CN1622819A

CN1622819A - 一种抗风湿药物及其制备方法

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Publication number: CN1622819A
Application number: CNA028286421A
Authority: CN
Inventors: 邓文龙
Original assignee: GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY; Sichuan Institute of Chinese Materia Medica
Current assignee: GUANGZHOU CHENLIJI PHARMACEUTICAL FACTORY; SICHUAN TRADITIONAL CHINESE MEDICINE INSTITUTE
Priority date: 2002-04-09
Filing date: 2002-04-09
Publication date: 2005-06-01
Anticipated expiration: 2022-04-09
Also published as: WO2003086425A1; EP1510217A1; JP4413013B2; CA2481459C; HK1074792A1; CN100502911C; US20050220906A1; EP1510217A4; JP2005530727A; CA2481459A1; KR20040101427A; EP1510217B1; AU2002254842A1; AU2002254842B2; KR100811873B1

Abstract

本发明公开了一种抗风湿药物及其制备方法，该药物以昆明山海棠、淫羊藿、枸杞子、菟丝子为原料制成，本发明药物具有疗效突出、毒副反应轻和服用方便的特点。

Description

一种抗风湿药物及其制备方法技术领域

本发明涉及一种药物及其制备方法，特别是涉及一种抗风湿的中药及其制备方法。

背景技术

普遍认为，风湿病和类风湿性关节炎（RA)是一种难以治愈的疾病，约有 18， 000, 000 RA患者因病致残.。对于治疗 RA新药的研究已经持续进行了近百年，阿斯匹林是最早广泛使用于 RA的药物。治疗 A的药物可概分为两类：非类固醇类抗炎药物（NSAIDs )和免疫抑制剂。 NSAIDs包括环氟拉嗪或者消炎痛，以及肾上腺皮质激素。临床研究表明， NSAIDs是有效的；免疫抑制剂和细胞毒类药物包括氨甲喋呤、环磷酰胺、青霉胺等等。近年来，免疫调节已被用作风湿性疾病的治疗方法。所有抗风湿药都表现出较为严重的副作用，而直到现在，还未研制出一种更加高效低毒的药物。

在抗风湿药物的研究和发展中有三方面是最需要强调的。第一方面包括 NSAIDs和细胞因子拮抗剂，例如重组可溶性肿瘤坏死因子拮抗剂、白细胞间介素 -1抑制剂和血小板活化因子抑制剂。第二方面是一种新的免疫抑制剂或者免疫调节剂，如环孢霉素 A。第三方面是复方药物。

在中医药学领域中研究对于痹病（RA)的治疗早至可以追溯到中国古代医药学家张仲景的嘛杏石甘汤"、己黄芪汤"和 "乌头汤 "。把花"是一种生长在四川省的野生植物，在局部地区的临床实验中（四川）被证实对风湿症患者有一定疗效。不幸的是，同时也观察到许多不可控制的问题和对人体生殖***的严重副作用。

中医药治疗痹病有悠久历史，经历代医家发展，中医药对痹病的治疗已有较高的疗效和众多药物，中国药典一九九五版、二 o o o版收载

确认本可治疗痹病的单味药不少于 80味，成药 29种。但也存在一些问题，主要是①对严重的痹病如类风湿性关节炎疗效尚欠理想， ②制剂剂型不能满足现代生活需要， ③少数药物疗效堪称佳良，但毒副作用大，如雷公藤制剂。因此研制高效低毒、剂型适合现代生活和用药习惯的抗风湿药物，特别是其疗效能与抗风湿合成药相近而毒副作用相对较低的药物是必要的。

技术内容

本发明目的在于提供一种具有抗风湿作用的、高效低毒、服用方便的复方药物；本发明目的还在于提供一种具有抗风湿作用的药物的制备方法

本发明药物技术方案是通过选取如下原料药实现的：

昆明山海棠 ( Tripterygium hypoglaucum (Levi. ) Hutch. ) 淫羊藿 ( Epimedium brevicornum Maxim. )

狗杞子 ( Lycium barbarum L. )

丝子 ( Cuscuta chinensis Lam.， Cuscuta austral is R. Br. ) 本发明的药物由上述原料药制成。

其中原料药可以是由昆明山海棠与其余三种药物中的任何一种或两种或三种共同组成。

本发明药物最优选原料药配比为：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量份

枸杞子 1 ~ 4重量份菟丝子 1 ~ 4重量份

本发明药物最优选原料药配比还可以为：

昆明山海裳 2重量份淫羊藿 2重量份

枸杞子 1重量份菟丝子 1重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海裳 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量份本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海裳 2重量偷淫羊藿 2重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量份

枸杞子 1 4重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 2重量份淫羊藿 2重量份

枸杞子 1重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量份

菟丝子 1 4重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 2重量份淫羊藿 2重量份

菟丝子 1重量份

以上药物組合物含量为淫羊藿甙 C₃₃H_4Q0₁₅计不得少于 2. 0mg。

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份和枸杞子 1 ~ 4重量份和 /或菟丝子 1 ~ 4重量份

本发明药物优选原料药配比还可以为：

昆明山海棠 2重量份和枸杞子 1重量份和 /或菟丝子 1重量份将上述原料药按比例称取，用常规制剂工艺可制成任何临床可接受的药物剂型，如丸剂、散剂、膏剂、片剂、胶嚢剂，如硬胶嚢和软胶嚢、颗粒剂、针剂等。

本发明药物制备方法为：

称取原料药：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量枸杞子 1 ~ 4重量份菟丝子 1 ~ 4重量份

将昆明山海棠、淫羊藿切碎，分別加水煎煮 2 - 4次，枸杞子、菟丝子分别用 80°C ~ 95°C水温浸 1 ~ 3次，分别每味中药的各次煎煮液或温浸液合并后，各合并液分别上各自对应的大孔吸附树脂柱；吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用 60% - 80 %乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变极浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液约为药材重量的 3 8倍；每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重 1. 10, 并分别喷雾干燥得各药材提取物；将四种提取物混匀，制成任何临床可接受的剂型。

本发明方法优选下述工艺步骤：

昆明山海棠 2重量份淫羊藿 2重量份

枸杞子 1 重量份菟丝子 1重量份

昆明山海棠切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；淫羊藿切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；枸杞子粉碎成粗料，用 20倍水 80°C温浸 1小时，连续 3次；菟丝子粉碎成粗粉，用 31倍水 8CTC温浸 1小时，连续 3次；四味药材的水煎煮液或水浸出液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱 JD- l (WLD) , 然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液。当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后分别得到提取物药粉；将四种提取物药粉混匀，制成任何临床可接受的剂型。

本发明药物的制备还可以采用下述方法：

称取原料药，淫羊藿、昆明山海棠分別切碎；枸杞子、菟丝子原形或粉碎，以上四味，分別或合并用 0 ~ 95 %的乙醇于 10 ~ 98"C提取，连续 1 - 4次，提取液分别或合并回收乙醇后浓缩，干燥，粉碎，混匀或按比例混匀，制为临床可接受的剂型。

本发明药物还可以以上述原料药当中的有效成分制备而成。上述原料药当中，淫羊藿含有淫羊藿甙，淫羊藿次甙 I，淫羊藿次甙 Π和淫羊藿糖甙 A，昆明山海棠当中含有双萜类，三萜类和生物碱类化合物，菟丝子和枸杞子的主要成分为黄酮。

因此，制备本发明药物的淫羊藿可以由淫羊藿甙，淫羊藿次甙 I，淫羊藿次甙 Π和淫羊藿糖甙 A 中的一种或一种以上代替，昆明山海棠可以由昆明山海棠当中的双萜类，三萜类和生物碱类化合物代替，菟丝子和枸杞子可以由其中所含的黄酮代替。

本发明药物（风湿平胶嚢）经药效学研究证明，风湿平经灌服给药，可显著抑制大鼠佐剂性关节炎（AA ) 的原发及继发性损伤；明显抑制 2, 4 -二硝基氟苯（ DNFB ) 所致小鼠耳迟发型超敏反应（ DTH ); 明显抑制小鼠溶血素抗体形成及小鼠巨噬细胞、脾细胞 IL-1、 IL-2、 IL-6、 TNF的活性；风湿平可显著抑制 ConA诱导的淋巴细胞转化，对于 CD₄、 CD₈细胞，风湿平均可显著抑制，但以对的 CD₄的作用为强，对 CD₄/CD₈比值无明显影响。风湿平的上述作用均有显著的剂量-效应线性关系， 12 ~ 18 (生药） g/kg为最低有效量。对于 NK细胞，风湿平也有显著抑制活性。但风湿平在有效剂量下不引起胸腺、脾脏等免疫器官萎缩，也不抑制巨噬细胞吞噬活性。

对于炎症反应，风湿平有显箸的抑制作用，能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，抑制巴豆油所致小鼠耳肿胀，抑制鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎及大鼠 CMC嚢中白细胞的聚集，但对鹿角菜胶性大鼠足爪肿胀及棉球性肉芽組织增生，风湿平抑制的作用较弱。此外，对于醋酸所致小鼠扭体反应风湿平有明显抑制作用。

