CN101291917A - 治疗蛋白激酶依赖性疾病的二芳基脲衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及二芳基脲衍生物在制备药物组合物中的用途，该组合物用于治疗RET依赖性障碍、尤其RET依赖性肿瘤疾病。本发明进一步涉及新颖的N－[4－(嘧啶－4－基氧基)－苯基]－N’－苯基－脲衍生物和它们治疗动物或人体、尤其治疗蛋白激酶依赖性疾病的用途，涉及包含这类新颖的N－[4－(嘧啶－4－基氧基)－苯基]－N’－苯基－脲衍生物的药物组合物和这类新颖的N－[4－(嘧啶－4－基氧基)－苯基]－N’－苯基－脲衍生物在制备药物组合物中的用途，该组合物用于治疗蛋白激酶依赖性疾病，尤其增殖疾病，例如肿瘤疾病。

Description

治疗蛋白激酶依赖性疾病的二芳基脲衍生物

发明概述

本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性病症、尤其RET依赖性肿瘤疾病的药物组合物中的用途。本发明进一步涉及新颖的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物和它们治疗动物或人体、尤其治疗蛋白激酶依赖性疾病的用途；涉及包含这类新颖的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物的药物组合物和这类新颖的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物在制备用于治疗蛋白激酶依赖性疾病、尤其增殖疾病、例如肿瘤疾病的药物组合物中的用途。

发明背景

蛋白激酶(PK)是催化细胞蛋白质中特异性丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基磷酸化的酶。底物蛋白质的这些翻译后修饰充当调节细胞增殖、活化和/或分化的分子开关。已经在很多疾病状态中观察到异常或过度的野生型或突变型PK活性，包括良性和恶性增殖病症。在很多情况下，已经有可能利用PK抑制剂治疗疾病、例如增殖病症。

鉴于蛋白激酶数量大和增殖疾病与其他PK-相关疾病众多，一直需要提供可用作PK抑制剂、从而治疗这些PK-相关疾病的化合物。

发明的一般描述

在转染期间重排(RET)的原致癌基因被确认为多发性内分泌肿瘤2型(MEN 2)的敏感基因，这是一种遗传性癌症综合征，以甲状腺髓样癌(MTC)为特征(Eng，J.Clin.Oncol.，17，380-93，1999；Takahashi，Cytokine andGrowth Factor Revs.，12，361-73，2001)。亚型RET/MEN2A是以细胞外结构域(例如C634R)的突变为特征，这引起组成型二聚作用和激酶活化。不太普遍的亚型RET/MEN2B以活化袢(activation loop)(M918T)的突变为特征，这引起组成型活化和底物特异性改变。RET/MEN2B仍然对它的配体有响应，因此GDNF家族亲神经因子的时间与空间表达可以进一步影响MEN 2B患者的临床表型(综述见于Jhiang，Oncogene，19，5590-7，2000)。

***状甲状腺癌(PTC)是甲状腺恶性肿瘤的最常见类型(85％)(Lorentz，World Journal of Surgery，18，547-50，1994)。该肿瘤与RET原致癌基因的体细胞突变有关，这受到基因重排的活化(Pacini，J.Endocrin.Invest.，23，328-38，2000；Tallini and Asa，Adv.Anat.Pathol.，8，345-54，2001)。重排的原致癌基因PTC致癌基因(RET/PTC)是原-RET的酪氨酸-激酶结构域与其他基因融合的产物。三种最常见的变型是RET/PTC1、RET/PTC2和RET/PTC3(Pacini，J.Endocrin.Invest.，23，328-38，2000；Tallini and Asa，Adv.Anat.Pathol.，8，345-54，2001)。在RET/PTC1、RET/PTC2和RET/PTC3中，酪氨酸-激酶结构域分别与基因H4、R1α和ELE1融合(Tallini and Asa，Adv.Anat.Pathol.，8，345-54，2001)。

RET受体酪氨酸激酶的各种突变型因此是开发靶向于癌症、具体为甲状腺癌的诱人目标。

也已发现RET及其各种突变型在很多不同的肿瘤细胞系和组织中于蛋白质和/或mRNA水平表达。野生型和突变型RET的抑制剂因此也尤其适合于治疗其他RET依赖性癌症，例如RET依赖性结肠癌、肺癌、乳癌和胰癌，以及其他RET依赖性实体肿瘤和白血病。

现在发现，式I化合物是野生型和/或突变型RET的抑制剂。这些化合物因此可用于治疗RET依赖性疾病、尤其RET依赖性增殖疾病，特别是RET依赖性肿瘤疾病，例如RET依赖性结肠癌、肺癌、乳癌和胰癌，以及其他RET依赖性实体肿瘤和白血病，尤其RET依赖性甲状腺癌。

发明详述

本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，它们是式I化合物

其中G不存在或者是低级亚烷基或C₃-C₅亚环烷基，Z是式Ia基团

或者G不存在，Z是式Ib基团

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1或2；

m是0、1或2；

p是0、2或3；

r是0至5；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或有机部分，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CHK，其中K是低级烷基或氢，p是零，其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O、S或CH₂；

Y₂是O、S或NH；

其条件是(Y₁)_n-(Y₂)_m不包括O-O、S-S、NH-O、NH-S或S-O基团；

每一R₁、R₂、R₃和R₅彼此独立地是氢或者无机或有机部分，或者任意两个一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，这些部分的其余一个是氢或者无机或有机部分；

R₄(如果存在的话，即如果r不是零)是无机或有机部分；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

本发明进一步涉及如下文实施例(实施例1-70)所公开的新颖的式IN-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物，它们在下文被称为“新颖的本发明化合物”。新颖的本发明化合物尤其显示对一种或多种下列蛋白酪氨酸激酶的抑制作用：c-Abl、Bcr-Abl、受体酪氨酸激酶Flt-3、RET、血管内皮生长因子受体(VEGF-R)和Tek(Tie2)，尤其Flt-3，以及两种或多种这些的组合；新颖的本发明化合物进一步也适合于抑制非受体酪氨酸激酶Raf，和/或抑制这些酶的突变体，尤其Bcr-Abl，例如Glu255→赖氨酸突变体。鉴于这些活性，新颖的本发明化合物可以用于治疗尤其涉及这些激酶类型的异常或过度活性的疾病，尤其所提到的那些。

上下文所用的通用术语在本文内优选具有下列含义，另有指示除外。

若提到“二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途”，这表示也包括这类二芳基脲衍生物治疗RET依赖性疾病的用途、使用这类二芳基脲衍生物治疗RET依赖性疾病的方法和治疗RET依赖性疾病的包含这类二芳基脲衍生物的药物组合物。进一步也表示包括用于治疗RET依赖性疾病的二芳基脲衍生物。

前缀“低级”表示具有1直至且包括最多7个、尤其1直至且包括最多4个碳原子的基团，有关基团是线性的，或者是分支的，具有单一或多个分支。低级烷基例如有甲基、乙基、正丙基、仲丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基或正庚基。

若复数形式用于化合物、盐、药物组合物、疾病等，这也表示单一的化合物、盐等。

卤(素)优选地是碘、溴、氯或氟，尤其氟、氯或溴。

鉴于二芳基脲衍生物的游离形式与它们的盐形式之间的密切关系，包括能够用作中间体的那些盐，例如用于纯化或鉴别式I化合物、互变体或互变体混合物和它们的盐，上下文任意对这些化合物、尤其对新颖的本发明化合物的称谓被理解为也表示这些化合物的相应互变体、这些化合物的互变体混合物、这些化合物的N-氧化物或者任意这些的盐，只要适当和适宜并且如果不是另有提到即可。互变体例如可以存在于这样的情况下，其中各自具有至少一个键合氢的氨基或羟基键合于通过双键与相邻原子键合的碳原子(例如酮-烯醇或亚胺-烯胺互变异构)。优选的互变体是化合物的吡啶酮基或嘧啶酮基形式，其中R₄是羟基，其他部分如式I化合物所定义。

若提到“化合物......其互变体；或其盐”等，这表示“化合物......其互变体或者该化合物或该互变体的盐”。

式I化合物中可选存在的不对称碳原子可以存在(R)、(S)或(R，S)构型，优选(R)或(S)构型。双键或环上的取代基可以存在顺式-(＝Z-)或反式-(＝E-)形式。这些化合物因而可以呈现异构体混合物或者优选纯的异构体。

盐优选地是本发明的二芳基脲衍生物、尤其新颖的本发明化合物的药学上可接受的盐。

成盐基团是具有碱性或酸性性质的基团或原子团。具有至少一个碱性基团或至少一个碱性原子团、例如氨基、不生成肽键的仲氨基或吡啶基的化合物可以生成酸加成盐，例如与无机酸如盐酸、硫酸或磷酸；或者与适合的有机羧酸或磺酸，例如脂族一元-或二元-羧酸，例如三氟乙酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、羟基马来酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或草酸；或氨基酸，例如精氨酸或赖氨酸；芳族羧酸，例如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸；芳族-脂族羧酸，例如扁桃酸或肉桂酸；杂芳族羧酸，例如烟酸或异烟酸；脂族磺酸，例如甲磺酸、乙磺酸或2-羟基乙磺酸；或者芳族磺酸，例如苯-、p-甲苯-或萘-2-磺酸。当存在若干碱性基团时，可以生成单-或多-酸加成盐。

具有酸性基团、羧基或酚羟基的化合物可以生成金属或铵盐，例如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐，或者与氨或适合的有机胺如三元单胺如三乙胺或三-(2-羟基乙基)-胺或杂环碱如N-乙基-哌啶或N，N’-二甲基哌嗪所生成的铵盐。盐的混合物是可能的。

同时具有酸性与碱性基团的化合物能够生成内盐。

出于分离或纯化的目的，以及在化合物进一步用作中间体的情况下，也有可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐。不过只有药学上可接受的、无毒的盐才可用于治疗目的，这些盐因此是优选的。

有机部分R优选地是未取代或取代的烷基、未取代或取代的烯基、未取代或取代的炔基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂环基、未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的环烯基；优选的是未取代的烷基。

“取代”无论何处用于一个部分，都意味着各部分中的一个或多个氢原子、尤其至多5个、更尤其至多3个氢原子彼此独立地被相应数量的取代基所代替，这些取代基优选地独立地选自低级烷基，例如甲基、乙基或丙基；卤代-低级烷基，例如三氟甲基；C₆-C₁₆-芳基，尤其苯基或萘基(其中C₆-C₁₆-芳基、尤其苯基或萘基是未取代的或者被一个或多个、尤其至多三个部分取代，所述取代基选自卤素、羧基、低级烷氧基羰基、羟基、低级烷氧基、苯基-低级烷氧基、低级烷酰氧基、低级烷酰基、氨基、N-低级烷基氨基、N，N-二-低级烷基氨基、N-苯基-低级烷基氨基、N，N-双(苯基-低级烷基)-氨基、低级烷酰氨基、卤代基、卤代-低级烷基(例如三氟甲基)、磺基、氨磺酰基、氨甲酰基、N-低级烷基-氨甲酰基、N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基(例如N-(2-羟基乙基)-氨甲酰基)、氰基、氰基-低级烷基和硝基)；C₃-C₁₀-环烷基，尤其环丙基或环己基；羟基-C₃-C₈-环烷基，例如羟基-环己基；杂环基，具有5或6个环原子和1至3个选自O、N和S的杂原子，尤其哌啶基(尤其哌啶-1-基)、哌嗪基(尤其哌嗪-1-基)、吗啉基(尤其吗啉-1-基)；羟基；低级烷氧基，例如甲氧基；卤代-低级烷氧基，尤其2，2，2-三氟乙氧基；苯基-低级烷氧基；氨基-低级烷氧基，例如2-氨基乙氧基；低级烷酰氧基；羟基-低级烷基，例如羟甲基或2-羟基乙基；氨基；N-低级烷基氨基；N，N-二-低级烷基氨基；N-苯基-低级烷基氨基；N，N-双(苯基-低级烷基)-氨基；低级烷酰氨基，尤其乙酰氨基；苯甲酰基-氨基；氨甲酰基-低级烷氧基；N-低级烷基-氨甲酰基-低级烷氧基或N，N-二-低级烷基-氨甲酰基-低级烷氧基；脒基；N-羟基-脒基；胍基；氨基-低级烷基，例如氨甲基或2-氨基乙基；脒基-低级烷基，例如2-脒基乙基；N-羟基-脒基-低级烷基，例如N-羟基-脒基-甲基或-2-乙基；卤素，例如氟、氯、溴或碘；羧基；低级烷氧基羰基；苯基-、萘基-或芴基-低级烷氧基羰基，例如苄氧羰基；低级烷酰基；磺基；低级烷磺酰基，例如甲磺酰基(CH₃-S(O)₂-)；膦酰基(-P(＝O)(OH)₂)；羟基-低级烷氧基磷酰基或二-低级烷氧基磷酰基；氨甲酰基；单-或二-低级烷基氨甲酰基；单-或二-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基；氨磺酰基；单-或二-低级烷基氨基磺酰基；硝基；氰基-低级烷基，例如氰甲基；和氰基。不言而喻，取代基仅仅位于在化学上可能的位置，本领域技术人员能够(在经验或理论上)确定哪些取代基是可能的、哪些不是，无需不适当的努力。例如，具有游离氢的氨基或羟基如果键合于具有不饱和(例如烯属)键的碳原子，可能是不稳定的。

烷基优选地具有至多20个、更优选至多12个碳原子，并且是线性的或者分支一次或多次；优选的是低级烷基，尤其C₁-C₄-烷基，特别是甲基、乙基或正丙基。烷基是未取代的或取代的，优选地被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地选自上文“取代”下提到的那些。作为有机部分R，未取代的烷基、优选低级烷基尤其是优选的。

在相对于取代的烷基的部分中，羟基-低级烷基、尤其2-羟基乙基，和/或卤代-低级烷基、尤其三氟甲基或2，2，2-三氟乙基，是尤其优选的。

烯基优选地是具有一条或多条双键的部分，优选地具有2至20个、更优选至多12个碳原子；它是线性的或者分支一次或多次(鉴于碳原子数，只要有可能)。优选的是C₂-C₇-烯基，尤其C₃-C₄-烯基，例如烯丙基或巴豆基。烯基可以是未取代的或取代的，尤其被一个或多个、更尤其至多三个上文“取代”下提到的取代基取代。诸如氨基或羟基等取代基(具有可自由离解的氢)优选地不与参与双键的碳原子键合，也优选地排除其他不够稳定的取代基。未取代的烯基是优选的，特别是C₂-C₇-烯基。

炔基优选地是具有一条或多条叁键的部分，优选地具有2至20个、更优选至多12个碳原子；它是线性的或者分支一次或多次(鉴于碳原子数，只要有可能)。优选的是C₂-C₇-炔基，尤其C₃-C₄-炔基，例如乙炔基或丙炔-2-基。炔基可以是未取代的或取代的，尤其被一个或多个、更尤其至多三个上文“取代”下提到的取代基取代。诸如氨基或羟基等取代基(具有可自由离解的氢)优选地不与参与叁键的碳原子键合，也优选地排除其他不足够稳定的取代基。未取代的炔基是优选的，特别是C₂-C₇-炔基。

芳基优选地具有不多于16个碳原子的环系，优选地是单-、二-或三-环，并且是未取代的或者优选地如上“取代”下所定义地被取代。优选地，芳基选自苯基、萘基、茚基、薁基和蒽基，在每种情况下优选地是未取代的或者是低级烷基(尤其甲基、乙基或正丙基)、卤代(尤其氟、氯、溴或碘)、卤代-低级烷基(尤其三氟甲基)、羟基、低级烷氧基(尤其甲氧基)、卤代-低级烷氧基(尤其2，2，2-三氟乙氧基)、氨基-低级烷氧基(尤其2-氨基-乙氧基)、低级烷基(尤其甲基或乙基)、氨甲酰基、N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基(尤其N-(2-羟基乙基)-氨甲酰基)和/或氨磺酰基-取代的芳基，尤其相应取代或未取代的苯基。

杂环基优选地是这样一种杂环基团，它在键合环中是不饱和、饱和或部分饱和的；优选地为单环或者在本发明的广义上是二环或三环的；具有3至24个、更优选4至16个环原子；其中至少在与式I分子键合的环中一个或多个、优选一个至四个、尤其一个或两个碳原子被选自氮、氧和硫的杂原子所代替，键合环优选地具有4至12个、优选5至7个环原子；杂芳基是未取代的或者被一个或多个、尤其1至3个取代基取代，所述取代基独立地选自如上“取代”下所定义的取代基；尤其是选自下组的杂芳基：环氧乙烷基、环氮乙烯基(azirinyl)、1，2-氧硫杂环戊烷基、咪唑基、噻吩基、呋喃基、四氢呋喃基、吡喃基、噻喃基、噻蒽基、异苯并呋喃基、苯并呋喃基、色烯基、2H-吡咯基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑烷基、苯并咪唑基、吡唑基、吡嗪基、吡唑烷基、pyranyol、噻唑基、异噻唑基、二噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基(尤其哌啶-1-基)、哌嗪基(尤其哌嗪-1-基)、哒嗪基、吗啉基(尤其吗啉代基)、硫吗啉基(尤其硫吗啉代基)、中氮茚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、苯并咪唑基、香豆素基、吲唑基、***基、四唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、苯并噻吩基、二苯并噻吩基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、

啶基、菲咯啉基、呋咱基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、色烯基、异色满基和色满基，每一这些基团是未取代的或者被一个至两个基团取代基，所述取代基选自低级烷基(尤其甲基或叔丁基)、低级烷氧基(尤其甲氧基)和卤代基(尤其溴或氯)。未取代的杂环基、尤其哌啶基、哌嗪基、硫吗啉代基或吗啉代基是优选的。

环烷基优选地是C₃-C₁₀-环烷基，尤其环丙基、二甲基环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基，环烷基是未取代的或者被一个或多个、尤其1至3个取代基取代，所述取代基独立地选自如上“取代”下所定义的取代基。

环烯基优选地是C₅-C₁₀-环烯基，尤其环戊烯基、环己烯基或环庚烯基，环烯基是未取代的或者被一个或多个、尤其1至3个取代基取代，所述取代基独立地选自如上“取代”下所定义的取代基。

无机部分优选地是卤素、羟基、氨基或硝基。

由虚线(间断线)代表的键和连接体(CH₂)_p如果p是2或3则存在，如果p是零则不存在。

有机部分优选地是未取代或取代的烷基、未取代或取代的烯基、未取代或取代的炔基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的杂环基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的环烯基、未取代或取代的烷氧基、未取代或取代的烯氧基、未取代或取代的炔氧基、未取代或取代的芳氧基、未取代或取代的杂环氧基、未取代或取代的环烷氧基、未取代或取代的环烯氧基或未取代或取代的烷基氨基、未取代或取代的烯基氨基、未取代或取代的炔基氨基、未取代或取代的芳基氨基、未取代或取代的杂环基氨基、未取代或取代的环烷基氨基或者未取代或取代的环烯基氨基。

有机部分优选地是烷基，尤其低级烷基，例如甲基、乙基或丙基；卤代-低级烷基，例如三氟甲基；低级烷氧基，例如甲氧基；卤代-低级烷氧基，例如2，2，2-三氟乙氧基；卤代基，例如氯或溴；苯基；苯基氨基；羟基-苯基氨基，例如4-羟基苯基氨基；氨基-低级烷氧基-苯基氨基，例如[4-(2-氨基乙基)氧基]-苯基氨基；氨甲酰基-苯基氨基，例如4-氨磺酰基-苯基氨基；[N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基]-苯基氨基，例如{N-[4-(2-羟基乙基)-氨甲酰基]-苯基}-氨基；5-或6-元饱和杂环基，具有1或2个选自N、O和S的杂原子，尤其哌啶基如哌啶-1-基，哌嗪基如哌嗪-1-基，吗啉基如吗啉代基，或者硫吗啉基如硫吗啉代基。

碱性有机部分是选自如本文所给出的有机部分的定义、并且具有碱性(碱)性质的部分。优选地，碱性有机部分是哌啶基，尤其哌啶-1-基；哌啶基-低级烷基，尤其哌啶-1-基甲基；低级烷基-哌嗪基，尤其4-甲基哌嗪-1-基或4-乙基哌嗪-1-基；或者低级烷基-哌嗪基-低级烷基，尤其4-甲基哌嗪-1-基甲基或4-乙基哌嗪-1-基甲基。

如果任意两个R₁、R₂和R₃一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，所述桥优选地是经由氧原子与连位碳原子键合的亚甲二氧基(O-CH₂-O)或亚乙二氧基(O-CH₂-CH₂-O)，这些部分的其余一个是氢或者如上所述的无机或有机部分。

术语“治疗酪氨酸蛋白激酶依赖性疾病”表示预防性或者优选治疗性(包括减轻和/或治愈性)治疗所述疾病，尤其本文提到的疾病。

式I化合物具有有价值的药理性质，可用于治疗RET依赖性疾病，尤其RET依赖性增殖疾病，特别是RET依赖性肿瘤疾病，例如RET依赖性结肠癌、肺癌、乳癌和胰癌以及其他RET依赖性实体肿瘤和白血病，尤其RET依赖性甲状腺癌。

RET激酶抑制作用如下测定：

克隆和表达：使用杆状病毒供体载体pFB-GSTX3生成重组杆状病毒，该病毒表达人RET-Men2A胞质激酶结构阈的氨基酸区域658-1072(Swiss prot No.Q9BTB0)，其相当于RET(wtRET)和RET-Men2B的野生型激酶结构阈，因活化环M918T中的激活突变而不同于wtRET。利用特异性引物，从cDNA文库借助PCR扩增wtRET胞质结构阈的编码序列。通过导致M918T突变的位点-定向诱变作用，生成RET-Men2B。用Sall和Kpnl消化，使所扩增的DNA片段和pFB-GSTX3载体适合于连接。这些DNA片段的连接分别导致杆状病毒供体质粒pFB-GX3-RET-Men2A和pFB-GX3-RET-Men2B。

病毒的产生：将含有激酶结构阈的杆状病毒供体质粒转染至DH10Bac细胞系(GIBCO)中，将所转染的细胞平板接种在选择性琼脂平板上。没有向病毒基因组(被细菌携带)***融合序列的集落是蓝色的。拾取单一的白色集落，借助标准质粒纯化工艺从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后使用Cellfectin试剂，将Sf9细胞或Sf21细胞(American Type Culture Collection)在25cm²烧瓶中用病毒DNA转染。

Sf9细胞中的蛋白质表达：从所转染的细胞培养物收集含有病毒的培养基，用于感染，以增加其滴度。两轮感染之后所得含有病毒的培养基用于大规模蛋白质表达。就大规模蛋白质表达而言，向100cm²圆形组织培养平板接种5×10⁷细胞/平板，用1mL含有病毒的培养基(大约5MOI)感染。3天后，从平板上刮取细胞，在500rpm离心5分钟。将来自10-20个100cm²平板的细胞沉淀重新悬浮在50mL冰冷的溶解缓冲液中(25mM Tris-HCl，pH7.5、2mM EDTA、1％NP40、1mM DTT、1mM PMSF)。将细胞在冰上搅拌15分钟，然后在5,000rpm离心20分钟。

GST-标记蛋白的纯化：将所离心的细胞溶解产物装上2mL谷胱甘肽-琼脂糖柱(Pharmacia)，用10mL 25mM Tris-HCl pH7.5、2mM EDTA、1mMDTT、200mM NaCl洗涤3次。然后将GST-标记蛋白用25mM Tris-HCl pH7.5、10mM还原谷胱甘肽、100mM NaCl、1mM DTT、10％甘油洗脱10次(各1mL)，贮存在-70℃下。

酶活性的测量：在30μL的最终体积中，利用纯化GST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白进行酪氨酸蛋白激酶测定，其中含有15ngGST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白、20mM Tris-HCl pH7.5、1mMMnCl₂、10mM MgCl₂、1mM DTT、3μg/mL聚(Glu，Tyr)4∶1、1％DMSO、2.0μM ATP(γ-[³³P]-ATP 0.1μCi)。在有或没有抑制剂的存在下通过测量³³P从[γ³³P]ATP向聚(Glu，Tyr)4∶1的掺入来测定活性。在上述条件下，在环境温度、在96-孔平板中进行测定达15分钟，加入20μL 125mM EDTA终止。随后，将40μL反应混合物转移到Immobilon-PVDF膜(Millipore)上，该膜预先用甲醇浸泡5分钟，用水冲洗，然后用0.5％H₃PO₄浸泡5分钟，固定在断开真空源的多头抽真空装置上。点上全部样品后，连接真空，每孔用200μL 0.5％H₃PO₄冲洗。除去膜，在振荡器上用1.0％H₃PO₄洗涤4次，用乙醇洗涤一次。在环境温度下干燥后，固定在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔Microscint^TM(Packard)后，计数膜的放射性。借助每一化合物一式两份在4种浓度(通常0.01、0.1、1和10μM)下的抑制百分比的线性回归分析，计算IC₅₀值。一个单位的蛋白激酶活性被定义为在37℃下从[³³P]ATP向底物蛋白转移1nmol ³³P/分钟/mg蛋白质。式I化合物在这里显示0.005与5μM之间的IC₅₀值，尤其0.01至1μM。

若随后关于新颖的本发明化合物提到术语“用途”，这分别包括任意一种或多种下列发明实施方式：在治疗(尤其酪氨酸)蛋白激酶依赖性疾病中的用途、制备用于治疗所述疾病的药物组合物的用途、使用新颖的本发明化合物治疗所述疾病的方法、用于治疗所述疾病的包含新颖的本发明化合物的药物组合物和用于治疗所述疾病的新颖的本发明化合物，只要适当和适宜即可，另有规定除外。确切而言，所要治疗的因而是新颖的本发明化合物的用途所优选的疾病，选自下文提到的(尤其酪氨酸)蛋白激酶依赖性(“依赖性”也表示“支持性”，不仅为“仅仅依赖性”)疾病，尤其相应的增殖疾病，更尤其依赖于c-Abl、Bcr-Abl、Flt-3、RET、VEGF-R和/或Tek、尤其Flt-3活性的疾病，尤其下文在这些具体蛋白酪氨酸激酶下提到的疾病。其他能够被新颖的本发明化合物所抑制的激酶包括血小板-衍生的生长因子受体(PDGF-R)、成纤维细胞生长因子受体(FGF-R)、胰岛素-样生长因子1受体(IGF-1R)、Eph受体(尤其例如EphB4受体)、c-Kit、Met、c-Src、Raf和ras。

新颖的本发明化合物具有有价值的药理性质，可用于治疗蛋白激酶依赖性疾病，尤其蛋白酪氨酸激酶依赖性疾病，例如作为治疗增殖疾病的药物。

新颖的本发明化合物作为c-Abl蛋白酪氨酸激酶活性抑制剂的功效可以证明如下：

在96-孔平板中进行体外酶测定，作为如Geissler等人，Cancer Res，1992；52：4492-4498所述的滤膜结合试验，并作下列改进。如Bhat等人，J.Biol.Chem.1997；272：16170-16175所述在杆状病毒/Sf9***中克隆和表达c-Abl的His-标记激酶结构域。借助两步工艺，经过钴金属螯合物柱、继之以阴离子交换柱纯化37kD的蛋白质(c-Abl激酶)，收率为1-2mg/LSf9细胞(Bhat等人，所引用的参考文献)。在考马斯蓝染色后，由SDS-PAGE判断c-Abl激酶的纯度为＞90％。测定物含有(总体积30μL)：c-Abl激酶(50ng)、20mM Tris-HGl pH7.5、10mM MgCl₂、10μM Na₃VO₄、1mM DTT和0.06μCi/测定[γ³³P]-ATP(5μM ATP)，使用30μg/mL聚-Ala，Glu，Lys，Tyr-6∶2∶5∶1(Poly-AEKY，Sigma P1152)，在1％DMSO的存在下。加入10μL 250mM EDTA终止反应，将30μL反应混合物转移到Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，该膜预先用甲醇浸泡5min，用水冲洗，然后用0.5％H₃PO₄浸泡5min，固定在断开真空源的多头抽真空装置上。点上全部样品后，连接真空，每孔用200μL 0.5％H₃PO₄冲洗。除去膜，在振荡器上用0.5％H₃PO₄洗涤4次，用乙醇洗涤一次。在环境温度下干燥，固定在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔Microscint^TM(Packard)后，计数膜。利用这种试验***，新颖的本发明化合物显示0.001至100μM的抑制IC₅₀值，通常为0.05至5μM。

