CN105753863B - 氧代二氢咪唑并吡啶类化合物及其应用 - Google Patents

氧代二氢咪唑并吡啶类化合物及其应用 Download PDF

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    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明提供了由通式(I)表示的2‑氧代1,3‑二氢咪唑并吡啶类化合物及其在制备治疗布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,BTK)所参与的各种疾病的药物中的应用。研究证明，本发明公开的化合物能有效抑制BTK的活性，进而通过抑制BTK阻止恶性血液肿瘤细胞的生存、增殖和扩散。此外，通过抑制BTK可以对抗炎症和自身免疫性疾病。因此，本发明的化合物能够用于治疗BTK所参与的各种疾病，特别适用于血液恶性肿瘤和炎症以及自身免疫性疾病的治疗，有较大的应用价值。

Description

氧代二氢咪唑并吡啶类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及化学医药领域，特别是涉及氧代二氢咪唑并吡啶类化合物及其应用。
背景技术
布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase，BTK)是B细胞受体信号复合体中的一种关键信号分子，是淋巴细胞生存和增殖的关键蛋白激酶。BTK在恶性B细胞的生存及扩散中起着重要作用。
BTK抑制剂通过抑制肿瘤细胞BTK而起到抗癌的作用。首创BTK抑制剂依鲁替尼(Ibrutinib)是一种4’-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶化合物(Proc Natl Acad Sci USA,107:13075，2010)，通过与靶蛋白BTK活性位点半胱氨酸残基(Cys-481)选择性地共价结合,不可逆性地抑制BTK。从而有效地阻止肿瘤从B细胞迁移到适应于肿瘤生长环境的淋巴组织。美国FDA于2013-2015年批准依鲁替尼用于难治套细胞淋巴瘤(MCL)、难治慢性淋巴细胞白血病(CLL)、携带del 17p删除突变的CLL的治疗和原发性巨球蛋白血症的治疗。
BTK抑制剂除了依鲁替尼以外，AVL-292(CC292)、ONO-4059、BGB-3111和ACP-196也进入临床开发阶段。用于B-细胞非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、毛细胞白血病、成人急性淋巴细胞白血病等治疗。依鲁替尼与化疗药物或其它靶向抗癌药联合治疗，可以增加这些血液肿瘤的疗效。临床试验中与BTK抑制剂联合使用的药物包括ituximab，来那度胺，氟达拉滨；环磷酰胺；阿霉素，长春新碱，强的松。
与正常造血细胞相比，大约80％的急性髓系白血病(AML)患者原始细胞中BTK活性增高，导致细胞在体外对口服BTK抑制剂依鲁替尼敏感(Marcel Spaargaren M.LancetHeamat.2：e180，2015)。一项依鲁替尼单用或与阿糖胞苷联合用药治疗急性髓系白血病的临床研究进入II期临床。
正常B细胞发育和活化过程中，BTK在B细胞受体(BCR)信使***作用至关重要。BCR信号异常是与自身免疫性疾病有关，如类风湿性关节炎(RA)。此外，BTK也在髓系细胞，包括单核细胞，巨噬细胞，中性粒细胞和肥大细胞表达。这些细胞浸润滑膜腔并产生炎性细胞因子，加重关节炎症状。BTK抑制剂可以阻断B细胞受体依赖性细胞增殖，减少炎性因子产生(Whang J.A.,Chang B.Y.Drug DiscovToday.19:1200,2014)。临床前研究表明BTK抑制剂还对多种炎症和自身免疫性疾病，如类风湿关节炎和动物模型有效。除了类风湿关节炎与红斑狼疮之外，这类药物有可能会用于狼疮性肾炎、多发性硬化症、肖格伦综合征及潜在疾病哮喘等。CC-292和HM71224等BTK抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗(如类风湿关节炎)进入临床试验阶段(ClinicalTrials.gov ID:NCT01975610，NCT01765478)。
上述研究都表明BTK抑制剂作为防治肿瘤、多种炎症和自身免疫性疾病的药物有很大的潜在价值。
发明内容
基于此，本发明的目的之一在于提供一种新型BTK抑制剂氧代二氢咪唑并吡啶类化合物。
实现上述发明目的的具体技术方案如下：
具有式(I)结构的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子：
式中：
X1和X2分别独立选自C或N；
Ar选自苯环或5-6元芳香杂环；
L选自O，S，NR5，CR5R6，OCH2，CH2O；
Y选自(CHR5)m,C＝O,其中m选自0、1、2、3；
Z选自饱和的5-7元杂环或碳环；
G选自如下基团：
R1和R2分别独立选自：H，C1-C6烷基，卤素，硝基，羟基，C1-C6烷氧基，氰基，氨基，C1-C6烷基取代胺基，酰基，酰胺基；
R3和R4分别独立选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基甲基，卤素取代C1-C4烷基，羟基取代C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，氨基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，卤素，硝基，羟基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C1-C6亚砜基，C1-C6砜基，氰基，氨基，C1-C6烷基取代胺基，酯基，酰基，酰胺基，羧基；
当R3和R4是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，OH或C1-C6烷基取代胺基，并且取代在Ar的相邻位置时，R3和R4可相连组成一个碳环或杂环，选自下列结构：
其中，n选自0、1、2；Q1和Q2分别独立选自O，NR6，CHR6；
R5、R6分别独立选自H，C1-C6烷基；
R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，氨基取代C1-C4烷基,C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，杂环取代C1-C4烷基。
在其中一些实施例中，所述化合物具有式II所示结构：
式中：X3，X4，X5，X6和X7分别独立选自C或N。
在其中一些实施例中，X3，X4，X5，X6和X7均选自C；或X3，X4，X5，X6和X7的其中一个选自N，其余选自C。
在其中一些实施例中，G选自如下基团：
在其中一些实施例中，X1和X2均为C。
在其中一些实施例中，L选自O，OCH2。
在其中一些实施例中，Y选自(CH2)m,其中m为0或1。
在其中一些实施例中，Z选自如下基团：
在其中一些实施例中，Z选自如下基团：
在其中一些实施例中，R3和R4分别独立选自：H，卤素，羟基，C1-C6烷氧基，羟基取代C1-C4烷基，C1-C6烷基取代胺基；当R3和R4是CN1-C6烷氧基或OH时，并且取代在Ar的相邻位置时，R3和R4可相连组成一个杂环，选自下列结构：
其中，n为0或1。
在其中一些实施例中，R5和R6均为H；
在其中一些实施例中，R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，5-6元饱和氮杂环取代C1-C4烷基。
在其中一些实施例中，X1和X2均为C；L选自O，OCH2；Y选自(CH2)m,其中m为0或1；Z选自R1和R2均为氢；
R3和R4均为氢；或者其中一个为氢，另一个选自卤素或羟基或C1-C6烷氧基；或者当R3和R4为C1-C6烷氧基或OH时，并且取代在Ar的相邻位置，R3和R4可相连组成一个杂环，选自下列结构：
其中，n为0或1；
R5和R6均为H；R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，5-6元饱和氮杂环取代C1-C4烷基。
本发明的另一目的是提供上述化合物的应用。
实现上述目的的具体技术方案如下：
上述2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子在制备布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中的应用。
上述2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子在制备防治肿瘤的药物中的应用。
上述2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子在制备防治血液肿瘤的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病。
上述2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂在制备防治炎症或自身免疫性疾病的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、肖格伦综合征及潜在疾病哮喘。
本发明的另一目的是提供一种治疗疾病的药物组合物。
实现上述目的的具体技术方案如下：
一种治疗疾病的药物组合物，包括作为活性成分的上述2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其前药分子，以及药学上可接受的载体。
在其中一些实施例中，所述疾病是血液肿瘤或与布鲁顿酪氨酸激酶相关的炎症或自身免疫性疾病。
在其中一些实施例中，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病；所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、肖格伦综合征及潜在疾病哮喘。
本发明提供了2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物，发明人经过大量实验研究证明，该类化合物能有效抑制布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,BTK)的活性，进而阻止恶性血液肿瘤细胞的生存、增殖和扩散。此外，通过抑制BTK可以对抗炎症和自身免疫性疾病。因此，本发明的化合物能够用于治疗BTK所参与的各种疾病，特别适用于血液恶性肿瘤和炎症以及自身免疫性疾病的治疗，有较大的应用价值。
附图说明
图1为实施例40的化合物11抑制人淋巴瘤Jeko-1和DOHH-2细胞株BTK磷酸化实验结果图；
图2为实施例42的化合物11在弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株TMD-8SCID小鼠模型的抗肿瘤活性图。
具体实施方式
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R1、R等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环***的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。术语“环烷基”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2,2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基、环己基等。
本文所用术语“杂环”或“杂环基”是指含有1-4个选自O、N和S的杂原子的芳香性或非芳香性杂环，且包括双环基团。“杂环基”因此包括杂芳基，也包括其二氢化及四氢化类似物。杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”意指包括氯、氟、溴和碘。
本发明包括式Ⅰ-Ⅲ化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。本文中一些特定的示例性化合物为胺类化合物的质子化了的盐。术语“游离形式”指以非盐形式的胺类化合物。包括在内的药学上可接受盐不仅包括本文所述特定化合物的示例性盐，也包括所有式Ⅰ-Ⅲ化合物游离形式的典型的药学上可接受的盐。可使用本领域已知技术分离所述化合物特定盐的游离形式。例如，可通过用适当的碱稀水溶液例如NaOH稀水溶液、碳酸钾稀水溶液、稀氨水及碳酸氢钠稀水溶液处理该盐使游离形式再生。游离形式在某些物理性质例如在极性溶剂中溶解度上与其各自盐形式多少有些区别，但是为发明的目的这种酸盐及碱盐在其它药学方面与其各自游离形式相当。
可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等制备的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2一乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N一乙基吗啉、N一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成方案(方案1-6)中的方法制备本发明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。
方案1
方案2
方案3
方案4
方案5
方案6
方案7
方案8
以下结合实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。
实施例1：(R)-4-胺基-1-[1-(2-丁炔酰基)吡咯烷-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(1-(but-2-ynoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物1)的制备
步骤1a：叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-((2-chloro-3-nitropyridin-4-yl)amino)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物103)的制备
往反应瓶中加入2,4-二氯-3-硝基吡啶(101)(9.65g，50.0mmol，1.0当量)，叔丁基(R)-3-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(102)(9.30g，50.0mmol，1.0当量)，三乙胺(6.56g，65.0mmol，1.3当量)和N,N-二甲基甲酰胺(60ml)，室温反应过夜。反应液加水(300mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，浓缩，然后用柱层析法纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(13.7g，收率：80％)。淡黄色油状物；TLC：Rf0.2(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)；LCMS(ESI)：m/z 343[M+1]+。
步骤1b：叔丁基(R)-3-((2-二苄胺基-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-((2-(dibenzylamino)-3-nitropyridin-4-yl)amino)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物104)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(103)(13.7g，40.06mmol，1.0当量)，二苄胺(8.47mL，44.06mmol，1.0当量)，三乙胺(11.15mL，80.12mmol，2.0当量)和乙腈(200ml)，加热回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到叔丁基(R)-3-((2-二苄胺基-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(20.0g，收率：99％)。黄色油状物；TLC：Rf0.4(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)；LCMS(ESI)：m/z 504[M+1]+。
步骤1c：叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-二苄胺基)吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-((3-amino-2-(dibenzylamino)pyridin-4-yl)amino)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物105)的制备
往锌粉(25.82g，397.1mmol，10.0当量)和氯化铵(17.87g，277.97mmol，7.0当量)的甲醇溶液(500ml)中加入叔丁基(R)-3-((2-二苄胺基-3-硝基吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(104)(20.0g，39.71mmol，1.0当量)，加热至50℃反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液旋干，用二氯甲烷：甲醇＝5：1(50ml)的混合溶剂溶解，过滤，有机相旋干得到粗品叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-二苄胺基)吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(18.3g，收率：97％)。淡黄色固体；TLC：Rf0.1(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)；LCMS(ESI)：m/z 474[M+1]+。
步骤1d：叔丁基(R)-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-(dibenzylamino)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物106)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-二苄胺基)吡啶-4-氨基)吡咯-1-羧酸酯(105)(18.3g，38.64mmol，1.0当量)，N,N'-羰基二咪唑(15.7g，96.6mmol，2.5当量)和四氢呋喃(200ml)，将反应液加热至回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝100：1)得到叔丁基(R)-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(17.5g，收率：91％)。淡黄色液体；TLC：Rf0.8(二氯甲烷：甲醇＝80：1)；LCMS(ESI)：m/z 500[M+1]+。
步骤1e：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物107)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(106)(17.5g，35.03mmol，1.0当量)，氢氧化钯(7.0g)，乙醇(240ml)和乙酸乙酯(60ml)，反应液加热到70℃，在氢气氛围中反应过夜。反应混合物用硅藻土过滤，滤液旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(9.0g，收率：80％)。无色固体；TLC：Rf0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 320[M+1]+。
步骤1f：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(4-phenoxyphenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物109-1)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(107)(5.93g,18.57mmol,1.0当量)、对苯氧基苯硼酸(108-1)(5.17g,24.14mmol,1.3当量)和吡啶(4.5mL,55.71mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，再加入醋酸铜(3.72g,20.43mmol,1.1当量)和4A分子筛(6.7g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(150mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(70mL×4)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(2.7g，收率：31％)。棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z488[M+1]+。
步骤1g：(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物110-1)的制备
将(R)-叔丁基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯-1-羧酸酯(109-1)(2.7g，5.54mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(25mL)中，再向其中加入三氟乙酸(5mL)，然后在室温下反应3小时。将反应混合液用二氯甲烷(150mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(50mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得：(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(2.0g，收率：93％)。灰色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 388[M+1]+。
步骤1h：(R)-4-胺基-1-[1-(2-丁炔酰基)吡咯烷-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(1-(but-2-ynoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物1)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(193.5mg，0.5mmol，1当量)溶于DMF(2ml)，加入2-丁炔酸(111-1)(51.5mg，0.6mmol，1.2当量)，EDCI(115mg，0.6mmol，1.2当量)，HOBt(7mg，0.05mmol，0.1当量)，室温反应1小时。加水(5ml)搅拌，二氯甲烷(2ml)萃取，有机相再用水(10ml)洗涤一次，干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：甲醇：EA＝1：10)分离得白色固体(R)-4-胺基-1-[1-(2-丁炔酰基)吡咯烷-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(163mg，收率70％)。熔点：106.5-107.0℃；LCMS(ESI)：m/z 454.40[M+1]+；1HNMR(600MHz,CDCl3):δ1.97(s,1.5H),2.03(s,1.5H),2.37(m,1H),2.64(m,1H),3.57(m,0.5H),3.76(m,0.5H),3.95(m,1.5H),4.11(m,3.5H),5.11(m,1H),6.52(d,J＝5.64Hz，0.5H),6.58(d,J＝5.58Hz，0.5H),7.11(m,4H),7.19(m,1H),7.40(m,4H),7.86(dd,J＝18.1,5.58Hz，1H)。
实施例2：(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(1-丙烯酰基吡咯烷-3基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-propioloylpyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物2)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.1g，0.26mmol，1.0当量)、丙炔酸(111-2)(21.7mg，0.31mmol，1.2当量)、DCC(63.9mg，0.31mmol，1.2当量)和DMAP(3.2mg，0.026mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(5mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(1-丙烯酰基吡咯烷-3基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮50mg，收率：44％)。白色固体，熔点：141.5-143.1℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 440[M+1]+，纯度：98.587％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.89-7.86(m,1H),7.42-7.37(m,4H),7.20-7.18(m,1H),7.13-7.09(m,4H),6.58-6.52(m,1H),5.11-5.08(m,1H),4.19-4.14(m,3H),3.99-3.95(m,2H),3.80-3.65(m,1H),3.08(d,J＝28Hz,1H),2.76-2.65(m,1H),2.45-2.36(m,1H)。
