкости были определены, как описано выше. Такой же анализ был проведен на обоих наборах данных. Результаты, отображенные на фиг. 7, показывают эффект остаточного ацетата на буферную емкость препаратов АЬ-ЕОРСЬ. Результаты проясняют, что буферная емкость остаточного ацетата является минорным фактором в буферной емкости препаратов самобуферирующегося АЬ-ЕОРСЬ, которые были проанализированы.
Пример 8. Буферная емкость АЬ-ЕОРСЬ плюс или минус остаточный ацетат в интервале рН от 5,0 до 6,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-ЕОРСЬ были получены и оттитрованы №ОН, как описано в предшествующих примерах. В дополнение к этому данные были доведены путем вычитания вклада остаточного ацетатного буфера, основываясь на определении содержания ацетата с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано, например, в примере 3. Буферные емкости были определены, как описано выше.
- 38 012801
Такой же анализ был проведен на обоих наборах данных. Результаты, отображенные на фиг. 8, показывают эффект остаточного ацетата на буферную емкость препаратов АЬ-НОРСЬ. Результаты проясняют, что буферная емкость остаточного ацетата является минорным фактором в буферной емкости препаратов самобуферирующегося АЬ-НОРСЬ, которые были проанализированы.
Пример 9. рН и стабильность АЬ-НОРСЬ в самобуферирующихся и обычно буферируемых препаратах.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-НОРСЬ были получены, как описано в предшествующих примерах. Дополнительно препараты были приготовлены содержащими обычный буферирующий агент и/или ацетат или глутамат. Все препараты содержали 60 мг/мл АЬ-НОРСЬ. Стабильность рН и АЬ-НОРСЬ в препаратах отслеживалась в течение 6 месяцев при хранении при 4°С. Стабильность отслеживалась применением мономерного АЬ-НОРСЬ в препаратах в течение времени хранения. Определение было осуществлено с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано выше. Результаты для всех трех препаратов показаны на фиг. 9. Панель А демонстрирует стабильность АЬ-НОРСЬ в трех препаратах. Стабильность в самобуферирующем препарате является такой же хорошей, как и в традиционно буферируемых препаратах. Панель В показывает стабильность рН трех препаратов. Снова стабильность рН в самобуфериующем препарате является такой же хорошей, как и в традиционно буферируемых препаратах.
Пример 10. Титрование и буферные емкости АН-НВ7КР1 - рН от 4,0 до 5,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-НВ7КР1 были получены в концентрациях 1, 10, 30 и 60 мг/мл, как описано для АЬ-НОРСЬ в предшествующих примерах. Титрования осуществляли с применением НС1, как описано выше. В дополнение к этому данные были доведены путем вычитания вклада остаточного ацетатного буфера, основываясь на определении содержания ацетата, с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано, например, в примере 3. На фиг. 10 (панель В) показана зависимость буферной емкости от концентрации препаратов АЬ-НВ7КР1 до и после вычитания вклада остаточного ацетатного буфера. Результаты ясно показывают самобуферирующую емкость АЬ-НВ7КР1 в этом интервале рН. При 40 мг/мл она обеспечивает приблизительно настолько большую буферную емкость в этом интервале рН, как и 10 мМ буфер ацетата натрия. При 60 мг/мл она обеспечивает приблизительно настолько большую буферную емкость, как и 15 мМ буфер ацетата натрия.
Пример 11. Титрование и буферные емкости АН-НВ7ВР1 - рН от 5,0 до 6,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-НВ7КР1 были получены в концентрациях 1, 10, 30 и 60 мг/мл, как описано для АЬ-НОРСЬ в предшествующих примерах. Титрования осуществляли с применением ЫаОН, как описано выше. В дополнение к этому данные были доведены путем вычитания вклада остаточного ацетатного буфера, основываясь на определении содержания ацетата с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано, например, в примере 3. На фиг. 11, панель А показывает результаты титрований, панель В - зависимость буферной емкости от концентрации препаратов АН-НВ7ВР1 до и после вычитания вклада остаточного ацетатного буфера. Результаты ясно показывают самобуферирующую емкость АН-НВ7ВР1 в этом интервале рН. При 60 мг/мл она обеспечивает приблизительно настолько большую буферную емкость в этом интервале рН, как и 10 мМ буфер ацетата натрия.
Пример 12. Стабильность АЬ-НВ7КР1 в самобуферирующихся и обычно буферируемых препаратах при 4 и 29°С.
АЬ-НВ7КР1 получали, как описано в предшествующих примерах, и готовили препарат, как описано выше, в самобуферирующихся препаратах и препаратах с применением традиционного буферирующего агента либо ацетата или глутамата. Все препараты содержали 60 мг/мл АЬ-НВ7КР1. Стабильность уровня рН раствора и АЬ-НВ7КР1 в растворе отслеживали в течение 26 недель хранения при 4 или при 29°С. Стабильность отслеживалась определением мономерного АЬ-НВ7КР1 в препаратах в течение времени хранения. Определение было осуществлено с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано выше. Результаты показаны на фиг. 12. Панель А отображает результаты для хранения при 4°С. Панель В отображает результаты для хранения при 29°С. АЬ-НВ7КР1 был, по меньшей мере, таким же стабильным в самобуферирующем препарате при 4°С, как и традиционно буферируемые препараты. При 29°С самобуферирующий препарат был, по меньшей мере, таким же стабильным, как и традиционно буферируемые препараты, и может быть слегка лучшим с 10-й недели до последней временной точки.
Пример 13. рН стабильность самобуферирующегося АЬ-НВ7КР1 при 4 и 29°С.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-НВ7КР1 при 60 мг/мл были получены, как описано в предшествующем примере. рН стабильность отслеживалась в течение времени и при тех же температурах, как описано в них. Результаты показаны на фиг. 13.
Пример 14. Буферная емкость препаратов АН-НСЭ22 - рН от 4,0 до 6,0.
Самобуферирующиеся препараты АН-НСЭ22 были получены и оттитрованы в интервалах рН от 4,0 до 5,0 и в интервале от 5,0 до 6,0, как описано для АЬ-НОРСЬ и АЬ-БВ7КР1 в предшествующих примерах. Буферные емкости были подсчитаны исходя из данных титрования, так же, как описано выше. Буферная емкость как функция концентрации показана на фиг. 14 для обоих интервалов рН. Панель А показывает буферную емкость для препаратов АЬ-11СЬ22 в пределах интервала рН от 4,0 до 5,0. Буферная емкость находится в линейной зависимости от концентрации, и приблизительно 21 мг/мл препарата АН-НСЭ22 имеет буферную емкость, равную 10 мМ буфера ацетата натрия рН 5,0, измеренную таким же образом.
- 39 012801
Панель В показывает буферную емкость как функцию концентрации в интервале рН от 5,0 до 6,0. В этом интервале рН приблизительно 30 мг/мл препарата АЬ-йСО22 имеет буферную емкость, равную 10 мМ буфера ацетата натрия, рН 5,0, измеренную таким же образом.
Пример 15. Титрования и буферные емкости препаратов АЬ-ЫЬ4В - рН 5,0 до 4,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-ЫЬ4В были получены в концентрациях 1, 10, 25 и 90 мг/мл, как описано для АЬ-йОРСЬ в предшествующих примерах. Титрования осуществляли с применением НС1, как описано выше. На фиг. 15 панель А показывает результаты титрования, панель В - зависимость буферной емкости от концентрации препаратов АЬ-ЫЬ4В. Результаты ясно показывают самобуферирующую емкость АЬ-ЫЬ4В в этом интервале рН. Приблизительно при 75 мг/мл она обеспечивает настолько большую буферную емкость в этом интервале рН, как и 10 мМ буфер ацетата натрия, рН 5,0, измеренную таким же образом.
Пример 16. Титрования и буферные емкости препаратов АЬ-ЫЬ4В - рН 5,0 до 6,0.
Самобуферирующиеся препараты АЬ-ЫЬ4В были получены в концентрациях 1, 10, 25 и 90 мг/мл, как описано для АЬ-йОРСЬ в предшествующих примерах. Титрования осуществляли с применением №ОН, как описано выше. На фиг. 16, панель А показывает результаты титрования, панель В - зависимость буферной емкости от концентрации АЬ-ЫЬ4В в этом интервале рН. Результаты ясно показывают самобуферирующую емкость АЬ-ЫЬ4В в этом интервале рН. Приблизительно при 90 мг/мл она обеспечивает настолько большую буферную емкость в этом интервале рН, как и 10 мМ буфер ацетата натрия, рН 5,0, измеренную таким же образом.
