TWI533883B - 抗ｉｌ－６抗體及其用途 - Google Patents

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TWI533883B TW098140116A TW98140116A TWI533883B TW I533883 B TWI533883 B TW I533883B TW 098140116 A TW098140116 A TW 098140116A TW 98140116 A TW98140116 A TW 98140116A TW I533883 B TWI533883 B TW I533883B
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安娜Ｅ Ｃ 詹生
凱提 歐爾生
班 杜薩
約翰 雷特漢
布萊恩 柯法席維屈
傑佛瑞Ｔ Ｌ 史密斯
馬克 里頓
蘭達爾 史恰斯曼
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Description

抗IL-6抗體及其用途 相關申請案之對照參考資料
本申請案請求美國臨時專利申請案第61/117,839、61/117,861，及61/117,811號案(所有者皆係於2008年11月25日申請)之優先權利益；且進一步係美國申請案第12/502,581號案(2009年7月14日申請)、美國序號第12/399,156號案(2009年3月6日申請)、美國序號第12/391,717號案(2009年2月24日申請)，及美國序號第12/366,567號案(2009年2月5日申請)之部份繼續案，此等之每一者之揭露在此被全部併入以供參考之用。
發明背景 發明領域
本發明係申請人於上述專利申請案中揭露之有關於新穎之抗-IL-6抗體、使用抗-IL-6抗體之新穎治療及治療方案，及含有抗-IL-6抗體之藥學組成物之先前發明之擴展。於較佳實施例，抗-IL-6抗體係Ab1，其包含其兔子或人類化型式，與其重鏈、輕鏈、片段、變體，及CDR，或以Ab1之抗體或抗體片段與其完整之人類IL-6多肽片段上之相同線性或構形抗原決定基專一地結合。本申請案特別係有關於一於此稱為Ab1及其變體之一例示人類化抗體之較佳組成物及治療用途。於較佳實施例，抗-IL-6抗體具有至少約25天之活體內半衰期，提高白蛋白之活體內功效，具有降低C-反應蛋白質之活體內功效，具有恢復正常凝血狀況之活體內功效，擁有少於約50皮克莫耳(picomolar)之對IL-6之結合親和力(Kd)，及/或具有少於或等於10-4 S-1之與IL-6之解離速率(Koff)。
本發明係亦係有關於篩選與IL-6有關之疾病及異常之方法，及藉由投用該抗體或其片段或變體而預防或治療與IL-6有關之疾病或異常之方法。
於一方面，本發明係有關於改善需要病患之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用抗-IL-抗體，諸如，Ab1或其片段或變體，藉此，此病患之C-反應蛋白質(“CRP”)之量被降低，及/或病患之白蛋白之量被升高，及選擇性地監測病患以測定病患之CRP及/或白蛋白之量。
於另一方面，本發明係有關於降低需要病患之C-反應蛋白質量之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患之CRP量被降低，及監測病患以評估CRP量。於另一方面，本發明係有關於提升需要病患之白蛋白量之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患之血清白蛋白量被提升，及監測病患以評估白蛋白量。
於另一方面，本發明係有關於預防或治療需要病患(例如，顯示升高CRP量之病患)之惡質症、虛弱、疲勞，及/或發熱之方法，包含對此病患投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，藉此，此病患之惡質症、虛弱、疲勞，及/或發熱被改善或恢復至正常狀況，及選擇性監測此病患以評估惡質症、虛弱、疲勞，及/或發熱。
於另一實施例，本發明係有關於預防或治療高凝血症狀態病患之血栓之方法，包含對此病患投用抗-IL-6抗體，諸如，Ab1或其片段或變體，藉此，此病患之凝血狀況被改善或恢復至正常狀況，及選擇性監測此病患以評估凝血狀況。
於另一方面，本發明係提供新穎之藥學組成物及其於新穎混合式治療之用途，且包含投用抗-IL-6抗體，諸如，Ab1或其片段或變體，及至至少一其它治療化合物，諸如，他汀(statins)、抗凝血劑、止吐劑、抗噁心劑、抗-惡質症劑、化療劑、抗細胞激素劑等。
體重喪失、疲勞，及肌弱虛弱係具末期癌症型式病患極普遍之症狀，且此等症狀於癌症持續進展時會惡化。疲勞、體重喪失及肌肉虛弱對於具末期癌症型式之病患之恢復具顯著負面作用，例如，混亂生活型態及關係及影響病患持續癌症治療之意願或能力。已知之解決疲勞、體重喪失及肌肉虛弱之方法包含規律之例行性健身及運動、保留病患能量之方法，及解決貧血誘發之疲勞及肌肉虛弱之治療。然而，於此技藝仍需改善癌症病患之疲勞、體重喪失及肌肉虛弱之方法及/或治療。
血栓係癌症病患死亡之一重要原因。Bick,N Engl J Med 349:109-111(2003)。例如，嚴重威脅生命之血栓結果於約6%之肺癌病患發生。Alguire等人，J Clin Oncol 2004第22冊(July 15th Supplement) No. 14S:8082。癌症病患通常展現高凝血症，其中，凝血系統具有增加之凝血趨勢。Rickles及Edwards,Blood 62:14-31(1983)。高凝血症之標記物係與至少一些癌症之差的病患結果有關。Bick,Semin Thromb Hemostat 18:353-372(1992)；Buccheri等人，Cancer 97:3044-3052(2003)；Wojtukiewicz,Blood Coagul Fibrinolysis 3:429-437(1992)。高凝血症之原因包含癌症本身及癌症治療(例如，化療)。高凝血症造成增加之血栓結果危險性，其於病患變成臥病不起時會進一步惡化。當不受禁忌時，抗凝血治療於某些癌症具有授予存活之益處。Lebeau等人，癌症74:38-45(1994)；Chahinian等人，J Clin Oncol 7:993-1002(1989)。但是，治療之選擇經常受限制，因為許多癌症病患具有大量出血之危險性，而排除投用能預防性降低血栓危險性之抗凝血劑。綜言之，預防癌症病患血栓之可利用方法係不令人滿意，因此，需要新的治療。此等治療能促癌症病患之生存及促進較佳生活品質。
血栓亦可為包含具慢性疾病或慢性發炎者、外科手術病患、臥床不起之個人及骨科病患之其它病患族群之不利結果及死亡之重大原因。當其等不受禁忌時，預防方法包含小腿壓縮及抗凝血劑(例如，低分子量肝素)。此等預防方法可降低─但非排除─血栓危險性。因為此等預防方法並非總是有效，且對於某些病患係受禁忌，且因為抗凝血劑會造成潛在致死副作用，諸如，大量出血，需要另外之預防此等病患之血栓之方法。此等方法需改善病患效果。
白細胞介素-6(其後係“IL-6”)(亦稱為干擾素-β2；B-細胞分化因子；B-細胞刺激因子-2；肝細胞刺激因子；融合瘤細胞生長因子；及漿細胞瘤生長因子)係於多種生物學方法(諸如，急性發炎反應之調節、包含B-及T-細胞分化之特定免疫反應之調變、骨骼代謝、血栓形成、表皮增殖、月經、神經元細胞分化、神經保護、老化、癌症，及於阿茲罕默氏症發生之發炎反應)中涉及之多功能性細胞激素。見A. Papassotiropoulos等人，Neurobiology of Aging,22:863-871(2001)。
IL-6係細胞激素家族之一員，經由一由訊息-傳遞糖蛋白gp130及IL-6受體(“IL-6R”)(亦稱為gp80)之至少一次單元所組成之一受體複合物促進細胞反應。IL-6R亦可以可溶型式(“sIL-6R”)存在。IL-6與IL-6R結合，然後，使訊息-傳遞受體gp130二聚合。見Jones,SA,J. Immunology,175:3463-3468(2005)。
於人類，基因編碼IL-6係以五個外顯子及四個內含子組織，且圖譜建立於7p21之染色體7之短臂。IL-6RNA之轉譯及後轉譯處理造成其成熟型式之具184個胺基酸之21至28kDa蛋白質形成。見A. Papassotiropoulos等人，Neurobiology of Aging,22:863-871(2001)。
如此間更詳細顯示，IL-6被認為於多種疾病及異常(不受限地包含疲勞、惡質症、自體免疫疾病、骨骼系統疾病、癌症、心臟病、肥胖、糖尿病、氣喘、阿茲罕默氏症及多發性硬化症)之發展扮演一角色。由於IL-6被理解涉及廣範圍之疾病及異常，於此項技藝仍需用於預防或治療與IL-6有關之疾病之組成物及方法，與用以識別具有與IL-6有關之疾病或異常之病患之篩選方法。特別較佳之抗-IL-6組成物係當投用至病患時具有最小或最小化之不利反應者。降低或抑制與IL-6有關之疾病或異常之組成物或方法對需要病患係有利。
IL-6之功能不受限於免疫反應，因其作用於造血作用、血栓形成、蝕骨細胞形成、誘發肝臟急性期反應，造成C-反應蛋白質(CRP)及血清類澱粉A(SAA)蛋白質升高。其已知係表皮角質細胞、腎絲球細胞、骨髓瘤及漿細胞瘤細胞之生長因子(Grossman等人，1989 Prot Natl Acad Sci.,86,(16) 6367-6371；Horii等人，1989,J Immunol,143,12,3949-3955；Kawano等人，1988,Nature 332,6159,83-85)。IL-6係藉由廣範圍之細胞型式產生，包含單核球/巨噬細胞、纖維母細胞、表皮角質細胞、血管內皮細胞、腎絲球細胞、神經膠細胞、軟骨細胞、T及B-細胞及某些腫瘤細胞(Akira等人，1990,FASEB J.,4,11,2860-2867)。除組成性產生IL-6之腫瘤細胞外，正常細胞不會表現IL-6，除非適當刺激。
升高之IL-6量已於多種癌症觀察到，包含乳癌、血癌、卵巢癌、***癌、胰臟癌、淋巴癌、肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌，及多發性骨髓瘤(例如，Chopra等人，2004,MJAFI 60:45-49；Songur等人，2004,Tumori 90:196-200；Blay等人，1992,Cancer Research 52:3317-3322；Nikiteas等人，2005,World J. Gasterenterol. 11:1639-1643；Heikkila等人，2008,Eur J Cancer,44:937-945中之評論)。如上所示，IL-6係已知或可能於促進至少某些型式之癌症之增殖或生存扮演一角色。再者，某些此等研究已證明IL-6量與病患結果間之相關性。一起地，此等結果暗示IL-6之抑制可能為治療上有利之可能性。事實上，臨床研究(Trikha等人，2003,Clinical Cancer Research 9:4653-4665之評論)已顯示由於投用各種抗-IL-6抗體而於病患結果之一些改善，特別係於其間於促進癌細胞增殖或生存中扮演直接角色之癌症。
如上所示，IL-6刺激肝臟急性期反應，造成增加之CRP產生及升高之血清CRP量。因此，C-反應蛋白質(CRP)已被報導包含IL-6活性之代用標記物。因此，升高之IL-6活性可經由測量血清CRP而檢測。相反地，IL-6活性之有效抑制，例如，經由投用經中和化之抗-IL-6抗體，可藉由造成之血清CRP量減少而檢測。
最近臨床試驗證明對具有升高CRP(大於2.0毫克/公升)之明顯健康個人投用瑞舒伐他汀降低其CRP量37%，且大量地減少心肌梗塞、中風、動脈血管再生、不穩定型心絞痛之住院，或心血管原因之死亡之發生率。Ridker等人，N Engl J Med. 2008 Nov 9[Epub ahead of print]。
除其於某些癌症及其它疾病之發病之直接角色外，慢性升高之IL-6量似乎不利地影響病患健康及生活品質。例如，升高之IL-6量已被報導與惡質症及發熱有關，及降低血清白蛋白。Gauldie等人，1987,PNAS 84:7251-7253；Heinric等人，1990,265:621-636；Zamir等人，1993,Metabolism 42:204-208；Zamir等人，1992,Arch Surg,127:170-174。藉由經中和化之抗體抑制IL-6已被報導改善癌症病患之發熱及惡質症，即使於此等病患之血清白蛋白量之改善尚未被報導(Emille等人，1994,Blood,84:2472-2479；Blay等人，1992,Cancer Research 52:3317-3322；Bataille等人，1995,Blood,86:685-691)。
各種研究建議CRP係癌症病患之一有價值之預後因子，且升高之CRP量預期差的結果。見，例如，Hefler等人，Clin Cancer Res,2008 Feb 1;14(3):710-4；Nagaoka等人，Liver Int,2007 Oct;27(8):1091-7；Heikkil等人，J Epidemiol Community Health,2007 Sep;61(9):824-33,Review；Hara等人，Anticancer Res,2007 Jul-Aug;27(4C):3001-4；Polterauer 等人，Gynecol Oncol,2007 Oct;107(1):114-7,Epub 2007 Jul 6；Tingstedt等人，Scand J Gastroenterol,2007 Jun;42(6):754-9；Suh等人，Support Care Cancer,2007 Jun;15(6):613-20,Epub 2007 Jan 18；Gerhardt等人，World J Gastroenterol,2006 Sep 14;12(34):5495-500；McArdle等人，Urol Int,2006;77(2):127-9；Guillem等人，Dis Esophagus,2005;18(3):146-50；Brown等人，Cancer,2005 Jan 15;103(2):377-82。減少之血清白蛋白(低白蛋白血症)亦與包含癌症之許多危險疾病之增加之發病率及死亡率有關(例如，Vigano等人，Arch Intern Med,2000 Mar 27;160(6):861-8；Hauser等人，Support Care Cancer,2006 Oct;14(10):999-1011；Seve等人，Cancer,2006 Dec 1;107(11):2698-705)。低白蛋白血症與差的病患結果間之明顯關連可能暗示經由直接之白蛋白灌輸恢復白蛋白量可促進病患生存，但是，單獨之白蛋白灌輸尚未能改善具末期癌症之病患(Demirkazik等人，Proc Am Soc Clin Oncol 21:2002(abstr 2892))或其它嚴重病患族群(Wilkes等人，Ann Intern Med,2001 Aug 7;135(3):149-64之評論)之生存。
格拉斯哥預後評分(GPS)係一以發炎為主之預後評分，其係結合白蛋白(<35毫克/公升=1點)及CRP(>10毫克/公升=1點)(Forrest等人，Br J Cancer,2004 May 4;90(9):1704-6)之量。其於2004年引入，格拉斯哥預後評分已顯示具有包含胃食道癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巢癌、支氣管癌，及轉移性腎癌之多種癌症死亡率預測之預後值(Forrest等人，Br J Cancer,2004 May 4;90(9):1704-6；Sharma等人，Clin Colorectal Cancer,2008 Sep;7(5):331-7；Sharma等人，Eur J Cancer,2008 Jan;44(2):251-6；McMillan等人，Nutr Cancer,2001;41(1-2):64-9；McMillan,Proc Nutr Soc,2008 Aug;67(3):257-62；Ramsey等人，Cancer,2007 Jan 15;109(2):205-12)。
美國專利申請公告第20080081041號案(有關於使用抗-IL-6抗體治療癌症)揭示因為IL-6與疾病活性有關及因為CRP係IL-6活性代用標記物，藉由其抗-IL-6抗體使IL-6中和化而持續抑制CRP(CNTO 328,Zaki等人，Int J Cancer,2004 Sep 10;111(4):592-5)可被假設對於達成生物學活性係需要。相同專利申請案指示良性及惡性***疾病之病患之IL-6及CRP間之關係係藉由McArdle事先檢測(McArdle等人，2004 Br J Cancer 91(10):1755-1757)。McArdle報導發現與***癌病患相比之具良性疾病之病患之IL-6及CRP之濃度間無顯著差異，於癌症病患，隨著增加之腫瘤程度，IL-6及CRP濃度皆顯著增加。對於86位***癌實驗對象之中間值血清CRP值係1.8毫克/公升。以此為基礎，上述參考專利申案之發明人假設一建議劑量及療程，其中，6毫克/公斤之抗-IL-6抗體(CNTO 328)係每二週投藥，且斷言於具轉移性HRPC之實驗對象可能達成持續抑制CRP。
IL-6訊息係藉由Jak-Tyk家族之細胞質酪胺酸激酶(包含JAK1、JAK2，及JAK3)媒介(於Murray J Immunol. 2007 Mar 1;178(5):2623-9評論)。Sivash等人報導於口腔磷狀癌細胞之IL-6-媒介之JAK訊息藉由環戊烯酮***素15d-PGJ2而廢除。British Journal of Cancer(2004)91,1074-1080。此等結果暗示JAK1、JAK2，或JAK3之抑制劑可作為IL-6之拮抗劑。
Ulanova等人報導非受體蛋白質酪胺酸激酶Syk之抑制(使用siRNA)減少藉由上皮細胞產生IL-6。Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2005 Mar;288(3):L497-507。此等結果暗示Syk之抑制劑可作為IL-6之拮抗劑。
Kedar等人報導於大部份之腎細胞癌病患以沙利竇邁治療血清CRP及IL-6之量顯著降低至正常或接近正常之量。Int J Cancer. 2004 Jun 10;110(2):260-5。此等結果暗示沙利竇邁及其可能之衍生物(諸如，來那度安)可為有用之IL-6之拮抗劑。
此外，另一公告之專利申請案US 20070292420教示使用治療具末期多發性骨髓瘤(N=12)之頑固病患之抗-IL-6(cCLB-8)抗體之第I期劑量累積研究，且指示此研究證明某些病患具有疾病穩定性。此申請案亦報導於治療中斷後，於M蛋白質量之增加加速，暗示於治療撤消後減少反彈。抗-IL-6 cCLB-8抗體抑制自由循環之IL-6。
此申請案亦指示此抗體試驗結果係無毒性(除於二重度前處理病患之短暫血小板過低外)或過敏反應被觀察到，且於所有病患C-反應蛋白質(CRP)係減至低於檢測量。其抗體(cCLB-8抗體)被報導擁有17.8天之循環半衰期，且無人類抗嫁接抗體(HACA)免疫反應被觀察到(van Zaanen等人1998)。其等指稱投用CNTO 328未造成血壓、脈博速率、溫度、血紅素、肝功能及腎功能改變。除於二重度前處理病患之短暫血小板過低外，無毒性或過敏反應被指稱被觀察到，且無人類抗嫁接抗體(HACA)免疫反應被觀察到。於其研究中之三病患被報導於治療期間發展出與感染有關之併發症，但是，與抗-IL-6 cCLB-8抗體之可能關係由發明人結論係不可能，因為感染性併發症被報導於最終階段之多發性骨髓瘤係普遍且係主要之死亡原因。其以其研究為基礎結論此抗-IL-6 cCLB-8抗體於多發性骨髓瘤病患係安全。
某些此間揭示之抗-IL-6抗體亦揭示於由本申請案之受讓人共同擁有之下列公告及未公告之專利申請案：U.S. 2009/0028784、WO 2008/144763、U.S. Ser. No. 12/391,717(2009年2月24日申請)(代理人案號67858.702201)，及U.S. Ser. No. 12/366,567(2009年2月5日申請)(代理人案號67858.702101)。
其它之抗-IL-6抗體　已揭示於下列美國專利案及公告之專利申請案：7,482,436；7,291,721；6,121,423；2008/0075726；2007/0178098；2007/0154481；2006/0257407；及2006/0188502。
如上所示，升高之IL-6於惡質症、虛弱、疲勞，及發熱之發病係有關連。與疲勞有關之疾病及異常不受限地包含一般之疲勞、與壓力有關之疲勞、與運動有關之疲勞、與癌症有關之疲勞、與發炎疾病有關之疲勞，及慢性疲勞症狀。見，例如，Esper DH,等人，癌症惡質症之症狀：代謝及臨床表現之評論(The cancer cachexia syndrome:a review of metabolic and clinical manifestations),Nutr Clin Pract.,2005 Aug;20(4):369-76；Vgontzas AN,等人，IL-6及其於人類之晝夜節律之分泌(IL-6 and its circadian secretion in humans),Neuroimmunomodulation,2005;12(3):131-40；Robson-Ansley,PJ,等人，急性白細胞介素-6投用授予健康受訓練之男性跑步者運動表現(Acute interleukin-6 administration impairs athletic performance in healthy,trained male runners),Can J Appl Physiol.,2004 Aug;29(4):411-8；Shephard RJ.，對身體活動之細胞激素反應，特別有關於IL-6：來源、作用及臨床運用(Cytokine responses to physical activity,with particular reference to IL-6:sources,actions,and clinical implications),Crit Rev Immunol.,2002;22(3):165-82；Arnold,MC,等人，使用白細胞介素-6誘發評估於慢性疲勞症候之經神心理表現(Using an interleukin-6 challenge to evaluate neuropsychological performance in chronic fatigue syndrome)，Psychol Med.,2002 Aug;32(6):1075-89；Kurzrock R.，細胞激素於與癌症有關之疲勞之角色(The role of cytokines in cancer-related fatigue),Cancer,2001 Sep 15;92(6 Suppl):1684-8；Nishimoto N,等人，人類化抗-白細胞介素-6受體抗體治療於卡斯托曼病之改善(Improvement in Castleman’s disease by humanized anti-interleukin-6 receptor antibody therapy),Blood,2000 Jan 1;95(1):56-61;Vgontzas AN,等人，晝夜節律白細胞介素-6分泌及睡眠之量及深度(Circadian interleukin-6 secretion and quantity and depth of sleep),J Clin Endocrinol Metab.,1999 Aug;84(8):2603-7；及Spath-Schwalbe E,等人，重組人類白細胞介素6於健康男性之內分泌及中樞神經睡眠功能之急性作用)Acute effects of recombinant human interleukin 6 on endocrine and central nervous sleep functions in healthy men,J Clin Endocrinol Metab.,1998 May;83(5):1573-9；其等每一者之揭示在此被全部併入以供參考之用。
與惡質症有關之疾病及異常不受限地包含與癌症有關之惡質症、與心臟有關之惡質症、與呼吸有關之惡質症、與腎有關之惡質症，及與年齡有關之惡質症。見，例如，Barton,BE.,白細胞介素-6及用於治療癌症、過度增殖症及腫瘤伴生症候群之新策略(Interleukin-6 and new strategies for the treatment of cancer,hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes),Expert Opin Ther Targets,2005 Aug;9(4):737-52;Zaki MH,等人，CNTO 328，IL-6之單株抗體，抑制裸小鼠之人類腫瘤誘發之惡質症(CNTO 328,a monoclonal antibody to IL-6,inhibits human tumor-induced cachexia in nude mice),Int J Cancer,2004 Sep 10;111(4):592-5;Trikha M,等人，癌症之標靶式抗-白細胞介素-6單株抗體治療：其本原理及臨床證據之評論(Targeted anti-Interleukin-6 monoclonal antibody therapy for cancer:a review of the rationale and clinical evidence),Clin Cancer Res.,2003 Oct 15;9(13):4653-65;Lelli G,等人，癌症厭食症-惡質症之症候之治療：重要再審視(Treatment of the cancer anorexia-cachexia syndrome:a critical reappraisal),J Chemother.,2003 Jun;15(3):220-5;Argiles JM,等人，細胞激素於癌症惡質症之發病(Cytokines in the pathogenesis of cancer cachexia),Curr Opin Clin Nutr Metab Care,2003 Jul;6(4):401-6;Barton BE.,IL-6-樣之細胞激素及癌症惡質症：慢性發炎之結果(IL-6-like cytokines and cancer cachexia:consequences of chronic inflammation),Immunol Res.,2001;23(1):41-58;Yamashita JI,等人，甲羥基孕酮乙酸鹽及癌症惡質症：白細胞介素-6涉及(Medroxyprogesterone acetate and cncer cachexia:Interleukin-6 involvement),Breast Cancer,2000;7(2):130-5;Yeh SS,等人，老年人惡質症：細胞激素之角色(Geriatric cachexia:the role of cytokines),Am J Clin Nutr.,1999 Aug;70(2):183-97;Strassmann G,等人，藉由抗細胞激素及抗細胞激素-受體治療抑制實驗性癌症惡質症(Inhibition of experimental cancer cachexia by anti-cytokine and anti-cytokine-receptor therapy),Cytokines Mol Ther.,1995 Jun;1(2):107-13;Fujita J,等人，抗-白細胞介素-6受體抗體以溶酶體及ATP-泛素-依賴性之蛋白質分解路徑之調節預防載負結腸-26腺癌之小鼠之肌肉萎縮(Anti-Interleukin-6 receptor antibody prevents muscle atrophy in colon-26 adenocarcinoma-bearing mice with modulation of lysosomal and ATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways),Int J Cancer,1996 Nov 27;68(5):637-43;Tsujinaka T,等人，白細胞介素6基因轉殖小鼠中之白細胞介素6受體抗體抑制肌肉萎縮及調節蛋白質分析系統(Interleukin 6 receptor antibody inhibits muscle atrophy and modulates proteolytic systems in Interleukin 6 transgenic mice),J Clin Invest.,1996 Jan 1;97(1):244-9;Emilie D,等人，投用抗-白細胞介素-6單株抗體至具後天免疫缺乏症候群及淋巴癌之病患：對淋巴癌生長及B臨床症候群之作用(Administration of an anti-Interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma:effect on lymphoma growth and on B clinical Symptoms),Blood,1994 Oct 15;84(8):2472-9；及Strassmann G,等人，於實驗癌症惡質症中涉及白細胞介素6之證據(Evidence for the involvement of Interleukin 6 in experimental cancer cachexia),J Clin Invest.,1992 May;89(5):1681-4；其等之每一者之揭示在此被全部併入以供參考之用。
另一與惡質症有關之疾病係發育不正常，亦稱為發育不全，其間，兒童展現比預期更少之重量增加率。發育不正常典型上定義為低於第三百分位之重量或於短期內2主要生長參數之百分等級減少。發育不正常係因異質醫學及心理社會學原因而造成，且此原因有時不被診斷發現。一最近之研究(總共34位病患)報導於被診斷出發育不正常之病患之IL-6量統計上顯著升高。Shaoul等人J Pediatr Gastroenterol Nutr.,2003 Oct;37(4):487-91。
 發明概要
本發明係係申請人先前之有關於對IL-6具結合專一性之專一性抗體、人類化或嵌合或單鏈之抗體及其片段及變體，特別是具有特定之異位專一性及/或功能性質之抗體，及使用此等及其它抗-IL-6抗體之新穎治療之發明之擴展。本發明之一實施例包含能與IL-6及/或IL-6/IL-6R錯合物結合之特定人類化抗體及其片段及變體。此等抗體可結合可溶性IL-6或細胞表面表現之IL-6。再者，此等抗體可抑制IL-6、IL-6/IL-6R錯合物、IL-6/IL-6R/gp130錯合物及/或IL-6/IL-6R/gp130之多聚體之一或多者之形成或生物學功效。本發明係有關於使用抗-IL-6抗體，較佳係此間所述者，之新穎治療及治療方案。特別地，本發明係有關於預防或治療需要病患(例如，於治療前顯示升高之D-二聚物及/或CRP量之病患)之血栓之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，以下識別者，例如，抗-IL-6抗體(諸如，Ab1)或其抗體片段或變體，藉此，病患之凝血狀況被改善或恢復至正常狀況。於某些實施例，此等方法可進一步包含投用可進一步幫助IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)(增效)之其它活性物(諸如，他汀)，且藉此，更有效治療或預防血栓。
本發明亦係有關於改善需要病患(例如，顯示升高之CRP量及/或降低之白蛋白量之病患)之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，於下識別者，例如，抗-IL-6抗體(例如，Ab1)或其抗體片段或變體，藉此，病患之C-反應蛋白質(“CRP”)量被降低，及/或病患之白蛋白量提高。於某些實施例，此等方法可進一步包含投用可進一步幫助IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)(增效)之其它活性物(諸如，他汀)，且藉此，更有效治療此病患。
本發明之另一實施例係有關於Ab1，包含其兔子及人類化之型式，與其重鏈、輕鏈、片段、變體，及CDR。於呈現之人類臨床試驗數據，人類化型式之Ab1被投用。
於一較佳實施例，此係藉由投用此間所述之抗體而產生，包含此間所述之VH、VL及CDR多肽之序列，或含有例示之抗-IL-6抗體序列之一或更多之CDR之其人類化或嵌合或單鏈型式，及其編碼之多核苷酸。較佳地，此等抗體可經無糖基化。於本發明之更特別實施例，此等抗體會阻斷gp130活化及/或擁有少於50皮克莫耳及/或少於或等於10-4S-1之Koff值之結合親和力(Kds)。
於本發明之另一實施例，此等抗體及人類化型式可自兔子免疫細胞(B淋巴細胞)衍生，且可以其對人類生殖細胞序列之同源性(序列一致性)為基礎而選擇。此等抗體可能需最小或無序列改質，藉此，促進於人類化後之功能性質之維持。於例示實施例，此等人類化之抗體會包含與於下描述之母(例如，兔子)抗體係高度同源(擁有高度之序列一致性)之人類架構。
於本發明之另一實施例，本發明之抗體可以其於功能分析(諸如，IL-6趨動之T1165增殖分析、IL-6刺激之HepG2結合球蛋白生產分析等)之活性為基礎而選擇。本發明之另一實施例係有關於抗-IL-6抗體之片段，包含VH、VL及CDR多肽或其變體或片段(例如，自兔子免疫細胞衍生)及其編碼之多核苷酸，與此等抗體片段及其編碼之多核苷酸於產生能識別IL-6及/或IL-6/IL-6R錯合物或IL-6/IL-6R/gp130錯合物及/或其多聚體之新穎抗體及多肽組成物之用途。
本發明亦注視與一或更多之功能性或可檢測之部份共軛之抗-IL-6抗體及其人類化、嵌合或單鏈型式及其其它結合片段及變體之共軛物之投用。本發明亦注視製造該人類化之抗-IL-6或抗-IL-6/IL-6R錯合物抗體及其結合片段及變體之方法。於一實施例，結合片段不受限地包含Fab、Fab'、F(ab')2、Fv及scFv片段。
本發明之實施例係有關於抗-IL-6抗體於診斷、評估及治療與IL-6或其反常表現有關之疾病及異常之用途。本發明亦注視抗-IL-6抗體之片段或變體於診斷、評估及治療與IL-6或其反常表現有關之疾病及異常之用途。本發明之抗體，特別係人類化、嵌合及單鏈抗體之較佳用途係治療及預防與癌症有關之疲勞，及/或惡質症與類風濕性關節炎。
本發明之其它實施例係有關於在重組宿主細胞(較佳係二位體酵母菌，諸如，二倍體畢赤酵母菌(Pichia)及其它酵囡菌株)內產生抗-IL-6抗體。
本發明之另一實施例係有關於改善被診斷癌症之病患之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，藉此，病患之血清C-反應蛋白質(“CRP”)量被穩定化且較佳係降低，及監測此病患以評估病患之血清CRP量之降低，其中，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，其較佳係無糖基化，專一地與相同之線性或構形抗原決定基結合及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其抗體片段或變體上之相同線性或構形抗原決定基之結合。
本發明之另一實施例係有關於改善診斷出癌症之病患之肌肉強度之方法，包含對此病患投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，藉此，病患之肌肉強度被改善，及監測此病患以評估肌肉強度，其中，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，其較佳係無糖基化，專一地與相同之線性或構形抗原決定基結合及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之結合。於此等方法，較佳地，病患之肌肉強度藉由手握強度測試測量係於投用此抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體約4週內係改善至少約15%，且更佳地，病患之肌肉強度藉由手握強度測試測量係於投用此抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體約4週內係改善至少約20%。
本發明之另一實施例係有關於增加需要病患之血清白蛋白之方法，包含對此病患投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，藉此，病患之血清白蛋白量被改善，及監測此病患以評估血清白蛋白量，其中，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，其較佳係無糖基化，專一地與相同之線性或構形抗原決定基結合及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其抗體片段或變體上之相同線性或構形抗原決定基之結合。較佳地，此等方法係於使病患之存活能力被改善之條件下，及/或於其中於投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體約6週內血清白蛋白量增加約5-10克/公升(較佳係7-8克/公升)之條件下產生。此等病患不受限地包含診斷出類風濕性關節炎、癌症、末期癌症、肝病、腎病、炎症性腸病、乳糜瀉、外傷、燒傷、與降低血清白蛋白有關之其它疾病，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，病患可被診斷出類風濕性關節炎、幼年型類風濕性關節炎、牛皮癬、乾癬性關節病變、僵直性脊椎炎、全身紅斑性狼瘡、克隆氏症、潰瘍性大腸炎、天皰瘡、皮肌炎、多發性肌炎、多發性肌痛症、巨細胞性動脈炎、血管炎、多發性結節性動脈炎、韋格納肉芽腫、川崎氏症、隔離CNS血管炎、丘克-史特勞斯(Churg-Strauss)動脈炎、顯微性多發性動脈炎、顯微性多血管、漢諾克-森萊(Henoch-Schonlein)紫斑症、冷凝球蛋白血管炎、類風濕性血管炎、冷凝球蛋白血症、復發性多軟骨炎、貝西氏症、高安氏動脈炎、缺血性心臟病、中風、多發性硬化症、敗血症、病毒感染之續發性血管炎(例如，B型肝炎、C型肝炎、HIV、巨細胞病毒、艾伯史登-巴爾(Epstein-Barr)病毒、Parvo B19病毒等)、勃氏症、癌症、末期癌症、骨關節炎、全身性硬化症、肢端硬皮綜合症、萊特氏症、骨骼之帕哲特氏症、薛格連氏症候群、1型糖尿病、2型糖尿病、家族性地中海熱、自體免疫血小板過低、自體免疫溶血性黃疸貧血、自體免疫甲狀腺疾病、惡性貧血、白斑、圓形禿、原發性膽汁鬱積性肝硬化、自體免疫慢性活動性肝炎、酒精性肝硬化、病毒性肝炎(包含B及C型肝炎)、其它器官自體免疫疾病、燒傷、特發性肺纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、過敏性氣喘、其它過敏狀況，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，病患於治療前可能具有升高之C-反應蛋白質(CRP)量。
本發明之另一實施例係有關於改善需要病患之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患之血清C-反應蛋白質(“CRP”)量被降低，監測病患以評估病患血清CRP量之降低。
本發明之另一實施例係有關於改善需要病患之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患之血清白蛋白量增加，及監測病患以評估病患血清白蛋白量之增加。
本發明之另一實施例係有關於改善需要病患之存活能力或生活品質之方法，包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患血清CRP量降低且病患血清白蛋白量增加，及監測病患以評估病患血清CRP量之降低及病患血清白蛋白量之增加。
本發明之另一實施例係有關於預防或治療高凝血症狀態之病患之血栓之方法，包含對此病患投用專一結合IL-6之IL-6拮抗劑，例如，抗-IL-6抗體(例如，Ab1)及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或多者之CDR)，較佳係經無糖基化，藉此，病患之凝血狀況被改善或恢復至正常狀態，及監測病患以評估凝血狀況。如下於一較佳例示實施例中所探討，抗-IL-6抗體會包含一含有Ab1之CDR人類化抗體，且更佳地會包含個別於序列識別編號：657及序列識別編號：709之可變化之重及輕鏈及個別於序列識別編號：588及586之固定區域或其變體，其中一或更多之胺基酸於實質上未中斷IL-6結合親和力下藉由取代或刪除而改質。
於此等方法，若IL-6拮抗劑係抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，較佳地，此抗體可以包含Ab1之抗-IL-6抗體及其片段及變體專一地結合相同線性或構形抗原決定基及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之結合。於本發明之預防或治療血栓之方法，病患之凝血狀況係藉由測量病患血清之D-二聚物、因子II、因子V,、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纖維蛋白裂解產物、凝血-抗凝血III錯合物、纖維素原、胞漿素原、凝血酶原，及溫韋伯氏因子之一或多者之量而評估，且較佳係藉由包含於投用抗-IL-6抗體前測量病患血清D-二聚物量，及若病患血清D-二聚物量升高時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體之方法。此外，C反應蛋白質之量亦可於治療前對病患評估，且若升高，此可作為病患之增加血栓危險性之進一步指示。
本發明之一實施例係有關於治療具有與高凝血症有關之疾病或狀況之病患之方法，其可包含對此病患投用IL-6拮抗劑，諸如，Ab1，藉此，病患之凝血狀況被改善或恢復至正常，及監測此病患以評估凝血狀況。
於本發明之一實施例，病患於治療前可具有升高之血清D-二聚物量。
於本發明之一實施例，病患於治療前可具有降低之血清白蛋白量。
於本發明之一實施例，病患之格拉斯哥預後評分(GPS)於治療後可被改善。
於本發明之一實施例，病患可於治療前具有升高之血清CRP量。
於本發明之一實施例，此方法可進一步包含投用至少一他汀。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可標定IL-6、IL-6受體α、gp130、p38 MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含抗體、抗體片段、肽、配醣生物鹼、反意核酸、核糖酶、維生素A酸、艾維米、小分子，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含抗-IL-6R、抗-gp130、抗-p38 MAP激酶、抗-JAK1、抗-JAK2、抗-JAK3，或抗-SYK抗體，或抗體片段。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含一包含沙利竇邁、來那度安，或其等之任何組合之小分子。
於本發明之一實施例，拮抗劑可包含抗-IL-6抗體(例如，Ab1)或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別抗體之一或更多之CDR)，其較佳係經無糖基化，專一地結合相同線性或構形抗原決定基及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之結合。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體可以Ab1結合相同線性或構形抗原決定基及/或競爭與完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之結合。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有於先前識別抗體之一或更多之CDR)，其較佳係經無糖基化，專一地結合完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以Ab1專一地結合完整人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可專一地結合完整IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基，其係以Ab1專一地結合，且其中，當藉由抗原決定點分析使用橫跨原生人類IL-6多肽之整個長度之重疊線性肽片段確認時，該抗原決定基包含一或更多之包含於IL-6片段之殘基，其係選自個別包含胺基酸殘基37-51、胺基酸殘基70-84、胺基酸殘基169-183、胺基酸殘基31-45及/或胺基酸殘基58-72者。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體於與於專一地結合IL-6之較佳係經無糖基化之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別抗體之一或更多之CDR)中所含者相同之可變化之輕區域及可變化之重區域之每一者包含至少2個互補決定區(CDR)。於某些實施例，含有此等CDR之抗體可以此間所揭示之人類化方法為基礎使用適當之人類框架建構。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可於與包含於Ab1內者相同之可變化之輕區域及可變化之重區域之每一者包含至少2個互補決定區域(CDR)。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體中之所有CDR可與專一地結合IL-6之較佳係經無糖基化之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別抗體之一或更多之CDR)內所含之CDR相同。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體中之所有CDR可與Ab1中所含之一或更多之CDR相同。
於一例示實施例，抗-IL-6抗體會包含Ab1中之所有CDR。於一更佳之實施例，抗-IL-6抗體會包含序列識別編號：657及序列識別編號：709，或其變體中之可變化之重及輕鏈序列。
於一較佳實施例，人類化抗-IL-6抗體會包含個別包含於序列識別編號：657及序列識別編號：709之可變化之重鏈及可變化之輕鏈序列，且較佳係進一步包含個別包含於序列識別編號：588及序列識別編號：586之重鏈及輕鏈固定區域，及其包含一或更多之不會實質上影響IL-6結合及/或所欲效應子功能之胺基酸取代或刪除之其變體。此實施例亦注視包含，或另外地由一或更多之編碼可變化之重鏈(序列識別編號：700)及可變化之輕鏈(序列識別編號：723)之序列及固定區域重鏈(序列識別編號：589)及固定區域輕鏈(序列識別編號：587)之序列之核酸所組成之多核苷酸。此實施例進一步注視包含編碼包含一或更多之對個別包含於序列識別編號：657及序列識別編號：709之可變化之重鏈及可變化之輕鏈序列及個別包含於序列識別編號：588及序列識別編號：586內之重鏈及輕鏈固定區域之胺基酸取代或刪除(其實質上不會影響IL-6結合及/或所欲效應子功能)之變體之核酸。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可經無糖基化。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可含有一Fc區域，其已被改質以改變效應子功能、半衰期、蛋白質水解，及/或糖基化。較佳地，Fc區域被改質以去除糖基化。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可為人類、人類化、單鏈或嵌合之抗體。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可為自兔子(母)抗-IL-6抗體衍生之人類化抗體。
於本發明之一實施例，個別於該抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體之可變化之輕區域及可變化之重區域之框架區域(FR)可為未經改質或藉由以母兔子抗體之相對應FR殘基取代可變化之輕或重鏈區域內之至多2或3個人類FR殘基而改質之人類FR，且人類FR可衍生自以其相較於此序列庫內所含之其它人類生殖細胞抗體序列之與相對應之兔子可變化之重或經鏈區域之高同源程度為基礎而選自人類生殖細胞抗體序列庫之人類可變化之重及輕鏈抗體序列。如下於一較佳實施例詳細揭露般，抗體會包含以其與經人類化之母抗體者之高同源度(序列一致度)為基礎而選擇之人類FR。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可以最多係每約4週，約8週，約12週，約16週，約20周，或約24週一次之頻率投用至病患。
於本發明之一實施例，病患之凝血狀況可於二連續之抗-IL-6抗體投藥間之整個期間維持改善。
於本發明之一實施例，於其間二連續之抗-IL-6抗體投藥之整個期間病患之血清CRP量可維持減少及/或血清白蛋白量可維持升高。
於本發明之一實施例，病患之惡質症、虛弱、疲勞，及/或發熱於其間二連續之抗-IL-6抗體投藥之整個期間維持改善。
於本發明之一實施例，病患可被診斷出選自之癌症：棘皮瘤、腺泡細胞癌、聽神經瘤、肢端黑色素瘤、末端孔管癌、急性嗜酸粒細胞白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性巨核細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性具成熟現象之骨髓母細胞白血病、急性骨髓樹突細胞白血病、急性骨髓白血病、急性前髓細胞性白血病、釉質瘤、腺癌、腺樣囊軑癌、腺腫瘤、腺瘤樣齒源性腫瘤、腎上腺皮質癌、成人T-細胞白血病、侵略性NK-細胞白血病、與AIDS有關之癌症、與AIDS有關之淋巴癌、肺泡狀軟組織肉瘤、釉細胞性纖維瘤、肛門癌、異生性大細胞淋巴癌、異生性甲狀腺癌症、血管免疫母細胞T-細胞淋巴癌、血管肌肉脂肪瘤、血管肉瘤、闌尾癌、星狀細胞瘤、非典型畸胎類橫紋肌細胞瘤、基底細胞癌、類基底癌、B-細胞白血病、B-細胞淋巴癌、腎集尿管癌、膽道癌、膀胱癌、胚細胞癌、骨癌、骨腫瘤、腦幹膠質瘤、腦瘤、乳癌、布雷納氏腫瘤、支氣管瘤、細支氣管肺泡腺癌、褐色腫瘤、巴氏淋巴癌、不明原發部位之癌症、類癌瘤、癌、原位癌、陰莖癌、不明原發部份之癌、癌肉瘤、卡斯托曼病、中樞神經系統胚芽腫瘤、小腦星狀細胞瘤、大腦星狀細胞瘤、子宮頸癌、膽管癌、軟骨瘤、軟骨肉瘤、原索瘤、絨毛膜癌、脈絡叢乳突瘤、慢性淋巴球白血病、慢性單核細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增殖性疾病、慢性嗜中性白血病、透明細胞腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽瘤、皮膚T-細胞淋巴癌、迪革斯症、隆突性皮膚纖維肉瘤、皮樣囊腫、促纖維化小圓細胞腫瘤、瀰漫性大B細胞淋巴癌、胚胎期發育不良神經上皮瘤、胚胎癌、肉胚竇瘤、子宮內膜癌、子宮內膜子宮癌、子宮內膜樣腫瘤、腸道病變有關之T-細胞淋巴癌、室管膜胚細胞癌、室管膜瘤、上皮狀肉瘤、紅白血病、食道癌、嗅神經母細胞癌、爾文氏腫瘤家族、爾文氏家族肉瘤、爾文氏肉瘤、顱外生殖細胞腫瘤、睪丸外生殖細胞腫瘤、肝臟外膽管癌、乳腺外帕哲特氏症、輸卵管癌、胎中胎、纖維瘤、纖維肉瘤、小囊淋巴癌、小囊甲狀腺癌、膽囊癌、膽囊癌、神經節膠質細胞瘤、神經節瘤、胃癌症、胃淋巴癌、胃腸癌、類胃腸癌腫瘤、胃腸基質腫瘤、胃腸基質腫瘤、生殖細胞腫瘤、生殖細胞瘤、妊娠絨毛膜癌、妊娠滋養母細胞腫瘤、骨骼之巨細胞性腫瘤、多形式膠質胚細胞癌、神經膠質瘤、腦神經膠質瘤、血管球腫瘤、高血糖素瘤、性腺胚細胞癌、卵泡細胞腫瘤、髮樣細胞白血病、髮樣細胞白血病、頭頸癌、頭頸癌、心臟癌、血管胚細胞癌、血管周圍細胞瘤、血管肉瘤、惡性血液疾病、肝細胞癌、肝脾T-細胞淋巴癌、遺傳性***-卵巢癌症候、何金氏淋巴癌、何金氏淋巴癌、下咽癌、下視丘神經膠質瘤、發炎性乳癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞癌、胰島細胞腫瘤、幼年型骨髓單核細胞白血病、卡波西氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、腎臟癌、克拉基氏腫瘤、克魯根堡氏腫瘤、喉癌、喉癌、惡性痣型黑色素瘤、白血病、白血病、唇及口腔癌症、脂質肉瘤、肺癌、黃體瘤、***瘤、***肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴白血病、淋巴癌、巨球蛋白血症、惡性纖維組織球瘤、惡性纖維組織球瘤、骨骼之惡性纖維組織球瘤、惡性神經膠質瘤、惡性間皮癌、惡性週圍神經鞘腫瘤、惡性類橫紋肌細胞腫瘤、惡性氘核腫瘤、MALT淋巴癌、被套細胞淋巴癌、肥大細胞白血病、縱膈生殖細胞腫瘤、縱膈腫瘤、骨髓甲狀腺癌症、骨髓胚細胞癌、骨髓胚細胞癌、神經上皮瘤、黑色素瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、麥克氏細胞癌、間皮癌、間皮癌、具潛藏原發腫瘤之轉移性鱗狀頸部癌症、轉移性尿路上皮癌、混合米勒氏腫瘤、單核細胞白血病、口腔癌、卵巢腫瘤、多發性內分泌腺瘤症候群、多發性骨髓瘤、多發性骨髓瘤、蕈狀肉芽腫、蕈狀肉芽腫、骨髓造血不良症、骨髓造血不良症候群、骨髓白血病、骨髓肉瘤、骨髓殖生症、黏液瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、鼻咽癌、腫瘤、神經瘤、神經胚細胞癌、神經胚細胞癌、神經纖維瘤、神經瘤、結節狀黑色素瘤、非何金氏淋巴癌、非何金氏淋巴癌、非黑色素瘤皮膚癌、非小細胞肺癌、眼部腫瘤、寡星狀細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、嗜酸細胞瘤、視神經鞘腦膜瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌症、骨肉瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞腫瘤、卵巢低惡性腫瘤、***之帕哲特氏症、潘氏腫瘤、胰臟癌、胰臟癌、乳突甲狀腺癌、乳突瘤、副神經膠質瘤、副鼻竇癌、副甲狀腺癌、陰莖癌、血管周圍上皮細胞腫瘤、喉癌、嗜鉻細胞瘤、中間分化之松果體實質性腫瘤、松果體胚細胞癌、下垂體腺腫、腦下垂體腺腫、腦下垂體腫瘤、漿細胞腫瘤、肺肋膜腔胚細胞癌、胚組織瘤、先質T-淋巴細胞性淋巴癌、原發性中樞神經系統淋巴癌、原發性積液淋巴癌、原發性肝細胞癌、原發性肝癌、原發性腹膜癌、原始性神經上皮細胞腫瘤、***癌症、腹膜偽黏液瘤、直腸癌、腎細胞癌、涉及染色體15上之NUT基因之呼吸道癌、神網膜胚細胞癌、肌橫紋肉瘤、橫紋肌肉瘤、雷特氏轉化、畸胎瘤、唾腺癌、肉瘤、神經鞘纖維瘤、皮脂腺癌、續發性腫瘤、***細胞瘤、漿液性腫瘤、Sertoli-Leydig細胞腫瘤、性索基質腫瘤、Szary症候群、印指環狀細胞癌、皮膚癌、小藍圓細胞腫瘤、小細胞癌、小細胞肺癌、小細胞淋巴癌、小腸癌、軟組織肉瘤、生長抑制素瘤、煤煙疣、脊髓腫瘤、脊腫瘤、脾邊緣區域淋巴癌、鱗狀細胞癌、胃癌、表淺散播型黑色素瘤、天幕上神經外胚層母細胞腫瘤、表面上皮-基質腫瘤、滑液肉瘤、T-細胞急性淋巴細胞性白血病、T-細胞大顆粒淋巴細胞白血病、T-細胞白血病、T-細胞淋巴癌、T-細胞幼淋巴球白血病、畸胎瘤、未端淋巴癌、睪丸癌、泡膜細胞瘤、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、腎骨盆及輸尿管之過渡細胞癌、過波細胞癌、擠尿管癌、尿道癌、泌尿生殖器腫瘤、子宮肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、***癌、微那莫里森症候群、疣狀癌、視覺路徑神經膠質瘤、外陰癌、Waldenstrm氏巨球蛋白血症、Warthin氏腫瘤、Wilms氏腫瘤，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，病患可為被診斷出一選自結腸直腸癌症、非小細胞肺癌、膽管癌、間皮癌、卡斯托曼病、腎細胞癌，或其等之任何組合之癌症。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可包含一包含：序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，或708之重鏈多肽序列；且可進一步包含一包含：序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709之VL多肽序列，或其變體，其中，於該VH或VL多肽內之一或更多之框架殘基(FR)可以造成專一結合人類IL-6之抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體之另一胺基酸殘基取代，或可包含一其中於其內之CDR被併納於一與該序列同源之人類框架內之多肽。較佳地，可變化之重及輕序列包含於序列識別編號：657及709內者。
