WO2005121794A1 - クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット - Google Patents

クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット Download PDF

Info

Publication number
WO2005121794A1
WO2005121794A1 PCT/JP2005/010386 JP2005010386W WO2005121794A1 WO 2005121794 A1 WO2005121794 A1 WO 2005121794A1 JP 2005010386 W JP2005010386 W JP 2005010386W WO 2005121794 A1 WO2005121794 A1 WO 2005121794A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
reagent
sample
analyte
site
reaction
Prior art date
Application number
PCT/JP2005/010386
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Ryo Shida
Hiromi Ito
Original Assignee
Denka Seiken Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Denka Seiken Co., Ltd. filed Critical Denka Seiken Co., Ltd.
Priority to US11/628,621 priority Critical patent/US7972872B2/en
Priority to AT05748995T priority patent/ATE489625T1/de
Priority to JP2006514504A priority patent/JP4758341B2/ja
Priority to CN200580026744XA priority patent/CN101002095B/zh
Priority to EP05748995A priority patent/EP1767941B1/en
Priority to DE602005024965T priority patent/DE602005024965D1/de
Priority to KR1020077000275A priority patent/KR101194112B1/ko
Publication of WO2005121794A1 publication Critical patent/WO2005121794A1/ja
Priority to HK07109961.9A priority patent/HK1101924A1/xx

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/545—Synthetic resin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/805—Test papers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/97—Test strip or test slide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/805—Optical property
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/81—Tube, bottle, or dipstick