Пример 17. АЬ-ЫЬ4В и рН стабильность в ацетате и самобуферирующихся препаратах АЬ-ЫЬ4В при 37°С.
Самобуферирующиеся и ацетатно-буферируемые препараты АЬ-йОРСЬ при рН 5,0 и 70 мг/мл были получены, как описано выше. рН и стабильность АЬ-ЫЬ4В в препаратах отслеживались в течение 4 недель при 37°С. Стабильность АЬ-ЫЬ4В отслеживалась с помощью 8Е-ВЭЖХ, как описано выше. Результаты показаны на фиг. 17. Панель А демонстрирует, что АЬ-ЫЬ4В является, по меньшей мере, таким же стабильным в самобуферирующем препарате, как и препарат буфера ацетата натрия. Панель В показывает, что рН в самобуферирующем препарате является таким же стабильным, как и в препарате буфера ацетата натрия.

Claims (32)

1. Композиция, содержащая фармацевтический белок, где при рН композиции, измеренной при 21°С, 1 атм и равновесии с окружающей атмосферой, белок имеет буферную емкость на единицу объема, равную по меньшей мере 1,50 мэкв/л-рН, где дополнительно, исключая указанную емкость, буферная емкость на единицу объема данной композиции менее чем 0,5 мэкв/л-рН, где композиция была утверждена для фармацевтического применения законно уполномоченным для этого органом.
2. Композиция по п.1, где при рН композиции, измеренной при 21°С, 1 атм и равновесии с окружающей атмосферой, белок имеет буферную емкость на единицу объема, равную по меньшей мере приблизительно 4,0 мМ буфера ацетата натрия в чистой воде в интервале рН от 4,0 до 5,0 или от 5,0 до 5,5 в тех же условиях, и где дополнительно, исключая буферную емкость указанного белка, буферная емкость на единицу объема данной композиции в тех же условиях равна не более чем 2,0 мМ буфера ацетата натрия в чистой воде в интервале рН от 4,0 до 5,0 или от 5,0 до 5,5 в тех же условиях.
3. Композиция по п.2, где белок обеспечивает по меньшей мере 80% буферной емкости композиции.
4. Композиция по п.2 или 3, где концентрация белка находится приблизительно между 20 и 400 мг/мл.
5. Композиция по пп.2, 3 или 4, где рН, поддерживаемый буферирующим действием белка, находится приблизительно между 3,5 и 8,0.
6. Композиция по п.5, где рН, поддерживаемый буферирующим действием белка, находится приблизительно между 4,0 и 6,0.
7. Композиция по п.5, дополнительно содержащая одну или более фармацевтически приемлемую соль.
8. Композиция по п.7, где общая концентрация соли составляет менее чем 150 мМ.
9. Композиция по п.8, где общая концентрация соли составляет менее чем 100 мМ.
10. Композиция по любому из пп.2-9, дополнительно содержащая один или более фармацевтически приемлемый полиол.
11. Композиция по п.10, где полиол представляет собой один или более из сорбита, маннита, сахарозы, трегалозы или глицерина.
12. Композиция по любому из пп.2-11, дополнительно содержащая одно или более фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество (ПАВ).
13. Композиция по п.12, где ПАВ представляет собой один или более из полисорбата 20, полисорбата 80, других эфиров жирной кислоты сорбита, полиэтоксилатов и полоксамера 188.
- 40 012801
14. Композиция по любому из пп.2-13, дополнительно содержащая одно или более фармацевтически приемлемое соединение: осмотические агенты; антиоксиданты; антибиотики; антимикотики; наполнители; лиопротекторы; противовспенивающие агенты; хелатирующие агенты; консерванты, красители и анальгетики или дополнительные фармацевтические агенты.
15. Композиция по любому из пп.2-14, где белок содержит первый связывающий участок пары родственных связывающих участков.
16. Композиция по любому из пп.2-15, где белок является или содержит антитело, фрагмент ЕаЬ, фрагмент ЕаЬ2, фрагмент ЕаЬ3, фрагмент Ес, фрагмент ксЕу, фрагмент Ь18-8сЕу(8), мини-боди, диабоди, триабоди, тетрабоди, домен Уш, домен У-NΑК, домен УН, домен Уъ, Ιβ верблюда, Ιβ NΑК, рецептитело, пептитело или вариант, или их производное, или связанный с ними белок, или их модификацию.
17. Композиция по любому из пп.2-16, где белок выбирают из группы, состоящей из белков, которые специфически связывают один или более из белков СО, белков семейства рецептора НЕК, молекул клеточной адгезии, факторов роста, факторов роста нервов, факторов роста фибробластов, трансформирующих факторов роста (ΤΟΕ), инсулиноподобных факторов роста, остеоиндуктивных факторов, инсулинов и связанных с инсулином белков, белков коагуляции, и белков, связанных с коагуляцией, колониестимулирующих факторов (С8Ек), других сывороточных белков и антигенов белков крови; рецепторов, рецепторов Т-клеток; нейротрофических факторов, нейротрофинов, релаксинов, интерферонов, интерлейкинов, вирусных антигенов, липопротеинов, интегринов, ревматоидных факторов, иммунотоксинов, поверхностных мембранных белков, транспортных белков, «хоминг-рецепторов», адрессинов, регуляторных белков и иммуноадгезинов.
18. Композиция по любому из пп.2-16, где белок выбирают из группы, состоящей из ОРСЬспецифически связывающих белков, миостатин специфически связывающих белков, ΙΕ-4-рецептора специфически связывающих белков, Ю-К1 специфически связывающих белков, Апд2 специфически связывающих белков, NСΕ специфически связывающих белков, СЭ22 специфически связывающих белков, IСΕ-I-рецептора специфически связывающих белков, В7КР-1 специфически связывающих белков, ΙΕΝгамма специфически связывающих белков, 'АБЕ-! специфически связывающих белков, факторов стволовых клеток, Е11-3 лигандов и ΙΕ-17 рецепторов.
19. Композиция по любому из пп.2-16, где белок выбирают из группы, состоящей из белков, которые специфически связывают один или более из СО3, СЭ4, СЭ8, СЭ19, СЭ20, СЭ34; НЕК2, НЕК3, НЕК4, рецептора ЕСЕ; ЬЕА-1, Мо1, р150,95, УЪА-4, КАМ-Е УСАМ, альфа ν/бета 3 интегрина; сосудистого фактора роста эндотелия (УЕСЕ); гормона роста, тиреоид-стимулирующего гормона, фолликулстимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, релизинг-фактора гормона роста, паратиреоидного гормона, мюллеровой ингибирующей субстанции, человеческого макрофагального белка воспаления (МЖ-1-альфа), эритропоэтина (ЕРО), NСΕ-бета, тромбоцитарного фактора роста (РОСЕ), аЕСЕ, ЬЕСЕ, эпидермального фактора роста (ЕСЕ), 'СЕ-альфа, ТСЕ-бета1, ТСЕ-бета2, ТСЕ-бета3, ТСЕ-бета4, ТСЕ-бета5, ЮЕ-Ι, ЮЕ-ΙΙ, дес(1-3)-IСΕ-I (ЮЕ-Ι мозга), инсулина, А-цепи инсулина, В-цепи инсулина, проинсулина, белков, связывающих инсулиноподобный фактор роста, таких как, среди других, фактор УШ, тканевый фактор, фактор фон Виллебрандта, белка С, альфа-1-антитрипсина, активаторов плазминогена, таких как урокиназа и активатор тканевого плазминогена (ΐ-РА), бомбазина, тромбина и тромбопоэтина; М-С8Е, СМ-С8Е, С-С8Е, альбумина, ^Е, Пк2/П(3 рецептора, рецептора ожирения (ОВ), нейротрофического фактора костного происхождения (ΈΟΝΙ), ΝΤ-3, ΝΤ-4, ΝΤ-5, ΝΤ-6; А-цепи релаксина, В-цепи релаксина, прорелаксина; интерферона-альфа, -бета и -гамма; ΙΓ-1 - ΙΓ-10; оболочечный антиген вируса СПИД; кальцитонина, глюкагона, атриального натрийуретического фактора, сурфактанта легких, фактора некроза опухоли -альфа и -бета, энкефалиназы, ΡΑNΤΕ8, мышиного гонадотропинсвязанного пептида, ДНКазы, ингибина и активина; белка А или Ό, костного морфогенетического белка (ВМР), супероксиддисмутазы, стимулятора гемолиза (ПАЕ).
