CN110964016B - 氨基降茨烷衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

氨基降茨烷衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

氨基降茨烷衍生物及其制备方法与应用，本发明涉及式I结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，包含式I结构的化合物的药物组合物及其作为BTK(C481S)突变体高选择性的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂用于制备预防或治疗异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症的药物的用途。

Description

氨基降茨烷衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体是涉及氨基降茨烷衍生物作为对C481S突变体高选择性的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂、其药物组合物、其制备方法及其在制备药物中的用途。
背景技术
B细胞受体(B-cell receptor，BCR)信号通路在B细胞的成熟，分化和发展中起关键作用。异常的BCR介导的信号转导可引起错误调节的(deregulated)B细胞活化和/或病原性自身抗体的形成，导致多种人类疾病，包括癌症、自身免疫疾病和异种免疫性疾病，自身免疫疾病包括红斑狼疮、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病，异种免疫性疾病包括炎性疾病、哮喘等。
布鲁顿酪氨酸激酶(bruton tyrosine kinase，BTK)是非受体型酪氨酸激酶TEC家族的一员，在BCR信号通路的活化过程中起着关键的作用，是早期B细胞形成以及成熟B细胞激活和存活的关键调节剂(Khan等，Immunity 1995 3：283；Ellmeier等，J Exp Med 2000192：1611)。Btk在调节B细胞增殖和凋亡发挥重要的作用(Islam和Smith，Immunol Rev2000 178：49；Davis等，Nature 2010 463：88-94)，因此，对Btk的抑制可用于治疗某些B细胞淋巴瘤和白血病(Feldhahn等，J Exp Med 2005 201：1837)。
关于Btk在自身免疫疾病和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模式得到确认。在***性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk-缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原蛋白诱惑的关节炎具有抗性(Jansson和Holmdahl，Clin Exp Immunol 1993 94：459)。选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中有着明显的量效关系(Pan等，Chem.Med.Chem.2007 2：58-61)。目前Btk抑制剂治疗关节炎的临床研究正在进行中。
依鲁替尼(Ibrutinib，商品名Imbruvica)作为第一个进入市场的布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂取得极大的成功，2017年年销售达26亿美元。然而与许多其他抗癌药物一样，部分患者对药物表现出耐药性。研究发现，BTK激酶的C481S突变是导致耐药的主要原因，依鲁替尼是通过与BTK激酶的C481色氨酸残基的不可逆共价结合而发生药效作用的，C481S突变将色氨酸变成丝氨酸从而失去与依鲁替尼共价结合的能力。
根据临床统计显示，BTK(C481S)突变占慢性淋巴癌(CLL)复发患者的87％(Woyach等，J Clin Oncol 2017 35：1437-1443)，在套细胞淋巴瘤(MCL)复发患者中～80％是BTK(C481S)突变(Chiron等，Cancer Discovery 2014 4(9)：1-14)。开发一种能对BTK(C481S)突变体有效的BTK抑制剂将能克服依鲁替尼因C481S突变而产生的耐药。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供新颖的、未见文献报道的对BTK(C481S)突变体高选择性的布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的化合物，其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，所述化合物在制药中的用途以及使用本发明化合物预防或治疗人或哺乳动物与过度Btk活性相关疾病的方法。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是：
式(I)的化合物
Figure BDA0001816769080000021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、活性代谢物、多晶型物、酯、光学异构体或前药，其中，
A环选自以下结构之一：
Figure BDA0001816769080000022
R5选自氢，卤素，氰基，羟基，炔基，氨基，C1-3烷基，C1-3烷氧基，C1-3卤代烷基，C1-3卤代烷氧基，C1-3卤代烷氨基，C3-7环烷基，C3-7环烷氧基，C3-7环烷氨基；
B环为取代或非取代的芳环或杂芳环；C环为取代或非取代的芳环或杂芳环；
L为单键、或以下结构之一；
Figure BDA0001816769080000031
R1选自R3或以下结构之一，
Figure BDA0001816769080000032
其中，R3选自氢、取代或非取代的C1-6烷基、取代或非取代的C1-6炔基、取代或非取代的C1-6烯基、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C1-9杂芳基、取代或非取代的C3-7环烷基或取代或非取代的C2-7杂环烷氨基；
R4选自氢、取代或非取代的C1-6烷基、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C1-9杂芳基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C3-7杂环烷基；
R2选自H、取代或非取代的C1-3烷基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C2-7杂环烷基、取代或非取代的C6-10芳基或取代或非取代的C1-9杂芳基。
R1、R2以及与之相连的N形成取代或非取代的C2-7杂环，R3、R4以及与之相连的N形成或不形成C3-7杂环氨基或C3-9杂芳环氨基。
优选的，所述R3中的取代的C1-6烷基、取代的C1-6炔基、取代的C1-6烯基、取代的C6-10芳基、取代的C1-9杂芳基、取代的C3-7环烷基、取代的C2-7杂环烷基中的取代基选自卤素、氰基、羟基、氨基、取代或非取代的酰基胺基、取代或非取代的氨基酰基、取代或非取代的C1-4烷基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C3-7环烷氧基、取代或非取代的C1-4烷基氨基、二[取代或非取代的C1-4烷基]氨基、取代或非取代的C3-7环烷氨基、取代或非取代的C3-7杂环烷氨基、取代或非取代的C1-3烷氧基、取代或非取代的C3-7环烷氧基、取代或非取代的C6-10芳基或取代或非取代的C3-7杂环烷基中的一个或多个。
优选的，所述R4中的取代的C1-6烷基、取代的C6-10芳基、取代的C1-9杂芳基、取代的C3-7环烷基，取代的C3-7杂环烷基中的取代基选自卤素、羟基、氰基、氨基、取代或非取代的C1-4烯基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C3-7环烷氧基、取代或非取代的C1-4烷基氨基、二[取代或非取代的C1-4烷基]氨基、取代或非取代的C3-7环烷氨基、取代或非取代的C3-7杂环烷氨基、取代或非取代的C1-3烷氧基、取代或非取代的C3-7环烷氧基、取代或非取代的C6-10芳基或取代或非取代的C3-7杂环烷基中的一个或多个。
优选的，所述A环结构如下式：
Figure BDA0001816769080000041
R5选自氢，卤素，氰基，羟基，炔基，氨基，C1-3烷基，C1-3烷氧基，C1-3卤代烷基，C1-3卤代烷氧基，C1-3卤代烷氨基，C3-7环烷基，C3-7环烷氧基，C3-7环烷氨基；
优选的，所述B环中的取代的芳环或芳杂环中的取代基选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、卤代C1-3烷氧基中的一个或多个。
优选的，所述B环结构如下式：
Figure BDA0001816769080000042
优选的，所述C环中的取代的芳环或芳杂环中的取代基选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤代C1-3烷基、卤代C1-3烷氧基中的一个或多个。
优选的，所述C环结构如下式：
Figure BDA0001816769080000043
优选的，所述R2选自H，R1选自：
Figure BDA0001816769080000044
其中，R3选自氢、取代或非取代的C1-6烷基、取代或非取代的C1-6炔基、取代或非取代的C1-6烯基、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C1-9杂芳基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C2-7杂环烷氨基。
最优选的，所述化合物选自如下任一结构所示：
Figure BDA0001816769080000051
Figure BDA0001816769080000061
以上任一项所述的化合物在制备预防或治疗异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症的药物中的用途。
其中，所述异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症与过度布鲁顿酪氨酸激酶活性相关。
其中，所述异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症与异常B细胞增殖相关。
更进一步的，所述异种免疫性疾病为炎性疾病或哮喘。
更进一步的，所述自身免疫性疾病为红斑狼疮、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。
一种药物组合物，包含一种或多种以上任一项所述的化合物。
一种药物制剂，包含治疗有效量的以上任一项所述的化合物，以及在药学上可接受的赋形剂。
所述的药物制剂，其配制用于选自口服施用、肠胃外施用、口腔施用、鼻腔施用、局部施用或直肠施用的施用途径。
所述的药物制剂用于治疗与过度布鲁顿酪氨酸激酶活性相关的疾病或状况，包括向需要的人或哺乳动物施用所述的药物制剂；所述过度布鲁顿酪氨酸激酶活性相关的疾病为异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症；所述异种免疫性疾病为炎性疾病、哮喘；所述自身免疫性疾病为红斑狼疮、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。
本发明包括将所述药物制剂与Btk接触的步骤，所述的接触步骤包括体外或者体内试验。
上述化合物I的制备方法1：包括以下步骤：(S1)化合物IIIA和硼酸或硼酸酯II进行Suzuki偶合得到化合物IV；(S2)化合物IV用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物V的盐酸盐；(S3)化合物V与有机酸偶合得到权利要求1中所述的化合物I；
Figure BDA0001816769080000071
其中X＝卤素，R2，R3，L，A环，B环和C环如前所述。
上述化合物I的制备方法2，包括以下步骤：(A1)化合物IIIA用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物VI的盐酸盐；(A2)化合物VI与有机酸偶合得到化合物VII；(A3)化合物VII与硼酸或硼酸酯II进行Suzuki偶合得到权利要求1中所述的化合物I；
Figure BDA0001816769080000081
其中X＝卤素，R2，R3，L，A环，B环和C环如前所述。
上述化合物I的制备方法3，包括以下步骤：(B1)化合物IIIB和硼酸II在醋酸铜催化下进行Chan-Lam-Evans偶合得到化合物VIII；(B2)化合物VIII用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物IX的盐酸盐；(B3)化合物IX与有机酸偶合得到权利要求1中所述的化合物I；
Figure BDA0001816769080000082
其中R2，R3，L，A环，B环和C环如前所述。
