KR20190058678A - c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물 - Google Patents

c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물 Download PDF

Info

Publication number
KR20190058678A
KR20190058678A KR1020197014236A KR20197014236A KR20190058678A KR 20190058678 A KR20190058678 A KR 20190058678A KR 1020197014236 A KR1020197014236 A KR 1020197014236A KR 20197014236 A KR20197014236 A KR 20197014236A KR 20190058678 A KR20190058678 A KR 20190058678A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
pharmaceutically acceptable
group
acceptable salt
mmol
Prior art date
Application number
KR1020197014236A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102070748B1 (ko
Inventor
슝빈 쉬
강 리
찰스 제트 딩
리훙 후
궈핑 후
지옌 리
수후이 천
즈강 츠
쿤 왕
Original Assignee
푸젠 코선터 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=62024383&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20190058678(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 푸젠 코선터 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 filed Critical 푸젠 코선터 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
Publication of KR20190058678A publication Critical patent/KR20190058678A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102070748B1 publication Critical patent/KR102070748B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings

Abstract

본 발명에서는 일종의 c-MET억제제로서의 피리돈계 화합물을 공개하였으며, 구체적으로 식(I)에서 나타내는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염을 공개하였다.

Description

c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물
본 발명은 일련의 c-MET 억제제로서의 피리돈계 화합물에 관한 것이며, 구체적으로 식(I)로 표시되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염을 공개하였다.
원발암유전자 MET로 코드된 c-MTE는 고도의 결합성을 가진 수용체 타이로신 키나아제로 RON 아족에 속하며， 분산인자 혹은 간세포 성장인자（HGF）의 유일한 이미 알려진 수용체이다．c-Met 단백질은 50kD의 α-서브유닛과 145kD의 β-서브유닛이 디설파이드 브릿지를 통해 연결된 헤테로 다이머로, 세포내 영역과 세포외 영역으로 나뉜다. 세포외 영역은 전체 α체인과 일부 β체인의 일부분을 커버하는 N-말단 리간드 결합영역(SEMA구역), 4개의 보존된 디설파이드 브릿지가 있는 시스틴 밀집영역, 및 면역구단백양의 구조영역 등 3개의 기능이 다른 구조 영역을 포함한다. 세포내 영역은 마찬가지로 Tyr1003 인산화 부위가 있는 근막구조 영역, Tyr1234와 Tyr1235인산화 부위가 있는 타이로신 키나아제 촉매 구조 영역, 및 Tyr1349와 Tyr1356 결합 타이로신이 있는 C-말단 멀티 결합구 영역 등 3개의 조절 영역으로 구성된다.
HGF와 c-Met 세포외 영역이 결합한 후 c-Met의 인산화를 유도하며, C-말단 멀티 영역에서 GAB1(성장인자 수용체 결합단백-1), GAB2(성장인자 수용체 결합단백-2) 등과 같은 여러 가지 세포간질 인자를 모집하여 나아가 SHP2,PI3K등 분자가 여기에 결합하도록 끌어들여 RAS /MAPK,PI3K/AKT,JAK/STAT경로 등을 활성화 시킴으로써 세포의 성장, 전이, 증식과 생존을 조절한다. c-Met 경로 이상은 특히 종양의 발생과 전이를 유발하여 많은 인류 악성종양, 예하면 방광암, 위암, 폐암, 유방암 중에서 비정상적으로 높게 발현된 c-Met를 발견할 수 있다. 그 외, c-Met는 종양이 여러 가지 키나아제 억제제에 대한 내약성과도 관련이 있다.
c-Met와 다중막 수용체 사이에는 크로스톡(crosstalk)이 존재하여 복잡한 네트워크를 구성한다. c-Met과 부착 수용체 CD44 사이의 크로스톡은 신호 펩타이드의 응답 작용을 확대하고, 뇌단백 수용체와 단백질의 상호작용으로 비의존적 리간드 HGF의 c-Met를 활성화시켜 그 침투작용을 강화시키며, 아포프토제닉 수용체 FAS 와의 상호작용으로 세포의 아포프토시스를 가속화시킨다. 여러 가지 수용체 타이로신 키나아제(예하면 EGFR, VEGFR 등)와 작용하여 서로의 활성화가 통제되도록 하여 혈관의 생성과정에 영향을 미친다. c-Met은 이러한 막 수용체 사이의 상호작용은 종양의 발생과 전이를 촉진시키며, 내약성이 생성되도록 유도한다.
전사인자 HIF-1α는 종양세포가 저산소 환경 압력에 적응하는 주요 조절인자이다. VEGFR 억제제는 치료 초기에 종양의 산소부족을 일으켜 저산소환경에서 HIF-1α가 c-Met 수준을 상향 조정한다. c-Met 농도의 증가는 종양세포의 전이를 촉진시켜, 종양이 영역적으로 확장되거나 전이되게 하여, 종양이 산소부족환경을 벗어나게 하며, 침투성과 생장능력이 더 강화된 클론체계를 구축한다. 종양이 EGFR 억제제에 대해 내약성이 생기는 원인은 아마 리간드 HGF 수준의 상향과 관련이 있을 것이다. 4% 내지 20%에서 게피티닙과 에를로티닙에 내약성이 생긴 비소세포 폐암환자에게서 c-Met의 증가가 검출되었으며, HGF는 GAB1를 통해 PI3K/AKT와 ERK 경로를 조절하여 직접적으로 EGFR 키나아제 억제제에 대해 내약성이 생성되게 한다. BRAF 돌연변이가 일어난 멜라닌 종양세포계에서 연구자들은 HGF의 상승이 BRAF 억제제 ramurafenib의 작용에 저항이 생기게 한다는 것을 발견하였다. 때문에, c-Met과 막 수용체 사이의 상호작용은 키나아제 표적 치료의 내약성이 나타나도록 유도한다.
현재 이미 출시된 항종양 약물은 알킬화제약물, 항대사성약물, 항종양항생물질, 면역조절제 등 항종양 약물이 비교적 많은데 대다수가 독성이 커서 환자가 견디기 힘들다. 종양분자생물학 연구가 심도있게 진행됨에 따라 종양의 발생 발전에 대한 분자적 기제는 날로 명확해지고, 여러 가지 악성 종양의 분자 표적 치료는 많은 주목을 받고 있다. 분자 표적 약물은 선택성이 높고, 광역 스펙트럼 효율이 높으며, 그 안전성이 세포독성 화학치료 약물보다 우수하여 현재 종양치료 분야의 새로운 발전방향이 되고있다.
현재 c-Met 경로를 대상으로 하는 항종양 치료약물은 두 가지가 있다. 한가지는 항HGF 혹은 c-Met 단일 클론항체이고, 다른 하나는 c-Met에 대한 소분자 억제제이다. 연구중이거나 이미 임상단계에 들어선 c-Met 소분자 억제제는 PF-2341066, EMD-1214063, XL-184 혹은 ARQ-197 등이다.
그 중, Tepotinib (EMD1214063) (WO2009006959, 공개일자 2009.1.15)의 항종양 활성이 가장 좋은바, 여러 가지 c-Met 고 발현 종양세포에 대해 아주 강한 억제작용(c-MET효소 활성 IC50=3.67nM, MHCC97H 세포 IC50=6.2nM）을 가지고 있으며, 현재 이미 임상2기 연구단계에 진입하였다.
그러나, Tepotinib (EMD1214063)는 비록 높은 선택성을 가지고 있으나, 여전히 대사안정성이 낮고, 체내 클리어런스가 높은 단점이 있다. 따라서 임상에서는 대사가 안정적인 c-Met 억제제로 이 단점을 보완할 필요가 시급하다.
본 발명은 식（I）로 표시되는 나타내는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
R1은 H,F에서 선택된다；
R2는 H,CH3에서 선택된다;
R2가 H가 아닐 경우, R2와 연결된 탄소원자는 R배치 혹은 S배치이다；
A는 1, 2 혹은 3개의 R3으로 임의로 치환된: 페닐기, 피리딜기, 피라졸릴기, 아이소옥사졸릴기, 아이소티아졸릴기 혹은 티아졸기에서 선택된다.
R3은 CN, 할로겐, C(=O)NH2에서 선택되거나, 혹은 1, 2 혹은 3개의 R0으로 임의로 치환된：C1-6알킬기, C1-6헤테로 알킬기 혹은 C3-6시클로알킬기에서 선택된다.
R0은 F,Cl,Br,I,OH,CN,NH2,C(=O)NH2, 혹은 1, 2 혹은 3개의 R'로 임의로 치환된: C1-3알킬기, C1-3헤테로알킬기에서 선택된다.
R'은 F,Cl,Br,I,CN,OH,NH2,CH3,CH3CH2,CF3,CHF2,CH2F에서 선택된다.
"C1-3헤테로알킬기", "C1-6헤테로알킬기"에서 가리키는 "헤테로"는: -O-,-C(=O)NR'-,-C(=O)NH-,-NR'-,-NH-에서 선택된다；
상기 임의의 상황에서도, 헤테로원자 혹은 헤테로원자단의 숫자는 각각 독립적으로 1, 2 혹은 3에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에서 상기 R0은 F,Cl,Br,I,OH,CN,NH2,C(=O)NH2,CH3,CH3CH2,CF3,CHF2,CH2F,NH2CH2,(NH2)2CH,CH3O,CH3CH2O,CH3OCH2,CH3NH,(CH3)2N에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R1은 H에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R1은 F에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R2는 H에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R2는 CH3에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R2와 연결된 탄소원자는 R배치이다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R2와 연결된 탄소원자는 S배치이다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R3은 CN, 할로겐, C(=O)NH2에서 선택되며，혹은 1, 2 또는 3개 R0으로 임의로 치환된: C1-3알킬기 혹은 C1-3헤테로알킬기에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 R3은 CN, F, Cl, Br, CH3, CH3CH2, CF3, CHF2, CH2F, CH3O, C(=O)NH2에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 A는 1, 2 혹은 3개 R3으로 임의로 치환된:
Figure pct00002
,
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
,
Figure pct00006
에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 A는 ：
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
,
Figure pct00011
,
Figure pct00012
에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 A는 ：
Figure pct00013
,
Figure pct00014
,
Figure pct00015
,
Figure pct00016
,
Figure pct00017
에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있어서, 상기 A는
Figure pct00018
,
Figure pct00019
,
Figure pct00020
,
Figure pct00021
,
Figure pct00022
,
Figure pct00023
,
Figure pct00024
,
Figure pct00025
에서 선택된다.
본 발명의 일부 형태에 있에서, 상기 화합물은 아래에서 선택된다.
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
본 발명은 또한 일종의 약물조성물을 제공하며, 상기 약물조성물은 치료유효량의 상기 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염과 수용 가능한 담체를 포함한다.
본 발명은 또한종양치료약물을 조제함에 있어서 상기 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염 혹은 상기 약물조성물의 응용을 제공한다.
기술효과
본 발명은 쉽게 대사되는 부위에 대한 정확한 구조적 수식에 초점을 맞춰, 표적 화합물의 대사 안정성을 크게 개선시켰다. 또한, 신규성 피리돈 코어 구조를 디자인 및 합성하여, 표적 화합물과 c-MET 효소의 결합능을 현저히 향상시켰으며, 더 우수한 종양 성장 억제 활성을 얻었다. 동시에, 체내 약리학적 결과는 동등한 투여량 하에, 본 발명의 화합물을 투여한 마우스의 종양 성장 속도가 Tepotinib (EMD1214063)에 비해 현저히 감소되었음을 나타내며, 본 발명의 화합물이 더 우수한 종양 억제 활성을 갖고 있음을 추가로 증명하였다. 본 발명의 화합물은 반감기가 증가하고, 표적에 대한 작용시간이 길어지며, 대사 안정성이 향상되고, 더 우수한 억제 활성을 갖는다.
정의와 설명
별도의 설명이 있는 경우를 제외하고, 본문에서 사용한 하기 용어와 표현은 다음과 같은 의미를 가진다. 하나의 특정 용어 혹은 표현은 특별한 정의가 없는 한, 정확하지 않거나 명확하지 않은 것으로 간주되어서는 안 되며, 일반적인 의미로 이해해야 한다. 본문 중에 상품명칭이 나타날 경우, 그에 대응되는 상품 혹은 그 활성성분을 가리킨다.
여기서 사용한 용어 "약학적으로 수용 가능한"은, 화합물, 재료, 조성물과/ 혹은 제형에 대해, 신뢰 가능한 의학적 판단의 범위 내에서, 인간과 동물의 조직접촉 사용에 적용되며, 과다한 독성, 자극성, 과민성 반응 혹은 기타 문제 혹은 합병증을 일으키지 않으며, 합리적인 이익/리스크 비율과 부합되는 것이다.
용어 "약학적으로 수용 가능한 염”은 본 발명의 화합물의 염을 의미하고, 본 발명이 발견한 특정 치환기를 구비하는 화합물과 상대적으로 독성이 없는 산 또는 염기로 제조된다. 본 발명의 화합물에 상대적으로 산성인 작용기가 포함될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 염기와 이러한 유형의 화합물이 중성 형태로 접촉시키는 방식을 통해 염기 부가염을 획득할 수 있다. 약학적으로 수용 가능한 염기 부가염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 암모니아 또는 마그네슘염 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물에 상대적으로 염기성인 작용기가 포함될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 산과 이러한 유형의 화합물이 중성 형태로 접촉시키는 방식을 통해 산 부가염을 획득할 수 있다. 약학적으로 수용 가능한 산 부가염의 구현예는 무기산염 및 유기산염을 포함하고, 상기 무기산염은 예컨대 염산, 브롬화수소산(hydrobromic acid), 질산(nitric acid), 탄산(carbonic acid), 중탄산기(bicarbonate group), 인산(phosphoric acid), 인산일수소기(monohydrogen phosphate), 인산이수소기(dihydrogen phosphate group), 황산(sulfuric acid), 황산수소기(hydrogen sulfate group), 요오드화수소산(hydroiodic acid), 아인산염(phosphoric acid) 등을 포함하고; 유기산염은 아세트산(acetic acid), 프로피온산(propionic acid), 이소부티르산(isobutyric acid), 말레산(maleic acid), 말론산(malonic acid), 벤조산(benzoic acid), 숙신산(succinic acid), 수베린산(suberic acid), 푸마르산(fumaric acid), 락트산(lactic acid), 만델린산(mandelic acid), 프탈산(phthalic acid), 벤젠술폰산(benzenesulfonic acid), p-톨루엔술폰산(p-toluenesulfonic acid), 구연산(citric acid), 타르타르산(tartaric acid) 및 메탄술폰산(methanesulfonic acid) 등 유사한 산을 포함하며; 아미노산(예를 들어 아르기닌 등)의 염, 및 글루쿠론산(glucuronic acid)과 같은 유기산의 염을 더 포함한다(Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)를 참조). 본 발명의 일부 특정 화합물은 염기성과 산성 작용기를 포함하여 어느 하나의 염기 또는 산 부가염으로 전환될 수 있다.
