DE60318177T2

DE60318177T2 - Rho-kinase inhibitoren

Info

Publication number: DE60318177T2
Application number: DE60318177T
Authority: DE
Inventors: Dhanapalan Bethany NAGARATHNAM; Jacques Bethany Dumas; Holia Hamden HATOUM-MOKDAD; Stephen Boyer; Hans Pluempe
Original assignee: Bayer Pharmaceuticals Corp
Current assignee: Bayer Healthcare LLC
Priority date: 2002-01-23
Filing date: 2003-01-23
Publication date: 2008-10-09
Anticipated expiration: 2023-01-24
Also published as: CA2473910C; US20120302587A1; US6943172B2; JP4423043B2; US20050209261A1; WO2003062227A1; CA2473910A1; ES2298497T3; MXPA04007196A; EP1470122B1; US20040002507A1; EP1470122A1; DE60318177D1; ATE381557T1; JP2005523894A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen und Derivate derselben, ihre Synthese und ihre Verwendung als Hemmstoffe für Rho-Kinase. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind zum Hemmen des Tumorwachstums, zur Behandlung von Erektionsstörungen und zur Behandlung weitere Indikationen, die durch Rho-Kinase vermittelt werden, z. B. Erkrankungen der Herzkranzgefäße, von Nutzen.
STAND DER TECHNIK
Die Pathologie einer Reihe von Krankheiten des Menschen und des Tieres, einschließlich Bluthochdruck, Erektionsstörungen, koronar-zerebraler Kreislaufstörungen, neurodegenerativer Störungen und Krebs kann direkt mit Veränderungen des Aktin-Zytoskeletts in Verbindung gebracht werden. Diese Krankheiten stellen aus medizinischer Sicht ein ernstes ungelöstes Problem dar. Das Aktin-Zytoskelett setzt sich aus einem gefleckt aus Aktin-Filamenten und actinbindenden Proteinen zusammen, die in allen eukaryotischen Zellen vorkommen. In den Zellen der glatten Muskulatur ist der Aufbau und Abbau des Aktin-Zytoskeletts die wichtigste treibende Kraft für die Anspannung und Entspannung der glatten Muskeln. In NichtMuskelzellen ist der dynamische Umbau des Aktin-Zytoskelett für die Regulierung der Zellmorphologie, für die Zellmotilität, für die Bildung von Aktin-Stressfasern, für das Anhaften der Zellen sowie für spezielle Zellfunktionen wie das Zurückziehen von Neuriten, die Phagozytose oder die Zytokinese verantwortlich (Van Aelst, et al. Genes Dev 1997, 11, 2295).
Das Aktin-Zytoskelett wird von einer Familie von Proteinen gesteuert, die eine Untergruppe des Ras-Superfamilie von GTPasen darstellen. Diese Untergruppe besteht gegenwärtig aus RhoA bis E und RhoG (die gemeinsam als Rho bezeichnet werden), Rac 1 und 2, Cdc42Hs und g25K und TC10-Isoformen (Mackay, et al. J Biol Chem 1998, 273, 20685). Diese Proteine sind GTP (Guanin-Nukleotid-Triphophat)-bindende Proteine mit intrinsischer GTPase-Aktivität. Sie wirken als molekulare Regel- und Kreisführungselemente zwischen den Bindungszuständen des inaktiven GDP (Guanin-Nukleotid-Diphosphat) und des aktiven GTP.
Durch Anwendung biochemisch und gentechnischer Verfahren konnten jedem Mitglied der Familie bestimmte Funktionen zugeschrieben werden. Nachdem sie aktiviert wurden, steuern die Rho-Proteine die Bildung von Aktin-Stressfasern, dicken Bündeln aus Aktin-Filamenten, sowie die Zusammenlagerung von Integrinen an fokalen Adhäsionskomplexen. Wenn sie aktiviert wurden, steuern die Rac-Proteine die Bildung von Lamellopodien oder Membrankräuselungen an der und Zelloberflächen, und Cdc42 steuert die Bildung von Filopodien. Gemeinsam trägt diese Familie von Proteine wesentlich zur Steuerung der Hauptzellfunktionen einschließlich der Zellbewegung, der Führung von Axonen, der Zytokinese sowie Veränderungen der Morphologie, dergestalt und der Polarität der Zelle bei.
In Abhängigkeit von der Zellart und dem aktivierenden Rezeptor können die Rho-Proteine verschiedene biologische Antworten steuern. In Zellen der glatten Muskulatur sind Rho-Proteine für die Calcium-Sensibilisierung während der Anspannung der glatten Muskulatur verantwortlich. In Zellen, die nicht der glatten Muskulatur angehören, sind die Rho-GTPasen für die Zellantworten auf Agonisten wie etwa Lysophosphatidsäure (LPA), Thrombin und Thromboxan A2 verantwortlich (Fukata, et al. Trends Pharcol Sci 2001, 22, 32). Die Antwort auf Agonisten erfolgt durch eine Kupplungsreaktion über die heterotrimeren G-Proteine G_alpha12 oder G_alpha13 (Goetzl, et al. Cancer Res 1999, 59, 4732; Buhl, et al. J Biol Chem 1995, 270, 24631), obgleich auch andere Rezeptoren beteiligt sein können. Nachdem sie aktiviert wurden, aktivieren Rho-GTPasen eine Reihe von nachgeschalteten Effektoren einschließlich der PIP5-Kinase, des Rhothekins, des Rhophilins, des PKN und den Isoformen der Rho-Kinase ROCK-1/ROKbeta and ROCK-1/ROKalpha (Mackay und Hall J Biol Chem 1998, 273, 20685; Aspenstrom Curr Opin Cell Biol 1999, 11, 95; Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44).
Die Rho-Kinase wurde nach Isolierung als Rinderhirn als ein Protein identifiziert, das mit RhoA in Wechselwirkung tritt (Matsui, et al. Embo J 1996, 15, 2208). Sie gehört zu der Myotone-Dystrophie-Familie von Proteinkinasen und enthält eine Serin/Threonin-Kinasedomäne am Aminoende, eine Doppelwendel-Domäne in der mittleren Region und eine Rho-Wechselwirkungsdomäne am Carboxyende (Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44). Ihre Kinase-Aktivität wird bei der Bindung an GTP-gebundenes RhoA verstärkt, und wenn sie in Zellen eingeschleust wird, kann sie viele der Wirkungen von aktiviertem RhoA reproduzieren. In Zellen der glatten Muskulatur vermittelt die Rho-Kinase die Calcium-Sensibilisierung und die Anspannung der glatten Muskulatur, wobei die Hemmung der Rho-Kinase zur einer Blockierung der Muskelanspannung, die durch die Agonisten 5-HT und Phenylephrin eingeleitet wurde, führt. Wenn sie in Zellen, die nicht der glatten Muskulatur angehören, eingeschleust wird, leitet die Rho-Kinase die Bildung von Stressfasern ein, und sie ist für die Zellumwandlung, die durch RhoA vermittelt wird, erforderlich (Sahai, et al. Curr Biol 1999, 9, 136). Die Rho-Kinase reguliert eine Reihe von nachgeschalteten Proteinen durch Phosphorylierung, einschließlich der Myosin-Leichtkette (Somlyo, et al. J Physiol (Lond) 2000, 522 Pt 2, 177), der phosphatasebindenden Untereinheit der Myosin-Leichtkette (Fukata, & al. J Cell Biol 1998, 141, 409) und der LIM-Kinase 2 (Sumi, et al. J Bio Chem 2001, 276, 670).