实施例3：(R)-4-氨基-1-(1-(2-戊炔酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(1-(pent-2-ynoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物3)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.15g，0.39mmol，1.0当量)、2-戊炔酸(46.1mg，0.47mmol，1.2当量)、DCC(97.0mg，0.47mmol，1.2当量)和DMAP(4.8mg，0.039mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(5mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-4-氨基-1-(1-(2-戊炔酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(80mg，收率：44％)。白色固体，熔点：180.1-181.6℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 468[M+1]+，纯度：99.450％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.87(dd,J＝16.0,6.0Hz,1H),7.42-7.38(m,4H),7.20-7.18(m,1H),7.14-7.09(m,4H),6.60-6.53(m,1H),5.15-5.06(m,1H),4.23(s,2H),4.13-3.94(m,3H),3.76-3.55(m,1H),2.68-2.60(m,1H),2.40-2.32(m,3H),1.25-1.17(m,3H)。
实施例4：(R)-1-(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpyrrolidin-3-yl)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物4)的制备
将丙烯酰氯(202-4)(56.5mg，0.62mmol，1.2当量)溶于二氯甲烷(5mL)中，冷却到0℃，然后向其中逐滴滴加(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.2g，0.52mmol，1.0当量)的二氯甲烷(5mL)溶液，接着再逐滴滴加N,N-二异丙基乙胺(101mg，0.78mmol，1.5当量)的二氯甲烷(1.0mL)溶液，将该混合液在0℃反应10分钟。将反应液用水(50mL)猝灭，然后用二氯甲烷(50mL×2)萃取。将得到的有机层用硅胶用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-1-(1-丙烯酰基吡咯烷-3-基)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.13g，收率：57％)。白色固体，熔点：119.2-120.5℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 442[M+1]+，纯度：99.019％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.87-7.84(m,1H),7.42-7.38(m,4H),7.19-7.17(m,1H),7.13-7.09(m,4H),6.58-6.40(m,3H),5.76-5.71(m,1H),5.16-5.08(m,1H),4.21(s,2H),4.10-3.96(m,3H),3.73-3.65(m,1H),2.80-2.65(m,1H),2.45-2.36(m,1H)。
实施例5：(R)-4-氨基-1-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(1-methacryloylpyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物5)的制备
往甲基丙烯酰氯(202-5)(0.065g，0.62mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.200g，0.52mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(8ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.100g，0.78mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(R)-4-氨基-1-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1，3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.140g，收率：59％)。无色固体，熔点：114.6-117.5℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 456[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(d,J＝5Hz,1H),7.41(m,4H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.12(m,4H),6.57(d,J＝5.5Hz,1H),5.30(s,1H),5.21(s,1H),5.08(m,1H),4.21(s,2H),4.03(m,3H),3.68(m,1H),2.64(m,1H),2.36(m,1H),1.99(s,3H)。
实施例6：(R，E)-4-氨基-1-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-1-(1-(but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物6)的制备
往(E)-丁-2-烯酰氯(202-6)(0.065g，0.62mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.200g，0.52mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(8ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.100g，0.78mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(R，E)-4-氨基-1-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.100g，收率：42％)。无色固体，熔点：102.3-105.8℃。TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 456[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(dd,1H),7.41(m,4H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.13(m,4H),7.08(m,1H),6.58(m,1H),6.20(dd,1H),5.08(m,1H),4.23(s,2H),4.01(m,3H),3.69(m,1H),2.72(m,1H),2.41(m,1H),1.88(dd,3H)。
实施例7：(R,E)-4-氨基-1-(1-(2-戊烯酰基)吡咯烷-3-基))-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮)((R,E)-4-amino-1-(1-(pent-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物7)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.2g，0.52mmol，1.0当量)、反式2-戊烯酸(67.7mg，0.68mmol，1.3当量)、HOBT(91.9mg，0.68mmol，1.3当量)、EDCI(130.4mg，0.68mmol，1.3当量)和二异丙基乙胺(0.26mL，1.56mmol，3.0当量)溶于二氯甲烷(8mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R,E)-4-氨基-1-(1-(2-戊烯酰基)吡咯烷-3-基))-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮)(83mg，收率：34％)。白色固体，熔点：221.3-222.4℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 470[M+1]+，纯度：96.527％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86-7.83(m,1H),7.42-7.38(m,4H),7.19-7.17(m,1H),7.13-7.09(m,4H),7.05-7.02(m,1H),6.59-6.55(m,1H),6.16-6.06(m,1H),5.18-5.05(m,1H),4.22(s,2H),4.08-3.96(m,3H),3.75-3.58(m,1H),2.76-2.65(m,1H),2.45-2.22(m,3H),1.11-1.05(m,3H)。
实施例8：(R，E)-4-氨基-1-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷-3基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-1-(1-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物8)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.5g，1.29mmol，1.0当量)、4-溴巴豆酸(277mg，1.68mmol，1.3当量)、DCC(347mg，1.68mmol，1.3当量)和DMAP(16mg，0.13mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(15mL)，然后在0℃下反应1.5小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)纯化得(R，E)-4-氨基-1-(3-(1-(4-溴-2-丁烯酰基)吡咯烷))-3-(4-苯氧苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.6g，收率：88％)。白色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 535[M+1]+。
将上述获得的(R，E)-4-氨基-1-(3-(1-(4-溴-2-丁烯酰基)吡咯烷))-3-(4-苯氧苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.15g，0.28mmol，1.0当量)和二甲胺(2M四氢呋喃溶液，0.63mL，1.26mmol，4.5当量)溶于四氢呋喃(3mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得化合物(R，E)-4-氨基-1-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷-3基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(60mg，收率：43％)。白色固体，熔点：103.6-105.3℃。TLC：Rf 0.3(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 499[M+1]+，纯度：95.928％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.87-7.84(m,1H),7.41-7.38(m,4H),7.19-7.17(m,1H),7.13-7.09(m,4H),6.99-6.95(m,1H),6.58-6.54(m,1H),6.41-6.28(m,1H),5.20-5.02(m,1H),4.17-3.98(m,5H),3.75-3.56(m,1H),3.17-3.10(m,2H),2.80-2.60(m,1H),2.43-2.38(m,1H),2.32(s,3H),2.28(s,3H)。
实施例9：(R，E)-4-氨基-1-(1-(4-甲氧基-2-丁烯酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-1-(1-(4-methoxybut-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物9)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.15g，0.387mmol，1.0当量)、4-甲氧基巴豆酸(58.4mg，0.503mmol，1.3当量)、DCC(103.8mg，0.537mmol，1.3当量)和DMAP(4.8mg，0.039mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(6mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)纯化得化合物(R，E)-4-氨基-1-(1-(4-甲氧基-2-丁烯酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(60mg，收率：32％)。白色固体，熔点：178.2-179.5℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 486[M+1]+，纯度：98.464％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.87-7.83(m,1H),7.40-7.37(m,4H),7.21-7.18(m,1H),7.13-7.09(m,4H),6.98-6.96(m,1H),6.57-6.54(m,1H),6.45-6.36(m,1H),5.19-5.03(m,1H),4.24(s,2H),4.14-4.03(m,5H),3.75-3.55(m,1H),3.50-3.42(m,3H),2.75-2.60(m,1H),2.45-2.30(m,1H)。
实施例10：(R，E)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(1-(4-(哌啶-1-基)-2-丁烯酰基)吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-(4-(piperidin-1-yl)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物10)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(110-1)(0.16g，0.413mmol，1.0当量)、4-哌啶基巴豆酸(90.1mg，0.537mmol，1.3当量)、HATU(204.1mg，0.537mmol，1.3当量)和三乙胺(125mg，1.239mmol，3.0当量)溶于二氯甲烷(5mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得化合物(R，E)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(1-(4-(哌啶-1-基)-2-丁烯酰基)吡咯烷-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(100mg，收率：45％)。白色固体，熔点：107.5-109.1℃。TLC：Rf 0.3(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 539[M+1]+，纯度：97.356％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.88-7.84(m,1H),7.41-7.38(m,4H),7.21-7.18(m,1H),7.13-7.09(m,4H),7.01-6.98(m,1H),6.58-6.54(m,1H),6.50-6.25(m,1H),5.20-5.05(m,1H),4.13-3.98(m,5H),3.78-3.58(m,1H),2.49(d,J＝19.5Hz,2H),2.80-2.60(m,1H),2.58-2.30(m,5H),1.78-1.56(m,3H),1.52-1.40(m,3H)。
实施例11：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物11)的制备
步骤11a：叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯((R)-tert-butyl(R)-3-((2-chloro-3-nitropyridin-4-yl)amino)piperidine-1-carboxylate)(化合物302)的制备
往反应瓶中加入2,4-二氯-3-硝基吡啶(101)(5.79g，30.0mmol，1.0当量)，叔丁基(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸酯(301)(6.00g，30.0mmol，1.0当量)，三乙胺(6.06g，60.0mmol，2.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(50ml)，室温反应过夜。将反应液用乙酸乙酯(250ml)稀释，用半饱和食盐水(200ml×4)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(8.21g，收率：77％)。LCMS(ESI)：m/z 357[M+1]+，淡黄色油状物；TLC：Rf 0.2(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。
步骤11b：叔丁基(R)-3-((2-(二苄基氨基)-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯((tert-butyl(R)-3-((2-(dibenzylamino)-3-nitropyridin-4-yl)amino)piperidine-1-carboxylate)(化合物303)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-((2-氯-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(302)(8.27g，23.2mmol，1.0当量)，二苄胺(5.94g，30.2mmol，1.3当量)，三乙胺(3.52g，34.8mmol，1.5当量)和乙腈(150ml)，加热回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4：1)得到叔丁基(R)-3-((2-(二苄基氨基)-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(10.9g，收率：91％)。LCMS(ESI)：m/z 518[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.4(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。
步骤11c：叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-(二苄基氨基)吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-((3-amino-2-(dibenzylamino)pyridin-4-yl)amino)piperidine-1-carboxylate)(化合物304)的制备
往锌粉(13.7g，210.0mmol，10.0当量)和氯化铵(11.2g，210.0mmol，10.0当量)的甲醇溶液(250ml)中加入叔丁基(R)-3-((2-(二苄基氨基)-3-硝基吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(303)(10.9g，21.0mmol，1.0当量)，加热至50℃反应半小时。反应液用硅藻土过滤，滤液旋干，用二氯甲烷：甲醇＝10：1(100ml)溶解，过滤，有机相旋干得到粗品叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-(二苄基氨基)吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(11.0g，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 488[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.1(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。
步骤11d：叔丁基(R)-3-(4-(二苄基氨基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯((tert-butyl(R)-3-(4-(dibenzylamino)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物305)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-((3-氨基-2-(二苄基氨基)吡啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(304)(11.0g，22.5mmol，1.0当量)，N,N'-羰基二咪唑(10.9g，67.5mmol，3.0当量)和四氢呋喃(150ml)，将反应液加热至回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝100：1)得到叔丁基(R)-3-(4-(二苄基氨基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(9.88g，收率：85％)。LCMS(ESI)：m/z 514[M+1]+，淡黄色液体；TLC：Rf 0.8(二氯甲烷：甲醇＝80：1)。
步骤11e：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物306)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-(二苄基氨基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(305)(9.88g，19.22mmol，1.0当量)，氢氧化钯(2.0g)，乙醇(120ml)和乙酸乙酯(30ml)，反应液在氢气中加热到60℃过夜。反应混合物用硅藻土过滤，滤液旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(5.28g，收率：83％)。LCMS(ESI)：m/z 334[M+1]+，无色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤11f：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(4-phenoxyphenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-11)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(3.0g，9.0mmol，1.0当量)，对苯氧基苯硼酸(108-1)(2.89g，13.5mmol，1.5当量)，醋酸铜(1.82g，9.9mmol，1.1当量)，分子筛(3.0g)，吡啶(2.13g，27mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(30ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(200ml)稀释，用半饱和食盐水(150ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(2.23g，收率：49％)。LCMS(ESI)：m/z 502[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤11g：(R)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-11)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(307-11)(2.23g，4.45mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，反应液在室温过夜。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(100ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(1.3g，收率：73％)。LCMS(ESI)：m/z 402[M+1]+，灰白色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤11h：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物11)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.25g，3.89mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(50ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-11)(1.3g，3.24mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(30ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.63g，4.86mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(5ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(100ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.67g，收率：45％)。无色固体，熔点：89.5-91.9℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 456[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.84(d,J＝5Hz,1H),7.41(m,4H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.13(m,4H),6.64(m,2H),6.33(d,J＝16.5Hz,1H),5.72(s,1H),4.82(m,1H),4.34(s,2H),4.10(m,2H),3.85(m,0.5H),3.48(m,0.5H),3.13(m,0.5H),2.62(m,1.5H),2.11(d,J＝12.5Hz,1H),1.98(d,J＝13.5Hz,1H),1.69(m,1H)。