实验例 1: 对佐剂性关节炎 ( )的影响

1. 1 对大鼠 M的防治作用

SD同窝大鼠 72只雌雄各半，体重 180 ~ 220g, 同源随机分为 6组，每組 12只，分笼饲养，每笼 6只。用精密窄带尺量取大鼠左、右后爪踝对风风风强昆

照湿的湿湿明

关松平平平山节及足爪最大周径作为正常值，分别灌服同体积不同剂量的药物或同体积西黄芪胶液，药后 lh，于各組大鼠左后足垫皮内注射弗氏完全佐剂

0.1ml/只。每日灌服药物 1次，连续 30天，逐曰同法量取大鼠左、右爪踝关节及足爪周径，预防性给药试验以测量日鼠爪周径减去致炎前鼠爪周径计算肿胀度（Δ cm), 结果见表 1.1、 1.2。到期称取体重及各組动物主要脏器重量，结果见表 1.3、 1.4。

1.1风湿平对 AA大鼠注射佐剂側鼠爪踝关节肿胀度的影响 (x^S)

剂量肿胀度 (Δ cm)

組别

(g/kg) Id 2d 3d 9d 12d 14d 16d 对照 - 0.69^0.17 0.69=10.12 0.92^0.18 0.84J0.41 1.10^.30 1.65^0.68 2.10^0.55 风湿平 7.5 0.74 12 0.66^0.074 0.83 ^0.13 0.77^0.27 1.11 d0.45 1.34 ¾.53 1.91 风湿平 15 0.80¾).24 0.62^0.13 0.76^0.18 0.49^0.17* 0.73 ¾.34* 1.00 i0.48* 1.38 ¾.67* 风湿平 30 0.75^.19 0.67 ¾.19 0.87 ¾.28 0.63 i0.22 0.73 ¾).34* 0.82 J0.43** 1.05^0.53** 昆明山海棠 5 0.72^.11 0.68 i0.16 0.91 0.66^0.23 0.88 ¾.29 1.03 i0.36* 1.37 33* 强的松 0.01 0.64 ¾.14 0.64^0.16 0.50 ¾.26 0.46^0.25 0.72 ¾.46* 0.87^0.46** 1.28¾).69* 剂量肿胀度 (Δ cm)

組别

(g/kg) 18d 20d 22d 24d 26d 28d 对照 - 2.18¾».44 2.05 ¾.46 2.00^0.46 2.04 ¾.57 1.92 iQ.65 1.83 ¾.67 风湿平 7.5 1.74 i0.73 1.81 ¾.55 1.81 J0.52 1.77 ¾.55 1.65^0.55 1.55 ¾.49 风湿平 15 1.32 iO.59" '* 1.28^0.58' ** 1.34^0.61* 1.33 ¾.67* 1.20^.64* 1.08¾.58** 风湿平 30 0.95 ¾.50" '* 0.87=¾).5Γ ** 0.95 *.54** 0.89^0.59** 0.90¾.57** 0.86¾.51** 昆明山海棠 5 1.47 J0.43^J '* 1.50^0.43 "* 1.49^0.43* 1.42 ¾.53* 1.40^0.56* 1.32^0.57 强的松 0.01 1.18^0.7*" 6 1.03 J0.67' "* 1.05 J0.69* 0.90 i0.64** 0.86^0.65** 0.85^0.59** 与对照組相比 *Ρ<0·05, **Ρ<0·01(下同）

1.2风湿平对 AA大鼠注射佐剂侧鼠爪跺关节肿胀度的影响 (x

剂量肿胀度 (Δ _cm)

组别

(g/kg) 2d 9d 12d 14d 16d 18d

- 0.14^0.05 0.06 ¾.10 0.34^0.36 0.80 ¾.52 1.43 1.36 ¾.61

7.5 0.18 ¾.06 0.10J0.14 0.26^.36 0.82 ¾.52 1.31 ¾.64 1.28^0.71

15 0.15 ¾.08 0.02^0.06 0.13 HO* - 0.37^0.31* 0.90^0.56* 0.79^0.60*

30 0.18 ¾.09 0.06^0.06 0.16^0.08* 0.29^.20** 0.49¾).41** 0.33 i0.29**

5 0.16^0.07 0.01 ¾.07 0.11 iO.10 0.44¾).19** 0.87^0.56* 0.84 J0.67*

0.01 0.20^0.06 0.08^0.08 0.21 =i0.16 0.44^0.43 0.99 d0.63 0.84¾).74* 剂量肿胀度 (A cm)

组别

(g/kg) 20d 22d 24d 26d 28d 对照一 1.28¾.57 1.38 ¾.64 1.35 i0.75 1.20¾).78 1.12^0.63 风湿平 7.5 1.33 J0.71 1.31 i0.73 1.27 ¾.73 1.16 ¾.73 1.07 «.65 风湿平 15 1.74 57* 1.92 *.61* 0.95^0.64* 0.88^.58* 1.83 i0.55 风湿平 30 0.27^0.30** 0.34 ¾.31** 0.32 ¾).33** 0.31 i0.32** 0.34¾).32** 昆明山海棠 5 0.82 ¾.65* 0.89^0.70* 0.80^0.67* 0.83 ¾.68 0.75^0.69 强的松 0.01 0.82 i0.72* 0.79^0.74* 0.75J0.67** 0.68^.64* 0.71 i0.67 昆 1.3风湿平对 AA大鼠体重变化的影响 (x )

风风风强明

¾湿湿湿的山剂量体重变化 (g)

组 ¾松平平平海别

(g/kg) 起始体重 AA1月时体重体重增加对照 - 228 ±34 231^52 3

7.5 229 ±34 220 ±t6 -9 风湿平 15 223 ±10 232 ±34 9

30 224 ±37 256 J60 32 昆明山海棠 5 226 ±45 230 ±t3 4

强的松 0.01 264 ¾5 244 ±31 -21

1.4风湿平对 AA大鼠免疫器官重量的影响 (预防 )(x )

剂量脏器*** (g组织 /100g体重）組别

(g/kg) 肝脾胸腺肾上腺

- 3.92 ¾.65 0.34^0.10 0.098 i0.040 0.027^0.01

7.5 3.73 J0.29 0.31 ¾.09 0.078 ¾.038 0.027 J0.008

15 3.48 ^0.32 0.38¾.10 0.100 i0.034 0.023 i0.005

30 3.38^0.28* 0.44¾.12* 0.100^.032 0.022^0.007 棠 5 3.21 ¾.30** 0.36^0.05 0.052 iO.011** 0.026^.009

0.01 3.04 ¾.20** 0.32 ¾.08 0.050^.060** 0.020^0.004*

1.2 对大鼠的治疗作用

另有雄性 SD大鼠 50只随机分 5组，同法处理，但药物于注射弗氏佐剂致炎后第 13日开始灌 Λ良，每曰 1次，连续 2周，以测量曰所测周径減去开始给药当日周径计算肿胀度（Δ cm), 结果见表 1.5、 1.6, 主要脏器重量见表 1.7。 _

1.5风湿平对 M大鼠注射佐剂侧鼠爪踝关节肿胀的治疗作用（x^) 剂量肿胀 (Δαη)

组别

(g/kg) Id 2d 4d 6d 对照 - 1.81 ¾.27 1.92J0.19 2.12 J0.22 2.16 ¾).27 风湿平 7.5 1.68 J0.50 1.64^0.54 1.70 i0.57 1.82 ¾.61 风湿平 15 1.44^0.41* 1.51 ¾.36** 1.65¾).34** 1.74 i0.31** 风湿平 30 1.50 ¾.56 1.48i0.41** 1.51 ¾).44** 1.59 ¾).51** 强的松 0.01 1.78 ¾.51 1.70^0.51 1.63 iO.SO* 1.58 ¾.50** 組别剂量肿胀 (Acin)

(g/kg) 8d 10d 12d 14d 对照 - 1.92J0.32 1.87^0.34 1.92¾.39 1.78 ¾).44 风湿平 7.5 1.67^0.68 1.60^0.71 1.61 J0.77 1.58 ¾.71 风湿平 15 1.46J0.37** 1.48^0.30* 1.28^.37** 1.22^.38** 风湿平 30 1.29¾.58** 1.29 ¾).65** 1.26^0.67** 1.20 ¾).68* 强的松 0.01 1.27¾.46** 1.09¾.54** 0.94^0.50** 0.94 ¾.42** 1.6风湿平对 AA大鼠注射佐剂对側踝关节肿胀的治疗作用 (x )

风风风风风风强强剂量肿胀 (A_em)