20. Композиция по любому из пп.2-16, где белок выбирают из группы, состоящей из актиммунна (интерферон-гамма-1Ь), активазы (алтеплаза), альдуразма (ларонидаза), амевива (алефацепт), авонекса (интерферон-бета-1а), ВепеЕЕХ (нонаког-альфа), беромун (тазонермин), беатсерон (интерферон-бета-1Ь), ВЕХХАК (тозитумомаб), тетропина (соматропин), биоклата или ^СОМВ^А^ (рекомбинант), СЕКЕ2МЕ (имиглуцераза), ЕАВЕЕБ (этанерцепт), Ергех (эпоэтин-альфа), ΕΡОСΕN/процита (эпоэтинальфа), ЕАВКА2УМЕ (агальзидаза-бета), фастуртека/элитека ЕЫ'ЕК (расбуриказа), ЕОК'ЕО (терипаратид), СΕNОΤКОΡIN (соматропин), С1исаСеп (глюкагон), глюкагон (глюкагон, происходящий от рДНК), СО^Е-Е (фолитропин-альфа), КОСΕNΑΤΕ Е8 (октоког-альфа), НΕКСΕΡΤIN (трастуцумаб), НиМАтаОРЕ (соматотропин), НИМЖА (адалимумаб), инсулина в растворе, INРΕКСΕN® (интерферональфакон-1), КINΕКΕΤ® (анакинра), Кодепа1е Е8 (антигемофилический фактор), БЕИКЮ (8АКСКΑМО8ΤIМ, рекомбинантный человеческий гранулоцит-макрофагальный колониестимулирующий фактор (гйиСМ-С8Е)), САМРАТН (алемтуцумаб), КIΤυXΑN® (ритуксимаб), ТНКазы (тенектеплаз), МУЕО'АКС (гемтуцумаб озогамицин), NΑΤКΕСОК (несиритид), ΑКΑNΕ8Ρ (дарбепоэтин-альфа), ΝΞυЕА8'А (пегфилграстим), АЕиМЕСА (опрелвекин), NΕυΡОСΕN (филграстим), NОК^IΤКОΡIN САК'^□№8 (соматотропин), NОУО8ΕVΕN (эптаког-альфа), NυΤКОΡIN Ар (соматропин), Опсакраг (пе
- 41 012801 гаспаргаза), ОЭТАК (денилейкин дефтитокс), ОКТНОСЬО№ ОКТ (муромонаб-СО3), ΟνΙΌΚΕΕ (хориогонадотропин-альфа), ΡΕСΑδΥδ (пегинтерферон-альфа-2а), ΕΡΟΕ-ΕυΡΙΝ (альдеслейкин), РЕЙМОΖΥΜΕ (дорназа-альфа), Ке1ауа§е (Ретеплаза), ^ΒΕ^ΟΝ комбинированная терапия, содержащая ΠΕΒΕΤΟ^® (рибавирин) и INΤΚΌN® А (интерферон-альфа-2Ь), ΠΕΒΙΡ (интерферон-бета-1а), ^РАСТО (антигемофилический фактор), ΚΕΡ^υ^ΑN (лепирудин), ΚΕΜIСΑ^Ε (инфликсимаб), ΚΕΟΓΚΟ (абциксимаб), Κ,ΟΡΈΚΟΝΦ-А (интерферон-альфа-2а), δIΜυ^ΕСΤ (баасиликсимаб), δΟΜΑVΕΚΤ (пегивизомант), δΥNΑСIδ® (паливицумаб), δΐетЬеη (анцестим, фактор стволовой клетки), 'ΜΥΡΏΟΕ^ ΙΝΤΚΌN® А (интерферон-альфа-2Ь), ΡΕС-INΤΚΌN® (пегинтерферон-альфа-2Ь), ΧΙΟΠΙδ® (активированный дротрекогин-альфа), ХОЬА1К® (омалицумаб), ΖΕNΑΡΑX® (даклицумаб) и ΖΕVΑ^IN® (ибритумомаб тиуксетан).
21. Композиция по любому из пп.2-20, где белок представляет собой АЬ-йОРСЬ, или его фрагмент, или вариант, или его производное, или производное его фрагмента или белок связан с АЬ-йОРСЬ, или его фрагментом, или модификацией любого из них.
22. Композиция по п.21, где белком является АЬ-йОРСЬ.
23. Композиция по любому из пп.2-20, где белок представляет собой АЬ-й1Ь4К, или его фрагмент, или вариант, или его производное, или производное его фрагмента или белок связан с АЬ-й1Ь4К, или его фрагментом, или модификацией любого из них.
24. Композиция по п.23, где белком является АЬ-й1Ь4К.
25. Композиция по любому из пп.2-20, где белок представляет собой АЬ-йВ7КР1, или его фрагмент, или вариант, или его производное, или производное его фрагмента или белок связан с АЬ-йВ7КР1, или его фрагментом, или модификацией любого из них.
26. Композиция по п.25, где белком является АЙ-ЙВ7ПР1.
27. Лиофилизат, который после восстановления обеспечивает композицию по любому из предшествующих пунктов.
28. Набор, содержащий один или более контейнеров композиции по любому из пп.1-26 и инструкции по его использованию или лиофилизат по п.27 и инструкции по его использованию.
29. Композиция по любому из пп.1-27 для применения в медицине.
30. Способ получения композиции по любому из пп.1-27, включающий удаление остаточного буфера с использованием противоиона или с использованием диафильтрации против раствора, не содержащего буфера, имеющего рН ниже желаемого значения.
31. Способ получения композиции по п.30, включающий удаление остаточного буфера с использованием одного или более из следующих в присутствии противоиона: гель-фильтрации, диализа и/или фильтрации тангенциального потока, и/или ионообменной хроматографии.
32. Способ получения композиции по п.30, где после диафильтрации рН доводится до желаемого уровня добавлением разбавленной кислоты и/или разбавленного основания.
