CN111484484B - 含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其制备与应用 - Google Patents

含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其制备与应用 Download PDF

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    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Abstract

本发明涉及通式I所示的含芳杂环的2,4‑二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及通式I所示化合物为活性成分的药物组合物，其中取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6、X、Y、Z具有在说明书中给出的含义。本发明还涉及通式I的化合物具有强的ALK和ROS1激酶抑制作用，并且还涉及该类化合物及其光学异构体、药学上可接受的盐，在制备用于治疗和/或预防由于ALK和ROS1异常表达所引起疾病的药物中的应用，特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

Description

含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其制备与应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及所述化合物较强的ALK和ROS1激酶抑制作用及其在制备用于治疗和/或预防由于ALK和ROS1异常表达所引起疾病的药物中的应用，特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。
背景技术
激酶靶点药物的研究已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向，其中蛋白激酶类是已知研究最多的一类。由于蛋白激酶的突变或重排而引起的信号传导过程障碍或出现异常可导致细胞生长、分化、代谢和生物学行为异常，继而可诱发多种肿瘤。
蛋白激酶(Protein Kinases,PKs)，是一种通过ATP的末端磷酸酯转移催化蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上的羟基磷酸化的酶，主要包括蛋白酪氨酸激酶(Proteintyrosine kinase,PTK)和丝氨酸-苏氨酸激酶(Serine-threonine kinase,STK)。这些酶通过信号转导途径调节细胞生长、分化和增殖等。
间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)为胰岛素受体酪氨酸激酶家族中的一员，于1994年首次发现于间变性大细胞淋巴瘤AMS3细胞中，是一个由1620个氨基酸组成的单链跨膜蛋白。ALK在胚胎发育时期呈高表达水平，随后表达水平逐渐下降，成年时期少量表达。该蛋白由膜外部分、跨膜区域以及膜内催化区域组成，下游信号通路为Ras-ERK、JAK3-STAT3，以及PI3-K/Akt 等，这些通路与细胞增殖、存活、迁移密切相关。
1994年Morri等人发现，2号染色体上ALK基因与5号染色体上的核仁磷酸蛋白NPM(nucleophosmin)基因错位融合，该重排突变基因NPM-ALK具有致癌性。2007年日本科学家Soda等人首次在肺腺癌组织中发现了ALK基因突变：2号染色体短臂内发生倒置突变，使得棘皮动物微管相关蛋白4(EML4)基因的1～13号外显子与ALK基因的20～29号外显子融合形EML4-ALK融合基因转染了EML4-ALK融合基因的NIH-3T3成纤维细胞具有恶性转化能力。约有 3％～7％的NSCLC患者中存在EML4-ALK融合基因。此外，研究还表明ALK基因突变参与了多种肿瘤的发病，包括间变性大细胞淋巴瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、神经母细胞瘤。因此，靶向ALK抑制剂可以通过抑制ALK下游相关信号而达到抗肿瘤的目的。
c-ros肉瘤致癌因子受体酪氨酸激酶ROS1(ROS proto-oncogene 1)也是单体型受体酪氨酸激酶。ROS1基因的融合、过度表达和突变均会导致ROS1蛋白的失调。异常的ROS1蛋白激酶将会激活下游多条致癌信号通路，控制细胞增殖、存活和细胞周期的通路。ROS1高度表达于多种肿瘤细胞中，其与ALK氨基酸序列同源性为49％，ATP结合区的同源性高达77％。多种ALK抑制剂在体外均可抑制ROS1的活性。
本发明设计并合成了一系列含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物。经体外活性筛选，表明该类化合物具有明显的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
Figure BDA0002447676200000021
其中，
n＝1或2
X独立地为C、N、O或S，且可被R5取代；
Y独立地为C、N、O或S，且可被R4取代；
Z独立地为C、N、O或S，且可被R6取代；
R1为羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(C1-C6)烷基亚磺酰基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基酰基、(C1-C6)烷基酰氨基、(C1-C6) 烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C6)烷基取代的氨基甲(乙)酰基、被1-2个羟基(C1-C6) 烷基取代的氨基甲(乙)酰基、(C1-C3)亚烷基二氧基；
R2为卤素、卤代或未被卤代的(C1-C6)烷基、羟基、氰基、氨基、硝基；
R3为H、卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷硫基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C6)烷基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C6)烷氧基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C6)烷硫基；
R4为H、(C1-C6)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C6)烷基酰基或(C1-C6) 烷基磺酰基；
R5为H、(C1-C6)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C6)烷基酰基或烷基磺酰基；或NR7R8、NHmCOR7R8、NHmCONHmR7R8、SO2(CH2)mNR7R8、 SO2(CH2)mCONR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、(CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、 NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、NHmCO(CH2)pNHmR7R8、COR7；
R6为H、(C1-C6)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C6)烷基酰基或(C1-C6) 烷基磺酰基；或NR7R8、NHmCOR7R8、NHmCONHmR7R8、SO2(CH2)mNR7R8、 SO2(CH2)mCONR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、(CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、 NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、NHmCO(CH2)pNHmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、(C1-C10) 烷氧基、(C2-C10)烯基、(C2-C10)炔基、氰基、羧基、羟基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C10)烷基、羟基和/或氨基取代的(C1-C10)烷氧基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-10元杂环基或4-10元杂芳基，所述杂环基或杂芳基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-4个选自 N、O和/或S的杂原子，所述杂环基或杂芳基任选被0-3个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、(C1-C10)烷氧基、羟基、羧基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C10)烷基、羟基和/或氨基取代的(C1-C10)烷氧基、卤素、卤代(C1-C10)烷基、卤代(C1-C10)烷氧基、硝基；
m独立的是为0-2，p独立的是为0-6。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1或2
X独立地为C、N、O或S，且可被R5取代；
Y独立地为C、N、O或S，且可被R4取代；
Z独立地为C、N、O或S，且可被R6取代；
R1为羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、(C1-C3)烷基亚磺酰基、(C1-C3)烷基磺酰基、(C1-C3)烷氧基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷基酰基、(C1-C3)烷基酰氨基、(C1-C3) 烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C3)烷基取代的氨基甲(乙)酰基、被1-2个羟基(C1-C3) 烷基取代的氨基甲(乙)酰基、亚烷基二氧基；
R2为卤素、卤代或未被卤代的(C1-C3)烷基、羟基、氰基、氨基、硝基；
R3为H、卤素、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、(C1-C3)烷硫基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C3)烷基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C3)烷氧基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C3)烷硫基；
R4为H、(C1-C3)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C3)烷基酰基或(C1-C3) 烷基磺酰基；
R5为H、(C1-C3)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C3)烷基酰基或(C1-C3) 烷基磺酰基；或NR7R8、NHmCOR7R8、NHmCONHmR7R8、SO2(CH2)mNR7R8、 SO2(CH2)mCONR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、(CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、 NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、NHmCO(CH2)pNHmR7R8、COR7；
R6为H、(C1-C3)烷基、3-6元饱和或部分饱和碳环、(C1-C3)烷基酰基或(C1-C3) 烷基磺酰基；或NR7R8、NHmCOR7R8、NHmCONHmR7R8、SO2(CH2)mNR7R8、 SO2(CH2)mCONR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、(CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、 NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、NHmCO(CH2)pNHmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C3) 烷氧基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、氰基、羧基、羟基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷氧基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-10元杂环基或4-10元杂芳基，所述杂环基或杂芳基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-4个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基或杂芳基任选被0-3个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基、羧基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷氧基、卤素、卤代(C1-C3)烷基、卤代(C1-C3)烷氧基、硝基；
m独立的是为0-2，p独立的是为0-6。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X独立地为C、N、O或S，且可被R5取代；
Y独立地为C、N、O或S，且可被R4取代；
Z独立地为C、N、O或S，且可被R6取代；
R1为(C1-C3)烷基亚磺酰基、(C1-C3)烷基磺酰基、(C1-C3)烷氧基、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷基酰基、(C1-C3)烷基酰氨基、(C1-C3)烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C3) 烷基取代的氨基甲(乙)酰基、被1-2个羟基(C1-C3)烷基取代的氨基甲(乙)酰基、亚烷基二氧基；
R2为卤素、羟基、氰基、氨基、硝基；
R3为H、卤素、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C3)烷基、卤素或/和羟基或/和氨基取代的(C1-C3)烷氧基；
