KR102032418B1

KR102032418B1 - 접합 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 브루톤티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR102032418B1
Application number: KR1020170075721A
Authority: KR
Inventors: 조성윤; 김필호; 이정옥; 김형래; 하재두; 정희정; 윤창수; 박지훈; 황종연
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2017-06-15
Filing date: 2017-06-15
Publication date: 2019-10-16
Also published as: KR20180137057A

Abstract

본 발명은 접합 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 브루톤티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 브루톤 티로신 키나제 또는 TMD80의 활성을 억제하는 능력이 우수하므로, 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련된 질환, 특히 암 또는 자가면역질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용할 수 있다.

Description

접합 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 브루톤티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Fused-pyrimidine derivatives, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for use in preventing or treating Bruton's tyrosine kinase activity related diseases containing the same as an active ingredient}

본 발명은 접합 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 브루톤티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

암(cancer)은 유전자 발현의 다양한 변화에 의하여 세포의 사멸이 정상적으로 조절되지 않고 세포의 비성장적인 성장이 야기된 상태로, 암세포는 비정상적으로 분열하며, 분화하는 성질을 가지고 있다. 상기 암세포는 인접한 조직에 침투하여 조직을 파괴하고 다른 부위로 전이하여 결국 사람을 사망하게 한다.

암은 신체의 어느 조직에서나 발생할 수 있고, 한가지 요인에 의해 유발되거나, 함께 작용하는 다양한 요인에 의해 유발된다고 알려져있다. 상기 요인들로는 광범위하고 다양한 화학물질, 방사선 등의 환경적 요인, 바이러스감염 등의 감염성 질환 그리고 유전적 인자들을 들 수 있다.

암의 2세대 치료방법으로 알려진 표적치료(targeted therapy)는 종양 생장 및 종양 생존에 필수적인 단백질 또는 유전자 등을 선택적으로 억제하는 것을 통해 특정 종양 세포의 생장 및 생존을 억제하여 항암효과를 유도하는 새로운 형태의 항암치료로서, 종래의 암세포를 직접적으로 공격하여 정상세포에도 공격 가능성이 커 부작용 발생 가능성이 큰 1세대 암 치료법인 화학항암제와 비교하여 암세포만 특이적으로 사멸이 가능하다.

상기 표적치료제로는, 만성 골수성 백혈병(Chronic myeloid leukaemia, CML)에 널리 사용되는 imatinib(Gleevec)은 CML 환자에 많이 분포하는 Bcr-Abl 융합(fusion) 단백질의 활성을 억제하여, CML의 감소(regression)를 유도하게 된다.

뿐만 아니라, gefitinib 또는 erlotinib 과 같은 EGFR 억제제는 최근 비 소세포 폐암(Non-small-cell lung carcinoma, NSCLC), 췌장암 (pancreatic cancer), 뇌종양 (glioblastoma) 환자 중에서 EGFR 돌연변이(mutation)(L858R, exon19 deletion)로 인해서 EGFR의 활성이 높게 나타나는 종양에 선택적인 효과를 나타낸다고 보고되었다. 또한, 최근에 FDA에서 허가를 받은 crizotinib은 폐암환자중 EML4-ALK 융합 유전자(fusion gene)을 가진 환자에 대해서 선택적으로 높은 치료율을 보이고 있다.

기존의 전통적인 항암치료에 사용되던 항암제 (Traditional antineoplastics:TANs)는 종양세포의 ‘빠른 세포 분열’ 특징을 표적으로 하여 제작되었으므로, ‘빠른 세포 분열’을 하는 종양세포 뿐만 아니라, 상대적으로 빠른 세포 분열을 하는 정상 세포(예, 모근세포, 위장관 세포, 골수세포, 생식세포)등을 손상시켜 극심한 부작용을 나타내는 문제가 있었다.

반면, 신개념 항암제(Novel antineoplastics: NANs)는 종양세포에만 특이적으로 작용하여, 종양세포의 생존에 필수적이나 정상세포에는 작용하지 않거나, 영향이 미비한 신호전달 물질들을 표적으로 하여 제작되어, 정상세포에 대한 선택성이 매우 높을 뿐 아니라, 또한, 암세포는 다양한 발암유전자 혹은 종양억제 유전자의 이상을 포함하지만 종양의 성장이나 발암과정은 흔히 하나 혹은 두 개의 신호전달경로의 지속적인 활성화에 의해 유지되므로 암세포의 성장이나 증식은 단 하나의 발암유전자를 불활성화시킴으로 해서 억제될 수 있다는 종양세포의 암유전자 중독(oncogene addiction)의 특징을 고려할 때 종양특이적인 신호전달 물질을 표적으로 하는 신개념 항암제의 종양선택성은 매우 우수한 것으로 나타났다.

한편, 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, BTK)는 비 수용체 티로신 키나제(Non-receptor tyrosine kinases)이며, 염색체 Xq22에 위치하고 있다. 또한, BTK는 Tec 패밀리 키나제로서 BTK 외에도 TEC, ITK, TXK가 이 부류에 속한다. 다른 조직에서는 거의 발현하지 않으며, 혈액세포 중에서도 T 세포(T cell)에는 전혀 존재하지 않고 B 세포(B cell)에서만 존재하는 단백질이다.

최근, 상기 B-세포 항원 수용체 신호전달 경로에서 중요한 말단 효소인 브루톤 티로신 키나제는 새로운 타겟으로 부상되고 있으며, 그 하위 신호전달 단백질은 정상 B-세포가 성장, 분화, 및 림프구로서 기능을 하는데 중요한 신호전달 역할을 하고 있다. 더욱이, 브루톤 티로신 키나제는 성숙 B-세포 림프증식성 질환들의 개시, 생존, 진행에 관련되어있는 것으로 알려져있어, 브루톤 티로신 키나제의 신호전달을 조절할 수 있는 치료제가 개발되면, 암종 및 브로톤 키나제와 관련된 다양한 면역관련 질환의 치료제로 개발될 가능성이 매우 크다.

특히, BTK는 성장인자, B-세포 항원, 케모카인의 수용체와 선천적 면역 수용체(innate immune receptor)의 하위신호 전달에 중요한 기능을 함으로써 세포성장, 생존, 분화, 병인, 신생혈관생성, 신호전달물질 생성, 항원제시와 같은 여러 세포활동에 중요하게 관여를 하고 있는 단백질으로, B-세포의 면역, 염증, 항암 등의 신호전달에 중요한 역할을 담당하고 있기 때문에, BTK 억제제(inhibitor)는 다른 조직은 공격하지 않고 오직 BTK의 활성이 있는 B 세포 종양만을 타겟으로 할 수 있으므로 암치료 과정에서 환자에게 일어나는 부작용을 최소화 할 수 있다는 장점이 있다.

특히, BTK 억제제가 타겟으로 하는 백혈병(Leukemia)은 BTK의 기능이 중요한 역할을 하는 B 세포 수용체 신호전달(B cell receptor signaling, BCR signaling)이 만성적으로 활성화(chronic activation)되어 있으므로 BTK 억제제는 종양만을 선택적으로 타겟화 할 수 있다.

기존의 만성 림프모구 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia, CLL) 치료를 위한 화합요법제들은 저연령의 어린 환자들에게서는 생존 기간을 증대시켰으나 고연령의 환자의 경우 골수억제 및 감염증가라는 심각한 부작용을 야기했으며, 이로인해서 CLL 치료제는 이제 표적치료를 추구하는 방향으로 연구되고 있다.

따라서, BTK를 억제하는 표적치료법을 통해 환자의 부작용을 최소화하면서 다양한 암종 및 면역에 관여하는 질병을 효과적으로 치료할 수 있다.

이에, 본 발명자들은 브루톤 티로신 키나제를 억제하는 효과를 나타내는 화합물을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 특정 구조의 접합 피리미딘 유도체가 브루톤 티로신 키나제 또는 TMD80의 활성을 우수하게 억제함으로써, 브루톤 티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 및 치료제로 사용될 수 있다는 것을 알아내고 본 발명을 완성하였다.

한국특허 KR 10-2016-0062103

본 발명의 목적은 접합 피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 접합 피리미딘 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 접합 피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 접합 피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

(상기 화학식 1에서,

n은 0 또는 1이고;

A는 단일 결합, -NH- 또는 -O-이고;

D¹은 CR⁴ 또는 N이고, 이때, 상기 R⁴는 수소 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬이고;

D²는 CH 또는 N 이고;

D³은 N 또는 NH이고;

은 단일결합 또는 이중결합이고;

R¹은 비치환 또는 치환된 C_6-10아릴이고,

여기서, 상기 치환된 C_6- ₁₀아릴은, 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬; 아크릴로일아민; 비치환된 C_6- ₁₀아릴; 비치환된 C_6- ₁₀아릴옥시; 및 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7 원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알케닐;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있으며,

이때, 상기 치환된 헤테로사이클로알킬 및 헤테로사이클로알케닐은, 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬; 및 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬카보닐;으로 이루어지는 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고,

R² 및 R³은 독립적으로 각각 독립적으로, 수소; 비치환 또는 치환된 C_6- ₁₀아릴; N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7 원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬; 비치환된 또는 치환된 C_3-7사이클로알킬; 또는 비치환 또는 치환된 인돌리닐이거나;

이들이 결합한 N원자와 함께 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고,

여기서, 상기 치환된 C_6- ₁₀아릴, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 C_3- ₇사이클로알킬 및 치환된 인돌리닐은 -NH₂; 아크릴로일; 아크릴로일아민; 및 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7 원자의 비치환 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬카보닐로 하나 이상 치환된 헤테로사이클로알킬;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있다).

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,

화학식 3으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및

상기 단계 1에서 얻은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다:

[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,
n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및

는 제1항의 화합물명에서 정의된 바와 같고;
X¹ 및 X²는 각각 독립적으로 동일 또는 상이한 할로겐이고; 및
L¹은 수소,

또는

이다).

삭제

나아가, 본 발명은 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이,

화학식 3으로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및

상기 단계 1에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다:

[반응식 2]

(상기 반응식 2에서,
n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및

는 제1항의 화합물명에서 정의된 바와 같고;
X¹ 및 X²는 각각 독립적으로 동일 또는 상이한 할로겐이고; 및

L¹은 수소,

또는

이다).

삭제

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련된 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련된 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 브루톤 티로신 키나제 또는 TMD80의 활성을 억제하는 능력이 우수하므로, 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련된 질환, 특히 암 또는 자가면역질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

[화학식 1]

상기 화학식 1에서,

n은 0 또는 1이고;

A는 단일 결합, -NH- 또는 -O-이고;

D²는 CH 또는 N 이고;

D³은 N 또는 NH이고;

은 단일결합 또는 이중결합이고;

R¹은 비치환 또는 치환된 C_6- ₁₀아릴이고,

R² 및 R³은 독립적으로 각각 독립적으로, 수소; 비치환 또는 치환된 C_6- ₁₀아릴; N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7 원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬; 비치환된 또는 치환된 C_3- ₇사이클로알킬; 또는 비치환 또는 치환된 인돌리닐이거나;

여기서, 상기 치환된 C_6- ₁₀아릴, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 C_3- ₇사이클로알킬 및 치환된 인돌리닐은 -NH₂; 아크릴로일; 아크릴로일아민; 및 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 7 원자의 비치환 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬카보닐로 하나 이상 치환된 헤테로사이클로알킬;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있다.

바람직하게는,

상기 n은 0 또는 1이고;

A는 단일 결합, -NH- 또는 -O-이고;

D¹은 CR⁴ 또는 N이고, 이때, 상기 R⁴는 수소 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬이고;

D²는 CH 또는 N 이고;

D³은 N 또는 NH이고;

은 단일결합 또는 이중결합이고;

R¹은 비치환 또는 치환된 페닐이고,

여기서, 상기 치환된 페닐은, 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₅알킬; 아크릴로일아민; 비치환된 페닐; 비치환된 페닐옥시; 및 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 6 원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알케닐;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있으며,

이때, 상기 치환된 헤테로사이클로알킬 및 헤테로사이클로알케닐은, 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬; 및 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬카보닐;으로 이루어지는 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고,

R² 및 R³은 독립적으로 각각 독립적으로, 수소; 비치환 또는 치환된 페닐; N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 6 원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬; 비치환된 또는 치환된 C_3- ₆사이클로알킬; 또는 비치환 또는 치환된 인돌리닐이거나;

이들이 결합한 N원자와 함께 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 6원자의 비치환 또는 치환된 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고,

여기서, 상기 치환된 페닐, 치환된 헤테로사이클로알킬, 치환된 C_3- ₆사이클로알킬 및 치환된 인돌리닐은 -NH₂; 아크릴로일; 아크릴로일아민; 및 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 하나 이상 포함하는 5 내지 6 원자의 비치환 또는 직쇄 또는 측쇄의 C_1- ₃알킬카보닐로 하나 이상 치환된 헤테로사이클로알킬;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있다.

보다 바람직하게는,

상기 n은 0 또는 1이고;

A는 단일 결합, -NH- 또는 -O-이고;

D¹은 CR⁴ 또는 N이고, 이때, 상기 R⁴는 수소 또는 메틸이고;

D²는 CH 또는 N 이고;

D³은 N 또는 NH이고;

은 단일결합 또는 이중결합이고;

R¹은 비치환 또는 치환된 페닐이고,

여기서, 상기 치환된 페닐은, 메틸; 아크릴로일아민; 비치환된 페닐; 비치환된 페닐옥시; 및 비치환 또는 치환된 모폴리닐, 피페라지닐, 피페리디닐 또는 1, 4, 5, 6-테트라하이드로-1, 2, 4-트리아지닐;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있으며,

이때, 상기 치환된 모폴리닐, 피페라지닐, 피페리디닐 및 1, 4, 5, 6-테트라하이드로-1, 2, 4-트리아지닐은, 메틸 및 아세틸으로 이루어지는 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있고,

R² 및 R³은 독립적으로 각각 독립적으로, 수소; 비치환 또는 치환된 페닐; 또는 비치환 또는 치환된 피롤리디닐 또는 피페리디닐; 비치환된 또는 치환된 사이클로헥실; 또는 비치환 또는 치환된 인돌리닐이거나;

이들이 결합한 N원자와 함께 비치환 또는 치환된 피페라지닐을 형성할 수 있고,

여기서, 상기 치환된 페닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 사이클로헥실 및 인돌리닐은 -NH₂; 아크릴로일; 아크릴로일아민; 모폴리닐; 및 아세틸이 치환된 피페라지닐;으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기로 하나 이상 치환될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물들을 들 수 있다:

<1> 1-(4-(4-((6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온;

<2> 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온;

<3> (R)-N-(1-(6-(4-모폴리노페닐아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;

<4> (S)-N-(1-(6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;

<5> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<6> 1-(4-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘 -1-일)프로페-2-엔-1-온;

<7> 4(R)-N-(1-(6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;

<8> (S)-1-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<9> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로판-1-온;

<10> (S)-1-(3-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<11> 1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<12> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<13> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<14> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<15> N-((1s, 4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<16> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<17> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<18> (R)-1-(3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<19> (R)-1-(3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<20> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<21> N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<22> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페닐) -1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<23> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<24> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<25> (R)-1-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<26> N-((1s, 4s)-4-((6-([1, 1'-비페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<27> N-((1s, 4s)-4-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;

<28> N-(2-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<29> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<30> N^4,N⁶-bis(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디아민;

<31> N⁴-(3-아미노페닐)-N2-(4-모폴리노페닐)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민;

<32> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<33> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<34> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<35> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<36> N^2,N⁴-비스(4-모폴리노페닐)피리도[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민;

<37> N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<38> N-(3-((6-((4-(1-메틸-5, 6-디히드로-1, 2, 4-트리아진-4(1H)-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<39> 1-(6-((6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<40> 1-(6-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<41> N-(3-((6-((3-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<42> N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;

<43> 1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<44> 1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;

<45> N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드; 및

<46> N-(3-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라조로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세테이트, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1, 4-디오에이트, 헥산-1, 6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,

상기 단계 1에서 얻은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

[반응식 1]

상기 반응식 1에서,

n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및

는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

X¹ 및 X²는 각각 독립적으로 동일 또는 상이한 할로겐이고; 및

L¹은 수소

또는

이다.

이하, 본 발명에 따른 상기 반응식 1로 표시되는 제조방법에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 상기 반응식 1로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 3으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 구체적으로, 화학식 3으로 표시되는 화합물의 할로겐과 화학식 4로 표시되는 화합물의 L¹이 반응하여 화학식 2로 표시되는 화합물을 얻는 단계이다.

