CN110248641A - 包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用组合物 - Google Patents
包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生用、伤口愈合用或皮肤舒缓用组合物,具体而言,涉及一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品组合物、皮肤外用剂、医药外品组合物及保健功能食品组合物。本发明的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物由于促进角质形成细胞的增殖及迁移,促进作为构成皮肤基质的蛋白质的弹性蛋白的表达,并且呈现出抑制NO生成的抗炎活性,因此能够有效地应用到皮肤再生、皮肤舒缓及伤口愈合中。
Description
技术领域
本发明涉及一种包含丝胶(sericin)、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用组合物,具体而言,涉及一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品组合物、皮肤外用剂、医药外品组合物以及保健功能食品组合物。
背景技术
皮肤与外部环境直接接触的同时承担从多种有害因子中保护我们的身体的功能。但是,皮肤因年龄的增加、紫外线、外部污染物质、压力、外伤等而受损,在该情况下开始受损皮肤的再生过程。皮肤再生为组织恢复过程,其经由包含细胞增殖、分化及复制、基质蛋白(matrix protein)的合成、血管的新生及创伤的再构成等在内的复杂生物学过程而构成。
具体而言,如果皮肤受损则首先产生炎症反应。因通过捕食经伤口进入的细菌而激活的巨噬细胞开始炎症反应,为了使如NO、NO2、HNO2、ONOO-等的活性氮物种(reactiventrogen species,RNS)攻击异物,大量生成炎症反应。但是,由于过度的炎症反应过多地生成上述活性氮物种并引起皮肤坏死、结节、囊肿等,因此为了进行适当的治疗而需要调节炎症反应。
然后,进行细胞增殖及迁移过程,该过程从皮肤受损之后两日起持续进行至三周。在该时期成纤维细胞活跃增殖,增殖后的细胞朝向受损皮肤移动而修补瑕疵,或者积累胶原蛋白、弹性蛋白等基质蛋白而赋予皮肤的弹力、保湿、柔韧性等。因此,为了皮肤再生、伤口愈合及皮肤的刺激缓解而适当控制炎症反应,并且通过促进成纤维细胞的增殖及迁移等而再构成皮肤是很重要的。
与此相关联地,正在进行用于皮肤的再生、舒缓或伤口愈合的多种物质的开发。具体而言,已知有将呈现出促进胶原蛋白生成的效果等的海马提取物作为有效成分含有的用于保湿、皱纹改善、美白、抗过敏或皮肤舒缓的化妆品组合物(韩国授权专利公报第10-1788537号)、包含从呈现出促进角质形成细胞的增殖和迁移的效果等的木槿树的花中提取的精油的用于皮肤再生的外用剂及化妆品组合物(韩国授权专利公报第10-1762750号)等。
发明内容
技术问题
本发明人为了开发一种使皮肤再生或舒缓且呈现出伤口愈合效果的物质而进行了深入研究,其结果确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物促进角质形成细胞/成纤维细胞的增殖及迁移,并且促进构成皮肤基质的基因的表达,进而呈现出优异的抗炎症效果,从而完成了本发明。
技术方案
本发明的一目的是提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品组合物。
本发明的另一目的是提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用皮肤外用剂。
本发明的又一目的是提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用医药外品组合物。
本发明的又一目的是提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用保健功能食品组合物。
有益效果
本发明的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物由于促进角质形成细胞的增殖及迁移,促进作为构成皮肤基质的蛋白质的弹性蛋白的表达,并且呈现出抑制NO生成的抗炎活性,因此能够有效地应用到皮肤的再生、舒缓及伤口愈合中。
附图说明
图1是呈现出丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的细胞增殖促进效果的图表。其中,*表示p<0.05,**表示P<0.01。
图2是呈现出丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的细胞迁移促进效果的图表(A)及图像(B)。其中,*表示p<0.05,**表示P<0.01。