바람직하게는, 통상적인 방식으로 염과 염기 또는 산을 접촉시키는 것으로 모체 화합물을 다시 분리시켜 화합물의 중성 형식을 재생시킨다. 화합물의 모체 형식과 이의 여러가지 염의 형식의 상이한 점은 극성 용매에서의 용해도의 차이와 같은 일부 물리적 성질에 있다.
본문에서 사용된 "약학적으로 수용 가능한 염”은 산 부가염 또는 염기 부가염의 방식으로 상기 모체 화합물을 수식하는 본 발명 화합물의 유도체에 속한다. 약학적으로 수용 가능한 염의 구현예로 아민과 같은 염기성기의 무기산 또는 유기산염, 카르복실산(carboxylic acid)과 같은 산기의 알칼리금속 또는 유기염 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 약학적으로 수용 가능한 염으로 무독성의 무기산 또는 유기산으로 형성된 염과 같은 통상적인 무독성의 염 또는 모체 화합물의 4급암모늄염(Quaternary ammonium salt)을 포함한다. 통상적인 무독성의 염은 무기산 및 유기산으로 유도된 염을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 상기 무기산 또는 유기산은 2-아세톡시벤조산(2-acetoxybenzoic acid), 2-히드록시에탄술폰산(2-hydroxyethanesulfonic acid), 아세트산, 아스코르빈산(ascorbic acid), 벤젠술폰산, 벤조산, 탄산수소이온, 탄산, 구연산, 에데트산(edetic Acid), 에탄디술폰산(Ethane disulfonic acid), 에탄술폰산(ethanesulfonic acid), 푸마르산(fumaric acid), 글루코헵토오스(glucoheptose), 글루콘산(gluconic acid), 글루타민산(glutamic acid), 글리콜산(glycollic acid), 브롬화수소산, 염산, 요오드화수소산염(hydriodate), 히드록시기(hydroxyl group), 히드록시나프탈렌(hydroxynaphthalene), 이세티온산(isethionic acid), 락트산, 유당, 도데실술폰산(dodecyl sulfonic acid), 말레산, 말산(malic acid), 만델린산, 메탄술폰산(methanesulfonic acid), 질산, 옥살산(oxalic acid), 팜산(pamoic acid), 판토텐산(pantothenic acid), 페닐아세트산(phenylacetic acid), 인산, 폴리갈락토스알데히드(polygalactosaldehyde), 프로피온산, 살리실산(salicylic acid), 스테아린산(stearic acid), 엽산칼슘(calcium Folinate), 숙신산, 술파민산(sulfamic acid), p-아미노벤젠술폰산(p-aminobenzenesulfonic acid), 황산, 탄닌(tannin), 타르타르산 및 p-톨루엔술폰산으로부터 선택된다.
본 발명의 약학적으로 수용 가능한 염은 산기 또는 염기를 함유한 모체 화합물로 통상적인 화학적 방법으로 합성할 수 있다. 일반적인 경우, 이러한 염의 제조 방법은, 물 또는 유기 용매 또는 양자의 혼합물에서 유리산 또는 염기 형식의 이러한 화합물을 화학적 계량된 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조한다. 일반적으로, 바람직하게는 에테르(Ether), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 에탄올(Ethanol), 이소프로판올(Isopropanol) 또는 아세토니트릴(Acetonitrile) 등 비수성 매질이다.
염의 형식 외에, 본 발명에서 제공되는 화합물은 프로드러그 형식도 존재한다. 본문에서 기술되는 화합물의 프로드러그는 생리적 조건 하에서 용이하게 화학 변화를 일으켜 본 발명의 화합물로 전환된다. 이 외에, 전구체 약물은 체내 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다.
본 발명의 일부 화합물은 수화물 형식을 포함하는 비용매화 형식 또는 용매화 형식으로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화 형식과 비용매화은 동등하며, 모두 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 일부 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 구비할 수 있다. 라세미체, 부분입체이성질체,기하적 이성질체와 단일 이성질체는 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
다른 설명이 없으면, 쐐기형 결합과 점선 결합(
Figure pct00030
)으로 하나의 입체 중심의 절대 배열을 나타내고,
Figure pct00031
으로 입체 중심의 상대 배열을 나타낸다. 본문에서 서술된 화합물은 올레핀계 이중 결합 또는 기타 기하적 비대칭 중심을 포함하고, 달리 규정되지 않는 한, 이들은 E, Z 기하적 이성질체를 포함한다. 마찬가지로, 모든 호변 이성질체 형식은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
본 발명의 화합물은 특정된 기하적 또는 입체 이성질체 형식으로 존재할 수 있다. 본 발명은 이러한 화합물은 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체로 농축된 혼합물과 같은 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상이성질체, (R)- 및 (S)-거울상이성질체, 부분입체이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미체 혼합물 및 기타 혼합물을 포함하는 것으로 구성되고, 모든 이러한 혼합물은 전부 본 발명의 범위에 속한다. 알킬기 등 치환기에는 다른 비대칭 탄소 원자가 존재할 수 있다. 이들 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
키랄(Chiral) 합성 또는 키랄 시약 또는 기타 통상적인 기술을 통해 광학 활성의 (R)- 및 (S)-이성질체 및 D 및 L 이성질체를 제조할 수 있다. 본 발명 화합물의 거울상이성질체를 얻으려면, 비대칭 합성 또는 키랄 보조제를 구비한 유도 작용으로 제조할 수 있으며, 여기서 얻은 부분입체이성질체 혼합물을 분리하고, 보조 라디칼을 절단하여 순수한 필요되는 거울상이성질체를 제공한다. 또는, 분자에 염기성 작용기(예를 들어 아미노기) 또는 산성 작용기(예를 들어 카복시기(Carboxyl group))가 함유될 경우, 적합한 광학 활성의 산 또는 염기와 부분입체이성질체의 염을 형성한 후, 본 분야에 공지된 통상적인 방법으로 부분입체이성질체를 분해한 후, 회수하여 순수한 거울상이성질체를 얻는다. 이 외에, 거울상이성질체와 부분입체이성질체의 분리는 크로마토그래피법(Chromatography)으로 완성되고, 상기 크로마토그래피법은 키랄 고정상을 사용하며 선택적으로 화학적 유도법과 결합하였다(예를 들어 아민으로 카바메이트(carbamate)를 생성하였다).
본 발명의 화합물은 상기 화합물을 구성하는 하나 또는 다수의 원자 상에 비천연적 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 트리튬(tritium)(3H), 요오드-125(125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 화합물을 표기할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소로 조성된 변화는 방사성이든 아니든 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
용어 “약학적으로 수용 가능한 담체”는 본 발명의 유효량의 활성 물질을 전달할 수 있고, 활성 물질의 생물 활성을 간섭하지 않으며 숙주 또는 환자에 독성이 없고 부작용이 없는 임의의 제제 또는 대표적인 담체로 물, 오일, 채소 및 미네랄, 크림기제, 세제기제, 연고기제 등을 포함하는 담체 매질을 지칭한다. 이러한 기제로 현탁제, 접착제, 경피 촉진제 등을 포함한다. 이들의 제제는 화장품 분야 또는 국소 약물 분야의 기술자들에게 주지된 바와 같다. 담체의 기타 정보로 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins(2005)를 참조할 수 있으며, 상기 문헌의 내용은 참조로서 본문에 인용된다.
약물 또는 약리학적 활성제에 대하여, 용어 “유효량” 또는 “치료 유효량”은 독성이 없지만 충분히 예기된 효과에 도달할 수 있는 약물 또는 약제의 충분한 용량을 지칭한다. 본 발명에서의 경구 투여 형태에 있어서, 조성물에서 활성 물질의 "유효량"은 상기 조성물에서 다른 활성 물질과 병용될 경우 예기된 효과에 도달하기 위한 양을 지칭한다. 유효량의 확정은 사람에 따라 다르고, 수용체의 연령과 일반적인 상황에 따라 다르며, 구체적인 활성 물질에 따라서도 다르므로, 실시예에서 적합한 유효량은 당업자에 의해 통상적인 시험으로 확정될 수 있다.
용어 "활성 성분", "치료제", "활성 물질" 또는 "활성제"는 표적의 문란, 질환 또는 병증을 효과적으로 치료할 수 있는 화학적 실체이다.
“선택적” 또는 “선택적으로”는 후술되는 상기 서술에는 상기 사건 또는 상황이 발생된 경우 및 상기 사건 또는 상황이 발생되지 않는 경우를 포함하는 사건 또는 상황이 나타날 수 있는지만 무조건 나타나는 것은 아닌 것을 지칭한다.
용어 “치환된”은 특정 원자에서의 임의의 하나 또는 다수의 수소 원자가 치환기에 의해 치환되는 것을 의미하며, 단지 특정 원자의 원자가가 정상적이고 치환된 후의 화합물이 안정적이면 중수소 및 수소의 변이체를 포함할 수 있다. 치환기가 케톤기(즉=O)일 경우, 두개의 수소 원자가 치환된 것을 의미한다. 케톤 치환은 아릴기에서 발생되지 않는다. 용어 “선택적으로 치환된”은 치환되거나 치환되지 않을 수도 있는 것을 의미하고, 다른 설명이 없으면, 치환기의 종류와 개수는 화학적으로 실현 가능한 기초 상에서 임의적일 수 있다.
화합물의 조성 또는 구조에서 임의의 변량(예를 들어 R)이 한번 이상 나타날 경우, 이의 각각의 경우에서의 정의는 모두 독립적이다. 따라서, 예를 들어, 만약 하나의 라디칼이 0 내지 2개의 R에 의해 치환되면, 상기 라디칼은 선택적으로 두개이하의 R에 의해 치환될 수 있고, 각각의 경우에서의 R은 모두 독립적인 선택항이다. 이 외에, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성하는 경우에서만 허용된다.
하나의 치환기의 결합이 하나의 고리의 두개의 원자에 교차 연결될 수 있을 경우, 이러한 치환기는 그 고리 상의 임의의 원자에 결합될 수 있다. 예를 들어, 열거된 치환기에서 어느 하나의 원자를 통해 화학 구조 일반식에 포함되지만 구체적으로 언급되지 않은 화합물에 연결되는 것을 명시하지 않을 경우, 이러한 치환기는 이의 임의의 원자에 의해 결합될 수 있다. 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 단지 이러한 조합에서 안정한 화합물을 생성할 수 있는 상황만이 허용된다. 예를 들어, 구조 단위
Figure pct00032
또는
Figure pct00033
는 이가 시클로헥실기(Cyclohexyl group) 또는 시클로헥사디엔기(Cyclohexadiene group) 상의 임의의 하나의 위치에서 치환될 수 있음을 의미한다.
다른 설명이 없으면, 용어 "헤테로”는 헤테로 원자 또는 헤테로 원자단(즉 헤테로 원자를 함유한 원자단)을 나타내고, 탄소(C)와 수소(H) 외의 원자 및 이러한 헤테로 원자를 함유한 원자단을 포함하며, 예를 들어 산소(O), 질소(N), 유황(S), 규소(Si), 게르마늄 (Ge), 알루미늄 (Al), 붕소(B), -O-, -S-, =O, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O)-, -S(=O)2-, 및 선택적으로 치환된 -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=O)2N(H)- 또는 -S(=O)N(H)-를 포함한다.
다른 설명이 없으면, 용어 "헤테로탄화수소기” 또는 이의 하위 개념(예를 들어 헤테로알킬기, 헤테로알케닐기(Heteroalkenyl group), 헤테로알키닐기(Heteroalkynyl group), 헤테로아릴기 등) 자체 또는 다른 용어와 함께 직쇄, 분지쇄 또는 고리형의 탄화수소 원자단 또는 이들의 조합을 나타내고, 일정 개수의 탄소 원자와 적어도 하나의 헤테로 원자로 이루어진다. 일부 실시예에서, 용어 "헤테로알킬기”는 자체 또는 다른 용어와 함께 안정적인 직쇄, 분지쇄의 탄화수소 원자단 또는 이의 조합을 나타내고, 일정 개수의 탄소 원자와 적어도 하나의 헤테로 원자로 이루어진다. 하나의 전형적인 실시예에서, 헤테로 원자는 B, O, N 및 S로부터 선택되고, 여기서 질소와 유황 원자는 선택적으로 산화되며, 질소헤테로 원자는 선택적으로 4차 암모늄화된다. 헤테로 원자 또는 헤테로 원자단은 상기 탄화수소기가 부착되는 분자의 나머지 부분의 위치를 포함하는 헤테로탄화수소기의 임의의 내부 위치에 위치할 수 있지만, 용어 "알콕시기”, "알킬아미노기(alkylamino group)" 및 "알킬티오기(alkylthio group)"(또는 티오알킬기(thioalkyl group))는 통상적인 표현에 속하는 것으로, 각각 하나의 산소 원자, 아미노기 또는 유황 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결되는 알킬기를 지칭한다. 구현예로 -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3, -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -CH2-CH=N-OCH3 및 -CH=CH-N(CH3)-CH3을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. -CH2-NH-OCH3와 같이 적어도 두개의 헤테로 원자는 연속적일 수 있다.
다른 설명이 없으면, 용어 "알킬기”는 직쇄 또는 분지쇄의 포화 탄화수소기를 나타내고, 단일 치환(예를 들어 -CH2F) 또는 다중 치환된 것일 수 있으며(예를 들어 -CF3), 1가(예를 들어 메틸기), 2가(예를 들어 메틸렌기) 또는 다가(예를 들어 메틴기)일 수 있다. 알킬기의 예로 메틸기(Me), 에틸기(Et), 프로필기(예를 들어, n-프로필기 및 이소프로필기), 부틸기(예를 들어, n-부틸기, 이소부틸기, s-부틸기, t-부틸기), 펜틸기(예를 들어, n-펜틸기, 이소펜틸기(isopentyl group), 네오펜틸기(neopentyl group)) 등을 포함한다.
다른 설명이 없으면, 시클로알킬기는 임의의 안정적인 고리형 또는 다환 탄화수소기를 포함하고, 임의의 탄소 원자는 전부 포화된 것이며, 단일 치환 또는 다중 치환될 수 있고, 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. 이러한 시클로알킬기의 구현예로 시클로프로필기(cyclopropyl group), 노르보닐기(norbornyl group), [2.2.2]디시클로옥탄([2.2.2] dicyclooctane), [4.4.0]비시클로데칸([4.4.0] bicyclodecane) 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
다른 설명이 없으면, 용어 "할로겐화” 또는 "할로겐”은 자체 또는 다른 치환기의 일부분으로서 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 나타낸다. 이 외에, 용어 "할로겐화 알킬기”는 모노할로겐화 알킬기와 폴리할로겐화 알킬기를 포함한다. 예를 들어, 용어 "할로겐화 (c1-c4)알킬기”는 트리플루오로메틸기(trifluoromethyl group), 2,2,2-트리플루오로에틸기(2,2,2-trifluoroethyl group), 4-클로로부틸기(4-chlorobutyl group) 및 3-브로모프로필기(3-bromopropyl group) 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 다른 설명이 없으면, 할로겐화 알킬기의 구현예로 트리플루오로메틸기(trifluoromethyl group), 트리클로로메틸기(trichloromethyl group), 펜타플루오로에틸기(pentafluoroethyl group), 및 펜타클로로에틸기(pentachloroethyl group)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화합물은 본 분야의 기술인원이 익히 알고 있는 여러 가지 합성방법으로 제조할 수 있다. 아래에 나열한 구체적인 실시방식, 기타 화학합성방법과의 결합으로 형성되는 실시방식 및 본 분야 기술자가 익히 알고 있는 동등한 대체방식을 포함하며, 바람직한 실시 방식은 본 발명의 실시예를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에서 사용하는 용매는 시중에서 구입할 수 있다. 본 발명에서는 다음과 같은 약칭을 사용한다: aq는 물을 의미하며; HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트(O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate)을 대표하며; EDC는Ｎ－（３－디메틸아미노프로필）－N＇－에틸카르보디이미염산염을 대표하며; m-CPBA는 3-클로로퍼록시벤조산을 대표하며; eq는 당량, 등량을 대표하며; CDI는 카르보닐디이미다졸을 대표하며; DCM은 다이클로로메테인을 대표하며; PE는 석유에테르를 대표하며; DIAD는 다이아이소프로필아조다이카르복시레이트를 대표하며; DMF는 N，N-다이메틸폼아마이드를 대표하며; DMSO는 다이메틸설폭사이드를 대표하며; EtOAc는 에틸아세테이트를 대표하며; EtOH는 에탄올을 대표하며; MeOH는 메탄올을 대표하며; CBz는 벤질옥시카르보닐(일종의 아민보호기)을 대표하며; BOC는 t-부틸카르보닐(일종의 아민보호기)을 대표하며; HOAc는 아세트산을 대표하며; NaCNBH3은 시아노수소화붕소나트륨을 대표하며; r.t.는 실온을 나타내고; O/ N는 오버나이트를 대표하며; THF는 테트라하이드로퓨란을 대표하며; Boc2O는 다이-tert-부틸다이카보네이트를 대표하며; TFA는 트리플루오로아세트산을 대표하며; DIPEA는 다이아이소프로필에틸아민을 대표하며; SOCl2는 염화티오닐을 대표하며; CS2는 이황화탄소를 대표하며; TsOH는 파라톨루엔설폰산을 대표하며; NFSI는 N-플루오로-N-(페닐설포닐)벤젠설폰이미드를 대표하며; NCS는 1-클로로피롤리딘-2,5-디온을 대표하며; n-Bu4NF는 불화테트라부틸암모늄을 대표하며; iPrOH는 아이소프로필 알코올을 대표하며; mp는 녹는점을 대표하며; LDA는 다이아이소프로필아미노리튬(Diisopropylamino lithium)대표한다.