구체적으로, L¹이 수소일 경우, 염기 존재하에 반응이 진행될 수 있으며, 상기 염기로는 특히 한정되는 것은 아니나, 피리딘, 트리에틸아민, N, N-디이소프로필에틸아민, 1, 8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU)등과 같은 유기염기 또는 수산화나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 수산화바륨 등과 같은 무기염기를 단독 또는 혼합하여, 당량 또는 과량으로 사용할 수 있다.

또한, 상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 특히 한정되는 것은 아니나, 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 디클로로메탄, 1, 2-디메톡시에탄 등의 에테르계 용매; 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등의 아로마틱 하이드로카본용매; 메탄올, 에탄올 등의 알코올계 용매; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드, 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

L¹이

또는

일 경우, 금속 촉매 및 염기 조건하에 반응시킬 수 있다.

이때, 상기 보론산 화합물은 상업적으로 시판되는 화합물들을 사용하거나, 대응되는 할라이드 화합물로부터 공지의 방법으로 제조하여 사용할 수 있다.

상기 금속 촉매로는 팔라듐 촉매를 사용할 수 있으며, 사용가능한 팔라듐 촉매는 Pd/C, Pd(PPh₃)_4,PdCl_2,Pd(OCOCH₃)_2,Pd(pph₃)₂Cl₂ 등을 사용할 수 있다. 바람직하게는 Pd(pph₃)₂Cl₂을 사용할 수 있으나, 이에 한정하지는 않는다.

상기 염기로는 피리딘, 트리에틸아민, N, N-디이소프로필에틸아민, 1, 8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운데센(DBU)등과 같은 유기염기 또는 수산화나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 수산화바륨 등과 같은 무기염기를 단독 또는 혼합항, 당량 또는 과량으로 사용할 수 있으나, 이에 한정하지는 않는다.

상기 반응에서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 디클로로메탄, 1, 2-디메톡시에탄 등의 에테르계 용매; 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등의 아로마틱 하이드로카본용매; 메탄올, 에탄올 등의 알코올계 용매; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드, 아세토나이트릴, 물 등이 있으며, 이를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 반응식 1로 표시되는 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계이며, 구체적으로, 화학식 2로 표시되는 화합물의 할로겐과 화학식 5로 표시되는 화합물의 2차 아민이 아미네이션 반응하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 얻는 단계이다.

상기 반응에서 사용가능한 용매는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 디클로로메탄, 1, 2-디메톡시에탄 등과 같은 에테르계 용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등과 같은 저급알코올; 디메틸포름아미드(DMF); 디메틸설폭사이드(DMSO); 아세토나이트릴, 물 등을 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

나아가, 본 발명은 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이,

상기 단계 1에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

[반응식 2]

상기 반응식 2에서,

n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및

는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고;

L¹은 수소

또는

이다.

상기 반응식 2에서, 단계 1의 상세한 설명은 반응식 1의 단계 2와 동일하고,

단계 2의 상세한 설명은 반응식 1의 단계 1과 동일하다.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

여기서, 상기 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련 질환은 암, 자가면역질환 등을 포함할 수 있다.

이때, 상기 암은 혈액암, 난소암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 간암, 위암, 췌장암, 결장암, 복막 전이암, 피부암, 방광암, 전립선암, 갑상선암, 폐암, 골육종, 섬유성 종양 및 뇌종양으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이며, 자가면역 질환은 류머티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 제1형 당뇨병, 갑상선 기능 항진증, 근무력증, 크론병, 강직성 척추염, 건선, 자가면역성 악성빈혈 및 쇼그렌 증후군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.

본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체의 브루톤 티로신 키나제 활성 억제 능력 및 TMD80 활성 억제 능력을 평가한 결과, 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 10 μM 이하의 IC₅₀ 값으로 브루톤 티로신 키나제의 활성을 억제하고, 실시예 3, 5, 12, 14-21, 24, 27, 28, 30, 32, 33, 37-39, 41, 45 및 46 화합물은 0.05 μM 이하즉, 50 nM 이하의 낮은 IC₅₀ 값을 나타내어, 우수한 브루톤 티로신 키나제 활성 억제능을 나타냄을 알 수 있으며, 특히, 실시예 14, 15, 19-21, 33, 37-39 및 41 화합물은 0.008 μM, 즉, 8 nM 이하의 현저하게 IC₅₀ 값으로 브루톤 티로신 키나제 활성을 억제하는 것을 확인하였다(실험예 1 및 표 3 참조).

또한, 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 10 μM 이하의 IC₅₀ 값으로 TMD80의 활성을 억제하고, 실시예 11, 21, 27, 28 및 46 화합물은 0.05 μM 이하즉, 50 nM 이하의 낮은 IC₅₀ 값을 나타내어, 우수한 TMD80 활성 억제능을 나타내는 것을 확인하였다(실험예 2 및 표 3 참조).

따라서, 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 브루톤 티로신 키나제 또는 TMD80의 활성을 억제하는 능력이 우수하므로, 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련된 질환, 특히 암 또는 자가면역질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.

이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/kg/일의 양으로 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격을 1일 수회, 바람직하게는 1일 1회 내지 3회로 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다.

나아가, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 브루톤티로신 키나제 활성 관련 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

여기서, 상기 브루톤 티로신 키나제 활성과 관련 질환은 암 또는 자가면역질환 등을 포함할 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 제조 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

나아가, 상기 외에 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 제조 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 1-(4-(4-((6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

단계 1 : 1-(4-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (200 mg, 0.73 mmol) 과 1-(4-(4-아미노페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (193 mg, 0.88 mmol) 을 부탄올 (2 mL)에 녹이고, 여기에 탄산칼륨 (152 mg, 1.1 mmol)을 가한다. 반응물을 13시간 동안 교반한다. 반응이 완결 되면, 감압 증류하여 용매를 제거하고, 디클로로메탄과 물을 가하여, 생성물을 유기층으로 추출한다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조한 다음, 농축하고 컬럼크로마토그라피로 생성물 1-(4-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (340 mg, 88%)을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.77 (s, 1H), 7.22 (m, 3H), 6.92 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.87 (brs, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 3.30 (m, 2H), 2.48 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.12 (s, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.78~1.52 (t, 9H), 0.98 (m, 2H).

단계 2: 1-(4-(4-((1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

밀폐된 압력용기 (sealed tube)에 1-(4-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (30 mg, 0.065 mmol), 톨루이딘 (8 mg, 0.074 mmol), Pd₂dba₃ (3 mg, 0.006 mmol), X-phos (9 mg, 0.021 mmol), 탄산칼륨 (18 mg, 0.13 mmol)을 부탄올 (2 mL)에 가하고, 90 ℃에서 15 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 에틸아세테이트 (20 mL)와 물 (5 mL)로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 농축하였다. 관크로마토그라피로 1-(4-(4-((1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (30 mg, 88%)을 얻었다..

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.56 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.15 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 6.95 (m, 4H), 5.80 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.18 (m, 4H), 2.54 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.94 (m, 5H), 1.65 (m, 1H).

단계 3: 1-(4-(4-((6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]?리미딘-4-일)아미노)페닐)피레라진-1-일)에탄-1-온의 제조

1-(4-(4-((1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (30 mg, 0.057 mmol)을 1, 4-디옥산 (1 mL)에 녹이고, 여기에 염산용액 (4 N, 1,4-디옥산, 0.5 mL)를 가하였다. 반응 용액을 15분 동안 상온에서 교반하고, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 재결정하여 생성물을 얻었다 (13 mg, 43%).

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.65 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.15 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 7.01 (m, 4H), 3.62 (m, 4H), 3.12 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 2.04 (s, 3H).

<실시예 2> 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

단계 1 : 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐l)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

밀폐된 압력용기 (sealed tube)에 1-(4-(4-((6-클로로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온 (30 mg, 0.065 mmol), 4-모폴리노아닐린 (8 mg, 0.074 mmol), Pd₂dba₃(3 mg, 0.006 mmol), X-phos (9mg, 0.021 mmol), 탄산칼륨(18 mg, 0.13 mmol)을 n-부탄올 (2 mL)에 가하고, 90 ℃에서 15 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 에틸아세테이트 (20 mL)와 물 (5 mL)로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 농축하였다. 관크로마토그라피로 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐l)피페라진-1-일)에탄-1-온(40 mg, 88%)을 합성하였다.

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.46 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.90-6.81 (m, 5H), 5.68 (d, J = 9.1Hz, 1H), 3.85-3.53 (m, 5H), 3.50 (s,2H), 3.20-3.00 (m, 5H), 2.45-2.41 (m, 2H), 2.10-1.95 (m, 2H), 1.80-1.65 (m, 6H), 1.55-1.48 (m, 2H), 0.67-0.63 (m, 3H).

단계 2: 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온의 제조

1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐l)피페라진-1-일)에탄-1-온 (50 mg, 0.057 mmol)을 1,4-디옥산 (1 mL)에 녹이고, 여기에 염산 (4 N, 1,4-디옥산, 3 mL)를 가하였다. 반응 용액을 15분 동안 상온에서 교반하고, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 재결정하여 생성물을 얻었다 (27 mg, 78%).

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.72-7.69 (m, 2H), 7.51-7.50 (m, 2H), 7.30-7.25 (d, J = 15.1 Hz, 5H), 3.78 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.41-3.27 (m, 11H), 3.17 (s, 2H), 2.08 (s, 3H): LCMS calculated for C₂₇H₃₁N₉O₂ = 513.26, found: 513.59.

<실시예 3> (R)-N-(1-(6-(4-모폴리노페닐아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드의 제조

단계 1: t-부틸 ((3R)-1-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)카바메이트의 제조

t-부틸 (S)-피페리딘-3-일카바메이트 (81 mg, 0.41 mmol)과 4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (100 mg, 0.37 mmol), 탄산칼슘(112 mg, 0.81 mmol)을 디메틸포름아미드 (2 mL)에 가하고, 6시간 교반하였다. 결과된 용애을 에틸아세테이트 (15 mL)와 물 (5 mL)로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 여과, 농축하였다. 관크로마토그라피를 하여 생성물을 얻었다. (145 mg, 70%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.23 (brs, 1H), 8.01 (s, 1H), 5.93 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.48-4.21 (m, 2H), 4.14 (m, 1H), 3.81 (m, 2H), 3.42 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.18 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).

단계 2: t-부틸 ((3R)-1-(6-((4-모포리노페틸)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)카바메이트의 제조

t-부틸 ((3R)-1-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)카바메이트 (48 mg, 0.11 mmol), 4-모폴리노아닐린 (19 mg, 0.11 mmol), Pd₂(dba)₃ (6.3 mg, 0.011 mmol), X-Phos (14 mg, 0.03 mol), 탄산칼륨(31 mg, 22 mml)을 t-부탄올 (1 mL)에 녹이고, 90 ℃에서 15시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 에틸아세테이트 (15 mL)와 물 (5 mL)로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 여과, 농축하였다. 관크로마토그라피를 하여 생성물을 얻었다. (34 mg, 60%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.00 (s, 1H), 7.52 (d, J = 9Hz, 2H), 6.90 (d, J = 6 Hz, 2H), 6.79 (s, 1H), 5.81 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.16-4.11 (m,2H), 3.89-3.86 (m, 3H), 3.15-3.10 (m, 4H), 1.68-1.56 (m, 4H), 1.47-1.25 (m, 9H).

단계 3: (R)-4-(3-아미노피페리딘-1-일)-N-(4-모포리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 제조

t-부틸 ((3R)-1-(6-((4-모포리노페틸)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)카바메이트 (34 mg, 0.051 mmol)을 메탄올 (1 mL)에 녹이고, 여기에 염산 (4 N, 1,4-디옥산, 1 mL)를 가하고, 2시간 동안 상온으로 교반 하였다. 반응 용액을 감압농축하고, 재결정하여 생성물을 얻었다. (20 mg, 84%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 10.20 (s, 1H), 8.58 (s, 3H), 7.51 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.08 (s, 6H), 1.87 (s, 1H), 1.72-1.69 (m, 1H),1.62-1.60 (m, 2H): LCMS calculated for C₂₀H₂₆N₈O = 394.22, found: 394.47.

단계 4: (R)-4-(3-아미노피페리딘-1-일)-N-(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 제조

(R)-4-(3-아미노피페리딘-1-일)-N-(4-모포리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (12 mg, 0.03 mmol), 아크릴산 (4.4 mg, 0.061 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (24 mg, 0.15 mmol), HOBt (21 mg, 0.15 mmol)과 디이소프로필에틸아민 (20 mg, 0.15 mmol)을 디클로로메탄에 가하였다. 반응물을 15시간 동안 교반 한 다음, 반응 용액을 에틸아세테이트 (15 mL)와 물 (5 mL)로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 여과, 농축하였다. 관크로마토그라피를 하여 생성물을 얻었다. (3 mg, 23%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.00 (s, 1H), 7.48 (d, J =6 Hz, 2H), 6.85 (d, J = 6 Hz, 2H), 6.75 (s,1H), 6.35 (d, J = 6 Hz,1 H), 6.08-5.89 (m, 2H),5.60 (d, J = 6 Hz, 1H), 3.89-3.75 (m, 4H), 3.70-3.68 (m, 1H), 3.06-3.00 (m, 4H); LCMS calculated for C₂₃H₂₈N₈O₂ = 448.23, found: 448.52.

<실시예 4> (S)-N-(1-(6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드의 제조

디클로로메탄 (2 mL)에 (S)-4-(3-아미노피레리딘-1-일)-N-(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (12 mg, 0.030 mmol)을 녹이고, 아크릴산 (4.2 μL, 0.061 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (24 mg, 0.15 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (21 mg, 0.15 mmol), 디이소프로필에틸아민 (28 μL, 0.15 mmol)을 가한 후, 상온에서 13시간 동안 교반 한다. 반응 종료 후, 디클로로메탄과 물을 가하고, 층분리하여 얻은 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 농축하였다. 결과된 거친 생성물을 5% 메탄올/디클로로메탄으로 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (3 mg, 23%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.00 (s, 1H), 7.48 (d, J = 6 Hz, 2H), 6.85 (d, J = 6 Hz, 2H), 6.75 (s, 1H), 6.35 (d, J = 6 Hz, 1H), 6.08-5.89 (m, 2H), 5.60 (d, J = 6 Hz, 1H), 3.89-3.75 (m, 4H), 3.70-3.68 (m, 1H), 3.06-3.00 (m, 4H): LCMS calculated for C₂₃H₂₈N₈O₂ = 448.23, found : 448.52.

<실시예 5> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: t-부틸 4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)에 4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (100 mg, 0.36 mmol)을 녹인 뒤, t-부틸 4-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (81 mg, 0.40 mmol), 탄산칼륨(10 mg, 0.74 mmol)을 넣고, 상온에서 13 시간 동안 교반한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트 (5 mL)와 물 (1 mL)로 반응 후처리 하고 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 농축하여 얻은 생성물을 30% 에틸아세테이트/헥산으로 컬럼크로마토그래피하여 목적 화합물을 얻었다. (110 mg, 69%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.93 (s, 1H), 5.93~5.81 (d, 1H), 5.80 (brs, 1H), 4.08 (q, 3H), 3.75 (t, 1H), 2.91 (t, 2H), 2.47 (q, 1H), 2.05 (d, 4H), 1.86 (d, 1H), 1.68 (t, 2H), 1.58 (d, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.28~1.23 (t, 1H).

단계 2: t-부틸 4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 t-부틸 4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.25 mmol)을 녹이고, 여기에 4-모폴리노아닐린 (45 mg, 0.25 mmol)과 Pd₂(dba)₃(1.5 mg, 0.0025 mmol), X-Phos (3.2 mg, 0.0076 mmol), 탄산칼륨(71 mg, 0.51 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90 ^oC에서 밤새 교반한다. 반응이 종결되면, 용액을 식힌 후, 용매를 제거하고, 농축액을 에틸아세테이트와 물로로 반응 후처리를 하고 에틸아세테이트층을 황산마그네슘으로 건조하고 농축하여, 5% 메탄올/디클로로메탄으로 관컬럼크로마토그래피한다. (95 mg, 66%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.74 (s, 1H), 7.73~7.52 (d,2H),6.87 (d, 2H), 5.76 (d, 1H), 4.08 (d, 4H), 3.86 (s, 4H), 3.09 (s, 4H), 2.87 (t, 2H), 2.48 (q, 1H), 2.02 (q, 4H), 1.89 (d, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.27 (t, 1H).