方法1、2和3中反应所得的每一个产物可以通过传统分离技术来得到，这种传统技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。合成所需要的起始原料可以自己合成或从商业机构购买获得，例如，但不限于，Adrich或Sigma。这些原料可以使用常规手段进行表征，比如物理常数和光谱数据。本发明所描述的化合物可以使用合成方法得到单一的光学异构体或者是光学异构体的混合物。
本发明中字母上标表示基团的标号，下标表示该原子的个数，例如：R1、R2、R3表示第1～3个R基团，C1-4烷基表示含1～4个C原子的烷基。取代基上C原子数不计算在主链中。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
中间体I-5的合成
中间体I-5的合成路线
Figure BDA0001816769080000091
4-(苄氧基羰基氨基)双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸甲酯I-2
Figure BDA0001816769080000092
向4-(甲氧基羰基)双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸I-1(3.5g，17.7mmol)和TEA(1.78g，17.7mmol)的甲苯(30mL)溶液中加入DPPA(5.34g，19.5mmol)。将混合物加热至90℃，保持2小时。冷却至室温并加入BnOH(1.9g，17.7mmol)。将反应在90℃下搅拌4天。冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用NaHCO3水溶液洗涤，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶4的柱色谱法纯化，得到3g所需化合物I-2，收率：56％。
4-(苄氧基羰基氨基)双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸I-3
Figure BDA0001816769080000093
向4-(苄氧基羰基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯I-2(3g，9.9mmol)的溶液中加入NaOH(792mg，19.8mmol)，将混合物加热至60℃，保持10小时。浓缩，加入水(50mL)，用1N HCl水溶液将pH调节至4。将其用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其不经纯化用于下一步，得到2.2g所需化合物I-3，收率：77％。
4-氨基甲酰基双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯I-4
Figure BDA0001816769080000101
向化合物I-3(2g，6.9mmol)和Et3N(1g，10mmol)的DCM(20mL)溶液中滴加0℃的氯代异丁基酯(1.36g，10mmol)。将混合物在0℃下搅拌20分钟，滴加NH4OH(10mL)并将其在室温下搅拌10分钟。将其倒入水(30mL)中，分离有机相，用DCM(2x15mL)萃取水溶液，将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将其通过柱色谱法纯化，用EA/PE(1∶1)-EA/MeOH(10∶1)洗脱。得到1.7g所需化合物I-4，产率：85％。
4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯I-5
Figure BDA0001816769080000102
将化合物I-4(1.6g，5.55mmol)和羟基甲基磺酰碘苯(2.17g，5.55mmol)在ACN(20mL)中的溶液加热回流1小时，蒸发溶剂并加入1M NaOH(12mL)，将其用EA(2x15mL)萃取，将有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将其通过柱色谱法纯化，用DCM/MeOH＝(10∶1)洗脱。得到920mg所需化合物I-5，收率：64％。LC-MS m/z＝261.1[M+1]+。
中间体硼酸II的合成
中间体II-1的合成路线
Figure BDA0001816769080000111
4-溴-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000112
在冰浴中向4-溴苯甲酸(5g，24.8mmol)和吡啶-2-胺(4.68g，49mmol)在吡啶(30mL)中的混合物中滴加POCl3(11.4g，74mmol)。将悬浮液在室温下搅拌20分钟。将反应倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(3x40mL)萃取。有机相用饱和NaCl水溶液(2x50mL)洗涤。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油＝1∶9～1∶1进行纯化，得到产物4-溴-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(3.28g，48％)。LC-MS m/z＝277.0[M+1]+。
(吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000113
将4-溴-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(2g，7.22mmol)，4，4，5，5-四(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(2.75g，10.83mmol)，PdCl2(dppf)(527mg，0.72mmol)和KOAc(235mg，2.4mmol)在甲苯(30mL)中的混合物加热至110℃保持6小时。将反应液蒸发并加入水(100mL)。将其用乙酸乙酯(2x40mL)萃取。分离有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1∶4～1∶1纯化，得到产物(吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(2g，85％)。
(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-1
Figure BDA0001816769080000121
向N-(吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺(2g，6.2mmol)在THF：H2O(24mL：6mL)的混合溶剂中的溶液中加入NaIO4(3.27g，18.6mmol)，并在室温下搅拌30分钟。加入2N HCl水溶液(1.65mL)。将其在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离并用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过使用MeOH/DCM＝1∶10的柱色谱法纯化得到产物(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-1(1.4g，93％)。LC-MS m/z＝243.1[M+1]+。
中间体II-2的合成路线
Figure BDA0001816769080000122
4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酰氯
Figure BDA0001816769080000123
向4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸(10g，40mmol)和1滴DMF的DCM(100mL)溶液中在冰浴下滴加草酰氯(10.2g，80mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后温热至室温另外3小时。浓缩，不经纯化用于下一步骤。
N-(4-氟吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000131
向4-氟吡啶-2-胺(421mg，3.76mmol)在吡啶(3mL)中的溶液中加入4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰氯(1g，3.76mmol)的DCM(6mL)溶液中，将悬浮液在0℃下搅拌30分钟。将其倒入水中并用DCM(2×20mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液洗涤，分离并用无水Na2SO4干燥。蒸发并通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油＝1∶9纯化，得到产物(1.04g，81％)。LC-MS m/z＝343.2[M+1]+。
4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-2
Figure BDA0001816769080000132
向N-(4-氟吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酰胺(1.04g，3.04mmol)在THF：H2O(24mL：6mL)的混合溶剂中的溶液中加入NaIO4(1.9g，9.12mmol)，并在室温下搅拌30分钟。加入HCl水溶液(1.65ml)。将其在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离并用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法用MeOH/DCM＝1∶10纯化。得到产物II-2(648mg，82％)。LC-MS m/z＝261.1[M+1]+。
4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-3
Figure BDA0001816769080000141
以4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(609mg，3.76mmol)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰氯(1g，3.76mmol)为原料，使用与II-2相同的合成方法得到607mg所需化合物。LC-MS m/z＝311.1[M+1]+。
4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-4
Figure BDA0001816769080000142
以4-甲基-吡啶-2-胺(406mg，3.76mmol)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰氯(1g，3.76mmol)为原料，使用与II-2相同的合成方法得到589mg所需化合物。LC-MS m/z＝257.1[M+1]+。
4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-5
Figure BDA0001816769080000143
以4-氰基-吡啶-2-胺(447mg，3.76mmol)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰氯(1g，3.76mmol)为原料，使用与II-2相同的合成方法得到465mg所需化合物。LC-MS m/z＝268.0[M+1]+。
中间体II-6的合成路线
Figure BDA0001816769080000151
4-溴-2-氟-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000152
在冰浴中向4-溴-2-氟苯甲酸(1g，4.56mmol)的DCM(30mL)溶液中滴加草酰氯(1.16g，9.13mmol)，然后加入1滴DMF。将混合物在室温下搅拌3小时。将其浓缩并溶于DCM(6mL)中，将该溶液在0℃下加入吡啶-2-胺(428mg，4.56mmol)的吡啶(3ml)溶液中，将悬浮液在0℃下搅拌，30分钟。将其倒入水中并用DCM(2×20mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液洗涤，分离并用无水Na2SO4干燥。蒸发并通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油＝1∶9纯化，得到产物(1.05g，78％)。LC-MS m/z＝295.0[M+1]+。
(吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000153