利用进一步的细胞体外实验可以证实对VEGF-诱导的受体自主磷酸化的抑制作用，所述细胞例如转染的CHO细胞，它永久表达人VEGF-R2受体(KDR)，将其接种在6孔细胞培养平板中的完全培养基(含有10％胎牛血清＝FCS)中，在37℃和5％CO₂下温育直至它们显示约80％的融合率。然后将所要测试的化合物稀释在培养基(没有FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)中，加至细胞(对照包含没有供试化合物的培养基)。在37℃下温育2小时后，加入重组VEGF；最终的VEGF浓度为20ng/ml。在37℃下温育另外5分钟后，将细胞用冰冷的PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤两次，立即溶解在100μL溶解缓冲液每孔中。然后将溶解产物离心，以除去细胞核，利用商用蛋白质测定法(BIORAD)测定上清液的蛋白质浓度。溶解产物然后可以立即使用，或者如果必要的话贮存在-20℃下。

进行夹心ELISA，以测量VEGF-R2磷酸化：将VEGF-R2单克隆抗体(例如Mab 1495.12.14；由H.Towbin，Novartis制备，或者相当的单克隆抗体)固定在黑色ELISA平板(来自Packard的OptiPlate^TM HTRF-96)上。然后洗涤平板，将剩余游离蛋白质-结合位点用含有吐温

(聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯，ICI/Uniquema)的3％

(Juro，Cat.#TB232010)的磷酸盐缓冲盐水(PBST)饱和。然后在这些平板中将细胞溶解产物(20μg蛋白质每孔)在4℃下与偶联有碱性磷酸酶的抗磷酸酪氨酸抗体(来自Zymed的PY20：AP)一起温育过夜。然后(再次洗涤平板)使用发光AP底物(CDP-Star，即用型，Emerald II；Applied Biosystems)证明抗磷酸酪氨酸抗体与所捕获的磷酸化受体的结合。在Packard TopCount微量平板闪烁计数器中测量发光。阳性对照(用VEGF刺激)与阴性对照(没有用VEGF刺激)之间的信号差异相当于VEGF-诱导的VEGF-R2磷酸化(＝100％)。供试物质的活性被计算为VEGF-诱导的VEGF-R2磷酸化的抑制百分比，其中诱发半数最大抑制作用的物质浓度被定义为IC₅₀(抑制50％的抑制剂量)。新颖的本发明化合物在这里显示0.0003至20μM的IC₅₀，优选0.001至10μM。

与之类似，VEGF-R1抑制作用可以如下所示：使用Flt-1VEGF受体酪氨酸激酶进行试验。详细操作如下：将30μL激酶(10ng Flt-1的激酶结构域，Shibuya等人，Oncogene 5，519-24(1990))在20mM Tris-HCl pH7.5中的溶液、3mM二氯化锰(MnCl₂)、3mM氯化镁(MgCl₂)、10mM钒酸钠、0.25mg/ml聚乙二醇(PEG)20000、1mM二硫苏糖醇与3g/ml聚(Glu，Tyr)4∶1(Sigma，Buchs，瑞士)、8μM[γ³³P]ATP(0.2μCi)、1％二甲基亚砜和0至100μM所要测试的新颖的本发明化合物一起在室温下温育10min。然后加入10μL 0.25M乙二胺四乙酸(EDTA)pH7终止反应。利用多通道分配器(LAB SYSTEMS，USA)，将20μL等分试样涂在PVDF(聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，USA)上，通过Millipore微量滴定过滤歧管与真空连接。完全除去液体后，将膜连续在含有0.5％磷酸(H₃PO₄)的浴液中洗涤4次，用乙醇洗涤一次，温育10min同时振荡，然后固定在HewlettPackard TopCount Manifold中，加入10μL

(闪烁计数液体)后测量放射性。借助每一化合物在三种条件(通常0.01、0.1和1μmol)下的抑制百分比的线性回归分析，确定IC₅₀值。可以发现新颖的本发明化合物的IC₅₀值在0.01至100μM的范围内，优选在0.01至50μM的范围内。

Flt-3激酶抑制作用如下测定：使用杆状病毒供体载体pFbacG01(GIBCO)生成重组杆状病毒，它表达人Flt-3胞质激酶结构域的氨基酸区域氨基酸563-993。从人cDNA文库(Clontech)借助PCR扩增Flt-3胞质结构阈的编码序列。用BamH1和Hindlll消化，使所扩增的DNA片段和pFbacG01载体适合于连接。这些DNA片段的连接导致杆状病毒供体质粒pFbacG01-Flt-3。病毒的产生、Sf9细胞中的蛋白质表达和GST-融合蛋白的纯化如下进行：

病毒的产生：将含有Flt-3激酶结构域的杆状病毒供体质粒(pFbacG01-Flt-3)转染至DH10Bac细胞系(GIBCO)中，将所转染的细胞平板接种在选择性琼脂平板上。没有向病毒基因组(被细菌携带)***融合序列的集落是蓝色的。拾取单一的白色集落，借助标准质粒纯化工艺从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后使用Cellfectin试剂，将Sf9细胞或Sf21细胞(American Type Culture Collection)在烧瓶中用病毒DNA转染。

Sf9细胞中的蛋白质表达：从所转染的细胞培养物收集含有病毒的培养基，用于感染，以增加其滴度。两轮感染之后所得含有病毒的培养基用于大规模蛋白质表达。就大规模蛋白质表达而言，向100cm²圆形组织培养平板接种5×10⁷细胞/平板，用1mL含有病毒的培养基(大约5MOI)感染。3天后，从平板上刮取细胞，在500rpm离心5分钟。将来自10-20个100cm²平板的细胞沉淀重新悬浮在50mL冰冷的溶解缓冲液中(25mM Tris-HClpH7.5、2mM EDTA、1％NP40、1mM DTT、1mM PMSF)。将细胞在冰上搅拌15分钟，然后在5,000rpm离心20分钟。

GST-标记蛋白的纯化：将所离心的细胞溶解产物装上2mL谷胱甘肽-琼脂糖柱(Pharmacia)，用10mL 25mM Tris-HCl pH7.5、2mM EDTA、1mMDTT、200mM NaCl洗涤3次。然后将GST-标记蛋白用25mM Tris-HCl pH7.5、10mM还原谷胱甘肽、100mM NaCl、1mM DTT、10％甘油洗脱10次(各1mL)，贮存在-70℃下。

酶活性的测量：在30μL的最终体积中，利用纯化GST-Flt-3蛋白进行酪氨酸蛋白激酶测定，其中含有200-1800ng酶蛋白(取决于比活性)、20mM Tris-HCl pH7.6、3mM MnCl₂、3mM MgCl₂、1mM DTT、10μMNa₃VO₄、3μg/mL聚(Glu，Tyr)4∶1、1％DMSO、8.0μM ATP和0.1μCi[γ³³P]ATP。在有或没有抑制剂的存在下，通过测量³³P从[γ³³P]ATP向聚(Glu，Tyr)底物的掺入，测定活性。在环境温度下，在96-孔平板中进行测定(30μL)达20分钟，加入20μL 125mM EDTA终止。随后，将40μL反应混合物转移到Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，该膜预先用甲醇浸泡5分钟，用水冲洗，然后用0.5％H₃PO₄浸泡5分钟，固定在断开真空源的多头抽真空装置上。点上全部样品后，连接真空，每孔用200μL 0.5％H₃PO₄冲洗。除去膜，在振荡器上用1.0％H₃PO₄洗涤4次，用乙醇洗涤一次。在环境温度下干燥，固定在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔Microscint^TM(Packard)后，计数膜。借助每一化合物一式两份在4种浓度(通常0.01、0.1、1和10μM)下的抑制百分比的线性回归分析，计算IC₅₀值。一个单位的蛋白激酶活性被定义为在37℃下从[³³P]ATP向底物蛋白转移1nmol ³³P/分钟/mg蛋白质。新颖的本发明化合物在这里显示0.005与20μM之间的IC₅₀值，尤其在0.01与10μM之间。

对Flt-3依赖性Ba/F3细胞增殖的抑制作用：

在依赖于突变型(ITD或D835Y；Gilliland and Griffin，Blood，Vol.100，No.5，1532-42(2002))Flt-3受体激酶的Ba/F3细胞中测定化合物穿透细胞膜和发挥抗增殖效应的潜能。

96-孔格式YO-PRO-1测定法的改进方案基于使用表达组成型活化的Flt-3激酶的野生型IL-3-依赖性造血细胞系Ba/F3(DSMZ，Braunschweig，德国)和突变亚系ITD-Ba/F3或D835Y-Ba/F3[Weisberg等人，Cancer Cell1(5)：433-43(2002)]。

将ITD-Flt3-或D835Y-Flt3-BaF3细胞稀释在新鲜培养基中，最终浓度为3×10⁵细胞每ml，将50μL等分试样接种在96-孔平板中(1.5×10⁴细胞每孔)。随后，加入50μL 2x化合物溶液，使细胞温育48h。

首先在10μM、1μM和0.1μM浓度下测试化合物对两种细胞系的抗增殖和细胞程序死亡活性，一式三份。用单独DMSO处理(加入至最终浓度为0.1％)的细胞总是充当对照。另外，按照惯例在仅含有100μL培养基而没有细胞的小孔中测定平板空白值。

为了进一步表征化合物，从10μM或3μM的有关化合物开始，进行ED₅₀测定。从这些浓度，进行逐步九次稀释，分别达到2nM和0.5nM的最终浓度。

如前人所述借助YO-PRO-1测定法评估抑制剂的活性[Idziorek等人，J.Immunol.Methods；185：249-58(1995)]。简言之，在48h处理阶段后，在96-孔平板中的小孔中直接向100μL培养基中加入25μL等分试样溶液，其中含有100mM柠檬酸钠pH4.0、134mM氯化钠和12.5μM YO-PRO-1染剂(YO-PRO-1碘化物，#Y3603，Molecular Probes)。这导致最终染剂浓度为2.5μM。然后将平板在暗处环境温度下温育10min。YO-PRO-1染剂向细胞内的摄取如下评估：利用Cytofluor II 96-孔平板读数器(PerSeptiveBiosystems)进行第一测量，设置如下：激发(nm)485/20，发射(nm)530/25，增益75。该第一读数后，向每孔加入25μL溶解缓冲液，由20mM柠檬酸钠pH4.0、26.8mM氯化钠、0.4％NP40、20mM EDTA和20mM组成。在室温下在60min内完成细胞溶解，利用Cytofluor II 96-孔读数器进行第二测量，测定与DNA结合的YO-PRO-1总量，设置与上述相同。利用这种测定法，新颖的本发明化合物对两种突变型亚系表现0.1nM至1μM的ED₅₀值，尤其0.1nM至100nM。

Tek激酶抑制作用可以如下进行：

使用杆状病毒供体载体pFbacG01生成重组杆状病毒，它表达N-末端与GST融合的人Tek胞质激酶结构域的氨基酸区域氨基酸773-1124。通过EcoRl切除和连接到经过EcoRl消化的pFbacG01中，将Tek重新克隆到pFbacG01转移载体中(FBG-Tie2/Tek)。病毒的产生、Sf9细胞中的蛋白质表达和GST-融合蛋白的纯化如下进行：

病毒的产生：将含有激酶结构域的转移载体转染至DH10Bac细胞系(GIBCO)中，将所转染的细胞平板接种在选择性琼脂平板上。没有向病毒基因组(被细菌携带)***融合序列的集落是蓝色的。拾取单一的白色集落，借助标准质粒纯化工艺从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后使用Cellfectin试剂，将Sf9细胞或Sf21细胞(American Type Culture Collection)在25cm²烧瓶中用病毒DNA转染。

Sf9细胞中的蛋白质表达：从所转染的细胞培养物收集含有病毒的培养基，用于感染，以增加其滴度。两轮感染之后所得含有病毒的培养基用于大规模蛋白质表达。就大规模蛋白质表达而言，向100cm²圆形组织培养平板接种5×10⁷细胞/平板，用1mL含有病毒的培养基(大约5MOI)感染。3天后，从平板上刮取细胞，在500rpm离心5分钟。将来自10-20个100cm²平板的细胞沉淀重新悬浮在50mL冰冷的溶解缓冲液中(25mM Tris-HClpH7.5、2mM EDTA、1％NP40、1mM DTT、1mM PMSF)。将细胞在冰上搅拌15分钟，然后在5,000rpm离心20分钟。

GST-标记蛋白的纯化：将所离心的细胞溶解产物装上2mL谷胱甘肽-琼脂糖柱(Pharmacia)，用10mL 25mM Tris-HCl pH7.5、2mM EDTA、1mMDTT、200mM NaCl洗涤3次。然后将GST-标记Tek用25mM Tris-HCl pH7.5、10mM还原谷胱甘肽、100mM NaCl、1mM DTT、10％甘油洗脱10次(各1mL)，贮存在-70℃下。

激酶测定：在30μL的最终体积中，利用纯化GST-Tek蛋白进行酪氨酸蛋白激酶测定，其中含有15mg/mL GST-Tek、20mM Tris-HCl pH7.5、3mM MnCl₂、3mM MgCl₂、1mM DTT、10μM Na₃VO₄、3μg/mL聚(Glu，Tyr)4∶1、0.25mM PEG、1％DMSO、8.0μM ATP([γ³³P]ATP 0.1μCi)。在有或没有抑制剂的存在下，通过测量³³P从[γ³³P]ATP向聚(Glu，Tyr)4∶1的掺入，测定活性。在环境温度下，在96-孔平板中进行测定(30μL)达10分钟，加入20μL 125mM EDTA终止。随后，将40μL反应混合物转移到Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，该膜预先用甲醇浸泡5分钟，用水冲洗，然后用0.5％H₃PO₄浸泡5分钟，固定在断开真空源的多头抽真空装置上。点上全部样品后，连接真空，每孔用200μL0.5％H₃PO₄冲洗。除去膜，在振荡器上用1.0％H₃PO₄洗涤4次，用乙醇洗涤一次。在环境温度下干燥，固定在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔Microscint^TM(Packard)后，计数膜。借助每一化合物一式两份在4种浓度(通常0.01、0.1、1和10μM)下的抑制百分比的线性回归分析，计算IC₅₀值。一个单位的蛋白激酶活性被定义为在37℃下从[³³P]ATP向底物蛋白转移1nmol ³³P/分钟/mg蛋白质。新颖的本发明化合物在这里显示0.001与5μM之间的IC₅₀值，尤其在0.01与0.2μM之间。

Bcr-Abl抑制作用可以借助捕获ELISA测定如下：从J Griffin获得用p210Bcr-Abl表达载体pGDp210Bcr/Abl(32D-bcr/abl)转染的鼠髓祖代细胞系32Dcl3(Bazzoni等人，J.Clin Invest.98，521-8(1996)；Zhao等人，Blood 90，4687-9(1997))。这些细胞表达具有组成型活性abl激酶并独立于增殖生长因子的融合bcr-abl蛋白。使细胞在RPMI 1640(AMIMED；cat#1-41F01)、10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺(Gibco)(完全培养基)中繁殖，将2×10⁶细胞每小瓶的等分试样冷冻在冷冻培养基(95％胎牛血清，5％二甲基亚砜(SIGMA，D-2650))中，制备工作储备液。融化后，使用最多10-12代期间的细胞进行实验。使用来自Upstate Biotechnology的抗体抗-ablSH3结构域cat.#06-466进行ELISA。就bcr-abl磷酸化的检测而言，使用来自ZYMED的用碱性磷酸酶(PY10(AP))标记的抗磷酸酪氨酸抗体AbPY20(cat.#03-7722)。作为对比和参照化合物，使用N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪子基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺的甲磺酸盐形式(一甲磺酸盐)(STI571)(以或市售；Novartis)。在DMSO中制备10mM储备溶液，贮存在-20℃下。就细胞测定而言，将储备溶液分两步(1∶100和1∶10)稀释在完全培养基中，得到起始浓度为10μM，继之以在完全培养基中制备系列三倍稀释液。利用这种工艺不会遇到溶解性问题。类似地处理供试新颖的本发明化合物。就测定而言，在96-孔圆底组织培养平板中，每孔接种200,000个32D-bcr/abl细胞/50μL。向细胞加入50μL每孔的供试化合物的系列三倍稀释液，一式三份。供试化合物的最终浓度例如从5μM降至0.01μM。使用未处理的细胞作为对照。将化合物与细胞一起在37℃、5％CO₂下温育90min，继之以在1300rpm离心组织培养平板(Beckman GPR离心机)，小心吸引除去上清液，注意不要除去任何已沉淀的细胞。加入150μL溶解缓冲液(50mM Tris/HCl pH7.4、150mM氯化钠、5mM EDTA、1mM EGTA、1％NP-40(非离子型洗涤剂，Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，德国)、2mM原钒酸钠、1mM苯甲磺酰氟、50μg/mL抑肽酶和80μg/mL亮肽素)溶解细胞沉淀，立即用于ELISA或者冷冻贮存在-20℃下备用。向黑色ELISA平板(PackardHTRF-96黑色平板；6005207)涂以200ng 50μL PBS每孔的抗-abl SH3结构域抗体，在4℃下过夜。用200μL/孔含有0.05％吐温20的PBS(PBST)和0.5％TopBlock(Juro，Cat.#TB 232010)洗涤3次后，在室温下将残余蛋白质结合位点用200μL/孔PBST、3％TopBlock封闭4h，继之以在4℃下与未处理或者经过化合物处理的细胞的50μL溶解产物温育3-4h(20μg总蛋白质每孔)。洗涤3次后，加入50μL/孔在封闭缓冲液中稀释至0.5μg/mL的PY20(AP)(Zymed)，温育过夜(4℃)。就全部温育步骤而言，将平板用平板密封器(Costar，cat.#3095)覆盖。最后，将平板用洗涤缓冲液洗涤另外3次，用去离子水洗涤一次，然后加入90μL/孔AP底物CPDStarRTU和Emerald II。将现在用Packard Top Seal^TM-A平板密封器(cat.#6005185)密封的平板在室温暗处温育45min，通过利用Packard Top Count微量平板闪烁计数器(Top Count)测量每秒的计数(CPS)，量化发光。就最终优化版本的ELISA而言，将50μL在96-孔组织培养平板中生长、处理和溶解的细胞溶解产物直接从这些平板转移至ELISA平板，后者预先涂有50ng/孔来自Upstate的兔多克隆抗-abl-SH3结构域AB 06-466。抗磷酸酪氨酸AB PY20(AP)的浓度可以减少至0.2μg/ml。洗涤、封闭和与发光底物温育同上。量化如下进行：计算未处理32D-bcr/abl细胞溶解产物所得ELISA读数(CPS)与测定背景(全部组分，但不含细胞溶解产物)读数之间的差异，取作100％，反映了存在于这些细胞中的组成型磷酸化bcr-abl蛋白质。化合物对bcr-alb激酶活性的活性以bcr-abl磷酸化的减少百分比表示。借助图形内推或外推，从剂量响应曲线测定IC₅₀值。新颖的本发明化合物在这里优选地显示20nM至200μM的IC₅₀值。

新颖的本发明化合物也抑制参与由营养因子介导的信号传递的蛋白酪氨酸激酶，例如src激酶家族的激酶，尤其例如c-Src激酶，血小板-衍生的生长因子(PDGF)受体酪氨酸激酶家族的成员，例如PDGF-R、c-Kit、VEGF-R和/或FGF-R；所有它们都参与动物、尤其哺乳动物细胞、包括人类细胞的生长调节和转化。适当的测定法如Andrejauskas-Buchdunger等人，Cancer Res.52，5353-8(1992)所述。

新颖的本发明化合物因此可以用于治疗蛋白激酶依赖性疾病。蛋白激酶依赖性疾病尤其是增殖疾病，优选良性或者尤其恶性肿瘤(例如肾、肝、肾上腺、膀胱、***、胃、卵巢、结肠、直肠、***、胰、肺、***或甲状腺的癌、肉瘤、成胶质细胞瘤和大量头颈肿瘤以及白血病)。它们能够引起肿瘤的消退，防止肿瘤转移的形成和(微)转移瘤的生长。另外，它们能够用于表皮过度增殖(例如牛皮癣)、***增生和治疗瘤形成，尤其有上皮特征的，例如乳癌。也有可能使用新颖的本发明化合物治疗免疫***疾病，只要牵涉有若干或者尤其个别的蛋白酪氨酸激酶；此外，新颖的本发明化合物也可以用于治疗其中牵涉有至少一种蛋白酪氨酸激酶、尤其选自具体提到那些的的信号传递的中枢或外周神经***疾病。

p21ras致癌基因是人实体癌症形成和进展的主要贡献因素，在30％的全部人类癌症中发生突变。内源性GTP酶活性如果在ras突变癌细胞中减轻，会介导组成型生长信号至下游效应器如raf激酶。抑制raf激酶信号途径因此能够用于抑制活性ras的效应。可用作ras抑制剂的新颖的本发明化合物因而尤其适合于治疗涉及ras过度表达或过度活性的疾病。

血管内皮生长因子受体-2(VEGF-2；KDR)在初生血管内皮上被选择性表达，是正常血管发育所必需的。为了生长超出最小的尺寸，肿瘤必须生成新的血管供应。血管生成或新血管萌芽是实体肿瘤生长的核心过程。就很多癌症而言，肿瘤血管化的程度是一种负性预后指标，预示着侵袭性疾病和转移潜在性增加。最近为理解与肿瘤有关的血管生成的分子基础所作的努力已经确定若干潜在的治疗靶，包括血管生成性因子血管内皮生长因子(VEGF)的受体酪氨酸激酶(参见Zeng等人，J.Biol.Chem.276(35)，32714-32719(2001))。可用作KDR抑制剂的新颖的本发明化合物因而尤其适合于治疗涉及VEGF受体酪氨酸激酶过度表达的疾病。在这些疾病中，尤其重要的有视网膜病、年龄相关性黄斑变性、牛皮癣、血管母细胞瘤、血管瘤、动脉硬化、炎性疾病(例如类风湿性或风湿性炎性疾病，尤其关节炎，例如类风湿性关节炎，或者其他慢性炎性障碍，例如慢性哮喘)、动脉或移植术后动脉粥样硬化、子宫内膜异位和尤其肿瘤疾病，例如所谓的实体肿瘤(尤其胃肠道、胰、***、胃、子宫颈、膀胱、肾、***、卵巢、子宫内膜、肺、脑的癌症、黑素瘤、卡波济氏肉瘤、头颈的鳞状细胞癌、恶性胸膜间皮瘤(mesotherioma)、淋巴瘤或多发性骨髓瘤)和液体肿瘤(例如白血病)。

Flt-3(FMD-样酪氨酸激酶)尤其在造血祖代细胞和淋巴系与骨髓系祖代中被表达。已有文献记载Flt-3基因的异常表达见于成人和儿童白血病，包括AML(急性髓性白血病)、伴有三系脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、ALL(急性成淋巴细胞性白血病)、CML(慢性髓性白血病)和脊髓发育不良综合征(MDS)，它们因此是优选用新颖的本发明化合物治疗的疾病。Flt-3中的活化性突变已经见于大约25至30％的AML患者。因而，越来越多的证据表明Flt-3在人类白血病中的作用，可用作Flt-3抑制剂的新颖的本发明化合物尤其可用于治疗这种类型的疾病(参见Tse等人，Leukemia 15(7)，1001-1010(2001)；Tomoki等人，Cancer Chemother.Pharmacol.48(Suppl.1)，S27-S30(2001)；Birkenkamp等人，Leukemia 15(12)，1923-1921(2001)；Kelly等人，Neoplasia 99(1)，310-318(2002))。

在慢性髓性白血病(CML)中，造血干细胞(HSC)中相互平衡的染色体易位产生BCR-ABL杂交基因。后者编码致癌性Bcr-Abl融合蛋白。ABL编码受紧密调节的蛋白酪氨酸激酶，它在调节细胞增殖、粘着和细胞程序死亡中扮演基本角色，而BCR-ABL融合基因编码组成型活化的激酶，它转化HSC产生表型，该表型表现克隆增殖失调、与骨髓基质粘着的能力降低和对诱变刺激的细胞程序死亡响应降低，这使其能够逐渐蓄积为更加恶性的转化。所得粒细胞不能发育为成熟的淋巴细胞，被释放到循环中，引起成熟细胞缺乏和感染敏感性增加。Bcr-Abl的ATP-竞争性抑制剂已被描述为防止激酶激活促有丝***和抗细胞程序死亡途径(例如P-3激酶和STAT5)，引起BCR-ABL表型细胞死亡，从而提供有效对抗CML的疗法。可用作Bcr-Abl抑制剂的新颖的本发明化合物因而尤其适合于治疗涉及其过度表达的疾病、尤其白血病，例如CML或ALL。

新颖的本发明化合物鉴于它们作为PDGF受体抑制剂的活性，也尤其适合于治疗增殖疾病，尤其小细胞肺癌、动脉粥样硬化、血栓形成、牛皮癣、硬皮病或纤维变性。

也有实验证明本发明化合物的体内抗肿瘤活性：体内抗肿瘤活性如下测试：例如使用乳癌细胞系，例如人***依赖性乳癌MCF-7(ATCC：HTB22)或-75-1(ATCC：CRL1500)，或者***依赖性乳癌MDA-MB468(ATCC：HTB132)或MDA-MB231(ATCC：HTB26)；结肠癌细胞系，例如结肠癌Colo 205(ATCC：CCL222)；成胶质细胞瘤细胞系，例如成胶质细胞瘤U-87MG (ATCC：HTB14)或U-373MG(ATCC：HTB17)；肺癌细胞系，例如“小细胞肺癌”NCI-H69(ATCC：HTB119)或NCI-H209(ATCC：HTB172)或者肺癌NCI-H596(ATCC：HTB178)；皮肤肿瘤细胞系，例如黑素瘤Hs294T(ATCC：HTB140)或A375(ATCC：CRL1619)；来自生殖泌尿***的肿瘤细胞系，例如卵巢癌NIH-Ovcar3(ATCC：HTB161)，以及***癌DU145(ATCC：HTB81)或PC-3(ATCC：CRL1435)，或者膀胱癌T24(ATCC：HTB4)；上皮癌，例如上皮癌KB31；或者(尤其关于白血病)K562细胞(American Type Culture Collection，Mannassas，VA)或人CFU-G细胞(CFU-G代表粒细胞集落生成单位，它代表早期而必然的(commited)粒细胞生成性前体细胞，在血流或骨髓中循环)，它们各自被植入到雌性或雄性Balb/c裸鼠中。其他细胞系包括白血病细胞系，例如K-562、SUPB15、MEG01、Ku812F、MOLM-13、BaF3、CEM/0、JURKAT/0或U87MG。

向载体小鼠(例如每种细胞系4-8只小鼠)皮下注射各种细胞后(含最少2×10⁶细胞的100mL磷酸盐缓冲生理盐水)，获得肿瘤。使所得肿瘤连续经过至少三次随后的移植术，然后开始处理。在Forene麻醉(Abbott，Switzerland)下，利用13-号Trocar针向动物左胁s.c.注射肿瘤片段(各约25mg)，供移植。向移植有***依赖性肿瘤的小鼠另外供应***药丸(质量适合医用的1.0cm试管，Dow Chemicals，含有5mg***，Sigma)。一旦肿瘤已经达到100mm³的平均尺寸，按照惯例开始处理(也就是较低或中等肿瘤负荷)。通过测量垂直直径，每周一次、两次或三次(依赖于细胞系的肿瘤生长)和最后一次处理后24h测定肿瘤生长。在肿瘤的情况下，按照公式L×D×p/6测定肿瘤体积(参见Evans，B.D.，Smith，I.E.，Shorthouse，A.J.and Millar，J.J.，Brit.J.Cancer，45：466-468，1982)。抗肿瘤活性被表示为T/C％(经过处理动物的肿瘤体积的平均增加除以对照动物肿瘤体积的平均增加乘以100)。肿瘤消退率(％)代表与处理开始时平均肿瘤体积相比的最小平均肿瘤体积。处死其中肿瘤达到1.5至2cm³以上直径的每一动物。通过检查具有白血病细胞系的动物的外周白细胞数和脾脏与胸腺重量，评估白血病负荷。

