BRPI0306740B1 - célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico e processo para a produção de etanol - Google Patents
célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico e processo para a produção de etanol Download PDFInfo
- Publication number
- BRPI0306740B1 BRPI0306740B1 BRPI0306740A BRPI0306740A BRPI0306740B1 BR PI0306740 B1 BRPI0306740 B1 BR PI0306740B1 BR PI0306740 A BRPI0306740 A BR PI0306740A BR PI0306740 A BRPI0306740 A BR PI0306740A BR PI0306740 B1 BRPI0306740 B1 BR PI0306740B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- host cell
- xylose
- nucleic acid
- allah
- gly
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/90—Isomerases (5.)
- C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/001—Amines; Imines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
- C12P5/026—Unsaturated compounds, i.e. alkenes, alkynes or allenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
- C12P7/20—Glycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
- C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/54—Acetic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/56—Lactic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
- C12Y207/01017—Xylulokinase (2.7.1.17)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
- C12Y503/01—Intramolecular oxidoreductases (5.3) interconverting aldoses and ketoses (5.3.1)
- C12Y503/01005—Xylose isomerase (5.3.1.5)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
"célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico, e, processos para a produção de etanol, e de um produto de fermentação". a presente invenção refere-se as células hospedeiras transformadas com uma seqüência de ácido nucleico codificadora de uma xilose-isomerase eucariótica obtenível de um fungo anaeróbico. quando expressada, a seqüência codificadora da xilose-isomerase confere à célula hospedeira a capacidade de converter xilose em xilulose que pode ser adicionalmente metabolizada pela célula hospedeira. assim, a célula hospedeira é capaz de crescer em xilose como fonte de carbono. a célula hospedeira preferivelmente é um microorganismo eucariótico tal como uma levedura ou um fungo filamentoso. a invenção refere-se adicionalmente aos processos para a produção de produtos de fermentação tal como etanol, no qual uma célula hospedeira da invenção usa xilose para crescimento e para a produção do produto de fermentação. a invenção refere-se adicionalmente às seqüências de ácido nucleico codificadoras de xilose-isomerases eucarióticas e de xilulose-quinases obteníveis de fungos anaeróbicos.
Description
[001] A presente invenção refere-se às células hospedeiras transformadas com uma sequência de ácido nucleico codificadora de uma xilose-isomerase eucariótica. A xila-isomerase é expressada na célula hospedeira para conferir a capacidade de isomerizar xilose à xilulose. A célula hospedeira é usada em um processo para a produção de etanol e de outros produtos de fermentação pela fermentação de um meio contendo pentose. A presente invenção refere-se adicionalmente às sequências de ácido nucleico codificadoras de xilose-isomerases eucarióticas.
Fundamentos da invenção [002] O consumo em grande escala de combustíveis fósseis (combustíveis baseados em petróleo) tradicionais nas últimas poucas décadas tem contribuído para os altos níveis de poluição.
Além do mais, a percepção de que o estoque mundial de petróleo não é ilimitado, combinada com a consciência ambiental crescente, tem estimulado novas iniciativas para a investigação da factibilidade de combustíveis alternativos tal como etanol, que poderiam realizar uma diminuição de 60-90% na produção de CO2. Embora o etanol derivado de biomassa possa ser produzido por fermentação de açúcares hexose que são obtidos de muitas fontes diferentes, até agora, entretanto, os substratos para a produção em escala industrial de álcool combustível são cana-de-açúcar e amido de grãos. A desvantagem destes substratos são os custos elevados.
003]
A expansão da produção de etanol requer a
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 9/57
2/43 capacidade do uso de matérias-primas de custo menor. Presentemente, apenas matéria-prima lignocelulósica de biomassa vegetal estará disponível em quantidades suficientes para substituir as culturas utilizadas para a produção de etanol. Os açúcares de fermentação principais de materiais lignocelulósicos são glicose e xilose, constituindo respectivamente cerca de 40% e 25% de lignocelulose. Entretanto, a maioria das leveduras que são capazes de fermentação alcoólica, como Saccharomyces cerevisiae, não são capazes de usarem xilose como uma fonte de carbono. Adicionalmente, não são conhecidos nenhuns microorganismos que podem fermentar xilose a etanol tanto com alto rendimento de etanol quanto com elevada produtividade de etanol. Para se permitir a produção comercial de etanol a partir de hidrolisado de lignocelulose, seria requerido um organismo possuindo ambas estas propriedades. Assim um objetivo da presente invenção é a provisão de uma levedura que seja capaz tanto de fermentação alcoólica quanto do uso de xilose como uma fonte de carbono.
[004] D-Xilose é metabolizável por numerosos microorganismos tais como bactérias entéricas, algumas leveduras e fungos. Na maioria das bactérias utilizadoras de xilose, a xilose é diretamente isomerizada a D-xilulose por xilose (glicose) isomerase (XI). Leveduras e fungos filamentosos, entretanto não são capazes desta isomerização em uma etapa e primeiro reduzem a xilose a xilitol pela ação de xilose-redutose (XR) após a qual o xilitol é convertido à xilulose por xilitol-desidrogenase (XDH). A primeira etapa requer NAD(P)H como um co-fator enquanto que a segunda etapa requer NAD+. A xilulose que é produzida subsequentemente
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 10/57
3/43 entra na rota de pentose-fosfato (PPP) após a qual ela é fosforilada por xilulose-quinase (XK). Fermentação anaeróbica da xilose a etanol não é possível com uma xiloseredutase (XR) estritamente dependente de NADPH. Isto é porque a xilitol-desidrogenase (XDH) é estritamente dependente de NAD+ resultando em um desequilíbrio redox (isto é, depleção de NAD+). Para solucionar o desequilíbrio redox sob condições anaeróbicas, o organismo produz subprodutos tais como glicerol e xilitol. Semelhantemente, a produção aeróbica de β-lactamas sobre xilose também é negativamente influenciada em comparação com a produção de β-lactama sobre glicose. Uma causa provável para estes rendimentos baixos é uma demanda relativamente alta de equivalentes redutores na forma de NADPH nesta rota, comparado com o uso de glicose (W. M. van Gulik et al., Biotechnol. Bioeng. Vol. 68, No. 6, June 20, 2000).
[005] No decorrer dos anos muitas tentativas têm sido feitas para a introdução de metabolismo de xilose em S. cerevisiae e leveduras semelhantes, como revisto em Zaldivar et al. (2001, Appl. Microbiol. Biotechnol. 56: 17-34). Uma abordagem concerne à expressão de pelo menos genes codificadores de uma xilose (aldose) redutase e uma xilitoldesidrogenase, por exemplo XYL1 e XYL2 de Pichia stipitis, em S. cerevisiae (US 5.886.382; WO 95/13362; e WO 97/42307). Embora esta abordagem permita o crescimento de S. cerevisiae sobre xilose, ela geralmente sofre de uma baixa produtividade ou rendimento de etanol bem como de uma alta produção de xilitol, principalmente como um resultado do desequilíbrio redox entre XR e XDH.
[006] A expressão de uma XI em S. cerevisiae ou
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 11/57
4/43 levedura relacionada ou em fungos filamentosos evitaria o desequilíbrio redox e as consequentes excreção e produção de xilitol. Os genes de xilose-isomerase de várias bactérias têm sido inseridos em S. cerevisiae, entretanto, a expressão de Xis procarióticas mesófilas não levou à XI ativa (Amore e Hollenberg, 1989, Nucleic Acids Res. 17: 7515; Amore et al., 1989, Appl. Microbiol. Biotechnol. 30: 351-357; Chan et al., 1986, Biotechnol. Lett. 8:231-234; Chan et al. , 1989, Appl. Microbiol. Biotechnol. H: 524-528; Ho et al., 1989, Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Biol. 42 : 2167; Hollenberg,
1987, EBC-Symposium on Brewees Yeast, Helsinki (Finlândia), 24-25 Nov.1986; Sarthy et al., 1987, Appl. Environ.
Microbiol. 53 : 1996-2000; Ueng et al. 1985, Biotechnol. Lett. 7: 153-158). Contudo, duas XIs de bactérias termófilas expressadas em S. cerevisiae mostraram uma atividade específica de 1 pmol por minuto por mg-1 a 85°C (Bao et al., 1999, Weishengwu-Xuebao 39: 49-54; Walfridson et al., 1996, Appl. Environ. Microbiol. 61: 4184-4190). Entretanto, em temperatura fisiológica para S. cerevisiae (20-35°C) apenas uma percentagem pequena desta atividade é deixada, que não é suficiente para a fermentação alcoólica eficiente a partir de xilose. Portanto, ainda há uma necessidade de ácidos nucleicos codificadores de uma XI que possa ser expressada em leveduras para a provisão de suficiente atividade de XI sob condições fisiológicas para a permissão do uso de xilose como fonte de carbono.
Descrição da invenção
Xilose-isomerase [007] A enzima xilose-isomerase (EC 5.3.1.5) é aqui definida como uma enzima que catalisa a isomerização
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 12/57
5/43 direta de D-xilose a D-xilulose e vice-versa. A enzima também é conhecida como uma D-xilose-ceto-isomerase. Algumas xilose-isomerases também são capazes de catalisarem a conversão entre D-glicose e D-frutose e são, portanto, algumas vezes referidas como glicose-isomerase. Xiloseisomerases requerem magnésio como co-fator. Xiloseisomerases da invenção podem ser adicionalmente definidas por sua sequência de aminoácidos como aqui abaixo descrita. Igualmente xilose-isomerases podem ser definidas pelas sequências de nucleotídeos que hibridizam com uma sequência de nucleotídeos de referência codificadora de uma xiloseisomerase como descrita aqui abaixo.
[008] Uma unidade (U) de atividade de xiloseisomerase é aqui definida como a quantidade de enzima que produz 1 nmol de xilulose por minuto, em uma mistura reacional contendo solução-tampão de fosfato 50 mM (pH 7,0), xilose 10 mM e Mg Cl2 10 mM, A 37°c. Xilulose formada foi determinada pelo método de Dische e Borenfreund 1951, J. Biol. Chem. 192: 583-587) ou por HPLC como descrito nos Exemplos.
Similaridade e identidade de sequência [009] Identidade de sequência é aqui definida como uma relação entre duas ou mais sequências de aminoácidos (polipeptídeo ou proteína) ou duas ou mais sequências de ácido nucleico (polinucleotídeo), determinada pela comparação das sequências. Na técnica, identidade também significa o grau de relacionamento entre as sequências de aminoácidos e de ácido nucleico, como pode ser o caso, determinado pela combinação entre o segmento de tais sequências. Similaridade entre duas sequências de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 13/57
6/43 aminoácidos é determinada pela comparação da sequência de aminoácidos e de seus substitutos de aminoácido conservados de um polipeptídeo com a sequência de um segundo polipeptídeo. Identidade e similaridade podem ser prontamente calculadas por métodos conhecidos, incluindo mas não limitados àqueles descritos em (Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., e Griffin, H. O., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in
Molecular Biology, von Heine, G.,
Sequence Analysis Primer, Gribskov,
Academic Press, 1987; e
M. e Devereux, J., eds.,
M Stockton.
Press, New York, 1991;
e Carillo, H., e Lipman, .,
D., SIAM J.
Applied Math., 48:1073
1988).
[0010]
Métodos preferidos para a determinação da identidade são designados para darem a combinação mais elevada entre as sequências testadas.
Métodos para a identificação de identidade e de similaridade estão codificados em programas de computador disponíveis ao público. Métodos de programa de computador preferidos para a determinação da identidade e da similaridade entre duas sequências incluem por exemplo o pacote de programas GCG
Devereux, J., et al.,
Nucleic
Acids Research 12 (1) :387
1984)), BestFit, BLAST,
BLASTN e PASTA (Altschul, S. F. et al.,
J. Mel. Biol. 215:403-410
1990). O programa BLAST X está disponível ao público da NCBI e outras fontes (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). O bem conhecido algoritmo de Smith Waterman também
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 14/57
7/43 pode ser usado para determinar a identidade.
[0011] Parâmetros preferidos para a comparação de sequências de polipeptídeo incluem os seguintes: Algorithm: Needleman and Wunsch”, J. Mot. Biol. 48:443453 (1970); Comparison matrix: BLOSSUM62 from Hentikoff and Hentikoff”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:10915-10919 (1992); Gap Penalty: 12; e Gap Length Penalty: 4. Um programa útil com estes parâmetros está disponível ao público como o programa Ogap” de Genetics Computer Group, localizado em Madison, WZ. Os parâmetros acima mencionados são os parâmetros padrão para as comparações de aminoácidos (juntamente sem penalidade para terminais).
[0012] Parâmetros preferidos para comparação de ácidos nucleicos incluem os seguintes: Algorithm: Needleman and Wunsch”, J. Mol. Biol. 48:443-453 (1970); Comparison matrix: matches= +10, mismatch = 0; Gap Penalty: 50; Gap Length Penalty: 3. Disponível como o programa Gap de Genetics Computer Group, localizado em Madison, WI. Acima são dados os parâmetros padrão para comparações de ácidos nucleicos. Opcionalmente, na determinação do grau de similaridade de aminoácidos, a pessoa experiente também pode considerar as denominadas substituições de aminoácido conservativas”, o que será claro para a pessoa experiente. Substituições de aminoácido conservativas referem-se à intercambialidade de resíduos possuindo cadeias laterais semelhantes. Por exemplo, um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais alifáticas é glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais alifáticas-hidroxiladas é serina e treonina; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais contendo amida é
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 15/57
8/43 asparagina e glutamina; um grupo de aminoácidos contendo cadeias laterais aromáticas é fenil-alanina, tirosina, e triptofano; um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais básicas é lisina, arginina, e histidina; e um grupo de aminoácidos possuindo cadeias laterais contendo enxofre é cisteína e metionina. Grupos de substituição de aminoácido conservativa preferidos são: valina-leucina-isoleucina, fenil-alanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina e asparagina-glutamina. Variantes de substituição da sequência de aminoácidos aqui descrita são aquelas nas quais pelo menos um resíduo nas sequências descritas tem sido removido e um resíduo diferente inserido em seu lugar. Preferivelmente, a mudança de aminoácido é conservativa. Substituições conservativas preferidas para cada um dos aminoácidos de ocorrência natural são as seguintes: Ala para ser; Arg para lys; Asn para gln ou his; Asp para glu; Cys para ser ou ala; Gln para asn; Glu para asp; Gly para pro; His para asn ou glin; Ile para leu ou val; Leu para ile ou val; Lys para arg; gln ou glu; Met para leu ou ile; Phe para met, leu ou tyr; Ser para thr, Thr para ser, Trp para tyr; Tyr para trp ou phe; e, Val para ile ou leu.
Sequências de ácido nucleico hibridizadoras [0013] Sequências de nucleotídeos codificadoras de xilose-isomerases ou de xilulose-quinases da invenção também podem ser definidas por sua capacidade de hibridizarem com as sequências de nucleotídeos da SEQ ID NO. 2 ou SEQ ID NO. 4, respectivamente, sob condições de hibridização moderadas, ou preferivelmente rigorosas. Condições de hibridização rigorosas são aqui definidas como condições que permitem que uma sequência de ácido nucleico de pelo menos cerca de 25,
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 16/57
9/43 preferivelmente cerca de 50 nucleotídeos, 75 ou 100 e mais preferivelmente de cerca de 200 ou mais nucleotídeos, hibridize em uma temperatura de cerca de 65°C em uma solução compreendendo sal a cerca de 1 M, preferivelmente 6 x SSC ou qualquer outra solução possuindo uma força iônica comparável, e lavagem a 65°C em uma solução compreendendo sal a cerca de 0,1 M, ou menos, preferivelmente 0,2 x SSC ou qualquer outra solução possuindo uma força iônica comparável. Preferivelmente, a hibridização é realizada durante a noite, isto é, pelo menos por 10 horas e preferivelmente a lavagem é conduzida por pelo menos uma hora com pelo menos duas mudanças da solução de lavagem. Estas condições normalmente permitirão a hibridização específica das sequências possuindo 90% ou mais de identidade de sequência.