图3是呈现出丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的皮肤基质基因(elastin;弹性蛋白)的表达促进效果的图表。其中,*表示p<0.05。
图4是呈现出丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的NO(Nitric Oxide,一氧化氮)生成减少效果的图表。其中,*表示p<0.05。
具体实施方式
本发明的一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品组合物。
本发明的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物由于促进角质形成细胞的增殖及迁移,促进构成皮肤基质的弹性蛋白基因的表达,并且抑制NO生成的抗炎症效果优异,因此能呈现出优异的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合效果。
本发明的术语“丝胶”为由桑蚕制成的蛋白质,呈现出与明胶类似的特性。如果将该丝胶溶解于热水后冷却则凝胶化,由于该丝胶对水的溶解性较高且分子量较低而容易用作提取物。
本发明的术语“蛇床子”(Erect hedge parsley)是指属于具有Torilis japonica学名的伞形科的两年生草本植物。该蛇床子在中医中用作药材,已知为对慢性湿疹或外***的瘙痒症、阴囊湿疹有效。
本发明的术语“槲寄生”(mistletoe)是指具有Viscum album学名的槲寄生科的寄生灌木。该槲寄生的茎和叶子在中医中用作药材,已知为在牙痛、腰痛、冻伤、动脉硬化等中使用该槲寄生。
此外,本发明的术语“蛇床子提取物”及“槲寄生提取物”是指从所述蛇床子及槲寄生中提取的提取物。
具体而言,所述术语“提取物”包含通过对所述蛇床子或槲寄生进行提取处理而得到的提取液、所述提取液的稀释液或浓缩液、通过对所述提取液进行干燥而得到的干燥物、所述提取液的粗纯化物或纯化物、或者它们的混合物等、提取液自身以及可利用提取液来形成的所有剂型的提取物。
提取所述蛇床子或槲寄生的方法并不特别受限,可根据本技术领域中通常使用的方法来提取所述蛇床子或槲寄生。作为所述提取方法的非限制性例,可列举热水提取法、超声波提取法、过滤法、回流提取法等,这些方法可单独执行或者并用两种以上的方法来执行。
此外,提取所述蛇床子或槲寄生时使用的提取溶剂的种类并不特别受限,可使用本技术领域中公知的任意溶剂。作为所述提取溶剂的非限制性例,可列举水、碳原子数为1至4的醇或它们的混合溶剂等,它们可单独使用或混合一种以上来使用。
本发明的术语“皮肤再生”是指对应于整体皮肤老化及皮肤诱发的损伤等而再构成皮肤组织的一系列反应,主要通过角质形成细胞等的皮肤细胞的增殖及迁移来执行皮肤再生。随着皮肤再生而能呈现出皮肤弹力增加及皱纹改善效果。另外,所述损伤可以是因紫外线、外部污染物质、创伤、外伤、烧伤、压力等而导致的,但并不限于此。
本发明的术语“伤口”为活体受损的状态,也称作创伤。可因紫外线、外部污染物质、创伤、外伤、烧伤等外部原因或压力等内部原因而引起所述损伤。
此外,本发明的术语“伤口愈合”是指如上所述的伤口的恢复。所述愈合过程被划分为急性期、修复期及瘢痕化步骤。急性期也称作渗出期,伴随炎症反应及血液凝固反应。修复期也称作增殖期,细胞的增殖及迁移活跃进展,并且通过活跃合成作为***的一种的胶原蛋白、弹性蛋白等蛋白质而再生表皮组织。瘢痕化步骤为活跃的细胞增殖变慢且交联构成***的蛋白质的同时损伤部位的物理强度增加的步骤,与周围的正常组织不同的其他组织位于损伤部位。通过反复如上所述的步骤而使伤口愈合。
在本发明中,所述皮肤再生或伤口愈合的原因并不受限,但具体而言可通过促进角质形成细胞的增殖、迁移或弹性蛋白基因的表达来实现所述皮肤再生或伤口愈合。
本发明的术语“皮肤舒缓”是指缓解并消退红斑或受刺激的皮肤部位等,可以是包含皮肤刺激缓解在内的概念。例如,可列举皮肤的水分损失减少和/或红晕减少,但并不限于此。
在本发明中,皮肤舒缓原因并不受限,具体而言可通过抗炎活性来实现皮肤舒缓,并且可通过本发明的组合物的抗炎活性来改善皮肤炎症而舒缓皮肤。
在本发明的具体一实施例中,确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物与各个单体物质相比促进角质形成细胞的增殖及迁移(图1及图2),并且促进作为皮肤基质蛋白的弹性蛋白的基因表达(图3),呈现出抑制LPS诱导NO合成的抗炎效果(图4)。
这给出了包含所述丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的本发明的组合物可有效地用作皮肤再生、伤口愈合或皮肤舒缓用途的启示。
本发明的化妆品组合物相对于组合物的总重量可包含0.0001至80重量%、具体而言0.0005至70重量%、更具体而言0.001至60重量%的所述丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物。如果所述含量小于0.0001重量%,则无法充分实现本来所期望的活性而不优选,如果所述含量大于80重量%,则无法与增加的含量相应地期待明显的效果增强而非经济性的,并且有可能在化妆品组合物的稳定性方面发生问题。