Definitions

  • the present invention relates to a chromatography type detection device and a detection method for specifically and qualitatively quantifying an analyte in a sample, and a kit using the same.
  • a labeling reagent site eg, visible colloidal gold particles or an enzyme
  • a ligand that specifically binds to an analyte eg, an antigen
  • an analyte eg, an antigen
  • a capture antibody for capturing a complex of a labeled antibody or analyte and an analyte and a labeling reagent (eg, an antibody).
  • the sample penetrates the labeling reagent section in the process of developing and moving the solid support, and the analyte is removed. Binds to the labeling reagent to form a complex of the analyte and the labeling reagent.
  • the analyte-labeled reagent complex is spread and moved on the membrane as it is, and when it enters the capture reagent site on the membrane, it is captured by the capture reagent immobilized on the solid support, and the capture reagent is labeled with the analyte.
  • a complex of reagents is formed at the capture reagent location.
  • the presence of the analyte can be determined by detecting the labeling reagent by any method (in the case of visible colloidal gold particles, its agglutination image, in the case of enzymes, a color reaction by adding a substrate). be able to.
  • Figure 7 shows a conventional immunochromatographic detection device. Indicates.
  • the immunochromatographic detection apparatus supplies a sample on a solid support and develops the sample.
  • a label containing an analyte and a ligand that specifically binds to the analyte is provided. Since the reaction that specifically binds the reagent and the reaction that specifically binds the complex of the analyte-labeled reagent and the capture reagent are continuously and automatically performed on the solid support, This is an excellent detection method in terms of simplicity. However, in many tests, the analyte containing the analyte has many impurities, and the analyte is separated from the sample by various chemical and physical treatments before the test to remove it. And pretreatment for extraction was required.
  • Patent Document 2 Patent No. 2131938
  • Patent Document 3 Japanese Patent No. 2504923
  • Patent Document 4 Patent No. 2890384
  • the present invention relates to a reaction in which an analyte and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte in the immunochromatography test method specifically bind, and a complex of the analyte and the labeling reagent.
  • the solid support is configured so as to continuously optimize the reaction conditions on the solid support to which the capture reagent specifically binds, and the pretreated sample is subjected to the above reaction on the solid support.
  • the present invention relates to an immunochromatographic detection device capable of pretreating a sample on a solid support, a detection method, a kit using the same, and The production method is provided.
  • the present inventor has proposed a reaction and a reaction in which an analyte and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte are specifically bound on the solid support of the immunochromatographic detection apparatus.
  • the conditions for the reaction in which the analyte-labeled reagent complex and the capture reagent specifically bind are continuously optimized on the solid support, and the pretreated sample is subjected to the above reaction on the solid support.
  • the present inventors have completed the present invention by providing a member having a function of optimizing reaction conditions and / or a functional site containing a reagent on a solid support as a means for optimizing reaction conditions. Reached. Further, the present inventor has provided a member having a sample processing means and / or a functional site including a reagent on a solid support so that detection can be performed without requiring pretreatment of the sample before adding the sample to the supply unit. The inventors have found that the present invention can be performed, and have completed the present invention.
  • the present invention is as follows.
  • a sample presumed to contain at least an analyte or a mixture of the sample and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte is provided on a sheet-like solid support.
  • a chromatographic detection device comprising a sample supply site to be supplied and a capture reagent site in which a capture reagent capable of specifically binding and capturing said analyte and said labeling reagent complex is immobilized.
  • a chromatographic detection device having at least one functional site having one or more of the following functions (a) to (c) between reagent sites.
  • a sample supply site for supplying a sample presumed to contain at least an analyte on a sheet-like solid support, and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte is supplied to the solid support.
  • the chromatography method according to [1] which includes a labeling reagent portion held so as to be expandable above and a capture reagent portion immobilized with a capture reagent capable of specifically binding and capturing the analyte and the labeling reagent complex. Detection device.
  • the analyte and the labeling reagent come into contact with the solid support in advance at a site separated therefrom, and specifically bind to the analyte and the analyte presumed to contain the analyte at the sample supply site.
  • the function of pretreating the sample is a function of extracting the analyte, and the functional part having the function of pretreating the sample includes a reagent for extracting the analyte from the sample.
  • the chromatography-type detection device according to [5].
  • Sample power A reagent for extracting an analyte is used for extracting an analyte from a biological matrix in a sample containing the biological matrix by alkali treatment, acid treatment, or surfactant treatment.
  • Chromatography kit [6] which is a basic substance, an acidic substance or a surfactant.
  • the function of pretreating the sample is a function of removing impurities from the sample, and the functional part having the function of pretreating the sample has a function of filtering, adsorbing, or aggregating impurities in the sample.
  • the chromatography-type detection device according to any one of [5] to [7].
  • a functional site having a function of pretreating a sample is provided with a reagent or a reagent for adsorbing impurities.
  • the functional part having the function of pretreating the sample contains a reagent for adsorbing impurities or a reagent for aggregating impurities, and the reagent for adsorbing impurities or the reagent for aggregating impurities is supported on a solid phase.
  • the chromatographic detection device according to [10] which is contained in the body.
  • a chromatographic detection device including a plurality of capture reagent sites capable of capturing different analytes, wherein a binding reaction between the capture material and the analyte is provided upstream of at least one capture reagent site.
  • the chromatography detector according to any one of [13] to [17], comprising a reagent for optimizing conditions.
  • the sample is a sample containing bacteria or a virus, and the functional site having a function of pretreating the sample has a function of extracting an analyte from the bacteria or a virus.
  • the analyte substance in the pretreated sample binds to an S ligand or a capture substance.
  • the chromatographic detection device according to [20] having a functional site for optimizing reaction conditions.
  • the sample is a nasal cavity or a pharyngeal swab, and the functional part having a function of pretreating the sample contains a reagent for aggregating the polysaccharide in the nasal cavity or the pharyngeal swab, and has a filtering function.
  • the chromatographic detection device according to any one of [5] to [21], comprising a filter for removing aggregated polysaccharides.
  • the analytes include an influenza A virus antigen and an influenza B virus antigen, and include a capture reagent site for capturing an influenza A virus antigen and a capture reagent site for capturing an influenza B virus antigen.
  • a chromatographic detection device comprising: binding of an influenza A virus antigen to a capture reagent capable of capturing an influenza B virus antigen; and / or a capture reagent capable of capturing an influenza B virus antigen and an influenza A virus antigen.
  • the immunochromatography complete set detection device according to any one of [5] to [21], including a functional site containing a reagent capable of suppressing binding by cross-reaction with the immunochromatography.
  • an analyte and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to an analyte can be specifically labeled on a solid support of an immunochromatography type inspection apparatus.
  • the reaction conditions for specific binding and analyte-specific binding of the complex of the labeling reagent and the capture reagent are continuously optimized on the solid support, so that it is quick, simple, and sensitive and specific. Detection with excellent properties can be performed. Also, since a sample that has become unsuitable for the reaction due to the pretreatment can be made to the optimum condition on the solid support, rapid detection becomes possible.
  • the apparatus of the present invention is provided with a sample processing means and a means for converting the processed sample into conditions suitable for the reaction, and can perform quicker and more sensitive detection.
  • FIG. 1 is a diagram showing an example of a detection device according to the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram showing an example of a detection device of the present invention.
  • FIG. 3 is a diagram showing a detection device using a member having an impurity filtering function.
  • FIG. 4 is a diagram showing a multi-detection device of the present invention capable of detecting a plurality of analytes, which can optimally adjust the reaction conditions of each analyte.
  • FIG. 5 is a diagram showing a detection apparatus that can make a sample pre-treated in advance to optimal conditions.
  • FIG. 6 is a diagram showing a detection apparatus that can make a sample pre-treated in advance to optimal conditions.
  • FIG. 7 is a diagram showing a conventional immunochromatography detection device.
  • FIG. 8 is a diagram showing a detection device in which an impurity-adsorbing substance is provided on a solid support.
  • control site control site
  • the present invention relates to an apparatus for detecting an analyte in a sample, comprising: It is a type detection device, an inspection method, and a kit to which this is applied.
  • the detection apparatus of the present invention supplies a sample presumed to contain at least an analyte or a mixture of the analyte and a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte on a sheet-like solid support. It includes a sample supply site and a capture reagent site on which a capture reagent capable of specifically binding and capturing the analyte-labeled reagent complex is immobilized.
  • the device of the present invention may further include a labeling reagent site in which a labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte is spreadably held on a solid support. Since the binding with the labeling reagent is performed on the solid support, only the sample must be supplied to the sample supply site.
  • the device of the present invention is provided with a means for optimizing a binding reaction such as an antigen-antibody reaction occurring on the solid support.
  • a binding reaction such as an antigen-antibody reaction occurring on the solid support.
  • the sample is supplied to the sample supply site, spreads on the solid support, moves to the labeling reagent site, and the analyte in the sample specifically binds to the labeling reagent and the analyte is labeled.
  • the analyte supply site on the solid-phase support is separated from the analyte by the at least one member or the functional site containing the reagent, which is located before the labeling reagent site. It is separated and the state is adjusted so that the analyte and the labeling reagent can easily bind specifically.
  • the force of the labeled reagent on the solid-phase support is determined in advance between the capture reagent and the capture reagent.
  • the complex and the capture reagent are separated from each other. It is adjusted to a state that allows easy binding.
  • the apparatus of the present invention is provided with a means for optimizing the conditions of a specimen whose conditions such as pH have become unsuitable for a binding reaction such as an antigen-antibody reaction by pretreatment such as acid treatment or alkali treatment.
  • the sample is supplied to the sample supply site, spreads on the solid support, moves to the labeling reagent site, and the analyte in the sample specifically binds to the labeling reagent and the analyte is labeled.
  • optimization is achieved by one or more members or functional sites containing reagents that have been previously placed between the sample supply site and the labeling reagent site on the solid support. It is.
  • the apparatus of the present invention is provided with a means for pretreating a specimen.
  • the pretreatment means to extract or isolate an analyte from a sample and to remove impurities in the sample.
  • the means for optimizing the binding reaction such as the antigen-antibody reaction occurring on the solid support, the means for optimizing the sample conditions, and the means for pretreating the sample are as follows. And a functional site including a member or a reagent having a function of optimizing a binding reaction such as an antigen-antibody reaction occurring on a solid support, a function of optimizing sample conditions, and a function of pretreating a sample. .
  • the sample supply site may use one end of the solid support as it is, or may be a member other than the solid support, for example, nitrocellulose, cellulose acetate, nylon, polyether.
  • Consists of members made of natural or synthetic polymers such as sulfone, polyvinyl alcohol, polyester, glass fiber, polyolefin, cellulose, polystyrene, or a mixture of these, and once absorbed the specimen or the mixture of specimen and labeling reagent, and then absorbed The solution is developed and moved by capillary flow with the solid support so that the sample or mixture is supplied to the solid support.
  • the sample supply site may contain a reagent that regulates and optimizes the above reaction conditions, that is, the sample supply site may also serve as a functional site, but when the sample supply site is directly immersed in the developing solution. Since the reagent contained in the sample supply section is released onto the developing solution, it is preferable that the reagent be provided independently.
  • the labeling reagent site may be arranged by applying the labeling reagent on a solid support and drying it, or by impregnating the above-mentioned member separate from the solid support and drying it. May be continuously linked to the solid support or to the solid support.
  • the capture reagent may be disposed on the solid support by applying the capture reagent to the support, and then drying the support, or by impregnating the above-described member separate from the solid support and drying the solid support. It may be connected on a support or continuously with a solid support. (Figs. 1 and 2)
  • a sample presumed to contain the analyte is supplied to the sample supply unit.
  • the analyte to be analyzed in the method of the present invention is usually, but not limited to, an antigen or an antibody.
  • Specimens are not limited, and biological samples such as whole blood, serum, plasma, urine, saliva, sputum, nasal or pharyngeal swabs, sweat, feces, etc. Extracts, environmental samples such as sewage, muddy water, soil, etc., microbial cultures or suspensions of bacteria and viruses, and extracts of bacteria and viruses are included.
  • the sample When supplying the sample, the sample may be directly supplied to the sample supply site without performing a process such as dilution. If the sample cannot be easily spread and moved on the solid support due to viscosity, etc., dilute the sample with the developing solution in advance, or directly contact the sample supply device such as a cotton swab with the sample supply site, and The cleaning liquid may be supplied to the sample supply site while cleaning the sample attached to the swab by supplying the sample to the collection instrument. As long as the developing solution can be spread on the solid support to such an extent that the analyte does not hinder the detection process, any buffer solution containing an acidic agent, a basic agent, a surfactant, a denaturing agent, etc. It may be a solution.
  • the analyte in the sample supplied to the sample supply site by the above-described method spreads and moves on the solid-phase support, and at the site where the labeling reagent is retained (labeled reagent site), the analyte is removed from the analyte.
  • a recognition reagent complex is formed, and the complex is captured by the capture reagent at the capture reagent site and is immobilized on the solid support.
  • the sample supply site and the labeling reagent site may be the same site or different sites that are spatially separated. If the two sites are different sites, the sample supply site and the label site may be in partial contact and communicate by capillary flow, or they may not be in contact and the solid support or function A site may be present and communicate by capillary flow through the solid support or functional site.
  • “communication by capillary flow” means that a fluid such as a specimen can move by capillary action between communicating portions.
  • the apparatus of the present invention may have a configuration in which the analyte and the labeling reagent come into contact in advance at a site separated from the solid support.
  • the analyte and the labeling reagent come into contact in advance at a site separated from the solid support '' means that the labeling reagent is not contained in the solid support or is in contact with the solid support and the liquid Is not included in a site that can communicate with the solid support, for example, a sample supply site.
  • the analyte and the labeling reagent are brought into contact with each other in advance at a portion other than the solid support and the portion in contact with the solid support.
  • a solid support and a porous support containing a labeling reagent are in contact with each other. Trial The porous support containing the drug also serves as the sample supply site.
  • the sample comes into contact with the labeling reagent, and the mixture of the sample and the labeling reagent immediately moves to the solid support. That is, in this conventional apparatus, the contact between the sample and the labeling reagent is performed at a site in contact with the solid support, but not at a site separated from the solid support.
  • the mixture of the sample and the labeling reagent is used in a portion other than the solid support and the portion in contact with the solid support. , Ie, at a site separated from the solid support.
  • the contact between the labeling reagent and the sample may be performed, for example, in a sample supply device.
  • the sample supply device is an accessory part outside the detection device, and is a container for containing collected samples and performing specific processing.
  • the devices include vials, syringes, tubes, and the like.
  • the device may include a filtering means for filtering the sample when adding and supplying the sample that can be obtained only by the container to the detection device.
  • the sample addition device includes a container portion for containing the sample and a portion for adding and supplying the sample in the container to the detection device.
  • the latter portion for adding and supplying the sample has a portion having a nozzle (opening) for discharging the sample from the inside of the container, and this portion can also serve as a lid for the container portion.
  • the part for adding and supplying the latter sample to the detection device is also called a nozzle part or a lid part.
  • the device for adding a sample includes a filtering means
  • the device for supplying a sample may be composed of two parts, a nozzle portion and a container portion, each of which includes a filter housing including a filtration filter.
  • the filter housing has an opening through which the sample passes through the filter and an opening through which the sample that has passed through the filter is discharged, and the filter exists between the openings.
  • the container for example, a syringe or the like that can pass a sample under pressure to a filter may be used.
  • the analyte expands and moves on the solid support to form the analyte-the labeling reagent complex at the labeling reagent site, and the complex is captured by the capture reagent at the capture reagent site.
  • one or more reaction conditions previously adjusted at one or more locations on the solid support are adjusted or optimized, or a material or a reagent thereof.
  • the functional part including the member or the reagent is provided with a sample supply part and a label according to the purpose. What is necessary is just to provide between a reagent part and between a labeling reagent part and a capture reagent part.
  • the term "between the sample supply site and the labeling reagent site” includes a sample supply site or a labeling reagent site. Will also serve as.
  • the sample supply site or the labeling reagent site may be configured using a member having a specific function, or the sample supply site or the labeling site may include a reagent having a specific function.
  • the members constituting the functional site previously arranged on the solid support include, for example, nitrocellulose, cenorellose acetate, nylon, polyethenoles norephone, polyvinylinoleanol reconole, polyester, glass fiber, polyolefin, cellulose, Artificial polymers composed of these mixed fibers are exemplified.
  • the present invention is not limited to these.
  • any member that can function as a filter can be used.
  • the member may include a reagent for adjusting the reaction conditions for filtering the liquid developing on the solid support.
  • the functional site is in communication with the solid support by capillary flow, and is arranged so that the solution can be developed and moved on the solid support through the functional site.
  • the reagent containing the functional site examples include various chemicals such as an acidic agent, a basic agent, a surfactant, and a denaturant, and various biochemical reagents such as an enzyme * antibody 'biotin' avidin 'protein A.
  • various chemicals such as an acidic agent, a basic agent, a surfactant, and a denaturant
  • biochemical reagents such as an enzyme * antibody 'biotin' avidin 'protein A.
  • the method of disposing the reagents if the sample is configured to be in contact with the developing process on the solid support, it may be applied on the solid support and dried, or the member may be impregnated. The dried product may be continuously connected on or between the solid supports so that the solid support is connected by capillary flow through the member.
  • 1 and 2 are views showing an example of the device of the present invention. As shown in the figure, it is possible to provide a plurality of functional parts as functional parts.
  • the position where the functional part is provided can also be set as appropriate.
  • the functional part may be provided so as to be mounted on the solid support as shown in the right functional part in FIG. 1 or to be provided on the solid support as shown in the right functional part in FIG. A solid support may be provided therebetween so as to communicate with the capillary flow.
  • the material (material) serving as the member of the functional portion may be the same as or different from the material of the solid support.
  • all of the fluid such as the specimen that is deployed and moved comes into contact with the functional part and can pass through the functional part. Also, without using the members that make up the functional part, It may be included directly in the solid support.
  • a substance capable of adsorbing and removing impurities to be described later may be included by coating or impregnating on a solid support.
  • the sites for including the functional sites on the solid support are between the sample supply site and the labeling reagent site, and between the labeling reagent site and the capture reagent site, and preferably between the sample supply site and the labeling reagent site.
  • One of the functions of the functional part is a pretreatment function of the specimen, for example, a filtering function or a method of removing impurities in the specimen by hydrophobic or electrostatic physical adsorption by a material forming a member of the functional part. Elimination.