[0014] Condições moderadas são aqui definidas como condições que permitem que uma sequência de ácido nucleico de pelo menos cerca de 50, preferivelmente cerca de 200 ou mais nucleotídeos, hibridize em uma temperatura de cerca de 45°C em uma solução compreendendo sal a cerca de 1 M, preferivelmente 6 x SSC ou qualquer outra solução possuindo uma força iônica comparável, e lavagem na temperatura ambiente em uma solução compreendendo sal a cerca de 1 M, ou menos, preferivelmente 6 x SSC ou qualquer outra solução possuindo uma força iônica comparável. Preferivelmente, a hibridização é realizada durante a noite, isto é, pelo menos por 10 horas e preferivelmente a lavagem é conduzida por pelo menos uma hora com pelo menos duas mudanças da solução de lavagem. Estas condições normalmente permitirão a hibridização específica das sequências possuindo até 50% de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 17/57
10/43 identidade de sequência. A pessoa experiente na técnica será capaz de modificar estas condições de hibridização com o propósito de especificamente identificar sequências variando em identidade entre 50% e 90%.
Opcionalmente ligado [0015] Como aqui usado, o termo operacionalmente ligado” refere-se a uma ligação de elementos de polinucleotídeo em uma relação funcional. Um ácido nucleico estará operacionalmente ligado” quando for colocado em uma relação funcional com outra sequência de ácido nucleico. Por exemplo, um promotor ou intensificador estará operacionalmente ligado em uma sequência codificadora se afetar a transcrição da sequência codificadora. Operacionalmente ligado significa que as sequências de DNA estando ligadas são tipicamente contíguas e, onde necessário para unir duas regiões codificadoras de proteína, contíguas e em matriz de leitura.
Promotor [0016] Como aqui usado, o termo promotor” referese a um fragmento de ácido nucleico que funciona para controlar a transcrição de um ou mais genes, localizado a montante com respeito à direção da transcrição do sítio de iniciação de transcrição do gene, e é estruturalmente identificado pela presença de um sítio de ligação para DNAdependente-RNA-polimerase, sítios de iniciação de transcrição e quaisquer outras sequências de DNA, incluindo, mas não se limitando aos sítios de ligação de fator de transcrição, sítios de ligação de proteína repressor e ativador, e quaisquer outras sequências de nucleotídeos conhecidas por uma pessoa experiente na técnica para atuar
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 18/57
11/43 direta ou indiretamente para regular a quantidade de transcrição do promotor. Um promotor constitutivo é um promotor que é ativo sob a maioria das condições de desenvolvimento e ambientais. Um promotor induzível é um promotor é ativo sob regulação de desenvolvimento e ambiental.
Descrição detalhada da invenção [0017] Em um primeiro aspecto a presente invenção refere-se a uma célula hospedeira transformada que possui a capacidade de isomerizar xilose à xilulose. A capacidade de isomerizar xilose à xilulose é conferida à célula hospedeira pela transformação da célula hospedeira com um construto de ácido nucleico compreendendo uma sequência de nucleotídeos codificadora de uma xilose-isomerase. A capacidade da célula hospedeira transformada de isomerizar xilose à xilulose é a isomerização direta de xilose à xilulose. Isto é entendido para significar que a xilose é isomerizada à xilulose em uma reação única catalisada por uma xilose-isomerase, em oposição à conversão em duas etapas de xilose à xilulose via um intermediário xilitol catalisada por xilose-redutase e xilitol-desidrogenase, respectivamente.
[0018] A sequência de nucleotídeos codifica uma xilose-isomerase que é preferivelmente expressada na forma ativa na célula hospedeira transformada. Assim, a expressão da sequência de nucleotídeos na célula hospedeira produz uma xilose-isomerase com uma atividade específica de pelo menos 10 U de atividade de xilose-isomerase por mg de proteína a 25°C, preferivelmente de pelo menos 20, 25, 30, 50, 100, 200 ou 300 U por mg a 25°C. A atividade específica de xiloseisomerase expressada na célula hospedeira transformada é
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 19/57
12/43 aqui definida como a quantidade de unidades de atividade de xilose-isomerase por mg de proteína de lisado livre de células da célula hospedeira, por exemplo um lisado livre de células de levedura. A determinação da atividade de xiloseisomerase, da quantidade de proteína e a preparação de lisado livre de células são como descritas no Exemplo 1. Alternativamente, a atividade específica pode ser determinada como indicada no Exemplo 4. Consequentemente, a expressão da sequência de nucleotídeos na célula hospedeira produz uma xilose-isomerase com uma atividade específica de pelo menos 50 U de atividade de xilose-isomerase por mg de proteína a 30°C, preferivelmente de pelo menos 100, 200, 500, ou 750 U por mg a 30°C.
[0019] Preferivelmente, a expressão da sequência de nucleotídeos na célula hospedeira produz uma xiloseisomerase com um Km para xilose que é menor do que 50, 40, 30 ou 25 mM com maior preferência, o Km para xilose é de cerca de 20 mM ou menor.
[0020] Uma sequência de nucleotídeos codificadora de xilose-isomerase pode ser selecionada do grupo consistindo de:
(a) sequências de nucleotídeos codificadoras de um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 40, 45, 49, 50, 53, 55, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98 ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO. 1;
(b) sequências de nucleotídeos codificadoras de um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 40, 50, 55, 56, 57, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98 ou 99% de identidade de sequência com a sequência de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 20/57
13/43 aminoácidos de SEQ ID NO. 2;
(c) sequências de nucleotídeos cuja fita complementar hibridiza em uma sequência de uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b);
(d) sequências de nucleotídeos cuja sequência difere da sequência de uma molécula de ácido nucleico de (c) devido à degeneração do código genético.
[0021] A sequência de nucleotídeos preferivelmente codifica uma xilose-isomerase eucariótica, isto é, uma xilose-isomerase com uma sequência de aminoácidos em um organismo eucariótico. Expressão de uma xilose-isomerase eucariótica aumenta a possibilidade de que a xiloseisomerase seja expressada na forma ativa em uma célula hospedeira eucariótica tal como levedura, em oposição às xilose-isomerases procarióticas mesófilas. Com maior preferência a sequência de nucleotídeos codifica uma xiloseisomerase de planta (por exemplo de Hordeum vulgare) ou uma xilose-isomerase de fungo (por exemplo de Basídíomycete). Mais preferivelmente, contudo, a sequência de nucleotídeos codifica uma xilose-isomerase de um fungo anaeróbico, para adicionalmente aumentar a possibilidade de expressão em forma enzimaticamente ativa em uma célula hospedeira eucariótica, particularmente em levedura. Mais preferivelmente são sequências de nucleotídeos codificadoras de uma xilose-isomerase de um fungo anaeróbico que pertence às famílias Neocallímastíx, Caecomyces, Piromyces, Orpinomyces ou Ruminomyces.
[0022] Uma célula hospedeira para a transformação com uma sequência de nucleotídeos codificadora de uma xiloseisomerase preferivelmente é uma hospedeira capaz de ativar
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 21/57
14/43 ou passivar o transporte de xilose para dentro da célula. A célula hospedeira preferivelmente contém glicólise ativa, a rota de pentose-fosfato e preferivelmente contém atividade de xilulose-quinase de modo que a xilulose isomerizada da xilose possa ser metabolizada a piruvato. A hospedeira adicionalmente preferivelmente contém enzimas para a conversão de piruvato em um produto de fermentação desejado tal como etanol, etileno ou ácido lático. Uma célula hospedeira preferida é uma célula hospedeira que é naturalmente capaz de fermentação alcoólica, preferivelmente, fermentação alcoólica anaeróbica. A célula hospedeira adicionalmente preferivelmente possui uma tolerância alta ao etanol e ácidos orgânicos como ácido lático, ácido acético ou ácido fórmico e aos produtos da degradação de açúcar tais como furfural e hidróxi-metilfurfural. Qualquer uma destas características ou atividades da célula hospedeira pode estar naturalmente presente na célula hospedeira ou pode ser introduzida ou modificada por modificação genética. Uma célula hospedeira adequada é um microorganismo como uma bactéria ou um fungo, contudo, mais adequados como célula hospedeira são leveduras ou fungos filamentosos.
[0023] Leveduras são aqui definidas como microorganismos eucarióticos e incluem todas as espécies da subdivisão Eumycotina (Alexopoulos, C. J., 1962, em: Introductíon Mycology, John Wiley & Sons, Inc., New York) que predominantemente crescem na forma unicelular. Leveduras quer podem crescer por broto de um talo unicelular quer podem crescer por fissão do organismo. Leveduras preferidas como células hospedeiras pertencem aos gêneros Saccharomyces,
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 22/57
15/43
Kluyveromyces, Candida, Pichia, Schizosaccharomyzes, Hansenula, Kloeckera, Schwanniomyces e Yarrowia. Preferivelmente a levedura é capaz de fermentação anaeróbica, com maior preferência de fermentação alcoólica anaeróbica.
[0024] Fungos filamentosos são aqui definidos como microorganismos eucarióticos que incluem todas as formas filamentosas da subdivisão Eumycotina. Estes fungos são caraterizados por um micélio vegetativo composto de quitina, celulose, e outros polissacarídeos complexos. Os fungos filamentosos da presente invenção são morfológica, fisiológica, e geneticamente distintos de leveduras. Crescimento vegetativo por fungos filamentosos é pelo alongamento hifal e o catabolismo de carbono da maioria dos fungos filamentosos é obrigatoriamente aeróbico. Fungos filamentosos preferidos como células hospedeiras pertencem aos gêneros Aspergillus, Trichoderma, Humicola, Acremonium, Fusarium e Penicillium.
[0025] No decorrer dos anos sugestões têm sido feitas para a introdução de vários organismos para a produção de bio-etanol a partir de açúcares de cultura. Na prática, contudo, todos os processos principais de produção de bioetanol têm continuado a usar as leveduras do gênero Saccharomyces como produtoras de etanol. Isto é devido às muitas características atrativas da espécie Saccharomyces para processos industriais, isto é, alta ácido-, etanol-, e osmo-tolerância, capacidade de crescimento anaeróbico, e claro sua alta capacidade fermentativa alcoólica. Espécies de levedura preferidas como células hospedeiras incluem S. cerevisiae, S. bulderi, S. barnetti, S. exiguus, S. uvarum,
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 23/57
16/43
S. diastaticus, K. lactis, K. marxianus, K. fragilis.
[0026] A célula é transformada com um construto de ácido nucleico como adicionalmente definido abaixo e pode compreender uma única, mas preferivelmente compreende múltiplas cópias do construto de ácido nucleico. O construto de ácido nucleico pode ser mantido epissomalmente e assim compreende uma sequência para replicação autônoma, tal como uma sequência ARS. Construtos de ácido nucleico epissomais adequados podem se basear por exemplo nos plasmídeos pKD1 ou 2μ de levedura (Fleer et al., 1991, Biotechnology 9 968975). Preferivelmente, contudo, o construto de ácido nucleico é integrado em uma ou mais cópias para dentro do genoma da célula hospedeira. A integração para dentro do genoma da célula hospedeira pode ocorrer aleatoriamente por recombinação ilegítima, mas preferivelmente o construto de ácido nucleico é integrado no genoma da célula hospedeira por recombinação homóloga o que é bem conhecido na técnica da genética molecular fúngica (veja por exemplo WO 90/1443, EP-A-0.481.008, EP-A-0.635,574 e US 6.265.186).
[0027] Em uma célula hospedeira transformada preferida de acordo com a invenção, o construto de ácido nucleico confere à célula hospedeira a capacidade de crescer sobre xilose como fonte de carbono, preferivelmente como única fonte de carbono, e preferivelmente sob condições anaeróbicas, por meio das quais preferivelmente a hospedeira transformada produz essencialmente nenhum xilitol, por exemplo o xilitol produzido está abaixo do limite de detecção de por exemplo menor do que 5, 2, 1% do carbono consumido em uma base molar. A célula hospedeira transformada possui a capacidade de crescer sobre xilose como a única fonte de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 24/57
17/43 carbono em uma taxa de pelo menos 0,01, 0,02, 0,05, 0,1 ou 0,2 h-1. A célula hospedeira transformada da invenção assim expressa uma xilose-isomerase em um nível de atividade específica definido acima.
[0028] Uma célula hospedeira pode compreender outras modificações genéticas que resultam em uma ou mais das características selecionadas do grupo consistindo de: (a) transporte aumentado de xilose para dentro da célula hospedeira; (b) atividade de xilulose-quinase diminuída; (c) fluxo aumentado da rota de pentose-fosfato; (d) sensibilidade diminuída à repressão catabólita; (e) tolerância aumentada ao etanol, à osmolaridade ou aos ácidos orgânicos; e (f) produção reduzida de subprodutos. Subprodutos são entendidos como moléculas contendo carbono diferente do produto de fermentação desejado e incluem por exemplo xilitol, glicerol e/ou ácido acético. Tais modificações genéticas podem ser introduzidas por mutagênese e triagem e/ou seleção clássica para o mutante desejado. Alternativamente, as modificações genéticas podem consistir de sobrexpressão de genes endógenos e/ou de expressão de um gene heterólogo e/ou inativação de genes endógenos. Os genes são preferivelmente escolhidos de genes codificadores de um transportador de hexose ou pentose; de uma xilulose-quinase tal como os genes de xilulose-quinase de S. cerevisiae (XKS1 Deng e Ho, 1990, Appl. Biochem. Biotechnol. 24-25: 193-199) ou de Piromyces (xylB, isto é, SEQ ID NO.4); uma enzima da rota de pentose-fosfato tal como uma transaldolase (TAL1) ou uma transcetolase ( TKL1) (veja por exemplo Meinander et al., 1995, Pharmacol, Toxicol. Suppl. 2: 45), enzimas glicolíticas, enzimas etanologênicas tais como álcool
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 25/57
18/43 desidrogenases. Genes endógenos preferidos para inativação incluem um gene de cetose-quinase por exemplo gene HXK2 de S. cerevisiae (veja Diderich et al., 2001, Appl. Environ. Microbiol. 67 : 1587-1593); os genes MIG1 ou MIG2 de; genes de aldose-redutase (não-específica) tal como GRE3 de S. cerevisiae (Traff et al., 2001, Appl. Environ. Microbiol. 67: 5668-5674); genes para enzimas envolvidas no metabolismo de glicerol tais como os genes de glicerol-fosfatodesidrogenase 1 e/ou 2 de S. cerevisiae; homólogos (hibridização) dos genes em outras espécies hospedeiras. Outras modificações preferidas das células hospedeiras para a fermentação de xilose são revistas em Zalvidar et al. (2001, supra).
[0029] Em outro aspecto a invenção refere-se a uma célula hospedeira transformada para a produção de produtos de fermentação diferentes de etanol. Tais produtos de fermentação não-etanólicos incluem em princípio qualquer composto químico fino ou não-fino que seja produzível por microorganismo eucariótico tal como uma levedura ou um fungo filamentoso. Tais produtos de fermentação incluem por exemplo ácido lático, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propano-diol, etileno, glicerol, antibióticos de β-lactama e cefalosporinas.
