DK159156B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af (2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(0-substitueret)-oxyiminoacetamido)-7-cephalosporan-syre og fysiologisk acceptable salte deraf - Google Patents

Description

DK 159156 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte (2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(0- -substitueret)-oxyiminoacetamido)-cephalosporansyre med den 1 1' almene formel I, hvor R, R', R", R og A har den i krav 5 l's indledning angivne betydning.

X ·

Blandt foretrukne værdier for R skal nævnes et ækvivalent natrium, kalium, lithium, calcium eller magnesium. Blandt de organiske baser skal nævnes trimethylamin, triethylamin, diethylamin, methylamin, propylamin, 10 Ν,Ν-dimethylethanolamin, tris-(hydroxymethyl)-aminomethan, arginin eller lysin.

A kan betegne et ækvivalent alkalimetal, jordalkali- metal, magnesium eller ammonium eller af en amineret

organisk base, som er nævnt ovenfor for R

2 DK 159156 B

Opfindelsen angår især en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med den almene formel I, hvor R1 betegner grup-

1 t Ί I

pen C02R , hvor R betegner en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, et hydrogenatom eller et ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, 5 magnesium eller ammonium eller af en amineret organisk base, og R* og R*’ betegner hvert et hydrogenatom.

Blandt forbindelserne med den almene formel I skal især nævnes de forbindelser, som er beskrevet i eksemplerne nedenfor, og navnlig: 10 - 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-carbethoxymethyloxyiminoacetamido)- « -3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxycarbonylmethyloximinoacet-amido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(((cyanmethyl)- 15 -oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - 3-acetoxymethy1-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-((((aminocarbonyl)--methyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer,og - 3-acetoxymethy1-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(((l-carboxy-1- 2 0 -methylethyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, samt deres salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium, ammoniak og aminerede organiske baser og navnlig: - dinatriumsaltet af 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxycarbonyl-methyloximinoacetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 25 syn-isomer, - natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2--(((cyanmethyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - natriumsaltet af 3-acetoxymethy1-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2- 30 -((((aminocarbonyl)-methyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em- -4-carboxylsyre, syn-isomer og - dinatriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)--2-(((1-carboxy-l-methylethy1)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph--3-em-4-carboxy1syre, syn-isomer.

35 De ovennævnte forbindelser med formlen I kan eksistere: - enten i den i formel I angivne form - eller i form af tautomeré forbindelser med formlen lz

DK 159156 B

3 0 (

Ff-i "-0-C-E1 \_j} R" 0 CH-O-C-CH^ I 2 li -5 C02A o 10

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l’s kendetegnende del anførte.

Som ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminer- 2 bar gruppe, som E kan betegne, kan nævnes tert.-butoxycarbonyl, 15 trityl, benzyl, dibenzyl, trichlorethyl, carbobenzyloxy, formyl, trichlorethoxycarbonyl eller 2-tetrahydropyranyl,

Blandt de ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eli- 1f' minerbare estergrupper, som R kan betegne, kan nævnes benzhydryl, tert,-butyl, benzyl, p-methoxybenzyl og trichlorethyl.

20 A* kan betegne en vilkårlig af de ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbaj© estergrupper, som er nævnt oven-1»» for for R .

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden behandler man forbindelsen med formlen II med et funktionelt derivat af 25 syren med formlen III såsom anhydridet eller syrechloridet, idet anhydridet kan dannes in situ ved indvirkning af isobutylchlorfor-miat eller dicyclohexylcarbodiimid på syren. Man kan ligeledes benyt te andre halogenider eller også andre anhydrider dannet in situ ved indvirkning af andre alkylchlorformiater, af dialkylcarbodiimid el-30 ler af et andet dicycloalkylcarbodiimid. Man kan ligeledes benytte andre syrederivater såsom syreazidet, syreamidet eller en aktiveret syreester dannet f.eks. med hydroxysuccinimid, p-nitrophenol eller 2,4-dinitrophenol, I det tilfælde, hvor reaktionen af forbindelsen med formlen II sker med et halogenid af syren med den almene 35 formel III eller med et anhydrid dannet med et isobutylchlorformiat, arbejder man fortrinsvis i nærværelse af et basisk middel.

Som basisk middel kan man f.eks. vælge et alkalimetalcarbo-nat eller en tertiær organisk base såsom F-methylmorpholin, pyridin eller en trialkylamin såsom triethylamin.

Omdannelsen af forbindelserne med formlen 1’ til forbindel-

4 DK 159156 B

o ser med formlen IQ har til formål at erstatte substituenten R med a 111 et hydrogenatom, at erstatte substituenten R , når denne betegner en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar 211 estergruppe, med gruppen R repræsenterende et hydrogenatom og 5 at erstatte substituenten A’, når denne betegner en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, med et hydrogenatom.

Til dette formål benytter man et eller flere midler til sur hydrolyse, når R betegner en ved sur hydrolyse let eliminerbar in "5 i f » in iU gruppe, R ikke betegner en gruppe CC^R * hvor R betegner en ved hydrogenolyse let eliminerbar estergruppe, og A* betegner et hydrogenatom eller en ved sur hydrolyse let eliminerbar estergruppe.

2

Man benytter et eller flere hydrogenolysemidler, når R be- 15 tegner en ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, R^ ikke beteg- 1»» τι» ner en gruppe C02R , hvor R betegner en ved sur hydrolyse let eliminerbar estergruppe, og A betegner et hydrogenatom eller en ved hydrogenolyse let eliminerbar estergruppe.

Man behandler forbindelsen med formlen I* med et eller flere 20 midler til sur hydrolyse og med et eller flere hydrogenolysemidler, når i det mindste en af substituenterne R , R og A' betegner en ved sur hydrolyse let eliminerbar gruppe, og i det mindste en af disse grupper betegner en ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe. Man behandler forbindelsen med formlen 1’ med thiourinstof 25 og eventuelt med et eller flere midler til sur hydrolyse eller til hydrogenolyse alt efter værdierne af R og Α», når R betegner en chloracetylgruppe.

Som middel til sur hydrolyse, hvormed man eventuelt behandler forbindelserne med formlen I’, kan nævnes myresyre, trifluor-30 eddikesyre eller eddikesyre.. Disse syrer kan benyttes vandfrie eller i vandig opløsning. Man kan ligeledes benytte et system bestående af zink og eddikesyre.

Man benytter fortrinsvis et middel til sur hydrolyse såsom vandfri trifluoreddikesyre eller vandig myresyre eller eddikesyre 35 til eliminering af tert.-butoxycarbonyl- eller tritylgrupperne, 2 som R fean betegne, eller grupperne benzhydryl, tert.-butyl eller p-methoxybenzyl, som R*^ og A' kan betegne. - Man benytter fortrinsvis et system af zink og eddikesyre til eliminering-af den trichlor-ethylgéuppe, som R2, R1*' og Akan betegne. 4

Man benytter fortrinsvis et middel til hydrogenolyse såsom hydrogen i nærværelse af en katalysator til eliminering af dibenzyl-

5. DK 159156 B

p og carbobenzyloxygrupperne, som R kan betegne, og benzylgruppen, som R1*' og A kan betegne..

Omsætningen af thiourinstof med forbindelsen med formlen 2 I’, hvor R betegner en ehloracetylgruppe, udføres fortrinsvis i 5 neutralt eller surt milieu. Denne reaktionstype er beskrevet af Masaki (JACS, 90, 4508 (1968)).

Omdannelsen til salt af forbindelserne med formlen I„ kan

<X

udføres efter gængse metoder. Omdannelsen til salt kan f.eks. opnås ved indvirkning på disse syrer af en uorganisk base såsom f.eks.

10 natrium- eller kaliumhydroxid eller natriumbicarbonat eller af et salt af en eventuelt substitueret aliphatisk carboxylsyre såsom diethyleddikesyre, ethylhexansyre eller specielt eddikesyre.

De foretrukne salte af de nævnte syrer er natriumsaltene. Omdannelsen til salt kan ligeledes opnås ved indvirkning af 15 ammoniak eller en organisk base som triethylamin, diethylamin, tri-methylamin, propylamin, N,R-dimethylethanolamin eller tris-(hydroxy-methyl)-aminomethan. Den kan ligeledes opnås ved indvirkning af ar-ginin eller lysin.

Til fremstilling af saltene kan solvater af frie syrer li-20 geledes benyttes som udgangsprodukter i stedet for de frie syrer.

Denne omdannelse til salt udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler såsom vand, ethyl-ether, methanol, ethanol eller acetone.

Saltene fås i amorf eller krystallinsk form alt efter de be-25 nyttede reaktionsbetingelser.

De krystallinske salte fremstilles fortrinsvis,ved at man ansætter de frie syrer med et af de ovennævnte salte af aliphatiske carboxylsyrer, fortrinsvis med natriumacetat.

Ved fremstillingen af et natriumsalt udføres reaktionen i 30 et passende organisk opløsningsmiddel såsom f.eks. methanol, som kan indeholde små mængder vand.

35

6 DK 159156 B

Det skal endelig bemærkes, at når omdannelsen ifølge fremgangsmåden ovenfor af forbindelserne med formlen I* til forbindelser med formlen I udføres ved hjælp af en syre såsom trifluor-eddikesyre, kan forbindelserne med formlen Ia isoleres i form af 5 salte mellem aminen af aminothiazolringen og denne syre. Eksempler på sådanne produkter er beskrevet nedenfor i den eksperimentelle del.

Man får om ønsket de frie baser af forbindelserne med formlen I_ ved indvirkning af ca. 1 ækvivalent af en base såsom pyridin. 0 Forbindelserne med den almene formel I har en meget god antibiotisk virkning, dels på grampositive bakterier såsom stafylokokker og streptokokker,dels på gramnegative bakterier, især på coliforme bakterier, Klebsiella, Salmonella og Proteus.

Forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfin-5 delsen har vist overlegne egenskaber ved sammenligning med forbindelsen ifølge eksempel 93 i USA patentskrift nr. 3.971.778, som må anses at være den nærmest beslægtede kendte forbindelse.

Det skal bemærkes, at en forbindelse ifølge eksempel 61 i svensk patentskrift nr. 442 202 er en anti-forbindelse med meget !0 svag antibiotisk virkning.