  • the impurities impede the development and movement of the sample on the solid support, or the analyte on the solid support and the labeling reagent containing a ligand that specifically binds to the analyte specifically bind to the analyte. It refers to a substance that can inhibit the binding reaction and the reaction in which the complex of the analyte-labeled reagent and the capture reagent specifically bind.
  • Another function of the functional site is to stably retain the reagent when the reagent is impregnated. Further, it has the function of adjusting the time and concentration gradient of the action and effect of the reagent contained in the functional site due to the difference between the solution development speed of the functional site and the solid support, and the amount of solution absorption.
  • the preprocessing function which is one of the functions of the functional part, also includes extraction of an analyte from a specimen.
  • the analyte is often present in an organism-derived matrix such as a cell membrane such as a microorganism or a cell, a cell wall, an organelle, or an intercellular substance.
  • an organism-derived matrix such as a cell membrane such as a microorganism or a cell, a cell wall, an organelle, or an intercellular substance.
  • a substance such as a protein present in a cell wall or the like of the bacteria is detected in order to detect the presence of the bacteria or the virus in the specimen.
  • a sample is pretreated in advance with an acid, an alkaline solution or a surfactant to solubilize the substance present on a cell membrane or a cell wall.
  • the extract was supplied to the specimen supply site and detected.
  • an analyte can also be extracted on a solid support.
  • the sample that is developed and moved on the solid support comes into contact with various biochemical reagents such as acids, bases, surfactants, etc. contained in the functional site, various chemicals and enzymes, antibodies, biotin, avidin, and protein A.
  • various biochemical reagents such as acids, bases, surfactants, etc. contained in the functional site, various chemicals and enzymes, antibodies, biotin, avidin, and protein A.
  • the analyte and the labeled reagent is an antigen primary antibody reaction
  • the [rho Eta ⁇ inorganic salt concentration to prone specific binding reaction is adjusted to the optimum range And a function of enhancing a specific reaction.
  • the optimal range is a range having a certain width, and is a range suitable for the reaction to proceed.
  • a reagent having such a function a reagent such as a surfactant, a polymer, an acidic compound, or a basic compound can be mentioned.
  • the antigen-antibody reaction is inhibited by the acid, alkali, surfactant, etc. used in the pretreatment. Is done.
  • the apparatus of the present invention can neutralize a sample inclined to acidity or basicity, or removes a surfactant and allows the reaction to be performed under optimal conditions. It also has the effect of reducing non-specific reactions.
  • a reagent such as a surfactant, a polymer, or a basic compound is used.
  • the solid support has a plurality of labeling reagent sites and a plurality of capture reagent sites, and the reaction conditions at each capture reagent site are optimized, or A functional site having a function of reducing cross reaction of each reaction component can be provided.
  • a reagent such as a surfactant, a polymer, an acidic compound, or a basic compound for adjusting the concentration of ⁇ inorganic salt in each capture reagent site is included in the functional site.
  • the left functional part is located above the sample supply part and overlaps the sample supply part
  • the central functional part is the sample supply part and the central part. And partly in contact with the labeling reagent site and in communication by capillary flow.
  • the functional units on the right are located at the labeling site and the capture reagent site on the solid support.
  • the sample is pre-processed in the left functional area, and the conditions such as ⁇
  • the binding reaction between the analyte and the capture reagent can be adjusted to optimize the binding reaction between the analyte and the capture reagent at the right functional site.
  • the sample supply site and the labeling reagent site are spatially separated.
  • Fig. 3 shows an apparatus of the present invention using a functional part having an impurity filtering function.
  • a reagent such as DEA-Dextmn that aggregates mucopolysaccharides such as chondroitin sulfate, which are nonspecific reaction components contained in the nasal cavity or pharyngeal swab, is included between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3.
  • the specimen is supplied to the specimen supply site 2 by suspending the throat swab, which is the specimen, in an arbitrary suspension, and adding the suspension to the specimen supply site or immersing only the specimen supply site 2 in the suspension. .
  • the sample spreads and moves from the sample supply site 2 to the functional site 1, and when it comes into contact with the reagent, mucopolysaccharides such as chondroitin sulfate aggregate and are captured at the functional site that has a filtration function, and expand to the labeled reagent site 3. By being unable to move, non-specific reactions can be suppressed.
  • the functional part is made of a specific member, and further has a pretreatment function of removing impurities in the specimen by containing a specific reagent.
  • a member having a filtering function such as a filter may be used as the functional part.
  • a member having a filtering function such as a filter
  • Those skilled in the art can easily select a member that can function as a filter.
  • a member capable of adsorbing or aggregating the impurity and preventing the movement of the sample by use of the impurity is used.
  • a substance capable of adsorbing or aggregating the impurities may be infiltrated into the member at the functional site and dried.
  • FIG. 3 the force that uses a member different from the solid support as the functional part As shown in FIG.
  • the substance that adsorbs or aggregates impurities can be included in the solid support by adsorption or the like.
  • the substance is contained in the solid support between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3.
  • antigens include bacterial antigens such as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa from a mixture of bacteria in which the presence of Staphylococcus aureus is suspected.
  • the collected sample is treated with a pretreatment liquid before supplying it to the sample supply site for the purpose of extracting or isolating the analyte, etc.
  • a method of adding an impurity-adsorbing substance to the pretreatment liquid used for the treatment is considered.
  • impurities that are not supplied to the sample supply site and do not affect the final test determination are also considered. Since it is necessary to prepare an impurity-adsorbing substance, there is a problem that an excessive amount of the impurity-adsorbing substance is required.
  • the addition of the impurity-adsorbing substance may cause precipitation or turbidity in the pretreatment liquid during long-term storage due to salting-out effects, etc., and decrease in non-specific adsorption efficiency due to decomposition and denaturation of the impurity-adsorbing substance.
  • a portion containing a substance that adsorbs impurities is provided as a functional portion 1 between the sample supply portion 2 and the labeling reagent portion 3 so that impurities affecting the test determination in the reaction solution are provided. It is only necessary to prepare an impurity-adsorbing substance for, so that it is possible to reduce the amount of impurity-adsorbing substances. Therefore, unnecessary precipitation and turbidity of the pretreatment liquid during long-term storage, degradation of non-specific adsorption efficiency due to decomposition and denaturation of impurity-adsorbed substances, and the like can be avoided.
  • the above problem can be avoided by providing a substance that adsorbs protein A as a functional site 1 between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3. Impurity-adsorbing substances can be reduced.
  • the substance that adsorbs to the protein A includes immunoglobulin G. Since the affinity between immunoglobulin G and protein A varies depending on the origin and subclass of immunoglobulin G, it is preferable to use one having a strong affinity with protein A.
  • IgGl, IgG2, and IgG4 subclasses show strong affinity with protein A
  • IgG2a, IgG2b, and IgG3 subclasses have protein A and strong peptide Shows affinity and IgGl subclass shows weak affinity.
  • Rat-derived immunoglobulin G hardly binds regardless of subclass.
  • the sample suspension is added to the sample supply site or only the sample supply site 2 is immersed in the bacterial suspension. Supply the sample to supply site 2. If pretreatment is required, add the pretreated bacterial suspension to the sample supply site, or immerse only the sample supply site 2 in the pretreated bacterial suspension and supply the sample to the sample supply site 2 I do.
  • the sample spreads from the sample supply site 2 to the functional site 1, and adsorbs protein A by contacting with an impurity-adsorbing substance such as an antibody, and is non-specific because it cannot expand and move to the labeling site 3 and capture reagent site 4.
  • an impurity-adsorbing substance such as an antibody
  • the reaction can be suppressed.
  • Protein G contained in the cell wall of group G streptococci also binds specifically to the Fc portion of immunoglobulin G, and is expected to cause non-specific reactions with labeling reagents or capture reagents.
  • the above method can be similarly used to avoid the above.
  • the Fc portion of the above-described strong affinity antibody was used as an impurity-adsorbing substance, and the Fc portion was excluded as a capture reagent and / or a labeling reagent.
  • an antibody By using an antibody, a detection system that further suppresses nonspecific reactions can be constructed.
  • the possibility of a sample containing an antibody against the antibody used for the capture antibody and the labeling reagent is also conceivable. Non-specific reaction can be suppressed by setting it in the functional site 1 used.
  • HAMA human anti mouse & 001
  • a heterophilic antibody against mouse is present in human serum at a frequency of several percent to several tens of percent, and an antibody against HAMA is used as an impurity-adsorbing substance.
  • the non-specific reaction can be suppressed by providing the functional site 1.
  • the specimen When the specimen is blood, fibrin and erythrocytes are mentioned as impurities, and an anti-fibrin antibody / anti-erythrocyte antibody may be used to remove these. If the specimen is feces, muscle tissue, bone fragments, muscular carcass, fat, etc. will be raised. To remove these, use kaolin minerals or bentonite minerals.
  • Fig. 4 shows a multi-detection device capable of detecting a plurality of analytes, which can optimally adjust the reaction conditions of each analyte.
  • a type A antigen of influenza virus is shown.
  • B-type antigens are shown.
  • the labeling reagent site 3 containing the type A labeling reagent complex and the type B labeling reagent complex, the capture reagent site 4 for capturing the type A antigen-type A labeling reagent complex, and the type B antigen-type B labeling A capture reagent site 4 'for capturing the reagent complex is provided on the solid support, and the capture reagent site 4 and the capture reagent site A member containing a reagent such as NaC1 for suppressing the binding between the A-type antigen A-type labeling reagent complex and the capture reagent site 4 'is placed between the 4' and the dried member is arranged as the functional site 1.
  • the reagent may be directly contained in the solid support.
  • the specimen supply site 2 is supplied with a specimen suspended in a suspension liquid that is configured so that type A antigen can easily bind to B type antigen in advance, and the A type antigen and B type antigen develop and move to label
  • reagent site 3 a type A antigen-A type labeling reagent complex and a type B antigen-B type labeling reagent complex are formed.
  • the type A antigen-1 type A labeling reagent complex is captured at the capture reagent site 4, but some of the type A antigen-1 type A labeling reagent complex and the type B antigen-1 type B labeling reagent complex are captured.
  • a reagent such as NaCl that suppresses the binding between the type A antigen-type A labeled reagent complex and the capture reagent site 4 'in the developing solution by passing through the functional site 1 when developing and moving to the reagent site 4' Is released, and the cross reaction between the type A antigen-type A labeling reagent complex and the capture reagent site 4 ′ is suppressed.
  • Substances that suppress the cross-reaction include salts such as NaCl and ionic surfactants.
  • the pH may be adjusted.
  • a buffer, an acidic substance, a basic substance, an inorganic salt, an organic salt, an amino acid, or the like may be contained as a reagent in the functional site.
  • concentrations and salts of these reagents to be included in the functional site may be appropriately determined depending on the type of the specimen and the optimal conditions. Generally, 5% (w / vol) to 10% of amino acid is used to adjust the pH to 5 to 8.5, so that the salt concentration is in the optimal range of 1.5M to 50mM during the reaction. (w / vol).
  • the optimum conditions for the antigen-antibody reaction may differ depending on the substances.
  • a functional unit containing a reagent for optimizing the reaction conditions may be provided upstream of the capture reagent site for each analyte.
  • FIG. 5 shows an apparatus of the present invention that can optimize a pretreated sample in an optimal condition.
  • PBP2 ′ present in the cell wall of MRSA is detected.
  • the sample is strongly basic, and the antigen-antibody reaction is inhibited as it is. Therefore, a member containing an acidic reagent for neutralizing the pH under alkaline conditions is placed between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3 as the functional site 1.
  • an acidic reagent may be included in the solid support to provide a functional site.
  • the sample is developed and moved from the sample supply site 2 to the functional site 1, and the pH of the developing suspension is adjusted to the neutral region by contact with the reagent. It is capable of developing and moving to the surface and binding specifically to the labeling reagent in a stable state.
  • the device of the present invention may have a function of preprocessing a specimen.
  • a functional site 1 containing a reagent for processing a sample for example, a basic substance, an acidic substance, a surfactant, or the like, is arranged between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3.
  • a reagent for processing a sample for example, a basic substance, an acidic substance, a surfactant, or the like.
  • a reagent such as formalin is contained between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3.
  • the pharyngeal swab, which is the specimen, is suspended in an arbitrary suspension, and the suspension is added to the specimen supply site, or only the specimen supply site 2 is immersed in the suspension, whereby the specimen is supplied to the specimen supply site 2.
  • the sample develops and moves from the sample supply site 2 to the functional site 1, and contacts the reagent to detect the H antigen by stably inactivating the bacterial cell surface without formalin destroying the H antigen. can do.
  • a sugar chain antigen such as Escherichia coli, hemolytic streptococci, Legionella, or Campylobacter
  • the sample is acidic because the sugar chain antigen is extracted with an acidic solution.
  • the reaction is inhibited. Therefore, a member containing a basic reagent for neutralizing the pH under acidic conditions is placed between the sample supply site 2 and the labeling reagent site 3 as the functional site 1.
  • a basic reagent may be included in the solid support to provide a functional site.
  • the cells are suspended in a suspension under acidic conditions, and then supplied to the sample supply site 2.
  • FIG. 6 also shows that when nitric acid is used to extract the sugar chain antigen, nitrite itself is strongly acidic and dangerous, so that sodium nitrite is included between the sample supply site 2 and the functional site 1.
  • the member is placed as the functional part 1 '. Instead of using a member, a functional part in which sodium nitrite is included in a solid support may be provided.
  • the cells are supplied to the specimen supply site 2.
  • the sample develops and moves from the sample supply site 2 to the functional site 1 ', and upon contact with the reagent, free nitrous acid is generated by the reaction between acetic acid and sodium nitrite in the developing suspension, and the action of the nitrite
  • the sugar chain antigen can be detached from the cells.
  • the sugar chain antigen detached by nitrous acid develops and moves from the functional site 1 'to the functional site 1 and contacts with the neutralizing reagent to adjust the pH of the developing suspension to a neutral range, thereby making the sugar chain antigen neutral.
  • the chain antigen develops and moves to the labeling reagent site 3 under neutral conditions, and can specifically bind to the labeling reagent in a stable state.
  • the analyte, the labeling reagent, and the capture substance bind.
  • the ligand that binds to the analyte is typically an antibody that specifically binds to the antigen when the analyte is an antigen, an antigen or an antigen that specifically binds to the antibody when the analyte is an antibody.
  • the analyte is a nucleic acid
  • the analyte is a nucleic acid, an antibody or a binding protein that specifically binds to the nucleic acid.
  • the labeling reagent is a conjugate in which the ligand is bound to an appropriate labeling substance.
  • the labeling substance include metal colloids such as gold colloid, nonmetallic colloids such as selenium colloid, colored resin particles, dye colloids, and colored ribosomes And an enzyme that catalyzes a color-forming reaction such as alkaline phosphatase and peroxidase, a fluorescent dye, a radioisotope, and the like.
  • the capture reagent and the labeling reagent may be the same substance, but if there is only one site that binds to the substance in the analyte, a complex of the labeling reagent-analyte-capture reagent is not formed.
  • the solid support may be any as long as the sample specimen can be absorbed and flow by capillary action.
  • the support may be made of nitrosenololose, senorelose acetate, nylon, polyethersulfone, polyvinylinolecohol, polyester, glass fiber, polyolefin, cellulose, polystyrene, etc. It is selected from the group consisting of natural and synthetic polymers, or mixtures thereof.
  • the solid support preferably has the shape of a strip.
  • the capture reagent may be immobilized on the solid support by a known method such as a method by adsorption, a method of chemically binding using a functional group such as an amino group or a carboxy group, or the like.
  • the detection device used in the method of the present invention may further contain an absorption part, even if it contains a control reagent.
  • the control reagent is not limited. For example, a substance to which a ligand in the labeling reagent binds can be used.
  • the control reagent may be immobilized downstream of the capture reagent site.
  • the absorbing section is a part having a liquid absorbing property for controlling the flow of the sample by absorbing the sample passing through the capturing section, and may be provided at the most downstream of the detection device.
  • the absorbing portion may be made of paper, for example, as the sorbent pad.
  • the apparatus of the present invention may be housed in a container (housing) that may be covered with a resin laminate at the front or a part thereof to protect the reagent against external environmental forces such as drying. May be.
  • colloidal gold antibody prepared in the previous section is sprayed onto a 10 mm x 300 mm polystyrene nonwoven fabric at a rate of 6.0 OD, 10 L / cm, and volume using a positive pressure spray device (BioDot, Biojet).
  • the glass fiber filter paper was immersed in a 2 to 10% DEAE-Dextran solution, dried at 45 ° C., cut into 10 mm ⁇ 4 mm, and used as a functional part 1.
  • LOmM Tris buffer pH7.5
  • lOmM prepared as 3.8mg / ml of Anti-Mouse IgG (Dako) as a control reagent
  • the phosphoric acid solution ⁇ 7.5
  • a solid support 6 containing a capture reagent site 4 and a control site 5 is placed on a top laminate 8, and a glass fiber filter paper is used as a labeling reagent site 3, a functional site 1, and a sample supply site 2, and a thick filter paper is used as an absorption site 7. It was arranged at any place using.
  • an immunochromatographic detection device with one functional site was prepared as a conventional product and used as a control (Fig. 7).
  • an influenza A virus antigen suspended in a phosphate buffer was used.
  • chondroitin sulfate suspended in phosphate buffer to 2% was used. The non-specific reaction caused by chondroitin sulfate was compared by immersing the sample supply site 2 in 150 ⁇ l of each sample of the invention product containing the functional site 1 and the conventional product not containing the functional site 1 prepared in the previous section.
  • the conventional product showed a positive reaction with a positive sample, but also showed a positive reaction with a non-specific sample. On the other hand, in the case of the invention product, a positive reaction was Was negative.
  • the colloidal gold antibody prepared in the previous section is sprayed onto a 10 mm x 300 mm polystyrene nonwoven fabric using a positive pressure spray device (BioDot, Biojet) at a rate of 0.5 OD, 10 L / cm, and volume.
  • a positive pressure spray device BioDot, Biojet
  • the filter paper was immersed in a phosphate buffer solution containing 0.5% nonionic surfactant, dried at 45 ° C. overnight, cut into 1.8 mm ⁇ 4 mm, and used as a functional part 1.
  • a solid support 6 containing a capture reagent site 4 and a control site 5 is placed on a top laminate 8, and a glass fiber filter paper is used as a labeling reagent site 3, a functional site 1, and a sample supply site 2, and a thick filter paper is used as an absorption site 7. It was arranged at any place using.
  • functional parts 1 A powerful immunochromatographic detector was constructed and used as a control ( Figure 7).
  • the suspension was suspended in 150 ⁇ l of OH and heated at 95 ° C for 3 minutes. After cooling, the invention containing the functional part 1 and the conventional product without the functional part 1 manufactured in the previous section were immersed in the sample supply part 2 for each sample, and the function of the neutralization pad was compared.
  • the conventional product showed a negative reaction to the negative sample, but also showed a negative reaction to the positive sample.
  • the invention product showed a negative reaction to the negative sample and a positive reaction to the positive sample.
  • the colloidal gold antibody prepared in the previous section is sprayed onto a 10 mm x 300 mm polystyrene non-woven fabric using a positive pressure spray device (BioDot, Biojet) at a rate of 0.50 D, 10 ⁇ iVcm, and volume.
  • a positive pressure spray device BioDot, Biojet
  • Mouse IgG2a which does not recognize PBP2 'as functional site 1 and has a high affinity for protein A, was adjusted to 3.8 mg / ml with lOmM phosphate buffer (pH 7.5) and anti-P 10 mM phosphate buffer (pH 7.5) adjusted to 7.2 / ig / m BP2 'antibody, and 10 mM phosphate adjusted to 3.8 mg / ml Anti-Mouse IgG (Dako) as a control reagent
  • Each of the acid solutions (PH7.5) was applied to a 20 mm ⁇ 200 mm Millipore Highflow HF12004 (Millipore) at 1.04 / i using a positive pressure spray device (BioDot, Biojet) 45. The resultant was dried with C for 60 minutes, cut into 20 mm ⁇ 4 mm, and used as a solid support 6.
  • a solid support 6 containing a functional site 1, a capture reagent site 4, and a control site 5 is placed on a top laminate 8, and a glass fiber filter paper is used as a labeling reagent site 3, a sample supply site 2, and a thick filter paper is used as an absorption site 7. It was arranged at any place using.
  • an immunochromatographic detection device with a functional unit of 1 was prepared and used as a control. ( Figure 8) (5) Detection method
  • the conventional product showed a positive reaction to the positive sample, but also showed a positive reaction to the negative sample.
  • the invention product showed a positive reaction for the positive sample and a negative reaction for the negative sample.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