将4-溴-2-氟-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(1.05g，3.55mmol)，(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(1.36g，5.3mmol)，PdCl2(dppf)(260mg，0.36mmol)和KOAc(1.04g，10.65mmol)的甲苯(30mL)溶液加热至110℃保持6小时。将反应物蒸发并加入水(100mL)。将其用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。分离有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过柱色谱法用乙酸乙酯/石油醚＝1∶4～1∶1进行纯化，得到产物(971mg，80％)。
3-氟-4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-6
Figure BDA0001816769080000161
向2-氟-N-(吡啶-2-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烯苯甲酰胺(970mg，2.84mmol)在THF：H2O(24mL：6mL)的混合溶剂中的溶液中加入NaIO4(1.8g，8.52mmol)，并在室温下搅拌30分钟。HCl水溶液(1.65ml)。将其在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离并用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法用MeOH/DCM＝1∶10纯化。得到产物II-6(605mg，82％)。LC-MS m/z＝261.1[M+1]+。
(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-7
Figure BDA0001816769080000162
以噻唑-2-胺(376mg，3.76mmol)和4-((4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)苯甲酰氯(1g，3.76mmol)为原料，使用与II-2相同的合成方法得到580mg所需化合物II-7。LC-MS m/z＝249.1[M+1]+。
2-氟-4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-8
Figure BDA0001816769080000163
以4-溴-3-氟-苯甲酸和吡啶-2-胺为原料，使用与II-1相同的合成方法得到138mg所需化合物II-8。LC-MS m/z＝261.0[M+1]+。
2-氟-4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-9
Figure BDA0001816769080000171
以4-溴-3-氟-苯甲酸和4-(三氟甲基)-吡啶-2-胺为原料，使用与II-1相同的合成方法得到130mg所需化合物II-9。LC-MS m/z＝329.0[M+1]+。
2-甲氧基-4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-10
Figure BDA0001816769080000172
以4-溴-3-甲氧基苯甲酸(1g，4.36mmol)和4-(三氟甲基)-吡啶-2-胺(706mg，4.36mmol)为原料，使用与II-6相同的合成方法得到440mg所需化合物II-10。LC-MS m/z＝341.0[M+1]+。
中间体硼酸酯II-11的合成路线
Figure BDA0001816769080000173
N-(4-溴苄基)-2-甲氧基苯甲酰胺
Figure BDA0001816769080000174
4-溴苄胺(1g，5.38mmol)，2-甲氧基苯甲酸(818mg，5.38mmol)，HATU(2.45g，6.46mmol)和DIEA(1.39g，10.76mmol)在DMF(20mL)中室温下搅拌2小时。将其倒入水(50mL)中并过滤。将其用水(2×30mL)洗涤并干燥。它无需纯化即可用于下一步。得到所需化合物1.6g，收率：93％。
N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苄基)-2-甲氧基苯甲酰胺II-11
Figure BDA0001816769080000181
将N-(4-溴苄基)-2-甲氧基苯甲酰胺(1.6g，5mmol)，4，4，5，5-四甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧戊环-2-基)-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(1.9g，7.5mmol)，PdCl2dppf(365mg，0.5mmol)和KOAc(1.47g，15mmol)的二恶烷(30mL)溶液加热至100℃，保持6小时。浓缩，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，用乙酸乙酯/石油＝1∶9的柱色谱法纯化。得到1.5g所需化合物II-11，产率：82％。
N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苄基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺II-12
Figure BDA0001816769080000182
以5-氟-2-甲氧基苯甲酸(915mg，5.38mmol)和4-溴苄胺(1g，5.38mmol)为原料，使用与II-11相同的合成方法得到900mg所需化合物II-12。
N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苄基)-4-氟-2-甲氧基苯甲酰胺II-13
Figure BDA0001816769080000183
以4-氟-2-甲氧基苯甲酸(915mg，5.38mmol)和4-溴苄胺(1g，5.38mmol)为原料，使用与II-11相同的合成方法得到1g所需化合物II-13。
中间体A-4的合成路线
Figure BDA0001816769080000191
4-(((3-氯吡嗪-2-基)甲基)氨基甲酰基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-1
Figure BDA0001816769080000192
4-(苄氧基羰基)双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸(2g，6.9mmol)，HATU(2.89g，7.6mmol)，DIEA(3.56g，27.6mmol)和(3-氯吡嗪-2-基)甲胺的盐酸盐(1.3g，7.24mmol)的DMF(20mL)溶液在室温下搅拌6小时。倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1～1∶0的柱色谱法纯化，得到2g所需化合物A-1，收率：70％。LC-MS m/z＝414.9[M+1]+。
4-(8-氯咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-2
Figure BDA0001816769080000193
向4N-(((3-氯吡嗪-2-基)甲基)氨基甲酰基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-1(2g，4.83mmol)的ACN(30mL)溶液中加入吡啶(381mg，4.83mmol)和PCl5(4g，19.32mmol)，然后将混合物加热至56℃保持1小时。冷却至室温并缓慢倒入100mL冰饱和NaHCO3水溶液中。保持pH＝9，将其用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到1.5g所需化合物A-2，收率：78％。
4-(8-氯-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-3
Figure BDA0001816769080000201
将4-(8-氯咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-2(1.5g，3.79mmol)和NIS(1.13g，5.04mmol)的DMF(10mL)混合液在N2气氛下加热至60℃，保持搅拌10小时。冷却至室温并倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。用乙酸乙酯/石油醚＝2∶3的柱色谱法纯化，得到1.52g所需化合物A-3，收率：77％。
4-(8-氨基-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-4
Figure BDA0001816769080000202
向化合物A-3(1.5g，2.87mmol)的IPA(15mL)悬浮液中加入NH4OH(3mL)，将混合物加热至110℃，保持6小时。浓缩并加入20mL饱和NaHCO3水溶液。用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚柱色谱纯化＝1∶1，得到1.1g所需化合物A-4，收率：77％。
中间体B-3的合成路线
Figure BDA0001816769080000211
4-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯B-1
Figure BDA0001816769080000212
将2-(4，6-二氯嘧啶-5-基)乙醛(735mg，3.8mmol)，4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯(1g，3.8mmol)和Et3N(389mg，3.8mmol)的EtOH(20mL)溶液加热至80℃，保持16小时。将其浓缩并加入水(20mL)用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，通过柱色谱用EA/PE＝1∶4纯化，得到1.25g所需化合物B-1，收率：83％。LC-MS m/z＝397.1[M+1]+。
4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯B-2
Figure BDA0001816769080000213
向化合物B-1(1.25g，3.16mmol)的DMF(10mL)溶液中加入NIS(950mg，4.2mmol)，将混合物加热至60℃，保持6小时。将其倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，通过柱色谱法用EA/PE＝1∶4纯化，所需得到1.09g化合物，收率：66％。LC-MS m/z＝523.1[M+1]+。
4-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯B-3
Figure BDA0001816769080000221
向4-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)双环苄基的溶液[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸酯B-2(1.09g，2.08mmol)的IPA(10mL)溶液中加入NH4OH(2mL)并将混合物加热至110℃保持6小时，浓缩并倒入NaHCO3水溶液中，用DCM(2×20mL)萃取，分离有机相，干燥并过滤，将其浓缩并通过柱色谱法用MeOH/DCM＝1∶20纯化，得到900mg所需化合物B-3，收率：86％
中间体C-4的合成路线
Figure BDA0001816769080000222
4-(6-氯-5-硝基嘧啶-4-基氨基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯C-1
Figure BDA0001816769080000223
将4，6-二氯-5-硝基嘧啶(518mg，2.68mmol)，4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯I-5(698mg，2.68mmol)和Et3N(1.1g，10.72mmol)的DCM(20mL)溶液在室温下搅拌4小时。除去溶剂并将残余物用乙酸乙酯(50mL)处理，用饱和NaCl水溶液洗涤，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，通过柱色谱法用EA/PE＝1∶4纯化。得到633mg所需化合物C-1，收率：57％。
4-(5-氨基-6-氯嘧啶-4-基氨基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯C-2
Figure BDA0001816769080000231
向化合物C-1(400mg，0.96mmol)在混合溶剂(EtOH/H2O＝20mL/4mL)中的溶液中加入Fe粉末(268mg，4.8mmol)和NH4Cl(254mg，4.8mmol)。将混合物加热至回流1小时。冷却至室温并过滤，用MeOH(10mL)洗涤，浓缩滤液，通过柱色谱法用EA/PE＝1∶4纯化。得到292mg所需化合物C-2，收率：79％。
4-(6-氯-8-氧代-7，8-二氢嘌呤-9-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯C-3
Figure BDA0001816769080000232
