CN109793726A - 苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用。本发明中结合体外体内实验发现苄索氯铵可以抑制肺癌的生长、增殖，由于苄索氯铵毒具有副作用小、安全性高，价格便宜的优点，因此可将其作为一种治疗肺癌的药物。此外，本发明还发现苄索氯氨与吉非替尼联合使用的时候，比单独使用吉非替尼的明显地抑制了肺癌细胞的生长，说明苄索氯铵的加入可以增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性，因此，可将苄索氯氨作为吉非替尼的增敏剂，或将苄索氯氨与吉非替尼联合用药，用于肺癌治疗方面。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用。
背景技术
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，也是世界上最难治疗的疾病之一，近年来发病率呈现升高趋势。由于肺癌与肺良性疾病鉴别较为困难，且肺癌初期症状不明显，多数患者就诊时病情已发展到中晚期，因而往往错过其最佳治疗时期，严重影响其治疗效果。目前肺癌治疗手段包括手术治疗、放射治疗、化学治疗、免疫治疗、中医中药治疗等，然而癌症对放化疗的耐受性导致了病人术后复发和较差的预后，治疗难度增加，且临床常用的抗癌药物往往具有一定的毒副作用且价格昂贵。因此，找到安全、高效的抑制肺癌生长的抗肿瘤药物刻不容缓。
苄索氯铵(Benzethonium chloride)是美国食品药品监督局(FDA)批准用于急救用品，是一种杀菌消毒剂，也是新型的防腐剂，具有较好的表面活性，广泛用于日化、医药等领域做防腐杀菌剂。但对于肺癌而言，并没有相关文献与专利报道苄索氯铵对肺癌细胞生长有抑制作用。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供苄索氯铵和吉非替尼在制备抗肿瘤联合用药物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用。
所述的苄索氯铵通过抑制肺癌的生长和/或增殖达到治疗肺癌的目的。
所述的苄索氯铵的有效浓度为5～20μM；优选为10～20μM。
苄索氯铵在制备抑制肺癌细胞的生长和/或增殖的药物中的应用。
所述的苄索氯铵的有效浓度为5～20μM；优选为10～20μM。
所述的肺癌细胞优选为A549细胞或H1299细胞。
苄索氯铵和吉非替尼在制备抗肿瘤联合用药物中的应用。
所述的肿瘤优选为肺癌。
一种抗肿瘤组合药物，包括苄索氯铵和吉非替尼。
所述的抗肿瘤组合药物中苄索氯铵的有效浓度为5～20μM(优选为5μM)，吉非替尼的有效浓度为5～20μM(优选为5μM)。
苄索氯铵在制备增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性的药物中的应用。
所述的防治肺癌的药物以及抗肿瘤组合药物中还可以含有一种或多种药学上可接受的载体或辅料；所述的辅料为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂或润滑剂中的至少一种。
所述的药物可以采用本领域的常规方法制备成药物制剂；包括口服给药的药物制剂，如胶囊、丸剂、片剂、口服液、颗粒剂、酊剂等。
苄索氯铵在制备吉非替尼的增敏剂中的应用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
1、苄索氯铵主要用于杀菌消毒剂，但其对肺癌的抑制作用目前还没有相关的报道及专利。本发明结合体外体内实验，结果表明苄索氯铵可以抑制肺癌的生长、增殖，苄索氯铵是FDA批准药物，其毒副作用小、安全性高，价格便宜，可将苄索氯铵用水溶解，口服使用，辅助肺癌治疗，可为肺癌的临床治疗提供一种新的药物选择，其开发利用的前景好。
2、吉非替尼作为肺癌一线用药，其产生耐药性的严重影响治疗效果，而本发明中发现苄索氯氨可以增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性，因此，可将苄索氯铵与吉非替尼联合用药，用于肺癌治疗方面。
附图说明
图1是苄索氯铵对肺癌细胞增殖的影响图；其中，图A为不同浓度的苄索氯铵对A549细胞生长能力影响；图B为不同浓度的苄索氯铵对H1299细胞的生长能力影响。
图2是苄索氯铵对肺癌细胞凋亡的影响图；其中，图A为不同浓度的卞索氯铵对A549和H1299细胞凋亡的影响；图B为不同浓度的卞索氯铵诱导A549细胞发生凋亡的统计结果；图C为不同浓度的卞索氯铵诱导H1299细胞发生凋亡的统计结果。
图3是苄索氯铵对裸鼠体内肺癌细胞的成瘤能力的影响图；其中，图A为裸鼠体内皮下肿瘤；图B为肿瘤体积大小的变化；图C为裸鼠的体重变化。
图4是苄索氯铵增加肺癌细胞对吉非替尼敏感性的结果图；其中，图A为不同药物对A549细胞生长能力影响；图B为不同药物对H1299细胞的生长能力影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得。
实施例1WST-1细胞活性检测
1.细胞铺板：收集A549和H1299细胞(购买于美国菌种保藏中心(AmericanTypeCulture Collection，ATCC)细胞库)，进行细胞计数，按照每孔3000个细胞的量铺于96孔板中，培养过夜。
2.药物处理：用DMEM完全培养基稀释苄索氯铵至处理浓度(0，5，10，15，20μM)，然后替换96孔板中原有的培养基，分别处理24、48和72h。