[0030] A transformação das células hospedeiras com os construtos de ácido nucleico da invenção e a modificação genética adicional das células hospedeiras, preferivelmente leveduras, como descritas acima podem ser realizadas por métodos bem conhecidos na técnica. Tais métodos são por exemplo conhecidos de livros-texto padrão, tais como Sambrook e Russel (2001) Molecular Cloning: A Laboratory
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 26/57
19/43
Manual (3a edition), Cold Spring Harbor Laboratory Press, ou F. Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology”, Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987). Métodos para a transformação e a modificação genética das células hospedeiras fúngicas são conhecidos de por exemplo EP-A-0.635.574, WO 98/46772, WO 99//60102 e WO 00/37671.
[0031] Em outro aspecto a invenção refere-se a um construto de ácido nucleico compreendendo uma sequência de nucleotídeos codificadora de uma xilose-isomerase como definida acima e usado para a transformação de uma célula hospedeira como definida acima. No construto de ácido nucleico, a sequência de nucleotídeos xilose-isomerase preferivelmente está codificadora da operacionalmente ligada em um promotor para controle e iniciação da transcrição da hospedeira como sequência de nucleotídeos em uma célula definida abaixo. O promotor preferivelmente é capaz de causar suficiente expressão da xilose-isomerase na célula hospedeira, para conferir à célula hospedeira a capacidade de isomerizar xilose à xilulose. Preferivelmente, o promotor causa uma atividade de xilose-isomerase específica na célula hospedeira como definida acima. Promotores úteis nos construtos de ácido nucleico da invenção incluem tanto os promotores naturais induzíveis constitutivos quanto os promotores engenhados. Um promotor preferido para uso na presente invenção será em adição insensível à repressão catabólita (glicose) e/ou preferivelmente não requererá xilose para indução. Promotores possuindo estas características estão amplamente disponíveis e são conhecidos pela pessoa experiente.
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 27/57
20/43
Exemplos apropriados de tais promotores incluem por exemplo promotores de levedura dos genes glicolíticos, tais como os promotores de fosfofrutoquinase (PPK) de levedura, triosefosfato-isomerase (TPI), gliceraldeído-3-fosfatodesidrogenase (GPD, TDH3 ou GAPDH), piruvato-quinase (PYK), fosfoglicerato-quinase (PGK); mais detalhes sobre tais promotores podem ser encontrados em (WO 93/03159). Outros promotores úteis são promotores de gene codificador de proteína ribossomal, o promotor de gene de lactose (LAC4), promotores de álcool-desidrogenase (ADH1, ADH4 e semelhantes), e o promotor de enolase (ENO). Outros promotores, tanto constitutivos quanto induzíveis e os intensificadores ou sequências de ativação a montante serão conhecidos por aquelas pessoas experientes na técnica. Os promotores utilizados nos construtos de ácidos nucleico da presente invenção podem ser modificados, se desejado, para afetarem suas características de controle. Preferivelmente, o promotor empregado no construto de ácido nucleico para a expressão de xilose-isomerase é homólogo à célula hospedeira na qual a xilose-isomerase é expressada.
[0032] No construto de ácido nucleico, a extremidade 3' da sequência de ácido nucleico codificadora de xiloseisomerase preferivelmente está operacionalmente ligada em uma sequência de terminador de transcrição. Preferivelmente a sequência de terminador é operacional em uma célula hospedeira escolhida, tal como por exemplo a espécie de levedura escolhida. Em qualquer caso a escolha do terminador não é crítica, pode ser por exemplo de qualquer gene de levedura, embora terminadores possam algumas vezes funcionar se de um gene, eucariótico, de não-levedura. A sequência de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 28/57
21/43 terminação de transcrição adicionalmente preferivelmente compreende um sinal de poliadenilação.
[0033] Opcionalmente, um marcador selecionável pode estar presente no construto de ácido nucleico. Como aqui usado, o termo marcador refere-se a um gene codificador de uma característica ou um fenótipo que permite a seleção de, ou triagem de, uma célula hospedeira contendo o marcador. O gene marcador pode ser um gene de resistência a antibiótico por meio do qual o antibiótico apropriado pode ser usado para selecionar células transformadas dentre as células que não estão transformadas. Exemplos de marcadores de resistência a antibiótico adequados incluem por exemplo dihidrofolato-redutase, higromicina-B-fosfo-transferase, 3'O-fosfo-transferase II (resistência à canamicina, à neomicina e a G418). Embora os marcadores de resistência a antibiótico possam ser mais convenientes para a transformação de células hospedeiras poliploides, preferivelmente, contudo, marcadores de resistência a antibiótico não são usados, tais como marcadores auxotróficos (URA3, TRP1, LUE2) ou o gene de TPI de S. pombe (descrito por Russell P.R., 1985, Gene 40:125-130). Em uma modalidade preferida as células hospedeiras transformadas com os construtos de ácido nucleico estão livres de gene marcador. Métodos para a construção de microbianas livres de gene marcador células hospedeiras recombinantes são descritos em EP-A-0.635.574 e baseiam-se no uso de marcadores bidirecionais tais como o gene amdS de
A.
nidulans acetamidase) ou os genes
URA3 e LYS2 de levedura.
Alternativamente, um marcador selecionável tal como uma
Proteína
Fluorescente
Verde, lacZ, luciferase,
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 29/57
22/43 cloranfenicol-acetil-transferase, beta-glicuronidase pode ser incorporado nos construtos de ácido nucleico da invenção permitindo a triagem de células transformadas.
[0034] Outros elementos opcionais que podem estar presentes nos construtos de ácido nucleico da invenção incluem, mas não se limitam a, uma ou mais sequências líderes, intensificadores, fatores de integração, e/ou genes repórter, sequências de intron, centrômeros, telômeros e/ou sequências de fixação de matriz (MAR). Os construtos de ácido nucleico da invenção podem adicionalmente compreender uma sequência para replicação autônoma, tal como uma sequência ARS. Construtos de ácido nucleico epissomais adequados podem por exemplo se basear nos plasmídeos pKD1 ou 2μ de levedura (Fleer et al., 1991, Biotechnology 9^ 968-975).
Alternativamente o construto de ácido nucleico pode compreender sequências para a integração, preferivelmente por recombinação homóloga. Tais sequências podem, portanto, ser sequências homólogas ao sítio alvo para a integração no genoma da célula hospedeira. Os construtos de ácido nucleico da invenção podem ser proporcionados em uma maneira per se conhecida, que em geral envolve técnicas tais como restrição e ligação de sequências de ácido nucleico e/ou de ácidos nucleicos, para as quais é feita referência aos livros-texto, tais como Sambrook e Russel (2001) Molecular Cloning: A
Laboratory Manual (3aedition),
Cold Spring Harbor
Laboratory,
Cold Spring Harbor Laboratory Press, ou F.
Ausubel et al., eds.,
Current Protocols in Molecular
Biology”, Green Publishing and Wiley Interscience, New York
1987).
[0035] Em outro aspecto a invenção refere-se a uma
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 30/57
23/43 molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica uma xilose-isomerase. A molécula de ácido nucleico é preferivelmente selecionada do grupo consistindo de:
(a) moléculas de ácido nucleico codificadoras de um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que
possui pelo | menos 50, 53, 54, | 55, 60, | 70, 80, | 90, 95, | 97, |
98, ou 99% | de identidade de | sequência | com a | sequência | de |
aminoácidos | de SEQ ID NO.1; | ||||
(b) moléculas de ácido | nucleico | codificadoras de | um |
polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 50, 56, 57, 58, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO.2;
(c) moléculas de ácido nucleico cuja fita complementar hibridiza em uma sequência de molécula de ácido nucleico de (a) ou (b);
(d) moléculas de ácido nucleico cuja sequência difere da sequência de uma molécula de ácido nucleico de (c) devido à degeneração do código genético.
[0036] Alternativamente, uma molécula de ácido nucleico de (a) pode codificar um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 67, 68, 69, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% de similaridade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO. 1. Uma molécula de ácido nucleico de (c) preferivelmente hibridiza sob condições moderadas, com maior preferência sob condições rigorosas como aqui definidas acima. Preferivelmente a molécula de ácido nucleico é de um eucarioto, com maior preferência de um microorganismo
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 31/57
24/43 eucariótico tal como um fungo, mais preferivelmente de um fungo anaeróbico, tal como por exemplo aqueles fungos anaeróbicos descritos acima.
[0037] Em ainda outro aspecto a invenção se refere a uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica uma xilulose-quinase, preferivelmente uma D-xilulose-quinase. Uma D-xilulosequinase (EC 2.7.1.17; também referida como uma Dxilulosequinase) é aqui definida como uma enzima que catalisa a conversão de D-xilulose em xilulose-5-fosfato. A molécula de ácido nucleico é preferivelmente selecionada do grupo consistindo de:
(a) moléculas de ácido nucleico codificadoras de um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 45, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO. 3;
(b) moléculas de ácido nucleico codificadoras de um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 30, 37, 38, 39, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO. 4;
(c) moléculas de ácido nucleico cuja fita complementar hibridiza em uma sequência de molécula de ácido nucleico de (a) ou (b); e (d) moléculas de ácido nucleico cuja sequência difere da sequência de uma molécula de ácido nucleico de (c) devido à degeneração do código genético.
[0038] Alternativamente, uma molécula de ácido nucleico de (a) pode codificar um polipeptídeo compreendendo
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 32/57
25/43 uma sequência de aminoácidos que possui pelo menos 64, 65, 66, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% de similaridade de sequência de aminoácidos de SEQ ID NO. 3. Uma molécula de ácido nucleico (c) preferivelmente hibridiza sob condições moderadas, com maior preferência sob condições rigorosas como aqui definidas acima. Preferivelmente a molécula de ácido nucleico é de um eucarioto, com maior preferência de um microorganismo eucariótico tal como um fungo, mais preferivelmente de um fungo anaeróbico, tal como por exemplo aqueles fungos anaeróbicos descritos acima.
[0039] Em um outro aspecto a invenção refere-se aos processos de fermentação nos quais as células hospedeiras transformadas da invenção são usadas para a fermentação de fonte de carbono compreendendo uma fonte de xilose, tal como xilose. Em adição a uma fonte de xilose a fonte de carbono no meio de fermentação também pode compreender uma fonte de glicose. A fonte de xilose ou glicose pode ser xilose ou glicose como tal ou pode ser qualquer oligo- ou polímero de carboidrato compreendendo unidades de xilose ou de glicose, tais como por exemplo lignocelulose, xilanos, celulose, amido e semelhantes. Para a liberação de unidades de xilose ou de glicose de tais carboidratos, carboidrases adequadas (tais como xilanases, glicanases, amilases e semelhantes) podem ser adicionadas no meio de fermentação ou podem ser produzidas pela célula hospedeira transformada. No último caso a célula hospedeira transformada pode ser geneticamente engenhada para produzir e excretar tais carboidrases. Em um processo preferido a célula hospedeira transformada fermenta tanto xilose quanto glicose, preferivelmente simultaneamente em cujo caso é empregada preferivelmente uma célula
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 33/57
26/43 hospedeira transformada que é insensível à repressão de glicose para prevenir crescimento diáuxico. Em adição a uma fonte de xilose (e glicose) como fonte de carbono, o meio de fermentação adicionalmente compreenderá o ingrediente apropriado requerido para o crescimento da célula hospedeira transformada. Composições de meios de fermentação para o crescimento de microorganismos tais como leveduras são bem conhecidos na técnica.
[0040] O processo de fermentação é um processo para a produção de um produto de fermentação tal como etanol, ácido lático, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propanodiol, etileno, glicerol, antibióticos de β-lactama tais como Penicilina G ou Penicilina V e seus derivados fermentativos e cefalosporinas. O processo de fermentação pode ser um processo de fermentação aeróbico ou anaeróbico. Um processo de fermentação anaeróbico é aqui definido como um processo de fermentação operado na ausência de oxigênio ou no qual substancialmente nenhum oxigênio é consumido, por exemplo menos do que 5 mmol/L/h, e no qual moléculas orgânicas servem tanto como doadoras de elétrons quanto como receptores de elétrons. Na ausência de oxigênio, NADH produzido em glicólise e formação de biomassa, não pode ser oxidado por fosforilação oxidativa. Para solucionar este problema muitos microorganismos usam piruvato ou um de seus derivados como um receptor de elétrons e de hidrogênio para deste modo regenerarem NAD+. Assim, em um processo de fermentação anaeróbica preferido piruvato é usado como um receptor de elétrons (e de hidrogênio) e é reduzido aos produtos de fermentação tais como etanol, ácido lático, 1,3-propanodiol, etileno, ácido acético ou ácido succínico.
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 34/57
27/43 [0041] O processo de fermentação é preferivelmente realizado em uma temperatura que é ótima para a célula hospedeira transformada. Assim, para a maioria das células hospedeiras de levedura ou de fungo, o processo de fermentação é conduzido em uma temperatura que é menor do que 38°C. Para células hospedeiras de levedura ou de fungo, o processo de fermentação é preferivelmente realizado em uma temperatura que é menor do que 35, 33, 30 ou 28°C e em uma temperatura que é maior do que 20, 22 ou 25°C.
[0042] Um processo preferido é um processo para a produção de etanol, por meio do qual o processo compreende as etapas de: (a) fermentar um meio contendo uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada como definida acima, por meio do qual a célula hospedeira fermenta xilose e etanol; e opcionalmente, (b) recuperar o etanol. O meio de fermentação também pode compreender uma fonte de glicose que também é fermentada a etanol. No processo a produtividade volumétrica de etanol é preferivelmente de pelo menos 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 5,0 ou 10,0 g de etanol por litro por hora. O rendimento de etanol sobre xilose e/ou glicose no processo preferivelmente é de pelo menos 50, 60, 70, 90, 95 ou 98%. O rendimento de etanol é aqui definido como uma percentagem do rendimento teórico, que, para a glicose e a xilose é de 0,51 g de etanol por g de glicose ou xilose.
[0043] Em um outro aspecto a invenção refere-se a um processo para a produção de um produto de fermentação selecionado do grupo consistindo de ácido lático, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,2-propano-diol, etileno, glicerol, antibióticos de β-lactama e cefalosporinas. O processo preferivelmente compreende as
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 35/57
28/43 etapas de: (a) fermentar um meio contendo uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada como definida aqui acima, por meio do qual a célula hospedeira fermenta xilose ao produto de fermentação, e opcionalmente, (b) recuperar o produto de fermentação. Em um processo preferido, o meio também contém uma fonte de glicose.
Descrição das figuras [0044] Figura 1. Curvas de crescimento de transformante de S. cerevisiae crescido sobre meio contendo galactose a 25 mM e xilose a 100 mM como fonte de carbono. Transformante pYes contém um vetor de expressão em levedura sem inserção. Transformantes 14.3, 16.2.1 e 16.2.2 são transformados com o vetor pYES contendo sequência codificadora de xilose-isomerase de Piromyces sp. E2
Exemplos Exemplo 1
Clonagem de cDNAs de xilulose-quinase e de xilose-isomerase de Piromyces
Organismos e condições de crescimento [0045] O fungo anaeróbico Piromyces sp. E2 (ATCC 76762), isolado das fezes de um elefante indiano, foi crescido anaerobicamente sob N2/CO2 (80%/20%)a 39°C em meio
M2 suplementado com várias fontes de carbono (24). Fontes de carbono usadas foram Avicel (celulose microcristalina do tipo PH 105, Serva, Alemanha), frutose ou xilose (todas a 0,5%, p/v). Após a cessação do crescimento, julgada pela produção de hidrogênio, as células foram coletadas por centrifugação (15.000 x g, 4°C, 15 min); ou por filtração sobre tela de náilon (tamanho de poro de 30 pm).