本发明所涉及的化妆品组合物可制备为选自由溶液、外用软膏、霜、泡沫、营养化妆水、柔软化妆水、面膜、柔软水、乳液、隔离霜、精华素、香皂、液体清洁料、入浴剂、防晒霜、防晒油、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、露、粉、香皂、含表面活性剂的洗面奶、油、粉末粉底、乳浊液粉底、蜡粉底、贴膜及喷雾组成的组的剂型,但并不限于此。
此外,本发明的化妆品组合物可进一步包含调配到普通皮肤化妆品中的化妆品学上可接收的一种以上的载体,可适当地调配作为通常成分的例如油分、水、表面活性剂、保湿剂、低级醇、增稠剂、螯合剂、色素、防腐剂、香料等,但并不限于此。
包含在本发明的化妆品组合物中的化妆品学上可接收的载体根据剂型而多种多样。
在本发明的剂型为软膏、糊剂、霜或凝胶的情况下,作为载体成分可利用动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌或它们的混合物。
在本发明的剂型为粉剂或喷雾剂的情况下,作为载体成分可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉或它们的混合物,特别是在本发明的剂型为喷雾剂的情况下,可进一步包含如氢氯氟化碳、丙烷/丁烷或二甲醚等的推进剂。
在本发明的剂型为溶液或乳浊液的情况下,作为载体成分可利用溶剂、增溶剂或乳化剂,例如可利用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇及1,3-丁二醇油,特别是可利用棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油、甘油脂肪酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇的脂肪酸酯。
在本发明的剂型为悬浮液的情况下,作为载体成分可利用液状稀释剂(如水、乙醇或丙二醇)、悬浮剂(如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯)、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等。
在本发明的剂型为香皂的情况下,作为载体成分可利用脂肪酸的碱金属盐、脂肪酸半酯盐、脂肪酸蛋白水解物、羟乙基磺酸盐、羊毛脂衍生物、脂肪族醇、植物性油、甘油、糖等。
在本发明的剂型为面膜(剥离面膜、清洗(wash off)面膜或面膜贴)的情况下,作为载体成分可利用聚乙烯醇、高岭土、滑石、氧化锌或二氧化钛等。
本发明的另一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用皮肤外用剂。
此时,关于所述“丝胶”、“蛇床子提取物”、“槲寄生提取物”、“皮肤再生”、“伤口愈合”及“皮肤舒缓”的说明如前所述。
本发明的术语“皮肤外用剂”为包含一般在皮肤外用中使用的整个物质的一笼括的概念,作为皮肤外用剂剂型的非限制性例,具有膏药剂(plaster)、涂剂(lotion)、搽剂(liniment)、液体药剂(liquid and solution)、气雾剂(aerosol)、浸膏剂(extracts)、软膏剂(ointment)、流浸膏剂(fluid extracts)、乳剂(emulsion)、悬浮剂(suspesions)、胶囊剂(capsules)、霜剂(creams)、软质明胶胶囊、硬质明胶胶囊、贴剂或缓释制剂。
本发明所涉及的皮肤外用剂可以是通过添加常用的无机或有机载体、赋形剂及稀释剂而制剂化为固体、半固体或液状形态的非经口给药剂。用于所述非经口给药的制剂可以是选自由滴剂、软膏、涂剂、凝胶、霜、贴片、喷雾剂、悬浮剂及乳剂组成的组中的经皮给药型剂型,但并不限于此。
作为可包含在所述外用剂中的载体、赋形剂及稀释剂,可列举乳糖、葡萄糖、蔗糖、低聚糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇、淀粉、***胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙烷酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。
对于利用各剂型的皮肤外用剂组合物来说,本领域技术人员可根据其他皮肤外用剂的剂型或使用目的而毫无困难地适当选择并配合除上述本发明的组合物以外的其他成分,在该情况下与其他原料同时应用时有可能产生相乘效果。
此外,本发明的皮肤外用剂也可以作为药学组合物使用。
本发明的药学组合物可进一步包含药学组合物的制备中通常使用的药学上可接收的载体、赋形剂或稀释剂,所述载体可包含非天然载体(non-naturally occuringcarrier)。