　イムノクロマトグラフィー式検査法における被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬が特異的に結合する反応および被分析物質－標識試薬の複合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条件を固相支持体上において連続的に至適化するように固相支持体を構成し、なおかつ前処理した検体を固相支持体上で上記反応に適した条件にすることにより、簡便且つ感度・特異性の優れたイムノクロマトグラフィー検出装置、検査法及びこれを応用したキット、並びにその製法を提供。 　シート状の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体または該検体と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬との混合物を供給する検体供給部位および前記被分析物質－前記標識試薬複合体を特異的に結合捕捉し得る捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式検出装置であって、検体供給部位と捕捉試薬部位の間に以下の機能の一つまたは複数の機能を有する少なくとも一つの機能部位を設けたクロマトグラフィー式検出装置。

Description

明 細 書
クロマトグラフィー式検出装置、検查法及びこれを応用したキット 技術分野
[0001] 本発明は、試料中の被分析物質を特異的に定性及び定量をするクロマトグラフィー 式検出装置、検查法及びこれを応用したキットに関するものである。
背景技術
[0002] 免疫反応の特異性を利用して試料中の分析対象物を検出又は定量する分析方法 として免疫拡散法、酵素測定法、凝集法等種々の方法論が実用化されている。特に 近年、ィムノクロマトグラフィー式検査（検出）法（ラテラルフロー式、タンジヱンシャノレ フロー式、特公平 7-13640号公報、特許第 2131938号公報、特許第 2890384号公報） による検査法はその簡便性から急速に普及している。
[0003] 以下にこれらの検査法の原理を簡単に説明する。市販されている多くのィムノクロ マトグラフィー検査法は、シート状の固相支持体を有し、固相支持体上の長さ方向に 対して、端から順番に 1.検体供給部位、 2.被分析物質 (例:抗原）に特異的に結合 するリガンドを含む標識試薬 (例：可視可能な金コロイド粒子または酵素）をメンブレン 上において展開可能に保持した標識試薬部位、 3.被分析物質 (例:抗原)または標 識抗体若しくは被分析物質と標識試薬の複合体を捕捉するための捕捉試薬 (例：抗 体)を固定化した捕捉試薬部位を溶液が毛細管現象により連続的に移動するよう構 成されている。まず、被分析物質を含む検体を検体浮遊液に浮遊させた試料を試料 添加部位に所定量供すると、試料が固相支持体を展開移動する過程で標識試薬部 位に侵入し、被分析物質が標識試薬と結合し被分析物質一標識試薬の複合体が形 成される。被分析物質—標識試薬複合体はそのままメンブレン上を展開移動し、メン プレン上の捕捉試薬部位に侵入すると、固相支持体上に固定化された捕捉試薬に 捕捉され、捕捉試薬 被分析物質 標識試薬の複合体が捕捉試薬位置に形成さ れる。そして、標識試薬を任意の方法 (可視可能な金コロイド粒子の場合はその凝集 像、酵素の場合は基質を添加することによる発色反応）で検出することで、被分析物 質の存在を判定することができる。図 7に従来のィムノクロマトグラフィー式検出装置 を示す。
[0004] ィムノクロマトグラフィー式検出装置はその構成上、検体を固相支持体上に供給し 展開させることにより、 A.被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含 む標識試薬が特異的に結合する反応、および B.被分析物質一標識試薬の複合体 と捕捉試薬が特異的に結合する反応が連続的に固相支持体上において自動的に 実施されることから、簡便性において優れた検查法である。しかし、実際には多くの 検査において、被分析物質を含む検体には不純物が多ぐそれを除去するために検 查を行う前に様々な化学的 ·物理的処理により検体から被分析物質を分離及び抽出 する前処理が必要であった。この際、前処理が抗原と抗体との結合反応に不適な条 件で行われることが多ぐ前処理の後に検体を結合反応に適した条件にする必要が あった。さらに被分析物質と標識試薬が特異的に結合しやすいように反応系におい て pH及び塩濃度等を調節する必要があった。しかし、必ずしも上記 Aおよび Bの各 反応の ρΗ ·塩濃度等の至適反応条件は一致しない為、 ELISA等の複数の反応を分 けて反応させる他の検査法と比較して簡便性や感度 ·特異性が劣る面もあった。 特許文献 1：特公平 7-13640号公報
特許文献 2：特許第 2131938号公報
特許文献 3：特許第 2504923号公報
特許文献 4：特許第 2890384号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明は、ィムノクロマトグラフィー式検査法における被分析物質と被分析物質に 特異的に結合するリガンドを含む標識試薬が特異的に結合する反応および被分析 物質 標識試薬の複合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条件を固相支持 体上において連続的に至適化するように固相支持体を構成し、なおかつ前処理した 検体を固相支持体上で上記反応に適した条件にすることにより、簡便且つ感度'特 異性の優れたィムノクロマトグラフィー検出装置、検査法及びこれを応用したキット、 並びにその製法を提供するものである。さらに、本発明は固相支持体上で検体を前 処理し得るィムノクロマトグラフィー検出装置、検查法及びこれを応用したキット、並び にその製法を提供するものである。
課題を解決するための手段
[0006] 本発明者は、ィムノクロマトグラフィー式検查装置の固相支持体上で被分析物質と 被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬が特異的に結合する反応 および被分析物質一標識試薬の複合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条 件を固相支持体上において連続的に至適化し、さらに前処理した検体を固相支持 体上で上記反応に適した条件にするように固相支持体を構成することにより、迅速、 簡便且つ感度 ·特異性の優れたィムノクロマトグラフィー検出装置を開発すべく鋭意 検討を行った。その結果、検体を供給部に添加してから連続的に上記各反応が起こ る際に、各反応毎に反応条件を至適化する手段を固相支持体上に含ませることによ り、簡便且つ感度 ·特異性の優れたィムノクロマトグラフィー検査法を実施できることを 見出した。本発明者は、反応条件を至適化する手段として固相支持体上に反応条件 を至適化する機能を有する部材および/または試薬を含む機能部位を設けることに より本発明を完成させるに至った。さらに、本発明者は、固相支持体に検体処理手段 を有する部材および/または試薬を含む機能部位を設け、検体を供給部に添加す る前の検体の前処理を必要とすることなく検出を行えることを見出し、本発明を完成さ せるに至った。
[0007] すなわち、本発明は以下のとおりである。
[0008] [1] シート状の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体また は該検体と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬との混合物を供 給する検体供給部位および前記被分析物質一前記標識試薬複合体を特異的に結 合捕捉し得る捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式検出 装置であって、検体供給部位と捕捉試薬部位の間に以下の機能 (a)から (c)の一つま たは複数の機能を有する少なくとも一つの機能部位を設けたクロマトグラフィー式検 出装置。
[0009] (a) 検体を前処理する機能、
(b) 検体中の被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試 薬が特異的に結合する反応の条件を至適化する機能、および (c) 被分析物質 標識試薬の複合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条件を 至適化する機能
[2] シート状の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体を供 給する検体供給部位、被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬を固 相支持体上で展開可能に保持した標識試薬部位および前記被分析物質一前記標 識試薬複合体を特異的に結合捕捉し得る捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位が含 まれる [1]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0010] [3] 被分析物質と標識試薬が固相支持体と分離した部位で予め接触し、検体供給 部位に被分析物質を含むと推定される検体と被分析物質に特異的に結合するリガン ドを含む標識試薬との混合物が供給される [1]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0011] [4] 検体供給部位と標識試薬部位が空間的に離れて設けられている [1]または [2] のクロマトグラフィー式検出装置。
[0012] [5] 検体を前処理する機能が検体から不純物を除去する機能および/または検体 から被分析物質を抽出する機能である、 [1]から [4]のいずれかのクロマトグラフィー式 検出装置。
[0013] [6] 検体を前処理する機能が被分析物質を抽出する機能であり、検体を前処理す る機能を有する機能部位が検体から被分析物質を抽出するための試薬を含んでい る、 [5]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0014] [7] 検体力 被分析物質を抽出するための試薬が、生物マトリックスを含む検体中の 生物マトリックスから、アルカリ処理、酸処理または界面活性剤処理により被分析物質 を抽出するための、塩基物質、酸性物質または界面活性剤である、 [6]のクロマトダラ フィ一式検出装置。
[0015] [8] 検体を前処理する機能が、検体から不純物を除去する機能であり、検体を前処 理する機能を有する機能部位が検体中の不純物を濾過、吸着または凝集する機能 を有する、 [5]から [7]のいずれかのクロマトグラフィー式検出装置。
[0016] [9] 検体を前処理する機能を有する機能部位がフィルターからなり、該フィルターに より検体中の不純物が濾過される、 [8]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0017] [10] 検体を前処理する機能を有する機能部位が、不純物を吸着する試薬または不 純物を凝集させる試薬を含む、 [8ほたは [9]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0018] [11] 検体を前処理する機能を有する機能部位が、不純物を吸着する試薬または不 純物を凝集させる試薬を含み、不純物を吸着する試薬または不純物を凝集させる試 薬が固相支持体中に含まれる [10]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0019] [12] 不純物を吸着する試薬または不純物を凝集させる試薬が固相支持体中の検 体供給部位と標識試薬部位の間に含まれる [11]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0020] [13] 反応の条件を至適化する機能を有する機能部位が、反応条件を至適化する ための試薬を含む、 [1]から [12]のいずれかのクロマトグラフィー式検出装置。
[0021] [14] 反応条件を至適化するための試薬により、反応系の pHが反応に至適な範囲 に調整される [13]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0022] [15] 反応条件を至適化するための試薬により、反応系の塩濃度が反応に至適な範 囲に調整される [13]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0023] [16] 試薬が、緩衝液、酸性試薬、塩基性試薬および界面活性剤からなる群から選 択される [13]から [15]のレ、ずれかのクロマトグラフィー式検出装置。
[0024] [17] あらかじめ前処理した検体中の被分析物質力 Sリガンドまたは捕捉物質と結合 する反応の条件を至適化するための機能部位を有する、 [13]から [16]のいずれかの クロマトグラフィー式検出装置。
[0025] [18] 異なる被分析物質を補足し得る複数の捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー 式検出装置であって、少なくとも一つの捕捉試薬部位の上流に該捕捉物質と被分析 物質との結合反応条件を至適化するための試薬を含む [13]から [17]のいずれかの クロマトグラフィー式検出装置。
[0026] [19] 異なる被分析物質とそれぞれの被分析物質に対する捕捉試薬との間でクロス 反応が生じ得る被分析物質であって、結合反応の条件を至適化することによりクロス 反応を抑制する、 [18]のクロマトグラフィー式検出装置。
[0027] [20] 検体が細菌またはウィルスを含む検体であって、検体を前処理する機能を有 する機能部位が細菌またはウィルスから被分析物質を抽出する機能を有する [5]から
[19]のいずれかのクロマトグラフィー式検出装置。
[0028] [21] さらに、前処理した検体中の被分析物質力 Sリガンドまたは捕捉物質と結合する 反応の条件を至適化するための機能部位を有する [20]のクロマトグラフィー式検出 装置。
[0029] [22] 検体が鼻腔または咽頭拭い液であって、検体を前処理する機能を有する機能 部位が、鼻腔もしくは咽頭拭い液中の多糖類を凝集させる試薬を含み、なおかつ濾 過機能により凝集した多糖類を除去するフィルターからなる [5]から [21]のいずれか のクロマトグラフィー式検出装置。
[0030] [23] 被分析物質が A型インフルエンザウイルス抗原および B型インフルエンザウイ ノレス抗原を含み、 A型インフルエンザウイルス抗原を捕捉する捕捉試薬部位および B 型インフルエンザウイルス抗原を捕捉する捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式 検出装置であって、 A型インフルエンザウイルス抗原と B型インフルエンザウイルス抗 原を捕捉し得る捕捉試薬との結合および/または B型インフルエンザウイルス抗原と A型インフルエンザウイルス抗原を捕捉し得る捕捉試薬とのクロス反応による結合を 抑制し得る試薬を含む機能部位を含む [5]から [21]のいずれかのィムノクロマトグラフ ィ一式検出装置。
[0031] [24] 標識試薬が、酵素または不溶性粒状物質により標識されたリガンドである [1]か ら [23]のいずれかのクロマトグラフィー式検出装置。
[0032] [25] 被分析物質とリガンドとの結合および被分析物質 リガンド複合体と捕捉試薬 との結合が、抗原 抗体反応により生じる、 [1]から [24]のいずれかのクロマトグラフィ 一式検出装置。
[0033] [26] 固相支持体がニトロセルロース、酢酸セルロース、ナイロンおよびポリエーテル スルホンからなる群から選択される、 [1]から [25]のレ、ずれかのクロマトグラフィー式検 出装置。
発明の効果
[0034] 本発明のィムノクロマトグラフィー装置を用いることにより、ィムノクロマトグラフィー式 検査装置の固相支持体上で被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリガンド を含む標識試薬が特異的に結合する反応および被分析物質 標識試薬の複合体 と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条件が固相支持体上において連続的に至 適化されるので、迅速、簡便且つ感度 ·特異性の優れた検出を行うことができる。また 、前処理により反応に不適切な条件になった検体も固相支持体上で至適条件にする ことができるので、迅速な検出が可能になる。さらに、本発明の装置は検体処理手段 および処理した検体を反応に適した条件にする手段を備えており、さらに迅速かつ 高感度な検出を行うことができる。
[0035] 本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願 2004-169200号の明細書 および/または図面に記載される内容を包含する。
図面の簡単な説明
[0036] [図 1]本発明の検出装置の一例を示す図である。
[図 2]本発明の検出装置の一例を示す図である。
[図 3]不純物濾過機能を有している部材を用いた検出装置を示す図である。
[図 4]複数の被分析物質を検出することができる本発明のマルチ検出装置であって、 各被分析物質の反応条件を至適に調節しうる検出装置を示す図である。
[図 5]予め前処理した検体を至適条件にし得る検出装置を示す図である。
[図 6]予め前処理した検体を至適条件にし得る検出装置を示す図である。
[図 7]従来のィムノクロマトグラフィー検出装置を示す図である。
[図 8]不純物吸着物質を固相支持体に設けた検出装置を示す図である。
符号の説明
[0037] 1、機能部位
2、検体供給部位
3、標識試薬部位
4、捕捉試薬 (キヤプチヤー抗体)部位
5、対照部位（コントロール部位）
6、固相支持体 (ニトロセルロース膜）
7、吸収部位（ァブソーベントパッド）
8、トップラミネートまたはハウジング
発明を実施するための最良の形態
[0038] 以下、本発明について詳細に説明する。
[0039] 本発明は、検体中の被分析物質を検出する装置であって、ィムノクロマトグラフィー 式検出装置、検査法及びこれを応用したキットである。本発明の検出装置はシート状 の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体または該検体と被 分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬との混合物を供給する検体供 給部位および前記被分析物質一前記標識試薬複合体を特異的に結合捕捉し得る 捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位を含む。検体供給部位に被分析物質を含むと 推定される検体を供給すると、検体は標識試薬部位、捕捉試薬部位の順に通過する よう構成されている。本発明の装置は、さらに被分析物質に特異的に結合するリガン ドを含む標識試薬を固相支持体上で展開可能に保持した標識試薬部位を含んでい てもよく、この場合、検体と標識試薬との結合は固相支持体上で行われるので、検体 供給部位には検体のみを供給すればょレ、。
さらに、本発明の装置は、固相支持体上で起こる抗原抗体反応等の結合反応を至 適化する手段を備えている。具体的には、検体が検体供給部位に供給され固相支 持体上を展開して標識試薬部位に移動し、検体中の被分析物質と標識試薬が特異 的に結合して被分析物質 標識試薬複合体を形成する過程において、予め固相支 持体上の検体供給部位力 標識試薬部位までの間に配置した 1つ以上の部材また は試薬を含む機能部位によって、検体から被分析物質を分離し、かつ被分析物質と 標識試薬の特異的に結合しやすい状態に調節される。また、前記複合体が捕捉試 薬と特異的に結合して、被分析物質 標識試薬 捕捉試薬複合体を形成する過程 において、予め固相支持体上の標識試薬部位力 捕捉試薬部位までの間に配置し た 1つ以上の部材または試薬を含む機能部位と接触することによって、前記複合体 が固相支持体上を展開して捕捉試薬部位に移動する過程において、前記複合体と 捕捉試薬とが特異的に結合しやすい状態に調節される。さらに、本発明の装置は酸 処理やアルカリ処理等の前処理により、 pH等の条件が抗原抗体反応等の結合反応 に適さない条件になった検体の条件を至適化する手段を備えている。具体的には、 検体が検体供給部位に供給され固相支持体上を展開して標識試薬部位に移動し、 検体中の被分析物質と標識試薬が特異的に結合して被分析物質一標識試薬複合 体を形成する過程にぉレ、て、予め固相支持体上の検体供給部位から標識試薬部位 までの間に配置した 1つ以上の部材または試薬を含む機能部位によって、至適化さ れる。さらに、本発明の装置は、検体を前処理する手段を備えている。ここで、前処 理とは、検体中から被分析物質を抽出あるいは単離すること、および検体中の不純 物を除去することをいう。
