TW201544502A - ２，３，４，６－四取代苯－１，５－二胺衍生物、其製法與醫藥上的用途 - Google Patents

２，３，４，６－四取代苯－１，５－二胺衍生物、其製法與醫藥上的用途 Download PDF

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Abstract

本發明涉及2,3,4,6-四取代苯-1,5-二胺衍生物、其製法與醫藥上的用途。具體地，本發明公開了式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化合物或前藥，及其製備方法和應用，式(I)中各基團的定義詳見說明書。

Description

2,3,4,6-四取代苯-1,5-二胺衍生物、其製法與醫 藥上的用途
本發明涉及醫藥技術領域，特別涉及一種2,3,4,6-四取代苯-1,5-二胺衍生物及其製備方法和作為EGFR酪胺酸激酶抑制劑的應用，以及由其製備的藥物組合物和藥用組合物。
肺癌是全球發病率最高的癌症，在中國肺癌發病率位居所有癌症中第一位，也是中國發病率和死亡率最高的癌症，在中國肺癌病人中，30%病人具有EGFR突變，其中L858R和外顯子19缺失突變占90%以上，這類病人對EGFR抑制劑更為敏感。現有已上市第一代EGFR抑制劑例如厄洛替尼，吉非替尼對這類病人效果良好，能夠使其中60%以上病人腫瘤縮小，明顯延長病人無進展生存期。但絕大多數病人在6~12個月獲得耐藥性，第一代EGFR抑制劑將不再生效，而這類病人目前處於無藥可用狀態。臨床發現對第一代EGFR抑制劑產生耐藥的病人中有50%檢測到EGFR T790M突變。在T790M突變細胞系H1975中第一代EGFR抑制劑，吉非替尼和厄洛替尼，均大於3μM，基本 沒有活性。
目前開發上市的第二代不可逆pan-EGFR抑制劑(Afatinib(BIBW2992))對EGFR突變肺癌病人療效顯著好於第一代EGFR抑制劑。但第二代抑制劑同時也具有很強的野生型EGFR抑制活性，對野生型EGFR的抑制活性顯著高於耐藥T790M突變，病人皮疹等毒副作用嚴重且對耐藥病人療效較差，僅有小部分第一代EGFR抑制劑耐藥病人對這類藥物產生應答。
為了提高對耐藥EGFR T790M突變抑制活性的同時降低對野生型EGFR的抑制活性，開發活性更高、選擇性更好、毒性更低的第三代EGFR突變體選擇性抑制劑具有重要的意義。
本發明的目的在於提供一種新型EGFR酪胺酸激酶抑制劑2,3,4,6-四取代苯-1,5-二胺衍生物，具有較高的EGFR T790M選擇抑制性。
本發明的第一方面，提供一種式(I)所示的化合物、或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥：
式(I)中，Z1、Z2、Z3各自獨立地為CR10或N； R10為氫、羥基、CN、NO2、鹵素(優選為F或Cl)、-NR11R12、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、-CHO、-COC1-10烷基(優選為-COC1-6烷基，更優選為-COC1-3烷基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)、C6-10芳基(優選為C6芳基，如苯基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-OC(O)C1-10烷基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)或第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素(優選為F或Cl)、硝基、C6-10芳基(優選苯基)、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-CHO、-OC(O)C1-10烷 基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)；Y1、Y2各自獨立地為二價C1-3烴基，或Y1或Y2中的伸甲基單元(-CH2-)被-C(RyRx)-、-NRyC(O)-、伸環丙基、-C(O)NRy-、-N(Ry)SO2-、-SO2N(Ry)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Ry)-或-C(O)-置換；其中，Ry、Rx各自獨立地為氫、鹵素(優選F或Cl)、羥基、CN、NO2、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C6-10芳基(優選為苯基)；X為NRz、O或S；Rz為氫、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、鹵代的C1-10烷基(優選為鹵代的C1-6烷基，更優選為鹵代的C1-3烷基)或C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)；m1、m3各自獨立地為0、1或2；m2為0或1；且m1、m2和m3不同時為0；A環為C6-10芳基(如苯環)、3至7員飽和或部分不飽和單環、8至10員飽和或部分不飽和雙環、具有1到3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3至7員飽和或部 分不飽和單雜環、具有1到5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的8至10員飽和或部分不飽和雙雜環、具有1到3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5至6員單環雜芳基環、或具有1到5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的8至10員雙環雜芳基環；Ra、Rb各自獨立地為氫、羥基、CN、NO2、鹵素(優選為F或Cl)、-NR11R12、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、-CHO、-COC1-10烷基(優選為-COC1-6烷基，更優選為-COC1-3烷基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)、C6-10芳基(優選為C6芳基，如苯基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-OC(O)C1-10烷基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)、-S(O)C1-10烷基(優選為-S(O)C1-6烷基，更優選為-S(O)C1-3烷基)、-S(O)C6-10芳基(優選為-S(O)C6芳基，如-S(O)-苯基)、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基(優選為-NHC1-6烷基，更優選為-NHC1-3烷基)、-NHC(O)C1-10烷基(優選為-NHC(O)C1-6烷基，更優選為-NHC(O)C1-3烷基)、-NHSO2C1-10烷基(優選為-NHSO2C1-6 烷基，更優選為-NHSO2C1-3烷基)；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基可未取代或任選地具有1-3個選自下組的取代基：鹵素(優選為F或Cl)、羥基、NO2、C6-10芳基(優選苯基)、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-CHO、-OC(O)C1-10烷基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)；或者Ra、Rb各自獨立地為具有1到4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5至6員單環雜芳基、具有1到5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的8至10員雙環雜芳基(優選為9至10員雙環雜芳基)；其中，所述的5至6員單環雜芳基或8至10員雙環雜芳基可未取代或任選地具有1-5個選自下組的取代基：鹵素(優選為F或Cl)、羥基、CN、NO2、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、鹵代的C1-10烷基(優選鹵代的C1-6烷基，更優選鹵代的C1-3烷基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3 烷氧基)、鹵代的C1-10烷氧基(優選為鹵代的C1-6烷氧基，更優選為鹵代的C1-3烷氧基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-CHO、-OC(O)C1-10烷基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)；n1、n2各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6；R1為氫或C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)；R2、R3、R5各自獨立地為氫、鹵素(優選F或Cl)、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)或C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)；R4為氫，羥基、-OC1-10烷基、CN、NO2、鹵素、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、-CHO、-COC1-10烷基、-COC6-10芳基、C6-10芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基、-N(C1-10烷基)2、-N(C1-10烷基)(C3-8環烷基)、-NHC(O)C1-10烷基、-NHSO2C1-10烷基、或含1或2個氮原子以及0到3個氧或 硫原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環(優選為5至6員飽和或部分不飽和單雜環)；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、3至7員飽和或部分不飽和單雜環為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素(優選為F或Cl)、NO2、CN、羥基、-CH2NR11R12、-NR11R12、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、-CHO、-COC1-10烷基(優選為-COC1-6烷基，更優選為-COC1-3烷基)、-COC6-10芳基(優選為-COC6芳基，如-CO-苯基)、C6-10芳基(優選為C6芳基，如苯基)、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基(優選為-C(O)OC1-6烷基，更優選為-C(O)OC1-3烷基)、-OC(O)C1-10烷基(優選為-OC(O)C1-6烷基，更優選為-OC(O)C1-3烷基)、-SO2C1-10烷基(優選為-SO2C1-6烷基，更優選為-SO2C1-3烷基)、-SO2C6-10芳基(優選為-SO2C6芳基，如-SO2-苯基)、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基(優選為-NHC1-6烷基，更優選為-NHC1-3烷基)、-NHC(O)C1-10烷基(優選為-NHC(O)C1-6烷基，更優選為-NHC(O)C1-3烷基)、-NHSO2C1-10烷基(優選為-NHSO2C1-6烷基，更優選為-NHSO2C1-3烷基)、嗎啉基、四氫吡咯基、哌基、甲基哌基；R6和R7各自獨立地為氫或-CH2NR13R14；其中 ，R13、R14各自獨立地為氫或甲基；或R13、R14和相連的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環；其中，R11、R12各自獨立地為氫、C1-10烷基(更優選為C1-6烷基，最優選為C1-3烷基)、C1-10烷氧基(更優選為C1-6烷氧基，最優選為C1-3烷氧基)、C3-8環烷基(更優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(更優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C6-10芳基(優選為苯基)；或者R11、R12和相連的氮原子共同形成3-6員含氮飽和雜環。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，A環為3至7員飽和或部分不飽和單環、8至10員飽和或部分不飽和雙環、具有1到3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環、具有1到5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的8至10員飽和或部分不飽和雙雜環。
在另一優選例中，A環為單環、雙環、單雜環或雙雜環時，選自下組：3至7員飽和或部分不飽和單環；8至10員飽和或部分不飽和雙環；含1個或2個氮原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環；含1個、2個或3個氮原子的8至10員飽和或部分不飽和雙雜環；含1個或2個氧原子或硫原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環；含1個、2個或3個氧原子或硫原子的8至10員飽和或部分不飽和雙雜環；含1個氮原子和1個氧原子或硫原子的3至7 員飽和或部分不飽和單雜環；含1個或2個氮原子和1個氧原子或硫原子8至10員飽和或部分不飽和雙雜環；含1個硫原子和1個氧原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環；或者含1個硫原子和1個氧原子的8至10員飽和或部分不飽和雙雜環。
在另一優選例中，A環為5至6員重環雜芳基 環或8至10員雙環雜芳基環時，選自下組： 或；其中，Ra1為氫、甲基或乙基。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(II)所示化合物：
式(II)中，n3、n4各自獨立地為0、1、2或3，且n3、n4不同時為0；W1為N或CR15；W2為N、O、S或CR15；R15為氫、羥基、CN、NO2、鹵素(優選為F或Cl)、-NR11R12、C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)、C3-8環烷基(優選為C3-6環烷基)、C3-8環烷氧基(優選為C3-6環烷氧基)、C2-10烯基(優選為C2-6烯基，更優選為C2-4烯基)、C2-10炔基(優選為C2-6炔基，更優選為C2-4炔基)、C1-10 烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基)、C6-10芳基(優選為C6芳基，如苯基)；且當W2為O或S時，R0不存在；R8、R9、R0的定義同上述Ra或Rb的定義；Z1、Z2、Z3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R11、R12、Y1、Y2、X、m1、m2、m3、n1、n2定義如上。
在另一優選例中，所述式(I)化合物中，Y1、Y2各自獨立地為二價C1-3烴基，且Y1或Y2中的伸甲基未被置換。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(VII-1)、式(VII-2)、式(VII-3)、式(VII-4)、式(VII-5)、式(VII-6)、式(VII-7)、式(VII-8)、式(VII-9)、式(VII-10)所示化合物：
上述各式中，Z1、Z2、Z3、R1、R2、R3、R4、 R5、R6、R7、Y1、Y2、X、m1、m2、m3、W1、W2、R0定義如上；R91、R92、R93、R94、R95、R81、R82、R83如R8、R9的定義。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，W1為 CH或N；W2為N、O、S或CH；且當W2為O或S時，R0不存在。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，W1為 CH或N；W2為N或CH。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，W1為 CH；且W2為N、O、S或CH；且當W2為O或S時，R0不存在。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，W1為CH；且W2為N。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(III)所示化合物：
式(III)中，Z1、Z2、Z3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Y2、X、m2、m3、n1、n2、n3、n4、R0定義如上。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(IV)所示化合物：
式(IV)中，Z2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Y2、X、m3、n1、n2、n3、n4、R0定義如上。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(V)所 示化合物：
式(V)中，Z2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、X、m3、n1、n2、n3、n4、R0定義如上。
在另一優選例中，所述式(I)化合物為式(VI)所示化合物：
式(VI)中，Z2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X、m3、n3、n4、R0定義如上。
在另一優選例中，Z2為CR10或N；R10為氫、羥基、CN、NO2、氟、氯、-NR11R12、C1-3烷基、C3-6環烷基、C3-6環烷氧基、C1-3烷氧基、-CHO、-COC1-3烷基、-CO-苯基、苯基、-CONR11R12、-C(O)OC1-3烷基、-OC(O)C1-3烷基、-SO2C1-3烷基、-SO2-苯基或第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、環烷基、苯基、烷氧基為未取代的或被1-3 個選自下組的取代基所取代：氟、氯、硝基、苯基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C3-6環烷基、C3-6環烷氧基、-CONR11R12、-C(O)OC1-3烷基、-CHO、-OC(O)C1-3烷基、-SO2C1-3烷基、-SO2-苯基、-CO-苯基。
在另一優選例中，Z2為CR10，R10為氫、羥基 、NO2、氟、氯、-NH2、-N(CH3)2、C1-3烷基、環丙基、環丙氧基、C1-3烷氧基、-CHO、-COCH3、-CO-苯基、苯基、-CONH2、-CON(CH3)2、-C(O)OCH3、-OC(O)CH3、-SO2CH3、-SO2-苯基或第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、環丙基、烷氧基或苯基為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：氟、氯、硝基、苯基、甲基、甲氧基、環丙基、環丙氧基、-CONH2、-CON(CH3)2、-C(O)OCH3、-CHO、-OC(O)CH3、-SO2CH3、-SO2-苯基、-CO-苯基。
在另一優選例中，Z2為CR10，R10為羥基、NO2 、氟、氯、-NH2、-N(CH3)2、三氟甲基、甲氧基、-CHO、-COCH3、-CONH2、-C(O)OCH3或-OC(O)CH3。