단계 3: N⁶-(4-모폴리노페닐)-N⁴-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디아민의 제조

t-부틸 4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (95 mg 0.16 mmol)에 염산 (4 M, 1,4-디옥산, 6 mL)을 가하고, 메탄올 (1 mL)을 추가로 가하고, 15분간 상온에서 교반한다. 반응이 종결되면, 용매를 제거하고, 디에틸에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (40 mg, 82%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 8.49 (s, 1H), 7.83~7.75 (q, 4H), 4.14 (s, 4H), 3.71 (s, 4H), 4.39 (t, 1H), 3.49~3.47 (m, 3H), 3.19 (t, 1H), 3.25~3.15 (t, 1H), 1.92~1.91 (q, 2H).

단계 4: 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

N⁶-(4-모폴리노페닐)-N4-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (66 mg, 0.16 mmol)을 디클로로메탄 (1 mL)에 녹인 후, 아크릴산 (14 mg, 0.2 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (130 mg, 0.83 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (113 mg, 0.83 mmol), 디이소프로필에틸아민 (110 mg, 0.83 mmol)을 가한 후, 상온에서 13 시간 동안 교반한다. 반응이 종결되면, 디클로로메탄과 물로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 농축하여 5% 메탄올/디클로로메탄으로 관컬럼크로마토그래피한다. (2.7 mg, 5%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 8.27 (s, 1H), 7.38~7.35 (d, 2H), 7.08~7.05 (d, 2H), 6.41~6.35 (d, 1H), 6.19~6.10 (q, 1H), 5.90~5.86 (d, 1H), 4.41 (t, 2H), 3.82 (t, 3H), 3.16 (t, 3H), 2.81 (t, 2H), 2.17~1.98 (m, 2H), 1.52~1.48 (m ,2H), 1.35~1.26 (m, 2H).

<실시예 6> 1-(4-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘 -1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온

실시예 5의 단계 1 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (74%): LCMS calculated for C₁₈H₂₃ClN₆O₂= 390.87, found:391.07.

단계 2: t-부틸 4-(4-((4-((1-아크릴로일피페리딘-4-일)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라딘-1-카르복실레이트

실시예 5의 단계 2에서 실시한 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (13%)

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃)δ7.78(s, 1H), 7.55(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.28 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.75 (s, 2H), 3.59 (t, J = 3.0 Hz, 4H), 3.23 (s, 2H), 3.07 (t, J = 3.0 Hz, 4H), 2.88 (s, 2H), 2.56 (s, 2H), 2.15 (s, 4H), 2.04 (s, 1H), 1.48 (s, 9H).

단계 3: 1-(4-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온

실시예 5에서 실시된 단계 3의 방법대로 합성하였다. (100%)

LCMS calculated for C₂₃H₂₉N₉O = 447.54, found:448.05

<실시예 7> 4(R)-N-(1-(6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드의 제조

단계 1: t-부틸 (3S)-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

실시예 3-1의 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (80%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃)δ8.00-7.95(m, 1H), 6.60(s, 1H), 5.90(d, J = 9 Hz, 1H), 4.15-4.08(m, 1H), 3.80-3.51(m, 1H), 3.00(s, 4H), 2.89(s, 3H), 2.55-2.43(m, 1H), 1.80-1.75(m, 1H), 1.73-1.48(m, 6H), 1.45(s, 9H)

단계 2: t-부틸(3S)-3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

실시예 3-2의 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다 (74%).

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.75 (s, 1H), 7.54 (d, J = 9 Hz, 2H) ,6.89 (d, J = 9 Hz, 2H), 5.77 (d, J = 9 Hz, 1H), 3.87-3.85 (m, 4H), 3.78-3.75 (m, 2H), 3.74-3.48 (m, 2H), 3.45-3.27 (m, 2H), 3.20-3.10 (m, 4H), 2.60-2.45 (m, 9H).

단계 3: (S)-N⁶-(4-모폴리노페닐)-N⁴-(피페리딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디아민의 제조

실시예 3-3의 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (82%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.94 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.89 (d, J = 6 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 6 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.81-3.70 (m, 3H), 3.52-3.48 (m, 1H), 3.40-3.32 (m, 6H), 2.21-2.23 (m, 1H), 2.02-1.99 (m, 1H), 1.85-1.83 (m, 1H).

LCMS calculated for C₁₉H₂₂N₁₀ = 394.22, found:394.47

단계 4: (R)-N-(1-(6-((4- 모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드의 제조

실시예 3-4의 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (30%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃)δ7.89(s, 1H), 7.60-7.51(m, 2H), 6.78(d, J = 6.1 Hz, 2H), 6.48-6.45 (m, 1H), 6.23 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5, 45-5.47 (m, 1H), 4.20-4.18 (m, 1H), 4.02 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 3.79 (d, J = 9.1 Hz, 4H), 3.02 (d, J = 9.1 Hz, 4H), 2.15-2.10 (m, 1H), 2.00-1.9 5(m, 2H), 1.90-1.85 (m, 1H), 1.35 (s, 2H): LCMS calculated for C₂₃H₂₈N₈O₂ = 448.23, found : 448.52.

<실시예 8> (S)-1-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

실시예 3 단계 3의 방법대로 실시하여 목적화합물을 얻었다. (35%, 15 mg)

LCMS calculated for C₂₅H₃₁N₉O₂=489.57, found:489.93.

<실시예 9> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로판-1-온의 제조

N⁶-(4-모폴리노페닐)-N⁴-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (50 mg, 0.12 mmol)을 테트라히드로퓨란 (3 mL)에 녹이고, 디이소프로필에틸아민 (82 mg, 0.63 mmol)을 가한 후 0 ^oC에서 10분간 교반한다. 그 후, 프로피오닐클로라이드 (14 mg, 0.15 mmol)을 가하고, 10분 더 교반한다. N,N-디메닐아미노피리딘 (18 mg, 0.15 mmol)을 가한 다음, 10분 동안 교반 한 후, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조하여 농축하였다. 결과물을 관 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (3.7mg, 6.2%)

¹H NMR (300 MHz, Acetone-d₆) δ 7.80 (s, 1H), 7.58-7.72 (d, 2H), 6.98-6.91 (t, 2H), 4.56-4.50 (d, 1H), 4.38-4.34 (q, 1H), 4.03-3.97 (d, 1H), 3.79-3.75 (t, 4H), 3.08-3.05 (t, 4H), 3.18-3.13 (t, 1H), 2.70-2.72 (d, 2H), 2.41-2.33 (q, 2H), 1.50-1.40 (m, 2H), 1.08-1.02 (t, 3H).

<실시예 10> (S)-1-(3-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

상기 실시예 9와 동일한 방법을 수행하여 목적 화합물을 얻었다(7 mg).

LCMS calculated for C₂₃H₂₉N₉O = 447.54, found:448.05

<실시예 11> 1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: t-부틸 (1-아크릴로일피페리딘-4-일)카바메이트의 제조

디클로로메탄 (20 mL)에 t-부틸 피페리딘-4-일 카바메이트 (1 g, 5 mmol)을 녹이고, 아크릴산 (1.8 g, 25 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (EDCI, 4.8 g, 25 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (HOBt, 1.35 g, 25 mmol), 디이소프로필에틸아민 (3.1 g, 25 mmol)을 가한 후, 상온에서 14시간 동안 교반 한다. 반응 종료 후, 디클로로메탄과 물을 가하고, 생성물을 유기층으로 추출한다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 농축하였다. 농축물을 30% 에틸아세테이트/헥산으로 컬럼 크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (750 mg, 60%)

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.57 (dd, J = 10.2, 6.6 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.68 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.94 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.69 (s, 1H), 3.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.83 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.01 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.32 (s, 2H).

단계 2: 1-(4-아미노피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

t-부틸 (1-아크릴로일피페리딘-4-일)카바메이트 (750 mg, 2.95 mmol)을 메탄올 (20 mL)에 가하고, 여기에 염산 (4 N, 1,4-디옥산, 20 mL)을 가하였다. 상온에서 15분간 교반하고, 반응이 종결되면 용매를 감압 증류하여 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (40 mg, 82%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 6.85-6.75 (q, 1H), 6.23-6.17 (d, 1H), 5.78-5.74 (d, 1H), 4.62 (d, 1H), 4.21-4.20 (d, 1H), 4.08-4.06 (d, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H), 2.15-2.04 (q, 2H), 1.61-1.45 (q, 2H).

단계 3: 1-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (300 mg, 1.1 mmol)을 디메틸포름아미드 (1 mL)에 녹인 후, 1-(4-아미노피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (186 mg, 1.2 mmol), 탄산칼륨(760 mg, 5.5 mmol)을 가하고, 상온에서 밤새 교반한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물을 가하여, 생성물을 유기층으로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고 농축하였다. 농축물을 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (110 mg, 69%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.07 (s, 1H), 6.85-6.80 (q, 1H), 6.76-6.18 (d, 1H), 5.82-5.73 (q, 2H), 4.55 (d, 1H), 4.40 (t, 1H), 4.13 (d, 1H), 4.00 (d, 1H), 3.74 (t, 1H), 2.87-2.85 (m, 3H), 2.42 (q, 1H), 2.12-2.08 (m, 4H), 2.78 (m, 3H).

단계 4: 1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1,4-디옥산 (1.5 mL)와 물 (0.5 mL)에 1-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (18 mg, 0.046 mmol)을 1,4-디옥산 (1.5 mL)와 물 (0.5 mL)에 녹이고, 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4-페녹시페닐)-1,3,2-디옥사보롤레인 (14 mg, 0.051 mmol), pd(dppf)₂Cl₂(2 mg, 0.0023 mmol), 탄산칼륨(13 mg, 0.092 mmol)을 가한 후, 질소를 충분히 주입한 뒤, 90 ℃에서 13시간 동안 반응시켰다. 반응이 종결되면, 용액을 식힌 후, 에틸아세테이트와 물을 가하여 생성물을 유기층으로 추출하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 농축한 다음, 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (7 mg, 27%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.47 (d, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.40-7.30 (t, 2H), 7.17-7.01 (m, 4H), 6.65-6.55 (t, 1H), 6.32-6.23 (d, 1H), 6.09-6.03 (d, 1H), 5.93-5.86 (m, 1H), 5.72-5.66 (d, 1H), 4.64-4.52 (d, 2H), 4.17-4.01 (m, 2H), 3.77 (t, 1H), 3.67 (s, 1H), 3.26 (t, 1H), 2.89 (t, 1H), 2.55 (t, 1H), 2.35-2.06 (m, 4H), 1.98-1.92 (d, 1H), 1.84-1.76 (m, 3H).

단계 5: 1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (7 mg, 0.013 mmol)에 염산 (4 M, 1,4-디옥산, 1.5 mL)을 가하고, 메탄올 (0.3 mL)를 가하였다. 반응 용액을 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면 용매를 감압증류하여 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (5.1 mg, 82%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 8.57 (s, 1H), 8.27 (s, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.14 (s, 4H), 6.78 (t, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 4.59 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 2.96 (t, 1H), 2.16 (m, 2H), 1.61 (t, 2H), 1.49 (d, 1H), 1.14 (t, 1H).

<실시예 12> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: t-부틸 3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (100 mg, 0.36 mmol)을 디메틸포름아미드 (1 mL)에 녹인 뒤, t-부틸 3-아미노피페리딘-1-카르복실레이트 (81 mg, 0.40 mmol), 탄산칼륨(138 mg, 0.81 mmol)을 가하고 상온에서 13시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물을 가하여 생성물을 유기층으로 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (151 mg, 78%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.02-7.98 (m, 1H), 5.85 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.85-3.80 (m, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.85 (s, 1H), 2.55-2.48 (m, 1H), 1.90-1.85 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 2H), 1.65-1.53 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).

단계 2: t-부틸 3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-알)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트의 제조

t-부틸-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.11 mmol)을 t-부탄올 (2mL)에 녹이고, 4-모폴리노아닐린 (21 mg, 0.11 mmol)과 Pd₂(dba)₃ (7 mg, 0.011 mmol), XPhos (15 mg, 0.034 mmol), 탄산칼륨 (33 mg, 0.24 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90 ^oC에서 13 시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 감압증류하여 용매를 제거하고, 농축액을 에틸아세테이트와 물을 가하여 생성물을 유기층으로 추출하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조하고, 농축하여 얻은 농축물을 컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (42 mg, 64%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.32 (s, 1H), 7.34 ( d, J = 15.0 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 15.0 Hz, 2H), 5.50 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.90-3.85 (m, 6H), 3.25-3.17 (m, 6H), 2.65 (s, 2H), 2.10-2.08 (m, 2H), 1.93-1.85 (m, 2H), 1.70-1.65 (m, 2H), 1.30 (s, 9H).

단계 3: N⁶-(4-모폴리노페닐)-N⁴-(피페리딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

t-부틸-3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트에 염산 (4 M, 1,4-디옥산, 4mL)을 가하고, 메탄올 (1 mL)에 가하고, 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (32 mg, 78%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 10.2 (s. 1H), 10.0 (s, 1H), 9.19 (s, 2H), 8.64 (s, 1H), 7.46 (d,J = 9.0 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.38 (s, 1H), 3.85 (s, 5H), 3.25 (s, 7H), 2.91 (s, 1H), 1.93-1.90 (m, 1H), 1.70-1.67 (m, 1H): LCMS calculated for C₂₀H₂₆N₈O = 394.22, found: 394.4.

단계 3: 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

N⁶-(4-모폴리노페닐)-N⁴-(피페리딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (50 mg, 0.13 mmol)을 테트라히드로퓨란 (3 mL)에 가하고, 디이소프로필에틸아민 (117 μL, 0.63 mmol)을 가한 후 0 ^oC에서 10분 간 교반 한다. 그 후, 아세틸크로라이드 (12 μL, 0.15 mmol)을 가하고 10분 더 교반 한다. N,N-메틸아미노피리딘 (18 mg, 0.15 mmol)을 가한 다음, 10분 더 교반 한 뒤, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (8 mg, 14%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.33-8.30 (m, 1H), 7.41 (d, J = 15.1 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 15.1 Hz, 2H), 6.85-6.80 (m, 2H), 6.26-6.23 (m, 1H), 6.02-5.90 (m, 1H), 5.80-5.78 (m, 1H), 5.55-5.50 (m, 1H), 4.18-4.16 (m, 1H), 4.05-4.01 (m, 1H), 3.95-3.85 (m, 3H), 3.30-3.20 (m, 3H), 3.05 (s, 1H), 2.87 (s, 1H), 2.41 (s. 1H), 2.20-2.13 (m, 1H), 1.78-1.74 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 1H), 1.44-1.41 (m, 1H), 1.38 (s, 1H), 1.30 (s, 1H): LCMS calculated for C₂₃H₂₈N₈O₂ = 448.24, found: 448.52.

<실시예 13> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온(50 mg, 0.12 mmol)을 테트라히드로퓨란 (3 mL)에 녹이고, 디이소프로필에틸아민 (86 μL, 0.63 mmol)을 가한 후 0 ^oC에서 10분간 교반 한다. 반응혼합물에 프로피오닐크로라이드 (18 μL, 0.25 mmol)을 가하고 10분 더 교반한다. N,N-디메틸아미노피리딘 (19 mg, 0.25 mmol)을 가하고, 10분 더 교반 한 뒤, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관컬럼크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (8 mg, 14%)

LCMS calculated for C₂₃H₃₀N₈O₂ = 450.24, found: 450.98.

<실시예 14> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: t-부틸 (4-아크릴아미노시클로헥실)카바메이트의 제조

디클로로메탄 (6 mL)에 t-부틸 (4-아미노시클로헥실) 카바메이트 (100 mg, 0.46 mmol)을 가하고, 아크릴산 (48 μL, 0.69 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (EDCI, 362 mg, 2.3 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (HOBt, 316 mg, 2.3 mmol), 디이소프로필에틸아민 (431 μL, 431 mmol)을 가한 후, 상온에서 13시간 교반 한다. 반응 종료 후, 디클로로메탄 (5 mL)와 물 (2 mL)를 가하여 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축해서 얻은 농축물을 컬럼크로마토그래피 한다. (97 mg, 77%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.88 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.65-5.50 (m, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.17 (s, 1H), 0.83-0.82 (m, 1H).