組别

湿湿湿的湿湿的湿 (g/kg) 2d 4d 6d 8d

¾¾松平平平平平平■·

~ 0.36^0.26 0.45^0.25 0.55 ¾.34 0.47 ¾.29

7.5 0.12 ¾.25 0.34 ¾.32 0.48 ^0.41 0.28 ¾.38

15 0.21 J0.18 0.38 ¾.27 0.44 ¾).33 0.21 ¾.33*

30 0.10^0.48 0.06 J0.28** 0.11 iQ.24** 0.06 iO.27**

0.01 O.lQdQ.13* 0.15JQ.28* 0.11 ^0.25** -0.08 JQ.34** 剂量肿胀 (Δ«η)

组別

(g/kg) lOd 12d 14d

~~ 0.48 25 0.46^0.31 0.40 36

7.5 0.35^0.30 0.30 JO^i- 0.30^0.35

15 0.19^0.45* 0.06^0.31** -0.06^.34**

30 0.02 i0.39** 0.05^0.38* -0.02 ¾.41**

0.01 -0.13 J0.28** -0.26^0.36** -0.33 39** n=10, 与对照组相比， *Ρ<0·05, **Ρ<0.01

1.7风湿平对 ΑΑ大鼠体重及免疫器官重量的影响

剂量脏器系数 (g组织 /100g体重）組别

(g/kg) 肝脾胸腺肾上腺对照 - " 0.35 ¾.23 0.35 ¾.061 0.073 ¾.014 0.026^0.0071 风湿平 7.5 3.21 i0.52 0.33 J0.091 0.071 i0.026 0.024 ¾.0085 风湿平 15 3.40 «.54 0.36 iO.014 0.067^0.022 0.023 «.0048 风湿平 30 2.79 .43 0.32 ¾.083 0.069 ¾.029 0.023 d0.0072 昆明山海棠 5 3.92 ¾.59 0.35 iO.100 0.075^0.034 0.027 J0.0060 强的松 0.01 3.52^0.35 0.28^0.047* 0.05 iO.011** 0.02 i0.0043* 由表 1.1、 1.2、 1.3及表 1.5、 1.6可见，风湿平对佐剂性关节炎大鼠注射佐剂侧的原发和注射佐剂对侧的继发性关节损伤均有强的抑制作用，致炎同时或致炎后 2周开始给药均有显著效果，表明风湿平对大鼠佐剂性关节炎有显箸的预防和治疗作用。分析风湿平对大鼠后肢踝关节处特异性免疫性肿胀及鼠爪非特异性肿胀的影响可见，风湿平的作用以对踝关节肿胀的作用为强，表明风湿平主要作用于免疫性炎症反应。

表 1.3、 1.4及 1.7结果表明， M大鼠于整个实验期间体重无明显增长，而风湿平在有效剂量下可见大鼠体重增加，强的松治疗、预防组均可见大鼠体重下降，胸腺、肾上腺明显萎缩，单味昆明山海棠也可见胸腺萎缩，但风湿平三个剂量均未见对胸腺、肾上腺重量有明显影响。 1. 3 对大鼠 M治疗作用的病理学观察

SD大鼠 45只分 6组，体重 180 20g, 用弗氏佐剂形成 AA后用风湿平灌胃治疗，连续 5天，末次药后 lh, 评价并计算大鼠关节指数。并取大鼠继发性损伤侧后肢关节用甲醛固定， HE染色，显微镜下观察关节滑膜及软骨的改变。各组大鼠关节指数结果见表 1. 8。

1.8风湿平对大鼠 AA关节指数的影响 (X 5)

剂量鼠数

关节指数 (g/kg) (只）

对照组 8

AA模型组 7 6.2 ^0.49 风湿平 7.5 9 4.86 ¾.90** 风湿平 15 7 4.71 =«.95** 风湿平 30 4.56 ±1.13** 雷公藤多甙 0.006 4.57 ^0.79** 与模型組相比 **P<0.01 关节指数根据大鼠每个关节红肿程度分别评分为 0— 4分，四肢分数之和即为关节指数。四肢及关节评分标准如下： 0分=正常， 1分=仅红， 2分=红、轻肿， 3分=严重肿， 4分=关节变形、强直。

显微镜下观察可见，模型組大鼠后肢关节滑膜层增生，胶原纤维增多，淋巴细胞及浆细胞浸润，形成明显肉芽肿；滑膜细胞变性，胞浆红染，胞核固缩，部分区域滑膜上皮脱落；软骨萎缩，表面粗糙，凹凸不平，软骨细胞有轻度增生。给予风湿平各剂量組治疗后，可见关节滑膜組织炎症减轻，形成较多胶原纤维；滑膜细胞部分脱落；软骨表层细胞增生，表面变平，软骨处于修复状态。

对照组大鼠，可见滑膜层增生，胶原纤维增多，淋巴细胞及浆细胞浸润，形成明显肉芽肿，滑膜细胞变性，胞浆红染，胞核固缩，部分区域滑膜上皮脱落。风湿平治疗组，关节滑膜组织炎症减轻，形成较多胶原纤维，滑膜细胞部分脱落，软骨表层细胞增生，表面变平，软骨处于修复状态。实施例 2 对 2， 4—二硝基氟苯 (DNFB)所致小鼠耳迟发型超敏反应（DTH) 的影响 NIH小鼠 50只，雌雄各半，随机分为 5组，各鼠于腹部去毛部位用 1 %的 DNFB丙酮溶液 0. 025ml /只致敏，隔日同法强化 1次，于致敏后第 5日，于小鼠右耳涂以 1 %的 DNFB食用油溶液 0. 01ml /只攻击， 24h 鼠将小鼠处死，按法于扭力天平称取左、右耳片重量，以其差值 (mg)作为小鼠 DTH反应的强度。实验以不同免疫、给药程序进行。

2. 1 全程给药对 DTH的影响

免疫、给药程序如下：

0 1 2 3 4 5_ 6

† †

致敏攻击测定

表 2.1, 风湿平对 NIH小鼠 DNFB所致小鼠迟发超敏反应的影响 (x

剂量给药时间鼠数抑制率組別耳肿胀百分率（％) P值

(g/kg) (天） (只） (%) 对照 10 34.20 ±3.77

风湿平 27 0-5 10 26.24 ±3.34 23.3 <0.01 风湿平 40 0-5 10 12.99 J .96 62.0 <0.01 风湿平 60 0-5 10 10.43 ^7.53 69.5 <0.01 *** 0.003 0-5 10 13.93 ±1.41 59.3 <0.01 对照 10 42.43 ¾.28

风湿平 40 -2-0 10 31.50 ±10.52 25.0 <0.01 风湿平 40 -2-2 10 30.88 S7.92 27.2 <0.01 风湿平 40 -2-5 10 21.07 ±t.62* 50.3 <0.01 风湿平 40 5-6 10 32.00 ¾.37 41.7 <0.01 环祷酰胺 0.05 -2-2 10 39.40 ±10.78 8.1 >0.05 环磷跣胺 0.05 -2-0 10 37.47 ^6.71 11.7 >0.05 对照 10 38.50 ±t.67

Cy 0.1 ¾ 0、 2、 4曰各 1次 10 23.00 *7.65 40.3 <0.01

Cy 0.25 -3d 10 41.84 *7.75 -8.7

风湿平 60 0-4 10 27.20 ±10.20 29.4 <0.01

Cy +风湿平 0.25 + 60 -3,0-4 10 38.07 ¾.65 1.1

*与其它各组比较 P<0.05或 P<0.01 由表 2. 1结果可见，风湿平对 DNFB所致小鼠 DTH有显著的抑制作用，其抑制作用强度有显著的剂量相关性，剂量加大作用增强，至 60. 9g/ kg 可使 DTH的抑制率达 69. 5 %。

2. 2 不同给药时间对小鼠 DTH的影响

免疫、给药程序及结果见表 2. 1 中栏和下半栏，由表中栏可见，致敏前 2 曰至致敏当日、致敏前 2 曰至致敏后 2 日、致敏前 2 曰至致敏后 5 曰、攻击前后给药均可显著抑制小鼠 DTH反应，但以致敏前加致敏后全程给药，即致敏前 2 日至致敏后 5 曰给药抑制作用尤强，提示风湿平抑制 DTH的作用环节和机制可能既与抑制 DTH反应的早期参予细胞，也抑制 DTH晚期的效应细胞以及 DTH反应中期细胞有关，而与环磷酰胺有不同，环磷酰胺于致敏前 2 日给药至致敏当曰或致敏后 2 曰，在较小剂量均不影响 DTH反应。

由表 2. 1下栏可见，于致敏前 3 日 1次给予大剂量的环磷酰胺，由于对 Ts细胞的强烈抑制而使 Th细胞功能相对亢进，表现为对小鼠 DTH 反应非但不抑制，反而有所增强，此时如与有显著 DTH抑制效果的风湿平合用，则可抵消风湿平的抑制效果，提示风湿平抑制 DTH反应的作用机理与环磷酰胺不同，有可能其对 TH细胞的抑制作用相对敏感。实验例 3 对体液免疫的影响

3. 1 对鸡红细胞（CRBC)免疫所致正常小鼠溶血素抗体生成的影响

18 ~ 22g小鼠 190只，雌雄各半，随机分为 19組，各組小鼠均 ip5 % CRBC0. 2ml免疫，于免疫后 7天，拔除眼球取血，用生理盐水稀释后测定风湿平对各組小鼠溶血素抗体形成的影响，风湿平于免疫的不同时间开始灌服，结果见表 3. 1、 3. 2、 3. 3。表 3.1风湿平对 NIH小鼠溶血素抗体生成的影响 (X