R4为H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷基酰基或(C1-C3)烷基磺酰基；
R5为H、(C1-C3)烷基；或NHmCONHmR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、 (CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、 NHmCO(CH2)pNHmR7R8、COR7；
R6为H、(C1-C3)烷基；或NHmCONHmR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pR7R8、 (CH2)pNmR7R8、CO(CH2)pR7R8、NHmCO(CH2)pR7R8、NHm(CH2)pCOR7R8、 NHmCO(CH2)pNHmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C3) 烷氧基、(C2-C4)烯基、(C2-C4)炔基、氰基、羧基、羟基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基或4-6元杂芳基，所述杂环基或杂芳基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-4个选自N、 O和/或S的杂原子，所述杂环基或杂芳基任选被0-2个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基、羧基、氨基、羟基和/或氨基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为0-2，p独立的是为0-6。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X独立地为C、N、O或S，且可被R5取代；
Y独立地为C、N、O或S，且可被R4取代；
Z独立地为C、N、O或S，且可被R6取代；
R1为(C1-C3)烷基酰氨基、(C1-C3)烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C3)烷基取代的氨基甲酰基；
R2为卤素、羟基、氰基；
R3为H、卤素、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基；
R4为H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷基酰基或(C1-C3)烷基磺酰基；
R5为H、NHmCONHmR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pNmR7R8、 NHmCO(CH2)pNHmR7R8、COR7；
R6为H、(C1-C3)烷基；或NHmCONHmR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pNmR7R8、 NHmCO(CH2)pNHmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C3-C6)环烷基、(C1-C3) 烷氧基、羟基取代的(C1-C3)烷基、羟基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-2个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为0-1，p独立的是为0-3。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X独立地为C或N，且可被R5取代；
Y为N，且可被R4取代；
Z独立地为C或N，且可被R6取代；
R1为(C1-C3)烷基酰氨基、(C1-C3)烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C3)烷基取代的氨基甲酰基；
R2为卤素；
R3为H；
R4为H；
R5为NHmCONHmR7R8、CONHmR7R8、(CH2)pNmR7R8、COR7；
R6为(C1-C3)烷基；或(CH2)pNmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基取代的(C1-C3)烷基、羟基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-1个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为0-1，p独立的是为0-3。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X独立地为C或N，且可被R5取代；
Y为N，且可被R4取代；
Z独立地为C或N，且可被R6取代；
R1为乙酰氨基、甲磺酰氨基、N-甲基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基；
R2为Cl；
R3为H；
R4为H；
R5为CONHmR7R8、COR7；
R6为甲基；或(CH2)pNmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基取代的(C1-C3)烷基、羟基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-1个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为0-1，p独立的是为0-3。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X为N；
Y为N，且可被R4取代；
Z为C，且可被R6取代；
R1为乙酰氨基、甲磺酰氨基、N-甲基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基；
R2为Cl；
R3为H；
R4为H；
R6为(CH2)pNmR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、羟基取代的(C1-C3) 烷基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-1个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为1，p独立的是为1。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X为N；
Y为N，且可被R4取代；
Z为C，且可被R6取代；
R1为乙酰氨基、甲磺酰氨基、N-甲基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基；
R2为Cl；
R3为H；
R4为H；
R6为
Figure BDA0002447676200000061
Figure BDA0002447676200000062
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X为C，且可被R5取代；
Y为N，且可被R4取代；
Z为C，且可被R6取代；
R1为甲磺酰氨基、N-甲基氨基甲酰基；
R2为Cl；
R3为H；
R4为H；
R5为CONHmR7R8、COR7；
R6为甲基；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基取代的(C1-C3)烷基、羟基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-1个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个相同或不同的R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
m独立的是为1。
本发明涉及通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，
其中，
n＝1
X为C，且可被R5取代；
Y为N，且可被R4取代；
Z为C，且可被R6取代；
R1为甲磺酰氨基、N-甲基氨基甲酰基；
R2为Cl；
R3为H；
R4为H；
R5为
Figure BDA0002447676200000071
Figure BDA0002447676200000072
R6为甲基。
本发明化合物及其光学异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药优选以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-(5-氯-2-((2-(((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)乙酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯基甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)乙酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基) 苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N-甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)乙酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-羟基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-(((2-((二异丙基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基) 苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)–N,N-二甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3- 羧酸乙酯
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3- 羧酸甲酯
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N-(2-羟乙基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-乙基哌嗪-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基) 苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基) 苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(硫代吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吡咯烷-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基) 苯基)甲磺酰胺
(R)-N-(2-((5-氯-2-((3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H- 吲哚-3-羧酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N- 甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N-二乙基-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3- 羧酸
而且，按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明中通式I的含芳杂环的 2,4-二芳氨基嘧啶衍生物可以与酸生成药学上可接受的盐。可药用加成盐包括无机酸和有机酸加成盐，与下列酸加成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。
此外，本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是通式Ⅰ的嘧啶类衍生物，通过含羟基的R5或R6基团与羧基化合物成酯后得到的(酯类前药)。它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
本发明中“卤素”是指氟、氯、溴或碘代；“烷基”是指直链、支链的烷基或环烷基；“亚烷基”是指直链或支链的亚烷基。
我们已发现本发明化合物体外具有抑制肿瘤细胞生长活性，因此，它可以用作制备治疗和/或预防癌症的药物，如乳腺、肺、肝脏、肾脏、结肠、直肠、胃、***、膀胱、子宫、胰腺、骨髓、睾丸、卵巢、淋巴、软组织、头颈、甲状腺、食道的癌和白血病、成神经细胞瘤等。
通过体外抑制高表达NPM-ALK蛋白的人间变性大细胞淋巴瘤细胞 Karpas299和高表达EML4-ALK蛋白的人肺腺癌细胞NCI-H2228的活性试验，本发明化合物对肺癌细胞、淋巴癌细胞具有显著抑制作用，特别用于制备治疗和 /或预防肺癌和淋巴癌的药物。
本发明的活性化合物或其可药用盐及其溶剂化物可作为唯一的抗肿瘤药物单独使用，或者可以与现已上市的抗肿瘤药物(如铂类药物顺铂、喜树碱类药物伊立替康、长春碱类药物诺维本等)联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不足以任何方式限制本发明的范围。
下面的合成路线概括并描述了本发明的式Ⅰ衍生物的制备，所有的原料都是通过这些路线中描述的方式、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终衍生物都是通过这些路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些路线中应用的全部可变因素如下文的定义或如权利要求中的定义。
Figure BDA0002447676200000111
按照本发明的式Ⅰ衍生物，都可按照路线1、路线2的方法由中间体M-1 与M-2在相应溶剂中发生亲核取代反应或中间体M-3和相应的HNR7R8在相应溶剂中，通过N-酰化反应制得。其中，化合物中的R1、R2、R3、R4、R6、R7和 R8如权利要求中所定义。
Figure BDA0002447676200000112
中间体M--1可按照路线3由中间体XII与取代的二氯嘧啶缩合得到。其中，化合物中的R1和R2如权利要求中所定义。