Preparação do extrato livre de células
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 36/57
29/43 [0046] As células fúngicas lavadas com água deionizada para a remoção dos componentes do meio. Os extratos livres de células foram preparados por congelamento das células em nitrogênio líquido e subsequente moagem com glóbulos de vidro (diâmetro de 0,10-0,11 mm) em um almofariz. Solução-tampão de Tris/HCl (100 mM, pH 7,0) foi adicionada no pó (1:1, p/v) e após descongelamento por 15 min a suspensão foi centrifugada (18.000 x g, 4°C, 15 min). O sobrenadante transparente foi usado como uma fonte de enzimas intracelulares.
Ensaios de enzima [0047] Atividade de xilose-isomerase foi ensaiada a 37°C em uma mistura reacional contendo solução-tampão de fosfato a 50 Mm (pH 7,0), xilose a 10 mM, MgCl2 a 10 mM e uma quantidade adequada de extrato livre de células. A quantidade de xilulose formada foi determinada pelo método de cisteína-carbazol (9). As atividades de xilulose-quinase e de xilose-redutase foram ensaiadas como descrito por Witteveen et al. (28). Uma unidade de atividade é definida como a quantidade de enzima produzindo 1 nmol de xilulose por min sob as condições do ensaio. Xilulose formada foi determinada pelo método de Dische e Borenfreund 1951, J. Biol. Chem. 192: 583-587) ou por HPLC usando uma coluna Biorad HPX-87N operada a 80°C e eluída a 0,6 mL/min utilizando Na2HPO4 a 0,01 M como o eluente. Xilose e xilulose foram detectadas por um detector de Índice de Refração em uma temperatura interna de 60°C.
[0048] A atividade específica é expressada como unidades por mg de proteína. Protepina foi determinada com o reagente de proteína Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories,
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 37/57
30/43
Richmond, CA, USA) com γ-globulina bovina como um padrão. Sequenciamento aleatório de uma biblioteca de Cdna de Piromyces sp. E2 [0049] A biblioteca de cDNA construída no vetor lambda ZAPII como descrito previamente (2) foi usada. Uma alíquota desta biblioteca foi convertida em clones de pBluescript SK por excisão de massa com ExAssist helper phage” (Stratagene, La Jolla, CA, USA). Clones selecionados aleatoriamente foram sequenciados com o iniciador reverso M13 para se obterem sequências de parte de 5'. cDNAs incompletos foram usados para a síntese de sondas que foram empregadas para o reexame da biblioteca. Para se obterem as sequências de comprimento total subclones foram gerados em pUC18. Sequenciamento foi realizado com o sequenciador automático API prism 310 com o kit de sequenciamento de DNA por reação útil de sequenciamento cíclico do terminador dRhodamine” (Perkin-Elmer Applied Biosystems).
Resultados [0050] Clones aleatoriamente selecionados de uma biblioteca de cDNA do fungo anaeróbico Piromyces sp. E2 foram sequenciados e isto resultou em dois clones (pH97 e pAK44) cujas sequências mostraram homologia alta em relação aos genes de xilose-isomerase e de D-xiluloquinase, respectivamente. Os clones foram analisados em detalhe.
[0051] Clone pH97 não conteve uma ORF completa e, portanto, a biblioteca de cDNA foi reexaminada com uma sonda projetada baseando-se nos dados de sequência do clone pH97. Isto resultou em um clone de pR3 com um inserto de 1669 pb. Uma ORF codificadora de uma proteína de 437 aminoácidos com alta similaridade às xilose-isomerases pôde ser
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 38/57
31/43 identificada. Embora a região não-traduzida 5' compreenda apenas 4 pb, o resíduo de metionina de iniciação presumido encaixou-se bem em um alinhamento de sequências de xiloseisomerase conhecidas. A região não-traduzida 3' foi de comprimento de 351 pb e teve um alto conteúdo de AT, que é típico de fungos anaeróbicos. A ORF continha os aminoácidos, que como mostrado, são importantes para a interação com o substrato (tríade catalítica His 102, Asp 105, Asp 340 e Lys 235) e a ligação de magnésio (Glu 232) (14,26). Em adição, dois padrões de assinatura (resíduos 185-194 e 230-237) desenvolvidos para xilose-isomerases (20) estavam presentes. A xilose-isomerase de Piromyces sp. E2 (XylA) mostra a homologia mais elevada para as enzimas de Haemophilus influenza (identidade de 52%, similaridade de 68%), e d Hordeum vulgare (identidade de 49%, similaridade de 67%). O polipeptídeo deduzido da sequência de cDNA corresponde a uma massa molecular de 49.395 Da e tem um pI calculado de 5,2.
[0052] O segundo clone, pAK44, teve um inserto de 2041 pb e continha uma ORF completa codificadora de uma proteína de 494 aminoácidos com um peso molecular de 53.158 Da e um pI de 5,0. A primeira metionina é precedida por uma região não-traduzida de 5' de 111 pb, enquanto que a região não-traduzida de 3' compreendia 445 pb. Ambas as regiões são ricas em AT. Pesquisas por BLAST e FASTA revelaram alta similaridade com xiluloquinases. As duas regiões de consenso de fosfato definidas por Rodriguez-Pefia et al. (22) foram verificadas nas posições 6-23 e 254-270 como mostrado em um alinhamento parcial. Em adição, as assinaturas para esta família de carboidrato-quinase como descrita no banco de dados de Prosite foram identificadas (131-145 e 351-372). A
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 39/57
32/43 xilulose-quinase (XylB) de Piromyces sp. E2 mostrou homologia mais elevada com a proteína XylB de Haemophilus influenza (identidade de 46%, similaridade de 64%).
Exemplo 2
Expressão de xilose-isomerase de Piromyces sp. E2 em Saccharomyces cerevisiae [0053] cDNA de Piromyces sp. E2 foi usado em uma reação de PCR com pfu polimerase (Stratagene). Os iniciadores foram projetados usando as sequências das extremidades 5' e 3' do gene de xilose-isomerase e também continham um sítio de restrição SfI e XbaI. O produto da PCR foi clonado no vetor pPICZa (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Para se obter o gene de xilose-isomerase, o vetor pPICZa foi digerido com EcoRI e XbaI. O produto da digestão foi ligado no vetor pYes2 (Invitrogen). O plasmídeo pYes2 com o gene de xiloseisomerase foi transformado em Saccharomyces cerevisiae (cepa BJ1991, doada por Beth Jones, UvA). O genótipo desta cepa é: mata, leu2, trp1, ura 3-251, prb-1-1122 e pep4-3. Transformantes foram plaqueados sobre placas SC (0,67% de meio YNB=0,05% de L-Trp + 2% de glicose + 2% de agarose). Células não transformadas não podem crescer sobre estas placas.
Indução [0054] Células de Saccharomyces cerevisiae transformadas foram crescidas sobre meio de glicose a 25°C por 72 h (rafinose pode ser usada como uma alternativa para a glicose). Células foram cultivadas e ressuspensas em meio SC com galactose no lugar de glicose. Após 8 h de indução as células foram coletadas e lisadas usando glóbulos de vidro (diâmetro de 0,10-0,11 mm) e solução-tampão de
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 40/57
33/43 fragmentação” (tampão de fosfato a 50 mM + 5% de glicerol + inibidor de protease). Após a lise a mistura foi centrifugada (18.000 x g, 4°C, 15 min). O sobrenadante límpido foi usado para determinar a atividade de xilose-isomerase utilizando o método descrito acima (Exemplo 1). Uma atividade de 10 U por mg de proteína foi medida a 37°C.
Exemplo 3
Crescimento sobre xilose de cepas de levedura transformada Composição do meio [0055] Cepas de Saccharomyces cerevisiae foram crescidas sobre meio SC com a seguinte composição: 0,67% (p/v) de base nitrogenada de levedura; 0,01% (p/v) de Ltriptofano; 0,01% (p/v) de L-leucina e quer glicose, galactose ou xilose, quer uma combinação destes substratos (veja abaixo). Para placas de ágar o meio foi suplementado com 2% (p/v) de ágar bacteriológico.
Experimento de crescimento [0056] Cepa BJ1991 de Saccharomyces cerevisiae (genótipo: mata, leu2, trpl, ura 3-251, prb-1-1122 e pep43) transformada com pYes2 sem inserção e três transformantes selecionados (16.2.1; 16.2.2 e 14.3) contendo pYes2 com o gene de xilose-isomerase de Piromyces sp. E2 foram crescidos sobre placas de SC com glicose a 10 mM como fonte de carbono. Quando as colônias foram visíveis, colônias individuais foram usadas para a inoculação de meio SVC líquido com xilose a 100 mM e galactose a 25 mM como fontes de carbono. Crescimento foi monitorado pela medição do aumento na densidade óptica a 600 nm em um espectrofotômetro LKB Ultrospec K.
Resultados
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 41/57
34/43 [0057] Os resultados dos experimentos de crescimento são compilados na Figura 1. A cultura com a cepa BJ1991 transformada com pYes2 sem inserção mostra um aumento na OD660 até em 80h. Após este tempo uma diminuição gradual é observada. Isto é causado pela agregação das células de levedura que é com frequência observada no final do crescimento. As culturas com os três transformantes não interromperam o crescimento após 80 h e mostram um aumento adicional até pelo menos 150 h.
Exemplo 4
Construção de um vetor de expressão em levedura novo, melhorado para a expressão constitutiva de xilose-isomerase de Piromyces sp. E2 em Saccharomyces cerevisiae [0058] O vetor pPICZa, contendo o gene de Piromyces sp. E2 codificador de xilose-isomerase, foi usado como um modelo para a PCR com VentR DNA polimerase (New England Biolabs). Os iniciadores foram projetados usando as sequências 3' e 5' do gene codificador de xilose-isomerase e incluíram um sítio EcoRI e SpeI. Adicionalmente os iniciadores foram projetados para a remoção do sítio XbaI encontrado no construto pPICZ«, substituindo-o por um códon de terminação (TAA). O produto final foi projetado para restaurar a matriz de leitura aberta original, sem os aminoácidos adicionados (marcadores his e cMyc) verificados no construto pPICZ«. O produto da PCR foi cortado com EcoRI e SpeI. O produto final foi clonado em um vetor derivado de pYES2 (Invitrogen). Neste vetor o promotor GAL1 encontrado em pYES2 foi substituído pelo promotor TPII com o propósito de garantir a expressão constitutiva da xilose-isomerase, eliminando deste modo a necessidade de galactose no meio. O
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 42/57
35/43 promotor TPII foi clonado de uma forma modificado de plasmídeo pYX012 (R&R systems). O promotor foi cortado como um fragmento NheI-EcoRI. Ambos o promotor TPII e o produto da PCR do gene codificador de xilose-isomerase foram ligados em pYES2 cortado com SpeI e XbaI. Este plasmídeo foi usado para transformar a cepa CEN.PK113-5D de Saccharomyces cerevisiae (doação de Peter Kotter, Frankfurt). O genótipo da cepa é: MatA ura3-52. Transformantes foram selecionados sobre placas de meio mineral (Versuyn et alEffect of benzoic acid on metabolismo fluxes in yeasts: a continuousculture study on the regulation of respiration and alcoholic fermentation” (1992) Yeast 8(7):501-17) com 2% de glicose como a fonte de carbono. As células não transformadas não podem crescer sobre estas placas. Os transformantes foram crescidos sobre misturas de glicose/xilose em culturas quimiostáticas limitadas em carbono. Os transformantes crescidos sob estas condições exibiram altas atividades de xilose-isomerase (800 unidades por mg a 30°C) de acordo com um ensaio de enzima específico como desenvolvido por Kersters-Hildersson et al. (Kinetic characterization of Dxylose isomerases by enzymatic assays using D-sorbitol dehydrogenase”, Enz. Microb. Technol. 9 (1987) 145-148). A atividade in vitro de xilose-isomerase nos extratos livres de células da cepa de S. cerevisiae transformada foi dependente de cátions bivalentes (Mg2+ ou Co2+) e um valor de Km relativamente baixo para a xilose de aproximadamente 20 mM foi medido.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Royal Nedalco B.V.
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 43/57
36/43 <120> CÉLULA HOSPEDEIRA TRANSFORMADA COM UM CONSTRUTO DE ÁCIDO NUCLÉICO, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, E,
PROCESSOS PARA A PRODUÇÃO DE ETANOL, E DE UM PRODUTO DE FERMENTAÇÃO <130> xilose-isomerase de Piromyces <140> BO 44829 <141> 2001-12 -31 <160> 4 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 437 <212> PRT <213> Piromyces sp.
<400> 1
Met | Ala | Lys | Glu | Tyr | Phe | Pro | Gln | Ile | Gln | Lys | Ile | Lys | Phe | Glu |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Gly | Lys | Asp | Ser | Lys | Asn | Pro | Leu | Ala | Phe | His | Tyr | Tyr | Asp | Ala |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Glu | Lys | Glu | Val | Met | Gly | Lys | Lys | Met | Lys | Asp | Trp | Leu | Arg | Phe |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Ala | Met | Ala | Trp | Trp | His | Thr | Leu | Cys | Ala | Glu | Gly | Ala | Asp | Gln |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Phe | Gly | Gly | Gly | Thr | Lys | Ser | Phe | Pro | Trp | Asn | Glu | Gly | Thr | Asp |
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 44/57
37/43
70 75
Ala | Ile | Glu | Ile | Ala 80 | Lys | Gln | Lys | Val | Asp 85 | Ala | Gly | Phe | Glu | Ile 90 |
Met | Gln | Lys | Leu | Gly | Ile | Pro | Tyr | Tyr | Cys | Phe | His | Asp | Val | Asp |
95 | 100 | 105 | ||||||||||||
Leu | Val | Ser | Glu | Gly | Asn | Ser | Ile | Glu | Glu | Tyr | Glu | Ser | Asn | Leu |
110 | 115 | 120 | ||||||||||||
Lys | Ala | Val | Val | Ala | Tyr | Leu | Lys | Glu | Lys | Gln | Lys | Glu | Thr | Gly |
125 | 130 | 135 | ||||||||||||
Ile | Lys | Leu | Leu | Trp | Ser | Thr | Ala | Asn | Val | Phe | Gly | His | Lys | Arg |
140 | 145 | 150 | ||||||||||||
Tyr | Met | Asn | Gly | Ala | Ser | Thr | Asn | Pro | Asp | Phe | Asp | Val | Val | Ala |
155 | 160 | 165 | ||||||||||||
Arg | Ala | Ile | Val | Gln | Ile | Lys | Asn | Ala | Ile | Asp | Ala | Gly | Ile | Glu |
170 | 175 | 180 | ||||||||||||
Leu | Gly | Ala | Glu | Asn | Tyr | Val | Phe | Trp | Gly | Gly | Arg | Glu | Gly | Tyr |
185 | 190 | 195 | ||||||||||||
Met | Ser | Leu | Leu | Asn | Thr | Asp | Gln | Lys | Arg | Glu | Lys | Glu | His | Met |
200 | 205 | 210 | ||||||||||||
Ala | Thr | Met | Leu | Thr | Met | Ala | Arg | Asp | Tyr | Ala | Arg | Ser | Lys | Gly |
215 | 220 | 225 | ||||||||||||
Phe | Lys | Gly | Thr | Phe | Leu | Ile | Glu | Pro | Lys | Pro | Met | Glu | Pro | Thr |
230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Lys | His | Gln | Tyr | Asp | Val | Asp | Thr | Glu | Thr | Ala | Ile | Gly | Phe | Leu |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||
Lys | Ala | His | Asn | Leu | Asp | Lys | Asp | Phe | Lys | Val | Asn | Ile | Glu | Val |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||
Asn | His | Ala | Thr | Leu | Ala | Gly | His | Thr | Phe | Glu | His | Glu | Leu | Ala |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||
Cys | Ala | Val | Asp | Ala | Gly | Met | Leu | Gly | Ser | Ile | Asp | Ala | Asn | Arg |
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 45/57
38/43
290 | 295 | 300 | ||||||||||||
Gly | Asp | Tyr | Gln | Asn | Gly | Trp | Asp | Thr | Asp | Gln | Phe | Pro | Ile | Asp |
305 | 310 | 315 | ||||||||||||
Gln | Tyr | Glu | Leu | Val | Gln | Ala | Trp | Met | Glu | Ile | Ile | Arg | Gly | Gly |
320 | 325 | 330 | ||||||||||||
Gly | Phe | Val | Thr | Gly | Gly | Thr | Asn | Phe | Asp | Ala | Lys | Thr | Arg | Arg |
335 | 340 | 345 | ||||||||||||
Asn | Ser | Thr | Asp | Leu | Glu | Asp | Ile | Ile | Ile | Ala | His | Val | Ser | Gly |
350 | 355 | 360 | ||||||||||||
Met | Asp | Ala | Met | Ala | Arg | Ala | Leu | Glu | Asn | Ala | Ala | Lys | Leu | Leu |
365 | 370 | 375 | ||||||||||||
Gln | Glu | Ser | Pro | Tyr | Thr | Lys | Met | Lys | Lys | Glu | Arg | Tyr | Ala | Ser |
380 | 385 | 390 | ||||||||||||
Phe | Asp | Ser | Gly | Ile | Gly | Lys | Asp | Phe | Glu | Asp | Gly | Lys | Leu | Thr |
395 | 400 | 405 | ||||||||||||
Leu | Glu | Gln | Val | Tyr | Glu | Tyr | Gly | Lys | Lys | Asn | Gly | Glu | Pro | Lys |
410 | 415 | 420 | ||||||||||||
Gln | Thr | Ser | Gly | Lys | Gln | Glu | Leu | Tyr | Glu | Ala | Ile | Val | Ala | Met |
425 | 430 | 435 |
Tyr Gln <210> 2 <211> 1669 <212> DNA <213> Piromyces sp.
