MX2011005396A - Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp. - Google Patents

Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.

Info

Publication number
MX2011005396A
MX2011005396A MX2011005396A MX2011005396A MX2011005396A MX 2011005396 A MX2011005396 A MX 2011005396A MX 2011005396 A MX2011005396 A MX 2011005396A MX 2011005396 A MX2011005396 A MX 2011005396A MX 2011005396 A MX2011005396 A MX 2011005396A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
seq
antibody
cancer
patient
tumor
Prior art date
Application number
MX2011005396A
Other languages
English (en)
Inventor
Jeffrey T L Smith
Original Assignee
Alder Biopharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US12/366,567 external-priority patent/US8062864B2/en
Priority claimed from US12/391,717 external-priority patent/US8178101B2/en
Priority claimed from US12/399,156 external-priority patent/US20090238825A1/en
Priority claimed from US12/502,581 external-priority patent/US8323649B2/en
Application filed by Alder Biopharmaceuticals Inc filed Critical Alder Biopharmaceuticals Inc
Publication of MX2011005396A publication Critical patent/MX2011005396A/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)

Abstract

La presente invención se dirige a métodos terapéuticos que usan antagonistas de IL-6 tales como anticuerpos y fragmentos de los mismos que tienen especificidad de unión por IL-6 para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita. En modalidades preferidas, los anticuerpos anti-IL-6 serán humanizados y/o serán aglicosilados. Asimismo, en modalidades preferidas estos pacientes comprenderán aquellos que exhiben (o están en riesgo de desarrollar) un nivel elevado de proteína C-reactiva en suero o un nivel reducido de albúmina en suero antes del tratamiento. En otra modalidad preferida, aumentará la escala de pronóstico de Glasgow del paciente y preferentemente mejorará la capacidad de supervivencia.