Disse egenskaber gør forbindelserne med formlen I, når de er farmaceutisk acceptable, egnede til at benyttes som medikamenter og navnlig som antibiotiske medikamenter i behandlingen af lidelser .hidrørende fra følsomme kim og navnlig i tilfælde af Staphylococci !5 såsom staphylococcus-septicemi, malign ansigts- eller hudstaphylo-cocci, pyodermitis, septiske eller suppurante sår, anthrax, phleg-mone, erysipel, primitiv eller efter influenza optrædende akut staphylococci, bronchopneumoni og pulmonære suppurationer.

Disse forbindelser kan ligeledes benyttes i medikamenter 50 ved behandlingen af colibacillose og beslægtede infektioner, ved infektioner med Proteus, Klebsiella og Salmonella og andre lidelser frembragt af gramnegative bakterier.

Blandt disse forbindelser skal især nævnes: - 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-carbethoxymethyloxyiminoaeetamido)- 55 -3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - 7“(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxycarbonylmethyloxyiminoacet-amido)-3-aoetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, - 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(((cyanmethyl)-oxy)--imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer,

7 DK 159156 B

- 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-y 1)-2-( (((aminocarbonyl)--methy 1 )-oxy) -imino) -acetyl) -amino) -ceph -3-em-4 -car "boxy lsyre, syn-isomer, - 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-((l-carboxy-1- 5 -me thyle thyl )-oxy) -imino) -acetyl) -amino)-ceph-3-em-4 -carboxylsyre, syn-isomer, samt deres farmaceutisk acceptable salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium eller aminerede organiske baser og især: - dinatriumsaltet af 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxycarbonyl-10 methyloxyiminoacetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, -natriumsaltet af 3-acetoxymethy1-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)--2-(((cyanmethyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, 15 -natriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2- -((((aminocarbonyl)-methyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em--4-carboxylsyre, syn-isomer, og - dinatriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)--2-(((l-carboxy-l-methylethyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph- 20 -3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

Dinatriumsaltet af 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxy-carbonyImethyloxyiminoacetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, har navnlig en meget god aktivitet mod gramnegative bakterier.

25 De farmaceutisk acceptable forbindelser med formlen I kan således benyttes til fremstilling af farmaceutiske præparater , der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste en af disse forbindelser.

Disse præparater kan indgives ad oral eller rektal vej eller 30 parenteralt eller intramuskulært eller lokalt i topisk applikation på huden og slimhinderne.

De kan være faste eller flydende og foreligge i de i den humane medicin gængs benyttede farmaceutiske former såsom f.eks. uoversukrede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granu-35 later, stikpiller, injektionspræparater, creme og gelé. De fremstilles efter de gængse metoder. Den eller de aktive bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske præparater normalt benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi arabicum, lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprin

8 DK 159156 B

delse, paraffinderivater, glycoler og diverse fugte-, dispergerings-eller emulgeringsmidler samt konserveringsmidler.

Den indgivne dosis varierer efter den behandlede lidelse, den pågældende patient, indgiftsmåden og præparatet selv. Den kan 5 f.eks, ligge mellem 0,250 g og 4 g om dagen ad oral vej hos mennesker i tilfælde af forbindelsen ifølge eksempel 5,8,11 eller 14 eller også mellem 0,500 g og 1 g 3 gange om dagen ad intramuskulær vej.

LO Eksempel 1.

7-(2-( 2-amino-4-thiazolyl)-2-oarbethox.ymeth.yloxyiininoacetamido) --5-acetoxymethylceph-5-em-4-carboxylsyre« syn-isomer.

Trin A; 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-oarbethoxymethyloxyimino-eddikesyre, syn-isomer« 15 Man indfører under argon 10,5 ml 1 M opløsning af kalium- -tert.-butylat i tetrahydrofuran og tilsætter i løbet af 10 minutter ved 20°C en suspension af 2,15 g 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)--2-hydroxyiminoeddikesyre, syn-isomer, i 35 ml tørt tetrahydrofuran og 2,5 ml 4 M opløsning af vand i tetrahydrofuran. Temperaturen sti-20 ger til 27°C. Man omrører 1 time og tilsætter dråbevis 5 ml af en opløsning, som fås, idet man til 1,1 ml ethylbromacetat sætter den fornødne mængde tetrahydrofuran til opnåelse af et rumfang på 10 ml.

Man omrører 1 time og tilsætter atter en ml af en 1 M opløsning af kalium-tert.-butylat i tetrahydrofuran, omrører yderligere 25 i 1 time, frasuger en smule uopløseligt materiale, skyller med tetrahydrofuran, uddriver opløsningsmidlet, optager i 50 ml ethylacetat, 15 ml 1 N saltsyre og 15 ml vand, rører om, dekanterer, vasker med vand, genekstraherer med ethylacetat, tørrer, inddamper til tørhed, tilsætter 20 ml ethylacetat, og produktet krystalliserer. Man isaf-30 køler, frasuger krystallerne, skyller med et minimum af ethylacetat og udriver med ether, tørrer og får 1,3 g rent produkt.

Man inddamper filtratet, optager i ethylacetat, findeler, isafkøler, frasuger krystallerne, skyller med ethylacetat, udriver med ether og får et yderligere udbytte på 185 mg rent produkt eller 35 i alt 1,485 g produkt.

Man får en analytisk prøve, idet man opvarmer 3,14 g produkt fremkommet som angivet ovenfor i 30 ml ethylacetat til nær tilbagesvalingstemperatur. Opløsningen er partiel. Man afkøler i iskoldt vand, frasuger krystallerne, skyller, udriver med ether og tørrer og får 2,77 g renset produkt.

9 DK 159156 B

Analyse: ^28^25^5^3^ beregnet: C$ 65,23 H$ 4,89 H$ 8,15 S$ 6,22 fundet: 65,1 4,9 8,0 6,1 H. M.R.spektrum (CDCl^, 90 MHz): 5 6,76 ppm (proton i thiazolring), 7,28 ppm (tritylgruppe).

Trin B: 7-.(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-oarbethoxymethyloxyimino-aoetamiflo)-5-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre« svn--isomer.

Man blander under argon 1,55 g af det i trin A opnåede pro- 10 dukt og 22 ml methylenchlorid, afkøler i is og tilsætter en opløsning indeholdende 345 mg dicyclohexyloarbodiimid i 1,5 ml methylenchlorid. Man omrører 1 time under afkøling i iskoldt vand, frasuger det dannede dicyclohexylurinstof, renser det med methylenchlorid og tørrer. Der fås 270 mg deraf.

Filtratet afkøles i et bad af methanol og is,og man tilsætter på én gang en opløsning af 410 mg 7-aminocephalosporansyre i 7,5 ml tørt methylenchlorid og 0,42 ml triethylamin. Man lader henstå til spontan opvarmning i 3 timer, tilsætter 7,5 ml vand og 3,75 2Q ml 1 H saltsyre, rører om, frasuger uopløseligt materiale, dekanterer filtratet, genekstraherer med methylenchlorid, vasker med vand, tørrer og inddamper filtratet. Man optager resten i 7,5 ml ethylacetat, omrører 1 time i iskoldt vand, frasuger krystallerne, skyller og får 600 mg af det forventede produkt.

25 Man uddriver opløsningsmidlerne af filtratet og får 1,34 g rest. Denne rest opløses i 6 ml ethylacetat, man tilsætter 0,15 ml rent diethylamin, fortynder gradvis under omrøring med 35 ml ether og får en uopløselig gummi, som genopløses i krystalform. Man suger fra, skyller med en opløsning af 15$ ethylacetat i ether, udriver 30 med ether og tørrer. Der fås 983 mg salt af diethylamin i renset tilstand.

Dette salt opløses i 10 ml methylenchlorid, man tilsætter I, 3 ml IH saltsyre (pH =2), omrører, dekanterer, vasker med vand, genekstraherer den vandige fase med methylenchlorid, tørrer, uddri- 35 ver opløsningsmidlerne, optager i ether, frasuger det uopløselige materiale og isolerer yderligere 818 mg af det forventede produkt.

10 DK 159156 B

Trin C: 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-oarbethoxymethyloxyiminoaoetamido)--5-acetoxymethyloeph-3-em-4-carboxylsyre« syn-isomer.

Man suspenderer 0,818 g produkt fremstillet i trin B 5 i 4 ml 50^'s vandig myresyre. Man opvarmer suspensionen på vandbad til 60°C i 20 minutter, og triphenylcarbinol udkrystalliserer. Man afkøler, fortynder med 4 ml vand, tørrer og får 305 mg stof.Man inddamper filtratet til tørhed under vakuum, optager resten i ethanol, afdamper opløsningsmidlet og optager endelig i vand, isafkøler i 15 minutter, frasuger uopløseligt materiale, skyller med vand, tørrer og får 229 mg af det forventede produkt.

Analyse: C19H21°9li5S2 beregnet: C$ 43,26 H$ 4,01 fundet: 43,3 4,3 15 N.M.R,spektrum (DMSO, 60 MHz): ^-O-CHg-COg-CHg-CHj: (a) triplet centreret om 1,2 ppm, J =7Hz

(c) (b) (a) (b) kvadroplet centreret om 4,15 ppm, J = 7 HZ

(c) singulet ved 4,66 ppm proton i thiazolringen: singulet ved 6,8 ppm

Fremstilling af udgangsmateriale: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-hydroxyiminoeddikesyre, syn--isomer, der benyttes som udgangsmateriale .her i eksempel 1, fremstilles som følger: 25 a) 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-hydroxyiminoeddikesyreethyl- ester« syn-isomer.

Man opløser 0,8 g thiourinstof i 2,4 ml ethanol og 4,8 ml vand. Man tilsætter i løbet af 5 minutter en opløsning af 2 g 4-ehlor--2-hydroxyiminoacetyleddikesyreethylester og omrører 1 time ved 30 stuetemperatur. Man uddriver størstedelen af ethanolet under partielt vakuum og neutraliserer til pH= 6, idet man tilsætter fast natriumbicarbonat. Man isafkøler, suger fra, vasker med vand, tørrer under vakuum ved 40°C og får 1,32 g af det forventede produkt med smp# 232°'C.

35

U DK 159156 B

Analyses C^H^O^N^S

beregnet: C$ 39,06 H$ 4,21 H$ 19,52 S $ 14,9 fundet: 58,9 4,4 19,7 14,6 b ) 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-hydroxyiminoeddikesyre-5 ethylester. syn-isomer.