단계 2: N-(4-아미노시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부틸 (4- t-부틸 (4-아크릴아미노시클로헥실)카바메이트 (97 mg 0.36 mmol)에 염산 (4 M, 1,4-디옥산, 20 mL)을 가하고, 메탄올 (2mL)을 가하여 녹인 후, 15분간 상온에서 교반한다. 반응이 종결되면, 용매를 제거고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (89 mg, 70%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.88 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.65-5.50 (m, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 3H), 1.17 (s, 2H), 0.83-0.82 (m, 1H).

단계 3: N-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)에 4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (28 mg, 0.11 mmol)을 녹인 뒤, N-(4-아미노헥실)아크릴아미드 (30 mg, 0.11 mmol), 탄산칼륨(146 mg, 1.11 mmol)을 가하고, 상온에서 13 시간 동안 교반한다. 반응 종료 후, 디클로로메탄 (5 mL)와 물 (2 mL)를 가하여 추출하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축해서 얻은 농축물을 컬럼크로마토그래피 한다. (68 mg, 44%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.22 (s, 1H), 6.00 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4,15-4.12 (m, 1H), 3.85-3.80 (m, 1H), 2.60-2.53 (m, 1H), 2.35-2.20 (m, 1H), 2.18-2.10 (m, 1H), 2.00-1.95 (m, 1H), 1.74-1.63 (m, 2H), 1.60-1.52 (m, 1H), 1.30-1.23 (m, 1H).

단계 4: N-(4-((6-((4-모폴리노)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 N-(4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (30 mg, 0.17 mmol)을 녹이고, 4-모폴리노아닐린 (14 mg, 0.17 mmol)과 Pd₂(dba)₃ (4 mg, 0.017 mmol), XPhos (22 mg, 0.052 mmol), K₂CO₃ (21 mg, 0.23 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후 90 ^oC에서 15 시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (20 mg, 50%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.74 (s, 1H), 7.55 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.45-6.36 (m, 1H), 6.15-6.07 (m, 1H), 5.80-5.76 (m, 2H), 5.58-5.50 (m, 1H), 4.50-4.45 (m, 1H), 4.15-4.06 (m, 2H), 3.85-3.75 (m, 3H), 3.15-3.10 (m, 3H), 2.58-2.52 (m, 1H), 2.25-2.00 (m, 6H), 1.80-1.78 (m, 1H), 1.75-1.55 (m, 4H), 1.50-1.25 (m, 2H).

단계 5: N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

MeOH (0.5 mL)에 N-(4-((6-((4-모폴리노)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드을 가하고, 여기에 염산 (4 M, 1,4-디옥산용액, 4mL)을 가하고, 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면 용매를 제거고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (24 mg, 64%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.74 (s, 1H), 7.55 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.45-6.36 (m, 1H), 6.15-6.07 (m, 1H), 5.58-5.50 (m, 1H), 4.50-4.45 (m, 1H), 4.15-4.06 (m, 2H), 3.85-3.75 (m, 3H), 3.15-3.10 (m, 3H), 2.25-2.00 (m, 6H), 1.50-1.25 (m, 2H): LCMS calculated for C₂₄H₃₀N₈O₂ = 462.25, found: 462.54.

<실시예 15> N-((1s, 4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: t-뷰틸 ((1s, 4s)-4-아크릴아미도시클로헥실)카바메이트의 제조

디클로로메탄 (6 mL)에 t-부틸 ((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (517 mg, 2.42 mmol)을 가하고, 아크릴산 (668 μL, 9.6 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (2.9 g, 19.3 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (2.6 g, 19.3 mmol), 디이소프로필에틸아민 (3.6 mL, 19.3 mmol)을 가한 후, 상온에서 14시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (175 mg, 30%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.88 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 5.65-5.50 (m, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.17 (s, 1H), 0.83-0.82 (m, 1H).

단계 2: N-((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부틸 ((1s,4s)-4-아크릴아미도시클로헥실)카바메이트 (150 mg, 0.81 mmol)에 염산 (4M 1,4-디옥산 용액, 20 mL)을 가하고, 메탄올 (2mL)를 가하고, 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면, 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (150 mg, 70%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.88 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 5.65-5.50 (m, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 3H), 1.17 (s, 2H), 0.83-0.82 (m, 1H).

단계 3: N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-p-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N,N-디메틸포름아미드 (2 mL)에 4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (185 mg, 0.68 mmol)을 가하고, N-((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)아크릴아미드 (200 mg, 0.74 mmol), 탄산칼륨 (935 mg, 6.7 mmol)을 가하고, 상온에서 14 시간 동안 교반한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (100 mg, 33%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.89 (s, 1H) ,6.34-6.28 (m, 1H), 6.13-6.10 (m, 1H), 5.95-5.91 (m, 1H), 5.68-5.65 (m, 1H), 4.10-4.60 (m, 2H), 3.75-3.79 (m, 1H), 3.00-2.88 (m, 1H), 2.60-2.57 (m, 1H), 2.35-2.20 (m, 2H), 1.95-1.80 (m, 4H), 1.78-1.68 (m, 2H), 1.58 (s, 3H).

단계 4: N-((1s,4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-p-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (52 mg, 0.12 mmol)을 녹이고, 4-모폴리노아닐린 (23 mg, 0.13 mmol)과 Pd₂(dba)₃ (8 mg, 0.012 mmol), X-Phos (17 mg, 0.038 mmol), 탄산칼륨(37 mg, 0.26 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90 ^oC에서 14시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 에틸아세테이트와 물로 반응 후 처리 하고, 유기층을 황산마그네슘으로 건조, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (60 mg, 86%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.85 (s, 1H), 7.50 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 7.15-6.90 (m, 2H), 6.48-6.35 (m, 2H), 6.30-6.20 (m, 1H), 5.85-5.70 (m, 2H), 5.55-5.50 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.12-4.00 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.78-3.75 (m, 1H), 3.17-3.10 (m, 3H), 2.65-2.60 (m, 1H), 2.28-2.20 (m, 1H), 1.85-1.60 (m, 10H), 1.38-1.25 (m, 4H).

단계 5: N-((1s,4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

메탄올 (1 mL)에 N-((1s,4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드에 염산 (4 M, 1,4-디옥산, 4 mL)을 가하고, 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면, 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (34 mg, 87%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 10.19 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 6.38-6.35 (m, 1H), 6.07 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.57 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.80-3.64 (m, 5H), 3.15-3.00 (m, 5H), 1.60 (s, 7H), 1.58-1.56 (m, 2H): LCMS calculated for C₂₄H₃₀N₈O₂= 462.25, found:462.55.

<실시예 16> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 의 제조

단계 1: N-((1s, 4s)-4-((6-((4-페녹시페닐) 아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (90 mg, 0.22 mmol) 를 1,4-디옥산 (3 mL) 에 녹인 용액에 4-페녹시아닐린 (49 mg, 0.27 mmol), Pd₂(dba)₃(10 mg, 0.01 mmol), Xantphos (6 mg ,0.01 mmol), 세슘카보네이트(217 mg, 0.67 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 충진 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 150 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 물을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후, 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체 N-((1s,4s)-4-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (32 mg, 27%, 0.054 mmol, 42%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.61-2.18 (m, 14H), 2.55-2.64 (m, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 4.09-4.20 (m, 3H), 5.49 (br, 1H), 5.61 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.05-6.14 (m, 1H), 6.26-6.31 (m, 1H), 6.98-7.09 (m, 6H), 7.29-7.35 (m, 2H), 7.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 8.74 (br, 1H).

단계 2: (R)-1-(3-((6-([1,1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 을 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 1,4-디옥산, 1 mL) 을 첨가하고 상온에서 12시간 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트를 이용하여 세척한 후, 흰색 고체로 목적화합물 (25 mg, 86%, 0.049 mmol)을 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.52-1.91 (m, 9H), 3.57-3.73 (m, 1H), 3.96 (brs, 1H), 4.18 (brs, 1H), 5.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.19-6.41 (m, 2H), 7.01-7.16 (m, 5H), 7.35-7.49 (m, 4H), 8.43 (s, 1H); LC/MS 470.03 [M + H+], 940.32 [2M + H+].

<실시예 17> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-((3R)-3-((6-([1, 1'-바이페닐]-4-일아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.13 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 [1,1'-바이페닐]-4-아민 (27 mg, 0.16 mmol), Pd₂(dba)₃(6 mg, 0.007 mmol), Xphos (3 mg, 0.007 mmol), 세슘카보네이트(130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 용존산소를 제거하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트 으로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체로 목적화합물 (42 mg, 63%, 0.082 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.59-2.63 (m, 10H), 3.56-3.88 (m, 5H), 4.13 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.79-5.00 (m, 1H), 5.59-5.68 (m, 1H), 5.83 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.31-6.39 (m, 2H), 7.16-7.17 (m, 1H), 7.29-7.33 (m, 1H), 7.40-7.45 (m, 2H), 7.56-7.62 (m, 4H) 7.76-7.80 (m, 2H), 7.99-8.09 (m, 1H); LC/MS 509.97 [M + H+].

1-((3R)-3-((6-([1,1'-바이페닐]-4-일아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (42 mg, 0.082 mmol)을 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 에틸에테르 용액, 1 mL) 을 첨가하고, 상온에서 20분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트로 세척한 후, 흰색 고체인 목적화합물 (30 mg, 83%, 0.065 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 2.16-2.44 (m, 2H), 3.60-4.18 (m, 4H), 4.60-4.89 (m, 1H), 5.69-6.24 (m, 1H), 6.27-6.54 (m, 1H), 6.57-6.71 (m, 1H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.37-7.42 (m, 2H), 7.53-7.60 (m, 4H), 7.82 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.94 (s, 1H); LC/MS 425.93 [M + H+], 851.21 [2M + H+].

<실시예 18> (R)-1-(3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 의 제조

단계 1: 1-((3R)-3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.13 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-페녹시아닐린 (29 mg, 0.16 mmol), Pd₂(dba)₃ (6 mg, 0.007 mmol), Xphos (3 mg, 0.007 mmol), 세슘카보네이트(130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 용존산소를 제거 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후, 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트로 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (45 mg, 65%, 0.086 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.57-2.34 (m, 9H), 2.56-2.63 (m, 1H), 3.55-3.86 (m, 5H), 4.09-4.13 (m, 1H), 4.75-4.87 (m, 1H), 5.59-5.68 (m, 1H), 5.79 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.29-6.38 (m, 2H), 6.99-7.02 (m, 4H), 7.06-7.11 (m, 2H), 7.29-7.35 (m, 2H), 7.65-7.69 (m, 2H), 7.99-8.08 (m, 1H); LC/MS 525.96 [M + H+].

단계 2: (R)-1-(3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 의 제조

1-((3R)-3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (45 mg, 0.086 mmol)를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 염산 용액 (4 N, 디에틸에테르, 1 mL) 을 첨가하고 상온에서 20분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후, 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체로 목적화합물 (28 mg, 78%, 0.059 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 2.16-2.42 (m, 2H), 3.63-4.00 (m, 1H), 4.76 (br, 1H), 5.72-5.79 (m, 1H), 6.24-6.32 (m, 1H), 6.49-6.65 (m, 1H), 7.01-7.16 (m, 5H), 7.35-7.49 (m, 4H), 8.38 (s, 1H); LC/MS 441.91 [M + H⁺], 883.14 [2M+H⁺].

<실시예 19> (R)-1-(3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 의 제조

단계 1: 1-((3R)-3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.13 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-(피페리딘-1-일)아닐린 (28 mg, 0.16 mmol), Pd₂(dba)₃ (6 mg, 0.007 mmol), Xphos (3 mg, 0.007 mmol), 세슘카보네이트(130 mg, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 용존산소를 제거하고, 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트 으로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (31 mg, 46%, 0.060 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.51-2.24 (m, 15H), 2.98 (br, 5H), 3.45-3.54 (m, 4H), 3.56-3.69 (m, 2H), 3.89-3.99 (m, 2H), 4.59-4.66 (m, 1H), 5.64-5.68 (m, 2H), 6.09-6.15 (m, 1H), 6.48-6.66 (m, 1H), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.50-7.70 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 8.04-8.07 (m, 1H), 8.95 (s, 1H); LC/MS 517.05 [M + H⁺],753.06[2M+H⁺].

단계 2: (R)-1-(3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (31 mg, 0.060 mmol)를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 4N 염산 디에틸에테르 용액 (1 mL) 을 첨가하고 상온에서 20분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후, 흰색 고체 목적화합물 (25 mg, 93%, 0.053 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.84-2.44 (m, 8H), 3.59-4.03 (m, 8H), 4.74 (brs, 1H), 5.77-5.81 (m, 1H), 6.28 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.57-6.71 (m, 1H), 7.84 (brs, 4H), 8.49 (s, 1H); LC/MS 432.94 [M + H+], 865.19 [2M + H⁺].

<실시예 20> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: 2-에톡시-1, 1-디이소시아노프로프-1-엔의 제조

말로니트릴 (3 g, 45 mmol)에 1, 1, 1-트리에톡시에탄 (10 mL, 54 mmol)을 가하고, 초산 (2 mL) 가한 다음, 90 ^oC에서 에탄올을 제거한다. 반응 용액을 140 ^oC로 조정하고, 30분간 교반 한다. 반응이 종결되면, 흰색고체를 여과하여 목적화합물을 얻었다. (2.9 g, 87%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ4.45(q, J = 9.1 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.42 (t, J = 9.1 Hz, 3H).

단계 2: 5-아미노-3-메틸-1H-피라졸-4-카보니트릴의 제조

2-에톡시-1, 1-디이소프로페-1-엔 (1 g, 7.3 mmol)에 히드라진 단수화물 (720μL, 14.6 mmol)을 가하고, 에탄올 (10 mL)를 0 ℃에서 가하여, 녹인 후, 80 ℃에서 90분간 교반 시켜준다. 반응 종료 시 냉각하고, 에틸아세테이트와 물을 가하여 생성물을 유기츠응로 추출하고, 유기층을 무수망초로 건조, 여과, 농축한 다음, 농축액을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (920 mg, 92%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ2.22(s, 3H).

단계 3: 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디올의 제조

5-아미노-3-메틸-1H-피라졸-4-카보니트릴 (0.92 g, 7.5 mmol)을 0^oC에서 20% 수산칼륨 (4.5 ml)와 10 ml 디메틸설폭사이드를 가하고, 12시간 동안 교반 시켜 준다. 다음으로, CS₂를 0 ^oC에서 서서히 가해준 후, 30분 교반시킨다. 그리고 상온에서 한시간 더 교반 시킨다. 반응 용액에 요오드메탄을 30분 동안 서서히 가한다. 상온에서 2시간 교반 시킨 후, 반응물을 얼음물에 가한 다음, 생성된 고체를 여과 하여 얻는다. (620 mg, 75%). 다음으로, 아세트산 (30 mL), 과산화수소 (30%, 7mL)를 가한 다음, 70 ℃에서 5시간 교반시켜 준다. 용매를 제거하고, 물을 가하여 생성된 흰색 고체를 여과해서 목적화합물을 얻었다. (100 mg, 37%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 12.92 (s, 1H), 11.15 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 2.46 (d, J = 12.1 Hz, 3H).

단계 4: 4,6-디클로로-3-메틸-피라졸로[3,4-d]피리미딘의 제조

3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디올 (100 mg, 0.60 mmol)을 POCl₃(10mL)에 가하고, PCl₅(417 mg, 2.0mmol)를 가하였다. 반응 용액을 12 시간 동안 환류시켜 주고, 반응이 종료되면, 반응물을 얼음물에 가하고, 에틸아세테이트로 추출한다. 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축한 다음, 관크로마토 그라피로 목적화합물을 얻었다. (70 mg)

LCMS calculated for C₆H₄Cl₂N₄ = 201.98, found: 202.34.

단계 5: 4, 6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘의 제조

4,6-디클로로-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (70 mg, 0.34 mmol)을 에틸아세테이트 (2 mL)에 가하고, 디히드로피란 (0.2 mL, 2.3 mmol)와 p-톨루엔설폰산 (3 mg)를 가하였다. 50 ℃에서 12시간 교반시켜 준다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (30 mg, 54%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 5.99-5.51 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.98-3.96 (m, 1H), 3.75-3.73 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.47-2.45 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.85-1.78 (m, 1H), 1.65-1.55 (m, 2H), 1.26 (s. 1H).