EA200800050A 2005-06-14 2006-06-08 Самобуферирующиеся композиции белков EA012801B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US69058205P 2005-06-14 2005-06-14
PCT/US2006/022599 WO2006138181A2 (en) 2005-06-14 2006-06-08 Self-buffering protein formulations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200800050A1 EA200800050A1 (ru) 2008-04-28
EA012801B1 true EA012801B1 (ru) 2009-12-30

Family

ID=37570999

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200800050A EA012801B1 (ru) 2005-06-14 2006-06-08 Самобуферирующиеся композиции белков

Country Status (16)

Country Link
US (12) US20080311078A1 (ru)
EP (3) EP1909831A4 (ru)
JP (6) JP2008543839A (ru)
KR (1) KR20080031684A (ru)
CN (1) CN101217979A (ru)
AU (1) AU2006259664A1 (ru)
BR (1) BRPI0611901A2 (ru)
CA (1) CA2610839C (ru)
EA (1) EA012801B1 (ru)
ES (1) ES2776657T3 (ru)
HK (1) HK1256288A1 (ru)
IL (1) IL188102A0 (ru)
MX (1) MX2007015476A (ru)
SG (1) SG162788A1 (ru)
WO (1) WO2006138181A2 (ru)
ZA (1) ZA200800338B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2644243C2 (ru) * 2011-10-20 2018-02-08 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы к cd22
RU2764521C2 (ru) * 2017-12-29 2022-01-18 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Водная фармацевтическая композиция рекомбинантного моноклонального антитела к ФНОа

Families Citing this family (130)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
CA2995971A1 (en) * 2005-03-25 2006-10-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vegf antagonist formulations
EA012801B1 (ru) * 2005-06-14 2009-12-30 Эмджен Инк. Самобуферирующиеся композиции белков
WO2007014073A2 (en) * 2005-07-22 2007-02-01 Amgen Inc. Concentrated protein lyophilates, methods, and uses
KR101105871B1 (ko) * 2005-09-27 2012-01-16 주식회사 엘지생명과학 인 난포자극호르몬의 안정한 용액 제형
NZ611859A (en) 2006-04-05 2014-12-24 Abbvie Biotechnology Ltd Antibody purification
JP5216002B2 (ja) 2006-06-16 2013-06-19 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 硝子体内投与に適したｖｅｇｆアンタゴニスト製剤
KR20090074040A (ko) 2006-09-13 2009-07-03 아보트 러보러터리즈 세포 배양의 개선
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
US7767206B2 (en) 2006-10-02 2010-08-03 Amgen Inc. Neutralizing determinants of IL-17 Receptor A and antibodies that bind thereto
AU2007234612B2 (en) 2006-12-14 2013-06-27 Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc Protein stabilization formulations
CA2790018C (en) * 2006-12-21 2015-02-03 Amgen Inc. Formulations
WO2008097926A2 (en) * 2007-02-02 2008-08-14 Yale University Transient transfection with rna
RU2476442C2 (ru) 2007-03-29 2013-02-27 Эббот Лэборетриз Кристаллические антитела против il-12 человека
US7678764B2 (en) 2007-06-29 2010-03-16 Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc Protein formulations for use at elevated temperatures
US8058237B2 (en) 2007-08-07 2011-11-15 Advanced Technologies & Regenerative Medicine, LLC Stable composition of GDF-5 and method of storage
US7982016B2 (en) 2007-09-10 2011-07-19 Amgen Inc. Antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin
CA2904458C (en) * 2007-11-30 2017-07-25 Wolfgang Fraunhofer Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
CN102026619A (zh) 2008-04-14 2011-04-20 先进科技及再生医学有限责任公司 液体缓冲的gdf-5制剂
SG10201702922VA (en) 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
SG10201702951RA (en) 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Viral inactivation during purification of antibodies
US20110236391A1 (en) * 2008-12-09 2011-09-29 Hanns-Christian Mahler Method for obtaining an excipient-free antibody solution
TW201117824A (en) 2009-10-12 2011-06-01 Amgen Inc Use of IL-17 receptor a antigen binding proteins
PT3295957T (pt) 2010-01-15 2019-11-12 Kirin Amgen Inc Formulação de anticorpo anti il-17ra e regimes terapêuticos para o tratamento de psoríase
US20110206672A1 (en) * 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
JOP20190250A1 (ar) * 2010-07-14 2017-06-16 Regeneron Pharma صيغ مستقرة تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد عامل نمو الأعصاب
US8945559B2 (en) 2010-10-06 2015-02-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stabilized formulations containing anti-interleukin-4 receptor (IL-4R) antibodies
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
MX344727B (es) 2010-11-11 2017-01-05 Abbvie Biotechnology Ltd Formulaciones liquidas de anticuerpos anti-tnf-alfa de alta concentracion mejoradas.
US9078878B2 (en) 2010-12-01 2015-07-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75
MX359070B (es) 2010-12-01 2018-09-13 Alderbio Holdings Llc Composiciones anti-ngf y uso de las mismas.
US9884909B2 (en) 2010-12-01 2018-02-06 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
US9539324B2 (en) 2010-12-01 2017-01-10 Alderbio Holdings, Llc Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions
US9067988B2 (en) 2010-12-01 2015-06-30 Alderbio Holdings Llc Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies
US11214610B2 (en) 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
CN102533704A (zh) * 2010-12-30 2012-07-04 上海雅心生物技术有限公司 即配即用型的胰蛋白酶制剂
KR102061355B1 (ko) * 2011-07-01 2019-12-31 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 아르기닌-없는 tnfr : fc-융합 폴리펩티드 조성물 및 이용 방법
KR102007055B1 (ko) 2011-09-22 2019-08-02 암젠 인크 Cd27l 항원 결합 단백질
JP6113176B2 (ja) * 2011-10-18 2017-04-12 コヒラス・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド キシリトールによって安定化されたエタネルセプト製剤
CN104169299B (zh) 2012-01-23 2018-06-05 瑞泽恩制药公司 含抗Ang-2 抗体的稳定化制剂
BR112014020930A2 (pt) * 2012-03-05 2017-06-27 De Staat Der Nederlanden Vert Door De Mini Van Vws Miniie Van Volksgezondheid Welzijn En Sport método para produzir uma formulação seca de um agente biofármaco, e, formulação de um agente biofármaco
UY34813A (es) 2012-05-18 2013-11-29 Amgen Inc Proteínas de unión a antígeno dirigidas contra el receptor st2
AR092325A1 (es) 2012-05-31 2015-04-15 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit
WO2014020171A1 (en) * 2012-08-03 2014-02-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Buffer capacity of antibodies
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
RS60226B1 (sr) 2012-09-07 2020-06-30 Coherus Biosciences Inc Stabilne vodene formulacije adalimumaba
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
WO2014096051A1 (en) * 2012-12-21 2014-06-26 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Anti her2 antibody formulation
JO3519B1 (ar) 2013-01-25 2020-07-05 Amgen Inc تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3
ES2728936T3 (es) 2013-01-25 2019-10-29 Amgen Inc Anticuerpos dirigidos contra CDH19 para melanoma
KR101990341B1 (ko) * 2013-03-12 2019-06-19 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 세포 내재화를 유도하기 위한 ｃｄ20-결합 면역독소 및 이의 사용 방법
US9580486B2 (en) 2013-03-14 2017-02-28 Amgen Inc. Interleukin-2 muteins for the expansion of T-regulatory cells
SI2970449T1 (sl) 2013-03-15 2019-11-29 Amgen Res Munich Gmbh Enoverižne vezavne molekule, ki vsebujejo N-terminalni ABP
US9708375B2 (en) 2013-03-15 2017-07-18 Amgen Inc. Inhibitory polypeptides specific to WNT inhibitors
WO2014140368A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Amgen Research (Munich) Gmbh Antibody constructs for influenza m2 and cd3
SG11201508829QA (en) 2013-05-30 2015-12-30 Biogen Ma Inc Oncostatin m receptor antigen binding proteins
AU2014318017B2 (en) 2013-09-05 2020-02-06 Amgen Inc. Fc-containing molecules exhibiting predictable, consistent, and reproducible glycoform profiles
AR097648A1 (es) 2013-09-13 2016-04-06 Amgen Inc Combinación de factores epigenéticos y compuestos biespecíficos que tienen como diana cd33 y cd3 en el tratamiento de leucemia mieloide