剂量给药鼠数抑制率组别溶血素值 P值

(g¾) 时间 (只） (% ) 对照 10 169.0 ¾2.0

风湿平 18 0-7 10 46.0 ±15.6 72.8 <0.01 风湿平 27 0-7 10 35.4 ±12.0 79.1 <0.01 风湿平 40 0-7 10 28.2 ¾.9 83.3 <0.01 风湿平 60 0-7 10 16.7 ±3.0 90.1 <0.01 昆明山海裳 13.3 0-7 10 121.0 ^8.0** 28.4 <0.015 环磷跣胺 0.02 0-7 10 35.0 ±12.0 79.3 <0.01

**与相同昆明山海棠含量的风湿平 (40g/kg)相比 P<0.01

表 3.2风湿平对 ICR小鼠溶血素抗体生成的影响 (χ ΐ")

剂量给药鼠数抑制率组别溶血素值 P值

(g/kg) 时间 (只） (%) 对照 - - 10 124.70 ±t2.60

风湿平 12 0-7 10 75.00 ¾3.10 39.9 <0.05 风湿平 18 0-7 10 45.60 ¾2.70 63.4 <0.01 风湿平 27 0-7 10 29.10 ¾2.10 76.8 <0.01 风湿平 40 0-7 10 28.20 ¾.30 77.4 <0.01 昆明山海棠 6.0 0-7 10 143.50 J67.90** >0.05 环磷酰胺 0.02 0-7 10 27.80 ¾.60 77.9 <0.01

**与同剂量风湿平 (18g/kg)相比 P<0.01 表 3.3风湿平对 ICR小鼠溶血素抗体生成的影响 (χ )

剂量给药鼠数抑制率組别溶血素值 P值

(g/kg) 时间 (只） (%) 对照 - - 10 256.0 ¾6.0

风湿平 18 -7-7 10 198.0 ¾0.0 22.7 <0.01 风湿平 18 -3-7 10 156.0 ^85.0 39.1 <0.01 风湿平 18 0-7 10 98.0 ±35.0 61.7 <0.01 环磷酕胺 0.02 0-7 10 25.0 ±t.O 90.2 <0.01

从上列 3表所示结果可见，风湿平对不同种系小鼠溶血素抗体形成均有显著抑制作用，并随剂量加大，作用增强，有良好的剂量一效应关系，最低抑制剂量为 12g/kg, 与风湿平組成主药之一的昆明山海棠相比，对抗体形成的抑制作用明显为强，表 3. 1 结果示风湿平的作用强度约为其 2. 25倍以上（13. 5g/kg昆明山海棠的作用较含 6g/kg昆明山海棠的风湿平的作用为弱）。

3. 2 对小鼠体液免疫功能的影响

NIH小鼠体重 20 ±2g,每鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂 0. 05ml, 3周后形成模型小鼠，随机分 6組后，分別灌服不同药物 5天，于开始给药同时 ipl0%绵羊红细胞（SRBC)0.5ml致敏， 5天后处死，取脾用 Hank' s液冲洗后制备淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为 2 xlOVml,取 1ml 加于试管中，加 0.2%SRBClml和 1:30补体 lml, 37°C水浴箱内孵育 1 小时， 2000rpm离心 5分钟，取上清液，用 722分光光度计于 415nm波长测其光密度，代表 PFC量。

另取上述致敏小鼠血，分离血清，以凝集试验测定其抗体效价，以 Lo_g2值表示，结果见表 3.4。

表 3.4风湿平对 AA小鼠体液免疫功能的影响 (xJs)

剂量鼠数 PFC

组别 IgM(Log₂)

(g/kg) (只） (OD)

对照组 - 8 0.819 ¾.013# 6.875^.641

AA模型组对照 - 10 0.940^.019** 7.700^.599* 风湿平 5 8 0.834^.012* *# 6.875 ¾.641# 风湿平 10 8 0.834 ¾.012**# 6.750 ¾.886# 风湿平 20 8 0.830 ¾.014**# 6.375 iO.S18## 雷公藤多甙 0.012 10 0.835 .015**# 6.950 ¾.597# 与对照组比较 *P<0.05, **P<0.01; 与模型组比较 # P<0.05, U# P<0.01 由表 3.4可见， AA小鼠 PFC、 IgM均显著高于正常小鼠，风湿平可显著降低 AA小鼠脾脏抗体生成细胞（PFC)及抗体（IgM)生成量。实验例 4 对大鼠被动皮肤过敏反应 (PCA)的影响

取大鼠肌注卵白蛋白 10mg/k_g, 同时腹腔注射百日咳杆菌 2 χΐθ¹⁰/ 0.2ml免疫， 2周后处死大鼠，取血分离血清备用。

另取体重 150 - 200g大鼠 60只，雌雄各半，随机分为 6组。于*** 轻度麻醉下，于鼠背剪毛部位皮内注射上迷抗卵蛋白血清（1:5、 1:10稀释，分别示为、 d₂)0. lml, 每稀释度 2点。 48h后用含卵白蛋白 lmg的 0.5%依文思蓝生理盐水溶液 lml iv攻击， 20min后将大鼠断头处死，翻转鼠背皮肤，根据蓝斑色泽深浅及面积，多人按染料渗出强弱评定蓝斑级别，然后将蓝染皮肤剪碎，浸泡于 5ml0.1%硫酸钠丙酮（7:3)液中， 48 小时后离心，取上清于 590nm测定光密度，计算各组大鼠 PCA反应强度及抑制百分率，结果见表 4。表风湿平对大鼠 PCA的影响 (X ¾)"

剂量分值吸光度组别

(g/kg) d, d₂ d, d₂ 对照 - 5.60 ±1.78 2.40 ¾.46 0.191 ¾).129 0.096 i0.106 风湿平 12 7.50 «.51 4.20 ¾.49 0.402 ^0.213* 0.192 ¾).175 风湿平 24 7.10 ¾.13 4.10 ±1.79 0.310 J0.177 0.137 ^0.099 风湿平 48 6.00 ±1.83 1.70 ±1.95 0.121 ¾.109 0.024 J0.026* 昆明山海棠 8 6.11 ±1.27 2.56 ±1.67 0.223 ^0.122 0.074 ^0.045

^替芬 0.1 2.78 ±1.64** 0.67 ±1.41 0.033 ¾.024** 0.027 ^0.019* 与对照组相比 *P<0.05， **P<0.01

由表 4可见，风湿平对大鼠 PCA抑制作用弱，仅在较大剂量时与对照相比有显著差异。实验例 5 对细胞因子的影响

5. 1 对小鼠 TNFa、 IL-2的影响

ICR小鼠体重 18 ~ 22g，雄雌各半 60只，随机分为 6組，分别灌服不同剂量的风湿平或其它药物，每日 1次，连续 10天，末次药后 24小时，无菌条件下取小鼠腹腔巨噬细胞或脾细胞，用 Hank' s液洗涤 2次，无血清 RPIM 1640液洗 1次，用 5 % FCS-RPMI 1640液调制为 2 ><10⁸ / ml 细胞悬液，分別加入 LPS 10ng/ ml或 ConAlong/ ml，于 37°C 5 % C0₂条件下培养 48h，按法测定 TNF α或 IL_2。

TNF ot的测定：

小鼠抗 TNF- α单克隆抗体包被板条，恢复室温后加入培养上清 50 μ 1/孔， 60分钟，加生物素标记抗体， 25°C 2h，加酶标亲和素， 30分钟，加底物 30分钟，加终止液， 450nm波长测 0D值。根据 0D值在标准曲线上计算 TNF- α含量（ng / ml)。

IL-2的测定：

取对数生长期、 IL- 2依赖性生长的 CTLL细胞，用 5 % FCS-RPMI1640 调制成 1 xlOVml细胞悬液。在 96孔平底细胞培养板中加入 CTLL细胞悬液 ΙΟΟ μ Ι/孔，培养上清液 100 μ ΐ/孔，每份样品作 3复孔，同时作不同稀释度标准 rHIL- 2和培养液对照。 37°C 5 % C0₂条件下培养 24小时，终止培养前 6小时离心，去上清 ΙΙΟ μ Ι/孔，加入 ΜΤΤΙΟ μ Ι /孔， 37°C , 3h测 0D 570nm和 0D 630nm值，每孔 0D值 =0D570nm - 0D630nm。

样品 0D -培养液对照 0D

IL-2活性 = 4示准品活性单位（IU/ml)

标准品 1-培养液对照 0D 表 5.1风湿平对 TNF及 IL-2的影响 (X ^s)

剂量鼠数 TNF IL-2 药照

(g/kg) (只） (pg/ml) (IU/ml) 对照 ― 10 87.80 ±14.63 26.30 ±t.22

12 10 62.14 ±13.13** 16.00 ¾.89** 风湿平 24 10 58.60 ^9.63** 18.80 ¾.86**

36 10 54.40 ±10.88** 18.20 ¾.86** 昆明山海棠 8 10 58.25 ±10.32** 16.00 ¾.88** 环磷酰胺 0.02 10 42.20 i9.57** 10.10 ±3.00**