Description

ANTAGONISTAS DE IL-6 PARA AUMENTAR LA ALBÚMINA Y/0 DISMINUIR LA CRP REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad a la solicitud de patente provisional de EUA No. 61/117,811, 61/117,86 y 61/117,839 todas presentadas el 25 de noviembre de 2008; y además es una continuación en parte de la solicitud de EUA 12/502, 581 presentada el 14 de Julio de 2009, No. de serie de EUA 12/399,156 presentada el 6 de marzo de 2009, No. de serie de EUA 12/391,717 presentada el 24 de febrero de 2009 y No. de serie de EUA 12/366,567 presentada el 5 de febrero de 2009, la descripción de todas ellas se incorpora a la presente en su totalidad a modo de referencia.
El listado de secuencias en el archivo denominado "67858o702002.txt" con un tamaño de 331,894 bites creado el 24 de noviembre de 2009 se incorpora a la presente en su to.talidad como referencia.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención La presente invención es una extensión de una invención anterior de los solicitantes descrita en las solicitudes de patente referidas anteriormente que se relacionan a anticuerpos anti-IL-6 novedosos y a terapias novedosas y protocolos terapéuticos que usan anticuerpos anti-IL-6, preferentemente aquellos descritos en la presente. En particular, la presente invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual disminuye el nivel de proteina C-reactiva ("CRP") del paciente, y/o aumenta el nivel de albúmina del paciente.
En un aspecto, la presente invención se relaciona a métodos para disminuir el nivel de proteina C-reactiva en un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual disminuye el nivel de CRP del paciente y monitorear al paciente para evaluar el nivel de CRP. En una modalidad, el antagonista de IL-6 comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 que específicamente se une al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) y/o compite para unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 humana intacta o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab'7 , Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y versiones de cadena simple, quimérica, humana o humanizada del mismo que se une específicamente a la IL-6 humana.
En otro aspecto, la presente invención se relaciona a métodos para aumentar el nivel de albúmina en un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual aumenta el nivel de albúmina de suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar el nivel de albúmina. En una modalidad, el antagonista de IL-6 comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 que específicamente se une al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o compite para unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y versiones de cadena simple, quimérica, humana o humanizada del mismo que se une específicamente a la IL-6 humana.
En otro aspecto, la invención proporciona terapias de combinación novedosas donde se disminuye el nivel de CRÉ y/o se aumenta el nivel de albúmina en un paciente que lo necesita mediante la administración de al menos un antagonista de IL-6 y al menos otro compuesto terapéutico, por ej . , un compuesto de estatina que incluye pero no se limita a atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina, o cualquier combinación de los mismos.
Asimismo, la presente invención se relaciona a métodos novedosos de disminución del nivel de CRP y/o aumento del nivel de albúmina en un paciente que lo necesita usando anticuerpos anti-IL-6, preferentemente, anticuerpos aglicosilados y/o humanizados que poseen una semivida de eliminación de al menos alrededor de 25 días.
Descripción de la técnica relacionada La interleucina-6 (en lo sucesivo "IL-6") (también conocida como interferón- 2; factor de diferenciación de linfocitos B; factor estimulador-2 de linfocitos B; factor estimulador de hepatocitos ; factor de crecimiento del hibridoma; y factor de crecimiento de plasmacitoma) es una citocina multifuncional involucrada en numerosos procesos biológicos tales como la regulación de la respuesta inflamatoria aguda, la modulación de respuestas inmunológicas especificas incluyendo la diferenciación de linfocitos , B y T, metabolismo óseo, trombopoyesis, proliferación epidérmica, menstruo, diferenciación de células neuronales, neuroprotección, envejecimiento, cáncer y la reacción inflamatoria que ocurre en la enfermedad de Alzheimer. Véase A. Papassotiropoulos et al, Neurobiology of Aging, 22:863-871 (2001) .
La IL-6 es un miembro de una familia de citocinas que promueven las respuestas celulares a través de un complejo de receptores que consiste en al menos una subunidad de la glicoproteina transductora de señales gpl30 y el receptor de IL-6 ("IL-6R") (también conocido como gp80) . La IL-6R puede también estar presente en forma soluble ("sIL-6R") . La IL-6 se une a la IL-6R, que luego dimeriza el receptor transductor de señales gpl30. Véase Jones, SA, J. Immunology, 175:3463-3468 (2005) .
En los seres humanos, el gen que codifica la IL-6 se organiza en cinco exones y cuatro intrones y mapea al brazo corto del cromosoma 7 en 7p21. La traducción del ARN de IL-6 y el procesamiento postraduccional da como resultado la formación de una proteina de 21 a 28 kDa con 184 aminoácidos en su forma madura. Véase A. Papassotiropoulos, et al, Neurobiology of Aging, 22:863-871 (2001).
Tal como se establece en mayor detalle en la presente, se cree que la IL-6 juega un papel importante en el desarrollo de una multitud de enfermedades y trastornos, que incluyen pero no se limitan a fatiga, caquexia, enfermedades autoinmunes, enfermedades del sistema óseo, cáncer, enfermedades coronarias, obesidad, diabetes, asma, enfermedad de Alzheimer y esclerosis múltiple. Debido a la participación percibida de la IL-6 en una gran variedad de enfermedades y trastornos, persiste la necesidad en la técnica de composiciones y métodos útiles para prevenir o tratar enfermedades asociadas con la IL-6, asi como también métodos de monitoreo para identificar pacientes con enfermedades o trastornos asociados con la IL-6. Las composiciones anti-IL-6 particularmente preferidas son aquellas que poseen efectos secundarios mínimos o reducidos al mínimo al administrarse al paciente. Las composiciones o métodos que reducen o inhiben las enfermedades o trastornos asociados con la IL-6 son beneficiosos para el paciente que los necesitan.
La función de la IL-6 no está restringida a la respuesta inmunológica ya que actúa en hematopoyesis', trombopoyesis, formación de osteoclastos, provocación de la respuesta hepática de fase aguda que da como resultado el aumento de la proteína C-reactiva (CRP) y la proteína amiloide A sérica (SAA) . Es sabido que es un factor de crecimiento para queratinocitos epidérmicos, células mesangiales renales, células de mieloma y plasmacitoma (Grossman et al., 1989 Prot Nati Acad Sci., 86, (16) 6367-6371; Horii et al., 1989, J Immunol, 143, 12, 3949-3955; Kawano et al., 1988, Nature 332, 6159, 83-85). La IL-6 es producida por una gran variedad de tipos de células incluyendo monocitos/macrófagos, fibroblastos, queratinocitos epidérmicos, células endoteliales vasculares, células mesangiales renales, células gliales, condrocitos, linfocitos T y B y algunas células tumorales (Akira et al, 1990, FASEB J. , 4, 11 2860-2867). Excepto por las células tumorales que producen constitutivamente la IL-6, las células normales no expresan la IL-6 a menos que se estimulen de manera adecuada.
Se han observado niveles elevados de IL-6 en varios tipos de cáncer, que incluyen cáncer de mama, leucemia, cáncer de ovario, cáncer de próstata, cáncer pancreático, linfoma, cáncer de pulmón, carcinoma de células renales, cáncer colorrectal y mieloma múltiple (por ej . , Chopra et al., 2004, MJAFI 60:45-49; Songur et al., 2004, Tumori 90:196-200; Blay et al., 1992, Cáncer Research 52:3317-3322; Nikiteas et al., 2005, World J. Gasterenterol . 11:1639-1643; analizado en Heikkila et al., 2008, Eur J Cáncer, 44:937-945). Tal como se describe anteriormente, es sabido o se sospecha que la IL-6 juega un papel importante en promover la proliferación o supervivencia de al menos algunos tipos de cáncer. Asimismo, algunos de estos estudios han demostrado correlación entre los niveles de IL-6 y el desenlace clínico del paciente. En su conjunto, estos resultados sugieren la posibilidad de que la inhibición de la IL-6 puede ser beneficiosa desde el punto de vista terapéutico. De hecho, estudios clínicos (analizados en Trikha et al., 2003, Clinical Cáncer Research 9:4653-4665) han demostrado, alguna mejora en el desenlace clínico del paciente debido a la administración de varios anticuerpos anti-IL-6, particularmente en aquellos cánceres en los que IL-6 juega un papel directo al promover la proliferación o supervivencia de células cáncerígenas .
Tal como se describe anteriormente, la IL-6 estimula la respuesta hepática de fase aguda, dando como resultado la producción aumentada de CRP y niveles elevados de CRP ert suero. Por esta razón, se ha informado que la proteína C-reactiva (CRP) comprende un marcador sustituto de la actividad de la IL-6. Por consiguiente, es posible detectar la actividad elevada de IL-6 mediante la medición de la CRP en suero. Por el contrario, es posible detectar la supresión efectiva de la actividad de la IL-6, por ej . , mediante la administración de un anticuerpo anti-IL-6 neutralizante, mediante la disminución resultante en los niveles de la CRP en suero.
Un reciente estudio clínico demostró que la administración de rosuvastatina a individuos aparentemente sanos que poseen la CRP elevada (mayor a 2.0 mg/1) redujo sus niveles de CRP en un 37% y disminuyó en gran medida la incidencia de infarto de miocardio, apoplejía, revascularización arterial, hospitalización por angina inestable o muerte por causas cardiovasculares. Ridker et al., N Engl J ed. 2008 Nov 9 [Publicación electrónica antes de su impresión] .
Además de su papel directo en la patogénesis de algunos cánceres y otras enfermedades, los niveles elevados de' manera crónica de IL-6 parecen afectar desfavorablemente al bienestar y calidad de vida de los pacientes. Por ejemplo, ¦ se ha informado que los niveles elevados de IL-6 están asociados con caquexia y fiebre y disminución de la albúmina en suero. Gauldie et al., 1987, PNAS 84:7251-7253; Heinric et al., 1990, 265:621-636; Zamir et al., 1993, Metabolism 42:204-208; Zamir et al., 1992, Arch Surg, 127:170-174. Se ha informado 1 que la inhibición de la IL-6 mediante un anticuerpo neutralizante mejora la fiebre y caquexia en pacientes con cáncer, aunque no se ha informado la mejora del nivel de albúmina en suero en estos pacientes (Emille et al., 1994, Blood, 84:2472-2479; Blay et al., 1992, Cáncer Research 52:3317-3322; Bataille et al., 1995, Blood, 86: 685-691).
Numerosos estudios han sugerido que la CRP es un valioso factor de pronóstico en pacientes con cáncer, con niveles elevados de CRP que predicen un pobre desenlace clínico . ! Véase, por e j., Hefler et al, Clin Cáncer Res, 2008 Feb 1; 14 (3): 710-4; Nagaoka et al, Liver Int, 2007 Oct; 27 (8) : 1091-7; Heikkilá et al, J Epidemiol Community Health, 2007 Sep; 61 ( 9) : 824-33, Review; Hará et al, Anticáncer Res, 2007 Jul-Aug; 27 (4C) : 3001-4 ; Polterauer et al, Gynecol Oncol, 2007 Oct; 107 (1) : 114-7, Epub 2007 Jul 6; Tingstedt et al, Scand J Gastroenterol, 2007 Jun; 42 (6) :754-9; Suh et al, Support Care Cáncer, 2007 Jun; 15 (6) : 613-20, Epub 2007 Jan 18; Gerhardt et al, World J Gastroenterol, 2006 Sep 14; 12 (34) : 5495-500; McArdle et al, Urol Int, 2006; 77 (2) : 127-9; Guillem et al, Dis Esophagus, 2005; 18 (3) : 146-50; Brown et al, Cáncer, 2005 Jan 15 ; 103 ( 2 ) : 377-82. La disminución de albúmina en suero (hipoalbuminemia) también está asociada con el aumento de la morbilidad y mortalidad en varias enfermedades graves, incluyendo cánceres (por ej . , Vigano et al., Arch Intern Med, 2000 Mar 27;160 (6) :861-8; Hauser et al., Support Care Cáncer, 2006 Oct; 14 (10) : 999-1011; Seve et al., Cáncer, 2006 Dec 1; 107 (11) : 2698-705) . El vinculo aparente entre la hipoalbuminemia y el pobre desenlace clínico del paciente sugiere que restablecer los niveles de albúmina mediante la infusión directa de albúmina podría promover la supervivencia de los pacientes, no obstante, la infusión de albúmina no ha mejorado la supervivencia de pacientes con cáncer avanzado (Demirkazik et al., Proc Am Soc Clin Oncol 21: 2002 (abstr 2892) ) u otros grupos de pacientes gravemente enfermos (analizado en Wilkes et al., Ann Intern Med, 2001 Aug 7;135(3) :149-64) .
El Glasgow Prognostic Score [Escala de Pronóstico de Glasgow] (GPS) es una escala de pronóstico basada en la inflamación que combina niveles de albúmina (< 35 mg/L = 1 punto) y CRP (> 10 mg/L = 1 punto) (Forrest et al.'r Br J Cáncer, 2004 May ; 90 ( 9) : 1704-6) . Desde su introducción en 2004, ya se ha demostrado que la escala de pronóstico de Glasgow posee un valor pronóstico como predictor de la mortalidad en numerosos cánceres, incluyendo cáncer gastro-esofágico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer broncogénico y cáncer renal metastático (Forrest et al., Br J Cáncer, 2004 May 4;90 (9) : 1704-6; Sharma et al., Clin Colorectal Cáncer, 2008 Sep;7 (5) : 331-7; Sharma et al., Eur J Cáncer, 2008 Jan; 4 (2) : 251-6; McMillan et al., Nutr Cáncer, 2001; 41 (1-2) : 64-9; McMillan, Proc Nutr Soc, 2008 Aug; 67 ( 3 ): 257-62 ; Ramsey et al., Cáncer, 2007 Jan 15; 109 (2) : 205-12) .
La publicación de la solicitud de patente de EUA No. 20080081041 (relacionada al tratamiento del cáncer usando un anticuerpo anti-IL-6) describe que debido a que la IL-6 está asociada a la actividad de la enfermedad y ya que la CRP es un marcador sustituto de la actividad de la IL-6, la supresión sostenida de la CRP mediante la neutralización de la IL-6 a través de su anticuerpo anti-IL-6 (CNTO 328, Zaki et al., Int J Cáncer, 2004 Sep 10; 111 (4) : 592-5) puede suponerse necesaria para alcanzar la actividad biológica. La misma solicitud de patente indica que la relación entre la IL-6 y la CRP en pacientes con enfermedad de próstata benigna y maligna fue previamente examinada por McArdle (McArdle et al. 2004 Br J Cáncer 91 ( 10 ) : 1755-1757 ) . Según se dice, McArdle no encontró diferencias considerables entre las concentraciones de IL-6 y CRP en los pacientes con enfermedad benigna en comparación con los pacientes con cáncer de próstata, en los pacientes con cáncer hubo un aumento considerable tanto en la concentración de IL-6 como en la de CRP con grado creciente de tumor. El valor medio de CRP en suero para los 86 sujetos con cáncer de próstata fue de 1.8 mg/L. Basándose en esto, los inventores de la presente solicitud de patente postulan una dosis y cronograma propuestos donde se administran 6 mg/kg de un anticuerpo anti-IL-6 (CNTO 328) cada 2 semanas y afirman que probablemente se alcance la supresión sostenida de la CRP en sujetos con HRPC metastático.
La señalización de la IL-6 está mediada por la familia Jak-Tyk de tirosina cinasas citoplasmáticas, incluyendo JAK1, JAK2 y JAK3 (analizado en Murray J Immunol. 2007 Mar 1; 178 (5) : 2623-9) . Sivash et al. informa la abrogación de la señalización JAK mediada por IL-6 por la prostaglandina ciclopentenona 15d-PGJ2 en las células de carcinoma escamosa oral. British Journal of Cáncer (2004) 91, 1074-1080. Estos resultados sugieren que los inhibidores de JAK1, JAK2, o JAK3 podrían emplearse como antagonistas de IL-6.
Ulanova et al. informa que la inhibición de la proteína tirosina cinasa no receptora Syk (usando ARNsi) disminuyó la producción de IL-6 por las células epiteliales. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2005 Mar;288 (3) :L497-507. Estos resultados sugieren que se podría emplear un inhibidor de Syk como un antagonista de IL-6.
Kedar et al. informa que el tratamiento con talidomida reduce considerablemente los niveles en suero de CRP e IL-6 hasta niveles normales o casi normales en una fracción importante de pacientes con carcinoma de células renales. Int J Cáncer. 2004 Jun 10; 110 (2 ): 260-5. Estos resultados sugieren que la talidomida y posiblemente derivados de la misma tales como lenalidomida, podrían ser útiles antagonistas de IL-6.
Asimismo, otra solicitud de patente publicada, EUA 20070292420 enseña un estudio de aumento de dosis de Fase I usando un anticuerpo anti-IL-6 (cCLB-8) para tratar pacientes que no responden al tratamiento con mieloma múltiple en etapa avanzada (N=12) e indica que este estudio demuestra que algunos pacientes presentaron una estabilización de su enfermedad. La solicitud también informa que luego de la interrupción del tratamiento se produjo aceleración en el aumento de los niveles de proteina M, lo que sugiere un rebote de la enfermedad luego del cese del tratamiento. El anticuerpo anti-IL-ß cCLB-8 inhibió la IL-6 que circula libremente.
La solicitud también indica que en este ensayo de anticuerpos no se observaron reacciones tóxicas (excepto trombocitopenia transitoria en dos pacientes previamente tratados de forma intensiva) o alérgicas y disminuyó la proteina C-reactiva (CRP) por debajo del nivel de detección en todos los pacientes. Su anticuerpo (anticuerpo cCLB-8) supuestamente poseía una semivida circulante de 17.8 días y no se observó ninguna respuesta inmunológica al anticuerpo! humano anti-quimérico (HACA) (van Zaanen et al. 1998) . Ellos ¡afirman que la administración de CNTO 328 no provocó cambios' en la presión sanguínea, pulsaciones, temperatura, hemoglobina, funciones hepáticas y funciones renales. Excepto por trombocitopenia transitoria en dos pacientes previamente tratados de forma intensiva, no se observaron supuestamente reacciones tóxicas o alérgicas y no se observó ninguna respuesta inmunológica al anticuerpo humano anti- ímerico (HACA) . Tres pacientes en su estudio supuestamente desarrollaron complicaciones relacionadas con la infección durante el tratamiento, no obstante, los inventores concluyeron que no era probable una posible relación con el anticuerpo anti-IL-6 cCLB-8 debido a que las complicaciones infecciosas son supuestamente comunes en el mieloma múltiple en etapa final y son una causa principal de muerte. Basándose en sus resultados concluyeron que este anticuerpo anti-IL-6 cCLB-8 era seguro en los pacientes con mieloma múltiple.
BREVE COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención es una extensión de invenciones anteriores de los solicitantes dirigida a anticuerpos específicos, anticuerpos humanizados o quiméricos o de cadena simple y fragmentos de los mismos que poseen especificidad de unión por IL-6, en particular anticuerpos que poseen especificidad epitópica específica y/o propiedades funcionales y terapias novedosas que usan estos y otros anticuerpos anti-IL-6. Una modalidad de la invención comprende anticuerpos humanizados específicos y fragmentos de los mismos capaces de unirse a IL-6 y/o el complejo IL-6/IL-6R. Estos anticuerpos pueden unir IL-6 solubles o IL-6 expresadas en la superficie celular. Asimismo, estos anticuerpos pueden inhibir la formación o los efectos biológicos de una o más IL-6, complejos IL-6/IL-6R, complejos IL-6/IL-6R/gpl30 y/o multímeros ' de IL-6/IL-6R/gpl30. La presente invención se relaciona a terapias novedosas y protocolos terapéuticos que usan anticuerpos anti-IL-6, preferentemente aquellos descritos en la presente. En particular, la presente invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia o la calidad de vida de un paciente que lo necesita, por ej . , un paciente que muestra niveles elevados de CRP y/o niveles disminuidos de albúmina, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, tal como aquellos identificados más adelante, por ej . , un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, por lo cual se disminuye el nivel de proteina C-reactiva ("CRP") , y/o se aumenta el nivel de albúmina del paciente. En algunas modalidades estos métodos también pueden incluir la administración de otros activos tales como estatinas que pueden ayudar adicionalmente (sinergizar) con el antagonista de IL-6 y de ese modo tratar de manera más efectiva al paciente.
En una modalidad preferida esto se efectúa mediante la administración de los anticuerpos descritos en la presente, que comprenden las secuencias de los polipéptidos de VH, VL y CDR descritas en la presente, o versiones humanizadas o quiméricas o de cadena simple de las mismas que contienen uno o más de las CDR de las secuencias de anticuerpo anti-IL-6 ejemplificadas y los polinucleótidos que las codifican. Preferentemente estos anticuerpos serán aglicosilados . En modalidades más especificas de la invención estos anticuerpos bloquearán la activación de gpl30 y/o poseerán afinidades de unión (Kds) menores a 50 picomolar y/o valores Koff menores o iguales a 10"4 S"1.
En otra modalidad de la invención estos anticuerpos y versiones humanizadas serán derivados de células inmunes de conejo (linfocitos B) y pueden seleccionarse basándose en su homología (identidad de secuencia) con las secuencias de línea germinal humana. Estos anticuerpos pueden requerir modificaciones mínimas de secuencias, o pueden no requerir modificaciones, por lo cual facilitan la retención de propiedades funcionales luego de la humanización. En ejemplos de modalidades estos anticuerpos humanizados comprenderán regiones flanqueantes humanas que son altamente homologas (poseen altos niveles de identidad de secuencia) a aquellas de un anticuerpo progenitor (por ej . conejo) tal como se describe más adelante.
En otra modalidad de la invención los anticuerpos en cuestión pueden seleccionarse según su actividad en ensayos funcionales tales como ensayos de proliferación de. T1165 conducidos por IL-6, ensayos de producción de haptoglobina de células HepG2 simulada por IL-6 y similares. Una modalidad adicional de la invención está dirigida a fragmentos de anticuerpos anti-IL-6 que comprenden polipéptidos de VH, Vl y CDR o variantes o fragmentos de los mismos, por ej . , derivados de células inmunes de conejo y los polinucleótidos que codifican los mismos, así como también el uso de: estos fragmentos de anticuerpo y los polinucleótidos que los codifican en la creación de anticuerpos y composiciones de polipéptidos novedosos capaces de reconocer complejos IL-6 y/o IL-6/IL-6R o complejos IL-6/IL-6R/gpl30 y/o multimeros de los mismos .
La invención también contempla la administración de conjugados de anticuerpos anti-IL-6 y versiones humanizadas, quiméricas o de cadena simple de los mismos y otros fragmentos de unión de los mismos conjugados a uno o más restos funcionales o detectables. La invención también contempla métodos para realizar dichos anticuerpos anti-IL-6 humanizados o anticuerpos de complejo anti-IL-6/IL-6R y fragmentos de unión de los mismos. En una modalidad, los fragmentos de unión incluyen pero no se limitan a fragmentos Fab, Fab', F(ab' )2, Fv y scFv.
Las modalidades de la invención se relacionan al uso de anticuerpos anti-IL-6 para el diagnóstico, evaluación y tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con · IL-6 o la expresión aberrante de la misma. La invención también contempla el uso de fragmentos de anticuerpos anti-IL-6 para el diagnóstico, evaluación y tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con IL-6 o la expresión aberrante de la misma. Los usos preferidos de los anticuerpos en cuestión, especialmente anticuerpos humanizados, quiméricos y de cadena simple son el tratamiento y prevención de cáncer asociado a la fatiga, debilidad, fiebre y/o caquexia y artritis reumatoide.
Otras modalidades de la invención se relacionan a la producción de anticuerpos anti-IL-6 en células hospedadoras recombinantes, preferentemente levadura diploide tal como Pichia diploide y otras cepas de levadura.
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia y la calidad de vida de un paciente al que se le diagnosticó cáncer, que comprenden administrar al paciente un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, por lo cual el nivel de proteina C-reactiva ("CRP") en suero del paciente se estabiliza y preferentemente disminuye y monitorear al paciente para evaluar la reducción en el nivel de CRP en suero del paciente, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) y/o competir para unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31,| Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos mencionados anteriormente o aquellas representadas en las Figuras 34-37) que se unen específicamente a IL-6, que preferentemente son aglicosilados .
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para mejorar la fuerza muscular de un paciente al que se le diagnosticó cáncer, que comprenden administrar al paciente un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, por lo cual mejora la fuerza muscular del paciente y monitorear al paciente para evaluar la fuerza muscular, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir para unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos mencionados anteriormente) que se unen específicamente a IL-6, que preferentemente son aglicosilados . En tales métodos preferentemente la fuerza muscular de los pacientes mejora al menos alrededor de 15% dentro de aproximadamente las 4 semanas a partir de la administración del anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, tal como lo mide la prueba Harid Grip Strength [de fuerza de prensión] y más preferentemente la fuerza muscular de los pacientes mejora al menos alrededor de 20% dentro de aproximadamente las 4 semanas a partir de la administración del anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, tal como lo mide la prueba de fuerza prensión.
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para aumentar la albúmina en suero en un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6, por lo cual aumenta la albúmina en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar el nivel de albúmina en suero, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir para unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27^ Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos, de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos mencionados anteriormente) que se unen específicamente a IL-6, que preferentemente son aglicosilados . Preferentemente estos métodos se llevan a cabo en condiciones por lo cual mejora la capacidad de supervivencia del paciente, y/o en condiciones donde aumenta el nivel de albúmina en suero alrededor de 5-10 g/L, preferentemente 7-8 g/L, dentro de aproximadamente 6 semanas a partir de la administración del anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6. Estos pacientes incluirán, sin limitación a ellos, aquellos a los que se les diagnosticó artritis reumatoide, cáncer, cáncer avanzado, enfermedad hepática, enfermedad renal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad celiaca, traumatismo, quemaduras, otras enfermedades asociadas con la disminución de albúmina en suero o cualquier combinación de las mismas.
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual disminuye el nivel de proteina C-reactiva ("CRP") en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar la reducción del nivel de CRP en suero del paciente.
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual aumenta el nivel de albúmina en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar el aumento del nivel de albúmina en suero del paciente.
Otra modalidad de la invención se relaciona a métodos para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprenden administrar al paciente un antagonista de IL-6, por lo cual disminuye el nivel de CRP en suero del paciente y aumenta el nivel de albúmina en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar la disminución del nivel de CRP en suero del paciente y el aumento del nivel de albúmina en suero del paciente.
En una modalidad de la invención, el paciente puede tener un nivel de CRP en suero elevado antes del tratamiento.
En una modalidad de la invención, el paciente puede tener un nivel reducido de albúmina en suero antes del tratamiento.
En una modalidad de la invención, la escala de pronóstico de Glasgow del paciente puede mejorar después del tratamiento.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede dirigirse a la IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, SYK, o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glucoalcaloide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña y cualquier combinación de los mismos.
En una modalida'd de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6R, anti-gpl30, anti-p38 MAP cinasa, anti-JAKl, anti-JAK2, anti-JAK3, o anti-SYK.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender una molécula pequeña que comprende talidomida, lenalidomida o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el antagonista puede comprender un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir para unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes mencionados) que se unen específicamente a la IL-!6, que preferentemente son aglicosilados . Tal como se discute más adelante, en un ejemplo de modalidad el anticuerpo anti-IL-6 comprenderá un anticuerpo humanizado que contiene las CDR de Abl y más preferentemente comprenderá la cadena pesada y, ligera variable en la SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 respectivamente y las regiones constantes en las SEQ ID NO: 588 y 586 respectivamente o una que comprenda cualquiera de las secuencias de VH y VL contenidas en las Figuras 34-37 y variantes de las mismas donde uno o más aminoácidos se modifican mediante la sustitución o eliminación sin sustancialmente alterar la afinidad de unión a IL-6.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 puede unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir por unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como Abl.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o anticuerpo del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes mencionados) que se unen específicamente a la IL-6, que preferentemente son aglicosilados .
En una modalidad de la invención, un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse especificamenteal/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como Abl o un anticuerpo humanizado o quimérico que comprende todas o la . mayoría de las mismas CDR como Abl o en particular un anticuerpo que comprende una o varias de las secuencias de VH y VL representadas en las Figuras 34-37 gue específicamente se unen a IL-6.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede unirse específicamentea los mismos epítopos lineales o conformacionales en un polipéptido de IL-6 intacta o fragmento del mismo que está(n) específicamente unidos por Abl y donde dichos epítopo(s), cuando se establecen por mapeo epitópico usando fragmentos de péptidos lineales superpuestos que abarcan todo el largo del polipéptido de IL-6 humana nativa, incluyen uno o más residuos comprendidos en fragmentos de IL-6 que se seleccionan de aquellos que respectivamente comprenden residuos de aminoácidos 37-51, residuos de aminoácidos 70-84, residuos de aminoácidos 169-183, residuos de aminoácidos 31-45 y/o residuos de aminoácidos 58-72. \ En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-ß puede comprender al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas en un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll', Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21> Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 o una combinación de CDR de uno o varios de dichos anticuerpos.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede comprender al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas en Abl.
En una modalidad de la invención, todas las CDR en el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 pueden ser idénticas a las CDR contenidas en un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes menci'onados) que se unen específicamente a la IL-6, que preferentemente son aglicosilados .
En una modalidad de la invención, todas las CDR en el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 pueden ser idénticas a una o más CDR contenidas en Abl y en particular anticuerpos que poseen secuencias de VH y VL representadas en las Figuras 34-37.
Otra modalidad de la invención se relaciona con Abl, incluyendo formas humanizadas y de conejo de la misma, asi como también cadenas pesadas, cadenas ligeras, fragmentos, variantes y CDR de las mismas. En los ensayos clínicos humanos presentados en los Ejemplos, se administró una forma humanizada de Abl.
En un ejemplo de modalidad preferida, el anticuerpo anti-IL-6 comprenderá todas las CDR en Abl. En una modalidad más preferida, el anticuerpo anti-IL-6 comprenderá la secuencia de cadena pesada variable en la SEQ ID 2 o 709 y la secuencia de cadena ligera en la SEQ ID 3 o 657 o variantes de las mismas.
En una modalidad preferida el anticuerpo anti-IL-6 humanizado comprenderá las secuencias de cadena pesada variable y de cadena ligera variable respectivamente contenidas en la SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 y preferentemente comprendiendo adicionalmente las regiones constantes de cadena pesada y cadena ligera respectivamente contenidas en las SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586 y variantes de las mismas que comprenden una o más sustituciones o eliminaciones de aminoácidos que no afectan sustancialmente la unión a IL-6 y/o la función efectora deseada. La presente modalidad también contempla polinucleótidos que comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno o más ácidos nucleicos que codifican las secuencias de cadena pesada variable (SEQ ID NO: 700) y variables de cadena ligera (SEQ ID NO: 723) y las secuencias de región constante de cadena pesada (SEQ ID NO: 589) y de ] región constante de cadena ligera (SEQ ID NO:587). Esta modalidad además contempla ácidos nucleicos que codifican variantes que comprenden una o más sustituciones o eliminaciones de aminoácidos a las secuencias de cadena pesada y ligera variables respectivamente contenidas en la SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 y las regiones constantes de cadena pesada y cadena ligera respectivamente contenidas en la SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586, que no afectan sustancialmente la unión a IL-6 y/o función efectora deseada.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser aglicosilado .
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede contener una región Fe que ha sido modificada para alterar la función efectora, semivida, proteólisis y/o glicosilación. Preferentemente la región Fe se modifica para eliminar la glicosilación.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser un anticuerpo humano, humanizado, de cadena simple o quimérico.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo anti-IL-6 de i conejo (progenitor) .
En una modalidad de la invención, las regiones flanqueantes (FR) en la región ligera variable y regiones pesadas variables de dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 respectivamente pueden ser una FR humana sin modificar o que ha sido modificada mediante la sustitución de como máximo 2 o 3 residuos de FR humanas en la región de cadena ligera variable o pesada con los correspondientes residuos de FR del anticuerpo progenitor de conejo y las FR humanas pueden haber sido derivadas de secuencias de anticuerpo de cadena pesada y ligera variables que han sido seleccionadas de una biblioteca de secuencias de anticuerpo germinales humanas basándose en su alto nivel de homología con las correspondientes regiones de cadena pesada o ligera variables de conejo relativas a otras secuencias de anticuerpo germinales humanas contenidas en la biblioteca. Tal como se describe en detalle más adelante, en una modalidad preferida el anticuerpo comprenderá FR humana que se selecciona basándose en su alto nivel de homología (grado de identidad de secuencia) a aquellos del anticuerpo principal que es humanizado.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede administrarse al paciente con una frecuencia de como máximo una vez por período de aproximadamente cuatro semanas, aproximadamente ocho semanas, aproximadamente doce semanas, aproximadamente dieciséis semanas, aproximadamente veinte semanas o aproximadamente veinticuatro semanas.
En una modalidad de la invención, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer disminuido y/o el nivel de albúmina en suero puede permanecer elevado durante todo un periodo entre dos administraciones consecutivas de anticuerpo anti-IL-6.
En una modalidad de la invención, al paciente se le pudo haber diagnosticado cáncer que se selecciona de acantoma, carcinoma de células acinicas, neuroma acústico, melanoma lentiginoso acral, acrospiroma, leucemia eosinofilica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia monocitica aguda, leucemia mieloblástica aguda con maduración, leucemia mieloide aguda de células dendriticas, leucemia mieloide aguda, leucemia promielocitica aguda, adamantinoma, adenocarcinoma, carcinoma quistico adenoide, adenoma, tumor odontogénico adenomatoide, carcinoma adrenocortical, leucemia de linfocitos T del adulto, leucemia agresiva de células NK, cánceres relacionados con SIDA, .linfoma relacionado con SIDA, sarcoma alveolar de partes blandas, fibroma ameloblástico, cáncer anal, linfoma anaplásico de células grandes, cáncer anaplásico de tiroides, linfoma angioinmunoblástico de linfocitos T, angiomiolipoma, angiosarcoma, cáncer de apéndice, astrocitoma, tumor rabdoide teratoide atipico, carcinoma de células básales, carcinoma de tipo basal, leucemia de linfocitos B, linfoma de linfocitos B, carcinoma de los conductos de Bellini, cáncer del · tracto biliar, cáncer de vejiga, blastoma, cáncer de hueso, tumor de hueso, glioma de tronco cerebral, tumor cerebral, cáncer de mama, tumor de Brenner, tumor bronquial, carcinoma bronquioloalveola , tumor de Brown, linfoma de Burkitt, cáncer de sitio primario desconocido, tumor carcinoide, carcinoma, carcinoma in situ, carcinoma' de pene, carcinoma de sitio primario desconocido, carcinosarcoma, enfermedad de Castleman, tumor embrionario del sistema nervioso central, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma cerebral, cáncer cervical, colangiocarcinoma, condroma, condrosarcoma, cordoma, coriocarcinoma, papiloma del plexo coroideo, leucemia linfocitica crónica, leucemia monocitica crónica, leucemia mielógena crónica, trastorno mieloproliferativo crónico, leucemia neutrofilica crónica, tumor de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, craniofaringioma, linfoma cutáneo de linfocitos T, enfermedad de Degos, dermatofibrosarcoma protuberans, quiste dermoide, tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, linfoma difuso de linfocitos B grandes, tumor neuroepitelial disembrioplásico, carcinoma embrionario, tumor de seno endodérmico, cáncer endometrial, cáncer uterino endometrial, tumor endometrioide, linfoma de linfocitos T asociado a enteropatia, ependimoblastoma, ependimoma, sarcoma epitelioide, eritroleucemia, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, tumor de la familia de Ewing, sarcoma de la familia de Ewing, sarcoma de Ewing, tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinales, cáncer de ducto biliar extrahepático, enfermedad de Paget extramamaria, cáncer de tubo falopiano, Fetus in fetu, fibroma, fibrosarcoma, linfoma folicular, cáncer folicular de tiroides, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vesícula biliar, ganglioglioma, ganglioneuroma, cáncer gástrico, linfoma gástrico, cáncer gastrointestinal, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor de células germinales, germinoma, coriocarcinoma gestacional, tumor trofoblástico gestacional, tumor óseo de células gigantes, glioblastoma multiforme, glioma, gliomatosis cerebri, tumor glómico, glucagonoma, gonadoblastoma, tumor de células granulosas, leucemia de células vellosas, leucemia de células vellosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de corazón, hemangioblastoma, hemangiopericitoma, hemangiosarcoma, malignidad hematológica, carcinoma hepatocelular, linfoma hepatoesplénico de linfocitos T, síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario, linfoma Hodgkin, linfoma de Hodgkin, · cáncer hipofaríngeo, glioma hipotalámico, cáncer de mama inflamatorio, melanoma infraocular, carcinoma de células de los islotes, tumor de células de los islotes, leucemia juvenil mielomonocítica, sarcoma Kaposi, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon, tumor de Klatskin, tumor de Krukenberg, cáncer de laringe, cáncer de laringe, melanoma léntigo maligno, leucemia, leucemia, cáncer del labio y la cavidad oral, liposarcoma, cáncer de pulmón, luteoma, linfangioma, linfangiosarcoma, linfoepitelioma, leucemia linfoide, linforna, macroglobulinemia, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno óseo, glioma maligno, mesotelioma maligno, tumor maligno de vaina nerviosa periférica, tumor rabdoide maligno, tumor tritón maligno, linfoma MALT, linfoma de células del manto, leucemia de mastocitos, tumor mediastinal de células germinales, tumor mediastinal, cáncer medular de tiroides, meduloblastoma, meduloblastoma, meduloepitelioma, melanoma, melánoma, meningioma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, mesotelioma, cáncer escamoso metastásico del cuello con tumor primario oculto, carcinoma urotelial metastásico, tumor Mülleriano mixto, leucemia monocitica, cáncer de boca, tumor mucinoso, síndrome de neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, mieloma múltiple, micosis fungoides, micosis fungoides, enfermedad mielodisplásica, síndromes mielodisplásicos, leucemia mieloide, 'sarcoma mieloide, enfermedad mieloproliferativa, mixoma, cáncer de la cavidad nasal, cáncer nasofaríngeo, carcinoma nasofaríngeo, neoplasma, neurinoma, neuroblastoma, neuroblastoma, neurofibroma, neuroma, melanoma nodular, linfoma no Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, cáncer de piel no melanoma, cáncer de pulmón no microcítico, oncología ocular, oligoastro!citoma, oligodendroglioma, oncocitoma, meningioma de la vaina del nervio óptico, cáncer oral, cáncer oral, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de ovario, cáncer epitelial de ovario, tumor de células germinales del ovario, tumor de ovario de bajo potencial maligno, enfermedad de Paget de la mama, tumor de Pancoast, cáncer pancreático, cáncer pancreático, cáncer papilar de tiroides, papilomatosis , paraganglioma, cáncer de seno paranasal, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, tumor perivascular de células epitelioides, cáncer faríngeo, feocromocitoma, tumor parénquima pineal de diferenciación intermedia, pineoblastoma, pituicitoma, adenoma pituitario, tumor pituitario, neoplasma de células plasmáticas, blastoma pleuropulmonar, poliembrioma, linfoma precursor linfoblástico de linfocitos T, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma de efusión primaria, cáncer hepatocelular primario, cáncer hepático primario, cáncer peritoneal primario, tumor neuroectodermal primitivo, cáncer de próstata, pseudomixoma peritoneal, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma del ' tracto respiratorio relacionado con el gen NUT en el cromosoma 15, retinoblastoma, rabdomioma, rabdomiosarcoma, transformación de Richter, teratoma sacrococcígeo, cáncer de la glándula salival, sarcoma, Schwannomatosis, carcinoma de glándulas sebáceas, neoplasma secundario, seminoma, tumor seroso, tumor de células de Sertoli-Leydig, tumor del estroma de los cordones sexuales, síndrome de Sézary, carcinoma de células en anillo de sello, cáncer de piel, tumor de células pequeñas, redondas y azules, carcinoma de células pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, linfoma de células pequeñas, cáncer del intestino delgado, sarcoma de tejido blando, somatoestatinoma, verruga del deshollinador, tumor de la médula espinal, tumor espinal, linfoma de la zona marginal esplénica, carcinoma de células escamosas, cáncer de estómago, melanoma superficial diseminante, tumor neuroectodermal primitivo supratentorial, tumor epitelial superficial de ovario, sarcoma sinovial, leucemia aguda de linfocitos T, leucemia linfocitica granular grande de linfocitos T, leucemia de linfocitos T, linfoma de linfocitos T, leucemia prolinfocitica de linfocitos T, teratoma, cáncer linfático terminal, cáncer testicular, tecoma, cáncer de garganta, carcinoma timico, timoma, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición de la pelvis renal y el uréter, carcinoma de células de transición, cáncer uracal, cáncer uretral, neoplasma urogenital, sarcoma uterino, melanoma uveal, cáncer vaginal, síndrome de Verner Morrison, ca'rcinoma verrugoso, glioma de la vía visual, cáncer ;vulvar, macroglobulinemia de Waldenstróm, tumor de Warthin, tumor de ilms, o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, al paciente pudo habérsele diagnosticado cáncer que se selecciona de cáncer colorrectal, cáncer de pulmón no microcítico, colangiocarcinoma, mesotelioma, enfermedad de Castleman, carcinoma de células renales o cualquier combinación de los mismos .
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede comprender una secuencia de polipéptido de VH que comprende: SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, o 708 o las secuencias de VH contenidas en los anticuerpos representados en las Figuras 34-37; y puede comprender además una secuencia de polipéptido de VL que comprende: SEQ ID NO: 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709 o las secuencias de VH contenidas en los anticuerpos representados en las Figuras 34-37 o una variante de las mismas donde uno o más de los residuos flanqueantes (residuos de FR) en dicho polipéptido de VH o L fue sustituido por otro residuo de aminoácido que da como resultado un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 que se une específicamente a IL-6 humana. Preferentemente las secuencias pesada y ligera variables comprenden aquellas- en las SEQ ID NO:657 y 709.
En una modalidad de la invención, uno o más de dichos residuos de FR pueden sustituirse por un aminoácido presente en el sitio correspondiente en un anticuerpo anti-IL-6 de conejo progenitor desde donde se han derivado las regiones determinantes de complementariedad (CDR) contenidas en dichos polipéptidos de VH o VL y por una sustitución consecutiva de aminoácidos .
En una modalidad de la invención, dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser humanizado.
En una modalidad de la invención, dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser quimérico.
En una modalidad de la invención, dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede además comprender una Fe humana, por ej . , una región Fe que comprende las regiones constantes de cadena pesada y ligera variables contenidas en la SEQ ID NO:704 y 702.
En una modalidad de la invención, la Fe humana puede derivar de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgGlO, IgGll, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16,, IgG17, IgG18 o IgG19. [ En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede comprender un polipéptido que tiene al menos 90% de homología de secuencia con una o más de las secuencies de polipéptidos de la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, 708, 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709 o las secuencias de VH y VL representadas en las Figuras 34-37.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede tener una semivida de eliminación de al menos alrededor de 22 días, al menos alrededor de 25 días, o al menos alrededor de 30 días.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede administrarse con untamente con un agente quimioterapéutico, que incluyen pero no se limitan a ello: antagonistas de VEGF, antagonistas de EGFR, platinos, taxoles, irinotecano, 5-fluorouracilo, gemcitabina, leucovorina, esteroides, ciclofosfamida, melfalán, alcaloides de la vinca (por ej . , vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina) , mustinas, inhibidores de tirosina cinasa, radioterapia, antagonistas de hormonas sexuales, moduladores selectivos del receptor de andrógeno, moduladores selectivos del receptor de estrógeno, antagonistas de PDGF, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-1, interleucinas (por ej . IL-12 o :iL-2), antagonistas de IL-12R, anticuerpos monoclonales conjugados con toxinas, anticuerpos monoclonales específicos contra antígenos tumorales, Erbitux™, Avastin™, Pertuzumab, anticuerpos anti-CD20, Rituxan®, ocrelizumab, ofatumumab, DXL625, Herceptin®, o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede estar directa o indirectamente unido a una etiqueta detectable o agente terapéutico .
En una modalidad de la invención, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 puede ser Abl o una cadena simple, humanizada, quimérica o fragmento de la misma que comprende todas o la mayoría de las CDR de Abl, o en particular un anticuerpo que comprende los polipéptidos de VH y VL en la SEQ ID NO:657 y 709.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede ser un ácido nucleico antisentido, por ejemplo que comprende al menos aproximadamente 10 nucleótidos de una secuencia que codifica IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, o SYK. : En una modalidad de la invención, el ácido nucleico antisentido puede comprender ADN, ARN, ácido nucleico peptídico, ácido nucleico bloqueado, morfolino (oligómero fosforodiamidato morfolino) , ácido nucleico glicólico,; ácido nucleico treósico, o cualquier combinación de los mismos: En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender Actemra™ (Tocilizumab) , Remicade®, Zenapax™ (daclizumab) o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender un polipéptido que tiene una secuencia que comprende un fragmento de IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 AP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, SYK, o cualquier combinación de los mismos, tal como un fragmento o polipéptido de longitud completa que es de al menos 40 aminoácidos de longitud.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede comprender una IL-6 soluble, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, SYK, o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el antagonista de IL-6 puede estar acoplado a un resto aumento de la semivida.
En una modalidad de la invención, el método puede incluir la medición del nivel de CRP en suero del paciente antes de la administración del anticuerpo anti-IL-6 y administrar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 si el nivel de CRP en suero del paciente es al menos aproximadamente 5 mg/L.
En una modalidad de la invención, el nivel de CRP en suero del paciente puede reducirse a menos de aproximadamente: 5 mg/L dentro de 1 semana a partir de la administración > de un antagonista de IL-6.
En una modalidad de -la invención, el nivel de CRP en suero del paciente puede reducirse a menos de 1 mg/L dentro de 1 semana a partir de la administración de un antagonista de IL.
En una modalidad de la invención, el tratamiento puede resultar en una reducción prolongada del nivel de CRP en suero del paciente.
En una modalidad de la invención, el nivel de CRP en suero del paciente puede reducirse a menos de 10 mg/L dentro de aproximadamente 1 semana a partir de la administración de un antagonista de IL-6.
En una modalidad de la invención, 14 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 21 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 28 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 35 días luego; de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de ! CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 42 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de ; CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 49 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, 56 días luego de la administración del antagonista de IL-ß, el nivel de CRP en suero del paciente puede permanecer por debajo de 10 mg/L.
En una modalidad de la invención, la capacidad de supervivencia del paciente mejora.
En una modalidad de la invención, el método puede incluir la medición del nivel de albúmina en suero del paciente antes de la administración del antagonista de IL-6 y administrar el antagonista de IL-6 si el nivel de albúmina en suero del paciente es menos de aproximadamente 35 g/L.
En una modalidad de la invención, el nivel de albúmina en suero del paciente puede aumentarse a más de aproximadamente 35 g/L dentro de aproximadamente 5 semanas a partir de la administración del antagonista de IL-6.
En una modalidad de la invención, el tratamiento puede resultar en un aumento prolongado del nivel de albúmina en suero del paciente.
En una modalidad de la invención, 42 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de albúmina en suero del paciente puede permanecer por encima de 35 g/L.
En una modalidad de la invención, 49 días luego, de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de albúmina en suero del paciente puede permanecer por encima de 35 g/L.; En una modalidad de la invención, 56 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de albúmina en suero del paciente puede permanecer por encima de 35 g/L.
En una modalidad de la invención, el nivel de albúmina en suero del paciente puede aumentarse alrededor de 5 g/L dentro de aproximadamente 5 semanas a partir de la administración del antagonista de IL-6.
En una modalidad de la invención, al paciente puede habérsele diagnosticado artritis reumatoide, cáncer, cáncer avanzado, enfermedad hepática, enfermedad renal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad celiaca, traumatismo, quemaduras, otras enfermedades asociadas con la disminución de albúmina en suero o cualquier combinación de las mismas.
En una modalidad de la invención, al paciente puede habérsele diagnosticado artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, psoriasis, artropatia psoriática, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pénfigo, dermatomiositis, polimiositis, polimialgia reumática, arteritis de células gigantes, vasculitis, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, enfermedad de Kawasaki, vasculitis aislada del sistema nervioso central, arteritis de Churg-Strauss, poliarteritis microscópica, poliangiitis microscópica, púrpura de Henoch-Schonlein, vasculitis crioglobulinémica esencial, vasculitis reumatoide, crioglobulinemia, policondritis recidivante, enfermedad de Behcet, arteritis de Takayasu, enfermedad cardíaca isquémica, apoplejía, esclerosis múltiple, sepsis, vasculitis causada por infecciones virales (por ej . , hepatitis B, hepatitis C, VIH, citomegalovirus , virus Epstein-Barr, virus Parvo B19, etc.), enfermedad de Buerger, cáncer, cáncer avanzado, osteoartritis , esclerosis sistémica, síndrome de CREST, enfermedad de Reiter, enfermedad ósea de Paget, síndrome de Sjogran, diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, fiebre mediterránea familiar, trombocitopenia autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, enfermedad tiroidea autoinmune, anemia perniciosa, vitíligo, alopecia areata, cirrosis biliar primaria, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis alcohólica, hepatitis viral incluyendo hepatitis B y C, otras enfermedades autoinmunes específicas de órganos, quemaduras, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma alérgico, otras afecciones alérgicas o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, el método puede además comprender la administración de una o más estatinas al paciente, que incluyen pero no se limitan a atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina o cualquier combinación de los mismos.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS DISTINTAS VISTAS DE LOS DIBUJOS La Fig. 1 muestra que se reconoció una variedad de epítopos únicos por la recolección de anticuerpos anti-IL-6 preparados .por el protocolo de selección de anticuerpos. La variabilidad de los epitopos se confirmó por medio de estudios de competencia de unión de anticuerpos anti-IL-6 (ForteBio Octet) .
La Fig. 2 muestra las alineaciones de secuencias de cadena ligera y pesada variables entre secuencias de cadena ligera variable y pesada variable de anticuerpo de conejo y secuencias humanas homologas y las secuencias humanizadas.
Las regiones flanqueantes se identifican como FR1-FR .
Las regiones determinantes de complementariedad se identifican como CDR1-CDR3. - Los residuos de amino ácido se enumeran tal como se muestra. Las secuencias iniciales de conejo se denominan RbtVL y RbtVH para las secuencias de cadena ligera y pesada variable respectivamente. Tres de las secuencias de anticuerpo germinales humanas más similares, que abarcan desde la Región Flanqueante 1 hasta el final de la Región Flanqueante 3, se alinean por debajo de las secuencias de conejo. La secuencia humana considerada la más similar a la secuencia de conejo se muestra en primer lugar. En el presente ejemplo, aquellas secuencias más similares son L12A para la cadena ligera y 3-64-04 para la cadena pesada. No se muestran las secuencias CDR3 humanas. La secuencia de Región Flanqueante humana 4 más cercana se alinea por debajo de la secuencia de Región Flanqueante de conejo 4. Los guiones verticales indican un residuo donde el residuo de conejo es idéntico a uno o más de los residuos humanos en la misma posición. Los residuos en negrita indican que el residuo de humano en esa posición es idéntico al residuo de conejo en la misma posición. Las secuencias finales humanizadas se denominan VLh y VHh para las secuencias de cadena ligera y pesada variable respectivamente. Los residuos subrayados indican que el residuo es igual al residuo de conejo en esa posición pero distinto que los residuos humanos en esa posición en las tres secuencias humanas alineadas.
La Fig. 3 muestra la alta correlación entre la IgG producida y la especificidad del antigeno para un ejemplo de protocolo IL-6. 9 de 11 pocilios mostraron correlación especifica de IgG con el reconocimiento de antigenos.
La Fig. 4 proporciona la curva de respuesta a la dosis de a-2-macroglobulina (A2M) para el anticuerpo Abl administrado por vía intravenosa en diferentes dosis una hora luego . de una dosis de IL-6 humano de 100 ug/kg s.c.
La Fig. 5 proporciona datos de supervivencia para los grupos de progresión del anticuerpo Abl contra los grupos de control .
La Fig. 6 proporciona datos adicionales de supervivencia para los grupos de regresión del anticuerpo Abl contra los grupos de control.
La Fig. 7 proporciona datos de supervivencia para IgG humana policlonal a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) contra el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) .
La Fig. 8 proporciona datos de supervivencia para IgG humana policlonal a 10 mg/kg i.v. cada tres dias (tamaño del tumor de 400-527 mg) contra el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres dias (tamaño del tumor de 400-527 mg) .
La Fig. 9 proporciona un perfil farmacocinético del anticuerpo Abl en monos macacos. Los niveles del anticuerpo Abl en plasma se cuantificaron mediante ELISA de captura de antigenos. Esta proteina muestra una semivida de entre 12 y 17 dias que concuerda con otros anticuerpos humanizados de longitud completa.
La Fig. 10 (A-D) proporciona datos de unión para los anticuerpos Ab4, Ab3, Ab8 y Ab2, respectivamente. La Fig. 10 E proporciona datos de unión para los anticuerpos Abl, Ab6 y Ab7.
La Fig. 11 resume los datos de unión de la Fig. 10 (A-E) de forma tabular. ' La Fig. 12 presenta las secuencias de los 15 péptidos de aminoácidos usados en el experimento de mapeo de péptidos del Ejemplo 14. i La Fig. 13 presenta los resultados de las : bandas preparadas en el Ejemplo 14.
La Fig. 14 presenta los resultados de las ; bandas preparadas en el Ejemplo 14. ! La Fig. 15A muestra la afinidad y cinética de uniónj de Abl para IL-6 de varias especies.
La Fig. 15B muestra la inhibición de la IL-6 por Abl en el ensayo de proliferación celular de T1165.
La Fig. 16 muestra la concentración promedio de Abl en plasma que resulta de la administración única de Abl a sujetos masculinos saludables en varios grupos de dosis.
La Fig. 17 muestra el área promedio bajo la curva de tiempo de concentración (AUC) de Abl en plasma para los grupos de dosis de la Fig. 16.
La Fig. 18 muestra el pico promedio de concentración de Abl en plasma (Cmáx) para los grupos de dosis de la Fig. 16.
La Fig. 19 resume las mediciones farmacocinéticas de Abl de los grupos de dosis de la Fig. 16.
La Fig. 20 muestra la concentración promedio de Abl en plasma que resulta de la administración única de Abl a pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 21 ilustra la semivida de eliminación sin precedentes de Abl en comparación con otros anticuerpos anti-IL-6.
La Fig. 22 muestra el aumento de la concentración de hemoglobina luego de la administración de Abl a pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 23 muestra las concentraciones promedio de lipidos en plasma luego de la administración de Abl a pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 24 muestra los conteos promedio de neutrófilos luego de la administración de Abl a pacientes con i cáncer avanzado .
La Fig. 25 muestra la supresión de los niveles de CRP en suero en individuos saludables.
La Fig. 26 (A-B) muestra la supresión de los niveles de CRP en suero en pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 27 muestra la prevención de la pérdida de peso por Abl en un modelo de caquexia cancerosa de ratón.
La Fig. 28 muestra la apariencia física de ratones de control y tratados con Abl representativos en el modelo de caquexia cancerosa.
La Fig. 29 muestra que el Abl promueve el aumento de peso en pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 30 muestra que el Abl disminuye la fatiga en pacientes con cáncer avanzado.
La Fig. 31 muestra que el Abl promueve la fuerza de prensión en pacientes con cáncer avanzado. ; La Fig. 32 muestra que el Abl suprime una proteína de fase aguda (amiloide A sérica) en ratones.
La Fig. 33 muestra que el Abl aumenta la concentración de albúmina en plasma en pacientes con cáncer avanzado.
Las Figuras 34 y 35 muestran alineaciones entre secuencias pesadas y ligeras variables de anticuerpo de conejo y secuencias humanas homologas y las secuencias humanizadas finales. Las regiones flanqueantes se identifican como FR1-FR . Las regiones determinantes de complementariedad se identifican como CDR1-CDR3.
Las Figuras 36 y 37 muestran alineaciones entre las secuencias pesadas y ligeras variables, respectivamente, de diferentes formas de Abl. Las regiones flanqueantes se identifican como FR1-FR4. Las regiones determinantes de complementariedad se identifican como CDR1-CDR3. Las diferencias de las secuencias dentro de las regiones . CDR se encuentran destacadas.
La Fig. 38 muestra los valores medios de CRP para cada concentración de dosis (placebo, 80 mg, 160 mg y 320 mg) del anticuerpo monoclonal Abl.
La Fig. 39 muestra el cambio en los valores medios de CRP de cada grupo de concentración de dosis correspondiente a la Fig. 38.
La Fig. 40 muestra una reducción en los niveles de' CRP en suero en pacientes con varios cánceres luego de dosificaciones de 80, 160 o 320 mg durante 12 semanas.
La Fig. 41 muestra una reducción en los niveles de1 CRP en suero en la población de pacientes con artritis reumatoide luego de dosificaciones de 80, 160 y 320 mg durante 12 semanas.
La Fig. 42 muestra que el Abl aumenta la hemoglobina promedio a 80, 160 y 320 mg luego de 12 semanas de dosificación. ; La Figura 43 muestra el cambio promedio desde la hemoglobina de referencia para los datos presentados en la Figura 42.
La Figura 44 muestra que el Abl aumenta la hemoglobina promedio a 160 y 320 mg luego de 12 semanas de dosificación en pacientes que tienen la hemoglobina de referencia por debajo de 11 g/1.
La Figura 45 muestra que el Abl aumenta la hemoglobina promedio a 80, 160 y 320 mg luego de 16 semanas de dosificación.
La Figura 46 muestra que el Abl aumenta la concentración de albúmina promedio a 80, 160 y 320 mg luego de 12 semanas de dosificación.
La Figura 47 muestra el cambio desde el punto de referencia para la concentración promedio de albúmina de cada grupo de concentración de dosis correspondiente a la Figura 46.
La Figura 48 muestra que el Abl proporciona aumentos sostenidos en la concentración promedio de albúmina a 160 y 320 mg luego de 12 semanas de dosificación en pacientes que; tienen la albúmina de referencia por debajo de 35 g/1. : La Figura 49 muestra los datos de cambio en el peso promedio de cada grupo de concentración de dosis (placebo, 80 mg, 160 mg y 320 mg) del anticuerpo monoclonal Abl durante 12 semanas .
La Fig. 50 muestra el cambio porcentual promedio en el peso corporal de cada grupo de concentración de dosis correspondiente a la Fig. 49.
La Figura 51 muestra los datos de masa corporal magra promedio para los grupos de concentración de dosis correspondientes a la Figura 49.
La Figura 52 muestra aumentos en la puntuación de subescala Facit-F FS promedio para algunos de los grupos de concentración de dosis en la población de pacientes luego de una dosificación de 80, 160 y 320 mg luego de 8 semanas.
La Fig. 53 muestra el cambio de la puntuación de subescala Facit-F FS desde el punto de referencia correspondiente a la Fig. 52.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Definiciones Se debe entender que la presente invención no se limita a la metodología, protocolos, líneas celulares, especies o géneros animales y reactivos particulares descritos, ya que los mismos pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en la presente tiene el fin de describir solamente modalidades particulares y no pretende limitar el alcance de la presente invención que estará limitado solamente por las reivindicaciones adjuntas.
Tal como se usa en la presente las formas en singular "un/a", "y" y "el/la" incluyen referentes en plural a menos que el contexto claramente exprese lo contrario. Por consiguiente, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de dichas células y la referencia a "la proteina" incluye la referencia a una o más proteínas y equivalentes de las mismas conocidas por los expertos en la técnica y así sucesivamente. Todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado tal como lo entiende el experto en la técnica a la que pertenece la presente invención a menos que se indique lo contrario.
Interleucina-6 (IL-6) : Tal como se usa en la presente, la interleucina-6 (IL-6) comprende no solo la siguiente secuencia de aminoácidos 2 12 disponible como acceso a la proteína GenBank No. NP_000591 : MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDG ISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKI ITGLLEFEVYL EYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDM TTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM (SEQ ID NO: 1 ) , sino también cualquier forma pre-pro, pro- y madura de esta secuencia de aminoácidos de IL-6, así como también mutantes y variantes que incluyen variantes alélicas de esta secuencia.
Antagonista de IL-6: Tal como se usa en la presente, el término "antagonista de IL-6" y variantes gramaticales del mismo incluyen cualquier composición que previene, inhibe o aminora los efectos de la señalización de IL-6. Generalmente, tales antagonistas pueden reducir los niveles o actividad de la IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, o una molécula involucrada en la transduccion de señalización de IL-6, o puede reducir los niveles o complejos de actividad entre los anteriores (por ej . , reducir la actividad de una IL-6/ complejo de receptores de IL-6) . Los antagonistas incluyen ácidos nucleicos antisentido, que incluyen ADN, ARN o un análogo de ácido nucleico tal como un ácido nucleico peptidico, ácido nucleico bloqueado, morfolino (oligómero fosforodiamidato morfolino) , ácido nucleico glicólico o ácido nucleico treósico. Véase Heasman, Dev Biol. 15 de marzo de 2002; 243 (2) : 209-14; Hannon and Rossi, Nature 16 de septiembre de 2004; 431 (7006) : 371-8 ; Paul et al., Nat Biotechnol. mayo de 2002; 20(5):505-8; Zhang et al., J Am Chem Soc. 30 de marzo de 2005; 127 (12 ): 4174-5; Wahlestedt et al., Proc Nati Acad Sci E.U.A. 9 de mayo de 2000; 97(10): 5633-8; Hanvey et al., 27 de noviembre de 1992; 258 (5087 ): 1481-5 ; Braasch et al., Biochemistry 9 de abril de 2002; 41(14) :4503-10; Schoning et al., Science 2000 Nov 17;290 (5495) : 1347-51. Además los antagonistas de IL-6 específicamente incluyen péptidos que bloquean la señalización de IL-6 tales como los descritos en cualquiera de las patentes de EUA No. 6,599,875; 6,172, 042; 6,838,433; 6,841,533; 5,210,075 et al. También, los antagonistas de IL-6 de acuerdo con la invención pueden incluir inhibidores de p38 MAP cinasa tales como los registrados en US20070010529 et al. dado este rol de cinasa en la producción de citosina y más particularmente la producción de IL-6. Adicionalmente, los antagonistas de IL-6 de acuerdo con la invención incluyen los compuestos glucoalcaloides registrados en el documento US20050090453 asi cómo también otros compuestos antagonistas de IL-6 aislables usando los ensayos de exploración de antagonistas de IL-6 registrados en el mismo. Otros antagonistas de IL-6 incluyen anticuerpos, tales como anticuerpos anti-IL-6, anticuerpos anti-IL-6 del receptor alfa, anticuerpos anti-gpl30 y anticuerpos anti-p38 MAP cinasa que incluyen (pero no se limitan a) los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente, Actemra™ (Tocilizumab) , Remicade®, Zenapax™ (daclizumab) , o cualquier combinación de los mismos. Otros antagonistas de IL-6 incluyen porciones o fragmentos de moléculas involucradas en la señalización de IL-6, tales como IL-6, receptor de IL-6 alfa y gpl30, que pueden ser secuencias nativas, mutantes o variantes y pueden opcionalmente estar acoplados a otros restos (tales como restos de semivida en aumento, por ej . un dominio Fe). Por ejemplo, un antagonista de IL-6 puede ser un receptor de IL-6 soluble o fragmento, un receptor de IL-6 soluble : proteina de fusión Fe, un inhibidor de molécula pequeña de IL-6, un anticuerpo del receptor anti-IL-6 o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico antisentido, etc. Otros antagonistas de IL-6 incluyen avemirs, tales como C326 (Silverman et al., Nat Biotechnol. 2005 Dec;23 (12) : 1556-61) y moléculas pequeñas, tales como retinoide AM80 sintético ( tamibaroteno) (Takeda et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2006 May; 26 ( 5 ): 1177-83 ) . Tales antagonistas de IL-6 pueden administrarse de cualquier manera conocida en la técnica, que incluye contactar un sujeto con ácidos nucleicos que codifican o hacen que se exprese cualquiera de los polipéptidos o secuencias antisentido.
Enfermedad o afección: Tal como se usa en la presente, "enfermedad o afección" refiere a una enfermedad o afección que se le ha diagnosticado a un paciente o se sospecha que la tenga, particularmente una enfermedad o afección asociada con IL-6 elevada. Una enfermedad o afección comprende, sin limitación, los efectos secundarios de medicaciones o tratamientos (tales como terapia de radiación) , asi como también afecciones idiopáticas caracterizadas por síntomas que incluyen IL-6 elevada.
Caquexia: Tal como se usa en la presente, caquexia, también conocida como enfermedad consuntiva, refiere a cualquier enfermedad marcada especialmente por demacración progresiva, debilidad, insalubridad general, desnutrición, pérdida de masa corporal, pérdida de masa muscular, o una pérdida acelerada de músculo esquelético en el contexto . de una respuesta inflamatoria crónica (analizado en Kotler, Ann lntern Med. 2000 Oct 17;133 (8) : 622-34) . Las enfermedades y afecciones en las que se observa frecuentemente la caquexia incluyen cáncer, artritis reumatoide, SIDA, enfermedad coronaria, deshidratación, desnutrición, exposición al plomo, malaria, enfermedad respiratoria, vejez, hipotiroidismo, tuberculosis, hipopituitarismo, neurastenia, hipernatremia, hiponatremia, enfermedad renal, esplénica, espondilitis anquilosante, síndrome del declive (retraso del crecimiento) y otras enfermedades, particularmente enfermedades crónicas. La caquexia también puede ser idiopática (que surge de una causa incierta) . Se entiende que la evaluación del peso en un paciente excluye los tumores o acumulación de fluidos, por ej . peso del tumor, acumulación de fluido extravascular, etc. La caquexia puede evaluarse mediante la medición de la masa corporal total del paciente (excepto los tumores o acumulación de fluidos), masa magra total (sin grasa) masa corporal, masa magra de brazos y piernas (masa magra apendicular, por ej . medida usando absorciometría de rayos x de energía dual o espectroscopia de impedancia bioeléctrica) , y/o índice de masa corporal magra (masa corporal magra dividida entre la altura del paciente al cuadrado) . Véase Kotler, Ann Intern Med. 2000 Oct 17; 133 (8) : 622-34; Marcora et al., Rheumatology (Oxford). 2006 Nov;45(ll) : 1385-8.
Debilidad: Tal como se usa en la presente, la debilidad refiere a la fatiga física, que típicamente se manifiesta como una pérdida de fuerza y/o resistencia muscular. La debilidad puede ser central (que afecta la mayoría o todos los músculos del cuerpo) o periférica (que afecta un subgrupo de músculos) . La debilidad incluye "debilidad real" en la que los músculos del paciente disminuyen en alguna medida la producción de fuerza pico y/o sostenida y "debilidad percibida", en la que el paciente percibe que se requiere un mayor esfuerzo para realizar una tarea aunque la fuerza medida de manera objetiva permanece casi igual y el paciente puede medirla de manera objetiva o reportarla él. mismo. Por ejemplo, la debilidad puede medirse de manera objetiva usando la prueba de fuerza de prensión (una prueba médicamente reconocida para evaluar la fuerza muscular) , típicamente utilizando un dinamómetro de prensión manual.
Fatiga: Tal como se usa en la presente, la fatiga refiere a fatiga mental (para fatiga física véase "debilidad") . La fatiga incluye sopor (somnolencia) y/o disminución de la atención. La fatiga puede medirse usando una variedad de pruebas conocidas en la. técnica, tales como la prueba FACIT-F (Evaluación funcional del tratamiento de enfermedades crónicas y de la fatiga). Véase, por ej . , Celia, D., Lai, J.S., Chang, C.H., Peterman, A., & Slavin, M. (2002). Fatigue in ' cáncer patients compared with fatigue in the general population. Cáncer, 94(2), 528-538; Celia, D. , Eton, D.T., Lai , F J-S., Peterman, A.H & Merkel, D.E. (2002). Combining anchor and distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cáncer Therapy anemia and fatigue scales. Journal of Pain & Symptom Management, 24 (6) 547-561.).
Fiebre:' Tal como se usa en la presente, "fiebre" refiere al punto de referencia de la temperatura corporal que aumenta al menos 1 a 2 grados Celsius. La fiebre se asocia comúnmente con un sentimiento subjetivo de hipotermia que se manifiesta como una sensación fría, temblores, aumento de la frecuencia cardíaca y frecuencia respiratoria por lo que el cuerpo del individuo alcanza el punto de referencia aumentado. Tal como se entiende en medicina, la temperatura corporal normal típicamente varía con el nivel de actividad y momento del día, con temperaturas máximas observadas en las horas de la tarde y antes de la noche y temperaturas mínimas observadas durante la segunda mitad del ciclo de sueño y las mediciones de temperatura pueden estar influenciadas por factores externos tales como respiración por la boca, consumo de comida o bebida, fumar o temperatura ambiente (dependiendo del tipo de medición) . Asimismo, el punto de referencia de la temperatura normal para los individuos puede variar hasta alrededor de 0.5 grados Celsius, por consiguiente un profesional médico puede interpretar la temperatura de un individuo según estos factores para diagnosticar si tiene fiebre. Por lo general, la fiebre se diagnostica típicamente por una temperatura interna corporal por encima de 38.0 grados Celsius, una temperatura oral por encima 37.5 grados Celsius, o una temperatura axilar por encima de 37.2 grados Celsius.
Mejorado: Tal como se usa en la presente, "mejorádo/a", "mejora" y otras variantes gramaticales incluyen cualquier cambio beneficioso que resulte de un tratamiento. Un cambio beneficioso es cualquier forma en la que el estado del paciente es mejor de lo que seria en ausencia del tratamiento. "Mejorado/a" incluye la prevención de una afección indeseada, el enlentecimiento del ritmo de empeoramiento de la afección, el retardo del desarrollo de una afección indeseada y restablecimiento a un estado esencialmente normal. Por ejemplo, la mejora de la caquexia comprende cualquier aumento de la masa del paciente, tal como la masa corporal total (excepto el peso normalmente excluido durante la evaluación de la caquexia, por ej . , peso del tumor, acumulación de fluido extravascular , etc.), masa corporal magra, y/o masa magra apendicular, asi como también cualquier retraso o enlentecimiento del ritmo de pérdida de masa, o prevención o enlentecimiento de la pérdida de masa asociado a una enfermedad o afección que se diagnosticó al paciente. Para otro ejemplo, la mejora en la debilidad comprende cualquier aumento' en la fuerza del paciente, asi como también cualquier demora o enlentecimiento del ritmo de pérdida de fuerza, o prevención o enlentecimiento de la pérdida de fuerza asociado con una enfermedad o afección que se diagnosticó al paciente. Para aun otro ejemplo, la mejora en la fatiga comprende cualquier disminución en la fatiga del paciente, asi como también cualquier demora o enlentecimiento del ritmo del aumento de la fatiga, o prevención o enlentecimiento del aumento de la' fatiga asociado con una enfermedad o afección que se diagnosticó al paciente. Para aun otro ejemplo, la mejora en la fiebre comprende cualquier disminución en la fiebre del paciente, asi como también cualquier demora o enlentecimiento del ritmo del aumento de la fiebre, o prevención o enlentecimiento del aumento de la fiebre asociado con una enfermedad o afección que se diagnosticó al paciente.
Proteina C-reactiva (CRP) : Tal como se usa en la presente, la proteina C-reactiva (CRP) comprende no solo la siguiente secuencia de 224 aminoácidos disponible como acceso a la proteina GenBank No. NP_000558: ME LLCFLVLTSLSHAFGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVSLKAPLTKPLKAFTVCLHFY TELSSTRGYSIFSYATKRQDNEILIFWSKDIGYSFTVGGSEILFEVPEVTVAPVHICTSWESA SGIVEFWVDGKPRVRKSLKKGYTVGAEASIILGQEQDSFGGNFEGSQSLVGDIGNVNM DFVL SPDEINTIYLGGPFSPNVLNWRALKYEVQGEVFTKPQLWP (SEQ ID NO: 726), sino también cualquier forma pre-pro, pro- y madura de esta secuencia de aminoácidos de CRP, asi como también mutantes y variantes que incluyen variantes alélicas de esta secuencia. Los niveles de CRP, por ej . en suero, hígado, tumor o en cualquier otra parte del cuerpo, puede medirse fácilmente usando métodos de rutina y reactivos comercialmente disponibles, por ej . ELISA, tira de prueba del anticuerpo, inmunoturbidimetría, inmunodifusión rápida, aglutinación visual, Western blot, Northern blot, etc.
, Receptor de interleucina-6 (IL-6R); también denominado receptor de IL-6 alfa (IL-6RA) : Tal como se usa en la presente, "receptor de interleucina-6" ("IL-6R"; también "receptor de IL-6 alfa" o "IL-6RA") comprende no solo la siguiente secuencia de aminoácidos 468 disponible como acceso a la proteina Swiss-Prot No. P08887: LAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATVHWVLR KPAAGSHPSRWAGMGRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSCFRKSP LSNVVCEWGPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGDSSFYI VSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVT QDPHSWNSSFYRLR FELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDA SGLRHVVQLRAQEEFGQGEWSEWSPEAMGTPW TESRSPPAENEVSTPMQALTTNKDDDNILFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGSLAFGT LLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPRPTPVLVPLISPPVSPSSLGSDN TSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR (SEQ ID NO: 727), sino también cualquier forma pre-pro, pro- y madura de esta secuencia de aminoácidos, así como también mutantes y variantes que incluyen variantes alélicas de esta secuencia. gpl30: Tal como se usa en la presente, gpl30 (también denominado receptor de interleucina-6 subunidad beta) comprende no solo la siguiente secuencia precursora de aminoácidos 918 disponible como acceso a la proteína Swiss-Prot No. P40189: MLTLQTWVVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYFHVNAN YIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNIQLTCNILTFGQLEQNVYGITÍISGLPP EKPKNLSCIVNEGKK RCEWDGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTV YFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNPSIKSV IILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSD SE EASGITYEDRPS APSFWYKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTR KSHLQ NYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKDNMLWV E TTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITD QQEDGTVHRTYLRGNLAESKCYLITVTPVYADGP GSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGNETA VNVDSSHTEYTLSSLTSDTLY VRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVCLAFL LTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQ SPHTPPRHNFNSKDQMYSDG FTDVSV VEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQNTSST VQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNC SQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAFGPGTE GQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ (SEQ ID NO: 728), sino también cualquier forma pre-pro, pro- y madura de esta secuencia de aminoácidos, tal como las formas maduras codificadas por aminoácidos 23 hasta 918 de la secuencia mostrada, asi como también mutantes y variantes que incluyen variantes alélicas de esta secuencia.
Escala de pronóstico de Glasgow: Tal como se usa en la presente, la escala de pronóstico de Glasgow se refiere a un puntaje basado en una inflamación que otorga un punto por un nivel de albúmina en suero menor que < 35 mg/L y un punto por un nivel de CRP por encima de 10 mg/L. Por consiguiente, un GPS de 0 indica albúmina y CRP normales, un GPS de 1 indica menos albúmina o más CRP de lo normal y un GPS de 2 indica menos albúmina y más CRP de lo normal.
Cantidad efectiva: Tal como se usa en la présente, "cantidad efectiva", "cantidad efectiva para", "cantidad de X efectiva para" y similares, refieren a una cantidad de un ingrediente activo efectivo para aliviar o reducir en algún punto uno o más de los síntomas de la enfermedad que necesita tratamiento, o para retardar el inicio de síntomas o marcadores clínicos de una enfermedad que necesita prevención, cuando se administra el compuesto. Por consiguiente, una cantidad efectiva refiere a una cantidad del ingrediente activo que exhibe efectos tales como (i) revertir el ritmo de progresión de una enfermedad; (ii) inhibir en algún punto un mayor progreso de la enfermedad; y/o (iii) aliviar en algún punto (o, preferentemente, eliminar) uno o más síntomas asociados con la enfermedad. La cantidad efectiva puede determinarse empíricamente mediante la experimentación con compuestos implicados en sistemas modelo in vivo e in vitro conocidos para una enfermedad que necesita tratamiento. El contexto en el que se usa la frase "cantidad efectiva" puede indicar un efecto deseado particular. Por ejemplo, "una cantidad ' de un anticuerpo anti-IL-6 efectiva para reducir los niveles : de CRP en suero" y frases similares refieren a una cantidad de anticuerpo anti-IL-6 que, cuando se administra a un sujeto, causará una disminución medible de los niveles de CRP en suero, o prevendrá, enlentecerá, retardará o detendrá un aumento de los niveles de CRP en suero que ponen en riesgo al paciente. De manera similar, "una cantidad de un anticuerpo anti-IL-6 efectiva para aumentar los niveles de albúmina en suero" y frases similares refieren a una cantidad de anticuerpo anti-IL-6 que, cuando se administra a un sujeto, causará un aumento medible de los niveles de albúmina en suero, o prevendrá, enlentecerá, retardará o detendrá una disminución de los niveles de albúmina en suero que ponen en riesgo al paciente. Una cantidad efectiva variará de acuerdo con el peso, sexo, edad e historial médico del individuo, asi como también la gravedad de la(s) afección (es) del paciente, el tipo de enfermedad (es ) , modo de administración y similares. Una cantidad efectiva puede determinarse fácilmente usando experimentos de rutina, por ej, titulación (administración de dosis crecientes hasta que se encuentra una dosis efectiva) y/o por referencia a cantidades que fueron efectivas para pacientes anteriores. En general, los anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención se administrarán en dosis que varían entre alrededor de 0.1 mg/kg y alrededor de 20 mg/kg del peso corporal de los pacientes.
Reducción prolongada de la CRP en suero: Tal como.se usa en la presente, "reducción prolongada de la CRP en suero" y frases similares refieren a una disminución medible del nivel de CRP en suero con respecto al nivel inicial de CRP en suero (es decir, el nivel de CRP en suero al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable aproximadamente dentro de aproximadamente de una semana a partir de que comienza el tratamiento (por ej . administración de un anticuerpo anti-IL-6) y permanece por debajo del nivel inicial de CRP en suero para una duración prolongada, por ej . al menos alrededor de 14 dias, al menos alrededor de 21 días, al menos alrededor de 28 dias, al menos alrededor de 35 dias, al menos alrededor de 40 dias, al menos alrededor de 50 dias, al menos alrededor de 60 dias, al menos alrededor de 70 dias, al menos alrededor de 11 semanas, o al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento.
Aumento prolongado de la albúmina en suero: Tal como se usa en la presente, "aumento prolongado de la albúmina en suero" y frases similares refieren a una disminución medible del nivel de albúmina en suero con respecto al nivel inicial de albúmina en suero (es decir, el nivel de albúmina en suero al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable durante aproximadamente una semana a partir de que comienza el tratamiento (por ej . administración de un anticuerpo anti-IL-6) y permanece por encima del nivel inicial de albúmina en suero para una duración prolongada, por ej . al menos alrededor de 14 dias, al menos alrededor de 21 dias, al menos alrededor de 28 dias, al menos alrededor de 35 dias, al menos alrededor de 40 dias, al menos alrededor de 50 dias, al menos alrededor de 60 dias, al menos alrededor de 70 dias, al menos alrededor de 11 semanas, o al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento.
Mejora prolongada de la caquexia: Tal como se usa en la presente, "mejora prolongada de la caquexia" refiere a una mejora medible de la masa corporal, masa corporal magra, masa corporal magra apendicular y/o índice de masa corporal magra del paciente, respecto del nivel inicial (es decir, el nivel al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable durante aproximadamente 4 semanas y permanece mejorado por un período prolongado, por ej . al menos alrededor de 35 días, al menos alrededor de 40 días, al menos alrededor de 50 días, al menos alrededor de 60 días, al menos alrededor de 70 días, al menos alrededor de 11 semanas, o al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento Mejora prolongada en la debilidad: Tal como se usa en la presente, "mejora prolongada de la debilidad" refiere a una mejora medible de la fuerza muscular, respecto del nivel inicial (es decir, el nivel al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable durante aproximadamente 2 semanas y permanece mejorado por un período prolongado, por ej . al menos alrededor de 21 días, al menos alrededor de 28 días, al menos alrededor de 35 días, al menos alrededor de 40 días, al menos alrededor de 50 días, al menos alrededor de 60 días, al menos alrededor de 70 días, al menos alrededor de 11 semanas, o ¦ al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento.
Mejora prolongada de la fatiga: Tal como se usa' en la presente, "mejora prolongada de la fatiga" refiere a una mejora medible de la fatiga, respecto del nivel inicial (es decir, el nivel al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable durante aproximadamente 1 semana y permanece mejorado por un periodo prolongado, por ej . al menos aproximadamente 14 días, al menos alrededor de 21 días, al menos alrededor de 28 días, al menos alrededor de 35 días, al menos alrededor de 40 días, al menos alrededor de 50 dias, al menos alrededor de 60 dias, al menos alrededor de 70 dias, al menos alrededor de 11 semanas, o al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento.
Mejora prolongada de la fiebre: Tal como se usa en la presente, "mejora prolongada de la fiebre" refiere a una disminución medible de la fiebre (por ej . la temperatura pico o cantidad de tiempo que la temperatura permanece alta) , respecto del nivel inicial (es decir, el nivel al momento anterior al comienzo del tratamiento) que es detectable durante aproximadamente 1 semana y permanece mejorado por un periodo prolongado, por ej . al menos alrededor de 14 dias, al menos alrededor de 21 dias, al menos alrededor de 28 dias, al menos alrededor de 35 dias, al menos alrededor de 40 dias, al menos alrededor de 50 dias, al menos alrededor de 60 dias, al menos alrededor de 70 dias, al menos alrededor de 11 semanas, o al menos alrededor de 12 semanas a partir del comienzo del tratamiento.
Especies de levadura capaces de apareamiento: La presente invención pretende comprender ampliamente cualquier levadura diploide o tetraploide que puede crecer en cultivo. Tales especies de levadura pueden existir en forma haploide, diploide o tetraploide. Las células de una determinada ploidia pueden, en condiciones apropiadas, proliferar para un número indeterminado de generaciones en dicha forma. Las células diploides también pueden esporular para formar células haploides. El apareamiento secuencial puede resultar en cepas tetraploides mediante apareamiento o fusión adicional de cepas diploides. En la presente invención las células de levadura diploides o poliploides son producidas preferentemente por apareamiento o fusión de esferoplastos .
En una modalidad de la invención, la levadura que puede aparearse es miembro de la familia Saccharomycetaceae, que incluye los géneros Arxiozyma; Ascobotryozyma; Citeromyces ; Debaryomyces ; Dekkera; Eremothecium; Issatchenkia; Kazachstania; Kluyveromyces; Kodamaea; Lodderómyces ; Pachysolen; Pichia; Saccharomyces ; Saturnispora; Tetrapisispora; Torulaspora; Williopsis; y Zygosaccharomyces . Otros tipos de levadura potencialmente útiles en la invención incluyen Yarrowia, Rhodosporidium, Candida, Hansenula, Filobasium, Filobasidellla, Sporidiobolus, Bullera, Leucosporidium y Filobasidella .
En una modalidad preferida de la invención, la levadura que puede aparearse es miembro del género Pichia. En una modalidad adicional preferida de la invención, la levadura que puede aparearse del género Pichia es una de las siguientes especies: Pichia pastoris, Pichia methanolica y Hansenula polymorpha (Pichia angusta) . En una modalidad particularmente preferida de la invención, la levadura que puede aparearse del género Pichia es la especie Pichia pastoris. Célula de levadura haploide: Célula que tiene una copia única de cada gen de su complemento genómico (cromosómico) normal.
Célula de levadura poliploide: Célula que tiene . más de una copia de su complemento genómico (cromosómico) normal.
Célula de levadura diploide: Célula que tiene dos copias (alelos) de esencialmente cada gen de su complemento genómico normal, típicamente formado por el proceso de fusión (apareamiento) de dos células haploides.
Célula de levadura tetraploide: Célula que tiene cuatro copias (alelos) de esencialmente cada gen de su complemento genómico normal, típicamente formado por el proceso de1 fusión (apareamiento) de dos células haploides. Las- tetraploides pueden tener dos, tres, cuatro o más casetes de expresión diferentes. Tales tetraploides podrían obtenerse ' en S. cerevisiae mediante apareamiento selectivo de diploides homocigóticos heterotálicos a/a y alfa/alfa y en Pichia mediante apareamiento secuencial de haploides para obtener diploides auxotróficos . Por ejemplo, una haploide [met his] puede aparearse con una haploide [ade his] para obtener una diploide [his]; y una haploide [met arg] puede aparearse con una haploide [ade arg] para obtener una diploide [arg] ; y la diploide [his] x diploide [arg] para obtener un prototrofo tetraploide. Los expertos en la técnica entenderán que la referencia a los beneficios y usos de células diploides también puede aplicar a células tetraploides .
Apareamiento de levadura: Proceso por el cual dos células de levadura haploides se fusionan naturalmente para formar una célula de levadura diploide.
Meiosis: Proceso por el cual una célula de levadura diploide se somete a división reductora para formar cuatro productos de esporas haploides. Cada espora puede luego germinar y formar una linea celular haploide vegetativamente en crecimiento .
Marcador seleccionable : Un marcador seleccionable es un gen o fragmento de gen que confiere un fenotipo de crecimiento (característica física de crecimiento) en una célula que recibe dicho gen, por ejemplo, mediante un evento de transformación. El marcador seleccionable permite que la célula sobreviva y crezca en un medio de crecimiento selectivo en condiciones en las que las células que no reciben dicho gen de marcador seleccionable no pueden crecer. Los genes de marcador seleccionable generalmente están comprendidos en varios tipos, que incluyen genes de marcador seleccionable positivos tales como un gen que confiere a una célula resistencia, a un antibiótico u otro fármaco, temperatura cuando dos mutantes ts se cruzan o cuando un mutante ts se transforma; los genes de marcador seleccionable negativo tales como un gen biosintético que confiere a una célula la capacidad de crecer en un medio sin un nutriente especifico necesitado por todas las células que no tienen dicho gen biosintético, o un gen bio sintético mutagenizado que confiere a una célula la incapacidad de crecer por células que no tienen el gen de tipo salvaje; y similares. Los marcadores adecuados incluyen pero no se limitan a: ZEO; G418; LYS3; METI; MET3a; ADE1; ADE3; URA3; y similares.
Vector de expresión: Estos vectores de ADN contienen elementos que facilitan la manipulación para la expresión de una proteina extraña dentro de la célula hospedadora objetivo. Convenientemente, la manipulación de secuencias y producción de ADN para la transformación se lleva a cabo en primer lugar en un hospedador bacteriano, por ej . E. coli y en general los vectores incluirán secuencias para facilitar ' dichas manipulaciones, que incluyen un origen bacteriano de replicación y un marcador de selección bacteriano apropiado. Los marcadores de selección codifican proteínas necesarias para la supervivencia o crecimiento de células hospedadoras transformadas cultivadas en un medio de cultivo selectivo. Las células hospedadoras no transformadas con el vectqr que contiene el gen de selección no sobrevivirán en el medio de cultivo. Los genes de selección típicos codifican proteínas que (a) brindan resistencia a antibióticos u otras toxinas, (b) complementan deficiencias auxotróficas, o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles de medios complejos.
Los ejemplos de vectores y métodos de transformación de levadura se describen, por ejemplo, en Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000) .
Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring, Harbor Laboratory Press.
Los vectores de expresión para usar en métodos, de la invención incluirán adicionalmente secuencias especificas de levadura, que incluyen un auxotrófico seleccionable o marcador de fármaco para identificar las cepas de levadura transformadas. Un marcador de fármaco puede usarse adicionalmente para ampliar el número de copias del vector en una célula hospedadora de levadura.
La secuencia de interés que codifica el polipéptido está operativamente enlazada a secuencias reguladoras transcripcionales y traslacionales que proporcionan la expresión del polipéptido en células de levadura. Estos componentes de vectores pueden incluir, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: un elemento potenciador, un promotor y una secuencia de terminación de la transcripción. También pueden estar incluidas secuencias para la secreción del polipéptido, por ej . una secuencia de señal y similares. Un origen de replicación de levadura es opcional, ya que los vectores de expresión están comúnmente integrados al genoma de la levadura.
En una modalidad de la invención, el polipéptido de interés está operativamente enlazado, o fusionado, a secuencias que proporcionan secreción optimizada del polipéptido de células diploides de levadura.
Los ácidos nucleicos están "operativamente enlazados" cuando se colocan en una relación funcional con otra secuencia de ácidos nucleicos. Por ejemplo, el ADN para una secuencia de señal está operativamente enlazado a un ADN para un polipéptido si se expresa como una preproteina que participa en la secreción de un polipéptido; un promotor o potenciador está operativamente enlazado a una secuencia codificante si afecta la transcripción de la secuencia. Generalmente, "operativamente enlazado" significa que las secuencias ,de ADN que están enlazadas son contiguas, y, en el caso de un lider secretor, contiguas y en marco de lectura. Sin embargo, los potenciadores no tienen que ser contiguos. El enlace se logra por la ligadura en sitios de restricción convenientes o de manera alternativa mediante un método PCR/de recombinación conocido para aquellos expertos en la técnica (GatewayR Technology; Invitrogen, Carlsbad California) . Si dichos sitios no existen, los adaptadores o enlaces de oligonucleótidos sintéticos se usan de acuerdo con la práctica convencional.
Los promotores son secuencias sin traducir situadas corriente arriba (5') al codón inicial de un gen estructural (generalmente entre alrededor de 100 y 1000 bp) que controlan la transcripción y traducción de secuencias de ácidos nucleicos particulares a las que están operativamente enlazadas. Dichos promotores están comprendidos en varias clases: promotores inducibles, constitutivos y represibles (que aumentan los niveles de transcripción en respuesta a la ausencia de un represor) . Los promotores inducibles pueden iniciar los niveles aumentados de transcripción desde el ADN bajo su control en respuesta a algún cambio en las condiciones de cultivo, por ej . , la presencia o ausencia de un nutriente o un cambio en la temperatura.
El fragmento promotor de levadura puede también servir como sitio para la recombinación e integración homologa del vector de expresión en el mismo sitio en el genoma de levadura; de manera alternativa un marcador seleccionable se usa como sitio para la recombinación homologa. La transformación de Pichia se describe en Cregg et al. (1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385. Ejemplos de promotores adecuados de Pichia incluyen el promotor AOXl (Cregg et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323); promotor ICLl (Menendez et al. (2003) , Yeast 20 (13) : 1097-108) ; promotor gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenase (GAP) (Waterham et al. (1997) Gene 186(1) :37-44); y promotor FLD1 (Shen et al. (1998) Gene 216 ( 1 ): 93-102 ) .
El promotor GAP es un promotor constitutivo fuerte y los promotores AOX y FLD1 son inducibles.
Otros promotores de levadura incluyen ADH1, alcohol deshidrogenasa II, ¦ 'GAL4 , PH03, PH05, Pyk y promotores quiméricos derivados de los mismos. Adicionalmente, los promotores que no son de levadura pueden usarse en la invención tales como promotores mamíferos, de insectos, vegetales, reptiles, anfibios, virales y de aves. Más típicamente el promotor comprenderá un promotor mamífero (potencialmente endógeno a los genes expresados) o comprenderá un promotor de levadura o viral que proporcione transcripción eficaz en los sistemas de levadura.
Los polipéptidos de interés pueden producirse de forma recombinante no solo directamente, sino también como un polipéptido de fusión con un polipéptido heterólogo, por ej . una secuencia de señal u otro polipéptido que tiene un sitio de escisión específico en el extremo N del polipéptido o p'roteína madura. En general, la secuencia de señal puede ser un componente del vector, o puede ser parte de la secuencia de codificación del polipéptido introducida en el vector. La secuencia de señal heteróloga seleccionada preferentemente es una que es reconocida y procesada a través de una de las vías estándares disponibles dentro de la célula hospedadorá. La señal pre-pro del factor alfa S. cerevisiae posee e.ficacia probada en la secreción de una variedad de proteínas recombinantes de P. pastoris. Otras secuencias de señal de levadura incluyen la secuencia de señal del factor de apareamiento alfa, la secuencia de señal de invertasa y las secuencias de otros polipéptidos de señal de levadura secretados. Adicionalmente, estas secuencias de péptidos de señal pueden diseñarse para proporcionar una secreción mejorada de los sistemas de expresión de levadura diploides. . Otras señales de secreción de interés también incluyen secuencias de señal de mamíferos, que pueden ser heterólogas a la proteína que se secreta, o puede ser una secuencia nativa para la proteína que se secreta. Las secuencias de señal incluyen secuencias prepeptídicas y en algunos casos pueden incluir secuencias propeptídicas . Varias de dichas secuencias de señal son conocidas en la técnica, incluyendo secuencias de señal encontradas en cadenas de inmunoglobulina, por ej . , secuencia de preprotoxina K28, PHA-E, FACE, CP-1 humana, secuencias de señal de albúmina en suero humanas, cadena pesada Ig humana, cadena ligera Ig humana y similares. Por ejemplo, véase Hashimoto et. al. Protein Eng 11(2) 75 (1998); y Kobayashi et. al. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998).
La transcripción puede aumentar insertando una secuencia activadora de la transcripción en el vector. Estos activadores son elementos de ADN que actúan en cis, en general alrededor de 10 a 300 bp, que actúan en un promotor para aumentar su transcripción. Los potenciadores de transcripción .tienen posición y orientación relativamente independiente, habiéndose encontrado en posición 5' y 3' con respecto a la unidad de transcripción, dentro de un intrón, asi como también dentro de la secuencia de codificación en si misma. El potenciador puede empalmarse en el vector de expresión en la posición 5' o 3' con respecto a la secuencia de codificación, pero está situado preferentemente en el sitio 5' del promotor.
Los vectores de expresión usados en células hospedadoras eucarióticas pueden también contener secuencias necesarias para la terminación de la transcripción y para estabilizar el ARNm. Dichas secuencias están comúnmente disponibles desde 3' al codón de terminación de traducción, en regiones sin traducir de ADN o ADNc eucarióticos o virales. Estas regiones contienen segmentos de nucleótidos transcriptos como fragmentos poliadenilados en la porción sin traducir del ARNm.
La construcción de vectores adecuados que contienen uno o más de los componentes enumerados anteriormente emplea técnicas estándar de ligadura o métodos PCR/de recombinación . · Los plásmidos aislados o fragmentos de ADN están escindidos, ! hechos a medida y religados en la forma deseada para generar los plásmidos requeridos o mediante métodos de recombinación. Para el análisis para confirmar las secuencias correctas de plásmidos construidos, se usan mezclas de ligadura para transformar células hospedadoras y los transformadores satisfactorios seleccionados por resistencia, a un antibiótico (por ej . ampicilina o Zeocin™ ( fleomicina) ) fueron los adecuados. Los plásmidos de los transformantes se preparan, analizan por digestión con endonucleasas de restricción y/o secuencian.
Como una alternativa a la restricción y ligadura de fragmentos, pueden usarse métodos de recombinación en sitios att y enzimas de recombinación para insertar secuencias de ADN en un vector. Dichos métodos son descritos, por ejemplo, por Landy (1989) Ann . Re . Biochem. 58:913-949; y son conocidos por los expertos en la técnica. Dichos métodos utilizan recombinación de ADN intermolecular que es mediada por una mezcla de proteínas de recombinación codificadas lambda y E.coli. La recombinación ocurre entre sitios de unión (att) específicos en las moléculas de ADN de interacción. Para una descripción de sitios att véase Weisberg and Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda II, Weisberg, ed. (Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Press), pp.211-250. Los segmentos de ADN que flanquean los sitios de recombinación se cambian, de modo que luego de la recombinación, los sitios att son secuencias híbridas comprendidas de secuencias donadas por cada vector parental. La recombinación puede ocurrir entre ADN de cualquier topología .
Los sitios att pueden introducirse en una secuencia de interés mediante la ligadura de la secuencia de interés a un vector apropiado; la generación de un producto de PCR que contiene sitios att B mediante el uso de cebadores específicos; la generación de una biblioteca de ADNc clonada en un vector apropiado que contiene sitios att; y similares.
El plegamiento, tal como se usa en la presente, refiere a la estructura tridimensional de polipéptidos y proteínas, donde las interacciones entre los residuos de aminoácido actúan para estabilizar la estructura. Mientras que las interacciones no covalentes son importantes para determinar la estructura, en general las proteínas de interés tendrán enlaces covalentes de disulfuro intra- y/o intermoleculares formados por dos residuos de cisteína. Para las proteínas y polipéptidos de origen natural o derivados y variantes de los mismos, el plegamiento apropiado es típicamente el arreglo que da como resultado una actividad biológica óptima y puede de manera conveniente monitorearse mediante ensayos para actividad, por ej . unión de ligando, actividad enzimática, etc.
En algunos casos, por ejemplo cuando el producto deseado es de origen sintético, los ensayos basados en actividad biológica serán menos significativos. El plegamiento adecuado de dichas moléculas puede determinarse basándose en propiedades físicas, consideraciones energéticas, estudios de modelado y similares.
El hospedador de expresión puede modificarse adicionalmente mediante la introducción de secuencias que codifican una o más enzimas que potencian el plegamiento y la formación de unión de disulfuro, es decir, foldasas, chaperoninas, etc. Dichas secuencias pueden expresarse constitutiva o induciblemente en la célula hospedadora de levadura, usando vectores, marcadores, etc., tal como se conoce en la técnica. Preferentemente las secuencias, que incluyen elementos reguladores transcripcionales suficientes para el patrón de expresión deseado, están integradas de manera estable en el genoma de la levadura mediante una metodología con fines específicos .
Por ejemplo, la PDI eucariótica es no solo un eficaz catalista de la oxidación de proteína cisteína e isomerización de unión de disulfuro, sino que también exhibe actividad chaperona. La expresión conjunta de PDI puede facilitar la producción de proteínas activas que poseen múltiples uniones de disulfuro. También de interés es la expresión de BIP (proteína de unión de cadena pesada de inmunoglobulina) ; ciclofiiina; y similares. En una modalidad de la invención, cada una de las cepas parentales haploides expresan una enzima de plegamiento distintiva, por ej . una cepa puede expresar BIP y la otra cepa puede expresar PDI o combinaciones de las mismas.
Los términos "proteína deseada" o "proteína objetivo" se usan de manera intercambiable y refieren generalmente a un anticuerpo humanizado o porción de unión del mismo descrito en la presente. El término "anticuerpo" pretende incluir cualquier estructura molecular que contiene una cadena de polipéptidos con forma especifica que se adecúan a y reconocen un epitopo, cuando una o más interacciones de unión no covalente estabilizan el complejo entre la estructura molecular y el epitopo. La molécula de anticuerpo arquetipica es la inmunoglobulina y todos los tipos de inmunoglobulinas , IgG, IgM, IgA, IgE, IgD, etc., de todas las fuentes, por ej . de humano, roedor, conejo, vaca, oveja, cerdo, perro, otros mamíferos, pollos, otras aves, etc., se consideran "anticuerpos". Una fuente preferida para producir anticuerpos útiles como material de partida de acuerdo con la invención son los conejos. Se han descrito numerosas secuencias de codificación de anticuerpos; y otras pueden surgir mediante métodos conocidos en la técnica. Ejemplos de las mismas incluyen anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanos y otros anticuerpos mamíferos no humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos de cadena simple tales como scFvs, anticuerpos de camélidos, nanoanticuerpos , IgNAR (anticuerpos de cadena i simple derivados de tiburones), productos farmacéuticos inmunológicos de molécula pequeña (SMIP) y fragmentos de anticuerpo tales como Fab, Fab ' , F(ab' )2 y similares. Véase Streltsov VA, et al., Structure of a shark IgNAR antibody variable domáin and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov; 14 (11) : 2901-9. Epub 2005 Sep 30; Greenberg AS, et al., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374 (6518) : 168-73; Nuttall SD, et al., Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop librarles, Mol Immunol. 2001 Aug; 38 (4 ) : 313-26; Hamers-Casterman C, et al., Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363 (6428) : 446-8; Gilí DS, et al., Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec; 17 ( 6) : 653-8. Epub 2006 Oct 19.
Por ejemplo, los anticuerpos o fragmentos de unión al antigeno pueden producirse mediante ingeniería genética. En esta técnica, al igual que con otros métodos, las células que producen anticuerpos se sensibilizan al antígeno o inmunógeno deseados. El ARN mensajero aislado de las células que producen anticuerpos se usa como una plantilla para producir ADNc usando amplificación por PCR. Una biblioteca de vectores, cada uno conteniendo un gen de cadena pesada y un gen de cadena ligera que retienen la especificidad inicial del antígeno, se produce por inserción de secciones apropiadas del AD c de inmunoglobulina amplificado en los vectores de expresión. Una biblioteca combinatoria se construye mediante la combinación de la biblioteca de genes de cadena pesada y la biblioteca de genes de cadena ligera. Esto da como resultado una biblioteca de clones que expresan conjuntamente una cadena ligera y pesada (asemejándose al fragmento Fab o fragmento de unión al antígeno de una molécula de anticuerpo) . Los vectores que llevan estos genes se cotransfectan en una célula- hospedadora. Cuando la síntesis de gen de anticuerpos se induce en el hospedador transíectado, las proteínas de cadena pesada y ligera se ensamblan a sí mismas para producir anticuerpos activos que pueden detectarse mediante análisis con el antígeno o inmunógeno .
Las secuencias de codificación de anticuerpos de interés incluyen aquellas codificadas por secuencias nativas, así como también ácidos nucleicos que, debido a la degeneración del código genético, no son idénticos en secuencia a los ácidos nucleicos descritos y variantes de los mismos. Los polipéptidos variantes pueden incluir sustituciones, adiciones o supresiones de aminoácidos (aa) . Las sustituciones de aminoácidos pueden ser sustituciones de aminoácidos conservadoras o sustituciones para eliminar aminoácidos no esenciales, como para alterar un sitio de glicosilación, ! o para minimizar la falta de plegamiento por sustitución o supresión de uno o más residuos de cisteína que no son necesarios para funcionar. Las variantes pueden diseñarse como para retener o tener actividad biológica potenciada de una región particular de la proteína (por ej . , un dominio funcional, residuos de aminoácidos catalíticos, etc) . Las variantes también incluyen fragmentos de los polipéptidos descritos en la presente, en particular fragmentos biológicamente activos y/o fragmentos correspondientes a dominios funcionales. Se conocen técnicas para mutagénesis in vitro de genes clonados. También se incluyen en la invención en cuestión polipéptidos que han sido modificados usando técnicas biológicas moleculares comunes para mejorar su resistencia a la degradación proteolitica o para optimizar las propiedades de solubilidad o para hacerlos más adecuados como agentes terapéuticos.
Los anticuerpos quiméricos pueden realizarse por medios recombinantes combinando las regiones de cadena ligera y pesada variables (VL y VH) , obtenidas de células que producen anticuerpos de una especie con las regiones constantes de cadena ligera y pesada de otras. Típicamente los anticuerpos quiméricos utilizan regiones variables de roedores o conejos y regiones constantes humanas para producir un anticuerpo predominantemente con dominios humanos. La "producción de dichos anticuerpos quiméricos es conocida en la técnica y puede lograrse por medios estándar (tal como se describe, por éj . , en la patente de EUA No. 5,624,659, incorporada en la presente en su totalidad a modo de referencia) . Adicionalmente, se contempla que las regiones constantes humanas de anticuerpos quiméricos de la invención pueden seleccionarse de regiones constantes IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgGlO, IgGll, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, 1 IgG17, IgG18 o IgG19.
Los anticuerpos humanizados están diseñados para contener aun más dominios de inmunoglobulina de tipo humano, e incorporar solo las regiones determinantes de complementariedad del anticuerpo, derivado de animales. Esto se logra examinando cuidadosamente la secuencia de los bucles hipervariables de las regiones variables del anticuerpo monoclonal y adecuándolos a la estructura de las cadenas de anticuerpo humanas. Aunque el proceso es aparentemente complejo, es sencillo en la práctica. Véase, por ej . , patente de EUA No. 6,187,287, incorporada en la presente en su totalidad a modo de referencia. En una modalidad preferida, la humanización puede afectarse tal como se describe en detalle más adelante. Este esquema injerta CDR en FR humanas altamente homologas a las FR de anticuerpo principal .
Además de inmunoglobulinas completas (u sus equivalentes recombinantes) pueden sintetizarse los fragmentos de inmunoglobulina que comprenden el sitio de unión al epitopo (por ej . Fab' , F(ab')2, u otros fragmentos). Se pueden diseñar "fragmentos", o inmunoglobulinas mínimas utilizando técnicas recombinantes de inmunoglobulina. Por ejemplo inmunoglobulinas "Fv" para uso en la presente invención pueden producirse sintetizando una región de cadena ligera variable fusionada y una región de cadena pesada variable. Las combinaciones de anticuerpos también son de interés, por ej . diacuerpos que comprenden dos especificidades de Fv distintas. En otra modalidad de la invención, los SMIP (productos farmacéuticos inmunológicos de molécula pequeña) , anticuerpos de camélidos, nanoanticuerpos e IgNAR están comprendidos en los fragmentos de inmunoglobulina .
Las inmunoglobulinas y fragmentos de las mismas pueden modificarse postraduccionalmente, por ej . , para agregar restos efectores tales como enlaces químicos, restos detectables, tales como tintes fluorescentes, enzimas, toxinas, sustratos, materiales bioluminiscentes, materiales radiactivos, restos quimioluminiscentes y similares, o pueden utilizarse los restos de unión específicos, tales como estreptavidina, avidina, o biotina y similares en los métodos y composiciones de la presente invención. Más adelante se proporcionan ejemplos de moléculas efectoras adicionales.
El término "levadura poliploide que expresa de manera estable o expresa un polipéptido heterólogo secretado deseado por tiempo prolongado" refiere a un cultivo de levadura que secreta dicho polipéptido por al menos varios días a una semana, más preferentemente al menos un mes, aun más preferentemente al menos 1-6 meses y aun más preferentemente más de un año a niveles umbral de expresión, típicamente al menos 10-25 mg/litro y preferentemente sustancialmente mayor.
El término "cultivo de levadura poliploide que secreta cantidades deseadas de polipéptido recombinante" refiere a cultivos que secretan de manera estable o durante períodos prolongados al menos 10-25 mg/litros de polipéptido heterólogo, más preferentemente al menos 50-500 mg/litros y más preferentemente 500-1000 mg/litros o más.
Una secuencia de polinucleótidos "corresponde" a una secuencia de polipéptidos si la traducción de la secuencia de polinucleótidos de acuerdo con el código genético produce la secuencia de polipéptidos (es decir, la secuencia de polinucleótidos "codifica" la secuencia de polipéptidos), una secuencia de polinucleótidos "corresponde" a otra secuencia de polinucleótidos si las dos secuencias codifican la misma secuencia de polipéptidos.
Una región o dominio "heterólogo" de una construcción de ADN es un segmento identificable de ADN dentro de una molécula de ADN más grande que no se encuentra asociado a la molécula más grande en la naturaleza. Por consiguiente, cuando la región heteróloga codifica un gen de mamífero, el gen en general se flanqueará por el ADN que no flanquea el ADN genómico de mamífero en el genoma del organismo original. Otro ejemplo de una región heteróloga es una construcción en la que la secuencia de codificación misma no se encuentra . en la naturaleza (por ej . , un ADNc donde la secuencia de codificación genómica contiene intrones, o secuencias sintéticas que poseen codones diferentes al gen nativo) . Las variaciones alélicas o eventos mutacionales de origen natural no provocan una región heteróloga de ADN tal como se define en la presente.
Una "secuencia de codificación" es una secuencia . dentro del marco de codones que (en vista del código genético) corresponde a o codifica una secuencia de péptido o proteina. Dos secuencias de codificación se corresponden con cada una si las secuencias o sus secuencias complementarias codifican las mismas secuencias de aminoácidos. Una secuencia de codificación asociada a secuencias reguladoras apropiadas puede transcribirse y traducirse en un polipéptido. Una señal de poliadenilación y secuencia de terminación de transcripción en general estará situada en dirección 3' con respecto a la secuencia de codificación. Una "secuencia promotora" es una región reguladora de ADN capaz de unirse a la ARN polimerasa en una célula e iniciar la transcripción de una secuencia de codificación corriente abajo (dirección 3' ) . Las secuencias promotoras típicamente contienen sitios adicionales para unir moléculas reguladoras (por ej . , factores de transcripción) que afectan la transcripción de la secuencia de codificación. Una secuencia de codificación está "bajo el control" de la secuencia promotora o "unida operativamente" al promotor ' cuando la ARN polimerasa enlaza la secuencia promotora en una célula y transcribe la secuencia de codificación en ARNm, que luego se traduce a su vez en la proteína codificada por la secuencia codificante.
Los vectores se usan para introducir una sustancia extraña, tal como ADN, ARN o proteína, en un organismo o célula hospedadora. Los vectores típicos incluyen virus recombinantes (para polinucleótidos) y liposomas (para polipéptidos) . Un "vector de ADN" es un replicón, tal como plásmido, fago o cósmido, al que se le puede unir otro segmento de polinucleótido para provocar la replicación del segmento unido. Un "vector de expresión" es un vector de ADN que contiene secuencias reguladoras que dirigirán la síntesis de polipéptidos mediante una célula hospedadora apropiada. Esto en general significa un promotor para unir 1 ARN polimerasa e inicia la transcripción de ARNm, así como también los sitios de unión a ribosomas y señales de iniciación para dirigir la traducción del ARNm en polipéptido (s ) . La incorporación de una secuencia de polinucleótido en un vector de expresión en el sitio apropiado y en el marco de lectura correcto, seguido por la transformación de una célula hospedadora apropiada por el vector, permite la producción de un polipéptido codificado por dicha secuencia de polinucleótidos. Los ejemplos de vectores de expresión y técnicas para su uso se describen en las siguientes publicaciones: Oíd et al., Principies of Gene Manipulation : An Introduction to Genetic Engineering, Black ell Scientific Publications, 4th edition, 1989; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001; Gorman, "High Efficiency Gene Transfer into Mammalian Cells," in DNA Cloning, Volume II, Glover, D. M. , Ed., IRL Press, Washington, D.C., pp. 143 190 (1985) .
Por ejemplo, un liposoma u otro agregado lípido puede comprender un lípido tal como fosfatidilcolinas (lecitinas) (PC), fosfatidiletanolaminas (PE), lisolecitinas, lisofosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas (PS), fosfatidilgliceroles (PG) , fosfatidilinositol (PI), esfingomielinas, cardiolipina, ácidos fosfatídicos (PA) , ácidos grasos, gangliósidos , glucolípidos , glicolípidos , mono-, di o triglicéridos , ceramidas, cerebrósidos y combinaciones . de los mismos; un lípido catiónico (u otro anfifilo catiónico) tal como 1, 2-dioleiloxi-3- (trimetilamino) propano (DOTAP); N-colesteriloxicarbaril-3, 7, 12-triazapentadecan-l, 15-diamina (CTAP) ; bromuro de N-[l-(2,3, -ditetradeciloxi) propil] -N, N-dimetil-N-hidroxietilamonio (DMRIE) ; bromuro de N-[l-(2,3,-dioleiloxi) propil] -N, N-dimetil-N-hidroxi etilamonio (DORIE) ; cloruro de N- [1- (2, 3-dioleiloxi) propil] -N,N, -trimetilamonio (DOTMA); 3 beta [N- (N ' , N ' -dimetilaminoetano) carb'amoilo] colesterol (DC-Choi); y dimetildioctadecilamonio ;( DDAB) ; dioleoilfosfatidil etanolamina (DOPE) , DOPC que contiene colesterol; y combinaciones de los mismos; y/o un polímero hidrofílico tal como polivinilpirrolidona, polivinilmetiléter , polimetiloxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropiloxazolina, polihidroxipropilmetacrilamida, polimetacrilamida, polidimetilacrilamida, polihidroxipropilmetacrilato, polihidroxietilacrilato, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, polietileneglicol , poliaspartamida y combinaciones de los mismos. Otros lipidos catiónicos adecuados se describen en Miller, Angew. Chem. Int. Ed. 37:1768 1785 (1998) y Cooper et al., Chem. Eur. J. 4(1): 137 151 (1998) . Los liposomas pueden estar reticulados, parcialmente reticulados o no reticulados. Los liposomas reticulados pueden incluir componentes reticulados asi como también no reticulados. Las citofectinas o liposomas catiónicos adecuados se encuentran comercialmente disponibles y también pueden prepararse tal como se describe en Sipkins et al., Nature Medicine, 1998, 4 (5): (1998), 623 626 o se describe en Miller, anteriormente. Los ejemplos de liposomas incluyen un lipido neutral o zwiteriónico polimerizable, un lipido que se dirige a la integrina polimerizable y un lipido catiónico polimerizable adecuado para unir un ácido nucleico. Los liposomas pueden opcionalmente incluir péptidos que proporcionan eficacia aumentada, por ejemplo tal cómo se describe en la patente de EUA No. 7,297,759. Adicionalmente, los ejemplos de liposomas y otros agregados de lipidos se describen en la patente de EUA No. 7,166,298.
La "amplificación" de secuencias de polinucleótidos es la producción in vitro de múltiples copias de una secuencia de ácido nucleico particular. La secuencia amplificada , es en general en forma de ADN . Una variedad de técnicas para llevar a cabo dicha amplificación se describe en una reseña de Van Brunt (1990, Bio/Technol . , 8 ( 4 ) : 291-29 ) . La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es un prototipo de amplificación de ácido nucleico y el uso de PCR en la misma debería considerarse ejemplo de otras técnicas de amplificación adecuadas.