AU2015241373B2 (en) 2014-03-31 2020-11-05 Amgen K-A, Inc. Methods of treating nail and scalp psoriasis
IL285529B2 (en) * 2014-05-13 2023-03-01 Amgen Inc Process control systems and methods for the use of filters and filtration processes
UY36245A (es) 2014-07-31 2016-01-29 Amgen Res Munich Gmbh Constructos de anticuerpos para cdh19 y cd3
EP3174901B1 (en) 2014-07-31 2019-06-26 Amgen Research (Munich) GmbH Optimized cross-species specific bispecific single chain antibody constructs
EP3218399A1 (en) 2014-11-10 2017-09-20 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies and methods of use in ophthalmology
IL283764B2 (en) 2015-04-10 2024-01-01 Amgen Inc Interleukin for the expansion of myotonic control T-2 cells
SG10201909308XA (en) 2015-04-17 2019-11-28 Amgen Res Munich Gmbh Bispecific antibody constructs for cdh3 and cd3
TWI717375B (zh) 2015-07-31 2021-02-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｃｄ７０及ｃｄ３抗體構築體
TW202346349A (zh) 2015-07-31 2023-12-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Dll3及cd3抗體構築體
TWI829617B (zh) 2015-07-31 2024-01-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｆｌｔ３及ｃｄ３抗體構築體
TWI744242B (zh) 2015-07-31 2021-11-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Egfrviii及cd3抗體構築體
TWI796283B (zh) 2015-07-31 2023-03-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｍｓｌｎ及ｃｄ３抗體構築體
SI3334747T1 (sl) 2015-08-13 2024-02-29 Amgen Inc. Globinsko nabito filtriranje proteinov, ki vežejo antigen
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
UA126656C2 (uk) 2016-02-03 2023-01-11 Емджен Рісерч (Мюнік) Гмбх Біспецифічна конструкція антитіла до psma і cd3, яке залучають t-клітини
MA43955B1 (fr) 2016-02-03 2022-02-28 Amgen Inc Anticorps anti-bcma et anti-cd3 bispécifiques de format bite
EA039859B1 (ru) 2016-02-03 2022-03-21 Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх Биспецифические конструкты антител, связывающие egfrviii и cd3
GB201603280D0 (en) * 2016-02-24 2016-04-13 Ferring Bv Stable liquid gonadotropin formulation
WO2017170626A1 (ja) * 2016-03-30 2017-10-05 千寿製薬株式会社 水性液剤
CA3019482A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Vhsquared Limited Compositions
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
EP3808764A1 (en) 2016-05-04 2021-04-21 Amgen Inc. Interleukin-2 muteins for the expansion of t-regulatory cells
EP3471773A4 (en) 2016-06-21 2020-07-08 Teneobio, Inc. ANTIBODIES BINDING CD3
JP2019527710A (ja) 2016-08-08 2019-10-03 アムジエン・インコーポレーテツド 抗スクレロスチン抗体を用いた結合組織付着の改善方法
JP7030109B2 (ja) 2016-09-14 2022-03-04 テネオバイオ， インコーポレイテッド Ｃｄ３結合抗体
EP3528787A4 (en) 2016-10-21 2020-05-06 Amgen Inc. PHARMACEUTICAL FORMULATIONS AND PROCESSES FOR THEIR PREPARATION
WO2018119215A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Teneobio, Inc. Anti-bcma heavy chain-only antibodies
JOP20190189A1 (ar) 2017-02-02 2019-08-01 Amgen Res Munich Gmbh تركيبة صيدلانية ذات درجة حموضة منخفضة تتضمن بنيات جسم مضاد يستهدف الخلية t
WO2018200533A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Amgen Inc. Excipients to reduce the viscosity of antibody formulations and formulation compositions
AU2018261951A1 (en) 2017-05-05 2019-10-31 Amgen Inc. Pharmaceutical composition comprising bispecific antibody constructs for improved storage and administration
EP3642237A2 (en) 2017-06-20 2020-04-29 Teneobio, Inc. Anti-bcma heavy chain-only antibodies
MA50239A (fr) 2017-09-15 2020-07-22 Amgen Inc Procédé de formulation pharmaceutique lyophilisée d'une protéine thérapeutique
WO2019057631A1 (en) 2017-09-20 2019-03-28 Alvotech Hf PHARMACEUTICAL FORMULATIONS FOR ADALIMUMAB
EP3692061A1 (en) 2017-10-04 2020-08-12 Amgen Inc. Transthyretin immunoglobulin fusions
JP7344206B2 (ja) 2017-12-11 2023-09-13 アムジェン インコーポレイテッド 二重特異性抗体製品のための連続製造プロセス
GB201721846D0 (en) * 2017-12-22 2018-02-07 Arecor Ltd Novel composition
UY38041A (es) 2017-12-29 2019-06-28 Amgen Inc Construcción de anticuerpo biespecífico dirigida a muc17 y cd3
CA3087574A1 (en) * 2018-01-09 2019-07-18 Otonomy, Inc. Growth factor otic formulations
US11103552B2 (en) 2018-05-10 2021-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High concentration VEGF receptor fusion protein containing formulations
EP3829633A1 (en) 2018-08-03 2021-06-09 Amgen Research (Munich) GmbH Antibody constructs for cldn18.2 and cd3
WO2020060179A1 (ko) * 2018-09-18 2020-03-26 삼성바이오에피스 주식회사 완충화제를 포함하지 않는 트라스투주맙 항체 안정화 제제
MX2021003976A (es) 2018-10-11 2021-05-27 Amgen Inc Procesamiento posterior de constructos de anticuerpos biespecificos.
TW202033216A (zh) * 2018-11-16 2020-09-16 南韓商三星Ｂｉｏｅｐｉｓ股份有限公司 包含蛋白質的穩定液體組成物
EP3897571A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Arecor Limited Novel composition
MA55033A (fr) * 2019-02-18 2021-12-29 Lilly Co Eli Formulation d'anticorps thérapeutique
EP3983520A1 (en) 2019-06-13 2022-04-20 Amgen, Inc Automated biomass-based perfusion control in the manufacturing of biologics
AR119746A1 (es) 2019-06-14 2022-01-05 Teneobio Inc Anticuerpos multiespecíficos de cadena pesada que se unen a cd22 y cd3
JP2022538083A (ja) 2019-06-21 2022-08-31 ソリッソ ファーマシューティカルズ，インク． ポリペプチド
JP2022537780A (ja) 2019-06-21 2022-08-29 ソリッソ ファーマシューティカルズ，インク． ポリペプチド
CA3140208A1 (en) 2019-07-08 2021-01-14 Amgen Inc. Multispecific transthyretin immunoglobulin fusions
GB201911461D0 (en) 2019-08-09 2019-09-25 Arecor Ltd Novel composition
AU2020328038A1 (en) 2019-08-13 2022-03-31 Amgen Inc. Interleukin-2 muteins for the expansion of T-regulatory cells
EP4058485A1 (en) 2019-11-13 2022-09-21 Amgen Inc. Method for reduced aggregate formation in downstream processing of bispecific antigen-binding molecules
JP6965474B1 (ja) * 2019-12-09 2021-11-10 旭化成ファーマ株式会社 テリパラチド又はその塩を含有するプレフィルドシリンジまたはカートリッジ製剤の振盪による白濁を抑制する方法
KR20220114595A (ko) 2019-12-17 2022-08-17 암젠 인크 치료에서의 사용을 위한 이중 인터류킨-2/tnf 수용체 효현제
EP4093771A1 (en) 2020-01-22 2022-11-30 Amgen Research (Munich) GmbH Combinations of antibody constructs and inhibitors of cytokine release syndrome and uses thereof
CA3175275A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Amgen Inc. Antibodies against mucin 17 and uses thereof
JP2023527293A (ja) 2020-05-19 2023-06-28 アムジエン・インコーポレーテツド Ｍａｇｅｂ２結合構築物
CN116249552A (zh) * 2020-08-11 2023-06-09 隆延生物科技（上海）有限公司 一种液体制剂及其应用
JP2023547661A (ja) 2020-11-06 2023-11-13 アムジエン・インコーポレーテツド Ｃｄ３に結合するポリペプチド構築物
AU2021374839A1 (en) 2020-11-06 2023-06-08 Amgen Inc. Multitargeting bispecific antigen-binding molecules of increased selectivity
WO2022096704A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Amgen Inc. Antigen binding domain with reduced clipping rate
CR20230235A (es) 2020-11-06 2023-10-05 Amgen Res Munich Gmbh Construcciones polipeptídicas que se unen selectivamente a cldn6 y cd3
AU2021379816A1 (en) * 2020-11-13 2023-06-22 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising human interleukin 2 variant or derivative thereof and use thereof
GB202102258D0 (en) * 2021-02-17 2021-03-31 Arecor Ltd Novel composition
AU2022223669A1 (en) 2021-02-17 2023-08-03 Arecor Limited Aqueous composition of an engineered protein construct comprising an fc domain
AU2022269312A1 (en) 2021-05-06 2023-10-19 Amgen Research (Munich) Gmbh Cd20 and cd22 targeting antigen-binding molecules for use in proliferative diseases
WO2023278821A2 (en) * 2021-07-01 2023-01-05 Upkara, Inc. Superconcentrated formulations of bioactive agents
TW202346368A (zh) 2022-05-12 2023-12-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 具有增加的選擇性的多鏈多靶向性雙特異性抗原結合分子
WO2024059675A2 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Amgen Inc. Bispecific molecule stabilizing composition