在另一優選例中，R0為氫、羥基、C1-3烷基、 C3-6環烷基、-CHO、-COC1-3烷基、-CO-苯基、苯基、-CONR11R12、-C(O)OC1-3烷基、-SO2C3-3烷基、-SO2-苯基、-S(O)C1-3烷基、-S(O)-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、環烷基、苯基為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：氟、氯、羥基、NO2、苯基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C3-6環烷基、C3-6環烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、-CONR11R12、-C(O)OC1-3烷基、-CHO、-OC(O)C1-3 烷基、-SO2C1-3烷基、-SO2-苯基、-CO-苯基；或R0為具有1到4個獨立選自氮、氧或硫的雜原 子的5至6員單環雜芳基、或為或 ；其中，Ra1為氫、甲基或乙基。
在另一優選例中，R0為氫、羥基、C1-3烷基、環丙基、-CHO、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、苯基、-CONH2、-CON(CH3)2、-C(O)OCH3、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、-S(O)C1-3烷基(優選為-S(O)CH3)、-S(O)-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、羥基、NO2、苯基、甲基、甲氧基、環丙基、環丙氧基、-CONH2、-CON(CH3)2、-C(O)OCH3、-CHO、-OC(O)CH3、-SO2CH3、-SO2-苯基、-CO-苯基；或者R0 選自：吡啶基、或
在另一優選例中，R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；在另一優選例中，R0為C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)；其中，所述的烷基為未取代的或被1個選自下組的取代基所取代：氟、氯。
在另一優選例中，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3)。
在另一優選例中，m3為0或1。
在另一優選例中，n3為1、2或3；n4為1或2。
在另一優選例中，n3為1；n4為1。
在另一優選例中，X為NH、N(C1-3烷基)、O或S。
在另一優選例中，式(VI)化合物中，(i)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯；m3為0；n3為1；n4為1；X為NH、O或S；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3))R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為或；或 (ii)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯； m3為0；n3為3；n4為2；X為O；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3))；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為或；或 (iii)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯；m3為0；n3為2；n4為2；X為NH或O；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3))；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自 獨立地為氫； R4為或；或 (iv)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯；m3為0；n3為1；n4為2；X為O；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3))；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為；或 (v)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯；m3為0；n3為3；n4為1；X為NH或O；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基 ；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3))；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為或；或 (vi)Z2為CR10，R10為三氟甲基、氟或氯；m3為1；n3為1；n4為1；X為O；R0為氫、C1-3烷基、-COC1-3烷基(優選為-COCH3)、-CO-苯基、-SO2C1-3烷基(優選為-SO2CH3)、-SO2-苯基、第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、苯基為未取代的或被1-3個(優選1個)選自下組的取代基所取代：氟、氯、甲基；(較佳地，R0為一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)、-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3)) ；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為
在另一優選例中，式(VI)化合物中，(i)X為NH，m3為0；n3為1；n4為1；Z2為CR10，R10為氟、氯或三氟甲基； R0為-COC1-3烷基(優選-COCH3)或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3)；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫； R4為：；或 (ii)X為O，m3為0或1；n3為1、2或3；n4為1或2；Z2為CR10，R10為氟、氯或三氟甲基；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫；R0為-COC1-3烷基(優選-COCH3)、-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3)或一氟取代的C1-3烷基(優選一氟乙基)；R4為選自下組： 或；或 (iii)X為S，m3為0；n3為1；n4為1；Z2為CR10，R10為氟、氯或三氟甲基；R1為氫；R2為甲氧基；R3、R5、R6和R7各自獨立地為氫；R0為-COC1-3烷基(優選-COCH3)、或-SO2C1-3烷基(優選-SO2CH3)； R4為：
在另一優選例中，式(I)所示化合物，R3、R5各自獨立地為氫或C1-10烷基(優選為C1-6烷基，更優選為C1-3烷基)。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R1為氫。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R2為C1-10烷氧基(優選為C1-6烷氧基，更優選為C1-3烷氧基，最優選為甲氧基)。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R4為氫、-OC1-10烷基、-N(C1-10烷基)2、-N(C1-10烷基)(C3-8環烷基)、含1或2個氮原子以及0、1、2或3個氧或硫原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環。其中，所述烷基、環烷基、3至7員飽和或部分不飽和單雜環可任選地被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素、NO2、CN、羥基、-CH2NR11R12、-NR11R12、C1-6烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、-CHO、-COC1-6烷基、-COC6芳基、C6芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-6烷基、-OC(O)C1-6烷基、-SO2C1-6烷基、-SO2C6芳基、第三丁氧羰基、-NHC1-6烷基、-NHC(O)C1-6烷基、-NHSO2C1-6烷基、嗎啉基、四氫吡咯基、哌基、甲基哌基。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R4為氫，或選自下組：
在另一優選例中，R4為選自下組的基團：
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R6和R7各自獨立地為氫。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R6和R7各自獨立地為氫或-CH2NR13R14，而且，R13、R14各自獨立地為氫或甲基。
在另一優選例中，式(I)所示化合物中，R6和R7各自獨立地為氫或-CH2NR13R14，而且，R13、R14和相連的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環。
較佳地，所述-CH2NR13R14的結構如式(a)所示 (a)；式(a)中，Q為O、S、NC1-10烷基或C(C1-10 烷基)2。
在另一優選例中，所述式(I)化合物選自下組：
本發明第二方面，提供了一種藥物組合物，它 包括如本發明第一方面所述的化合物(如上述式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物、式(VII-1)化合物、式(VII-2)化合物、式(VII-3)化合物、式(VII-4)化合物、式(VII-5)化合物、式(VII-6)化合物、式(VII-7)化合物、式(VII-8)化合物、式 (VII-9)化合物、式(VII-10)化合物，或上述示例化合物)、或其藥學可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或前藥，並且還包括藥學可接受的載體。
通常，本發明化合物或其藥學可接受的鹽、或 其溶劑化物、或其立體異構體、或前藥可以與一種或多種藥用載體形成適合的劑型施用。這些劑型適用於口服、直腸給藥、局部給藥、口內給藥以及其他非胃腸道施用(例如，皮下、肌肉、靜脈等)。例如，適合口服給藥的劑型包括膠囊、片劑、顆粒劑以及糖漿等。這些製劑中包含的本發明的化合物可以是固體粉末或顆粒；水性或非水性液體中的溶液或是混懸液；油包水或水包油的乳劑等。上述劑型可由活性化合物與一種或多種載體或輔料經由通用的藥劑學方法製成。上述的載體需要與活性化合物或其他輔料相容。對於固體製劑，常用的無毒載體包括但不限於甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、纖維素、葡萄糖、蔗糖等。用於液體製劑的載體包括水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可與上述載體形成溶液或是混懸液。
本發明的組合物以符合醫學實踐規範的方式配 製，定量和給藥。給予化合物的“有效量”由要治療的具體病症、治療的個體、病症的起因、藥物的靶點以及給藥方式等因素決定。
本發明第三方面，提供了本發明第一方面所述 的化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其 立體異構體、或前藥在用於製備調控(上調或下調)EGFR酪胺酸激酶活性的藥物，或製備治療EGFR相關疾病的藥物中的應用。
作為優選，所述EGFR相關疾病為癌症，糖尿 病，免疫系統疾病，神經退行性疾病或心血管疾病、使用EGFR調節劑治療期間具有獲得性耐藥性的疾病。
作為優選，所述癌症為非小細胞肺癌、頭頸癌 、乳腺癌、腎癌、胰腺癌、子宮頸癌、食道癌、胰腺癌、***癌、膀胱癌、結腸直腸癌、卵巢癌、胃癌、腦惡性腫瘤包括成膠質細胞瘤等，或它們的任何組合。
作為優選，所述獲得性耐藥性是由EGFR外顯 子20編碼的T790突變引起的或者是包含EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的耐藥性，如T790M。
作為優選，所述非小細胞肺癌是由EGFR突變 引起的，包括敏感型突變(如L858R突變或外顯子19缺失)和耐藥性突變(如EGFR T790M突變)。
在本發明中，EGFR調節劑是指靶向EGFR的小 分子酪胺酸激酶抑制劑，如吉非替尼，厄洛替尼，埃克替尼，拉帕替尼、阿法替尼等。
本發明第四方面，提供了一種藥用組合物，包 括治療有效量的本發明第一方面所述的化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或前藥，以及選自下組的藥物：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、ARRY-334543、EKB-569 、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕尼突單抗、馬妥珠單抗、尼妥珠單抗、紮魯木單抗、帕妥珠單抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX 1041、HSP90抑制劑、CNF2024、坦螺旋黴素、阿螺旋黴素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922或其組合。 除本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或前藥以外，上述藥用組合物中的其他藥物均為本領域技術人員熟知的抗腫瘤藥物。
“治療有效量”是指可對人和/或動物產生功能或活性的且可被人和/或動物所接受的量。
本發明的所述藥物組合物或所述藥用組合物中含有的本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或其前藥的治療有效量優選為0.1mg-5g/kg(體重)。
所述的藥用組合物可用於治療EGFR異常表達的疾病，如癌症，糖尿病，免疫系統疾病，神經退行性疾病或心血管疾病、使用EGFR調節劑治療期間具有獲得性耐藥性的疾病。
所述獲得性耐藥性的疾病是由EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的疾病，或者是包含EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的疾病。
在另一優選例中，所述的EGFR外顯子20編碼的T790為T790M。
本發明的式(I)化合物、或其藥學上可接受的鹽 、或溶劑化物、或其立體異構體、或前藥在某些疾病中可以與其他藥物聯合應用，以達到預期的治療效果。一個聯合應用的例子是用來治療晚期NSCLC。例如，將治療有效量的本發明式(I)所示化合物與mTOR抑制劑聯用(例如雷帕黴素)；或與Met抑制劑(包括Met抗體MetMAb和Met小分子抑制劑PF02341066)聯用；或與IGF1R抑制劑聯用(例如OSI-906)；或與熱休克蛋白抑制劑聯用等。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各 技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。
本發明人經過長期而深入的研究，意外地發現了一類EGFR突變選擇性抑制劑，體外實驗表明其在納摩爾濃度下即可抑制EGFR T790M/L858R雙突變酶和細胞株H1975的增殖，同時對EGFR敏感性突變細胞株HCC827(外顯子19缺失)也有很高的抑制強度，而對野生型EGFR酶和細胞株A431的抑制則相對較弱。因此，此類結構不但可用於EGFR敏感型突變癌症的治療，還適用於目前EGFR-TKI治療中產生繼發性耐藥的病例；同時其突變選擇性大大減小了因抑制野生型EGFR而產生的毒副作用，此 外，該類化合物在正常細胞系(如3T3細胞)中具有較低的細胞毒性，從而大大降低了非特異性毒副作用，是第二代EGFR-TKI的理想替代物。
術語定義
“C1-10烷基”是指具有1至10個碳原子的直鏈或 支鏈的飽和脂族烴基。例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、戊基、己基等。優選為含有1至6個碳原子的烷基，更優選的是含有1至3個碳原子的烷基。
“C2-10烯基”指具有2-10個(較佳地2-6個)碳原 子的直鏈或支鏈的具有碳碳雙鍵(C=C)的不飽和脂族烴基。例如乙烯基、丙烯基、異丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、戊烯基、己烯基等。
“C2-10炔基”指具有2-10個(較佳地2-6個)碳原 子的直鏈和支鏈的具有碳碳三鍵的不飽和脂族烴基。例如乙炔基、丙炔基、正丁炔基、異丁炔基、戊炔基、己炔基等。
“C3-8環烷基”指具有3-8個碳原子的環烷基。環烷基實例有環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。
“C1-10烷氧基”指C1-10烷基-O-。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
“C3-8環烷氧基”指C3-8環烷基-O-。例如環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基等。
“C6-10芳基”是指具有6-10個碳原子的芳香烴基 ，例如苯基、萘基等。
“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
“二價C1-3烴基”是指直鏈或支鏈的伸烷基、伸烯基和伸炔基。其中，“伸烷基”是指二價烷基，例如，伸甲基、伸乙基等；“伸烯基”指二價烯基。“伸甲基被置換”是指二價C1-3直鏈或分支鏈烴鏈中的伸甲基可以被本文所定義的基團所置換。置換後例如，-CH2-S(O)-CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-C(O)NRy-CH2-、-C(O)-CH2-CH2-、-CH2-C(RyRx)-CH2-、-N(Ry)-CH2-CH2-、-C(RyRx)-C(RyRx)-CH2-等。
術語“伸環丙基”結構為：。
“雜芳基環”與“雜芳基”可互換使用，是指具有5到10個環原子，優選5、6、9或10個環原子；環陣列中共用6、10或14個π電子；且除碳原子外還具有1到5個雜原子的基團。術語“雜原子”是指氮、氧或硫。
“5至6員單環雜芳基環”是指含5至6個環原子的單環雜芳基環，例如包括(但不限於)：噻吩環、呋喃環、噻唑環、咪唑環、唑環、吡咯環、吡唑環、***環、四唑環、異唑環、二唑環、噻二唑環、吡啶環、嗒環、嘧啶環、吡環等。
“8至10員雙環雜芳基環”是指含8至10個環原子的雙環雜芳基環，例如包括(但不限於)：苯并呋喃環、苯并噻吩環、吲哚環、異吲哚環、喹啉環、異喹啉環、吲唑環、苯并噻唑環、苯并咪唑環、喹唑啉環、喹啉環、噌 啉環、酞環。
在本發明中，所述5至6員單環雜芳基環或8 至10員雙環雜芳基環可選自下組： 或；其中，Ra1為氫、甲基或乙基。
如本文所用，“部分不飽和”是指含有一個或多個不飽和鍵但不具有完全共軛的π電子系統。
“3至7員飽和或部分不飽和單環”是指含3至7個環原子的飽和的全碳單環或部分不飽和的全碳單環。例如包括(但不限於)：環丙基環、環丁基環、環戊基環、環己烷、環己二烯環、環庚烷、環庚三稀環等。
“8至10員飽和或部分不飽和雙環”是指含8至10個環原子的飽和的全碳雙環或部分不飽和的全碳雙環。“3至7員飽和或部分不飽和單雜環”是指含3至7個環原子且1到3個碳原子被選自氮、氧或硫的雜原子所取代的飽和單環或部分不飽和單環。單雜環的實例包括(但不限於)四氫呋喃環、四氫噻吩環、吡咯烷基環、哌啶環、吡咯啉環、唑烷環、哌環、二氧戊環、嗎啉環。