在0℃下，向化合物C-2(290mg，0.75mmol)的DCM(10mL)溶液中加入Et3N(166mg，1.5mmol)和三光气(291mg，0.9mmol)，然后在0℃下搅拌。持续2小时。将其倒入水(20mL)中，分离有机相，用DCM(2×10mL)萃取水溶液，分离，用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤并浓缩，将其用于下一步骤不经纯化，得到C-3粗品316mg。
4-(6-氨基-8-氧代-7，8-二氢嘌呤-9-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯C-4
Figure BDA0001816769080000233
向化合物C-3(310mg，0.75mmol)的IPA(10mL)溶液中加入NH4OH(2mL)，将混合物加热至150℃，保持24小时，浓缩，倒入NaHCO3水溶液中，用将DCM(2×20mL)，分离有机相，干燥并过滤，将其浓缩并通过柱色谱法用MeOH/DCM＝1∶20纯化，得到100mg所需化合物C-4，收率：34％。LC-MS m/z＝395.1[M+1]+。
中间体D-5的合成路线
Figure BDA0001816769080000241
苄基4-(6-氯-5-甲醛基嘧啶-4-基氨基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-1
Figure BDA0001816769080000242
将I-5(1.47g、5.65mmol)、4，6-二氯嘧啶-5-甲醛(1g、5.65mmol)、三乙胺(1.15g、11.4mmol)在DCM(20mL)中的混合液室温下搅拌过夜。反应液用EA(50mL)稀释，用水洗涤(2x30mL)。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩。残留物用硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到所需的产品D-1(1.24g，55％)。LC-MS m/z＝401.0[M+1]+。
(E)-苄基4-(6-氯-5-(羟基亚氨基)甲基)嘧啶-4-基氨基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-2
Figure BDA0001816769080000243
将D-1(1.2g，3.0mmol)，羟胺-O-磺酸(0.41g，3.6mmol)在DCM/ACN(50毫升/50毫升)的混合液在室温下搅拌16h，然后在50℃搅拌6h。冷却后，浓缩至10mL，固体过滤和用ACN(2mL)洗涤，得到所需的产品D-2(1.0g，81％)。LC-MS m/z＝416.0[M+1]+。
苄基4-(4-氯-1H-吡咯[3，4-d-]嘧啶-1-基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-3
Figure BDA0001816769080000244
向D-2(1.0g，2.41mmol)的DCM(100mL)溶液中加了入DIEA(4mL)。然后滴加TsCl(0.23mL，2.9mmol)。混合物在室温下搅拌3h。反应混合物用水(100mL)处理。有机相用盐水洗涤(2x30mL)，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，由乙酸乙酯/石油醚(1∶6)洗脱，得到所需的产品D-3(400mg，42％)。LC-MS m/z＝398.1[M+1]+。
苄基4-(4-氨基-1H-吡咯[3，4-d-]嘧啶-1-基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-4
Figure BDA0001816769080000251
将D-3(400mg、1.0mmol)、氢氧化铵(30％、5mL)在异丙醇(20mL)的混合物在封管中在120℃下搅拌6h。蒸干溶剂，残留物用硅胶柱层析纯化，用PE/EA(2∶1)洗脱，得到所需的产品D-4(280mg，73.4％)。
苄基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡咯[3，4-d-]嘧啶-1-基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-5
Figure BDA0001816769080000252
将D-4(190mg、0.5mmol)、NIS(400mg、1.78mmol)、HBF4(50％、19.6mmol、4mL)在ACN(2.5mL)的混合物在封管中加热到85℃搅拌6h。冷却后，用饱和NaHCO3淬灭，用EA(2x50mL)提取。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，由用EA/PE(1∶1-1∶0)洗脱，得到所需的产品D-5(96mg，38.1％)。LC-MS m/z＝505.0[M+1]+。
实施例1
化合物A-7-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000253
3-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺A-5
Figure BDA0001816769080000261
将化合物A-4(1g，1.99mmol)在TFA/DCM(10mL/10mL)的混合溶剂中的溶液加热至60℃，保持6小时。浓缩并加入DCM(2×20mL)，浓缩并溶于DCM(20mL)中，加入5mL HCl的二恶烷溶液并在室温下搅拌10分钟。将其蒸发并加入DCM(2×20mL)，将其蒸发并加入DME(20mL)。将其在室温下搅拌30分钟。过滤并用DME(2×10mL)洗涤。所得化合物A-5无需纯化即可用于下一步骤。LC-MS m/z＝370.1[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)丁-2-炔酰胺A-6
Figure BDA0001816769080000262
将化合物A-5(1.35g，2.8mmol)，DIEA(3.28g，25.2mmol)，丁-2-炔酸(235mg，2.8mmol)和HATU(1.06g，2.8mmol)的DMF(20mL)溶液在室温下搅拌30分钟。将其倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。用乙酸乙酯/石油醚＝2∶3的柱色谱法纯化，得到800mg所需化合物A-6，收率：65％。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-1
Figure BDA0001816769080000271
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯硼酸II-1(20mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂的溶液中加热至80℃3小时。浓缩，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到10mg所需化合物A-7-1，收率：30％。LC-MS m/z＝506.2[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-氟吡啶吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-2
Figure BDA0001816769080000272
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-2(22mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的的溶液加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到15mg所需化合物A-7-2，收率：34％。LC-MS m/z＝524.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-3
Figure BDA0001816769080000281
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-3(26mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的的溶液中加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到12mg所需化合物A-7-3，收率：31％。LC-MS m/z＝574.2[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-甲基吡啶吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-4
Figure BDA0001816769080000282
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-4(22mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的溶液加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到14mg所需化合物A-7-4，收率：39％。LC-MS m/z＝520.2[M+1]+。
4-(8-氨基-3(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-氰基吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-5
Figure BDA0001816769080000291
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-5(23mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的溶液加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到12mg所需化合物A-7-5，收率：33％。LC-MS m/z＝531.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-2-氟-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-6
Figure BDA0001816769080000292
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，3-氟-4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-6(22mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的溶液加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na 2SO 4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到15mg所需化合物A-7-6，收率：42％。LC-MS m/z＝524.2[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(噻唑-2-基)苯甲酰胺A-7-7
Figure BDA0001816769080000301
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-N-(噻唑-2-基)苯甲酰胺II-7(28mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂的溶液中加热至80℃保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸干。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到13mg所需化合物A-7-7，收率：37％。LC-MS m/z＝512.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-3-氟-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-8
Figure BDA0001816769080000302
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，2-氟-4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基硼酸II-8(22mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中的溶液加热至80℃达3小时。浓缩，加入水(20mL)。用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到14mg所需化合物A-7-8，收率：39％。LC-MS m/z＝524.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-3-氟-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-9
