JP4934147B2 - 迅速診断のためのテスト装置 - Google Patents
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Description
‐ 液体が特定の試薬でコーティングされた感作領域に移動することを可能にするために、多孔質の活性物質を含む、第一の領域またはゾーン。この第一のゾーンまたは領域は、その上で乾燥させた、またはそれに含浸させた検出試薬を含む。第一のゾーンまたは領域は更に、添加(サブ)ゾーンおよび/または吸着(サブ)ゾーンを含んでもよい。第一ゾーンは一般的に添加ゾーンと呼ばれる;
‐ 特定の試薬が吸着される、多孔質の活性物質からなる検出ゾーンとも呼ばれる第二の領域またはゾーン。該装置の第二の領域のサブゾーン(例えば線)に置かれているこれらの試薬のいくつかは、検出するべき分析物に特異的であり、また試料分析物標識試薬複合体と反応するはずであり、一方第二の領域の更なるサブゾーン(例えば更なる線として)に最終的に置かれる他の非特異的な試薬は、過剰な検出試薬と反応するために用いられる。この第二ゾーンまたは領域は、好ましくはニトロセルロースで作られており、好ましくは検出ゾーンの後ろに、コントロールサブゾーンをも又含んでもよく;ならびに
‐ 第一および第二領域を通ってくる過剰の液体を吸収するために用いられる多孔質の物質からなる第三領域またはゾーン。この領域は一般的に吸収体または吸収領域と呼ばれる。
‐ 試料添加ゾーン(2)を含む第一の毛細管ゾーン;
‐ 検出ゾーン(4)を含む第二の毛細管ゾーン、場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に配置した中間ゾーン(6)、また場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に吸収ゾーンまたは領域(5)、場合によってはコントロールサブゾーンを含む前記検出ゾーン(4);および
‐ 試料添加ゾーン(2)を検出ゾーン(4)または任意選択の中間ゾーン(6)から分離する、非毛細管ゾーン(14)、
ここで、検出ゾーン(4)は、少なくとも1つの分析物またはそのアナログを認識する、少なくとも1つのキャプチャー試薬を含み;および
試料添加ゾーン(2)は、少なくとも1つの分析物またはそのアナログの検出のための、直接または間接標識を有する、少なくとも1つの分析物特異的な複合体を含む。中間ゾーン(6)は装置に存在するかまたは存在しないかも知れないが、場合によっては少なくとも1つの分析物またはそのアナログの検出のための、直接または間接標識を有する、少なくとも1つの分析物特異的な複合体を含んでもよい。
一実施態様では、本発明は、(i)試料受けゾーン(2)である第一の毛細管ゾーン、(ii)非毛細管ゾーン(14)、および(iii)試料検出ゾーン(4)である第二の毛細管ゾーンを、一端から他端へ隣接して配置して含む固形支持体(18)を含む、試料中の少なくとも1つの分析物を検出するための、「シート様重力駆動テスト装置」とも呼ばれる、テスト装置(1)を提供する。本発明によれば、本装置は、支持体の縦方向軸の両端に配置した二つの毛細管を含み、非毛細管ゾーンを通って互いの液体連絡しており、テストされるべき試料は重力によって流動する。前記固形支持体は、いかなる適切な形でもよく、これらに限られないが、矩形、正方形、三角形または任意の他の形が挙げられる。好ましくは、前記支持体(18)は、実質的に矩形である。
(a)試料添加ゾーン(2)を含む第一の毛細管ゾーン、
(b)検出ゾーン(4)、場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に配置した中間ゾーン(6)、および場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に配置した吸収ゾーンまたは領域(5)を含み、前記検出ゾーン(4)は、場合によってはコントロールサブゾーンを含む第二の毛細管ゾーンを含み、ならびに
(c)第一毛細管ゾーンの試料添加ゾーン(2)を第二の毛細管ゾーンの検出ゾーン(4)または任意選択の中間ゾーン(6)から分離する、非毛細管ゾーン、
ここで、該試料添加ゾーン(2)、該非毛細管ゾーン(14)および該検出ゾーン(4)または該任意選択の中間ゾーン(6)は、装置が使用されている場合、試料は、試料添加ゾーン(2)から検出ゾーン(4)または任意選択の中間ゾーン(6)に重力によって流れることができるように配置されている。
試料添加ゾーン(2)は少なくとも1つの分析物特異的複合体を含む。