中间体M-2可按照路线4由中间体XIII与氯乙酸环合得到中间体XIV，再与相应的小分子胺发生N-烃化反应得到中间体XV，最后经硝基还原得到。其中，化合物中的R3、R4、R7和R8如权利要求中所定义，还原方法包括氢气/Pd-C/醇体系、水合肼/三氯化铁六水合物/活性炭/醇体系、金属/酸或氯化铵体系、氯化亚锡二水合物/醇体系。
中间体M-3可按照路线5由中间体XVI与R6取代的酰基乙酸甲/乙酯发生取代反应得到中间体XVII，后经还原方法得到中间体XVIII，再与中间体M-1 发生亲核取代反应得中间体XIX，最后经水解方法得到。其中，化合物中的R1、 R2、R3和R6如权利要求中所定义，还原方法包括氢气/Pd-C/醇体系、水合肼/三氯化铁六水合物/活性炭/醇体系、金属/酸或氯化铵体系、氯化亚锡二水合物/醇体系。水解方法包括如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂在内的无机碱与醇/水或四氢呋喃组成的溶剂体系。
当R1为甲磺酰氨基或乙酰氨基时，R2为Cl时，中间体M1-1和M2-1的制备方法如路线6所示。
Figure BDA0002447676200000121
当R1为N-甲基氨基甲酰基或N,N-二甲基氨基甲酰基时，R2为Cl时，中间体M3-1和M4-1的制备方法如路线7所示。
Figure BDA0002447676200000122
当R3为H，R4为H时中间体M-2的制备方法如路线8所示。
Figure BDA0002447676200000123
当R1为甲磺酰氨基或N-甲基氨基甲酰基时，R3为H，R6为甲基时中间体 M1-3和M2-3的制备方法如路线9所示。
Figure BDA0002447676200000131
具体实施方式：
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。化合物的核磁共振氢谱用BrukerARX-400测定，质谱用Agilent 1100LC/MSD测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
Figure BDA0002447676200000132
其中R2为Cl，R3为H，R4为H，Z为C，n＝1。
表一
Figure BDA0002447676200000133
Figure BDA0002447676200000141
Figure BDA0002447676200000151
实施例1：
步骤A N-(2,5-二氯嘧啶-4基)-1,2-二苯胺(III)
将30.00g(0.16mol)邻苯二胺(II)和17.70g(0.16mol)2，4，5-三氯嘧啶加入至300mL干燥的异丙醇(i-PrOH)中，缓慢加入42.30g(0.33mol) N,N-二异丙基乙胺，升温至80℃反应1.5h。趁热抽滤，得白色粉末固体37.35g，收率89.7％。
步骤B N-(2–((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺(M1-1)
冰浴条件下，将10g(0.04mol)中间体III和9.3g(0.12mol)吡啶(Py) 加入到50mL干燥的四氢呋喃中，缓慢滴加5.4g(0.05mol)甲基磺酰氯。滴毕，室温反应2.5小时，抽滤，四氢呋喃(10mL×3)洗涤，得白色粉末固体11.7g，收率89.3％。
步骤C 2-(氯甲基)-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑(VI)
室温下，将10.0g(0.07mol)4-硝基邻苯二胺(V)，12.3g(0.13mol)氯乙酸和50mL水加入到133mL浓盐酸中，回流反应4h。将反应液放置室温，用氨水调pH＝9，抽滤得橙红色固体，所得固体用甲醇重结晶得淡黄色固体8.9g，收率64.5％。
步骤D 2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑(VII-1)
室温下，将9.0g(0.04mol)VI溶于100mL四氢呋喃(THF)中，加入8.5 g(0.09mol)N-甲基哌嗪和11.8g(0.09mol)无水碳酸钾，50℃反应2小时。将反应液冷却至室温后倒入20mL水中搅拌30分钟后，抽滤得到浅褐色固体8.0 g，收率68.3％
步骤E 2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M1-2)
室温下，将5.0g(0.02mol)VII-1溶于50mL 90％的乙醇溶液中，加入0.74 g(2.7mmol)六水合三氯化铁、0.07g(5.5mmol)活性炭粉。温度升高至40℃后滴加50mL 80％水合肼，滴毕升温至回流反应1小时。趁热抽滤，将滤液蒸干得灰白色固体4.3g，收率97.0％
步骤F N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺(实施例I)
室温下，将0.7g(2.9mmol)M1-2溶于10mL异丙醇中，加入0.85g(2.9 mmol)M1-1与0.50g(2.9mmol)对甲苯磺酸，80℃反应6小时。将反应液放置室温加入20mL水，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝8，用60mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相蒸干得浅褐色固体0.46g，收率31.9％，柱层析得浅黄色固体。
m.p.:232.5-233.4℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):542.38；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ9.27(s,1H),8.74(s,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),8.15(s,1H),7.78(s,1H),7.35 (d,J＝5.8Hz,2H),7.33(s,2H),7.13(d,J＝7.0Hz,1H),7.09(dd,J＝7.5,1.7Hz, 2H),3.67(s,2H),2.89(s,3H),2.50–2.42(m,3H),2.38(s,4H),2.18(s,4H).
实施例2N-(2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基) 氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与N-羟乙基哌嗪发生N-烃化反应制备得到2-(4-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙基-1-醇 (VII-2)。收率为83.0％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-2为原料，通过还原反应得到2-(4-((6- 氨基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)哌嗪-1-基)乙基-1-醇(M2-2)，收率为97.8％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M2-2为原料，制备实施例2，收率80.5％。
m.p.:237.6-240.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):572.46；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.05(s,1H),9.27(s,1H),8.63(s,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),8.15(s,1H),7.76 (s,1H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),7.32(s,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.12(t,J＝7.0 Hz,1H),4.38(s,1H),3.66(s,2H),3.50(d,J＝4.0Hz,2H),3.47(d,J＝6.1Hz,2H), 2.92(s,3H),2.47(s,4H),2.39(t,J＝6.2Hz,4H).
实施例3 N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与二甲胺(40％水溶液)发生N-烃化反应制备得到N,N-二甲基-1-(6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺 (VII-3)。收率为96.2％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-3为原料，通过还原反应得到2-((二甲氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M3-2)，收率为92.6％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M3-2为原料，制备实施例3，收率95.9％。
m.p.:212.3-215.1℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):487.28；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.14(s,1H),9.27(s,1H),8.57(s,1H),8.16(s,1H),8.15(s,1H),7.74(s,1H), 7.36(d,J＝7.8Hz,2H),7.33(s,1H),7.29(d,J＝9.7Hz,1H),7.25(d,J＝7.7Hz, 1H),7.16(t,J＝7.1Hz,1H),3.63(s,3H),2.94(s,2H),2.24(s,6H).
实施例4 N-(2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与六氢吡啶(哌啶)发生 N-烃化反应制备得到6-硝基-2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑(VII-4)。收率为85.7％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-4为原料，通过还原反应得到2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M4-2)，收率为90.5％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M4-2为原料，制备实施例4，收率91.7％。
m.p.:228.5-230.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):527.35；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.04(s,1H),9.26(s,1H),8.63(s,1H),8.18(d,J＝8.0Hz,1H),8.15(s,1H),7.75 (s,1H),7.35(dd,J＝7.8,1.2Hz,2H),7.32(s,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(t,J ＝7.1Hz,1H),3.63(s,2H),2.92(s,3H),2.41(s,4H),1.55–1.52(m,4H),1.40(d,J ＝4.4Hz,2H).
实施例5 N-(2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与N-乙基哌嗪发生N-烃化反应制备得到2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑(VII-5)。收率为83.0％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-5为原料，通过还原反应得到2-((4- 乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M5-2)，收率为92.2％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M5-2为原料，制备实施例5，收率81.9％。
m.p.:232.9-234.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):556.48；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.03(s,1H),9.28(s,1H),8.64(s,1H),8.18(d,J＝7.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.77 (s,1H),7.35(d,J＝7.7Hz,2H),7.32(s,1H),7.19(dd,J＝15.2,7.3Hz,2H),7.15– 7.09(m,1H),3.57(s,2H),2.93(s,3H),2.85(dd,J＝14.3,7.1Hz,2H),2.44(s,4H), 2.40–2.27(m,4H),0.99–0.97(m,3H).
实施例6 N-(2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与四氢吡咯发生N-烃化反应制备得到6-硝基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑(VII-6)。收率为85.9％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-6为原料，通过还原反应得到2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M6-2)，收率为95.0％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M6-2为原料，制备实施例6，收率85.5％。
m.p.:215.9-219.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):513.40；1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ12.08(s,1H),9.26(s,1H),8.65(s,1H),8.19(d,J＝7.5Hz,1H),8.15(s,1H),7.75 (s,0H),7.34(d,J＝7.5Hz,2H),7.33(s,2H),7.18(t,J＝7.1Hz,1H),7.11(t,J＝7.5 Hz,1H),3.79(s,2H),2.92(s,3H),2.54(s,4H),1.73(s,4H).
