本申请要求2008年4月7日递交的美国临时申请序列号61/043,111和2008年11月19日递交的美国临时申请序列号61/116,023的优先权,在此将它们全部引入作为参考。
发明内容
本发明涉及新的嘧啶衍生物及其药物组合物,以及它们作为药物的用途。
一方面,本发明提供了式(1)或(2)化合物或其生理可接受的盐:
R1和R2彼此独立地是H、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R3是卤素、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R4是H;
或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起可形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选地被1-2个R10基团所取代的5-6元环,其中R10是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、任选取代的苯基或NR2;
R5、R6和R8彼此独立地是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基、氰基、CR(OR17)R17、OR17、NR(R17)、CR(R17)NRR17、(CR2)qY、C(O)O0-1R17、C(O)NR(R17)、C(O)CRR17-NR(R17)、C(O)NR(CR2)pNR(R17)、C(O)NR(CR2)pOR17、C(O)NR(CR2)pSR17、C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、S(O)0-2R18、(CR2)1-6NR(CR2)pOR17、(CR2)1-6NR(CR2)qC(O)R18、S(O)2NRR17、S(O)2NR(CR2)pNR(R17)或S(O)2NR(CR2)pOR17;其中R8可在稠环的任何位置上;
R7是S(O)0-2R19、S(O)2NRR20或C(O)NR(R20);其中R19和R20彼此独立地是C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基或C3-7环烷基;或R20是H;
各R9彼此独立地是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-C(O)-CR(R17)-NRR17、-L-C(O)-NR-(CR2)p-NRR17、-L-C(O)NR(CR2)pOR17、-L-C(O)-(CR2)q-NR-C(O)-R18、-L-C(O)NR(CR2)pSR17、-L-C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、(CR2)pNR(CR2)pOR17或(CR2)pNR-L-C(O)R18、-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地选自H或C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;或R11和R12、R12和R15、R15和R16、R13和R14或R13和R15与它们所连接的碳和/或氮原子一起可形成3-7元饱和、不饱和或部分不饱和环,该环任选地含有最多3个选自C(O)、N、O和S(O)0-2的原子或基团;
L是(CR2)1-4或键;
R17和R18彼此独立地是C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基;或R17是H;
Y是C3-12碳环、C6-10芳基;或5-10元杂芳基或4-10元杂环;它们均任选地被1-3个R6基团所取代;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;并且
q是0-4。
在一个实施方案中,本发明提供了式(2A)化合物:
其中R3是卤素;
R7是S(O)0-2R19;
R8是甲氧基、乙氧基或异丙氧基;
R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R1、R2、R4、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、L和p如式(1)或(2)中所定义。
在某些实施例中,本发明提供了式(3)化合物:
其中R3是卤素;
或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起可形成含有1-3个N杂原子并且任选地被1-2个R10基团所取代的5-6元环;
R5a和R5b彼此独立地是卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷氧基;
R7是S(O)0-2R19;
R1、R2、R9、R10和R19如式(1)或(2)中所定义。
在以上式(3)的一个具体实施方案中,R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1)其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、L和p如式(1)或(2)中所定义。
在另一个具体的实施方案中,本发明提供了式(3A)、(3B)、(3C)或(3D)化合物:
其中R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R10b、R10e、R10f和R10h彼此独立地是H或C1-6烷基;
R10a、R10c、R10d和R7g彼此独立地是H、卤素、C1-6烷基、NR2或任选取代的苯基;并且
R1、R2、R7、R9和R如式(1)或(2)中所定义。
在上式(3A)、(3B)、(3C)或(3D)中的任一个中,R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15、R16、L和p如上所定义;并且
R17和R18彼此独立地是C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;或者R17是H。
另一方面,本发明提供了式(4)或(5)化合物或其生理可接受的盐:
Z是NR9a或O;
R1和R2彼此独立地是H、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R3和R4与它们所连接的碳原子一起形成选自下组的环
R5a和R5b彼此独立地是卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷氧基;
R7是S(O)0-2R19、S(O)2NRR20或C(O)NR(R20);其中R19和R20彼此独立地是C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;或R20是H;
各R9a彼此独立地是H、C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基;-(CR2)p-OR17、-L-C(O)-R17、-C(O)O-R17或-L-C(O)-NRR17;其中R和R17与NRR17中的N一起可形成任选地含有O或S的5-6元环;
L是(CR2)1-4或键;
R17和R18彼此独立地是苄基、任选地被卤素取代的C1-6烷基或任选地被C1-6烷基或卤素取代的C3-7环烷基;或R17是H;
R21、R22、R24、R27和R29彼此独立地是H或C1-6烷基;
R23、R25、R26和R28彼此独立地是H、C1-6烷基、NR2或卤素;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;并且
条件是R22和R23不都是H;R24、R25和R26不都是H;并且R27和R28不都是H。
在某些实施例中,本发明提供了式(4)或(5)化合物,其中R9a是H、C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基。
在上式(1)、(2)、(2A)、(3)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)中的任一个中,R1和R2可以是H。
另一方面,本发明提供了合成式(6)化合物或其可药用盐的方法
其中W是含1-3个氮原子的5-6元环;
R5是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基、氰基、CR(OR17)R17、OR17、NR(R17)、CR(R17)NRR17、(CR2)qY、C(O)O0-1R17、C(O)NR(R17)、C(O)CRR17-NR(R17)、C(O)NR(CR2)pNR(R17)、C(O)NR(CR2)pOR17、C(O)NR(CR2)pSR17、C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、S(O)0-2R18、(CR2)1-6NR(CR2)pOR17、(CR2)1-6NR(CR2)qC(O)R18、S(O)2NRR17、S(O)2NR(CR2)pNR(R17)或S(O)2NR(CR2)pOR17;
R17和R18彼此独立地是(CR2)qY或C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被下列基团取代:卤素、氨基、酰氨基、羟基、烷氧基、氰基、羧基或Y;或R17是H;
R19是C1-6烷基;
Y是C3-12碳环、C6-10芳基;或5-10元杂芳基或4-10元杂环;它们均任选地被1-3个R5基团所取代;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;
q是0-4;
该方法包括:a)将式(6a)的试剂与式(6b)的试剂或其可药用盐
在足以形成式(6c)的中间体的条件下相接触;
b)将所述的式(6c)的中间体与氧化剂相接触以形成式(6d)的中间体;
其中X1和X2是离去基;然后
c)将所述的式(6d)的中间体与式(6e)的试剂或其可药用盐
在足以形成式(6)化合物或其可药用盐的条件下相接触。
在一个实施方案中,本发明提供了合成式(6f)、(6g)、(6h)或(6i)化合物的方法:
其中R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R10a、R10b、R10c、R10d、R10e、R10f、R10g和R10h彼此独立地是H、卤素、C1-6烷基、NH2、卤素或任选取代的苯基;并且
各R19如上式(6)所定义。
在本发明的方法中,所述的式(6e)的试剂可通过以下方法合成:i)将式(7)的试剂与烷基化剂相接触以形成式(8)的中间体,
然后
ii)将所述的式(8)的中间体还原以形成式(6e)的试剂;其中R5和R19如上式(6)所定义。
在某些实施例中,烷基化剂是对甲苯磺酸甲酯。在其它实施例中,将烷基化的式(6)化合物通过氢化还原。
另一方面,本发明还提供了包含式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)的化合物和生理可接受的载体的药物组合物,并且任选地与第二种治疗剂例如抗过度增殖剂联合。
另一方面,本发明提供了用于抑制细胞内的选自Ros、IGF-1R、InsR和间变性淋巴瘤激酶的激酶的方法,该方法包括将细胞与有效量的式(1)、(2)、(2A)、(3)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)化合物或其药物组合物相接触。
本发明还提供了在患有该类疾病的个体中治疗、改善或预防对抑制Ros、IGF-1R、InsR或ALK有响应的病症的方法,该方法包括向所述的个体施用有效量的式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)化合物或其可药用盐或药物组合物,任选地联合第二种治疗剂,由此治疗所述的病症。此外,本发明还提供了式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)化合物在制备用于治疗由Ros、IGF-1R、InsR或ALK所介导的病症的药物中的用途。在具体的实施方案中,本发明的化合物可以单独或与第二种治疗剂联合以治疗由Ros、IGF-1R、InsR或ALK介导的病症,其中所述病症是自身免疫疾病、移植疾病、感染性疾病或细胞增殖性病症。
此外,本发明提供了在患病的给体中治疗细胞增殖性病症的方法,包括向所述的个体施用有效量的式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)化合物或其可药用盐或其药物组合物,任选联合第二种治疗剂,从而治疗所述病症。此外,本发明还提供了式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)化合物在制备用于治疗细胞增殖性病症的药物中的用途。在具体实例中,本发明化合物可单独或与化疗剂联合使用以治疗细胞增殖性病症,包括但不限于多发性骨髓瘤、神经母细胞瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、肉瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤、尤文氏肉瘤、肝细胞瘤、胃肠道基质肿瘤或***、肾、***、结直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、肺、子宫、呼吸道、脑、消化道、泌尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头和颈、甲状腺或甲状旁腺的固体肿瘤。
定义
“烷基”指的是一个基团或其他基团例如卤素取代的烷基和烷氧基的结构元素,且可以是直链或支链的。本文所用的任选取代的烷基、链烯基或炔基可以任选被卤代(例如CF3),或者可以具有一个或多个被杂原子如NR、O或S取代或替代的碳(例如-OCH2CH2O-、烷硫醇、硫代烷氧基、烷基胺类等)。
“芳基”指的是含有碳原子的单环或稠和双环芳族环。“亚芳基”意指衍生自芳基的二价基团。例如,芳基可以是苯基、茚基、茚满基、萘基或1,2,3,4-四氢萘基,其可任选在邻位、间位或对位取代。
本文所用的“杂芳基”如以上对芳基所定义,其中一个或多个环成员是杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、
唑基、异
唑基、***基、苯并***基、四唑基、吡唑基、噻吩基、吡咯基、异喹啉基、嘌呤基、噻唑基、四嗪基、苯并噻唑基、
二唑基、苯并
二唑基等。
本文所用的“碳环”指的是含有碳原子的饱和或部分不饱和的、单环、稠和双环或桥接多环,其可任选被例如=O取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙烯、环己酮等。
本文所用的“杂环”如以上对于碳环所定义,其中一个或多个环碳原子是杂原子。例如,杂环可含有N、O、S、-N=、-S-、-S(O)、-S(O)2-或-NR-,其中R可以是氢、C1-4烷基或保护基。杂环的实例包括但不限于吗啉-4-基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-8-基、1,2,3,4-四氢喹啉基等。本文所用的杂环可以包括双环胺和双环二胺。
本文所用的任何取代基(例如CH2)中的H原子包括所有适当的同位素变体例如H、2H和3H。
本文所用的离去基是以稳定物种的形式被替换的带有成键电子的原子(或原子的基团)。离去基通常是阴离子(例如Cl-)或中性分子(例如H2O)。适当的离去基包括但不限于卤素、烷氧基、烷硫基、芳氧基、甲苯磺酰基和芳硫基。本领域技术人员知晓适用于本发明的其它离去基。
本文所用的氧化剂是可转移氧原子的化合物。常用的氧化剂包括但不限于高氯酸盐、氯酸盐、亚氯酸盐、次氯酸盐、碘和其它卤素、过氧化物、亚砜、过硫酸、六价铬化合物例如三价铬和二价铬酸和三氧化铬、吡啶氯铬酸盐(PCC)和铬酸盐/重铬酸盐化合物、过硼酸盐等。本领域技术人员知晓适用于本发明的其它氧化剂。
本文所用的烷基化剂是可转移烷基的化合物,并且包括亲核性烷基化剂、亲电性烷基化剂、游离基烷基化剂或卡宾烷基化剂。
本文所用的氢化是指导致氢的加成的化学反应。氢化通常用于还原或饱和不饱和有机化合物。该反应通常在催化剂、例如铂族金属的存在下进行;非催化性氢化在高温下进行。
除非另有指示,当取代基被认为是“任选取代的”时,这意味着该取代基是可被一个或多个单独地并且独立地选自下列的基团所取代的基团:例如任选卤代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺、氨基、包括单-和二-取代的氨基、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、碳环、氰基、环烷基、卤素、杂烷基、杂链烯基、杂炔基、杂芳基、杂环、羟基、异氰酸基、异硫氰酸基、巯基、硝基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、全卤代烷基、全氟烷基、甲硅烷基、磺酰基、硫代羰基、氰硫基、三卤代甲磺酰基及其保护的化合物。
本文所用的术语“共同施用”或“联合施用”等意指包括向单个患者施用所选治疗剂,并且包括其中各活性剂不一定通过相同施用途径或在同一时间施用的治疗方案。