实施例12：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-胺基-3-(4–(4-氯苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物13)的制备
步骤12a：叔丁基(R)-3-(4-胺基-3-(4-(4-氯-苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-13)的制备
将2-(4–(4-氯-苯氧基)-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代硼烷(108-13)(1.78g，5.39mmol，1.5当量)溶于甲醇(10ml)再加入浓盐酸(1ml)搅拌反应1h后水洗，二氯甲烷萃取，干燥后过滤母液备用，往上述母液中加叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(1.20g，3.59mmol，1当量)，Cu(OAc)2(1.30g，7.18mmol，2当量)，Et3N(0.73g，7.18mmol，2当量)和吡啶(0.57g，7.18mmol，2当量)，室温反应过夜。将反应液水洗，二氯甲烷萃取，干燥后浓缩，用乙酸乙酯/正己烷(3:1)柱层析得到淡黄色油状物叔丁基(R)-3-(4-胺基-3-(4-(4-氯-苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.77g，收率40.00％)。LCMS(ESI)：m/z 536.50[M+H]+。
步骤12b：(R)-4-胺基-3-(4-(4-氯苯氧基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-13)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-胺基-3-(4-(4-氯-苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(307-13)(0.77g，1.44mmol，1当量)溶于二氯甲烷(5ml)，加入TFA(2.5ml)，室温反应1h。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠中和至稍偏碱性，用5ml二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，甲醇/二氯甲烷/三乙胺(1：10：0.3)柱层析得类白色泡沫状固体(R)-4-胺基-3-(4-(4-氯苯氧基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(325mg，收率52.08％)。LCMS(ESI)：m/z 436.10[M+H]+。
步骤12c:(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-胺基-3-(4-(4-氯苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物13)的制备
将丙烯酰氯(202-4)(81mg，0.90mmol，1.2当量)溶于二氯甲烷(10ml)，冰盐浴下滴加(R)-4-胺基-3-(4-(4-氯苯氧基)苯基)-1-(吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-13)(325mg，0.75mmol，1当量)的二氯甲烷(5ml)溶液，最后加入DIEA(116mg，0.90mmol，1.2当量)的二氯甲烷(5ml)溶液，反应10分钟。加水(40ml)搅拌，二氯甲烷(20ml)萃取，有机相再用水(20ml)洗涤一次，干燥，浓缩，甲醇/二氯甲烷(1：20)和甲醇/乙酸乙酯(1：20)柱层析两次得白色固体(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-胺基-3-(4-(4-氯苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(66mg，收率18％),含量100％，熔点：90-92℃；LCMS(ESI)：m/z 490.05[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.03(d,J＝30.0Hz,1.5H),2.10(d,J＝23.7Hz,1H),2.60(m,1.5H)，3.13(s,0.5H)，3.46(s,1H)，3.86(d,J＝37.0Hz,0.5H),4.10(s,4H)，4.81(d,J＝30.0Hz,1H)，5.34(t,J＝11.0Hz,0.5H)，5.73(d,J＝21.6Hz,1H)，6.32(d,J＝40Hz,1H)，6.63(d,J＝12.6Hz,2H)，7.03(d,J＝22.1Hz,2H)，7.11(d,J＝22.1Hz,2H)，7.35(d,J＝22.1Hz,2H)，7.41(d,J＝21.9Hz,2H)，7.87(d,J＝14.0Hz,1H)
实施例13：(R)-4-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-2-氧代-1，2-二氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)苯氧基)苯腈((R)-4-(4-(1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-2-oxo-1,2-dihydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-3-yl)phenoxy)benzonitrile)(化合物15)的制备
步骤13a：叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-(4-氰基苯氧基))-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(4-cyanophenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-15)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(1.0g，3.0mmol，1.0当量)，4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)苯腈(108-15)(1.25g，3.9mmol，1.3当量)，醋酸铜(0.60g，3.3mmol，1.1当量)，分子筛(1.0g)，吡啶(0.71g，9.0mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(15ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(200ml)稀释，用半饱和食盐水(100ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-(4-氰基苯氧基))-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.36g，收率：23％)。LCMS(ESI)：m/z 527[M+1]+，浅绿色油状物；TLC：Rf 0.6(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤13b：(R)-4-(4-(4-氨基-2-氧代-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-基)苯氧基)苯腈((R)-4-(4-(4-amino-2-oxo-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-3(2H)-yl)phenoxy)benzonitrile)(化合物308-15)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-(4-氰基苯氧基))-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(307-15)(0.36g，0.68mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，室温反应过夜。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-(4-(4-氨基-2-氧代-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-基)苯氧基)苯腈(0.122g，收率：42％)。LCMS(ESI)：m/z 427[M+1]+，无色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤13c：(R)-4-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-2-氧代-1，2-二氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)苯氧基)苯腈((R)-4-(4-(1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-2-oxo-1,2-dihydro-3H-imidazo[4,5-c]pyridin-3-yl)phenoxy)benzonitrile)(化合物15)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.032g，0.35mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-(4-(4-氨基-2-氧代-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3(2H)-基)苯氧基)苯腈(308-15)(0.122g，0.29mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(7ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.056g，0.44mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(R)-4-(4-(1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-2-氧代-1，2-二氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-3-基)苯氧基)苯腈(0.052g，收率：38％)。白色固体，熔点：116.1-118.7℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 481[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.89(d,J＝5Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.49(d,J＝8.5Hz,2H),7.22(d,J＝8.5Hz,2H),7.12(d,J＝8.5Hz,2H),6.66(m,2H),6.34(d,J＝16.5Hz,1H),5.72(s,1H),4.82(m,1H),4.16(m,4H),3.85(m,0.5H),3.48(m,0.5H),3.12(m,0.5H),2.60(m,1.5H),2.12(m,1H),1.99(m,1H),1.65(m,1H)。
实施例14：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-苯基吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloyl piperidine-3-yl)-4-amino-3-(6-phenyl pyridin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物16)的制备
步骤13a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯((tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(6-phenoxypyridin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-16)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(0.666g，2.0mmol，1.0当量)，2-苯氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(108-16)(0.891g，3.0mmol，1.5当量)，醋酸铜(0.400g，2.2mmol，1.1当量)，分子筛(0.500g)，吡啶(0.474g，6.0mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(8ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(100ml)稀释，用半饱和食盐水(100ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝60：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.520g，收率：52％)。LCMS(ESI)：m/z503[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤13b：(R)-4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(6-phenoxypyridin-3-yl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-16)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.52g，1.0mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，反应液室温过夜。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.215g，收率：53％)。LCMS(ESI)：m/z 403[M+1]+，灰白色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤13c：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-苯基吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloyl piperidine-3-yl)-4-amino-3-(6-phenyl pyridin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物16)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.059g，0.65mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(6-苯氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-16)(0.215g，0.54mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(7ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.104g，0.81mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-苯基吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.083g，收率：34％)。无色固体，熔点：107.9-109.9℃。TLC：Rf0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 457[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ8.29(s，1H)，7.89(d，1H)，7.78(t，J＝6Hz,2H)，7.42(m，2H)，7.24(m，1H)，7.18(d，J＝7.5Hz,2H)，7.05(d，J＝9Hz,1H)，6.65(m,1H)，6.57(m,1H)，6.30(m,1H),，5.71(m，1H)，4.82(m，1H)，4.02(m，4H)，3.85(m，0.5H)，3.44(m，0.5H)，3.13(m，0.5H)，2.57(m，1.5H)，2.11(m，1H)，1.98(m，1H)，1.63(m，1H)。
实施例15：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物17)的制备
步骤15a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-iodophenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物402-17)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(2.5g,7.50mmol,1.0当量)、对碘苯硼酸(401-17)(2.14g,8.62mmol,1.3当量)和吡啶(1.78g,22.5mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，再加入醋酸铜(1.50g,8.25mmol,1.1当量)和4A分子筛(3.0g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(100mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(50mL×4)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(1.6g，收率：40％)。棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z536[M+1]+。
步骤15b：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-17)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(402-17)(0.8g,1.49mmol,1.0当量)、芝麻酚(403-17)(0.31g,2.24mmol,1.5当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(39mg,0.28mmol,0.18当量)溶于二氧六环(8mL)中，再加入碘化亚铜(14.2mg,0.075mmol,0.05当量)和碳酸铯(0.97g,2.98mmol,2.0当量)，然后在氮气保护中100℃反应24小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40:1到20:1)纯化得叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(0.35g，收率：44％)。灰色固体；TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 546[M+1]+。
步骤15c：(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物308-17)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(307-17)(0.35g，0.64mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(10mL)中，再向其中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(50mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.26g，收率：91％)。灰色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 446[M+1]+。
步骤15d：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物17)的制备
将丙烯酰氯(202-4)(0.057mL，0.7mmol，1.2当量)溶于二氯甲烷(5mL)中，冷却到0℃，然后向其中逐滴滴加(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-17)(0.26g，0.584mmol，1.0当量)的二氯甲烷(5mL)溶液，接着再逐滴滴加N,N-二异丙基乙胺(0.156mL，0.876mmol，1.5当量)的二氯甲烷(1.0mL)溶液，将该混合液在0℃反应10分钟。将反应液用水(50mL)猝灭，然后用二氯甲烷(50mL×2)萃取。将得到的有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.170g，收率：58％)。白色固体，熔点：194.5-195.6℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 500[M+1]+，纯度：97.054％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(d,J＝5.5Hz,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(d,J＝9.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.64-6.55(m,4H),6.34-6.30(m,1H),6.00(s,2H),5.78-5.65(m,1H),4.82-4.78(m,1H),4.25-3.80(m,5H),3.17-2.45(m,2H),2.15-1.94(m,2H),1.82-1.75(m,1H)。
实施例16：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-hydroxyphenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物18)的制备
步骤16a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯((R)-tert-butyl 3-(4-amino-3-(4-(4-(benzyloxy)phenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-18)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(402-17)(0.7g,1.31mmol,1.0当量)、4-苄氧基苯酚(403-18)(0.39g,1.96mmol,1.5当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(34mg,0.24mmol,0.18当量)溶于二氧六环(10mL)中，再加入碘化亚铜(12.5mg,0.066mmol,0.05当量)和碳酸铯(0.85g,2.62mmol,2.0当量)，然后在氮气保护中100℃反应20小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40:1到20:1)纯化得叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(0.4g，收率：50％)。淡黄色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 608[M+1]+。
步骤16b：(R)-4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(4-(benzyloxy)phenoxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物308-18)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶-1-羧酸酯(307-18)(0.40g，0.658mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(10mL)中，再向其中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(50mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.305g，收率：91％)。灰色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 508[M+1]+。