화합물은 수작업 혹은 ChemDraw®소프트웨어로 명명하였으며, 시중 판매 화합물은 공급상 리스트 명칭을 사용하였다.
아래에 실시예를 통해 본 발명에 대해 자세하게 기술하나 이는 본 발명에 대해 어떠한 불리한 제한을 의미하는 것이 아니다. 본문에서 이미 본 발명에 대해 자세하게 기술하였고, 그 중 구체적인 실시형태실시예도 공개하였으며, 본 분야의 기술자에게 있어, 본 발명정신과 범위를 벗어나지 않는 한, 본 발명의 구체적인 실시형태에 대해 여러 가지 변화와 수정을 가할 수 있는것은 분명하다.
실시예 1（1-1과 1-2)
Figure pct00034
Figure pct00035
단계 A：
중간체 7C(합성방법은 실시예 7을 참조)(20.4g, 50.88mmol)와 이산화망간(44.23g, 508.7mmol)을 DCM(300ml)용액에서 실온에서 16시간 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응액을 여과하고 농축하여 중간체 1A(18.4g)를 얻어 직접 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: 398 (M+1).
단계 B：
0℃에서, 중간체 1A(23.0g, 57.87mmol)의 THF(200ml)용액에 브롬화메틸마그네슘(3M, 38.58ml)을 넣었다. 반응액을 실온에서 1시간 교반하였다. 반응 완료 후 반응액을 포화염화암모늄 용액(300ml)로 급냉각시키고, 에틸아세테이트로 추출(200ml×2)하여, 무수황산나트륨으로 건조시키고 여과, 농축하여 중간체 1B(22.76g, 수율 95.11%)를 얻는다. LCMS (ESI) m/z: 414 (M+1). HNMR (400MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.46 (s, 2H), 8.38 - 8.33 (m, 1H), 8.26 (td, J=1.9, 6.9 Hz, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 5.02 (q, J=6.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 3.95 (d, J=6.4 Hz, 2H), 2.78 (br t, J=12.1 Hz, 2H), 2.13 (br s, 1H), 2.08 - 1.96 (m, 1H), 1.86 (br d, J=12.9 Hz, 2H), 1.58 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.39 - 1.29 (m, 2H).
단계 C：
0℃에서 중간체 1B(22.76g, 55.04mmol)의 DCM(300ml) 용액에 다이이소프로필에틸아민(21.34g, 165.12mmol)과 메탄설포닐클로라이드(9.12g, 79.62mmol)을 넣었다. 반응액을 실온에서 1시간 교반하였다. 박층 크로마토그래피가 반응 완료를 나타냈다. 반응액을 포화염화암모늄 용액(200ml)으로 2회 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축하여 중간체 1C(30g, 크루드)를 얻어 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 D：
실온에서, 중간체 1C(19g, 38.65mmol)의 DMF(100ml) 용액에 탄산칼륨(10.68g, 77.30mmol), 요오드화칼륨(641.58mg, 3.86mmol)과 5-브로모-3-플루오로-1H-피리딘-2-온(11.13g, 57.97mmol)을 넣었다. 반응액을 90℃에서 3시간 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액에 에틸아세테이트(300ml)을 넣고 포화식염수(500ml)로 3회 세척하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축하여 중간체 1D(5.8g, 수율 25.54%)를 얻었다. HNMR (400MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.47 (s, 2H), 8.41 - 8.32 (m, 2H), 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.39 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 7.11 - 7.07 (m, 1H), 6.52 (q, J=7.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 2H), 4.01 - 3.93 (m, 2H), 2.87 - 2.72 (m, 2H), 2.09 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.80 (m, 5H), 1.49 (s, 9H), 1.39 - 1.30 (m, 2H).
단계 E：
실온에서 질소가스의 보호 하에, 중간체 1D(2.0g, 3.4mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1,3,2-다이옥사보롤란(1.04g, 4.09mmol), 초산칼륨(668.21mg, 6.81mmol)과 Pd（dppf）Cl2(498.20mg, 680.87μmol)을 1,4-다이옥산(30ml)에 용해시켰다. 반응액을 90℃에서 2시간 교반하였다. 반응 완료 후, 중간체 1E의 1,4-다이옥산 용액 30ml을 얻었다. 이 반응액은 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 F（1F-1, 1F-2）：
실온에서 질소가스 보호 하에 중간체 1E의 1,4-다이옥산 용액 30ml(1.92g, 3.03mmol), 탄산나트륨(642.30mg, 6.06mmol), 2-브로모-5-사이아노피리딘(665.42mg, 3.64mmol)과 Pd（dppf）Cl2(443.43mg, 606.0mmol)을 1,4-다이옥산(40ml)과 물(6ml)에 용해시켰다. 반응액을 90℃에서 3시간 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 여과하고 여과액에 물(100ml)을 추가하고 에틸아세테이트(60ml×3)로 추출하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 크루드 제품은 분취용 플레이트로 정제하고, 제품은 SFC(컬럼모델: AS(250mmХ30mm,10um); 이동상: [B：0.1%NH3H2O ETOH];B%: 55%-55%,10min;200minmin)으로 분리하여 중간체 1F-1(t=2.819, 490mg, 수율 26.04%)와 중간체 1F-2(t=3.933, 480mg, 수율 25.95%)를 얻었다.
LCMS (ESI) m/z: 611 (M+1).
HNMR(중간체 1F-1)(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (dd, J=0.9, 5.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.17 - 8.08 (m, 2H), 7.58 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.15 (br d, J=13.3 Hz, 2H), 4.06 (d, J=6.3 Hz, 2H), 2.84 (br s, 2H), 2.14 - 2.01 (m, 1H), 1.97 (d, J=7.3 Hz, 3H), 1.87 (br d, J=11.9 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 - 1.28 (m, 2H).
HNMR(중간체 1F-2)(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (dd, J=0.8, 5.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.16 - 8.09 (m, 2H), 7.61 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.15 (br d, J=13.2 Hz, 2H), 4.06 (d, J=6.3 Hz, 2H), 2.84 (br s, 2H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.99 - 1.95 (m, 3H), 1.87 (br d, J=10.9 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 - 1.29 (m, 2H).
단계 G（1G-1, 1G-2）：
0℃에서, 중간체 1F-1(490mg, 786.01μmol)의 DCM(10ml) 용액에 트리플루오로아세트산(3ml)을 넣었다. 반응액을 실온에서 1시간 교반하였다. 반응 완료 후 반응액을 농축, 회전건조하여 중간체 1G-1(502mg, 크루드)를 얻었으며 직접 다음 단계에 사용하였다. 중간체 1G-1과 같은 제조방법으로 중간체 1G-2 (491mg, 크루드)를 얻었다.
단계 H：
0℃에서, 중간체 1G-1(502.00mg, 803.74mmol)의 DCM(10ml) 용액에 포름알데히드 수용액(326.27mg, 4.02mmol, 순도 37%)과 소듐트리아세톡시보로하이드레이드(511.03mg, 2.41mmol)을 넣었다. 반응액을 실온에서 2시간 교반하였다. 반응 완료 후 반응액을 물(50ml)로 급냉각시키고 DCM(30mlХ2)를 사용하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켜 얻은 크루드 제품을 분취용 HPLC로 정제하여 실시예 1-1(150mg, 수율 35.41%)을 얻었다.
실시예 1-1과 같은 제조방법으로 중간체 1G-2로부터 실시예 1-2(100.6mg, 수율 23.91%)를 얻었다.
실시예 1-1：
LCMS (ESI) m/z: 525 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (d, J=4.9 Hz, 1H), 8.56 (s, 2H), 8.49 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.34 - 8.26 (m, 2H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 7.61 - 7.49 (m, 3H), 6.50 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.13 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.53 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.03 (br t, J=12.4 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.27 - 2.08 (m, 3H), 1.97 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.81 - 1.63 (m, 2H).
실시예 1-2：
LCMS (ESI) m/z: 525 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.72 (dd, J=0.8, 5.0 Hz, 1H), 8.61 - 8.46 (m, 3H), 8.38 (s, 1H), 8.33 - 8.25 (m, 2H), 8.16 - 8.08 (m, 2H), 7.58 - 7.47 (m, 3H), 6.49 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.12 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.50 (br d, J=12.2 Hz, 2H), 3.05 - 2.93 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.22 - 2.06 (m, 3H), 1.96 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 2H).
실시예 2（2-1과 2-2)
Figure pct00036
Figure pct00037
단계 A：
실온에서 질소가스의 보호 하에, 중간체 1D(1.0gХ2, 1.70mmol), 3-메틸-5-（4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2- 다이옥사보롤란 -2-일）이소티아졸(1.15g, 5.10mmol), 인산칼륨(1M, 3.4ml)과 1,1-디(t-부틸포스핀)페로센염화팔라듐(110.80mg, 170.00μmol)을 THF(10ml)에 넣었다. 반응액을 70℃에서 16시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 물(50ml)를 넣었다. 혼합용액을 에틸아세테이트(30ml×3)로 추출하였다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축하여 얻은 크루드 제품을 분취용 HPLC로 정제하였다. 제품을 SFC(컬럼모델: AS(250mm×30mm,10um); 이동상: [0.1%NH3H2O ETOH];B%: 35%-35%,7.2min;200minmin)로 분리하여 중간체 2A-1(t=2.529,560mg, 수율 24.28%)와 중간체 2A-2(t=3.494,500mg, 수율 27.19%)를 얻었다.
LCMS (ESI) m/z: 605 (M+1)
HNMR(중간체 2A-1)(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.61 - 8.50 (m, 2H), 8.41 - 8.26 (m, 2H), 7.76 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=2.1, 10.0 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.45 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.16 (br d, J=13.3 Hz, 2H), 4.07 (d, J=6.1 Hz, 2H), 2.85 (br s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.08 (br s, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 5H), 1.48 (s, 9H), 1.37 - 1.29 (m, 2H).
　HNMR(중간체 2A-2)(400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.59 - 8.53 (m, 2H), 8.41 - 8.27 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 2H), 7.28 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.45 (q, J=6.9 Hz, 1H), 4.16 (br d, J=13.6 Hz, 2H), 4.06 (dd, J=3.9, 6.1 Hz, 2H), 2.94 - 2.78 (m, 2H), 2.44 (d, J=2.1 Hz, 3H), 2.07 (td, J=3.7, 9.6 Hz, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 5H), 1.48 (s, 9H), 1.36 - 1.27 (m, 2H).
단계 B: 중간체 1G-1과 같은 방법으로 제조하여 중간체 2B-1와 중간체 2B-2를 얻었다.
단계 C: 실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 2-1과 2-2를 얻었다.
실시예 2-1：
LCMS (ESI) m/z: 520 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.73 (s, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.29 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.86 - 7.81 (m, 1H), 7.72 (dd, J=2.3, 10.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 6.45 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.21 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.63 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.15 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.06 (m, 3H), 1.99 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.86 - 1.73 (m, 2H).
실시예 2-2：
LCMS (ESI) m/z: 520 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.75 (s, 2H), 8.37 (s, 1H), 8.28 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.88 - 7.81 (m, 1H), 7.70 (dd, J=2.3, 10.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.56 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 6.42 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.20 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.62 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.12 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.33 - 2.08 (m, 3H), 1.96 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.87 - 1.70 (m, 2H).
실시예 3
Figure pct00038
Figure pct00039
단계 A：
중간체 1D와 같은 방법으로 제조하여 중간체 3D를 얻었다.
단계 B:
중간체 1F와 같은 방법으로 제조하여 중간체 3E를 얻었다. 제품을 SFC(컬럼모델: AS(250mm×30mm,10um); 이동상: [0.1%NH3H2O ETOH]; B%: 40%-40%,5min;80minmin)로 분리하여 중간체 3E-1(t=2.805,33mg, 수율 33.0%)와 중간체 3E-2(t=3.255,33mg, 수율 33.0%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 588 (M+1).
단계 C:
중간체 1G와 같은 방법으로 제조하여 중간체 3F-1(580mg, 크루드), 3F-2(520mg, 크루드)를 얻었다.
단계 D:
실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 3-1과 3-2를 얻었다.
실시예 3-1：
LCMS (ESI) m/z: 502 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.62 - 8.49 (m, 3H), 8.36 (s, 1H), 8.31 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.77 (br d, J=9.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.71 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.42 (q, J=6.6 Hz, 1H), 4.13 (br d, J=5.1 Hz, 2H), 3.50 (br d, J=11.9 Hz, 2H), 2.97 (br t, J=12.2 Hz, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.24 - 2.06 (m, 3H), 1.91 (br d, J=7.1 Hz, 3H), 1.80 - 1.61 (m, 2H).
실시예 3-2：
LCMS (ESI) m/z: 502 (M+1).
HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.56 (s, 2H), 8.49 (br s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.30 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.91 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J=2.4, 9.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.70 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.41 (q, J=7.1 Hz, 1H), 4.13 (d, J=5.7 Hz, 2H), 3.54 (br d, J=12.3 Hz, 2H), 3.05 (br t, J=11.9 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.21 - 2.08 (m, 3H), 1.91 (d, J=7.1 Hz, 3H), 1.79 - 1.67 (m, 2H).
실시예 4
Figure pct00040
Figure pct00041
단계 A:
중간체 1D와 같은 방법으로 제조하여 중간체 4A를 얻었다.
단계 B:
중간체 1E와 같은 방법으로 제조하여 중간체 4B를 얻었다.
단계 C:
중간체 1F와 같은 방법으로 제조하여 중간체 4C를 얻었다.
단계 D:
중간체 1G와 같은 방법으로 제조하여 중간체 4D를 얻었다.
단계 E:
실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 4를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 510 (M+1). HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.59 - 8.47 (m, 3H), 8.37 (s, 1H), 8.32 - 8.24 (m, 1H), 8.17 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.95 (dd, J=2.0, 7.3 Hz, 1H), 7.85 - 7.73 (m, 2H), 7.51 - 7.46 (m, 2H), 7.41 (dd, J=8.6, 10.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.12 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.52 (br d, J=12.8 Hz, 2H), 3.08 - 2.96 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.26 - 2.09 (m, 3H), 1.79 - 1.63 (m, 2H).
실시예 5
Figure pct00042
Figure pct00043
단계 A:
중간체 1D와 같은 방법으로 제조하여 중간체 5A를 얻었다.
단계 B:
중간체 1F와 같은 방법으로 제조하여 중간체 5B를 얻었다.
단계 C:
중간체 1G와 같은 방법으로 제조하여 중간체 5C를 얻었다.
단계 D:
실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 5를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 506 (M+1).HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.58 - 8.49 (m, 3H), 8.37 - 8.26 (m, 2H), 8.16 (dd, J=1.3, 2.1 Hz, 1H), 7.74 (dd, J=2.2, 10.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J=5.3 Hz, 2H), 7.34 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.12 (d, J=5.8 Hz, 2H), 3.51 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.06 - 2.94 (m, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.23 - 2.07 (m, 3H), 1.80 - 1.62 (m, 2H).
실시예 6
Figure pct00044
Figure pct00045
단계 A:
중간체 1E와 같은 방법으로 제조하여 중간체 6A를 얻었다.
단계 B：
중간체 1F와 같은 방법으로 제조하여 중간체 6B를 얻었다.
단계 C：
중간체 1G와 같은 방법으로 제조하여 중간체 6C를 얻었다.
단계 D：
실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 6을 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 493 (M+1).HNMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 8.75 (d, J=5.0 Hz, 1H), 8.69 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.58 - 8.43 (m, 3H), 8.34 (s, 1H), 8.30 - 8.22 (m, 2H), 8.13 (s, 1H), 7.55 (dd, J=1.1, 5.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 6.71 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.10 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.54 (br d, J=12.0 Hz, 2H), 3.04 (br t, J=12.0 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.23 - 2.07 (m, 3H), 1.79 - 1.65 (m, 2H).
실시예 7
Figure pct00046
Figure pct00047
단계 A：
0℃에서 질소가스 보호 하에, t-부틸-4-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카르복실레이트(68.00g, 315.85mmol)와 다이아이소프로필에틸아민(81.64g, 631.71mmol)의 염화메틸렌(800ml) 용액에 메탄설포닐클로라이드(45.15g, 394.15mmol)를 드롭하였다. 드롭 완료 후 25℃에서 2시간 교반하였다. 박층 크로마토그래피로 반응 완료여부를 검사하였다. 반응액은 포화염화암모늄 용액(500ml×2)과 포화식염수(300ml×2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과 및 농축하여 중간체 7A(붉은 색 오일상 액체, 95.00g, 수율 100%)를 얻어 정제가 필요 없이 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 B：
25℃에서 질소가스 보호 하에, 중간체 7A(94.40g, 321.77mmol)과 2-클로로피리딘-5-올(35.00g, 268.14mmol)의 DMF(1.00L)액에 탄산칼륨(74.12g, 536.28mmol)을 넣었다. 반응액을 80℃에서 16시간 반응시키고, 박층 크로마토그래피로 반응 완료를 검사하였다. 반응액을 실온까지 냉각시키고 농축시켰다. 잔류물에 물(500ml)을 넣고, 에틸아세테이트(300ml×3)로 추출하여 유기상을 포화식염수(400ml×2)로 세척하였다. 유기층을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 7B(옅은 황색고체, 84.00g, 수율 95.05%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 327.7 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.08 - 1.25 (m, 2 H) 1.40 (s, 9 H) 1.69 - 1.78 (m, 2 H) 1.88 - 2.03 (m, 1 H) 2.58 - 2.88 (m, 2 H) 3.89 - 4.05 (m, 4 H) 8.50 - 8.57 (m, 2 H)
단계 C：
질소가스 보호 하에, 중간체 7B(84.00g, 254.85mmol), [3-(하이드록시메틸)페닐]보론산(42.60g, 280.34mmol), Pd(PPh3)2Cl2(17.89g, 25.49mmol)과 탄산칼륨(70.45g, 509.71mmol)을 1,4-다이옥산(1.00L)과 물(200.00ml)의 혼합용액에서 80℃로 16시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시키고 여과하여 염화메틸렌(500ml×3)으로 추출한 후, 유기층을 병합하여 포화식염수(500ml×2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 잔여물을 메탄올로 재결정시켜 중간체 7C(백색 고체, 77.60g, 수율 76.22%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 400.1 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.14 - 1.31 (m, 2 H) 1.45 (s, 9 H) 1.75 - 1.87 (m, 2 H) 1.95 - 2.10 (m, 1 H) 2.66 - 2.93 (m, 2 H) 3.94 - 4.22 (m, 4 H) 4.63 (d, J=5.62 Hz, 2 H) 5.34 (t, J=5.81 Hz, 1 H) 7.41 - 7.54 (m, 2 H) 8.21 (d, J=7.46 Hz, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 8.68 (s, 2 H)
단계 D：
0℃에서 질소가스 보호 하에 교반하면서, 중간체 7C(10.00g, 25.03mmol)과 다이아이소프로필에틸아민(6.47g, 50.06mmol)의 염화메틸렌(100.00ml)용액에 메탄설포닐 클로라이드(3.44g, 30.04mmol)를 드롭하였다. 드롭 완료 후 25℃에서 2시간 교반하고 박층 크로마토그래피로 반응 완료를 검사하였다. 반응액을 포화염화암모늄 용액(500ml×2)과 포화식염수(300ml×2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과 및 농축하여 중간체 7D(회색 고체, 14.00g, 수율 100%)를 얻어 정제가 필요 없이 직접 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: 478.1 (M+1).
단계 E：
25℃에서 질소 가스 보호 하에, 중간체 7D(12.00g, 25.13mmol)과 5-브로모-3-불화-1-하이드로겐-피리딘-2-테론(5.79g, 30.16mmol)의 DMF(100.00ml) 용액에 탄산칼륨(6.95g, 50.26mmol)을 넣었다. 반응액을 90℃에서 3시간 반응시키고, 박층 크로마토그래피로 반응완료를 검사하였다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후 농축시켰다. 잔여물에 물(100ml)을 넣고 에틸아세테이트(100ml×3)로 추출한 후, 유기상을 포화식염수(200ml×2)로 세척하고, 유기층을 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시킨 후, 잔여물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 7E(황색고체, 9.60g, 수율 66.62%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 574.9 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.09 - 1.27 (m, 2 H) 1.41 (s, 9 H) 1.77 (br d, J=11.13 Hz, 2 H) 1.90 - 2.10 (m, 1 H) 2.62 - 2.91 (m, 2 H) 3.87 - 4.14 (m, 4 H) 5.16 - 5.30 (m, 2 H) 7.39 - 7.52 (m, 2 H) 7.76 (dd, J=9.66, 2.45 Hz, 1 H) 8.14 - 8.19 (m, 1 H) 8.24 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 8.28 (s, 1 H) 8.65 (s, 2 H)
단계 F：
질소가스 보호 하에, 중간체 7E(200.00mg, 348.77μmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1,3,2-다이옥사보롤란(92.99mg, 366.21μmol), Pd(dppf)Cl2(25.52mg, 34.88μmol)과 아세트산칼륨(102.68mg, 1.05mmol)을 1,4-다이옥산(10.00ml)의 혼합용액에서, 70℃에서 2시간 교반하여 반응시켜 중간체 7F의 1,4-다이옥산용액을 얻었다. 반응액은 처리가 필요없이 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
단계 G：
