CN104610214B - 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法 - Google Patents

一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104610214B
CN104610214B CN201310539312.5A CN201310539312A CN104610214B CN 104610214 B CN104610214 B CN 104610214B CN 201310539312 A CN201310539312 A CN 201310539312A CN 104610214 B CN104610214 B CN 104610214B
Authority
CN
China
Prior art keywords
radix euphorbiae
methanol
column chromatography
peaceful
chloroform
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201310539312.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104610214A (zh
Inventor
肖红斌
王志鑫
高明哲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Institute of Chemical Physics of CAS
Original Assignee
Dalian Institute of Chemical Physics of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Institute of Chemical Physics of CAS filed Critical Dalian Institute of Chemical Physics of CAS
Priority to CN201310539312.5A priority Critical patent/CN104610214B/zh
Publication of CN104610214A publication Critical patent/CN104610214A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104610214B publication Critical patent/CN104610214B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/42—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms in positions 2 and 4
    • C07D311/44—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms in positions 2 and 4 with one hydrogen atom in position 3
    • C07D311/54—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms in positions 2 and 4 with one hydrogen atom in position 3 substituted in the carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/32—2,3-Dihydro derivatives, e.g. flavanones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/40—Separation, e.g. from natural material; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明涉及一种快速制备瑞香狼毒中6种高纯化合物（异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)‑狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A）的新工艺。以瑞香狼毒药材95%乙醇提取物为原料，经正相硅胶柱层析、反相ODS柱层析初步分离富集，以制备型高效液相色谱为最终分离手段，通过一步高效液相制备，收集相应流份直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98%的化合物。本发明工艺步骤简单，产品纯度高、色泽好，非常适合大规模生产。

Description

一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法
技术领域
本发明涉及一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的新工艺。主要包括正、反相柱层析分离富集以及快速的高效液相色谱除杂制备。化合物1（异西瑞香素）为双香豆素，化合物2（雁皮素B）、3（雁皮素C）、4（(+)-狼毒宁B）、5（异狼毒宁B）、6（异狼毒宁A）为双二氢黄酮。其中，化合物1为狼毒属植物中首次制备，化合物2、6为该类双二氢黄酮的新异构体。这6种化合物的化学结构分别如下：
背景技术
瑞香狼毒（Stellerachamaejasme L.）系瑞香科狼毒属植物，俗名断肠草，分布于中、俄、蒙、朝等国，在我国主要产自北方各省区及西南地区，生于海拔2600～4200米干燥而向阳的高山草坡、草坪或河滩台地。其味苦辛，性平，有大毒，入肺脾肝经，根入药，有逐水祛痰、破积杀虫之功效。现代药理学研究表明瑞香狼毒具有很好的抗肿瘤活性，最新研究还发现其具有抗病毒、抗菌、抗惊厥和免疫调节等作用。目前，从瑞香狼毒中分离鉴定出的化学成分主要有二萜类、倍半萜类、黄酮类、香豆素类、木脂素和苯丙素苷类等，其中，黄酮类多为双二氢黄酮，是该药材的指标性化学成分，也是其主要活性成分之一。雁皮素C（化合物3）对恶性疟原虫氯喹耐药性株具有明显的杀除作用，其IC50值可达0.56μg/ml（Nunome S,etal.PLANTA MED,2004,70(1)）；（+）-狼毒宁B（化合物4）在体外能够抑制多种肿瘤细胞的增殖，对人肺腺癌细胞A549的IC50值可达1.08μmol/L（Zhang C，et al.ACTA PHARMACOL SIN，2013，34（2））；异狼毒宁B（化合物5）显示较强的抗真菌和抗有丝***活性，对稻瘟霉的MIC值为6.25μg/mL（Yang G，et al.CHEM PHARM BULL，2005，53（7））；对化合物2、6的分离制备和药理研究还未见报道。另外，作为质控指标成分，必须有大量可用的化学对照品供应，但目前市场上对包括这6种化合物在内的香豆素和双二氢黄酮类对照品鲜有提供。因此，对瑞香狼毒药材中这6种化合物同时、高效制备方法的研究具有重要意义。
发明内容
本发明在前期研究瑞香狼毒化学成分***分离分析的基础上，提供了一种快速制备瑞香狼毒药材中6种化合物（异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A）的新工艺。以瑞香狼毒药材为原料，经正相硅胶柱层析、反相ODS柱层析初步分离富集，以制备型高效液相色谱为最终分离手段，通过一步高效液相制备，收集含各化合物的流份直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98%的化合物。具体步骤如下：
（1）正相硅胶柱层析：
取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。
（2）反相ODS柱层析：
将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μmODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。
（3）高效液相色谱制备：
将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为50～100mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；滤液采用柱长25-50cm、直径2-10cm的高效液相制备色谱柱进行分离，每次进样体积为0.5～2.5ml，以体积浓度70%～80%甲醇-水或45%～55%乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在10～100ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品。
上述方法中，高效液相制备柱的填料为C18键合相，其粒径为5～10μm，紫外检测波长优选295nm，具体检测波长根据样品中目标化合物信号的超载情况而定。
本发明从瑞香狼毒材中同时制备6种化合物（1种双香豆素，5种双二氢黄酮），具有如下优点和进步：
①本发明采用三步法，先通过正、反相两步柱层析对目标化合物进行初步富集，然后采用一步高效液相制备方法分别进行除杂和精制，工艺较简单。
②本发明以制备型高效液相为最后分离手段，分离效率高，可以保证对照品的纯度。
③本发明发展的高效液相制备方法为快速制备方法，单针分离时间在40-60分钟之间，非常适合大批量化学对照品的制备；同时加上制备溶剂的回收再利用，可降低批量制备的成本。
④本发明采用紫外检测器在线检测，对各个对照品的分离情况可直接观察，可直接选择性收集高纯度样品，从而实现纯度保证下的高回收率。
总之，本发明工艺步骤简单，产品纯度高、色泽好，非常适合大规模生产。
附图说明
图1为瑞香狼毒药材二级粗分物及6种化合物（异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B、异狼毒宁A）的HPLC分析谱图（295nm），
图1a：为二级粗分物图；
图1b：为异西瑞香素图；
图1c：为雁皮素B图；
图1d：为雁皮素C图；
图1e：为(+)-狼毒宁B图；
图1f：为异狼毒宁B图；
图1g：为异狼毒宁A图。
其积分报告分别如下：
Name Retention Time Area %Area
1 - 4.39 36.5 1.77
2 异西瑞香素 6.21 2030.1 98.23
Name Retention Time Area %Area
1 - 4.37 63 0.66
2 雁皮素B 14.64 9523.4 99.34
Name Retention Time Area %Area
1 雁皮素C 16.21 6040.6 99.25
2 - 18.34 45.4 0.75
Name Retention Time Area %Area
1 - 4.37 124.2 0.60
2 (+)-狼毒宁B 28.50 20530.6 99.40
Name Retention Time Area %Area
1 - 4.37 185.6 1.01
2 异狼毒宁B 36.65 18280.2 98.99
Name Retention Time Area %Area
1 - 4.37 254.6 1.28
2 异狼毒宁A 45.11 19579.1 98.72
（HPLC条件：色谱柱为江申Chromatorex C18（4.6×250mm，10μm），柱温30℃，流速1ml/min，进样体积5μl，流动相为：0～60min，50%乙腈-水）。
具体实施方式
现结合实施例和附图对本发明做进一步详细说明，实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
实施例1
本实施例中，以瑞香狼毒药材95%（体积浓度，下同）乙醇提取物为原料，第一步正相柱层析采用200～300目硅胶，第二步反相柱层析采用40～50μm ODS，第三步高效液相色谱制备采用5μm C18键合相制备柱，采用体积浓度75%的甲醇-水溶液为洗脱体系，经三步分离即获得6种化合物纯品。具体工艺步骤如下：
（1）正相硅胶柱层析：取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1（体积比，下同）、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。
（2）反相ODS柱层析：将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水（体积浓度，下同）洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。
（3）高效液相色谱制备：将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为50mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；色谱柱为Chromatorex C18制备柱，粒径5μm，尺寸250×20mm；进样体积为0.5ml，以体积浓度为75%的甲醇-水溶液（体积浓度，下同）为洗脱体系，流速控制在20ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种淡棕色粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品（质量依次约1.5mg，3.6mg，1.5mg，6.0mg，5.2mg，6.6mg）。
实施例2
本实施例中，以瑞香狼毒药材95%乙醇提取物为原料，第一步正相柱层析采用200～300目硅胶，第二步反相柱层析采用40～50μm ODS，第三步高效液相色谱制备采用10μmC18键合相制备柱，采用50%的乙腈-水溶液为洗脱体系，经三步分离即获得6种化合物纯品。具体工艺步骤如下：
（1）正相硅胶柱层析：取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。
（2）反相ODS柱层析：将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。
（3）高效液相色谱制备：将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为60mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；色谱柱为Chromatorex C18制备柱，粒径10μm，尺寸300×50mm；进样体积为1ml，以体积浓度为50%的乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在40ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种淡棕色粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品（质量依次约3.6mg，8.6mg，3.6mg，14.4mg，12.4mg，15.5mg）。
实施例3
本实施例中，以瑞香狼毒药材95%乙醇提取物为原料，第一步正相柱层析采用200～300目硅胶，第二步反相柱层析采用40～50μm ODS，第三步高效液相色谱制备采用5μm C18键合相制备柱，采用70%的甲醇-水溶液为洗脱体系，经三步分离即获得6种化合物纯品。具体工艺步骤如下：
（1）正相硅胶柱层析：取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。
（2）反相ODS柱层析：将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。
（3）高效液相色谱制备：将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为70mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；色谱柱为Chromatorex C18制备柱，粒径5μm，尺寸500×60mm；进样体积为1.4ml，以体积浓度为70%甲醇-水溶液为洗脱体系，流速控制在60ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种淡棕色粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品（质量依次约5.8mg，14.1mg，5.8mg，23.5mg，20.4mg，25.8mg）。
实施例4
本实施例中，以瑞香狼毒药材95%乙醇提取物为原料，第一步正相柱层析采用200～300目硅胶，第二步反相柱层析采用40～50μm ODS，第三步高效液相色谱制备采用10μmC18键合相制备柱，采用45%乙腈-水溶液为洗脱体系，经三步分离即获得6种化合物纯品。具体工艺步骤如下：
（1）正相硅胶柱层析：取瑞香狼毒药材95%乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物。
（2）反相ODS柱层析：将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱（柱长40cm，内径8cm），中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以15%、30%、45%、60%、70%甲醇-水洗脱，收集70%甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物。
（3）高效液相色谱制备：将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为80mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；色谱柱为Chromatorex C18制备柱，粒径10μm，尺寸600×80mm；进样体积为1.8ml，以体积浓度为45%乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在90ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物1、2、3、4、5、6的流份，负压干燥得6种淡棕色粉末，即为纯度大于98%的化合物1、2、3、4、5、6纯品（质量依次约8.6mg，20.7mg，8.6mg，34.5mg，29.9mg，38.0mg）。
上述6种化合物的物理参数及结构鉴定结果如下：
化合物1，白色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：205，350。MS（+ESI）m/z：353.068（[M+H]+）。分子量352，分子式为C19H12O7。该化合物鉴定为异西瑞香素。
化合物2，淡棕色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：215，295。CD（c=0.1mg/ml，MeOH）未出峰。MS（+ESI）m/z：557.148（[M+H]+）。分子量556，分子式为C31H24O10。该化合物为新异构体，命名为雁皮素B。
化合物3，淡棕色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：215，295。CD（c=0.1mg/ml，MeOH）未出峰。MS（+ESI）m/z：557.148（[M+H]+）。分子量556，分子式为C31H24O10。该化合物鉴定为雁皮素C。
化合物4，淡棕色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：215，295。CD（c=0.1mg/ml，MeOH）-4.2（346），0（325），+13.8（302），+1.0（274），+3.2（253），0（240），-2.7（233），-0.3（225），-7.3（217）。MS（+ESI）m/z：571.165（[M+H]+）。分子量570，分子式为C32H26O10。该化合物鉴定为（+）-狼毒宁B。
化合物5，淡棕色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：215，295。CD（c=0.2mg/ml，MeOH）未出峰。MS（+ESI）m/z：571.165（[M+H]+）。分子量570，分子式为C32H26O10。该化合物鉴定为异狼毒宁B。
化合物6，淡棕色粉末。UV（MeOH，）λmax nm：215，295。CD（c=0.1mg/ml，MeOH）-13.0(309)，0(299)，+19.4(286)，0(260)，-1.1(254)，0(247)，+1.6(241)，0(234)，-14.1(217)。MS（+ESI）m/z：571.165（[M+H]+）。分子量570，分子式为C32H26O10。该化合物为新异构体，命名为狼毒宁A。
各化合物的NMR氢谱、碳谱数据见下表：
注：1.溶剂为DMSO-d6。2.na表示信号未出现或不明显。

Claims (4)

1.一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法，其特征在于：以瑞香狼毒药材体积浓度为95％乙醇提取物为原料，依次经正相硅胶柱层析、反相ODS柱层析初步分离富集，最后通过一步高效液相色谱制备，收集含各化合物的流份，分别直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98％的6种化合物；它们分别为异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A,其中结构式为
(1)正相硅胶柱层析：
取瑞香狼毒药材体积浓度为95％乙醇提取浸膏，以氯仿、甲醇中的一种或两种的混合液溶解，在不断搅拌下，加入与浸膏等质量的200～300目柱层析硅胶，拌样，常温下充分晾干；之后干法上样，常压下过200～300目硅胶柱，依次以氯仿、氯仿-甲醇体积浓度比为100：1、氯仿-甲醇50：1、氯仿-甲醇20：1洗脱，收集氯仿-甲醇20：1流份，负压浓缩回收溶剂后，得一级粗分物；
(2)反相ODS柱层析：
将上述一级粗分物以甲醇溶解后，加入与一级粗分物等质量的粒径为40～50μm ODS柱层析填料拌样，常温下充分晾干并处理成粉状；之后干法上样，过40～50μm ODS层析柱，其中柱长40cm，内径8cm，中压泵加压，压力为5～10MPa，流量控制在50～100ml/min，依次以体积浓度为15％、30％、45％、60％、70％甲醇-水洗脱，收集70％甲醇-水流份，负压浓缩回收溶剂后，得二级粗分物；
(3)高效液相色谱制备：
将上述二级粗分物以DMSO溶解，配制成浓度为50～100mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；滤液采用柱长25-50cm、直径2-10cm的高效液相制备色谱柱进行分离，每次进样体积为0.5～2.5ml，以体积浓度70％～80％甲醇-水或45％～55％乙腈-水溶液为洗脱体系，流速控制在10～100ml/min，在线紫外检测，检测波长设定为295nm，分别收集含有化合物异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A的流份，负压干燥得6种粉末，即分别为纯度大于98％的化合物异西瑞香素、雁皮素B、雁皮素C、(+)-狼毒宁B、异狼毒宁B和异狼毒宁A纯品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第一步正相柱分离所采用的填料为200～300目柱层析硅胶；第二步反相柱分离所采用的填料为40～50μm柱层析ODS。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第三步高效液相制备过程采用的制备柱填料为C18键合相填料，粒径为5～10μm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：高效液相制备过程采用采用在线紫外检测，其检测波长295nm。
CN201310539312.5A 2013-11-04 2013-11-04 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法 Expired - Fee Related CN104610214B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310539312.5A CN104610214B (zh) 2013-11-04 2013-11-04 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310539312.5A CN104610214B (zh) 2013-11-04 2013-11-04 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104610214A CN104610214A (zh) 2015-05-13
CN104610214B true CN104610214B (zh) 2017-02-08

Family

ID=53144900

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310539312.5A Expired - Fee Related CN104610214B (zh) 2013-11-04 2013-11-04 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104610214B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111574348B (zh) * 2020-06-15 2022-10-25 浙江诚意药业股份有限公司 一种维生素k1的纯化工艺
CN112940056B (zh) * 2021-02-03 2023-02-03 上海诗丹德标准技术服务有限公司 苦番红花素的对照品的制备方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100439362C (zh) * 2003-11-20 2008-12-03 周乐 瑞香狼毒中新狼毒素b的提取分离方法及其应用
CN102060827A (zh) * 2010-12-30 2011-05-18 苏州瑞蓝博中药技术开发有限公司 一种从瑞香狼毒中提取新狼毒素b的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104610214A (zh) 2015-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102796066B (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN104262129B (zh) 一种纳豆枯草芽孢杆菌以及由该菌株提纯维生素甲萘醌-7的方法
CN105884621B (zh) 一种倍半萜类化合物及其制备方法和应用
CN105131077B (zh) 从破壁灵芝孢子粉中提取过氧麦角甾醇的方法
CN103145677B (zh) 一种利用高速逆流色谱分离白木香叶片中活性成分的方法
CN101353363B (zh) 高速逆流色谱分离纯化罗汉果叶黄酮化合物的方法及产品
CN105566414B (zh) 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法
CN101863935B (zh) 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法
CN108017530A (zh) 一种从菌渣中连续分离辅酶q10的方法
CN104610214B (zh) 一种快速制备瑞香狼毒中6种化合物的方法
CN102627679A (zh) 一种从广金钱草中制备夏佛塔苷的方法
CN101941961B (zh) 一种从凤仙花中提取分离山奈酚的方法
CN107903291A (zh) 一种从防风中提取的色原酮苷类化合物及其方法和应用
CN102977065B (zh) 一种黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN105330710B (zh) 一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的方法
CN100434148C (zh) 大孔吸附树脂-反渗透膜联用分离纯化有机化合物的制备工艺
CN102260307A (zh) 一种特女贞苷的制备方法
CN106916162B (zh) 一种岩大戟内酯b原料药的制备方法
CN104892708B (zh) 从黄绿蜜环菌子实体规模化制备腺苷化学对照品的方法
CN101863939A (zh) 一种沙苑子苷a的制备方法
CN105131063B (zh) 从全缘叶绿绒蒿花中同时分离纯化多种黄酮类成分的方法
CN102977059A (zh) 一种苯丙素化合物及其制备方法与应用
CN104262231B (zh) 从白刺种子中提取分离l-色氨酸的方法
CN109081858A (zh) 唐古特虎耳草中黄酮类化合物的定向分离纯化方法
CN102108072B (zh) 从当归提取物中制备洋川芎内酯i的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20170208

Termination date: 20201104