步骤16c：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-hydroxyphenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物18)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-(4-苄氧基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-18)(0.305g，0.6mmol，1.0当量)溶于乙醇(10mL)中，再向其中加入钯/碳(100mg)，然后在氢气球的气氛下40℃反应过夜。反应液冷却到室温后过滤，收集滤液浓缩得到粗产品，用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.22g，收率：88％)。灰色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝8：1)；LCMS(ESI)：m/z 418[M+1]+。将上述所得的(R)-4-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.2g，0.48mmol，1.0当量)、丙烯酸(201-18)(38mg，0.53mmol，1.1当量)、DCC(119mg，0.58mmol，1.2当量)和DMAP(6mg，0.048mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在0℃下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)纯化得化合(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-羟基苯氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(83mg，收率：37％)。白色固体，熔点：196.3-198.2℃。TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 471[M+1]+，纯度：96.893％；1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(d,J＝5.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.5Hz,2H),7.03(d,J＝9.0Hz,2H),6.94(d,J＝8.5Hz,2H),6.81(d,J＝8.5Hz,2H),6.66-6.59(m,2H),6.34(d,J＝15Hz,1H),5.75-5.73(m,1H),4.83-4.78(m,1H),4.19(s,2H),4.13-4.07(m,2H),3.85-3.47(m,1H),3.14-2.59(m,2H),2.12-1.96(m,3H)。
实施例17：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-nitrophenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物19)的制备
步骤17a：叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-羟基苯基)-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-hydroxyphenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物502-19)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(3.0g，9.0mmol，1.0当量)，4-羟基苯硼酸(501-19)(1.62g，11.7mmol，1.3当量)，醋酸铜(1.820g，10mmol，1.1当量)，分子筛(3.0g)，吡啶(2.13g，27.0mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(30ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(200ml)稀释，用半饱和食盐水(200ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-羟基苯基)-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.240g，收率：6％)。LCMS(ESI)：m/z 426[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.35(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤17b：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)3-(4-amino-3-(4-(4-nitrophenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-19)的制备
往反应瓶中加入得到叔丁基(R)-3-(4-氨基3-(4-羟基苯基)-2氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(502-19)(0.240g,0.56mmol,1.0当量)，对氟硝基苯(503-19)(0.088g,0.62mmol,1.1当量)，碳酸钾(0.116g,0.84mmol,1.5当量)和乙腈(15ml)，将反应液加热回流过夜。将反应液用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)纯化得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶啶-1-羧酸酯(0.270g，收率：89％)。LCMS(ESI)：m/z 547[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤17c：(R)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(4-nitrophenoxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物308-19))的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶啶-1-羧酸酯(307-19)(0.27g，0.5mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，室温反应半小时。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.220g，收率：99％)。LCMS(ESI)：m/z 447[M+1]+，无色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤17d：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-nitrophenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物19)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.054g，0.60mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-19)(0.220g，0.50mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(7ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.097g，0.75mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-硝基苯氧基)苯基)-1，3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.170g，收率：68％)。黄色固体，熔点：92.6-98.6℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 501[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ8.27(d,J＝9Hz,2H),7.89(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),7.25(d,J＝9Hz,2H),7.14(d,J＝9Hz,2H),6.67(m,2H),6.34(d,J＝17Hz,1H),5.74(d,J＝7.5Hz,1H),4.83(m,1H),4.22(m,4H),3.86(m,0.5H),3.48(m,0.5H),3.13(m,0.5H),2.62(m,1.5H),2.12(d,J＝12Hz,1H),1.99(d,J＝13Hz,1H),1.66(m,1H)。
实施例18：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(benzyloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物24)的制备
步骤18a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯((tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(benzyloxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物602-24)的制备
将叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(500mg，1.5mmol，1当量)溶于二氯甲烷(5ml)，依次加入4A分子筛(1g)、醋酸铜(408mg，2.25mmol，1.5当量)、苄氧基苯硼酸(601-24)(410mg，1.8mmol，1.2当量)、吡啶(178mg，2.25mmol，1.5当量)、Et3N(227mg，2.25mmol，1.5当量)，室温搅拌24小时。反应完毕，过滤，母液水洗两遍，干燥，浓缩，甲醇/二氯甲烷(1：40)柱层析得黄棕色固体叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(350mg，收率45.3％)。LCMS(ESI)：m/z 516.40[M+1]+。
步骤18b：(R)-4-胺基-3-(4-(苄氧基)苯基)-1-[哌啶-3-基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-(benzyloxy)phenyl)-1-[(piperidin-3-yl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物603-24)的制备
叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(602-24)(350mg，0.68mmol，1当量)溶于二氯甲烷(1ml)，加入TFA(2ml)，室温反应1h。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠中和至稍偏碱性，用5ml二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，甲醇/二氯甲烷/三乙胺(1：10：0.3)柱层析得类白色泡沫状固体(R)-4-胺基-3-(4-(苄氧基)苯基)-1-[哌啶-3-基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(90mg，收率32％)。LCMS(ESI)：m/z 416.40[M+1]+。
步骤18c：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(benzyl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物24)的制备
将丙烯酰氯(202-4)(24mg，0.26mmol，1.2当量)溶于二氯甲烷(4ml)，冰浴下加入(R)-4-胺基-3-(4-(苄氧基)苯基)-1-[哌啶-3-基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(603-24)(90mg，0.217mmol，1当量)的二氯甲烷(4ml)溶液，最后加入DIEA(34mg，0.26mmol，1.2当量)的二氯甲烷(2ml)溶液，反应10分钟。加水(5ml)搅拌，二氯甲烷(2ml)萃取，有机相再用水(10ml)洗涤一次，干燥，浓缩，甲醇/乙酸乙酯(1：10)柱层析得白色固体(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(苄基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(19.4mg，收率19％)。熔点：75-76℃；LCMS(ESI)：m/z 470.50[M+1]+；1HNMR(600MHz,CDCl3):δ1.27(s,1.5H),2.02(m,1.5H),2.12(s,1H),2.51(d,J＝10.74Hz，0.5H),2.63(dd,J＝26.34，11.88Hz，1H),3.14(t,J＝11.94Hz，0.5H),3.49(t,J＝11.46Hz，0.5H),3.86(t,J＝10.86Hz，0.5H),4.08(t,J＝28.56Hz，3.5H),4.22(s,0.5H),4.84(dd,J＝34.98，10.68Hz，1H),5.14(s,2H),5.74(d,J＝9.96Hz，1H),6.34(t,J＝15.9Hz，1H,),6.65(m,2H),7.14(d,J＝8.64Hz，2H,),7.38(t,J＝8.64Hz，3H),7.43(q,J＝7.32Hz，2H),7.46(d,J＝7.32Hz，2H),7.87(s,1H)。
实施例19：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((4-chlorobenzyl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物26)的制备
步骤19a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-((4-chlorobenzyl)oxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物602-26)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(0.423g，1.27mmol，1.0当量)，(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)硼酸(601-26)(0.433g，1.65mmol，1.3当量)，醋酸铜(0.254g，1.40mmol，1.1当量)，分子筛(0.400g)，吡啶(0.301g，3.81mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(100ml)稀释，用半饱和食盐水(100ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝60：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.200g，收率：29％)。LCMS(ESI)：m/z 551[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤19b：(R)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-((4-chlorobenzyl)oxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物603-26)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(602-26)(0.20g，1.0mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，室温反应半小时。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(80ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.145g，收率：90％)。LCMS(ESI)：m/z 451[M+1]+，浅黄色固体；TLC：Rf0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤19c：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((4-chlorobenzyl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物26)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.035g，0.39mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(603-26)(0.145g，0.32mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(8ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.062g，0.48mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-((4-氯苄基)氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.100g，收率：62％)。无色固体，熔点：93.1-95.9℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z504[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.83(d,J＝5Hz,1H),7.37(m,6H),7.09(d,J＝8.5Hz,1H),6.62(m,2H),6.32(m,1H),5.71(m,1H),5.08(s,2H),4.80(m,1H),4.22(s,2H),4.09(m,2H),3.84(m,0.5H),3.45(m,0.5H),3.12(m,0.5),2.60(m,1.5H),2.19(m,2H),2.09(m,1H),1.97(m,1H)。
实施例20：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-(苄氧基)吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(6-(benzyloxy)pyridin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物27)的制备
步骤20a：叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯((tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(6-(benzyloxy)pyridin-3-yl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(602-27)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(0.999g，3.0mmol，1.0当量)，2-苄氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡啶(601-27)(1.400g，4.5mmol，1.5当量)，醋酸铜(0.820g，4.5mmol，1.5当量)，分子筛(0.500g)，吡啶(0.710g，9.0mmol，3.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(100ml)稀释，用半饱和食盐水(100ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝60：1)得到叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.410g，收率：52％)。LCMS(ESI)：m/z517[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤20b：(R)-4-氨基-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(6-(benzyloxy)pyridin-3-yl)-1-(piperidin-3-yl)-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-2(3H)-one)(603-27)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(602-27)(0.41g，1.0mmol，1.0当量)，二氯甲烷(10ml)和三氟醋酸(2.0ml)，室温反应半小时。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，浓缩物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到(R)-4-氨基-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.220g，收率：66％)。LCMS(ESI)：m/z 417[M+1]+，浅黄色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤20c：(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-(苄氧基)吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(6-(benzyloxy)pyridin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物27)的制备
往丙烯酰氯(202-4)(0.057g，0.64mmol，1.2当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中0℃下滴加(R)-4-氨基-3-(6-苄氧基吡啶-3-基)-1-(哌啶-3-基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(603-27)(0.220g，0.53mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(7ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.102g，0.80mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(50ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，剩余物用柱层析法纯化(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇＝30：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(6-(苄氧基)吡啶-3-基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.135g，收率：54％)。无色固体，熔点：107.3-109.2℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 471[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ8.29(d，J＝3Hz,1H)，7.89(d，J＝5.5Hz,1H)，7.68(q，2H)，7.48(d，J＝7Hz,2H)，7.40(t，J＝7Hz,2H)，7.35(m，1H)，6.96(d，J＝8.5Hz,1H),6.60(m,2H)，6.30(m,1H),，5.71(m，1H)，5.44(s，2H)，4.82(m，1H)，4.0-4.19(m，4H)，3.84(m，0.5H)，3.45(m，0.5H)，3.13(m，0.5H)，2.58(m，1.5H)，2.11(m，1H)，1.98(m，1H)，1.65(m，1H)。
实施例21：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(1-((R)-1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-fluorophenoxy)phenyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物12)的制备
步骤21a：2-(4-(4–氟-苯氧基)-苯基]-4,4,5,5-四甲基–1,3,2-二氧硼戊环(2-(4-(4-fluorophenoxy)phenyl)-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane)(化合物108-12)的制备
将1-溴-4-(4–氟-苯氧基)苯(2.00g，7.54mmol，1.0当量)，联硼酸频哪醇酯(5.84g，15.1mmol，2.0当量)，醋酸钾(1.48g，15.1mmol，2.0当量)和Pd(dppf)Cl2(0.54g，0.754mmol，0.1当量)充氮气保护，然后加入二氧六环(20ml)，90℃反应过夜。将反应液冷却水洗，二氯甲烷萃取，干燥后浓缩，柱层析(洗脱剂：二氯甲烷：正己烷＝1:2)得到2-(4-(4–氟-苯氧基)-苯基]-4,4,5,5-四甲基–1,3,2-二氧硼戊环(1.10g，收率46.5％)，类白色固体，TLC:Rf 0.6(二氯甲烷：正己烷＝1:2)
步骤21b：((3R)-叔丁基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯((3R)-tert-butyl 3-(4-amino-3-(4-(4-fluorophenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-12)的制备