Man indfører 43,2 g 2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-hydroxyimino-eddikesyreethylester, syn-isomer, fremstillet under A) ovenfor i 120 ml tørt dimethylformamid.

Man afkøler til -35°C, indfører 32 ml triethylamin og der- 10 efter i løbet af 30 minutter i småportioner 60 g tritylchlorid.

Man lader temperaturen stige, iagttager en fuldstændig opløsning og derefter en opvarmning til 30°C. Efter 1 times forløb hælder man i 1,2 liter iskoldt vand indeholdende 40 ml 22° Bé saltsyre.

Man omrører i et bad med isvand, suger fra, skyller med 15 IH saltsyre og udriver med ether.

Der fås 69,3 g hydrochlorid.

Den frie base fås, idet man opløser produktet i 5 rumfang methanol tilsat 120$ triethylamin, idet man derefter udfælder forsigtigt med 5 rumfang vand.

20 Analyse: ^26^23^3^3^ * l/4 H^O

beregnet: C$ 67,6 H$ 5,1 H$ 9,1 S$ 6,9 fundet: 67,5 5,1 8,8 6,8 er) 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-hydroxyiaino.edflikesyre» syn-isomer.

25 Man indfører 11,5 g produkt fremstillet under B ovenfor i 30 ml dioxan og 25 ml 2 H natriumhydroxidopløsning. Man omrører 1 time på vandbad ved 50°C, Man isafkøler 10 minutter, suger fra, skyller med 50$’s vandigt dioxan, med en blanding af dioxan og ether (1:1) og med ether. Der fås efter tørring 11,05 g natriumsalt.

30 Den tilsvarende syre fås, idet man optager saltet i vandigt methanol i nærværelse af saltsyre.

35

DK 159156 B

12

Eksempel 2 .

7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-tert.-butoxycarbonylmethyloxy-iminoaoetamido)-3-aoetox.vmethy lceph-3-em-4-carboxylsyre-tert.--butylester. syn-isomer.

5 Trin A: 2-tert.-butoxyoarbonylmethyloxyimino-2-(2-tritylamino-4--thiazolyl)-eddikesyre« syn-isomer.

a) Man blander under argon 8,59 g 2-hydroxyimino-2-(2-tri-tylamino-4-thiazolyl)-eddikesyre i 10 ml dioxan indeholdende 4 mol vand pr. liter og 80 ml dioxan og omrører 15 minutter, ίο β) Man fremstiller separat en opløsning af 5,134 g kalium- -tert.-butylat i 40 ml dioxan, omrører ved stuetemperatur under argon i 10 minutter og får en homogen suspension. Man indfører derpå ved 23-25°C i løbet af 15 minutter den under a) ovenfor fremstillede suspension, idet man afkøler en smule, og idet man skyller med 15 25 ml dioxan.

Man omrører 1 time ved 23-25°C. Man indfører derpå i løbet af 15 minutter ved 28-29°C en opløsning af 4,919 g bromeddikesyre--tert.-butylester i 15 ml dioxan. Man omrører 1 time ved 26-28°C og tilsætter derpå med 10 minutters mellemrum først 0,471 g kalium-20 -tert.-butylat og dernæst en opløsning af 0,772 g bromeddikesyre--tert.-butylester i 2 ml dioxan. Man omrører 45 minutter ved 25°C under argon, indstiller pH-værdien på 6 med 0,5 ml eddikesyre og destillerer derefter til tørhed og får 19,4 g af en harpiks.

Man optager denne i 100 ml methylenchlorid og 100 ml vand 25 og syrner dernæst til en pH-værdi på 2-3 med 25 ml 1 I saltsyre.

Man dekanterer, vasker med destilleret vand, filtrerer, genekstra-herer med methylenchlorid, tørrer, skyller med methylenchlorid og destillerer til tørhed under vakuum. Der fås 12,3 g produkt. Man 30 35

13 DK 159156 B

optager i 31 ml ethylacetat, indleder en krystallisation og omrører 1 time ved stuetemperatur og derefter 2 timer ved en temperatur mellem 0 og 5°C. Man suger fra og skyller ved denne temperatur med ethylacetat. Man tørrer under vakuum og får 5,04 g af det 5 forventede produkt.

Produktet renses på følgende måde.

3,273 g opløses i 60 ml methylethylketon mættet med vand under tilbagesvaling. Man tilsætter 0,33 g aktivkul i varmen, suger fra og skyller med 2 gange 3 ml methylethylketon mættet med 10 vand og i kogende tilstand. Man inddamper filtratet under vakuum, idet man genvinder 36 ml opløsningsmiddel. Produktet krystalliserer. Man isafkøler 1 time ved en temperatur mellem 0 og 5°C under omrøring, suger fra og skyller med methylethylketon mættet med vand.

Man tørrer under vakuum og får 2,68 g af det forventede produkt i 15 ren tilstand. Smp. 190°C.

Analyse: C30H2 9¾1¾2 beregnet: C# 66,28 5,38 7,73 S# 5,9 fundet: 66,5 5,7 7,7 5,6 U.M.R.spektrum (CDCl·^, 60 MHz): 20 1,46 ppm (proton i tert.-butyl), 6,8 ppm (proton i thiazolring).

Trin B: 7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-tert.-butoxycarbon.vl-methyloxyiminoaoetamido)-3-acetoxymethyloeph-3-em-4-carb-oxylsyre-tert.-butylester, syn-isomer.

Man blander 2,174 g 2-tert,-butoxycarbonylmethyloxyimino- 25 -2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-eddikesyre, syn-isomer, fremstillet i trin A ovenfor, 1,313 g tert.-butylester af 7-aminocephalosporan- syre og 35 ml methylenchlorid. Man omrører ved 20°C i 5 minutter og indfører ved 20-22°C i løbet af 5 minutter 8,8 ml dicyclohexyl- carbodiimid opløst i methylenchlorid med en koncentration på 2,06 g 30 pr, 20 ml. Man omrører under argon i 2 timer. Dicyclohexylurinstof fælder ud. Man tilsætter 4 dråber eddikesyre og omrører 5 minutter. Man frasuger dicyclohexylurinstoffet og skyller med methylenchlorid. Der fås 523 mg deraf. Man destillerer opløsningen under vakuum, optager i ether, frasuger atter dicyclohexylurinstoffet (der fås 35 204 mg deraf), sætter 30 ml ether til filtratet, vasker med saltsyre og derefter med vand. Den organiske opløsning vaskes derefter med en vandig natriumbicarbonatopløsning. Man får i uopløselig form 0,438 g natriumsalt af 2-tert.-butoxycarbonylmethoxyimino-2--(2~tritylamino-4-thiazolyl)-eddikesyre. Man vasker med vand indtil neutralitet, genekstraherer vaskevæskerne med ether, tørrer den or-

14 DK 159156 B

ganiske fase, "behandler med aktivkul, suger fra, skyller med ether og destillerer til tørhed under vakuum. Der fås 5,16 g produkt.

Man chromatograferer dette produkt på silioagel under elue-ring med en "blanding af ether og benzen (1:1) og får en første stør-5 re fraktion af et produkt med Rf =0,5 (1,15 g) og en homogen anden fraktion med Bf = 0,5 indeholdende 0,957 g af det forventede produkt.

Eksempel 3.

7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-hydroxyoarbonylmethyloxyiminoaoetamido)-10 -5-acetoxymethylcéph-5-em-4-carboxylsyre« syn-isomer.

Man blander under argon ved 20-22°C 11,5 ml trifluoreddike-syre og 1,15 g 7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-tert.-ethoxycarbo-nylmethyloxyiminoacetamido)-5-acetoxymethylceph-5-em-4-carboxylsyre--tert.-butylester.

15 Man omrører 10 minutter ved 20-22°C. Man destillerer under vakuum indtil et rumfang på 5 ml. Man optager i 55 ml isopropyl-ether, idet man afkøler ved hjælp af et isbad, og et produkt fælder ud. Man omrører ved stuetemperatur i 10 minutter, suger fra og skyller med isopropylether. Man tørrer trifluoracetatet under vakuum 20 og får 0,557 g produkt.

Man indfører 0,526 g af trifluoracetatet i 2,5 ml ethanol og omrører ved stuetemperatur indtil opløsning (pH = 1-2). Man tilsætter derpå 0,47 ml 2 M opløsning af pyridin i ethanol.

Man iagttager en udfældning af fri amin, og man omrører i 25 5 minutter ved 20-25°C under argon. Man suger fra ved stuetempera tur. Man skyller med en blanding af ether og ethanol og derefter med ether, tørrer og får 0,261 g gult produkt.

Man inddamper moderludene og optager i ether. Der fås et andet udbytte på 0,084 g produkt. Man forener de to fraktioner og 30 udriver dem med blandinger af ether og ethanol og derefter med ether. Man tørrer og får 0,516 g af det forventede produkt.

H.M.R.spektrum (DMS0, 60 MHz): 4,16 ppm (-O-CHq-COqH) og 6,84 ppm (proton i thiazolring).

35 Eksempel 4.

Dinatriumsaltet af 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-2-h.vdrox.vcarbonyl-methyloxyiminoacetamido)-5-acetoxymethylceph-5-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

Man opløser under omrøring 0,224 g syre fremstillet i eksempel 3 i i ml methanolisk opløsning af natriumacetat (1 M) og 2 ml

15 DK 159156B

methanol. Man suger fra og skyller med methanol, Ian inddamper under vakuum indtil ca. 1 ml og tilsætter 5 ml ethanol, Natriumsaltet fælder ud, man omrører 10 minutter ved stuetemperatur, suger fra og skyller med ethanol og med ether. Man tørrer og får 200 mg produkt.

5 Analyse: °17H15°9lir5S2lira2 heregnet: Na# 8,46 fundet: 8,54

Hf - 0,3 (acetone med 10# vand).

10 Eksempel 5 .

3-acetoxymethyl-7-( (2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-( ((cyanmethyl)-oxy)--imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre. syn-i3omer, i form af trifluoracetat.

Trin A? 2-( ((c.vanmethyl)-oxy )-imlno)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-15 -eddikesyrecyanmethylester, syn-isomer.