*P<0.05, **P<0.01 表 5. 1结果表明，风湿平对 TNFa有显著的抑制效果， 12g/kg可见有非常显箸的抑制作用，剂量加大作用增强，但剂量一效应曲线平緩。对于 IL-2, 风湿平也有显著抑制作用，但剂量一效应关系不明显。

5. 2 对 IL- 1、 IL-6的影响

NIH小鼠体重 18 ~ 22g，雌雄各半， 70只随机分为 7组，分别灌服不同剂量的风湿平或其它药物，每日 1次，连续 10天，末次药后 24小时处死，按法取腹腔巨噬细胞及脾细胞，测定 IL-1及 IL-6。

IL-1的测定：

无菌条件下取腹腔巨噬细胞，用 Hank' s 液洗涤两次，无血清 RP-MI1640洗涤一次，用 5 % FCS-RPM1 1640调制成 4 ><10⁶ / ml细胞悬液，取 lml于康氏管中， 37°C 5%C0₂条件下培养 1小时，弃未粘附细胞，加入 5%FCS-RPM1 1640和 LPS(10ng/ml)，37t5%C0₂条件下培养 72小时，反复冻融， 4°C保存。另取 C57小鼠，在无菌条件下取胸腺细胞，用 5% FCS-RPM11640调制成 1 xl0⁶/ml细胞悬液。

取胸腺细胞悬液和冻融上清各 100 μ 1加入 96孔平底细胞培养板，每份样品作三复孔，同时作不同稀释度标准品 rHIL-1和培养液对照，然后加入 ConA2ng/孔，平板置 37°C 5 % C0₂条件培养 72小时，于终止培养前 14小时加入 ¾-TdR 0.1 μ Ci/孔，用多头细胞收集仪收集细胞，测 cpm 值。一

样品 cpm -培养液对照 cpm

IL-1活性 = X标准品活性单位（ng/ml) 标准品 cpm -培养液对照 cpm

IL-6的测定：

无菌条件下取小鼠脾细胞，用 Hank's液洗涤两次，无血清 RPM11640 洗涤一次，用 5 % FC ~ RPM1 1640调制成 2 xl0⁶/ml细胞悬液，取 lml于康氏管中，加入 ConA(10ng/ml), 37 °C 5% C0₂条件下培养 72小时。

取对数生长期、 IL-6依赖性生长的 MH60细胞，用 5%FC- RPMI1640 调制成 1 xlOVml细胞悬液。

在 96孔平底细胞培养板中加入 MH60细胞悬液 100 μ 1/孔、培养上清液 25 μ 1/孔，用 5 % FCS-RPMI 1640补足 200 μ 1/孔，每份样品作三复孔，同时作不同稀释度标准 rHIL-6和培养液对照。 37 °C 5 % C0₂条件下培养 72 小时，终止培养前 6小时离心，去上清 ΙΙΟμΙ/孔，加入 ΜΤΤΙΟμΙ/孔， 37 °C 3小时，测 OD570nm和 0D630nm值，每孔 0D值 =0D570nm - 0D630nm„ 样品 0Γ-培养液对照 0D

IL-2 活性样品稀释度 χ标准品活性单位 (IU/ml)

标准品 0D -培养液对照 0D

由表可见，风湿平对小鼠腹腔巨噬细胞生成 IL- 1及脾细胞生成 IL-6 均有强的抑制作用，并随剂量加大，作用增加。

5. 3 对佐剂性关节炎大鼠血浆 NO的影响

SD大鼠 160 ~ 200g雌雄各半， 60只随机分为 6组：空白对照组，每鼠右后足跖皮内注射 NS 0. 5ml; 模型組及风湿平高、中、低剂量組及雷公藤多甙组，每鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂（FCA) 0. 5ml。于造模 18天形成大鼠佐剂性关节炎 (M)后开始灌胃给药，每天 1次，连续 5天，空白对照组和模型组给予蒸熘水；高、中、低剂量组分别给予高、中、低剂量的风湿平，阳性对照组给予雷公藤多甙片。末次药后 1 小时腹主脉取血 2ml, 分离血浆， - 70°C保存待测。 NO的测定按 NO试剂盒说明书进行:取血浆 0. lml加 0. 6mlC试剂混匀，加双蒸水 0. 4ml,混匀，加 0. ImlD 试剂混匀，水上孵育 60min， 12000转离心 2min, 取上清 0. 6ml加 0. ½1 双蒸水及 0. lmlA试剂，冰水孵育 15min之后，加 0. lmlB试剂，室温放置 1小时， 545nm比色读 0D值。根据样品 0D值，按标准曲线计算 N0含量，结果见表 5. 3。由表 5. 3可见，模型組大鼠血浆 NO水平显著高于空白对照组，风湿平可显箸降低 AA大鼠血浆 NO水平，雷公藤多甙片也可降低关节炎大鼠血浆 NO水平，但作用明显为弱。

实验例 6 对小鼠 T淋巴细胞、 CD₄、 00₈及1¾细胞的影响

6. 1 对正常小鼠淋巴细胞转化的影响

NIH小鼠 80只雌雄各半，随机分 8组，分别灌^^不同药物，每天 1 次，连续 10天，末次药后 24小时小鼠处死，无菌条件下取小鼠脾细胞，用 Hank' s液洗涤两次，无血清 RPJ111640洗涤一次，用 5 % FCS-RP- MI1640 调制成 2 xlOVml细胞悬液。将细胞悬液加入 96孔平底细胞培养板， 100g μ 1/孔，每份作 3复孔，其中 2孔加刺激剂（ConA2ng/孔）作为转化孔，另 1孔不加刺激剂，作为对照孔。平板置 37°C 5 % C0₂条件培养 72小时，终止培养前 14小时，加入 ¾-TdR 0. 1 μ Ci /孔。用多头细胞收集仪收集细胞，测 cpm值，计算复孔平均值。直接用各組 cpm或刺激指数进行比较，刺激指数按下式计算：

对照 cpm

结果见表 6. 1。表 6.1对 ConA致小鼠淋巴细胞转化的影响 (x Js)

剂量鼠数

组别 cpm 刺激指数

(g/kg) (只）

对照 - 10 20433 ±3579 25.87 ±3.06

7.5 10 13566 ±1779** 27.29 *7.67

15 10 12708 ±1692** 18.04 ±3.76 风湿平

30 10 12809 ¾575** 16.17 J4.37

60 10 12090 ±1706** 19.05 ±3.80

2.5 10 18038 ±3359 17.11 ¾.60 昆明山海棠

5 10 12081 ±1039** 17.58 M.37 环磷跣胺 0.02 9 9922 ±1145** 13.66 ¾.28 与对照相比 *P<0.05, **P<0.01 由表 6. 1可见，风湿平对 ConA刺激下的淋巴细胞转化有显著的抑制作用，并呈一定的量一效关系。

6. 2 对正常小鼠 CD₄、 CD₈及 NK细胞的影响

实验同 5. 1, 停药 24小时后用 5 % FCS-RPIM1640制备小鼠脾细胞悬液，调细胞数为 2 xlOVml按法测定 CD₄、 CD₈及其比值和 NK细胞。

CD₄、 CD₈的测定：

取小鼠脾细胞悬液 50 μ 1,加在经多聚赖氨酸铺底的玻片上制成细胞涂片。用经尼绒毛分离的小鼠 Τ细胞为阳性对照。细胞涂片经丙酮固定后用正常小鼠血清封闭，加人生物素标记的抗 CD₄、 CD₈抗体， 37°C孵育 2 小时，加酶标亲和素，室温 10分钟，加底物 10分钟，洗涤，苏木精复染 2分钟。梯度酒精脱水后，明胶甘油封片，高倍显微镜下数 200个细胞。

着色细胞数

细胞含量 = 00 %

200

NK细胞的测定：

EC细胞制备：无菌条件下取小鼠脾细胞，用 Hank' s液洗涤两次，无血清 RPMI1640洗涤一次，用 5 % FCS- RPMI1640调制成 2 ><107ml细胞悬液，作为 EC。 TC细胞制备：对数生长期、小鼠 NK细胞敏感的 Yack- 1细胞调制成 4xl0⁴/ml细胞悬液，作为 TC。

测定：取 EC和 TC各 100 μ 1加入 96孔平底细胞培养板，每份样品作 3复孔，同时作 EC和 TC对照（EC对照： EC100 l + 5%FCSRPMI 1640 100 μ 1； TC对照： TC100 1 + 5%FCS RPM1 1640 100μ 1)。 37。C5%C0₂ 条件下培养 24小时，终止培养前 6小时离心，去上清 ΙΙΟμ Ι/孔，加入 MTT10 μ 1/孔， 37 °C 3小时测 OD570nm和 0D630nm值，每孔 0D值 =OD570nm 一 0D630nm。样品 0D-EC对照 0D

NK活性 = (1 - = ~~

TC对照 0D

表 6.2风湿平对 CD₄、 CD_S、 NK细胞的影响 (xJs)

剂量鼠数 CD₄ CD₈

药物 CD₄/CD_S NK

(g/kg) (只） (%) (%)