往反应瓶中加入叔丁基(R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(306)(3.0g，9.0mmol，1.0当量)，2-(4-(4–氟-苯氧基)-苯基]-4,4,5,5-四甲基–1,3,2-二氧硼戊环(108-12)(0.85g，2.5mmol，1.00当量)，醋酸铜(0.98g，5mmol，2当量)，三乙胺(0.5g,5mmol，2.00当量)，吡啶(0.40g，5mmol，2.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，反应液在空气中加热到40℃过夜。反应液用乙酸乙酯(200ml)稀释，用半饱和食盐水(150ml×3)洗涤，有机相用硅胶拌样旋干，剩余物用柱层析法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯：环己烷＝2：1)得到叔丁基((3R)-叔丁基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(0.19g，收率：14％)。LCMS(ESI)：m/z 519[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf0.57(乙酸乙酯：环己烷＝2：1)。
步骤21c：4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡咯[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(4-amino-3-(4-(4-fluorophenoxy)phenyl)-1-((R)-piperidin-3-yl)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物308-12)的制备
往反应瓶中加入叔丁基((3R)-叔丁基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(307-12)(0.19g，0.36mmol，1.0当量)，二氯甲烷(5ml)和三氟醋酸(1.0ml)，反应液在室温过夜。将反应液倒入饱和碳酸钠溶液(100ml)中，用二氯甲烷(10mlX2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，剩余物用柱层析法(洗脱剂：二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝10：1：0.1)纯化得到4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡咯[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(0.1g，收率：66.7％)。LCMS(ESI)：m/z419[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤21d：1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(1-((R)-1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-fluorophenoxy)phenyl)-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-2(3H)-one)(化合物12)的制备
往丙烯酰氯(0.032g，0.36mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(5ml)中在0℃下滴加(4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1-((R)-哌啶-3-基)-1H-吡咯[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(308-12)(0.1g，0.24mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(3ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.062g，0.48mmol，2.0当量)的二氯甲烷溶液(2ml)，在0℃下反应5分钟。将反应液倒入水(10ml)中，用二氯甲烷(10mlX2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，剩余物用柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝40：1)得到(1-((R)-1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(4-氟苯氧基)苯基)-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2(3H)-酮(0.028g，收率：24％)。类白色固体，熔点：86-88℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 473[M+1]+，1HNMR(CDCl3，400MHz)：δ7.87(d,J＝5Hz,1H),7.39(d,J＝8.7Hz,2H),7.08(m,6H),6.63(d,J＝5Hz,2H),6.30(d,J＝17.6Hz,1H),5.72(s,1H),4.82(d,J＝12Hz,1H),4.12(d,J＝13.6Hz,4H),3.85(m,0.5H),3.48(d,J＝11.2Hz,0.5H),3.13(m,0.5H),2.62(m,1.5H),2.11(d,J＝11.2Hz,1H),1.98(d,J＝14Hz,1H),1.60(m,1H)。
实施例22：(R)-1-(3-(1-(丙烯酰基)哌啶))-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-(dimethylamino)phenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物21)的制备
步骤22a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-二甲氨基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(4-(dimethylamino)phenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-21)的制备
(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-羟基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(502-19)(0.88g,2.07mmol,1.0当量)、对二甲氨基溴苯(1.24g,6.21mmol,3.0当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(0.35g,2.48mmol,1.2当量)溶于二氧六环(20mL)中，再加入碘化亚铜(0.12g,0.62mmol,0.3当量)和碳酸铯(2.36g,7.25mmol,3.5当量)，然后在氮气保护中100℃反应24小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-二甲氨基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(0.69g，收率：61％)。LCMS(ESI)：m/z 545[M+1]+，灰色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤22b:(R)-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(4-(dimethylamino)phenoxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-21)的制备
将((R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-二甲氨基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(307-21)(0.69g，1.27mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(15mL)中，再向其中加入三氟乙酸(3mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(100mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.52g，收率：93％)。LCMS(ESI)：m/z 445[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤22c:(R)-1-(3-(1-(丙烯酰基)哌啶))-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(4-(dimethylamino)phenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物21)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-21)(0.2g，0.45mmol，1.0当量)、丙烯酸(39mg，0.54mmol，1.2当量)、DCC(111mg，0.54mmol，1.2当量)和DMAP(5.5mg，0.045mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-1-(3-(1-(丙烯酰基)哌啶))-4-氨基-3-(4-(4-二甲氨基苯氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(60mg，收率：27％)。白色固体，熔点：92.3-97.6℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝15：1)。LCMS(ESI)：m/z 499[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.85(s,1H),7.35(d,J＝9.0Hz,2H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.01(d,J＝2.5Hz,2H),6.75(d,J＝6.5Hz,2H),6.70-6.51(m,2H),6.33-6.30(m,1H),5.71(s,1H),4.83-4.81(m,1H),4.25-4.10(m,4H),3.84-3.46(m,1H)。
实施例23:(3R)-1-[1-(1-丙烯酰基)哌啶-3-基]-4-胺基-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((3R)-1-(1-Acryloyl-piperidin-3-yl)-4-amino-3-[4-(4-trifluoromethyl-phenoxy)-phenyl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物22)的制备
步骤23a:(3R)-3-[4-氨基-2-氧代-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3-{4-Amino-2-oxo-3-[4-(4-trifluoromethyl-phenoxy)-phenyl]-2,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl}-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester)(化合物307-22)的制备
将(3R)-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(306)(1.17g，3.52mmol，1当量)溶于DMF(15ml)，依次加入 分子筛(2g)、醋酸铜(0.96g，5.28mmol，1.5当量)、4-三氟甲基苯氧基苯硼酸(108-22)(1.19g，4.22mmol，1.1当量)、吡啶(0.417g，5.28mmol，1.5当量)，室温搅拌过夜。反应完毕，过滤，母液水洗两遍，干燥，浓缩，甲醇/DCM(1：40)柱层析得棕色浆状物(3R)-3-[4-氨基-2-氧代-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.55g，收率27.5％)；TLC：Rf 0.7(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；LCMS(ESI)：m/z 570[M+1]+1。
步骤23b:(3R)-4-氨基-1-[哌啶-3-基]-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基)-苯基]1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(4-Amino-1-piperidin-3-yl-3-[4-(4-trifluoromethyl-phenoxy)-phenyl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-22)的制备
将(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(307-22)(0.55g，0.97mmol，1当量)溶于DCM(2ml)，加入TFA(2ml)，室温反应1h。反应液浓缩，再用饱和碳酸氢钠中和至稍偏碱性，用5mlDCM萃取，干燥，浓缩，甲醇/DCM/三乙胺(1：10：0.1)柱层析得类白色泡沫状固体(3R)-4-氨基-1-[哌啶-3-基]-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基)-苯基]1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.408g，收率90％)；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 470[M+1]+1。
步骤23c:(3R)-1-[1-(1-丙烯酰基)哌啶-3-基]-4-胺基-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((3R)-1-(1-Acryloyl-piperidin-3-yl)-4-amino-3-[4-(4-trifluoromethyl-phenoxy)-phenyl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物22)的制备
将4-胺基-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-1-[(3R)-哌啶-3-基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-22)(67mg，0.143mmol，1当量)、丙烯酸(12mg，0.171mmol，1.2当量)溶于DCM(5ml)，加入HATU(71mg，0.186mmol，1.3当量)和Et3N(22mg，0.215mmol，1.5当量)，冰浴下反应0.5小时。反应完毕，浓缩，柱层析纯化(洗脱剂：甲醇：二氯甲烷＝1：20)得白色固体(3R)-1-[1-(1-丙烯酰基)哌啶-3-基]-4-胺基-3-[4-(4-三氟甲基苯氧基-苯基)]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(20mg，收率20％)；纯度95.1％；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；熔点：64～65℃；LCMS(ESI)：m/z 524[M+1]+1；1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.64(m,1H),1.99(m,3H),2.64(m,1.5H),3.13(t,0.5H,J＝12.36Hz),3.47(t,0.5H,J＝11.34Hz),3.86(s,0.5H),4.11(m,1.5H),4.21(s,0.5H),4.31(s,1H),4.83(dd,1H,1J＝10.08Hz,2J＝8.34Hz),5.75(d,1H,J＝9.66Hz),6.35(d,1H,J＝16.2Hz),6.62(m,2H),7.18(dd,4H,1J＝8.64Hz,2J＝8.4Hz),7.46(d,2H,J＝8.52Hz),7.65(d,2H,J＝8.4Hz),7.86(s,1H)。
实施例24:(3R)-1-(1-丙烯酰基-哌啶-3-基)-4-氨基-3-[4-(4-羟甲苯氧基)-苯基]-1,3-2H-咪唑[4,5-c]吡啶-2-酮(1-(1-Acryloyl-piperidin-3-yl)-4-amino-3-[4-(4-hydroxymethyl-phenoxy)-phenyl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物23)的制备
步骤24a:(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-(4-羟甲基苯氧基-苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3-{4-Amino-2-oxo-3-(4-hydroxy methylphenoxy-phenoxy)-2,3-dihydro-1-H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl}-piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester)(化合物307-23)的制备
往烧瓶里加入(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-(4-羟基苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(502-19)(737mg，1.73mmol，1当量)，Cs2CO3(1.13g，3.46mmol，2当量)，加入NMP(10ml)搅拌呈棕色悬浮液，加入4-氟苯甲醛(258mg，2.076mmol，1.2当量)，80℃反应过夜。将反应体系冷却，过滤，母液加入20ml水并加入醋酸调节pH至偏酸性，DCM(10ml)萃取两次，有机相最后再用水(20ml)洗涤2次，浓缩，柱层析(甲醇：DCM＝1:40)得到(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-(4-甲醛基苯氧基-苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，收率55％)，TLC：Rf 0.4(甲醇：二氯甲烷＝1：40)，浅棕色浆状物，LCMS(ESI)：m/z 530[M+1]+。将上述化合物(500mg，0.945mmol，1当量)，溶于甲醇/四氢呋喃(3ml/3ml)，加入硼氢化钠(179mg，4.73mmol，5当量)和氯化锂(200mg，4.73mmol，5当量)。加入水(20ml)搅拌，DCM(10ml x 2)萃取，浓缩，柱层析(甲醇：DCM＝1:40)得到(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-(4-羟甲基苯氧基-苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(220mg，收率44％)，TLC：Rf 0.3(甲醇：二氯甲烷＝1：40)，浅黄色浆状物，LCMS(ESI)：m/z 532[M+1]+。
步骤24b:(3R)-4-胺基-3-[4-(4-羟甲基苯氧基-苯基)]-1-哌啶-3-基-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(4-Amino-3-[4-(4-hydroxymethyl-phenoxy)-phenyl]-1-piperidin-3-yl-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-23)的制备
往烧瓶里加入(3R)-3-[4-胺基-2-氧代-3-[4-(4-羟甲基苯氧基-苯基)]-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(307-23)(0.22g，0.41mmol，1当量)，溶于DCM(2ml)，加入TFA(1ml)，室温反应1h。反应液浓缩，再用饱和碳酸氢钠中和至稍偏碱性，用5ml DCM萃取，干燥，浓缩，甲醇/DCM/三乙胺(1：10：0.1)柱层析得(3R)-4-胺基-3-[4-(4-羟甲基苯氧基-苯基)]-1-哌啶-3-基-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.092g，收率52％)，类白色油状物，TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；LCMS(ESI)：m/z 432[M+1]+1。
步骤24c:(3R)-1-(1-丙烯酰基-哌啶-3-基)-4-氨基-3-[4-(4-羟甲苯氧基)-苯基]-1,3-2H-咪唑[4,5-c]吡啶-2-酮(1-(1-Acryloyl-piperidin-3-yl)-4-amino-3-[4-(4-hydroxymethyl-phenoxy)-phenyl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物23)的制备
往烧瓶里加入(3R)-4-胺基-3-[4-(4-羟甲基苯氧基-苯基)]-1-哌啶-3-基-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-23)(80mg，0.1854mmol，1当量)，溶于DCM(2ml)/Et3N(56mg)，冰浴下加入丙烯酸(15mg，0.2039mmol，1.1当量)和HATU(92mg，0.241mmol，1.3当量)，反应0.5小时。反应完毕，柱层析纯化(洗脱剂：甲醇：二氯甲烷＝1：20)得白色固体4-胺基-1-[(3R)-1-(2-丁烯酰基)二甲胺-3-基]-3-[4-(4-羟甲基苯氧基-苯基)]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(20mg，收率22％)；纯度95.3％；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)；熔点：99～100℃；LCMS(ESI)：m/z 486[M+1]+1；1HNMR(600MHz,CDCl3):δ1.64(m,1H),1.89(m,2H),2.10(s,1H),2.64(m,1.5H),3.12(t,0.5H,J＝12.12Hz),3.46(t,0.5H,J＝11.04Hz),3.85(s,0.5H),4.21(m,4H),4.82(dd,1H,1J＝8.04Hz,2J＝11.22Hz),5.74(d,1H,J＝9.84Hz),6.34(m,1H),6.62(m,2H),7.11(dd,4H,1J＝8.52Hz,2J＝8.34Hz),7.39(t,4H,J＝6.36Hz),7.86(s,1H)。
实施例25:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶基)-4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((4-fluorobenzyl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物25)的制备
步骤25a:4-(4-氟苄氧基)苯硼酸((4-((4-fluorobenzyl)oxy)phenyl)boronicacid)(化合物601-25)的制备
往反应瓶中加入对溴苯酚(3.0g，17.34mmol，1.0当量)，对氟苄溴(3.93g，20.81mmol，1.2当量)，碳酸钾(4.79g，34.68mmol，2.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，室温反应过夜。反应液加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，浓缩，然后用柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20：1)得到4-(4-氟苄氧基)溴苯(4.48g，收率：92％)。LCMS(ESI)：m/z 281[M+1]+，白色固体；TLC：Rf 0.5(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)。将上述得到的化合物(3.16g,11.24mmol,1.0当量)溶于无水四氢呋喃(40mL)中，用干冰丙酮浴冷却到-78℃，然后缓慢地滴加正丁基锂(2.5M,5.4mL,13.49mmol,1.2当量),滴加完毕后在-78℃下搅拌1小时。把硼酸三甲酯(2.55mL,22.48mmol,2.0当量)加进去然后缓慢升到室温并搅拌过夜。加入2N盐酸水溶液(20mL)并搅拌2小时。水层用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机层后用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得4-(4-氟苄氧基)苯硼酸(0.92g，收率：33％)。LCMS(ESI)：m/z 247[M+1]+，白色固体；TLC：Rf 0.2(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)。