Man hiander under indifferent atmosfære 12,9 g 2-((hydroxy)--imino)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-eddikesyre, syn-isomer, 9,12 g kaliumcarhonat, 60 ml tørt dimethylformamid og 7,6 ml chloraceto-nitril. Man rører om. Efter størkning lader man henstå 65 timer un-20 der lukket atmosfære. Man hælder i en blanding af 750 ml vand, 130 ml 1 N saltsyre, 150 ml ethylacetat, rører om, frasuger uopløseligt materiale, skyller med ethylacetat og med vand og dekante rer. Man vasker med 100 ml vand, genekstraherer med 3 gange 100 ml ethylacetat, tørrer den organiske fase, suger fra, skyller, inddam-25 per til tørhed og får en rest, som man chromatograferer på silica-gelsøjle under eluering med ether. Man uddriver etheren og får 8,69 g af det forventede produkt i form af en olie.

N.M.R.spektrum (CDCl^, 60 MHz): proton i thiazol: 6,8 ppm, 30 proton i trityl: 7,37 ppm

Trin B: 2-( ((oyanmeth.vl)-oxy)-imino)-2-(2-tritylaminothiazol-4-.vl)--eddikesyre, syn-isomer. ,

Man indfører 8,69 g af det i trin A opnåede produkt i 52 ml dioxan. Man afkøler i et ishad og tilsætter drå.bevis i løhet af 20 35 minutter 17,1 ml 1 N natriumhydroxidopløsning. Man lader henstå til spontan opvarmning og tilsætter 10,5 ml 2 N saltsyre, uddriver dioxanet og næsten alt vandet.

Man tilsætter 20 ml vand og 30 ml ether, omrører i 15 minutter, frasuger krystallerne, skyller med vand og med ether, tørrer

16 DK 159156 B

og får 4,32 g af <3et forventede produkt, Smp. oa, 180°C (sønderdeling).

U.M.R, spektrum (CDCl^, 60 1Hz): 4.7 ppm! OCH^Cir 5 6,7 ppm! proton i thiazol 7,54 ppm: proton i trityl.

Trin 0: 5-acetoxymethyl-7-( (2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2- -(((cyanmethyl)-oxy)-imino)-aoetyl)-amino)-ceph-5-em-4--carboxylsyre-tert.-butylester. syn-isomer.

Man blander under indifferent atmosfære 1,875 g 2-(((cyan-methyl)-oxy)-imino)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-eddikesyre, syn--isomer, fremstillet i trin B og 1,512 g tert.-butylester af 7-amino--cepbalosporansyre i 12 ml tørt methylenchlorid.

Man omrører og tilsætter en opløsning af 960 mg dieyclo-hexylcarbodiimid i 12 ml tørt methylenchlorid. Man omrører, lader henstå ved stuetemperatur i 1 time 45 minutter, frasuger den dannede dicyclohexylurinstof og isolerer 457 mg deraf.

Man inddamper filtratet til tørhed og får en rest, som man chromatograferer på silicagel under eluering med methylenchlorid 20 og derefter med ether.

Man samler de rige fraktioner, uddriver etheren og optager derefter i ether. Man indleder en krystallisation, og produktet krystalliserer langsomt i køleskab. Man suger fra, skyller med ether ved 0°C ved udrivning og tørrer. Der isoleres 776 mg af det 25 o forventede produkt, Smp, 180°C (sønderdeling).

N.M.R,spektrum (60 MHz, CDCl^):

4,9 ppm: 0-CH2-CR

6.8 ppm: proton i thiazolring 30 7,31 ppm: proton i trityl.

Trin D: 5-acetoxymeth.vl-7-( (2-(2-aminothiazol-4-yl)~2-( ((c.yanmethyl)-oxy)--imino)-acetyl)-amino)-ceph-5-em-4-carboxylsyre, syn-isomer, i form 35 af trifluoracetat.

Man indfører 779 mg produkt fremstillet i trin c i 4 ml trifluoreddikesyre. Man omrører indtil opløsning, lader henstå 17 minutter i kontakt og hælder derpå i 40 ml isopropylether. Man rører om, suger fra, tørrer og isolerer 523 mg af det forventede produkt.

17 DK 159156 B

Eksempel 6,

Uatriumsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2--(2-aminothiazol-4-yi)-2--(((cyanmethyl)-oxy)-imino)-acetyll)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

s.vn-isomer.

5 Man opløser de 523 mg trifluoracetat fremstillet i eksempel 5 i 2 ml 1 1 methanolisk opløsning af natriumaoetat.

Man fortynder med 6,6 ml ethanol, omrører 10 minutter, frasuger det uopløselige materiale, skyller nmd ethanol, tørrer og får 226 mg af det forventede natriumsalt. Smp. ca, 200°C (sønder-10 deling).

U.M.R,spektrum (CDCl^, 60 MHz):

4,98 ppm: 0-0¾-CU

6,86 ppm: proton i thiazolringen

Analyse: cl7Hl5®7^6S2Na 15 beregnet: C# 40,64 W° 3,01 la$ 4,57 fundet: 40,2 3,3 4»5

Eksempel 7.

3-aoetox.ymethyl-7~( (2-((( (amino carbonyl) -methyl)-ox.y)-imino) -2-20 -(2-amlnothiazol-4-yl)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer i form af trifluoracetat.

Trin A: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-((((ethylcarboxy)-methyl)--oxy)-imino)-eddikesyreethylester« syn-isomer.

Man anbringer under argon 9,88 g hydrochlorid af 2-(2-tri-25 tylamino-4-thiazolyl)-2-(hydroxyimino)-eddikesyreethylester i 25 ml tørt dimethylformamid og tilsætter 8,28 g rent kaliumcarbonat. Man omrører milieuet i 15 minutter og afkøler derefter i 10 minutter i et bad af methanol og is, hvorpå man dråbevis i løbet af 5 minutter tilsætter 11,2 ml ethylbromacetat og lader henstå til spontan 30 opvarmning under omrøring og under indifferent atmosfære. Man hælder derpå i en blanding af 400 ml vand og 80 ml ethylacetat, rører om, dekanterer, vasker med 2 gange 80 ml vand, genekstraherer med 80 ml og 50 ml ethylacetat, tørrer den organiske fase, suger fra, skyller og inddamper til tørhed.

35 Man optager i ether, og rører om, og det forventede produkt krystalliserer. Man suger fra, skyller med ether, tørrer og isolerer 7,54 g af det forventede produkt. Smp. 154°C.

N.M.R.spektrum (OHCl^, 60 MEz): 4,75 ppm: 0-0¾C02 6,55 ppm: proton i thiazolringen.

18 DK 159156 B

Analyse: G30H29°5%S

beregnet: C!$ 66,28 H$ 5,38 E$ 7,73 S$ 5,90 fundet: 66,1 5,4 7,5 5,9

Trin B: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-eddikesyreethyl-2-iminoxy-5 eddikesyreester, syn-isomer.

Man blander under indifferent atmosfære og i et isbad 4,077 g produkt fremstillet i trin A i 11,3 ml dioxan, Efter afkøling indfører man i løbet af 20 minutter 8,25 ml 1 N natriumhydroxidopløsning. Man lader milieuet henstå 1 time i kulden, uddriver 10 dioxanet ved 25°C og tilsætter derpå 9,75 ml 1 H saltsyre. Man tilsætter 40 ml ethylacetat, rører om, vasker og genekstraherer med ethylacetat. Man tørrer den organiske fase over magnesiumsulfat, suger fra, uddriver opløsningsmidlerne, optager i ether, indleder en krystallisation, omrører de dannede krystaller i 30 minutter, 15 suger fra, skyller med ether, tørrer og får 3,462 g af det forventede produkt. Smp, 200°C.

Det rene produkt til analyse fås som følger:

Man opløser 400 mg af det opnåede produkt i 1 ml dioxan, fortynder med 10 ml isopropylether, rører om, lader krystallisere 20 i et isbad, suger fra, skyller med en opløsning af isopropylether med 10$ dioxan og afslutter med at udrive med isopropylether og isolerer 320 mg renset produkt, N.M.E.spektrum (60 MHz, GDCl^): 4,71 ppm: -O-Cffi^-COg 25 6,46 ppm: proton i thiazolringen.

Trin C: 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-((((aminooarbonyl)-methyl)--ox.y )-imino )-eddikesyreethylester, syn-is omer.

Man indfører under indifferent atmosfære og i et bad af methanol og kulsyresne en blanding af 3,609 g 2-(2-tritylamino-4--thiazolyl)-eddikesyre-ethyl-2-iminooxyeddikesyreester fremstillet i trin B i 28 ml tørt tetrahydrofuran, 21 ml tørt methylenchlorid og 0,77 ml rent H-methylmorpholin.

Man iagttager en opløsning, afkøler milieuet i et bad til -20°C og tilsætter dråbevis 0,91 nil isobutylehlorformiat.

35

Man omrører 3 minutter ved denne temperatur og afkøler derefter til -35°0 og tilsætter gasformig ammoniak i overskud. Man omrører 15 minutter ved -30°C og derefter 1 time ved stuetemperatur. Man inddamper til tørhed, optager i ethanol, omrører 20 minutter, frasuger de dannede krystaller, skyller med ethanol og tørrer.

is DK 159156 B

Der fås 3,33 g af det forventede produkt. Smp. 180°C.

H.M.R.spektrum (CDCl^, 60 MHz): 4,76 ppm: O-CH2-CO2 6,63 ppm: proton i thiazolringen

5 Analyse: C28H26°4li4S

beregnet: C$ 65,35 W° 5,09 6,23 fundet: 65,5 5,1 6,3

Trin J): 2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-2-( (((aminocarbonyl)-meth.yl)--oxy)-iminQ)-eddikesyre, syn-isomer.

Man indfører 3,5 g af det i trin C fremstillede produkt i 24 ml dioxan og 6,8 ml 2 H natriumhydroxidopløsning. Man omrører ved stuetemperatur og iagttager opløsningen og derefter krystallisationen af natriumsaltet efter 45 minutters kontakt. Man lader henstå under omrøring i lukket atmosfære i 3 timer 15 minutter. Man frasuger natriumsaltet, skyller med en blanding af dioxan og vand (70:30) og derefter med ether, tørrer og isolerer 1,81 g natriumsalt, Man opløser dette salt i 5,3 ml dimethylsulfoxid, tilsætter 5 ml 1 IT saltsyre og iagttager en udfældning og derefter en krystal-lisation. Man fortynder med 70 ml vand, omrører 20 minutter, suger fra, skyller med vand, tørrer og får 1,3 g af det forventede produkt. Smp. ca, 200°C, N.M.H.spektrum (CDCl^, 60 MHz): 4,58 ppm: -0-CH2-C0 6,66 ppm: proton i thiazolringen 25

Trin E: 5-aoetoxymethyl-7-( (2-( (((aminocarbonyl)-meth.vl)-oxy)- -imino)-2-(2-trltylaminothiazol-4-yl)-acetyl)-amino)-ceph--3-em-4-carboxylsyre« tert.-butylester, syn-isomer.