질소가스 보호 하에, 중간체 7F의 1,4-다이옥산용액(210.00mg, 338.43μmol), 2-브로모피리딘-4-카보나이트릴(185.81mg, 1.02mmol), Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(55.28mg, 67.69μmol)과 탄산칼륨(93.55mg, 676.86μmol)을 1,4-다이옥산(10.00ml)과 물(2.00ml)의 혼합용액에서, 80℃에서 3시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온으로 냉각시켜 여과하고 농축한 후, 잔류물에 물(50mL)을 넣고 용해시키고 에틸아세테이트(30ml×3)로 추출하였다. 유기층을 병합하고 포화식염수(30ml×2)로 세척한 후, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 잔류물은 박층 크로마토그래피 플레이트로 정제하여 중간체 7G(황색고체, 50.00mg, 수율 24.76%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 619.2 (M+23).
단계 H：
0℃에서 질소가스 보호 하에, 중간체 7G(50.00mg, 83.80μmol)의 염화메틸렌(10.00ml) 용액에 트리플루오로아세트산(4.62g, 40.52mmol, 3.00ml)을 드롭하였다. 반응물을 25℃에서 1시간 교반하였다. 반응물을 농축 건조하여 중간체 7H(흑갈색 오일상 액체, 60.00mg, 수율 100%, 트리플루오로아세트산염)을 얻었으며, 정제 과정이 필요없이 직접 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: 497.2 (M+1).
단계 I：
0℃에서 질소가스 보호 하에, 중간체 7H(50.00mg, 100.70μmol)의 염화메틸렌(5.00ml) 용액에 포름알데히드(40.87mg, 503.50μmol, 37.50μl, 37% 수용액)과 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(64.03mg, 302.10μmol)를 넣었다. 혼합물을 25℃에서 16시간 반응시킨 후 농축시키고, 잔류물을 준비형 HPLC로 정제하여 실시예 7(21.70mg, 수율 38.48%, 포름산염)을 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 511.1 (M+1).　 1HNMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 - 1.43 (m, 2 H) 1.77 (br d, J=9.78 Hz, 3 H) 1.99 (br t, J=11.43 Hz, 2 H) 2.22 (s, 3 H) 2.85 (br d, J=11.37 Hz, 2 H) 4.05 (d, J=5.99 Hz, 2 H) 5.39 (s, 2 H) 7.50 (d, J=5.01 Hz, 2 H) 7.75 (dd, J=5.01, 1.22 Hz, 1 H) 8.18 - 8.26 (m, 2 H) 8.28 (s, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 8.64 (s, 2 H) 8.78 (d, J=1.34 Hz, 1 H) 8.82 (d, J=5.01 Hz, 1 H)
실시예 8（8-1과 8-2)
Figure pct00048
Figure pct00049
단계 A：
질소 가스 보호 하에, 중간체 1D(1.50g, 2.55mmol), 트리부틸(1-에톡시에틸렌)주석(1.14g, 3.16mmol, 1.07ml)과 Pd(PPh3)2Cl2(358.43mg, 510.66μmol)을 톨루엔(10.00ml) 용액에서, 100℃에서 3시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 염산(10.21ml, 1N 수용액)을 넣고, 25℃에서 1시간 교반하였다. 여과, 농축시킨 후 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 8A(황색 오일상 액체, 1.13g, 수율 80.48%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 573.1 (M+23). 1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.50 (s, 9 H) 1.89 (d, J=7.03 Hz, 6 H) 1.98 - 2.10 (m, 2 H) 2.31 (s, 3 H) 2.72 - 2.86 (m, 2 H) 3.98 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 4.12 - 4.31 (m, 2 H) 6.54 (q, J=7.28 Hz, 1 H) 7.42 (br d, J=7.65 Hz, 1 H) 7.61 (dd, J=9.66, 2.26 Hz, 1 H) 7.65 - 7.74 (m, 1 H) 7.84 (d, J=1.38 Hz, 1 H) 8.38 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 8.42 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H)
단계 B：
질소가스 보호 하에, 중간체 8A(1.13g, 2.05mmol)을 1,1-다이메톡시-N,N-다이메틸-에탄(5.00ml) 용액에서, 120℃에서 3시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 반응물을 농축, 건조하여 중간체 8B(흑갈색 오일상 액체, 1.27g, 수율 100%)를 얻었으며, 정제 과정이 없이 바로 다음 단계에 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: 620.1 (M+1).
단계 C：
질소가스 보호 하에, 중간체 8B(1.27g, 2.05mmol)의 에탄올(20.00ml) 용액에 하이드록실아민(213.61mg, 3.08mmol, 염산염)을 넣었다. 혼합물을 80℃에서 16시간 반응시켰다. 농축한 후 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하고, 라세미체를 분취용 SFC(컬럼모델: AS(250mm×30mm,10um); 이동상: [0.1% NH3-H2O ETOH]; B%: 0%-55%, 5.2min; 150minmin)를 거쳐 분해하여 중간체 8C-1(백색고체, 380.00mg, 수율 31.44%, 100% ee값, Rt=2.431min)과 중간체 8C-2(백색고체, 350.00mg, 수율 28.95%, 100% ee값, Rt=3.299min)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 590.4 (M+1). 1HNMR（중간체 8C-1） (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.31 - 1.38 (m, 2 H) 1.50 (s, 9 H) 1.82 - 1.94 (m, 5 H) 1.97 - 2.12 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 2.79 (br t, J=12.23 Hz, 2 H) 3.98 (d, J=6.36 Hz, 2 H) 4.21 (br s, 2 H) 6.06 (s, 1 H) 6.59 (d, J=6.97 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=9.41, 2.20 Hz, 1 H) 7.40 - 7.46 (m, 1 H) 7.48 - 7.55 (m, 1 H) 7.56 - 7.62 (m, 1 H) 8.36 (d, J=7.70 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H ).
1HNMR(중간체 8C-2) (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.30 - 1.37 (m, 2 H) 1.49 (s, 9 H) 1.81 - 1.94 (m, 5 H) 1.96 - 2.10 (m, 1 H) 2.29 (s, 3 H) 2.79 (br t, J=12.10 Hz, 2 H) 3.98 (d, J=6.24 Hz, 2 H) 4.20 (br s, 2 H) 6.06 (s, 1 H) 6.59 (q, J=7.05 Hz, 1 H) 7.33 (dd, J=9.29, 2.20 Hz, 1 H) 7.41 - 7.46 (m, 1 H) 7.48 - 7.54 (m, 1 H) 7.59 (d, J=1.59 Hz, 1 H) 8.36 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 8.42 (s, 1 H) 8.47 (s, 2 H)
단계 D：
중간체 1G에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 중간체 8D-1, 8D-2를 얻었다.
단계 E：
실시예 1과 같은 방법으로 제조하여 실시예 8-1, 8-2를 얻었다.
실시예 8-1
LCMS (ESI) m/z: 504.1 (M+1).
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.54 - 1.72 (m, 2 H) 1.85 - 2.13 (m, 6 H) 2.24 (s, 3 H) 2.69 - 2.80 (m, 3 H) 2.86 - 3.16 (m, 2 H) 3.19 - 3.52 (m, 2 H) 4.09 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 6.29 (q, J=7.07 Hz, 1 H) 6.78 (s, 1 H) 7.47 - 7.60 (m, 2 H) 7.92 (dd, J=10.42, 2.13 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.21 - 8.35 (m, 2 H) 8.62 - 8.75 (m, 2 H) 10.37 - 10.80 (m, 1 H)
실시예 8-2
LCMS (ESI) m/z: 504.1 (M+1).
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.57 - 1.74 (m, 2 H) 1.81 - 2.12 (m, 6 H) 2.23 (s, 3 H) 2.62 - 2.79 (m, 3 H) 2.86 - 3.05 (m, 2 H) 3.41 (br d, J=11.92 Hz, 2 H) 4.09 (d, J=6.27 Hz, 2 H) 6.29 (q, J=6.99 Hz, 1 H) 6.79 (s, 1 H) 7.53 (d, J=5.02 Hz, 2 H) 7.92 (dd, J=10.48, 2.07 Hz, 1 H) 8.08 (s, 1 H) 8.20 - 8.34 (m, 2 H) 8.61 - 8.73 (m, 2 H) 10.75 (br s, 1 H)
실시예 9
Figure pct00050
Figure pct00051
단계 A：
질소 가스 보호 하에, 중간체 3D(1.00g, 1.76mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1,3,2-다이옥사보롤란(469.28mg, 1.85mmol), Pd(dppf)Cl2(128.78mg, 176.00μmol)과 아세트산칼륨(518.18mg, 5.28mmol)을 1,4-다이옥산(15.00ml) 혼합 용액에서, 80℃에서 2시간 교반하여 반응시켰다. 중간체 9A의 1,4-다이옥산 용액을 얻었으며, 반응액은 별도 처리가 없이 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
단계 B：
질소가스 보호 하에, 중간체 9A의 1,4-다이옥산 용액(1.09g, 1.77mmol), 2-브로모피리딘-4-카보나이트릴(485.89mg, 2.66mmol), Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(289.09mg, 354.00μmol)과 탄산칼륨(489.26mg, 3.54mmol)을 1,4-다이옥산(20.00ml)과 물(4.00ml)의 혼합용액에서, 80℃에서 3시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 여과, 농축시켰다. 잔류물을 박층 크로마토그래피 플레이트로 정제하고, 분취용 SFC(컬럼모델: AS(250mm×30mm,10um); 이동상: [0.1% NH3-H2O ETOH]; B%: 55%-55%, 8.2min; 100minmin)으로 분해하여 중간체 9B-1(황색 오일상 액체, 200.00mg, 100% ee값, 수율 19.06%, Rt=2.973min)과 중간체 9B-2(황색 오일상 액체, 200.00mg, 100% ee값, 수율 19.06%, Rt=3.605min)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 593.1 (M+1).
단계 C：
중간체 1G에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 중간체 9C-1, 9C-2를 얻었다.
단계 D：
실시예 1에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 실시예 9-1, 9-2를 얻었다.
실시예 9-1
LCMS (ESI) m/z: 507.1 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.29 - 1.45 (m, 2 H) 1.80 (br d, J=10.54 Hz, 3 H) 1.88 (d, J=7.28 Hz, 3 H) 2.14 (br t, J=11.17 Hz, 2 H) 2.30 (s, 3 H) 2.94 (br d, J=11.29 Hz, 2 H) 4.05 (d, J=6.02 Hz, 2 H) 6.32 (d, J=7.15 Hz, 1 H) 6.62 (d, J=9.66 Hz, 1 H) 7.46 - 7.55 (m, 2 H) 7.69 (dd, J=5.02, 1.25 Hz, 1 H) 8.19 - 8.26 (m, 3 H) 8.27 (s, 1 H) 8.43 (t, J=1.07 Hz, 1 H) 8.49 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.64 (s, 2 H) 8.77 (dd, J=5.02, 0.88 Hz, 1 H)
실시예 9-2
LCMS (ESI) m/z: 507.1 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.27 - 1.46 (m, 2 H) 1.81 (br d, J=10.54 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=7.28 Hz, 3 H) 2.17 (br t, J=11.17 Hz, 2 H) 2.31 (s, 3 H) 2.96 (br d, J=11.29 Hz, 2 H) 4.09 (d, J=6.02 Hz, 2 H) 6.35 (d, J=7.15 Hz, 1 H) 6.65 (d, J=9.66 Hz, 1 H) 7.42 - 7.57 (m, 2 H) 7.66 (dd, J=5.02, 1.25 Hz, 1 H) 8.21 - 8.27 (m, 3 H) 8.29 (s, 1 H) 8.45 (t, J=1.07 Hz, 1 H) 8.51 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.67 (s, 2 H) 8.79 (dd, J=5.02, 0.88 Hz, 1 H)
실시예 10
Figure pct00052
Figure pct00053
단계 A:
잘소가스 보호 하에, 중간체 4A(200.00mg, 346.53μmol), 1-메틸-4-(，4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2다이옥사보롤란-2-일)피라졸(108.15mg, 519.80μmol), Pd(dppf)Cl2(25.36mg, 34.65μmol)과 탄산나트륨(110.19mg, 1.04mmol)을 1,4-다이옥산(10.00ml) 용액에서, 80℃에서 2시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 여과, 농축하고, 잔류물에 물(60ml)을 넣어 용해시키고, 에틸아세테이트(50ml×3)로 추출하였다. 유기층을 병합시키고, 포화식염수(80ml×2)로 세척한 후, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 잔류물은 분취용 박층 크로마토그래피로 정제하여 중간체 10B(황색 오일상 액체, 200.00mg, 수율 95.45%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 557.3 (M+1).
단계 B:
중간체 1G에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 중간체 10C를 얻었다.
단계 C:
실시예 1에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 실시예 10을 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 471.2 (M+1). 1HNMR (400 MHz, METHANOL-d4): 1.63 - 1.80 (m, 2 H) 2.09 - 2.25 (m, 3 H) 2.88 (s, 3 H) 3.05 (t, J=12.17 Hz, 2 H) 3.55 (d, J=12.67 Hz, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 4.12 (d, J=5.90 Hz, 2 H) 5.34 (s, 2 H) 6.67 (d, J=9.41 Hz, 1 H) 7.42 - 7.51 (m, 2 H) 7.75 (s, 1 H) 7.81 (dd, J=9.35, 2.57 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.05 (d, J=2.38 Hz, 1 H) 8.25 - 8.29 (m, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 8.55 (s, 2 H).