於本發明之一實施例，一或更多之該FR殘基可以一存在於衍生包含於該VHVL多肽內之互補決定區域(CDR)之母兔子抗-IL-6抗體內之相對應位置處之胺基酸或藉由保守胺基酸取代而取代。
於本發明之一實施例，該抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可經人類化。
於本發明之一實施例，該抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可為嵌合。
於本發明之一實施例，該抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可進一步包含一人類Fc，例如，一由包含於序列識別編號：704及702內之可變化之重及輕鏈固定區域所包含之Fc區域。
於本發明之一實施例，該人類Fc可衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可包含一與序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704、708、2、20、647、651、660、666、699、702、706，及709之多肽序列之一或更多者具有至少90%之序列同源性之多肽。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可具有至少約22天，至少約25天，或至少約30天之排除半衰期。
於本發明之一實施例，諸如Ab1之IL-6拮抗劑可與化療劑投用。於本發明之一實施例，化療劑不受限地包含：VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑、紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、亞葉酸鈣、類固醇、環磷醯胺、美法侖、長春花生物鹼(例如，長春鹼、長春新鹼、長春地辛及長春瑞濱)、莫司汀、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素(例如，IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗劑、毒素共軛單株抗體、腫瘤抗原專一性單株抗體、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠單抗、抗-CD20抗體、Rituxan、歐克利入馬、歐法土木瑪、DXL625、Herceptin，或其等之任何混合。
於本發明之一實施例，另一治療化合物可為他汀。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體可直接或間接附接至一可檢測之標籤或治療劑。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或抗體片段可為包含Ab1之所有或大部份CDR之Ab1或其人類化、嵌合、單鏈或片段。
於本發明之一實施例，疾病或狀況可選自急性靜脈血栓、肺栓塞、懷孕期間之血栓、皮膚出血性壞疽、急性或慢性之泛發性血管內血液凝固症(DIC)、手術之血塊形成、長期臥床休息、長期固定、靜脈血栓、猛爆性菌血症、急性血栓中風、急性冠狀動脈閉塞、急性周邊動脈閉塞、嚴重肺栓塞、腋靜脈血栓、嚴重骼骨靜脈血栓、阻塞之動脈導管、阻塞之靜脈導管、心肌症、肝靜脈阻塞性疾病、低血壓、減少之心輸出量、減少之血管阻力、肺高血壓症、減低之肺順從性、白血球減少、血小板過低、肝素誘發之血小板過低(HIT)、肝素誘發之血小板過低及血栓(HITT)、心房顫動、人工心臟瓣膜移植、血栓之基因易感性、萊頓第五因子、凝血酶原基因突變、甲撐基四氫葉酸還原酶(MTHFR)多型性、血小板-受體多型性、外傷、骨折、燒傷，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，疾病或狀況可選自癌症、類風濕性關節炎、AIDS、心臟病、脫水、營養不良、鉛曝露、瘧疾、呼吸疾病、年老、甲狀腺機能不全、結核病、垂體機能減退、經神衰弱症、高血鈉症、低血鈉症、腎臟病、脾、僵直性脊椎炎、發育不正常(發育不全)，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此方法可包含投用與惡質症有關之因子、與虛弱有關之因子、與疲勞有關之因子，及/或與發熱有關之因子之拮抗劑。與惡質症有關之因子、與虛弱有關之因子、與疲勞有關之因子，及/或與發熱有關之因 子可選自腫瘤凋亡因子-α、干擾素γ、白細胞介素1α、白細胞介素1β、白細胞介素6、誘發蛋白質水解之因子、白血病抑制因子，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此方法可包含投用選自***、屈***酚(MarinolTM)、庚苯吡酮(Cesamet)、***二酚、***環萜酚、四氫***酚、沙提維斯、甲羥孕酮乙酸鹽，或其等之任何組合之抗惡質症之藥劑。
於本發明之一實施例，此方法可包含投用選自5-HT3受體拮抗劑、香辣椒、阿立必利、抗膽鹼劑、抗組織胺劑、阿瑞比坦、苯二氮平類、***環萜酚、***二酚、***鹼、***、卡索比坦、氯丙、塞克立辛、***、***、茶苯海明(GravolTM)、苯海拉明、度洛西汀、氯哌酮、多巴胺拮抗劑、多西拉敏、屈***酚(MarinolTM)、氟哌利多、益吐寧、薑、格拉斯瓊、氟哌丁苯、羥、東茛菪鹼、勞拉西伴、敏克靜、甲氧氯普胺、咪達唑侖、毒蠅蕈醇、庚苯吡酮(Cesamet)、nk1受體拮抗劑、奧丹亞龍、帕洛諾斯瓊、胡椒薄荷、非那根、普魯氯、普洛馬可、異丙、潘他、異丙酚、沙提維斯、四氫***酚、三甲氧苯醯胺、托烷斯瓊、諾龍、己烯雌酚、沙利竇邁、來那度安、飢餓素激動素、肌骨素拮抗劑、抗肌骨素抗體、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、血管緊縮素AII拮抗劑、β2腎上腺素受體激動素、β3腎上腺素受體激動素，或其等之任何組合之抗噁心劑或抗吐劑。
於本發明之一實施例，此方法可包含投用選自5-HT3 受體拮抗劑、香辣椒、阿立必利、抗膽鹼劑、抗組織胺劑、阿瑞比坦、苯二氮平類、***環萜酚、***二酚、***鹼、***、卡索比坦、氯丙、塞克立辛、***、***、茶苯海明(GravolTM)、苯海拉明、度洛西汀、氯哌酮、多巴胺拮抗劑、多西拉敏、屈***酚(MarinolTM)、氟哌利多、益吐寧、薑、格拉斯瓊、氟哌丁苯、羥、東茛菪鹼、勞拉西伴、敏克靜、甲氧氯普胺、咪達唑侖、毒蠅蕈醇、庚苯吡酮(Cesamet)、nk1受體拮抗劑、奧丹亞龍、帕洛諾斯瓊、胡椒薄荷、非那根、普魯氯、普洛馬可、異丙、潘他、異丙酚、沙提維斯、四氫***酚、三甲氧苯醯胺、托烷斯瓊、諾龍、己烯雌酚、沙利竇邁、來那度安、飢餓素激動素、肌骨素拮抗劑、抗肌骨素抗體、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、血管緊縮素AII拮抗劑、β2腎上腺素受體激動素、β3腎上腺素受體激動素，或其等之任何組合之抗噁心劑或抗吐劑。
於本發明之一實施例，病患之發熱可藉由測量病患體溫而評估。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用抗-IL-6抗體前測量病患之體溫，及若病患之體溫高於約38℃時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用抗-IL-6抗體前24小時內測量病患之體溫，及若病患之體溫測量指示發熱存在時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，此方法可進一步包含於投用抗-IL-6抗體前測量病患之體重，且若病患之體重於約30天內下降大於約5%，或若病患之瘦身體質量指數少於約17公斤/公尺2(男性病患)或少於約14公斤/公尺2(女性病患)時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用抗-IL-6抗體前測量病患之肌肉強度，及若病患之肌肉強度於約30天內下降大於約20%時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，本發明可造成延長改善病患之惡質症、虛弱、疲勞，及/或發熱。
於本發明之一實施例，病患之身體質量可於投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體約4週內上升約1公斤。
於本發明之一實施例，病患之惡質症可於投用抗-IL-6抗體約4週內可測量地改善。
於本發明之一實施例，病患之惡質症可藉由測量病患之總身體質量、瘦身體質量、瘦身體質量指數，及/或四肢瘦身體質量而評估。
於本發明之一實施例，病患之身體質量之測量可扣除(減去)病患腫瘤及/或血管外流體收集物之估算重量。
於本發明之一實施例，病患之惡質症可於投用抗-IL-6抗體後約8週維持可測量之改善。
於本發明之一實施例，病患之虛弱可於投用抗-IL-6抗體約4週內可測量地改善。
於本發明之一實施例，病患之虛弱可藉由手握強度而測量。
於本發明之一實施例，病患之手握強度可改善至少約15%，或至少約20%。
於本發明之一實施例，病患之虛弱可於投用抗-IL-6抗體後約8週維持可測量之改善。
於本發明之一實施例，病患之疲勞可於投用抗-IL-6抗體約1週內可測量地改善。
於本發明之一實施例，病患之疲勞可藉由FACIT-F FS測試測量。
於本發明之一實施例，病患之FACIT-F FS評分可改善至少約10點。
於本發明之一實施例，病患之疲勞可於投用抗-IL-6抗體後約8週維持可測量之改善。
於本發明之一實施例，病患之發熱可於投用抗-IL-6抗體約1週內可測量地改善。
於本發明之一實施例，病患之發熱可於投用抗-IL-6抗體後約8週維持可測量之改善。
於本發明之一實施例，病患之生活品質可被改善。
於本發明之一實施例，可包含投用一或更多之抗凝血劑或他汀。
於本發明之一實施例，此一或更多之抗凝血劑可選自阿昔單抗(ReoProTM)、香豆醇、抗凝血酵素III、阿加曲班、阿斯匹靈、比伐盧定(AngiomaxTM)、氯吡多、達比加群、達比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西盧定(RevascTM/IprivaskTM)、雙嘧達莫、埃替非巴(IntegrilinTM)、磺達肝癸鈉、肝素、水蛭素、艾卓肝素、匹盧定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚滿二酮、苯丙羥基香豆素、梯可比定、替羅非班(AggrastatTM)、華法林、辛美拉加群、辛美拉加群(ExantaTM/ExartaTM)，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此一或更多之他汀可選自阿托伐他汀、西立伐他汀、夫路伐他汀、若伐他汀、米伐他汀、皮他伐他汀、皮拉伐他汀、瑞舒伐他汀、西姆伐他汀，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，病患之凝血狀況可藉由測量病患血清之D-二聚物、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纖維蛋白降解產物、凝血-抗凝血酵素III錯合物、纖維素原、胞漿素原、凝血酶原，及溫韋伯氏(von Willebrand)氏因子之一或多者之量而評估。
於本發明之一實施例，病患之凝血狀況可藉由功能性測量凝血能力而評估。
於本發明之一實施例，功能性測量凝血能力可選自凝血酶原時間(PT)、凝血酶原比例(PR)、國際正常化比例(INR)，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用IL-6拮抗劑前測量病患之國際正常化比例(INR)，及若病患之INR少於約0.9時對病患投用諸如Ab1之IL-6拮抗劑。
於本發明之一實施例，本發明可包含於投用IL-6拮抗劑前測量病患之國際正常化比例(INR)，及若病患之INR少於約0.5時對病患投用諸如Ab1之IL-6拮抗劑。
於本發明之一實施例，病患之INR可於對病患投用IL-6拮抗劑4週內升高至多於約0.9。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用IL-6拮抗劑前測量病患血清之D-二聚物量，及若病患血清之D-二聚物量高於正常參考範圍時投用諸如Ab1之IL-6拮抗劑。
於本發明之一實施例，病患血清之D-二聚物量可於對病患投用IL-6拮抗劑4週內降低至少於正常參考範圍之上限。
於本發明之一實施例，此方法可造成延長改善病患之凝血狀況。
於本發明之一實施例，病患之凝血狀況可於投用IL-6拮抗劑約2週內可測量地改善。
於本發明之一實施例，病患之凝血狀況可於對病患投用IL-6拮抗劑後約12週維持可測量之改善。
於本發明之一實施例，病患之存活能力可被改善。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可為一反意核酸。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可為一，例如，包含一編碼IL-6、IL-6受體α、gp130、p38 MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3，或SYK之序列之至少約10個核苷酸之反意核酸。
於本發明之一實施例，反應核酸可包含DNA、RNA、肽核酸、鎖核酸、嗎啉基(磷醯二胺嗎啉寡核苷酸)、甘油核酸、蘚糖核酸，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含ActemraTM(托西利單抗)、Remicade、ZenapaxTM(達株單抗)，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含一具有一包含IL-6、IL-6受體α、gp130、p38 MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK，或其等之任何組合之片段之序列之多肽，諸如，長度係至少40個胺基酸之片段或全長度之多肽。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可包含可溶性之IL-6、IL-6受體α、gp130、p38 MAP激酶、JAK1、JAK2、JAK3、SYK，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，IL-6拮抗劑可與一增加半衰期之部份偶合。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用抗-IL-6抗體前測量病患血清之CRP量，及若病患血清之CRP量係至少約5毫克/公升時投用抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。
於本發明之一實施例，病患血清之CRP量可於投用IL-6拮抗劑1週內降至少於約5毫克/公升。
於本發明之一實施例，病患血清之CRP量可於投用IL-6拮抗劑1週內降至低於1毫克/公升。
於本發明之一實施例，治療可造成病患血清之CRP量延長降低。
於本發明之一實施例，病患血清之CRP量可於投用IL-6拮抗劑約1週內降至低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後14天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後21天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後28天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後35天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後42天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後49天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，投用IL-6拮抗劑後56天，病患血清之CRP量可維持低於10毫克/公升。
於本發明之一實施例，病患之存活能力被改善。
於本發明之一實施例，此方法可包含於投用IL-6拮抗劑前測量病患血清之白蛋白量，及若病患血清之白蛋白量少於約35克/公升時投用諸如Ab1之IL-6拮抗劑。
於本發明之一實施例，病患血清之白蛋白量可於投用IL-6拮抗劑約5週內增至多於約35克/公升。
於本發明之一實施例，治療可造成病患血清之白蛋白量延長增加。
於本發明之一實施例，於投用IL-6拮抗劑後42天，病患血清之白蛋白量可維持高於35克/公升。
於本發明之一實施例，於投用IL-6拮抗劑後49天，病患血清之白蛋白量可維持高於35克/公升。
於本發明之一實施例，於投用IL-6拮抗劑後56天，病患血清之白蛋白量可維持高於35克/公升。
於本發明之一實施例，病患血清之白蛋白量可於投用IL-6拮抗劑約5週內增加約5克/公升。
於本發明之一實施例，病患可已診斷出類風濕性關節炎、癌症、末期癌症、肝病、腎病、發炎性腸病、乳糜瀉症、外傷、燒傷、與降低之血清白蛋白有關之其它疾病，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此方法可進一步包含對病患投用一或更多之不受限地包含阿托伐他汀、西立伐他汀、夫路伐他汀、若伐他汀、米伐他汀、皮他伐他汀、皮拉伐他汀、瑞舒伐他汀、西姆伐他汀，或其等之任何組合之他汀。
本發明之另一實施例係有關於一種包含IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)及抗凝血劑之組成物。於本發明之一實施例，此一或更多之抗凝血劑可選自阿昔單抗(ReoProTM)、香豆醇、抗凝血酵素III、阿加曲班、阿斯匹靈、比伐盧定(AngiomaxTM)、氯吡多、達比加群、達比加群酯(PradaxaTM/PradaxTM)、地西盧定(RevascTM/IprivaskTM)、雙嘧達莫、埃替非巴(IntegrilinTM)、磺達肝癸鈉、肝素、水蛭素、艾卓肝素、匹盧定(RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群、苯茚滿二酮、苯丙羥基香豆素、梯可比定、替羅非班(AggrastatTM)、華法林、辛美拉加群、辛美拉加群(ExantaTM/ExartaTM)，或其等之任何組合。
本發明之另一實施例係有關於一種包含IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)及一化療劑之組成物。於本發明之一實施例，化療劑可選自VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑、紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他演、亞葉酸鈣、類固醇、環磷醯胺、美法侖、長香花生物鹼(例如，長春鹼、長春新鹼、長春地辛及長春瑞濱)、莫司汀、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性之男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性之動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素(例如，IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗劑、毒素共軛之單株抗體、腫瘤抗原專一性單株抗體、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠單抗、抗-CD20抗體、Rituxan、歐克立茲馬、歐法突坶馬、DXL625、Herceptin，或其等之任何組合。
圖式簡單說明
第1圖顯示各種獨特之抗原決定基係藉由收集藉由抗體選擇方案製備之抗-IL-6抗體而辨認。抗原決定基變異度係藉由抗體-IL-6結合競爭研究(ForteBio Octet)確認。
第2圖顯示兔子抗體可變化輕序列及可變化重序列與同源人類序列及人類化序列間之可變化輕序列及可變化重序列間之比對。框架區域係識別為FR1-FR4。互補決定區域係識別為CDR1-CDR3。胺基酸殘基係如所示般編號。起始之兔子序列對於可變化輕序列及可變化重序列個別稱為RbtVL及RbtVH。從框加1橫跨至框架3之末端之最相似之人類生殖細胞抗體序列之三者係比對於兔子序列下。被認為與兔子序列最相似之人類序列係先顯示。於此實施例，最相似之序列對於輕鏈係L12A且對於重鏈係3-64-04。人類CDR3序列未被顯示。最接近之人類框架4序列係比對於兔子框架4序列下。垂直虛線指示其間兔子殘基與於相同位置之一或更多之人類殘基相同之殘基。粗體字殘基指示於該位置之人類殘基係與於相同位置之兔子殘基相同。最終之人類化序列對於可變化輕序列及可變化重序列個別稱為VLh及VHh。劃底線之殘基指示此殘基係與於該位置之兔子殘基相同，但與於三比對之人類序列之該位置之人類殘基不同。
第3圖證明對於一例示之IL-6方案之產生之IgG及抗原之專一性間之高相關性。11個孔中之9個顯示與抗原辨認之專一性IgG相關性。
第4圖提供於100μg/kg s.c.劑量之人類IL-6後1小時以不同劑量經靜脈投用抗體Ab1之α-2-巨球蛋白(A2M)劑量反應曲線。
第5圖提供抗體Ab1發展組與對照組之生存數據。
第6圖提供抗體Ab1發展組與對照組之另外之生存數據。
第7圖提供每三天靜脈注射10毫克/公斤之多株人類IgG(270-320毫克腫瘤尺寸)相對於每三天靜脈注射10毫克/公斤之抗體Ab1(270-320毫克腫瘤尺寸)之生存數據。
第8圖提供每三天靜脈注射10毫克/公斤之多株人類IgG(400-527毫克腫瘤尺寸)相對於每三天靜脈注射10毫克/公斤之抗體Ab1(400-527毫克腫瘤尺寸)之生存數據。
第9圖提供食蟹獼猴之抗體Ab1之藥物動力學描述。血漿之抗體Ab1量係經由抗原捕捉ELISA量化。此蛋白質顯示12與17天間之半衰期，其係與其它完全長度人類化抗體一致。
第10(A-D)圖個別提供抗體Ab4、Ab3、Ab8及Ab2之結合數據。第10E圖提供抗體Ab1、Ab6及Ab7之結合數據。
第11圖以表格型式綜述第10(A-E)圖之結合數據。
第12圖呈現用於實施例14之肽圖譜實驗之15個胺基酸肽之序列。
第13圖呈現實施例14製備之漬點之結果。
第14圖呈現實施例14製備之漬點之結果。
第15A圖顯示Ab1對於各種物種之IL-6之親和力及結合動力學。
第15B圖證明於T1165細胞增殖分析藉由Ab1抑制IL-6。
第16圖顯示自數個劑量組對健康男性患者單次投用Ab1形成之Ab1之平均血漿濃度。
第17圖顯示對於第16圖所示之劑量組之於血漿Ab1濃度時間曲線(AUC)下之平均面積。
第18圖顯示第16圖所示之劑量組之平均峰值Ab1濃度(C最大)。
第19圖綜述第16圖所示劑量組之Ab1藥物動力學測量。
第20圖示對具末期癌症之病患單次投用而產生之Ab1之平均血漿濃度。
第21圖例示與其它抗-IL-6抗體相比之Ab1之空前之排除半衰期。
第22圖顯示於對具末期癌症病患投用Ab1後之增加的血紅素濃度。
第23圖顯示於對具末期癌症之病患投用Ab1後之平均血脂濃度。
第24圖顯示對具末期癌症之病患投用Ab1後之平均嗜中性白血球計量。
第25圖證明健康個人中血清CRP量之抑制。
第26(A-B)圖證明於末期癌症病患之血清CRP量之抑制。
第27圖顯示於小鼠癌症惡質症模型中藉由Ab1預防體重喪失。
第28圖顯示癌症惡質症模型中之代表性之以Ab1治療及對照組之小鼠之身體外觀。
第29圖證明Ab1促進末期癌症病患之重量增加。
第30圖證明Ab1降低末期癌症病患之疲勞。
第31圖證明Ab1促進末期癌症病患之手握強度。
第32圖證明Ab1抑制小鼠之急性期蛋白質(血清類澱粉A)。
第33圖證明Ab1增加末期癌症病患之血漿白蛋白濃度。
第34及35圖顯示兔子抗體輕及可變化之重序列與同源人類序列及人類化序列間之比對。框架區域識別為FR1-FR4。互補決定區域識別為CDR1-CDR3。
第36(A-B)及37(A-B)圖個別顯示不同型式之Ab1之輕及可變化之重序列間之比對。框架區域識別為FR1-FR4。互補決定區域識別為CDR1-CDR3。CDR區域內之序列差異被強調。
第38圖顯示每一劑量濃度(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均CRP值。
第39圖顯示相對應於第38圖之每一劑量濃度組之中間CRP值。
第40圖顯示具各種癌症之病患於以80、160或320毫克投藥12週後之血清CRP量之降低。
第41圖顯示具類風濕性關節炎之病患人口於以80、160及320毫克投藥12週後之血清CRP量之降低。
第42圖證明以80、160及320毫克投藥12週後Ab1增加平均血紅素。
第43圖證明第42圖呈現之數據之自基線血紅素之平均變化。
第44圖證明於具有低於11克/公升之基線血紅素之病患以160及320毫克投藥12週後Ab1增加平均血紅素。
第45圖證明以80、160及320毫克投藥16週後Ab1增加平均血紅素。
第46圖證明以80、160及320毫克於投藥12週後Ab1增加白蛋白濃度。
第47圖證明相對應於第46圖之每一劑量濃度組自平均白蛋白濃度之基線之變化。
第48圖證明於具有低於35克/公升之基線白蛋白之病患於以160及320毫克投藥12週後Ab1提供於平均白蛋白濃度之持續增加。
第49圖證明於12週期間Ab1單株抗體之每一劑量濃度組(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之平均重量變化數據。
第50圖證明相對應於第49圖之每一劑量濃度組之平均體重變化百分率。
第51圖證明對於相對應於第49圖之劑量濃度組之平均瘦身體質量數據之變化。
第52圖證明於以80、160及320毫克投藥8週後於病患人口之某些劑量濃度組之平均Facit-F FS次量表評分。
第53圖證明相對應於第52圖之自基線Facit-F FS次量表評分之變化。
第54圖證明以80、160及320毫克投藥16週後Ab1優於安慰劑地降低D-二聚物之量。
第55圖證明相對應於第54圖之每一劑量濃度組於D-二聚物濃度自基線之變化百分率。
第56圖證明以ACR度量為基準之治療具類風濕性關節炎之病患產生優於安慰劑之顯著改善。
第57圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 20。
第58圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 50。
第59圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 70。
第60圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之自ACR度量之組份之基線之變化。
第61圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於HAQ-DI評分之變化。
第62圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於DAS28評分之變化。
第63圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於達成EULAR良好或中等反應之病患百分率之變化。
 詳細說明 定義
需瞭解本發明係不限於所述之特別方法、方案、細胞株、動物之種類或屬，試劑，因為此等可改變。亦需瞭解此間使用之用辭僅係用於說明特別實施例，且非用以限制本發明之範圍，其僅係藉由所附申請專利範圍限制。
“變體”一辭(當應用於包含Ab1之抗體)包含單鏈抗體、二聚物、多聚體、序列變體、區域取代變體等。單鏈抗體，諸如，SMIP、鯊角抗體、奈米抗體(例如，駱駝抗體)。序列變體可藉由百分率相同度(或相似度)(例如，99%、95%、90%、85%、80%、70%、60%等)或藉由允許月保守性或非保守性取代而專一化。區域取代變體包含以一相關蛋白質之一相似區域替換一蛋白質之一區域。一相似區域可藉由序列、結構(實際或預期)，或功能之相似性而識別。例如，區域取代變體包含一或更多之CDR及/或框架區徎之取代。
於此使用時，除非內容明確作其它規定，單數型式"一"、"及"，與"該"包含複數之提及物。因此，例如，提及"一細胞"係包含複數個此等細胞，及提及"該蛋白質係包含提及一或更多之蛋白質及熟習此項技藝者所知之等化物等。除非明確作其它規定，此間使用之所有技術及科學用辭具有熟習與本發明所屬技術者所普遍瞭解之相同意義。
白細胞介素-6(IL-6)：　於此使用時，白細胞介素-6(IL-6)不僅包含下列之可以基因資料庫蛋白質登錄號(GenBank Protein Accession No.)NP_000591獲得之212胺基酸序列：MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM(序列識別編號：1)，亦包含此IL-6胺基酸序列之任何前原期、原期，及成熟之型式，與包含具此序列之等位變體之突變體及變體。
IL-6拮抗劑：　於此使用時，“IL-6拮抗劑”一辭及其合乎文法之變體包含預防、抑制，或減少IL-6訊息傳送之作用之任何組成物。一般，此等拮抗劑可降低IL-6、IL-6受體α、gp130，或IL-6訊息傳遞中涉及之分子之量或活性，或可降低前述者間之錯合物之量或活性(例如，降低IL-6/IL-6受體錯合物之活性)。拮抗劑包含反意核酸，包含DNA、RNA，或核酸類似物，諸如，肽核酸、鎖核酸、嗎啉基(磷醯二胺嗎啉寡核苷酸)、甘油核酸，或蘚糖核酸。見Heasman,Dev Biol. 2002 Mar 15;243(2):209-14；Hannon及Rossi,Nature. 2004 Sep 16;431(7006):371-8；Paul等人，Nat Biotechnol. 2002 May;20(5):505-8；Zhang等人，J Am Chem Soc. 2005 Mar 30;127(12):4174-5；Wahlestedt等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 May 9;97(10):5633-8；Hanvey等人，1992 Nov 27;258(5087):1481-5；Braasch等人，Biochemistry. 2002 Apr 9;41(14):4503-10；Schoning等人，Science. 2000 Nov 17;290(5495):1347-51。此外，IL-6拮抗劑特別包含阻斷IL-6訊息傳送之肽，諸如，於美國專利第6,599,875；6,172,042；6,838,433；6,841,533；5,210,075等之任何者中所述者。再者，依據本發明之IL-6拮抗劑可包含p38 MAP激酶抑制劑，諸如，US20070010529等中所報導者，其係示此激酶於細胞激素生產且更特別係於IL-6生產之角色。再者，依據本發明之IL-6拮抗劑包含於US20050090453報導之配醣生物鹼化合物，與可使用此間報導之IL-6拮抗劑篩選分析隔離之其它IL-6拮抗劑化合物。其它IL-6拮抗劑包含諸如抗-IL-6抗體、抗-IL-6受體α抗體、抗-gp130抗體，及抗-p38 MAP激酶抗體之抗體，其(不受限地)包含此間揭露之抗-IL-6抗體、ActemraTM(托株單抗)、Remicade、ZenapaxTM(達株單抗)，或其等之任何組何。其它IL-6拮抗劑包含於IL-6訊息傳送中涉及之分子之部份或片段，諸如，IL-6、IL-6受體α，及gp130，其可為原生、突變體，或變體序列，且可選擇性地與其它部份(諸如，增加半衰期之部份，例如，Fc區域)偶合。例如，IL-6拮抗劑可為可溶性之IL-6受體或片段、可溶性之IL-6受體：Fc融合蛋白質、IL-6之小分子抑制劑、抗-IL-6受體抗體或其抗體片段或變體、反意核酸等。其它IL-6拮抗劑包含艾維米(avemirs)，諸如，C326(Silverman等人，Nat Biotechnol. 2005 Dec;23(12):1556-61)及小分子，諸如，合成維生素A酸AM80(他米巴羅汀)(Takeda等人，Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006 May;26(5):1177-83)。此等IL-6拮抗劑可藉由此項技藝所知之任何手段投藥，包含使一患者與編碼或造成表現任何前述多肽或反意序列之核酸接觸。
血栓：於此使用時，血栓係指血管內之血栓(血塊)。此用辭不受限地包含動脈及靜脈血栓，包含深層靜脈血栓、門靜脈血栓、頸靜脈血栓、腎靜脈血栓、中風、心肌梗塞、Budd-Chiari氏症候、帕哲特-施羅特症，及大腦靜脈竇血栓。與血栓有關之疾病及狀況不受限地包含急性靜脈血栓、肺栓塞、懷孕期間之血栓、懷孕期間之血栓、皮膚出血性壞疽、急性或慢性之泛發性血管內血液凝固症(DIC)、手術之血塊形成、長期臥床休息、長期固定、靜脈血栓、猛爆性菌血症、急性血栓中風、急性冠狀動脈閉塞、急性周邊動脈閉塞、嚴重肺栓塞、腋靜脈血栓、嚴重骼骨靜脈血栓、阻塞之動脈導管、阻塞之靜脈導管、心肌症、肝靜脈阻塞性疾病、低血壓、減少之心輸出量、減少之血管阻力、肺高血壓症、減低之肺順從性、白血球減少，及血小板過低。
D-二聚物：於此使用時，D-二聚物係指一於藉由纖維蛋白分解酶分解血塊期間產生之纖維蛋白降解產物。具特別反應性對抗D-二聚物之單株抗體可輕易獲得，例如，DD-3B6/22(Elms等人，1986,Am J Clin Pathol. 85:360-4)。D-二聚物量之臨床測量可依慣例實施，例如，使用紅血細胞凝集測試、ELISA等(於Dempfle,Semin Vasc Med,2005 Nov;5(4):315-20之評論)。D-二聚物之測量可依測量方法及測試實驗室而改變，然而，一般之“參考範圍”可對任何特定之方法及測試實驗室輕易建立，例如，藉由健康個人之測量。因此，升高之D-二聚物量被熟習此項技藝者瞭解係指D-二聚物量係高於特定方法及測試實驗室之參考範圍。
凝血狀況：於此使用時，凝血狀況一般係指凝血系統之功能。凝血之組織因子(非固有)及接觸活化(固有)之路徑係凝血狀況之組份。一般之凝血狀況係指一般健康個人之凝血功能，即，維持控制流血之能力及過度凝血趨勢(血栓趨勢)間之平衡。異常凝血狀況可為凝血趨勢之減少或增加。一特別異常之凝血狀況係高凝血症，其係指大量增加過度血塊形成之危險性，造成高血栓危險性。凝血狀況可藉由此項技藝已知之各種測試及分析評估，諸如：活化之部份凝血酶原時間(PTT)測試；凝血酶原時間(PT)測試(12至15秒之典型參考範圍)；自PT測試衍生之測量，諸如，凝血酶原比例(PR)國際正常化比例(INR)(典型參考範圍0.8至1.2)；纖維素原測試(例如，Clauss方法(Clauss A,"Rapid Physiological Coagulation Method for the Determination of Fibrinogen[German],"Acta Haematol,1957,17:237-46)或Ellis方法(Ellis BC及Stransky A,"A Quick and Accurate Method for the Determination of Fibrinogen in Plasma,"J Lab Clin Med,1961,58:477-88)；活化蛋白質C阻抗性、蛋白質C、蛋白質S，及抗凝血酵素之分析；抗磷酯抗體(狼瘡抗凝血劑及抗牛心脂素抗體)之分析；升高之同半胱胺酸；胞漿素原、異常纖維蛋白血症、肝素共因子II，或血小板高凝集性之分析。用於評估凝血狀況之其它分析包含測量凝血之凝血因子及/或指示劑，諸如，血清之D-二聚物、因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纖維蛋白降解產物、凝血-抗凝血酵素III錯合物、血小板增多、纖維素原、胞漿素原、凝血酶原，及溫韋伯氏因子之量。凝血狀況變差係指反映正常凝結趨勢惡化之凝結指示劑之可測量改變(例如，任何前述分析)，如此，測得之值變異常或比先前者更偏離正常範圍。凝血狀況之改善係指反應正常凝結趨勢之部份或完全恢復之凝結指示劑之可測量改變(例如，任何前述分析)，即，於治療介入後，諸如，投用抗-IL-6抗體，測得之值係於正常範圍內或比治療介入前更接近正常範圍。
疾病或狀況：於此使用時，“疾病或狀況”係指病患已被診斷出或被懷疑特別係具有與升高之IL-6有關之疾病或狀況之疾病或狀況。疾病或狀況不受限地包含藥物或治療(諸如，放射治療)之副作用，與特徵在於包含升高之IL-6之症狀之原發性狀況。
惡質症：於此使用時，惡質症(亦稱為損耗疾病)係指特別係於慢性發炎反應內容之漸進式消瘦、虛弱、普遍之身體不好、營養不良、身體質量喪失、肌肉質量喪失，或骨骼肌肉加速喪失顯著之任何疾病(於Kotler,Ann Intern Med. 2000 Oct 17;133(8):622-34中評論)。其間惡質症頻繁被觀察到之疾病或狀況包含癌症、類風濕性關節炎、AIDS、心臟病、脫水、營養不良、鉛曝露、瘧疾、呼吸疾病、年老、甲狀腺機能不全、結核病、垂體機能減退、經神衰弱症、高血鈉症、低血鈉症、腎臟病、脾、僵直性脊椎炎、發育不正常(發育不全)及其它疾病，特別是慢性疾病。惡質症亦可為原發性(不確定原因引起)。病患重量評估需瞭解排除生長或流體疊積，例如，腫瘤重量、血管外流體累積等。惡質症可藉由測量病患之總身體質量(排除生長或流體連續)、總瘦(無脂肪)身體質量、手臂及腿之瘦質量(四肢之瘦質量，例如，使用雙能量x-射線吸收量儀或生物電子阻抗光譜術測量)，及/或瘦身體質量指數(瘦身體質量除以病患高度平方)而評估。見Kotler,Ann Intern Med. 2000 Oct 17;133(8):622-34;Marcora等人，Rheumatology(Oxford). 2006 Nov;45(11):1385-8。
虛弱：於此使用時，虛弱係指身體疲勞，典型上係以肌肉強度及/或耐力喪失而顯示。虛弱可為中樞性(影響身體之大部份或所有之肌肉)或周邊性(影響肌肉之子集)。虛弱包含“真正虛弱”，其間，病患之肌肉於峰值及/或維持力輸出之一些測量減少，及“察覺性之虛弱”，其間，病患察覺對於一工作之實施需費更大力量，即使客觀之測量強度維持接近相同，且可由病患客觀地測量或自行報告。例如，虛弱可使用手握強度測量客觀地測量(醫學上認可之用於評估肌肉強度之測試)，典型上係使用一手握動力計。
疲勞：於此使用時，疲勞係指精神疲勞(對於身體疲勞，見“虛弱”)。疲勞包含困倦(想睡)及/或減低注意力。疲勞可藉由使用此項技藝所知之各種測試測量，諸如，FACIT-F(慢性疾病治療-疲勞之功能評估)測試。見，例如，Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,＆ Slavin,M.(2002).癌症病患之疲勞與一般人口之疲勞之比較(Fatigue in cancer patients compared with fatigue in the general population). Cancer,94(2),528-538;Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H ＆ Merkel,D.E.(2002).結合固定及分佈為主之方法衍生對癌症治療之貧血及疲勞評分之功能評估之最小臨床重要差異(Combining anchor and distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cancer Therapy anemia and fatigue scales). Journal of Pain ＆ Symptom Management,24(6) 547-561。
發熱：於此使用時，“發熱”係指體溫基準點升高至少1至2℃。發熱通常係與以冷感、發抖、增加心跳速率及呼吸速率展現之主觀低體溫感覺有關，藉此，個人之身體達增加之基準點。如於醫學技藝所瞭解，正常體溫典型上係隨活動量及一天之時間而改變，且最高溫度係於下午及傍晚觀察到，且最低溫係於睡眠週期之下半部期間觀察到，且溫度測量會受外在因素影響，諸如，口呼吸、食物或飲料之消耗、抽煙，或周圍溫度(依測量型式而定)。再者，個人之正常溫度基準點可變化至最高達約0.5℃，因此，醫療專業人員會基於此等因素闡釋個人溫度，以診斷發熱是否存在。一般而言，發熱典型上係藉由高於38℃之核心體溫，高於37.5℃之口溫，或高於37.2℃之腋下溫度而診斷。
改善：於此使用時“經改善”、“改善”，及其它合乎文法之變體包含治療造成之任何有利改變。有利改變係病患狀況比缺乏治療者更佳之任何方式。“經改善”包含預防非所欲之狀況，減緩狀況變差之速率，延遲非所欲狀況之發展，及恢復至基本上正常之狀況。例如，於惡質症之改善包含諸如總身體質量(排除一般於評估惡質症期間排除之重量，例如，腫瘤重量、血管外流體累積等)、瘦身體質量，及/或四肢瘦質量之病患質量之任何增加，與質量喪失速率之任何延遲或減緩，或預防或減緩與病患被診斷出之疾病或狀況有關之質量喪失。另外例如，於虛弱之改善包含病患強度之任何增加，與強度喪失速率之任何延遲或減緩，或預防或減緩與病患被診斷出之疾病或狀況有關之強度喪失。另外例如，於疲勞之改善包含病患疲勞之任何減少，與於疲勞增加速率之任何延遲或減緩，或預防或減緩與病患被診斷出之疾病或狀況有關之疲勞增加。另外例如，於發熱之改善包含病患發熱之任何減少，與發熱增加速率之任何延遲或減緩，或預防或減緩與病患被診斷出之疾病或狀況有關之發熱增加。
C-反應蛋白質(CRP)：於此使用時，C-反應蛋白質(CRP)不僅包含下列之可以基因資料庫蛋白質登錄號NP_000558獲得之224胺基酸序列：MEKLLCFLVLTSLSHAFGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVSLKAPLTKPLKAFTVCLHFYTELSSTRGYSIFSYATKRQDNEILIFWSKDIGYSFTVGGSEILFEVPEVTVAPVHICTSWESASGIVEFWVDGKPRVRKSLKKGYTVGAEASIILGQEQDSFGGNFEGSQSLVGDIGNVNMWDFVLSPDEINTIYLGGPFSPNVLNWRALKYEVQGEVFTKPQLWP(序列識別編號：726)，亦包含此CRP胺基酸序列之任何前原期、原期，及成熟之型式，與包含具此序列之等位變體之突變體及變體。CRP量(例如，於血清、肝臟、腫瘤，或身體之其它處)可使用例行方法及可購得之試劑輕易測量，例如，ELISA、抗體測試紙條、免疾濁度測驗、快速免疾擴散、視覺凝集法、西方墨點、北方墨點等。如上所述，CRP量可另外依據本發明於具有發展性血栓或有此危險性之病患測量。
白細胞介素-6受體(IL-6R)；亦稱為IL-6受體α(IL-6RA)：於此使用時，“白細胞介素-6受體”(“IL-6R”；亦稱為“IL-6受體α”或“IL-6RA”)不僅包含可以Swiss-Pro蛋白質登錄號P08887獲得之下列468胺基酸序列：MLAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATVHWVLRKPAAGSHPSRWAGMGRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSCFRKSPLSNVVCEWGPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGDSSFYIVSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVTWQDPHSWNSSFYRLRFELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDAWSGLRHVVQLRAQEEFGQGEWSEWSPEAMGTPWTESRSPPAENEVSTPMQALTTNKDDDNILFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGSLAFGTLLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPRPTPVLVPLISPPVSPSSLGSDNTSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR(序列識別編號：727)，亦包含此胺基酸序列之任何前原期、原期，及成熟之型式，與包含具此序列之等位變體之突變體及變體。
gp130：於此使用時，gp130(亦稱為白細胞介素-6受體亞單元β)不僅包含可以Swiss-Pro蛋白質登錄號P40189獲得之下列918胺基酸序列：MLTLQTWVVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYFHVNANYIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNIQLTCNILTFGQLEQNVYGITIISGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCEWDGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTVYFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNPSIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRWKSHLQNYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKDNMLWVEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITDWQQEDGTVHRTYLRGNLAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGNETAVNVDSSHTEYTLSSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVCLAFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHNFNSKDQMYSDGNFTDVSVVEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ(序列識別編號：728)，亦包含此胺基酸序列之任何前原期、原期，及成熟之型式，諸如，以所示序列之胺基酸23至918編碼之成熟型式，與包含具此序列之等位變體之突變體及變體。
格拉斯哥預後評分(GPS)：於此使用時，格拉斯哥預後評分(GPS)係指以發炎為主之預後評分，其對於<35毫克/公升之血清白蛋白量係授予1點，且對於高於10毫克/公升之CRP量係授予1點。因此，0之GPS係指示正常之白蛋白及CRP，1之GPS係指示降低之白蛋白或升高之CRP，且2之GPS係指示降低之白蛋白及升高之CRP。
有效量：於此使用時，“有效量”、“使有效之量”、“使有效之X之量”等係指當化合物被投用時，使需要治療之疾病之一或多種症狀有效減緩或降低至某一程度或延遲需要預防之疾病之臨床標記或症狀之起始之活性成份之量。因此，有效量係指展現諸如下述之效果之活性成份之量，(i)使疾病進展速率逆轉；(ii)使疾病之進一步進展抑制至某一程度；及/或(iii)使與此疾病有關之一或更多之症狀減緩至某一程度(或較佳係去除)。有效量可以考量之化合物於已知之活體內及於試管內之模型系統對需治療之疾病進行實驗而以實驗決定。“有效量”一辭被使用之內容可指示一特別所欲之效果。例如，“有效預防或治療高凝血狀態之抗-IL-6抗體之量”及相似用辭係指當投用至一患者時會造成此患者之凝血狀況之可測量之改善或預防、減慢、延遲，或阻止處於危險之此患者之凝血狀況變差之抗-IL-6抗體之量。相似地，“有效降低血清CRP量之抗-IL-6抗體之量”及相似用辭係指當投用至一患者時會造成此患者之血清CRP量之可測量之減少或預防、減慢、延遲，或阻止處於危險之此患者之血清CRP量增加之抗-IL-6抗體之量。相似地，“有效增加血清白蛋白量之抗-IL-6抗體之量”及相似用辭係指當投用至一患者時會造成此患者之血清白蛋白量之可測量之增加或預防、減慢、延遲，或阻止處於危險之此患者之血清白蛋白量減少之抗-IL-6抗體之量。相似地，“有效降低虛弱之抗-IL-6抗體之量”及相似用辭係指當投用至一患者時會造成以手握強度測試決定時之虛弱之可測量之減少之抗-IL-6抗體之量。相似地，“有效增加重量之抗-IL-6抗體之量”及相似用辭係指當投用至一患者時會造成病患重量之可測量之增加之抗-IL-6抗體之量。有效量會依個人之重量、性別、年齡及醫療歷史與病患狀況嚴重性、疾病型式、投藥模式等而改變。有效量可使用例行實驗輕易決定，例如，藉由滴定(投用增加之劑量至發現有效劑量為止)及/或藉由參考對先前病患有效之量。一般，本發明之抗-IL-6抗體會於以病患體重計之於約0.1毫克/公斤與約20毫克/公斤間範圍之劑量投藥。
凝血狀況之延長改善：於此使用時，“凝血狀況之延長改善”及相似用辭係指相較於起始凝血狀況(即，於治療開始前之凝血狀況)患者凝血狀況之可測量之改善，其可從治療開始(例如，投用諸如Ab1之IL-6拮抗劑)約1週內檢測且使改善維持延長之時間，例如，從治療開始至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
血清CRP之延長降低：於此使用時，“血清CRP之延長降低”及相似用辭係指相較於起始血清CRP量(即，治療開始前之血清CRP量)之血清CRP量之可測量之減少，其可從治療開始(例如，投用抗-IL-6抗體)約1週內檢測且使低於起始血清CRP量維持延長之時間，例如，從治療開始至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
血清白蛋白之延長增加：於此使用時，“血清白蛋白之延長增加”及相似用辭係指相較於起始血清白蛋白量(即，治療開始前之血清白蛋白量)之血清白蛋白量之可測量之減少，其可從治療開始(例如，投用抗-IL-6抗體)約1週內檢測，且使高於起始血清白蛋白量維持延長時間，例如，從治療開始至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
惡質症之延長改善：於此使用時，“惡質症之延長改善”係指相較於起始量(即，治療開始前之量)之病患之身體質量、瘦身體質量、四肢瘦身體質量，及/或瘦身體質量指數之可測量之改善，其可於約4週內檢測，且使改善維持延長時間，例如，自治療開始至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
虛弱之延長改善：於此使用時，“虛弱之延長改善”係指相較於起始量(即，治療開始前之量)之肌肉強度之可測量之改善，其可於約2週內檢測，且使改善維持延長時間，例如，從治療開始至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
疲勞之延長改善：於此使用時，“疲勞之延長改善”係指相較於起始量(即，治療開始前之量)之疲勞之可測量之改善，其可於約1週內檢測，且使改善維持延長時間，例如，從治療開始至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
發熱之延長改善：於此使用時，“發熱之延長改善”係指相較於起始量(即，治療開始前之量)之發熱(例如，溫度升高之峰值溫度或時間)之可測量之改善，其可於約1週內檢測，且使改善維持延長時間，例如，從治療開始至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約40天，至少約50天，至少約60天，至少約70天，至少約11週，或至少約12週。
交配勝任酵母菌種：於本發明，此係意欲廣泛地包含可於培養物生長之任何二倍體或四倍體酵母菌。此酵母菌種可以單倍體、二倍體，或四倍體之型式存在。特定倍體之細胞於適當條件下可以此型式增殖無限數量之世代。二倍體細胞亦可以孢子生殖形成單倍體細胞。循序交配可經由二倍體品種之進一步交配或融合造成四倍體品種。於本發明，二倍體或多倍體之酵母菌細胞較佳係藉由交配或原生質球融合產生。
於本發明之一實施例，交配勝任酵母菌係包含阿茲歐酵母屬；阿斯可巴酵母屬；固囊酵母屬；德巴利酵母屬；德克酵母屬；阿舒假囊酵母屬；伊薩酵母屬；哈蕯克酵母屬；克魯維斯酵母屬；柯達酵母屬；婁德酵母屬；管囊酵母屬；畢赤酵母屬；釀酒酵母屬；沙特尼酵母屬；德特拉比西普拉酵母；孢圓酵母屬；威爾酵母；及魯氏酵母之酵母科家族之一員。可能用於本發明之其它型式之酵母菌包含耶氏酵母、海洋拮抗酵母、念珠菌、漢遜酵母、非若巴西姆酵母、非若巴西德拉酵母、鎖擲孢酵母、布勒酵母、白冬孢酵母，及非若巴西德拉酵母。
於本發明之一較佳實施例，交配勝任酵母菌係畢赤酵母屬之一員。於本發明之進一步實施例，畢赤酵母屬之交配勝任酵母菌係下列種之一：巴斯德畢赤酵母、嗜甲醇畢赤酵母，及多形漢遜酵母(安格斯畢赤酵母)。於本發明之一特別較佳實施例，畢赤酵母屬之交配勝任酵母菌係巴斯德畢赤酵母種。
單倍體酵母菌細胞：具有單份之其正常基因(染色體)互補體之每一基因之細胞。
多倍體酵母菌細胞：具有多於一份之其正常基因(染色體)互補體之細胞。
二倍體酵母菌細胞：具有二份(對偶基因)之正常基因互補體之基本上每一基因之細胞，典型上係藉由二單倍體細胞之融合(交配)方法而形成。
四倍體酵母菌細胞：具有四份(對偶基因)之其正常基因互補體之基本上每一基因之細胞，典型上係藉由二單倍體細胞之融合(交配)方法形成。四倍體可載荷二、三、四，或更多之不同表現系統(expression cassette)。此等四倍體於釀酒酵母藉由選擇***配純質性雌雄異體a/a及α/α二倍體及於畢赤酵母藉由單倍體之依序交配獲得營養缺陷型之二倍體而獲得。例如，[met his]單倍體可與[ade his]單倍體交配以獲得二倍體[his]；且[met arg]單倍體可與[ade arg]單倍體交配以獲得二倍體[arg]；然後，二倍體[his]x二倍體[arg]而獲得四倍體原養型微生物。熟習此項技藝者會瞭解有關於二倍體細胞之利益及使用亦可應用於四倍體細胞。
酵母菌交配：藉以使二個單倍體酵母菌細胞自然融合形成一個二倍體酵母菌細胞之方法。
減數***：藉此使一個二倍體酵母菌細胞進行殘餘細胞***形成四個單倍體孢子產物。然後，每一孢子可生殖及形成單倍體植物性生長細胞株。
可選擇之標記物：可選擇之標記物係於，例如，經由轉化結果時接受基因之細胞上授予生長表現型(生理性生長特性)之基因或基因片段。可選擇之標記物能使細胞於一選擇性生長介質中於未接受此可選擇之標記物基因之細胞不能生長之條件下生存及生長。可選擇之標記物基因一般落於多種型式，包含正可選擇之標記物基因，諸如，當二ts突變體交叉或一ts突變體被轉換時於細胞上授予對抗生素或其它藥物、溫度之阻抗性之基因；負可選擇之標記物基因，諸如，授予細胞於無不具有生物合成基因之所有細胞所需之特定營養之介質中能生長之能力之生物合成基因，或授予細胞不能藉由不具有野生型基因之細胞生長之能力之經誘變之生物合成基因等。適合之標記物不受限地包含：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3等。
表現載體：此等DNA載體含有促進外來蛋白質於標靶宿主細胞內之表現之操作之元素。方便地，用於轉化之DNA之序列及生產之操作係先於細菌宿主(例如，大腸桿菌)內實施，且通常，載體會包含促進此等操作之序列，包含細菌複製源及適當細菌標記物。選擇標記物編碼用於在選擇性培養基內之經轉化之宿主細胞之生存或生長所需之蛋白質。未以含有選擇性基因之載體轉化之宿主細胞於培養基內會不能生存。典型之選擇基因編碼(a)授予對抗生素或其它毒素之阻抗性，(b)互補營養缺陷型之缺陷，或(c)提供不能自錯合物介質獲得之重要營養素之蛋白質。例示之載體及用於轉化酵母菌之方法係描述於，例如，Burke,D.,Dawson,D.,& Stearns,T.(2000). Methods in yeast genetics:a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press。
用於本發明方法之表現載體進一步包含酵母菌特定序列，包含用於識別經轉化之酵母菌株之可選擇性之營養缺陷型或藥物之標記物。藥物標記物可進一步用以放大酵母菌宿主細胞內之載體之份數。
感興趣之多肽編碼序列係與提供多肽於酵母菌細胞內之表現之轉錄及轉譯之調控序列係可操作地連接。此等載體組份可不受限地包含下列之一或更多者：增強子元素、促進子，及轉錄終結序列。用於分泌多肽之序列亦可被包含，例如，訊息序列等。酵母菌之複製源係選擇性，因為表現載體通常係融入酵母菌基因組內。
於本發明之一實施例，感興趣之多肽與提供自酵母菌二倍體細胞最佳化分泌多肽之序列可操作地連接或融合。
核酸係於被置於與另一核酸序列呈功能性關係內時被”可操作連接”。例如，若其以參與多肽分泌之前蛋白質表現，訊息序列之DNA係與多肽之DNA可操作連接；若其影響序列轉錄，促進子或增強子係與編碼序列可操作連接。一般，"可操作連接"意指將被連接之DNA序列係相鄰，且於分泌前導之情況，係相鄰且於讀取框內。但是，增強子無需係相鄰。連接係藉由於方便之限制位置處結紮或另外地經由熟習此項技藝者熟悉之PCR/重組方法而完成(GatewayR Technology;Invitrogen,Carlsbad California)。若此等位置不存在，合成寡聚核苷酸接頭或連接子係依據傳統實施使用。