实施例7 N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与4-甲基哌啶发生N-烃化反应制备得到2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-6-硝基-1H-苯并[d]咪唑(VII-7)。收率为76.9％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-7为原料，通过还原反应得到2-((4- 甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M7-2)，收率为93.9％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M7-2为原料，制备实施例7，收率89.6％。
m.p.:219.6-221.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):541.48；1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ12.07(s,1H),9.24(s,1H),8.98(s,1H),8.30(s,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H), 7.34(s,2H),7.27(d,J＝7.8Hz,2H),6.95(t,J＝7.3Hz,1H),6.89(s,1H),3.65(s, 2H),2.83(s,3H),2.80(s,4H),2.04(t,J＝11.1Hz,2H),1.59(d,J＝11.9Hz,2H), 1.19(dd,J＝10.6,1.4Hz,1H),0.90(d,J＝6.5Hz,3H).
实施例8 N-(2-((5-氯-2-((2-((4-羟基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与4-羟基哌啶发生N-烃化反应制备得到1-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)哌啶-4-醇(VII-8)。收率为 97.0％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-8为原料，通过还原反应得到1-((6- 氨基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)哌啶-4-醇(M8-2)，收率为95.0％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M8-2为原料，制备实施例8，收率83.2％。
m.p.:240.2-243.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):543.57；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.09(s,1H),9.29(s,1H),8.50(s,1H),8.18(s,1H),8.13(d,J＝7.8Hz,1H),7.77 (s,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,2H),7.33(s,2H),7.30(d,J＝8.5Hz,1H),7.19(t,J＝7.1 Hz,1H),4.66(s,1H),3.77(s,1H),2.97(s,3H),2.81(s,2H),2.30(s,2H),1.76(d,J ＝11.2Hz,2H),1.48(d,J＝9.2Hz,2H).
实施例9N-(2-((5-氯-2-((2-((二异丙基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与二异丙胺发生N-烃化反应制备得到N-异丙基-N-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)丙烷-2-胺(VII-9)。收率为70.2％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-9为原料，通过还原反应得到2-((二异丙基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M9-2)，收率为89.0％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M9-2为原料，制备实施例9，收率75.2％。
m.p.:240.2-243.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):543.60；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.56(s,1H),9.26(s,1H),8.69(s,1H),8.21(d,J＝6.1Hz,1H),8.14(s,1H),7.78 (s,1H),7.34(d,J＝6.6Hz,2H),7.30(s,2H),7.12(dd,J＝11.6,8.1Hz,2H),3.79(s, 2H),3.04(d,J＝6.1Hz,2H),2.91(s,3H),1.03(d,J＝5.8Hz,12H).
实施例10 N-(2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与吗啉发生N-烃化反应制备得到4-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)吗啉(VII-10)。收率为91.5％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-10为原料，通过还原反应得到2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M10-2)，收率为93.7％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M10-2为原料，制备实施例10，收率85.3％。
m.p.:222.8-223.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):529.39；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.08(s,1H),9.27(s,1H),8.71(s,1H),8.21(d,J＝7.3Hz,1H),8.15(s,1H),7.79 (s,1H),7.33(s,2H),7.33(s,22H),7.17–7.05(m,2H),3.68(s,2H),3.62–3.60(m, 4H),2.90(s,3H),2.46(s,4H).
实施例11 N-(2-((5-氯-2-((2-((二乙基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与二乙胺发生N-烃化反应制备得到N-乙基-N-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)乙胺(VII-11)。收率为 85.2％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-11为原料，通过还原反应得到2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M11-2)，收率为90.1％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M11-2为原料，制备实施例11，收率65.2％。
m.p.:202.1-205.4℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):515.51；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.96(s,1H),9.68(s,1H),9.23(s,1H),9.05(s,1H),8.33(d,J＝7.7Hz,1H),8.11 (s,1H),7.82(s,1H),7.34(s,2H),7.26(d,J＝7.8Hz,2H),6.93(t,J＝7.1Hz,1H), 3.75(s,2H),2.78(s,3H),2.58–2.52(m,4H),1.03(t,J＝7.1Hz,6H).
实施例12 N-(2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例1中步骤D的方法，以VI为原料，与硫代吗啉发生N-烃化反应制备得到4-((6-硝基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)硫吗啉(VII-12)。收率为81.9％。
按照实施例1中步骤E的方法，以VII-12为原料，通过还原反应得到2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺(M12-2)，收率为92.2％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和M12-2为原料，制备实施例12，收率81.9％。
m.p.:222.9-224.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):545.58；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.44(s,1H),9.37(s,1H),8.98(s,1H),8.84–8.56(m,1H),8.43(s,1H),8.23(s, 1H),8.08(d,J＝12.0Hz,1H),7.53(d,J＝6.9Hz,1H),7.34(d,J＝47.6Hz,2H), 7.12(d,J＝51.4Hz,2H),3.51(s,2H),3.02(d,J＝3.5Hz,4H),2.92(s,34H),2.51(s, 4H).
实施例13 N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
按照实施例1中步骤B的方法，以III为原料，与乙酰氯发生N-酰化反应制备得到N-(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(M2-1)。
按照实施例1中步骤F的方法，以M2-1和M1-2为原料，制备实施例13，收率78.6％。
m.p.:230.2-235.5℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):506.39；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ9.28(s,1H),8.63(s,1H),8.18(d,J＝8.3Hz,1H),8.16(s,1H),7.77(s,1H),7.36
(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(s,1H),7.23–7.17(m,1H),7.13(dd,J＝13.7,7.8Hz,2H),6.61(s,1H),6.46(d,J＝8.4Hz,1H),3.57(s,2H),2.93(s,3H),2.85(dd,J＝14.4, 7.2Hz,3H),2.44(s,4H),2.34(dt,J＝13.8,7.0Hz,4H).
实施例14 N-(2-((-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基) 氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M2-1和M2-2为原料，制备实施例14，收率92.0％。
m.p.:270.9-273.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):536.58；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.00(s,1H),10.09(s,1H),9.18(s,1H),8.42(s,1H),8.11(s,1H),7.84(d,J＝7.2 Hz,1H),7.69(s,1H),7.31(s,2H),7.28(d,J＝7.9Hz,2H),7.17(t,J＝7.5Hz,1H), 4.44(s,1H),3.66(s,2H),3.51(s,2H),3.48(d,J＝6.0Hz,2H),2.49–2.45(m,4H), 2.45–2.39(m,4H),2.10(s,3H).
实施例15 N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)乙酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M2-1和M3-2为原料，制备实施例15，收率85.5％。
m.p.:212.7.9-213.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):451.39；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.08(s,1H),10.13(s,1H),9.18(s,1H),8.43(s,1H),8.12(s,1H),7.85(d,J＝7.7 Hz,1H),7.70(d,J＝36.2Hz,1H),7.38–7.30(m,2H),7.28(d,J＝7.6Hz,2H),7.17 (t,J＝7.5Hz,1H),3.61(s,2H),2.23(s,6H),2.11(s,3H).
实施例16 N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M2-1和M7-2为原料，制备实施例16，收率92.8％。
m.p.:215.7.9-218.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):505.58；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.04(s,1H),10.15(s,1H),9.16(s,1H),8.43(s,1H),8.11(s,1H),7.84(d,J＝7.9 Hz,1H),7.69(s,1H),7.30(d,J＝7.1Hz,2H),7.27(d,J＝7.6Hz,2H),7.15(t,J＝ 7.5Hz,1H),3.63(s,2H),2.81(d,J＝11.2Hz,2H),2.10(s,3H),1.56(t,J＝20.4Hz, 2H),1.23(s,4H),1.17(s,1H),0.89(d,J＝6.3Hz,3H).