步骤25b:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-((4-fluorobenzyl)oxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物602-25)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(0.85g,2.55mmol,1.0当量)、4-(4-氟苄氧基)苯硼酸(0.82g,3.32mmol,1.3当量)和吡啶(0.62mL,7.65mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，再加入醋酸铜(0.51g,2.81mmol,1.1当量)和分子筛(1g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(100mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(50mL×2)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(0.27g，收率：32％)。LCMS(ESI)：m/z 534[M+1]+，棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤25c:(R)-4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-((4-fluorobenzyl)oxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物603-25)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(602-25)(0.27g，0.51mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(10mL)中，再向其中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(50mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.20g，收率：90％)。LCMS(ESI)：m/z 434[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤25d:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶基)-4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((4-fluorobenzyl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物25)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-(4-氟苄氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(603-25)(0.20g，0.46mmol，1.0当量)、丙烯酸(43mg，0.60mmol，1.3当量)、DCC(124mg，0.60mmol，1.3当量)和DMAP(5.6mg，0.046mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在0℃下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物6-7(110mg，收率：49％)。白色固体，熔点：69.7-71.7℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 488[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(s,1H),7.44-7.41(m,2H),7.38-7.35(m,2H),7.11-7.08(m,4H),6.64-6.57(m,2H),6.34-6.30(m,1H),5.72(s,1H),5.08(s,2H),4.90-4.82(m,1H),4.25-4.05(m,4H),3.90-3.46(m,1H),3.16-2.50(m,2H),2.18-2.10(m,1H),2.02-1.95(m,1H),1.70-1.60(m,1H)。
实施例26:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶基)-4-氨基-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-2-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物28)的制备
步骤26a:4-(2-吡啶氧基)苯硼酸((4-(pyridin-2-yloxy)phenyl)boronic acid)(化合物108-28)的制备
往反应瓶中加入对溴苯酚(3.0g，17.34mmol，1.0当量)，2-氟吡啶(2.02g，20.81mmol，1.2当量)，碳酸钾(4.79g，34.68mmol，2.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，120℃反应过夜。反应液加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，浓缩，然后用柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到2-(4-溴苯氧基)吡啶(1.2g，收率：28％)。LCMS(ESI)：m/z 250[M+1]+，淡黄色油状液体；TLC：Rf 0.5(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。将上述所得化合物(1.17g,4.68mmol,1.0当量)和双联频哪醇硼酸酯(1.54g,6.08mmol,1.3当量)溶于二氧六环(15mL)中，然后加入醋酸钾(1.38g,14.04mmol,3.0当量)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.34g,0.47mmol,0.1当量)。用氮气置换三遍然后在100℃下反应过夜。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝20：1)纯化得4-(2-吡啶氧基)苯硼酸频那醇酯(1.1g，收率：79％)。LCMS(ESI)：m/z298[M+1]+，无色油状液体；TLC：Rf 0.5(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)。将上述所得的化合物(1.0g,3.37mmol,1.0当量)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入高碘酸钠(1.08g,5.05mmol,1.5当量)和1N盐酸溶液(10mL)，在室温下反应3小时。反应完成后加入碳酸氢钠固体调节溶液的pH值为6-7。水层用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机层混合后用饱和食盐水(30mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩得到4-(2-吡啶氧基)苯硼酸(0.62g，收率：86％)。LCMS(ESI)：m/z 216[M+1]+，白色固体；TLC：Rf 0.1(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。
步骤26b:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(4-(pyridin-2-yloxy)phenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-28)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(306)(0.74g,2.22mmol,1.0当量)、4-(2-吡啶氧基)苯硼酸(108-28)(0.62g,2.89mmol,1.3当量)和吡啶(0.54mL,6.66mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，再加入醋酸铜(0.44g,2.44mmol,1.1当量)和分子筛(1g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(100mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(50mL×2)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(0.228g，收率：20％)。LCMS(ESI)：m/z503[M+1]+，棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤26c:(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(piperidin-3-yl)-3-(4-(pyridin-2-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-28)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(307-28)(0.228g，0.454mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(10mL)中，再向其中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(50mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.17g，收率：93％)。LCMS(ESI)：m/z 403[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤26d:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶基)-4-氨基-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-2-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物28)的制备
将(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-28)(0.17g，0.422mmol，1.0当量)、丙烯酸(40mg，0.549mmol，1.3当量)、DCC(113mg，0.549mmol，1.3当量)和DMAP(5.2mg，0.042mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在0℃下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶基)-4-氨基-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(115mg，收率：60％)。白色固体，熔点：211.2-213.3℃。TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 457[M+1]+，1HNMR(CDCl3-d1，500MHz)：δ8.23-8.22(m,1H),7.88(d,J＝5.0Hz,1H),7.76-7.73(m,1H),7.46(d,J＝8.5Hz,2H),7.30(d,J＝8.5Hz,2H),7.08-7.06(m,1H),6.99(d,J＝8.5Hz,1H),6.64-6.55(m,2H),6.35-6.32(m,1H),5.75-5.73(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.18(s,2H),4.15-4.07(m,2H),3.86-3.49(m,1H),3.13-2.61(m,2H),2.51-2.08(m,1H),2.01-1.95(m,1H),1.86-1.82(m,1H)。
实施例27:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶)-4-氨基-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-3-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物29)的制备
步骤27a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(4-(pyridin-3-yloxy)phenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-29)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(402-17)(0.8g,1.49mmol,1.0当量)、3-羟基吡啶(403-29)(0.21g,2.24mmol,1.5当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(39mg,0.28mmol,0.18当量)溶于二氧六环(8mL)中，再加入碘化亚铜(14.2mg,0.075mmol,0.05当量)和碳酸铯(0.97g,2.98mmol,2.0当量)，然后在氮气保护中100℃反应60小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝40:1到20:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(0.24g，收率：32％)。LCMS(ESI)：m/z 503[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤27b:(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(piperidin-3-yl)-3-(4-(pyridin-3-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-29)的制备
合成方法如实施例26步骤26c，仅是将其中(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(307-28)替换为(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(307-29)(0.24g，0.48mmol，1.0当量),得到(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.18g，收率：93％)。LCMS(ESI)：m/z 403[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤27c:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶)-4-氨基-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-3-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物29)的制备
合成方法如实施例26步骤26d，仅是将其中(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-28)替换为(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-29)(0.18g，0.45mmol，1.0当量),得到(R)-1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶)-4-氨基-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.18g，收率：93％)。白色固体，熔点：80.5-83.8℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 457[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ8.49(d,J＝2.5Hz,1H),8.45(d,J＝4.0Hz,1H),7.88(d,J＝5.5Hz,1H),7.45-7.39(m,3H),7.35-7.32(m,1H),7.16(d,J＝8.5Hz,2H),6.65-6.58(m,2H),6.34-6.31(m,1H),5.72(s,1H),4.83-4.79(m,1H),4.20-4.11(m,4H),3.92-3.47(m,1H),3.15-2.52(m,2H),2.12-1.96(m,2H),1.70-1.60(m,1H)。
实施例28:(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-4-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物30)的制备
步骤28a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(3-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-2-oxo-3-(4-(pyridin-3-yloxy)phenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-30)的制备
合成方法如实施例26步骤26b，仅是将其中4-(2-吡啶氧基)苯硼酸(108-28)替换为(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)硼酸(108-30)(0.645g，3.0mmol，1.0当量)，得到(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.21g，收率：14％)。LCMS(ESI)：m/z 503[M+1]+，灰白色固体；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤28b:(R)-4-氨基-1-(哌啶-3-基)-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(piperidin-3-yl)-3-(4-(pyridin-4-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-30)的制备
合成方法如实施例26步骤26c，仅是将其中(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(2-吡啶氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)哌啶(307-28)替换为(R)-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(307-30)(0.21g，0.42mmol，1.0当量),得到(R)-4-氨基-1-(哌啶-3-基)-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.158g，收率：94％)。LCMS(ESI)：m/z403[M+1]+，无色固体；TLC：Rf 0.1(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤28c:(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-(pyridin-4-yloxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物30)的制备
往丙烯酰氯(0.039g，0.43mmol，1.1当量)的二氯甲烷溶液(7ml)中在0℃下滴加(R)-4-氨基-1-(哌啶-3-基)-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-30)(0.158g，0.39mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(10ml)，然后再滴加二异丙基乙基胺(0.075g，0.59mmol，1.5当量)的二氯甲烷溶液(1ml)，在0℃下反应10分钟。将反应液倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(100ml×2)萃取，有机相用硅胶拌样旋干，剩余物用柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到(R)-1-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-4-氨基-3-(4-(吡啶-4-基氧基)苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5c]吡啶-2-酮(0.050g，收率：28％)。无色固体，熔点：79.6-81.7℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 457[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ8.51(d,J＝6Hz,2H),7.89(d,J＝5Hz,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,2H),7.27(d,J＝8.5Hz,2H),6.94(d,J＝6Hz,2H),6.67(s,1H),6.60(d,J＝9.5Hz,1H),6.34(d,J＝16.5Hz,1H),5.72(s,1H),4.84(m,1H),4.31-4.11(m,4H),3.86(m,0.5H),3.48(m,0.5H),3.13(m,0.5H),2.63(m,1.5H),2.11(d,J＝12Hz,1H),1.98(d,J＝13.5Hz,1H),1.69(m,1H)。
实施例29:(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-(1-丙炔酰基哌啶))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-propioloylpiperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物32)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-11)(0.20g，0.50mmol，1.0当量)、丙炔酸(42mg，0.60mmol，1.2当量)、DCC(123mg，0.60mmol，1.2当量)和DMAP(6mg，0.05mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在0℃下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-(1-丙炔酰基哌啶))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(80mg，收率：35％)。白色固体，熔点：89.3-95.6℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 454[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.90-7.86(m,1H),7.41-7.38(m,4H),7.20-7.17(m,1H),7.14-7.09(m,4H),6.64-6.60(m,1H),4.79-4.63(m,1H),4.58-4.45(m,1H),4.20-4.05(m,3H),3.95-3.52(m,1H),3.20-2.70(m,2H),2.68-2.53(m,1H),2.15-1.95(m,2H),1.73-1.65(m,1H)。
实施例30:(R)-4-氨基-1-(3-(1-(2-丁炔酰基))哌啶基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-1-(1-(but-2-ynoyl)piperidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物33)的制备
合成方法如实施例29，仅是将其中丙炔酸替换为2-丁炔酸(52mg，0.62mmol，1.3当量),得到(R)-4-氨基-1-(3-(1-(2-丁炔酰基))哌啶基)-3-(4-苯氧苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(60mg，收率：27％)。白色固体，熔点：84.6-89.4℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z468[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.89-7.85(m,1H),7.41-7.37(m,4H),7.21-7.18(m,1H),7.14-7.08(m,4H),6.66-6.60(m,1H),4.77-4.65(m,1H),4.55-4.45(m,1H),4.28-4.05(m,3H),3.90-3.47(m,1H),3.10-2.62(m,1H),2.60-2.50(m,1H),2.15-1.95(m,5H),1.75-1.60(m,1H)。
实施例31:1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶甲基)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(1-((1-acryloylpiperidin-3-yl)methyl)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物35)的制备
步骤31a:1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-氯-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(tert-butyl 3-(((2-chloro-3-nitropyridin-4-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物702-35)的制备
往反应瓶中加入2,4-二氯-3-硝基吡啶(101)(1.0g，5.18mmol，1.0当量)，1-叔丁氧羰基-3-氨甲基哌啶(701-35)(1.11g，5.18mmol，1.0当量)，三乙胺(1.4mL，10.36mmol，2.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，室温反应过夜。反应液加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，浓缩，然后用柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)得到1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-氯-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(1.66g，收率：86％)。LCMS(ESI)：m/z 371[M+1]+，淡黄色油状物；TLC：Rf 0.2(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)。