促進子係位於一結構基因(一般係於約100至1000bp內)之起始密碼子上游(5’)之未經轉錄序列，其控制被可操作連接之特定核酸序列之轉錄及轉譯。此等促進子落於數種類內：誘發型、組成型，及抑制型之促進子(其增加轉錄量以回應缺乏抑制子)。誘發型之促進子可於其控制下增加自DNA之轉錄量以回應培養條件之某些改變，例如，營養素存在或缺乏或溫度改變。
酵母菌促進子片段亦可作為用於使表現載體同源重組及融入酵母菌基因組之相同位置內之位置；另外，一可選擇之標記物係作為用於同源重組之位置。畢赤轉化稱描述於Cregg等人之(1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385。
來自畢赤之適合促進子之例子包含AOX1及促進子(Cregg等人(1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323)；ICL1促進子(Menendez等人(2003) Yeast 20(13):1097-108)；甘油醛-3-磷酸鹽脫氫酶促進子(GAP)(Waterham等人(1997) Gene 186(1):37-44)；及FLD1促進子(Shen等(1998) Gene 216(1):93-102)。GAP促進子係一強的組成型促進子，且AOX及FLD1促進子係誘發型。
其它之酵母菌促進子包含ADH1、醇脫氫酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk，及自其衍生之嵌合促進子。另外，非酵母菌之促進子可用於本發明，諸如，哺乳動物、昆蟲、植物、爬行動物、兩棲動物、病毒，及鳥類之促進子。最典型，促進子會包含哺乳動物之促進子(對表現基因係潛在內生性)或會包含酵母菌或病毒之促進子，其於酵母菌系統提供有效率之轉錄。
感興趣之多肽不僅可直接，而且以與一異源多肽(例如，一訊息序列或成熟蛋白質或多肽之N-終端具有一特定切割位置之其它多肽)之融合多肽重組地產生。一般，訊息序列可為載體之一組份，或其可為被***載體內之多肽編碼序列之一部份。選擇之異源訊息序列較佳係經由可於宿主細胞內獲得之標準路徑之一辨認及處理者。釀酒酵母α因子前原期訊息已證明於自巴斯德畢赤酵母分泌各種重組蛋白質係有效。其它酵母菌訊息序列包含α交配因子訊息序列、轉化酶訊息序列，及自其它分泌之酵母菌多肽衍生之訊息序列。另外，此等訊息肽序列可被工程化以於二倍體酵母菌表現系統內提供促進之分泌。感興趣之其它分泌訊息亦包含哺乳動物之訊息序列，其可與欲被分泌之蛋白質異源，或可為欲被分泌之蛋白質之原生序列。訊息序列包含前期肽序列，且於某些例子，可包含原期肽序列。許多此等訊息序列係此項技藝已知，包含於免疫血球素鏈發現之訊息序列，例如，K28前原期毒素序列、PHA-E、FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白訊息序列、人類Ig重鏈、人類Ig輕鏈等。例如，見Hashimoto等人之Protein Eng 11(2) 75(1998)；及Kobayashi等人之Therapeutic Apheresis 2(4) 257(1998)。
轉錄可藉由使一轉錄活化子序列***載體內而增加。此等活化子可為DNA之順作用元素，通常係約從10至300bp，其於促進子上作用以增加其轉錄。轉錄增強子於內含子與於其編碼序列內相對上於定向及位置上係獨立，已發現轉錄單元之5'及3'。增強子可於編碼序列之5’或3’位置接合於表現載體內，但較佳係位於距促進子之5’位置。
用於真核宿主細胞之表現載體亦可含有用於終結轉錄及使mRNA穩定所需之序列。此等序列可於真核或病毒DNA或cDNA之未經轉譯區域內自轉譯終結密碼子之3'普遍獲得。此等區域含有以mRNA之未經轉譯部份內之多腺苷酸化片段轉錄之核苷酸片段。
含有一或更多之上列組份之適合載體之建構使用標準結紮投術或PCR/重組方法。經隔離之質體或DNA片段被切割，修整及以所欲型式再結紮產生所需之質體或經由重組方法。為了確認建構質體內之正確序列之分析，結紮混合物被用以轉化宿主細胞，及適當之藉由耐抗生素選擇之成功轉化株(例如，青黴素或ZeocinTM(腐草黴素))。轉化株之質體被製備，藉由限制性內切酶消化而分析及/或序列化。
作為片段之限制及結紮之另一方式，以att位置及重組酶為主之重組方法可用以使DNA序列***載體內。此等方法係描述於，例如，Landy(1989) Ann.Rev.Biochem. 58:913-949；且係熟習此項技藝者所知。此等方法利用分子間之DNA重組，其係藉由λ噬菌體及大腸桿菌之混合物媒介-編碼重組蛋白質。重組發生於交互作用之DNA分子上之特定附接(att)位置間。對於att位置之描述，見Weisberg及Landy(1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda,in Lambda II,Weisberg,ed.(Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Press),211-250頁。於重組位置側面之DNA片段被切換，如此於重組後，att位置係由每一母載體捐出之序列所包含之混雜序列。重組可發生於任何拓樸之DNA間。
Att位置可藉由使感興趣之序列結紮於適當載體內；經由使用特定引子產生含有att B位置之PCR產物；產生複製於含有att位置之適當載體內之cDNA庫等而引入感興趣之序列內。
摺疊，於此使用時係指多肽及蛋白質之三維結構，其間胺基酸殘基間之交互作用係用以使此結構穩定。雖然非共價之交互作用於決定結構時係重要，但通常，感興趣之蛋白質會具有藉由二半胱胺酸殘基形成之分子外及/或分子內之共價二硫化物鍵。對於自然發生之蛋白質及多肽或其衍生物及變體，適當摺疊典型上係造成最佳生物活性之配置，且可方便地藉由活性分析(例如，配位體結合、酶活性等)而監測。
於某些例子，例如，其間所欲產物係具合成源，以生物活性為主之分析會較不具意義。此等分子之適當摺疊可以物理性質、能量考量、模型研究等為基礎而決定。
表現宿主可藉由引入編碼一或更多之促進摺疊及二硫化物鍵形成之酶(即，摺疊酶、伴護子等)之序列而進一步改良。此等序列可如此項技藝所知般使用載體、標記物等於酵母菌宿主細胞內結構性或誘發性地表現。較佳地，包含對於所欲表現圖案係足夠之轉錄調控元素之序列係經由標靶方法穩定地融入酵母菌基因組內。
例如，真核PDI不僅係蛋白質半胱胺酸氧化反應及二硫化物鍵異構化之有效催化劑，而且亦展現伴護蛋白活性。PDI之共同表現可促進具有多個二硫化物鍵之活性蛋白質之產生。亦感興趣係BIP(免疫血球素重鏈結合蛋白質)；親環素等之表現。於本發明之一實施例，每一單倍體母株表現一獨特摺疊酶，例如，一株可表現BIP，且另一株可表現PDI或其等之組合。
"所欲蛋白質"或"標靶蛋白質"之用辭可互換使用且一般係指此間所述之人類化抗體或其結合部份。“抗體”一辭係意欲包含具有符合及辨織抗原決定基之特定形狀之任何含有多肽鏈之分子結構，其中，一或更多之非共價結合交互作用穩定分子結構與抗原決定基間之錯合。原型抗體分子係免疫血球素，且來自所有來源(例如，人類、齧齒動物、兔子、牛、羊、豬、狗、其它哺乳動物、雞、其它鳥類等)之所有型式之免疫血球素，IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等，被認為係“抗體”。用以產生作為依據本發明之起始材料之抗體之較佳來源係兔子。多種抗體編碼序列已被描述，且其它可藉由此項技藝已知之方法培養。其例子包含嵌合抗體、人類抗體及其它非人類之哺乳動物之抗體、人類化抗體、單鏈抗體(諸如，scFvs)、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR(自鯊魚衍生之單鏈抗體)、小模組免疫藥物(SMIPs)，及抗體片段(諸如，Fabs、Fab',F(ab')2等)。見Streltsov VA,等人之鯊魚IgNAR抗體之可變化區域之結構及早期發展同型模式(Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype),Protein Sci. 2005 Nov;14(11):2901-9. Epub 2005 Sep 30；Greenberg AS等人之於鯊魚中進行重新排列及廣泛細胞體多異化之新抗源受體基因家族(A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks),Nature. 1995 Mar 9;374(6518):168-73；Nuttall SD等人之自沃比貢鯊魚隔離新抗原受體，及作為用以顯示蛋白質迴圈庫之支架(Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks,and use as a scaffold for the display of protein loop libraries),Mol Immunol. 2001 Aug;38(4):313-26；Hamers-Casterman C等人之(缺乏輕鏈之自然發生之抗體Naturally occurring antibody devoid of light chains),Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8；Gill DS等人之使用蛋白質支架之生物藥學藥物發現(Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds),Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec;17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19。
例如，抗體或抗原結合片段或其變體可藉由基因工程產生。於此技術，如其它方法般，產生抗體之細胞對所欲抗原或免疫源敏感化。與產生抗體之細胞隔離之信使RNA被作為用以使用PCR放大製造cDNA之模板。每一者含有維持起始抗原專一性之一重鏈基因及一輕鏈基因之載體庫係藉由使放大之免疫血球素cDNA之適當區段***表現載體內而產生。組合庫係藉由使重鏈基因庫與輕鏈基因庫組合而建構。此造成共同表現重及輕鏈(類似結合抗體分子之片段之Fab片段或抗原)之複製物庫。載荷此等基因之載體被共同轉染於宿主細胞內。當抗體基因合成於經轉染之宿主內誘發時，重及輕鏈蛋白質自行組合產生活性抗體，其可藉由以抗原或免疫源篩選而檢測。
感興趣之抗體編碼序列包含以原生序列與藉由基因密碼退化於序列係不同於所揭示之核酸之核酸或其變體編碼者。變體多肽可包含胺基酸(aa)取代、加成，或刪除。胺基酸取代可為保守性胺基酸取代或用以去除非基本性胺基酸之取代，諸如，改變糖基化位置，或藉由取代或去取對於功能係不需要之一或更多之半胱胺酸而使錯誤摺疊達最小。變體可被設計以維持或具有蛋白質之一特定區域(例如，一功能區域、催化胺基酸殘基等)之促進之生物活性。變體亦包含此間揭露之多肽之片段，特別是生物活性之片段及/或相對應於功能區域之片段。株系基因之試管內突變之技術係已知。亦包含於本發明係已使用一般分子生物技術改質以改良其對蛋白質降解之阻抗性或使溶解性質達最佳化或使其更適於作為治療劑之多肽。
嵌合抗體可藉由重組手段藉由使自產生一物種之細胞之抗體獲得之可變化之輕及重鏈區域(VL及VH)與來自另一者之固定之輕及重鏈域組合而製造。典型上，嵌合抗體利用齧齒動物或兔子之可變化區域及人類固定區域，以產生具主要係人類區域之抗體。此等嵌合抗體之產生係此項技藝已知，且可藉由標準手段達成(例如，於美國專利第5,624,659號案中所述般，其在此被全部併入以供參考之用)。進一步注視係本發明之嵌合抗體之人類固定區域可選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19固定區域。
人類化抗體被工程化以含有更似人類之免疫血球素區域，且僅併納動物衍生之抗體之決定互補性之區域。此可藉由小心檢查單株抗體之可變化區域之高變化迴路之序列，及使其等適合人類抗體鏈之結構而完成。雖然表面上複雜，但此方法實際上係直接。見，例如，美國專利第6,187,287號案，其在此被併入以供參考之用。於一較佳實施例，人類化可如下詳細揭露般產生。此流程使CDR接枝於與欲被人類化之母抗體高度同源之人類FR上。
除整個免疫血球素(或其重組對兆物)外，包含抗原決定基結合位置之免疫血球素片段(例如，Fab’、F(ab’)2，或其它片段)可被合成。“片段”或其最小免疫血球素可利用重組免疫血球素投術設計。例如，用於本發明之“Fv”免疫血球素可藉由合成一融合之可變化輕鏈區域及一可變化之重鏈區域而產生。抗體之組合物亦感興趣，例如，包含二獨特Fv特異度之雙官能抗體。於本發明之另一實施例，SMIP(小分子免疾藥物)、駱駝抗體、奈米抗體，及IgNAR係包含於免疫血球素片段。
免疫血球素及其片段可後轉譯地改質，例如，添加效應子部份(諸如，化學連結子)、可檢測部份(諸如，螢光染料、酵素、毒素、基材、生物發光材料、放射性材料、化學發光部份等)，或專一結合部份(諸如，卵白素、親和素，或生物素)等可用於本發明之方法及組成物。另外效應子之例子係於下提供。
“穩定表現或延長表現所欲之分泌異源多肽之多倍體酵母菌”一辭係指以臨界表現量(典型上係至少10-25毫克/公升且更佳係更大)分泌該多肽持續至少數天至一週，更佳係至少一個月，更佳係至少1-6個月，且更佳係多於一年之酵母菌培養物。
“分泌所欲量之重組多肽之多倍體酵母菌培養物”一辭係指穩定或延長地分泌至少10-25毫克/公升之異源多肽，更佳係至少50-500毫克/公升，且最佳係500-1000毫克/公升或更多之培養物。
若依據基因密碼之多核苷酸序列之轉譯產生多肽序列，多核苷酸序列"相對應"於多肽序列(即，多核苷酸序列"編碼"多肽序列)，若二序列編碼相同多肽序列，一多核苷酸序列"相對應於"另一多核苷酸序列。
一DNA結構之一"非同系"區域或範圍係一較大DNA分子內之於性質上未被發現與此較大分子有關之可識別之DNA片段。因此，當異源區域編碼哺乳動物基因時，此基因通常會以不會於源生物之基因組內之哺乳動物基因體DNA側之DNA於側面上。異源區域之另一例子係一其間編碼序列本身於自然中未發現之結構(例如，其間基因體編碼序列含有內含子之cDNA，或具有不同於原生基因之密碼子之合成序列)。等位基因之變體或自然發生之突變結果不會產生此間所定義之DNA之異源區域。
一"編碼序列"係相對應或編碼蛋白質或肽序列之密碼子之框內序列(基於基因密碼)。若序列或其互補序列編碼相同胺基酸序列，二編碼序列彼此相對應。與適當調控序列結合之編碼序列可轉錄及轉譯成一多肽。一多腺苷酸化訊息及轉錄終結序列通常位於編碼序列之3’。"促進子序列"係能結合細胞內之RNA聚合物酶及起始下游(3'方向)編碼序列之轉錄之DNA調控區域。促進子序列典型上含有用於結合影響編碼序列之轉錄之調控分子(例如，轉錄因子)之另外位置。當RNA聚合物酶結合細胞內之促進子序列及使編碼序列轉錄成mRNA，其於後轉譯成藉由編碼序列編碼之蛋白質，一編碼序列係於促進子序列之”控制下”或"操作地連接"此促進子。
載體被用以使一外來物質(諸如，DNA、RNA或蛋白質)引入一生物或宿主細胞內。典型載體包含重組病毒(對於多核苷酸)及微脂類或其它脂質聚結物(對於多肽及/或多核苷酸)。"DNA載體"係一可附接另一多核苷酸片段以發生複製附接片段之複製子(諸如，質體、噬菌，或噬菌粒)。"表現載體"係一含有會藉由適當宿主細胞指導多肽合成之調控序列之DNA載體。此通常意指結合RNA聚合物酶及起始mRNA轉錄之促進子，與核醣體結合位置及使mRNA轉譯成多肽之起始訊息。於正確位置及以正確讀取框使多核苷酸序列併納於一表現載體內，其後藉由載體轉化適當宿主細胞能產生藉由該多核苷酸序列編碼之多肽。例示之表現載體及其使用技術係描述於下列公告文獻：Old等人，基因操作原理：基因工程導論(Principles of Gene Manipulation:An Introduction to Genetic Engineering),Blackwell Scientific Publications,第4版,1989；Sambrook等人，分子複製：實驗室手冊(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989；Sambrook等人，分子複製：實驗室手冊(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第3版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001；Gorman,DNA複製之"高效率基因轉移於哺乳動物細胞內"("High Efficiency Gene Transfer into Mammalian Cells,"in DNA Cloning),第II冊,Glover,D. M.,Ed.,IRL Press,Washington,D.C.,143 190頁(1985)。
例如，微脂類或其它脂質聚結物可包含諸如磷脂醯膽鹼(卵磷酯)(PC)、磷酯醯基乙醇胺(PE)、溶血卵磷酯、溶血磷酯醯基乙醇胺、磷酯醯基絲胺酸(PS)、磷酯醯基甘油(PG)、磷酯醯基肌醇(PI)、鞘髓磷脂、心磷脂、磷脂酸(PA)、脂肪酸、神經節配醣、醣酯、醣脂、單、二或三酸甘油脂、腦苷脂及其等之混合物之脂質；陽離子性脂質(或其它陽離子性兩親分子)，諸如，1,2-二油氧基-3-(三甲基胺基)丙烷(DOTAP)；N-膽固醇基氧甲保利-3,7,12-三氮雜十五烷-1,15-二胺(CTAP)；N-[1-(2,3,-二(十四烷氧基))丙基]-N,N-二甲基-N-羥乙基銨溴化物(DMRIE)；N-[1-(2,3,-二油氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-羥乙基銨溴化物(DORIE)；N-[1-(2,3-二油氧基)丙基]-N,N,N-三甲基銨氯化物(DOTMA)；3β[N-(N',N'-二甲基胺基乙烷)胺甲醯基]膽固醇(DC-Choi)；及二甲基二(十八烷基)銨(DDAB)；二油醯基磷酯醯基乙醇胺(DOPE)、含膽固醇之DOPC；及其等之組合物；及/或親水性聚合物，諸如，聚乙烯基吡咯烷、聚乙烯基甲基醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚二甲基丙烯醯胺、聚羥丙基甲基丙烯酸酯、聚羥乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬醯胺，及其等之組合物。其它適合之陽離子性脂質係描述於Miller,Angew. Chem. Int. Ed. 37:17681785(1998)，及Cooper等人，Chem. Eur. J. 4(1):137151(1998)。微脂類可被交聯、部份交聯，或無交聯。經交聯之微脂類可包含經交聯及未經交聯之組份。適合之陽離子性微脂類或細胞轉染劑係可購得，且亦可如Sipkins等人，Nature Medicine,1998,4(5):(1998),623626或如先前之Miller等所述般製備。例示之微脂類包含可聚合之兩性或中性之脂質、可聚合之整合素標靶脂質及適於結合核酸之可聚合之陽離子性脂質。微脂類可選擇性地包含提供增加效率之肽，例如，於美國專利第7,297,759號案中所述者。另外之例示微脂類及其它脂質聚結物係描述於美國專利第7,166,298號案。
多核苷酸序列之”放大”係於試管內生產多份之特定核酸序列。經放大之序列通常係呈DNA之型式。用以完成此放大之各種技術係描述於Van Brunt之評論文章(1990,Bio/Technol.,8(4):291-294)。聚合物酶鏈反應或PCR係核酸放大之一原型，此間PCR之使用需考量其它適合放大技術之例子。
脊椎動物之抗體之一般結構現係充份瞭解(Edelman,G. M.,Ann. N.Y. Acad. Sci.,190:5(1971))。抗體係由二相同之分子量約23,000道爾頓之輕多肽鏈(“輕鏈”)，及二相同之分子量53,000-70,000之重鏈(“重鏈”)組成。四鏈係藉由二硫化物鏈以“Y”結構結合，其中，輕鏈承托於“Y”結構之嘴部處起始之重鏈。”Y”結構之”分支”部份被稱為Fab區域，”Y”結構之柄部份被稱為Fc區域。胺基酸序列定向係從“Y”結構之頂部之N-終結端進行至每一鏈之底部之C-終結端。N-終結端擁有對使其誘發之抗原具專一性之可變化區域，且於長度係約100個胺基酸，其於輕與重鏈間及抗體至抗體具些微變化。
可變化區域於每一鏈係與一延伸此鏈之剩餘長度且於一特定種類之抗體內不會因抗體之專一性(即，引誘其之抗原)而改變之固定區域連接。有五種決定免疫血球素分子之種類之已知主要種類之固定區域(IgG、IgM、IgA、IgD，及IgE係相對應於γ、μ、α、δ，及ε之重鏈固定區域)。固定區域或種類決定抗體之隨後效應子功能，包含互補體之活化(Kabat,E. A.,Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry,第2版,413-436頁,Holt,Rinehart,Winston(1976))，及其它細胞回應(Andrews,D. W.,等人，Clinical Immunobiology,1-18頁,W. B. Sanders(1980)；Kohl,S.,等人，Immunology,48:187(1983))；而可變化區域決定會與其反應之抗原。輕鏈分類為κ或λ。每一重鏈可與κ或λ輕鏈成對。輕及重鏈係彼此共價鍵結，且當免疫血球素藉由融合瘤細胞或藉由B細胞產生時，二重鏈之“尾”部份係藉由共價二硫化物結合彼此鍵結。
“可變化區域”或“VR”之表示係指於一抗體內之每一輕及重鏈對內之直接涉及抗體與抗原之結合之範圍。每一重鏈於一末端具有一可變化範圍(VH)，其後係多個固定範圍。每一輕鏈於一端具有一可變化範圍(VL)及於其另一端之一固定範圍；輕鏈之固定範圍係與重鏈之第一固定範圍比對，且輕鏈之可變化範圍係與重鏈之可變化範圍比對。
“互補性決定區域”、“高變化區域”或“CDR”之表示係指於一抗體之輕或重鏈之可變化區域內發現之一或更多之高變化或互補性決定區域體(CDR)(見Kabat，E. A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。此等表示包含Kabat等人定義之高變化區域(“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”Kabat E.,等人，US Dept. of Health and Human Services,1983)或抗體內之3維結構(Chothia及Lesk,J Mol. Biol. 196 901-917(1987))。每一鏈內之CDR係藉由框加區域維持緊鄰，且以來自其它鏈之CDR，促成抗原結合位置之形成。於CDR內，具有已被描述作為選擇性決定區域(SDR)選擇胺基酸，其代表CDR於抗體-抗原交互作用使用之重要接觸殘基(Kashmiri,S.,Methods,36:25-34(2005))。用於例示抗-IL-6抗體之CDR於此間被提供。
“框架區域”或“FR”之表示係指於一抗體之輕及重鏈之可變化區域內之一或更多之框架區域(見Kabat,E. A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,(1987))。此等表示包含插置於一抗體之輕及重鏈之可變化區域內之CDR間之胺基酸序列區域。如較佳實施例中所提及，FR會包含與母抗體(例如，兔子抗體)高度同源之人類FR。
Ab1抗-IL-6抗體及其結合片段
本發明包含對IL-6具結合專一性且擁有一包含如下所示序列之可變化輕鏈序列之抗體：MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN(序列識別編號：2)或AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR(序列識別編號：709)及包含於第2及34-37圖所示者及第1表中識別者之其人類化型式及變體。
本發明亦包含對IL-6具結合專一性且擁有一包含如下所示序列之可變化重鏈序列之抗體：METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK(序列識別編號：3)或EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS(序列識別編號：657)及包含第2及34-37圖所示者及第1表中識別者之其人類化型式及變體。
本發明進一步包含對IL-6具有結合專一性且擁有一序列識別編號：3之改質型式之可變化重鏈序列之抗體，其中，CDR2之色胺酸殘基被改變成如下所示之絲胺酸：METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATSAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK(序列識別編號：658)及包含第2及34-37所示者及第1表中識別者之其人類化型式及變體。
本發明係進一步注視包含一或更多之相對應於序列識別編號：2之可變化輕鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：4；序列識別編號：5；及序列識別編號：6之多肽序列；及/或一或更多之相對應於序列識別編號：3或19之可變化重鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：7；序列識別編號：8或120；及序列識別編號：9之多肽序列；或此等多肽序列之組合物之抗體。於本發明之另一實施例，本發明之抗體包含CDR及如上所示之可變化之重及輕鏈序列之組合物。
於另一實施例，本發明係注視包含一或更多之相對應於序列識別編號：2之可變化輕鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：4；序列識別編號：5；及序列識別編號：6之多肽序列，及/或一或更多之相對應於序列識別編號：3或19之可變化重鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：7；序列識別編號：8或120；及序列識別編號：9之多肽序列，或此等多肽序列之組合物之其它抗體(諸如，嵌合抗體)。於本發明之另一實施例，本發明之抗體包含CDR及如上所示之人類化型式之可變化重及輕鏈序列之組合物。
本發明亦注視對IL-6具有結合專一性之抗體片段。於本發明之一實施例，本發明之抗體片段包含人類化型式之序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709之多肽序列，或另外地由其等組成。於本發明之另一實施例，本發明之抗體片段包含人類化型式之序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，或708之多肽序列，或另外地由其等組成。
於本發明之另一實施例，對IL-6具結合專一性之抗體片段包含一或更多之相對應於序列識別編號：2或序列識別編號：709之可變化輕鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：4；序列識別編號：5；及序列識別編號：6之多肽序列，或另外地係由其等組成。
於本發明之另一實施例，對IL-6具結合專一性之抗體片段包含一或更多之相對應於序列識別編號：3及657或19之可變化重鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：7；序列識別編號：8或序列識別編號：120；及序列識別編號：9之多肽序列，或另外地係由其等組成。
本發明亦注視包含一或更多之此間所述之抗體片段之抗體片段。於本發明之一實施例，對IL-6具結合專一性之抗體片段包含一、二、三或更多(包含所有)之下列抗體片段，或另外地由其等組成：序列識別編號：2之可變化輕鏈區域；序列識別編號：3之可變化重鏈區域；序列識別編號：2之可變化輕鏈區域之互補性決定區域(序列識別編號：4；序列識別編號：5；及序列識別編號：6)；及序列識別編號：3及657或19之可變化重鏈區域之互補性決定區域(序列識別編號：7；序列識別編號：8或序列識別編號：120；及序列識別編號：9)。
本發明係亦注視其中序列識別編號：18或序列識別編號：19之重鏈多肽序列取代序列識別編號：3或657之重鏈多肽序列；或序列識別編號：20之輕鏈多肽序列取代序列識別編號：2或序列識別編號：709之輕鏈多肽序列；且序列識別編號：120之重鏈CDR序列取代序列識別編號：8之重鏈CDR序列之變體。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體係Ab1，其包含序列識別編號：2及序列識別編號：3，或更特別地，係包含序列識別編號：657及序列識別編號：709(其個別係以序列識別編號：700及序列識別編號：723內之核酸序列編碼)之抗體，或包含如先前段落中所示之另外之序列識別編號且具有至少一此間所示之生物活性者。於一較佳實施例，抗-IL-6抗體會包含如第34-37圖所示之人類化序列。
本發明之抗-IL-6抗體之序列係如第1表中所示。例示之序列變體之其它另外型式之Ab1至Ab7之重及輕鏈被顯示。本發明之抗體包含另外之序列變體，包含保守性取代、一或更多CDR序列及/或FR序列之取代等。
例示之Ab1實施例包含一包含輕鏈及/或重鏈之變體之抗體。例示之Ab1之輕鏈之變體包含如所示之任何Ab1輕鏈之序列(即，序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709之任何者)，其中，整個CDR1序列被替換，或其中CDR1序列中之一或更多之殘基係以所示之其它輕鏈CDR1序列之任何者(即，序列識別編號：23、39、55、71、87、103、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380、396、412、428、444、460、476、492、508、524、540、556，或572之任何者)之相對應位置之殘基取代；及/或整個CDR2序列被替換，或其中，CDR2序列之一或更多之殘基係以如所示之其它輕鏈CDR2序列之任何者(即，序列識別編號：24、40、56、72、88、104、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365、381、397、413、429、445、461、477、493、509、525、541、557，或573之任何者)之相對應位置之殘基取代；及/或其中，整個CDR3序列被替換，或其中，CDR3序列之一或更多之殘基係以如所示之其它輕鏈CDR3序列之任何者(即，序列識別編號：25、41、57、73、89、105、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382、398、414、430、446、462、478、494、510、526、542、558，或574之任何者)之相對應位置之殘基取代。
例示之Ab1重鏈之變體包含如所示之Ab1重鏈之任何者之序列(即，序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，或708之任何者)，其中，整個CDR1序列被替換，或其中，CDR1序列之一或更多之殘基係以如所示之其它重鏈CDR1序列之任何者(即，序列識別編號：26、42、58、74、90、106、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367、383、399、415、431、447、463、479、495、511、527、543、559，或575之任何者)之相對應位置之殘基取代；及/或其中，整個CDR2序列被替換，或其中，CDR2序列之一或更多之殘基係以諸如第1表所示者之Ab1重鏈CDR2(即，序列識別編號：8，或120之任何者)或如所示之其它重鏈CDR2序列之任何者(即，序列識別編號：27、43、59、75、91、107、121、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384、400、416、432、448、464、480、496、512、528、544、560，或576之任何者)之相對應位置之殘基取代；及/或其中，整個CDR3序列被替換，或其中，CDR3序列之一或更多之殘基係以如所示之其它重鏈CDR3序列之任何者(即，序列識別編號：28、44、60、76、92、108、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369、385、401、417、433、449、465、481、497、513、529、545、561，或577之任何者)之相對應位置之殘基取代。
於另一實施例，本發明係注視包含一或更多之相對應於序列識別編號：2之可變化輕鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：4；序列識別編號：5；及序列識別編號：6之多肽序列，及/或一或更多之相對應於序列識別編號：3或序列識別編號：19之可變化重鏈序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域)之序列識別編號：7(CDR1)；序列識別編號：8(CDR2)；序列識別編號：120(CDR2)；及序列識別編號：9(CDR3)之多肽序列，或此等多肽序列之組成物之其它抗體(諸如，嵌合或人類化抗體)。於本發明之另一實施例，本發明之抗體包含CDR及如上所示之可變化重及輕鏈序列(包含第2及34-37圖所示者及第1表中識別者)之組合物。
於另一實施例，本發明之抗-IL-6抗體係包含下列之至少一者：序列識別編號：12或序列識別編號：694之序列編碼之CDR1輕鏈；以序列識別編號：13之序列編碼之輕鏈CDR2；以序列識別編號：14或序列識別編號：695序列編碼之輕鏈CDR3；以序列識別編號：15之序列編碼之重鏈CDR1；以序列識別編號：16或序列識別編號：696編碼之重鏈CDR2，及以序列識別編號：17或序列識別編號：697編碼之重鏈CDR3。此外，本發明包含此等核酸序列及其變體。
於另一實施例，本發明係有關於相對應於該-IL-6抗體之CDR之胺基酸序列，其係選自序列識別編號：4(CDR1)、序列識別編號：5(CDR2)、序列識別編號：6(CDR3)、序列識別編號：7、序列識別編號：120及序列識別編號：9。
於另一實施例，本發明之抗-IL-6抗體包含序列識別編號：10、662、698、701、705、720、721、722，或723之輕鏈核酸序列；及/或序列識別編號：11、663、700、703、707、724，或725之重鏈核酸序列。此外，本發明係有關於以前述核酸序列及其等之組合物之任意者編碼之相對應多肽。
於本發明之一特別實施例，抗-IL-6抗體或其一部份會以選自於序列識別編號：10、12、13、14、662、694、695、698、701、705、720、721、722、723、11、15、16、17、663、696、697、700、703、707、724，及725中包含者之核酸序列編碼。例如，輕鏈之CDR1可以序列識別編號：12或694編碼，輕鏈之CDR2可以序列識別編號：13編碼，輕鏈之CDR3可以序列識別編號：14或695編碼；重鏈之CDR1可以序列識別編號：15編碼，重鏈之CDR2可以序列識別編號：16或696編碼，重鏈之CDR3可以序列識別編號：17或697編碼。.如下所探討，含有此等CDR之抗體可以此間所揭露之人類化方法為基礎使用適當之人類框架而建構。
於本發明之另一特別實施例，可變化輕鏈會以序列識別編號：10、662、698、701、705、720、721、722，或723編碼，且抗-IL-6抗體之可變化重鏈會以序列識別編號：11、663、700、703、707、724，或725編碼。
於一更特別實施例，抗-IL-6抗體可變化輕及重鏈係個別以序列識別編號：10及11，或序列識別編號：698及序列識別編號：700，或序列識別編號：701及序列識別編號：703，或序列識別編號：705及序列識別編號：707編碼。
於另一特別實施例，本發明涵蓋含有前述核酸序列及其等之組合物之任何者之核酸結構物，與含有此等核酸序列及結構物之重組細胞，其中，此等核酸序列或結構可為染色體外或融入宿主細胞基因組內。
於另一特別實施例，本發明涵蓋含有於序列識別編號：4、序列識別編號：5、序列識別編號：6、序列識別編號：7、序列識別編號：8、序列識別編號：120、序列識別編號：9所述之CDR或其等之組合物之任何者之多肽，或包含於序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709中包含之可變化輕多肽及/或於序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，或708中包含之可變化重多肽之任何者之多肽。此等多肽選擇性地可直接或間接與其它免疫血球素多肽或效應子部份(諸如，治療或可檢測之實體)附接。
於另一實施例，抗-IL-6抗體係包含至少一下列者：以序列識別編號：10或序列識別編號：698或序列識別編號：701或序列識別編號：705之序列編碼之可變化輕鏈，及以序列識別編號：11或序列識別編號：700或序列識別編號：703或序列識別編號：707之序列編碼之可變化鏈。
於另一實施例，抗-IL-6抗體係於框架及/或CDR序列中包含一或更多取代且於試管內及/或於活體內投藥時具有Ab1之一或更多性質之前述序列之變體。
此等於試管內及於活體內之性質係更詳細地描述於下列之實施例且包含：與Ab1競爭與IL-6及/或其肽之結合；具有少於約50皮克莫耳之對IL-6之結合親和力(Kd)，及/或少於或等於10-4 S-1之與IL-6之分解速率(Koff)；於健康人類主體具有至少約22天之試管內半衰期；預防或治療低蛋白血症之能力；預防或治療升高之CRP之能力；預防或治療異常凝結之能力；及/或減少於具有與增加血栓危險性有關之疾病或狀況之個人之血栓危險性之能力。抗-IL-6活性之另外之非限制性例子係如此間，例如，於標題為“抗-IL-6活性”所示。
於另一實施例，抗-IL-6抗體包含一或更多之Ab1輕鏈及/或重鏈CDR序列(見第1表)或其變體，其於試管內及/或於活體內投藥時具有一或更多之Ab1性質(此等性質之例子係於前段落中探討)。熟習此項技藝者會瞭解如何結合此等CDR序列以形成一抗原結合表面，例如，藉由與一或更多之支架連接，其可包含人類或其它哺乳動物之框架序列，或自SMIP、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR或其它免疫血球素或其它工程化抗體衍生之其功能性直系同源物。例如，實施例可專一地結合人類IL-6且包含一、二、三、四、五、六，或更多之下列CDR序列或其變體。
與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少72.7%(即，11個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少81.8%(即，11個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少90.9%(即，11個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有100%(即，11個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有至少85.7%(即，7個胺基酸之6個)之一致性之多肽；與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有100%(即，7個胺基酸之7個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽；與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有至少80%(即，5個胺基酸之4個)之一致性之多肽；與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有100%(即，5個胺基酸之5個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少50%(即，16個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少56.2%(即，16個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少62.5%(即，16個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少68.7%(即，16個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少75%(即，16個胺基酸之12個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少81.2%(即，16個胺基酸之13個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少87.5%(即，16個胺基酸之14個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少93.7%(即，16個胺基酸之15個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有100%(即，16個胺基酸之16個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少33.3%(即，12個胺基酸之4個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少41.6%(即，12個胺基酸之5個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號:9之重鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽；與序列識別編號:4之輕鏈CDR1具有至少90.9%(即，11個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號:4之輕鏈CDR1具有100%(即，11個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號:5之輕鏈CDR2具有至少85.7%(即，7個胺基酸之6個)之一致性之多肽；與序列識別編號:5之輕鏈CDR2具有100%(即，7個胺基酸之7個)之一致性之多肽；與序列識別編號:6之輕鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽；與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有至少80%(即，5個胺基酸之4個)之一致性之多肽；與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有100%(即，5個胺基酸之5個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少56.2%(即，16個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少62.5%(即，16個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少68.7%(即，16個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少75%(即，16個胺基酸之12個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少81.2%(即，16個胺基酸之13個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少87.5%(即，16個胺基酸之14個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少93.7%(即，16個胺基酸之15個)之一致性之多肽；與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有100%(即，16個胺基酸之16個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽；與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽。
其它例示之實施例包含一或更多之編碼下列之任何者之多核苷酸，例如，編碼與人類IL-6專一結合之多肽之多核苷酸，且包含一、二、三、四、五、六，或更多之下列CDR或其變體：編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少72.7%(即，11個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少81.8%(即，11個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少90.9%(即，11個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有100%(即，11個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有至少85.7%(即，7個胺基酸之6個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有100%(即，7個胺基酸之7個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有至少80%(即，5個胺基酸之4個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有100%(即，5個胺基酸之5個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少50%(即，16個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少56.2%(即，16個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少62.5%(即，16個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少68.7%(即，16個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少75%(即，16個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少81.2%(即，16個胺基酸之13個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少87.5%(即，16個胺基酸之14個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少93.7%(即，16個胺基酸之15個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有100%(即，16個胺基酸之16個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少33.3%(即，12個胺基酸之4個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少41.6%(即，12個胺基酸之5個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少75%(即，12個肽基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有至少90.9%(即，11個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：4之輕鏈CDR1具有100%(即，11個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有至少85.7%(即，7個胺基酸之6個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：5之輕鏈CDR2具有100%(即，7個胺基酸之7個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：6之輕鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有至少80%(即，5個胺基酸之4個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：7之重鏈CDR1具有100%(即，5個胺基酸之5個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少56.2%(即，16個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少62.5%(即，16個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少68.7%(即，16個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少75%(即，16個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少81.2%(即，16個胺基酸之13個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少87.5%(即，16個胺基酸之14個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有至少93.7%(即，16個胺基酸之15個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：120之重鏈CDR2具有100%(即，16個胺基酸之16個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少50%(即，12個胺基酸之6個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少58.3%(即，12個胺基酸之7個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少66.6%(即，12個胺基酸之8個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少75%(即，12個胺基酸之9個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少83.3%(即，12個胺基酸之10個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有至少91.6%(即，12個胺基酸之11個)之一致性之多肽之多核苷酸；編碼與序列識別編號：9之重鏈CDR3具有100%(即，12個胺基酸之12個)之一致性之多肽之多核苷酸。
第1表.　例示之抗-IL-6抗體之序列
*重及輕鏈之例示序列變體型式係於個別行顯示。
PRT.：多肽序列
Nuc.：例示之編碼序列
作為參考，非包含於第1表內之序列識別號係綜述於第2表。
第2表.本申請案之序列識別號之綜述
此等抗體片段或其變體可以一或更多之下列非限制性型式存在：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv及單鏈Fv抗體型式。於一較佳實施例，此間所述之抗-IL-6抗體進一步包含包含如下所示序列之κ固定輕鏈序列：VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列識別編號：586)。
於另一較佳實施例，此間所述之抗-IL-6抗體進一步包含包含如下所示序列之一之γ-1固定重鏈多肽序列：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列識別編號：588)及ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列識別編號：719)。
此間所述抗體之實施例可包含一前導序列，諸如，兔子Ig前導、白蛋白前肽、酵母菌交配因子前原分泌前導序列(諸如，巴斯德畢赤酵母或釀酒酵母a或α因子)，或人類HAS前導。例示之前導序列係如下般於第36A及37A圖所示之多肽之N-終端顯示自FR1之分支：序列識別編號：2及660(MD...)及序列識別編號：3及661(ME...)之兔子Ig前導序列；及序列識別編號：706及708之白蛋白前肽，其促進分泌。授予所欲性質(諸如，分泌、改善之穩定性或半衰期等)之此項技藝所知之其它前導序列亦可單獨或彼此混合地用於重及/或輕鏈，其可選擇性地於投用至患者前被***。例如，多肽可於細胞或無細胞之表現系統(其亦表現或包含(或被改質以表現或包含)蛋白酶(例如，膜結合之訊息肽酶，其分解前導序列)中表現。
於另一實施例，本發明注視一經隔離之抗-IL-6抗體，其包含一包含：序列識別編號：3、18、19、22、38、54、70、86、102、117、118、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、395、411、427、443、459、475、491、507、523、539、555、571、652、656、657、658、661、664、665、668、672、676、680、684、688、691、692、704，或708之VH多肽序列；且進一步包含一包含：序列識別編號：2、20、21、37、53、69、85、101、119、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458、474、490、506、522、538、554、570、647、651、660、666、667、671、675、679、683、687、693、699、702、706，或709之VL多肽序列，或其等之變體，其中，該VH或VL多肽之一或更多之框架殘基(FR殘基)或CDR殘基已以另一胺基酸殘基取代，造成專一地結合IL-6之抗-IL-6抗體。本發明注視人類化及嵌合型式之此等抗體，其中，較佳地，FR會包含與母抗體高度同源之人類FR。嵌合抗體可包含自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19固定區域且特別係可變化重及輕鏈固定區域(當包含於序列識別編號：588及序列識別編號：586)衍生之Fc。
於本發明之一實施例，於起始此間提及之人類化方法前，抗體或VH或VL多肽係源自或選自一或更多之兔子B細胞族群。
於本發明之另一實施例，抗-IL-6抗體及其片段及變體對人類IL-6蛋白質之靈長類同源物具結合專一性。人類IL-6蛋白質之靈長類同源物之非限制性例子係自長尾獼猴(亦稱為食蟹獼猴)及恆河猴獲得之IL-6。於本發明之另一實施例，抗-IL-6抗體及其片段及變體抑制IL-6與IL-6R之結合，及/或IL-6/IL-6R/gp130錯合物之產生及/或IL-6/IL-6R/gp130多聚體之產生及/或對抗一或更多之前述之生物作用。
如上所述，抗體及其片段及變體可後轉譯地改質以添加效應子部份(諸如，化學結合子)、可檢測之部份(諸如，螢光染料、酶、基材、生物發光材料、放射性材料，及化學發光部份)，或功能性部份(諸如，卵白素、親和素、生物素、細胞毒素、細胞毒劑，及放射性材料)。
有關於可檢測之部份，進一步之例示酶不受限地包含辣根過氧化酶、乙醯膽鹼酯酶、鹼性磷酸酶、β-半乳醣苷酶，及螢光酶。進一步例示之螢光材料不受限地包含若丹明、螢光黃、螢光黃異硫氰酸酯、傘形酮、三氯三胺、藻紅蛋白，及丹磺醯氯。進一步例示之化學發光部份不受限地包含魯米諾。進一步例示之生物發光部份不受限地包含冷光素及水母素。進一步例示之放射性材料不受限地包含碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)及磷32(32P)。
有關於功能性部份，例示之生物抑制劑不受限地包含甲氨蝶呤、氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶達卡巴仁；烷基化劑，諸如，莫司汀、沙奧特帕莫司汀苯丁酸、美法侖、卡莫司汀(BSNU)、絲裂鰴素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亞硝基脲、環磷醯胺、莫司汀、白消安、二溴甘露醇、鏈佐菌素、絲裂鰴素C、順-二氯二胺鉑(II)(DDP)、順鉑及卡鉑(佳鉑帝)；蒽環類，包含道諾紅菌素(先前係道諾鰴素)、多柔比星(阿黴素)、地托比星、洋紅黴素、泛達黴素、泛艾黴素、雙羥葱醌，及比生群；抗生素包含放線菌素(放線菌素D)、博來黴素、卡奇黴素、光輝黴素，及氨茴黴素(AMC)；及抗有絲***劑，諸如，長香花生物鹼、長春新鹼，及長春鹼。其它細胞毒劑包含太平洋紫杉醇(紫杉醇)、蓖麻毒蛋白、綠膿桿菌外毒素、吉西他濱、松胞菌素B、短桿菌素D、溴化乙菲錠、吐根鹼、依托泊、替尼泊、可樂喜、二羥基炭疽菌素二酮、1-脫氫睪固酮、糖皮質素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛酮、嘌呤黴素、甲芐肼、羥基脲、門冬醯胺酶、皮質類固醇、米托坦(O,P'-(DDD))、干擾素，及此等細胞毒劑之混合物。