3.WST-1检测：按照1：10(w/v)的稀释比例，用DMEM完全培养基稀释WST-1(WST-1细胞增殖检测试剂盒)，得到含有WST-1的培养基；然后用含有WST-1的培养基替换96孔板中原有的培养基，另外将含有WST-1的培养基加入没有培养细胞的孔中作为空白对照，每孔100μL。再将96孔板放于37℃恒温培养箱中孵育1h后，用酶标仪读板检测(450nm)。全程避光操作。
4.结果：结果如图1A和1B所示，图中显示，显示随着浓度梯度和时间梯度的药物处理，肺癌细胞的生长受到了明显的抑制，即苄索氯铵可以用于抑制肺癌细胞的增殖。
实施例2细胞凋亡
1.药物处理：收集A549和H1299细胞铺于6孔板中，使细胞密度大约为40％，分别加入含有0、10、15和20μM苄索氯铵的DMEM培养基处理细胞。
2.收集细胞：药物处理48h后，先收集上清中发生凋亡的细胞，1100rpm离心3min后弃上清，然后把贴壁的细胞用0.25％的胰蛋白酶消化，收集于同一离心管中，1100rpm离心3min后弃上清。PBS缓冲液清洗两次后进行染色。
3.染色：首先用500μL的Binding Buffer(细胞凋亡检测试剂盒)重悬细胞，然后每管加入5μL的Annexin V-FITC混匀后再加入5μL的Propidium Iodide混匀，然后避光室温反应15min。
4.流式检测：染色结束后用C6流式细胞仪检测，上机前，样品用400目滤网过滤去除颗粒物。其中Annexin V-FITC为绿色荧光，选择FL1通道检测，Propidium Iodide为红色荧光选择FL2或者FL3通道检测。
5.结果：结果如2所示，图2显示苄索氯铵处理后，明显地诱导了细胞的凋亡。
实施例3裸鼠皮下成瘤实验
1.本课题的动物实验严格遵守动物护理机构的指导原则，且均获得暨南大学动物实验伦理委员会批准。
2.本课题所用的实验动物为6～8周龄雌性裸小鼠(Balb/c-nu，购买于南方医科大学实验动物中心)，共15只，其中对照组5只和实验组10只，构建裸鼠皮下成瘤模型：
(1)细胞收集：收集细胞进行细胞计数，以每只裸小鼠1×106个A549细胞的量计算总细胞数，细胞用PBS缓冲液重悬后与基质胶(购买于广州思尔生物科技有限公司，coring)按体积比1:1混合。
(2)接种：对小鼠进行麻醉(通过无痛及有痛刺激来评估麻醉程度，确定裸鼠处于麻醉状态)后，用1mL注射器(25G针头)取上述与基质胶混合后的重悬细胞对裸鼠进行皮下注射。
3.细胞注射一周后，观察裸小鼠的成瘤情况并进行测量，当肿瘤达到5×5的大小后，开始以腹腔注射以及灌胃的方式给药。本实验共设置3个苄索氯铵浓度梯度(先用DMSO配制苄索氯铵母液50mg/mL，再用无菌水稀释成使用浓度，每只小鼠每次给药100μL)，两种给药方式。分别为0mg/kg，5mg/kg(腹腔注射)和10mg/kg(灌胃)，各5只，每两天给药一次。6.给药过程中，每两天对裸鼠体重和移植瘤的大小进行测量。两周后，将裸鼠安乐死并将肿瘤取出。
4.结果：结果如图3所示。图3A和3B显示裸鼠体内皮下成瘤实验结果，肿瘤的生长曲线表明裸鼠体内皮下成瘤受到苄索氯铵的明显抑制。表明苄索氯铵可以抑制肺癌的肿瘤生长。而图3C是给药后的三组小鼠的体重统计结果，显示三组小鼠之间体重并无显著差异，证明苄索氯铵作为抗肿瘤药物的使用的安全性。
实施例4苄索氯氨增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性
1.细胞铺板：收集A549和H1299细胞，进行细胞计数，按照每孔3000个细胞的量铺于96孔板中，培养过夜。
2.药物处理：分别用DMEM完全培养基稀释苄索氯铵与吉非替尼至5μM，然后替换96孔板中原有的培养基，处理72h。
3.WST-1检测：按照1：10(w/v)的稀释比例，用DMEM完全培养基稀释WST-1(WST-1细胞增殖检测试剂盒)，得到含有WST-1的培养基；然后用含有WST-1的培养基替换96孔板中原有的培养基，另外将含有WST-1的培养基加入没有培养细胞的孔中作为空白对照，每孔100μL。再将96孔板放于37℃恒温培养箱中孵育1h后，用酶标仪读板检测(450nm)。全程避光操作。
4.结果：如图4所示，单独使用吉非替尼组与联合使用组相比，明显地抑制了肺癌细胞的生长，存在显著性差异，说明苄索氯铵的加入可以增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用，其特征在于：所述的苄索氯铵通过抑制肺癌的生长和/或增殖达到治疗肺癌的目的。
3.根据权利要求1所述的苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用，其特征在于：所述的苄索氯铵的有效浓度为5～20μM。
4.苄索氯铵在制备抑制肺癌细胞的生长和/或增殖的药物中的应用。
5.苄索氯铵和吉非替尼在制备抗肿瘤联合用药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的苄索氯铵和吉非替尼在制备抗肿瘤联合用药物中的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肺癌。
7.一种抗肿瘤组合药物，其特征在于：包括苄索氯铵和吉非替尼。
8.根据权利要求7所述的抗肿瘤组合药物，其特征在于：所述的抗肿瘤组合药物中苄索氯铵的有效浓度为5～20μM，吉非替尼的有效浓度为5～20μM。
9.苄索氯铵在制备增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性的药物中的应用。
10.苄索氯铵在制备吉非替尼的增敏剂中的应用。
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