本发明化合物或其盐的示范性(而非限制性)给药方案是每日给药，优选每日1至3次，持续较长时间，可能的话直至治愈疾病，或者如果仅仅为了缓和性治疗，则根据需要，持续尽可能长的时间；作为替代选择，治疗例如5天，和/或在第1、4和9天给药，最后在一段没有治疗的时间后重复，也是可能的。作为替代选择，一天治疗若干次(例如2至5次)或者连续给药治疗(例如输注)，例如在最后一句所示时间点，也是可能的。一般而言，给药为口服或肠胃外方式，优选口服。供试化合物优选地被稀释在水或无菌0.9％盐水中。

所有人肿瘤细胞系都是从American Type Culture Collection(ATCC，Rockville，MD.，USA)获得，另有指示除外，并在含有相应添加剂的建议培养基中培养(ATCC培养条件)，另有提到除外。c-sis-和v-sis-转化的BALB/c3T3细胞从Dr.C.Stiles(Dana Farber Cancer Institute，Boston，MA，USA)获得。它们是在“Dulbecco改性Eagle氏培养基”(DMEM)中培养，其中补充有10％胎牛血清和浓度为0.2mg/mL的潮霉素B或浓度为0.5mg/mL的G418。在补充有10％胎牛血清的DMEM中供养BALB/c AMuLVA.6R.1细胞(ATCC)。

本发明化合物的药理活性例如可以在本质上如下文所述的临床研究或试验方法中加以证明。

适合的临床研究例如有患有上文提到肿瘤疾病之一的患者的开放标记的非随机化剂量递增研究。对增殖疾病的有益效果可以直接通过这些研究结果来确定，或者借助本领域技术人员已知的研究设计变化来确定。在这类研究中可以如下确定治疗功效：例如在肿瘤的情况下，在18或24周后，每6周放射学评价肿瘤，在白血病的情况下，例如测定异常白细胞的数量，和染色单核细胞和/或借助测定最小残余疾病(MRD)，例如借助FACS-LPCMRD或PCR。

作为替代选择，可以利用安慰剂对照的双盲研究，以证实本发明化合物的益处。

式I的二芳基脲衍生物可以如WO 03/099771所述制备。新颖的本发明化合物优选地如下文“实施例”下所述制备。

根据本发明的优选实施方式

在下列优选的实施方式中，通用措辞可以用上下文提供的更具体的定义所代替，从而得到更加优选的发明实施方式。

在优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I^＊化合物

其中A、A′、n、m、p、r、X、Y₁、Y₂和R₁-R₅具有如上式I化合物所定义的含义；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在另一种优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I化合物，其中

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1或2；

m是0、1或2；

p是0、2或3；

r是1至5；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或有机部分，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，

其条件是如果X是NH，如果r＞1，每一R₄彼此独立地是如上式I下所定义的部分，但是不经由-C(＝O)-、-C(NR)-或-S(O₂)-桥与式I其余部分键合，或者

X是CHK，其中K是低级烷基或氢，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O、S或CH₂；

Y₂是O、S或NH；

其条件是(Y₁)_n-(Y₂)_m不包括O-O、S-S、NH-O、NH-S或S-O基团；

每一R₁、R₂、R₃和R₅彼此独立地是氢或者无机或有机部分，或者任意两个R₁、R₂和R₃一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，这些部分的其余一个是氢或者无机或有机部分，其条件是如果G不存在，Z是式Ia基团，R₁、R₂和R₃不能都是氢，

进一步的条件是如果R₁、R₂和R₃之一是卤代基或低级烷基-磺酰基，其他两个不能都是氢；

R₄是无机或有机部分，其条件是如果n是1，m是0，p是0，r是1，X是NH，Y₁是O，G不存在，Z是式Ia基团，R₄与含有A和A’的苯环一起不构成甲基吡啶基、2-羟基吡啶-4-基或1H-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基；且

G和Z具有如上式I下所给出的含义；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在进一步优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I^＊化合物，其中

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1；

m是0；

p是0、2或3；

r是1；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或低级烷基，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CH₂，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O或CH₂；

每一R₁、R₂和R₃彼此独立地是氢；低级烷基；卤代基，尤其溴或氯；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；低级烷氧基，尤其甲氧基；卤代-低级烷氧基，尤其2，2，2-三氟乙氧基；苯基；哌啶基，尤其哌啶-1-基；哌嗪基，尤其哌嗪-1-基；吗啉基，尤其吗啉；硫吗啉基，尤其硫吗啉代基，或者任意两个一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，这些部分的其余一个是氢或者所述部分之一，其条件是R₁、R₂和R₃不能都是氢，进一步的条件是如果R₁、R₂和R₃之一是卤代基，其他两个不能都是氢；

R₄是低级烷氧基，尤其甲氧基；低级烷酰氨基，尤其乙酰氨基；羟基苯基氨基，尤其p-羟基苯基氨基；氨基-低级烷氧基-苯基氨基，尤其4-[(2-氨基乙基)氧基苯基]-氨基；氨磺酰基苯基氨基，尤其4-氨磺酰基苯基氨基；氨甲酰基苯基氨基，尤其4-氨甲酰基苯基氨基；[N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基]-苯基氨基，尤其[N-(2-羟基乙基)-氨甲酰基]-苯基氨基；或者卤代基，尤其氯；且

R₅是氢、低级烷基或卤代基，尤其氢；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在进一步尤其优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I化合物，其中

G不存在，或者是低级亚烷基，尤其亚甲基或亚乙基，或C₃-C₅亚环烷基，尤其亚环丙基，Z是式Ia基团，或者

G不存在，Z是式Ib基团；

A是CH或N，A’是N或N→O；

n是1；

m是0或1；

p是0、2或3；

r是0或1；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或低级烷基，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CHK，其中K是氢，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O、S或CH₂；

Y₂是O；

其条件是(Y₁)_n-(Y₂)_m不包括O-O或S-O基团；

每一R₁、R₂和R₃彼此独立地是氢；低级烷基，尤其甲基、乙基、正丙基、异丙基或叔丁基；低级烯基，尤其异丙烯基；羟基-低级烷基，尤其羟基-丙基；低级烷氧基，尤其甲氧基；卤代基，尤其氯或溴；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；卤代-低级烷氧基，尤其三氟甲氧基或三氟乙氧基；氨基-低级烷基，尤其氨甲基；氨基-低级烷氧基，尤其氨基乙氧基；二-低级烷基-氨基，尤其二乙氨基；羟基-低级烷基-氨基，尤其羟基-丙基氨基；双-(低级烷氧基-低级烷基)-氨基，尤其双-(2-甲氧基-乙基)-氨基；二-低级烷基-氨基-低级烷基，尤其二甲氨基甲基；苯基；吗啉基，尤其吗啉-4-基；哌啶基，尤其哌啶-1-基；哌啶基-低级烷基，尤其哌啶-1-基甲基；低级烷基-哌嗪基，尤其4-甲基哌嗪-1-基或4-乙基哌嗪-1-基；低级烷基-哌嗪基-低级烷基，尤其4-甲基哌嗪-1-基甲基或4-乙基哌嗪-1-基甲基；吡啶基，尤其吡啶-2-基；或者低级烷基-咪唑基，尤其2-或4-甲基咪唑-1-基；

如果r是1，R₄是低级烷基，尤其甲基、乙基或异丙基；羟基；氨基羰基；低级烷基-羰基，尤其甲基羰基；环己基；卤代基，尤其氯或氟；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；低级烷氧基，尤其甲氧基；氨基；低级烷基-氨基，尤其甲氨基、乙氨基、异丙氨基或叔丁氨基；二-低级烷基-氨基，尤其二甲氨基；低级烯基-氨基，尤其丙-2-烯基氨基或丁-3-烯基氨基；低级烷基-羰基-氨基，尤其甲基碳酰氨基；氰基；叠氮基；羟基-苯基-氨基，尤其3-或4-羟基-苯基-氨基；单或三低级烷氧基-苯基-氨基，尤其甲氧基-苯基-氨基或三甲氧基-苯基-氨基；低级烷氧基-卤代-苯基-氨基，尤其甲氧基-氟-苯基-氨基；苯基-低级烷基氨基，尤其苄氨基；(单或二-低级烷氧基)-苯基-低级烷基氨基，尤其甲氧基-苄氨基或二甲氧基-苄氨基；氨基磺酰基-苯基-低级烷基氨基，尤其氨基磺酰基-苄氨基；氨基-低级烷氧基-苯基-氨基，尤其氨基乙氧基-苯基-氨基；低级烷基-氨基-磺酰基-低级烷基-苯基氨基，尤其甲氨基-磺酰基甲基-苯基氨基；低级烷基-哌嗪基-低级烷基氨基，尤其4-甲基哌嗪-1-基-丙氨基；吗啉基-低级烷基氨基，尤其吗啉-4-基-丙氨基；低级烷基-哌啶基-氨基，尤其1-甲基哌啶-4-基氨基；四唑基，尤其1H-四唑-5-基；低级烷基-四唑基，尤其低级烷基-四唑-5-基，例如1-甲基-1H-四唑-5-基或2-甲基-2H-四唑-5-基；或者(二-低级烷基)-氨基-低级烷基-四唑基，尤其(二-低级烷基)-氨基-低级烷基-四唑-5-基，例如2-(3-二甲氨基丙基)-2H-四唑-5-基；且

R₅最优选地是氢；或低级烷基，尤其甲基；或者卤代基，尤其氯；或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在另一种尤其优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I化合物，其中

A和A’都是N，n是1，m是0，p是0或2，r是1，如果p是0，X是NH，或者如果p是2，X是氮，它与(CH₂)₂和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，Y₁是O，G不存在，Z是式Ia基团，R₁、R₂和R₃至少有一个是碱性有机部分，R₄是氨基或低级烷基氨基，R₅是氢；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在另一种优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I^＊化合物，其中

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1；

m是0；

p是0、2或3；

r是0、1或2；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或低级烷基，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CH₂，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O或CH₂；

每一R₁、R₂和R₃彼此独立地是氢；低级烷基；卤代基，尤其溴或氯；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；低级烷氧基，尤其甲氧基；卤代-低级烷氧基，尤其2，2，2-三氟乙氧基；苯基；哌啶基，尤其哌啶-1-基；哌嗪基，尤其哌嗪-1-基；吗啉基，尤其吗啉；硫吗啉基，尤其硫吗啉代基，或者任意两个一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，这些部分的其余一个是氢或者所述部分之一；

如果r不是零，R₄是低级烷基，尤其甲基或乙基；低级烷氧基，尤其甲氧基；低级烷酰氨基，尤其乙酰氨基；羟基苯基氨基，尤其p-羟基苯基氨基；氨基-低级烷氧基苯基-氨基，尤其4-[(2-氨基乙基)氧基苯基]-氨基；氨磺酰基苯基氨基，尤其4-氨磺酰基苯基氨基；氨甲酰基苯基氨基，尤其4-氨甲酰基苯基氨基；[N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基]-苯基氨基，尤其[N-(2-羟基乙基)-氨甲酰基]-苯基氨基；卤代基，尤其氯；或者羟基；且

R₅是氢、低级烷基或卤代基，尤其氢；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在另一种尤其优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I化合物，其中

G不存在，或者是低级亚烷基，尤其亚甲基或亚乙基，或C₃-C₅亚环烷基，尤其亚环丙基，Z是式Ia基团，或者

G不存在，Z是式Ib基团；

A是CH或N，A’是N或N→O；

n是1；

m是0或1；

p是0、2或3；

r是1；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或低级烷基，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CHK，其中K是氢，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O、S或CH₂；

Y₂是O；

其条件是(Y₁)_n-(Y₂)_m不包括O-O或S-O基团；

每一R₁、R₂和R₃彼此独立地是氢；低级烷基，尤其甲基、乙基、正丙基、异丙基或叔丁基；低级烯基，尤其异丙烯基；羟基-低级烷基，尤其羟基-丙基；低级烷氧基，尤其甲氧基；卤代基，尤其氯或溴；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；卤代-低级烷氧基，尤其三氟甲氧基或三氟乙氧基；氨基-低级烷基，尤其氨甲基；氨基-低级烷氧基，尤其氨基乙氧基；二-低级烷基-氨基，尤其二乙氨基；羟基-低级烷基-氨基，尤其羟基-丙基氨基；双-(低级烷氧基-低级烷基)-氨基，尤其双-(2-甲氧基-乙基)-氨基；二-低级烷基-氨基-低级烷基，尤其二甲氨基甲基；苯基；吗啉基，尤其吗啉-4-基；哌啶基，尤其哌啶-1-基；哌啶基-低级烷基，尤其哌啶-1-基甲基；低级烷基-哌嗪基，尤其4-甲基哌嗪-1-基或4-乙基哌嗪-1-基；低级烷基-哌嗪基-低级烷基，尤其4-甲基哌嗪-1-基甲基或4-乙基哌嗪-1-基甲基；吡啶基，尤其吡啶-2-基；或者低级烷基-咪唑基，尤其2-或4-甲基咪唑-1-基，其条件是如果G不存在，Z是式Ia基团，R₁、R₂和R₃不能都是氢，进一步的条件是如果R₁、R₂和R₃之一是卤代基，其他两个不能都是氢；

R₄是低级烷基，尤其甲基、乙基或异丙基；羟基；氨基羰基；低级烷基-羰基，尤其甲基羰基；环己基；卤代基，尤其氯或氟；卤代-低级烷基，尤其三氟甲基；低级烷氧基，尤其甲氧基；氨基；低级烷基-氨基，尤其甲氨基、乙氨基、异丙氨基或叔丁氨基；二-低级烷基-氨基，尤其二甲氨基；低级烯基-氨基，尤其丙-2-烯基氨基或丁-3-烯基氨基；低级烷基-羰基-氨基，尤其甲基碳酰氨基；氰基；叠氮基；羟基-苯基-氨基，尤其3-或4-羟基-苯基-氨基；单或三低级烷氧基-苯基-氨基，尤其甲氧基-苯基-氨基或三甲氧基-苯基-氨基；低级烷氧基-卤代-苯基-氨基，尤其甲氧基-氟-苯基-氨基；苯基-低级烷基氨基，尤其苄氨基；(单或二-低级烷氧基)-苯基-低级烷基氨基，尤其甲氧基-苄氨基或二甲氧基-苄氨基；氨基磺酰基-苯基-低级烷基氨基，尤其氨基磺酰基-苄氨基；氨基-低级烷氧基-苯基-氨基，尤其氨基乙氧基-苯基-氨基；低级烷基-氨基-磺酰基-低级烷基-苯基氨基，尤其甲氨基-磺酰基甲基-苯基氨基；低级烷基-哌嗪基-低级烷基氨基，尤其4-甲基哌嗪-1-基-丙氨基；吗啉基-低级烷基氨基，尤其吗啉-4-基-丙氨基；低级烷基-哌啶基-氨基，尤其1-甲基哌啶-4-基氨基；四唑基，尤其1H-四唑-5-基；低级烷基-四唑基，尤其低级烷基-四唑-5-基，例如1-甲基-1H-四唑-5-基或2-甲基-2H-四唑-5-基；或者(二-低级烷基)-氨基-低级烷基-四唑基，尤其(二-低级烷基)-氨基-低级烷基-四唑-5-基，例如2-(3-二甲氨基丙基)-2H-四唑-5-基，其条件是如果X是NH，R₄不是氨基羰基或低级烷基-羰基，进一步的条件是如果n是1，m是0，p是0，r是1，X是NH，Y₁是O，G不存在，Z是式Ia基团，R₄与含有A和A’的苯环一起不构成甲基吡啶基、2-羟基吡啶-4-基或1H-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基；

R₅最优选地是氢；或低级烷基，尤其甲基；或者卤代基，尤其氯；或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在进一步非常优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I化合物，其中

A和A’都是N，n是1，m是0，p是0或2，r是1，如果p是0，X是NH，或者如果p是2，X是氮，它与(CH₂)₂和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，Y₁是O，G不存在，Z是式Ia基团，R₁、R₂和R₃至少有一个是碱性有机部分，R₄是氨基或低级烷基氨基，R₅是氢；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在进一步非常优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I^＊化合物，其中

A、A’、n、m、p、Y₁、Y₂、R₁、R₂、R₃和R₄具有上式I^＊下给出的含义，r是1至5，如果p是0，X是NR，其中R是氢或有机部分，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)₂和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CH₂，p是零；

如果p是零，虚线代表的键不存在；

其条件是如果X是NH，每一R₄如果存在的话，彼此独立地是如上式I^＊下所定义的部分，但是不经由-C(＝O)-、-C(NR)-或-S(O₂)-桥与式I^＊其余部分键合，取代基R₁、R₂和R₃选自下列部分，其中相对于该环与式I^＊分子其余部分(经由NH-C(＝O)-X-部分)键合的位置指示各位置(o＝邻位，m＝间位，p＝对位)：

如果只有R₁不是氢：

R₁＝p-低级烷基，尤其p-甲基、p-乙基、p-正丙基；

m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基；或者

苯基、p-哌啶-1-基和p-哌嗪-1-基；

如果R₁和R₂都不是氢：

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-卤代基，尤其p-溴；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-卤代-低级烷氧基，尤其p-(2，2，2-三氟乙氧基)；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-苯基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-哌啶-1-基或p-哌嗪-1-基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-N-吗啉代基或p-N-硫吗啉代基；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-卤代基，尤其p-溴(次优选)；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-卤代-低级烷氧基，尤其p-2，2，2-三氟乙氧基；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-苯基；或者

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-哌啶-1-基或p-哌嗪-1-基；或者如果R₁、R₂和R₃不是氢：

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₃＝p-低级烷氧基，尤其p-甲氧基；或者

R₁＝低级烷氧基，尤其甲氧基，R₂和R₃一起构成低级亚烷二氧基，尤其-O-CH₂-CH₂-O-桥；

R₅是氢、低级烷基或卤代基，尤其氢；

其条件是如果n是1，m是0，p是0，r是1，X是NH且Y₁是O，R₄与含有A和A’的苯环一起不构成甲基吡啶基、2-羟基吡啶-4-基或1H-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基；

或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在进一步尤其优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是式I^＊化合物，其中

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1；

m是0；

p是0、2或3；

r是1或2；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或低级烷基，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CH₂，p是零，

其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O或CH₂；

R₁、R₂和R₃选自下列部分，其中相对于该环与式I^＊分子其余部分(经由NH-C(＝O)-X-部分)键合的位置指示各位置(o＝邻位，m＝间位，p＝对位)：如果只有R₁不是氢：

R₁＝p-低级烷基，尤其p-甲基、p-乙基、p-正丙基；

m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基；或者

苯基、p-哌啶-1-基和p-哌嗪-1-基；

如果R₁和R₂都不是氢：

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-卤代基，尤其p-溴；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-卤代-低级烷氧基，尤其p-(2，2，2-三氟乙氧基)；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-苯基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-哌啶-1-基或p-哌嗪-1-基；

R₁＝m-卤代-低级烷基，尤其m-三氟甲基，R₂＝p-N-吗啉代基或p-N-硫吗啉代基；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-卤代基，尤其p-溴(次优选)；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-卤代-低级烷氧基，尤其p-2，2，2-三氟乙氧基；

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-苯基；或者

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝p-哌啶-1-基或p-哌嗪-1-基；或者如果R₁、R₂和R₃不是氢：

R₁＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₂＝m-低级烷氧基，尤其m-甲氧基，R₃＝p-低级烷氧基，尤其p-甲氧基；或者

R₁＝低级烷氧基，尤其甲氧基，R₂和R₃一起构成低级亚烷二氧基，尤其-O-CH₂-CH₂-O-桥；

如果r不是零，R₄是低级烷氧基，尤其甲氧基；低级烷酰氨基，尤其乙酰氨基；羟基苯基氨基，尤其p-羟基苯基氨基；氨基-低级烷氧基苯基-氨基，尤其4-[(2-氨基乙基)氧基苯基]-氨基；氨磺酰基苯基氨基，尤其4-氨磺酰基苯基氨基；氨甲酰基苯基氨基，尤其4-氨甲酰基苯基氨基；[N-(羟基-低级烷基)-氨甲酰基]-苯基氨基，尤其[N-(2-羟基乙基)-氨甲酰基]-苯基氨基；或者卤代基，尤其氯；

R₅是卤代基，尤其氯；低级烷基，尤其甲基；或者优选氢；或其互变体；或其药学上可接受的盐。

在另一种非常优选的实施方式中，本发明涉及二芳基脲衍生物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，其中该二芳基脲衍生物是选自WO 03/099771实施例的式I化合物或其药学可接受盐。

最优选地，本发明涉及新颖的本发明化合物或其药学可接受盐。

进一步优选的是新颖的本发明化合物或其药学上可接受的盐的用途，其中所要治疗的蛋白激酶依赖性疾病是蛋白酪氨酸激酶依赖性疾病，尤其增殖疾病(优选良性或者尤其恶性肿瘤)，尤其是依赖于任意一种或多种下列蛋白激酶的疾病：c-Abl、Bcr-Abl、Flt-3、RET、VEGF-R、Tek、PDGF-R、FGF-R、IGF-IR、Eph受体(尤其例如EphB4受体)、c-Kit、Met、c-Src、Raf和/或ras，尤其c-Abl、Bcr-Abl、Flt-3、RET、VEGF-R和/或Tek，最尤其Flt-3。

药物组合物

本发明也尤其涉及包含新颖的本发明化合物的药物组合物；涉及新颖的本发明化合物在治疗性(在本发明更广义的方面中以及预防性)治疗(尤其酪氨酸)蛋白激酶依赖性疾病的用途或者治疗(尤其酪氨酸)蛋白激酶依赖性疾病的方法，尤其上文提到的优选疾病；涉及用于所述用途的新颖的本发明化合物和尤其用于所述用途的药物组合物的制备。

本发明也涉及新颖的本发明化合物的前体药物，它们体内转化为新颖的本发明化合物本身。任何对新颖的本发明化合物的称谓因此被理解为也表示新颖的本发明化合物的相应的前体药物，只要适当和适宜即可。

本发明化合物可以用于制备例如药物组合物，其中包含药学有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，以及或者混合有显著量的一种或多种无机或有机的、固体或液体的药学可接受载体。

本发明也涉及药物组合物，它适合于对温血动物给药，尤其人类(或者从温血动物、尤其人类衍生的细胞或细胞系，例如淋巴细胞)，用于治疗或者在本发明的更广义方面预防(对抗)响应于蛋白激酶活性、尤其蛋白酪氨酸激酶活性抑制的疾病，尤其上文关于新颖的本发明化合物的用途作为优选提到的疾病之一，所述组合物包含就所述抑制作用而言是有效的一定量新颖的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体。

根据本发明的药物组合物是肠道给药如鼻、直肠或口服或者肠胃外给药如肌内或静脉内对温血动物(尤其人类)给药，它包含有效剂量的药理活性成分，单独或者以及显著量药学上可接受的载体。活性成分的剂量依赖于温血动物的品种、体重、年龄与个体条件、个体药动学数据、所要治疗的疾病和给药的方式。

本发明也涉及治疗响应于(尤其酪氨酸)蛋白激酶抑制的疾病、尤其上文关于新颖的本发明化合物的用途作为优选提到的疾病之一的方法，所述方法包括预防性或者尤其治疗性给予(对抗所述疾病)有效量的新颖的本发明化合物，尤其对由于所述疾病之一而需要这类治疗的温血动物、例如人给药。

式I化合物或其药学上可接受的盐对温血动物、例如体重大约70kg的人的给药剂量优选地从大约3mg至大约30g、更优选大约10mg至大约1.5g、最优选约100mg至约1000mg每人每天，优选地分为例如可以是相同大小的1至3个单一剂量。通常，儿童接受成人剂量的一半。

药物组合物包含大约1％至大约95％、优选大约20％至大约90％的活性成分。根据本发明的药物组合物例如可以是单元剂型，例如安瓿、小瓶、栓剂、糖衣丸、片剂或胶囊的形式。

本发明的药物组合物按照本身已知的方式制备，例如借助常规的溶解、冻干、混合、制粒或成型过程。

活性成分的溶液和悬液、尤其等渗的水溶液或悬液是一种优选的使用形式，例如在包含单独的活性成分或者以及载体如甘露糖醇的冻干组合物的情况下，有可能在使用前制成这类溶液或悬液。药物组合物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、湿润和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂，按照本身已知的方式制备，例如借助常规的溶解或冻干过程。所述溶液或悬液可以包含粘度增加物质，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。

油中的悬液包含惯用于注射目的的植物性、合成或半合成油作为油组分。尤其可以提到液体脂肪酸酯，其中含有具有8至22个、尤其12至22个碳原子的长链脂肪酸作为酸组分，例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸或者相应的不饱和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、brasidic acid或亚油酸，如果需要的话加入抗氧化剂，例如维生素E、β-胡萝卜素或3，5-二-叔丁基-4-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分具有最多6个碳原子，并且是单-或多-羟基的，例如单-、二-或三-羟基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或者它们的异构体，但是尤其甘醇和甘油。因此提到下列脂肪酸酯的实例：油酸乙基酯、肉豆蔻酸异丙基酯、棕榈酸异丙基酯、″Labrafil M 2375″(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefosse，Paris)、″Miglyol 812″(链长C₈至C₁₂的饱和脂肪酸的甘油三酯，Huls AG，德国)，但是尤其植物油，例如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油，更尤其花生油。

注射组合物是按照惯用方式在无菌条件下制备；这也适用于向安瓿或小瓶引入组合物和密封容器。

口服给药用药物组合物可以如下得到：合并活性成分与固体载体，如果需要的话将所得混合物制粒，如果需要或必要的话，在加入适当的赋形剂后将混合物加工成片剂、糖衣丸芯或胶囊。也有可能将它们掺入到允许计量扩散或释放活性成分的塑性载体中。

适合的载体尤其是填充剂，例如糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制品和/或钙的磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；和粘合剂，例如淀粉糊，例如采用玉米、小麦、水稻或马铃薯淀粉，明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；和/或如果需要的话，崩解剂，例如上述淀粉和/或羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或其盐，例如藻酸钠。赋形剂尤其是流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其盐，例如硬脂酸镁或钙，和/或聚乙二醇。糖衣丸芯带有适合的、可选肠溶性的包衣，尤其使用浓糖溶液，其中可以包含***胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，或者在适合有机溶剂中的包衣溶液，或者就肠溶衣制备而言，使用适合的纤维素制品的溶液，例如乙基纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯。

胶囊是由明胶制成的干法填充胶囊和由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。干法填充的胶囊可以包含活性成分的颗粒形式，例如以及填充剂，例如乳糖；粘合剂，例如淀粉，和/或助流剂，例如滑石或硬脂酸镁，如果需要的话还有稳定剂。在软胶囊中，活性成分优选地是溶解或悬浮在适合的油性赋形剂中，例如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇，也有可能加入稳定剂和/或抗菌剂。可以向片剂或糖衣丸包衣或者胶囊壳加入染剂或色素，例如出于区分目的或者指示活性成分的不同剂量。

式I化合物、尤其新颖的本发明化合物也可以有利地用于与其他抗增殖剂组合。这类抗增殖剂包括但不限于芳构化酶抑制剂、抗***、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷基化剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、法呢基转移酶抑制剂、COX-2抑制剂、MMP抑制剂、mTOR抑制剂、抗瘤形成性抗代谢物、铂化合物、降低蛋白激酶活性的化合物与进一步的抗血管生成化合物、***释放因子激动剂、抗雄激素、bengamide、双膦酸类化合物、类固醇、抗增殖性抗体、17-(烯丙氨基)-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)和替莫唑胺(

)。

本文所用的术语“芳构化酶抑制剂”涉及抑制***产生、也就是底物雄烯二酮和睾酮分别向雌酮和***转化的化合物。该术语包括但不限于类固醇，尤其依西美坦和福美坦，以及特别是非类固醇，尤其氨鲁米特、伏罗唑、法倔唑、阿那曲唑，非常尤其是来曲唑。依西美坦例如可以以其市售形式给药，例如商标为AROMASIN^TM。福美坦例如可以以其市售形式给药，例如商标为LENTARON^TM。法倔唑例如可以以其市售形式给药，例如商标为AFEMA^TM。阿那曲唑例如可以以其市售形式给药，例如商标为ARIMIDEX^TM。来曲唑例如可以以其市售形式给药，例如商标为FEMARA^TM或FEMAR^TM。氨鲁米特例如可以以其市售形式给药，例如商标为ORIMETEN^TM。