WO2024104409A1 (zh) * 2022-11-16 2024-05-23 苏州盛迪亚生物医药有限公司 一种含抗rankl-ngf双特异性抗体的药物组合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040023313A1 (en) * 2002-04-05 2004-02-05 Boyle William J Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors

Family Cites Families (182)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
DE2837168A1 (de) 1978-08-25 1980-03-06 Blutspendedienst Dt Rote Kreuz Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese anwendung geeigneten immunglobulinloesung
US4362661A (en) 1979-08-09 1982-12-07 Teijin Limited Immunoglobulin composition having a high monomer content, and process for production thereof
US4360457A (en) 1979-08-30 1982-11-23 Teijin Limited S-Sulfonated immunoglobulin composition having a high monomer content and a process for production thereof
US4374763A (en) 1979-09-17 1983-02-22 Morishita Pharmaceutical Co., Ltd. Method for producing gamma-globulin for use in intravenous administration and method for producing a pharmaceutical preparation thereof
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4396608A (en) 1981-08-24 1983-08-02 Cutter Laboratories Intravenously injectable immune serum globulin
DE3374837D1 (en) 1982-02-17 1988-01-21 Ciba Geigy Ag Lipids in the aqueous phase
US5702699A (en) 1982-09-23 1997-12-30 Cetus Corporation Process for the recovery of lipophilic proteins
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
DE3474511D1 (en) 1983-11-01 1988-11-17 Terumo Corp Pharmaceutical composition containing urokinase
US4681713A (en) 1984-03-15 1987-07-21 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Method of making a hollow fiber membrane for dialysis
US4597966A (en) 1985-01-09 1986-07-01 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Histidine stabilized immunoglobulin and method of preparation
US6673347B1 (en) * 1986-04-30 2004-01-06 Gryphon Therapeutics Polypeptide and protein derivatives and process for their preparation
GB8628104D0 (en) 1986-11-25 1986-12-31 Connaught Lab Pasteurization of immunoglobin solutions
DE3640513A1 (de) 1986-11-27 1988-06-09 Biotest Pharma Gmbh Verfahren zur herstellung eines virussicheren, lagerstabilen und intravenoes vertraeglichen immunglobulin-g-praeparates
JP2547556B2 (ja) 1987-02-06 1996-10-23 株式会社 ミドリ十字 ｒ−グロブリンの液状製剤
US5237054A (en) 1987-02-20 1993-08-17 Akzo Pharma Stabilized aqueous composition containing antibodies
WO1990005183A1 (en) * 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
US5395760A (en) 1989-09-05 1995-03-07 Immunex Corporation DNA encoding tumor necrosis factor-α and -β receptors
EP1132471A3 (de) 1989-09-12 2001-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
US6204363B1 (en) 1989-10-16 2001-03-20 Amgen Inc. Stem cell factor
SG59931A1 (en) 1989-10-16 1999-02-22 Amgen Inc Stem cell factor
DE3939346A1 (de) 1989-11-29 1991-06-06 Behringwerke Ag Arzneimitel zur subkutanen oder intramuskulaeren applikation enthaltend polypeptide
US5945098A (en) 1990-02-01 1999-08-31 Baxter International Inc. Stable intravenously-administrable immune globulin preparation
US5177194A (en) 1990-02-01 1993-01-05 Baxter International, Inc. Process for purifying immune serum globulins
GB9017002D0 (en) 1990-08-02 1990-09-19 Health Lab Service Board Improved method for the purification of erwina l-asparaginase
JP3179538B2 (ja) 1990-12-11 2001-06-25 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 安定なヒトカルシトニンの水性溶液
JPH0565233A (ja) 1991-03-08 1993-03-19 Mitsui Toatsu Chem Inc モノクローナル抗体含有凍結乾燥製剤
US5110910A (en) 1991-03-25 1992-05-05 Miles Inc. Virucidal euglobulin precipitation
US5256571A (en) 1991-05-01 1993-10-26 Cytyc Corporation Cell preservative solution
GB9122820D0 (en) 1991-10-28 1991-12-11 Wellcome Found Stabilised antibodies
WO1993013133A1 (en) 1991-12-20 1993-07-08 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. HUMAN TYPE ANTIBODY REACTIVE WITH GPIIb/IIIa
US6004555A (en) 1992-03-05 1999-12-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for the specific coagulation of vasculature
US5298410A (en) 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
US5484892A (en) * 1993-05-21 1996-01-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies that block ligand binding to the CD22 receptor in mature B cells
NZ314644A (en) 1993-05-24 2000-11-24 Immunex Corp Use of flt3-ligands as a growth stimulator of stem cells in the transplantation of tissue
US6288030B1 (en) 1993-12-22 2001-09-11 Amgen Inc. Stem cell factor formulations and methods
DE4344824C1 (de) 1993-12-28 1995-08-31 Immuno Ag Hochkonzentriertes Immunglobulin-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung
GB9401448D0 (en) 1994-01-26 1994-03-23 Ciba Geigy Ag Stable dry powders
US5955448A (en) 1994-08-19 1999-09-21 Quadrant Holdings Cambridge Limited Method for stabilization of biological substances during drying and subsequent storage and compositions thereof
US5580856A (en) 1994-07-15 1996-12-03 Prestrelski; Steven J. Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
NZ306653A (en) 1995-03-23 1999-03-29 Immunex Corp Isolated dna il-17 receptors
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
CN101712720A (zh) 1996-02-09 2010-05-26 艾博特生物技术有限公司 结合人TNFα的人抗体
TW518219B (en) 1996-04-26 2003-01-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Erythropoietin solution preparation
GB9610992D0 (en) 1996-05-24 1996-07-31 Glaxo Group Ltd Concentrated antibody preparation
TW555765B (en) 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
CA2261291A1 (en) 1996-07-18 1998-01-29 Csl Limited Pasteurization of immunoglobulin solutions
TW491855B (en) 1996-08-07 2002-06-21 Csl Ltd Purification of immunoglobulins
EP0852951A1 (de) 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
GB9705810D0 (en) 1997-03-20 1997-05-07 Common Services Agency Intravenous immune globulin
US5886154A (en) 1997-06-20 1999-03-23 Lebing; Wytold R. Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies
JP3679406B2 (ja) 1998-05-20 2005-08-03 協和醗酵工業株式会社 遺伝子組換え抗体
US6436897B2 (en) 1998-06-01 2002-08-20 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulations for IGF/IGFBP
JP4685238B2 (ja) 1998-06-09 2011-05-18 ツエー・エス・エル・ベーリング・アクチエンゲゼルシヤフト 静脈投与用免疫グロブリン及び他の免疫グロブリン生成物の製造法
US6610206B1 (en) 1998-10-20 2003-08-26 Advanced Renal Technologies Buffered compositions for dialysis
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
US7294481B1 (en) 1999-01-05 2007-11-13 Immunex Corporation Method for producing recombinant proteins
EP2332976B1 (en) * 1999-02-03 2014-04-02 Amgen, Inc Novel polypeptides involved in immune response
DK1165119T3 (da) 1999-04-08 2003-12-15 Genentech Inc Sammensætning baseret på modsat ladede polypeptider
DK1181036T3 (da) 1999-04-09 2008-11-24 Ortho Mcneil Pharm Inc Farmaceutiske sammensætninger af erythropoietin
US20040220103A1 (en) 1999-04-19 2004-11-04 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
CA2366785C (en) 1999-04-19 2012-02-07 Immunex Corporation Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
US20010021380A1 (en) 1999-04-19 2001-09-13 Pluenneke John D. Soluble tumor necrosis factor receptor treatment of medical disorders
EP1220682B1 (en) 1999-10-04 2006-11-22 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Stabilized liquid polypeptide-containing pharmaceutical compositions
NZ519222A (en) 1999-12-14 2004-04-30 Genentech Inc TNF-alpha antagonists and LFA-1 antagonist for treating LFA-1 or TNF-alpha mediated disorder
AU2262501A (en) 1999-12-16 2001-06-25 Amgen, Inc. Tnfr/opg-like molecules and uses thereof
JP2003522155A (ja) 2000-02-10 2003-07-22 ワイス 細胞損傷または細胞死を治療または阻害する方法
ES2267593T3 (es) 2000-02-16 2007-03-16 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-april y celulas hibridomas.