Figure BDA0001816769080000311
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，2-氟-4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-9(28mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到19mg所需化合物A-7-9，收率：47％。LC-MS m/z＝592.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-3-甲氧基-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-7-10
Figure BDA0001816769080000312
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，2-甲氧基-4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基硼酸II-10(29mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂的溶液中加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到16mg所需化合物A-7-10，收率：38％。LC-MS m/z＝604.0[M+1]+。
N-((4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)甲基)-2-甲氧基A-7-11
Figure BDA0001816769080000321
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基)-2-甲氧基苯甲酰胺II-11(31mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到21mg所需化合物A-7-11，收率：50％。LC-MS m/z＝549.3[M+1]+。
N-((4-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)甲基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-7-12
Figure BDA0001816769080000322
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺II-12(33mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中加热至80℃。持续3个小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到24mg所需化合物A-7-12，收率：56％。LC-MS m/z＝567.0[M+1]+。
N-((-(8-氨基-3-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)甲基)-4-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-7-13
Figure BDA0001816769080000331
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基)-4-氟-2-甲氧基苯甲酰胺II-13(33mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中加热至80℃。持续3个小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。将其用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到26mg所需化合物A-7-13，收率：60％。LC-MS m/z＝567.1[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)丁-2-炔酰胺A-7-14
Figure BDA0001816769080000332
将化合物A-6(30mg，0.069mmol)，4-苯氧基苯硼酸(18mg，0.085mmol)，Pd[PPh3]4(8mg，0.0069mmol)和Cs2CO3(45mg，0.138mmol)在DME/H2O(1.5mL/0.3mL)的混合溶剂中加热至80℃，保持3小时。浓缩，加入水(20mL)。将其用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，分离有机相并用Na2SO4干燥，过滤并蒸干。用乙酸乙酯/石油醚＝1∶1的柱色谱法纯化，得到19mg所需化合物A-7-14，收率：49％。LC-MS m/z＝478.0[M+1]+。
化合物A-10-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000341
4-(1-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚烷苄基-1-基氨基甲酸A-8
Figure BDA0001816769080000342
4-(8-氨基-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸苄酯A-4(300mg，0.6mmol)，4-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯硼酸II-3(229mg，0.738mmol)，Pd[PPh3]4(69mg，0.06mmol)和Cs2O3(239mg，0.738mmol)在DME：H2O(2.5mL：0.5mL)的混合溶剂中加热到80℃过夜。浓缩，用甲醇/DCM(1∶30)柱层析法对其进行纯化。获得265毫克所需化合物A-8，产率：69％。
4-(8-氨基-3-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-9
Figure BDA0001816769080000351
将化合物A-8(265mg，0.42mmol)在DCM/TFA(10mL：10mL)混合溶剂的溶液加热到60℃18小时。蒸干后加入DCM(2x20mL)，浓缩。剩余物溶于DCM(30mL)中，加入HCl二恶烷溶液中，蒸干，加入DCM(2X20毫升)，浓缩后加入异丙醚(30mL)，搅拌2小时，过滤和用异丙醚洗涤(2X10mL)，得到196mg所需的产品A-9的盐酸盐，未经纯化直接用于下一步。
(E)-4-(8-氨基-3-(4-(4-甲氧基-丁-2-烯酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-1
Figure BDA0001816769080000352
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HATU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16，0.12mmol)和(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(2.8mg，0.024mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，将其倒入水(5mL)中并用乙酸乙酯(2X5mL)萃取，将有机相用饱和NaCl水溶液洗涤，分离有机相。用无水Na2SO4干燥，过滤并蒸干。将其通过柱色谱法纯化，用DCM/MeOH＝20∶1洗脱，得到5mg产物A-10-1，产率：35％。LC-MS m/z＝606.1[M+1]+。
(E)-4-(8-氨基-3-(4-(4-(四氢吡咯-1-基)丁-2-烯酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-2
Figure BDA0001816769080000361
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和(E)-4-(四氢吡咯-1-基)-丁-2-烯酸(4mg，0.024mmol)在DMF(1mL)的溶液中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5ml)，用乙酸乙酯(2x5ml)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-2，产率：38％。LC-MS m/z＝645.0[M+1]+。
4-(3-(4-丙烯酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-3
Figure BDA0001816769080000362
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和丙烯酸(2mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水(1ml)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-3，产率：38％。LC-MS m/z＝562.0[M+1]+。
4-(3-(4-乙酰胺基双环[2.2.1]庚-1-基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-4
Figure BDA0001816769080000371
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和乙酸(1.5mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水(1ml)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到4mg产品A-10-4，产率：31％。LC-MS m/z＝550.0[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-(三氟甲基)-吡啶-2-基)-氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-3-甲基环氧丙烷基-3-甲酰胺A-10-5
Figure BDA0001816769080000372
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和3-甲基环氧丙烷-3-羧酸(3mg，0.024mmol)的DMF(1ml)的溶液中在室温下搅拌1小时，倒入水(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)，有机相洗涤的饱和NaCl水溶液，有机相分离和用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-5，产率：40％。LC-MS m/z＝606.1[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(2-羟基-2-甲基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-6
Figure BDA0001816769080000381
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-羟-2-甲基丙酸(2.5mg，0.024mmol)在室温下被搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-6，产率：41％。LC-MS m/z＝594.1[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(2-甲氧基乙酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-7
Figure BDA0001816769080000382
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-甲氧基乙酸(2mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-7，产率：36％。LC-MS m/z＝580.1[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(3-甲氧基丙酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-8
Figure BDA0001816769080000391