Actualmente se conoce bien la estructura general de anticuerpos en vertebrados (Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). Los anticuerpos consisten en dos cadenas ligeras de polipéptidos idénticas de peso molecular de aproximadamente 23,000 daltons (la "cadena ligera") y dos cadenas pesadas idénticas de peso molecular 53,000-70,000 (la "cadena pesada") . Las cuatro cadenas se juntan por uniones de disulfuro en una configuración "Y" donde las cadenas ligeras agrupan las cadenas pesadas comenzando en la boca de la configuración "Y". La porción "rama" de la configuración "Y" se designa como región Fab; la porción tallo de la configuración "Y" se designa como región Fe. La orientación de la secuencia de .aminoácidos va desde el extremo N-terminal al comienzo de la configuración "Y" hasta el extremo C-terminal al final de cada cadena. El extremo N-terminal posee la región variable que tiene especificidad para el antígeno que lo provocó y es aproximadamente 100 aminoácidos de longitud, habiendo pequeñas variaciones entre cadena ligera y pesada y de anticuerpo a anticuerpo.
La región variable se une en cada cadena a una ; región constante que extiende la longitud restante de la cadena y que dentro de una clase particular de anticuerpo no varia con la especificidad del anticuerpo (es decir, el antigeno que lo provoca) . Hay cinco clases principales conocidas de regiones constantes que determinan la clase de molécula de inmunoglobulina (IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE que corresponden a regiones constantes de cadena pesada ?, µ, a, d y e (gamma, mu, alfa, delta o epsilon) ) . La región o clase constante determina la función efectora posterior del anticuerpo, que incluye la activación de complemento (Kabat, E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, inston (1976)) y otras respuestas celulares (Andrews, D. W. , et al., Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl, S., et al., Immunology, 48: 187 (1983)); mientras que la región variable determina el antigeno con el cual reaccionará. Las cadenas ligeras se clasifican como (kappa) o ? (lambda) . Cada clase de cadena pesada puede arreglarse en pares con la cadena ligera de ya sea kappa o lambda. Las cadenas ligera y pesada están covalentemente enlazadas entre si y las porciones "cola" de las dos cadenas pesadas están enlazadas entre si por medio de enlaces disulfuro covalentes cuando las inmunoglobulinas se generan por hibridomas o por linfocitos B.
La expresión "región variable" o "VR" refiere a los dominios dentro de cada par de cadenas ligera y pesada en un anticuerpo están directamente involucrados en la unión del anticuerpo con el antigeno. Cada cadena pesada tiene en un extremo un dominio variable (VH) seguido por un número de dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable (VL) en un extremo y un dominio constante en su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera está alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada y el dominio variable de cadena ligera está alineado con el dominio variable de la cadena pesada.
Las expresiones "región determinante . de complementariedad", "región hipervariable" o "CDR" refieren a una o más de las regiones determinantes de complementariedad o hipervariables (CDR) que se encuentran en las regiones de las cadenas ligera o pesada variables de un anticuerpo (Véase Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. , (1987)). Estas expresiones incluyen regiones hipervariables tal como se define en Kabat et al. ("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., et al., US Dept . of! Health and Human Services, 1983) o los bucles hipervariables en estructuras tridimensionales de anticuerpos (Chothia and Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987)). Las CDR de cada cadena se mantienen a gran proximidad por regiones flanqueantes y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antigeno. Dentro de las CDR hay aminoácidos selectos que han sido descritos como las regiones determinantes de selectividad (SDR) que representan los residuos de contacto críticos usados por las CDR en la interacción anticuerpo-antígeno (Kashmiri, S., Methods, 36 : 25 - 34 ( 2005 ) ) . En la presente se proporcionan las CDR para ejemplos de anticuerpos anti-IL-6.
Las expresiones "región flanqueante" o "FR" refieren a una o más de las regiones flanqueantes dentro de las regiones de las cadenas ligera o pesada variables de un anticuerpo (Véase Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). Estas expresiones incluyen aquellas regiones de secuencia de aminoácidos interpuestas entre las CDR dentro de las regiones de las cadenas ligera y pesada variables de un anticuerpo. Tal como se menciona en las modalidades preferidas, las FR comprenderán FR humanas altamente homologas al anticuerpo progenitor (por ej . anticuerpo de conejo).
Anticuerpos anti-IL-6 y fragmentos de unión de los mismos La invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYD TQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPG QRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGG TEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN (SEQ ID NO: 2 ) o AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 709) .
La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGL EWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNLW GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK (SEQ ID NO: 3) o EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVT VRQAPGKGLEWVGIIYGSDETAYATSA IGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSD DAKFNLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 657) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; y SEQ ID NO: 6 que corresponde a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2 o 709, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; y SEQ ID NO: 9 que corresponde a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 657 o aquellas contenidas en las Figuras 34-37, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la¦ SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; y SEQ ID NO: 6 que corresponde a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2 o 709 o las otras secuencias VL humanizadas contenidas en las Figuras 34-37, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; y SEQ ID NO: 9 que corresponde a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 o 657, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y versiones humanizadas de las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en, versiones humanizadas de la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 2 o 709. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo¦ de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en, versiones humanizadas de una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 3 o 657.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 4; SEQ ID NO: 5; y SEQ ID NO: 6 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO:709.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; y SEQ ID NO: 9 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 y, SEQ ID NO: 657 y las secuencias de VH en las Figuras 34-37.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión á IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno; dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2 o 709; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 o 657; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; y SEQ ID NO: 6) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2 o 709; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; y SEQ ID NO: 9) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 657 y las secuencias de VH en las Figuras 34-37.
La invención también contempla variantes donde ya sea cualquiera de las secuencias de polipéptidos de cadena pesada de la SEQ ID NO: 18 o SEQ ID NO: 19 se sustituyen por la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de la SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 657 o las otras secuencias de VH en las Figuras 34-37; la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de la SEQ ID NO: 20 se sustituyen por la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 709 o las otras secuencias VL en las Figuras 34-37; la secuencia CDR de cadena pesada de la SEQ ID NO: 120 se sustituye por la secuencia CDR de cadena pesada de la SEQ ID NO: 8. : En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl, que comprende la SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3, o más particularmente un anticuerpo que comprende la SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 (que están respectivamente codificadas por las secuencias de ácido nucleico en la SEQ ID NO: 700 y SEQ ID NO:723) o uno comprendido de las secuencias SEQ ID NO alternativas establecidas en el párrafo anterior y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente. En una modalidad preferida, el anticuerpo anti-IL-6 comprenderá al menos una secuencia humanizada tal como se muestra en las Figuras 34-37.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-ß y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYSWLSWY QQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDN VFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY (SEQ ID NO: 21) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNDHA GWVRQAPGKG LEYIGFINSGGSARYASWAEGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRGGAVWSIHSFDP WGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK (SEQ ID NO: 22) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; y SEQ ID NO: 25 que corresponden; a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable, de la SEQ ID NO: 21, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; y SEQ ID NO: 28 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la ,SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; y SEQ ID NO: 25 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; y SEQ ID NO: 28 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22, o combinaciones dé estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 21. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 22.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; y SEQ ID NO: 25 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; y SEQ ID NO: 28 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) .de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos1 en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; y SEQ ID NO: 25) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; y SEQ ID NO: 28) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab2 que comprende la SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 22, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD NAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN (SEQ ID NO: 37) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSVYYMN VRQAPGKGL EWIGFIT SDNINYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRG GTMGRLDLW GPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK (SEQ ID NO: 38) .' La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; y SEQ ID NO: 41 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; y SEQ ID NO: 44 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; y SEQ ID NO: 41 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o régiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; y SEQ ID NO: 44 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 37. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 38.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; y SEQ ID NO: 41 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; y SEQ ID NO: 44 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; y SEQ ID NO: 41) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; y SEQ ID NO: 44) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab3 que comprende la SEQ ID NO: 37 y SEQ ID NO: 38, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: DTRAPTQLLGLLLLWLPGAICDPVLTQTPSPVSAPVGGTVSISCQASQSVYENNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGASTLDSGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD DAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQL SGTASVVCLLNN (SEQ ID NO: 53) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFSLNAYYMNWVRQAPGKG LEWIGFITLNNNVAYANWAKGRFTFSKTSTTVDLKMTSPTPEDTATYFCARSRG GAMGRLDL WGHGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK (SEQ ID NO: 54).
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; y SEQ ID NO: 57 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; y SEQ ID NO: 60 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En . otra modalidad, la invención contempla · otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; y SEQ ID NO: 57 que corresponden, a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable, de la SEQ ID NO: 53, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; y SEQ ID NO: 60 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 53. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 54.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a' IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ? más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; y SEQ ID NO: 57 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; y SEQ ID NO: 60 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; y SEQ ID NO: 57) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; y SEQ ID NO: 60) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab4 que comprende la SEQ ID NO: 53 y SEQ :ID NO: 54, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de ^cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : DTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVDDNNWLG WYQQKRGQPPKYLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGFSGNIF AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF (SEQ ID NO: 69) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQAPGKGL EWIGIIGGFGTTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARGGPGNGGDIWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD (SEQ ID NO: 70) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 71; SEQ ID NO: 72; y SEQ ID NO: 73 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 74; SEQ ID NO: 75; y SEQ ID NO: 76 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70, o combinaciones de; estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente. ; En otra modalidad, la invención contempla . otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 71; SEQ ID NO: 72; y SEQ ID NO: 73 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 74; SEQ ID NO: 75; y SEQ ID NO: 76 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 69. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 70.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una j o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 71; SEQ ID NO: 72; y SEQ ID NO: 73 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 74; SEQ ID NO: 75; y SEQ ID NO: 76 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno,, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 71; SEQ ID NO: 72; y SEQ ID NO: 73) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 74; SEQ ID NO: 75; y SEQ ID NO: 76) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO,: 70.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab5 que comprende la SEQ ID NO: 69 y SEQ ID NO: 70, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-ß y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSVPVGGTVTIKCQSSQSVYNNFLSW YQQKPGQPPKLLIYQASKLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADN AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF (SEQ ID NO: 85) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYAMSWVRQAPGKGL EWIGIIYAGSGSTWYAS AKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDGYDDYGDFDRL DLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD (SEQ ID NO:, 86) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; y SEQ ID NO: 89 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable; de la SEQ ID NO: 85, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO: 91; y SEQ ID NO: 92 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de tadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; y SEQ ID NO: 89 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO: 91; y SEQ ID NO: 92 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente. ' La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 85. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos dé la SEQ ID NO: 86.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; y SEQ ID NO: 89 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO: 91; y SEQ ID NO: 92 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86.1 La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de' la SEQ ID NO: 85; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 87; SEQ ID NO: 88; y SEQ ID NO: 89) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 90; SEQ ID NO: 91; y SEQ ID NO: 92) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab6 que comprende la SEQ ID NO: 85 y SEQ ID NO: 86, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLL LPGARCAYD TQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELS Y QQKSGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDN AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF (SEQ ID NO: 101) La invención también incluye anticuerpos que 'poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ^pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLSGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGL EWIGMIYGSDETAYANWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNL GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK (SEQ ID NO: 102) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; y SEQ ID NO: 105 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 106; SEQ ID NO: 107; y SEQ ID NO: 108 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; y SEQ ID NO: 105 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 106; SEQ ID NO: 107; y SEQ ID NO: 108 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 101. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 102.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; y SEQ ID NO: 105 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ;o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: .106; SEQ ID NO: 107; y SEQ ID NO: 108 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos' de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; y SEQ ID NO: 105) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 106; SEQ ID NO: 107; y SEQ ID NO: 108) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102.
La invención también contempla variantes donde ya sea cualquiera de las secuencias de polipéptidos de cadena pesada de la SEQ ID NO: 117 o SEQ ID NO: 118 se sustituyen por la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de la SEQ ID NO: 102; la secuencia de polipéptido de cadena ligera de la SEQ ID NO: 119 se sustituyen por la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de la SEQ ID NO: 101; y la secuencia CDR de cadena pesada de la SEQ ID NO: 121 se sustituye por la secuencia CDR de cadena pesada de la SEQ ID NO: 107.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab7 que comprende la SEQ ID NO: 101 y SEQ ID NO: 102, o las secuencias SEQ ID NO alternativas establecidas en el párrafo anterior y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVGNNQDLS WFQQRPGQPPKLLIYEISKLESGVPSRFSGSGSGTHFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAD NA (SEQ ID NO: 122) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCHSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSRTMSWVRQAPGKGL EWIGYIWSGGSTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARLGDTGGHAYATRL NL (SEQ ID NO: 123) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la 'SEQ ID NO: 124; SEQ ID NO: 125; y SEQ ID NO: 126 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 127; SEQ ID NO: 128; y SEQ ID NO: 129 que corresponden a las regiones determinantes de omplementariedad (CDR, o regiones hipervariabl de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 124; SEQ ID NO: 125; y SEQ ID NO: 126 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 127; SEQ ID NO: 128; y SEQ ID NO: 129 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de '. cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, ' los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 122. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 123.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 124; SEQ ID NO: 125; y SEQ ID NO: 126 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 127; SEQ ID NO: 128; y SEQ ID NO: 129 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable^ de la SEQ ID NO: 123.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno,; dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 124; SEQ ID NO: 125; y SEQ ID NO: 126) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 127; SEQ ID NO: 128; y SEQ ID NO: 129) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123.
En una modalidad preferida de . la invención, el anticuerpo anti-IL-ß es Ab8 que comprende la SEQ ID NO: 122 y SEQ ID NO: 123, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : DTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVSISCQSSQSVYSN YLA WYQQKPGQPPKLLIYWTSKLASGAPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGAYDDDAD NA (SEQ ID NO: 138) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTASGFSLEGGYMTWVRQAPGKGL EWIGISYDSGSTYYAS AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRSLKYPTVTSDDL (SEQ ID NO: 139) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 140; SEQ ID NO: 141; y SEQ ID NO: 142 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 143; SEQ ID NO: 144; y SEQ ID NO: 145 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 140; SEQ ID NO: 141; y SEQ ID NO: 142 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 143; SEQ ID NO: 144; y SEQ ID NO: 145 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 138. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 139.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 140; SEQ ID NO: 141; y SEQ ID NO: 142 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 143; SEQ :ID NO: 144; y SEQ ID NO: 145 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 140; SEQ ID NO: 141; y SEQ ID NO: 142) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 143; SEQ ID NO: 144; y SEQ ID NO: 145) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139. í En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab9 que comprende la SEQ ID NO: 138 y SEQ ÍD NO: 139, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYNNNDLA WYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAAAYYCLGGYDDDAD NA (SEQ ID NO: 154) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLSLSSNTINWVRQAPGKGL EWIGYIWSGGSTYYASWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGYASGGYPYATR LDL (SEQ ID NO: 155) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 156; SEQ ID NO: 157; y SEQ ID NO: 158 que corresponden a las reqiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 159; SEQ ID NO: 160; y SEQ ID NO: 161 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla .otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 156; SEQ ID NO: 157; y SEQ ID NO: 158 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 159; SEQ ID NO: 160; y SEQ ID NO: 161 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 154. En otra modalidad | de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invénción comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 155.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una b más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 156; SEQ I'D NO: 157; y SEQ ID NO: 158 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 159; SEQ ID NO: 160; y SEQ ID NO: 161 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 156; SEQ ID NO: 157; y SEQ ID NO: 158) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 159; SEQ ID NO: 160; y SEQ ID NO: 161) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-ß es AblO que comprende la SEQ ID NO: 154 y SEQ ID NO: 155, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNDYLS WYQQRPGQRPKLLIYGASKLASGVPSRFKGSGSGKQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDAD NT (SEQ ID NO: 170) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFTLSTNYYLSWVRQAPGKG LEWIGIIYPSGNTYCAK AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARNYGGDESL (SEQ ID NO: 171) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 172; SEQ ID NO: 173; y SEQ ID NO: 174 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176; y SEQ ID NO: 177 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente. ¡ En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 172; SEQ ID NO: 173; y SEQ ID NO: 174 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176; y SEQ ID NO: 177 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente. ; La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 170. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 171.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 172; SEQ ID NO: 173; y SEQ ID NO: 174 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176; y SEQ ID NO: 177 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable ' de la SEQ ID NO: 171.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a , IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 172; SEQ ID NO: 173; y SEQ ID NO: 174) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176; y SEQ ID NO: 177) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abll que comprende la SEQ ID NO: 170 y SEQ ID NO: 171, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASETIGNALAWY QQKSGQPPKLLIYKASKLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQWCYFGDSV (SEQ ID NO: 186) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVTVLKGVQCQEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSGYYMCWVRQAPGK GLEWIACIFTITTNTYYAS AKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYLCARGIYSDNNYY AL (SEQ ID NO: 187) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 188; SEQ ID NO: 189; y SEQ ID NO: 190 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 191; SEQ ID NO: 192; y SEQ ID NO: 193 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla ' otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 188; SEQ ID NO: 189; y SEQ ID NO: 190 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 191; SEQ ID NO: 192; y SEQ ID NO: 193 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad, de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de . cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 186. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 187.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una [ o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 188; SEQ |ID NO: 189; y SEQ ID NO: 190 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 191; SEQ ID NO: 192; y SEQ ID NO: 193 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 188; SEQ ID NO: 189; y SEQ ID NO: 190) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 191; SEQ ID NO: 192; y SEQ ID NO: 193) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl2 que comprende la SEQ ID NO: 186 y SEQ ID NO: 187, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente. ; En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MD RAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGNALA Y QQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCADAAAYYCQWCYFGDSV (SEQ ID NO: 202) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQQQLVESGGGLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVRQAPGK GLESIACIFTITDNTYYANWAKGRFTISKPSSPTVTLQMTSLTAADTATYFCARGIYSTDNYY AL (SEQ ID NO: 203) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 204; SEQ ID NO: 205; y SEQ ID NO: 206 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena .ligera variable de la SEQ ID NO: 202, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 207; SEQ ID NO: 208; y SEQ ID NO: 209 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 204; SEQ ID NO: 205; y SEQ ID NO: 206 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 207; SEQ ID NO: 208; y SEQ ID NO: 209 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 202. En otra modalidad 'de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 203.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a , IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 204; SEQ ID NO: 205; y SEQ ID NO: 206 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión á IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 207; SEQ ID NO: 208; y SEQ ID NO: 209 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202; la región de cadena pesada variable de la SEQ :ID NO: 203; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 204; SEQ ID NO: 205; y SEQ ID NO: 206) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 207; SEQ ID NO: 208; y SEQ ID NO: 209) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl3 que comprende la SEQ ID NO: 202 y SEQ ID NO: 203, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVV TQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSVSSYLNWY QQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGTSSSYG AA (SEQ ID NO: 218) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGISLSSNAISWVRQAPGKGL EWIGI ISYSGTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDDPTTVMV LIP FGAGMDL (SEQ ID NO: 219) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 220; SEQ ID NO: 221; y SEQ ID NO: 222 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218, y/o una o más. de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 223; SEQ ID NO: 224; y SEQ ID NO: 225 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 220; SEQ ID NO: 221; y SEQ ID NO: 222 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 223; SEQ ID NO: 224; y ;SEQ ID NO: 225 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. Eh otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la1 invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 218. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 219.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una , o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 220; SEQ ID NO: 221; y SEQ ID NO: 222 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 223; SEQ ID NO: 224; y SEQ ID NO: 225 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes': la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 220; SEQ ID NO: 221; y SEQ ID NO: 222) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 223; SEQ ID NO: 224; y SEQ ID NO: 225) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl4 que comprende la SEQ ID NO: 218 y SEQ ID NO: 219, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASPVSAAVGGTVTINCQASQSVYKNNYLS WYQQKPGQPPKGLIYSASTLDSGVPLRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSSG DCYA (SEQ ID NO: 234) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSY MC VRQAPGKGL E IACIVTGNGNTYYAN AKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAKAYDL ( SEQ ID NO: 235) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 236; SEQ ID NO: 237; y SEQ ID NO: 238 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 239; SEQ ID NO: 240; y SEQ ID NO: 241 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de : cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 236; SEQ ID NO: 237; y SEQ ID NO: 238 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 239; SEQ ID NO: 240; y SEQ ID NO: 241 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 234. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 235.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 236; SEQ ID NO: 237; y SEQ ID NO: 238 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 239; SEQ ID NO: 240; y SEQ ID NO: 241 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión á IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 236; SEQ ID NO: 237; y SEQ ID NO: 238) la región de 'cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 239; SEQ ID NO: 240; y SEQ ID NO: 241) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235. ; En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl5 que comprende la SEQ ID NO: 234 y SEQ ID NO: 235, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGSTFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLS WYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGTGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVFNDDSD DA (SEQ ID NO: 250) La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVPKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTLSGFSLSAYYMSWVRQAPGKGL EWIGFITLSDHISYAR AKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRGWGAMGRLDL (SEQ ID NO: 251) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 252; SEQ ID NO: 253; y SEQ ID NO: 254 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CQR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256; y SEQ ID NO: 257 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, O regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 252; SEQ ID NO: 253; y SEQ ID NO: 254 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256; y SEQ ID NO: 257 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 250. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 251.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la- SEQ ID NO: 252; SEQ ID NO: 253; y SEQ ID NO: 254 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256; y SEQ ID NO: 257 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos ! en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a, IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251; las regiones determinantes de complementariedad (SÉQ ID NO: 252; SEQ ID NO: 253; y SEQ ID NO: 254) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250; y las regiones" determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256; y SEQ ID NO: 257) de la región de cadena pesada ' variable de la SEQ ID NO: 251.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl6 que comprende la SEQ ID NO: 250 y SEQ ID NO: 251, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQASQSVYNN NLA WYQQKSGQPPKLLIY ASTLASGVSSRFSGSGSGTQFTLTVSGVQCDDAATYYCLGVFDDDAD NA (SEQ ID NO: 266) La invención también incluye anticuerpos que : poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ; pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYSMT VRQAPGKGL EYIGVIGTSGSTYYAT AKGRFTISRTSTTVALKITSPTTEDTATYFCVRSLSSITFL (SEQ ID NO: 267) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la :SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269; y SEQ ID NO: 270 que corresponden a. las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 271; SEQ ID NO: 272; y SEQ ID NO: 273 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269; y SEQ ID NO: 270 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 271; SEQ ID NO: 272; y SEQ ID NO: 273 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 2:67, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En: otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 266. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 267.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269; y SEQ ID NO: 270 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable, de la SEQ ID NO: 266. ! En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 271; SEQ ID NO: 272; y SEQ ID NO: 273 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269; y SEQ ID NO: 270) la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 271; SEQ ID NO: 272; y SEQ ID NO: 273) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl7 que comprende la SEQ ID NO: 266 y SEQ ID 'NO: 267, que posee al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida' a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQNIYRYLAWY QQKPGQPPKFLIYLASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYSSNSVA (SEQ ID NO: 282) : La invención también incluye anticuerpos que poseen especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLVESGGDLVQPEGSLTLTCTASELDFSSGYWIC VRQVPGK GLE IGCIYTGSSGSTFYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYSGFGYF KL (SEQ ID NO: 283) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 284; SEQ ID NO: 285; y SEQ ID NO: 286 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 287; SEQ ID NO: 288; y SEQ ID NO: 289 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 284; SEQ ID NO: 285; y SEQ ID NO: 286 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 287; SEQ ID NO: 288; y SEQ ID NO: 289 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 282. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 283.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 284; SEQ ID NO: 285; y SEQ ID NO: 286 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 287; SEQ ID NO: 288; y SEQ ID NO: 289 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 284; SEQ ID NO: 285; y SEQ ID NO: 286) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 287; SEQ ID NO: 288; y SEQ ID NO: 289) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-ß es Abl8 que comprende la SEQ ID NO: 282 y SEQ ID NO: 283 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYD TQTPASVEVAVGGTVTIKCQASEDIYRLLAWY QQKPGQPPKLLIYDSSDLASGVPSRFKGSGSGTEFTLAISGVQCDDAATYYCQQA SYSDIDN A (SEQ ID NO: 298) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQAPGKGL EWIGIITTSGNTFYASWAKGRLTISRTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARTSDIFYYRNL (SEQ ID NO: 299) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 300; SEQ ID NO: 301; y SEQ ID NO: 302 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 303; SEQ ID NO: 304; y SEQ ID NO: 305 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 300; SEQ ID NO: 301; y SEQ ID NO: 302 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 303; SEQ ID NO: 304; y SEQ ID NO: 305 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 298. En: otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 299.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 300; SEQ ID NO: 301; y SEQ ID NO: 302 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298. En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 303; SEQ ID NO: 304; y SEQ ID NO: 305 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos. en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno,, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 300; SEQ ID NO: 301; y SEQ ID NO: 302) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 303; SEQ ID NO: 304; y SEQ ID NO: 305) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Abl9 que comprende la SEQ ID NO: 298 y SEQ ID NO: 299 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTASPVSAAVGATVTINCQSSQSVYNDMDLA WFQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCLGAFDDDAD NT (SEQ ID NO: 314) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLTRHAIT VRQAPGKGL EWIGCIWSGGSTYYAT AKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARVIGDTAGYAYFTG LDL (SEQ ID NO: 315) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 316; SEQ ID NO: 317; y SEQ ID NO: 318 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 319; SEQ ID NO: 320; y SEQ ID NO: 321 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 316; SEQ ID NO: 317; y SEQ ID NO: 318 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 319; SEQ ID NO: 320; y SEQ ID NO: 321 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 314. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 315.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 316; SEQ ID NO: 317; y SEQ ID NO: 318 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ¡o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 319; SEQ ID NO: 320; y SEQ ID NO: 321 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos : en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 316; SEQ ' ID NO: 317; y SEQ ID NO: 318) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 319; SEQ ID NO: 320; y SEQ ID NO: 321) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab20 que comprende la SEQ ID NO: 314 y SEQ ID NO: 315 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSVYNWLS Y QQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVECADAATYYCQQGYTSDVDNV (SEQ ID NO: 330) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEEAGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGKGL EYIGIISSSGSTYYATWAKGRFTISQASSTTVDLKITSPTTEDSATYFCARGGAGSGGVWLLD GFDP (SEQ ID NO: 331) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 332; SEQ ID NO: 333; y SEQ ID NO: 334 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 335; SEQ ID NO: 336; y SEQ ID NO: 337 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 332; SEQ ID NO: 333; y SEQ ID NO: 334 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 335; SEQ ID NO: 336; y SEQ ID NO: 337 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 330. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 331.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión á IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ,o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 332; SEQ ID ??': 333; y SEQ ID NO: 334 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 335; SEQ ID NO: 336; y SEQ ID NO: 337 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 332; SEQ ID NO: 333; y SEQ ID NO: 334) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 335; SEQ I;D NO: 336; y SEQ ID NO: 337) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab21 que comprende la SEQ ID NO: 330 y SEQ ID NO: 331 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAKCADVVMTQTPASVSAAVGGTVTINCQASENIYNWLAW YQQKPGQPPKLLIYTVGDLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSSYVD NV (SEQ ID NO: 346) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNDYAVG FRQAPGKG LEWIGYIRSSGTTAYATWAKGRFTISATSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGAGSSGVWILD GFAP (SEQ ID NO: 347) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 348; SEQ ID NO: 349; y SEQ ID NO: 350 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 351; SEQ ID NO: 352; y SEQ ID NO: 353 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla 'otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 348; SEQ ID NO: 349; y SEQ ID NO: 350 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 351; SEQ ID NO: 352; y SEQ ID NO: 353 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de. la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 346. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una 3??µ????3 de polipéptidos de la SEQ ID NO: 347.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 348; SEQ ID NO: 349; y SEQ ID NO: 350 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 351; SEQ ID NO: 352; y SEQ ID NO: 353 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpos que poseen una especificidad de unión a. IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todo's los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO.: 348; SEQ ID NO: 349; y SEQ ID NO: 350) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 351; SEQ ID NO: 352; y SEQ ID NO: 353) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab22 que comprende la SEQ ID NO: 346 y SEQ ID NO: 347 y posee al menos una de las actividades biológicas aqui establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: DTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYQNNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGAATLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGAYRDVDS (SEQ ID NO: 362) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTASGFSFTSTYYIYWVRQAPGKG LEWIACIDAGSSGSTYYATWVNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAK DYGGNVGW GYDL (SEQ ID NO: 363) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 364; SEQ ID NO: 365; y SEQ ID NO: 366 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362, y/o una o más de las secuéncias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 367; SEQ ID NO: 368; y SEQ ID NO: 369 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 364; SEQ ID NO: 365; y SEQ ID NO: 366 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 367; SEQ ID NO: 368; y SEQ ID NO: 369 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 362. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 363.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 364; SEQ ID NO: 365; y SEQ ID NO: 366 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 367; SEQ ID NO: 368; y SEQ ID NO: 369 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) 'de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363. : La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 364; SEQ ID NO: 365; y SEQ ID NO: 366) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 367; SEQ ID NO: 368; y SEQ ID NO: 369) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab23 que comprende la SEQ ID NO: 362 y SEQ ID NO: 363 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWY QQKPGQPPKFLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYDSVSNP (SEQ ID NO: 378) ' La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCKASGLDLGTYWF CWVRQAPGKG LE IACIYTGSSGSTFYASWVNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYSGYGYFK L (SEQ ID NO: 379) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias, de polipéptidos de la SEQ ID NO: 380; SEQ ID NO: 381; y SEQ ID NO: 382 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 383; SEQ ID NO: 384; y SEQ ID NO: 385 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 380; SEQ ID NO: 381; y SEQ ID NO: 382 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 383; SEQ ID NO: 384; y SEQ ID NO: 385 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 378. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 379.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 380; SEQ ID NO: 381; y SEQ ID NO: 382 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable: de la SEQ ID NO: 378.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ? más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 383; SEQ ID NO: 384; y SEQ ID NO: 385 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 380; SEQ ID NO: 381; y SEQ ID NO: 382) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 383; SEQ ID NO: 384; y SEQ ID NO: 385) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379. ; En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab24 que comprende la SEQ ID NO: 378 y SEQ ID NO: 379 y posee al menos una de las actividades biológicas; aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: : MDTRAPTQLLGLLLL LPGVTFAIEMTQSPFSVS7AAVGGTVSISCQASQSVYKNNQLS WYQQKSGQPPKLLIYGASALASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDVQCDDAATYYCAGAITGSID TDG (SEQ ID NO: 394) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTTSGFSFSSSYFICWVRQAPGKG LEWIACIYGGDGSTYYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAREWAYSQGYFG AFDL (SEQ ID NO: 395) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 396; SEQ ID NO: 397; y SEQ ID NO: 398 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 399; SEQ ID NO: 400; y SEQ ID NO: 401 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3,95, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En- otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla ,otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 396; SEQ ID NO: 397; y SEQ ID NO: 398 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 399; SEQ ID NO: 400; y SEQ ID NO: 401 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 394. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 395.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 396; SEQ ID NO: 397; y SEQ ID NO: 398 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 399; SEQ ID NO: 400; y SEQ ID NO: 401 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 396; SEQ ID NO: 397; y SEQ ID NO: 398) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 399; SEQ ID NO: 400; y SEQ ID NO: 401) de la región de cadena pesada váriable de la SEQ ID NO: 395. : En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab25 que comprende la SEQ ID NO: 394 y SEQ ID NO: 395 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASEDISSYLAWY QQKPGQPPKLLIYAASNLESGVSSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQCTYGTISISD GNA (SEQ ID NO: 410) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYF T VRQAPGEGL EYIGFINPGGSAYYASWVKGRFTISKSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLIVSYGAFTI (SEQ ID NO: 411) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 412; SEQ ID NO: 413; y SEQ ID NO: 414 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 415; SEQ ID NO: 416; y SEQ ID NO: 417 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 4:11, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 412; SEQ ID NO: 413; y SEQ ID NO: 414 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 415; SEQ ID NO: 416; y SEQ ID NO: 417 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 410. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 411.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 412; SEQ ID NO: 413; y SEQ ID NO: 414 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 415; SEQ ID NO: 416; y SEQ ID NO: 417 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable' de la SEQ ID NO: 411.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 412; SEQ ID NO: 413; y SEQ ID NO: 414) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 415; SEQ ID NO: 416; y SEQ ID NO: 417) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab26 que comprende la SEQ ID NO: 410 y SEQ ID NO: 411 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASEDIESYLAWY QQKPGQPPKLLIYGASNLESGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGÍISISD GNA (SEQ ID NO: 426) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMTWVRQAPGEGL EYIGFMNTGDNAYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLVVAYGAFNI (SEQ ID NO: 427) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos, que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 428; SEQ ID NO: 429; y SEQ ID NO: 430 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 431; SEQ ID NO: 432; y SEQ ID NO: 433 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 428; SEQ ID NO: 429; y SEQ ID NO: 430 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 431; SEQ ID NO: 432; y SEQ ID NO: 433 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En; otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 426. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 427.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 428; SEQ ID NO: 429; y SEQ ID NO: 430 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable1 de la SEQ ID NO: 426.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ¡o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 431; SEQ ID NO: 432; y SEQ ID NO: 433 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 428; SEQ ID NO: 429; y SEQ ID NO: 430) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 431; SEQ ID NO: 432; y SEQ ID NO: 433) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab27 que comprende la SEQ ID NO: 426 y SEQ ID NO: 427 y posee al menos una de las actividades biológicas! aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSEPVGGTVSISCQSSKSVMNNNYLA WYQQKPGQPPKLLIYGASNLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGGYTGYSD HGT (SEQ ID NO: 442) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTVSGIDLSSYPMNWVRQAPGKGL EWIGFINTGGTIVYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGSYVSSGYAYYFN V (SEQ ID NO: 443) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 444; SEQ ID NO: 445; y SEQ ID NO: 446 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 447; SEQ ID NO: 448; y SEQ ID NO: 449 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la S'EQ ID NO: 444; SEQ ID NO: 445; y SEQ ID NO: 446 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 447; SEQ ID NO: 448; y SEQ ID NO: 449 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 442. En otra modalidad' de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 443. ' En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 444; SEQ ID NO: 445; y SEQ ID NO: 446 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad {CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 447; SEQ ID NO: 448; y SEQ ID NO: 449 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 444; SEQ ID NO: 445; y SEQ ID NO: 446) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 447; SEQ ID NO: 448; y SEQ ID NO: 449) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab28 que comprende la SEQ ID NO: 442 y SEQ ID NO: 443 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQSVYNNNWLS WFQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRF GSGSGTQFTLTISDVQCDDVATYYCAGGYLDSVI (SEQ ID NO: 458) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYSINWVRQAPGKGL EWIGIIANSGTTFYANWAKGRFTVSKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARESGMYNEYGKFNI (SEQ ID NO: 459) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 460; SEQ ID NO: 461; y SEQ ID NO: 462 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 463; SEQ ID NO: 464; y SEQ ID NO: 465 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 460; SEQ ID NO: 461; y SEQ ID NO: 462 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 463; SEQ ID NO: 464; y SEQ ID NO: 465 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 458. En otra modalidad; de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 459.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 460; SEQ ID NO: 461; y SEQ ID NO: 462 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 463; SEQ ID NO: 464; y SEQ ID NO: 465 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos^ en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 460; SEQ ID NO: 461; y SEQ ID NO: 462) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 463; SEQ ID NO: 464; y SEQ ID NO: 465) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab29 que comprende la SEQ ID NO: 458 y SEQ ID NO: 459 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWY QQKPGQPPKLLIFKASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDN N (SEQ ID NO: 474) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMIWVRQAPGEGL E ITIIYPNGITYYAN AKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNAYWGYF NV (SEQ ID NO: 475) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 476; SEQ ID NO: 477; y SEQ ID NO: 478 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 479; SEQ ID NO: 480; y SEQ ID NO: 481 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 476; SEQ ID NO: 477; y SEQ ID NO: 478 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena :ligera variable de la SEQ ID NO: ; 474, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 479; SEQ ID NO: 480; y SEQ ID NO: 481 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 474. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 475.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 476; SEQ ID NO: 477; y SEQ ID NO: 478 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) 'de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474. , En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 479; SEQ ID NO:: 480; y SEQ ID NO: 481 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) :de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 476; SEQ ID NO: 477; y SEQ ID NO: 478) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 479; SEQ ID NO: 480; y SEQ ID NO: 481) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab30 que comprende la SEQ ID NO: 474 y SEQ ID NO: 475 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas. : En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación :- { }- MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWY QQKPGQPPKLLIFRASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDN N (SEQ ID NO: 490) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLR LLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMIWVRQAPGEGL EWITIIYPNGITYYANWAKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNAY GYF NV (SEQ ID NO: 491) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 492; SEQ ID NO: 493; y SEQ ID NO: 494 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 495; SEQ ID NO: 496; y SEQ ID NO: 497 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla : otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la :SEQ ID NO: 492; SEQ ID NO: 493; y SEQ ID NO: 494 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 495; SEQ ID NO: 496; y SEQ ID NO: 497 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 490. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 491.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión á IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una :o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 492; SEQ ID NO:: 493; y SEQ ID NO: 494 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 495; SEQ ID NO: 496; y SEQ ID NO: 497 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos, en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 492; SEQ ID NO: 493; y SEQ ID NO: 494) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 495; SEQ ID NO: 496; y SEQ ID NO: 497) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab31 que comprende la SEQ ID NO: 490 y SEQ ID NO: 491 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAIEMTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASESVFNNMLSW YQQKPGHSPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYCAGYKSDSNDG DNV (SEQ ID NO: 506) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNRNSITWVRQAPGEGL E IGIITGSGRTYYAN AKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGHPGLGSGNI (SEQ ID NO: 507) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 508; SEQ ID NO: 509; y SEQ ID NO: 510 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 511; SEQ ID NO: 512; y SEQ ID NO: 513 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 508; SEQ ID NO: 509; y SEQ ID NO: 510 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 511; SEQ ID NO: 512; y SEQ 'ID NO: 513 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente. \ La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 506. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 507.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 508; SEQ ID NO: 509; y SEQ ID NO: 510 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 511; SEQ ID NO: 512; y SEQ ID NO: 513 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 508; SEQ ID NO: 509; y SEQ ID NO: 510) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 511; SEQ ID NO: 512; y SEQ ID NO: 513) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab32 'que comprende la SEQ ID NO: 506 y SEQ ID NO: 507 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas.
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNYLSW YQQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISEVQCDDAATYYCQGYYSGPIIT (SEQ ID NO: 522) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNNYYIQWVRQAPGEGL EWIGIIYAGGSAYYATWANGRFTIAKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGTFDGYEL (SEQ ID NO: 523) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 524; SEQ ID NO: 525; y SEQ ID NO: 526 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 527; SEQ ID NO: 528; y SEQ ID NO: 529 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 524; SEQ ID NO: 525; y SEQ ID NO: 526 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 527; SEQ ID NO: 528; y SEQ ID NO: 529 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) :de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-ß. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 522. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 523.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 524; SEQ ID NO: 525; y SEQ ID NO: 526 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 527; SEQ ID NO: 528; y SEQ ID NO: 529 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) ;de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523. [ La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos; en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 524; SEQ ID NO: 525; y SEQ ID NO: 526) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 527; SEQ ID NO: 528; y SEQ ID NO: 529) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab33 que comprende la SEQ ID NO: 522 y SEQ ID NO: 523 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: \ MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSVPVGDTVTISCQSSESVYSNNLLS WYQQKPGQPPKLLIYRASNLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGAQCDDAATYYCQGYYSGVIN S (SEQ ID NO: 538) ! La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYF SWVRQAPGEGL EYIGFINPGGSAYYASWASGRLTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARILIVSYGAFTI (SEQ ID NO: 539) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 540; SEQ ID NO: 541; y SEQ ID NO: 542 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 543; SEQ ID NO: 544; y SEQ ID NO: 545 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla : otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 540; SEQ ID NO: 541; y SEQ ID NO: 542 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 543; SEQ ID NO: 544; y SEQ ID NO: 545 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de · la SEQ ID NO: 539, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención> los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 538. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 539.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una ;o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 540; SEQ ID NO: 541; y SEQ ID NO: 542 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 543; SEQ ID NO: 544; y SEQ ID NO: 545 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 540; SEQ ID NO: 541; y SEQ ID NO: 542) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 543; SEQ ID NO: 544; y SEQ ID NO: 545) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539. ' En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab34 que comprende la SEQ ID NO: 538 y SEQ D NO: 539 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas. | En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELSWY QQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDN A (SEQ ID NO: 554) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSKYYMSWVRQAPEKGL KYIGYIDSTTVNTYYATWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARGSTYFTDGGHRL DL (SEQ ID NO: 555) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 556; SEQ ID NO: 557; y SEQ ID NO: 558 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 559; SEQ ID NO: 560; y SEQ ID NO: 561 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 556; SEQ ID NO: 557; y SEQ ID NO: 558 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 559; SEQ ID NO: 560; y SEQ ID NO: 561 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 554. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 555. : En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 556; SEQ ID NO: 557; y SEQ ID NO: 558 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de- cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 559; SEQ ID NO: 560; y SEQ ID NO: 561 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555.
La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 556; SEQ ID NO: 557; y SEQ ID NO: 558) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 559; SEQ ID NO: 560; y SEQ ID NO: 561) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555..
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab35 que comprende la SEQ ID NO: 554 y SEQ ID NO: 555 y posee al menos una de las actividades biológicas aquí establecidas .
En otra modalidad, la invención incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a cont inuación : MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELSWY QQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDN A (SEQ ID NO: 570) La invención también incluye anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 y una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYNMGWVRQAPGKGL E IGSITIDGRTYYASWAKGRFTVSKSSTTVDLKMTSLTTGDTATYFCARILIVSYGAFTI (SEQ ID NO: 571) .
La invención contempla adicionalmente anticuerpos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 572; SEQ ID NO: 573; y SEQ ID NO: 574 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 575; SEQ ID NO: 576; y SEQ ID NO: 577 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 572; SEQ ID NO: 573; y SEQ ID NO: 574 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 575; SEQ ID NO: 576; y SEQ ID NO: 577 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En; otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente.
La invención también contempla fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo dé la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 570. En otra modalidad de la invención, los fragmentos de anticuerpo de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en una secuencia de polipéptidos de la SEQ ID NO: 571.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 572; SEQ ID NO: 573; y SEQ ID NO: 574 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570.
En una modalidad adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO 575; SEQ ID NO: 576; y SEQ ID NO: 577 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571. j La invención también contempla fragmentos de anticuerpo que incluyen uno o más fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno,, dos, tres o más fragmentos de anticuerpo, incluidos todos los siguientes: la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570; la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571; las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 572; SEQ ID NO: 573; y SEQ ID NO: 574) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570; y las regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 575; SEQ ID NO: 576; y SEQ ID NO: 577) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571.
En una modalidad preferida de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 es Ab36 que comprende la SEQ ID NO: 570 y SEQ ID NO: 571 y posee al menos una de las actividades biológicas aqui establecidas.
Las secuencias de anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención se muestran en la Tabla 1. Se muestran ejemplos de variantes de secuencias y otras formas alternativas de las cadenas pesadas y ligeras de Abl a Ab7. Los anticuerpos de la presente invención comprenden variantes de secuencia adicionales que incluyen sustituciones conservadoras, sustituciones de una o más secuencias de CDR y/o secuencias FR, etc.
Ejemplos de modalidades de Abl incluyen un anticuerpo que comprende una variante de la cadena ligera y/o la cadena pesada. Ejemplos de variantes de la cadena ligera de Abl incluyen la secuencia de cualquiera de las cadenas ligeras de Abl mostradas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 2, 20, 647, 651, 660, 666, 699, 702, 706, o 709) donde se reemplaza la totalidad de la secuencia CDR1 o donde uno o más residuos' en la secuencia CDR1 se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de cualquiera de las otras secuencias CDR1 de cadena ligera establecidas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 39, 55, 71, 87, 103, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332, 348, 364, 380, 396, 412, 428, 444, 460, 476, 492, 508, 524, 540, 556, o 572); y/o donde la totalidad de la secuencia CDR2 se reemplaza o donde uno o más residuos en la secuencia CDR2 se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de cualquiera de las otras secuencias CDR2 de cadena ligera establecidas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 24, 40, 56, 72, 88, 104, 125, 141, 157, 173, 189, 205, 221, 237, 253, 269, 285, 301, 317, 333, 349, 365, 381, 397, 413, 429, 445, 461, 477, 493, 509, 525, 541, 557, o 573); y/o donde la totalidad de la secuencia CDR3 se reemplaza o donde uno o más residuos en la secuencia CDR3 se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de cualquiera de las otras secuencias CDR3 de cadena ligera establecidas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 25, 41, 57, 73, 89, 105, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334, 350, 366, 382, 398, 414, 430, 446, 462, 478, 494, 510, 526, 542, 558, o 574).
Ejemplos de variantes de la cadena pesada de Abl incluyen la secuencia de cualquiera de las cadenas pesadas de Abl mostradas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 3, 18, 19, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 704, o 708) donde la totalidad de la secuencia CDRl se reemplaza o donde uno o más residuos en la secuencia CDRl se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de cualquiera de las otras secuencias CDRl de cadena pesada establecidas '(esto es, cualquiera de (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 26, 42, 58, 74, 90, 106, 127, 143, 159, 175, 191, 207, 223, 239, 255, 271, ' 287, 303, 319, 335, 351, 367, 383, 399, 415, 431, 447, 463, 479, 495, 511, 527, 543, 559, o 575); y/o donde la totalidad de la secuencia CDR2 se reemplaza o donde uno o más residuos en la secuencia CDR2 se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de una CDR2 de cadena pesada de Abl, tal como se establece en la Tabla 1 (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 8, o 120) o cualquier otra de las secuencias de CDR2 de cadena pesada establecidas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 27, 43, 59, 75, 91, 107, 121, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336, 352, 368, 384, 400, 416, 432, 448, 464, 480, 496, 512, 528, 544, 560, o 576); y/o donde la totalidad de la secuencia CDR3 se reemplaza ?· donde uno o más residuos en la secuencia CDR3 se sustituye por el residuo en la posición correspondiente de cualquiera de las otras secuencias CDR3 de cadena pesada establecidas (esto es, cualquiera de las SEQ ID NO: 28, 44, 60, 76, 92, 108, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 241, 257, 273, 289, 305, 321, 337, 353, 369, 385, 401, 417, 433, 449, 465, 481, 497, 513, 529, 545, 561, o 577) .
En otra modalidad, la invención contempla otros anticuerpos, tales como por ejemplo anticuerpos quiméricos o humanizados que comprenden una o más secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; y SEQ ID NO: 6 que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de la SEQ ID NO: 7 (CDRl); 'SEQ ID NO: 8 (CDR2); SEQ ID NO: 120 (CDR2); y SEQ ID NO: 9 (CDR3) que corresponden a las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 19, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra modalidad de la invención, los anticuerpos de la invención incluyen combinaciones de las CDR y las secuencias de cadena ligera y pesada variable establecidas anteriormente incluidas aquellos establecidas en las Figuras: 2 y 34-37 y aquellas identificadas en la Tabla 1.
En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-6 de la invención es uno que comprende al menos una de las siguientes: una cadena ligera de CDRl codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 694; una cadena ligera de CDR2 codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 13; una cadena ligera de CDR3 codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 695; una cadena pesada de CDRl codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 15, una cadena pesada de CDR2 codificada por la SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 696 y una cadena pesada de CDR3 codificada por la SEQ ID NO: 17 o SEQ ID NO: 697. Además, la invención abarca dichas secuencias de ácido nucleico y variantes de las mismas.
En otra modalidad, la invención se dirige a secuencias de aminoácidos correspondientes a las CDR de dicho anticuerpo anti-IL-6 que se seleccionan de la SEQ ID NO: 4 (CDR1), SEQ ID NO: 5 (CDR2), SEQ ID NO: 6 (CDR3 ) , SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 120 y SEQ ID NO: 9.
En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-6 de la invención comprende una secuencia de ácido nucleico de cadena ligera de la SEQ ID NO: 10, 662, 698, 701, 705, 720, 721, 722, o 723; y/o una secuencia de ácido nucleico de cadena pesada de la SEQ ID NO: 11, 663, 700, 703, 707, 724, o 725. Además, la invención se dirige a los polipéptidos correspondientes codificados por cualquiera de las secuencias de ácido nucleico mencionadas y combinaciones de las mismas.
En una modalidad especifica de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 o una porción de los mismos se codificarán por una secuencia de ácido nucleico seleccionado de aquellas comprendidas en SEQ ID NO: 10, 12, 13, 14, 662, 694, 695, 698, 701, 705, 720, 721, 722, 723, 11, 15, 16, 17;, 663, 696, 697, 700, 703, 707, 724 y 725. Por ejemplo, la CDR1; en la cadena ligera puede codificarse por la SEQ ID NO: 12 o 694, la CDR2 en la cadena ligera puede codificarse por la SEQ ID NO: 13, la CDR3 en la cadena ligera puede codificarse por la SEQ ID NO: 14 o 695, la CDRl en la cadena pesada puede codificarse por la SEQ ID NO: 15, la CDR2 en la cadena pesada puede codificarse por la SEQ ID NO: 16 o 696, la CDR3 en la cadena pesada puede codificarse por la SEQ ID NO: 17 o 697. Tal como se · discute más adelante los anticuerpos que contienen estas CDR pueden crearse usando regiones flanqueantes humanas apropiadas basadas en procesos de humanización descritos en la presente.
En otra modalidad especifica de la invención la cadena ligera variable se codificará por la SEQ ID NO: 10, 662, 698, 701, 705, 720, 721, 722, o 723 y la cadena pesada variable de los anticuerpos anti-IL-6 se codificarán por la SEQ ID NO: 11, 663, 700, 703, 707, 724, o 725.
En una modalidad más especifica, las cadenas variables ligera y pesada del anticuerpo anti-IL-6 se codificarán por la SEQ ID NO: 10 y 11, o SEQ ID NO: 698 y SEQ ID NO: 700, o SEQ ID NO: 701 y SEQ ID NO: 703 o SEQ ID NO: 705 y SEQ ID NO: 707.
En otra modalidad especifica, la invención abarca construcciones de ácido nucleico que contienen cualquiera de las secuencias de ácido nucleico precedentes y combinaciones de las mismas asi como células recombinantes que contienen estas secuencias y construcciones de ácido nucleico y donde estas secuencias o construcciones de ácido nucleico pueden ser extracromosomales o estar integradas en el genoma de la célula hospedadora.
En otra modalidad especifica, la invención abarca polipéptidos que contienen cualquiera de las CDR o combinaciones de las mismas descritas en la SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 9 o polipéptidos que comprenden cualquiera de los polipéptidos de cadena ligera variable comprendidos en la SEQ ID NO: 2, 20, 647, 651, 660, 666, 699, 702, 706, o 709 y/o los polipéptidos de cadena pesada variable comprendidos en la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 704, o 708. Estos polipéptidos pueden estar opcionalmente unidos, directa o indirectamente, a otros polipéptidos de inmunoglobulina o restos efectores tales como entidades terapéuticas o detectables.
En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-6 es uno que comprende al menos una de las siguientes: una cadena ligera variable codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 10 o^EQ ID NO: 698 o SEQ ID NO: 701 o SEQ ID NO: 705 y una cadena variable codificada por la secuencia en SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 700 o SEQ ID NO: 703 o SEQ ID NO: 707.
En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-6 es una variante de las secuencias precedentes que incluyen una o más sustituciones en las secuencias flanqueantes y/o de CDR y que tiene una o más de las propiedades de Abl in vitro y/o luego de la administración in vivo.
Estas propiedades in vitro e in vivo se describen ,en más detalle en los ejemplos a continuación e incluyen: competir con Abl para la unión a IL-6 y/o péptidos de esta; con una afinidad de unión (Kd) para IL-6 o menor a aproximadamente 50 picbmolar, y/o una tasa de disociación (K0ff) a partir de IL-6 o menor o igual a 10-4 S"1; con semivida in vivo de al menos alrededor de 22 días en un ser humano sano; habilidad para prevenir o tratar hipoalbuminemia; habilidad para prevenir o tratar CRP elevado; habilidad para prevenir o tratar la coagulación anormal; y/o habilidad para disminuir el riesgo de trombosis en un individuo con una enfermedad o afección asociada con el riesgo aumentado de trombosis. Ejemplos adicionales no limitantes de la actividad anti-IL-6 se establecen en la presente, por ejemplo, bajo el titulo "Actividad anti-IL-6".
En otra modalidad, el anticuerpo anti-IL-6 incluye una o más secuencias de CDR de cadena ligera y/o pesada de Abl (véase Tabla 1) o variantes de las mismas que poseen una o más, de las propiedades de Abl in vitro y/o luego de la administración in vivo (ejemplos de dichas propiedades se discuten en el párrafo anterior) . Un experto en la técnica entenderá cómo combinar estas secuencias de CDR para formar una superficie de unión al antigeno, por ej . por medio de un enlace a uno o más andamiajes que pueden comprender otras secuencias flanqueantes humanas o mamiferas o sus ortólogos funcionales derivados a partir de un SMIP, anticuerpos de camélido, nanoanticuerpos, IgNAR ü otra inmunoglobulina u otro anticuerpo diseñado. Por ejemplo, las modalidades pueden unirse especificamentea IL-6 humano e incluyen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más de las siguientes secuencias de CDR o variantes de las mismas: un polipéptido que posee al menos una identidad de 72.7% (esto es, 8 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4; un polipéptido que posee al menos una identidad de 81.8% (esto es, 9 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4; un polipéptido que posee al menos una identidad de 90.9% (esto es, 10 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4; un polipéptido que posee al menos una identidad de 100% (esto es, 11 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4 ; un polipéptido que posee al menos una identidad de; 85.7% (esto es, 6 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 , de la SEQ ID NO: 5; un polipéptido que posee al menos una identidad de 100% (esto es, 7 de 7 aminoácidos) ,con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polipéptido que posee al menos una identidad de 50% (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 58.3% (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 66.6% (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 75% (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 83.3% (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 91.6% (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos una identidad de 100% (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3, de la SEQ ID NO: 6; I un polipéptido que posee al menos una identidad de 80% (esto es, 4 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 de la SEQ ID NO: 7; un polipéptido que posee al menos una identidad de 100% (esto es, 5 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 ;de la SEQ ID NO: 7; un polipéptido que posee al menos una identidad de 50% (esto es, 8 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 56.2% (esto es, 9 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 62.5% (esto es, 10 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 68.7% (esto es, 11 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 75% (esto es, 12 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 81.2% (esto es, 13 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; . un polipéptido que posee al menos una identidad de.87.5% (esto es, 14 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 ' de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 93.7% (esto es, 15 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de: 100% (esto es, 16 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos una identidad de 33.3% (esto es, 4 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 41.6% (esto es, 5 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 50% (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 58.3% (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 66.6% (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 75% (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 83.3% (esto es, 10 de 12 aminoácidos con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de ,91.6% (esto es, 11 de 12 aminoácidos con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos una identidad de 100% (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9/ un polipéptido que posee al menos un 90.9% de semejanza (esto es, 10 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de la SEQ ID NO: 4; un polipéptido que posee un 100% de semejanza (esto es, 11 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de la SEQ ID NO: 4; un polipéptido que posee al menos un 85.7% de semejanza (esto es, 6 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polipéptido que posee al menos un 100% de semejanza (esto es, 7 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polipéptido que posee al menos un 66.6% de semejanza (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 ,de la SEQ ID NO: 6; ' un polipéptido que posee al menos un 75% de semejanza (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos un 83.3% de semejanza (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos un 91.6% de semejanza (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee 100% de semejanza (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polipéptido que posee al menos un 80% de semejanza (esto es, 4 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDRl de la SEQ ID NO: 7; un polipéptido que posee al menos 100% de semejanza (esto es, 5 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDRl de la SEQ ID NO: 7; un polipéptido que posee al menos 56.2% de semejanza (esto es, 9 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 62.5% de semejanza (esto es, 10 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 68.7% de semejanza (esto es, 11 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2;de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 75% de semejanza ' (esto es, 12 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 81.2% de semejanza (esto es, 13 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 87.5% de semejanza (esto es, 14 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos 93.7% de semejanza (esto es, 15 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee 100% de semejanza (esto es, 16 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polipéptido que posee al menos un 50% de semejanza (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos un 58.3% de semejanza (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos un 66.6% de semejanza (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR31 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos un 75% de semejanza (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 |de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos un 83.3% de semejanza (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee al menos un 91.6% de semejanza (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polipéptido que posee 100% de semejanza (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9.
Otros ejemplos de modalidades incluyen uno o más polinucleotidos que codifican cualquiera de las anteriores, por ej . un polinucleótido que codifica un polipéptido que se une de manera especifica a IL-6 humana e incluye uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más de las siguientes CDR o variantes de las mismas: un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 72.7% de identidad (esto es, 8 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de la SEQ ID NO: 4; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 81,8% de identidad (esto es, 9 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de la SEQ ID NO: 4; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al '.menos 90,9% de identidad (esto es, 10 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 11 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDRl de la SEQ ID NO: 4; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 85,7% de identidad (esto es, 6 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 7 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 50% de identidad (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 58,3% de identidad (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 66,6% de identidad (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 75% de identidad (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 83,3% de identidad (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; : un polinucleótido que codifica un polipéptido con al' menos 91,6% de identidad (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 80% de identidad (esto es, 4 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 de la SEQ ID NO: 7; un polinucleotido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 5 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 de la SEQ ID NO: 7; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 50% de identidad (esto es, 8 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 56,2% de identidad (esto es, 9 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 62,5% de identidad (esto es, 10 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 68, 7% de identidad (esto es, 11 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al 'menos 75% de identidad (esto es, 12 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al -menos 81,2% de identidad (esto es, 13 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al :menos 87,5% de identidad (esto es, 14 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 93,7% de identidad (esto es, 15 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120/ un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 16 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 33,3% de identidad (esto es, 4 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 41,6% de identidad (esto es, 5 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 50% de identidad (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al, menos 58,3% de identidad (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al: menos 66,6% de identidad (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al; menos 75% de identidad (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; : un polinucleótido que codifica un polipéptido con al :menos 83,3% de identidad (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 91,6% de identidad (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleotido que codifica un polipéptido con 100% de identidad (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 90, 9% de semejanza (esto es, 10 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de la SEQ ID NO: 4; un polinucleotido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 11 de 11 aminoácidos) con la cadena ligera CDR1 de. la SEQ ID NO: 4; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 85,7% de semejanza (esto es, 6 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polinucleotido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 7 de 7 aminoácidos) con la cadena ligera CDR2 de la SEQ ID NO: 5; un polinucleotido que codifica un polipéptido con al .menos 66,6% de semejanza (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; : un polinucleotido que codifica un polipéptido con al menos 75% de semejanza (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 83,3% de semejanza (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 91,6% de semejanza (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena ligera CDR3 de la SEQ ID NO: 6; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 80% de semejanza (esto es, 4 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 de la SEQ ID NO: 7; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 5 de 5 aminoácidos) con la cadena pesada CDR1 de la SEQ ID NO: 7; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al 'menos 56,2% de semejanza (esto es, 9 de 16 aminoácidos) con la qadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 62,5% de semejanza (esto es, 10 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 68,7% de semejanza (esto es, 11 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 75% de semejanza (esto es, 12 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 81,2% de semejanza (esto es, 13 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 87,5% de semejanza (esto es, 14 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 93,7% de semejanza (esto es, 15 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 16 de 16 aminoácidos) con la cadena pesada CDR2 de la SEQ ID NO: 120; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al; menos 50% de semejanza (esto es, 6 de 12 aminoácidos) con la ¡cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; '· un polinucleótido que codifica un polipéptido con aL menos 58,3% de semejanza (esto es, 7 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al, menos 66,6% de semejanza (esto es, 8 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al1 menos 75% de semejanza (esto es, 9 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 83,3% de semejanza (esto es, 10 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con al menos 91,6% de semejanza (esto es, 11 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9; un polinucleótido que codifica un polipéptido con 100% de semejanza (esto es, 12 de 12 aminoácidos) con la cadena pesada CDR3 de la SEQ ID NO: 9.
Tabla 1. Secuencias de ejemplos de anticuerpos anti 706 705 4 694 5 13 6 695 709 723 4 12 5 13 6 14 Cadenas 648 - 710 713 ligeras 649 711 714 humanas usadas en humanización de Abl 650 712 715 3 11 7 15 8 16 9 17 18 7 15 8 16 9 17 19 724 7 15 120 696 9 17 652 725 7 15 8 16 9 17 656 7 15 8 16 9 17 Cadenas 657 700 7 15 659 696 9 697 pesadas de Abl 658 7 15 120 696 9 17 661 663 7 15 8 16 9 17 664 7 15 8 16 9 , 17 665 7 15 120 696 9 17 704 703 7 15 120 696 9 697 708 707 7 15 120 696 9 697 Cadenas 653 716 717 pesadas 654 716 717 humanas usadas en humanización de Abl 655 74 82 718 Cadenas 21 29 23 31 24 32 25 33 ligeras de Ab2 667 669 23 31 24 32 25 33 Cadenas 22 30 26 34 27 35 28 36 pesadas de A 2 668 670 26 34 27 35 28 36 Cadenas 37 45 39 47 40 48 41 49 ligeras de Ab3 671 673 39 47 40 48 41 49 Cadenas 38 46 42 50 43 51 44 52 pesadas de Ab3 672 674 42 50 43 51 44 52 Cadenas 53 61 55 63 56 64 57 65 ligeras de Ab4 675 677 55 63 56 64 57 65 Cadenas 54 62 58 66 59 67 60 68 pesadas de Ab4 676 678 58 66 59 67 60 68 Cadenas 69 77 71 79 72 80 73 81 ligeras de Ab5 679 681 71 79 72 80 73 81 Cadenas 70 78 74 82 75 83 76 ; 84 pesadas de Ab5 680 682 74 82 75 83 76 84 Cadenas 85 93 87 95 88 96 89 ': 97 ligeras de Ab6 683 685 87 95 88 96 89 : 97 Cadenas 86 94 90 98 91 99 92 : í o o pesadas de Ab6 684 686 90 98 91 99 92 100 101 109 103 111 104 112 105 113 Cadenas 119 103 111 104 112 105 113 ligeras de Ab7 687 689 103 111 104 112 105 ; 113 693 103 111 104 112 105 113 102 110 106 114 107 115 108 116 117 106 114 107 115 108 116 Cadenas 118 106 114 121 108 116 pesadas de A 7 688 690 106 114 107 115 108 116 691 106 114 107 115 108 116 692 106 114 121 108 116 Cadenas ligeras de A 8 122 130 124 132 125 133 126 134 Cadena pesada de Ab8 123 131 127 135 128 136 129 , 137 Cadena ligera de A 9 138 146 140 148 141 149 142 ; 150 Cadena pesada de Ab9 139 147 143 151 144 152 145 •153 Cadena ligera de AblO 154 162 156 164 157 165 158 ',166 Cadena pesada de AblO 155 163 159 167 160 168 161 169 Cadena ligera de Abll 170 178 172 180 173 181 174 182 Cadena pesada de Abll 171 179 175 183 176 184 177 185 Cadena ligera de Abl2 186 194 188 196 189 197 190 198 Cadena pesada de Abl2 187 195 191 199 192 200 193 201 Cadena ligera de Abl3 202 210 204 212 205 213 206 214 Cadena pesada de Abl3 203 211 207 215 208 216 209 1 217 Cadena ligera de Abl4 218 226 220 228 221 229 222 230 Cadena pesada de Abl4 219 227 223 231 224 232 225 ' 233 Cadena ligera de 234 242 236 244 237 245 238 246 Abl5 Cadena pesada de Abl5 235 243 239 247 240 248 241 249 Cadena ligera de Abl6 250 258 252 260 253 261 254¦ 262 Cadena pesada de Abl6 251 259 255 263 256 264 257 265 Cadena ligera de Abl7 266 274 268 276 269 277 270 278 Cadena pesada de Abl7 267 275 271 279 272 280 273 281 Cadena ligera de Abl8 282 290 284 292 285 293 286 , 294 Cadena pesada de Abl8 283 291 287 295 288 296 289 297 Cadena ligera de Abl9 298 306 300 308 301 309 302 ; 310 Cadena pesada de Abl9 299 307 303 311 304 312 305 .313 Cadena 314 322 316 324 317 325 318 '> 326 ligera de Ab20 Cadena pesada de Ab20 315 323 319 327 320 328 321 329 Cadena ligera de Ab21 330 338 332 340 333 341 334 342 Cadena pesada de Ab21 331 339 335 343 336 344 337 345 Cadena ligera de Ab22 346 354 348 356 349 357 350 358 Cadena pesada de Ab22 347 355 351 359 352 360 353 361 Cadena ligera de Ab23 362 370 364 372 365 373 366 ' 374 Cadena pesada de Ab23 363 371 367 375 368 376 369 : 377 Cadena ligera de Ab24 378 386 380 388 381 389 382 : 390 Cadena pesada de Ab2 379 387 383 391 384 392 385 393 Cadena ligera de Ab25 394 402 396 404 397 405 398 406 Cadena pesada de Ab25 395 403 399 407 400 408 401 409 Cadena ligera de Ab26 410 418 412 420 413 421 414 422 Cadena pesada de Ab26 411 419 415 423 416 424 417 425 Cadena ligera de Ab27 426 434 428 436 429 437 430 438 Cadena pesada de Ab27 427 435 431 439 432 440 433 441 Cadena ligera de Ab28 442 450 444 452 445 ' 453 446 1 454 Cadena pesada de Ab28 443 451 447 455 448 456 449 ; 457 Cadena ligera de Ab29 458 466 460 468 461 469 462 ' 470 Cadena pesada de 459 467 463 471 464 472 465 473 Ab29 Cadena ligera de Ab30 474 482 476 484 477 485 478 486 Cadena pesada de Ab30 475 483 479 487 480 488 481 489 Cadena ligera de Ab31 490 498 492 500 493 501 494 502 Cadena pesada de Ab31 491 499 495 503 496 504 497 505 Cadena ligera de Ab32 506 514 508 516 509 517 510 518 Cadena pesada de Ab32 507 515 511 519 512 520 513 521 Cadena ligera de Ab33 522 530 524 532 525 533 526 : 534 Cadena pesada de Ab33 523 531 527 535 528 536 529 537 Cadena ligera de Ab34 538 546 540 548 541 549 542 550 Cadena 539 547 543 551 544 552 545 553 pesada de Ab34 Cadena ligera de Ab35 • 554 562 556 564 557 565 558 566 Cadena pesada de Ab35 555 563 559 567 560 568 561 569 Cadena ligera de Ab36 570 578 572 580 573 581 574 582 Cadena pesada de Ab36 571 579 575 583 576 584 577 585 * Ejemplos de formas de variantes de secuencia de cadenas pesada y ligera se muestran en lineas separadas.
PRT . : Secuencia de polipéptidos Nuc. : Ejemplos de secuencia de codificación. : Como referencia, los identificadores de secuencia distintos de los incluidos en la Tabla 1, se resumen en la Tabla 2.
Tabla 2. Resumen de los identificadores de secuencia en esta solicitud. secuencia de polinucléotido de cadena 587 ligera constante kappa secuencia de polipéptido de cadena 588 pesada constante gamma-1 secuencia de polinucléotido de cadena 589 pesada constante gamma-1 590 - Péptidos de IL-6 humana (véase FIG. 12 646 y Ejemplo 14) Secuencia de polipéptido de cadena pesada constante gamma-1 (difiere de la 719 SEQ ID NO: 518 en dos posiciones) Secuencia de polipéptido de la proteina 726 C reactiva 727 Receptor de IL-6 alfa 728 Receptor de IL-6 beta / gpl30 Dichos fragmentos de anticuerpo pueden estar presentes en una o más de las siguientes formas no restrictivas: Fab, Fab', F(ab' ) 2f F y formas de anticuerpo de cadena simple Fv. En una modalidad preferida, los anticuerpos anti IL-6 descritos ' en la presente comprenden adicionalmente la secuencia de cadena ligera constante kappa que comprende la secuencia establecida a continuación: VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID, NO: 586) .
En otra modalidad preferida, los anticuerpos anti: IL-6 descritos en la presente comprenden adicionalmente la secuencia de polipéptido de cadena pesada constante gamma-1 que comprende una de las secuencias establecidas a continuación: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 588) y ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 719) .
Modalidades de los anticuerpos descritos en la presente pueden incluir una secuencia líder, tal como, líder Ig de conejo, prepéptido de albúmina, una secuencia líder pre o pro secreción de factor de apareamiento de la levadura (tal cómo P. pastoris o Saccharomyces cerevisiae o factor alfa) , o líder HAS humano. Ejemplos de secuencias líder se muestran desalineados con respecto a FR1 en la N-terminal de los polipéptidos mostrados en las Figuras 36A y 37A como sigue: Secuencias líder de Ig de ratón de la SEQ ID NOs: 2 y 660 (MD . . .) y SÉQ ID NOs: 3 y 661 (ME. . . ); y un prepéptido de albúmina en la SEQ ID NOs : 706 y 708, lo que facilita su secreción. También se pueden usar otras secuencias líder conocidas en la técnica para conferir propiedades deseadas, tales como secreción, estabilidad mejorada o semivida, etc., solas o en combinaciones entre sí, en las cadenas pesadas y/o ligeras, que puede escindirse opcionalmente previo a la administración a un sujeto. Por ejemplo, se puede expresar un polipéptido en un sistema celular o libre de células que también expresa o incluye (o se modifica para expresar o incluir) una proteasa, por ej . una peptidasa señal ligada a la membrana que escinde una secuencia líder.
En otra modalidad, la invención contempla un anticuerpo anti-IL-6 aislado que comprende una secuencia de polipéptido de VH que comprende: SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657,' 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, o 708; y comprende también una secuencia de polipéptido de VL que comprende: SEQ ID NO: 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675,. 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709 o una variante de la misma donde uno o más de los residuos flanqueantes (residuos FR) en dicho polipéptido de VH 0 VL fue sustituido por otro residuo de aminoácido que da como resultado un anticuerpo anti-IL-6 que se une específicamente a IL-6. La invención contempla formas humanizadas y quiméricas de estos anticuerpos, preferentemente donde FR comprenderá FR humano altamente homólogo al anticuerpo progenitor. Los anticuerpos quiméricos pueden incluir un Fe derivado de las regiones constantes IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgGlO, IgGll, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgGl7, IgGl8 y IgG19 y en particular una región constante de cadena pesada y ligera variable tal como la contenida en la SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586.
En una modalidad de la invención, los anticuerpos o los polipéptidos de VH o VL se originan o se seleccionan de una o más poblaciones de células B de conejos previo al inicio del proceso de humanización nombrado en la presente.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 y fragmentos de los mismos poseen especificidad de 'unión por homólogos de primate de la proteína IL-6 humana. Ejemplos no limitantes de homólogos primates de la proteína IL-6 humana son IL-6 obtenidas a partir de Macaca fascicularis (también conocidas como mono macaco) y el macaco Rhesus. En ' otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 y fragmentos de los mismos inhiben la asociación de IL-6 con IL-6R, y/o la producción de complejos IL-6/IL-6R/gpl30 y/o la producción de multímeros IL-6/IL-6R/gpl30 y/o antagonizan los efectos biológicos de uno o más de los antemencionados.
Tal como se estableció anteriormente, los anticuerpos y fragmentos de los mismos pueden modificarse postraduccionalmente para agregar restos efectores tales como enlaces químicos, restos detectables tales como, por ejemplo, tintes fluorescentes, enzimas, sustratos, materiales bioluminiscentes , materiales radiactivos y restos quimioluminiscentes o restos funcionales tales como, por ejemplo, estreptavidina, avidina, biotina, una citotoxlna, un agente citotóxico y materiales radiactivos.
En cuanto a restos detectables, ejemplos adicionales de enzimas incluyen pero no se limitan a, peroxidasa de rábano picante, acetilcolinesterasa, fosfatasa alcalina, betagalactosidasa y luciferasa. Ejemplos adicionales de materiales fluorescentes incluyen pero no se limitan a, rodamina, fluoresceína, isotiocianato de fluores.ceína , umbelliferona, diclorotriazinilamina, ficoeritrina y cloruro de dansilo. Ejemplos adicionales de restos quimioluminiscentes incluyen pero no se limitan a, luminol. Ejemplos adicionales de materiales bioluminiscentes incluyen pero no se limitan a, luciferina y aequorina. Ejemplos adicionales de materiales radiactivos incluyen pero no se limitan a, Yodo 125 (125I), Carbono 14 (14C) , Azufre 35 (35S) , Tritio (3H) y Fósforo 32 (32P).
En cuanto a restos funcionales, ejemplos de agentes citotóxicos incluyen pero no se limitan a, metotrexato, aminopterina, ß-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil dacarbazina; ¦ agentes alquilantes tales como mecloretamina, tioepa clorambucil, melfalan, carmustina (BSNU) , mitomicina C, lomustina (CCNU) , 1-metilnitrosourea, ciclofosfamida, mecloretamina, busulfan, dibromomanitol , estreptozotocina, mitomicina C, cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatino y carboplatino (paraplatino) ; antraciclinas incluyen daunorubicina (antiguamente daunomicina) , doxorubicina (adriamicina) , detorubicina, carminomicina, idarubicina, epirubicina, mitoxantrona y bisantreno; antibióticos incluyen dactinomicina (actinomicina D) , bleomicina, caliqueamicina, mitramicina y antramicina (AMC) ; y agentes antimitóticos tales como los alcaloides de la vinca, vincristina y vinblastina. Otros agentes citotóxicos incluyen paclitaxel (taxol), ricina, pseudomonas exotoxina, gemcitabina, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, etoposida, tenoposida, colchicina, dihidroxi antracina diona, 1-dihidrotestostérona, glucocorticoides, procaina, tetracaina, lidocaina, propraholol, puromicina, procarbazina, hidroxiurea, asparaginasa, corticosteroides, mitotano (0, P 1 - (DDD) ) , interferones y mezclas de estos agentes citotóxicos.
Agentes citotóxicos adicionales incluyen pero no se limitan a, agentes quimioterapéuticos tales como carboplatino, cisplatino, paclitaxel, gemcitabina, caliqueamicina, doxorubicina, 5-fluorouracilo, mitomicina C, actinomicina D, ciclofosfamida, vincristina, bleomicina, antagonistas de VEGF, antagonistas de EGFR, platinos, taxoles, irinotecano, 5-fluorouracilo, gemcitabina, leucovorina, esteroides, ciclofosfamida, melfalán, alcaloides de la vinca (por ej . , vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina) , mustinas, inhibidores de tirosina cinasa, radioterapia, antagonistas de hormonas sexuales, moduladores selectivos del receptor de andrógeno, moduladores selectivos del receptor de estrógeno, antagonistas de PDGF, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-1, interleucinas (por ej . IL-12 o IL-2) , antagonistas de IL-12R, anticuerpos monoclonales conjugados con toxinas, anticuerpos monoclonales específicos contra antígenos tumorales, Erbitux™, Avastin™, Pertuzumab, anticuerpos anti-CD20, Rituxan®, ocrelizumab, ofatumumab, DXL625, Herceptin®, o combinaciones de los mismos. Enzimas tóxicas de plantas y bacterias tales como ricina, toxina difteria y toxina Pseudomonas pueden conjugarse a los anticuerpos humanizados o fragmentos de unión de los mismos para generar reactivos para la destrucción específica de un tipo de células (Youle, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci . USA 77:5483 (1980); Gilliland, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980); Krolick, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)).
Otros agentes citotóxicos incluyen ribonucleasas citotóxicas tal como describe Goldenberg en la Patente estadounidense No. 6,653,104. Modalidades de la invención también se refieren a radioinmunoconjugados donde un radionúclido que emite partículas alfa o beta se encuentra acoplado de manera estable al anticuerpo o fragmentos de unión del mismo, con o sin el uso de agentes formadores de complejos. Tales radionúclidos incluyen emisores beta tales como Fósforo-32 (32P), Escandio-47 (47Sc) , Cobre-67 (67Cu) , Galio-67 (67Ga) , Itrio-88 (88Y), Itrio-90 (90Y) , Yodo-125 (125I), Yodo-131 (131I), Samario-153 (153Sm) , Lutecio-177 (177Lu) , Renio-186 (186Re) o Renio-188 (188Re) y emisores alfa tales como Astatina-211 (211At), Plomo-212 (212Pb) , Bismuto-212 (212Bi) o -213 (213Bi) o Actinio-225 (225Ac) .
Se conocen métodos en la técnica para la conjugación de un anticuerpo o un fragmento de unión del mismo a un resto detectable y similar, tal como, por ejemplo, aquellos métodos descritos por Hunter et al, Nature 144:945 (1962); David et al, Biochemistry 13:1014 (1974); Pain et al, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); y Nygren, J. , Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982) .
Modalidades descritos en la presente incluyen adicionalmente variantes y equivalentes sustancialmente homólogos a los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, diacuerpos, SMIP, anticuerpos de camélido, nanoanticuerpos, IgNAR, polipéptidos, regiones variables y CDR establecidas en la presente. Estos pueden contener, por ej . mutaciones de sustitución conservadoras (esto es,, la sustitución de uno o más aminoácidos por medio de aminoácidos similares) . Por ejemplo, sustitución conservadora se refiere a la sustitución de un aminoácido por otro dentro de la misma clase general, por ej . un aminoácido ácido con otro aminoácido ácido, un aminoácido básico con otro aminoácido básico, o un aminoácido neutro con otro aminoácido neutro. Se conoce bien en la técnica lo que se pretende por la sustitución conservadora de un aminoácido.
En otra modalidad, la invención contempla secuencias de polipéptidos que poseen al menos 90% o más de homología de secuencia con una o más de las secuencias de fragmentos de anticuerpos, regiones variables y CDR establecidas en la presente. Más preferentemente, la invención contempla secuencias de polipéptidos que poseen al menos 95% o más de homología de secuencia, más preferentemente al menos 98% o más de homología de secuencia y aún más preferentemente al : menos 99% o más de homología de secuencia con una o más de las secuencias de fragmentos de anticuerpos, regiones variables y CDR establecidas en la presente. Métodos para determinar la homología entre las secuencias de ácido nucleico y de aminoácido son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica .
En otra modalidad, la invención contempla adicionalmente los homólogos de polipéptidos antemencionados de los fragmentos de anticuerpo, regiones variables y CDR establecidas en la presente que poseen actividad IL-6 adicional. Ejemplos no limitantes de la actividad anti-IL-6 tal como se establece en la presente, por ejemplo, bajo el titulo "Actividad anti-IL-6" más adelante.
En otra modalidad, la invención contempla adicionalmente la creación y el uso de anticuerpos anti-idiotipicos que se unen a cualquiera de las secuencias precedentes. En una modalidad ejemplar, este anticuerpo anti-idiotipico puede administrarse al sujeto que recibió un anticuerpo anti-IL-6 para modular, reducir o neutralizar el efecto del anticuerpo anti-IL-6. Dichos anticuerpos anti-idiotipicos también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades autoinmunes caracterizadas por la presencia de anticuerpos anti-IL-6. Un ejemplo de uso adicional de tales anticuerpos anti-idotipicos es la detección de anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención, por ejemplo, monitorear los niveles de antic.uerpos anti-IL-6 presentes en la sangre de un sujeto u otros fluidos corporales .
La presente invención también contempla anticuerpos ' anti-IL-6 que comprenden cualquiera de las secuencias de polipéptidos o polinucleótidos descritas en la presente sustituidas por cualquier otra secuencia de polinucleótidos descrita en la misma. Por ejemplo y sin limitación a ellos, la presente invención contempla anticuerpos que comprenden la combinación de cualesquiera secuencias de cadena ligera variable y pesada variable descritas en la presente y contempla adicionalmente anticuerpos que resultan de la sustitución de cualquier secuencia de CDR descrita en la presente por cualquier secuencias de CDR descrita en la misma.
Ejemplos de modalidades adicionales de la invención En otra modalidad, la invención contempla uno o más anticuerpos o fragmento de anticuerpo anti-IL-ß que puede unirse específicamente al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir para unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 humana intacta o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes mencionados) que se unen específicamente a la IL-6, que preferentemente son aglicosilados . En una modalidad preferida, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento del mismo puede unirse específicamente al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o competir por unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 humana intacta o un fragmento del mismo como Abll o un anticuerpo que comprende las CDR de Abl.
En otra modalidad de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 que puede unirse específicamente a los mismos epítopos lineales o conformacionales en un polipéptido de IL-6 intacta o un fragmento del mismo que está unido específicamente por Abl, puede unirse a un/unos epítopo/s determinados por el mapeo epitópico usando fragmentos del polipéptido lineales superpuestos que abarcan todo el largo del polipéptido de IL-6 humana nativa. En una modalidad de la invención, el epítopo de IL-6 comprende, o de manera alternativa consiste en une o más residuos comprendidos en fragmentos de IL-6 seleccionados a partir de aquellos que comprenden respectivamente residuos de aminoácidos 37-51, residuos de aminoácidos 70-84, residuos aminoácidos 169-183, residuos de aminoácidos 31-45 y /o residuos de aminoácidos 58-72.
La invención también se dirige a un anticuerpo anti-IL-6 que se une al/a los mismo (s) epítopo (s) y/o compite/n con un anticuerpo anti-IL-6 para unirse a IL-6 como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo descrito en la presente, incluido pero sin limitación, un anticuerpo anti-IL-6 seleccionado a partir de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados, de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes mencionados) que se unen específicamente a la IL-6, que preferentemente son aglicosilados .
En otra modalidad, la invención también se dirige a un anticuerpo anti-IL-6 aislado o un fragmento de anticuerpo que comprende una o más de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptido de VH que comprenden: SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, o 708; y/ una o más de las CDR contenidas en la secuencia de polipéptidos de VL que comprenden: 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o: 709 y las secuencias VH y VL descritas en las alineaciones de anticuerpo comprendidas en las Figuras 34-37 de esta solicitud.
En una modalidad de la invención, el anticuerpo antí-IL-6 analizado en los dos párrafos anteriores o fragmento de anticuerpo puede comprender al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas :en un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, ;Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados y de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos antes mencionados) que se unen específicamente a IL-6, que preferentemente son aglicosilados .
En una modalidad preferida, el anticuerpo anti-IL-6 al que se hizo referencia anteriormente comprende al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ; ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas en Abl. En otra modalidad, todas las CDR del anticuerpo anti-IL-6 a las que se hizo referencia anteriormente son idénticas a las CDR contenidas en una anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7 , Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, ;Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpos quiméricos, humanizados y de cadena simple y fragmentos de los mismos (que contienen una o más CDR de los anticuerpos 'antes mencionados) que se unen específicamente a IL-6, que preferentemente son aglicosilados. En una modalidad preferida de la invención, todas las CDR del anticuerpo anti-IL-6 analizadas anteriormente son idénticas a las CDR contenidas en Abl, por e . un anticuerpo que comprende las secuencias VH y VL comprendidas en la SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 respectivamente, o anticuerpos que comprenden una combinación de la secuencia humanizada contenida en las Figuras 34-37.
La invención contempla adicionalmente que el/los anticuerpo/s anti-IL-6 analizado/s anteriormente es/son aglicosilado/s que contiene/n una región Fe que fue modificada para alterar la función efectora, semivida, proteólisis y/o glicolisación; es/son humano/s, humanizado/s , de cadena simple o quimérico/s; y son un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo anti-IL-6 de conejo (progenitor). Ejemplos de regiones constantes que prevén la producción de anticuerpos aglicosilados en Pichia están comprendidos en la SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586 que se codifican respectivamente por las secuencias de ácido nucleico en la SEQ ID NO: 589 y SEQ ID NO: 587.
La invención contempla adicionalmente uno o más anticuerpos donde las regiones flanqueantes (FR) en la .región ligera variable y regiones pesadas variables de dicho anticuerpo son respectivamente una FR humana sin modificar o que han sido modificadas mediante la sustitución de como máximo 2 o 3 residuos FR humanas en la región de cadena ligera o pesada variables con los correspondientes residuos FR del anticuerpo de conejo progenitor y donde dichas FR humanas se derivan de secuencias de anticuerpo de cadena pesada y ligera variables que han sido seleccionadas de una biblioteca de secuencias de anticuerpo germinales humanas basándose en su alto nivel de homología con las correspondientes regiones de cadena pesada o ligera variables de conejo relativas a otras secuencias de anticuerpo germinales humanas contenidas en la biblioteca .
En una modalidad de la invención, el anticuerpo anti-IL-6 o fragmento del mismo puede unirse específicamente a células humanas gue expresan IL-6 y/o o a moléculas solubles gue circulan en IL-6, incluidas IL-6 expresadas en o por células humanas en un paciente gue padece una enfermedad asociada con células que expresan IL-6.
En otra modalidad, la enfermedad se selecciona de fatiga general, fatiga inducida por el ejercicio, fatiga relacionada con el cáncer, fatiga relacionada con enfermedad inflamatoria, síndrome de fatiga crónica, fibromialgia, caquexia cancerosa, caquexia cardíaca, caquexia respiratoria, caquexia renal, caquexia relacionada con la edad, artritis reumatoide, ' lupus eritematoso sistémico (SLE) , artritis idiopática juvenil sistémica, psoriasis, artropatía psoriásica, espondilitis anquilosante, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), polimialgia reumática, arteritis de células gigantes, vasculitis autoinmune, enfermedad crónica de injerto versus huésped (GVHD) , síndrome de Sjogren, enfermedad de Still de comienzo en el adulto, artritis reumatoide, artritis idiopática juvenil sistémica, osteoartritis , osteoporosis , enfermedad ósea de Paget, osteoartritis, mieloma múltiple, linfoma de Hodgkin, linfoma no-Hodgkin, cáncer de próstata, leucemia, cáncer de células renales, enfermedad de Castleman multicéntrica, cáncer de ovario, tolerancia a fármacos en quimioterapia contra el cáncer, toxicidad de quimioterapia contra el cáncer, enfermedad cardiaca isquémica, ateroesclerosis , obesidad, diabetes, asma, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad cerebrovascular, fiebre, respuesta de fase aguda, alergias, anemia, anemia de inflamación (anemia de enfermedad crónica) , hipertensión, depresión, depresión asociada con enfermedad crónica, trombosis, trombocitosis, insuficiencia cardiaca aguda, síndrome metabólico, abortos naturales, obesidad, prostatitis crónica, glomerulonefritis, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión, rechazo de transplante, enfermedad de injerto versus huésped (GVHD) , gripe aviar, viruela, gripe pandémica, síndrome de distrés respiratorio del adulto (ARDS) , síndrome respiratorio agudo severo (SARS), sepsis y síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) . En una modalidad preferida, la enfermedad se selecciona de cáncer, trastorno inflamatorio, trastorno viral o trastorno autoinmune. En una modalidad particularmente preferida, la enfermedad es artritis, caquexia y síndrome consuntivo.
La invención contempla adicionalmente anticuerpos o fragmentos anti-IL-6 directa o indirectamente unidos a una etiqueta detectable o agente terapéutico.
La invención también contempla una o más secuencias de ácido nucleico que da como resultado la expresión de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 tal como se estableció anteriormente, incluidas aquellas que comprenden, o de manera alternativa consisten en, codones preferidos de levadura o humanos. La invención también contempla vectores (incluidos vectores plásmidos o recombinantes virales) que comprenden dicha/s secuencia/s de ácido nucleico. La invención también contempla células hospedadoras o células hospedadoras recombinantes que expresan al menos uno de los anticuerpos establecidos anteriormente, incluidas células de mamíferos, de levadura, bacteriana y de insectos. En una modalidad preferida, la célula hospedadora es una célula de levadura. En una modalidad preferida adicional, la célula de levadura es una célula de levadura diploide. En una modalidad aun más preferida, la célula de levadura es una célula Pichia.
La invención también contempla un método de tratamiento que comprende administrar a un paciente que padece una enfermedad o afección asociada con células que expresan ' IL-6, una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un anticuerpo o fragmento de IL-6. Las enfermedades que pueden tratarse se presentan en la lista no taxativa establecida anteriormente. En una modalidad preferida, la enfermedad se selecciona de cáncer, enfermedad autoinmune o afección inflamatoria. En una modalidad particularmente preferida, la enfermedad es cáncer o infección viral. En otra modalidad, el tratamiento incluye adicionalmente la administración de otro agente o régimen terapéutico seleccionado a partir de quimioterapia, radioterapia, administración de citocina o terapia génica.
La invención contempla adicionalmente un método de imágenes in vivo que detecta la presencia de células que expresan IL-6 que comprende administrar una cantidad efectiva desde el punto de vista del diagnóstico de al menos un anticuerpo anti-IL-6. En una modalidad, dicha administración incluye adicionalmente la administración de un radionúclido o fluoróforo que facilita la detección del anticuerpo en sitios de la enfermedad que expresan IL-6. En otra modalidad de la invención, el método de imágenes in vivo se utiliza para detectar tumores o metástasis que expresan IL-6 o se usa para detectar la presencia de sitios de trastornos autoinmunes asociados con células que expresan IL-6. En una modalidad adicional, los resultados de tal método de imágenes in vivo se usan para facilitar el diseño de un régimen terapéutico apropiado que incluye regímenes terapéuticos incluyendo radioterapia, quimioterapia o una combinación de estos.
Polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpo anti-IL-6 La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACÁG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT (SEQ ID NO: 10) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGGGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGT|CTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG (SEQ ID NO: 11) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 12; SEQ ID NO: 13; y SEQ ID NO: 14 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 15; SEQ ID NO: 16; y SEQ ID NO: 17 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable; de la SEQ ID NO: 3.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en .la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 10) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 2; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 11 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 3; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; y SEQ ID NO: 14) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 10; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16; y SEQ ID NO: 17) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 11 y polinucleótidos que codifican las secuencias de cadena ligera y pesada variable en SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709 respectivamente, por ej . , las secuencias de ácido nucleico en SEQ ID NO: 700 y SEQ ID NO,: 723 y fragmentos o variantes de los mismos, por ej . , basados en la degeneración de codones . Estas secuencias de ácido nucleico que codifican secuencias de cadena pesada y ligera variables pueden expresarse solas o en combinación y estas secuencias preferentemente se fusionan a secuencias constantes variables adecuadas, por ej . , aquellas en SEQ ID NO: 589 y SEQ ID NÚ: 587.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAG (SEQ ID NO: 29) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCGAGGGA AGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAG AAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTG ATCCCTGGGGCCCAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCT TCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AG (SEQ ID NO: 30) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 31; SEQ ID NO: 32; y SEQ ID NO: 33 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 34; SEQ ID NO: 35; y SEQ ID NO: 36 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 29) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 21; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 30 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 22; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; y SEQ ID NO: 33) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 29; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; y SEQ ID NO: 36) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 30.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCGTGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGT.GCAGT GTGACGATGCTGCCACTTAC.TATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCCTTCG GCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT (SEQ ID NO: 45) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACCCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGTCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATC TCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG (SEQ ID NO: 46) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 47; SEQ ID NO: 48; y SEQ ID NO: 49 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 50; SEQ ID NO: 51; y SEQ ID NO: 52 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos 1 todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 45) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 46 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; y SEQ ID NO: 49) de. la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 37; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 50; SEQ ID NO: 51; y SEQ ID NO: 52) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 38.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCATATGTGACCCTGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTATCTGCACCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGATTCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATTACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGGCTTCG GCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT (SEQ ID NO: 61) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54: ¦ ' ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTAACGCCTGGAGGAACCCTGACACTCACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGCCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGA AAGGCCGATTCACCTTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAC CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGG ATCTCTGGGGCCATGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCT TCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGG (SEQ ID NO: 62) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 63; SEQ ID NO: 64; y SEQ ID NO: 65 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable ^de la SEQ ID NO: 53. : En una modalidad adicional de la invención, , los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 66; SEQ ID NO: 67; y SEQ ID NO: 68 que corresponden a polinucleótidos que codifican^ las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54.
La invención ¦ también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 61) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 62 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 63; SEQ ID NO: 64; y SEQ ID NO: 65) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 53; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 66; SEQ ID NO: 67; y SEQ ID NO: 68) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 54.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCGCCTGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGCTGGTATCAGC AGAAACGAGGGCAGCCTCCCAAGTACCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT (SEQ ID NO: 77) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCÁGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCAGCTGCA CAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGG GGCTGGAGTGGATCGGAATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATCTGGGGCC AAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCC GGCAC CCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT (SEQ ID NO: 78) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codificán fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 79; SEQ ID NO: 80; y SEQ ID NO: 81 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69.
En una modalidad adicional de la invención/ los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 82; SEQ ID NO: 83; y SEQ ID NO: 84 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos !todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 77) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 78 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 79; SEQ ID NO: 80; y SEQ ID NO: 81) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 69; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 82; SEQ ID NO: 83; y SEQ ID NO: 84) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 70.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGTACCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCGTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGT.CCCAG ATAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC (SEQ ID NO: 93) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACGCTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATC GATTGGATCTCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCAT CGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACT (SEQ ID NO: 94).
En una modalidad adicional de la invención, i los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 95; SEQ ID NO: 96; y SEQ ID NO: 97 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CD , o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85. ; En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 98; SEQ ID NO: 99; y SEQ ID NO: 100 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos , todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 93) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 94 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 96; y SEQ ID NO: 97) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 85; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO: 99; y SEQ ID NO: 100) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 86.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAATGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAT CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC ' (SEQ ID NO: 109) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102: ¡ ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCTCAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG (SEQ ID NO: 110) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 111; SEQ ID NO: 112; y SEQ ID NO: 113 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable, de la SEQ ID NO: 101.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 114; SEQ ID NO: 115; y SEQ ID NO: 116 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable 'de la SEQ ID NO: 102.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 109) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 110 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 111; SEQ ID NO: 112; y SEQ ID NO: 113) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 101; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 114; SEQ ID NO: 115; y SEQ ID NO: 116) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 102.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden,; o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTGGTAATAACCAGGACTTATCCTGGTTTCAGC AGAGACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACGAAATATCCAAACTGGAATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACACTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTACAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT (SEQ ID NO: 130) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC ACTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCAQCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGTCGTACAATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGATTGGGCGATACTGGTGGTCACGCTTATGCTACTC GCTTAAATCTC (SEQ ID NO: 131) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 132; SEQ ID NO: 133; y SEQ ID NO: 134 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 135; SEQ ID NO: 136; y SEQ ID NO: 137 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 130) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 131 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 132; SEQ ID NO: 133; y SEQ ID NO: 134) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 122; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 136; y SEQ ID NO: 137) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 123.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAATAAGTACCTAGCCTGGTÁTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGACATCCAAACTGGCATCTGGGGCCC CATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAATTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTATGATGATGATGCTGATAATGCT (SEQ ID NO: 146) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAAGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTGGAGGGCGGCTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCAGTTATGATAGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGCGTCAGATCACTAAAATATCCTACTGTTACTTCTGATG ACTTG (SEQ ID NO: 147) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 148; SEQ ID NO: 149; y SEQ ID NO: 150 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138.
En una modalidad adicional de la invención,' los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 151; SEQ ID NO: 152; y SEQ ID NO: 153 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 146} que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 147 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 148; SEQ ID NO: 149; y SEQ ID NO: 150) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 138; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 151; SEQ ID NO: 152; y SEQ ID NO: 153) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 139.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleotidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATAACGACTTAGCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTCCTGATCTATTATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT (SEQ ID NO: 162) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCAGCTGCA CAGTATCTGGATTATCCCTCAGTAGCAATACAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGTACATACTACGCGAGCTGGGTGAATG GTCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTTACGCTAGTGGTGGTTATCCTTATGCCA CTCGGTTGGATCTC (SEQ ID NO: 163) . : En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 164; SEQ ID NO: 165; y SEQ ID NO: 166 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 167; SEQ ID NO: 168; y SEQ ID NO: 169 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencia's de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 162): que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 163 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 164; SEQ ID NO: 165; y SEQ ID NO: 166) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 154; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 167; SEQ ID NO: 168; y SEQ ID NO: 169) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 155.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170: ; ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACGACTACTTATCCTGGTATCAAC AGAGGCCAGGGCAACGTCCCAAGCTCCTAATCTATGGTGCTTCCAAACTGGCATCTGGGGTCC CGTCACGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGAAACAGTTTACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTGGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATACT (SEQ ID NO: 178) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACTTGCA CAGTCTCTGGATTCACCCTCAGTACCAACTACTACCTGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTAGAATGGATCGGAATCATTTATCCTAGTGGTAACACATATTGCGCGAAGTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGA CAACCGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGCCAGAAATTATGGTGGTGATGAAAGTTTG (SEQ ID NO: 179) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 180; SEQ ID NO: 181; y SEQ ID NO: 182 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable , de la SEQ ID NO: 170.
En una modalidad adicional de la invención,' los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 183; SEQ ID NO: 184; y SEQ ID NO: 185 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 178) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 179 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 180; SEQ ID NO: 181; y SEQ ID NO: 182) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 170; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 183; SEQ ID NO: 184; y SEQ ID NO: 185) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 171.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleotidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGACCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAAT CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT (SEQ ID NO: 194) En otra modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCACTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCT GCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCGTGTATTTTCACTATTACTACTAACACTTACTACGCGAGCT GGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATCTCTGTGCGAGAGGGATTTATTCTGATAATAATT ATTATGCCTTG (SEQ ID NO: 195).
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo1 que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 196; SEQ ID NO: 197; y SEQ ID NO: 198 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 199; SEQ ID NO: 200; y SEQ ID NO: 201 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 194) que codifica la región. de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 195 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 196; SEQ ID NO: 197; y SEQ ID NO: 198) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 186; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 199; SEQ ID NO: 200; y SEQ ID NO: 201) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 187.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCGATCGC GGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGCCG ATGCTGCCGCTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT (SEQ ID' NO: 210)' En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGCAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCGGGGGCATCCCTGACACTCACCT GCAAAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTCGATCGCATGCATTTTTACTATTACTGATAACACTTACTACGCGAACT GGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGCCCTCGTCGCCCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGGGGGATTTATTCTACTGATAATT ATTATGCCTTG (SEQ ID NO: 211).
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 212; SEQ ID NO: 213; y SEQ ID NO: 214 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable ;de la SEQ ID NO: 202.
En una modalidad adicional de la invención, 1 los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 215; SEQ ID NO: 216; y SEQ ID NO: 217 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 210) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 211 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203;; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 212; SEQ ID NO: 213; y SEQ ID NO: 214) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 202; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 215; SEQ ID NO: 216; y SEQ ID NO: 217) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 203.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCGTTAGTAGCTACTTAAACTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGTACTTATGGTACTAGTAGTAGTTATGGTGCTGCT (SEQ ID NO: 226) En otra modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CCGTCTCTGGTATCTCCCTCAGTAGCAATGCAATAAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTAGTTATAGTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACTAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGATGACCCTACGACAGTTATGGTTATGTTGA TACCTTTTGGAGCCGGCATGGACCTC (SEQ ID NO: 227).
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 228; SEQ ID NO: 229; y SEQ ID NO: 230 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 231; SEQ ID NO: 232; y SEQ ID NO: 233 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219. : La invención también contempla secuencias, de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 226) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 227 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 228; SEQ ID NO: 229; y SEQ, ID NO: 230) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 218; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 231; SEQ ID NO: 232; y SEQ ID NO: 233) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 219.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCGAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAAGGCCTGATCTATTCTGCATCGACTCTAGATTCTGGGGTCC CATTGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTATG CT (SEQ ID NO: 242) : En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden,¦ o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCTACTGGATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGCATGCATTGTTACTGGTAATGGTAACACTTACTACGCGAACTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGA CAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTTTGTGCGAAAGCCTATGACTTG (SEQ ID NO: 243) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 244; SEQ ID NO: 245; y SEQ ID NO: 246 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable , de la SEQ ID NO: 234.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 247; SEQ ID NO: 248/ y SEQ ID NO: 249 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 242) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 243 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235,· los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 244; SEQ ID NO: 245; y SEQ ID NO: 246) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 234; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 247; SEQ ID NO: 248; y SEQ ID NO: 249) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 235.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTT CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTATTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGACAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCACGGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTTTAATGATGATAGTGATGATGCC · (SEQ ID NO: 258) En otra modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCCCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CACTCTCTGGATTCTCCCTCAGTGCATACTATATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAGTGATCATATATCTTACGCGAGGTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATC TC (SEQ ID NO: 259) . ; En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 260; SEQ ID NO: 261; y SEQ ID NO: 262 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden,' o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 263; SEQ ID NO: 264; y SEQ ID NO: 265 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable; de la SEQ ID NO: 251.
La invención también contempla secuencias* de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos ;todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 258) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250; el polinucleótido de la SEQ ID ¦. O: 259 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 260; SEQ ID NO: 261; y SEQ ID NO: 262) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 250; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 263; SEQ ID NO: 264; y SEQ ID NO: 265) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 251.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-ß. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden,; o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTCGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCGGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAACAACAAAAATTTAGCCTGGTATCAGC AGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCT CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCGTCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGTTTTTGATGATGATGCTGATAATGCT (SEQ ID NO: 274) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATATATCGGAGTCATTGGTACTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGCTCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGGAGTCTTTCTTCTATTACTTTCTTG (SEQ ID NO: 275) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 276/ SEQ ID NO: 277; y SEQ ID NO: 278 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 279; SEQ ID NO: 280; y SEQ ID NO: 281 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de. complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En ' una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 274) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 275 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 276; SEQ ID NO: 277; y SEQ ID NO: 278) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 266; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 279; SEQ ID NO: 280; y SEQ ID NO: 281) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 267.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTATAGATACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTATCTGGCATCTACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTTAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGTTATTATAGTAGTAATAGTGTCGCT ( SEQ ID NO: 290) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCT GCACAGCTTCTGAGTTAGACTTCAGTAGCGGCTACTGGATATGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTATACTGGTAGTAGTGGTAGCACTTTTTACGCGA GTTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGA CCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGGTTATAGTGGCTT GGTT ACTTTAAGTTG (SEQ ID NO: 291) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 292; SEQ ID NO: 293; y SEQ ID NO: 294 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 295; SEQ ID NO: 296; y SEQ ID NO: 297 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable1 de la SEQ ID NO: 283.
La invención también contempla secuencias ' de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 290) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 291 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 292; SEQ ID NO: 293; y SEQ ID NO: 294) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 282; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 295; SEQ ID NO: 296; y SEQ ID NO: 297) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 283.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden> o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298 : ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTATAGGTTATTGGCCTGGTATCAACÁGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATTCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCGCCATCAGCGGTGTGCAGTGJGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGCTTGGAGTTATAGTGATATTGATAATGCT ( SEQ ID NO: 306) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCGGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTACTAGTGGTAATACATTTTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGGCTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAACTTCTGATATTTTTTATTATCGTAACTTG (SEQ ID NO: 307) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 308; SEQ ID NO: 309; y SEQ ID NO: 310 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298. ; En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 311; SEQ ID NO: 312; y SEQ ID NO: 313 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos , todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 306) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 307 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 308; SEQ ID NO: 309; y SEQ ID NO: 310) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 298; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 311; SEQ ID NO: 312; y SEQ ID NO: 313) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 299.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACGTTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACTGCATCACCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATGACATGGACTTAGCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTTTGATGATGATGCTGATAATACT (SEQ ID NO: 322) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la ' siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACGTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCACTAGGCATGCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATGCATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTCAGAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGTCATTGGCGATACTGCTGGTTATGCTTATTTTA CGGGGCTTGACTTG (SEQ ID NO: 323) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 324; SEQ ID NO: 325; y SEQ ID NO: 326 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 327; SEQ ID NO: 328; y SEQ ID NO: 329 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable, de la SEQ ID NO: 315.
La invención también contempla secuencias de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 322) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 323 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 324; SEQ ID NO: 325; y SEQ ID NO: 326) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 314; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 327; SEQ ID NO: 328; y SEQ ID NO: 329) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 315.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTAGTGATGTTGATAATGTT (SEQ ID NO: 338) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGGCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATACATCGGAATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCACAAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATTACCAGTCCGACAA CCGAGGACTCGGCCACATATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTGGTGGTGTTTGGCTGC TTGATGGTTTTGATCCC (SEQ ID NO: 339) .
En una modalidad adicional de la invención, ¡ los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias' de polinucleótidos de la SEQ ID NO 340; SEQ ID NO: 341; y SEQ ID NO: 342 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 343; SEQ ID NO: 344; y SEQ ID NO: 345 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 338) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 339 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 340; SEQ ID NO: 341; y SEQ ID NO: 342) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 330; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 343; SEQ ID NO: 344; y SEQ ID NO: 345) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 331.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAAATGTGCCGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCA CAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAATTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGTAGGCGATCTGGCATCTGGGGTCTCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTG CCGATGCTGCCACTTACTATTGTCAACAGGGTTATAGTAGTAGTTATGTTGATAATGTT (SEQ ID NO: 354) En otra modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucléotidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCT GCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATGACTATGCAGTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTCGTAGTAGTGGTACCACAGCCTACGCGACCTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCGCTACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTAGTGGTGTGTGGATCC TTGATGGTTTTGCTCCC (SEQ ID NO: 355) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de , manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 356; SEQ ID NO: 357; y SEQ ID NO: 358 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 359; SEQ ID NO: 360; y SEQ ID NO: 361 que corresponden a polinucléotidos que codificán las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable. de la SEQ ID NO: 347.
La invención también contempla secuencias ( de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 354) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 355 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 356; SEQ ID NO: 357; y SEQ ID NO: 358) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 346; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 359; SEQ ID NO: 360; y SEQ ID NO: 361) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 347.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCTCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCAGAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCGGCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTTATAGGGATGTGGATTCT (SEQ ID NO: 370) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCTTTACTAGTACCTACTACATCTACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCATGTATTGATGCTGGTAGTAGTGGTAGCACTTACTACGCGACCT GGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAAATGGGATTATGGTGGTAATGTTG GTTGGGGTTATGACTTG (SEQ ID NO: 371) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 372; SEQ ID NO: 373; y SEQ ID NO: 374 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable ,de la SEQ ID NO: 362.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 375; SEQ ID NO: 376; y SEQ ID NO: 377 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos , todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 370) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 371 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 372; SEQ ID NO: 373; y SEQ ID NO: 374) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 362; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 375; SEQ ID NO: 376; y SEQ ID NO: 377) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 363.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGTTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTACAGGGCGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATTATGATAGTGTTTCAAATCCT (SEQ ID NO: 386) : En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCA AAGCCTCTGGACTCGACCTCGGTACCTACTGGTTCATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCTTGTATTTATACTGGTAGTAGTGGTTCCACTTTCTACGCGAGCT GGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACTTATTTTTGTGCGAGAGGTTATAGTGGTTATGGTTATT TTAAGTTG (SEQ ID NO: 387) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 388; SEQ ID NO: 389; y SEQ ID NO: 390 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 391; SEQ ID NO: 392; y SEQ ID NO: 393 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable 'de la SEQ ID NO: 379. i La invención también contempla secuencias de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucléotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 386) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 387 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 388; SEQ ID NO: 389; y SEQ ID NO: 390) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 378; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 391; SEQ ID NO: 392; y SEQ ID NO: 393) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 379. ¦ La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden,' o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG TCACATTTGCCATCGAAATGACCCAGAGTCCATTCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACCAATTATCCTGGTATCAGC AGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCGGCTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTATTACTGGTAGTATTGATACGGATGGT (SEQ ID NO: 402) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCA CAACTTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCAGCTACTTCATTTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCATGCATTTATGGTGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGG CGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACGCTGCAAATGACCAGTC TGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGAATGGGCATATAGTCAAGG.TTATT TTGGTGCTTTTGATCTC (SEQ ID NO: 403) .
En una modalidad adicional de la invención, 1 los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 404; SEQ ID NO: 405; y SEQ ID NO: 406 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 407; SEQ ID NO: 408; y SEQ ID NO: 409 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable, de la SEQ ID NO: 395.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos ! todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 402) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 403 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 404; SEQ ID NO: 405; y SEQ ID NO: 406) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 394; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 407; SEQ ID NO: 408; y SEQ ID NO: 409) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 395.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-ß. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGATATTAGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCATCGC GATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTG;TGCCG ATGCTGCCACCTATTACTGTCAATGTACTTATGGTACTATTTCTATTAGTGATGGTAA GCT (SEQ ID NO: 418) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCTTACTACGCGAGCTGGGTGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAGTCCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTGATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC (SEQ ID NO: 419) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 420; SEQ ID NO: 421; y SEQ ID NO: 422 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpp que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 423; SEQ ID NO: 424; y SEQ ID NO: 425 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411.
La invención también contempla secuencias , de polinucléotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 418) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 419 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 420; SEQ ID NO: 421; y SEQ ID NO: 422) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 410; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 423; SEQ ID NO: 424; y SEQ ID NO: 425) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 411. ; La invención se dirige adicionalmente a polinucleó'tidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden,; o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCÁGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTGAAAGCTATCTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTATTGTCAATGCACTTATGGTATTATTAGTATTAGTGATGGTAATGCT (SEQ ID NO: 434) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATGAATACTGGTGATAACGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTTGTTGTTGCTTATGGAGCCTTTAA'CATC (SEQ ID NO: 435) . i En una modalidad adicional de la invención, < los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 436; SEQ ID NO: 437; y SEQ ID NO: 438 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 439; SEQ ID NO: 440; y SEQ ID NO: 441 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos jtodos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 434); que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 435 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 436; SEQ ID NO: 437; y SEQ ID NO: 438) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 426; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 439; SEQ ID NO: 440; y SEQ ID NO: 441) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 427.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTAAGAGTGTTATGAATAACAACTACTTAGCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGCATCTGGGGTCC CATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCGGTTATACTGGTTATAGTGATCATGGGACT (SEQ ID NO: 450) : En otra modalidad de la invención, los polinucleótidbs de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATCCAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTAATACTGGTGGTACCATAGTCTACGCGAGCTGGGCAAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCAGTTATGTTTCATCTGGTTATGCCTACTATT TTAATGTC (SEQ ID NO: 451).
En una · modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 452; SEQ ID NO: 453; y SEQ ID NO: 454 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442.
En una modalidad adicional de la invención, : los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 455; SEQ ID NO: 456; y SEQ ID NO: 457 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443.
La invención también contempla secuencias · de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 450) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 451 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 452; SEQ ID NO: 453; y SEQ ID NO: 454) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 442; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 455; SEQ ID NO: 456; y S,EQ ID NO: 457) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 443. ' La invención se dirige adicionalmente a polinucleotidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad dé la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, ; o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458: : ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTGGTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGTTGCCACTTACTACTGTGCGGGCGGTTATCTTGATAGTGTTATT (SEQ ID NO: 466) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipépt.ido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATTCAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAATGGATCGGAATCATTGCTAATAGTGGTACCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGAGAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGAGTGGAATGTACAATGAATATGGTAAATTTA ACATC (SEQ ID NO: 467) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 468; SEQ ID NO: 469; y SEQ ID NO: 470 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 471; SEQ ID NO: 472; y SEQ ID NO: 473 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesadá variable de la SEQ ID NO: 459.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 466) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 467 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459'; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 468; SEQ ID NO: 469; y SEQ ID NO: 470) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 458; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 471; SEQ ID NO: 472; y SEQ ID NO: 473) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 459.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAAGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT ( SEQ ID NO: 482) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCT ACTTTAACGTC (SEQ ID NO: 483) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 484; SEQ ID NO: 485; y SEQ ID NO: 486 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474.
En una modalidad adicional de la invención,' los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 487; SEQ ID NO: 488; y SEQ ID NO: 489 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable :de la SEQ ID NO: 475.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 482.) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 483 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 484; SEQ ID NO: 485; y SEQ ID NO: 486) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 474; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 487; SEQ ID NO: 488; y SEQ ID NO: 489) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 475.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAGGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT (SEQ ID NO: 498) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCT ACTTTAACGTC (SEQ ID NO: 499) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 500; SEQ ID NO: 501; y SEQ ID NO: 502 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 503; SEQ ID NO: 504; y SEQ ID NO: 505 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 498) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 499 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 49 ; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 500; SEQ ID NO: 501; y SEQ ID NO: 502) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 490; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 503; SEQ ID NO: 504; y SEQ ID NO: 505) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 491.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden/ o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCATTGAAATGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTGTTTTTAATAATATGTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCACTCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGGAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGGTATAAAAGTGATAGTAATGATGGCGATAATGTT (SEQ ID NO: 514) : En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAACAGGAATTCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTGGTAGTGGTAGAACGTACTACGCGAACTGGGCAAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCCATCCTGGTCTTGGTAGTGGTAACATC (SEQ ID NO: 515) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 516; SEQ ID NO: 517; y SEQ ID NO: 518 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506. j En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 519; SEQ ID NO: 520; y SEQ ID NO: 521 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en ,.la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 514) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 515 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 516; SEQ ID NO: 517; y SEQ ID NO: 518) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 506; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 519; SEQ ID NO: 520; y SEQ ID NO: 521) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 507.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCGCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGCCTGGCATCTGGGGTCCCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGAAGTGCAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTCCTATAATTACT (SEQ ID NO: 530) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATAACTACTACATACAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCGGGATCATTTATGCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGGGCAAACG GCCGATTCACCATCGCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAGATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGACATTTGATGGTTATGAGTTG (SEQ ID NO: 531) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 532; SEQ ID NO: 533; y SEQ ID NO: 534 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleotidos de la SEQ ID NO 535; SEQ ID NO: 536; y SEQ ID NO: 537 que corresponden a polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523.
La invención también contempla secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más secuencias de polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 530) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 531 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 532; SEQ ID NO: 533; y SEQ ID NO: 534) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 522; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 535; SEQ ID NO: 536; y SEQ ID NO: 537) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 523.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCTGTGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTGAGAGCGTTTATAGTAATAACCTCTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCAATCTGGCATCTGGTGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGCACAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTGTCATTAATAGT ( SEQ ID NO: 546) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAGTG GCCGACTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC (SEQ ID NO: 547) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 548; SEQ ID NO: 549; y SEQ ID NO: 550 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538. ; En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucléotidos de la SEQ ID NO 551; SEQ ID NO: 552; y SEQ ID NO: 553 que corresponden a polinucléotidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos' todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 546) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 538; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 547 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 548; SEQ ID NO: 549; y SEQ ID NO: 550) de la región de cadena ligera variable de la SEQ I;D NO: 538; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 551; SEQ ID NO: 552; y SEQ ID NO: 553) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 539.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleótidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad dé la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554: ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT ( SEQ ID NO: 562) En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAAGTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGAGAAGG GGCTGAAATACATCGGATACATTGATAGTACTACTGTTAATACATACTACGCGACCTGGGCGA GAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAGATCACCAGTCCGACAA GTGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGAAGTACTTATTTTACTGATGGAGGCCATC GGTTGGATCTC (SEQ ID NO: 563) .
En una modalidad adicional de la invención,1 los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 564; SEQ ID NO: 565; y SEQ ID NO: 566 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554.
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 567; SEQ ID NO: 568; y SEQ ID NO: 569 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 562): que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 563 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555; los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 564; SEQ ID NO: 565; y SEQ ID NO: 566) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 554; y los polinucleotidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 567; SEQ ID NO: 568; y SEQ ID NO: 569) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 555.
La invención se dirige adicionalmente a polinucleotidos que codifican polipéptidos de los anticuerpos que poseen una especificidad de unión a IL-6. En una modalidad de la invención, los polinucléotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleotidos que codifican una secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570: ; ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT ; (SEQ ID NO: 578) En otra modalidad de la invención, los polinucleotidos de la invención comprenden, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571: ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACAACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAAGTATTACTATTGATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAAGCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCG GGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGGGCCTTTACCATC (SEQ ID NO: 579) .
En una modalidad adicional de la invención, los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 580; SEQ ID NO: 581; y SEQ ID NO: 582 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable > de la SEQ ID NO: 570.
En una modalidad adicional de la invención,' los polinucléotidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en una o más secuencias de polinucleótidos de la SEQ ID NO 583; SEQ ID NO: 584; y SEQ ID NO: 585 que corresponden a polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de complementariedad (CDR, o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571.
La invención también contempla secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más secuencias de polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo descritos en la presente. En una modalidad de la invención, los polinucleótidos que codifican fragmentos del anticuerpo que posee una especificidad de unión a IL-6 comprenden, o de manera alternativa consisten en, uno, dos, tres o más, incluidos todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpo: el polinucleótido de la SEQ ID NO: 578) que codifica la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570; el polinucleótido de la SEQ ID NO: 579 que codifica la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571; los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 580; SEQ ID NO: 581; y SEQ ID NO: 582) de la región de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 570; y los polinucleótidos que codifican regiones determinantes de complementariedad (SEQ ID NO: 583; SEQ ID NO: 584; y SEQ ID NO: 585) de la región de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 571.
En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden adicionalmente, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de cadena ligera constante kappa de la SEQ ID NO: 586: GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGG TGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACA GCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCT ACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG AGTGT (SEQ ID NO: 587) .
En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden adicionalmente, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada constante gamma-1 de la SEQ ID NO: 588: GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCGTGGGACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGAC TCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT GCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTG ACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCC TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGG TGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG TGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCG TCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACA AAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAÁCCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGC TCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGG CTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA (SEQ ID NO: 589) .
En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden adicionalmente, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena pesada variable de la SEQ ID NO: 700: GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAC TCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTC CAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCT CCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGA ACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGG ATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 700).
En otra modalidad de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden adicionalmente, o de manera alternativa consisten en la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptido de cadena ligera variable de la SEQ ID NO: 723: GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGÁGTCA CCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAG GGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGT TCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATT TTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAG GGACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO : 723).
En una modalidad, la invención se dirige a un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido que codifica un anticuerpo de aminoácido anti-IL-ß VH seleccionado de la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475; 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, o 708 o codifica una variante de la misma donde al menos un residuo flanqueante (residuo FR) fue sustituido por un aminoácido presente en la posición correspondiente en un polipéptido de VH de anticuerpo anti-IL-6 de conejo o una sustitución conservadora de aminoácidos. ¦ En otra modalidad, la invención se dirige a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de polinucleótidos que codifica una secuencia de aminoácido de anticuerpo anti-IL-6 VL seleccionado de la SEQ ID NO: 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378,; 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570,. 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702:, 706 o 709 o codifica una variante de la misma donde al menos un residuo flanqueante (residuo FR) fue sustituido por un aminoácido presente en la posición correspondiente en un polipéptido de VL de anticuerpo anti-IL-6 de conejo o una sustitución conservadora de aminoácidos.
En aun otra modalidad, la invención se dirige a uno o más polinucleótidos heterólogos que comprenden una secuencia que codifica los polipéptidos contenidos en la SEQ ID NO: 2 y SEQ ID N0:3; SEQ ID NO : 2 y SEQ ID N0:18; SEQ ID N0:2 y SEQ ID N0:19; SEQ ID NO:20 y SEQ ID N0:3; SEQ ID NO:20 y SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO:20 y SEQ ID NO:19; SEQ ID NO:21 y SEQ ID NO:22; SEQ ID' NO:37 y SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 53 y SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 69 y SEQ ID NO: 70; SEQ : ID NO:85 y ' SEQ IC ) NO > : 86 ; SEQ ID NO: 101 y SEQ ID NO: 102; SEQ ID NO: 101 y SEQ ID NO: 117; SEQ ID NO: 101 y SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 119 y SEQ ID NO: 102; SEQ ID NO: 119 y SEQ ID NO: 117; SEQ ID NO: 119 y SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 122 y SEQ ID NO: 123; SEQ ID NO: 138 y SEQ ID NO: 139; SEQ ID NO: 154 y SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 170 y SEQ ID NO: 171; SEQ ID NO: 186 y SEQ ID NO: 187; SEQ ID NO: 202 y SEQ ID NO: 203; SEQ ID NO: :218 y SEQ ID NO: 219; SEQ ID NO: 234 y SEQ ID NO: 235; SEQ ID NO: :250 y SEQ ID NO: 251; SEQ ID NO: 266 y SEQ ID NO: 267; SEQ ID NO: :282 y SEQ ID NO: 283; SEQ ID NO: 298 y SEQ ID NO: 299; SEQ ID NO: :314 y SEQ ID NO: 315; SEQ ID NO: 330 y SEQ ID NO: 331; SEQ ID NO: ;346 y SEQ ID NO: 347; SEQ ID NO: 362 y SEQ ID NO: 363; SEQ ID NO: :378 y SEQ ID NO: 379; SEQ ID NO: 394 y SEQ ID NO: 395; SEQ ID NO: : 410 y SEQ ID NO: 411; SEQ ID NO: 426 y SEQ ID NO: 427; SEQ ID NO: : 442 y SEQ ID NO: 443; SEQ ID NO: 458 y SEQ ID NO: 459; SEQ ID NO: 474 y SEQ ID NO: 475; SEQ ID NO: 490 y SEQ ID NO: 491; SEQ ID NO: 506 y SEQ ID NO: 507; SEQ ID NO: 522 y SEQ ID NO: 523; SEQ ID NO: 538 y SEQ ID NO: 539; SEQ ID NO: 554 y SEQ ID NO: 555; o SEQ ID NO: 570 y SEQ ID NO:571.
En otra modalidad, la invención se dirige a un polinucleótido aislado que expresa un polipéptido que contiene al menos un polipéptido de CDR derivado de un anticuerpo anti-IL-6 donde dicho polipéptido expresado se une . solo específicamente a IL-6 o se une específicamente a IL-6 cuando se expresa asociado con otra secuencia de polinucleótidos que expresa un polipéptido que contiene al menos un polipéptido de CDR derivado de un anticuerpo anti-IL-6 donde al menos una de las CDR se selecciona de aquellas contenidas en los polipéptidos de VL o VH contenidos en la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54 , 70 , 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171,; 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, . 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555,; 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, 708, 2 , 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, ; 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709. Ejemplos dé las secuencias de ácido nucleico que codifican los polipéptidos de VH y VL, SEQ ID NO: 657 y SEQ ID NO: 709, están comprendidas en la SEQ ID NO: 700 y SEQ ID NO: 723, respectivamente.
También se contemplan células ospedadoras y vectores que comprenden dichos polinucleótidos .
En otra modalidad especifica, la invención abarca construcciones de ácido nucleico que contienen cualquiera de las secuencias de ácido nucleico precedentes y combinaciones de las mismas asi como células recombinantes que contienen estas secuencias y construcciones de ácido nucleico y donde estas secuencias o construcciones de ácido nucleico pueden ser extracromosomales o estar integradas en el genoma de la célula hospedadora .
La invención contempla adicionalmente vectores que comprenden secuencias de polinucleótidos que codifican secuencias de polipéptido de cadena ligera y pesada variable, asi como las regiones determinantes de complementariedad (CDR o regiones hipervariables) individuales establecidas en la presente, asi como células hospedadoras que comprenden dichas secuencias. En una modalidad de la invención, la célula hospedadora es una célula de levadura. En otra modalidad de la invención, la célula hospedadora de levadura pertenece al género Pichia.
En algunos casos se proporciona más de un ejemplo de polinucleótido que codifica una secuencia de polipéptidos determinada, tal como se resume en la Tabla 3.
Tabla 3. Múltiples ejemplos de polinucleotidos que codifican polipéptidos particulares. 431 423, 439 461 213, 469, 485 475 483, 499 476 484, 500 477 213, 469, 485 478 486, 502 479 487, 503 480 488, 504 481 489, 505 491 483, 499 492 484, 500 493 13, 112, 389, 501 494 486, 502 495 487, 503 496 488, 504 497 489, 505 525 341, 533 545 553, 585 554 562, 578 556 564, 580 557 80, 325, 565, 581. 558 566, 582 570 562, 578 572 564, 580 573 80, 325, 565, 581 574 566, 582 577 553, 585 En algunos casos, identificadores de secuencia múltiple se refieren a la misma secuencia de polipéptido o polinucleótido, tal como se resumen en la Tabla 4. Se entiende que las referencias a estos identificadores de secuencias son intercambiables, salvo cuando el contexto indique lo contrario.
Tabla 4. Secuencias repetidas. Cada celda enumera un grupo de secuencias repetidas incluidas en el listado de secuencias .
SEQ ID NO DE SECUENCIAS REPETIDAS 4, 103 5, 104, 381, 493 6, 105 9, 108 12, 111 13, 112 14, 113 17, 116 39, 252 40, 253 48, 261 60, 257 68, 265 72, 317, 557, 573 80, 325, 565, 581 89, 126, 158 97, 134 , 166 120, 659 190, 206 191, 207 198, 214 199, 215 205, 461, 477 213, 469 333, 525 415, 431 423, 439 475, 491 476, 492 478, 494 479, 495 480, 496 481, 497 483, 499 484, 500 486, 502 487, 503 488, 504 489, 505 545, 577 554, 570 556, 572 558, 574 562, 578 564, 580 566, 582 Algunos ejemplos de modalidades incluyen polinucleótidos que se hibridan en condiciones de hibridación de restricción moderada o alta a un polinucleótido que posee uno de los ejemplos de secuencias codificadoras citadas en la Tabla 1 y también incluyen polinucleótidos que se hibridan en condiciones de hibridación de restricción moderada o alta a un polinucleótido que codifica el mismo polipéptido como un polinucleótido que posee uno de los ejemplos de secuencias codificadoras citadas en la Tabla 1, o un polipéptido codificado por cualquiera de los polinucleótidos anteriores.
La expresión "condiciones de hibridación de restricción alta" se refiere a condiciones bajo las cuales una sonda se híbrida a su subsecuencia blanco, típicamente en una mezcla compleja de ácido nucleico pero no a otras secuencias. Las condiciones de restricción alta dependen de las secuencias y serán diferentes en circunstancias distintas. Secuencias más largas se hibridan específicamente a temperaturas superiores. Una guía amplia para la hibridación de ácidos nucleicos se encuentra en Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principies of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993) . En general, se establece que las condiciones de restricción alta son alrededor de 5-10 °C menos que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica a un pH y fuerza iónica definida. La Tm es la temperatura (según concentración nucleica, pH y fuerza iónica definidos) en la que el 50% de las sondas complementarias al objetivo hibridan la secuencia objetivo en equilibrio (como las secuencias objetivo están presentes en exceso, a Tm, el 50% de las sondas están ocupadas en equilibrio) . Las condiciones de restricción alta serán aquellas en donde la concentración salina es menor a aproximadamente 1.0 M ión de sodio, típicamente alrededor de 0.01 a 1.0 M concentración de ión de sodio (u otras sales) a pH 7.0 a 8.3 y la temperatura es al menos alrededor de 30 °C para sondas cortas (por ej . , 10 a 50 nucleótidos) y al menos alrededor de 60 °C para sondas largas (por ej . , mayor1 a 50 nucleótidos). Las condiciones de restricción alta támbién pueden lograrse con la adición de agentes desestabilizadores tales como formamida. Para hibridación selectiva o específica, una señal positiva es al menos dos veces hibridación de fondo, opcionalmente 10 veces de fondo. Los ejemplos de condiciones de hibridación de restricción alta pueden ser como sigue: 50% de formamida, 5*SSC y 1% SDS, incubando a 42 °C, o 5<SSC, 1%; SDS, incubando a 65 °C, con lavado en 0.2><SSC y 0.1% SDS a 65 °C.
Tales etapas de hibridación y lavado pueden realizarse durante, por ej . , 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60; o más minutos.
Los ácidos nucleicos que no se hibridan entre ellos en condiciones de restricción alta aún están sustancialmente relacionados si los polipéptidos que codifican están sustancialmente relacionados. Esto ocurre, por ejemplo, cuando se crea una copia de ácido nucleico usando la máxima degeneración del codón permitida por el código genético. En estos casos, los ácidos nucleicos se hibridan típicamente en condiciones de restricción moderada. Ejemplos de "condiciones de hibridación de restricción moderada" incluyen: una hibridación en un tampón de 40% de formamida, 1 M NaCl, 1% SDS a 37 °C y un lavado en 1*SSC a 45 °C. Tales etapas de hibridación y lavado pueden realizarse durante, por ej . , 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60, o más minutos. Una hibridación positiva es al menos dos veces de fondo. Los expertos en la técnica rápidamente reconocerán que las condiciones alternativas de hibridación y lavado pueden utilizarse para proporcionar condiciones de restricción similar.
Ejemplos de modalidades de polipéptidos y polinucleótidos de cadena pesada y ligera Esta sección describe ejemplos de modalidades de polipéptidos de cadena pesada y ligera, asi como ejemplos de polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos. Estos ejemplos de polinucleótidos son adecuados para su expresión en el sistema de expresión Pichia descrito.
En determinadas modalidades, la presente invención comprende polinucleótidos que poseen al menos 70%, tal como al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99%, o 100% de identidad con los polinucleótidos descritos en esta solicitud o que codifican polipéptidos descritos en esta solicitud o que se hibridan con aquellos polinucleótidos en condiciones de restricción baja, restricción moderada o restricción alta, preferentemente aquellos que codifican polipéptidos (por ej . una cadena pesada y ligera de inmunoglobulina, un anticuerpo de cadena simple, un fragmento de anticuerpo, etc.) que poseen al menos una de las actividades biológicas establecidas en la presente, que incluyen pero no se limitan a la unión especifica a un polipéptido de IL-6. En otro aspecto, la invención comprende una composición que comprende tal polinucleótido y/o un polipéptido codificado por tal polinucleótido. En aun otro aspecto, la invención comprende un método para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con una IL-6 o que puede prevenirse, tratarse o mejorarse con un antagonista de IL^6 tal como Abl (por ej . caquexia, fatiga por cáncer, artritis, ¡etc. ) que comprende la administración de una composición, que comprende tal polinucleótido y/o polipéptido. ; En algunas modalidades preferidas, un polipéptido de cadena pesada comprenderá una o más secuencias de CDR de los polipéptidos de cadena pesada y/o ligera descritos en la presente (incluidos aquellos contenidos en los polipéptidos de cadena pesada y ligera descritos en la presente) y uno o más polipéptidos de la región flanqueante descritos en la presente, incluidos aquellos representados en las Figuras 2 y 34-37 o Tabla 1 y contenidos en las secuencias de polipéptidos de cadena pesada y ligera descritas en la presente. En determinadas modalidades preferidas, un polipéptido de cadena pesada comprenderá una o más secuencias de región flanqueante 4 tal como se representa en las Figuras 2 y 34-37 o Tabla 1, o según se contenga en polipéptidos de cadena pesada o ligera descritos en la presente.
En determinadas modalidades preferidas, un polipéptido de cadena ligera comprenderá una o más secuencias de CDR de los polipéptidos de cadena pesada y/o ligera descritos en la presente (incluidos aquellos contenidos en los polipéptidos de cadena pesada y ligera descritos en la presente) y uno 'o más polipéptidos de la región flanqueante descritos en la presente, incluidos aquellos representados en las Figuras 2 y 34-37 o Tabla 1 y contenidos en las secuencias de polipéptidos de cadena pesada y ligera descritas en la presente. ; En determinadas modalidades preferidas, un polipéptido de cadena ligera comprenderá una o más secuencias de región flanqueante 4 tal como se representa en las Figuras 2 y 34-37 o Tabla: 1, o según se contenga en polipéptidos de cadena pesada o ligera descritos en la presente.
En cualquier modalidad descrita en la presente, determinadas secuencias descritas pueden ser sustituidas entre ellas, a menos que el contexto indique lo contrario. El hecho de que secuencias particulares puedan sustituirse entre ellas, donde ocurrieran tales hechos, se entiende que son de carácter ilustrativo y no limitante y también se entiende que dichas sustituciones se encuentran comprendidas aun cuando no se describieran ejemplos ilustrativos de sustituciones, por ejemplo, donde se describe uno o más de los polipéptidos de cadena ligera de Abl, por ej . cualquiera de la SEQ ID NO: 2, 20, 647, 651, 660, 666, 699, 702, 706, o 709, otro polipéptido de cadena ligera de Abl puede sustituirse a menos que el contexto indique lo contrario. De manera similar, donde se describe uno de los polipéptidos de cadena pesada de Abl, por ej cualquiera de la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 652, 656, 657,' 658, 661, 664, 665, 704, o 708, otro polipéptido de cadena pesada de Abl puede sustituirse a menos que el contexto indique lo contrario. Asimismo, donde se describe uno de los polinucleótidos de cadena ligera de Abl, por ej . cualquiera de la SEQ ID NO: 10, 662, 698, 701, o 705, otro polinucleótido de cadena ligera de Abl puede sustituirse a menos que el contexto indique lo contrario. De manera similar, donde se describe uno de los polinucleótidos de cadena pesada de Abl, por ej . cualquiera de la SEQ ID NO: 11, 663, 700, 703, o 707, otro polinucleótido de cadena pesada de Abl puede sustituirse a menos que el contexto indique lo contrario. Adicionalmente, se entiende que la descripción de cualquiera de los siguientes grupos comprende la sustitución por cualquier otro miembro del grupo , tal como sigue: polipéptidos de cadena ligera de Ab2 (SEQ ID NO: 21 y 667) ; polinucleótidos de cadena ligera de Ab2 (SEQ ID NO: 29 y 669) ; polipéptidos de cadena pesada de Ab2 (SEQ ID NO: 22 y 668) ; polinucleótidos de cadena pesada de Ab2 (SEQ ID NO: 30 y 670) ; polipéptidos de cadena ligera de Ab3 (SEQ ID NO: 37 y 671) ; polinucleótidos de cadena ligera de Ab3 (SEQ ID NO: 45 y 673) ; polipéptidos de cadena pesada de Ab3 (SEQ ID NO: 38 y 672) ; polinucleótidos de cadena pesada de Ab3 (SEQ ID NO: 46 y 674) ; polipéptidos de cadena ligera de Ab (SEQ ID NO: 53 y 675) ; polinucleótidos de cadena ligera de Ab (SEQ ID NO: 61 y 677) ; polipéptidos de cadena pesada de Ab (SEQ ID NO: 54 y 676) ; polinucleótidos de cadena pesada de Ab (SEQ ID NO: 62 y 678) ; polipéptidos de cadena ligera de Ab5 (SEQ ID NO: 69 y 679) ; polinucleótidos de cadena ligera de Ab5 (SEQ ID NO: 77 y 681) ; polipéptidos de cadena pesada de Ab5 (SEQ ID NO: 70 y 680) ; polinucleótidos de cadena pesada de Ab5 (SEQ ID NO: 78 y 682) ; polipéptidos de cadena ligera de Ab6 (SEQ ID NO: 85 y 683) ; polinucleótidos de cadena ligera de Ab6 (SEQ ID NO: 93 y 685) ; polipéptidos de cadena pesada de Ab6 (SEQ ID NO: 86 y 684) ; polinucleótidos de cadena pesada de Ab6 (SEQ ID NO: 94 y 686) ; polipéptidos de cadena ligera de Ab7 (SEQ ID NO: 101, 119, 687, 693); polinucleótidos de cadena ligera de Ab7 (SEQ ID NO: 109 y 689); polipéptidos de cadena pesada de Ab7 (SEQ ID NO: 102, 117, 118, 688, 691 y 692); polinucleótidos de cadena pesada de Ab7 (SEQ ID NO: 110 y 690) ; polinucleótidos CDR1 de cadena ligera de Abl (SEQ ID NO: 12 y 694); polinucleótidos CDR3 de cadena ligera de Abl (SEQ ID NO: 14 y 695); polinucleótidos CDR2 de cadena pesada de Abl (SEQ ID NO: 16 y 696) ; y polinucleótidos CDR3 de cadena pesada de Abl (SEQ ID NO: 17 y 697) .
Actividad anti-IL-6 Tal como se estableció previamente, la IL-6 es un miembro de la familia de las citocinas que promueven las respuestas celulares a través de un complejo de receptores que consiste en al menos una subunidad de la glicoproteina transductora de señales gpl30 y el receptor IL-6 (IL-6R) . La IL-6R puede también estar presente en forma soluble (5IL-6R) . La IL-6 se une a la IL-6R, que luego dimeriza el receptor transductor de señales gpl30.
Se cree que los anticuerpos anti-IL-6 de la invención, o fragmentos de unión a IL-6, son útiles al presentar actividad anti-IL-6. En una modalidad no limitante de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 de la invención o los fragmentos de unión a la IL-6 de los mismos, presentan actividad anti-IL-6 mediante la unión con IL-6 que puede ser IL-6 soluble o IL-6 expresadas en la superficie celular y/o pueden prevenir o inhibir la unión a IL-6 con IL-6R y/o la activación (dimerización) de la glicoproteina transductora de señales gpl30 y la formación de multimeros IL-6/IL-6R/gpl30 y los efectos biológicos de cualquiera de los anteriores. Los anticuerpos anti-IL-6 en cuestión pueden poseer distintas actividades antagonistas según dónde (esto es, epitopo) el anticuerpo particular se une a IL-6 y/o cómo afecta la formación de los complejos y/o multimeros anteriores y los efectos biológicos de los mismos. Como consecuencia, diferentes anticuerpos anti-IL-6 de acuerdo con la invención, por ej . pueden ser más adecuados para prevenir o tratar afecciones que involucren la formación y acumulación de IL-6 soluble sustancial tal como artritis reumatoide mientras que otros anticuerpos pueden ser favorables en tratamientos donde la prevención de IL-6/IL-6R/gpl30 o multimeros IL-6/IL-6R/gpl30 es el resultado terapéutico que se desea. Esto, puede determinarse en ensayos de unión y otros.
La actividad anti-IL-6 del anticuerpo anti-IL-6 de la presente invención y fragmentos del mismo que poseen especificidad de unión a IL-6 pueden también estar descritos por su fuerza de unión o su afinidad por IL-6. Esto también puede afectar sus propiedades terapéuticas. En una modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención y fragmentos de los mismos que poseen especificidad de unión a IL-6, se unen a IL-6 con una constante, de disociación (KD) menor o igual a 5xl0"7, 10"7, 5xl0~8, 10"8, 5x10" 9, 10"9, 5xl0"10, 10~10, 5xl0"n, 10"11, 5xl0"12, 10"12, 5xl0"13, 10"13, 5xl0"14, 10~14, 5xl0~15 o 10"15. Preferentemente, los anticuerpos anti-IL-6 y fragmentos de los mismos se unen a IL-6 con una constante de disociación menor o igual a 5xl0~10.
En otra modalidad de la invención, la actividad anti-IL-6 de los anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención y fragmentos de los mismos que poseen especificidad de unión a IL-6, se unen a IL-6 con una tasa de disociación menor o igual a 10~4 S"1, 5xl0"5 o 10" S . En una modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención y fragmentos de los mismos que poseen especificidad de unión a IL-6, se unen a un epitopo lineal o conformacional de IL-6.
En una modalidad adicional de la invención, la actividad anti-IL-6 de los anticuerpos anti-IL-6 de la presente invención y fragmentos de los mismos que poseen especificidad de unión a IL-6, presentan la actividad anti-IL-6 mediante la mejora o reducción de los síntomas de, o que de manera alternativa tratan o previenen enfermedades y trastornos asociados con IL-6. Se establecen más adelante ejemplos no limitantes de las enfermedades y trastornos asociados con IL-6. Tal como se observa, la fatiga relacionada con cáncer, caquexia y artritis reumatoide son indicaciones preferidas para los anticuerpos anti-IL-6 en cuestión.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o los fragmentos de unión a IL-6 de los mismos no poseen especificidad de unión por IL-6R o la glicoproteína transductora de señales gp-130.
Análisis y aislamiento de linfocitos B En una modalidad, la presente invención proporciona métodos de aislamiento de una población clonal de linfocitos B específicos para antígeno que pueden usarse para aislar al menos una célula específica para antígeno. Tal como se describe y ejemplifica más adelante, estos métodos contienen una serie de etapas de cultivo y selección que pueden ser usadas por separado, en combinación, de manera secuencial, repetitiva o periódica. Preferentemente, estos métodos se usan para aislar al menos una célula específica para antígeno que puede usarse para producir un anticuerpo monoclonal que es especifico para un anticuerpo deseado o una secuencia de , ácido nucleico que se corresponde con tal anticuerpo.
En una modalidad, la presente invención proporciona un i método que comprende las etapas de: a. preparar una población celular que comprende al ! menos un linfocito B específico para antígeno; b. enriquecer la población celular, por ej.,' por cromatografía, para formar una población celular enriquecida que comprende al menos un linfocito B específico para antígeno; c. aislar el linfocito B simple a partir de la población de linfocitos B enriquecidos; y d. determinar si el linfocito B simple produce un anticuerpo especifico para el antigeno.
En otra modalidad, la presente invención proporciona una mejora para un método para aislar un linfocito B simple, productor de anticuerpos, esta mejora comprende enriquecer la población de linfocitos B obtenida a partir de un hospedador que fue inmunizado o naturalmente expuesto a un antigeno, donde la etapa de enriquecer precede la etapa de selección, comprende al menos una etapa de cultivo y trae como resultado una población clonal de linfocitos B que producen un anticuerpo monoclonal simple especifico para dicho antigeno.
A lo largo de esta solicitud, una "población clonal de linfocitos B" se refiere a una población de linfocitos B que solo secreta un único anticuerpo especifico para un antigeno deseado. Esto es que estas células producen solamente un tipo de anticuerpo monoclonal especifico para el antigeno deseado.
En la presente solicitud, "enriquecer" una población celular significa aumentar la frecuencia de células deseadas, típicamente células específicas para antigeno, contenidas en una población celular mixta, por ej . , un aislamiento que contiene linfocitos B derivados a partir de un hospedador que se inmuniza contra un antigeno deseado. Por tanto, una población celular enriquecida comprende una población celular que posee una mayor frecuencia de A células específicas para antigeno como resultado de una etapa de enriquecimiento, pero esta población celular puede contener y producir diferentes anticuerpos.
El término general "población celular" comprende poblaciones celulares previas y posteriores al enriquecimiento, teniendo presente que cuando se llevan a cabo las etapas de múltiple enriquecimiento, una población celular puede ser previa o posterior al enriquecimiento. Por ejemplo, en una modalidad, la presente invención proporciona un método: a. que cultiva una población celular a partir de un hospedador inmunizado para obtener una población celular cultivada; b. que crea al menos una suspensión unicelular a partir de la población celular cultivada; c. que enriquece al menos una suspensión unicelular para formar una primera población celular enriquecida; ; d. que enriquece la primera población celular enriquecida para formar una segunda población celular enriquecida; : e. que enriquece la segunda población celular enriquecida para formar una tercera población celular enriquecida y; f. que selecciona un anticuerpo producido por una célula especifica para antigeno de la tercera población celular enriquecida.
Cada población celular puede usarse directamente en la próxima etapa o puede congelarse parcial o totalmente para almacenamientos a corto o largo plazo o para etapas posteriores. Además, las células de una población celular pueden suspenderse individualmente para proporcionar suspensiones unicelulares. La suspensión unicelular puede enriquecerse en tal medida que una suspensión unicelular sirva como la población celular previa al enriquecimiento. Entonces, una o más de las suspensiones unicelulares específicas para el antígeno forman conjuntamente la población celular enriquecida; las suspensiones unicelulares especificas para el antígeno pueden agruparse, por ej . , colocarse nuevamente en placas para su posterior análisis y/o producción de anticuerpos.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para enriquecer una población celular para dar una población celular enriquecida que posee una frecuencia celular específica para el antígeno de entre alrededor de 50% y alrededor de 100% o aumentos de los mismos. Preferentemente, la población celular enriquecida posee una frecuencia celular específica para el antígeno mayor o igual a alrededor de 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, o 100%.
En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para enriquecer una población celular por la cual se aumenta la frecuencia de las células específicas para el antígeno al menos 2 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces, 50 veces, 100 veces, o aumentos de los mismos.
A lo largo de esta solicitud, el término "aumento" se usa para definir un valor numérico en mayor o menor grado de precisión, por ej . , lo más cerca posible a 10, 1, 0.1, 0.01, etc. El aumento se puede redondear a cualquier grado de precisión mensurable y el aumento puede no redondearse al mismo grado de precisión en ambos extremos de un rango. Por ejemplo, el rango de 1 a 100 o aumentos de los mismos varia tanto como 2 a 80, 5 a 50 y 0.4 a 98. Cuando un rango no tiene limite fijo, por ej . , un rango menor a 100, aumentos del mismo significa aumentos entre 100 y el limite mensurable. Por ejemplo, menos de 100 o aumentos del mismo significa 0 a 100 o aumentos del mismo a menos que la propiedad, por ej . , la temperatura, no esté limitada por 0.
La especificidad para antigeno puede medirse con respecto a cualquier antigeno. El antigeno puede ser cualquier sustancia a la que pueda unirse un anticuerpo que incluye pero no se limita a, péptidos, proteínas o fragmentos de los mismos, carbohidratos; moléculas orgánicas e inorgánicas; receptores producidos por células animales, células bacterianas y virus; enzimas; agonistas y antagonistas de las rutas biológicas; hormonas; y citocinas. Ejemplos de antígenos incluyen pero no se limitan a IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-a, IFN-?, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y Hepcidina. Los antígenos preferidos incluyen IL-6, IL-13, TNF- , VEGF- , factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y Hepcidina. En un método que utiliza más de una etapa de enriquecimiento, el antigeno usado en cada etapa de enriquecimiento puede ser el mismo o diferente en cada etapa. Las múltiples etapas de enriquecimiento con el mismo antigeno pueden dar una población grande y/o diversa de células especificas para antigeno; las múltiples etapas de enriquecimiento con distintos antigenos pueden dar un población celular enriquecida con especificidad cruzada para los diferentes antigenos.
El enriquecimiento de una población celular puede llevarse a cabo por cualquier medio de selección celular conocido en la técnica para el aislamiento de células especificas para antigeno. Por ejemplo, una población celular puede enriquecerse por medio de técnicas cromatográficas, por e . , tecnología de cuentas Miltenyi o cuentas magnéticas. Las cuentas pueden unirse directa o indirectamente al antígeno de interés. En una modalidad preferida, el método de enriquecimiento de una población celular incluye al menos una etapa de enriquecimiento cromatográfica.
Una población celular también puede enriquecerse por cualquier técnica de ensayo de especificidad para antígeno conocida en la técnica, por ej . , un ensayo ELISA o ensayo de halógeno. Ensayos ELISA incluyen pero no se limitan : a la inmovilización selectiva de antígenos (por ej . , captura de antígeno biotinilado por placas revestidas con estreptavídina, avidina o neutravidina) , revestimiento de placa para antígeno no específico y a través de una estrategia de concentración de antígeno (por ej . , captura de antígeno selectivo seguido de la adición de · un compañero de unión para generar un complejo heteromérico proteína-antígeno) . El antígeno puede estar unido directa o indirectamente a una matriz o soporte sólido, por e . una columna. Un ensayo de halógeno comprende contactar las células con cuentas cargadas con antígeno y el anticuerpo anti-hospedador marcado específico para el hospedador usado para el cultivo de linfocitos B. La marca puede ser, por ej . , fluoróforo. En una modalidad, al menos una etapa de enriquecimiento del ensayo se realiza en al menos una suspensión unicelular. En otra modalidad, el método de enriquecimiento de una población celular incluye al menos una etapa de enriquecimiento cromatográfico y al menos una etapa de enriquecimiento del ensayo.
Se conocen en la técnica métodos de "enriquecimiento" de una población celular por tamaño o densidad. Véase, por ej . , Patentes estadounidense 5,627,052. Estas etapas pueden usarse en el presente método adicionalmente para enriquecer la población celular por especificidad del antígeno. ; Las poblaciones celulares de la presente invención contienen al menos una célula capaz de reconocer un antígeno. Las células que reconocen antígenos incluyen pero no se limitan a, linfocitos B, células plasmáticas y progenies de las mismas. En una modalidad, la presente invención proporciona una población celular clonal que contiene un único tipo de linfocitos B específicos para antígeno, esto es, la población celular produce un anticuerpo monoclonal simple específico para un antígeno deseado.
En tal modalidad, se cree que la población clonal específica para antígeno de linfocitos B consiste predominantemente de células específicas para antígeno, células que secretan anticuerpos que se obtienen por medio del nuevo cultivo y el protocolo de selección provisto en la presente. Por consiguiente, la presente invención también proporciona métodos para la obtención de una población celular enriquecida que contiene al menos una célula especifica para antígeno y que secreta un anticuerpo. En una modalidad, la presente invención proporciona una población celular enriquecida que contiene alrededor de 50% a alrededor de 100%, o aumentos de los mismos, o más de o igual a alrededor de 60%, 70%, 80%, 90%, o 10,0% de células especificas para antígeno y que secretan un anticuerpo.
En una modalidad, la presente invención proporciona un método para aislar un linfocito B simple enriqueciendo una población celular obtenida a partir de un hospedador antes de las etapas de selección, por ej . , seleccionar un linfocito B particular de una población celular y/o seleccionar un anticuerpo producido por una célula particular. La etapa de enriquecimiento puede realizarse en una, dos, tres o! más etapas. En una modalidad, se aisla un linfocito B simple a partir de una población celular enriquecida antes de confirmar si el linfocito B simple secreta un anticuerpo con especificidad de antigeno y/o una propiedad deseada.
En una modalidad, un método para enriquecer una población celular se usa en un método para la producción y/o selección de anticuerpos. Por tanto, la presente invención proporciona un método que comprende enriquecer una población celular antes de seleccionar un anticuerpo. El método puede incluir las etapas de: preparar una población celular que comprende al menos una célula especifica para antigeno, enriquecer la población celular mediante el aislamiento de al menos una célula especifica para antigeno para formar una población celular enriquecida, e inducir la producción de anticuerpos a partir de al menos una célula especifica para antigeno. En una modalidad preferida, la población celular enriquecida contiene más de una célula especifica para antigeno. En una modalidad, cada célula especifica para antigeno de la población enriquecida se cultiva en condiciones que proporcionen una población clonal de linfocitos B específicos para antígeno antes de aislar una célula que produce anticuerpos de estos y/o de producir un anticuerpo que usa dicho linfocito B o una secuencia de ácido nucleico que corresponde a ese anticuerpo. A diferencia de técnicas previas donde los anticuerpos se producen a partir de una población celular con una baja frecuencia de células específicas para antígeno, la presente invención permite la selección de anticuerpos de entre una alta frecuencia de células especificas para antigeno. Debido a que se usa una etapa de enriquecimiento previo a la selección de anticuerpos, la mayoría de las células, preferente y virtualmente todas las células, usadas para la producción de anticuerpos son específicas para antígeno. Mediante la producción de anticuerpos a partir de una población de células con una frecuencia aumentada de especificidad de antígeno, la cantidad y variedad de anticuerpos aumenta.
En los métodos de selección de anticuerpos de la presente invención, se selecciona preferentemente un anticuerpo luego de las etapas de enriquecimiento y cultivo que da como resultado una población clonal de linfocitos B específicos para antígeno. Los métodos pueden comprender adicionalmente una etapa de determinar la secuencia de un anticuerpo seleccionado o porciones de este a partir de una o más células específicas para antígeno aisladas. Se puede emplear cualquier método conocido en la técnica para determinar secuencias y este 'puede incluir determinar la secuencia de la cadena pesada, cadena ligera, región/es variables/s y/o región/es determinante/s de complementariedad (CDR) .
Además de la etapa de enriquecimiento, el método de selección de anticuerpos también puede incluir una o más etapas de análisis de la población celular para reconocimiento de antígenos y/o funcionalidad del anticuerpo. Por ejemplo,: los anticuerpos deseados pueden tener características estructurales específicas, tal como unión a un epítopo particular o mimetismo de una estructura particular; actividad antagonista o agonista o actividad neutralizante, por ej . , inhibir la unión entre el antígeno y un ligando. En una modalidad, el análisis de la funcionalidad del anticuerpo depende del ligando. El análisis de la funcionalidad del anticuerpo incluye pero no se limita a, un ensayo de interacción proteína-proteína in vitro que recrea la interacción natural del ligando antígeno con la proteína recombinante receptora; y una respuesta con base en la célula que depende del ligando y se monitorea fácilmente (por ej . , respuesta de proliferación) . En una modalidad, el método para la selección de anticuerpos incluye una etapa de análisis de la población celular para la funcionalidad del anticuerpo mediante la medición de la concentración inhibitoria (CI50) . En una modalidad, al menos una de las células aisladas específicas para antígeno produce un anticuerpo con un CI50 menor a aproximadamente 100, 50, 30, 25, 10 g/mL o aumentos de los mismos.
Además de la etapa de enriquecimiento, el método de selección de anticuerpos también puede incluir una o más etapas de análisis de la población celular para la fuerza de unión al anticuerpo. La fuerza de unión al anticuerpo puede medirse por cualquier método conocido en la técnica (por ej . Biacore™) . En una modalidad, al menos una de las células aisladas y específicas para antígeno produce un anticuerpo que posee una elevada afinidad al ¦ antígeno, por ej . , una constante de disociación (Kd) menor a aproximadamente 5xl0"10 M-l, preferentemente alrededor de entre lxlO-13 y 5xl0~10, lxlO-12 y lxlO-10, lxlO-12 y 7.5xl0~n, lxlO'11 y 2xl0_ , alrededor de 1.5xl0~n o menos, o aumentos de los mismos. En esta modalidad, se dice que los anticuerpos son de afinidad madura. En una modalidad preferida, la afinidad de los anticuerpos se puede comparar con o es mayor que la afinidad de cualquiera de Panorex® (edrecolomab) , Rituxan® (rituximab) , Herceptin® ( traztuzumab) , Mylotarg® (gentuzumab) , Campath® (alemtuzumab) , Zevalin™ (ibritumomab) , Erbitux™ (cetuximab) , Avastin™ (bevicizumab) , Raptiva™ (efalizumab) , Remicade® (infliximab) , Humira™ (adalimumab) y Xolair™ (omalizumab) . Preferentemente, la afinidad de los anticuerpos se puede comparar o es mayor gue la afinidad de Humira™. La afinidad de un anticuerpo también puede aumentarse por medio de técnicas de maduración de afinidad conocidas. En una modalidad, se analiza al menos una población celular para determinar, al menos : una, preferentemente ambas, la funcionalidad del anticuerpo ' y la fuerza de unión al antígeno.
Además de la etapa de enriquecimiento, el método de selección de anticuerpos también puede incluir una o más etapas de análisis de la población celular para la homología de secuencia de anticuerpos, en especial homología en humanos!. En una modalidad, al menos una de las células aisladas y especificas para antigeno produce un anticuerpo que posee homología con un anticuerpo humano de alrededor de 50% a alrededor de 100%, o aumentos de los mismos, o más que alrededor de 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, o 95% homólogos. Los anticuerpos pueden humanizarse para aumentar la homología con una secuencia humana mediante técnicas conocidas en el arte tal como injerto de CDR o injerto de residuo determinante de selectividad (SDR) .
En otra modalidad, la presente invención también proporciona los anticuerpos mismos de acuerdo con cualquiera de las modalidades descritas anteriormente en cuanto a CI50, Kd y/o homología.
El protocolo de selección de linfocitos B descrito en la presente tiene varias ventajas intrínsecas con respecto a otros métodos para la obtención de linfocitos B que secretan anticuerpos y anticuerpos monoclonales específicos para los antígenos objetivo deseados. Estas ventajas incluyen pe'ro no se limitan a las siguientes: Primero, se ha descubierto que cuando se utilizan estos procedimientos de selección con un antígeno deseado tal, como IL-6 o TNF-a, estos métodos traen como resultado, de manera reproducible, linfocitos B específicos para antígeno capaces de generar lo que parece ser un complemento sustancialmente integral para los anticuerpos, esto es, anticuerpos que se; unen a distintos epitopos del antigeno. Sin limitarse a la teoría, se plantea la hipótesis de que el complemento integral es atribuible a la etapa de enriquecimiento del antígeno que se realiza antes de la recuperación del linfocito B inicial. Además, esta ventaja permite el aislamiento y la selección de anticuerpos con diferentes propiedades ya que estas propiedades pueden variar dependiendo de la especificidad epitópica del anticuerpo particular.
Segundo, se ha descubierto que el protocolo de selección de linfocitos B produce de manera reproducible un cultivo clonal de linfocitos B que contiene un linfocito B simple o su progenie, secretando un anticuerpo monoclonal simple que en general se une al antígeno deseado con una afinidad de unión relativamente alta, esto es, afinidades de unión al antígeno picomolares o mejores. En cambio, los métodos anteriores de selección de anticuerpos tienen a producir pocos anticuerpos de alta afinidad y por lo tanto requieren de procedimientosde análisis exhaustivo para aislar un anticuerpo con potencial terapéutico. Sin limitarse a la teoría, se plantea la hipótesis de que el protocolo trae como resultado la inmunización in vivo de linfocitos B del hospedador (inmunización primaria) seguida de una segunda estimulación in vitro de linfocitos B (etapa secundaria de cebado del antígeno) que puede mejorar la capacidad y la propensión de; los linfocitos B clónales recuperados para secretar un anticuerpo monoclonal simple de alta afinidad especifico para el antigeno obj etivo .
Tercero, se ha observado (tal como se muestra en la presente con linfocitos B específicos para IL-6) que el protocolo de selección de linfocitos B produce de manera reproducible linfocitos B enriquecidos que producen IgG que son, en promedio, altamente selectivos (específico para antígeno) del objetivo deseado. Se cree que los linfocitos B enriquecidos por antígeno recuperados por estos métodos contienen linfocitos B capaces de producir el complemento total deseado de especificidades epitópicas tal como se discute anteriormente .
Cuarto, se ha observado que los protocolos de selección de linfocitos B, aun cuando usados con antígenos pequeños, esto es, péptidos de 100 aminoácidos o menos, por ej . , 5-50 aminoácidos de largo, genera de manera reproducible un cultivo clonal de linfocitos B que secreta un único anticuerpo de. alta afinidad al antígeno pequeño, por ej . , un péptido. Esto .causa sorpresa ya que en general es bastante difícil y cuesta mucho trabajo y a veces no es posible producir anticuerpos de. alta afinidad por péptidos pequeños. Por consiguiente, se puede usar la invención para producir anticuerpos terapéuticos a los objetivos péptidos deseados, por ej . , péptidos virales, bacterianos o autoantígenos y de esta manera permite la producción de anticuerpos monoclonales con propiedades de unión muy específicas o aun la producción de un cóctel de anticuerpos monoclonales para diferentes objetivos péptidos, por e . , diferentes cepas virales. Esta ventaja puede ser útil especialmente en el contexto de la producción de una vacuna terapéutica o profiláctica que posee la valencia deseada, tal como una vacuna contra el HPV que induce la inmunidad protectora para distintas cepas del HPV.
Quinto, el protocolo de selección de linfocitos 'B, en particular cuando se usa con linfocitos B derivados de conejos, tiende a producir de manera reproducible secuencias de anticuerpos específicos para antígeno que son muy similares a las inmunoglobulinas humanas endógenas (alrededor de 90% similar al nivel de aminoácidos) y que contienen CDR que poseen una longitud muy similar a las inmunoglobulinas humanas y por lo tanto requieren poca o ninguna modificación de secuencias (típicamente a lo sumo solo unos pocos residuos de CDR pueden modificarse en la secuencia de anticuerpo principal y no se introducen residuos exógenos flanqueantes) para poder eliminar posibles problemas de inmunogenicidad potencial. En particular, preferentemente el anticuerpo recombinante contendrá solo los residuos CDRl y CDR2 del hospedador (conejo) requeridos para el reconocimiento del antígeno y la totalidad de CDR3. De ese modo, la alta afinidad de unión al antígeno de las secuencias de anticuerpo recuperadas producidas de acuerdo con el protocolo de selección de linfocitos B y anticuerpos permanece intacta o sustancialmente intacta aun con humanización.
En resumen, estos métodos pueden usarse para producir anticuerpos que exhiben mayores afinidades de unión con epitopos más distintos por el uso de un protocolo más eficaz que el ya conocido.
En una modalidad especifica, la presente invención proporciona un método para identificar un linfocito B simple que secreta un anticuerpo especifico para un antigeno deseado y que opcionalmente posee al menos una propiedad funcional deseada tal como afinidad, avidez, actividad citolitica y similares, por medio de un proceso que incluye las siguientes etapas : a. inmunizar un hospedador contra un antigeno; b. cultivar linfocitos B del hospedador; c. enriquecer los linfocitos B cultivados para aumentar la frecuencia de las células especificas para antigeno; d. crear al menos una suspensión unicelular; e. cultivar una subpoblación a partir de la suspensión unicelular en condiciones que favorecen la supervivencia de un único linfocito B especifico para antigeno por pocilio de cultivo; f. aislar linfocitos B de la subpoblación; y g. determinar si el linfocito B simple produce un anticuerpo especifico para el antigeno.
Típicamente, estos métodos comprenderán adicionalmente una etapa adicional de aislamiento y determinación de secuencia, parcial o total, de las secuencias de polipéptidos y ácidos nucleicos que codifican el anticuerpo deseado. Estas secuencias o versiones modificadas o porciones de las mismas pueden expresarse en células hospedadoras deseadas para producir anticuerpos recombinantes a un antígeno deseado.
Tal como se observó anteriormente, se cree que la población clonal de linfocitos B comprende predominantemente linfocitos B que secretan anticuerpos que producen un anticuerpo contra el antígeno deseado.
También se cree, basándose en resultados experimentales obtenidos con diversos antígenos y con diferentes poblaciones de linfocitos B, que los linfocitos B producidos por clonación y los linfocitos B aislados específicos para antígeno derivados de estos, producidos de acuerdo con la invención, secretan un anticuerpo monoclonal que típicamente tiene afinidad relativamente alta y además es capaz de producir eficazmente y de manera reproducible una selección de anticuerpos monoclonales de mayor variabilidad epitópica en comparación con otros métodos de derivación de anticuerpos monoclonales a partir de linfocitos B cultivados específicos para antígeno.
En un ejemplo de modalidad, la población de células inmunes usada en dichos métodos de selección de linfocitos B proviene de un conejo. Sin embargo, otro hospedador que produce anticuerpos incluyendo hospedadores no humanos y humanos, puede de manera alternativa ser usado como fuente de linfocitos B inmunes. Se cree que el uso de conejos como fuente de linfocitos B puede mejorar la diversidad de los anticuerpos monoclonales que pueden originarse por medio de estos métodos. También, las secuencias de anticuerpos derivados de conejos de acuerdo con la invención, poseen típicamente secuencias con un alto grado de identidad de secuencia con secuencias de anticuerpos humanos haciéndolas favorables para su uso en humanos dado que deberían poseer baja antigenicidad. En el transcurso de la humanización, el anticuerpo humanizado final posee un contenido mucho menor de residuo extraño/hospedador , normalmente restringido a un subgrupo de los residuos CDR del hospedador que difieren dramáticamente debido a su naturaleza contra la secuencia objetivo humana usada en injertos. Esto mejora la probabilidad de recuperación completa de actividad en la proteína del anticuerpo humanizada.
Los métodos de selección de anticuerpos que usan una! etapa de enriquecimiento descrito en la presente incluyen una ; etapa para la obtención de una población celular que contiene células inmunes a partir de un hospedador inmunizado. Los métodos para la obtención de una población celular que contiene células inmunes a partir de un hospedador inmunizado son conocidos en la técnica y en general incluyen inducir una respuesta inmune en un hospedador y cultivar células a partir del hospedador para obtener una o más poblaciones celulares. La respuesta puede provocarse mediante la inmunización del hospedador contra un antigeno deseado. De manera alternativa, el hospedador usado como origen de tales células inmunes puede exponerse naturalmente al antigeno deseado tal como un individuo que fue infectado con un patógeno particular tal como una bacteria o virus o de manera alternativa ¦ ha montado una respuesta de anticuerpo especifica para el cáncer sufrido por el individuo.
Los animales hospedadores son bien conocidos en la técnica e incluyen pero no se limitan a cobayos, conejos, ratones, ratas, primates no humanos, humanos, asi como otros mamíferos y roedores, pollos, vacas, cerdos, cabras y ovejas. Preferentemente el hospedador es un mamífero, más preferentemente, un conejo, ratón, rata o humano. Al exponerse a un antígeno, el hospedador produce anticuerpos como parte de la respuesta inmune nativa al antígeno. Tal como se mencionó, la respuesta inmune puede ser de origen natural, como resultado de una enfermedad o puede ser inducida por la inmunización con el antígeno. La inmunización puede realizarse por cualquier método conocido en la técnica, tal como, por una o más inyecciones del antígeno con o sin un agente para mejorar la respuesta inmune, tal como un adyuvante de Freund completo o incompleto. En otra modalidad, la invención también contempla la inmunización intraesplénica . Como una alternativa para inmunizar un animal hospedador in vivo, el método puede comprender inmunizar un cultivo de células hospedadoras in vitro .
Luego de permitir tiempo a la respuesta inmune (por ej . , según las mediciones de la detección de anticuerpos de suero) , células hospedadoras de animales se cultivan para obtener una o más poblaciones celulares. En una modalidad preferida, se analiza una población celular cultivada para determinar la fuerza de unión al anticuerpo y/o funcionalidad de anticuerpo Una población celular cultivada es preferentemente de al menos uno de bazo, nodulos linfáticos, médula ósea y/o células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Las células pueden cultivarse a partir de más de una fuente y acumularse. Se pueden preferir algunas fuentes para ciertos antigenos. Por ejemplo, se prefiere el bazo, nodulos linfáticos y PBMC para IL-6; y se prefieren los nodulos linfáticos para TNF. La población celular se cultiva durante alrededor de ,20 a alrededor de 90 días o aumentos de los mismos luego de la inmunización, preferentemente durante alrededor de 50 a alrededor de 60 días. Una población celular cultivada y/o una suspensión unicelular de la misma se puede enriquecer, analizar y/o cultivar para la selección de anticuerpos. La frecuencia de células especificas para antigeno dentro de una población celular cultivada es normalmente alrededor de 1% a alrededor de 5% o aumentos de los mismos.
En una modalidad, una suspensión unicelular de una población celular cultivada se enriquece, preferentemente usando cuentas Miltenyi. A partir de la población celular cultivada con una frecuencia de células especificas para antigeno de alrededor de 1% a alrededor de 5%, se deriva una población celular enriquecida con una frecuencia de células especificas para antigeno que se acerca al 100%.
El método de selección de anticuerpos usando una etapa de enriquecimiento incluye una etapa de producción de anticuerpos de al menos una célula especifica para antigeno de una población celular enriquecida. Los métodos de producción de anticuerpos in vitro son bien conocidos en la técnica y puede usarse cualquier método adecuado. En ¦ una modalidad, una población celular enriquecida, tal como una suspensión unicelular especifica para antigeno de una población celular cultivada, se colocó en placas a diversas densidades celulares, tal como 50, 100, 250, 500 u otros aumentos entre 1 y 1000 células por pocilio. Preferentemente, la subpoblación comprende no más de alrededor de 10,000 células que secretan anticuerpos especificas para antigeno, más preferentemente alrededor de 50-10,000, alrededor de 50-5,000, alrededor de 50-1,000, alrededor de 50-500, alrededor de 50-250 células que secretan anticuerpos especificas para antigeno o aumentos de los mismos. Entonces, se cultivan estas subpoblaciones con un medio adecuado, (por ej . , un medio acondicionado de linfocitos T activado, en particular 1-5% de un medio acondicionado de linfocitos : T de conejo activado) en una capa de alimentación, preferentemente en condiciones que favorecen la supervivencia de una única célula de proliferación que secreta anticuerpos por pocilio de cultivo. La capa de alimentación, que en general comprende material celular irradiado, por ej . , células EL4B, no constituye parte de la población celular. Las células se cultivan en un medio adecuado por un periodo suficiente para la producción de anticuerpos, por ejemplo alrededor de 1 \ día a alrededor de 2 semanas, alrededor de 1 día a alrededor de 10 dias, al menos alrededor de 3 días, alrededor de 3 a alrededor de 5 días, alrededor de 5 días a alrededor de 7 días, al menos alrededor de 7 días o aumentos de los mismos. En una modalidad, se cultiva simultáneamente más de una subpoblación . Preferentemente, sobrevive una célula simple que produce anticuerpos y progenie de esta en cada pocilio, proporcionando así una población clonal de linfocitos B específicos, para antígeno en cada pocilio. En esta etapa, la inmunoglobulina G (IgG) producida por la población clonal es altamente correlativa con la especificidad del antígeno. En una modalidad preferida, las IgG exhiben una correlación con la especificidad del antígeno que es mayor a alrededor del 50%, más preferentemente mayor al 70%, 85%, 90%, 95%, 99% o aumentos del mismo. Véase Figura 3 que muestra un ejemplo de correlación para IL-6. Las correlaciones se mostraron colocando cultivos de linfocitos B en condiciones limitantes j para establecer productos simples de anticuerpos especificoa para antígeno por pocilio. Se compararon las síntesis específicas para antígeno con las de IgG generales. Se observaron tres poblaciones: Una IgG que reconoció un formato simple de antígeno (revestimiento biotinilado y directo) , IgG detectable y reconocimiento de antígeno sin tomar en cuenta la inmovilización y producción de IgG únicamente. La producción de IgG fue altamente correlativa con la especificidad para antígeno .
Opcionalmente se recoge un sobrenadante que contiene anticuerpos que pueden enriquecerse, analizarse y/o cultivarse para la selección de anticuerpos de acuerdo con las etapas descritas anteriormente. En una modalidad, el sobrenadante se enriquece (preferentemente por medio de un ensayo de especificidad del antígeno, en especial un ensayo ELISA) y/o se analiza para determinar la funcionalidad del anticuerpo.
En otra modalidad, la población enriquecida, preferentemente clonal, de linfocitos B específicas' para antígeno a partir de la cual se analiza opcionalmente un supernadante descrito anteriormente para detectar la presencia del anticuerpo monoclonal secretado deseado se utiliza para el aislamiento de unos pocos linfocitos B, preferentemente un linfocito B simple que luego se prueba en un ensayo apropiado para confirmar la presencia de un linfocito B simple que produce anticuerpos en la población clonal de linfocitos B. En una modalidad, se aislan alrededor de 1 a alrededor de 20 células a partir de la población de linfocitos B, preferentemente menos de alrededor de 15, 12, 10, 5, o 3 células, o aumentos de los mismos, más preferentemente una célula simple. El ensayo se efectúa preferentemente por un ensayo de- especificidad del antigeno, en especial un ensayo de halógeno. El ensayo de halógeno se puede realizar con la proteina de longitud completa o un fragmento de esta. El sobrenadante que contiene anticuerpos puede también analizarse para determinar al menos uno de: afinidad de unión al antigeno; agonismo o antagonismo de la unión del ligando al antigeno, inducción o inhibición de la proliferación de un tipo celular objetivo especifico; inducción o inhibición de la lisis de una célula objetivo e inducción o inhibición de una vía biológica que involucre el antigeno.
La célula identificada especifica para antigeno ¡puede usarse para encontrar las correspondientes secuencias de ácido nucleico que codifican el anticuerpo monoclonal deseado.' (Un compendio AluI puede confirmar que se produce solo un tipo de anticuerpo monoclonal simple por pocilio) . Tal como se mencionó anteriormente, estas secuencias pueden mutarse; tal como por humanización, para proporcionarlas de manera adecuada para su uso en medicamentos para humanos.
Tal como se mencionó anteriormente, la población de linfocitos B enriquecida usada en el proceso también puede enriquecerse, analizarse y/o cultivarse adicionalmente para la selección de anticuerpos de acuerdo con las etapas descritas anteriormente que pueden repetirse o realizarse en distinto orden. En una modalidad preferida, se aisla, cultiva y se usa para la selección de anticuerpos al menos una célula de una población ' celular enriquecida, preferentemente clonal y especifica para antigeno.
Por tanto, en una modalidad, la presente invención proporciona un método que comprende: a. cultivar una población celular a partir de un hospedador inmunizado que cultiva una población celular; b. crear,, al menos una suspensión unicelular a partir de una población celular cultivada; c. enriquecer al menos una suspensión unicelular, preferentemente por cromatografía, para formar una primera población celular enriquecida; d. enriquecer la primera población celular enriquecida, preferentemente por el ensayo ELISA, para formar una segunda población celular enriquecida que es preferentemente clonal, esto es, contiene solo un único tipo de linfocito B especifico para antigeno. e. enriquecer la segunda población celular enriquecida, preferentemente por el ensayo de halógeno, para formar una tercera población celular enriquecida que contiene uno o ,pocos linfocitos B que producen un anticuerpo especifico para un antigeno deseado; y f. seleccionar un anticuerpo producido por una célula especifica para antigeno aislada de la tercera población celular enriquecida.
El método puede adicionalmente incluir una o más etapas de análisis de la población celular cultivada para la fuerza de unión al anticuerpo (afinidad, avidez) y/o la funcionalidad del anticuerpo. Las etapas de análisis adecuado incluyen pero no se limitan a métodos de análisis que detectan: ya sea que el anticuerpo producido por el linfocito B identificado especifico para antigeno produce un anticuerpo que posee mínima afinidad de unión al antígeno, ya sea que el anticuerpo agoniza o antagoniza la unión de un antígeno deseado para el ligando; ya sea que el anticuerpo induce o inhibe la proliferación de un tipo celular específico; ya sea que el anticuerpo induce o provoca una reacción citolítica contra células objetivo; ya sea que el anticuerpo se une a un epítopo específico; y ya sea que el anticuerpo modula (inhibe o agoniza) vía/s biológica/s específica/s que involucren el antígeno.
De manera similar, el método puede adicionalmente incluir una o más etapas de análisis de la segunda población celular enriquecida para determinar la fuerza de unión al anticuerpo y/o la funcionalidad del anticuerpo.
El método puede adicionalmente incluir una etapa de secuenciar secuencias de polipéptidos o de la secuencia de ácido nucleico correspondiente del anticuerpo seleccionado. El método también puede incluir una etapa de producción de un anticuerpo recombinante usando la secuencia, un fragmento de la misma o una versión genéticamente modificada del anticuerpo seleccionado. Los métodos para la mutación de secuencias de anticuerpos para retener las propiedades deseadas son bien conocidos por los expertos e la técnica e incluyen humanización, quimerización, producción de anticuerpos de cadena simple; estos métodos de mutación pueden producir anticuerpos recombinantes que poseen la función efectora deseada, inmunogenicidad, estabilidad, eliminación o adición de glicosilación y similares. El anticuerpo recombinante puede producirse por una célula recombinante adecuada que incluye pero no se limita a células de mamífero tales como CHO, COS, BHK, HEK-293, células bacterianas, células de levadura, células vegetales, células de insecto y células anfibias. En una modalidad, los anticuerpos se expresan en células de levadura poliploides, esto es, células de levadura diploides;, en particular Pichia.
En una modalidad, el método comprende: a. inmunizar un hospedador contra un antígeno para producir anticuerpos hospedadores de levadura; b. analizar los anticuerpos hospedadores para determinar la especificidad del antígeno y neutralización; b. cultivar linfocitos B del hospedador; d. enriquecer los linfocitos B cultivados para crear una población celular enriquecida con una frecuencia aumentada de células especificas para antigeno; e. cultivar una o más subpoblaciones de la población celular enriquecida en condiciones que favorecen la supervivencia de un linfocito B simple para producir una población clonal en al menos un pocilio de cultivo; f. determinar si la población clonal produce un anticuerpo especifico para el antigeno. g. aislar un linfocito B simple; y h. secuenciar la secuencia de ácido nucleico del anticuerpo producido por el linfocito B simple.
Métodos de humanización de anticuerpos En otra modalidad de la invención, se proporciona un método para la humanización de cadenas pesada y ligera de anticuerpos. En esta modalidad, se sigue el siguiente método para la humanización de cadenas pesada y ligera: Cadena ligera 1. Identificar el aminoácido que es el primero que le sigue a la secuencia de péptidos de señal. Este es el comienzo de la Región Flanqueante 1. El péptido de señales comienza en la primera metionina de iniciación y tiene típicamente, pero no necesariamente, 22 aminoácidos de longitud para las secuencias de proteínas de cadena ligera de conejo. El comienzo del polipéptido maduro también puede determinarse de manera experimental secuenciando la proteina N-terminal o se puede prever usando un algoritmo de previsión. Este también es el comienzo de la Región Flanqueante 1 tal como se suele definir por los expertos en la materia.
Ejemplo: Residuo de aminoácido RbtVL 1 en la Figura 2, que comienza con "AYDM" . 2. Identificar el final de la Región Flanqueante 3. Este tiene típicamente 86-90 aminoácidos que siguen al comienzo de la Región Flanqueante 1 y es típicamente un residuo de cisteina precedido por dos residuos de tirosina. Este es el final de la Región Flanqueante 3 tal como se suele definir por los expertos en la materia.
Ejemplo: Residuo de aminoácido RbtVL 88 en la Figura 2, que termina con "TYYC" . 3. Usar la secuencia de cadena ligera de conejo del polipéptido que comienza por el principio de la Región Flanqueante 1 hasta el final de la Región Flanqueante '3 tal como se definió anteriormente y realizar una búsqueda de homología de secuencias para las secuencias de proteínas de anticuerpos más similares. Esta búsqueda será típicamente contra secuencias germinales humanas previa a la maduración del anticuerpo para reducir la posibilidad de inmunogenicidad; sin embargo, se puede usar cualquier secuencia humana. Típicamente se puede usar un programa del estilo de BLAST para buscar en una base de datos de secuencias las más homologas. Las bases de datos de secuencias de anticuerpos humanos pueden encontrarse en varias fuentes tales como NCBI (Centro Nacional de Información Biotecnológica) .
Ejemplo: La secuencia de aminoácidos RbtVL a partir de residuos numerados 1 a 88 en la Figura 2 se compara en. BLAST con una base de datos de líneas germinales de anticuerpos humanos. Las únicas tres secuencias principales devueltas se muestran en la Figura 2 como L12A, VI y Vx02. 4. En general, la secuencia de cadena ligera variable de la línea germinal humana más homologa luego se usa como base de la humanización. Sin embargo, aquellos expertos en la técnica pueden decidir usar otra secuencia que no fuera de mayor homología tal como lo determina el algoritmo de homología, basado en otros factores que incluyen espacios de secuencias y similitudes en la región flanqueante. , Ejemplo: En la Figura 2, L12A era la secuencia de cadena ligera variable de la línea germinal humana más homologa' y se usa como base para humanización de RbtVL. 5. Determinar la Región Flanqueante y el arreglo de CDR (FR1, FR2, FR3, CDRl y CDR2) para el homólogo humano usado para humanización de cadena ligera. Esto es, usar la distribución tradicional tal como se describe en la materia. Alinear la secuencia de cadena ligera variable de conejo con el homólogo humano, mientras se mantiene la distribución de las regiones flanqueantes y CDR.
Ejemplo: En la Figura 2, la secuencia RbtVL se alinea con la secuencia homologa humana L12A y se indican los dominios flanqueante . y CDR. 6. Reemplazar las regiones CDRl y CDR2 de la secuencia de cadena ligera homologa humana con las secuencias de CDRl y CDR2 de la secuencia de conejo. Si existieran diferencias de longitud entre las secuencias de CDR humana y de conejo entonces usar la totalidad de las secuencias de CDR de conejo y sus longitudes. Es posible que la especificidad, afinidad y/o inmunogenicidad del anticuerpo humanizado resultantes puedan no alterarse si se realizan intercambios de secuencias mayores o menores o si se alteran residuos específicos, sin embargo los intercambios tal como fueron descritos han sido usados exitosamente pero no se excluye la posibilidad de que se permitan otros cambios.
Ejemplo: En la Figura 2, los residuos de aminoácidos de CDRl y CDR2 de la cadena ligera variable homologa humana L12A se reemplazan con secuencias de aminoácidos de CDRl y CDR2 de la secuencia de cadena ligera del anticuerpo de conejo RbtVL. Las regiones flanqueantes 1, 2 y 3 de L12A humanas no se alteran. La secuencia humanizada resultante se muestra a continuación como residuos de VLh enumerados del 1 al 88. Nótese que solo se subrayan los residuos que son distintos a la secuencia humana L12A y por tanto son los residuos de aminoácidos derivados de conejo. En este ejemplo solo 8 de 88 residuos son diferentes a la secuencia humana. 7. Luego de la región flanqueante 3 de la nueva secuencia híbrida creada en la Etapa 6, adjuntar la totalidad de la CDR3 de la secuencia de anticuerpos de cadena ligera de conejo. La secuencia de CDR3 puede tener diversas longitudes pero tiene típicamente 9 a 15 residuos de aminoácidos de longitud. La región CDR3 y el comienzo de la próxima región de la región flanqueante 4 se definen clásicamente y de manera que se puedan identificar por aquellos expertos en la técnica. Típicamente el comienzo de la región flanqueante 4 y por tanto luego del final de la CDR3 consiste en la secuencia "FGGG...", sin embargo puede existir alguna variación en estos residuos.
Ejemplo: En la Figura 2, la CDR3 de RbtVL (residuos de aminoácidos enumerados del 89 al 100) se agrega al final de la región flanqueante 3 en la secuencia humanizada indicada como VLh. 8. La Región Flanqueante 4 de la cadena ligera de conejo que es típicamente los últimos 11 residuos de aminoácidos de la cadena ligera variable y comienza como se indica en la Etapa 7 anterior y termina típicamente con la secuencia de aminoácidos "...WKR", se reemplaza con el homólogo de la Región Flanqueante 4 de cadena ligera humana más cercana, normalmente de la secuencia germinal. Frecuentemente, esta región flanqueante 4 de cadena ligera humana es de secuencia ^FGGGTKVEIKR' . Es posible que otras secuencias de la Región Flanqueante 4 de cadena ligera humana que no son las más homologas o de otra manera diferentes, pueden usarse sin afectar la especificidad, afinidad y/o inmunogenicidad del anticuerpo humanizado resultante. Esta secuencia de la Región Flanqueante 4 de cadena ligera humana se agrega al final de la secuencia humanizada de cadena ligera variable que sigue inmediatamente la secuencia de CDR3 de la Etapa 7 anterior. Este es el final de la secuencia de aminoácidos humanizados de cadena ligera variable.
Ejemplo: En la Figura 2, la región flanqueante 4 (FR4) de la secuencia de cadena ligera de conejo RbtVL se muestra sobre una secuencia de FR4 humana homologa. La secuencia de FR4 humana se agrega a la secuencia de cadena ligera variable humanizada (VLh) enseguida del final de la región CD3 agregada en la Etapa 7 anterior. ; Cadena pesada : 1. Identificar el aminoácido que es el primero que le sigue a la secuencia de péptidos de señal. Este es el comienzo de la Región Flanqueante 1. El péptido de señales comienza en la primera metionina de iniciación y tiene típicamente 19 aminoácidos de longitud para las secuencias de proteínas de cadena pesada de conejo. Típicamente, pero no necesariamente siempre, los residuos finales de aminoácidos 3 de un péptido señal de cadena pesada de conejo son "...VQC" seguido del comienzo de la Región Flanqueante 1. El comienzo del polipéptido maduro también se puede determinar de manera experimental secuenciando la proteína N-terminal o se puede prever usando un algoritmo de previsión. Este también es el comienzo de la Región Flanqueante 1 tal como se suele definir por los expertos en la materia.
Ejemplo: Residuo de aminoácido RbtVL 1 en la Figura 2, que comienza con "QEQL..." 2. Identificar el final de la Región Flanqueante 3. Este tiene típicamente 95-100 aminoácidos que siguen al comienzo de la Región Flanqueante 1 y típicamente tiene la secuencia final "...CAR" (aunque la alanina también puede ser una valina) . Este es el final de la Región Flanqueante 3 tal como se suele definir por los expertos en la materia.
Ejemplo: Residuo de, aminoácido RbtVH 98 en la Figura 2, que termina con "... FCVR" . 3. Usar la secuencia de cadena pesada de conejo del polipéptido que comienza por el principio de la Región Flanqueante 1 hasta el final de la Región Flanqueante 3 tal como se definió anteriormente y realizar una búsqueda de homología de secuencias para las secuencias de proteínas de anticuerpos más similares. Esta será típicamente contra una base de datos de secuencias germinales humanas previa ¡a la maduración del anticuerpo para reducir la posibilidad de inmunogenicidad; sin embargo se puede usar cualquier secuencia humana. Típicamente se puede usar un programa del estilo de BLAST para buscar en una base de datos de secuencias las más homologas. Las bases de datos de secuencias de anticuerpos humanos pueden encontrarse en varias fuentes tales como NCBI (Centro Nacional de Información Biotecnológica) .
Ejemplo: La secuencia de aminoácidos RbtVH a partir de residuos numerados 1 a 98 en la Figura 2 se compara en. BLAST con una base de datos de lineas germinales de anticuerpos humanos. Las únicas tres secuencias principales devueltas se muestran en la Figura 2 como 3-64-04, 3-66-04 y 3-53-02. 4. En general, la secuencia de cadena pesada variable de la linea germinal humana más homologa luego se usa como base de la humanización. Sin embargo, aquellos expertos en la técnica pueden decidir usar otra secuencia que no fuera la más homologa tal como lo determina el algoritmo de homología, basado en otros factores que incluyen espacios de secuencias y similitudes de marco.
Ejemplo: 3-64-04 en la Figura 2, era la secuencia de cadena pesada variable de la línea germinal humana más homologa y se usa como base para la humanización de RbtVH. 5. Determinar la región flanqueante y el arreglo de CDR (FR1, FR2, FR3, CDR1 y CDR2) para el homólogo humano usado para humanización de cadena pesada. Esto es, usar la distribución tradicional tal como se describe en la materia. Alinear la secuencia de cadena pesada variable de conejo con el homólogo humano, mientras se mantiene la distribución de las regiones flanqueantes y CDR.
Ejemplo: En la Figura 2, la secuencia RbtVH se alinea con la secuencia homologa humana 3-64-04 y se indican los dominios flanqueantes y CDR. 6. Reemplazar las regiones CDR1 y CDR2 de la secuencia de cadena pesada homologa humana con las secuencias de CDR1 y CDR2 de la secuencia de conejo. Si existieran diferencias de longitud entre las secuencias de CDR humana y de conejo entonces usar la totalidad de las secuencias de CDR de conejo y sus longitudes. Adicionalmente, puede ser necesario reemplazar los últimos tres aminoácidos de la región flanqueante 1 de cadena pesada humana con los últimos tres aminoácidos de la región flanqueante 1 de cadena pesada de conejo. Típicamente, pero no siempre, en la región flanqueante 1 de cadena pesada de conejo estos tres residuos siguen los residuos de glicina precedidos por un residuo de serina. Además, puede ser necesario reemplazar el aminoácido final de la región flanqueante 2 de cadena pesada humana con el aminoácido 'final de la región flanqueante 2 de cadena pesada de conejo. Típicamente, pero no necesariamente siempre, este es un residuo de glicina antecedido por un residuo de isoleucina en la región flanqueante 2 de cadena pesada de conejo. Es posible que la especificidad, la afinidad y/o la inmunogenicidad . del anticuerpo humanizado resultante puedan no resultar alterados si se realizan intercambios de secuencia más pequeños o más grandes o si se alteran residuos específicos; sin embargo los intercambios tal como fueron descritos fueron usados exitosamente pero no excluyen la posibilidad de que se permitan otros cambios. Por ejemplo, un residuo de aminoácido de triptófano ocurre típicamente cuatro residuos antes que el final de la región CDR2 de cadena pesada de conejo, mientras que el la CDR2 de cadena pesada humana este residuo es típicamente un residuo de serina. Se ha demostrado que el hecho de cambiar este residuo de triptófano de conejo por un residuo de serina humana en esta posición tiene un efecto mínimo o inexistente sobre la especificidad o afinidad del anticuerpo humanizado y por tanto minimiza adicionalmente el contenido de los residuos de aminoácidos que derivan de la secuencia de conejo en la secuencia humanizada.
Ejemplo: En la Figura 2, los residuos de aminoácidos de CDR1 y CDR2 de la cadena pesada variable homologa huma'na se reemplazan por secuencias de aminoácidos de CDR1 y CDR2 'de la secuencia de cadena ligera de anticuerpo de conejo RbtVH, salvo el residuo secuenciado que es triptófano en la secuencia de conejo (número de posición 63) y serina en la misma posición en la secuencia humana y se mantiene como el residuo de serina humano. Adicionalmente a los cambios de CDR1 y CDR2 los últimos tres aminoácidos de la región flanqueante 1 (posiciones 28-30) asi como el residuo final de la región flanqueante 2 (posición 49) se retienen como residuos de aminoácidos de conejo en vez de humanos. La secuencia humanizada resultante se muestra a continuación como residuos de VHh enumerados del 1 al 98. Nótese que solo se subrayan los residuos que son distintos a la secuencia humana 3-64-04 y por tanto son residuos de aminoácidos derivados de conejo. En este ejemplo solo 15 de 98 residuos son diferentes de la secuencia humana. 7. Luego de la región flanqueante 3 de la nueva secuencia híbrida creada en la Etapa 6, adjuntar la totalidad de la CDR3 de la secuencia de anticuerpos de cadena pesada de conejo. La secuencia de CDR3 puede tener diversas longitudes pero tiene típicamente 5 a 19 residuos de aminoácidos de longitud. La región CDR3 y el comienzo de la próxima región flanqueante 4 se definen clásicamente y de manera que puedan identificarse por aquellos expertos en la técnica. Típicamente el comienzo de la región flanqueante 4 y por tanto luego del final de lá CDR3 consiste en la secuencia "WGXG..." (donde X es normalmente Q o P) ; sin embargo puede existir alguna variación en , estos residuos.
Ejemplo: La CDR3 de RbtVH (residuos de aminoácidos enumerados del 99 al 110) se agrega al final de la región flanqueante 3 en la secuencia humanizada indicada como VHh. 8. La región flanqueante 4 de la cadena pesada de conejo que son típicamente los últimos 11 residuos de aminoácidos de la cadena pesada variable y comienza como se indica en la Etapa 7 anterior y termina típicamente con la secuencia de aminoácidos "...TVSS" y se reemplaza- con el homólogo de la región flanqueante 4 de cadena pesada humana más cercana, normalmente de la secuencia germinal. Frecuentemente, esta región flanqueante 4 de cadena pesada humana es de secuencia 'WGQGTLVTVSS" . Es posible que otras secuencias de la región flanqueante 4 de cadena pesada humana que no son las más homologas o de otra manera diferentes, pueden usarse sin afectar la especificidad, afinidad y/o inmunogenicidad del anticuerpo humanizado resultante. Esta secuencia de la región flanqueante 4 de cadena pesada humana se agrega al final de la secuencia humanizada de cadena pesada variable que sigue inmediatamente la secuencia de CDR3 de la Etapa 7 anterior. Este es el final de la secuencia de aminoácidos humanizados de cadena pesada variable.
Ejemplo: En la Figura 2, la región flanqueante 4 (FR4) de la secuencia de cadena pesada de conejo RbtVH se muestra 1 sobre una secuencia de FR4 pesada humana homologa. La secuencia de FR4 humana se agrega a la secuencia de cadena pesada variable humanizada (VHh) enseguida del final de la región CD3 que se agrega en la Etapa 7 anterior.
Métodos para la producción de anticuerpos y fragmentos de los mismos La invención también se dirige a la producción de anticuerpos descritos en la presente o fragmentos de los mismos. Los polipéptidos recombinantes que corresponden a los anticuerpos descritos en la presente o fragmentos de los mismos se secretan a partir de cepas poliploides, preferentemente diploides o tetraploides de levadura que puede aparearse. En un ejemplo de modalidad, la invención se dirige a métodos para la producción de estos polipéptidos recombinantes en forma secretada por periodos prolongados usando cultivos que comprenden levadura poliploide, esto es, al menos varios días a una semana, más preferentemente al menos un mes o varios meses y aun más preferentemente al menos 6 meses a un año o más. Estos cultivos de levadura poliploide expresarán al menos 10-25 mg/litro del polipéptido, más preferentemente al menos 50-250 mg/litro, aun más preferentemente al menos 500-1000 mg/litro y más preferentemente un gramo por litro o más de polipéptido/s recombinante/s .
En una modalidad de la invención, un par de células haploides de levadura marcadas genéticamente se transforman con vectores de expresión que comprenden subunidades de una proteina heteromultimérica deseada. Una célula haploide comprende un primer vector de expresión y una segunda célula haploide comprende un segundo vector de expresión. En otra modalidad, las células diploides de levadura serán transformadas con uno o más vectores de expresión que proporcionan la expresión y secreción de uno o más de los polipéptidos recombinantes . En aun otra modalidad, una célula haploide simple puede transformarse con uno o más vectores y usarse para producir una levadura poliploide mediante estrategias de fusión o apareamiento. En aun otra modalidad, un cultivo de levadura diploide puede transformarse con uno o más vectores que proporcionan la expresión y secreción de un/os polipéptido/s deseado/s. Estos vectores pueden comprender vectores, por ej . plásmidos linealizados u otros productos de ADN lineal que integran el genoma celular de la levadura al azar a través de la recombinación homologa o usando una recombinasa tal como Cre/Lox o Flp/Frt. Opcionalmente, vectores de expresión adicionales pueden introducirse en las células haploides o diploides; o el primer o segundo vector de expresión puede comprender secuencias de codificación adicional para la síntesis de heterotrímeros; heterotetrámeros; etc. Los niveles de expresión de los polipéptidos no idénticos pueden calibrarse individualmente y ajustarse a través de una selección apropiada, número de copia de vector, fuerza del promotor e/o inducción y similares. Las células haploides transformadas se cruzan o fusionan genéticamente. Las cepas diploides o tetraploides resultantes se utilizan para producir y secretar proteínas totalmente ensambladas y funcionales biológicamente, anticuerpos humanizados descritos en la presente o fragmentos de los mismos.
El uso de células diploides o tetraploides para la producción de proteínas proporciona beneficios inesperados. Se pueden cultivar células para fines de producción, esto es, aumentado a escala y por períodos de tiempo extendidos, en condiciones que pueden ser perjudiciales para el cultivo de células haploides, cuyas condiciones pueden incluir una alta densidad celular; cultivo en medios mínimos; cultivo a bajas temperaturas; cultivo estable en ausencia de presión selectiva y que puede proporcionar el mantenimiento de una integridad de secuencia de genes heterologos y mantenimiento de un alto nivel de expresión en el tiempo. Sin ánimo de limitarse a esto, los inventores teorizan acerca de que esos beneficios pueden surgir, al menos en parte, de la creación de dos cepas diploides de cepas haploides parentales distintas. Tales cepas haploides pueden comprender varias mutaciones autotróficas de poca importancia; estas mutaciones se complementan en la diploide o tetraploide, posibilitando el crecimiento y la producción mejorada en condiciones altamente selectivas. ; Las células de levadura haploides capaces de apareamiento proporcionan un método genético que permita el apareamiento de subunidades de una proteína deseada. Las cepas de levadura haploide se transforman con cada uno de los dos vectores de expresión, un primer vector para dirigir la síntesis de una cadena de polipéptido y un segundo vector para dirigi;r la síntesis de una segunda cadena de polipéptidos no idénticos. Las dos cepas haploides se aparean para proporcionar un hospedador diploide donde se puede obtener una producción de proteínas objetivo optimizados.
Opcionalmente, se proporcionan secuencias de codificación no idénticas. Tales secuencias pueden estar presentes en vectores de expresión adicionales o en el primer o segundo vector de expresión. Tal como se conoce en la técnica, múltiples secuencias de codificación pueden expresarse independientemente de promotores individuales; o se pueden expresar de manera coordinada a través de la inclusión de un "sitio interno de entrada al ribosoma" o "IRES" que es un elemento que promueve una entrada de ribosomas internos al codón de iniciación tal como aTG de un cistrón (una región que codifica una proteína) causando una traducción del gen independiente de cap. Se describen elementos IRES funcionales en levadura en Thompson et al. (2001) P.N. A. S. 98:12866-12868.
En una modalidad de la invención, las secuencias de anticuerpo se producen en combinación con una cadena secretora J, que proporciona estabilidad mejorada de IgA (véase Patentes estadounidenses N° 5,959,177; y 5,202,422).
En una modalidad preferida, las dos cepas de levadura haploides son cada una auxotróficas y requieren un complemento de medios para el cultivo de células haploides. El par de auxotróficos son complementarios, de manera que el producto diploide crecerá en la ausencia de los complementos requeridos para las células haploides. Muchos de esos marcadores genéticos son conocidos en la levadura, e incluyen requerimientos de aminoácidos (por ej . met, lys, his> arg, etc.), nucleósidos (por ej . ura3, adel, etc.); y similares. Los marcadores de aminoácidos se preferirán para los métodos de la invención. De manera alternativa, las células diploid.es que contienen los vectores deseados pueden seleccionarse por otros medios, por ej . , por el uso de otros marcadores tales como proteina verde fluorescente, genes resistentes a antibióticos, diversos marcadores seleccionables dominantes y similares.
Se cruzan genéticamente células haploides transformadas y se seleccionan cepas diploides que surgen del evento de apareamiento por sus requerimientos nutricionales híbridos y/o espectro de resistencia a antibióticos. De manera alternativa, las poblaciones de dos cepas haploides transformadas se someten a esferoplasto y se fusionan y se regenera y selecciona la progenie diploide. Por medio de cualquier método, se pueden identificar las cepas diploides y se desarrollan de ;forma selectiva basándose en su habilidad de crecer en medios distintos de sus progenitores. Por ejemplo, las células diploides se pueden desarrollar en un medio mínimo que puede incluir antibióticos. La estrategia de síntesis diploide tiene ciertas ventajas. Las cepas diploides tienen el potencial de producir niveles mejorados de proteína heteróloga a través de una complementación más amplia para mutaciones subyacentes que pueden impactar en la producción y/o secreción de proteina recombinante . Además, una vez que se obtienen las cepas estables, cualquier antibiótico usado para seleccionar esas cepas no necesita necesariamente estar presente continuamente en el medio de cultivo.
Tal como se observa anteriormente, en algunas modalidades, se puede transformar una levadura haploide con uno o múltiples vectores y apareado o fusionado con una célula no transformada para producir una célula diploide que contiene el o los vectores. En otras modalidades, se puede transformar una levadura diploide con uno o más vectores que proporcionan la expresión y secreción de un polipéptido heterólogo deseado por medio de la célula de levadura diploide.
En una modalidad de la invención, se transforman dos cepas haploides con una biblioteca de polipéptidos, por ej.> una biblioteca de anticuerpo de cadena pesada o ligera. Las células haploides transformadas que sintetizan los polipéptidos se aparean con las células haploides complementarias. '. Las células diploides resultantes se analizan para determinar la proteina funcional. Las células diploides proporcionan un medio para reunir rápidamente, convenientemente y económicamente una gran cantidad de combinaciones de polipéptidos para pruebas funcionales. Esta tecnología es en especial aplicable para la creación de productos de proteina heterodimérica, donde los niveles de síntesis de subunidad optimizados son críticos para la expresión y secreción de proteínas funcionales.
En otra modalidad de la invención, la relación del nivel de expresión de las dos subunidades se regula para poder maximizar la creación de productos. Los niveles de proteína de subunidad heterodimérica han demostrado anteriormente impactar la creación de productos finales (Simmons LC, J Immunol Methods. 2002 May 1/263 (1-2) : 133-47) . La regulación puede lograrse previo a la etapa de apareamiento mediante la selección de un marcador presente en el vector de expresión. Se puede aumentar el nivel de expresión aumentando de forma estable el número de copia del vector. En algunos casos, se puede desear aumentar el nivel de una cadena relativa a otra de manera de alcanzar una proporción balanceada entre las subunidades del polipéptido. Los marcadores de resistencia a antibióticos son útiles para este fin, por ej . marcador de resistencia Zeocin™ (fleomicina) , resistencia a G418, etc. y proporcionan un medio de enriquecimiento para cepas que contienen múltiples copias integradas de un vector de expresión en una cepa seleccionando transformadores resistentes a mayores niveles de Zeocin™ (fleomicina) o G418. La relación de proteínas, por ej . 1:1, 1:2, etc. de los genes de la subunidad pueden resultar importantes para la eficiente protección de proteínas. Aun cuando se usa el mismo promotor para transcribir ambas subunidades, muchos otros factores pueden contribuir al nivel final de proteina expresado y por tanto puede ser útil para aumentar el número de copias de un gen codificado relativo al otro. De manera alternativa, las, cepas diploides que producen mayores niveles de un polipéptido relativos a cepas de vector de copia simple, se crean apareando dos cepas haploides y ambas tienen múltiples copias de vectores de expresión.
Las células hospedadoras se transforman con los vectores de expresión antemencionados, apareados para formar cepas diploides y cultivados en medios nutritivos convencionales modificados según corresponda para la inducción de promotores, selección de los transformadores o amplificación de los genes que codifican las secuencias deseadas. Se conoce en la técnica un número de medios mínimos adecuados para el cultivo de levadura. Cualquiera de estos medios puede complementarse , según sea necesario con sales (tales como cloruro de sodio, calcio, magnesio y fosfato) , tampones (tales como fosfato, HÉPES) , nucleósidos (tales como adenosina y timidina) , antibióticos, elementos traza y glucosa o una fuente de energía equivalente. Cualquier otro suplemento necesario también puede incluirse en concentraciones apropiadas conocidas por aquellos expertos en la técnica. Las condiciones del cultivo, tales como temperatura, pH y similares son aquellos previamente usado.s con la célula hospedadora seleccionada para la expresión y será evidente para los expertos en la técnica.
Las proteínas secretadas se recuperan del medio de cultivo. Un inhibidor de proteasa, tal como fluoruro de fenil metil sulfonilo (PMSF) puede ser útil para inhibir la degradación proteolítica durante la purificación y se pueden incluir antibióticos para prevenir el cultivo de contaminantes accidentales. La composición puede concentrarse, filtrarse, dializarse, etc., usando métodos conocidos en la técnica.
Las células diploides de la invención se cultivan para fines de producción. Tales fines de producción incluyen de forma deseada el cultivo en medios mínimos que carece de aminoácidos preformados y otras biomoléculas complejas, por ej . medios que comprenden amoníaco como fuente de nitrógeno y glucosa como fuente de energía y carbono y sales como fuente de fosfato, calcio y similares. Preferentemente, tales medios de producción carecen de agentes selectivos tales ' como antibióticos, aminoácidos, purinas, pirimidinas, etcJ Las células diploides pueden cultivarse con alta densidad celular, por ejemplo al menos alrededor de 50 g/L; más normalmente al menos de alrededor de 100 g/L; y al menos alrededor dé 300, alrededor de 400, alrededor de 500 g/L o más.
En una modalidad de la invención, el cultivo de las células analizadas para los fines de producción se realiza en temperaturas bajas que pueden bajarse durante la fase logarítmica, durante la fase estacionaria, o ambas. El término "baja temperatura" se refiere a temperaturas de al menos alrededor de 15 °C, más normalmente al menos alrededor de 17 °C y tal vez alrededor de 20 °C y normalmente no mayores a alrededor de 25 °C, más normalmente no mayores a alrededor de 22 °C. En otra modalidad de la invención, la temperatura baja normalmente no es mayor que alrededor de 28 °C. La temperatura de cultivo puede impactar la producción de proteínas secretadas en su longitud completa en cultivos de producción y el hecho de reducir las temperaturas de crecimiento del cultivo puede aumentar fuertemente el rendimiento del producto intacto. Las temperaturas disminuidas parecen asistir el tráfico intracelular a través de las vías de procesamiento de plegamiento y postraduccionales usadas por el hospedador para generar el producto objetivo junto con una reducción de degradación de proteasa celular.
Los métodos de la invención proporcionan la expresión de proteína secretada activa preferentemente una proteína mamífera. En una modalidad, los "anticuerpos activos" secretados, tal como se usan en la presente, se refieren a un multímero correctamente plegado de al menos dos cadenas arregladas apropiadamente en pares y que se unen con exactitud a su antígeno cognado. Los niveles de expresión de proteínas activas son normalmente al menos alrededor de 10-50 mg/litro del cultivo, más normalmente al menos alrededor de 100 mg/litro, preferentemente al menos alrededor de 500 mg/litro y pueden ser 1000 mg/litro o más.
Los métodos de la invención pueden proporcionar una estabilidad aumentada de las secuencias hospedadoras y heterólogas de codificación durante la producción. La estabilidad se evidencia, por ejemplo, mediante el mantenimiento de altos niveles de expresión de tiempo, cuando el nivel de expresión de partida disminuye en no más de alrededor de 20%, normalmente no más de alrededor de 10% y puede disminuir en no más de 5% de alrededor de 20 duplicaciones, 50 duplicaciones, 100 duplicaciones o más.
La estabilidad de las cepas también proporciona el mantenimiento de la integridad de las secuencias de genes heterólogos con el paso del tiempo, donde se mantiene la secuencia de la secuencia de codificación activa y los elementos necesarios de regulación transcripcional en al menos alrededor del 99% de las células diploides, normalmente en al menos alrededor del 99.9% de las células diploides y preferentemente en al menos alrededor del 99.99% de las células diploides de 20 duplicaciones, 50 duplicaciones,' 100 duplicaciones o más. Preferentemente, sustancialmente todas las células diploides mantienen la secuencia de la secuencia de codificación activa y los elementos necesarios de regulación transcripcionales .
Otros métodos para la producción de anticuerpos son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, métodos para la producción de anticuerpos quiméricos son ahora bien conocidos en la técnica (Véase, por ejemplo, , Patent estadounidense N° 4,816,567 to Cabilly et al.; orrison et al., P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. et al., Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. et al., Nature, 312:643-46 (1984), cuyas descripciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia) .
Asimismo, otros métodos para la producción de anticuerpos humanizados son ahora bien conocidos en la técnica (Véase, por ejemplo, Patente estadounidense N° 5,530,101, 5, 58.5, 089, 5,693,762 y 6,180,370 to Queen et al; Patente estadounidense N° 5,225,539 y 6,548,640 to Winter; Patente estadounidense N° 6,054,297, 6,407,213 y 6,639,055 to Cárter et al; Patente estadounidense N° 6,632,927 to Adair; Jones, P.T. et al, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L . , et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, et al, Science, 239:1534-36 (1988), cuyas descripciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia) . ; Los polipéptidos del anticuerpo de la invención que poseen especificidad de unión a IL-6 también pueden producirse construyendo, usando técnicas convencionales bien conocidas en la técnica, un vector de expresión que contiene un operón y una secuencia de ADN que codifica una cadena pesada de anticuerpo en donde la secuencia de ADN que codifica las CDR necesarias para la especificidad del anticuerpo proviene de una fuente celular no humana, preferentemente una fuente de linfocitos B de conejo, mientras que la secuencia de ADN que codifica las partes remanentes de la cadena de anticuerpo proviene de una fuente celular humana.
Un segundo vector de expresión se produce usando los mismos medios convencionales bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, dicho vector de expresión contiene un operón y una secuencia de ADN que codifica una cadena ligera de anticuerpo donde la secuencia de ADN que codifica las CDR necesarias para la especificidad del anticuerpo proviene de una fuente celular no humana, preferentemente una fuente de linfocitos B de conejo, mientras que la secuencia de ADN que codifica las partes remanentes de la cadena de anticuerpo proviene de una fuente celular humana Los vectores de expresión se transfectan en una célula hospedadora mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica para producir una célula hospedadora transíectada ; esta célula hospedadora transfectada cultivada mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica para producir dichos polipéptidos de anticuerpos .
La célula hospedadora puede transfectarse conjuntamente con los dos vectores de expresión descritos anteriormente, el primer vector de expresión contiene ADN que codifica un operón y un polipéptido derivado de una cadena ligera y el segundo vector contiene ADN que codifica un operón y un polipéptido derivado de una cadena pesada. Los dos vectores contienen diferentes marcadores seleccionables, pero preferentemente alcanzan sustancialmente la misma expresión de polipéptidos de cadena pesada y ligera. De manera alternativa, se puede usar un vector simple, este vector incluye ADN que codifica ambos polipéptidos de cadena pesada y ligera. Las secuencias de codificación para las cadenas pesadas y ligeras pueden comprenden ADNc.
Las células hospedadoras usadas para expresar polipéptidos de anticuerpo pueden ser tanto células bacterianas, como ser E.coli, como una célula eucariota. En una modalidad preferida de la invención, se puede usar una célula mamífera de un tipo bien definido para este fin, tal como una línea celular de célula de mieloma o de ovario de hámster chino (CHO) .
Los métodos generales por los cuales se pueden construir los vectores, métodos de transfección requeridos para producir la célula hospedadora y métodos de cultivo requeridos para producir los polipéptidos de anticuerpo a partir de dichas células hospedadoras, todos incluyen técnicas convencionales. Aunque preferentemente la línea celular usada para producir el anticuerpo es una línea celular de mamífero, cualquier otra línea celular adecuada, tal como una línea celular de bacteria como ser una cepa bacteriana derivada de E.coli, o una línea celular de levadura, puede usarse de manera alternativa.
De manera similar, los polipéptidos de anticuerpo una vez producidos pueden estar purificados de acuerdo con los procedimientos estándar de la técnica, tal como por ejemplo, filtración de flujo cruzado, precipitación de sulfato de amonio, cromatografía de afinidad de columna y similares.
Los polipéptidos de anticuerpo descritos en la presente también pueden usarse para el diseño y síntesis de cualquier mimético peptídico o no peptídico que pueden ser útiles para las mismas aplicaciones terapéuticas que los polipéptidos de anticuerpo de la invención. Véase, por ejemplo, Saragobi et al, Science, 253:792-795 (1991), cuyo contenido se incorpora en su totalidad a modo de referencia.
Ensayos de análisis La invención también incluye ensayos de análisis diseñados para asistir a la identificación de enfermedades y trastornos asociados con IL-6 en pacientes que presentan síntomas dé una enfermedad o trastorno asociado con IL-6.
En una modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 de la invención o fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, se usan para detectar la presencia de IL-6 en una muestra biológica obtenida de un paciente que presenta síntomas dé una enfermedad o trastorno asociado con IL-6. La presencia de ; IL-6 o niveles elevados de este al compararse con niveles de ;IL-6 previos a la enfermedad en una muestra biológica comparable, puede ser beneficioso para el diagnóstico de una enfermedad o trastorno asociado con IL-6.
Otra modalidad de la invención proporciona un ensayo de diagnóstico o análisis para asistir al diagnóstico de enfermedades o trastornos asociados con IL-6 en pacientes que presentan síntomas de una enfermedad o trastorno asociado con IL-6 identificado en la presente, que comprenden ensayar el nivel de expresión de IL-6 en una muestra biológica de dicho paciente usando un anticuerpo anti-IL-6 modificado postraduccionalmente o un fragmento de unión del mismo. El anticuerpo anti-IL-6 o el fragmento de unión del mismo pueden estar modificados postraduccionalmente para incluir un resto detectable tal como se establece previamente en la descripción.
El nivel de IL-6 en la muestra biológica se determina usando un anticuerpo anti-IL-6 o un fragmento de unión del mismo tal como se establece en la presente y comparando el nivel de IL-6 en la muestra biológica contra el nivel estándar de IL-6 (por ej . , el nivel en muestras biológicas normáles) . El médico experto entenderá que puede existir variabilidad entre las muestras biológicas normales y lo tomará en cuenta al evaluar los resultados.
El ensayo mencionado anteriormente también puede ser útil en el monitoreo de una enfermedad o trastorno, donde el nivel de IL-6 obtenido en una muestra biológica de un paciente que se cree tiene una enfermedad o trastorno asociado con IL-6 se compara con el nivel de IL-6 en muestras biológicas anteriores en el mismo paciente, para poder establecer si el nivel de IL-6 en dicho paciente ha cambiado, por ejemplo, con un régimen de tratamiento .
La invención también se dirige a un método de diagnóstico por imágenes in vivo que detecta la presencia de células que expresan IL-6 que comprenden administrar una cantidad efectiva desde el punto de vista del diagnóstico de una composición de diagnóstico. Dichos diagnósticos por imágenes in vivo son útiles para la detección y diagnóstico por imágenes de IL-6 que expresan tumores y metástasis y sitios inflamatorios que expresan IL-6, por ejemplo y pueden usarse como parte de un régimen de planificación para diseñar un protocolo de tratamiento efectivo para artritis o cáncer. El protocolo de tratamiento puede incluir, por ejemplo, uno o más de radiación, quimioterapia, terapia con citocina, terapia genética y terapia con anticuerpos, asi como un anticuerpo anti-IL-6 o fragmento del mismo. ; Un médico experto entenderá que una muestra biológica incluye pero no se limita a suero, plasma, orina, saliva, mucosa, fluido pleural, fluido sinovial y fluido espinal.
Métodos para mejorar o reducir síntomas de o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con IL-6.
En una modalidad de la invención, los antagonistas de IL-6 descritos en la presente son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con IL-6. Los antagonistas de IL-6 descritos en la presente pueden también administrarse en una cantidad terapéuticamente efectiva a pacientes que necesitan de un tratamiento para enfermedades y trastornos asociados con IL-6 en forma de una composición farmacéutica tal como se describe en detalle a continuación.
En una modalidad de la invención, los antagonistas de IL-6 descritos en la presente son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con la proteína C-reactiva (CRP) elevada. Tales enfermedades incluyen cualquier enfermedad que presenta inflamación crónica, por ej . , artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, psoriasis, artropatía psoriática, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pénfigo, dermatomiositis, polimiositis, polimialgia reumática, artéritis de células gigantes, vasculitis, poliarteritis nódosa, granulomatosis de egener, enfermedad de Kawasaki, vasculitis aislada del sistema nervioso central, artéritis de Churg-Strauss, poliarteritis microscópica, poliangiitis microscópica, púrpura de Henoch-Schonlein, vasculitis crioglobulinémica esencial, vasculitis reumatoide, crioglobulinemia, policondritis recidivante, enfermedad de Behcet, artéritis de Takayasu, enfermedad cardiaca isquémica, apoplejía, esclerosis múltiple, sepsis, vasculitis causada por infecciones virales (por ej . , hepatitis B, hepatitis C, VIH, citomegalovirus , virus Epstein-Barr, virus Parvo B19, etc.), enfermedad de Buerger, cáncer, cáncer avanzado, osteoartritis , esclerosis sistémica, síndrome de CREST, enfermedad de Reiter, enfermedad ósea de Paget, síndrome de Sjogran, diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, fiebre mediterránea familiar, trombocitopenia autoínmune, anemia hemolítica autoínmune, enfermedad tiroidea autoínmune, anemia perniciosa, vitíligo, alopecia areata, cirrosis biliar primaria, hepatitis activa crónica autoínmune, cirrosis alcohólica, hepatitis viral incluyendo hepatitis B y C, otras enfermedades autoinmunes específicas de órganos, quemaduras, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma alérgico, otras afecciones alérgicas o cualquier combinación de los mismos.
En una modalidad de la invención, los antagonistas de IL-6 descritos en la presente son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con albúmina en suero reducida, por ej . , artritis reumatoide, cáncer, cáncer avanzado, enfermedad hepática, enfermedad renal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad celíaca, traumatismo, quemaduras, otras enfermedades asociadas con albúmina en suero reducida o cualquier combinación de las mismas.
En otra modalidad de la invención, los antagonistas de IL-6 descritos en la presente se administran a un paciente en combinación con otro agente activo. Por ejemplo, el antagonista de IL-ß también puede administrarse conjuntamente con uno o más agentes quimioterapéuticos , tales como antagonistas de VEGF, antagonistas de EGFR, platinos, taxoles, irinotecano, 5-fluorouracilo, gemcitabina, leucovorina, esferoides, ciclofosfamida, melfalán, alcaloides de la vinca (por ej . , vinblastina, vincristina, vindesina y vinorelbina) , mustinas, inhibidores de tirosina cinasa, radioterapia, antagonistas de hormonas sexuales, moduladores selectivos del receptor de andrógeno, moduladores selectivos del receptor de estrógeno, antagonistas de PDGF, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-1, interleucinas (por ej . IL-12 o IL-2), antagonistas de IL-12R, anticuerpos monoclonales conjugados con toxinas, anticuerpos monoclonales específicos contra antígenos tumorales, Erbitux™, Avastin™, Pertuzumab, anticuerpos ' anti-CD20, Rituxan®, ocrelizumab, ofatumumab, DXL625, Herceptin®, o combinaciones de los mismos.
En una modalidad de la invención, los antagonistas de anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con la fatiga. Enfermedades y trastornos asociados con la fatiga incluyen pero no se limitan a, fatiga general, fatiga inducida por ejercicio, fatiga relacionada con cáncer, fibromialgia, fatiga relacionada con enfermedad inflamatoria y síndrome de fatiga crónica. Véase, por ejemplo, Esper DH, et al, The cáncer cachexia syndrome: a review of metabolic and clinical manifestations , Nutr Clin Pract . , 2005 Aug;20 (4):369-76; Vgontzas AN, et al, IL-6 and its circadian secretion in humans, Neuroimmunomodulation, 2005; 12 (3) : 131-40; Robson-Ansley, PJ, et al, Acute interleukin-6 administration impairs athletic performance in healthy, trained male runners, Can J Appl Physiol., 2004 Aug; 29 ( 4 ) : 411-8 ; Shephard RJ. , Cytokine responses to physical activity, with particular reference to IL-6: sources, actions, and clinical implications , Crit Rev Immunol., 2002 ; 22 ( 3 ): 165-82 ; Arnold, MC, et al, Using an interleukin-6 challenge to evalúate neuropsychological performance in chronic fatigue syndrome, Psychol Med., 2002 Aug; 32 (6) : 1075-89; Kurzrock R. , The role of cytokines in cancer-related fatigue, Cáncer, 2001 Sep 15;92(6 Suppl) : 1684-8 ; Nishimoto N, et al, Improvement in Castleman's disease by humanized anti-interleukin-6 receptor antibody therapy, Blood, 2000 Jan 1; 95 (1):56-61; Vgontzas AN, et al, Circadian interleukin-6 secretion and quantity and depth of sleep, J Clin Endocrinol Metab., 1999 Aug; 84 ( 8 ): 2603-7 ; and Spath-Schwalbe E, et al, Acute effects of recombinant human interleukin 6 on endocrine and central nervous sleep functions in healthy men, J Clin Endocrinol Metab., 1998 May; 83 (5) : 1573-9; icuyas descripciones se incorporan en su totalidad a la presente como referencia .
En una modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir la caquexia. Enfermedades y trastornos asociados con la caquexia incluyen pero no se limitan a, caquexia cancerosa, caquexia cardíaca, caquexia respiratoria, caquexia renal y caquexia relacionada con la edad. Véase, por ejemplo, Barton, BE., Interleukin-ß and new strategies for the treatment of cáncer, hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes, Expert Opin Ther Targets, 2005 Aug; 9 (4) :737-52; Zaki MH, et al, CNTO 328, a monoclonal antibody to IL-ß, inhibits human tumor-induced cachexia in nude mice, Int J Cáncer, 2004 Sep 10 ; 111 (4) : 592-5 ; Trikha M, et al, Targeted anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for cáncer: a review of the rationale and clinical evidence,' Clin Cáncer Res., 2003 Oct 15 ; 9 ( 13 ) : 653-65 ; Lelli G, ef al, Treatment of the cáncer anorexia-cachexia syndrome: a critical reappraisal, J Chemother., 2003 Jun; 15 (3) : 220-5; Argües JM, et al, Cytokines in the pathogenesis of cáncer cachexia, Curr Opin Clin Nutr Metab Care, 2003 Jul ; 6 ( 4 ) : 401-6; Barton BE., IL-6-like cytokines and cáncer cachexia: consequences of chronic inflammation, Immunol Res., 2001;23 (1) : 41-58; Yamashita JI, et al, Medroxyprogesterone acétate and cáncer cachexia: interleukin-6 involvement, Breast Cáncer, 2000 ; 7 ( 2 ) : 130-5 ; Yeh SS, et al, Geriatric cachexia: the role of cytokines, Am J Clin Nutr., 1999 Aug; 70 (2) : 183-97 ; Strassmann G, et al, Inhibition of experimental cáncer cachexia by anti-cytokine and anti-cytokine-receptor therapy, Cytokines Mol Ther., 1995 Jun; 1 ( 2 ): 107-13 ; Fujita J, et al, Anti-interleukin-6 receptor antibody prevents muscle atrophy in colon-26 adenocarcinoma-bearing mice with modulation of lysosomal and ATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways, Int J Cáncer, 1996 Nov 27; 68 (5) : 637-43; Tsujinaka T, et al, Interleukin 6 receptor antibody inhibits muscle atrophy and modulates proteolytic systems in interleukin 6 transgenic mice, J Clin Invest., 1996 Jan 1; 97 (1) : 244-9; Emilie D, et al, Administration of an anti-interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma: effect on lymphoma growth and on B clinical Symptoms, Blood, 1994 Oct 15; 84 (8):2472-9; and Strassmann G, et al, Evidence for the involvement of interleukin 6 in experimental cáncer cachexia, J Clin Invest., 1992 May; 89 ( 5 ) : 1681-4 ; cuyas descripciones se incorporan en su totalidad a la presente como referencia. .
En otra modalidad de la invención, los antagonistas de anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos autoinmunes. Enfermedades y trastornos asociados con autoinmunidad incluyen pero no se limitan a, artritis reurnatoide, lupus eritematoso sistémico (SLE) , artritis idiopática juvenil sistémica, psoriasis, artropatia psoriática, espondilitis anquilosante, enfermedad inflamatoria intestinal (IBD), polimialgia reumática, arteritis de células gigantes, vasculitis autoinmune, enfermedades de injerto versus huésped (GVHD) , síndrome de Sjogren, enfermedad de Still de comienzo en el adulto. En una modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 humanizados descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir artritis reurnatoide y artritis idiopática juvenil sistémica. Véase, por ejemplo, Nishimoto N., Clinical studies in patients with Castleman' s disease, Crohn' s disease, and rheumatoid arthritis in Japan, Clin Rev Allergy Immunol., 2005 Jun;28 (3) :221-30; Nishimoto N, et al, Treatment of rheumatoid arthritis with humanized anti-interleukin-6 receptor antibody: a multicenter, double-blind, placebo-controlled trial, Arthritis Rheum. , 2004 Jun; 50 ( 6) : 1761-9/ Choy E . , Interleúkin 6 receptor as a target for the treatment of rheumatoid arthritis, Ann Rheum Dis., 2003 Nov;62 Suppl 2:ii68-9; Nishimoto N, et al, Toxicity, pharmacokinetics, and dose-finding study of repetitive treatment with the humanized anti-interleukin 6 receptor antibody IVIRA in rheumatoid arthritis. Phase I/II clinical study, J Rheumatol . , 2003 Jul ; 30 ( 7 ) : 1426-35 ; Mihara M, et al, Humanized antibody to human interleukin-ß receptor inhibits the development of collagen arthritis in cynomolgus monkeys, Clin Immunol., 2001 Mar; 98 (3) : 319-26; Nishimoto N, et al, Anti-interleukin 6 receptor antibody treatment in rheumatic disease, Ann Rheum Dis., 2000 Nov;59 Suppl l:i21-7; Tackey E, et al, Rationale for interleukin-ß blockade in systemic lupus erythematosus, Lupus, 2004; 13 (5) :339-43; Finck BK, et al, Interleukin 6 promotes murine lupus in NZB/NZW Fl mice, J Clin Invest., 1994 Aug;94 (2):585-91; Kitani A, et al, Autostimulatory effects of IL-6 on excessive B 1 cell differentiation in patients with systemic lupus erythematosus: analysis of IL-6 production and IL-6R expression, Clin Exp Immunol., 1992 Apr; 88 ( 1 ): 75-83 ; Stuart RA, et al, Elevated serum interleukin-6 levéis associated with active disease in systemic connective tissue disorders, Clin Exp Rheumatol., 1995 Jan-Feb;13 (l):17-22; Miñara M, et al, IL-6 receptor blockage inhibits the onset of autoimmune kidney disease in NZB/W Fl mice, Clin Exp Immunol., 1998 Jun; 12 (3) : 397-402; oo P, et al, Open label phase II trial of single, ascending doses of MRA in Caucasian children with severe systemic juvenile idiopathic arthritis: proof of principie of the efficacy of IL-6 receptor blockade in this type of arthritis and demonstration of prolonged clinical improvement, Arthritis Res Ther., 2005;7 (6) :RI281-8. Epub 2005 Sep 15; Yokota S, et al, Clinical study of tocilizumab in children with systemic-onset juvenile idiopathic arthritis, Clin Rev Allergy Immunol., 2005 Jun;28 (3) :231-8; Yokota S, et al, Therapeutic efficacy of humanized recombinant anti-interleukin-6 receptor antibody in children with systemic-onset juvenile idiopathic arthritis, Arthritis Rheum. , 2005 Mar; 52 (3) : 818-25; de Benedetti F, et al, Targeting the interleukin-6 receptor: a new treatment for systemic juvenile idiopathic arthritis?, Arthritis Rheum., 2005 Mar; 52 (3) : 687-93; De Benedetti F, et al, Is systemic juvenile rheumatoid arthritis an interleukin 6 mediated disease?, J Rheumatol., 1998 Feb; 25 (2 ) : 203-7 ; Ishihara K, et al, IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferative disease, Cytokine Growth Factor Rev., 2002 Aug-0ct;13 (4-5):357- 68; Gilhar A, et al, In vivo effects of cytokines on psoriatic skin grafted on nude mice : involvement of the tumor necrosis factor (TNF) .receptor, Clin Exp Immunol., 1996 Oct; 106 (1) : 134-42; Spadaro A, et al, Interleukin-6 and soluble interleukin-2 receptor in psoriatic arthritis: correlations with clinical and laboratory parameters, Clin Exp Rheumatol., 1996 Jul-Aug;14 (4):413-6; Ameglio F, et al, Interleukin-6 and tumor necrosis factor levéis decrease in the suction blister fluids of psoriatic patients during effective therapy, Dermatology, 1994 ; 189 ( 4 ) : 359-63 ; Wendling D, et al, Combination therapy of anti-CD4 and anti-IL-6 monoclonal antibodies; in a case of severe spondylarthropathy, Br J Rheumatol., 1996 Dec; 35 ( 12 ) : 1330 ; Gratacos J, et al, Serum cytokines (IL-6; TNF-alpha, IL-1 beta and IFN-gamma) in ankylosing spondylit;is : a cióse correlation between serum IL-6 and disease activity and severity, Br J Rheumatol., 1994 Oct; 33 (10) : 927-31; Ito H., Treatment of Crohn' s disease with anti-IL-6 receptor antibody, J Gastroenterol. , 2005 Mar;40 Suppl 16:32-4; Ito H, et al, A pilot randomized trial of a human anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody in active Crohn' s disease, Gastroenterology, 2004 Apr; 126 ( ): 989-96; discussion 947; Ito H., IL-6 and Crohn' s disease, Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2003 Jun; 2 (2 ) : 12530 ; Ito H, et al, Anti-IL-ß receptor monoclonal antibody inhibits leukocyte recruitment and promotes T-cell apoptosis in a murine model of Crohn' s disease, J Gastroenterol., 2002 Nov;37 Suppl 14:56-61; Ito H., Anti-interleukin-6 therapy for Crohn' s disease, Curr Pharm Des., 2003; 9 (4) -.295-305; Salvarani C, et al, Acute-phase reactants and the risk of relapse/recurrence in polymyalgia rheumatica: a prospective follow-up study, Arthritis Rheum. , 2005 Feb 15; 53 ( 1 ) : 33-8 ; Roche NE, et al, Correlation of interleukin-6 production and disease activity in polymyalgia rheumatica and giant cell arteritis, Arthritis Rheum., 1993 Sep; 36 ( 9) : 1286-94 ; Gupta M, et al, Cytokine modulation with immune gamma-globulin in peripheral blood of normal children and its implications in Kawasaki disease treatment, J Clin Immunol., : 2001 May;21 (3) : 193-9; Noris M, et al, Interleukin-6 and RANTES in Takayasu arteritis: a guide for therapeutic decisions?, Circulation, 1999 Jul 6; 100 (1) : 55-60; Besbas N, et al, The role of cytokines in Henoch Schonlein purpura, Scand J Rheumatol., 1997;26(6) :456-60; Hirohata S, et al, Cerebrospinal fluid interleukin-ß in progressive Neuro-Behcet ' s syndrome, Clin Immunol Immunopathol . , 1997 Jan;82 (1) : 12-7; Yamakawa Y, et al, Interleukin-6 (IL-6) in patients with Behcet's disease, J Dermatol Sci., 1996 Mar; 11 (3) : 189-95; Kim DS . , : Serum interleukin-ß in Kawasaki disease, Yonsei Med J. , 1992 Jun; 33 (2) : 183-8; Lange, A., et al, Cytokines, adhesión molecules (E-selectin and VCAM-1) and graft-versus-host disease, Arch. Immunol Ther Exp., 1995, 43 (2) : 99-105; Tanaka, J. , et al, Cytokine gene expression after allogeneic bone marrow transplantation, Leuk. Lymphoma, 1995 16 ( 5-6) : 413-418 ; Dickenson, AM, et al, Predicting outcome in hematological stem cell transplantation, Arch Immunol Ther Exp., 2002 50 ( 6) : 371-8 ; Zeiser, R, et al, Immunopathogenesis of acute graft-versus-host disease: implications for novel preventive and therapeutic strategies, Ann Hematol., 2004 83 ( 9 ) : 551-65 ; Dickinson, AM, et al, Genetic polymorphisms predicting the outcome of bone marrow transplants, Br. J Haematol., 2004 127 (5) : 479-90; and Scheinberg MA, et al, Interleukin 6: a possible marker of disease activity in adult onset Still's disease,. Clin Exp Rheumatol., 1996 Nov-Dec;14 (6):653-5, cuyas descripciones se incorporan en su totalidad a la presente como referencia.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos ánti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con el sistema óseo. Enfermedades y trastornos asociados con el sistema óseo incluyen pero no se limitan a, osteoartritis, osteoporosis y enfermedad ósea de Paget . En una modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 humanizados descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir la osteoartritis. Véase, por ejemplo, Malemud CJ. , Cytokines as therapeutic targets for osteoarthritis, BioDrugs, 2004;18 (1) :23-35; estacott CI, et al, Cytokines in osteoarthritis: mediators or markers of joint destruction? , Semin Arthritis Rheum. , 1996 Feb; 25 ( ) : 254-72; Sugiyama T., Involvement of interleukin-6 and prostaglandin E2 in particular osteoporosis of postmenopausal women with rheumatoid arthritis, J Bone Miner Metab., 2001; 19 (2) : 89-96; Abrahamsen B, et al, Cytokines and bone loss in a 5-year longitudinal study hormone replacement therapy suppresses serum soluble interleukin-6 receptor and increases interleukin-l-receptor antagonist: the Danish Osteoporosis Prevention Study, J Bone Miner Res., 2000 Aug; 15 (8) : 1545-54; Straub RH, et al, Hormone replacement therapy and interrelation between serum interleukin-6 and body mass index in postmenopausal women: a population-based study, J Clin Endocrinol Metab., 2000 Mar;85 (3) :1340-4; Manolagas SC, The role of IL-6 type cytokines and their receptors in bone, Ann N Y Acad Sci., 1998 May 1;840: 194-204; Ershler WB, et al, Immunologic aspects of osteoporosis, Dev Comp Imraunol., 1997 Nov-Dec; 21 ( 6) : 487-99 ; Jilka RL, et al, Increased osteoclast development after estrogen loss: mediation by interleukin-6, Science, 1992 Jul 3;257 (5066) : 88-91; Kallen KJ, et al, New developments in IL-6 dependent biology and therapy: where do we stand and what are the options?, Expert Opin Investig Drugs, 1999 Sep; 8 (9) : 1327-49; Neale SD, et al, The influence of serum cytokines and growth factors on osteoclast formation in Paget's disease, QJM, 2002 Apr;95 (4):233 - 40; Roodman GD, Osteoclast function In Paget's disease and múltiple myeloma, Bone, 1995 Aug;17(2 Suppl) :57S-61S; Hoyland JA, et al, Interleukin-6, , IL-6 receptor, and IL-6 nuclear factor gene expression in Paget's disease, J Bone Miner Res., 1994 Jan; 9 ( 1) : 75-80 ; and Roodman GD, et al, Interleukin 6. A potential autocrine/paracrine factor in Paget's disease of bone, J Clin Invest., 1992 Jan; 89 (1) : 46-52; cuyas descripciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti- IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedades y trastornos asociados con cáncer. Enfermedades y trastornos asociados con cáncer incluyen pero no se limitan a acantoma, carcinoma de células acínicas, neuroma acústico, melanoma lentiginoso acral, acrospiroma, leucemia eosinofilica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia monocitica aguda, leucemia mieloblástica aguda con maduración, leucemia mieloide aguda de células dendriticas, leucemia mieloide aguda, leucemia promielocitica aguda, adamantinoma, adenocarcinoma, carcinoma quistico adenoide, adenoma, tumor odontogénico adenomatoide, carcinoma adrenocortical, leucemia de células T del adulto, leucemia agresiva de células NK, cánceres relacionados con SIDA, linfoma relacionado con SIDA, sarcoma alveolar de partes blandas, fibroma ameloblástico, cáncer anal, linfoma anaplásico de células grandes, cáncer anaplásico de tiroides, linfoma angioinmunoblástico de células T, angiomiolipoma, angiosarcoma, cáncer de apéndice, astrocitoma, tumor rabdoide teratoide atipico, carcinoma de células básales, carcinoma de tipo basal, leucemia de células B, linfoma de células B, carcinoma de los conductos de Bellini, cáncer del tracto biliar, cáncer de vejiga, blastoma, cáncer de hueso, tumor de hueso, glioma de tronco cerebral, tumor cerebral, cáncer de mama, tumor de Brenner, tumor bronquial, carcinoma bronquioloalveolar, tumor de Brown, linfoma de Burkitt, cáncer de sitio primario desconocido, tumor carcinoide, carcinoma, carcinoma in situ, carcinoma de pene, carcinoma de sitio primario desconocido, carcinosarcoma, enfermedad de Castleman, tumor embrionario del sistema nervioso central, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma cerebral, cáncer cervical, colangiocarcinoma, condroma, condrosarcoma, cordoma, coriocarcinoma, papiloma del plexo coroideo, leucemia linfocítica crónica, leucemia monocitica crónica, leucemia mielógena crónica, trastorno mieloproliferativo crónico, leucemia neutrofilica crónica, tumor de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, craniofaringioma, linfoma cutáneo de células T, enfermedad de Degos, dermatofibrosarcoma protuberans, quiste dermoide, tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, linfoma difuso de células B grandes, tumor neuroepitelial disembrioplásico, carcinoma embrionario, tumor de seno endodérmico, cáncer endometrial, cáncer uterino endometrial, tumor endometrioide, linfoma de células T asociado a enteropatia, ependimoblastoma, ependimoma, sarcoma epitelioide, eritroleucemia, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, tumor de la familia de Ewing, sarcoma de la familia de Ewing, sarcoma de Ewing, , tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinales, cáncer de ducto biliar extrahepático, enfermedad de Paget extramamaria, cáncer de tubo falopiano, Fetus in fetu, fibroma, fibrosarcoma, linfoma folicular, cáncer folicular de tiroides, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vesícula biliar, ganglioglioma, ganglioneuroma, cáncer gástrico, linfoma gástrico, cáncer gastrointestinal, .tumor carcinoide gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor de células germinales, germinoma, coriocarcinoma gestacional, tumor tro oblástico gestacional, tumor óseo de células gigantes, glioblastoma multiforme, glioma, gliomatosis cerebri, tumor glómico, glucagonoma, gonadoblastoma, tumor de células granulosas, leucemia de células vellosas, leucemia de células vellosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de corazón, hemangioblastoma, hemangiopericitoma, hemangiosarcoma, malignidad hematológica, carcinoma hepatocelular , linfoma hepatoesplénico de células T, síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario, linfoma Hodgkin, linfoma de Hodgkin, cáncer hipofaríngeo, glioma hipotalámico, cáncer de mama inflamatorio, melanoma intraocular, carcinoma de células de los islotes, tumor de células de los islotes, leucemia juvenil mielomonocítica, sarcoma Kaposi, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon, tumor de Klatskin, tumor de Krukenberg, cáncer de laringe, cáncer de laringe, melanoma léntigo maligno, leucemia, leucemia, cáncer del labio !y la cavidad oral, liposarcoma, cáncer de pulmón, luteoma, linfangioma, linfangiosarcoma, linfoepitelioma, leucemia linfoide, linfoma, macroglobulinemia, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno óseo, glioma maligno, mesotelioma maligno, tumor maligno de vaina nerviosa periférica, tumor rabdoide maligno, tumor tritón maligno, linfoma MALT, linfoma de células del manto, leucemia de mastocitos, tumor mediastinal de células germinales, tumor mediastinal, cáncer medular de tiroides, meduloblastoma, meduloblastoma, meduloepitelioma, melanoma, melanoma, meningioma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, mesotelioma, cáncer escamoso metastásico del cuello con tumor primario oculto, carcinoma urotelial metastásico, tumor Mülleriano mixto, leucemia monocitica, cáncer de boca, tumor mucinoso, síndrome de neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, mieloma múltiple, micosis fungoides, micosis fungoides, enfermedad mielodisplásica, síndromes mielodisplásicos, leucemia mieloide, sarcoma mieloide, enfermedad mieloproliferativa, mixoma, cáncer de la cavidad nasal, cáncer nasofaríngeo, carcinoma nasofaríngeo, neoplasma, neurinoma, neuroblastoma, neuroblastoma, neurofibroma, neuroma, melanoma nodular, linfoma no Hodgkin, linfoma no Hodgkin, cáncer de piel no melanoma, cáncer de pulmón no microcítico, oncología ocular, oligoastrocitoma, oligodendroglioma, oncocitoma, meningioma de la vaina del nervio óptico, cáncer oral, cáncer oral, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de ovario, cáncer epitelial de ovario, tumor de células germinales del ovario, tumor de ovario de bajo potencial maligno, enfermedad de Paget de la mama, tumor de Pancoast, cáncer pancreático, cáncer pancreático, cáncer papilar de tiroides, papilomatosis, paraganglioma, cáncer de seno paranasal, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, tumor perivascular de células epitelioides, cáncer faríngeo, feocromocitoma, tumor parénquima pineal de diferenciación intermedia, pineoblastoma, pituicitoma, adenoma pituitario, tumor pituitario, neoplasma de células plasmáticas, blastoma pleuropulmonar, poliembrioma, linfoma precursor linfoblástico de células T, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma de efusión primaria, cáncer hepatocelular primario, cáncer hepático primario, cáncer peritoneal primario, tumor neuroectodermal primitivo, cáncer de próstata, pseudomixoma peritoneal, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma del tracto respiratorio relacionado con el gen NUT en el cromosoma 15, retinoblastoma, rabdomioma, rabdomiosarcoma, transformación de Richter, teratoma sacrococcígeo, cáncer de la glándula salival, sarcoma, Schwannomatosis, carcinoma de glándulas sebáceas, neoplasma secundario, seminoma, tumor seroso, tumor de células de Sertoli-Leydig, tumor del estroma de los cordones sexuales, síndrome de Sézary, carcinoma de células en anillo de sello, cáncer de piel, tumor de células pequeñas, redondas y azules, carcinoma de células pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, linfoma de células pequeñas, cáncer del intestino delgado, sarcoma de tejido blando, somatoestatinoma, verruga del deshollinador, tumor de la médula espinal, tumor espinal, linfoma de la zona marginal esplénica, carcinoma de células escamosas, cáncer de estómago, melanoma superficial diseminante, tumor neuroectodermal primitivo supratentorial , tumor epitelial superficial de ovario, sarcoma sinovial, leucemia linfoblástica aguda de células T, leucemia linfocitica granular grande de células T, leucemia de células T, linfoma de células T, leucemia prolinfocitica de células T, teratoma, cáncer linfático terminal, cáncer testicular, tecoma, cáncer de garganta, carcinoma timico, timoma, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición de la pelvis renal y el uréter, carcinoma de células de transición, cáncer uracal, cáncer uretral, neoplasma urogenital, sarcoma uterino, melanoma uveal, cáncer vaginal, síndrome de Verner Morrison, carcinoma verrugoso, glioma de la vía visual, cáncer vulvar, macroglobulinemia de aldenstróm, tumor de Warthin, tumor de Wilms, o cualquier combinación de los mismos así como resistencia a los fármacos en quimioterapia contra el cáncer y toxicidad de quimioterapia contra el cáncer. Véase, por ejemplo, Hirata T, et al, Humanized anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody induced apoptosis of fresh and cloned ;human myeloma cells in vitro, Leuk Res., 2003 Apr;27 (4) : 343-9, Bataille R, et al, Biologic effects of anti-interleukin-6 murine monoclonal antibody in advanced múltiple myeloma, Blood, 1995 Jul 15;86 (2):685-91; Goto H, et al, ouse anti-human interleukin-6 receptor monoclonal antibody inhibits proliferation of fresh human myeloma cells in vitro, Jpn J Cáncer Res., 1994 Sep; 85 ( 9) : 958-65; Klein B, et al, Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasma cell leukemia, Blood, 1991 Sep 1 ; 78 ( 5 ): 1198-204 ; Mauray S, et al, Epstein-Barr virus-dependent lymphoproliferative disease: critical role of IL-6, Eur J Immunol., 2000 Jul;30 (7) :2065-73; Tsunenari T, et al, New xenograft model of múltiple myeloma and efficacy of a humanized antibody against human interleukin-6 receptor, Blood, 1997 Sep 15; 90 ( 6) : 2437-44 ; Emilie D, et al, Interleukin-ß production in high-grade B lymphomas: correlation with the presence of malignant immunoblasts in acquired immunodeficiency syndrome and in human immunodeficiency virus-seronegative patients, Blood, 1992 Jul 15; 80 (2) : 498-504; Emilie D, et al, Administration of an anti-interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma: effect on lymphoma growth and on B clinical Symptoms, Blood, 1994 Oct 15; 84 (8) : 2472-9; Smith PC, et al, Anti-intefleukin-6 monoclonal antibody induces regression of human prostate cáncer xenografts in nude mice, Prostate, 2001 Jun 15; 48 (1) : 47-53; Smith PC, et al, Interleukin-ß and prostate cáncer progression, Cytokine Growth Factor Rev., 2001 Mar; 12 ( 1 ): 33-40 ; Chung TD, et al, Characterization of the role of IL-6 in the progression of prostate cáncer, Prostate, 1999 Feb 15; 38 (3) : 199-207 ; Okamoto M, et al, Interleukin-6 as a paracrine and autocrine growth factor in human prostatic carcinoma cells in vitro, Cáncer Res., 1997 Jan 1; 57 (1) : 141-6; Reittie JE, et al, Interleukin-6 inhibits apoptosis and tumor necrosis factor induced proliferation of B-chronic lymphocytic leukemia, Leuk Lymphoma, 1996 Jun;22 (1-2) :83-90, follow 186, color píate VI; Sugiyaraa H, et al, The expression of IL-6 and its related genes in acute leukemia, Leuk Lymphoma, 1996 Mar; 21 ( 1-2) : 9-52 ; Bataille R, et al, Effects of an anti-interleukin-6 (IL-6) murine monoclonal antibody in a patient with acute monoblastic leukemia, Med Oncol Tumor Pharmacother . , 1993; 10 (4 ): 185-8 ; Kedar I, et al, Thalidomide reduces serum C-reactive protein and interleukin-6 and induces response to IL-2 in a fraction of metastatic renal cell cáncer patients ho failed IL-2-based therapy, Int J Cáncer, 2004 Jun 10; 110 (2) : 260-5; Angelo LS, Talpaz M, Kurzrock R, Autocrine interleukin-ß production in renal cell carcinoma: evidence for the involvement of p53, Cáncer Res., 2002 Feb 1; 62 (3) : 932-40; Nishimoto N, Humanized anti-interleukin-6 receptor antibody treatment of multicentric Castleman disease, Blood, 2005 Oct 15;106 (8) :2627-32, Epub 2005 Jul 5; Katsume A, et al, Anti-interleukin 6 (IL-6) receptor antibody suppresses Castleman' s disease like symptoms emerged in IL-6 transgenic mice, Cytokine, 2002 Dec 21 ; 20 ( 6) : 30,4-11 ; Nishimoto N, et al, Improvement in Castleman' s disease by humanized anti-interleukin-6 receptor antibody therapy, Blood, 2000 Jan 1; 95 (1) : 56-61; Screpanti I, Inactivation of the1 IL-6 gene prevents development of multicentric Castleman' s disease in C/EBP beta-deficient mice, J Exp Med., 1996 : Oct 1; 184 (4 ): 1561-6; Hsu SM, et al, Expression of interleukin-6 in Castleman's disease, Hum Pathol., 1993 Aug; 24 ( 8 ) : 833-9 ; Yoshizaki K, et al, Pathogenic significance of interleukin-6 (IL 6/BSF-2) in Castleman's disease, Blood, 1989 Sep;74 (4) : 1360-7; Nilsson B, et al, Interleukin-6, secreted by human ovarían carcinoma cells, is a potent proangiogenic cytokine, Cáncer Res., 2005 Dec 1; 65 (23) : 10794-800; Toutirais O, et al, Constitutive expression of TGF-betal, interleukin-6 and interleukin-8 by tumor cells as a major component of immune escape in human ovarían carcinoma, Eur Cytokine Netw., 2003 0ct-Dec;14 (4) : 246-55; Obata NH, et al, Effects of interleukin 6 on in vitro cell attachment, migration and invasión of human ovarían carcinoma, Anticancer Res., 1997 Jan-Feb;17 (1A) :337-42; Dedoussis GV, et al, Endogenous interleukin 6 conveys resistance to cis-diamminedichloroplatinum-mediated apoptosis of the K562 human leukemic cell line, Exp Cell Res., 1999 Jun 15;249 (2) :269-78; Borsellino N, et al, Blocking signaling through the Gpl30 receptor chain by interleukin-6 and oncostatin M inhibits PC-3 cell growth and sensitizes the; tumor cells to etoposide and cisplatin-mediated cytotoxicity, Cáncer, 1999 Jan 1 ; 85 ( 1 ) : 134-44 ; Borsellino N, et al, Endogenous interleukin 6 is a resistance factor for ¦ cis-diamminedichloroplatinum and etoposide-mediated cytotoxicity of human prostate carcinoma cell lines, Cáncer Res., 1995 Oct 15; 55 (20) : 633-9; Mizutani Y, et al, Sensitization of human renal cell carcinoma cells to cis-diamminedichloroplatinúm (II ) by anti-interleukin 6 monoclonal antibody or anti-interleukin 6 receptor monoclonal antibody; Cáncer Res., 1995 Feb 1;55 (3) : 590-6; Yusuf RZ, et al, Paclitaxel resistance: molecular mechanisms and pharmacologic manipulation, Curr Cáncer Drug Targets, 2003 Feb; 3 ( 1) : 1-19; Duan Z, et al, Overexpression of IL-6 but not IL-8 increases paclitaxel resistance of U-20S human osteosarcoma cells, Cytokine, 2002 Mar 7 ; 17 ( 5) : 234-42 ; Conze D, et al, Autocrine production of interleukin 6 causes multidrug resistance in breast cáncer cells, Cáncer Res., 2001 Dec 15; 61 (2 ): 8851-8 ; Rossi JF, et al, Optimizing the use of anti-interleukin-6 monoclonal antibody with dexamethasone and 140 mg/m2 of melphalan in múltiple myeloma: results of a pilot study including biological aspects, Bone Marrow Transplant, 2005 Nov; 36 (9) : 771-9; and Tonini G, et al, Oxaliplatin may induce cytokine-release syndrome in colorectal cáncer patients, J Biol Regul Homeost Agents,, 2002 Apr-Jun;16 (2):105-9; cuyas descripciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o prevenir enfermedad cardíaca isquémica, ateroesclerosis, obesidad, diabetes, asma, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, enfermedad cerebrovascular, fiebre, respuesta de fase aguda, alergias, anemia, anemia de inflamación (anemia de enfermedad crónica) , hipertensión, depresión, depresión asociada con enfermedad crónica, trombosis, trombocitosis, insuficiencia cardíaca aguda, síndrome metabólico, abortos naturales, obesidad, prostatitis crónica, glomerulonefritis, enfermedad inflamatoria pélvica, lesión por reperfusión y rechazo de transplante. Véase, por ejemplo, Tzoulaki I, et al, C-reactive protein, interleukin-6, and soluble adhesión molecules as predictors of progressive peripheral atherosclerosis in the general population: Edinburgh Artery Study, Circulation, 2005 Aug 16; 112 (7 ): 976-83, Epub 2005 Aug 8; Rattazzi M, et al, C-reactive protein and interleukin-6 in vascular disease: culprits or passive bystanders?, J Hypertens., 2003 Oct ; 21 ( 10 ): 1787-803 ; Ito T, et al, HMG-CoA reductase inhibitors reduce interleukin-6 synthesis in human vascular smooth muscle cells, Cardiovasc Drugs Ther., 2002 Mar; 16 (2) : 121-6; Stenvinkel P, et al, Mortality, malnutrition, and atherosclerosis in ESRD: what is the role of interleukin-6?, Kidney Int Suppl., 2002 May; ( 80 ): 103-8 ; Yudkin JS, et al, Inflammation, obesity, stress and coronary heart disease: is interleukin-6 the link?, Atherosclerosis, 2000 Feb; 148 (2)':: 209-14; Huber SA, et al, Interleukin-6 exacerbates early atherosclerosis in mice, Arterioscler Thromb Vasc Biol.,; 1999 Oct;19 (10) :2364-7; Kado S, et al, Circulating levéis of interleukin-6, its soluble receptor and interleükin-6/interleukin-6 receptor complexes in patients with type 2 diabetes mellitus, Acta Diabetol . , 1999 Jun; 36 ( 1-2 ) : 67-72 ; Sukovich DA, et al, Expression of interleukin-6 in atherosclerotic lesions of male ApoE-knockout mice: inhibition by 17beta-estradiol, Arterioscler Thromb Vasc Biol.,1998 Sept 8 (9) : 1498-505; Klover PJ, et al, Interleukin-6 depletion selectively improves hepatic insulin action in obesity, Endocrinology, 2005 Aug; 146 (8 ) : 3417-27 , Epub 2005 Apr 21; Lee YH, et al, The evolving role of inflammation in obesity and the metabolic syndrome, Curr Diab Rep., 2005 Feb; 5 (1) : 70-5; Diamant , et al, The association between abdominal visceral fat and carotid stiffness is mediated by circulating inflammatory markers in uncomplicated type 2 diabetes, J Clin Endocrinol Metab., 2005 Mar ; 90 ( 3 ) : 1 95-501 , Epub 2004 Dec 21; Bray GA, Medical consequences of obesity, J Clin Endocrinol Metab., 2004 Jun; 89 ( 6) : 2583 9; Klover PJ, et al, Chronic exposure to interleukin-6 causes hepatic insulin resistance in mice, Diabetes, 2003 Nov;52 (ll) :2784-9; Yudkin JS, et al, Inflammation, obesity, stress and coronary heart diseasé: is interleukin-6 the link?, Atherosclerosis, 2000 Feb; 148 (2) : 209-14; Doganci A, et al, Pathological role of IL-6 in the experimental allergic bronchial asthma in mice, Clin: Rev Allergy Immunol., 2005 Jun; 28 ( 3 ) : 257-70 ; Doganci A, et al, The IL-6R alpha chain controls lung CD4+CD25+ Treg development and function during allergic airway inflammation in vivo, J ; Clin Invest., 2005 Feb; 115 (2 ) : 313 25, (Erratum in: J Clin Invest., 2005 May; 115 (5) : 1388, Lehr, Hans A [added] ) ; Stelmasiak Z, et al, IL 6 and sIL-6R concentration in the cerebrospinal fluid and serum of MS patients, ed Sci Monit . , 2001 Sep-Oct; 7 (5) : 914-8; Tilgner J, et al, Continuous interleukin-6 application in vivo via macroencapsulation of interleukin-6-expressing COS-7 cells induces massive gliosis, Glia, 2001 Sep;35 (3) :234-45, Brunello AG, et al, Astrocytic alterations in interleukin-6 Soluble interleukin-6 receptor alpha double-transgenic mice, Am J Pathol . , 2000 Nov; 157 (5) : 1485-93; Hampel H, et al, Pattern of interleukin-6 receptor complex immunoreacti ity between cortical regions of rapid autopsy normal and Alzheimer' s disease brain, Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci., 2005 Aug; 255 ( 4 ): 269-78 , Epub 2004 Nov 26; Cacquevel M, et al, Cytokines in neuroinflammation and Alzheimer' s disease, Curr Drug Targets, 2004 Aug; 5 ( 6) : 529-34 ; Quintanilla RA, et al, Interleukin 6 induces Alzheimer-type phosphorylation of tau protein by deregulating the cdk5/p35 pathway, Exp Cell Res., 2004 Apr 15; 295 (l):245-57; Gadient RA, et al, Interleukin-6 (IL-6)--a molecule with both beneficial and destructive potentials, Prog Neurobiol., 1997 Aug; 52 (5) : 379-90 ; Hull M, et al, Occurrence of interleukin-6 in cortical plaques of Alzheimer' s disease patients may precede transíormation of diffuse into neuritic plaques, Ann N Y Acad Sci., 1996 Jan 17;777:205-12; Rallidis LS, et al, Inflammatory markers and in-hospital mortality in acute ischaemic stroke, Atherosclerosis , 2005 Dec 30; Emsley HC, et al, Interleukin-6 and acute ischaemic stroke, Acta Neurol Scand. , 2005 Oct ; 112 ( 4 ) : 273-4 ; Smith CJ, et al, Peak plasma interleukin-6 and other peripheral markers of inflammation in the first week of ischaemic stroke correlate with brain infarct volume, stroke severity and long- term outcome, BMC Neurol., 2004 Jan 15; 4: 2; Vila N, et al, Proinflammatory cytokines and early neurological worsening in ischemic stroke, Stroke, 2000 Oct; 31 (10) : 2325-9; and Tarko ski E, et al, Early intrathecal production of interleukin-6 predicts the size of brain lesión in stroke, Stroke, 1995 Aug; 26 (8 ) : 1393-8 ; cuyas descripciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos son útiles para mejorar o reducir los síntomas de, o tratar o i prevenir enfermedades y trastornos asociados con una crisis de citocina. Enfermedades y trastornos asociados con una crisis de citocina incluyen pero no se limitan a, enfermedad de injerto versus huésped (GVHD) , gripe aviar, viruela, 'gripe pandémica, síndrome de distrés respiratorio del adulto (ARDS) , síndrome respiratorio agudo severo (SARS) , sepsis y síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) . Véase, por ejemplo, Cecil, R. L., Goldman, L., & Bennett, J. C. (2000). |Cecil textbook of medicine. Philadelphia : W.B. Saunders; Ferrara JL, et al., Cytokine storm of graft-versus-host disease: a critical effector role for interleukin-1 , Transplant Proc. 1993 Feb;25(l Pt 2): 1216-7; Osterholm MT, Preparing for the Next Pandemic, N Engl J Med. 2005 May 5 ; 352 ( 18 ): 1839-42 ; Huang KJ, et al., An interferon-gamma-related cytokine storm in SARS patients, J Med Virol. 2005 Feb; 75 (2) : 185-94 ; and Cheung CY, et al., Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages by influenza A (H5N1) viruses: a mechanism for the unusual severity of human disease? Lancet. 2002 Dec 7 ; 360 ( 9348 ): 1831-7.
En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de los mismos, son útiles como una ayuda al insomnio.
Administración En una modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, asi como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se administran a un sujeto en una concentración de entre alrededor de 0.1 y 20 mg/kg, tal como alrededor dé 0.4 mg/kg, alrededor de 0.8 mg/kg, alrededor de 1.6 mg/kg, o alrededor de 4 mg/kg, del peso corporal del sujeto receptor. En una modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de unión a, IL-6 de los mismos, asi como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se administran a un sujeto en una concentración de alrededor de 0.4 mg/kg del peso corporal del sujeto receptor En una modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, asi como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se administran a un sujeto receptor con una frecuencia de una vez cada veintiséis semanas o menos, tal como una vez cada dieciséis semanas o menos, una vez cada ocho semanas o menos, o una vez cada cuatro semanas o menos. En otra modalidad preferida de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, asi como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se administran a un sujeto receptor con una frecuencia de como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente una semana, como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente dos semanas como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente cuatro semanas, como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente ocho semanas, como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente doce semanas, como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente dieciséis semanas, como ser, como máximo una vez durante un periodo de aproximadamente veinticuatro semanas.
Se entiende que la dosis efectiva dependerá de1 los atributos del sujeto receptor, tales como, por ejemplo, edad, sexo, estado de gravidez, índice de masa corporal, masa corporal magra, afección o afecciones para las que se proporciona la composición, otras afecciones médicas del sujeto receptor que puedan afectar el metabolismo o la tolerancia a la composición, niveles de IL-6 en el sujeto receptor y resistencia a la composición (por ejemplo, que surgen cuando el paciente desarrolla anticuerpos contra la composición) . Un experto en la técnica será capaz de determinar una dosis y una frecuencia de administración efectivas a través de experimentos de rutina, por ejemplo, guiándose por las descripciones de la presente y las enseñanzas en Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman 's the pharmacological basis of therapeutics . New York: McGraw-Hill; Howland, R. D. , Mycek, M. J. , Harvey, R. A. , Champe, P. C, & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology . Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia : Lippincott Williams & Wilkins; and Golan, D. E. (2008) . Principies of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams & Wilkins. ; En otra modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o los fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, asi como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se administran a un sujeto como una formulación farmacéutica .
Una "composición farmacéutica" se refiere a una composición química o biológica adecuada para administración a un mamífero. Tales composiciones pueden formularse específicamente para administración mediante una o mas rutas, que incluyen pero no se limitan a bucal, epicutáneo, epidural, inhalación, intraarterial , intracardial , intracerebroventricular, intradermal, intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intraespinal , intratecal, intravenosa, oral, parenteral, rectal mediante un enema o supositorio, subcutáneo, subdermal, sublingual, transdermal y transmucosal . Además, la administración puede ocurrir por medios de inyección, polvo, líquido, gel, gotas u otros medios de administración.
En una modalidad de la invención, los anticuerpos anti-IL-6 descritos en la presente o los fragmentos de unión a IL-6 de los mismos, así como combinaciones de dichos fragmentos de anticuerpo, se pueden administrar opcionalmente en combinación con uno- o más agentes activos. Dichos agentes activos incluyen agentes analgésicos, antipiréticos, antiinflamatorios, antibióticos, antivirales y anticitocina . Agentes activos incluyen agonistas, antagonistas y moduladores de TNF-a, 'IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-a, IFN-?, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) , Hepcidina, que incluyen anticuerpos reactivos contra cualquiera de los anteriores y anticuerpos reactivos contra cualquiera de sus receptores. Los agentes activos también incluyen ácidos 2-Arilpropiónicos, Aceclof'enac, Acemetacina, ácido Acetilsalicílico (Aspirina) , Alclofenac, Alminoprofeno, Amoxiprina, Ampirona, . ácidos Arilalcanoicos , Azapropazona, Benorilato/Benorilato, Benoxaprofeno, Bromfenac, Carprofeno, Celecoxib, salicilato de magnesio y colina, Clofezona, inhibidores de COX-2, Dexibuprofeno, Dexketoprofeno, Diclofenac, Diflunisal, Droxicam, Etenzamida, Etodolac, Etoricoxib, Faislamina, ácidos fenámicos, Fenbufeno, Fenoprofeno, ácido Flufenámico, Flunoxaprofeno, Flurbiprofeno, Ibuprofeno, Ibuproxam, Indometacina, Indoprofeno, Kebuzona, Ketoprofeno, Ketorolac, Lornoxicam, Loxoprofeno, Lumiracoxib, salicilato de Magnesio, ácido Meclofenámico, ácido Mefenámico, Meloxicam, Metamizol, salicilato de Metilo, Mofebutazona, Nabumetona, Naproxen, ácidos N-Arilantranílieos , Oxametacina, Oxaprozin, Oxicams, Oxifenbutazona, Parecoxib, Fenazona, Fenilbutazona, Fenilbutazona, Piroxicam, Pirprofeno, profenos, Proglumetacina, derivados de Pirazolidina, Rofecoxib, salicilato de Salicilo, Salicilamida, Salicilatos, Sulfinpirazona, Sulindac, Suprofeno, Tenoxicam, ¦ ácido Tiaprófenico, ácido Tolfenámico, Tolmetin y Valdecoxib. Los antibióticos incluyen Amikacina, Aminoglicosidas , Amoxicilina, Ampicilina, Ansamicinas, Arsfenamina, Azitromicina, Azlocilina, Aztreonam, Bacitracina, Carbacefem, Carbapenems, Carbenicilina, Cefaclor, Cefadroxil, Cefalexina, Cefalotina, Cefalotina, Cefamandol, Cefazolina, Cefdinir, Cefditoren, Cefepima, Cefixima, Cefoperazona, Cefotaxima, Cefoxitin, Cefpodoxima, Cefprozil, Ceftazidima, Ceftibuten, Ceftizoxima, Ceftobiprol, Ceftriaxona, Cefuroxima, Cefalosporinsa, Clorarafenicol , Cilastatina, Ciprofloxacina, Claritromicina, Clindamicina, Cloxacilina, Colistina, Co-trimoxazol, Dalfopristina, Demeclociclina, Dicloxacilina, Diritromicina, Doripenem, Doxiciclina, Enoxacina, Ertapenem, Eritromicina, Etambutol, Flucloxacilina, Fosfomicina, Furazolidona, ácido Fusidico, Gatifloxacina, Geldanamicina, Gentamicina, Glicopéptidos , Herbimicina, Imipenem, Isoniazida, Kanamicina, Levofloxacina, Lincomicina, Linezolida, Lomefloxacina, Loracarbef, acrolidas, Mafenida, Meropenem, Meticilina, etronidazol, Mezlocilina, Minociclina, Monobactams, Moxifloxacina, Mupirocina, Nafcilina, Neomicina, Netilmicina, Nitrofurantoina, Norfloxacina, Ofloxacina, Oxacilina, Oxitetraciclina, Paromomicina, Penicilina, Penicilinas, Piperacilina, Platensimicina, Polimixina B, Polipéptidos, Prontosil, Pirazinamida, Quinolonas, Quinupristina, Rifampicina, Rifampina, Roxitromicina, Espectinomicina, Estreptomicina, Sulfacetamida, Sulfametizol, Sulfanilimida, Sulfasalazina, Sulfisoxazol , Sulfonamidas, Teicoplanina, Telitromicina, Tetraciclina, Tetraciclinas, Ticarcilina, Tinidazol, Tobramicina, Trimetoprim, Trimetoprim-Sulfametoxazol, Troleandomicina, Trovafloxacina y Vancomicina. Los agentes activos también incluyen Aldosterona, Beclometasona, Betametasona, Corticosteroides, Cortisol, acetato de Cortisona, acetato de Desoxicorticosterona, Dexametasona, acetato de Fludrocortisona, Glucocorticoides, Hidrocortisona, Metilprednisolona, Prednisolona, Prednisona, Esteroides y Triamcinolona . Los agentes antivirales incluyen abacavir, aciclovir, aciclovir, adefovir, amantadina, amprenavir, una combinación de dosis fija antiretroviral, un potenciador sinérgico antiretroviral, arbidol, atazanavir, atripla, brivudina, cidofovir, combivir, darunavir, delavirdina, didanosina, docosanol, edoxudina, efavirenz, emtricitabina, enfuvirtida, entecavir, inhibidores de entrada, famciclovir, fomivirsen, fosamprenavir, foscarnet, fosfonet, inhibidor de fusión, ganciclovir, gardasil, ibacitabina, idoxuridina, imiquimod, imunovir, indinavir, inosina, inhibidor de integrasa, interferon, interferon tipo I, interferon tipo II, interferon tipo III, lamivudina, lopinavir, lovirida, maraviroc, MK-0518, moroxidina, nelfinavir, nevirapina, nexavir, análogos de nucleósido, oseltamivir , penciclovir, peramivir, pleconaril, podofilotoxina, inhibidor de proteasa, inhibidor de transcriptasa inversa, ribavirina, rimantadina, ritonavir, saquinavir, stavudina, tenofovir, tenofovir disoproxilo, tipranavir, trifluridina, triz'ivir, tromantadina, truvada, valaciclovir, valganciclpvir, vicriviroc, vidarabina, viramidina, zalcitabina, zanamivir y zidovudina. Se contempla también cualquier combinación adecuada de estos agentes activos.
Un "excipiente farmacéutico" o un "excipiente farmacéuticamente aceptable" es un portador, normalmente un liquido, donde se formula un agente terapéutico activo. En una modalidad de la invención, el agente terapéuticamente activo es un anticuerpo humanizado descrito en la presente, o uno o más fragmentos del mismo. El excipiente en general no proporciona ninguna actividad farmacológica a la formulación aunque puede proporcionar estabilidad química y/o biológica y características de liberación. Se pueden encontrar ejemplos de formulaciones, por ejemplo, en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Grennaro, A., Ed., 1995, que se incorpora en la presente como referencia.
Tal como se usa en la presente un "portador farmacéuticamente aceptable" o un "excipiente" incluye cualesquiera solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes retardantes isotónicos y de absorción que son fisiológicamente compatibles. En una modalidad, el portador es adecuado para administración parenteral. De manera alternativa, el portador puede ser adecuado para administración intravenosa, intraperitóneal, intramuscular o sublingual. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y o polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conocen bien en la técnica. Salvo en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea compatible con el compuesto activo, se contempla el uso del mismo en las composiciones farmacéuticas de la invención. También se pueden incorporar compuestos activos complementarios a las composiciones.
En una modalidad de la invención que puede usarse para administrar anticuerpos de la invención de forma intravenosa, incluido Abl, para indicaciones en cáncer; la formulación de administración comprende, o de manera alternativa consiste en, alrededor de 10.5 mg/mL de anticuerpo, 25 mM de base de histidina, ácido fosfórico c.s.p. a pH 6 y 250 mM de sorbitol.
En otra modalidad de la invención que puede usarse para administrar anticuerpos de la invención de forma intravenosa, incluido Abl, para indicaciones en cáncer; la formulación de administración comprende, o de manera alternativa consiste en, alrededor de 10.5 mg/mL de anticuerpo, 12.5 mM de base de histidina HC1 (o 25 mM de base de histidina y ácido clorhídrico c.s.p. a pH 6), 250 mM de sorbitol y 0.015% (p/p) de polisorbato 80.
En una modalidad de la invención que puede usarse ¡para administrar anticuerpos de la invención de forma subcutánea, incluido Abl, para indicaciones en artritis reumatoide; la formulación de administración comprende, o de manera alternativa consiste en, alrededor de 50 o 100 mg/mL de anticuerpo, alrededor de 5 mM de base de histidina, alrededor de 5 mM HC1 de histidina para alcanzar finalmente un pH ß,! 250 mM de sorbitol y 0.015% (p/p) de polisorbato 80.
En otra modalidad de la invención que puede usarse para administrar anticuerpos de la invención de forma subcutánea, incluido Abl, para indicaciones en artritis reumatoide; la formulación de administración . comprende, o de manera alternativa consiste en, alrededor de 20 o 100 mg/mL de anticuerpo, alrededor de 5 mM de base de histidina, alrededor de 5 mM HCl de histidina para alcanzar finalmente un pH 6, 250 a 280 mM de sorbitol (o sorbitol en combinación con sucrosa) y 0.015% (p/p) de polisorbato 80, dicha formulación posee un espacio libre de nitrógeno en los recipientes de envió.
Las composiciones farmacéuticas típicamente deben ser estériles y estables en condiciones de fabricación y almacenamiento. La invención contempla que la composición farmacéutica está presente en una forma liofilizada .. La composición puede formularse como solución, microemulsión, liposoma u otra estructura adecuada para altas concentraciones del fármaco. El portador puede ser un medio solvente o de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos. La invención contempla adicionalmente la inclusión de un estabilizador en la composición farmacéutica.
En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tal como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede ocasionarse mediante la inclusión en la composición de un agente que retarda la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina. Además, el polipéptido alcalino puede formularse en una formulación de liberación en el tiempo, por ejemplo en una composición que incluye un polímero de liberación lenta. Los compuestos activos pueden prepararse con portadores que protegerán el compuesto de la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada que incluye implantes y sistemas microencapsulados de liberación. Pueden usarse polímeros biodegradables y biocompatibles, tal como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, ácido poliláctico y copolímeros polilácticos y poliglicólicos (PLG) . Muchos métodos para la preparación de dichas formulaciones son conocidos por aquellos expertos en la técnica.
Para cada una de las modalidades descritas, los compuestos pueden administrarse por una variedad de formas de dosificación. Se contempla toda forma de dosis biológicamente aceptable conocida por expertos en la técnica y combinaciones de la misma. Ejemplos de dichas formas de dosificación incluyen pero no se limitan a, polvos reconstituíbles, elíxires, líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, polvos, gránulos, partículas, micropartículas, gránulos dispersables , sellos, inhalantes, inhalantes en aerosol, parches, inhalantes en partículas, implantes, implantes de depósito, inyectables (que incluyen subcutáneos, intramusculares, intravenosos y intradermales) , infusiones y combinaciones de los mismos.
La descripción anterior de varias modalidades ilustradas de la invención no pretende ser taxativa ni limitar la invención a la forma concreta descrita. Mientras que modalidades específicas y ejemplos de la invención se describen en la presente con fines ilustrativos, es posible realizar varias modificaciones equivalentes dentro del alcance de la invención, así como aquellos expertos en la técnica correspondiente reconocerán. Las enseñanzas de la invención proporcionadas en la presente pueden aplicarse con otros fines distintos de los ejemplos descritos anteriormente.
Estos y otros cambios se pueden realizar a la invención en vista de la descripción detallada antes mencionada. ', En general, en las reivindicaciones a continuación, los términos usados no deberán entenderse como limitantes de la invención a modalidades específicas descritas en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones. Por consiguiente, su descripción no limita la invención pero en cambio el alcance de la invención será determinado totalmente por las reivindicaciones a continuación.
La invención puede ponerse en práctica en formas distintas de aquellas descritas particularmente en la descripción anterior y en los ejemplos. Son posibles numerosas modificaciones y variaciones de la invención en vista de las enseñanzas anteriores y por lo tanto se encuentran dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
Ciertas enseñanzas relacionadas con los métodos, para obtener una población clonal de linfocitos B específicos para antígeno descritos en la solicitud de patente provisional estadounidense N° 60/801,412 presentada el 19 de mayo de 2006, cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente como referencia.
Ciertas enseñanzas relacionadas con la humanización de anticuerpos monoclonales derivados del conejo y modificaciones preferidas de secuencias para mantener la afinidad de unión al antígeno fueron descritas en la solicitud internacional N° 12/124,723, correspondiente al N° de expediente, del representante 67858.704001, titulado "Novel Rabbit Antibody Humanization Method and Humanized Rabbit Antibodies", filed May 21, 2008, cuya descripción se incorpora en su totalidad' a la presente como referencia.
Ciertas enseñanzas relacionadas con la producción de anticuerpos o fragmentos de los mismos usando levadura que puede aparearse y métodos correspondientes fueron descritos en la solicitud de patente estadounidense N° 11/429,053 presentada el 8 de mayo de 2006, (publicación de solicitud de patente estadounidense N° US2006/0270045) , cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente como referencia.
Ciertas enseñanzas relacionadas con anticuerpos anti-IL-6, métodos para la producción de anticuerpos o fragmentos de estos usando levadura que puede aparearse y métodos correspondientes fueron descritos en la solicitud de patente provisional estadounidense N° 60/924,550 presentada el 21 de mayo de 2007, cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente como referencia.
Ciertas enseñanzas relacionadas con anticuerpos anti-IL-6 y métodos para el uso de estos anticuerpos o fragmentos de estos para aumentar los niveles de albúmina o reducir los niveles de CRP, fueron descritos en la solicitud de patente provisional estadounidense N° 61/117,811 presentada el 25 de noviembre de 2008, cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente como referencia.
Ciertos polinucleótidos y polipéptidos de anticuerpos anti-IL-6 se describen en el listado de secuencias que acompaña esta presentación de solicitud de patente y cuya descripción se incorpora en su totalidad a la presente como referencia.
La totalidad de la descripción de cada documento citado (incluyendo patentes, solicitudes de patente, artículos de periódico, resúmenes, manuales, libros u otras descripciones) en Antecedentes de la Invención, Descripción Detallada y Ejemplos, se incorpora en la presente en su totalidad ; como referencia .
Los siguientes ejemplos se proponen para proporcionar a los expertos en la técnica una descripción completa de cómo hacer y usar la invención mencionada y no se pretende que limiten el alcance de lo que se entiende por la invención. Se han realizado esfuerzos para asegurar la exactitud con respecto a los números usados (por ej . , cantidades, temperaturas, concentraciones, etc.) pero se tendrán en cuenta ciertos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio, la temperatura se da en grados centígrados y la presión es de o cercana a la atmosférica.
EJEMPLOS Ejemplo 1 Producción de cultivos de anticuerpos de linfocitos B específicos para antígeno Los paneles de anticuerpos se obtienen inmunizando animales hospedadores de anticuerpos tradicionales para explotar la respuesta inmunitaria nativa a un antígeno objetivo de interés. Típicamente, el hospedador usado para la inmunización es un conejo u otro hospedador que pr duce anticuerpos usando un proceso de maduración similar y proporciona una población de linfocitos B específicos ; para antígeno produciendo anticuerpos de diversidad comparable^ por e . diversidad epitópica. La inmunización de antígeno inicial puede conducirse usando un adyuvante de Freund (CFA) y los refuerzos posteriores efectuados con un adyuvante incompleto. Alrededor de 50-60 dias luego de la inmunización, preferentemente el día 55, se prueban las titulaciones de anticuerpos y se inicia la Selección de Anticuerpos (ABS) si se establecen titulaciones de anticuerpos apropiadas. Los dos criterios clave para la iniciación de ABS son el reconocimiento de antigenos potentes y la actividad modificadora de funciones en el suero policlonal.
En el momento en que se establecen titulaciones de anticuerpos se sacrifican animales y se aislan fuentes de linfocitos B. Estas fuentes incluyen: el bazo, nodulos linfáticos, médula espinal y células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Se generan suspensiones unicelulares y las suspensiones celulares se lavan para hacerlas compatibles con almacenamientos a largo plazo a baja temperatura. Luego las células se congelan típicamente.
Para iniciar el proceso de identificación de anticuerpos, una pequeña fracción de las suspensiones celulares congeladas se descongela, lava y se coloca en un medio de cultivo tisular. Estas suspensiones luego se mezclan con una forma biotinilada del antigeno usada para generar la respuesta inmunitaria del animal y se recuperan células especificas para antigeno usando los métodos de selección de células con cuentas magnéticas de Miltenyi. Se conduce un enriquecimiento especifico usando cuentas de estreptavidina . La población enriquecida se recupera y se desarrolla en la próxima fase de aislamiento de linfocitos B específicos.
Ejemplo 2 Producción de cultivos clónales que contienen linfocitos B específicos para antígeno Los linfocitos B enriquecidos producidos de acuerdo con el Ejemplo 1 luego se colocan en placas a diversas densidades celulares por pocilio en una placa de microtitulación de 96 pocilios. En general esto es a 50, 100, 250 o 500 células por pocilio con 10 placas por grupo. El medio se complementa con un medio acondicionado de 4% de linfocitos activados de conejo junto con 50K de fibroblastos EL4B irradiados y congelados. Estos cultivos permanecen inalterados durante 5-7 días en' los que se recoge el anticuerpo secretado que contiene sobrenadante y se evalúa para propiedades objetivo en un marco de ensayo separado. El sobrenadante remanente se deja intacto y la placa se congela a -70 °C. En estas condiciones, el proceso de cultivo resulta típicamente en pocilios que contienen una población celular mixta que comprende una población clon'al de linfocitos B específicos para antígeno, esto es, un solo pocilio solo contendrá un anticuerpo monoclonal simple específico para el antígeno deseado. ; Ejemplo 3 Análisis de los sobrenadantes del anticuerpo para el anticuerpo monoclonal de especificidad deseada y/o propiedades funcionales Los sobrenadantes que contienen anticuerpos que proceden del pocilio que contiene una población de linfocitos B específicos para antígeno producida de acuerdo con el Ejemplo 2, se analizan inicialmente para reconocer antígenos 'usando métodos ELISA. Este incluye la inmovilización selectiva de antígenos (por ej . , captura de antígeno biotinilado por placas revestidas por estreptavidina) , revestimiento de placa para antígeno no específico o de manera alternativa, a través de una estrategia de concentración de antígeno (por ej . , captura de antígeno selectivo seguido de la adición de un compañero de unión para generar un complejo heteromérico proteina-antígeno) . Luego los sobrenadantes de pocilio positivo para antígeno se prueban opcionalmente en un ensayo de modificación de función que depende estrictamente del ligando. Un ejemplo de estos es un ensayo de interacción proteína-proteína in vitro que recrea la interacción natural del ligando del antígeno con la proteína receptora recombinante . De manera alternativa, se utiliza una respuesta basada en la célula que depende del ligando '< y se monitorea fácilmente (por ej . , respuesta de proliferación). El sobrenadante que muestre un significativo reconocimiento y potencia de antígeno se considera un pocilio positivo. Las células que proceden del pocilio positivo original luego efectúan una transición a la fase de recuperación del anticuerpo.
Ejemplo 4 Recuperación de un linfocito B simple que produce anticuerpos de especificidad del antígeno deseada Las células se aislan de un pocilio que contiene una población clonal de linfocitos B específicos para antígeno (producidos de acuerdo con el Ejemplo 2 o 3) que secretan una secuencia de anticuerpos simple. Las células aisladas luego se ensayan para aislar una célula simple que secreta anticuerpos. Las cuentas de estreptavidina Dynal se recubren con antígenos objetivo biotinilados en un medio tamponado para preparar microcuentas que contienen antígenos con viabilidad celular. Las próximas cuentas cargadas de antígeno, células que producen anticuerpos a partir de un pocilio positivo y un anticuerpo IgG H&L anti-hospedador marcado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) (tal como se observa, el hospedador puede ser cualquier hospedador mamífero, por ej . , conejo, ratón, rata, etc.) se incuban juntos a 37 °C. Esta mezcla luego se coloca nuevamente en una pipeta en alícuotas en un portaobjetos de manera tal que cada alícuota tiene como promedio un linfocito B simple que produce anticuerpos. Las células específicas para antígeno y que secretan anticuerpos luego se detectan a través de microscopía de fluorescencia. El anticuerpo secretado se concentra localmente en cuentas adyacentes debido al antígeno unido y proporciona información de localización basándose en la señal fluorescente fuerte. Las células que secretan anticuerpos se identifican mediante detección de FITC en complejos anticuerpo-antígeno formados adyacentes a la célula secretora. La célula simple encontrada en el centro de ¡ este complejo luego se recupera usando un micromanipulador . La célula se congela instantáneamente en un tubo PCR de Eppendorf para almacenamiento a -80 °C hasta que se inicie la recuperación de la secuencia de anticuerpos.
Ejemplo 5 Aislamiento de secuencias de anticuerpos a partir de linfocitos B específicos para antígeno Las secuencias de anticuerpos se recuperan usando un método combinado basado en RT-PCR a partir de un linfocito B simple aislado de acuerdo con el Ejemplo 4 o un linfocito B especifico antigénico aislado a partir de la población clonal de linfocitos B obtenidos de acuerdo con el Ejemplo 2. Se diseñan cebadores para ibridarse en regiones conservadas y constantes de los genes de inmunoglobulina objetivo (pesada y ligera), tal como secuencias de inmunoglobulina de conejo y se usa un paso de recuperación de PCR anidado en dos pasos. Se analizan amplicones de cada pocilio para integridad de recuperación y tamaño. Los fragmentos resultantes luego se digieren con AluI para identificar genéticamente la clonación de la secuencia. Las secuencias idénticas presentan un patrón de fragmentación común en su análisis electroforático . Significativamente, este patrón común de fragmentación que prueba la clonación de células se observa en general aun en los pocilios originalmente colocados en placas hasta '< 100 células/pocilio. Los fragmentos de amplicón original de cadena pesada y ligera se digieren por enzima de restricción con HindIII y Xhol o HindIII y BsiWI para preparar las piezas respectivas de ADN para clonación. Las digestiones resultantes luego se ligan en un vector de expresión y se transforman en bacterias para la propagación y producción de plásmidos. Se seleccionan colonias para la caracterización de secuencias.
Ejemplo 6 Producción recombinante de anticuerpo monoclonal de especificidad del antigeno deseada y/o propiedades funcionales Se establecen las secuencias de anticuerpo de longitud completa correcta para cada pocilio que contiene un anticuerpo monoclonal simple y se prepara una miniprep de ADN usando metodología de fase sólida de Qiagen. El ADN luego se usa para transfectar células de mamífero para producir anticuerpos de longitud completa recombinante. Se prueba el producto de anticuerpo bruto para el reconocimiento de antígeno y se encuentran propiedades funcionales para confirmar ; las características originales en la proteína recombinante de anticuerpo. Cuando fuera apropiado, se contemplan' las transfecciones mamíferas transitorias a gran escala y se purifica el anticuerpo a través de cromatografía de afinidad de Proteína A. Se evalúa el Kd usando métodos estándar (ej. Biacore™) así como IC50 en un ensayo de potencia.
Ejemplo 7 Preparación de anticuerpos de unión a IL-6 humana Usando el protocolo de selección de anticuerpos descrito en la presente, se puede generar un panel extenso de anticuerpos. Los anticuerpos poseen alta afinidad para IL-6 (pM Kd de simple a doble dígito) y demuestran un potente antagonismo de IL-6 en múltiples sistemas de análisis basados en células (T1165 y HepG2). Además, la recolección de anticuerpos presenta distintos modos de antagonismo hacia los procesos conducidos por IL-6.
Estrategia de inmunización Se inmunizaron conejos con huIL-6 (R&R) . La inmunización consistió en una primera inyección subcutánea (se) de 100 g en un adyuvante de Freund completo (CFA) (Sigma) seguido de dos refuerzos, con dos semanas de separación, de 50 µg cada uno en adyuvante de Freund incompleto (IFA) (Sigma) . Los animales se desangraron el día 55 y se determinaron las titulaciones de suero mediante ELISA (reconocimiento de antígeno) y mediante ensayo de proliferación no radiactivo (Promega) usando la línea celular T1165.
Evaluación de la titulación en la selección de anticuerpos El reconocimiento del antígeno se determinó mediante el revestimiento de placas Immulon 4 (Thermo) con 1 µ?/p?? de huIL-6 (50 µ?/pocillo) en solución salina tamponada de fosfato (PBS, Hyclone) durante la noche a 4 °C. El día del ensayo, las placas se lavaron 3 veces con PBS /T een 20 (tabletas PBST, Calbiochem) . Las placas luego se bloquearon con 200 µ?/pdcillo de 0.5% de gelatina de piel de pescado (FSG, Sigma) en PBS durante 30 minutos a 37 °C. La solución de bloqueo se eliminó y las placas se transfirieron. Las muestras de suero se realizaron (sangrados y presangrados ) en una dilución inicial de 1:100 (todas las diluciones se realizaron en FSG 50 µ?/pocillo) seguida de diluciones 1:10 a través de la placa (la columna 12 se dejó en blanco para control de fondo) . Las placas se incubaron durante 30 minutos a 37 °C. Las placas se lavaron 3 veces con PBS/Tween 20. Se agregó FC-HRP cabra anticonejo (Pierce) diluido 1:5000 a todos los pocilios (50 µ?/pocillo) y las placas se incubaron durante 30 minutos a 37 °C. Las placas se lavaron tal como se describe anteriormente. 50 µ?/pocillo de detención T B-Stable (Fitzgerald Industries) se agregó a las placas y se dejó desarrollar el color, en general durante 3 a 5 minutos. La reacción de desarrollo se detuvo con 50 µ?/pocillo 0.5 M HC1. Las placas se leyeron a 450 nm. La densidad óptica (OD) contra la dilución se gráfico usando un software Graph Pad Prizm y se determinaron las titulaciones .
Evaluación de la titulación funcional La actividad funcional de la muestras se determinó mediante un ensayo de proliferación T1165. Las células 1165 se mantuvieron de manera rutinaria en un medio RPMI modificado (Hyclone) complementado con Hepes, piruvato de sodio, bicarbonato de sodio, L-glutamina, glucosa alta, penicilina/estreptomicina, 10% suero bovino fetal inactivado por calor (FBS) (todos complementos de Hyclone) , 2-mercaptoetanol (Sigma) y 10 ng/ml de huIL-6 (R&D) El día del ensayo, la viabilidad celular se determinó mediante azul de tripano (Invitrogen) y las células se sembraron a una densidad fija de 20,000 células/pocilio. Antes del sembrado, las células se lavaron dos veces en el medio descrito anteriormente sin IL-6 humana (centrifugando a 13000 rpm durante 5 minutos y eliminando el sobrenadante) . Luego del último lavado, las células se volvieron a suspender en el mismo medio usadó para su lavado en un volumen equivalente a 50 µ?/pocillo. Las células se separaron a temperatura ambiente.
En una placa de fondo redondo de 96 pocilios (Costar) , se agregaron muestras de suero comenzando en 1:100 seguido de una dilución de 1:10 a través de la placa (columnas 2 a 10) a 30 µ?/pocillo en replicones de 5 (filas B a F: dilución llevada a cabo en el medio descrito anteriormente sin huIL-6) . , La columna 11 solo sirvió de medio para control de IL-6.: 30 µ?/pocillo de huIL-6 a una concentración 4x del CE50 |final (concentración previamente determinada) se agregó a todos los pocilios (huIL-6 se diluyó en el medio descrito anteriormente) . Los pocilios se incubaron durante 1 hora a 37 °C para permitir que ocurra la unión del anticuerpo. Luego de 1 hora, 50 µ?/pocillo del complejo anticuerpo-antígeno (Ab-Ag) se transfirió a una placa de fondo redondo de 96 pocilios (Costar) siguiendo el formato de mapa de placa dispuesto en la placa de fondo redondo. En la fila G, se agregó 50 µ?/pocillo de medio a todos los pocilios (columnas 2 a 11) para control de fondo. Se agregó 50 µ?/pocillo de la suspensión celular separada se agregó a todos los pocilios (columnas 2 a 11, filas B a G) . En las columnas 1 y 12 y filas A y H, se agregó 200 µ?/pocillo de medio para prevenir la evaporación de pocilios de prueba y para minimizar el efecto borde. Las placas se incubaron durante 72 h a 37 °C en 4% C02. A las 72 h, se agregó 20 µ?/pocillo de reactivos CellTiter96 (Promega) a todos los pocilios de prueba el protocolo del fabricante y las placas se incubaron durante 2 h a 37 °C. A las 2 h, las placas se mezclaron delicadamente en un agitador orbital para dispersar las células y permitir la homogeneidad en los pocilios de prueba. Las placas se leyeron a 490 nm de longitud de onda. La densidad óptica (OD) contra la dilución se graficaron usando un software Graph Pad Prizm y se determinaron las titulaciones funcionales. Se condujo una placa de control de ensayo tal como se describió anteriormente usando MAB2061 (R&D Systems) en una concentración inicial de 1 g/ml (concentración \ final seguida de diluciones 1:3 a través de la placa.
Cultivo de tejidos Una vez que las titulaciones aceptables se establecieron se sacrificó el/los conejo/s. El bazo, los nodulos linfáticos y la sangre se cultivaron y procesaron de la siguiente manera: El bazo y los nodulos linfáticos se procesaron en una suspensión unicelular mediante disociación del tejido y abriendo camino mediante una tela metálica a 70 µt (Fisher) con un émbolo de una jeringa de 20 ce. Las células se recogieron en el medio RPMI modificado descrito anteriormente sin huIL-6 pero con baja glucosa. Las células se lavaron dos veces por centrifugación. Luego del último lavado, la densidad celular se determinó por azul de tripano. Las células se centrifugaron a 1500 rpm durante 10 minutos; se eliminó el sobrenadante. Las células se volvieron a suspender en el volumen apropiado de 10% dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma) en FBS (Hyclone) y se dispensaron a 1 ml/recipiente . Los recipientes luego se almacenaron a -70 °C durante 24 h previo a colocarlo en un tanque de nitrógeno liquido (LN2) para su almacenamiento a largo plazo.
Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron mezclando sangre con partes iguales del medio de, baja glucosa descrito anteriormente sin FBS. 35 mi de una mezcla de sangre se colocó en capas cuidadosamente sobre 8 mi de Lympholyte Rabbit (Cedarlane) en un tubo cónico de 45 mi (Corning) y se centrifugó por 30 minutos a 2500 rpm a temperatura ambiente sin detenerse. Luego de la centrifugación, las capas PBMC se eliminaron cuidadosamente usando una pipeta de vidrio Pasteur (VWR) , se combinaron y colocaran en un recipiente limpio de 50 mi. Las células se lavaron dos veces con el medio modificado descrito anteriormente por centrifugación a 1500 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente y la densidad celular se determinó por teñido de azul de tripano. Tras el último lavado, las células se volvieron a suspender en un medio de volumen apropiado de 10% DMSO/FBS y se congelaron tal como se describió anteriormente .
Cultivo de linfocitos B El día en que se establece el cultivo de linfocitos B, se descongelaron recipientes de PB C, esplenocito o nodulos linfáticos para su uso. Los recipientes se eliminaron del tanque Ln2 y se colocaron en un baño de agua a 37 °C hasta descongelarse. El contenido de los recipientes se transfirió a un tubo de centrifugado cónico de 15 mi (Corning) y se agregó al tubo suavemente 10 mi de RPMI modificado descrito anteriormente. Las células se centrifugaron durante 5 minutos a 1.5K rpm y se eliminó el sobrenadante. Las células se volvieron a suspender en 10 mi de un medio nuevo. La densidad y viabilidad celular se determinaron mediante azul de tripano. Las células se lavaron nuevamente y se volvieron a suspender en células 1E07/80 pL medio. Se agregó huIL-6 biotinilado (B huIL-6) a la suspensión celular en la concentración final de 3 ug/mL y sE incubó durante 30 minutos a 4°C. Se eliminó BjhuIL-6 no unido con dos lavados de 10 mi de fosfato tamponado ( PBF) : Ca/Mg libre de PBS (Hyclone) , 2 mM de ácido etilendiamina tetraacético (EDTA) , 0.5% de albúmina de suero bovino ¦ (BSA) (Sigma-libre de biotina) . Luego del segundo lavado, las células se volvieron a suspender en células 1E07/80 µ? PBF. Se agregó 20 µ? de cuentas MACS® de estreptavidina (Milteni ) /células 10E7 a la suspensión celular. Las células se incubaron a 4 °C durante 15 minutos. Las células se lavaron una vez con 2 mi de PBF/células 10E7. Luego de lavarse, las células se volvieron a suspender en células 1E08/500 µ? de PBF y se separaron. Se prelavó una columna MACS® MS (Milteni) con 500 mi de PBF en un mecano magnético (Milteni) . La suspensión celular se aplicó a la columna a través de un prefiltro y se recogió una fracción no unida. La columna se lavó con 1.5 mi de tampón PBF. La columna se eliminó del mecano magnético y se colocó en un tubo limpio estéril de 5 mi de polipropileno tipo Falcon. Se agregó 1 mi de tampón PBF a la parte superior de la columna y se recogieron células seleccionadas positivas. El rendimiento y la viabilidad de fracciones celulares positivas y negativas se determinaron mediante teñido de azul de tripano. La selección positiva proporcionó un promedio de 1% de la concentración celular inicial.
Se estableció un análisis celular modelo para proporcionar información acerca de niveles de siembra para el cultivo. Se sembraron tres grupos de 10 placas (un total de 30 placas) en 50, 100 y 200 linfocitos B enriguecidos/pocillo . Además, cada pocilio contenia 50K células/pocilio de células irradiadas EL-4.B5 (5,000 Rads) y un nivel apropiado de sobrenadante de linfocitos T (que varía de 1-5% dependiendo de la preparación) en un medio modificado de alta glucosa RP I con un volumen final de 250 µ?/pocillo. Los cultivos se incubaron durante 5 a 7 días a 37 °C en 4% C02.
Identificación de linfocitos B que secretan anticuerpos selectivos Los cultivos se probaron para reconocimiento de antígeno y actividad funcional entre los días 5 y 7.
Análisis de reconocimiento de antígeno El formato ELISA usado es tal como se describió anteriormente a menos que 50 µ? de sobrenadante de los pocilios de cultivos de linfocitos B (BCC) (todas las 30 placas) se usaron como fuente del anticuerpo. El medio acondicionado se transfirió a placas revestidas de antígeno. Luego de que se identificaran placas positivas, el sobrenadante se eliminó y se transfirió a una/s placa/s principal/es de 96 pocilios,. Las placas de cultivo originales se congelaron eliminando todos los sobrenadantes salvo 40 µ?/pocillo y agregando 60 µ?/pociílo de 16% D SO en FBS . Las placas se envolvieron en toalla de papel para enlentecer el congelado y se colocaron a -70 °C.
Análisis de actividad funcional Las placas principales se analizaron para determinar la actividad funcional en el ensayo de proliferación T1165, tal como se describió anteriormente, salvo la fila B que fue medio solo para control de fondo, la fila C que fue medio + IL-6 para control de proliferación positiva y las filas D-G y columnas 2-11 que fueron pocilios de BCC (50 µ?/pocillo, puntos simples). Se agregó 40 µ? de IL-6 a todos los pocilios, salvo la fila del medio 2.5 veces la concentración de CE50 determinada para el ensayo. Luego de 1 h de incubación, el complejo Ab/Ag se transfirió a una placa de fondo redondo de 96 pocilios tratado con cultivo celular (TC) . Se agregó 20 µ? de suspensión celular en un medio RPMI modificado sin huIL-6 (T1165 a 20,000 células/pocilio) a todos los pocilios (100 µ? de volumen final por pocilio) . Se sustrajo el fondo y los valores OD observados se transformaron en % de inhibición.
Recuperación de linfocitos B Las placas que contenían pocilios de interés se eliminaron de -70 °C y las células de cada pocilio se recuperaron con 5-200 µ? lavados de medio/pocilio. Los lavados se acumularon en un tubo de centrifugado estéril de 1.5 mi y las células se granularon durante 2 minutos a 1500 rpm.
El tubo se invirtió, el giro se repitió y el sobrenadante se eliminó cuidadosamente. Las células se volvieron a suspender en 100 µ?/tubo del medio. Se agregó a la suspensión celular 100 µ? de dynabeads biotiniladas M280 de estreptavidina revestidas con IL-6 (Invitrogen) y 16 µ? de IgG-FITC H&L ;cabra anti-conejo diluido 1:100 en el medio.
Se eliminó 20 µ? de una suspensión célula/cuentas/F;ITC y se prepararon 5 µ? de gotas en un portaobjetos (Corning) previamente tratadas con Sigmacote (Sigma) , 35 a 40 gotas/portaobjetos. Se agregó una barrera impermeable de queroseno ( JT Baker) para sumergir las gotas y se incubó el portaobjetos durante 90 minutos a 37 °C, .4% C02 en la oscuridad.
Los linfocitos B específicos que producen anticuerpos pueden identificarse por un anillo fluorescente alrededor de ellos debido a la secreción de anticuerpo, reconocimiento del antígeno biotinilado asociado con cuentas y la detección subsiguiente mediante el reactivo de detección fluorescente IgG. Una vez que la célula de interés se identificó, la célula en el centro del anillo fluorescente se recuperó a través de un micromanipulador (Eppendorf ) . La célula simple que sintetiza y exporta el anticuerpo se transfirió en un tubo de microcentrifugado y se colocó en hielo seco. Luego de recuperar todas las células de interés, estas se transfirieron a -70 °C para almacenamiento a largo plazo.
Ejemplo 8 Expresión de células de levadura Genes de anticuerpos: Los genes se clonaron y se interpreta que dirigieron la síntesis de un anticuerpo monoclonal de conejo humanizado quimérico. ¡ Vector de expresión: El vector contiene los siguientes componentes funcionales: 1) un origen mutante ColEl de replicación que facilita la replicación del vector plásmido en células de la bacteria Escherichia coli; 2) un gen bacteriano Sh ble que confiere resistencia al antibiótico Zeocin™ (fleomicina) y sirve como marcador seleccionable para transformaciones tanto de E. coli como de P. pastoris; 3) un cassette de expresión del promotor del gen de gliceraldehido deshidrogenasa (gen GAP) , fusionado a las secuencias que codifican la secuencia líder del factor de apareamiento Saccharomyces cerevisiae alfa pre pro secreción, seguido de secuencias que codifican la señal transcripcional de terminación de P. pastoris del gen alcohol oxidasa I (A0X1) P. pastoris. El gen marcador de resistencia Zeocin™ (fleomicina) proporciona un medio de enriquecimiento para cepas que contienen múltiples copias integradas de un vector de expresión en una cepa mediante la selección de transformadores resistentes a niveles más altos de Zeocin™ (fleomicina) . Cepas P. pastoris: Se pueden usar las cepas de P. pastoris metí,¦ lys3, ura3 y adel. Aunque cualesquiera dos sets complementarios de cepas auxotróficas pueden usarse para la construcción I y el mantenimiento de cepas diploides, estas dos cepas : están especialmente ubicadas para este método por dos razones. Primero, crecen más despacio que las cepas diploides que son el resultado de su apareamiento o fusión. Por tanto, si una pequeña cantidad de células haploides adel o ura3 siguen presentes en un cultivo o surgen a través de la meiosis u otro mecanismo, la cepa diploide crecerá más en el cultivo.
Segundo, es fácil monitorear el estado sexual de estas cepas dado que las colonias diploides Ade+ que surgen de su apareamiento son de color blanco o crema regular mientras que las células de todas las cepas que son mutantes haploides adel formarán una colonia con un color rosado distinto. Además, todas las cepas que seas mutantes haploides ura3 son resistentes al fármaco ácido 5-fluoro-orótico (FOA) y pueden identificarse sensiblemente colocando en placas muestras de un cultivo en un medio mínimo + placas de uracilo con FOA. En estas placas, solo las cepas del mutante ura3 que requiere uracilo (supuestamente haploides) pueden crecer y formar colonias. Por tanto, con cepas progenitoras haploides marcadas con adel y ura3, se puede monitorear rápidamente el estado sexual de las resultantes cepas diploides que producen anticuerpos (haploide contra diploide) .
Métodos Construcción de vectores de expresión pGAPZ-alfa para la transcripción de genes de anticuerpo de cadena ligera y pesada. Los fragmentos de cadena ligera y pesada humanizada se clonaron en vectores de expresión pGAPZ a través de un proceso tendente a PCR. Las construcciones humanizadas recuperadas se sometieron a amplificación en condiciones de un kit de polimerasa KOD estándar (Novagen) ((1) 94 °C, 2 minutos; (2) 94 °C, 30 segundos (3) 55 °C, 30 segundos; (4) 72 °C, 30 segundos alternados a través de pasos 2-4 durante 35 veces; (5) 72 °C 2 minutos) usando los siguientes cebadores ; (1) AGCGCTTATTCCGCTATCCAGATGACCCAGTC directa de cadena ligera-solo se subraya el sitio Afel. El final de la secuencia de señal HSA se subraya dos veces, seguido de la secuencia para la secuencia de cadena ligera variable madura (no se subraya) ; la CGTACGTTTGATTTCCACCTTG inversa.
Cebador inverso de cadena ligera variable. El sitio Bsi I se subraya seguido del complemento inverso para el extremo 3' de la cadena ligera variable. Tras la digestión de la enzima de restricción con Afel y BsiWI se permite la inserción dentro del marco con el vector pGAPZ usando la secuencia líder HAS humana dentro del marco con la región constante de cadena ligera kappa humana para exportar. (2) Se realiza una estrategia similar para la cadena pesada. El cebador directo empleado es AGCGCTTATTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTC . Solo se subraya el sitio Afel. El final de la secuencia de señal HSA se subraya dos veces, seguido de la secuencia para la secuencia de cadena pesada variable madura (no se subraya) . El cebador de cadena pesada inverso es CTCGAGACGGTGACGAGGGT . El sitio Xhol se subraya seguido del complemento inverso para el extremo ;3' de la cadena pesada variable. Esto permite la clonación de la cadena pesada dentro del marco con la región IgG-Dl CH1-CH2-CH3 previamente insertada dentro de pGAPZ usando una estrategia de clonación direccional comparable.
Transformación de vectores de expresión en 1 cepas hospedadoras haploides adel ura3, metí y lys3 de P. pastoris. Todos los métodos usados para la transformación de cepas haploides P. pastoris y la manipulación genética del ciclo sexual de P. pastoris se describen en Higgins, D. R. , and Cregg, J. M., Eds . 1998. Pichia Protocols. Methods in Molecular Biology. Humana Press, Totowa, NJ.
Previo a la transformación, cada vector de expresión se linealiza dentro de las secuencias del cebador GAP con Avrll para dirigir la integración de los vectores en el locus del cebador GAP del genoma P. pastoris. Las muestras de cada vector se transforman individualmente en cultivos electrocompetentes de cepas adel, ura3, metí y lys3 mediante electroporacion y se seleccionaron transformadores exitosos en placas YPD Zeocin™ (fleomicina) por sus resistencia a este antibiótico. Las colonias resultantes se seleccionan, se estrian para colonias simples en placas de YPD Zeocin™ (fleomicina) y luego se examinaron por la presencia de un inserto de gen de anticuerpo mediante un ensayo PCR en ADN genómico extraído de cada cepa para el inserto de gen de anticuerpo adecuado y/o mediante la habilidad de cada cepa de sintetizar una cadena de anticuerpo mediante un método de transferencia de colonias/inmunotransferencia ( ung et al. Biotechniques 21 808-812 (1996) . Las cepas haploides , adel, metí y lys3 que expresan una de las tres construcciones de cadena pesada se recogen para construcciones diploides . unto con una cepa haploide ura3 que expresa un gen de cadena ligera. Los genes de cadena pesada que expresan haploides se' aparean con la cadena ligera apropiada haploide ura3 para generar una proteína secretora diploide.
El apareamiento de cepas haploides que sintetizan una cadena de anticuerpo simple y la selección de derivados diploides que sintetizan anticuerpos funcionales tetraméricos . Para aparear cepas haploides P. pastoris, cada cepa que produce una cadena pesada adel (o metí o lys3) a ser cruzada se estría a través de una placa rica en YPD y la cepa que produce una cadena ligera ura3 se estría a través de una segunda placa YPD (~10 estrías por placa) . Luego de uno o dos días de incubación a 30 °C, las células de una placa que contiene cepas de cadena pesada y una placa que contiene cepas de cadena ligera ura3 se transfieren a una tela de terciopelo estéril en un bloque de placas réplica en un patrón cruzado de incubación de manera que cada cepa de cadena pesada contiene un parche de células mezcladas con cada cepa de cadena ligera. Las células colocadas en placas réplica cruzadas y estriadas luego se transfieren a una placa de apareamiento y se incuban a 25 °C para estimular la iniciación del apareamiento entre las cepas. Luego de dos días, las células en placas de apareamiento se transfieren nuevamente a un terciopelo estéril en un bloque de placas réplica y luego se transfieren a placas de medio mínimo. Estas placas se incuban a 30 °C durante tres días para, permitir el crecimiento selectivo de colonias de cepas diploides prototróficas . Las colonias que surgen se eligen y se estrían sobre una segunda placa de medio mínimo para aislar la colonia simple y purificar cada cepa diploide. Las líneas celulares diploides resultantes se examinan luego para la producción de anticuerpos .
Las supuestas cepas diploides se prueban para demostrar que son diploides y que contienen ambos vectores de expresión para la producción de anticuerpos. Para diploidía, las muestras de una cepa se propagan en placas de apareamiento para estimularlas a someterse a meiosis y formar esporas.- Los productos de esporas haploides se recogen y prueben para fenotipo. Si un porcentaje significativo de los productos de espora resultantes son auxótrofos simples o dobles se puede concluir que la cepa original debe haber sido diploide: Las cepas diploides se examinaron para la presencia de ambos genes de anticuerpo extrayendo el ADN genómico de cada uno y utilizando este ADN en reacciones PCR específicas para cada gen .
La fusión de cepas haploides que sintetizan una cadena de anticuerpo simple y la selección de derivados diploides que sintetizan anticuerpos funcionales tetraméricos . Comp una alternativa al procedimiento de apareamiento descrito anteriormente, los cultivos individuales de anticuerpo de cadena simple que producen cepas haploides adel y ura3 se someten a esferoplasto y · sus esferoplastos resultantes se fusionan usando polietilenglicol/CaCl2. Las cepas haploides fusionadas luego se incluyen en agar que contiene 1 M de sorbitol y un medio mínimo para permitir que las cepas diploides regeneren su pared celular y desarrollen colonias visibles. Las colonias resultantes se recogen del agar y se estrían en una placa de medio mínimo y las placas se incuban durante dos días a 30 °C para generar colonias a partir de células simples de líneas celulares diploides. Las supuestas líneas celulares diploides resultantes luego se examinan para diploidía y producción de anticuerpo tal como se describió anteriormente.
Purificación y análisis de anticuerpos. Una cepa diploide para la producción de anticuerpo de longitud total surge del apareamiento de la cadena ligera metí y la cadena pesada lys3 usando los métodos descritos anteriormente. Los medios de cultivo de los cultivos de frasco agitador o fermentador de cepas de expresión diploide de P. pastoris se recogen y examinan para la presencia de la proteína de anticuerpo a través de SDS-PAGE e inmunotransferencia usando anticuerpos dirigidos contra cadenas pesadas y ligeras de IgG humana o específicamente contra la cadena pesada de IgG.
Para purificar los anticuerpos secretados de levadura, los medios clarificados de un anticuerpo que produce cultivos se pasan a través de una columna de proteína A y luego de lavarse con 20 mM de fosfato de sodio, a pH 7.0, tampón de unión, la proteína unida a la proteína A se eluye usando 0.1 M de tampón de glicina HCl, pH 3.0. Las fracciones que contienen la mayoría total de proteínas se examinan mediante SDS-PAGE tamizado Coomasie blue e inmunotransferencia para proteínas de anticuerpos. El anticuerpo se caracteriza usando el ELISA descrito anteriormente para reconocimiento de IL-6.
Ensayo de actividad de anticuerpo. El anticuerpo recombinante derivado de levadura se evalúa para determinar la actividad funcional a través de un ensayo de proliferación celular T1165 conducido por IL-6.
Ejemplo 9 Neutralización de la respuesta en fase aguda mediante administración intravenosa de Abl de anticuerpo anti-IL-6.
La IL-6 humana puede provocar una respuesta de fase . aguda en ratas y una de las proteínas de fase aguda más relevante que se estimula en la rata es macroglobulina a-2 (A2M) . Se diseñó un estudio para evaluar la dosis del anticuerpo Abl requerido para extirpar la respuesta A2M a una única inyección s.c. de 100 de IL-6 humana administrados una hora después de las diferentes dosis (0.03, 0.1, 0.3, 1 y 3 mg/kg) del anticuerpo Abl administrado de forma intravenosa (n=10 ratas/nivel de dosis) o IgGl humana policlonal como (n=10 ratas) . Se recuperó el plasma y la A2M se cuantificó mediante un kit intercalado de ELISA comercial (ICL Inc., Newberg OR; cat. no.- E-25A2M) : El criterio de valoración fue la diferencia en la concentración de A2M en plasma en el punto de la hora 24 (luego de Abl) . '. Los resultados se muestran en la Figura .
La ID50 para el anticuerpo Abl fue 0.1 mg/kg con supresión completa de la respuesta A2M a 0.3 mg/kg. Esto establece firmemente que la neutralización in vivo de la IL-6 humana puede lograrse mediante el anticuerpo Abl.
Ejemplo 10 Estudio modelo 1 de caquexia RXF393 Introducción La linea celular de cáncer renal humano, RXF393, produce una gran pérdida de peso al transplantarse a ratones lampiños atimicos. La pérdida de peso comienza alrededor del día 15 luego del transplante con el 80% de los animales perdiendo al menos el 30% del peso corporal total alrededor de los días 18-20 luego del transplante. RXF393 secreta IL-6 humana y la concentración de IL-6 humana en plasma en estos animales es muy alta alrededor de 10ng/ml. IL-6 humana puede unirse al receptor de IL-6 soluble murino y activar las respuestas de IL-6 en el ratón. IL-6 humana es aproximadamente 10 veces ' menos potente que IL-6 murina en la activación de respuestas de IL-6 en el ratón. Los objetivos de este estudio fueron determinar el efecto del anticuerpo Ablen parámetros de supervivencia, peso corporal, proteina A amiloide sérica, hematología y crecimiento tumoral en ratones lampiños atimicos transplantados con la línea celular de cáncer renal humano, RXF393.
Métodos A ocho ratones lampiños atimicos de 6 semanas de edad se les implantaron fragmentos de tumor RXF393 (30-40 mg) de forma subcutánea en el lado derecho. Los animales luego se dividieron en ocho grupos de diez ratones. A tres grupos se les dio ya sea 3 mg/kg, 10 mg/kg o 30 mg/kg de anticuerpo abl de forma intravenosa semanalmente el día 1, día 8, día 15 y día 22 luego del transplante (grupos de progresión) . A otros tres grupos se les dio ya sea 3 mg/kg, 10 mg/kg o 30 mg/kg de anticuerpo abl de forma intravenosa semanalmente el día 8, día 15 y día 22 luego del transplante (grupos de regresión) . Finalmente, a un grupo de control se le dio 30 mg/kg de IgG humano policlonal y a un segundo grupo de control se le dio solución salina tamponada con fosfato de forma intravenosa semanalmente el día 1, el día 8, día 15 y día 22 luego del transplante.
Los animales se sometieron a eutanasia ya sea el día 28 cuando el tumor alcanzó los 4,000 mm3 o cuando se debilitaron (>30% de pérdida de peso corporal) . Los animales se pesaron los días 1 y 6 y luego diariamente desde el día 9 al 28' luego del transplante. Se usó el promedio de porcentaje de peso corporal (MPBW) como principal parámetro para monitoréar la pérdida de peso durante el estudio. Se calculó de esta manera: (peso corporal-peso del tumor) /peso corporal de referencia x 100. El peso del tumor se midió los días 1, 6, 9, 12, 15, 18, 22, 25 y 28 luego del transplante. Se sacó sangre bajo anestesia de cinco ratones en cada grupo los días 5 y 13 y todos los diez ratones en cada grupo se sometieron a eutanasia (en la mayoría de los casos el día 28) . Se analizó la sangre para concentración de proteina A amiloide hematológica y sérica (SAA) . A un grupo adicional de 10 ratones lampiños atimicos de 6 semanas de edad sin tumor se le sacaron muestras de sangre para estimar la concentración hematológica y de SAA para actuar como conjunto de valores de referencia.
Resultados - Supervivencia No se sometieron a eutanasia ni murieron animales del grupo del anticuerpo Abl previo a la fecha de finalización del estudio el día 28. En dos de los grupos de control, 15 animales (7/9 en el grupo de IgG humana policlonal y 8/10 en el grupo de solución salina tamponada con fosfato) fueron encontrados muertos o fueron sometidos a eutanasia debido a que estaban debilitados (>30% de pérdida de peso corporal) . El tiempo medio de supervivencia en ambos grupos de control fue 20 días.
Las curvas de supervivencia para dos de los grupos de control y los grupos de progresión del anticuerpo Abl (dosificado a partir del día 1 del estudio) se presentan 'en la Figura 5.
Las curvas de supervivencia para dos de los grupos de control y los grupos de regresión del anticuerpo Abl (dosificado a partir del día 8 del estudio) se presentan en la Figura 6.
Existió una diferencia estadísticamente significativa entre las curvas de supervivencia para los grupos de control de IgG humana policlonal (p=0.0038) y de solución salina tamponada con fosfato (p=0.0003) y la curva de supervivencia para los seis grupos del anticuerpo Abl. No hubo estadísticamente ninguna diferencia entre los dos grupos de control (p=0.97).
Resultados - Tamaño del tumor El tamaño del tumor en los ratones supervivientes se estimó por palpación. En los primeros 15 días del estudio, ninguno de los ratones de ningún grupo se encontró muerto ni se sometió a eutanasia y por tanto la comparación de tamaños de tumor entre grupos estos días está libre de sesgos de muestreo. No se observó diferencia alguna en el tamaño del tumor entre los grupos de progresión o regresión de anticuerpo Abl y los grupos de control hasta el día 15. No se emprendió una comparación de los tamaños de tumor entre los ratones supervivientes en los grupos de control y tratamiento subsiguientes al comienzo de la mortalidad en los ratones (el día 15) , dado que el tamaño del tumor en ratones de control supervivientes estaba supuestamente sesgado y por lo tanto los resultados de esa comparación no serían significativos.
Como la administración del anticuerpo Abl promovió la supervivencia sin reducción aparente del tamaño del tumor, la IL-6 sérica elevada puede contribuir a la mortalidad mediante mecanismos independientes de crecimiento tumoral. Las observaciones soportan la hipótesis de que el anticuerpo Abl puede promover la supervivencia del paciente con cáncer sin afectar directamente el crecimiento tumoral, posiblemente potenciando el bienestar del paciente en general.
Resultados - Pérdida de peso El promedio del porcentaje de peso corporal (MPB ) (? SEM) contra el tiempo se muestra en la Figura 27. Comparado con otros controles, los ratones dosificados con Abl se protegieron contra la pérdida de peso. El día 18, el MPBW en ratones de control fue de 75%, correspondiente a una pérdida de peso promedio de 25%. En contraste, el mismo día, el MPBW en grupos de tratamiento con Ab-1 se cambió mínimamente (entre ;97% y 103%). Hubo una diferencia estadísticamente significativa entre las curvas de MPBW para controles (que reciben IgG humana policlonal o PBS) y 10 mg/kg de grupo de dosificación (p<0.0001) o 3 mg/kg y 30 mg/kg de grupos de dosificación (p<0.0005). No hubo estadísticamente ninguna diferencia entre los dos grupos de control.
Fotografías representativas de los ratones de control y tratados con Abl (Figura 28) ilustran la condición demacrada de los ratones de control comparados con la apariencia normal del ratón tratado con Abl al final del estudio (nótese sitios de tumor visibles externamente en el lado derecho) .
Estos resultados sugieren que Abl puede ser útil : para prevenir o tratar caquexia causada por IL-6 elevada en humános.
Resultados - Plasma amiloide sérica A La concentración promedio en plasma amiloide sérica A (? SEM) contra el tiempo para dos grupos de control y los grupos de progresión (dosificado desde el dia 1 del estudio) y la regresión (dosificado desde el dia 8 del estudio) del anticuerpo Abl se presentaron en la Tabla 5 y gráficamente en la Figura 32.
Tabla 5: Plasma promedio SAA-anticuerpo Abl, todos los grupos contra grupos de control Abl 30 mg/kg 375 ± 177 (n=5) 1492 ± 418 498 ± 83 (n=9) iv (n=4) semanalmente desde el día 8 Abl 10 mg/kg 487 ± 170 (n=5) 1403 ± 187 396 ± 58 (n=5) (n=10) semanalmente desde el día 8 Abl 3 mg/kg iv 1255 ± 516 466 ± 157 685 ± 350 semanalmente (n=5) (n=5) (n=5) desde el día 8 SAA se sobre-regula a través de la estimulación de hIL-6 y esta respuesta se correlaciona directamente con niveles circulantes de hIL-6 que surgen del tumor implantado. El marcador sustituto proporciona una lectura indirecta de hIL-6 activa. Por tanto en dos grupos de tratamiento descritos anteriormente existen niveles significativamente disminuidos de SAA debido a la neutralización de hIL-6 que derivan de un tumor. Este soporta adicionalmente que la discusión del anticuerpo Abl muestra eficacia in vivo.
Ejemplo 11 Estudio modelo 2 de caquexia RXF393 Introducción Se realizó un segundo estudio en el modelo de caquexia RXF-393 donde el tratamiento con el anticuerpo Abl comenzó en una etapa posterior (días 10 y 13 luego del transplante) y con una fase de tratamiento más prolongada (hasta 49 días luego del transplante) . El intervalo de dosificación con el anticuerpo Abl se acortó a 3 días de 7 y también se midió el consumo de alimentos diario. También hubo un intento de estandarizar los tamaños de tumor al momento de iniciar la dosificación con el anticuerpo Abl.
Métodos A ochenta ratones lampiños atímicos de 6 semanas de edad se les implantaron fragmentos de tumor RXF393 (30-40 mg) de forma subcutánea en el lado derecho. Se seleccionaron 20 ratones cuyos tumores alcanzaron entre 270-320 mg de tamaño y se dividieron en dos grupos. Un grupo recibió el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días y el otro grupo recibió 10 mg/kg de IgG humana policonal cada 3 días desde ese punto en el tiempo (día 10 luego del transplante) . Se seleccionaron otros 20 ratones cuando su tamaño de tumor alcanzó 400-527 mg de tamaño y se dividieron en dos grupos. Un grupo recibió el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días y el otro ¡grupo recibió 10 mg/kg de IgG humana policonal cada 3 días desde ese punto en el tiempo (día 13 luego del transplante) . Los 40 ratones restantes no fueron más parte del estudio y se sometieron a eutanasia ya sea el día 49, cuando el tumor alcanzó 4,000 mm3 o cuando se tornaron muy debilitados (>30% de pérdida de peso corporal) .
Los animales se pesaron cada 3-4 días a partir del día 1 al día 49 luego del transplante. Se usó el promedi;o de porcentaje de peso corporal (MPBW) como principal parámetro para monitorear la pérdida de peso durante el estudio. Se calculó de esta manera: ((peso corporal - peso del tumor) /peso corporal de referencia) x 100. El peso del tumor se midió cada 3-4 días a partir del dia 5 al dia 49 luego del transplante. El consumo de alimento se midió (cantidad consumida en 24 horas por peso (g) por cada grupo de tratamiento) cada dia por grupos tumorales de 270-320 mg y el dia 13 por grupos tumorales de400-527 mg.
Resultados - Supervivencia Las curvas de supervivencia para el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) contra 10 mg/kg i.v la IgG humana policlonal cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) se presentan en la Figura 7.
La supervivencia mediana para él anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) fue 46 días y para 10 mg/kg i.v de IgG humana policlonal cada tres días (tamaño del tumor de 270-320 mg) fue 32.5 días (p=0.0071).
Las curvas de supervivencia para el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 400-527 mg) contra 10 mg/kg i.v la IgG humana policlonal cada tres días (tamaño del tumor de 400-527 mg) se presentan en la Figura 8. La supervivencia mediana para el anticuerpo Abl a 10 mg/kg i.v. cada tres días (tamaño del tumor de 400-527 mg) fue 46.5 días y para 10 mg/kg i.v de IgG humana policlonal cada tres días (tamaño del tumor de 400-527 mg) fue 27 días (p=0.0481). , Ejemplo 12 Evaluación de dosificación múltiple farmacocinética de anticuerpo Abl en primates no humanos.
El anticuerpo Abl se dosificó en una única infusión de bolo a un único mono macaco masculino y un único femenino en solución salina tamponada con fosfato. Se eliminaron muestras de plasma en intervalos de tiempo fijo y el nivel de anticuerpo Abl se cuantificó a través del uso de un ensayo ELISA de captura de antigeno. Se capturó IL-6 (50 DI de 3 Dg/mL) en estreptavidina recubierta con placas de microtitulación . de 96 pocilios. Las placas se lavaron y bloquearon con 0.5% de gelatina de piel de pescado. Las muestras de plasma diluida apropiadamente se agregaron e incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Los sobrenadantes se eliminaron y se aplicó un segundo anticuerpo anti-hFc-HRP conjugado y se dejó a temperatura ambiente.
Las placas luego se aspiraron y se agregó tMB, para visualizar la cantidad de anticuerpo. Los niveles específicos luego se determinaron mediante el uso de una curva estándar. Una segunda dosis de anticuerpo Abl se administró el día 35 a los dos mismos monos macacos y se replicó el experimento usando un plan de muestreo idéntico. Las concentraciones resultantes son entonces gráfico contra tiempo tal como se muestra en la Figura 9. ; Este anticuerpo aglicosilado humanizado de longitud ( total expresado y purificado Pichia pastoris muestra características comparables con la proteína mamífera expresada. Además, las dosis múltiples de este producto muestran semividas reproducibles infiriendo que la plataforma de producción no genera productos que muestran inmunogenicidad mejorada.
Ejemplo 13 Caracterización mecánica del octeto de proteínas de anticuerpo La señalización de IL-6 depende de las interacciones entre IL-6 y dos receptores, IL-6R1 (CD126) y gpl30 ' (IL-6 transductora de señales ) . Para determinar el mecanismo de acción del anticuerpo, se realizaron estudios mecánicos usando interferometría de biocapas con un instrumento Octet QK (ForteBio; Menlo Park, CA) . Se realizaron estudios en dos configuraciones diferentes. En esta primera orientación, la IL-6 biotinilada (número de partes de sistemas R&D 206-IL-001MG/CF, biotinilada usando Pierce EZ-link sulfo-NHS-LC-LC-biotin número de producto 21338 de acuerdo con los protocolos del fabricante) se unieron inicialmente a un biosensor recubierto con estreptavidina (número de parte ForteBiol8-5006). La unión se monitorea como un aumento de señal.
La IL-6 unida al sensor luego se incubó ya sea con el anticuerpo en cuestión o la solución diluyente sola. El sensor luego se incubó con una molécula de IL-6R1 soluble (número de producto de sistemas R&D 227-SR-025/CF) . Si la molécula de IL-6R1 no pudiera unirse, se entiende que el anticuerpo bloquea las interacciones de IL-6/IL-6R1. Estos complejos se incubaron con gpl30 (sistemas R&D 228-GP-010/CF) en presencia de IL-6R1 con fines de estabilidad. Si gpl30 no se uniera, se concluye que el anticuerpo bloqueó las interacciones de gpl30 con IL-6.
En la segunda orientación, el anticuerpo se unió a un biosensor recubierto con un reactivo específico anti-humano IgGl Fe (número de parte ForteBiol8-5001 ) . La IL-6 se unió al anticuerpo inmovilizado y el sensor se incubó con IL-6R1. Si la IL-6R1 no interactúa con la IL-6, entonces se concluye que el anticuerpo de unión de IL-6 bloqueó las interacciones de IL-6/IL-6R1. En las situaciones en que se observa anticuerpo/IL-6/IL-6R1, el complejo se incuba con gpl30 en presencia de IL-6R1. Si gpl30 no interactuara, se concluye entonces que el anticuerpo bloqueó las interacciones IL-6/gpl30. Todos los estudios se realizaron en un volumen final de 200 DL, a 30C y 1000 rpms. Para estos estudios, se diluyeron todas las proteínas usando una muestra de tampón diluyente ForteBio (número de parte 18-5028). '.
Los resultados se presentan en la Fig. 10 (A-E) y Fig'. 11.
Ejemplo 14 Mapeo peptídico Para determinar el epítopo reconocido por Abl en( IL-6 humana, el anticuerpo se usó en un ensayo basado en Western blot. La forma de IL-6 humana utilizada en este ejemplo! tuvo una secuencia de 183 aminoácidos de longitud (mostrado a continuación) . Se sintetizó comercialmente una biblioteca de 57 miembros de 15 péptidos de aminoácidos superpuestos que comprende esta secuencia y se unió covalentemente a una membrana de nitrocelulosa PepSpots (JPT Peptide technologies , Berlín, Germany) . Las secuencias de 15 péptidos de aminoácidos superpuestos se muestran en la Figura 12. Las bandas se prepararon y sondaron de acuerdo con recomendaciones del fabricante .
En resumen, las bandas se premojaron en metanol, se enjuagaron en PBS y se bloquearon por más de 2 horas en 10% de leche descremada en PBS/0.05% Tween (solución bloqueante). El anticuerpo Abl se usó en una dilución final de 1 mg/ml y se usó el anticuerpo secundario Anti-Humano-Kappa de ratón conjugado con HRP (Southern BioTech #9220-05) en una dilución de 1:5000. Las diluciones/incubaciones del anticuerpo se realizaron en una solución bloqueante. Las transformaciones se desarrollaron usando reactivos previos de Amersham ECL (GE# RPN2135) y señal quimioluminiscente documentados usando una cámara, CCD (Alphalnnotec) . Los resultados de las bandas se muestran en las Figuras 13 y 14.
La secuencia de la forma de IL-6 humana utilizada para generar una biblioteca de péptidos se establece en: VPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAE NNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVL IQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM (SEQ ID NO: 1) .
Ejemplo 15 Abl tiene alta afinidad para IL-6. ; Se usó una resonancia de plasmones superficiales para medir la tasa de asociación (Ka) , tasa de disociación (Kd) y constante de disociación (KD) para Abl para IL-6 de rata, ratón, perro, humano y mono macaco a 25 °C (Figura 15A) . La constante de disociación para IL-6 humana fue 4 pM, indicando una afinidad muy alta. Tal como se esperaba, la afinidad en general disminuyó con distancia filogenética de la humana. Las constantes de disociación de Abl para IL-6 de monos macacos, ratas y ratones fueron 31 pM, 1.4 nM y 0.4 nM, respectivamente. La afinidad de Abl para IL-6 de perro está por debajo del limite de cuantificación del experimento.
La alta afinidad de Abl para 11-6 de ratón, rata y mono macaco sugiere que Abl pueda ser usado para inhibir 11-6 de estas especies. Esta hipótesis se probó usando un ensayo de proliferación celular. En resumen, cada IL-6 de estas especies se usó para estimular la proliferación de células T1165, y se midió la concentración en la que Abl pudo inhibir el 50% de proliferación (CI50) . La inhibición coincide con las constantes de disociación medidas (Figura 15B) . Estos resultados demuestran que Abl puede inhibir la IL-6 nativa de estas especies y sugieren el uso de estos organismos¦ para modelado in vitro o in vivo de inhibición de IL-6 por Abl.: Ejemplo 16 Evaluación de dosificación múltiple farmacocinética de anticuerpo Abl en voluntarios humanos sanos.
El anticuerpo Abl se dosificó en una única infusión de bolo en histidina y sorbitol a voluntarios humanos sanos'. Las dosis de 1 mg, 3 mg, 10 mg, 30 mg o 100 mg se administraron a cada individuo en grupos de dosificación que contienen cinco a seis individuos. Las muestras de plasma se eliminaron en intervalos de tiempo fijos por hasta doce semanas. El plasma humano se recogió a través de venupunción en un tubo de extracción al vacio que contiene EDTA. El plasma se separó y usó para evaluar los niveles de circulación de Abl usando un anticuerpo monoclonal especifico para Abl, tal como sigue. Se recubrió una placa de microtitulación de 96 pocilios durante la noche con el anticuerpo monoclonal especifico para Abl en IX PBS durante la noche a 4 °C. Las etapas restantes se condujeron a temperatura ambiente. Los pocilios se aspiraron y se bloquearon posteriormente usando 0.5% de gelatina de piel de pescado (FSG) (Sigma) en IX PBS durante 60 minutos.; Las muestras de plasma humano luego se agregaron e incubaron durante 60 minutos, luego se aspiraron, luego se agregó 50 L de 1 µ?/mL de IL-6 biotinilada a cada pocilio y se incubaron durante 60 minutos. Los pocilios se aspiraron y se agregó 50 xL de estreptavidina-HRP ( Pharmingen) , en 1:5,000 diluidos en 0.5% FSG/PBS y se incubaron durante 45 minutos. El desarrollo se condujo usando métodos estándar empleando TMB para detección. Los niveles luego se determinaron mediante comparación con una curva estándar preparada en un formato comparable.
La concentración en plasma promedio de Abl para cada grupo de dosificación contra tiempo se muestra en la Figura 16. Los promedios de AUC y Cmax aumentaron de forma lineal con la dosificación (Figuras 17 y 18, respectivamente) . Para dosis de 30 mg y más, el promedio de la semivida de Abl en cada grupo de dosificación fue aproximadamente de entre 25 y 30 días (Figura 19) .
Ejemplo 17 Farmacocinética de Abl en pacientes con cáncer avanzado.
El anticuerpo Abl se dosificó en una única infusión de bolo en solución salina tamponada con fosfato para : cinco individuos con cáncer avanzado. Cada individuo recibió una dosis de 80 mg (n=2) o 160 mg (n=3) de Abl. Las muestras de plasma se tomaron semanalmente y el nivel de anticuerpo Abl se cuantificó como en el Ejemplo 16.
La concentración en plasma promedio de Abl en estos individuos como función del tiempo se muestra en la Figura 20. El promedio de semivida de Abl fue de aproximadamente 31 días.
Ejemplo 18 Semivida sin precedentes de Abl.
En general, la semivida promedio de Abl fue de aproximadamente 31 días en humanos (para dosificaciones de 10 mg y más) y de aproximadamente 15-21 días en el mono macaco. La semivida de Abl en humanos y monos macacos no tiene precedentes cuando se compara con la semivida de otros anticuerpos anti-IL-6 (Figura 21) . Tal como se describe, el Abl surge de la humanización de un anticuerpo de conejo y se produce a partir de Pichia pastoris en forma aglicosilada . Estas características dan como resultado un anticuerpo con muy poca inmunogenicidad en humanos. Además, la falta de glicosilación evita que Abl interactúe con el receptor o complemento de Fe. Sin el ánimo de limitarse a la teoría, se cree que la semivida sin precedentes de Abl es al menos parcialmente atrxbuible a la humanización y/o falta de glicosilación. La secuencia y/o estructura particular de las superficies de unión al antígeno también pueden contribuir a la semivida de Abl.
Ejemplo 19 Efecto de Abl en la concentración de hemoglobina, concentración de lípidos en plasma y conteos de neutrófilos en pacientes con cáncer avanzado.
El anticuerpo Abl se dosificó en una única infusión de bolo en solución salina tamponada con fosfato a ocho individuos con cáncer avanzado (NSCLC, cáncer colorrectal, colangiocarcinoma o mesotelioma) . Cada individuo recibió una dosis de 80 mg, 160 mg, o 320 mg de Abl. Se extrajeron muestras de sangre antes de la infusión y a intervalos de tiempo establecidos durante seis semanas y se determinó la concentración de hemoglobina, la concentración de lípidos en plasma y los conteos de neutrófilos. La concentración promedio de hemoglobina aumentó levemente (Fig. 22), así como también el colesterol total y los triglicéridos (Fig. 23), mientras que los conteos promedio de neutrófilos disminuyeron levemente (Fig. 24) .
Estos resultados demuestran adicionalmente algunos de los efectos beneficiosos de la administración de Abl a individuos con enfermedades crónicas. Debido a que la IL-6 es la citocina principal responsable de la anemia de enfermedades crónicas (incluida la anemia relacionada con el cáncer) , la neutralización de IL-6 mediante Abl aumenta la concentración de hemoglobina en estos individuos. De manera similar, debido a que la IL-6 es muy importante en el aumento de conteos de neutrófilos en la inflamación, la leve reducción observada en los conteos de neutrófilos confirma adicionalmente que Abl inhibe la IL-6. Finalmente, la IL-6 causa anorexia asi como también caquexia en estos pacientes; la neutralización de IL-6 mediante Abl hace que se recupere el apetito y se revierta la caquexia. El aumento de las concentraciones de lipidos en plasma refleja el estado nutricional mejorado de los paciéntes. Tomados en conjunto, estos resultados demuestran adicionalmente que Abl efectivamente revierte estas consecuencias adversas de la IL-6 en estos pacientes.
Ejemplo 20 Abl suprime la CRP en suero en voluntarios sanos y en pacientes con cáncer avanzado.
Introducción Las concentraciones de CRP en suero han sido descritas como un fuerte indicador pronóstico en pacientes con ciertas formas de cáncer. Por ejemplo, Hashimoto et al. llevó a cabo análisis univariado y multivariado de concentraciones de CRP en suero preoperativas en pacientes con carcinoma hepatocelular para identificar factores que afectan la supervivencia y recurrencia de la enfermedad (Hashimoto, K., et al., Cáncer, 103 (9) :1856-1864 (2005)). Se clasificó a los pacientes en dos grupos, aquellos con niveles de CRP en suero > 1.0· mg/dL ("grupo con CRP positiva") y aquellos con niveles de CRP en suero < 1.0 mg/dL ("grupo con CRP negativa"). Los autores describieron "una correlación importante entre el nivel de CRP en suero preoperatorio y el tamaño del tumor". Id. Además, los autores encontraron que "[l]as tasas de supervivencia general y supervivencia sin recurrencia en el grupo con CRP positiva fueron significativamente más bajas en comparación con las tasas del grupo con CRP negativa." Id. Los autores concluyeron que el nivel de CRP preoperatorio en pacientes es un importante indicador predictivo independiente de prognosis pobre y recurrencia temprana en pacientes con carcinoma hepatocelular. : Otros investigadores han identificado correlaciones similares. Por ejemplo, Karakiewicz et al. determinó que la CRP en suero era un predictor independiente e informativo de la mortalidad especifica del carcinoma de células renales (Karakiewicz, P.I., et al., Cáncer, 110 ( 6) : 1241-1247 (2007)). Por consiguiente, sigue habiendo una necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos que reduzcan las concentraciones de proteina C-reactiva (CRP) en suero en pacientes con cáncer y particularmente aquellos con cánceres avanzados.
Métodos Los voluntarios sanos recibieron una única infusión intravenosa (IV) de 1 hora de ya sea 100 mg (5 pacientes) , 30 mg (5 pacientes), 10 mg (6 pacientes), 3 mg (6 pacientes) o 1 mg (6 pacientes) de anticuerpo monoclonal Abl, mientras que otros 14 voluntarios sanos recibieron placebo intravenoso. De manera comparativa, 2 pacientes con formas avanzadas de cáncer colorrectal recibieron una única infusión intravenosa (IV) de 1 hora de 80 mg del anticuerpo monoclonal Abl. No se administraron dosis adicionales del anticuerpo monoclonal Abl a la población de prueba.
Los pacientes se evaluaron antes de la administración de la dosis y a partir de ahi semanalmente durante al menos 5 semanas luego de la dosis. Al momento de cada evaluación, se analizó la concentración de CRP en suero en los pacientes.
Resultados Voluntarios sanos Tal como se menciona anteriormente, los niveles de CRP en suero son un marcador de inflamación; por consiguiente^ los niveles de CRP de referencia son típicamente bajos en los individuos sanos. Los niveles de CRP de referencia 'bajos pueden hacer que una reducción adicional en los niveles de CRP sea difícil de detectar. Sin embargo, se detectó una reducción considerable de las concentraciones de CRP en suero en voluntarios sanos que recibieron todas las concentraciones del anticuerpo monoclonal Abl, en comparación con los controles (Fig. 25) . La reducción de los niveles de CRP en suero fue rápida y ocurrió al cabo de una semana de administración de anticuerpos y se prolongó al menos hasta que se realizó la medición final (8 o 12 semanas a partir de la administración del anticuerpo) .
Pacientes con cáncer A cinco pacientes con cáncer avanzado (cáncer colorrectal, colangiocarcinoma, o NSCLC) con niveles elevados de CRP en suero se les dosificó 80 mg o 160 mg de Abl. Los niveles de CRP en suero se redujeron en gran medida en estos pacientes (Fig. 26A) . La reducción de los niveles de CRP en suero fue rápida, con 90% de reducción dentro de una semana a partir de la administración de Abl y se prolongó al menos hasta que se realizó la medición final (hasta doce semanas). En la Fig. 26B se muestran los niveles de CRP de dos individuos representativos. En esos individuos, los niveles dé CRP disminuyeron por debajo del rango de referencia normal (menos que 5 - 6 mg/1) dentro de una semana. Por consiguiente, la administración de Abl a pacientes con cáncer avanzado ;puede causar una supresión rápida y sostenida de los niveles de CRP en suero.
Ejemplo 21 Abl mejoró la fuerza muscular, mejoró el peso y redujo la fatiga en pacientes con cáncer avanzado Introducción La pérdida de peso y fatiga (acompañadas por debilidad muscular) son síntomas muy comunes en pacientes con formas avanzadas de cáncer y estos síntomas pueden empeorar a medida que el cáncer progresa. La fatiga, la pérdida de pesó y la debilidad muscular pueden tener efectos negativos considerables en la recuperación de los pacientes con formas avanzadas de cáncer, por ejemplo, alterando estilos de vida y relaciones y afectando la voluntad o capacidad de los pacientes para continuar tratamientos contra el cáncer. Los métodos conocidos para abordar la fatiga, pérdida de peso y debilidad muscular incluyen rutinas regulares de entrenamiento y ejercicios, métodos para conservar la energía de los pacientes y tratamientos que abordan la fatiga inducida por anemia y la debilidad muscular. Sin embargo, sigue habiendo una necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos para mejorar la fatiga, la pérdida de peso y debilidad muscular en pacientes con cáncer.
Métodos Cuatro pacientes con formas avanzadas de cáncer (cáncer colorrectal (2), NSCLC (1), colangiocarcinoma (1)) recibieron una única infusión intravenosa (IV) de 1 hora de ya sea 80 mg o 160 mg del anticuerpo monoclonal Abl. No se administraron dosis adicionales del anticuerpo monoclonal Abl a la población de prueba.
Los pacientes se evaluaron antes de la administración de la dosis y a partir de ahi durante al menos 6 semanas luego de la dosis. .Al momento de cada evaluación, se analizó a los pacientes para determinar lo siguiente: a.) cualquier cambio en el peso; b.) fatiga medida usando el cuestionario de la subescala de fatiga Facit-F, una prueba reconocida a nivel médico para evaluar la fatiga (Véase, e.g., Celia, D., Lai, J.S., Chang, C.H., Peterman, A., & Slavin, M. (2002). Fatigue in cáncer patients compared with fatigue in the general population. Cáncer, 94(2), 528-538; Celia, D., Eton, D.T., Lai , F J-S., Peterman, A.H & Merkel, D.E. (2002). Combining anchor and distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cáncer Therapy anemia and fatigue scales. Journal of Pain & Symptom Management, 24 (6) 547-561.); y fuerza de prensión; (una prueba reconocida a nivel médico para evaluar la fuerza muscular, típicamente empleando un dinamómetro de prensión) .
Resultados Cambio en el peso : Los datos promediados para ambas concentraciones de dosis (80 mg y 160 mg) del anticuerpo monoclonal Abl demostraron un aumento de aproximadamente 2 kilogramos de peso por paciente durante el período de 6 semanas (Fig. 29).
Fatiga ; Los datos promediados para ambas concentraciones de dosis (80 mg y 160 mg) del anticuerpo monoclonal Abl demostraron un aumento en la puntuación media de la subescala de Facit-F FS de al menos aproximadamente 10 puntos en la población de pacientes durante el periodo de 6 semanas (Fig. 30).
Fuerza de prensión Los datos promediados para ambas concentraciones de dosis (80 mg y 160 mg) del anticuerpo monoclonal Abl demostraron un aumento en la fuerza de prensión de al menos aproximadamente 10 puntos en la población de pacientes durante el periodo de 6 semanas (Fig. 31) .
Ejemplo 22 Abl aumenta la concentración de albúmina en plasma en pacientes con cáncer avanzado Introducción Las concentraciones de albúmina en suero son reconocidas como indicadores predictivos de supervivencia y/o éxito en la recuperación de pacientes con cáncer. La hipoalbuminemia tiene una fuerte correlación con una evolución pobre del paciente en numerosas formas de cáncer. Por ejemplo, en un estudio ningún paciente sometido a quimioterapia sistémica por adenocarcinoma pancreático metastásico y con niveles de albúmina en suero menores a 3.5 g/dL respondió de forma satisfactoria a la quimioterapia sistémica (Fujishiro, M., et al., Hepatogastroenterology, 47 (36) : 1744-46 (2000)). Los autores concluyen que "[p]acientes con ... hipoalbuminemia ... podrían ser candidatos mapropiados para quimioterapia sistémica y podrían tratarse con otros enfoques experimentales o cuidados paliativos." Id.
De manera similar, Sénior y aroni expresan que "[l]a reciente apreciación acerca de que la hipoalbuminemia es la predictora más poderosa de la mortalidad en enfermedades renales de etapa terminal destaca la importancia crítica del consumo de proteínas adecuadas para esta población de pacientes." (J.R. Sénior and B.J. Maroni, Am. Soc. Nutr. Sci., 129: 313S-314S (1999)).
En al menos un estudio, los intentos por rectificar la hipoalbuminemia en 27 pacientes con cáncer metastásico mediante la infusión de albúmina intravenosa diaria de 20 g hasta que se alcanzaron los niveles de albúmina en suero normales (>3.5 g/dL) no tuvieron mucho éxito. Los autores mencionan que "[l]a infusión de albúmina para pacientes con cáncer en ¡etapa avanzada tiene valor limitado en la práctica clínica. , Los pacientes con PS 4 e hipoalbuminemia tienen una prognosis más pobre." (Demirkazik, A., et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 21:Abstr 2892 (2002) ) . ; Por consiguiente, sigue habiendo necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos que mejoren las concentraciones de albúmina en suero en pacientes con cáncer y que se ocupen de estados hipoalbuminémicos en pacientes con cáncer, particularmente aquellos con cánceres avanzados.
Métodos Cuatro pacientes con formas avanzadas de cáncer (cáncer colorrectal (2), NSCLC (1), colangiocarcinoma (1)) recibieron una única infusión intravenosa (IV) de 1 hora de ya sea 80 mg o 160 mg del anticuerpo monoclonal Abl. No se administraron dosis adicionales del anticuerpo monoclonal Abl a la población de prueba.
Los pacientes se evaluaron antes de la administración de la dosis y a partir de ahi durante al menos 6 semanas luego de la dosis. Al momento de cada evaluación, se analizó la concentración de albúmina en plasma en los pacientes.
Resultados Los datos promediados para ambas concentraciones de dosis (80 mg y 160 mg) del anticuerpo monoclonal Abl demostraron un aumento de aproximadamente 5 g/L de concentración de albúmina en plasma por paciente durante el periodo de 6 semanas (Fig. 33) .
Ejemplo 23 Abl suprime la CRP en suero en pacientes con cáncer avanzado.
Introducción Las concentraciones de CRP en suero han sido descritas como un fuerte indicador pronóstico en pacientes con ciertas formas de cáncer. Por ejemplo, Hashimoto et al. llevó a cabo análisis univariado y multivariado de concentraciones de CRP en suero preoperatorias en pacientes con carcinoma hepatocélular para identificar factores que afectan la supervivencia y recurrencia de la enfermedad (Hashimoto, K., et al., Cáncer, 103 (9) : 1856-1864 (2005)). Se clasificó a los pacientes en dos grupos, aquellos con niveles de CRP en suero > 1.0 mg/dL ("grupo con CRP positiva") y aquellos con niveles de CRP en suero < 1.0 mg/dL ("grupo con CRP negativa"). Los autores describieron "una correlación importante entre el nivel de CRP en suero preoperatorio y el tamaño del tumor". Id. Además, los autores encontraron que "[l]as tasas de supervivencia general y supervivencia sin recurrencia en el grupo con CRP positiva fueron significativamente más bajas en comparación con las tasas del grupo con CRP negativa." Id. Los autores concluyeron que el nivel de CRP preoperatorio en pacientes es un importante indicador predictivo independiente de prognosis pobre y recurrencia temprana en pacientes con carcinoma hepatocelular .
Otros investigadores han identificado correlaciones similares. Por ejemplo, Karakiewicz et al. determinó que la CRP en suero era un predictor independiente e informativo de la mortalidad especifica del carcinoma de células renales (Karakiewicz, P.I., et al., Cáncer, 110 ( 6) : 1241-1247 (2007)). Por consiguiente, sigue habiendo una necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos que reduzcan las concentraciones de proteina C-reactiva (CRP) en suero en pacientes con cáncer y particularmente aquellos con cánceres avanzados. i Métodos Se dividieron ciento veinticuatro pacientes con cáncer de pulmón no microcitico (NSCLC) en 4 grupos de tratamiento. Los pacientes de un grupo recibieron una infusión intravenosa (IV) de 1 hora ya sea de placebo (n=31) , 80 mg (n=29) , 160 mg (n=32) , o 320 mg (n=32) del anticuerpo monoclonal Abl' cada 8 semanas durante 24 semanas por un total de 3 dosis. La concentración de CRP se cuantificó mediante un ensayo inmunoturbidimétrico potenciado con partículas de proteína C-reactiva usando anticuerpos anti-CRP unidos con látex (es decir Roche CRP Tinaquant®) . En resumen, aproximadamente 1.0 mL del suero de muestra del paciente se recogió y se almacenó en un tubo de recolección de plástico. La muestra se colocó en un tampón adecuado y el anticuerpo anti-CRP acoplado a micropartículas de látex se agregó a una muestra para comenzar la reacción. Estos anticuerpos anti-CRP con micropartículas de látex conjugadas reaccionan con antígenos en la muestra ', para formar un complejo de antígeno/anticuerpo . Luego de la aglutinación, esto se midió de forma turbidimétrica usando un analizador Roche/Hitachi Modular P.
Los pacientes fueron evaluados antes de la administración de la dosis y a partir de entonces en las semanas 2, 4, 8 y 12. Al momento de cada evaluación, se analizó la concentración de CRP en suero de los pacientes.
Resultados Los datos promediados para cada concentración de dosis (placebo, 80 mg, 160 mg . y 320 mg) del anticuerpo monoclonal Abl se graficaron en la Figura 38. Todos los niveles de dosis del anticuerpo Abl demostraron una caída inmediata en las concentraciones de CRP con relación al placebo durante un período de 12 semanas. Los niveles de CRP mostraron avances al cabo de 8 semanas luego de la dosis. Los niveles de CRP cayeron por debajo de 5 mg/L en la semana 12. Los valores promedio de CRP demostraron disminuciones rápidas y sostenidas para todas las concentraciones de dosis con relación al placebo (Fig. 39). Por consiguiente, la administración de Abl a pacientes con cáncer avanzado puede causar una supresión rápida y sostenida de los niveles de CRP en suero.
Ejemplo 24 Abl suprime la CRP en suero en pacientes con cánceres avanzados.
Introducción ¡ Las concentraciones de CRP en suero han sido descritas como un fuerte indicador pronóstico en pacientes con ciertas formas de cáncer. Por ejemplo, Hashimoto et al. llevó a cabo análisis univariado y multivariado de concentraciones de CRP en suero preoperatorias en pacientes con carcinoma hepatocelular para identificar factores que afectan la supervivencia y recurrencia de la enfermedad (Hashimoto, ., et al., Cáncer, 103 (9) : 1856-1864 (2005)). Se clasificó a los pacientes en dos grupos, aquellos con niveles de CRP en suero > 1.0 mg/dL ("grupo con CRP positiva") y aquellos con niveles de CRP en suero < 1.0 mg/dL ("grupo con CRP negativa"). Los autores describieron "una correlación importante entre el nivel de CRP en suero preoperatorio y el tamaño del tumor". Id. Además, los autores encontraron que "[l]as tasas de supervivencia general y supervivencia sin recurrencia en el grupo con CRP positiva fueron significativamente más bajas en comparación con las tasas del grupo con CRP negativa." Id. Los autores concluyeron que el nivel de CRP preoperatorio en pacientes es un importante indicador predictivo independiente de prognosis pobre y recurrencia temprana en pacientes con carcinoma hepatocelular .
Otros investigadores han identificado correlaciones similares. Por ejemplo, Karakiewicz et al. determinó que la CRP en suero era un predictor independiente e informativo de la mortalidad especifica del carcinoma de células renales (Karakiewicz, P.I., et al., Cáncer, 110 ( 6) : 1241-1247 (2007)). Por consiguiente, sigue habiendo una necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos que reduzcan las concentraciones de proteina C-reactiva (CRP) en suero en pacientes con cáncer y particularmente aquellos con cánceres avanzados.
Métodos Ocho pacientes con diferentes formas avanzadas de cáncer (cáncer colorrectal (3), NSCLC (1), colangio (1) y mesotelioma (2)) recibieron una única infusión intravenosa de 1 hora de ya sea 80 mg (2 pacientes), 160 mg (3 pacientes) o 320 mg (3 pacientes) del anticuerpo raonoclonal Abl. No se administraron dosis adicionales del anticuerpo monoclonal Abl a la población de prueba.
Los pacientes se evaluaron antes de la administración de la dosis y a partir de ahi semanalmente durante al menos 8 semanas luego de la dosis. Al momento de cada evaluación, se analizó la concentración de CRP en suero en los pacientes. La concentración de CRP se cuantificó mediante un ensayo inmunoturbidimétrico potenciado con partículas de proteína C-reactiva usando anticuerpos anti-CRP unidos con látex (es decir Roche CRP Tinaguant®) . En resumen, aproximadamente 1.0 mL del suero de muestra del paciente se recogió y se almacenó .en un tubo de recolección de plástico. La muestra se colocó en un tampón adecuado y el anticuerpo anti-CRP acoplado a micropartículas de látex se agregó a una muestra para comenzar la reacción. Estos anticuerpos anti-CRP con micropartículas de látex conjugadas reaccionan con antígenos en la muestra' para formar un complejo de antígeno/anticuerpo . Luego de la aglutinación, esto se midió de forma turbidimétrica usando un analizador Roche/Hitachi Modular P.
Resultados Los niveles de CRP en suero se redujeron en gran medida en todos los pacientes estudiados (Fig. 40). La reducción de los niveles de CRP en suero fue rápida, con aproximadamente 90% de reducción dentro de una semana a partir de la administración de Abl y los niveles disminuidos prolongados continuaron al menos hasta que se realizó la medición final (hasta doce semanas) . En todos los casos excepto un paciente con cáncer colorrectal, los niveles de CRP cayeron al rango de referencia normal o por debajo de este (menos que 5-6 mg/L) dentro de una semana. El paciente con cáncer colorrectal alcanzó niveles normales similares en la semana 4 del estudio. Por consiguiente, la administración de Abl a pacientes con cáncer avanzado puede causar una supresión rápida y sostenida de los niveles de CRP en suero.
Ejemplo 25 Abl suprime la CRP en suero en pacientes con artritis reumatoide.
Introducción Las concentraciones de CRP en suero han sido descritas como un fuerte indicador pronóstico en pacientes con artritis reumatoide. Los pacientes que padecen artritis reumatoide con niveles altos de CRP demostraron un deterioro casi total. ' Amos et al., 1 Br. Med. J. 195-97 (1977). Por el contrario,, los pacientes con niveles bajos de CRP no mostraron progreso de la enfermedad, lo que sugiere que es necesario mantener bajos los niveles de CRP para tratar la artritis reumatoide de forma eficaz. Id. El seguimiento de la CRP durante los regímenes de tratamiento de la artritis reumatoide de oro, D-penicilamina, cloroquina o dapsona indicaron que dificultó el deterioro radiológico luego de los primeros 6 meses de tratamiento cuando se controlaron de manera constante los niveles de CRP. Dawes et al., 25 Rheumatology 44-49 (1986). Se identificó una correlación altamente significativa entre la producción de CRP y la progresión radiológica, van Leeuwen et al., 32 (Supp. 3) Rheumatology 9-13 (1997). Otro estudio reveló que para pacientes con artritis reumatoide activa, la supresión de CRP elevada de manera anormal produjo una mejora en métricas funcionales de prueba, mientras que la elevación de CRP continuo se asocia con el deterioro en las mismas métricas. Devlin et al., 24 J. Rheumatol. 9-13 (1997). No se observó deterioro adicional sin una nueva elevación de la CRP, lo que indica la supresión de la CRP como un candidato viable para el tratamiento de la artritis reumatoide. Id. Por consiguiente, sigue existiendo la necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos para reducir las concentraciones de protei.na C-reactiva (CRP) en pacientes con artritis reumatoide.
Métodos Se dividieron ciento veintisiete pacientes con artritis reumatoide activa y CRP =10 mg/L en 4 grupos de tratamiento. Los pacientes de un grupo recibieron una infusión intravenosa (IV) de 1 hora ya sea de placebo (n=33) , 80 mg (n=32), 1,60 mg (n=34), o 320 mg (n=28) del anticuerpo monoclonal Abl, una vez al comienzo del ensayo de 16 semanas y nuevamente en la semana 8. La concentración de CRP se cuantificó mediante un ensayo inmunoturbidimétrico potenciado con partículas de proteína C-reactiva usando anticuerpos anti-CRP unidos con látex (es decir, Roche CRP Tinaquant®) . En resumen, aproximadamente 1.0 mL del suero de muestra del paciente se recogió y se almacenó en un tubo de recolección de plástico. La muestra se colocó en un tampón adecuado y el anticuerpo anti-CRP acoplado a micropartículas de látex se agregó a una muestra para comenzar la reacción. Estos anticuerpos anti-CRP con micropartículas de látex conjugadas reaccionan con antígenos en la muestra para formar un complejo de antígeno/anticuerpo . Luego de la aglutinación, esto se midió de forma turbidimétrica usando un analizador Roche/Hitachi Modular P. Se recogieron los datos de la concentración de CRP cada semana durante las primeras 4 semanas, cada dos semanas entre las semanas 4 y 12 y al término de la prueba en la semana 16.
Resultados Los niveles de CRP en suero se redujeron en gran medida en todos los pacientes estudiados (Fig. 41) . La reducción de los niveles de CRP en suero fue rápida, con una reducción inmediata de los niveles de CRP con relación al placebo dentro de una semana a partir de la administración de Abl y los niveles disminuidos prolongados continuaron al menos hasta que se realizó la medición final (hasta dieciséis semanas) . En todos los casos, los niveles de CRP cayeron al rango de referencia normal o por debajo de este (menos que 5-6 mg/L) dentro de una semana. Por consiguiente, la administración de Abl a pacientes con artritis reumatoide puede causar una supresión rápida y sostenida de los niveles de CRP en suero y presenta un régimen eficaz de tratamiento.
Ejemplo 26 Abl aumenta la hemoglobina en pacientes con cáncer avanzado El anticuerpo Abl se dosificó a 80 mg, 160 mg o 320 mg de Abl en solución salina tamponada con fosfato a 93 individuos con carcinoma pulmonar no microcitico. El grupo tratado con placebo se dosificó a 31 individuos con carcinoma pulmonar no microcitico solo con solución salina tamponada con fosfato. Se extrajeron muestras de sangre justo antes de la dosificación (semana cero) y en las semanas dos, cuatro, ocho y doce y se determinó la concentración de hemoglobina. La concentración promedio de hemoglobina aumentó para aquellos que reciben el anticuerpo Abl mientras que la concentración promedio de hemoglobina de aquellos que reciben placebo no aumentó luego de las doce semanas al compararla con la concentración justo antes de la dosificación (semana cero) (Figuras 42 y 43) .
Un subgrupo de la población de estudio comenzó el estudio con niveles bajos de hemoglobina, estando la concentración de hemoglobina de referencia por debajo de 11 g/1.. La concentración promedio de hemoglobina aumentó por encima de 11 g/1 luego de ocho noches para aquellos que recibieron el anticuerpo Abl en dosis de 160 mg y 320 mg, mientras quie la concentración promedio de hemoglobina de aquellos que recibieron el anticuerpo Abl en dosis de 80 mg o placebo no aumentó por encima de 11 g/l luego de ocho semanas (Fig. 44).
Estos resultados demuestran adicionalmente algunos de los efectos beneficiosos de la administración de Abl a individuos con enfermedades crónicas. Debido a que la IL-6 es la principal citocina responsable de la anemia en enfermedades crónicas (incluida la anemia relacionada con el cáncer) , la neutralización de IL-6 mediante Abl aumenta la concentración de hemoglobina en estos individuos.
Ejemplo 27 Abl aumenta la hemoglobina en pacientes con artritis reumatoide.
Los niveles de hemoglobina se analizaron en pacientes con artritis reumatoide durante el tratamiento con anticuerpo Abl. El anticuerpo Abl se dosificó a 80 mg, 160 mg o 320 mg en solución salina tamponada con fosfato a 94 individuos con artritis reumatoide. El grupo tratado con placebo ;de 33 individuos con artritis reumatoide se dosificó solo con solución salina tamponada con fosfato. Se extrajeron muestras de sangre justo antes de la dosificación (semana cero) y a la semana uno, dos, tres, cuatro, seis, ocho, diez, doce y dieciséis y se determinó la concentración de hemoglobina. La concentración promedio de hemoglobina aumentó para aquellos que reciben el anticuerpo Abl mientras que la concentración promedio de hemoglobina de aquellos que recibieron placebo no aumentó luego de las dieciséis semanas al compararla con la concentración justo antes de la dosificación (semana cero) (Figura 45) .
Estos resultados demuestran adicionalmente algunos de los efectos beneficiosos de la administración de Abl a individuos con enfermedades crónicas. Debido a que la IL-6 es la citocina principal responsable de la anemia de enfermedades crónicas (incluida la anemia relacionada con el cáncer) , la neutralización de IL-6 mediante Abl aumenta la concentración de hemoglobina .
Ejemplo 28 Abl aumenta la albúmina en pacientes con cáncer avanzado Introducción Las concentraciones de albúmina en suero son reconocidas como indicadores predictivos de supervivencia y/o éxito en la recuperación de pacientes con cáncer. La hipoalbuminemia ¡tiene una fuerte correlación con una evolución pobre del paciente en numerosas formas de cáncer. Por ejemplo, en un estudio ningún paciente sometido a quimioterapia sistémica por adenocarcinoma pancreático metastásico y con niveles de albúmina en suero menores a 3.5 g/dL respondió de forma satisfactoria a la quimioterapia sistémica (Fujishiro, M. , et <al., Hepatogastroenterology, 47 (36) : 1744-46 (2000)). Los autores concluyen que "[placientes con ... hipoalbuminemia ... podrían ser candidatos inapropiados para quimioterapia sistémica y podrían tratarse con otros enfoques experimentales o cuidados paliativos." Id. De manera similar, Sénior y Maroni expresan que w[l]a reciente apreciación acerca de que la hipoalbuminemia es la predictora más poderosa de la mortalidad en enfermedades renales de etapa terminal destaca la importancia critica del consumo de proteínas adecuadas para esta población de pacientes." (J.R. Sénior and B.J. Maroni, Am. Soc. Nutr. Sci., 129:313S-314S (1999)).
En al menos un estudio, los intentos por rectificar la hipoalbuminemia en 27 pacientes con cáncer metastásico mediante la infusión de albúmina intravenosa diaria de 20 g hasta que se alcanzaron los niveles de albúmina en suero normales (>3.5 g/dL) no tuvieron mucho éxito. Los autores mencionan que "[l]a infusión de albúmina para pacientes con cáncer en etapa avanzada tiene valor limitado en la práctica clínica. Los pacientes con PS 4 e hipoalbuminemia tienen una prognosis pobre." ( Demirkazik, A., et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 21:Abstr 2892 (2002)). Por consiguiente, sigue habiendo necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos que mejoren las concentraciones de albúmina en suero en pacientes con cáncer y que se ocupen de estados hipoalbuminémicos en pacientes con cáncer, particularmente aquellos con cánceres avanzados.
Métodos El anticuerpo Abl se dosificó a 80 mg, 160 mg o 320 mg de Abl en solución salina tamponada con fosfato a 93 individuos con carcinoma pulmonar no microcitico. Cada individuo recibió una dosis de 80 mg, 160 mg, o 320 mg de Abl. El grupo tratado con placebo de 31 individuos con carcinoma pulmonar no microcitico se dosificó solo con solución salina tamponada con fosfato. Se extrajeron muestras de sangre justo antes de la dosificación (semana cero) y en la semanas dos, cuatro, ocho y doce y se determinó la concentración de albúmina.
Resultados La concentración promedio de albúmina aumentó para aquellos que recibieron el anticuerpo Abl mientras que la concentración promedio de albúmina de aquellos que recibieron placebo no aumentó luego de las doce semanas al compararla con la concentración justo antes de la dosificación (semana cero) (Figura 46) . El cambio en los valores de albúmina de referencia para todos los grupos de concentración de dosis se gráfica en la Figura 47. ; Un subgrupo de la población del estudio comienza el estudio con niveles bajos de albúmina definida '¦ como concentración de albúmina de referencia menor o igual a 35 g/L. La concentración promedio de albúmina inicialmente aumentó con todas las dosificaciones del anticuerpo Abl sobre el placebo, pero solo los pacientes que recibieron 160 mg o 320 mg demostraron niveles de albúmina sostenidos sobre 35 g/L tras 8 semanas de estudio (Figura 48) . El grupo de dosificación de 80 mg demostró un aumento inicial pero disminuyó gradualmente luego de la semana 2 y no aumentó a más que 35 g/L durante las 8 semanas en las que los datos se encontraban disponibles (Id. ) .
Ejemplo 29 Abl mejoró el peso y redujo la fatiga en pacientes con cáncer avanzado Introducción La pérdida de peso, la fatiga y la debilidad muscular son síntomas muy comunes en pacientes con formas avanzadas de cáncer y estos síntomas pueden empeorar a medida que el cáncer progresa. La fatiga y la pérdida de peso pueden tener efectos negativos considerables en la recuperación de los pacientes con formas avanzadas de cáncer, por ejemplo alterando estilos de vida y relaciones y afectando la voluntad o capacidad de los pacientes para continuar tratamientos contra el cáncer. Los métodos conocidos para abordar la fatiga y la pérdida de; peso incluyen rutinas regulares de entrenamiento y ejercicios, métodos para conservar la energía de los pacientes y tratamientos que abordan la fatiga inducida por anemia. ¦ Sin embargo, sigue habiendo una necesidad en la técnica de métodos y/o tratamientos para mejorar la fatiga y la pérdida de peso en pacientes con cáncer.
Métodos Se dividieron ciento veinticuatro pacientes con cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) en 4 grupos de tratamiento. Los pacientes de un grupo recibieron una infusión intravenosa (IV) de 1 hora ya sea de placebo (n=31) , 80 mg (n=29) , 160 mg (n=32), o 320 mg (n=32) del anticuerpo monoclonal Abl cada 8 semanas durante 24 semanas por un total de 3 dosis.
Los pacientes se evaluaron antes de la administración de la dosis y a partir de ahi durante al menos 12 semanas luego de la dosis. Al momento de cada evaluación, se analizó a los pacientes para determinar lo siguiente: a.) cualquier cambio en el peso y b.) fatiga medida usando el cuestionario de la subescala de fatiga Facit-F, una prueba reconocida a nivel médico para evaluar la fatiga (Véase, e.g., Celia, D. , Lai, J.S., Chang, C.H., Peterman, A., & Slavin, M. (2002). Fatigue in cáncer patients compared with fatigue in the general population. Cáncer, 94(2), 528-538; Celia, D. , Eton, D.T., Lai , F J-S., Peterman, A.H & Merkel, D.E. (2002). Combining anchor and distribution based methods to derive minimal clinically important differences on the Functional Assessment of Cáncer Therapy anemia and fatigue scales. Journal of Pain & Symptom Management, 24 (6) 547-561.).
Resultados Cambio en el peso Los datos promediados de cambio en el peso de cada grupo de concentración de dosis (placebo, 80 mg, 160 mg y 320 mg) del anticuerpo monoclonal Abl durante 12 semanas se grafican en la Figura 49. El cambio de porcentaje promedio en el peso corporal de cada concentración de dosis se gráfica en la Figura 50. Los datos promediados de masa corporal magra para los grupos de concentración de dosis se grafican en la Figura 51.
Fatiga La fatiga promediada de cada grupo de concentración de dosis (placebo, 80 mg, 160 mg y 320 mg) del anticuerpo monoclonal Abl demostró aumentos en la puntuación de subescala Facit-F FS promedio para algunos de los grupos de concentración de dosis en la población de pacientes por un periodo de 8 semanas (Figura 52) . El cambio de la puntuación de se subescala Facit-F de referencia se gráfica en la Figura 53.
LISTADO DE SECUENCIAS Las secuencias biológicas referidas en la presente se proporcionan a continuación.
SEQ ID NO: 1 VPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAE NNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVQMSTKVL IQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM SEQ ID NO: 2 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWY QQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDN AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN SEQ ID NO: 3 ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQA PGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSD DA KFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 4 QASQSINNELS SEQ ID NO: 5 RASTLAS SEQ ID NO: 6 QQGYSLRNIDNA SEQ ID NO: 7 NYYVT SEQ ID NO: 8 IIYGSDETAYATWAIG SEQ ID NO: 9 DDSSDWDAKFNL SEQ ID NO: 10 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGG,CACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCÁTCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT SEQ ID NO: 11 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG SEQ ID NO: 12 C AGGC C AGTCAGAGCAT AAC AAT G AAT T AT C C ¾ SEQ ID NO: 13 AGGGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 14 CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 15 AACTACTACGTGACC SEQ ID NO: 16 ATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAGGC SEQ ID NO: 17 ' GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG j SEQ ID NO: 18 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATWAIGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL SEQ ID NO: 19 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL | SEQ ID NO: 20 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA SEQ ID NO: 21 MDTRAPTQLLGLLLL LPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYS LSWY QQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDN VFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAK SEQ ID NO: 22 ETGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNDHAMGWVRQ APGKGLEYIGFINSGGSARYAS AEGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRGGAVWSI HSFDPWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 23 QASETIYSWLS SEQ ID NO: 24 QASDLAS SEQ ID NO: 25 QQGYSGSNVDNV SEQ ID NO: 26 '; DHA G SEQ ID NO: 27 FINSGGSARYASWAEG SEQ ID NO: 28 GGAVWSIHSFDP SEQ ID NO: 29 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAG SEQ I D NO : 30 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAG AAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTG ATCCCTGGGGCCCAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCT TCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AG j SEQ I D NO : 31 CAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCC SEQ I D NO : 32 CAGGCATCCGATCTGGCATCT S EQ I D NO : 33 CAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTT SEQ I D NO : 34 , GACCATGCAATGGGC SEQ ID NO: 35 TTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAGAAGGC SEQ ID NO: 36 GGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTGATCCC SEQ ID NO: 37 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD NAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF SEQ ID NO: 38 METGLR LLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSVYYMN VRQA PGKGLE IGFITMSDNINYAS AKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRGWGTMG RLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 39 QASQSVYDNNYLS SEQ ID NO: 40 GASTLAS SEQ ID NO: 41 ' AGVYDDDSDNA SEQ ID NO: 42 VYYMN i SEQ ID NO: 43 FITMSDNINYAS AKG SEQ ID NO: 44 SRGWGTMGRLDL SEQ ID NO: 45 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCGTGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCCTTCG GCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT SEQ ID NO: 46 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACCCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGTCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATC TCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG SEQ ID NO: 47 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCC SEQ ID NO: 48 GGTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 49 I GCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCC SEQ ID NO: 50 GTCTACTACATGAAC ': SEQ ID NO: 51 TTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 52 AGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATCTC SEQ ID NO: 53 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAICDPVLTQTPSPVSAPVGGTVSISCQASQSVYENNYLS EQQKPGQPPKLLIYGASTLDSGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD DAFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN SEQ ID NO: 54 METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFSLNAYYMNWVRQ APGKGLEWIGFITLNNNVAYANWAKGRFTFSKTSTTVDLKMTSPTPEDTATYFCARSRGWGAM GRLDLWGHGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 55 QASQSVYENNYLS SEQ ID NO: 56 GASTLDS ; SEQ ID NO: 57 ; AGVYDDDSDDA SEQ ID NO: 58 I AYYMN SEQ ID NO: 59 ; FITLNNNVAYANWAKG SEQ ID NO: 60 SRGWGAMGRLDL SEQ ID NO: 61 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCATATGTGACCCTGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTATCTGCACCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGATTCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATTACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCCTTCG GCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTT SEQ ID NO: 62 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTAACGCCTGGAGGAACCCTGACACTCACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGCCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGA AAGGCCGATTCACCTTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAC CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGG ATCTCTGGGGCCATGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCT TCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGG SEQ ID NO: 63 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCC SEQ ID NO: 64 GGTGCATCCACTCTGGATTCT ; SEQ ID NO: 65 GCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCC ' SEQ ID NO: 66 GCCTACTACATGAAC SEQ. ID NO: 67 TTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 68 AGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC SEQ ID NO: 69 DTRAPTQLLGLLLL LPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVDDNN LG YQQKRGQPPKYLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGFSGNIF AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS VCLLNNF SEQ ID NO: 70 METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYAMSWVRQA PGKGLE IGIIGGFGTTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARGGPGNGGD IWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD SEQ ID NO: 71 QASQSVDDNNWLG SEQ ID NO: 72 '¦ SASTLAS SEQ ID NO: 73 ' AGGFSGNIFA SEQ ID NO: 74 \ SYAMS : SEQ ID NO: 75 ': I IGGFGTTYYATWAKG : SEQ ID NO: 76 GGPGNGGDI SEQ ID NO: 77 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCGCCTGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGCTGGTATCAGC AGAAACGAGGGCAGCCTCCCAAGTACCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT; SEQ ID NO: 78 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGG GGCTGGAGTGGATCGGAATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATCTGGGGCC AAGGGACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCAC CCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT ' SEQ ID NO: 79 CAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGC SEQ ID NO: 80 TCTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 81 GCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCT SEQ ID NO: 82 AGCTATGCAATGAGC SEQ ID NO: 83 ATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 84 GGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATC SEQ ID NO: 85 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSVPVGGTVTIKCQSSQSVYNNFLSW YQQKPGQPPKLLIYQASKLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADN AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF SEQ ID NO: 86 ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYAMSWVRQA PGKGLEWIGIIYAGSGSTWYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDGYDDYG DFDRLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD SEQ ID NO: 87 QSSQSVYNNFLS SEQ ID NO: 88 QASKLAS SEQ ID NO: 89 LGGYDDDADNA SEQ ID NO: 90 DYAMS SEQ ID NO: 91 IIYAGSGSTWYAS AKG ; SEQ ID NO: 92 DGYDDYGDFDRLDL SEQ ID NO: 93 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGTACCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCGTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCAG ATAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC SEQ ID NO: 94 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACGCTCAGCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATC GATTGGATCTCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCAT CGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCC TGGTCAAGGACT SEQ ID NO: 95 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCG SEQ ID NO: 96 CAGGCATCCAAACTGGCATCT SEQ ID NO: 97 CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT : SEQ ID NO: 98 GACTATGCAATGAGC SEQ ID NO: 99 ATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 100 : GATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATCGATTGGATCTC SEQ ID NO: 101 DTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYD TQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELS Y QQKSGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDN AFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF SEQ ID NO: 102 METGLRWLLLVAVLSGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYY TWVRQA PG GLEWIGMIYGSDETAYANWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDA KFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 103 QASQSINNELS SEQ ID NO: 104 RASTLAS SEQ ID NO: 105 QQGYSLRNIDNA SEQ ID NO: 106 NYYMT SEQ ID NO: 107 ! MIYGSDETAYANWAIG SEQ ID NO: 108 DDS S DWDAKFNL SEQ I D NO : 109 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAATGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAT CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCG GAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTAGCGGCCCCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTC SEQ I D NO : 1 10 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCTCAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCC CCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG SEQ I D NO : 111 CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCC SEQ I D NO : 1 12 i AGGGCATCCACTCTGGCATCT SEQ I D NO : 113 ; C AAC AGGGT T AT AGT CTGAGGAAT AT T GAT AAT GCT SEQ ID NO: 114 AACTACTACATGACC SEQ ID NO: 115 ATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAGGC SEQ ID NO: 116 GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACTTG SEQ ID NO: 117 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWVGMIYGSDETA YANWAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL SEQ ID NO: 118 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLE VG IYGSDETA YANSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNL SEQ ID NO: 119 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGV PSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNA SEQ ID NO: 120 ; I IYGSDETAYATSAIG SEQ ID NO: 121 IYGSDETAYANSAIG SEQ ID NO: 122 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVGNNQDLS FQQRPGQPPKLLIYEISKLESGVPSRFSGSGSGTHFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDAD NA SEQ ID NO: 123 : METGLRWLLLVAVLKGVQCHSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSRTMSWVRQA PGKGLEWIGYI SGGSTYYAT AKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARLGDTGGHA YATRLNL SEQ ID NO: 124 QSSQSVGNNQDLS SEQ ID NO: 125 EISKLES SEQ ID NO: 126 LGGYDDDADNA SEQ ID NO: 127 SRTMS SEQ ID NO: 128 YIWSGGSTYYAT AKG SEQ ID NO: 129 LGDTGGHAYATRLNL SEQ ID NO: 130 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTGGTAATAACCAGGACTTATCCTGGTTTCAGC AGAGACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACGAAATATCCAAACTGGAATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACACTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTACAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 131 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC ACTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGTCGTACAATGTCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGATTGGGCGATACTGGTGGTCACGCTTATGCTACTC GCTTAAATCTC SEQ ID NO: 132 CAGTCCAGTCAGAGTGTTGGTAATAACCAGGACTTATCC SEQ ID NO: 133 GAAATATCCAAACTGGAATCT SEQ ID NO: 134 CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 135 AGTCGTACAATGTCC SEQ ID NO: 136 TACATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 137 TTGGGCGATACTGGTGGTCACGCTTATGCTACTCGCTTAAATCTC ; SEQ ID NO: 138 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVSISCQSSQSVYSNKYLA WYQQKPGQPPKLLIYWTSKLASGAPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGAYDDDAD NA SEQ ID NO: 139 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTASGFSLEGGYMTWVRQA PGKGLEWIGISYDSGSTYYAS AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRSLKYPTV TSDDL SEQ ID NO: 140 " : QSSQSVYSNKYLA SEQ ID NO: 141 WTSKLAS SEQ ID NO: 142 LGAYDDDADNA SEQ ID NO: 143 GGYMT SEQ ID NO: 144 ISYDSGSTYYASWAKG SEQ ID NO: 145 SLKYPTVTSDDL SEQ ID NO: 146 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAATAAGTACCTAGCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGACATCCAAACTGGCATCTGG!GGCCC CATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAATTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTATGATGATGATGCTGATAATGCt SEQ ID NO: 147 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAAGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACGTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTGGAGGGCGGCTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCAGTTATGATAGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGCGTCAGATCACTAAAATATCCTACTGTTACTTCTGATG ACTTG SEQ ID NO: 148 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAGTAATAAGTACCTAGCC SEQ ID NO: 149 TGGACATCCAAACTGGCATCT SEQ ID NO: 150 CTAGGCGCTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 151 GGCGGCTACATGACC SEQ ID NO: 152 ATCAGTTATGATAGTGGTAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 153 TCACTAAAATATCCTACTGTTACTTCTGATGACTTG SEQ ID NO: 154 DTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQSSQSVYNNNDLA WYQQKPGQPPKLLIYYASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAAAYYCLGGYDDDAD NA SEQ ID NO: 155 METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLSLSSNTINWVRQA PGKGLEWIGYI SGGS YYASWVNGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGYASGGY PYATRLDL SEQ ID NO: 156 QSSQSVYNNNDLA , SEQ ID NO: 157 '¦ YASTLAS SEQ ID NO: 158 LGGYDDDADNA SEQ ID NO: 159 SNTIN SEQ ID NO: 160 YI SGGSTYYAS VNG SEQ ID NO: 161 GGYASGGYPYATRLDL SEQ ID NO: 162 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCACCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATAACGACTTAGCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTCCTGATCTATTATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 163 ; ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTATCTGGATTATCCCTCAGTAGCAATACAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGGATACATTTGGAGTGGTGGTAGTACATACTACGCGAGCTGGGTGAATG GTCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTTACGCTAGTGGTGGTTATCCTTATGCCA CTCGGTTGGATCTC SEQ ID NO: 164 ' CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATAACGACTTAGCC SEQ ID NO: 165 TATGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 166 CTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 167 AGCAATACAATAAAC SEQ ID NO: 168 TACATTTGGAGTGGTGGTAGTACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGT SEQ ID NO: 169 GGGGGTTACGCTAGTGGTGGTTATCCTTATGCCACTCGGTTGGATCTC SEQ ID NO: 170 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNDYLS WYQQRPGQRPKLLIYGASKLASGVPSRFKGSGSGKQFTLTISGVQCDDAATYYCLGDYDDDAD NT SEQ ID NO: 171 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFTLSTNYYLSWVRQ APGKGLEWIGIIYPSGNTYCAKWAKGRFTISKTSSTTVDLK TSPTTEDTATYFCARNYGGDE SL SEQ ID NO: 172 QSSQSVYNNDYLS SEQ ID NO: 173 j GASKLAS ! SEQ ID NO: 174 LGDYDDDADNT '; SEQ ID NO: 175 ' TNYYLS SEQ ID NO: 176 IIYPSGNTYCAK AKG SEQ ID NO: 177 NYGGDESL SEQ ID NO: 178 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACGACTACTTATCCTGGTATCAAC AGAGGCCAGGGCAACGTCCCAAGCTCCTAATCTATGGTGCTTCCAAACTGGCATCTGGGGTCC CGTCACGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGAAACAGTTTACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTGGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATACT SEQ ID NO: 179 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACTTGCA CAGTCTCTGGATTCACCCTCAGTACCAACTACTACCTGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTAGAATGGATCGGAATCATTTATCCTAGTGGTAACACATATTGCGCGAAGTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGA CAACCGAGGACACAGCCACGTATTTCTGTGCCAGAAATTATGGTGGTGATGAAAGTTTG SEQ ID NO: 180 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACGACTACTTATCC ; SEQ ID NO: 181 GGTGCTTCCAAACTGGCATCT SEQ ID NO: 182 CTGGGCGATTATGATGATGATGCTGATAATACT SEQ ID NO: 183 ' ACCAACTACTACCTGAGC SEQ ID NO: 184 ATCATTTATCCTAGTGGTAACACATATTGCGCGAAGTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 185 AATTATGGTGGTGATGAAAGTTTG SEQ ID NO: 186 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASETIGNALA Y QQKSGQPPKLLIYKASKLASGVPSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQWCYFGDSV SEQ ID NO: 187 ETGLRWLLLVTVLKGVQCQEQLVESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSGYYMC VR QAPGKGLEWIACIFTITTNTYYASWÁKGRFTISKTSSTTVTLQ TSLTAADTATYLCARGIYS DNNYYAL SEQ ID NO: 188 QASETIGNALA SEQ ID NO: 189 KASKLAS SEQ ID NO: 190 QWCYFGDSV SEQ ID NO: 191 SGYY C SEQ ID NO: 192 CIFTITTNTYYASWAKG SEQ ID NO: 193 GIYSDNNYYAL ' SEQ I D NO : 194 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGACCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAAT CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT SEQ I D NO : 195 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCACTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCT GCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTGGATCGCGTGTATTTTCACTATTACTACTAACACTTACTACGCGAGCT GGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATCTCTGTGCGAGAGGGATTTATTCTGATAATAATT ATTATGCCTTG SEQ I D NO : 196 CAGGCCAGTGAGACCATTGGCAATGCATTAGCC : SEQ I D NO : 197 AAGGCATCCAAACTGGCATCT SEQ I D NO : 198 CAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT SEQ I D NO : 199 ; AGCGGCTACTACATGTGC ; SEQ I D NO : 200 TGTATTTTCACTATTACTACTAACACTTACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC i SEQ ID NO: 201 GGGATTTATTCTGATAATAATTATTATGCCTTG SEQ ID NO: 202 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGNALA Y QQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCADAAAYYCQ CYFGDSV SEQ ID NO: 203 METGLR LLLVAVLKGVQCQQQLVESGGGLVKPGASLTLTCKASGFSFSSGYYMCWVR QAPGKGLESIACIFTITDNTYYANWAKGRFTISKPSSPTVTLQMTSLTAADTATYFCARGIYS TDNYYAL SEQ ID NO: 204 QASESIGNALA SEQ ID NO: 205 KASTLAS SEQ ID NO: 206 QWCYFGDSV SEQ ID NO: 207 SGYYMC SEQ ID NO: 208 CIFTITDNTYYANWAKG SEQ ID NO: 209 GIYSTDNYYAL SEQ ID NO: 210 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGOACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAATGCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGCCG ATGCTGCCGCTTACTACTGTCAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT SEQ ID NO: 211 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGCAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCGGGGGCATCCCTGACACTCACCT GCAAAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCGGCTACTACATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTCGATCGCATGCATTTTTACTATTACTGATAACACTTACTACGCGAACT GGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGCCCTCGTCGCCCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGGGGGATTTATTCTACTGATAATT ATTATGCCTTG SEQ ID NO: 212 CAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAATGCATTAGCC SEQ ID NO: 213 AAGGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 214 CAATGGTGTTATTTTGGTGATAGTGTT SEQ ID NO: 215 AGCGGCTACTACATGTGC SEQ ID NO: 216 TGCATTTTTACTATTACTGATAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 217 GGGATTTATTCTACTGATAATTATTATGCCTTG SEQ ID NO: 218 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASQSVSSYLNWY QQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGTSSSYG AA SEQ ID NO: 219 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGISLSSNAISWVRQA PGKGLE IGIISYSGTTYYAS AKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDDPTTVM VMLIPFGAGMDL SEQ ID NO: 220 QASQSVSSYLN SEQ ID NO: 221 RASTLES SEQ ID NO: 222 QCTYGTSSSYGAA SEQ ID NO: 223 SNAIS SEQ ID NO: 224 IISYSGTTYYASWAKG SEQ ID NO: 225 DDPTTVMVMLI PFGAGMDL SEQ ID NO: 226 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCGTTAGTAGCTACTTAAACTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGAATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAATGTACTTATGGTACTAGTAGTAGTTATGGTGCTGCT SEQ ID NO: 227 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CCGTCTCTGGTATCTCCCTCAGTAGCAATGCAATAAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTAGTTATAGTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACTAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGATGACCCTACGACAGTTATGGTTATGTTGA TACCTTTTGGAGCCGGCATGGACCTC SEQ ID NO: 228 CAGGCCAGTCAGAGCGTTAGTAGCTACTTAAAC SEQ ID NO: 229 AGGGCATCCACTCTGGAATCT SEQ ID NO: 230 CAATGTACTTATGGTACTAGTAGTAGTTATGGTGCTGCT SEQ ID NO: 231 AGCAATGCAATAAGC .
SEQ ID NO: 232 : ATCATTAGTTATAGTGGTACCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 233 GATGACCCTACGACAGTTATGGTTATGTTGATACCTTTTGGAGCCGGCATGGACCTC SEQ ID NO: 234 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASPVSAAVGGTVTINCQASQSVYKNNYLS YQQKPGQPPKGLIYSASTLDSGVPLRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAA YYCLGSYDCSSG DCYA SEQ ID NO: 235 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCTASGFSFSSYWMC VRQA PGKGLEWIACIVTGNGNTYYANWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAKAYDL SEQ ID NO: 236 QASQSVYKNNYLS SEQ ID NO: 237 SASTLDS SEQ ID NO: 238 LGSYDCSSGDCYA SEQ ID NO: 239 SYWMC SEQ ID NO: 240 CIVTGNGNTYYANWAKG SEQ ID NO: 241 AYDL SEQ ID NO: 242 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTACTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAAGGCCTGATCTATTCTGCATCGACTCTAGATTCTGGGGTCC CATTGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTATG CT SEQ ID NO: 243 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCTACTGGATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGATCGCATGCATTGTTACTGGTAATGGTAACACTTACTACGCGAACTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCAGTCTGA CAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTTTGTGCGAAAGCCTATGACTTG SEQ ID NO: 244 CAGGCCAGTCAGAGTGTT ATAAGAACAACTACTTATCC SEQ ID NO: 245 TCTGCATCGACTCTAGATTCT SEQ ID NO: 246 CTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTATGCT SEQ ID NO: 247 AGCTACTGGATGTGC SEQ ID NO: 248 TGCATTGTTACTGGTAATGGTAACACTTACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 249 GCCTATGACTTG SEQ ID NO: 250 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGSTFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLS WYQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFKGTGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVFNDDSD DA SEQ ID NO: 251 METGLRWLLLVAVPKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTLSGFSLSAYYMS VRQA PGKGLE IGFITLSDHISYARWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRG GA G RLDL SEQ ID NO: 252 : QASQSVYDNNYLS SEQ ID NO: 253 ¦ GASTLAS SEQ ID NO: 254 AGVFNDDSDDA SEQ ID NO: 255 AYYMS SEQ ID NO: 256 FITLSDHISYAR AKG SEQ ID NO: 257 SRGWGAMGRLDL SEQ ID NO: 258 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTT CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTATTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGACAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCACGGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTTTAATGATGATAGTGATGATGGC SEQ ID NO: 259 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCCCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CACTCTCTGGATTCTCCCTCAGTGCATACTATATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAGTGATCATATATCTTACGCGAGGTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATC C SEQ ID NO: 260 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTATTTATCC SEQ ID NO: 261 GGTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 262 GCAGGCGTTTTTAATGATGATAGTGATGATGCC SEQ ID NO: 263 GCATACTATATGAGC SEQ ID NO: 264 TTCATTACTCTGAGTGATCATATATCTTACGCGAGGTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 265 AGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGGATCTC SEQ ID NO: 266 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVTISCQASQSVYNNKNLA WYQQKSGQPPKLLIYWASTLASGVSSRFSGSGSGTQFTLTVSGVQCDDAA YYCLGVFDDDAD NA SEQ ID NO: 267 METGL WLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYS TWVRQA PGKGLEYIGVIGTSGSTYYATWAKGRFTISRTSTTVALKITSPTTEDTATYFCVRSLSSITFL SEQ ID NO: 268 QASQSVYNNKNLA SEQ ID NO: 269 ASTLAS ¡ SEQ ID NO: 270 LGVFDDDADNA SEQ ID NO: 271 SYSMT SEQ ID NO: 272 VIGTSGSTYYAT AKG SEQ ID NO: 273 SLSSITFL SEQ ID NO: 274 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTCGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGCGGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAACAACAAAAATTTAGCCTGGTATCAGC AGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACTGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCT CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCGTCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGTTTTTGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 275 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATATATCGGAGTCATTGGTACTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGCTCTGAAAATCACCAGTCCGAGAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGGAGTCTTTCTTCTATTACTTTCTTG SEQ ID NO: 276 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAACAACAAAAATTTAGCC SEQ ID NO: 277 TGGGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 278 CTAGGCGTTTTTGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 279 AGCTACTCCATGACC SEQ ID NO: 280 GTCATTGGTACTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 281 AGTCTTTCTTCTATTACTTTCTTG SEQ ID NO: 282 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQNIYRYLAWY QQKPGQPPKFLIYLASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYSSNSVA SEQ ID NO: 283 METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLVESGGDLVQPEGSLTLTCTASELDFSSGY ICWVR QVPGKGLEWIGCIYTGSSGSTFYAS AKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYS GFGYFKL SEQ ID NO: 284 QASQNIYRYLA SEQ ID NO: 285 LASTLAS SEQ ID NO: 286 QSYYSSNSVA SEQ ID NO: 287 SGYWIC SEQ ID NO: 288 i CIYTGSSGSTFYAS AKG SEQ ID NO: 289 GYSGFGYFKL SEQ ID NO: 290 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAACATTTATAGATACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTATCTGGCATCTACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTTAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGTTATTATAGTAGTAATAGTGTCGCT SEQ ID NO: 291 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGGTGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCT GCACAGCTTCTGAGTTAGACTTCAGTAGCGGCTACTGGATATGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAG GGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTATACTGGTAGTAGTGGTAGCACTTTTTACGCGA GTTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGA CCAGTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGGTTATAGTGGCTT;TGGTT ACTTTAAGTTG SEQ ID NO: 292 '; CAGGCCAGTCAGAACATTTATAGATACTTAGCC SEQ ID NO: 293 CTGGCATCTACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 294 CAAAGTTATTATAGTAGTAATAGTGTCGCT SEQ ID NO: 295 AGCGGCTACTGGATATGC SEQ ID NO: 296 TGCATTTATACTGGTAGTAGTGGTAGCACTTTTTACGCGAGTTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 297 GGTTATAGTGGCTTTGGTTACTTTAAGTTG SEQ ID NO: 298 [ MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASEDIYRLLAWY QQKPGQPPKLLIYDSSDLASGVPSRFKGSGSGTEFTLAISGVQCDDAATYYCQQAWSYSDIDN A SEQ ID NO: 299 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMSWVRQA PGKGLEWIGIITTSGNTFYASWAKGRLTISRTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARTSDI FYYR NL SEQ ID NO: 300 QASEDIYRLLA SEQ ID NO: 301 DSSDLAS SEQ ID NO: 302 ; QQAWSYSDIDNA SEQ ID NO: 303 SYYMS SEQ ID NO: 304 I ITTSGNTFYASWAKG SEQ ID NO: 305 TSDIFYYRNL SEQ ID NO: 306 [ ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTTATAGGTTATTGGCCTGGTATCAACAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATTCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCGCCATCAGCGGTGTGCAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGCTTGGAGTTATAGTGATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 307 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCGGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTACTAGTGGTAATACATTTTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGGCTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAACTTCTGATATTTTTTATTATCGTAACTTG SEQ ID NO: 308 CAGGCCAGTGAGGACATTTATAGGTTATTGGCC SEQ ID NO: 309 GATTCATCCGATCTGGCATCT SEQ ID NO: 310 CAACAGGCTTGGAGTTATAGTGATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 311 AGCTACTACATGAGC SEQ ID NO: 312 ATCATTACTACTAGTGGTAATACATTTTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 313 ACTTCTGATATTTTTTATTATCGTAACTTG SEQ ID NO: 314 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTASPVSAAVGATVTINCQSSQSVYNDMDLA WFQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCLGAFDDDAD NT SEQ ID NO: 315 METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLTRHAITWVRQA PGKGLEWIGCIWSGGSTYYAT AKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARVIGDTAGY AYFTGLDL SEQ ID NO: 316 QSSQSVYNDMDLA SEQ ID NO: 317 SASTLAS SEQ ID NO: 318 LGAFDDDADNT SEQ ID NO: 319 RHAIT SEQ ID NO: 320 j CI SGGSTYYATWAKG SEQ ID NO: 321 VIGDTAGYAYFTGLDL [ SEQ ID NO: 322 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACGTTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACTGCATCACCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGCCACAG TCACCATCAACTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATGACATGGACTTAGCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGCTTTTGATGATGATGCTGATAATACT SEQ ID NO: 323 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCACTAGGCATGCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATGCATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTCAGAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAGTCATTGGCGATACTGCTGGTTATGCTTATTTTA CGGGGCTTGACTTG SEQ ID NO: 324 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATGACATGGACTTAGCC SEQ ID NO: 325 TCTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 326 CTAGGCGCTTTTGATGATGATGCTGATAATACT SEQ ID NO: 327 AGGCATGCAATAACC SEQ ID NO: 328 TGCATTTGGAGTGGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 329 GTCATTGGCGATACTGCTGGTTATGCTTATTTTACGGGGCTTGACTTG SEQ ID NO: 330 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQASQSVYN LSWY QQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVECADAATYYCQQGYTSDVDNV SEQ ID NO: 331 ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEEAGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQA PGKGLEYIGIISSSGSTYYATWAKGRFTISQASSTTVDLKITSPTTEDSATYFCARGGAGSGG V LLDGFDP SEQ ID NO: 332 QASQSVYNWLS SEQ ID NO: 333 TASSLAS SEQ ID NO: 334 QQGYTSDVDNV SEQ ID NO: 335 SYAMG SEQ ID NO: 336 IISSSGSTYYAT AKG SEQ ID NO: 337 GGAGSGGVWLLDGFDP , SEQ ID NO: 338 ! ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATACTAGTGATGTTGATAATGTT SEQ ID NO: 339 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGGCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATACATCGGAATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCACAAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATTACCAGTCCGACAA CCGAGGACTCGGCCACATATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTGGTGGTGTTTGGCTGC TTGATGGTTTTGATCCC SEQ ID NO: 340 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTGGTTATCC SEQ ID NO: 341 ACTGCATCCAGTCTGGCATCT SEQ ID NO: 342 CAACAGGGTTATACTAGTGATGTTGATAATGTT SEQ ID NO: 343 AGCTATGCAATGGGC SEQ ID NO: 344 ATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 345 GGGGGTGCTGGTAGTGGTGGTGTTTGGCTGCTTGATGGTTTTGATCCC SEQ ID NO: 346 ; MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAKCADVVMTQ PASVSAAVGGTVTINCQASENIYNWLA YQQKPGQPPKLLIYTVGDLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSSYVD NV ; SEQ ID NO: 347 : ETGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNDYAVGWFRQ APGKGLE IGYIRSSGTTAYATWAKGRFTISATSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGGAGSSG VWILDGFAP SEQ ID NO: 348 QASENIYNWLA SEQ ID NO:' 349 TVGDLAS SEQ ID NO: 350 QQGYSSSYVDNV SEQ ID NO: 351 DYAVG SEQ ID NO: 352 YIRSSGTTAYATWAKG SEQ ID NO: 353 GGAGSSGVWILDGFAP SEQ ID NO: 354 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAAATGTGCCGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCA CAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAATTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGTAGGCGATCTGGCATCTGGGGTCTCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTG CCGATGCTGCCACTTACTATTGTCAACAGGGTTATAGTAGTAGTTATGTTGATAATGTT SEQ ID NO: 355 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCT GCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAATGACTATGCAGTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTCGTAGTAGTGGTACCACAGCCTACGCGACCTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCGCTACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGGTGCTGGTAGTAGTGGTGTGTGGATCC TTGATGGTTTTGCTCCC SEQ ID NO: 356 CAGGCCAGTGAGAACATTTATAATTGGTTAGCC SEQ ID NO: 357 ACTGTAGGCGATCTGGCATCT SEQ ID NO: 358 CAACAGGGTTATAGTAGTAGTTATGTTGATAATGTT SEQ ID NO: 359 GACTATGCAGTGGGC SEQ ID NO: 360 TACATTCGTAGTAGTGGTACCACAGCCTACGCGACCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 361 GGGGGTGCTGGTAGTAGTGGTGTGTGGATCCTTGATGGTTTTGCTCCC SEQ ID NO: 362 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYQNNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGAATLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGAYRDVDS SEQ ID NO: 363 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTASGFSFTSTYYIYWVRQ APGKGLEWIACIDAGSSGSTYYAT VNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCAKWDYG GNVG GYDL SEQ ID NO: 364 QASQSVYQNNYLS SEQ ID NO: 365 GAATLAS SEQ ID NO: 366 AGAYRDVDS SEQ ID NO: 367 STYYIY SEQ ID NO: 368 : CIDAGSSGSTYYATWVNG SEQ ID NO: 369 WDYGGNVGWGYDL SEQ ID NO: 370 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCTCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCAGAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCGGCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTTATAGGGATGTGGATTCT SEQ ID NO: 371 ; ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCTTTACTAGTACCTACTACATCTACTGGGTCCGCCAGGCTCGAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCATGTATTGATGCTGGTAGTAGTGGTAGCACTTACTACGGGACCT GGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAAT;GACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAAATGGGATTATGGTGGTAATGTTG GTTGGGGTTATGACTTG ; SEQ ID NO: 372 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCAGAACAACTACTTATCC SEQ ID NO: 373 GGTGCGGCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 374 GCAGGCGCTTATAGGGATGTGGATTCT SEQ ID NO: 375 AGTACCTACTACATCTAC SEQ ID NO: 376 TGTATTGATGCTGGTAGTAGTGGTAGCACTTACTACGCGACCTGGGTGAATGGC SEQ ID NO: 377 TGGGATTATGGTGGTAATGTTGGTTGGGGTTATGACTTG SEQ ID NO: 378 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAFELTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQASQSISSYLAWY QQKPGQPPKFLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQSYYDSVSNP SEQ ID NO: 379 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPEGSLTLTCKASGLDLGTYWFMC VRQ APGKGLEWIACIYTGSSGSTFYAS VNGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARGYSG YGYFKL SEQ ID NO: 380 \ QASQSISSYLA SEQ ID NO: 381 ! RASTLAS SEQ ID NO: 382 QSYYDSVSNP · SEQ ID NO: 383 ¡ TYWFMC SEQ ID NO: 384 CIYTGSSGSTFYASWVNG SEQ ID NO: 385 GYSGYGYFKL SEQ ID NO: 386 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGTTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGTTCCTGATCTACAGGGCGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATTATGATAGTGTTTCAAATCCT SEQ ID NO: 387 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCA AAGCCTCTGGACTCGACCTCGGTACCTACTGGTTCATGTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCTTGTATTTATACTGGTAGTAGTGGTTCCACTTTCTACGCGAGCT GGGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAAATGACCA GTCTGACAGCCGCGGACACGGCCACTTATTTTTGTGCGAGAGGTTATAGTGGTTATGGTTATT TTAAGTTG SEQ ID NO: 388 CAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGTTACTTAGCC SEQ ID NO: 389 AGGGCGTCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 390 \ CAAAGCTATTATGATAGTGTTTCAAATCCT SEQ ID NO: 391 ACCTACTGGTTCATGTGC SEQ ID NO: 392 TGTATTTATACTGGTAGTAGTGGTTCCACTTTCTACGCGAGCTGGGTGAATGGC SEQ ID NO: 393 GGTTATAGTGGTTATGGTTATTTTAAGTTG SEQ ID NO: 394 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGVTFAIEMTQSPFSVSAAVGGTVSISCQASQSVYKNNQLS WYQQKSGQPPKLLIYGASALASGVPSRFKGSGSGTEFTLTISDVQCDDAATYYCAGAITGSID TDG SEQ ID NO: 395 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGDLVKPGASLTLTCTTSGFSFSSSYFICWVRQ APGKGLEWIACIYGGDGSTYYASWAKGRFTISKTSSTTVTLQMTSLTAADTATYFCARE AYS QGYFGAFDL SEQ ID NO: 396 : QASQSVYKNNQLS SEQ ID NO: 397 GASALAS SEQ ID NO: 398 AGAITGSIDTDG SEQ ID NO: 399 SSYFIC SEQ ID NO: 400 . CIYGGDGSTYYASWAKG i SEQ ID NO: 401 EWAYSQGYFGAFDL SEQ ID NO: 402 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG TCACATTTGCCATCGAAATGACCCAGAGTCCATTCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACCAATTATCCTGGTATCAGC AGAAATCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCGGCTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGCTATTACTGGTAGTATTGATACGGATGGT SEQ ID NO: 403 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCAAGCCTGGGGCATCCCTGACACTCACCTGCA CAACTTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCAGCTACTTCATTTGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAGTGGATCGCATGCATTTATGGTGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGG CGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACGCTGCAAATGACCAGTC TGACAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCGAGAGAATGGGCATATAGTCAAGGTTATT TTGGTGCTTTTGATCTC ' SEQ ID NO: 404 CAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACCAATTATCC SEQ ID NO: 405 GGTGCATCGGCTCTGGCATCT SEQ ID NO: 406 GCAGGCGCTATTACTGGTAGTATTGATACGGATGGT ' SEQ ID NO: 407 AGCAGCTACTTCATTTGC ¡ SEQ ID NO: 408 TGCATTTATGGTGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 409 GAATGGGCATATAGTCAAGGTTATTTTGGTGCTTTTGATCTC SEQ ID NO: 410 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCDVV TQTPASVEAAVGGTVTIKCQASEDISSYLA Y QQKPGQPPKLLIYAASNLESGVSSRFKGSGSGTEYTLTISDLECADAATYYCQCTYGTISISD GNA SEQ ID NO: 411 ' ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMTWVRQA PGEGLEYIGFINPGGSAYYASWVKGRFTISKSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLIVSYGA FTI SEQ ID NO: 412 QASEDISSYLA SEQ ID NO: 413 AASNLES SEQ ID NO: 414 QCTYGTISISDGNA : SEQ ID NO: 415 ¦ SYFMT : SEQ ID NO: 416 FINPGGSAYYASWVKG SEQ ID NO: 417 '.
VLIVSYGAFTI SEQ ID NO: 418 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGATATTAGTAGCTACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCATCGC GATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACCTATTACTGTCAATGTACTTATGGTACTATTTCTATTAGTGATGGTAATGCT SEQ ID NO: 419 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAATGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCTTACTACGCGAGCTGGGTGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAGTCCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTGATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 420 CAGGCCAGTGAGGATATTAGTAGCTACTTAGCC SEQ ID NO: 421 GCTGCATCCAATCTGGAATCT SEQ ID NO: 422 CAATGTACTTATGGTACTATTTCTATTAGTGATGGTAATGCT SEQ ID NO: 423 AGCTACTTCATGACC SEQ ID NO: 424 TTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCTTACTACGCGAGCTGGGTGAAAGGC SEQ ID NO: 425 GTTCTGATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 426 DTRAPTQLLGLLLL LPGARCDVVMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASEDIESYLAWY QQKPGQPPKLLIYGASNLESGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQCTYGIISISD GNA SEQ ID NO: 427 METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMTWVRQA PGEGLEYIGFMNTGDNAYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARVLVVAYGA FNI SEQ ID NO: 428 QASEDIESYLA SEQ ID NO: 429 GASNLES SEQ ID NO: 430 QCTYGIISISDGNA SEQ ID NO: 431 SYFMT SEQ ID NO: 432 .
FMNTGDNAYYASWAKG ! SEQ ID NO: 433 VLVVAYGAFNI ; SEQ ID NO: 434 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGATGTTGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGGACATTGAAAGCTATCTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCTCÁTCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTATTGTCAATGCACTTATGGTATTATTAGTATTAGTGATGGTAATGCT SEQ ID NO: 435 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATGAATACTGGTGATAACGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGGTTCTTGTTGTTGCTTATGGAGCCTTTAACATC SEQ ID NO: 436 CAGGCCAGTGAGGACATTGAAAGCTA C AGCC SEQ ID NO: 437 GGTGCATCCAATCTGGAATCT SEQ ID NO: 438 CAATGCACTTATGGTATTATTAGTATTAGTGATGGTAATGCT SEQ ID NO: 439 ; AGCTACTTCATGACC ; SEQ ID NO: 440 ; TTCATGAATACTGGTGATAACGCATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 441 GTTCTTGTTGTTGCTTATGGAGCCTTTAACATC SEQ ID NO: 442 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSEPVGGTVSISCQSSKSVMN NYLA WYQQKPGQPPKLLIYGASNLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAA YYCQGGYTGYSD HGT SEQ ID NO: 443 METGLR LLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVKPDETLTLTCTVSGIDLSSYPMNWVRQA PGKGLEWIGFINTGGTIVYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGSYVSSGY AYYFNV SEQ ID NO: 444 QSSKSVMNNNYLA SEQ ID NO: 445 GAS LAS SEQ ID NO: 446 QGGYTGYSDHGT SEQ ID NO: 447 SYPMN SEQ ID NO: 448 FINTGGTIVYASWAKG ' SEQ ID NO: 449 GSYVSSGYAYYFNV SEQ ID NO: 450 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTAAGAGTGTTATGAATAACAACTACTTAGCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCAATCTGGCATCTGGGGTCC CATCACGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCGGTTATACTGGTTATAGTGATCATGGGACT SEQ ID NO: 451 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCAAGCCTGACGAAACCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTATCCAATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTAATACTGGTGGTACCATAGTCTACGCGAGCTGGGCAAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCAGTTATGTTTCATCTGGTTATGCCTACTATT TTAATGTC SEQ ID NO: 452 CAGTCCAGTAAGAGTGTTATGAATAACAACTACTTAGCC SEQ ID NO: 453 GGTGCATCCAATCTGGCATCT SEQ ID NO: 454 CAAGGCGGTTATACTGGTTATAGTGATCATGGGACT SEQ ID NO: 455 AGCTATCCAATGAAC SEQ ID NO: 456 TTCATTAATACTGGTGGTACCATAGTCTACGCGAGCTGGGCAAAAGGC SEQ ID NO: 457 GGCAGTTATGTTTCATCTGGTTATGCCTACTATTTTAATGTC SEQ ID NO: 458 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQSSQSVYNNNWLS WFQQKPGQPPKLLIYKASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDVATYYCAGGYLDSVI SEQ ID NO: 459 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYSINWVRQA PGKGLE IGIIANSGTTFYAN AKGRFTVSKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARESGMYNEY GKFNI SEQ ID NO: 460 QSSQSVYNNNWLS SEQ ID NO: 461 KASTLAS SEQ ID NO: 462 AGGYLDSVI SEQ ID NO: 463 TYSIN SEQ ID NO: 464 IIANSGT FYAN AKG SEQ ID NO: 465 ESGMYNEYGKFNI SEQ ID NO: 466 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTGGTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAAGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGT GTGACGATGTTGCCACTTACTACTGTGCGGGCGGTTATCTTGATAGTGTTATT SEQ ID NO: 467 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATTCAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GCCTGGAATGGATCGGAATCATTGCTAATAGTGGTACCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGAGAGTGGAATGTACAATGAATATGGTAAATTTA ACATC SEQ ID NO: 468 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACTGGTTATCC SEQ ID NO: 469 AAGGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 470 GCGGGCGGTTATCTTGATAGTGTTATT SEQ ID NO: 471 ACCTATTCAATAAAC SEQ ID NO: 472 ATCATTGCTAATAGTGGTACCACATTCTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 473 GAGAGTGGAATGTACAATGAATATGGTAAATTTAACATC SEQ ID NO: 474 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWY QQKPGQPPKLLIFKASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDN N : SEQ ID NO: 475 ; ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMI VRQA PGEGLEWITIIYPNGITYYANWAKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNA YWGYFNV SEQ ID NO: 476 QASENIYSFLA SEQ ID NO: 477 ¦ KASTLAS SEQ ID NO: 478 QQGATVYDIDNN SEQ ID NO: 479 AYAMI SEQ ID NO: 480 I IYPNGITYYANWAKG SEQ ID NO: 481 DAESSKNAYWGYF V SEQ ID NO: 482 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAAGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT > SEQ ID NO: 483 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCA'GTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCT ACTTTAACGTC SEQ ID NO: 484 CAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCC SEQ ID NO: 485 AAGGCTTCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 486 CAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT SEQ ID NO: 487 GCCTATGCAATGATC SEQ ID NO: 488 ATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 489 GATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC SEQ ID NO: 490 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCASDMTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASENIYSFLAWY QQKPGQPPKLLIFRASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCQQGATVYDIDN N SEQ ID NO: 491 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSAYAMIWVRQA PGEGLE ITIIYPNGITYYANWAKGRFTVSKTSTAMDLKITSPTTEDTATYFCARDAESSKNA YWGYFNV SEQ ID NO: 492 QASENIYSFLA SEQ ID NO: 493 RASTLAS SEQ ID NO: 494 QQGATVYDIDNN SEQ ID NO: 495 AYA I SEQ ID NO: 496 11YPNGITYYA WAKG SEQ ID NO: 497 DAESSKNAY GYFNV SEQ ID NO: 498 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTCTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTTCAGGGCTTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT SEQ ID NO: 499 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTTTCTGGAATCGACCTCAGTGCCTATGCAATGATCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCACAATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAACCTCGACCGCGATGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCT ACTTTAACGTC SEQ ID NO: 500 CAGGCCAGTGAGAACATTTATAGCTTTTTGGCC SEQ ID NO: 501 AGGGCTTCCACTCTGGCATCT · SEQ ID NO: 502 CAACAGGGTGCTACTGTGTATGATATTGATAATAAT SEQ ID NO: 503 GCCTATGCAATGATC SEQ ID NO: 504 ATCATTTATCCTAATGGTATCACATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 505 GATGCAGAAAGTAGTAAGAATGCTTATTGGGGCTACTTTAACGTC SEQ ID NO: 506 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAIEMTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASESVFNNMLSW YQQKPGHSPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVECDDAATYYCAGYKSDSNDG DNV SEQ ID NO: 507 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNRNSITWVRQA PGEGLEWIGIITGSGRTYYANWAKGRFTISKTSTTVDLK TSPTTEDTATYFCARGHPGLGSG NI .
SEQ ID NO: 508 QASESVFNN LS i SEQ ID NO: 509 DASDLAS ; SEQ ID NO: 510 AGYKSDSNDGDNV SEQ ID NO: 511 RNSIT ; SEQ ID NO: 512 I ITGSGRTYYANWAKG SEQ ID NO: 513 GHPGLGSGNI SEQ ID NO: 514 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCATTGAAATGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCCGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTGTTTTTAATAATATGTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCACTCTCCTAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGGAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGGTATAAAAGTGATAGTAATGATGGCGATAATGTT SEQ ID NO: 515 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAACAGGAATTCAATAACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTACTGGTAGTGGTAGAACGTACTACGCGAACTGGGCAAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGAC.AACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCCATCCTGGTCTTGGTAGTGGTAACATC SEQ ID NO: 516 CAGGCCAGTGAGAGTGTTTTTAATAATATGTTATCC SEQ ID NO: 517 GATGCATCCGATCTGGCATCT SEQ ID NO: 518 GCAGGGTATAAAAGTGATAGTAATGATGGCGATAATGTT SEQ ID NO: 519 AGGAATTCAATAACC SEQ ID NO: 520 ATCATTACTGGTAGTGGTAGAACGTACTACGCGAACTGGGCAAAAGGC SEQ ID NO: 521 GGCCATCCTGGTCTTGGTAGTGGTAACATC SEQ ID NO: 522 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTASSVSAAVGGTVTINCQSSQSVYNNYLSW YQQKPGQPPKLLIYTASSLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISEVQCDDAATYYCQGYYSGPIIT SEQ ID NO: 523 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNNYYIQWVRQA PGEGLE IGIIYAGGSAYYATWANGRFTIAKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGTFDGYE L SEQ ID NO: 524 QSSQSVYNNYLS SEQ ID NO: 525 TASSLAS SEQ ID NO: 526 QGYYSGPIIT SEQ ID NO: 527 ' NYYIQ SEQ ID NO: 528 IIYAGGSAYYATWANG SEQ ID NO: 529 GTFDGYEL ; SEQ ID NO: 530 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCGCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCGTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACTACTTATCCTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATACTGCATCCAGCCTGGCATCTGGGGTCCCAT CGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGAAGTGCAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTCCTATAATTACT SEQ ID NO: 531 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATAACTACTACATACAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATGGATCGGGATCATTTATGCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGGGCAAACG GCCGATTCACCATCGCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAGATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGACATTTGATGGTTATGAGTTG SEQ ID NO: 532 CAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACTACTTATCC SEQ ID NO: 533 ACTGCATCCAGCCTGGCATCT SEQ ID NO: 534 CAAGGCTATTATAGTGGTCCTATAATTACT SEQ ID NO: 535 AACTACTACATACAA SEQ ID NO: 536 ATCATTTATGCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGACCTGGGCAAACGGC SEQ ID NO: 537 GGGACATTTGATGGTTATGAGTTG SEQ ID NO: 538 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSVPVGDTVTISCQSSESVYSNNLLS YQQKPGQPPKLLIYRASNLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGAQCDDAATYYCQGYYSGVIN S SEQ ID NO: 539 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYFMSWVRQA PGEGLEYIGFINPGGSAYYASWASGRLTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARILIVSYGA FTI SEQ ID NO: 540 QSSESVYSNNLLS SEQ ID NO: 541 RASNLAS SEQ ID NO: 542 QGYYSGVINS SEQ ID NO: 543 SYFMS SEQ ID NO: 544 FINPGGSAYYASWASG ; SEQ ID NO: 545 ILIVSYGAFTI ! SEQ ID NO: 546 ' ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCGAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCTGTGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAG TCACCATCAGTTGCCAGTCCAGTGAGAGCGTTTATAGTAATAACCTCTTATCCTGGTATCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACAGGGCATCCAATCTGGCATCTGGTGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGGACAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAGGCTATTATAGTGGTGTCATTAATAGT SEQ ID NO: 547 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTGTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACTTCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGG GGCTGGAATACATCGGATTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAGTG GCCGACTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 548 CAGTCCAGTGAGAGCGTTTATAGTAATAACCTCTTATCC SEQ ID NO: 549 AGGGCATCCAATCTGGCATCT SEQ ID NO: 550 CAAGGCTATTATAGTGGTGTCATTAATAGT SEQ ID NO: 551 AGCTACTTCATGAGC SEQ ID NO: 552 TTCATTAATCCTGGTGGTAGCGCATACTACGCGAGCTGGGCGAGTGGC SEQ ID NO: 553 ATTCTTATTGTTTCTTATGGAGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 554 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELSWY QQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDN A SEQ ID NO: 555 ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSKYYMS VRQA PEKGLKYIGYIDSTTVNTYYATWARGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARGSTYFTD GGHRLDL SEQ ID NO: 556 QATESIGNELS SEQ ID NO: 557 SASTLAS SEQ ID NO: 558 QQGYSSANIDNA SEQ ID NO: 559 KYYMS SEQ ID NO: 560 YIDSTTVNTYYATWARG SEQ ID NO: 561 GSTYFTDGGHRLDL SEQ ID NO: 562 .
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 563 ! ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAAGTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGAGAAGG GGCTGAAATACATCGGATACATTGATAGTACTACTGTTAATACATACTACGCGACCTGGGCGA GAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAGATCACCAGTCCGACAA GTGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGAAGTACTTATTTTACTGATGGAGGCCATC GGTTGGATCTC SEQ ID NO: 564 CAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCC SEQ ID NO: 565 TCTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 566 CAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 567 AAGTACTACATGAGC SEQ ID NO: 568 TACATTGATAGTACTACTGTTAATACATACTACGCGACCTGGGCGAGAGGC SEQ ID NO: 569 ' GGAAGTACTTATTTTACTGATGGAGGCCATCGGTTGGATCTC ; SEQ ID NO: 570 DTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTIKCQATESIGNELS Y QQKPGQAPKLLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTITGVECDDAATYYCQQGYSSANIDN A SEQ ID NO: 571 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYNMGWVRQA PGKGLEWIGSITIDGRTYYASWAKGRFTVSKSSTTVDLK TSLTTGDTATYFCARILIVSYGA FTI SEQ ID NO: 572 QATESIGNELS SEQ ID NO: 573 SASTLAS SEQ ID NO: 574 QQGYSSANIDNA SEQ ID NO: 575 TYNMG SEQ ID NO: 576 S IT I DGRT Y YASWAKG SEQ ID NO: 577 ILIVSYGAFTI SEQ ID NO: 578 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGGCTCCCAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACCGGCGTGGAGTGTGATG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT ¦ SEQ ID NO: 579 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTACAACATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAAGTATTACTATTGATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCGTCTCCAAAAGCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCG GGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGATTCTTATTGTTTCTTATGGGGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 580 CAGGCCACTGAGAGCATTGGCAATGAGTTATCC SEQ ID NO: 581 TCTGCATCCACTCTGGCATCT SEQ ID NO: 582 CAACAGGGTTATAGTAGTGCTAATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 583 ACCTACAACATGGGC SEQ ID NO: 584 AGTATTACTATTGATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGC SEQ ID NO: 585 ATTCTTATTGTTTCTTATGGGGCCTTTACCATC SEQ ID NO: 586 VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH VYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 587 GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAA CTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGG TGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAÁGGACA GCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCT ACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAG AGTGT SEQ ID NO: 588 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 589 GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGAC TCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT GCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTG ACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCC TCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGG TGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG TGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCG TCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACA AAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCC TGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGA ACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGC TCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGG CTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 590 i VPPGEDSKDVAAPHR SEQ ID NO: 591 GEDSKDVAAPHRQPL SEQ ID NO: 592 SKDVAAPHRQPLTSS SEQ ID NO: 593 VAAPHRQPLTSSERI SEQ ID NO: 594 PHRQPLTSSERIDKQ SEQ ID NO: 595 QPLTSSERIDKQIRY SEQ ID NO: 596 TSSERIDKQIRYILD SEQ ID NO: 597 ERIDKQIRYILDGIS SEQ ID NO: 598 DKQIRYILDGISALR SEQ ID NO: 599 IRYILDGISALRKET SEQ ID NO: 600 ILDGISALRKETCNK SEQ ID NO: 601 GISALRKETCNKSNM SEQ ID NO: 602 ALRKETCNKSNMCES SEQ ID NO: 603 KETCNKSNMCESSKE SEQ ID NO: 604 CNKSNMCESSKEALA SEQ ID NO: 605 SNMCESSKEALAENN SEQ ID NO: 606 CESSKEALAENNLNL SEQ ID NO: 607 SKEALAENNLNLPKM SEQ ID NO: 608 ALAENNLNLPKMAEK SEQ ID NO: 609 ENNLNLPKMAEKDGC SEQ ID NO: 610 LNLPKMAEKDGCFQS SEQ ID NO: 611 PKMAEKDGCFQSGFN SEQ ID NO: 612 AEKDGCFQSGFNEET SEQ ID NO: 613 DGCFQSGFNEETCLV SEQ ID NO: 614 FQSGFNEETCLVKII SEQ ID NO: 615 GFNEETCLVKIITGL SEQ ID NO: 616 EETCLVKIITGLLEF SEQ ID NO: 617 CLVKI ITGLLEFEVY SEQ ID NO: 618 KIITGLLEFEVYLEY SEQ ID NO: 619 TGLLEFEVYLEYLQN SEQ ID NO: 620 LEFEVYLEYLQNRFE SEQ ID NO: 621 EVYLEYLQNRFESSE SEQ ID NO: 622 LEYLQNRFESSEEQA SEQ ID NO: 623 LQNRFESSEEQARAV SEQ ID NO: 624 RFESSEEQARAVQMS SEQ ID NO: 625 SSEEQARAVQMSTKV SEQ ID NO: 626 EQARAVQMSTKVLIQ SEQ ID NO: 627 RAVQMSTKVLIQFLQ SEQ ID NO: 628 QMSTKVLIQFLQKKA SEQ ID NO: 629 TKVLIQFLQKKAKNL SEQ ID NO: 630 LIQFLQKKAKNLDAI SEQ ID NO: 631 FLQKKAKNLDAITTP SEQ ID NO: 632 KKAKNLDAITTPDPT SEQ ID NO: 633 KNLDAITTPDPTTNA SEQ ID NO: 634 DAITTPDPTTNASLL SEQ ID NO: 635 TTPDPTTNASLLTKL SEQ ID NO: 636 DPTTNASLLTKLQAQ SEQ ID NO: 637 TNASLLTKLQAQNQW SEQ ID NO: 638 SLLTKLQAQNQWLQD SEQ ID NO: 639 TKLQAQNQWLQDMTT SEQ ID NO: 640 QAQNQWLQDMTTHLI SEQ ID NO: 641 NQWLQDMTTHLILRS SEQ ID NO: 642 LQDMTTHLILRSFKE SEQ ID NO: 643 TTHLILRSFKEFLQ SEQ ID NO: 644 HLILRSFKEFLQSSL SEQ ID NO: 645 LRSFKEFLQSSLRAL SEQ ID NO: 646 FKEFLQSSLRALRQM SEQ ID NO: 647 ¦ AYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWYQQKPGQRPKLLIYRASTLASGV SSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTEVVVKR SEQ ID NO: 648 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC SEQ ID NO: 649 ; DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC SEQ ID NO: 650 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLA YQQKPGKAPKLLIYKASSLESGV PSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYC SEQ ID NO: 651 i AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRAST'LASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 652 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLE IGIIYGSDETAY ATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDAKFNL GQGTLVTVSS SEQ ID NO: 653 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 654 EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLE VSVIYSGGSTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 655 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSST YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK SEQ ID NO: 656 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATWAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 657 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLS YYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCARDDSSD DAKFNLWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 658 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVT VRQA PGKGLEWIGIIYGSDETAYATSAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDA KFNL GQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK SEQ ID NO: 659 , IIYGSDETAYATSAIG SEQ ID NO: 660 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELSWY QQKPGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDN A SEQ ID NO: 661 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYVTWVRQA PGKGLEWIGIIYGSDETAYATWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSD DA KFNL SEQ ID NO: 662 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT SEQ ID NO: 663 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGGCGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGAGAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TG SEQ ID NO: 664 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATWAIGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISFA GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQ SLSLSPGK SEQ ID NO: 665 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGI IYGSDETA YATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSD DAKFNL GQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK ; SEQ ID NO: 666 IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 667 MDTRAPTQLLGLLLL LPGARCAYDMTQTPASVEVAVGGTVTINCQASETIYS LS Y QQKPGQPPKLLIYQASDLASGVPSRFSGSGAGTEYTLTISGVQCDDAATYYCQQGYSGSNVDN V : SEQ ID NO: 668 METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLNDHAMGWVRQ APGKGLEYIGFINSGGSARYASWAEGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRGGAV SI HSFDP SEQ ID NO: 669 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCTGTGGAGGTAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGACCATTTACAGTTGGTTATCCTGGTATCAGCAGAAGC CAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGC GATTCAGCGGCAGTGGGGCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTGGTAGTAATGTTGATAATGTT SEQ ID NO: 670 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTTACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGACCATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATACATCGGATTCATTAATAGTGGTGGTAGCGCACGCTACGCGAGCTGGGCAG AAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGTCAGAGGGGGTGCTGTTTGGAGTATTCATAGTTTTG ATCCC : SEQ ID NO: 671 MDTRAPTQLLGLLLL LPGATFAAVLTQTPSPVSAAVGGTVSISCQASQSVYDNNYLS WFQQKPGQPPKLLIYGASTLASGVPSRFVGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD NA SEQ ID NO: 672 ¡ ETGLRWLLLVAVLKGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSVYYMNWVRQA PGKGLEWIGFITMSDNINYAS AKGRFTISKTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARSRG GTMG RLDL SEQ ID NO: 673 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCCGCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGACAACAACTACTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCGTGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATAATGCC SEQ ID NO: 674 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACCCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTGTCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGATTCATTACAATGAGTGATAATATAAATTACGCGAGCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTACAATGGGTCGGTTGGATC C ! SEQ ID NO: 675 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGAICDPVLTQTPSPVSAPVGGTVSISCQASQSVYENNYLS WFQQKPGQPP LLIYGASTLDSGVPSRFKGSGSGTQFTLTITDVQCDDAATYYCAGVYDDDSD DA ; SEQ ID NO: 676 ¡ METGLRWLLLVAVLKGVQCQEQLKESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFSLNAYY NWVRQ APGKGLEWIGFITLNNNVAYAN AKGRFTFSKTSTTVDLK TSPTPEDTATYFCARSRGWGAM GRLDL SEQ ID NO: 677 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCATATGTGACCCTGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTATCTGCACCTGTGGGAGGCACAG TCAGCATCAGTTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGAGAACAACTATTTATCCTGGTTTCAGC AGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGGTGCATCCACTCTGGATTCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATTACAGACGTGCAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTGCAGGCGTTTATGATGATGATAGTGATGATGCC SEQ ID NO: 678 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTGGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGAGGAGGCCTGGTAACGCCTGGAGGAACCCTGACACTCACCT GCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAATGCCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGA AGGGGCTGGAATGGATCGGATTCATTACTCTGAATAATAATGTAGCTTACGCGAACTGGGCGA AAGGCCGATTCACCTTCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAC CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCGTGGCTGGGGTGCAATGGGTCGGTTGG ATCTC SEQ ID NO: 679 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVDDNNWLG WYQQKRGQPPKYLIYSASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDLECDDAATYYCAGGFSGNIF A ' SEQ ID NO: 680 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYA SWVRQA PGKGLE IGIIGGFGTTYYATWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARGGPGNGGD I SEQ ID NO: 681 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCGAGGTG CCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTCCATCGCCTGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTGATGATAACAACTGGTTAGGCTGGTATCAGC AGAAACGAGGGCAGCCTCCCAAGTACCTGATCTATTCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCC CATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGT GTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGCAGGCGGTTTTAGTGGTAATATCTTTGCT SEQ ID NO: 682 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCÁCCTGCA CAGTCTCTGGCTTCTCCCTCAGTAGCTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGG GGCTGGAGTGGATCGGAATCATTGGTGGTTTTGGTACCACATACTACGCGACCTGGGCGAAAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGAATCACCAGTCCGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGTGGTCCTGGTAATGGTGGTGACATC SEQ ID NO: 683 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAAVLTQTPSPVSVPVGGTVTIKCQSSQSVYNNFLSW YQQKPGQPPKLLIYQASKLASGVPDRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDADN A SEQ ID NO: 684 METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYAMSWVRQA PGKGLEWIGIIYAGSGSTWYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDGYDDYG DFDRLDL SEQ ID NO: 685 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCACATTTGCAGCCGTGCTGACCCAGACACCATCGCCCGTGTCTGTACCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAATTTCTTATCGTGGTATCAGCAGA AACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACCAGGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCAG ATAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTG ACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATGCTGATAATGCT SEQ ID NO: 686 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTC AGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACGCTCACCTGCA CAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGCAATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGCTGGTAGTGGTAGCACATGGTACGCGAGCTGGGCGA AAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAA CCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGGATACGATGACTATGGTGATTTCGATC GATTGGATCTC SEQ ID NO: 687 MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCAYDMTQTPASVSAAVGGTVTIKCQASQSINNELS Y QQKSGQRPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSLRNIDN A SEQ ID NO: 688 ETGLRWLLLVAVLSGVQCQSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMT VRQA PGKGLEWIGMIYGSDETAYANWAIGRFTISKTSTTVDLKMTSLTAADTATYFCARDDSSDWDA KFNL SEQ ID NO: 689 ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTG CCAGATGTGCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAG TCACCATCAAATGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAAT CAGGGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGC GGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCG ATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCT 1 SEQ ID NO: 690 ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCTCAGGTGTCCAGTGTC AGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCA CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAATGGATCGGAATGATTTATGGTAGTGATGAAACAGCCTACGCGAACTGGGCGATAG GCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAGCCG CGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAATTTAACT TG SEQ ID NO: 691 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWVGMIYGSDETA YANWAIGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCARDDSSDWDAKFNLWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSS STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 692 ,' EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYMTWVRQAPGKGLEWVGMIYGSDETA YANSAIGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDSSD DAKFNLWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALH NHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 693 DIQ TQSPSTLSASVGDRVTITCQASQSINNELS YQQKPGKAPKLLIYRASTLASGV PSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 694 CAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCC SEQ ID NO: 695 CAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT SEQ ID NO: 696 ATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAGGC SEQ ID NO: 697 GATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGTTCAACTTG SEQ ID NO: 698 GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAG GGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGT TCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGÁTGATT TTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAG GGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACG ' SEQ ID NO: 699 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRT ' SEQ ID NO: 700 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAC TCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTC CAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCT CCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGA ACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGG ATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC SEQ ID NO: 701 GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAG GGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGT TCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATT TTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAG GGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTG ATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAG AGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCA CAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAG ACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCA CAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT ; SEQ ID NO: 702 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELS YQQKPGKAPKLLIYRASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 703 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAC TCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTC CAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCT CCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTGAAATGA ACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGG ATGCAAAGTTCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGG GCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGG GCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGA CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCÁGCAGCG TGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATGACAAGC CCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCC CACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCA AGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA AGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACC AGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCGTGCCCC CATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATC CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGC CTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCA GGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCÁCTACA CGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA ; SEQ ID NO: 704 ; EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVTWVRQAPGKGLEWVGIIYGSDETA YATSAIGRFTISRDNSKNTLYLQ NSLRAEDTAVYYCARDDSSD DAKFNLWGQGTLVTVSSA STKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLT VLHQD LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 705 ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGCTA TCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTT GCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCC CTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCA GTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTT ATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGG TGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGT TGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGG ACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGA AACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCT TCAACAGGGGAGAGTGT ¡ SEQ ID NO: 706 ; KWVTFISLLFLFSSAYSAIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELSWYQQKP GKAPKLLIYRASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNiDNAFGG GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 707 '.
ATGAAGTGGGTAACCTTTATTTCCCTTCTGTTTCTCTTTAGCAGCGCTTATTCCGAGG TGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTG CAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGG GGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCTCCGCTATAG GCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTCAAATGÁACAGCCTGA GAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAGT TCAACTTGTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGG TCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGG TCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCG TGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCG TGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCÁGCAACA CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCC CAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCC TCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTG AGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG AGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGC TGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAA CCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG AGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACA TCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTGCCGTGC TGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA j SEQ I D NO : 7 08 MKWVT FI SLLFLFS SAYSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSNYYVT VRQA PGKGLEWVG I I YGS DETAYATSAIGRFT I SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDS S DW DAKFNLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTC PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 709 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSINNELS YQQKPGKAPKLLIYRASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQGYSLRNIDNAFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 710 RASQGIRNDLG SEQ ID NO: 711 RASQGISNYLA SEQ ID NO: 712 RASQSISS LA SEQ ID NO: 713 AASSLQS ' SEQ ID NO: 714 AASTLQS SEQ ID NO: 715 KASSLES SEQ ID NO: 716 SNY S : SEQ ID NO: 717 : VIYSGGSTYYADSVKG SEQ ID NO: 718 VIYSGGSSTYYADSVKG SEQ ID NO: 719 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 720 ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCA TCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGA AAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCA GCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTG CAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCT SEQ ID NO: 721 GCCTATGATATGACCCAGACTCCAGCCTCGGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCAfcAGTCA CCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAATTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAG GGCAGCGTCCCAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATbGCGGT TCAAAGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATG CTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAATATTGATAATGCTTTCGGCGGAG GGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT SEQ ID NO: 722 ATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCA TCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGA AAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGTTCA GCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTG CAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAGGGA CCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATG AGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGG CCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAG AGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACT ACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAA AGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT ; SEQ ID NO: 723 GCTATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCACTTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAACAATGAGTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAG GGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGGGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCAAGGT TCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATT TTGCAACTTATTACTGCCAACAGGGTTATAGTCTGAGGAACATTGATAATGCTTTCGGCGGAG GGACCAAGGTGGAAA CAAACGT SEQ ID NO: 724 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAC TCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGTGAGGCTC CAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGCATCATCTATGGTAGTGATGAAACCGCCTACGCTACCT CCGCTATAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACCCTGTATCTTGAAATGA ACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTACTGTGCTAGAGATGATAGTAGTGACTGGG ATGCAAAGTTCAACTTG SEQ ID NO: 725 CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCA CCTGCACAGCCTCTGGATTCTCCCTCAGTAACTACTACGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAG GGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAATCATTTATGGTAGTGATGAAACGGCCTACGCGACCTGGG CGATAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGA CAGCCGCGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATAGTAGTGACTGGGATGCAAAAT TTAACTTGTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC SEQ ID NO: 726 EKLLCFLVLTSLSHAFGQTDMSRKAFVFPKESDTSYVSLKAPLTKPLKAFTVCLHFY TELSSTRGYSIFSYATKRQDNEILIF SKDIGYSFTVGGSEILFEVPEVTVAPVHICTSWESA SGIVEFWVDGKPRVRKSLKKGYTVGAEASIILGQEQDSFGGNFEGSQSLVGDIGNVNMWDFVL SPDEINTIYLGGPFSPNVLN RALKYEVQGEVFTKPQLWP SEQ ID NO: 727 MLAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATV HWVLRKPAAGSHPSR AG GRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSC FRKSPLSNVVCE GPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGD SSFYIVSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVTWQDPHS NSS FYRLRFELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDAWSGLRHVVQLRAQEEFGQGEWSEWSPEA GTPWTESRSPPAENEVSTPMQALTTNKDDDNILFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGS LAFGTLLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPRPTPVLVPLISPPVSPSS LGSDNTSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR SEQ ID NO: 728 LTLQT VVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYF HVNANYIVWKTNHFTIPKEQY IINRTASSVTFTDIASLNIQLTC ILTFGQLEQNVYGITII SGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCE DGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTV DYSTVYFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNP SIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGY SDWSEEASGITYEDRPSKAPSF YKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRW KSHLQNYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKD NML VEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITD QQEDGTVHRTYLRGNLAESKCYLITVTPV YADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTII GNETAVNVDSSHTEYTLSSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPV CLAFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHNFNSKDQMYSDGNF TDVSVVEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQ NTSSTVQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQY FKQNCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAF GPGTEGQVERFETVG EAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ

Claims (90)

REIVINDICACIONES
1. Un método para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprende administrar al paciente un antagonista de IL-6, por el cual se reduce el nivel de proteina C-reactiva ("CRP") en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar la reducción del nivel de CRP en suero del paciente.
2. Un método para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprende administrar al paciente un antagonista de IL-6, por el cual aumenta el nivel de albúmina en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar el aumento del nivel de albúmina en suero del paciente.
3. Un método para mejorar la capacidad de supervivencia o calidad de vida de un paciente que lo necesita, que comprende administrar al paciente un antagonista de IL-6, por el cual se reduce el nivel de CRP en suero del paciente y aumenta el nivel de albúmina en suero del paciente y monitorear al paciente para evaluar la reducción del nivel de CRP en suero del paciente y el aumento del nivel de albúmina en suero del paciente. ¡
4. El método de la reivindicación 1 o 3, dondé dicho paciente tiene un nivel elevado de CRP en suero antes del tratamiento.
5. El método de la reivindicación 2 o 3, donde dicho paciente tiene un nivel reducido de albúmina en suero antes del tratamiento.
6. El método de la reivindicación 4 o 5, por el cual mejora la escala de pronóstico de Glasgow del paciente.
7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 inclusive, donde el antagonista de IL-6 se dirige a la IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, SYK, o cualquier combinación de los mismos.
8. El método de la reivindicación 7, donde el antagonista de IL-6 comprende un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un péptido, un glucoalcaloide, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, un retinoide, un avemir, una molécula pequeña o cualquier combinación de los mismos.
9. El método de la reivindicación 8, donde el antagonista de IL-6 comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6R, anti-gpl30, anti-p38 MAP cinasa, anti-JAK1, anti-JAK2, anti-JAK3, o anti-SYK.
10. El método de la reivindicación 8, donde la molécula pequeña comprende talidomida, lenalidomida, o cualquier combinación de los mismos. ;
11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el antagonista comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6.
12. El método de la reivindicación 11, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se une específicamente al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal(es) o conformacional (es) y/o compite para unirse al/a los mismo (s) epitopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7 Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y anticuerpo quimérico, humanizado, de cadena simple o fragmentos del mismo que se unen específicamente a la IL-6.
13. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo anti-IL-6 se une al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es) y/o compite por unirse al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal (es) o conformacional (es ) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o un fragmento del mismo como Abl.
14. El método de la reivindicación 12 donde el anticuerpo anti-IL-6 comprende la cadena pesada variable en la SEQ; ID NO: 657 y la cadena ligera variable en la SEQ ID NO: 709 respectivamente o una variante de las mismas donde .dichas secuencias de cadena pesada y/o ligera variable comprenden una o más mutaciones de sustitución que no afectan sustancialmente la unión de anticuerpos de IL-6 con relación al anticuerpo anti-IL-6 que no presenta dichas mutaciones. '
15. El método de la reivindicación 14 donde el anticuerpo anti-IL-6 comprende la cadena pesada variable en la SEQ ID NO: 657 y la cadena ligera variable en la SEQ ID NO: 709. ; i
16. El método de la reivindicación 14 o 15 donde el¡ anticuerpo anti-IL-6 comprende adicionalmente las regiones! constantes de cadena pesada y cadena ligera comprendidas en las¡ i SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586 respectivamente. i
17. El método de la reivindicación 12, donde el, anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se une específicamente al/a los mismo (s) epítopo(s) lineal'(es) oj conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o fragmento del mismo como un anticuerpo anti-IL-6 que comprende: Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2,' i Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22,: Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32,¡ Ab33, Ab34, Ab35, o Ab36 y el anticuerpo quimérico, humanizado,! de cadena simple o fragmentos del mismo que se une: j específicamente a la IL-6. i i ¡
18. El método de la reivindicación 17, donde elj i anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se une¡ específicamente al/a los mismos epítopo(s) lineal (es) o1 conformacional (es) en un polipéptido de IL-6 intacta humana o. un fragmento del mismo como Abl. [ i i
19. El método de la reivindicación 12, donde el; anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se une! específicamente a los mismos epítopos lineales o! conformacionales en un polipéptido de IL-6 intacta o fragmento del mismo que está(n) específicamente unidos por Abl y donde dicho (s) epítopo(s), cuando se establece (n) por mapeo epitópico usando fragmentos de péptidos lineales superpuestos que abarcan todo el largo del polipéptido de IL-6 humana nativa, incluye (n) uno o más residuos comprendidos en fragmentos de IL-6 que se seleccionan de aquellos que respectivamente comprenden residuos de aminoácidos 37-51, residuos de aminoácidos 70-84, residuos de aminoácidos 169-183, residuos de aminoácidos 31^45 y/o residuos de aminoácidos 58-72.
20. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 comprende al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas en un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31 Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 o Ab36.
21. El método de la reivindicación 20, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 comprende al menos 2 regiones determinantes de complementariedad (CDR) en cada región ligera variable y pesada variable que son idénticas a aquellas contenidas en Abl. :
22. El método de la reivindicación 20, donde todas las CDR en el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 son idénticas a las CDR contenidas en un anticuerpo anti-IL-6 que comprende Abl, Ab2, Ab3, Ab4 , Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3, Abl4, Abl5, Abl6, Abl7, Abl8, Abl9, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 o Ab36. 1
23. El método de la reivindicación 20, donde todas las CDR en el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 son idénticas a las CDR contenidas en Abl. j
24. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es aglicosilado. i
25. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 contiene una región Fe que ha sido modificada para alterar la función efectora, semivida, proteólisis y/o glicosilación .
26. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es un anticuerpo humano, humanizado, de cadena simple o quimérico. ,
27. El método de la reivindicación 26, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo anti-IL-6 de conejo (progenitor) .
28. El método de la reivindicación 27, donde las regiones flanqueantes (FR) en la región ligera variable y región pesada variable de dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo ahti-IL- 6 respectivamente son una FR humana sin modificar o que ha sido modificada mediante la sustitución de como máximo 2 o 3 residuos de FR humanas en la región de cadena ligera o pesada variable con los correspondientes residuos de FR del anticuerpo progenitor de conejo y donde dichas FR humanas han derivado de secuencias de anticuerpo de cadena pesada y ligera variable que han sido seleccionadas de una biblioteca de secuencias de anticuerpo germinales humanas basándose en su alto nivel de homología con las correspondientes regiones de cadena pesada o ligera variable de conejo relativas a otras secuencias de anticuerpo germinales humanas contenidas en la biblioteca.
29. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se administra al paciente con una frecuencia de como máximo una vez por período de aproximadamente cuatro semanas.
. 30. El método de la reivindicación 29, donde el i anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-ß se adminijstra al paciente con una frecuencia de como máximo una vez por período de aproximadamente ocho semanas. ;
31. El método de la reivindicación 30, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se administra al paciente con una frecuencia de como máximo una vez por período de aproximadamente doce semanas . ¡
32. El método de la reivindicación 31, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 se administra al paciente con una frecuencia de como máximo una vez por periodo de aproximadamente dieciséis semanas.
33. El método de cualquiera de las reivindicaciones 29-32 donde el anticuerpo administrado comprende las mismas CDR que Abl o cualquiera de las secuencias de anticuerpo pesada y ligera variable comprendidas en las Figuras 34-37.
34. El método de la reivindicación 33 donde el anticuerpo comprende las secuencias pesada variable y ligera variable en las SEQ ID NO: 657 o SEQ ID NO: 709 o cualquiera de las secuencias de anticuerpo pesada y ligera variable comprendidas en las Figuras 34-37.
35. El método de la reivindicación 33 o 34 donde dicho anticuerpo comprende adicionalmente las secuencias \ pesada constante y ligera constante en las SEQ ID NO: 588 y SEQ ID NO: 586 respectivamente.
36. El método de cualquiera de las reivindicaciones 29-35, donde el nivel de CRP en suero del paciente permanece disminuido y/o el nivel de albúmina en suero permanece elevado durante todo un periodo entre dos administraciones consecutivas de anticuerpo anti-IL-6.
37. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 inclusive, donde al paciente se le diagnosticó cáncer ¡que se selecciona de acantoma, carcinoma de células acinicas, neuroma acústico, melanoma lentiginoso acral, acrospiroma, leucemia eosinofilica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia monocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda con maduración, leucemia mieloide aguda de células dendriticas, leucemia mieloide aguda, leucemia promielocítica aguda, adamantinoma, adenocarcinoma, carcinoma quistico adenoide, adenoma, tumor odontogénico adenomatoide, carcinoma adrenocortical, leucemia de células T del adulto, leucemia agresiva de células NKP cánceres relacionados con SIDA, linfoma relacionado con SIDA, sarcoma alveolar de partes blandas, fibroma ameloblástico, cáncer anal, linfoma anaplásico de células grandes, cáncer anaplásico de tiroides, linfoma angioinmunoblástico de células T, angiomiolipoma, angiosarcoma, cáncer de apéndice, astrocitoma, tumor rabdoide teratoide atipico, carcinoma de células básales, carcinoma de tipo basal, leucemia de células B, linfoma de células B, carcinoma de los conductos de Bellini, cáncer del tracto biliar, cáncer de vejiga, blastoma, cáncer de hueso, tumor de hueso, glioma de tronco cerebral, tumor cerebral, cáncer de mama, tumor de Brenner, tumor bronquial, carcinoma bronquioloalveolar,' tumor de Brown, linfoma de Burkitt, cáncer de sitio primario desconocido, tumor carcinoide, carcinoma, carcinoma iri situ, carcinoma de pene, carcinoma de sitio primario desconocido, carcinosarcoma, enfermedad de Castleman, tumor embrionario del sistema nervioso central, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma cerebral, cáncer cervical, colangiocarcinoma, condroma, condrosarcoma, cordoma, coriocarcinoma, papiloma del plexo coroideo, leucemia linfocítica crónica, leucemia monocitica crónica, leucemia mielógena crónica, trastorno mieloproliferativo crónico, leucemia neutrofilica crónica, tumor de células claras, cáncer de colon, cáncer color-rectal, craniofaringioma, linfoma cutáneo de células T, enfermedad de Degos, dermatofibrosarcoma protuberans, quiste dermoide, tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, linfoma difuso de células B grandes, tumor neuroepitelial disembrioplásico, carcinoma embrionario, tumor de seno endodérmico, cáncer endometrial, cáncer uterino endometrial, tumor endometrioide, linfoma de células T asociado a enteropatia, ependimoblastoma, ependimoma, sarcoma epitelioide, eritroleucemia, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, tumor de la familia de Ewing, sarcoma de la familia de Ewing, sarcoma de Ewing, tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinales, cáncer de ducto biliar extrahepático, enfermedad de Paget extramamaria, cáncer de tubo falopiano, Fetus in fetu, fibroma, fibrosarcoma, linfoma folicular, \ cáncer folicular de tiroides, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vesícula biliar, ganglioglioma, ganglioneuroma, ' cáncer gástrico, linfoma gástrico, cáncer gastrointestinal, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal, tumor de células germinales, germinoma, coriocarcinoma gestacional, tumor trofoblástico gestacional, tumor óseo de células gigantes, glioblastoma multiforme, glioma, gliomatosis cerebri, tumor glómico, glucagonoma, gonadoblastoma, tumor de células granulosas, leucemia de células vellosas, leucemia de células vellosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de corazón, hemangioblastoma, hemangiopericitoma, hemangiosarcoma, malignidad hematológica, carcinoma hepatocelular, linfoma hepatoesplénico de células T, síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario, linfoma Hodgkin, linfoma de Hodgkin, cáncer hipofaríngeo, glioma hipotalámico, cáncer de mama inflamatorio, melanoma intraocular, carcinoma de células de los islotes, tumor de células de los islotes, leucemia juvenil mielomonocítica, sarcoma Kaposi, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon, tumor de Klatskin, tumor de Krukenberg, cáncer de laringe, cáncer de laringe, melanoma léntigo maligno, leucemia, leucemia, cáncer del labio y la cavidad oral, liposarcoma, cáncer de pulmón, luteoma, linfangioma, linfangiosarcoma, linfoepitelioma, leucemia linfoide, linfoma, macroglobulinemia, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno, histiocitoma fibroso maligno óseo, glioma maligno, mesotelioma maligno, , tumor maligno de vaina nerviosa periférica, tumor rabdoide maligno, tumor tritón maligno, linfoma MALT, linfoma de células del manto, leucemia de mastocitos, tumor mediastinal de células germinales, tumor mediastinal, cáncer medular de ti'roides, meduloblastoma, meduloblastoma, meduloepitelioma, melanoma, melanoma, meningioma, carcinoma de células de Merkel, mesotelioma, mesotelioma, cáncer escamoso metastásico del cuello con tumor primario oculto, carcinoma urotelial metastásico, tumor Mülleriano mixto, leucemia monocítica, cáncer de boca, tumor mucinoso, síndrome de neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, mieloma múltiple, micosis fungoides, micosis fungoides, enfermedad mielodisplásica, síndromes mielodisplásicos, leucemia mieloide, -sarcoma mieloide, enfermedad mieloproliferativa, mixoma, cáncer de la cavidad nasal, cáncer nasofaríngeo, carcinoma nasofaríngeo, neoplasma, neurinoma, neuroblastoma, neuroblastoma, neurofibroma, neuroma, melanoma nodular, linfoma no Hodgkin, linfoma no Hodgkin, cáncer de piel no melanoma, cáncer de pulmón no microsítico, oncología ocular, oligoastrocitoma, oligodendroglioma, oncocitoma, meningioma de la vaina del nervio óptico, cáncer oral, cáncer oral, cáncer orofaríngeo, osteosarcoma, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de ovario, cáncer epitelial de ovario, tumor de células germinales del ovario, tumor de ovario de bajo potencial maligno, enfermedad de Paget de la mama, tumor de Pancoast, cáncer pancreático, cáncer pancreático, cáncer papilar de tiroides, papilomátosis, paraganglioma, cáncer de seno paranasal, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, tumor perivascular de células epitelioides , cáncer faríngeo, feocromocitoma , tumor parénquima pineal de diferenciación intermedia, pineoblástoma, pituicitoma, adenoma pituitario, tumor pituitario, neoplasma de células plasmáticas, blastoma pleuropulmonar, poliembrioma, linfoma precursor linfoblástico de células T, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma de efusión primaria, cáncer hepatocelular primario, cáncer hepático primario, cáncer peritoneal primario, tumor neuroectodermal primitivo, cáncer de próstata, pseudomixoma peritoneal, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma del tracto respiratorio relacionado con el gen NUT en el cromosoma 15, retinoblastoma, rabdomioma, rabdomiosarcoma, transformación de Richter, teratoma sacrococcigeo, cáncer de la glándula salival, sarcoma, Schwannomatosis, carcinoma de glándulas sebáceas, neoplasma secundario, seminoma, tumor seroso, tumor de células de Sertoli-Leydig, tumor del estroma de los cordones sexuales, síndrome de Sézary, carcinoma de células en anillo de sello, cáncer de piel, tumor de células pequeñas, redondas y azules, carcinoma de células pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, linfoma de células pequeñas, cáncer del intestino delgado, sarcoma de tejido blando, somatoestatinoma, verruga del deshollinador, tumor de la médula espinal, tumor espinal, linfoma de la zona marginal esplénica, carcinoma de células escamosas, cáncer de estómago, melanoma superficial diseminante, tumor neuroectodermal primitivo supratentorial, tumor epitelial superficial de ovario, sarcoma siriovial, leucemia linfoblástica aguda de células T, leucemia linfocítica granular grande de células T, leucemia de células T, linfoma de células T, leucemia prolinfocitica de células T, teratoma, cáncer linfático terminal, cáncer testicular, tecoma, cáncer de garganta, carcinoma timico, timoma, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición de la pelvis renal y el uréter, carcinoma de células de transición, cáncer uracal, cáncer uretral, neoplasma urogenital, sarcoma uterino, melanoma uveal, cáncer vaginal, síndrome de Verner Morrison, carcinoma verrugoso, glioma de la vía visual, cáncer vulvar, macroglobulinemia de Waldenstróm, tumor de Warthin, tumor de Wilms, o cualquier combinación de los mismos.
38. El método de la reivindicación 37, donde el cáncer se selecciona de cáncer colorrectal, cáncer de pulmón no microcítico, colangiocarcinoma, mesotelioma, enfermedad de Castleman, carcinoma de células renales, o cualquier combinación de los mismos.
39. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 comprende una secuencia de polipéptidos de VH que comprende: SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, o 708; y comprende adicionalmehte una secuencia de polipéptido VL que comprende: SEQ ID NO: 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709 o cualquiera de las secuencias de VH o VL : de las Figuras 34-37 o una variante de las mismas donde uno o más de los residuos flanqueantes (residuos de FR) en dicho polipéptido de VH o VL se sustituyó por otro residuo de aminoácido : que da como resultado un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 que se une específicamente a IL-6 humana.
40. El método de la reivindicación 39, donde uno o más de dichos residuos FR se sustituyen por un aminoácido presente en el sitio correspondiente en un anticuerpo anti-IL-6 de conejo progenitor desde donde derivaron las regiones determinantes de complementariedad (CDR) contenidas en dichos polipéptidos de VH o VL o por una sustitución conservadora de aminoácidos.
41. El anticuerpo de la reivindicación 39, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es humanizado.
42. El anticuerpo de la reivindicación 39, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es quimérico.
43. El anticuerpo de la reivindicación 42, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 comprende adicionalmente una Fe humana.
44. El método de la reivindicación 43, donde, dicha Fe humana proviene de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgGlO, IgGll, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, . IgG16, IgG17, IgG18 o IgG19.
45. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 comprende un polipéptido que tiene al menos 90% de homología de secuencia con una o más de las secuencies de polipéptidos de la SEQ ID NO: 3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571, 652, 656, 657, 658, 661, 664, 665, 668, 672, 676, 680, 684, 688, 691, 692, 704, 708, 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554, 570, 647, 651, 660, 666, 667, 671, 675, 679, 683, 687, 693, 699, 702, 706, o 709 o cualquiera de las secuencias pesada variable y ligera variable contenidas en cualquiera de las Figuras 34-37.
46. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 tiene una semivida de eliminación de al menos alrededor de 22 días.
47. El método de la reivindicación 46, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 tiene una semivida de eliminación de al menos alrededor de 25 días. ',
48. El método de la reivindicación 47, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 tiene una semivida de eliminación de al menos alrededor de 30 días.
49. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el antagonista de IL-6 se administra conjuntamente con un agente quimioterapéutico .
50. El método de la reivindicación 49, donde el agente quimioterapéutico se selecciona de antagonistas de VEGF, antagonistas de EGFR, platinos, taxoles, irinotecano, 5-fluorouracilo, gemcitabina, leucovorina, esteroides, ciclofosfamida, melfalán, alcaloides de la vinca, mustinas, inhibidores de tirosina cinasa, radioterapia, antagonistas de hormonas sexuales, moduladores selectivos del receptor de andrógeno, moduladores selectivos del receptor de estrógeno, antagonistas de PDGF, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-1, interleucinas , antagonistas de IL-12R, anticuerpos monoclonales conjugados con toxinas, anticuerpos monoclonales específicos contra antígenos tumorales, Erbitux™, Avastin™, Pertuzumab, anticuerpos anti-CD20, Rituxan®, ocrelizumab, ofatumumab, DXL625, Herceptin®, o cualquier combinación , de los mismos .
51. El método de la reivindicación 50, donde el agente quimioterapéutico comprende un inhibidor de JAKl, JAK2, JAK3, o SYK.
52. El método de la reivindicación 50 donde dichas interleucinas incluyen IL-12 e IL-2.
53. El método de la reivindicación 50 donde el alcaloide de la vinca comprende vinblastina, vincristina, vindesina o vinorelbina.
54. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 está directa o indirectamente unido a una etiqueta detectable o . agente terapéutico .
55. El método de la reivindicación 12, donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-IL-6 es Abí o un fragmento del mismo. :
56. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el antagonista de IL-6 es un ácido nucleico antisentido .
57. El método de la reivindicación 56, donde el ácido nucleico antisentido comprende al menos aproximadamente 10 nucleótidos de una secuencia que codifica la IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAKl, JAK2, JAK3, o SYK.
58. El método de la reivindicación 56, donde el; ácido nucleico antisentido comprende ADN, ARN, ácido nucleico peptidico, ácido nucleico bloqueado, morfolino (oligómero fosforodiamidato morfolino), ácido nucleico glicólico,¡ ácido nucleico treósico, o cualquier combinación de los mismos.,
59. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el antagonista de IL-6 comprende Actemra™ (Tocilizumab) , Remicade®, Zenapax™, o cualquier combinación de los mismos. '
60. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde el antagonista de IL-6 comprende un polipéptido que tiene una secuencia que comprende un fragmento de IL-6, receptor de IL-6 alfa, gpl30, p38 MAP cinasa, JAK1, JAK2, JAK3, SYK, o cualquier combinación de los mismos.
61. El método de la reivindicación 60, donde el antagonista de IL-6 es al menos 40 aminoácidos de longitud.
62. El método de la reivindicación 60, donde el antagonista de IL-6 comprende un receptor de IL-6 alfa soluble, gpl30 soluble, o cualquier combinación de los mismos.
63. El método de la reivindicación 60, donde el antagonista de IL-6 está acoplado a un resto de semivida creciente .
64. El método de la reivindicación 1 o 3, que comprende adicionalmente : medir el nivel de CRP en suero del paciente antes de la administración del antagonista de IL-6 y administrar el antagonista de IL-6 si el nivel de CRP en suero del paciente es al menos aproximadamente 5 mg/L.
65. El método de la reivindicación 64, donde el nivel de CRP en suero del paciente se reduce a menos de aproximadamente 5 mg/L dentro de 1 semana a partir de la administración del antagonista de IL-6.
66. El método de la reivindicación 1, donde el nivel de CRP en suero del paciente se reduce por debajo de aproximadamente 1 mg/L dentro de 1 semana a partir de la administración del antagonista de IL-6.
67. El método de la reivindicación 1 o 3, que da como resultado una reducción prolongada del nivel de CRP en suero del paciente.
68. El método de la reivindicación 1 o 3, donde el nivel de CRP en suero del paciente se reduce por debajo de 10 mg/L dentro de alrededor de 1 semana a partir de la administración del antagonista de IL-6.
69. El método de la reivindicación 68, donde 14 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
70. El método de la reivindicación 68, donde 21 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
71. El método de la reivindicación 68, donde 28 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
72. El método de la reivindicación 68, donde 35 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
73. El método de la reivindicación 68, donde 42 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
74. El método de la reivindicación 68, donde 4-9 dias luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
75. El método de la reivindicación 68, donde 56 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de CRP en suero del paciente permanece por debajo de 10 mg/L.
76. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, por el cual mejora la capacidad de supervivencia del paciente .
77. El método de la reivindicación 2 o 3, que comprende adicionalmente : medir el nivel de albúmina en suero del paciente antes de la administración del antagonista de: IL-6 y administrar el antagonista de IL-6 si el nivel de albúmina en suero del paciente es menor a aproximadamente 35 g/L.
78. El método de la reivindicación 77, donde el nivel de albúmina en suero del paciente aumenta a más de aproximadamente 35 g/L dentro de aproximadamente 5 semanas a partir de la administración del antagonista de IL-6. ;
79. El método de la reivindicación 2 o 3, que da como resultado un aumento prolongado del nivel de albúmina en suero del paciente.
80. El método de la reivindicación 78, donde 42 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de albúmina en suero del paciente permanece por encima de 35 g/L.
81. El método de la reivindicación 78, donde 49 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el riivel de albúmina en suero del paciente permanece por encima de 35 g/L.
82. El método de la reivindicación 78, donde 56 días luego de la administración del antagonista de IL-6, el nivel de albúmina en suero del paciente permanece por encima de 35 g/L.
83. El método de la reivindicación 2 o 3, donde el nivel de albúmina en suero del paciente aumenta alrededor de 5 g/L dentro de aproximadamente 5 semanas a partir de la administración del antagonista de IL-6.
84. El método de la reivindicación 2 o 3, donde al paciente se le ha diagnosticado artritis reumatoide, cáncer, cáncer avanzado, enfermedad hepática, enfermedad ' renal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad celiaca, traumatismo, quemaduras, otras enfermedades asociadas con la disminución de albúmina en suero o cualquier combinación de las mismas .
85. El método de la reivindicación 1 o 3, donde al paciente se le ha diagnosticado artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, psoriasis, artropatia psoriática, espondilitis anquilosante, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pénfigo, dermatomiositis, polimiositis, polimialgia reumática, arteritis de células gigantes, vasculitis, poliarteritis nodosa, granulomatosis de Wegener, enfermedad de Kawasaki, vasculitis aislada del sistema nervioso central, arteritis de : Churg-Strauss, poliarteritis microscópica, poliangiitis microscópica, púrpura de Henoch-Schonlein, vasculitis crioglobulinémica esencial, vasculitis reumatoide, crioglobulinemia, policondritis recidivante, enfermedad de Behcet, arteritis de Takayasu, enfermedad cardiaca isquémica, apoplejía, esclerosis múltiple, sepsis, vasculitis causada por infecciones virales, enfermedad de Buerger, cáncer, cáncer avanzado, osteoartritis , esclerosis sistémica, síndrome de CREST, enfermedad de Reiter, enfermedad ósea de Paget, síndrome de Sjogran, diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, fiebre mediterránea familiar, trombocitopenia autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, enfermedad tiroidea autoinmune, anemia perniciosa, - vitíligo, alopecia areata, cirrosis biliar primaria, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis alcohólica, hepatitis viral incluyendo hepatitis B y C, otras , enfermedades autoinmunes específicas de órganos, quemaduras, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma alérgico, otras afecciones alérgicas o cualquier combinación de los mismos. ;
86. El método de la reivindicación 85, donde la infección viral comprende hepatitis B, hepatitis C, VIH, citomegalóvirus, virus Epstein-Barr, o virus Parvo B19. ;
87. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende adicionalmente la administración de una, o más estatinas al paciente. !
88. El método de la reivindicación 87, donde una! o más estatinas se seleccionan de atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina, o cualquier combinación de las mismas.
89. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-88, donde el anticuerpo anti-IL-6 contiene todas las CDR contenidas en el anticuerpo humanizado contenido en las Figuras 34-37.
90. El" método de cualquiera de las reivindicaciones 1-89 donde el anticuerpo anti-IL-6 contiene al menos una de las secuencias pesada y ligera variable en las SEQ ID No. 657 y SEQ ID No. 709 o en las Figuras 34-37.
MX2011005396A 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp. MX2011005396A (es)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11781108P 2008-11-25 2008-11-25
US11786108P 2008-11-25 2008-11-25
US11783908P 2008-11-25 2008-11-25
US12/366,567 US8062864B2 (en) 2007-05-21 2009-02-05 Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US39161509A 2009-02-24 2009-02-24
US12/391,717 US8178101B2 (en) 2007-05-21 2009-02-24 Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US12/399,156 US20090238825A1 (en) 2007-05-21 2009-03-06 Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US12/502,581 US8323649B2 (en) 2008-11-25 2009-07-14 Antibodies to IL-6 and use thereof
PCT/US2009/006257 WO2010065072A1 (en) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2011005396A true MX2011005396A (es) 2011-06-09

Family

ID=42233511

Family Applications (7)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2014004474A MX365985B (es) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.
MX2011005396A MX2011005396A (es) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.
MX2011005408A MX2011005408A (es) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para prevenir o tratar la trombosis.
MX2011005411A MX2011005411A (es) 2008-11-25 2009-11-24 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2014008792A MX364874B (es) 2008-11-25 2009-11-24 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2019005415A MX2019005415A (es) 2008-11-25 2011-05-20 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2019007500A MX2019007500A (es) 2008-11-25 2011-05-20 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2014004474A MX365985B (es) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2011005408A MX2011005408A (es) 2008-11-25 2009-11-24 Antagonistas de il-6 para prevenir o tratar la trombosis.
MX2011005411A MX2011005411A (es) 2008-11-25 2009-11-24 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2014008792A MX364874B (es) 2008-11-25 2009-11-24 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2019005415A MX2019005415A (es) 2008-11-25 2011-05-20 Anticuerpos de il-6 y uso de los mismos.
MX2019007500A MX2019007500A (es) 2008-11-25 2011-05-20 Antagonistas de il-6 para aumentar la albumina y/o disminuir la crp.

Country Status (19)

Country Link
EP (5) EP2361095B1 (es)
JP (9) JP5620918B2 (es)
KR (4) KR20110112307A (es)
CN (5) CN103861106B (es)
AR (1) AR074227A1 (es)
AU (5) AU2009323007B2 (es)
BR (1) BRPI0921569A2 (es)
CA (1) CA2744400C (es)
DK (1) DK3338799T3 (es)
EA (1) EA201100641A1 (es)
HK (1) HK1256622A1 (es)
IL (2) IL212728B (es)
MX (7) MX365985B (es)
NO (1) NO2367570T3 (es)
NZ (2) NZ602166A (es)
SG (1) SG171804A1 (es)
TW (6) TWI533883B (es)
WO (4) WO2010065079A2 (es)
ZA (1) ZA201103803B (es)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
NZ597767A (en) 2007-05-21 2013-06-28 Bristol Myers Squibb Co Antibodies to IL-6 and use thereof
US8404235B2 (en) 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
CA2700394C (en) 2007-09-26 2017-10-24 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
MX369784B (es) 2007-09-26 2019-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo de modificacion del punto isoelectrico de anticuerpos mediante la sustitucion de aminoacidos en region de determinacion de complementariedad (cdr).
CN107551270A (zh) 2008-04-11 2018-01-09 中外制药株式会社 与多个分子的抗原反复结合的抗原结合分子
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
KR20110112307A (ko) * 2008-11-25 2011-10-12 앨더 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 알부민을 상승시키고 및／또는 ｃｒｐ를 낮추는 ｉｌ­６의 길항제
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US8337847B2 (en) 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US9452227B2 (en) 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US7947653B1 (en) 2009-10-09 2011-05-24 Cold Spring Harbor Laboratory Methods for treating epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor-resistant cancers
US8323883B1 (en) 2009-10-09 2012-12-04 Cold Spring Harbor Laboratory Methods of assessing therapeutic benefits of patients having cancers resistant to epidermal growth factor receptor kinase inhibitors
CN102740888B (zh) * 2009-11-24 2016-10-12 奥尔德生物制药公司 Il-6抗体及其用途
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
JP2012041271A (ja) * 2010-08-12 2012-03-01 Univ Of Tokyo 血栓形成を抑制する作用を有する組成物
TWI603738B (zh) 2010-11-08 2017-11-01 建南德克公司 皮下投予抗－ｉｌ－６受體抗體
ES2847891T3 (es) 2010-11-23 2021-08-04 Vitaeris Inc Anticuerpos anti-IL-6 para el tratamiento de la mucositis oral
RU2658504C9 (ru) 2010-11-30 2018-08-21 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антигенсвязывающая молекула, способная многократно связываться с множеством антигенных молекул
CN104066428A (zh) * 2011-10-12 2014-09-24 思佰益药业股份有限公司 抗癌剂的副作用的预防剂和/或治疗剂
JO3370B1 (ar) * 2011-11-10 2019-03-13 Regeneron Pharma طريقة لتثبيط نمو الورم عن طريق تثبيط مستقبل انترلوكين 6
KR102124758B1 (ko) * 2012-05-03 2020-06-19 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항-ｉｌ-23ｐ19 항체
DK4019041T3 (da) 2012-07-13 2023-04-03 Univ Pennsylvania Toksicitetshåndtering for cars antitumoraktivitet
EP2875360B1 (en) * 2012-07-20 2018-08-08 Agency For Science, Technology And Research In vitro assay for predicting renal proximal tubular cell toxicity
CN104797132B (zh) * 2012-09-13 2017-06-30 中外制药株式会社 基因敲入非人动物
EP2722341B1 (en) 2012-10-22 2017-12-06 Fountain Biopharma Inc. Antibodies to interleukin-6 and uses thereof
RS60026B1 (sr) 2013-02-18 2020-04-30 Vegenics Pty Ltd Molekuli koji vezuju ligande i njihove upotrebe
KR101332836B1 (ko) * 2013-05-15 2013-11-27 재단법인 통합의료진흥원 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물
WO2014200018A1 (ja) 2013-06-11 2014-12-18 独立行政法人 国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
WO2015054293A1 (en) * 2013-10-07 2015-04-16 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of psoriatic arthritis
CN103739672B (zh) * 2013-12-31 2015-06-10 威特曼生物科技（南京）有限公司 一种聚乙二醇修饰的抑制vegfr2酪氨酸激酶多肽及其应用
EP2926815A1 (en) * 2014-04-03 2015-10-07 Institut Curie New derivatives of cephalosporin for treating cancer
JO3663B1 (ar) * 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
CN104147120A (zh) * 2014-09-04 2014-11-19 成都市飞龙水处理技术研究所 一种治疗多发性神经纤维瘤的内服中药液及其制备方法
CN107074976B (zh) * 2014-11-04 2020-10-09 北京韩美药品有限公司 同时阻断b7/cd28和il6/il6r/gp130信号通路的重组融合蛋白
TWI805046B (zh) 2015-02-27 2023-06-11 日商中外製藥股份有限公司 Il-6受體抗體用於製備醫藥組成物的用途
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
US11174317B2 (en) 2015-06-04 2021-11-16 National Center Of Neurology And Psychiatry Therapeutic agent for mental illness comprising IL-6 inhibitor as active ingredient
SG10201913062SA (en) * 2015-07-31 2020-03-30 Medimmune Ltd Methods for treating hepcidin-mediated disorders
CN105586426B (zh) * 2016-03-01 2019-02-26 浙江大学 与慢性乙型肝炎病毒感染相关的IL-6基因rs2069852位点标志物及其应用
KR102055390B1 (ko) * 2017-01-06 2019-12-12 경북대학교 산학협력단 혈전-표적성 펩타이드, 페리틴 단편 및 혈전 용해성 펩타이드를 포함하는 융합 펩타이드 및 이의 용도
AU2018214554C1 (en) 2017-02-01 2022-12-15 Novo Nordisk A/S Treatment of diuretic resistance
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US11452707B2 (en) * 2017-08-31 2022-09-27 Hanyi Bio-Technology (Beijing) Co., Ltd. Use of cannabidiol in preparation of drugs for resisting against influenza
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
WO2019103138A1 (ja) * 2017-11-24 2019-05-31 国立研究開発法人理化学研究所 ＩＬ‐１β及び／又はＩＬ‐６の発現抑制剤とその利用
JP2021509915A (ja) * 2018-01-04 2021-04-08 ヴィタエリス、インコーポレイテッド 固形臓器移植レシピエントの脱感作のため、及び／または抗体媒介性拒絶反応（ａｂｍｒ）の予防、安定化、もしくは軽減のための抗ｉｌ−６抗体、例えば、クラザキズマブの使用
MX2020007033A (es) * 2018-01-05 2021-02-26 Immunext Inc Anticuerpos anti-mct1 y usos de estos.
JP7395479B2 (ja) 2018-01-05 2023-12-11 ノヴォ ノルディスク アー／エス 免疫抑制なしにｉｌ－６媒介性炎症を処置する方法
US20210071183A1 (en) * 2018-02-26 2021-03-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Zinc associated treatment for and diagnosis of cachexia
JP7336717B2 (ja) 2018-09-26 2023-09-01 パナソニックＩｐマネジメント株式会社 開閉ユニット、開閉機能付きコンセント、および、それらの生産方法
US11633399B2 (en) 2018-12-25 2023-04-25 Sol-Gel Technologies Ltd. Treatment of skin disorders with compositions comprising an EGFR inhibitor
CN110297093B (zh) * 2019-03-18 2022-04-22 山西瑞豪生物科技有限公司 一种检测人免疫球蛋白g4的方法和试剂盒
CA3160091A1 (en) 2019-11-05 2021-05-14 Abbvie Inc. Dosing regimens for use in treating myelofibrosis and mpn-related disorders with navitoclax
CN111053909A (zh) * 2020-02-27 2020-04-24 南通大学 2019-nCoV3CL水解酶抑制剂与IL-6单抗在制备治疗新冠肺炎药物中的应用
EP4121455A1 (en) * 2020-03-18 2023-01-25 Vitaeris Inc. Use of anti-il-6 antibody, e.g., clazakizumab for treatment/prevention of ards associated with coronavirus (covid-19) infection
CN112098549B (zh) * 2020-09-03 2022-11-15 长沙创新药物工业技术研究院有限公司 一种测定盐酸阿比多尔溶液中杂质含量的方法
CN112175080B (zh) * 2020-10-22 2021-05-25 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司 抗人白介素-6高亲和力兔单克隆抗体及应用
KR20230113306A (ko) 2020-10-30 2023-07-28 고쿠리츠켄큐카이하츠호진 고쿠리츠쥰칸키뵤 겐큐센터 주산기 심근증 치료제
WO2022188013A1 (zh) * 2021-03-08 2022-09-15 苏州大学 化学发光介导的纳米颗粒、自组装聚集体及其制备方法和应用
WO2023182801A1 (ko) * 2022-03-24 2023-09-28 (주) 테라베스트 자연살해세포를 포함하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5202422A (en) 1989-10-27 1993-04-13 The Scripps Research Institute Compositions containing plant-produced glycopolypeptide multimers, multimeric proteins and method of their use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
WO1994021293A1 (en) 1993-03-19 1994-09-29 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
TW458985B (en) 1993-05-31 2001-10-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Reconstructed human antibody against human interleukin-6
EP1624068A1 (en) 1993-06-01 2006-02-08 Life Technologies Inc. Genetic immunization with cationic lipids
AU3272695A (en) 1994-08-12 1996-03-07 Immunomedics Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
ATE423790T1 (de) 1995-09-28 2009-03-15 Yeda Res & Dev Synthetische peptide mit il-6 aktivitäthemmung
US6841533B1 (en) 1995-12-07 2005-01-11 Peptor Limited Conformationally constrained backbone cyclized interleukin-6 antagonists
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
EP2210945B1 (en) * 1998-01-14 2013-06-26 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Neisseria meningitidis antigens
EP0972780A1 (en) 1998-05-18 2000-01-19 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Il-6 antagonist peptides
US7345217B2 (en) * 1998-09-22 2008-03-18 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
IL139380A0 (en) * 2000-10-31 2001-11-25 Prochon Biotech Ltd Active variants of fibroblast growth factor
US20040198661A1 (en) * 2000-12-08 2004-10-07 Bowdish Katherine S. Polypeptides and antibodies derived from chronic lymphocytic leukemia cells and uses thereof
US7169573B2 (en) * 2001-02-20 2007-01-30 Oklahoma Medical Research Foundation Method for monitoring coagulability and hypercoagulable states
JP2003066047A (ja) * 2001-06-14 2003-03-05 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫反応測定方法及びそれに用いる免疫反応測定用試薬
US20030219839A1 (en) * 2001-09-20 2003-11-27 Katherine Bowdish Anti-PDGF antibodies and methods for producing engineered antibodies
EP2308888B1 (en) * 2001-11-14 2017-03-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses
KR100468316B1 (ko) 2002-01-29 2005-01-27 주식회사 웰진 Ｄｎａ의 세포 또는 조직 내 전달 효율을 높이는 펩타이드
CA2492524A1 (en) * 2002-08-15 2004-02-26 Epitomics, Inc. Humanized rabbit antibodies
CN1678744B (zh) 2002-08-30 2010-05-26 财团法人化学及血清疗法研究所 人的抗人白细胞介素-6抗体以及所述抗体的片段
US20050090453A1 (en) 2003-01-15 2005-04-28 Solbec Pharmaceuticals Co., Ltd. Methods of modulating IL-6
US20070010529A1 (en) 2003-05-19 2007-01-11 Kanji Takahashi Nitrogenous heterocyclic compounds and medical use thereof
US20070134242A1 (en) * 2003-10-17 2007-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Mesothelioma therapeutic agent
DK2330201T3 (en) 2003-10-22 2017-07-24 Keck Graduate Inst PROCEDURES FOR SYNTHESIS OF HEATER-MULTIMATE POLYPEPTIDES WHEN USING A HAPLOID COUPLE STRATEGY
CA2572119A1 (en) * 2004-06-29 2006-01-12 Warner-Lambert Company Llc Combination therapies utilizing benzamide inhibitors of the p2x7 receptor
GB0419424D0 (en) 2004-09-02 2004-10-06 Viragen Scotland Ltd Transgene optimisation
WO2006047639A2 (en) * 2004-10-27 2006-05-04 Medimmune, Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
US20080033027A1 (en) * 2005-03-21 2008-02-07 Vicus Therapeutics Spe 1, Llc Drug combination pharmaceutical compositions and methods for using them
US7431927B2 (en) * 2005-03-24 2008-10-07 Epitomics, Inc. TNFα-neutralizing antibodies
PE20061324A1 (es) * 2005-04-29 2007-01-15 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos
KR101422523B1 (ko) 2005-12-09 2014-07-24 유씨비 파마, 에스.에이. 사람 ｉｌ­6에 특이성을 지니는 항체 분자
US8080528B2 (en) * 2005-12-22 2011-12-20 The Releef Initiative Compositions and methods for treatment of cachexia
DK1966244T3 (da) * 2005-12-30 2012-04-23 Merck Patent Gmbh Anti-il-6-antistoffer der forebygger bindingen af il-6 sammensat af il-6ralfa til gp130
EP2010214A4 (en) * 2006-04-10 2010-06-16 Abbott Biotech Ltd USES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF RHEUMATOID ARTHRITIS
AU2007307324B2 (en) * 2006-05-19 2013-08-15 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific B cells
WO2007139359A1 (en) * 2006-05-31 2007-12-06 Hanwha Chemical Corporation Vcam-1 specific monoclonal antibody
US7919095B2 (en) * 2006-08-03 2011-04-05 Vaccinex, Inc. Anti-IL-6 monoclonal antibodies
WO2008042611A2 (en) 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
TW200831528A (en) * 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
TWI609965B (zh) * 2007-05-21 2018-01-01 艾爾德生物控股有限責任公司 新穎兔抗體人化方法以及經人化之兔抗體
NZ597767A (en) * 2007-05-21 2013-06-28 Bristol Myers Squibb Co Antibodies to IL-6 and use thereof
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
KR20110112307A (ko) * 2008-11-25 2011-10-12 앨더 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 알부민을 상승시키고 및／또는 ｃｒｐ를 낮추는 ｉｌ­６의 길항제
US11783908B2 (en) 2019-10-11 2023-10-10 SK Hynix Inc. Stacked semiconductor device and semiconductor system including the same

Also Published As

Publication number Publication date
JP2012509874A (ja) 2012-04-26
IL212728B (en) 2018-02-28
MX2019007500A (es) 2019-09-04
EP2361095B1 (en) 2017-12-20
TW201023889A (en) 2010-07-01
TW201527321A (zh) 2015-07-16
TWI481413B (zh) 2015-04-21
EP2361095A4 (en) 2013-07-24
MX2019005415A (es) 2019-08-12
KR20110112307A (ko) 2011-10-12
DK3338799T3 (da) 2021-06-14
HK1256622A1 (zh) 2019-09-27
AU2009323007A1 (en) 2010-06-10
JP2015028048A (ja) 2015-02-12
TWI547502B (zh) 2016-09-01
WO2010065079A2 (en) 2010-06-10
JP6050431B2 (ja) 2016-12-21
EP2367570A2 (en) 2011-09-28
EP3338799B1 (en) 2021-04-07
AU2016256810B2 (en) 2019-01-17
CN103861106A (zh) 2014-06-18
TWI498120B (zh) 2015-09-01
AU2009323008B2 (en) 2016-02-18
JP6190028B2 (ja) 2017-08-30
IL212728A0 (en) 2011-07-31
KR20110112308A (ko) 2011-10-12
TW201028164A (en) 2010-08-01
EP2376126A4 (en) 2013-07-24
JP5620918B2 (ja) 2014-11-05
CN103861106B (zh) 2017-03-22
CA2744400C (en) 2019-01-15
TW201023888A (en) 2010-07-01
NO2367570T3 (es) 2018-05-19
EP3338799A1 (en) 2018-06-27
AU2016256810A1 (en) 2016-12-01
CN102438653B (zh) 2019-04-23
EP2367570A4 (en) 2013-07-31
EP2376126B1 (en) 2017-12-20
KR20110091780A (ko) 2011-08-12
MX2011005408A (es) 2011-06-16
CN102292107B (zh) 2014-03-26
TWI469793B (zh) 2015-01-21
WO2010065072A1 (en) 2010-06-10
WO2010065072A8 (en) 2010-12-16
JP2017048222A (ja) 2017-03-09
JP5832291B2 (ja) 2015-12-16
JP2012509872A (ja) 2012-04-26
AU2009323002B2 (en) 2016-01-28
WO2010065079A3 (en) 2010-07-29
EP2376126A2 (en) 2011-10-19
JP2012509873A (ja) 2012-04-26
EP2361096A4 (en) 2013-01-09
JP2015157855A (ja) 2015-09-03
EP2361095A1 (en) 2011-08-31
JP5898496B2 (ja) 2016-04-06
AU2009323009A1 (en) 2010-06-10
CN102292106A (zh) 2011-12-21
WO2010065077A2 (en) 2010-06-10
CN102292107A (zh) 2011-12-21
JP5815098B2 (ja) 2015-11-17
EP2361096A1 (en) 2011-08-31
TW201023890A (en) 2010-07-01
JP6035373B2 (ja) 2016-11-30
MX2011005411A (es) 2011-06-16
ZA201103803B (en) 2022-03-30
AU2009323002A1 (en) 2010-06-10
JP5832292B2 (ja) 2015-12-16
AU2009323008A1 (en) 2010-06-10
TWI533883B (zh) 2016-05-21
CN102292449A (zh) 2011-12-21
EP2361096B1 (en) 2019-01-02
TW201609139A (zh) 2016-03-16
AU2009323009B2 (en) 2016-01-28
JP2012509871A (ja) 2012-04-26
CN102292449B (zh) 2016-03-30
CN102438653A (zh) 2012-05-02
MX365985B (es) 2019-06-21
IL257290A (en) 2018-03-29
AU2009323007B2 (en) 2016-01-28
SG171804A1 (en) 2011-07-28
JP2015164951A (ja) 2015-09-17
CN102292106B (zh) 2016-02-03
NZ592516A (en) 2013-02-22
EP2367570B1 (en) 2017-12-20
WO2010065077A3 (en) 2010-09-10
NZ602166A (en) 2014-02-28
MX364874B (es) 2019-05-09
CA2744400A1 (en) 2010-06-10
JP2015187132A (ja) 2015-10-29
WO2010065078A1 (en) 2010-06-10
TWI617318B (zh) 2018-03-11
BRPI0921569A2 (pt) 2019-09-24
EA201100641A1 (ru) 2012-01-30
KR20110091781A (ko) 2011-08-12
JP6050430B2 (ja) 2016-12-21
AR074227A1 (es) 2010-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10787511B2 (en) Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US10471143B2 (en) Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US20200354446A1 (en) Antagonists of il-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and /or fever
US10040851B2 (en) Antagonists to IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
AU2009323002B2 (en) Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US9546213B2 (en) Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US9701747B2 (en) Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US20200031923A1 (en) Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp
MX2011005406A (es) Antagonistas de il-6 para prevenir o tratar la caquexia, la debilidad, la fatiga y/o la fiebre.
AU2013203851A1 (en) Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
AU2013203879A1 (en) Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue and/or fever

Legal Events

Date Code Title Description
GB Transfer or rights

Owner name: ALDERBIO HOLDINGS LLC

FG Grant or registration