第三の実施態様では該複合体パッド(13)および該第二の吸収膜(15)は1つ以上の特異的なおよび/またはコントロール複合体を保有する。検出ゾーン(4)は、分析物特異的なキャプチャー試薬(7)およびコントロール(参照) キャプチャー試薬(7’)を含む活性膜(16)を含む。吸収ゾーン(5)は、吸収膜(17)を含む。
ポリスチレン微粒子の調製:
ポリスチレン微粒子(Estapor)は特定の洗浄バッファー(Coris BioConcept)中で洗浄する。その後微粒子を、13,000RPMで5分から10分遠心分離して1mL容積に回収する。沈渣を活性化バッファーに再懸濁し、1時間混合する。懸濁液をそれから2回洗浄バッファーで洗い、最後の遠心分離の後にカップリングバッファーに最終的に再懸濁する。
ポリスチレン微粒子への試薬のカップリングは、本質的には製造業者が提供したプロトコルに従って行った。
本実施例のシート様免疫重力駆動テスト装置(1)は、プラスチック裏打ち固形支持体(MDI)(2)から成っており、その上に三つの複合体を含むStandard 14(Whatman)から成る複合体パッド(13)を覆うFusion 5(Whatman)から成る試料添加ゾーン(2)、非毛細管ゾーン(14)、GFBR-1(MDI)から成る中間ゾーン(6)、ニトロセルロース(MDI)から成る検出ゾーン(4)およびセルロース(MDI)で作られた吸着領域(5)、を備えている。
本発明の免疫重力駆動テスト装置を用いたテストは、装置を試験管に入れて垂直に、試料添加ゾーンを最上部にして行う。
コロイド金粒子の調製
約40nmのコロイド金粒子は市販の物(Diagam)を購入した。
コロイド金粒子への抗体のカップリングは当技術分野で十分周知である。この実施例では、レジオネラ ニューモフィラ尿抗原に対する精製ウサギ抗体を用いた。精製ポリ血清を、炭酸カリウム溶液で緩衝したコロイド金粒子懸濁液と反応させ、所望のpHを得た。このpHは予め定めておき、免疫試薬ごとに異なっていてもよい。カップリング行程で用いることになる精製ポリ血清は、予備実験で規定した。
本実施例のシート様免疫重力駆動テスト装置(1)は、その上に添加、非毛細管、中間、検出および吸収ゾーンを有するプラスチック裏打ち固形支持体(MDI)(18)から成る。
本テストは、本発明の免疫重力駆動テスト装置(1)を用いて、レジオネラ ニューモフィラ尿抗原の検出を目標にした。第一の実施例に記述したのと同様にテストを実施した。
2 試料添加ゾーン
3 第一の反応ゾーン
4 検出ゾーン
5 吸収ゾーン
6 中間ゾーン
7 分析物特異的キャプチャー試薬
7' コントロールキャプチャー試薬
71 分析物特異的なキャプチャー試薬
72 分析物特異的なキャプチャー試薬
73 分析物特異的なキャプチャー試薬
8 可視的な信号
9 可視的な信号
10 受け領域
11 ハウジング
12 吸収膜
13 複合体領域またはパッド
14 非毛細管ゾーン
15 第二の吸収膜
16 活性膜
17 吸収膜
18 支持体
20 ステッカー
21 第二のステッカー
30 包装
31 ホルダー
32 カバーシート
33 除去可能なカバーシート
34 アッセイ装置
311 ロッジ
312 試料沈着領域
Claims (12)
- 試料中の少なくとも1つの分析物を検出するための分析物検出法であって、テスト装置を垂直に配置し、該テスト装置を試料と接触させ、該試料を装置の最上部から該装置の底部へ、重力によって該装置の非毛細管ゾーン(14)を通って移動させ、そして分析物を検出させるステップを含み、ここで該テスト装置は固形支持体(18)の1つ以上の側面上に、該装置の一端から他端へ配置した以下を含む:
(a)試料添加ゾーン(2)を含む第一の毛細管ゾーン、ここで該試料添加ゾーン(2)は、少なくとも1つの分析物またはそのアナログの検出のための直接または間接標識を有する少なくとも1つの分析物特異的な複合体を含むものである、
(b)検出ゾーン(4)、場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に配置した中間ゾーン(6)、および場合によっては前記検出ゾーン(4)の隣に配置した吸収ゾーンまたは領域(5)を含み、前記検出ゾーン(4)は、場合によってはコントロールサブゾーンを含む、第二の毛細管ゾーン、そしてここで該検出ゾーン(4)は、少なくとも1つの分析物またはそのアナログを特異的に認識する少なくとも1つのキャプチャー試薬を含むものである、並びに
(c)第一毛細管ゾーンの該試料添加ゾーン(2)を第二の毛細管ゾーンの該検出ゾーン(4)または該任意選択の中間ゾーン(6)から分離する、非毛細管ゾーン(14)、