所述药学组合物可通过各个通常方法剂型化为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液剂、糖浆剂或气雾剂等的口服型剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态而使用。
所述“药学上可接收的”是指呈现出不会对露出到所述组合物中的细胞或人类具有毒性的特性。
具体而言,所述载体的种类不受特别限制,只要是该技术领域中通常使用且药学上可接收的载体则可使用任何载体。作为所述载体的非限制性例,可列举盐水、灭菌水、林格氏液、缓冲盐水、白蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇等。它们可单独使用或者混合两种以上而使用。此外,必要时可通过添加抗氧化剂、缓冲液和/或制菌剂等其他通常的添加剂而使用,并且可通过进一步添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、结合剂、润滑剂等来制剂化为如水溶液、悬浮液、乳浊液等的注射用剂型、丸药、胶囊、颗粒或片剂等而使用。
此时,包含在所述药学组合物中的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的含量不受特别限制,相对于药学组合物的总重量,可包含0.01至100重量%,具体而言可包含1至80重量%。
本发明的又一方式提供一种皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合方法,该方法包括将所述药学组合物给药到需要该药学组合物的个体中的步骤。
此时,关于所述“丝胶”、“蛇床子提取物”、“槲寄生提取物”、“皮肤再生”、“伤口愈合”及“皮肤舒缓”的说明如前所述。
本发明的术语“个体”是指包含需要皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合的人类在内的所有动物。
本发明的术语“给药”是指利用适当的方法向个体导入规定的物质。可通过能够到达活体内的标的的任何一般路径来给药本发明的组合物。本申请的组合物的给药路径不受特别限制,可进行经口或非经口给药。具体而言,可进行非经口给药,更具体而言可应用涂敷于皮肤的方式(即,经皮给药)。
更具体而言,本发明的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合方法可包括向个体以药学上有效的量给药所述药学组合物的步骤。
本发明的术语“药学上有效的量”是指足以按医药学治疗中可应用的合理的受益/危险比率治疗疾患且不会引起副作用的程度的量,本领域技术人员可根据包含患者的性别、年龄、体重、健康状态、疾病种类、重症度、药物活性、对药物的敏感度、给药方法、给药时间、给药路径和排出比率、治疗期间、调配或者同时使用的药物在内的要素及其他医学领域中众所周知的要素来容易确定有效用量水平。
本发明的药学组合物可以以独立治疗剂给药,或者与其他治疗剂一并给药,或者可以依次或同时给药本发明的药学组合物和现有的治疗剂。此外,可以给药单一或多种本发明的药学组合物。考虑上述所有要素而给药不会诱发副作用的同时能够以最小量获得最大效果的量是很重要的,这可由本领域技术人员容易确定。
本发明的又一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用医药外品组合物。
此时,关于所述“丝胶”、“蛇床子提取物”、“槲寄生提取物”、“皮肤再生”、“伤口愈合”及“皮肤舒缓”的说明如前所述。
本发明的术语“医药外品”是指与以诊断、治疗、改善、减轻、处置或预防人类或动物的疾病的目的使用的物品中的医药品相比作用微小的物品。例如,药事法所涉及的医药外品是除了以医药品的用途使用的物品以外,包含用于治疗或预防人类/动物的疾病的产品、对人体的作用微小或不会直接作用的产品等。
在将本发明所涉及的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物用作医药外品添加物的情况下,能够直接添加所述组合物或者能够与其他医药外品或医药外品成分一同使用所述组合物,可根据通常方法适当使用所述组合物。可根据使用目的(预防、健康或治疗处置)来适当地确定有效成分的混合量。
所述医药外品组合物不受特别限制,具体而言,可通过制备为软膏剂、涂剂、喷雾剂、贴片剂、霜剂、散剂、悬浮剂、凝胶剂或凝胶的形态来使用。
本发明的又一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用保健功能食品组合物。
此时,关于所述“丝胶”、“蛇床子提取物”、“槲寄生提取物”、“皮肤再生”、“伤口愈合”及“皮肤舒缓”的说明如前所述。
本发明的术语“保健功能食品”(functional food)为与特定保健用食品(foodfor special health use,FoSHU)相同的术语,是指加工为除供应营养以外高效地呈现活体调节机能的医学及医疗效果高的食品。在本发明中,所述保健功能食品与保健食品或保健辅助食品混用。