包含芳构化酶抑制剂作为抗瘤形成剂的本发明组合特别可用于治疗激素受体阳性乳腺肿瘤。

本文所用的术语“抗***”涉及在***受体水平上拮抗***效应的化合物。该术语包括但不限于他莫昔芬、fulvestrant、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬例如可以以其市售形式给药，例如商标为NOLVADEX^TM。盐酸雷洛昔芬例如可以以其市售形式给药，例如商标为EVISTA^TM。fulvestrant可以如US 4,659,516所述配制，或者例如可以以其市售形式给药，例如商标为FASLODEX^TM。

本文所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、伊立替康、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148(WO 99/17804中的化合物A1)。伊立替康例如可以以其市售形式给药，例如商标为CAMPTOSAR^TM。拓扑替康例如可以以其市售形式给药，例如商标为HYCAMTIN^TM。

本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环素类(antracycline)阿霉素(包括脂质体制剂，例如CAELYX^TM)、表柔比星、伊达比星和奈莫比星(nemorubin)，蒽醌类米托蒽醌和洛索蒽醌，和鬼臼毒素类依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷例如可以以其市售形式给药，例如商标为ETOPOPHOS^TM。替尼泊苷例如可以以其市售形式给药，例如商标为VM 26-BRISTOL^TM。阿霉素例如可以以其市售形式给药，例如商标为ADRIBLASTIN^TM。表柔比星例如可以以其市售形式给药，例如商标为FARMORUBICIN^TM。伊达比星例如可以以其市售形式给药，例如商标为ZAVEDOS^TM。米托蒽醌例如可以以其市售形式给药，例如商标为NOVANTRON^TM。

术语“微管活性剂”涉及微管稳定化与微管去稳定化剂，包括但不限于紫杉烷类泰素(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)，长春花属生物碱，例如长春碱，尤其硫酸长春碱，长春新碱，尤其硫酸长春新碱，和长春烯碱，海绵内酯(discodermolide)和埃坡霉素(epothilone)，例如埃坡霉素B和D。多西他赛例如可以以其市售形式给药，例如商标为TAXOTERE^TM。硫酸长春碱例如可以以其市售形式给药，例如商标为VINBLASTIN R.P.^TM。硫酸长春新碱例如可以以其市售形式给药，例如商标为FARMISTIN^TM。海绵内酯例如可以如US 5,010,099所述得到。

本文所用的术语“烷基化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺和美法仑。环磷酰胺例如可以以其市售形式给药，例如商标为CYCLOSTIN^TM。异环磷酰胺例如可以以其市售形式给药，例如商标为HOLOXAN^TM。

术语“组蛋白去乙酰酶抑制剂”涉及抑制组蛋白去乙酰酶并且具备抗增殖活性的化合物。这包括WO 02/22577所公开的化合物，尤其N-羟基-3-[4-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺和其药学上可接受的盐。进一步尤其包括辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。

术语“法呢基转移酶抑制剂”涉及抑制法呢基转移酶并且具备抗增殖活性的化合物。

术语“COX-2抑制剂”涉及抑制环加氧酶2型酶(COX-2)并且具备抗增殖活性的化合物，例如塞来昔布(

)、洛芬昔布(

)和鲁米拉考昔(COX189)。

术语“MMP抑制剂”涉及抑制基质金属蛋白酶(MMP)并且具备抗增殖活性的化合物。

术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)并且具备抗增殖活性的化合物，例如西罗莫司()、everolimus(Certican^TM)、CCI-779和ABT578。

术语“抗瘤形成性抗代谢产物”包括但不限于5-氟尿嘧啶、替加氟、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、磷酸氟达拉滨、氟尿苷(fluorouridine)、吉西他滨、6-巯基嘌呤、羟基脲、甲氨蝶呤、依达曲沙和这类化合物的盐，此外还有ZD 1694(RALTITREXED^TM)、LY231514(ALIMTA^TM)、LY264618(LOMOTREXOL^TM)和OGT719。

本文所用的术语“铂化合物”包括但不限于卡铂、顺铂和奥沙利铂。卡铂例如可以以其市售形式给药，例如商标为CARBOPLAT^TM。奥沙利铂例如可以以其市售形式给药，例如商标为ELOXATIN^TM。

本文所用的术语“降低蛋白激酶活性的化合物与进一步的抗血管生成化合物”包括但不限于降低下列活性的化合物，例如血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、c-Src、蛋白激酶C、血小板衍生生长因子(PDGF)、Bcr-Abl、c-Kit、Flt-3、***I受体(IGF-IR)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)，具有不同于降低蛋白激酶活性的作用机理的抗血管生成化合物。

降低VEGF活性的化合物尤其是抑制VEGF受体、尤其VEGF受体的酪氨酸激酶活性的化合物和与VEGF结合的化合物，特别是在下列文献中一般和具体公开的那些化合物、蛋白质和单克隆抗体：WO 98/35958(描述式I化合物)、WO 00/09495、WO 00/27820、WO 00/59509、WO 98/11223、WO 00/27819、WO 01/55114、WO 01/58899和EP 0769947；M.Prewett等人在Cancer Research 59(1999)5209-5218中、F.Yuan等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA(vol.93，14765-14770，1996年12月)中、Z.Zhu等人在Cancer Res.58，1998，3209-3214中和J.Mordenti等人在ToxicologicPathology，vol.27，no.1，14-21，1999中所述的那些；WO 00/37502和WO94/10202；Angiostatin^TM，如M.S.O′Reilly等人，Cell 79，1994，315-328所述；Endostatin^TM，如M.S.O′Reilly等人，Cell 88，1997，277-285所述；

降低EGF活性的化合物尤其是抑制EGF受体、尤其EGF受体的酪氨酸激酶活性的化合物和与EGF结合的化合物，特别是在下列文献中一般与具体公开的那些化合物：WO 97/02266(描述式IV化合物)、EP 0564409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0566226、EP 0787722、EP 0837063、WO 98/10767、WO 97/30034、WO 97/49688、WO 97/38983和尤其WO96/33980；

降低c-Src活性的化合物包括但不限于如下所定义的抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物和SH2相互作用抑制剂，例如公开在WO 97/07131和WO 97/08193中的那些；

抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物包括但不限于属于下列结构种类的化合物：吡咯并嘧啶类、尤其吡咯并[2，3-d]嘧啶；嘌呤类；吡唑并嘧啶类、尤其吡唑并[3，4-d]嘧啶；吡唑并嘧啶类、尤其吡唑并[3，4-d]嘧啶；和吡啶并嘧啶类、尤其吡啶并[2，3-d]嘧啶。优选地，该术语涉及公开在WO 96/10028、WO 97/28161、WO 97/32879和WO 97/49706中的那些化合物；

降低蛋白激酶C活性的化合物尤其是公开在EP 0296110中的那些星形孢菌素衍生物(描述在WO 00/48571中的药物制备物)，这些化合物是蛋白激酶C抑制剂；

降低IGF-IR活性的化合物尤其是公开在WO 02/92599中的那些化合物；

降低蛋白激酶活性并且也可以与本发明化合物联合使用的进一步具体化合物有Imatinib(

)、PKC412、Iressac^TM(ZD1839)、{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基}-((R)-1-苯基-乙基)-胺(AEE788)和其药学可接受盐(另见WO 03/13541)、1-(4-氯-苯胺基)-4-(4-吡啶基-甲基)-酞嗪(PTK787)和其药学上可接受的盐(另见WO98/35958)、ZD6474、GW2016、CHIR-200131、CEP-7055/CEP-5214、CP-547632、KRN-633和SU5416；

具有不同于降低蛋白激酶活性的作用机理的抗血管生成化合物包括但不限于例如沙利度胺(THALOMID)、塞来昔布(Celebrex)和ZD6126。

本文所用的术语“***释放因子激动剂”包括但不限于abarelix、性瑞林和乙酸性瑞林。性瑞林公开在US 4,100,274中，例如可以以其市售形式给药，例如商标为ZOLADEX^TM。abarelix例如可以如US 5,843,901所述配制。

本文所用的术语“抗雄激素”包括但不限于比卡鲁胺(CASODEX^TM)，它例如可以如US 4,636,505所述配制。

术语“bengamide”涉及bengamide和其具有抗增殖性质的衍生物。

本文所用的术语“双膦酸类化合物”包括但不限于依曲膦酸(etridonicacid)、氯膦酸(clodronic acid)、替鲁膦酸(tiludronic aicd)、帕米膦酸(pamidronic acid)、阿仑膦酸(alendronic acid)、伊班膦酸(ibandronicacid)、利塞膦酸(risedronic acid)和唑来膦酸(zoledronic acid)。依曲膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为DIDRONEL^TM。氯膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为BONEFOS^TM。替鲁膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为SKELID^TM。帕米膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为AREDIA^TM。阿仑膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为FOSAMAX^TM。伊班膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为BONDRANAT^TM。利塞膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为ACTONEL^TM。唑来膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为ZOMETA^TM。

术语“类固醇”包括氢化可的松、***(

)、甲基氢化***龙和***龙。

本文所用的术语“抗增殖性抗体”包括但不限于司徒曼布(Trastuzumab)(Herceptin^TM)、司徒曼布-DM1、erlotinib(Tarceva^TM)、bevacizumab(Avastin^TM)、利妥希玛(

)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗体。

就急性髓性白血病(AML)的治疗而言，式I化合物、尤其是新颖的本发明化合物可以与标准白血病疗法联合使用，尤其用于治疗AML的疗法。确切而言，本发明的化合物可以与例如法呢基转移酶抑制剂和/或其他可用于治疗AML的药物联合给药，例如柔红霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂和PKC412。

由代码、通用名称或商品名称所确定的活性成分的结构可以来自标准著作“默克索引”的现行版本或者来自数据库，例如Patents International(例如IMS World Publications)。

上述可以与式I化合物联合使用的化合物可以如本领域例如上面引用的文献所述制备和给药。

实施例(新颖的本发明化合物)

下列实施例起到阐述发明而非限制其范围的作用。

温度按摄氏度测量。除非另有指示，反应发生在室温下。

R_f值表明每一物质移动的距离与前方洗脱剂移动的距离之比，使用各自所列举的溶剂***、借助薄层色谱法在硅胶薄层平板(Merck，Darmstadt，Germany)上测定R_f值。

缩写：

Anal.   元素分析(就所示原子而言，计算与测量值之间的差异≤0.4％)

aq      含水

盐水    NaCl在水中的饱和溶液

Boc     叔丁氧羰基

Bu      丁基

conc.   浓

d       天

DIPE    二异丙醚

DIPEA   二异丙基乙胺

DMAP    二甲氨基吡啶

DME     1，2-二甲氧基乙烷

DMF     二甲基甲酰胺

DMSO-d₆ 全氘代二甲基亚砜

equiv   当量

醚      二***

EtOAc   乙酸乙酯

EtOH    醇

Ex.     实施例

h       小时

HPLC    高压液相色谱

L             升

Me            甲基

MeOH          甲醇

min           分钟

m.p.          熔点

MPLC          中压液相色谱

              -Combi Flash***：正压SiO₂

              -Gilson***：反相Nucleosil C18(H₂O/CH₃CN+TFA)

              一般而言，用NaHCO₃中和后，所得产物为游离碱

MS            质谱

NEt₃          三乙胺

NMR           核磁共振

R_f            比移值(TLC)

rt            室温

TBDMS         叔丁基-二甲基-甲硅烷基

tBu           叔丁基

THF           四氢呋喃(从Na/二苯酮中蒸馏)

TFA           三氟乙酸

TLC           薄层色谱

t_Ret          保留时间(HPLC)

三光气        双(三氯甲基)碳酸酯

HPLC条件：

^A t _Ret ：***A的保留时间[min]：线性梯度20-100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)13min+5min 100％CH₃CN(0.1％TFA)；检测波长215nm；流速1ml/min，25或30℃；柱子：Nucleosil 120-3C18(125×3.0mm)。

^B t _Ret ：***B的保留时间[min]：线性梯度20-100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)7min；检测波长215nm；流速1ml/min，25或30℃；柱子：Nucleosil 100-3C18HD(125×4.0mm)。

^C t _Ret ：***C的保留时间[min]：线性梯度20-100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)7min+2min 100％CH₃CN(0.1％TFA)；检测波长215nm；流速1ml/min，30℃；柱子：Nucleosil 100-3C18HD(125×4mm)。

^D t _Ret ：***D的保留时间[min]：线性梯度20-100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)5min+1.5min 100％CH₃CN(0.1％TFA)；检测波长215nm；流速1ml/min，30℃；柱子：Nucleosil 100-3C18HD(70×4mm)。

实施例1：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下935mg(3.78mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的3ml THF溶液加入870mg(3.78mMol)3-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺(步骤1.6)的20ml醚溶液。在rt搅拌3h后，在真空中部分浓缩反应混合物，用醚稀释，由此结晶出标题化合物，可以滤出，用醚洗涤：MS：[M+1]⁺＝478；¹H-NMR(CDCl₃)：8.58(s，1H)，7.61(s，1H)，7.46(s，1H)，7.44(d，8.6Hz，2H)，7.24(s，1H)，7.12(d，8.6Hz，2H)，6.93(s，1H)，6.89(s，1H)，6.81(s，1H)，3.59(s，2H)，3.24(t，7.0Hz，2×2H)，2.11(q，7.0Hz，2H)。

原料如下制备：

步骤1.1：4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶

向冰冷的214g(5.35Mol)NaOH的6.5L H₂O溶液加入744g(5.35Mol)4-硝基苯酚。然后在60min内滴加797g(5.35Mol)4，6-二氯嘧啶的6.5L丙酮溶液，将混合物在65℃搅拌18h。将反应混合物冷却至10℃，滤出所沉淀的粗产物，用400ml H₂O/丙酮1∶1洗涤：m.p.：127-128℃；元素分析C₁₀H₆ClN₃O₃：C，H，N，Cl，O；MS：[M]＝251；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.70(s，1H，嘧啶基)，8.34(d，9Hz，2H，苯基)，7.59(s，1H，嘧啶基)，7.57(d，9Hz，2H，苯基)。

步骤1.2：4-(6-氯-嘧啶-4-基-氧基)-苯胺

在33g阮内镍的存在下，将1095g(4.3Mol)4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶的10L MeOH/THF 2∶1溶液在rt氢化4h。将反应溶液过滤，浓缩。从EtOAc中结晶，得到标题化合物：元素分析C₁₀H₈ClN₃O：C，H，N，Cl，O；MS：[M+1]⁺＝222；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.60(s，1H)，7.12(s，1H)，6.86(d，9Hz，2H，苯基)，6.57(d，9Hz，2H，苯基)，5.13(s，2H，NH₂)。

步骤1.3：4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶

仪器：18升反应容器、滴液漏斗和冷凝器。将在N₂气氛下用10L甲苯稀释的光气溶液(20％甲苯溶液，1.43L，2.9Mol)冷却至大约-20℃。然后在30min内加入250g(1.12Mol)4-(6-氯-嘧啶-4-基-氧基)-苯胺的4.4L CH₂Cl₂溶液。将所得悬液加热至蒸馏除去大约4.5L溶剂。继续蒸馏(沸点110℃)，在反应容器中得到澄清的溶液(≈3L)，冷却至rt，在真空中浓缩。在0.2mbar下蒸馏所得蜡状粗产物，得到标题化合物，为固体：m.p.：103℃。

步骤1.4：(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(氮杂环丁烷-1-基)-甲酮

在冰浴中、在N₂气氛下，混合9.77g(41.6mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸(Lancaster)、150ml CH₂Cl₂、几滴DMF和5.8ml(67mMol)草酰氯，然后在rt搅拌17h。在真空中浓缩所得溶液。将残余物溶于50ml CH₂Cl₂，滴加到冰冷的5.9ml(87mMol)氮杂环丁烷的50ml CH₂Cl₂溶液中。搅拌15min后，混合物用1N HCl、稀Na₂CO₃溶液、水和盐水洗涤。水层用EtOAc反萃取两次，合并有机相，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。从己烷中结晶，得到标题化合物；m.p.：91℃；MS：[M+1]⁺＝275.

步骤1.5：(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(氮杂环丁烷-1-基)-甲酮

在2g阮内镍的存在下，在200ml乙醇中氢化10.39g(37.9mMol)(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(氮杂环丁烷-1-基)-甲酮，通过硅藻土过滤，部分浓缩滤液，用己烷稀释，得到结晶性标题化合物；m.p.：154℃；MS：[M+1]⁺＝245。

步骤1.6：3-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺

向N₂气氛下在冰浴中冷却的8.62g(35.3mMol)(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(氮杂环丁烷-1-基)-甲酮的75ml THF溶液滴加含10.6ml(95％；106mMol)BH₃-Me₂S的15ml THF。将所得溶液在rt搅拌2d，然后在65℃搅拌4h。冷却至rt后，加入50ml浓HCl/H₂O 1∶1，将混合物在rt搅拌15h，在65℃搅拌7h。将混合物倒入EtOAc和10％Na₂CO₃溶液中，分离出水相，用EtOAc萃取两次。将有机层用水和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。柱色谱处理(SiO₂；EtOAc/EtOH 95∶5→EtOAc/EtOH/Et₃N 95∶5∶1)，得到标题化合物；m.p.：60-61℃；MS：[M+1]⁺＝231。

实施例2：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

在N₂气氛下，将含250mg(0.52mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲的3ml 33％MeNH₂的EtOH溶液在冰浴中搅拌4h。然后向溶液加入≈1g SiO₂，在真空中浓缩混合物。将所得粉末置于MPLC柱(SiO₂)顶部，用MeOH(+1％NH₃ ^aq)/CH₂Cl₂3∶97→1∶9→1∶4洗脱，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝473；¹H-NMR(CD₃OD+CDCl₃)：8.11(s，1H)，7.95(m，1H)，7.46(s，1H)，7.45(d，7.4Hz，2H)，7.17(s，1H)，7.03(d，7.4Hz，2H)，5.59(s，1H)，3.90(s，2H)，3.63(m，2×2H)，2.81(s，H₃C)，2.30(m，2H)。

实施例3：N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

将300mg(0.63mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲与82mg(1.26mMol)NaN₃在5ml DMF中的混合物在40℃搅拌16h，在60℃搅拌5h。将反应混合物倒入水中，用3份EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。将残余物重新溶于20ml THF，过滤，滤液直接用于Ex.4的氢化步骤。在真空中浓缩滤液可以得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝485；¹H-NMR(CDCl₃)：8.53(s，1H)，7.96(s，1H)，7.94(s，1H)，7.57(s，1H)，7.53(s，1H)，7.45(d，8.6Hz，2H)，7.17(s，1H)，7.04(d，8.6Hz，2H)，6.25(s，1H)，3.58(s，2H)，3.27(t，7.0Hz，2×2H)，2.11(q，7.0Hz，2H)。

实施例4：N-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

在60mg Pd/C 10％的存在下、在20ml THF中氢化N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲(0.63mMol)。滤出催化剂后，向滤液加入≈1g SiO₂，在真空中浓缩混合物。将所得粉末置于MPLC柱(SiO₂)顶部，用EtOH(+1％NEt₃)/EtOAc 1∶49→4∶46→1∶4洗脱，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝459；¹H-NMR(CD₃OD)：8.08(s，1H)，7.82(s，1H)，7.54(s，1H)，7.52(d，9.0Hz，2H)，7.24(s，1H)，7.09(d，9.0Hz，2H)，5.75(s，1H)，3.68(s，2H)，3.35(t，7.2Hz，2×2H)，2.16(q，7.2Hz，2H)。

实施例5：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在N₂气氛下，将1.00g(4.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的3ml THF溶液滴加到1.31g(4.3mMol)3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺(步骤5.3)的33ml醚溶液中。在rt搅拌4h后，在真空中浓缩反应混合物。柱色谱处理(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH 9∶1→88∶12→85∶15)得到标题化合物：m.p.：101℃；MS：[M+1]⁺＝549；¹H-NMR(CDCl₃)：8.57(s，1H)，7.64(s，1H)，7.48(s，1H)，7.47(d，9Hz，2H)，7.28(s，1H)，7.19(m，1H)，7.13(s，1H)，7.12(d，9Hz，2H)，6.92(s，1H)，3.49(s，2H)，2.69(七重峰，6.3Hz，1H)，2.58(m，4H)，2.52(m，4H)，1.08(d，6.3Hz，6H)。

原料如下制备：

步骤5.1：(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(4-异丙基哌嗪-1-基)-甲酮

在冰浴中、在N₂气氛下，混合9.00g(38.3mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸(Lancaster)、150ml CH₂Cl₂、几滴DMF和5.3ml(61mMol)草酰氯，然后在rt搅拌4.5h。在真空中浓缩所得溶液。将残余物溶于50ml CH₂Cl₂，滴加到冰冷的10.3g(80mMol)1-异丙基哌嗪的50ml CH₂Cl₂溶液中。搅拌140min后，混合物用稀Na₂CO₃溶液、水和盐水洗涤。水层用EtOAc反萃取两次，合并有机相，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。从DIPE/己烷中结晶，得到标题化合物；m.p.：70-71℃；MS：[M+1]⁺＝346。

步骤5.2：(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-异丙基哌嗪-1-基)-甲酮

如步骤1.5所述，在2g阮内镍的存在下、在200ml乙醇中氢化9.2g(27mMol)(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(4-异丙基哌嗪-1-基)-甲酮，得到标题化合物；m.p.：89-90℃；MS：[M+1]⁺＝316.

步骤5.3：3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺

向N₂气氛下含7.0g(22mMol)(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-异丙基哌嗪-1-基)-甲酮的70ml THF滴加67ml(1M THF溶液，67mMol)BH₃-THF。将所得溶液在rt搅拌18h，然后加入100ml浓HCl/H₂O1∶1，将混合物在rt搅拌5h。将反应混合物用EtOAc萃取，有机相用0.1N HCl洗涤，弃去。然后向酸性水层加入250ml饱和Na₂CO₃溶液，继之以用3份EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物，为油：[M+1]⁺＝302；¹H-NMR(CDCl₃)：6.93(s，1H)，6.82(s，1H)，6.77(s，1H)，3.82(s，H₂N)，3.45(s，2H)，2.67(七重峰，6.3Hz，1H)，2.57(m，4H)，2.51(m，4H)，1.07(d，6.3Hz，6H)。

实施例6：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在N₂气氛下，将含368mg(0.67mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲的3ml 33％MeNH₂的EtOH溶液在冰浴中搅拌4.5h。将混合物倒入EtOAc和NaHCO₃水溶液中，分离出水相，用EtOAc萃取两次。将有机层用水和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。反相色谱处理得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝544；¹H-NMR(CD₃OD)：8.15(s，1H)，7.84(s，1H)，7.66(s，1H)，7.56(d，9Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.13(d，9Hz，2H)，5.72(s，1H)，3.63(s，2H)，2.87(s，H₃C)，2.9-2.5(m，9H)，1.15(d，6.7Hz，6H)。

实施例7：N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

将470mg(0.86mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲与111mg(1.7mMol)NaN₃在7mlDMF中的混合物在80℃搅拌2h。然后将溶液在冰浴中冷却，在剧烈搅拌下倒入80ml水中。过滤所得悬液，用水洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝556；HPLC ^At_Ret＝11.2。

实施例8：N-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在100mg Pd/C 5％的存在下、在20ml THF中氢化0.39g(0.70mMol)N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲。滤出催化剂，在真空中浓缩滤液，将残余物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，加入≈1g SiO₂后再次浓缩。将所得粉末置于MPLC柱(SiO₂)顶部，用EtOAc/EtOH(+1％NEt₃)19∶1→9∶1→7∶3洗脱，从己烷中结晶后得到标题化合物：元素分析C₂₆H₃₀N₇F₃O₂.0.8H₂O.0.2EtOAc：C，H，N，H₂O；MS：[M+1]⁺＝530；¹H-NMR(CD₃OD)：8.12(s，1H)，7.86(s，1H)，7.63(s，1H)，7.57(d，8.6Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.13(d，8.6Hz，2H)，5.79(s，1H)，3.62(s，2H)，2.8-2.5(m，9H)，1.13(d，6.7Hz，6H)。

实施例9：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[3-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

将1.00g(4.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的3mlTHF溶液和1.1g(4.0mMol)3-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺(步骤9.3)的30ml醚溶液类似于Ex.5转化为标题化合物：m.p.：291-292℃；元素分析C₂₄H₂₄N₆ClF₃O₂·0.5H₂O：C，H，N，Cl，F；MS：[M+1]⁺＝521.

原料如下制备：

步骤9.1：(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮

类似于步骤5.1，将9.00g(38.3mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸用5.3ml(61mMol)草酰氯活化，与8.9ml(80mMol)1-甲基哌嗪反应，得到标题化合物，为油；MS：[M+1]⁺＝318；HPLC ^At_Ret＝8.7。

步骤9.2：(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮

如步骤1.5所述，在2g阮内镍的存在下、在200ml乙醇中氢化11.8g(37mMol)(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮，得到标题化合物；m.p.：114-115℃；MS：[M+1]⁺＝288.