“8至10員飽和或部分不飽和雙雜環”是指具有8至10個環原子且1到5個碳原子被選自氮、氧或硫的雜原子所取代的飽和雙環或部分不飽和雙環。雙雜環的實例包括(但不限於)四氫喹啉環、四氫異喹啉環、十氫喹啉環。
“含1或2個氮原子以及0到3個氧或硫原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環”是指該單雜環中，1或2 個碳原子被氮原子所置換，且0、1、2或3個碳原子被氧或硫原子所置換。
藥物組合物
術語“本發明的活性物質”或“本發明的活性化 合物”是指本發明式(I)化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或其前藥，其具有顯著耐藥EGFR T790M突變(特別是EGFR T790M/L858R雙突變)抑制活性。
如本文所用，所述“藥學上可接受的鹽”包括藥學可接受的酸加成鹽和藥學可接受的鹼加成鹽。
“藥學上可接受的酸加成鹽”是指能夠保留游離鹼的生物有效性而無其他副作用的，與無機酸或有機酸所形成的鹽。無機酸鹽包括但不限於鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等；有機酸鹽包括但不限於甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、乙醇酸鹽、葡糖酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、谷胺酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和水楊酸鹽等。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。
“藥學可接受的鹼加成鹽”，包括但不限於無機鹼的鹽如鈉鹽，鉀鹽，鈣鹽和鎂鹽等。包括但不限於有機鹼的鹽，比如銨鹽，三乙胺鹽，離胺酸鹽，精胺酸鹽等。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。
如本文所用，式(I)化合物可以存在於一種或多種晶型，本發明的活性化合物包括各種晶型及其混合物。
本發明中提及的“溶劑化物”是指本發明的化合 物與溶劑形成的配合物。它們或者在溶劑中反應或者從溶劑中沉澱析出或者結晶出來。例如，一個與水形成的配合物稱為“水合物”。式(I)化合物的溶劑化物屬於本發明範圍之內。
本發明式(I)所示的化合物可以含有一個或多個 手性中心，並以不同的光學活性形式存在。當化合物含有一個手性中心時，化合物包含對映異構體。本發明包括這兩種異構體和異構體的混合物，如外消旋混合物。對映異構體可以通過本專業已知的方法拆分，例如結晶以及手性層析等方法。當式(I)化合物含有多於一個手性中心時，可以存在非對映異構體。本發明包括拆分過的光學純的特定異構體以及非對映異構體的混合物。非對映異構體可由本專業已知方法拆分，比如結晶以及製備層析。
本發明包括上述化合物的前藥。前藥包括已知 的胺基保護基和羧基保護基，在生理條件下被水解或經由酶反應釋放得到母體化合物。具體的前藥製備方法可參照Saulnier,M.G.；Frennesson,D.B.；Deshpande,M.S.；Hansel,S.B.and Vysa,D.M.Bioorg.Med.Chem.Lett.1994,4,1985-1990；和Greenwald,R.B.；Choe,Y.H.；Conover,C.D.；Shum,K.；Wu,D.；Royzen,M.J.Med.Chem.2000,43,475.。
製備方法
本發明提供了式(I)化合物的製備方法，本發明 中的化合物可以通過多種合成操作容易地製備，這些操作是所屬領域技術人員熟練掌握的。這些化合物的示例性製備方法可以包括(但不限於)下文所述的流程。
本發明式(I)化合物可以參照下述合成路線進行 製備，在具體操作過程中，可以根據需要對方法中的步驟進行擴展或合併。
步驟1：式(I-a)化合物與式(I-b)化合物可通過取 代反應(例如親核取代反應等)或偶聯反應(如Suzuki偶聯等)生成式(I-c)化合物，式(I-a)化合物中的L1和L2為離去基團，包括(但不限於)三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等；醯氧基，如乙醯氧基、三氟乙醯氧基等。
步驟2：式(I-c)化合物可通過取代反應或偶聯反 應與式(I-d)化合物反應生成式(I-e)化合物，例如在一定溫度下，使用合適的催化劑(或含合適的配體)或鹼及適當的溶劑進行。如使用酸催化，催化劑可以是但不限於TFA或對甲苯磺酸。使用Buchwald-Hartwig胺化法，所用的鈀催化劑可以是但不限於Pd2(dba)3，所用的配體可以是但不限於XantPhos(4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽)，所用的鹼可以是但不限於碳酸銫。
步驟3：該硝基化合物轉化為相應的胺基化合物可在酸性條件下，用金屬(可以是但不限於鐵粉，鋅粉)或者氯化亞錫進行還原；或者在鈀碳催化下，加氫還原。
步驟4：該胺基化合物可在鹼性條件下與相應的醯氯縮合成醯胺，或者在縮合劑存在下與相應的羧酸縮合成醯胺。
以上各步驟中的反應均是本領域技術人員已知的常規反應。式(I-a)化合物與式(I-b)化合物可以市購得到，或通過本領域技術人員已知的方法製備。
本發明式(VI)化合物可通過方案1所示的方法製備。
方案1
方案1中，各取代基和基團如說明書中所定義。
步驟1：式(I-a-a)化合物與式(I-b-a)化合物可通過取代反應(例如親核取代反應等)或偶聯反應(如Suzuki偶聯等)生成式(I-c-a)化合物，式(I-a-a)化合物中的L1和L2為離去基團，包括(但不限於)三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等；醯氧基，如乙醯氧基、三氟乙醯氧基等。
步驟2：式(I-c-a)化合物可通過取代反應或偶聯反應與式(I-d-a)化合物反應生成式(I-e-a)化合物，例如在一定溫度下，使用合適的催化劑(或含合適的配體)或鹼及適當的溶劑進行。如使用酸催化，催化劑可以是但不限於TFA 或對甲苯磺酸。使用Buchwald-Hartwig胺化法，所用的鈀催化劑可以是但不限於Pd2(dba)3(三(二亞苄基丙酮)二鈀)，所用的配體可以是但不限於XantPhos(4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽)，所用的鹼可以是但不限於碳酸銫。
步驟3：該硝基化合物I-e-a轉化為相應的胺基化合物可在酸性條件下，用金屬(可以是但不限於鐵粉，鋅粉)或者氯化亞錫進行還原；或者在鈀碳催化下，加氫還原。
步驟4：該胺基化合物I-f-a可在鹼性條件下與相應的醯氯縮合成醯胺，或者在縮合劑存在下與相應的羧酸縮合成醯胺。
方案1中，式(I-a-a)化合物可市購得到，式(I-b-a)化合物可按如下示例性方法1製得。
方法1
步驟1：通過對式(I-b1)化合物進行脫保護得到式(I-b2)化合物，式(I-b1)化合物中的PG為胺基保護基。胺基保護基包括但不限於：第三丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；三甲基甲矽烷基(TMS)和第三丁基二甲基甲矽烷基(TBS)等等。脫保護的方法可參考本領域常規方法。式(I-b1)化合物可市購得到，或通過本領域技術人員已知的方法製備。
步驟2：根據R0的不同，選擇合適方法將式 (I-b2)化合物和式(I-b3)化合物進行醯化、偶聯(如Suzuki偶聯等)等反應生成式(I-b-a)化合物，其中，HX為帶有電負性的親核基團，包括(但不限於)羥基、胺基、巰基。
式(I-c-a)化合物也可按如下方法製得
式(I-b4)化合物可通過將式(I-a-a)化合物與式(I-b1)化合物按方案1中步驟1的類似方法進行製備，式(I-c-a)化合物可以式(I-b4)化合物為原料，按照方案1中方法1的類似方法製備。
本發明式(VI)化合物可通過方案2所示的方法製備。
方案2
方案2中，各取代基和基團如說明書中所定義。
式(I-c-a)化合物可通過取代反應或偶聯反應與 式(I-j-a)化合物反應生成式(VI)化合物，例如在一定溫度下，使用合適的催化劑(或含合適的配體)或堿及適當的溶劑進行。如使用酸催化，催化劑可以是但不限於TFA或對甲苯磺酸。使用Buchwald-Hartwig胺化法，所用的鈀催化劑可以是但不限於Pd2(dba)3(三(二亞苄基丙酮)二鈀)，BINAP((±)-2,2'-雙-(二苯膦基)-1,1'-聯萘)所用的配體可以是但不限於Xantphos(4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽)，所用的堿可以是但不限於碳酸銫。
方案2中，式(I-j-a)化合物可通過如下示例性方 法進行製備：
以式(I-d1)化合物為起始原料，依次經過胺基上保護基反應、胺取代反應、硝基還原反應、醯化反應和胺基脫保護反應來製備式(I-j-a)化合物。上述各步反應均為本領域常規反應。式(I-d1)化合物可市購得到，或通過本領域技術人員已知的方法製備(式(I-j-a)化合物的合成方法可參見WO2013014448A1)。
本發明公開的式(I)化合物以及化合物的製備方 法、藥物組成和治療方案，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進製程參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的產品、方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和範圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
與現有技術相比，本發明的主要優點在於：
(1)本發明化合物對EGFR T790M突變型(特別是EGFR T790M/L858R雙突變型)酶和細胞具有高抑制活性，且對EGFR野生型(EGFR WT)酶和細胞具有低抑制活性，因此具有高選擇抑制性。
(2)本發明化合物對EGFR雙突變型酶和細胞表現高選擇抑制性的同時還具有低非特異性細胞毒性。
(3)與其他已知的EGFR突變抑制劑相比，本發明化合物還顯示出有利的物理性質(例如，較高的水溶性)，有利的毒性特徵(例如較低的hERG阻斷傾向)，有利的代謝特徵(例如，較好的藥代動力學特徵，如生物利用度)。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。
除非另行定義，本文所用的術語與本領域熟練 人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或同等的方法及材料皆可應用於本發明中。
試劑與儀器
1H NMR：Bruker AVANCE-400核磁儀，內標為四甲基矽烷(TMS)；LC-MS：Agilent 1200 HPLC System/6140 MS液質聯用質譜儀(生產商：安捷倫)，管柱Waters XBridge，150×4.6mm，3.5μm。
製備高效液相層析(pre-HPLC)：Waters PHW007，管柱XBridge C18，150×4.6mm，3.5μm。
採用ISCO CombiFlash-Rf75或Rf200型自動過柱儀，Agela 4g、12g、20g、40g、80g、120g一次性矽膠柱。
已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可以購自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)和達瑞化學品等公司。
若無特殊說明，實施例中的反應均在氮氣氛或氬氣氛下進行；實施例中的溶液為水溶液。
實施例中，反應進程的監測可採用薄層層析法(TLC)，化合物純化可採用柱層析。柱層析或TLC所用的展開劑體系可選自：二氯甲烷和甲醇體系、正己烷和乙酸乙酯體系、石油醚和乙酸乙酯體系和丙酮體系等，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節。
DMF：二甲基甲醯胺，DMSO：二甲基亞碸，THF ：四氫呋喃，DIEA：N,N-二異丙基乙胺，EA：乙酸乙酯，PE：石油醚，BINAP：(2R,3S)-2,2'-雙二苯膦基-1,1'-聯萘；NBS：(N-溴代丁二醯亞胺)、NCS：(N-氯代丁二醯亞胺)、Pd2(dba)3：(三(二亞苄基丙酮)二鈀)、Pd(dppf)Cl2：([1,1'-雙(二苯基磷)二茂鐵]二氯化鈀)。
如本文所用，室溫是指約25℃。
化合物a1的製備
步驟a：將反應底物1(10.6g,58mmol)放置於500mL的單口反應瓶中，加入THF/水(100mL/60mL)混合溶液使底物溶解。在室溫下，向攪拌的反應瓶中依次加入氯化銨(15.5g,292mmol)和還原鐵粉(26g,467mmol)，隨後將反應體系加熱至65℃並持續攪拌3小時。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，過濾除去多餘的鐵粉，濾餅用乙酸乙酯淋洗三次。濾液用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得到化合物2(8.0g)，直接用於下一步反應。產率：93%；純度：90%；MS m/z(ESI)：142.0[M+H]+。
步驟b：將化合物2(8.0g,43mmol)放置於500mL的單口反應瓶中，在勻速攪拌下加入濃硫酸(100mL)使 底物溶解。在零下20℃下，向攪拌的反應瓶中緩慢滴加濃硝酸(6.15mL,48mmol)，並保持該溫度攪拌5分鐘。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，倒入冰水中。保持零下20℃冰浴，向反應體系中緩慢加入氫氧化鈉/水溶液(150mL/300mL)，調節pH值至8-9。中和完成後的反應液用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得到化合物a1(8.7g)，直接用於下一步反應。產率：80%；純度：100%；MS m/z(ESI)：187.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 7.34(d,J=7.8Hz,1H),7.04(d,J=13.4Hz,1H),5.25(brs,2H),3.90(s,3H)。
化合物a的製備
步驟1：將4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺a1(11.16 g，60mmol)溶於150mL二氯甲烷，加入二碳酸二第三丁酯(15.60g，72mmol)、三乙胺(12.24g，120mmol)和4-二甲胺基吡啶(0.74g，6mmol)室溫下攪拌反應18小時。通 過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，減壓濃縮反應液，柱層析[PE：EA=80：20]分離純化得到目標產物a2(12.56g，73%)。MS m/z(ESI)：285[M-H]+。
步驟2：將反應底物第三丁基4-氟-2-甲氧基-5- 硝基苯基胺基甲酸第三丁酯a2(11.46g，40mmol)溶於60mL N,N-二甲基乙醯胺，加入N,N,N'-三甲基乙二胺(4.90g，48mmol)，N,N-二異丙基乙基胺(7.74g，60mmol)，加熱至90℃攪拌反應6小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，將反應液冷卻至室溫，倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得目標產物a3(12.51g，85%)。直接用於下一步反應。 MS m/z(ESI)：369[M+H]+。
步驟3：將4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基 )-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基甲酸第三丁酯a3(12g，32.6mmol)溶於200mL甲醇，加入1.0g 10% Pd/C。以氫氣置換空氣後，於室溫下以氫氣球加氫，攪拌反應1小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，經砂芯漏斗抽濾，以少量甲醇洗滌濾餅，將濾液濃縮得到目標產物a4(10.70g，97%)。直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：339[M+H]+。
步驟4：將5-胺基-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲 基)胺基)-2-甲氧基苯基胺基甲酸第三丁酯a4(10.1g，30mmol)和三乙胺(6.12g，60mmol)溶於200mL二氯甲烷，冷卻至0℃，加入丙烯醯氯(3.24g，36mmol)，在氮氣保護 下，室溫攪拌3小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，以飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水順次洗滌，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，經減壓濃縮得到目標產物a5(9.64g，82%)。直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：393[M+H]+。
步驟5：將5-丙烯醯胺基-4-((2-(二甲基胺基) 乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基胺基甲酸第三丁酯a5(9.41g，24mmol)溶解在100mL二氯甲烷中，冷卻到0℃，加入20mL三氟乙酸，在氮氣保護下室溫攪拌18小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，減壓濃縮反應液。將殘留物以300mL二氯甲烷溶解，用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水順次洗滌，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，減壓濃縮得到粗品。經柱層析[DCM：MeOH=10：1]純化得到目標產物N-(5-胺基-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺a(3.26g，46.5%)。MS m/z(ESI)：293[M+H]+。
化合物b的製備
製備方法同化合物a，不同的是將化合物a製法中步驟2中的N,N,N'-三甲基乙二胺換成4-二甲胺基哌啶。
化合物4-a的製備
步驟1：將化合物2a(19.7g，110mmol)，碳酸 銫(65.2g，200mmol)加入到N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷(17.3g，100mmol)的400mL的DMF溶劑中，83℃下劇烈攪拌4小時。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三遍，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，旋乾後得到的粗產品。經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~40：60]純化後得化合物4a-2(25g，88%)。MS m/z(ESI)：286.1[M+H]+。
步驟2：將化合物a1(1.96g，10.5mmol)， Pd2(dba)3(964mg，1.05mmol)，Xantphos(1.219g，2.11mmol)和碳酸銫(6.86g，21.0mmol)加入到化合物4a-2(3g，10.5mmol)的70mL 1,4-二氧六環溶液中。120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌20小時。反應結束後，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~20：80]純化後得化合物4-a(2.86g，62%)。 MS m/z(ESI)：436.2[M+H]+。