In Tiermodellen hat die Hemmung der Rho-Kinase-Aktivität eine Reihe von Wirkungen der Rho-Kinase-Hemmstoffe aufgezeigt, die für die Behandlung menschlicher Krankheiten von Nutzen sind. Es sind mehrere Patente angemeldet worden, in denen die Verbindung (+)-trans-4-(1-Aminoethyl)-1-(pyridin-4-ylaminocarbonyl)cyclohexan-dihydrochlorid-mono-hydrat ( WO-00078351 , WO-00057913 ) sowie substituiertes Isochinolinsulfonyl ( EP-00187371 ) als Rho-Kinase-Hemmstoffe mit einer Aktivität in Tiermodellen beansprucht werden. Dazugehören Modelle für Herz-Kreislauf-Krankheiten wie etwa Bluthochdruck (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990), Arteriosklerose (Retzer, et al. FEBS Lett 2000, 466, 70), Restenose (Eto, et al. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000, 278, H1744; Negoro, et al. Biochem Biophys Res Commun 1999, 262, 211), zerebrale Ischämie (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990; Seasholtz, et al. Circ Res 1999, 84, 1186; Hitomi, et al. Life Sci 2000, 67, 1929; Yamamoto, et al. J Cardiovasc Pharmacol 2000, 35, 203), zerebraler Vasospasmus (Sato, et al. Circ Res 2000, 87, 195; Kim, et al. Neurosurgery 2000, 46, 440), penile Erektionsstörungen (Chitaley et al. Nat Med 2001, 7, 119), Störungen des zentralen Nervensystems wie etwa neuronale Degeneration und Rückenmarksverletzungen (Hara, et al. J Neurosurg 2000, 93, 94; Toshima, et al. Stroke 2000, 31, 2245) sowie Neoplasien, bei denen gezeigt wurde, dass die Hemmung der Rho-Kinase das Wachstum von Tumorzellen und die Metastasenbildung hemmt (Itoh, et al. Nat Med 1999, 5, 221; Somlyo, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 652), Angiogenese (Uchida, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 633; gingras, et al. Biochem J 2000, 348 Pt 2, 273), thrombotische Störungen der Arterien wie etwa Plättchenaggregation (Klages, et al. J Cell Biol 1999, 144, 745; Retzer, et al. Cell Signal 2000, 12, 645) und Leukozytenaggregation (Kawaguchi, et al. Eur J Pharmacol 2000, 403, 203; Sanchez-Madrid, et al. Embo J 1999, 18, 501), Asthma (Setoguchi, et al. Br J Pharmacol 2001, 132, 111; Nakahara, et al. Eur J Pharmacol 2000, 389, 103), Regulation des Augen-innendrucks (Honjo, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001, 42, 137) und Knochenschwund (Chellaiah, et al. J Biol Chem 2000, 275, 11993; Zhang, et al. J Cell Sci 1995, 108, 2285).
Die Hemmung der Rho-Kinase-Aktivität wirkt sich bei Patientengünstig auf die Beherrschung zerebraler Vasospasmen und Ischämie infolge eines subarachnoidalen Blutverlusts aus (Pharma Japan 1995, 1470, 16).
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die Verbindungen und ihre Derivate, die in dieser Erfindung vorgestellt werden, sich als Rho-Kinase-Hemmstoffe von Nutzen und können daher zur Behandlung von Bluthochdruck, Arteriosklerose, Restenose, zerebraler Ischämie, zerebralem Vasospasmus, neuronaler Degeneration, Brustkrebs, Darmkrebs, Rückenmarksverletzungen, Prostatakrebs, Eierstockkrebs, Hirntumor, Lungenkrebs sowie Metastasen der genannter Krebserkrankungen, thrombotischen Störungen, Asthma, Glaukom lind Osteoporose dienen.
Darüber hinaus sind die Verbindungen der Erfindung für die Behandlung von Erektionsstörungen, d. h. Erektionsstörungen, die durch Rho-Kinase vermittelt sind, von Nutzen. Erektionsstörungen können als Unfähigkeit, eine Erektion zu bekommen oder aufrechtzuerhalten, die für den Geschlechtsverkehr geeignet ist, definiert werden, WO 94/28902 , US-Patentschrift 6,103,765 und US-Patentschrift 6,124,461 .
Die Erfindung beinhaltet Verbindungen mit den folgenden Strukturen:
Die Verbindungen nach Formel I können gemäß herkömmlichen chemischen Routineverfahren hergestellt werden und/oder gemäß der nachstehenden Offenbarung, und zwar aus Ausgangsstoffen, die entweder im Handel erhältlich sind oder gemäß herkömmlichen chemischen Routineverfahren herstellbar sind. Die Verfahren zur Herstellung der Verbindungen sind unten in den Beispielen angegeben.
In den folgenden Beispielen sind sämtliche Temperaturen in unkorrigierten Celsius-Graden angegeben; und alle Anteile und Prozentangaben, wenn nichts anderes angegeben ist, nach gewicht.
Die vollständigen Offenbarungen sämtlicher Anwendungen, Patentschriften und Veröffentlichungen, die vorstehend oder nachstehend zitiert sind, sowie die Vorläufige Anmeldung Nr. 60/349,986, eingereicht am 23. Januar 2002, werden hiermit durch Literaturverweis eingefügt.
ABKÜRZUNGEN UND AKRONYME

Wenn im vorliegenden Schriftstück die folgenden Abkürzungen verwendet werden, haben sie die folgende Bedeutung:

Ac₂O	Essigsäureanhydrid
anhy	wasserfrei
n-BuOH	n-Butanol
t-BuOH	tert.-Butanol
CD₃OD	Methanol-d₄
Celite^®	Kieselgur-Filtermittel, Celite^® Corp.
CH₂Cl₂	Dichlormethan
CI-MS	Massenspektroskopie mit chemischer Ionisierung
konz.	konzentriert
zers.	Zersetzung
DME	Dimethoxyethan
DMF	N,N-Dimethylformamid
DMSO	Dimethylsulfoxid
ELSD	Verdampfungs-Lichtstreudetektor
EtOAc	Ethylacetat
EtOH	Ethanol (100%)
Et₂O	Diethylether
Et₃N	Triethylamin
HPLC ES-MS	Hochleistungsflüssigchromatographie-Elektrospray-Massenspektroskopie
NMM	4-Methylmorpholin
Ph₃P	Triphenylphosphin
Pd(dppf)Cl₂	[1,1'- bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]dichlorpalladium(II)
Pd(PPh₃)₄	tetrakis(Triphenylphosphin)-palladium(0)
Pd(OAc)₂	Palladiumacetat
P(O)Cl₃	Phosphoroxychlorid
RT	Retentionszeit (HPLC0)
rt	Raumtemperatur
THF	Tetrahydrofuran
TFA	Trifluoressigsäure
DC	Dünnschichtchromatographie

VERSUCHSBEISPIELE
Sämtliche Reaktionen wurden in flammengetrockneten oder ofengetrocknetenglasgeräten unter Überdruck von trockenem Argon durchgeführt, und sie wurden magnetisch gerührt, wenn keine anderslautenden Angaben gemacht werden. Empfindliche Flüssigkeiten und Lösungen wurden mit einer Spritze oder Kanüle überführt und durch ein Gummiseptum in die Reaktionsgefäße gegeben. Reagentien und Lösemittel mit handelsüblichen Reinheitsgraden wurden ohne weitere Aufreinigung eingesetzt. Die Dünnschichtchromatographie (DC) wurden auf Analtech UNIPLATE^TM vorbeschichteten Kieselgel-Glasplatten des Typs 60 A F-254 mit einer Dicke von 250 μm durchgeführt. Die Säulen-chromatographie (Schnellchromatographie) wurde auf einem Biotage-System unter Verwendung von vorgepackten Kieselgelkartuschen mit 32 bis 63 Mikrometer, 60 A, durch geführt. Die Protonen(¹H)-Magnetresonanzspektren (NMR) wurden an einem Varian-Spektrometer (300 MHz) aufgenommen, mit residuell protoniertem Lösemittel (CHCl₃ δ 7,26; MeOH δ 3,30; DMSO δ 2,49) als Standard. Die gering auflösenden Massenspektren (MS) wurden entweder als Elektronenstoß(EI)-Massenspektren oder als Massenspektren nach schnellem Atombeschuss(FAB) aufgenommen.
Der IUPAC-Name wurde dem ACD/ILab-Webservice entnommen. A. HERSTELLUNG DER CHLORPYRIMIDIN-ZWISCHENPRODUKTE ZWISCHENPRODUKT A1 HERSTELLUNG VON 2-AMINO-4-CHLOR-5,6-DIMETHYL-PYRIMIDIN
Schritt 1. Herstellung von 2-Amino-5,6-dimethyl-4-pyrimidinon
Einer Lösung von Ethyl-2-acetoacetat (6,0 g, 41,6 mmol) und Guanidincarbonat (5,6 g, 31,2 mmol) in EtOH (32 ml) wurden 12N HCl (350 μL) zugesetzt. Die Mischung wurde 16 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Nachdem der Reaktionsansatz auf Raumtemperatur abgekühlt war, wurde der Feststoff durch Filtration gewonnen und mit EtOH gewaschen. Eine Lösung des Feststoffs in 1N NaOH wurde 3 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Nachdem der Reaktionsansatz auf Raumtemperatur abgekühlt war, wurde die wässrige Mischung mit konzentrierter Essigsäure auf einen pH-Wert von 5 eingestellt. Der erhaltene Niederschlag wurde durch Filtration gewonnen, mit Wasser und dann mit Hexanen gewaschen, woraufhin eine Trocknung unter Vakuum erfolgt. Zielverbindung (6,34 g, 45,6 mmol, 100% Ausbeute); 1H NMR (D2O; NaOD) δ 1,47 (s, 3H), 1,29 bis 1,30 (m, 2H), 1,22 (s, 3H); ES MS [M+H]+= 140. Schritt 2. Herstellung von 2-Amino-4-chlor-5,6-dimethyl-pyrimidin
Das Produkt aus dem vorhergehenden Schritt (2,0 g, 14,4 mmol) sowie Phosphoroxychlorid (6 ml, 57,5 mmol) wurden 4 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Der Reaktionsansatz wurde auf rt abgekühlt und in eine Vorlage aus Eis gegeben. Die Mischung wurde getrennt, und die wässrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert (3 × 75 ml). Die wässrige Mischung wurde mit konzentriertem Ammoniumhydroxid auf einen pH-Wert von 9 eingestellt. Das erhaltene feststoffliche Produkt wurde durch Filtration gewonnen, mit Wasser gewaschen und unter Vakuum getrocknet. Zielverbindung (963 mg, 6,1 mmol, 43% Ausbeute); Smp = 212 bis 220°C; ES MS [M+H]+= 158; DC (CH₂Cl₂-MeOH, 90:10); Rf = 0,72. ZWISCHENPRODUKT A2 HERSTELLUNG VON 2-AMINO-4-CHLOR-6-(4-PYRIDYL)-PYRIMIDIN
Schritt 1. Herstellung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(4-pyridyl-pyrimidin
Eine Lösung von Guanidincarbonat (7,1 g, 39 mmol, 1,5 eq), Ethylisonicotinoylacetat (10 g, 51.76 mmol) und Salzsäure (0,75 ml, 9,0 mmol) in absolutem Ethanol (80 ml) wurde unter Argon eine Nacht lang unter Rückfluss erhitzt. Der gebildete Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und getrocknet. Der Feststoff wurde anschließend in 1N NaOH (100 ml) gelöst und 2 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur abgekühlt, mit Eisessig angesäuert und der gebildete Feststoff abfiltriert bundgetrocknet, um die Zielverbindung in Form eines weißen Feststoffs zu erhalten (5,45 g, 56%). 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,24 (s, 1H), 6,79 (bs, 2H), 7,85 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 8,62 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 11,22 (bs, 1H). Schritt 2. Herstellung von 2-Amino-4-chlor-6-(4-pyridyl)-pyrimidin:
Eine Lösung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(4-pyridyl)-pyrimidin (5,45 g, 29 mmol) in POCl3 (12 ml) wurde unter Argon 5 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, in eine Vorlage aus Eis gegeben und 2 Std. lang bei Raumtemperatur weiter gerührt, um sicherzustellen, dass das keine POCl₃-Reste verbleiben. Danach wurde die Mischung durch Zugabe von 1N NaOH basisch-gemacht und der braune fest abfiltriert, um 4,52 g des Rohprodukts zu erhalten, welches ohne weitere Aufreinigung verwendet wurde (aus der NMR-Untersuchung geht ein Verhältnis von 1:1 aus Produkt/Ausgangsstoff hervor). In dem Filtrat bildete sich weiterer Feststoff nach Stehenlassen bei Raumtemperatur (1g, NMR-Untersuchung zeigte ein Verhältnis von 2:1 Produkt/Ausgangsstoff) 1H-NMR (DMSO-d6) δ 7,34 (bs, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,99 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 8,72 (d, J = 4,6 Hz, 2H). ZWISCHENPRODUKT A3 HERSTELLUNG VON 2-AMINO-4-CHLOR-6-(2-THIENYL)-PYRIMIDIN
Schritt 1. Herstellung von Ethyl-2-(thiophen-2-oyl)-acetat
Eine Lösung von Thiophen-2-carbonsäure (8,9 g, 68,5 mmol), 2,2-Dimethyl-1,3-dioxan-4,6-dion (12,0 g, 81,6 mmol) und 4-Dimethylaminopyridin (17,0 g, 138 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (100 ml) wurde auf 0°C abgekühlt und mit einer Lösung von 1,3-Dicyclohexylcarbodiimid (75 ml, 1,0 M in CH₂Cl₂, 75 mmol) behandelt. Der Reaktionsansatz wurde bei Raumtemperatur 2 Std. lang gerührt, und anschließend wurde der Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und mit CH₂Cl₂ gewaschen. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck aufkonzentriert und der Rückstand in absolutem Ethanol (400 ml) gelöst. Die Lösung wurde anschließend mit einer Lösung von p-Toluolsulfonsäure-Monohydrat (32 g, 168 mmol) in absolutem Ethanol (100 ml) behandelt und 1 Std. lang unter Argon unter Rückfluss erhitzt. Danach wurde der Ethanol unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde in EtOAc gelöst und nacheinander mit H₂O (300 ml), gesättigtem NaHCO₃ (200 ml), 1N HCl (200 ml), gesättigtem NaCl gewaschen bundgetrocknet (MgSO4). Das Lösemittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde mit 10% EtOAc/90% Hexanen über eine Lage Kieselgel filtriert, um die Zielverbindung in Form eines Öls zu erhalten (13 g, 96%). DC (20% EtOAc/80% Hexan) Rf 0,21; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 1,17 (t, J = 7,01, 3H), 4,06 bis 4,14 (m, 4H), 7,25 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 4,9 Hz, 1H). Schritt 2. Herstellung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(2-thienyl)-pyrimidin
Es wurde in ähnlicher Weise vorgegangen wie für das Zwischenprodukt A2, Schritt 1, wobei jedoch Ethyl-2-(thienyl-2-oyl)-acetat aus Ausgangsstoff eingesetzt wurde. (43% Ausbeute). DC (6% ecOH/94% CH₂Cl₂) Rf 0,23; MS ES 194 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,06 (s, 1H), 6,70 (bs, 2H), 7,11 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 10,95 (bs, 1H). Schritt 3. Herstellung von 2-Amino-4-chlor-6-(2-thienyl)-pyrimidin
Es wurde in ähnlicher Weise vorgegangen wie für das Zwischenprodukt A2, Schritt 2, wobei jedoch 2-Amino-4-hydroxy-6-(2-thiophen)-pyrimidin aus Ausgangsstoff eingesetzt wurde. Nach Aufreinigung über Kieselgel mit 15% EtOAc/85% Hexanen Betrug die Ausbeute 33%. DC (20% EtOAc/80% Hexane) Rf 0,29; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 7,16 bis 7,23 (m, 4H), 7,77 (dd, J = 0,8, 5,0 Hz, 1H), 7,98 (dd, J = 1,0, 3,8 Hz, 1H). ZWISCHENPRODUKT A4 HERSTELLUNG VON 2-AMINO-4-CHLOR-6-{2-FURYL)-PYRIMIDIN
Schritt 1. Herstellung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(2-furyl)-pyrimid
Es wurde im Allgemeinen vorgegangen wie bei der Herstellung des Zwischenprodukts A2 (Schritt 1); (37% Ausbeute). MS (ES) 178 [M+H]+.Schritt 2. Herstellung von 2-Amino-4-chlor-6-(2-furyl)-pyrimidin
Eine Lösung von 2-Amino-4-hydroxy-6-(2-furyl)-pyrimidin (1,40 g, 7,9 mmol) in POCl₃ (4 ml) wurde unter Argon 2 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Das POCl₃ wurde abdestilliert; der Rückstand wurde mit EtOAc verdünnt in eine Vorlage aus eisgekühltem NaHCO₃ gegeben. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Phase mit EtOAc (100 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit gesättigtem NaCl gewaschen, getrocknet (MgSO₄), und das Lösemittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, um 0,5 g des Rohproduktes zu erhalten, welches ohne weitere Aufreinigung eingesetzt wurde. DC (20% EtOAc/80% Hexan) Rf 0,26; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,68 (dd, J = 1,7, 3,4 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,25 (dd, J = 1, 3,7 Hz, 1H), 7,91 (dd, J = 0,8, 1,9 Hz, 1H). ZWISCHENPRODUKT A5 HERSTELLUNG VON 6-BENZYL-4-CHLOR-5,6,7,8-TETRAHYDRO-PYRIDO[4,3-D]-PYRIMIDIN-2-AMIN
Schritt 1. Herstellung von 2-Amino-7-benzyl-5,6,7,8-tetrahydropyrido[3,4-d]-pyrimidin-4(3H)on.
Zu EtOH (16 ml), welches auf 0°C gekühlt wurde (Eis/H₂O-Bad), wurden Na-Kugeln gegeben (204 mg, 8,9 mmol). Die Mischung wurde gerührt, bis sämtliches Na in Lösung gegangen war. Es wurden 1-Benzyl-4-oxo-3-piperidincarboxylat-Hydrochlorid (3,0 g, 10,1 mmol) sowieguanidincarbonat (1,4 g, 7,6 mmol) zugesetzt. Die Mischung wurde 16 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Nachdem der Reaktionsansatz auf Raumtemperatur abgekühlt war, wurde der Feststoff durch Filtration gewonnen, mit EtOH gewaschen und unter Vakuum getrocknet.
Zielverbindung (2,58 g, 10,0 mmol; 99+% Ausbeute); Smp = 202 bis 212° (Zers.); ES MS [M+H]+= 257; DC (CH₂Cl₂-MeOH, 90:10); Rf = 0,20. Schritt 2. Herstellung von 6-Benzyl-4-chlor-5,6,7,8-tetrahydropyrido[4,3-d]-pyrimidin-2-amin.
Eine Lösung des Produktes aus Schritt 1 (3,5 g, 13,7 mmol) in POCl₃ (52 ml) wurde unter Argon 5 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, in eine Vorlage aus Eisgegeben und 2 Std. lang bei Raumtemperatur weiter gerührt, um sicherzustellen, dass das keine POCl₃-Reste verbleiben. Danach wurde die Mischung durch Zugabe von Ammoniumhydroxid basischgemacht und mit CH₂Cl₂ (3 × 200 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden zunächst mit 1N NaOH und dann mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Der Rückstand wurde in Benzol aufgenommen und durch Zusatz von 1N HCl in Diethylether angesäuert. Der braune Feststoff wurde abfiltriert, um 0,35 g des Rohproduktes zu erhalten, welches ohne weitere Aufreinigung eingesetzt wurde. ES MS [M+H]+= 275. ZWISCHENPRODUKT A6 HERSTELLUNG VON 2-AMINO-6-(TRIFLUORMETHYL)-4-PYRIMIDINYL-4-METHYL-BENZOLSULFONAT
Einer Lösung von 2-Amino-6-(trifluormethyl)-4(3H)-pyrimidinon (250 mg, 1,4 mmol), Triethylamin (196 μL, 1,4 mmol) und N,N-Dimethylaminopyridin (17 mg, 0,14 mmol) in CH₂Cl₂ (13 ml), welche auf 0°C gekühlt wurde, wurde p-Toluolsulfonylchlorid (534 mg, 2,8 mmol) zugesetzt. Die Mischung wurde 16 Std. lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde mit CH₂Cl₂ verdünnt, zunächst mit H₂O (2 × 20 ml) und dann mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), eingedampft und unter Vakuum getrocknet. Zielverbindung (466 mg, 1,4 mmol; 99+% Ausbeute; ES MS [M+H]+= 140.
Unter Anwendung der obigen Verfahren zur Herstellung von A1 bis A6 wurden auch die folgenden Pyrimidin-Zwischenprodukte hergestellt, wobei jedoch die entsprechenden geeigneten Ausgangstoffe eingesetzt wurden. TABELLE CHLORPYRIMIDIN-ZWISCHENPRODUKTE A
B. HERSTELLUNG DER ARYLAMIN-ZWISCHENPRODUKTE ZWISCHENPRODUKT B1 HERSTELLUNG VON 1-(4-PYRIDINYL)-1H-INDOL-5-AMIN
Schritt 1. Herstellung von 5-Nitro-1-(4-pyridinyl)-1H-indol
Einer Lösung von 5-Nitroindol (7,0 g, 43,2 mmol) und 4-Chlorpyridin-Hydrochlorid (7,8 g, 51,8 mmol) in DMF (43 ml) wurde portionsweise Kalium-tert.-butoxid (12,1 g, 108,0 mmol) zugesetzt. Der Reaktionsansatz wurde 48 Std. lang auf 100°C erhitzt. Die Mischung wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen und in eine Vorlage aus Wasser (400 ml) gegeben. Das erhaltene feststoffliche Produkt wurde durch Filtration entnommen und unter Vakuum getrocknet. Zielverbindung (6,04 g, 25,3 mmol; 58% Ausbeute); 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,76 (dd, J = 1,7, 4,5, 2H), 8,68 (d, J = 2,2, 1H), 8,06 bis 8,13 (m, 2H), 7,92 (d, J = 9,2, 1H), 7,75 (dd, J = 1,5, 4,6, 2H), 7,07 (dd, J = 0,9, 3,5, 1H); ES MS [M+H]+= 240. Schritt 2. Herstellung von 1-(4-Pyridinyl)-1H-indol-5-amin
Eine Mischung aus dem Produkt aus Schritt 1 (8,27 g, 34,6 mmol) und 10%igem Palladium-auf-Holzkohle-Katalysator (827 mg) in Ethylacetat (166 ml) und EtOH (9 ml) wurde 48 Std. lang unter Wasserstoff mit Atmosphärendruck gerührt. Es wurde weiterer Katalysator (414 mg) zugesetzt und der Reaktionsansatz 24 Std. lang gerührt. Es wurde erneut weiterer Katalysator (414 mg) zugesetzt und der Reaktions-ansatz weitere 24 Std. lang gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration über Kieselgur entfernt, und das Lösemittel wurde aus dem Filtrat durch Verdampfen entfernt. Der Rückstand wurde mit Ether zerrieben, durch Filtration entnommen und unter Vakuum getrocknet. Zielverbindung (4,67 g, 22,3 mmol; 65% Ausbeute); Smp = 149 bis 154°C; ES MS [M+H]+= 210; DC (CH₂Cl₂-MeOH, 95:5); Rf = 0,29. ZWISCHENPRODUKT B2 HERSTELLUNG VON 4-[(4-AMINOPHENYL)-SULFANYL]PHENOL
Schritt 1. Herstellung von 4-[(4-Nitrophenyl-sulfanyl]-phenol.
Einer Lösung von Nitrobenzolsulfonylchlorid (4 g, 21 mmol) in Ether (25 ml) wurde Phenol (1,97 g, 20 mmol) in Form einer Lösung in Ether (25 ml) zugesetzt. Nach 15 ständigem Rühren bei rt wurde die Mischung aufkonzentriert, um ein feststoffliches Rohprodukt zu erhalten, welche in Essigsäure umkristallisiert wurde. Zielverbindung (4,0 g, 16,2 mmol, 76% Ausbeute). DC (Hexane/EtOAc 70:30), Rf = 0,54. Schritt 2. Herstellung von 4-[(4-Aminophenyl)-sulfanyl]-phenol.
Einer Lösung des Produktes aus Schritt 1 (4 g, 16,2 mmol) in EtOH (500 ml) wurden SnCl2·2H₂O (18,3 g, 81 mmol) zugesetzt. Die Lösung wurde erwärmt, bis Rückfluss auftrat. Nach 3stündigem Rühren wurde die Mischung auf rt abkühlen gelassen, und die flüchtigen Verbindungen wurden am Rotationsverdampfer entfernt. Die dick-flüssige Rückstand wurde in EtOAc in Suspension gebracht, woraufhin festes NaHCO3 hinzugefügt wurde. Anschließend wurde die Mischung filtriert, und der abfiltrierte Feststoff wurde gründlich mit EtOAc gewaschen. Das organische Filtrat wurde mit Wasser gewaschen, und die wässrigen Waschlaugen wurden mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO4), filtriert und aufkonzentriert, um einen orangefarbenen Feststoff zu erhalten, der ohne zusätzliche Aufreinigung eingesetzt wurde. Zielverbindung (3,0 g, 13,8 mmol, 86% Ausbeute).
DC (Hexane/EtOAc 70:30), Rf = 0,34. ZWISCHENPRODUKT B3 HERSTELLUNG VON (3-AMINOPHENYL)-[4-(METHYL-SULFANYL-PHENYL]-METHANON
Schritt 1. Herstellung von [4-(Methylsulfanyl)-phenyl]-(nitrophenyl)-methanon
Einer Lösung von Thioanisol (3,16 ml, 26,94 mmol) und 1,2-Dichlorethan (95 ml) wurde 3- Nitrobenzoylchlorid (5,0 g, 26,94 mmol) zugesetzt. Die erhaltene Reaktionsmischung wurde auf 0°C gekühlt (Eis/H₂O-Bad), und es wurden 0,5 Äquivalente an Aluminiumtrichlorid (1,8 g, 13,47 mmol) hinzugefügt. Der Reaktionsansatz wurde 15 min. lang bei dieser Temperatur gerührt, woraufhin das Kühlbad entfernt und die verbleibenden Äquivalente an AlCl₃ (2,51 g, 18,87) hinzugefügt wurden. Die Reaktionslösung färbte sich dunkelgrünlich/gelb und wurde 18 Std. lang bei Raumtemperatur gerührt, woraufhin die Reaktion langsam mit H2O (50 ml) gestoppt wurde. Die Mischung wurde mit CH₂Cl₂ (50 ml) verdünnt und mit H₂O (3 × 50 ml) gewaschen, und die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigtem NaHCO₃ (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Das Rohmaterial wurde durch Chromatographie über eine Kieselgelsäule aufgereinigt (EtOAc/Hexan ¼), um 3,3 g (44%) an 4-(Methylsulfanyl)-phenyl]-(3-nitrophenyl)-methanon in Form eines Feststoffs zu erhalten.
EI-LRMS m/z 274 (M+); DC Rf 0,68 (EtOAc/Hex, 2/3). Schritt 2. Herstellung von (3-Aminophenyl)-[4-(methylsulfanyl-phenyl]-methanon
Die Herstellung erfolgte in Analogie zu dem Zwischenprodukt B2, Schritt 2. Das Rohprodukt wurde durch Säulen-Schnellchromatographie aufgereinigt, wobei mit 70:30 Hexanen/EtOAc eluiert wurde. DC: (Hexane/EtOAc, 70:30); Rf = 0,15. ZWISCHENPRODUKT B4 HERSTELLUNG VON 4-(4-AMINOPHENOXY)-PHENOL
Schritt 1. Herstellung von 4-(4-Nitrophenoxy)-phenol
Eine Mischung von p-Nitrofluorbenzol (25 g, 0,177 mol), Dihydrochinon (19,5 g, 0,177 mol) und Natriumhydroxid (7,08 g, 0,177 mol) in EtOH/H2O (1:1 v/v, 176 ml) wurde 20 Std. lang unter Rückfluss erhitzt und anschließend auf Raumtemperatur abkühlen gelassen. Die Mischung wurde filtriert, und das Filtrat wurde mit wässriger HCl angesäuert, woraufhin der erhaltene Niederschlag abfiltriert wurde, um das Rohprodukt in Form eines gelben Feststoffs zu gewinnen. Die Zielverbindung wurde in EtOH umkristallisiert. (15 g, 0,064 mol, 37% Ausbeute). DC (Hexane/EtOAc 70:30), Rf 0,44. Schritt 2. Herstellung von 4-(4-Aminophenoxy)-phenol
Einer Lösung des Produktes aus Schritt 1 in EtOH (100 ml) wurde 10%iges Palladium auf Kohlenstoff (200 mg) zugesetzt. Nachdem über Nacht unter Wasserstoffatmosphäre gerührt wurde, wurde die Mischung über Celite^® filtriert. Die flüchtigen Verbindungen wurden aus dem Filtrat entfernt, um das Rohprodukt zu gewinnen, welches durch Säulen-Schnellchromatographie aufgereinigt wurde, wobei mit Hexanen/EtOAc (85:15, dann 75:25) eluiert wurde. Zielverbindung (1,5 g, 7,45 mmol; 86%). DC (Hexane/EtOAc 70:30), Rf = 0,41. ZWISCHENPRODUKT B5 HERSTELLUNG VON 4-(4-PYRIDINYLTHIO)ANILIN
Einer Lösung von 4-Aminothiophenol (20,2 g, 156,5 mmol) in wasserfreiem DMF (200 ml) wurde zunächst 4-Chlorpyridin-Hydrochlorid (24,4 g, 161,0 mmol und dann Kalium mit gesättigtem Carbonat (44 g, 318,4 mmol zugesetzt). Die Reaktionmischung wurde eine Nacht lang auf 80°C erwärmt und anschließend mit Ethylacetat (400 ml) und Wasser (400 ml) verdünnt. Die wässrige Schicht wurde wiederum mit Ethylacetat (2 × 200 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit einer gesättigten wässrigen NaCl-Lösung (200 ml) gewaschen, über anhy MgSO₄ getrocknet und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Der Rückstand wurde mit Ethylacetat über eine Lage aus Kieselgel filtriert, und der erhaltene Stoff wurde mit einer Lösung aus Ether/Hexan verrieben, um die Zielverbindung zu gewinnen (24,7 g, 78%). DC (50% Ethylacetat/50% Hexan) Rf 0,25; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 5,67 (bs, 2H),, 65 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,27 (d, J = 6,2 Hz, 2H), MS [M+H]+ = 203. ZWISCHENPRODUKT B6 HERSTELLUNG VON 4-[2-(4-PYRIDINYL)-ETHYL]-ANILIN
Schritt 1. Herstellung von 4-[(E)-2-(4-Nitrophenyl)-ethenyl]-pyridin
Ein ofengetrockneter Dreihalskolben wurde zunächst mit (4-Nitrobenzyl)-triphenylphosphoniumbromid (15 g, 30,42 mmol) und dann mit THF (100 ml) beschickt. In einem Eisbad wurde die Lösung auf 0°C gekühlt. Anschließend wurde Kalium-tert.-butoxid (3,9 g, 33,02 mmol) in einer einzigen Abschnitt zugesetzt, woraufhin eine orangefarbene Suspension erhalten wurde. Die Temperatur der Suspension wurde bei 0°Cgehalten, während eine Lösung von 4-Pyridin-2-carboxaldehyd (2,7 g, 24,70 mmol) in THF (20 ml) innerhalb von 10 Minuten zugesetzt wurde. Das Eisbad wurde entfernt, lind der Reaktionsansatz wurde 2 Std. lang bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde die Reaktion mitgesättigter Ammoniumchloridlösung (50 ml) gestoppt und weitere 15 min. lang gerührt. Die Mischung wurde daraufhin mit Ethylacetat (2 × 100 ml) extrahiert, und die vereinigten Extrakte wurden mitgesättigter wässriger NaCl-Lösung (100 ml) gewaschen und getrocknet (MgSO4). Das Lösemittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde auf Kieselgel mit 0 bis 50% Ethylacetat in Hexanen chromatographisch behandelt, um die Zielverbindung (1,8 g, 32%) zu gewinnen. DC (50% Ethylacetat/50% Hexan) Rf 0,28; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,84 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,15 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,47 (d, J = 6,2 Hz, 2H). Schritt 2. Herstellung von 4-(2-(4-Pyridinyl)-ethyl]-anilin
Ein trockener 50-ml-Kolben, der mit Argon gespült wurde, wurde zunächst mit 10%igem Pd auf Kohlenstoff (285 mg) und dann mit Ethanol (12 ml) und dem Produkt aus Schritt 1 (1,8 g, 8,0 mmol) beschickt. Danach wurde die Argonzuleitung durch einen Wasserstoffballon ersetzt und der Reaktionsansatz über Nacht gerührt. Die Mischung wurde über eine Lage aus Celite^® filtriert, und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Der feste Rückstand wurde anschließend mit Ether/Hexanen verrieben, um die Zielverbindung (1,2 g, 67%) zu erhalten. DC (4% Aceton/96% Dichlormethan) Rf 0,09; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,67 bis 2,83 (m, 4H), 4,83 (bs, 2H), 6,45 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 6 Hz, 2H), 8,41 (d, J = 6 Hz, 2H). ZWISCHENPRODUKT 87 HERSTELLUNG VON 3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYL-SULFANYL)-ANILIN
Schritt 1. Herstellung von 4-[(2-Fluor-4-nitrophenyl-sulfanyl]-pyridin.
Eine Lösung von 4-Mercaptopyridin (4,2 g, 35,6 mmol), 3,4-Difluornitrobenzol (5,7 g, 35,7 mmol) und Kaliumcarbonat (12,4 g, 89,7 mmol) in wasserfreiem DMF (40 ml) wurde unter Argon 3 Std. lang bei 40°C gerührt. Über DC wurde die Vollständigkeit der Reaktion nachgewiesen. Die Mischung wurde mit Ethylacetat (100 ml) und Wasser (100 ml) verdünnt, und die wässrige Schicht wurde wiederum mit Ethylacetat (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden mit einer-gesättigten wässrigen NaCl-Lösung (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie mit 50% Ethylacetat/50% Hexanen aufgereinigt. Die Zielverbindung wurde in Form eines gelben Feststoffs (6,3 g, 71%) gewonnen. DC (50% EtOAc/50% Hexan) Rf 0,53; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 7,27 (dd, J = 0,76, 4,2 Hz, 2H), 7,78 (dt, J = 0,76, 7,2 Hz, 1H), 8,11 bis 8,15 (m, 1H), 8,28 bis 8,33 (m, 1H), 8,5 (dd, J = 1,4, 4,6 Hz, 2H), MS [M+H]+ = 251. Schritt 2. Herstellung von 3-Fluor-4-(4-pyridinyl-sulfanyl)-anilin.
Eine Aufschlämmung von 3-Fluor-4-(pyridinylthio)nitrobenzol (6,3 g, 25,2 mmol), Eisenpulver (6,0 g, 107,4 mmol), Essigsäure (100 ml) und Wasser (1 ml) wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde mit Et₂O (100 ml) und Wasser (100 ml) verdünnt. Der pH-Wert der wässrigen Phase wurde mit einer 4N NaOH-Lösung auf 5 eingestellt. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit einer gesättigten wässrigen NaCl-Lösung (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromato graphie mit 50% Ethylacetat/50% Hexanen aufgereinigt. Die Zielverbindung wurde in Form eines weißen Feststoffs (4,8 g, 86%) gewonnen. DC (50% EtOAc/50% Hexan) Rf 0,28; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,04 (bs, 2H), 6,47 bis 6,51 (m, 2H), 6,91 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 7,22 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 8,30 (d, J = 6,4 Hz, 2H).
Unter Anwendung ähnlicher Verfahren wie denjenigen, die für die Herstellung der Zwischenprodukte B1 bis B7 beschrieben wurden, erfolgte auch die Herstellung der folgenden zusätzlichen Verbindungen: TABELLE 2 ARYLAMIN-ZWISCHENPRODUKTE B
C. Herstellung von Beispielen der Erfindung BEISPIEL 1 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)PHENYL]AMIN
Eine Suspension von 2-Amino-4-chlor-6-methylpyrimidin (Zwischenprodukt A7, 0,2 g, 1,3 mmol), 3-Fluor-4-(4-pyridinylthio)anilin (Zwischenprodukt B7, 0,3 g, 1,3 mmol) und K₂CO₃ (0,2 g, 1,3 mmol) in o-Xylol (1,3 ml) wurde über Nacht in einem 5-ml-Reaktionsprobengefäß auf 100°C erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde mit MeOH verdünnt, als Schicht auf Kieselgel aufgebracht und mittels MPLC (Biotage) mit 5 bis 7% MeOH in CH₂Cl₂ aufgereinigt. Es wurden 74 mg des Produktes gewonnen (18% Ausbeute). DC (6% McOH/94% CH₂Cl₂) Rf 0,29; MS ES 328 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,12 (s, 3H), 5,92 (s, 1H), 6,38 (bs, 2H), 6,96 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 7,39 bis 7,52 (m, 2H), 8,26 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 9,55 (bs, 1H). BEISPIEL 2 HERSTELLUNG VON 6-ETHYL-N4-[4-FLUOR-4-(4-PYRIDINYL-SULFANYL)-PHENYL]-2,4-PYRIMIDTNDIAMIN
2-Amino-4-chlor-6-ethylpyrimidin (Zwischenprodukt A8, 55,1 mg, 0,25 mmol) und Zwischenprodukt B7 (39,4 mg, 0,25 mmol) wurden in 0,01 M wässriger HCl (500 μL) in Suspension gebracht. Die Mischung wurde 6 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Nachdem der Reaktionsansatz auf Raumtemperatur abgekühlt war, wurde das Lösemittel im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde durch Umkehrphasenchromatographie auf einer C18-Säule des Typs YMC Pack-pro (Handelsmarke) aufgereinigt, wobei mit Acetonitril/H₂O (Gradient von 10:90 bis 90:10) eluiert wurde. Die Verbindung wurde durch präparative DC weiter aufgereinigt, wobei mit CH₂Cl₂/MeOH (90:10) eluiert wurde. Zielverbindung (2,9 mg, 0,0085 mmol; 34% Ausbeute); 1H NMR (Methanol-d4) 8,16 (dd, J = 1,7, 4,7, 2H), 8,00 bis 8,04 (m, 1H), 7,37 (m, 2H), 6,93 (dd, J = 1,8, 4,9, 2H), 5,91 (s, 1H), 2,39 (q, J = 7,7, 2H), 1,13 (t, J = 7,5, 3H); ES MS [M+H]+ = 342 ; DC (CH₂Cl₂-MeOH, 90:10); Rf = 0,48
BEISPIELE 3 BIS 26
Unter Anwendung der obengenannten Vorgehensweisen wurden die folgenden Beispiele für Pyridine synthetisiert, die in Tabelle 3 zusammenfassend dargestellt sind. TABELLE 3
Durch Auswahl von Kombinationengeeigneter Zwischenprodukte A1 bis A21 mit den Zwischenprodukten B1 bis B17 wurden in ähnlicher Weise mehrere Produkte hergestellt, die in den Beispielen 27 bis 31 beschrieben sind. 5 BEISPIEL 27 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-{4-[(4-PYRIDINYLMETHYL)-SULFANYL]PHENYL}AMIN
Hergestellt mit 34%iger Ausbeute aus Zwischenprodukt A7 und B8: DC (7% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,36; MS (ES) 324 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,09 (s, 3H), 4,12 (s, 2H), 5,87 (s, 1H), 6,33 (bs, 2H), 7,19 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,43 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 9,20 (bs, 1H). BEISPIEL 28 HERSTELLUNG VON 15 N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-{4-[(4-PYRIDINYLSULFANYL)METHYL]-PHENYL}AMIN
Hergestellt mit 6%iger Ausbeute aus Zwischenprodukt A7 und B18: DC (7% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,38; MS (ES) 342 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,06 (s, 3H), 4,30 (s, 2H), 5,84 (s, 1H), 6,13 (bs, 2H), 7,27 bis 7,31 (m, 4H), 7,63 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 8,33 (d, 20 J = 6,1 Hz, 2H), 8,99 (bs, 1H). BEISPIEL 29 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-{4-[2-(4-PYRIDINYL)-ETHYL]-PHENYL}AMIN
Hergestellt mit 30%iger Ausbeute aus A7 und B6: DC (8% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,34; MS (ES) 306 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,06 (s, 3H), 2,83 bis 2,87 (m, 4H), 5,82 (s, 1H), 6,09 (bs, 2H), 7,07 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 8,41 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 8,87 (s, 1H). BEISPIEL 30 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)3-(TRIFLUORMETHYL) PHENYL]AMIN
Hergestellt mit 1,2%iger Ausbeute aus A7 und B9: DC (7% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,39; MS (ES) 378 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,03 (s, 3H), 5,94 (s, 1H), 6,33 (bs, 2H), 6,91 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,19 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 8,37 (dd, J = 2,1, 8,6 Hz, 1H), 9,66 (s, 1H). BEISPIEL 31 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL-N-[4-(5-ISOCHINOLINYLOXY)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 30%iger Ausbeute aus A7 und B10: DC (6% MeOH in CH₂Cl₂) Rf.0,39; MS (ES) 344 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,08 (s, 3H), 5,85 (s, 1H), 6,11 (bs, 2H), 7,02 bis 7,08 (m, 3H), 7,58 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 9,03 (bs, 1H), 9,35 (bs, 1H). BEISPIEL 32 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N[3-FLUOR-4-(5-ISOCHINOLINYLOXY)-PHENYL]AMIN
Eine Suspension von 2-Amino-4-chlor-6-methylpyrimidin (Zwischenprodukt A7, 0,14 g, 1,0 mmol), 3-Fluor-4-(5-isochinolinoxy)anilin (Zwischenprodukt B10, 0,25 g, 1,0 mmol) und HCl (0,1 ml) in H2O (1,0 ml) wurde über Nacht in einem 5-ml-Reaktionsprobengefäß auf 70°C erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde mit MeOH verdünnt, mitgesättigter NaHCO3 behandelt, als Schicht als Kieselgel aufgebracht und mittels MPLC (Biotage) mit 5% MeOH in CH₂Cl₂ aufgereinigt. Es wurden 52 mg des Produktes gewonnen (14% Ausbeute). DC (6% MeOH/94% CH₂Cl₂) Rf 0,45; MS (ES) 362 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,10 (s, 3H), 5,88 (s, 1H), 6,29 (bs, 2H), 6,93 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 1,7, 8,9 Hz; 1H), 7,55 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,21 (dd, J = 2,6, 14,2 Hz, 1H), 8,58 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 9,30 (bs, 1H), 9,36 (s, 1H).
Unter Anwendung des oben für das Beispiel 32 beschriebenen Verfahrens, wurden die Beispiele 33 bis 41 in ähnlicher Weise hergestellt. BEISPIEL 33 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[3,5-DICHLOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 10%iger Ausbeute aus A7 und B14: DC (5% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,14; MS (ES) 378 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,14 (s, 3H), 5,92 (s, 1H), 6,49 (bs, 2H), 6,93 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 8,13 (s, 2H), 8,35 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 9,63 (bs, 1H). BEISPIEL 34 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[3,5-DICHLOR-4-(5-ISOCHINOLINYLOXY)PHENYL]AMIN
Hergestellt mit 58%iger Ausbeute aus A7 und B12: DC (70% EtOAc/30% Hexane) Rf 0,18; MS (ES) 412 [M+H]±; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,13 (s, 3H), 5,89 (s, IN), 6,38 (bs, 2H), 6,73 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,9 Hz, IN), 7,82 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,05 (s, 2H), 8,16 (d, J = 5,8 Hz, IN), 8,61 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 9,36 (s, IN), 9,42 (s, 1H) BEISPIEL 35 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[6-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-3-PYRIDINYL]-AMIN
Hergestellt mit 16%iger Ausbeute aus A7 und B13: DC (6% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,16; MS (ES) 311 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 2,11 (s, 3H), 5,91 (s, 1H), 6,34 (bs, 2H), 7,15 (d, J = 6,2 Hz,, 2H), 7,48 (d, J = 8,8 Hz, IN), 8,30 (dd, J = 2,5, 8,4 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 9,00 (d, J = 2,4 Hz, IN), 9,45 (bs, 1H). BEISPIEL 36 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-PHENYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[4-(4-PYRIDINYL-SULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 65%iger Ausbeute aus A17. DC (4% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,22; MS (ES)372 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ6,46 (bs, 2H), 6,55 (s, 1H), 6,96 (d, J = 4,8 Hz, 2H),7,46 bis 7,49 (m, 5H), 7,91 bis 8,00 (m, 4H), 8,32 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 9,57 (bs, 1H). BEISPIEL 37 HERSTELLUNG VONN-[2-AMINO-6-(3-PYRIDINYL)-4-PYRIMIDINYL]-N-[3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 45%iger Ausbeute. DC (4% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,27; MS (ES) 391 [M+H]+; 1 H-NMR (DMSO-d6) δ 6,58 (s, 1H), 6,70 (bs, 2H), 6,99 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,46 bis 7,57 (m, 3H), 8,23 bis 8,36 (m, 4H), 8,65 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 9,09 (s, 1H), 9,86 (bs, 1H). BEISPIEL 38 HERSTELLUNG VON N-[2-AMINO-6-(4-PYRIDINYL)-4-PYRIMIDINYL]-N-[3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 22%iger Ausbeute aus A2 und B7: DC (6% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,32; MS (ES) 391 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,63 (s, 1H), 6,74 (bs, 2H), 6,99 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,46 bis 7,58 (m, 2H), 7,85 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 8,31 bis 8,36 (m, 3H), 6,70 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 9,92 (bs, 1H). BEISPIEL 39 HERSTELLUNG VON N-[2-AMINO-6-(4-PYRIDINYL)-4-PYRIMIDINYL]-N-[3,5-DICHLOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 0.4%iger Ausbeute aus A2 und B14: DC (4% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,15; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,60 (s, 1H), 6,82 (bs, 2H), 6,95 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 8,18 (s, 2H), 8,36 (d, J = 3,8 Hz, 2H), 8,71 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 9,99 (bs, 1H). BEISPIEL 40 HERSTELLUNG VON N-[2-AMINO-6-(3-PYRIDINYL)-4-PYRIMIDINYL]-N-[3-FLUOR-4-(5-ISOCHINOLINYLOXY)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 54%iger Ausbeute aus A18 und B11: DC (5% MeOH in CH₂Cl₂) Rf 0,34; MS (ES) 425 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,53 (s, 1H), 6,59 (bs, 2H), 6,96 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 7,38-7,59 (m, 3H), 7,83 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,23-8,31 (m, 2H), 8,58-8,65 (m, 2H), 9,09 (bs, 1H), 9,37 (bs, 1H), 9,61 (bs, 1H). BEISPIEL 41 HERSTELLUNG VON N-[2-AMINO-6-(2-PYRIDINYL)-4-PYRIMIDINYL]-N-[3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)PHENYL]-AMIN
Hergestellt mit 60%iger Ausbeute aus A19 und B7: DC (50% EtOAc/50% Hexane) Rf 0,14; MS (ES) 391 [M+H]+; 1H-NMR (DMSO-d6) δ 6,63 (bs, 2H), 6,98 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,45 bis 7,57 (m, 3H), 7,93 (dt,, J = 1,9, 7,7 Hz, 1H), 8,23 bis 8,37 (m, 4H), 8,65 bis 8,67 (m, 1H), 9,90 (bs, 1H). BEISPIEL 42 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-ETHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[4-(4-PYRIDINYL-SULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Eine Mischung aus dem Zwischenprodukt B5 (50,6 mg, 0,250 mmol) und 2-Amino-4-ethyl-6-chlorpyrimidin (Zwischenprodukt A8, 39,4 mg, 0,25 mmol) in 0,01 M wässriger HCl (500 μL) wurde 6 Std. lang unter Rückfluss erhitzt. Nachdem der Reaktionsansatz auf Raumtemperatur abgekühlt war, wurde das Lösemittel im Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde durch Umkehrphasenchromatographie auf einer C18-Säule des Typs YMC Pack-pro aufgereinigt, wobei mit Acetonitril/H2O (Gradient von 10:90 bis 90:10) eluiert wurde, um die Zielverbindung (13,0 mg, 0,040 mmol; 16% Ausbeute) zu erhalten; Smp = 181 bis 186°C; ES MS [M+H]+= 324; DC (CH₂Cl₂ – MeOH, 95:5); Rf = 0,41. BEISPIEL 43 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-CHLOR-4-PYRIMIDINYL)-N-[3-FLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)PHENYL]-AMIN
2-Amino-4,6-dichlorpyrimidin (A21, 12 mmol) und 3-Fluor-4-(4-pyridinylthio)-aniline (B7, 12 mmol) wurden in Wasser (150 ml) in Suspension gebracht und mit 10 Tropfen konzentrierter Salzsäure behandelt. Die Mischung wurde über Nacht bei 100°C gerührt. Die klare Lösung wurde anschließend mit Ammoniumhydroxid neutralisiert. Das ausgefallene gelbe Produkt wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und mittels Säulenchromatographie mit 1 bis 3% MeOH in CH₂Cl₂ aufgereinigt, um die Zielverbindung in Form eines weißen Feststoffs (1,98 g; 47%) zu erhalten. BEISPIEL 44 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDTNYL)-N-[2,5-DIFLUOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Die Verbindung wurde unter Anwendung eines ähnlichen Verfahrens wie desjenigen, welches für die Herstellung von Beispiel 1 (oben beschrieben) zur Anwendung kam, aus A7 und B15 hergestellt: HPLC/MS: [M+H]+ 346,1 m/z. Retentionszeit (HPLC/MS) = 1,39 min. BEISPIEL 45 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-CHLOR-4-PYRIMIDINYL)-N-[3,5-DICHLOR-4-(4-PYRIDINYLSULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Die Verbindung wurde unter Anwendung eines ähnlichen Verfahrens wie desjenigen, welches für die Herstellung von Beispiel 43 (oben beschrieben) zur Anwendung kam, aus A21 und B14 hergestellt: HPLC/MS: [M+H]+ 399,0 m/z. Retentionszeit (HPLC/MS) = 3,02 min. BEISPIEL 46 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-CHLOR-4-PYRIMIDINYL)-N-[3-FLUOR-4-(5-ISOCHINOLINYLOXY)PHENYL]-AMIN
Das Produkt wurde unter Anwendung eines ähnlichen Verfahrens wie desjenigen, welches für die Herstellung von Beispiel 43 (oben beschrieben) zur Anwendung kam, aus A21 und B11 hergestellt: HPLC/MS: [M+H]+ 382,1 m/z. Retentionszeit (HPLC/MS) = 2,91 min.
Beispiele 47 bis 49
Unter Anwendung von Vorgehensweisen, die den obigen Beispielen ähnlich sind, und unter Einsatzgeeigneter Zwischenprodukte A und B wurden die folgenden Beispiele in ähnlicher Weise hergestellt: BEISPIEL 47 HERSTELLUNG VON N-(2-AMINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[1-(4-PYRIDINYL)-1H-INDOL-5-YL]-AMIN
Hergestellt durch Umsetzung der Zwischenprodukte A7 und B1. BEISPIEL 48 HERSTELLUNG VON N-(2-ANILINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[1-(4-PYRIDINYL)-1H-INDOL-5-YL]-AMIN
Hergestellt durch Umsetzung der Zwischenprodukte A16 und B1. BEISPIEL 49 HERSTELLUNG VON N-(2-ANILINO-6-METHYL-4-PYRIMIDINYL)-N-[4-FLUOR-3-(4-PYRIDINYL-SULFANYL)-PHENYL]-AMIN
Hergestellt durch Umsetzung der Zwischenprodukte A16 und B7.
Biochemischer Rho-Kinase-Assay:
Aktivitätskriterien für ROCK-1: 0 keine Wirkung (< 40% Hemmung), 1 Wirkung (> 40% Hemmung). In dem Assay wird die Hemmung der ROCK-1-Phosphorylierung von MBP (Basisches Myelinprotein) untersucht. Die Reaktion (100 μl Endvolumen) wird auf Polypropylenplatten mit 96 Vertiefungen in 50 mM HEPES-Puffer pH 7,5, welcher 5 mM MgCl2 und 1 mM DTT enthält, durchgeführt. In jeder Vertiefung werdengstROCK1 (0,25 μggstROCK1 von BAYER DRT) mit MBP (1 μg) in Reaktionspuffer (70 μL gesamt Volumen) vermischt. Die Hemmstoffe (5 μL der 20-fachen Konzentration in 40% DMSO) werden derart in die einzelnen Vertiefungen gegeben, dass eine 8stufige Antwortskala von 1,0 μm bis 0,5 nM erhalten wird. Die Reaktion wird gestartet, indem 25 μL ATP (4 × = 12 μm) in Reaktionspuffer, welcher 0,8 μCi an 33 Pgamma-ATP (4 ×) enthält, hinzugefügt werden, sodass die Endkonzentration 3 μM an kaltem und 0,2 μCi heißem ATP beträgt. Die Platten wurden 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert, woraufhin die Reaktion durch Zugabe von 7 μL a IN HCl gestoppt wurde. Das radioaktiv markierte MBP wurde auf P30-Filtermatten (EG&G Wallac) überführt, in 1%iger Phosphorsäure gewaschen und dann mehrmals kurz in Wasser gewaschen. Anschließend wurden die Filtermattengetrocknet und der Einbau von 33P mittels eines Flüssig-Szintillationszählers detektiert. Der Blindwert des 33P-Einbaus wird anhand der ROCK1-Selbstphosphorylierung ohne MBP bestimmt. Die Angaben entsprechen der prozentualen Hemmwirkung:% Hemmwirkung = 1 – ((Zählereignisse pro Minute ohne Hemmstoff – Blindwert)/(Zählereignisse mit Hemmstoff – Blindwert))·100.

Claims

Eine Verbindung nach der Formel
Verwendung einer Verbindung gemäß der Definition in Anspruch 1 zur Herstellung eines medizinischen Wirkstoffs, welcher zur Behandlung einer Indikation, die durch Rho-Kinase vermittelt wird, von Nutzen ist.
Verwendung gemäß Anspruch 2 zur Herstellung des humanmedizinischen Wirkstoffs.
Verwendung einer Verbindung gemäß der Definition in Anspruch 1 zur Herstellung eines medizinischen Wirkstoffs, welcher zur Behandlung von Bluthochdruck, Arteriosklerose, Restenose, zerebraler Ischämie, zerebralem Vasospasmus, neuronaler Degeneration, Rückenmarksverletzungen, Brustkrebs, Darmkrebs, Prostatakrebs, Eierstockkrebs, Hirntumor, Lungenkrebs, thrombotischen Störungen, Asthma, Glaukom, Osteoporose oder Erektionsstörungen von Nutzen ist.
Verwendung gemäß Anspruch 4 zur Herstellung eines humanmedizinische Wirkstoffs.