<400> 2 gtaaatggct aaggaatatt tcccacaaat tcaaaagatt aagttcgaag gtaaggattc 60 taagaatcca ttagccttcc actactacga tgctgaaaag gaagtcatgg gtaagaaaat 120 gaaggattgg ttacgtttcg ccatggcctg gtggcacact ctttgcgccg aaggtgctga 180
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 46/57
39/43 ccaattcggt ggaggtacaa agtctttccc atggaacgaa ggtactgatg ctattgaaat 240 tgccaagcaa aaggttgatg ctggtttcga aatcatgcaa aagcttggta ttccatacta 300 ctgtttccac gatgttgatc ttgtttccga aggtaactct attgaagaat acgaatccaa 360 ccttaaggct gtcgttgctt acctcaagga aaagcaaaag gaaaccggta ttaagcttct 420 ctggagtact gctaacgtct tcggtcacaa gcgttacatg aacggtgcct ccactaaccc 480 agactttgat gttgtcgccc gtgctattgt tcaaattaag aacgccatag acgccggtat 540 tgaacttggt gctgaaaact acgtcttctg gggtggtcgt gaaggttaca tgagtctcct 600 taacactgac caaaagcgtg aaaaggaaca catggccact atgcttacca tggctcgtga 660 ctacgctcgt tccaagggat tcaagggtac tttcctcatt gaaccaaagc caatggaacc 720 aaccaagcac caatacgatg ttgacactga aaccgctatt ggtttcctta aggcccacaa 780 cttagacaag gacttcaagg tcaacattga agttaaccac gctactcttg ctggtcacac 840 tttcgaacac gaacttgcct gtgctgttga tgctggtatg ctcggttcca ttgatgctaa 900 ccgtggtgac taccaaaacg gttgggatac tgatcaattc ccaattgatc aatacgaact 960 cgtccaagct tggatggaaa tcatccgtgg tggtggtttc gttactggtg gtaccaactt 1020 cgatgccaag actcgtcgta actctactga cctcgaagac atcatcattg cccacgtttc 1080 tggtatggat gctatggctc gtgctcttga aaacgctgcc aagctcctcc aagaatctcc 1140 atacaccaag atgaagaagg aacgttacgc ttccttcgac agtggtattg gtaaggactt 1200 tgaagatggt aagctcaccc tcgaacaagt ttacgaatac ggtaagaaga acggtgaacc 1260 aaagcaaact tctggtaagc aagaactcta cgaagctatt gttgccatgt accaataagt 1320 taatcgtagt taaattggta aaataattgt aaaatcaata aacttgtcaa tcctccaatc 1380 aagtttaaaa gatcctatct ctgtactaat taaatatagt acaaaaaaaa atgtataaac 1440 aaaaaaaagt ctaaaagacg gaagaattta atttagggaa aaaataaaaa taataataaa 1500 caatagataa atcctttata ttaggaaaat gtcccattgt attattttca tttctactaa 1560 aaaagaaagt aaataaaaca caagaggaaa ttttcccttt tttttttttt tgtaataaat 1620 tttatgcaaa tataaatata aataaaataa taaaaaaaaa aaaaaaaaa 1669
<210> | 3 |
<211> | 494 |
<212> | PRT |
<213> | Piromyces sp. |
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 47/57
40/43 <400> 3
Met | Lys | Thr | Val | Ala | Gly | Ile | Asp | Leu | Gly | Thr | Gln | Ser | Met | Lys |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Val | Val | Ile | Tyr | Asp | Tyr | Glu | Lys | Lys | Glu | Ile | Ile | Glu | Ser | Ala |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Ser | Cys | Pro | Met | Glu | Leu | Ile | Ser | Glu | Ser | Asp | Gly | Thr | Arg | Glu |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||
Gln | Thr | Thr | Glu | Trp | Phe | Asp | Lys | Gly | Leu | Glu | Val | Cys | Phe | Gly |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||
Lys | Leu | Ser | Ala | Asp | Asn | Lys | Lys | Thr | Ile | Glu | Ala | lie | Gly | Ile |
65 | 70 | 75 | ||||||||||||
Ser | Gly | Gln | Leu | His | Gly | Phe | Val | Pro | Leu | Asp | Ala | Asn | Gly | Lys |
80 | 85 | 90 | ||||||||||||
Ala | Leu | Tyr | Asn | Ile | Lys | Leu | Trp | Cys | Asp | Thr | Ala | Thr | Val | Glu |
95 | 100 | 105 | ||||||||||||
Glu | Cys | Lys | Ile | Ile | Thr | Asp | Ala | Ala | Gly | Gly | Asp | Lys | Ala | Val |
110 | 115 | 120 | ||||||||||||
Ile | Asp | Ala | Leu | Gly | Asn | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Phe | Thr | Ala | Pro |
125 | 130 | 135 | ||||||||||||
Lys | Ile | Leu | Trp | Leu | Lys | Arg | Asn | Lys | Pro | Glu | Ala | Phe | Ala | Asn |
140 | 145 | 150 | ||||||||||||
Leu | Lys | Tyr | Ile | Met | Leu | Pro | His | Asp | Tyr | Leu | Asn | Trp | Lys | Leu |
155 | 160 | 165 | ||||||||||||
Thr | Gly | Asp | Tyr | Val | Met | Glu | Tyr | Gly | Asp | Ala | Ser | Gly | Thr | Ala |
170 | 175 | 180 | ||||||||||||
Leu | Phe | Asp | Ser | Lys | Asn | Arg | Cys | Trp | Ser | Lys | Lys | Ile | Cys | Asp |
185 | 190 | 195 | ||||||||||||
Ile | Ile | Asp | Pro | Lys | Leu | Leu | Asp | Leu | Leu | Pro | Lys | Leu | Ile | Glu |
200 205 210
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 48/57
41/43
Pro | Ser | Ala | Pro | Ala 215 | Gly | Lys | Val | Asn | Asp 220 | Glu | Ala | Ala | Lys | Ala 225 |
Tyr | Gly | Ile | Pro | Ala | Gly | Ile | Pro | Val | Ser | Ala | Gly | Gly | Gly | Asp |
230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Met | Met | Gly | Ala | Val | Gly | Thr | Gly | Thr | Val | Ala | Asp | Gly | Phe |
245 | 250 | 255 | ||||||||||||
Leu | Thr | Met | Ser | Met | Gly | Thr | Ser | Gly | Thr | Leu | Tyr | Gly | Tyr | Ser |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||
Asp | Lys | Pro | Ile | Ser | Asp | Pro | Ala | Asn | Gly | Leu | Ser | Gly | Phe | Cys |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||
Ser | Ser | Thr | Gly | Gly | Trp | Leu | Pro | Leu | Leu | Cys | Thr | Met | Asn | Cys |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||
Thr | Val | Ala | Thr | Glu | Phe | Val | Arg | Asn | Leu | Phe | Gln | Met | Asp | Ile |
305 | 310 | 315 | ||||||||||||
Lys | Glu | Leu | Asn | Val | Glu | Ala | Ala | Lys | Ser | Pro | Cys | Gly | Ser | Glu |
320 | 325 | 330 | ||||||||||||
Gly | Val | Leu | Val | Ile | Pro | Phe | Phe | Asn | Gly | Glu | Arg | Thr | Pro | Asn |
335 | 340 | 345 | ||||||||||||
Leu | Pro | Asn | Gly | Arg | Ala | Ser | Ile | Thr | Gly | Leu | Thr | Ser | Ala | Asn |
350 | 355 | 360 | ||||||||||||
Thr | Ser | Arg | Ala | Asn | Ile | Ala | Arg | Ala | Ser | Phe | Glu | Ser | Ala | Val |
365 | 370 | 375 | ||||||||||||
Phe | Ala | Met | Arg | Gly | Gly | Leu | Asp | Ala | Phe | Arg | Lys | Leu | Gly | Phe |
380 | 385 | 390 | ||||||||||||
Gln | Pro | Lys | Glu | Ile | Arg | Leu | Ile | Gly | Gly | Gly | Ser | Lys | Ser | Asp |
395 | 400 | 405 | ||||||||||||
Leu | Trp | Arg | Gln | Ile | Ala | Ala | Asp | Ile | Met | Asn | Leu | Pro | Ile | Arg |
410 | 415 | 420 | ||||||||||||
Val | Pro | Leu | Leu | Glu | Glu | Ala | Ala | Ala | Leu | Gly | Gly | Ala | Val | Gln |
425 430 435
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 49/57
42/43
Ala | Leu | Trp | Cys | Leu 440 | Lys | Asn | Gln | Ser | Gly 445 | Lys | Cys | Asp | Ile | Val 450 |
Glu | Leu | Cys | Lys | Glu | His | Ile | Lys | Ile | Asp | Glu | Ser | Lys | Asn | Ala |
455 | 460 | 465 | ||||||||||||
Asn | Pro | Ile | Ala | Glu | Asn | Val | Ala | Val | Tyr | Asp | Lys | Ala | Tyr | Asp |
470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Glu | Tyr | Cys | Lys | Val | Val | Asn | Thr | Leu | Ser | Pro | Leu | Tyr | Ala |
485 490 <210> 4 <211> 2041 <212> DNA <213> Piromyces sp.
<400> 4 attatataaa ataactttaa ataaaacaat ttttatttgt ttatttaatt attcaaaaaa 60 aattaaagta aaagaaaaat aatacagtag aacaatagta ataatatcaa aatgaagact 120 gttgctggta ttgatcttgg aactcaaagt atgaaagtcg ttatttacga ctatgaaaag 180 aaagaaatta ttgaaagtgc tagctgtcca atggaattga tttccgaaag tgacggtacc 240 cgtgaacaaa ccactgaatg gtttgacaag ggtcttgaag tttgttttgg taagcttagt 300 gctgataaca aaaagactat tgaagctatt ggtatttctg gtcaattaca cggttttgtt 360 cctcttgatg ctaacggtaa ggctttatac aacatcaaac tttggtgtga tactgctacc 420 gttgaagaat gtaagattat cactgatgct gccggtggtg acaaggctgt tattgatgcc 480 cttggtaacc ttatgctcac cggtttcacc gctccaaaga tcctctggct caagcgcaac 540 aagccagaag ctttcgctaa cttaaagtac attatgcttc cacacgatta cttaaactgg 600 aagcttactg gtgattacgt tatggaatac ggtgatgcct ctggtaccgc tctcttcgat 660 tctaagaacc gttgctggtc taagaagatt tgcgatatca ttgacccaaa acttttagat 720 ttacttccaa agttaattga accaagcgct ccagctggta aggttaatga tgaagccgct 780 aaggcttacg gtattccagc cggtattcca gtttccgctg gtggtggtga taacatgatg 840 ggtgctgttg gtactggtac tgttgctgat ggtttcctta ccatgtctat gggtacttct 900
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 50/57
43/43 ggtactcttt acggttacag tgacaagcca attagtgacc cagctaatgg tttaagtggt 960 ttctgttctt ctactggtgg atggcttcca ttactttgta ctatgaactg tactgttgcc 1020 actgaattcg ttcgtaacct cttccaaatg gatattaagg aacttaatgt tgaagctgcc 1080 aagtctccat gtggtagtga aggtgtttta gttattccat tcttcaatgg tgaaagaact 1140 ccaaacttac caaacggtcg tgctagtatt actggtctta cttctgctaa caccagccgt 1200 gctaacattg ctcgtgctag tttcgaatcc gccgttttcg ctatgcgtgg tggtttagat 1260 gctttccgta agttaggttt ccaaccaaag gaaattcgtc ttattggtgg tggttctaag 1320 tctgatctct ggagacaaat tgccgctgat atcatgaacc ttccaatcag agttccactt 1380 ttagaagaag ctgctgctct tggtggtgct gttcaagctt tatggtgtct taagaaccaa 1440 tctggtaagt gtgatattgt tgaactttgc aaagaacaca ttaagattga tgaatctaag 1500 aatgctaacc caattgccga aaatgttgct gtttacgaca aggcttacga tgaatactgc 1560 aaggttgtaa atactctttc tccattatat gcttaaattg ccaatgtaaa aaaaaatata 1620 atgccatata attgccttgt caatacactg ttcatgttca tataatcata ggacattgaa 1680 tttacaaggt ttatacaatt aatatctatt atcatattat tatacagcat ttcattttct 1740 aagattagac gaaacaattc ttggttcctt gcaatataca aaatttacat gaatttttag 1800 aatagtctcg tatttatgcc caataatcag gaaaattacc taatgctgga ttcttgttaa 1860 taaaaacaaa ataaataaat taaataaaca aataaaaatt ataagtaaat ataaatatat 1920 aagtaatata aaaaaaaagt aaataaataa ataaataaat aaaaattttt tgcaaatata 1980 taaataaata aataaaatat aaaaataatt tagcaaataa attaaaaaaa aaaaaaaaaa 2040 a 2041
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 51/57
Claims (9)
1/3
REIVINDICAÇÕES
1. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada com um construto de ácido nucleico compreendendo uma sequência de nucleotídeos codificadora de uma xilose-isomerase, caracterizada pelo fato de compreender uma sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 ou suas sequências degeneradas que codificam a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, pela qual o construto de ácido nucleico ao transformar a célula hospedeira, confere à célula hospedeira a capacidade de crescer em xilose como fonte de carbono.
2. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a levedura pertence a uma das espécies: S. cerevisiae, S. bulderi, S. barnetti, S. exiguus, S. uvarum e S. diastaticus.
3. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a sequência de nucleotídeos codificadora de uma xilose-isomerase está operacionalmente ligada a um promotor que causa expressão da xiloseisomerase na célula hospedeira, para conferir à célula hospedeira a capacidade de isomerizar xilose em xilulose.
4. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o promotor é insensível à repressão catabólica na célula hospedeira.
5. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 52/57
2/3 compreende uma modificação genética que consiste de sobrexpressão de um gene endógeno ou expressão de um gene heterólogo, e pela qual o gene é selecionado do grupo consistindo de um gene codificador de: um transportador de pentose ou hexose, uma xilulose-quinase; uma enzima da rota de pentose-fosfato, uma enzima glicolítica, e uma enzima etanologênica.
6. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira compreende uma modificação genética que consiste da inativação de um gene endógeno, através da qual o gene é selecionado do grupo consistindo de um gene codificador de um gene de hexose-quinase ou dos genes MIG1 e MIG2.
7. Célula hospedeira de Saccharomyces transformada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a célula hospedeira expressa uma ou mais enzimas que conferem à célula hospedeira a capacidade de produzir ácido lático, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propano-diol, etileno, glicerol, antibióticos de β-lactama e cefalosporinas.
8. Processo para a produção de etanol, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:
a) fermentar um meio contendo uma fonte de xilose com uma célula hospedeira de Saccharomyces transformada, como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, por meio do qual a célula hospedeira fermenta xilose a etanol; e opcionalmente, (b) recuperar o etanol.
Petição 870190045011, de 13/05/2019, pág. 53/57
3/3
9. Processo, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o meio também contém uma fonte de glicose.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP02075266 | 2002-01-23 | ||
PCT/NL2003/000049 WO2003062430A1 (en) | 2002-01-23 | 2003-01-23 | Fermentation of pentose sugars |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BRPI0306740B1 true BRPI0306740B1 (pt) | 2019-08-27 |
Family
ID=27589120
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BRPI0306740A BRPI0306740B1 (pt) | 2002-01-23 | 2003-01-23 | célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico e processo para a produção de etanol |
BR0306740-8A BR0306740A (pt) | 2002-01-23 | 2003-01-23 | Célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico, molécula de ácido nucleico isolada, e, processos para a produção de etanol, e de um produto de fermentação |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BR0306740-8A BR0306740A (pt) | 2002-01-23 | 2003-01-23 | Célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico, molécula de ácido nucleico isolada, e, processos para a produção de etanol, e de um produto de fermentação |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US7622284B2 (pt) |
EP (1) | EP1468093B2 (pt) |
JP (4) | JP4334352B2 (pt) |
CN (1) | CN100448996C (pt) |
AT (1) | ATE418616T2 (pt) |
BR (2) | BRPI0306740B1 (pt) |
CA (1) | CA2474033C (pt) |
CY (1) | CY1108905T1 (pt) |
DE (1) | DE60325457D1 (pt) |
DK (1) | DK1468093T4 (pt) |
ES (1) | ES2319757T5 (pt) |
PT (1) | PT1468093E (pt) |
SI (1) | SI1468093T2 (pt) |
WO (1) | WO2003062430A1 (pt) |
Families Citing this family (289)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100448996C (zh) * | 2002-01-23 | 2009-01-07 | 皇家奈达尔科股份有限公司 | 戊糖的发酵 |
CA2517920C (en) | 2003-03-10 | 2012-12-18 | Broin And Associates, Inc. | Method for producing ethanol using raw starch |
US20050233030A1 (en) | 2004-03-10 | 2005-10-20 | Broin And Associates, Inc. | Methods and systems for producing ethanol using raw starch and fractionation |
PL2338895T3 (pl) | 2003-05-02 | 2013-11-29 | Cargill Inc | Genetycznie modyfikowane gatunki drożdży i sposoby fermentacji z użyciem genetycznie modyfikowanych drożdży |
RU2006144096A (ru) * | 2004-05-13 | 2008-06-20 | Новозаймз Норт Америка, Инк. | Способ производства ферментационного продукта |
BRPI0513437A (pt) * | 2004-07-16 | 2008-05-06 | Univ Delft Tech | célula hospedeira eucariótica com a capacidade para isomerizar diretamente xilose em xilulose, e, processos para produzir etanol e um produto de fermentação |
US20150328347A1 (en) | 2005-03-24 | 2015-11-19 | Xyleco, Inc. | Fibrous materials and composites |
US7708214B2 (en) | 2005-08-24 | 2010-05-04 | Xyleco, Inc. | Fibrous materials and composites |
AU2006291566A1 (en) | 2005-06-02 | 2007-03-22 | Cargill, Inc. | Genetically modified yeast of the species issatchenkia orientalis and closely related species and fermentation processes using same |
PT103331A (pt) * | 2005-08-05 | 2007-02-28 | Fundacao Da Faculdade De Cienc | Expressão dum transportador activo de xilose em saccharomyces cerevisiae modificada geneticamente |
US7919289B2 (en) | 2005-10-10 | 2011-04-05 | Poet Research, Inc. | Methods and systems for producing ethanol using raw starch and selecting plant material |
US7357527B2 (en) * | 2006-03-03 | 2008-04-15 | Thomas A Meyers | Solar sign light |
JP5507045B2 (ja) | 2006-12-15 | 2014-05-28 | 石原産業株式会社 | アントラニルアミド系化合物の製造方法 |
DE102006060381B4 (de) * | 2006-12-20 | 2010-04-08 | Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main | Neuer spezifischer Arabinose-Transporter aus der Hefe Pichia stipitis und dessen Verwendungen |
SG182157A1 (en) | 2007-06-01 | 2012-07-30 | Solazyme Inc | Production of oil in microorganisms |
EP2171038A2 (en) * | 2007-07-19 | 2010-04-07 | Royal Nedalco B.V. | Novel arabinose-fermenting eukaryotic cells |
EP2062967A1 (en) | 2007-11-21 | 2009-05-27 | Technical University of Denmark | Genetically engineered aspergillus |
EP2128262A1 (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-02 | Università Degli Studi Di Milano - Bicocca | Improved yeast strains for organic acid production |
DE102008031350B4 (de) * | 2008-07-02 | 2011-02-10 | Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main | Prokaryotische Xylose-Isomerase zur Konstruktion Xylose-vergärender Hefen |
GB0812318D0 (en) | 2008-07-04 | 2008-08-13 | Terranol As | Microorganism |
US8440449B2 (en) | 2008-09-30 | 2013-05-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Transformed Saccharomyces cerevisiae engineered for xylose utilization |
CN102712858B (zh) | 2008-11-28 | 2015-08-12 | 索拉兹米公司 | 在重组异养型微生物中制备特制油 |
CN102300986A (zh) | 2008-12-04 | 2011-12-28 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
GB0822937D0 (en) * | 2008-12-16 | 2009-01-21 | Terranol As | Microorganism |
WO2010080532A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Novozymes, Inc. | Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material in the presence of cellobiose dehydrogenase |
WO2010080407A2 (en) | 2008-12-19 | 2010-07-15 | Novozymes, Inc. | Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material |
CN102325893A (zh) | 2008-12-19 | 2012-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 在过氧化物酶存在下增加纤维素材料酶法水解的方法 |
EP2367928B1 (en) | 2008-12-24 | 2018-03-14 | DSM IP Assets B.V. | Xylose isomerase genes and their use in fermentation of pentose sugars |
US8604277B2 (en) | 2009-01-28 | 2013-12-10 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
WO2010088463A2 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having expansin activity and polynucleotides encoding same |
US9068206B1 (en) | 2009-03-03 | 2015-06-30 | Poet Research, Inc. | System for treatment of biomass to facilitate the production of ethanol |
US8450094B1 (en) | 2009-03-03 | 2013-05-28 | Poet Research, Inc. | System for management of yeast to facilitate the production of ethanol |
HUE025623T2 (en) * | 2009-03-03 | 2016-04-28 | Poet Res Inc | A method of fermenting biomass for ethanol production |
JP5608999B2 (ja) * | 2009-04-08 | 2014-10-22 | 株式会社豊田中央研究所 | キシロースを利用して有用物質を生産する方法 |
DK2435561T3 (en) | 2009-05-29 | 2018-11-05 | Novozymes Inc | PROCEDURES FOR IMPROVING THE DEGRADATION OR CONVERSION OF CELLULOSE SUBSTANCES |
CN104480088A (zh) | 2009-06-02 | 2015-04-01 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
US8143021B2 (en) | 2009-07-07 | 2012-03-27 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2451960A2 (en) * | 2009-07-09 | 2012-05-16 | Verdezyne, Inc. | Engineered microorganisms with enhanced fermentation activity |
EP3269804B1 (en) | 2009-09-17 | 2020-11-11 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CN102712916B (zh) | 2009-09-18 | 2015-11-25 | 诺维信股份有限公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
DK2483403T3 (en) | 2009-09-29 | 2018-02-12 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES WITH XYLANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
WO2011050037A1 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Novozymes, Inc. | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
CN102666847B (zh) | 2009-10-29 | 2015-12-09 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
EP2496694B1 (en) | 2009-11-06 | 2017-04-19 | Novozymes, Inc. | Compositions for saccharification of cellulosic material |
EP2496692B1 (en) | 2009-11-06 | 2016-03-16 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
BR112012008260A2 (pt) | 2009-11-06 | 2015-09-15 | Novozymes Inc E Novozymes As | polipeptídeo, polinucleotídeo, métodos para produzir o polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula precursora, para inibir a expressão de um polipeptídeo, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, planta transgênica, parte da planta ou célula da planta,e, molécula de rna inibitória de filamento duplo. |
WO2011059314A1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Stichting Voor De Technische Wetenschappen | Pentose transporters and uses thereof |
CA2785276C (en) | 2009-12-22 | 2019-04-23 | Kabushiki Kaisha Toyota Chuo Kenkyusho | Xylose isomerase and use thereof |
EP2519642B1 (en) | 2009-12-28 | 2017-10-25 | DSM IP Assets B.V. | Recombinant thraustochytrids that grow on xylose, and compositions, methods of making, and uses thereof |
WO2011079388A1 (en) | 2009-12-30 | 2011-07-07 | Iogen Energy Corporation | Modified yeast strains exhibiting enhanced fermentation of lignocellulosic hydrolysates |
US8759049B2 (en) | 2010-02-25 | 2014-06-24 | Iogen Energy Corporation | Method for the production of a fermentation product from a sugar hydrolysate |
MX2012012171A (es) * | 2010-04-21 | 2013-02-27 | Dsm Ip Assets Bv | Proceso para la produccion de celulas que tienen la capacidad de convertir arabinosa. |
WO2011149353A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | C5 Yeast Company B.V. | Yeast strains engineered to produce ethanol from acetic acid and glycerol |
CN103124499B (zh) | 2010-05-28 | 2016-09-28 | 泰拉瑞亚控股公司 | 包含特制油的食品组合物 |
CA2798937A1 (en) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
EP2576762A4 (en) | 2010-06-03 | 2013-12-04 | Mascoma Corp | YEAST FOR THE EXPRESSION OF SACCHAROLYTIC ENZYMES FOR CONSOLIDATED BIOVERIC PROCESSING USING STARCH AND CELLULOSE |
ES2543909T3 (es) | 2010-06-17 | 2015-08-25 | Poet Research, Inc. | Método para producir etanol a partir de biomasa |
US8581042B2 (en) | 2010-06-30 | 2013-11-12 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
US20130109071A1 (en) | 2010-07-07 | 2013-05-02 | Novozymes North America, Inc. | Fermentation Process |
EP2603595A1 (en) | 2010-08-12 | 2013-06-19 | Novozymes, Inc. | Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and a dioxy compound and uses thereof |
CA2807702C (en) | 2010-08-20 | 2018-07-24 | Codexis, Inc. | Use of glycoside hydrolase 61 family proteins in processing of cellulose |
WO2012024046A2 (en) * | 2010-08-20 | 2012-02-23 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
US9267126B2 (en) | 2010-08-30 | 2016-02-23 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030849A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030811A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
EP2611901B1 (en) | 2010-08-30 | 2016-05-11 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
DK2735611T3 (en) | 2010-08-30 | 2019-01-28 | Novozymes As | POLYPEPTIDES WITH CELLULOLYSE INCREASING ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
US20130212746A1 (en) | 2010-08-30 | 2013-08-15 | Novoyzmes A/S | Polypeptides Having Hemicellulolytic Activity And Polynucleotides Encoding Same |
US8709770B2 (en) | 2010-08-31 | 2014-04-29 | Iogen Energy Corporation | Process for improving the hydrolysis of cellulose in high consistency systems using one or more unmixed and mixed hydrolysis reactors |
CN102399804A (zh) * | 2010-09-15 | 2012-04-04 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 木糖异构酶基因的功能及其应用 |
MX2013003237A (es) | 2010-09-30 | 2013-05-30 | Novozymes Inc | Variantes de polipeptidos que tienen actividad potenciadora celulolitica y polinucleotidos que codifican a los mismos. |
CN103282489B (zh) | 2010-09-30 | 2016-12-14 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽变体及其编码多核苷酸 |
US9688975B2 (en) | 2010-10-01 | 2017-06-27 | Novozymes, Inc. | Beta-glucosidase variants and polynucleotides encoding same |
CN103189505A (zh) * | 2010-10-13 | 2013-07-03 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 具有通透酶活性的多肽 |
BR112013009817B1 (pt) | 2010-10-26 | 2020-02-04 | Novozymes As | métodos de degradar ou converter refugo de cana de açúcar, de produzir um produto de fermentação, e, de fermentar refugo de cana de açúcar |
EP2635689B1 (en) | 2010-11-02 | 2015-04-15 | Novozymes, Inc. | Methods of pretreating cellulosic material with a gh61 polypeptide |
MX354145B (es) | 2010-11-03 | 2018-02-14 | Terravia Holdings Inc | Aceites microbianos con puntos de fluidez reducidos, fluidos dielectricos producidos a partir de estos y metodos relacionados. |
US9212354B2 (en) | 2010-11-04 | 2015-12-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same |
CA2819315C (en) * | 2010-11-11 | 2015-11-03 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Method for producing ethanol using recombinant yeast strain |
WO2012062220A1 (en) | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012068509A1 (en) | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Novozymes, Inc. | Chimeric polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2663645B1 (en) | 2010-11-18 | 2014-12-17 | DSM IP Assets B.V. | Yeast strains engineered to produce ethanol from glycerol |
WO2012078656A1 (en) | 2010-12-06 | 2012-06-14 | Novozymes North America, Inc. | Methods of hydrolyzing oligomers in hemicellulosic liquor |
CA2825336A1 (en) | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Poet Research, Inc. | Systems and methods for improving fermentation |
EP3235903B1 (en) | 2011-01-26 | 2021-07-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
MX2013007720A (es) | 2011-01-26 | 2013-08-09 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad celobiohidrolasa y polinucleotidos que codifican para los mismos. |
MX337942B (es) | 2011-01-26 | 2016-03-29 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de endoglucanasa y polinucleotidos que codifican los mismos. |
EP2668270B1 (en) | 2011-01-26 | 2018-11-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
CN105838698B (zh) | 2011-01-26 | 2019-10-11 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸 |
WO2012134626A2 (en) | 2011-01-31 | 2012-10-04 | Novozymes North America, Inc. | Processes for enzymatic refining of pretreated cellulosic material for saccharification |
KR102117225B1 (ko) | 2011-02-02 | 2020-06-02 | 테라비아 홀딩스 인코포레이티드 | 재조합 유지성 미생물로부터 생산된 맞춤 오일 |
CN102643845A (zh) * | 2011-02-21 | 2012-08-22 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 大麦木糖异构酶基因的功能及其应用 |
CN102174549B (zh) * | 2011-02-22 | 2012-10-10 | 山东大学 | 一种编码木糖异构酶的核酸分子及其编码的木糖异构酶 |
CN103384678B (zh) | 2011-02-23 | 2017-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素水解增强活性的多肽及其编码多核苷酸 |
DK3339442T3 (da) | 2011-03-09 | 2022-06-20 | Novozymes Inc | Fremgangsmåder til forøgelse af den cellulolyseforbedrende aktivitet af et polypeptid |
WO2012122477A1 (en) | 2011-03-10 | 2012-09-13 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012125027A1 (en) | 2011-03-14 | 2012-09-20 | Dsm Ip Assets B.V. | Yeast strains that ferment uronic acids |
US9879294B2 (en) | 2011-03-25 | 2018-01-30 | Novozymes A/S | Methods for degrading or converting cellulosic material |
JP5813977B2 (ja) | 2011-03-30 | 2015-11-17 | トヨタ自動車株式会社 | Kluyveromyces属の変異体酵母及びこれを用いたエタノールの製造方法 |
WO2012135719A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Novozymes, Inc. | Cellulose binding domain variants and polynucleotides encoding same |
WO2012135659A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Novozymes A/S | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
BR112013027333A2 (pt) | 2011-04-28 | 2016-11-29 | Novozymes As | célula hospedeira microbiana transgênica, construto de ácido nucleico, vetor de expressão, polipeptídeo isolado tendo atividade de endoglucanase, polinucleotídeo isolado, métodos para produzir um polipeptídeo com atividade de endoglucanase, para produzir um mutante de uma célula precursora, para inibir a expressão de um polipeptídeo com atividade de endoglucanase em uma célula, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico. |
MX2013011827A (es) | 2011-04-29 | 2014-01-08 | Novozymes Inc | Metodos para mejorar la degradacion o conversion de material celulosico. |
AU2012253803A1 (en) * | 2011-05-06 | 2013-12-05 | Terravia Holdings, Inc. | Genetically engineered microorganisms that metabolize xylose |
US8993286B2 (en) | 2011-05-19 | 2015-03-31 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
WO2012159007A1 (en) | 2011-05-19 | 2012-11-22 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
CA2839829C (en) | 2011-06-21 | 2019-10-01 | Vib Vzw | Specific alleles important for ethanol tolerance |
EP2546336A1 (en) | 2011-07-11 | 2013-01-16 | DSM IP Assets B.V. | Yeast strains that consume uronic acids and produce fermentation products such as ethanol |
BR112013032861A2 (pt) | 2011-07-22 | 2017-01-24 | Novozymes North America Inc | métodos para aumentar a atividade da enzima celulolítica durante a hidrólise do material celulósico, para hidrolisar um material celulósico pré-tratado, para a produção de um produto da fermentação, e para a fermentação de um material celulósico pré-tratado |
US8859227B2 (en) | 2011-08-04 | 2014-10-14 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
US8951767B2 (en) | 2011-08-04 | 2015-02-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014004171A2 (pt) | 2011-08-22 | 2018-11-06 | Codexis Inc | variantes da proteína glicósideo hidrolase gh61 e cofatores que aumentam a atividade de gh61 |
CN108179139A (zh) | 2011-08-24 | 2018-06-19 | 诺维信股份有限公司 | 纤维素分解酶组合物及其用途 |
EP2748314B1 (en) | 2011-08-24 | 2016-12-28 | Novozymes, Inc. | Aspergillus fumigatus cellulolytic enzyme compositions and uses thereof |
WO2013039776A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Novozymes North America, Inc. | Methods of hydrolyzing and fermenting cellulosic material |
US20140308705A1 (en) | 2011-09-20 | 2014-10-16 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same |
BR112014006853A2 (pt) | 2011-09-23 | 2017-04-04 | Novozymes As | composição de enzima, método para hidrolisar material celulósico acetilado, e, processo para produzir um produto de fermentação a partir de material celulósico acetilado |
US20140329284A1 (en) | 2011-09-30 | 2014-11-06 | Novozymes, Inc. | Chimeric Polypeptides Having Beta-Glucosidase Activity and Polynucleotides Encoding Same |
EP2773656B1 (en) | 2011-10-31 | 2019-06-19 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US9562222B2 (en) | 2011-11-18 | 2017-02-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
CA2855451A1 (en) | 2011-11-21 | 2013-08-15 | Novozymes, Inc. | Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same |
WO2013075644A1 (en) | 2011-11-22 | 2013-05-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014012417A2 (pt) | 2011-12-01 | 2017-06-06 | Novozymes Inc | polipeptídeo e polinucleotídeo isolados, célula hospedeira recombinante, métodos para a produção de um polipeptídeo, de um mutante de uma célula de origem, e de uma proteína, e para a inibição da expressão de um polipeptídeo, planta transgênica, parte da planta ou célula de planta, molécula de rna, processos para degradar ou converter um material celulósico ou contendo xilano, para produzir um produto de fermentação, e de fermentação de um material celulósico ou contendo xilano, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
EP2791330B1 (en) | 2011-12-16 | 2017-07-26 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014014697A2 (pt) | 2011-12-19 | 2020-10-27 | Novozymes, Inc. | polipeptídeo isolado, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, para gerar oxigênio molecular, e para remover peróxido de hidrogênio do tecido, processos para degradar ou converter um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
CN103998605B (zh) | 2011-12-20 | 2021-08-03 | 诺维信股份有限公司 | 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸 |
US20150017670A1 (en) | 2011-12-21 | 2015-01-15 | Novozymes, Inc. | Methods For Determining The Degradation Of A Biomass Material |
CN104203005A (zh) | 2012-01-23 | 2014-12-10 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 二萜的生产 |
EP2626423A1 (en) * | 2012-02-07 | 2013-08-14 | Clariant Produkte (Deutschland) GmbH | Pentose-fermenting microorganism |
EP2831255A2 (en) | 2012-03-26 | 2015-02-04 | Novozymes North America, Inc. | Methods of preconditioning cellulosic material |
EP2859110B1 (en) | 2012-03-30 | 2022-10-26 | Novozymes North America, Inc. | Processes of producing fermentation products |
CA2870364A1 (en) | 2012-04-18 | 2013-10-24 | Solazyme, Inc. | Recombinant microbes with modified fatty acid synthetic pathway enzymes and uses thereof |
US9719114B2 (en) | 2012-04-18 | 2017-08-01 | Terravia Holdings, Inc. | Tailored oils |
BR112014024804A2 (pt) | 2012-04-23 | 2017-07-11 | Novozymes As | polipeptídeo isolado tendo atividade de glucuronil esterase, composição, polinucleotídeo isolado, construção de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, métodos para a produção de um polipeptídeo, para a degradação ou conversão de um material celulósico e para a produção de um produto de fermentação |
CN104245929A (zh) | 2012-04-23 | 2014-12-24 | 诺维信公司 | 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
NL2008682C2 (en) | 2012-04-23 | 2013-10-31 | Stichting Energie | Wet biomass treatment. |
CA2868308A1 (en) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | Novozymes, Inc. | Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same |
DK2877576T3 (da) | 2012-07-24 | 2019-08-12 | Bp Corp North America Inc | Xyloseisomeraser og anvendelser deraf |
WO2014035458A1 (en) | 2012-08-29 | 2014-03-06 | Mascoma Corporation | Expression of enzymes in yeast for lignocellulose derived oligomer cbp |
US8748152B1 (en) | 2012-09-14 | 2014-06-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Prevotella ruminicola xylose isomerase and co-expression with xylulokinase in yeast for xylose fermentation |
WO2014092832A2 (en) | 2012-09-19 | 2014-06-19 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
CN105861469B (zh) | 2012-10-08 | 2020-04-14 | 诺维信公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
BR112015008370B1 (pt) | 2012-10-16 | 2022-10-18 | Dsm Ip Assets B.V | Células de saccharomyces com conversão de pentose melhorada e processo para a produção de um produto da fermentação |
US20150275194A1 (en) | 2012-10-24 | 2015-10-01 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same |
BR112015010139A2 (pt) | 2012-11-07 | 2017-07-11 | Dsm Ip Assets Bv | propagação de levedura com ph controlado |
CN104870639A (zh) | 2012-12-14 | 2015-08-26 | 诺维信公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
WO2014099798A1 (en) | 2012-12-19 | 2014-06-26 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancinc activity and polynucleotides encoding same |
US20140178954A1 (en) | 2012-12-20 | 2014-06-26 | E I Du Pont De Nemours And Company | Expression of xylose isomerase activity in yeast |
US11492753B2 (en) | 2013-02-15 | 2022-11-08 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | Process for the treatment of lignocellulosic biomass |
NL2011164C2 (en) | 2013-07-15 | 2015-01-21 | Stichting Energie | Improved process for the organosolv treatment of lignocellulosic biomass. |
CN105074001A (zh) | 2013-02-21 | 2015-11-18 | 诺维信公司 | 糖化和发酵纤维素材料的方法 |
EP2964760B1 (en) | 2013-03-08 | 2021-05-12 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
NZ743055A (en) | 2013-03-08 | 2020-03-27 | Xyleco Inc | Equipment protecting enclosures |
US8669076B1 (en) * | 2013-03-11 | 2014-03-11 | E I Du Pont De Nemours And Company | Cow rumen xylose isomerases active in yeast cells |
US9187743B2 (en) | 2013-03-11 | 2015-11-17 | E I Du Pont De Nemours And Company | Bacterial xylose isomerases active in yeast cells |
US9340767B2 (en) | 2013-03-13 | 2016-05-17 | Poet Research, Inc. | Propagating an organism and related methods and compositions |
US9034631B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-05-19 | Poet Research, Inc. | Systems and methods for yeast propagation |
JP6027559B2 (ja) * | 2013-03-28 | 2016-11-16 | 株式会社豊田中央研究所 | キシロースイソメラーゼ活性を有するタンパク質及びその利用 |
WO2014170330A2 (en) | 2013-04-15 | 2014-10-23 | Vib Vzw | Yeast alleles involved in maximal alcohol accumulation capacity and tolerance to high alcohol levels |
EP2994529B1 (en) | 2013-05-10 | 2018-11-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
EP3004366B1 (en) | 2013-05-31 | 2019-02-27 | DSM IP Assets B.V. | Microorganisms for diterpene production |
JP5845210B2 (ja) | 2013-06-13 | 2016-01-20 | トヨタ自動車株式会社 | 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法 |
EP3885443A1 (en) | 2013-07-15 | 2021-09-29 | DSM IP Assets B.V. | Diterpene production |
HUE040545T2 (hu) | 2013-07-17 | 2019-03-28 | Novozymes As | Pullulanáz kimérák és az azokat kódoló polinukleotidok |
CN108064226A (zh) | 2013-07-31 | 2018-05-22 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 甜菊糖苷的回收 |
CA2919157A1 (en) | 2013-09-04 | 2015-03-12 | Novozymes A/S | Processes for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material |
SG10201802834YA (en) | 2013-10-04 | 2018-05-30 | Terravia Holdings Inc | Tailored oils |
JP6210487B2 (ja) * | 2013-10-11 | 2017-10-11 | 国立大学法人山口大学 | キシロース資化能を有するエタノール生産酵母を生産する方法 |
US9938552B2 (en) | 2013-11-01 | 2018-04-10 | Novozymes A/S | Methods of saccharifying and fermenting a cellulosic material |
EP3074513A1 (en) | 2013-11-26 | 2016-10-05 | Novozymes A/S | Enzyme compositions and uses thereof |
KR20150065213A (ko) | 2013-12-04 | 2015-06-15 | 삼성전자주식회사 | 감소된 에탄올 생산능을 갖는 효모 세포 및 이의 용도 |
US10287563B2 (en) | 2014-01-07 | 2019-05-14 | Novozymes A/S | Process for degrading mannan-containing cellulosic materials |
DK3415624T3 (da) | 2014-01-22 | 2021-11-08 | Novozymes As | Pullulanasevarianter og polynukleotider, som koder for dem |
WO2015160887A1 (en) | 2014-04-17 | 2015-10-22 | Shell Oil Company | Processes for producing fermentation products |
US20180030482A1 (en) | 2014-04-18 | 2018-02-01 | Moralco B.V. | Use of acetaldehyde in the fermentative production of ethanol |
JP6443944B2 (ja) | 2014-04-28 | 2018-12-26 | 国立大学法人山口大学 | キシロース資化能及びエタノール生産能を有する酵母 |
EP3152315B1 (en) | 2014-06-06 | 2018-08-15 | Novozymes A/S | Enzyme compositions and uses thereof |
WO2015200068A1 (en) | 2014-06-24 | 2015-12-30 | Poet Research, Inc. | Methods of pitching yeast for fermentation, and related methods of fermentation and systems |
EP3167053B1 (en) | 2014-07-10 | 2019-10-09 | Corbion Biotech, Inc. | Novel ketoacyl acp synthase genes and uses thereof |
WO2016011555A1 (en) | 2014-07-22 | 2016-01-28 | Iogen Corporation | Process for producing fuel using two fermentations |
US10619173B2 (en) | 2014-07-22 | 2020-04-14 | Iogen Corporation | Process for using biogenic carbon dioxide derived from non-fossil organic material |
WO2016029107A1 (en) | 2014-08-21 | 2016-02-25 | Novozymes A/S | Process for saccharifying cellulosic material under oxygen addition |
US11390898B2 (en) | 2014-09-05 | 2022-07-19 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
ES2896153T3 (es) | 2014-09-23 | 2022-02-24 | Novozymes As | Procedimientos para producir etanol y organismos de fermentación |
EP3209788B1 (en) | 2014-10-23 | 2019-06-05 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
BR102014027233A2 (pt) * | 2014-10-30 | 2016-05-24 | Biocelere Agroindustrial Ltda | cassete de expressão, micro-organismo geneticamente modificado para expressão de xilose isomerase, processo para produção de biocombustíveis e/ou bioquímicos e biocombustível e/ou bioquímicos produzidos |
JP6303984B2 (ja) | 2014-10-31 | 2018-04-04 | トヨタ自動車株式会社 | 連続培養によるエタノールの製造方法及び連続培養装置 |
WO2016087327A1 (en) | 2014-12-01 | 2016-06-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having pullulanase activity comprising the x25, x45 and cbm41 domains |
US11434509B2 (en) | 2014-12-08 | 2022-09-06 | Iogen Corporation | Process for using biogenic carbon dioxide derived from non-fossil organic material |
EP3250697B1 (en) | 2015-01-28 | 2019-12-04 | DSM IP Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
WO2016120296A1 (en) | 2015-01-28 | 2016-08-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
WO2016120298A1 (en) | 2015-01-28 | 2016-08-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
NL1041192B1 (en) | 2015-02-16 | 2017-01-05 | Stichting Energieonderzoek Centrum Nederland | Separation of lignin from organosolv liquors. |
WO2016138167A2 (en) | 2015-02-24 | 2016-09-01 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
BR112017019331A2 (pt) | 2015-03-12 | 2018-06-05 | Beta Renewables Spa | processos para sacarificação de múltiplos estágios de um material lignocelulósico e para melhorar um rendimento de glicose ou xilose de sacarificação de um material lignocelulósico em um reator de tanque continuamente agitado |
BR112017018461A2 (pt) | 2015-03-12 | 2018-04-17 | Novozymes As | processos para hidrólise multiestágio, para produção de um produto de fermentação, e, para aumento de rendimento de açúcar de hidrólise. |
TN2017000318A1 (en) | 2015-03-12 | 2019-01-16 | Beta Renewable Spa | Multi-stage enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass |
US10421667B2 (en) | 2015-03-16 | 2019-09-24 | Iogen Corporation | Process for treating lignocellulosic feedstock comprising wet oxidation |
EP3862426A3 (en) | 2015-03-16 | 2021-11-17 | DSM IP Assets B.V. | Udp-glycosyltransferases |