对照一 10 20.80 «.94 14.80 ¾.49 1.42 ¾.18 40.13 ±t.89

12 10 19.14 ¾.91 13.43 ¾.51 1.43 J0.08 31.94 ±».52**^ΛΔ 风湿平 24 10 17.30 ¾.51** 12.00 ¾.40 1.46 ¾.16 35.36 ±3.40*"

36 10 16.30 ¾.50** 11.23 ±2.94** 1.49*.20 31.06 ±3.53**^4Λ 昆明山海棠 8 10 16.25 ¾.25** 11.50 ¾.45 1.44^0.18 32.20 ¾.00** 环磷跣胺 0.02 10 11.50 ¾.50** 4.10 ±1.20** 2.91 i0.53** 23.10 ±3.66** 与对照组比较 *Ρ<0.05, **Ρ<0.01; 与 Cy比较 ^ΛΔΡ<0.01 从表 6.2可见，风湿平对 CD₄、 CD₈细胞均有一定抑制作用，也呈现剂量一效应关系，但剂量一效应曲线很平緩。对 CD₄的抑制有效剂量为 24g/kg, 而对 CD₈细胞则于 36g/kg高剂量才有显著抑制作用。相应，对 CD₄/CD₈比值，风湿平无明显影响。环磷酰胺则对 CD₄、 CD₈均有强的抑制作用，而对 CD₈的作用尤强，结果导致 CD₄/CD₈比值大为增高。

对于 NK细胞，风湿平也有显著抑制效果，但量一效关.系不明确，而环磷酰胺则有强烈的抑制作用， 20mg/kg与 12、 24、 36g/kg风湿平的作用相比，均有非常显著的差异。

6. 3 对 M小鼠 T淋巴细胞数和功能的影响

20 ±2gNIH小鼠每鼠右后足跖皮内注射 Freund' s完全佐剂 0. 05ml, 三周后制成佐剂性关节炎模型。阴性对照组每鼠右后足跖皮内注射生理盐水 0. 05ml。灌服给药，每日 1次，连续 5曰。 5天后分别取各组小鼠外周血推血片，进行酯酶染色。油镜下观察酯酶染色阳性细胞百分率（即外周血中 T细胞的百分率）。小鼠麻醉后，取脾脏制成单细胞悬液， PBS 洗一次，弃上清，加红细胞溶解液 4 uml, 充分摆动 2 ~ 3min待红细胞完全溶解后，离心弃上清，荧光洗液洗二次，离心后弃上清，调整细胞浓度为 1 xlOVml, 每管分别加入 50 μ 1稀释抗 CD₄、 CD₈抗体， 4°C孵育 1小时，荧光洗液洗两次后加固定液 2ml。 400目网过滤至 FCA管，上流式细胞仪分析，结果见表 6. 3。表 6.3对佐剂性关节炎小鼠 T细胞的影响 (x¾

剂量 ANAE+ CD8

分组 CD4+/CD8+

(s/kg) (%) (%)

对照组 50.60 ±4.25 26.13 ±1.16 15.56 J0.68 1.68 ^0.03

AA模型组 - 49.00 ±t.22^x 32.56 ¾.87** 13.59 ±1.03** 2.49 ^0.16**

7.5 49.13 ±1.03^ 27.30 ±1.76##⁴ 15.98 ±1.11##^Α 1.71 J0.04##⁴ 风湿平 15 49.31 ¾.29^Α 27.96 ±1.67##⁴ 16.23 ±1.27##^Α 1.73 ^0.05##'

30 48.56 ±3.23 26.75 ±1.94##⁴ 15.58 ±1.29##" 1.72 ¾.04##' 雷公藤多甙 0.012 48.88 ¾.89^Λ 27.88 ±1.99##^Α 16.33 ±1.31##" 1.70 ¾.03##⁴ n=8, 与对照组比较 *P<0.05, **P<0.01; 与模型组比较 # P<0.05, ## P<0.01; 与对照組比较 P>0.05

由表 6. 3可见， ANAE阳性细胞各組无明显差异，但 AA小鼠 CD₄细胞明显增加，而 CD₈细胞明显减少， CD₄/CD₈则明显升高，风湿平治疗可使 CD₄、 CD₈、 CD₄/CD₈异常恢复至正常水平。实验例 7 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

NIH小鼠 50只，体重 18 ~ 22g，雌雄各半，随机分为 5组，分別灌服同体积不同剂量的药液，每日 1次，连续 1周，末次药后 lh, 每鼠腹腔注风风风风风风- *入 10%鸡红细胞 0.2ml, 4h后小鼠处死，取出腹腔液，用漓片法于 ¾湿湿湿湿湿湿

镜下观察一一一r一 -一 --，，-，,，并计数吞噬有 CRBC的巨噬细胞数及每巨噬细胞吞噬 CRBC的数目，结果见表 7。

表 7风湿平对 ICR小鼠腹腔巨噬 CRBC能力和影响 (X is)

剂量鼠数吞噬百分率

組别吞噬指数

(g/kg) (只） (%)

对照 - 10 25.75^9.40 1.28^0.20 风湿平 27 10 33.20 ±12.77 1.46¾).36 风湿平 40.5 10 35.20 ±10.16 1.21 .20 风湿平 60.9 10 37.78 ¾0.14 1.53 i0.32 *** 0.005 10 8.33 ±10.13* l.lOiO.18

*P<0.05 由表 7可见，于 27、 40.5及60.98/1¾剂量，风湿平对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力均无明显影响。

实验例 8 对小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响

NIH小鼠 90只体重 18~22g, 雌雄各半，随机分 9组，分别灌服同体积不同剂量的药液 1次或每日 1次，连续 3日，末次药后 1小时，每鼠腹腔注射 0.7%HAC生理盐水溶液，同时 iv 0.5%依文思蓝生理盈水 0. lml/lOg, 30分钟后小鼠脱颈推处死，剪开腹腔，每鼠用 5ml生理盐水分数次冲洗腹腔，吸出冲洗液，合并，并添加生理盐水定容至 8ml /鼠， 3000rpm离心后取上清液于 590nm比色测 0D值，结果见表 8。表 8风湿平对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响 (xJs)

― ― ― 染料透出量 ~

^J (g/kg) 次数（只）（OD) ^

0.29^0.13

27 0.26^.14 >0.05 40 0.25^0.10 >0.05 60 0.25 ¾.09 >0.05

0.28J0.15

27 0.25^0.12 >0.05 40 0.18^0.10 <0.05 60 0.15 ¾.13 <0.05 *** 0.15 0.11 ¾.07 <0.01 由表 8结果可见，风湿平对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，给药 1次时无明显作用，连续给药 3天则有显著的抑制效果。实验例 9 对鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎渗出和炎性细胞聚集的影响

小鼠随机分組后，分別于尾静脉按 0. lml/lOg体重注入 0. 5 %伊文思兰生理盐水溶液，小鼠以***浅麻，并按 0. 03ml /只给小鼠右胸腔内用特制针头注入 1 %鹿角菜胶液。分别于致炎后 4h和 32h断头处死小鼠，剪开腹部，暴露膈肌，以 1ml注射器分两次注入总量为 2ml的胸腔洗液，并收集洗液于试管中。取上述洗出液 20 μ 1, 加于 400 μ 1白细胞稀释液中，于镜下进行白细胞计数。余液 3000rpm离心 lOmin,取上清液于 600nm 处比色测定光密度，以胸腔洗液原液校零，结果见表 9。

表 9风湿平对鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎细胞聚集的影响 (χ ^"

剂量白细胞数 (2 >¾0⁵) 染料渗出 (OD) 组别

(g/kg) 4h 32h 4h 32h 对照一 46.0 J6.9 16.0 ^.6 0.156 ¾.066 0.109 ¾).019 风湿平 27 26.8 H.S* 14.2 ¾.0 0.121 *.062 0.116 ¾).031 风湿平 40.5 10.9 ±1.0** 17.3 M.6 0.100 ¾.048 0.153 ¾).032 风湿平 60 8.0 ¾.5** 6.6 M * 0.129 i0.066 0.092 ^0.051 *** 0.05 12.7 ±10.2** 4.4 ±4.0* 0.085 i0.045 0.063 iO.017

*P<0.05, **P<0.01 由表 9可见，风湿平对小鼠胸膜炎白细胞聚集有显著的抑制效果，此作用以对早期聚集为尤强， 4h时得到回归方程 y=44. 13 - 2. 01x, r= - 0. 9625，对晚期聚集弱，至 20g/kg剂量方有显著效果，对胸膜炎渗出则无明显影响。实验例 10 对大鼠 CMC嚢中自细胞聚集的影响 SD大鼠体重 150 ~ 180g, 雌雄各半， 64只随机分为 8组，分别灌服相同体积不同剂量的药液 1次或每曰 1次，连续 3 日。实验曰向前一曰预先于大鼠背部注射 20ml空气造成的气嚢中注入 1 % CMC溶液 20ml, 于 3. 5h及 7. 5h各吸取嚢液 0. 1ml, 置于 0. 01 %亮甲酚蓝 PBS溶液中染色，于镜下计数 CMC嚢液中白细胞数，结果见表 10。

表 10风湿平对大鼠羧甲基纤维素囊白细胞数的响 (x Js)

組别剂量鼠数 WBC数（ 0⁷/L)

(g/kg) (只） 3.5小时 7.5小时对照 - 8 9.7 .2 57.7 ±17.3 风湿平 27 4 8 8.5 ±3.5 39.4 ±16.5 风湿平 40 x1 8 8.7 *7.3 35.3 ¾3.2 风湿平 60 x1 8 6.6 ±3.3 18.1 ¾.6** 对照 - 8 10.97 ¾.7 35.6 ±11.2 风湿平 27 >3 8 15.4 ^ .7 38.6 ±15.5 风湿平 40 β 8 4.8 ±3.4** 18.4 ±12.2** 风湿平 60 ¾ 8 3.0 ¾.8** 11.0 ^9.2* 可的松 0.1 ¾ 8 14.2 ¾.0 41.7 ±16.0 对照一 8 10.9 ±3.0 41.3 ¾.9 风湿平 18 ><7 8 6.2 ±3.0* 11.4 ¾.4* 风湿平 27 ^7 8 3.7 ±1.7** 6.4 ±3.1** 风湿平 40 7 8 2.5 ±1.9** 5.9 ±3.9** 可的松 2mg ¾ 8 1.5 ^.7** 3.0 ±1.0** 与对照相比 **P<0.01 从表 10可见，风湿平对大鼠 CMC嚢中白细胞聚集有显著的抑制作用，并呈明显量一效关系并随给药时间延长，作用增强，连续给药 7天，于 18g / kg即能非常显著地抑制白细胞游走，可的松嚢内注射，也有很强的抑制效果。实验例 11 对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响

NIH小鼠 60只，体重 18 ~ 22g，雄雌各半，随机分为 6组，分别灌服同体积不同剂量的药液或西黄芪胶液，每日 1次，连续 3 曰，末次药后 lh,每鼠左耳用 2 %巴豆油合剂 0. 02ml均匀涂于耳廓两侧， 4h后将小鼠拉断颈推处死，切取左右耳片，按法称取致炎及对照耳片重量，以左右耳片重量之差的 mg数为耳肿胀程度，结果见表 11。表 11风湿平对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响 (x )

剂量鼠数耳肿胀度抑制率

組别 P值

(g/kg) (只） (mg) (%)

对照 - 10 44.38 ^ .40

风湿平 27 10 39.05 ±12.33 12.00 >0.05 风湿平 40 10 36.65 ¾.83 17.64 <0.05 风湿平 60 10 34.91 ^ .71 21.34 <0.05 *** 0.003 10 14.13 ¾.75 68.16 <0.01

由表 11可见，风湿平对巴豆油所致小鼠耳肿有显著抑制作用，且具有量一效关系，但量一效关系曲线较平緩， 13. 5g/kg有显著抑制效果。实验例 12 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

昆明种小鼠 60只，体重 18 ~ 22g, 雄雌各半，随机分为 6組，分别灌服不同剂量的药液或西黄芪胶液，药后 lh，每鼠腹腔注射

0. 7 % HAC生理盐水溶液 0. 2ml，将小鼠置于玻璃缸中观察各鼠发生扭体反应的潜伏期及 20分钟内小鼠扭体次数，结果见表 12。

表 12风湿平对醋酸所致小鼠扭体次体的影响

剂量鼠数潜伏时间组别扭体次数

(g/kg) (只） (分）对照 - 10 34.6 ±14.1 3.13 J0.80 风湿平 27 10 28.2 ¾.76 3.82 ^0.85 风湿平 40 10 31.0 ±18.4 3.86 ¾.00 风湿平 60 10 20.7 ±12.3* 3.95 ±1.42 昆明山海棠 20 10 25.1 ±11.9 3.60 ¾.93 盐酸*** 10mg/kg 10 0.0 iO.O 0.00 ^0.00 由表 12 可见，风湿平于较大剂量可使醋酸所致小鼠扭体反应发生时间延迟，并明显減少 20分钟内小鼠扭体次数，提示风湿平有一定镇痛作用。实验例 13 对大鼠血液流变学的影响

SD大鼠体重 180 ±20g, 每只大鼠右后足跖皮内注射 Freuncf s完全佐剂 0. 05ml制成佐剂性关节炎模型。阴性对照组每只大鼠右后足跖皮内注射生理盐水 0. 05ml。造模三周后将鼠分为模型組、高、中、低剂量组、阴性对照組和阳性对照組，阳性对照组给予雷公藤多甙片。灌给药，每日 1次，连续 5天，末次给药后 1小时，于大鼠腹主动脉取血 3ml, 置于 1 %肝素抗凝试管中，用 NXE- 1型锥板式粘度计在 230、 115、 46、 23、 11. 5及 5. 75S^_1切变率下测定全血粘度，用 WTP-ΒΠ型可调恒压毛细管粘度计测定血浆粘度；用红细胞压积管离心法测红细胞压积、红细胞聚积指数，红细胞刚性指数系由上述结果计算而得，结果见表 13。

表 13对佐剂性关节炎大鼠血液流变性的影响 (χ )

风湿平风湿平风湿平

組别雷公藤多甙对照组模型组

(30g/kg) (15g/kg) (7.5g/kg) (6mg/kg) 全血粘度

(mPa.s)

230S- ¹ 4.43 ¾.09 4.92 ¾.15** 4.56 ¾.09## 4.49 ¾).11## 4.54i0.16## 4.66 i0.28#

115S"¹ 5.17 ^0.25 5.81 ^.19** 5.33 J0.09## 5.32 ¾.10## 5.16i0.14## 5.60 ¾.48#

46S"¹ 6.84 ^0.11 7.20 ¾.18** 6.56 ^0.13## 6.59 ¾.09## 6.67 J0.14## 6.70=¾.48#

23S"¹ 8.10 ¾.15 8.23 ¾.38 7.95 ·22 7.93 i0.12 7.97 ¾.14 8.02 ¾.14

9.35 ^0.08 9.78 ¾.10** 9.40 ^0.08## 9.45 ¾.10## 9.30 ^.133 9.31 ¾.12#S

6.5S"¹ 11.03 i0.14 12.66 *.31** 11.21 i0.2辦 11.29 J0.19## 11.60 ¾).40## 11.42 ¾).52#) 血浆粘度

1.158 ¾.032 1.248 ¾.040** 1.161 i0.011## 1.154 i0.023## 1.156 ^0.018## 1.158 i0.029# (mPa.s)

红细胞压积 (％) 46.13 ¾.31 41.33 ±1.12** 45.10 «.39## 44.33 ±1.52## 45.71 ±1.04## 46.03 ±3.S9#) 红细胞聚集指数 2.49 ¾.032 2.58 ^0.083* 2.46¾.066# 2.49 ¾.094# 2.44 ¾.048## 2.45 ¾.091# 红细胞刚性指数 6.155 ^0.536 7.127 ¾.557** 6.506 ^0.558 6.525 J0.146 6.394 i0.200# 6.621 ¾.883 与阴性对照組比较 *P<0.05, **P<0.01; 与模型组比较 # P<0.05, ## P<0.01

由表 13可以看出， AA大鼠血流型性发生明显变化，全血、血浆粘度增高，红细胞压积下降，红细胞聚集指数和刚性指数增加，风湿平治疗可使上述血液流变学指标明显改善。

以上实验例证实了风湿平的药理作用，风湿平许多重要药理作用均有良好的剂量 -效应关系，提示临床中可以通过调节剂量以达到最佳疗效。

在中国、曰本、澳大利亚进行了风湿平的临床疗效研究。单独使用风湿平胶嚢，按国际有关病种诊断、治疗及疗效标准进行观察，结果表明，风湿平对 RA的有效率为 94%左右，显效率为 60 %左右，能较快地改善晨僵、肿

痛等症状及 RA相关检测指标，见表 14 ~ 21。治疗組和对照组治疗效果的比较

緩解显效率有效率組别例数显效有效无效

(临床治愈） ( % ) ( % ) 治疗組 32 5 14 11 2 59.38 93.74 对照组 30 3 10 12 5 43.33 83.33 表 15 对 IgG、 IgA、 IgM的影响（X^S )

例 IeG IsA ΙεΜ 組别

数前 ¾ +1 后前后前后正常人 32 12.45 ±1.48 2.37 ±1.00 1.58 ¾.59

32 16.92 ±3.49 14.17 o

治疗組 ±1.39** 3.65 ±1.03 2.39 ±1.18** 1.89 i0.88 1.48 ±1.01 对照组 30 17.03 Λ2 15.14 ¾.21** 3.45 ±1.86 2.32 ±1.75** 2.03 i0.95 1.76 ±1.28 与治疗前比较 P<0.01

表 16 对 C3、 C4的影响（X =S )

例数 C3 C4 組别

(只）前后 . 前后正常人 32 0.62 ¾.13 0.14 ^0.15

治疗組 32 1.88 ¾).72 1.25 J0.66** 0.48 ^0.12 0.26 ^0.06*

对照組 30 2.13 .64 1.56 ¾.62** 0.40 i0.16 0.25 ¾.07** 与治疗前比较 *P<0.05， **P<0.01

o

表 17 对 ESR、 CRP的影响（X¾ )

例数 ESR CRP 组别

(只）前后前后正常人 32 8.37 ¾.26 4.12 ±1.88

治疗组 32 66.58 ^ .01 30.31 ¾.53** 13.35 ¾.67 8.86 ±3.34* 对照组 30 73.33 ^9.09 35.83 ±11.61** 14.21 ¾.29 9.04 ±3.15** 与治疗前比较 *P<0.05， **P<0.01

握力治疗前后的比较（X )

治疗組对照組

組别

前后 m 后

80.47 土 24,00 土 1 63(21) 55.15 ± 握力左（mmHg )

23.27**(21)

35.85 土 22.46(15) 85.32 ± 22,80 ± 12.32(21) 58.17 ± 右

36.32* *(15)

与治疗前比较 *P<0.05， **P<0.01

表 19 对关节肿痛、晨僵的影响（X ¾ )

治疗组对照组

项目

前后前后关节肿痛 5.79 ^0.52 3.14 ^.83* 5.56 ¾.15 3.92 ¾.26* 晨僵时间（分） 50.33 ¾.47 20.24 ±3.27** 48.75 ^8.34 27.50 ±3.78** 与治疗前比较 *P<0.05, **P<0.01 表 20 对 RF阴转的影响

RF阴性

组别例数

治前治后转阴率(％) 治疗組 32 24 11 54.2

对照組 30 18 10 44.4 在取得显著疗效的同时，风湿平还可使患者血清 SIL - 2R、 STNF、 SIL - 6R等指标下降，见表 21。表 21 对 SIL - 2R、 STNF、 SIL - 6R等主要指标的影响（ X )

例数 SIL-2R(u/ml) STNF Rlfne/ml) SIL-6R(ng/ml) 組别

(只）前后前后前后

299 1.56 ¾.48 72.05 ±18.26 正常人 32

(n=32) (n=24) (n=22) 风湿平 15 683 ±189 381 ±157** 2.87 ¾.66 1.75 ¾.54** 136.18 ¾8.57 90.15 ¾0.12** 对照组 10 765 ¾03 412 ±167** 2.63 72 2.38 39 148.21 ±30.31 99.02 ¾6.70**

(n=8)

与治疗前比较 **P<0.01

经验证，本发明下述实施例均能实现上述发明效果。

实施例 1:

淫羊藿 2222g 昆明山海裳 2222g

枸杞子 llllg 菟丝子 llllg

以上四味，昆明山海棠，切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；淫羊藿，切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；枸杞子粉碎成粗料，用 20倍水 80°C温浸 1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用 31倍水 80。C温浸 1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；将四种提取物药粉加入药用淀粉至 200g, 混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢每粒内装药物提取物 0. 2g, 且每粒胶嚢中含淫羊藿甙 C₃₃ 。0₁₅ 不得少于 2. 0mg。常规用量为：口服，一曰 3次，每次 3粒。实施例 2:

昆明山海棠 2000g 淫羊藿 2000g

以上两味，昆明山海棠，切成碎块，分別加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；淫羊藿，切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1 小时；药材的水煎煮液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；将提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢每粒内装药物提取物 0. 2g，且每粒胶嚢中含淫羊藿甙（₃₃ 。0₁₅不得少于 2. 0mg。常规用量为：口服，一曰 3次，每次 3粒。

实施例 3:

昆明山海棠 2000g 淫羊藿 2000g

枸杞子 1000g

昆明山海棠，切成碎块，分別加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1 小时；淫羊藿，切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；枸杞子粉碎成粗料，用 20倍水 80°C温浸 1小时；药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢每粒内装药物提取物 0. 2g，且每粒胶嚢中含淫羊藿甙 C₃₃i )₁₅不得少于 2. 0mg。常规用量为：口服，一曰 3次，每次 3粒。

实施例 4

昆明山海棠 2000g 淫羊藿 2000g

菟丝子 1000g 昆明山海棠，切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1 小时；淫羊藿，切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用 31倍水 80°C温浸 1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢每粒内装药物提取物 0. 2g, 且每粒胶嚢中含淫羊藿甙 C₃₃H₄。0₁₅ 不得少于 2. 0mg。常规用量为：口服，一日 3次，每次 3粒。

实施例 5

昆明山海棠 2000g 菟丝子 1000g

昆明山海棠，切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用 31倍水 80°C温浸 1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢日服用量相当生药量 30g/日。

实施例 6:

昆明山海棠 2000g 枸杞子 1000g 昆明山海棠，切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1 小时；枸杞子粉碎成粗料，用 20倍水 80°C温浸 1小时；药材^水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液；当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕；每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉；提取物药粉加入药用淀粉，混匀，装 1000粒胶嚢。用本发明方法制得的胶嚢曰服用量相当生药量 30g/曰。

Claims

权利要求

1. 一种抗风湿药物，其特征在于该药物由下述原料药制成：

昆明山海棠淫羊藿枸杞子菟丝子

其中原料药可以是由昆明山海棠与其余三种药物中的任何一种或两种或三种共同組成。
2. 如权利要求 1所述的药物，其特征在于该药物由下述份量的原料药制成：

昆明山海棠 1 ~ 4重量份淫羊藿 1 ~ 4重量份

枸杞子 1 ~ 4重量份菟丝子 1 ~ 4重量份
3. 如权利要求 1所述的药物，其特征在于该药物由下述份量的原料药制成：

昆明山海棠 2重量份淫羊藿 2重量份

枸杞子 1重量份菟丝子 1 重量份
4. 如权利要求 1所述的药物，其特征在于还可以由上述原料药当中的有效成分制备而成，其中淫羊藿可以由淫羊藿甙，淫羊藿次甙 I，淫羊藿次甙 Π和淫羊藿糖甙 A 中的一种或一种以上代替，昆明山海棠可以由昆明山海棠当中的萜类，三萜类和生物碱类化合物代替，菟丝子和枸杞子可以由其中所含的黄酮代替。
5. 如权利要求 1、 2或 3所迷的药物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

称取原料药，淫羊藿、昆明山海棠分别切碎；枸杞子、菟丝子原形或粉碎，以上四味，分别或合并用 0 ~ 95 %的乙醇于 10 ~ 98°C提取，连续 1 4次，提取液分别或合并回收乙醇后浓缩，干燥，粉碎，混匀或按比例混匀，制成临床可接受的剂型；

或者称取原料药：淫羊藿、昆明山海棠切碎，分别加水煎煮三次，枸杞子或菟丝子分别用 80°C ~ 95°C水温浸 1 ~ 3次，每味中药的三次煎煮液或温浸液分别合并后，各合并液分别上各自对应的大孔吸附树脂柱。吸附完毕，用水冲洗树脂柱至流出液澄清，然后用 30 ~ 99. 5%乙醇洗脱，至流出液颜色变深时开始收集洗脱液，直至洗脱液颜色由深变为很浅时，用水压出柱上乙醇液，并与洗脱液合并，总洗脱液用量约为药材重量的 1 8 倍;每味中药的洗脱液分别回收、浓缩至比重 1. 10, 分別或合并喷雾干燥得各药材提取物。将各药材提取物按比例混匀，制成临床可接受的剂型。
6. 如权利要求 1、 2或 3所述药物的制备方法，其特征在于用该方法可制成包括硬胶嚢、软胶嚢、片剂、颗粒剂、针剂在内的任何临床可接受的剂型。
7. 如权利要求 1、 2或 3所述药物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步驟：

昆明山海棠，切成碎块，分别加 13、 10、 10倍水提取三次，每次 1 小时；淫羊藿，切段，分别加 15、 10、 10倍水提取三次，每次 1小时；枸杞子粉碎成粗料，用 20倍水 80 'C ~ 95°C温浸 1小时；菟丝子粉碎成粗粉，用 31倍水 90°C温浸 1小时；四味药材的水煎煮液或水浸液分别滤过，分别通过 WLD或 D_1Q1或其它型号大孔吸附树脂柱，然后用 70%乙醇洗脱，当流出液颜色明显变深时开始收集洗脱液。当洗脱液颜色变得极浅时洗脱完毕;每味药材的洗脱液分别回收乙醇、浓缩、干燥，最后得到提取物药粉;将提取物药粉按比例混匀，制成临床可接受的剂型。
8. 如权利要求 1、 2或 3所述药物在制备抗风湿性关节炎和类风湿性关节炎的药物中的应用。
9. 如权利要求 1、 2或 3所述药物在制备治疗***性红斑狼疮的药物中的应用。
10. 如权利要求 1、 2或 3所述药物在制备治疗慢性肾炎、克隆氏病、麻风反应等自身免疫病的药物中的应用。
本发明公开了一种抗风湿药物及其制备方法，该药物以昆明山海裳、淫羊藿、枸杞子、菟丝子为原料制成，本发明药物具有疗效突出、毒副反应轻和 J3良用方便的特点。