ここで、前記試料添加ゾーン(2)、前記非毛細管ゾーン(14)および前記検出ゾーン(4)または前記任意選択の中間ゾーン(6)は、試料が該試料添加ゾーン(2)から該検出ゾーン(4)または該任意選択の中間ゾーン(6)に重力によってのみ流れることができるように配置されている、
分析物検出法。 - 該装置上の試料添加ゾーンを試料と接触させて、該試料を毛細管により該試料受けゾーンを通らせて非毛細管ゾーンへ移動させ、該試料を重力によって非毛細管ゾーンを通って検出ゾーンへ移動させ、該試料を毛細管により該検出ゾーンを通って移動させ、該分析物を検出することを含む、請求項1に記載の分析物検出法。
- 該テスト装置を垂直に配置し、
該装置の最上部に試料を添加し、
該試料添加ゾーン(2)を通って該試料を移動させ、該少なくとも1つの分析物特異的な複合体を水和させ、
前記試料中の少なくとも1つの分析物を該少なくとも1つの分析物特異的な複合体と反応させ、それによって少なくとも1つの複合体を形成させ、
該少なくとも1つの複合体を該非毛細管ゾーンに到達させ、重力によって該非毛細管ゾーンを通過させ、該任意選択の中間ゾーン(6)と接触またその中を移動させ、該検出ゾーン(4)を通過させ、それにより少なくとも1つのキャプチャー試薬と反応させ、
検出可能な信号を発生させ、それによって前記少なくとも1つの分析物を検出する
ステップを含む、請求項1に記載の分析物検出法。 - クリプトスポリジウム パルブム(Cryptosporidium parvum)、トキソプラズマ ゴンディ(Toxoplasma gondii)、ジアルジア ランブリア(Giardia lamblia)、大腸菌(E. coli)、赤痢アメーバ(E. histolytica)、クロストリジウム ディフィシル(C. difficile)、クロストリジウム ディフィシル(C. difficile) 毒素、RSV(呼吸器多核体ウイルス(Respiratory Syncytial Virus))、インフルエンザ-A および -B ウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス 40型および41型 または他のアデノウイルスグループ、レジオネラ ニューモフィラ(Legionella pneumophila)尿抗原、ヒトおよび動物起源のコロナウイルスおよびヒトメタニューモウイルスを含む(有害な)微生物由来の、分析物またはアナログを検出するための、請求項1〜3のいずれかに記載の分析物検出法。
- 前記キャプチャー試薬が、オリゴヌクレオチドもしくはそのアナログ、またはポリクローナルもしくはモノクローナル抗体、または超可変性抗体断片、またはIgG、IgA、IgEおよびIgMのような血清中の化合物によって認識される抗原、またはビオチン―ストレプトアビジンのような対になった特異的試薬を含む群から選択される、請求項1〜4のいずれかに記載の分析物検出法。
- 該試料添加ゾーン(2)が、少なくとも1つのコントロール複合体を更に含んでいる、請求項1〜5のいずれかに記載の分析物検出法。
- 該検出ゾーン(4)が、該添加ゾーン(2)における該コントロール複合体を特異的に認識する、少なくとも1つのコントロールキャプチャー試薬(7')を有する、少なくとも1つのコントロールテストラインを含む、請求項1〜6のいずれかに記載の分析物検出法。
- 該分析物特異的複合体および/または該コントロール複合体が、複合金属コロイド、複合ポリスチレン微粒子、炭素ナノチューブおよび特定の色を有する微粒子またはナノ粒子、蛍光微粒子またはナノ粒子を含む群から選択される標識を含む、請求項1〜7のいずれかに記載の分析物検出法。
- 該検出ゾーン(4)が、該添加ゾーンまたはテストされる該試料中に存在する別の試薬と相互作用する試薬をコーティングすることができる、ニトロセルロースまたは別の基質から成る活性膜(16)を含む、請求項1〜8のいずれかに記載の分析物検出法。
- 該中間ゾーン(6)が、吸収膜(15)を含む、請求項1〜9のいずれかに記載の分析物検出法。
- ステッカー(20)が、該試料添加ゾーン(2)、該非毛細管ゾーン(14)、該中間ゾーン(6)を覆い、かつ該検出ゾーン(4)と部分的に重なる、請求項1〜10のいずれかに記載の分析物検出法。
- 前記装置が、中空の筐体または熱成形筐体に入れて提供される、または重合体に包埋されている、請求項1〜11のいずれかに記載の分析物検出法。
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