步骤9.3：3-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯胺

类似于步骤1.6，将90ml THF中的9.91g(34.5mMol)(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮用BH₃.Me₂S还原为标题化合物：m.p.：98-99℃；MS：[M+1]⁺＝274；¹H-NMR(CDCl₃)：6.94(s，1H)，6.82(s，1H)，6.78(s，1H)，3.82(s，H₂N)，3.45(s，2H)，2.48(m，8H)，2.30(s，H₃C)。

Ex.10-13化合物可以类似于本文所述工艺制备：

实施例10：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

将171mg(0.69mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的2ml THF溶液和170mg(0.69mMol)3-(二乙氨基-甲基)-5-三氟甲基-苯胺(步骤10.3)的6ml醚溶液类似于Ex.5转化为标题化合物。MS：[M+1]⁺493.9。

原料如下制备：

步骤10.1：(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(二乙氨基)-甲酮

类似于步骤5.1，将2.40g(10.0mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸用1.7ml(20.0mMol)草酰氯活化，与7.3g(100mMol)二乙胺反应，得到标题化合物，为油；MS：[M-1]＝290；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.79(s，1H)，8.41(s，1H)，8.21(s，1H)，3.50(q，2H)，3.21(q，2H)，1.19(t，3H)，1.01(t，3H)。

步骤10.2：(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮

如步骤1.5所述，在140mg Pd-C的存在下、在50ml乙醇中氢化2.8g(9.6mMol)(3-硝基-5-三氟甲基-苯基)-(二乙氨基)甲酮，得到标题化合物，为黄色固体；MS：[M+1]⁺261.¹H-NMR(DMSO-d₆)：6.89(s，1H)，6.78(s，1H)，6.60(s，1H)，5.79(s，2H，NH₂)，3.50-3.39(m，2H)，3.25-3.02(m，2H)，1.21-0.99(m，6H)。

步骤10.3：3-(二乙氨基甲基)-5-三氟甲基-苯胺

类似于步骤1.6，将15ml THF中的1.04g(4.0mMol)(3-氨基-5-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮用BH₃-Me₂S还原为标题化合物：MS：[M+1]⁺＝247；¹H-NMR(DMSO-d₆)：6.87(s，1H)，6.84(s，1H)，6.81(s，1H)，5.60(s，2H，NH₂)，2.75-2.65(m，4H)，1.28-1.08(m，6H)。

实施例11：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

在N₂气氛下，将含250mg(0.52mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲的3ml 33％MeNH₂的EtOH溶液在5℃搅拌2h。水处理后，粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，梯度CH₂Cl₂/MeOH 0-40％)，得到标题化合物：m.p.：68-70℃；MS：[M+1]⁺＝489；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.21(s，1H，NH)，8.83(s，1H，NH)，8.09(s，1H)，7.85(s，1H)，7.45(d，2H)，7.20(s，1H)，7.05(d，2H)，5.71(s，1H)，3.56(s，2H)，2.74(s，3)，2.50-2.32(m，4H)，1.01-0.95(m，6H)。

实施例12：N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

将218mg(0.44mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲与50mg(0.7mMol)NaN₃在6ml DMF中的混合物在80℃搅拌2h。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。分离有机层，干燥，浓缩，得到粗产物，经过快速色谱纯化(SiO₂，梯度CH₂Cl₂/MeOH 0-40％)。MS：[M+1]⁺＝501。

实施例13：N-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

在20mg Pd/C 5％的存在下、在10ml DME中氢化98mg(0.17mMol)N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-二乙氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲。滤出催化剂，在真空中浓缩滤液，残余物经过制备型TLC纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)，得到标题化合物：m.p.：63-65℃.MS：[M+1]⁺＝475。

实施例14：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下冰冷的687mg(2.77mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的3ml THF溶液滴加758mg(2.77mMol)4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤14.4)的20ml醚溶液。在rt搅拌3h后，将所得悬液过滤，残余物用醚洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝521；¹H-NMR(CDCl₃)：8.55(s，1H)，7.67(d，8.6Hz，1H)，7.56(d，8.6Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.41(d，9Hz，2H)，7.21(s，1H)，7.15(s，1H)，7.08(d，9Hz，2H)，6.91(s，1H)，3.58(s，2H)，2.48(m，8H)，2.30(s，H₃C)。

原料如下制备：

步骤14.1：N-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺

向N₂气氛下冰冷的320g(1.827Mol)5-氨基-2-甲基三氟甲苯与1.47L(18.27Mol)吡啶的4.5L CH₂Cl₂溶液滴加284ml(2.01Mol)三氟乙酸酐。50min后，混合物用5L冰冷的2N HCl稀释。分离出有机相，用2L冷的2N HCl洗涤两次，然后用1L 2N HCl、最后用2L盐水洗涤。将水层用CH₂Cl₂萃取两次，有机相干燥(Na₂SO₄)，部分浓缩。加入己烷结晶，得到标题化合物：m.p.：72-73℃。

步骤14.2：N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺

向N₂气氛下60.9g(224.6mMol)N-(4-甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺的830ml乙酸正丁酯溶液加入44g(247mMol)N-溴琥珀酰亚胺和830mg(5mMol)偶氮异丁腈。将悬液加热至60℃，然后用Philips低电压灯泡(500W；10500Im)照明30min，由此温度升至70-75℃，生成澄清的褐色溶液。仍然可检测到剩余的浸提物，因此分3份加入另外22g N-溴琥珀酰亚胺。总计6h照明后，滤出所得固体，弃去，浓缩滤液。使残余物在2L CH₂Cl₂与1L H₂O之间分配，水层用1L CH₂Cl₂萃取。将有机相用1L H₂O、0.5L盐水洗涤4次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。柱色谱处理(SiO₂；己烷/CH₂Cl₂ 2∶1→1∶1)和从CH₂Cl₂/己烷中结晶，得到标题化合物：m.p.：119-120℃。

步骤14.3：2，2，2-三氟-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰 胺

在30min内向N₂气氛下冰冷的1.9ml(17.1mMol)N-甲基哌嗪的50ml乙腈溶液滴加2.00g(5.71mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺的50ml乙腈溶液。另外20min后，在真空中浓缩反应混合物。所得油用EtOAc和饱和NaHCO₃溶液/H₂O 1∶1稀释。分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机层用饱和NaHCO₃溶液/H₂O 1∶1、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，直接用于步骤14.4：MS：[M+1]⁺＝370；HPLC ^At_Ret＝9.5。

步骤14.4：4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

向1.102g(2.98mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺在26ml沸腾甲醇中的溶液滴加14ml 1M K₂CO₃水溶液。搅拌1h后，将反应混合物冷却至rt，用EtOAc和水稀释。分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物，直接用于Ex.14：MS：[M+1]⁺＝274；HPLC＝5.4。

4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺的替代合成：

步骤14.4.1：4-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸[参见J.Gen.Chem.USSR(Engl. Transl.)33(1963)，2957]

在N₂气氛下，将机械搅拌着的50g(263mMol)o-三氟甲基-苯甲酸与307ml H₂SO₄ 96％的混合物在冰浴中冷却。然后在75min内，在5-7℃滴加105ml HNO₃ 100％。除去冰浴，继续在rt搅拌2h。将反应混合物倒入1.9kg冰中，搅拌20min。过滤悬液，用100ml冷水洗涤，干燥(0.2mbar，50℃)，得到粗的标题化合物，含有20％区域异构体。将这种产物部分溶于0.4L沸腾甲苯，过滤。浓缩滤液至其体积的一半，然后加入0.1L己烷。冷却至rt后，标题化合物结晶出来，可以滤出：m.p.：138-141℃；¹H-NMR(CDCl₃)：8.71(d，2.3Hz，1H)，8.56(dd，2.3Hz，8.2Hz，1H)，8.18(d，8.2Hz，1H)。

步骤14.4.2：(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮

向N₂气氛下冰冷的17.99g(76.5mMol)4-硝基-2-三氟甲基-苯甲酸、300ml CH₂Cl₂与3ml DMF溶液滴加12.3ml(145mMol)草酰氯。4.5h后，在真空中浓缩所得溶液。将残余物溶于300ml CH₂Cl₂，滴加到冰冷的17.8ml(160mMol)1-甲基哌嗪的120ml CH₂Cl₂溶液中。搅拌3h后，将混合物用0.5L CH₂Cl₂稀释，用3份10％ Na₂CO₃溶液、水和盐水洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)，浓缩得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝318；¹H-NMR(CDCl₃)：8.62(d，2.3Hz，1H)，8.50(dd，2.3Hz，8.2Hz，1H)，7.60(d，8.2Hz，1H)，3.90(m，1H)，3.84(m，1H)，3.21(t，5.1Hz，2H)，2.53(t，5.1Hz，2H)，2.36(s，3H)，2.36(m，2H)。

步骤14.4.3：(4-氨基-2-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮

在4g阮内镍的存在下氢化24g(76mMol)(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)-甲酮的400ml乙醇溶液达14h。滤出催化剂，在真空中浓缩滤液。在500ml沸腾甲苯中过滤残余物，部分浓缩滤液，直至产物开始结晶。冷却至rt，过滤，得到标题化合物：m.p.：154-156℃；MS：[M+1]⁺＝288。

步骤14.4.4：4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

在75min内向N₂气氛下含17.2g(60mMol)(4-氨基-2-三氟甲基-苯基)-(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮的160ml THF加入180ml(1M THF溶液；180mMol)BH₃-THF。将所得溶液在rt搅拌18h，然后在冷却下加入180ml浓HCl/H₂O 1∶1，将混合物在rt搅拌18h。将反应混合物部分浓缩，残余物用EtOAc萃取，分离有机相，用0.1N HCl洗涤，弃去。然后向酸性水层加入0.7L饱和Na₂CO₃溶液(→pH9-10)，继之以用3份EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。从沸腾甲苯中结晶，得到标题化合物：m.p.：119-121℃。

实施例15：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下冰冷的1.251g(5.05mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的4ml THF溶液滴加1.522g(5.05mMol)4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤15.2)的25ml醚溶液。搅拌2.5h后，将反应混合物用醚稀释，滤出固体，用醚洗涤。将粗产物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，吸附在SiO₂上，然后置于SiO₂色谱柱顶部。用CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq 95∶5∶1洗脱，得到标题化合物：元素分析C₂₆H₂₈N₆ClF₃O₂ 0.5H₂O：C，H，N，F；MS：[M+1]⁺＝549；¹H-NMR(CDCl₃)：8.56(s，1H)，7.68(d，8Hz，1H)，7.57(d，8Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.43(d，9Hz，2H)，7.11(s，1H)，7.10(d，9Hz，2H)，7.05(s，1H)，6.92(s，1H)，3.58(s，2H)，2.67(七重峰，6.3Hz，1H)，2.56(m，4H)，2.51(m，4H)，1.08(d，6.3Hz，6H)。

原料如下制备：

步骤15.1：2，2，2-三氟-N-[4-(4-异丙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙 酰胺

在35min内向N₂气氛下冰冷的3.46g(27mMol)N-异丙基哌嗪的70ml乙腈溶液滴加3.15g(9.0mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的70ml乙腈溶液。另外5min后，如步骤14.3所述进行处理，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝398；HPLC ^At_Ret＝10.1。

步骤15.2：4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

向3.58g(9.0mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(4-异丙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺的90ml沸腾甲醇溶液滴加45ml 1M K₂CO₃水溶液。搅拌110min后，将反应混合物冷却至rt，在真空中部分浓缩。将残余物用EtOAc和水稀释，分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，部分浓缩。用己烷稀释后，标题化合物结晶出来，可以过滤分离：m.p.：117-119℃；MS：[M+1]⁺＝302。

实施例16：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲三氟乙酸盐

在N₂气氛下，将含450mg(0.82mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲的4ml 33％MeNH₂的EtOH溶液在冰浴中搅拌3h。将混合物倒入EtOAc和10％NaHCO₃溶液中，分离出水相，用EtOAc萃取两次。将有机层用水和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。反相色谱处理，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝544；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.16(s，HN)，9.04(m，HN⁺)，8.93(s，HN)，8.12(m，1H)，7.95(s，1H)，7.62(2s，2H)，7.48(d，9Hz，2H)，7.33(m，HNMe)，7.05(d，9Hz，2H)，5.73(s，1H)，3.65(s，2H)，3.47(m，1H)，3.39(m，2H)，3.00(m，2H)，2.95(m，2H)，2.76(m，H₃C)，2.39(m，2H)，1.26(d，7Hz，6H)。

实施例17：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基-4-氧基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲三氟乙酸盐

在Ex.16的反应混合物的反相色谱处理期间，可以分离标题化合物，为较慢移动的副产物：MS：[M+1]⁺＝560；¹H-NMR(DMSO-d₆)：11.48(s，HN)，9.14(s，HN)，8.92(s，HN)，8.11(m，1H)，7.95(s，1H)，7.63(m，2H)，7.47(d，8Hz，2H)，7.30(m，HNMe)，7.05(d，8Hz，2H)，5.73(s，1H)，3.95(七重峰，7Hz，1H)，3.69(s，2H)，3.60(m，4H)，2.87(m，2H)，2.76(m，H₃C)，2.7(m，2H)，1.35(d，7Hz，6H)。

实施例18：N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

如Ex.7所述，从647mg(1.18mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲制备标题化合物：MS：[M+1]⁺＝556；HPLC ^At_Ret＝11.4。

实施例19：N-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

在0.12g Pd/C 10％(″Engelhard 4505″)的存在下、在25ml THF中氢化0.66g(1.18mMol)N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲，过滤，浓缩滤液，色谱处理[MPLC：CH₂Cl₂/MeOH(+1％NH₃ ^aq)199∶1→93∶7→82∶18]，得到标题化合物：元素分析C₂₆H₃₀N₇F₃O₂·0.8H₂O：C，H，N，F；MS：[M+1]⁺＝530；¹H-NMR(CDCl₃)：8.25(s，1H)，7.86(s，1H)，7.65(d，8.2Hz，1H)，7.56(m，3H)，7.25(d，8Hz，2H)，6.97(d，8Hz，2H)，5.64(s，1H)，5.26(s，H₂N)，3.57(s，2H)，2.64(七重峰，6.7Hz，1H)，2.53(m，4H)，2.49(m，4H)，1.06(d，6.7Hz，6H)。

类似于本文所述工艺，可以制备Ex.19-1和19-2化合物：

实施例19-1：N-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-4-(4-H-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在0.05g Pd/C 10％(″Engelhard 4505″)的存在下、在10ml DME中氢化0.33g(0.68mMol)N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲，过滤，浓缩滤液，色谱处理[C18：CH₃CN/H₂O(+0.1％TFA)]，得到标题化合物：m.p.：153-155℃.MS：[M+1]⁺＝488；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.39(s，1H)，9.17(s，1H)，8.59(s，2H，NH)，8.18(s，1H)，7.98(s，1H)，7.59(s，1H)，7.42(d，2H)，7.01(d，2H)；5.62(s，2H)，3.17-3.08(m，4H)，2.62-2.52(m，4H)。

原料如下制备：

步骤19-1.1：2，2，2-三氟-N-[4-(4-苯甲酰氧基羰基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲 基-苯基]-乙酰胺

在N₂气氛下，在35min内向1.57g(7.1mMol)N-苄基-1-哌嗪甲酸酯的10ml EtOH溶液滴加1.0g(2.8mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的5ml EtOH溶液。搅拌另外30min，如步骤14.3所述进行处理后，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝491；¹H-NMR(CDCl₃)：8.15(s，1H，NH)，7.81-6.99(m，3H)，7.39-7.28(m，5H)，5.15(s，2H)，3.59(s，2H)，3.52-3.43(m，4H)，2.44-2.39(m，4H)。

步骤19-1.2：4-(4-苯甲酰氧基羰基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

向1.31g(2.67mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(4-苄氧羰基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺的20ml沸腾甲醇溶液滴加13ml 1M K₂CO₃水溶液。搅拌1h后，将反应混合物冷却至rt，用EtOAc和水稀释。分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物，直接用于步骤19-1.3：[M+1]⁺＝394；¹H-NMR(DMSO-d₆)：7.39-7.21(m，6H)，6.82(s，1H)，6.75(d，1H)，5.41(s，2H)，5.01(s，2H)，3.40-3.29(m，6H)，2.31-2.24(m，4H)。

步骤19-1.3：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰基哌 嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下冰冷的0.38g(1.52mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的5ml THF溶液滴加0.60g(1.52mMol)4-(4-苯甲酰氧基羰基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤15.2)的15ml醚溶液。搅拌1.5h后，将反应混合物用醚稀释，滤出固体，用醚洗涤。将粗产物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，吸附在SiO₂上，然后置于SiO₂色谱柱顶部。用CH₂Cl₂/MeOH(梯度0-3％MeOH)洗脱，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝642.7；¹H-NMR(CDCl₃)：8.59(s，1H)，7.62(d，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.41(d，2H)，7.35-7.30(m，3H)，7.18(s，1H)，7.15(d，2H)，7.05(s，1H)，6.90(s，1H)，5.19(s，2H)，3.62(s，2H)，3.59-3.40(m，4H)，2.51-2.38(m，4H)。

步骤19-1.4：N-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰 基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

如Ex.7所述，从300mg(0.46mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苄氧羰基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲制备标题化合物：MS：[M+1]⁺＝648；¹H-NMR(CDCl₃)：8.58(s，1H)，8.01(s，1H)，7.69-7.59(m，3H)，7.41(d，1H)，7.39-7.35(m，5H)，7.20(s，1H)，7.09(d，2H)，6.25(s，1H)，5.17(s，2H)，3.61(s，2H)，3.59-3.42(m，4H)，2.43-2.38(m，4H)。

实施例19-2：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-H-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在15mg Pd/C 10％(″Engelhard 4505″)的存在下、在5ml MeOH中氢化88.0mg(0.14mMol)N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲，过滤，浓缩滤液，色谱处理[C18：CH₃CN/H₂O(+0.1％TFA)，得到标题化合物：m.p.：197-198℃；MS：[M+1]⁺＝502；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.80(s，1H，NH)，8.52(s，1H，NH)，8.06(s，1H)，7.89(s，1H)，7.63(d，1H)，7.58(d，1H)，7.49(d，2H)，7.05(d，2H)，5.79(s，1H)，3.18-3.09(m，4H)，2.80(s，3H)，2.69-2.59(m，4H)。

原料如下制备：

步骤19-2.1：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰 基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

在N₂气氛下，将含122mg(0.19mMol)N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲(Ex.20-1)的4ml 33％MeNH₂的EtOH溶液在冰浴中搅拌2h。将混合物倒入EtOAc和10％NaHCO₃溶液中，分离出水相，用EtOAc萃取两次。将有机层用水和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。快速色谱处理(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-5％MeOH)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝636；¹H-NMR(CDCl₃)：8.21(s，1H)，7.61-7.44(m，3H)，7.39-7.31(m，5H)，7.17-6.99(m，3H)，6.51(d，1H)，5.75(s，1H)，5.12(s，2H)，3.59(s，3H)，3.48-3.41(m，4H)，2.91(s，2H)，2.41-2.35(m，4H)。

实施例20：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-叔丁基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备。粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-10％MeOH)，得到标题化合物，为黄色泡沫。C₂₇H₃₀ClF₃N₆O₂；MS(ES+)，M+H＝563.6；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.59(s，1H)，7.62(d，1H)，7.60-7.56(m，2H)，7.42(d，2H)，7.18-7.11(m，3H)，7.02(s，1H)，3.79(s，2H)，2.78-2.54(m，4H)，2.51-2.40(m，4H)，1.04(s，9H)。

原料如下制备：

步骤20.1：双-(2-氯-乙基)-氨基甲酸乙基酯

按照文献工艺[J.Pharmaceutical.Sci.61(1972)，1316]，从双-(2-氯乙基)胺制备标题化合物。C₇H₁₃Cl₂NO₂；MS(ES+)，M+H＝216.4；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：4.19(q，2H)，3.75-3.58(m，8H)，1.14(t，3H)。

步骤20.2：4-叔丁基-哌嗪-1-甲酸乙基酯

将步骤20.1化合物(10g，46mmol)溶于叔丁醇，随后在rt加入NaI(280mg，1.8mmol)和叔丁胺(5.12g，70mmol)。然后将黄色反应混合物在油浴中加热至130℃，搅拌13h。再次冷却至rt，加入K₂CO₃(6.9g，50mmol)。然后将反应暴露于微波照射(130℃/6min)。过滤收集产物，溶于EtOAc，经过酸/碱洗涤纯化，得到标题化合物，为黄色的油(2.54g，32mMol，26％)。C₁₁H₂₂N₂O₂；MS(ES+)，M+H＝215.5；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：4.15(q，2H)，3.51-3.40(m，4H)，2.58-2.41(m，4H)1.12(t，3H)，1.02(s，9H)。

步骤20.3：1-叔丁基-哌嗪

将步骤20.2化合物(1g，4.6mmol)溶于乙醇(15ml)。加入KOH(1.2g，201mmol)，将反应加热至回流达12h。冷却至rt，在减压下浓缩。将残余物溶于EtOAc，用盐水洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，浓缩，在高真空下干燥，得到标题化合物，为黄色的油(546mg，3.7mMol，82％)。C₈H₁₈N₂；MS(ES+)，M+H＝143.5；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：2.91-2.84(m，4H)，2.59-2.48(m，4H)，1.02(s，9H)。

步骤20.4：N-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-2，2，2-三氟-乙 酰胺

将步骤20.3化合物(540mg，3.8mmol)溶于EtOH(3ml)，在rt加入532mg(1.5mmol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)。将反应在环境温度搅拌1.5小时直至完成。浓缩，残余粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-8％MeOH)，得到标题化合物，为黄色的油(654mg，1.5mMol，42％)。C₁₈H₂₃F₆N₃O；MS(ES+)，M+H＝412.0。

步骤20.5：4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺

将步骤20.4化合物(650mg，1.5mmol)溶于MeOH(15ml)，于rt用K₂CO₃(7.9ml 1N水溶液)处理。将反应加热至回流达1h直至完成，冷却回到rt，浓缩。将残余的油溶于EtOAc，用盐水洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下浓缩。在高真空下干燥，得到标题化合物，为黄色的油(496mg，1.5mmol)。C₁₆H₂₄F₃N₃；MS(ES+)，M+H＝316.1；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：7.44(d，1H)，6.91(d，1H)，6.79(d，d，1H)，3.79(bs，2H)，3.51(s，2H)，2.67-2.59(m，4H)，2.58-2.40(m，4H)，1.01(s，9H)。

类似于本文所述工艺，可以制备Ex.20-1至20-8化合物：

实施例20-1：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-苯甲酰氧基羰基-哌 嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于600mg(1.5Mmol)4-(4-氨基-2-三氟甲基-苄基)-哌嗪-1-甲酸苄基酯。粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-10％MeOH)。MS(ES+)，M+H＝643；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.57(s，1H)，7.64(d，1H，J＝8.2Hz)，7.59-7.55(m，2H)，7.43(d，J＝8.7Hz)，7.36-7.32(m，3H)，7.17(s，1H)，7.08(d，J＝8.7Hz)，7.04(s，1H)，6.91(s，1H)，5.17(s，2H)，3.60(s，2H)，3.57-3.45(m，4H)，2.49-2.33(m，4H)。

原料如下制备：

步骤20-1.1：4-[4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-2-三氟甲基-苄基]-哌嗪-1-甲酸苄基 酯

将1.0g(2.8mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的15ml EtOH溶液在rt用1.57g(7.1mMol)苄基-1-哌嗪-甲酸酯处理。将反应在rt搅拌1h。完成后，浓缩，残余粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-10％MeOH)，得到标题化合物，为黄色固体。MS(ES+)，M+H＝491；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.19(s，1H，NH)，7.92-7.89(m，3H)，7.40-7.38(m，5H)，5.18(s，2H)，3.60(s，2H)，3.58-3.52(m，4H)，2.49-2.38(m，4H)。

步骤20-1.2：4-(4-氨基-2-三氟甲基-苄基)-哌嗪-1-甲酸苄基酯

将1.3g(2.6mMol)4-[4-(2，2，2-三氟-乙酰氨基)-2-三氟甲基-苄基]-哌嗪-1-甲酸苄基酯的20ml MeOH溶液在rt用13.4ml 1M K₂CO₃水溶液处理。然后将反应加热至回流，搅拌2h。完成后，蒸馏除去MeOH，残余水悬液用EtOAc萃取(3x)。合并有机萃取液，经Na₂SO₄干燥，过滤和在真空中浓缩后，得到标题化合物，为黄色固体。MS(ES+)，M+H＝394；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：7.39-7.29(m，6H)，6.82(s，1H)，6.74(d，1H)；5.41(s，2H；NH₂)，5.02(s，2H)，3.42(s，2H)，3.40-3.31(m，4H)，2.31-2.24(m，4H)。

实施例20-2：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(N，N-二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于110mg(0.5mMol)4-(4-(N，N-二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺和125mg(0.5mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)。粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-10％MeOH)，得到标题化合物，为黄色泡沫。m.p.：98-105℃。MS(ES+)，M+H＝466。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：9.02(s，1H)，8.92(s，1H)，8.60(s，1H)，7.97(s，1H)，7.59-7.54(m，2H)，7.49(d，2H)，7.38(s，1H)，7.12(d，2H)，3.41(s，2H)，2.19(s，6H)。

原料如下制备：

步骤20-2.1：4-(4-(N，N-二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基-2，2，2-三氟-乙酰胺

将501mg(1.5mmol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)在rt加入到5ml二甲胺的EtOH溶液(33％)中。将反应在环境温度搅拌0.5h直至完成。浓缩，残余粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-5％MeOH)，得到标题化合物，为黄色的油。MS(ES+)，M+H＝315。

步骤20-2.2：4-(4-(N，N-二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺

将步骤20-1.1化合物(359mg，1.2mmol)溶于MeOH(12ml)，在rt用K₂CO₃(6ml 1N水溶液)处理。将反应加热至回流达1.5h直至完成，冷却回到rt，浓缩。将残余的油溶于EtOAc，用盐水洗涤。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下浓缩。在高真空下干燥，得到标题化合物，为黄色的油。M+H＝219。

实施例20-3：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(N，N-二乙氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于370mg(1.5mMol)4-(4-(N，N-二乙氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺和371mg(1.5mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)。粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH，梯度0-10％MeOH)，得到标题化合物：MS(ES+)，M+H＝494。

实施例20-4：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-[(3-二甲氨基-丙基)-甲基-氨基-甲基]]-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于600mg(2.2mMol)4-[(3-二甲氨基丙基)-甲基-氨基-甲基]]-3-三氟甲基-苯基-胺和539mg(2.2mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)，得到标题化合物：MS(ES+)，M+H＝523。

实施例20-5：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-[(4-氰基-苄基)-氨基-甲基]-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于440mg(1.4mMol)4-[(4-氰基-苄基)-氨基-甲基]]-3-三氟甲基-苯基-胺和375mg(1.4mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)，得到标题化合物：MS(ES+)，M+H＝553。

实施例20-6：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(1-吗啉基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于260mg(1.0mMol)4-(吗啉-4-基甲基)-3-三氟甲基-苯基胺和248mg(1.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)，得到标题化合物：MS(ES+)，M+H＝508；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：8.82(s，1H，NH)，8.79(s，1H，NH)，8.69(s，1H)，7.91(s，1H)，7.75-7.65(2×d，2H)，7.50(d，2H)，7.15(d，2H)，7.12(s，1H)，3.74(s，2H)，3.71-3.61(m，4H)，2.62-2.52(m，4H)。

实施例20-7：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(吡咯烷-1-基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备。MS(ES+)，M+H＝493；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.59(s，1H)，7.71(d，2H)，7.51-7.39(m，3H)，7.17(s，1H)，7.02(d，2H)，6.93(s，1H)，3.79(s，2H)，2.62-2.58(m，4H)，2.93-2.72(m，4H)。

实施例20-8：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-(4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14制备，始于878mg(2.3mMol)4-[4-(4-甲氧基-苄基)-哌嗪基]-3-三氟甲基-苯基胺和573mg(2.3mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)，得到标题化合物：MS(ES+)，M+H＝628；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.59(s，1H)，7.75(d，1H)，7.41(d，2H)，7.20(d，2H)，7.17(d，2H)，6.98(s，1H)，6.83(d，3H)，6.79(s，1H)，3.80(s，3H)，3.59(s，2H)，3.42(s，2H)，2.58-2.37(m，8H)。

实施例21：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(甲基-叔丁基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14，将1.0g(4.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的3ml THF溶液与1.1g(4.2mMol)4-(甲基-叔丁基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤21.2)的30ml醚溶液反应，得到标题化合物：元素分析C₂₄H₂₅N₅ClF₃O₂：C，H，N，Cl，F；MS：[M+1]⁺＝508；¹H-NMR(CDCl₃)：8.61(s，1H)，7.94(d，8.2Hz，1H)，7.63(d，2Hz，1H)，7.54(dd，8Hz，2Hz，1H)，7.47(d，9Hz，2H)，7.14(d，9Hz，2H)，6.95(s，1H)，6.93(s，1H)，6.91(s，1H)，3.69(s，2H)，2.13(s，H₃C)，1.17(s，叔丁基)。

原料如下制备：

步骤21.1：2，2，2-三氟-N-[4-(甲基-叔丁基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙 酰胺

在30min内向N₂气氛下冰冷的2.05ml(17mMol)甲基-叔丁基-胺的80ml乙腈溶液滴加2.0g(5.7mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的80ml乙腈溶液。另外30min后，如步骤14.3所述进行处理，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝357；HPLC ^At_Ret＝10.0。

步骤21.2：4-(甲基-叔丁基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯胺

如步骤15.2所述皂化2.55g(7.2mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(甲基-叔丁基-氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺，得到标题化合物，为油：MS：(M+1)⁺＝261；HPLC ^At_Ret＝8.3。

实施例22：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14，将431mg(1.7mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的2ml THF溶液与400mg(1.7mMol)4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤22.2)的10ml醚溶液反应，得到标题化合物：MS：[M+1]＝478；HPLC ^At_Ret＝11.3。

原料如下制备：

步骤22.1：2，2，2-三氟-N-[4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰 胺

在65min内向N₂气氛下冰冷的1.74ml(25.7mMol)氮杂环丁烷的100ml乙腈溶液滴加3.0g(8.5mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的100ml乙腈溶液。另外75min后，如步骤14.3所述进行处理，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝327；HPLC ^At_Ret＝9.1。

步骤22.2：4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

如步骤15.2所述皂化2.67g(8.2mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(氮杂环丁烷-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝231；¹H-NMR(CDCl₃)：7.37(d，8.2Hz，1H)，6.90(d，2Hz，1H)，6.79(dd，8Hz，2Hz，1H)，3.75(s，H₂N)，3.64(s，2H)，3.25(t，6.8Hz，4H)，2.10(五重峰，6.8Hz，2H)。

实施例23：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4，5-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