本文所用的术语“药物组合”指的是通过混合或合并活性成分所获得的产品,包括活性成分的固定或非固定组合。术语“固定组合”意指活性成分例如式(1)化合物和共同活性剂以单一实体或剂量形式同时施用于患者。术语“非固定组合”意指活性成分例如式(1)化合物和共同活性剂作为分离的实体同时、并行或无特定时间限制地相继施用于患者,其中这类施用在患者体内提供治疗有效水平的活性成分。后者还适用于鸡尾酒疗法,例如施用三种或多种活性成分。
术语“治疗有效量”意指可以在细胞、组织、器官、***、动物或人中引起研究者、兽医、医生或其他临床医师所寻求的生物或医学响应的化合物的量。
术语“施用”化合物意指向需要这类治疗的个体提供本发明化合物及其前药。
“化疗剂”是用于治疗癌症的化合物。化疗剂的实例包括烷基化剂例如塞替派和CYTOXAN
环磷酰胺;磺酸烷基酯例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡;氮丙啶类例如苯佐替哌、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌;亚乙基亚胺类和甲基蜜胺类,包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三乙撑硫化磷酰胺和三羟甲蜜胺;番荔枝内酯类(尤其是布拉他辛和布拉他辛酮);δ-9-四氢***酚(屈***酚、MARINOL
);β-拉帕醌;拉帕醇;秋水仙碱;桦木酸;喜树碱(包括合成的类似物拓扑替康(HYCAMTIN
)、CPT-11(伊立替康,CAMPTOSAR
)、乙酰基喜树碱、东莨菪亭和9-氨基喜树碱);苔藓抑素;Callystatin;CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物);鬼臼毒素;鬼臼酸;替尼泊苷;隐藻素类(尤其是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀;Duocarmycin(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素;水鬼蕉碱(pancratistatin);Sarcodictyin;海绵抑素;氮芥例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺、雌莫司汀、异磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、三芥环磷酰胺、尿嘧啶氮芥;亚硝基脲类例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀;抗生素,例如烯二炔类抗生素(例如,加利车霉素,尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(例如,参见Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994));蒽环类抗生素,包括蒽环类抗生素A;埃斯波霉素;以及新抑癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、氨茴霉素、氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN
多柔比星(包括吗啉-4-基-多柔比星、氰基吗啉-4-基-多柔比星、2-吡咯啉-1-基-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素,例如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培来霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星;抗代谢物,例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物,例如二甲叶酸、甲氨喋呤、蝶罗呤、曲麦克特;嘌呤类似物例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤;嘧啶类似物例如安西他滨、氮杂胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷;雄激素例如卡普睾酮、羟甲雄酮丙酸酯、表硫雄醇、美雄烷、睾内酯;抗-肾上腺素例如氨鲁米特、曼托坦、曲洛司坦;叶酸补充剂例如亚叶酸;醋葡内酯;醛磷酰胺糖苷;氨基酮戊酸;蒽尿嘧啶;氨苯吖啶;Bestrabucil;比生群;依达曲沙;Defofamine;秋水仙胺;地吖醌;Elfomithine;依利醋铵;埃博霉素;环氧甘醚;硝酸镓;羟基脲;蘑菇多糖;氯尼达明;美登木素生物碱例如美登素和美坦西醇类;丙米腙;米托蒽醌;莫匹达谋;Nitraerine;喷司他丁;蛋氨氮芥;吡柔比星;洛索蒽醌;2-乙基酰肼;甲基苄肼;PSK
多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.);丙亚胺;根霉素;西作非兰;螺旋锗;细格孢氮杂酸;三亚胺醌;2,2′,2″-三氯三乙胺;单端孢菌素类(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素);乌拉坦;长春地辛(ELDISINE
FILDESIN
);达卡巴嗪;甘露醇氮芥;二溴甘露醇;二溴卫矛醇;哌泊溴烷;Gacytosine;阿糖胞苷(“Ara-C”);塞替派;紫杉醇类,例如TAXOL
紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、不含克列莫佛的ABRAXANE
TM、用白蛋白加工的紫杉醇的纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和TAXOTERE
多西他赛(
-Poulenc Rorer,Antony,France);苯丁酸氮芥;吉西他滨(GEMZAR
);6-硫鸟嘌呤;巯基嘌呤;甲氨蝶呤;铂类似物例如顺铂和卡铂;长春碱(VELBAN
);铂;依托泊苷(VP-16);异磷酰胺;米托蒽醌;长春新碱(ONCOVIN
);奥沙利铂;亚叶酸;长春瑞滨(NAVELBINE
);诺安托;依达曲沙;道诺霉素;氨基蝶呤;伊本膦酸盐;拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类视黄醇例如视黄酸;卡培他滨(XELODA
);以上任一化合物的可药用盐、酸或衍生物;以及以上两种或多种化合物的组合,例如CHOP,即环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和***龙的联合疗法的缩写,和FOLFOX,即奥沙利铂(ELOXATIN
TM)与5-FU和甲酰四氢叶酸(leucovovin)的联合用药的治疗方案的缩写。
此外,“化疗剂”还包括可以调节、减少、阻断或抑制可以促进癌生长的激素的作用的抗激素药,并且通常是***性或整体性的治疗。它们可以是激素自身。实例包括抗***和选择性的***受体调节剂(SERM),包括例如他莫西芬(包括NOLVADEX
他莫西芬)、EVISTA
雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫西芬、曲奥昔芬、Keoxifene、LY117018、奥那司酮和FARESTON
托瑞米芬;抗***;***受体减量调节剂(ERD);用于抑制或终止卵巢的作用的活性剂,例如促黄体激素-释放激素(LHRH)激动剂例如LUPRON
和ELIGARD
醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、醋酸布舍瑞林和曲普瑞林;其它抗雄激素药例如氟他米特、尼鲁米特和比卡鲁胺;和芳香酶抑制剂,其抑制调节肾上腺中***产生的芳香酶,例如,4(5)-咪唑类、氨鲁米特、MEGASE
醋酸甲地孕酮、AROMASIN
依西美坦、福美司坦、法倔唑、RIVISOR
伏罗唑、FEMARA
来曲唑和ARIMIDEX
阿纳托唑。此外,该化疗剂的定义还包括二膦酸类例如氯膦酸(例如,BONEFOS
或OSTAC
)、DIDROCAL
依替膦酸、NE-58095、ZOMETA
唑来膦酸/唑来膦酸盐、FOSAMAX
阿伦膦酸、AREDIA
帕米膦酸、SKELID
替鲁膦酸或ACTONEL
利塞膦酸;以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物);反义寡核苷酸,特别是那些抑制异常细胞增殖中涉及的信号传导途径中的基因表达的反义寡核苷酸,例如,PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗,例如THERATOPE
疫苗和基因疗法疫苗,例如,ALLOVECTIN
疫苗、LEUVECTIN
疫苗,和VAXID
疫苗;LURTOTECAN
拓扑异构酶1抑制剂;ABARELIX
rmRH;拉帕替尼二甲苯磺酸盐(ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂,也称为GW572016);和以上任一化合物的可药用盐、酸或衍生物。
实施本发明的方式
本发明提供了新的嘧啶衍生物及其药物组合物,以及使用这类化合物的方法。
一方面,本发明提供了式(1)或(2)化合物或其生理可接受的盐:
R1和R2彼此独立地是H、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R3是卤素、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R4是H;
或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起可形成含有1-3个选自N、O和S的杂原子并且任选地被1-2个R10基团所取代的5-6元环,其中R10是卤素、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、任选取代的苯基或NR2;
R5、R6和R8彼此独立地是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基、氰基、CR(OR17)R17、OR17、NR(R17)、CR(R17)NRR17、(CR2)qY、C(O)O0-1R17、C(O)NR(R17)、C(O)CRR17-NR(R17)、C(O)NR(CR2)pNR(R17)、C(O)NR(CR2)pOR17、C(O)NR(CR2)pSR17、C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、S(O)0-2R18、(CR2)1-6NR(CR2)pOR17、(CR2)1-6NR(CR2)qC(O)R18、S(O)2NRR17、S(O)2NR(CR2)pNR(R17)或S(O)2NR(CR2)pOR17;其中R8可在稠环的任何位置上;
R7是S(O)0-2R19、S(O)2NRR20或C(O)NR(R20);其中R19和R20彼此独立地是C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基或C3-7环烷基;或R20是H;
各R9彼此独立地是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-C(O)-CR(R17)-NRR17、-L-C(O)-NR-(CR2)p-NRR17、-L-C(O)NR(CR2)pOR17、-L-C(O)-(CR2)q-NR-C(O)-R18、-L-C(O)NR(CR2)pSR17、-L-C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、(CR2)pNR(CR2)pOR17或(CR2)pNR-L-C(O)R18、-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地选自H或C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;或R11和R12、R12和R15、R15和R16、R13和R14或R13和R15与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成3-7元饱和、不饱和或部分不饱和的环,该环任选地含有最多3个选自C(O)、N、O和S(O)0-2的原子或基团;
L是(CR2)1-4或键;
R17和R18彼此独立地是C1-6烷基、卤素取代的C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基;或R17是H;
Y是C3-12碳环、C6-10芳基;或5-10元杂芳基或4-10元杂环;它们均任选地被1-3个R6基团所取代;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;并且
q是0-4。
在一个实施方案中,本发明提供了式(2A)化合物:
其中R3是卤素;
R7是S(O)0-2R19;
R8是甲氧基、乙氧基或异丙氧基;
R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R1、R2、R4、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、L和p如式(1)或(2)中所定义。
在某些实例中,本发明提供了式(3)化合物:
其中R3是卤素;
或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起可形成含有1-3个N杂原子并且任选地被1-2个R10基团所取代的5-6元环;
R5a和R5b彼此独立地是卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷氧基;
R7是S(O)0-2R19;
R1、R2、R9、R10和R19如式(1)或(2)中所定义。
在以上式(3)的一个具体实施方案中,R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、L和p如式(1)或(2)中所定义。
在另一个具体的实施方案中,本发明提供了式(3A)、(3B)、(3C)或(3D)化合物:
其中R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R10b、R10e、R10f和R10h彼此独立地是H或C1-6烷基;
R10a、R10c、R10d和R7g彼此独立地是H、卤素、C1-6烷基、NR2或任选取代的苯基;并且
R1、R2、R7、R9和R如式(1)或(2)中所定义。
在以上式(3A)、(3B)、(3C)或(3D)的任何一个中,R9可以是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15、R16、L和p如上所定义;并且
R17和R18彼此独立地是C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;或者R17是H。
另一方面,本发明提供了式(4)或(5)化合物或其生理可接受的盐:
Z是NR9a或O;
R1和R2彼此独立地是H、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R3和R4与它们所连接的碳原子一起形成选自下组的环
R5a和R5b彼此独立地是卤素、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素取代的C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷氧基;
R7是S(O)0-2R19、S(O)2NRR20或C(O)NR(R20);其中R19和R20彼此独立地是C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;或R20是H;
各R9a彼此独立地是H、C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基;-(CR2)p-OR17、-L-C(O)-R17、-C(O)O-R17或-L-C(O)-NRR17;其中R和R17与NRR17中的N一起可形成任选地含有O或S的5-6元环;
L是(CR2)1-4或键;
R17和R18彼此独立地是苄基、任选地被卤素取代的C1-6烷基或任选地被C1-6烷基或卤素取代的C3-7环烷基;或R17是H;
R21、R22、R24、R27和R29彼此独立地是H或C1-6烷基;
R23、R25、R26和R28彼此独立地是H、C1-6烷基、NR2或卤素;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;并且
条件是R22和R23不都是H;R24、R25和R26不都是H;并且R27和R28不都是H。
另一方面,本发明提供了合成式(6)化合物或其可药用盐的方法,
其中W是含1-3个氮原子的5-6元环;