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和3-甲氧基丙酸(2.5mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-8，产率：35％。LC-MS m/z＝594.1[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(1-羟基环丙烷甲酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-9
Figure BDA0001816769080000392
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和1-羟基环丙烷甲酸(2.5mg，0.024mmol)的DMF(1ml)在室温下搅拌1小时，倒入水(5mL)，用乙酸乙酯(2X5毫升)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-9，产率：36％。LC-MS m/z＝592.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(2-吗啉乙酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-10
Figure BDA0001816769080000401
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-吗啉乙酸(3.5mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到7mg产品A-10-10，产率：47％。LC-MS m/z＝635.0[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-(三氟甲基)吡-2-基)-氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-四氢呋喃-2-甲酰胺A-10-11
Figure BDA0001816769080000402
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和四氢呋喃-2-甲酸(2.8mg，0.024mmol)的DMF(1mL)中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2X5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-11，产率：35％。LC-MS m/z＝606.0[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(1-氰基环丙烷甲酰胺基)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-12
Figure BDA0001816769080000411
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和1-氰基环丙烷甲酸(2.7mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯萃取(2X5mL)，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-12，产率：42％。LC-MS m/z＝601.3[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(2-氰基乙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-13
Figure BDA0001816769080000412
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-氰基乙酸(2mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-13，产率：44％。LC-MS m/z＝575.2[M+1]+。
4-(8-氨基-3-(4-(2-氰基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺A-10-14
Figure BDA0001816769080000421
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-氰基丙酸(2.4mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品A-10-14，产率：36％。LC-MS m/z＝589.3[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-4-氰基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺A-10-15
Figure BDA0001816769080000422
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和4-氰基四氢-2H-吡喃-4-羧酸(3.7mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-15，产率：39％。LC-MSm/z＝645.0[M+1]+。
1-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶2基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)氨基甲酰基)环丙烷甲酸A-10-16
Figure BDA0001816769080000431
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和环丙烷-1，1-二羧酸(3mg，0.024mmol)的DMF(1mL)溶液中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20：1，得到6mg产品A-10-16，产率：40％。LC-MS m/z＝555.3[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶2基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)苯甲酰胺A-10-17
Figure BDA0001816769080000432
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和苯甲酸(3mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-10-17，产率：53％。LC-MS m/z＝612.2[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-吡啶-2-甲酸胺A-10-18
Figure BDA0001816769080000441
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-吡啶甲酸(3mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯萃取(2x5mL)，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到9mg产品A-10-18，产率：60％。LC-MS m/z＝613.2[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)烟酰胺A-10-19
Figure BDA0001816769080000442
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和烟酸(3mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-10-19，产量：54％。LC-MS m/z＝613.2[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-2-甲氧基苯甲酰胺A-10-20
Figure BDA0001816769080000451
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和2-甲氧基苯甲酸(3.6mg，0.024mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤，蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-10-20，产率：52％。LC-MS m/z＝642.3[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)呋喃-2-甲酰胺A-10-21
Figure BDA0001816769080000452
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和呋喃-2-羧酸(2.7mg，0.024mmol)的DMF(1mL)中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-21，产率：43％。LC-MS m/z＝602.2[M+1]+。
N-(4-(1-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-8-氨基咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)噻唑-2-甲酰胺A-10-22
Figure BDA0001816769080000461
将化合物A-9(15mg，0.024mmol)，HTAU(9.12mg，0.024mmol)，DIEA(16mg，0.12mmol)和噻唑-2-羧酸(3mg，0.024mmol)的DMF(1mL)中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-10-22，产率：40％。LC-MS m/z＝619.2[M+1]+。
化合物A-13-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000462
苄基4-(8-氨基-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸A-11
Figure BDA0001816769080000463
4-(8-氨基-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸A-4(300mg，0.6mmol)，4-苯氧苯酸(158mg，0.738mmol)，Pd[PPh3]4(69mg，0.06mmol)和Cs2O3(239mg，0.738mmol)在DME：H2O(2.5mL：0.5mL)的混合溶剂中加热到80℃过夜。浓缩后采用柱层析法纯化，得到268毫克所需化合物A-11，产率：82％。
3-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-8-胺A-12
Figure BDA0001816769080000471
化合物A-11(260mg，0.48mmol)在DCM/TFA(10mL：10mL)混合溶剂中加热到60℃搅拌18小时。蒸干后加入DCM(2x20mL)，浓缩。剩余物溶解在DCM(30mL)中，加入HCl二恶烷溶液，蒸干并加入DCM(2x20mL)。浓缩并加入异丙醚(30mL)，搅拌2小时，过滤和用异丙醚洗涤(2x10mL)，得到200mg所需的产品A-12的盐酸盐，未经纯化直接用于下一步。
N-(4-(8-氨基-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺A-13-1
Figure BDA0001816769080000472
将化合物A-12(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和2-羟基-2-丙酸(3mg，0.029mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙基乙酯萃取(2x5mL)，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-13-1，产率：57％。LC-MS m/z＝498.4[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-3-甲氧基丙酰胺A-13-2
Figure BDA0001816769080000481
将化合物A-12(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和3-甲氧基丙酸(3mg，0.029mmol)在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-13-2，产率：40％。LC-MS m/z＝498.7[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-3-甲基环氧丙烷-3-甲酰胺A-13-3
Figure BDA0001816769080000482