AUPQ599700A0 (en) 2000-03-03 2000-03-23 Super Internet Site System Pty Ltd On-line geographical directory
US20050209447A1 (en) 2000-07-25 2005-09-22 Takashi Ito Process for producing recombinant protein
JP5490972B2 (ja) 2000-08-04 2014-05-14 中外製薬株式会社 タンパク質注射製剤
WO2002013860A1 (fr) 2000-08-11 2002-02-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparations stabilisees contenant un anticorps
AU2002213441B2 (en) 2000-10-12 2006-10-26 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
MXPA03005327A (es) 2000-12-14 2004-12-03 Fujisawa Pharmaceutical Co Anticuerpos anti-cd28 silenciados y el uso de estos.
US6693173B2 (en) 2000-12-26 2004-02-17 Alpha Therapeutic Corporation Method to remove citrate and aluminum from proteins
WO2002053596A2 (en) * 2001-01-05 2002-07-11 Pfizer Inc. Antibodies to insulin-like growth factor i receptor
ES2184594B1 (es) 2001-01-17 2004-01-01 Probitas Pharma Sa Procedimiento para la produccion de gammaglobulina g humana inactivada de virus.
CZ20032208A3 (cs) 2001-02-23 2004-01-14 Immunex Corporation Zvýšený výtěžek aktivních proteinů
EP1921088B1 (en) 2001-05-11 2014-10-08 Amgen Inc. Peptides and related molecules that bind to tall-1
GB0113179D0 (en) * 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
JP2004521474A (ja) 2001-06-25 2004-07-15 コーニンクレッカ　フィリップス　エレクトロニクス　エヌ　ヴィ 高圧ガス放電ランプおよび高圧ガス放電ランプの製造方法
CN1547486A (zh) * 2001-06-26 2004-11-17 抗opgl抗体
WO2004081026A2 (en) 2003-06-30 2004-09-23 Domantis Limited Polypeptides
US7153507B2 (en) 2001-08-23 2006-12-26 Genmab A/S Human antibodies specific for interleukin 15 (IL-15)
US7247304B2 (en) 2001-08-23 2007-07-24 Genmab A/S Methods of treating using anti-IL-15 antibodies
WO2003024388A2 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for treating and preventing skin disorders using binding agents specific for psma
US7521053B2 (en) 2001-10-11 2009-04-21 Amgen Inc. Angiopoietin-2 specific binding agents
US7138370B2 (en) 2001-10-11 2006-11-21 Amgen Inc. Specific binding agents of human angiopoietin-2
EP1441589B1 (en) 2001-11-08 2012-05-09 Abbott Biotherapeutics Corp. Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
AU2002359495A1 (en) 2001-11-30 2003-06-17 Centocor, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
US7122641B2 (en) 2001-12-21 2006-10-17 Immunex Corporation Methods for purifying protein
JP4364645B2 (ja) * 2002-02-14 2009-11-18 中外製薬株式会社 抗体含有溶液製剤
EP1476120B1 (en) 2002-02-21 2010-09-29 Duke University Treatment methods using anti-cd22 antibodies
SI1478394T1 (sl) 2002-02-27 2008-12-31 Immunex Corp STABILIZIRAN TNFR-Fc SESTAVEK Z ARGININOM
MXPA04009381A (es) 2002-03-27 2005-01-25 Immunex Corp Metodos para incrementar la produccion de polipeptidos.
DK1501369T3 (en) 2002-04-26 2015-09-28 Genentech Inc Non-affinity purification of proteins
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
GB0210121D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
CA2490423A1 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Biogen Idec Inc. Buffered formulations for concentrating antibodies and methods of use thereof
KR20050042466A (ko) 2002-07-19 2005-05-09 애보트 바이오테크놀로지 리미티드 ＴＮＦα 관련 질환의 치료
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
EA018072B1 (ru) 2002-09-06 2013-05-30 Амджен Инк. Антитело к рецептору интерлейкина-1 типа 1 (il-1r1) и его применение
AU2003285874A1 (en) 2002-10-16 2004-05-04 Amgen Inc. HUMAN ANTI-IFN-Gamma NEUTRALIZING ANTIBODIES AS SELECTIVE IFN-Gamma PATHWAY INHIBITORS
US7674885B2 (en) 2002-11-01 2010-03-09 Bayer Healthcare Llc Process for concentration of macromolecules
US20040086532A1 (en) 2002-11-05 2004-05-06 Allergan, Inc., Botulinum toxin formulations for oral administration
US20040191243A1 (en) 2002-12-13 2004-09-30 Bei Chen System and method for stabilizing antibodies with histidine
NZ541253A (en) 2002-12-20 2010-03-26 Amgen Inc Peptide binding agents which inhibit myostatin
EP1603948A1 (en) 2003-03-14 2005-12-14 Pharmacia Corporation Antibodies to igf-i receptor for the treatment of cancers
ZA200507757B (en) 2003-04-04 2007-01-31 Genentech Inc High concentration antibody and protein formulations
JP4850709B2 (ja) 2003-05-14 2012-01-11 ダニスコ・ユーエス・インコーポレーテッド 反復配列タンパク質ポリマーを使用する、活性剤の制御放出
US7354578B2 (en) 2003-06-06 2008-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of tumor regression with VEGF inhibitors
SI1648509T1 (sl) 2003-07-15 2012-12-31 Amgen Inc. Humana protitelesa, ki nevtralizirajo anti-ngf, kot selektivni inhibitorji poti nfg
EP2149585B1 (en) 2003-11-04 2013-08-14 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of antagonistic anti-CD40 monoclonal antibodies
ATE548388T1 (de) 2003-11-07 2012-03-15 Immunex Corp An den interleukin-4-rezeptor bindende antikörper
EP1532983A1 (en) 2003-11-18 2005-05-25 ZLB Bioplasma AG Immunoglobulin preparations having increased stability
ES2553987T3 (es) 2003-12-25 2015-12-15 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Preparación farmacéutica de base acuosa estable que contiene anticuerpo
CN1953768B (zh) 2004-02-12 2010-10-13 默克专利有限公司 抗-egfr抗体的高浓缩液体制剂
US20070292346A1 (en) 2004-03-25 2007-12-20 Rong Fan Lng105 Antibody Composition and Methods of Use, and Use of Lng105 to Assess Lung Cancer Risk
CN103393601A (zh) 2004-05-12 2013-11-20 巴克斯特国际公司 含有蛋白并在高浓度蛋白下显示可注射性的微球体
WO2006003999A1 (ja) 2004-07-05 2006-01-12 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute ヒト抗ヒトb7rp-1抗体およびその抗体フラグメント
US7648742B2 (en) 2004-07-29 2010-01-19 Merck Patent Gmbh Difluorosubstituted heterocyclic compounds and the use thereof in the form of components in liquid crystalline media
TW200621282A (en) 2004-08-13 2006-07-01 Wyeth Corp Stabilizing formulations
US7300773B2 (en) 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
CA2581208A1 (en) 2004-08-30 2006-03-09 Lonza Biologics Plc. Affinity- plus ion exchange- chromatography for purifying antibodies
US20060051347A1 (en) 2004-09-09 2006-03-09 Winter Charles M Process for concentration of antibodies and therapeutic products thereof
WO2006064373A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Genzyme Polyclonals S.A.S. Methods of purifying immunologlobulins
US8597709B2 (en) 2005-04-12 2013-12-03 Inovobiologic Inc. Dietary supplement and methods of use
EA012801B1 (ru) 2005-06-14 2009-12-30 Эмджен Инк. Самобуферирующиеся композиции белков
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US20070049732A1 (en) 2005-09-01 2007-03-01 Zurlo Eugene J Ultra-high yield intravenous immune globulin preparation
US8877281B2 (en) 2005-09-21 2014-11-04 Burcon Nutrascience (Mb) Corp. Preparation of canola protein isolate involving isoelectric precipitation
US8067350B2 (en) 2005-12-15 2011-11-29 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Color changing cleansing composition
US20070202051A1 (en) 2006-02-10 2007-08-30 Pari Gmbh Aerosols for sinunasal drug delivery
CA2649538C (en) 2006-04-21 2014-06-03 Yatin Gokarn Buffering agents for biopharmaceutical formulations
JP5290152B2 (ja) 2006-04-21 2013-09-18 ノバルティス アーゲー 拮抗剤抗ｃｄ４０抗体薬学的組成物
EP2059523A2 (en) 2006-09-15 2009-05-20 Barofold, Inc. High pressure treatment of proteins for reduced immunogenicity
CA2667655A1 (en) 2006-10-27 2008-05-15 Abbott Biotechnology Ltd. Crystalline anti-htnfalpha antibodies
CA2790018C (en) 2006-12-21 2015-02-03 Amgen Inc. Formulations
CA2904458C (en) * 2007-11-30 2017-07-25 Wolfgang Fraunhofer Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) * 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
US20110060290A1 (en) 2008-02-07 2011-03-10 Amgen Inc. Stabilized protein compositions
EP2276527B1 (en) 2008-05-20 2018-02-28 Avant Medical Corp. Autoinjector system
US8052645B2 (en) 2008-07-23 2011-11-08 Avant Medical Corp. System and method for an injection using a syringe needle
US8177749B2 (en) 2008-05-20 2012-05-15 Avant Medical Corp. Cassette for a hidden injection needle
CN102159204B (zh) 2008-09-19 2015-04-01 辉瑞公司 稳定的液体抗体制剂
MX345226B (es) 2008-10-29 2017-01-20 Ablynx Nv Formulaciones de moleculas de union a antigeno de dominio sencillo.