R5是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基、氰基、CR(OR17)R17、OR17、NR(R17)、CR(R17)NRR17、(CR2)qY、C(O)O0-1R17、C(O)NR(R17)、C(O)CRR17-NR(R17)、C(O)NR(CR2)pNR(R17)、C(O)NR(CR2)pOR17、C(O)NR(CR2)pSR17、C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、S(O)0-2R18、(CR2)1-6NR(CR2)pOR17、(CR2)1-6NR(CR2)qC(O)R18、S(O)2NRR17、S(O)2NR(CR2)pNR(R17)或S(O)2NR(CR2)pOR17;
R17和R18彼此独立地是(CR2)qY或C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被下列基团取代:卤素、氨基、酰氨基、羟基、烷氧基、氰基、羧基或Y;或R17是H;
R19是C1-6烷基;
Y是C3-12碳环、C6-10芳基;或5-10元杂芳基或4-10元杂环;它们均任选地被1-3个R5基团所取代;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;
q是0-4;
该方法包括:a)将式(6a)的试剂与式(6b)的试剂或其可药用盐
在足以形成式(6c)的中间体的条件下相接触;
b)将所述的式(6c)的中间体与氧化剂相接触以形成式(6d)的中间体;
其中X1和X2是离去基;然后
c)将所述的式(6d)的中间体与式(6e)的试剂或其可药用盐
在足以形成式(6)化合物或其可药用盐的条件下相接触。
在一个实施方案中,本发明提供了合成式(6f)、(6g)、(6h)或(6i)化合物的方法:
其中R5a是甲氧基或异丙氧基;
R5b是甲基;
R10a、R10b、R10c、R10d、R10e、R10f、R10g和R10h彼此独立地是H、卤素、C1-6烷基、NH2、卤素或任选取代的苯基;并且
各R19如以上式(6)所定义。
另一方面,本发明提供了式(9)或(10)化合物或其可药用盐:
B1是被1-3个R7基团取代的芳基或任选地被1-3个R7基团取代的杂芳基;
B2是芳基或杂芳基;
环E任选地含有双键;
Z1、Z2和Z3之一是O、SO0-2、NR8或NR9,另一个是CR2;
Z4是NR8或NR9;
R1和R2彼此独立地是H、C(O)R10、C1-6烷基或卤素取代的C1-6烷基;
R3和R4彼此独立地是卤素、OR17、NR(R17)、SR17;C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;C(O)R17、NC(O)R18、C(O)NRR17、S(O)2NRR17、NS(O)2R18、S(O)0-2R18;或任选取代的C3-12碳环、C6-10芳基;或含有1-4个选自N、O和S的杂原子的5-10元杂芳基或杂环;
或者R3和R4之一是H,或R3和R4与它们所连接的碳原子一起可形成9-12元环,该环任选地被1-2个R7基团取代并且任选地含有1-3个选自N、O和S的杂原子;
R5、R6和R7彼此独立地是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基、氰基、CR(OR17)R17、OR17、NR(R17)、CR(R17)NRR17、(CR2)qY、C(O)O0-1R17、C(O)NR(R17)、C(O)CRR17-NR(R17)、C(O)NR(CR2)pNR(R17)、C(O)NR(CR2)pOR17、C(O)NR(CR2)pSR17、C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、S(O)0-2R18、(CR2)1-6NR(CR2)pOR17、(CR2)1-6NR(CR2)qC(O)R18、S(O)2NRR17、S(O)2NR(CR2)pNR(R17)或S(O)2NR(CR2)pOR17;其中R6可在稠环的任何位置上;
R8是H、C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;卤素、硝基或氰基;-CR(OR17)R17、-(CR2)p-OR17、(CR2)p-NR(R17)、-L-CR(R17)NRR17、-L-Y、-L-C(O)-R17、-(CR2)1-4-C(O)O-R17或-L-C(O)-NRR17;
R9是-L-CR(OR17)-CtF(2t+1),其中t是1-3;-L-C(O)-CR(R17)-NRR17、-L-C(O)-NR-(CR2)p-NRR17、-L-C(O)NR(CR2)pOR17、-L-C(O)-(CR2)q-NR-C(O)-R18、-L-C(O)NR(CR2)pSR17、-L-C(O)NR(CR2)pS(O)1-2R18、(CR2)pNR(CR2)pOR17或(CR2)pNR-L-C(O)R18、-L-S(O)2R18、-L-S(O)2NRR17、-L-S(O)2NR(CR2)pNR(R17)、-L-S(O)2NR(CR2)pOR17或选自式(a)、(b)、(c)或(d)的基团:
其中R11、R12、R13、R14、R15和R16彼此独立地选自H或C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;或R11和R12、R12和R15、R15和R16、R13和R14或R13和R15与它们所连接的碳和/或氮原子一起形成3-7元饱和、不饱和或部分不饱和的环,该环任选地含有最多3个选自C(O)、N、O和S(O)0-2的原子或基团;
L是(CR2)1-4或键;
R10、R17和R18彼此独立地是(CR2)qY或C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被下列基团取代:卤素、氨基、酰氨基、羟基、烷氧基、氰基、羧基或Y;或R17是H;
Y是C3-12碳环、C6-10芳基;或5-10元杂芳基或4-10元杂环;它们均任选地被1-3个R17基团取代;
各R是H或C1-6烷基;
p是2-4;
q是0-4;
条件是当R3和R4之一是卤素、OR17、NR(R17)、SR17;C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6链烯基或C2-6炔基,它们均任选地被卤素、氨基或羟基取代;或当R3和R4一起形成苯基、吡啶基、哌啶基或
或其互变异构体时,Z
4以及Z
1、Z
2和Z
3之一是NR
9;并且
进一步的条件是当B1是杂芳基时,R3和R4与它们所连接碳原子一起形成环。
在以上每一通式中,任意不对称碳原子可以以(R)-、(S)-或(R,S)-构型存在。化合物由此可以作为异构体混合物或作为纯异构体存在,例如作为纯的对映体或非对映体。本发明进一步包括本发明化合物可能的互变异构体。
本文给出的任何结构式还代表该化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有通过本文所给出的结构式所描述的结构,所不同的是一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子所代替。可引入本发明化合物的同位素的实例分别包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素,例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。
本发明包括本文所定义的各种同位素标记的化合物,例如,存在引入的放射性同位素例如3H、13C和14C的那些化合物。该同位素标记的化合物可用于代谢研究(利用例如14C)、反应动力学研究(利用例如2H或3H)、检测或成像技术、例如正电子成像术(PET)或单光子发射断层扫描(SPECT),包括药物或底物组织分布试验或用于患者的放射性治疗。在其他实施例中,18F或标记的化合物可用于PET或SPECT研究。该化合物的同位素变体能够改变化合物的代谢结果和/或在物理性能例如疏水性等方面产生小的变化。同位素变体还能够提高效果和安全性、提高生物利用度和半衰期,改变蛋白结合,改变生物分布,增加活性代谢物的比率和/或降低反应性或毒性代谢物的形成。同位素标记的本发明化合物及其前药一般通过进行流程或以下实施例和制备例所公开的方法通过将非同位素标记的试剂用容易得到的同位素标记的试剂替换来制备。
在以上每一通式中,每一任选取代的部分可以被以下基团取代:C1-6烷基、C2-6链烯基或C3-6炔基,它们均可以任选地被卤代或任选具有可被N、S、O或其组合替代或取代的碳(例如羟基C1-C8烷基、C1-C8烷氧基C1-C8烷基);卤代、氨基、脒基、C1-6烷氧基;羟基、亚甲二氧基、羧基;C1-8烷基羰基、C1-8烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-8烷基氨甲酰基、氨磺酰基、氰基、氧代、硝基,或如前所述的任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基。药理学和用途
当在体外于无细胞激酶试验中以及在细胞测定法中测定时,本发明化合物及其药学可接受的盐显示有价值的药理学性质,因此可用作药物。
一方面,式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)的化合物可抑制间变性淋巴瘤(ALK)和NPM-ALK融合蛋白的酪氨酸激酶活性。该蛋白酪氨酸激酶来自核磷蛋白(NPM)和ALK的基因融合,使得ALK蛋白酪氨酸激酶活性不依赖于配体。NPM-ALK在众多导致血液学和肿瘤疾病的造血***和其他人类细胞的信号传递中扮演关键角色,所述疾病为例如间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL),特别是ALK+NHL或阳性淋巴瘤(Alkomas)、炎性肌纤维母细胞瘤(IMT)和神经母细胞瘤(Duyster等人,2001Oncogene 20,5623-5637)。除了NPM-ALK,其他基因融合已经在人血液学和肿瘤疾病中被鉴定,例如TPM3-ALK(非肌肉原肌球蛋白和ALK的融合)。
ALK酪氨酸激酶活性抑制可使用已知方法证明,例如使用ALK的重组激酶结构域按照与J.Wood等人,Cancer Res.60,2178-2189(2000)所述的VEGF-R激酶测定法类似的方式进行。通常,使用GST-ALK蛋白酪氨酸激酶的体外酶测定法在96-孔板中以滤膜结合测定法的形式在20mMTris HCl,pH=7.5、3mM MgCl2、10mM MnCl2、1mM DTT、0.1μCi/测定(=30μl)[γ-33P]-ATP、2μM ATP、3μg/mL聚(Glu,Tyr 4∶1)聚-EY(Sigma P-0275)、1%DMSO、25ng ALK酶中进行。将测定溶液在环境温度孵育10分钟。加入50μl 125mM EDTA终止反应,将反应混合物转移至MAIP Multiscreen板(Millipore,Bedford,MA,USA),该板预先用甲醇润湿,用H2O再水化5分钟。洗涤后(0.5%H3PO4),将板在液体闪烁计数器中计数。通过百分抑制的线性回归分析计算IC50。
式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)的化合物可有效地抑制过表达人NPM-ALK的鼠BaF3细胞的生长(德国微生物菌种保藏中心(DSMZ,Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH),德国)。NPM-ALK的表达可以通过用编码NPM-ALK的表达载体pClneoTM(Promega Corp.,Madison WI,USA)转染BaF3细胞系、随后选择抗G418细胞而获得。未转染的BaF3细胞依赖于IL-3进行细胞存活。相反,表达NPM-ALK的BaF3细胞(以下称为BaF3-NPM-ALK)可在不存在IL-3的条件下增殖,因为它们通过NPM-ALK激酶获得增殖信号。因此,NPM-ALK激酶的推定抑制剂可消除生长信号,并可导致抗增殖活性。但是,NPM-ALK激酶的推定抑制剂的抗增殖活性可通过加入IL-3而消除,后者通过独立于NPM-ALK的机制提供生长信号。还描述了类似的使用FLT3激酶的细胞***(参见E Weisberg等人,Cancer Cell;1,433-443(2002))。
本发明化合物的抑制活性可如下确定。一般而言,将BaF3-NPM-ALK细胞(15,000/微量滴定板孔)转移至96-孔微量滴定板。将溶于二甲基亚砜(DMSO)的测试化合物以一系列浓度(稀释系列)、以DMSO的终浓度不大于1%(v/v)的方式加入。加入后,将板孵育2天,期间无测试化合物的对照培养基能够经历两次细胞***周期。BaF3-NPM-ALK细胞的生长借助YOPROTM染色测定[T Idziorek等人,J.Immunol.Methods;185:249-258(1995)]:向各孔加入25μl溶解缓冲液,其包含20mM柠檬酸钠,pH 4.0、26.8mM氯化钠、0.4%NP40、20mM EDTA和20mM。细胞溶解在室温下于60分钟内完成,结合至DNA的YOPROTM的总量通过使用Cytofluor II 96-孔读数仪(PerSeptive Biosystems)测量而确定,所述读数仪的设定如下:激发(nm)485/20,发射(nm)530/25。
IC50可通过计算机辅助***、使用以下公式确定:
IC50=[(ABS测试-ABS起始)/(ABS对照-ABS起始)]x100.(ABS=吸收)
在这些试验中的IC50值表示为导致细胞计数较使用无抑制剂的对照所获得的计数低50%的所讨论测试化合物的浓度。游离形式或药学可接受盐形式的本发明化合物可显示有价值的药理学特性,例如如该申请所描述的体外试验所示。一般而言,本发明化合物的IC50值为1nM至10μM。在一些实施例中,本发明化合物的IC50值为1nM至5μM,或尤其是1nM至1μM。在其他实施例中,本发明化合物的IC50值小于1nM或大于10μM。本发明化合物在10μM时对ALK可显示大于50%的百分抑制,或在其他实施方案中,可显示大于约70%的百分抑制。
本发明化合物的抗增殖作用也可以在人KARPAS-299淋巴瘤细胞系(德国微生物菌种保藏中心(DSMZ,Deutsche Sammiung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH),德国,记载于WG Dirks等人.Int.J.Cancer 100,49-56(2002))中、使用以上关于BaF3-NPM-ALK细胞系所述的相同方法确定。在一些实施方案中,本发明化合物可显示抑制活性,IC50范围为约0.01至1μM。本发明化合物对ALK自磷酸化的作用可在人KARPAS-299淋巴瘤细胞系中、借助免疫印迹按照WG Dirks等人,Int.J.Cancer 100,49-56(2002)的描述确定。
另一方面,本发明化合物可抑制粘着斑激酶(FAK),且可用作药物以治疗由与FAK相联的信号级联功能异常导致的病症,如治疗特定的肿瘤。内源性FAK信号传导的抑制导致运动性降低,在一些情况下诱导细胞死亡。另一方面,通过外源性表达增强FAK信号传导可增加细胞运动性。此外,FAK在侵袭性和转移上皮、间质、甲状腺和***癌中过度表达。因此,FAK抑制剂可能作为抗肿瘤生长和转移的药物。本发明化合物由此可用于预防和/或治疗罹患肿瘤疾病、特别是乳腺肿瘤、肠(结肠和直肠)癌、胃癌和卵巢和***癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肝癌、黑素瘤、***和头颈癌的脊椎动物,尤其是哺乳动物。
FAK抑制和免疫***之间的关系描述于例如G.A.van Seventer等人,Eur.J.Immunol.2001,31,1417-1427。因此,本发明化合物例如可用于预防和/或治疗脊椎动物、尤其是哺乳动物,其罹患免疫***障碍、由T淋巴细胞、B淋巴细胞、肥大细胞和/或嗜酸细胞介导的障碍或疾病,例如器官或组织同种异体移植或异种移植的急性或慢性排斥、动脉粥样硬化、由血管损伤如血管成型术导致的血管阻塞、再狭窄、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、CNS疾病如阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化;癌症、感染性疾病如AIDS;脓毒性休克或成人呼吸窘迫综合征、缺血/再灌注损伤例如心肌梗塞、中风、肠道缺血、肾衰竭或出血性休克或创伤性休克。
在另一方面,本发明化合物可抑制ζ链相关蛋白70(ZAP-70)。本发明化合物的ZAP-70蛋白酪氨酸激酶相互作用可例如通过它们在水溶液中防止LAT-11(活化T细胞的连接体)被人ZAP-70蛋白酪氨酸激酶磷酸化的能力来证明。因此,本发明化合物可用于预防或治疗其中ZAP-70抑制发挥作用的障碍或疾病。
本发明化合物还可抑制***受体1(IGF-1R),且可用于治疗IGF-1R介导的疾病。IGF-1R介导的疾病的实例包括但不限于增殖性疾病如肿瘤,例如***、肾、***、结直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经元、肺、子宫和胃肠道肿瘤,以及骨肉瘤和黑素瘤。本发明化合物作为IGF-1R酪氨酸激酶活性抑制剂的功效可使用细胞截获ELISA证实。在该试验中,确定了本发明化合物对(IGF-1)-诱导的IGF-1R自磷酸化的活性。