将化合物A-12(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和3-甲基环氧丙烷-3-羧酸(3.4mg，0.029mmol)的DMF(1mL)中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-13-3，产率：53％。LC-MS m/z＝510.2[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-(4-苯氧苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-2-吗啉乙酰胺A-13-4
Figure BDA0001816769080000491
将化合物A-12(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和2-吗啉乙酸(4.2mg，0.029mmol)在DMF(1mL)中室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到9mg产品A-13-4，产率：58％。
化合物A-16-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000492
苄基4-(8-氨基-1-(4-(5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺)苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基-氨基甲酸A-14
Figure BDA0001816769080000501
将4-(8-氨基-1-碘咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸A-4(300mg，0.6mmol)，N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苄)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺II-12(284mg，0.738mmol)，Pd[PPh3]4(69mg，0.06mmol)和Cs2O3(239mg，0.738mmol)在DME：H2O(2.5mL：0.5mL)的混合溶剂中加热到80℃搅拌过夜。浓缩后采用柱层析法纯化，得到285毫克所需化合物A-14，产率：75％。
N-(4-(8-氨基-3-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)甲基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-15
Figure BDA0001816769080000502
化合物A-14(280mg，0.44mmol)在DCM/TFA(10mL：10毫升)混合溶剂的溶液中加热到60℃搅拌18小时。蒸干并加入DCM(2x20mL)，浓缩。剩余物溶解在DCM(30mL)中，加入HCl的二恶烷溶液(10mL)，蒸干并加入DCM(2x20mL)。浓缩后加入异丙醚(30mL)，搅拌2小时，过滤和用异丙醚洗涤(2x10mL)，得到180mg所需的产品A-15的盐酸盐，未经纯化直接用于下一步。
N-(4-(8-氨基-3-(4-(2-羟基-2-甲基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)甲基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-16-1
Figure BDA0001816769080000511
将化合物A-15(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和2-羟-2-丙酸(2.6mg，0.025mmol)在DMF(1mL)中室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯萃取(2x5mL)，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品A-16-1，产率：40％。LC-MS m/z＝587.3[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-3-(4-(3-甲氧基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-16-2
Figure BDA0001816769080000512
将化合物A-15(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和3-甲氧基丙酸(2.6mg，0.025mmol)在DMF(1mL)中室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到8mg产品A-16-2，产率：40％。LC-MS m/z＝587.3[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-1-(4-(5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺)苯基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-3-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-3-甲基环氧丙烷-3-甲酰胺A-16-3
Figure BDA0001816769080000521
将化合物A-15(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和3-甲基环氧丙烷-3-羧酸(2.9mg，0.025mmol)的DMF(1mL)中在室温下搅拌1小时，倒入水中(5mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到10mg产品A-16-3，产率：66％。LC-MS m/z＝599.3[M+1]+。
N-(4-(8-氨基-3-(4-(2-吗啉乙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)咪唑并[1，5-a]吡嗪-1-基)苯基)-5-氟-2-甲氧基苯甲酰胺A-16-4
Figure BDA0001816769080000522
将化合物A-15(15mg，0.025mmol)，HATU(9.3mg，0.025mmol)，DIEA(19mg，0.15mmol)和2-吗啉乙酸(3.6mg，0.025mmol)在DMF(1mL)中室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到9mg产品A-16-4，产量：57％。LC-MS m/z＝628.3[M+1]+。
化合物B-6-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000531
苄基4-(5-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-4-氨基-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸B-4
Figure BDA0001816769080000532
将化合物B-3(200mg，0.4mmol)，4-(4-(三氟甲基)吡啶2-基)氨基甲酰基)苯硼酸II-3(152mg，0.49mmol)，Pd[PPh3]4(46mg，0.04mmol)和Cs2CO3(159mg，0.49mmol)在DME：H2O(2.5mL：0.5mL)的混合溶剂中加热到80℃过夜。浓缩后剩余物用甲醇/DCM(1∶40)柱层析纯化。得到187mg所需化合物B-4，产率：73％。
4-(4-氨基-7-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺B-5
Figure BDA0001816769080000533
化合物B-4(187mg，0.29mmol)在DCM/TFA(10mL：10mL)混合溶剂中加热到60℃ 18小时。蒸干并加入DCM(2x20mL)，浓缩。剩余物中再加入DCM(30mL)，加入盐酸二恶烷溶液中(10mL)，蒸干，重新加入DCM(2X20毫升)，再蒸干。加入异丙醚(30mL)，搅拌2小时，过滤和用异丙醚洗涤(2x10mL)，得到所需的产品B-5的盐酸盐，未经纯化直接用于下一步反应。
4-(4-氨基-7-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺B-6-1
Figure BDA0001816769080000541
将化合物B-5(19mg，0.031mmol)，HATU(12mg，0.031mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)和丁-2-炔酸(2.6mg，0.031mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到11mg产品B-6-1，产率：59％。LC-MS m/z＝574.3[M+1]+。
4-(4-氨基-7-(4-(2-羟基-2-甲基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺B-6-2
Figure BDA0001816769080000542
将化合物B-5(19mg，0.031mmol)，HATU(12mg，0.031mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)和2-羟基-2-甲基丙酸(3.2mg，0.031mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到9mg产品B-6-2，产率：49％。LC-MSm/z＝594.2[M+1]+。
4-(4-氨基-7-(4-(3-甲氧基丙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺B-6-3
Figure BDA0001816769080000551
将化合物B-5(19mg，0.031mmol)，HATU(12mg，0.031mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)和3-甲氧基丙酸(3.2mg，0.031mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到12mg产品B-6-3，产率：66％。LC-MS m/z＝594.2[M+1]+。
N-(4-(5-(4-(4-(三氟甲基)吡啶2基)氨基甲酰基苯基)-4-氨基-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-7-基)双环[2.2.1]庚-1-基)-3-甲基环氧丙烷-3-甲酰胺B-6-4
Figure BDA0001816769080000552
将化合物B-5(19mg，0.031mmol)，HATU(12mg，0.031mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)和3-甲基环氧丙烷-3-羧酸(3.6mg，0.031mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到12mg产品B-6-4，产率：64％。LC-MS m/z＝606.3[M+1]+。
4-(4-氨基-7-(4-(2-吗啉乙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)-7H-吡咯[2，3-d]嘧啶-5-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺B-6-5
Figure BDA0001816769080000561
将化合物B-5(19mg，0.031mmol)，HATU(12mg，0.031mmol)，DIEA(24mg，0.19mmol)和2-吗啉乙酸(4.5mg，0.031mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到11mg产品B-6-5，产率：58％。LC-MS m/z＝635.2[M+1]+。
化合物C-7-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000562
苄基4-(7-(4-(4-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基苯基)-6-氨基-8-羰基-7，8-二氢嘌呤-9-基)双环[2.2.1]庚-1-基氨基甲酸C-5
Figure BDA0001816769080000571
将化合物C-4(100mg，0.25mmol)，4-(4-(三氟甲基)吡啶2基)氨基甲酰基)苯硼酸II-3(160mg，0.5mmol)，醋酸铜(60mg，0.3mmol)和Et3N(30mg，0.3mmol)在DCM(10毫升)中在室温下搅拌24小时。倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯(2x10mL)萃取。有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干，用柱层析法纯化EA/PE＝1∶1～EA。得到47mg所需的化合物C-5，产率：29％。LC-MS m/z＝657.3[M-1]-。