在N₂气氛下，将238mg(0.96mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和246mg(0.91mMol)4-(4，5-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤23.2)溶于5ml THF。15min后，加入10ml DIPE(有沉淀生成)，继续搅拌2h。过滤和用DIPE洗涤，得到标题化合物：m.p.：195-196℃；Anal.C₂₄H₂₀N₆ClF₃O₂·0.4DIPE·0.1THF：C，H，N，Cl，F；MS：[M+1]⁺＝517；¹H-NMR(CDCl₃)：9.23(s，1H)，8.99(s，1H)，8.52(s，1H)，8.46(d，2Hz，1H)，7.55(d，9.0Hz，2H)，7.45(s，1H)，7.03(d，9Hz，2H)，6.83(s，1H)，6.34(dd，8.6Hz，2Hz，1H)，6.12(d，8.6Hz，1H)，5.15(s，2H)，2.20(s，H₃C)，2.02(s，H₃C)。

原料如下制备：

步骤23.1：2，2，2-三氟-N-[4-(4，5-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙 酰胺

在30min内向N₂气氛下冰冷的1.81g(18.8mMol)4，5-二甲基咪唑的70ml乙腈溶液滴加2.2g(6.3mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的70ml乙腈溶液。5h后，将悬液过滤，残余物用CH₃CN洗涤，得到标题化合物(如步骤14.3所述浓缩滤液，萃取，可以分离到更多的产物)：m.p.：238-239℃；MS：[M+1]⁺＝366。

步骤23.2：4-(4，5-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

如步骤15.2所述皂化2.67g(7.3mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(4，5-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺，经过色谱处理(SiO₂，EtOAc/Et₃N99∶1→EtOAc/EtOH/Et₃N 97∶2∶1)，从EtOAc中结晶，得到标题化合物：m.p.：185-186℃；MS：[M+1]⁺＝270。

实施例24：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(2-甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

在N₂气氛下，将1.00g(4.04mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和1.03g(4.04mMol)4-(2-甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤24.2)溶于40ml THF。在rt搅拌4h期间，生成悬液，可以滤出标题化合物：m.p.：228℃；Anal.C₂₃H₁₈N₆CIF₃O₂：C，H，N，Cl；MS：[M+1]⁺＝503；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.15(s，1H)，8.93(s，1H)，8.67(s，1H)，8.14(d，2Hz，1H)，7.55(d，9.0Hz，2H)，7.54(m，1H)，7.36(s，1H)，7.19(d，9Hz，2H)，7.08(s，1H)，6.84(s，1H)，6.66(d，8.6Hz，1H)，5.27(s，2H)，2.20(s，H₃C)。

原料如下制备：

步骤24.1：2，2，2-三氟-N-[4-(2-甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰 胺

在30min内向N₂气氛下冰冷的1.85g(22.5mMol)2-甲基咪唑的80ml乙腈悬液滴加2.64g(7.5mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)的80ml乙腈溶液。在rt搅拌5h后，生成溶液，然后在真空中浓缩。残余物用EtOAc和饱和NaHCO₃溶液/H₂O 1∶1稀释。分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机层用饱和NaHCO₃溶液/H₂O 1∶1、水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。经过柱色谱处理(SiO₂，EtOAc/EtOH 19∶1→9∶1)，得到标题化合物：m.p.：229-230℃；MS：[M+1]⁺＝352。

步骤24.2：4-(2-甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺

如步骤15.2所述皂化2.0g(5.69mMol)2，2，2-三氟-N-[4-(2-甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-乙酰胺，从EtOAc中结晶后得到标题化合物：m.p.：146-147℃；MS：[M+1]⁺＝256。

实施例25：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(2，4-二甲基咪唑-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

可以类似于Ex.23或24制备。

实施例26：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-甲基-苯基]-脲

类似于Ex.14，将467mg(1.88mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)的2ml THF溶液与440mg(1.88mMol)4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-甲基-苯胺(步骤26.4)的8ml醚悬液反应，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝481；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.77(s，1H)，8.67(s，1H)，8.60(s，1H)，7.53(d，9.0Hz，2H)，7.35(d，0.8Hz，1H)，7.21-7.27(m，2H)，7.17(d，9.0Hz，2H)，7.10(d，8.2Hz，1H)，3.34(s，2H)，2.36(m，10H)，2.30(s，H₃C)，0.98(t，7.2Hz，H₃C)。

原料如下制备：

步骤26.1：4-硝基-2-甲基-苯甲酸

将3.04g(18.7mMol)2-甲基-4-硝基苄腈[制备参见J.Med.Chem.44(2001)，3856]、26ml浓HCl与26ml乙酸的混合物在密封的试管中加热8h至150℃。冷却反应混合物，过滤，用水洗涤，得到标题化合物：m.p.：151-155℃；MS：[M-1]⁺＝180。

步骤26.2：(4-硝基-2-甲基-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮

类似于步骤5.1，将8.72g(48.1mMol)4-硝基-2-甲基-苯甲酸用6.52ml(77mMol)草酰氯活化，与13.45ml(106mMol)1-乙基哌嗪反应，得到标题化合物：m.p.：96-99℃；MS：[M+1]⁺＝278。

步骤26.3：(4-氨基-2-甲基-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮

如步骤1.5所述，在2g阮内镍的存在下、于200ml乙醇中氢化12.6g(45.5mMol)(4-硝基-2-甲基-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮，得到标题化合物，为油：[M+1]⁺＝248。

步骤26.4：4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-甲基-苯胺

类似于步骤5.3，将11.12g(45mMol)(4-氨基-2-甲基-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮在100ml THF中用135ml BH₃(1M THF溶液)还原。经过色谱处理(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq 97∶3∶1)，得到油性标题化合物：MS：[M+1]⁺＝234；¹H-NMR(CDCl₃)：7.04(d，8.2Hz，1H)，6.54(d，2.4Hz，1H)，6.51(dd，8Hz，2.4Hz，1H)，3.59(s，H₂N)，3.39(s，2H)，2.5(m，8H)，2.43(q，7.2Hz，2H)，2.31(s，H₃C)，1.11(t，7.2Hz，H₃C)。

实施例27：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-苯基]-脲

将230mg(0.93mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和200mg(0.91mMol)4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-苯胺在8ml THF中的溶液在rt搅拌40min。加入≈15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：m.p.：203-204℃；MS：[M+1]⁺＝467；¹H-NMR(CDCl₃)：8.62(s，1H)，7.48(d，9.0Hz，2H)，7.33(m，4H)，7.13(d，9.0Hz，2H)，6.95(s，1H)，6.88(s，1H)，6.75(s，1H)，3.52(s，2H)，2.53(m，8H)，2.45(q，7.0Hz，2H)，1.12(t，7.0Hz，H₃C)。

原料如下制备：

步骤27.1：4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-苯胺

类似于步骤5.3，在65℃将7.8g(33.4mMol)(4-氨基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮[合成如上所述或者参见J.Pharmaceutical Sci.57(1968)，2073]在105ml THF中用100ml BH₃(1M THF溶液)还原：MS：[M+1]⁺＝220；¹H-NMR(CDCl₃)：7.13(d，8.2Hz，2H)，6.68(d，8.2Hz，2H)，3.67(s，H₂N)，3.47(s，2H)，2.6(m，8H)，2.53(q，7.3Hz，2H)，1.16(t，7.3Hz，H₃C)。

实施例28：1-(4-[1，4′]联哌啶-1′-基-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲

将248mg(1.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和327mg(1.0mMol)4-[1，4′]联哌啶-1′-基-3-三氟甲基-苯基胺(步骤28.2)在8mlTHF中的溶液在rt搅拌30min。加入15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝575；HPLC ^Bt_Ret＝2.06。

原料如下制备：

步骤28.1：1′-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-1-[1，4′]联哌啶

将1.0ml(7.27mMol)1-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯、1.47g(8.73mMol)[1，4′]联哌啶与1.51g(10.9mMol)K₂CO₃在15ml DMF中溶液在室温搅拌17h。在减压下蒸发DMF后，将反应混合物用80ml H₂O稀释，用60mlEtOAc萃取3x。合并有机相，用30ml H₂O和30ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(SiO₂，4.0×24cm，MeOH/CH₂Cl₂ 1∶19)，得到标题化合物，为油：¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：8.45(dd，1H)，8.25(dd，1H)，7.20(dd，1H)，3.45(m，2H)，2.88(m，2H)，2.58(m，4H)，2.40(m，1H)，1.60(m，10H)。

步骤28.2：4-[1，4′]联哌啶-1′-基-3-三氟甲基-苯基胺

如步骤1.5所述，在220mg 10％Pd/C的存在下、在25ml乙醇中氢化2.14g(5.99mMol)1′-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-[1，4′]联哌啶，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝328.

实施例29：1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-{4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基甲基]-3-三氟甲基-苯基}-脲

将112mg(0.45mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和150mg(0.45mMol)4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基甲基]-3-三氟甲基-苯基胺(步骤29.4)在8ml THF中的溶液在rt搅拌30min。加入≈15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝578；HPLC^Bt_Ret＝2.18；¹H-NMR(d₆-DMSO)：9.00(bs，1H)，8.82(bs，1H)，8.60(s，1H)，7.94(s，1H)，7.5(m，4H)，7.30(s，1H)，7.10(m，2H)，3.46(bs，2H)，2.45(m，4H)，2.35(m，4H)，2.00(s，2H)，0.80(s，9H)。

原料如下制备：

步骤29.1：3-[2-(2，2-二甲基-丙基氨基)-乙基]-噁唑烷-2-酮

将5g(17.5mMol)甲苯-4-磺酸2-(2-氧代-噁唑烷-3-基)-乙基酯、1.68g(19.2mMol)2，2-二甲基-丙基胺与3.63g(26.3mMol)K₂CO₃在35ml MeCN中的溶液在40℃搅拌12h。在减压下蒸发MeOH后，将反应混合物用80mlH₂O稀释，用60ml EtOAc萃取3x。合并有机相，用30ml H₂O和30ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，得到标题粗化合物，为油。MS：[M+1]⁺＝201；¹H-NMR(CDCl₃)：4.30(dd，2H)，3.65(dd，2H)，3.35(t，2H)，2.80(t，2H)，2.35(s，2H)，0.90(s，9H)。

步骤29.2：1-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪二氢溴酸盐

按照文献工艺(Tetrahedron Letters，40，7331，1994)，使用3-[2-(2，2-二甲基-丙基氨基)-乙基]-噁唑烷-2-酮制备1-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪二氢溴酸盐：MS：[M+1]⁺＝157。

步骤29.3：N-{4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基甲基]-3-三氟甲基-苯 基}-2，2，2-三氟-乙酰胺

将1.0g(3.14mMol)1-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪二氢溴酸盐、440mg(1.25mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)和0.53ml(3.77mMol)三乙胺溶于10ml DMF，在rt搅拌3h。在减压下蒸发乙腈后，将反应混合物用80ml H₂O稀释，用70ml EtOAc萃取3次。合并有机相，用30ml NaHCO₃溶液和30ml盐水洗涤两次，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(MeOH/CH₂Cl₂1∶19)，得到黄色固体：MS：[M+1]⁺＝426；HPLC ^Bt_Ret＝2.13。

步骤29.4：4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基甲基]-3-三氟甲基-苯基胺

向445mg(1.04mMol)N-{4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基甲基]-3-三氟甲基-苯基}-2，2，2-三氟-乙酰胺在18ml沸腾甲醇中的溶液滴加5.2ml 1MK₂CO₃水溶液。搅拌1h后，将反应混合物冷却至rt，用EtOAc和水稀释。分离出水层，用EtOAc萃取两次。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物，直接用于Ex.29：MS：[M+1]⁺＝330；HPLC ^Dt_Ret＝1.73。

实施例30：1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-{4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基]-3-三氟甲基-苯基}-脲

将141mg(0.57mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和180mg(0.57mMol)4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基]-3-三氟甲基-苯基胺(步骤30.2)在8ml THF中的溶液在rt搅拌30min。加入≈15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝563；HPLC ^Dt_Ret＝2.28。

原料如下制备：

步骤30.1：1-(2，2-二甲基-丙基)-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-哌嗪

将0.36ml(2.62mMol)1-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯、1.0g(3.14mMol)1-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪二氢溴酸盐与1.08g(7.86mMol)K₂CO₃在8mlDMF中的溶液在室温搅拌17h。在减压下蒸发DMF后，将反应混合物用80ml H₂O稀释，用60ml EtOAc萃取3x。合并有机相，用30ml H₂O和30ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(SiO₂，MeOH/CH₂Cl₂1∶19)，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝346；HPLC^Dt_Ret＝2.39；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：8.50(dd，1H)，8.30(dd，1H)，7.25(dd，1H)，3.15(m，4H)，2.70(m，4H)，2.10(s，2H)，0.90(s，9H)。

步骤30.2：4-[4-(2，2-二甲基-丙基)-哌嗪-1-基]-3-三氟甲基-苯基胺

如步骤1.5所述，在40mg 10％ Pd/C的存在下、在10ml乙醇中氢化210mg(0.63mMol)1-(2，2-二甲基-丙基)-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-哌嗪，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝316。

实施例31：1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

将248mg(1.00mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和288mg(1.00mMol)4-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-3-三氟甲基-苯基胺(步骤31.2)在8ml THF中的溶液在rt搅拌30min。加入≈15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝535；HPLC ^At_Ret＝1.98。

原料如下制备：

步骤31.1：1-甲基-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯氧基甲基)-哌啶

将1.00ml(7.27mMol)1-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯、1.88g(14.5mMol)(1-甲基-哌啶-4-基)-甲醇与470mg(1.45mMol)四丁基溴化铵在的6ml甲苯与6ml 25％KOH^aq中的溶液在60℃搅拌17h。冷却溶液后，将反应混合物用80ml H₂O稀释，用60ml EtOAc萃取3次。合并有机相，用30mlNaHCO₃溶液和30ml盐水洗涤两次，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(MeOH/CH₂Cl₂ 1∶19)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝319。

步骤31.2：4-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-3-三氟甲基-苯基胺

如步骤1.5所述，在190mg 10％ Pd/C的存在下、在20ml乙醇中氢化1.86g(5.84mMol)1-甲基-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯氧基甲基)-哌啶，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝289。

实施例32：1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

将248mg(1.00mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和274mg(1.00mMol)4-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-3-三氟甲基-苯基胺(步骤32.2)在8ml THF中的溶液在rt搅拌30min。加入≈15ml DIPE结晶，过滤，用DIPE洗涤，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝522；HPLC ^At_Ret＝1.96。

原料如下制备：

步骤32.1：1-甲基-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯氧基)-哌啶

将1.00ml(7.27mMol)1-氟-4-硝基-2-三氟甲基-苯、1.71ml(14.5mMol)1-甲基-哌啶-4-醇与470mg(1.45mMol)四丁基溴化铵在6ml甲苯与6ml25％KOH_aq中的溶液在60℃搅拌17h。冷却溶液后，将反应混合物用80mlH₂O稀释，用60ml EtOAc萃取3次。合并有机相，用30ml NaHCO₃溶液和30ml盐水洗涤两次，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(MeOH/CH₂Cl₂ 1∶19)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝305。

步骤32.2：4-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-3-三氟甲基-苯基胺

如步骤1.5所述，在180mg 10％ Pd/C的存在下、在20ml乙醇中氢化1.74g(5.72mMol)1-甲基-4-(4-硝基-2-三氟甲基-苯氧基)-哌啶，得到标题化合物，为油：MS：[M+1]⁺＝275。

实施例33：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-{4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3-三氟甲基-苯基}-脲

在N₂气氛下，将370mg(1.49mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)和450mg(1.49mMol)4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3-三氟甲基-苯基胺(步骤33.3)溶于1.4ml THF和7.4ml醚，搅拌1h。浓缩和反相色谱处理(Gilson System)，得到标题化合物：HPLC ^At_Ret＝11.1；MS：[M+1]⁺＝549；¹H-NMR(CDCl₃)：8.60(s，1H)，7.58(d，1H)，7.57(s，1H)，7.46(d，9.0Hz，2H)，7.30(m，1H)，7.12(m，4H)，6.95(s，1H)，2.94(m，2H)，2.6(m，12H)，1.13(t，7.2Hz，H₃C)。

原料如下制备：

步骤33.1：2-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-1-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙酮

向冰冷的11.4g(45.9mMol)(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-乙酸在200mlCH₂Cl₂与2ml DMF中的溶液中滴加7.36ml(87.2mMol)草酰氯。20min后在真空中浓缩反应混合物。将残余物重新溶于200ml CH₂Cl₂，滴加12.2ml(96mMol)N-乙基-哌嗪的80ml CH₂Cl₂溶液。1h后，将混合物用0.4L 10％Na₂CO₃溶液和0.4L CH₂Cl₂稀释，分离出水层，用CH₂Cl₂萃取两次。将有机相用10％Na₂CO₃溶液、水和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，得到标题化合物：HPLC ^At_Ret＝9.2；MS：[M+1]⁺＝346。

步骤33.2：2-(4-氨基-2-三氟甲基-苯基)-1-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙酮

在2.46g阮内镍(B113W Degussa)的存在下、在245ml乙醇中氢化15.35g(44.5mMol)2-(4-硝基-2-三氟甲基-苯基)-1-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙酮。过滤，浓缩滤液，经过柱色谱处理(SiO₂，EtOAc/EtOH+1％NH₃ ^aq 4∶1)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝316；R_f(EtOAc/EtOH+1％NH₃ ^aq 4∶1)：0.11。

步骤33.3：4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3-三氟甲基-苯基胺

在30min内向3.47g(11.0mMol)2-(4-氨基-2-三氟甲基-苯基)-1-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙酮的35ml THF溶液滴加46.8ml1M BH₃的THF溶液。搅拌20h后，在≈30℃在20min内滴加60ml浓HCl与水的1∶1混合物。将混合物在rt搅拌16h，然后在真空中部分浓缩。将残余物用EtOAc萃取3次，有机层用0.1N HCl洗涤，然后弃去。向酸性水相加入饱和Na₂CO₃溶液至碱性，用EtOAc萃取3次。将有机层用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。经过Combi快速色谱处理(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq 99∶1→95∶5)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝302。

实施例34：类似于所述工艺，可以制备下列化合物：

^＊)离析物A的合成参见Ex.65

^＊＊)类似于Ex.16，分别从MeNH₂和EtNH₂的THF溶液制备，在rt下4-10d

^＊＊＊)离析物步骤69.1

$)^Dt_Ret

类似于本文所述工艺可以制备Ex.35-44化合物：

实施例35：3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺

类似于Ex.14，将250mg(1.0mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)溶于2ml THF，与204mg(1.0mMol) 3-氨基-5-三氟甲基)-苯甲酰胺(步骤35.2)的6ml醚溶液反应，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝452；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.41(s，1H，NH)，9.05(s，1H，NH)，8.62(s，1H)，8.16(s，2H，NH₂)，8.14(s，1H)，8.02(s，1H)，7.81(s，1H)，7.55-7.52(m，3H)，7.32(s，1H)，7.17(d，2H)。

原料如下制备：

步骤35.1：(3-硝基-5-三氟甲基)-苯甲酰胺

类似于步骤1.4制备，从2.35g(10.0mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸(Lancaster)和20ml NH₃(25％水溶液)得到标题化合物。MS：[M+1]⁺＝233。

步骤35.2：(3-氨基-5-三氟甲基)-苯甲酰胺

类似于步骤1.5制备，将2.34g(10mmol)(3-硝基-5-三氟甲基)-苯甲酰胺用250mg Pd-C(10％ Engelhard 4505)氢化。MS：[M+1]⁺＝205。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.99(s，1H)，7.31(s，1H)，7.19(s，2H，NH₂)，6.89(s，1H)，5.78(s，2H，NH₂)。m.p.：94-98℃。

实施例36：3-{3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺

类似于Ex.16，由45mg(0.1mMol)3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺和0.8ml甲胺(33％EtOH溶液)制备。MS：[M+1]⁺＝447；HPLC ^Bt_Ret：2.31。

实施例37：3-{3-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺

如Ex.7所述，从150mg(0.33mMol)3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺制备标题化合物，直接用作Ex.38的原料。MS：[M+1]⁺＝459。

实施例38：3-{3-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺

在20mg Pd/C 10％(″Engelhard 4505″)的存在下、在10ml DME中氢化0.15g(0.33mMol)3-{3-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-5-三氟甲基-苯甲酰胺，过滤，浓缩滤液，经过色谱处理(制备型TLC：CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝433；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.72(s，1H，NH)，9.43(s，1H，NH)，8.18(s，1H)，8.16(s，1H)，8.06(s，2H)，7.78(s，1H)，7.52(d，2H)，7.05(d，2H)，6.82(s，2H，NH₂)。

实施例39：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-氨甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

实施例40：3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺

类似于Ex.14，将250mg(1.5mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)溶于3ml THF，与218mg(1.5mMol)3-氨基-N-甲基-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺(步骤35.2)的6ml醚溶液反应，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝466；HPLC ^Bt_Ret：2.31。

原料如下制备：

步骤40.1：N-甲基-(3-硝基-5-三氟甲基)-苯甲酰胺

类似于步骤1.4制备，从2.35g(10.0mMol)3-硝基-5-三氟甲基-苯甲酸(Lancaster)和40ml NH₃(40％水溶液)得到标题化合物。MS：[M-1]＝247。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.09(q，1H，NH)，8.89(s，1H)，8.39(s，1H)，8.38(s，1H)，2.81(d，3H)。

步骤40.2：3-氨基-N-甲基-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺

类似于步骤1.5制备，将2.34g(10mmol)N-甲基-(3-硝基-5-三氟甲基)苯甲酰胺用240mg Pd-C(10％Engelhard 4505)氢化。MS：[M+1]⁺＝219。¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.41(q，1H，NH)，7.24(s，1H)，7.19(s，1H)，6.98(s，1H)，3.41(s，2H，NH₂)，2.78(d，3H)。

实施例41：3-{3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺

类似于Ex.16，由83mg(0.18mMol)3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺和1.5ml甲胺(33％EtOH溶液)制备。MS：[M+1]⁺ 461；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.19(s，1H，NH)，8.87(s，1H，NH)，8.65(q，1H，NH)，8.13(s，1H)，8.03(s，1H)，7.75(s，1H)，7.5(d，2H)，7.26(s，1H)，7.07(d，2H)，5.72(s，1H)，3.59(s，3H)，2.82(d，3H)。

实施例42：3-{3-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺

如Ex.7所述，从300mg(0.64mMol)3-{3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺制备标题化合物，直接用作Ex.43的原料。MS：[M+1]⁺＝473。

实施例43：3-{3-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基苯甲酰胺

在60mg Pd/C 10％(″Engelhard 4505″)的存在下、在10ml DME中氢化0.3g(0.64mMol)3-{3-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-N-甲基-5-三氟甲基-苯甲酰胺，过滤，浓缩滤液，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝447；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.17(s，1H，NH)，8.82(s，1H，NH)，8.60(q，1H，NH)，8.12(s，1H)，8.03(s，1H)，8.01(s，1H)，7.73(s，1H)，7.50(d，2H)，7.05(d，2H)，6.80(s，1H)，5.68(s，1H)，3.57(s，3H)，2.80(d，3H)。HPLC ^Bt_Ret：1.82。

实施例44：N-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-(3-甲氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲

可以类似于本文所述化合物合成。

实施例45：N-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下在冰浴中冷却的98mg(0.33mMol)三光气的11ml CH₂Cl₂溶液滴加302mg(1.00mMol)4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤15.2)和0.14ml(1.0mMol)NEt₃的5ml CH₂Cl₂溶液。在冰浴中搅拌10min，在rt搅拌30min，然后在5min内加入202mg(1.0mMol)4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基胺(步骤45.3)与0.14ml(1.0mMol)NEt₃的5ml CH₂Cl₂悬液。在rt搅拌15min后，在真空中浓缩反应混合物，将残余物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，加入SiO₂后再次浓缩。将所得粉末置于MPLC色谱柱顶部，用CH₂Cl₂/甲醇(+1％NH₃ ^aq)19∶1→9∶1洗脱标题化合物，最后从二噁烷中冻干：元素分析C₂₆H₃₀N₇F₃O₂·1.2H₂O·0.1C₄H₈O₂：C，H，N，F；MS：[M+1]⁺＝530；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.06(s，HN)，8.86(s，HN)，8.10(d，5.5Hz，1H)，7.98(d，2.3Hz，1H)，7.65(d，8.6Hz，1H)，7.59(dd，8.6Hz，2.3Hz，1H)，7.50(d，9.0Hz，2H)，7.10(d，9.0Hz，2H)，6.62(s，H₂N)，6.09(d，5.5，1H)，3.54(s，2H)，2.67(m，1H)，2.50(m，4H)，2.41(m，4H)，0.99(d，6.7Hz，6H)。

原料如下制备：

步骤45.1：2-氯-4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶

将18g(130mMol)2，4-二氯嘧啶溶于100ml丙酮，在0℃缓慢加入到5.32g(130mMol)NaOH与16.64g(118.4mMol)4-硝基苯酚的100ml H₂O溶液中。在80℃搅拌23h后，在减压下浓缩反应混合物，冷却，滤出所沉淀的粗产物，用H₂O洗涤，在真空中干燥。进行快速色谱纯化(SiO₂；4.5×46cm，己烷/EtOAc 2∶1)：MS：[M+1]⁺＝252；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.67(d，4.5Hz，1H，嘧啶基)，8.33(d，8.5Hz，2H，苯基)，7.56(d，8.5Hz，2H，苯基)，7.31(d，4.5Hz，1H，嘧啶基)，R_f(己烷/EtOAc＝1∶1)：0.38，HPLC ^Bt_Ret：5.97。

步骤45.2：4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基胺

将4g(15.9mMol)2-氯-4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶溶于100ml EtOH和100ml NH₃水溶液(25％)，在100℃高压釜(2bar)中搅拌2h。在减压下浓缩反应混合物后，将沉淀产物溶于MeOH，经过快速色谱处理(SiO₂；4.5×26cm，EtOAc/己烷/NH₃ 50∶50∶1.5→100∶50∶1.5)，得到标题化合物，为白色固体：R_f(EtOAc/己烷/NH₃：100∶50∶1.5)：0.10；MS：[M+1]⁺＝233。

步骤45.3：4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基胺

将1.68g(6.7mMol)4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基胺溶于50ml MeOH，在500mg阮内镍的存在下氢化4h。经过Hyflo过滤，用40ml EtOH洗涤两次，在减压下浓缩反应溶液，经过快速色谱处理(SiO₂；4.5×26cm，EtOAc/己烷/NH₃ 100∶50∶1.5→200∶50∶1.5)，得到标题化合物，为米色固体：R_f(EtOAc/己烷/NH₃：100∶50∶1.5)：0.10；MS：[M+1]⁺＝203。

实施例46：N-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

向N₂气氛下在冰浴中冷却的60mg(0.20mMol)三光气的7ml CH₂Cl₂溶液滴加181mg(0.60mMol)4-(4-异丙基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤15.2)和83μl(0.6mMol)NEt₃的3ml CH₂Cl₂溶液。在冰浴中搅拌10min，在rt搅拌30min，然后在5min内加入130mg(0.60mMol)[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-甲基-胺(步骤46.2)与83μl(0.6mMol)NEt₃的3mlCH₂Cl₂悬液。在rt搅拌90min后，在真空中浓缩反应混合物，将残余物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，加入SiO₂后再次浓缩。将所得粉末置于MPLC色谱柱顶部，用CH₂Cl₂/甲醇(+1％NH₃ ^aq)97∶3→93∶7洗脱标题化合物：MS：[M+1]⁺＝544；¹H-NMR(CD³OD/CDCl₃)：7.99(d，5Hz，1H)，7.67(d，2Hz，1H)，7.60(dd，8.6Hz，2Hz，1H)，7.55(d，8.6Hz，1H)，7.43(d，9.0Hz，2H)，7.03(d，9.0Hz，2H)，5.96(d，5Hz，1H)，3.59(s，2H)，2.99(m，1H)，2.83(s，H₃C)，2.70(m，4H)，2.58(m，4H)，1.12(d，6.3Hz，6H)。