進一步之細胞毒劑不受限地包含化療劑，諸如，卡鉑、順鉑、太平洋紫杉醇、吉西他濱、卡奇黴素、多柔比星、5-氟尿嘧啶、絲裂黴素C、放線菌素D、環磷醯胺、長春新鹼、博來黴素、VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑、紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他演、亞葉酸鈣、類固醇、環磷醯胺、美法侖、長春花生物鹼(例如，長春鹼、長春新鹼、長春地辛，及長春瑞濱)、莫司汀、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素(例如，IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗劑、毒素共軛單株抗體、腫瘤抗原專一性單株抗體、ErbituxTM、AvastinTM、鉑帕妥株單抗、抗-CD20抗體、Rituxan、歐克立茲馬、歐法突坶馬、DXL625、Herceptin，或其等之任何組合物。來自植物及細菌毒性酶，諸如，蓖麻毒蛋白、白喉毒素及綠膿桿菌毒素，可與人類化抗體或其結合片段共軛，產生細胞型專一性殺死劑(Youle等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483(1980)；Gilliland等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539(1980)；Krolick等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419(1980))。
其它細胞毒劑包含Goldenberg於美國專利第6,653,104號案所述之細胞毒劑核糖核酸酶。本發明之實施例亦係有關於放射免疫共軛物，其中，發射α或β顆粒之放射性核素係於使用或未使用形成錯合物之試劑下穩定地與抗體或其結合片段偶合。此等放射性核素包含β-發射劑，諸如，磷-32(32P)、鈧-47(47Sc)、銅-67(67Cu)、鎵-67(67Ga)、釔-88(88Y)、釔-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、釤-153(153Sm)、鑥-177(177Lu)、錸-186(186Re)，或錸-188(188Re)，及α-發射劑，諸如，砈-211(211At)、鉛-212(212Pb)、鉍-212(212Bi)或-213(213Bi)或錒-225(225Ac)。
用於使抗體或其結合片段與一可檢測部份等共軛之方法係此項技藝已知，諸如，Hunter等人，Nature 144:945(1962)；David等人，Biochemistry 13:1014(1974)；Pain等人，J. Immunol. Meth. 40:219(1981)；及Nygren,J.,Histochem. and Cytochem. 30:407(1982)所述之方法。
此間所述之實施例進一步包含與此間所示之抗體、抗體片段、雙功能抗體、SMIP、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR、多肽、可變化區域及CDR實質上同源之變體及等化物。此等可含有，例如，保守性取代突變體(即，以相同胺基酸取代一或更多之胺基酸)。例如，保守性取代係指以相同一般種類內之另一者取代胺基酸，例如，以另一酸性胺基酸取代一酸性胺基酸，以另一鹼性胺基酸取代一鹼性胺基酸，或以另一中性胺基酸取代一中性胺基酸。保守性胺基酸之意思係此項技藝所熟知。
於另一實施例，本發明係注視與此間所示之抗體片段、可變化區域及CDR之多肽序列之一或更多者具有至少90%或更大之序列一致性之多肽序列。更佳地，本發明係注視與此間所示之抗體片段、可變化區域及CDR之多肽序列之一或更多者具有至少95%或更大之序列一致性，更佳係至少98%或更大之序列一致性，且更佳係至少99%或更大之序列一致性，之多肽序列。用以決定核酸與胺基酸序列間之一致性之方法係熟習此項技藝者所知。
於另一實施例，本發明係進一步注視進一步具有抗-IL-6活性之此間所示之抗體片段、可變化區域及CDR之如上所述之多肽同源物。抗-IL-6活性之非限制性例子係如此間所示，例如，如下之標題為“抗-IL-6活性”。
於另一實施例，本發明係進一步注視結合任何前述序列之抗遺傳屬性抗體之產生及使用。於一例示實施例，此一抗遺傳屬性抗體可被投用至已接受抗-IL-6抗體之患者以調節、降低，或中和抗-IL-6抗體之作用。此抗遺傳屬性抗體亦可用於治療特徵在於抗-IL-6抗體之存在之自體免疫疾病。此抗遺傳屬性抗體之進一步例示之使用係用於檢測本發明之抗-IL-6抗體，例如，以監測存在於患者血液或其它體液內之抗-IL-6抗體之量。
本發明亦注視包含取代此間所述之任何其它多核苷酸序列之任何此間所述之多肽或多核苷酸序列之抗-IL-6抗體。例如，不受限地，本發明係注視包含此間所述之可變化輕鏈及可變化重鏈序列之任何者之組合物之抗體，且進一步注視自此間所述之任何CDR序列取代任何此間所述之其它CDR序列而造成之抗體。如所示，較佳之抗-IL-6抗體或其片段或變體可含有如第34或35圖所示之可變化重及/或輕序列，諸如，序列識別編號：651、657、709，或其變體，其中，一或更多之CDR或FR殘基係於未不利地影響抗體與IL-6結合或其它所欲功能活性下改質。
編碼抗-IL-6抗體多肽之多核苷酸
本發明進一步係有關於編碼對IL-6具有結合專一性之抗體之多肽之多核苷酸。於本發明之一實施例，本發明之多核苷酸包含編碼序列識別編號：2之可變化輕鏈多肽序列之下列多核苷酸序列，或另外係由此等所組成：ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT(序列識別編號：10)或序列識別編號：662、698、701，或705之多核苷酸序列。
於本發明之另一實施例，本發明之多核苷酸包含編碼序列識別編號：3之可變化重鏈多肽序列之下列多核苷酸序列，或另外地由此等組成：ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG(序列識別編號：11)或序列識別編號：663、700、703，或707之多核苷酸序列。
於本發明之另一實施例，編碼對IL-6具結合專一性之抗體之片段或變體之多核苷酸包含序列識別編號：12或694；序列識別編號：13；及序列識別編號：14或695之一或更多之多核苷酸序列，其係相對應於編碼序列識別編號：2之輕鏈可變化序列之互補性決定區域(CDR，或高變化區域s)之多核苷酸，或另外地由此等組成。
於本發明之另一實施例，編碼對IL-6具結合專一性之抗體之片段或變體之多核苷酸包含序列識別編號：15：序列識別編號：16或696；及序列識別編號：17或697之一或更多之多核苷酸序列，其係相對應於編碼序列識別編號：3或序列識別編號：661或序列識別編號：657或第34或35圖所述之其它者之重鏈可變化序列之互補性決定區域(CDR，高變化區域)之多核苷酸，或另外地由此等所組。
本發明亦注視包含編碼此間所述之抗體片段或變體之一或更多之多核苷酸序列之多核苷酸序列。於本發明之一實施例，編碼對IL-6具結合專一性之抗體之片段或變體之多核苷酸包含編碼抗體片段之一、二、三，或更多(包含全部)之下列多核苷酸，或另外地由此等組成：編碼序列識別編號：2之輕鏈可變化區域之多核苷酸序列識別編號：10；編碼序列識別編號：3之重鏈可變化區域之多核苷酸序列識別編號：11；編碼序列識別編號：20之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：720；編碼序列識別編號：647之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：721；編碼序列識別編號：660之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：662；編碼序列識別編號：666之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：722；編碼序列識別編號：699之輕鏈多肽多核苷酸序列識別編號：698；編碼序列識別編號：702之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：701；編碼序列識別編號：706之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：705；編碼序列識別編號：709之輕鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：723；編碼序列識別編號：19之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：724；編碼序列識別編號：652之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：725；編碼序列識別編號：657之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：700；編碼序列識別編號：661之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：663；編碼序列識別編號：704之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：703；編碼序列識別編號：708之重鏈多肽之多核苷酸序列識別編號：707；編碼前述輕鏈多鏈之互補性決定區域之序列識別編號：12、13、14、694及695之多核苷酸；及編碼前述重鏈多肽之互補性決定區域之序列識別編號：15、16、17、696及697之多核苷酸；及編碼個別於序列識別編號：657及序列識別編號：709之可變化重及輕鏈序列(例如，於序列識別編號：700及序列識別編號：723及其片段或變體之核酸序列，例如，以密碼子退化為主)之多核苷酸。編碼可變化重及輕鏈序列之此等核酸序列可單獨或結合地表現，且此等序列較佳地係融合至適合之可變化固定序列，例如，於序列識別編號：589及序列識別編號：587者。
編碼本發明之抗-IL-6抗體之例示之核苷酸序列係於上之第1表中識別。所示之多核苷酸序列需瞭解係例示性，而非限制性。熟習此項技藝者可輕易決定會編碼一特定多肽之多核苷酸序列，且可輕易產生適於一特定表現系統之表現之編碼序列，諸如，藉由採用提供之多核苷酸序列及/或藉由使其重新產生，且可輕易產生密碼子最佳化之表現序列，例如，於公告之美國專利申請案第2008/0120732號案所述般或使用此項技藝已知之其它方法。
於本發明之另一實施例，本發明之多核苷酸進一步包含編碼序列識別編號：586κ固定輕鏈序列之下列多核苷酸序列：GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT(序列識別編號：587)。
於本發明之另一實施例，本發明之多核苷酸進一步包含編碼序列識別編號：588之γ-1固定重鏈多肽序列之下列多核苷酸序列：GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA(序列識別編號：589)。
於一實施例，本發明係有關於一包含編碼選自序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，及708之抗-IL-6VH抗體胺基酸序列或編碼其變體之多核苷酸之經隔離之多核苷酸，其中，至少一框架殘基(FR殘基)係已以存在於兔子抗-IL-6抗體VH多肽之相對應位置之胺基酸或保守性胺基酸取代而取代。此外，本發明係特別包含人類化抗-I1-6抗體或其人類化抗體結合片段或變體及編碼包含於於第2或34-37圖所含序列中所述之人類化可變化重鏈及/或輕鏈多肽，或第1表中識別者，或其變體之前述者之核酸序列，其中，一或更多之框架或CDR殘基可被改質。較佳地，若任何改質被引入，其不會不利地影響形成之抗-IL-6抗體或其片段或變體之結合親和力。
於另一實施例，本發明係有關於一包含編碼選自序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，及709之抗-IL-6VL抗體胺基酸序列或編碼其變體之多核苷酸序列之經隔離之多核苷酸，其中，至少一框架殘基(FR殘基)係已以存在於兔子抗-IL-6抗體VL多肽之相對應位置之胺基酸或保守性胺基酸取代而取代。
於另一實施例，本發明係有關於一或更多之包含編碼包含於序列識別編號：2及序列識別編號：3；序列識別編號：2及序列識別編號：18；序列識別編號：2及序列識別編號：19；序列識別編號：20及序列識別編號：3；序列識別編號：20及序列識別編號：18；或序列識別編號：20及序列識別編號：19內之多肽之序列之異源多核苷酸。
於另一實施例，本發明係有關於一表現含有至少一衍生自抗-IL-6抗體之CDR多肽之多肽之經隔離之多核苷酸，其中，該表現之多肽單獨地專一地結合IL-6，或當與表現含有至少一衍生自抗-IL-6抗體之CDR多肽之多肽之另外多核苷酸序列結合表現時專一地結合IL-6，其中，該至少一CDR係選自包含於包含於序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704、708、2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709之VL或VH多肽者。
包含該多核苷酸之宿主細胞及載體亦被注視。
於另一特別實施例，本發明涵蓋含有前述核酸序列及其等之組合物之任何者之核酸結構物，與含有此等核酸序列及結構物之重組細胞，其中，此等核酸序列或結構物可為染色體外或融入宿主細胞基因組。
本發明進一步注視包含編碼可變化重及輕鏈多肽序列，與此間所示之個別之互補性決定區域(CDR，或高可變化區域)之多核苷酸序列之載體，與包含該序列之宿主細胞。於本發明之一實施例，宿主細胞係酵母菌細胞。於本發明之另一實施例，酵母菌宿主細胞屬於畢赤酵母屬。
於某些例示，多於一編碼特定多肽序列之例示多核苷酸提供，其係如第3表中所綜述。
第3表.多數個編碼特定多肽之例示之多核苷酸
於某些例子，多數之序列識別子係指相同之多肽或多核苷酸序列，如第4表中所綜述。提及此等序列識別子需瞭解係可互換，除非內容作其它指示。
第4表.重複之序列，每一細胞列示一組包含於列示序列之重複序列
某些例示實施例包含於中度或高度嚴苛雜交條件下雜交成具有第1表中所述之例示編碼序列之一之多核苷酸之多核苷酸，且亦包含於中度或高度嚴苛雜交條件下雜交成編碼與具有第1表中所述之例示編碼序列之一之多核苷酸相同之多肽，或藉由前述多核苷酸之任何者編碼之多肽之多核苷酸之多核苷酸。
"高度嚴苛之雜交條件"一辭係指探測物會雜交至其標靶亞序列(典型上係於核酸之錯合混合物)但非其它序列之條件。高度嚴苛之條件係依序列而定，且於不同狀況會不同。較長之序列於較高溫度專一地雜交。核酸雜交之廣泛指導係於Tijssen,Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes,“雜交原理及核酸分析策略之概述”(Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays)(1993)中發現。一般，高度嚴苛條件對於在定義之離子強度pH之特定序列係選擇為比熱熔點(Tm)低約5-10℃。Tm係平衡時與標靶互補之探測物之50%與標靶序列雜交之溫度(於定義之離子強度，pH，及核酸濃度下)(標靶序列以過量存在時，於Tm，平衡時50%之探測物被佔據)。高度嚴苛之條件係於pH 7.0至8.3時鹽濃度係少於約1.0M鈉離子，典型上係約0.01至1.0M鈉離子濃度(或其它鹽)且溫度對於短探測物(例如，10至50個核苷酸)係至少約30℃且對於長探測物(例如，大於50個核苷酸)係至少約60℃者。高度嚴苛條件亦可藉由添加去穩定劑(諸如，甲醯胺)而達成。對於選擇性或專一之雜交，正訊息係至少2倍背景，選擇性係10倍背景雜交。例示之高度嚴苛雜交條件可為如下：50%甲醯胺，5×SSC，及1% SDS，於42℃培養，或，5×SSC，1% SDS，於65℃培養，且於65℃於0.2×SSC及0.1% SDS清洗，且此等雜交及清洗步驟可實行，例如，1、2、5、10、15、30、60；或更多分鐘。
若其編碼之多肽係實質上有關時，於高度嚴苛條件下彼此不會雜交之核酸仍實質上有關。此發生於，例如，一份核酸係使用基因密碼允許之最大密碼子退化產生時。於此等情況，核酸典型上於中度嚴苛雜交條件下雜交。例示之"中度嚴苛雜交條件"包含於37℃之40%甲醯胺，1M NaCl，1% SDS之緩衝液雜交，且於45℃之1×SSC清洗。此等雜交及清洗步驟可實行，例如，1、2、5、10、15、30、60，或更多分鐘。正雜交係至少2倍背景。熟習此項技藝者會輕易瞭解另外之雜交及清洗條件可用以提供相似嚴苛性之條件。
本發明之另外例示實施例
於另一實施例，本發明係注視一或更多之可專一地結合相同線性或構形抗原決定基及/或以專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體，其人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，較佳係經無糖基化，競爭與完整之人類IL-6多肽或其片段上之上之相同線性或構形抗原決定基之結合之抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體。於一較佳實施例，抗-IL-6抗體或其片段或變體可專一地結合相同線性或構形抗原決定基及/或以專一地結合IL-6之Ab1及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，較佳係無糖基化，競爭與於完整之人類IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之結合。
於本發明之另一實施例，可專一地結合完整以Ab1專一地結合之於IL-6多肽或其片段上之相同線性或構形抗原決定基之抗-IL-6抗體可使用橫跨原生人類IL-6多肽之全部長度之重疊線性肽片段與藉由抗原決定基圖譜確定之IL-6抗原決定基結合。於本發明之一實施例，IL-6抗原決定基包含於選自個別包含胺基酸殘基37-51、胺基酸殘基70-84、胺基酸殘基169-183、胺基酸殘基31-45及/或胺基酸殘基58-72者之IL-6片段所包含之一或更多之殘基，或另外地由此等組成。
本發明亦係有關於抗-IL-6抗體that binds與相同IL-6抗原決定基結合及/或以專一地結合IL-6之此間揭露之抗體或抗體片段，不受限地包含選自Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，較佳係無糖基化，與抗-IL-6抗體競爭與IL-6之結合。
於另一實施例，本發明亦係有關於一經隔離之抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體，其包含於包含如下之VH多肽序列內所含之一或更多之CDR：序列識別編號:3、18、19、22、38、54、70、86、102、117、118、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、395、411、427、443、459、475、491、507、523、539、555、571、652、656、657、658、661、664、665、668、672、676、680、684、688、691、692、704，或708，及/或於由如下組成之VL多肽序列中所含之一或更多之CDR：2、20、21、37、53、69、85、101、119、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458、474、490、506、522、538、554、570、647、651、660、666、667、671、675、679、683、687、693、699、702、706，或709及本申請案之第34-37圖中所包含之抗體比對所述之VH及VL序列。
於本發明之一實施例，於前二段落中所探討之抗-IL-6抗體於每一可變化輕及可變化重區域包含至少2個互補性決定區域(CDR)，其係與於專一地結合IL-6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有先前識別之抗體之一或更多之CDR)，較佳係無糖基化，中所含者相同。
於一較佳實施例，於上探討之抗-IL-6抗體於每一可變化輕及可變化重區域包含至少2個互補性決定區域(CDR)，其係與Ab1中所含者相同。於另一實施例，於上探討之抗-IL-6抗體之所有CDR係與於專一地結合IL6之包含Ab1之抗-IL-6抗體及其嵌合、人類化、單鏈抗體及片段(含有前述抗體之一或更多之CDR)，較佳係無糖基化，中所含之CDR相同。於本發明之一較佳實施例，於上探討之抗-IL-6抗體之所有CDR係與於Ab1(例如，由個別包含於序列識別編號：657及序列識別編號：709之VH及VL序列所包含之抗體)中所含之CDR相同。
本發明進一步注視一或更多之於上探討之抗-IL-6抗體係無糖基化；含有已改質而改變效應子功能、半衰期、蛋白質水解，及/或糖基化之Fc區域；係人類、人類化、單鏈或嵌合；係自兔子(母)抗-IL-6抗體衍生之人類化抗體。例示之用以於畢赤酵母產生無糖基化之抗體而提供之固定區域係包含於序列識別編號：588及序列識別編號：586，其係個別以序列識別編號：589及序列識別編號：587中之核酸序列編碼。
本發明進一步注視一或更多之抗-IL-6抗體，其中，該抗體之可變化輕區域及可變化重區域之框架區域(FR)個別係未經改質或藉由使可變化輕或重鏈區域內之至多2或3個人類FR殘基以母免子抗體之相對應FR殘基取代而改質之人類FR，且其中，該人類FR係衍生自選自人類生殖細胞抗體序列庫(其係以其相較於此庫內所含之其它人類生殖細胞抗體序列之與相同應之兔子可變化重或輕鏈區域之高度一致性為基礎而選)之人類可變化重及輕鏈抗體序列。
於本發明之一實施例，抗-IL-6抗體或其片段或變體可專一地結合活體內之表現人類細胞之IL-6及/或循環之可溶性IL-6分子，包含於具有與表現IL6之細胞有關之疾病之病患內之人類細胞上或藉此表現之IL-6。
於另一實施例，此疾病係選自一般疲勞、運動誘發之疲勞、與癌症有關之疲勞、與發炎疾病有關之疲勞、慢性疲勞症候、纖維肌痛、與癌症有關之惡質症、與心臟病有關之惡質症、與呼吸有關之惡質症、與腎有關之惡質症、與年齡有關之惡質症、類風濕性關節炎、全身紅斑性狼瘡(SLE)、全身性幼年型自發性關節炎、牛皮癬、乾癬性關節病變、僵直性脊椎炎、發炎性腸病(IBD)、多發性肌痛症、巨細胞性動脈炎、自體免疫血管炎、移植物抗宿主病(GVHD)、修格連氏症候群、成人史迪爾氏症、類風濕性關節炎、全身性幼年型自發性關節炎、骨關節炎、骨質疏鬆症、骨骼之帕哲特氏症、骨關節炎、多發性骨髓瘤、何金氏淋巴癌、非何金氏淋巴癌、***癌、白血病、腎細胞癌、多重中心卡斯托曼病、卵巢癌症、癌症化療之抗藥性、癌症化療毒性、缺血性心臟病、動脈粥狀硬化症、肥胖、糖尿病、氣喘、多發性硬化症、阿茲罕默氏症、腦血管疾病、發熱、急性期反應、過敏、貧血、發炎性貧血(慢性疾病之貧血)、高血壓、憂鬱症、與慢性疾病有關之憂鬱症、血栓、血小板增多、急性心臟衰竭、代謝症候群、流產、肥胖、慢性攝護腺炎、腎絲球腎炎、骨盆發炎症、再灌流傷害、移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、禽流感、天花、流行性感冒、成人呼吸窘迫症候群(ARDS)、嚴重急性呼吸症候群(SARS)、敗血症，及全身性發炎反應症候群(SIRS)。於一較佳實施例，此疾病係選自癌症、發炎疾病，或自體免疫疾病。於一特別較佳實施例，此疾病係關節炎、惡質症，及消耗性症候群。
本發明進一步注視一與可檢測之標籤或治療劑直接或間接附接之抗-IL-6抗體或其片段或變體。
本發明亦注視一或更多之造成如前所示之抗-IL-6抗體或其抗體片段或變體表現之核酸序列，包含包含酵母菌或人類較佳密碼子或另外地由此等所組成者。本發明亦注視包含該核酸序列之載體(包含質體或重組病毒載體)。本發明亦注視表現如上所示抗體之至少一者之宿主細胞或重組宿主細胞，包含哺乳動物、酵母菌、細菌，及昆蟲之細胞。於一較佳實施例，宿主細胞係酵母菌細胞。於一進一步之較佳實施例，酵母菌細胞係二倍體酵母菌細胞。於一更佳之實施例，酵母菌細胞係畢赤酵母菌。
本發明亦注視一種治療方法，包含對具有與表現IL-6之細胞有關之疾病或狀況之病患投用治療有效量之至少一抗-IL-6抗體或其片段或變體。可被治療之疾病係於如上所示之非限制性列示中呈現。於一較佳實施例，此疾病係選自癌症、自體免疫疾病，或發炎狀況。於一特別較佳實施例，此疾病係癌症或病毒感染。於另一實施例，治療進一步包含投用選自化療、放射治療、細胞激素投藥或基因治療之另一治療試劑或計畫。
本發明係進一步注視一種於活體內檢測表現IL-6之細胞之存在之影像化之方法，包含投用一診斷有效量之至少一抗-IL-6抗體。於一實施例，該投用進一步包含投用促進於表現IL-6之疾病位置之抗體之檢測之放射性核素或螢光劑。於本發明之另一實施例，於活體內影像化之方法被用以檢測表現IL-6之腫瘤或轉移瘤或被用以檢測與表現IL-6之細胞有關之自體免疫疾病之位置之存在。於另一實施例，該於活體內之影像化方法之結果被用以促進包含放射治療、化療或其等之組合之適合治療計畫之設計。
抗-IL-6活性
如前所述，IL-6係經由一由訊息-傳遞糖蛋白gp130之至少一亞單元及IL-6受體(IL-6R)組成之受體錯合物促進細胞反應之細胞激素家族之一員。IL-6R亦可以可溶型式(sIL-6R)存在。IL-6與IL-6R結合，然後，二聚合訊息-傳遞受體gp130。
相信本發明之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，係藉由展現抗-IL-6活性而使用。於本發明之一非限制性實施例，本發明之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，藉由與IL-6(其可為可溶性之IL-6或細胞表面表現之IL-6)結合展現抗-IL-6活性，及/或可避免或抑制IL-6與IL-6R之結合及/或gp130訊息-傳遞糖蛋白之活化(二聚合)及IL-6/IL-6R/gp130多聚體之形成及任何前述之生物作用。此抗-IL-6抗體可以專一性抗體係於何處(即，抗原決定基)結合IL-6及/或其係如何影響前述IL-6錯合物及/或多聚體之形成及其生物作用為基礎而擁有不同拮抗性。因此，依據本發明之不同抗-IL-6抗體，例如，可較佳地適於預防或治療涉及大量可溶性IL-6之形成及累積之狀況，諸如，類風濕性關節炎，而其它抗體可有利於其中IL-6/IL-6R/gp130或IL-6/IL-6R/gp130多聚體之預防係所欲治療結果之治療。此可於結合及其它之分析決定。
對IL-6具結合專一性之本發明之抗-IL-6抗體及其片段及變體之抗-IL-6活性亦可藉由其結合強度或其對IL-6之親和力而描述。此亦會影響其治療性質。於本發明之一實施例，對IL-6具結合專一性之本發明之抗-IL-6抗體及其片段係以少於或等於5x10-7、10-7、5x10-8、10-8、5x10-9、10-9、5x10-10、10-10、5x10-11、10-11、5x10-12、10-12、5x10-13、10-13、5x10-14、10-14、5x10-15或10-15之解離常數(KD)結合IL-6。較佳地，抗-IL-6抗體及其片段及變體係以少於或等於5x10-10之解離常數結合IL-6。
於本發明之另一實施例，對IL-6具結合專一性之本發明之抗-IL-6抗體及其片段及變體之抗-IL-6活性係以少於或等於10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1，或10-7S-1之解離速率結合IL-6。於本發明之一實施例，對IL-6具結合專一性之本發明之抗-IL-6抗體及其片段及變體結合線性或構形IL-6抗原決定基。
於本發明之另一實施例，對IL-6具結合專一性之本發明之抗-IL-6抗體及其片段及變體之抗-IL-6活性係藉由改善或降低與IL6有關之疾病及異常之症候，或另外地治療或預防而展現抗-IL-6活性。與IL-6有關之疾病及異常之非限制性例子係如下所示。如所示，與癌症有關之疲勞、惡質症及類風濕性關節炎係此抗-IL-6抗體之較佳指示。
於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體或其IL-6結合片段及變體對IL-6R或gp-130訊息-傳遞糖蛋白不具有結合專一性。
B-細胞篩選及隔離
於一實施例，本發明提供隔離抗原專一性B細胞之株系族群之方法，其可用於隔離至少一抗原專一性細胞。於下所述及例示，此等含有一系列之培養及選擇步驟，其可個別、結合、依序、重複，或週期性使用。較佳地，此等方法係用於隔離至少一可用以產生單株抗體，對相對應於此一抗體之所欲抗原或核酸序列具專一性之抗原專一性細胞。
於一實施例，本發明提供一種方法，其包含步驟：
a.製備包含至少一抗原專一性B細胞之細胞族群；
b.　使細胞族群豐富化，例如，藉由色譜分析術，以形成包含至少一抗原專一性B細胞之經豐富化之細胞族群；
c.　使單一B細胞與經豐富化之B細胞族群隔離；及
d.　決定此單一B細胞是否產生對此抗原係專一之抗體。
於另一實施例，本發明提供對一隔離單一之產生抗體之B細胞之方法之改良，此改良包含使自一經免疫化或自然曝置於抗原之宿主獲得之B細胞族群豐富化，其中，此豐富化步驟係於任何選擇步驟(包含至少一培養步驟)之前，且形成B細胞之株系族群，其產生對該抗原具專一性之單一之單株抗體。
於此申請案各處，“B細胞株系族群”係指僅分泌對所欲抗源具專一性之單一抗體之B細胞族群，。即，此等細胞僅產生對所欲抗原具專一性之一種單株抗體。
於本申請案，使細胞族群細胞”豐富化”意指增加於一混細胞族群(例如，自經免疫化對抗所欲抗原之宿主衍生之含B細胞之隔離物)內所含之所欲細胞(典型上抗原專一性之細胞)之頻率。因此，經豐富化之細胞族群包含因豐富化步驟而具有較高頻率之抗原專一性細胞之細胞族群，但此細胞族群可含有及產生不同抗體。
“細胞族群”之一般用辭包含前及後豐富化之細胞族群，記得當多次豐富化步驟被實施時，細胞族群可為前及後豐富化。例如，於一實施例，本發明提供一種方法：
a.　自一經免疾化之宿主收集細胞族群而獲得經收集之細胞族群；
b.　自經收集之細胞族群產生至少一單一細胞懸浮液；
c.　使至少一單一細胞懸浮液豐富化而形成第一之經豐富化之細胞族群；
d.　使第一之經豐富化之細胞族群豐富化而形成第二經豐富化之細胞族群；
e.　使第二之經豐富化之細胞族群豐富化形成第三之經豐富化之細胞族群；及
f.　選擇藉由第三之經豐富化之細胞族群之抗原專一性細胞產生之抗體。
每一細胞族群可直接用於下步驟，或其可部份或完全冷凍以供長或短期之貯存或其後之步驟。再者，細胞族群之細胞可個別懸浮產生單一細胞懸浮液。此單一細胞懸浮液可被豐富化，如此單一細胞懸浮液作為前豐富化細胞族群。然，一或更多之抗原專一性之單一細胞懸浮液一起形成經豐富化之細胞族群；抗原專一性之單一細胞懸浮液可聚集在一起，例如，再次覆蓋以供進一步分析及/或抗體之產生。
於一實施例，本發明提供一種使細胞族群豐富化產生具有約50%至約100%或於其內之增加量之抗原專一性之細胞頻率之經豐富化之細胞族群之方法。較佳地，經豐富化之細胞族群具有大於或等於約50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、99%，或100%之抗原專一性之細胞之頻率。
於另一實施例，本發明提供一種使細胞族群豐富化之方法，藉此使抗原專一性之細胞之頻率增加至少約2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍，或於其內之增加量。
於此申請案各處，“增加量”一辭用以定義一變化精確度之數值，例如，最接近10、1、0.1、0.01等。增加量可四捨五入至任何可測量之精確度，且增加量無需四捨五入至一範圍之二側上之相同精確度。例如，1至100之範圍或其內之增加量包含諸如20至80、5至50，及0.4至98之範圍。當一範圍係無限制時，例如，少於100之範圍，其內之增加量意指100與可測量極限間之增加量。例如，少於100或其內之增加量意指0至100或其內之增加量，除非此特徵(例如，溫度)不受0限制。
抗原專一性係關於任何抗原而測量。抗原可為抗體可結合之任何物質，不受限地包含肽、蛋白質或其片段；碳水化物；有機及無機之分子；動物細胞、細菌細胞，及疾病產生之受體；酶；生物路徑之激動素及拮抗劑；荷爾蒙；及細胞激素。例示之抗原不受限地包含IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝細胞生長因子(HGF)及海帕西啶。較佳之抗原包含IL-6、IL-13、TNF-α、VEGF-α、肝細胞生長因子(HGF)及海帕西啶。於使用多於一豐富化步驟之方法，用於每一豐富化步驟之抗原可彼此相同或相異。具相同抗原之多個豐富化步驟可產生大及/或不同之抗原專一性細胞族群；具不同抗原之多個豐富化步驟可產生對不同抗原具交叉專一性之經豐富化之細胞族群。
細胞族群之豐富化可藉由此項技藝所知之用於隔離抗原專一性細胞之任何細胞選擇手段實施。例如，細胞族群可藉由色層分析技術(例如，Miltenyi珠材或磁性珠材技術)豐富化。此等珠材可與感興趣之抗原直接或間接地附接。於一較佳實施例，細胞族群豐富化之方法包含至少一色層分析豐富化步驟。
細胞族群亦可藉由以此項技藝所知之任何抗原專一性分析實施而豐富化，例如，ELISA分析或鹵基分析。ELISA分析不受限地包含選擇性抗原免疫化(例如，藉由卵白素、親和素，或中性鏈親和素塗覆板之生物素基化之抗原捕集)、非專一性抗原板塗覆，及經由抗原積聚策略(例如，選擇性抗原捕集，及其後添加結合夥伴產生異質蛋白質-抗原錯合物)。抗原可與一固體基質或撐體(例如，管柱)直接或間接地附接。鹵基分析包含使細胞與載荷抗原之珠材及對用以收集B細胞之宿主具專一性之經標籤化之抗宿主抗體接觸。此標籤可為，例如，螢光劑。於一實施例，至少一分析豐富化步驟係於至少一單一細胞懸浮液實施。於另一實施例，細胞族群豐富化之方法包含至少一色層分析豐富化步驟及至少一分析豐富化步驟。
藉由尺寸或密度使細胞族群”豐富化”之方法係此項技藝已知。見，例如，美國專利第5,627,052號案。除藉由抗原專一性使細胞族群豐富化外，此等步驟亦可用於本發明。
本發明之細胞族群含有至少一能識別抗原之細胞。抗原識別細胞不受限地包含B細胞、漿細胞，及其後代。於一實施例，本發明提供含有單一型式之抗原專一性B-細胞之株系細胞族群，即，細胞族群產生對所欲抗原具專一性之單一單株抗體。
於此實施例，相信株系抗原專一性之B細胞族群主要係由藉由此間提供之新穎培養及選擇方案獲得之抗原專一性之分泌抗體之細胞組成。因此，本發明亦提供獲得含有至少一抗原專一性之分泌抗體之細胞之經豐富化之細胞族群之方法。於一實施例，本發明提供含有約50%至約100%，或其內之增加量，或大於或等於約60%、70%、80%、90%，或100%之抗原專一性之分泌抗體之細胞之經豐富化之細胞族群。
於一實施例，本發明提供一種於任何選擇步驟(例如，自細胞族群選擇特別B細胞及/或選擇藉由專一性細胞產生之抗體)前，藉由使自宿主獲得之細胞族群豐富化隔離單一B細胞之方法。此豐富化步驟可以一、二、三，或更多之步驟實施。於一實施例，單一B細胞係於確認此單一B細胞是否分泌具抗原專一性及/或所欲性質之抗體前自經豐富化之細胞族群隔離。
於一實施例，細胞族群豐富化之方法被用於產生及/或分泌抗體之方法。因此，本發明提供包含於選擇抗體前使細胞族群豐富化之方法。此方法可包含步驟：製備包含至少一抗原專一性之細胞之細胞族群，藉由隔離至少一抗原專一性細胞使細胞族群豐富化而形成經豐富化之細胞族群，及誘發自至少一抗原專一性細胞產生抗體。於一較佳實施例，經豐富化之細胞族群含有多於一抗原專一性之細胞。於一實施例，於自其隔離產生抗體之細胞及/或使用該B細胞產生抗體，或相對應於此一抗體之核酸序列前，經豐富化之族群之每一抗原專一性之細胞係於產生株系抗原專一性B細胞族群之條件下培養。與其間抗體係自具低頻率之抗原專一性細胞之細胞族群產生之習知技術相反，本發明能自高頻率之抗原專一性細胞選擇抗體。因為一豐富化步驟於抗體選擇前使用，用於產生抗體之大部份細胞(較佳係實質上所有細胞)係抗原專一性。藉由自具有增加頻率之抗原專一性之細胞族群產生抗體，抗體之量及變化性增加。
於本發明之抗體選擇方法，抗體係於豐富化步驟及培養步驟(其產生抗原專一性B細胞之株系族群)後選擇。此方法可進一步包含使自一或更多之經隔離之抗原專一性細胞之經選擇之抗體或其部份序列化之步驟。此項技藝所知之用於序列化之任何方法可被使用且可包含使重鏈、輕鏈、可變化區域，及/或互補性決定區域(CDR)序列化。
除豐富化步驟外，抗體選擇方法亦可包含一或更多之對於抗原辨認及/或抗體功能性而篩選細胞族群之步驟。例如，所欲之抗體可具有特定之結構特徵，諸如，與具特定結構之特定抗原決定基或模仿物結合；拮抗劑或激動素之活性；中和化之活性，例如，抑制抗原與配位子間之結合。於一實施例，抗體功能性之篩選係依配位子而定。抗體功能性之篩選不受限地包含恢復抗原配位子與重組受體蛋白質間之自然交互作用之試管內之蛋白質-蛋白質交互作用分析；及依配位子而定且易於監測之以細胞為主之反應(例如，增殖反應)。於一實施例，用於抗體選擇之方法包含藉由測量抑制濃度(IC50)而對於抗體功能性而篩選細胞族群之步驟。於一實施例，至少一經隔離之抗原專一性細胞產生具有少於約100、50、30、25、10μg/mL或其間之增加量之抗體。
除豐富化步驟外，用於抗體選擇之方法亦可包含一或更多之對於抗體結合強度而篩選細胞族群之步驟。抗體結合強度可藉由此項技藝已知之任何方法(例如，BiacoreTM)測量。於一實施例，至少一經隔離之抗原專一性細胞產生具有高抗原親和力(例如，少於約5x10-10 M-1，較佳係約1x10-13至5x10-10、1x10-12至1x10-10、1x10-12至7.5x10-11、1x10-11至2x10-11、約1.5x10-11或更少，或其間之增加量之解離常數(Kd))之抗體。於此實施例，抗體被認為係親和力成熟。於一較佳實施例，抗體之親和力係可與Panorex(決洛單抗)、Rituxan(利妥昔單抗)、Herceptin(提來組單抗)、Mylotarg(真組單抗)、Campath(阿來組單抗)、ZevalinTM(依布里單抗)、ErbituxTM(西土斯單抗)、AvastinTM(比非西單抗)、RaptivaTM(衣法利單抗)、Remicade(印福利單抗)、HumiraTM(阿達利單抗)，及XolairTM(歐瑪利單抗)之任一者之親和力相比擬或更高。較佳地，抗體之親和力係可與HumiraTM之親和力相比擬或更高。抗體之親和力亦可藉由親和力成熟技術增加。於一實施例，至少一細胞族群係對於抗體功能性及抗體結合強度之至少一者，較佳係二者，而篩選。
除豐富化步驟外，抗體選擇方法亦可包含一或更多之對於抗體序列同源性，特別是人類同源性，而篩選細胞族群之步驟。於一實施例，至少一經隔離之抗原專一性細胞產生具有至少約50%至約100%，或其內之增加量，或大於約60%、70%、80%、85%、90%，或95%之一致性之與人類抗體之同源性之抗體。抗體可藉由此項技藝已知之技術(諸如，CDR接枝或選擇性決定殘基接枝(SDR))人類化而產增加與人類序列之同源性。
於另一實施例，本發明亦以IC50、Kd及/或同源性而言依據此間所述之實施例提供抗體本身。
相較於用以獲得對所欲標靶抗原具專一性之分泌抗體之B細胞及單株抗體之其它方法，此間揭露之B細胞選擇方案具有多數個固有之優點。此等優點不受限地包含下述：
第一，已發現當此等選擇程序以所欲抗原(諸如，IL-6或TNF-α)使用時，此等方法係可複製地產生能產生似乎係實質上全部互補之抗體(即，與抗原之各種不同抗原決定基結合之抗體)之抗原專一性B細胞。雖不受理論所限制，但假設此全部互補性係有助於於起始B細胞回收前實施之抗原豐富化步驟。再者，此優點能隔離及選擇具不同性質之抗體，因為此等性質可依專一性抗體之抗原決定基專一性而改變。
第二，已發現B細胞選擇方案係可複製地產生含有單一B細胞，或其後代，分泌一般係以相對較高之結合親和力(即，皮克莫耳或較佳之抗原結合親和力)與所欲抗原結合之單一單株抗體之株系B細胞培養物。相反地，習知之抗體選擇方法易產生相對較不高親和力之抗體，因此，需要大量之篩選程序以隔離具治療潛能之抗體。雖不受理論限制，但假設此方案造成宿主之於活體內之B細胞免疫化(主要免疫化)及其後之於試管內之B細胞刺激(次要之抗原觸發步驟)，其可促進回收之株系B細胞之分泌對抗原標靶具專一性之單一高親和力之單株抗體之能力及傾向。
第三，已觀察到(如此間以IL-6專一性之B細胞所示)B細胞選擇方案係可複製地產生經豐富化之B細胞，其產生平均對所欲標靶具高選擇性(抗原專一性)之IgG。藉由此等方法回收之抗原豐富化之B細胞被認為含有能產生如上所探討之所欲完全互補性之抗原決定基特異度之B細胞。
第四，已觀察到B細胞選擇方案甚至於以小抗原(即，具100個胺基酸或更少，例如，5-50個胺基酸長，之肽)使用時，係可複製地產生分泌小抗原(例如，肽)之單一高親加力抗體之株系B細胞培養物。此係高度驚人，因為產生小肽之高親和力抗體一般係相當困難，勞力密集，且有時甚至不可行。因此，本發明可用以產生對欲肽標靶(例如，病毒、細菌或自體抗原肽)之治療抗體，藉此，能產生具極不同結合性質之單株抗體，或甚至產生不同肽標靶(例如，不同病毒株)之雞尾酒式之單株抗體。此優點可特別地用於生產具所欲價之治療或預防性之疫苗，諸如，誘發對不同HPV株之保護免疫性之HPV疫苗。
第五，B細胞選擇方案，特別是當以自兔子衍生之B細胞使用時，係易可複製地產生抗原專一性之抗體序列，其係與內生性人類免疫血球素極相似(於胺基酸量係約90%相似)且含有擁有與人類免疫血球素極類似之長度之CDR，因此，需極少或無需用以去除可能之免疫源性顧慮之序列改質(典型上最多僅一些CDR殘基可能於母抗體序列改質，且未引入框架外生性殘基)。特別地，較佳地，重組抗體會僅含有用於抗原辨認所需之宿主(兔子)CDR1及CDR2殘基及整個CDR3。藉此，依據B細胞及抗體選擇方案產生之回收抗體序列之高抗原結合親和力維持完整或實質上完整，即使經人類化。
綜言之，此等方法可用以藉由使用比先前所知者更有效率之方案產生展現對於更多獨特抗原決定基之更高結合親和力之抗體。
於一特別實施例，本發明提供一種藉由包含下列步驟之方法識別分泌對所欲抗原具專一性之抗體且選擇性擁有至少一所欲功能性質(諸如，親和力、活動性、細胞溶解活性等)之單一B細胞之方法：
a.使對抗抗原之宿主免疫化；
b.　自宿主收集B細胞；
c.　使收集之B細胞豐富化以增加抗原專一性之細胞之頻率；
d.　產生至少一單一細胞懸浮液；
e.於利於每一培養孔之單一抗原專一性B細胞生存之條件下自單一細胞懸浮液培養亞族族群；
f.自亞族群隔離B細胞；及
g.決定單一B細胞是否產生對抗原具專一性之抗體。
典型上，此等方法會進一步包含全部或部份地隔離及序列化編碼對所欲抗體之多肽及核酸序列之另外步驟。此等序列或其經改質之型式或部份可於所欲宿主細胞表現以對所欲抗原產生重組抗體。
如前所示，相信B細胞之株系族群主要包含產生對抗所欲抗原之抗體之分泌抗體之B細胞。基於以數種抗原及以不同B細胞族群而獲得之實驗結果亦相信依據本發明產生之株系產生之B細胞及自其衍生之經隔離之抗原專一性之B細胞分泌典型上具有相對較高親和力且再者能有效率且可複製地產生與其它自培養之抗原專一性B細胞衍生單株抗體之方法相比具更大之抗原決定基變異度之單株抗體之選擇之單株抗體。於一例示實施例，用於此等B細胞選擇方法之免疫細胞族群會自兔子衍生。但是，其它產生抗體之宿主(包含非人類及人類宿主)可另外地作為免疫B細胞之來源。相信使用兔子作為B細胞來源可促進可藉由此等方法衍生之單株抗體之多變性。再者，依據本發明之自兔子衍生之抗體序列典型上擁有對於人類抗體序列具高序列識別度之序列，使其有利於用於人類，因為其擁有極少之抗原性。於人類化期間，最終之人類化抗體含有遠為較低之外來/宿主殘基含量，通常限於相較於用於接枝之人類標靶序列由於其性質而戲劇性地不同之宿主CDR殘基之亞集。此促進人類化抗體蛋白質之完全活性恢復之可能性。
使用此間揭露之豐富化步骤之抗體選擇方法包含自經免疫化之宿主獲得含有免疫細胞之細胞族群之步驟。自經免疫化之宿主獲得含有免疫細胞之細胞族群之方法係此項技藝已知，且一般包含誘發宿主內之免疫反應及自宿主收集細胞以獲得一或更多之細胞族群。此反應可藉由使對抗所欲抗原之宿主免疫化而引出。另外，作為此等免疫細胞之來源之宿主可自然地曝置於所欲抗原，諸如，已感染特定病原體(諸如，細菌或病毒)或另外地置放對個人遭受之癌症之特定抗體之個人。
宿主動物係此項技藝已知，且不受限地包含天竺鼠、兔子、小鼠、大鼠、非人類之靈長類、人類，與其它哺乳動物及齧齒動物、雞、牛、豬、山羊，及綿羊。較佳地，宿主係哺乳動物，更佳係兔子、小鼠、大鼠，或人類。當曝置於抗原時，宿主產生抗體作為對抗原之部份原生免疫反應。如所述，免疫反應可自然發生，疾病之結果，或可藉由以抗原免疫化而誘發。免疫化可藉由此項技藝所知之任何方法實施，諸如，藉由一或更多之抗原注射，其可具有或不具有用以促進免疫反應之試劑，諸如，完全或非完全之Freund佐劑。於另一實施例，本發明亦注視脾臟內之免疫化。除活體內宿主動物免疫化外，此方法可包含試管內之宿主細胞培養物免疫化。
於免疫反應之容許時間(例如，藉由血清抗體檢測而測量)後，宿主動物細胞被收集以獲得一或更多之細胞族群。於一較佳實施例，收集之細胞族群係對於抗體結合強度及/或抗體功能性而篩選。收集之細胞族群較佳係來自脾臟、淋巴結、骨髓，及/或週邊血液單核細胞(PBMCs)之至少一者。細胞可自多於一來源收集與聚集。某些來源對於抗原可能較佳。例如，脾臟、淋巴結，及PBMC對於IL-6係較佳；且淋巴結對於TNF係較佳。細胞族群係於免疫化後約20至約90天或其間之增加量收集，較佳係約50至約60天。收集之細胞族群及/或自其之單一細胞懸浮液可被豐富化、篩選，及/或培養以供抗體選擇。收集之細胞族群內之抗原專一性細胞之頻率通常係約1%至約5%，或其內之增加量。
於一實施例，來自收集之細胞族群之單一細胞懸浮液被豐富化，較佳係藉由Miltenyi珠材。自具有約1%至約5%之抗原專一性細胞頻率之收集之細胞族群，具約100%之抗原專一性細胞頻率之經豐富化之細胞族群因而被衍生。
使用豐富化步驟之抗體選擇方法包含自經豐富化之細胞族群之至少一抗原專一性細胞產生抗體之步驟。於試管內產生抗體之方法係此項技藝已知，且任何適合方法可被使用。於一實施例，經豐富化之細胞族群(諸如，自收集之細胞族群之抗原專一性單一細胞懸浮液)係以各種細胞密度(諸如，每一孔係50、100、250、500，或1與1000個細胞間之其它增加量)覆蓋。較佳地，亞族群包含不多於約10,000個抗原專一性之分泌抗體之細胞，更佳係約50-10,000，約50-5,000，約50-1,000，約50-500，約50-250個抗原專一性之分泌抗體之細胞，或其內之增加量。然後，此等亞族群係每一培養孔以於一滋養層上之適合介質(例如，以經活化之T細胞調節之介質，特別是1-5%之經活化之兔子T細胞調節之介質)，較佳係於有利於單一之增殖性之分泌抗體之細胞生存之條件下培養。一般包含經照射之細胞物料(例如，EL4B細胞)之滋養層不構成細胞族群之一部份。此等細胞係於一適合介質培養足以產生抗體之時間，例如，約1天至約2週，約1天至約10天，至少約3天，至少約3至約5天，約5天至約7天，至少約7天，或其間之其它增加量。於一實施例，多於一亞族群被同時培養。較佳地，單一之產生抗體之細胞及其後代於每一孔中生存，藉此，於每一孔提供抗原專一性之B細胞之株系族群。於此階段，藉由株系族群產生之免疫血球素G(IgG)係與抗原專一性高度有關。於一實施例，IgGs展現與大於約50%，更佳係大於約70%、85%、90%、95%、99%，或其間之增加量之抗原專一性之相關性。見第3圖，其例示對於IL-6之一例示相關性。此等相關性係藉由於限制性條件下建立B細胞培養物以於每一孔建立單一抗原專一性抗體產物而證實。相較於一般IgG合成之抗原專一性被比較。三族群被觀察：識別單一型式之抗原(生物素化及直接塗覆)之IgG，可檢測之IgG及與免疾化無關之抗原辨認，單獨之IgG產生。IgG產生係與抗原專一性具高度相關性。
含有抗體之上澄液被選擇性地收集，其可依據上述步驟豐富化、篩選，及/或培養以供抗體選擇。於一實施例，上澄液係經豐富化(較佳係藉由抗原專一性分析，特別是ELISA分析)及/或對於抗體功能性而篩選。
於另一實施例，經豐富化，較佳係株系之抗原專一性之B細胞族群(上述之上澄液係選擇性地自其篩選以檢測所欲分泌之單株抗體之存在)被用於隔離一些B細胞，較佳係單一B細胞，然後，以適當分析測試以確認株系B細胞族群內之單一之產生抗體之B細胞之存在。於一實施例，約1至約20個細胞自株系B細胞族群隔離，較佳係少於約15、12、10、5，或3個細胞，或其內之增加量，最佳係單一細胞。篩選較佳係藉由抗原專一性分析，特別是鹵基分析產生，鹵基分析可以全長之蛋白質或其片段實施。含有抗體之上澄液亦可對於抗原結合親和力；抗原-配位子結合之激動作用或拮抗作用，特定標靶細胞型式之增殖之誘發或抑制；標靶細胞之溶解之誘發或抑制，及涉及抗原之生物路徑之誘發或抑制之至少一者篩選。
經識別之抗原專一性細胞可用以衍生編碼所欲單株抗體之相對應核酸序列(AluI消化確認每一孔僅單一單株抗體型式產生)。如上所述，此等序列可經突變，諸如，人類化，以使其適用於人類藥劑。
如所述，用於此方法之經豐富化之B細胞族群亦可依據如上所述之步驟進一步豐富化、篩選，及/或培養以供抗體選擇，其可被重複或以不同順序實施。於一較佳實施例，經豐富化，較佳係株系之抗原專一性細胞族群之至少一細胞被隔離、培養，及用於抗體選擇。
因此，於一實施例，本發明提供一種方法，包含：
a.　自經免疫之宿主收集細胞族群以獲得經收集之細胞族群；
b.　自經收集之細胞族群產生至少一單一細胞懸浮液；
c.　使至少一單一細胞懸浮液豐富化，較佳係藉由色譜分析術，以形成第一之經豐富化之細胞族群；
d.　使第一之經豐富化之細胞族群豐富化，較佳係藉由ELISA分析，以形成第二之經豐富化之細胞族群，其較佳係株系，即，其僅含有單一型式之抗原專一性B細胞；
e.　使第二之經豐富化之細胞族群豐富化，較佳係藉由鹵基分析，以形成第三之豐富化之細胞族群，其含有單一或一些數量之產生對所欲抗原具專一性之抗體之B細胞；及
f.　選擇藉由自第三之豐富化細胞族群隔離之抗原專一性細胞產生之抗體。
此方法可進一步包含一或更多之對於抗體結合強度(親和力、活動性)及/或抗體功能性而篩選收集之細胞族群之步驟。適合之篩選步驟不受限地包含分析方法，檢測：藉由經識別之抗原專一性B細胞產生之抗體是否產生擁有最小抗原結合親和力之抗體，抗體是否激動或拮抗所欲抗原與配位子之結合；抗體是否誘發或抑制特定細胞型式之增殖；抗體是否誘發或引出對抗標靶細胞之細胞溶解反應；抗體是否結合特定之抗原決定基；及抗體是否調節(抑制或激動)涉及抗原之一特定生物路徑或多個路徑。
相似地，此方法可包含一或更多之對於抗體結合強度及/或抗體功能性而篩選第二之豐富化之細胞族群之步驟。
此方法可進一步包含使選擇抗體之多肽序列或相對應核酸序列序列化之步驟。此方法亦包含使用此序列或其片段生產重組抗體，或經基因改質型式之選擇抗體之步驟。使抗體序列突變以保持所欲性質之方法係熟習此項技藝者已知，且包含人類化，嵌合體化，生產單一鏈抗體；此等突變方法可產生擁有所欲效應子功能、免疫源性、穩定性、移除或添加糖基化等之重組抗體。重組抗體可藉由任何適合之重組細胞製造，不受限地包含哺乳動物細胞，諸如，CHO、COS、BHK、HEK-293、細菌細胞、酵母菌細胞、植物細胞、昆蟲細胞，及兩棲動物細胞。於一實施例，抗體係於多倍體酵母菌細胞(即，二倍體酵母菌細胞，特別是畢赤酵母菌)表現。
於一實施，此方法包含：
a.　免疫化對抗抗原之宿主產生宿主抗體；
b.　對於抗原專一性及中和化篩選宿主抗體；
c.　自宿主收集B細胞；
d.　豐富化收集之B細胞產生具有增加之抗原專一性細胞頻率之豐富化細胞族群；
e.　於有利於單一B細胞生存之條件下自豐富化之細胞族群培養一或更多之亞族群以於至少一培養孔內產生株系族群；
f.　決定株系族群是否產生對抗源具專一性之抗體；
g.　隔離單一B細胞；及
h.序列化藉由單一B細胞產生之抗體之核酸序列。
使抗體人類化之方法
於本發明之另一實施例，提供一種使抗體重及輕鏈人類化之方法。於此實施例，下列方法被依循以使重及輕鏈人類化。
輕鏈
1.識別訊息肽序列後第一個之胺基酸。此係框架1之開始。訊息肽係於第一起始蛋胺酸開始，且典型上，但非必要，對於兔子輕鏈蛋白質序列長度係22個胺基酸。成熟多肽之開始亦可藉由N-終結之蛋白質序列化以實驗決定，或可使用預測算法預測。此亦係藉由此領域者傳統上界定之框架1之開始。
實施例：第2圖之RbtVL胺基酸殘基1，開始‘AYDM...’
2.識別框架3之末端。此典型上係於框架1之開始後之86-90個胺基酸，且典型上係以二酪胺酸殘基在前之半胱胺酸殘基。此係藉由此領域者之傳統上界定之框架3之末端。
實施例：第2圖之RbtVL胺基酸殘基88，以‘TYYC’結束。
3.使用如上所定義般之自框架1之開始處開始至框架3之末端之多肽之兔子輕鏈序列，且實施用於最相似人類抗體蛋白質序列之序列同源性研究。此典型上係於抗體突變前之對人類生殖細胞序列之研究，以降低免疫源性之可能性，但是，任何人類序列可被使用。典型上，諸如BLAST之程式可用以研究最具同源性之序列之資料庫。人類抗體序列之資料庫可自各種來源發現，諸如，NCBI(國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information))。
實施例：第2圖之自編號1至88之殘基之RbtVL胺基酸序列係對人類抗體生殖細胞資料庫進行BLAST。前三個獨特之返回序列係於第2圖以L12A、V1及Vx02顯示。
4.　一般，最具同源性之人類生殖細胞可變化輕鏈序列被作為人類化之基礎。但是，熟習此項技藝者可決定使用藉由以包含序列間隙及框架相似性之其它因素為基礎之同源性計算決定非最高同源性之另一序列。
實施例：於第2圖，L12A係最具同源性之人類生殖細胞可變化輕鏈序列，且作為RbtVL人類化之基礎。
5.　決定用於輕鏈人類化之人類同源物之框架及CDR配置(FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2)。此係使用此領域所述之傳統配置。使兔子可變化輕鏈序列與人類同源物比對，同時維持框架及CDR區域之配置。
實施例：於第2圖，RbtVL序列與人類同源序列L12A比對，且框架及CDR區域被指示。
6.　以兔子序列之CDR1及CDR2替換人類同源之輕鏈序列CDR1及CDR2區域。若於兔子及人類之CDR序列間於長度有差異，則使用整個兔子CDR序列及其長度。若較小或較大之序列交換被實施，或若特定殘基被改變，形成之人類化抗體之專一性、親和力及/或免疫源性可能未改變，但是，所述之交換被成功地使用，但不排除允許其它變化之可能性。
實施例：於第2圖，人類同源可變化輕鏈L12A之CDR1及CDR2胺基酸殘基係以RbtVL兔子抗體輕鏈序列之CDR1及CDR2胺基酸序列替換。人類L12A框架1、2及3未改變。形成之人類化序列係如下以編號1至88之殘基之VLh顯示。注意僅不同於L12A人類序列之殘基被畫底線，因此，係自兔子衍生之胺基酸殘基。於此實施例，88個殘基中僅8個不同於人類序列。
7.　於步驟6產生之新雜交序列之框架3後，附接兔子輕鏈抗體序列之整個CDR3。CDR3序列可具各種不同長度，但長度典型上係9至15個胺基酸殘基。CDR3區域及其後框架4區域之開始係以傳統般定義，且可由熟習此項技藝者識別。典型上，框架4之開始及因而之於CDR3之末端係由序列‘FGGG...’組成，但是，一些變化可存在於此等殘基。
實施例：於第2圖，RbtVL(編號89-100之胺基酸殘基)之CDR3係於以VLh指示之人類化序列內之框架3末端後添加。
8.　兔子輕鏈框架4，其典型上係可變化輕鏈之最後11個胺基酸殘基且係以如上之步驟7指示者開始，且典型上係以胺基酸序列‘...VVKR’終結，係以通常來自生殖細胞序列最接近之人類輕鏈框架4同源物替換。經常地，人類輕鏈框架4係具序列‘FGGGTKVEIKR’。非最具同源性或不同之其它人類輕鏈框架4序列可能於未影響形成之人類化抗體之專一性、親和力及/或免疫源性下使用。人類輕鏈框架4序列係於如上之步驟7之CDR3序列後立即添加至可變化輕鏈人類化序列之末端。此現在係可變化輕鏈人類化胺基酸序列之末端。
實施例：於第2圖，RbtVL兔子輕鏈序列之框架4(FR4)係於上顯示同源之人類FR4序列。人類FR4序列係於如上之步驟7添加之CD3區域之末端後立即添加至人類化可變化輕鏈序列(VLh)。
此外，第34及35圖描述自依據本發明之Ab1內之可變化重及輕區域人類化之較佳之人類化抗-IL-6可變化重及可變化輕鏈序列。此等人類化輕及重鏈區域係個別包含於序列識別編號：647或651及於序列識別編號：652、656,657或658中所含之多肽內。序列識別編號：657之人類化可變化重區域之CDR2(於CDR2含有絲胺酸取代)係含於序列識別編號：658內。比對例示之輕及重鏈之變體係個別顯示於第36及37圖，且CDR區域內之序列差異被強調。CDR序列及例示之編碼序列之序列識別子係綜述於上之第1表。
重鏈
1.識別訊息肽序列後第一個之胺基酸。此係框架1之開始。訊息肽係於第一起始蛋胺酸開始，且典型上，對於兔子重鏈蛋白質序列長度係19個胺基酸。典型上，但非總是必要，兔子重鏈訊息肽之最後3個胺基酸殘基係’...VQC’，其後係框架1之開始。成熟多肽之開始亦可藉由N-終結之蛋白質序列化以實驗決定，或可使用預測算法預測。此亦係藉由此領域者傳統上界定之框架1之開始。
實施例：第2圖之RbtVH胺基酸殘基1，開始‘QEQL...’