[0041] 本発明の装置において、上記の固相支持体上で起こる抗原抗体反応等の結合反 応を至適化する手段、検体の条件を至適化する手段および検体を前処理する手段 は、それぞれ固相支持体上で起こる抗原抗体反応等の結合反応を至適化する機能 、検体の条件を至適化する機能および検体を前処理する機能を有する部材または 試薬を含む機能部位からなる。
[0042] 本発明の装置において、検体供給部位は固相支持体の一端をそのまま使用しても 構わないし、固相支持体とは別の部材、例えば、ニトロセルロース、酢酸セルロース、 ナイロン、ポリエーテルスルホン、ポリビュルアルコール、ポリエステル、ガラス繊維、 ポリオレフイン、セルロース、ポリスチレン等の天然、合成ポリマー、あるいはこれらの 混合物からなる部材で構成し、一旦検体または検体と標識試薬の混合物を吸収し、 次いで吸収した検体または混合物を固相支持体に供給するように、固相支持体と毛 管流により溶液が展開移動可能となるよう配置する。検体供給部位が前記の反応条 件を調節、至適化する試薬を含有していても、すなわち検体供給部位が機能部位を 兼ねていても良いが、検体供給部位を直接展開液に浸漬する場合は、検体供給部 位に含有した前記試薬が展開液上に放出されるので、望ましくは独立して設けた方 が良い。また、標識試薬部位の配置は固相支持体上に標識試薬を塗布して乾燥さ せても構わなレ、し、固相支持体とは別の上述の部材に含侵させて乾燥した物を固相 支持体上または固相支持体と連続的に連結させても構わない。捕捉試薬部位の配 置も同様に固相支持体上に捕捉試薬を塗布して乾燥させても構わないし、固相支持 体とは別の上述の部材に含侵させて乾燥した物を固相支持体上または固相支持体 と連続的に連結させても構わない。 （図 1、 2)
本発明の方法においてはまず、被分析物質を含むと推定される検体を検体供給部 位に供給する。本発明の方法において分析しょうとする被分析物質は、限定されな いが通常は抗原または抗体である。検体も限定されず、全血、血清、血漿、尿、唾液 、喀痰、鼻腔または咽頭拭い液、汗、糞便等の生体試料の他、肉、植物等の食物の 抽出物、汚水、泥水、土壌等の環境由来の試料、菌、ウィルス等の微生物培養液も しくは浮遊液等、菌ゃウィルス等の抽出物が含まれる。
[0043] 検体を供給する際は、検体を検体供給部位に希釈等の処理をすることなく直接供 給してもよレ、。また、検体が粘性等により固相支持体上で容易に展開移動できない 検体に関しては予め展開液で希釈したり、また検体を採取した綿棒等の採取器具を 直接検体供給部位に接触させ、展開液を前記採取器具に供給することにより、綿棒 に付着した検体を洗浄しながら、検体供給部位にその洗浄液を供給してもよい。展 開液は被分析物質が検出工程上、支障がない程度に固相支持体上を展開できれば 、酸性剤、塩基性剤、界面活性剤、変性剤等を含む各種緩衝液でも、いかなる組成 の溶液でもよい。
[0044] 上述の方法で検体供給部位に供給された検体中の被分析物質は、固相支持体上 を展開移動して標識試薬を保持した部位 (標識試薬部位)で被分析物質一前記標 識試薬複合体を形成し、前記複合体は捕捉試薬部位で捕捉試薬に捕捉され、固相 支持体上に固定化される。
[0045] この際、検体供給部位と標識試薬部位は同一の部位であっても、空間的に離れて 存在している異なる部位であってもよい。両部位が異なる部位である場合、検体供給 部位と標識部位が部分的に接触して毛管流により連絡していてもよいし、接触してお らず両部位の間に固相支持体または機能部位が存在しており、該固相支持体また は機能部位を介して毛管流により連絡していてもよい。ここで、「毛管流により連絡」と は連絡している部位間で検体等の流体が毛管現象により移動し得ることをいう。また 、本発明の装置は被分析物質と標識試薬が固相支持体と分離した部位で予め接触 するような構成を有していてもよい。 「被分析物質と標識試薬が固相支持体と分離し た部位で予め接触する」とは、標識試薬が固相支持体に含まれておらず、または固 相支持体と接触しており液体が固相支持体と連絡し得る部位、例えば、検体供給部 位等にも含まれていないことをいう。この場合、被分析物質と標識試薬は、固相支持 体および固相支持体と接触している部位以外で予め接触する。例えば、従来のィム ノクロマトグラフィー式検出装置においては、固相支持体と標識試薬を含む多孔質支 持体が接触する形で構成されているものがあり、該従来の装置においては、標識試 薬を含む多孔質支持体が検体供給部位を兼ね、該検体供給部位に検体を添加する ことにより、検体と標識試薬が接触し、検体と標識試薬の混合物は直ちに固相支持 体に移動する。すなわち、この従来の装置においては、検体と標識試薬の接触は固 相支持体と接触した部位で行われるのであり、固相支持体と分離した部位では行わ れない。本発明においては、検体と標識試薬の接触時間等を調節するために、この 従来の装置とは異なり、検体と標識試薬の混合物を固相支持体および固相支持体と 接触している部位以外の部位、すなわち固相支持体と分離した部位で接触する。標 識試薬と検体との接触は、例えば、検体供給用デバイス中で行ってもよい。検体供 給用デバイスは、検出装置外の付属部品であり、採取した検体を入れ特定の処理を 行うための容器である。該デバイスには、バイアル、シリンジ、チューブ等が含まれる 。また、該デバイスは容器だけでなぐ検体を検出装置に添加供給する際に検体を 濾過するための濾過手段を含んでいてもよい。検体添加用デバイスは、検体を収容 する容器部分と容器内の検体を検出装置に添加供給する部分を含む。後者の検体 を添加供給する部分は、検体を容器内から排出するためのノズル（開口部）を有する 部分を有し、該部分は容器部分の蓋を兼ねることもできる。後者の検体を検出装置 に添加供給する部分は、ノズル部分あるいは蓋部分ともいう。また、検体添加用デバ イスが濾過手段を含む場合、検体供給用デバイスは濾過フィルターを含むフィルタ 一ハウジングからなるノズル部分と容器部分の 2つの部品から構成されていてもよい 。この場合のフィルターハウジングは、検体をフィルターに通す開口部とフィルターを 通過した検体を排出する開口部を有し、両開口部の間にフィルターが存在する。容 器は、例えば、検体をフィルターに圧力をかけて通すことができるシリンジ等を用いれ ばよい。
本発明の装置において、被分析物質が、固相支持体上を展開移動して標識試薬 部位で被分析物質一前記標識試薬複合体を形成し、前記複合体は捕捉試薬部位 で捕捉試薬に捕捉され、固相支持体上に固定化されるまでの過程において、予め固 相支持体上の任意の場所に配置された 1つ以上の反応条件を調整、至適化する部 材または試薬若しくはその両方を含む機能部位に接触し、あるいは機能部位を通過 する。該部材または試薬を含む機能部位はその目的に応じて、検体供給部位と標識 試薬部位の間、標識試薬部位と捕捉試薬部位の間に設ければよい。この場合、「検 体供給部位と標識試薬部位の間」とレ、う場合、検体供給部位または標識試薬部位を 含み、この場合検体供給部位または標識試薬部位が前記部材または試薬を含む機 能部位を兼ねることになる。具体的には、検体供給部位または標識試薬部位を特定 の機能を有する部材を用いて構成するか、あるいは検体供給部位または標識部位に 特定の機能を有する試薬を含ませればよレ、。
予め固相支持体上に配置する機能部位を構成する部材は例えば、ニトロセルロー ス、酢酸セノレロース、ナイロン、ポリエーテノレスノレホン、ポリビニノレアノレコーノレ、ポリエ ステル、ガラス繊維、ポリオレフイン、セルロース、これらの混合繊維からなる人工ポリ マー等が挙げられる。但し、これらのものには限定されず、例えば機能部位に濾過機 能を持たせる場合、フィルタ一として作用しうるあらゆる部材を用いることができる。該 部材は、固相支持体上を展開する液を濾過するば力、りでなぐ反応条件を調整する 試薬を含み得る。該機能部位は、固相支持体と毛管流により連絡しており、溶液が機 能部位を通って固相支持体上を展開移動可能となるよう配置する。また機能部位が 含む試薬は、酸性剤、塩基性剤、界面活性剤、変性剤等各種化学薬品や酵素 *抗 体 'ビォチン'アビジン'プロテイン A等各種生化学試薬が挙げられる。試薬の配置方 法としては、検体が固相支持体上で展開する過程において接触するよう構成するな らば、固相支持体上に塗布して乾燥させても構わないし、前記部材に含侵させ乾燥 した物を固相支持体上または固相支持体の間に固相支持体が該部材を介して毛管 流により連絡するように連続的に連結させても構わない。図 1および図 2は、本発明の 装置の一例を示す図である。図に示すように機能部位として複数の機能部位を設け ること力 Sできる。機能部位を設ける位置も適宜設定することができる。機能部位の設け 方も図 1の右の機能部位のように、固相支持体の上に載せるようにして設けてもよい し、図 2の右の機能部位のように、固相支持体の間に固相支持体を毛管流により連 絡するように設けてもよレ、。この場合、機能部位の部材となる素材 (材料)は固相支持 体の素材と同じであっても異なっていてもよい。図 2の右の機能部位の場合、展開移 動する検体等の流体の全てが機能部位と接触し、機能部位を通過し得るので、より 効果を奏することができる。また、機能部位を構成する部材を用いずに、機能部位を 固相支持体に直接含ませてもよい。例えば、後述の不純物を吸着除去し得る物質を 固相支持体上に塗布したり含浸させたりすることにより含ませればよい。固相支持体 上の機能部位を含ませる部位としては、検体供給部位と標識試薬部位の間、標識試 薬部位と捕捉試薬部位の間があるが、検体供給部位と標識試薬部位の間が好まし レ、。
[0048] 前記機能部位の機能の一つは検体の前処理機能であり、例えば濾過機能または、 機能部位の部材を形成する素材による疎水的、静電的等物理的吸着による検体中 の不純物の除去である。ここで、不純物とは固相支持体上における検体の展開移動 を阻害し、あるいは固相支持体上で被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリ ガンドを含む標識試薬が特異的に結合する反応および被分析物質一標識試薬の複 合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応を阻害し得る物質をいう。前述のように、検 体としては多種のものを用いることができる力 S、検体により特有の不純物が含まれるこ と力 Sある。例えば、血液検体には、フイブリンや赤血球が存在し、鼻腔や咽頭ぬぐい 液等にはコンドロイチン硫酸等の多糖類が存在し、糞便等には種々の固形物が存在 する。機能部位の部材として多孔性の繊維を用いれば該部材はフィルタ一として濾 過機能を発揮し、検体中の不純物を除去することができる。不純物の除去により被分 析物質または被分析物質 標識試薬複合体は単離され、それぞれ標識試薬または 捕捉試薬と特異的に結合できる状態になる。また前記機能部位の別の作用として、 前記試薬を含侵させた場合は前記試薬の安定した保持が挙げられる。さらに、機能 部位と固相支持体の溶液展開速度、溶液吸収量の差による前記機能部位に含まれ る試薬の作用効果の時間及び濃度勾配を調節する機能も有する。
[0049] 前記機能部位の機能の一つである前処理機能は、検体からの被分析物質の抽出 も含む。臨床検体中の被分析物質を検出する場合は、被分析物質は微生物や細胞 等の細胞膜、細胞壁、細胞内小器官等あるいは細胞間物質等の生体由来マトリック スに存在する場合が多い。例えば、細菌感染症やウィルス感染症を検出する場合、 検体中の細菌やウィルスの存在を検出するために、細菌の細胞壁等に存在するタン パク質等の物質を検出する。従来の検出法においては、あらかじめ検体を酸、アル力 リ溶液や界面活性剤で前処理し、細胞膜や細胞壁に存在する前記物質を可溶化す ることにより抽出し抽出物を検体供給部位に供給して検出していた。本発明の装置 においては、固相支持体上で被分析物質の抽出も行うことができる。すなわち、固相 支持体上に展開移動している検体が、機能部位に含まれる酸 ·塩基 ·界面活性剤等 各種化学薬品や酵素 ·抗体 ·ピオチン ·アビジン ·プロテイン A等各種生化学試薬と接 触し、微生物及び細胞マトリックスが破壊され、さらに破壊された不純物が吸着等に より検体中から除去され、被分析物質のみが単離され展開移動する。
[0050] また機能部位の別の機能として、被分析物質と標識試薬が抗原一抗体反応の場合 に、特異的結合反応を生じやすくするように ΡΗ ·無機塩類濃度を至適範囲に調整し 、かつ特異反応を増強する機能が挙げられる。ここで、至適範囲とは一定の幅を有 する範囲であり、反応が進行するのに好適な範囲をいう。このような機能を有する試 薬として、界面活性剤、高分子ポリマー、酸性化合物、塩基性化合物等の試薬が挙 げられる。例えば、前述のように検体を検出装置に供給する前段階で、あるいは固相 支持体上で前処理した場合、前処理に用いた酸、アルカリ、界面活性剤等により抗 原-抗体反応が阻害される。この場合、本発明の装置により酸性あるいは塩基性に 傾いた検体を中和することができ、あるいは界面活性剤を除去し、反応を至適条件 で行わせることが可能になる。また、非特異反応を軽減する作用も挙げられ、この場 合は、界面活性剤や高分子ポリマー、塩基性化合物等の試薬が用いられる。さらに、 複数の被分析物質を検出するマルチアツセィの場合、固相支持体上に複数の標識 試薬部位及び複数の捕捉試薬部位を有し、それぞれの捕捉試薬部位での反応条件 を至適化し、あるいは各反応成分のクロス反応を軽減する機能を有する機能部位を 設けることができる。この場合は、それぞれの捕捉試薬部位において ρΗ ·無機塩類濃 度を調整する界面活性剤、高分子ポリマー、酸性化合物、塩基性化合物等の試薬を 機能部位に含ませる。
[0051] 図 1の装置の場合、例えば 3つの機能部位のうち、左の機能部位は検体供給部位 の上に位置し、検体供給部位と重なっており、中央の機能部位は検体供給部位およ び標識試薬部位と部分的に接触し毛管流により連絡している。さらに、右の機能部 位は、固相支持体上の標識部位と捕捉試薬部位に位置する。例えば、左の機能部 位で検体を前処理し、中央の機能部位で前処理した検体の ρΗ等の条件を被分析物 質と標識試薬の結合反応が至適になるよう調整し、右の機能部位で被分析物質と捕 捉試薬の結合反応が至適になるように調整することができる。図 1の装置の場合、検 体供給部位と標識試薬部位は、空間的に離れて存在している。
[0052] 以下、本発明の具体的な態様を図に基づき説明する。
[0053] 図 3は、不純物濾過機能を有している機能部位を用いた本発明の装置を示し、一 例として鼻腔また咽頭拭い液からインフルエンザウイルスを検出する場合が挙げられ る。この場合、検体供給部位 2と標識試薬部位 3の間に、鼻腔または咽頭拭い液中に 含まれる非特異反応成分であるコンドロイチン硫酸等のムコ多糖類を凝集させる DEA E— Dextmn等の試薬を含ませ乾燥させた多孔質で濾過機能を持ち合わせた機能部 位 1を配置する。検体である咽頭拭い液を任意の浮遊液に浮遊して、浮遊液を検体 供給部位に添加または検体供給部位 2のみを前記浮遊液に浸漬することで、検体供 給部位 2に検体を供給する。検体は検体供給部位 2から機能部位 1に展開移動し、 試薬と接触することでコンドロイチン硫酸等のムコ多糖類が凝集し、且つ濾過機能を 持ち合わせた機能部位において捕捉され、標識試薬部位 3に展開移動できないこと で、非特異反応を抑制することができる。図 3に示す装置の場合、機能部位が特定の 部材からなり、さらに特定の試薬を含むことにより、検体中の不純物を除去する前処 理機能を有する。
[0054] 糞便等の固形物が多く含まれる検体の場合、フィルタ一等の濾過機能を有する部 材を機能部位として用いればよい。フィルタ一として作用しうる部材は当業者ならば 容易に選択することができる。また特定の不純物が含まれる検体の場合は、該不純 物を吸着または凝集し展開移動を阻止し得る部材を用いればょレ、。検体中の不純物 を除去しうるためには、不純物を吸着または凝集させうる物質を機能部位の部材に浸 潤させ乾燥させておけばよい。図 3においては機能部位として固相支持体とは別の 部材を用いている力 図 8のように不純物を吸着または凝集させる物質は、固相支持 体に吸着等により含ませることもできる。図 8に示す装置の場合、検体供給部位 2と標 識試薬部位 3との間の固相支持体に物質を含ませている。このような例として、黄色 ブドウ球菌の存在が疑われる菌混合液からの大腸菌、緑濃菌等の細菌の抗原、特に 前記菌混合液からの多剤耐性ブドウ球菌（MRSA)細胞壁に存在するペニシリン結合 蛋白（ΡΒΡ2' )の検出の場合が挙げられる。黄色ブドウ球菌の細胞壁中に含まれるプ 口ティン Αは免疫グロブリン Gの Fc部分と特異的に結合するため、標識試薬、あるい は捕獲試薬と非特異反応を起こすことが予想される。
[0055] 検体中力 被分析物質を抽出あるいは単離する等の目的で、採取した検体を検体 供給部位に供給する前に前処理液で処理する場合は、非特異反応を回避する為に 前処理に用いる前処理液中に不純物吸着物質を添加する方法が考えられる。しかし この方法では、採取した検体と前処理液を反応させた後の反応液に存在する物質の うち、検体供給部位に供給されず最終的な試験判定に影響を与えない不純物に対 しても不純物吸着物質を準備する必要があるため、過剰に不純物吸着物質を必要と するという問題がある。また、不純物吸着物質の添加を原因として、長期保存時の前 処理液に塩析効果等による沈殿や濁り、不純物吸着物質の分解、変性による非特異 吸着効率の低下等を生じてしまう可能性があるという問題がある。一方、本発明の方 法においては、検体供給部位 2と標識試薬部位 3の間に不純物を吸着する物質を含 む部位を機能部位 1として設けることで反応液中の試験判定に影響を与える不純物 に対してのみ不純物吸着物質を準備すれば良いので、不純物吸着物質の削減を図 ることが可能である。従って、長期保存時の前処理液の無用な沈殿や濁り、不純物 吸着物質の分解、変性による非特異吸着効率の低下等を避けることができる。
[0056] 具体的には、上記菌混合液を用いる場合、検体供給部位 2と標識試薬部位 3の間 に、プロテイン Aと吸着する物質を機能部位 1として設けることで上記問題が回避でき 、用いる不純物吸着物質を減らすことが可能となる。例えば、前記プロテイン Aと吸着 する物質として免疫グロブリン Gが挙げられる。免疫グロブリン Gとプロテイン Aのァフィ 二ティは免疫グロブリン Gの由来とサブクラスにより、強弱の差が見られるので、プロテ イン Aとのァフィ二ティが強いものを用いることが望ましい。一般的にヒト由来の免疫グ ロブリン Gでは IgGl、 IgG2、 IgG4のサブクラスがプロテイン Aと強いァフィ二ティを示し、 マウス由来の免疫グロブリン Gでは IgG2a、 IgG2b、 IgG3のサブクラスがプロテイン Aと 強レヽァフィニティを示し IgGlのサブクラスは弱レヽァフィニティを示す。ラット由来の免 疫グロブリン Gはサブクラスによらず殆ど結合しなレ、。検体である菌懸濁液を検体供 給部位に添加、または検体供給部位 2のみを前記菌懸濁液に浸漬すことで、検体供 給部位 2に検体を供給する。前処理が必要な場合は前処理済みの菌懸濁液を検体 供給部位に添加、または検体供給部位 2のみを前処理済み菌懸濁液に浸漬した後 に、検体供給部位 2に検体を供給する。検体は検体供給部位 2から機能部位 1に展 開移動し、抗体等の不純物吸着物質と接触することでプロテイン Aを吸着し、標識部 位 3および捕獲試薬部位 4に展開移動できないことで非特異反応を抑制することがで きる。グループ Gの連鎖球菌の細胞壁中に含まれるプロテイン Gも免疫グロブリン Gの Fc部分と特異的に結合するため、標識試薬、あるいは捕獲試薬と非特異反応を起こ すことが予想され、この非特異反応の回避にも上記方法を同様に用いることができる 。また、プロテイン Aは免疫グロブリン Gの Fc部分と特異的に結合するので、不純物吸 着物質として上記ァフィ二ティの強い抗体の Fc部を用い、捕捉試薬及び/又は標識 試薬として Fc部を除いた抗体を用いることで、さらに非特異反応を抑えた検出系を組 むことができる。また、捕捉抗体及び標識試薬に用いる抗体に対する抗体を含む検 体の可能性も考えられるが、この場合、これら捕捉抗体及び標識試薬に用いる抗体 に対する抗体と特異的に吸着する物質を不純物吸着物質として用い機能部位 1に設 けることで非特異反応を抑えることができる。例えば、マウスに対する異好性抗体 HA MA(human anti mouse & 001 )は数％から数十％の頻度で、ヒト血清中に存在する ことが示されており、 HAMAに対する抗体を不純物吸着物質として用い機能部位 1に 設けることで非特異反応を抑えることができる。