原料如下制备：

步骤46.1：甲基-[4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-胺

将2g(7.95mMol)2-氯-4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶溶于40ml MeNH₂(30％EtOH溶液)，在rt搅拌50min。蒸发溶剂后，粗产物经过快速色谱处理(SiO₂；4.5×30cm，己烷/EtOAc 1∶1)，得到标题化合物，为白色固体：R_f(己烷/EtOAc 2∶1)：0.18；MS：[M+1]⁺＝247；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：8.33(d，8.5Hz，2H，苯基)，8.24(d/宽峰，1H，嘧啶基)，7.35(d，8.5Hz，2H，苯基)，6.22(d，6.0Hz，1H，嘧啶基)，2.90(s/宽峰，3H，CH₃)。

步骤46.2：[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-甲基-胺

在阮内镍的存在下氢化，从甲基-[4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-胺制备标题化合物：R_f(己烷/EtOAc 1∶1)：0.13；MS：[M+1]⁺＝217；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.04(s/宽峰，1H，嘧啶基)，6.95(s/宽峰，1H，HN)，6.76(d，8.5Hz，2H，苯基)，6.54(d，8.5Hz，2H，苯基)，5.90(s/宽峰，1H，嘧啶基)，5.00(s，2H，NH₂)，2.70(s/宽峰，3H，CH₃)。

实施例47：N-[4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

从2-氯-4-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶和4-(二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基胺制备标题化合物。

类似于本文所述工艺，可以制备Ex.48-50化合物：

实施例48：N-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-二甲氨基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

按照Ex.45制备，始于101mg(0.43mMol)4-(N，N-二甲氨基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(步骤20.1-2)和100mg(0.43mMol)[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-甲基-胺(步骤46.2)。在rt搅拌3h后，在真空中浓缩反应混合物，将残余物重新溶于CH₂Cl₂/MeOH，粗产物经过制备型TLC纯化(CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝461；HPLC ^Bt_Ret：2.03，R_f(CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)：0.65。

实施例49：N-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-叔丁基哌嗪基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

按照Ex.45制备，始于146mg(0.43mMol)4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺(步骤20.5)和100mg(0.43mMol)[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-甲基-胺(步骤46.2)，在5min内加入83μl(0.6mMol)NEt₃的3ml CH₂Cl₂溶液。在rt搅拌0.5h后，过滤分离所沉淀的产物。MS：[M+1]⁺＝558；m.p.257-258℃，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.60(bs，1H，NH)，9.09(s，1H，NH)，8.78(s，1H，NH)，8.10(d，1H，)，7.86(s，1H)，7.69-7.55(m，2H)，7.48(d，2H)，7.08(d，2H)，6.50(bs，1H，NH)，6.04(d，1H)，3.70(s，2H)，3.49-3.37(m，4H)，3.10-2.87(m，4H)，2.85(s，3H)，1.37(s，9H)。

实施例50：N-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-叔丁基哌嗪基-甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

按照Ex.45制备，始于312mg(0.98mMol)4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基-胺(步骤20.5)和200mg(0.98mMol)4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基胺(步骤45.3)。在rt搅拌30min后，过滤分离所沉淀的产物，用冷THF洗涤，在真空中干燥，得到标题化合物，为白色固体。MS：[M+1]⁺＝548；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.41(s，1H，HN)，9.17(s，1H，NH)，8.03(d，1H)，7.97(s，1H)，7.62-7.58(m，2H)，7.43(d，2H)，7.02(d，2H)，6.59(bs，2H)，6.01(d，1H)，3.62(s，2H)，3.49-3.39(m，2H)，2.99-2.82(m，4H)，2.61-2.48(m，2H)，1.17(s，9H)。

原料(胺组分)如实施例20步骤1-5所述制备。

实施例51：类似地可以制备下列化合物：

1)类似于Ex.45制备；2)类似于Ex.46制备

实施例52：类似于实施例45制备下列化合物：

步骤52c.1：N-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-2，2，2-三氟-乙酰 胺

将2g(5.71mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)和2.22ml(17.14mMol)N-乙基哌嗪溶于55ml乙腈，在rt搅拌45min。在减压下蒸发乙腈后，将反应混合物用80ml H₂O稀释，用70mlEtOAc萃取3次。合并有机相，用30ml NaHCO₃溶液和30ml盐水洗涤两次，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(SiO₂；4.0×24cm，MeOH/CH₂Cl₂1∶19)，得到黄色固体：R_f(MeOH/CH₂Cl₂1∶4)：0.42；MS：[M+1]⁺＝384；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.40(s/宽峰，1H，NH)，8.02(s，1H)，7.90(d，7.5Hz，1H)，7.74(d，7.5Hz，1H)，3.56(s，2H，CH₂-芳基)，2.30(m，10H)，2.51(t，7.5Hz，3H，CH₃)。

步骤52c.2：4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基胺

在Ar下，将1.59g(4.1mMol)N-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-2，2，2-三氟-乙酰胺在41ml MeOH与20.5ml 1M K₂CO₃H₂O溶液中的溶液在70℃搅拌1.5h。在减压下蒸发MeOH后，将反应混合物用80mlH₂O稀释，用60ml EtOAc萃取3x。合并有机相，用30ml H₂O和30ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，经过快速色谱处理(SiO₂；4.0×24cm，MeOH/CH₂Cl₂ 1∶19)，得到标题化合物，为黄色固体：R_f(MeOH/CH₂Cl₂1∶4)：0.42；MS：[M+1]⁺＝288；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.24(d，7.5Hz，1H)，6.81(s，1H)，6.73(d，7.5Hz，1H)，5.41(s，2H，CH₂-芳基)，3.35(m，2H，CH₂-CH₃)，2.30(m，8H，哌嗪基)，2.51(t，6.5Hz，3H，CH₃)。

步骤52d.1：3-吡啶-2-基-5-三氟甲基-苯基胺

按照[Lam F，Chan KS(1995)，Synthesis of acyclic dinucleating Schiffbase-pyridine and Schiff base-phosphine ligands.Tetrahedron Lett；36(6)：919-922]的工艺合成标题化合物，将600mg(2.44mMol)3-氨基-5-溴三氟甲苯、1g(2.69mMol)2-(三丁基甲锡烷基)-吡啶和285mg四(三苯膦)钯溶于10ml THF，在Ar下，在90℃搅拌7d。经过色谱分离(SiO₂；4.5×19cm，EtOAc/己烷1∶2→2∶3)，得到标题化合物，为浅褐色固体：R_f(己烷/EtOAc2∶1)：0.17；MS：[M+1]⁺＝239；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.81(d，4.5Hz，1H，吡啶基)，7.88(m，2H，吡啶基)，7.53(s，1H，苯基-CF₃)，7.43(s，1H，苯基-CF₃)，7.37(m，1H，吡啶基)，6.89(s，1H，苯基-CF₃)，5.73(s，2H，NH₂)。

实施例53：类似于实施例46制备下列化合物：

^＊相应三氟甲基苯基胺构件的合成分别如步骤53b.3和53d.1下所述。

步骤53b.1：(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯

将25g(104mMol)3-溴-5-三氟甲基-苯胺、24g(110mMol)(Boc)₂O与1.2g(10mMol)DMAP的200ml MeCN溶液在60℃搅拌10h。在减压下蒸发溶剂后，残余物经过快速色谱处理(SiO₂；己烷/EtOAc 10∶1)，从己烷中结晶，得到标题化合物，为白色晶体：R_f(己烷/EtOAc 1∶5)：0.23；MS：[M+1]⁺＝341。

步骤53b.2：[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁基酯

将6.8g(20mMol)(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯、2.6ml(24mMol)1-甲基-哌嗪、2.7g(28mMol)NaOtBu、6ml三叔丁基膦(10％己烷溶液，3mMol)和0.5g(1mMol)三-(二亚苄基丙酮)-二-钯溶于100ml甲苯，在Ar下、在70℃搅拌6h。将反应溶液用200ml EtOAc稀释，经过Hyflo过滤。用50ml盐水洗涤后，将滤液干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，重新从EtOAc/己烷中结晶，得到标题化合物，为褐色的油：R_f(MeOH/CH₂Cl₂ 1∶5)：0.45；MS：[M+1]⁺＝360。

步骤53b.3：3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯基胺

将3.2g(8.9mMol)[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯基]-氨基甲酸叔丁基酯溶于60ml 2.5N HCl的2-丙醇溶液，在60℃搅拌5.5h。在减压下蒸发溶剂后，使残余物在200ml EtOAc与100ml NaHCO₃溶液之间分配。将有机相用50ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，蒸发溶剂，得到标题化合物，为褐色的油：MS：[M+1]⁺＝260；R_f(MeOH/CH₂Cl₂ 1∶5)：0.18；¹N-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：6.31(s，1H)，6.27(s，1H)，5.34(s，1H)，3.32(s/宽峰，2H，NH₂)，3.70/2.42(m/m，4H/4H，CH₂-哌嗪基)，2.20(s，3H，CH₃)。

步骤53d.1：4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-三氟甲基-苯基胺

标题化合物如下合成：1-溴-4-硝基-2-三氟甲基-苯与1-甲基-哌嗪进行亲核取代反应(140℃，4h)，进一步借助阮内镍氢化还原硝基官能团为胺：m.p.：121-123℃；R_f(MeOH/CH₂Cl₂＝1∶5)：0.17；MS：[M+1]⁺＝260；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.21(d，9Hz，1H)，6.74(m，2H)，5.35(s/宽峰，2H，NH₂)，2.70(m/宽峰，4H，CH₂)，2.36(s/宽峰，4H，CH₂)，2.18(s，3H，CH₃)。

实施例54：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-5-三氟甲基-苯基]-脲

在0℃，将252mg(1mMol)3-(6-甲基-吡啶-2-基)-5-三氟甲基-苯基胺(步骤54.2)与0.12ml NEt₃的4.5ml CH₂Cl₂溶液加入到99mg(0.33mMol)三光气的9ml CH₂Cl₂溶液中。在rt搅拌15min后，加入202mg(1mMol)4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-6-基胺(步骤54.3)与0.12ml NEt₃在4.5ml CH₂Cl₂与0.5ml DMF中的溶液。将褐色反应溶液在rt搅拌3.5h后，在减压下蒸发溶剂，经过快速色谱处理(SiO₂；2.5×18cm，MeOH/CH₂Cl₂/NH₃ 5∶95∶0.5)，得到标题化合物，为米色固体：R_f(MeOH/CH₂Cl₂/NH₃ 5∶95∶0.5)：0.06；MS：[M+1]⁺＝481；¹H-NMR(DMSO-d₆)：9.21/8.83(s/s，1H/1H，脲)，8.29(s，1H，嘧啶基)，8.06(m，2H，吡啶基)，7.93(s，1H，苯基-CF₃)，7.80(s，1H，苯基-CF₃)，7.79(s，1H，苯基-CF₃)，7.51(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.26(m，1H，吡啶基)，7.06(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.77(s，2H，NH₂)，5.66(s，1H，嘧啶基)，2.51(s，3H，CH₃)。

步骤54.1：6-甲基-2-(三丁基甲锡烷基)-吡啶

类似于Zhang等人(Synthetic Communications 31(2001)，1129)的工艺合成标题化合物。在Ar下、在-78℃，向3.83g(22.2mMol)2-溴-6-甲基-吡啶的7ml THF溶液缓慢加入13.9ml nBuLi(1.6N己烷溶液；22.2mMol)。在-78℃搅拌1.5h后，缓慢加入6ml(22.2mMol)三丁基甲锡烷基氯，将反应溶液在-78℃搅拌另外30min。过滤反应混合物后，快速色谱分离标题化合物(SiO₂；5×16cm，EtOAc/己烷1∶9)：无色的油：R_f(己烷/EtOAc 3∶2)：0.42；MS：[M+1]⁺＝380。

步骤54.2：3-(6-甲基-吡啶-2-基)-5-三氟甲基-苯基胺

将1g(4.19mMol)3-氨基-5-溴三氟甲苯、1g(2.60mMol)6-甲基-2-(三丁基甲锡烷基)-吡啶和30mg四(三苯膦)钯溶于1.5ml THF，在密封的试管中、在微波炉(Emrys Optimizer，personal chemistry，Sweden)中、在Ar下、在140℃搅拌1000秒。色谱分离(SiO₂；5×18cm，EtOAc/己烷1∶9→2∶3)，得到标题化合物，为无色的油：R_f(己烷/EtOAc 3∶2)：0.42；MS：[M+1]⁺＝253；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.62(t，6.5Hz，1H，吡啶基)，7.74/7.70(s/s，1H/1H，苯基-CF₃)，7.69(d，6.5Hz，1H，吡啶基)，7.12(d，6.5Hz，1H，吡啶基)，6.91(s，1H，苯基-CF₃)，3.95(s/宽峰，2H，NH₂)，2.63(s，3H，CH₃)。

步骤54.3：4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-6-基胺

将2.0g(9.725mMol)4-(6-氯-嘧啶-4-基-氧基)-苯胺(步骤1.2)溶于80mlNH₃水(25％)和60ml EtOH，在密封的试管中、在80℃搅拌23h。在减压下、在40℃水浴上蒸发溶剂后，残余物经过快速色谱处理(SiO₂；5.5×65cm；CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)，得到标题化合物，为白色固体：R_f(CH₂Cl₂/MeOH＝9∶1)：0.37；MS：[M+1]⁺＝203；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.01(s，1H，嘧啶基)，6.74(d，9Hz，2H，苯基)，6.70(s，2H，NH₂)，6.57(d，9Hz，2H，苯基)，5.51(s，1H，嘧啶基)，5.03(s，2H，NH₂)。

实施例55：类似于实施例54化合物的制备，经由脲的生成合成另外的化合物：

^＊酚型胺的OH基团被TBDMS保护。生成脲后，借助HF的吡啶溶液(30％)裂解除去酚型氧的TBDMS保护基团。

步骤55a.1a：4-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基氨基]-苯酚

将3g(11.9mMol)4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.1)、1.95g(17.9mMol)4-氨基苯酚和3.04ml(17.9mMol)DIPEA溶于50ml 2-丙醇，在85℃搅拌18h。在减压下浓缩反应混合物后，产物沉淀，为无色微细固体：R_f(EtOAc/己烷2∶1)：0.48；MS：[M+1]⁺＝245；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.40/9.25(s/s，2H，NH/OH)，8.28(d，7.5Hz，2H，苯基-NO₂)，8.26(s，1H，嘧啶基)，7.40(d，7.5Hz，2H，苯基-NO₂)，7.24(d，8.0Hz，2H，苯基-OH)，6.77(d，8.0Hz，2H，苯基-OH)，6.15(s，1H，嘧啶基)。

步骤55a.1b：[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-苯基]-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧 啶-4-基]-胺

将1.5g(4.63mMol)4-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基氨基]-苯酚、1.39g(9.26mMol)叔丁基-二甲基-甲硅烷基氯、1.29ml(9.26mMol)NEt₃溶于20mlDMF，搅拌3.5h。在减压下浓缩反应混合物，溶于磷酸盐缓冲液(50ml，pH＝7)后，产物用10ml EtOAc萃取，经过快速色谱纯化(SiO₂；3.0×17cm，EtOAc/己烷1∶1→4∶1)，得到标题化合物，为无色固体：MS：[M+1]⁺＝439；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.56(s，1H，NH)，8.28(m，3H，嘧啶基，苯基-NO₂)，7.40(m，4H，苯基-OTBS，苯基-NO₂)，6.81(d，8.8Hz，2H，苯基-OTBS)，6.20(s，1H，嘧啶基)，0.93(s，9H，TBS)，0.18(s，6H，TBS)。

步骤55a.1c：[6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧 基)-苯基]-胺

在0.4g阮内镍的存在下、在50ml EtOH/THF(35/15)中氢化1.8g(4.1mMol)[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-苯基]-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-胺达3h，经过快速色谱纯化(SiO₂；3.0×18cm，EtOAc/己烷1∶1→4∶1)，得到标题化合物，为无色固体：R_f(EtOAc/己烷＝2∶1)：0.22；MS：[M+1]⁺＝409；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.22(s，1H，NH)，8.20(s，1H，嘧啶基)，7.37(d，8.8Hz，2H，苯基-OTBS)，6.77(d，8.8Hz，2H，苯基-NH₂)，6.70(d，8.8Hz，2H，苯基-OTBS)，6.55(8.8Hz，2H，苯基-NH₂)，5.79(s，1H，嘧啶基)，5.02(s，2H，NH₂)，0.90(s，9H，TBS)，0.12(s，6H，TBS)。

步骤55b.2：4-二甲氨基甲基-3-三氟甲基-苯基胺

将1.8g(5.14mMol)N-(4-溴甲基-3-三氟甲基-苯基)-2，2，2-三氟-乙酰胺(步骤14.2)溶于25ml HNMe₂(30％EtOH溶液)，在rt搅拌1h，然后(就2，2，2-三氟乙酰胺官能团的皂化而言)另外在50℃搅拌3h。在减压下蒸发溶剂后，残余物经过快速色谱纯化(SiO₂；5.5×17cm，丙酮/CH₂Cl₂/NH₃5∶94∶1→50∶49∶1)，得到黄色的油：R_f(丙酮/CH₂Cl₂/NH₃50∶49∶1)：0.73；MS：[M+1]⁺＝219；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.32(d，8.5Hz，1H)，6.88(d，4.5Hz，1H)，6.76(d，8.5Hz，1H)，5.44(s，2H，CH₂)，3.33(s，2H，NH₂)，2.12(s，6H，CH₃)。

步骤55c.1a：(3-甲氧基-苯基)-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-胺

将5g(19.9mMol)4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.1)和4.88ml(43.8mMol)m-茴香胺溶于7.4ml DIPEA和85ml 2-丙醇，回流162h。在减压下浓缩反应混合物期间，残余物沉淀，得到标题化合物，为白色晶体，用冷MeOH洗涤：MS：[M+1]⁺＝339；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.69(s，1H，NH)，8.40(s，1H，嘧啶基)，8.31(d，9.5Hz，2H，苯基)，7.44(d，9.5Hz，2H，苯基)，7.29(s/宽峰，1H，MeO-苯基)，7.23(t，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，7.16(d，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，6.62(d/宽峰，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，7.97(s/宽峰，1H，嘧啶基)，5.11(s，2H，NH₂)，3.74(s，3H，CH₃)。

步骤55c.1b：[6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺

将5.4g(16mMol)(3-甲氧基-苯基)-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-胺溶于160ml MeOH/THF 2∶1，在阮内镍的存在下氢化16h。将反应悬液经过Hyflo过滤冰浓缩反应混合物后，沉淀出标题化合物，为白色晶体：MS：[M+1]⁺＝309；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.47(s，1H，NH)，8.36(s，1H，嘧啶基)，7.31(s/宽峰，1H，MeO-苯基)，7.19(t，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，7.14(d，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，6.88(d，9.5Hz，2H，苯基)，6.63(d，9.5Hz，2H，苯基)，6.58(d/宽峰，8.5Hz，1H，MeO-苯基)，7.97(s/宽峰，1H，嘧啶基)，5.06(s/宽峰，2H，NH₂)，5.11(s，2H，NH₂)，3.73(s，3H，CH₃)；HPLC ^Bt_Ret：3.82。

步骤55c.2：4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基胺

标题化合物如下合成：1-溴-4-硝基-2-三氟甲基-苯与吗啉进行亲核取代反应(140℃，4h)，进一步借助阮内镍氢化还原硝基官能团为胺：m.p.：149-151℃；R_f(己烷/EtOAc 1∶1)：0.30；MS：[M+1]⁺＝247.1，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：7.22(d，9Hz，1H)，6.77(m，2H)，5.37(s/宽峰，2H，NH₂)，3.62(m/宽峰，4H，CH₂)，2.67(m，宽峰4H，CH₂)。

步骤55d.1a：4-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基氨基]-环己醇

将300mg(1.19mMol)4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.1)和184mg(1.60mMol)4-氨基-环己醇溶于0.5ml DIPEA和30ml 2-丙醇，回流3h。蒸发溶剂后，残余物经过快速色谱处理两次(SiO₂；2.5×12cm，己烷/EtOAc1∶1→MeOH/EtOAc 5∶95.SiO₂；2×15cm，5→10％MeOH的CH₂Cl₂溶液)，得到无色的油：R_f(MeOH/CH₂Cl₂1∶9)：0.50；MS：[M+1]⁺＝331，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.30(d，10.5Hz，2H，苯基)，8.14(s/宽峰，1H，嘧啶基)，7.43(d，8.5Hz，1H，NH)，7.38(d，10.5Hz，2H，苯基)，5.95(s/宽峰，1H，嘧啶基)，5.06(s/宽峰，2H，NH₂)，4.55(d，4.5Hz，1H，OH)，3.76(s/宽峰，1H，CH)，3.41(m/宽峰，1H，CH)，1.92-1.80(m，4H，CH₂)，1.25(m，4H，CH₂)。

步骤55d.1b：4-[6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-4-基氨基]-环己醇

将100mg(0.30mMol)4-[6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶-4-基氨基]-环己醇溶于15ml MeOH，在阮内镍的存在下氢化3h。将反应悬液经过Hyflo过滤并蒸发溶剂后，粗产物经过快速色谱纯化(SiO₂；2×20cm，丙酮/CH₂Cl₂/NH₃ 5∶94∶1→50∶49∶1)，得到标题化合物，为黄色的油：R_f(MeOH/CH₂Cl₂/NEt₃ 15∶84∶1)：0.12；MS：[M+1]⁺＝301；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.09(s，1H，嘧啶基)，7.13(d，8.5Hz，1H，NH)，6.76(d，9.5Hz，2H，苯基)，6.56(d，9.5Hz，2H，苯基)，5.55(s/宽峰，1H，嘧啶基)，5.06(s/宽峰，2H，NHa)，4.56(d，4.0Hz，1H，OH)，3.64(s/宽峰，1H，CH)，3.38(m/宽峰，1H，CH)，1.79(m，4H，CH₂)，1.23(m，4H，CH₂)。

实施例56：类似地可以制备下列化合物：

实施例57：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-2-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

在密封的试管中，在氩气氛下，将150mg(0.320mMol)1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-脲(步骤57.3)、590mg(1.602mMol)2-(三丁基甲锡烷基)-吡啶和97mg(0.084mMol)四(三苯膦)钯悬浮在1，4-二噁烷中。在150℃搅拌2.5h后，在减压下除去溶剂。经过柱色谱处理(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH 95∶5)，从醚中结晶，得到标题化合物，为白色粉末：m.p.：188-192℃；R_f(CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)：0.19；MS：[M+1]⁺＝470；HPLC ^Ct_Ret＝5.49。

原料如下制备：

步骤57.1：1-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲

向N₂气氛下4.0g(16.15mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(实施例1；步骤1.3)的13ml THF溶液加入3.88g(16.15mMol)4-溴-3-三氟甲基-苯胺的85ml醚溶液。在rt搅拌27h后，滤出产物，用醚洗涤。干燥后，得到标题化合物，为白色晶体：m.p.：179-182℃；R_f(EtOAc)：0.55；MS：[M+1]⁺489；HPLC ^Ct_Ret＝7.46。

步骤57.2：1-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)- 脲

将4.13g(8.47mMol)1-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲与1.1g(16.94mMol)NaN₃在65ml DMF中的混合物在50℃搅拌19h，在60℃搅拌6h。将反应混合物倒入150ml水中，用EtOAc萃取(3×350ml)。将有机层用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩。粗产物直接用于后面的氢化步骤(步骤57.3)。R_f(EtOAc)：0.58；MS：[M+1]⁺＝494；HPLC ^Ct_Ret＝7.58。

步骤57.3：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-脲

将4.1g(8.3mMol)1-[4-(6-叠氮基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-脲溶于80ml EtOH，在1g阮内镍的存在下、在rt氢化15h。将反应溶液过滤，浓缩。经过柱色谱处理(SiO₂；EtOAc)，从醚中结晶，得到标题化合物：m.p.：186-188℃；R_f(EtOAc)：0.18；MS：[M+1]⁺＝469；HPLC ^Ct_Ret＝5.49。

实施例58：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-3-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

如实施例57所述制备标题化合物，使用3-(1，1，1-三丁基甲锡烷基)吡啶：m.p.：132-135℃；MS：[M+1]⁺＝467；HPLC ^Ct_Ret＝3.54。

实施例59：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

如实施例57所述制备标题化合物，使用4-(1，1，1-三丁基甲锡烷基)吡啶：m.p.：131-135℃；MS：[M+1]⁺＝467；HPLC ^Ct_Ret＝3.51。

实施例60：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(6-甲基-吡啶-2-基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

如实施例57所述制备标题化合物，使用2-甲基-6-三丁基甲锡烷基-吡啶(步骤54.1)：m.p.：130-133℃；MS：[M+1]⁺＝481；HPLC ^Ct_Ret＝3.66。

实施例61：1-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-2-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

在密封的试管中，在氩气氛下，将136mg(0.282mMol)1-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲(步骤61.1)、129mg(0.35mMol)2-(三丁基甲锡烷基)-吡啶和36mg(0.031mMol)四(三苯膦)钯悬浮在0.5ml THF中。将反应混合物在微波炉(Emrys Optimizer)中、在140℃加热85min。过滤后，蒸发母液，经过色谱处理(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH 95∶5)。借助制备型TLC(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)，得到标题化合物，为白色粉末：m.p.：114-118℃；R_f(CH₂Cl₂/MeOH 9∶1)：0.32；MS：[M+1]⁺＝481；HPLC ^Ct_Ret＝3.78。

原料如下制备：

步骤61.1：1-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]- 脲

将3g(6.15mMol)1-(4-溴-3-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲(步骤57.1)溶于35.5ml 33％MeNH₂的EtOH溶液，在冰浴中搅拌4h。在减压下除去溶剂后，残余物经过色谱处理(SiO₂；EtOAc)，从醚中结晶，得到标题化合物，为白色晶体：m.p.：161-164℃；R_f(EtOAc)：0.26；MS：[M+1]⁺＝482；HPLC ^Ct_Ret＝5.64。

实施例62：1-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-3-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

如实施例61所述制备标题化合物，使用3-(1，1，1-三丁基甲锡烷基)吡啶：m.p.：118-123℃；MS：[M+1]⁺＝481；HPLC ^Ct_Ret＝3.67。

实施例63：1-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吡啶-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

如实施例61所述制备标题化合物，使用4-(1，1，1-三丁基甲锡烷基)吡啶：m.p.：127-130℃；MS：[M+1]⁺＝481；HPLC ^Ct_Ret＝3.64。

实施例64：1-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(6-甲基-吡啶-2-基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

如实施例61所述制备标题化合物，使用2-甲基-6-三丁基甲锡烷基-吡啶(步骤54.1)：m.p.：106-109℃；MS：[M+1]⁺＝495；HPLC ^Ct_Ret＝3.80。

实施例65：N-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N′-[4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-氯-苯基]-脲

向N₂气氛下的720mg(2.8mMol) 4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-氯-苯胺(步骤65.3)的30ml THF溶液加入710mg(2.86mMol)4-氯-6-(4-异氰酰基-苯氧基)-嘧啶(步骤1.3)。搅拌18h后，将反应混合物过滤，部分浓缩滤液，加入DIPE结晶出标题化合物：MS：[M+1]⁺＝501；¹H-NMR(DMSO-d₆)：8.91(s，1H)，8.88(s，1H)，8.66(s，1H)，7.72(d，2Hz，1H)，7.54(d，9Hz，2H)，7.36(d，8Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.28(dd，8Hz，2Hz，1H)，7.18(d，9Hz，2H)，3.49(s，2H)，2.43(m，8H)，2.32(q，7.1Hz，2H)，0.99(t，7.1Hz，H₃C)。

原料如下制备：

步骤65.1：(4-硝基-2-氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮

类似于步骤5.1，将5.0g(24.8mMol)4-硝基-2-氯-苯甲酸用6.0ml(71mMol)草酰氯活化，与6.6ml(52mMol)1-乙基哌嗪反应，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝298；HPLC ^At_Ret＝7.3。

步骤65.2：(4-氨基-2-氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮

如步骤1.5所述，在1.3g阮内镍的存在下、在130ml乙醇中氢化7.29g(24.5mMol)(4-硝基-2-氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮，从甲苯中结晶，得到标题化合物：m.p.：123-124℃；MS：[M+1]⁺＝268。