Man blander under indifferent atmosfære 488 mg af det i 30 trin H opnåede produkt og 328 mg tert.-butylester af 7-aminocepha-losporansyre i 3 ml tørt methylenohlorid. Man tilsætter derpå ved stuetemperatur en opløsning indeholdende 240 mg dicyclohexylcarbo-diimid i 3 ml tørt methylenohlorid. Efter opløsning iagttager man fremkomsten af krystaller, omrører 2 timer, frasuger det dannede 35 dicyclohexylurinstof, skyller det med methylenohlorid, tørrer og får 130 mg.

Man inddamper til tørhed og chromatograferer på en silica-gelsøjle under eluering med en blanding af ethylacetat, ethanol og vand (70:20:10) og får fraktionerne indeholdende det forventede produkt. Man uddriver opløsningsmidlerne, optager i 1 ral ethanol 20 DK 1591568 og fortynder derefter med 8 ml isopropylether, og produktet fælder ud. Man suger fra, skyller med en opløsning af isopropylether og ethanol (89:11), udriver med isopropylether, tørrer og får 324 mg af det forventede produkt.

5 N.M.R.spektrum (CPCl^, 60 MHz): 6,68 ppm: proton i thiazol

Trin F: 3-aoetoxymethyl-7-((2-((((aminocarbonyl)-methyl)-oxy)-imino)-2-10 -(2-aminothiazol-4-yl)-acetyl)-amino)-oeph-3-em-4-oarboxylsyre. syn-isomer i form af trifluoracetat.

Man opløser 357 mg af det i trin E opnåede produkt i 1,1 ml trifluoreddikesyre. Man lader henstå 25 minutter i lukket atmosfære og udfælder ved tilsætning af 11 ml isopropylether, su-15 ger fra, skyller med isopropylether, tørrer og får 275 mg af det ønskede trifluoracetat.

Eksempel 8.

Natriums alt et af 5-aoetoxymethyl-7-( (2-( (((aminocarhonyl)-meth.vl)-20 -oxy)-imino)-2-(2-aminothiazol-4-y1)-aoe tyl)-amino)-ce ph-3-em-4--carboxylsyre, syn-isomer.

Man opløser 275 mg trifluoracetat fremstillet i eksempel 7 i 1,2 ml 1 M natriumacetatopløsning i methanol. Man fortynder med 4 ml ethanol. Produktet fælder ud, og man suger fra, skyller med 25 ethanol, tørrer og får endelig 153 mg af det forventede natriumsalt. Smp. ca, 200°C (sønderdeling).

N.M.R.spektrum (PISO, 90 MHz):

4,4 ppm: ^-O-CHg-OO

6,8 ppm: proton i thiazolring 30

Eksempel 9 .

3-acetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(((l-carboxy-1--methylethy1)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer i form af trifluoracetat.

35 Trin A: 2-(2-trit.ylaminothiazol-4-yl)-2-(((l-tert.-butoxycarbonyl--1-methylethyl)-oxy)-imino)-edd ikesyreethylester, syn--isomer.

Man blander 9,88 g hydrochlorid af 2-(2-tritylaminotbiazol--4-yl)-2-((hydroxy)-imino)-eddikesyreethylester og 8,28 g kalium-carbonat i 25 ml tørt dimethylformamid. Man afkøler i 10 minutter

2i DK 159156 B

1 et bad til -10°0 og tilsætter i løbet af 3 minutter 19 ml 2-brom--2-methylpropionsyre-tert,-butylester i rå tilstand. Man lader henstå til opvarmning og omrører i 16 timer. Man iagttager en størkning. Man hælder i en blanding af 400 ml destilleret vand og 200 ml 5 ethylacetat. Man rører om, dekanterer og vasker med vand, ekstra-herer med 2 gange 100 ml ethylacetat, tørrer, suger fra, inddamper, samler en olie, hvortil man sætter 240 ml petroleumsether, afkøler, indleder en krystallisation, suger fra efter 30 minutters forløb og får 10,8 g af det forventede produkt. Smp. 134°C.

10 N.M.R.spektrum (60 MHz, CDCl^): 6,71 ppm: proton i thiazol 7,28 ppm: proton i trityl Analyse: beregnet: C% 68,09 W° 6,22 Ufo 7,01 S$ 5,35 15 fundet: 68,3 6,3 6,9 5,3

Trin Bi 2-(2-tritylaminothiazol-4-vl)-2-(((l-tert.-butoxycarbonyl--1-methylethyl)-oxy)-imino)-eddikesyre. syn-isomer.

Man blander 1,2 g produkt fremstillet i trin A i 2 ml 1 H methanolisk kaliumhyd roxid opløsning og 4 ml methanol. Man opvarmer 20 2 timer til tilbagesvaling, afkøler, iagttager krystallisation af udgangsproduktet og får 390 mg deraf. Man har altså hydrolyseret 810 mg produkt. Man inddamper filtratet til tørhed, tilsætter 1 ml dimethylformamid og 2 ml 1 N saltsyre (pH =2), Man omrører, tilsætter 10 ml vand og methylenchlorid, dekanterer, vasker med vand, 25 genekstraherer med methylenchlorid, tørrer den organiske fase, suger fra, inddamper filtratet indtil opnåelse af en olie. Man tilsætter 4 ml chloroform og fortynder med 30 ml ether. Man indleder en krystallisation, frasuger krystallerne efter 30 minutters omrøring, skyller med ether, tørrer og isolerer 472 mg af det forven-30 tede produkt. Smp. 190°C.

H.M.R.spektrum (DMS0, 60 MHz) 6,76 ppm: proton i thiazol 7,33 ppm: proton i trityl 35 Trin C: 5-acetoxymeth.vl-7-( (2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-( ((l--tert.-butoxycarbonyl-l-methylethyl)-oxy)-imino)-acetyl)--amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre-tert.-butylester, syn-isomer.

Man blander 1,715 g af det i trin 3 fremstillede produkt og 984 mg tert,-butylester af 7-aminocephalosporansyre i 26 ml methy-

22 DK 159156 B

lenchlorid, Man opvarmer til opløsning, afkøler til stuetemperatur og tilsætter 678 mg dicyclohexylcarbodiimid i 6,6 ml tørt methylen-ehlorid. Man omrører ved stuetemperatur i 2 timer. Man iagttager krystallisationen af dicyclohexylurinstoffet, suger det fra og får 5 268 mg deraf. Man inddamper filtratet til tørhed, optager i ether, tilsætter lidt eddikesyre (indtil pH 4). Man omrører 20 minutter, frasuger det uopløselige materiale, skyller med ether og får 79 mg dicyclohexylurinstof eller i alt 347 mg.

Man inddamper etherfasen til tørhed og chromatograferer re-10 sten på silicagelsøjle under eluering med ether. Der fås først en blanding og derefter 463 mg af det forventede rene produkt, Ef = 0,7 (elueringsmiddel: ether).

Trin D: 15 3-aoetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-( ((1-carboxy-l- -methylethyl·)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-4-carboxylsyre, syn-isomer i form af trifluoracetat.

Man indfører 432 g af det i trin C opnåede produkt i 4,3 ml trifluoreddikesyre i ren tilstand og opbevarer under henstand 20 i 15 minutter efter opløsning. Man fortynder under omrøring med 43 ml isopropylether, frasuger det uopløseltge materiale, uddriver opløsningsmidlet, fortynder atter med 50 ml isopropylether, frasuger det dannede uopløselige materiale, skyller med isopropylether og får endelig 173 mg trifluoracetat med Bf = 0,5 (elueringsmiddel: 25 acetone tilsat 10$ vand).

Eksempel 10.

Di natriums alt et af 5-acetoxymethy1-7-( (2-(2-aminothiazol-4-y!l)-2--(((l-carboxy-l-methylethyl)-oxy)-imino)-acetyl)-amino)-ceph-3-em-30 -4-carboxylsyre, syn-isomer.

Man blander 173 mg trifluoracetat fremstillet i eksempel 9 og 0,95 ml 1 M natriumacetatopløsning i methanol. Efter en svag opvarmning filtrerer man sporene af uopløseligt materiale, skyller, inddamper til lille rumfang og fortynder med 2,5 ml ethanol. Man 35 iagttager udfældningen af det forventede produkt, rører om, suger fra, skyller med ethanol og derefter med ether, tørrer og får 77 mg af det forventede produkt, H.M.B,spektrum (DMS0, 60 MHz): 6,75 ppm: proton i thlazol.

Analyse: beregnet: C$'39,93 H$ 3,35 fundet: 39,5 3,6

23 DK 159156 B

Eksempel H· 3-acetoxymethyl-7-( (2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-carboxylmethyloxy-imino)-acetyl)-aminooeph-5-em-4-oarboxylsyre. s.vn-isomer« 1 form af trifluoraoetat.

5 Trin A: 2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-(1-methyl-l-methoxyethoxy-imino)-eddikesyre, syn-isomer« lan omrører i 20 minutter ved stuetemperatur 12,9 g 2-((hydroxy )-imino)-2-(2-tritylaminothiazol-4-y1)-eddikesyre, syn-isomer, i 120 ml methylenehlorid og 12 ml 2-methoxypropen. Man inddamper 10 til tørhed og omrører atter i 30 minutter i 60 ml methylenehlorid og 12 ml methoxypropen. Man inddamper til tørhed under formindsket tryk.

Man får det forventede produkt, som man “benytter i denne tilstand# 15 Trin B: Piethylaminsaltet af 3-acetoxymethyl-7-((2-(2-tritylamino-thiazol-4-yl)-2-(1-methyl-l-methoxyethoxy)-imino)-acetyl)--aminoeeph-5-em-4-carboxylsyre, syn-isomer.

Man opløser 2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-(1-methyl-l--methoxyethoxyimino)-eddikesyre-syn-isomer fremstillet efter frem-20 gangsmåden beskrevet i trin A ud fra 47*25 g 2-(2-tritylaminothia-zol-4-yl)-2-hydroxyiminoeddikesyre i 230 ml methylenehlorid. Man tilsætter 12,5 g dicyclohexylcarbodiimid og omrører 1 time ved stuetemperatur. Man frasuger det dannede dicyclohexylurinstof, som man skyller med lidt methylenehlorid. Der fås 9*82 g deraf. Til filtra- 25 tet sætter man en opløsning af 13,6 g 7-aminocephalosporansyre i 70 ml methylenehlorid og 14 ml triethylamin. Man omrører 2 timer ved stuetemperatur. Man vasker i skilletragt med 350 ml 1 I saltsyre, dekanterer, vasker med^vand, tørrer og inddamper til tørhed.

Man opløser resten i 100 ml ethylaeetat og indleder en krystalli- 30 sation. Man lader krystallisere 30 minutter, suger fra og får 5,5 g af udgangsproduktet, filtratet inddampes til tørhed, og resten omrøres 30 minutter med 200 ml isopropylether. Efter frasugning og tørring får man 37,35 g råt kondensat. Til rensning deraf går man frem som følgeri Produktet opløses i 148 ml ethylaeetat. Man til-35 sætter 5,5 ml diethylamin og udfælder under kraftig omrøring med 65Ο ml ether. Man suger fra, vasker med ether, tørrer og får 26,35 g af det forventede produkt. Man inddamper derpå filtratet til tørhed, optager i 50 ml ether og får et yderligere udbytte på 2,8 g, som er identisk med det første udbytte ved tyndtlagschromatografi.

24 DK 159156 B

Diethylaminsaltet bruges umiddelbart i det følgende.

H.M.R. spektrum (CDCl^, 60 MHz): . CH^(a) (a) = 1,54 ppm X0-1-0H3(a) (b) = 3,27 ppm 5 OOH-(b) proton i thiazolring: 6,78 ppm

Trin 0: 5-acetorymethyl-7-( (2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-( 1--meth.vl-l-methoiyethoxy)-imino)-acetyl)-aminoceph-5-em-10 -4-carboxyls.vre-diphenylmethylester, syn-isomer.

Man indfører 4,15 g af det i trin B fremstillede diethyl-aminsalt i 40 ml methylenehlorid og 55 ml 0,1 IT saltsyre.

Man omrører 10 minutter ved stuetemperatur, dekanterer, vasker den organiske fase med 2 gange 25 ml vand. Denne fase tør-15 res derpå, suges fra og skylles med methylenehlorid.

Man indfører i løbet af 10 minutter under omrøring 15 ml diazodiphenylmethan (8$) i benzen. Man omrører 15 minutter ved stuetemperatur og afdamper derefter opløsningsmidlerne ved formindsket tryk ved 30°C. Man optager i isopropylether, findeler og afdamper 20 opløsningsmidlet under formindsket tryk. Efter en fornyet optagelse i isopropylether suger man fra og skyller. Efter tørring får man 4,41 g af det forventede produkt.

J.MeR.spektrum (CDCl^, 60 MHz): 25 (.) *, O ? sk' \^~L^ ——- (a) π / i • piL.(a) _ 30 % \ J \K20CCii3(b) ___(a) T 0 • . CH«(c) J 00.,011 φ0 a = 1,53 ppm (o) b = 2,01 ppm 35 c = 3,26 ppm d =6,78 ppm e =7,33 ppm

25 DK 159156 B

Trin D; 5-acetoxymethyl-7-( (2-(2-tritylamiEothiazol-4-yl)-2-(hy-droxy)-imino)-acetyl)-aminoceph-3-em-4-carboxylsyrediphe- n.v Ime thy leat er. syn-isomer.

Man anbringer 2,775 g produkt fremstillet i trin C ovenfor 5 i 14 ml acetone og 4»5 ml 1 N saltsyre. Man omrører 2 timer ved stuetemperatur og uddriver acetonen under formindsket tryk.

Man tilsætter 20 ml ethylacetat, rører om og dekanterer derpå. Man vasker den organiske fase med 2 gange 10 ml svagt saltet vand. Vaskevæskerne ekstraheres med 5 ml ethylacetat. De or-10 ganiske fraktioner forenes og tørres. Man suger fra, skyller med ethylacetat og afdamper derpå opløsningsmidlet under formindsket tryk. Hesten optages i ether og krystalliserer. Man findeler, suger fra og skyller med ether. Efter tørring får man 1,88 g af det forventede produkt.

15 U.M.E,spektrum (CDCl^, 60 MHz): 6,88 ppm: proton i thiazolring 7,33 ppm: proton i phenylringene

Hf = 0,5 (elueringsmiddel: ether med 20$ acetone)

Trin E: 3-acetorymethyl-7-(2-(2-tritylaminothiazol-4-vl)-2-tert.--butoxycarbonylmethyloxyimino)-acetylaminoceph-3-em-4--carboxylsyrediphenylmethylester, syn-isomer.

Man indfører 0,85 g produkt fremstillet i trin D i 4 ml dimethylformamid og 0,8 ml tert.-butylbromacetat. Efter omrøring i 5 minutter i isbad tilsætter man 1,7 g sølvoxid.

25

Man omrører 1 time efter at have fjernet badet. Man suger fra og skyller med ethylacetat. Man sætter 80 ml vand til filtratet, dekanterer og ekstraherer den vandige fase med 2 gange 20 ml ethylacetat. De organiske faser vaskes med 2 gange 50 ml saltvand.

De organiske faser tørres i nærværelse af 80 mg aktivkul. Man su- 30 ger fra og skyller med ethylacetat. Opløsningsmidlet uddrives under formindsket tryk, og resten optages i isopropylether. Man findeler, suger fra og skyller med isopropylether. Efter tørring får man 0,724 g af det forventede produkt. Hf =0,34 (methylenchlorid tilsat 5$ ether).

35

Trin F: 5-acetox.vmethyl-7-( (2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-carbox.ylmethyloxy-imino)-acetyl)-aminoceph-3-em-4-oarboxylsyre. syn-isomer. i form af trifluoracetat.

Man afkøler ved hjælp af et bad af methanol og is 5 ml tri-

26 DK 159156 B

fluoreddikesyre. Man tilsætter 0,482 g af det i trin e fremstillede produkt og omrører 15 minutter efter at have fjernet badet. Man iagttager en opløsning efter 5 minutters forløb. Man uddriver syren under formindsket tryk og tilsætter 20 ml isopropyl-5 ether. Man omrører 5 minutter og skyller med isopropylether. Efter tørring får man 0,277 g af det forventede trifluoracetat, som er identisk med det i eksempel 4 fremstillede produkt.

Eksempel 12.

10 Dinatriumsaltet af 3-aeetoxymethyl-7-((2-(2-aminothiazol-4-yl)--2 -o arb oxylme thyloxyimin o) -acetyl) -aminooeph-5-em-4-carboxylsyre. syn-isomer.

Det i eksempel 11 fremstillede salt opløses i 0,5 ml methanol, og man tilsætter langsomt 1,5 ml 1 M opløsning af natrium -15 acetat i methanol. Man findeler og tilsætter langsomt 5 ml ethanol. Man suger fra, skyller 2 gange med ethanol og derefter med ether. Efter tørring får man 0,178 g af det forventede dinatriumsalt, Produktet er identisk med det i eksempel 5 fremstillede.

20 Eksempel 13.

5-ace toxymethy1-7-((2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-tert.-butoxy-oarbonylmethyloxyimino)-acetyl)-amino oe ph-5-em-4-carboxylsyre--tert.-butylester, s.vn-isomer.

Trin A: 3-acetoxymethy 1-7-( (2-(2-tritylaminothiazol-4-yl) -2-( 1-25 -methyl-1-methox.ve thoxy) -imino) -acetyl) -aminocePh-3-em- -4-carboxylsyre-tert.-butylester. syn-isomer.

Man opløser i 120 ml methylenehlorid 2-(2-tritylaminothia-zol-4-yl)-2-(1-methyl-l-methoxyethoxyimino)-eddikesyre, syn-isomer, fremstillet i trin A i eksempel H. Man tilsætter 9,84 g tert.-30 butylester af 7-aminocephalosporansyre. Man afkøler til 10°C og tilsætter 6,6 g dicyclohexylcarbodiimid. Man fjerner kølebadet og lader henstå 3 timer under omrøring ved stuetemperatur. Man frasuger det opnåede dieyclohexylurinstof (4 g), inddamper til tørhed og opløser resten i 25 ml ethylaeetat. Man tilsætter 100 ml 35 ether og vasker med 100 ml 0,2 li saltsyre og 100 ml vand og 20 ml 1 M natriumbicarbonatopløsning. Man udfælder således natriumsaltet af udgangsproduktet, som man suger fra og tørrer, og man får 3,9 g deraf.

Man vasker med vand, tørrer, suger fra og inddamper til tørhed.

27 DK 159156 B

Man optager i 50 ml ether og indleder og afslutter en krystallisation med tilsætning af 50 ml isopropylether. Man suger fra, vasker og tørrer. Der fås 10,8 g af det forventede produkt, Smp. ca. 160°0, 5 jr.M.R.spektrum (GDCl^, 60 MHz): ^ (a) 1,53 ppm ^ Q 0H5(a) (b) 3,26 ppm \ o-OE-(a) proton i thiazol: 6,76 ppm ’ ^ O-CH^(b) 10 Trin_B: 3-aoetoxymethyl-»7'-( (2-(2-tritylaminothiazol-4-.vl)^-(hydroxy )-imino) -acetyl) -aminocenh-5 -em-4-carboxylsyre -tert.--butylester. syn-isomer.

Man holder i 3 timer under omrøring ved stuetemperatur en opløsning af 0,812 g produkt fremstillet i trin A i 4 ml acetone 15 og 1 ml 1 N saltsyre. Bian tilsætter 1 ml 1 M vandig natriumcarbo-natopløsning, 10 ml vand og 5 ml ethylacetat. Der fås 0,551 g af det forventede produkt. Smp, ca. 200°C.

Analyse : ^38^37^7^5^*2 beregnet: C# 61,69 5,04 9,47 S# 8,66 20 fundet: 61,5 5,0 9,1 8,4 H,M.R.spektrum (0DC1 , 60 MHz): 3 1,55 ppm: tert.-butyl 6,88 ppm: proton i thiazol 25 Trin 0» 3-acetoxymeth.vl-7-( C2-(2-tritylaminothiazol-4-vl)-2-tert.--butoxycarbonylmethyloxyimino)-aoetyl)-aminoceph-3-em-4--carboxylsyre-tert,-butylester.