实施例17 2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
步骤A：2-氨基-N-甲基苯甲酰胺(XII-1)
室温下，将20.0g(0.12mol)靛红酸酐(IV)溶于100.0mL乙醇中，开动搅拌，缓慢滴加14.45mL(0.15mol)40％甲胺水溶液滴毕，反应毕。向反应液中加入50mL饱和食盐水，搅拌20分钟。用750mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，蒸干溶剂，干燥得淡黄色固体15.8g。收率85.7％。
按照实施例1中步骤A的方法，以XII-1与2,4,5,-三氯嘧啶为原料，通过N- 酰化反应制备2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺(M3-1)，收率79.5％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M3-1和M2-2为原料，制备实施例17，收率31.9％。
m.p.:282.9-285.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):536.56；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.16(s,1H),11.69(s,1H),9.38(s,1H),8.83(s,1H),8.78(s,1H),8.20(s,1H), 7.83(s,1H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(s,2H),7.33(d,J＝8.7Hz,1H),7.09(t,J ＝7.4Hz,1H),5.70(d,J＝7.7Hz,1H),3.68(s,2H),3.50(d,J＝4.7Hz,2H),3.47(d, J＝6.1Hz,2H),2.81(d,J＝4.1Hz,3H),2.47(s,4H),2.38(t,J＝6.1Hz,4H).
实施例18 2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M3-1和M3-2为原料，制备实施例18，收率50.0％。
m.p.:216.7-218.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):451.49；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.22(s,1H),11.69(s,1H),9.38(s,1H),8.85(d,J＝6.2Hz,1H),8.78(d,J＝4.0
Hz,1H),8.20(s,1H),7.82(s,1H),7.76(d,J＝7.7Hz,1H),7.39(d,J＝12.0Hz,2H), 7.35(s,1H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),3.65(s,2H),2.82(d,J＝4.2Hz,3H),2.25(s,6H).
实施例19 2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M3-1和M7-2为原料，制备实施例19，收率72.5％。
m.p.:225.3-226.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):505.68；1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ12.17(s,1H),11.68(s,1H),9.37(s,1H),8.84(s,1H),8.79(s,1H),8.19(s,1H), 7.82(s,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,1H),7.39(s,2H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),7.08(t,J ＝7.4Hz,1H),3.66(s,2H),2.83(s,3H),2.81(d,J＝4.1Hz,4H),2.04(t,J＝11.1Hz, 2H),1.59(d,J＝12.5Hz,2H),1.19(dd,J＝11.7,2.0Hz,1H),0.90(d,J＝6.4Hz, 3H).
实施例20 2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例17中步骤A的方法，以IV和二甲胺为原料，通过N-酰化反应制备2-氨基-N，N-二甲基苯甲酰胺(XII-2)，收率99.4％。
按照实施例1中步骤A的方法，以XII-2与2,4,5,-三氯嘧啶为原料，通过 N-酰化反应制备2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(M4-1)，收率71.8％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M1-2为原料，制备实施例20，收率74.5％。
m.p.:227.3-229.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):520.45；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ9.29(s,1H),9.16(s,1H),8.37(d,J＝7.8Hz,1H),8.17(s,1H),7.80(s,1H),7.41 (d,J＝7.4Hz,2H),7.34(d,J＝8.7Hz,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),6.07(s,1H), 5.64(s,1H),3.67(s,2H),3.51(s,4H),2.98(s,4H),2.36(s,6H),2.16(s,3H).
实施例21 2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M2-2为原料，制备实施例21，收率65.0％。
m.p.:275.6-278.6℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):550.56；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.14(s,1H),9.30(s,1H),9.18(s,1H),8.38(d,J＝8.0Hz,1H),8.17(s,1H),7.80 (s,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,2H),7.37(d,J＝12.9Hz,1H),7.33(s,1H),7.15(t,J＝ 7.2Hz,1H),4.66(s,1H),3.67(s,2H),3.50(d,J＝5.8Hz,2H),3.47(d,J＝6.0Hz, 2H),2.99(s,6H),2.46(s,4H),2.40–2.35(m,4H).
实施例22 2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M3-2为原料，制备实施例22，收率69.3％。
m.p.:212.9-214.5℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):465.32；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.20(s,1H),9.29(s,1H),9.17(s,1H),8.38(d,J＝8.6Hz,1H),8.17(s,1H),7.79 (s,1H),7.44–7.39(m,2H),7.34(s,2H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),3.62(s,2H),2.99 (s,6H),2.23(s,6H).
实施例23 2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M4-2为原料，制备实施例23，收率80.0％。
m.p.:222.7-223.6℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):505.32；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.09(s,1H),9.29(s,1H),9.16(s,1H),8.38(d,J＝8.2Hz,1H),8.17(s,1H),8.09 (d,J＝15.0Hz,1H),7.80(s,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,2H),7.39(s,1H),7.32(s,1H), 3.66(s,2H),2.99(s,6H),2.44(s,4H),1.54(d,J＝5.1Hz,4H),1.40(s,2H).
实施例24 2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M5-2为原料，制备实施例24，收率70.2％。
m.p.:225.6.9-226.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):534.42；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ9.40(s,1H),9.21(s,1H),8.36(d,J＝7.9Hz,1H),8.19(s,1H),8.01(d,J＝49.2 Hz,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,2H),7.43(d,J＝8.6Hz,2H),7.12(d,J＝7.7Hz,2H), 3.89(s,2H),3.10(s,2H),2.99(s,6H),2.52(s,4H),2.29(s,4H),1.17(t,J＝7.1Hz, 3H).
实施例25 2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M6-2为原料，制备实施例25，收率76.9％。
m.p.:221.2.9-223.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):491.50；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.20(s,1H),9.32(s,1H),9.17(s,1H),8.37(d,J＝8.4Hz,1H),8.18(s,1H),7.85 (s,1H),7.47–7.41(m,2H),7.37(s,2H),7.16(t,J＝7.3Hz,1H),4.05(s,2H),2.99 (s,6H),2.81(s,4H),1.81(s,4H).
实施例26 2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M10-2为原料，制备实施例26，收率71.6％。
m.p.:234.6.9-237.8℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):507.49；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.17(s,1H),9.31(s,1H),9.18(s,1H),8.38(d,J＝8.4Hz,1H),8.17(s,1H),7.82 (s,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,2H),7.34(t,J＝7.4Hz,2H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H), 3.69(s,2H),3.63–3.60(m,4H),2.98(d,J＝8.1Hz,6H),2.46(s,4H).
实施例27 2-((5-氯-2-((2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M11-2为原料，制备实施例27，收率71.6％。
m.p.:214.6.9-217.5℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):493.66；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.02(s,1H),9.31(s,1H),9.18(s,1H),8.38(d,J＝8.5Hz,1H),8.18(s,1H),7.84 (s,1H),7.42(dd,J＝7.6,1.5Hz,2H),7.33(dd,J＝8.6,1.7Hz,2H),7.15(t,J＝7.5 Hz,1H),3.87(s,2H),2.99(s,6H),2.64(d,J＝6.9Hz,4H),1.06(t,J＝7.1Hz,6H).
实施例28 2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)–N,N-二甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M4-1和M12-2为原料，制备实施例28，收率59.8％。
m.p.:227.0-230.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):523.51；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ12.11(s,1H),9.34(s,1H),9.18(s,1H),8.37(d,J＝8.5Hz,1H),8.18(s,1H),7.86 (s,1H),7.42(d,J＝6.4Hz,2H),7.37(t,J＝7.7Hz,2H),7.16(t,J＝7.4Hz,1H), 3.80(s,2H),2.99(s,6H),2.78(d,J＝3.0Hz,4H),2.68(d,J＝3.9Hz,4H).