由于日常能够摄取本发明的保健功能食品组合物,因此能期待皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合效果,并且可以以健康增强目的非常有用地使用本发明的保健功能食品组合物。
此时,包含在所述保健功能食品组合物中的丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的含量不受特别限制,相对于保健功能食品组合物的总重量,可包含0.01至100重量%,具体而言,可包含1至80重量%。
所述保健功能食品可通过剂型化为选自由丸剂、粉末、颗粒、冲剂、片剂、胶囊及饮料形式组成的组而制备,以能够获取对皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合有用的效果。此外,对所述保健功能食品的种类没有其他限制,例如可以是各种饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、保健辅助食品类等。
在所述保健功能食品组合物中可添加不会妨碍保健功能食品的预防或改善效果的其他成分,其种类并不特别受限。例如,如通常的食品那样作为添加成分可含有各种中药提取物、食品学上可接收的食品辅助添加剂或天然碳水化物等。
此外,所述保健功能食品组合物可进一步包含食品学上可接收的载体或者能够通常使用于食品组合物而提高气味、味道、视觉等的成分,这可通过本领域技术人员适当选择来使用。
本发明的又一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的组合物的用于皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合的用途。本发明的又一方式提供一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的组合物的用于制备皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品、食品、医药品或药剂的用途。
关于包含所述丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的组合物及其用途如前所述。
实施例
下面,通过下述例对本发明进行详细说明。但是,下述例只是用于举例说明本发明,并不是通过下述例来限制本发明的范围。
制备例1:丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的获取方法
首先,利用如下所述的方法来获取丝胶。首先,将切断后的蚕茧作为原料来使用。相对于定量的原料重量而加入7~8倍的水(H2O),并且利用蒸汽来提高温度且在95℃下提取六小时而获取丝胶粗提取物。之后,利用20μm过滤器来过滤所述粗提取物,并且向所述过滤液中加入蛋白质分解酶且在55℃下反应24小时,为了使酶反应失活而在95℃下加热30分钟。然后,在利用10μm过滤器来进行过滤之后浓缩过滤液并利用喷雾干燥器来进行粉末化。
另外,利用如下所述的方法来获取槲寄生提取物。在洗涤及干燥槲寄生之后,向槲寄生50g中加入丁二醇(Butylene Glycol)400g和水550g并在50℃下利用超声波提取器来提取72小时。然后,进行24小时的熟成,并且利用0.5μm过滤器进行过滤后利用0.3μm过滤器进行过滤来获取各提取物。
此外,利用如下所述的方法来获取蛇床子提取物。在定量干燥后的蛇床子1kg并洗涤之后,加入蒸馏水49kg并在60℃下提取2小时。在室温下熟成提取出的液相48小时之后,利用压力过滤器(Filter press)来进行过滤。使用除菌过滤器来对过滤后的提取液进行除菌处理,并且添加防腐原料来制备蛇床子提取物。
实施例1:确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的细胞增殖促进效果
为了确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等的效果,通过MTT分析(MTT assay)来确认所述混合物的细胞增殖促进效果。
具体而言,在添加10%FBS和1%的庆大霉素(gentamicine)的DMEN(高糖)培养基中以37℃、5%CO2条件培养作为人类角质形成细胞(Human keratinocyte cell)的HaCat。然后,将HaCat细胞在96孔板中分株成5×103细胞/孔的数量,并且用单独的丝胶(0.001%,v/v)、单独的蛇床子提取物(0.002%,v/v)、单独的槲寄生提取物(0.001%,0.002%,0.005%,0.01%,v/v)或它们的混合物进行处理后培养24小时。然后,将MTT溶液处理为100μg/mL的浓度,并且在37℃、5%CO2培养基中反应一小时之后均去除培养液,在各孔中分别加入酸性-异丙醇(acid-isopropanol)100μl并在570nm下利用ELISA读取器来测量吸光度。
[表1]
其结果,确认如上述表1及图1所示,与用单独的丝胶、蛇床子提取物或槲寄生提取物处理的情况相比,在用它们的混合物处理的情况下细胞增殖能力增加至约1.3至1.5倍以上。特别是,可知尽管蛇床子提取物及槲寄生提取物单独使用时不具备细胞增殖能力,但在与丝胶混合使用的情况下能发挥优异的增效效果。