Man blander 0,074 g produkt fremstillet i trin B, 0,7 ml dimethylformamid og 0,5 ml tert.-butylbromacetat. Ted 20°C indfø-30 rer man 0,5 g sølvoxid. Man omrører 50 minutter, suger fra og skyller med ethylacetat. Man tilsætter 10 ml vand, dekanterer, ekstra-herer med 5 ml ethylacetat og vasker derefter de forenede organiske faser med 5 ml saltvand. Man tørrer over magnesiumsulfat, suger fra, skyller med ethylacetat, uddriver opløsningsmidlerne og 35 optager resten i isopropylether. Man findeler og skyller med iso-propylether. Efter tørring får man 0,02 g produkt. Bf =0,34 (me-thylenchlorid med 51» ethylether).

Produktet er identisk med det i eksempel 2 fremstillede.

28 DK 159156 B

Eksempel 14.

3-acetoxymethyl-7-( (2-( 2-aminothiazol-4-yl )-2~carboxymeth.ylox.YiminpJj= -acetyl)-aminoceph-3-em-4-carBoxylsyre. syn-isomer. i form af trl-fluoracetat.

5 Trin A: Diethylaminsaltet af 3-acetoxymeth.vl-7-( (2-(2-tritylamino-thiazol-4-yl)-2-hydroxyimino) -acetyl)-aminoceph-3-em-4--oarBox.vlsyre. syn-is omer.

Man opløser 7,6 g diethylaminsalt af 3-acetoxymethyl-7--((2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-(l-methyl-l-methoxyethoxy)-10 -imino)-aeetyl)-aminoceph-3-em-4-carBoxylsyre, syn-isomer, fremstillet i trin B i eksempel 15 i 30 ml acetone og 10 ml 2 IT saltsyre.

Man omrører 40 minutter ved stuetemperatur, tilsætter 20 ml vand, uddriver acetonen ved 30°C under formindsket tryk, tilsætter 25 ml ethylacetat, dekanterer, genekstraherer, vasker med vand, tørrer 15 og suger fra, tilsætter filtratet 1 ml diethylamin, udriver, isafkøler og frasuger det dannede diethylaminsalt, vasker det med ether og får 6 g rent produkt.

Analy se: gH^ q07^6S 2

Beregnet: C$ 60,30 B# 5,33 B* 11,10 S# 8,47 20 fundet: 60,5 5,7 10,9 8,2 U.H.R.spektrum (CDCl^, 60 MHz): 6,63 ppm: proton i thiazol 7,33 ppm: proton i trityl

Trin B: Biethvlaminsaltet af 3-acetoxymethvl-7-((2-(2-tritylamino-thiazol-4-yl)-2-tert.-ButoxycarBonylmethyloxvimino)-ace- t.vl )-aminoceph-3-em-4-carboxylsyre. syn-isomer.

Man fremstiller 10,25 g 3-acetoxymethy1-7-((2-(2-trity1-aminothiaz ol-4-yl)-2-Byd roxyimino)-acetyl)-aminoceph-3-em-4-carb- oxylsyre ud fra det tilsvarende diethylaminsalt fremstillet ifølge 3 0 trin A ovenfor ved Behandling af diethylaminsaltet med saltsyre efter opløsning i methylenchlorid og optagelse i isopropylether af den tørre rest.

De 10,25 g syre opløses i 225 ml methylenchlorid. Man tilsætter 150 ml destilleret vand. Man indfører linder kraftig omrø- 3 5 ring 21 ml triethylamin. Man får en emulsion. Man indfører derpå 13,2 ml tert.-ButylBromaeetat, Man omrører 3 timer 30 minutter ved 20-25°C, Man syrner ved 15-20°0 med 90 ml 2 tf saltsyre. Man rører om og dekanterer, vasker med destilleret vand og ekstraherer vaske-væskerne med chloroform. Man tørrer, suger fra, skyller med methylenchlorid, inddamper til tørhed og får 14,85 g af en Brun harpiks.

*

29 DK 159156 B

Man optager denne harpiks i 30 ml ethylacetat og tilsætter ved 20°C langsomt 1,65 ml diethylamin. Opløsningen indføres i løbet af 10 minutter i en ballon indeholdende 60 ml isopropylether under omrøring. Man omrører 30 minutter ved 20-25°C og suger herpå fra 5 og skyller med 2 gange 5 ml af en blanding af ethylacetat og iso- propylether (1:2) og derefter med isopropylether. Man tørrer under formindsket tryk og får 11,14 g af det forventede produkt. Saltet optages i 30 ml ethylacetat. Til denne opløsning sætter man 30 ml ethylacetat med 10$ isopropylether. En udfældning kommer til syne.

10 Man omrører 5 minutter og suger fra. Man inddamper til tørhed indtil opnåelse af en brun rest, som man optager i 50 ml isopropyl-ether. Man omrører 1 time ved stuetemperatur, suger fra og skyller med isopropylether. Der fås 10,75 g af det forventede produkt. Analyse: G44H50°9Ii6S2 15 beregnet: C$ 60,67 H$ 5,78 U$ 9,65 S$ 7,36 fundet: 61,1 5,8 9,6 7,1 Η,Μ.E.spektrum (CDCl^, 90 MHz): 1,43 ppm: tert,-butyl 6,8 ppm: proton i thiazolring 20

Trin C; 3-acetox.vmethyl-7-( (2-(2-aminothiazol-4-yl )-2~carboxymethyloxyimino) --acetyl)-aminooeph-3-em-4-oarboxylsyre. syn-isomer. i form af tri-fluoracetat.

25 Til 36 ml trifluoreddikesyre sætter man i løbet af 1 minut ved 20-25°C under indifferent atmosfære 9 g diethylaminsalt fremstillet i trin b. Man omrører under indifferent atmosfære i 15 minutter. Man afkøler ved hjælp af et isbad og indfører hurtigt 360 ml isopropylether. Man omrører 15 minutter, suger fra og 30 skyller med isopropylether og derefter med ethylether. Man tørrer og får 5,08 g råprodukt. Man foretager en rensning på forskellige hold eller i alt 8,28 g råprodukt. Man udriver 15 minutter med 33 ml acetone med 1$ vand. Man fortynder med 330 ml ether, omrører 15 minutter, suger fra og skyller med ether.

35 Man tørrer og får 7,03 g af det forventede produkt.

Produktet er identisk med det i eksempel 11 fremstillede.

30 DK 159156 B

Parmakologisk undersøgelse.

Aktivitet in vitro.

Metode med fortyndinger i væskeformet milieu.

Man fremstiller en række glas, hvori man fordeler samme 5 mængde sterilt næringsmilieu. Man fordeler i hvert glas voksende mængder af det produkt, som skal undersøges, og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme.

Efter inkubering i 24 eller 48 timer i varmeskab ved 37°C vurderes vækstinhiberingen ved gennemlysning, hvilket gør det mu-10 ligt at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer (MIC) ud-trykt i μg/ml.

Der fås følgende resultater: 15 20 25 30 35

31 DK 159156 B

Φ W) LA ,

ΗΗΛ IA CM O Η Η H

»g O O O - O O ·>···· - 'H'^'^OO H CM CM O 4 -4 o o o o o

•H b£ -4 !\ K

H ft ‘ -U Q) ΙΛ

.isj Q ·Η ΙΓ\ CM O H HH

i g rj O O O *> o O ·> * *> ·* *

T3 φ O H CM CM O CM <1- O O O O O

OM H 4 βΛ S CM ' a, φ

<D

bO Λ Η .,00 Η H m [A in •'OOlACMHH H *

S S 00 O -4- O

^ 4· /. A

•H bi ' Η ft

p φ IA

,¾ ft ·Η ,β O ΙΑ ΙΑ H

3g ΙΛ (O m » in O «CM * H h » d Φ O -4 o <t o o o O W M CM Λ UX s ft Φ

P

S β JA

O Φ O

CQ P ΙΆ H W . ,

S ·Η t>- H

<h co κη h βω vo •H β _ o η β σ p

Η Ή H

•HH O <!

OH O

•Η ·Η Μ) Η P

β O -4 <5 β -P

ω ·Η η _ ω β ρ, β β -ρ ω φ 4 ο w Ρ ά 00 ft ΙΑ w ·η ω -4 fT\ Η ω ·Η Η m to · >4 s ω μ

CM β C-- «Η β ω CM

ν£) Η β Η CM ΙΑ β β M3 β ΙΑ M3 m ft ΙΑ ·Η ·Η W β Ο Η · ΙΑ -4 VOHHM3H · ο ft σ Ο Ο CM Ο ft ho χ <; cn σ md >, >. ο ·η Μ <£ p Φ Ο Ο Η S ω to w ra ο cd Φ ω ωΜκιω·Η·Ηθββ · -ρ Ο © β β β βΗΗΗ-Ρ-Ρ ft β β ω φφφφφφ-^φφΗφια-η s βββωοο -p-ρω bocM β g β β β ο ω ω w η ο cd cd cd ω >> Φ Λ η ·Η ·ηi ·η ·η § +5 ftCHPHHHHHIAft rn CQWW ·Η Ο Ο Ο Ο ΙΓ\ Φ βββΦΦΦΡΟΟΟΟ β ΟΟΟβββΑ^^^ ft ft οοοοοοβΦΦΦΦ Ο Ο Ο Ο Ο Ο W ·Η ·Η ·Η ·Η β Cd Ο Ο Ο Ο Ο Ο ,β,β,β,βΉΗ οοοοοοωοοοοοΗ Η Η Η Ο Ο Ο β ·Η ·Η ·Η ·Η Φ £>* {>> ί>> -Ρ -Ρ ·Ρ Η β β β β S ·Η 3 Λ A ft ft ft Η Φ Φ Φ Φ Φ Μ ft, ft ft Φ Φ ΦΗ,β,β,β,ββΡ φφφβββΟΟΟΟΟΡΦ 4J -Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Φ W W Μ Μ Ο Η