步骤31b:1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-二苄胺基-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(tert-butyl 3-(((2-(dibenzylamino)-3-nitropyridin-4-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物703-35)的制备
往反应瓶中加入1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-氯-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(702-35)(1.66g，4.48mmol，1.0当量)，二苄胺(0.95mL，4.92mmol，1.1当量)，三乙胺(1.24mL，8.96mmol，2.0当量)和乙腈(25ml)，加热回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得到1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-二苄胺基-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(2.13g，收率：90％)。LCMS(ESI)：m/z 532[M+1]+，黄色油状物；TLC：Rf 0.4(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)。
步骤31c:1-叔丁氧羰基-3-(4-(3-氨基-2-二苄胺基)吡啶氨甲基)哌啶(tert-butyl 3-(((3-amino-2-(dibenzylamino)pyridin-4-yl)amino)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物704-35)的制备
往锌粉(2.60g，40.1mmol，10.0当量)和氯化铵(1.50g，28.07mmol，7.0当量)的甲醇溶液(40ml)中加入1-叔丁氧羰基-3-(4-(2-二苄胺基-3-硝基)吡啶氨甲基)哌啶(703-35)(2.13g，4.01mmol，1.0当量)，加热至50℃反应1小时。反应液用硅藻土过滤，滤液旋干，用二氯甲烷：甲醇＝5：1(50ml)溶解，过滤，有机相旋干得到粗品1-叔丁氧羰基-3-(4-(3-氨基-2-二苄胺基)吡啶氨甲基)哌啶(2.10g，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 502[M+1]+，灰色固体；TLC：Rf 0.1(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)。
步骤31d:1-叔丁氧羰基-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(tert-butyl 3-((4-(dibenzylamino)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物705-35)的制备
往反应瓶中加入1-叔丁氧羰基-3-(4-(3-氨基-2-二苄胺基)吡啶氨甲基)哌啶(704-35)(2.10g，4.19mmol，1.0当量)，N,N'-羰基二咪唑(1.70g，10.46mmol，2.5当量)和四氢呋喃(30ml)，将反应液加热至回流过夜。反应液用硅胶拌样旋干，用柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝100：1)得到1-叔丁氧羰基-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(1.87g，收率：85％)。LCMS(ESI)：m/z 528[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝80：1)。
步骤31e:1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(tert-butyl 3-((4-amino-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物706-35)的制备
往反应瓶中加入1-叔丁氧羰基-3-(4-二苄胺基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(705-35)(1.87g，3.54mmol，1.0当量)，氢氧化钯(1.6g)，乙醇(40ml)和乙酸乙酯(10ml)，反应液加热到70℃在氢气氛围中过夜。反应混合物用硅藻土过滤，滤液旋干，剩余物用柱层析法纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)得到1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(0.8g，收率：65％)。LCMS(ESI)：m/z 348[M+1]+，白色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤31f:1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(tert-butyl 3-((4-amino-2-oxo-3-(4-phenoxyphenyl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate)(化合物707-35)的制备
将1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(706-35)(0.8g,2.30mmol,1.0当量)、对苯氧基苯硼酸(0.64g,2.99mmol,1.3当量)和吡啶(0.55g,6.90mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，再加入醋酸铜(0.46g,2.53mmol,1.1当量)和分子筛(1g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(100mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(30mL×3)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(0.45g，收率：38％)。LCMS(ESI)：m/z 516[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤31g:4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-哌啶甲基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(piperidin-3-ylmethyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物708-35)的制备
将1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-苯氧苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶甲基)哌啶(707-35)(0.45g，0.87mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(15mL)中，再向其中加入三氟乙酸(3mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(50mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-哌啶甲基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(0.34g，收率：93％)。LCMS(ESI)：m/z 416[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤31h:1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶甲基)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(1-((1-acryloylpiperidin-3-yl)methyl)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物35)的制备
将4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-哌啶甲基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(708-35)(0.17g，0.41mmol，1.0当量)、丙烯酸(38mg，0.53mmol，1.3当量)、DCC(110mg，0.53mmol，1.3当量)和DMAP(5.0mg，0.041mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(10mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物1-(3-(1-丙烯酰基)哌啶甲基)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(55mg，收率：29％)。白色固体，熔点：68.5-70.7℃。TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。LCMS(ESI)：m/z 470[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(d,J＝4.0Hz,1H),7.41-7.38(m,4H),7.20-7.17(m,1H),7.13-7.09(m,4H),6.58-6.50(m,2H),6.26-6.23(m,1H),5.68-5.66(m,1H),4.51-4.41(m,1H),4.19(s,2H),3.83-3.78(m,3H),3.20-3.03(m,1H),2.88-2.75(m,1H),2.20-2.12(m,1H),1.95-1.75(m,2H),1.59-1.42(m,2H)。
实施例32:(R，E)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-1-(1-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-(4-methoxyphenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物44)的制备
步骤32a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-iodophenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物801-44)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(107)(4.5g,14.09mmol,1.0当量)、对碘苯硼酸(401-17)(4.54g,18.32mmol,1.3当量)和吡啶(3.4mL,42.27mmol,3.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，再加入醋酸铜(2.82g,15.50mmol,1.1当量)和分子筛(5g)，然后在空气中50℃反应过夜。反应液冷却到室温并用乙酸乙酯(200mL)稀释，过滤，滤液用半饱和食盐水(50mL×4)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(3.05g，收率：41％)。LCMS(ESI)：m/z 522[M+1]+，棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤32b:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(4-methoxyphenoxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物109-44)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(801-44)(2.0g,3.84mmol,1.0当量)、对甲氧基苯酚(403-44)(1.19g,9.59mmol,2.5当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(1.07g,7.68mmol,2.0当量)溶于二氧六环(20mL)中，再加入碘化亚铜(0.37g,1.92mmol,0.5当量)和碳酸铯(7.51g,23.04mmol,6.0当量)，然后在氮气保护中100℃反应20小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝40:1到20:1)纯化得((R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(4-甲氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(0.61g，收率：31％)。LCMS(ESI)：m/z 518[M+1]+，灰色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤32c:(R)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(4-methoxyphenoxy)phenyl)-1-(pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物110-44)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(109-44)(0.61g，1.18mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(15mL)中，再向其中加入三氟乙酸(3mL)，然后在室温下反应2小时。将反应混合液用二氯甲烷(100mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.45g，收率：92％)。LCMS(ESI)：m/z 418[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤32d:(R，E)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-1-(1-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-(4-methoxyphenoxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物44)的制备
将(R)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(110-44)(0.28g，0.671mmol，1.0当量)、4-二甲氨基巴豆酸盐酸盐(144mg，0.872mmol，1.3当量)、HATU(332mg，0.872mmol，1.3当量)和三乙胺(0.28mL，2.013mmol，3.0当量)溶于二氯甲烷(5mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得化合物(R，E)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(70mg，收率：20％)。白色固体，熔点：50.4-55.9℃。TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。LCMS(ESI)：m/z 529[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86-7.83(m,1H),7.35(d,J＝9.0Hz,2H),7.07-7.04(m,4H),6.94-6.91(m,3H),6.57-6.43(m,2H),5.12-5.06(m,1H),4.21(s,2H),4.12-4.02(m,3H),3.83(s,3H),3.75-3.73(m,1H),3.31-3.23(m,2H),2.75-2.71(m,2H),2.44(s,3H),2.38(s,3H)。
实施例33:(R，E)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1-(1-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物45)的制备
步骤33a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)(化合物109-45)的制备
合成方法如实施例32步骤32b，仅是将其中对甲氧基苯酚(403-44)替换为芝麻酚(403-45)(1.21g,8.78mmol,1.5当量),得到(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(1.0g，收率：39％)。LCMS(ESI)：m/z 532[M+1]+，灰色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤33b:(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1-(pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物110-45)的制备
合成方法如实施例32步骤32c，仅是将其中(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(109-44)替换为(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-2-氧代-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶)吡咯烷(109-45)(1.0g，1.88mmol，1.0当量),得到(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.76g，收率：94％)。LCMS(ESI)：m/z 432[M+1]+，淡黄色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤33c:(R，E)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1-(1-(4-(dimethylamino)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物45)的制备
合成方法如实施例32步骤32d，仅是将其中(R)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(110-44)替换为(R)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-吡咯烷)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(110-45)(0.20g，0.464mmol，1.0当量),得到化合物(R，E)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-二甲氨基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(38mg，收率：15％)。白色固体，熔点：186.3-188.5℃。TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。LCMS(ESI)：m/z 543[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86-7.83(m,1H),7.36(d,J＝7.0Hz,2H),7.09-7.07(m,2H),6.98-6.94(m,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(d,J＝2.0Hz,1H),6.57-6.54(m,2H),6.45-6.31(m,1H),6.00(s,2H),5.13-5.07(m,1H),4.20(s,2H),4.10-1.00(m,3H),3.73-3.71(m,1H),3.21-3.14(m,2H),2.79-2.63(m,1H),2.45-2.38(m,1H),2.35(s,3H),2.31(s,3H)。
实施例34:(R，E)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-哌啶基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-3-(4-(4-methoxyphenoxy)phenyl)-1-(1-(4-(piperidin-1-yl)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物46)的制备
合成方法如实施例32步骤32d，仅是将其中4-二甲氨基巴豆酸盐酸盐替换为4-哌啶基巴豆酸盐酸盐(109mg，0.529mmol，1.3当量),得到化合物(R，E)-4-氨基-3-(4-(4-甲氧苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-哌啶基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(45mg，收率：19％)。白色固体，熔点：79.9-82.4℃。TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。LCMS(ESI)：m/z569[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.87-7.83(m,1H),7.35(d,J＝9.0Hz,2H),7.06-7.03(m,4H),6.94-6.91(m,3H),6.61-6.57(m,1H),6.47-6.35(m,1H),5.15-5.06(m,1H),4.15-4.01(m,5H),3.82(s,3H),3.75-3.62(m,1H),3.37-3.29(m,2H),2.69-2.61(m,5H),2.42-2.36(m,1H),1.70-1.66(m,4H),1.50-1.49(m,2H)。
实施例35:(R，E)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-哌啶基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R,E)-4-amino-3-(4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yloxy)phenyl)-1-(1-(4-(piperidin-1-yl)but-2-enoyl)pyrrolidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物47)的制备
合成方法如实施例33步骤33c，仅是将其中4-二甲氨基巴豆酸盐酸盐替换为4-哌啶基巴豆酸盐酸盐(112mg，0.542mmol，1.3当量),得到化合物(R，E)-4-氨基-3-(4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基)-1-(3-(1-(4-哌啶基-2-丁烯酰基)吡咯烷))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(70mg，收率：29％)。白色固体，熔点：125.2-128.3℃。TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。LCMS(ESI)：m/z 583[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.85-7.83(m,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(d,J＝2.5Hz,2H),6.95-6.90(m,1H),6.80(d,J＝8.0Hz,1H),6.72-6.54(m,4H),6.00(s,2H),5.10-5.04(m,1H),4.17-4.01(m,5H),3.78-3.55(m,1H),3.52-3.36(m,2H),2.95-2.60(m,6H),2.42-2.33(m,2H),1.88-1.83(m,4H)。
实施例36:4-胺基-1-[(3R)-1-(2-丁烯酰基)哌啶-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(4-Amino-3-(4-phenoxy-phenyl)-1-[1-(4-piperidin-1-yl-but-2-enoyl)-piperidin-3-yl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物48)的制备
将4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1-[(3R)-哌啶-3-基]-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-11)(80mg，0.2mmol，1当量)、4-(哌啶胺)-2-丁烯酸盐酸盐(49mg，0.24mmol，1.2当量)溶于DCM(5ml)，加入HATU(99mg，0.26mmol，1.3当量)和Et3N(61mg，0.6mmol，3当量)，冰浴下反应1小时。反应完毕，浓缩，甲醇/乙酸乙酯(1：20)柱层析得白色固体4-胺基-1-[(3R)-1-(2-丁烯酰基)哌啶-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(16mg，收率15％)；纯度96.7％；TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：85.2～86.0℃；LC-MS：553[M+1]+；1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.48(s,3.5H),1.70(s,1H),1.98(m,2.5H),2.10(d,1.5H,J＝11.56Hz),2.21(t,0.5H,J＝7.51Hz),2.57(s,5.5H),3.12(t,1H,J＝10.84Hz),3.27(s,2H),3.48(t,1H,J＝10.76Hz),3.84(s,0.5H),4.15(s,4H),4.80(d,1H,J＝24.72Hz),6.63(m,2H),6.90(m,1H),7.10(m,4H),7.18(t,1H,J＝7.4Hz),7.40(m,4H),7.87(d,1H,J＝5.44Hz)。
实施例37:4-胺基-1-[(3R)-1-(2-丁烯酰基)二甲胺-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(4-Amino-3-(4-phenoxy-phenyl)-1-[1-(4-piperidin-1-yl-but-2-enoyl)-dimethylamino-3-yl]-1,3-dihydro-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物49)的制备
合成方法如实施例36步骤，仅是将其中4-(哌啶胺)-2-丁烯酸盐酸盐替换为4-(二甲胺)-2-丁烯酸盐酸盐(49mg，0.24mmol，1.2当量),得到白色固体4-胺基-1-[(3R)-1-(2-丁烯酰基)二甲胺-3-基]-3-(4-苯氧基苯基)-1,3-二氢-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(20mg，收率20％)；纯度95.5％；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：67～68℃；LC-MS：513[M+1]+；1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.65(m,0.5H),1.98(m,0.5H),2.11(d,1.5H,J＝12.64Hz),2.21(t,0.5H,J＝7.52Hz),2.37(d,6H,17.8Hz),2.62(m,1.5H),3.21(m,2.5H),3.46(m,0.5H),3.83(d,0.5H,J＝10.12Hz),4.15(s,4H),4.80(m,1H),6.60(m,2H),6.87(m,1H),7.10(m,4H),7.18(t,1H,J＝7.36Hz),7.40(m,4H),7.86(d,1H,J＝5.6Hz)。
实施例38:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基哌啶))-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物52)的制备
步骤38a:(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(1，4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶基)哌啶(tert-butyl(R)-3-(4-amino-3-(4-((2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)oxy)phenyl)-2-oxo-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]pyridin-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(化合物307-52)的制备
将1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(4-碘苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶基)哌啶(402-17)(0.65g,1.214mmol,1.0当量)、1,4-苯并二恶烷-6-酚(403-52)(0.28g,1.821mmol,1.5当量)和N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐(67.8mg,0.486mmol,0.4当量)溶于二氧六环(8mL)中，再加入碘化亚铜(23mg,0.121mmol,0.1当量)和碳酸铯(1.19g,3.642mmol,3.0当量)，然后在氮气保护中100℃反应20小时。反应液冷却到室温并浓缩，得到的粗产品用柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝40:1到20:1)纯化得(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(1，4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶基)哌啶(0.26g，收率：39％)。LCMS(ESI)：m/z 560[M+1]+，棕色固体；TLC：Rf 0.4(二氯甲烷：甲醇＝20：1)。
步骤38b:(R)-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1-(3-哌啶基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮((R)-4-amino-3-(4-((2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)oxy)phenyl)-1-(piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物308-52)的制备
将(R)-1-叔丁氧羰基-3-(4-氨基-3-(1，4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶基)哌啶(307-52)(0.26g，0.472mmol，1.0当量)溶于二氯甲烷(10mL)中，再向其中加入三氟乙酸(2mL)，然后在室温下反应1小时。将反应混合液用二氯甲烷(100mL)稀释，依次用饱和碳酸钠溶液(30mL×2)和饱和食盐水(60mL)洗涤，然后将有机层用硅胶拌样旋干，之后用柱层析法(二氯甲烷：甲醇：三乙胺＝100：10：1)纯化得(R)-1-(3-哌啶基)-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(0.195g，收率：90％)。LCMS(ESI)：m/z 460[M+1]+，白色固体；TLC：Rf 0.2(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。
步骤38c:(R)-1-(3-(1-丙烯酰基哌啶))-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-1-(1-acryloylpiperidin-3-yl)-4-amino-3-(4-((2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)oxy)phenyl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物52)的制备
将(R)-1-(3-哌啶基)-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2(3H)-酮(308-52)(0.195g，0.424mmol，1.0当量)、丙烯酸(40mg，0.552mmol，1.3当量)、DCC(114mg，0.522mmol，1.3当量)和DMAP(5.1mg，0.042mmol，0.1当量)溶于二氯甲烷(8mL)，然后在室温下反应1小时。反应完成后浓缩得到粗产品，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得化合物(R)-1-(3-(1-丙烯酰基哌啶))-4-氨基-3-(4-(1,4-苯并二恶烷-6-氧基)苯基)-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(62mg，收率：28％)。白色固体，熔点：235.0-236.7℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)。LCMS(ESI)：m/z 514[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.86(d,J＝5.0Hz,1H),7.36(d,J＝9.0Hz,2H),7.08(d,J＝9.0Hz,2H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),6.65-6.58(m,4H),6.33-6.30(m,1H),5.71(s,1H),4.83-4.78(m,1H),4.28(s,4H),4.27-4.01(m,4H),3.84-3.48(m,2H),3.12-2.52(m,2H),2.11-2.08(m,1H),1.98-1.95(m,1H)。
实施例39:(R)-4-氨基-3-(4-苯氧苯基)-1-(3-(1-乙烯磺酰基)哌啶))-1,3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮((R)-4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-(vinylsulfonyl)piperidin-3-yl)-1,3-dihydro-2H-imidazo[4,5-c]pyridin-2-one)(化合物55)的制备
将(R)-4-氨基-1-(3-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1，3-2H-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-酮(308-11)(0.26g,0.648mmol,1.0当量)和三乙胺(0.18mL,1.296mmol,2.0当量)溶于二氯甲烷(20mL)中，用干冰-丙酮浴冷却到-60℃，然后把氯乙基磺酰氯(158mg,0.971mmol,1.5当量)溶于二氯甲烷(5mL)中并逐滴加进去。反应液在-60℃下反应30分钟然后缓慢升到室温。用旋蒸除去溶剂得到粗产物，通过柱层析法(二氯甲烷：甲醇＝50：1)纯化得化合物6-53(100mg，收率：31％)。白色固体，熔点：86.3-89.4℃。TLC：Rf 0.5(二氯甲烷：甲醇＝15：1)。LCMS(ESI)：m/z 492[M+1]+，1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.88(d,J＝5.5Hz,1H),7.41-7.37(m,4H),7.20-7.17(m,1H),7.13-7.08(m,4H),6.62(d,J＝5.5Hz,1H),6.48-6.42(m,1H),6.27-6.23(m,1H),6.04(d,J＝9.5Hz,1H),4.32-4.26(m,1H),4.16(s,2H),3.86-3.83(m,2H),3.48-3.44(m,1H),2.66-2.65(m,1H),2.46-2.44(m,1H),2.03-1.98(m,2H),1.89-1.82(m,1H)。
实施例40生物活性试验
一、BTK酶活性抑制实验
1、实验方法
采用Caliper迁移率变动检测技术(Caliper mobility shift assay)测定BTK蛋白激酶活性(参见J Biomol Screen 14:31，2009)。将上述得到的化合物用DMSO溶解后用激酶缓冲液(50mM HEPES-pH 7.5，0.0015％Brij-35，10mM MgCl2，2mM DTT)稀释10倍，在384孔板中加入5μl的10％DMSO溶解的5倍反应终浓度的化合物，无化合物对照孔和无酶活性对照孔中是5μl的10％DMSO。加入10μl 2.5倍反应终浓度的BTK酶溶液(BTK，Cat.No.08-080,Carna)，与化合物后在室温下孵育10分钟，其中无酶活对照孔中加入10μl激酶缓冲液。再加入10μl的2.5倍反应终浓度的底物FAM-labeled SRCtide peptide(Biochem,Cat.No.112394)和ATP(90μM)的底物溶液，起始反应。后在室温下孵育10分钟。28℃下孵育1小时后加25μl终止液(100mM HEPES,pH 7.5，0.015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA)终止反应。在Caliper EZ Reader II(CaliperLife Sciences)上读取转化率数据。计算抑制率，计算公式为抑制率％＝(max-转化)/(max-min)×100％。
2、实验结果
这类化合物能强有力的抑制BTK活性,比阳性对照化合物Ibrutinib和ONO-4059的抑制作用相当或更好。表格1中列出本发明中所述的代表性化合物在BTK检测中所具有的活性。在这些检测中，使用下述级别：对于IC50而言，I>200nM,200nM>II>100nM,100nM>III>50nM,50nM>IV>10nM,V<10nM。
表1 BTK酶活性的抑制结果
注：表中的化合物编号对应于实施例1-39的化合物编号。
二、肿瘤细胞增殖抑制实验
1、实验方法
采用CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒法(Promega，#G7572,Madison，WI)测定三磷酸腺苷(ATP)的含量来评估细胞活力。弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株TMD-8、大B细胞淋巴瘤细胞株SU-DHL-16购买自上海复旦IBS细胞资源中心和美国菌种保藏中心(ATCC)。用胰酶将细胞从细胞培养皿上消化和DPBS培养基重悬后用Scepter自动细胞计数仪(Millipore，#PHCC00000)计数测定细胞密度。将细胞稀释成每毫升含44,000个细胞的溶液。调整密度后的细胞溶液以每孔90μl加入细胞实验板中。孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养24小时后加入不同浓度的待试化合物。细胞在10％胎牛血清存在下与化合物一起培养72小时。使用Luminescent Cell ViabilityAssay kit(见厂家说明书)测定ATP的含量来评估细胞生长抑制。简要来讲，每个孔中加入30μl试剂，摇板10分钟，诱导细胞裂解，用荧光/化学发光分析仪FluoroskanAscent FL(ThermoScientific FluoroskanAscent FL)检测记录荧光信号。从二甲基亚砜(DMSO)处理72或120小时的细胞得到最大的信号值。从单独的培养基(细胞数为零)得到最小信号值定义为0。抑制率％＝(最大信号值-化合物信号值)/(最大信号值-最小信号值)×100％。使用GraphPadPrism V5.0(GraphPad Software,San Diego,CA)软件处理数据。通过S形剂量-反应曲线拟合计算IC50值。
2、实验结果
这类化合物对肿瘤细胞如TMD-8、SU-DHL-16等有很强的抗细胞增殖的活性，比阳性对照化合物Ibrutinib和ONO-4059的活性相当或更好，下述的表格2中列出本发明中所述的代表性化合物在基于细胞的检测中所具有的抗细胞增殖的活性。在这些检测中，使用下述级别：对于IC50而言，I>1uM,1uM>II>0.1uM,0.1uM>III>0.05uM,0.05uM>IV>0.01uM,V<0.01uM。
表2 肿瘤细胞增殖的抑制结果
注：表中的化合物编号对应于实施例1-39的化合物编号。
三、蛋白免疫印迹(Western Blot)实验
1、实验方法
ATCC人体套细胞淋巴瘤细胞Jeko-1和DOHH-2购买自上海拜力生物科技有限公司,悬浮培养生长,加入待试化合物或参考化合物培养1小时后，低速离心(1200rpm；4min)收集细胞，然后用无血清培养基重悬细胞。加入GoatF(ab’)2Anti-Human IgM(10ug/ml)，2min后,用预冷的PBS洗两次，收集细胞，用生物样品均质器匀浆3次，12,000rpm于4℃离心10min，取上清液。采用Branfor法测定蛋白浓度，加入上样缓冲液(Beyotime，#P0015L)于100℃煮4min，以10％SDS-PAGE电泳分离蛋白后转移至PVDF膜，再用含5％牛血清白蛋白(BSA)(碧云天；CATNo.ST023)的TBST溶液封闭1小时，加一抗β-actin mAb(CST，#4970)、BTK(D3H5)mAb(CST，#8547)或phospho-BTK(Try223)mAb(CST，#5802)于4℃下孵育过夜，然后用TBST液洗膜3×10min。以荧光二抗IRDye@680CW Goat(polyclonal)Anti-Rabbit lgG(H+L)，Highly Cross Adsorbed(LI-COR，#926-68071)室温下避光孵育2h后再洗膜，洗涤条件同上。最后将膜置于LI-COR Odyssey红外荧光扫描成像***上检测成像。
2、实验结果
实施例11制备的化合物11和参照物Ibrutinib强力抑制Jeko-1和DOHH-2淋巴瘤细胞BTK蛋白磷酸化，使IgM刺激下Jeko-1和DOHH-2细胞p-BTK表达明显下降(结果如图1所示)。由图1中可以看出，本发明提供的化合物11作用于Jeko-1和DOHH-2人淋巴瘤细胞，能有效降低BTK的磷酸化。
实施例41药代动力学(PK)实验
1、实验方法
雄性SD大鼠，体重250-300克，试验前过夜禁食。待试化合物溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)中，以20mg/kg灌胃给药。给药后15分钟、30分钟和1、2、3、4、6、8及24小时尾端断口取血，每时间点约0.3ml，置于含K2-EDTA的离心管中，离心处理(2,000g，10分钟，4℃)取血浆，储存在-80℃的超低温冰箱中。50μL的血浆样品与5微升内标(IS)混合，用乙酸乙酯萃取。真空干燥后残留物重新溶于乙腈中。对样品进行过滤，并注入到LC-MS/MS分析。
2、实验结果
实施1制备的化合物1和实施例11制备的化合物11灌胃给药后，吸收良好，血液暴露量效高。Cmax分别为544.3和2776.7ng/ml。化合物11半衰期较短(1.2小时)，但是AUC较高(4985.5ng/ml*h)(表3)。表中Tmax是指达峰时间，Cmax是指最大血药浓度，T1/2为半衰期，AUC0-24是指0-24小时时间-浓度曲线下面积，AUCinf是指0-Inf时间-浓度曲线下面积。
表3.灌胃给药(20mg/kg)药代动力学数据
实施例42药效学实验
1、实验方法
免疫功能严重缺陷SCAD小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司,饲养于SPF动物房。培养皿中人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株TMD-8达到足够数量时，收集细胞，DPBS洗2遍。最后细胞用不含血清的RPMI1640培养基和基质胶(1:1,v/v)悬浮接种。只有大于90％的存活率(台盼蓝排斥)的单细胞悬液才可用于注射。采用1ml的注射器和25G注射器针头，将悬浮在0.2毫升不含血清的培养基和基质胶(1:1,v/v)中500万个细胞注入每只小鼠右侧翼皮下区域并小心避开血管。在植入一周左右即可测量出肿瘤大小。使用游标卡尺测量肿瘤的大小。并用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(长×宽2)/2。
当肿瘤体积达到100-300mm3左右，将小鼠分为3个灌胃给药组，即赋形剂对照组，Ibrutinib灌胃给药组(50mg/kg,1次/日)和实施例11制备的化合物11灌胃给药组(25mg/kg,2次/日)。每组6个动物。将Ibrutinib或化合物11溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)以及1.0摩尔等值的盐酸(pH 3-4)中，以10ml/kg灌胃给药，连续给药14天。
2、实验结果
化合物11和Ibrutinib在TMD-8移植肿瘤模型的抗肿瘤活性极高。化合物11灌胃给药(剂量为25mg/kg,bid)能显著抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株TMD-8的生长，给药14天后，移植肿瘤TMD-8缩小至消失。与给药前比较，各给药组无明显体重下降(图2)。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (18)

1.具有式(I)结构的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐：
式中：
X1和X2均选自C；
Ar选自苯环；
L选自O，OCH2；
Y选自(CHR5)m,C＝O,其中m选自0、1；
Z选自：
G选自如下基团：
R1和R2分别独立选自：H，C1-C6烷基，卤素，硝基，羟基，C1-C6烷氧基，氰基，氨基，C1-C6烷基取代胺基，酰基，酰胺基；
R3和R4分别独立选自：H，C1-C6烷基，C3-C6环烷基，C3-C6环烷基甲基，卤素取代C1-C4烷基，羟基取代C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，氨基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，卤素，硝基，羟基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C1-C6亚砜基，C1-C6砜基，氰基，氨基，C1-C6烷基取代胺基，酯基，酰基，酰胺基，羧基；并且R3和R4不同时为氢；
当R3和R4是C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，OH或C1-C6烷基取代胺基，并且取代在Ar的相邻位置时，R3和R4可相连组成一个碳环或杂环，选自下列结构：
其中，n选自0、1、2；Q1和Q2分别独立选自O，NR6，CHR6；
R5、R6分别独立选自H，C1-C6烷基；
R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，氨基取代C1-C4烷基,C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，杂环取代C1-C4烷基。
2.根据权利要求1所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，G选自如下基团：
3.根据权利要求1-2任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，Y选自(CH2)m,其中m为0或1。
4.根据权利要求1或2所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，Z选自如下基团：
5.根据权利要求1-2任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R3和R4分别独立选自：H，卤素，羟基，C1-C6烷氧基，羟基取代C1-C4烷基，C1-C6烷基取代胺基；并且R3和R4不同时为氢；
当R3和R4是C1-C6烷氧基或OH时，并且取代在Ar的相邻位置时，R3和R4可相连组成一个杂环，选自下列结构：
其中，n为0或1。
6.根据权利要求1-2任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R5和R6均为H。
7.根据权利要求1-2任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，5-6元饱和氮杂环取代C1-C4烷基。
8.根据权利要求1-2任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，
X1和X2均为C；
L选自O，OCH2；
Y选自(CH2)m,其中m为0或1；
Z选自或
R1和R2均为氢；
R3和R4中的一个为氢，另一个选自卤素或羟基或C1-C6烷氧基；或者当R3和R4为C1-C6烷氧基或OH时，并且取代在Ar的相邻位置，R3和R4可相连组成一个杂环，选自下列结构：
其中，n为0或1；
R5和R6均为H；
R7选自H，C1-C6烷基，C1-C3烷氧基取代C1-C4烷基，C1-C3烷基胺基取代C1-C4烷基，5-6元饱和氮杂环取代C1-C4烷基。
9.根据权利要求1所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：
10.权利要求1-9任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂中的应用。
11.权利要求1-9任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备防治肿瘤的药物中的应用。
12.权利要求1-9任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备防治血液肿瘤的药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病或急性髓系白血病。
14.权利要求1-9任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐作为布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂在制备防治炎症或自身免疫性疾病的药物中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、肖格伦综合征及潜在疾病哮喘。
16.一种治疗疾病的药物组合物，其特征在于，包括作为活性成分的权利要求1-9任一项所述的2-氧代1,3-二氢咪唑并吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其特征在于，所述疾病是血液肿瘤或与布鲁顿酪氨酸激酶相关的炎症或自身免疫性疾病。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述血液肿瘤为淋巴瘤、骨髓瘤、淋巴细胞白血病、急性髓系白血病；所述炎症或自身免疫性疾病为类风湿关节炎、红斑狼疮、狼疮性肾炎、多发性硬化症、肖格伦综合征及潜在疾病哮喘。
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