RU2011140498A (ru) 2009-03-06 2013-04-20 Дженентек, Инк. Препарат антител
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
MX344727B (es) * 2010-11-11 2017-01-05 Abbvie Biotechnology Ltd Formulaciones liquidas de anticuerpos anti-tnf-alfa de alta concentracion mejoradas.
US9173999B2 (en) 2011-01-26 2015-11-03 Kaleo, Inc. Devices and methods for delivering medicaments from a multi-chamber container
CA2833427C (en) 2011-04-20 2019-09-24 Sandoz Ag Stable pharmaceutical liquid formulations of the fusion protein tnfr:fc
LT2699293T (lt) 2011-04-20 2019-04-25 Amgen Inc. Automatinio purškimo prietaisas
UY34105A (es) 2011-06-03 2012-07-31 Lg Life Sciences Ltd Formulación líquida estable de etanercept
KR102061355B1 (ko) 2011-07-01 2019-12-31 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 아르기닌-없는 tnfr : fc-융합 폴리펩티드 조성물 및 이용 방법
JP6113176B2 (ja) 2011-10-18 2017-04-12 コヒラス・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド キシリトールによって安定化されたエタネルセプト製剤
WO2013180295A1 (ja) 2012-06-01 2013-12-05 日本電信電話株式会社 パケット転送処理方法およびパケット転送処理装置
EP2869871B1 (en) 2012-07-05 2021-03-17 UNL Holdings LLC Automatic injectors for injectable cartridges and drive control mechanisms therefor
EA029193B1 (ru) 2012-07-09 2018-02-28 Кохерус Байосайенсис, Инк. Составы этанерцепта, отличающиеся заметным уменьшением содержания частиц довидимого диапазона
IN2015KN00452A (ru) 2012-09-11 2015-07-17 Coherus Biosciences Inc
US10058589B2 (en) 2012-10-26 2018-08-28 Lupin Limited Stable pharmaceutical composition of Etanercept in a phosphate citrate buffer with glycine as an anti-aggregating agent
EP2919812A4 (en) 2012-11-19 2016-05-18 Merck Sharp & Dohme Liquid formulations for TNFR: FC fusion proteins
WO2014084508A1 (ko) 2012-11-27 2014-06-05 (주)알테오젠 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물
US9452138B2 (en) 2012-12-28 2016-09-27 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Delivery of biologic therapeutics
TWI639449B (zh) 2013-03-15 2018-11-01 美商安美基公司 用於注射器之匣盒
CA2904725C (en) 2013-03-15 2022-04-12 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
JP2016518386A (ja) 2013-05-02 2016-06-23 マブキシェンス エス．アー． ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合ポリペプチドの代替配合物
KR20210041101A (ko) 2013-10-24 2021-04-14 아스트라제네카 아베 안정한 수성 항체 제제
KR101712245B1 (ko) 2013-11-29 2017-03-06 아레스 트레이딩 에스.에이. TNFR 및 면역글로블린 Fc 영역을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 액상 제제
US9300829B2 (en) 2014-04-04 2016-03-29 Canon Kabushiki Kaisha Image reading apparatus and correction method thereof
ES2733298T3 (es) 2014-07-18 2019-11-28 Sandoz Ag Cuantificación de TNFR2:Fc plegado erróneamente
CN107106769A (zh) 2014-08-28 2017-08-29 尤尼特拉克特注射器控股有限公司 用于药物递送装置的皮肤传感器
EP3733228B1 (en) 2014-08-28 2024-03-06 UNL Holdings LLC Sensor systems for drug delivery devices
ES2833506T3 (es) 2014-12-22 2021-06-15 Ares Trading Sa Composición farmacéutica líquida
EP3268042A4 (en) 2015-03-13 2018-08-01 Samsung Bioepis Co., Ltd. Anti-tnf-alpha polypeptide composition and use thereof
US9763976B1 (en) 2016-08-02 2017-09-19 Zo Skin Health, Inc. Composition and method for treating skin conditions
EP3528787A4 (en) 2016-10-21 2020-05-06 Amgen Inc. PHARMACEUTICAL FORMULATIONS AND PROCESSES FOR THEIR PREPARATION

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US20040023313A1 (en) * 2002-04-05 2004-02-05 Boyle William J Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2644243C2 (ru) * 2011-10-20 2018-02-08 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы к cd22
RU2764521C2 (ru) * 2017-12-29 2022-01-18 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Водная фармацевтическая композиция рекомбинантного моноклонального антитела к ФНОа

Also Published As

Publication number Publication date
MX2007015476A (es) 2008-02-25
ES2776657T3 (es) 2020-07-31
EA200800050A1 (ru) 2008-04-28
US20130273067A1 (en) 2013-10-17
CA2610839A1 (en) 2006-12-28
US20130273066A1 (en) 2013-10-17
US20160362484A1 (en) 2016-12-15
US20160367665A1 (en) 2016-12-22
EP1909831A4 (en) 2013-02-20
HK1256288A1 (zh) 2019-09-20
JP2022185048A (ja) 2022-12-13
AU2006259664A1 (en) 2006-12-28
IL188102A0 (en) 2008-03-20
JP2008543839A (ja) 2008-12-04
JP2016053061A (ja) 2016-04-14
JP6293103B2 (ja) 2018-03-14
US20160339102A1 (en) 2016-11-24
WO2006138181A2 (en) 2006-12-28
CA2610839C (en) 2019-06-25
KR20080031684A (ko) 2008-04-10
US20170368170A1 (en) 2017-12-28
CN101217979A (zh) 2008-07-09
US20160319011A1 (en) 2016-11-03
BRPI0611901A2 (pt) 2012-08-28
ZA200800338B (en) 2010-06-30
US20080311078A1 (en) 2008-12-18
US20160367666A1 (en) 2016-12-22
US20160362485A1 (en) 2016-12-15
JP5856555B2 (ja) 2016-02-10
US20160362486A1 (en) 2016-12-15
WO2006138181A3 (en) 2007-12-06
JP2018048196A (ja) 2018-03-29
EP3351269B1 (en) 2020-01-29
US20120028877A1 (en) 2012-02-02
JP2020183421A (ja) 2020-11-12
SG162788A1 (en) 2010-07-29
EP3351269A1 (en) 2018-07-25
EP3673919A1 (en) 2020-07-01
JP2013047261A (ja) 2013-03-07
EP1909831A2 (en) 2008-04-16
US11607451B2 (en) 2023-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA012801B1 (ru) Самобуферирующиеся композиции белков
KR101195295B1 (ko) 고농도 항체 및 단백질 제형
EP3681483B1 (en) Process for lyophilized pharmaceutical formulation of a therapeutic protein
CN104740631A (zh) 单域抗原结合性分子的制剂
CN101951885A (zh) 制剂
JP2022512704A (ja) 抗ｒｓｖ抗体の製剤及びその使用方法
Arvinte et al. The formulation of biological molecules
AU2017202889B2 (en) Self-buffering protein formulations
AU2012272950B2 (en) Self-buffering protein formulations
CN118056572A (zh) 含有抗il-17抗体的稳定制剂
CN117693362A (zh) 含有抗il-4r抗体的稳定制剂

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM