DE395367T1 - Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI. - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI.Info
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Claims (13)
1. Ein Klonxerungsvektor, welcher ein Xma I
Restriktionsendonukleasegen einschließt.
2. Ein transformierter Wirt, welcher den Klonierungsvektor
gemäß Anspruch 1 enthält.
3. Der Klonierungsvektor nach Anspruch 1, wobei das Xma I
Gen ausgeschnitten ist aus Xanthomonas malvacaerum (ATCC 9924).
4. Ein Klonierungsvektor, welcher ein Xma I Modifikationsgen einschließt.
5. Ein transformierter Wirt, welcher den Klonierungsvektor gemäß Anspruch 4 enthält.
6. Ein Verfahren zum Klonieren eines Xma I Restriktionsendonukleasegens,
welches umfaßt:
(a) Bilden einer Bibliothek aus DNA aus X. malvacaerum;
(b) Isolieren von Klonen, welche das Xma I Modifikationsgen enthalten;
(c) Testen von Klonen, welche das Modifikationsgen enthalten und Isolieren von Klonen, welche das
Xma I Restriktionsendonukleasegen enthalten.
7. Das Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Bibliothek gebildet
wird durch die folgenden Schritte:
(a) Reinigen von DNA aus X. malvacaerum;
(b) Verdauen der gereinigten DNA, um DNA-Fragmente zu bilden;
(c) Ligieren der Fragmente in einen Klonierungsvektor;
(d) Transformieren einer Wirtszelle mit dem Klonierungsvektor
aus Schritt (c), um eine Zellbibliothek zu bilden; und
(e) Reinigen von rekombinanten Vektoren aus der Zellbibliothek, um eine Plasmidbibliothek zu
bilden.
8. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Klonierungsvektor pKL19-2 ist.
9. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Wirtszelle ein E. coli Stamm ist, welcher hsdR" ist.
10. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Klon, welcher das Xma I Modifikationsgen enthält, isoliert wird durch
Verdauung der Plasmidbibliothek mit Sma I, um einen Verdauungspool zu bilden, Übertragen des
Verdauungspools in eine Wirtszelle und Auswählen von
Klonen, welche das Modifikationsgen enthalten.
11. Ein Verfahren zum Herstellen von Xma I Restriktionsendonuklease, welches umfaßt:
(a) Reinigen von DNA aus X. malvacaerum;
(b) Verdauen der gereinigten DNA mit einer geeigne- *
ten Restriktionsendonuklease, um DNA-Fragmente
zu bilden; *·'
(C) Ligieren der Fragmente in den Klonierungsvektor,
um eine DNA-Mischung zu bilden;
(d) Transformieren einer Wirtszelle mit der DNA-Mischung aus Schritt (c), um eine Bibliothek zu
bilden;
(e) Isolieren von Klonen, welche das Xma I Modifikationsmethylasegen
enthalten;
(f) Testen von Klonen, welche das Xma I Modifikationsmethylasegen enthalten und Isolieren
von Klonen, welche das Xma I Restriktionen donukleasegen enthalten;
(g) Kultivieren der Wirtszellen, welche die Klone
gemäß Schritt (f) enthalten; und
(h) Gewinnen von Xma I Restriktionsendonuklease aus
der Kultur.
12. Das Verfahren nach Anspruch 11, wobei der Klonierungsvektor ein Plasmid- oder virales DNA-Molekül ist.
13. Das Verfahren nach Anspruch 12, wobei das Plasmid pKL19-2 ist.
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