2.識別框架3之末端。此典型上係於框架1之開始後之95-100個胺基酸，且典型上具有’...CAR’之最終序列(即使丙胺酸亦可為纈草胺酸)。此係藉由此領域者之傳統上界定之框架3之末端。
實施例：第2圖之RbtVH胺基酸殘基98，以‘...FCVR’結束。
3.使用如上所定義般之自框架1之開始處開始至框架3之末端之多肽之兔子重鏈序列，且實施用於最相似人類抗體蛋白質序列之序列同源性研究。此典型上係於抗體突變前之對人類生殖細胞序列之資料庫，以降低免疫源性之可能性，但是，任何人類序列可被使用。典型上，諸如BLAST之程式可用以研究最具同源性之序列之資料庫。人類抗體序列之資料庫可自各種來源發現，諸如，NCBI(國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information))。
實施例：第2圖之自編號1至98之殘基之RbtVH胺基酸序列係對人類抗體生殖細胞資料庫進行BLAST。前三個獨特之返回序列係於第2圖以3-64-04、3-66-04，及3-53-02顯示。
4.一般，最具同源性之人類生殖細胞可變化重鏈序列被作為人類化之基礎。但是，熟習此項技藝者可決定使用藉由以包含序列間隙及框架相似性之其它因素為基礎之同源性計算決定非最高同源性之另一序列。
實施例：第2圖之3-64-04係最具同源性之人類生殖細胞可變化重鏈序列，且作為RbtVH人類化之基礎。
5.　決定用於重鏈人類化之人類同源物之框架及CDR配置(FR1、FR2、FR3、CDR1及CDR2)。此係使用此領域所述之傳統配置。使兔子可變化重鏈序列與人類同源物比對，同時維持框架及CDR區域之配置。
實施例：於第2圖，RbtVH序列與人類同源序列3-64-04比對，且框架及CDR區域被指示。
6.　以兔子序列之CDR1及CDR2替換人類同源之重鏈序列CDR1及CDR2區域。若於兔子及人類之CDR序列間於長度有差異，則使用整個兔子CDR序列及其長度。此外，可能需以兔子重鏈框架1之最後三個胺基酸替換人類重鏈框架1區域之最後三個胺基酸。典型上，但非總是，於兔子重鏈框架1，此三個殘基係於先前為絲胺酸殘基之甘胺酸殘基之後。此外，可能需以兔子重鏈框架2之最後胺基酸替換人類重鏈框架2區域之最後胺基酸。典型上，但非總是，兔子重鏈框架2內於異白胺酸殘基前係甘胺酸殘基。若較小或較大之序列交換被實施，或若特定殘基被改變，形成之人類化抗體之專一性、親和力及/或免疫源性可能未改變，但是，所述之交換被成功地使用，但不排除允許其它變化之可能性。例如，色胺酸胺基酸殘基典型上於兔子重鏈CDR2區域之終端前四個殘基發生，而於人類重鏈CDR2，此殘基典型上係絲胺酸殘基。於此位置使兔子色胺酸殘基變成人類絲胺酸殘基已證明對人類化抗體之專一性或親和力具最小至無之作用，且因此進一步使人類化序列內之兔子序列衍生之胺基酸殘基之含量達最小。
實施例：於第2圖，人類同源可變化重鏈之CDR1及CDR2胺基酸殘基係以RbtVH兔子抗體輕鏈序列之CDR1及CDR2胺基酸序列替換，但箱形殘基除外，其於兔子序列係色胺酸(位置編號63)且於人類序列之相同位置係絲胺酸，且保持為人類絲胺酸殘基。除CDR1及CDR2改變外，框架1之最後三個胺基酸(位置28-30)及框架2之最後殘基(位置49)係維持為兔子胺基酸殘基，而非人類。形成之人類化序列係於下以編號1至98之殘基之VHh顯示。注意僅不同於3-64-04人類序列之殘基被畫底線，且因此係兔子衍生之胺基酸殘基。於此實施例，98個殘基中僅15個不同於人類序列。
7.於步驟6產生之新雜交序列之框架3後，附接兔子重鏈抗體序列之整個CDR3。CDR3序列可具各種不同長度，但長度典型上係5至19個胺基酸殘基。CDR3區域及其後框架4區域之開始係以傳統般定義，且可由熟習此項技藝者識別。典型上，框架4之開始及因而之於CDR3之末端係由序列‘WGXG...’(其中，X通常係O或P)組成，但是，一些變化可存在於此等殘基。
實施例：RbtVH(編號99-110之胺基酸殘基)之CDR3係於以VHh指示之人類化序列內之框架3之末端後添加。
8.兔子重鏈框架4，其典型上係可變化重鏈之最後11個胺基酸殘基且係以如上之步驟7指示者開始，且典型上係以胺基酸序列‘...TVSS’終結，係以通常來自生殖細胞序列最接近之人類重鏈框架4同源物替換。經常地，人類重鏈框架4係具序列‘WGQGTLVTVSS’。非最具同源性或不同之其它人類重鏈框架4序列可能於未影響形成之人類化抗體之專一性、親和力及/或免疫源性下使用。人類重鏈框架4序列係於如上之步驟7之CDR3序列後立即添加至可變化重鏈人類化序列之末端。此現在係可變化重鏈人類化胺基酸序列之末端。
實施例：於第2圖，RbtVH兔子重鏈序列之框架4(FR4)係於上顯示同源之人類重FR4序列。人類FR4序列係於如上之步驟7添加之CD3區域之末端後立即添加至人類化可變化重鏈序列(VHh)。
產生抗體及其片段之方法
本發明亦係有關於生產此間所述之抗體或其片段。相對應於此間所述之抗體或其片段之重組多肽係選自交配勝任酵母菌之多倍體，較佳係二倍體或四倍體系。於一例示實施例，本發明係有關於使用包含多倍體酵母菌之培養物生產持續延長時間之分泌型式之此等重組多肽之方法，即，至少數天至一週，更佳係至少一個月或數個月，且更佳係至少6個月至一年或更久。此等多倍體酵母菌培養物會表現至少10-25毫克/公升之多肽，更佳係至少50-250毫克/公升，更佳係至少500-1000毫克/公升，且最佳係1克/公升或更多之重組多肽。
於本發明之一實施例，一對經基因標記之酵母菌單倍體細胞係以包含所欲雜多聚體蛋白質之亞單元之表現載體轉化。一單倍體細胞包含一第一表現載體，及一包含一第二表現載體之第二單倍體細胞。於另一實施例，二倍體酵母菌細胞會以一或更多之提供表現及分泌一或更多之重組多肽之表現載體轉化。於另一實施例，單一單倍體細胞可以一或更多之載體轉化且用以藉由融合或交配策略產生多倍體酵母菌。於另一實施例，二倍體酵母菌培養物可以一或更多之提供表現及分泌一所欲多肽或多種多肽之載體轉化。此等載體可包含例如線性化之質體或其它線性DNA產物之載體，其可任意地，經由同源重組，或使用重組酶(諸如，Cre/Lox或Flp/Frt)融入酵母菌細胞基因組內。選擇性地，另外之表現載體可被引入單倍體或二倍體細胞內；或第一或第二表現載體可包含另外之編碼序列；用於合成雜三聚物；雜四聚物等。不相同之多肽之表現量可個別校正，且經由適當選擇、載體份數、促進子強度及/或誘發等而調整。經轉化之單倍體細胞經基因交叉或融合。形成之二倍體或四倍體系被用以生產及分泌完全組合及生物功能性之蛋白質、此間所述之人類化抗體，或其片段。
使用二倍體或四倍體細胞生產蛋白質提供不可預期之益處。細胞可於不利於單倍體細胞生長之條件生長以供生產目的，即，依比例增加，及供延長時間，此條件可包含高細胞密度；於最小介質中生長；於低溫生長；於無選擇性壓力穩定生長；且隨時間提供維持異源基因序列之整體性及維持高度表現。雖不欲受此限制，但發明人推理此等益處可至少部份自由二獨特之母單倍體系產生二倍體系而產生。此單倍體系可包含多數之微小自養突變物，此突變物於二倍體或四倍體係互補，能於高度選擇性之條件下生長及促進生長。
經轉化之交配組份單倍體酵母菌細胞提供一種能使亞單元配對所欲蛋白質之基因方法。單倍體酵母菌系係以二表現載體之每一者轉化，第一載體導引一多肽鏈之合成，且第二載體導引第二之不相同多肽鏈之合成。此二單倍體系被交配提供可獲得最佳化標靶蛋白質之產生之二倍體宿主。
選擇性地，另外不相同之編碼序列被提供。此等序列可存在於另外之表現載體上或於第一或第二之表現載體。如此項技藝所知，多數之編碼序列可自個別之促進子獨立地表現；或可經由包含“內部核醣體進入位置”或“IRES”(其係一促進直接內部核醣體進入至順反子(蛋白質編碼區域)之起始密碼子(諸如，ATG)之元素，藉此導致基因之與封蓋無關之轉譯)而協同地表現。酵母菌中作用之IRES元素係由Thompson等人於(2001)P.N.A.S. 98:12866-12868描述。
於本發明之一實施例，抗體序列係與一提供IgA促進之穩定性之分泌J鏈結合地製造(見美國專利第5,959,177；及5,202,422號案)。
於一較佳實施例，此二單倍體酵母菌系每一者係營養缺陷型，且需補充用於單倍體細胞生長之介質。此對營養缺陷體係呈互補，如此，二倍體產物會於缺乏單倍體細胞所需之補充物中生長。許多此等基因標記物於酵母菌係已知，包含胺基酸(例如，met、lys、his、arg等)、核苷(例如，ura3、ade1等)等所需要者。胺基酸標記物對於本發明之方法係較佳。另外，含有所欲載體之二倍體細胞可藉由其它手段選擇，例如，藉由使用其它標記物，諸如，綠色螢光蛋白質、耐抗生素之基因、各種優勢選擇標記物等。
二經轉化之單倍體細胞可被基因交叉，且自此交配結果產生之二倍體系係藉由其雜交營養要求及/或耐抗生素光譜而選擇。另外，此二經轉化之單倍體系之族群係經原生質球化及融合，且二倍體後代再次產生及選擇。藉由任一方法，二倍體系可以其於不同於母體之介質中生長之能力為基礎而識別及選擇性生長。例如，二倍體細胞可於最小之介質(其可包含抗生素)中生長。二倍體之合成策略具有某些優點。二倍體系具有經由基本突變體之較廣互變產生促進量之異源蛋白質之潛能，此會衝擊重組蛋白質之生產及/或分泌。再者，一旦穩定之品系被獲得，用以選擇此等品系之任何抗生素不需於生長介質中連續存在。
如上所示，於某些實施例，單倍體酵母菌可以單一或多個載體轉化，且與未經轉化之細胞交配或融合產生含有此一載體或此等載體之二倍體細胞。於其它實施例，二倍體酵母菌細胞可以一或更多之藉由二倍體酵母菌細胞提供所欲異源多肽之表現及分泌之載體轉化。
於本發明之一實施例，二單倍體系係以多肽庫(例如，抗體重或輕鏈庫)轉化。合成多肽之經轉化之單倍體細胞與互補之單倍體細胞交配。形成之二倍體細胞對功能性蛋白質作篩選。二倍體細胞提供使大量之用於功能性測試之多肽混合物快速、便利且不昂貴地在一起之手段。此技術係可特別地應用於產生雜二聚物蛋白質產物，其中，最佳化之亞單元合成量對於功能性蛋白質表現及分泌係重要。
於本發明之另一實施例，此二亞單元之表現量比例被調節以使產物之產生達最大。雜二聚物亞單元蛋白質量以前已顯示衝擊最終產生之產生(Simmons LC,J Immunol Methods. 2002 May 1;263(1-2):133-47)。調節可於交配步驟前藉由選擇存在於表現載體上之標記物而達成。藉由穩定增加載體之份數，表現量可增加。於某些情況，可所欲地增加一鏈相對於另一者之量，以於多肽之亞單元間達一平衡比例。耐抗生素標記物對於此目的係重要，例如，耐ZeocinTM(腐草黴素)之標記物、耐G418等，且提供藉由選擇耐較高量之ZeocinTM(腐草黴素)或G418之轉化株而使於一品系內含有多數一體化份數之表現載體之品系豐富化之手段。亞單元基因之適當比例(例如，1:1；1:2等)對於有效率之蛋白質產生可能重要。即使當相同促進子被用於轉譯二亞單元，許多其它因子助於表現蛋白質之最終量，因此，可用於增加一經編碼之基因相較於另一者之份數。另外，相較於單份載體系產生較高多肽量之二倍體系係藉由使二者皆具有多份之表現載體之二單倍體系交配而產生。
宿主細胞係以上述表現載體轉化，交配形成二倍體系，及於對於誘發促進子、選擇轉化株或放大編碼所欲序列之基因係適合之傳統營養素介質中培養。數種適於酵母菌生長之最小介質係此項技藝已知。任何此等介質需要時可以鹽(諸如，氯化鈉、鈣、鎂，及磷酸鹽)、緩衝液(諸如，磷酸鹽、HEPES)、核苷(諸如，腺苷酸及胸腺嘧啶核苷)、抗生物、微量元素，及葡萄糖或等化之能源補充。任何其它需要之補充物亦可以熟習此項技藝者所知之適當濃度包含。培養條件(諸如，溫度、pH等)係先前以對於表現而選擇之宿主細胞使用者，且對熟習此項技藝者係顯見。
分泌之蛋白質自培養介質回收。蛋白酶抑制劑(諸如，苯基甲基磺醯氟(PMSF))可用以抑制純化期間之蛋白質降解，且抗生素可被包含以避免外來污染物之生長。組成物可使用此項技藝所知之方法濃縮、過濾、透析等。
本發明之二倍體細胞係用於生產目的而生長。此等生產目的所欲地包含於最小介質中生長，此介質係缺乏預形成之胺基酸及其它錯合生物分子，例如，包含氨作為氮來源，及包含葡萄糖作為能量及碳來源，及鹽作為磷酸鹽、鈣等之來源之介質。較佳地，此生產介質缺乏選擇性試劑，諸如，抗生素、抗生素、胺基酸、嘌呤、嘧啶等。二倍體細胞可生長至高細胞密度，例如，至少約50g/L；更通常係至少約100g/L；且可為至少約300、約400、約500g/L或更多。
於本發明之一實施例，用於生產目的之主題細胞之生長係於低溫實施，此溫度於對數期期間，於穩定期期間，或二者時可較低。“低溫”一辭係指至少約15℃之溫度，更通常係至少約17℃，且可為約20℃，且通常不多於約25℃，更通常係不多於約22℃。於本發明之另一實施例，低溫通常不多於約28℃。生長溫度可衝擊生產培養物內之全長度分泌之蛋白質之生產，且減少培養物生長溫度可強烈促進完整產物產率。減少之溫度似乎助於經由宿主使用之摺疊及後轉譯處理路徑之細胞內之運輸，以產生標靶產物，及降低細胞蛋白酶之降解。
本發明之方法提供分泌之活性蛋白質(特別是哺乳動物蛋白質)之表現。於一實施例，分泌之“活性抗體”於此使用時係指至少二適當配對之鏈之正確摺疊之多聚體，其準確地結合其同源抗原。活性蛋白質之表現量通常係至少約10-50毫克/公升培養物，更通常係至少約100毫克/公升，較佳係至少約500毫克/公升，且可為1000毫克/公升或更多。
本發明之方法可提供於生產期間之宿主及異源編碼序列之增加穩定性。此穩定性係，例如，藉由維持高時間表現量而證實，其中，於約20次之倍數遞增，50次之倍數遞增，100次之倍數遞增，或更多，起始表現量係減少不多於約20%，通常不多於10%，且可減少不多於約5%。
品系穩定性亦提供維持隨時間之異源基因序列一體性，其中，於約20次之倍數遞增，50次之倍數遞增，100次之倍數遞增，或更多，活性編碼序列之序列及必要之轉錄調節元素係維持於至少約99%之二倍體細胞，通常係至少約99.9%之二倍體細胞，且較佳係至少約99.99%之二倍體細胞。較佳地，實質上所有之二倍體細胞維持活性編碼序列之序列及必要之轉錄調節元素。
產生抗體之其它方法係熟習此項技藝者已知。例如，產生嵌合抗體之方法現係此項技藝已知(見，例如，Cabilly等人之美國專利第4,816,567號案；Morrison等人之P.N.A.S. USA,81:8651-55(1984)；Neuberger,M.S.等人之Nature,314:268-270(1985)；Boulianne,G.L.等人之Nature,312:643-46(1984)，此等之每一者之揭示在此被全部併入以供參考之用)。
相同地，生產人類化抗體之其它方法係此項技藝已知(見，例如，Queen等人之美國專利第5,530,101、5,585,089、5,693,762，及6,180,370號案；Winter之美國專利第5,225,539及6,548,640號案；Carter等人之美國專利第6,054,297、6,407,213及6,639,055號案；Adair之美國專利第6,632,927號案；Jones,P.T.等人之Nature,321:522-525(1986)；Reichmann,L.,等人之Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen,M,等人之Science,239:1534-36(1988)，此等之每一者之揭示在此被全部併入以供參考之用)。
具有IL-6結合專一性之本發明之抗體多肽亦可藉由使用熟習此項技藝者所知之傳統技術建構一含有操縱子及編碼抗體重鏈之DNA序列之表現載體而產生，其中，編碼抗體專一性所需之CDR之DNA序列係衍生自非人類細胞源，較佳係兔子B-細胞源，而編碼抗體鏈之剩餘部份之DNA序列係衍生自人類細胞源。
第二表現載體係使用熟習此項技藝者所知之相同傳統手段產生，該表現載體含有操縱子及編碼抗體輕鏈之DNA序列，其中，編碼抗體專一性所需之CDR之DNA序列係衍生自非人類細胞源，較佳係兔子B-細胞源，而編碼抗體鏈之剩餘部份之DNA序列係衍生自人類細胞源。
表現載體係藉由熟習此項技藝者所知之傳統技術轉染至宿主細胞內以產生經轉染之宿主細胞，該經轉染之宿主細胞藉由熟習此項技藝者所知之傳統技術培養產生該抗體多肽。
宿主細胞可與如上所述之二表現載體(含有編碼操縱子及輕鏈衍生之多肽之DNA之第一表現載體及含有編碼操縱子及重鏈衍生之多肽之DNA第二載體)共轉染。此二載體含有不同之可選擇標記物，但較佳地達成實質上相等之重及輕鏈多肽表現。另外，單一載體可被使用，此載體包含編碼重及輕鏈多肽之DNA。重及輕鏈之編碼序列可包含cDNA。
用以表現抗體多肽之宿主細胞可為細菌細胞，諸如，大腸桿菌，或真核細胞。於本發明之一特別較佳實施例，用於此目的之充份定義型式之哺乳動物細胞，諸如，骨髓瘤細胞或中國倉鼠卵(CHO)細胞株可被使用。
可建構載體之一般方法，用以產生宿主細胞所需之轉染方法，及用以自宿主細胞產生抗體多肽之培養方法皆含有傳統技術。雖然較佳地用以產生抗體之細胞株係哺乳動物細胞株，但任何其它適合之細胞株，諸如，細菌細胞株，諸如，大腸桿菌衍生之細菌系，或酵母菌細胞株，可另外地被使用。
相似地，一旦產生，抗體多肽可依據此項技藝之標準程序純化，諸如，交叉流動過濾、硫酸銨沈澱、親和力管柱色譜分析術等。
此間所述之抗體多肽亦可用於設計及合成可用於與本發明之抗體多肽相同之治療應用之肽或非肽之模仿物。見，例如，Saragobi等人之Science,253:792-795(1991)，其內容在此被全部併入以供參考之用。
重及輕鏈多肽及多核苷酸之例示實施例
此段落描述重及輕鏈多肽之例示實施例，與編碼此等多肽之例示多核苷酸。此等例示多核苷酸係適於所揭露畢赤酵母菌之表現系統之表現。
於某些實施例，本發明包含與本申請案所述之多核苷酸具有至少70%，諸如，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，或100%之一致性，或編碼此申請案中所述之多肽，或於低嚴苛性、中度嚴苛性，或高度嚴苛性之條件下雜交至該多核苷酸之多核苷酸，較佳係編碼具有此間所示之生物活性之至少一者(不受限地包含對IL-6多肽之專一結合性)之多肽(例如，免疫血球素重及輕鏈、單鏈抗體、抗體片段等)者。於另一方面，本發明包含一包含此一多核苷酸及/或以此一多核苷酸編碼之多肽之組成物。於另一方面，本發明包含一種治療與IL-6有關或可以IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)預防、治療，或改善之疾病或狀況(例如，惡質症、癌症疲勞、關節炎等)之方法，包含投用一包含此一多核苷酸及/或多肽之組成物。
於某些較佳實施例，重鏈多肽會包含此間所述之重及/或輕鏈多肽之一或更多之CDR序列(包含於此間所述之重及輕鏈多肽內所含者)及一或更多之此間所述之框架區域多肽，包含於第2及34-37圖或第1表所述，及包含於此間所述之重及輕鏈多肽序列內者。於某些較佳實施例，重鏈多肽會包含一或更多之如第2及34-37圖或第1表所述或如此間所述之重或輕鏈多肽內所含之框架4區域序列。
於某些較佳實施例，輕鏈多肽會包含此間所述之重及/或輕鏈多肽之一或更多之CDR序列(包含於此間所述之重及輕鏈多肽內所含者)及一或更多之此間所述之框架區域多肽，包含於第2及34-37圖或第1表所述，及包含於此間所述之重及輕鏈多肽序列內者。於某些較佳實施例，輕鏈多肽會包含一或更多之如第2及34-37圖或第1表所述或如此間所述之重或輕鏈多肽內所含之框架4區域序列。
於此間所述實施例之任何者，除內容中作其它指示外，某些所述之序列可彼此取代。特定序列可彼此取代之描述，若被描述時，需瞭解係例示而非限制性，且亦需瞭解此等取代即使於無例示之取代實施例被描述時亦被包含。例如，若一或更多之Ab1輕鏈多肽被描述，例如，序列識別編號：2、20、647、651、660、666、699、702、706，或709之任何者，另外之Ab1輕鏈多肽可被取代，除非內容作其它指示外。相似地，若一Ab1重鏈多肽被描述，例如，序列識別編號：3、18、19、652、656、657、658、661、664、665、704，或708之任何者，另外之Ab1重鏈多肽可被取代，除非內容作其它指示外。相同地，若一Ab1輕鏈多核苷酸被描述，例如，序列識別編號：10、662、698、701，或705之任何者，另外之Ab1輕鏈多核苷酸可被取代，除非內容作其它指示外。相似地，若Ab1重鏈多核苷酸之一者被描述，例如，序列識別編號：11、663、700、703，或707之任一者，另外之Ab1重鏈多核苷酸可被取代，除非內容作其它指示外。另外，下列族群之任何者之任何成員之描述需瞭解係包含以此族群之任何其它成員取代，其係如下：Ab2輕鏈多肽(序列識別編號：21及667)；Ab2輕鏈多核苷酸(序列識別編號：29及669)；Ab2重鏈多肽(序列識別編號：22及668)；Ab2重鏈多核苷酸(序列識別編號：30及670)；Ab3輕鏈多肽(序列識別編號：37及671)；Ab3輕鏈多核苷酸(序列識別編號：45及673)；Ab3重鏈多肽(序列識別編號：38及672)；Ab3重鏈多核苷酸(序列識別編號：46及674)；Ab4輕鏈多肽(序列識別編號：53及675)；Ab4輕鏈多核苷酸(序列識別編號：61及677)；Ab4重鏈多肽(序列識別編號：54及676)；Ab4重鏈多核苷酸(序列識別編號：62及678)；Ab5輕鏈多肽(序列識別編號：69及679)；Ab5輕鏈多核苷酸(序列識別編號：77及681)；Ab5重鏈多肽(序列識別編號：70及680)；Ab5重鏈多核苷酸(序列識別編號：78及682)；Ab6輕鏈多肽(序列識別編號：85及683)；Ab6輕鏈多核苷酸(序列識別編號：93及685)；Ab6重鏈多肽(序列識別編號：86及684)；Ab6重鏈多核苷酸(序列識別編號：94及686)；Ab7輕鏈多肽(序列識別編號：101、119、687、693)；Ab7輕鏈多核苷酸(序列識別編號：109及689)；Ab7重鏈多肽(序列識別編號：102、117、118、688、691，及692)；Ab7重鏈多核苷酸(序列識別編號：110及690)；Ab1輕鏈CDR1核苷酸(序列識別編號：12及694)；Ab1輕鏈CDR3多核苷酸(序列識別編號：14及695)；Ab1重鏈CDR2多核苷酸(序列識別編號：16及696)及Ab1重鏈CDR3核苷酸(序列識別編號：17及697)。
例示之Ab1編碼之多核苷酸序列係如下所述：
序列識別編號：662：ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
序列識別編號：663：ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
序列識別編號：698:GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACG
序列識別編號：700:GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC
序列識別編號：701：GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
序列識別編號：703：GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
序列識別編號：705:ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
序列識別編號：707:ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
序列識別編號：720:ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCT GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTC AGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAA CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATC CACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCA GTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGC CTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG GGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT
序列識別編號：721：GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGC AGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCC AGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAG AAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGC ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAG GCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGC GACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCA ACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGG CGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT
序列識別編號：722：ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCT GTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAGTC AGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAA CCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATC CACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGC CTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAG GGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGA GGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCAC CATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGA AATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAAC TTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGA TAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAG CAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAA CACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCT GAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAG TGT
序列識別編號:723:GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCA TCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCCAG TCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCA TCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGG CAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCA GCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAAC AGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGT
序列識別編號:724:GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTG
序列識別編號：725：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC
篩選分析
本發明亦包含設計用以助於識別展現與IL-6有關之疾病或異常之症候群之病患之與IL-6有關之疾病及異常之篩選分析。
於本發明之一實施例，本發明之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，係用以檢測自展現與IL-6有關之疾病或異常之症候群之病患獲得之生物樣品中之IL-6之存在。IL-6之存在，或其與一可相比擬之生物樣品中之疾病前之IL-6量相比之升高量，於診斷與IL-6有關之疾病或異常係有利。
本發明之另一實施例提供一種助於診斷與展現此間識別之與IL-6有關之疾病或異常之症候群之病患中之與IL-6有關之疾病或異常之診斷或篩選分析，包含使用後轉譯改質之抗-IL-6抗體或其結合片段或變體分析來自該病患之生物樣品中之IL-6表現量。抗-IL-6抗體或其結合片段或變體可經後轉譯改質以包含於此揭露內容中於前所示之一可檢測之部份。
生物樣品中之IL-6量係使用此間所示之經改質之抗-IL-6抗體或其結合片段或變體決定，且使生物樣品內之IL-6量與標準之IL-6量(例如，正常生物樣品中之量)比較。熟習此項技藝之臨床醫師會瞭解某些變異性會存在於正常生物樣品間，且於評估結果時會考量。
上述分析亦可用以監測一疾病或異常，其中，來自被認為具有與IL-6有關之疾病或異常之病患之生物樣品中獲得之IL-6量與來自相同病患之先前生物樣品內之IL-6量比較，以確認該病患之IL-6量是否以，例如，一治療法而改變。
本發明亦係有關於一種檢測表現IL-6之細胞存在之活體內影像化之方法，包含投用診斷有效量之一診斷組成物。該活體內影像化係用於檢測及圖像化，例如，表現IL-6之腫瘤或轉移瘤及表現IL-6之發炎位置，及可作為用於設計有效之癌症或關節炎治療方案之計劃方法之一部份。此治療方案可包含，例如，放射線、化療、細胞激素治療、基因治療，及抗體治療之一或多者，與作為抗-IL-6抗體或其片段或變體。
熟習此項技藝之臨床醫師會瞭解生物樣品不受限地包含血清、血漿、尿、唾液、分泌黏液、肋膜積液、滑膜液，及脊髓液。
改善或降低與IL-6有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防之方法
於本發明之一實施例，此間所述之IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)係用於改善或降低與IL-6有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。此間所述之IL-6拮抗劑(例如，Ab1)亦可以於下更詳細描述之藥學組成物型式以治療有效量投用至需要治療與IL-6有關之疾病及異常之病患。
於本發明之一實施例，此間所述之IL-6拮抗劑(例如，Ab1)係用於改善或降低與升高之C-反應蛋白質(CRP)有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。此等疾病包含展現慢性發炎之任意疾病，例如，類風濕性關節炎、幼年型類風濕性關節炎、牛皮癬、乾癬性關節病變、僵直性脊椎炎、全身紅斑性狼瘡、克隆氏症、潰瘍性大腸炎、天皰瘡、皮肌炎、多發性肌炎、多發性肌痛症、巨細胞性動脈炎、血管炎、多發性結節性動脈炎、韋格納肉芽腫、川崎氏症、隔離CNS血管炎、丘克-史特勞斯(Churg-Strauss)動脈炎、顯微性多發性動脈炎、顯微性多血管、漢諾克-森萊(Henoch-Schonlein)紫斑症、冷凝球蛋白血管炎、類風濕性血管炎、冷凝球蛋白血症、復發性多軟骨炎、貝西氏症、高安氏動脈炎、缺血性心臟病、中風、多發性硬化症、敗血症、病毒感染之續發性血管炎(例如，B型肝炎、C型肝炎、HIV、巨細胞病毒、艾伯史登-巴爾(Epstein-Barr)病毒、Parvo B19病毒等)、勃氏症、癌症、末期癌症、骨關節炎、全身性硬化症、肢端硬皮綜合症、萊特氏症、骨骼之帕哲特氏症、薛格連氏症候群、1型糖尿病、2型糖尿病、家族性地中海熱、自體免疫血小板過低、自體免疫溶血性黃疸貧血、自體免疫甲狀腺疾病、惡性貧血、白斑、圓形禿、原發性膽汁鬱積性肝硬化、自體免疫慢性活動性肝炎、酒精性肝硬化、病毒性肝炎(包含B及C型肝炎)、其它器官自體免疫疾病、燒傷、特發性肺纖維化、慢性阻塞性肺部疾病、過敏性氣喘、其它過敏狀況，或其等之任何組合。
於本發明之一實施例，此間所述之IL-6拮抗劑(諸如，抗-IL-6抗體(例如，Ab1))，其變體，或其片段，係用於改善或降低與降低之血清白蛋白有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防，例如，類風濕性關節炎、癌症、末期癌症、肝病、腎病、發炎性腸病、乳糜瀉症、外傷、燒傷、與降低之血清白蛋白有關之其它疾病，或其等之任何組合。
於本發明之另一實施例，此間所述之IL-6拮抗劑係與另外之活性劑混合投用至病患。例如，IL-6拮抗劑(諸如，Ab1)可與一或更多之化療劑共同投藥，諸如，VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑、紫杉醇、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、亞葉酸鈣、類固醇、環磷醯胺、美法侖、長春花生物鹼(例如，長春鹼、長春新鹼、長春地辛及長春瑞濱)、莫司汀、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素(例如，IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗劑、毒素共軛單株抗體、腫瘤抗原專一性單株抗體、ErbituxTM、AvastinTM、帕妥珠單抗、抗-CD20抗體、Rituxan、歐克利入馬、歐法土木瑪、DXL625、Herceptin，或其等之任何混合。
於本發明之一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低與疲勞有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。與疲勞有關之疾病及異常不受限地包含一般疲勞、運動誘發之疲勞、與癌症有關之疲勞、纖維肌痛、與發炎疾病有關之疲勞，及慢性疲勞症候。見，例如，Esper DH等人，癌症惡質症症候：代謝及臨床特徵之評論(The cancer cachexia syndrome:a review of metabolic and clinical manifestations),N utr Clin Pract.,2005 Aug;20(4):369-76；Vgontzas AN等人，IL-6及其於人類之晝夜節律分泌(IL-6 and its晝夜節律secretion in humans),Neuroimmunomodulation,2005;12(3):131-40 Robson-Ansley,PJ等人，急性白細胞介素-6投用損害健康受訓練之男性跑步者之運動表現(Acute interleukin-6 administration impairs athletic performance in healthy,trained male runners),Can J Appl Physiol.,2004 Aug;29(4):411-8；Shephard RJ.,對身體活動之細胞激素反應，特別有關於IL-6：來源、作用及臨床運用(Cytokine responses to physical activity,with particular reference to IL-6:sources,actions,and clinical implications),Crit Rev Immunol.,2002;22(3):165-82；Arnold,MC等人，使用白細胞介素-6誘發評估於慢性疲勞症候之經神心理表現(Using an interleukin-6 challenge to evaluate neuropsychological performance in chronic fatigue syndrome),Psychol Med.,2002 Aug;32(6):1075-89；Kurzrock R.,細胞激素於與癌症有關之疲勞之角色(The role of cytokines in cancer-related fatigue)，Cancer,2001 Sep 15;92(6 Suppl):1684-8；Nishimoto N等人，人類化抗-白細胞介素-6受體抗體治療於卡斯托曼病之改善(Improvement in Castleman’s disease by humanized anti-interleukin-6 receptor antibody therapy),Blood,2000 Janl;95(1):56-61；Vgontzas AN等人，晝夜節律白細胞介素-6分泌及睡眠之量及深度(Circadian interleukin-6 secretion and quantity and depth of sleep),J Clin Endocrinol Metab.,1999 Aug;84(8):2603-7；及Spath-SchwalbeE等人，重組人類白細胞介素6於健康男性之內分泌及中樞神經睡眠功能之急性作用(Acute effects of recombinant human interleukin 6 on endocrine and central nervous sleep functions in healthy men),J Clin Endocrinol Metab.,1998 May;83(5):1573-9；此等之每一者之揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
於本發明之一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低惡質症之症候群，或其治療或預防。與惡質症有關之疾病及異常不受限地包含與癌症有關之惡質症、與心臟有關之惡質症、與呼吸有關之惡質症、與腎有關之惡質症，及與年齡有關之惡質症。見，例如，Barton,BE.,白細胞介素-6及用於治療癌症、過度增殖症及腫瘤伴生症候群之新策略(Interleukin-6 and new strategies for the treatment of cancer,hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes),Expert Opin Ther Targets,2005 Aug;9(4):737-52;Zaki MH,等人，CNTO 328，IL-6之單株抗體，抑制裸小鼠之人類腫瘤誘發之惡質症(CNTO 328,a monoclonal antibody to IL-6,inhibits human tumor-induced cachexia in nude mice),Int J Cancer,2004 Sep 10;111(4):592-5;Trikha M,等人，癌症之標靶式抗-白細胞介素-6單株抗體治療：其本原理及臨床證據之評論(Targeted anti-Interleukin-6 monoclonal antibody therapy for cancer:a review of the rationale and clinical evidence),Clin Cancer Res.,2003 Oct 15;9(13):4653-65;Lelli G,等人，癌症厭食症-惡質症之症候之治療：重要再審視(Treatment of the cancer anorexia-cachexia syndrome:a critical reappraisal),J Chemother.,2003 Jun;15(3):220-5;Argiles JM,等人，細胞激素於癌症惡質症之發病(Cytokines in the pathogenesis of cancer cachexia),Curr Opin Clin Nutr Metab Care,2003 Jul;6(4):401-6;Barton BE.,IL-6-樣之細胞激素及癌症惡質症：慢性發炎之結果(IL-6-like cytokines and cancer cachexia:consequences of chronic inflammation),Immunol Res.,2001;23(1):41-58;Yamashita JI,等人，甲羥基孕酮乙酸鹽及癌症惡質症：白細胞介素-6涉及(Medroxyprogesterone acetate and cncer cachexia:Interleukin-6 involvement)，Breast Cancer,2000;7(2):130-5;Yeh SS,等人，老年人惡質症：細胞激素之角色(Geriatric cachexia:the role of cytokines),Am J Clin Nutr.,1999 Aug;70(2):183-97;Strassmann G,等人，藉由抗細胞激素及抗細胞激素-受體治療抑制實驗性癌症惡質症(Inhibition of experimental cancer cachexia by anti-cytokine and anti-cytokine-receptor therapy),Cytokines Mol Ther.,1995 Jun;1(2):107-13;Fujita J,等人，抗-白細胞介素-6受體抗體以溶酶體及ATP-泛素-依賴性之蛋白質分解路徑之調節預防載負結腸-26腺癌之小鼠之肌肉萎縮(Anti-Interleukin-6 receptor antibody prevents muscle atrophy in colon-26 adenocarcinoma-bearing mice with modulation of lysosomal and ATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways),Int J Cancer,1996 Nov 27;68(5):637-43;Tsujinaka T,等人，白細胞介素6基因轉殖小鼠中之白細胞介素6受體抗體抑制肌肉萎縮及調節蛋白質分析系統(Interleukin 6 receptor antibody inhibits muscleatrophy and modulates proteolytic systems in Interleukin 6 transgenic mice),J Clin Invest.,1996 Jan 1;97(1):244-9;Emilie D,等人，投用抗-白細胞介素-6單株抗體至具後天免疫缺乏症候群及淋巴癌之病患：對淋巴癌生長及B臨床症候群之作用(Administration of an anti-Interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma:effect on 1ymphoma growth and on B clinical Symptoms),Blood,1994 Oct 15;84(8):2472-9；及Strassmann G,等人，於實驗癌症惡質症中涉及白細胞介素6之證據(Evidence for the involvement of Interleukin 6 in experimental cancer cachexia),J Clin Invest., 1992 May;89(5):1681-4；其等之每一者之揭示在此被全部併入以供參考之用。
於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低自體免疫疾病及異常之症候群，或其治療或預防。與自體免疫有關之疾病及異常不受限地包含類風濕性關節炎、全身紅斑性狼瘡(SLE)、全身性幼年型自發性關節炎、牛皮癬、乾癬性關節病變、僵直性脊椎炎、發炎性腸病(IBD)、多發性肌痛症、巨細胞性動脈炎、自體免疫血管炎、移植物抗宿主病(GVHD)、修格連氏症候、成人史迪爾氏症。於本發明之一較佳實施例，此間所述之人類化抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低類風濕性關節炎及全身性幼年型自發性關節炎之症候群，或其治療或預防。見，例如，Nishimoto N.,日本之具卡斯托曼病、克隆氏症，及類風濕性關節炎之病患之臨床研究(Clinical studies in patients with Castleman’s disease,Crohn’s disease,and rheumatoid arthritis in Japan),Clin Rev Allergy Immunol.,2005 Jun;28(3):221-30；Nishimoto N等人，以人類化抗-白細胞介素-6受體抗體治療類風濕性關節炎：多重中心，雙盲，安慰劑控制試驗，(Treatment of rheumatoid arthritis with humanized anti-interleukin-6 receptor antibody:a multicenter,double-blind,placebo-controlled trial),Arthritis Rheum.,2004 Jun;50(6):1761-9；Choy E.,白細胞介素6受體作為治療類風濕性關節炎之標靶(Interleukin 6 receptor as a target for the treatment od rheumatoid arthritis),Ann Rheum Dis.,2003 Nov;62 Suppl 2:ii68-9；Nishimoto N等人，於類風濕性關節炎之以人類化抗-白細胞介素6受體抗體MRA重複治療之毒性、藥物動力學，及劑量發現之研究，I/II期之臨床研究(Toxicity,pharmacokinetics,and dose-finding study of repetitive treatment with the humanized anti-interleukin 6 receptoer antibody MRA in rheumatoid arthitis. Phase I/II clinical study),J Rheumatol.,2003 Jul;30(7):1426-35；MiharaM等人，人類白細胞介素-6受體之人類化抗體抑制食蟹獼猴之膠原蛋白關節炎之發展(Humanized antibody to human interleukin-6 receptor inhibits the development of collagen arthritis in cynomolgus monkeys),Clin Immunol.,2001 Mar;98(3):319-26；Nishimoto N等人，風濕病之抗-白細胞介素6受體抗體治療(Anti-interleukin 6 receptor antibody treatment in rheumatic disease),Ann Rheum Dis.,2000 Nov;59 Suppl 1:i21-7；Tackey E等人，全身紅斑性狼瘡之白細胞介素-6阻礙物之基本原理(Rationale for interleukin-6 blockade in systemic lupus erythematosus),Lupus,2004;13(5):339-43；Finck BK等人，白細胞介素6促進NZB/NZW F1小鼠之鼠科狼瘡(Interleukin 6 promotes murine lupus in NZB/NZW F1 mice),J Clin Invest.,1994 Aug;94(2):585-91；Kitani A等人，於具全身紅斑性狼瘡之病患之IL-6對過度B細胞分化之自動刺激作用：IL-6產生及IL-6R表現之分析(Autostimulatory effects of IL-6 on excessive B cell differentiation in patients with systemic lupus erythematosus:analysis of IL-6 production and IL-6 expression),Clin Exp Immunol.,1992 Apr;88(1):75-83；Stuart RA等人，與全身性結締組織異常之活躍性疾病有關之升高之血清白細胞介素-6量(Elevated serum interleukin-6 levels associated with active disease in systemic connective tissue disorders),Clin Exp Rheumatol.,1995 Jan-Feb;13(1):17-22；Mihara M等人，IL-6受體阻礙物抑制NZB/W F1小鼠之自體免疫腎臟病之發生(IL-6 receptor blockage inhibits the onset of自autoimmune kidney disease in NZB/W F1 mice),Clin Exp Immunol.,1998 Jun;12(3):397-402；Woo P等人，具嚴重全身性幼年型自發性關節炎之高加索症兒童之單一上升劑量之MRA之開放標籤II期試驗：IL-6受體阻礙物於此型關節炎之效率原理之證明及延長臨床改善之證實(Open label phase II trial of single,ascending doses of MRA in Caucasian children with severe systemic juvenile idiopathic arthritis:proof of principle of the efficacy of IL-6 receptor blockade in this type of arthritis and demonstration of prolonged clinical improvement),Arthritis Res Ther.,2005;7(6):RI281-8. Epub 2005 Sep 15；Yokota S等人，托株單抗於具全身性幼年型自發性關節炎之兒童之臨床研究(Clinical study of托西利單抗in children with systemic-onset juvenile idiopathic arthritis),Clin Rev Allergy Immunol.,2005 Jun;28(3):231-8；Yokota S等人，人類化重組抗-白細胞介素-6受體抗體於具全身性幼年型自發性關節炎之兒童之治療功效(Therapeutic efficacy of humanized recombinant anti-interleukin-6 receptor antibody in children with systemic-onset juvenile idiopathic arthritis),Arthritis Rheum.,2005 Mar;52(3):818-25；de Benedetti F等人，白細胞介素-6受體之標靶化：全身性幼年型自發性關節炎之新治療？(Targeting the interleukin-6 receptor:a new treatment for systemic juvenile idiopathic arthritis？),Arthritis Rheum.,2005 Mar;52(3):687-93；De Benedetti F等人，全身性幼年型類風濕性關節炎是否係白細胞介素6媒介之疾病？(Is systemic juvenile idiopathic arthritis an interleukin 6 mediated disease？),J Rheumatol.,1998 Feb;25(2):203-7；Ishihara K等人，自體免疫疾病及慢性發炎性增殖疾病中之IL-6(IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferative disease),Cytokine Growth Factor Rev.,2002 Aug-Oct;13(4-5):357-68；Gilhar A等人，細胞激素對於接於裸小鼠之乾癬性皮膚之活體內作用：腫瘤凋亡因子(TNF)受體之涉及(In vivo effects of cytokines on psoriatic skin grafted on nude mice:involvement of the tumor necrosis factor(TNF) receptor),Clin Exp Immunol.,1996 Oct;106(1):134-42；SpadaroA等人，乾癬性關節炎之白細胞介素-6及可溶性白細胞介素-2受體：與臨床及實驗室參數之相關性(Interleukin-6 and soluble interleukin-2 recepor in psoriatic arthritis:correlations with clinical and laboratory parameters),Clin Exp Rheumatol.,1996 Jul-Aug;14(4):413-6；AmeglioF等人，白細胞介素-6及腫瘤凋亡因子量於有效治療期間之乾癬病患之抽吸水泡流體內減少(Interleukin6 and tumor necrosis factor levels decrease in the suction blister fluids of psoriatic patients during effective therapy),Dermatology,1994;189(4):359-63；WendlingD等人，於嚴重脊椎炎情況之抗-CD4及抗-IL-6單株抗體之混合治療(Combination therapy of nti-CD4 and anti-IL-6 monoclonal antibodies in a case of severe spondylarthropathy),Br J Rheumatol.,1996 Dec;35(12):1330；Gratacos J等人，僵直性脊椎炎中之血清細胞激素(IL-6,TNF-a、IL-1β及IFN-γ)：血清IL-6與疾病活性及嚴重性之親密相關性(Serum cytokines(IL-6,TNF-alha,,IL-1 beta and IFN-gamma) in ankylosing spondylitis:a close correlation between serum IL-6 and disease activity and severity),Br J Rheumatol.,1994 Oct;33(10):927-31；Ito H.,以抗-IL-6受體抗體治療克隆氏症(Treatment of Crohn’s disease ith anti-IL-6 receptor antibody),J Gastroenterol.,2005 Mar;40 Suppl 16:32-4；Ito H等人，人類抗-白細胞介素-6受體單株抗體於活性克隆氏症之先期隨機試驗(A pilot randomized trial of a human anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody in active Crohn’s disease),Gastroenterology,2004 Apr;126(4):989-96;discussion 947;Ito H.,IL-6 and Crohn’s disease,Curr Drug Targets Inflamm Allergy,2003 Jun;2(2):12530；Ito H等人，鼠科動物模式之克隆氏症之抗-IL-6受體單株抗體抑制白血球聚集及促進T-細胞死亡(Anti-IL-6 receptor monoclonal antibody inhibits leukocyte recruitment and promotes T-cell apoptosis in a murine model of Crohn’s disease),J Gastroenterol.,2002 Nov;37 Suppl 14:56-61；Ito H.,克隆氏症之抗-白細胞介素-6治療(Anti-interleukin-6 therapy for Crohn’s disease),Curr Pharm Des.,2003;9(4):295-305；salvarani C等人，多發性肌痛症之急性期反應物及復發/重現之危險性：前瞻性後續研究(Acute-phase reactants and the risk of relapse/recurrence in polymyalgia rheumatica:a prospective follow-up study),Arthritis Rheum.,2005 Feb 15;53(1):33-8；Roche NE等人，多發性肌痛症及巨細胞性動脈炎中之白細胞介素-6之產生與疾病活性之相關性(Correlation of interleukin-6 production and disease activity in polymyalgia rheumatica and giant cell arteritis),Arthritis Rheum.,1993 Sep;36(9):1286-94；Gupta M等人，正常兒童週邊血液內之以免疫γ-球蛋白之細胞激素調節及其於川崎氏症治療之可能作用(Cytokine modulation with immune gamma-globulin in peripheral blood of normal children and its implications in Kawasaki disease treatment),J Clin Immunol.,2001 May;21(3):193-9；Noris M等人，高安氏動脈炎中之白細胞介素-6及RANTES：治療決定之指導？(Interleukin-6 and RANTES in Takayasu arteritis:a guide for therapeutic decision？),Circulation,1999 Jul 6;100(1):55-60；Besbas N等人，細胞激素於漢諾克-森萊紫斑症之角色(The role of cytokines in Henoch Schonlein purpura),Scand J Rheumatol.,1997;26(6):456-60；Hirohata S等人，進行性神經-貝西氏症候之腦脊液白細胞介素-6(Cerebrospinal fluid interleukin-6 in progressive Neuro-Behcet’s syndrome),Clin Immunol Immunopathol.,1997 Jan;82(1):12-7；Yamakawa Y等人，具貝西氏症之病患之白細胞介素-6(IL-6)(Interleukin-6(IL-6) in patients with Behcet’s disease),J Dermatol Sci.,1996 Mar;11(3):189-95；Kim DS.,川崎氏症之血清白細胞介素-6(Serum interleukin-6 in Kawasaki disease),Yonsei Med J.,1992 Jun;33(2):183-8；Lange,A.等人，細胞激素，黏著分子(E-選擇素及VCAM-1)及移植體對抗宿主之疾病(Cytokines,adhesion molecules(E-selectin and VCAM-1) and graft-versus-host disease),Arch. 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於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低與骨骼系統有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。與骨骼系統有關之疾病及異常不受限地包含骨關節炎、骨質疏鬆症，及骨骼之帕哲特氏症。於本發明之一較佳實施例，此間所述之人類化抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低骨關節炎之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。見，例如，Malemud CJ.,作為骨關節炎之治療標靶之細胞激素(Cytokines as therapeutic targets for osteoarthritis),BioDrugs,2004;18(1):23-35；Westacott CI等人，骨關節炎之細胞激素：關節損壞之調節劑或標記物？(Cytokines in osteoarthritis”mediators or markers of joint destruction？),Semin Arthritis Rheum.,1996 Feb;25(4):254-72；Sugiyama T.,白細胞介素-6及***素E2於具類風濕性關節炎之停經後婦女之特別係骨質疏鬆症之涉及(Involvement of interleukin-6 and prostaglandin E2 in particular osteoporosis of postmenopausal women with rheumatoid arthritis),J Bone Miner Metab.,2001;19(2):89-96；Abrahamsen B等人，於5年縱貫研究之細胞激素及骨骼損失-荷爾蒙置換治療抑制血清可溶之白細胞介素-6受體且增加白細胞介素-1-受體拮抗劑：丹麥人骨質疏鬆症預防研究(Cytokines and boneloss in a 5-year longitudinal study-hormone replacement therapy suppresses serum soluble interleukin-6 receptor and increases interleukin-1-receptor antagonist：the Danish Osteoporosis Prevention Study),J Bone Miner Res.,2000 Aug;15(8):1545-54；Straub RH等人，停經後婦女之荷爾蒙置換治療及血清白細胞介素-6及骨骼質量指數間之相關性：以族群為主之研究(Hormone replacement therapy and interrelation between serum interleukin-6 and body mass index in postmenopausal women:a population-based study),J Clin Endocrinol Metab.,2000 Mar;85(3):1340-4；Manolagas SC,IL-6型細胞激素及其受體於骨骼之角色(The role of L-6 type cytokines and their receptors in bone),Ann N Y Acad Sci.,1998 May 1;840:194-204；Ershler WB等人，免疫學方面之骨質疏鬆症(Immunologic aspects of osteoporosis),Dev Comp Immunol.,1997 Nov-Dec;21(6):487-99；Jilka RL等人，動情激素喪失後之增加蝕骨細胞發展：藉由白細胞介素-6調節(Increased osteoclast development after estrogen loss:mediation by interleukin-6),Science,1992 Jul 3;257(5066):88-91；Kallen KJ等人，IL-6依賴性之生物學及治療之新發展：我們之立足點為何且我們之選擇為何？(New development in IL-6 dependent biology and therapy:where do we stand and what are the options？),Expert Opin Investig Drugs,1999 Sep;8(9):1327-49；Neale SD等人，血清細胞激素及生長因子對帕哲特氏症之蝕骨細胞形成之影響(The influence of serum cytokines and growth factors on osteoclast formation in Paget’s disease),QJM,2002 Apr;95(4):233-40；Roodman GD，蝕骨細胞於帕哲特氏症及多發性骨髓瘤之作用(Osteoclast function In Paget’s disease and multiple myeloma),Bone,1995 Aug;17(2 Suppl):57S-61S；Hoyland JA等人，帕哲特氏症之白細胞介素-6、IL-6受體，及IL-6核因子基因表現(Interleukin-6,IL-6 receptor,and IL-6 nuclear factor gene expression in Paget’s disease),J Bone Miner Res.,1994 Jan;9(1):75-80；及Roodman GD等人，白細胞介素6.　