KR100821683B1

KR100821683B1 - 이카리사이드 Ⅱ (ｉｃａｒｉｓｉｄｅ Ⅱ)를 유효성분으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100821683B1
Application number: KR1020060106977A
Authority: KR
Inventors: 은재순; 김대근; 소윤조; 최화정
Original assignee: 우석대학교 산학협력단
Priority date: 2006-11-01
Filing date: 2006-11-01
Publication date: 2008-04-15

Abstract

본 발명은 이카리사이드 II (icariside II)를 유효성분으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 음양곽으로부터 추출한 이카리사이드 II를 유효성분으로 함으로써, 인체에 안전하고 독성이 적으며, 히프-1 (hypoxia inducible factor, HIF-1)의 억제를 통해 혈관 신생 및 전이를 조절하므로 암, 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 및 허혈 질환과 같은 혈관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료효과를 기대할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

이카리사이드, 히프-1, 음양곽, 암, 관절염, 당뇨병성 망막증

Description

이카리사이드 Ⅱ (ｉｃａｒｉｓｉｄｅ Ⅱ)를 유효성분으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물{A composition containing icariside II for preventing and treating diseases associated with abnormal angiogenesis}

도 1은 사람 뼈육종세포주 (HOS)의 세포독성에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 2가는 사람 뼈육종세포주의 저산소 배양 후 히프-1알파 (HIF-1α)에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 2나는 히프-1알파에 의해 유도되는 유전자의 발현에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 2다는 히프-1알파와 결합하는 브이에이치엘 (VHL)의 항체에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 3가는 브이이지에프 (VEGF)의 발현에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 3나는 사람탯줄정맥내피세포 (human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)의 관형성 (tube formation)에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이 다.

도 4가는 사람 뼈육종세포주의 이동능력 (migration ability)에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 4나는 침투성 (invasiveness)에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 5가는 당의 대사에 관여하는 유전자인 포도당전달체 4 (glucose transporter 4, Glut4)의 발현에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

도 5나는 당 대사와 관련된 유전자인 알도레이즈알파 (aldolase α), 에놀레이즈1 (enolase 1)에 대한 이카리사이드 II의 효과를 나타낸 도이다.

본 발명은 이카리사이드 II를 유효성분으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

히프-1은 저산소에 의해 조절되는 알파 (α) 단위와 산소에 민감하지 않은 베타 (β) 단위로 구성된 전사인자로 알려져 있으며, 정상적인 산소상태 (normoxia)에서 히프-1알파는 빨리 분해되므로 축적이 되지 않고 없어진다. 그러나 저산소 상태(hypoxia)에서는 알파단위의 분해가 막히므로 축적된 히프-1알파가 베타단위와 결합 후 핵 내로 들어가 저산소반응요소(Hypoxia-responsive element, HRE)를 인식하여 전사인자로 작용하여 혈관신생, 혈관긴장도, 포도당대사, 세포생존 등에 관여하는 유전자의 발현을 촉진한다. 정상적 산소상태에서는 히프-1알파의 산소의존성 분해 영역 (oxygen dependent degradation domain, ODD)에 있는 프롤린 (proline) 402번과 506번이 프롤릴수산화효소 (prolyl hydroxylase domain protein, PHD)에 의해 수산화 됨으로써 브이에치엘 (VHL)과 결합되고 이어서 유비퀴틴이 결합된 후 프로테아좀 (proteasome)에 의해 분해된다.

이 과정에서 프롤릴수산화효소 (PHD)는 산소감지기로서 히프의 기능을 조절하는 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 프롤릴수산화효소는 현재 3개의 동종효소 (PHD1, 2, 3)가 클론 되었으며 프롤릴수산화효소2 가 가장 효소 활성이 높은 것으로 밝혀져 있다. 프롤릴수산화효소가 히프의 기능을 조절하는 효소로 암 치료에 중요한 작용점이 될 수 있어 프롤릴수산화효소를 활성화 할 수 있는 물질이 새로운 항암제로서 관심을 끌고 있으나 (Semenza, GL. Targeting HIF-1 for cancer therapy. Nat Rev Cancer 2003, 3:721-732, Vaupel, P. The role of hypoxia-induced factors in tumor progression. Oncologist 9 Suppl 2004, 5:10-17), 아직까지 프롤릴수산화효소 활성제가 보고 된 적은 없다 .

히프는 혈관신생과 포도당대사 등을 조절하는 전사인자로 암생물학 분야에서 지대한 관심을 기지고 있다. 실제로 미국식품의약국의 허가를 받은 항암제나 임상실험 단계에 있는 항암제는 히프를 억제하는 물질이 많다 (예, Herceptin, Glivec, Iressa 등). 암 이외에도 류마티스 관절염 (Hollander AP 등. Expression of hypoxia-inducible factor 1alpha by macrophages in the rheumatoid synovium: implications for targeting of therapeutic genes to the inflamed joint. Arthritis Rheum. 2001, 44(7):1540-1544), 당뇨병성 망막증 (Ozaki H 등. Hypoxia inducible factor-1alpha is increased in ischemic retina: temporal and spatial correlation with VEGF expression. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1999, 40(1):182-189), 건선 (Kwon YW 등. Insulin-like growth factor-II regulates the expression of vascular endothelial growth factor by the human keratinocyte cell line HaCaT. J Invest Dermatol. 2004, 123(1):152-8), 신생혈관 녹내장 (Arjamaa O 등. Oxygen-dependent diseases in the retina: role of hypoxia-inducible factors. Exp Eye Res. 2006, 83(3):473-483), 혈관종 (Flamme I 등. Up-regulation of vascular endothelial growth factor in stromal cells of hemangioblastomas is correlated with up-regulation of the transcription factor HRF/HIF-2alpha. Am J Pathol. 1998, 153(1):25-9) 등도 혈관신생의 비정상에 기인한 질병으로 알려져 있어 히프의 주요작용점이 될 수 있다.

이에 본 발명의 발명자들은 히프-1을 차단하는 물질을 개발하고자 연구를 거듭한 결과, 음양곽 (Epimedium koreanum)에 함유된 이카리사이드 II가 히프-1에 의해 유도되는 유전자들인 브이지에프 (VEGF), 알돌레이즈 에이 (aldolase a), 에놀레이즈 1 (enolase 1), 포도당전달체 4 (glucose transporter 4, Glut4) 등을 억제하였으며, 사람탯줄정맥내피세포 (HUVEC)의 신생혈관 형성 저해 및 세포의 전이와 침투 능력을 억제하였고, 당대사에 관여하는 효소를 전사수준(transcriptional level)에서 억제함을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 히프-1을 억제하는 작용을 통해 암, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 등 혈관 형성 장애 관련된 질환의 예방 및 치료가 가능한 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있다.

본 발명은 이카리사이드 II를 유효성분으로 하는 혈관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

삭제

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 음양곽으로부터 추출한 이카리사이드 II를 유효성분으로 함으로써, 인체에 안전하고 독성이 적으며, 히프-1 (hypoxia inducible factor, HIF-1)의 억제를 통해 혈관 신생 및 전이를 조절하므로 암, 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 및 허혈 질환과 같은 혈관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료효과를 기대할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 혈관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료용 조성물의 유효성분이 되는 이카리사이드 II는 하기 화학식 1을 갖는 화합물이다.

상기 화학식을 갖는 이카리사이드 II (8-γγ-dimethylallyl-4’-methoxy-3,5,7-trihydroxyflavone-3-O-rhamnopyranoside)는 신경분화촉진작용 (Kuroda, M 등. Flavonol Glycosides from Epimedium sagittatum and Their Neurite Outgrowth Activity on PC12h Cells. Planta Med., 2000, 66:575-577), 인지능력 향상작용 (Oh, M. H. 등. Screening of Korean herbal medicines used to improve cognitive function for anti-cholinesterase activity. Phytomedicine. 2004, 11:544-548)등의 효과를 갖는 것으로 알려져 있으나, 이카리사이드 II가 히프-1알파나, 이에 관련된 혈관 혈성 장애에 효과가 있다는 사실은 어떠한 문헌에도 기재되거나 암시된 바가 없다.

본 발명자는 이카리사이드 II가 히프-1에 의해 유도되는 유전자들인 브이지에프, 알돌레이즈 에이, 에놀레이즈 1, 글루트 4 등을 억제하였으며, 사람탯줄정맥내피세포의 신생혈관 형성 저해 및 세포의 전이와 침투 능력을 억제하였고, 당대사에 관여하는 효소를 전사수준에서 억제한다는 사실을 발견하고 본 발명에 따른 혈 관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료용 조성물을 완성하게 되었다.

본 발명에 따른 조성물은 유효성분으로서의 이카리사이드 II 이외에도, 약제학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수도 있으며, 이러한 담체로는 부형제, 결합제, 활택제, 붕괴제, 피복제, 유화제, 현탁제, 용제, 안정화제, 흡수조제, 주사용수, 및 등장화제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 담체를 예로 들 수 있다.

상기한 약제학적으로 허용가능한 담체는 당업자의 선택에 의하여 용의채택될 수 있는 것으로, 이들의 종류 및 사용량은 조성물의 제형에 따라 달라질 것이며, 이에 의하여 본 발명이 한정되는 것이 아님은 자명하다.

본 발명에 따른 조성물은 다양한 경구용 제제 또는 주사제로 제형화될 수 있으며, 바람직하게는, 경구 제제로 제형화 될 수 있다. 이러한 경구 제제로는, 과립제, 정제, 캅셀제, 액제 등을 예로 들 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 이카리사이드 II 중량 기준으로, 2∼5000 mg/일인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 10∼1000 mg/일인 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물은 혈관 혈성 장애에 의한 암, 류마티스 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 등의 예방 및 치료에 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 쥐, 개, 토끼, 고양이, 닭 등의 온혈 동물 치료에도 응용될 수 있다.

일반적으로 이카리사이드 II는 공지의 방법들 (Li, W. K. 등. Anhydroicaritin 3-O-rhamnosyl(1→2)rhamnoside from Epimedium koreanum and a reappraisal of other phamnosyl(1→2, 1→3 and 1→4)rhanmoside structures. Phytochemistry 1996, 42:213-216, Liu, R. 등. Preparative isolation and purification of three flavonoids from the Chinese medicinal plant Epimedium koreanum Nakai by high-speed counter-current chromatography. J. Chromatogr. A 2005, 1064:53-57, Mizuno, M. 등. Flavonol glycosides from Epimedium sagittatum . Phytochemistry 1987, 26:861-863, Li, W. K. 등. Flavonoids from Epimedium wanshanense . Phytochemistry 1987, 26:861-863)에 의해 추출 할 수 있다.

구체적으로 설명하면, 이카리사이드 II는 음양곽 Epimedium koreanum , Epimedium sagittatum , Epimedium wanshanense 등)에서 분리되어지는데, 음양곽을 음건하여 메탄올로 추출한 다음 여과하여 여액을 감압농축하는 단계; 상기 농축액을 헥산-클로르포름-에칠아세테이트-부탄올로 분획하는 단계; 에칠아세테이트 분획을 클로르포름-에칠아세테이트-메탄올을 유출용매로 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하는 단계; 및 에칠아세테이트-메탄올을 유출용매로 사용하여 정제하는 단계를 포함하여 추출할 수 있다.

바람직하게는, 상기 메탄올 추출 단계는 3 ~ 5회 수행되며, 상기 클로르포름-에칠아세테이트-메탄올 유출용매의 부피비는 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10이며, 최적 조건은 2 : 1 : 1이고, 에칠아세테이트-메탄올 유출용매의 부피비는 5 ~ 20 : 1 ~ 10 이며, 최적 조건은 10 : 1이다.

또한, 최종 컬럼정제 단계는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 세파덱스 엘에 치-20 (sephadex LH-20) 등의 정제 컬럼을 사용하여 수행될 수 있다.

또한, 본 발명의 상기한 조성물을 포함하는 건강보조 식품을 제공하며, 이러한 건강보조 식품의 비제한적인 예로는 차, 과자류, 음료, 캡슐제 등의 건강보조 식품류 등을 들 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하되, 본 발명의 범위가 하기 실시예로만 제한되는 것은 아니다.

실시예 1. 음양곽으로부터의 이카리사이드 II 의 추출

음양곽 건조중량 약 1 kg을 메탄올을 넣어 가끔 진탕하면서 5시간씩 50℃에서 2회 온침 추출하였다. 그 추출액을 수욕상에서 감압농축하여 메탄올 엑스 153g을 얻었으며, 이 메탄올 엑스에 증류수 1ℓ를 가하여 현탁시켜 상법에 따라 동량의 헥산-클로르포름-에칠아세테이트-부탄올로 분획하였다. 이들 분획 중 활성이 확인된 에칠아세테이트 분획에 대하여 클로르포름-에칠아세테이트-메탄올 (2 : 1 : 1)을 유출용매로 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 실시하여 7개 분획으로 나눈 다음 가장 활성이 강한 분획을 에칠아세테이트-메탄올 (10 : 1)을 유출용매로 사용하여 세파덱스 엘에치-20 (sephadex LH-20) 컬럼으로 정제하여 이카리사이드 II(icariside II)를 얻었다.

상기 정제한 이카리사이드 II를 사용하여 다음에 제시되는 실험들을 수행하였다.

실시예 2. 이카리사이드 II 의 세포독성에 미치는 영향 평가

사람뼈육종세포주 (5 x 103 )를 96-웰 플레이트(well plate) 에 분주한 후 24시간 이산화탄소배양기 (CO2 incubator)에서 배양하였다. 소태아혈청 (FBS)을 제거한 배지에 여러 농도의 이카리사이드 II를 처리한 후 24 시간 더 배양하였다. 배지를 제거한 후 생리식염수로 세척하고 엠티티 (MTT)를 처리하고 2 시간 배양하였다. 디엠에스오 (DMSO) 200 μl을 넣고 10분 정도 배양 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 1은 사람뼈육종세포주에 대한 이카리사이드 II의 세포독성 효과를 나타낸다. 세포에 이카리사이드 II 0.1, 1, 10, 25, 50 μM 농도를 24 시간 처리한 후 세포 생존율을 확인한 결과, 이카리사이드 II는 25 μM까지는 세포에 독성을 나타내지 않았다.

실시예 3. 알티피시알 ( RT - PCR ) 분석

총 알엔에이 (RNA)를 트리졸 (TRIzol)을 이용하여 얻은 후 수퍼스크립트역전사효소 (SuperScript II reverse transcriptase)를 넣은 반응을 통해 시디엔에이 (cDNA)를 얻었다. 그 후 각각의 유전자의 조건에 따라 피시알 (PCR) 반응을 진행시킨 후 0.8% 아가로스 겔 영동 (agarose gel electrophoresis)를 통해 피시알 (PCR) 산물을 분리한 후, 에티디움 브로마이드 (Ethidium bromide)로 발색 시켰다. 각 유전자의 프라이머는 표 1과 같다. 피시알산물의 농도는 농도측정기 (densitometry)를 이용하여 정량 분석하였다.

실시예 4. 웨스턴블롯 ( Western blot ) 분석

세포에 용해완충액 (lysis buffer, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Trixon X-100, 1 mM Na3VO4, 및 1 mM PMSF)을 넣고 수집한 다음 13,000 x g에서 30 분간 원심분리하였다. 상등액은 전체세포 추출물로 이용되었다. 히프-1알파 (HIF-1α)의 웨스턴브롯에 대해서 간단히 언급하면, 세포를 500 ml의 저등장 완충액 (hypotonic buffer, 10 mM HEPES, 1.5 mM MgCl2, 10 mM KCl, 0.5 mM DTT, 및 0.2 mM PMSF)으로 10 분간 재현탁 한 다음 얼음 위에 10 분간 세포를 배양하였다. 그 후 13,000 x g에서 1 분간 원심분리하고 침전물은 100 ml의 고염완충액 (high salt buffer, 10 mM HEPES, 25% glycerol, 420 mM NaCl, 1.5 mM MgCl2, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM DTT, 및 0.5 mM PMSF)에 재현탁시킨 후 20 분간 얼음 위에서 배양하였다. 13,000 x g에서 30분 간 원심분리 후, 상등액을 취해 핵추 출물로 사용하였다. 전체세포 추출물 또는 핵추출물을 10% 에스디에스-페이지 (SDS-PAGE)로 전기영동한 후 피브이디에프 (polyvinylidene difluoride, PVDF)막으로 분리된 단백질을 이동하였다. 피브이디에프막을 티티비에스 (TTBS, 0.5% 트윈-20이 첨가된 트리스완충 생리식염수)에 용해된 5% 탈지분유로 1 시간 실온에서 배양한 다음, 히프-1알파, 브이지에프와 글루트 4에 대한 토끼항체 (5% 탈지분유 첨가된 티티비에스로 1: 1,000배 희석)와 4 ℃에서 16 시간 배양하였다. 그 후 티티비에스로 막을 씻은 후 2차 항체로 홍당무과산화효소-접합 항체 (Horseradish peroxidase-conjugated anti-rabbit 또는 mouse antibody)를 5% 탈지분유 첨가된 티티비에스로 1:5000 - 1:10000배 희석한 후 1시간 동안 실온에서 배양한 후, 이시엘 (enhanced chemiluminescence, ECL) 반응을 통해 항체와 결합한 단백질의 양을 정량하였다.