本发明的化合物也可用于治疗和/或预防急性或慢性炎性疾病或障碍或自身免疫疾病,例如类风湿性关节炎、骨关节炎、***性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、糖尿病(I型和II型)和与其相关的障碍、呼吸***疾病如哮喘或炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫学介导的障碍或疾病的皮肤表现、炎性和过度增殖性皮肤疾病(如银屑病、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其他湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病,例如干燥综合征、角结膜炎或葡萄膜炎、炎性肠病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。
根据前述,本发明提供了:
(1)用作药物的本发明化合物;
(2)用作ALK抑制剂、FAK抑制剂、ZAP-70抑制剂和/或IGF-1R抑制剂的本发明化合物,例如用于以上所示的任何具体适应症的本发明化合物;
(3)药物组合物,例如用于以上所示的任何适应症的药物组合物,其包含本发明化合物作为活性成分,以及一种或多种药学可接受的稀释剂或载体;
(4)在有需要的个体中治疗以上所示的任何具体适应症的方法,包括施用有效量的本发明化合物或包含其的药物组合物;
(5)本发明化合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗或预防其中ALK、FAK、ZAP-70和/或IGF-1R活化发挥作用或牵涉其中的疾病或病症;
(6)以上(4)下定义的方法,包括共同施用、例如并行或相继施用治疗有效量的本发明化合物和一种或多种其他药物物质,所述其他药物物质可用于以上所示的任何具体适应症;
(7)组合产品,其包含治疗有效量的本发明化合物和一种或多种其他药物物质,所述其他药物物质可用于以上所示的任何具体适应症;
(8)本发明化合物在制备用于治疗或预防对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病的药物中的用途;
(9)根据(8)的用途,其中所治疗的疾病选自间变性大细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、神经母细胞瘤和肿瘤疾病;
(10)根据(8)或(9)的用途,其中所述化合物是任意一项实施例的化合物或其药学可接受的盐;
(11)治疗对抑制间变性淋巴瘤激酶有响应的疾病、尤其是选自以下的疾病的方法:间变性大细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、神经母细胞瘤和肿瘤疾病,包括施用有效量的本发明化合物或其药学可接受的盐。
施用和药物组合物
一般而言,本发明化合物以治疗有效量经由本领域已知的任何常规和可接受的方式单独施用或与一种或多种治疗剂联合施用。治疗有效量可在宽范围内变化,并取决于疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和本领域普通技术人员已知的其他因素。例如,对于***疾病和免疫***障碍,所需剂量将随施用方式、所治疗的具体病症和所需效果而异。
一般而言,***性的满意结果在约0.01至约100mg/kg体重或特别是约0.03至2.5mg/kg体重的日剂量获得。在较大的哺乳动物、例如人中的适合的日剂量可在约0.5mg至约2000mg或更特别是约0.5mg至约100mg的范围,方便地例如以每天不超过四次的分剂量或以延迟形式施用。适合的口服施用单位剂型包含约1至50mg活性成分。
本发明化合物可以作为药物组合物通过任何常规途径施用,例如肠内,例如口服施用,例如以片剂或胶囊形式;胃肠外施用,例如以注射溶液或混悬液形式;或局部施用,例如以洗剂、凝胶、软膏或霜剂或以鼻用或栓剂形式施用。
包含本发明化合物的游离形式或药学可接受盐形式以及至少一种药学可接受载体或稀释剂的药物组合物可以以常规方式通过混合、制粒、包衣、溶解或冻干方法制备。例如,包含本发明化合物以及至少一种药学可接受载体或稀释剂的药物组合物可以以常规方式、通过与药学可接受载体或稀释剂混合而制备。用于口服施用的单位剂量形式含有例如约0.1mg至约500mg活性成分。
在一个实施方案中,药物组合物是活性成分的溶液,包括混悬液或分散体,如等渗水溶液。在包含单独或与载体如甘露醇一起的活性成分的冻干组合物的情况下,可在使用前制备分散体或混悬液。药物组合物可以是无菌的和/或含有助剂,如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。适合的防腐剂包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸或杀微生物剂如山梨酸或苯甲酸。溶液或混悬液可进一步包含增粘剂,包括但不限于羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、明胶或增溶剂,例如Tween 80(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单-油酸酯)。
油混悬液可包含作为油组分的常用于注射目的的植物、合成或半合成油。实例包括液体脂肪酸酯,其含有具有8至22个碳原子或在一些实施方案中具有12至22个碳原子的长链脂肪酸作为酸组分。适合的液体脂肪酸酯包括但不限于月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或相应的不饱和酸,例如油酸、反油酸、芥酸、十三烷二酸和亚油酸,和如果需要可含有抗氧化剂,例如维生素E、3-胡萝卜素或3,5-二叔丁基-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分可具有六个碳原子,且可以是一元或多元的,例如一元-、二元-或三元醇。适合的醇组分包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其异构体;二醇和甘油。
其他适合的脂肪酸酯包括但不限于油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、LABRAFIL
M 2375、(聚氧乙烯甘油)、LABRAFIL
M1944 CS(不饱和聚乙二醇化的甘油酯,由杏仁油的醇解制备,包含甘油酯和聚乙二醇酯)、LABRASOL
TM(饱和聚乙二醇化的甘油酯,由TCM的醇解制备,包含甘油酯和聚乙二醇酯,均得自GaKefosse,法国)和/或MIGLYOL
812(链长C
8至C
12的饱和脂肪酸的甘油三酯,Hüls AG,德国)和植物油如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油或花生油。
用于口服施用的药物组合物可如下获得:例如通过混合活性成分和一种或多种固体载体、需要时将所得混合物制粒、加入其他赋形剂加工混合物或颗粒,形成片剂或片芯。
适合的载体包括但不限于填充剂,如糖,例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素制品和/或磷酸钙,例如磷酸三钙或磷酸氢钙,以及粘合剂,如淀粉,例如玉米、小麦、稻米或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮,和/或(如果需要的话)崩解剂,如上述淀粉、羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、藻酸或其盐如藻酸钠。其他赋形剂包括流动调节剂和润滑剂,例如硅酸、滑石、硬脂酸或其盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙,和/或聚乙二醇或其衍生物。
可为片芯提供适当的包衣、尤其是肠溶包衣,其通过例如使用浓的糖溶液来进行,所述溶液可包含***胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化肽,或使用适合的有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液,或者,为了制备肠溶包衣,可使用适合的纤维素制品的溶液,如醋酸纤维素酞酸酯或羟丙甲基纤维素酞酸酯。可以向片剂或片剂包衣中加入染料或色素,例如用于鉴定目的或指示活性成分的不同剂量。
用于口服施用的药物组合物还包括包含明胶的硬胶囊或包含明胶和增塑剂如甘油或山梨醇的软密封胶囊。硬胶囊可含有颗粒形式的活性成分,例如与填充剂如玉米淀粉、粘合剂和/或助流剂如滑石或硬脂酸镁以及任选的稳定剂混合。在软胶囊中,活性成分可溶于或混悬于适合的液体赋形剂如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中,其中也可加入稳定剂和洗涤剂,如聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯类型的。
适合于直肠施用的药物组合物有例如包含活性成分和栓剂基质组合的栓剂。适合的栓剂基质有例如天然或合成的甘油三酯、石蜡烃、聚乙二醇或高级链烷醇。
适合于胃肠外施用的药物组合物可包含水溶性形式的活性成分如水溶性盐的水溶液或含有增粘物质如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖以及需要时的稳定剂的水性注射混悬液。活性成分任选地与赋形剂一起也可以是冻干物的形式,且可通过添加适合的溶剂在胃肠外施用前制成溶液。如此使用的例如用于胃肠外施用的溶液也可以用作输注溶液。注射制剂的制备通常在无菌条件下进行,如填充至例如安瓿或小瓶中以及密封容器。
本发明化合物可作为单独的活性成分施用,或与可用于对抗肿瘤疾病或可用于免疫调节方案的其他药物一起施用。例如,根据本发明,本发明化合物可与对以上所述的各种疾病有效的药物组合物联合使用,例如与环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨、顺铂、卡铂、长春新碱、长春碱、依托泊苷、伊立替康、紫杉醇、多西他赛、利妥昔单抗、阿霉素、吉非替尼或伊马替尼;或环孢素、雷帕霉素、子囊霉素或它们的免疫抑制类似物,例如环孢素A、环孢素G、FK-506、西罗莫司或依维莫司、皮质类固醇,例如***、环磷酰胺、咪唑硫嘌呤(azathioprene)、甲氨蝶呤、金盐、柳氮磺吡啶、抗疟药、白瑞夸尔、来氟洛米、咪唑立宾、霉酚酸、霉酚酸吗啉乙酯、15-脱氧精胍菌素、免疫抑制单克隆抗体,例如白细胞受体的单克隆抗体,例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、ICD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD152、CD137、CD154、ICOS、LFA-1、VLA-4或它们的配体,或其他免疫抑制化合物,例如CTLA41g。
本发明还提供药物组合,例如试剂盒,其包括a)第一活性剂,其为本文所公开的游离形式或药学可接受盐形式的本发明化合物,和b)至少一种共活性剂。试剂盒可包括用于其施用的说明书。
制备本发明化合物的方法
用于制备本发明化合物的一般方法描述在下面的实施例中。在所描述的反应中,可将终产物中所需的反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基进行保护以避免其不需要的参与反应。可按照标准实践使用常规保护基(参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts“有机化学中的保护基”,John Wiley和Sons,1991)。
在某些实施例中,式(1)化合物可按照流程1所述的合成方法制备:
流程1
式(6)化合物还可按照流程2所述的方法制备。
流程2
本发明化合物、包括它们的盐也可以以水合物形式获得,或它们的晶体可例如包括用于结晶的溶剂(以溶剂合物存在)。盐通常可转化为游离形式的化合物,例如用适合的碱性试剂处理,例如用碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物,如碳酸钾或氢氧化钠处理。碱加成盐形式的本发明化合物通过用适当的酸(例如盐酸等)处理可转化成相应的游离酸。鉴于游离形式的新化合物与它们的盐形式、包括例如在纯化或鉴定新化合物中可用作中间体的那些盐之间的密切关系,上下文中对游离化合物的任何提及在适当时应理解为也指相应的盐。
具有成盐基团的本发明化合物的盐可以以本身已知的方式制备。式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)的化合物的酸加成盐可通过用酸或用适合的阴离子交换试剂处理而获得。本发明化合物的药学可接受的盐可以以例如酸加成盐的形式用有机或无机酸由具有碱性氮原子的式(1)、(2)、(2A)、(3A)、(3B)、(3C)、(3D)、(4)或(5)的化合物形成。
适合的无机酸包括但不限于氢卤酸如盐酸、硫酸或磷酸。适合的有机酸包括但不限于羧酸、磷酸、磺酸或氨磺酸,例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸如谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲或乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1,5-萘-二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N环己基氨磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨磺酸或其他有机质子酸,如抗坏血酸。出于分离或纯化目的,也可使用药学不可接受的盐,例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途,仅仅使用药学可接受的盐或游离化合物(适合时以药物制剂的形式)。
未氧化形式的本发明化合物可由本发明化合物的N-氧化物、通过用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)在适合的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、二烷水溶液等)中、在0至80℃处理而制备。
本发明化合物的前药衍生物可通过本领域普通技术人员熟知的方法制备(例如进一步细节参见Saulnier等人,(1994),Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,Vol.4,p.1985)。例如,适合的前药可通过使非衍生化的本发明化合物与适合的氨甲酰化试剂(例如1,1-酰氧基烷基氯甲酸酯、碳酸对硝基苯基酯等)反应而制备。
本发明化合物的被保护的衍生物可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。适于引入保护基及其除去的技术的详细描述可见于T.W.Greene,“有机化学中的保护基”,第三版,John Wiley and Sons,Inc.,1999。
本发明化合物可如下制备为其单独的立体异构体:使化合物的外消旋混合物与光学活性拆分剂反应形成一对非对映异构化合物,分离非对映异构体并回收光学纯的对映体。对映体的拆分可使用本发明化合物的共价非对映衍生物或通过使用可解离的复合物(例如晶体非对映体盐)进行。非对映体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解度、反应性等)且可通过利用这些差异容易地分离。非对映体可以通过分步结晶、色谱或通过基于溶解度差异的分离/拆分技术分离。然后通过任何不会导致外消旋化的实用手段回收光学纯对映体以及拆分剂。适用于自外消旋混合物拆分化合物的立体异构体的技术的更详细描述可见于Jean Jacques,Andre Collet,Samuel H.Wilen,“Enantiomers,Racemates and Resolutions”,John Wiley And Sons,Inc.,1981。
总之,本发明化合物可通过实施例所述的方法制备;并且
(a)任选地转化本发明化合物为药学可接受的盐;
(b)任选地转化本发明化合物的盐形式为非盐形式;
(c)任选地转化本发明化合物的未氧化形式为药学可接受的N-氧化物;
(d)任选地转化本发明化合物的N-氧化物形式为其未氧化形式;
(e)任选地自异构体混合物拆分本发明化合物的单个异构体;
(f)任选地转化本发明的未衍生化的化合物为药学可接受的前药衍生物;和
(g)任选地转化本发明化合物的前药衍生物为其未衍生化的形式。
在原料化合物的制备未进行具体描述的情况下,该化合物是已知的或可类似于本领域已知的方法或如下文实施例所述制备。本领域技术人员将理解:上述转化仅仅是制备本发明化合物方法的代表,其他熟知的方法可以类似地使用。以下阐述本发明化合物制备的实施例进一步示例了本发明而非限制本发明。
中间体的制备
中间体1
2,4,6-三氯嘧啶-5-甲醛
将巴比妥酸(5.0g,39.1mmol)在室温及氮气氛下加入到搅拌着的POCl3(23.5mL,252mmol)和DMF(3mL,38.8mmol)的溶液中。将混合物回流15小时,然后冷却至室温。真空除去过量的POCl3并将形成的粘稠物质小心地倒在碎冰(150g)上。将浅棕色沉淀物过滤并真空干燥得到2,4,6-三氯嘧啶-5-甲醛。
中间体2
2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基苯基氨基)嘧啶-5-甲醛