[0057] 検体が血液の場合、フイブリンや赤血球が不純物として挙げられ、これらの除去の ためには抗フイブリン抗体ゃ抗赤血球抗体を用いればよい。検体が糞便の場合は筋 組織、骨片、筋体の死骸、脂肪等が上げられ、これらの除去のためにはカオリン鉱物 やベントナイト鉱物等を用レ、ればよレ、。
[0058] 図 4は、複数の被分析物質を検出することができるマルチ検出装置において、各被 分析物質の反応条件を至適に調整しうる装置を示し、一例としてインフルエンザウイ ノレスの A型抗原及び B型抗原を検出する場合が挙げられる。この場合は、 A型標識 試薬複合体及び B型標識試薬複合体が含まれる標識試薬部位 3と A型抗原一 A型 標識試薬複合体を捕捉する捕捉試薬部位 4及び B型抗原一 B型標識試薬複合体を 捕捉する捕捉試薬部位 4'を固相支持体上に設け、捕捉試薬部位 4と捕捉試薬部位 4'の間に A型抗原 A型標識試薬複合体と捕捉試薬部位 4'との結合を抑制する Na C1等の試薬を含ませ乾燥させた部材を機能部位 1として配置する。この場合、試薬を 固相支持体に直接含ませてもよい。検体供給部位 2には予め A型抗原が結合しやす ぐ B型抗原が結合しにくいよう構成された浮遊液に浮遊された検体が供給され、 A 型抗原及び B型抗原は展開移動して標識試薬部位 3にて A型抗原一 A型標識試薬 複合体及び B型抗原一 B型標識試薬複合体が形成される。前記 A型抗原一 A型標 識試薬複合体は捕捉試薬部位 4に捕捉されるが、一部の前記 A型抗原一 A型標識 試薬複合体と B型抗原一 B型標識試薬複合体が捕捉試薬部位 4 'に展開移動する際 に前記機能部位 1を通過することで、展開液に A型抗原— A型標識試薬複合体と捕 捉試薬部位 4'との結合を抑制する NaCl等の試薬が放出され、 A型抗原一 A型標識 試薬複合体と捕捉試薬部位 4'のクロス反応が抑制される。クロス反応を抑制する物 質としては、 NaCl等の塩類の他、イオン性界面活性剤が挙げられる。また、 pHを調整 してもよく、この場合は、緩衝液、酸性物質、塩基性物質、無機塩、有機塩、アミノ酸 等を試薬として機能部位に含ませればよい。機能部位に含ませるこれらの試薬の濃 度や塩は、検体の種類や至適条件により適宜決定すればよい。一般的には、反応時 に塩濃度が至適範囲である 1.5M〜50mMになるように、 pH力 ·5〜8·5になるように、 アミノ酸が 5%(w/vol)〜10%(w/vol)になるように設定すればよい。
[0059] また、クロス反応が生じ得ない複数の被分析物質を一度に検出する場合も、物質に よって抗原 抗体反応の至適条件が異なる場合がある。この場合、それぞれの被分 析物質に対する捕捉試薬部位の上流に、反応条件を至適化する試薬を含む機能部 位を設ければよい。
[0060] 図 5は、予め前処理した検体を至適条件にし得る本発明の装置を示し、例えば、 M RSAの細胞壁に存在する PBP2'を検出する場合が挙げられる。この場合、 PBP2'の 抽出は塩基性溶液で行われるため、検体は強塩基性であり、そのままでは抗原—抗 体反応は阻害される。従って、検体供給部位 2と標識試薬部位 3の間にアルカリ条件 の pHを中性にする酸性試薬を含ませた部材を機能部位 1として配置する。部材を用 いる代わりに、固相支持体に酸性試薬を含ませ、機能部位を設けてもよい。細胞壁を 破壊するため、 MRSA菌体を強アルカリ条件下の浮遊液に浮遊した後、検体供給部 位 2へ供給する。検体は検体供給部位 2から機能部位 1に展開移動し、試薬と接触 することで展開中浮遊液の pHが中性域に調整されることにより、 PBP2'は中性条件 下において標識試薬部位 3に展開移動し、安定した状態で標識試薬と特異的に結 合すること力 Sできる。
[0061] さらに、本発明の装置は、検体を前処理する機能を有していてもよい。この場合、検 体供給部位 2と標識試薬部位 3の間に検体を処理するための試薬、例えば塩基性物 質、酸性物質、界面活性剤等を含む機能部位 1を配置する。この場合、前処理により pH等の条件の変わった検体を反応に至適な条件にする必要があり、固相支持体上 の前処理するための部位の下流に、前記の条件を至適にする他の機能部位を設け れは'よレ、。
[0062] 例えば、大腸菌、サルモネラ等の細菌の抗原、特に加熱処理に弱レ、鞭毛（H抗原） を検出する場合、検体供給部位 2と標識試薬部位 3の間に、ホルマリン等の試薬を含 ませ乾燥させた多孔質で濾過機能を持ち合わせた機能部位 1を配置する。検体であ る咽頭拭レ、液を任意の浮遊液に浮遊して、浮遊液を検体供給部位に添加または検 体供給部位 2のみを前記浮遊液に浸潰すことで、検体供給部位 2に検体を供給する 。検体は検体供給部位 2から機能部位 1に展開移動し、試薬と接触することで菌体表 面がホルマリンによって H抗原が破壊されることなく安定して不活化されることにより、 H抗原を検出することができる。
[0063] 例えば、大腸菌、溶血レンサ球菌、レジオネラ、カンピロバクタ一等の糖鎖抗原を検 出する場合、糖鎖抗原の抽出は酸性溶液で行われるため、検体は酸性であり、その ままでは抗原 抗体反応は阻害される。従って、検体供給部位 2と標識試薬部位 3 の間に酸性条件の pHを中性にする塩基性試薬を含ませた部材を機能部位 1として 配置する。部材を用レ、る代わりに、固相支持体に塩基性試薬を含ませ、機能部位を 設けてもよい。菌体から糖鎖抗原を剥離するため、菌体を酸性条件下の浮遊液に浮 遊した後、検体供給部位 2へ供給する。検体は検体供給部位 2から機能部位 1に展 開移動し、試薬と接触することで展開中浮遊液の pHが中性域に調整されることにより 、糖鎖抗原は中性条件下において標識試薬部位 3に展開移動し、安定した状態で 標識試薬と特異的に結合することができる。 [0064] 図 6はまた、糖鎖抗原の抽出を亜硝酸によって行う場合は亜硝酸自体が酸性が強 く危険なため、検体供給部位 2と機能部位 1との間に亜硝酸ナトリウムを含ませた部 材を機能部位 1 'として配置する。部材を用いる代わりに、固相支持体に亜硝酸ナトリ ゥムを含ませた機能部位を設けてもよい。菌体を酢酸等の浮遊液に浮遊した後、検 体供給部位 2へ供給する。検体は検体供給部位 2から機能部位 1 'に展開移動し、試 薬と接触することで展開中の浮遊液の酢酸と亜硝酸ナトリウムの反応により遊離の亜 硝酸が発生し、その亜硝酸の作用によって菌体力 糖鎖抗原を剥離することができ る。また、亜硝酸により剥離した糖鎖抗原は機能部位 1 'から機能部位 1に展開移動 し、中和試薬と接触することで展開中浮遊液の pHが中性域に調整されることにより、 糖鎖抗原は中性条件下において標識試薬部位 3に展開移動し、安定した状態で標 識試薬と特異的に結合することができる。
[0065] ィムノクロマトグラフィー装置において、被分析物質と標識試薬および捕捉物質が 結合する。被分析物質に結合するリガンドは、典型的には被分析物質が抗原の場合 は、該抗原に特異的に結合する抗体、被分析物質が抗体の場合は該抗体が特異的 に結合する抗原または抗体であり、被分析物質が核酸の場合は、該核酸に特異的 に結合する核酸、抗体または結合タンパクであり、その他、被分析物質 リガンドの 組合わせとして、受容体 リガンド、リガンドー受容体等の組合わせが挙げられる。標 識試薬とは、前記リガンドと適当な標識物質を結合させたコンジュゲートであり、標識 物質として、金コロイド等の金属コロイド、セレニウムコロイド等の非金属コロイド、着色 樹脂粒子、染料コロイド及び着色リボソーム等の不溶性粒状物質やアルカリフォスフ ァターゼ、ペルォキシダーゼ等の発色反応を触媒する酵素、蛍光色素、放射性同位 体等が挙げられる。捕捉試薬と標識試薬は同じ物質でもよいが、被分析物質中に該 物質と結合する部位が一つしか存在しない場合は、標識試薬一被分析物質一捕捉 試薬複合体が形成されない。従って、この場合捕捉試薬と標識試薬はそれぞれ被分 析物質の異なる部位に結合する必要がある。固相支持体は毛管現象により試料検 体が吸収され流動し得るものであれば、どのようなものであってもよい。例えば、支持 体はニトロセノレロース、酢酸セノレロース、ナイロン、ポリエーテルスルホン、ポリビニノレ アルコール、ポリエステル、ガラス繊維、ポリオレフイン、セルロース、ポリスチレン等の 天然、合成ポリマー、あるいはこれらの混合物からなる群から選択される。固相支持 体は好ましくは短冊状のストリップの形状を有する。前記捕捉試薬の固相支持体へ の固定化は、吸着による方法、アミノ基、カルボキシノレ基等の官能基を利用して化学 的に結合させる方法等、公知の方法で行えばよい。
[0066] 本発明の方法に用いる検出装置は、さらに、対照用試薬を含んでいてもよぐさら に吸収部を含んでいてもよい。対照用試薬は限定されないが、例えば標識試薬中の リガンドが結合する物質を用いることができる。対照用試薬は、捕捉試薬部位の下流 に固定化すればよい。吸収部は、捕捉部を通過した検体を吸収することにより、検体 の流れを制御する液体吸収性を有する部位であり、検出装置の最下流に設ければよ レ、。吸収部は例えば紙製のものをァブソーベントパッドとして用いればよい。
[0067] さらに、本発明の装置は、試薬を乾燥等の外部環境力 保護するために、樹脂製 のラミネートで前面または一部が覆われていてもよぐまた容器 (ハウジング）に収めら れていてもよい。
実施例
[0068] 本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に よって限定されるものではない。
[0069] 実施例 1 A型インフルエンザウイルスの検出におけるコンドロイチン硫酸の非特異 反応の除去（図 3)
(1)金コロイド抗体の調製
lOmLの金コロイドを取り、 lOOmM炭酸カリウムで pHを 7.0に調整する。 2mMホウ酸溶 液で透析、遠心分離し精製した抗 A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を 2mMホウ酸溶液で ΙΟΟ μ g/mLの濃度になるように調製する。調製した抗 A型インフル ェンザウィルスモノクローナル抗体の最終濃度が 10 μ g/mLとなる量を十分撹拌させ ながら金コロイドに加える。 5分後 10%BSAを lmL加え、穏やかに 10分間ローテ一ター で撹拌する。全量を遠心管に移し、 14000rpm、 30分、 4°Cで遠心する。遠心後上清を 吸弓 [廃棄し、沈殿してレ、る金コロイドと抗 A型インフルエンザウイルスモノクローナル 抗体の感作されたものに、 10mMホウ酸緩衝液 lmLで浮遊する。
[0070] (2)金コロイド抗体の乾燥化 前項で作製した金コロイド抗体を陽圧噴霧装置（BioDot社製、 Biojet)を用いて 6.0 OD 、 lO L/cmの速度、及び量で 10mm X 300mmのポリスチレン不織布に噴霧する
。次いで減圧装置内で 1時間減圧乾燥し、乾燥金コロイド抗体パッドとした。使用時 には 4mm間隔で裁断し、標識試薬部位 3として用いた。
[0071] (3) DEAE_Dextranパッドの作製
ガラス系繊維濾紙を 2〜10%DEAE-Dextran溶液に浸漬し、 45°Cでー晚乾燥させ、 10mm X 4mmに裁断し、機能部位 1として用いた。
[0072] (4)固相支持体 6及び捕捉試薬部位 4及び対照部位 5の設定
捕捉試薬として抗インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を 2.0OD になるよう 調製した lOmMトリス緩衝液（pH7.5)、及び対照用試薬として Anti- Mouse IgG(Dako社 )を 3.8mg/mlになるよう調製した lOmMリン酸溶液 (ρΗ7·5)をそれぞれ陽圧噴霧装置（ BioDot社製、 Biojet)を用いて 1.04 μ 1ん mで 20mm X 200mmの Millipore Highflow HFl 2004(Millipore)に塗布し 45°Cで 60分乾燥させ、 20mm X 4mmに裁断し、固相支持体 6 として用いた。
[0073] (5)ィムノクロマトグラフィー式検出装置の製作
トップラミネート 8上に捕捉試薬部位 4及び対照部位 5を含む固相支持体 6を配置し 、標識試薬部位 3、機能部位 1、検体供給部位 2としてガラス系繊維濾紙、吸収部位 7として厚めの濾紙を用いて任意の場所に配置した。また、従来品として機能部位 1 力 いィムノクロマトグラフィー式検出装置を作製し、比較対照とした（図 7)。
[0074] (6)検出方法
陽性検体として、 A型インフルエンザウイルス抗原をリン酸緩衝液に浮遊させたもの を使用した。また、非特異検体としてコンドロイチン硫酸を 2%になるようリン酸緩衝液 に浮遊したものを使用した。前項で制作した機能部位 1を含む発明品と機能部位 1を 含まない従来品をそれぞれ各検体 150 μ 1に検体供給部位 2を浸漬して、コンドロイチ ン硫酸による非特異反応を比較試験した。
[0075] (7)試験結果
従来品は陽性検体に対して陽性反応を示したが、非特異検体に対しても陽性反応 を示した。一方、発明品においては陽性検体に対して陽性反応を示し、非特異検体 に対しては陰性を示した。
[0076] 実施例 2 MRSAの PBP2'の検出（図 5)
(1)金コロイド抗体の調製
lOmLの金コロイドを取り、 lOOmM炭酸カリウムで pHを 8.0に調製する。 2mMホウ酸溶 液で透析、遠心分離し精製した抗 PBP2'抗体を 2mMホウ酸溶液で 40 μ g/mlの濃 度になるように調製する。調製した抗 PBP2'抗体の最終濃度が 2 μ g/mLとなる量を十 分撹拌させながら金コロイドに加える。 5分後 10%BSAを lmLカ卩え、穏やかに 10分間口 ーテーターで撹拌する。全量を遠心管に移し、 14000卬 m、 30分、 4°Cで遠心する。遠 心後上清を吸引廃棄し、沈殿している金コロイドと抗 A型インフルエンザウイルスモノ クローナル抗体の感作されたものに、 10mMホウ酸緩衝溶液 lmLで浮遊する。
[0077] (2)金コロイド抗体の乾燥ィ匕
前項で作製した金コロイド抗体を陽圧噴霧装置（BioDot社製、 Biojet)を用いて 0.5 OD 、 lO L/cmの速度、及び量で 10mm X 300mmのポリスチレン不織布に噴霧する
520
。次いで減圧装置内で 1時間減圧乾燥し、乾燥金コロイド抗体パッドとした。使用時 には 4mm間隔で裁断し、標識試薬部位 3として用いた。
[0078] (3)中和パッドの作製
濾紙を 0.5%非イオン性界面活性剤入りのリン酸緩衝溶液に浸漬し、 45°Cで一晩乾 燥させ、 1.8mm X 4mmに裁断し、機能部位 1として用いた。
[0079] (4)固相支持体 6及び捕捉試薬部位 4及び対照部位 5の設定
捕捉試薬として抗 PBP2'抗体を 7.2 μ g/mになるよう調整した 10mMリン酸緩衝液（p H7.5)、及び対照用試薬として Anti-Mouse IgG (Dako社）を 3.8mg/mlになるよう調製 した lOmMリン酸溶液 (ρΗ7·5)をそれぞれ陽圧噴霧装置（BioDot社製、 Biojet)を用い て 1.04 μ 1ん mで 20mm X 200mmの Millipore Highflow HF12004(Millipore)に塗布し 45 °Cで 60分乾燥させ、 20mm X 4mmに裁断し、固相支持体 6として用いた。
[0080] (5)ィムノクロマトグラフィー式検出装置の製作
トップラミネート 8上に捕捉試薬部位 4及び対照部位 5を含む固相支持体 6を配置し 、標識試薬部位 3、機能部位 1、検体供給部位 2としてガラス系繊維濾紙、吸収部位 7として厚めの濾紙を用いて任意の場所に配置した。また、従来品として機能部位 1 力 いィムノクロマトグラフィー式検出装置を作製し、比較対照とした（図 7)。
[0081] (6)検出方法
陽性検体として MRSA、陰性検体として MSSAをそれぞれ 2白金耳採取し、 0.1N Na
OH 150 μ ΐに浮遊し、 95°C、 3分間加熱した。冷却後、前項で製作した機能部位 1を 含む発明品と機能部位 1を含まない従来品をそれぞれ各検体に検体供給部位 2を 浸漬して、中和パッドの機能を比較試験した。
[0082] (7)試験結果
従来品は陰性検体に対して陰性反応を示したが、陽性検体に対しても陰性反応を 示した。一方、発明品においては陰性検体に対して陰性反応を示し、陽性検体に対 しては陽性反応を示した。
[0083] 実施例 3 MRSAの PBP2'の検出におけるプロテイン Aによる非特異反応の回避（図 8
)
(1)金コロイド抗体の調製
10mLの金コロイドを取り、 lOOmM炭酸カリウムで pHを 8.0に調製する。 2mMホウ酸溶 液で透析、遠心分離し精製した抗 PBP2'抗体を 2mMホウ酸溶液で 40 μ g/mlの濃 度になるように調製する。調製した抗 PBP2'抗体の最終濃度が 2 μ g/mLとなる量を十 分撹拌させながら金コロイドに加える。 5分後 10%BSAを lmL加え、穏やかに 10分間口 ーテーターで撹拌する。全量を遠心管に移し、 14000rpm、 30分、 4°Cで遠心する。遠 心後上清を吸引廃棄し、沈殿している金コロイドと抗 A型インフルエンザウイルスモノ クローナル抗体の感作されたものに、 10mMホウ酸緩衝溶液 lmLで浮遊する。
[0084] (2)金コロイド抗体の乾燥ィ匕
前項で作製した金コロイド抗体を陽圧噴霧装置（BioDot社製、 Biojet)を用いて 0. 50D 、 10 μ iVcmの速度、及び量で 10mmx300mmのポリスチレン不織布に噴霧する
520
。次いで減圧装置内で 1時間減圧乾燥し、乾燥金コロイド抗体パッドとした。使用時に は 4mm間隔で裁断し、標識試薬部位 3として用いた。
[0085] (3)固相支持体 6及び機能部位 1及び捕捉試薬部位 4及び対照部位 5の設定
機能部位 1として PBP2'を認識せず、プロテイン Aとの親和性の高いマウス IgG2aを 3 .8mg/mlになるように調整した lOmM リン酸緩衝液（pH7.5)及び、捕捉試薬として抗 P BP2 '抗体を 7.2 /i g/mになるよう調整した 10mM リン酸緩衝液（pH7.5)、及び対照用 試薬として Anti-Mouse IgG (Dako社）を 3.8mg/mlに成るよう調整した 10mM リン酸溶 液（PH7.5)をそれぞれ陽圧噴霧装置（BioDot社製、 Biojet)を用いて 1.04 /i で 20 mm X 200mmの Millipore Highflow HF12004(Millipore)に塗布し 45。Cで 60分乾燥させ 、 20mm X 4mmに裁断し、固相支持体 6として用いた。
[0086] (4)ィムノクロマトグラフィー式検出装置の製作
トップラミネート 8上に機能部位 1及び捕捉試薬部位 4及び対照部位 5を含む固相 支持体 6を配置し、標識試薬部位 3、検体供給部位 2としてガラス系繊維濾紙、吸収 部位 7として厚めの濾紙を用いて任意の場所に配置した。また、従来品として機能部 位 1がなレ、ィムノクロマトグラフィー式検出装置を作製し、比較対照とした。 （図 8) (5)検出方法
陽性検体として MRSA、陰性検体として MSSAをそれぞれ 2白金耳採取し、希アル力 リ溶液 150 μ ΐに浮遊し、 95°C、 3分間加熱した。冷却後、リン酸緩衝液で中和し、前 項で制作した機能部位 1を含む発明品と機能部位 1を含まない従来品をそれぞれ各 検体に検体供給部位 2を浸漬して、プロテイン Aによる非特異反応を比較試験した。
[0087] (6)試験結果
従来品は陽性検体に対して陽性反応を示したが、陰性検体に対しても陽性反応を 示した。一方、発明品においては陽性検体に対して陽性反応を示し、陰性検体に対 しては陰性を示した。
[0088] 本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本 明細書にとり入れるものとする。