실시예 11
Figure pct00054
Figure pct00055
단계 A:
0℃에서 질소가스 보호 하에，3-메틸아이소티아졸-5-아민(5.00g, 33.19mmol, 염산염)의 물(14.00ml)과 황산(10.00ml, 순도 98%)의 혼합 용액에, 아질산나트륨(2.52g, 36.51mmol)의 물(50ml) 용액을 한 방울씩 추가하였다. 반응액을 0℃에서 1시간 교반한 후, 요오드화칼륨(6.06g, 36.51mmol)의 물(35ml) 용액에 넣고, 80℃에서 1시간 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 물(100ml)을 넣고 희석하고, 염화메틸렌(50ml×2)으로 추출하였다. 유기층을 병합하여 포화식염수(25ml, × 2)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 11A(황색고체, 4.00g, 수율 53.55%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 225.9 (M+1). 1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 2.39 - 2.48 (m, 3 H) 7.04 - 7.13 (m, 1 H)
단계 B:
-25℃의 질소가스 보호 하에, 중간체 11A(1.00g, 4.44mmol)과 2-아이소프로폭시-4,4,5,5,-1,3,2- 다이옥사보롤란(850mg, 4.57mmol)의 테트라하이드로퓨란(5.00ml) 용액에 아이소프로필마그네슘 클로라이드-염화리튬복합물(3.66ml, 1.3M테트라하이드로퓨란 용액）에 한 방울씩 추가하였다. 반응액을 -25℃에서 0.5시간 교반하여 반응시켰다. 반응 완료 후, 아세트산(0.24ml)의 테트라하이드로퓨란(0.67ml) 용액을 넣어 급냉시켰다. 반응액에 석유 에테르(48ml)와 tert-부틸메틸에테르(24ml)를 넣고, 여과하고 농축시켜 중간체 11B(황색 오일상 액체, 512mg, 수율 51.22%)을 얻어 정제 과정 없이 바로 다음 단계에 사용하였다. 1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.28 (s, 12 H) 2.46 - 2.48 (m, 3 H) 7.31 (s, 1 H).
단계 C:
질소가스 보호 하에, 중간체 11B(283.69mg, 1.26mmol), 중간체 4A(500.00mg, 900.15μmol), 1,1-디(t-부틸포스핀)페로센염화팔라듐(58.67mg, 90.02μmol)과 포타슘포스페이트3수화물(479.44mg, 1.80mmol)을 테트라하이드로퓨란(5.00ml)과 물(1.00ml)의 혼합 용액에 넣고 65℃에서 12시간 교반하여 반응시켰다. 반응액을 실온까지 냉각시킨 후, 여과, 농축한 후, 잔류물에 물(50ml)에 용해시키고, 에틸아세테이트(100ml×2)로 추출한 후, 유기층을 병합하여 포화식염수(50ml×2)로 세척한 후, 무수황산나트륨으로 건조, 여과, 농축시켰다. 잔류물은 박층 크로마토그래피 플레이트로 정제하여 중간체 11C(황색고체, 266.00mg, 수율 51.51%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 574.2 (M+1). 1HNMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.27 - 1.34 (m, 6 H) 1.60 - 1.64 (m, 10 H) 1.60 - 1.65 (m, 10 H) 1.83 - 1.91 (m, 2 H) 1.95 (s, 1 H) 2.46 - 2.52 (m, 3 H) 3.95 - 4.01 (m, 2 H) 5.28 - 5.31 (m, 2 H) 6.71 - 6.77 (m, 1 H) 6.94 - 6.97 (m, 1 H) 7.39 - 7.56 (m, 3 H) 7.63 - 7.68 (m, 1 H) 8.37 (s, 2 H) 8.47 (s, 2 H)
단계 D:
중간체 1F에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 중간체 11D를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 474.2 (M+1).
단계 E:
실시예 1에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 실시예 11을 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 488.2 (M+1). 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.37 (br d, J=10.54 Hz, 2 H) 1.79 (br d, J=10.04 Hz, 3 H) 2.11 (br s, 2 H) 2.26 - 2.31 (m, 3 H) 2.40 - 2.44 (m, 3 H) 2.89 - 2.97 (m, 2 H) 4.01 - 4.09 (m, 2 H) 5.25 (s, 2 H) 6.57 (d, J=9.41 Hz, 1 H) 7.45 (d, J=11.80 Hz, 3 H) 7.79 (dd, J=9.41, 2.64 Hz, 1 H) 8.20 - 8.26 (m, 2 H) 8.29 (s, 1 H) 8.53 - 8.56 (m, 1 H) 8.62 - 8.66 (m, 2 H).
실시예 12
Figure pct00056
Figure pct00057
단계 A:
페닐 아이소사이아네이트(830.74mg, 6.97mmol)의 나이트로에테인(261.77mg, 3.49mmol, 249.30μl) 용액에 트리에틸아민(32.08mg, 317.00μmol, 43.94 μl)을 넣고, 50℃에서 30분동안 교반한 후, 다시 트리부틸(에티닐)스타난(1.00g, 3.17mmol)의 톨루엔(8.00ml) 용액에 넣고, 반응액을 50℃에서 5시간 반응시켰다. 박층 크로마토그래피로 반응 완료여부를 검사하였다. 반응액에 물(100ml)을 넣고, 에틸아세테이트(100ml)로 추출하였다. 유기상을 포화식염수(50ml)로 세척하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과하고 회전증발기로 농축 건조한 후, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 12A(황색 오일상 액체, 700.00mg, 수율 42.13%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 373.14 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 0.82 - 0.85 (m, 9 H) 0.97 - 1.11 (m, 6 H) 1.20 - 1.34 (m, 12 H) 1.49 - 1.52 (m, 3 H) 7.18 - 7.20 (m, 1 H)
단계 B:
20℃에서 중간체 4A(200.00mg, 360.06μmol)의 1,4-다이옥산(4.00ml) 용액에 중간체 12A(200.00mg, 348.77μmol)과 Pd(PPh3)2Cl2(25.27mg, 36.01μmol)를 넣고, 질소가스 보호 하에 100℃까지 가열하여 12시간 교반하였다. 박층 크로마토그래피로 반응 완료여부를 검사하였다. 반응액에 물(50ml)을 넣고, 에틸아세테이트(50mlХ2)로 추출하였다. 유기상을 포화식염수(50ml)로 세척한 후, 무수황산나트륨으로 건조, 여과 후, 회전증발기로 농축 건조시켜, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 중간체 12B(황색고체, 110.00mg, 수율 42.18%)를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 557.26 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.21 - 1.31 (m, 4 H) 1.40 (s, 9 H) 1.72 - 1.81 (m, 2 H) 1.89 - 1.98 (m, 1 H) 2.22 (s, 3 H) 2.70 (br s, 2 H) 3.88 (d, J=6.36 Hz, 2 H) 5.21 (s, 2 H) 6.02 (s, 1 H) 6.63 (d, J=9.54 Hz, 1 H) 7.33 - 7.37 (m, 1 H) 7.50 (dd, J=9.54, 2.57 Hz, 1 H) 7.57 - 7.64 (m, 1 H) 7.83 (d, J=2.32 Hz, 1 H) 8.23 - 8.31 (m, 2 H) 8.38 (s, 2 H)
단계 C:
중간체 1에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 중간체 12C를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 457.21 (M+1).
단계 D:
실시예 1에서 기술한 것과 같은 방법으로 제조하여 실시예 12를 얻었다. LCMS (ESI) m/z: 471.23 (M+1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.14 - 1.21 (m, 2 H) 1.49 (br s, 2 H) 1.79 - 1.95 (m, 3 H) 1.99 (s, 2 H) 2.24 (s, 3 H) 2.38 - 2.38 (m, 1 H) 2.46 (s, 3 H) 3.12 (br d, J=10.92 Hz, 2 H) 5.29 (s, 2 H) 6.65 (s, 1 H) 7.47 (br s, 1 H) 7.82 - 7.90 (m, 1 H) 8.29 (br s, 2 H) 8.63 (s, 2 H)
실험예 1: c-MET효소 결합 활성 실험
시제와 소모품:
cMET (invitrogen PV3143)
Tracer 236 (Lot Number: 10815978)
Eu-Anti-His AB (MAb Anti 6HIS-K)
PerkinElmer 회사 Envison검사 665nm와 615nm
384웰 플레이트_검사판(PerkinElmer #6007299)
실험원리:
본 실험은 LanthaScreenTM Eu 키나아제 결합측정법(LanthaScreenTM Eu Kinase Binding Assay)을 이용하여, 그림 1에서 나타낸 바와 같이, Eu 표지항체를 추가하는 것을 통해 Alexa Fluor결합체 혹은 키나아제 "트레이서"와 결합하였다. 트레이서와 항체 및 키나아제의 결합은 고도의 FRET를 가져오며, 반대로 키나아제 억제화합물을 사용하여 트레이서를 대체하면 FRET 로스를 일으킨다.
실험방법:
1）항체 Eu-Anti-His AB, 효소cMET, 트레이서 Tracer236을 희석하였다.
2）화합물 조제: 10 mM 피험 화합물 및 참조 화합물을 100% DMSO로 0.667 mM까지 희석한 후, 전자동마이크로웰 플레이트 전처리 시스템 ECHO를 사용하여 3배로 희석하여 8개의 농도구배를 나누어, 더블 반복홀을 설치하며, 각 홀 당 75 nL이다.
3）화합물 플레이트에 7.5 uL 항체(1/375 nM)와 키나아제(10 nM) 혼합물을 넣고, 다시 7.5 uL Tracer(60nM)를 추가하였다. 반응최종농도: cMET: 5nM， Tracer 236: 30nM， Eu-Anti-His AB (MAb Anti 6HIS-K): 1/750 nM이다.
4）4℃에서 60 분동안 인큐베이팅한 후, 멀티표지 마이크로웰 플레이트 계측기 Envision로 데이터를 읽었다(665nm/615nm 신호값을 Prism 5로 데이터분석; Ex 루미네선스: Laser mirror446 Em발사광: 615 및 665 nM ).
실험결과: 표 1 참조.
결론: 본 발명화합물은 c-MET효소에 대해 비교적 강한 억제활성을 가지고 있다.
측정화합물 c-MET IC50 (nM) 측정화합물 c-MET IC50 (nM)
실시예 1-2 1.09 실시예 7 15.50
실시예 2-2 9.33 실시예 8-2 3.79
실시예 4 6.16 실시예 10 69.50
실시예 5 2.90 실시예 11 5.00
실시예 6 4.37
실험예 2:세포증식의 억제효과 측정시제와 소모재:
1. 세포배양: DMEM배지, 송아지 태아 혈청, DPBS
2. 세포주: MHCC97-H
3. 측정시제: 생세포측정시제 킷트 CellTiter-Glo
4. 기타 주요 소모재 및 시제: 화합물 희석판, 중간판, 측정판, DMSO
실험원리:
ATP의 함유량은 세포의 수 및 세포상태를 직접적으로 반영한다. 따라서 ATP에 대한 정량측정을 통해 살아있는 세포의 수를 측정할 수 있다. 생세포 측정 킷트는 루시페레이스 및 그 기질을 포함하고 있으며, ATP의 관여를 통해 루시페레이스는 기질에 촉매 작용을 하여 안정적인 광학 신호를 내보내게 하므로, 신호의 강도를 측정하여 세포 중 ATP 수를 측정한다. 그 중 광 신호와 세포 중 ATP의 양은 정비례하며, ATP는 또한 생세포 수와 관련이 있으므로 이를 통해 세포의 증식 상황을 측정할 수 있다. 측정판은 PE사의 Envision을 사용하여 분석하였다.
실험방법:
1. 세포판 준비
MHCC97-H세포를 각각 384웰 플레이트에 각 홀에 500개 세포가 포함되게 접종하였다. 세포판은 이산화탄소 배양박스에서 밤새 배양하였다.
2. 화합물 준비
Echo로 4배 희석하고, 9개 화합물 농도를 설정하여 더블 반복홀 실험을 셋팅하였다.
3. 화합물에 의한 세포 처리
화합물을 세포판으로 옮겼다. 화합물의 초기 농도는 10uM이다. 세포판을 이산화탄소 배양박스에서 3일 동안 배양하였다.
4. 측정
세포판에 Promega CellTiter-Glo시제를 넣고, 실온에서 10분간 인큐베이팅하여 발광신호를 안정시켰다. PerkinElmer Envision 다중표기 분석기를 사용하여 데이터를 읽었다.
실험결과: 표 2 참조.
결론: 본 발명화합물은 MHCC97H세포에 대해 비교적 좋은 억제활성을 나타냈다.
측정화합물 MHCC97H 세포 IC50 (nM) 측정화합물 MHCC97H 세포 IC50 (nM)
실시예 1-2 8.80 실시예 7 22.30
실시예 2-2 13.80 실시예 9-2 22.10
실시예 3-2 19.0 실시예 10 166.00
실시예 4 72.90 실시예 11 93.80
실시예 5 58.80 실시예 12 51.40
실시예 6 32.90
실험예3: MHCC97H간암세포 피하이종이식 종양모델의 약력학에 관한 실험 세포배양:
MHCC97H세포의 체외 단일층 배양에 있어서, 배양조건은 RPMI1640 배지에 10％의 불활성화 소태아혈청, 1%페니실린-스트렙토 마이신 이중항체를 첨가하여 37ºC 5％CO2에서 배양하였다. 일주일에 두번 트립신-EDTA로 통상적인 소화처리를 진행하여 계대시켰다. 세포가 지수 성장 단계에 있을 경우, 세포를 수확하고, 계수하며, 접종을 진행하였다.
동물：
BALB/c누드 마우스, 6 내지 8주령，체중18 내지 22g
종양접종：
0.2 ml의 5×106개 MHCC97H세포를 포함하는 현탁액을 각 마우스의 오른쪽 배후에 피하 접종하였다. 종양의 평균체적이 약 172 mm3에 도달하면 그룹을 나누어 투여하기 시작하였다. 실험 그룹 및 투여 방법은 하기 표를 참조로 하였다.
실험지표:
실험지표는 종양 성장의 억제, 지연 또는 치유되었는지를 관찰하는 것이다. 1주 2번 버니어 캘리퍼스(vernier callipers)로 종양 직경을 측적하였다. 종양 체적의 계산 공식은 V = 0.5a × b2이고, a와 b는 각각 종양의 긴 지름과 짧은 지름을 표시하였다. 화합물의 종양 억제 치료효과(TGI)는 T-C (일) 및 T/C(%)로 평가하였다.
실험결과: 표3을 참조로 하였다.
결론:
본 발명의 화합물은 MHCC97H 간암 세포 피하 이종이식 종양 모델의 약력학 실험에서, 테포티닙(Tepotinib)보다 더 우수한 종양 억제 작용을 나타내었다.
그룹 종양체적 (mm3)a
（24일째）		 T/C
(%)		 TGI
(%)		 P 값b
블랭크 2059±305 - - -
(Tepotinib) 255±5 12.4 95.6 <0.001
실시예 1-2 153±12 7.4 101.0 <0.001
실시예 8-2 161±6 7.8 100.6 <0.001
주 : 인간 간암 MHCC97H세포 이종 이식 모델에서 시험 약물의 항 종양 효능 평가（투여 후 24일째의 종양 체적에 기초하여 산출）
a. 평균치 ± SEM.
b. p 값은 종양 체적에 의해 계산하였다.
본 발명의 화합물은 테포티닙(tepotinib)보다 더 우수한 대사 안정성을 갖는다. 예하면, 실시예1 내지 2에서 인간, 랫트 및 마우스 3종간의 간 입자 대사의 t1/2는 각각 62.1분, 36.5분, 49.1분이며, 동등한 조건하에, 테포티닙은 인간, 랫트 및 마우스 3종간의 간 입자 대사의 t1/2는 각각 48.3분, 10.5분, 12.4분이다. 본 발명의 화합물의 반감기가 증가하고, 표적에 대한 작용시간이 길어지고, 대사 안정성이 증가되었으며, 더 우수한 억제 활성을 갖는다. 반감기의 연장은 혈중농도를 더 오랫동안 유지시키며, 이로써 상기 화합물을 종양 치료에 사용하면 동일한 종류의 약물에 비해, 환자의 투여량 또는 투여 차수를 감소시키게 되며, 환자의 의존성도 현저히 개선될 것으로 예측된다.
c-MET와 HGF가 결합된 후, MAPK, PI3K/AKT, Cdc42/Rac1 등 경로를 활성화시켜, 암세포의 생존과 증식을 유도하여, 종양 성장을 촉진한다. 따라서, c-MET 억제제로서의 피로돈계 화합물은, 간암, 비소세포 폐암, 위암 등 표적 치료 약물중에서 비교적 큰 사용 가능성을 갖는다. 특히, 간암 치료에 있어서, 상기 화합물은 c-MET 고 발현의 간암에 대해 정확한 치료 효과를 가지며, 생체내 및 시험관내에서의 현저한 억제활성과 양호한 대사 안정성을 고려하여, 유사한 제품보다 더 효과적이고 우수한 신약으로 기대된다.