WO2016145531A1 (en) | 2015-03-16 | 2016-09-22 | Iogen Corporation | Sulfur dioxide and/or sulfurous acid pretreatment with sulfur dioxide recovery |
BR112017017895A2 (pt) | 2015-03-16 | 2018-04-10 | Iogen Corp | processo para produzir um produto de fermentação e para produzir um álcool a partir de uma matéria prima lignocelulósica. |
EP3274448B1 (en) | 2015-03-23 | 2021-08-11 | DSM IP Assets B.V. | Udp-glycosyltransferases from solanum lycopersicum |
EP3718417A1 (en) | 2015-04-03 | 2020-10-07 | DSM IP Assets B.V. | Steviol glycosides |
WO2016169893A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Whole fermentation broth |
WO2016169892A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
WO2016170045A1 (en) | 2015-04-21 | 2016-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Geranylgeranyl pyrophosphate synthase |
CN116676293A (zh) | 2015-05-27 | 2023-09-01 | 国投生物科技投资有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
WO2016201184A1 (en) * | 2015-06-11 | 2016-12-15 | Ebio, Llc | Efficient production of biofuels from cells carrying a metabolic-bypass gene cassette |
WO2016205127A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products |
WO2016207144A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
MY192153A (en) | 2015-07-10 | 2022-08-02 | Dsm Ip Assets Bv | Steviol glycoside composition |
US9951326B2 (en) * | 2015-07-13 | 2018-04-24 | MARA Renewables Corporation | Enhancing microbial metabolism of C5 organic carbon |
BR112018001041A2 (pt) | 2015-07-24 | 2018-09-11 | Novozymes Inc | polipeptídeo isolado, composição, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, célula hospedeira recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo e para produção de uma proteína, planta, parte de planta ou célula de planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e para fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico. |
WO2017019491A1 (en) | 2015-07-24 | 2017-02-02 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
US10844363B2 (en) | 2015-08-05 | 2020-11-24 | Cargill, Incorporated | Xylose isomerase-modified yeast strains and methods for bioproduct production |
WO2017025649A1 (en) | 2015-08-13 | 2017-02-16 | Dsm Ip Assets B.V. | Steviol glycoside transport |
CN108350044B (zh) | 2015-09-22 | 2022-05-24 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
WO2017049394A1 (en) | 2015-09-24 | 2017-03-30 | Iogen Corporation | Wet oxidation of biomass |
BR112018006724A2 (pt) | 2015-10-05 | 2018-10-09 | Dsm Ip Assets Bv | ácido caurenoico hidroxilases |
WO2017070219A1 (en) | 2015-10-20 | 2017-04-27 | Novozymes A/S | Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same |
BR112018010741B1 (pt) | 2015-11-25 | 2022-11-22 | Iogen Energy Corporation | Método para resfriamento e hidrólise de biomassa pré-tratada e sistema para hidrólise de biomassa |
CA3006672A1 (en) | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Iogen Corporation | Sulfur dioxide and/or sulfurous acid pretreatment |
CA3012218A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Iogen Corporation | Pretreatment of lignocellulosic biomass with sulfur dioxide and/or sulfurous acid |
EP3423577B1 (en) | 2016-03-02 | 2024-05-08 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
EP3433358B1 (en) | 2016-03-24 | 2022-07-06 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
BR112018070645A2 (pt) | 2016-04-08 | 2019-02-05 | Du Pont | células de levedura recombinante, métodos para produzir uma célula de levedura e método para produzir um composto alvo |
WO2017205535A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
CN109312380A (zh) | 2016-06-09 | 2019-02-05 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于大规模酶生产的种子训练 |
JP6447583B2 (ja) | 2016-06-24 | 2019-01-09 | トヨタ自動車株式会社 | 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法 |
CN109642225A (zh) | 2016-07-21 | 2019-04-16 | 诺维信公司 | 丝氨酸蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
US11891645B2 (en) | 2016-07-21 | 2024-02-06 | Novozymes A/S | Serine protease variants and polynucleotides encoding same |
WO2018019948A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Dsm Ip Assets B.V. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and uses thereof |
WO2018026868A1 (en) | 2016-08-01 | 2018-02-08 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP3497109A1 (en) | 2016-08-09 | 2019-06-19 | DSM IP Assets B.V. | Crystallization of steviol glycosides |
CA3033243A1 (en) | 2016-08-09 | 2018-02-15 | Dsm Ip Assets B.V. | Crystallization of steviol glycosides |
WO2018073107A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Eukaryotic cell comprising xylose isomerase |
US11225647B2 (en) | 2016-10-27 | 2022-01-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Geranylgeranyl pyrophosphate synthases |
WO2018085370A1 (en) | 2016-11-02 | 2018-05-11 | Novozymes A/S | Processes for reducing production of primeverose during enzymatic saccharification of lignocellulosic material |
US20190271017A1 (en) | 2016-11-04 | 2019-09-05 | Inbicon A/S | Method for preparing fermentable sugars from lignocellulosic biomass |
BR112019010355B1 (pt) | 2016-11-24 | 2024-03-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Composição de enzimas |
CN109996883A (zh) | 2016-11-24 | 2019-07-09 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 酶组合物 |
CN110177873A (zh) | 2016-11-29 | 2019-08-27 | 诺维信公司 | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
BR112019011612A2 (pt) | 2016-12-06 | 2020-08-18 | Novozymes A/S | processos melhorados para a produção de etanol a partir de substratos celulósicos que contêm xilose com o uso de cepas de levedura geneticamente modificadas |
BR112019011525A2 (pt) | 2016-12-08 | 2020-01-28 | Dsm Ip Assets Bv | ácido caurenoico hidroxilases |
WO2018115251A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Vib Vzw | Xylose isomerases that confer efficient xylose fermentation capability to yeast |
WO2018114995A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Fermentation process for producing steviol glycosides |
WO2018185071A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
WO2018220116A1 (en) | 2017-05-31 | 2018-12-06 | Novozymes A/S | Xylose fermenting yeast strains and processes thereof for ethanol production |
CN110730824A (zh) | 2017-06-02 | 2020-01-24 | 诺维信公司 | 用于乙醇生产的改善的酵母 |
EP4155400A1 (en) | 2017-06-27 | 2023-03-29 | DSM IP Assets B.V. | Udp-glycosyltransferases |
MX2019014889A (es) | 2017-06-28 | 2020-02-13 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad trehalasa y polinucleotidos que los codifican. |
BR112020002115A2 (pt) | 2017-08-08 | 2020-08-11 | Novozymes A/S | polipeptídeo variante de trealase, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, composição, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, método de produção de uma variante de trealase, e, processo de produção de um produto de fermentação |
BR112020003866A2 (pt) | 2017-08-30 | 2020-09-08 | Novozymes A/S | processo para produção de um produto de fermentação, e, composição. |
CN111225982A (zh) | 2017-10-09 | 2020-06-02 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于木质纤维素材料的酶促水解和糖发酵的方法 |
WO2019086369A1 (en) | 2017-10-30 | 2019-05-09 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
WO2019086370A1 (en) | 2017-10-30 | 2019-05-09 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars |
CA3078833A1 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Iogen Corporation | Low temperature pretreatment with sulfur dioxide |
WO2019090413A1 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Iogen Corporation | Low temperature sulfur dioxide pretreatment |
BR112020007140A2 (pt) | 2017-11-14 | 2020-09-29 | Dsm Ip Assets B.V. | polipeptídeos com especificidade de transporte de arabinose melhorada |
US11371012B2 (en) | 2017-11-16 | 2022-06-28 | Poet Research, Inc. | Methods for propagating microorganisms for fermentation and related methods and systems |
BR112020011904A2 (pt) | 2017-12-14 | 2020-11-24 | Poet Research, Inc. | métodos & sistemas para propagar micro-organismos em composições de vinhaça |
CA3089135A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | Novozymes A/S | Microorganisms with improved nitrogen utilization for ethanol production |
EP3746546A1 (en) | 2018-02-01 | 2020-12-09 | DSM IP Assets B.V. | Yeast cell capable of simultaneously fermenting hexose and pentose sugars |
KR20200135469A (ko) | 2018-03-27 | 2020-12-02 | 바스프 에스이 | 자일로스 대사 효모 |
US11193145B2 (en) | 2018-03-28 | 2021-12-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Enzyme composition |
WO2019185681A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | Enzyme composition |
CA3094413A1 (en) | 2018-04-06 | 2019-10-10 | Iogen Corporation | Pretreatment with lignosulfonic acid |
WO2019211230A1 (en) | 2018-04-30 | 2019-11-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Steviol glycoside transport |
BR112020023198A2 (pt) | 2018-05-17 | 2021-02-09 | Dsm Ip Assets B.V. | processo para produção de um polipeptídeo |
CA3099202A1 (en) | 2018-05-30 | 2019-12-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for producing sugars from carbohydrate materials |
EP3827088A1 (en) | 2018-07-25 | 2021-06-02 | Novozymes A/S | Enzyme-expressing yeast for ethanol production |
WO2020058249A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars |
WO2020058248A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars |
WO2020058253A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars |
JP7078900B2 (ja) | 2018-10-05 | 2022-06-01 | トヨタ自動車株式会社 | 形質転換酵母及びこれを用いたエタノールの製造方法 |
MX2021003955A (es) | 2018-10-08 | 2021-05-27 | Novozymes As | Levadura que expresa enzimas para la produccion de etanol. |
BR112021011384A2 (pt) | 2018-12-12 | 2022-05-17 | Novozymes As | Polipeptídeo isolado, composição de enzimas, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, planta, parte da planta ou célula da planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e de fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico |
EP3938525A1 (en) | 2019-03-12 | 2022-01-19 | DSM IP Assets B.V. | Process for producing a fermentation broth |
EP4004029A1 (en) | 2019-07-26 | 2022-06-01 | Novozymes A/S | Microorganisms with improved nitrogen transport for ethanol production |
US20220307036A1 (en) | 2019-08-06 | 2022-09-29 | Novozymes A/S | Fusion proteins for improved enzyme expression |
WO2021048164A1 (en) | 2019-09-10 | 2021-03-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Enzyme composition |
CN115175923A (zh) | 2019-12-10 | 2022-10-11 | 诺维信公司 | 用于改善的戊糖发酵的微生物 |
MX2023002490A (es) | 2020-09-04 | 2023-03-09 | Novozymes As | Organismo fermentador mejorado para la produccion de etanol. |
AU2021367159A1 (en) | 2020-10-22 | 2023-05-04 | Cargill, Incorporated | Microorganisms for diterpene production |
WO2022214459A1 (en) | 2021-04-06 | 2022-10-13 | Dsm Ip Assets B.V. | Enzyme composition |
CN117178060A (zh) | 2021-04-06 | 2023-12-05 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 酶组合物 |
BR112023020448A2 (pt) | 2021-04-06 | 2023-11-21 | Dsm Ip Assets Bv | Composição enzimática |
EP4320259A1 (en) | 2021-04-08 | 2024-02-14 | Versalis S.p.A. | Process for the preparation of a sugar product and a fermentation product |
WO2022261003A1 (en) | 2021-06-07 | 2022-12-15 | Novozymes A/S | Engineered microorganism for improved ethanol fermentation |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5643758A (en) * | 1987-03-10 | 1997-07-01 | New England Biolabs, Inc. | Production and purification of a protein fused to a binding protein |
US5190877A (en) * | 1987-09-03 | 1993-03-02 | Gist-Brocades N.V. | Saccharomyces strains for maltose fermentation |
EP0635574B1 (en) | 1993-07-23 | 2003-04-23 | Dsm N.V. | Selection marker gene free recombinant strains, a method for obtaining them and the use of these strains |
GB9502413D0 (en) | 1995-02-08 | 1995-03-29 | Primalco Ltd | Xylose isomerase |
US5935837A (en) * | 1997-07-28 | 1999-08-10 | Novo Nordisk A/S | DNA constructs and methods of producing xylose isomerase |
SE9901298D0 (sv) | 1999-04-09 | 1999-04-09 | Forskarpatent I Syd Ab | Xylose isomerase with improved kinetic properties |
CN100448996C (zh) * | 2002-01-23 | 2009-01-07 | 皇家奈达尔科股份有限公司 | 戊糖的发酵 |
PL2338895T3 (pl) | 2003-05-02 | 2013-11-29 | Cargill Inc | Genetycznie modyfikowane gatunki drożdży i sposoby fermentacji z użyciem genetycznie modyfikowanych drożdży |
BRPI0513437A (pt) | 2004-07-16 | 2008-05-06 | Univ Delft Tech | célula hospedeira eucariótica com a capacidade para isomerizar diretamente xilose em xilulose, e, processos para produzir etanol e um produto de fermentação |
US8399215B2 (en) | 2008-03-07 | 2013-03-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Pentose sugar fermenting cell |
EP2367928B1 (en) | 2008-12-24 | 2018-03-14 | DSM IP Assets B.V. | Xylose isomerase genes and their use in fermentation of pentose sugars |
CN102174549B (zh) | 2011-02-22 | 2012-10-10 | 山东大学 | 一种编码木糖异构酶的核酸分子及其编码的木糖异构酶 |
CN103131720A (zh) | 2011-11-23 | 2013-06-05 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 一种真菌木糖异构酶基因及其应用 |
-
2003
- 2003-01-23 CN CNB038026597A patent/CN100448996C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 BR BRPI0306740A patent/BRPI0306740B1/pt unknown
- 2003-01-23 DK DK03731853.2T patent/DK1468093T4/en active
- 2003-01-23 BR BR0306740-8A patent/BR0306740A/pt active IP Right Grant
- 2003-01-23 DE DE60325457T patent/DE60325457D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 US US10/500,872 patent/US7622284B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 AT AT03731853T patent/ATE418616T2/de active
- 2003-01-23 PT PT03731853T patent/PT1468093E/pt unknown
- 2003-01-23 EP EP03731853.2A patent/EP1468093B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 SI SI200331513T patent/SI1468093T2/en unknown
- 2003-01-23 JP JP2003562297A patent/JP4334352B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 CA CA2474033A patent/CA2474033C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-23 WO PCT/NL2003/000049 patent/WO2003062430A1/en active Application Filing
- 2003-01-23 ES ES03731853.2T patent/ES2319757T5/es not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-03-23 CY CY20091100337T patent/CY1108905T1/el unknown
- 2009-05-07 JP JP2009112827A patent/JP5113800B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2009-10-15 US US12/580,018 patent/US8058040B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-11-14 US US13/295,914 patent/US8367396B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-07-27 JP JP2012167585A patent/JP6046941B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2012-11-29 US US13/688,418 patent/US9023629B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2014
- 2014-10-02 US US14/505,088 patent/US20150031076A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-01-19 JP JP2015007514A patent/JP2015070856A/ja active Pending
-
2017
- 2017-07-21 US US15/657,042 patent/US20170321242A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2474033C (en) | Fermentation of pentose sugars | |
US10093914B2 (en) | Xylose isomerase genes and their use in fermentation of pentose sugars | |
BRPI0908198B1 (pt) | célula de fermentação de açúcar pentose | |
WO2009109631A1 (en) | A pentose sugar fermenting cell | |
EP2250263A1 (en) | A pentose sugar fermenting cell | |
DK2069476T3 (en) | Metabolic MODIFICATION of arabinose-fermenting YEAST CELLS |