도 2는 사람골육종세포주에서 이카리사이드 II가 저산소에서 증가된 히프-1알파를 감소시킨 결과를 나타낸 것이다. 여러 농도 (0, 0.1, 1, 10 mM) 의 이카리사이드 II를 처리하고 4시간 동안 저산소 배양 후 히프-1알파에 대한 항체로 웨스턴 블롯을 한 결과를 도 2가에 나타내었으며, 이카리사이드 II는 농도 의존적으로 히프의 단백질 농도를 감소시키는 것으로 나타났다. 도 2나는 히프에 의해 유도되는 유전자의 발현을 알티-피시알로 확인하였는데 이카리사이드 II를 처리하였을 때 유전자의 발현을 억제하였다. 도 2다는 히프-1알파와 결합하는 브이에이치엘의 항체를 이용하여 면역침전 시행 후 이카리사이드 II의 히프-1알파에 대한 영향을 보았는데 이카리사이드 II를 처리한 후 농도 의존적으로 히프-1알파와 브이에이 치엘과의 상호작용이 감소되었다.

실시예 5. 사람탯줄정맥내피세포 ( HUVEC )를 이용한 관형성 ( tube formation ) 측정법

세포를 마트리젤 (matrigel)로 표면처리한 판에 배양한 후 이카리사이드 II를 처리한 세포군과 대조군을 저산소 배양기에서 배양하여 브이지에프와 같은 혈관 형성 유도 물질이 유도되게 한 후 모세관 유사 구조를 지닌 관 형성을 촬영하였다.

도 3은 이카리사이드 II의 혈관형성억제에 대한 효과를 나타낸 것이다. 우선 도 3가는 웨스턴블롯을 통하여 이카리사이드 II가 브이지에프의 발현을 농도 의존적으로 억제하는 결과를 나타낸 도면이다. 도 3나는 이카리사이드 II가 사람탯줄정맥내피세포의 관형성을 억제하였는데, 이 결과들은 이카리사이드 II가 브이지에프의 발현을 억제하고 이를 통해 혈관신생도 억제하는 것을 의미한다.

실시예 6. 시험관내 침투 측정

24웰 트랜스 유닛 (24-well transwell unit)을 이용하였고 필터의 아랫면을 제1형 콜라젠으로 표면처리하고 윗면은 마트리젤로 표면처리 하였다. 아래분획을 혈청이 없는 배지로 채웠고 트랜스웰 판의 위부분에 세포 (5 x 104)를 17시간 배양 후 메탄올로 고정하고 헤마톡실린 (hematoxylin)과 에오신 (eosin)으로 염색하였다. 침투모양을 현미경으로 관찰하면서 계수함으로 정량 분석하였다.

이카리사이드 II의 세포 이동과 침투에 대한 영향을 사람골육종세포주에서 살펴보았다 (도 4). 도 4가는 사람골육종세포주의 이동능력 (migation ability)을 본 것인데, 이카리사이드 II가 처리된 세포에서 현저히 감소되었다. 도 4나는 이카리사이드 II의 침투 (invasiveness)에 대한 영향을 보았는데 저산소에서 증가되었던 침투가 이카리사이드 II가 처리된 세포에서 현저히 감소하였다.

실시예 7. 면역세포화학 ( immunocytochemistry ) 실험

사람골육종세포주를 4% 파라포름알데히드 (paraformaldehyde)로 고정한 후 0.5% 트리톤 엑스-100 (Triton X-100)을 처리하였다. 일차 항체와 실온에서 배양한 후 에프아이티시 (FITC)로 표지된 2차 항체와 암실, 실온에서 배양하였다. 마운트액을 넣은 후 커버슬립을 놓고 형광현미경으로 관찰하였다.

도 5에서는 이카리사이드 II가 당의 대사에 관여하는 유전자의 발현에 미치는 영향을 웨스턴블롯 및 알티피시알 (RT-PCR)로 살펴 본 도면이다. 도 5가는 이카리사이드 II가 포도당전달체 4에 대해 감소 효과를 나타내었고, 도 5나는 당 대사와 관련된 유전자 알돌레이즈 에이와 에놀레이즈 1을 알티피시알로 보왔는데, 이 유전자들 역시 이카리사이드 II에 의해 발현이 감소되었다.

실시예 8. 약제학적 조성물의 제조

하기 조성에 따라서 각각 정제, 캡슐제, 산제 및 주사제를 제조하였다.

1) 정제

이카리사이드 II 500.0 ㎎

유당 500.0 ㎎

탈크 5.0 ㎎

마그네슘 스테아레이트 1.0 ㎎

2) 캡슐제

이카리사이드 II을 체질하여 부형제와 혼합한 후, 젤라틴 캡슐 중에 하기 조성에 따라 충전함으로써 캡슐제를 제조하였다.

이카리사이드 II 500.0 ㎎

전분 1500 10.0 ㎎

스테아르산마그네슘 100.0 ㎎

3) 산제

하기 성분을 통상의 산제 제조방법으로 혼합하고, 봉지에 넣어 밀봉한 후 산제를 제조하였다.

이카리사이드 II 500.0 ㎎

유당 100.0 ㎎

탈크 5.0 ㎎

4) 주사제

하기 성분을 통상의 주사제 제조방법으로 2.0 ㎖의 용량의 앰플에 충전하고, 멸균시켜 주사제를 제조하였다.

이카리사이드 II 50.0 ㎎

산화방지제 1.0 ㎎

트윈 80 1.0 ㎎

주사용 증류수 ≤2.0 ㎖

실시예 9. 건강보조 식품의 제조

하기 성분을 물과 혼합하여 통상의 방법으로 음료를 제조하되, 총 100 ml로 맞춘 후 95 ℃에서 15초간 살균 및 냉각하여 드링크제를 제조하였다.

이카리사이드 II 5.0 g

구연산 1.0 g

아라비아검 1.0 g

설탕 5.0g

상술한 바와 같이 본 발명에 따르면, 인체에 안전하고 독성이 적으며, 히프-1 (HIF-1)에 의해 유도되는 유전자들인 브이지에프 (VEGF), 알돌레이즈 에이 (aldolase a), 에놀레이즈 1 (enolase 1), 및 글루트 4, (Glut4) 등을 억제하고, 사람탯줄정맥내피세포 (HUVEC) 세포의 신생혈관 형성 저해 및 세포의 전이와 침투 능력을 억제하며, 당대사에 관여하는 효소를 전자수준에서 억제할 수 있으므로, 암, 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 및 허혈 질환과 같은 혈관 형성 장애와 관련된 질환의 예방 및 치료가 가능한 효과를 기대할 수 있다.

Claims

이카리사이드 II를 유효성분으로 하는 암, 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선, 신생혈관 녹내장, 혈관종 및 허혈성 질환 중에서 선택된 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,

상기 이카리사이드 II는 음양곽으로부터 추출된 것을 특징으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 이카리사이드 II는,

음양곽을 메탄올로 추출한 다음 여과하여 여액을 감압농축하는 단계;

상기 농축액을 헥산-클로르포름-에칠아세테이트-부탄올로 분획하는 단계;

에칠아세테이트 분획을 클로르포름-에칠아세테이트-메탄올을 유출용매로 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하는 단계; 및

에칠아세테이트-메탄올을 유출용매로 사용하여 정제하는 단계

를 포함하는 방법으로 추출된 것을 특징으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
제 4 항에 있어서,

상기 메탄올 추출 단계는 3 ~ 5회 수행되는 것을 특징으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
제 4 항에 있어서,

상기 클로르포름-에칠아세테이트-메탄올 유출용매의 부피비는 2 : 1 : 1이고, 에칠아세테이트-메탄올 유출용매의 부피비는 10 : 1인 것을 특징으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 조성물이 경구 또는 주사제 제제인 것을 특징으로 하는 혈관 형성 장애 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물.
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