Claims (17)

  1. 식(I)로 표시되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염에서,
    Figure pct00058

    R1은 H, F에서 선택되고；
    R2은 H, CH3에서 선택되며；
    R2가 H가 아닐 경우, R2와 연결된 탄소원자는 R배치 혹은 S배치이며；
    A는 1, 2 혹은 3개의 R3으로 임의로 치환된: 페닐기, 피리딜기, 피라졸릴기, 이소옥사졸릴기, 이소티아졸릴기 혹은 티아졸릴기에서 임의로 선택되며;
    R3은 CN, 할로겐, C(=O)NH2에서 선택되거나, 혹은 1, 2 혹은 3개의 R0으로 임의로 치환된 C1-6알킬기, C1-6헤테로알킬기 혹은 C3-6시클로알킬기에서 선택되며;
    R0은 F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, C(=O)NH2에서 선택되거나, 혹은 1, 2 혹은 3개의 R'로 임의로 치환된 C1-3알킬기, C1-3헤테로알킬기에서 선택되며;
    R'은 F, Cl, Br, I, CN, OH, NH2, CH3, CH3CH2, CF3, CHF2, CH2F에서 선택되며;
    "C1-3헤테로알킬기", "C1-6헤테로알킬기"에서 "헤테로"는 -O-, -C(=O)NR'-, -C(=O)NH-, -NR'-, -NH-에서 선택되며;
    상기 임의의 상황에서도, 헤테로원자 혹은 헤테로원자단의 수는 각각 독립적으로 1, 2 혹은 3에서 선택된다.
  2. 청구항1에 있어서,
    R0은 F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, C(=O)NH2, CH3, CH3CH2, CF3, CHF2, CH2F, NH2CH2, (NH2)2CH, CH3O, CH3CH2O, CH3OCH2, CH3NH, (CH3)2N에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  3. 청구항1 또는 2에 있어서,
    R1은 H에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  4. 청구항1 또는 2에 있어서,
    R1은 F에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  5. 청구항1 또는 2에 있어서,
    R2는 H에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  6. 청구항1 또는 2에 있어서,
    R2는 CH3에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  7. 청구항6에 있어서,
    R2와 연결된 탄소 원자가 R배치인 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  8. 청구항6에 있어서,
    R2와 연결된 탄소 원자가 S배치인 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  9. 청구항1 또는 2에 있어서,
    R3은 CN, 할로겐, C(=O)NH2에서 선택되거나, 혹은 1, 2 혹은 3개의 R0로 임의로 치환된: C1-3알킬기 혹은 C1-3헤테로알킬기에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  10. 청구항9에 있어서,
    R3은 CN, F, Cl, Br, CH3, CH3CH2, CF3, CHF2, CH2F, CH3O, C(=O)NH2에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  11. 청구항1 또는 2에 있어서,
    A는 1, 2 혹은 3개의 R3으로 임의로 치환된 :
    Figure pct00059
    ,
    Figure pct00060
    ,
    Figure pct00061
    ,
    Figure pct00062
    ,
    Figure pct00063
    에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  12. 청구항11에 있어서,
    A는
    Figure pct00064
    ,
    Figure pct00065
    ,
    Figure pct00066
    ,
    Figure pct00067
    ,
    Figure pct00068
    ,
    Figure pct00069
    에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  13. 청구항12에 있어서,
    A는
    Figure pct00070
    ,
    Figure pct00071
    ,
    Figure pct00072
    ,
    Figure pct00073
    ,
    Figure pct00074
    에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  14. 청구항10 또는 13에 있어서,
    A는
    Figure pct00075
    ,
    Figure pct00076
    ,
    Figure pct00077
    ,
    Figure pct00078
    ,
    Figure pct00079
    ,
    Figure pct00080
    ,
    Figure pct00081
    ,
    Figure pct00082
    에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  15. 청구항1에 있어서,
    Figure pct00083