단계 6: t-부틸 ((1s,4s)-4-아크릴아미도시클로헥실)카바메이트의 제조

디클로로메탄 (6 mL)에 t-부틸 ((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (517 mg, 2.4 mmol)을 녹이고, 아크릴산 (668 μL, 9.6 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (2.9 g, 19.3 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (2.6 g, 19.3 mmol), 디이소프로필에틸아민 (3.6 mL, 19.3 mmol)을 가한 후, 상온에서 13 시간 동안 교반한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (175 mg, 30%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.87 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.85-5.84 (m, 1H), 4.60-4.45 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.55-2.52 (m, 1H), 1.85-1.75 (m, 2H), 1.65-1.50 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35-1.25 (m, 2H), 0.83-0.80 (m, 1H).

단계 7: N-((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부틸 ((1s,4s)-4-아크릴아미도시클로헥실)카바메이트 (150 mg, 0.82 mmol)에 염산 (4M in 1,4-디옥산, 20 mL)을 가하고, 메탄올 (2 mL)를 가하고 녹인 후, 15분간 상온에서 교반한다. 반응이 종결되면 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (150 mg, 70%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 6.16-6.06 (m, 1H), 5.88 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 5.65-5.50 (m, 1H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.93 (s, 1H), 3.62 (s, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.75-1.70 (m, 2H), 1.60-1.55 (m, 3H), 1.17 (s, 2H), 0.83-0.82 (m, 1H).

단계 8: N-((1s,4s)-4-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

디메틸포름아미드 (6mL)에 4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (362 mg, 1.26 mmol)을 녹인 뒤, N-((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)아크릴아미드 (234 mg, 1.39 mmol), 탄산칼륨(1.7 mg, 12.6 mmol)을 넣고 상온에서 13시간 동안 교반한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (30 mg, 6%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃ δ 6.35-6.34 (m, 1H), 6.10-6.05 (m, 1H), 5.90-5.81 (m, 1H), 5.70-5.57 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.80-3.73 (m, 2H), 2.59 (s, 2H), 2.50-2.44 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.90-1.85 (m, 2H), 1.80-1.65 (m, 6H), 1.54 (s, 4H).

단계 9: N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 N-((1s,4s)-4-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-yl)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (25 mg, 0.059 mmol)을 용해시키고, 4-모폴리노아닐린 (11 mg, 0.059 mmol)과 Pd₂(dba)₃ (4 mg, 0.006 mmol), XPhos (8 mg, 0.017 mmol), 탄산칼륨(25 mg, 0.17 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90^oC에서 14시간 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (14 mg, 42%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.58 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.95-6.91 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.30-6.23 (m, 2H), 5.65-5.62 (m, 2H), 4.25-4.20 (m, 1H), 4.10-3.95 (m, 2H), 3.72-3.68 (m, 3H), 3.12-3.07 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.41 (s, 1H), 2.05-1.88 (m, 2H), 1.80-1.75 (m, 6H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.35-1.25 (m, 6H), 0.87-0.83 (m, 4H).

단계 10: N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (14 mg, 0.025 mmol)에 염산 (4M, 1,4-디옥산, 4 mL)을 가하고, 메탄올 (1 mL)를 가하고 녹인 후, 15 분 간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (6 mg, 87%)

¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 8.00 (s, 4H), 6.80-6.75 (m, 2H), 5.50 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.44-4.30 (m, 4H), 4.28-4.25 (s, 1H), 4.00-3.90 (m, 5H), 3.55 (s, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.80-1.98 (m, 7H): LCMS calculated for C₂₅H₃₂N₈O₂ = 476.26, found: 476.57.

<실시예 21> N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (50 mg, 0.13 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (27 mg, 0.15 mmol), Pd₂(dba)₃(6 mg, 0.006 mmol), Xphos (3 mg, 0.006 mmol) 과 세슘카보네이트(122 mg, 0.38 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 무수망초 (Na₂SO₄)로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (21 mg, 31%, 0.039 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.61-1.74 (m, 4H), 1.91-1.95 (m, 1H), 2.05-2.11 (m, 2H), 2.20-2.60 (m, 1H), 3.09-3.13 (m, 4H), 3.77-3.88 (m, 5H), 4.11-4.14 (m,1H), 5.72-5.83 (m,2H), 6.24-6.28 (m,1H), 6.43 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.16-7.23 (m, 2H) 7.47-7.55 (m, 5H), 7.94 (s, 1H); LC/MS 541.00 [M + H⁺].

단계 2: N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (20 mg, 0.039 mmol) 를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 에틸에테르, 1 mL) 을 가하고, 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후, 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체 목적화합물 (11 mg, 61%, 0.022 mmol)를 얻었다

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 3.67 (brs, 4H), 4.12-4.15 (m, 4H), 5.81 (dd, J = 9.8 Hz, 2.1 Hz, 1H) 6.35-6.54 (m, 2H), 7.41-7.74 (m, 7H), 8.05 (s, 1H), 8.57 (s, 1H); LC/MS 456.95 [M + H⁺], 913.25 [2M+H⁺].

<실시예 22> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페닐) -1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (50 mg, 0.12 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL)에 녹인 용액에 (4-페녹시페닐)보론산 (32 mg, 0.15 mmol), PdCl₂(PPh₃)_2. (6 mg, 0.006 mmol) 을 가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 130 ℃에서 15분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 무수망초 (Na₂SO₄)로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (31 mg, 46%, 0.060 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.64-2.18 (m, 14H), 2.59-2.63 (m, 1H), 3.79-3.86 (m, 1H), 4.07-4.16 (m, 2H), 4.40 (brs, 1H), 5.62 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.75 (brs, 1H), 6.08-6.14 (m, 2H), 6.28 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 7.06-7.17 (m, 5H), 7.34-7.39 (m, 2H), 7.44-7.69 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 8.47 (d, J = 8.7 Hz, 2H); LC/MS 538.98 [M + H⁺].

단계 2: N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페닐) -1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (30 mg, 0.060 mmol) 를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 디에틸에테르, 0.2 mL)을 가하고, 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후, 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체 목적화합물 (22 mg, 81%, 0.045 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.93-2.02 (m, 8H), 4.01 (brs, 1H), 4.61 (brs, 1H), 5.61 (d, J = 10 Hz, 2.1 Hz, 1H), 6.20-6.36 (m, 2H), 7.12-7.29 (m, 4H), 7.44-7.65 (m, 3H), 8.26 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H); LC/MS 454.99 [M+H+], 909.27[2M+H⁺].

<실시예 23> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (50 mg, 0.12 mmol) 를 디메틸프름아미드 (2 mL) 에 녹인 용액에, 4-페녹시페놀 (34 mg, 0.19 mmol), 구리 (Cu, 9 mg, 0.15 mmol), 세슘카보네이트(120 mg, 0.37 mmol), 에틸렌디아민 (촉매량) 을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 150 ^oC에서 15분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트 으로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용, 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (36 mg, 53%, 0.065 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.59-2.18 (m, 12H), 2.50-2.64 (m, 1H), 3.69-3.81 (m, 1H), 4.02-4.10 (m, 3H), 5.62 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.80-5.84 (m, 3H), 6.07-6.12 (m, 1H), 6.27 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.89-7.08 (m, 4H), 7.10-7.19 (m, 3H), 7.32-7.37 (m, 2H), 7.87 (s, 1H); LC/MS 555.04 [M+H⁺].

단계 2: N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (30 mg) 를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 디에틸에테르, 0.2 mL)을 가하고, 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체로 목적화합물 (26 mg, 81%, 0.051 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.53-1.85 (m, 8H), 3.82 (brs, 1H), 3.93 (brs, 1H), 5.64 (dd, J = 9.9 Hz, 2.1 Hz, 1H), 6.19-6.39 (m, 2H), 7.02-7.19 (m, 5H), 7.31-7.43 (m, 4H), 8.59 (s, 1H); LC/M S470.98 [M+H⁺], 941.20[2M+H⁺].

<실시예 24> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 N-((1s,4s)-4-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (20 mg, 0.047 mmol)을 녹이고, 4-(피페리딘-1-일)아닐린 (8 mg, 0.048 mmol), Pd₂(dba)₃(3 mg, 4.7 μmol), X-Phos (7 mg, 0.014 mmol), 탄산칼륨(14 mg, 0.098 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90 ^oC에서 14 시간 동안 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (15 mg, 86%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.49 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 6.76 s, 1H), 6.31-6.28 (m, 2H), 5.70-5.60 (m, 3H), 4.80-4.75 (m, 7H), 4.30-4.10 (m, 4H), 3.63-3.43 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 0.79-0.65 (m, 5H).

단계 2: N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (25 mg, 0.052 mmol)을 메탄올 (1 mL)에 가하고, 여기에 염산 (4 N, 1,4-디옥산, 4 mL)을 가한 다음, 15분간 상온에서 교반한다. 반응이 종결되면 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (2 mg, 12%)

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.85-7.72 (m, 4H), 6.30-6.25 (m, 2H), 5.64 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.75-3.65 (m, 6H), 3.60-3.55 (m, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.72 (s, 1H), 2.28-2.05 (m, 3H), 1.95-1.75 (m, 3H), 1.55-1.35 (m, 3H), 1.22 (s, 4H), 0.86 (s, 1H): LCMS calculated for C₂₆H₃₄N₈O = 474.29, found : 474.60.

<실시예 25> (R)-1-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-((3R)-3-((6-(4- 페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.13 mmol)를 1,4-디옥산 (2 mL)에 녹인 용액에 (4-페녹시페닐 보론산 (34 mg, 0.16 mmol), 탄산나트륨(42 mg, 0.39 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 110 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (30 mg, 45%, 0.058 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.60-2.63 (m, 9H), 3.64-3.96 (m, 5H), 4.12-4.16 (m, 1H), 4.96-5.17 (brs, 1H), 5.59-5.69 (m, 1H), 6.07 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.31-6.42 (m, 2H), 7.07-7.26 (m, 5H), 7.36-7.69 (m, 4H), 8.19-8.24 (m, 1H), 8.50 (d, J = 8.7 Hz, 2H); LC/MS 510.98 [M+H⁺].

단계 2: (R)-1-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-((3R)-3-((6-(4- 페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온 (30 mg) 를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 디에틸에테르용액, 0.2 mL) 을 첨가하고 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체인 목적화합물 (21 mg, 78%, 0.045 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 2.30-2.55 (m, 2H), 3.74-3.17 (m, 4H), 5.18-5.27 (m, 1H), 5.74-5.82 (m, 1H), 6.27-6.34 (m, 1H), 6.57-6.72 (m, 1H), 7.12-7.29 (m, 5H), 7.44-7.49 (m, 2H), 8.30 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.65 (s, 1H); LC/MS 426.88 [M + H⁺], 854.12 [2M+H⁺].

<실시예 26> N-((1s, 4s)-4-((6-([1, 1'-비페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-((1s,4s)-4-((6-([1,1'-비페닐]-4-일아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (50 mg, 0.12 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 [1,1'-비페닐]-4-아민 (25 mg, 0.15 mmol), Pd₂(dba)₃ (6 mg, 0.006 mmol), Xphos (3 mg, 0.006 mmol), 세슘카보네이트(120 mg, 0.37 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용, 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (40 mg, 61%, 0.074 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.73-2.18 (m, 14H), 2.64 (brs, 1H), 3.60-3.82 (m, 1H), 5.60 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 5.82-5.93 (m, 2H), 6.04-6.14 (m, 1H), 6.28 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 7.26-7.34 (m, 3H), 7.41-7.46 (m, 2H), 7.55-7.61 (m, 4H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.82 (s,1H); LC/MS537.97 [M+H⁺].

단계 2: N-((1s,4s)-4-((6-([1,1'-비페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 의 제조

N-((1s,4s)-4-((6-([1,1'-비페닐]-4-일아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (35 mg)를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 (4 N, 디에틸에테르용액, 0.2 mL) 을 첨가하고 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 에틸아세테이트를 이용하여 세척한 후 흰색 고체 목적화합물 (28 mg, 88%, 0.057 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.75-1.95 (m, 8H), 3.98 (brs, 1H), 34.2 (brs, 1H), 5.66 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 7.32-7.37 (m, 1H), 7.43-7.48 (m, 2H), 7.61-7.72 (m, 6H), 8.48 (s, 1H); LC/MS 453.91 [M+H⁺] , 907.24 [2M+H⁺].

<실시예 27> N-((1s, 4s)-4-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

단계 1: 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2,4-디올의 제조

6-아미노피리미딘-2,4-디올 (2.0 g, 15.7 mmol) 를 물 (20 mL) 에 녹인 용액에 나트륨아세테이트 (1.29 g, 23.60 mmol)을 첨가하고 80 ^oC로 가열하였다. 반응혼합물에 클로로아세트알데히드를 가한 후 80 ^oC에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 고체를 여과한 다음, 물로 씻어주어 갈색 고체 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2,4-디올 (1.60 g, 66%, 10.6 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 4.39 (s, 1H), 6.18 (s, 2H), 10.09 (s, 2H); LC/MS 151.97 [M + H⁺], 302.98 [2M+H⁺].

단계 2: 2,4-디클로로-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘-2,4-디올의 제조

7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2,4-디올 (1.0 g, 6.6 mmol) 를 POCl₃(4mL, 43.0 mmol))에 녹인 용액에 N,N-디메틸아닐린 (0.4 g, 3.3 mmol) 을 첨가하였다. 반응혼합물을 180 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 얼음물을 가하여 반응을 종료시키고 생성된 고체를 여과한 다음, 실리카겔 칼럼 하에서 헥산s/EtOAc을 이용 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (300 mg, 25%, 1.59 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) 6.63 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 12.76 (s, 1H); LC/MS 188.02 [M + H⁺].

단계 3: N-((1s,4s)-4-((2-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

2,4-디클로로-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘-2,4-디올 (100 mg, 0.53 mmol) 를 디메틸프롬아미드 (2 mL) 에 녹인 용액에 시스-1,4-시클로헥산디아민 (73 mg, 0.64 mmol), K₂CO₃ (220 mg, 1.59mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 80 ^oC에서 14시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 감압증류하여 용매 제거한 후 클로로포름:메탄올 (1:1)을 가하였다. 생성된 고체를 제거하고 남은 용액을 감압증류하여 얻은 고체 (100 mg, 0.38 mmol)를 다음, 반응에 그대로 사용하였다. 얻은 고체 (100 mg, 0.38 mmol)를 디메틸프롬아미드에 녹인 용액에 아크릴산 (32 mg, 0.45 mmol), HATU (285 mg, 0.75 mmol) and 트리에틸아민 (0.16 mL, 1.13 mmol)를 가하고 상온에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류하여 용매를 제거한 후, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트을 이용 정제하여 흰색 고체 목적화합물 (80 mg, 47%, 0.25 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.61-1.98 (m, 8H), 3.79 (brs, 1H), 3.99 (brs, 1H), 5.54 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.28-6.65 (m, 1H), 6.65 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 11.62 (s, 1H); LC/MS 319.89 [M + H⁺], 638.92 [2M+H⁺].

단계 4: N-((1s,4s)-4-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드의 제조

N-((1s,4s)-4-((2-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드 (40 mg, 0.13 mmol) 를 t-부탄올 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모포리노아닐린 (27 mg, 0.15 mmol), Pd₂(dba)₃ (6 mg, 0.006 mmol), Xphos (3 mg, 0.006 mmol), 세슘카보네이트(52 mg, 0.38 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 90 ^oC에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 Na₂SO₄로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/EtOAc을 이용 정제하여 노란색 고체인 목적화합물 (15 mg, 26%, 0.030 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.71-2.05 (m, 8H), 3.09 (brs, 4H), 3.86 (brs, 4H), 4.08-4.11 (m, 1H), 4.23 (brs, 1H), 4.80-5.00 (m, 1H), 5.65 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.12-6.18 (m, 2H), 6.28-6.33 (m, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 9.41 (s, 1H); LC/MS 462.01 [M+H⁺], 923.38 [2M+H⁺].

<실시예 28> N-(2-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,2-디아민의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.8 mmol) 를 에탄올 (5 mL) 에 녹인 용액에 1,2-페닐렌디아민 (247 mg, 2.19 mmol)과 Et₃N (0.76mL, 5.49 mmol)을 첨가하고 상온에서 30분동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 에탄올로 씻은 후 흰색 고체 목적화합물 (580 mg, 92%, 1.68 mmol)를 얻었다.

LC/MS 344.89 [M + H⁺], 689.00 [2M+H⁺].

단계 2: N-(2-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,2-디아민 (250 mg, 0.73 mmol) 를 테트라히드로퓨란 (10 mL) 에 녹인 용액에 아크릴산 (63 mg, 0.87 mmol). HATU (550 mg, 1.45 mmol), 트리에틸아민 (0.25 mL, 1.81 mmol)을 0 ^oC에서 첨가하였다. 반응혼합물을 상온에서 4시간 동안 교반시켰다. 물을 가하여 반응을 종료하고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (200 mg, 69%, 0.501 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.63-2.11 (m, 5H), 2.49 (brs, 1H), 3.79-3.83 (m, 1H), 4.08-4.13 (m, 1H), 5.80 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.20-6.29 (m, 1H), 6.45 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 7.18-7.26 (m, 2H), 7.42-7.44 (m, 2H), 8.40 (brs, 2H); LC/MS 398.95 [M+H⁺], 997.07 [2M+H⁺].

단계 3: N-(2-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(2-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (120 mg, 0.30 mmol) 를 염산 (0.08 M, 에톡시 에탄올, 3 mL, 10 mmol%)에 녹인 용액을 90 ^oC에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 생성된 고체를 여과하여 에탄올로 씻은 후, 흰색 고체인 목적화합물 (70 mg, 47%, 0.14 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.21 (brs, 4H), 3.83 (brs, 4H), 5.70 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.21 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 6.51-6.57 (m, 1H), 7.11 (brs, 2H), 7.24-7.39 (m, 4H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.60 (br, 1H), 10.21 (brs, 1H), 11.30 (brs, 1H); LC/MS 456.99 [M + H⁺].

<실시예 29> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.83 mmol) 를 에탄올(5 mL) 에 녹인 용액에 1,4-페닐렌디아민 (296 mg, 2.75 mmol) 과 Et₃N (0.51 mL, 3.66 mmol)을 첨가하고 상온에서 30분동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 에탄올로 씻은 후 엷은갈색 고체인 목적화합물 (615 mg, 98%, 1.7 mmol)를 얻었다.

LC/MS 344.89 [M + H⁺], 688.93 [2M+H⁺].

단계 2: N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,4-디아민 (500 mg, 1.45 mmol) 를 디클로로메탄 (10 mL) 에 녹인 용액에 아크릴로일 클로라이드 (144 mg, 1.59 mmol), 트리에틸아민 (0.40 mL, 2.90 mmol)을 0 ^oC에서 첨가하였다. 반응혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반시켰다. 물을 가하여 반응을 종료하고, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물을 (380 mg, 66%, 0.95 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.61-1.90 (m, 4H), 2.05 (brs, 1H), 2.45-2.48 (m, 1H), 3.76-3.82 (m, 1H), 4.08-4.14 (m, 1H), 5.81 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.24-6.33 (m, 1H), 6.45-6.50 (m, 1H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.77 (s, 1H), 8.06 (s, 1H); LC/MS 399.00 [M+H⁺], 797.11 [2M+H⁺].

단계 3: N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N¹-(6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (80 mg, 0.20 mmol) 를 염산 (0.08 M, 에톡시 에탄올, 2 mL, 10 mmol%)에 녹인 용액을 90 ^oC에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 생성된 고체를 여과하여 에탄올로 씻은 후 흰색 고체인 목적화합물 (60 mg, 61%, 0.12 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.23 (br, 4H), 3.82 (brs, 4H), 5.76 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.44-6.53 (m, 1H), 7.14 (brs, 1H), 7.44 (brs, 1H), 7.69 (s, 4H), 8.69 (brs, 1H), 10.11 (brs, 1H), 10.37 (s, 1H), 11.28 (brs, 1H); LC/MS 457.06 [M + H⁺].

<실시예 30> N^4,N⁶-bis(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디아민의 제조

단계 1: 6-클로로-N-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.83 mmol) 를 에탄올 (20 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (195 mg, 1.09 mmol) 과 Et₃N (0.20 mL, 1.46 mmol)을 첨가하고 상온에서 30분동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과하고, 에탄올로 씻은 후 엷은노란색 고체인 목적화합물 (269 mg, 89%, 0.64 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.55-1.97 (m, 5H), 2.35 (brs, 1H), 3.12 (brs, 4H), 3.63-3.77 (m, 5H), 3.91-3.95 (m, 1H), 5.77 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.58 (brs, 2H) 8.35 (brs, 1H), 10.36 (s, 1H); LC/MS 415.11 [M + H⁺].

단계 2: N⁴,N⁶-비스(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

6-클로로-N-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (50 mg, 0.12 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (26 mg, 0.15 mmol), Pd₂(dba)₃ (6 mg, 0.006 mmol), Xphos (3 mg, 0.006 mmol), 세슘카보네이트(118 mg, 0.36 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 120 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트를 이용 정제하여, 흰색 고체인 목적화합물 (38 mg, 57%, 0.068 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃+CD₃OD) δ 1.63-2.10 (m, 5H), 2.48 (brs, 1H), 3.15-3.17 (m, 8H), 3.74-3.89 (brs, 8H), 4.11 (brs, 1H), 5.77 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.93-6.95 (m, 4H), 7.36-7.43 (m, 4H), 7.56-7.59 (m, 2H); LC/MS 557.03 [M+H⁺].

단계 3: N⁴,N⁶-bis(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

N⁴,N⁶-비스(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (33 mg)를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 4N HCl 디에틸에테르용액 (0.2 mL) 을 첨가하고 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 디에틸에테르를 이용하여 씻어준 후 흰색 고체인 목적화합물 (28 mg, 93%, 0.055 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.31 (brs, 8H), 3.88 (brs, 8H), 7.32-7.37 (m, 1H), 7.28-7.49 (m, 6H), 7.71 (brs, 2H), 8.80 (brs, 1H), 10.34 (s, 1H), 10.45 (brs, 1H); LC/MS 473.04 [M + H⁺].

<실시예 31> N⁴-(3-아미노페닐)-N2-(4-모폴리노페닐)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민의 제조

단계 1: N¹-(2-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,3-디아민의 제조

2,4-디클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.53 mmol)를 디메틸설폭사이드 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (86 mg, 0.79 mmol) 과 디이소프로필에틸아민 (0.19 mL, 1.06 mmol) 을 첨가하고 100 ^oC에서 6시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (100 mg, 72%, 0.38 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 5.07 (s, 2H), 6.29 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.85-6.96 (m, 3H), 7.14 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 9.38 (s, 1H), 11.80 (s, 1H); LC/MS 260.09 [M + H⁺].

단계 2: N⁴-(3-아미노페닐)-N²-(4-모폴리노페닐)- 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,3-디아민의 제조

N¹-(2-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)벤젠-1,3-디아민 (100 mg, 0.39 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (111 mg, 0.46 mmol), Pd₂(dba)₃ (18 mg, 0.019 mmol), Xphos (9 mg, 0.019 mmol), 세슘카보네이트(372 mg, 1.16 mmol).을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 140 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼 하에서 헥산/에틸아세테이트을 이용, 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (31 mg, 21%, 0.077 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 2.98-2.99 (m, 4H), 3.69-3.71 (m, 4H), 4.87 (s, 2H), 6.21 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.79-6.84 (m, 3H), 6.88-6.94 (m, 1H), 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.37 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 11.04 (s, 1H); LC/MS 402.24 [M + H⁺].

<실시예 32> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N⁶-(3-아미노페닐)-N⁴-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

6-클로로-N-(4- 아미노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H- 피라졸로 [3,4-d]피리미딘-4- 아민 (100 mg, 0.24 mmol) 를 1,4-디옥산 (2 mL) 에 녹인 용액에 1,3-페닐렌디아민 (39 mg, 0.36 mmol), Pd₂(dba)₃ (11 mg, 0.012 mmol), Xphos (6 mg, 0.012 mmol), 세슘카보네이트(236 mg, 0.72 mmol)을 첨가하였다. 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 120 ^oC에서 20분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (62 mg, 53%, 0.065 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.60-1.80 (m, 2H), 1.88-1.93 (m, 1H), 2.00-2.15 (m, 1H), 2.52 (brs, 1H), 3.18-3.20 (m, 4H), 3.64-3.79 (m, 3H), 3.87-3.89 (m, 4H), 4.11-4.13 (m, 1H), 5.80 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.89-6.96 (m, 4H), 7.01 (brs, 1H), 7.06-7.11 (m, 1H), 7.19( brs, 1H), 7.35 (d, J = 9.0 Hz, 2H); LC/MS 487.00 [M+H⁺].

단계 2: N-(3-((4-((4-모폴리노페닐아미노)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로 [3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N⁶-(3-아미노페닐)-N⁴-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (50 mg, 0.10 mmol)를 디클로로메탄 (2 mL) 에 녹인 용액에 아크릴산 (0.008 mL, 0.12 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (30 mg, 0.16 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (21 mg, 0.16 mmol), 디이소프로필에틸아민 (0.04 mL, 0.21 mmol)을 첨가하고, 상온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물에 물을 가하여 반응을 종료시키고 디클로로메탄으로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (35 mg, 64%, 0.953 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.52 (brs, 2H), 1.77-1.81 (m, 2H), 1.96 (brs, 1H), 2.34-2.39 (m, 1H), 3.04 (brs, 4H), 3.72 (brs, 5H), 3.87-3.91 (m, 1H), 5.72-5.74 (m, 1H), 5.87-5.98 (m, 1H), 6.14-6.26 (m, 1H), 6.41-6.51 (m, 1H), 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.12-7.18 (m, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.99 (br, 1H), 8.74 (br, 1H), 9.25 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 10.04 (s, 1H); LC/MS 540.11 [M + H⁺].

단계 3: N⁶-(3-아미노페닐)-N⁴-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

N-(3-((4-((4-모폴리노페닐아미노)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로 [3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (30 mg) 를 메탄올 (1 mL) 에 녹인 용액에 염산 용액 (4 N, 디에틸에테르, 0.2 mL) 을 첨가하고 상온에서 30분 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후, 디에틸에테르을 이용하여 씻어준 후 흰색 고체인 목적화합물 (25 mg, 93%, 0.051 mmol)을 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.09 (brs, 4H), 3.74 (brs, 4H), 5.74 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.46-6.51 (m, 1H), 6.95 (brs, 2H), 7.23-7.52 (m, 3H), 7.62 (br, 2H), 7.81 (s, 1H), 8.60 (brs, 1H), 10.32 (s, 1H), 11.10 (brs, 1H); LC/MS 457.10 [M + H⁺], 913.89 [2M+H⁺].

<실시예 33> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: 2,6-디클로로-9-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-9H-퓨린의 제조

2,6-디클로로-9H-퓨린 (300 mg, 1.59 mol) 를 에틸아세테이트 (5 mL) 에 녹인 용액에 3,4-디히드로-2H-피란 (360 mg, 4.3 mol) 와 p-톨루엔설폰산 (8 mg, 0.05 mmol) 을 첨가하고 50 ^oC에서 2시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔컬럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (301 mg, 70%, 1.1 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.64-2.19 (m, 6H), 3.75-3.83 (m, 1H), 4.17-4.21 (m, 1H), 5.77 (dd, J = 2.4 Hz, 10.8 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H); LC/MS 273.08 [M+H⁺].

단계 2: N-(3-((2-클로로-9-(테트라히드로 -2H-피란-2-일)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

2,6-디클로로-9-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-9H-퓨린 (100 mg, 0.37 mmol)를 에탄올 (2 mL) 에 녹인 용액에 N-(3-아미노페닐)아크릴아미드 (65 mg, 0.40 mmol)와 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.92 mmol)을 첨가하고 80 ^oC에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 감압증류하고 물을 가한 후 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (78 mg, 56%, 0.19 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.26-1.75 (m, 3H), 1.93-2.10 (m, 3H), 3.69-3.76 (m, 1H), 4.11 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.66-5.72 (m, 2H), 6.26-6.43 (m, 2H), 7.19-7.28 (m, 1H), 7.37-7.46 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.33 (s, 1H); LC/MS 399.00 [M+H⁺], 797.31 [2M+H⁺].

단계 3: N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((2-클로로-9-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (50 mg, 0.13 mmol)를 HCl 용액 (0.08 M, ethoxy에탄올, 1.5 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (27 mg, 0.15 mmol)을 가한 후, 100 ^oC에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 냉각 시킨 후, 생성된 고체를 여과하여 에탄올로 씻은 후, 회색 고체인 목적화합물 (35 mg, 57%, 0.070 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.11 (brs, 4H), 3.78 (m, 4H), 5.76 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 17.1 Hz, 1H) 6.45-6.59 (m, 1H), 6.96-7.05 (m, 2H), 7.18-7.31 (m, 2H), 7.45-7.67 (m, 3H), 8.16 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 10.38 (s, 1H); LC/MS 457.19 [M + H⁺].

<실시예 34> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-(3-((2-클로로피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노페닐)페닐)아크릴아미드의 제조

2,4-디클로로피리도[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.49 mmol) 를 에탄올 (2 mL) 에 녹인 용액에 N-(3-아미노페닐)아크릴아미드 (81 mg, 0.49 mmol) 과 디이소프로필에틸아민 (0.22 mL, 1.25 mmol)을 첨가하고 상온에서 4시간 동안 교반시켰다. 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 씻은 후 엷은노란색 고체인 목적화합물 (126 mg, 78%, 0.38 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 5.75 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 1.8 Hz, 17.1 Hz, 1H), 6.41-6.50 (m, 2H), 7.53 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.63-7.67 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 9.00-9.04 (m, 2H), 10.25 (s, 1H), 10.45 (s, 1H); LC/MS 326.02 [M + H⁺], 651.10 [2M+H⁺].

단계 2: N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((2-클로로피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노페닐)페닐)아크릴아미드 (100 mg, 0.35 mmol) 과 염산 (0.08 M, 에톡시에탄올 용액, 3 mL)을 혼합한 후, 100 ^oC에서 45분 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 생성된 고체를 여과하고, 여과한 고체를 탄산수소나트륨 수용액에 녹인 후, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 노란색 고체인 목적화합물 (116 mg, 81%, 0.173 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 2.98 (brs, 4H), 3.70 (brs, 4H), 5.74 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.41-6.50 (m, 1H), 6.79-6.81 (m, 2H), 7.17-7.21 (m, 1H), 7.28-7.34 (m, 1H) 7.38 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.67 (brs, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.72-8.74 (m, 2H), 9.13 (brs, 1H), 9.82 (brs, 1H), 10.18 (s, 1H); LC/MS 467.18 [M + H⁺], 935.62 [2M+H⁺].

<실시예 35> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: 2-클로로-N-(4-모폴리노페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-4-아민의 제조

2,4-디클로로피리도[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.99 mmol) 를 에탄올 (2 mL) 에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (196 mg, 1.09 mmol) 과 디이소프로필에틸아민 (0.44 mL, 2.49 mmol)을 첨가하고 상온에서 6시간 동안 교반시켰다. 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 씻은 후 엷은초록색 고체인 목적화합물 (305 mg, 78%, 0.89 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.11-3.12 (m, 4H), 3.73-3.74 (m, 4H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.61-7.65 (m, 1H), 8.94 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 9.01 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 10.35 (s, 1H); LC/MS 341.98 [M + H⁺], 683.23 [2M+H⁺].

단계 2: N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

2-클로로-N-(4-모폴리노페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-4-아민 (50 mg, 0.15 mmol)) 를 디메틸아세트아미드 (3 mL)에 녹인 용액에 N-(3-아미노페닐)아크릴아미드 (28 mg, 0.18 mmol)을 첨가한 후 80 ^oC에서 6시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 생성된 고체를 여과하여 노란색 고체인 목적화합물 (38 mg, 56%, 0.081 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.09 (brs, 4H), 3.74 (brs, 4H), 5.76 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.45-6.54 (m, 1H), 6.91 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.23-7.28 (m, 1H), 7.35 (brs, 1H), 7.46 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.47-7.58 (m, 3H), 7.89 (brs, 1H), 8.80 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 9.14 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 10.36 (s, 1H), 10.46 (s, 1H), 10.94 (brs, 1H); LC/MS 468.12 [M + H⁺], 935.62 [2M+H⁺].

<실시예 36> N^2,N⁴-비스(4-모폴리노페닐)피리도[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민의 제조

2,4-디클로로피리도[2,3-d]피리미딘 (200 mg, 0.99 mmol) 를 에탄올 (2 mL)에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (196 mg, 1.1 mmol) 과 디이소프로필에틸아민 (0.44 mL, 2.49 mmol)을 첨가하고 상온에서 6시간 동안 교반시켰다. 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 씻은 후, 엷은초록색 고체인 목적화합물 (305 mg, 78%, 0.89 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.11-3.12 (m, 4H), 3.73-3.74 (m, 4H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.61-7.65 (m, 1H), 8.94 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 9.01 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 10.35 (s, 1H); LC/MS 341.98 [M + H⁺], 683.23 [2M+H⁺].