Claims

請求の範囲
[1] シート状の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体または該 検体と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬との混合物を供給す る検体供給部位および前記被分析物質一前記標識試薬複合体を特異的に結合捕 捉し得る捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式検出装置 であって、検体供給部位と捕捉試薬部位の間に以下の機能 (a)から (c)の一つまたは 複数の機能を有する少なくとも一つの機能部位を設けたクロマトグラフィー式検出装 置。
(a) 検体を前処理する機能、
(b) 検体中の被分析物質と被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試 薬が特異的に結合する反応の条件を至適化する機能、および
(c) 被分析物質 標識試薬の複合体と捕捉試薬が特異的に結合する反応の条件を 至適化する機能
[2] シート状の固相支持体上に少なくとも被分析物質を含むと推定される検体を供給 する検体供給部位、被分析物質に特異的に結合するリガンドを含む標識試薬を固相 支持体上で展開可能に保持した標識試薬部位および前記被分析物質一前記標識 試薬複合体を特異的に結合捕捉し得る捕捉試薬を固定化した捕捉試薬部位が含ま れる請求項 1記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[3] 被分析物質と標識試薬が固相支持体と分離した部位で予め接触し、検体供給部 位に被分析物質を含むと推定される検体と被分析物質に特異的に結合するリガンド を含む標識試薬との混合物が供給される請求項 1記載のクロマトグラフィー式検出装 置。
[4] 検体供給部位と標識試薬部位が空間的に離れて設けられている請求項 1または 2 記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[5] 検体を前処理する機能が検体から不純物を除去する機能および/または検体から 被分析物質を抽出する機能である、請求項 1から 4のいずれ力 1項に記載のクロマト グラフィ一式検出装置。
[6] 検体を前処理する機能が被分析物質を抽出する機能であり、検体を前処理する機 能を有する機能部位が検体から被分析物質を抽出するための試薬を含んでいる、請 求項 5記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[7] 検体力 被分析物質を抽出するための試薬が、生物マトリックスを含む検体中の生 物マトリックスから、アルカリ処理、酸処理または界面活性剤処理により被分析物質を 抽出するための、塩基物質、酸性物質または界面活性剤である、請求項 6記載のク 口マトグラフィ一式検出装置。
[8] 検体を前処理する機能が、検体から不純物を除去する機能であり、検体を前処理 する機能を有する機能部位が検体中の不純物を濾過、吸着または凝集する機能を 有する、請求項 5から 7のいずれ力 4項に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[9] 検体を前処理する機能を有する機能部位がフィルターからなり、該フィルタ一により 検体中の不純物が濾過される、請求項 8記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[10] 検体を前処理する機能を有する機能部位が、不純物を吸着する試薬または不純物 を凝集させる試薬を含む、請求項 8または 9記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[11] 検体を前処理する機能を有する機能部位が、不純物を吸着する試薬または不純物 を凝集させる試薬を含み、不純物を吸着する試薬または不純物を凝集させる試薬が 固相支持体中に含まれる請求項 10記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[12] 不純物を吸着する試薬または不純物を凝集させる試薬が固相支持体中の検体供 給部位と標識試薬部位の間に含まれる請求項 11記載のクロマトグラフィー式検出装 置。
[13] 反応の条件を至適化する機能を有する機能部位が、反応条件を至適化するため の試薬を含む、請求項 1から 12のいずれ力 1項に記載のクロマトグラフィー式検出装 置。
[14] 反応条件を至適化するための試薬により、反応系の pHが反応に至適な範囲に調 整される請求項 13記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[15] 反応条件を至適化するための試薬により、反応系の塩濃度が反応に至適な範囲に 調整される請求項 13記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[16] 試薬が、緩衝液、酸性試薬、塩基性試薬および界面活性剤からなる群から選択さ れる請求項 13から 15のいずれか 1項に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[17] あらかじめ前処理した検体中の被分析物質がリガンドまたは捕捉物質と結合する反 応の条件を至適化するための機能部位を有する、請求項 13から 16のいずれか 1項 に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[18] 異なる被分析物質を補足し得る複数の捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式検 出装置であって、少なくとも一つの捕捉試薬部位の上流に該捕捉物質と被分析物質 との結合反応条件を至適化するための試薬を含む請求項 13から 17のいずれ力、 1項 に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[19] 異なる被分析物質とそれぞれの被分析物質に対する捕捉試薬との間でクロス反応 が生じ得る被分析物質であって、結合反応の条件を至適化することによりクロス反応 を抑制する、請求項 18記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[20] 検体が細菌またはウィルスを含む検体であって、検体を前処理する機能を有する 機能部位が細菌またはウィルス力 被分析物質を抽出する機能を有する請求項 5か ら 19のいずれか 1項に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[21] さらに、前処理した検体中の被分析物質力 Sリガンドまたは捕捉物質と結合する反応 の条件を至適化するための機能部位を有する請求項 20記載のクロマトグラフィー式 検出装置。
[22] 検体が鼻腔または咽頭拭い液であって、検体を前処理する機能を有する機能部位 力 鼻腔もしくは咽頭拭い液中の多糖類を凝集させる試薬を含み、なおかつ濾過機 能により凝集した多糖類を除去するフィルターからなる請求項 5から 21のいずれか 1 項に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[23] 被分析物質が A型インフルエンザウイルス抗原および B型インフルエンザウイルス 抗原を含み、 A型インフルエンザウイルス抗原を捕捉する捕捉試薬部位および B型ィ ンフルェンザウィルス抗原を捕捉する捕捉試薬部位を含むクロマトグラフィー式検出 装置であって、 A型インフルエンザウイルス抗原と B型インフルエンザウイルス抗原を 捕捉し得る捕捉試薬との結合および/または B型インフルエンザウイルス抗原と A型 インフルエンザウイルス抗原を捕捉し得る捕捉試薬とのクロス反応による結合を抑制 し得る試薬を含む機能部位を含む請求項 5から 21のいずれ力 4項に記載のィムノク 口マトグラフィ一式検出装置。
[24] 標識試薬が、酵素または不溶性粒状物質により標識されたリガンドである請求項 1 力 23のいずれ力 1項に記載のクロマトグラフィー式検出装置。
[25] 被分析物質とリガンドとの結合および被分析物質 リガンド複合体と捕捉試薬との 結合が、抗原—抗体反応により生じる、請求項 1から 24のいずれ力、 1項に記載のクロ マトグラフィ一式検出装置。
[26] 固相支持体がニトロセルロース、酢酸セルロース、ナイロンおよびポリエーテルスル ホンからなる群から選択される、請求項 1から 25のレ、ずれ力 4項に記載のクロマトダラ フィ一式検出装置。
PCT/JP2005/010386 2004-06-07 2005-06-07 クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット WO2005121794A1 (ja)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/628,621 US7972872B2 (en) 2004-06-07 2005-06-07 Chromatography detection apparatus, detection method, and kit utilizing the same
AT05748995T ATE489625T1 (de) 2004-06-07 2005-06-07 Chromatographische nachweisvorrichtung
JP2006514504A JP4758341B2 (ja) 2004-06-07 2005-06-07 クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット
CN200580026744XA CN101002095B (zh) 2004-06-07 2005-06-07 色谱检测装置，检测方法和利用此的试剂盒
EP05748995A EP1767941B1 (en) 2004-06-07 2005-06-07 Chromatographic detection apparatus
DE602005024965T DE602005024965D1 (de) 2004-06-07 2005-06-07 Chromatographische nachweisvorrichtung
KR1020077000275A KR101194112B1 (ko) 2004-06-07 2005-06-07 크로마토그래피식 검출 장치, 검사법 및 이것을 응용한키트
HK07109961.9A HK1101924A1 (en) 2004-06-07 2007-09-13 Chromatographic detection apparatus

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004-169200 2004-06-07
JP2004169200 2004-06-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2005121794A1 true WO2005121794A1 (ja) 2005-12-22

Family

ID=35503203

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2005/010386 WO2005121794A1 (ja) 2004-06-07 2005-06-07 クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット

Country Status (9)

Country Link
US (1) US7972872B2 (ja)
EP (2) EP2063269B1 (ja)
JP (1) JP4758341B2 (ja)
KR (1) KR101194112B1 (ja)
CN (1) CN101002095B (ja)
AT (1) ATE489625T1 (ja)
DE (1) DE602005024965D1 (ja)
HK (1) HK1101924A1 (ja)
WO (1) WO2005121794A1 (ja)

Cited By (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007121205A (ja) * 2005-10-31 2007-05-17 Denka Seiken Co Ltd ポリアミンを用いた免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法
JP2007121204A (ja) * 2005-10-31 2007-05-17 Denka Seiken Co Ltd 塩基性多糖類を含有する免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法
JP2007333426A (ja) * 2006-06-12 2007-12-27 Denka Seiken Co Ltd サンドイッチイムノアッセイ法及びその検出装置
JP2008249606A (ja) * 2007-03-30 2008-10-16 Sysmex Corp クロマトグラフィー用試験具
JP2009085751A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Sysmex Corp イムノクロマトグラフィー用試験具
JP2009145079A (ja) * 2007-12-11 2009-07-02 Hitachi Chem Co Ltd クロマトグラフィー分析用ストリップ
JP2010060297A (ja) * 2008-09-01 2010-03-18 Arkray Inc 免疫分析方法およびそれに用いる検体分析用具
JP2010510525A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 流体の抗体を含有する装置及び方法
JP2010510524A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 試料を調製及び分析するシステム並びに方法
JP2012505382A (ja) * 2008-10-13 2012-03-01 アレル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング 血液試料から赤血球を分離する方法およびその使用
JP2012524279A (ja) * 2009-04-15 2012-10-11 レリア ダイアグノスティック システムズ，インク． 診断デバイスおよび関連する方法
US8431351B2 (en) 2005-12-14 2013-04-30 Denka Seiken Co., Ltd. Immunochromatography detection of multidrug-resistant Staphylococcus and diagnostic kit
WO2013147123A1 (ja) * 2012-03-30 2013-10-03 国立大学法人大阪大学 Ｃ１ｑ－アディポネクチン複合体及びその利用
JP2013539041A (ja) * 2010-10-01 2013-10-17 ホロジック， インコーポレイテッド 診断システムに使用する免疫検定検査ストリップ
WO2013186885A1 (ja) * 2012-06-13 2013-12-19 旭化成株式会社 乳汁中の特定物質を検出する方法
WO2015012384A1 (ja) * 2013-07-25 2015-01-29 古河電気工業株式会社 イムノクロマトグラフィー用試験片、これに用いられる展開液、およびこれを用いたイムノクロマトグラフィー
JP2016029384A (ja) * 2010-02-26 2016-03-03 積水メディカル株式会社 偽陽性反応を抑制する検体抽出液
JP2016145789A (ja) * 2014-02-28 2016-08-12 株式会社リコー 検査装置、検査キット、転写媒体、検査装置の製造方法、及び検査方法
JP2016164553A (ja) * 2015-02-27 2016-09-08 株式会社リコー 標的検査装置、標的検査キット、標的検査方法、転写媒体、及び標的検査装置の製造方法
JP2016164554A (ja) * 2015-02-27 2016-09-08 株式会社リコー 標的検査装置、標的検査キット、標的検査方法、転写媒体、及び標的検査装置の製造方法
WO2017010574A1 (ja) * 2015-07-16 2017-01-19 田中貴金属工業株式会社 免疫測定法、免疫クロマトキット
CN106771164A (zh) * 2016-12-20 2017-05-31 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种检测奶牛***炎中金黄色葡萄球菌的胶体金试纸及其制备方法
WO2017213227A1 (ja) 2016-06-09 2017-12-14 デンカ生研株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片及び検体添加用デバイス、並びにそれを用いたイムノクロマト法
WO2018168906A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 非特異反応を防止し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
WO2018168907A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
WO2018168905A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマトデバイス
WO2020158763A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験キット
WO2020158765A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 疎水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
WO2020158764A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 親水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
WO2021066139A1 (ja) 2019-10-04 2021-04-08 デンカ株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマトデバイス
WO2022014563A1 (ja) 2020-07-16 2022-01-20 デンカ株式会社 簡易鼻腔粘膜表面付着粘液の採取方法および該検体中の被検出物を検出するための検査キット

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101750244B (zh) * 2008-10-13 2014-03-12 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种分离血液样本中红细胞的方法以及运用
CN102460172B (zh) * 2009-05-07 2015-03-04 生物梅里埃有限公司 用于抗微生物剂抗性测定的方法
CN105126792A (zh) * 2009-08-04 2015-12-09 沃特世科技公司 包含可离子化改性剂的高纯度色谱材料
US10159911B2 (en) 2009-08-04 2018-12-25 Waters Technologies Corporation High purity chromatographic materials comprising an ionizable modifier
JP5414424B2 (ja) * 2009-08-31 2014-02-12 シスメックス株式会社 目的物質の検出方法、及び目的物質を検出するためのクロマトグラフィー用試験キット
JP5416159B2 (ja) * 2011-03-31 2014-02-12 富士フイルム株式会社 高感度なイムノクロマトグラフ方法
CN103212454B (zh) 2012-01-20 2019-06-04 奥索临床诊断有限公司 具有可控样品大小的测定装置
KR101332336B1 (ko) * 2013-05-07 2013-11-22 (주)래피젠 프로존 효과를 회피할 수 있는 면역크로마토그래피 스트립 및 이를 포함하는 키트
WO2015153018A2 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Chembio Diagnostic Systems, Inc. Immunoassay utilizing trapping conjugate
US9576595B1 (en) 2014-11-19 2017-02-21 Seagate Technology Llc Transfer printing an epitaxial layer to a read/write head to form an integral laser
US11376588B2 (en) 2020-06-10 2022-07-05 Checkable Medical Incorporated In vitro diagnostic device

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11505327A (ja) * 1995-05-09 1999-05-18 スミスクライン ダイアグノスティックス インコーポレイテッド 血液の液体部分から血液の細胞成分を分離する装置および方法
JPH11248708A (ja) * 1997-12-24 1999-09-07 Roche Diagnostics Gmbh 分析要素の多目的構造体およびアナライト測定のためのその用途
JP2002202308A (ja) * 2000-12-27 2002-07-19 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫クロマトデバイス
JP2003532896A (ja) * 2000-05-12 2003-11-05 ロダリス・ファーマシューティカルズ・リミテッド Ｉｐｇアッセイ
JP2004169200A (ja) 2002-11-18 2004-06-17 Yasuo Aoyama 部分二重くつ下

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4105499A (en) * 1976-10-06 1978-08-08 Kiyasu John Y Heart attack screening method, apparatus and kit for same
US4652517A (en) * 1984-06-11 1987-03-24 Diagnostic Research Limited Partnership Methods for the in vitro detection and identification of unknown pathogens or genetic entities
DE3445816C1 (de) 1984-12-15 1986-06-12 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel
GB8621910D0 (en) * 1986-09-11 1986-10-15 Technology Licence Co Ltd Monoclonal antibodies
CA1303983C (en) 1987-03-27 1992-06-23 Robert W. Rosenstein Solid phase assay
US5252496A (en) * 1989-12-18 1993-10-12 Princeton Biomeditech Corporation Carbon black immunochemical label
US5998220A (en) * 1991-05-29 1999-12-07 Beckman Coulter, Inc. Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them
DE4238806A1 (en) * 1991-11-18 1993-05-27 Dainabot Co Methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA)detection method - by detection of MRSA penicillin binding protein (PBP)2 antigen-antibody complex, and synthetic MRSA PBP2 peptides
EP0781850A3 (en) * 1995-12-28 1998-08-12 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Assay utilizing hydrogen peroxide adduct
KR100292182B1 (ko) * 1997-09-18 2001-11-26 모리시타 요이찌 면역크로마토그라피장치
AU2002361677A1 (en) * 2001-12-14 2003-06-30 Integrated Biotechnology Corporation Rapid immunoassay for rsv
EP1664781B1 (en) * 2003-09-22 2013-05-08 Quidel Corporation Devices for the detection of multiple analytes in a sample

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11505327A (ja) * 1995-05-09 1999-05-18 スミスクライン ダイアグノスティックス インコーポレイテッド 血液の液体部分から血液の細胞成分を分離する装置および方法
JPH11248708A (ja) * 1997-12-24 1999-09-07 Roche Diagnostics Gmbh 分析要素の多目的構造体およびアナライト測定のためのその用途
JP2003532896A (ja) * 2000-05-12 2003-11-05 ロダリス・ファーマシューティカルズ・リミテッド Ｉｐｇアッセイ
JP2002202308A (ja) * 2000-12-27 2002-07-19 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫クロマトデバイス
JP2004169200A (ja) 2002-11-18 2004-06-17 Yasuo Aoyama 部分二重くつ下

Cited By (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007121204A (ja) * 2005-10-31 2007-05-17 Denka Seiken Co Ltd 塩基性多糖類を含有する免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法
JP2007121205A (ja) * 2005-10-31 2007-05-17 Denka Seiken Co Ltd ポリアミンを用いた免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法
JP4718301B2 (ja) * 2005-10-31 2011-07-06 デンカ生研株式会社 塩基性多糖類を含有する免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法
US8431351B2 (en) 2005-12-14 2013-04-30 Denka Seiken Co., Ltd. Immunochromatography detection of multidrug-resistant Staphylococcus and diagnostic kit
JP2007333426A (ja) * 2006-06-12 2007-12-27 Denka Seiken Co Ltd サンドイッチイムノアッセイ法及びその検出装置
JP2010510525A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 流体の抗体を含有する装置及び方法
JP2010510524A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 試料を調製及び分析するシステム並びに方法
JP2008249606A (ja) * 2007-03-30 2008-10-16 Sysmex Corp クロマトグラフィー用試験具
JP2009085751A (ja) * 2007-09-28 2009-04-23 Sysmex Corp イムノクロマトグラフィー用試験具
JP2009145079A (ja) * 2007-12-11 2009-07-02 Hitachi Chem Co Ltd クロマトグラフィー分析用ストリップ
JP2010060297A (ja) * 2008-09-01 2010-03-18 Arkray Inc 免疫分析方法およびそれに用いる検体分析用具
JP2012505382A (ja) * 2008-10-13 2012-03-01 アレル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング 血液試料から赤血球を分離する方法およびその使用
JP2012524279A (ja) * 2009-04-15 2012-10-11 レリア ダイアグノスティック システムズ，インク． 診断デバイスおよび関連する方法
JP2016029384A (ja) * 2010-02-26 2016-03-03 積水メディカル株式会社 偽陽性反応を抑制する検体抽出液
JP2013539041A (ja) * 2010-10-01 2013-10-17 ホロジック， インコーポレイテッド 診断システムに使用する免疫検定検査ストリップ
JPWO2013147123A1 (ja) * 2012-03-30 2015-12-14 国立大学法人大阪大学 Ｃ１ｑ−アディポネクチン複合体及びその利用
WO2013147123A1 (ja) * 2012-03-30 2013-10-03 国立大学法人大阪大学 Ｃ１ｑ－アディポネクチン複合体及びその利用
WO2013186885A1 (ja) * 2012-06-13 2013-12-19 旭化成株式会社 乳汁中の特定物質を検出する方法
US10048262B2 (en) 2012-06-13 2018-08-14 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Method for detecting specific substance in milk
JPWO2013186885A1 (ja) * 2012-06-13 2016-02-01 旭化成株式会社 乳汁中の特定物質を検出する方法
US10545146B2 (en) 2012-06-13 2020-01-28 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Method for detecting specific substance in milk
JPWO2015012384A1 (ja) * 2013-07-25 2017-03-02 古河電気工業株式会社 イムノクロマトグラフィー用試験片、これに用いられる展開液、およびこれを用いたイムノクロマトグラフィー
WO2015012384A1 (ja) * 2013-07-25 2015-01-29 古河電気工業株式会社 イムノクロマトグラフィー用試験片、これに用いられる展開液、およびこれを用いたイムノクロマトグラフィー
JP2016145789A (ja) * 2014-02-28 2016-08-12 株式会社リコー 検査装置、検査キット、転写媒体、検査装置の製造方法、及び検査方法
JP2016164554A (ja) * 2015-02-27 2016-09-08 株式会社リコー 標的検査装置、標的検査キット、標的検査方法、転写媒体、及び標的検査装置の製造方法
JP2016164553A (ja) * 2015-02-27 2016-09-08 株式会社リコー 標的検査装置、標的検査キット、標的検査方法、転写媒体、及び標的検査装置の製造方法
WO2017010574A1 (ja) * 2015-07-16 2017-01-19 田中貴金属工業株式会社 免疫測定法、免疫クロマトキット
US10591469B2 (en) 2015-07-16 2020-03-17 Tanaka Kikinzoku Kogyo K.K. Immunoassay method and immunochromatographic kit
JPWO2017010574A1 (ja) * 2015-07-16 2018-04-26 田中貴金属工業株式会社 免疫測定法、免疫クロマトキット
WO2017213227A1 (ja) 2016-06-09 2017-12-14 デンカ生研株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片及び検体添加用デバイス、並びにそれを用いたイムノクロマト法
CN109313185B (zh) * 2016-06-09 2022-07-26 电化株式会社 用于提取并测量糖链抗原的免疫色谱试验片及检体添加用设备和使用其的免疫色谱法
EP4220167A1 (en) 2016-06-09 2023-08-02 Denka Company Limited Immunochromatography test piece and specimen adding device for extracting and measuring sugar chain antigen
CN109313185A (zh) * 2016-06-09 2019-02-05 电化生研株式会社 用于提取并测量糖链抗原的免疫色谱试验片及检体添加用设备和使用其的免疫色谱法
KR20190017826A (ko) 2016-06-09 2019-02-20 덴카 세이켄 가부시키가이샤 당사슬 항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편 및 검체 첨가용 디바이스, 및 그것을 이용한 면역크로마토그래피법
CN106771164A (zh) * 2016-12-20 2017-05-31 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种检测奶牛***炎中金黄色葡萄球菌的胶体金试纸及其制备方法
KR20190120332A (ko) 2017-03-14 2019-10-23 덴카 세이켄 가부시키가이샤 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 이뮤노크로마토그래피 디바이스
KR20190120334A (ko) 2017-03-14 2019-10-23 덴카 세이켄 가부시키가이샤 검체의 전개를 제어할 수 있는, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 이뮤노크로마토그래피 시험편
WO2018168906A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 非特異反応を防止し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
KR20190120333A (ko) 2017-03-14 2019-10-23 덴카 세이켄 가부시키가이샤 비특이 반응을 방지할 수 있는, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 이뮤노크로마토그래피 시험편
US12013394B2 (en) 2017-03-14 2024-06-18 Denka Company Limited Immunochromatographic test piece for extracting and measuring sugar chain antigen, which is capable of preventing non-specific reaction
WO2018168907A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
US11906513B2 (en) 2017-03-14 2024-02-20 Denka Company Limited Immunochromatographic test piece for extracting and measuring sugar chain antigen, which is capable of controlling development of specimen
EP4235176A2 (en) 2017-03-14 2023-08-30 Denka Company Limited Immunochromatographic device for extracting and measuring carbohydrate antigens
WO2018168905A1 (ja) 2017-03-14 2018-09-20 デンカ生研株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマトデバイス
WO2020158765A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 疎水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
KR20210121076A (ko) 2019-01-29 2021-10-07 덴카 주식회사 친수성 소재에 아질산염 또는 고형상 산성시약을 함침시킴으로써, 검체의 전개를 제어할 수 있는, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편
KR20210121069A (ko) 2019-01-29 2021-10-07 덴카 주식회사 검체의 전개를 제어할 수 있는, 당쇄항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험 키트
KR20210121094A (ko) 2019-01-29 2021-10-07 덴카 주식회사 소수성 소재에 아질산염 또는 고형상 산성 시약을 함침시키는 것에 의해, 검체의 전개를 제어할 수 있는, 당쇄 항원을 추출하고 측정하기 위한 면역크로마토그래피 시험편
WO2020158764A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 親水性素材に亜硝酸塩又は固形状酸性試薬を含浸させることにより、検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験片
WO2020158763A1 (ja) 2019-01-29 2020-08-06 デンカ生研株式会社 検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験キット
WO2021066139A1 (ja) 2019-10-04 2021-04-08 デンカ株式会社 糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマトデバイス
WO2022014563A1 (ja) 2020-07-16 2022-01-20 デンカ株式会社 簡易鼻腔粘膜表面付着粘液の採取方法および該検体中の被検出物を検出するための検査キット
KR20230038661A (ko) 2020-07-16 2023-03-21 덴카 주식회사 간이 비강 점막 표면 부착 점액의 채취 방법 및 검체 중의 피검출물을 검출하기 위한 검사 키트

Also Published As

Publication number Publication date
HK1101924A1 (en) 2007-11-02
EP2063269A2 (en) 2009-05-27
EP2063269A3 (en) 2009-06-17
US20080194013A1 (en) 2008-08-14
EP1767941B1 (en) 2010-11-24
ATE489625T1 (de) 2010-12-15
EP2063269B1 (en) 2013-07-31
US7972872B2 (en) 2011-07-05
JP4758341B2 (ja) 2011-08-24
EP1767941A4 (en) 2008-07-23
EP1767941A1 (en) 2007-03-28
KR20070026782A (ko) 2007-03-08
CN101002095B (zh) 2013-01-02
DE602005024965D1 (de) 2011-01-05
CN101002095A (zh) 2007-07-18
JPWO2005121794A1 (ja) 2008-04-10
KR101194112B1 (ko) 2012-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4758341B2 (ja) クロマトグラフィー式検出装置、検査法及びこれを応用したキット
JP4672263B2 (ja) 簡便な検出法、検出装置及び検出キットとその製法
JP4934147B2 (ja) 迅速診断のためのテスト装置
JP5308029B2 (ja) 分析物を検出するための装置および方法
JP5340575B2 (ja) イムノクロマトグラフィー用試験具
CN102388310B (zh) 抑制展开部件的液体浸透性降低的方法
EP3598131B1 (en) Immunochromatographic test piece for extracting and measuring sugar chain antigen, which is capable of preventing non-specific reaction
US20070092978A1 (en) Target ligand detection
JP2007139556A (ja) 新規な分析方法およびキット
EP2270508B1 (en) Membrane assay method and kit
JP4980944B2 (ja) 免疫学的測定方法
KR102593963B1 (ko) 면역학적 측정용 시약 조성물 및 이의 용도
CN102388312B (zh) 分析方法、样品分析用具、防止样品液逆流的方法和防止背景上升的方法
JP2012137326A (ja) 検体分析用具
JP6703354B2 (ja) 非特異反応抑制剤および前処理方法
JP2010060297A (ja) 免疫分析方法およびそれに用いる検体分析用具
EP4350353A1 (en) Fecal sample test method and immunochromatographic test piece therefor
WO2024122616A1 (ja) イムノクロマト法検査デバイスの試料展開部の形成方法およびイムノクロマト法検査デバイス
JP7313830B2 (ja) 検体の展開を制御し得る、糖鎖抗原を抽出し測定するためのイムノクロマト試験キット
JP2007121320A (ja) フロースルーアッセイ方法、キット及び装置
JP2003344408A (ja) フロースルーアッセイ方法、キット及び装置
CA2712273A1 (en) Methods for detecting an analyte
JP2001159631A (ja) 多孔質材、それを用いた検出装置および検出方法
JPH04315960A (ja) 免疫分析測定法

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006514504

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11628621

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005748995

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020077000275

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200580026744.X

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1020077000275

Country of ref document: KR

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005748995

Country of ref document: EP