骨骼之帕哲特氏症之可能自分泌/旁分泌因子(Interleukin 6. A potential autocrine/paracrine factor in Paget’s disease of bone),J Clin Invest.,1992 Jan;89(1):46-52；此等之每一者之揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低與癌症有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。與癌症有關之疾病及異常不受限地包含棘皮瘤、腺泡細胞癌、聽神經瘤、肢端黑色素瘤、末端孔管癌、急性嗜酸粒細胞白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性巨核細胞白血病、急性單核細胞白血病、急性具成熟現象之骨髓母細胞白血病、急性骨髓樹突細胞白血病、急性骨髓白血病、急性前髓細胞性白血病、釉質瘤、腺癌、腺樣囊軑癌、腺腫瘤、腺瘤樣齒源性腫瘤、腎上腺皮質癌、成人T-細胞白血病、侵略性NK-細胞白血病、與AIDS有關之癌症、與AIDS有關之淋巴癌、肺泡狀軟組織肉瘤、釉細胞性纖維瘤、肛門癌、異生性大細胞淋巴癌、異生性甲狀腺癌症、血管免疫母細胞T-細胞淋巴癌、血管肌肉脂肪瘤、血管肉瘤、闌尾癌、星狀細胞瘤、非典型畸胎類橫紋肌細胞瘤、基底細胞癌、類基底癌、B-細胞白血病、B-細胞淋巴癌、腎集尿管癌、膽道癌、膀胱癌、胚細胞癌、骨癌、骨腫瘤、腦幹膠質瘤、腦瘤、乳癌、布雷納氏腫瘤、支氣管瘤、細支氣管肺泡腺癌、褐色腫瘤、巴氏淋巴癌、不明原發部位之癌症、類癌瘤、癌、原位癌、陰莖癌、不明原發部份之癌、癌肉瘤、卡斯托曼病、中樞神經系統胚芽腫瘤、小腦星狀細胞瘤、大腦星狀細胞瘤、子宮頸癌、膽管癌、軟骨瘤、軟骨肉瘤、原索瘤、絨毛膜癌、脈絡叢乳突瘤、慢性淋巴球白血病、慢性單核細胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓增殖性疾病、慢性嗜中性白血病、透明細胞腫瘤、結腸癌、結腸直腸癌、顱咽瘤、皮膚T-細胞淋巴癌、迪革斯症、隆突性皮膚纖維肉瘤、皮樣囊腫、促纖維化小圓細胞腫瘤、瀰漫性大B細胞淋巴癌、胚胎期發育不良神經上皮瘤、胚胎癌、肉胚竇瘤、子宮內膜癌、子宮內膜子宮癌、子宮內膜樣腫瘤、腸道病變有關之T-細胞淋巴癌、室管膜胚細胞癌、室管膜瘤、上皮狀肉瘤、紅白血病、食道癌、嗅神經母細胞癌、爾文氏腫瘤家族、爾文氏家族肉瘤、爾文氏肉瘤、顱外生殖細胞腫瘤、睪丸外生殖細胞腫瘤、肝臟外膽管癌、乳腺外帕哲特氏症、輸卵管癌、胎中胎、纖維瘤、纖維肉瘤、小囊淋巴癌、小囊甲狀腺癌、膽囊癌、膽囊癌、神經節膠質細胞瘤、神經節瘤、胃癌症、胃淋巴癌、胃腸癌、類胃腸癌腫瘤、胃腸基質腫瘤、胃腸基質腫瘤、生殖細胞腫瘤、生殖細胞瘤、妊娠絨毛膜癌、妊娠滋養母細胞腫瘤、骨骼之巨細胞性腫瘤、多形式膠質胚細胞癌、神經膠質瘤、腦神經膠質瘤、血管球腫瘤、高血糖素瘤、性腺胚細胞癌、卵泡細胞腫瘤、髮樣細胞白血病、髮樣細胞白血病、頭頸癌、頭頸癌、心臟癌、血管胚細胞癌、血管周圍細胞瘤、血管肉瘤、惡性血液疾病、肝細胞癌、肝脾T-細胞淋巴癌、遺傳性***-卵巢癌症候、何金氏淋巴癌、何金氏淋巴癌、下咽癌、下視丘神經膠質瘤、發炎性乳癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞癌、胰島細胞腫瘤、幼年型骨髓單核細胞白血病、卡波西氏肉瘤、卡波西氏肉瘤、腎臟癌、克拉基氏腫瘤、克魯根堡氏腫瘤、喉癌、喉癌、惡性痣型黑色素瘤、白血病、白血病、唇及口腔癌症、脂質肉瘤、肺癌、黃體瘤、***瘤、***肉瘤、淋巴上皮瘤、淋巴白血病、淋巴癌、巨球蛋白血症、惡性纖維組織球瘤、惡性纖維組織球瘤、骨骼之惡性纖維組織球瘤、惡性神經膠質瘤、惡性間皮癌、惡性週圍神經鞘腫瘤、惡性類橫紋肌細胞腫瘤、惡性氘核腫瘤、MALT淋巴癌、被套細胞淋巴癌、肥大細胞白血病、縱膈生殖細胞腫瘤、縱膈腫瘤、骨髓甲狀腺癌症、骨髓胚細胞癌、骨髓胚細胞癌、神經上皮瘤、黑色素瘤、黑色素瘤、腦膜瘤、麥克氏細胞癌、間皮癌、間皮癌、具潛藏原發腫瘤之轉移性鱗狀頸部癌症、轉移性尿路上皮癌、混合米勒氏腫瘤、單核細胞白血病、口腔癌、卵巢腫瘤、多重中心卡斯托曼病、多發性內分泌腺瘤症候群、多發性骨髓瘤、多發性骨髓瘤、蕈狀肉芽腫、蕈狀肉芽腫、骨髓造血不良症、骨髓造血不良症候群、骨髓白血病、骨髓肉瘤、骨髓殖生症、黏液瘤、鼻腔癌、鼻咽癌、鼻咽癌、腫瘤、神經瘤、神經胚細胞癌、神經胚細胞癌、神經纖維瘤、神經瘤、結節狀黑色素瘤、非何金氏淋巴癌、非何金氏淋巴癌、非黑色素瘤皮膚癌、非小細胞肺癌、眼部腫瘤、寡星狀細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、嗜酸細胞瘤、視神經鞘腦膜瘤、口腔癌、口腔癌、口咽癌症、骨肉瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞腫瘤、卵巢低惡性腫瘤、***之帕哲特氏症、潘氏腫瘤、胰臟癌、胰臟癌、乳突甲狀腺癌、乳突瘤、副神經膠質瘤、副鼻竇癌、副甲狀腺癌、陰莖癌、血管周圍上皮細胞腫瘤、喉癌、嗜鉻細胞瘤、中間分化之松果體實質性腫瘤、松果體胚細胞癌、下垂體腺腫、腦下垂體腺腫、腦下垂體腫瘤、漿細胞腫瘤、肺肋膜腔胚細胞癌、胚組織瘤、先質T-淋巴細胞性淋巴癌、原發性中樞神經系統淋巴癌、原發性積液淋巴癌、原發性肝細胞癌、原發性肝癌、原發性腹膜癌、原始性神經上皮細胞腫瘤、***癌症、腹膜偽黏液瘤、直腸癌、腎細胞癌、涉及染色體15上之NUT基因之呼吸道癌、神網膜胚細胞癌、肌橫紋肉瘤、橫紋肌肉瘤、雷特氏轉化、畸胎瘤、唾腺癌、肉瘤、神經鞘纖維瘤、皮脂腺癌、續發性腫瘤、***細胞瘤、漿液性腫瘤、Sertoli-Leydig細胞腫瘤、性索基質腫瘤、Szary症候群、印指環狀細胞癌、皮膚癌、小藍圓細胞腫瘤、小細胞癌、小細胞肺癌、小細胞淋巴癌、小腸癌、軟組織肉瘤、生長抑制素瘤、煤煙疣、脊髓腫瘤、脊腫瘤、脾邊緣區域淋巴癌、鱗狀細胞癌、胃癌、表淺散播型黑色素瘤、天幕上神經外胚層母細胞腫瘤、表面上皮-基質腫瘤、滑液肉瘤、T-細胞急性淋巴細胞性白血病、T-細胞大顆粒淋巴細胞白血病、T-細胞白血病、T-細胞淋巴癌、T-細胞幼淋巴球白血病、畸胎瘤、未端淋巴癌、睪丸癌、泡膜細胞瘤、喉癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、腎骨盆及輸尿管之過渡細胞癌、過波細胞癌、擠尿管癌、尿道癌、泌尿生殖器腫瘤、子宮肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、***癌、微那莫里森症候群、疣狀癌、視覺路徑神經膠質瘤、外陰癌、Waldenstrm氏巨球蛋白血症、Warthin氏腫瘤、Wilms氏腫瘤，或其等之任何組合，與癌症化療及癌症化療毒性之抗藥性。見，例如，Hirata T等人，試管內之新製及株系人類骨髓瘤細胞之人類化抗-白細胞介素-6受體單株抗體誘發之細胞凋亡(Humanized anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody induced細胞死亡of fresh and cloned human mueloma cell in vitro),Leuk Res.,2003 Apr;27(4):343-9；Bataille R等人，抗-白細胞介素-6鼠科動物單株抗體於末期多發性骨髓瘤之生物作用(Biologic effects of anti-interleukin-6 murine monoclonal antibody in advanced multiple myeloma),Blood,1995 Jul 15;86(2):685-91；Goto H等人，於試管內之小鼠抗人類白細胞介素-6受體單株抗體抑制新製人類骨髓瘤細胞之增殖(Mouse anti-human interleukin-6 receptor monoclonal antibody inhibits proliferation of fresh human myeloma cells in vitro),Jpn J Cancer Res.,1994 Sep;85(9):958-65；Klein B等人，具血漿細胞白血病之病患之鼠科動物抗-白細胞介素-6單株抗體治療(Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasma cell leukemia),Blood,1991 Sep 1;78(5):1198-204；Mauray S等人，Epstein-Barr病毒依賴性之淋巴增殖疾病：IL-6之重要角色(Epstein-Barr virus-dependent lymphoproliferative disease:critical role of IL-6),Eur J Immunol.,2000 Jul;30(7):2065-73；Tsunenari T等人，多發性骨髓瘤之新穎異種皮移植模式及人類化抗體對抗人類白細胞介素-6受體之功效(New xenograft model of multiple 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於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低缺血性心臟病、動脈粥狀硬化症、肥胖、糖尿病、氣喘、多發性硬化症、阿茲罕默氏症、腦血管疾病、發熱、急性期反應、過敏、貧血、發炎性貧血(慢性疾病之貧血)、高血壓、憂鬱症、與慢性疾病有關之憂鬱症、血栓、血小板增多、急性心臟衰竭、代謝症候、流產、肥胖、慢性攝護腺炎、腎絲球腎炎、骨盆發炎症、再灌流傷害，及移植排斥之症候群，或其治療或預防。見，例如，Tzoulaki I等人，作為一般族群之漸進性週邊動脈粥狀硬化症之預測子之C-反應蛋白質、白細胞介素-6，及可溶性黏著分子(C-reactive protein,interleukin-6,and soluble adhesion molecules as predictors of progressive peripheral atherosclerosis in the general population):Edinburgh Artery Study,Circulation,2005 Aug 16;112(7):976-83,Epub 2005 Aug 8；Rattazzi M等人，血管疾病之C-反應蛋白質及白細胞介素-6：罪犯或消極逃避者？(C-reactive rotein and interleukin-6 in vascular disease:culprits or passive bystanders？),J Hypertens.,2003 Oct;21(10):1787-803；Ito T等人，HMG-CoA還原酶抑制劑降低人類血管平滑肌細胞之白細胞介素-6合成(HMG-CoA reductase inhibitors reduce interleukin-6 synthesis in human vascular smooth muscle cells),Cardiovasc Drugs Ther.,2002 Mar;16(2):121-6；Stenvinkel P等人，ESRD之死亡、營養不良，及動脈粥狀硬化症：白細胞介素-6之角色為何？(Mortality,malnutrition,and atherosclerosis in ESRD:what is the role of interleukin-6 ?),Kidney 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於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係用於改善或降低與細胞激素風暴有關之疾病及異常之症候群，或其治療或預防。與細胞激素風暴有關之疾病及異常不受限地包含移植物抗宿主病(GVHD)、禽流感、天花、流行性感冒、成人呼吸窘迫症候群(ARDS)、嚴重急性呼吸症候群(SARS)、敗血症，及全身性發炎反應症候群(SIRS)。見，例如，Cecil,R. L.,Goldman,L.,& Bennett,J. C.(2000).塞西爾醫學教科書(Cecil textbook of medicine). Philadelphia:W.B. Saunders；Ferrara JL等人，移植物抗宿主病之細胞激素風暴：白細胞介素-1之重要效應子角色(Cytokine storm of graft-versus-host disease:a critical effector role for interleukin-1),Transplant Proc. 1993 Feb;25(1 Pt 2):1216-7；Osterholm MT,下一流行病之準備(Preparing for the Next Pandemic),N Engl J Med. 2005 May 5;352(18):1839-42；Huang KJ等人，SARS病患之與干擾素-γ有關之細胞激素風暴(An interferon-gamma-related cytokine storm in SARS病患),J Med Virol. 2005 Feb;75(2):185-94；及Cheung CY等人，藉由A型流行性感冒(H5N1)病毒於人類巨噬細胞內引入促發炎之細胞激素：人類疾病之不尋常嚴重性之機構？(Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages by influenza A(H5N1) viruseS:a mechanism for the unusual severity of human disease?) Lancet. 2002 Dec 7;360(9348):1831-7。
於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其片段或變體，係作為助清醒劑。
投藥
於本發明之一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，係以接受患者體重之約0.1與20毫克/公斤間之濃度投用至患者，諸如，約0.4毫克/公斤、約0.8毫克/公斤、約1.6毫克/公斤，或約4毫克/公斤。於本發明之一較佳實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，係以接受患者體重之約0.4毫克/公斤之濃度投用至患者。於本發明之一較佳實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，係以每26週或更少週一次，諸如，每16週或更少週一次，每8週或更少週一次，或每4週或更少週一次，之頻率投用至接受患者。於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，係以最多約每1週一次，諸如，最多約每2週一次，諸如，最多約每4週一次，諸如，最多約每8週一次，諸如，最多約每12週一次，諸如，最多約每16週一次，諸如，最多約每24週一次，之頻率投用至接受患者。
需瞭解有效劑量可依接受患者之屬性，諸如，年齡、性別、懷孕情狀、身體質量指數、瘦身體質量、組成物給予之狀況、可能影響組成物之代謝或容忍度之接受患者之其它健康狀況、接受患者之IL-6量，及對組成物之阻抗性(例如，病患發展對抗此組成物之抗體而引起)而定。熟習此項技藝者能經由例行實驗決定有效劑量及投藥頻率，例如，藉由此間之揭露內容及於Goodman,L. S.,Gilman,A.,Brunton,L. L.,Lazo,J. S.,＆ Parker,K. L.(2006). Goodman及Gilman之治療藥理基礎(Goodman ＆ Gilman's the pharmacological basis of therapeutics). New York:McGraw-Hill;Howland,R. D.,Mycek,M. J.,Harvey,R. A.,Champe,P. C.,＆ Mycek,M. J. (2006). Pharmacology. Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia:Lippincott Williams ＆ Wilkins;and Golan,D. E. (2008).藥理原則：藥物治療之病理生理基礎(Principles of pharmacology:the pathophysiologic basis of drug therapy). Philadelphia,Pa.,[etc.]:Lippincott Williams ＆ Wilkins之教示而指導。
於本發明之另一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，係以一藥學組成物投用至患者。
“藥學組成物”係指一適於投藥至哺乳動物之化學或生物學之組成物。此等組成物可被特別配製以供經由不受限地包含口頰、表皮、更膜外、吸入、動脈內、心臟內、顱腔內、皮內、肌內、鼻腔內、眼內、腹膜內、脊內、腦脊髓膜內、靜脈內、口、腸胃外、以灌腸劑或栓劑經直腸、皮下、皮下、舌下、透皮式，及透黏膜之多種路徑之一或更多而投藥。此外，投藥可藉由注射、粉末、液體、凝膠、滴液，或其它投藥手段發生。
於本發明之一實施例，此間所述之抗-IL-6抗體，或其IL-6結合片段或變體，與該抗體片段或變體之組合物，可選擇性地與一或更多之活性劑混合而投藥。此等活性劑包含止痛、退熱、抗發炎、抗生素、抗病毒，及抗細胞激素之藥劑。活性劑包含TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝細胞生長因子(HGF)、海帕西啶之激動素、拮抗劑，及調節劑，包含具對抗任何前述者之反應性之抗體，及具對抗任何其抗體之反應性之抗體。活性劑亦包含2-芳基丙酸、醋氯芬酸、愛斯美特、乙醯基水楊酸(阿斯匹靈)、烯氯苯乙酸、阿明洛芬、阿莫西林、氨基安替比林、芳基烷基酸、可札丙酮、貝諾酯/貝諾酯、苯噁洛芬、溴芬那酸、卡洛芬、塞來昔布、膽鹼水楊酸鎂、氯非宗、COX-2抑制劑、右旋布洛芬、右酮洛芬、待克菲那、氟苯水楊酸、屈惡昔康、乙水楊胺、伊托多雷、依托考昔、法西拉胺、芬那酸、苯酮酸、苯氧布若芬、氟芬那酸、氟諾洛芬、氟比洛芬酯、布洛芬、布洛森、吲哚美辛、吲哚洛芬、凱布宗、酮基布洛芬、酮咯酸、氯諾昔康、洛索洛芬、羅美昔布、美楊酸鎂、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水楊酸甲酯、莫非布宗、萘丁美酮、奈普生、N-芳基鄰胺基苯甲酸、奧沙美辛、歐洒普辛、昔康、羥布宗、帕瑞昔布、非那宗、苯基丁唑酮、苯基丁唑酮、吡羅昔康、吡洛芬、洛芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、洛芬可昔、雙水楊酸鹽、水楊醯胺、水楊酸酯、苯磺唑酮、亞磺酸茚乙酸、舒洛芬、特若西卡、泰普菲酸、托芬那酸酸、托美汀，及伐地昔布。抗生物包含愛黴素、胺基糖苷、安默西林、青黴素、袢黴素、阿斯凡納明、阿齊黴素、阿諾西林、氮烯內醯胺、崔西桿菌素、碳頭孢烯、碳青黴烯、羧芐青黴素、頭孢克洛、頭孢羥氨芐、頭孢氨芐、頭孢噻吩、頭孢金素、羥芐四唑頭孢菌素、頭孢唑啉、頭孢地尼、頭孢妥侖、頭孢吡肟、頭孢克肟、頭孢哌酮、西氟士林、西氟士汀、頭孢泊肟、西福撲菌、西他利汀、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢比普酯、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢菌素、氯絲菌素、西拉他汀、環丙沙星、克拉黴素、克林達黴素、氯唑西林、黏菌素、複方磺胺甲基異噁唑、達福普丁、去氧金黴素、二氯唑西林、地紅黴素、多尼培南、多西環素、依諾沙星、厄他培南、紅黴素、乙胺丁醇、氟氯唑西林、弗斯黴素、富來頓、夫西地酸、加替沙星、膠達那黴素、慶大黴素、幾丁聚醣、除莠黴素、亞胺培那、異菸鹼硫胼、卡那黴素、左氧氟沙星、克林黴素、利奈唑胺、洛美沙星、氯碳孢頭、大環內酯、磺胺米隆、美羅培南、甲氧西林、甲硝唑、美洛西林、米諾環素、單環胺基類、美西沙星、莫匹羅星、奈夫西林、新黴素、奈替米星、呋喃妥因、氟諾沙星、氧氟沙星、扼塞青黴素、土黴素、巴母黴素、盤尼西林、盤尼西林類、哌拉西林、平板黴素、多黏菌素B、多肽、百浪多息、吡醯胺、喹諾酮類、奎奴普丁、利福平辛、利福平、羅紅黴素、壯觀黴素、鏈黴素、磺胺醋醯、磺胺甲二唑、氨苯磺醯胺、柳氨磺吡啶、硫代異噁唑、磺胺類、替考拉寧、泰利黴素、四環黴素、四環黴素類、噻卡青黴素、替硝唑、磺醯尿素、甲氧芐啶、甲氧芐啶-磺胺甲噁唑、醋竹桃黴素、曲伐沙星，及萬古黴素。活性劑亦包含醛固酮、倍氯米松、倍他米松、皮質類固醇、考地索、乙酸可體松、乙酸去氧皮質酮、***、乙酸氟氫可體松、糖皮質素類、乙酸氫可體松、甲基去氫皮質醇、去氫皮質醇、潑尼松、類固醇，曲安奈德。抗病毒劑包含阿巴卡韋、無環鳥苷、無環鳥苷、阿德福韋酯、金剛胺、安佩那維、抗逆轉錄病毒劑固定劑量複合劑、抗逆轉錄病毒劑增效增強子、阿爾比朵、阿札那韋、阿特利拉、溴呋啶、西多福韋、卡貝滋、地瑞納韋、地拉韋啶、去羥肌苷、二十二醇、依度尿苷、依發韋侖、恩曲他濱、恩夫韋肽、恩替卡韋、進入抑制劑、泛昔洛韋、福米韋森、弗沙佩那維、膦甲酸、膦乙酸、融合抑制劑、更昔洛韋、嘉達喜、伊班他濱、碘苷、咪喹莫特、異丙肌苷、印地那韋、肌苷、整化酶抑制劑、干擾素、第I型干擾素、第II型干擾素、第III型干擾素、拉脈優啶、洛匹那韋、洛韋胺、馬拉維洛、MK-0518、嗎啉胍、奈非那韋、奈弗拉平、蕾沙瓦、核苷類似物、奧司他韋、噴昔洛韋、帕拉米韋、普利康那利、鬼臼毒素、蛋白酶抑制劑、反轉錄酶抑制劑、利巴韋林、金剛乙胺、利托那韋、沙昆那韋、司他夫定、泰諾福韋、泰諾福韋富馬酸酯、替拉那韋、曲氟尿苷、三協韋、托孟他定、舒發泰、伐昔洛韋、伐更昔洛韋、韋克韋羅、阿糖腺苷、韋拉密汀、札西他濱、札那米韋，及齊多夫定。此等活性劑之任何適合組合物亦被注視。
“藥學賦形劑”或“藥學上可接受之賦形劑”係一於其間活性治療劑被配製之載劑，通常係液體。於本發明之一實施例，活性治療劑係此間所述之人類化抗體，或其一或更多之片段或變體。賦形劑一般不提供此組成物任何藥理活性，即使其可提供化學及/或生物學穩定性，及釋放特性。例示之組成物可，例如，於Remington’s Pharmaceutical Sciences,第19版,Grennaro,A.,Ed.,1995發現，其被併入以供參考之用。
於此使用時，“藥學上可接受之載劑”或“賦形劑”包含任何及所有之藥理可相容之溶劑、分散介質、塗料、抗細菌及抗黴菌劑、等滲透及吸收延遲劑。於一實施例，載劑係適於腸胃外之投藥。另外，載劑可適於靜脈內、腹膜內、肌內，或舌下之投藥。藥學上可接受之載劑包含無菌水溶液或分散液及用於即興製備無菌可注射之溶液或分散液之無菌粉末。此等介質及試劑於藥學活性物質之使用係此項技藝已知。除任何傳統介質或試劑與活性化物不相容之範圍外，其於本發明之藥學組成物之使用被注視。補充之活性化合物亦可被併納於此等組成物內。
於可用於靜脈內投用本發明之用於癌症指示之抗體(包含Ab1)之本發明之一實施例，投藥組成物包含約10.5毫克/毫升之抗體、25mM之組胺酸鹼、磷酸(適當至pH 6)，及250mM之山梨糖醇，或另外地係由此等組成。
於可用於靜脈內投用本發明之用於癌症指示之抗體(包含Ab1)之本發明之另一實施例，投藥組成物包含約10.5毫克/毫升之抗體、12.5mM之組胺酸鹼、12.5mM之組胺酸HCl(或25mM之組胺酸鹼及氫氯酸(適當至pH 6))、250mM之山梨糖醇，及0.015%(w/w)之聚山梨醇酯80，或另外地係由此等組成。
於可用於皮下投用本發明之用於類風濕性關節炎指示之抗體(包含Ab1)之本發明之一實施例，投藥組成物包含約50或100毫克/毫升之抗體、約5mM之組胺酸鹼、約5mM之組胺酸HCl(成最終pH 6)、250mM之山梨糖醇，及0.015%(w/w)之聚山梨醇酯80，或另外地由此等組成。
於可用於皮下投用本發明之用於類風濕性關節炎指示之抗體(包含Ab1)之本發明之另一實施例，投藥組成物包含約20或100毫克/毫升之抗體、約5mM之組胺酸鹼、約5mM之組胺酸HCl(成最終pH 6)、250至280mM之山梨糖醇(或與蔗糖混合之山梨糖醇)，及0.015%(w/w)之聚山梨醇酯80，或另外地由此等組成，該組成物於運送玻璃瓶具有氮氣上部空間。
藥學組成物於製造及貯存條件下典型上需為無菌且穩定。本發明注視藥學組成物係以冷凍乾燥型式存在。組成物可以溶液、微乳化液、微脂類，或適於高藥物濃度之其它精心安排之結構配製。載劑可為含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇，及液體聚乙二醇)，及其等之適合混合物之溶劑或分散介質。本發明注視於此藥學組成物中包含穩定劑。
於許多情況，較佳係於組成物中包含等滲透劑，例如，糖、聚醇(諸如，甘露糖醇、山梨糖醇)，或氯化鈉。可注射組成物之延長吸收可藉由於組成物中包含延遲吸收劑(例如，單硬脂酸鹽及明膠)而發生。再者，鹼多肽可以時間釋放組成物而配製，例如，包含緩慢釋放聚合物之組成物。活性化合物可與會保護化合物抗快速釋放之載劑製備，諸如，包含植入物及微封裝遞送系統之控制式釋放之組成物。生物可降解、生物可相容之聚合物可被使用，諸如，乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酯類、聚乳酸及聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLG)。用於製備此等組成物之許多方法係熟習此項技藝者所知。
對於每一所述實施例，化合物可藉由各種藥劑型式投藥。熟習此項技藝者所知之任何生物學可接受之藥劑型式，及其等之組合，被注視。此等藥劑型式之例子不受限地包含可重組之粉末、酏劑、液體、溶液、懸浮液、乳化液、粉末、顆粒、粒子、微粒子、可分散之顆粒、藥包、吸入劑、氣溶膠吸入劑、貼片、粒子吸入劑、植入物、積存式植入物、注射物(包含皮下、肌內、靜脈內，及皮內)、灌輸液，及其等之組合物。
上述之本發明各種例示實施例非意指全面性或使本發明限於所揭示之明確型式。雖然本發明之特別實施例，或範例，於此用於例示目的而描述，各種等化之改質於本發明之範圍內如熟習此項技藝者所瞭解般係可能。本發明於此間提供之教示可應用於除上述範例外之其它目的。
此等及其它變化可基於如上詳細說明而對本發明為之。一般，於下列申請專利範圍，使用之用辭不應被作為用以使本發明限於說明書及申請專利範圍中所揭露之特別實施例而闡釋。因此，本發明係並不受揭露內容所限制，相反地，本發明之範圍係全然藉由下列申請專利範圍決定。
本發明可以除於下列說明及實施例中特別描述者外之方式實施。本發明之多種改質及改變基於如上之教示係可能，因此，係於所附申請專利範圍之範圍內。
與獲得抗原專一性之B細胞之株系族群有關之某些教示係揭示於美國臨時專利申請案第60/801,412號案，其係於2006年5月19日申請，其揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
與兔子衍生之單株抗體之人類化及較佳序列改質以維持抗原結合親和力有關之某些教示係揭示於國際申請案第12/124,723號案，其係相對應於代理人案第67858.704001號案，名稱係“新穎之兔子抗體人類化及人類化之兔子抗體”，2008年5月21日申請，其揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
與使用交配勝任酵母菌及相對應方法產生抗體或其片段有關之某些教示係揭示於美國專利申請案第11/429,053號案，2006年5月8日申請，(美國專利申請公告第US2006/0270045號案)，其揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
與抗-IL-6抗體、使用交配勝任酵母菌及相對應方法產生抗體或其片段之方法有關之某些教示係揭示於美國臨時專利申請案第60/924,550號案，2007年5月21日申請，其揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
與抗-IL-6抗體及使用此等抗體或其片段解決某些疾病及/或異常之方法有關之某些教示係揭示於美國臨時專利申請案第61/117,839、61/117,861，及61/117,811號案，所有皆係於2008年11月25日申請，其等之每一者在此被全部併入以供參考之用。
某些抗-IL-6抗體多核苷酸及多肽揭示於伴隨此專利申請案之申請而列示之序列，且該序列列示之揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
此間引述之每一文獻(包含專利案、專利申請案、期刊文章、摘要、手冊、書本，或其內揭示)之全部揭示內容在此被全部併入以供參考之用。
下列實施例係被提出以提供熟習此項技藝者如何實施及使用本發明之完全揭露內容及說明，且非用以限制被視為本發明之範圍。已致力確保有關於使用數字(例如，量、溫度、濃度等)之真確性，但某些實驗誤差及偏差應可被允許。除非其它指示，份數係重量份，分子量係平均分子量，溫度係攝氏度，且壓力係於大氣壓或接近大氣壓。
實施例
於下列實施例，除此內容其它指示外，“Ab1”一辭係指含有序列識別編號：702之輕鏈序列及序列識別編號：704重鏈序列之抗體。
實施例1　生產豐富化之抗原專一性之B細胞抗體培養物
抗體群組係藉由使傳統抗體宿主動物免疫化激發對感興趣之標靶抗原之原生免疫反應而衍生。典型上，用於免疫化之宿主係使用相似成熟方法產生抗體及提供產生具可相比擬之多樣性，例如，抗原決定基多樣性，之抗體之抗原專一性B細胞族群之兔子或其它宿主。起始抗原免疫化可使用完全佛蘭氏佐劑(CFA)進行，且其後之促進係以不完全佐劑產生。於免疫化後約50-60天，較佳係於第55天，抗體效價被測試，且若適當效價被建立，抗體選擇(ABS)方法被起始。ABS起始之二重要標準係有效抗原辨認及多株血清之功能改質活性。
於正抗體效價被建立時，動物被犧牲且B細胞源被隔離。此等來源包含脾臟、淋巴結、骨髓，及週邊血液單核細胞(PBMC)。單一細胞懸浮液被產生，且細胞懸浮液被清洗以使其可相容於低溫長期貯存。然後，細胞典型上被冷凍。
為起始抗體識別方法，一小部份之冷凍細胞懸浮液被解凍、清洗，及置於織組培養基。然後，此等懸浮液與用以產生動物免疫反應之生物素化型式之抗原混合，且抗原專一性之細胞使用Miltenyi磁性珠材細胞選擇方法回收。特定之豐富化使用卵白素珠材進行。經豐富化之族群被回收及進行下一階段之特定B細胞隔離。
實施例2　生產含株系、抗原專一性之B細胞之培養物
然後，依據實施例1產生之經豐富化之B細胞以每一孔不同細胞密度覆蓋於96孔之微滴定盤。一般，此係每一孔50、100、250，或500個細胞，且每一組10盤。介質係以4%活化兔子T細胞調節之介質及50K冷凍放射線照射之EL4B供給細胞補充。此等培養物未受干擾地留置5-7天，此時，含有分泌抗體之上澄液被收集且於一個別分析裝置評估目標性質。剩餘之上澄液保持完整，且此盤於-70℃冷凍。於此等條件下，培養方法典型上造成含有包含抗原專一性B細胞之株系族群之混合細胞族群之孔，即，單一孔會僅含有對所欲抗原具專一性之單一單株抗體。
實施例3　對具所欲專一性及/或功能性質之單株抗體而篩選抗體上澄液
自含有依據實施例2產生之株系抗原專一性B細胞族群之孔衍生之含有抗體之上澄液係使用ELISA方法對於抗原辨認而起始篩選。此包含選擇性抗原免疫化(例如，藉由以卵白素塗覆之盤進行生物素化抗原之捕捉)、非專一性抗原盤塗覆，或另外地，經由抗原累積策略(例如，選擇性抗原捕捉，及其後之結合夥伴添加產生異質蛋白質-抗原錯合物)。然後，抗原-正性孔上澄液選擇性地於嚴格地依配位體而定之功能改質分析中測試。一此例子係試管內之蛋白質-蛋白質交互作用分析，其再生抗原配位體與重組受體蛋白質之自然交互作用。另外，依配位體而定且輕易監測之以細胞為主之反應(例如，增殖反應)被使用。顯示顯著抗原辨認及功效之上澄液被視為正性孔。然後，自原始正性孔衍生之細胞被轉移至抗體回收階段。
實施例4　回收具所欲抗原專一性之單一、產生抗體之B細胞
細胞係自含有分泌單一抗體序列之抗原專一性B細胞之株系族群(依據實施例2或3產生)之孔隔離。然後，隔離之細胞被分析以隔離單一之分泌抗體之細胞。Dynal卵白素珠材係於含有緩衝介質下以生物素化標靶抗原塗覆，以製備能與細胞存活性相容之含抗原之微珠材。其次，載荷抗原之珠材、得自正型孔之產生抗體之細胞，及以螢光黃異硫氰酸酯(FITC)標示之抗-宿主H＆LIgG抗體(如所示，宿主可為任何哺乳動物宿主，例如，兔子、小鼠、大鼠等)於37℃一起培養。然後，此混合物以等份樣品方式重複吸移至一玻璃載片上，以使每一等份樣品平均具有單一、產生抗體之B-細胞。然後，抗原專一性、分泌抗體之細胞經由螢光顯微術檢測。分泌之抗體由於結合之抗原而局部集中於相鄰之珠材上，且提供以強烈螢光訊息為基礎之局部化資訊。分泌抗體之細胞係經由與分泌細胞相鄰而形成之抗體-抗原錯合物之FITC檢測而識別。然後，於此錯合物中心形成之單一細胞使用顯微操作儀回收。細胞於eppendorf PCR管內急凍以於-80℃貯存至抗體序列回收被起始為止。
實施例5　抗體序列與抗原專一性之B細胞隔離
抗體序列係使用以結合式之RT-PCR為主之方法自依據實施例4產生之單一之經隔離之B-細胞或自依據實施例2獲得之株系B細胞族群隔離之抗原專一性B細胞回收。引子被設計成於標靶免疫血球素基因之保守及固定區域(重及輕)(諸如，兔子免疫血球素序列)退火，且二步驟之嵌套式PCR回收步驟被用以獲得抗體序列。來自每一孔之增幅子被分析回收及尺寸完整性。然後，形成之片段以AluI消化以辨識序列株系性。相同之序列於其電泳分析顯示共同片段圖案。顯著地，證明細胞株系性之此共同片段圖案普遍被觀察到，即使於原始被覆蓋最高達1000個細胞/孔之孔內。然後，原始之重及輕鏈增幅子片段係以HindIII及XhoI或HindIII及BsiWI消化之限制酶，以製備用於複製之個別種之DNA。然後，形成之消化物結紮至表現載體內，且轉換於細胞內以供質體增殖及產生。菌落被選擇以供序列特性描述。
實施例6　重組產生具所欲抗原專一性及/或功能性質之單株抗體
用於含有單一單株抗體之每一孔之正確全長度抗體序列被建立，且小量製備之DNA係使用Qiagen固相方法製備。然後，此DNA被用以轉染哺乳動物細胞以產生重組之全長度抗體。粗製之抗體產物被測試抗原辨認及功能性質，以確保原始特性於重組抗體蛋白質中發現。若適合，大規模之瞬間哺乳動物轉染被完全，且抗體經由蛋白質A親和力色譜分析術純化。Kd係使用標準方法(例如，BiacoreTM)與功效分析之IC50評估。
實施例7　製備結合人類IL-6之抗體
藉由使用此間所述之抗體選擇方案，可產生大量之抗體群組。抗體對IL-6具高親和力(一位至二位數之pM Kd)，且於多種以細胞為主之篩選系統(T1165及HepG2)證實IL-6之有效拮抗作用。再者，抗體之收集顯示對IL-6-趨動之方法之獨特拮抗作用模式。
免疫化策略
兔子以huIL-6(R＆R)免疫化。免疫化係由先皮下(sc)注射於完全佛蘭氏佐劑(CFA)(Sigma)內之100μg，其後係二次增量(隔開二週，每一者係於不完全佛蘭氏佐劑(IFA)(Sigma)內50μg)而組成。動物於第55天放血，且血清效價係使用T1165細胞株藉由ELISA(抗原辨認)及藉由非放射性增殖分析(Promega)決定。
抗體選擇效價評估
抗原辨認係於4℃隔夜以於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS,Hyclone)內之1μg/mL之huIL-6(50μL/孔)塗覆Immulon 4盤(Thermo)而決定。於分析日，此等盤以PBS/Tween 20(PBST錠，Calbiochem)清洗3次。然後，此等盤於37℃以200μL/孔之於PBS內之0.5%魚皮明膠(FSG，Sigma)阻絕30分鐘。阻絕溶液被移除，且此等盤被塗上墨點。血清樣品係以1:100之起始稀釋(所有稀釋係於FSG 50μL/孔為之)及其後於整個盤以1:10稀釋(第12列維持空白以供背景對照)而為之(放血及預放血)。此等盤於37℃培養30分鐘。此等盤以PBS/Tween 20清洗3次。1:5000稀釋之山羊抗兔子Fc-HRP(Pierce)添加至所有孔(50μL/孔)，且此等盤於37℃培養30分鐘。此等盤以如上所述般清洗。50μL/孔之TMB-Stable停止劑(Fitzgerald Industries)添加至此等盤，且使顏色顯色，一般係3至5分鐘。顯影反應以50μL/孔之0.5M HCl停止。此等盤於450nm讀取。相對於稀釋之光學密度(OD)係使用Graph Pad Prizm軟體繪製，且效價被決定。
功能效價評估
樣品之功能活性係藉由T1165增殖分析決定。T1165細胞係依慣例地維持於以HEPES、丙酮酸鈉、碳酸氫鈉、L-麩醯胺、高葡萄糖、盤尼西林/鏈黴素、10%熱鈍化之胎牛血清(FBS)(所有補充物係來自Hyclone)、2-巰乙醇(Sigma)，及10ng/mL之huIL-6(R＆D)補充之經改質之RPMI介質(Hyclone)內。於分析日，細胞生存率係藉由錐蟲藍(Invitrogen)決定，且細胞係以20,000個細胞/孔之固定密度播種。播種前，細胞於無人類-IL-6之上述介質中清洗兩次(藉由於13000rpm離心處理5分鐘，且棄置上澄液)。最後清洗後，細胞係以等於50μL/孔之體積再次懸浮於與清洗用相同之介質內。細胞於室溫留置。
於一圓底之96孔之盤(Costar)，血清樣品被添加，其係以1:100開始，其後於整個盤以1:10之稀釋(第2至10列)，30μL/孔，重複5次(B至F排：以不具huIL-6之如上所述介質內製得之稀釋)。第11列係僅供IL-6對照之介質。30μL/孔之4x最終EC50濃度(事先決定之濃度)之huIL-6添加至所有孔(huIL-6係於如上所述介質稀釋)。孔於37℃培養1小時以使抗體結合發生。1小時後，50μL/孔之抗體-抗原(Ab-Ag)錯合物係依循於圓底盤佈局之盤圖樣格式轉移至一平底之96-孔之盤(Costar)。於第G排，50μL/孔之介質添加至所有孔(第2至11列)以供背景對照。50μL/孔之被留置之細胞懸浮液添加至所有孔(第2至11列，第B至G排)。於第1及12列及於A及H排，添加200μL/孔之介質以避免測試孔蒸發及使端緣效應達最小。此等盤於37℃於4% CO2培養72小時。於第72小時，20μL/孔之CellTiter96(Promega)試劑係依據製造商之方案添加至所有孔，且此等盤於37℃培養2小時。於第2小時，此等盤於一軌道搖動器上溫和地混合以使細胞分散及使測試孔內均勻。此等盤以490nm之波長讀取。相對於稀釋之光學密度(OD)係使用Graph Pad Prizm軟體繪製，且功能效價被決定。正型分析對照盤係如上所述般使用MAB2061(R&D Systems)以1μg/mL之起始濃度(最終濃度)及其後於此盤上以1:3稀釋而建構。
組織收集
一旦可接受之效價被建立，兔子被犧牲。脾臟、淋巴結，及全血被收集及如下般處理：脾臟及淋巴結藉由分離此組織及以20cc注射器之柱塞經由70μm之無菌金屬絲網(Fisher)推送而處理成單細胞懸浮液。細胞收集於無huIL-6但具低葡萄糖之如上所述之經改質之RPMI介質。細胞以離心處理清洗兩次。最後清洗後，細胞密度藉由錐蟲藍決定。細胞以1500rpm離心處理10分鐘；上澄液被棄置。細胞再次懸浮於適當體積之於FBS(Hyclone)內之10%二甲基亞碸(DMSO,Sigma)，且以1毫升/玻璃瓶分配。然後，於置於液態氮(LN2)槽內長期貯存前，玻璃瓶於-70℃貯存24小時。
週邊血液單核細胞(PBMC)係藉由使全血與等份之無FBS之上述低葡萄糖介質混合而隔離。35毫升之全血混合物小心層置於在45毫升錐形管(Corning)內之8毫升免子淋巴細胞分離液(Cedarlane)上，且不休息地於室溫以2500rpm離心處理30分鐘。離心處理後，PBMC層係使用玻璃巴氏吸管(Pasteur pipette)(VWR)小心移除，混合，及置於一乾淨之50毫升玻璃瓶內。細胞以如上所述之經改質之介質藉由於室溫以1500rpm離心處理10分鐘而清洗兩次，且細胞密度係藉由錐蟲藍染色而決定。最後清洗後，細胞再次懸浮於適當體積之10% DMSO/FBS介質內，且如上所述般冷凍。
B細胞培養物
於建立B細胞培養物當天，PBMC、脾細胞，或淋巴結玻璃瓶被解凍以供使用。玻璃瓶自LN2槽移出且置於37℃水浴至解凍為止。玻璃瓶之內容物被轉移至15毫升之錐形離心管(Corning)，且10毫升之上述經改質之RPMI緩慢添加至此管。細胞以1.5K rpm離心處理5分鐘，且上澄液被棄置。細胞再次懸浮於10毫升之新的介質。細胞密度及生存率藉由錐蟲藍決定。細胞被再次清洗且以1E07個細胞/80μL之介質再次懸浮。生物素化之huIL-6(B huIL-6)以3μg/mL之最終濃度添加至細胞懸浮液，且於4℃培養30分鐘。未結合之B huIL-6以二10毫升之磷酸鹽緩衝(PBF):Ca/Mg游離PBS(Hyclone)、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5%之胎牛血清白蛋白(BSA)(無Sigma-生物素)之清洗液移除。第二次清洗後，細胞以1E07個細胞/80μL PBF再次懸浮。20μL之MACS卵白素珠材(Milteni)/10E7細胞添加至細胞懸浮液。細胞於4℃培養15分鐘。細胞以2毫升之PBF/10E7細胞清洗一次。清洗後，細胞以1E08個細胞/500μL之PBF再次懸浮且留置於一旁。一MACS MS管柱(Milteni)於一磁性座(Milteni)上以500毫升之PBF預沖洗。細胞懸浮液經由一預過濾器施加至管柱，且未結合之分級物被收集。管柱以1.5毫升之PBF緩衝液清洗。管柱自磁性座移除且置於一乾淨、無菌之5毫升聚丙烯Falcon管。1毫升之PBF緩衝液添加至此管柱之頂部，且正型選擇之細胞被收集。正型及負型之細胞分級物之產率及生存率係藉由錐蟲藍染色而決定。正型選擇產生起始細胞濃度之1%之平均值。
先導細胞篩選被建立以提供用於此培養物之播重量之資訊。三個10-盤組(總共30盤)係以50、100，及200個豐富化B細胞/孔而播種。此外，每一孔係以250μL/孔之最後體積而於高葡萄糖改質之RPMI介質內含有50K個細胞/孔之經照射之EL-4.B5細胞(5,000雷得(Rad))及適當量之T細胞上澄液(範圍係1-5%，其係依製備而定)。培養物於37℃，4% CO2培養5至7天。
分泌選擇性抗體之B細胞之識別
培養物於5及7天間測試抗原辨認及功能活性。
抗原辨認篩選
使用之ELISA格式係如上所述，但50μL之來自B細胞培養物(BCC)孔(全部30個盤)之上澄液係作為抗體來源。經調節之介質轉移至以抗原塗覆之盤。於正型孔被識別後，上澄液被移除且轉移至96-孔之主盤。然後，原始之培養盤藉由移除所有上澄液(40μL/孔除外)及添加60μL/孔之16%之於FBS內之DMSO而冷凍。盤以紙巾包包裹以減緩冷凍，且置於-70℃。
功能活性篩選
然後，主盤於如上所述之T1165增殖分析篩選功能活性，但第B排係僅供背景對照之介質，第C排係用於正型增殖對照之介質+IL-6，且第D-G排及第2-11列係得自BCC之孔(50μL/孔，單一點)。40μL之IL-6係以供此分析而決定之EC50濃度之2.5倍添加至除介質排之所有孔。1小時培養後，Ab/Ag錯合物轉移至一以組織培養物(TC)處理之96孔之平底盤。20μL之於無huIL-6之經改質之RPMI介質內之細胞懸浮液(20,000個細胞/孔之T1165)添加至所有孔(每一孔係100μL之最終體積)。背景被扣除，且觀察到之OD值轉換成抑制%。
B細胞回收
含有感興趣之孔之盤自-70℃移開，且每一孔之細胞以5-200μL之介質清洗物/孔回收。清洗物集中於1.5毫升之無菌離心管內，且細胞以1500rpm粒化2分鐘。
此管被倒置，旋轉被重複，且上澄液小心移除。細胞再次懸浮於100μL/管之介質。100μL之生物素化IL-6塗覆之卵白素M280磁性珠材(dynabead)(Invitrogen)及16μL之山羊抗兔H＆L IgG-FITC(於介質內以1:100稀釋)添加至細胞懸浮液。
20μL之細胞/珠材/FITC懸浮液被移除，且5μL之滴液於事先以Sigmacote(Sigma)處理之玻璃載片(Corning)上製備，35至40個滴液/載片。添加不可滲透之石蠟油障壁物(JT Baker)以掩蓋此等滴液，且載片於黑暗中於37℃，4% CO2培養90分鐘。
產生抗體之專一性B細胞可藉由因抗體分泌而將其等圍繞之螢光環，辨認與珠材結合之生物素化之抗原，及其後藉由螢光-IgG檢測劑檢測而識別。一旦感興趣之細胞被識別，於螢光環中心之細胞經由顯微操作儀(Eppendorf)回收。合成及輸出抗體之單一細胞轉移至250μL之微離心管且置於乾冰。回收所有感興趣之細胞後，此等被轉移至-70℃以供長期貯存。
實施例8　酵母菌細胞表現
抗體基因：指導嵌合人類化兔子單株抗體之合成之基因被複製及建構
表現載體：載體含有下列功能性組份：1)突變體ColE1複製源，其促進大腸桿菌細胞內之質體載體之複製；2)細菌Sh ble基因，其授予對抗生物ZeocinTM(腐草黴素)之阻抗性且作為用於大腸桿菌及巴斯德畢赤酵母之轉化之選擇標記物；3)由甘油醛脫氫酶基因(GAP基因)促進子組成之表現系統，與編碼釀酒酵母α交配因子前源分泌前導序列之序列融合，其後係與編碼來自巴斯德畢赤酵母酒精氧化酶I基因(AOX1)之巴斯德畢赤酵母轉錄終結訊息之序列融合。ZeocinTM(腐草黴素)阻抗標記物基因係藉由對較高含量之ZeocinTM(腐草黴素)具阻抗性之轉化株而選擇提供使於一品系含有數整份之表現載體之品系豐富化之手段。
巴斯德畢赤酵母系：巴斯德畢赤酵母系met1、lys3、ura3及ade1可被使用。雖然任二互補組之營養缺陷型系可用於建構及維持二倍體系，但此二品系因二理由而係特別適於此方法。第一，其比其交配或融合之結果之二倍體系更緩慢生長。因此，若小量之單倍體ade1或ura3細胞維持存在於培養物或經由減數***或其它機構產生，二倍體系於培養物係比其長得更快。
第二係其易於監測此等品系之性狀態，其自交配產生之二倍體Ade+菌落正常係白色或乳色，而單倍體ade1突變體之任何品系之細胞會形成具獨特粉紅色之菌落。此外，單倍體ura3突變體之任何品系係對藥物5-氟-乳清酸(FOA)具阻抗性，且可藉由使培養物之樣品覆蓋於具FOA之最小介質+尿嘧啶盤上而敏感地識別。於此等盤上，僅需尿嘧啶之ura3突變體(大概係單倍體)系可生長及形成菌落。因此，藉由以ade1及ura3標記之單倍體母系，可輕易監測形成之產生抗體之二倍體系之性狀態(單倍體與二倍體之比對)。
方法
建構用於輕及重鏈抗體基因之轉錄之pGAPZ-α表現載體.人類化之輕及重鏈片段係經由PCR導引方法複製於pGAPZ表現載體內。回收之人類化結構物接受於標準KOD聚合酶(Novagen)試劑盒條件下((1) 94℃，2分鐘；(2) 94℃，30秒；(3) 55℃，30秒；(4)72℃，30秒-步驟2-4循環35次；(5) 72℃，2分鐘)之放大作用，其係使用下列引子(1)輕鏈前置-AfeI位置係畫單底線。HSA訊息序列之末端係畫雙底線，其後係成熟可變化輕鏈之序列(未畫底線)；反轉CGTACGTTTGATTTCCACCTTG。
可變化輕鏈反轉引子. BsiWI位置係畫底線，其後係可變化輕鏈之3’末端之反轉互補體。於以AfeI及BsiWI之限制酶消化時，此能於具有用於輸出之人類κ輕鏈固定區域之框內使用人類HAS前導序列以pGAPZ載體於框內***。(2)相似策略對重鏈實施。使用之前置引子係。AfeI位置係畫單底線。HSA訊息序列末端係畫雙底線，其後係成熟可變化重鏈之序列(未畫底線)。反轉重鏈引子係CTCGAGACGGTGACGAGGGT。XhoI位置係畫底線，其後係可變化重鏈之3’末端之反轉互補體。此能使用一可相比擬之導引複製策略以事先於pGAPZ內***之IgG-γ1 CH1-CH2-CH3區域於框內複製此重鏈。
表現載體轉化於巴斯德畢赤酵母單倍體ade1 ura3、met1及lys3宿主系內.所有用於單倍體巴斯德畢赤酵母系之轉化及巴斯德畢赤酵母性週期之基因組成之方法係描述於Higgins,D. R.，及Cregg,J. M.,Eds. 1998.畢赤方案方法.分子生物學.Humana Press,Totowa,NJ。
轉化前，每一表現載體係以AvrII於GAP促進子序列內線性化，以使載體之整合導入巴斯德畢赤酵母基因組之GAP促進子核心內。然後，每一載體之樣品係藉由電穿孔法個別轉化於ade1、ura3、met1及lys3系之電穿孔勝任培養物內，且成功之轉化株於YPD ZeocinTM(腐草黴素)盤上藉由其對此抗生素之阻抗性而選擇。形成之菌落被選擇，於YPD ZeocinTM(腐草黴素)盤上對單一菌落條紋化，然後，藉由於自每一單系萃取以供適當抗體基因***之基因DNA上之PCR分析及/或藉由菌落轉移/免疫印跡方法(Wung等人Biotechniques 21 808-812(1996)之每一品系合成抗體鏈之能力而檢測抗體基因***之存在。表現三重鏈結構之一之單倍體ade1、met1及1ys3系被收集以供與表現輕鏈基因之單倍體ura3系一起建構二倍體。表現重鏈基因之單倍體與適當之輕鏈單倍體ura3交配產生分泌蛋白質之二倍體。
合成單一抗體鏈之單倍體系之交配及合成四聚物功能性抗體之二倍體衍生物之選擇.為交配巴斯德畢赤酵母單倍體系，每一產生欲被交叉之品系之ade1(或met1或lys3)重鏈係於一富YPD之盤上條紋化，且產生ura3輕鏈之品系於一第二YPD盤上條紋化(每一盤係~10條紋)。於30℃培養一或二天後，來自一含有重鏈系之盤及一含有ura3輕鏈系之盤之細胞係以交叉圖案轉移至於一複製平板塊上之無菌絨布，以使每一重鏈系含有一與每一輕鏈系混合之細胞斑塊。然後，交叉條紋化之複製平板細胞轉移至一交配盤，且於25℃培養以刺激起始品系間之交配。兩天後，於交配盤上之細胞再次轉移至於一複製平板塊上之無菌絨布，然後，轉移至最小介質盤。此等盤於30℃培養三天以選擇性生長原養型微生物二倍體系之菌落。產生之菌落被採集且於一第二最小介質盤上條紋化，以單菌落隔離及純化每一二倍體系。然後，形成之二倍體細胞株被檢測抗體之產生。
推定之二倍體系被測試以證明其係二倍體且含有用於產生抗體之二表現載體。對於二倍性，一品系之樣品散佈於交配盤上以刺激使進行減數***及形成孢子。單倍體孢子產物被收集及測試顯型。大量百分率之形成孢子產物係單或雙營養缺陷體，可推論原始品系應已為二倍體。二倍體系係藉由萃取來自每一者之基因DNA及使此DNA用於對每一基因具專一性之PCR反應而檢測二抗體基因之存在。
合成單一抗體鏈之單倍體系之融合及合成四聚物功能性抗體之二倍體衍生物之選擇.　作為上述交配程序之另外選擇，產生單鏈抗體之單倍體ade1及ura3系之個別培養物係經原生質球化，且其形成之原生質球使用聚乙二醇/CaCl2融合。然後，融合之單倍體系被包埋於含有1M山梨糖醇及最小介質之瓊脂，以使二倍體系再生其細胞壁及長成可見到之菌落。形成之菌落自瓊脂採集，於一最小介質盤上條紋化，且此等盤於30℃培養兩天以自二倍體細胞株之單一細胞產生菌落。然後，形成之推定二倍體細胞株係如上所述般檢測二倍性及抗體之產生。
抗體之純化及分析.用於生產全長度抗體之二倍體系係使用上述方法經由met1輕鏈及lys3重鏈之交配而衍生。得自振盪燒瓶之培養介質或二倍體巴斯德畢赤酵母表現系之發酵槽培養物被收集及使用對抗人類IgG之重及輕鏈或特別地對抗IgG之重鏈而導引之抗體經由SDS-PAGE及免疫印跡檢測抗體蛋白質之存在。
為純化酵母菌分泌之抗體，來自產生抗體之培養物之經分類之介質通過一蛋白質A管柱，且於以20mM磷酸鈉(pH 7.0，結合緩衝液)清洗後，與蛋白質A結合之蛋白質使用0.1M甘胺酸HCl緩衝液(pH 3.0)洗提。含有大部份總蛋白質之分級物藉由考馬斯藍染色之SDS-PAGE及免疫印跡檢測抗體蛋白質。抗體係使用如上用於IL-6辨認所述之ELISA特性化。
抗體活性分析.重組之酵母菌衍生之人類化抗體經由如上所述之IL-6趨動之T1165細胞增殖分析及IL-6刺激之HepG2結合球蛋白分析評估功能活性。
實施例9　藉由靜脈內投用抗-IL-6抗體Ab1之急性期反應中和化
人類IL-6可於大鼠引起急性期反應，且於大鼠中刺激之一主要急性期蛋白質係α-2巨球蛋白(A2M)。一研究被設計以評估對於靜脈內投用不同劑量(0.03、0.1、0.3、1，及3毫克/公斤)之抗體Ab1(n=10隻/劑量)或作為對照之多株人類IgG1(n=10隻大鼠)後1小時給予之單一皮下注射100μg之人類IL-6之A2M反應消除所需之抗體Ab1之劑量。漿體被回收且A2M係經由一可購得之三明治式ELISA試劑盒(ICL Inc.,Newberg OR;cat. no.-E-25A2M)定量。端點係於24小時之時間點之漿體濃度之差異(後-Ab1)。結果係呈現於第4圖。
抗體Ab1之ID50係0.1毫克/公斤，且於0.3毫克/公斤完全抑制A2M反應。此明確證實人類IL-6之活體內中和化可藉由抗體Ab1完成。
實施例10 RXF393惡質症模型研究1
簡介
人類腎細胞癌症細胞株，RXF393當移植至無胸腺裸小鼠時產生重大之重量喪失。重量喪失開始於移植後約第15天，且全部動物之80%於移植後第18-20天喪失其總體重之至少30%。RXF393分泌人類IL-6且此等動物之人類IL-6之血漿內濃度係極高約10ng/mL。人類IL-6可結合鼠科動物之可溶性IL-6受體及活化小鼠內之IL-6反應。於活化小鼠之IL-6反應，人類IL-6係比鼠科動物IL-6功效少約10倍。此研究之目的係用以決定抗體Ab1對以人類腎細胞癌症細胞株，RXF393移植之無胸腺裸小鼠之生存、體重、血清類澱粉A蛋白質、血液學參數，及腫瘤生長之功效。
方法
八十隻6週大之公的無胸腺裸小鼠於右側經皮下移植RXF393腫瘤片段(30-40毫克)。然後，動物分成八組之十隻小鼠。三組係於移植後第1天、第8天，第15天及第22天以靜脈內每週給予3毫克/公斤、10毫克/公斤，或30毫克/公斤之抗體Ab1(推進組)。另三組係於移植後第8天、第15天及第22天以靜脈內每週給予3毫克/公斤，或10毫克/公斤，或30毫克/公斤之抗體Ab1(迴歸組)。最後，一對照組係給予多株人類IgG 30毫克/公斤，且第二對照組係於移植後第1天、第8天，第15天及第22天以靜脈內每週給予磷酸鹽緩衝之食鹽水。
動物於第28天(當腫瘤達4,000mm3)或若變疲憊(>30%之體重喪失)時被安樂死。動物移植後之第1、6天及其後從第9至28天每天稱重。平均體重百分率(MPBW)被作為此研究期間監測重量喪失之主要參數。其係如下般計算：(體重-腫瘤重量)/基線體重x 100。腫瘤重量係於移植後第1、6、9、12、15、18、22、25及28天測量。血液係於第5及13天自每一組五隻小鼠於麻醉下取得，且於安樂死時(於大部份情況係第28天)自每一組之全部十隻小鼠取得。血液被分析血液學及血清類澱粉A蛋白質(SAA)濃度。另一組之10隻非載荷腫瘤之6週大之非胸腺裸小鼠之血液樣品被取得用於血液學及SAA濃度評估而作為基線數值組。
結果-生存
於第28天之研究結束日前於任一抗體Ab1組無動物被安樂死或死亡。於二對照組，15隻動物(於多株人類IgG組係7/9且於磷酸鹽緩衝之食鹽水組係8/10)被發現死亡或因極度疲憊(>30%之體重喪失)而被安樂死。二對照組之中間值生存時間係20天。
二對照組及抗體Ab1推進(自此研究第1天服藥)之生存曲線於第5圖呈現。
二對照組及抗體Ab1迴歸(自此研究第8天服藥)之生存曲線於第6圖呈現。
多株人類IgG(p=0.0038)及磷酸鹽緩衝之食鹽水(p=0.0003)對照組之生存曲線與六抗體Ab1組之生存曲線間具統計上之重大差異。二對照組(p=0.97)間無統計上之重大差異。
結果-腫瘤尺寸
生存小鼠之腫瘤尺寸係藉由觸診而估算。對於此研究之前15天，任何組之小鼠未被發現死亡或被安樂死，因此，於這些天之各組間之腫瘤尺寸比較係無取樣偏差。至第15天抗體Ab1推進或迴歸組及對照組間未觀察到腫瘤尺寸差異。於對照組死亡開始(第15天)後之對照及治療組之生存小老鼠間之腫瘤尺寸比較未被進行，因為生存對照小鼠之腫瘤尺寸被推定係具偏差，因此，此比較之結果係無意義。
因為投用抗體Ab1促進生存且於腫瘤尺寸無任何明顯降低，升高之血清IL-6可能經由與腫瘤生長無關之機構促成死亡。此等觀察支持抗體Ab1可於無直接影響腫瘤生長而促進癌症病患存活能力之假說，可能係藉由促進一般之病患健康。
結果-重量喪失
相對於時間之平均體重百分率(MPBW)(±SEM)係顯示於第27圖。與對照組比較，以Ab1服藥之小鼠受保護而免於重量喪失。於第18天，對照小鼠之MPBW係75%，其係相對應於25%之平均重量喪失。相反地，於同一天，Ab-1治療組之MPBW係最小變化(於97%與103%間)。於對照組(接受多株人類IgG或PBS)與10毫克/公斤之劑量組(p<0.0001)或3毫克/公斤及30毫克/公斤之劑量組(p<0.0005)之MPBW曲線間具統計上顯著差異。於二對照組間無統計上顯著差異。
對照組及以Ab1治療之小鼠之代表照片(第28圖)例示於研究結束時與以Ab1治療之小鼠之一般外觀相比之對照小鼠之瘦弱狀況(注意可從外部看到於右側之腫瘤位置)。
此等結果暗示Ab1可用於預防或治療人類之藉由升高之IL-6造成之惡質症。
結果-血漿血清類澱粉A
二對照組及抗體Ab1推進(從此研究之第1天服藥)及迴歸(從此研究之第8天服藥)組之相對於時間之平均(±SEM)血漿血清類澱粉A濃度係於第5表呈現且圖示於第32圖。
第5表：平均血漿SAA-抗體Ab1，相對於對照組之所有組
SAA係經由hIL-6之刺激而上調，且此反應係與自移植腫瘤衍生之hIL-6之循環量直接相關。代用標記物提供活性hIL-6之間接讀取。因此，於上述之二治療組，由於腫瘤衍生之hIL-6之中和化而具有明顯降低之SAA量。此進一步支持抗體Ab1顯示活體內效率之觀點。
實施例11 RXF393惡質症模型研究2
簡介
第二研究係於RXF-393惡質症模型實施，其中，以抗體Ab1之治療係於較後之階段(移植後第10及13天)開始，且具更延長之治療期(移植後49天)。抗體Ab1之服藥間隔係從7縮短至3天，且每天之食物消耗亦被測量。亦企圖使起始以抗體Ab1服藥時之腫瘤尺寸標準化。
方法
八十隻之6週大之公的無胸腺之裸小鼠於右側以皮下移植RXF393腫瘤片段(30-40毫克)。20隻小鼠被選擇，其等之腫瘤於尺寸已達270-320毫克之間，且分成二組。一組係每三天一次經靜脈內接受10毫克/公斤之抗體Ab1，且另一組係自時間點(移植後第10天)接受每3天一次之10毫克/公斤之多株人類IgG。另外20隻小鼠當其等之腫瘤尺寸於尺寸達400-527毫克時被選擇，且分成二組。一組係每三天一次經靜脈內接受10毫克/公斤之抗體Ab1，且另一組自時間點(移植後第13天)接受每3天一次之10毫克/公斤之多株人類IgG。剩餘之40隻小鼠於此研究未進一步分開，且於第49天(當腫瘤達4,000mm3)或若其變疲憊(>30%之體重喪失)時安樂死。
動物於移植後從第1天至第49天每3-4天稱重。平均體重百分率(MPBW)作為監測此研究期間之重量喪失之主要參數。其係如下般計算：((體重-腫瘤重量)/基線體重)x 100。腫瘤重量係於移植後第5天至第49天每3-4天測量。食物消耗對於270-320毫克之腫瘤組係從第10天且對於400-527毫克之腫瘤組係從第13天每天測量(每一治療組以重量計(g)之於24小時消耗之量)。
結果-生存
每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之抗體Ab1(270-320毫克之腫瘤尺寸)及每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之多株人類IgG(270-320毫克之腫瘤尺寸)之生存曲線係呈現於第7圖。
每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之抗體Ab1(270-320毫克之腫瘤尺寸)之中間值生存係48天，且每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之多株人類IgG(270-320毫克之腫瘤尺寸)者係32.5天(p=0.0071)。
每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之抗體Ab1(400-527毫克之腫瘤尺寸)及每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之多株人類IgG(400-527毫克之腫瘤尺寸)之生存曲線係呈現於第8圖。每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之抗體Ab1(400-527毫克之腫瘤尺寸)之中間值生存係46.5天，且每三天一次經靜脈之10毫克/公斤之多株人類IgG(400-527毫克之腫瘤尺寸)者係27天(p=0.0481)。
實施例12　非人類之靈長類之抗體Ab1之多劑量藥物動力學評估
抗體Ab1係於磷酸鹽緩衝之食鹽水內以單一大量灌輸服用至單隻公的及單隻母的食蟹獼猴。血漿樣品於固定時間間隔移除且抗體Ab1之量經由使用抗原捕捉ELISA分析量化。生物素化之IL-6(50μl之3μg/mL)捉捕於以卵白素塗覆之96孔微滴定盤。此等盤被清洗且以0.5%之魚皮明膠阻絕。適當稀釋之血漿樣品被添加且於室溫培養1小時。上澄液被移除，且與抗-hFc-HRP共軛之二級抗體被施用且於室溫留置。
然後，此等盤被抽氣，且添加TMB以觀看抗體量。然後，特定量係經由使用標準曲線決定。第二劑之抗體Ab1係於第35天投用至相同之二食蟹獼猴，且實驗係使用相同取樣計劃重複。然後，形成之濃度係如第9圖所示般相對於時間作圖。
此人類化之全長度無糖基化抗體表現及純化之畢赤酵母顯現與哺乳動物表現之蛋白質可相比擬之特性。此外，多劑量之此產物展現可再生之半衰期，意指此生產平台未產生展現促進之免疫源性之產物。
實施例13　抗體蛋白質之八重機械特性
IL-6訊息傳遞係IL-6及二受體、IL-6R1(CD126)及gp130(IL-6訊息傳導子)間之交互作用而定。為決定抗體之作用機構，機械研究係使用生物層干涉度量術以Octet QK儀器(ForteBio;Menlo Park,CA)實施。研究係於二不同結構實施。於第一方向，生物素化之IL-6(R＆D系統元件編號206-IL-001MG/CF，依據製造商之方案使用Pierce EZ-link sulfo-NHS-LC-LC-生物素產物編號21338生物素化)開始與以卵白素塗覆之生物感應器(ForteBio元件編號18-5006)結合。結合係以訊息之增加監測。
然後，與感應器結合之IL-6以探討之抗體或單獨之稀釋溶液培養。然後，感應器以可溶性之IL-6R1(R&D系統產品編號227-SR-025/CF)分子培養。若IL-6R1分子無法結合，抗體被視為阻絕IL-6/IL-6R1交互作用。此等錯合物為了穩定目的於IL-6R1存在中以gp130(R&D系統228-GP-010/CF)培養若gp130未結合，斷定抗體阻絕gp130與IL-6之交互作用。
於第二方向，抗體與以抗-人類IgG1 Fc-專一性試劑(ForteBio元件編號18-5001)塗覆之生物感應器結合。IL-6與免疫化之抗體結合，且感應器以IL-6R1培養。若IL-6R1未與IL-6交互作用，則推斷與IL-6結合之抗體阻絕IL-6/IL-6R1交互作用。於其間抗體/IL-6/IL-6R1被觀察到之情況，錯合物係於IL-6R1存在中以gp130培養。若gp130未交互作用，則推斷抗體阻絕IL-6/gp130交互作用。所有研究係於200Ml最後體積，於30C及1000rpm實施。對於此等研究，所有蛋白質係使用ForteBio樣品稀釋緩衝液(元件編號18-5028)稀釋。
結合係呈現於第10(A-E)圖及第11圖。
實施例14　肽圖譜
為決定人類IL-6上以Ab1識別之抗原決定基，抗體係用於以西方墨點為主之分析。用於此實施例之人類IL-6之型式於長度具有183個胺基酸之序列(如下所示)。包含此序列之重疊之15個胺基酸肽之一57-成員之庫係商業上可合成且與PepSpots硝基纖維素膜(德國柏林之JPT Peptide technologies)共價結合。重疊之15個胺基酸肽之序列係顯示於第12圖且相對應於序列識別編號：590-646。墨點係依據製造商之提議製備及探測。
簡言之，墨點係於甲醇中預濕潤，於PBS沖洗，且於PBS/0.05% Tween(阻絕溶液)內之10%脫脂牛奶中阻絕2小時。Ab1抗體係以1毫克/毫升之最終稀釋使用，且與HRP-共軛之小鼠抗-人類-K二級抗體(Southern BioTech #9220-05)係以1:5000之稀釋使用。抗體稀釋/培養係於阻絕溶液實施。墨點係使用Amersham ECL進階試劑(GE#RPN2135)顯影，且化學螢光訊息係使用CCD相機(AlphaInnotec)提供。墨點之結果係顯示於第13圖及第14圖。
用以產生肽庫之人類IL-6型式之序列係如所示：VPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM(序列識別編號：1)。
實施例15 Ab1對IL-6具高親和力
表面電漿共振被用於測量於25℃時之Ab1與來自大鼠、小鼠、狗、人類，及食蟹獼猴之IL-6之結合速率(Ka)、解離速率(Kd)及解離常數(KD)(第15A圖)。人類IL-6之解離常數係4 Pm，指示極高親和力。如所預期，親和力一般係隨與人類之演化距離而減少。Ab1對食蟹獼猴、大鼠，及小鼠之IL-6之解離常數個別係31pM、1.4nM，及0.4n。Ab1對於狗之IL-6之親和力係低於此實驗之量化極限。
Ab1對於小鼠、大鼠，及食蟹獼猴之IL-6之高親和力暗示Ab1可用以抑制此等物種之IL-6。此假說係使用細胞增殖分析測試。簡言之，每一物種之IL-6被用以刺激T1165細胞之增殖，且Ab1能抑制50%之增殖(IC50)之濃度被測量。抑制作用係與測得之解離常數一致(第15B圖)。此等結果證明Ab1可抑制此等物種之原生IL-6，且暗示使用此等生物於藉由Ab1之試管內或活體內模式之IL-6抑制。
實施例16　抗體Ab1於健康人類自願者之多劑量藥物動力學評估
抗體Ab1係以於組胺酸及山梨糖醇內之單一大量灌輸而服用至健康人類自願者。1毫克、3毫克、10毫克、30毫克或100毫克之劑量投用至含有5至6個人之服藥組之每一個人。血漿樣品係於固定時間間隔移除最高達十二週。人類血漿係經由靜脈穿刺收集於含有EDTA之真空收集管。血漿被分離，且如下般用以評估使用對Ab1具專一性之單株抗體之Ab1之循環量。一96乳之微滴定盤係於4℃以於1X PBS之對Ab1具專一性之單株抗體塗覆隔夜。剩餘步驟係於室溫進行。此等孔被抽氣，且其後使用於1X PBS內之0.5%魚皮明膠(FSG)(Sigma)阻絕60分鐘。然後，人類血漿樣品被添加且培養60分鐘，然後，抽氣，然後，50μL之1μg/mL之生物素化之IL-6添加至每一孔且培養60分鐘。此等孔被抽氣，且50μL之於0.5% FSG/PBS以1：5,000稀釋之卵白素-HRP(Pharmingen)被添加且培養45分鐘。發展係使用標準方法使用用於檢測之TMB進行。然後，量係經由與以可相比擬格式製備之標準曲線比較而決定。