COCOCOCOWWWftWH WP W

32 DK 159156 B

Φ

&0 CM

rH Η ,ϋ H r-t O in

S g - - ·> - O CM CM

«Η ^ \ CO o O O O CM

•hh w v/ -μ φ

x α ·Η CM

3 g ,£3 r—1 rH O CM

O O ϋ ·> ·> » » ΙΡ\ Η Η Ο W Η <}· οοοο Η S Μ CU 0) ^ Φ

ID

Η Η Λ CM

S g CM Η * CM O LT\ LA

'Η ^ ''ν. 00 Ο Η •Η bl Η Ρ -μ φ X Ρ Ή

3 S Λ CM

Τ) Φ ϋ CM Η •'ΗΟΙΑΙΛ Ο Μ Η Ο Η fe*i S CM Ο* Φ •μ β Φ -μ 10 •Η Φ Φ fe β •Η Ο •Η

S CM

cd in m p cm ιλ in β in cm

Φ CM CM

W5 <! c -μ ΚΩ ^ β tn ^ l Ο φ in + cm -μ Η η to Φ CM Η Ο C0 ·Η g ο -d g id to g Φ -3 β 3 Φ cd cd β ·η *h φ fe +1 ·Η ·Η W fe cd β CO β w 3 O ·Η o m g cd co o

g CO -Η *H O <1- -H

3 -Η Η Λ H g © fe -π ά o 3 co fi cd & R o -μ ρ, ω cd +> β β H fe φ cd φ cd 3 ·η co -μ ·η ω Η > a Η ϋ Ο Η η cd β cd φ (Q 10 Φ ρ φ ·Η •η 3 3 β ο -ο -μ w φ φ ο. fe ·η cd ,ω -μ -μ ε φ > fe φ ο ο η -μ ο fe Η fe fe cd β fe φ « Ρη ρ μ μ Ρ co

33 DK 159156 B

Produkt ifølge eksempel 8.

MIC i ug/ml

Stammer 24 h 48 h 5

Staphylococcus aureus ATCC 6 538 penicillinfølsom 2 2

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 2 3 10

Staphylococcus aureus exp. nr, 54 146 2 3

Streptococcus pyogenes A 561 0,05 0,05 15 Streotococcus faecalis 5 432 3 20

Streptococcus faecalis 99 E 74 10 >40

Bacillus subtilis ATCC 6 633 0,5 1 20

Escherichia coli tetracyclinfølsom 0,5 0,5 ATCC 9 637

Escherichia coli tetracyclinresistent ATCC 11 303 0,05 0,05 25

Escherichia coli exp. TOggBg 0,2 0,2

Escherichia coli gentamicinresistent tobramycin R 55 123 D 0,2 0,2 30

Klebsiella pneumoniae exp. 52 145 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae 2 536 gentamycin- resistent 1 1 35 Proteus mirabilis (indol -) A 235 0,05 0,05

Salmonella typhimurium 420 0,5 0,5

34 DK 159156 B

MIC 1 ug/ml

Stammer 24fa 48 h

Enterobacter cloacae 681 3 5 5

Providencia Du 48 55

Serratia gentamicinresistent 2 532 2 2 10 15 20 25 30 35

35 DK 159156 B

Produkt ifølge eksempel 8.

Stammer 1 24 h 48_h 5 1 ‘

Staphylococcus aureus ATCC 6 538 penicillinfølsom 2 3

Staphylococcus aureus UG 1 128 penicillinresistent 5 5 10

Staphylococcus aureus exp. nr. 54 146 3 5

Streptococcus pyogenes A 561 0,1 0,1 15 Streptococcus faeealis 5 432 5 20

Streptococcus faeealis 99 P 74 20 ^ 40

Bacillus subtilis ATCC 6 633 0,5 1 20

Escherichia coli tetracyclinfølsom ATCC 9 637 0,2 0,5

Escherichia coli tetraeyclinresistent 25 ATCC 11 503 0,05 0,05

Escherichia coli exp. T02gBg 0,1 0,1

Escherichia coli gentamicinresistent, tobramycin R 55 123 D 0,1 0,1 30

Klebsiella pneumoniae exp. 52 145 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae 2 556 gentamicinresistent 0,5 GCj5 35

Proteus mirabilis (indol -) A 255 0,1 0,1

Proteus vulgaris (indol +) A 252 5 40

36 DK 159156 B

MIC i ng/ml

Stammer_;_ 24 h 48 h

Salmonella typhimurium 420 0,2 0,2 5

Enterobacter cloacae 681 2 10

Providencia Du 48 5 5

Serratia gentamicinresistent 2 532 2 2 15 20 25 30 35

37 DK 159156 B

Produkt ifølge eksempel 10.

Stammer Μΐ° -1 24 h 48 h 5 - —-- -

Staphylococcus aureus ATCC 6 538 penicillinfølsom 20 20

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 20 40 10

Staphylococcus aureus exp. nr. 54 146 20 ' 40

Streptococcus pyogenes A 561 1 1 15

Streptococcus faecalis 5 432 ~".-40 y40

Streptococcus faecalis 99 E 74 >-40 >40

Bacillus subtilis ATCC 6 633 10 >40 20

Escherichia coli tetracyclinfølsom 0,5 0,5 ATOO 9 637

Escherichia coli tetracyclinresistent 25 ATCC 11 303 0,2 0,2

Escherichia coli exp. TOggBg 0,5 0,5

Escherichia coli gentamicinresistent, 30 tobramycin R 55 123 D 0,5 0,5

Klebsiella pneumoniae exp. 52 145 1 1

Klebsiella pneumoniae 2 536 gentamicin- resistent 1 1

Proteus mirabilis (indol -) A 235 0,05 0,05 35

38 DK 159156 B

MIC i ug/ml _s'fcammer_ 24 h 48 h

Proteus vulgaris (indol +) A 232 0,1 3 5 Salmonella typhimurium 420 1 1

Enterobacter cloacae 681 40 J> 40

Providencia Du 48 23 10

Serratia gentamisinresistent 2 532 1 1 15 20 25 30 35

Claims (2)

39 DK 159156 B Patentkrav.

1, Analogifremgangsmåde til fremstilling af (2-(2-amino-thiazol-4-yl)-2-(O-substitueret)-oxyiminoacetamid<^-7-cephalosporan-syre med den almene formel I nh2 5 o »4* ΪΠ 10 Ε» Χνγ:;:::ί^Ννα-ι2-ο-α-θΗ3 co2a o hvor E^betegner enten en gruppe -COgR1', hvor R1* betegner en alky lgruppe med 1-3 carbonatomer, et hydrogenatom eller et ækviva-15 lent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, eller R^ betegner en nitrilgruppe, eller R3· betegner en carbamoylgruppe C0NH2, A betegner et hydrogenatom, et ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, R* og R", som kan være ens eller 20 forskellige, betegner et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer, idet gruppen R* i O-C-R1 r

25 H" befinder sig i syn-stilling, og idet det bemærkes, at i det tilfæl- 1 it 11 de, hvor R betegner gruppen C02R , hvor R betegner et hydrogenatom, betegner A et hydrogenatom, og når R1 betegner en gruppe it TI G02R , frvor R betegner et ækvivalent alkalimetal, jordalkalime-30 tal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, betegner A samme ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, kendetegnet ved, at man behandler en forbindelse med formlen II Vx_

35 I (II) 0^N\t^'C..2-o-c-cii3 C02A' . o

40 DK 159156 B hvor A* betegner et hydrogenatom eller en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar estergruppe , med en syre med formlen III EH-R2 5 s^V ' '===^-rr-—· CO,II (III) IT ‘V 1 -s O-C-ϊΓ ti" n 10 eller et funktionelt derivat af denne syre, hvor R betegner en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe % Ilt eller en chloracetylgruppe. R betegner enten en gruppe C0«R · 1» t c hvor R betegner en alkylgruppe med 1-3 earbonatomer eller en ved sur hydrolyse eller ved hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, 15 eller R^ betegner en nitrilgruppe eller en earbamoylgruppe -C0HH2, Rf og Rff har samme betydning som ovenfor, og gruppen R» -0-C-R5 i

20 H" befinder sig i syn-stillingen, til opnåelse af en forbindelse med formlen I1 2 ’ 1JH-R ” \_v i cl·) τΤ^νΤΊ x0-C-Ir J_i i·' 0 -o-c-CH 30. f CO-Λ' 2 3 2 hvor R , R , R', R*1 og A* har samme betydning som ovenfor, hvilken forbindelse med formlen I* man behandler med et eller flere midler, som vælges blandt midler til sur hydrolyse, midler til 2 i»» 35 hydrogenolyse og thiourinstof alt efter værdierne af R , R og Α», til opnåelse af en forbindelse med formlen Ia 4i DK 159156 B l"2 S o W II 5 a) ' S-*4 J_J H" Q'' 'ννγ/Χ^>Ν'αΗ2-ο-|-'αΗ3 co II 0 10 , 4. 2 ’ ’ 21 1 hvor IT betegner enten en gruppe C02R , hvor R betegner en alkylgruppe med 1-3 carbonatomer eller et hydrogenatom, eller R^ betegner en nitrilgruppe, eller R^ betegner en earbamoylgruppe COUHg, og R* og R** har samme betydning som ovenfor, og svarende 15 til en forbindelse med formlen I, hvor R1 har betydningen R^, og A betegner et hydrogenatom, hvilken forbindelse Ie man om ønsket omdanner til salt efter gængse metoder til opnåelse af forbindelserne med formlen 1^ MHp ” „ · \_/ i <v 25 °V

0 CH -O-C-CH-

2 I 3 CO2h" o K ·*» I * t t hvor Br betegner enten en gruppe C02R , hvor R betegner en al-30 kylgruppe med 1-3 earbonatomer eller et ækvivalent alkalimetal, 3ordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, eller en nitrilgruppe eller en earbamoylgruppe C0IH2, A,f betegner et ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, idet det bemærkes, at hvis C 7 I I “7 11

35 R^ betegner en gruppe C02R^ , hvor R*' betegner et ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, så betegner A·1 et ækvivalent alkalimetal, jordalkalimetal, magnesium, ammonium eller af en amineret organisk base, R* og Rfr har den ovenfor angivne værdi, og svarende til en 1 *5 forbindelse med formlen I, hvor R har betydningen R , og A har be- «2 DK 159156 B tydningen A".

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxycarbonyl-methyloxyiminoacetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 5 syn-isomer, og dens salte med alkalimetaller, jordalkalimetaller, magnesium, ammonium og aminerede organiske baser, fortrinsvis dinatriumsaltet . 10 15 20 25 30 35