向搅拌着的2,4,6-三氯嘧啶-5-甲醛(5.0g,23.8mmol)的DCM(50mL)溶液中于0℃在氮气氛下加入2-(异丙基磺酰基)苯胺(9.5g,47.6mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并搅拌过夜。滤出固体并将滤液真空浓缩,然后通过硅胶色谱纯化(DCM/EtOAC/己烷:15/15/70)得到2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲醛。MS(ES+):374.0(MH+)。
中间体3
1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙醇
向2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲醛(797mg,2.14mmol)的THF(10mL)溶液中在-78℃在氮气氛下加入甲基溴化镁(3.0M的二***溶液,6.4mL,19.3mmol)。将反应混合物逐渐升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物在0℃下倒入20mL饱和NH4Cl水溶液中并在EtOAc(30mL x 2)和盐水(10mL x 2)之间进行分配。将收集的有机萃取液用Na2SO4干燥,真空浓缩并通过硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷:30/70)得到1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙醇。MS(ES+):390.0(MH+)。
中间体4
1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙酮
向1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙醇(580mg,1.49mmol)的DCM(30mL)溶液中加入PDC(561mg,1.49mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用硅胶垫过滤并将该垫用1LDCM洗涤。将滤液真空浓缩得到浅黄色固体状的1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙酮。MS(ES+):388.0(MH+)。
中间体5
叔丁基4-(4-(5-乙酰基-4-氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-甲酸酯
向1-(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)乙酮(113mg,0.29mmol)的EtOH(2mL)溶液中加入叔丁基-4-(4-氨基-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-甲酸酯(203mg,0.58mmol)并将反应混合物在130℃下加热30分钟。将反应液真空浓缩,然后通过硅胶色谱纯化(EtOAC/己烷:3/7)得到叔丁基4-(4-(5-乙酰基-4-氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-甲酸酯。MS(ES+):700.3(MH+)。最终化合物的制备
实施例1
1-(4-(4-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮(1)
4-(5-异丙氧基-2-甲基-4-硝基-苯基)-吡啶
将4-吡啶硼酸(147mg,1.20mmol,1.1当量)溶于二恶烷和H2O的2∶1v/v混合物(15mL)并将N2鼓泡通过5分钟。在N2气氛下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(100mg,0.109mmol,0.1当量)、2-二环己基膦-2’-6’-二甲氧基联苯(112mg,0.272mmol,0.25当量)、1-氯-5-异丙氧基-2-甲基-4-硝基-苯(250mg,1.09mmol,1.0当量)和K3PO4(462mg,2.18mmol,2.0当量)。将反应容器密封并用微波照射在150℃下加热20分钟。冷却至室温后,将反应液用乙酸乙酯稀释并用1N NaOH水溶液洗涤(两次)。然后将有机层用Na2SO4干燥并过滤。浓缩后,将粗产物通过硅胶色谱纯化(从己烷至30%乙酸乙酯的己烷溶液的梯度)得到棕色固体状的4-(5-异丙氧基-2-甲基-4-硝基-苯基)-吡啶:ESMS m/z 273.1(M+H+)。
4-(4-氨基-5-异丙氧基-2-甲基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将得自前一步骤的溶于乙酸(30mL)的4-(5-异丙氧基-2-甲基-4-硝基-苯基)-吡啶(438mg,1.61mmol)用TFA(0.24mL,3.22mmol)和PtO2(176mg,40%w/w)处理。将反应混合物在1大气压H2下剧烈搅拌36小时。将反应混合物过滤并将滤液真空浓缩。将形成的残余物用乙酸乙酯稀释并用1N NaOH水溶液洗涤(两次)。然后将有机层用Na2SO4干燥并过滤。浓缩后,将粗产物(391mg)溶于无水CH2Cl2(30mL)。加入TEA(0.44mL,3.15,2当量),然后加入Boc2O(344mg,1.57当量,1当量)。将反应液在室温下搅拌30分钟。将反应液真空浓缩。将形成的残余物通过硅胶色谱纯化(从己烷至30%乙酸乙酯的己烷溶液的梯度)得到粘稠泡沫状的4-(4-氨基-5-异丙氧基-2-甲基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯:ESMS m/z 293.1(M-tBu+H)+。
步骤4和5:将得自前一步骤的4-(4-氨基-5-异丙氧基-2-甲基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(170mg,0.488mmol)、(2,5-二氯-嘧啶-4-基)-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-胺(169mg,0.488mmol,1当量)、Xantphos(28mg,0.049mmol,0.1当量)、乙酸钯(5.5mg,0.024mmol,0.05当量)和Cs2CO3(477mg,1.46mmol,3当量)溶于无水THF(6mL)。将N2鼓泡通过反应混合物5分钟,将反应容器密封并用微波照射在150℃下加热20分钟。将反应液过滤并将滤液真空浓缩。浓缩后,将粗产物通过硅胶色谱纯化(从己烷至30%乙酸乙酯的己烷溶液的梯度)得到黄色薄膜状的(4-{5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基氨基]-嘧啶-2-基氨基}-5-异丙氧基-2-甲基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯:ESMS m/z 658.3(M+H+)。将该产物(105mg,0.160mmol)溶于CH2Cl2(3mL)并用TFA(3mL)处理。45分钟后,将反应液真空浓缩。加入1N HCl的Et2O溶液(5mL x 2),引起产物HCl盐沉淀析出。通过倾析除去溶剂。将形成的5-氯-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-哌啶-4-基-苯基)-N4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-嘧啶-2,4-二胺在高真空下干燥,生成米白色粉末:1H NMR(400MHz,DMSO-d6+痕量D2O)δ8.32(s,1H),8.27(d,1H),7.88(d,1H),7.67(dd,1H),7.45(dd,1H),7.42(s,1H),6.79(s,1H),4.56-4.48(m,1H),3.49-3.32(m,3H),3.10-2.91(m,3H),2.09(s,3H),1.89-1.77(m,4H),1.22(d,6H),1.13(d,6H);ESMS m/z 558.1(M+H+)。
1-(4-(4-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮
按照通过将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺用5-氯-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺代替的方法制得。得到产物。MS(ES+):643.28(M+1)+。
实施例2
(S)-(4-(4-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)(吡咯烷-2-基)甲酮(7)
按照实施例1的方法,通过将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺用5-氯-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺代替并且将2-(二甲基氨基)乙酰氯盐酸盐用(S)-吡咯烷-2-羰基氯盐酸盐代替来制得。得到产物。MS(ES+):655.28(M+1)。
实施例3
(S)-(4-(4-(5-氯-4-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)(吡咯烷-2-基)甲酮(8)
2,5-二氯-N-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基)-嘧啶-4-胺
向2,4,5-三氯嘧啶(1mmol)和2-(二氟甲基磺酰基)苯胺(1mmol)的10mL DMF溶液中在0℃下加入氢化钠(2mmol)。将反应混合物升温至室温并在50℃下搅拌1小时。经后处理和快速色谱(CH2Cl2/MeOH 9∶1)后得到产物。MS(ES+):353.96(M+1)+。
5-氯-N4-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基)-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺
向2,5-二氯-N-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基)-嘧啶-4-胺(0.5mmol)的1mL异丙醇悬浮液中加入2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺(0.5mmol)和4-甲基苯磺酸(0.5mmol)。将该悬浮液在150℃下搅拌3小时。经后处理和制备型-HPLC后得到产物。MS(ES+):566.17(M+1)+。
(S)-(4-(4-(5-氯-4-(2-(二氟甲基磺酰基)-苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)(吡咯烷-2-基)甲酮
按照实施例1的方法,通过将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺用5-氯-N4-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基)-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺代替并且将2-(二甲基氨基)乙酰氯盐酸盐用(S)-吡咯烷-2-羰基氯盐酸盐代替来制备。得到产物。MS(ES+):663.23(M+1)+。
1-(4-(4-(5-氯-4-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮
按照实施例1的方法,通过将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺用5-氯-N4-(2-(二氟甲基磺酰基)苯基)-N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺代替来制备。得到产物。MS(ES+):651.23(M+1)+。
实施例4
6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)哌啶-4-基)-5-异丙氧基异吲哚啉-1-酮(9)
2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酸:
将2-氯-4-氟-5-硝基-苯甲酸(5.0g,22.8mmol)和碳酸铯(29.7g,91.1mmol)的2-丙醇(100mL)混合物在50℃下加热过夜。真空除去溶剂并加入100mL水。在0℃下将浓HCl溶液滴加到该溶液中至pH=2。通过过滤分离出所形成的产物沉淀,用水洗涤并真空干燥得到2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酸。
4-(2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酰基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酸(10g,38.5mmol)的DCM(200mL)和DMF(1mL)溶液中通过注射器缓慢加入亚硫酰氯(9.17g,77mmol)。将混合物搅拌3小时并浓缩至干。将得到的白色固体2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酰氯真空干燥。向4-氨基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.44g,7.2mmol)和三乙胺(3mL,21.6mmol)的DCM(100mL)混合物中通过注射器缓慢加入溶于DCM(10mL)的2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酰氯(2g,7.2mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时并浓缩。将得到的固体溶于乙酸乙酯并分别用水和盐水洗涤。蒸发溶剂后得到浅黄色固体状标题化合物,该化合物不经进一步纯化即可用于下一步骤。
4-(4-异丙氧基-5-硝基-2-乙烯基-苯甲酰基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向前一步骤得到的4-(2-氯-4-异丙氧基-5-硝基-苯甲酰基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.2mmol)、乙烯基硼酸二丁酯(1.72g,9.4mmol)和碳酸钠(5.34g,50.4mmol)的THF/H2O(100/25mL)混合物中加入二氯二(三苯基膦)钯(II)(442mg,5%mmol)。将混合物用N2净化3分钟,然后在配备有冷凝器的圆底烧瓶中在90℃下在N2下加热过夜。将混合物冷却至室温并倒入饱和氯化铵水溶液中。将混合物用乙酸乙酯萃取(3 x 100mL)。将有机萃取液合并,用盐水洗涤并浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱纯化(40%乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固体状的4-(4-异丙氧基-5-硝基-2-乙烯基-苯甲酰基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
4-(5-异丙氧基-6-硝基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将得自前一步骤的4-(4-异丙氧基-5-硝基-2-乙烯基-苯甲酰基氨基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.9g,4.38mmol)溶于DCM(100mL)并冷却至-78℃。将O3(g)鼓泡进入溶液至溶液的颜色变成蓝色/灰色。然后将溶液用N2(g)净化至蓝色消失。将溶液升温至室温并用在DCM(100mL)中预膨胀的三苯基膦树脂(5g)处理。30分钟后,将混合物过滤,将滤液浓缩,将形成的残余物溶于DCM/TFA(100mL/25mL)。向该混合物中加入三乙基硅烷(4.6mL,17.5mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩并重新溶于DCM,将DCM溶液用1N HCl溶液洗涤(3 x 20mL)。将合并的水层用浓NaOH溶液处理至pH=12。将水层用乙酸乙酯萃取(3 x30mL)。将合并的有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂后得到浅黄色固体。
将固体溶于甲醇和三乙胺的混合物(100mL,9∶1v/v)。向该混合物中加入二碳酸二叔丁酯(680mg,3.1mmol)。在50℃下搅拌30分钟后,将混合物浓缩并通过硅胶快速柱色谱纯化(洗脱剂:40~50%乙酸乙酯的己烷溶液)得到白色固体状的4-(5-异丙氧基-6-硝基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(s,1H),7.11(s,1H),4.74(q,1H),4.45-4.38(m,1H),4.35(s,2H),2.90-2.80(m,2H),1.85-1.81(m,2H),1.66-1.63(m,2H),1.48(s,9H),1.42(d,6H)。
6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮
向得自前一步骤的4-(5-异丙氧基-6-硝基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg,2mmol)的甲醇溶液中加入Pd/C(10%在碳上,100mg)。将混合物在1大气压氢气下氢化。4小时后,将混合物过滤并浓缩。得到的黄色固体状的苯胺不经进一步纯化即可用于下一步骤。在微波试管中,向得自前一步骤的粗产物(2mmol)、(2,5-二氯-嘧啶-4-基)-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-胺(770mg,2.2mmol)、碳酸铯(1.3g,4mmol)和Xantphos(115mg,0.2mmol)的THF(20mL)混合物中加入乙酸钯(22mg,5%mmol)。将混合物用N2净化3分钟。将密封的试管在微波照射下在150℃下加热20分钟。将混合物冷却,过滤并浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱纯化(洗脱剂:65%乙酸乙酯的己烷溶液)得到黄色固体。将固体用DCM/TFA(1/1,10mL)处理1小时,然后真空浓缩。最后用制备型RP LC-MS纯化得到白色固体状的6-{5-氯-4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基氨基]-嘧啶-2-基氨基}-5-异丙氧基-2-哌啶-4-基-2,3-二氢-异吲哚-1-酮。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.38(s,1H),10.13(s,1H),9.60-9.50(br,1H),9.34-9.21(br,1H),8.46(d,1H),8.26(s,1H),8.08(s,1H),7.91(dd,1H),7.71(m,1H),7.34(t,1H),7.03(s,1H),4.30(m,1H),4.53(m,1H),4.33(s,2H),3.62(m,2H),3.21-3.09(m,3H),2.31-2.21(m,2H),2.09-2.05(m,2H),1.41(d,6H),2.30(d,6H);ESMS m/z 599.2(M+H+)。
6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)哌啶-4-基)-5-异丙氧基异吲哚啉-1-酮
向6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮(20mg,0.03mmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入2-(二甲基氨基)乙酰氯盐酸盐(0.17mmol,26mg)和三乙胺(0.18mmol,18mg)。将反应混合物在室温下搅拌1小时并通过过滤除去固体副产物。将剩余的滤液通过制备型RP-HPLC纯化得到6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)-苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-(1-(2-(二甲基氨基)乙酰基)哌啶-4-基)-5-异丙氧基异吲哚啉-1-酮。
实施例5
(S)-6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(1-(1-甲基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮(15)
向6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮(52mg,0.09mmol)的DMF(1.0mL)溶液中依次加入(S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸(19mg,0.09mmol)、HATU(50mg,0.130mmol)和DIEA(0.174mmol,30μL)。将反应混合物搅拌1小时,然后在EtOAc和水之间进行分配。将有机萃取液干燥(Na2SO4)并真空浓缩。将粗产物在DCM(1mL)和TFA(1mL)的溶液中搅拌1小时,然后真空浓缩。向所形成的粗产物在1mL MeOH和1mL THF中的溶液中加入3滴AcOH、甲醛(37wt.%的水溶液,0.09mmol,7mg)。搅拌1小时后,加入氰基硼氢化钠(0.18mmol,11mg)并将反应混合物继续搅拌30分钟。将反应混合物过滤并将形成的滤液通过制备型RP-HPLC纯化得到(S)-6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(1-(1-甲基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮。
实施例6
2-(1-(氮杂环丁烷-3-羰基)哌啶-4-基)-6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基异吲哚啉-1-酮(16)
向6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-(哌啶-4-基)异吲哚啉-1-酮C(41mg,0.07mmol)的DMF(1.0mL)溶液中依次加入1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-甲酸(14mg,0.07mmol)、HATU(39mg,0.104mmol)和DIEA(0.138mmol,24μL)。将反应混合物搅拌1小时,然后在EtOAc和水之间进行分配。将有机萃取液干燥(Na2SO4)并真空浓缩。将粗产物在DCM(1mL)和TFA(1mL)的溶液中在室温下搅拌1小时。将形成的溶液浓缩,然后通过制备型RP-HPLC纯化得到2-(1-(氮杂环丁烷-3-羰基)哌啶-4-基)-6-(5-氯-4-(2-(异丙基磺酰基)苯基-氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基异吲哚啉-1-酮。
实施例7
2-(二甲基氨基)-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮(21)
4-羟基-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶
将4-羟基-6-巯基-吡唑并[3,4-d]嘧啶(14g)溶于氢氧化钠(10g)的水(300mL)溶液。将溶液冷却至5℃并与甲基碘(12g)一起振摇。15-20分钟后向溶液中加入活性炭,过滤并用乙酸酸化得到粗产物。在酸中重结晶得到所需产物。MS(ES+):183.0(M+1)+。
4-氯-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶
向40mL磷酰氯和二甲基苯胺(3mL)中加入2.2g粗4-羟基-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶。将溶液回流30-60分钟至所有固体溶解。减压除去过量的磷酰氯。将糖浆状残余物在剧烈搅拌下倒入冰水混合物中。10分钟后,将水溶液用***萃取。将***溶液用冷水洗涤并用无水硫酸钠干燥。将反应液过滤并减压除去***得到产物。211.0(M+1)+。
N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
将4-氯-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶(10mmol)和2-(N,N-二甲基磺酰基)苯胺(10mmol)的100mL异丙醇溶液在回流下搅拌1小时。冷却至室温后,将三乙胺(12mmol)加入到反应混合物中,然后将溶液加热回流半小时。经后处理和快速色谱(己烷/EtOAc 4∶1)后得到产物。364.08(M+1)+。
N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1mmol)的10mL 1,2-二氯乙烷溶液中在0℃下加入MCPBA(3mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌1小时,然后通过快速色谱纯化(CH2Cl2/MeOH 9∶1)得到产物。MS(ES+):396.07(M+1)+。
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺
向N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-6-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.5mmol)的1mL异丙醇悬浮液中加入2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺(0.5mmol)和4-甲基苯磺酸(0.5mmol)。将该悬浮液在150℃下搅拌3小时。经过制备型-HPLC后得到终产物。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.74-8.77(d,1H),8.24(s,1H),7.92-7.96(m,2H),7.65-7.70(m,1H),7.27-7.33(m,1H),6.85(s,1H),4.60-4.67(m.1H),3.71-3.74(m,2H),3.25-3.32(m,1H),2.78-2.97(m,6H),2.28-2.33(m,5H),1.95-1.98(m,2H),1.39-1.41(d,6H),1.33-1.35(d,6H);MS(ES+):578.28(M+1)+。
2-(二甲基氨基)-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮
将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(56mg)溶于3mL二氯甲烷。将溶液冷却至5℃并将2-(二甲基氨基)乙酰氯盐酸盐(24mg)加入到溶液中,然后加入三乙胺(15mg)。将溶液在室温下搅拌约30分钟。经过制备型-LC-MS后得到终产物。MS(ES+):649.32(M+1)+。
通过重复以上实施例(中间体和最终化合物)所述的方法利用适当的原料得到下面的式I化合物,如表1所示。
表1
实施例8
2-溴-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮(24)
向N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(50mg,0.087mmol)的CH2Cl2(3mL)混合物中在0℃下滴加溴乙酰氯(10uL,0.095mmol)。减压除去溶剂并将残余物通过硅胶色谱纯化,用EtOAc/己烷(0-100%)梯度洗脱得到浅黄色固体状标题化合物(2-溴-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮)。MS:m/z=698.2(M+1)。
实施例9
1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(哌啶-1-基)乙酮(29)
将得自实施例8的2-溴-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮(10mg,0.014mmol)和哌啶(3uL,0.031mmol)的DMF混合物在室温下搅拌过夜。将粗混合物直接通过反相HPLC纯化得到1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(哌啶-1-基)乙酮。MS:m/z=703.4(M+1),352.2(M/2+1)。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ=8.39(brs,1H),7.98(dd,1H,J=1.6,8.0Hz),7.70(t,1H,J=7.6Hz),7.53-7.49(m,2H),6.88(s,1H),4.73-4.69(m,1H),4.62(sept,1H,J=6.0Hz),4.31(d,1H,J=16.4Hz),4.22(d,1H,J=16.4Hz),3.85-3.82(m,1H),3.60(t,2H,J=12.0Hz),3.41-3.25(m,2H),3.11-3.00(m,3H),2.90-2.84(m,1H),2.79(s,3H),2.22(s,3H),1.99-1.85(m,7H),1.80-1.54(m,3H),1.27(d,6H,J=6.0Hz),1.24(d,6H,J=6.8Hz)。
实施例10
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(33)
向叔丁基4-(4-(5-乙酰基-4-氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-2-基氨基)-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-甲酸酯(81mg,0.12mmol)的EtOH(2mL)溶液中依次加入二氯化肼(36mg,0.34mmoL)和乙酸钠(47mg,0.57mmol)并将反应混合物在80℃下加热过夜。将反应液冷却至室温并真空浓缩。将粗产物溶于TFA(2mL)的DCM(2mL)溶液,将反应液搅拌30分钟,然后浓缩并通过RP-HPLC纯化得到N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺。MS(ES+):578.3(MH+)。
实施例11
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(34)
向N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(39mg,0.067mmol)的5.0mLMeOH和5.0mL THF溶液中依次加入几滴AcOH和HCHO[1N的MeOH和THF溶液(v/v:1/1),0.12mmol,120μL]。将反应混合物在室温下搅拌30分钟,然后加入NaB(CN)H3(6.6mg,0.12mmol)并将反应混合物继续搅拌1小时。将饱和NH4Cl水溶液加入到反应液中并将反应混合物真空浓缩。将粗产物在EtOAc和盐水之间进行分配。将有机萃取液浓缩并通过RP-HPLC纯化得到N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺。MS(ES+):592.3(MH+)。
实施例12
2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酰胺(35)
将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(20mg,0.035mmol)、2-溴乙酰胺(0.1N的DMF溶液,0.035mmol,0.35mL)和三乙胺(0.1N的DMF溶液,0.105mmol,1.05mL)的混合物在100℃下加热10分钟。将形成的反应混合物通过RP-HPLC纯化得到2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酰胺。MS(ES+):635.3(MH+)。
实施例13
2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-N-甲基乙酰胺(36)
将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(20mg,0.035mmol)、2-溴乙酰胺(0.1N的DMF溶液,0.070mmol,0.70mL)和三乙胺(1.0N的DMF溶液,0.105mmol,0.105mL)的混合物在100℃加热10分钟。将形成的反应混合物通过RP-HPLC纯化得到2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-N-甲基乙酰胺。MS(ES+):649.3(MH+)。
实施例14
2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙醇(37)
将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(20mg,0.035mmol)、2-溴乙醇(0.1N的DMF溶液,0.070mmol,0.70mL)和三乙胺(0.1N的DMF溶液,0.18mmol,1.75mL)的混合物在100℃下加热10分钟。将形成的反应混合物通过RP-HPLC纯化得到2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙醇。MS(ES+):622.3(MH+)。
实施例15
N6-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(38)
将N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(26.6mg,0.046mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(1.0N的DMF溶液,0.46mmol,0.46mL)和三乙胺(1.0N的DMF溶液,0.46mmol,0.46mL)的混合物在100℃下加热10分钟。将形成的反应混合物通过RP-HPLC纯化得到N6-(2-异丙氧基-4-(1-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺。MS(ES+):636.3(MH+)。
实施例16
2-(6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)-N,N-二甲基苯磺酰胺(39)
4-羟基-3-甲基-6-巯基吡唑并[3,4-d]嘧啶
该试剂按照文献J.med.Chem.33:2174-8(1990)所述的方法制得。4-羟基-3-甲基-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶
将4-羟基-6-巯基-3-甲基吡唑并[3,4-d]嘧啶(14g)溶于10g氢氧化钠的300ml水溶液。将溶液冷却至5℃并与12g甲基碘一起振摇。15-20分钟后,向溶液中加入活性炭,过滤并用乙酸酸化得到12g粗产物。在乙酸中重结晶得到产物。MS(ES+):197.0(M+1)+。
4-氯-3-甲基-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶
向40mL磷酰氯和3mL二甲基苯胺中加入2.2g粗4-羟基-3-甲基-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶。将溶液回流30-60分钟至所有固体溶解。减压除去过量的磷酰氯。将残余物在剧烈搅拌下倒入冰水混合物中。10分钟后,将水溶液用***萃取。将***溶液用冷水洗涤并用无水硫酸钠干燥。过滤并减压除去***后得到产物。215.0(M+1)+。
N,N-二甲基-2-(3-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺
将4-氯-3-甲基-6-甲硫基吡唑并[3,4-d]嘧啶(10mmol)和2-(N,N-二甲基磺酰基)苯胺(10mmol)的100mL异丙醇溶液在回流下搅拌1小时。冷却至室温后,将三乙胺(12mmol)加入到反应混合物中,然后将溶液加热回流半小时。经后处理和快速色谱(己烷/EtOAc 4∶1)后得到产物。379.08(M+1)+。
N,N-二甲基-2-(3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)苯磺酰胺
向N-(2-(N,N-二甲基磺酰基)苯基)-3-甲基-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1mmol)的10mL 1,2-二氯乙烷溶液中在0℃下加入MCPBA(3mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌1小时。经后处理和快速色谱后得到产物(CH2Cl2/MeOH 9∶1)。MS(ES+):411.10(M+1)+。
2-(6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)-N,N-二甲基苯磺酰胺
向N-(2-(N,N-二甲基磺酰基)苯基)-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.5mmol)的1mL异丙醇悬浮液中加入2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(0.5mmol)和4-甲基苯磺酸(0.5mmol)。将该悬浮液在150℃下搅拌3小时。经处理和制备型HPLC后得到产物。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.23-8.25(d,1H),7.79-8.12(m,1H),7.56(s,1H),7.42-7.46(m,1H),7.28-7.32(m,1H),6.77(s,1H),4.51-4.54(m.1H),3.57-3.62(m,2H),3.16-3.23(m,1H),2.60-2.83(m,11H),2.54(s,3H),2.38-2.47(m,3H),2.04(s,3H),1.86-1.95(m,2H),1.25-1.27(d,6H);MS(ES+):593.18(M+1)+。
实施例17
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-3-甲基-N4-(2-(甲基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(40)
该化合物按照实施例15的方法,通过将2-(N,N-二甲基磺酰基)苯胺用2-(甲基磺酰基)苯胺代替来制备。
实施例18
2-(二甲基氨基)-1-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酮(41)
该化合物按照实施例15的方法,通过将2-(N,N-二甲基磺酰基)苯胺用2-(异丙基磺酰基)苯胺代替并且将2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺用1-(4-(4-氨基-5-异丙氧基-2-甲基苯基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮代替来制备。
实施例19
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3,4,6-三胺(42)
2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲腈
向2,4,6-三氯嘧啶-5-甲腈(1.0mmol)和2-(异丙基磺酰基)苯胺(1.0mmol)的5mL DMF溶液中加入氢化钠(24mg)。将该悬浮液在30℃下搅拌2小时。经后处理和柱色谱(9∶1 己烷∶EtOAc)后得到产物。MS(ES+):371.01(M+1)+。
4-氯-2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基氨基)-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲腈
向2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲腈(0.5mmol)和2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(0.5mmol)的3mL异丙醇溶液中加入4-甲基苯磺酸(0.5mmol)。将该悬浮液在120℃搅拌2小时。经后处理和制备型HPLC后得到产物。MS(ES+):597.23(M+1)+。
N6-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3,4,6-三胺(20)
向4-氯-2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基氨基)-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲腈(0.1mmol)的5mL异丙醇溶液中加入无水肼(0.3mmol)。将溶液在120℃加热3小时。经后处理和制备型HPLC后得到产物。MS(ES+):593.29(M+1)+。1H NMR(MeOD,400MHz)δ8.01-8.03(d,1H),7.83-7.86(m,1H),7.31-7.43(m,3H),6.91(s,1H),4.56-4.59(m.1H),3.64-3.68(m,2H),3.19-3.24(m,3H),2.93(s,3H),2.25(s,3H),2.02-2.07(m,4H),1.17-1.32(m,12H);MS(ES+):593.18(M+1)+。
实施例20
N6-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(43)
(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮
向2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-甲醛(112.3mg,0.3mmol)的THF(1.0mL)溶液中在0℃下在氩气氛下加入苯基溴化镁(3.0M的二乙基醚溶液,1.0mL,3.0mmol)。加入后将反应混合物缓慢升温至室温并继续搅拌过夜。然后向反应混合物中在0℃下加入2.0mL饱和NH4Cl水溶液,溶于EtOAc(50mL)并用H2O(10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机相用Na2SO4干燥,真空浓缩并通过硅胶色谱纯化(洗脱剂:EtOAc的己烷溶液:0至33%)得到无色油状的(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲醇。MS(ES+):452.0(MH+)。
向(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲醇(113.4mg,0.25mmol)的DCM(10mL)溶液中加入PDC(236mg,0.63mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将形成的混合物用硅胶垫过滤并将该垫用5%EtOAc的DCM(200mL)溶液洗涤。将滤液真空浓缩得到无色油状的(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮。MS(ES+):450.0(MH+)。
(4-氯-2-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基氨基)-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮
向10mL微波反应试管中依次加入(2,4-二氯-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮(24.1mg,0.0548mmol)、2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯胺(16.8mg,0.0548mmol)、2-丙醇(4mL)和Hunig碱(3滴)。将形成的混合物利用微波仪在150℃下搅拌2小时。将反应溶液真空浓缩得到浅黄色粘稠油状的粗(4-氯-2-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基氨基)-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮。MS(ES+):720.30(MH+)。
N6-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺
向10mL微波试管中加入(4-氯-2-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基氨基)-6-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)嘧啶-5-基)(苯基)甲酮(0.0548mmol)、THF(4mL)和H2NNH2(0.4mL)。将形成的混合物利用微波仪在120℃搅拌30分钟。将反应溶液真空浓缩并将残余物通过反相HPLC纯化得到浅黄色固体状的N6-(2-异丙氧基-4-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-苯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺。MS(ES+):698.30(MH+)。
表2描述了可按照以上实施例所述的方法制备的化合物。
表2
实施例21
N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺(68)
7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二醇
向40g 6-氨基嘧啶-2,4-二醇(1)(315mmol)的1.0L水溶液中加入54.3gNaOAc(662mmol)和48mL 2-氯乙醛(50wt%的H2O溶液,378mmol)。将形成的混合物加热回流并搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温,然后缓慢加入300mL 2N HCl的H2O溶液。将沉淀过滤,用H2O洗涤并在50℃下真空干燥得到标题化合物。
2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
将11.5g(76mmol)7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二醇(2a)溶于40mL甲苯并在室温下缓慢加入21.3mL POCl3(229mmol)。将反应混合物加热至70℃并在2小时内在N2下滴加26.5mL DIPEA(153mmol)。将反应温度升至106℃并将混合物搅拌过夜。冷却至室温后,将反应混合物倒入200mL EtOAc和300mL水的混合物中,然后通过硅藻土过滤。将水层用3x200mL EtOAc萃取并将合并的有机层用盐水洗涤,用活性炭脱色,通过硅藻土过滤并浓缩得到标题化合物。
5-溴-2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
向935mg 2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3a)(5.0mmol)的100mL1,4-二恶烷溶液中在0℃下在10分钟内缓慢加入256μL Br2(5.0mmol)。在0℃下搅拌30分钟后,将反应混合物倒入150mL EtOAc和150mL饱和Na2SO3水溶液的混合物中,然后通过硅藻土过滤。将水相用EtOAc萃取(3x100mL),将合并的有机层用盐水洗涤,浓缩并通过快速柱色谱纯化得到标题化合物。
2,4-二氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
将1.4g 5-溴-2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4)(5.2mmol)溶于200mLTHF。冷却至-78℃后,在30分钟内缓慢加入9.75mL BuLi(1.6M的己烷溶液,15.6mmol),然后在-78℃下搅拌30分钟,然后在1小时内将396uL MeI(6.24mmol)滴加到反应混合物中。将反应混合物在-78℃下再搅拌1小时并通过在该温度下加入20mL饱和NH4Cl水溶液终止反应。然后将反应混合物在100mL饱和NaHCO3和100mL EtOAc之间进行分配。分离出有机层,将水层用EtOAc萃取(3x100mL)。将合并的有机层用盐水洗涤,用Na2SO4干燥并浓缩得到粗标题化合物,其不经进一步纯化即可使用。
2,4-二氯-5-甲基-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
将503mg 2,4-二氯-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(5)(2.5mmol)和523mg TsCl(2.75mmol)溶于20mL DMF。冷却至0℃后,在N2下缓慢加入200mg NaH(2.75mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟并通过在该温度下加入10mL 10%NH4Cl水溶液终止反应,然后用EtOAc萃取(3x50mL)。将合并的有机层用盐水洗涤,用Na2SO4干燥并通过快速柱色谱纯化得到浅黄色固体状标题化合物。
2-(异丙硫基)苯胺
向200mL 19.9g 2-氨基苯硫醇(7)(159mmol)和17.4mL 2-碘丙烷(175mmol)的EtOH溶液中在0℃下在N2下缓慢加入23.2g KOBu-t(207mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌2小时,然后通过硅藻土过滤并浓缩。将残余物重新溶于300mL EtOAc,用水洗涤,然后用盐水洗涤,浓缩并通过快速柱色谱纯化得到浅黄色油状标题化合物。
2-氯-N-(2-(异丙硫基)苯基)-5-甲基-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
将350mg 2,4-二氯-5-甲基-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6)(1.0mmol)和255mg 2-(异丙硫基)苯胺(8)(1.5mmol)溶于15mL DMF。然后在N2下缓慢加入336mg KOBu-t(3.0mmol)。在室温下搅拌1小时后,将反应混合物倒入100mL水中并用EtOAc萃取(3x100mL)。将合并的有机层用盐水洗涤,用Na2SO4干燥并通过快速柱色谱纯化得到白色固体状标题化合物。