化合物5-a的製備
步驟1：將4-二甲胺基哌啶(106mg，0.83mmol) 和碳酸鉀(286mg，2.07mmol)加入到化合物4-a(300mg，0.69mmol)的20mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌4h。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物5a-1(400mg，95%)，MS m/z(ESI)：544.2[M+H]+。
步驟2：將三氟乙酸(3mL)加入到化合物5a-1(1 g，1.84mmol)的30mL的二氯甲烷溶液中，室溫下劇烈攪拌6小時。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，減壓下旋掉多餘的二氯甲烷，加水稀釋，調節pH至鹼性，用二氯甲烷和甲醇(10：1)萃取，將有機相旋乾，得化合物5-a(1.1g，45.8%)。MS m/z(ESI)：444.2[M+H]+。
化合物7-a的製備
步驟1：將化合物1a(10g,54.5mmol)、碳酸鉀(13.7g,99.1mmol)和N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷(8.58g,49.5mmol)置於500mL單口反應瓶中，加入300mL乙腈，加熱至90℃攪拌反應4小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，用乙酸乙酯/水體系萃取三遍，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，濃縮得到粗產品。經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~40：60]分離純化得到目標產物7a-2(11.6g,73.2%)。MS m/z(ESI)：320.1[M+H]+。
步驟2：將反應底物7a-2(500mg,1.56mmol) 溶於20mL二氯甲烷，緩慢加入三氟乙酸(3.5g,30.7mmol)，在室溫下攪拌反應2小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，減壓濃縮反應液得到800mg目標粗產物7a-3，直接用於下一步反應。
步驟3：將反應底物7a-3(800mg，約1.56mmol)溶於25mL二氯甲烷，冷卻至0℃後，加入N,N-二異丙基乙基胺(2.07g,16.02mmol)。攪拌10分鐘後，加入甲基磺醯氯(360mg,3.14mmol)，升至室溫攪拌反應2小時。通過TLC檢測反應進度，待底物反應完全後，加入二氯甲烷25mL稀釋反應液，經水洗，飽和食鹽水洗滌，減壓濃縮得到粗產品。以CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~75：25]分離純化得到目標產物7-a(362mg,77.8%)。MS m/z(ESI)：298.0[M+H]+。
化合物8-a的製備
步驟1：室溫下，向化合物7a-2(640mg，2.0mmol)的1,4-二氧六環(10mL)溶液中滴加鹽酸/1,4-二氧六環(10mL，40mmol)溶液。反應混合物室溫攪拌3小時後，減壓濃縮反應液得486mg化合物8a-1的粗品，直接用於下一步反應。
步驟2：0℃下，向化合物8a-1(440mg，2.0mmol)和三乙胺(810mg，8.0mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液 中滴加乙醯氯(165mg，2.1mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。反應混合物在0℃下攪拌1小時，反應結束後，加二氯甲烷和水並用二氯甲烷萃取。有機相用鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得300mg粗品，粗品經CombiFlash柱層析分離純化得到目標產物8-a(148.8mg，產率57%)。MS m/z(ESI)：262[M+H]+。
化合物14-a的製備
步驟1：將化合物1a(3g，16.36mmol)、(R)-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯(3.1g，16.56mmol)和碳酸銫(8g，24.55mmol)加入30mL乙腈中，反應混合物在80℃下攪拌3小時。用TLC板和LC-MS跟蹤反應。反應結束後，將反應液過濾，用二氯甲烷洗滌，濃縮濾液得粗產品，粗產品經CombiFlash(PE：EA=95：5-80：20)純化得到化合物14a-1(3.31g，產率60.0%)。MS m/z(ESI)：278[M-56+H]+。
步驟2：在0℃下，將三氟乙酸(3.50g,30.70mmol)加入到化合物14a-1(510mg，1.53mmol)的5mL的二氯甲烷溶液中，室溫下劇烈攪拌5小時。反應結束後，將反應液在減壓下蒸乾，得化合物14a-2粗產品831mg，產物直接用於下一步。
步驟3：在0℃下，將N,N-二異丙基乙胺(1.92g, 14.86mmol)加入到化合物14a-2(831mg，1.53mmol)的25mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌30分鐘後加入甲磺醯氯(344mg,3.00mmol)，0℃下劇烈攪拌2小時。反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮，將得到的粗產品經CombiFlash(PE：EA=100：0-50：50)純化得到化合物14-a(302mg，產率70.1%)。MS m/z(ESI)：312[M+H]+。
化合物15-a、16-a、17-a的製備
製備方法同化合物14-a的製備，不同的是將步驟1中(R)-第三丁基-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯換成(S)-第三丁基-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯。MS m/z(ESI)：312[M+H]+。
製備方法同化合物14-a的製備，不同的是將步驟3中的甲磺醯氯換成乙醯氯。MS m/z(ESI)：276[M+H]+。
製備方法同化合物14-a的製備，不同的是將步驟1中的(R)-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯換成(S)-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯，將步驟3中甲磺醯氯換成乙醯氯 。MS m/z(ESI)：276[M+H]+。
化合物18-a至化合物21-a的製備
化合物18-a至化合物21-a的製備方法同化合物14-a的製備，不同的是：製備化合物18-a時，將步驟1中2,4,5-三氯嘧啶換成2,4-二氯-5-氟嘧啶，將步驟3中甲磺醯氯換成乙醯氯。
製備化合物19-a時，將步驟1中2,4,5-三氯嘧啶換成2,4-二氯-5-氟嘧啶，將(R)-第三丁基-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯換成(S)-第三丁基-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯，將步驟3中甲磺醯氯換成乙醯氯。
製備化合物20-a時，將步驟1中2,4,5-三氯嘧啶換成2,4-二氯-5-氟嘧啶。
製備化合物21-a時，將步驟1中2,4,5-三氯嘧啶換成2,4-二氯-5-氟嘧啶，將(R)-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯換成(S)-3-羥基吡咯烷-1-甲酸第三丁酯。
MS[M+H]+：260
MS[M+H]+：260
MS[M+H]+：296
MS[M+H]+：296
化合物22-a的製備
步驟1：將化合物a1(186mg，1mmol)，Pd2(dba)3 (92mg，0.1mmol)，BINAP(93mg，0.15mmol)和碳酸銫(652mg，2mmol)加入到化合物7a-2(320mg，1mmol)的11mL 1,4-二氧六環溶液中。160℃下微波反應20小時。TLC跟蹤反應。反應結束後，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經CombiFlash柱層析[PE：EA=90：10~50：50]純化後得化合物22a-1(185.5mg，產率39.5%)。MS m/z(ESI)：370[M-100+H]+。
步驟2：將4-二甲胺基哌啶(106mg，0.83mmol) 和碳酸鉀(152mg，1.10mmol)加入到化合物22a-1(371mg，0.55mmol)的6mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌1h。 通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到粗產品，經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~85：15]純化後得化合物22a-2(323mg，產率100%)。MS m/z(ESI)：578.3[M+H]+。
步驟3：以化合物22a-2(323mg，0.42mmol) 為原料，參照化合物5-a製備方法的步驟2製備，得216mg化合物22-a。不純化直接下一步。
化合物23-a的製備
步驟1：0℃下，向氫化鈉(220mg，5.49mmol) 的THF溶液中加入(R)-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(550mg，2.75mmol)。反應混合物在0℃下攪拌1小時後，向其中加入化合物1a(500mg，2.75mmol)。反應混合物在0℃下攪拌2小時後再在室溫下攪拌20小時。反應結束後，0℃下加入水淬滅反應。反應液用乙酸乙酯萃取，用飽和氯化鈉溶液和水洗滌，濃縮得粗產品，粗產品經CombiFlash(PE：EA=80：20)純化得到500mg化合物23a-1。MS m/z(ESI)：292[M-56+H]+。
步驟2-3：以化合物23a-1(500mg，1.44mmol)為原料參照化合物14-a的製備方法中的步驟2和3製備，得240mg化合物23-a，MS m/z(ESI)：326[M+H]+。
化合物24-a至化合物26-a的製備
化合物24-a至化合物26-a的製備方法同化合物23-a的製備，不同的是：製備化合物24-a時，將步驟1中(R)-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯換成(S)-3-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯。
製備化合物25-a時，將步驟1中化合物7a-1換 成2,4-二氯-5-氟嘧啶。
製備化合物26-a時，將步驟3中甲磺醯氯換成乙醯氯。
MS[M+H]+：326.0
MS[M+H]+：310.1
MS[M+H]+：290
化合物31-a的製備
步驟1：室溫下，向化合物1a(1.83g，10mmol)和N,N-二異丙基乙胺(2.58g，20mmol)的二氯甲烷(90mL)溶液中滴加3-胺基氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯(1.89g，11mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液。反應混合物室溫下攪拌5小時。反應結束後，加水和二氯甲烷萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮得2.85g粗產品31a-1，不經純化直接下一步反應。MS m/z(ESI)：319[M+H]+。
步驟2：室溫下，向化合物31a-1(638mg，2.0mmol)的1,4-二氧六環(20mL)溶液中滴加鹽酸/1,4-二氧六環(10mL，40mmol)溶液。反應混合物室溫攪拌3小時後，減壓濃縮反應液得680mg化合物31a-2的粗品，直接用於下一步反應。
步驟3：以化合物31a-2為原料，參照化合物 7-a的製備方法中步驟3製備。得化合物31-a。MS m/z(ESI)：297[M+H]+。
化合物32-a的製備
步驟1：以化合物1a和(S)-3-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯為原料，參照化合物31-a製法中的步驟1製備。得化合物32a-1。MS m/z(ESI)：347[M+H]+。
步驟2-3：以化合物32a-1為原料，參照化合物7-a製法中的步驟2、3製備。得化合物32-a。MS m/z(ESI)：325.0[M+H]+。
化合物33-a、34-a的製備
製備方法同化合物31-a的製備，不同的是將步驟3中的甲磺醯氯換成乙醯氯。MS m/z(ESI)：261[M+H]+。
製備方法同化合物32-a的製備，不同的是將步驟1中的(S)-3-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯換成(R)-3-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯。MS m/z(ESI)：325[M+H]+。
化合物35-a的製備
將化合物31a-2(584mg，2.0mmol)、1-溴-2- 氟乙烷(280mg，2.2mmol)和碳酸鉀(1.1g，8.0mmol)的乙腈(40mL)溶液在50℃下封管攪拌過夜。反應混合物加水和乙酸乙酯萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗產品。經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~90：10]分離純化得到目標產物35-a(71mg，產率13.4%)。MS m/z(ESI)：265[M+H]+。
化合物36-a的製備
以化合物32a-2為原料，參照化合物35-a的製備方法製備。得化合物36-a。MS m/z(ESI)：293[M+H]+。
化合物37-a的製備
製備方法參照化合物36-a的製備。不同的是將(S)-3-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯換成(R)-3-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯。MS m/z(ESI)：293[M+H]+。
化合物38-a的製備
步驟1：向4-胺基哌啶-1-甲酸第三丁酯(550mg，2.75mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入化合物1a(500mg，2.75mmol)和碳酸鉀(758mg，5.49mmol)，反應混合物 在90℃下攪拌2小時，反應結束後過濾濃縮。經CombiFlash柱層析[PE：EA=80：20]分離純化得到700mg目標產物38a-1，MS m/z(ESI)：347.2[M+H]+。
步驟2-3：以化合物38a-1為原料，依次參照化 合物7-a的製備方法中步驟2和步驟3進行製備。得化合物38-a。MS m/z(ESI)：325.0[M+H]+。
化合物39-a的製備
將化合物31-a(500mg，1.68mmol)的5mL二 甲基甲醯胺溶液0℃下逐滴加入到鈉氫(80mg，2mmol)的10mL二甲基甲醯胺溶液中，0℃攪拌1小時後，室溫攪拌下逐滴加入碘甲烷(286mg，2mmol)，室溫攪拌3小時。反應結束，加入冰水，二氯甲烷和水萃取，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到粗品，經CombiFlash柱層析純化得到固體化合物39-a(260mg)，直接用於下一步反應。
產率：49.8%，MS m/z(ESI)：311[M+H]+。
化合物40-a的製備
以化合物13e為原料，參照化合物8-a的製備方法中步驟2製備。MS m/z(ESI)：278[M+H]+。
化合物41-a的製備
以化合物13c和2,4-二氯-5-氟嘧啶為起始原料，依次參照化合物13f的製備方法中的步驟3、4和5製備化合物41-a。MS m/z(ESI)：298[M+H]+。
化合物42-a的製備
以化合物41a-2為原料，參照化合物8-a的製備方法中步驟2製備。MS m/z(ESI)：262[M+H]+。
化合物43-a的製備
步驟1：0℃下，向化合物13c(1.6g，8.5mmol)的乙腈(50mL)溶液中加入2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.84g，8.5mmol)和碳酸鉀(2.35g，17mmol)，反應混合物在0℃下攪拌1小時。反應結束後加水淬滅，用乙酸乙酯萃取，濃縮有機相得到粗產品。經CombiFlash柱層析分離純化得到目標產物43a-1(2.5g，產率67%)。MS m/z(ESI)：370[M+H]+。
步驟2-3：以化合物43a-1為原料，參照化合物13f製備方法中步驟4和5製備。MS m/z(ESI)：348[M+H]+。
化合物44-a的製備
步驟1：將化合物1a(1g，5.45mmol)、3-(羥甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸(1g，5.34mmol)和碳酸銫(2.67g，8.19mmol)加入15mL乙腈中，反應混合物80℃下攪拌3小時，反應結束後過濾，用二氯甲烷洗滌，濃縮，經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~80：20]分離純化得到目標產物44a-1(1.06g，產率58.18%)。MS m/z(ESI)：278[M-55]+。
步驟2-3：以化合物44a-1為原料，參照化合物13f製備方法中步驟4和5製備。MS m/z(ESI)：312[M+H]+。
化合物45-a的製備
製備方法同化合物44-a的製備，不同的是將步驟3中的甲磺醯氯換成乙醯氯。MS m/z(ESI)：276[M+H]+。
化合物46-a的製備
以化合物27a-2和化合物b為原料，參考化合 物J-27的製備方法製備得化合物46-a。MS m/z(ESI)：586.3[M+H]+。
化合物47-a的製備
步驟1：在氫氣氛下，將化合物47a-1(5.0g，0.0292mmol)、二甲胺鹽酸鹽(4.77g，0.0584mmol)、2.1gPd/C和2.5mL醋酸加入到100mL甲醇中，氫氣置換後室溫反應48小時。反應結束後過濾，濃縮得粗產品。加飽和NaHCO3和乙酸乙酯萃取，鹽水洗滌，濃縮得目標物47a-2(5.0g，產率85%)。MS m/z(ESI)：201[M+H]+。
步驟2：0℃下，向化合物47a-2(5.0g，0.025mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入HCl/1,4-二氧六環溶液(4M)。反應混合物室溫攪拌3小時。反應結束後濃縮，得目標物47-a(3.5g，82%)。MS m/z(ESI)：173[M+H]+。
化合物48-a的製備
將鋅粉(980mg，15.08mmol)、三甲基氯矽烷(175mg，1.61mmol)、1,2-二溴乙烷(303mg，1.61mmol)依次加入20mL DMF溶液中，氬氣置換後，反應混合物室溫攪拌3分鐘。加入化合物48a-1(3.95g，13.95mmol)的 10mL DMF溶液，室溫攪拌1.5小時。將上述反應液加入到化合物2a(1.6g，10.74mmol)、Pd(dppf)Cl2(393mg，0.54mmol)、碘化亞銅(102mg，0.54mmol)和20mL DMF的混合物中。氬氣置換後100℃封管反應16小時。反應結束後過濾，濃縮，加二氯甲烷溶解，用飽和碳酸氫鈉和鹽水溶液洗滌，濃縮，經CombiFlash柱層析分離純化得到目標產物48-a。MS m/z(ESI)：214[M-55]+。
化合物49-a和50-a的製備
化合物49-a和50-a可參照化合物31-a的方法製備，不同的是將步驟1中的化合物7a-1分別換成2,4-二氯-5-氟嘧啶和2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶。
MS[M+H]+：281
MS[M+H]+：331
化合物51-a和52-a的製備
製備方法同化合物31-a的步驟1。MS m/z(ESI)：204[M+H]+。
製備方法同化合物7-a的製備，不同的是將步驟1中N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷換成3-羥基-3-甲基氮雜環 丁烷-1-甲酸第三丁酯。MS m/z(ESI)：312[M+H]+。
實施例1 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲磺醯基)氮雜環庚烷-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(J-1)的製備
步驟1：將2,4,5-三氯嘧啶1a(2g，10.9mmol)和碳酸銫(10.2g，31.2mmol)加入到4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯(2.24g，10.9mmol)的100mL乙腈溶液中，85℃下劇烈攪拌5小時。反應結束後，濾去不溶物，以乙酸乙酯洗滌濾餅。有機層減壓濃縮，經CombiFlash純化得到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯1b(200mg，5%)。MS m/z(ESI)：306.0[M-56]+。
步驟2：在0℃下，將三氟乙酸(1.89g，16.7mmol)加入到4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯1b(300mg，0.83mmol)的10mL的二氯甲烷溶液中，室溫下劇烈攪拌5小時。反應結束後，將反應液在減壓下蒸乾，得到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環 庚烷1c(380mg)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：262.0[M+1]+。
步驟3：在0℃下，將N,N-二異丙基乙胺(4g， 30.5mmol)加入到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環庚烷1c(400mg，1.53mmol)的12mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌30分鐘後加入甲磺醯氯(350mg，3.05mmol)，0℃下劇烈攪拌2小時。反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮，經CombiFlash純化得到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)-1-(甲基磺醯基)氮雜環庚烷1d(360mg，70%)。MS m/z(ESI)：362.0[M+1]+。
步驟4：將N-(5-胺基-2-((2-(二甲基胺基)乙基)( 甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺a(155mg，0.53mmol)，Pd2(dba)3(49mg，0.05mmol)，BINAP(66mg，0.10mmol)和碳酸銫(345mg，1.06mmol)加入到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)-1-(甲基磺醯基)氮雜環庚烷1d(180mg，0.53mmol)的5mL 1,4-二氧六環溶液中。在微波反應下，160℃下劇烈攪拌30分鐘。反應結束後，過濾，濾液用乙酸乙酯/水體系萃取三次，有機相減壓濃縮後得粗產品，經製備液相分離純化得化合物N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環庚烷-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺J-1(84.24mg)。MS m/z(ESI)：596.3[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 10.12(s,1H),8.75(s,1H),8.29(s,1H),8.26(s,1H),8.25 (s,1H),6.99(s,1H),6.44(dd,J=16.9,10.1Hz,1H),6.23(dd,J=16.9,1.8Hz,1H),5.75(dd,J=10.1,1.7Hz,1H),5.46(dd,J=7.6,3.8Hz,1H),3.83(s,3H),3.39-3.32(m,1H),3.27(t,J=6.3Hz,3H),2.90(d,J=6.0Hz,2H),2.87(s,3H),2.68(s,3H),2.37(t,J=5.6Hz,2H),2.24(s,6H),2.13-2.03(m,1H),1.98-1.79(m,4H),1.72-1.58(m,1H)。
實施例2 4-(2-(5-丙烯醯胺基-4-(4-(二甲基胺 基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(J-2)的製備
步驟1：將2,4-二氯嘧啶2a(10g，67.11mmol) 和碳酸銫(39.8g，122.09mmol)加入到第三丁基-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(12.8g，63.68mmol)的300mL DMF溶液中，80℃下劇烈攪拌8小時。反應結束後，加水稀釋，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，水和飽和氯化鈉洗三次，有機層減壓濃縮後，經CombiFlash純化[PE：EA=100：0~50：50]得到化合物4-(2-氯嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯2b(7.6g，40%)。MS m/z(ESI)：314.1[M+1]+。
步驟2：將化合物N-(5-胺基-2-(4-(二甲基胺基) 哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺b(250mg，0.80mmol) ，Pd2(dba)3(80mg，0.08mmol)，Xantphos(100mg，0.16mmol)和碳酸銫(520mg，1.60mmol)加入到化合物4-(2-氯嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯2b(250mg，0.80mmol)的5mL 1,4-二氧六環溶液中。在微波反應下，160℃下劇烈攪拌30分鐘。反應結束後，過濾，濾液用乙酸乙酯/水體系萃取三次，有機相減壓濃縮後得粗產品，經製備液相分離純化得4-(2-(5-丙烯醯胺基-4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯J-2(34.91mg，7%)。MS m/z(ESI)：596.3[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 9.02(s,1H),8.66(s,1H),8.15(d,J=5.6Hz,1H),7.90(s,1H),6.83(s,1H),6.68(dd,J=17.0,10.2Hz,1H),6.25-6.15(m,2H),5.71(d,J=10.2Hz,1H),5.34(s,1H),3.85(s,3H),3.71(d,J=13.3Hz,2H),3.01(d,J=11.6Hz,4H),2.65(t,J=10.6Hz,2H),2.22(s,6H),2.17(s,1H),1.94(d,J=8.9Hz,2H),1.82(d,J=11.0Hz,2H),1.68(d,J=9.3Hz,2H),1.49(d,J=9.6Hz,2H),1.40(s,9H)。
實施例3 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(J-3)的製備
步驟1：在0℃下，將4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(10g，49.8mmol)加入到氫化鈉(2.4g，59.8mmol)的200mL的THF溶液中，0℃下攪拌1h後，加入2,4,5-三氯嘧啶1a(10g，54.7mmol)，室溫下劇烈攪拌8小時。反應結束後，加水稀釋，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，水和飽和氯化鈉洗三次，有機層減壓濃縮後，經CombiFlash純化[PE：EA=100：0~50：50]得到化合物4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯3a(7.6g，52%)。MS m/z(ESI)：292.0[M+1]+。
步驟2：以4-(2,5-二氯嘧啶-4-基氧基)哌啶-1-甲酸第三丁酯3a(1.5g，4.32mmol)為原料，參照實施例1中的步驟2進行合成，得到化合物2,5-二氯-4-(哌啶-4-基氧基)嘧啶3b(2.4g，100%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：248.0[M+1]+。
步驟3：以2,5-二氯-4-(哌啶-4-基氧基)嘧啶3b (908mg，1.62mmol)為原料，參照實施例1中的步驟3進行合成，得到化合物2,5-二氯-4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶3c(150mg，28%)。MS m/z(ESI)：326.0[M+1]+。
步驟4：以2,5-二氯-4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4- 基氧基)嘧啶3c(130mg，0.40mmol)為原料，參照實施例1中的步驟4進行合成，得化合物N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺J-3(75.60mg，33%)。 MS m/z(ESI)：582.2[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 9.92(s,1H),8.72(s,1H),8.27(d,J=9.5Hz,2H),8.19(s,1H),6.99(s,1H),6.54(dd,J=16.9,10.1Hz,1H),6.26(dd,J=16.9,1.8Hz,1H),5.77(dd,J=10.2,1.7Hz,1H),5.47-5.32(m,1H),3.84(s,3H),3.40-3.34(m,2H),3.03(dt,J=11.8,7.3Hz,4H),2.87(s,3H),2.66(s,5H),2.41(s,6H),2.10-2.00(m,2H),1.84-1.72(m,2H)。
實施例4 N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(J-4)的製備
以化合物2a(10g，67.11mmol)為原料，參照實施例1的方法進行合成，不同的是將實施例1步驟1中 4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯換成4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(12.8g，63.68mmol)，得化合物N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺J-4(93.42mg，33%)。MS m/z(ESI)：548.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.15(s,1H),8.96(s,1H),8.17(d,J=5.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.00(s,1H),6.40(dd,J=16.9,10.0Hz,1H),6.25(td,J=6.6,2.0Hz,2H),5.76(dd,J=10.0,1.9Hz,1H),5.45-5.32(m,1H),3.85(s,3H),3.38(dd,J=11.6,5.6Hz,2H),3.02(t,J=9.1Hz,2H),2.86(d,J=9.0Hz,5H),2.70(s,3H),2.28(t,J=5.7Hz,2H),2.19(s,6H),2.09-2.01(m,2H),1.77-1.66(m,2H)。
實施例5 N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4- 甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(J-5)的製備
以化合物2a(10g，67.11mmol)為原料，參照 實施例1的方法進行合成，不同的是將實施例1步驟1中的4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯換成4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(12.8g，63.68mmol)，將實施例1步驟4中的化合物a換成化合物b(164mg，0.52mmol)，得化合物N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺 醯基)哌啶-4-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(142.64mg，47%)。MS m/z(ESI)：574.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.01(s,1H),8.67(s,1H),8.16(d,J=5.6Hz,1H),7.92(s,1H),6.84(s,1H),6.67(dd,J=16.9,10.1Hz,1H),6.29-6.19(m,2H),5.75(d,J=10.3Hz,1H),5.31(s,1H),3.85(s,3H),3.44-3.35(m,2H),3.33(s,3H),3.01(s,4H),2.87(s,3H),2.66(t,J=10.7Hz,2H),2.23(s,6H),2.20-2.14(m,1H),2.05(d,J=11.2Hz,2H),1.84(d,J=10.4Hz,2H),1.78-1.62(m,4H)。
實施例6 N-(5-(4-(1-苯甲醯基氮雜-3-基氧基 )嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(J-6)的製備
步驟1：將化合物2，4-二氯嘧啶2a(19.7g， 110mmol)，碳酸銫(65.2g，200mmol)加入到N-Boc-3-羥 基氮雜環丁烷(17.3g，100mmol)的400mL的DMF溶劑中，83℃下劇烈攪拌4小時。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三遍，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，旋乾後得到的粗產品。經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~40：60]純化後得化合物3-(2-氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6a(25g，88%)。MS m/z(ESI)：286.1[M+1]+。
步驟2：將化合物4氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺 (1.96g，10.5mmol)，Pd2(dba)3(964mg，1.05mmol)，Xantphos(1.219g，2.11mmol)和碳酸銫(6.86g，21.0mmol)加入到化合物3-(2-氯嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6a(3g，10.5mmol)的70mL 1,4-二氧六環溶液中。 120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌20小時。反應結束後，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~20：80]純化後得化合物3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6b(2.86g，62%)。MS m/z(ESI)：436.2 M+1]+。
步驟3：將N,N,N’-三甲基乙二胺(4.08g，40.0 mmol)和碳酸鉀(13.8g，100mmol)加入到化合物3-(2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6b(14.5g，33.3mmol)的170mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌4h。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機 層，減壓濃縮得到化合物3-(2-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6c(9.2g，54%)，MS m/z(ESI)：518.3[M+1]+。
步驟4：將三氟乙酸(27mL，356.0mmol)加入 到化合物3-(2-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯6c(9.2g，17.8mmol)的250mL的二氯甲烷溶液中，室溫下劇烈攪拌6小時。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，減壓下旋掉多餘的二氯甲烷，加水稀釋，調節pH至鹼性，用二氯甲烷和甲醇(10：1)萃取，將有機相旋乾，得化合物N1-(4-(氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺6d(5.2g，70%)。MS m/z(ESI)：418.2[M+1]+。
步驟5：在0℃下，將與三乙胺(1.01g，10mmol) 加入到化合物N1-(4-(氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺6d(1.4g，1mmol)的10mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌30分鐘後加入苯甲醯氯(140mg，1.2mmol)。 反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮得到化合物(3-(2-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-基)(苯基)甲酮6e(660mg，99%)。產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：522.3[M+1]+。
步驟6：將Pd/C(110mg)加入到化合物 (3-(2-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基-5-硝基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-基)(苯基)甲酮6e(650mg，1mmol)的50mL甲醇溶液中。室溫下，在H2氛圍中劇烈攪拌4小時。反應結束後，過濾，濾液濃縮，得化合物(3-(2-(5-胺基-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-基)(苯基)甲酮6f(630mg，99%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：492.3[M+1]+。
步驟7：在0℃下，將丙烯醯氯(138mg，1.54 mmol)與三乙胺(195mg，1.92mmol)加入到化合物(3-(2-(5-胺基-4-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-2-甲氧基苯基胺基)嘧啶-4-基氧基)氮雜環丁烷-1-基)(苯基)甲酮6f(630mg，1mmol)的10mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌2小時。反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮得到粗產物。經製備液相分離純化得化合物N-(5-(4-(1-苯甲醯基氮雜-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺J-6(70.67mg，13%)。MS m/z(ESI)：545.8[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.14(s,1H),8.93(s,1H),8.22(d,J=5.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.59(d,J=7.1Hz,2H),7.50(t,J=7.3Hz,1H),7.42(t,J=7.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.35(d,J=5.6Hz,1H),6.34-6.27(m,1H),6.18(dd,J=16.9,2.1Hz,1H),5.76-5.66(m,2H),4.50(d,J=25.3Hz,2H),4.35(s,1H), 4.05(s,1H),3.83(s,3H),2.82(d,J=3.9Hz,2H),2.66(s,3H),2.23(s,2H),2.14(s,6H)。
實施例7 N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(苯基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(J-7)的製備
以化合物6b(14.5g，33.3mmol)為原料，參照實施例6的方法進行合成，不同的是將實施例6步驟5中的苯甲醯氯換成苯磺醯氯(210mg，1.2mmol)，化合物N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(苯基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺J-7(44.30mg，7%)。MS m/z(ESI)：582.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.98(s,1H),8.65(s,1H),8.15(s,1H),8.17(d,J=5.6Hz,1H),7.79(m,3H),7.69(t,J=7.5Hz,2H),6.98(s,1H),6.82-6.36(m,1H),6.25(d,J=16.7Hz,1H),6.12(d,J=5.6Hz,1H),5.74(d,J=11.8Hz,1H),5.29(s,1H),4.09(t,J=15.6Hz,2H),3.83(s,3H),3.59(m,2H),2.99(s,2H),2.67(s,3H),2.50-2.14(m,8H)。
實施例8 N-(5-(4-(1-苯甲醯基氮雜-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基 )丙烯醯胺(J-8)的製備
以化合物6b(6.7g，15.4mmol)為原料，參照 實施例6的方法進行合成，不同的是將實施例6步驟3中的N,N,N’-三甲基乙二胺換成4-二甲胺基哌啶(2.37g，18.5mmol)，得化合物N-(5-(4-(1-苯甲醯基氮雜-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺J-8(33.46mg，15%)。MS m/z(ESI)：572.8[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.95(s,1H),8.58(s,1H),8.20(d,J=5.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.65-7.58(m,2H),7.51(t,J=7.3Hz,1H),7.44(t,J=7.4Hz,2H),6.79(s,1H),6.62(dd,J=16.9,10.2Hz,1H),6.33(d,J=5.6Hz,1H),6.17(dd,J=16.9,1.9Hz,1H),5.68(d,J=10Hz,1H),5.63(s,1H),4.49(d,J=19.8Hz,2H),4.33(s,1H),4.03(d,J=7.7Hz,1H),3.82(s,3H),2.95(d,J=12.6Hz,2H),2.69-2.53(m,2H),2.22(s,6H),2.16(t,J=10.9Hz,1H),1.81(d,J=11.1Hz,2H),1.66(d,J=9.6Hz,2H)。
實施例9 N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4- 甲氧基-5-(4-(1-(苯基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(J-9)的製備
以化合物6b(6.7g，15.4mmol)為原料，參照 實施例6的方法進行合成，不同的是將實施例6步驟3中的N,N,N’-三甲基乙二胺換成4-二甲胺基哌啶(2.37g，18.5mmol)，將實施例6步驟5中的苯甲醯氯換成苯磺醯氯(88mg，0.45mmol)，得到化合物N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(苯基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺J-9(78.86mg，34%)。MS m/z(ESI)：608.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.96(s,1H),8.41(s,1H),8.12(s,2H),7.75(m,5H),6.73(d,J=60.1Hz,2H),6.17(d,J=58.5Hz,2H),5.73(d,J=20.8Hz,1H),5.25(s,1H),4.08(d,J=7.2Hz,2H),3.82(d,J=14.9Hz,3H),3.59(s,2H),3.03(s,2H),2.66(s,2H),2.26(s,7H),1.85(s,2H),1.72(s,2H)。
實施例10 N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基 )-4-甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(J-10)的製備
以化合物6b(6.7g，15.4mmol)為原料，參照 實施例6的方法進行合成，不同的是將實施例6步驟3中的N,N,N’-三甲基乙二胺換成4-二甲胺基哌啶(2.37g，18.5mmol)，將實施例6步驟5中的苯甲醯氯換成甲磺醯氯(57mg，0.50mmol)，得到化合物N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺J-10(93.21mg，45%)。MS m/z(ESI)：546.3[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.01(s,1H),8.51(s,1H),8.20(d,J=4.5Hz,1H),8.10(s,1H),6.83(s,1H),6.76-6.59(m,1H),6.30(d,J=5.6Hz,1H),6.26(d,J=16.4Hz,2H),5.74(d,J=9.9Hz,1H),5.45(s,1H),4.23-4.14(t,J=7.8Hz,2H),3.95-3.89(m,2H),3.83(s,3H),3.04(s,2H),3.01(s,3H),2.66(t,J=10.8Hz,2H),2.24(s,7H),1.82(d,J=12.4Hz,2H),1.69(m,2H)。
實施例11 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-11)的製備
以化合物1a(10g，54.5mmol)為原料，參照實施例1的方法進行合成，不同的是將實施例1步驟1中的4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯換成N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷(8.58g，49.5mmol)，得到N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺 醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺J-11(56.2mg，31.5%)。MS m/z(ESI)：553.6[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 12.37(s,1H),9.50(s,1H),9.14(s,1H),8.08(s,1H),7.29-7.31(m,1H),6.63(s,1H),6.37-6.41(d,J=16.4Hz,1H),5.99(s,1H),5.67-5.70(dd,J=11.6Hz,2Hz,1H),4.27-4.31(t,J=8Hz,2H),4.00-4.04(q,J=4.6Hz,2H),3.85(s,3H),3.27-3.29(m,2H),3.07-3.09(m,2H),2.82(s,3H),2.77(s,3H),2.76(s,3H),2.71(s,3H)。
實施例12 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜 環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺甲酸鹽(J-12)的製備
以化合物1a(10g，54.5mmol)為原料，參照實 施例1的方法進行合成，不同的是將實施例1步驟1中的4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯換成N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷(8.58g，49.5mmol)，將實施例1步驟4中的化合物a換成化合物b(160mg，0.50mmol)，得化合物N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺甲酸鹽J-12(81.9mg，30.7%)。MS m/z(ESI)：580.2[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 9.02(s,1H),8.43(s,1H),8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.16(s,1H),6.83(s,1H),6.63-6.70(dd,J=17.2Hz,10.8Hz,1H),6.24-6.29(dd,J=17.2Hz,2Hz,1H),5.72-5.75(d,J=11.6Hz,1H),5.42-5.45(m,1H),4.15-4.19(t,J=8Hz,2H),3.93-3.97(q,J=4.8Hz,2H),3.81(s,3H),3.12-3.16(m,2H),3.02(s,3H),2.66-2.71(t,J=10.8Hz,2H),2.54-2.59(m,1H),2.42(s,6H),1.89-1.92(d,J=11.2Hz,2H),1.72-1.80(m,2H)。
實施例13 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基硫代)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(J-13)的製備
步驟1：將3-碘氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯13a(2g，7.2mmol)和碳酸銫(4.72g，14.4mmol)加入到化合物硫代乙酸(1.1g，14.4mmol)的10mL N,N-二甲基甲醯胺溶液中，70℃下劇烈攪拌4小時。反應結束後，濾去不溶物，以乙酸乙酯洗滌濾餅。有機層減壓濃縮，經CombiFlash純化得到化合物3-(乙醯硫基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯13b(700mg，43%)。MS m/z(ESI)：232[M+H]+。
步驟2：將3-(乙醯硫基)氮雜環丁烷-1-甲酸第 三丁酯13b(0.7g，3.03mmol)和碳酸鉀(0.836g，6.05mmol)加入到10mL甲醇中，50℃下劇烈攪拌2小時。反應結束後，冷卻到室溫，用2M的鹽酸水溶液調pH值至2-3，加水稀釋，用乙酸乙酯/水體系萃取二次，有機層減壓濃縮得化合物3-巰基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯13c(450mg，78%)，不純化直接用於下一步。MS m/z(ESI)：190[M+1]+。
步驟3：將3-巰基氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯 13c(0.45g，2.38mmol)，2,4,5-三氯嘧啶(0.46g，2.5mmol)和碳酸鈉(0.631g，5.96mmol)加入到20mL乙腈中，70℃下劇烈攪拌3小時。反應結束後，冷卻過濾濃縮，經CombiFlash純化得到化合物3-(2,5-二氯嘧啶-4-基硫基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯13d(580mg，72%)。MS m/z(ESI)：337[M+1]+。
步驟4：將3-(2,5-二氯嘧啶-4-基硫基)氮雜環丁 烷-1-甲酸第三丁酯13d(0.58g，1.73mmol)加入到10mL二氯甲烷中，在0℃和攪拌的條件下滴加三氟乙酸(5g，43.9mmol)，回到室溫反應3小時結束，濃縮後得到化合物粗品3-(2,5-二氯嘧啶-4-基硫基)氮雜環丁烷13e(1.5g)，不游離純化直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：237[M+1]+。
步驟5：以化合物13e(1.5g)為原料，參照實施 例1步驟3的方法合成，得到化合物2,5-二氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基硫代)嘧啶13f。MS m/z(ESI)：314 [M+1]+。
步驟6：以化合物13f(314mg，1mmol)和化合 物b(318mg，1mmol)為原料，參照實施例2的步驟2合成，得化合物N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜環丁烷-3-基硫代)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺J-13(89.06mg)。MS m/z(ESI)：596[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ 9.94(s,1H),9.05(s,1H),8.68(s,1H),8.25(s,1H),8.23(s,1H),8.15(s,1H),6.85(s,1H),6.69(dd,J=16.4,10.0Hz,1H),6.28(d,J=16.0Hz,1H),5.75(d,J=11.6Hz,1H),4.44(f,1H),4.08(br,s,2H),3.84-3.72(m,5H),3.40-3.20(m,1H),3.16(d,J=11.6Hz,2H),3.00(s,3H),2.81(d,J=4.8Hz,6H),2.75(t,J=11.6Hz,2H),2.05(d,J=9.6Hz,2H),1.85-2.00(m,2H)。
實施例14 N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基) 胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-(喹啉-3-基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基基)苯基)丙烯醯胺(J-14)的製備
步驟1：將3-溴喹啉(0.31g，1.473mmol)， Pd2(dba)3(0.135g，0.1473mmol)，Xantphos(0.171g，0.2946mmol)和碳酸銫(1.92g，5.69mmol)加入到化合物6d(1.0g，1.473mmol)的50mL 1,4-二氧六環溶液中。120℃下，在 N2氛圍中劇烈攪拌20小時。反應結束後，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經CombiFlash柱層析[PE：EA=100：0~20：80]純化後得化合物14b(0.42g，52.8%)。MS m/z(ESI)：545[M+H]+。
步驟2：以化合物14b(80mg，0.15mmol)為原 料，參照實施例6中步驟6進行製備，得化合物14c的粗產品70mg，不經純化直接下一步。MS m/z(ESI)：515[M+H]+。
步驟3：以化合物14c(70mg，0.11mmol)為原 料，參照實施例6中步驟7進行製備，得到的粗產品經製備液相分離純化得標題化合物J-14(13mg，產率16.9%)。 MS m/z(ESI)：569[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.12(s,1H),9.51(s,1H),8.33(d,J=2.6Hz,1H),8.19(d,J=5.6Hz,1H),7.99-7.92(m,1H),7.65(s,1H),7.60(dd,J=5.9,3.4Hz,1H),7.42(dd,J=6.3,3.3Hz,2H),6.93(s,1H),6.78(s,1H),6.25(d,J=5.6Hz,1H),6.18(d,J=15.6Hz,2H),5.36(s,1H),4.57-4.50(m,2H),4.10(dd,J=8.6,4.0Hz,2H),3.89(s,3H),2.88(s,2H),2.71(s,3H),2.22(s,6H),2.01(s,2H)。
實施例15-19
化合物J-15、J-16和J-17以化合物6d為起始 原料，參照實施例14的方法進行製備，不同的是將步驟1中3-溴喹啉分別換成5-溴-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶、5-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶和3-溴吡啶。
化合物J-18和J-19以化合物5-a為起始原料， 參照實施例14的方法進行製備，不同的是將步驟1中3-溴喹啉分別換成5-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶和5-溴-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶。
實施例20-34
化合物J-20至化合物J-32均以各種5位取代或未取代的2,4-二氯嘧啶與N-Boc-3-羥基氮雜環丁烷為起始原料，參照實施例6的方法進行製備。根據化合物結構的不同，將實施例6中步驟3和步驟5中的N,N,N’-三甲基乙二胺和苯甲醯氯換成相應的胺和醯氯。
化合物J-33、J-34、J-75分別以化合物45-a、 44-a和52-a為原料，與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例2中步驟2。
化合物J-76的製備方法同化合物J-12類似。
實施例35-37
化合物J-35、J-36和J-37均以各種5位氯代或未取代的2,4-二氯嘧啶與4-羥基氮雜環庚烷-1-羧酸第三丁酯為起始原料，參照實施例1的方法進行製備。根據化合物結構的不同，將實施例1中步驟3和步驟4中的甲磺醯氯和化合物a換成相應的甲磺醯氯和化合物b。
實施例38-39
化合物J-38和J-39參照實施例3的方法製備，根據化合物結構的不同，將實施例3中步驟3和步驟4中的甲磺醯氯和化合物a換成相應的乙醯氯和化合物b。
實施例40 (R)-N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基) 哌啶-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-40)的製備
向化合物23-a(109mg，0.38mmol)和化合物a(120mg，0.38mmol)的4mL 1,4-二氧六環溶液中加入Pd2(dba)3(35mg，0.04mmol)、BINAP(47mg，0.08mmol)和碳酸銫(247mg，0.75mmol)。反應混合物140℃下微波反應20分鐘。反應結束後，過濾反應混合物，用二氯甲烷洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經製備液相分離純化得93mg標題化合物J-40。MS m/z(ESI)：582.2[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 10.09(s,1H),8.72(s,1H),8.29(s,1H),8.27(s,1H),8.23(s,1H),6.98(s,1H),6.50-6.36(m,1H),6.25(dd,J=16.9,2.0Hz,1H),5.74(dd,J=10.0,2.0Hz,1H),5.41(s,1H),3.83(s,3H),3.36(d,J=5.4Hz,2H),3.23-3.09(m,2H),2.88(s,5H),2.67(d,J=11.6Hz,3H),2.38(s,2H),2.25(d,J=1.8Hz,6H),1.97-1.88 (m,1H),1.86-1.71(m,2H),1.60(s,1H)。
實施例41-44
化合物J-41、J-42、J-43、J-44分別以化合物23-a、24-a、25-a、26-a、為原料與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例40。
實施例45 (R)-N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基) 吡咯烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-45)的製備
將化合物b(159mg，0.48mmol)，Pd2(dba)3(44 mg，0.048mmol)，Xantphos(42mg，0.073mmol)、碳酸銫(315mg，0.97mmol)和化合物14-a(150mg，0.48mmol)加入到5mL 1,4-二氧六環溶液中。氬氣置換後120℃下封管攪拌過夜。LC-MS監測反應，反應結束後，過濾，用二氯甲烷洗滌，濾液濃縮後得粗產品，經製備液相分離純化 得標題化合物J-45(63.77mg，產率20.7%)。MS m/z(ESI)：594.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 9.00(s,1H),8.49(s,1H),8.26(s,2H),8.23(s,1H),6.82(s,1H),6.66(dd,J=16.9,10.3Hz,1H),6.22(d,J=17.0Hz,1H),5.79(s,1H),5.73(d,J=11.6Hz,1H),3.83(s,3H),3.57(dd,J=12.3,4.4Hz,2H),3.03(d,J=11.2Hz,2H),2.90(s,3H),2.64(d,J=11.0Hz,2H),2.23(d,J=13.0Hz,9H),1.84(d,J=11.3Hz,2H),1.68(d,J=8.9Hz,2H)。
實施例46-52
化合物J-46、J-47、J-48、J-49、J-50、J-51和J-52分別以化合物15-a、16-a、17-a、18-a、19-a、20-a和21-a為原料與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例45。
實施例53 N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-5-(4-(1-(2-氟乙基)氮雜環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-53)的製備
步驟1：將化合物6d(210mg，0.5mmol)，1-溴-2-氟乙烷(75mg，0.6mmol)和碳酸鉀(205mg，1.5mmol)的乙腈(5mL)溶液在50℃下封管攪拌過夜，反應結束後， 用二氯甲烷/水體系萃取三遍，分離出有機層，經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，濃縮。得到化合物53b的粗產品。經CombiFlash柱層析純化後得化合物53b(115mg，產率50%)。MS m/z(ESI)：464[M+H]+。
步驟2-3：以化合物53b為原料，參照實施例6中步驟6和步驟7進行製備，經製備液相分離純化得標題化合物J-53(35mg，產率31%)，MS m/z(ESI)：488[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.02(s,1H),9.38(s,1H),8.17-8.16(d,J=5.6Hz,1H),7.49(s,1H),6.74(s,1H),6.47(s,1H),6.43(s,1H),6.20-6.19(d,J=5.6Hz,1H),5.71-5.68(d,J=11.9Hz,2H),4.52-4.50(t,J=4.9Hz,1H),4.40-4.38(t,J=4.9Hz,1H),3.86(s,3H),3.84-3.80(t,J=8.2Hz,2H),3.41(s,2H),2.93(s,2H),2.85-2.77(m,2H),2.70(s,3H),2.34(s,8H)。
實施例54-55
化合物J-54以化合物22-a為原料，參照實施例53的方法製備。化合物J-55以化合物46-a為原料，依次參照實施例3步驟2和實施例53步驟1方法製備。
實施例56-59
化合物J-56、J-57、J-58和J-59分別以化合物40-a、41-a、42-a和43-a為原料與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例13。
實施例60 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜 環丁烷-3-基胺基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-60)的製備
在氬氣氛圍下，在室溫下，向化合物b(143mg ，0.45mmol)、化合物31-a(135mg，0.45mmol)、Xantphos(52mg，0.09mmol)和碳酸銫(293mg，0.9mmol)的1,4-二氧六環(10mL)溶液中加入Pd2(dba)3(41mg，0.045mmol)，反應混合物在160℃下微波反應15分鐘。反應結束後過濾，減壓濃縮濾液得粗產品，經製備液相分離純化得標題化合物J-60(44.03mg，產率15.6%)。MS m/z(ESI)：579[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.99(s,1H),8.66(s,1H),8.23(s,1H),7.96(s,1H),7.72-7.71(d,J=6.6Hz,1H),7.69(s,1H),6.80(s,1H),6.69-6.62(dd,J 1=10.2Hz,J 2=17.0Hz,1H),6.30-6.26(d,J=16.8Hz,1H),5.73-5.70(d,J=10.2Hz,1H),4.99-4.94(m,1H),4.05-4.01(t,J=8.0Hz,2H),3.96-3.92(t,J=6.9Hz,2H),3.83(s,3H),3.02-2.99(m,5H),2.67-2.62(t,J=10.1Hz,2H),2.26(s,7H),1.85-1.82(d,J=11.1Hz,2H),1.73-1.66(m,2H)。
實施例61-64和實施例73
化合物J-61、J-62、J-63、J-64、J-73和J-74 分別以化合物33-a、49-a、35-a、50-a、39-a和51-a為原料與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例60。
實施例65 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)哌啶 -3-基胺基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(J-65)的製備
向化合物32-a(150mg，0.46mmol)的1,4-二氧 六環溶液中加入化合物b(147mg，0.46mmol)，Pd2(dba)3(43mg，0.046mmol)，BINAP(58mg，0.092mmol)和碳酸銫(301mg，0.922mmol)，在微波反應下，130℃下攪拌25分鐘。反應結束後，過濾，濃縮反應混合物後得粗產品，經製備液相分離純化得標題化合物J-65(28.56mg)。MS m/z(ESI)：607.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.95(s,1H),8.58(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),7.67(s,1H),6.80(s,1H),6.74(d,J=8.3Hz,1H),6.65(dd,J=16.9,10.1Hz,1H),6.23(d,J=16.9Hz,1H),5.72(d,J=11.4Hz,1H),4.28(s,1H),3.84(s,3H),3.47(d,J=7.9Hz,1H),3.35(d,J=11.1Hz,1H),3.03(s,2H),2.83(s,3H),2.76(dd,J=17.4,7.5Hz,2H),2.72-2.58(m,2H),2.40(s,6H),1.88(d,J=10.2Hz,3H),1.64(dd,J=40.4,31.7Hz,6H)。
實施例66-69
化合物J-66、J-67、J-68和J-69分別以化合物34-a、37-a、36-a和38-a為原料與化合物b反應製得，反應步驟和條件參照實施例65。
實施例70 N-(5-(5-氯-4-(1-(甲基磺醯基)氮雜 環丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-基胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌 -1-基)苯基)丙烯醯胺(J-70)的製備
步驟1：將化合物a1(186mg，1mmol)，Pd2(dba)3(92mg，0.1mmol)，Xantphos(90mg，0.15mmol)和碳酸銫(652mg，2mmol)加入到化合物7-a(298mg，1mmol)的4mL 1,4-二氧六環溶液中。160℃下，微波反應20分鐘。反應結束後，過濾，乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮後得粗產品，經CombiFlash柱層析純化後得化合物70b(160mg，產率35.8%)。MS m/z(ESI)：448[M+H]+。
步驟2：將1-甲基哌(72mg，0.72mmol)和碳酸鉀(99.5mg，0.72mmol)加入到化合物70b(160mg，0.36mmol)的3mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌2h。通過TLC檢測反應進度，待底物完全反應後，用乙酸乙酯/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得180mg粗產品化合物70c，不純化直接下一步。MS m/z(ESI)：528[M+H]+。
步驟3-4：以化合物70c(180mg，0.34mmol) 為原料，參照實施例6中步驟6和步驟7進行製備。得標題化合物J-70(74.5mg，產率37%)。MS m/z(ESI)：552[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.01(s,1H),8.43(s,1H),8.31(s,1H),8.29(s,1H),6.85(s,1H),6.61(dd,J=17.0,10.2Hz,1H),6.25(d,J=16.9Hz,1H),5.74(d,J=11.7Hz,1H),5.50-5.38(m,1H),4.25-4.14(m,2H),3.96(dd,J=9.8,4.7Hz,2H),3.83(s,3H),3.03(s,3H),2.86(t,J=4.6Hz,4H),2.52(s,4H),2.26(s,3H)。
實施例71-72
化合物J-71、J-72參照實施例70的方法製備。 不同的是將實施例70步驟2中的1-甲基哌分別換成2-(二甲基胺基)乙醇和化合物47-a。
對比化合物2的製備
以化合物48-a和化合物a1為原料，依次參照化合物4-a、化合物6d和實施例14的方法製備。MS m/z(ESI)：518.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.02(s,1H),9.63(s,1H),8.41(d,J=5.0Hz,1H),8.28(d,J=2.7Hz,1H),7.65(d,J=5.6Hz,2H),6.91(d,J=2.7Hz,1H),6.75(s,1H),6.71(d,J=5.1Hz,1H),6.45(d,J=15.6Hz,2H),5.70(d,J=11.7Hz,1H),4.40-4.35(m,2H),4.26(t,J=6.7Hz,2H),4.19(s,3H),4.09-4.01(m,1H),3.85(s,3H),2.88(s,2H),2.67(s,3H),2.26(s,6H),1.73(s,2H)。
測試例1：對野生型EGFR和突變型EGFR激 酶的活性抑制測試
以下z-lyte測試方法中所用試劑均可購自Invitrogen。
利用z-lyte方法測定待測物對T790M/L858R雙突變型EGFR激酶(Invitrogen，PV4879)、野生型EGFR激酶(Invitrogen，PV3872)。
10μL T790M/L858R激酶反應體系中各組分的工作濃度為：25μM ATP，0.1(或0.08)ng/μL T790M/L858R激酶，2μM Tyr04底物(Invitrogen，PV3193)。加入本發明上述實施例製備的化合物(即待測物)後DMSO的濃度為2%。
10μL野生型EGFR激酶反應體系中各組分的工作濃度為：10μM ATP，0.8ng/μL野生型EGFR激酶，2μM Tyr04底物(Invitrogen，PV3193)。加入待測物後DMSO的濃度為2%。
室溫溶解10mM的藥物儲存液經4% DMSO的水梯度稀釋至終濃度10-0.005μM。每孔中加入2.5μL的待測物溶液以及5μL經反應緩衝液稀釋的T790M/L858R激酶(或野生型EGFR激酶)與Tyr04底物的混合物，再加入2.5μL的ATP啟動反應。其中C1孔用反應緩衝液代替ATP，C2孔不加入任何藥物，C3孔按說明書描述加入磷酸化的底物。在25度搖床避光反應60分鐘後。加入5μL Development Reagent B(Invitrogen，用TR-FRET稀釋緩衝液進行稀釋)，於室溫搖床反應60分鐘。在Victor X5螢光酶標儀 (PerkinElmer)上讀板，測定激發波長為405nm、發射波長為450nm和520nm的光吸收(例如，C3520nm表示C3孔在520nm的讀值)。
抑制率計算方法(參照Invitrogen，PV3193的說明書)如下：1、ER=Coumarin Emission(450nm)/Fluorescein Emission(520nm)
3、抑制率(IR)=(1-(測試化合物的磷酸化率)/(C2的磷酸化率))×100%
用XLFIT 5.0軟體(英國IDBS公司)擬合計算半數抑制濃度IC50。對酶的抑制活性和選擇抑制活性結果參見表1。
由表1可知，本發明的示例化合物在100nM濃 度(部分化合物在10nM以下)以下即可抑制EGFR突變型酶(T790M/L858R)的活性，表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型酶(T790M WT)抑制活性較弱，與陽性對照物BIBW2992(Afatinib)相比，本發明的化合物對EGFR突變型酶具有明顯的選擇抑制活性。並且本發明示例化合物對EGFR突變型酶的選擇抑制活性超過了對比化合物1(具體結構如下所示，並可參見WO2013014448A1)，選擇性最高比對比化合物1提高了21倍。而研究發現將取代基R0換成雜芳基環後，對EGFR突變型酶的選擇抑制活性與對比化合物1相比明顯降低。
測試例2：MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)方法檢測細胞抑制活性
MTT測試方法步驟採用本領域技術人員熟知的方法進行，方法中所用試劑均可市購得到。
首先，移除培養基並加入0.25%的胰酶/EDTA(Gibco，25200-056)。洗一次後，再加入1.5mL胰酶/EDTA消化貼壁細胞，至細胞分離，然後加入3.5mL培養基終止消化。將消化完的細胞懸浮液移至15mL離心管，1300rpm離心3分鐘後棄上清，並用新鮮的培養基懸浮細胞。然後細胞計數，並稀釋細胞至以下濃度：H1975細胞每毫升2.78 萬，A431細胞和NIH3T3細胞每毫升3.33萬。將細胞種入96孔板(BD 3072)，每孔90μL，培養過夜。
A431細胞培養基為：10%FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；NIH3T3細胞培養基為：10%FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；H1975細胞培養基為：10%FBS(Gibco，10099-141)RPMI-1640(Hyclone SH30809.01B)；取20μL 10mM待測化合物，按照如下濃度梯度(2000，666.67，222.22，74.07，24.69，8.23，2.74，0.91μM)稀釋10X藥品，再加入無血清培養基(終濃度為：10，3.333，1.111，0.370，0.123，0.041，0.014，0.005μM)，並每孔加入10μL藥品到細胞培養板內，其中DMSO終濃度為0.5%。
加藥後將細胞放入培養箱，培養72小時後，每孔加入10μL的5mg/mL的MTT(Sigma，M5655)溶液，然後將96孔板放入37℃ 5%CO2培養箱孵育4小時。
再在2000rpm，5min的條件下離心平板，移除上清後，每孔加入150μL DMSO，並在搖床中震盪平板至所有結晶紫溶解。最後使用酶標儀測定492nm光吸收，使用XLFIT 5.0軟體(英國IDBS公司)計算IC50。示例化合物對細胞的抑制活性或選擇抑制活性見表2和表3。
由表2可知，本發明的示例化合物在100nM濃 度及以下(部分化合物在10nM以下)即可抑制H1975細胞的活性，對EGFR突變型細胞(H1975細胞)表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型細胞(A431細胞)表現出較弱抑制活性，與陽性對照物BIBW2992相比，本發明的化合物對EGFR突變型細胞生長具有明顯的選擇抑制活性。並且對EGFR突變型細胞生長的選擇抑制活性均超過了對比化合物1和2。選擇性最高比對比化合物1提高至近10倍。而研究發現將氮雜環直接與嘧啶環連接和/或取代基R0換成 雜芳基環後，對H1975細胞活性和對細胞生長的選擇抑制活性明顯降低。
由表3可知，與陽性對照物對比化合物1相比，本發明的示例化合物對NIH3T3細胞具有較高的IC50值，因此顯示出較小的毒性。
測試例3：EGFR T790M抑制劑細胞活性ELISA法測定
以下方法中的試劑、溶液的配置方法以及細胞處理和裂解液製備步驟、ELISA檢測步驟均按照R&D DYC3570，R&D DYC1095E以及R&D DYC1095BE的說明書進行操作。
一、試劑和溶液
細胞裂解緩衝液：1% NP-40，20mM Tris(pH 8.0)，137mM NaCl，10% glycerol，1mM NaVO3，2mM EDTA。
細胞裂解液：細胞裂解緩衝液+10μg/mL抑肽酶(Aprotinin)(Sigma)，10μg/mL亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)(Sigma)，現配現用。
1x PBS緩衝液：NaCl：0.137M，KCl：0.0027M，Na2PO4-12H2O：0.01M，KH2PO4：0.0015M，pH7.4。
洗滌緩衝液：含有0.05% Tween-20的PBS緩衝液。
檢測抗體稀釋液：20mM Tris，137mM NaCl，0.05% Tween-20，0.1% BSA，pH 7.2-7.4。
封閉液：含有1%BSA的PBS緩衝液。
ELISA試劑盒：R&D DYC3570，R&D DYC1095E和R&D DYC1095BE。
二、H1975細胞
2.1 H1975細胞處理和裂解液製備
(1)將H1975細胞以1×104/孔的密度種到96孔板中，每孔90微升10%FBS,1640培養基，37℃、5% CO2培養過夜。
(2)將待測化合物按照MTT實驗中藥物稀釋方法稀釋，將10μL稀釋後的化合物或稀釋後的DMSO加入到細胞培板的對應孔中，DMSO終濃度為0.5%，37℃、5% CO2培養1小時。以純DMSO處理的細胞培養體系作為細胞對照。
(3)吸掉培養基後加入100μL細胞裂解液，封板模封置於-80℃冰箱中過夜。以細胞裂解緩衝液作為空白對照。
2.2 ELISA檢測步驟
按照R&D DYC1095E或R&D DYC1095BE給定說明書進行操作。
(1)R&D捕獲抗體((DYC1095BE或DYC1095E))用PBS 1：180稀釋，稀釋好的抗體100μL/孔加入ELISA反應板(Corning costar 42592)，25℃搖床包被過夜；(2)360μL洗滌緩衝液洗3次；(3)加入300μL封閉液，25℃搖床孵育2小時 ；(4)360μL洗滌緩衝液洗3次；(5)加入40μL細胞裂解緩衝液和60μL細胞裂解液，25℃搖床孵育2小時；(6)360μL洗滌緩衝液洗3次；(7)檢測抗體用檢測抗體稀釋液以試劑盒說明規定比例稀釋，每孔加入100μL，25℃搖床避光孵育1小時；(8)360μL洗滌緩衝液洗3次；(9)將TMB底物(R&D DY999)中的A試劑和B試劑以1：1進行混合，每孔100μL，25℃搖床避光孵育20分鐘；(10)2N H2SO4每孔加入50μL；(11)用酶標儀讀板(Thermo Multiskan K3)分別測定細胞對照、空白對照以及藥物處理情況下的OD450值和OD570值，並用相同孔的OD450值減去相應OD570值分別得到OD細胞、OD空白和OD藥物處理。
2.3 數據分析
抑制率(%)=100%×(OD細胞-OD藥物處理)/(OD細胞-OD空白)
2.4 將計算得到的抑制率用XLFIT 5.0軟體計算出IC50值，參見表4。
三、A431細胞
3.1 A431細胞的處理和測試步驟
(1)將A431細胞以1×104/孔的密度種到96孔板中，每孔90微升含有10% FBS的DMEM培養基37℃、5% CO2培養過夜。
(2)將A431細胞培養基更換為90微升無血清DMEM培養基，繼續培養過夜。
(3)將待測化合物按照MTT實驗中藥物稀釋方法稀釋，將10μL稀釋後的化合物或稀釋後的DMSO加入到細胞培板的對應孔中，DMSO終濃度為0.5%，37℃、5% CO2培養1小時。然後在除細胞對照孔外的每孔中加入10微升2μg/L的EGF，在細胞孔加入10微升無血清DMEM培養45分鐘；以不加入EGF與藥物處理的細胞作為細胞對照，以不加入藥物的只加入EGF處理的細胞作為EGF對照。
(4)吸掉培養基後加入100μL細胞裂解液，封板模封置於-80℃冰箱中過夜。
3.2 ELISA檢測步驟
參照R&D DYC3570E說明書進行操作。
(1)R&D捕獲抗體(DYC3570E)用PBS 1：180稀釋，稀釋好的抗體100μL/孔加入ELISA反應板(Corning costar 42592)，25℃搖床包被過夜；(2)360μL洗滌緩衝液洗3次；(3)加入200μL封閉液，25℃搖床孵育2小時；(4)360μL洗滌緩衝液洗3次； (5)加入40μL細胞裂解緩衝液和60μL細胞裂解液，25℃搖床孵育2小時；(6)360μL洗滌緩衝液洗3次；(7)檢測抗體用檢測抗體稀釋液以試劑盒說明規定比例稀釋，每孔加入100μL，25℃搖床避光孵育1小時；(8)360μL洗滌緩衝液洗3次；(9)將TMB底物(R&D DY999)中的A試劑和B試劑以1：1進行混合，每孔100μL，25℃搖床避光孵育20分鐘；(10)2N H2SO4每孔加入50μL；(11)用酶標儀讀板(Thermo Multiskan K3)分別測定細胞對照、空白對照以及藥物處理情況下的OD450值和OD570值，並用相同孔的OD450值減去相應OD570值分別得到ODEGF、OD藥物、OD細胞。
3.3 數據分析
抑制率(%)=100%×(ODEGF-OD藥物)/(ODEGF-OD細胞)
3.4 將計算得到的抑制率用XLFIT 5.0軟體計算出IC50值，結果見表4。
從表4可以看出，本發明的示例化合物在100 nM濃度及以下(部分化合物在10nM以下)即可抑制H1975細胞的活性，在細胞層級上對標靶突變型細胞表現出較強的抑制活性，而在細胞層級上對標靶EGFR野生型細胞(A431細胞)表現出較弱抑制活性。與陽性對照物BIBW2992相比，本發明的示例化合物在細胞層級上對標靶細胞具有明顯的的選擇抑制活性。並且與對比化合物1和2相比，在細胞層級上對標靶細胞的選擇抑制活性最高提高至32倍。而研究發現將氮雜環直接與嘧啶環連接和/或取代基R0換成雜芳基環後，對H1975細胞活性和在細胞層級上對標靶細胞的選擇抑制活性提高不大，甚至明顯降低。
從體外酶、細胞生長抑制實驗顯示，本發明化 合物對EGFR突變型酶、細胞表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型酶、細胞表現出較弱抑制活性，因此對EGFR突變株細胞具有較好的選擇性；細胞毒性實驗中對NIH-3T3細胞有極弱的抑制作用，故表現出較低的細胞毒性；因此此類化合物對T790M突變的EGFR有較好的選擇抑制活性和較低的細胞毒性。
測試例4：大鼠或小鼠體內試驗
應用LC/MS/MS法測定了大鼠或小鼠分別灌胃和靜注給予實施例化合物後不同時刻血漿中的藥物濃度，研究本發明化合物在大鼠或小鼠體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特徵。
實驗方案： 試驗動物：健康成年雄性SD大鼠(體重200-300g，6隻，禁食)或雄性CD1小鼠(體重20-30g，18隻，自由飲水和飲食)，由斯萊克公司提供。
給藥方式與劑量：給予SD大鼠足背靜脈給藥(1mg/kg，5mL/kg，5% DMAC(二甲基乙醯胺)，5% Solutol HS 15(聚乙二醇硬脂酸脂15)和90%鹽水和灌胃給藥(20mg/kg，10mL/kg，0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液)；給予CD1小鼠尾靜脈給藥(1mg/kg,5mL/kg，5% DMAC,5% Solutol HS 15和90%鹽水)和灌胃給藥(5mg/kg,10mL/kg，5% DMAC,5% Solutol HS 15和90%鹽水)。
血樣採集：首先對給藥前挑選符合實驗要求的動物，稱重標記。採集血樣前，綁定大鼠或小鼠，每一隻給藥的大鼠在預定的採血時間點(足背靜脈給藥：分別於給藥前，給藥後的0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h採血，共9個時間點；灌胃給藥：分別於給藥前，給藥後的0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h採血，共9個時間點)，通過尾靜脈採血，或經心臟採血(終末採血)約150μL。每一隻給藥的小鼠在預定的採血時間點(尾靜脈給藥於0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24採血，共8個時間點；灌胃給藥：於0.25,0.5,1,2,4,8,24採血，共7個時間點)，通過眼眶採血，或經心臟採血(終末採血)約150μL。血液轉移至預先加入K2EDTA的1.5mL試管中。採完的血樣放在濕冰上，離心5min(2000g,4℃)，取出血漿，整個過程在採血後15min內完成。所有的樣品都需要存放於-70℃冰箱直到樣品分析。
應用LC/MS/MS法測定藥物濃度，本發明部分 實施例化合物在相同劑量和給藥方式下大鼠和小鼠體內的藥代動力學性質參數如表5所示：
從表5可以看出，本發明示例化合物的藥代吸收好，具有明顯的藥代吸收效果，同時表現出良好的生物利用度。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。
惟以上所述者，僅為本發明之實施例而已，當不能以此限定本發明實施之範圍，几是依本發明申請專利範圍及專利說明書內容所作之簡單的等效變化與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。

Claims (14)

  1. 一種式(I)所示的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥： 式(I)中，Z1、Z2、Z3各自獨立地為CR10或N；R10為氫、羥基、CN、NO2、鹵素、-NR11R12、C1-10烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、-CHO、-COC1-10烷基、-COC6-10芳基、C6-10芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基或第三丁氧羰基；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素、硝基、C6-10芳基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-CHO、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、-COC6-10芳基；Y1、Y2各自獨立地為二價C1-3烴基，或Y1或Y2中的伸甲基被-C(RyRx)-、-NRyC(O)-、伸環丙基、 -C(O)NRy-、-N(Ry)SO2-、-SO2N(Ry)-、-S-、-S(O)-、-SO2-、-OC(O)-、-C(O)O-、-O-、-N(Ry)-或-C(O)-置換；其中，Ry、Rx各自獨立地為氫、鹵素、羥基、CN、NO2、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基或C6-10芳基；X為NRz、O或S；Rz為氫、C1-10烷基、鹵代的C1-10烷基或C3-8環烷基；m1、m3各自獨立地為0、1或2；m2為0或1；且m1、m2和m3不同時為0；A環為3至7員飽和或部分不飽和單環、具有1到3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環；Ra、Rb各自獨立地為氫、羥基、CN、NO2、鹵素、-NR11R12、C1-10烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、-CHO、-COC1-10烷基、-COC6-10芳基、C6-10芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、-S(O)C1-10烷基、-S(O)C6-10芳基、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基、-NHC(O)C1-10烷基、-NHSO2C1-10烷基；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、烷氧基為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素、羥基、NO2、C6-10芳基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-CHO、-OC(O)C1-10烷 基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、-COC6-10芳基；或者Ra、Rb各自獨立地為具有1到4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的5至6員單環雜芳基、具有1到5個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的8至10員雙環雜芳基；其中，所述的5至6員單環雜芳基或8至10員雙環雜芳基為未取代的或被1-5個選自下組的取代基所取代：鹵素、羥基、CN、NO2、C1-10烷基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-CHO、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、-COC6-10芳基；n1、n2各自獨立地為0、1、2、3、4、5或6；R1為氫或C1-10烷基；R2、R3、R5各自獨立地為氫、鹵素、C1-10烷基或C1-10烷氧基；R4為氫，羥基、-OC1-10烷基、CN、NO2、鹵素、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、-CHO、-COC1-10烷基、-COC6-10芳基、C6-10芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基、-N(C1-10烷基)2、-N(C1-10烷基)(C3-8環烷基)、-NHC(O)C1-10烷基、-NHSO2C1-10烷基、或含1或2個氮原子以及0到3個氧或硫原子的3至7員飽和或部分不飽和單雜環；其中，所述的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、3至7 員飽和或部分不飽和單雜環為未取代的或被1-3個選自下組的取代基所取代：鹵素、NO2、CN、羥基、-CH2NR11R12、-NR11R12、C1-10烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、-CHO、-COC1-10烷基、-COC6-10芳基、C6-10芳基、-CONR11R12、-C(O)OC1-10烷基、-OC(O)C1-10烷基、-SO2C1-10烷基、-SO2C6-10芳基、第三丁氧羰基、-NHC1-10烷基、-NHC(O)C1-10烷基、-NHSO2C1-10烷基、嗎啉基、四氫吡咯基、哌基、甲基哌基；R6和R7各自獨立地為氫或-CH2NR13R14；其中，R13、R14各自獨立地為氫或甲基；或R13、R14和相連的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環；其中，R11、R12各自獨立地為氫、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、C6-10芳基；或者R11、R12和相連的氮原子共同形成3-6員含氮飽和雜環。
  2. 如請求項1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，R4為氫，或選自下組：
  3. 如請求項1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，所述式(I)化合物為式(II)所示化合物： 式(II)中，n3、n4各自獨立地為0、1、2或3，且n3、n4不同時為0；W1為N或CR15；W2為N、O、S或CR15；R15為氫、羥基、CN、NO2、鹵素、-NR11R12、C1-10烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-10烷氧基、C6-10芳基；且當W2為O或S時，R0不存在；R8、R9、R0的定義同請求項1中Ra或Rb的定義；Z1、Z2、Z3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R11、R12、Y1、Y2、X、m1、m2、m3、n1、n2如請求項1所定義。
  4. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，所述式(I) 化合物為式(III)所示化合物： 式(III)中，Z1、Z2、Z3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Y2、X、m2、m3、n1、n2、n3、n4、R0如請求項3所定義。
  5. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，所述式(I)化合物為式(IV)所示化合物： 式(IV)中，Z2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Y2、X、m3、n1、n2、n3、n4、R0如請求項3所定義。
  6. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，所述式(I) 化合物為式(VI)所示化合物： 式(VI)中，Z2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X、m3、n3、n4、R0如請求項3所定義。
  7. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，R3、R5各自獨立地為氫。
  8. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，R1為氫。
  9. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，R2為甲氧基。
  10. 如請求項3所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，R6和R7各自獨立地為氫。
  11. 如請求項1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，其中，所述式(I)化合物選自下組：
  12. 一種藥物組合物，所述組合物包括請求項1至11中任一項所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥；以及藥學可接受的載體。
  13. 如請求項1至11中任一項所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥在製備調控(上調或下調)EGFR酪胺酸激酶活性或者治療 EGFR相關疾病的藥物中的應用。
  14. 一種藥用組合物，所述藥用組合物包括請求項1至11中任一項所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、其溶劑化物、其立體異構體或其前藥，以及選自下組藥物中的一種或多種：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、ARRY-334543、EKB-569、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕尼突單抗、馬妥珠單抗、尼妥珠單抗、紮魯木單抗、帕妥珠單抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX 1041、HSP90抑制劑、CNF2024、坦螺旋黴素、阿螺旋黴素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922或其組合。
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