CN103479963A - 一种治疗类风湿关节炎的中药胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗类风湿关节炎的中药胶囊及其制备方法，它是由中药烫狗脊、乌梢蛇、千年健、黑骨藤、青风藤、三七、姜黄、白芍、甘草、微晶纤维素制备而成，本发明中药胶囊疗效确切，安全可靠，服用方便，释药迅速，价格经济实惠，携带方便，为患者提供了更多的用药选择。

Description

一种治疗类风湿关节炎的中药胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，特别是涉及一种治疗类风湿关节炎的中药胶囊及其制备方法。 

背景技术

类风湿关节炎是临床最常见的风湿免疫病之一，其发病充和致残率高，起病1年内致残率高达20%，10年内可达到60%，是世界上导致残疾的主要疾病之一，有“不死癌症”之称。我国RA年发病率约为0.32-0.36%，发病高峰年龄为45-55岁左右，其患病率随年龄的增加而增加。据估计，我国有成年RA患者约400-500万，其中老年RA约占120万，而在我国l3亿多人口中，每年新增加的RA患者可达40万。国外资料显示，因医疗费用和关节致残丧失劳动给社会造成的经济负担，影响到全球0.5%-1%的人口。由于其发病机制的不确定性，目前治疗主要以减轻关节疼痛、控制病情进展为主要目的，常用药物如非甾体类抗炎药、糖皮质激素、免疫抑制剂等，因这些药物的毒副作用大，致使很多患者难以坚持用药，近年国外引进的生物制剂如肿瘤坏死因子拮抗剂等虽然显示了较好疗效，但由于上市时间短，缺乏长期不良反应监测，加上价格昂贵，大部分患者难以承担，使临床应用受到限制。而运用中药制剂治疗该症的有效药物还不多见，怎样使祖国博大的中药能运用到该疾病的治疗领域，成为中医工作者的一项迫切任务。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种疗效确切，安全可靠，服用方便，释药迅速，携带方便，价格经济实惠的治疗类风湿关节炎的中药胶囊及其制备方法，为患者提供了更多的用药选择。 

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案： 

按照重量份计算，本发明治疗类风湿关节炎的中药胶囊是由中药原料烫狗脊 200～400g  乌梢蛇 100～300g  千年健 200～400g  黑骨藤 150～350g  青风藤 500～700g  三  七40～100g  姜  黄 300～500g  白  芍 500～700 g  甘  草 80～160g  微晶纤维素60～110g 制备而成。

优选的，上述中药胶囊是由烫狗脊 312.5g  乌梢蛇 208.3g  千年健 312.5g  

黑骨藤 187.5g  青风藤 625.0g  三  七62.5g  姜  黄 416.7g  白  芍 625.0g  甘  草 125.0g  微晶纤维素85g制备而成。

本发明还提供了前述中药胶囊的优选制备方法：三七打成细粉备用，其余8味药第一次加9.3倍量的水浸泡1小时后煎煮0.5小时，第二、三次各加8倍量的水煎煮，每次0.5小时，合并3次煎液，滤过，滤液常压浓缩至相对密度为1.35～1.40（60℃）的稠浸膏，置于80℃常压干燥，干膏粉碎过65目筛与三七粉、微晶纤维素混合均匀，装入0#硬胶囊即得。 

本发明商品名称：金乌健骨胶囊 

本发明君药烫狗脊补肝肾、强腰脊、祛风湿，乌梢蛇祛风湿、通经活血；臣药千年健、黑骨藤、青风藤祛风止痛、强筋健骨；佐药三七、姜黄活血止痛；使药白芍、甘草养血和胃，缓急止痛。全方具有补肾健骨、活血通络止痛之功效，使筋骨健、经络通、郁邪散、瘀血化，邪退而正不伤，从补肾、强筋、健骨、活血、养血、祛风、通络、定痛等多角度组方，形散而力专，配合精当。发明人在临床研究中证实金乌健骨方对RA的治疗具有良好疗效，尤其是减轻RA患者临床症状、降低抗风湿药如甲氨喋呤等的毒副作用方面显示了较好的临床疗效，对其进行深入研究，探讨其治疗机制，提高RA的治疗、改善生活质量，具有广阔的临床应用前景。

用法与用量：口服 每次4粒，每天3次。 

实验一：制剂工艺研究

一、    工艺路线的选择依据

（一）处方药物理化性质及药理研究

烫狗脊（蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium barometz ( L. ) J. Sm. 的干燥根茎，除去泥沙，去硬根、叶柄及金黄色绒毛，切厚片，干燥再照中国药典2010年版一部 附录II D烫法，用砂烫至鼓起，放凉后除去残存绒毛）据文献资料，烫狗脊化学成分归纳起来主要有以下几类：挥发油：主要成分是高级脂肪酸，含量最高的是棕榈酸、亚油酸；蕨素类：金毛蕨素、金粉蕨素-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、金粉蕨素-15′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；水溶性酚酸类化合物：原儿茶酸、咖啡酸；芳香族化合物：原儿茶酸、原儿茶醛、(3R)-去-O-甲基茂狄波老素、金毛狗脊苷；黄酮类：山奈素；皂苷类：金毛狗脊皂苷；糖及糖苷类化合物：正丁基-β-D-吡喃果糖苷、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、5-羟甲基糠醛、3-羟基-γ-吡喃酮；还含有氨基酸（天门冬氨酸、谷氨酸和脯氨酸含量较高）；无机元素（以K的含量最高，其次是Mn），以及β-谷甾醇、β-谷甾醇-3-O-(6′-正十六酰氧基)-3-β-D-葡萄糖苷、β-谷甾醇-3-O-(6′-正n酰氧基)-β-D-葡萄糖苷、β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷（胡萝卜苷）、硬脂酸、鞣质、对羟基乙酰苯胺磷脂酰胆碱（PC）等化合物。

烫狗脊味苦、甘，性温。归肝、肾经。具有祛风湿，补肝肾，强腰膝。用于风湿痹痛，腰膝酸软，下肢无力。苗族医药认为“窝有加溜”（狗脊）味苦、甜，性冷，入热经。现代药理研究资料表明，狗脊可能有增加骨激活频率和刺激骨形成的作用，防治骨质疏松。砂烫狗脊中水溶性成分，能显著抑制血小板聚集。狗脊及其炮制品和狗脊毛具有镇痛作用和不同程度的活血作用。狗脊能够改善佐剂性关节炎大鼠及肾阳虚佐剂性关节炎大鼠血液流变性，通过活血化瘀起到一定的治疗作用，砂烫炮制后作用增强。水溶性芬酸类成分原儿茶酸和咖啡酸，具有抗炎、抗风湿的药理活性。金粉蕨素具有保肝作用，还可清除过氧化物和自由基。体外试验表明，狗脊具有一定抑菌作用，对流感病毒、肺炎双球菌有抑制作用。 

乌梢蛇（游蛇科动物乌梢蛇 Zaocys dhumnades (Cantor)的干燥体）据文献资料，乌梢蛇化学成分主要为氨基酸类：主要含天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、精氨酸、γ-氨基丁酸等；及无机元素、蛋白质、脂肪、果糖-1,6-二磷酸酯酶、蛇肌缩醛酶和胶原蛋白等。从乌梢蛇的甲醇提取物中分离得到，brachystemidines A、邻苯二甲酸丁酯异丁酯、二氢阿魏酸、β-谷甾醇、胸腺嘧啶、4-羟基苯甲醛。 

乌梢蛇味甘，性平。归肝经。具有祛风，通络，止痉的作用。用于风湿顽痹，麻木拘挛，中风口眼斜，半身不遂，抽搐痉挛，破伤风，麻风，疥癣。苗族医药认为“能格冒”（乌梢蛇）味咸，性微热。入慢经、半边经。现代药理研究表明，乌梢蛇具有镇静、抗惊、镇痛、抗炎作用。乌梢蛇II型胶原与牛II型胶原具有相同的免疫调节作用，两者能减低关节炎大鼠外周血TNF-a水平、抗II型胶原抗体滴度和CD₄+/CD₈+比值，提高IL-10水平的作用，推测乌梢蛇II型胶原可能是乌梢蛇治疗RA的活性药理成分。乌梢蛇水解液治疗类风湿性关节炎总有效率为64.2%，显效率为16.7%，明显高于安慰剂组的38.3%、6.7%。其最适证型是痰瘀互结型。 

千年健（天南星科植物千年健 Homalomena occulta (Lour. ) Schoot的干燥根茎，春秋二季采挖，洗净，除去外皮，晒干）据文献资料，从千年健氯仿及乙酸乙酯部位分离并鉴定出7个化合物，β-谷甾醇，β-胡萝卜苷；另外5个为倍半萜类化合物，分别为倍半萜(1)oplodiol，(2)oplopanone，(3)homalomenol C，(4)bullatantriol和(5)1β,4β,7α-trihy-droxyeudesmane；从石油醚和正丁醇部位共分离并鉴定了6个化合物，其中包括石油醚部位的三个化合物，分别为：α-羟基二十五碳酸，棕榈酸及十五碳酸和正丁醇部位的三个化合物，它们分别为：葡萄糖，D-半乳糖醇及赤鲜醇；挥发性成分是：γ-松油烯、芳樟醇、松油醇-4、乙酸芳樟醇酯、γ-依兰油烯、β-石竹烯、α-律草烯、α-蛇床烯、(-)-α-依兰油烯、α-紫惠槐烯、δ-杜松烯、α-雪松醇、叔杜松醇、叔依兰油醇、(Z)-6,10-二甲基-5,9-癸二烯-2-酮、2-氨基-3-羟基苯甲酸等。 

千年健味苦、辛，性温。归肝、肾经。具有祛风湿，壮筋骨的作用。用于风寒湿痹，腰膝冷痛，拘挛麻木，筋骨痿软。现代药理研究资料表明千年健具有以下药理作用：(1)抗菌、抗病毒：滤纸片平板法实验显示千年健挥发油可完全抑制布氏杆菌的生长；千年健水提取物体外还能抑制I型单纯性疱疹病毒（HSV-1）；(2)抗炎、镇痛：千年健甲醇提取物可明显抑制角叉菜胶引起的大鼠足趾肿胀，也可有效抑制醋酸引起的小鼠扭体反应；(3)抗组胺：豚鼠离体气管法显示千年健醇提取物能拮抗组胺引起的豚鼠气管平滑肌收缩；(4)抗凝血：千年健水提取物有较强的抗凝血作用；(5)其他：千年健还具有抑制钙通道阻滞剂受体和血管紧张素II受体的活性。 

黑骨藤（萝藦科植物黑龙骨Periploca forrestii Schltr.的干燥根）据文献资料研究，黑骨藤所含化合物主要有以下几类：根茎含强心甾内酯成分滇杠柳昔元A和滇杠柳苷，胡萝卜苷，熊果酸，8-羟基杠柳苷元、杠柳苷元、杠柳苷、北五加皮苷；二萜醌类化合物：丹参酮II_A；苷类化合物，分别为：大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷，山柰酚-3-O-α-L-吡喃***糖苷，槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，槲皮素-3-O-α-L-吡喃***糖苷。通过水蒸汽蒸馏法提取黔产黑骨藤全株挥发油，利用GC-MS联用技术并结合标准谱库的检索，从得到的44个化合物中鉴定了27种成分，检出成分占挥发油成分的93. 2%。其中棕榈酸含量最高，占挥发油总量的45. 6%。明确了黔产黑骨藤挥发油成分及其含量，为提高其综合开发利用提供实验依据。 

黑骨藤味苦、辛，性凉；有小毒。苗族医药认为“蛙莽塞”（黑骨藤）味辛、苦、性热；有小毒。入冷经。具有舒筋活血，祛风除湿的作用。主治风湿痹痛，闭经，乳痈，跌扑损伤，骨折，口腔炎，胃痛，消化不良，疟疾。现代药理学研究资料表明：α₂香树脂醇和β-香树脂醇乙酸酯对关节炎有明显的对抗作用；α-香树脂醇乙酸酯和β-香树脂醇乙酸酯可抑制棉球肉芽肿，其作用类似于氢化可的松；β-香树脂醇乙酸酯可使肝匀浆ATP磷酸水解酶明显升高，这与黑骨藤的抗炎作用相吻合。熊果酸在体外对革兰阳性菌、阴性菌、酵母菌有抑制活性,可明显降低大鼠的正常体温，并有安定作用（抗菌作用）。大黄素具有较强的抗肿瘤活性和诱导细胞凋亡的作用，大黄素通过激活p₅₃、p₂₁的表达，在体外能有效抑制肝癌细胞HepG₂的增殖并诱导其凋亡，其半数抑制浓度130 μmol/L。大黄素还能诱导肺癌细胞株H₄₆₀、CL₅发生凋亡。β-胡萝卜苷是一种抗肿瘤药物，具有抗真菌活性。因此这些化合物的发现在一定程度上阐明了黑骨藤药用价值的化学物质基础。黑骨藤新鲜茎皮中提出总苷，经过在位蛙心及兔心，兔心电图及离体豚鼠心试验，证明有强心作用，其强心作用特点类似毒毛旋花子苷G，鸽平均致死量为5.9±1.0 mg/Kg。采用小鼠扭体法和热板法，黑骨藤有明显镇痛作用。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀度实验，黑骨藤各提取部位均能使小鼠耳肿胀度不同程度降低；通过醋酸致小鼠毛细血管通透性实验，黑骨藤有抑制毛细血管通透性增加的作用。HGT-5A 100～500 mg·Kg^-1灌胃给药对巴豆油诱发的小鼠急性耳肿胀具有明显抑制作用，100～500 mg·Kg^-1灌胃给药对DNCB诱导的DTH反应具有明显抑制作用，并且对DTH模型小鼠脾细胞增殖反应均具有明显抑制作用。黑骨藤具有良好的抗RA作用，其作用机制可能与调节免疫器官功能及促炎细胞因子IL-1β，IL-6，TNF-α的含量水平有关。 

   青风藤（防己科植物青藤Sinomenium acutum (Thunb. )Rehd. et Wils. 和毛青藤S. acutum (Thunb. )Rehd. et Wils. var. cinereum Rehd. et Wils. 的干燥藤茎。秋末冬初采割，扎把或切长段，晒干）据文献资料青风藤的藤茎主要含生物碱类成分：青藤碱、青风藤碱、青藤防己碱、N-去甲基青藤防己碱、N-氧化青藤碱、N-去甲基青藤碱、降尖青风藤碱、双青藤碱、四氢表小檗碱、土藤碱、木兰花碱、异青藤碱、白兰花碱、光千金藤碱、8,14-二氢萨鲁塔里定碱、青风藤定碱、千金藤宁碱、蝙蝠葛宁碱、N-去甲基-N-甲酰基去氢荷叶碱、鹅掌楸碱、蝙蝠葛任碱、樟叶木防己碱、去氢离木亭、表小檗碱、巴马亭、acutupyrrocoline。其中青藤碱为主要的活性成分，藤茎越粗，青藤碱的含量越高。 

青风藤味苦、辛，性平。归肝、脾经。现代药理研究资料表明，青风藤具有以下药理作用：(1)抗炎：青藤碱体外能明显降低酵母多糖或钙离子载体诱导的小鼠腹膜巨噬细胞合成***素E₂（PGE₂）和白三烯C₄（LTC₄）；对大鼠抗原诱导的急性关节炎（AIA）模型，短期或中期腹腔注射青藤碱可减轻关节肿胀，减慢红细胞沉降速率（ESR）；以体外小鼠脾细胞核人外周血单个核细胞观察青藤碱对淋巴细胞作用，发现青藤碱抑制淋巴细胞的增殖具有可逆性，并能增加白介素6（IL-6）的产生，抑制白介素2（IL-2）膜受体表达；青藤碱体外能通过下调人外周血单个核细胞IL-1β、IL-8 mRNA表达而产生抗风湿性关节炎作用；对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠，青藤碱灌胃可通过抑制骨膜细胞恶性增殖及IL-6 mRNA的表达来阻断骨膜炎的进程。进一步抗炎作用机理研究发现青藤碱可能通过下调单核/巨噬细胞***炎症介质和细胞因子合成发挥抗炎作用，并呈剂量依赖性地显著降低T细胞内细胞因子TNF-γ、TNF-α分子表达，也可能与其抑制细胞核转录因子NFkBp₆₅核移位及其抑制因子IkB-α的降解和抑制细胞核因子NF-kB活性有关。此外，体外酶反应实验体系和脂多糖诱导的神经细胞增殖实验还发现，青藤碱对环氧化酶-2（COX-2）所致PGE₂合成表现出现较强的抑制作用；深入研究表明，青藤碱对COX-2活性具有一定的选择性抑制作用，并可能主要通过对COX酶活性的直接作用来实现。(2)免疫抑制：观察青藤碱对ACI-Lewis小鼠心脏移植后产生的异源移植排斥反应作用，发现腹腔注射青藤碱能盐城移植的存活时间。青藤碱体外实验表明能减少活性T淋巴细胞中胸苷的结合、IL-2的合成和细胞循环周期；其作用机理可能是抑制Th1细胞产生IL-2，抑制T细胞亚群，也可能通过抑制外周血CD4细胞增殖，下调TNF-α、γ干扰素（IFN-γ）的表达水平而产生对同种异体移植的免疫抑制作用；此外，以实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠尾模型发现，青藤碱的免疫抑制作用与抑制脑组织NF-kB活性有关，而这种抑制作用可能与增加皮质醇分泌、抑制泌乳素分泌有关。(3)对心脑血管***的影响：①降血压，青藤碱对内皮素刺激的离体家兔平滑肌细胞增殖反应有抑制作用，还可抑制DNA合成，这可能与青藤碱明显而持久的降血压作用有关。②抗心律失常，研究青藤碱对酶分离的豚鼠单个心室肌细胞膜钠离子电流（INa）、L型钙电流（ICa-L）的影响发现，青藤碱对INa和ICa-L具频率依赖性阻滞作用，这可能为其抗心律失常的重要机理；青藤碱对单个心室肌细胞内向整流钾电流（IK-L）及延迟整流钾电流（Ik）也具有浓度依赖性阻滞作用，其延长心肌细胞的复极效用可能与钾通道阻滞有关。③心脏抑制，分别灌注青藤碱及其同分异构体8,14-二氢萨鲁塔里啶碱（DHS）给正常离体大鼠工作心脏，发信啊两者对心脏有直接抑制作用，使心脏的收缩功率降低，且DHS对缺血大鼠心脏的舒张功能具有明显保护作用。④抗血管新生，青藤碱体外和体内均可抑制碱性成纤细胞生长因子（bFGF）导致的血管形成，还可降低血管通透性，抑制粒性白细胞游走，从而起到缓解类风湿性关节炎（RA）的作用；⑤扩张血管，青藤碱体外可抑制Ca²⁺通道和蛋白激酶C（PKC）的活性，增加内皮细胞一氧化氮（NO）和前列环素（PGI₂）的活性，具有舒血管作用。(4)抑制***依赖：以剂量递增法形成***依赖鼠模型，并在注射青藤碱后以纳洛酮进行催促戒断，发现青藤碱腹腔注射能抑制***依赖小鼠催促戒断症状，显著缓解成瘾小鼠和大鼠的体重下降，其机理可能与调节单胺类神经递质紊乱有关；通过离体豚鼠回肠试验还表明青风藤水提物也能抑制***依赖性的戒断症状；青风藤醇提液或青藤碱在体内外也均能有效抑制***依赖性模型纳洛酮催促的戒断反应；此外，连续灌胃还可明显抑制***引起的小鼠位置偏爱的形成，并对小鼠已形成的条件性位置偏爱效应也具有一定的抑制作用。(5)镇痛：青藤碱灌胃或皮下注射对小鼠醋酸所致的扭体反应、电刺激尾部所致的嘶叫反应均有抑制作用。(6)抗焦虑：青藤碱经口给药可增加高架十字迷宫中小鼠对开放臂的访问次数和停留时间，增加明暗模型中小鼠在明箱的停留时间和活动量，增加小鼠在群体接触实验中的群体接触时间，具有明显的抗焦虑作用。 

三七（五加科植物三七Panax notoginseng (Burk. )F. H. Chen的干燥根和根茎。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及根茎，干燥）据文献资料研究，三七的根及根茎含多种三萜皂苷类成分：三七皂苷A、B、C、D、E、G、H、I、J、K、L、M、N、U、R₁、R₂、R₃、R₄、R₆、R₇，人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rd、Re、Rg₁、Rg₂、Rh₁、Rh₄、U，20-O-葡萄糖人参皂苷Rf、达玛-20(22)-烯-3β,12β,25-三醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、绞股蓝苷XVII等；环二肽类成分：环（亮氨酸-苏氨酸）、环（亮氨酸-丝氨酸）、环（异亮氨酸-缬氨酸）等；黄酮类成分：槲皮素等；多糖类成分；三七多糖A。此外，还含三七酸β-槐糖苷、田七氨酸等成分及各种微量元素等。 

三七味甘、微苦，性温。归肝、胃经。具有散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。现代药理研究资料表明，三七具有以下药理作用：(1)止血、抗血栓、促进造血：田七氨酸洛氏溶液腹腔注射能缩短小鼠断尾的出血时间。熟三七粉醇提物口服，对小鼠有温和的促进凝血和促进纤维蛋白溶解的作用。三七皂苷R₁和人参皂苷Rd皮下注射能显著促进或改善正常小鼠及去甲肾上腺素所致耳廓微循环障碍小鼠的微循环，延长血浆复钙时间和凝血时间。三七总皂苷体外能促进人骨髓粒系（CFU-GM）、红系（CFU-E）造血祖细胞的增殖，诱导造血细胞AP-1家族转录因子NF-E2、c-jun、c-fos的增加，与特异性DNA促进子结合活性增高，调控与人造血细胞增殖分化相关的基因表达；(2)对心血管***的影响：三七皂苷体外对心肌细胞电压依赖性钙通道开放和与β受体关联的钙通道开放引起的胞浆Ca²⁺升高有抑制作用；三七总皂苷体外可抑制胎牛血清、高脂血清诱发的人胎血管、兔主动脉、大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖，抑制高脂血清促进[3H]thymidine渗入细胞的过程，减少高脂血清抑制NO释放，阻滞细胞于G₀/G₁期，降低NF-kB活性，从而发挥抗动脉粥样硬化作用。三七总皂苷体外对血管紧张素-II（AngII）诱导的心肌细胞凋亡有显著抑制作用；灌胃可改善急性心肌缺血大鼠心脏功能，静脉注射预处理能抑制肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放，增加bcl-2蛋白表达，同时减少Bax蛋白表达；三七有效成分能增强离体大鼠心肌收缩力，减慢心率，减少过氧化脂质（LPO）产生和乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CPK）释放，减少血管内皮活性因子缩血管物质（TXB2）释放和心肌细胞能量消耗，增加血管内皮扩血管物质（PGF₁）释放，减轻缺血再灌注引起的大鼠心肌细胞损伤；(3)保护大脑和神经***：三七的三醇皂苷腹腔注射可上调HSP₇₀蛋白，下调转铁蛋白表达，降低脑含水量，保护血脑屏障，对大脑中动脉阻塞型大鼠（MCAO）局灶性脑缺血有保护作用，促进MCAO大鼠脑细胞增殖；三七总皂苷静脉注射可扩张脑血管平滑肌，降低脑血管阻力（CVR），腹腔注射可抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血区大脑皮层和尾壳核髓过氧化物酶（MPO）活性、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达、中性粒细胞浸润，减轻脑梗死区炎症反应，抑制基质金属蛋白酶（MMP-9）表达，减轻脑梗死区体积和血脑屏障破坏程度，降低大鼠尾核注射胶原酶诱导脑出血后脑铁离子浓度。三七粗皂苷、人参皂苷Rd可促进培养神经干细胞的星形胶质细胞分化；三七总皂苷腹腔注射可升高T₁₃-L₁节脊髓Allen`s损伤大鼠的前列环素（PGI₂）、降低血小板血栓素A₂（TXA₂），调节血管扩张与收缩之间的关系，增加脊髓血流量，减少丙二醛（MDA）生成和超氧化物歧化酶（SOD）活性降低，减轻灰质区出现坏死，髓鞘分离和线粒体水肿，改善微循环障碍，减轻继发性病理损害；(4)延缓衰老：三七皂苷皮下注射可降低D-半乳糖致大鼠氧化损伤造成的脑海马区白介素1β、白介素6（IL-1β、IL-6）含量增加，减少神经细胞Ca²⁺超载和凋亡，改善衰老大鼠学***下降，静脉注射可拮抗IBA所致痴呆大鼠学***，减轻肝组织脂肪变；三七总皂苷体外能显著抑制大鼠肝星状细胞（HSC）增殖，诱导HSC凋亡，可能是其抗肝纤维化的作用机理之一；(6)抗肝脏缺血再灌注损伤：三七总皂苷特异性阻断培养大鼠肝细胞膜上受体依赖性Ca²⁺通道（ROC），抑制肝细胞的Ca²⁺内流，阻断内源性三磷酸肌醇（IP3）途径，防止Ca²⁺超载；三七总皂苷预处理大鼠供肝，能有效地减轻抑制肝的缺血再灌注损伤，抑制肝细胞凋亡，抑制TNF-α，caspase-3的表达，抑制氧自由基生成，上调调控基因bcl-2蛋白的表达，并可通过抑制钙超载、抗氧自由基损伤、促进能量物质代谢等多种机理减轻大鼠肝脏在低温保存时的损伤；(7)抗肾间质纤维化：三七总皂苷体外可抑制IL-1α诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化，减少细胞外基质分泌，抑制尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞HK-2增殖及总胶原分泌，延缓肾小管-间质纤维化过程；(8)免疫调节功能：三七根中提取的木聚糖酶有抑制I型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）逆转录酶的活性；三七皂苷灌胃能明显刺激小鼠脾淋巴细胞增殖、转化、促进迟发性***反应作用，提高小鼠抗体生产细胞数、血清溶血素水平，促进单核-巨噬细胞炭粒廓清作用，提高自然杀伤（NK）细胞活性；三七皂苷皮下给药可显著促进刀豆蛋白A（ConA）、美洲商陆蛋白（PWM）、卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠脾细胞增殖，提高血清中OVA特异性IgG、IgG₁、IgG_2b抗体水平；腹腔注射能显著提高烫伤小鼠腹腔中性粒细胞吞噬功能，降低NO产生，提高淋巴细胞增殖功能；三七总苷可改善弗氏佐剂所致大鼠多发性关节炎，该作用可能与抑制血清炎性细胞因子TNF、IL-1β的分泌有关。此外，三七总苷在治疗过程中对大鼠生长发育无抑制作用。(9)其他：三七提取物也及所含的人参皂苷Rg₁有抗肿瘤活性；三七总皂苷可促进成年大鼠视网膜节细胞再生；叶中所含的皂苷饲喂，可显著降低高血脂家兔的血清胆固醇、三酰甘油含量，提高高密度脂蛋白与胆固醇的比值。此外，三七皂苷还有降血糖、调节机体物质代谢等作用。 

姜黄（本品为姜科植物Curcuma longa L. 的干燥根茎。冬季茎叶枯萎时采挖，洗净，煮或蒸至透心，晒干，出去须根）据文献资料研究，姜黄的根茎化学成分主要有：姜黄素类物质，其母核结构为二苯基庚烃类，有酚性与非酚性之分，还包括脱甲氧基姜黄素和脱二甲氧基姜黄素。二苯基庚烷类成分：姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、letestuianin C、二氢姜黄素、四氢姜黄素；萜类化合物：姜黄挥发油中的主要成分为倍半萜和单萜类化合物，其结构类型主要有：吉马烷型、愈创木烷型、蒈烷型、桉烷型、没药烷型、榄香烷型、苍耳烷型等。倍半萜类成分：姜黄新酮、姜黄酮醇A,B、大牻牛儿酮-13-醛、莪术双环烯酮、α-姜黄酮、甜没药姜黄醇、甜没药姜黄酮、莪术醇、原莪术醇、异原莪术醇、表原莪术醇、去氧莪术二酮、(+)-吉玛酮-4,5-环氧化物、莪术薁酮二醇；生物碱类：已分离出喹啉类生物碱2-(2'-methyl-1'-propenyl)-4,6-dimethyl-7-hydroxyquinoline；多糖类成分：姜黄多糖A、B、C、D及微量元素。 

    姜黄味辛、苦，性温。归脾、肝经。具有破血行气，通经止痛。用于胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经闭经，症瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛。苗族医药认为“窝哈”（姜黄）味麻、辣、微苦，性热。入冷经。现代药理学研究资料表明：姜黄具有以下药理作用：(1)抗炎、镇痛：姜黄挥发油及姜黄各种提取物灌胃能减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，对蛋清所致大鼠足趾肿胀有明显抑制作用；在蛙皮素和乙醇结合低剂量胆囊收缩素造成的两种大鼠胰腺炎模型中，姜黄素能明显改善血清淀粉酶、胰蛋白酶和嗜中性粒细胞浸润等指标；姜黄素体内和体外均可通过阻断T淋巴细胞中Janus激酶-STAT（JAK-STAT）通路上的白介素12（IL-12）信号传导，抑制实验性变应性脑脊髓炎小鼠的炎症反应；姜黄素给慢性结肠炎小鼠口服，能增加髓过氧化物酶（MPO）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的活性；(2)抑制血小板聚集：姜黄根茎甲醇提取物的环己烷部位体外能抑制胶原蛋白和花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集，芳姜黄酮为主要活性成分；(3)抗肿瘤：姜黄素可抑制人肝癌细胞的生长；还能通过调节细胞免疫功能，防止小鼠肠粘膜腺癌的形成；(4)抗菌：体外实验表明，姜黄挥发油对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白喉杆菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等细菌及黑曲霉素等真菌有不同程度的抑制作用；姜黄的甲醇提取物对产气荚膜梭状芽孢杆菌、大肠杆菌有强烈的抑制作用；姜黄根茎的醋酸乙酯、甲醇和水提取物均能抑制耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌，醋酸乙酯提取物还能有效地抑制耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌入侵人类粘膜成纤维细胞。姜黄素是抑菌活性成分之一；(5)姜黄粉末体外能提高大鼠肝细胞膜的抗氧化作用，消除对-乙酰氨基酚对肝细胞的促氧化作用；口服给药能降低CCl₄引起的大鼠肝细胞损伤，还能降低腹腔注射氯化锅镉所致肝损伤小鼠的氧化应激和血清转氨酶升高。姜黄根乙醇提取物能抑制乙酰氨基酚所致肝损伤大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）升高；口服给药能抑制曼森氏裂体吸虫感染造成的小鼠肝功能异常，还能降低丙酮酸激酶的水平。姜黄素灌胃给药对CCl₄、D-半乳糖胺及卡介苗加脂多糖诱导小鼠的肝损伤均有保护作用；体外能抑制小鼠肝星状细胞-T6I型胶原的表达和细胞外信号调节激酶的磷酸化，从而抑制肝星状细胞的增生；(6)保肾：姜黄素体内给药可上调线粒体基质内抗氧化酶的表达，对大鼠输尿管梗阻或缺血再灌注引起的肾损伤有保护作用；(7)抗氧化：腹腔注射姜黄素可抑制缺血再灌注大鼠脑组织丙二醛（MDA）和亚硝酸盐的产生，提高超氧化物歧化酶（SOD）活性；(8)抗纤维化：口服姜黄素可明显抑制博来霉素所致大鼠肺纤维化，减少大鼠肝脏胶原沉积和星形细胞DNA合成。在琼脂糖凝胶中，姜黄的提取物对DNA的氧化损伤有保护作用；(9)缓解心理压力：口服姜黄乙醇提取物能降低小鼠强迫性游泳产生的压力，包括降低血清素、5-羟基吲哚乙酸、去甲肾上腺素、多巴胺等水平。长期轻微受压的大鼠口服姜黄乙醇提取物，能增加血清的白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α），减低脾细胞的自然杀伤细胞（NKC）的活性，达到减压的作用；(10)降血糖：四氢姜黄素口服能降低2型糖尿病小鼠的血糖和血浆糖蛋白。姜黄根乙醇提取物中的类姜黄色素和己烷提取物中的倍半萜类成分口服能抑制2型糖尿病小鼠KK-A(y)的血糖上升。姜黄素给链脲霉素所致糖尿病肾病大鼠口服，可提高氧化应激，产生肾保护作用；(11)对心血管***的影响：口服姜黄粉能降低心肌局部缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞脱噬作用，减少由缺血再灌注引起的心肌梗塞，恢复心肌的抗氧化状态和改变的血液动力学参数，明显降低脂质过氧化反应；(12)其他：姜黄还具有调节免疫、抗胃溃疡、抗生育等作用；姜黄素还具有抗皮肤氧化损伤、杀利什曼原虫等作用。 

白芍（毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干）据文献资料，白芍根含单萜苷类成分：芍药苷、苯甲酰芍药苷、没食子酰芍药苷、羟基芍药苷、白芍苷_R1、氧化芍药苷、芍药苷元酮、(Z)-(1S, 5R)-β-pinen-10-yl- 

β-vicianoside、paeonilactones A、B、C，6-O-β-D-glucnoxqanosyl-lactinolide；三萜类成分：11α, 12α-epoxy-3β, 23-dihydroxyolean-28, 13β-olide、3β-hydroxy-11-

oxo-olean-12-en-28-oic acid、3β, 23-dihydroxy-olean-11, 13(18)-dien-28-oic acid、11α, 12α-epoxy-3β, 23-dihydroxy-30-norolean-20(29)-en-28, 13β-olide；还含可水解鞣质：1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖、儿茶精[(+)-catechin]、1,2,3,4-tetragalloyl

-6-digalloyl-β-D-glucose等；挥发油主要含苯甲酸、丹皮酚等。

白芍味苦、酸，性微寒。归肝、脾经。具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳。用于血虚萎黄，***，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。现代药理研究资料表明，白芍具有以下药理作用：(1)解痉：白芍水提液对兔肠管平滑肌运动有明显抑制作用。对隔日禁食喂养所致的胃电节律失常大鼠，白芍煎剂能通过使氮能神经减少和胆碱能神经增多令其胃电节律恢复正常。白芍水提液对缩宫素所致离体小鼠子宫的收缩频率有明显的抑制作用；(2)镇痛：用小鼠热板法、扭体法证实白芍总苷有镇痛作用，可明显延长小鼠嘶叫潜伏期，抑制扭体反应；其镇痛作用不被纳洛酮翻转；(3)免疫调节功能：用白芍水煎剂给小鼠饲喂，小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数均较对照组有明显提高。白芍总苷对大鼠腹腔巨噬细胞产生白三烯B₄的抑制作用与同剂量的非甾体抗炎药氟灭酸相当，并呈剂量相关性，提示白芍总苷的抗炎和免疫调节作用可能与其影响的白三烯B₄的产生有关。白芍总苷、芍药苷和白芍总苷去除芍药苷均对佐剂性关节炎大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应有增强作用，防止腹腔巨噬细胞产生过量的白介素1（IL-1）；(4)保肝：白芍总苷对D-氨基半乳糖（D-Gal-N）、卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）、四氯化铁和白蛋白所致小鼠各种肝损伤和肝纤维化模型均有保护作用，能明显降低血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平，减轻肝脏的病理损害和纤维化程度；(5)抗菌：白芍对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、草绿色链球菌、肺炎球菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌均有不同程度的抑制作用；(6)对心脑血管***的影响：白芍总苷对二磷酸腺苷（ADP）诱导的大鼠血小板凝集有抑制作用；能明显改善垂体后叶素引起的家兔缺血性心肌的功能，延长窒息性缺氧小鼠心电消失的时间；还可延长小鼠断颅后的喘息时间，改善大鼠的脑电活动，降低脑钙、钠和水含量，对脑梗塞有保护作用，作用机理可能与抗自由基和减少细胞凋亡有关；(7)其他：白芍还有抗肿瘤、降血脂、抗衰老、抗应激和促进学习记忆等作用。 

甘草（豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根和根茎）据文献资料，甘草根及根茎主含以五环三萜为苷元的三萜皂苷，主要含甘草甜素，是甘草酸的钾、钙盐，为甘草的甜味成分；甘草酸水解后生成甘草次酸，又名18β-甘草酸；其他的三萜皂苷有：乌拉尔甘草皂苷A、B，甘乌内酯、乌拉内酯、甘草皂苷A₃、B₂、C₂、D₃、E₂、F₃、G₂、H₂、J₂、K₂；黄酮类化合物有：甘草苷元、甘草苷、异甘草苷元、异甘草苷、新甘草苷、新异甘草苷、甘草西定、甘草利酮、芒柄花素、异芒柄花苷、异甘草素葡萄糖洋芫荽糖苷、5-O-甲基甘草西定、甘草素-4`-芹糖基（1→2）葡萄糖苷、甘草素-7,4`-二葡萄糖苷。 

甘草味甘，性平。归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓解止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。现代药理研究资料表明，甘草具有以下药理作用：(1)肾上腺皮质激素样作用：甘草及其制剂中的甘草酸及甘草次酸可抑制肾脏11-β羟甾脱氢酶（11-OHSD）活性，使肾脏局部皮质醇或皮质酮水平增多而超过局部醛固酮水平继而作用于醛固酮受体而产生盐皮质激素样作用。此外还有糖皮质激素样作用；(2)对消化***的影响：甘草酸铋钾灌胃对醋酸、水浸应激及幽门结扎引起的大鼠胃溃疡均有良好的抑制作用，还可抑制胃酸分泌，降低胃蛋白酶的活性。甘草水煎液灌胃对大鼠胃动力有抑制作用，与其引起5-羟色胺（5-HT）、P-物质（SP）和血管活性肠肽（VIP）分泌失调有关；(3)抗炎：甘草水煎液皮下注射对巴豆油诱发的小鼠耳廓肿胀、醋酸诱发的急性渗出炎症以及慢性肉芽组织增生的炎症均有明显的抑制作用。噶哪哦算可能由于增强垂体-肾上腺轴功能，从而使肾上腺激素分泌增加而产生抗炎作用；甘草次酸的作用和抑制炎症组织中***素E₂（PGE₂）的生成、拮抗炎症介质组胺、5-羟色胺等有关；(4)抗菌、抗病毒：体外实验表明，甘草水煎液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌、乙型链球菌、铜绿假单胞菌等；甘草黄酮对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、肺炎杆菌等；甘草次酸钠对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、变异链球菌等均有显著的抑制作用。甘草甜素对I型单纯性疱疹病毒（HSV-1）、严重急性呼吸器官综合征（SARS）病毒、巨细胞病毒以及人类免疫缺陷病毒（HIV）具有显著的抑制作用；甘草黄酮对HIV病毒增殖的抑制作用是甘草甜素的25倍；甘草水煎液对呼吸道合胞病毒也抑制作用；(5)对心血管***的影响：甘草甜素能使大鼠动脉壁溶媒体磷脂酶A₂活性明显下降，还可抑制机体及血管壁的炎症反应，防止动脉硬化的发生及发展。18β-甘草此酸钠腹腔注射能抗氯仿诱发的小鼠室颤、氯仿-肾上腺素所致兔室性心律失常，延长氯化钙所致大鼠室性心律失常出现时间，减慢大鼠和兔心律，部分对抗异丙肾上腺素的心率加速作用。此外，甘草水提液、甘草总黄酮以及异甘草素等也具有抗心律失常作用；(6)镇咳祛痰：甘草黄酮、甘草次酸及甘草浸膏灌胃对小鼠氨水引咳、二氧化硫引咳均有显著的镇咳作用，其中作用最强的是甘草次酸。甘草黄酮类化合物的镇咳与中枢和外周作用均有关。此外，还能促进咽喉及支气管的分析，呈现镇咳祛痰的效果；(7)解毒：甘草及其制剂对某些药物中毒、食物中毒、体内代谢产物中毒都有一定的解毒作用。解毒的机制与甘草酸同毒物结合转化为低度或无毒物质、甘草甜素吸附毒物及肾上腺素作用、以及其水解后生成的甘草次酸和葡萄糖醛酸的保肝功能有关；(8)抗肿瘤：甘草甜素、甘草酸、甘草次酸等都有不同程度的抗肿瘤作用，其机制与诱导肿瘤细胞凋亡、抗氧化、抗促癌、抗致突变以及免疫调节作用有关；(9)其他：甘草还具有抗氧化、抗过敏、提高内耳听觉功能、抗脑缺血等作用。 

 （二）基本工艺路线的确定 

本方为中药复方，以硬胶囊剂应用于临床。根据传统用药习惯，采用水煎煮提取浓缩的方法制备胶囊剂，由于所得水提液浸膏干燥打粉后吸湿性强，不易长期保存，通过成型工艺筛选，加入微晶纤维素作为辅料可提高粉体流动性，并降低浸膏吸湿性。该制剂基本工艺路线为：以上以上九味药材（三七打粉除外）加水煎煮提取→水提液浓缩，干燥得浸膏粉→加入三七粉和适量辅料，混合均匀→填充胶囊→抛光→装瓶，成品。

  二、药材前处理工艺研究

烫狗脊、乌梢蛇、千年健、姜黄、白芍、青风藤、甘草、三七为《中国药典》2010版一部收载品；黑骨藤为《贵州省中药材、民族药质量标准（2003年版）》，处方中药材均由贵阳中医学院第二附属医院韩云霞副主任药师鉴定。 

烫狗脊  本品为蚌壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium barometz ( L. ) J. Sm. 的干燥根茎，除去泥沙，去硬根、叶柄及金黄色绒毛，切厚片，干燥再照中国药典2010年版一部 附录II D烫法，用砂烫至鼓起，放凉后除去残存绒毛。 

乌梢蛇  本品为游蛇科动物乌梢蛇 Zaocys dhumnades (Cantor) 的干燥体。 

千年健  本品为天南星科植物千年健 Homalomena occulta (Lour. ) Schoot的干燥根茎，春秋二季采挖，洗净，除去外皮，晒干。 

黑骨藤  本品为萝藦科植物黑龙骨Periploca forrestii Schltr.的干燥根。 

青风藤  本品为防己科植物青藤Sinomenium acutum (Thunb. )Rehd. et Wils. 和毛青藤S. acutum (Thunb. )Rehd. et Wils. var. cinereum Rehd. et Wils. 的干燥藤茎。秋末冬初采割，扎把或切长段，晒干。 

三  七  本品为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk. )F. H. Chen的干燥根和根茎。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及根茎，干燥。 

姜  黄  本品为姜科植物 Curcuma longa L. 的干燥根茎。冬季茎叶枯萎时采挖，洗净，煮或蒸至透心，晒干，出去须根。 

白  芍  本品为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根。夏、秋二季采挖，洗净，除去头尾和细根，置沸水中煮后除去外皮或去皮后再煮，晒干。 

甘  草  本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G. in-

flata Bat.或光果甘草G. glabra L. 的干燥根和根茎。

三、工艺条件的筛选

    （一）提取工艺研究

1 药材吸水率的测定

称取1/5处方量药材（三七粉除外）共计27g，加10倍量水浸泡，浸泡不同时间，滤过，称湿药重量（至药材重量不再增加为止)，测定药材吸水率，公式如下（结果见表1-1）。

mb—药材吸水饱和状态下的质量（g）    

mg—药材在干燥状态下的质量（g）

                                                   

由表1-1可知，药材吸水率为128.15%，为方便操作，以吸水率为130%计算，即药材吸水量为药材重的1.3倍。因此首次水提时应该多加1.3倍量的水。 

2 煎煮工艺的正交因素 

在满足药材吸水率的条件下，浸泡1h，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三个影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，用L₉(3⁴)正交表安排试验（表2-1）。水煮工艺采用正交试验进行筛选（表2-2），以总固体物收率为考察指标，对提取工艺进行探讨。正交结果方差分析及因素水平分析见表2-3，表2-4。

2.1 试验方法和结果 

2.1.1 样品制备  

称取1/5处方量药材（三七粉除外）27g，按正交试验表进行试验(表2-2)（第一次浸泡1h），药液滤过，浓缩定容至100ml。备用。

2.1.2 总固体物收率测定  

从上述滤液中各精密取两份10ml，至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，照干燥失重测定法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ G）测定，计算总固体物收率，公式如下。  

W为10ml滤液中固体物的重量，V为定容体积，Wt为样品投料重量。

 2.2 结果分析 

以总固体物收率为指标，从表2-3、表2-4分析可得：因素B有统计学意义，为主要因素，因素A、C无显著性影响，为次要因素。参考B因素水平的均数估计值，该试验指标总固体物得率高越好，因此选择B因素水平3；对于次要因素A、B，根据节约成本及生产需要选择A水平1，C水平1，则该处方提取最佳工艺条件为：A₁B₃C₁，即药材浸泡1 h，8倍量水煎煮3次（第一次多加1.3倍量水），每次0.5小时。

2.3 三批样品的工艺验证实验 

取烫狗脊、乌梢蛇、千年健、黑骨藤等药材，按最佳提取工艺条件A₁B₃C₁提取，测定总固体物收率，结果表明（见表2-5）：总固体物收率平均值为14.43%，RSD=1.37%，说明工艺稳定可行。

3 浓缩与干燥 

3.1 浸膏相对密度对浸膏干燥时间的影响 

取烫狗脊、乌梢蛇、千年健、黑骨藤等药材（三七除外）1/5处方量27 g，按最佳提取工艺条件A₁B₃C₁提取（第一次浸泡1 h），合并煎液，煎液静置于室温过夜，滤过，浓缩定容至100ml。备用。精密量取等量提取液，浓缩（传统工艺浓缩）至不同相对密度，于80℃常压干燥，观察干燥时间长短。结果见表3-1。

试验结果表明：浸膏浓缩至相对密度为1.35-1.40时，干燥所用时间最短，且也易于操作，故选择将浸膏浓缩至相对密度为1.35-1.40。 

3.2干燥温度对浸膏干燥时间的影响 

取烫狗脊、乌梢蛇、千年健、黑骨藤等药材（三七除外）1/5处方量27 g，按最佳提取工艺条件A₁B₃C₁提取（第一次浸泡1 h），合并煎液，煎液静置于室温过夜，滤过，浓缩定容至100ml。备用。精密量取等量提取液，浓缩至相对密度为1.35-1.40，以不同温度、不同干燥方式（常压干燥、减压干燥）干燥至恒重，观察干燥时间。见表3-2。

由表4-2可知，80℃减压干燥（0.06 MPa）耗时少，浸膏易于粉碎；常压80℃干燥耗时较80℃减压干燥耗时略长。干燥温度为90℃时，因其温度过高有可能引起其有效成分的改变，故不采纳。综合考虑，选用80℃常压干燥浸膏。 

（二）制剂成型工艺研究 

4 浸膏粉的制备

取处方量的药材，按照金乌健骨胶囊提取工艺研究优选的工艺进行提取、浓缩、减压干燥处理得干浸膏。干浸膏粉碎，过65目筛，得干膏浸粉，防潮备用。不同批次金乌健骨胶囊中药材（三七除外）出膏率实验数据，见表4。

结果：通过8批次的实验，其平均出膏率为11.50%。 

5 辅料的选择 

5.1 处方日服用量确定

根据原临床处方药材量（三七除外）为135 g，为成人三日服用量，按11.50%的出膏率计算，成人每日服用浸膏总量（含三七）为6.175 g，拟定日服三至四次，每次服用4粒0#硬胶囊，每粒装0.45 g。基本满足原临床处方日服生药量。

5.2 药物原粉的制备 

根据临床处方剂量、本品出膏率及成品日服剂量，计算制剂所用浸膏粉与辅料的比例为3.38:1，按相关文献，课题组选用微晶纤维素、可溶性淀粉为辅料，设计4个不同处方，研究它们与浸膏粉混合后的药粉和全浸膏粉的吸湿情况（设计处方见表5-1）。

5.2 药粉吸湿百分率的测定 

将称量瓶烘至恒重，冷却后准确称重，分别加入上述混匀后的药物细粉，在称量瓶底部匀摊厚度约2 mm，精密称重。另将底部盛有NaCl过饱和溶液的干燥器放入25℃培养箱内恒温24 h，此时，干燥器内的相对湿度约为75%，将称重后的药粉瓶放入干燥器内（称量瓶盖打开），分别于24，48，72，96h称重，按如下公式计算药粉吸湿百分率。

 

处方2药粉吸湿百分率降低最多表明微晶纤维素抗湿性能最优，因此确定它作为该胶囊剂的辅料。

5.3 药物原粉物理特性考察 

按工艺制备1批金乌健骨胶囊原粉，测定临界相对湿度、休比角及堆密度，以考察生产过程，对环境湿度要求，药粉的流动性及胶囊装量。

5.3.1 药物原粉的临界相对湿度测定 

硬胶囊灌装环境湿度对硬胶囊灌装影响很大，有必要测定金乌健骨胶囊原粉的临界相对湿度。在已恒重的称量瓶底部平铺厚度约2 mm的原粉，在P₂O₅干燥器中，放置至恒重，共制备7份样品，分别置于盛有不同浓度硫酸和不同盐过饱和溶液的干燥容器内（称量瓶盖打开），于25℃恒温培养箱，保持7 d后称重，计算原粉吸湿率，见表5-2。 

 

 6 包装

    将填充好的胶囊装入药用高密度聚乙烯包装瓶中密封保存，经初步稳定考察，室温（相对湿度控制在62%）下保存13个月，胶囊仍保持整洁，无粘连，变形，***，破裂等现象。内容物无吸潮、风化、僵硬、结块变味等现象。

7 中试 

按拟订制备工艺条件进行三批放大10倍生产，对生产工艺指标进行全面考核，对药材和成品进行质量评定，考察本品制备工艺的合理性。由表7中数据显示，按所投料理论应生产10000粒成品计，胶囊剂成品实际得率不低于85% 。工艺生产条件符合工厂大生产要求，可操作性较强，成品、药材、半成品质量可控，成品质量稳定。中试生产工艺参数及中试产品质量检验数据，见表7。

表7 中试生产工艺参数及中试产品质量检测数据

实验二：临床药效研究

1   临床资料

1.1 一般资料　 90例RA患者均为我院风湿科门诊和住院病人，按随机数字表进行统一编号，分为两组，治疗组90例和对照组30例。治疗组90例中男18例，女42例，年龄16～70岁，平均51.78±14.67岁；病程最长21年，最短6个月，平均4.83±5.14；关节功能分级参照ACR制定标准^[1]：Ⅰ级22例，Ⅱ级14例，Ⅲ级10例，Ⅳ级14例。对照组30例中男11例，女19例，年龄16～69岁，平均50.71±15.13岁；病程最长19年，最短6个月，平均5.44±3.91；关节功能分级Ⅰ级11例，Ⅱ级8例，Ⅲ级7例，Ⅳ级4例。两组患者年龄、性别、病情、关节功能等临床资料分布无显著差异(P＞0.05)。 

1.2 诊断标准  

西医诊断标准，按美国风湿病协会1987年颁布的RA分类标准^[2]；

晨僵至少1小时，持续至少6周。

3个或3个以上关节肿，持续至少6周。 

腕、掌指关节或近端指间关节肿，持续至少6周。 

对称性关节肿，持续至少6周。 

皮下结节。 

X线的改变。 

类风湿因子阳性，滴定度＞1:32。 

以上7条中具备4条或4条以上即可确诊类风湿关节炎。 

中医证候分型标准  按***《中药新药治疗类风湿关节炎临床研究指导原则》，证属肾气虚寒型^[3]。 

主症：关节冷痛而肿，遇寒痛增，得热痛减，关节屈伸不利，晨僵，关节畸形。 

次症：口淡不渴，恶风寒，阴雨天加重，肢体沉重。 

舌脉：舌质淡，苔白，脉沉细弱。 

1.3 纳入标准  ⑴年龄16-70岁的男性和女性患者；⑵符合RA的分类标准和中医诊断标准，证属肾气虚寒型；⑶未伴有其它影响治疗和检测指标的疾病；⑷愿接受检查治疗者。⑸由患者或其家属(监护人)签署的同意参加本试验的知情同意书。 

1.4 排除标准  ⑴除规定用药外，长期服用治疗本病的西药或其他药物未停服者；⑵合并有心、脑、肝、肾功能不全和造血***等严重疾病者；⑶年龄在16岁以下或70岁以上者；⑷妊娠或哺乳期妇女；⑸过敏体质，或对本药过敏者；⑹根据研究者的判断，认为不宜入选者。 

1.5剔除及脱落病例   剔除病例：⑴不符合纳入标准而被纳入者；⑵未按规定用药，无法判断疗效，或资料不全影响疗效或安全性判断者。脱落的判定：筛选合格进入试验的患者，均有权随时退出临床试验，无论何时何因退出，只要没有完成临床试验全程观察，均为脱落病例。脱落病例处理：当患者脱落后，尽可能与患者联系，完成所能完成的评估项目，尽可能记录最后一次服药时间。对因不良反应而脱落，经随访最后判断与试验药物是否有关。 

研究方法

2.1 治疗方法   治疗组：口服金乌健骨胶囊（本院制剂室生产，批号：050203、051223），每次4粒，每天3次；对照组：口服尪痹片[辽宁好护士药业(集团)有限责任公司生产，批号：050306、060103]，每次4片，每天3次。两组治疗时间均为2个月。

2.2 观察项目   

⑴中医症状体征（见表 1），临床症状和关节功能：关节痛或压痛数，关节肿胀数，晨僵时间，双手平均握力；⑵实验室检查：类风湿因子(RF)，血沉(ESR)，C-反应蛋白(CRP)；⑶安全性检测：血、尿、大便常规，肝肾功能、胸片、心电图等；⑷)X线摄片：双手关节正位片，由放射科医师盲法阅片。

2.3 疗效判定标准  ⑴临床控制：主要症状、体征整体改善率≥75%，血沉及C反应蛋白正常或明显改善或接近正常；⑵显效：主要症状、体征整体改善率≥50%，血沉及C反应蛋白有改善；⑶有效：主要症状、体征整体改善率≥30%，血沉及C反应蛋白有改善或无改善；⑷无效：主要症状、体征整体改善率＜30%，血沉及C反应蛋白无改善。 

主要症状、体征是指关节疼痛数、关节肿胀数、晨僵时间（分钟）、疼痛水平及关节功能分级等5项。整体改善率是指以上5项指标的改善百分率：（治疗前-治疗后）/治疗前值×100%，相加后求其平均值。 

中医证候疗效断定标准： 

临床控制：中医临床症状、体征消失，证候积分减少≥95%。

显效：中医临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%。 

有效：中医临床症状、体征均有改善，证候积分减少≥30%。 

无效：中医临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少不足≥30%。 

计算公式（尼莫地平法）：[治疗前积分-治疗后积分/治疗前积分]×100%。 

2.4 统计方法   采用SPSS17.0软件分析，计量资料数据用

±S表示，两组间计量资料比较用t检验，计数资料率的比较用χ²检验，等级资料采用 Ridit分析。 

2.5 有效性与安全性评价   ⑴有效性评价：分别在治疗前及治疗后检测ESR、CRP、RF等疗效指标，并进行症候学评分。⑵安全性评价：在治疗前及治疗后检测血常规、尿常规、大便常规、肝肾功能等安全性指标，进行安全性评估。 