단계 2: N²,N⁴-비스(4-모폴리노페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-2,4-디아민의 제조

2-클로로-N-(4-모폴리노페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-4-아민 (50 mg, 0.15 mmol)) 를 디메틸아세트아미드 (3 mL)에 녹인 용액에 4-모폴리노아닐린 (32 mg, 0.18 mmol)을 첨가한 후, 80 ^oC에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 생성된 고체를 여과하여 노란색 고체인 목적화합물 (41 mg, 59%, 0.085 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.06-3.15 (m, 8H), 3.75-3.76 (m, 8H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.39-7.61 (m, 5H), 8.77 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 9.77 (br, 1H), 10.41 (br, 1H); LC/MS 484.24 [M + H⁺], 968.02 [2M+H⁺].

<실시예 37> N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: 1-(4-(4-((3-메틸-4-((3-니트로페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄온의 제조

t-부탄올 (2 mL)에 6-클로로-3-메틸-N-(3-니트로페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (50 mg, 0.12 mmol)을 녹이고, 1-(4-(4-아미노페닐)피페라진-1-일)에탄온 (36 mg, 0.16 mmol)과 Pd₂(dba)₃(1.2 mg, 0.0013 mmol), XPhos (1.7 mg, 0.0038 mmol), 탄산칼륨(43 mg, 0.31 mmol)을 가하고, 질소를 충전시킨 후, 90 ^oC에서 14 시간 동안 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (32 mg, 43.5%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.58 (s, 1H), 7.95-7.93 (d, 2H), 7.49-7.44 (d, 2H), 6.99-6.95 (d,2H), 6.91-6.88 (d, 2H), 5.77-5.74 (d, 1H), 4.15-4.13 (d, 1H), 3.82-3.75 (t, 3H), 3.65-3.62 (t, 3H), 3.16-3.09 (m, 4H), 2.66 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.92-1.87 (d, 1H), 1.80-1.69 (m, 5H).

단계 2: 1-(4-(4-((4-((3-아미노페닐)아미노)-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-필란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)필페라진-1-일)에탄온의 제조

메탄올 (2 mL)에 1-(4-(4-((3-메틸-4-((3-니트로페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄온 (30 mg, 0.052 mmol)을 녹인 후, Zn (17 mg, 0.26 mmol), 암모늄포메이트 (17 mg, 0.26 mmol)을 가하고, 상온에서 4시간 교반하였다. 반응 종료 후, 필터하고, 여액을 농축한 뒤, 에틸아세테이트/물을 가하여 생성물을 유기층으로 추출한 후, 유기층을 건조하고, 농축하여, 생성물을 얻고, 정제 하지 않고 다음 반응을 진행하였다.

단계 3: N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

디클로로메탄 (4 mL)에 1-(4-(4-((4-((3-아미노페닐)아미노)-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-필란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)필페라진-1-일)에탄온 (22 mg, 0.041 mmol)을 가하고, 여기에 아크릴산 (3.1 uL, 0.045 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (32 mg, 0.21 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (28 mg, 0.21 mmol), 디이소프로필에틸아민 (38 mL, 0.21mmol)을 모두 가한 후, 상온에서 14 시간 동안 교반한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (2.7 mg, 3.3%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.25 (b, 1H), 7.59-7.56 (d, 2H), 7.43 (b, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 6.94-6.93 (d, 2H), 6.87 (s, 1H), 6.51-6.47 (d, 1H), 6.30-6.25 (q, 1H), 5.81-5.77 (t, 2H), 4.17-4.16 (d, 1H), 3.81-3.77 (t, 4H), 3.66-3.61 (m, 4H), 3.16-3.11 (m, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.17 (s, 1H), 1.80-1.69 (m, 5H).

단계 4: N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐) 아미노)-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (4 mg 0.0067 mmol)를 메탄올 (1 mL)에 가하고, 여기에 염산 (4M, 1,4-디옥산, 1 mL)을 가하고, 15분간 상온에서 교반 한다. 반응이 종결되면 용매를 제거하고, 에테르로 재결정하여 목적화합물을 얻었다. (3.2 mg, 93%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 7.85 (s, 1H), 7.67-7.55 (d, 2H), 7.49-.7.33 (m, 2H), 7.29-7.19 (m, 3H), 6.47-6.38 (m, 2H), 5.83-5.77 (d, 1H), 4.17-4.16 (d, 1H), 3.81-3.77 (t, 4H), 3.66-3.61 (m, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.17 (s, 1H), 1.80-1.69 (m, 5H).

<실시예 38> N-(3-((6-((4-(1-메틸-5, 6-디히드로-1, 2, 4-트리아진-4(1H)-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (50 mg, 0.13 mmol) 과 HCl (0.08 M, 에톡시에탄올 용액, 1.3 mL) 을 혼합한 후 4-(1-메틸-5,6-디히드로-1,2,4-트리아진-4(1H)-일)아닐린 (27 mg, 0.15 mmol)을 첨가하고, 100 ^oC에서 6시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 탄산수소나트륨 수용액을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (15 mg, 26%, 0.032 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 2.71 (s, 3H), 2.95-2.98 (m, 2H), 3.76-3.79 (m, 2H), 5.78 (dd, J = 3.0 Hz, 8.9 Hz, 1H), 6.39-6.43 (m, 2H), 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.27-7.33 (m, 1H), 7.40 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.01 (s, 1H), 8.30 (s, 1H); LC/MS 413.36 [M+H⁺].

<실시예 39> 1-(6-((6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-(6-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (100 mg, 0.37 mmol) 을 에탄올 (2 mL)에 녹인 용액에 1-(6-아미노인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (76 mg, 0.40 mmol) 과 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.92 mmol)을 첨가하고, 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 0 ^oC로 냉각하고, 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 세척하고, 흰색 고체인 목적화합물 (118 mg, 76%, 0.24 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.56-2.03 (m, 5H), 2.32-2.43 (m, 1H), 3.15-3.19 (m, 2H), 3.65-3.73 (m, 1H), 3.94 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.24-4.27 (m, 2H), 5.77-5.86 (m, 2H), 6.32 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.72-6.81 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.67 (brs, 1H), 8.38 (brs, 1H), 10.56 (s, 1H); LC/MS 425.16 [M + H⁺], 849.63 [2M+H⁺].

단계 2: 1-(6-((6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.12 mmol) 과 염산 (0.08M, 에톡시에탄올 용액, 1.2 mL) 을 혼합한 후 4-모폴리노아닐린 (25 mg, 0.14 mmol)을 첨가하고 90 ^oC에서 6시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 소디움바이카보네이트수용액을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (15 mg, 27%, 0.031 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 2.96-3.08 (m, 4H), 3.16-3.18 (m, 2H), 3.73-3.76 (m, 4H), 4.09-4.11 (m, 2H), 4.82 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 6.74-6.86 (m, 3H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 12.85 (s, 1H); LC/MS 483.29 [M + H⁺].

<실시예 40> 1-(6-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-(6-((2-클로로피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

2,4-디클로로피리도[2,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.50 mmol) 을 n-부탄올 (2 mL) 에 녹인 용액에 1-(6-아미노인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (103 mg, 0.55 mmol) 과 디이소프로필에틸아민 (0.22 mL, 1.25 mmol)을 첨가하고 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 0 ^oC로 식힌 후 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 씻어 노란색 고체인 목적화합물 (166 mg, 95%, 0.47 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.19 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.28 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.85 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.73-6.82 (m, 1H), 7.31 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.65-7.69 (m, 1H), 8.46 (s, 1H), 9.03-9.05 (m, 2H), 10.52 (s, 1H); LC/MS 351.16 [M + H⁺],703.41[2M+H⁺].

단계 2: 1-(6-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((2-클로로피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.14 mmol) 과 염산 (0.08M, 에톡시에탄올 용액, 1.4 mL)을 혼합한 후, 4-모폴리노아닐린 (30 mg, 0.17 mmol)을 첨가하고 90 ^oC에서 6시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 탄산수소나트륨 수용액을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼크로마토그라피로 정제하여 노란색 고체인 목적화합물 (25 mg, 36%, 0.051 mmol)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.02 (br, 4H), 3.19 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.73-3.74 (m, 4H), 4.25 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.31 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.75-6.84 (m, 3H), 7.19-7.28 (m, 2H), 7.85 (brs, 3H), 8.32-8.40 (m, 1H), 8.75-8.79 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.82 (s, 1H); LC/MS 494.29 [M + H⁺].

<실시예 41> N-(3-((6-((3-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (100 mg, 0.25 mmol) 과 염산 (0.08 M, 에톡시에탄올 용액, 2.5 mL)을 혼합한 후 3-모폴리노아닐린 (54 mg, 0.30 mmol)을 첨가하고, 90 ^oC에서 2시간 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 탄산수소나트륨 수용액을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 목적화합물 (26 mg, 0.057 mmol, 23%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.06 (brs, 4H), 3.74 (brs, 4H), 5.78 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 6.44-6.55 (m, 2H), 7.07-7.12 (m, 1H), 7.32-7.38 (m, 3H), 7.46 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.12 (s, 2H), 9.79 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 12.98 (s, 1H); LC/MS 457.26 [M + H⁺].

<실시예 42> N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 -4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (50 mg, 0.13 mmol) 을 1,4-디옥산 (2 mL)에 녹인 용액에 4-페녹시페닐보론산 (32 mg, 0.15 mmol) 와 탄산나트륨(40 mg, 0.37 mmol)수용액 (1 mL)을 첨가한 후, 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고, 마이크로웨이브반응기를 이용하여 110 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 냉각시킨 후, 물을 가하여 반응을 종료시키고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여, 흰색인 목적화합물 (49 mg, 0.092 mmol, 74%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.79-2.11 (m, 5H), 2.58-2.62 (m, 1H), 3.79-3.86 (m, 1H), 4.13-4.16 (m, 1H), 5.69 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.08 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 9.9 Hz, 17.1 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 7.01-7.11 (m, 4H), 7.14-7.16 (m, 1H), 7.21-7.26 (m, 2H), 7.34-7.39 (m, 3H), 7.55 (s, 1H), 7.69 (brs, 1H), 7.88 (s, 2H), 8.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H); LC/MS 533.41 [M+H⁺].

단계 2: N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (30 mg) 을 메탄올 (1 mL) 와 디에틸에테르 (2 mL)에 녹인 용액에 염산 (5 M, 에틸에테르, 2 mL) 용액을 혼합하고, 상온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류한 후, 탄산수소나트륨 수용액을 가하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후, 실리카겔 칼럼크로마토그라피로 정제하여, 흰색 고체인 목적화합물 (15 mg, 0.033 mmol, 60%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 5.76 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 9.9 Hz, 17.1 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.37-7.49 (m, 3H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.34 (br, 1H), 8.51 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.58 (s, 1H); LC/MS 449.23 [M + H⁺].

<실시예 43> 1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 1-(6-((6-클로로-1-(1-테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

4,6-디클로로-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.83 mmol) 을 에탄올 (5 mL) 에 녹인 용액에 1-(6-아미노인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (380 mg, 2.01 mmol) 와 트리에틸아민 (0.64 mL, 4.6 mmol)을 첨가하고 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 0 ^oC로 냉각시킨 후, 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 씻은 후, 흰색 고체인 목적화합물 (770 mg, 1.8 mmol, 76%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.57-2.03 (m, 5H), 2.33-2.44 (m, 1H), 3.52-3.21 (m, 2H), 3.65-3.74 (m, 1H), 3.94-3.98 (m, 1H), 4.25-4.30 (m, 2H), 5.78-5.87 (m, 2H), 6.33 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 11.1 Hz, 16.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.65 (br, 1H), 8.39 (br, 2H), 10.57 (s, 1H); LC/MS 425.23 [M + H⁺], 849.83 [2M+H⁺].

단계 2: 1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((6-클로로-1-(1-테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.12 mmol) 을 1,4-디옥산 (2 mL)에 녹인 용액에 (4- 페녹시페닐 보론산 (30 mg, 0.14 mmol), 탄산나트륨(37 mg, 0.35 mmol) 수용액 (1 mL), PdCl₂(PPh₃)₂ (6 mg, 0.008 mmol)을 첨가한 후, 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 110 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후에 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (30 mg, 0.054 mmol, 46%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.71-2.17 (m, 5H), 2.55-2.58 (m, 1H), 3.16-3.19 (m, 2H), 3.77-3.84 (m, 1H), 4.11-4.14 (m, 3H), 5.62 (brs, 1H), 6.07 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 10.5 Hz, 1H), 6.41 (brs, 2H), 8.39 (brs, 2H), 7.08-7.17 (m, 6H), 7.35-7.40 (m, 2H), 7.61 (brs, 2H), 8.52-8.55 (m, 3H); LC/MS 475.33 [M+H⁺], 950.00 [2M+H⁺].

단계 3: 1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (25 mg, 0.051 mmol)을 메탄올 (1 mL) 와 디에틸에테르 (2 mL)에 녹인 용액에 염산 (5 N, 디에틸에테르, 0.2 mL)용액을 혼합하고, 상온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류한 후 탄산수소나트륨 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 컬럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (20 mg, 0.042 mmol, 95%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 3.15-3.19 (m, 2H), 4.26-4.31 (m, 2H), 5.81 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 11.1 Hz, 17.1 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.21-7.26 (m, 1H), 7.30 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 7.45-7.49 (m, 2H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.32 (brs, 1H), 8.57 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 9.04 (brs, 1H), 10.06 (s, 1H), 13.60 (s, 1H); LC/MS 475.33 [M+H⁺], 950.00 [2M+H⁺].

<실시예 44> 1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

단계 1: 4, 6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘의 제조단계 1: 4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘의 제조

4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 2.46 mmol)을 에틸아세테이트 (5 mL) 에 녹인 용액에 3,4-디히드로-2H-피란 (0.61 mL, 0.56 mmol) 와 p-톨루엔설폰산 (13 mg, 0.074 mmol)을 첨가한 후, 반응혼합물을 50 ^oC에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (700 mg, 2.5 mmol, 99%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.58-2.04 (m, 5H), 2.36-2.40 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 3.69-3.77 (m, 1H), 3.94-3.98 (m, 1H), 5.88 (d, J = 9.6 Hz, 1H); LC/MS 287.22 [M + H⁺].

단계 2: 1-(6-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.74 mmol) 을 에탄올 (5 mL) 에 녹인 용액에 1-(6-아미노인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (361 mg, 1.92 mmol) 와 트리에틸아민 (0.61 mL, 4.4 mmol)을 첨가하고 상온에서 4시간 교반시켰다. 반응혼합물을 0 ^oC로 식힌 후 생성된 고체를 여과하고 에탄올로 세척시킨 후, 흰색 고체인 목적화합물 (710 mg, 1.62 mmol, 76%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 1.56-2.00 (m, 5H), 2.35-2.39 (m, 1H), 2.63 (m, 3H), 3.16-3.22 (m, 2H), 3.68-3.69 (m, 1H), 3.93-3.97 (m, 1H), 4.26-4.29 (m, 2H), 5.72 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.74-6.77 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.21 (s, 1H); LC/MS 439.25 [M+H⁺], 877.84 [2M+H⁺].

단계 3: 1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (50 mg, 0.11 mmol) 을 1,4-디옥산 (2 mL)에 녹인 용액에 4-페녹시페닐 보론산 (29 mg, 0.14 mmol), Na₂CO₃ (36 mg, 0.34 mmol) 수용액(1 mL), PdCl₂(PPh₃)₂ (6 mg, 0.008 mmol)을 첨가한 후, 반응혼합물을 아르곤으로 10분 동안 디가싱 (degassing) 하고 마이크로웨이브반응기를 이용하여 110 ^oC에서 10분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 상온으로 식힌 후, 물을 가하여 반응을 종료시키고 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매를 제거한 후, 실리카겔 칼럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (53 mg, 0.093 mmol, 82%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.60-2.14 (m, 5H), 2.55-2.66 (m, 1H), 2.73 (s, 3H), 3.18-3.23 (m, 2H), 3.78-3.85 (m, 1H), 4.11-4.24 (m, 3H), 5.78 (brs, 1H), 6.13 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.35-6.93 (m, 2H), 7.01 (s, 1H), 7.06-7.16 (m, 5H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.34-7.39 (m, 2H), 7.78 (brs, 1H), 8.54-8.56 (m, 3H); LC/MS 473.49 [M+H⁺].

단계 4: 1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온의 제조

1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온 (40 mg) 을 메탄올 (1 mL) 와 디에틸에테르 (2 mL)에 녹인 용액에 염산 (5 N, 디에틸에테르, 0.2 mL) 용액을 혼합하고 상온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응혼합물을 감압증류한 후 탄산수소나트륨 수용액을 가하고, 에틸아세테이트로 두 번 추출하였다. 추출한 유기층을 황산마그네슘으로 건조 시킨 후, 여과한 다음, 감압증류 하여 용매 제거한 후 실리카겔 컬럼으로 정제하여 흰색 고체인 목적화합물 (15 mg, 0.031 mmol, 44%)를 얻었다.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 2.73 (s, 3H), 3.18 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 5.79 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 9.9 Hz, 16.2 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.20-7.29 (m, 2H), 7.39-7.48 (m, 3H), 7.39-7.48 (m, 3H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.64 (s, 1H), 8.91 (br, 1H), 13.21 (s, 1H); LC/MS 489.36 [M + H⁺], 978.08 [2M+H⁺].

<실시예 45> N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: 6-클로로-3-메틸-N-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민의 제조

4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (200 mg, 0.69 mmol)을 디메틸포름아미드 (1 mL)에 가하고, 4-모폴리노아닐린 (149 mg, 0.84 mmol), 탄산칼륨(241 mg, 1.7 mmol)을 가하고, 상온에서 14시간 동안 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.33-7.27 (d, 2H), 6.99-6.96 (d, 2H), 5.78-5.74 (m, 1H), 4.13-4.11 (m, 2H), 3.62-3.58 (m, 2H), 3.17-3.14 (t, 4H), 2.62 (s, 3H).

단계 2: 3-메틸-N⁴-(4-모폴리노페닐)-N⁶-(3-니트로페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

6-클로로-3-메틸-N-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (100 mg, 0.23 mmol)을 t-부탄올 (2 mL)에 가하고, 3-니트로아닐린 (36 mg, 025 mmol), Pd₂(dba)₃ (1 mg, 0.023 mmol), X-phos (1 mg, 0.069 mmol), 탄산칼륨(67 mg, 0.48 mmol)을 넣고, 90 ^oC에서 14 시간 동안 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다.

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.81-7.79 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 7.47-7.42 (m ,4H), 7.37-7.32 (t, 1H), 6.90-6.87 (d, J = 8.94 Hz, 2H), 5.87-5.83 (d, J = 10.8 Hz, 1H), ), 4.13-4.11 (m, 2H), 3.62-3.58 (m, 2H), 3.89-3.86 (t, 4H), 3.17-3.14 (t, 4H), 2.62 (s, 3H), 2.09-2.02 (m, 4H),

단계 3: N⁶-(3-아미노페닐)-3-메틸-N⁴-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민의 제조

3-메틸-N⁴-(4-모폴리노페닐)-N⁶-(3-니트로페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (58 mg, 0.11 mmol)을 메탄올 (1 mL)에 가하고, 아연 (36 mg, 0.54 mmol), 암모늄포메이트 (35 mg, 0.55 mmol)을 가하고, 상온에서 4시간 교반한다. 반응 종료 후, 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축한 후, 다음 반응 진행한다.

단계 4: N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N⁶-(3-아미노페닐)-3-메틸-N⁴-(4-모폴리노페닐)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (40 mg, 0.080 mmol)을 디클로로메탄 (2 mL)에 가하고, 아크릴산 (7 mg, 0.096 mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노피리딘)카보디이미드 (23 mg, 0.12 mmol), 히드록시벤조트리아졸 (17 mg, 0.12 mmol), 디이소프로필에틸아민 (30 νL, 0.16 mmol)을 가한 뒤, 상온에서 12시간 교반한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (25 mg, 57%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.52-7.50 (d, J = 8.85 Hz, 2H), 7.24-7.12 (m, 4H), 6.95-6.92 (d, J = 8.85 Hz, 1H), 6.47-6.41 (m, 1H), 6.29-6.26 (m, 1H), 5.93-5.89 (m, 1H), 5.78-5.74 (m, 1H), 4.13-4.11 (m, 2H), 3.62-3.58 (m, 2H), 3.89-3.86 (t, 4H), 3.17-3.14 (t, 4H), 2.62 (s, 3H), 2.09-2.02 (m, 4H).

단계 5: N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (20 mg, 0.043 mmol)을 메탄올 (0.5 mL)에 가하고, 여기에 염산 (4 N, 디옥산, 1 mL)을 가한 다음, 상온에서 15분 교반 한다. 반응 종료 후, 감압 농축해서 화합물을 얻는다. (18 mg, 92%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.52-7.50 (d, J = 8.85 Hz, 2H), 7.24-7.12 (m, 4H), 6.95-6.92 (d, J = 8.85), 6.47-6.41 (m, 1H), 6.29-6.26 (m, 1H), 5.93-5.89 (m, 1H), 3.89-3.86 (t, 4H), 3.17-3.14 (t, 4H)

<실시예 46> N-(3-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라조로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

단계 1: N-(3-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)단계 1: N-(3-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

에탄올 (1 mL)에 4,6-디클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘(200 mg, 0.73 mmol), 트리풀루오르아세트산 (256 νL, 1.8 mmol)을 가하고 상온에서 14 시간 동안 교반 한다. 반응이 종결되면, 여과하여 목적화합물을 얻었다. (175 mg, 58%)

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.98 (s, 2H), 7.31-7.30 (d, 1H), 7.19-7.14 (t, 2H), 7.07-7.04 (d, 1H), 6.43-6.37 (d, 1H), 6.24-6.15 (q, 1H), 5.86-5.83 (d, 1H), 5.74-5.71 (d, 1H), 4.15-4.13 (d, 1H), 3.80-3.76 (t, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.05-2.04 (m, 2H), 1.89-1.76 (m, 4H).

단계 2: N-(3-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드의 제조

에톡시에탄올 (0.08 M HCl, 2 mL) 에 N-(3-((6-클로로-3-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드 (42 mg, 0.10 mmol)과 4-모폴리노아닐리 (19 mg, 0.10 mmol)을 가한 후, 110 ^oC에서 14 시간 동안 교반 한다. 반응이 종료되면 에틸아세테이트와 물로 추출한 다음, 유기층을 무수망초로 건조시키고, 여과, 농축하였다. 농축물을 관크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. (17 mg, 35%)

¹H NMR (300 MHz, MeOH) δ 8.05 (s, 1H), 7.51-7.48 (d, 3H), 7.38-7.30 (m, 3H), 6.83-6.81 (d, 2H), 6.42-6.38 (d, 2H), 5.77-5.75 (d, 1H), 3.79 (s, 4H), 3.02 (s, 4H), 2.61 (s, 3H).

하기 표 1 및 2에 상기 실시예 1 내지 46에서 제조한 화합물의 화학구조식을 정리하여 나타내었다.

실시예	화학구조	실시예	화학구조
1		2
3		4
5		6
7		8
9		10
11		12
13		14
15		16
17		18
19		20
21		22
23		24

실시예	화학구조	실시예	화학구조
25		26
27		28
29		30
31		32
33		34
35		36
37		38
39		40
41		42
43		44
45		46

<실험예 1> 접합 피리미딘 유도체의 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, BTK) 활성 억제 평가

본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체의 브루톤 티로신 키나제 활성 억제를 평가하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.

BTK 효소 평가는 BTK 효소저해 진단키트 (시스바이오, Codolet, 프랑스)를 사용하여 평가하였다. ATP(adenosine triphosphate), BTK, 펩타이드 (biotin-Aca-AAAEEIYGEI-NH2)와 본 발명에 따른 실시예 1-34 화합물을 가하고, 30분 동안 반응시키고, 여기에 EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid)를 가하여 반응을 정지시켰다. 여기서 EDTA 용액은 유로피움을 함유하는 항체 (antiphosphoresidue antibody) 와 스트랩타비딘-XL665 (SA-XL665, cisbio)룰 함유하고 있으며, 1시간 동안 인큐베이션 하고 형광도 (fluorescence)를 측정하여, 엔비젼 (Envision)리더로 337 nm에서 여기 (excitation) 되는 665와 620 nm의 발광도 (emission)를 측정하여 값을 정하였다. IC₅₀값은 그래패드 (GraphPad) 프리즘 (5 version)을 사용하여 구하였다. 여기서 커브는 간접적 (non-linear) 리그레션 모델로 로그함수와 반응값으로 구하였다.

<실험예 2> 접합 피리미딘 유도체의 TMD80 활성 억제 평가

본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체의 TMD80 활성 억제를 평가하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.

TMD8 세포들을 96-웰 플레이트에 나누고 (30% 정도 용액상태), 활성화합물을 처리하였다. 72시간 후에, WST-1 시약을 가하고, 흡광도 (450 nm)를 측정하였다. (Spectramax spectrometer, Molecular Devices, 미국). IC₅₀값은 그래패드 (GraphPad) 프리즘 (5 version)을 사용하여 구하였다. 여기서 커브는 간접적 (non-linear) 리그레션 모델로 로그함수와 반응값으로 구하였다.

실시예	Btk IC₅₀ (uM)	TMD80 IC₅₀ (uM)	실시예	Btk IC₅₀ (uM)	TMD80 IC₅₀ (uM)
1	0.46	1.2	24	0.035	10
2	0.048	1.5	25	10	2.2
3	1.1	2.5	26	0.21	0.23
4	1.7	10	27	0.092	0.76
5	0.0049	10	28	0.049	0.63
6	0.14	10	29	0.017	1.9
7	0.11	2.16	30	0.04	10
8	0.14	10	31	2.1	1.3
9	0.34	10	32	0.03	0.45
10	0.25	10	33	0.005	0.02482
11	0.21	0.01	34	2.5	2.8
12	0.017	0.07	35	10	4
13	0.17	10	36	10	10
14	0.008	0.18	37	0.005	0.01681
15	0.003	0.09	38	0.001	0.03213
16	0.03	0.14	39	0.001	0.1343
17	0.05	1.3	40	0.083	0.7965
18	0.01	5.06	41	0.008	0.1079
19	0.005	3.95	42	0.43	3.695
20	0.001	0.25	43	1.2	0.46
21	0.001	0.01	44	2.5	0.18
22	0.15	2	45	0.024	0.5672
23	1.5	1.7	46	0.0014	0.02258

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 10 μM 이하의 IC₅₀ 값으로 브루톤 티로신 키나제의 활성을 억제하고, 실시예 3, 5, 12, 14-21, 24, 27, 28, 30, 32, 33, 37-39, 41, 45 및 46 화합물은 0.05 μM 이하즉, 50 nM 이하의 낮은 IC₅₀ 값을 나타내어, 우수한 브루톤 티로신 키나제 활성 억제능을 나타냄을 알 수 있으며, 특히, 실시예 14, 15, 19-21, 33, 37-39 및 41 화합물은 0.008 μM, 즉, 8 nM 이하의 현저하게 IC₅₀ 값으로 브루톤 티로신 키나제 활성을 억제하는 것을 확인하였다.

또한, 본 발명에 따른 접합 피리미딘 유도체는 10 μM 이하의 IC₅₀ 값으로 TMD80의 활성을 억제하고, 실시예 11, 21, 27, 28 및 46 화합물은 0.05 μM 이하즉, 50 nM 이하의 낮은 IC₅₀ 값을 나타내어, 우수한 TMD80 활성 억제능을 나타내는 것을 확인하였다.

<제제예 1> 산제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<제제예 2> 정제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<제제예 3> 캡슐제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<제제예 4> 주사제의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎

만니톨 180 ㎎

Na₂HPO₄ㆍ2H₂O 26 ㎎

증류수 2974 ㎎

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.

<제제예 5> 건강식품의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 500ng

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70mg

비타민 E 1.0mg

비타민 0.13mg

비타민 B2 0.15mg

비타민 B6 0.5mg

비타민 B12 0.2mg

비타민 C 10mg

비오틴 10mg

니코틴산아미드 1.7mg

엽산 50mg

판토텐산 칼슘 0.5mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75mg

산화아연 0.82mg

탄산마그네슘 25.3mg

제1인산칼륨 15mg

제2인산칼슘 55mg

구연산칼륨 90mg

탄산칼슘 100mg

염화마그네슘 24.8mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<제제예 6> 건강음료의 제조

화학식 1로 표시되는 화합물 500ng

구연산 1000mg

올리고당 100g

매실농축액 2g

타우린 1g

정제수를 가하여 전체 900ml

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims

하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
<1> 1-(4-(4-((6-(p-톨릴아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온;
<2> 1-(4-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에탄-1-온;
<3> (R)-N-(1-(6-(4-모폴리노페닐아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;
<4> (S)-N-(1-(6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;
<5> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<6> 1-(4-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘 -1-일)프로페-2-엔-1-온;
<7> 4(R)-N-(1-(6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-3-일)아크릴아미드;
<8> (S)-1-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<9> 1-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로판-1-온;
<10> (S)-1-(3-((6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<11> 1-(4-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<12> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<13> 1-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<14> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<15> N-((1s, 4s)-4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<16> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<17> (R)-1-(3-((6-([1, 1'-디페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<18> (R)-1-(3-((6-((4-페녹시페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<19> (R)-1-(3-((6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<20> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<21> N-(3-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<22> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페닐) -1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<23> N-((1s, 4s)-4-((6-(4-페녹시페녹시)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<24> N-((1s, 4s)-4-((3-메틸-6-((4-(피페리딘-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<25> (R)-1-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)피롤리딘-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<26> N-((1s, 4s)-4-((6-([1, 1'-비페닐]-4-일아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<27> N-((1s, 4s)-4-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)시클로헥실)아크릴아미드;
<28> N-(2-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<29> N-(4-((6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<30> N^4,N⁶-bis(4-모폴리노페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4, 6-디아민;
<31> N⁴-(3-아미노페닐)-N2-(4-모폴리노페닐)-7H-피롤로[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민;
<32> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<33> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)-9H-퓨린-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<34> N-(3-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<35> N-(3-((4-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<36> N^2,N⁴-비스(4-모폴리노페닐)피리도[2, 3-d]피리미딘-2, 4-디아민;
<37> N-(3-((6-((4-(4-아세틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<38> N-(3-((6-((4-(1-메틸-5, 6-디히드로-1, 2, 4-트리아진-4(1H)-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<39> 1-(6-((6-((4-모포리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<40> 1-(6-((2-((4-모폴리노페닐)아미노)피리도[2, 3-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<41> N-(3-((6-((3-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<42> N-(3-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드;
<43> 1-(6-((6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<44> 1-(6-((3-메틸-6-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)인돌린-1-일)프로페-2-엔-1-온;
<45> N-(3-((3-메틸-4-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)아크릴아미드; 및
<46> N-(3-((3-메틸-6-((4-모폴리노페닐)아미노)-1H-피라조로[3,4-d]피리미딘-4-일)아미노)페닐)아크릴아미드.
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하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 3으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및
상기 단계 1에서 얻은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물의 제조방법:
[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,
n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및
는 제1항의 화합물명에서 정의된 바와 같고;
X¹ 및 X²는 각각 독립적으로 동일 또는 상이한 할로겐이고; 및
L¹은 수소,
또는
이다).
하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이,
화학식 3으로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및
상기 단계 1에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 4로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하는 제1항의 화합물군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물의 제조방법:
[반응식 2]

(상기 반응식 2에서,
n, A, D^1,D^2,D^3,R^1,R^2,R³ 및
는 제1항의 화합물명에서 정의된 바와 같고;
X¹ 및 X²는 각각 독립적으로 동일 또는 상이한 할로겐이고; 및
L¹은 수소,
또는
이다).
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, BTK)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제7항에 있어서,
상기 암은 혈액암, 난소암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 간암, 위암, 췌장암, 결장암, 복막 전이암, 피부암, 방광암, 전립선암, 갑상선암, 폐암, 골육종, 섬유성 종양 및 뇌종양으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제10항에 있어서,
상기 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, BTK)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제10항에 있어서,
상기 자가면역질환은 특징으로 류머티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 제1형 당뇨병, 갑상선 기능 항진증, 근무력증, 크론병, 강직성 척추염, 건선, 자가면역성 악성빈혈 및 쇼그렌 증후군으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.