DE395367T1 - Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI. - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI.

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DE395367T1
DE395367T1 DE90304413T DE90304413T DE395367T1 DE 395367 T1 DE395367 T1 DE 395367T1 DE 90304413 T DE90304413 T DE 90304413T DE 90304413 T DE90304413 T DE 90304413T DE 395367 T1 DE395367 T1 DE 395367T1
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Germany
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xma
gene
cloning vector
dna
restriction endonuclease
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Keith D Lunnen
Geoffrey G Wilson
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New England Biolabs Inc
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New England Biolabs Inc
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    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10Transferases (2.)
    • C12N9/1003Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
    • C12N9/1007Methyltransferases (general) (2.1.1.)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/16Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
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Claims (13)

90304413.9 M:NE27O9A1 New England Biolabs Inc. Patentansprüche &iacgr;
1. Ein Klonxerungsvektor, welcher ein Xma I Restriktionsendonukleasegen einschließt.
2. Ein transformierter Wirt, welcher den Klonierungsvektor gemäß Anspruch 1 enthält.
3. Der Klonierungsvektor nach Anspruch 1, wobei das Xma I Gen ausgeschnitten ist aus Xanthomonas malvacaerum (ATCC 9924).
4. Ein Klonierungsvektor, welcher ein Xma I Modifikationsgen einschließt.
5. Ein transformierter Wirt, welcher den Klonierungsvektor gemäß Anspruch 4 enthält.
6. Ein Verfahren zum Klonieren eines Xma I Restriktionsendonukleasegens, welches umfaßt:
(a) Bilden einer Bibliothek aus DNA aus X. malvacaerum;
(b) Isolieren von Klonen, welche das Xma I Modifikationsgen enthalten;
(c) Testen von Klonen, welche das Modifikationsgen enthalten und Isolieren von Klonen, welche das Xma I Restriktionsendonukleasegen enthalten.
7. Das Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Bibliothek gebildet wird durch die folgenden Schritte:
(a) Reinigen von DNA aus X. malvacaerum;
(b) Verdauen der gereinigten DNA, um DNA-Fragmente zu bilden;
(c) Ligieren der Fragmente in einen Klonierungsvektor;
(d) Transformieren einer Wirtszelle mit dem Klonierungsvektor aus Schritt (c), um eine Zellbibliothek zu bilden; und
(e) Reinigen von rekombinanten Vektoren aus der Zellbibliothek, um eine Plasmidbibliothek zu bilden.
8. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Klonierungsvektor pKL19-2 ist.
9. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Wirtszelle ein E. coli Stamm ist, welcher hsdR" ist.
10. Das Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Klon, welcher das Xma I Modifikationsgen enthält, isoliert wird durch Verdauung der Plasmidbibliothek mit Sma I, um einen Verdauungspool zu bilden, Übertragen des Verdauungspools in eine Wirtszelle und Auswählen von Klonen, welche das Modifikationsgen enthalten.
11. Ein Verfahren zum Herstellen von Xma I Restriktionsendonuklease, welches umfaßt:
(a) Reinigen von DNA aus X. malvacaerum;
(b) Verdauen der gereinigten DNA mit einer geeigne- * ten Restriktionsendonuklease, um DNA-Fragmente
zu bilden; *·'
(C) Ligieren der Fragmente in den Klonierungsvektor, um eine DNA-Mischung zu bilden;
(d) Transformieren einer Wirtszelle mit der DNA-Mischung aus Schritt (c), um eine Bibliothek zu bilden;
(e) Isolieren von Klonen, welche das Xma I Modifikationsmethylasegen enthalten;
(f) Testen von Klonen, welche das Xma I Modifikationsmethylasegen enthalten und Isolieren von Klonen, welche das Xma I Restriktionen donukleasegen enthalten;
(g) Kultivieren der Wirtszellen, welche die Klone gemäß Schritt (f) enthalten; und
(h) Gewinnen von Xma I Restriktionsendonuklease aus
der Kultur.
12. Das Verfahren nach Anspruch 11, wobei der Klonierungsvektor ein Plasmid- oder virales DNA-Molekül ist.
13. Das Verfahren nach Anspruch 12, wobei das Plasmid pKL19-2 ist.
DE90304413T 1989-04-27 1990-04-25 Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI. Pending DE395367T1 (de)

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