4-(6-氨基-9-(4-氨基双环[2.2.1]庚-1-基)-8-羰基-8，9-二氢嘌呤-7-基)-N-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺C-6
Figure BDA0001816769080000572
将化合物C-5(45mg，0.09mmol)在DCM/TFA(10mL：10mL)混合溶剂中加热到60℃18小时。蒸干并且加入DCM(2x20mL)，浓缩。剩余物溶解在DCM(30mL)中，加入盐酸二恶烷溶液中(10mL)，蒸干后再加DCM(2x20mL)，浓缩后加入异丙醚(30mL)，搅拌2小时，过滤和用异丙醚(2x10毫升)洗涤，得到所需的产品C-6的盐酸盐，未经纯化直接用于下一步。
4-(6-氨基-9-(4-丁-2-炔酰胺双环[2.2.1]庚-1-基)-8-羰基-8，9-二氢嘌呤-7-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺C-7-1
Figure BDA0001816769080000581
将化合物C-6(13mg，0.022mmol)，HATU(9mg，0.022mmol)，DIEA(16.8mg，0.13mmol)和丁-2-炔酸(1.8mg，0.022mmol)的DMF(1mL)的溶液中在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，有机相分离，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到5mg产品C-7-1，产率：38％。LC-MSm/z＝591.2[M+1]+。
4-(6-氨基-9-(4-(2-吗啉乙酰胺)双环[2.2.1]庚-1-基)-8-羰基-8，9-二氢嘌呤-7-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯甲酰胺C-7-2
Figure BDA0001816769080000582
将化合物C-6(13mg，0.022mmol)，HATU(9mg，0.022mmol)，DIEA(16.8mg，0.13mmol)和2-吗啉乙酸(3.2mg，0.022mmol)的DMF(1mL)溶液在室温下搅拌1小时，倒入水中(1mL)，用乙酸乙酯(2x5mL)萃取，有机相用饱和NaCl水溶液冲洗，分离有机相，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸干。用柱层析法纯化DCM/MeOH＝20∶1，得到6mg产品C-7-2，产率：42％。LC-MS m/z＝652.2[M+1]+。
化合物D-8-n的合成路线
Figure BDA0001816769080000591
苄基4-(3-(4-(4-三氟甲基)吡啶2基)氨基甲酰基苯基)-4-氨基-1H-吡咯[3，4-d]嘧啶1-基)双环[2.2.1]庚烷-1-基氨基甲酸D-6
Figure BDA0001816769080000592
将D-5(96mg，0.19mmol)，II-3(73mg，0.234mmol)，Pd[PPh3]4(22mg，0.019mmol)，Cs2CO3(76.4mg，0.234mmol)在DME/H2O(9mL/1mL)的混合液用N2脱氧1min后在封管中加热到80℃搅拌12h。冷却后，用盐水(20mL)淬火反应，用EA(2x50mL)萃取。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，由用PE/EA(1∶1)洗脱，得到所需的产品D-6(42mg，34.4％)。LC-MS m/z＝643.2[M+1]+。
4-(4-氨基-1-(4-氨基双环[2.2，1]庚烷-1-基)-1H-吡咯[3，4-d]嘧啶-3-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯酰胺D-7
Figure BDA0001816769080000593
将D-6(42mg，0.065mmol)在TFA/DCM(1mL/1mL)的混合物在60℃搅拌12h。冷却后，蒸干溶剂，加入二恶烷(2mL)的HCl溶液，搅拌10min，浓缩。残留物加入异丙醚(10mL)，搅拌，再浓缩。重复上述程序两次。固体被过滤和洗与异丙醚，干燥，得到所需的产品D-7的HCl盐(30mg，75％)。
4-(4-氨基-1-(4-丁-2-炔基氨基双环[2.2.1]庚烷-1-基)-1H-吡咯[3，4-d]嘧啶-3-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯酰胺D-8-1
Figure BDA0001816769080000601
将D-7(15mg，0.025mmol)、丁-2-炔酸(2mg，0.024mmol)、HATU(9.1mg，0.024mmol)和DIEA(0.041mL，0.241mmol)在DMF(1mL)中的混合液在室温下搅拌4h。反应液用EA(30mL)稀释，用盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，用PE/EA(1∶1)洗脱，得到所需的产品D-8-1(12mg，86％)。LC-MS m/z＝575.2[M+1]+。
4-(4-氨基-1-(4-(2-吗啉乙酰胺基)双环[2.2.1]庚烷-1-基)-1H-吡咯[3，4-d]嘧啶-3-基)-N(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯酰胺D-8-2
Figure BDA0001816769080000602
将D-7(15mg、0.025mmol)、2-吗啉乙酸(3.5mg、0.024mmol)、HATU(9.1mg、0.024mmol)和DIEA(0.041mL、0.241mmol)在DMF(1mL)的混合液在室温下搅拌4h。反应用EA(30mL)稀释，用盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，用PE/EA(1∶1)洗脱，得到所需的产品D-8-2(8.5mg，56％)。LC-MS m/z＝636.2[M+1]+。
1.对BTK(wt)/BTK(C481S)的体外抑制活性(IC50值的测定)
(1)实验方法
底物溶液的配制是将底物聚(Glu，Tyr)钠盐(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)加入到底物反应缓冲液(20mM Hepes(pH 7.5)，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.02％Brij35，0.02mg/ml BSA，0.1mM Na3VO4，2mM DTT和1％DMSO)中(最终底物在反应中的浓度是0.2uM)。将测试化合物用100％DMSO配制成10mM浓度的储备液中，并在384孔循环烯烃共聚物LDV微量培养板中进行10次剂量的3倍连续稀释。将BTK(WT)或者BTK(C481S)激酶(重组人源全长蛋白，组氨酸标签，在昆虫细胞中表达，Invitrogen，Carlsbad，CA)加入底物溶液中并轻轻混合(最终BTK在反应中的浓度为8nM)。然后，通过声学液体转移技术(Echo550；纳升范围)(LabcyteInc，Sunnyvale，CA)将100％DMSO中的测试化合物加入到激酶反应混合物中，并在室温下温育20分钟。将33P-ATP(特定活性10μCi/μl)加入到反应混合物中以引发反应，随后在室温下孵育2小时。取小部分反应液点在P-81离子交换滤纸(Whatman)上。用0.75％磷酸缓冲液洗去滤纸上未结合的磷酸盐(三次)并干燥后，测量留在滤纸上的放射性。激酶活性数据用测试样品中剩余激酶活性与载体(二甲基亚砜)空白反应的百分比来表示。使用Prism(GraphPad Software)软件对获得数据进行曲线拟合来计算IC 50值。
(2)实验结果
本发明所术大部分化合物拥有比第二代BTK抑制剂Acalabrutinib更强的对BTK(WT)野生型酶活性的抑制能力，更为重要的是绝大部分化合物对BTK(C481S)突变体显示出更杰出的抑制活性，有的甚至小于0.1nM。
表1.BTK(wt)/BTK(C481S)酶活性的抑制结果：A≤0.1nM；0.1nM＜B≤1nM；1nM＜C≤10nM；10nM＜D≤50nM；
Figure BDA0001816769080000611
Figure BDA0001816769080000621

Claims (13)

1.式I的化合物
Figure FDA0003011106650000011
或其药学上可接受的盐，其中，A环选自以下结构之一：
Figure FDA0003011106650000012
R5选自氢；
B环选自以下结构之一：
Figure FDA0003011106650000013
C环选自以下结构之一：
Figure FDA0003011106650000014
L为选自以下结构之一：
Figure FDA0003011106650000015
R1选自以下结构：
Figure FDA0003011106650000016
其中，R3选自氢、取代或非取代的C1-6烷基、取代或非取代的C2-6炔基、取代或非取代的C2-6烯基、取代或非取代的C6-10芳基、取代或非取代的C1-9杂芳基、取代或非取代的C3-7环烷基、取代或非取代的C2-7杂环烷基；
所述R3中的取代的C1-6烷基、取代的C2-6炔基、取代的C2-6烯基、取代的C6-10芳基、取代的C1-9杂芳基、取代的C3-7环烷基、取代的C2-7杂环烷基中的取代基选自氰基、羟基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或C3-7杂环烷基中的一个或多个；
R2选自H。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R1选自以下结构之一:
Figure FDA0003011106650000021
3.权利要求1～2中任一项所述的化合物在制备预防或治疗异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症与过度布鲁顿酪氨酸激酶活性相关。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症与过度布鲁顿酪氨酸激酶突变体C481S活性相关。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述异种免疫性疾病、自身免疫性疾病或癌症与异常B细胞增殖相关。
7.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述异种免疫性疾病为炎性疾病或哮喘。
8.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病为红斑狼疮、慢性淋巴细胞性淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。
9.一种药物组合物，包含一种以上如权利要求1～2中任一项所述的化合物。
10.一种药物制剂，包含治疗有效量的如权利要求1～2中任一项所述的化合物，以及在药学上可接受的赋形剂。
11.权利要求1～2中任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(S1)化合物IIIA和硼酸或硼酸酯II进行Suzuki偶合得到化合物IV；(S2)化合物IV用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物V的盐酸盐；(S3)化合物V与有机酸偶合得到化合物I；
Figure FDA0003011106650000031
其中X＝卤素，R2，R1，L，A环，B环和C环如权利要求1～2中所述。
12.权利要求1～2中任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(A1)化合物IIIA用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物VI的盐酸盐；(A2)化合物VI与有机酸偶合得到化合物VII；(A3)化合物VII与硼酸或硼酸酯II进行Suzuki偶合得到化合物I；
Figure FDA0003011106650000032
其中X＝卤素，R2，R1，L，A环，B环和C环如权利要求1～2中所述。
13.权利要求1～2中任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(B1)化合物IIIB和硼酸II在醋酸铜催化下进行Chan-Lam-Evans偶合得到化合物VIII；(B2)化合物VIII用三氟乙酸处理脱去苄氧羰基后转化成化合物IX的盐酸盐；(B3)化合物IX与有机酸偶合得到化合物I；
Figure FDA0003011106650000041
其中R2，R1，L，A环，B环和C环如权利要求1～2中所述。
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