每一服藥組相對於時間之Ab1之平均血漿濃度係顯示於第16圖。平均AUC及C最大係隨劑量呈線性增加(個別係第17圖及第18圖)。對於30毫克及以上之劑量，每一服藥組之平均Ab1半衰期係約25與30天之間(第19圖)。
實施例17 Ab1於具末期癌症之病患之藥物動力學
抗體Ab1係以於磷酸鹽緩衝之食鹽水內之單一大量灌輸服用至五個具末期癌症之個人。每一個人接收80毫克(n=2)或160毫克(n=3)劑量之Ab1。血漿樣品係每週抽出，且抗體Ab1之量係如實施例16般量化。
為時間之函數之此等個人之Ab1之平均血漿內濃度係顯示於第20圖。平均Ab1半衰期係約31天。
實施例18 Ab1之前所未有之半衰期
整體而言，Ab1之平均半衰期於人類係約31天(對於10毫克及以上之劑量)，且於食蟹獼猴係約15-21天。當與其它抗-IL-抗體之半衰期相比，於人類及食蟹獼猴之Ab1半衰期係前所未有(第21圖)。如上所述，Ab1係衍生自兔子抗體之人類化，且係以無糖基化型式自畢赤酵母菌產生。此等特性造成於人類具極低免疫源性之抗體。再者，無糖基化 避免Ab1與Fc受體或互補體交互作用，雖不欲受理論所限制，但認為Ab1之前所未有之半衰期至少部份係歸因於人類化及/或無糖基化。抗原結合表面之特定序列及/或結構亦促進Ab1之半衰期。
實施例19 Ab1對具末期癌症病患之血紅素濃度、血漿脂肪濃度，及嗜中性白血球數量之功效
抗體Ab1係以於磷酸鹽衝緩之食鹽水內之單一大量灌輸服用至八位具末期癌症(NSCLC、結腸直腸癌、膽管癌，或間皮癌)之個人。每一個人係接受80毫、160毫克，或320毫克劑量之Ab1。血液樣品於灌輸前及於固定時間間隔移除持續六週，且血紅素濃度、血漿脂肪濃度，及嗜中性白血球數量被決定。平均血紅素濃度些微上升(第22圖)，其係如總膽固醇及三酸甘油酯般(第23圖)，而平均嗜中性白血球數量些微下降(第24圖)。
此等結果進一步證明投用Ab1至慢性疾病之個人之一些有利功效。因為IL-6係負責慢性疾病之貧血(包含與癌症有關之貧血)之主要細胞激素，藉由Ab1使IL-6中和化增加此等個人之血紅素濃度。相似地，因IL-6於增加發炎之嗜中性白血球數量係最重要，觀察到之嗜中性白血球數量些微下降進一步確認Ab1抑制IL-6。最後，IL-6造成此等病患之厭食症及惡質症；藉由Ab1使IL-6中和化造成食欲恢復及惡質症反轉。血漿脂肪濃度增加反映病患之改善之營養狀態。結合在一起，此等結果進一步證明Ab1有效地反轉IL-6於此等病患之不利結果。
實施例20 Ab1抑制健康自願者及具末期癌症之病患之血清CRP
簡介
血清CRP濃度已被承認作為具某些型式之癌症之病患之強烈預後指示子。例如，Hashimoto等人實施具肝癌之病患之手術前血清CRP濃度之單變量及多變量分析，以識別影響生存及疾病復發之因子(Hashimoto,K.等人，Cancer,103(9):1856-1864(2005))。病患被分成二組，具有>1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP正型組”)及具有<1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP負型組”)。作者識別“手術前血清CRP量及腫瘤尺寸之重大相關性”。再者，作者發現“與CRP-負型組之比率相比，CRP-正型組之整體生存及無復發之生存率係顯著較低”。作者斷定病患之手術前CRP量於具肝癌之病患係一獨立且重大之預測指示子或差的預測及早期復發。
相似之相關性已由其它調查者識別。例如，Karakiewicz等人測定血清CRP係腎細胞癌特定死亡之一獨立及提供有用訊息之預測子(Karakiewicz,P.I.等人，Cancer,110(6):1241-1247(2007))。因此，於此項技藝仍需降低癌症病患且特別是具末期癌症者之血清C-反應蛋白質(CRP)之方法及/或治療。
方法
健康自願者接受單一之1-小時靜脈內(IV)灌輸100毫克(5位病患)、30毫克(5位病患)、10毫克(6位病患)、3毫克(6位病患)或1毫克(6位病患)之Ab1單株抗體，而另外14位健康自願者經靜脈內接收安慰劑。比較地，2位具末期型式之結腸直腸癌之病患接受單一之1-小時靜脈內(IV)灌輸80毫克之Ab1單株抗體。無進一步劑量之Ab1單株抗體投用至測試族群。
病患於投用此藥劑前且其後於服藥後以一週為基礎持續至少5週評估。每一次評估時，病患係對血清CRP濃度作篩選。
結果
健康自願者
如上所示，血清之CRP量係發炎之一標記物，因此，基線CRP量於健康之個人典型上係低。低基線CRP量於難以檢測之CRP量係更低。然而，與對照組相比，血清CRP濃度之大量降低於接收所有濃度之Ab1單株抗體之健康自願者係可檢測到(第25圖)。血清CRP量之降低係快速，於抗體投藥後一週內發生，且延長，至少持續至最後測量進行時(距抗體投藥8或12週)。
癌症病患
五位具升高血清CRP量之末期癌症病患(結腸直腸癌、膽管癌，或NSCLC)以80毫克或160毫克之Ab1服藥。血清CRP量於此等病患係大量降低(第26A圖)。血清CRP量之降低係快速，90%之減少係於Ab1投藥一週內發生，且延長，至少持續至最後測量進行時(最高達十二週)。二代表性之個人之CRP量係顯示於第26B圖。於此等個人，CRP量係於一週內降至低於正常參考範圍(少於5-6毫克/公升)。因此，Ab1投用至末期癌症病患可造成快速且持續抑制血清CRP量。
實施例21 Ab1改善具末期癌症之病患肌肉強度、改善重量，及降低疲勞
簡介
重量喪失及疲勞(及伴隨之肌肉虛弱)係具末期癌症型式之病患之極普遍症候，且此等症候於癌症持續進展時惡化。疲勞、重量喪失及肌肉虛弱對於具末期癌症型式之病患之恢復具重大之負面作用，例如，擾亂生活型態及關係及影響病患持續癌症治療之意願或能力。解決疲勞、重量喪失及肌肉虛弱之已知方法包含規律之例行健身及運動，保存病患能量之方法，及解決貧血誘發之疲勞及肌肉虛弱之治療。然而，於此項技藝仍需改善癌症病患之疲勞、重量喪失及肌肉虛弱之方法及/或治療。
方法
四位具末期癌症型式之病患(結腸直腸癌(2)、NSCLC(1)、膽管癌(1))接受單一之1-小時之靜脈內(IV)灌輸80毫克或160毫克之Ab1單株抗體。無進一步劑量之Ab1單株抗體被投用至測試族群。
病患於投用此藥劑前及其後於服藥後持續至少6週評估。每一次評估時，病患係對下述作篩選：a.)重量之任何改變；b.)使用Facit-F疲勞分量表問卷，醫學上承認之用於評估疲勞之測試(見，例如，Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,& Slavin,M.(2002).癌症病患之疲勞與一般族群之疲勞比較(Fatigue in cancer patients compared with fatigue in the general population). Cancer,94(2),528-538；Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H & Merkel,D.E.(2002).結合以固定及分佈為主之方法衍生於癌症治療之貧血及疲勞程度之功能性評估之最小臨床重要差異(Combining anchorand distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cancer Therapy anemia and fatigue scales)Journal of Pain & Symptom Management,24(6)547-561.))；及手握強度(一種醫學上承認之用於評估肌肉強度之測試，典型上係使用手握動力計)測量之疲勞。
結果
重量變化
二劑量濃度(80毫克及160毫克)之Ab1單株抗體之平均數據證明於6週期間每一病患重量增加約2公斤(第29圖)。
疲勞
二劑量濃度(80毫克及160毫克)之Ab1單株抗體之平均數據證明於6週期間病患族群之平均Facit-F FS分量表分數增加至少約10點(第30圖)。
手握強度
二劑量濃度(80毫克及160毫克)之Ab1單株抗體之平均數據證明於6週期間病患族群之平均手握強度增加至少約10%(第31圖)。
實施例22 Ab1用於預防血栓
先前之研究已顯示投用抗-IL-6抗體可造成減少之血小板數量。Emilie,D.等人，Blood,84(8):2472-9(1994)；Blay等人，Int J Cancer,72(3):424-30(1997)。此等結果顯然已被視為可能危險之指示，因為血小板數量之進一步減少會造成諸如出血之併發症。但是，申請人現看出抑制IL-6恢復正常凝血狀況，申請人預測會預防血栓。抑制IL-6造成之減少之血小板數量並非可能危險之指示，而係反映有利地恢復正常之凝結作用。
恢復正常凝結作用之機構被認為係IL-6與急性期反應間之相互作用之結果。回應升高之IL-6量(例如，於癌症病患)，肝臟產生急性期蛋白質。此等急性期蛋白質包含凝結因子，諸如，因子II、因子V、因子VIII、因子IX、因子XI、因子XII、F/纖維蛋白降解產物、凝血-抗凝血酵素III錯合物、纖維素原、胞漿素原、凝血酶原，及溫韋伯氏因子。此於凝結因子之增加可直接測量，或可自功能性測量凝血能力而推斷。IL-6之拮抗劑(諸如，Ab1)抑制急性期蛋白質，例如，血清類澱粉A(見第32圖及實施例10)。申請人現預測此急性期蛋白質之抑制會恢復正常凝血狀況，因此，預防血栓。正常凝結作用之恢復可造成血小板數量些微下降，但僅管如此，病患會維持正常凝結能力，因此，不會增加出血之危險性。此一治療會呈現優於可利用之抗凝結治療(其使用受諸如大量出血之不利副作用之危險性而限制)之重大改善。
申請人注視到不管抑制方法，抑制IL-6之相同有利功效會被獲得。抑制IL-6之適合方法包含投用抗-IL-6抗體、反意治療、可溶性IL-6受體等，可為個別或組合式。
實施例23　Ab1增加具末期癌症之病患之血漿白蛋白濃度
簡介
血清白蛋白濃度被確認作為癌症病患之生存及/或復原成功之預測指示。低蛋白血症於多種癌症型式係與差的病患表現強烈相關。例如，於一研究，無對轉移性胰腺癌進行全身性化療及具有少3.5g/dL之血清白蛋白量之病患對全身性化療成功地顯示效果(Fujishiro,M.,等人，Hepatogastroenterology,47(36):1744-46(2000))。作者推斷“具低蛋白血症之患者可能不適合作為全身性化療之候選人，且可以其它實驗方式或支持性照顧治療”。
相似地，Senior and Maroni表示“低蛋白血症係末期腎病死亡之最有利之預測子之最近理解強調確保此等病患族群之適當蛋白質攝取之重要性”。(J.R. Senior and B.J. Maroni,Am. Soc. Nutr. Sci.,129:313S-314S(1999))。
於至少一研究，藉由每天靜脈內之20克白蛋白灌輸以矯正27位具轉移性癌症之病患之低白蛋白血症至正常血清白蛋白量(>3.5g/dL)被達成為止之努力具極少之成功。作者指出“對末期癌症病患之白蛋白灌輸於臨床實務具有限之價值。具PS4及低蛋白血症之病患具較差之預測”。(Demirkazik,A.,等人，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol.,21:Abstr 2892(2002))。
因此，於此項技藝仍需改善癌症病患之血清白蛋白濃度及解決癌症病患(特別是具末期癌症者)之低血蛋白狀態之方法及/或治療。
方法
四位具末期癌症型式之病患(結腸直腸癌(2)、NSCLC(1)、膽管癌(1))接受單一之1-小時靜脈內(IV)灌輸80毫克或160毫克之Ab1單株抗體。無進一步劑量之Ab1單株抗體被投用至測試族群。
病患於投用藥劑前及其後於投藥後至少6週評估。於每一次評估，病患係對血漿白蛋白濃度作篩選。
結果
二劑量濃度(80毫克及160毫克)之Ab1單株抗體之平均數據證明於6週期間每一病患之血漿白蛋白濃度增加約5g/L(第33圖)。
實施例24　Ab1抑制具末期癌症之病患之血清CRP
簡介
血清CRP濃度已被承認作為具某些型式之癌症之病患之強烈預後指示子。例如，Hashimoto等人實施具肝癌之病患之手術前血清CRP濃度之單變量及多變量分析，以識別影響生存及疾病復發之因子(Hashimoto,K.等人，Cancer,103(9):1856-1864(2005))。病患被分成二組，具有>1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP正型組”)及具有<1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP負型組”)。作者識別“手術前血清CRP量及腫瘤尺寸之重大相關性”。再者，作者發現“與CRP-負型組之比率相比，CRP-正型組之整體生存及無復發之生存率係顯著較低”。作者斷定病患之手術前CRP量於具肝癌之病患係一獨立且重大之預測指示子或差的預測及早期復發。
相似之相關性已由其它調查者識別。例如，Karakiewicz等人測定血清CRP係腎細胞癌特定死亡之一獨立及提供有用訊息之預測子(Karakiewicz,P.I.等人，Cancer,110(6):1241-1247(2007))。因此，於此項技藝仍需降低癌症病患且特別是具末期癌症者之血清C-反應蛋白質(CRP)之方法及/或治療。
方法
124位具非小細胞肺癌(NSCLC)之病患分成4治療組。一組之病患於24週期間每8週接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=31)、80毫克(n=29)、160毫克(n=32)，或320毫克(n=32)之Ab1單株抗體，共3次服藥。CRP濃度係藉由C-反應蛋白質顆粒促進之免疫比濁分析使用膠乳附接之抗-CRP抗體(即，CRP Tinaquant)量化。簡言之，約1.0毫克之病患樣品血清被收集，且貯存於一塑料製收集管內。樣品被置於適當緩衝液內，且與膠乳微顆粒偶合之抗-CRP抗體添加至樣品以起始此反應。此等具共軛膠乳微顆粒之抗-CRP抗體與樣品內之抗原反應形成抗原/抗體錯合物。於凝集後，此係使用Roche/Hitachi Modular P分析器以比濁分析測量。
病患係於投用藥劑前，及其後於第2、4、8，及12週評估。於每一次評估時，病患係對血清CRP濃度作篩選。
結果
每一劑量濃度(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均數據係於第38圖繪製。所有劑量之Ab1抗體證實於12週期間相較於安慰劑於CRP濃度係立即下降。CRP量於服藥後第8週顯示突破。CRP量於第12週前落至低於5毫克/公升。CRP之中間值證明對於所有劑量濃度相較於安慰劑係快速且持續減少(第39圖)。因此，投用Ab1至末期癌症病患可造成血清CRP量快速且持續之抑制。
實施例25 Ab1抑制具末期癌症病患之血清CRP
簡介
血清CRP濃度已被承認作為具某些型式之癌症之病患之強烈預後指示子。例如，Hashimoto等人實施具肝癌之病患之手術前血清CRP濃度之單變量及多變量分析，以識別影響生存及疾病復發之因子(Hashimoto,K.等人，Cancer,103(9):1856-1864(2005))。病患被分成二組，具有>1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP正型組”)及具有<1.0mg/dL之血清CRP量者(“CRP負型組”)。作者識別“手術前血清CRP量及腫瘤尺寸之重大相關性”。再者，作者發現“與CRP-負型組之比率相比，CRP-正型組之整體生存及無復發之生存率係顯著較低”。作者斷定病患之手術前CRP量於具肝癌之病患係一獨立且重大之預測指示子或差的預測及早期復發。
相似之相關性已由其它調查者識別。例如，Karakiewicz等人測定血清CRP係腎細胞癌特定死亡之一獨立及提供有用訊息之預測子(Karakiewicz,P.I.等人，Cancer,110(6):1241-1247(2007))。因此，於此項技藝仍需降低癌症病患且特別是具末期癌症者之血清C-反應蛋白質(CRP)之方法及/或治療。
方法
八位具各種末期癌症型式之病患(結腸直腸(3)、NSCLC(1)、膽管(1)，及間皮癌(2))接受單一之1-小時之靜脈內灌輸80毫克(2病患)、160毫克(3病患)或320毫克(3病患)之Ab1單株抗體。無進一步劑量之Ab1單株抗體被投用至測試族群。
病患於於投用藥劑前及其後於服藥後以一週為基礎持續至少8週評估。於每一次評估時，病患係對血清CRP濃度作篩選。CRP濃度係藉由C-反應蛋白質顆粒促進之免疫比濁分析使用膠乳附接之抗-CRP抗體(即，Roche CRP Tinaquant)量化。簡言之，約1.0毫克之病患樣品血清被收集，且貯存於一塑料製收集管內。樣品被置於適當緩衝液內，且與膠乳微顆粒偶合之抗-CRP抗體添加至樣品以起始此反應。此等具共軛膠乳微顆粒之抗-CRP抗體與樣品內之抗原反應形成抗原/抗體錯合物。於凝集後，此係使用Roche/Hitachi Modular P分析器以比濁分析測量。
結果
血清CRP量於所有被研究之病患大量降低(第40圖)。血清CRP量之降低快速，約90%之降低係於Ab1投藥一週內發生，且延長之減少量持續至少至最後測量被進行為止(最高達12週)。於除具結腸直腸癌之病患外之所有情況，CRP量係於1週內落至或低於正常參考範圍(少於5-6毫克/公升)。結腸直腸癌病患於此研究之第4週前達相似之正常量。因此，投用Ab1至末期癌症病患可造成快速且持續抑制血清CRP量。
實施例26 Ab1抑制具類風濕性關節炎之病患之血清CRP
簡介
血清CRP濃度已被承認作為具類風濕性關節炎之病患一強烈預後指示子。具高CRP量之患有類風濕性關節炎之病患證明幾乎普遍性惡化。Amos等人，1 Br. Med. J. 195-97(1977)。相反地，具低CRP量之病患未顯示疾病發展，暗示維持低CRP量於有效治療類風濕性關節炎係必要。金、D-青黴胺、氯奎寧，或氨苯碸之類風濕性關節炎治療規範期間之CRP追蹤指示當CRP量被一致地控制時放射退化於治療前6個月後被阻止。Dawes等人，25 Rheumatology 44-49(1986)。CRP之產生與放射發展間之高度重大相關性被識別。van Leeuwen等人，32(Supp. 3)Rheumatology 9-13(1997)。另一研究顯示對於具主動性類風濕性關節炎之病患，抑制異常升高之CRP導致功能測試度量之改善，而持續之CRP升高與相同度量之退化有關。Devlin等人，24 J. Rheumatol. 9-13(1997)。無進一步之退化於無CRP再度升高時被觀察到，指示CRP之抑制作為類風濕性關節炎治療之可行候選物。因此，於此項技藝仍需降低類風濕性關節炎病患之血清C-反應蛋白質(CRP)濃度之方法及/或治療。
方法
127位之具主動性類風濕性關節炎及毫克/公升之病患被分成4治療組。一組之病患接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=33)、80毫克(n=32)、160毫克(n=34)，或320毫克(n=28)之Ab1單株抗體，其係於16週試驗開始時一次且於第8週再一次。CRP濃度係藉由C-反應蛋白質顆粒促進之免疫比濁分析使用膠乳附接之抗-CRP抗體(即，Roche CRP Tinaquant)量化。簡言之，約1.0毫克之病患樣品血清被收集，且貯存於一塑料製收集管內。樣品被置於適當緩衝液內，且與膠乳微顆粒偶合之抗-CRP抗體添加至樣品以起始此反應。此等具共軛膠乳微顆粒之抗-CRP抗體與樣品內之抗原反應形成抗原/抗體錯合物。於凝集後，此係使用Roche/Hitachi Modular P分析器以比濁分析測量。CRP濃度之數據於前4週係每週，第4與12週間係每二週，及於第16週測試結束時收集。
結果
血清CRP量於所有被研究之病患係大量下降(第41圖)。血清CRP量之降低係快速，且於投用Ab1一週內CRP量相較於安慰劑係立即下降，且延長之減少量持續至少至最後測量被進行為止(最高達16週)。於所有情況，CRP量於1週內落至或低於正常參考範圍(少於5-6毫克/公升)。因此，投用Ab1至類風濕性關節炎病患可造成快速且持續抑制血清CRP量及呈現有效治療方式。
實施例27　Ab1增加具末期癌症之病患之血紅素
抗體Ab係以於磷酸鹽緩衝之食鹽水內之80毫克、160毫克，或320毫克之Ab1服用至93位具非小細胞肺癌之個人。31位具非細胞肺癌之個人之安慰劑組僅以服用磷酸鹽緩衝之食鹽水。血液樣品於服藥前(0週)，及於第2、4、8及12週移除，且血紅素濃度被測定。平均血紅素濃度對於接受抗體Ab1者上升，而接受安慰劑者之平均血紅素濃度於12週後與服藥前(0週)之濃度相比時未上升(第42及43圖)。
此研究族群之一亞組係以低血紅素量開始此研究，其定義為低於11g/l之基線血紅素濃度。對於接受160毫克及320毫克劑量之抗體Ab1者，平均血紅素濃度於8週後上升高於11g/l，而接受80毫克劑量之抗體Ab1或安慰劑者之平均血紅素濃度於8週後未上升高於11g/l(第44圖)。
此等結果進一步證明投用Ab1至慢性疾病之個人之一些有利功效。因為IL-6係負責慢性疾病之貧血(包含與癌症有關之貧血)之主要細胞激素，藉由Ab1使IL-6中和化增加此等個人之血紅素濃度。
實施例28　Ab1增加具類風濕性關節炎之病患之血紅素
血紅素量係對於以Ab1抗體治療期間之具類風濕性關節炎之病患作分析。Ab1抗體係以於磷酸鹽緩衝之食鹽水中之80毫克、160毫克，或320毫克服用至94個具類風濕性關節炎之個人。33位具類風濕性關節炎之個人之安慰劑組係僅服用磷酸鹽緩衝之食鹽水。血液樣品於服藥前(0週)，及第1、2、3、4、6、8、10、12，及16週移除，且血紅素濃度被測定。平均血紅素濃度對於接受抗體Ab1者係上升，而接受安慰劑者之平均血紅素濃度於16週後與服藥前(0週)之濃度相比時未看出上升。(第45圖)。
此等結果進一步證明投用Ab1至慢性疾病之個人之一些有利功效。因為IL-6係負責慢性疾病之貧血(包含與癌症有關之貧血)之主要細胞激素，藉由Ab1使IL-6中和化增加此等個人之血紅素濃度。
實施例29　Ab1增加具末期癌症之病患之白蛋白
簡介
血清白蛋白濃度被確認作為癌症病患之生存及/或復原成功之預測指示。低蛋白血症於多種癌症型式係與差的病患表現強烈相關。例如，於一研究，無對轉移性胰腺癌進行全身性化療及具有少3.5g/dL之血清白蛋白量之病患對全身性化療成功地顯示效果(Fujishiro,M.,等人，Hepatogastroenterology,47(36):1744-46(2000))。作者推斷“具低蛋白血症之患者可能不適合作為全身性化療之候選人，且可以其它實驗方式或支持性照顧治療”。
相似地，Senior及Maroni表示“低蛋白血症係末期腎病死亡之最有利之預測子之最近理解強調確保此等病患族群之適當蛋白質攝取之重要性”。(J.R. Senior and B.J. Maroni,Am. Soc. Nutr. Sci.,129:313S-314S(1999))。
於至少一研究，藉由每天靜脈內之20克白蛋白灌輸以矯正27位具轉移性癌症之病患之低白蛋白血症至正常血清白蛋白量(>3.5g/dL)被達成為止之努力具極少之成功。作者指出“對末期癌症病患之白蛋白灌輸於臨床實務具有限之價值。具PS4及低蛋白血症之病患具較差之預測”。(Demirkazik,A.,等人，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol.,21:Abstr 2892(2002))。
因此，於此項技藝仍需改善癌症病患之血清白蛋白濃度及解決癌症病患(特別是具末期癌症者)之低血蛋白狀態之方法及/或治療。
方法
抗體Ab1係以於磷酸鹽緩衝之食鹽水中之80毫克、160毫克，或320毫克Ab1服用至93個具非小細胞肺癌之個人。每一個人接受一劑量。31位具非小細胞肺癌之個人之安慰劑組僅服用磷酸鹽緩衝之食鹽水。血液樣品於服藥前(0週)，及2、4、8及12週移除，且白蛋白濃度被測定。
結果
平均白蛋白濃度對於接受抗體Ab1者係上升，而接受安慰劑者之平均白蛋白濃度於12週後與服藥前(0週)之濃度相比時未上升(第46圖)。所有劑量濃度組之自基線白蛋白值之變化係繪於第47圖。
此研究族群之一亞組係以低白蛋白量開始此研究，其定義為少於或等於35g/L之基線白蛋白濃度。平均白蛋白濃度對於所有劑量之抗體Ab1係優於安慰劑而開始上升，但僅接受160毫克或320毫克之病患證明於此研究之8週期間持續高於35g/L之白蛋白量(第48圖)。80毫克劑量組證明起始增加，但於第2週後逐漸下降，且於8週期間若數據可獲得係不再上升高於35g/L。
實施例30 Ab1改善具末期癌症之病患之重量及降低疲勞
簡介
重量喪失及疲勞係具末期癌症型式病患極普遍之症狀，且此等症狀於癌症持續進展時會惡化。疲勞及重量喪失對於具末期癌症型式之病患之恢復具顯著負面作用，例如，混亂生活型態及關係及影響病患持續癌症治療之意願或能力。已知之解決疲勞及重量喪失之方法包含規律之例行性健身及運動、保留病患能量之方法，及解決貧血誘發之疲勞之治療。然而，於此技藝仍需改善癌症病患之疲勞及重量喪失之方法及/或治療。
方法
124位具非小細胞肺癌(NSCLC)之病患被分成4治療組。一組之病患於24週期間每8週接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=31)、80毫克(n=29)、160毫克(n=32)，或320毫克(n=32)之Ab1單株抗體，總共3次服藥。
病患於投用此藥劑前及其後於服藥後持續至少12週評估。每一次評估時，病患係對下述作篩選：a.)重量之任何改變；b.)使用Facit-F疲勞分量表問卷，醫學上承認之用於評估疲勞之測試(見，例如，Cella,D.,Lai,J.S.,Chang,C.H.,Peterman,A.,& Slavin,M.(2002).癌症病患之疲勞與一般族群之疲勞比較(Fatigue in cancer patients compared with fatigue in the general population). Cancer,94(2),528-538；Cella,D.,Eton,D.T.,Lai,F J-S.,Peterman,A.H ＆ M erkel,D.E.(2002).結合以固定及分佈為主之方法衍生於癌症治療之貧血及疲勞程度之功能性評估之最小臨床重要差異(Combining anchor and distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cancer Therapy anemia and fatigue scales)Journal of Pain ＆ Symptom Management,24(6)547-561.))測量之疲勞。
結果
重量變化
於12週期間之每一劑量濃度組(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均重量變化數據係繪於第49圖。每一劑量濃度之平均體重變化百分率係繪於第50圖。劑量濃度組之平均瘦體質量數據係繪於第51圖。
疲勞
每一劑量濃度組(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均疲勞證明於8週期間對於某些劑量濃度組之病患族群之平均Facit-F FS分量表分數增加(第52圖)。自基線Facit-F分量表分數之變化係繪於第53圖。
實施例31 Ab1減少具末期癌症之病患之D-二聚物量
簡介
D-二聚物濃度濃度被承認作為預測病患之血栓結果之危險性之有用之診斷工具。(Adam等人，113 Blood 2878-87(2009))對於D-二聚物係負之病患具有低血栓可能性。例如，D-二聚物分析可排除病患之可疑下肢深層靜脈血栓。(Well等人，349 N. Engl. J. Med. 1227-35(2003))與負D-二聚物測試結合之臨床評估可使肺動脈栓塞之事例降低至0.5%。(Van Belle等人，295 JAMA 172-79(2006);Kruip等人，162 Arch. Intern. Med. 1631-35(2002);Wells等人，135 Ann. Intern. Med. 98-107(2001))
D-二聚物分析可用於追蹤治療凝結異常之進展。一研究指示急性靜脈血栓性栓塞症之抗凝結治療造成D-二聚物濃度逐漸下降。(Adam等人，113 Blood 2878-87(2009)；Schutgens等人，144 J. Lab. Clin. Med. 100-07(2004))此發現導致D-二聚物量之監測可用以評估治療反應性之結論。(Adam等人，113 Blood at 2883)
對於具癌症之病患，D-二聚物之分析具有另外之重要性，因為癌症增加血栓之普遍性。(Adam等人，113 Blood 2878-87(2009))一有關於癌症病患之研究指示D-二聚物濃度於診斷肺動脈栓塞具有高負預測值及高敏感性。(King 等人，247 Radiology 854-61(2008))深層靜脈血栓對於具低發展深層靜脈血栓可能性及對D-二聚物係負測試之癌症病患可相似地被排除，即使此一結合對於癌症病患較不可能。(Lee等人，123 Thromb. Res. 177-83(2008))對負D-二聚物結果之較高門檻於癌症病患可能需要。(Righini等人，95 Haemost. 715-19(2006))
因此，於此項技藝仍需改善癌症病患之D-二聚物濃度及解決癌症病患(特別是具末期癌症者)之升高之D-二聚物狀態之方法及/或血栓治療。
方法
124位具非小細胞肺癌(NSCLC)之病患被分成4治療組。一組之病患於24週期間每8週接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=31)、80毫克(n=29)、160毫克(n=32)，或320毫克(n=32)之Ab1單株抗體，總共3次服藥。D-二聚物濃度之數據對先8週之治療收集。D-二聚物數據濃度藉由D-二聚物免疫比濁分析量化。簡言之，此分析係以藉由光度測定術測量微顆粒懸浮液之濁度變化為基礎。約1.5毫升之病患樣品檸檬酸鈉血漿被收集且貯存於塑膠製收集管。藉由與對D-二聚物具專一性之單株抗體共價鍵結而塗覆之膠乳微顆粒之懸浮液與欲被分析D-二聚物量之測試血漿混合。導致膠乳微顆粒凝集之抗原-抗體反應誘發反應介質之濁度增加。此濁度增加係藉由吸收率增加而反映，後者係使用STAGO STA分析器以光度測定術測量。吸收率之增加係測試樣品中存在之D-二聚物量之函數。
結果
每一劑量濃度(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均數據係繪於第54圖。誤差條為了清楚之目的係自此圖省略。自D-二聚物濃度基線之變化百分率係繪於第55圖。所有劑量之Ab1抗體證明於8週期間D-二聚物量之下降係優於安慰劑。
實施例32 Ab1於具類風濕性關節炎之病患達成ACR20/50/70
簡介
類風濕性關節炎係一種主要攻擊關節滑膜之慢性、全身性發炎異常。此疾病造成疼痛及可能失能之發炎，且開始典型上發生於40與50歲間之年齡。類風濕性關節炎之藥物治療效果之闡釋因多年來可獲得之大量之主觀及客觀評估工具而變困難。美國風濕病學院(“ACR”)發行類風濕性關節炎測量之一標準化套組，以促進臨床試驗之疾病改善之評估。Felson等人，36 Arthritis ＆ Rheumatism 729-40(1993)。
方法
127位具主動性類風濕性關節炎及毫克/公升之病患被分成4治療組。一組之病患接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=33)、80毫克(n=32)、160毫克(n=34)，或320毫克(n=28)之Ab1單株抗體，於16週試驗開始時一次，且於第8週再一次。CRP濃度之數據對於前4週係每週，第4與12週間之每兩週，及於第16週測試結束時收集。
於美國風濕病學院之標準化方案下之評估被用以決定於臨床試驗期間病患之改善百分率且係由評估類風濕性關節炎之一般技藝訓練者進行。此評估係以活動性測量為基礎，包含壓痛關節數、腫脹關節數、病患疼痛評估、病患及醫師之疾病活動性全面評估，及紅血球沈降速率或CRP量之實驗室評估。病患之疼痛評估係以史丹佛健康評估問卷失能指數(Stanford Health Assessment Questionnaire Disability Index)(HAQ DI)為基礎。臨床試驗期間於類風濕性關節炎之活動性測量達20%增加之病患被歸類為達ACR 20。相似地，達50%及70%改善之病患個別被歸類為ACR 50及ACR 70。
結果
大部份之患有類風濕性關節炎之病患於此研究期間達ACR 20或更大(第56圖)。於此研究之前4週，病患於步統內觀察到快速改善，且持續地，於整個16週之評估期間係穩定改善(第57、58，及59圖)。最大結果係由接受320毫克劑量之病患展現，且於此研究期間43%達ACR 70之狀態(第59圖)。
ACR評估之個別組份之分析證明於每一組份之進步(第60圖)。HAQ DI分數證明於此評估期間之優於安慰劑之臨床上有意義之變化(第61圖)。血清CRP量於所有被研究之病患係大量降低(第41圖)。血清CRP量之降低係快速，且於Ab1投藥1週內CRP量相較於安慰劑係立即降低，且延長之減少量至少持續至最後測量被進行時(最高達16週)。於所有情況，CRP量於1週內落至或低於正常參考範圍(少於5-6毫克/公升)。因此，投用Ab1可造成快速且持續改善類風濕性關節炎病患，如於臨床評估期間之ACR分數之重大改善所證實，及呈現一有效治療方式。
實施例33 Ab1於具類風濕性關節炎之病患達改善之DAS28及EULAR分數
簡介
類風濕性關節炎係一種主要攻擊關節滑膜之慢性、全身性發炎異常。此疾病造成疼痛及可能失能之發炎，且開始典型上發生於40與50歲間之年齡。類風濕性關節炎之藥物治療效果之闡釋因多年來可獲得之大量之主觀及客觀評估工具而變困難。美國風濕病學院(“ACR”)發行類風濕性關節炎測量之一標準化套組，以促進臨床試驗之疾病改善之評估。Felson等人，36 Arthritis ＆ Rheumatism 729-40(1993)。
與類風濕性關節炎有關之發炎活性係使用多種變數經由有效反應標準(諸如，疾病活動性分數(DAS)，DAS28及EULAR)測量。DAS係類風濕性關節炎疾病活動性之臨床指數，其結合腫脹關節、壓痛關節、急性期反應，及一般健康之資訊。Fransen,J.,等人，Clin. Exp. Rheumatol.,23(Suppl. 39):S93-S99(2005)。DAS 28係相似於原始DAS之指數，但使用28壓痛關節數(範圍0-28)、28腫脹關節數(範圍0-28)、ESR(血紅素沈降速率)，及選擇性之視覺類比刻度一般健康評估(範圍0-100)。歐洲風濕病聯盟(European League against Rheumatism)(EULAR)反應標準係使用達到之DAS及DAS值之個別改變量(低、中、高)使病患分類為下列類別：良好；中等，或無-反應者。
方法
127位具主動性類風濕性關節炎之病患被分成4治療組。一組之病患接受一1-小時之靜脈內(IV)灌輸安慰劑(n=33)、80毫克(n=32)、160毫克(n=34)，或320毫克(n=28)之Ab1單株抗體，其係於16週試驗之開始時一次及於第8週再一次。DAS28及EULAR分數之數據於前4週係每週，於第4與12週間係每二者，及於第16週之測試結束時收集。於標準化之DAS28及EULAR方案下之評估被用以決定臨床試驗期間病患之個別分數，且係由受評估類風濕性關節炎之一般技藝順練者進行。
結果
接受80毫克、160毫克或320毫克Ab1之病患證明於16週期間相較於接受安慰劑之病患之改善之DAS28分數，如第62圖以自基線DAS28分數之平均變化所呈現般。再者，重大百分率之接受80毫克、160毫克或320毫克Ab1之病患於16週期間相較於接受安慰劑之病患係達“良好”或“中等”類別。(第63圖)。
因此，與接受安慰劑之病患相比時，投用Ab1可於類風濕性關節炎造成改善之DAS28及EULAR分數。
序列列示
此間提及之生物序列係於下提供：
序列識別編號：1
VPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM
序列識別編號：2
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN
序列識別編號：3
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
序列識別編號：4
QASQSINNELS
序列識別編號：5
RASTLAS
序列識別編號：6
QQGYSLRNIDNA
序列識別編號：7
NYYVT
序列識別編號：8
IIYGSDETAYATWAIG
序列識別編號：9
DDSSDWDAKFNL
序列識別編號：10
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT
序列識別編號：11
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG
序列識別編號：12
CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCC
序列識別編號：13
AGGGCATCCACTCTGGCATCT
序列識別編號：14
CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT
序列識別編號：15
AACTACTACGTGACC
序列識別編號：16
ATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGC
序列識別編號：17
GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG
序列識別編號：18
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序列識別編號：19
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL
序列識別編號：20
IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA
序列識別編號：21
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYSWLSWYQQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDNVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK
序列識別編號：22
METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNDHAMGWVRQAPGKGLEYIGFINSGGSARYASWAEGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRGGAVWSIHSFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
序列識別編號：23
QASETIYSWLS
序列識別編號：24
QASDLAS
序列識別編號：25
QQGYSGSNVDNV
序列識別編號：26
DHAMG
序列識別編號：27
FINSGGSARYASWAEG
序列識別編號：28
GGAVWSIHSFDP
序列識別編號：29
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG
序列識別編號：30
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAG
序列識別編號：31
CAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCC
序列識別編號：32
CAGGCATCCGATCTGGCATCT
序列識別編號：33
CAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTT
序列識別編號：34
GACCATGCAATGGGC
序列識別編號：35
TTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGC
序列識別編號：36
GGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCC
序列識別編號：37
MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLSWFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSDNAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF
序列識別編號：38
METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSVYYMNWVRQAPGKGLEWIGFITMSDNINYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRGWGTMGRLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK
序列識別編號：39
QASQSVYDNNYLS
序列識別編號：40
GASTLAS
序列識別編號：41
AGVYDDDSDNA
序列識別編號：42
VYYMN
序列識別編號：43
FITMSDNINYASWAKG
序列識別編號：44
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<400> 2
第1圖顯示各種獨特之抗原決定基係藉由收集藉由抗體選擇方案製備之抗-IL-6抗體而辨認。抗原決定基變異度係藉由抗體-IL-6結合競爭研究(ForteBio Octet)確認。
第2圖顯示兔子抗體可變化輕序列及可變化重序列與同源人類序列及人類化序列間之可變化輕序列及可變化重序列間之比對。框架區域係識別為FR1-FR4。互補決定區域係識別為CDR1-CDR3。胺基酸殘基係如所示般編號。起始之兔子序列對於可變化輕序列及可變化重序列個別稱為RbtVL及RbtVH。從框加1橫跨至框架3之末端之最相似之人類生殖細胞抗體序列之三者係比對於兔子序列下。被認為與兔子序列最相似之人類序列係先顯示。於此實施例，最相似之序列對於輕鏈係L12A且對於重鏈係3-64-04。人類CDR3序列未被顯示。最接近之人類框架4序列係比對於兔子框架4序列下。垂直虛線指示其間兔子殘基與於相同位置之一或更多之人類殘基相同之殘基。粗體字殘基指示於該位置之人類殘基係與於相同位置之兔子殘基相同。最終之人類化序列對於可變化輕序列及可變化重序列個別稱為VLh及VHh。劃底線之殘基指示此殘基係與於該位置之兔子殘基相同，但與於三比對之人類序列之該位置之人類殘基不同。
第3圖證明對於一例示之IL-6方案之產生之IgG及抗原之專一性間之高相關性。11個孔中之9個顯示與抗原辨認之專一性IgG相關性。
第4圖提供於100μg/kg s.c.劑量之人類IL-6後1小時以不同劑量經靜脈投用抗體Ab1之α-2-巨球蛋白(A2M)劑量反應曲線。
第5圖提供抗體Ab1發展組與對照組之生存數據。
第6圖提供抗體Ab1發展組與對照組之另外之生存數據。
第7圖提供每三天靜脈注射10毫克/公斤之多株人類IgG(270-320毫克腫瘤尺寸)相對於每三天靜脈注射10毫克/公斤之抗體Ab1(270-320毫克腫瘤尺寸)之生存數據。
第8圖提供每三天靜脈注射10毫克/公斤之多株人類IgG(400-527毫克腫瘤尺寸)相對於每三天靜脈注射10毫克/公斤之抗體Ab1(400-527毫克腫瘤尺寸)之生存數據。
第9圖提供食蟹獼猴之抗體Ab1之藥物動力學描述。血漿之抗體Ab1量係經由抗原捕捉ELISA量化。此蛋白質顯示12與17天間之半衰期，其係與其它完全長度人類化抗體一致。
第10(A-D)圖個別提供抗體Ab4、Ab3、Ab8及Ab2之結合數據。第10E圖提供抗體Ab1、Ab6及Ab7之結合數據。
第11圖以表格型式綜述第10(A-E)圖之結合數據。
第12圖呈現用於實施例14之肽圖譜實驗之15個胺基酸肽之序列。
第13圖呈現實施例14製備之漬點之結果。
第14圖呈現實施例14製備之漬點之結果。
第15A圖顯示Ab1對於各種物種之IL-6之親和力及結合動力學。
第15B圖證明於T1165細胞增殖分析藉由Ab1抑制IL-6。
第16圖顯示自數個劑量組對健康男性患者單次投用Ab1形成之Ab1之平均血漿濃度。
第17圖顯示對於第16圖所示之劑量組之於血漿Ab1濃度時間曲線(AUC)下之平均面積。
第18圖顯示第16圖所示之劑量組之平均峰值Ab1濃度(C最大)。
第19圖綜述第16圖所示劑量組之Ab1藥物動力學測量。
第20圖示對具末期癌症之病患單次投用而產生之Ab1之平均血漿濃度。
第21圖例示與其它抗-IL-6抗體相比之Ab1之空前之排除半衰期。
第22圖顯示於對具末期癌症病患投用Ab1後之增加的血紅素濃度。
第23圖顯示於對具末期癌症之病患投用Ab1後之平均血脂濃度。
第24圖顯示對具末期癌症之病患投用Ab1後之平均嗜中性白血球計量。
第25圖證明健康個人中血清CRP量之抑制。
第26(A-B)圖證明於末期癌症病患之血清CRP量之抑制。
第27圖顯示於小鼠癌症惡質症模型中藉由Ab1預防體重喪失。
第28圖顯示癌症惡質症模型中之代表性之以Ab1治療及對照組之小鼠之身體外觀。
第29圖證明Ab1促進末期癌症病患之重量增加。
第30圖證明Ab1降低末期癌症病患之疲勞。
第31圖證明Ab1促進末期癌症病患之手握強度。
第32圖證明Ab1抑制小鼠之急性期蛋白質(血清類澱粉A)。
第33圖證明Ab1增加未期癌症病患之血漿白蛋白濃度。
第34及35圖顯示兔子抗體輕及可變化之重序列與同源人類序列及人類化序列間之比對。框架區域識別為FR1-FR4。互補決定區域識別為CDR1-CDR3。
第36(A-B)及37(A-B)圖個別顯示不同型式之Ab1之輕及可變化之重序列間之比對。框架區域識別為FR1-FR4。互補決定區域識別為CDR1-CDR3。CDR區域內之序列差異被強調。
第38圖顯示每一劑量濃度(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之Ab1單株抗體之平均CRP值。
第39圖顯示相對應於第38圖之每一劑量濃度組之中間CRP值。
第40圖顯示具各種癌症之病患於以80、160或320毫克投藥12週後之血清CRP量之降低。
第41圖顯示具類風濕性關節炎之病患人口於以80、160及320毫克投藥12週後之血清CRP量之降低。
第42圖證明以80、160及320毫克投藥12週後Ab1增加平均血紅素。
第43圖證明第42圖呈現之數據之自基線血紅素之平均變化。
第44圖證明於具有低於11克/公升之基線血紅素之病患以160及320毫克投藥12週後Ab1增加平均血紅素。
第45圖證明以80、160及320毫克投藥16週後Ab1增加平均血紅素。
第46圖證明以80、160及320毫克於投藥12週後Ab1增加白蛋白濃度。
第47圖證明相對應於第46圖之每一劑量濃度組自平均白蛋白濃度之基線之變化。
第48圖證明於具有低於35克/公升之基線白蛋白之病患於以160及320毫克投藥12週後Ab1提供於平均白蛋白濃度之持續增加。
第49圖證明於12週期間Ab1單株抗體之每一劑量濃度組(安慰劑、80毫克、160毫克，及320毫克)之平均重量變化數據。
第50圖證明相對應於第49圖之每一劑量濃度組之平均體重變化百分率。
第51圖證明對於相對應於第49圖之劑量濃度組之平均瘦身體質量數據之變化。
第52圖證明於以80、160及320毫克投藥8週後於病患人口之某些劑量濃度組之平均Facit-F FS次量表評分。
第53圖證明相對應於第52圖之自基線Facit-F FS次量表評分之變化。
第54圖證明以80、160及320毫克投藥16週後Ab1優於安慰劑地降低D-二聚物之量。
第55圖證明相對應於第54圖之每一劑量濃度組於D-二聚物濃度自基線之變化百分率。
第56圖證明以ACR度量為基準之治療具類風濕性關節炎之病患產生優於安慰劑之顯著改善。
第57圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 20。
第58圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 50。
第59圖證明於以80、160，及320毫克投藥16週後病患達成優於安慰劑之ACR 70。
第60圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之自ACR度量之組份之基線之變化。
第61圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於HAQ-DI評分之變化。
第62圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於DAS28評分之變化。
第63圖證明安慰劑、80、160，及320毫克劑量濃度組之於達成EULAR良好或中等反應之病患百分率之變化。

Claims (64)

  1. 一種組成物，其包含一抗-IL-6抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  2. 一種組成物，其包含編碼一抗-IL-6抗體或抗體片段之一核酸或多個核酸，該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  3. 一種組成物，其包含一包含有編碼一抗-IL-6抗體或抗體片段之一核酸或多個核酸的細胞，該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  4. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約22天之活體內半衰期。
  5. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約25天之活體內半衰期。
  6. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約30天之活體內半衰期。
  7. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體基本上由序列識別編號：702及序列識別編 號：704之多肽組成。
  8. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係經無糖基化(aglycosylated)。
  9. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段含有一已被改質而改變效應子功能、半衰期、蛋白質水解，及/或糖基化之Fc區域。
  10. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係一人類化單一鏈、或嵌合之抗體。
  11. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係一Fab、Fab'、F(ab')2、Fv，或scFv。
  12. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段進一步包含一人類Fc。
  13. 如申請專利範圍第12項之組成物，其中該人類Fc係衍生自IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。
  14. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係自一重組細胞表現。
  15. 如申請專利範圍第14項之組成物，其中該細胞係選自一哺乳動物、酵母菌、細菌，及昆蟲之細胞。
  16. 如申請專利範圍第15項之組成物，其中該細胞係一酵母菌細胞。
  17. 如申請專利範圍第16項之組成物，其中該酵母菌細胞係一二倍體(diploidal)酵母菌細胞。
  18. 如申請專利範圍第16項之組成物，其中該酵母菌細胞係一畢赤(Pichia)酵母菌。
  19. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該組成物進一步包含另一治療劑，該另一治療劑係選自於：化療劑、他汀(statins)、細胞激素、免疫抑制劑、基因治療劑、抗凝血劑、抗惡質症(anti-cachexia)藥劑、抗虛弱劑、抗疲勞劑、抗發熱劑、抗噁心劑、抗吐劑、IL-6拮抗劑、細胞毒劑、止痛劑、退熱劑、抗發炎劑、抗生素、抗病毒劑、抗細胞激素劑，或其等之任何組合。
  20. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該化療劑係選自於：VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑(platins)、紫杉醇、伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcytabine)、亞葉酸鈣(leucovorine)、類固醇、環磷醯胺、美法侖(melphalan)、長春花生物鹼、長春鹼、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、莫司汀(mustines)、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑(modulators)、選擇性動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素、IL-12、IL-2、IL-12R拮抗劑、毒素共軛單株抗體、腫瘤抗原特定單株抗體、ErbituxTM(爾必得舒)、AvastinTM(癌思停)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、抗-CD20抗體、Rituxan®(利妥昔)、歐克利入馬(ocrelizumab)、歐法土木瑪(ofatumumab)、DXL625、Herceptin®(賀癌平)，或其等之任何組合。
  21. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該抗凝血劑係選自於：阿昔單抗(abciximab,ReoProTM)、香豆醇(acenocoumarol)、抗凝血酵素III、阿加曲班(argatroban)、阿斯匹靈、比伐盧定(bivalirudin,AngiomaxTM)、氯吡多(clopidogrel)、達比加群(dabigatran)、達比加群酯(dabigatran etexilate,PradaxaTM/PradaxTM)、地西盧定(desirudin,RevascTM/IprivaskTM)、雙嘧達莫(dipyridamole)、埃替非巴(eptifibatide,IntegrilinTM)、磺達肝癸鈉(fondaparinux)、肝素、水蛭素、艾卓肝素(idraparinux)、匹盧定(lepirudin,RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群(melagatran)、苯茚滿二酮(phenindione)、苯丙羥基香豆素(phenprocoumon)、梯可比定(ticlopidine)、替羅非班(tirofiban,AggrastatTM)、華法林(warfarin)、辛美拉加群(ximelagatran)、辛美拉加群(ExantaTM/ExartaTM)，或其等之任何組合。
  22. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該他汀係選自於：阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、夫路伐他汀(fluvastatin)、若伐他汀(lovastatin)、米伐他汀(mevastatin)、皮他伐他汀(pitavastatin)、皮拉伐他汀(pravastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、西姆伐他汀(simvastatin)，或其等之任何組合。
  23. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該抗惡質症藥劑係選自於：***、屈***酚(dronabinol,MarinolTM)、庚苯吡酮(nabilone,Cesamet)、***二酚、***環萜酚 (cannabichromene)、四氫***酚、沙提維斯(Sativex)、甲羥孕酮乙酸酯(megestrol acetate)，或其等之任何組合。
  24. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該抗噁心劑或抗吐劑係選自於：5-HT3受體拮抗劑、香辣椒(ajwain)、阿立必利(alizapride)、抗膽鹼劑、抗組織胺劑、阿瑞比坦(aprepitant)、苯二氮平類(benzodiazepines)、***環萜酚(cannabichromene)、***二酚、***鹼、***、卡索比坦(casopitant)、氯丙、塞克立辛(cyclizine)、***(dexamethasone)、茶苯海明(dimenhydrinate,GravolTM)、苯海拉明(diphenhydramine)、度洛西汀(dolasetron)、氯哌酮(domperidone)、多巴胺拮抗劑、多西拉敏(doxylamine)、屈***酚(dronabinol,MarinolTM)、氟哌利多(droperidol)、益吐寧(emetrol)、薑、格拉斯瓊(granisetron)、氟哌丁苯(haloperidol)、羥(hydroxyzine)、東茛菪鹼(hyoscine)、勞拉西伴(lorazepam)、敏克靜(meclizine)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、咪達唑侖(midazolam)、毒蠅蕈醇(muscimol)、庚苯吡酮(nabilone,CesametTM)、nk1受體拮抗劑、奧丹亞龍(ondansetron)、帕洛諾斯瓊(palonosetron)、胡椒薄荷(peppermint)、非那根(Phenergan)、普魯氯(prochlorperazine)、普洛馬可(Promacot)、異丙(promethazine)、潘他(Pentazine)、異丙酚(propofol)、沙提維斯(Sativex)、四氫***酚、三甲氧苯醯胺(trimethobenzamide)、托烷斯瓊(tropisetron)、諾龍(nandrolone)、己烯雌酚、沙利竇邁(thalidomide)、來那度 安(lenalidomide)、飢餓素激動素(ghrelin agonists)、肌骨素(myostatin)拮抗劑、抗肌骨素抗體、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、血管緊縮素AII拮抗劑、β2腎上腺素受體激動素、β3腎上腺素受體激動素，或其等之任何組合。
  25. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該另一治療劑係選自於他莫昔芬(tamoxifen)、BCL-2拮抗劑、動情激素、雙磷酸鹽類(bisphosphonates)、副甲狀腺素(teriparatide)、雷尼酸鍶(strontium ranelate)、阿侖膦酸鈉(sodium alendronate,FosamaxTM)、利塞膦酸鹽(risedronate,ActonelTM)、雷洛昔芬(raloxifene)、伊班膦酸鹽(ibandronate,BonivaTM)、阿巴托拉(Obatoclax)、ABT-263、棉籽油酚、吉非替尼(gefitinib)、表皮生長因子受體酪胺酸激酶抑制劑、埃羅替尼(erlotinib)、表皮生長因子受體抑制劑、補骨脂素、三甲沙林(trioxysalen)、甲氧沙林(methoxsalen)、香檸檬內酯(bergapten)、維生素A酸(retinoids)、壬四烯酸乙醇(etretinate)、阿曲汀(acitretin)、因福利美(infliximab,Remicade®)、阿達木單抗(adalimumab)、因福利美(infliximab)、伊那西普(etanercept)、ZenapaxTM(賽尼哌)、環孢靈、甲氨蝶呤(Methotrexate)、有粒細胞菌落(granulocyte-colony)刺激因子、非格司亭(filgrastim)、來格司亭(lenograstim)、紐保津(Neupogen)、紐拉斯他(Neulasta)、2-芳基丙酸、醋氯芬酸(Aceclofenac)、愛斯美特(Acemetacin)、乙醯基水楊酸(阿斯匹靈)、烯氯苯乙酸 (Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、阿莫西林(Amoxiprin)、氨基安替比林(Ampyrone)、芳基烷基酸(Arylalkanoic acids)、可札丙酮(Azapropazone)、貝諾酯/貝諾酯(Benorylate/Benorilate)、苯噁洛芬(Benoxaprofen)、溴芬那酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、塞來昔布(Celecoxib)、膽鹼水楊酸鎂、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制劑、右旋布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、待克菲那(Diclofenac)、氟苯水楊酸(Diflunisal)、屈惡昔康(Droxicam)、乙水楊胺(Ethenzamide)、伊托多雷(Etodolac)、依托考昔(Etoricoxib)、法西拉胺(Faislamine)、芬那酸(fenamic acids)、苯酮酸(Fenbufen)、苯氧布若芬(Fenoprofen)、氟芬那酸(Flufenamic acid)、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬酯(Flurbiprofen)、布洛芬(Ibuprofen)、布洛森(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凱布宗(Kebuzone)、酮基布洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯諾昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、羅美昔布(Lumiracoxib)、水楊酸鎂、甲氯芬那酸(Meclofenamic acid)、甲芬那酸(Mefenamic acid)、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、水楊酸甲酯、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、奈普生(Naproxen)、N-芳基鄰胺基苯甲酸(N-Arylanthranilic acids)、奧沙美辛(Oxametacin)、歐洒普辛(Oxaprozin)、昔康(Oxicams)、羥布宗 (Oxyphenbutazone)、帕瑞昔布(Parecoxib)、非那宗(Phenazone)、苯基丁唑酮(Phenylbutazone)、吡羅昔康(Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、普洛芬(profens)、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑烷(Pyrazolidine)衍生物、洛芬可昔(Rofecoxib)、雙水楊酸鹽(Salicyl salicylate)、水楊醯胺、水楊酸鹽、苯磺唑酮(Sulfinpyrazone)、亞磺酸茚乙酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、特若西卡(Tenoxicam)、泰普菲酸(Tiaprofenic acid)、托芬那酸(Tolfenamic acid)、托美汀(Tolmetin)，及伐地昔布(Valdecoxib)，抗生素包含愛黴素(Amikacin)、胺基糖苷、安默西林(Amoxicillin)、青黴素(Ampicillin)、袢黴素(Ansamycins)、阿斯凡納明(Arsphenamine)、阿齊黴素(Azithromycin)、阿諾西林(Azlocillin)、氮烯內醯胺(Aztreonam)、崔西桿菌素(Bacitracin)、碳頭孢烯、碳青黴烯、羧芐青黴素(Carbenicillin)、頭孢克洛(Cefaclor)、頭孢羥氨芐(Cefadroxil)、頭孢氨芐(Cefalexin)、頭孢噻吩(Cefalothin)、頭孢金素(Cefalotin)、羥芐四唑頭孢菌素(Cefamandole)、頭孢唑啉(Cefazolin)、頭孢地尼(Cefdinir)、頭孢妥侖(Cefditoren)、頭孢吡肟(Cefepime)、頭孢克肟(Cefixime)、頭孢哌酮(Cefoperazone)、西氟士林(Cefotaxime)、西氟士汀(Cefoxitin)、頭孢泊肟(Cefpodoxime)、西福撲菌(Cefprozil)、西他利汀(Ceftazidime)、頭孢布烯(Ceftibuten)、頭孢唑肟(Ceftizoxime)、頭孢比普酯(Ceftobiprole)、頭孢曲松(Ceftriaxone)、頭孢呋辛 (Cefuroxime)、頭孢菌素、氯絲菌素(Chloramphenicol)、西拉他汀(Cilastatin)、環丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉黴素(Clarithromycin)、克林達黴素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、黏菌素、共磺胺甲基異噁唑(Co-trimoxazole)、達福普丁(Dalfopristin)、去氧金黴素(Demeclocycline)、二氯唑西林(Dicloxacillin)、地紅黴素(Dirithromycin)、多尼培南(Doripenem)、多西環素(Doxycycline)、依諾沙星(Enoxacin)、厄他培南(Ertapenem)、紅黴素、乙胺丁醇、氟氯唑西林(Flucloxacillin)、弗斯黴素(Fosfomycin)、富來頓(Furazolidone)、夫西地酸(Fusidic acid)、加替沙星(Gatifloxacin)、膠達那黴素(Geldanamycin)、慶大黴素(Gentamicin)、幾丁聚醣(Glycopeptides)、除莠黴素(Herbimycin)、亞胺培那(Imipenem)、異菸鹼硫胼(Isoniazid)、卡那黴素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、克林黴素(Lincomycin)、利奈唑胺(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳孢頭(Loracarbef)、大環內酯(Macrolides)、磺胺米隆(Mafenide)、美羅培南(Meropenem)、甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米諾環素(Minocycline)、單環胺基類(Monobactams)、美西沙星(Moxifloxacin)、莫匹羅星(Mupirocin)、奈夫西林(Nafcillin)、新黴素、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、氟諾沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星 (Ofloxacin)、扼塞青黴素(Oxacillin)、土黴素(Oxytetracycline)、巴母黴素(Paromomycin)、盤尼西林(Penicillin,Penicillins)、哌拉西林(Piperacillin)、平板黴素(Platensimycin)、多黏菌素B、多肽、百浪多息(Prontosil)、吡醯胺、喹諾酮類(Quinolones)、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平辛(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、羅紅黴素(Roxithromycin)、壯觀黴素(Spectinomycin)、鏈黴素、磺胺醋醯(Sulfacetamide)、磺胺甲二唑(Sulfamethizole)、氨苯磺醯胺(Sulfanamide)、柳氨磺吡啶(Sulfasalazine)、硫代異噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺類(Sulfonamides)、替考拉寧(Teicoplanin)、泰利黴素(Telithromycin)、四環黴素類(Tetracycline,Tetracyclines)、噻卡青黴素(Ticarcillin)、替硝唑(Tinidazole)、磺醯尿素(Tobramycin)、甲氧芐啶(Trimethoprim)、甲氧芐啶-磺胺甲噁唑(Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃黴素(Troleandomycin)、曲伐沙星(Trovafloxacin)，及萬古黴素(Vancomycin)，可為該治療劑之活性劑亦包含醛固酮、倍氯米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮質類固醇、考地索(Cortisol)、乙酸可體松乙酸酯(Cortisone acetate)、去氧皮質酮乙酸酯(Deoxycorticosterone acetate)、***(Dexamethasone)、乙酸氟氫可體松酯(Fludrocortisone acetate)、糖皮質素、氫可體松、甲基去氫皮質醇(Methylprednisolone)、去氫皮質醇(Prednisolone)、潑尼松(Prednisone)、類固醇，及曲安奈 德(Triamcinolone)，抗病毒劑包含阿巴卡韋(Abacavir)、無環鳥苷(aciclovir,acyclovir)、阿德福韋酯(adefovir)、金剛胺(amantadine)、安佩那維(amprenavir)、抗逆轉錄病毒劑固定劑量組合物、抗逆轉錄病毒劑增效增強子(antiretroviral synergistic enhancer)、阿爾比朵(arbidol)、阿札那韋(atazanavir)、阿特利拉(atripla)、溴呋啶(brivudine)、西多福韋(cidofovir)、卡貝滋(combivir)、地瑞納韋(darunavir)、地拉韋啶(delavirdine)、去羥肌苷(didanosine)、二十二醇(docosanol)、依度尿苷(edoxudine)、依發韋侖(efavirenz)、恩曲他濱(emtricitabine)、恩夫韋肽(enfuvirtide)、恩替卡韋(entecavir)、進入抑制劑、泛昔洛韋(famciclovir)、福米韋森(fomivirsen)、弗沙佩那維(fosamprenavir)、膦甲酸(foscarnet)、膦乙酸(fosfonet)、融合抑制劑、更昔洛韋(ganciclovir)、嘉達喜(GardasilTM)、伊班他濱(ibacitabine)、碘苷、咪喹莫特(imiquimod)、異丙肌苷(imunovir)、印地那韋(indinavir)、肌苷、整化酶(integrase)抑制劑、干擾素、第I型干擾素、第II型干擾素、第III型干擾素、拉脈優啶(lamivudine)、洛匹那韋(lopinavir)、洛韋胺(loviride)、馬拉維洛(maraviroc)、MK-0518、嗎啉胍(moroxydine)、奈非那韋(nelfinavir)、奈弗拉平(nevirapine)、蕾沙瓦(nexavir)、核苷類似物、奧司他韋(oseltamivir)、噴昔洛韋(penciclovir)、帕拉米韋(peramivir)、普利康那利(pleconaril)、鬼臼毒素、蛋白酶抑制劑、反轉錄酶抑制劑、利巴韋林(ribavirin)、金剛乙 胺(rimantadine)、利托那韋(ritonavir)、沙昆那韋(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、泰諾福韋(tenofovir)、泰諾福韋富馬酸酯(tenofovir disoproxil)、替拉那韋(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三協韋(trizivir)、托孟他定(tromantadine)、舒發泰(truvada)、伐昔洛韋(valaciclovir)、伐更昔洛韋(valganciclovir)、韋克韋羅(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、韋拉密汀(viramidine)、札西他濱(zalcitabine)、札那米韋(zanamivir)、齊多夫定(zidovudine)，或其等之任何組合。
  26. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該細胞毒劑、化療劑，或免疫抑制劑係選自於：1-去氫睪固酮、1-甲基亞硝基脲(1-methylnitrosourea)、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿巴西普(Abatacept)、阿巴拉珊(Abraxane)、阿曲汀(acitretin)、阿克拉黴素(aclarubicin)、錒-225(225Ac)、放線菌素、阿達木單抗(Adalimumab)、腺苷酸去胺酶抑制劑、阿非莫單抗(Afelimomab)、阿柏西普(Aflibercept)、阿夫土珠(Afutuzumab)、阿法賽特(Alefacept)、順式視黃酸(alitretinoin)、烷基磺酸鹽、烷基化劑、六甲密胺(altretamine)、阿夫西地(alvocidib)、胺基左旋糖酸/胺基左旋糖酸甲酯、胺基蝶呤、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那白滯素(Anakinra)、蒽二酮類(anthracenediones)、蒽環類、氨茴黴素(anthramycin,AMC)；抗真菌劑(antimytotic agents)、抗生素、抗-CD20抗體、抗菌抗生素(antifolates)、 抗淋巴細胞球蛋白、抗代謝物、抗胸腺細胞球蛋白、三氧化砷(arsenic trioxide)、阿塞株單抗(Aselizumab)、門冬醯胺酶(asparaginase)、天門冬素破壞劑(asparagine depleters)、砈-211(211At)、阿利若瑪(Atlizumab)、阿托木單抗(Atorolimumab)、阿曲生坦(atrasentan)、AvastinTM(癌思停)、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、氮卓斯汀(azelastine)、氮丙啶、巴利昔單抗(Basiliximab)、BAYX抗體、貝拉他西(Belatacept)、貝利單抗(Belimumab)、貝洛替康(belotecan)、苯達莫司汀(bendamustine)、柏替木單抗(Bertilimumab)、蓓蕯羅汀(bexarotene)、比生群(bisantrene)、鉍-213(213Bi)、鉍-212(212Bi)、博來黴素(bleomycin)、BLyS抗體、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、鈣調磷酸酶(Calcineurin)抑制劑、卡奇黴素(calicheamicin)、喜樹鹼類(camptothecin,camptothecins)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin，卡波鉑[paraplatin])、卡波醌(carboquone)、洋紅黴素(carminomycin)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡莫司汀(BSNU)、CAT抗體、CD11a抗體、CD147/貝西金(Basigin)抗體、CD154抗體、CD18抗體、CD20抗體、CD23抗體、CD3抗體、CD4抗體、CD40抗體、CD62L/L-選擇素(selectin)抗體、CD80抗體、CDK抑制劑、西利株單抗(Cedelizumab)、塞來昔布(celecoxib)、塞妥株單抗(Certolizumab pegol)、莫司汀苯丁酸(chlorambucil)、環孢黴素(Ciclosporin)、順-二氯二胺鉑 (II)(DDP)順鉑、克拉屈濱(cladribine)、克拉昔單抗(Clenoliximab)、氯伐拉濱(clofarabine)、可樂喜(colchicin)、互補體組份5抗體、銅-67(67Cu)、皮質類固醇、CTLA-4抗體、CTLA-4融合蛋白質、親環素(Cyclophilin)抑制劑、環磷醯胺類(cyclophosphamides,cyclothosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、松胞菌素B(cytochalasin B)、細胞毒劑核糖核酸酶類、達卡巴(dacarbazine)、達株單抗(Daclizumab)、放線菌素(dactinomycin)、放線菌素(放線菌素D)、道諾紅菌素(daunorubicin)、道諾紅菌素(先前係道諾鰴素[daunomycin])、地西他濱(decitabine)、地弗若里馬(Deforolimus)、秋水仙胺(demecolcine)、地托比星(detorubicin)、二溴甘露醇、乙胺(diethylcarbamazine)、二氫葉酸鹽還原酶抑制劑、二羥基炭疽菌素二酮、白喉毒素、DNA聚合酶抑制劑、多西紫杉醇(docetaxel)、阿托度單抗(Dorlimomab aritox)、多利辛單抗(Dorlixizumab)、多柔比星(doxorubicin，阿黴素[adriamycin])、DXL625、艾庫組單抗(Eculizumab)、依法利單抗(Efalizumab)、乙丙昔羅(efaproxiral)、EGFR拮抗劑、伊利司莫(elesclomol)、伊沙蘆星(elsamitrucin)、伊西利莫單抗(Elsilimomab)、吐根鹼、內皮縮血管肽受體拮抗劑(endothelin receptor antagonists)、表鬼臼毒素、泛艾黴素(epirubicin)、埃坡黴素類(epothilones)、ErbituxTM(爾必得舒)、厄利株單抗(Erlizumab)、雌莫司汀(estramustine)、伊那西普 (Etanercept)、乙菲錠溴化物(ethidium bromide)、伊托格魯(etoglucid)、依托泊(etoposide)、依托泊磷酸鹽、依維莫司(Everolimus)、法拉莫單抗(Faralimomab)、法呢醯基轉移酶(farnesyltransferase)抑制劑、FKBP抑制劑、氟尿苷(floxuridine)、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿嘧啶、芳妥株單抗(Fontolizumab)、福莫司汀(fotemustine)、格利西單抗(Galiximab)、鎵-67(67Ga)、甘堤尼單抗(Gantenerumab)、加維莫單抗(Gavilimomab)、吉西他濱(gemcitabine)、糖皮質素類、格里姆單抗(Golimumab)、格米利單抗(Gomiliximab)、短桿菌素D、胍利司莫(Gusperimus)、Herceptin®(賀癌平)、類(hydrazines)、羥基脲、低甲基化劑、泛達黴素類(idarubicin,Idarubicine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、IL-1拮抗劑類、IL-1受體拮抗劑類、IL-12、IL-12抗體、IL-12R拮抗劑類、IL-13抗體、IL-2、IL-2抑制劑、IL-2受體/CD25抗體、IL-6抗體、伊瑪替尼甲磺酸鹽(imatinib mesylate)、免疫血球素E抗體、IMP脫氫酶抑制劑、因福利美(Infliximab)、伊洛莫單抗(Inolimomab)、整合素(Integrin)抗體、干擾素抗體、干擾素、白細胞介素5抗體、白細胞介素-6受體抗體、白細胞介素、碘-125(125I)、碘-131(131I)、伊比利單抗(Ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、克利辛單抗(Keliximab)、拉洛他賽(larotaxel)、鉛-212(212Pb)、利布林單抗(Lebrilizumab)、來氟米特(Leflunomide)、來那度安(Lenalidomide)、拉地利單抗(Lerdelimumab)、亞葉酸鈣 (leucovorine)、LFA-1抗體、利多卡因(lidocaine)、脂肪加氧酶抑制劑、洛莫司汀(lomustine,CCNU)、氯尼達明(lonidamine)、硫蒽酮(lucanthone)、魯昔單抗(Lumiliximab)、鎦-177(177Lu)、大環內酯類(Macrolides)、甘露舒凡(mannosulfan)、馬司莫單抗(Maslimomab)、馬索羅酚(masoprocol)、莫司汀(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、美波利單抗(Mepolizumab)、巰基嘌呤、美堤利單抗(Metelimumab)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、微管組合抑制劑、微管安定增強子(enhancers)、光輝黴素(mithramycin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托胍腙(mitoguazone)、絲裂鰴素、絲裂鰴素C、米托坦(mitotane)、雙羥葱醌(mitoxantrone)、莫洛利單抗(Morolimumab)、mTOR抑制劑、木利莫單抗-CD3(MuromonAb-CD3)、莫司汀(mustines)、黴酚酸、米托坦(mytotane；O,P'-(DDD))、那塔利單抗(Natalizumab)、奈達鉑(nedaplatin)、那利里單抗(Nerelimomab)、尼莫司汀(nimustine)、氮莫司汀類(nitrogen mustards)、亞硝基脲類(nitrosoureas)、去甲二氫愈創木酸(nordihydroguaiaretic acid)、奧利默森(oblimersen)、歐克立茲馬(ocrelizumab,Ocrelizumab)、歐度利單抗(Odulimomab)、歐法突坶馬(ofatumumab)、歐拉巴利(olaparib)、歐馬利單抗(Omalizumab)、歐塔塔西(ortataxel)、歐替利單抗(Otelixizumab)、草酸鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel，紫杉醇)、巴思可單抗(Pascolizumab)、PDGF拮抗劑、培門冬酶 (pegaspargase)、培美曲賽(pemetrexed)、噴他汀(Pentostatin)、鉑帕妥株單抗(Pertuzumab)、匹西利單抗(Pexelizumab)、磷二酯酶(phosphodiesterase)抑制劑、磷-32(32P)、匹美莫司阿貝莫司(Pimecrolimus Abetimus)、吡柔比星(pirarubicin)、匹杉瓊(pixantrone)、鉑(platins)、光輝黴素(plicamycin)、聚ADP核醣聚合酶抑制劑、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、紫質衍生物、潑尼莫司汀(prednimustine)、普魯卡因(procaine)、甲芐肼(procarbazine)、普萘洛酮(propranolol)、蛋白質降解酶(proteasome)抑制劑、綠膿桿菌(pseudomonas)外毒素、綠膿桿菌毒素、嘌呤合成抑制劑、嘌呤黴素、嘧啶合成抑制劑、放射性核素、放射治療、雷替曲占(raltitrexed)、雷莫司汀(ranimustine)、雷西利單抗(Reslizumab)、維生素A酸X受體(retinoid X receptor)激動素、維生素A酸(retinoids)、錸-186(186Re)、錸-188(188Re)、核糖核苷酸還原酶抑制劑、蓖麻毒蛋白、利洛納賽(Rilonacept)、Rituxan®(利妥昔)、利妥昔單抗(Rovelizumab)、魯比特康(rubitecan)、魯比利單抗(Ruplizumab)、釤-153(153Sm)、沙鉑(satraplatin)、鈧-47(47Sc)、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、西利西利(seliciclib)、司莫司汀(semustine)、性荷爾蒙拮抗劑、西匹利單抗(Siplizumab)、西羅司莫(Sirolimus)、類固醇芳香環轉化酶(aromatase)抑制劑、類固醇、鏈脲佐菌素(streptozocin)、鏈佐菌素(streptozotocin)、他克司莫 (Tacrolimus)、他拉普芬(talaporfin)、他利單抗(Talizumab)、紫杉類(taxanes)、紫杉醇類(taxols)、堤加非(tegafur)、阿替莫單抗(Telimomab aritox)、替莫卟吩(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替西羅司莫(temsirolimus,Temsirolimus)、替尼利單抗(Teneliximab)、替尼泊甙(teniposide)、替伯利單抗(Teplizumab)、特立氟胺(Teriflunomide)、特西塔賽(tesetaxel)、睪內酯(testolactone)、丁卡因(tetracaine)、沙利竇邁(Thalidomide)、沙奧特帕莫司汀苯丁酸(thioepa chlorambucil)、硫代嘌呤硫代鳥嘌呤(thiopurines thioguanine)、ThioTEPA(硫替派)、胸苷酸鹽(thymidylate)合成酶抑制劑、噻唑呋林(tiazofurin)、替匹法尼(tipifarnib)、T-淋巴細胞抗體、TNF拮抗劑、TNF抗體、TNF融合蛋白質、TNF受體融合蛋白質、TNF-α抑制劑、托株單抗(Tocilizumab)、拓樸異構酶抑制劑、拓樸替康(topotecan)、托拉利單抗(Toralizumab)、特拉貝替汀(trabectedin)、特立米利單抗(Tremelimumab)、曲奧舒凡(treosulfan)、維甲酸(tretinoin)、三氮烯類、三亞胺醌(triaziquone)、三乙撐基密胺(triethylenemelamine)、四硝酸三鉑、曲磷胺(trofosfamide)、腫瘤抗原特定性單株抗體、酪胺酸激酶抑制劑、烏拉莫司汀(uramustine)、烏司替單抗(Ustekinumab)、戊柔比星(valrubicin,Valrubicine)、法巴利單抗(Vapaliximab)、VEGF拮抗劑、維巴利單抗(Vepalimomab)、維替泊芬(verteporfin)、長春鹼、長春花 生物鹼類、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春氟寧(vinflunine)、長春瑞濱(vinorelbine)、維西利單抗(Visilizumab)、伏立諾他(vorinostat)、釔-88(88Y)、釔-90(90Y)、拉諾利單抗(Zanolimumab)、齊留通(zileuton)、齊拉利單抗(Ziralimumab)、若利莫單抗(Zolimomab aritox)、佐柔比星(zorubicin)、若他若利(Zotarolimus)，或其等之任何組合。
  27. 如申請專利範圍第19項之組成物，其中該IL-6拮抗劑係選自於：其它抗-IL-6抗體或其片段、反意(antisense)核酸、多肽．小分子，或其等之任何組合。
  28. 如申請專利範圍第27項之組成物，其中該IL-6拮抗劑係與一增加半衰期之部份偶合。
  29. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係直接或間接與一或更多之另一治療劑偶合。
  30. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之組成物，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係直接或間接與一可檢測標籤偶合。
  31. 如申請專利範圍第30項之組成物，其中該可檢測標籤係選自於：螢光染料、生物發光材料、放射性材料、化學發光部份、卵白素(avidin)、親和素(streptavidin)、生物素、酶類、基材類(substrates)、辣根過氧化酶、乙醯基膽鹼酯酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、若丹明(rhodamine)、螢光黃、螢光黃異硫氰酸酯、傘形酮 (umbelliferone)、二氯三基胺、藻紅蛋白(phycoerythrin)、丹磺醯氯化物、魯米諾(luminol)、冷光素(luciferin)、水母素(aequorin)、碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)、磷32(32P)，或其等之任何組合。
  32. 如申請專利範圍第2或3項之組成物，其中該編碼該抗-IL-6抗體之一或更多之核酸包含序列識別編號：723及序列識別編號：700之重及輕鏈多核苷酸序列；或序列識別編號：701及序列識別編號：703之重及輕鏈多核苷酸序列。
  33. 一種一抗-IL-6抗體或抗體片段於製造一組成物以供在一個體中預防、治療或診斷一與IL-6有關之疾病或狀況之用途，其中該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  34. 一種編碼一抗-IL-6抗體或抗體片段之一核酸或多個核酸於製造一組成物以供在一個體中預防、治療或診斷一與IL-6有關之疾病或狀況之用途，其中該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  35. 一種一包含有編碼一抗-IL-6抗體或抗體片段之一核酸或多個核酸的細胞於製造一組成物以供在一個體中預防、治療或診斷一與IL-6有關之疾病或狀況之用途，其中該抗體或抗體片段包含一具有序列識別編號：709之胺 基酸序列的輕鏈多肽及一具有序列識別編號：657之胺基酸序列的重鏈多肽。
  36. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約22天之活體內半衰期。
  37. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約25天之活體內半衰期。
  38. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段於一健康人類個體具有至少約30天之活體內半衰期。
  39. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體基本上由序列識別編號：702及序列識別編號：704之多肽組成。
  40. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係經無糖基化(aglycosylated)。
  41. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段含有一已被改質而改變效應子功能、半衰期、蛋白質水解，及/或糖基化之Fc區域。
  42. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係一人類化單一鏈、或嵌合之抗體。
  43. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係一Fab、Fab'、F(ab')2、Fv，或 scFv。
  44. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段進一步包含一人類Fc。
  45. 如申請專利範圍第44項之用途，其中該人類Fc係衍生自IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。
  46. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係自一重組細胞表現。
  47. 如申請專利範圍第46項之用途，其中該細胞係選自一哺乳動物、酵母菌、細菌，及昆蟲之細胞。
  48. 如申請專利範圍第47項之用途，其中該細胞係一酵母菌細胞。
  49. 如申請專利範圍第48項之用途，其中該酵母菌細胞係一二倍體(diploidal)酵母菌細胞。
  50. 如申請專利範圍第48項之用途，其中該酵母菌細胞係一畢赤(Pichia)酵母菌。
  51. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該組成物進一步包含另一治療劑，該另一治療劑係選自於：化療劑、他汀(statins)、細胞激素、免疫抑制劑、基因治療劑、抗凝血劑、抗惡質症(anti-cachexia)藥劑、抗虛弱劑、抗疲勞劑、抗發熱劑、抗噁心劑、抗吐劑、IL-6拮抗劑、細胞毒劑、止痛劑、退熱劑、抗發炎劑、抗生素、抗病毒劑、抗細胞激素劑，或其等之任何組合。
  52. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該化療劑係選自於：VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、鉑(platins)、紫杉醇、 伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcytabine)、亞葉酸鈣(leucovorine)、類固醇、環磷醯胺、美法侖(melphalan)、長春花生物鹼、長春鹼、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春瑞濱(vinorelbine)、莫司汀(mustines)、酪胺酸激酶抑制劑、放射治療、性荷爾蒙拮抗劑、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑(modulators)、選擇性動情激素受體調節劑、PDGF拮抗劑、TNF拮抗劑、IL-1拮抗劑、白細胞介素、IL-12、IL-2、IL-12R拮抗劑、毒素共軛單株抗體、腫瘤抗原特定單株抗體、ErbituxTM(爾必得舒)、AvastinTM(癌思停)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、抗-CD20抗體、Rituxan®(利妥昔)、歐克利入馬(ocrelizumab)、歐法土木瑪(ofatumumab)、DXL625、Herceptin®(賀癌平)，或其等之任何組合。
  53. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該抗凝血劑係選自於：阿昔單抗(abciximab,ReoProTM)、香豆醇(acenocoumarol)、抗凝血酵素III、阿加曲班(argatroban)、阿斯匹靈、比伐盧定(bivalirudin,AngiomaxTM)、氯吡多(clopidogrel)、達比加群(dabigatran)、達比加群酯(dabigatran etexilate,PradaxaTM/PradaxTM)、地西盧定(desirudin,RevascTM/IprivaskTM)、雙嘧達莫(dipyridamole)、埃替非巴(eptifibatide,IntegrilinTM)、磺達肝癸鈉(fondaparinux)、肝素、水蛭素、艾卓肝素(idraparinux)、匹盧定(lepirudin,RefludanTM)、低分子量肝素、美拉加群(melagatran)、苯茚滿二酮(phenindione)、苯 丙羥基香豆素(phenprocoumon)、梯可比定(ticlopidine)、替羅非班(tirofiban,AggrastatTM)、華法林(warfarin)、辛美拉加群(ximelagatran)、辛美拉加群(ExantaTM/ExartaTM)，或其等之任何組合。
  54. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該他汀係選自於：阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、夫路伐他汀(fluvastatin)、若伐他汀(lovastatin)、米伐他汀(mevastatin)、皮他伐他汀(pitavastatin)、皮拉伐他汀(pravastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、西姆伐他汀(simvastatin)，或其等之任何組合。
  55. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該抗惡質症藥劑係選自於：***、屈***酚(dronabinol,MarinolTM)、庚苯吡酮(nabilone,Cesamet)、***二酚、***環萜酚(cannabichromene)、四氫***酚、沙提維斯(Sativex)、甲羥孕酮乙酸酯(megestrol acetate)，或其等之任何組合。
  56. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該抗噁心劑或抗吐劑係選自於：5-HT3受體拮抗劑、香辣椒(ajwain)、阿立必利(alizapride)、抗膽鹼劑、抗組織胺劑、阿瑞比坦(aprepitant)、苯二氮平類(benzodiazepines)、***環萜酚(cannabichromene)、***二酚、***鹼、***、卡索比坦(casopitant)、氯丙、塞克立辛(cyclizine)、***(dexamethasone)、茶苯海明(dimenhydrinate,GravolTM)、苯海拉明(diphenhydramine)、度洛西汀(dolasetron)、氯哌酮(domperidone)、多巴胺拮抗劑、多西拉敏(doxylamine)、 屈***酚(dronabinol,MarinolTM)、氟哌利多(droperidol)、益吐寧(emetrol)、薑、格拉斯瓊(granisetron)、氟哌丁苯(haloperidol)、羥(hydroxyzine)、東茛菪鹼(hyoscine)、勞拉西伴(lorazepam)、敏克靜(meclizine)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、咪達唑侖(midazolam)、毒蠅蕈醇(muscimol)、庚苯吡酮(nabilone,CesametTM)、nk1受體拮抗劑、奧丹亞龍(ondansetron)、帕洛諾斯瓊(palonosetron)、胡椒薄荷(peppermint)、非那根(Phenergan)、普魯氯(prochlorperazine)、普洛馬可(Promacot)、異丙(promethazine)、潘他(Pentazine)、異丙酚(propofol)、沙提維斯(Sativex)、四氫***酚、三甲氧苯醯胺(trimethobenzamide)、托烷斯瓊(tropisetron)、諾龍(nandrolone)、己烯雌酚、沙利竇邁(thalidomide)、來那度安(lenalidomide)、飢餓素激動素(ghrelin agonists)、肌骨素(myostatin)拮抗劑、抗肌骨素抗體、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、血管緊縮素AII拮抗劑、β2腎上腺素受體激動素、β3腎上腺素受體激動素，或其等之任何組合。
  57. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該另一治療劑係選自於他莫昔芬(tamoxifen)、BCL-2拮抗劑、動情激素、雙磷酸鹽類(bisphosphonates)、副甲狀腺素(teriparatide)、雷尼酸鍶(strontium ranelate)、阿侖膦酸鈉(sodium alendronate,FosamaxTM)、利塞膦酸鹽(risedronate,ActonelTM)、雷洛昔芬(raloxifene)、伊班膦酸鹽(ibandronate,BonivaTM)、阿巴 托拉(Obatoclax)、ABT-263、棉籽油酚、吉非替尼(gefitinib)、表皮生長因子受體酪胺酸激酶抑制劑、埃羅替尼(erlotinib)、表皮生長因子受體抑制劑、補骨脂素、三甲沙林(trioxysalen)、甲氧沙林(methoxsalen)、香檸檬內酯(bergapten)、維生素A酸(retinoids)、壬四烯酸乙醇(etretinate)、阿曲汀(acitretin)、因福利美(infliximab,Remicade®)、阿達木單抗(adalimumab)、因福利美(infliximab)、伊那西普(etanercept)、ZenapaxTM(賽尼哌)、環孢靈、甲氨蝶呤(Methotrexate)、有粒細胞菌落(granulocyte-colony)刺激因子、非格司亭(filgrastim)、來格司亭(lenograstim)、紐保津(Neupogen)、紐拉斯他(Neulasta)、2-芳基丙酸、醋氯芬酸(Aceclofenac)、愛斯美特(Acemetacin)、乙醯基水楊酸(阿斯匹靈)、烯氯苯乙酸(Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、阿莫西林(Amoxiprin)、氨基安替比林(Ampyrone)、芳基烷基酸(Arylalkanoic acids)、可札丙酮(Azapropazone)、貝諾酯/貝諾酯(Benorylate/Benorilate)、苯噁洛芬(Benoxaprofen)、溴芬那酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、塞來昔布(Celecoxib)、膽鹼水楊酸鎂、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制劑、右旋布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、待克菲那(Diclofenac)、氟苯水楊酸(Diflunisal)、屈惡昔康(Droxicam)、乙水楊胺(Ethenzamide)、伊托多雷(Etodolac)、依托考昔(Etoricoxib)、法西拉胺(Faislamine)、芬那酸(fenamic acids)、苯酮酸(Fenbufen)、苯氧布若芬(Fenoprofen)、氟芬那酸(Flufenamic acid)、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬酯(Flurbiprofen)、布洛芬(Ibuprofen)、布洛森(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凱布宗(Kebuzone)、酮基布洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯諾昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、羅美昔布(Lumiracoxib)、水楊酸鎂、甲氯芬那酸(Meclofenamic acid)、甲芬那酸(Mefenamic acid)、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、水楊酸甲酯、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、奈普生(Naproxen)、N-芳基鄰胺基苯甲酸(N-Arylanthranilic acids)、奧沙美辛(Oxametacin)、歐洒普辛(Oxaprozin)、昔康(Oxicams)、羥布宗(Oxyphenbutazone)、帕瑞昔布(Parecoxib)、非那宗(Phenazone)、苯基丁唑酮(Phenylbutazone)、吡羅昔康(Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、普洛芬(profens)、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑烷(Pyrazolidine)衍生物、洛芬可昔(Rofecoxib)、雙水楊酸鹽(Salicyl salicylate)、水楊醯胺、水楊酸鹽、苯磺唑酮(Sulfinpyrazone)、亞磺酸茚乙酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、特若西卡(Tenoxicam)、泰普菲酸(Tiaprofenic acid)、托芬那酸(Tolfenamic acid)、托美汀(Tolmetin)，及伐地昔布(Valdecoxib)，抗生素包含愛黴素(Amikacin)、胺基糖苷、安默西林(Amoxicillin)、青黴素(Ampicillin)、袢黴素(Ansamycins)、阿斯凡納明 (Arsphenamine)、阿齊黴素(Azithromycin)、阿諾西林(Azlocillin)、氮烯內醯胺(Aztreonam)、崔西桿菌素(Bacitracin)、碳頭孢烯、碳青黴烯、羧芐青黴素(Carbenicillin)、頭孢克洛(Cefaclor)、頭孢羥氨芐(Cefadroxil)、頭孢氨芐(Cefalexin)、頭孢噻吩(Cefalothin)、頭孢金素(Cefalotin)、羥芐四唑頭孢菌素(Cefamandole)、頭孢唑啉(Cefazolin)、頭孢地尼(Cefdinir)、頭孢妥侖(Cefditoren)、頭孢吡肟(Cefepime)、頭孢克肟(Cefixime)、頭孢哌酮(Cefoperazone)、西氟士林(Cefotaxime)、西氟士汀(Cefoxitin)、頭孢泊肟(Cefpodoxime)、西福撲菌(Cefprozil)、西他利汀(Ceftazidime)、頭孢布烯(Ceftibuten)、頭孢唑肟(Ceftizoxime)、頭孢比普酯(Ceftobiprole)、頭孢曲松(Ceftriaxone)、頭孢呋辛(Cefuroxime)、頭孢菌素、氯絲菌素(Chloramphenicol)、西拉他汀(Cilastatin)、環丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉黴素(Clarithromycin)、克林達黴素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、黏菌素、共磺胺甲基異噁唑(Co-trimoxazole)、達福普丁(Dalfopristin)、去氧金黴素(Demeclocycline)、二氯唑西林(Dicloxacillin)、地紅黴素(Dirithromycin)、多尼培南(Doripenem)、多西環素(Doxycycline)、依諾沙星(Enoxacin)、厄他培南(Ertapenem)、紅黴素、乙胺丁醇、氟氯唑西林(Flucloxacillin)、弗斯黴素(Fosfomycin)、富來頓(Furazolidone)、夫西地酸(Fusidic acid)、加替沙星 (Gatifloxacin)、膠達那黴素(Geldanamycin)、慶大黴素(Gentamicin)、幾丁聚醣(Glycopeptides)、除莠黴素(Herbimycin)、亞胺培那(Imipenem)、異菸鹼硫胼(Isoniazid)、卡那黴素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、克林黴素(Lincomycin)、利奈唑胺(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳孢頭(Loracarbef)、大環內酯(Macrolides)、磺胺米隆(Mafenide)、美羅培南(Meropenem)、甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米諾環素(Minocycline)、單環胺基類(Monobactams)、美西沙星(Moxifloxacin)、莫匹羅星(Mupirocin)、奈夫西林(Nafcillin)、新黴素、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、氟諾沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、扼塞青黴素(Oxacillin)、土黴素(Oxytetracycline)、巴母黴素(Paromomycin)、盤尼西林(Penicillin,Penicillins)、哌拉西林(Piperacillin)、平板黴素(Platensimycin)、多黏菌素B、多肽、百浪多息(Prontosil)、吡醯胺、喹諾酮類(Quinolones)、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平辛(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、羅紅黴素(Roxithromycin)、壯觀黴素(Spectinomycin)、鏈黴素、磺胺醋醯(Sulfacetamide)、磺胺甲二唑(Sulfamethizole)、氨苯磺醯胺(Sulfanamide)、柳氨磺吡啶(Sulfasalazine)、硫代異噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺類(Sulfonamides)、替考拉寧(Teicoplanin)、泰利黴素 (Telithromycin)、四環黴素類(Tetracycline,Tetracyclines)、噻卡青黴素(Ticarcillin)、替硝唑(Tinidazole)、磺醯尿素(Tobramycin)、甲氧芐啶(Trimethoprim)、甲氧芐啶-磺胺甲噁唑(Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃黴素(Troleandomycin)、曲伐沙星(Trovafloxacin)，及萬古黴素(Vancomycin)，可為該治療劑之活性劑亦包含醛固酮、倍氯米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮質類固醇、考地索(Cortisol)、乙酸可體松乙酸酯(Cortisone acetate)、去氧皮質酮乙酸酯(Deoxycorticosterone acetate)、***(Dexamethasone)、乙酸氟氫可體松酯(Fludrocortisone acetate)、糖皮質素、氫可體松、甲基去氫皮質醇(Methylprednisolone)、去氫皮質醇(Prednisolone)、潑尼松(Prednisone)、類固醇，及曲安奈德(Triamcinolone)，抗病毒劑包含阿巴卡韋(Abacavir)、無環鳥苷(aciclovir,acyclovir)、阿德福韋酯(adefovir)、金剛胺(amantadine)、安佩那維(amprenavir)、抗逆轉錄病毒劑固定劑量組合物、抗逆轉錄病毒劑增效增強子(antiretroviral synergistic enhancer)、阿爾比朵(arbidol)、阿札那韋(atazanavir)、阿特利拉(atripla)、溴呋啶(brivudine)、西多福韋(cidofovir)、卡貝滋(combivir)、地瑞納韋(darunavir)、地拉韋啶(delavirdine)、去羥肌苷(didanosine)、二十二醇(docosanol)、依度尿苷(edoxudine)、依發韋侖(efavirenz)、恩曲他濱(emtricitabine)、恩夫韋肽(enfuvirtide)、恩替卡韋(entecavir)、進入抑制劑、泛昔洛 韋(famciclovir)、福米韋森(fomivirsen)、弗沙佩那維(fosamprenavir)、膦甲酸(foscarnet)、膦乙酸(fosfonet)、融合抑制劑、更昔洛韋(ganciclovir)、嘉達喜(GardasilTM)、伊班他濱(ibacitabine)、碘苷、咪喹莫特(imiquimod)、異丙肌苷(imunovir)、印地那韋(indinavir)、肌苷、整化酶(integrase)抑制劑、干擾素、第I型干擾素、第II型干擾素、第III型干擾素、拉脈優啶(lamivudine)、洛匹那韋(lopinavir)、洛韋胺(loviride)、馬拉維洛(maraviroc)、MK-0518、嗎啉胍(moroxydine)、奈非那韋(nelfinavir)、奈弗拉平(nevirapine)、蕾沙瓦(nexavir)、核苷類似物、奧司他韋(oseltamivir)、噴昔洛韋(penciclovir)、帕拉米韋(peramivir)、普利康那利(pleconaril)、鬼臼毒素、蛋白酶抑制劑、反轉錄酶抑制劑、利巴韋林(ribavirin)、金剛乙胺(rimantadine)、利托那韋(ritonavir)、沙昆那韋(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、泰諾福韋(tenofovir)、泰諾福韋富馬酸酯(tenofovir disoproxil)、替拉那韋(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、三協韋(trizivir)、托孟他定(tromantadine)、舒發泰(truvada)、伐昔洛韋(valaciclovir)、伐更昔洛韋(valganciclovir)、韋克韋羅(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、韋拉密汀(viramidine)、札西他濱(zalcitabine)、札那米韋(zanamivir)、齊多夫定(zidovudine)，或其等之任何組合。
  58. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該細胞毒劑、化療劑，或免疫抑制劑係選自於：1-去氫睪固酮、1-甲基亞 硝基脲(1-methylnitrosourea)、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿巴西普(Abatacept)、阿巴拉珊(Abraxane)、阿曲汀(acitretin)、阿克拉黴素(aclarubicin)、錒-225(225Ac)、放線菌素、阿達木單抗(Adalimumab)、腺苷酸去胺酶抑制劑、阿非莫單抗(Afelimomab)、阿柏西普(Aflibercept)、阿夫土珠(Afutuzumab)、阿法賽特(Alefacept)、順式視黃酸(alitretinoin)、烷基磺酸鹽、烷基化劑、六甲密胺(altretamine)、阿夫西地(alvocidib)、胺基左旋糖酸/胺基左旋糖酸甲酯、胺基蝶呤、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那白滯素(Anakinra)、蒽二酮類(anthracenediones)、蒽環類、氨茴黴素(anthramycin,AMC)；抗真菌劑(antimytotic agents)、抗生素、抗-CD20抗體、抗菌抗生素(antifolates)、抗淋巴細胞球蛋白、抗代謝物、抗胸腺細胞球蛋白、三氧化砷(arsenic trioxide)、阿塞株單抗(Aselizumab)、門冬醯胺酶(asparaginase)、天門冬素破壞劑(asparagine depleters)、砈-211(211At)、阿利若瑪(Atlizumab)、阿托木單抗(Atorolimumab)、阿曲生坦(atrasentan)、AvastinTM(癌思停)、阿扎胞苷(azacitidine)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、氮卓斯汀(azelastine)、氮丙啶、巴利昔單抗(Basiliximab)、BAYX抗體、貝拉他西(Belatacept)、貝利單抗(Belimumab)、貝洛替康(belotecan)、苯達莫司汀(bendamustine)、柏替木單抗(Bertilimumab)、蓓蕯羅汀(bexarotene)、比生群(bisantrene)、鉍-213(213Bi)、鉍 -212(212Bi)、博來黴素(bleomycin)、BLyS抗體、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、鈣調磷酸酶(Calcineurin)抑制劑、卡奇黴素(calicheamicin)、喜樹鹼類(camptothecin,camptothecins)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑(carboplatin,卡波鉑[paraplatin])、卡波醌(carboquone)、洋紅黴素(carminomycin)、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡莫司汀(BSNU)、CAT抗體、CD11a抗體、CD147/貝西金(Basigin)抗體、CD154抗體、CD18抗體、CD20抗體、CD23抗體、CD3抗體、CD4抗體、CD40抗體、CD62L/L-選擇素(selectin)抗體、CD80抗體、CDK抑制劑、西利株單抗(Cedelizumab)、塞來昔布(celecoxib)、塞妥株單抗(Certolizumab pegol)、莫司汀苯丁酸(chlorambucil)、環孢黴素(Ciclosporin)、順-二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑、克拉屈濱(cladribine)、克拉昔單抗(Clenoliximab)、氯伐拉濱(clofarabine)、可樂喜(colchicin)、互補體組份5抗體、銅-67(67Cu)、皮質類固醇、CTLA-4抗體、CTLA-4融合蛋白質、親環素(Cyclophilin)抑制劑、環磷醯胺類(cyclophosphamides,cyclothosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、松胞菌素B(cytochalasin B)、細胞毒劑核糖核酸酶類、達卡巴(dacarbazine)、達株單抗(Daclizumab)、放線菌素(dactinomycin)、放線菌素(放線菌素D)、道諾紅菌素(daunorubicin)、道諾紅菌素(先前係道諾鰴素[daunomycin])、地西他濱(decitabine)、地弗若里馬 (Deforolimus)、秋水仙胺(demecolcine)、地托比星(detorubicin)、二溴甘露醇、乙胺(diethylcarbamazine)、二氫葉酸鹽還原酶抑制劑、二羥基炭疽菌素二酮、白喉毒素、DNA聚合酶抑制劑、多西紫杉醇(docetaxel)、阿托度單抗(Dorlimomab aritox)、多利辛單抗(Dorlixizumab)、多柔比星(doxorubicin，阿黴素[adriamycin])、DXL625、艾庫組單抗(Eculizumab)、依法利單抗(Efalizumab)、乙丙昔羅(efaproxiral)、EGFR拮抗劑、伊利司莫(elesclomol)、伊沙蘆星(elsamitrucin)、伊西利莫單抗(Elsilimomab)、吐根鹼、內皮縮血管肽受體拮抗劑(endothelin receptor antagonists)、表鬼臼毒素、泛艾黴素(epirubicin)、埃坡黴素類(epothilones)、ErbituxTM(爾必得舒)、厄利株單抗(Erlizumab)、雌莫司汀(estramustine)、伊那西普(Etanercept)、乙菲錠溴化物(ethidium bromide)、伊托格魯(etoglucid)、依托泊(etoposide)、依托泊磷酸鹽、依維莫司(Everolimus)、法拉莫單抗(Faralimomab)、法呢醯基轉移酶(farnesyltransferase)抑制劑、FKBP抑制劑、氟尿苷(floxuridine)、氟達拉濱(fludarabine)、氟尿嘧啶、芳妥株單抗(Fontolizumab)、福莫司汀(fotemustine)、格利西單抗(Galiximab)、鎵-67(67Ga)、甘堤尼單抗(Gantenerumab)、加維莫單抗(Gavilimomab)、吉西他濱(gemcitabine)、糖皮質素類、格里姆單抗(Golimumab)、格米利單抗(Gomiliximab)、短桿菌素D、胍利司莫(Gusperimus)、Herceptin®(賀癌平)、類(hydrazines)、羥基脲、低甲基 化劑、泛達黴素類(idarubicin,Idarubicine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、IL-1拮抗劑類、IL-1受體拮抗劑類、IL-12、IL-12抗體、IL-12R拮抗劑類、IL-13抗體、IL-2、IL-2抑制劑、IL-2受體/CD25抗體、IL-6抗體、伊瑪替尼甲磺酸鹽(imatinib mesylate)、免疫血球素E抗體、IMP脫氫酶抑制劑、因福利美(Infliximab)、伊洛莫單抗(Inolimomab)、整合素(Integrin)抗體、干擾素抗體、干擾素、白細胞介素5抗體、白細胞介素-6受體抗體、白細胞介素、碘-125(125I)、碘-131(131I)、伊比利單抗(Ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、伊沙匹隆(ixabepilone)、克利辛單抗(Keliximab)、拉洛他賽(larotaxel)、鉛-212(212Pb)、利布林單抗(Lebrilizumab)、來氟米特(Leflunomide)、來那度安(Lenalidomide)、拉地利單抗(Lerdelimumab)、亞葉酸鈣(leucovorine)、LFA-1抗體、利多卡因(lidocaine)、脂肪加氧酶抑制劑、洛莫司汀(lomustine,CCNU)、氯尼達明(lonidamine)、硫蒽酮(lucanthone)、魯昔單抗(Lumiliximab)、鎦-177(177Lu)、大環內酯類(Macrolides)、甘露舒凡(mannosulfan)、馬司莫單抗(Maslimomab)、馬索羅酚(masoprocol)、莫司汀(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、美波利單抗(Mepolizumab)、巰基嘌呤、美堤利單抗(Metelimumab)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、微管組合抑制劑、微管安定增強子(enhancers)、光輝黴素(mithramycin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托胍腙(mitoguazone)、絲裂鰴素、絲裂鰴素C、米托坦(mitotane)、 雙羥葱醌(mitoxantrone)、莫洛利單抗(Morolimumab)、mTOR抑制劑、木利莫單抗-CD3(MuromonAb-CD3)、莫司汀(mustines)、黴酚酸、米托坦(mytotane；O,P'-(DDD))、那塔利單抗(Natalizumab)、奈達鉑(nedaplatin)、那利里單抗(Nerelimomab)、尼莫司汀(nimustine)、氮莫司汀類(nitrogen mustards)、亞硝基脲類(nitrosoureas)、去甲二氫愈創木酸(nordihydroguaiaretic acid)、奧利默森(oblimersen)、歐克立茲馬(ocrelizumab,Ocrelizumab)、歐度利單抗(Odulimomab)、歐法突坶馬(ofatumumab)、歐拉巴利(olaparib)、歐馬利單抗(Omalizumab)、歐塔塔西(ortataxel)、歐替利單抗(Otelixizumab)、草酸鉑(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel，紫杉醇)、巴思可單抗(Pascolizumab)、PDGF拮抗劑、培門冬酶(pegaspargase)、培美曲賽(pemetrexed)、噴他汀(Pentostatin)、鉑帕妥株單抗(Pertuzumab)、匹西利單抗(Pexelizumab)、磷二酯酶(phosphodiesterase)抑制劑、磷-32(32P)、匹美莫司阿貝莫司(Pimecrolimus Abetimus)、吡柔比星(pirarubicin)、匹杉瓊(pixantrone)、鉑(platins)、光輝黴素(plicamycin)、聚ADP核醣聚合酶抑制劑、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、紫質衍生物、潑尼莫司汀(prednimustine)、普魯卡因(procaine)、甲芐肼(procarbazine)、普萘洛酮(propranolol)、蛋白質降解酶(proteasome)抑制劑、綠膿桿菌(pseudomonas)外毒素、綠膿桿菌毒素、嘌呤合成抑制劑、嘌呤黴素、嘧啶合成抑 制劑、放射性核素、放射治療、雷替曲占(raltitrexed)、雷莫司汀(ranimustine)、雷西利單抗(Reslizumab)、維生素A酸X受體(retinoid X receptor)激動素、維生素A酸(retinoids)、錸-186(186Re)、錸-188(188Re)、核糖核苷酸還原酶抑制劑、蓖麻毒蛋白、利洛納賽(Rilonacept)、Rituxan®(利妥昔)、利妥昔單抗(Rovelizumab)、魯比特康(rubitecan)、魯比利單抗(Ruplizumab)、釤-153(153Sm)、沙鉑(satraplatin)、鈧-47(47Sc)、選擇性男性荷爾蒙受體調節劑、選擇性動情激素受體調節劑、西利西利(seliciclib)、司莫司汀(semustine)、性荷爾蒙拮抗劑、西匹利單抗(Siplizumab)、西羅司莫(Sirolimus)、類固醇芳香環轉化酶(aromatase)抑制劑、類固醇、鏈脲佐菌素(streptozocin)、鏈佐菌素(streptozotocin)、他克司莫(Tacrolimus)、他拉普芬(talaporfin)、他利單抗(Talizumab)、紫杉類(taxanes)、紫杉醇類(taxols)、堤加非(tegafur)、阿替莫單抗(Telimomab aritox)、替莫卟吩(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替西羅司莫(temsirolimus,Temsirolimus)、替尼利單抗(Teneliximab)、替尼泊甙(teniposide)、替伯利單抗(Teplizumab)、特立氟胺(Teriflunomide)、特西塔賽(tesetaxel)、睪內酯(testolactone)、丁卡因(tetracaine)、沙利竇邁(Thalidomide)、沙奧特帕莫司汀苯丁酸(thioepa chlorambucil)、硫代嘌呤硫代鳥嘌呤(thiopurines thioguanine)、ThioTEPA(硫替派)、胸苷酸鹽(thymidylate) 合成酶抑制劑、噻唑呋林(tiazofurin)、替匹法尼(tipifarnib)、T-淋巴細胞抗體、TNF拮抗劑、TNF抗體、TNF融合蛋白質、TNF受體融合蛋白質、TNF-α抑制劑、托株單抗(Tocilizumab)、拓樸異構酶抑制劑、拓樸替康(topotecan)、托拉利單抗(Toralizumab)、特拉貝替汀(trabectedin)、特立米利單抗(Tremelimumab)、曲奧舒凡(treosulfan)、維甲酸(tretinoin)、三氮烯類、三亞胺醌(triaziquone)、三乙撐基密胺(triethylenemelamine)、四硝酸三鉑、曲磷胺(trofosfamide)、腫瘤抗原特定性單株抗體、酪胺酸激酶抑制劑、烏拉莫司汀(uramustine)、烏司替單抗(Ustekinumab)、戊柔比星(valrubicin,Valrubicine)、法巴利單抗(Vapaliximab)、VEGF拮抗劑、維巴利單抗(Vepalimomab)、維替泊芬(verteporfin)、長春鹼、長春花生物鹼類、長春新鹼、長春地辛(vindesine)、長春氟寧(vinflunine)、長春瑞濱(vinorelbine)、維西利單抗(Visilizumab)、伏立諾他(vorinostat)、釔-88(88Y)、釔-90(90Y)、拉諾利單抗(Zanolimumab)、齊留通(zileuton)、齊拉利單抗(Ziralimumab)、若利莫單抗(Zolimomab aritox)、佐柔比星(zorubicin)、若他若利(Zotarolimus)，或其等之任何組合。
  59. 如申請專利範圍第51項之用途，其中該IL-6拮抗劑係選自於：其它抗-IL-6抗體或其片段、反意(antisense)核酸、多肽．小分子，或其等之任何組合。
  60. 如申請專利範圍第59項之用途，其中該IL-6拮抗劑係與 一增加半衰期之部份偶合。
  61. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係直接或間接與一或更多之另一治療劑偶合。
  62. 如申請專利範圍第33-35項中任一項之用途，其中該抗-IL-6抗體或抗體片段係直接或間接與一可檢測標籤偶合。
  63. 如申請專利範圍第62項之用途，其中該可檢測標籤係選自於：螢光染料、生物發光材料、放射性材料、化學發光部份、卵白素(avidin)、親和素(streptavidin)、生物素、酶類、基材類(substrates)、辣根過氧化酶、乙醯基膽鹼酯酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、若丹明(rhodamine)、螢光黃、螢光黃異硫氰酸酯、傘形酮(umbelliferone)、二氯三基胺、藻紅蛋白(phycoerythrin)、丹磺醯氯化物、魯米諾(luminol)、冷光素(luciferin)、水母素(aequorin)、碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)、磷32(32P)，或其等之任何組合。
  64. 如申請專利範圍第34或35項之用途，其中該編碼該抗-IL-6抗體之一或更多之核酸包含序列識別編號：723及序列識別編號：700之重及輕鏈多核苷酸序列；或序列識別編號：701及序列識別編號：703之重及輕鏈多核苷酸序列。
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