2-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
将86mg mCPBA(0.38mmol)在室温下缓慢加入到94mg 2-氯-N-(2-(异丙硫基)苯基)-5-甲基-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(9)(0.19mmol)的10mL CHCl3溶液中。在室温下搅拌2小时后,通过加入5mL饱和Na2SO3水溶液终止反应并分离所形成的两层。将水层用CH2Cl2萃取(3x10mL),将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。将残余物重新溶于5mL MeOH并向该溶液中加入1.1mL NaOMe(0.5M的MeOH溶液,0.55mmol)。将混合物加热至50℃并搅拌30分钟。冷却至室温后,真空除去溶剂并将残余物重新溶于20mL EtOAc,用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤,用Na2SO4干燥并浓缩得到白色固体状标题化合物。
N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺
将32mg TsOH(0.165mmol)加入到20mg N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺(0.055mmol)和31.3mg 2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺HCl盐(0.11mmol)的0.2mL 2-丙醇溶液中。将反应混合物加热至170℃并在微波照射下搅拌40分钟。冷却至室温后,真空除去溶剂,将残余物重新溶于1mL DMSO并通过质量-触发的HPLC纯化得到标题化合物。
实施例22
2-(4-(5-异丙氧基-4-(4-(2-(异丙基磺酰基)苯基氨基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基氨基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酰胺(69)
将82uL Et3N(0.69mmol)加入到40mg N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺(11)(0.069mmol)和28.5mg 2-溴乙酰胺(0.207mmol)的1mLDMF溶液中。将反应混合物加热至100℃并在微波照射下搅拌10分钟。冷却至室温后,真空除去溶剂,将残余物重新溶于1mL DMSO并通过质量-触发的HPLC纯化得到标题化合物。
表3描述了可通过重复以上实施例所述的方法利用适当的原料制备的化合物。
表3
实施例23
N5-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N7-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-5,7-二胺(实施例82)
5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-***-4-甲酰胺。
将1-(叠氮基甲基)-4-甲氧基苯(5g)和2-氰基乙酰胺(5g)的混合物加入到乙醇钠溶液(由1.6g钠在100mL乙醇中制备)中。将形成的混合物回流20小时。冷却至室温并减压除去溶剂。将剩余的固体溶于水(20mL)并用乙酸乙酯萃取(3 x 50mL)。将萃取液合并,用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂并将残余物用热水结晶得到所需产物5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-***-4-甲酰胺。ESMS计算值C11H13N5O2(m/z):247.1;实测值(M+H+):248.1
3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-5,7-二醇。
向5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1,2,3-***-4-甲酰胺(0.9g)和碳酸二乙酯(1.2mL)的THF(30mL)溶液中加入叔丁醇钾(1.2g)。将混合物在氮气下回流6小时。然后冷却至室温。加入水(20mL)并将反应混合物浓缩至约20mL。用1N HCl中和至pH 6并过滤。收集固体并用水洗涤,然后晾干得到所需产物。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ7.24(d,2H),7.21(m,1H),6.92(d,2H),6.88(m,1H),5.52(s,2H),3.78(s,3H)ppm;ESMS计算值C12H11N5O3(m/z):273.0,实测值(M+H+):274.0。
5,7-二氯-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶。
将3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-5,7-二醇(0.8g)、磷酰氯(3mL)和可力丁(2.1mL)的混合物在120℃下加热3小时并冷却至室温。加入冰水并将混合物用乙酸乙酯萃取(3 x 15mL)。将有机液合并,用水洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂,粗品5,7-二氯-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶不经进一步纯化即可用于下一步骤。5-氯-N-(2-(异丙硫基)苯基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-7-胺。
将5,7-二氯-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶(0.03g)和2-(异丙硫基)苯胺(0.1g)的二恶烷(10mL)溶液在100℃下加热10小时。然后冷却至室温并加入乙酸乙酯(20mL)。将混合物用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂并将剩余的残余物在硅胶柱(乙酸乙酯∶己烷=1∶10)上纯化得到所需产物。ESMS计算值C21H21ClN6OS(m/z):440.1;实测值(M+H+):441.1。
5-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-7-胺。
向5-氯-N-(2-(异丙硫基)苯基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-7-胺(0.1g)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(77%,230mg)。将混合物在室温下搅拌4小时。加入二氯甲烷(20mL),将混合物用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂并将剩余的残余物在硅胶柱(乙酸乙酯∶己烷=1∶3)上纯化得到纯的所需产物。1H NMR(400MHz,丙酮-d6)δ10.81(s,1H),8.82(d,1H),7.96(d,1H),7.82(dd,1H),7.48(dd,1H),7.42(d,2H),6.92(d,2H),5.82(s,2H),3.91(s,3H),3.68(m,1H),1.36(d,6H)ppm;ESMS计算值C21H21ClN6O3S(m/z):472.1,实测值(M+H+):472.2。
N5-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)-N7-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-5,7-二胺(实施例87)
将5-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1,2,3]***并[4,5-d]嘧啶-7-胺(10mg)和2-异丙氧基-5-甲基-4-(哌啶-4-基)苯胺(7mg)的2M HCl/二恶烷(2mL)溶液在压力试管中密封并在110℃下加热2天。冷却至室温并减压除去溶剂。将剩余的残余物溶于三氟乙酸(2mL)并在80℃下加热2小时。除去三氟乙酸并将剩余产物通过制备型LC-MS纯化得到所需产物。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.67(d,1H),7.98(m,2H),7.74(t,1H),7.43(t,1H),6.82(s,1H),4.61(m,1H),3.57(m,2H),3.38(m,1H),3.18-3.24(m,2H),2.26(s,3H),2.03(m,2H),1.82-1.93(m,2H),1.41(d,6H),1.31(d,6H)ppm;ESMS计算值C28H36N8O3S(m/z):564.2(M+H+),实测值:565.2。
实施例24
N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N6-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-7-甲基-7H-嘌呤-2,6-二胺(实施例89)
2-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-7-甲基-7H-嘌呤-6-胺
将MCPBA(2.2当量)的浆液在室温下加入到2-氯-N-(2-(异丙硫基)苯基)-7-甲基-7H-嘌呤-6-胺(1当量)的CHCl3溶液(2mL/mmol)中。在室温下搅拌2小时后,通过加入5mL饱和Na2SO3水溶液终止反应并分离出所形成的两层。将水层用CH2Cl2萃取,将合并的有机层用盐水洗涤并干燥。将形成的残余物用快速柱色谱纯化得到白色固体状所需产物。
N2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-N6-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-7-甲基-7H-嘌呤-2,6-二胺
向2-氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-7-甲基-7H-嘌呤-6-胺(1当量)的异丙醇悬浮液中加入2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯胺(1当量)和4-甲基苯磺酸(1当量)。将该悬浮液在150℃下搅拌3小时,冷却至室温并蒸发溶剂。将残余物用制备型HPLC纯化得到树胶样固体状所需产物。
表4描述了可通过重复以上实施例所述的方法利用适当的原料制备的化合物。
表4
试验
使用以下测定法以及本领域已知的其他测定法,可以评价本发明化合物抑制ALK的能力。
Ba/F3细胞系组和试剂
Ba/F3是鼠IL-3-依赖性pro-B淋巴瘤细胞系。用亲本Ba/F3细胞产生一组亚系,用通过与TEL(氨基酸1-375)或BCR的氨基末端部分融合而活化的单个酪氨酸激酶进行稳定转染而使其增殖和存活不依赖于IL-3。为了生成经Tel-酪氨酸激酶(TK)融合转化的Ba/F3细胞系,将亲本Ba/F3细胞用带有各个激酶结构域的逆转录病毒感染并进行嘌呤霉素(puromycin)选择和IL-3戒除,以得到不依赖于IL-3的转化的Ba/F3细胞。
将各经转化的Ba/F3细胞在RPMI-1640培养基(Gibco Cat #11875093,Carlsbad,CA)中培养,所述培养基中添加有10%FBS(Hyclone Cat#SV30014.03,Logan,UT)、4.5g/L葡萄糖(Sigma #G5400,St.Louis,MO)、1.5g/L碳酸氢钠(Biowhittaker #17-613E,Walkersville,MD)和Pen/Strep(Gibco #10378-016,Carlsbad,CA)。细胞每周***两次。
Ba/F3细胞成活力抑制测定法
按照如下描述测定测试化合物对各种Tel-TK转化的Ba/F3细胞系的功效。将指数生长期的BaF3 Tel-TK细胞用新鲜培养基稀释至75,000细胞/mL,使用μFill液体分配器(BioTek,Winooski,VT,USA)以50μL/孔接种至384-孔板(3750细胞/孔)。对于每一细胞系使用一式两份的板。将测试和对照化合物用DMSO系列稀释,排列于聚丙烯384-孔板中。使用针头-转移装置将50nL化合物转移至测定板中,将各板在37℃(5%CO2)孵育48小时。加入25μL Bright-Glo(Promega,Madison,WI,USA),使用Analyst GT(Perkin Elmer,Wellesley,MA)定量发光。使用定制的曲线拟合软件来生成细胞成活百分比作为抑制剂浓度对数的函数的逻辑拟合。将IC50内推为降低细胞成活力至DMSO对照的50%所需的化合物浓度。按照如上所述的相同方法,将在IL-3(1ng/ml最终)存在下维持和培养的亲本Ba/F3细胞用含有IL-3(最终1ng/ml)的新鲜培养基稀释至75,000细胞/mL。
Kapas 299细胞测定法
通过感染编码荧光素酶基因的逆转录病毒并在添加有10%FBS、1%P/S/L-Glu的RPMI-1649培养基中培养来生成荧光素化的Karpas 299(Karpas299-Luc)。在第1天,收集细胞,以150,000细胞/ml(细胞数使用ViCell(BD)测量)的密度重新悬浮。使用μFill(Bio-TEK)将细胞自稀释悬液以50μl体积分配至384-孔测定板中。使用50nL针头将系列稀释的化合物(在DMSO中)转移至板中。将测定板在37℃孵育48小时。在第4天,使用μFill(Bio-TEK)加入25μl/孔的Bright-Glo试剂(Promega)。30分钟内,使用默认设置的Analyst GT测量荧光素酶信号进行荧光检测。
酶HTRF测定法
IGF-1R和INSR(胰岛素受体)购自Upstate。以下试剂自行制备:10x激酶缓冲液(KB)(200mM Tris(pH 7.0)、100mM MgCl2、30mM MnCl2、50nM NaVO4),10mM ATP,100mg/ml BSA,0.5M EDTA,4M KF。来自Perkin-Elmer的Proxiplate-384用于建立测定。所有HTRF试剂、包括底物(生物素-聚-GT(61GT0BLB)、Mab PT66-K、(61T66KLB)、链霉抗生物素蛋白-XLent(611SAXLB))购自CIS-US,Inc。
底物/ATP混合物通过将ATP(终浓度:3μM)和生物素化的聚-GT(终浓度:10ng/μl)添加至1x KB中而制备,使用μFill(Bio-TEK)以5μl/孔分配至Proxiplate-384。使用50nL针头将系列稀释的化合物(在DMSO中)转移至板中。使用μFill(Bio-TEK)加入5μL所制备的酶混合物(酶(终浓度:5ng/μl)与BSA和DTT在1x KB中混合),以引发激酶反应。将测定板在室温孵育2小时。添加Mab PT66-K和链霉抗生物素蛋白-XLent至含有KF(终浓度:125mM)、EDTA(终浓度:50mM)和BSA(终浓度:100μg/ml)的0.5x KB溶液中以制备检测混合物。在反应结束时,加入10μL检测混合物,在室温孵育30分钟,然后测量。使用Analyst-GT(Molecular Dynamic)检测HTRF信号。
针对IGF1-S3-5或INSR-S3-5用RE1-pGL3在U2OS细胞中进行的报告基因检测
接种10M细胞/T175Flask于Mc Coy 10%FBS中,4天后,吸出培养液,加入新鲜培养液。次日(接种后5天),用胰蛋白酶消化细胞,用PBS洗涤一次,然后重悬细胞于含有P/S/G的Mc-Coy培养液4%脱脂血清中。计数细胞并稀释至400,000细胞/ml。
对于95mL细胞(400000细胞/ml(40M)),制备以下DNA/Fugene6混合物:不含血清的5mL Mc-Coy培养液;120μg DNA混合物(20μg IGF1R-S3-5或INSR-S3-5+100μg RE1-pGL3);和240μL Fugene6试剂。孵育DNA/Fugene6混合物15分钟,然后将其加至在4%脱脂血清中的细胞中。分配50μL/孔于384孔板中。22-24小时后,使用针头加入50nL系列稀释的化合物。30分钟后,使用μ-Fill加入在Mc-Coy 4%脱脂血清中稀释的2μL 26X IGF1(或100X胰岛素)。30小时后,加入25μL 100%Bright-glo,在Analyst-GT上读数测量发光。
应该理解,本文所述实施例和实施方案仅仅用于说明目的,根据其进行的各种修饰或改变是本领域技术人员可以想到的并且包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求的范围内。本文所引用的所有出版物、专利和专利申请在此出于全部目的被引用作为参考。