结果

3.1 病例脱落情况  病例脱落情况  治疗结束后统计资料，治疗组、对照组均无脱落病例。

3.2 临床疗效比较   治疗组临床控制15例，显效17例，有效14例，无效14例，总有效率为76.7%；对照组临床控制4例，显效7例，有效8例，无效11例，总有效率为63.3%，两组比较有统计学意义(P<0.05)。 

3.3 两组患者治疗前后中医症候积分比较  见表1、表2，两组患者治疗后主症、次症均有明显改善(P<0.05或P<0.01)，除关节疼痛和关节作冷两症外，其余各项指标治疗组均优于对照组(P<0.05)。 

3.6 安全性评价　治疗组60例患者治疗过程中未出现不良反应。对照组30例患者治疗过程中出现不良反应4例(13.33%)，其中胃肠反应2例，转氨酶轻度升高 1例，停经1例。两组患者经对症处理后恢复正常，未影响治疗。 

结论

RA属祖国医学“痹证”范畴，《内经》最早提出了风寒湿邪与机体“外内相合”致痹的观点，认为“风寒湿三气杂至合而为痹也”，指出其发生除了风寒湿外邪的侵袭外，还与机体正气不足有关。中医药对RA治疗有上千年的历史，因临床疗效显著，毒副作用小，日益受到人们的重视。金乌健骨胶囊即是贵州苗族同胞长期用于治疗痹证有经验方之一，作为发明人协定方剂，我院风湿科用于治疗RA显示了较好临床疗效。药物烫狗脊、青风藤、黑骨藤、千年健、乌梢蛇、三七、白芍、姜黄、甘草等组成。君药金毛狗脊补肝肾、强腰脊、祛风湿，乌梢蛇祛风湿、通经活血；臣药千年健、黑骨藤、小花青风藤祛风止痛、强筋健骨；佐药三七、姜黄活血止痛；使药白芍、甘草养血和胃，缓急止痛。全方具有补肾健骨、活血通络止痛之功效，使筋骨健、经络通、郁邪散、瘀血化，邪退而正不伤，从补肾、强筋、健骨、活血、养血、祛风、通络、定痛等多角度组方，形散而力专，配合精当。我们在前期的临床研究证实金乌健骨方对RA的治疗具有良好疗效，尤其是减轻RA患者临床症状、降低抗风湿药如甲氨喋呤等的毒副作用方面显示了较好的临床疗效，对其进行深入研究，探讨其治疗机制，提高RA的治疗、改善生活质量，具有广阔的临床应用前景。通过本组资料显示金乌健骨胶囊对RA患者临床疗效显著，能够减轻RA患者临床症状和体征，降低血沉、C反应蛋白等炎性指标，临床疗效优于尪痹片。

、典型病例

左某某，女，42岁，小学教师，2006年4月就诊（门诊号：1180873）。患者于3年前无明显诱因出现四肢多关节对称性疼痛，呈进行性加重，在外院查RF阳性，抗CCP阳性，诊断RA，予静脉注射甲氨喋呤，口服英太青、来氟米特、雷公藤多甙片等治疗，关节疼痛缓解不明显，血沉、C反应蛋白持续升高，转治省内外多家医院疗效欠佳。双手腕关节及掌指关节逐渐变形，医生建议加用生物制剂，患者因经济原因拒绝应用，后经朋友介绍就诊我科。查：双手掌指关节、近端指间关节、腕关节及双膝关节肿胀、疼痛剧烈，遇寒加重，腰膝酸软，部分关节变形，活动障碍，生活不能自理，X片示双手指间关节间隙狭窄、部分关节骨质破坏，血常规示HGB：81g/L，PLT：372×10⁹/L，ESR：102mm/h，CRP：86mg/L，RF：320IU/L。舌质淡，苔白腻，脉沉细弱。中医诊断：痹证，属肾气虚寒。西医诊断：类风湿关节炎。中医治疗予补肾健骨，活血通络，口服金乌健骨胶囊（药物由烫狗脊、乌梢蛇、千年健、黑骨藤、青风藤、三七、姜黄、白芍、甘草等组成），每次4粒，每天3次，关节疼痛稍减，继服1月后，饮食倍增，关节疼痛明显减轻。继服2个月，关节肿胀消失，疼痛不明显，活动改善，复查血常规正常，ESR：21mm/h，CRP：2.7mg/L。继续调理巩固治疗半年后，诸症基本消除，身体恢复良好。

具体实施方式

实施例1：原料：烫狗脊 312.5g  乌梢蛇 208.3g  千年健 312.5g  

黑骨藤 187.5g  青风藤 625.0g  三  七62.5g  姜  黄 416.7g  白  芍 625.0g  甘  草 125.0g  微晶纤维素85g 

制备方法：三七打成细粉备用，其余8味药第一次加9.3倍量的水浸泡1小时后煎煮0.5小时，第二、三次各加8倍量的水煎煮，每次0.5小时，合并3次煎液，滤过，滤液常压浓缩至相对密度为1.35～1.40（60℃）的稠浸膏，置于80℃常压干燥，干膏粉碎过65目筛与三七粉、微晶纤维素混合均匀，装入0#硬胶囊即制成硬胶囊剂1000粒，即得金乌健骨胶囊。

用法用量：口服，一日3次，每次4粒。 

实施例2：原料：烫狗脊 200g  乌梢蛇 100g  千年健 200g  黑骨藤 150g  青风藤 500g  三  七40g  姜  黄 300g  白  芍 500g  甘  草 80g  微晶纤维素60g 

制备方法：三七打成细粉备用，其余8味药第一次加9.3倍量的水浸泡1小时后煎煮0.5小时，第二、三次各加8倍量的水煎煮，每次0.5小时，合并3次煎液，滤过，滤液常压浓缩至相对密度为1.35～1.40（60℃）的稠浸膏，置于80℃常压干燥，干膏粉碎过65目筛与三七粉、微晶纤维素混合均匀，装入0#硬胶囊即制成硬胶囊剂，即得金乌健骨胶囊。

用法用量：口服，一日3次，每次4粒。 

实施例3：原料：烫狗脊 400g  乌梢蛇 300g  千年健 400g  黑骨藤 350g  青风藤 700g  三  七100g  姜  黄 500g  白  芍 700 g  甘  草 160g  微晶纤维素110g 

制备方法：三七打成细粉备用，其余8味药第一次加9.3倍量的水浸泡1小时后煎煮0.5小时，第二、三次各加8倍量的水煎煮，每次0.5小时，合并3次煎液，滤过，滤液常压浓缩至相对密度为1.35～1.40（60℃）的稠浸膏，置于80℃常压干燥，干膏粉碎过65目筛与三七粉、微晶纤维素混合均匀，装入0#硬胶囊即制成硬胶囊剂，即得金乌健骨胶囊。

用法用量：口服，一日3次，每次4粒。 

Claims (3)

1.一种治疗类风湿关节炎的中药胶囊，其特征在于：按照重量份计算，它是由 烫狗脊 200～400g、 乌梢蛇 100～300g、 千年健 200～400g、  黑骨藤 150～350g、 青风藤 500～700g、 三 七40～100g、 姜 黄 300～500g、  白 芍 500～700g、甘 草 80～160g、微晶纤维素60～110g制备而成。

2.根据权利要求1所述治疗类风湿关节炎的中药胶囊，其特征在于：按照重量份计算，它是由 烫狗脊312.5g、乌梢蛇 208.3g、千年健 312.5g、黑骨藤187.5g、 青风藤 625.0g、 三 七62.5g、 姜 黄 416.7g、 白 芍 625.0g、  甘 草 125.0g、 微晶纤维素85g 制备而成。

3.权利要求1或2所述治疗类风湿关节炎的中药胶囊的制备方法，其特征在于：三七打成细粉备用，其余8味药第一次加9.3倍量的水浸泡1小时后煎煮0.5小时，第二、三次各加8倍量的水煎煮，每次0.5小时，合并3次煎液，滤过，滤液常压浓缩至相对密度为1.35～1.40的稠浸膏，置于80℃常压干燥，干膏粉碎过65目筛与三七粉、微晶纤维素混合均匀，装入硬胶囊即得。