步骤65.3：4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-3-氯-苯胺

类似于步骤5.3，将5.06g(18.9mMol)(4-氨基-2-氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)-甲酮在60ml THF中用57ml BH₃(1M THF溶液)还原。经过色谱处理(SiO₂；CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq 95∶5∶1→80∶20∶1)，得到标题化合物：MS：[M+1]⁺＝254；¹H-NMR(CDCl₃)：7.21(d，8Hz，1H)，6.72(d，2.3Hz，1H)，6.58(dd，8Hz，2.3Hz，1H)，3.70(s，H₂N)，3.57(s，2H)，2.6(m，8H)，2.47(q，7.2Hz，2H)，1.13(t，7.2Hz，H₃C)。

实施例66：1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基-苯基]-3-(4-哌嗪-1-基甲基-3-三氟甲基-苯基)-脲

在20mg Pd/C(10％；Engelhard 4505)的存在下、在6ml甲醇中氢化107mg(0.172mMol)4-(4-{3-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲基}-2-三氟甲基-苄基)-哌嗪-1-甲酸苄基酯(Ex.51.h.1)，过滤，经过Combi快速色谱处理(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq 95∶5→4∶1)，得到标题化合物：R_f(CH₂Cl₂/MeOH/NH₃ ^aq 80∶20∶1)：0.10；HPLC ^At_Ret＝7.6；MS：[M+1]⁺＝488；¹H-NMR(CD₃OD)：8.09(d，5.9Hz，1H)，7.90(m，1H)，7.74(d，8.2Hz，1H)，7.64(d，8.2Hz，1H)，7.53(d，9.0Hz，2H)，7.12(d，9.0Hz，2H)，6.18(d，5.9Hz，1H)，3.63(s，2H)，2.88(m，4H)，2.48(m，4H)。

实施例67：1-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基-苯基]-3-(4-哌嗪-1-基甲基-3-三氟甲基-苯基)-脲

可以类似于本文所述工艺制备。

实施例68：N-(6-{4-[3-(3-三氟甲基-苯基)-脲基]-苯氧基}-嘧啶-4-基)乙酰胺

在Ar下，将N-(4-(4-氯嘧啶-6-基)-氧基苯基)-N′-(3-三氟甲基苯基)-脲(步骤68.1)(100mg，0.245mmol)、乙酰胺(40mg，0.68mmol)、Pd₂(dba)₃(三(二亚苄基丙酮)二钯(0))(6mg)、4，5-双(二苯膦基)-9，9-二甲基呫吨(9mg)和Cs₂CO₃(160mg)在THF(3ml)中、在55℃搅拌8h。过滤和蒸发溶剂后，借助制备型薄层色谱分离产物(4个20×20cm平板，丙酮/CH₂Cl₂＝3∶7)：白色固体，M+H＝431.9，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：10.85(s，1H，嘧啶基)，9.03/8.84(s/s，1H/1H，脲)，8.45(s，1H，NH)，7.98(s，1H，嘧啶基)，7.56(d，8.5Hz，1H)，7.56(d/s，9.0Hz，2H/1H)，7.29(d，8.5Hz，1H)，7.06(d，9.0Hz，2H)，2.09(s，3H，CH₃)，R_f(丙酮/CH₂Cl₂＝3∶7)：0.34。

步骤68.1N-(4-(4-氯嘧啶-6-基)-氧基苯基)-N′-(3-三氟甲基苯基)-脲

将3-三氟甲基-苯基异氰酸酯(412mg，2.2mmol)、4-(6-氯-嘧啶-4-基-氧基)-苯胺(步骤68.2；0.25g，1.1mmol)和吡啶(0.18ml)溶于THF(3ml)，搅拌过夜后，在减压下浓缩反应溶液，经过快速色谱处理(硅胶，2.5×17cm；丙酮/CH₂Cl₂＝5∶95→1∶9)，得到标题化合物，为无色固体：M+H＝408.9/410.9，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.07(s，1H，NH)，8.89(s，1H，NH)，8.63(d，2.0Hz，1H，吡啶基)，8.01(s，1H，3-CF₃-苯基)，7.57(d/宽峰，8.0Hz，1H，CF₃-苯基)，7.52(d，9.5Hz，2H，氧代-苯基-胺)，7.50(m，1H，3-CF₃-苯基)，7.32(d，2.0Hz，1H，吡啶基)，7.29(d/宽峰，8.0Hz，1H，-CF₃-苯基)，7.15(d，9.5Hz，2H，氧代-苯基-胺)，(d，6.5Hz，2H，吡啶基)；R_f(丙酮/CH₂Cl₂＝1∶9)：0.54；m.p.＝187.4-189.7℃。

原料如下制备：

步骤68.2：4-(6-氯-嘧啶-4-基-氧基)-苯胺

将4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶(步骤68.3；3.6g，14.3mmol)溶于MeOH(250ml)，在阮内镍(3g)的存在下、在40℃氢化3d。将反应溶液过滤，在减压下浓缩，从EtOAc/己烷中结晶，得到4-氯-6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶：M+H＝222/224；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.62(s，1H，哌啶基)，7.13(s，1H，哌啶基)，6.83(d，9Hz，2H，苯基)，6.56(d，9Hz，2H，苯基)，5.12(s，2H，NH₂)；m.p.＝135.5-138.1℃。

步骤68.3：4-氯-6-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶

将4-硝基苯酚(2.8g，20.1mMol)、2，4-二氯-嘧啶(3g，20.1mMol)、NaOH(0.8g，20.1mmol)溶于H₂O/丙酮(80ml；1∶1)，在60-65℃搅拌1h。在减压下浓缩反应溶液，经过快速色谱处理(硅胶，4.5×22cm，EtOAc/己烷＝1∶4)，得到标题化合物，为无色固体：M+H＝252/254；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)：8.67(s，1H，嘧啶基)，8.34(d，9Hz，2H，苯基)，7.58(d，9Hz，2H，苯基)，7.53(s，1H，嘧啶基)；R_f(EtOAc/己烷＝1∶1)：0.16；m.p.＝125.4-126.6℃。

实施例69：N-(6-{4-[3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲基]-苯氧基}-嘧啶-4-基)-乙酰胺

类似于实施例68化合物的合成，从1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲(步骤69.1)制备标题化合物：米色固体，M+H＝516.9，HPLC[20→100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)7min，保持100％CH₃CN(0.1％TFA)2min]：t_Ret＝7.72min，R_f(MeOH/CH₂Cl₂＝1∶9)：0.42。

步骤69.1：1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯 基)-脲

类似于实施例1化合物的合成、始于步骤55c.2化合物制备标题化合物：白色固体，M-H＝491.9，HPLC[20-100％CH₃CN(0.1％TFA)和H₂O(0.1％TFA)7min，保持100％CH₃CN(0.1％TFA)2min]：t_Ret＝7.52min，R_f(MeOH/CH₂Cl₂＝3∶97)：0.17。

实施例70：[6-(4-{3-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲基}苯氧基)-嘧啶-4-基]-氨基甲酸甲基酯

将787μl(10.2mMol)氯甲酸甲酯溶于10ml CH₂Cl₂，在rt缓慢加入到160mg(0.31mMol)1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲(步骤70.1)、5.6ml吡啶与20mg DMAP的16ml CH₂Cl₂溶液中。搅拌2h后，将所得悬液过滤，滤液用100ml EtOAc稀释，用H₂O和盐水洗涤两次。将水层用EtOAc萃取两次，有机相干燥(Na₂SO₄)，在减压下浓缩。经过Combi快速色谱处理(CH₂Cl₂/NH₃ ^aq/MeOH96∶1∶3→90∶1∶9)，得到白色晶体：m.p.：191-193℃；元素分析C₂₇H₃₀N₇F₃O₄：C，H，N；MS：[M+1]⁺＝574。

步骤70.1：1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲 基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

类似于Ex.19化合物的合成制备标题化合物：元素分析C₂₅H₂₈N₇F₃O₂·0.86H₂O：C，H，N，F，H₂O；MS：[M+1]⁺＝516；HPLC^At_Ret＝8.0。

实施例71：1-[4-(2-乙酰氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

将119μl(1.67mMol)乙酰氯溶于7ml CH₂Cl₂，在2.5h内加入到250mg(0.50mMol)1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲(Ex.52a)与10mg DMAP的6.5ml吡啶溶液中。搅拌另外1小时后，混合物用200ml水和250ml EtOAc稀释。分离水层，用EtOAc反萃取两次。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，在真空中浓缩。经过反相色谱处理(Gilson System)，得到标题化合物：丙酮/EtOH+1％Et₃N 95∶5→4∶1；MS：[M+1]⁺＝544；R_f(丙酮/EtOH/Et₃N 80∶20∶1)：0.11；HPLC ^At_Ret＝7.8。

实施例72：类似于所述工艺可以制备下列化合物：

实施例73：3-[3-(4-{6-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基氧基}-苯基)-脲基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺

类似于Ex.54化合物的制备，从[6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)-苯基]-胺和3-氨基-5-三氟甲基-苯甲酰胺(步骤73.1)经过脲的生成制备标题化合物：MS：[M+1]⁺＝639；R_f(MeOH/CH₂Cl₂＝1∶9)：0.49。

步骤73.1：[6-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-4-基]-[4-(叔丁基-二甲基-甲硅烷氧基)- 苯基]胺

标题化合物如WO 2003/099771所述制备。

实施例74：1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲

将3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-胺(48mg，0.18mMol)与DIPEA(67μL，0.38mMol，2.2equiv)的CH₂Cl₂(0.6ml)溶液滴加到冷(0℃)的三光气(19mg，0.07mMol)的CH₂Cl₂(0.6ml)溶液中。然后向反应混合物加入N-[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(56mg，0.18mMol)与DIPEA(66μL，0.38mMol，2.2equiv)的CH₂Cl₂(1.1ml)溶液。使混合物升温至rt，搅拌10min，在真空中浓缩。粗产物经MPLC纯化(CH₃CN/H₂O/TFA)得到标题化合物，为黄色固体：MS：613.9[M]⁺；HPLC^Dt_Ret＝4.2。

步骤74.1：N-[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4- 二胺

将[4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-苯基胺(808mg，3.43mMol)、4-二甲氨基丁基胺(438mg，3.77mMol，1.1equiv)与K₂CO₃(1.3g，9.26mMol，2.7equiv)在DMF(8ml)中的混合物在100℃搅拌1h。使反应混合物冷却至rt，通过玻璃烧结漏斗过滤。在真空中浓缩滤液。粗产物经过硅胶柱色谱纯化(CH₂Cl₂/MeOH 9∶1→CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq 9∶1)，得到标题化合物，为黄色的油：MS：316.1[M]⁺；R_f＝0.23(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，4∶1)。

步骤74.2：4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-苯基胺

在rt、氢气氛下，将2-氯-4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶(992mg，3.73mMol)与阮内镍(700mg)在MeOH/THF(3∶1，40ml)中的混合物搅拌7h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，在真空中浓缩滤液，得到标题化合物，为黄色固体：MS：236.0[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ret＝2.2。

步骤74.3：2-氯-4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶

将2，4-二氯嘧啶(3.7g，25.17mMol，2equiv)一次性加入到4-硝基-m-甲酚(1.9g，12.59mMol)与粉状NaOH(0.605g，15.11mMol，1.2equiv)在DMF(25ml)中的混合物中。将反应混合物在rt搅拌1h，用H₂O(300ml)稀释，用EtOAc(600ml)萃取。将水层用NaCl饱和，用CH₂Cl₂/MeOH萃取(9∶1，2×300ml)。合并有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。所得黄色结晶性产物经过硅胶柱色谱纯化(己烷→己烷/EtOAc 6∶1→4∶1)，得到标题化合物，为白色晶体：HPLC ^Dt_Ret＝4.7；Rf＝0.17(己烷/EtOAc，3∶1)。

步骤74.4：3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-胺

将5-氨基-2-溴三氟甲苯(500mg，2.1mMol)、3-氯苯基代硼酸(970mg，6.2mMol，3equiv)、Pd(PPh₃)₄(70mg，0.018mMol，0.03equiv)、Na₂CO₃(2MH₂O溶液，5ml，10mMol，4.76equiv)与甲苯(14ml)的混合物在回流下搅拌1h。使反应混合物冷却至rt，通过硅藻土垫过滤，用CH₂Cl₂和H₂O洗涤滤饼。分离各层，水相用CH₂Cl₂萃取(2×60ml)。合并有机相，用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，在真空中浓缩。粗产物经MPLC纯化(CH₃CN/H₂O/TFA)得到标题化合物：MS：270.0[M-2]^-；HPLC ^Dt_Ret＝4.9。

实施例75：1-(3′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用3′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-胺。标题化合物：MS：658.8(M+1)⁺；HPLC^Dt_Ref＝4.3；R_f＝0.47(CH₂Cl₂/MeOH，99∶1)。

步骤75.1：3′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-胺

如Ex.74(步骤74.4)关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用3-溴苯基代硼酸。标题化合物：MS：315.9(M-1)^-；HPLC ^Dt_Ref＝4.9；R_f＝0.16(己烷/EtOAc，4∶1)。

实施例76：1-(4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-胺。标题化合物：MS：612.9(M)⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.3；R_f＝0.13(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

步骤76.1：4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-胺

如Ex.74(步骤74.4)关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用4-氯苯基代硼酸。标题化合物：MS：270.0[M-2]^-；HPLC ^Dt_Ref＝4.9。

实施例77：1-(4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-胺。标题化合物：MS：658.8[M+1]⁺；HPLC^Dt_Ref＝4.4；R_f＝0.07(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

步骤77.1：4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-胺

如Ex.74(步骤74.4)关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用4-溴苯基代硼酸。标题化合物：MS：315.9[M-1]^-；HPLC ^Dt_Ref＝4.9；R_f＝0.14(己烷/EtOAc，4∶1)。

实施例78：1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-三氟甲基-苯基}-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺。标题化合物：MS：668.8[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.4；R_f＝0.01(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

步骤78.1：N-[4-(4-氨基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷 -1，4-二胺

如Ex.74(步骤74.1)关于N-[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺所述制备标题化合物，但是使用4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-三氟甲基-苯基胺。标题化合物：MS：370.1[M]⁺；HPLC^Dt_Ref＝2.6；R_f＝0.14(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，4∶1)。

步骤78.2：4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-三氟甲基-苯基胺

如Ex.74(步骤74.2)关于4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-苯基胺所述制备标题化合物，但是使用2-氯-4-(4-硝基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶。标题化合物：MS：288.0[M-1]^-；HPLC ^Dt_Ref＝4.6。

步骤78.3：2-氯-4-(4-硝基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶

如Ex.74(步骤74.3)关于2-氯-4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶所述制备标题化合物，但是使用4-硝基-3-(三氟甲基)-苯酚。将反应混合物在rt搅拌3h。标题化合物：MS：317.9[M-1]^-；HPLC ^Dt_Ref＝4.8。

实施例79：1-(3′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-三氟甲基-苯基}-脲

如Ex.75关于1-(3′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(Ex.78，步骤78.1)。标题化合物：MS：712.7[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.5；R_f＝0.04(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

实施例80：1-(4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-三氟甲基-苯基}-脲

如Ex.76关于1-(4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(Ex.78，步骤78.1)。标题化合物：MS：668.8[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.5；R_f＝0.08(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

实施例81：1-(4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-三氟甲基-苯基}-脲

如Ex.77关于1-(4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-3-三氟甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(Ex.78，步骤78.1)。标题化合物：MS：712.7[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.5；R_f＝0.07(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

实施例82：1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺。标题化合物：MS：600.9[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.3；R_f＝0.02(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

步骤82.1：N-[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺

如Ex.74(步骤74.1)关于N-[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺所述制备标题化合物，但是使用4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基胺。标题化合物：MS：302.2[M]⁺；R_f＝0.27(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，4∶1)。

步骤82.2：4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基胺

如Ex.74(步骤74.2)关于[4-(2-氯-嘧啶-4-基氧基)-2-甲基-苯基胺所述制备标题化合物，但是使用2-氯-4-(4-硝基-苯氧基)-嘧啶(Ex.45，步骤45.1)。标题化合物：MS：223.9[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝1.6；R_f＝0.62(CH₂Cl₂/MeOH，95∶5)。

实施例83：1-(4′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-脲

如Ex.76关于1-(4′-氯-2-三氟甲基联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(Ex.82，步骤82.1)。标题化合物：MS：598.9[M]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.3；R_f＝0.10(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

实施例84：1-(4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-脲

如Ex.77关于1-(4′-溴-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用N-[4-(4-氨基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-N′，N′-二甲基-丁烷-1，4-二胺(Ex.82，步骤82.1)。标题化合物：MS：644.8[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.3；R_f＝0.10(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

实施例85：1-{4-[2-(3-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-[4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺和4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯胺(Ex.14，步骤14.4)。标题化合物：MS：622.0[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝3.5；R_f＝0.33(CH₂Cl₂/MeOH+1％NH₃ ^aq，9∶1)。

步骤85.1：[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-(3-甲氧基-苯基)-胺

在rt、氢气氛下，将(3-甲氧基-苯基)-[4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-胺(400mg，1.14mMol)与阮内镍(200mg)在MeOH/THF(3∶1，40ml)中的混合物搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，在真空中浓缩滤液，得到标题化合物，为黄色-褐色固体：MS：323.1[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ret＝2.6。

步骤85.2：(3-甲氧基-苯基)-[4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-胺

将2-氯-4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶(Ex.74，步骤74.3)(700mg，2.63mMol)、m-茴香胺(357mg，2.90mMol，1.1equiv)与2-丙醇(10.5ml)的混合物在100℃搅拌1h。使反应混合物冷却至rt，用H₂O(90ml)稀释，用CH₂Cl₂(350ml)萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。标题化合物：MS：353.3[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝4.6；R_f＝0.08(己烷/EtOAc，3∶1)。

实施例86：1-(2-甲基-4-{2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基氧基}-苯基)-3-(3-三氟甲基-苯基)-脲

如Ex.74关于1-(3′-氯-2-三氟甲基-联苯-4-基)-3-{4-[2-(4-二甲氨基-丁基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-2-甲基-苯基}-脲所述制备标题化合物，但是使用[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺和3-氨基三氟甲苯。标题化合物：MS：577.9[M]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝3.7；R_f＝0.29(CH₂Cl₂/MeOH，9∶1)。

步骤86.1：[4-(4-氨基-3-甲基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯 基]-胺

在rt、氢气氛下，将[4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-胺(133mg，0.32mMol)与阮内镍(50mg)在MeOH(10ml)中的混合物搅拌6h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，在真空中浓缩滤液，得到标题化合物，为红色-褐色固体：MS：391.1[M]⁺；HPLC ^Dt_Ret＝1.3。

步骤86.2：[4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶-2-基]-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯 基]胺

将2-氯-4-(3-甲基-4-硝基-苯氧基)-嘧啶(Ex.74，步骤74.3)(400mg，1.51mMol)、4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基胺(318mg，1.66mMol，1.1equiv)、4NHCl(1.1ml，4.8mMol，2.7equiv)与2-丙醇(6ml)的混合物在100℃搅拌1h。使反应混合物冷却至rt，用H₂O(30ml)稀释，用CH₂Cl₂(120ml)萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩。标题化合物：MS：421.1[M+1]⁺；HPLC ^Dt_Ref＝3.1；R_f＝0.39(CH₂Cl₂/MeOH，9∶1)。

实施例87：1-{4-[6-(5-氯-2-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲

向1-[4-(6-氯-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲(步骤69.1)(34mg，68μmol)的3ml异丙醇∶二噁烷(1∶1，v/v)溶液加入5-氯-2-甲氧基-苯基胺(54mg，340μmol；Fluka，Buchs，Switzerland)和浓HCl(5μl)。将混合物在微波炉(Emrys Optimizer，Personal Chemistry；Uppsala，Sweden)中加热直至反应完成。将反应混合物用EtOAc(50ml)稀释，用0.1NNaOH(x2)和水(x2)萃取。弃去水相，将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，浓缩至干。经过硅胶色谱处理(CH₂Cl₂∶MeOH，98∶2，v/v)，得到标题化合物：MS：615.2，616.4，617.4；HPLC t_Ret ^new＝8.67(新的梯度：MeCN/0.09％TFA与H₂O/0.1％TFA从1∶49至1∶0的线性梯度7min和1∶03min，检测波长215nm，流速2.0ml/min，柱子Nucleosil C18-柱(250×4.6mm，5μm，100A))。

使用适当的胺衍生物，如实施例87所述制备下列化合物：

实施例	化合物名称	ES-MS(M+H)+	tRet new[min]
				88	1-{4-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	558.2	6.69
89	1-[4-(6-二甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	503.3	7.14
				90	N，N-二甲基-4-(6-{4-[3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲基]-苯氧基}-嘧啶-4-基氨基)-苯甲酰胺	622.4	7.68
91	1-{4-[6-(2-甲氧基-5-甲基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	595.6	8.17
				92	1-{4-[6-(2-甲氧基-5-硝基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	626.5	8.50
93	1-{4-[6-(2，5-二甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	611.5	8.10
				94	N，N-二乙基-4-甲氧基-3-(6-{4-[3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲基]-苯氧基}-嘧啶-4-基氨基)-苯磺酰胺	716.4	8.39
95	1-{4-[6-(2-甲氧基-苯基氨基)-嘧啶-4-基氧基]-苯基}-3-(4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基)-脲	581.3	7.91

实施例96：RET蛋白酪氨酸激酶活性的抑制作用

如上所述进行抑制作用试验。下表给出一些式I化合物的IC₅₀值：

化合物名称	IC50RET[μM]
		1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-(3-氮杂环丁烷-1-基甲基-5-三氟甲基-苯基)-脲	0.083
1-(3-二甲氨基甲基-5-三氟甲基-苯基)-3-[4-(6-甲基氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲	0.11
		1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.18
1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲	0.26
		1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.31
1-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-3-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲	0.35
		1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-异丙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.4
1-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.45
		1-[4-(2-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯基]-脲	0.45
1-[4-(6-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-异丙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.55
		1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4-叔丁基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-脲	0.56
1-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-3-三氟甲基-苯基]-3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲	0.58
		1-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-脲	0.59
1-[4-(2-氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-3-[4-(4，5-二甲基-咪唑-1-基甲基)-3-	0.85

三氟甲基-苯基]-脲
		1-[3-(4-异丙基-哌嗪-1-基甲基)-5-三氟甲基-苯基]-3-[4-(6-甲氨基-嘧啶-4-基氧基)-苯基]-脲	0.96

实施例97：Flt-3蛋白酪氨酸激酶活性的抑制作用

如上所述进行抑制作用试验。下表给出一些式I化合物的IC₅₀值：

实施例    IC50 Flt-3No.       [μM]	实施例   IC50 Flt-3No.      [μM]	实施例   IC50 Flt-3No.      [μM]
			1         0.9052         1.24         0.1535         0.546         0.48         0.519         0.3211        0.2313        0.3414        0.3615        0.616        0.3617        0.9419        0.2519-1      0.03819-2      0.0821        1.823        1.324        0.1734a.1     1.134a.3     0.8334b.1     0.3634b.3     0.3734c.1     0.5434c.3     0.35	34d.1    0.6734d.3    0.2934e.1    0.1634e.3    0.07934g.1    0.334g.3    0.37834j.1    0.2534j.3    0.28334k.1    0.1334k.3    0.134l.1    0.6234m.1    0.434m.3    0.234n.1    0.3134n.3    0.234p.1    0.5934s.2    0.2434t.2    0.2934u.2    1.534w.2    0.1438       0.35441       0.4243       0.1648       0.5850       0.12	51a.1    0.08551a.2    0.1251b.1    0.1351b.2    0.1751d.1    0.09151d.2    0.13551e.1    0.2551e.2    0.9152a      0.1252b      0.0852c      0.02952d      0.2653b      0.1253d      0.1955c      0.3755d      0.9757       0.11858       0.1259       0.07660       0.1661       0.4962       0.1663       0.1464       0.34

实施例98：Flt-3依赖性细胞增殖的抑制作用

如上所述进行抑制作用测定，使用表达组成型活化的Flt-3激酶的野生型IL-3-依赖性造血细胞系Ba/F3和突变型亚系ITD-Ba/F3或D835Y-Ba/F3。下表给出一些实施例化合物的ED₅₀值：

实施例99：包含实施例化合物的片剂

遵照标准工艺，利用下列组成制备片剂，包含100mg任意一种实施例1至95化合物作为活性成分：

组成

活性成分                    100mg

结晶性乳糖                  240mg

Avicel                      80mg

PVPPXL                      20mg

Aerosil                     2mg

硬脂酸镁                    5mg

                            447mg

制备：将活性成分与载体材料混合，借助压片机(Korsch EKO，Stempeldurchmesser 10mm)压制。

Avicel是微晶纤维素(FMC，Philadelphia，USA)。

PVPPXL是交联聚乙烯聚吡咯烷酮(BASF，德国)。

Aerosil是二氧化硅(Degussa，德国y)。

实施例100：胶囊剂

按照标准工艺制备下列组成的胶囊剂，包含100mg任意一种实施例1至95化合物作为活性成分：

组成

活性成分         100mg

Avicel           200mg

PVPPXL           15mg

Aerosil          2mg

硬脂酸镁         1.5mg

                 318.5mg

制备：混合各组分，填充在1号硬明胶胶囊中。

Claims (12)

1、式I化合物在制备用于治疗RET依赖性疾病的药物组合物中的用途，

其中G不存在或者是低级亚烷基或C₃-C₅亚环烷基，Z是式Ia基团

或者G不存在，Z是式Ib基团

A是CH、N或N→O，A’是N或N→O，其条件是A和A’不超过一个可以是N→O；

n是1或2；

m是0、1或2；

p是0、2或3；

r是0至5；

如果p是0，X是NR，其中R是氢或有机部分，或者如果p是2或3，X是氮，它与(CH₂)_p和虚线(间断线)代表的键、包括它们所键合的原子一起构成一个环，或者

X是CHK，其中K是低级烷基或氢，p是零，其条件是如果p是零，虚线代表的键不存在；

Y₁是O、S或CH₂；

Y₂是O、S或NH；

其条件是(Y₁)_n-(Y₂)_m不包括O-O、S-S、NH-O、NH-S或S-O基团；

每一R₁、R₂、R₃和R₅彼此独立地是氢或者无机或有机部分，或者任意两个一起构成经由氧原子键合的低级亚烷二氧基桥，这些部分的其余一个是氢或者无机或有机部分；

R₄(如果存在的话，即如果r不是零)是无机或有机部分；

或其互变体；

或其药学上可接受的盐。

2、根据权利要求1的用途，其中该RET依赖性疾病是RET依赖性肿瘤疾病。

3、根据权利要求2的用途，其中该RET依赖性肿瘤疾病选自结肠癌、肺癌、乳癌、胰癌和甲状腺癌。

4、根据权利要求3的用途，其中该癌症是甲状腺癌。

5、选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其盐。

6、药物组合物，包含选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

7、用于治疗动物或人体、尤其治疗蛋白激酶依赖性疾病的选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其药学上可接受的盐。

8、根据权利要求7的化合物，其中所要治疗的蛋白激酶依赖性疾病是蛋白酪氨酸激酶依赖性疾病，尤其依赖于任意一种或多种下列蛋白酪氨酸激酶的增殖疾病：c-Abl、Bcr-Abl、Flt-3、RET、VEGF-R和/或Tek，尤其Flt-3。

9、选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其药学上可接受的盐用于治疗蛋白激酶依赖性疾病的用途。

10、选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗蛋白激酶依赖性疾病的药物组合物中的用途。

11、根据权利要求9或10的用途，其中该蛋白激酶依赖性疾病是蛋白酪氨酸激酶依赖性疾病，尤其依赖于任意一种或多种下列蛋白酪氨酸激酶的增殖疾病：c-Abl、Bcr-Abl、Flt-3、RET、VEGF-R和/或Tek，尤其Flt-3。

12、治疗响应于(尤其酪氨酸)蛋白激酶抑制的疾病的方法，包括对需要这类治疗的温血动物、例如人给予预防性或者尤其治疗性有效量的选自如说明书所述的实施例1-67、68-70或71-95化合物的N-[4-(嘧啶-4-基氧基)-苯基]-N’-苯基-脲衍生物或其药学上可接受的盐。