实施例29 6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H- 吲哚-3-羧酸乙酯
步骤A 2-(2,4-二硝基苯基)-3-氧代丁酸乙酯(IX-1)
室温下，将1.31g(11.3mmol)乙酰乙酸乙酯与1.26g(11.3mmol)叔丁醇钾加入到10mL四氢呋喃中，室温搅拌2小时，后加入1.0g(5.4mmol)2,4- 二硝基氟苯(VIII)，反应1小时。加入1.2M盐酸调节pH＝2后静置分层，收集上层有机相，蒸干有机溶剂，干燥得到黄色固体1.4g，收率91.19％。
步骤B 6-氨基-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(X-1)
室温下，将0.5g(1.7mmol)IX溶于15mL乙醇中，后加入2.29g(10.1mmol) 氯化亚锡二水合物和1.2mL浓盐酸，回流反应4小时。将反应液倒入30％氢氧化钠溶液，搅拌30分钟，乙酸乙酯萃取，合并有机相，蒸干。干燥的棕色固体 0.2g，收率54.1％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和X-1为原料，制备实施例29，收率58.3％。
m.p.:172.9-173.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):515.36；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.66(s,1H),9.29(s,1H),8.93(s,1H),8.30(d,J＝7.2Hz,1H),8.14(s,1H),7.78(s, 1H),7.73(d,J＝8.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(d,J＝7.4Hz,1H),7.07 –6.93(m,2H),4.26(dd,J＝13.9,6.8Hz,2H),2.83(s,3H),2.62(s,3H),1.34(dd,J ＝18.6,11.7Hz,3H).
实施例30 6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H- 吲哚-3-羧酸甲酯
按照实施例29中步骤A的方法，以VIII为原料，与乙酰乙酸甲酯发生C- 烃化反应制备得到2-(2,4-二硝基苯基)-3-氧代丁酸甲酯(IX-2)。收率为98.9％。
按照实施例29中步骤B的方法，以IX-2为原料，通过还原反应得到6-氨基-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸甲酯(X-2)，收率为90.5％。
按照实施例1中步骤F的方法，以M1-1和X-2为原料，制备实施例30，收率90.98％。
m.p.:174.7-176.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):501.30；1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ11.64(s,1H),9.38(s,1H),9.30(s,1H),8.53(s,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),7.79 (d,J＝8.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝8.6 Hz,1H),7.30(t,J＝7.6Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),3.80(s,3H),2.97(s,3H), 2.62(s,3H).
实施例31 6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H- 吲哚-3-羧酸
室温下，将0.5g(1.0mmol)实施例30投入10mL甲醇中，将0.32g(8.0 mmol)氢氧化钠溶于1mL水中，将配制好的氢氧化钠溶液滴入甲醇中，回流反应6小时。将反应液放置室温后逐滴加入1M盐酸调节pH＝1，抽滤，干燥，得深紫色固体0.46g，收率94.9％。粗产品经柱层析纯化得类白色固体。
m.p.:207.2-210.3℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):487.39；1H NMR(600MHz,DMSO-d6) δ11.96(s,1H),11.64(s,1H),9.38(s,1H),9.30(s,1H),8.53(s,1H),8.19(s,1H), 8.17(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.7Hz, 1H),7.33(d,J＝8.6Hz,1H),7.30(t,J＝7.6Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),2.97(s, 3H),2.62(s,3H).
实施例32N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基甲磺酰胺
将0.5g(1.02mmol)实施例31、0.20g(2.05mmol)N-甲基哌嗪、0.78g (2.05mmol)HATU、0.012g(0.10mmol)4-二甲氨基吡啶(DMAP)和0.53g (4.12mmol)N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF) 中，室温反应1小时。向反应液中加20mL水搅拌，60mL乙酸乙酯萃取分三次萃取，合并有机相。5％氯化锂溶液洗涤一次，饱和食盐水洗涤一次后，蒸干溶剂的棕色固体0.12g，收率34.3％。粗产品经柱层析纯化得淡黄色固体。
m.p.:223.2-225.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):569.39；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.22(s,1H),9.25(s,1H),8.81(s,1H),8.32-8.09(m,2H),7.67(s,1H),7.33(s, 2H),7.20(s,1H),7.07(s,1H),6.61(s,1H),3.49(s,4H),2.96(s,3H),2.87(s,3H), 2.36(d,J＝19.2Hz,4H),2.22(s,3H).
实施例33N-(2-((5-氯-2-((3-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基) 嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和N-羟乙基哌嗪为原料，制备实施例 33，收率94.6％。
m.p.:239.6.2-242.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):599.69；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.21(s,1H),9.39(s,1H),9.27(s,1H),8.52(s,1H),8.17(s,1H),8.14(d,J＝8.0 Hz,1H),7.62(s,1H),7.40(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.32(d,J＝1.8Hz,1H),7.31– 7.28(m,1H),7.22(dd,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.17(d,J＝8.7Hz,1H),4.49(s,1H), 3.53(dd,J＝11.6,5.6Hz,4H),3.49(s,4H),3.38(dd,J＝14.0,7.0Hz,2H),2.96(d, J＝5.2Hz,3H),2.47(s,2H),2.38(s,3H).
实施例34 6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N-(2-羟乙基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和乙醇胺为原料，制备实施例34，收率92.5％。
m.p.:232.3.2-234.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):530.37；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.25(s,1H),9.61(s,1H),9.27(s,1H),8.62(s,1H),8.22(d,J＝7.9Hz,1H),8.17 (s,1H),7.72(s,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.37(d,J＝7.1Hz,1H),7.29(d,J＝ 8.7Hz,1H),7.24(d,J＝7.6Hz,1H),7.21–7.17(m,1H),7.16(d,J＝7.4Hz,1H), 4.79(s,1H),3.55(t,J＝5.9Hz,2H),3.37(dd,J＝11.5,5.7Hz,2H),2.95(s,3H), 2.55(s,3H).
实施例35N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-乙基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和N-乙基哌嗪为原料，制备实施例35，收率78.9％。
m.p.:221.6.2-224.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):583.47；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.21(s,1H),9.28(s,1H),8.51(s,1H),8.18(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.62 (s,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,1H),7.31(d,J＝7.9Hz,2H),7.22(d,J＝7.4Hz,1H), 7.18(d,J＝8.8Hz,1H),3.51(s,6H),2.97(s,3H),2.49–2.44(m,4H),2.39(s,3H), 1.05(t,J＝6.7Hz,3H).
实施例36N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和4-甲基哌啶为原料，制备实施例36，收率75.3％。
m.p.:217.6.2-219.6℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):568.40；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.21(s,1H),9.30(s,1H),9.21(s,1H),8.09(s,1H),7.75(s,1H),7.31(d,J＝8.4 Hz,1H),7.25–7.15(m,2H),6.83(t,J＝7.7Hz,1H),6.65(t,J＝7.5Hz,1H),6.09– 6.04(m,2H),2.89(s,3H),2.70(s,4H),2.37(s,3H),1.63(d,J＝10.9Hz,4H),0.94 (d,J＝5.6Hz,3H),0.86(dd,J＝9.5,6.1Hz,1H).
实施例37N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和4-羟基哌啶为原料，制备实施例37，收率85.2％。
m.p.:230.2.2-232.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):570.56；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.14(s,1H),9.30(s,1H),9.25(s,1H),8.49(s,1H),8.17(s,1H),8.13(d,J＝7.5 Hz,1H),7.61(s,1H),7.39(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(dd,J＝18.9,8.7Hz,2H),7.21(t, J＝7.6Hz,1H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),4.75(s,1H),3.77(d,J＝47.9Hz,4H),3.51 (s,1H),3.13(dd,J＝21.1,10.5Hz,4H),2.97(s,3H),2.37(s,3H).
实施例38N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和六氢吡啶(哌啶)为原料，制备实施例38，收率95.6％。
m.p.:216.9.2.2-219.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):554.57；1H NMR(600MHz, DMSO-d6)δ11.14(s,1H),9.40(s,1H),9.24(s,1H),8.58(s,1H),8.17(s,1H),8.16 (s,1H),7.63(s,1H),7.37(d,J＝7.9Hz,1H),7.27(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.25– 7.22(m,1H),7.17(d,J＝4.3Hz,1H),7.16(s,1H),3.46(s,4H),2.94(s,3H),2.37(s, 3H),1.61(s,2H),1.50(s,4H).
实施例39N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基) 氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和吗啉为原料，制备实施例39，收率 56.5％。
m.p.:222.2-225.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):556.49；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.23(s,1H),9.30(s,1H),9.27(s,1H),8.52(s,1H),8.17(s,1H),8.15(d,J＝8.0 Hz,1H),7.65(s,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.30(d,J＝8.3Hz,2H),7.21(t,J＝ 7.6Hz,2H),3.62(s,4H),3.49(s,4H),2.97(s,3H),2.39(s,3H).