    Figure pct00084

    에서 선택되는 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염.
  16. 유효치료량의 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항의 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염과 약학적으로 수용 가능한 담체를 포함하는 약물 조성물.
  17. 종양치료약물 제조에서의 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항의 화합물 혹은 그의 약학적으로 수용 가능한 염 혹은 청구항 16의 약물조성물의 용도.
KR1020197014236A 2016-10-27 2017-10-27 c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물 KR102070748B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610954377.X 2016-10-27
CN201610954377 2016-10-27
PCT/CN2017/107964 WO2018077227A1 (zh) 2016-10-27 2017-10-27 作为c-MET抑制剂的吡啶酮类化合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190058678A true KR20190058678A (ko) 2019-05-29
KR102070748B1 KR102070748B1 (ko) 2020-01-29

Family

ID=62024383

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197014236A KR102070748B1 (ko) 2016-10-27 2017-10-27 c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물

Country Status (28)

Country Link
US (1) US10501443B2 (ko)
EP (1) EP3533787B1 (ko)
JP (1) JP6719679B2 (ko)
KR (1) KR102070748B1 (ko)
CN (1) CN109311812B (ko)
AU (1) AU2017348810B2 (ko)
BR (1) BR112019008415B1 (ko)
CA (1) CA3041164C (ko)
CO (1) CO2019005165A2 (ko)
DK (1) DK3533787T3 (ko)
EA (1) EA038108B1 (ko)
ES (1) ES2835301T3 (ko)
HR (1) HRP20201985T1 (ko)
HU (1) HUE051734T2 (ko)
IL (1) IL266126B (ko)
LT (1) LT3533787T (ko)
MX (1) MX2019004626A (ko)
MY (1) MY189557A (ko)
PE (1) PE20190912A1 (ko)
PH (1) PH12019500875A1 (ko)
PL (1) PL3533787T3 (ko)
PT (1) PT3533787T (ko)
RS (1) RS61126B1 (ko)
SG (1) SG11201903801YA (ko)
SI (1) SI3533787T1 (ko)
UA (1) UA122737C2 (ko)
WO (1) WO2018077227A1 (ko)
ZA (1) ZA201903074B (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3786155B1 (en) * 2018-04-26 2023-08-16 Fujian Akeylink Biotechnology Co., Ltd. Crystal form of c-met inhibitor and salt form thereof and preparation method therefor
JP7214879B2 (ja) * 2019-02-01 2023-01-30 メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド ｃ－Ｍｅｔ阻害剤としてのピリミジニルを含むトリシクリル系化合物
WO2022063869A2 (en) 2020-09-24 2022-03-31 Merck Patent Gmbh Compounds for the treatment of viral infections
EP4346829A1 (en) 2021-06-04 2024-04-10 Merck Patent GmbH Compounds for the treatment of glioblastoma

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110098854A (ko) * 2008-12-23 2011-09-01 메르크 파텐트 게엠베하 피리다지논 유도체
KR20140138984A (ko) * 2012-03-19 2014-12-04 메르크 파텐트 게엠베하 항암 활성을 갖는 6-옥소-1,6-디히드로-피리다진 유도체와 기타 항종양 화합물과의 조합
KR20150067343A (ko) * 2012-10-11 2015-06-17 메르크 파텐트 게엠베하 항암 활성을 갖는 6-옥소-1,6-디히드로-피리다진 유도체와 ｍｅｋ 억제제와의 조합
WO2016091347A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-16 Merck Patent Gmbh Combination of a 6-oxo-1,6-dihydro-pyridazine derivative having anti-cancer activity with a quinazoline derivative

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002002519A2 (en) * 2000-06-29 2002-01-10 Bristol-Myers Squibb Pharma Company THROMBIN OR FACTOR Xa INHIBITORS
CN1930126A (zh) * 2004-03-05 2007-03-14 万有制药株式会社 吡啶酮衍生物
WO2008103277A2 (en) 2007-02-16 2008-08-28 Amgen Inc. Nitrogen-containing heterocyclyl ketones and their use as c-met inhibitors
DE102007032507A1 (de) 2007-07-12 2009-04-02 Merck Patent Gmbh Pyridazinonderivate
EP2768826A1 (de) 2011-10-17 2014-08-27 Bayer Intellectual Property GmbH Substituierte oxadiazolylpyridinone und - pyridazinone als hif - hemmer

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110098854A (ko) * 2008-12-23 2011-09-01 메르크 파텐트 게엠베하 피리다지논 유도체
KR20140138984A (ko) * 2012-03-19 2014-12-04 메르크 파텐트 게엠베하 항암 활성을 갖는 6-옥소-1,6-디히드로-피리다진 유도체와 기타 항종양 화합물과의 조합
KR20150067343A (ko) * 2012-10-11 2015-06-17 메르크 파텐트 게엠베하 항암 활성을 갖는 6-옥소-1,6-디히드로-피리다진 유도체와 ｍｅｋ 억제제와의 조합
WO2016091347A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-16 Merck Patent Gmbh Combination of a 6-oxo-1,6-dihydro-pyridazine derivative having anti-cancer activity with a quinazoline derivative

Also Published As

Publication number Publication date
IL266126A (en) 2019-06-30
EP3533787A1 (en) 2019-09-04
AU2017348810A1 (en) 2019-05-23
KR102070748B1 (ko) 2020-01-29
PL3533787T3 (pl) 2021-03-08
JP6719679B2 (ja) 2020-07-08
CN109311812B (zh) 2020-03-17
SI3533787T1 (sl) 2021-01-29
ZA201903074B (en) 2020-01-29
SG11201903801YA (en) 2019-05-30
HUE051734T2 (hu) 2021-03-29
PH12019500875A1 (en) 2019-06-17
US10501443B2 (en) 2019-12-10
BR112019008415A2 (pt) 2019-07-09
AU2017348810B2 (en) 2020-05-07
PT3533787T (pt) 2020-11-20
CA3041164C (en) 2019-12-17
MX2019004626A (es) 2019-11-08
NZ753020A (en) 2021-08-27
JP2019535806A (ja) 2019-12-12
EA038108B1 (ru) 2021-07-07
UA122737C2 (uk) 2020-12-28
CN109311812A (zh) 2019-02-05
BR112019008415B1 (pt) 2020-09-29
IL266126B (en) 2020-07-30
HRP20201985T1 (hr) 2021-02-05
PE20190912A1 (es) 2019-06-26
CO2019005165A2 (es) 2019-05-31
MY189557A (en) 2022-02-16
EP3533787B1 (en) 2020-09-30
ES2835301T3 (es) 2021-06-22
DK3533787T3 (da) 2020-11-30
CA3041164A1 (en) 2018-05-03
EP3533787A4 (en) 2019-11-13
RS61126B1 (sr) 2020-12-31
WO2018077227A1 (zh) 2018-05-03
EA201990952A1 (ru) 2019-11-29
US20190248763A1 (en) 2019-08-15
LT3533787T (lt) 2020-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2866152T3 (es) Derivados de tirosina amida como inhibidores de la Rho-quinasa
CN108349940B (zh) 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
WO2020094104A1 (zh) 一类含氮稠杂环类shp2抑制剂化合物、制备方法和用途
US9181264B2 (en) Fused heteroaryls and their uses
CN110494433B (zh) 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
KR20170023156A (ko) 단백질 키나제 저해제로서의 아미노피리다지논 화합물
CN112469720B (zh) 用于抗肿瘤疗法中的双重atm和dna-pk抑制剂
JP2021504317A (ja) ハロアリルアミン類のｓｓａｏ／ｖａｐ−１阻害剤とその用途
TWI628180B (zh) 作為ＰＩ３Ｋ抑制劑的吡啶并［１，２－ａ］嘧啶酮類似物
KR102070748B1 (ko) c-MET 억제제로서의 피리돈계　화합물
JP7328263B2 (ja) 免疫調節化合物
ES2906205T3 (es) Inhibidor de Syk y método de uso para el mismo
KR20190017959A (ko) TGF-βRI 억제제인 벤조트리아졸에서 유도된 α,β-불포화 아미드계 화합물
JP2021536436A (ja) キノリン誘導体から調製される新規な阻害剤
JP7357146B2 (ja) アザヘテロアリール化合物及びその使用
JP6646044B2 (ja) キナーゼ阻害剤としての化合物および組成物
KR20230145360A (ko) 4-아미노퀴나졸린 화합물
BR112020008991A2 (pt) compostos de piridopirimidina que atuam como inibidores duais de mtorc 1/2
TW202334167A (zh) 作為ｅｒｂｂ２抑制劑之稠合四環喹唑啉衍生物
TWI652265B (zh) 氮雜吲哚衍生物
WO2023077259A1 (en) Fused tetracyclic quinazoline derivatives as inhibitors of erbb2
NZ753020B2 (en) Pyridone compound as c-met inhibitor
WO2023036156A1 (zh) Dna-pk选择性抑制剂及其制备方法和用途
WO2024044713A1 (en) Naphthyridine compounds for inhibition of raf kinases
CN117597346A (zh) Nek7抑制剂

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant