TWI324157B

TWI324157B - Compositions useful as inhibitors of gsk-3

Info

Publication number: TWI324157B
Application number: TW092121162A
Authority: TW
Inventors: J Forster Cornelia; C Park Larry; W Wannamaker Marion; Yao Yung-Mae
Original assignee: Vertex Pharma
Priority date: 2002-08-02
Filing date: 2003-08-01
Publication date: 2010-05-01
Also published as: CA2494100A1; JP4733388B2; EA200500299A1; IL166620A0; TW200409774A; BR0313176A; AR040773A1; PL374967A1; HK1081186A1; US7872129B2; DK1532145T3; EP1532145B1; EP1532145A1; DE60308387D1; NZ550883A; ECSP055640A; CN1319968C; AU2003257078B2; NO20051100L; CO5700772A2

Description

1324157 玖、發明說明：相關申請案之交叉女# 本申請案主張優先於2002年8月2日申請之羞因此夫國臨時專利申請案60/4〇〇,967之權益’其揭示内容已以引用+、1 〜用又万式併入本文中。【發明所屬之技術領域】本發明係有關蛋白質激酶，尤指肝醣合成酶激酶_3 (GSK 3) ’即絲胺酸/蘇胺酸蛋白質激酶之抑制劑。本發明亦提供包含本發明抑制劑之組合物及利用彼等組合物治療多種病變之方法，如：糖尿病、阿茲海默氏症、亨丁頓氏症、帕金森氏症 '多發性硬化（MS) '中風、神經性與神經變性病變及精神病。【先前技術】近年來著重於尋求新穎醫療劑之作法對了解與目標疾病有關之酵素及其他生物分子之結構有極大助益。其中一種已積極探討之酵素為蛋白質激酶。蛋白質激酶可媒介細胞内訊號轉導，使核苷三磷酸之磷酸基轉移至涉及訊號途徑之蛋白質受體。細胞外刺激及其他刺激透過許多種激酶與途徑引起細胞内發生多種細胞反應。此等刺激實例包括環境與化學壓力訊號（例如：滲透壓衝擊、熱衝擊、紫外線照射、細菌性内毒素與h2〇2)、細胞素（例如.間白素-1 (IL-1)與腫瘤壞死因子α (TNF-α))及生長因子（例如.粒細胞-巨噬細胞·菌落_刺激因子（GM_CSF)及纖維母細胞生長因子（FGF))。細胞外刺激可能影響與細胞生長、 87005 1324157 轉移 '分化 '激素分泌'轉錄因子活化、肌肉收縮、葡萄糖代謝、蛋白質合成控制及細胞循環調節等作用有關之一種或多種細胞反應。許多種疾病與蛋白質激酶所媒介過程引起之異常細胞反應有關。此等疾病包括自體免疫疾病、發炎疾病、骨體疾病、代謝疾病、神經性與神經變性疾病、癌症、心血管疾病、過敏與氣喘、阿茲海默氏症及與激素有關之疾病。因此，醫藥化學上仍持續努力尋找可作為有效醫療劑之蛋白質激酶抑制劑。肝醣合成酶激酶-3 (GSK-3)為一種絲胺酸/蘇胺酸蛋白質激酶，其係由分別由獨特基因編碼之α與β異構型組成[Coghlan et al, Chemistry & Biology, 7, 793-803 (2000); Kim and Kimmel, Curr. Opinion Genetics Dev·, 10，508-514 (2000)] o GSK-3 涉及多種疾病，包括糖尿病、阿茲海默氏症、CNS病變如：躁鬱症與神經變性疾病及心肌肥大[參見例如：WO 99/65897; WO 00/38675; Kaytor and Orr, Curr. Opin. Neurobiol., 12, 275-8 (2000); Haq et al., J. Cell Biol., 151, 117-30 (2000); Eldar-Finkelman, Trends Mol. Med., 8, 126-32 (2002)]。此等疾病與涉及GSK-3之某些細胞訊號途徑異常運作有關。已發現GSK-3已磷酸化且調節許多種調節性蛋白質之活性。包括肝醣合成酶（其係肝醣合成作用中所需之速率限制酵素）、與微小管結合之蛋白質-τ、基因轉錄因子β-連接素、轉譯起始因子elF-2B及ΑΤΡ檸檬酸水解酶、艾克新（axin)、熱休克因子-1、c-Jun、c-myc、c-myb、CREB 與 CEPBa。此等不同 1324157 目標在許多細胞代謝、增生、分化與發展等方面上涉及 GSK-3。與II型糖尿病之治療有關之GSK-3所媒介途徑中，胰島素誘發之訊號造成細胞葡萄糖吸收及肝酷合成作用。GSK-3為一種此途徑中胰島素所誘發訊號之負向調節劑。正常時，胰島素之存在會抑制GSK-3所媒介之肝醣合成酶磷酸化及去活化作用。抑制GSK-3造成肝St合成作用與葡萄糖吸收作用

提高[Klein et al_, PNAS，93, 8455-9 (1996); Cross et al.，Biochem. J·, 303, 21-26 (1994); Cohen，Biochem. Soc. Trans·, 21，555-567 (1993)與 Massillon et al., Biochem J. 299, 123-128 (1994); Cohen and Frame, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol” 2, 769-76 (2001)]。然而若糖尿病患者之胰島素反應受損時，儘管血液中含有相當高量胰島素，亦無法進行肝醋合成與葡萄糖吸收作用。結果造成急性與慢性之高血糖，最終造成心血管疾病、腎衰竭與失明。此等患者中，無法進行正常胰島素誘發之GSK-3抑制作用。亦有文獻指出，

II型糖尿病患者之GSK-3過度表現[WO 00/38675]。GSK-3之醫藥性抑制劑因此適用於治療對胰島素之反應受損之糖尿病患者。細胞调亡過程涉及絕血性腦傷害之病理生理學（Li et al·， 1997; Choi, et al., 1996; Charriaut-Marlangue et al., 1998; Grahm and Chen, 2001; Murphy et al·, 1999; Nicotera et al_, 1999)。最近之文獻指出， GSK-3p之活化作用可能涉及細胞调亡機轉（Kaytor and Orr, 2002; Culbert et al·，2001)。在大鼠之中腦動脈閉鎖（MCAO)試驗所誘發之絕血中風模式中發現，絕血後之GSK-3p表現提高（Wang et 87005 1324157 al., Brain Res, 859, 381-5, 2000; Sasaki et al., Neurol Res, 23, 588-92, 2001) 。纖維母細胞生長因子（FGF)可在大鼠之永久性中腦動脈閉鎖（MCO)後降低絕血腦傷害（Fisher et al. 1995; Song et al. 2002)。大鼠之絕血模式中的確證實FGF之保護神經效果可受GSK-3p依賴PI-3激酶/ AKT之去活化作用調節（Hashimoto et al.，2002)。因此，在發生腦絕血後抑制GSK-3p時，可能減輕絕血之腦傷害0 GSK-3 亦涉及心肌梗塞。參見 Jonassen et al.，Circ Res, 89:1191， 2001 (於再灌流時投與胰島素以減輕心肌梗塞之過程係經由依賴 Akt之訊號途徑調節）；Matsui et al.，Circulation, 104:330, 2001 (Akt活化作用可於活體内在暫時性心絕血時保持心臟功能並預防心肌細胞受損）；Miao et al.，J Mol Cell Cardiol，32:2397, 2000 (活體内絕血再灌流傷害後，冠狀動脈内由腺病毒所媒介之Akt基因於心臟中傳送，可降低蔓延之梗塞面積）；與 Fujio et al·，Circulation et al·，101:660, 2000 (Akt訊號於活體外抑制心肌細胞之細胞凋亡並於小白鼠心臟中防止絕血-再灌流傷害）。 GSK-3活性在頭邵創傷中扮演某種角色。參見Noshita et al.， Neurobiol Dis, 9; 294, 2002(向上調節Akt/PI3-激酶途徑對腦創傷後之細胞存活性具有關键重要性）及Dietrich et al·，J Neurotrauma, 13:309, 1996(在大鼠腦創傷模式中，於創傷後投與bFGF可顯著降低皮質神經元與挫傷總體積）。亦已知GSK-3在精神病上扮演某種角色。參見Eldar-Finkelman, Trends Mol Med, 8:126, 2002; Li et al., Bipolar Disord, 4:137, 2002 (LiCl 87005 -9- 1324157 與瓦普酸(Valproic acid)，係抗精神病之情緒安定藥物，可降低 GSK3 活性及提高 β-連接素）及Lijam et al.，Cell, 90:895, 1997(狄斯維德(Dishevelled) KO小白鼠出現異常社交行為及感覺運動門控障礙。狄斯維德係一種涉及WNT途徑之細胞質蛋白質，抑制GSK30活性）。已知鐘與瓦普酸抑制GSK3之作用會誘發軸突再造及改變突觸連接性。參見 Kaytor & Orr，Curr Opin Neurobiol，12:275, 2002 (向下調節GSK3之結果改變與微小管結合之蛋白質：τ、MAP 1&2)及 Hall et al·，Mol Cell Neurosci，20:257, 2002(鋰與瓦普酸誘發軸突上似生長錐結構形成）。 GSK-3活性亦與阿兹海默氏症有關。此疾病之特徵為出現習知之β-搬粉狀蛋白肽，並形成細胞内神經纖絲纏結。該神經纖絲纏結含有過度磷酸化之τ蛋白質，其中τ於異常位置上磷酸化。已知細胞與動物模式中此等異常位置上之 GSK-3已磷酸化。此夕卜，已知抑制GSK-3可預防細胞中τ蛋白質過度嶙酸化[Lovestone et al.，Curr· Biol.，4，1077-86 (1994); and Brownlees et al., Neuroreport 8, 3251-55 (1997); Kaytor and Orr, Curr. Opin. Neurobiol.，12, 275-8 (2000)]。經轉殖基因而過度表現GSK3之小白鼠中，觀察到過度鱗酸化之τ與異常形態之神經元增加 [Lucas et al·，EMBO J, 20:27-39 (2001)]。纏結前之神經元之細胞質中，活性GSK3累積結果造成AD患者腦中之神經纖絲纏結 [Pei et al_，J Neuropathol Exp Neurol, 58, 1010-19 (1999)]。因此，抑制 GSK-3可延緩或遏止神經纖絲纏結產生及因而治療或降低阿茲海默氏症之嚴重性。 87005 •10- 1324157 GSK-3於阿茲海默氏症中之角色已於活體夕卜證實。參見 Aplin et al (1996), J Neurochem 6Ί.699-, Sun et al (2002), Neurosci Lett 321:61 (GSK3b使澱粉狀蛋白前體蛋白質（APP)之細胞質功能部位磷酸化及GSK3b於APPP轉感染細胞中抑制Ab40 & Ab42分泌）；Takashima et al (1998)，PNAS 95:9637; Kirschenbaum et al (2001)，J Biol Chem 276:7366 (GSK3b與早老素-1 (presenilin-1)複合及磷酸化，後者係與由APP合成Ab之γ-分泌酶活性有關）；Takashima et al (1998)，Neurosci Res 31:317 (Ab (25-35)活化 GSK3b之作用可加強海馬回神經元中τ蛋白質之磷酸化。此觀察結果提供Ab與過度磷酸化之τ蛋白質（AD之另一種病理指標）所組成之神經纖絲纏結之間之關連性）；Takashima et al (1993), PNAS 90:7789(阻斷GSK3b表現或活性可防止Ab誘發皮質與海馬回初級培養物之神經變性）；Suhara et al (2003), Neurobiol Aging. 24:437(細胞内 Ab42會干擾依賴Akt/GSK-3b訊號之機轉之活化作用，因而對内皮細胞有毒）；De Ferrari et al (2003) Mol Psychiatry 8:195(链保護N2A細胞與初級海馬回神經元免於Ab纖絲所锈發之細胞毒性及降低β-連接素之核轉移/去安定化作用）；及Pigino et al.，J Neurosci, 23:4499, 2003 (阿茲海默氏症之早老素-1之突變作用可能失去調節GSK-3活性之能力及提高其活性，繼而損害神經元中軸突傳遞。受損神經元中軸突傳遞降低之結果最終造成神經變性）。 GSK-3於阿茲海默氏症中角色之證據已於活體内證實。參見 Yamaguchi et al (1996)，Acta Neuropathol 92:232; Pei et al (1999)，J Neuropath Exp Neurol 58:1010 (AD腦部之感受區中 GSK3b免疫反 87005 -11 - 1324157 應性提高）；Hernandez et al (2002), J Neurochem 83:1529(發生條件性GSK3b過度表現之轉殖基因小白鼠出現類似AD之轉殖基因APP小白鼠模式之認知力缺陷）；De Ferrari et al (2003) Mol Psychiatry 8:195 (慢性It處理可挽救海馬回内注射Ab纖絲所引起神經變性及行為受損（莫氏（Morris)水迷宮）；McLaurin et al·， Nature Med，8:1263, 2002 (AD轉殖基因模式中，接種Ab可降低似AD之神經病變及空間記憶損害）與Phiel et al (2003) Nature 423:435 (AD轉殖基因小白鼠中，GSK3經由直接抑制γ-分泌酶來調節澱粉狀蛋白肽產生）。早老素-1與激動素(kinesin)-l亦為GSK-3之受質，與GSK-3在阿茲海默氏症中所扮演角色之機轉有關，最近說明於Pigino, G·，et al·, Journal of Neuroscience (23:4499，2003)。已發現GSK3P 磷酸化激動素-1輕鏈，使與膜結合之細胞器釋出激動素-1，造成快速順行之柏突傳遞下降(Morfmi et al.，2002)。作者認為 PS1之突變可能失去調節GSK-3活性之能力及提高其活性，繼而損害神經元中軸突傳遞。受損神經元中軸突傳遞降低之結果最終造成神經變性。 GSK-3亦與肌萎縮性侧索硬化（ALS)有關。參見Williamson and Cleveland, 1999 (mSODl小白鼠在ALS極早期之轴突傳遞已延滞）；Morfini et al., 2002 (GSK3構酸化激動素輕鏈，並抑制順行之軸突傳遞）；Warita et al.，Apoptosis, 6:345, 2001(此 ALS 之 SOD1轉殖基因動物模式中，在顯著喪失神經元之前之出現症狀之前及出現症狀早期，大多數脊柱運動神經元已喪失對PI3-K及Akt之免疫反應性）及Sanchez et al·，2001 (抑制PI-3K會 87005 -12- 1324157 誘發GSK3活化作用所媒介之抽索收縮）。 GSK-3活性亦與脊柱及周邊神經傷害有關。已知鋰與瓦普酸抑制GSK3之結果可誘發誘發軸突再造及改變突觸連接性。參見 Kaytor & Orr, Curr Opin Neurobiol，12:275, 2002(向下調節 GSK3之結果改變與微小管結合之蛋白質：τ、MAP 1&2)及 Hall et al.，Mol Cell Neurosci, 20:257, 2002(鋰與瓦普酸誘發軸突上似生長錐結構形成）。亦參見 Grothe et al.，Brain Res, 885: l72, 2〇00 (FGF2刺激施萬細胞（Schwann cell)增生及於軸突生長期間抑制髓鞘形成）；Grothe and Nikkhah，2001 (FGF-2於神經壓碎後5小時内向上調節近端與遠端神經殘株）；及Sanchez et al.，2001 (抑制PI-3K會誘發GSK3活化作用所媒介之軸索收縮）。 GSK-3之另一種受質為β-連接素，會在經GSK-3磷酸化後降解。已有報告指出精神***患者中β-連接素含量下降，其亦與其他有關神經元細胞死亡之疾病相關[Zhong et al., Nature, 395, 698-702 (1998); Takashima et al., PNAS, 90, 7789-93 (1993); Pei et al., J. Neuropathol. Exp, 56, 70-78 (1997); and Smith et al., Bio-org. Med. Chem. II，635-639 (2001)]。此外，β-連接素與 Tcf-4在血管再造中扮演雙重角色，即抑制血管平滑肌細胞之細胞凋亡及促進增生（Wang et al·, Circ Res, 90:340，2002)。因此，GSK-3 與血管新生病變有關。亦參見Liu et al., FASEB J, 16:950, 2002 (GSK3 之活化作用減少肝細胞生長因子，造成内皮細胞障壁功能改變，減低血管整合性）及 Kim et al.，k J Biol Chem，277:41888, 2002(採用馬奇膠填料分析法(Matrigel plug assay)證實活體内之 GSK3P活化作用抑制血管新生作用··抑制GSK3P訊號可加強 87005 -13 - 1324157 毛血管形成）。 GSK-3與亨丁頓氏症之間關係已經證實。參見Carmichael et al., J Biol Chem_, 277:33791，2002 (GSK3P抑制作用可保護細胞免於因β-連接素增加及其相關之轉錄途徑所致之聚麩醯胺誘發之神經元與非神經元細胞死亡）。GSK3過度表現會降低熱休克轉錄因子-1與熱休克蛋白質HSP70之活化作用（Bijur et al·， J Biol Chem, 275:7583, 2000)，其於活體外HD模式中顯示可同時降低聚-(Q)凝集物及細胞死亡（Wyttenbach eta 1.，Hum Mol Genet， 11:1137, 2002)。 GSK-3影響FGF-2含量，並於可使大鼠腦髓鞠再形成之腦凝集培養物再形成髓稍期間增加其受體含量。參見Copelman et al·, 2000, Messersmith，et al·, 2000 及 Hinks 與 Franklin, 2000。亦發現，FGF-2可誘發寡突神經膠質細胞向外生長，此表示FGF 涉及髓勒再形成作用（Oh and Yong, 1996; Gogate et al·, 1994)及 FGF-2基因療法已顯示可改善過敏性腦脊髓炎（EAE)實驗小白鼠之恢復率（Ruffini，et al.，2001)。 GSK-3亦與毛髮生長有關，因為Wnt/β-連接素訊號在毛囊形態發生及分化作用中扮演主要角色（Kishimotot et al. Genes Dev, 14:1181, 2000; Millar，J Invest Dermatol，118:216, 2002)。已發現小白鼠皮膚中Wnt訊號之抑制劑出現構成性過度表現時，無法發展成毛囊。Wnt訊號係毛囊初期發展時所必需，且 GSK3在構成上藉由抑制β-連接素來調節Wnt途徑（Andl et al., Dev Cell 2:643, 2002)。暫時性Wnt訊號提供啟動新的毛髮生長循環之重要初始刺激，其係活化β-連接素及表皮毛囊前體 87005 -14- 1324157 中 TCF-調節基因之轉錄作用（Van Mater et al.，Genes Dev, 17:1219， 2003)。由於GSK-3活性與***活動性有關，因此GSK-3抑制作用適用為雄性避孕劑。已知***GSK3活性下降與牛及猴子附睪中***活動性之發展有關（Vijayaraghavan et al., Biol Reprod, 54: 709, 1996; Smith et al·, J Androl，20:47, 1999)。此外，公牛中可 : 活動***中，GSK3之酪胺酸與絲胺酸/蘇胺酸磷酸化作用比：不動***高（Vijayaraghavan et al·，Biol Reprod, 62:1647, 2000)。此 Φ 結果亦於人類***中證實（Luconi et al., Human Reprod，16:1931， 2001)。基於目前仍缺乏與GSK-3蛋白質激酶有關之大多數疾病之治療法，因此仍極需要可抑制目標蛋白質之醫療劑。【發明内容】本發明提供式⑴化合物或其醫藥上可接受之鹽來說明此需要：

其中W、R1與Ry如下述定義。本發明化合物可抑制GSK-3活性。根據本發明，此等化合物亦可用於抑制GSK-3活性之組合物與方法及治療或減輕與 87005 •15- 13241^/ 患者與GSK-3有關之症滤七—. ^ 〈疾涡或蜗症嚴重性之方法。可採用本發明方法>、士、一疾病或病症包括例如：神經性與神 ’’·二又性病％、糖尿病、精神病、多發性硬化(MS)、心肌梗塞、再灌流/絕血、禿髮與中風。【實施方式】本發明提供式I化合物：

或其醫藥上可接受之鹽，其中： W為氮或CH ;

Rl係選自氫或氟；及

Ry為（:“脂系基團，可視需要經N(R2)2或含有丨_2個分別獨立選自：氮、氧或硫中雜原子之5-6員飽和環取代，其中：各R2分別獨立選自：氫或C10脂系基團，其可視需要經 OH、N(R3)2或含有1_2個分別獨立選自：氮、氧或硫中雜原子之5-6員飽和環取代，其中：各R3分別獨立選自：氫或Cw脂系基團；但其限制條件為：當R1為氫且W為CH時，則Ry不為甲基。

本文中所使用"脂系π或”脂系基團"意指直鏈或分支Q-Q 87005 -16- 其係完全飽和或包含_個或多個不飽 Γ;:烴鍵’其係完全飽和或包含-個或多個二卜 π又中冉為碟環”或"環烷基"），且 1早-附接點連接其餘分子m適之括 (，不限於):直鏈或分支之燒基、缔基、炔基及其= ，=㈣基悚基、（環缔基）燒基或（環燒基）缔基; :基、~基|’與"炔基"單獨使用或作為較一邵份時，應包括含有1-4個/搭2 t Π切股又個雔鍵去反原子與至少2個碳原子與— :又鍵（右為缔基時）及至少二個碳基時）之直鏈與分支鏈。個參鍵（右為炔本發明所㈣（化合物限於彼等因此，僅杏μ >+.仏人” L 于工J订五女疋者。 …：；合物中取代基或代號之組合可形成安定 …匕合物時，此等組合才可行。安定化二或化學上可行之化合物係指其化學結口 ΙΓ:實；:=氣或其他化學反應性條件下歷時 Μ傻貝为上不會改變。習此相關技藝之人Α π b 現互變異構型。化合物此ί發明某些化合物可能出範圍内。 #此辛互變異構型均在本發明除非另有說明’否則本文所有立體化學型；亦即各不對稱中心所發明化合物之軍^ m ^ s ^ S ，"因此，本異構物均在本=構物_映所示結構式亦_因含有一素 87005 -17· 1324157 差異之化合物。例如：化合物結構中氫被氘或氚置換者或碳被含13c-或14c-之碳置換者均在本發明範圍内。本發明化合物涵括在PCT公告案W0 〇2/226〇7所說明之化合物範圍内。然而，申請者已發現本化合物在保護神經元對抗絕血傷害及治療中風上具有令人驚訝之提高效力。本發明一方面係有關式！化合物，其中Ry為未取代之Ci_C4 脂系基團。式I化合物之較佳脂系基團為烷基。此等烷基較佳為曱基、乙基、環丙基、第三丁基或異丙基。式j化合物之更佳'丨元基為曱基、環丙基、與第三丁基。根據一項具體實施例，本發明係有關式〗化合物，其中Ry 為經含有1-2個分別獨立選自：氮、氧或硫中雜原予之6員飽和環取代之CVC4脂系基團。此等6_員飽和環包括嗎啉基六氫p比咬基與六氫ρ比p井基。根據另一項具體實施例，本發明係有關式j化合物，其中 Ry為經N(R2)2取代之CrC4脂系基團。某些具體實施例中，本發明係有關式〗化合物，其中R2為氯。根據另一項具體實施例，本發明係有關式J化合物，其中 r2為未取代之CrQ脂系基團。另一項具體實施例中，本發明係有關式〗化合物，其中R2 為經OH或N(R3)2取代之CrC3脂系基團。 2根據另一項具體實施例，本發明係有關式j化合物，其中 ^為經含有1-2個分別獨立選自：氮、氧或硫中雜原子之6 員飽和裱取代足Cr(：3脂系基團。此等6_員飽和環包括嗎、 87005 •18· 土、六氫吡啶基與六氫吡畊基。根據—項具體實施例，本發明係有關式I化合物，其中w 為氮。根據另一項具體實施例，本發明係有關式J化合物，其中 w 為 CH。根據另一項具體實施例，本發明係有關式〗化合物，其中 R為氫。根據另一項具體實施例，本發明係有關式〗化合物，其中 Rl為氟。咸了解，本文所述具體實施例之所有組合與次組合均在本發明範圍内。式I化合物之代表性實例示於下表j。表I.式I化合物

87005 -19- 1324157

!-16 1-17 與 Ι·18 本發明化合物可依下列反應圖Ι-ΙΙ及習此相關技藝之人士已知之一般方式製備。 87005 -20- 1324157 反應圖i

試劑與條件：⑻草醯氯，二氯乙烷，70°C ; (b)二甲胺，戊烷，TiCU ; (c) NHtOAc，HOAc，THF，回流；（d) POCl3，n-Pr3N，回流；（e) 160°C，無溶劑。上述反應圖I出示製備本發明化合物之一般方法。步驟⑻ 中，由芳基醯胺I經草醯氯處理，形成醯基異氰酸酯2。如步驟（c)所示，由醯基異氰酸酯2與烯胺3縮合，產生嘧啶酮4 (J. Org. Chem (1993), 58, 414-418; J.Med. Chem., (1992), 35, 1515-1520; J.Org.Chem·, 91967, 32, 313-214)。中間物4再經 P0C13處理，形成氯化合物5，其再與胺基-W唑衍生物6組合，產生式I化合物。製備胺基-吲唑衍生物6之方法係相關技藝已知。明確言之，此等衍生物之合成法示於WO 02/22607中。 87005 -21 - 1324157

Ο Ο

RyJl^C02Et」b)

* f NH CF, 7 8 9

試劑與條件：（a) z· LiN(TMS)2，醚，thF，/z. H

EtOH，回流。，⑼ NaOEt，上述反應圖II出示另一種製備嘧啶酮中間物$、、可用於製備上述反應圖I步驟（e)所示式j化合物。:万法，其方基腈7為苯甲脒中間物8，其隨後經β_酉同基酉旨9處，⑷中’ 嘧啶酮化合物5，其可用於上述反應。 3 理，形成習此相關技藝之人士可使用容易合成或可自試劑，依指定技術合成本發明其他化合物。于< 用於本發明之化合物作為GSK_3抑制劑之活性可於、活f豆内或細胞株中分析。活體外分析法包括測定心之 GSK-3之磷酸化活性或Ατρ酶活性。活體外八抑制劑與GSK-3結合之能力。抑制劑結合性之測定=! 抑制劑上進行放射性標記，單離抑制劑;· 子夂口物，叙所結合之放射性標記物含量。或者，可進行性貫驗，：定抑制劑結合性，其中由新抑制劑與已錄 σ已知放射性標記物之GSK_3培養。入根據另—項具體實施例’本發明提供—種組合物，其包 :本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之輔劑或媒劑。本發明組合物中化合物之用量應使生物檢體或患者體内抑制蛋白質激酶，特定言之GSK:5之效 87005 -22- 1324157 供投與需配成經σ 果被有效檢測到。本發明組合物最好經過調配，要此等組合物之患者。最佳者，本發明組投藥給患者。較佳為哺乳動物，最本文所採用"患者"一詞係指動物佳指人類。 ”醫樂上可接受之載劑、辅劑或媒劑"係指不會破所調配化合物之藥理活性之無毒性載劑、輔劑或媒劑。^ 發明組合物可使用之醫藥上可接受之載劑、辅劑或媒劑或包括（但不限於）：離子交換劑、蓉土、硬脂酸銘、卵替、：清蛋白如：人類血清白蛋白、緩衝物質如：磷酸鹽、甘胺私、山梨酸、山梨酸_、飽和植物性脂肪酸之部份甘 :酯混合物、纟、鹽類或電解質如·魚精蛋白硫酸鹽、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽 '膠體矽石、三矽酸鎂、聚乙埽峨略淀酮、以纖維素為主之物質、聚乙二醇、，甲基纖維素納、聚丙烯酸鹽、壎類、聚乙聚氧两締_ 嵌段聚合物、聚乙二醇與羊毛脂。本文中所採用"可檢測之抑制"指包含該組合物與觸激酶之樣本與包含GSK_3激酶但不㈣組合物之同等樣本之間 GSK-3活性出現可測得之變化。 "醫藥上可接受之鹽"指本發明化合物之任何無毒性鹽、. 圉曰之鹽或其他衍生物當投與接受者時，可直接或間接產生本發明化合物或其抑制活性代謝物或殘質。本文所知用其抑制活性代謝物或殘質"意指亦可抑制 GSK-3激酶之本發明化合物之代謝物或其殘質。 87005 •23· 叫 4157 本發明化合物之醫藥上可接受之鹽包括彼等衍生自醫藥上可接受:之無機與有機酸或鹼者。合適酸鹽之實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯績酸鹽 '硫酸氫鹽、丁酸鹽、擰檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、乙醇酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2_萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽 '過硫酸鹽、3·苯基丙酸鹽、磷酸、苦未敗a特戊阪·鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥链酸鹽 3酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽'甲苯績酸鹽與十一碳垅酸鹽。其他酸類如：草酸，雖然本身並非醫藥上可接受、’但仍可作為適料製得本發明化合物及其醫藥上可接受之酸加成鹽之鹽中間物。何生自週當鹼之鹽類包括鹼金屬(例如：鈉與鉀）、鹼土 :屬（例如：鎂）、錄與N+(C1_4垸基）4之鹽類。本發明亦包、、本發明所揭不化合物任何含驗性氮基團之四級化。水或油溶性或勻散性產物均可依此等四級化反應製得。，：明組合物可經口、非經腸式 '經吸入式噴液局部 =腸'鼻、頻内、***或經由植入式儲存器投藥。本又所採用”非經腸式”一詞包括皮下靜脈内、肌内、椎管内、滑膜内、胸骨内、 4〇 .. 注心认月内#為内、肝内、損害邵位内及顱内、 /王射或輪液技術。較佳去孕义佳者，組合物經口、腹膜内或靜脈内 87005 •24- 投藥。本發明組合物之血 uM. 乏·.、囷/王射型可呈水性或油性懸浮液。此寺懸洋液可根據相關技蓺 4、仅w已知芡技術，採用合適勻畨或濕化劑與懸浮劑調配。盔菌欢 t , …、固/王射剜亦可為含於無毒性非、.至腸式可接受之稀釋劑或溶劑中〃# >予液，例如：含於丁二醇 ^ 哔甲形成溶液。可使用之可接受媒劑與溶劑為水、林格氏溶洛、a + 气/合履及♦張性氯化鈉溶液。此外 ’亦㊉使用無菌之固體油類作為落劑或懸浮劑。此目的可使用任何品牌之^油類，包括合成之單或二、、㈣°脂肪酸如：油酸及其甘油S旨衍生物均適用於製備圧射劑，天然之醫藥上可接受之油或蓖麻油，尤指並聚氧 A a ^ ^ p .橄欖十_^入如”永乳乙基化型。此等油溶液或懸浮液藥二劑或勾散劑’如：幾甲基纖維素或醫 JTh之劑型（包括乳液與懸浮液）之調配上常用之類

似勻散劑。其他當用士只&、^ llL A I面活性劑如：Tweens ' Spans與其他 A &醫藥上可接受之固體、液體或其他 «生物利用率加強劑亦可用於調配之目的。本發月醫藥上可接受之組合物可呈任何口服可接受之劑其包括（但不限於）膠囊、鍵劑、水性懸浮液二〜液右為口服用錠劑時，常用之載劑包括乳糖與玉米 :私典型5F添加潤滑劑如··硬脂酸鎂。適合口服用 ‘:：：釋劑包括乳糖與乾燥之玉米澱粉。當需要口服用水時〜時，由活性成分與乳化劑及懸浮劑组合。若需要〆亦可添加某些甜味劑、調味劑或著色劑。或者，本發明之醫藥上可接受之組合物可呈經直腸投藥 87005 -25- 丄以4157 之栓劑型投藥。其製法為混合藥劑與於。於直腸溫度下卻呈液態之合適之無刺激性固感，但 :於直腸中融化釋出藥物。此等材料包括可二因：將與聚乙二醇。』了奶油、蜂蠟本發明《1·藥上可接受之組合物亦疼B 局部投藥’尤JL去 / 口療目U括谷易經由局部施用到之區 ^ 眼晴、皮膚或下腸道之疾病。合適之 /，’包括針對各區域或器官製備。邵用调配物很容易下腸道之局部施用法可使用直腸用栓或合適之灌腸調配物進行。亦（口上述）局部投藥時，醫藥上^接受之==穿皮式貼布。 ,按又<'·且口物可調配成合適油春物/ '分料或溶於—種或多種載劑中。本發明化I 投藥用載劑包括(但不限於)確物油、液態石螺：壤m者丙rr聚氧乙婦、聚氧丙婦化合物、乳化或，:，醫樂上可接受之組合物可調配成合適洗液 ^ 中3有活性成分懸浮或溶於一種或多種醫藥上 :接受之載劑中。合適載劑包括（但不限於）礦物油、山梨糖㈣早硬脂酸醋、聚山梨酸酿60、,_基醋蟻'_ 硬脂醇、2·辛基十二烷醇、苯甲醇與水。」艮用之醫藥上可接受之组合物可於已調整pH之等張性無菌生理艮鹽水中調配成微粉化之懸浮液或較佳為使用或不使用防腐則（如：’氯卞貌銨於已調整pH之等張性無菌生里艮鹽水中掏配成落液。或者，眼用之醫藥上可接受之組合物可於油膏（如：石蠟）中調配。 87005 -26- 丄 1本發：鮝藥上可接受之組合物亦可呈鼻噴液或吸入劑投藥。此等組合物係依據醫藥調配物相關技藝已知之技術製備，t可於生理食鹽水中，使用苯甲醇或其他合適防腐劑、力如生物利用率之促進吸收劑、氟碳化物與/或其他常用 ’谷解劑或勻散劑等，製成溶液。最佳者，本發明冑藥上可接受之組合物係ΐ周配成經口投藥用。可/'、載蜊材料組合製成單一劑型組合物之本發明化合物用里將Ik所治療之宿主、特定之投藥途徑而定。較佳者，心周配 <且s物，使接受此等組合物投藥之患者可接受0.01 _ 100 mg/kg體重之間之抑制劑劑量。咸了解，對任何特定患者之明確劑量與療程將依多種因素而定，包括所使用特定化合物之活性、年齡、體重、一般健康情形 '性別、飲食、投藥時間、***速度、藥物組合及治療醫師之韻與所治療特定疾病之嚴重性。組合物本發月化合物之用量亦依組合物中特定化合物而異。人依據該需要預防或治療特^病症或疾病而^，本發明組 ""中亦可包含通常用於治療或預防該病症之醫療劑。」沐申紅營養因子或其他用於治療神經性或神經變性以又之藥浏可與本發明化合物組合，供治療神經性或神經 :性病變。已知神經營養因子實例包括(但不限於)乙醯膽驗醋酶抑制劑、励抑制劑、干擾素、抗痙攣劑、離子通逞阻斷劑、利路唑(rilUZ0le)與抗帕金森氏症劑。已知治療中風之藥劑實例包括細纖⑧，一種組織血纖維 87005 •27· 1324157 蛋白溶g每原活化劑（rt-PA)之重組體或基因工程產物、肝素、麩胺酸擷抗劑、鈣擷抗劑、鴉片製劑擷抗劑、GABA促效劑與抗氧化劑。亦可與本發明化合物组合之其他藥劑實例包括（但不限於）：抗抑鬱'劑如：Zoloft®、Prozac®、Paxil® 與 Buspar® ;消炎劑如：皮質類固醇、TNF阻斷劑、IL-1 RA、氮°坐嗜呤(azathioprine) 、環磷醯胺與柳氮磺胺嘧啶；免疫調節劑與免疫抑制劑如：環孢素、塔克利姆斯（tacrolimus)、阮帕徽素（rapamycin)、黴齡酸鹽莫非太（mycophenolate mofetil)、干擾素、皮質類固醇、環磷醯胺、氮唑嘌呤與柳氮磺胺嘧啶；神經營養因子如：乙酿膽驗醋酶抑制劑、MAO抑制劑、干擾素、抗瘦攣劑、離子通道阻斷劑、利路11 坐（riluzole)與抗帕金森氏症劑；治療心血管疾病之藥劑如：β阻斷劑、ACE抑制劑、利尿劑、硝酸鹽、#5通道阻斷劑與抑制素（statins);治療糖尿病之藥劑如：胰島素、胰島素類似物、α葡糖嘗酶抑制劑、雙胍類與胰島素敏化劑；及治療免疫缺乏症之藥劑如：γ球蛋白。本發明組合物中其他醫療劑之用量將不超過包含該醫療劑作為唯一活性劑之組合物之正常投藥量。本發明所揭示組合物中所含其他醫療劑用量在包含該醫療劑作為唯一活性劑之組合物中之正常含量之約50%至100%範圍内。根據另一項具體實施例，本發明係有關對患者投與另一種選自下列之藥劑：治療阿茲海默氏症（AD)、治療帕金森氏症.、治療多發性硬化（MS)、治療氣喘之藥劑、消炎劑、免疫調節劑或免疫抑制劑、神經營養因子、治療中風之藥 87005 -28- 1324157 劑、治療心血管疾病之藥劑、抗抑鬱劑、抗精神病劑或治療糖尿病之藥劑’其中：該另一種醫療劑適合所治療之疾病；且該另一種醫療劑與該組合物共同形成單一劑型投藥或與該組合物分開形成多重劑型之一部份投藥。根據另一項具體實施例’本發明係有關於生物樣本中抑制GSK-3激酶活性之方法’其包括之步驟為由該生物樣本與本發明化合物或含該化合物之組合物接觸。本文所採用π生物樣本”包括（但不限於）細胞培養物或其萃取物；得自哺乳動物之生物檢體材料或其萃取物及血液、唾液、尿、糞、***、淚液或其他體液或其萃取物。生物樣本中GSK-3激酶活性適用於習此相關技藝之人士已知之多種目的。此等目的實例包括（但不限於）輸血、器官移植、生物檢體保存及生物分析法。根據另-項具體實施例’本發明係有關為患者抑制哪3 激酶活性之方法’纟包括之步驟為對該患者投與本發明化合物或含該化合物之組合物。根=項具體實施例’本發明提供一種治療或減輕患根撼媒介疾病或病症之方法’其包括之步驟為對該患者权與根據本發明組合物。錄ΓΓ所，用GSK_3所媒介疾病"意指gsk·3在其中扮演某種角色之任何疾病或其堂症舍括ί但；r服. 有。涡症或疾病。此等疾病或病、於）自體免疫疾病、炎症、代謝里常、_ 病、糖尿病、血瞢耜h 人征代忒吳吊、精神生性疾頰、τ-蛋白質形成異常(tau〇p〇thy) 87005 -29· 1324157 、神經性或神經變性病變、脊柱傷害、杳血管疾病。青先眼1髮或心根據另一項具體實施例，本發明係有 ' H有需贾之患者治療或減輕選自下列之疾病、病變或病症之、體免疫疾病 '炎症、代謝異常、精神病、糖：：万二二生性疾病、τ-蛋白質形成異常、神經性或神經變性病: 脊柱傷菩、青光眼、亮髮或心血管疾病， - 對該患者投與根據化合物或其組合物。 ‘ 4為 =另:項具體實施例，本發明係有關—種治療或減輕《屄届、病變或病症之方法：過敏、氣喘病、阿兹海默氏症、亨丁頓氏症、帕金森氏症、愈_ 二癡呆症 '肌萎縮性側索硬化(ALS路格威氏症卜 G〜S dlsease))、多發性硬化_)、因頭部創傷造成之” 精神刀农症、焦慮症、兩極化病變、τ•蛋白 $ 、脊柱或周邊神缔復堂 ^ ^成異吊逯砷忑傷α、心肌梗塞、心肌細胞肥大、青光 :、注意力缺乏異常(ADD)、抑费症、睡眠障礙、再灌产/ 牛中風、血管新生性病變或禿髮，其中該方法包括之步驟為對有需要之患者投與化合物或其組合物。風佳具體實施例’本發明方法係有關治療或減輕中風歇重性之方法。 Τ 读金另Μ佳具體實施例，本發明方法係、有關治療或減輕相性或神經變性病變嚴重性之方法。僚Χ 、^發月另—万面係有關—種降低男性患者***活動力之万法，其包括對該患者投與化合物或其組合物。 87005 -30- 丄 W4157 另一項具體實施例中，使用不含其他醫療劑之組合物之本發明方法包括另一個對該患者分開投與該另一種醫療劑之步驟。當此等其他醫療劑分開投藥時，可在投與本發明組合物之前、接續或之後投與患者。為了更了解本發明，出示下列實例。咸了解，此等實例僅供說明用，並未以任何方式限制本發明。實例本文所採用稱為"方法A"之HPLC法如下： $ 柱· C18, 3 um，2.1 X 50 mm，品名為 jones Chromatography 公司之” Lighting"。梯度：100%水（含丨％乙腈，〇 1% TFAg 1〇〇%乙腈（含〇 1〇/〇 TFA)，歷時4.0分鐘，保持100%乙腈14分鐘，然後回到初始條件。總運作時間7.0分鐘。成速：0.8mL/分鐘。本文所採用”Rt，’一詞指滞留時間（以分鐘計），由化合物依指定之HPLC法取得。下列實例中之化合物編號相當於上表 1中所示之化合物編號。實例1 6-曱基-2-(2-三氟曱基-苯基）_识_嘧啶_4_酮：取含2_三氟曱基_ 笨曱脒（2_ 13 g，4 mmol)與乙醇鈉（0.83 g, 12 mmol)之乙醇（2〇就)混合物經乙醯乙酸甲酯（〇 44 mL，4 處理，加熱24小時。反應冷卻，濃縮，加水稀釋，以2 N鹽酸酸化。所得溶液經乙酸乙酯萃取，經硫酸鈉脫水及濃縮。經急驟層析法純化 87005 -31 - 1324157 [Si〇2，曱醇：二氯甲烷（3:97)]，產生標題化合物（0.51 g，收率 50%)之黃色固體；W-NMR (500 MHz，DMSO-d6) δ 12.7 (br s，1H)， 7.9 (m, 1H), 7.8 (m, 2H), 7.7 (m, 1H), 6.3 (s, 1H), 2.21 (s, 3H) ppm; MS (FIA) 255.0 (M+H); Rt(方法 Α)2·578 分鐘。實例2 4-氯-6-曱基-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶：取含6-甲基-2-(2-三氟甲基-苯基）-3Η-ρ密咬-4-酮（10.7 g, 41.9 mmol)之磷酿氣（39 mL, 419 mmol)溶液經三-正丙胺（16 mL，83.9 mmol)處理，於ll〇-i2〇°C下回流1小時。蒸發溶劑，與甲苯共沸三次後，真空乾燥。殘質溶於乙酸乙酯中，依序以1 N氫氧化鈉 '水與鹽水洗滌後，經硫酸鈉脫水及濃縮。經急驟層析法純化[Si02，乙酸乙酯：己烷（1:9)]，產生標題化合物（9.61 g，收率84%)之橙色油狀物。1HNMR (CDC13, 500 ΜΗζ) δ 2.63 (3H，s)，7.26 (s, 1H)，7.61 (t， J=7.6Hz，1Η)，7.67 (t，J=7.5Hz，1Η)，7.76 (d, J=7.6Hz，1Η)，7.82 (d， J=7.8Hz，IH) ppm; MS (FIA) 273.0 (M+H); Rt(方法 A)3.499 分鐘。實例3 (5-氟-1H-峭唑-3-基）-[6-甲基-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶·4_基] 胺（1-2):取含4-氣-6-甲基-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶(〇.10g，〇37 mmol)與5-亂-1H-H丨峻-3-基胺（0.072 g，0.48 mmol)於無溶劑下，在 160-170°C下加熱8小時。所得殘質冷卻至至周溫後，溶於N_ 甲基-被洛淀酮（2 mL)中。此混合物倒至水（20 mL)中，添加碳酸氫鈉（5 mL) ’所得混合物過滤，以水洗務。經製備性hplc 純化，產生標題化合物（〇·〇81 g，收率43%)之黃褐色固體。 'H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (br s, 1H), 10.6 (br s, 1H), 7.86 (d, 87005 -32- 1324157 J=8.0Hz, 1H), 7.77 (m, 4H), 7.62 (br s, 1H), 7.50 (m, 1H),7.29 (m, 1H), 2_44 (s, 3H) ppm LC-MS 388.05 (M+H); Rt(方法 A)2.900分鐘。實例4 6-第三丁基-2-(2-三氟曱基-苯基）-3H-嘧啶-4-酮：取含2-三氟甲基苯甲脒（1.12 g, 5 mmol) ' 乙醇鈉（1.02 g, 15 mmol)與 4,4-二曱基-3-氧代-戊酸甲醋（0.80 mL, 5 mmol)之乙醇（50 mL)混合物回流加熱16小時。反應冷卻，濃縮，加水稀釋，以2 N鹽酸酸化。此溶液經乙酸乙酯萃取，經硫酸鈉脫水及濃縮。.經急驟層析法純化[Si02，甲醇：二氯甲烷（2:98)]產生標題化合物 (0.48 g，收率 32%)之黃色固體；]H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (br s, 1H), 7.89 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.78 (m, 2H), 7.71 (d, J=7.4Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 1.20 (s, 9H) ppm; LC-MS 297.03 (M+H); Rt(方法 A)3.30分鐘。實例5 6-第三丁基-6-氯-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶：取含6-第三丁基-2-(2-三氟1曱基-苯基）-3 H-p密口定-4-酮（0.47 g, 1.59 mmol)之磷酉盛氯（1.65 mL, 15.9 mmol)溶液經三-正丙胺（0.61 mL, 3.17 mmol)處理，於110-120°C下加熱1小時。蒸發排除溶劑後，與甲苯共沸三次。殘質溶於乙酸乙酯中，依序以1N氫氧化鈉、水與鹽水洗滌後，經硫酸鈉脫水及濃縮。經急驟層析法純化 [Si02，乙酸乙酯：己烷（1:9)]，產生標題化合物（0.33 g，收率 66%)之黃色油狀物。1H NMR (CDC13, 500 ΜΗζ) δ 1.31 (9H，s)，7.25 (s, 1Η), 7.51 (t, J=7.6Hz, 1H), 7.58 (t,J=7.5Hz, 1H), 7.74 (t, J=8.5Hz, 2H) ppm; MS (FIA) 314.9 (M+H); Rt(方法 A)4.156分鐘。 87005 -33 - 1324157 實例6 [6-弟二丁基-2-(2-三氟甲基-苯基）-p密这_4_基]σ坐並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-3) ·取含4-氯-6-第三丁基-2-(2-三氟甲基-苯基）-i 淀（0.10 g，〇·32 mmol)與 lH-ρ比峻並[3,4-b]p比咬-3-基胺（0.064 g，0.48 mmol)於無溶劑下，在160-170°C下加熱16小時。所得殘質冷卻’溶於N-曱基-p比p各咬酮（2 mL)中後，倒至水（20 mL)中 ’添加碳酸氫鈉（5 mL)，以乙酸乙酯萃取2次。合併之有機層經水洗滌4次，以鹽水洗滌1次後，經硫酸鈉脫水與濃縮。粗產物經製備性HPLC純化，產生標題化合物（0.007 g，收率 4%)之黃色固體。W-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (br s, 1H)， 10.6 (br s, 1H), 8.49 (m, 2H), 7.84 (d, J=7.8Hz, 2H), 7.76 (m, 2H), 7.68 (m，1H)，7.12 (m，1H)，1.32 (s，9H) ppm; LC-MS 413.08 (M+H); Rt(方法A)3.112分鐘。實例7 6-環丙基-2-(2-三氟甲基-苯基）_3H-嘧啶_4_酮： • (l-ί哀丙基-乙缔基）_二甲胺：於0C與氮蒙氣下，在含環丙基曱基酮（19 8也，200 _〇1)之戊 (600 mL)溶液中添加二曱胺/四氫呋喃（2Μ，5〇〇此，1〇〇〇 mmol) ’然後滴加含氯化鈦（IV)(121虹，u〇 mmd)之戊烷（6〇 mL)溶液。反應於(TC下攪拌〇·5小時後，於室溫下攪拌5小時。反應經寅氏鹽過濾，以戊烷與醚洗滌，於槽溫15_2〇<>c下真空濃縮後’呈橙色油狀物於-4°C下存放一夜。 • 2-三氟曱基苯曱醯基異氰酸酯：於室溫下與氮蒙氣下’取含2·三氟甲基苯醯胺(349 g, 185 87005 -34- 1324157 mmol)之1，2-一鼠乙燒（600 mL)溶液，快速滴加草酿氯（2〇.2此, 230 mmol)處理’反應於7〇_8〇t：下攪拌一夜。蒸發排除溶劑殘質與甲苯共沸2次。 • 6-環丙基-2-(2-三氟甲基苯基）_3H_P密啶_4_酮：於與氮蒙氣下，在含（1·環丙基_乙烯基）_二甲胺之四氫呋喃（400 rnL)溶液中滴加含2-三氟甲基苯甲醯基異氰酸酯之四氫呋喃（50 mL)溶液處理。攪拌反應〇.5小時後，添加乙酸銨 (78 g，1〇〇〇 mm〇l)與乙酸（400 mL)。反應混合物回流加熱3小時 ’同時連績排除四氯咬喃後，冷卻，倒至水（1.2 l)中。過滤收集所得沉澱，以水與醚洗滌，產生6_環丙基_2-(2-三氟甲基-苯基）-3H-嘧啶-4-酮（28.79 g，收率56°/。）之白色固體，其係標題化合物與（2-三氟曱基，苯甲醯基卜脲之混合物（91:9， HPLC 測定）。W-NMR (500 MHz，DMSO-d6) δ 12.7 (br s，lH)，7.87 (d， J=7.6Hz，lH)，7·79 (m，2Η),7·73 (d，J=7.5Hz，lH), 6.32 (s，lH)，1.93 (m，lH)，0.90 (m，4H)，[脲：10.8 (br s，IH)，7.45 (br s, IH)] ppm; LC-MS 280.96 (M+H); Rt(方法A)2.961分鐘（標題化合物），2.313分鐘（脲雜質）。實例8 4-氯-6-環丙基-2-(2-三氟曱基-苯基）_嘧啶：取環丙基·2-(2-三氟甲基-苯基）-3Η-嘧啶-4-酮（12.0 g，42.8 mmol)之磷醯氯(40 mL， 428 mmol)溶液於75-80°C下加熱1小時》蒸發排除溶劑，與甲苯共·冻3次。殘質冷卻至〇°C，溶於乙酸乙醋中，以碎冰及水處理。混合物依序經碳酸氫鈉 '水與鹽水洗滌，經硫酸鋼脫水及濃縮。經急驟層析法純化[Si〇2，5:95乙酸乙醋：己 87005 -35- 1324157 烷（5:95)] ’產生標題化合物（9.71 g ’收率76%)之無色油狀物。NMR (CDC13, 500 ΜΗζ) δ 1.12 (m，2H)，1.30 (m，2H). 2.02 (m, 1H), 7.24 (s, IH), 7.56 (t, J=7.6Hz, 1H), 7.64 (t, J=7.6Hz, 1H), 7.79 (m5 2H) ppm; MS (FIA) 299.1/300.9 (M+H); Rt(方法 A)3 882分鐘。實例9 [6-環丙基-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶-4-基]-(iH-M丨唑-3-基）-胺 (1-4):取含4-氯-6-環丙基-2-(2-三氟甲基-苯基）密症（〇.〇8 g, 0.27 mmol)與1Η-Θ丨唑-3-基胺（0_036 g，0·41 mmol)之混合物於無溶劑下’在160-170°C下加熱6小時。所得殘質冷卻，溶於N-甲基-吡咯啶酮（2 mL)中後，倒至水（30 mL)中，添加碳酸氫鈉（5 mL)後，過濾’以水與醚洗滌。收集沉澱，合併醚洗液，濃縮。經急驟層析法純化[Si02，甲醇：二氯甲烷（2..98)]，產生標題化合物（0.017 g，收率15%)之淺黃色固體。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.6 (br s,lH), 10.2 (br s,lH), 8.00(d, J=8.1Hz, 2H), 7.81 (d, J=7.9Hz, 1H), 7.71 (m, 3H), 7.65 (t, J=7.3Hz, 1H), 7.45 (d, J=8.4Hz, 1H), 7.36 (t, J=7.5Hz, 1H), 7.06 (t, J=7.5Hz, 1H), 2.04 (m, 1H), 1.01 (m，2H), 0_96 (m，2H) ppm; LC-MS 396.10 (M+H); Rt(方法 a) 3.122分鐘。實例10 [6-環丙基-2-(2-三氟甲基-苯基）-p密咬-4-基]-(lH-p比峻並[3,4_ b]n比淀-3-基）-胺（1-1):取含4-氯-6-環丙基-2-(2-三氟1曱基-苯基）-喊淀（7.00 g，23.4 mmol，依上述實例8所述製備）與iH-p比吐並[3,4-b]p比淀-3-基胺（9.43 g，70.3 mmol)之N-曱基p比p各咬酮（5〇 mL)溶液於130°C下加熱12小時。殘質冷卻，溶於N-曱基p比 87005 -36 - 1324157 咯啶酮(2 mL)中’倒至水（500 mL)與碳酸氫鈉（15 mL)中後，過滤，以水洗蘇。經急驟層析法純化[Si〇2，乙酸乙酿：己燒 (35:65)] ’產生標題化合物（5.25 g ’收率57%)之白色固體。也 NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.1 (br s, 1H), 10.5 (br s, 1H), 8.50 (m, 2H), 7.82 (d,J=7.8Hz, 1H), 7.73 (m, 3H), 7.66 (t, J=7.7Hz, 1H), 7.12 (m, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.02 (m, 2H), 0.97 (m, 2H) ppm; LC-MS 397.22 (M+H);Rt(方法 A)3.412 分鐘。實例11 [6-環丙基-2-(2-三氟曱基-苯基）-p密咬_4_基]_(ih-p比峻並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺鹽酸鹽：HC1鹽之製法為取化合物M (8.42 g， 21.4 mmol)溶於6 N鹽酸中，冷凍乾燥後，產生標題化合物 (9.242 g, 99 %)之黃色固體。iH-NMR (500 MHz，DMSOO δ 13.3 (br s, 1H), 10.9 (br s, 1H), 8.53 (dd, J=4.4, 1.4Hz, 1H), 8.48 (br d, J=7.4Hz, IH), 7.87 (d, J=7.8Hz, 1H), 7.79 (m, 2H), 7.72 (t, J=6.8Hz, 2H), 7.15 (m, 1H), 2.14 (m, IH), 1.07 (m, 4H) ppm; MS (FIA) 397.3 (M+H), 395·2 (M-H)，431.2 (M-H+HC1); Rt(方法 A)2.798 分鐘。實例12 6-丁 -3-烯基-2-(2-三氟甲基-苯基）_3H-嘧啶-4-酮：依上述實例1 所述，但改用3-氧代-庚_6_烯酸乙酯製備6-丁 -3-缔基-2-(2-三氟甲基-苯基）-3H-嘧啶-4-酮。此反應產生標題化合物（2.545 g ，收率 49%)之乳色固體。Ijj-nmr (500 MHZ，DMS〇_d6) δ 12 8 (s， 1H)} 7.88 (d, 1H), 7.79 (t, 1H), 7.75 (t, 1H), 7.68 (d, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.80 (m, 1H), 5.03 (dd, 1H), 4.98 (dd, 1H), 2.56 (t, 2H), 2.36 (m, 2H) ppm; MS (FIA) 295.1 (M+H); Rt(方法 A)3.160分鐘。 87005 -37- 1324157 實例13 4-丁-3-婦基-6-氯-2-(2-三氟甲基-苯基）-σ密咬：依上述實例2所述，但改用6-丁 -3-稀基-2-(2-三氟甲基-苯基）-3Η-ρ密淀-4-酮製備標題化合物，產生黃色油狀物（〇·49 g，收率99%)。b-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.72 (d, 1Η), 7.67 (d, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.51 (t, 1H), 7.13 (s, IH),5.77 (m, 1H), 4.98 (m, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.49 (m, 2H) ppm; MS (FIA) 313.0 (M+H); Rt(方法 A)4.220 分鐘。實例14 [6-丁 -3-婦基-2-(2-三氟甲基-苯基）-P密淀-4-基]比咬並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-7):依實例6所述，但改用4-丁-3-晞基-6-氯-2-(2-三氟甲基-苯基）-p密咬製備標題化合物，產生乳色固體（2.712 g，收率 62%)。W-NMR (500 MHz，DMSO-d6) δ 13.1 (s，1H), 10.56 (s, 1Η), 8.50 (m, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.76 (t, 1H), 7.69 (m, 3H), 7.13 (m, 1H), 5.86 (m, 1H), 5.06 (dd, 1H), 4.98 (dd, 1H), 2.76 (t, 2H), 2.46 (m, 2H) ppm; MS (FIA) 411.2 (M+H); Rt(方法 A)3.019 分鐘。實例15 嗎啉_4_基-丙基）-2-(2-三氟甲基-苯基）嘧啶-4-基]-(1H-吡吐並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-8):取含[6-丁 -3-烯基-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶-4-基]-(1H-吡唑並[3,4七]吡啶-3-基）-胺（0.10 g, 〇·25 mm〇i)之甲醇此)與四氫呋喃乱)溶液於_78t>c下通入臭氧5刀叙。在此混合物中添加嗎p林（〇.〇5 mL，0.56 mmol)與三乙酿氧基氫硼化鈉（0·39 g，185 _〇1)。反應於室溫下攪拌24 小時’此期間再添加嗎琳（〇1〇 I，128 mm〇i)與三乙醯氧基氫石朋化納（0.39 g，1.85 mmd)，然後繼續攪拌2小時。添加碳酸氫 87005 -38- 1324157 納中止反應及蒸發。經急驟層析法純化⑶〇2，以1:9甲醇：二氣甲烷溶離），然後經製備性册以^純化，產生標題化合物之鮮黃色冷凍乾燥物（〇.068 g， NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1H), 10.7 (s, 1H), 9.60 (br s, 1H), 8-52 (m, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.70(m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.97 (br m, 2H), 3.61 (br m, 2H), 3.44 (br m, 2H), 3.18 (br m, 2H), 3.05 (br m, 2H)，2.78 (t，2H)，2.08 (m, 2H) ppm。實例16 實質上依本文中實例M5 ' 一般反應圖及採用習此相關技藝之人士已知之方法製備下列化合物。 [6-(3-六氫峨啶-μ基-丙基）_2_(2_三氟甲基_苯基）p密啶_4_基]_(111_ 峨峻並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺(1-9): 482.2(M+H)。iH-NMRpOOMHz， DMSO-dg) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (S, 1H), 9.04 (br s, 1H), 8.52 (m, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.14 (m5 1H), 3.42 (m, 2H), 3.10 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.77(t, 2H), 2.09 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.61 (m, 3H), 1.35 (m, 1H) ppm。 [6-(3-二乙胺基-丙基）-2-(2-三氟甲基-苯基）嘧啶-4-基]-(1Η-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-10): 470 (M+H)。W-NMR (500 MHz， DMSO-de) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.50 (m, 1H), 7.85 (m, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.71 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.11 (m, 6H), 2.80 (t, 2H), 2·05 (m，2H)，1.15 (t, 6H) ppm。 [6-(3-(4-甲基-7T氮p比喷-1-基）-丙基）-2-(2_三氟甲基-苯基）p密咬_ 4-基]-(lH-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-11):497.2 (]^+11)。1沁 NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1H), 10.7 (s, 1H), 8.52 (m, 1H), 8.47 87005 •39- 1324157 (m, 2H), 7.85 (d, 1H), 111 (m, 1H), 7.72 (m5 3H), 7.14 (m, 1H), 3.0-3.7 (br，IOH)，2.83 (s，3H)，2.77 (t，2H)，2.05 (m, 2H) ppm。 [6-(3-六氫吡畊-1-基-丙基）-2-(2-三氟甲基-苯基）嘧啶-4-基]-(1Η-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-12): 483.3 (M+H)。iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (s, 1H), 9.06 (br s, 2H), 8.52 (m, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.34 (br m，8H)，3·15 (br m，2H)，2.77 (t，2H)，2.06 (m，2H) ppm。 [6-(3-二甲胺基·丙基）-2-(2-三氟甲基-苯基）嘧啶-4-基]-(1Η-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺(1-13): 442.1 (M+H)。W-NIVIR (500 MHz， DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (s, 1H), 9.40 (br s} 1H), 8.52 (m, 1H), 8.47 (d, 1H), 7.85 (d, IH), 7.78 (m, 1H), 7.71 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.12 (m, 2H)，2.77 (m，8H)，2_06 (m，2H) ppm。 N,N-二甲基-Ν’-{3-[6-(lH-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基-胺基）-2-(2-三氟甲基-苯基）-嘧啶-4-基]-丙基}-乙烷-1，2-二胺（1-14): 485.3 (M+H) ° 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (s, 1H), 9.7 (br, 1H), 8.8 (br s, 1H), 8.52 (m, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.71 (m, 2H) 7.14 (m, 1H), 3.32 (s, 4H), 3.07 (br m, 2H), 2.84 (s, 6H), 2.80 (m，2H), 2_04 (m, 2H) ppm。 [6-(3-曱胺基-丙基）-2-(2-三曱基-苯基）p密咬-4-基]-(1H-p比吐並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-15): 428.1 (M+H)。W-NMR (500 MHz， DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1Η), 10.7 (s, IK), 8.51 (m, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.37 (br s, 2H), 7.85 (d, IH), 111 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 2.97 (m, 2H)，2.78 (t，2H), 2.55 (m，3H)，2.01(m，2H) ppm。 2-{3-[6-(lH-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基胺基）-2-(2-三氟甲基-苯基）- 87005 -40- 1324157 嘧啶-基]丙胺基}-乙醇(1-16): 458.2 (M+H)。W-NMR (500 MHz， DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1H), 10.7 (s, 1H), 8.52 (m, 1H), 8.47 (m, 2H), 7.85 (d, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.62 (t, 2H), 2.99 (m, 4H), 2.78 (t，2H)，2.04 (m，2H) ppm。 [6-(3-(2-嗎林-4-基-乙胺基）-丙基）-2-(2-二鼠曱基-苯基）喊淀-4_ 基]-(1H-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-17): 527.2 (M+H)。W-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s, 1H), 10.7 (s, 1H), 8.76 (br s, 2H), 8.52 (m, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.81 (br s, 4H), 3.1-3.3 (brm, 8H), 3.06 (t, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.05 (t, 2H) ppm o [6-{3-[甲基-(2-嗎*淋-4-基-乙基）-胺基卜丙基}-2-(2-二鼠甲基_ 苯基）嘧啶-4-基]-(1H-吡唑並[3,4-b]吡啶-3-基）-胺（1-18): 541.2 (M+ii)。々-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 13.2 (s，1H)，10.7 (s，1H)，8.52 (m, 1Η), 8.47 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.14 (m, 1H), 3.73 (br s, 4H), 3.39 (m, 2H),3.21 (m, 2H), 2.8-3.3 (br m, 6H) 2.81 (s, 3H), 2.78 (t, 2H), 2.09 (m, 2H) ppm。實例17 抑制GSK-3之Kej定法

採用標準之偶合酵素系統篩選化合物抑制GSK-3p (ΑΑ 1-420)之能力（Fox et al_ (1998) Protein Sci· 7，2249)。於含 100 mM HEPES (pH 7·5)、10 mM MgCl2、25 mM NaC卜 300 μΜ NADH、1 mM DTT與1.5% DMSO之溶液中進行反應。分析法中最終受質濃度為 20 μΜ ATP (Sigma Chemicals, St Louis, MO)與 300 μΜ肽 (HSSPHQS(P〇3H2)EDEEE，American Peptide, Sunnyvale, CA)。於 30〇C 87005 -41 - 1324157 下與20 nM GSK-3P反應。偶合酵素系統中最終成分濃度為2.5 mM磷酸烯醇丙酮酸酯、300 μΜ NADH、30 pg/ml丙酮酸酯激酶及10 pg/ml乳酸酿脫氫酶。製備含有上述所有試劑，但不含ATP及所需試驗化合物之分析母液缓衝液。取分析母液緩衝液（175 μΐ)於96孔分析板中與5 μΐ所需試驗化合物（終濃度範圍在0.002 μΜ至30 μΜ)，於30°C下培養10分鐘。典型地，於子分析板中，使用試驗化合物之DMSO製備一系列稀釋液（由10 mM化合物母液製備）進行12點滴定。添加20 μΐ ATP(終濃度20 μΜ)開始反應。採用 Molecular Devices Spectramax 分析板讀數機（Sunnyvale, CA)於 30°C 下操作10分鐘，得到反應速率。由反應速率隨抑制劑濃度之變化函數，得到艮值。已採用上述分析法發現本發明化合物之Ki值小於100 nM。實例18 神經保謨性百分比測法本文所採用"保護性百分比"代表保護神經元細胞對抗絕血傷害（OGD)之百分比，其計算法如下：保護性％ =(試驗值-OGD) /(正常值-OGD) * 100 此方法說明採用缺氧-再灌氧方法，於培養之海馬回神經元細胞中誘發實驗性絕血之方法。試驗化合物之保護神經效應係針對絕血誘發之神經元細胞傷害及細胞死亡分析。在分析前一天進行下列步驟：取 LoG-Neurobasal [LoG-Neurobasal 含有 NoG-Neurobasal 培養基 (Invitrogen Corp，客戶訂製）加0.5 mM葡萄糖、0.5 mM L-熟酿胺 87005 -42- 1324157 與0.25χ青黴素/鏈黴素]於低氧室中預平衡一夜。取LoG-Neurobasal於正常培養箱（5% C〇2)中預平衡一夜。在正常培養箱（5% C〇2)中，取 Neurobasal/B27AO [Neurobasal/ B27AO 含有 Neurobasal培養基（Invitrogen Corp 目錄編號 21103-049) 與減去A0之2x B27補充物（Invitrogen Corp目錄編號10889-038)， 0.5 mML-麩醯胺與0.25x青黴素/鏈黴素]預平衡一夜。在分析當天進行下列步驟：自低氧室中取出LoG-Neurobasal培養基，使100°/。氮氣流輕輕通過培養基30分鐘，使之完全脫氧化。採用附接無菌玻璃吸管之真空幫浦，自各12孔板中之細胞吸出 Neurobasal/B27m 培養基[Neurobasal/B27m 含有 Neurobasal培養基與 2x B27補充物（Invitrogen Corp 目錄編號 17504-044)及 0.5 mM L-麵醯胺]。以2 ml無葡萄糖-BSS〇 (pH 7.4)(由下列材料製備：143.6 mM NaCl ' 5.4 mM KC1 ' 1.8 mM CaCU、0.8 mM MgS〇4、1 mM NaH2P〇4、26.2 mM NaHC〇3、10 mg/1盼紅與 0.25x P/S)洗務分析板一次。在神經元（自初次培養後10-11天）中補充脫氧之LoG-Neurobasal (各 12-孔分析板中每孔 1 ml) 。此等神經元細胞係依據 Park LC，Calingasan NY，Uchida K，Zhang H，Gibson GE· (2000) ” 培養物中代謝損傷誘發腦細胞型態選擇性之氧化壓力與細胞死亡變化”，J Neurochem 74(1):1 14-124之方法製備。直接添加試驗化合物至各孔中（3種試驗化合物濃度加陽性對照組，各進行三重覆）。取化合物溶於100% DMSO中’ 87005 -43- 1324157 其中DMSO之濃度不可超過0.5%，將分析板加上蓋子後置於低氧室中5小時。正常含氧控制組中，在各孔中添加預先平衡之正常含氧 LoG-Neurobasal培養基，分析板置於正常培養箱中4小時。缺氧4小時後，小心吸出原有培養基，在各孔中添加2 mL 新近通氧（預先平衡）之Neurobasal/B27AO。使用前，培養基於培養箱（5% C02/95% 02)中培養一夜，使培養基再度含氧。再添加相同濃度之相同試驗化合物至相應孔中，分析板置於細胞培養箱（5% C02/95% 02)中，再度通氧20-24小時。通氧20-24小時後，採用下文說明之綠色細胞追蹤劑螢光法計算活的神經元數目。自12孔分析板之各孔中吸出原有之培養基，以預溫熱至 30-37°C之2 ml HBSS (pH 7.4，Invitrogen Corp，目錄編號14170-112) 洗蘇神經元一次。在分析板之各孔中添加已溶於HBSS之lml 2.5 μΜ綠色細胞追縱劑（Cell Tracker Green)(Molecular Probes 目錄編號 2925)與 5 μΜ Hoechst 33342螢光染料。分析板置於室温下之暗室中15分鐘後，以2 ml HBSS洗滌神經元一次。在各孔中添加1 ml HBSS ，採用Cellomics®自動化顯影系統計算活的與死的螢光細胞數目。已發現本發明化合物之保護值匕30%。實例19 中腦動脈閉鎖模式（MCAO) 此研究法採用之動物為雄性Sprague-Dawley大鼠，體重270 87005 -44 - 1324157 至333 g之間（Charles River, NC)。使大鼠於12小時光/暗日夜循環中適應動物試驗設備至少一週。可以自由飲水與攝食。用於阻斷中腦動脈（MCA)源頭之管腔内動脈閉鎖器係由4_ 0號尼龍單絲縫合線切成長25 mm之線段所組成。縫合、線尖端經加熱而呈圓鼓端。為了提高閉鎖器阻斷動脈管腔之有效性，使用1%聚-L-離胺酸懸浮液塗覆，於60°C烘箱中乾燥i 小時。缝合線係購自Ethelon，Somerville, NJ。所使用之化學試劑如下： 1_ 2,3,5-三苯基四唑鑌氯化物或TTC，目錄編號T8877，批號 50K1435 及 PEG400，目錄編號P-3265 ’ 購自 Sigma Chemical

Co.，St. Louis, Missouri。 2. 磷酸鹽緩衝之福馬林。目錄編號245-685，購自Fisher Scientific Co.，Middletown，VA。 3. 自行製造之蒸餾水。 4. 乙醇，目錄編號 E702-3，購自 Aldridge，Milwaukee, WI。採用實質上依Longa, et al.· Stroke, 20:84-91 (1989)所述之方法進行局部性腦絕血之管腔内縫合模式。在左外頸靜脈上插管供投與媒劑或化合物。為了在試驗期間保持大鼠在含水狀態，於MCAO後10、24 及48小時時，在各下腹經皮下注射含5%右旋糖之水溶液與含乳酸鹽之林格氏溶液（各5 ml)。取出符合初閉鎖條件之大鼠（神經性分數為2且體溫>38.5 °C)隨機依序分配至媒劑組或化合物處理組。分配至指定組之大鼠之每日處理將於每天輪流交替。 87005 -45- 於MCAO後6小時，經靜脈内注#大丸劑開始進行化合物或媒劑處理，並採用Infil Disk幫浦持續注射18小時。暫時麻醉大鼠，切開頸背部’冑出頸靜脈導管。投與化合物或媒劑之大丸劑劑量，5分鐘後再啟動輪液幫浦。輸液幫浦係利用一件外套固定在鼠背上。化合物溶液係使用含水：PEG400:乙醇（體積比5:4:丨)之溶液，每天新鮮製備。此模式使用之組別與劑量示於下表2中。表2. t-MCAO模式之化合物齋丨吾

組別 η 處理大丸劑輸液劑量大丸劑輸液劑量* (mg/kg/小時）化合物化合物* * 1 12 媒劑」mg/kg) ---~~~-- _(mg/mL) (mg/mL) 2 10 化合物 35 14 21.4 21 4 *大丸劑劑量體積0.49 mL **輸液速率0.21 mL/小時，輸液時間歷時18小時。修改Bederson等人（1986)所述之方法，由7個連續2, 3,孓三苯基四唑鑌氣化物（TTC)染色之切片進行影像分析’決定梗塞體積。MCAO後3天，以C〇2窒息法殺死大鼠及斷頭。迅速自頭中取出腦部，置於在冰浴中之含PBS之燒杯内3〇分鐘。採用腦組織手術刀片切下厚2毫米之冠狀腦部切片。腦部切片置於含2% TTC之PBS溶液之有標記之培養皿中，於37〇Ct2〇分鐘。TTC使活的腦組織染成紅色，留下絕血區域呈白色。將腦切片浸入10%中性緩衝之福馬林中，於4<>c下至少Μ 小時。所有切片均在殺死後3天内顯影。 87005 -46- 1324157 福馬林固定之TTC染色腦切片（7張連續切片）採用Adobe Photoshop軟體與數位相機捕捉數位影像。將影像輸入IPLab 影像分析程式中。標出皮質梗塞區域（白色區）並測量。使用下列公式計算梗塞體積：梗塞體積=Σ梗塞面積X 2 (各切片之間距離）同樣測定同側與反側半球總體積。水腫體積之計算法為自同側半球體積中扣除反側半球體積。大鼠之處理並未告知進行此分析之科學家。依Bederson等人（1986b)所述，使用記分系統，於MACO後2 、24、48及72小時時，分析大鼠之神經功能。分數範圍為0 至3, 0分表示正常，3分表示嚴重缺陷。採用絕血2小時時之神經學分數作為試驗之閉鎖標準。若大鼠之神經學分數不到至少2分或若得到3分時，則自試驗中淘肽。大鼠之處理並未告知進行神經分析法之研究者。於注射大丸劑後5分鐘及4、22、46與70小時時，自大鼠體内抽出血樣（約0.5 mL)，供進行藥物動力學分析。大鼠經異氟烷醚輕微麻醉。使用23號蝴蝶型輸液組，自外側尾靜脈抽血至含肝素之血液收集管中（容量0.6 mL)。血樣於微離心機中離心4分鐘（設定在10)。排出血漿，置入有標籤之小瓶中，存放在-20°C冷凍庫中。 MCA0後72小時時，使用大鼠吸入C02深度麻醉，並由心臟儘可能抽出血液。血液置入含肝素之血液收集管中（容量 6 mL)。血液於4000 rpm下離心5分鐘（Allegra R6)，分離血漿。收集血漿，置入有標籤之塑膠管中，存放在-20°C冷凍庫中。 87005 -47 - 1324157 採用雙尾史都登氏（Student's) t-試驗，進行媒劑組與處理組之間梗塞區域、血漿葡萄糖、體溫及體重之統計分析。以非變數分析法統計分析神經學分數。數據以平均值tSEM表示。在暫時性局部中風模式中，於MCAO後6小時投與式I化合物之處理對降低梗塞體積極為有效（圖1)。化合物處理組之大鼠之梗塞總體積（88土31 mm3)相較於媒劑對照組(418±_31 mm3, p<0.0001)具有高度顯著之79%降低效果。化合物處理組之大鼠之皮質絕血傷害（32 土20 mm3)相較於媒劑對照組(272 土22 mm3, p<0.0001)亦具有高度顯著之88%降低效果。式I化合物處理組之紋狀體絕血傷害（55：tl2 mm3)相較於媒劑對照組（146土 13 mm3, ρ<0·0001)可以顯著降低62%。最後，式I化合物處理組（21土 10 mm3)相較於媒劑對照組(97土10 mm3, ρ<0.0001)降低79%水腫形成量。接受式I化合物處理之大鼠證實可以隨實驗時間顯著改善神經功能（圖2)。開始投藥後18小時時，即可由化合物處理組相較於媒劑對照組觀察到神經功能之顯著改善（1.3土0.3相對於2上0單位，分別為ρ<0·01)。MCAO後72小時之化合物處理組大鼠之分數仍持續改善，這些大鼠之功能缺陷很少或沒有。反之，媒劑處理組大鼠之神經功能則在實驗期間沒有改善。實例20 抗抑鬱劑之動物模式實質上類似 Porsolt，R.D·，et al.，1977; 229: 327-336: Bourin Μ· 87005 -48 - 1324157 分析本發明化

Fundam Clin Pharmacol 1990; 4: 49-64所述之方法合物於大鼠中之抗抑鬱劑活性。大之泳試驗（抑鬱症就給、將大鼠置入充水之透明圓筒中。 :上其:義為大鼠僅做最小幅之身體動作，以:::::: 筒二：二?時錄再度將大鼠置於圓舰試驗期間均記錄其不動時間。 =天取雄性wi伽大藏（細9品種；⑽·⑽g)置入圓间：刀鐘。手動記錄大鼠之不動時間，其定義為大鼠僅做取小幅之身體動作，以保持頭在水面上之時間。為了在 -天内測試合理之動物數量，在15分鐘試驗期内限於下列二個小試驗期：0-2.5錢（亦即試驗開始時），625_8 75分於 (試驗中期）及U.S-M分鐘（試驗結束時）。過去即發現此:= 可代表動物在整個試驗期之‘效能，。 ' 莖赞11(第二次碑鹼、：第4天時，再將大鼠置入圓筒中5分鐘。整個試驗期間均記錄其不動時間。 H二試驗化合物懸浮於〇.5°/〇甲基纖維素(Methocel)中，經口投藥 (5 ml/kg)。藥物係於第一天（試驗j當天）傍晚（約16:〇〇)，第2與 3天之早晨（約〇8:〇〇)與傍晚及試驗n(第4天）前丨小時整時投藥。一天中兩隻大鼠之處理可以相似或相異，依進行試驗隨機分配而定。以…^⑹^處理組之大鼠或15 mg/kg經口投與狄帕胺(Despiramine 處理組之大鼠分別作為對照組與陽 87005 -49- 1324157 性標準組。已發現本發明化合物在上述模式中具有抗抑鬱活性。實例21 精神***症之動物模式：驚嚇之前脈衝抑制作用 (Pre-pulse Inhibition of Startle (PPD") 與注意力及認知力障礙有關之感覺運動門控受損之現象常見於精神***患者。精神***患者之驚嚇之前脈衝抑制作用（PPI)亦受損。當先有微弱聲音出現後，隨後出現之聲音刺激會抑制驚嚇反射，此時即發生前脈衝抑制作用。PPI 被視為可預測精神***症，具有良好之表面上及結構上有效性之試驗。陽性對照組為氯氮平（clozapine)，係一種可自商品取得之非典型抗精神病藥物（Clozaril®)。氣氮平對D4多巴胺與5-HT2 受體之親和性高，可在動物模式中有效加強PPI反應。依下列方法進行PPI分析法，該方法實質上類似Spooren等人之說明（原型趨代謝性麩胺酸鹽受體5擷抗劑2-甲基-6-(苯乙块V比喊於喔齒類中之似解焦慮效果，j Pharmacol Exp Ther. 295: 1267-1275 (2000))。實驗前至少3天，取雄性C57BL/6 (20-30 g)依每組4隻分置於麥克隆飼養蘢（macr〇l〇n cages)中（42x26x15 cm)。飼養設備均控制溫度與濕度，並加裝人工照明（照光時間6:00 AM至6:00 pM) °動物可自由飲水及攝食。所有動物均沒有接受實驗之經驗。武驗動物先經試驗化合物（3〇、60、100 mg/kg)、氯氮平（30 87005 -50- 1324157 mg/kg)(陽性對照組）或媒劑（〇.5%甲基纖維素）前處理。45分鐘後’小白鼠分置於背景有白色噪音7〇 dB之驚嚇試驗箱中，在播干擾下留置10分鐘。然後在15分鐘内進行56次試驗。驚嚇刺激為40 ms - 12〇 dB -白色噪音，前脈衝為20 ms -白色噪音72、74與78 dB，然後為1〇〇脂之驚嚇。進行8種試驗：前脈衝加驚嚇（每種前脈衝強度有7次試驗）、單獨前脈衝（每種前脈衝強度有7次試驗）、單獨驚嚇（7 次試驗）及無刺激（7次試驗）試驗之間平均間隔15秒（1〇至2〇秒之間）°無刺激試驗中，取得底線測定值。在單獨驚嚇試驗中’測量基礎聽覺驚嚇振幅⑻，及於前脈衝加驚嚇試驗中 ’測量正常^嚇之抑制量，並以相對於基礎驚嚇之百分比表示。單獨前脈衝之試驗中，測量對微弱噪音之反應，作為對照組。根據公式。/qPPI = 100_100 X [(PA2 PPP)/PA2]計算前脈衝抑制百分比。已發現本發明化合物於小白鼠之聽覺驚嚇反射中加強PPI。實例22 邂l焦慮劑之動物模式依下列方法進行解焦慮分析法，該方法實質上類似 Spooren等人（原型驅代謝性麩胺酸鹽受體5擷抗劑2_甲基_6_ (苯乙炔）吡啶於噶齒類中之似解焦慮效果，j Pharmacol Exp

Ther. 295: 1267-1275 (2000))與 Lecci A，Borsini F, Volterra G and Meli A ，（預測小白鼠焦慮症之新穎動物模式之醫藥有效性， Psychopharmacology 101: 255-261 (1990))中之說明。 I.饜力誘發之體溫過高： 87005 -51 - 1324157 壓力謗發體溫過高（SIH)之試驗法係稍微修改擷用自Lecci 等人（1990)之原始說明。使用溫度計（丹麥哥本哈根ELLAB儀器公司），經由已潤滑之熱敏電阻探針（直徑2毫米），*** 直腸内20毫米處，測量直腸溫度至接近0.1°C，同時用手固定小白鼠尾巴基部。探針留置至得到穩定讀數為止（15秒内）。每個麥克隆飼養籠（42 X 26 X 15 cm)内有15隻動物。至少在實驗前24小時，在同一籠動物之皮毛上做記號，以便將來辨識。量取直腸溫度前60分鐘，使同一籠内所有動物依序間隔1分鐘使用試驗化合物處理（劑量：1.3、10或30 mg/kg，經口投藥；注射體積：10 ml/kg)，氯達普賽（〇111〇池&269〇\丨<^)-HC1 (10 mg/kg，經口投藥；Research Biochemicals International)，亦即陽性對照組或媒劑（0.5%甲基纖維素；Animed)。30分鐘整之後，依序自籠中取出小白鼠（仍間隔1分鐘），測量直腸溫度並記錄。一旦記錄後，將動物移至另一個（相鄰）籠内。相關之變數，亦即壓力誘發之體溫過熱之定義為同一籠内先取出6隻小白鼠之直腸溫度中間值與後取出6隻之直腸溫度中間值之δ值。依明確處理組而定，計算這6至8個籠子之 δ值，最後使用這6至8個值之平均值代表。此外，採用第一隻動物之直腸溫度分析該化合物本身對基礎體溫之潛在影響力。 II.大鼠之社交探索試驗：採用成年雄性Sprague-Dawley大鼠（=π原住者"大鼠；350-400 g) 與幼小Lister Hooded大鼠侵入者”大鼠；100-120 g)。試驗前 2週，侵入者大鼠成對分置於籠内，原住者大鼠則個別安置 87005 -52 - 1324157 於麥克隆飼養籠内（42 χ 26 x 15 cm)。所有動物均在同一間屋内。飼養設備為控制溫度與濕度，並加裝人工照明（照光時間6:00AM至6··00 PM)。動物可自由飲水及攝食。所有動物均沒有接受實驗之經驗。試驗動物接受試驗化合物（劑量：0.3、3、10或30 mg/kg) ' 氯達普赛（chlordiazepoxide)-HCl (5 mg/kg，經口投藥；CDZ， Research Biochemicals International, Natick, ΜΑ) ' LiCl (10 ' 30 mg/kg) (作為參考/陽性化合物）或媒劑（〇_5%曱基纖維素）。注射體積為2 ml/kg。侵入者大鼠僅接受口服處理，在投與化合物後1 小時進行試驗。所有觀察結果均在原住者大鼠（如上述）之原來籠内，於照光期（8:00 AM至1:00 PM)進行。籠子地板上鋪有鋸屑。其中一組實驗組或對照組隨機分配到一隻侵入者大鼠與一隻原住者大鼠配成一對。手動記錄侵入者大鼠對原住者大鼠之積極探索行為（嗅、鼻觸、整毛、舔、玩耍）所費之時間卜耗費在社交活動之時間）。並累積計錄5分鐘0 III.架高之十字迷宮試驗：實驗前至少3天，取雄性Sprague-Dawley大鼠（180-220 g)依每組4隻分置於麥克隆飼養籠中（42 χ 26 χ 15 cm)。飼養設備均控制溫度與濕度，並加裝人工照明（照光時間6:00 AM至6:00 PM)。動物可自由飲水及攝食。所有動物均沒有接受實驗之經驗。架高之十字迷宮有兩個開口臂（40 χ 12 cm)及兩個封閉臂 (40 χ 12 χ 20 cm)，均由一個共同中心平台延伸出（12 χ 12 cm)。 87005 -53 - 1324157 〃，·且怨形成十字形，相對兩端之長臂安排類似，此裝置架在底座上離地6G Gm高處。此迷宮由灰色Plexiglas玻璃製成。開放臂上 < 握把周邊有稍微升高之圍籬（〇 25 cm)。依下列方法進行解焦慮分析法，該方法實質上類似Handiey， S.L· /、Mitham S.所述（α腎上腺素激導性受體促效劑與擷抗劑於以”恐懼”刺激行為之迷宮模式中之效應，黯學也㈣㈣邮 Arch Pharmacol 327: M (1984)p大鼠隨機分配至其中一種處理。於試驗前至少1小時將動物自飼養室中移至實驗室。經口投與化合物後，大鼠單獨置於麥克隆飼養蘢内（22 χ 16 χ 14 cm)，60分鐘後，放在中心平台上，面向封閉臂。進行8分鐘試驗，個體之間徹底清潔迷宮。由觀察者坐在接近迷宮處’直接5己綠’並採用下列常用參數：進入開口臂與封閉臂之次數（進入臂内之定義為所有四隻爪均進入臂内）及在開口臂上耗費之時間（不包括中心平台）。取不同處理組之動物X替试驗，於8:3〇 AM至12:30 PM之間，亦即在照光期之前半段時間進行試驗。記錄下列焦慮反射參數：耗費在開口臂上之時間比（開口臂/總時間）、離開第一隻臂前之滯留時間及進入臂内之總次數。本發明化合物於上述動物模式中展現類似解焦慮之效果。實例23 H羞·海默氏症之細胞分析法-神經元存活性貫為上類似 Kienlen-Campard，et al·，J Biol Chem 277:15666 (2002) 所述之方法進行下列分析法。自E 18大鼠胚胎製備海馬回神經元之初級培養物（park et al.，J Neurochem，74:114, 2000)。細 87005 -54- 1324157 胞塗覆在經聚（D-離胺酸）前處理之6-或96-孔培養盤中（4 χ ΙΟ5 個細胞/cm2)或玻離蓋玻片上（1.25 X ΙΟ5個細胞/cm2)，在感染重組腺病毒之前，於活體外，在NEUROBASALTM培養基（補充 2% B-27與0.5 mM L-麵酿胺）中培養6天。在此等條件下，神經元培養物（高達98%神經元）展現高度分化及存活率。重組腺病毒與神經元感染-製備APP695之編碼腺病毒之突變株之方法，增生法與純化法。於活體外6天後，於最少體積之培養基中，依100之感染比例感染神經元培養物4小時。然後將感染培養基換成新鮮培養基3-5天。在此等條件下，至少75%神經元表現重組腺病毒所編碼之蛋白質。細胞存活性-神經元存活性係採用比色MTT分析法測定或使用Cellomics自動影像分析系統進行CellTracker螢光細胞活力分析法。進行核染色時，固定細胞（0.37%曱醛/0.2%戊二醛之磷酸鹽緩衝生理食鹽溶液），於Hoechst 33342染料中（1 pg/ml) 培養30分鐘。

Abeta生產定量法-收集培養基，使用蛋白酶抑制劑處理（1 pg/ml胃蛋白酶抑制素，10 pg/ml抗纖維蛋白溶酶肽，1 mM 苯甲磺醯基氟化物），離心澄清（16,000 χ g，5分鐘，4°C)。取 100 μΐ上澄液定量Abeta。實例24 β澱粉狀蛋白（1-40)生產之抑制作用阿茲海默氏症之特徵為腦中出現細胞外斑點及細胞内神經纖絲纏結。此等斑點之主要蛋白質成分為β殿粉狀蛋白 ("Αβ”）肽，其係自澱粉狀蛋白前體蛋白質（"ΑΡΡ”）裂解而來。 87005 -55- 1324157 細胞株與化合物處理：於人類H4神經膠質瘤細胞中，經同時表現含瑞典突變 (K595N, M596L)之APP695與作為選拔標記物之γρρ之反轉錄病毒載體轉導，構築可以分泌Αβ之穩定細胞株。篩選表現高量YFP之細胞，選拔表現ΑΡΡ695之穩定轉導體。細胞塗覆在含杜氏改良伊格氏培養基（Dulbeccc/s Modified Eagle Medium)(Invitrogen，目錄編號 11965-092)(補充 10%胎牛血清 (FBS)與青黴素/鏈黴素）之96孔板中，每孔80,〇〇〇個細胞。24 小時後，培養基換成含有試驗化合物之新鮮培養基，其中化合物試驗濃度在20 μΜ至10 nM之範圍内，在7個滴定點上進行二重覆。於37°C下，與試驗化合物培養18-24小時後，使用hAp40 ELISA測定上澄液中ΙιΑβ (1-40)濃度。所分泌Αβ之ELISA分析法採用 The Biosource International, Inc. Signal Select™人類 β 澱粉狀蛋白（1ιΑβ40) ELISA(目錄編號KHB3482)定量樣本之培養物上澄液中1ιΑβ40。取針對ΙιΑβ之泌12末端之單株抗體塗覆在微滴定板之孔上。吸取樣本（包括已知ΙιΑβ含量之標準物）加至此等孔中，然後添加針對hAp之1-40序列之免子抗體。採用標記辣根過氧化酶之抗兔子抗體檢測已結合之兔子抗體。排出過量抗兔子抗體後，添加受質溶液，經結合之酵素裂解後，產生顏色。所產生顏色強度與樣本中所含hAp (1-40)濃度成正比。 ELISA分析法如下：取樣本與含有已知濃度ΙιΑβ (1-40)肽之標準物於標準物/樣 87005 -56- 1324157 本稀釋劑中稀釋（Biosource試劑）。添加蛋白酶抑制劑AEBSF 、抗蛋白酶肽、胺肽酵素抑制劑（Bestatin)、E-64、抗纖維素蛋白溶酶肽與胃蛋白酶抑制素A (Calbiochem，蛋白酶抑制劑混合液第III組，目錄編號539134)至所有樣本中，以防止Αβ 肽發生蛋白質分解。添加100 μΐ樣本與標準物至96-孔ELISA 分析板之孔中，於室溫下培養2小時或於4°C下培養一夜。以100 μΐ洗蘇緩衝液（Biosource試劑）洗務孔四次後，添加100 μΐ檢測抗體’分析板於室溫下培養2小時。檢測抗體可以辨識 Μβ(1-40)序歹ij。以100 μΐ洗滌緩衝液洗滌孔四次後，添加100 μΐ標記辣根過氧化酶（HRP)之抗兔子二級抗體。分析板於室溫下培養2 小時。然後以100 μΐ洗滌緩衝液洗滌孔5次，添加100 μΐ安定之發色原。分析板於室溫與黑暗下培養30分鐘。安定之發色原為一種受質溶液，當被已結合之HRP裂解時，會轉呈藍色，因此可於標準微滴定板讀數機中追蹤。然後添加100 μΐ中止反應溶液，使用Molecular Devices SpectraMAX 3 40分析板讀數機，於450 nm下測定孔中顏色強度。典型地，在化合物濃度20 μΜ至10 nM之範圍内，以二重覆測定7個點之劑量反應，分析化合物。由含有已知Αβ肽濃度之標準物產生之標準曲線中計算樣本中Αβ (1-40)濃度。測試本發明化合物3天。每一天均包括Calbiochem γ分泌酶 π抑制劑X"作為對照組。其係已知IC5G為50 ηΜ之可通透細胞之羥乙烯二肽電子等排物。（目錄編號565771)。雖然上文中已說明本發明多項具體實施例，但咸了解吾 87005 -57- 髀實二丨乂51可利用本發明化合物與方法變化形成其他具月且貧施例，因此，或利範圍界定，而m ，明《範圍係由附錄之_請專非由貫例代表之明確具體實施例所界定。【圖式簡單說明】圖1說明式I化合物處理组相較於媒劑對照組，於中腦動脈閉鎖模式(MCAO)中投藥6小時後，降低梗塞總體積、皮質梗塞體積、紋狀體絕血傷害及水腫形成上之效果。圖2說明式I化合物處理組相較於媒劑對照組，大腦之神經功能隨實驗時間之變化。 87005 58·

Claims

1324157 第092121162號專利申請案中文申請專利範圍替換本(99年1月）拾、申請專利範圍】· 一種式I化合物：公告本

或其醫藥上可接受之鹽，其中： w為氮； R係選自氫或氟；及把為cM脂系基團。 2. 根據申請專利範圍第丨項之化合物，其中Ry係選自：甲基 '乙基、環丙基、第三丁基或異丙基。 3. 根據申凊專利範圍第2項之化合物，其中Ry係選自：甲基 0 、環丙基或第三丁基。根據申5月專利範圍第1項之化合物，其中R1為氫。根據申吻專利範圍第1項之化合物，其中R1為氟。種化合物’其係選自下列各物組成之群中： 87005-990128.DOC 1324157

7. 一種西藥上可接受之組合物’其包 8. 第1項之化合物及其醫藥上可接受之載劑：：專：範圍根據申請專利範圍第7項之組合物，A 媒劑。口明兵另包含一種選自下列之醫療劑：治療阿兹海默氏症（AD)、治療帕金森氏症治療多發性硬化（MS)之藥劑、治療氣喘之藥劑、消^劑 '免疫调節劑或免疫抑制劑、神經營養因子、治療中之藥劑、治療心也管疾病之藥劑、抗抑鬱劑、抗精神: 87005-990128.DOC 劑或治療糖尿病之藥劑。 9. 一種抑制生物樣本中GSK-3激酶活性之方法，其包括之步驟為使該生物樣本與 a) 根據申請專利範圍第7項之組合物接觸；或與 b) 根據申請專利範圍第1項之化合物接觸。 10. 根據申請專利範圍第7或8項之醫藥上可接受之組合物或根據申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物，其係用於治療用途，特別是用於抑制患者之GSK_3激酶活性。 11·根據申請專利範圍第7項之醫藥上可接受之組合物，其係用於治療自體免疫疾病、炎症、代謝異常、精神病、糖尿病、新血管形成性疾病、>蛋白質形成異常、神經性或神經變性病變、脊柱傷害、青光眼、亮髮或心血管疾病〇 12’根據申請專利範圍第11項之醫藥上可接受之組合物，其中u疾病病邊或病症係選自下列：過敏、氣喘、糖尿病 '阿茲海默氏症、亨丁頓氏症、帕金森氏症、與AIDS-有關之癡呆症、肌萎縮性側索硬化(ALS，路格威氏症（Lou =ehng s dlsease))、多發性硬化（Ms)、因頭部創傷造成之傷 =神刀裂症、焦慮症、兩極化病變、τ-蛋白質形成異 :脊柱或周邊神經傷害、錢梗塞、錢細胞肥大了月光眼、注意力缺乏異常（ADD)、抑鬱症、睡眠障礙 '再灌流/絕血、中風、·血管新生性病變或禿髮。 13·根據申印專利範圍第12項之醫藥上可接受之組合物，其中該疾病、病變或病症為中風。 " 87005-990128.DOC 1324157 14.根據申5月專利範圍第I?項之邀@ ι / 項之醫樂上可接受之組合物，其中该疾病、病變或病症為阿兹海默氏症。 15·:據申！專利範圍第n項之醫藥上可接受之組合物，宜中該病ι為神經性或神經變性病變。八 16.根據申請專利範圍第7或8 其係用於降低***活動力 ^上可接叉之組合物’ Π.根據申請專利範圍fu項之醫藥上可接受之組合物，其係與選自以下之另一種醫療劑妓、用.療阿茲海默氏症 ()之樂劑、治療帕金森氏症之藥劑、治療多發性硬化 _之樂劑、治療氣喘之藥劑、消炎劑、免疫調節劑或免疫抑制劑、神經營養因子、治療中風之藥劑、治療、血管疾病之藥劑、抗抑鬱劑、抗精神病劑尿二之藥劑。 K病

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