实施例40N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(硫代吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶 -4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和硫代吗啉为原料，制备实施例40，收率47.8％。
m.p.:221.3-223.5℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):572.38；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.20(s,1H),9.31(s,1H),9.26(s,1H),8.50(s,1H),8.18(s,1H),8.15(d,J＝8.0 Hz,1H),7.65(s,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,1H),7.28(dd,J＝ 8.7,1.5Hz,1H),7.22(d,J＝7.7Hz,1H),7.18(d,J＝8.8Hz,1H),3.76(s,4H),2.98 (s,3H),2.60(s,4H),2.38(s,3H).
实施例41N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吡咯烷-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和四氢吡咯为原料，制备实施例41，收率98.0％。
m.p.:213.9-216.5℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):540.50；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.16(s,1H),9.22(s,1H),9.12(s,1H),8.38(s,1H),8.11(s,1H),7.73(s,1H),7.27 (d,J＝8.7Hz,1H),7.22(dd,J＝14.8,9.2Hz,1H),6.92(s,1H),6.79(s,1H),6.21– 5.98(m,2H),2.76(s,3H),2.38(s,3H),1.84(s,4H),0.86(s,4H).
实施例42(R)-N-(2-((5-氯-2-((3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基) 氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和L-脯氨醇为原料，制备实施例42，收率95.7％。
m.p.:233.6-235.3℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):570.42；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.10(s,1H),9.28(s,1H),9.24(s,1H),8.53(s,1H),8.17(d,J＝2.9Hz,1H),8.16 (s,1H),7.62(s,1H),7.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,2H),7.17(dd,J＝ 12.8,6.5Hz,2H),4.83(s,1H),3.42(d,J＝5.2Hz,2H),2.96(s,3H),2.72(s,1H), 2.37(s,3H),2.07–1.94(m,2H),1.94–1.81(m,2H),0.95–0.75(m,2H).
实施例43N-(2-((5-氯-2-((3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和N-杂环丁烷-3-醇为原料，制备实施例43，收率32.1％。
m.p.:228.6-231.7℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):542.39；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.27(s,1H),9.30(d,J＝20.4Hz,1H),9.27(s,1H),8.50(s,1H),8.18(s,1H),8.15 (d,J＝8.1Hz,1H),7.63(s,1H),7.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.36–7.30(m,1H),7.29(s, 1H),7.23(dd,J＝17.1,9.5Hz,2H),5.69(d,J＝6.2Hz,1H),4.16(t,J＝7.7Hz,2H), 3.75(dd,J＝9.5,4.4Hz,2H),3.48(d,J＝17.9Hz,1H),2.98(s,3H),2.45(s,3H).
实施例44 6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
按照实施例32的方法，以实施例31和二甲胺(40％水溶液)为原料，制备实施例44，收率32.1％。
m.p.:212.3-216.0℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):514.59；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.14(s,1H),9.90(s,1H),9.25(s,1H),8.50(s,1H),8.18(s,1H),8.15(s,1H),7.64 (s,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.31(t,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.22(m,1H),7.17 (dd,J＝18.5,7.9Hz,2H),2.98(s,9H),2.36(s,3H).
实施例45 2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例1中步骤F的方法，以M3-1和X-2为原料，制备6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸甲酯(XI-2)，收率73.75％。
按照实施例31的方法，以XI-2为原料发生水解反应得到6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸(M2-3)，收率： 92.30％。
按照实施例32的方法，以M2-3和N-甲基哌嗪为原料，制备实施例45，收率91.9％。
m.p.:208.9-210.4℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):533.62；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.70(s,1H),11.29(s,1H),9.36(s,1H),8.87(d,J＝8.1Hz,1H),8.77(d,J＝4.4 Hz,1H),8.20(s,1H),7.76(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(s,1H),7.40(d,J＝7.4Hz,1H), 7.32(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,1H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),3.51 (s,3H),2.81(d,J＝4.5Hz,3H),2.39(s,3H),2.33(s,4H),2.21(s,4H).
实施例46 6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
按照实施例32的方法，以M2-3和二甲胺(40％水溶液)为原料，制备实施例 46，收率80.92％。
m.p.:206.3-208.9℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):478.63；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.71(s,1H),11.22(s,1H),9.34(s,1H),8.89(d,J＝8.0Hz,1H),8.76(d,J＝4.6 Hz,1H),8.20(s,1H),7.76(s,1H),7.74(s,1H),7.40(t,J＝8.1Hz,1H),7.28(dd,J＝ 8.6,1.3Hz,1H),7.24(d,J＝8.5Hz,1H),7.11(t,J＝7.5Hz,1H),2.99(s,6H),2.81 (d,J＝4.4Hz,3H),2.38(s,3H).
实施例47 2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例32的方法，以M2-3和吗啉为原料，制备实施例47，收率50.39％。 m.p.:216.9-219.3℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):520.38；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.72(s,1H),11.35(s,1H),9.38(s,1H),8.89(d,J＝7.6Hz,1H),8.80(d,J＝4.5 Hz,1H),8.21(s,1H),8.15(s,1H),7.77(d,J＝7.9Hz,1H),7.42(t,J＝7.3Hz,1H), 7.31(s,1H),7.12(t,J＝7.5Hz,1H),6.77(d,J＝6.2Hz,1H),3.51(s,4H),3.05(s, 4H),2.82(d,J＝4.5Hz,3H),2.42(s,3H).
实施例48 2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例32的方法，以M2-3和吗啉为原料，制备实施例48，收率91.23％。 m.p.:212.9-215.8℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):532.67；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.69(s,1H),11.23(s,1H),9.35(s,1H),8.86(s,1H),8.77(s,1H),8.20(s,1H), 7.75(d,J＝7.5Hz,1H),7.70(s,1H),7.40(s,1H),7.27(dd,J＝19.0,8.6Hz,2H), 7.10(t,J＝7.5Hz,1H),2.89(s,4H),2.81(d,J＝4.3Hz,3H),2.38(s,3H),1.63(d,J ＝10.2Hz,4H),1.07(s,1H),0.94(d,J＝5.4Hz,3H).
实施例49 2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4- 基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
按照实施例32的方法，以M2-3和吗啉为原料，制备实施例49，收率83.65％。 m.p.:231.8-234.2℃；ESI-MS[M+H]+(m/z):534.61；1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ11.69(s,1H),11.24(s,1H),9.35(s,1H),8.87(d,J＝7.5Hz,1H),8.76(d,J＝4.3 Hz,1H),8.20(s,1H),8.07(s,1H),7.75(d,J＝7.8Hz,1H),7.40(s,1H),7.26(q,J＝8.4Hz,2H),7.11(t,J＝7.3Hz,1H),4.76(s,1H),3.51(s,1H),3.20–3.07(m,4H), 2.81(d,J＝4.0Hz,3H),2.38(s,3H),1.30(d,J＝37.7Hz,4H).