通过上述结果可知,丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物与它们单独使用相比细胞增殖促进活性显著卓越,因此对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等呈现出优异的效果。
此外,确认槲寄生提取物在各种浓度下均具有优异的细胞增殖能力,即使浓度不同也呈现出增效效果。
实施例2:确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的细胞迁移促进效果
为了确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等的效果,通过伤口愈合分析(Wound healing assay)来确认所述混合物的细胞迁移促进效果。
具体而言,将HaCat细胞在96孔板中分株成1×103细胞/孔的数量,并且在24小时之后替换为添加5%FBS的DMEM培养基,然后在各孔中用单独的丝胶(0.0005%,0.002%,v/v)、单独的蛇床子提取物(0.002%,0.01%,v/v)、单独的槲寄生提取物(0.0005%,0.005%,v/v)或它们的混合物进行处理。在48小时之后利用黄梢(yellow tip)来提供给伤口,并且在24小时之后拍照伤口愈合的程度且通过图像J(image J)程序来测量面积。
[表2]
其结果,确认如上述表2及图2所示,与用单独的丝胶、蛇床子提取物或槲寄生提取物处理的情况相比,在用它们的混合物处理的情况下细胞迁移能力增加至约1.3至1.8倍以上。
通过上述结果可知,丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物与它们单独使用相比细胞迁移促进活性显著卓越,因此对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等呈现出优异的效果。
此外,确认蛇床子提取物或槲寄生提取物在各种浓度下均具有优异的细胞迁移能力,即使浓度不同也呈现出增效效果。
实施例3:确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的皮肤基质基因的表达促进效果
为了确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等的效果,通过RT-PCR来确认所述混合物对作为皮肤基质基因的弹性蛋白(elastin)的表达促进效果。
具体而言,在FGM-2Bullet试剂盒(Bullet kit)培养基中以37℃、5%CO2条件培养作为人类皮肤成纤维细胞(normal human dermal fibroblast)的NHDF。然后,将NHDF细胞在6孔板中分株成1×105细胞/孔的数量,并且在各孔中用单独的丝胶(0.002%,0.005%,v/v)、单独的蛇床子提取物(0.005%,v/v)、单独的槲寄生提取物(0.002%,0.01%,v/v)或它们的混合物来进行处理。在24小时之后利用Trizol来溶化细胞后提取总RNA,并且在将该总RNA转换为cDNA之后通过qPCR来确认弹性蛋白基因的表达量。此时,所使用的引物如下所述。弹性蛋白(F:5'-TCG CAA CAC GTA ACG CAA T-3',序列号1;R:5'-ACT TCT CTT TTTCCA CCC CAT TT-3',序列号2)、gapdh(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)(F:5'-CCT CAA GAT CATCAG CAA T-3',序列号3;R:5'-CCA TCC ACA GTC TTC TGG GT-3',序列号4)。
[表3]
其结果,确认如上述表3及图3所示,与用单独的丝胶、蛇床子提取物或槲寄生提取物处理的情况相比,在用它们的混合物处理的情况下细胞的弹性蛋白表达量增加至约1.3至2倍以上。
通过上述结果可知,丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物与它们单独使用相比细胞的弹性蛋白基因表达促进活性显著卓越,因此对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等呈现出优异的效果。
此外,确认丝胶或槲寄生提取物在各种浓度下均具有优异的弹性蛋白表达促进效果,即使浓度不同也呈现出增效效果。
实施例4:确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物的抗炎症效果
为了确认丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等的效果,通过NO(Nitric Oxide)合成程度来确认所述混合物的抗炎症效果。
具体而言,在添加10%FBS和1%的庆大霉素的DMEM(High glucose)培养基中以37℃、5%CO2条件培养作为鼠巨噬细胞(murine macrophage)的Raw264.7。然后,将Raw264.7细胞在12孔板中分株成5×105细胞/孔的数量,并且用LPS 1μg/mL和单独的丝胶(0.002%,v/v)、单独的蛇床子提取物(0.001%、0.002%、v/v)、单独的槲寄生提取物(0.0005%,0.001%,v/v)或它们的混合物进行处理后培养24小时。然后,在聚集细胞培养液并进行离心分离之后使细胞培养液100μl和格里斯(Griess)试剂100μl反应十分钟,并且在540nm下利用ELISA读取器来测量吸光度。
[表4]
其结果,确认如上述表4及图4所示,与用单独的丝胶、蛇床子提取物或槲寄生提取物处理的情况相比,在用它们的混合物处理的情况下细胞的因LPS导致的NO合成量减少至约0.76至0.66倍以下。
通过上述结果可知,丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的混合物与它们单独使用相比巨噬细胞的NO生产量显著减少,因此对皮肤再生、皮肤舒缓、刺激缓解、伤口愈合等呈现出优异的效果。
此外,确认蛇床子提取物或槲寄生提取物在各种浓度下均具有优异的抗炎症效果,即使浓度不同也呈现出增效效果。
本申请所属技术领域的技术人员从以上的说明中可理解为在不变更本申请的技术思想或必要特征的情况下可以以其他具体方式实施本申请。与此相关联地,应理解为以上所述的实施例在所有方面只是示意性的而不是限定性的。本申请的范围应解释为从比上述详细说明后述的权利要求书的意义及范围以及从其等同概念导出的所有变更或变型后的方式包含在本申请的范围内。
<110> (株)自然人
<120> 包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用组合物
<130> OPA19017-PCT
<150> KR 10-2018-0003989
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<170> KoPatentIn 3.0
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 弹性蛋白F引物
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ccatccacag tcttctgggt 20
Claims (10)
1.一种皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用化妆品组合物,包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物。
2.根据权利要求1所述的化妆品组合物,其中,
所述皮肤再生或所述伤口愈合通过促进角质形成细胞的增殖、迁移或弹性蛋白基因的表达来实现。
3.根据权利要求1所述的化妆品组合物,其中,
所述皮肤舒缓通过抗炎活性来实现。
4.根据权利要求3所述的化妆品组合物,其中,
所述抗炎通过抑制巨噬细胞的NO合成来实现。
5.根据权利要求1所述的化妆品组合物,其中,
所述组合物具有选自由溶液、外用软膏、霜、泡沫、营养化妆水、柔软化妆水、面膜、柔软水、乳液、隔离霜、精华素、香皂、液体清洁料、入浴剂、防晒霜、防晒油、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、露、粉、香皂、含表面活性剂的洗面奶、油、粉末粉底、乳浊液粉底、蜡粉底、贴膜及喷雾组成的组中的剂型。
6.一种皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用皮肤外用剂,包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物。
7.一种皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用医药外品组合物,包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物。
8.一种皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合用保健功能食品组合物,包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物。
9.一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的组合物的用于皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合的用途。
10.一种包含丝胶、蛇床子提取物及槲寄生提取物的组合物的用于制备用于皮肤再生、皮肤舒缓或伤口愈合的化妆品的用途。
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