本发明产物的抗肿瘤活性研究
体外抗肿瘤细胞活性
对按照本发明的上式I的嘧啶类衍生物进行了体外抑制高表NPM-ALK蛋白的人间变性大细胞淋巴瘤细胞Karpas299和高表达EML4-ALK蛋白的人肺腺癌细胞NCI-H2228及EGFR高表达的人肺腺癌细胞A549的活性筛选。
(1)细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10μL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为104个 /孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。
(2)用50μL二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液，然后在24孔板中将样品稀释为20、4、0.8、0.16、0.032μg/mL。
每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养72h。
(3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(0.5mg/mL)100μL放入培养箱中4h后，弃去MTT 溶液，加入二甲基亚砜100μL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC50值。
化合物的抑制淋巴细胞瘤Karpas299和肺腺癌细胞A549活性结果见表1。
表1
Figure BDA0002447676200000281
Figure BDA0002447676200000291
L1196M ALK和ROS1酶活性试验
用于测量L1196M ALK酶活性的试验基于酶联免疫吸附试验。具体操作是：
室温下，在0.25mg/mL PGT包被的板上，将实施例化合物、50pM L1196M ALK 和5uMATP在试验缓冲液中(25mM MOPS,Ph 7.4,1mM DTT,5mM MgCl2,1mM MnCl2,0.1％NaN3)温育20min。通过冲洗除去反应混合液并用0.2ug/mL缀合辣根过氧化酶的磷酸酪氨酸特异性克隆抗体检测磷酸聚合物底物。加入1M磷酸终止显色后，于450nm处通过分光光度法定量显色的底物颜色。
ROS1酶活性的试验操作同L1196M ALK酶活性测试方法。
实施例化合物对L1196M ALK和ROS1的抑制数据见表2。
表2
Figure BDA0002447676200000292
本发明中通式I的化合物可单独施用，但通常是和药用载体混合物给予，所述药用载体的选择要根据所需用药途径和标准药物实践，下面分别用该类化合物的各种药物剂型，例如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂的制备方法，说明其在制药领域中的新应用。

Claims (7)

1.通式Ⅰ所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐，
Figure FDA0003227695940000011
其中，
X独立地为C、N，且可被R5取代；
Y独立地为N，且可被R4取代；
Z独立地为C，且可被R6取代；
n＝1；
R1为(C1-C3)烷基酰氨基、(C1-C3)烷基磺酰氨基、被1-2个(C1-C3)烷基取代的氨基甲酰基；R2为Cl；R3为H；R4为H；
R5为CONR7R8、COR7；
R6为(C1-C3)烷基、CH2NR7R8；
R7和R8相同或不同，分别独立的选自H、(C1-C3)烷基、(C1-C3)烷氧基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基；
或R7和R8与和它们所连接的氮原子一起形成4-6元杂环基，所述杂环基除了与R7和R8连接的氮原子外，任选含有0-1个选自N、O和/或S的杂原子，所述杂环基任选被0-1个R9取代；
R9为(C1-C3)烷基、羟基、羟基取代的(C1-C3)烷基。
2.权利要求1的通式I所示的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐，
其中，R5为：
Figure FDA0003227695940000012
Figure FDA0003227695940000013
R6为甲基、
Figure FDA0003227695940000014
Figure FDA0003227695940000015
3.如下的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐，N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-(5-氯-2-((2-(((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯基甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二甲基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((4-羟基哌啶-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-(((2-((二异丙基氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
2-((5-氯-2-((2-(哌啶-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(吡咯烷-1-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-((二乙氨基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-(硫代吗啉代甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)–N,N-二甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸乙酯
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸甲酯
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N-(2-羟乙基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-乙基哌嗪-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(硫代吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吡咯烷-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
(R)-N-(2-((5-氯-2-((3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
N-(2-((5-氯-2-((3-(3-羟基氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)甲磺酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N,2-三甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(吗啉-4-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((2-甲基-3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
2-((5-氯-2-((3-(4-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基-1H-吲哚-6-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-N-甲基苯甲酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-N,N-二乙基-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酰胺
6-((5-氯-4-((2-(甲基磺酰胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-甲基-1H-吲哚-3-羧酸。
4.一种药物组合物，包含权利要求1-3所述的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
5.权利要求1-3所述的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐或权利要求4所述的药物组合物在制备ALK和ROS1激酶抑制剂中的应用。
6.权利要求1-3所述的含芳杂环的2,4-二芳氨基嘧啶衍生物及其光学异构体、药学上可接受的盐或权利要求4所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为淋巴癌或肺癌。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023178094A2 (en) * 2022-03-14 2023-09-21 Purdue Research Foundation Spleen tyrosine kinase inhibitor, composition, and methods of use

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003030909A1 (en) * 2001-09-25 2003-04-17 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2- and 4-aminopyrimidines n-substtituded by a bicyclic ring for use as kinase inhibitors in the treatment of cancer
WO2003078404A1 (en) * 2002-03-15 2003-09-25 Novartis Ag Pyrimidine derivatives
WO2005026158A1 (en) * 2003-09-16 2005-03-24 Novartis Ag 2,4 di (hetero) -arylamino-pyrimidine derivatives as zap-70 and/or syk inhibitors
CN1852900A (zh) * 2003-09-18 2006-10-25 诺瓦提斯公司 可用于治疗增殖性病症的2,4－二(苯基氨基)嘧啶类
WO2008073687A2 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
WO2008118822A1 (en) * 2007-03-23 2008-10-02 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
WO2009032703A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Irm Llc 2- (het) arylamino-6-aminopyridine derivatives and fused forms thereof as anaplastic lymphoma kinase inhibitors
WO2009080638A2 (en) * 2007-12-20 2009-07-02 Cellzome Limited Sulfamides as zap-70 inhibitors
WO2009112490A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Cellzome Limited Sulfonamides as zap-70 inhibitors
WO2009126515A1 (en) * 2008-04-07 2009-10-15 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
WO2012106540A1 (en) * 2011-02-02 2012-08-09 Irm Llc Methods of using alk inhibitors
WO2016033100A1 (en) * 2014-08-25 2016-03-03 Salk Institute For Biological Studies Novel ulk1 inhibitors and methods using same
CN105524045A (zh) * 2014-10-22 2016-04-27 山东轩竹医药科技有限公司 四环类间变性淋巴瘤激酶抑制剂

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003030909A1 (en) * 2001-09-25 2003-04-17 Bayer Pharmaceuticals Corporation 2- and 4-aminopyrimidines n-substtituded by a bicyclic ring for use as kinase inhibitors in the treatment of cancer
WO2003078404A1 (en) * 2002-03-15 2003-09-25 Novartis Ag Pyrimidine derivatives
WO2005026158A1 (en) * 2003-09-16 2005-03-24 Novartis Ag 2,4 di (hetero) -arylamino-pyrimidine derivatives as zap-70 and/or syk inhibitors
CN1852900A (zh) * 2003-09-18 2006-10-25 诺瓦提斯公司 可用于治疗增殖性病症的2,4－二(苯基氨基)嘧啶类
WO2008073687A2 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
WO2008118822A1 (en) * 2007-03-23 2008-10-02 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
WO2009032703A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Irm Llc 2- (het) arylamino-6-aminopyridine derivatives and fused forms thereof as anaplastic lymphoma kinase inhibitors
WO2009032694A1 (en) * 2007-08-28 2009-03-12 Dana Farber Cancer Institute Amino substituted pyrimidine, pyrollopyridine and pyrazolopyrimidine derivatives useful as kinase inhibitors and in treating proliferative disorders and diseases associated with angiogenesis
WO2009080638A2 (en) * 2007-12-20 2009-07-02 Cellzome Limited Sulfamides as zap-70 inhibitors
WO2009112490A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Cellzome Limited Sulfonamides as zap-70 inhibitors
WO2009126515A1 (en) * 2008-04-07 2009-10-15 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
WO2012106540A1 (en) * 2011-02-02 2012-08-09 Irm Llc Methods of using alk inhibitors
WO2016033100A1 (en) * 2014-08-25 2016-03-03 Salk Institute For Biological Studies Novel ulk1 inhibitors and methods using same
CN105524045A (zh) * 2014-10-22 2016-04-27 山东轩竹医药科技有限公司 四环类间变性淋巴瘤激酶抑制剂

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Discovery of N6-phenyl-1H -pyrazolo[3 ,4-d]pyrimidine-3,6-diamine derivatives as novel CK1 inhibitors using comm on-feature pharmacop hore model based virtual screening and hit-to-lead optimization;Ling-Ling Yang等;《Eu ropean Journal of Medicina l Chemistry》;20120814;Supporting information *
RN:511247-06-6;STN;《STN检索记录》;20030506;第1页 *
Substituted aminobenzimidazole pyrimidines as cyclin-dependent kinase inhibitors;Sharad Verma等;《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》;20050415;第1975页Table 2.化合物19 *
Virtual Screening for Potential Allosteric Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinase 2 from Traditional Chinese Medicine;Fang Lu等;《Molecules》;20160921;第9页Figure 8. *

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