TW201204388A

TW201204388A - Anti-Axl antibodies and methods of use

Info

Publication number: TW201204388A
Application number: TW100121293A
Authority: TW
Inventors: Lin Pei; Yan Wu; Xiaofen Ye
Original assignee: Genentech Inc
Priority date: 2010-06-18
Filing date: 2011-06-17
Publication date: 2012-02-01
Also published as: RU2013102225A; CN103080136A; US8853369B2; HK1179636A1; USRE47761E1; KR20130032896A; CA2794731C; MX336001B; JP2013538553A; AR082017A1; RU2577986C2; CA2794731A1; EP3098240B1; EP3098240A3; KR101885388B1; JP5940061B2; CN103080136B; WO2011159980A1; BR112012027995A2; EP2582729A1

Description

201204388 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於抗-Axl抗體及其使用方法。本申請案在35 USC § 119下主張2010年6月18日提出申請之美國臨時申請案第61/356,508號之優先權，其全部内容以引用方式併入本文中。序列表本申請案含有序列表，其以ASCII格式經由EFS-Web呈送且其全部内容以引用方式併入本文中。【先前技術】

Axl係受體酪胺酸激酶之TAM(Tyro3、Axl、及Mer)家族成員（O'Bryan等人，1991 ; Lai等人，1991)。最初，將 Axl 鑑別為血液惡性腫瘤中之轉化基因（(TBryan等人，1991 ; Janssen等人，1991)。Axl或其配體Gas6之失調與各種人類癌症之發病機制有關。在各種人類癌症中已報導Axl之過度表現（Berclaz等人，2001 ; Craven等人，1995 ; Shieh等人，2005 ; Sun等人，2004 ; Ito等人，1999)且與以下疾病有關：在肺中之侵襲及轉移（Shieh等人，2005)、***癌 (Sainaghi等人，2005)、乳癌（Meric等人，2002 ; Zhang等人，2008)、胃癌（Wu等人，2002)、及胰腺癌（Koorstra等人，2009)、腎細胞癌（Chung等人，2003)、以及膠質母細胞瘤（Hutterer等人，2008)。近來，藉由剖析構酸路胺酸信號傳導，在NSCLC之約5%原發性腫瘤中檢測到活化Axl蛋白（Rikova等人，2007)。藉由靶定之化學療法藥物來誘導 156813.doc 201204388

Axl表現，且藥物誘導性Axl表現在急性髓性白血病中賦予化學療法抗性（Hong等人，2008)，以及分別在胃腸道間質瘤（Mehadevan等人，2007)及乳癌（Liu等人，2009)中賦予伊馬替尼（imatinib)及拉帕替尼（Lapatinib)/赫賽':丁 (Herceptin)抗性。其他涉及Axl及抗-Axl抗體之公開案包含 WO 2004/039955 ' WO 2009/063965、2009年 7 月 27 曰提出申請之共同擁有之美國申請案第61/228,915號、WO 2009/062690 ' WO 2004/008147、5,468,634 ° 顯而易見，業内持續需要具有最適於研發用作治療劑之臨床屬性的藥劑。本文所述之本發明可滿足此需要且提供其他益處。本文所引用之所有參考文獻（包含專利申請案及公開案）之全部内容皆以引用方式併入本文中。【發明内容】本發明提供抗-Axl抗體及其使用方法。

在一態樣中，本發明提供結合人類Axl之分離抗體，其中該抗體以$600 pM之親和力結合人類Axl，其中該抗體以 £1 nM之親和力結合小鼠Axl。在一些實施例中，抗體促進. Axl受體下調。在一些實施例中，抗體抑制組成型Axl活化。在一些實施例中，抗體結合包括下列胺基酸序列、基本上由其組成或由其組成之多肽：MAWRCPRMGRVPL AWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTG TLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDE QDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGY 156813.doc 201204388 VG (SEQ ID ΝΟ:111)。在其他實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係人類抗體、人類化抗體、或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係結合Axl之抗體片段》在一些實施例中，抗體係人類抗體。在一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括 (a)包括 GFXiXzXsXJsXsX^ 之 HVR-H1，其中乂1係3或 T; X2係 L、F 或 V ; X3係 S、T、或 R ; X4係 G 或 S ; X5係 S、Η、 Τ或 I ; 乂6係贾或 G ; Χ7 係 I或 L (SEQ ID NO:112) ; (b)包括 X1X2IX3PX4X5X6X7X8X9X10YYADSVKG 之 HVR-H2，其中或 A ; X2係 W 或 G ; X3係 N、S、A 或 P ; X4係 Y、A 或 V ; X5係 R、G、或 S ; X6係 G、R 或 S ; X7係 Y、S、H或 Y ; Χ8係 A、Τ、或P(SEQ ID ΝΟ:113);及/或包括XAJXJXj X5X6X7X8X9X10YYADSVKG之 HVR-H2，其中 X1#G 或 A ; X2係 w 或 G ; X3 係 N、S、A 或 P ; X4係 Y、A 或 V ; X5係 R、 G、或 S ; X6係 G、R或 S ; X7係 Y、S、H 或 Y ; X8係 A、T、或P ; X9係任一胺基酸或不存在；x1Q係任一胺基酸或不存在（SEQ ID NO:166); (C)包括 ARXaAsXdXsXeXAsXA,。 XUX12X13MDY之 HVR-H3，其中或 W ; X2係 Y 或 R ; X3 係 S、N 或 P ; X4係 G、D、或 L ; X5 係 W 或 S ; X6係 G、 R、A、或S ; X7係G或S ; X8係S或不存在；X9係S、Y或不存在；又1()係V、I或不存在；又^系G或不存在；父12係γ或不存在；Xi3係A、E或不存在（SEQ ID NO: 114) ; (d)包括 RASQX1X2X3X4XsX6A 之HVR-L1，其中Xj、D、I或 S ; X2 156813.doc 201204388 係V或I ; X3係s、G或R ; X4係Τ、I、N或R ; X5係A或S ; X6 係 V 或 L (SEQ ID NO:115) ; (e)包括 XiASXzLXJ 之 HVR-L2，其中XjS、A、或V ; X2係 F、N或S ; X3係Y或 A (SEQ ID NO:116);及（f)包括 QQXiXsXsXAXsXsT 之 HVR-L3，其中或 A ; X2係 Y、K 或 N ; X3 係 T、S、 Y、M、R或 A ; X4係T、N、S、或F ; X5係P或 R ; 、 Y、S 或 L (SEQ ID NO:117)。在另一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括（a)包括 GFXJ2X3GX4WIH 之HVR-H1，其中Χι係 T或 S， X2係 F 或 L，X3係 T或 S，X4係 Η、S或 T (SEQ ID NO:118); (b)包括 GWIX/YX2X3X4X5YYADSVKG 之 HVR-H2，其中 XHSS、N 或 A ; X2係 G、R或 S ; X3係 G 或 R ; X4係 S、Y或 Η ; X5係 Τ、A或 P (SEQ ID NO:119) ; (c)包括 AREYX】X2 WX3X4SX5X6GYX7MDY 之 HVR-H3，其中又1係8、N或 P ; X2係 G 或 D ; X3 係 G、R、或 A ; X4係 G 或 S ; X5 係 S 或 Y ; X6 係 V 或 I ; X7 係 A 或 E (SEQ ID NO: 120);及（d)包括 QQSYXiXzXaXJ之 HVR-L3，其中、S或Y ; X2係 T、 N、S 或 F ; X3係 P或 R ; X4係 P、Y或 S (SEQ ID NO:121)。在另一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其包括（a)包括 SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3、（b)包括SEQ ID ]^0:12之胺基酸序列之1^11丄3、及（(〇包括8£()1〇1^0:8之胺基酸序列之HVR-H2。

在另一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其包括（a)包括 SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1、（b)包括SEQ ID 156813.doc 201204388 NO:8之胺基酸序列之HVR-H2、及（c)包括SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3。在另一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其包括（a)包括 SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之HVR-L2;及（c)包括SEQ ID NO:12 之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其包括（a)包括 SEQ ID ΝΟ··10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID N〇:ll之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:12 之胺基酸序列之HVR-L3。在一些實施例中，抗體進一步包括圖3 A-B、4、5或6中所示之重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域框架序列。在一態樣中，本發明提供抗-Axl抗體，其包括（a)與 SEQ ID ΝΟ:103之胺基酸序列具有至少95%之序列一致性的VH序列；（b)與SEQ ID NO:104之胺基酸序列具有至少 95%之序列一致性的VL序列；或（c)如（a)中之VH序列及如（b)中之VL序列。在一些實施例中，抗體包括SEQ ID NO: 103之VH序列。在一些實施例中，抗體包括SEQ ID ΝΟ:104之VL序列。在一些實施例中，抗體包括SEQ ID NO:103之 VH序列及 SEQ ID N〇:104之 VL序列。在一些實施例中，抗體係全長IgGl抗體。本發明亦提供編碼本發明抗體中之任一者的分離核酸。本發明亦提供包括本發明核酸之宿主細胞。本發明亦提供產生抗體之方法，其包括培養本發明之宿 156813.doc 201204388 主細胞從而產生抗體。在一些實施例中，該等方法進一步包括自宿主細胞回收抗體。本發明亦提供包括本發明抗-Axl抗體中之任—者及細胞毒性劑的免疫接合物（immunoconjugate) 〇本發明亦提供包括本發明抗_Axl抗體中之任—者及醫藥上可接受之載劑的醫藥調配物。在一些實施例中醫藥調配物進一步包括其他治療劑。在一些實施例中，其他治療劑選自VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、及化學治療劑。本發明亦提供用作藥劑之本文所述抗_八幻抗體中之任一者。在一些實施例中，該應用係治療癌症。在一些實施例中，該應用係治療免疫性病症、心血管病症、血栓症或糖尿病。在一些實施例中，該應用係抑制細胞增殖。在一些實施例中’該應用係促進Αχί下調。在一些實施例中，該應用係抑制血管生成。本發明亦提供用於製造藥劑之本文所述抗_Αχ1抗體中之任一者。在一些實施例中，該藥劑用於治療癌症。在一些實施例中’該藥劑用於治療免疫性病症、心血管病症、血检症或糖尿病。在一些實施例中，該藥劑用於抑制細胞增殖、抑制血管生成、促進Αχί下調、抑制轉移、抑制血管生成。本發明亦提供治療患有癌症之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之本文所揭示抗·Αχ1抗體中之任一者。在一些實施例中，該等方法進一步包括向個體投與其他治療劑。在一些實施例中，其他治療劑選自由VEGF拮抗劑、 156813.doc -8 - 201204388 EGFR拮抗劑及化學治療劑組成之群。本發明亦提供治療患有免疫性病症、心血管病症、血栓症或糖尿病之個體之方法，其包括向該個體投與有效量之本文所揭示抗-Axl抗體中之任一者。本發明亦提供在個體中抑制血管生成、抑制細胞增殖、促進Axl受體下調或抑制轉移之方法，其包括向該個體投與有效量之本文所揭示抗-Axl抗體中之任一者以抑制血管生成、抑制細胞增殖、促進Axl受體下調或抑制轉移。本發明亦提供抑制組成型Axl活化之方法，其包括向該個體投與有效量之本文所揭示抗-Axl抗體中之任一者以抑制組成型Axl。在一態樣中，本發明提供治療患有與EGFR活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體之方法，其中該個體對使用EGFR拮抗劑治療產生抗性，該等方法包括確定該個體是否具有Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，且向彼等具有Axl活化突變或Axl基因擴增之個體投與EGFR拮抗劑及本文所述抗- Axl抗體中之任一者。在一態樣中，本發明提供治療患有與EGFR活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體之方法，其包括：（i)監測使用EGFR拮抗劑治療之個體以確定該個體是否產生Axl 表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，及（ii)若該個體已產生Axl活化突變或Axl基因擴增，則改變該個體之治療方案以除EGFR拮抗劑外包含本文所述抗-Axl抗體中之任一者0 156813.doc 201204388 在一態樣中，本發明提供治療患有與EGFR活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體之方法，其包括：（i)監測使用EGFR拮抗劑治療之個體以確定該個體是否對抑制劑產生抗性，（ii)測試該個體以確定該個體是否具有Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，及（iii)若該個體具有Axl 活化突變或Axl基因擴增，則改變該個體之治療方案以除 EGFR拮抗劑外包含本文所述抗-Axl抗體中之任一者。在一態樣中，本發明提供評估EGFR拮抗劑之方法，其包括：（i)監測使用EGFR拮抗劑治療之個體群以鑑別彼等對治療劑產生抗性之個體，（Π)測試抗性個體以確定該等個體是否具有Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，及 (iii)若該等個體具有Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，則改變該等個體之治療方案以除EGFR拮抗劑外包含本文所述抗-Axl抗體中之任一者。在一態樣中，本發明提供減小癌細胞中之EGFR磷酸化之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及EGFR 拮抗劑接觸的步驟。在一態樣中，本發明提供減小癌細胞中之PI3K調介之信號傳導之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及EGFR拮抗劑接觸的步驟。 156813.doc •10· 201204388 在一態樣中，本發明提供減小癌細胞中之EGFR調介之信號傳導之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl表現、Axl活化突變或Axl 基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及EGFR拮抗劑接觸。在一態樣中，本發明提供恢復癌細胞對於EGFR拮抗劑之敏感性之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl表現、Axl活化突變或Axl 基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及EGFR拮抗劑接觸。在一態樣中，本發明提供減小癌細胞之生長或增殖之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及 EGFR拮抗劑接觸的步驟。在一態樣中，本發明提供增加癌細胞之細胞凋亡之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及 EGFR拮抗劑接觸的步驟。在一態樣中，本發明提供減小癌細胞對於EGFR拮抗劑之抗性之方法，其中該癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性，且其中該細胞包括Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及 156813.doc -11 - 201204388 EGFR拮抗劑接觸的步驟。在一態樣中，本發明提供治療癌細胞中獲得之EGFR拮抗劑抗性之方法，其中該細胞包括Axl活化突變或Axl基因擴增，該等方法包括使該細胞與本文所述抗-Axl抗體中之任一者及EGFR拮抗劑接觸。在一些實施例中，癌細胞係任一 EGFR驅動性癌症。在一些實施例中，癌細胞包括EGFR活化突變。在一些實施例中，癌細胞包括EGFR基因擴增。在一些實施例中， EGFR基因擴增至少2倍。在一些實施例中，Axl擴增至少2 倍。在一些實施例中，癌細胞包括與EGFR拮抗劑抗性增加有關之EGFR基因突變。在一些實施例中，與EGFR拮抗劑抗性增加有關之EGFR基因突變係EGFR之T790M突變。在一些實施例中，EGFR拮抗劑係小分子治療劑、核酸治療劑、或蛋白質治療劑。在一些實施例中，EGFR拮抗劑係抗體、反義分子、或小分子激酶抑制劑。在一些實施例中，EGFR拮抗劑係選自由以下組成之群之EGFR激酶抑制劑：吉非替尼（gefitinib)、埃羅替尼（erlotinib)、西土西單抗（cetuximab)、帕尼單抗（pantinumumab)。在一些實施例中，EGFR拮抗劑係選自由西土西單抗、帕尼單抗組成之群之抗-EGFR抗體。在一些實施例中，核酸治療劑係 siRNA分子。在一態樣中，本發明提供鑑別作為使用EGFR拮抗劑及本文所述抗-Axl抗體中之任一者進行治療之候選者之個體的方法，其中該個體已使用EGFR拮抗劑進行治療且患有 156813.doc -12- 201204388 已獲得對於該EGFR拮抗劑之抗性之癌症，該等方法包括檢測來自該個體之癌細胞中之Axl表現、Axl活化突變或 Axl基因擴增。在一態樣中，本發明提供鑑別使用EGFR拮抗劑進行治療及處於獲得對於該EGFR拮抗劑之抗性之風險中之個體的方法，其包括檢測來自該個體之癌細胞中之Axl表現、 Axl活化突變或Axl基因擴增之存在，其中存在該Axl表現、Axl活化突變或Axl基因擴增可指示獲得該抗性之風險。在一態樣中，本發明提供治療患有對使用EGFR拮抗劑治療具有抗性之癌症之個體的方法，其包括向該個體投與 EGFR拮抗劑及本文所述抗- Axl抗體中之任一者。在一態樣中，本發明提供治療患有與EGFR活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體的方法，其中該個體已產生對於使用EGFR拮抗劑治療之抗性，該等方法包括確定該個體是否具有Axl表現（例如高Axl含量及/或活性），且向彼等具有Axl表現（例如高Axl活性）之個體投與EGFR拮抗劑及本文所述抗-Axl抗體中之任一者。在一態樣中，本發明提供治療患有與EGFR活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體的方法，其包括：（i)監測使用EGFR拮抗劑治療之個體以確定該個體是否產生Axl 表現（例如高含量及/或Axl活性），及（ii)若該個體已產生 Axl表現（例如高Axl含量及/或活性），則改變該個體之治療方案以除EGFR拮抗劑外包含本文所述抗-Axl抗體中之任 156813.doc •13- 201204388 一者。在一態樣中，本發明提供治療患有與egfr活化突變或 EGFR基因擴增有關之癌症之個體的方法，其包括：（i)監測使用EGFR拮抗劑治療之個體以確定該個體是否產生對於該抑制劑之抗性，（ii)測試該個體以確定該個體是否具有Axl表現（例如高Axl含量及/或活性），及（iii)若該個體具有高Axl含量及/或活性，則改變該個體之治療方案以除 EGFR拮抗劑外包含本文所述抗-Axl抗體中之任一者。在另一態樣中，本發明提供用於以下之方法：⑴恢復癌細胞對於EGFR拮抗劑之敏感性，（Π)減小癌細胞對於 EGFR拮抗劑之抗性，及/或（in)治療癌細胞中之獲得之 EGFR拮抗劑抗性，其係藉由使該細胞與EGFR拮抗劑及本文所述抗-Axl抗體中之任一者接觸來達成。在實例性實施例中，癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性且包括高含量之Axl活性及/或表現（例如，與Axl基因中之活化突變、 Axl基因擴增、或Gas6調介之Axl活化有關）。本文所揭示方法可用於對於癌細胞而言恢復敏感性、減小抗性、及/ 或治療獲得之抗性。在另一態樣令，本發明提供藉由使癌細胞與EGFR拮抗劑及本文所述抗- Axl抗體中之任一者接觸來減小癌細胞之生長及/或增殖、或增加癌細胞之細胞凋亡的方法。在實例性實施例中，癌細胞已獲得對於EGFR拮抗劑之抗性且包括高Axl活性及/或表現（例如，與Αχ丨基因中之活化突變、Axl基因擴增、或〇as6調介之Αχί活化有關）。 156813.doc -14· 201204388 【實施方式】 !·定義出於本文㈣’「受體人類框架」係包括源自人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之輕鏈可變結構域叫桓架或重鍵可變結構域（VH)框架之絲酸序列的框架，如下文所定義。「源自」人類免疫球蛋白框架或人類共有框架之受體人類框架可包括其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在-些實施例中，胺基酸變化之數量為1〇或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4 或更小、3或更小、或2或更小。在一些實施例中，受體人類框架之序列與VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列相同。「親和力」係指分子（例如，抗體）之單一結合位點與其結合配偶體（例如，抗原）間之非共價相互作用之總強度。除非另有所述，否則本文所用之「結合親和力」係指反映結合對成員（例如，抗體及抗原）間之1:1相互作用的固有結合親和力。分子X對於其配偶體丫之親和力通常可由解離常數（Kd)表示。可藉由業内已知之常用方法來量測親和力，包含彼等本文所述者。用於量測結合親和力之具體闡釋性及實例性實施例闡述於下文中。「親和力成熟」抗體係指與不具有變化之親代抗體相比在一或多個超變區域（HVR)中具有一或多個變化的抗體，該等變化使得可改良抗體對於抗原之親和力。「血官生成病症」係指血管生成之任一失調，包含非贅 156813.doc 201204388 瘤性及贅瘤性病狀二者。贅瘤性病狀包含但不限於彼等閱述於下文中者（例如，參見，「Cancerj)1f瘤性病症包含但不限於不期望或異常之肥大、關節炎、類風濕性關節炎(RA)、牛皮癬、牛皮癬斑塊、肉瘤樣病、動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬化斑塊、糖尿病性及其他增殖性視網膜病變（包含早產兒視網膜病變）、晶狀體後纖維增生、新生血营性青光眼、年齡相關性黃斑變性、糖尿病性黃斑水腫、角膜新生血管形成、角膜移植片新生血管形成、角膜移植片排斥、視網膜/脈絡膜新生血管形成、眼角新生丘管形成（發紅）、眼部新生血管性疾病、血管再狹窄、動靜脈畸形（AVM)、腦膜瘤、血管瘤、血管纖維瘤、甲狀腺增生（包含格拉夫氏病（Grave's disease))、角膜及其他組織移植、慢性炎症、肺炎、急性肺損傷/ARDS、敗血病、原發性肺動脈高壓、，惡性肺積液、腦水腫（例如，與急性中風/閉合佳頭外傷/創傷有關）、滑膜炎症、RA中之血管醫形成、骨化性肌炎、肥大性骨形成、骨關節炎（〇A)、頑固性腹水夕囊性印巢病、子宮内膜異位症、第三間隙液體疾病 (膜腺炎、間隔症候群、燒傷、腸病）、子宮纖維樣肌瘤、早產分娩、慢性炎症（例如IBD(克羅恩氏病（Cr〇hnis disease)及潰瘍性結腸炎）、腎臟同種異體移植排斥、發炎腸病、腎病症候群、不期望或異常之組織積聚生長（非癌症）、血友病性關節、肥厚性瘢痕、毛髮生長抑制、奥斯勒-羊伯症候群（Osier·Weber syndrome)、膿性肉芽腫、晶狀體後纖維增生、硬皮病、沙眼、血管黏連、滑膜炎、皮 156813.doc • 16 · 201204388 炎、先兆子癇、腹水、心包腔積液（例如與心包炎有關）及胸膜腔積液。抗血官生成劑」係指阻斷、或在一定程度上干擾血管產生之化合物。抗血管生成劑可（例如）係結合涉及促進血管生成之生長因子或生長因子受體的小分子或抗體。在一貫施例中，抗jk管生成劑係結合金管内皮生長因子（vegf) 之抗體’例如貝伐單抗（bevacizumab) (avasTIN®)。術语「抗-Axl抗體」及「結合Αχ1之抗體」係指能夠以足夠親和力結合Axl從而該抗體可用作靶向Axl中之診斷劑及/或治療劑的抗體。在一實施例中，抗_Αχ1抗體與不相關非Axl蛋白之結合程度小於該抗體與Axl之結合的約丨〇0/〇，如（例如）藉由放射免疫分析（RIA)所量測。在某些實施例中，結合Axl之抗體之解離常數（Kd)為y μΜ、$1〇〇 nM、 ^10 nM、：1 nM、SO·1 nM、$〇·〇1 nM、或 $0.001 nM(例如 10 M或更小’例如W8 M至10-13 M，例如，1(Γ9 M至10·13 M)。在某些實施例中，抗-Axl抗體結合在來自不同物種之 Αχ1中保守之Axl表位。術3吾「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包含但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體（例如’雙特異性抗體）、及抗體片段，只要其展示期望抗原結合活性。「抗體片段」係指除完整抗體外之分子，其包括完整抗體中結合完整抗體所結合之抗原的一部分。抗體片段之實例包含但不限於 Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、雙特 156813.doc -17- 201204388 異性抗體、直鏈抗體、單鏈抗體分子（例如scFv)、及自抗體片段形成之多特異性抗體。「結合相同表位之抗體」（作為參考抗體）係指在競爭分析中將參考抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高的抗體，且反之’參考抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或更高。實例性競爭分析提供於本文中。除非另有所述’否則本文所用之術語「Αχί」係指來自任一脊椎動物來源之任一天然Axl，該脊椎動物來源包含哺乳動物’例如靈長類動物（例如人類）及齧齒類動物（例如’小鼠及大鼠）。該術語涵蓋「全長」未處理Αχί以及自處理細胞產生之任一形式的Axl。該術語亦涵蓋Axl之天然存在變體，例如，剪接變體或等位基因變體。實例性人類 Axl之胺基酸序列示於圖12中。「Axl活化」係指Axl受體之活化、或磷酸化。通常， Axl活化會產生信號轉導（例如，由Axl或基質多肽中Axl受體磷酸化酪胺酸殘基之細胞内激酶結構域引起）。Axl活化可由結合目標Axl受體之Axl配體（Gas6)調介。Gas6與Axl 之結合可活化Axl之激酶結構域，且由此對Axl中之酿胺酸殘基進行磷酸化及/或對其他基質多肽中之酪胺酸殘基進行磷酸化。術語「癌症」及「癌性之」係指或闡述哺乳動物之通常特徵在於細胞生長/增殖失調之生理學病狀。癌症之實例包含但不限於癌、淋巴瘤（例如，何傑金氏（Hodgkin's)及非何傑金氏淋巴瘤）、母細胞瘤、肉瘤、及白血病。該等 156813.doc -18 · 201204388 癌症之更具體實例包含鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、***癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、白血病及其他淋巴組織增殖性病症、及各種類型之頭頸癌。術語「細胞增殖性病症」及「增殖性病症」係指與一定程度之異常細胞增殖有關的病症。在一實施例中，細胞增殖性病症係癌症。「化學治療劑」係指用於治療癌症之化合物。化學治療劑之貫例包含院基化劑’例如售替η辰（thiotepa)及環鱗酿胺 (cyclosphosphamide) (CYTOXAN®);磺酸烷基酯，例如白消安（busulfan)、英丙舒凡（improsulfan)及哌泊舒凡 (piposulfan);氮丙啶，例如苯佐替派（benz〇dopa)、卡波醌 (carboquone)、美妥替哌（meturedopa)、及烏瑞替派 (uredopa);伸乙基亞胺及曱基嘧胺，包括六甲嘧胺 (altretamine)、三伸乙基嘧胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基嘧胺；番荔枝内酯類（尤其係布拉他辛（bullatacin)及布拉他辛酮（bullatacinone)) ; δ-9-四氫***盼（屈***紛（dronabinol)，MARINOL®) ; β-拉帕酉昆 (beta-lapachone);拉帕醇（lapachol);秋水仙驗 (colchicine);白樺脂酸（betulinic acid);喜樹驗 (camptothecin)(包含合成類似物托泊替康（topotecan) lS6813.doc -19- 201204388 (HYCAMTIN®) 、 CPT-11(伊立替康（irinotecan)， CAMPTOSAR®)、乙醯基喜樹驗（acetylcamptothecin)、東莨菪内酯（scopolectin)、及9-胺基喜樹驗（9-aminocamptothecin));苔蘚抑制素（bryostatin);卡利抑制素（callystatin) ; CC-1065(包含其阿多來新（adozelesin)、卡折來新（carzelesin)及比折來新（bizelesin)合成類似物）；鬼白毒素（podophyllotoxin);龙白酸（podophyllinic acid);替尼泊戒（teniposide);克利特非辛（cryptophycin)(尤其係克利特非辛1及克利特非辛8);多拉司他汀（dolastatin);多卡米星（duocarmycin)(包含合成類似物：KW-2189及CB1-TM1);艾權素（eleutherobin);盤洛司他汀（pancratistatin); 匍枝珊蝴醇（sarcodictyin);海緯素（spongistatin);氮齐 (nitrogen mustard)’ 例如苯丁酸氮芬（chlorambucil)、萘氮芥（chlornaphazine)、氯墙酿胺（cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、異環填醯胺（ifosfamide)、雙氣乙基甲胺（mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥、美法余（melphalan)、新氮芬（novembichin)、苯乙酸氮芬膽甾醇酯 (phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、曲構胺 (trofosfamide)、尿嘯咬氮芥；亞琐基脲，例如卡莫司；丁 (carmustine)、氯腺菌素（chlorozotocin)、福莫司；丁 (fotemustine)、洛莫司汀（lomustine)、尼莫司汀（nimustine) 及雷莫司汀（ranimnustine);抗生素，例如烯二快抗生素 (例如，卡奇黴素（calicheamicin)，尤其係卡奇黴素γΐΐ及卡奇黴素ω II(例如，參見，Nicolaou等人，Angew. Chem 156813.doc -20- 201204388

Inti. Ed. Engl.，33: 183-186 (1994)); CDP323,其係口服 α-4整合素抑制劑；達内黴素（dynemicin)，包含達内黴素 A ;埃斯波黴素（esperamicin);以及新製癌菌素發色團 (neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白稀二快抗生素發色團）、阿克拉黴素（aclacin〇mysin)、放線菌素 (actinomycin)、安麯黴素（authramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素（bleomycin)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉黴素 (carabicin)、洋紅黴素（carminomycin)、嗜癌黴素 (carzinophilin)、色徽素（chromomycin)、放線菌素 D (dactinomycin)、柔紅黴素（daunorubicin)、地托比星 (detorubicin)、6 -重氮-5-側氧基-L -正白胺酸；多柔比星 (doxorubicin)(包含 ADRIAMYCIN®、嗎啉基-多柔比星、氰嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體注射物（DOXIL®)、多柔比星脂質體TLC D-99 (MYOCET®)、聚乙二醇化多柔比星脂質體（CAELYX®)、及脫氧多柔比星）、表柔比星（epirubicin)、依索比星 (esorubicin)、伊達比星（idarubicin)、麻西羅黴素 (marcellomycin)、絲裂黴素（mitomycin)(例如絲裂黴素 C)、黴紛酸（mycophenolic acid)、諾拉黴素 (nogalamycin)、橄欖黴素（olivomycin)、培洛黴素 (peplomycin)、泊非黴素（porHromycin)、嗓吟黴素 (puromycin)、三鐵阿黴素（quelamycin)、羅多比星 (rodorubicin)、鏈黑黴素（streptonigrin)、鏈脲黴素 (streptozocin)、殺結核菌素（tubercidin)、烏苯美司 156813.doc -21 - 201204388 (ubenimex)、淨司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin); 抗代謝物，例如胺曱嗓呤（methotrexate)、吉西他濱 (gemcitabine)(GEMZAR®)、替加氟（tegafur)(UFTORAL®)、卡培他濱（capecitabine) (XELODA®)、埃坡黴素 (epothilone)、及 5-氟尿喊咬（5-fluorouracil)(5-FU);葉酸類似物，例如二曱葉酸（denopterin)、胺甲蝶呤、蝶羅吟 (pteropterin)、曲美沙特（trimetrexate);嗓呤類似物，例如氣達拉濱（fludarabine)、6-疏基11票吟、硫_ °票呤 (thiamiprine)、硫烏嗓吟（thioguanine) ; D密0定類似物，例如安西他濱（ancitabine)、阿紮胞苦（azacitidine)、6-氮尿苦 (6-azauridine)、卡莫敗（carmofur)、阿糖胞苦 (cytarabine)、二脫氧尿苷（dideoxyuridine)、脫氧氟尿苦 (doxifluridine)、依諾他濱（enocitabine)、氟尿芽 (floxuridine);雄激素，例如卡普睪嗣（calusterone)、丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate)、環硫雄醇 (epitiostanol)、美雄烧（mepitiostane)、睪内醋（testolactone); 抗腎上腺素，例如胺魯米特（aminoglutethimide)、米托坦 (mitotane)、曲洛司坦（trilostane);葉酸補充劑，例如亞葉酸；乙醯葡醛酸内酯（aceglatone);醛磷醯胺糖苷 (aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸 (aminolevulinic acid);恩尿嘴咬（eniluracil);安 β丫咬 (amsacrine);***-苯丁酸氮芬複合物（bestrabucil);比生群（bisantrene);依達曲沙（edatraxate); 地墻醯胺 (defofamine);秋水仙胺（demecolcine);地 β丫酿 156813.doc -22- 201204388 (diaziquone)；依氣鳥胺酸（eflornithine);依利乙銨 (elliptinium acetate);埃坡黴素；依託格魯（etoglucid);確酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；氯尼達明（lonidainine);類美登素（maytansinoid)，例如美登素（maytansine)及柄型菌素 (ansamitocins);米托胍腙（mitoguazone);米托蒽酉昆 (mitoxantrone);莫娘達醇（mopidamol);尼群克林 (nitraerine);喷托他丁（pentostatin);蛋胺氮芬 (phenamet) ; °比柔比星（pirarubicin); 洛索蒽酉昆 (losoxantrone) ; 2-乙基醢肼；丙卡巴肼（procarbazine); PSK® 多糖複合物（JHS Natural Products，Eugene，OR); 雷佐生（razoxane);根黴素（rhizoxin);西佐 B南（sizofiran); 螺旋錄（spirogermanium);細格抱氣雜酸（tenuazonic acid);三亞胺酿（triaziquone) ; 2,2’，2"-三氣三乙胺；單端抱黴稀族毒素類（trichothecenes)(尤其係T-2毒素、疲疮菌素A (verracurin A)、杆抱菌素（roridin A)及蛇形菌素 (anguidine));烏拉坦（urethan);長春地辛（vindesine) (ELDISINE®、FILDESIN®);達卡巴嗪（dacarbazine);甘露莫司；丁（mannomustine);二溴甘露醇（mitobronitol);二溴衛矛醇（mitolactol);。底泊溴烧（pipobroman) ; °葛薩托辛 (gacytosine);阿糖胞苷（arabinoside) (「Ara-C」）；。塞替哌；紫杉烷類，例如紫杉醇（paclitaxel)(TAXOL®)、紫杉醇（ABRAXANETM)之白蛋白調控之紫杉醇奈米顆粒調配物及多西他赛（docetaxel) (TAXOTERE®);苯丁酸氮芥 (chloranbucil) ; 6-硫鳥嘌呤；疏基嘌呤；胺曱喋吟；鉑類 156813.doc -23- 201204388 似物，例如順始（cisplatin)、奥沙利翻（oxaliplatin)(例如’ ELOXATIN®)及卡翻（carboplatin)；長春花提取物 (vincas)，其可防止微管蛋白聚合形成微管，包含長春驗 (vinblastine) (VELBAN®)、長春新驗（vincristine) (ONCOVIN®)、長春地辛（vindesine) (ELDISINE®、 FILDESIN®)、及長春瑞濱（vinorelbine) (NAVELBINE®); 依託泊苷（etoposide) (VP-16);異環磷醯胺；米托蒽醌；亞葉酸釣（leucovorin);諸安托（novantrone);依達曲沙；道諾黴素（daunomycin);胺基蝶呤（aminopterin);伊班膦酸鹽（ibandronate);拓撲異構酶抑制劑RFS 2000 ;二氟甲基鳥胺酸（difluoromethylornithine) (DMFO);類視色素，例如視黃酸，包含貝沙羅汀（bexarotene) (TARGRETIN®); 雙膦酸鹽，例如氣膦酸（clodronate)(例如，BONEFOS®或 OSTAC®)、依替膦酸（etidronate) (DIDROCAL®)、 NE-58095、"坐來膦酸（zoledronic acid)/( β坐來膦酸鹽）(ΖΟΜΕΤΑ®)、阿屈鱗酸鹽（alendronate) (FOSAMAX®)、帕米膦酸鹽（pamidronate) (AREDIA®)、替魯膦酸鹽 (tiludronate) (SKELID®)、或利塞膦酸鹽（risedronate) (ACTONEL®);曲沙他濱（troxacitabine)(l，3-二氧戊院核苷胞嘧啶類似物）；反義寡核苷酸，尤其係彼等抑制與異常細胞增殖中信號傳導路徑中之基因表現有關者；例如， PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體（EGF-R);疫苗，例如THERATOPE®疫苗及基因療法疫苗，例如， ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗、及 VAXID®疫 156813.doc -24- 201204388 苗：拓撲異構酶1抑制劑（例如，LURTOTECAN®); rmRH(例如，ABARELIX®) ; BAY439006(索拉非尼 (sorafenib) ; Bayer) ; SU-11248(舒尼替尼（sunitinib)， SUTENT®，Pfizer);哌立福辛（perifosine)、COX-2抑制劑 (例如塞來考昔（celecoxib)或艾托考昔（etoricoxib))、蛋白體抑制劑（例如 PS341);硼替佐米（bortezomib) (VELCADE®); CCI-779 ;替比伐尼（tipifarnib) (R1 1577);索拉非尼 (orafenib)、ABT510 ; Bcl-2抑制劑，例如奥利默森納 (oblimersen sodium)(GENASENSE®);匹善重（pixantrone); EGFR抑制劑（參見下文定義）；酪胺酸激酶抑制劑（參見下文定義）；絲胺酸-丙胺酸激酶抑制劑，例如雷帕黴素 (rapamycin)(西羅莫司（sirolimus)，RAPAMUNE®);法呢醯基轉移酶抑制劑，例如洛那伐尼（l〇nafarnib)(SCH 6636, SARASARTM);及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、S曼或衍生物；以及兩種或兩種以上上述藥劑之組合，例如 CHOP，其係環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼、及潑尼松龍（prednisolone)之組合療法的縮寫；及FOLFOX，其係奥沙利鉑（ELOXATINtm)與5-FU及亞葉酸鈣之組合治療方案的縮寫。如本文所定義之化學治療劑包含用於調節、減小、阻斷、或抑制可促進癌症生長之激素之效應的「抗激素藥」或「内分泌治療劑」。其可為激素本身，包含但不限於：具有混合之激動劑/拮抗劑性質之抗***，包含他莫昔芬（tamoxifen) (NOLVADEX®)、4_羥基他莫昔芬、托瑞米 156813.doc -25- 201204388 芬（toremifene) (FARESTON®)、艾多昔芬（idoxifene)、屈洛昔芬（droloxifene)、雷洛昔芬（raloxifene) (EVISTA®)、曲沃昔芬（trioxifene)、雷洛昔芬（keoxifene);及選擇性雌激素受體調節劑（SERM)，例如SERM3 ;無激動劑性質之純抗***，例如氟維司群（fulvestrant) (FASLODEX®)、及EM800(該等藥劑可阻斷***受體（ER)之二聚作用，抑制DNA結合，增加ER更新，及/或阻抑ER含量）；芳香酶抑制劑，包含類固醇芳香酶抑制劑，例如福美坦 (formestane)及依西美坦（exemestane)(AROMASIN®)，及非類固醇芳香酶抑制劑，例如阿那曲β坐（anastrazole) (ARIMIDEX®)、來曲。坐（letrozole)(FEMARA®)及胺魯米特；及其他芳香酶抑制劑，包含伏氯嗤（vorozole) (RIVISOR®)、乙酸甲地孕酮（megestrol acetate) (MEGASE®)、法倔唑（fadrozole)、及4(5)-咪唑；黃體化激素-釋放激素激動劑，包含亮丙瑞林（leuprolide)(LUPRON® 及ELIGARD®)、戈舍瑞林（goserelin)、布舍瑞林 (buserelin)、及雷公藤精（tripterelin);性類固醇，包含孕激素（例如乙酸曱地孕酮及乙酸甲羥孕酮 (medroxyprogesterone acetate))、***（例如已稀雌紛 (diethylstilbestrol)及普雷馬林（premarin))及雄激素/類視色素（例如氟曱睪酮（fluoxymesterone)、全反式視黃酸及芬維 a胺（fenretinide));奥那司酮（onapristone);抗孕顏I ;雌激素受體下調劑（ERD);抗雄激素，例如氟他胺 (flutamide)、尼魯米特（nilutamide)及比卡魯胺 156813.doc -26- 201204388 (bicalutamide);及上述任一者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物；以及兩種或兩種以上上述藥劑之組合。術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自特定來源或物種、而重鏈及/或輕鏈之剩餘部分衍生自不同來源或物種的抗體。抗體「種類」係指恆定結構域或重鏈所擁有之恆定區域之類型。存在5大類抗體·· IgA、IgD、IgE、igG、及

IgM ’且該等種類中之若干種可進—步分成子類（同種型）’例如，IgGl、IgG2、IgG3、抓、从、及恤。對應於不同種類之免疫球蛋白之重鍵怪定結構域分別稱為 α、δ、ε、γ、及 μ 〇本文所用之術語「組成型」（例如用於受體激酶活性）係指並不依賴於配體或其他活化分子之存在之受體的連續信號傳導活性。端視受體之性質’所有活性皆可為組受體活性可進一步藉由結合盆 σ具他刀子（例如配體）進行活化。引起受體活化之細胞事件為晋仟马彼荨熟習此項技術者所孰知。舉例而言，活化可包 ·、、匕3泰聚（例如，二聚、三聚等更高級受體複合物β藉人私、複合物可包括單-種類之蛋白質，亦即’同源複合物。另一撰遲灸 _為’複合物可包括至少兩種不同之蛋白質種類，亦即，里異源複合物。複合物形成可藉由 (例如）過度表現細胞表面上稽由 .6人又體之正常或突變體形式引起。複口物形成亦可藉由受起。又體中之一或多種特異性突變弓丨術語「細胞生長抑制劑蜊」係私在活體外或活體内阻止 I56813.doc •27· 201204388 胞生長之化合物或組合物。因此，細胞生長抑制劑可為顯著減小s期中之細胞百分比者。細胞生長抑制劑之其他實例包含藉由誘導G0/G1阻止或M_期阻止來阻斷細胞循環進展之藥劑。人類化抗-Her2抗體曲妥珠單抗 (trastUZUmab)(HERCEPTIN®)係誘導G0/G1阻止之細胞生長抑制劑之實例。典型Μ期阻斷劑包含長春花提取物（長春新鹼及長春鹼）、紫杉烷及拓撲異構酶π抑制劑，例如多柔比星表柔比星、柔紅徽素、依託泊苦及博來徽素。阻止gi 之某些藥劑亦阻止S_期，例如，DNA烷基化劑，例如他莫昔芬' 潑尼松（prednisone)、達卡巴嗪、雙氯乙基甲胺、順銘、胺曱蝶呤、5 -氟尿嘧咬及ara-C。其他資訊可參見

Mendelsohn及 Israel編輯 ’ The Molecular Basis of Cancer，第 1 章’標題為「Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs」，Murakami 等人（W.B. Saunders,

Philadelphia，1995)，例如，第13頁。紫杉烷（紫杉醇及多西他賽）係源自紫杉樹之抗癌藥。自歐洲紫杉得到之多西他赛（TAXOTERE®，Rhone-Poulenc Rorer)係紫杉醇 (TAXOL®，Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。紫杉醇及多西他賽可促進微管自微管蛋白二聚體之裝配並藉由防止解聚而使微管穩定，此可抑制細胞有絲***。本文所用之術語「細胞毒性劑」係指可抑制或防止細胞功能及/或引起細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包含但不限於放射性同位素（例如，At211、I131、I125、γ9〇、 Re186、Rem、Smm、Bi2i2、ρ32、外⑴及匕之放射性同位 156813.doc -28- 201204388 素）；化學治療劑或藥物（例如胺甲蝶呤、阿黴素 (adriamicin)、長春花生物驗類（vinCa alkaloids)(長春新鹼、長春驗、依託泊苷）、多柔比星、.美法侖、絲裂黴素 C、苯丁酸氮芥、柔紅黴素或其他嵌入劑）；生長抑制劑；酶及其片段’例如溶核酶；抗生素；毒素，例如來自細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶促活性毒素’包含其片段及/或變體；及下文所揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑》「效應子功能」係指彼等歸因於抗體之Fc區域之生物活性’其可隨抗體同種型而有所變化。抗體效應子功能之實例包含：Clq結合及補體依賴性細胞毒性（Cdc) ; Fc受體結合；抗體依賴性細胞調介之細胞毒性（ADCC);吞噬作用；細胞表面受體（例如B細胞受體）之下調；及B細胞活化0 藥劑（例如，醫藥調配物）之「有效量」係指在所需時間段内以所需劑量有效達成期望治療或預防結果之量。術語「Fc區域」在本文中用於界定免疫球蛋白重鏈中含有怪定區域之至少一部分的C_末端區域。該術語包含天然序列Fc區域及變體Fc區域。在一實施例中，人類IgG重鏈 Fc區域自Cys226、或自Pro230延伸至重鏈之羧基末端 '然而’可存在或可不存在Fc區域之C-末端離胺酸（Lys447)。除非在本文中另外指出，否則Fc區域或恆定區域中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統獲得，亦稱為EU指數，如 Kabat 荨人，Sequences of Proteins of Immunological 156813.doc -29- 201204388

Interest，第 5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，MD，1991 中所述。「框架」或「FRj係指除超變區域（HVR)殘基外之可變結構域殘基。可變結構域之FR通常由4個FR結構域： FR1、FR2、FR3、及FR4組成。因此，HVR及FR序列通常出現於VH(或VL)中之下列序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，其係指具有實質上與天然抗體結構相似之結構或具有含有如本文所定義Fc區域之重鏈的抗體。術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指向其中引入外源核酸之細胞，包含該等細胞之子代》宿主細胞包含「轉化體」及「經轉化細胞」，其包含原代經轉化細胞及源自其之子代（與傳代次數無關）。子代與親代細胞之核酸含量可能並不完全相同，但可含有突變。本文包含經篩選或選擇用於原始經轉化細胞中之具有相同功能或生物活性的突變體子代。「人類抗體」係具有對應於如下抗體之胺基酸序列的胺基酸序列者·其由人類或人類細胞產生或源自利用人類抗體譜或其他編碼人類抗體之序列之非人類來源。此人類抗體之定義明確排除包括非人類抗原結合殘基之人類化抗體。「人類共有框架」係代表在選擇人類免疫球蛋白乂[或 VH框架序列中存在最普遍之胺基酸殘基之框架。通常， 156813.doc -30· 201204388 人類免疫球蛋白VL或VH序列之選擇係來自可變結構域序列亞群。通常，序列亞群係*Kabat等人，SeqUences 〇f Proteins of Immunological Interest，第 5版，NIH公開案 91-3242’ Bethesda MD (1991) ’ 第 1-3卷中之亞群。在一實施例中，對於VL而言’亞群係如Kabat等人所述之亞群κ 1(參見上文）。在一實施例中，對VH而言，該亞群係如 Kabat等人所述之III亞群（參見上文）。「人類化」抗體係指包括來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中’人類化抗體包括貫質上全部之至少一個、且通常兩個可變結構域’其中全部或實質上全部之HVR(例如，CDR) 對應於非人類之彼等HVR，且全部或實質上全部之fr對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視需要可包括源自人類抗體之抗體恒定區域的至少一部分β抗體之「人類化形式」（例如，非人類抗體）係指已經受人類化之抗體。如本文所用之術語「超變區域」或「HVR」係指抗體可變結構域區域中序列具有超變性及/或形成結構上經界定之環（「超變環」）中的每一者。通常，天然四鏈抗體包括六個HVR ;三個位於VH中（HI、Η2、Η3)，且三個位於VL 中（LI、L2、L3)。HVR通常包括來自超變環及/或來自「互補決定區域」（CDR)之胺基酸殘基，後者具有最高序列可變性及/或涉及抗原識別。實例性超變環出現於胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (Η1)、 53-55 (Η2)、及 96-101 (Η3)處。（Chothia及 Lesk，J. Mol. 156813.doc -31 · 201204388

Biol. 196:901-917(1987))。實例性 CDR(CDR-L1 、 CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、及 CDR-H3)出現於胺基酸殘基L1之24-34、L2之50-56、L3之89-97、HI之 31-358、112之50-65、及113之 95-102 處。（1^5&1等人， Sequences of Proteins of Immunological Interest > 第 5版， Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，MD (1991)。）除 VH 中之 CDR1 外，CDR通常包括形成超變環之胺基酸殘基。CDR亦包括「特異性決定殘基」、或「SDR」，其係接觸抗原之殘基。SDR含於CDR中稱為縮短-CDR (abbreviated-CDR)、或 a-CDR之區域内。實例性a-CDR(a-CDR-Ll、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-HI、a-CDR-H2、及a-CDR-H3)出現於胺基酸殘基LI之 31-34、L2 之 50-55、L3 之 89-96、HI 之 31-35B、H2 之 50-58、及 H3 之 95-102 處。（參見 Almagro 及 Fransson， Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)。）除非另有所述，否則可變結構域中之HVR殘基及其他殘基（例如，FR殘基）在本文中係根據Kabat等人所述進行編號（參見上文）。「免疫接合物」係接合至一或多個異源分子（包含但不限於細胞毒性劑）之抗體。個體（「individual」或「subject」）係哺乳動物。哺乳動物包含但不限於家養動物（例如，牛、綿羊、貓、狗、及馬）、靈長類動物（例如，人類及非人類靈長類動物，例如猴子）、兔、及齧齒類動物（例如，小鼠及大鼠）。在某些實施例中，個體係人類。 156813.doc •32· 201204388 抑制細胞生長或增殖」意指將細胞之生長或增殖降低至少 10〇/〇、20%、30%、40%、50%、60〇/〇、70%、80〇/〇、 90%、95%、或100%，且包含誘導細胞死亡。「分離J抗體係自天然環境組份分離者。在一些實施例中’將抗體純化至具有大於95%或99%之純度，如藉由（例如）電泳（例如，SDS-PAGE、等電聚焦（IEF)、毛細管電泳）或層析（例如，離子交換或反相HPLC)所測定。對於評價抗體純度之方法之综述，例如，參見Flatman等人，j

Chromatogr. B 848:79-87 (2007)。「分離」核酸係指自天然環境組份分離之核酸分子。分離核酸包含通常含有核酸分子之細胞中所含的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同之染色體位置。編碼抗-Axl抗體之分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈（或其片段）之一或多個核酸分子，包含單一載體或單獨載體中之該核酸分子、及存在於宿主細胞中一或多個位置處之該核酸分子。本文所用之術語「配體獨立性」（例如用於受體信號傳導活性）係指並不依賴於配體存在之信號傳導活性。具有配體獨立性激酶活性之受體未必阻止配體與該受體之結合以產生激酶活性之其他活化。本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上同源抗體之群獲得的抗體’亦即’包括該群之個別抗體相同及/或結合相同表位，可能之變體抗體除外，例如，含有天然存在 156813.doc -33- 201204388 之突變或在產生單株抗體製劑期間甚* _ 间產生’該等變體通常以較小量存在。與通常編號針對不间也 N决疋簇（表位）之不同抗體的多株抗體製劑相比，單株抗體製劑之每—單株抗體針對抗原上之單個決定蒸。因此，修飾語「單株」表示自抗體之實質上同源群獲得之抗體性質，負’且不應解釋為需要藉由任-特定方法產生抗體。舉例而言，用於本發明中之單株抗體可藉由各種技術製得，包含佃 G 3但不限於雜交瘤方法、重組DNA方法、毯菌體展示方法、及利用含有所有或-部分人類免疫球蛋白基因座之轉基因動物的方法製備單株抗體之該等方法及其他實例性方法闞述於本文中。「裸抗體」係指不與異源部分（例如，細胞毒性部分）或放射性標記接合之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。「天然抗體」係、指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體係約15〇〇〇〇道爾頓之異四聚體糖蛋白，其由二硫鍵鍵結之兩條相同輕鍵及兩條相同重鏈>•且成。自>1-至C末端，每一重鏈具有可變區域 (VH)，亦稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域，隨後為二個恆定結構域（CH1、CH2、及CH3)。類似地，自至C 末端，每一輕鏈依次具有可變區域（VL)(亦稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域）及恆定輕鏈（CL)結構域。基於抗體恆疋結構域之胺基酸序列，可將該抗體之輕鏈分為兩種類型中之一者，稱為κ型及λ型。術浯「包裝插頁」用於係指通常包含於治療產品商業包裝内之說明書’其含有有關適應症、用法、劑量、投與、 156813.doc -34· 201204388 組合療法、禁忌症及/或涉及該等治療產品使用之警告的資訊。就參考肽序列而言，「胺基酸序列一致性百分比（％)」定義為在比對序列並引入空位（若需要）以達到最大序列一致性百分比後候選序列中與參考肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比，且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的，比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，例如BLAST、BLAST-2、 ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。彼等熟習此項技術者可確定用於比對序列之合適參數，包含在所比較序列之全長範圍内連成最大比對所需要之任何算法。然而，出於本文目的，使用序列對比電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性％之值。ALIGN-2序列對比電腦程式係由 Genentech公司設計，且原始碼與用戶文件已一起編入美國版權局，Washington D.C.，20559中，其中其以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech公司，South San Francisco, California公開獲得，或可自源代碼進行編譯。ALIGN-2程式應經編譯用於UNIX操作系統（包含數位UNIX V4.0D)中。所有序列對比參數均由 ALIGN-2程式設定且並不改變。在將ALIGN-2用於胺基酸序列對比之情形下，給定胺基酸序列A相對於（to)、與（with)或對（against)給定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性％(或者可表達為相對於、與或對 156813.doc •35· 201204388 給定胺基酸序列B給定胺基酸序列A所具有或包括之一定胺基酸序列一致性％)計算如下： 100乘以分數X/Y，其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式aligN-2評定為一致性匹配之胺基酸殘基數，且其中γ係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解’在胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A相對於B之胺基酸序列一致性％不等於B相對於A之胺基酸序列一致性％。除非另外明確闡述，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性％的值係如前面緊接段落中所述使用ALIGN-2電腦程式獲得。術語「醫藥調配物」係指如下製劑：其呈現形式允許其中所含活性成份之生物活性有效，且不含對投與調配物之個體具有不可接受毒性的其他組份。醫藥上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成份外對個體無毒之成份。醫藥上可接受之載劑包含但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑、或防腐劑。本文所用之「治療」（及其語法變體，例如「卜邮」或「treating」）係指欲改變所治療個體之自然過程的臨床干預且可出於預防性目的或在臨床病理學過程期間實施。治療之期望效應包含但不限於防止疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾狀任何直帛或間接病理結&、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和㈣㈣後》在-些實_中，使用本發明抗體來延遲疾病發^ 減緩疾病進展。 156813.doc -36 - 201204388 術語「腫瘤」係指所有贅瘤性細胞生長及增殖（無論惡性抑或良性）以及所有癌前期及癌性細胞及組織。本文所提及之術語「癌症」、「癌性的」、「細胞增殖性病症」、「增殖性病症」及「腫瘤」並不相互排斥。術語「可變區域」或「可變結構域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與使抗體與抗原結合之結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變結構域（分別係VH及VL)通常具有相似結構，其中每一結構域皆包括4個保守框架區域（FR)及三個超變區域（HVR)。（例如，參見，Kindt 等人 Kuby Immunology，第 6版，W.H. Freeman and Co.，第 91 頁（2007)。）單一 VH 或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。另外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL結構域進行分離以分別篩選互補VL或VH結構域文庫。例如，參見，Portolano 等人，J_ Immunol· 150:880-887 (1993) ; Clarkson等人，Nature 352:624-628 (1991)。本文所用之術語「載體」係指能夠轉運與其連接之另一核酸的核酸分子。術語包含呈自複製核酸結構之載體，以及納入引入其之宿主細胞基因組中的載體。某些載體能夠引導與其可操作連接之核酸的表現。該等載體在本文中稱為「表現載體」。

「VH III亞群共有框架」包括自Kabat等人之可變重鏈 III亞群中之胺基酸序列獲得之共有序列。在一實施例中，該VH III亞群共有框架胺基酸序列包括以下序列中之每一者的至少一部分或全部：EVQLVESGGGLVQPGGSLR 156813.doc -37- 201204388 LSCAAS (SEQ ID NO: 122)-Hl-WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO: 123)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO: 124)-H3-WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 125) » 「VL I亞群共有框架」包括自Kabat等人之可變輕鏈κ I 亞群中之胺基酸序列獲得之共有序列。在一實施例中，該 VH I亞群共有框架胺基酸序列包括以下序列中之每一者的至少一部分或全部：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO:126)-Ll-WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 127)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO:128)-L3-FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:129)。 II.組合物及方法在一態樣中，本發明部分地基於對於各種Axl結合劑（例如抗體及其片段）之鑑別。Axl展示重要且有利之治療乾，且本發明提供基於藥劑與Axl之結合之組合物及方法。本發明中結合Axl之藥劑（如本文所述）提供了用於靶向與Axl 信號傳導路徑之表現及/或活性有關之病理學病狀的重要治療性及診斷藥劑。在某些實施例中，提供結合Axl之抗體。本發明抗體可（例如）用於診斷或治療癌症。 A.實例性抗-Axl抗體在一態樣中，本發明提供結合Axl之分離抗體。在某些實施例中，抗-Axl抗體以$550 PM之親和力結合人類Axl，且在一些實施例中，以SI nM之親和力結合小鼠Axl。在一些實施例中，抗-Axl抗體結合人類及小鼠Axl。 156813.doc • 38 · 201204388 在一些實施例中，抗-Axl抗體誘導Axl受體表現在細胞表面（例如腫瘤細胞表面）上下調。在一些實施例中，將細胞表面Axl表現減小至小於在不存在Axl抗體治療時Axl細胞表面表現之80%。在一些實施例中，將細胞表面表現減小至在不存在Axl抗體治療時Axl細胞表面表現之小於 70%、小於60%、小於5 0%或小於40%。在一些實施例中，將細胞（例如，腫瘤細胞）中之總Axl表現減小至小於在不存在Axl抗體治療時總Axl表現之80%。在一些實施例中，將總Axl表現減小至在不存在Axl抗體治療時總Axl表現之小於70%、小於60%、小於50%或小於40%。在一些實施例中，Axl表現之下調可迅速發生並持續至少24小時。在一些實施例中，抗-Axl抗體抑制組成型Axl活性。在一些實施例中，抗-Axl抗體並不顯著與Sky或Mer交叉反應。在一些實施例中，抗-Axl抗體並不顯著結合Sky或 Mer且結合人類及小鼠Axl。在一些實施例中，抗- Axl抗體抑制Axl活性。在一些實施例中，抗- Axl抗體促進細胞（例如，腫瘤細胞，例如A549腫瘤細胞）之細胞凋亡。在一些實施例中，抗-Axl抗體抑制Axl配體（例如，Gas6)與Axl之結合。在一些實施例中，抗-Axl抗體抑制Axl下游信號傳導。在一些實施例中，抗- Axl抗體抑制Gas-6獨立性細胞增殖。在一些實施例中，抗-Axl抗體抑制來自腫瘤相關性巨嗤細胞之發炎細胞因子表現。在一些實施例中，抗-Axl抗體藉由調節腫瘤間質功能來抑制腫瘤生長及/或轉移。 156813.doc -39- 201204388 在一些實施例中，抗-Axl抗體結合包括下列胺基酸序列、基本上由其組成或由其組成之多肽： MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFV GNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILEL ADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCL VFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID NOilll)。在一些實施例中，抗-Axl抗體結合包括下列胺基酸序列、基本上由其組成或由其組成之多肽： ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQ AVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPH TPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL (SEQ ID NO:130) 在一些實施例中，抗體結合包括成熟人類Axl胺基酸序列之1-1 22號胺基酸、基本上由其組成或由其組成之多肽。在一些實施例中，抗體結合包括成熟人類Axl胺基酸序列之221-234號胺基酸、基本上由其組成或由其組成之多肽。在一些實施例中，抗-Axl抗體結合與以下序列具有至少 70%、80%、90%、95%、98%之序列一致性或相似性的胺基酸序列： MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFV GNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILEL ADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCL VFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID ΝΟ:111)。 156813.doc -40- 201204388 在一些實施例中，抗-Axl抗體結合與以下序列具有至少 70%、80%、90%、95%、98%之序列一致性或相似性的胺基酸序列： ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQ AVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPH TPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL (SEQ ID NO.130)。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:2之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:4之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:5之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:6之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗- Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID ΝΟ··10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（f)包括SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包 156813.doc • 41- 201204388 括SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列之11乂11丄1;(6)包括8£(5 1〇]^0:17之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:18之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:23之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:24之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:29之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:30之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包 156813.doc -42- 201204388 括SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:32之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:35之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:36之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:38之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:41之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:42之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2; (c)包括SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:46之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID ΝΟ··47之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID ΝΟ··48之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包 156813.doc -43- 201204388 括SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:53之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:54之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:55之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:56之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:57之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:58之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:59之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:60之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:61之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:62之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:63之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:64之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:65之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:66之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包 156813.doc -44- 201204388 括SEQ ID NO:67之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:68之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:70之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:71之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:72之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:73之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:74之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:75之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:76之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:77之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:78之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:79之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:80之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:81之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:82之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:83之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID ΝΟ··84之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包 156813.doc -45- 201204388 括SEQ ID NO:85之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID ]^0:86之胺基酸序列之11¥11-112;(〇包括8丑(^10 1^0:87之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:88之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:89之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:90之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:91之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:92之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:94之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:95之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:96之胺基酸序列之 HVR-L3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個選自以下之HVR之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:97之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:98之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID N0:100之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:101之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（f)包括SEQ ID NO:102之胺基酸序列之 HVR-L3。

在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ 156813.doc • 46- 201204388 ID ΝΟ:1之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:2之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:14 之胺基酸序列之11乂11-112;及（(〇包括8£(5 1〇]^0:15之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:20 之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:26 之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID ΝΟ··27之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有 156813.doc -47- 201204388 三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:32 之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 38之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 44之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 50之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:55之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 56之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:57之胺基酸序列之HVR-H3。 156813.doc -48- 201204388 在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:61之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 62之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID NO:63之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:67之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 68之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:73之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 74之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:75之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:79之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 80之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID NO:81之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:85之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO: 86之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQIDN0.87之胺基酸 156813.doc -49- 201204388 序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:91之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:92 之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3。在一態樣中，本發明提供包括至少一個、兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗-Axl抗體：（a)包括SEQ ID NO:97之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:98 之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:9 之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有 8£卩1〇]^0:15之胺基酸序列之11乂11-113。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之 HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有 SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:51之胺基酸序列之 HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有 156813.doc -50- 201204388 SEQ ID NO:63之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中’抗體包括含有SEq ID ΝΟ:75之胺基酸序列之 HVR_H3。在一實施例中’抗體包括含有seq id ν〇:81之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有 SEQ ID ΝΟ:87之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:93之胺基酸序列之HVR-H3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:99之胺基酿序列之 HVR-H3 » 在另一實施例中’抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:3之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID ΝΟ:6之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEq ID Ν〇:9之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID ΝΟ:12之胺基酸序列之 1^11-1^3。在一實施例中，抗體包括含有把(51〇1^0:15之胺基酸序列之11乂11-113及含有8£(5 1〇1<[〇:18之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEq id ΝΟ:21 之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID ΝΟ:24之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEq ID NO:27之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEq ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有 SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括 156813.doc -51- 201204388 含有SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:48之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:54之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:60之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:63之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO :66之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:72之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:75之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:78之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:81之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:84之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:87之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID NO:96之胺基酸序列之HVR-L3。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3及含有SEQ ID ]^〇:102之胺基酸序列之11¥11-]^3。在另一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之 HVR-L3及含有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:9之胺基酸序列之 156813.doc -52- 201204388 HVR-H3、含有SEQ ID NO:12之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:33 之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:32之胺基酸序列之 HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID N〇:38之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中’抗體包括含有SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3、含有SEQ ID NO:48之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中’抗體包括含有SEQ ID NO:51之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID ΝΟ··54之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID Ν〇:50之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中’抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:57之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID ΝΟ:60之胺基酸序列之HVR-L3及含 156813.doc -53· 201204388 有SEQ ID NO:56之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:63之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID NO:66之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:62之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:69之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID NO:72之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:68之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:75之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID NO:78之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:74之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:81之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID NO:84之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID NO:80之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID NO:87之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID ΝΟ··86之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:93之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID Ν〇:96之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID ΝΟ:92之胺基酸序列之HVR-H2。在一實施例中，抗體包括含有SEQ ID ΝΟ:99之胺基酸序列之 HVR-H3、含有SEQ ID ΝΟ:102之胺基酸序列之HVR-L3及含有SEQ ID ΝΟ:98之胺基酸序列之HVR-H2。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:2之胺基酸序列之 156813.doc -54- 201204388 HVR-H2 ；及（c)包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列之 HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ··8之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:9之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ··19之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:20 之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括 SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:27 之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a) 包括SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:32之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:38之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 156813.doc -55- 201204388 SEQIDNO:50之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQID NO:51之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:55之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:56之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO: 57之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:61之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 8丑卩1〇]^0:62之胺基酸序列之11¥11-112;及（(〇包括8£(^10 NO:63之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:67之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:68之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:73之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:74之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:75之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:79之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:80之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ.·81之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:85之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQIDNO:86之胺基酸序列之HVR-H2;及（c)包括SEQID NO: 87之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:91之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 SEQ ID NO:92之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3。在另一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:97之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括 156813.doc -56- 201204388 SEQ ID NO:98之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:4之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:5之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:6之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:11 之胺基酸序列之HVR-L2;及（c)包括SEQ ID NO:12之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:16 之胺基酸序列之 HVR-L1 ; (b)包括 SEQ ID ΝΟ··17 之胺基酸序列之1^11-1^2;及〇)包括8£(5 10>10:18之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:23 之胺基酸序列之HVR-L2;及（c)包括SEQ ID NO:24之胺基酸序列之HVR-L3。

在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ 156813.doc -57- 201204388 ID NO:28之胺基酸序列之HVR-Ll ; (b)包括SEQ ID NO:29 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:30之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-Ll ; (b)包括SEQ ID NO:35 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-Ll ; (b)包括SEQ ID NO:41 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:46之胺基酸序列之HVR-Ll ; (b)包括SEQ ID NO:47 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:48之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-Ll ; (b)包括SEQ ID NO:53 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:54之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、 I56813.doc -58- 201204388 或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:58之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:59 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO.60之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:64之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:65 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:66之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:70之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:71 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:72之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:76之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:77 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:78之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID ΝΟ··82 之胺基酸序列之 HVR-L1 ; (b)包括 SEQ ID NO:83 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:84之胺基酸序列之HVR-L3。 156813.doc -59- 201204388 在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:88之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:89 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:90之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID NO:94之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:95 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:96之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之抗體：（a)包括SEQ ID N0:100之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:101之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID ]^〇:102之胺基酸序列之11¥11-[3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:4之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:5之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（c)包括SEQ ID NO:6之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NOilO 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:12之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:16 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:17之胺基酸序列之1^^11-1^2;及（〇包括8£(5 10 1^0:18之胺基酸序列之 156813.doc -60- 201204388 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:22 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:23之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:24之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:28 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:29之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:30之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:34 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:35之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:36之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:40 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ··41之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:42之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:46 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ··47之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:48之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:52 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:53之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:54之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:5 8 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:59之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:60之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID ΝΟ:64 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:65之胺基酸序列之HVR-L2;及（c)包括SEQ ID ΝΟ:66之胺基酸序列之丨I:: 156813.doc -61 - 201204388 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:70 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:71之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:72之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:76 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:77之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:78之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:82 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:83之胺基酸序列之11乂11丄2;及（(〇包括3£(^1〇]^0:84之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO: 8 8 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:89之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:90之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID NO:94 之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:95之胺基酸序列之11乂11-1^2;及（(〇包括8£(^1〇]^0:96之胺基酸序列之 HVR-L3。在一實施例中，抗體包括（a)包括SEQ ID N0:100之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID NO:101 之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:102之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： (i)包括SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:2之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一 156813.doc -62- 201204388 個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域··⑴包括SEQ ID NO:4之胺基酸序列之HVR-Ll、 (ii)包括SEQ ID NO:5之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:6之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1、 (Π)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括把(^1]〇1^0:12之胺基酸序列之^1¥11_1^。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括犯卩10>^0:14之胺基酸序列之1^11-112、及(^丨）包括選自 SEQIDNO:15之胺基酸序列之HVR-H3;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:16之胺基酸序列之HVR-L1、 0)包括8£()1〇>^〇:17之胺基酸序列之1^11-1^2、及（(：）包括 8丑(^10 1^0:18之胺基酸序列之1^1^3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： 156813.doc -63- 201204388 (i) 包括SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-Hl、（ii)包括 SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：（i)包括SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii) 包括SEQ ID NO:23之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:24之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-Hl、（ii)包括 SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：（i)包括SEq ID n〇:28之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID NO:29之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 8£卩1〇1\[〇:3 0之胺基酸序列之1^11-1^3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-Hl、（ii)包括 SEQ ID NO:32之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID N〇:33之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：（i)包括SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID NO:35之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 156813.doc •64· 201204388 SEQ ID NO:36之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:38之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-L1、 (Π)包括SEQ ID NO:41之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:42之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:44之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:45之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:46之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID N0..47之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NCM8之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID ΝΟ··51之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一 156813.doc -65- 201204388 個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID NO:53之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:54之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:55之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:56之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQIDNO:5 7之胺基酸序列之HVR-H3;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID ΝΟ··58之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID ΝΟ:5 9之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID ΝΟ:60之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:61之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:62之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 8丑卩1〇]^0:63之胺基酸序列之11¥11-113;及（13)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID ΝΟ··64之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID ΝΟ:65之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 8丑〇1〇]^0:66之胺基酸序列之11¥11丄3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： 156813.doc -66- 201204388 (i) 包括SEQ ID NO:67之胺基酸序列之HVR-Hl、（ii)包括 SEQ ID NO:68之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：（i)包括SEQ ID NO:70之胺基酸序列之HVR-L1、 (Π)包括SEQ ID ΝΟ··71之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID ΝΟ:72之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:73之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:74之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID ΝΟ··75之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:76之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii) 包括SEQ ID NO:77之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:78之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:79之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:80之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:81之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:82之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID NO:83之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 !|：： 156813.doc -67- 201204388 SEQ ID NO:84之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： (i) 包括SEQ ID NO:85之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:86之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQIDNO:87之胺基酸序列之HVR-H3;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:88之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii) 包括SEQ ID NO:89之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:90之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:91之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:92之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：⑴包括SEQ ID NO:94之胺基酸序列之HVR-L1、 (ii)包括SEQ ID NO:95之胺基酸序列之HVR-L2、及（c)包括 SEQ ID NO:96之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明抗體包括（a)包括至少一個、至少兩個、或所有三個選自以下之VH HVR序列之VH結構域： ⑴包括SEQ ID NO:97之胺基酸序列之HVR-H1、（ii)包括 SEQ ID NO:98之胺基酸序列之HVR-H2、及（iii)包括選自 SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3 ;及（b)包括至少一 156813.doc -68 - 201204388 個、至少兩個、或所有三個選自以下之VL HVR序列之VL 結構域：（丨)包括8£(^1〇]^〇:100之胺基酸序列之11¥11-[1、 (^)包括8£〇10 1^0:101之胺基酸序列之11¥11-[2、及（(；）包括SEQ ID NO:102之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:2之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:4之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:5之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID ΝΟ·_6之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVH-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括. SEQ ID NO:13之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:14之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:15之胺基酸序列之HVR-H3;(d)包括SEQIDNO:16之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:17之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之 156813.doc -69- 201204388 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:19之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:20之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:21之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:22之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NCh23之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（f)包括SEQ ID NO:24之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:25之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:26之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:27之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:28之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:29之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:30之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:31之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:32之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:33之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:34之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:35之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:36之胺基酸序列之 HVR-L3。

在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:37之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID 156813.doc -70- 201204388 NO:38之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:39之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:40之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:41之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:42之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:43之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID 1^0:44之胺基酸序列之11乂11-1^;((〇包括8£(5 10>10:45之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID ΝΟ··46之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID ΝΟ:47之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（f)包括SEQ ID ΝΟ:48之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:49之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:50之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:51之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:52之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID ΝΟ··53之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID ΝΟ:54之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:55之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:56之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:57之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:58之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:59之胺基酸序列之 156813.doc -71 - 201204388 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:60之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:61之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:62之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:63之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:64之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:65之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（f)包括SEQ ID NO:66之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:67之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:68之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:69之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:70之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:71之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:72之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:73之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:74之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:75之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:76之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:77之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:78之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 156813.doc •72- 201204388 SEQ ID NO:79之胺基酸序列之HVR-Hl ; (b)包括SEQ ID NO:80之胺基酸序列之HVR-H2; (c)包括SEQ ID NO:81之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:82之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID ΝΟ··83之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID ΝΟ:84之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID ΝΟ·_85之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:86之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:87之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:88之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:89之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:90之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:91之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:92之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:93之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID NO:94之胺基酸序列之HVR-L1 ; (e)包括SEQ ID NO:95之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:96之胺基酸序列之 HVR-L3。在另一態樣中，本發明提供包括以下之抗體：（a)包括 SEQ ID NO:97之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:98之胺基酸序列之HVR-H2 ; (c)包括SEQ ID NO:99之胺基酸序列之HVR-H3 ; (d)包括SEQ ID N0:100之胺基酸 156813.doc -73- 201204388 序列之HVR-Ll ; (e)包括SEQ ID NO:101之胺基酸序列之 HVR-L2 ；及（f)包括SEQ ID NO:102之胺基酸序列之 HVR-L3 » 在某些實施例中，上文所提供抗-Axl抗體之任一或多個胺基酸在下列HVR位置經取代或不存在： -在HVR-H1 (SEQ ID NO:7)中：位置2、3、4、5、6、7、 8 、 9 、及10 ; -在 HVR-H2 (SEQ ID NO:8)中：位置1、2、4、6、7、8、 9、及 10 ; -在11¥11-113(8£(^10 1^0:9)中：位置3、4、5、6、7、8、 9 、 10 、 11 、 12 、 13 、 14 、或15 ; -在《^11-1^1(8丑(）1〇]^〇:10)中：位置5、6、7、8、9、及 10 ； -在 HVR-L2 (SEQ ID ΝΟ:11)中：位置 1、4、及 6 ; -在11乂11-1^3(8£(5 1〇]^0:12)中：位置3、4、5、6、7、及 8 ° 在某些實施例中，本文所提供之取代係保守取代。在某些實施例中，下列取代中之任一個或多者可以任一組合進行： -在 HVR-H1 (SEQ ID NO:7)中：S28T; L29F或 V: S30T或 R ; G31S ; S32H、T或 I ; W33G ; I34L ; -在 HVR-H2 (SEQ ID NO:8)中：G49A ; W50G ; N52S、 A、或 P ; Y53A 或 V ; R54G 或 S ; G5 5S 或 R ; Y5 6S 或 Η ; Α57Τ或Ρ ; 156813.doc • 74· 201204388 -在 HVR-H3 (SEQ ID NO:9)中：E95W ; Y96R ; S97N或 P ; G98D或 L ; W99S ; G100R、A、或 S ; GlOOaS ; SlOOb不存在；SlOOcY或不存在；VIOOdI或不存在；GlOOe或不存在；YlOOf或不存在；AlOOgE或不存在； -在 HVR-L1 (SEQ ID NO:10)中：D28I 或 S ; V29I ; S30G或 R ; T31I、N或 R ; A32S ; V33L ; -在 HVR-L2 (SEQ ID ΝΟ:11)中：S50A 或 V ; F53N或 S ; Y55A ； -在 HVR-L3 (SEQ ID ΝΟ]2)中：S91A ; Y92K 或 N ; T93S、Y、Μ、R、或 A ; T94N、F、或 S ; P95R ; P96Y、 S、或L。在某些實施例中，下列取代中之任一個或多者可以任一組合進行： -在 HVR-H1 (SEQ ID NO:7)中：S28T ; L29F或 V : S30T ; G31S ； S32H、T或 I ; -在 HVR-H2 (SEQ ID NO:8)中：N52S、或 A ; R54G或 S ; G55R ; Y56S、或 Η ; A57T或 P ; -在 HVR-H3 (SEQ ID ΝΟ:9)中：S97N 或 Ρ ; G98D ; G100 S ； -在 HVR-L3 (SEQ ID ΝΟ:12)中：T93S、或 Υ ; Τ94Ν、F、或S。共有序列涵蓋上述取代之所有可能組合： -HVR-H1 (SEQ ID NO:112): GFXiXzXAXsXAH，其中 XI 係 S 或 T ; X2係 L、F或 V ; X3係 S、T、或 R ; X4係 G或 S ; 156813.doc -75- 201204388 X5係S、Η、T或I ;又6係W或G ; X7係I或L ;

-在 HVR-H2 (SEQ ID NO:113)中：XiXjXsPXAXAXsY YADSVKG ’其中又,係G或A ; X2係W或G ; X3係N、S、A 或 P ; X4 係 Y、A 或 V ; X5 係 R、G、或 S ; X6 係 G、R 或 S ; X7係Y、S、H或Y ;又8係八、T、或P;及/或（SEQ ID NO:166) : XAJXsPAXsXeXasXsXwYYADSVKG，其中或 A ; X2係 W或 G ; X3係 N、S、A或 P ; X4係 Y、A或 V ; X5係 R、G、或 S ; X6係 G、R或 S ; X7係 Y、S、H 或 Y ; X8係A、T、或P ; X9係任一胺基酸或不存在；x1〇係任一胺基酸或不存在； -在 HVR-H3 (SEQ ID NO:114)中：ARXjXAXAXAXs X9X10XnX12X13MDY，其中或 W ; X2係 Y或 R ; χ3係 S、Ν 或 Ρ ; Χ4係 G、D、或 L ; Χ5係 W 或 S ; Χ6係 G、R、A、或S ; XHIiG或S ; X8係S或不存在；X9係S、Y或不存在；又10係V、I或不存在；又„係G或不存在；乂12係Y或不存在；Χι3係A、Ε或不存在； -在 HVR-L1 (SEQ ID ΝΟ:115)中：RASQXAXsXaXsXa，其中Xi係D、I或S ; X2係V或I ; X3係S、G或R ; X4係τ、 I、N或R ;又5係八或S ;又6係乂或L ; -在 HVR-L2 (SEQ ID NO:116)中：XASXAXsS，其中父1係 S、A、或 V ; X2係 F、N 或 S ; X3 係 Y 或 A ; -在 HVR-L3 (SEQ ID NO:117)中：QQX!X2X3 X4 X5X6丁，其中 Xi 係 S 或 A ; X2係 Y、K 或 Ν ; X3 係 T、S、Y、Μ、R 或 A ; Χ4係 Τ、Ν、S、或 F ; Χ5係 Ρ 或 R ; Χ6係 Ρ、Υ、S 或 L。 156813.doc •76- 201204388 在一些實施例中，提供下列共有序列： -在 HVR-Hl (SEQ ID NO:118)中：GFXJ2X3GX4WIH，其中又“系丁或S，X2係F或L，X3係T或S，X4係Η、S或T ; -在 HVR-H2 (SEQ ID ΝΟ:119)中：GWIXjPYXAXAYY ADSVKG，其中乂1係3、N或A ; X2係G、R或S ; X3係G或 R ; X4係 S、Y或 Η ; X5係 T、A 或 P ; -在 HVR-H3 (SEQ ID NO:120)中：AREYXAWXASXA GYX7MDY，其中 X々S、N或 P ; X2係 G或 D ; X3係 G、R、或A ; X4係G或S ; X5係S或Y ; X6#V或I ; X7係A或E ; -在 HVR-L3 (SEQ ID NO:121)中：QQSYXJzXJJ，其中、S或 Y ; X2係T、N、S或 F ; X3係P或R ; x4係P、γ 或s。在另一態樣中，抗-Axl抗體包括與SEQ ID NO:1〇3、 105、107或109之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 1〇〇%之序列一致性的重鏈可變結構域（VH)序列。在某些實施例中，具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、或99°/。之一致性之VH序列相對於參考序列含有取代（例如，保守取代）、***、或缺失，但包括該序列之抗-Axl抗體保持結合Axl之能力。在某些實施例中，總共1至10個胺基酸在SEQ ID NO: 103、105、1〇7或1〇9中發生取代、***及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入、或缺失發生於HVR外側之區域中（亦即，在fr中）。視需要’抗-Axl抗體包括SEQ ID NO:103、105、1〇7或1〇9中 156813.doc •77- 201204388 之VH序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR : (a)包括 SEQ ID ΝΟ:1、7、13、19、25、31、37、43、49、55、 61、67、73、79、85、91、或97之胺基酸序列之 HVR-H1，（b)包括 SEQ ID NO:2、8、14、20、26、32、 38、44、50、56、62、68、74、80、86、92、或 98 之胺基酸序列之HVR-H2，及（c)包括 SEQ ID NO:3、9、15、21、 27 、 33 、 39 、 45 、 51 、 57 、 63 、 69 ' 75 、 81 、 87 、 93或99 之胺基酸序列之HVR-H3。在一特定實施例中，VH包括一個、兩個或三個選自以下之HVR:(a)包括SEQIDNO:7之胺基酸序列之HVR-H1，（b)包括SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2，及（c)包括SEQ ID NO:9之胺基酸序列之 HVR-H3。

在另一態樣中，提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括與 SEQ ID NO:104、106、108或110之胺基酸序列具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%、或100%之序列一致性的輕鏈可變結構域（VL)。在某些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、或99%之一致性之VL序列相對於參考序列含有取代（例如，保守取代）、***、或缺失，但包括該序列之抗-Axl抗體保持結合PRO之能力。在某些實施例中，總共1至10個胺基酸在SEQ ID NO: 104、106、108 或110中發生取代、***及/或缺失。在某些實施例中，取代、***、或缺失發生於HVR外側之區域中（亦即，在FR 156813.doc -78- 201204388 中）。視需要，抗-Axl抗體包括SEQ ID NO:104、106、108 或110中之VL序列，包含該序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR : (a)包括 SEQ ID NO:4、10、16、22、28、34、40、46、 52、58、64、70、76、82、88、94、或 100之胺基酸序列之 HVR-L1 ; (b)包括 SEQ ID NO: 5、11、17、23、29、 35、41、47、53、59、65、77、83、89、95、或 101 之胺基酸序列之 HVR-L2 ;及（c)包括 SEQ ID NO: 6、12、18、 24 、 30 、 36 、 42 、 48 、 54 、 60 、 66 、 72 、 78 、 84 、 90 、 96 或102之胺基酸序列之HVR-L3。在一特定實施例中，VL包括一個、兩個或三個選自以下之HVR : (a)包括SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之HVR-L2;及（c)包括SEQ ID NO:12之胺基酸序列之HVR-L3。在另一態樣中，提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括如上文所提供任一實施例中之VH。在一些實施例中，抗體進一步包括VL。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO:103中之VH序列。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO: 105中之 VH序列。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO: 107中之 VH序列。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO: 109中之 VH序列。在另一態樣中，提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括如上文所提供任一實施例中之VL。在一些實施例中，抗體進一步包括VH。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO:104中 156813.doc -79- 201204388 之VL序列。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO:106中之 VL序列。在一實施例中’抗體包括SEQ ID NO:108中之VL 序列。在一實施例中，抗體包括SEQ ID NO: 110中之VL序列。在另一態樣中，提供抗-Axl抗體，其中該抗體包括如上提供之任一實施例中之VH及如上提供之任一實施例中之 VL。在一個實施例中，抗體包括分別於SEQ ID NO:103及 SEQ ID NO:104中之VH及VL序列，包含該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，抗體包括分別於SEQ ID NO:105及SEQ ID NO:106中之VH及VL序列，包含該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，抗體包括分別於SEQ ID NO:107及SEQ ID NO:1〇8中之VH及VL序列，包含該等序列之轉譯後修飾。在一個實施例中，抗體包括分別於 SEQ ID NO:109 及 SEQ ID NO:110 中之 VH 及 VL序列’包含該等序列之轉譯後修飾。本發明抗體可包括任何適宜框架可變結構域序列，但 Axl之結合活性實質上保持。舉例而言，在一些實施例中，本發明抗體包括人類ΠΙ亞群重鏈框架共有序列。在該等抗體之一個實施例中，該框架共有序列在位置71、73及/ 或78包括取代。在該等抗體之一些實施例中，位置71係 A，73係T及/或78係A。在一個實施例中，該等抗體包括 huMAb4D5-8(HERCEPTIN® > Genentech，Inc., South San Francisco，CA，USA)(在美國專利第 6,407,213 及5,821，337 號及 Lee 等人，J. Mol. Biol. (2004), 340(5): 1073-1093 中亦 156813.doc -80 · 201204388 提及）之重鏈可變結構域框架序列。在一個實施例中，該等抗體進一步包括人類κΐ輕鏈框架共有序列。在一個特定實施例中，該等抗體包括如美國專利第6,407,213及 5,821，337號中所述之huMAb4D5-8之輕鏈HVR序列。在一個實施例中，該等抗體包括huMAb4D5-8(HERCEPTIN®， Genentech，Inc·，South San Francisco, CA，USA)(在美國專利第 6,407,213 及 5,821,337 號及 Lee 等人，J. Mol. Biol. (2004), 3 40(5):1073-1093中亦提及）之輕鏈可變結構域序列。在一個實施例中，抗-Axl抗體包括上述任一實施例中之HVRs，且進一步包括VH及/或VL，其包括圖2、3A-B、 4、5或6中所示之FR1、FR2、FR3或FR4序歹ij。

在另一態樣中，本發明提供與本文所提供抗-Axl抗體結合相同表位之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供與包括SEQ ID NO:103之VH序列及SEQ ID NO:104之VL序列之抗-Axl抗體結合相同表位的抗體。在某些實施例中，提供與包括SEQ ID NO:107之VH序列及SEQ ID NO: 108之VL 序列之抗-Axl抗體結合相同表位的抗體。在某些實施例中，提供結合以下胺基酸組成之Axl片段内之表位的抗體：MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEES

PFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQI LELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQY QCLVFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID ΝΟ:111)。在某些實施例中，提供結合以下胺基酸組成之Axl片段内之表位的抗體：ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLT ιΓ·: 156813.doc -81 - 201204388 HCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLG SLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL (SEQ ID NO: 130)。在另一態樣中，本發明提供與包括SEQ ID NO:103之VH 序列及SEQ ID NO:104之VL序列之抗-Axl抗體競爭結合人類Axl的抗體。在某些實施例中，提供與包括SEQ ID NO:107之VH序列及SEQ ID NO:108之VL序列之抗-Axl抗體競爭結合人類Axl的抗體。在本發明另一態樣中，上文任一實施例之抗-Axl抗體係單株抗體，包含嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一實施例中，抗- Axl抗體係抗體片段，例如，Fv、Fab、 Fab·、scFv、雙鏈抗體、或F(ab')2片段。在另一實施例中，抗體係全長抗體，例如，完整IgG抗體或如本文所定義之其他抗體種類或同種型。在另一態樣中，上文任一實施例之抗-Axl抗體可單獨或組合納入任一特徵，如下文在部分1 -7中所述： 1.抗體親和力在某些實施例中，本文所提供抗體之解離常數（Kd)為£1 μΜ ' <100 ηΜ ' <10 ηΜ ' <1 ηΜ ' <0.1 ηΜ ' <0.01 ηΜ ' 或 <0.001 ηΜ(例如10_8 Μ或更小，例如1 (Γ8 Μ至1 Ο·13 Μ，例如，10_9 Μ至 10·13 Μ)。在一實施例中，藉由放射性標記之抗原結合分析（RIA) 來量測Kd，該放射性標記之抗原結合分析係使用目標抗體之Fab形式及其抗原如下列分析中所述來實施。藉由如下方式來量測Fab對抗原之溶液結合親和力：在滴定系列之 156813.doc -82 - 201204388 未經標記抗原存在下使用最小濃度之經（125ι)標記之抗原平衡Fab，然後使用塗敷有抗-Fab抗體之板捕獲已結合之抗原（例如，參見，Chen等人，J_ Mol. Biol. 293:865-881 (1999))。為確立該分析之條件，使用存於50 mM碳酸鈉 (pH9.6)中之5μg/ml捕獲抗-Fab抗體（CappelLabs)將 MICROTITER®多孔板（Thermo Scientific)塗敷過夜，並隨後在室溫（約23°C )下使用存於PBS中之2% (w/v)牛血清白蛋白阻斷2至5小時。在非吸附性板（Nunc #269620)中，將 100 pM或26 pM [1251]-抗原與目標Fab之連續稀釋液混合 (例如，與抗-VEGF抗體Fab-12之評價一致，參見presta等人，Cancer Res. 57:4593-4599 (1997))。然後將目標 Fab培育過夜；然而，可繼續培育較長時間（例如，約65小時）以確保達到平衡。然後，將混合物轉移至捕獲板中以在室溫下進行培育（例如，一小時）。然後去除溶液且使用存於 PBS中之0.1%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20®)將板洗滌8次。在板已乾燥時，添加150 μΐ/孔之閃爍體（MICROSCINT-20 TM ; Packard)，且在 TOPCOUNT ΤΜγ計數器（Packard)上經 10分鐘對該等板進行計數。選擇得到小於或等於20%之最大結合之每一 Fab的濃度用於競爭性結合分析。根據另一實施例，Kd係藉由利用表面電漿共振分析進行量測，該分析係在25°C下使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3 000(BIAcore 公司，Piscataway，NJ)用固定抗原 CM5 晶片以約10個反應單位（RU)實施。簡言之，按照供應商說明書使用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基）-碳化二亞胺鹽酸鹽 156813.doc -83- 201204388 (EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺（NHS)來活化羧曱基化之葡聚糖生物感測器晶片（CM5，BIACORE公司）。使用10 mM乙酸鈉（pH 4.8)將抗原稀釋至5 pg/ml(約0·2 μΜ)，然後以5 μΐ/分鐘之流速注射以達成約10個反應單位（RU)之接合蛋白。注射抗原後，注射1 Μ乙醇胺以阻斷未反應之基團》對於動力學量測，將Fab之兩倍連續稀釋液（0.78 ηΜ至500 ηΜ)在25°C下以約25 μΐ/min之流速注射至具有0.05%聚山梨醇酯20 (TWEEN-20tm)表面活性劑的PBS (PBST)中。使用簡單一對一 Langmuir結合模型（BIACORE ®評估軟體，版本3·2)藉由同時擬合締合及解離感應圖譜來計算締合速率（k*合）及解離速率（k««〇 ^以比率之形式來計算平衡解離常數（Kd)。例如，參見Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)。若藉由上述表面電漿共振分析測得之上速率超過106 M·1 S·1，則上速率可藉由使用螢光猝滅技術進行測定，該技術在25°C下於增加濃度之抗原存在下量測存於PBS (pH 7.2)中之20 ηΜ抗-抗原抗體（Fab形式）之螢光發射強度的增加或降低（激發波長=295 nm ;發射波長= 340 nm，16 nm帶通），如於分光光度計中所量測，例如帶有授拌比色杯之停流裝備之分光光度計（Aviv Instruments)或 8000-系列 SLM-AMINCOtm分光光度計（ThermoSpectronic)。 2.抗體片段在某些實施例中，本文所提供抗體係抗體片段。抗體片段包含但不限於 Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、及 scFv片段、及下文所述之其他片段。關於某些抗體片段之 136813.doc -84- 201204388 綜述，參見Hudson等人Nat. Med. 9:129-134 (2003)。關於 scFv片段之綜述，例如，參見Pluckthiin， The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷’ Rosenburg 及 Moore 編輯（Springer-Verlag，New York) ’ 第 269-3 15頁（1994);亦參見WO 93/16185、及美國專利第 5,571，894號及第5,587,458號。關於包括補救受體結合表位殘基且具有增加之活體内半衰期之Fab及F(ab')2片段的論述，參見美國專利第5,869,046號》雙鏈抗體係具有兩個抗原結合位點之可為二價或雙特異性之抗體片段。例如，參見EP 404,097 ; WO 1993/01161 ; Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003);及Hollinger等人，Proc· Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)。三鍵抗體及四鏈抗體亦闡述於Hudson等人’ Nat. Med_ 9:129-134 (2003)中。單一結構域抗體係包括抗體中重鏈可變結構域之全部或一部分或輕鏈可變結構域之全部或一部分的抗體片段。在某些實施例中，單一結構域抗體係人類單一結構域抗體 (Domantis公司，Waltham，ΜΑ ;例如，參見美國專利第 6,248,516 B1 號）。可藉由各種技術來製備抗體片段’包含但不限於蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞（例如大腸桿菌（E. coli)或噬菌體）來產生，如本文所述。嵌合及人類化抗艎在某些實施例_，本文所提供抗體係嵌合抗體。某些嵌 156813.doc • 85- 201204388 合抗體闡述於（例如）美國專利第4,816,567號、及Morrison 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)) 中。在一實例中’嵌合抗體包括非人類可變區域（例如，源自小鼠、大鼠、倉鼠、兔、或非人類靈長類動物（例如猴子）之可變區域）及人類恆定區域。在另一實例中，嵌合抗體係種類或子類已自親代抗體發生變化之「種類轉換」抗體。嵌合抗體包含其抗原結合片段。在某些實施例中，嵌合抗體係人類化抗體。通常，將非人類抗體人類化以減小對人類之免疫原性，而保留親代非人類抗體之特異性及親和力。通常，人類化抗體包括一或多個可變結構域，其中HVR(例如，CDR)(或其部分）源自非人類抗體，且FR(或其部分）源自人類抗體序列。人類化抗體視需要亦包括人類恆定區域之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體 (例如，產生HVR殘基之抗體）之相應殘基取代以（例如）恢復或改良抗體特異性或親和力。人類化抗體及其製備方法可參見（例如）Almagro及

Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)中，且進一步闡述於（例如）以下出版物中：Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988) ; Queen等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989);美國專利第 5,821,337號、第 7,527,791 號、第 6,982,321 號、及第 7,087,4〇9 號； Kashmiri 等人，Methods 36:25-34 (2005)(闡述 SDR(a-CDR)接枝）；Padlan，Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)(闡述 156813.doc ·86· 201204388 「翻新」）；Dall’Acqua等人，Methods 36:43-60 (2005)(闡述「FR 改組」）；及 Osbourn 等人，Methods 36:61-68 (2005)及 Klimka等人，Br. J· Cancer 83:252-260 (2000)(闡述用於FR改組之「引導選擇」方式）。可用於人類化之人類框架區域包含但不限於：使用「最佳擬合j方法選擇之框架區域（例如，參見，Sims等人J. Immunol. 151:2296 (1993));源自輕鏈或重鏈可變區域之特定亞群之人類抗體之共有序列的框架區域（例如，參見，Carter 等人 Proc. Natl· Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992);及 Presta 等人 J. Immunol·，151:2623 (1993));人類成熟（經體突變）框架區域或人類種系框架區域（例如，參見，Almagro 及 Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008));及自篩選FR文庫獲得之框架區域（例如，參見， Baca等人，J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及 Rosok 等人，J· Biol· Chem. 271:22611-22618 (1996))。 4.人類抗體在某些實施例中，本文所提供抗體係人類抗體。可使用業内已知之各種技術來產生人類抗體。人類抗體概述於 van Dijk及 van de Winkel，Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008) 中 o 可藉由向轉基因動物投與免疫原來製備人類抗體，該轉基因動物已經改良以產生具有響應抗原性激發之人類可變區域的完整人類抗體或完整抗體。該等動物通常含有人類 156813.doc •87· 201204388 免疫球蛋白基因座之全部或一部分，該等基因座可代替内源免疫球蛋白基因座，或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中。在該等轉基因小鼠中，内源免疫球蛋白基因座通常已活化。關於自轉基因動物獲得人類抗體之方法的綜述，參見Lonberg，Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)。亦例如，參見美國專利第6,075，181號及第6,150,584號（闡述XEN0M0USETK^iL術）、美國專利第5,770,429號（闡述 HUMAB®技術）、美國專利第7,041，870號（闡述K-M MOUSE®技術）、及美國專利申請公開案第US 2007/0061900號（闡述 VELOCIMOUSE®技術）。可進一步 (例如）藉由與不同人類恆定區域進行組合來修飾來自由該等動物產生之完整抗體的人類可變區域。人類抗體亦可藉由基於雜交瘤之方法製得。已闡述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜交骨髓瘤細胞系。（例如，參見 Kozbor J· Immunol·，133: 3001 (1984) ; Brodeur 等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第 51-63 頁（Marcel Dekker公司，New York，1987);及 Boerner 等人，J. Immunol.，147: 86 (1991)。）經由人類B-cell雜交瘤技術產生之人類抗體亦闡述於 Li等人，Proc. Natl. Acad· Sci. USA，103:3557-3562 (2006)中。其他方法包含彼等闡述於（例如）美國專利第 7，189,826號（闡述來自雜交瘤細胞系之單株人類IgM抗體之產生）及Ni，Xiandai Mianyixue，26(4):265-268 (2006)(闡述人類-人類雜交瘤）中者。人類雜交瘤技術（Trioma技術）亦 156813.doc -88 - 201204388 闡述於 Vollmers 及Brandlein，Histology & Histopathology， 20(3):927-937 (2005)及 Vollmers 及 Brandlein，Methods & Findings in Exp.& Clin. Pharmacology, 27(3):185-91 (2005) 中。亦可藉由分離選自人類源噬菌體展示文庫之Fv純系可變結構域序列來產生人類抗體。該等可變結構域序列然後可與期望之人類恆定結構域進行組合。自抗體文庫選擇人類抗體之技術闡述於下文中。 5.源自文庫之抗體可藉由自組合文庫篩選具有一或多種期望活性之抗體來分離本發明抗體。舉例而言，業内已知用於產生噬菌體展示文庫及自該等文庫篩選具有期望結合特性之抗體的各種方法。該等方法可例如，參見Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien 等人，編輯， Human Press，Totowa，NJ，2001)，且進一步闡述於（例如）以下中：McCafferty等人，Nature 348:552-554 ; Clackson 等人，Nature 352: 624-628 (1991) ; Marks等人，J· Mol. Biol. 222: 581-597 (1992) ; Marks及 Bradbury，Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編輯，Human Press, Totowa，NJ, 2003) ; Sidhu等人，J. Mol· Biol. 338(2): 299-310 (2004) ; Lee等人，J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004) ； Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004);及 Lee 等人，J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)。 156813.doc -89- 201204388 在某些噬菌體展示方法中’藉由聚合酶鏈反應（PCR)來單獨選殖VH及VL基因譜且隨機重組至噬菌體文庫中，然後可篩選結合抗原之嗤菌體’如winter等人，Ann· Rev. Immunol.，12: 433-455 (1994)中所述。噬菌體通常展示抗體片段，該抗體片段係單鏈Fv (scFv)片段或Fab片段。來自免疫化來源之文庫可向免疫原提供高親和力抗體而無需構建雜交瘤。另一選擇為，可選殖天然譜（例如，自人類）以向各種無任何免疫之非自體抗原以及自體抗原提供單一來源之抗體，如由Griffiths等人’ EMBO J, 12: 725-734 (1993)所述。最後，亦可藉由以下方式以合成方式製得天然文庫：選殖來自幹細胞之未重排V-基因片段，且使用含有隨機序列之PCR引物編碼高度可變CDR3區域並在活體外進行重排，如由 Hoogenboom及 Winter, J. Mol. Biol.， 227: 381-388 (1992)所述。闡述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包含（例如）：美國專利第5,750,373號、及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第 2005/0266000號、第 2007/0117126號、第 2007/0160598 號、第 2007/0237764 號、第 2007/0292936 號、及第 2009/0002360號。自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段可視為本文中之人類抗體或人類抗體片段。 6.多特異性抗想在某些實施例中，本文所提供之抗體係多特異性抗體’ 例如雙特異性抗體。多特異性抗體係具有關於至少兩個不 156813.doc -90- 201204388 同位點之結合特異性的單株抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者係關於Axl且另一者係關於任一其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合Axl之兩個不同表位。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑局域化至表現Axl之細胞。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段形式製得。製備多特異性抗體之技術包含但不限於重組共表現具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對（參見Milstein及 Cuello，Nature 305: 537 (1983))、WO 93/08829、及 Traunecker等人，EMBO J. 10: 3655 (1991))、及「球窩配對」工程（例如，參見美國專利第5,73 1,168號）。亦可藉由以下方式來製備多特異性抗體：改造用於製備抗體Fc-異源二聚體分子之靜電牽引效應（WO 2009/089004A1);使兩個或兩個以上抗體或片段交聯（例如，參見美國專利第 4,676,980號、及 Brennan等人，Science 229: 81 (1985)); 使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體（例如，參見，Kostelny 等人，J. Immunol·，148(5):1547-1553 (1992));使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙鏈抗體」技術（例如，參見，Hollinger等人，Proc· Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993));及使用單鏈Fv (sFv)二聚體（例如，參見 Gruber等人，J. Immunol. 152:5368 (1994));及製備三特異性抗體，如（例如）Tutt等人，J. Immunol. 147: 60 (1991) 中所述。本文亦包含經構建以具有三個或更多個功能抗原結合位 156813.doc -91 - 201204388 點之抗體（包含「章魚抗體」）（例如，參見us 2006/0025576A1) ° 本文之抗體或片段亦包含含有結合Αχ1以及另一不同抗原之抗原結合位點的「雙重作用之FAb」或「DAF」（例如，參見US 2008/0069820)。 7.抗體變髏在某些實施例中，本發明涵蓋本文提供抗體之胺基酸序列變體。舉例而言，可能期望改良抗體之結合親和力及/ 或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變體係藉由向編碼抗體之核苷酸序列中引入適宜修飾或藉由肽合成來製備。該等修飾包含（例如）抗體胺基酸序列中殘基之缺失、及/或插入及/或取代。可實施缺失、***及取代之任一組合以達成最終構建體，前提係最終構建體應具有期望特性，例如抗原結合性》 a)取代、***、及缺失變趙在某些實施例中，k供具有一或多個胺基酸取代之抗體變體。用於取代誘變之目標位點包含HVR及FR^保守取代示於表1之「保守取代」標題下。該等實質性變化提供於表1之「實例性取代」標題下，且如下文參照胺基酸側鏈種類進一步所述。可將胺基酸取代引入目標抗體及經篩選具有期望活性之產物中，該期望活性係（例如）保持/改良抗原結合、降低免疫原性、或改良ADCC或CDC。 156813.doc -92· 201204388 表1 初始殘基實例性取代較佳取代 Ala (A) Val ; Leu ; lie Val Arg(R) Lys ; Gin ; Asn Lys Asn (N) Gin ； His ； Asp, Lys ； Arg Gin Asp (D) Glu ； Asn Glu Cys (C) Ser ; Ala Ser Gin (Q) Asn ; Glu Asn Glu (E) Asp ; Gin Asp Gly (G) Ala Ala His (H) Asn ; Gin ; Lys ; Arg Arg lie (I) Leu ; Val ; Met ; Ala ; Phe ;正白胺酸 Leu Leu (L) 正白胺酸；lie ; Val ; Met ; Ala ; Phe lie Lys (K) Arg ; Gin ; Asn Arg Met (M) Leu ； Phe ； lie Leu Phe(F) Trp ； Leu ； Val ； lie ； Ala ； Tyr Tyr Pro (P) Ala Ala Ser(S) Thr Thr Thr(T) Val ； Ser Ser Trp(W) Tyr ； Phe Tyr Tyr⑺ Trp ; Phe ; Thr ; Ser Phe Val (V) lie ; Leu ; Met ; Phe ; Ala ;正白胺酸 Leu 可根據常見側鏈性質對胺基酸進行分組： (1)疏水性殘基：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、 lie ; (2) 中性親水性殘基：Cys、Ser、Thr、Asn、Gin ; (3) 酸性殘基：Asp、Glu ; 156813.doc -93- 201204388 (4) 驗性殘基：His、Lys、Arg ; (5) 影響鍵取向之殘基：Gly、Pro; (6) 芳族殘基：Trp、Tyr、Phe。非保守取代需要將該等種類之一的成員調換成另一種類。一種取代變體類型涉及取代親代抗體（例如人類化或人類抗體）之一或多個超變區域殘基。通常，選擇用於進一步研究之所得變體相對於親代抗體在某些生物性質（例如’增加親和力、減小免疫原性）中具有修飾（例如，改良）及/或實質上保持親代抗體之某些生物性質。實例性取代變體係親和力成熟抗體’其可便利地（例如）使用基於喔菌體展示之親和力成熟技術（例如彼等本文所述者）產生。簡言之，一或多個HVR殘基發生突變且變體抗體展示於噬菌體上並篩選特定生物活性（例如結合親和力）。可對HVR作出變化（例如，取代）以（例如）改良抗體親和力。該等變化可在HVR「熱點」（亦即，由在體細胞成熟過程期間發生高頻突變之密碼子編碼的殘基）（例如，參見，Chowdhury，Methods Mol. Biol· 207:179-196 (2008))、及/或SDR(a-CDR)中進行，其中測試所得變體VH或V]L之結合親和力》藉由自二級文庫構建及重新選擇來達成親和力成熟已闡述於（例如）H〇〇genb〇〇m等人，Methods in Molecular Biology 178:1_37(〇丨如印等人編輯，Human

Press，T〇towa，NJ，（200 i))中。在親和力成熟之一些實施例中，將多樣性引入所選可變基因中以藉由各種方法（例 156813.doc •94· 201204388 如’錯配PCR、鏈改組、或寡核苷酸引導之誘變）中之任一者來達成成熟。然後建立二級文庫。然後篩選文庫以鑑別具有期望親和力之任一抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方式’其中將若干HVR殘基（例如，一次4-6 個殘基）隨機化。可特定鑑別（例如，使用丙胺酸掃描誘變或建模）涉及抗原結合之HVR殘基。特定而言，通常靶向 CDR-H3 及 CDR-L3。在某些實施例中，取代、***、或缺失可發生於一或多個HVR内’只要該等變化並不實質上減小抗體結合抗原之月b力。舉例而言’並不實質上減小結合親和力之保守變化 (例如’本文所提供之保守取代）可發生於HVR中。該等變化可位於HVR「熱點」或SDR外側。在上文所提供變體νΉ 及VL序列之某些實施例中，每一 hVR未發生變化，或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。用於鑑別抗體上可靶向用於誘變之殘基或區域的有用方法稱為「丙胺酸掃描誘變」，如Cunninghan^weiis (1989) Science，244:1081-1 〇85中所述。在此方法中，已鑑別殘基或目標殘基組（例如，帶電殘基，例如arg、asp、his、lys 及glu)，並由中性或帶負電之胺基酸（例如，丙胺酸或多丙胺酸）代替以確定是否影響抗體與抗原之相互作用。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代°另一選擇為或另外’抗原-抗體複合體之晶體結構以鑑別抗體與抗原之間之接觸點。可靶向該等接觸殘基及相鄰殘基作為取代候選殘基或將其排除。可篩選變體以確定 156813.doc -95· 201204388 其是否含有期望性質。胺基酸序列***包含胺基-及/或羧基末端融合（長度介於一個殘基至含有上百或更多殘基之多肽之間）、以及單個或多個胺基酸殘基之序列内***。末端***之實例包含具有Ν-末端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他***變體包含酶（例如用於ADEPT者）或可延長抗體血清半衰期之多肽與抗體N-末端或C末端之融合體。 b)糖基化變體在某些實施例中’改變本文所提供抗體以增加或降低抗體發生糖基化之程度。可藉由改變胺基酸序列從而產生或去除一或多個糖基化位點來便利地達成抗體糖基化位點的添加或缺失。若抗體包括Fc區域’則其所附接之碳水化合物可有所改變。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包括具支鏈、雙觸角寡糖，其通常藉由N_鍵聯附接至Fc區域之CH2結構域的 Asn297。例如’參見 Wright 等人 TIBTECH 15:26-32 (1997)。寡糖可包含各種碳水化合物，例如，甘露糖、n_ 乙醯基葡糖胺（GlcNAc)、半乳糖、及唾液酸、以及附接至雙觸角寡糖結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中’可修飾本發明抗體中之寡糠以產生具有某些改良性質之抗體變體。在一實施例中，提供具有缺乏附接（直接或間接）至Fc區域之岩藻糖之碳水化合物結構的抗體變體。舉例而言，該抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或 136S13.doc • 96 · 201204388

20%至40%。藉由計算相對於附接至Asn 297之所有糖結構 (例如複合物、雜合體及高甘露糖結構）之總量Asn297處糖鏈内岩藻糖之平均量來測定岩藻糖的量，如藉由MALDI-TOF質譜所量測，如（例如）WO 2008/077546中所述。 Asn297係指位於Fc區域中大約位置297處之天冬醯胺殘基 (Fc區域殘基之Eu編號）；然而，因抗體中具有微小序列變化，故Asn297亦可位於位置297之上游或下游之大約 ± 3 個胺基酸處，亦即，介於位置294與300之間。該等岩藻糖基化變體可改良ADCC功能。例如，參見美國專利公開案第 US 2003/0157108 號（Presta，L.) ; US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo有限公司）。關於「去岩藻糖基化」或「岩藻糖-缺失」抗體變體之公開案實例包含：US 2003/0157108 ； WO 2000/61739 ； WO 2001/29246 ； US

2003/0115614 ； US 2002/0164328 ； US 2004/0093621 ； US

2004/0132140 ； US 2004/0110704 ； US 2004/0110282 ； US

2004/0109865 ； WO 2003/085119 ； WO 2003/084570 ； WO 2005/035586 ； WO 2005/035778 ； W02005/053742 ； W02002/031140 ; Okazaki等人，J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004) ; Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)。能夠產生去岩藻糖基化抗體之細胞系之實例包含缺少蛋白質岩藻糖基化之Lecl3 CHO細胞（Ripka等人，Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986);美國專利申請案第 US 2003/0157108 A1 號，Presta，L ;及 WO 2004/056312 Al，Adams等人，尤其在實例11中）、及基因 156813.doc -97- 201204388 剔除細胞系（例如α-1，6-岩藻糖基轉移酶基因、FUT8、基因剔除CHO細胞）（例如，參見Yamane-Ohnuki等人，Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) ; Kanda，Y.等人，Biotechnol.

Bioeng·，94(4):680-688 (2006);及 WO 2003/085107) ° 進一步提供二等分寡糖之抗體變體，例如，其中附接至抗體Fc區域之雙觸角募糖由GlcNAc二等分。該等抗體變體可具有減小之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能》該等抗體變體之實例闡述於（例如）WO 2003/011878(Jean-Mairet 等人）、美國專利第6,602,684號（Umana等人）、及US 2005/0123546(Umana等人）中。亦提供在附接至Fc區域之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體變體。該等抗體變體可具有改良之CDC功能》該等抗體變體闡述於（例如）w〇 1997/30087(Patel等人）、WO 1998/58964 (Raju，S.)、及 WO 1999/22764 (Raju，S.)中。 c) Fc區域變體在某些實施例中’可將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供抗體之Fc區域中，由此產生Fc區域變體。Fcg域變體可包括在一或多個胺基酸位置包括胺基酸修飾（例如取代）之人類Fc區域序列（例如人類IgGl、lgG2、IgG3或IgG4 Fc 區域）。在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些（但非全部）效應子功能之抗體變體’此情況使其成為許多應用之合意的候選物，在該等應用中抗體之活體内半衰期較為重要，但某些效應子功能（例如補體及ADCC)係不必要或有害的。可 156813.doc -98 · 201204388 實施活體外及/或活體内細胞毒性分析來證實CDC及/或 ADCC活性之降低/缺失。舉例而言，可實施Fc受體（FcR) 結合分析以確保抗體缺少FcYR結合能力（因此可能缺少 ADCC活性），但保留FcRn結合能力。用於調介ADCC之原代細胞（NK細胞）僅表現FcyRIII，而單核細胞可表現 FcyRI、FcyRII及 FcyRIII。在 Ravetch及 Kinet，Annu. Rev. Immunol 9:457-492 (1991)之第464頁表3中對FcR於造血細胞中之表現進行了總結。用於評價目標分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例闡述於美國專利第5,500,362 號（例如，參見Hellstrom，I.等人，Proc· Nat'l Acad· Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人，Proc. Nat，l Acad· Sci. USA 82:1499-1502 (1985) ; 5,821，337(參見 Bruggemann，M.等人，J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)) 中。另一選擇為，可使用非放射性分析方法（例如，參見用於流式細胞術之aciti™非放射性細胞毒性分析 (CellTechnology 公司，Mountain View，CA)、及 CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析（Promega，Madison, WI))。用於該等分析之有用效應子細胞包含周邊血單核細胞（PBMC) 及天然Killer (NK)細胞。或者或另外，可在活體内（例如，在諸如 Clynes等人，Proc. Nat’l Acad· Sci. USA 95:652-656 (1998)中所揭示之動物模型中）對目標分子之ADCC活性進行評價。亦可實施Clq結合分析來證實抗體不能與Clq結合且因此缺少CDC活性。例如，參見WO 2006/029879及 WO 2005/100402中之Clq及C3c結合ELISA。為評價補體活 156813.doc •99- 201204388 化，可實施CDC分析（例如，參見Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163 (1996) ; Cragg，M.S.等人， Blood 101:1045-1052 (2003);及 Cragg，M.S.及 M.J.

Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004))。亦可使用業内已知方法來實施FcRn結合及活體内清除/半衰期測定（例如，參見 Petkova，S.B.等人，Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)) » 具有較小效應子功能之抗體包含彼等具有Fc區域殘基 23 8、265、269、270、297、327及 329 中之一或多者的取代者（美國專利第6,737,056號）。該等Fc突變體包含在 265、269、270、297及327中之兩個或兩個以上胺基酸位置經取代之Fc突變體，包含殘基265及297經丙胺酸取代之所謂的「DANA」Fc突變體（美國專利第7,332,581號）》闡述對FcR具有改良或減小之結合的某些抗體變體。（例如，參見美國專利第6,737,056號、WO 2004/056312、及 Shields等人，J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001))。在某些實施例中，抗體變體包括具有一或多個改良 ADCC之胺基酸取代之Fc區域，例如，在Fc區域之位置 298、333、及/或334處之取代（殘基之EU編號）。在一些實施例中，Fc區域有所變化，從而改變（亦即，改良或減小）Clq結合及/或補體依賴性細胞毒性（CDC)，例如，如美國專利第6，194,551號、WO 99/51642、及 Idusogie 等人，J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)中所述0 156813.doc -100· 201204388 具有增加之半衰期及對於新生Fc受體（FcRn)之改良結合的抗體（其負責將母體IgGs轉移至胎中）(Guyer等人，J. Immunol. 117:587 (1976)及 Kim 等人，J. Immunol. 24:249 (1994))闡述於US2005/0014934A1 中（Hinton等人）。彼等抗體包括具有一或多個改良Fc區域與FcRn之結合之取代的Fc 區域。該等Fc變體包含彼等在下列Fc區域殘基之一或多者處具有取代者：23 8、256、265、272、286、303、3 05、 307 、 311 、 312 ' 317 、 340 、 356 、 360 、 362 ' 376 、 378 、 380、382、413、424或434，例如，取代Fc區域殘基 434(美國專利第7,371，826號）。亦參見 Duncan及 Winter, Nature 322:738-40 (1988);美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及涉及Fc 區域變體之其他實例之WO 94/29351。 d)半胱胺酸改造之抗體變體在某些實施例中’可期望產生半胱胺酸改造之抗體，例如「硫代MAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基出現於抗體之可及位點處。藉由使用半胱胺酸取代該等殘基，反應性硫醇基團由此位於抗體之可及位點處且可用於使抗體接合至其他部分（例如藥物部分或連接體·藥物部分）以產生免疫接合物，如本文進一步所述。在某些實施例中，下列殘基中之任一個或多個可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號）、重鏈之A118(EU編號）、及重鍵Fc區域之S400(EU編號）。半胱胺酸改造之抗體可如（例如）美國專利第7,521，541 156813.doc -101 - 201204388 號中所述來產生。 e)抗體衍生物在某些實施例中，可進一步修飾本文所提供抗體以含有業内已知且易於獲得之其他非蛋白質性部分。適於衍生抗體之部分包含但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包含但不限於聚乙二醇（PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧曱基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚-i，3_二氧戊環、聚_丨，3,6_三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸（均聚物或無規共聚物）、及葡聚糖或聚（η-乙烯基基η比咯啶酮）聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯化之多元醇（例如，甘油）、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於在水中具有穩定性而在製造方面具有優勢。聚合物可具有任何刀子量且了為具支鏈或非具支鍵。附接至抗體之聚合物的數量可有所變化’且若附接一個以上之聚合物，則其可為相同或不同分子…般而言，S生化所用聚合物之數量及/或類型可根據包括但不限於以下在内之考慮因素來確定.擬改良抗體之特定性哲七竹疋性質或功能、抗體衍生物是否將用於界定條件下之療法等。在另-實施例中，提供抗體及非蛋白質性部分之接名物，其可藉由曝露於輕射來選擇性加熱。在—實施例中，非蛋白質性部分係碳奈米f (Kam等人，P鼠Natl. Acad

Sci. 長，輕射可具有任一波其並不危害正常細 USA 102: 1160(Ml6〇5 (2〇〇5))。且包含但不限於如了波長之輻射： 156813.doc 201204388 胞’但將非蛋白質性部分加熱至可將毗鄰抗體-非蛋白質性部分之細胞殺滅的溫度。 B.組方法及組合物可使用重組方法及組合物來產生抗體，例如，如美國專利第4,816,567號中所述。在一實施例中，提供本文所述之編碼抗-Axl抗體之分離核酸《該核酸可編碼抗體中包括Vl 之胺基酸序列及/或包括VH之胺基酸序列（例如，抗體之輕鏈及/或重鏈）。在另一實施例中，提供一或多個包括該核酸之載體（例如，表現載體）。在另一實施例中，提供包括該核酸之宿主細胞。在一該實施例中，宿主細胞包括以下物質（例如，已經該等物質轉化）：（1)包括如下核酸之載體：其編碼包括抗體之VL之胺基酸序列及包括抗體之VH 之胺基酸序列，或（2)包括編碼包括抗體之VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包括編碼包括抗體之VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一實施例中，宿主細胞係真核細胞，如中國倉鼠卵巢（CHO)細胞或淋巴樣細胞（例如， Y0、NS0、Sp2〇細胞）。在一實施例中，提供製備抗-Axl抗體之方法，其中該方法包括在適於表現抗體之條件下培養包括編碼如上文所提供抗體之核酸的宿主細胞，及視需要自宿主細胞（或宿主細胞培養基）回收抗體。為重組產生抗-Axl抗體，分離編碼抗體（例如，如上文所述）之核酸並***一或多個載體中以進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。該核酸可使用習用程序容易地分離出來並進行測序（例如，藉由使用能夠與編碼該抗體之重鏈 156813.doc -103- 201204388 及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針）β 用於選殖或表現編碼抗體之載體之適宜宿主細胞包含本文所述的原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，尤其在無需糖基化及Fc效應子功能時^關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，例如，參見美國專利第5 648,237 號、第 5,789，199 號、及第 5,840,523 號（亦參見 Charlt〇n， Methods in Molecular Biology，第 248卷（B.K.C. Lo編輯， Humana Press，Totowa，NJ，2003)，第 245-254頁，其闡述抗體片段在大腸桿菌中之表現）。表現後，可自細菌細胞漿液以可溶部分形式分離出抗體且可進一步純化。除原核生物外’真核微生物（例如絲狀真菌或酵母）亦適用於用於編碼抗體之載體之選殖或表現宿主，包含糖基化路徑已「人類化」從而產生部分或完全人類糖基化圖案之抗體的真菌及酵母菌株。參見Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及 Li等人，Nat· Biotech. 24:210-215 (2006)〇用於表現糖基化抗體之適宜宿主細胞亦源自多細胞有機體（無脊椎動物及脊椎動物）。無脊椎動物細胞之實例包含植物及昆蟲細胞。已鑑別出可與昆蟲細胞聯合使用之許多杆狀病毒菌株，尤其用於轉染草地貪夜蛾（Spodoptera frugiperda)細胞。亦可使用植物細胞培養物作為宿主。例如，參見美國專利第 5,959，177 號、第 6,040,498 號、第 6,420,548 號、第 7，125,978號、及第6,417,429號（闡述產生轉基因植物中之 156813.doc .104· 201204388 抗體之PLANT IBODIESTM 技術）。亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。舉例而言，可使用適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞系。有用哺乳動物宿主細胞系之其他實例係經SV40轉化之猴腎CV1細胞系（COS-7);人類胚腎細胞系（293細胞或如（例如）Graham等人，J. Gen Virol· 36:59 (1977)中所述之293細胞）；幼倉鼠腎細胞 (BHK);小鼠赛特利細胞（sertoli cell)(TM4細胞，如（例如）Mather，Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)中所述）；猴腎細胞（CV1);非洲綠猴腎細胞（VERO-76);人類子宮頸癌細胞（HELA);犬腎細胞（MDCK);布法羅大鼠（buffalo rat)肝細胞（BRL 3A);人類肺細胞（W138);人類肝細胞（Hep G2);小鼠***腫瘤（MMT 060562) ; TRI細胞（如（例如）Mather等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982) 中所述）；MRC5細胞；及FS4細胞。其他有用哺乳動物宿主細胞系包含中國倉鼠卵巢（CHO)細胞，包含DHFR_ CHO 細胞（Urlaub 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980));及骨髓瘤細胞系，例如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞系之综述，例如，參見 Yazaki及 Wu，Methods in Molecular Biology，第 248 卷（B.K.C. Lo編輯，Humana Press, Totowa, NJ)，第 255-268 頁（2003)。 C.分析可藉由業内已知之各種分析來鑑別本文所提供之抗-Axl 抗體、篩選、或表徵其物理/化學性質及/或生物活性。 156813.doc -105- 201204388 1.結合分析及其他分析在一態樣中，舉例而言，藉由已知方法（例如ELISA、西方印跡（Western blot)等）測試本發明抗體之抗原結合活性。在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別與下列抗體中之一或多者競爭結合Axl的抗體：327.6、327.6.S2、 327.6.S11、327.6.S50、327.6.S52 ' 327.6.S65、327.42、 327.42.S8 、327.42.S31 ' 327.42.S13 、327.42.S43 ' 327.42.552 、327.42.S63 、327.42.S73 、327.42.H2 ' 327.42.114、及/或327.42.1120。在某些實施例中，此一競爭抗體結合由以下結合之相同表位（例如，線性或構象表位)：327.6 、327.6.S2 、327.6.S11 、327.6.S50 、 327.6_S52、327.6.S65、327.42、327.42.S8、327.42.S31、 327.42.513 ' 327.42.S43 、327.42.S52、327.42.S63 、 327.42.573 ' 327.42.H2、327.42.H4' 及 / 或 327.42.H20 ° 映射抗體所結合表位之詳細實例性方法提供於Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」，Methods in Molecular Biology，第 66 卷（Humana Press, Totowa，NJ) 中o 在實例性競爭分析中，在包括結合Axl之第一標記抗體 (例如，327.6、327.6.S2、327.6.S11、327.6.S50、 327.6.552 ' 327.6.S65 ' 327.42 ' 327.42.S8 > 327.42.S31 ' 327.42.513 ' 327.42.S43、327.42.S52、327.42.S63、 327.42.573 ' 327.42.H2、327.42.H4 ' 及 / 或 327.42.H20)及 156813.doc -106- 201204388 第二未標記抗體的溶液中培育固定Axl，其中測試該第二未標記抗體與該第一抗體競爭結合Axl之能力。第二抗體可存在於雜交瘤上清液中。作為對照，在包括第一標記抗體但不包括第二未標記抗體之溶液中培育固定Axl。在允許第一抗體結合Axl之條件下培育後，去除過量之未結合抗體，且量測與固定Axl結合之標記的量。若與固定Axl結合之標記之量在測試試樣中相對於對照試樣實質上有所減小，則此表明第二抗體與第一抗體競爭結合Axl。參見 Harlow 及 Lane (1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。 2.活性分析在一態樣中，提供分析以鑑別其具有生物活性之抗- Axl 抗體。生物活性可包含（例如）抑制Gas6與Axl之結合，抑制Axl活化，抑制Axl下游分子信號傳導，抑制Axl表現（例如，諸如腫瘤細胞等細胞中之Axl細胞表面表現或總Axl表現），抑制發炎細胞因子分泌，促進細胞调亡（例如，藉由抑制細胞凋亡之Gas6調介之抑制），抑制瘤内血管系統，抑制腫瘤間質Axl活性及/或表現及/或抑制轉移。亦提供在活體内及/或活體外具有該生物活性之抗體。在某些實施例中，測試本發明抗體之該生物活性。在某些實施例中，測試抗體在活體外促進細胞凋亡（例如，腫瘤細胞之細胞凋亡）之能力。測定細胞生長及/或增殖及/或細胞调亡之實例性方法包含（例如）BrdU納入分析、MTT、 156813.doc -107- 201204388 [3H]胸苦納入（例如’ TopCount分析（PerkinElmer))、細胞存活率分析（例如，CellTiter-Glo (Promega))、DNA片段化分析、半胱天冬酶活化分析、台盼藍排除、染色質形態分析及諸如此類》在某些實施例中’使用（例如）本文闡述及例示之方法來測試抗體對於Axl表現之抑制。在一實施例中，將抗_Αχ1 抗體與適宜測試細胞（例如，NSCLC細胞Α549)—起培育，且在適宜時間後，收穫細胞裂解物並檢驗總Αχ1含量。亦可使用FACS分析來檢驗在與候選抗_Αχ1抗體一起培育後之表面Axl受體含量。在一實施例中，檢驗使用抗_Αχΐ抗體處理後腫瘤試樣之Axl表現。在某些實施例中，測試本發明抗體抑制發炎細胞因子部分之能力，例如，如本文所例示性闡述。在某些實施例中，測試本發明抗體減小瘤内血管系統及/ 或抑制腫瘤間質Axl活性及/或表現之能力，例如，如本文所例示性闡述。在一些實施例中’腫瘤間質Αχ1活性係瘤内血管系統之轉移或發展。在某些實施例中，測試本發明抗體在活體外抑制細胞生長或增殖之能力。用於抑制細胞生長或增殖之分析在業内已眾所周知。用於細胞增殖之某些分析（由本文所述之「細胞殺滅」分析所例示）可量測細胞存活率。一種該分析係CellTiter-Gl〇TM發光細胞存活率分析，其購自 (Madison，WI)。該分析基於所存在Ατρ之定量來測定培養物中活細胞之數量，此可指示代謝活性細胞。參見Cr〇°uch 156813.doc •108· 201204388 等人（1993) J. Immunol. Meth_ 160:81-88、美國專利第 6602677號。該分析可以96-或384孔模式實施，從而使得其適用於自動高通量篩選（HTS)。參見Cree等人（1995) AntiCancer Drugs 6:398-404。分析程序涉及直接向培養之細胞中添加單一試劑（CellTiter-Glo®試劑）。此使得發生細胞裂解並產生由螢光素酶反應產生之發光信號。發光信號與所存在ATP之量成正比，該ATP之量與培養物中所存在活細胞之數量成正比。可藉由發光計或CCD照相機成像裝置來記錄數據。將發光輸出表示為相對光單位（RLU)。用於細胞增殖之另一分析係「MTT」分析，其係藉由線粒體還原酶量測3-(4,5-二曱基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑鑌溴化物至曱月替之氧化的比色分析。如同CellTiter-GloTM分析，此分析可指示細胞培養物中所存在代謝活性細胞之數量。例如，參見Mosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65:55-63、及 Zhang等人（2005) Cancer Res.65:3877-3882。用於上文任一活體外分析之細胞包含天然表現Axl或經改造表現Axl之細胞或細胞系。該等細胞包含相對於相同組織來源之正常細胞過度表現Axl的腫瘤細胞。該等細胞亦包含表現Axl之細胞系（包含腫瘤細胞系）及並不天然表現 Axl但已經編碼Axl之核酸轉染的細胞系。本文所提供用於上文任一活體外分析之實例性細胞系包含NSCLC細胞系 A549、NSCLC細胞系H1299、及乳癌細胞系MDA-MB231。 156813.doc -109- 201204388 在一態樣中’測试其抗-Axl抗體在活體内抑制細胞生長或增殖之能力。在某些實施例中，測試其抗-Αχ1抗體在活體内抑制腫瘤生長之能力。活體内模型系統（例如異種移植物模型）可用於該測試。在實例性異種移植物系統中，將人類腫瘤細胞引入經適宜免疫妥協之非人類動物（例如’無胸腺「裸」小鼠）中。將本發明抗體投與動物。量測抗體抑制或降低腫瘤生長之能力。在上述異種移植物系統之某些實施例中’人類腫瘤細胞係來自人類患者之腫瘤細胞。該等異種移植物模型購自Oncotest GmbH (Frieberg， Germany)。在某些實施例中，人類腫瘤細胞係來自人類腫瘤細胞系之細胞’例如MDA-MB-23 1乳癌細胞或A549非小細胞肺癌細胞。在某些實施例中，藉由皮下注射或藉由移植至適宜位點（例如乳腺脂肪墊）來將人類腫瘤細胞引入經適宜免疫妥協之非人類動物中。應理解’可使用本發明免疫接合物代替抗_八乂丨抗體或與抗· -Axl抗體一起來實施任-上述分析。應理解，可使用抗-Axl抗體及其他治療劑（例如VEGF拮抗劑及/或EGFR拮抗劑及/或化學治療劑）來實施任一上述分析。 D·免疫偶聯物本發明亦提供包括接合至一或多種細胞毒性劑之本發明抗-Axl抗體的免疫接合物，該等細胞毒性劑係（例如）化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素（例如，蛋白質毒素、細菌之酶促活性毒素、真菌、植物、或動物來源、或其片 156813.doc 110- 201204388 段）、或放射性同位素。在一實施例中，免疫接合物係抗體藥物接合物（ADC)，其中抗體接合至一或多種藥物，該等藥物包含但不限於類美登素（參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1);奥裏斯他汀（auristatin)，例如單曱基奥裏斯他汀藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號、及第7,498,298 號）；多拉司他汀；卡奇黴素或其衍生物（參見美國專利第 5,712,374 號、第 5,714,586 號、第 5,739，116 號、第 5,767,285 號、第 5,770,701 號、第 5,770,710 號、第 5,773,001 號、及第 5,877,296 號；Hinman 等人，Cancer Res. 53:3336-3342 (1993);及 Lode 等人，Cancer Res. 5 8:2925-2928 (1998));蒽環抗生素，例如道諾黴素或多柔比星（參見 Kratz 等人，Current Med. Chem. 13:477-523 (2006) ; Jeffrey 等人，Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006) ; Torgov等人，Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005) ; Nagy 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000) ; Dubowchik 等人，Bioorg· & Med. Chem. Letters 12:1529-153 2 (2002) ; King 等人，J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002);及美國專利第 6,630,579號）；胺甲蝶呤；長春地辛；紫杉烷，例如多西他赛、紫杉醇、拉羅他塞（larotaxel)、特西他塞（tesetaxel)、及歐他紫杉烧 (ortataxel);單端孢黴烯；及 CC1065。在另一實施例中，免疫接合物包括與酶促活性毒素或其 156813.doc -111 - 201204388 片段接合之本文所述抗體，該酶促活性毒素或其片段包含但不限於白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素 A鏈（來自綠膿桿菌（Pseud〇m〇nas aerugin〇sa))、蓖麻毒素a 鏈、相思豆毒蛋白A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α-八疊球菌、油桐（Aleurites f0rdii)蛋白質、石竹素蛋白質、美洲商陸 (Phytolaca americana)蛋白質（ρΑρι、ρΑρπ及 pAp_s)、苦瓜 (momordica charantia)抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、皂草 (sapaonada 〇fficinaiis)抑制劑、白樹毒素、絲裂吉菌素 (mitogellin)、侷限麴菌素（restrict〇cin)、紛黴素 (phenomycin)、依諾黴素（enomycin)及單端孢黴烯族毒素 (tricothecene)。在另一實施例中，免疫接合物包括接合至放射性原子以形成放射性接合物的本文所述抗體。多種放射性同位素可用於產生放射性接合物。實例包含At211、I131、J125、 Y9Q、Re186、、Sml53、Bi212、p32、pb21jLu之放射性同位素。當接合物係用於檢測時，其可包括用於閃爍法研究之放射性原子，例如tc99m4 Π23 ;或用於核磁共振 (NMR)成像（亦稱為磁共振成像’ mri)之自旋標記，例如碘-123(再次）、碘-131、銦-in、氟 _19、碳_13、氮_15、氧-17、乱》、猛或鐵。抗體與細胞毒性劑之接合物可使用多種雙功能蛋白質偶合劑來製得’例如3-(2-吡啶基二硫代）丙酸N_琥珀醯亞胺醋（SPDP)、4-(1^_馬來醯亞胺曱基）環己烷」·曱酸琥珀酿亞胺酯、亞胺基硫咪（IT)、亞胺酸酯之雙功能衍生物（例如己 156813.doc •112· 201204388 二醯亞胺二曱酯HCl)、活性酯（例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯）、醛（例如戊二醛）、雙-疊氮基化合物（例如雙（對-疊氮基苯甲醯基）己二胺）、雙-重氮衍生物（例如雙-(對-重氮苯曱醯基）-乙二胺）、二異氰酸酯（例如曱苯2,6-二異氰酸酯）及雙-活性氟化合物（例如丨，5·二氟_2,4_二硝基苯）。例如’ 蓖麻毒素免疫毒素可如vitetta等人’ Science，238: 1098 (1987)中所述來製備。經碳-14標記之1-異硫氰酸根合苄基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸（MX-DTPA)係用於放射性核苷酸與抗體接合的實例性螯合劑。參見W094/11026。連接體可為有利於細胞毒性藥物在細胞内釋放之「可裂解連接體」。舉例而言，可使用酸不穩定連接體、肽酶敏感性連接體、光不穩定連接體、二曱基連接體或含有二硫鍵之連接體（Chari等人，Cancer Res. 52:127-131 (1992);美國專利第5,208,020號）。本文之免疫接合物或ADC明確地涵蓋但不限於使用以下交聯體試劑製備之該等接合物：BMPS、EMCS、GMBS、 HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、 SMCC、SMPB、SMPH、硫代-EMCS、硫代-GMBS、硫代-KMUS、硫代-MBS、硫代-SIAB、硫代-SMCC及硫代-SMPB、以及SVSB((4-乙烯基颯）苯甲酸琥珀醯亞胺酯），以上試劑市面有售（例如，可購自Pierce Biotechnology公司，Rockford，IL.，U.S_A)。 Ε·用於診斷及檢測之方法及組合物在某些實施例中，本文所提供抗-Axl抗體中之任一者皆 156813.doc -113· 201204388 可用於檢測生物試樣中Axl之存在。本文所用之術語「檢測」涵蓋定量或定性檢測。在某些實施例中，生物試樣包括細胞或組織，例如***、胰腺、食管、肺及/或腦。在一實施例中，提供用於診斷或檢測方法中之抗·八乂丨抗體。在另一態樣中’提供檢測生物試樣中Αχί之存在之方法。在某些實施例中’該方法包括使生物試樣與本文所述抗-Axl抗體在允許抗-Axl抗體與Αχί結合之條件下接觸，並檢測在抗-Axl抗體與Axl之間是否形成複合物。該方法可為活體外或活體内方法。在一實施例中，使用抗· Αχ1抗體來選擇適用於使用抗-Axl抗體之療法的個體，舉例而言，其中Axl係用於選擇患者之生物標記物。可使用本發明抗體診斷之實例性病症包含癌症（例如，乳癌、肺癌、胰腺癌、腦癌、腎癌、卵巢癌、胃癌、白血病、子宮内膜癌、結腸癌、***癌、甲狀腺癌、肝癌、骨肉瘤、及/或黑素瘤）。在某些實施例中，提供經標記之抗·AX1抗體。標記包含但不限於直接檢測之標記或部分（例如螢光劑、顯色劑、電子緻密劑、化學發光劑、及放射性標記）、以及（例如）經由酶反應或分子相互作用間接檢測之部分（例如酶或配體）。實例性標記包含但不限於放射性同位素32P、、 125I、3h、及131I、螢光團（例如稀土螯合物或螢光黃及其衍生物）、若丹明（rhodamine)及其衍生物、丹磺醯傘形酮、螢光素酶(例如’螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(美國專利第4,737,456號）、勞光素、2,3_二氫化二氮二 156813.doc -114- 201204388 酮、如辣根過氧化物酶（hrp)、鹼性磷酸酶、卜半乳糖苷酶、葡萄糖澱粉酶、溶菌酶、糖氧化酶（例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶）、雜環氧化酶（例如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與諸如HRp、乳過氧化物酶、或微過氧化物酶等使用過氧化氫來氧化染料前體之酶接合）、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基、及諸如此類。 F·醫藥調配物本文所述抗-Axl抗體之醫藥調配物係藉由混合具有期望純度之该抗體與一或多種醫藥上可接受之可選載劑 (Remington’s Pharmaceutical Sciences，第 16版，〇sol 八編輯（1980))以凍乾之調配物或水溶液形式製得。醫藥上可接受之載劑通常在所用劑量及濃度下對接受者無毒，且包含緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、及其他有機酸；抗氧化劑，包含抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑（例如十八烧基二甲基苄基氯化銨；氣化六曱雙銨；苯紮氯銨、节索氯銨；苯酚、丁醇或苯曱醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶紛；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間-曱酚）；低分子量（小於約1〇個殘基）多肽；蛋白質’例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物’例如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA ;糖，例如蔗糖、甘露醇、 156S13.doc -115· 201204388 海藻糖或山梨醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物 (例如Zn-蛋白質錯合物）；及/或非離子表面活性劑，例如聚乙二醇（PEG)。本文之實例性醫藥上可接受之載劑進一步包含間質性藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白（sHASEGP)，例如，人類可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如 rHuPH20 (sHYLENEX®， Baxter International公司）。某些實例性HASEGP及使用方法（包含 rHuPH20)闡述於美國專利公開案第2005/0260186號及第 2006/0104968號中。在一態樣中，將sHASEGP與一或多種其他醣胺多醣酶（例如軟骨素酶）進行組合。實例性凍乾抗體調配物闡述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包含彼等闡述於美國專利第6,171，586 號及W02006/044908中者，後一調配物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝液。本發明調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適應症之活性成份，較佳為彼等相互間不會產生不利影響之具有補充活性者。舉例而言，可期望進一步提供EGFR 拮抗劑（例如埃羅替尼）、抗血管生成劑（例如VEGF拮抗劑，例如抗-VEGF抗體）或化學治療劑（例如紫杉烷或鉑試劑）。該等活性成份適宜以對欲達成目的有效之量以組合形式存在。活性成份亦可分別裝入藉由（例如）凝聚技術或界面聚合製備之微膠囊（例如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(曱基丙烯酸曱酯）微膠囊）中、膠質藥物遞送系統（例如，脂質 156813.doc -116- 201204388 體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊）或粗商乳液中該專技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences，第 16 版，〇s〇l，Α·編輯（198〇)中。可製成緩釋製劑。緩釋製劑之適宜實例包含含有抗體之固態疏水性聚合物之半透性基質，該等基質係呈成形物件形式，例如，膜或微膠囊。擬用於活體内投與之調配物通常為無菌的。無菌性可易於（例如）藉由使用無菌過濾膜進行過濾來達成。 G·治療方法及组合物本文所提供抗-Axl抗體中之任一者皆可用於治療方法中。在一態樣中，提供用作藥劑之抗_Αχ1抗體。在其他態樣中’提供用於治療癌症（例如，乳癌、#小細胞肺癌、騰腺癌、腦癌、胰腺癌、腦癌、腎癌、卵巢癌、胃癌、白血病、子宮内膜癌、結腸癌、***癌、甲狀腺癌、肝癌、骨肉瘤、及/或黑素瘤）之抗_Αχ1抗體。在某些實施例中，提供用於治療方法中之抗-Axl抗體。在某些實施例中，本發明提供用於治療患有癌症之個體之方法中之抗^“抗體，其包括向該個體投與有效量之抗_Αχ1抗體。在某些實施例中，本發明提供抗-Αχ1抗體以供用於治療患有以下疾病之個體之方法中：免疫性病症（例如，自體免疫病症）、心血管病症（例如，動脈粥樣硬化、高血壓、血栓症）、傳染病（例如’埃博拉病毒（Eb〇la virus)、馬爾堡病毒 (Mairbutg vuus))或糖尿病，該方法包括向該個體投與有效 156813.doc -117- 201204388 量之抗-Axl抗體。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，例如，如下文所述。在其他實施例中，本發明提供抗_八幻抗體以供用於抑制血管發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細胞因子分泌（例如，來自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統（例如，瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能。在某些實施例中，本發明提供在個體中用於以下之方法之抗-Axl抗體：抑制血管發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細胞因子分泌（例如，來自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統（例如，瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能，其包括向個體投與可有效抑制血管發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細胞因子分泌（例如，來自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統發育（例如，瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能之抗-Axl抗體。任一上述實施例之「個體」較佳係人類。在另一態樣中，本發明提供抗_Axl抗體在製造或製備藥劑中之用途。在一實施例中，該藥劑用於治療癌症（在一些實施例中，癌症係乳癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、腦癌、胰腺癌症、腦癌、腎癌、卵巢癌、胃癌、白血病、子呂内膜癌、結腸癌、***癌、甲狀腺癌、肝癌、骨肉瘤、及/或黑素瘤）。在另一實施例中，該藥劑用於治療癌症之方法中，其包括向患有癌症之個體投與有效量之藥 156813.doc -118· 201204388 劑。在另一實施例中，該藥劑用於治療以下疾病之方法中：免疫性病症（例如’自體免疫病症）、心血管病症（例如，動脈粥樣硬化、高血壓、血拴症）、傳染病（例如，埃博拉病毒、馬爾堡病毒）或糖尿病，其包括向該個體投與有效量之抗-Axl抗體。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，例如，如下文所述。在另一實施例中，該藥劑用於抑制血管發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細胞因子分泌 (例如，來自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統（例如，瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能。在另-實施例t，豸藥劑用於在個體中抑制血官發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細月L因子刀必（例如，來自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統（例如，瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能之方法中，纟包括該向個體投與有效量之藥劑以抑制血管發生、抑制細胞增殖、促進免疫性功能、誘導發炎細胞因子部分（例如，I自腫瘤相關性巨噬細胞）、抑制腫瘤血管系統發育（例如’瘤内血管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能。任一上述實施例之「個體」可為人類。在另態樣中，本發明提供治療癌症之方法。在一實施例中’該方法包括向患有該癌症之個體投與有效量之抗 AXl抗體°在—該實施财，該方法進-步包括向個體投與有效量之至少-種其他治療劑，如下文所述。任一上述 156813.doc -119- 201204388 實施例之「個體」可為人類。在另—態樣中，本發明提供治療以下疾病之方法：免疫性病症（例如，自體免疫病症）、心血管病症（例如，動脈粥樣硬化、高血壓、血栓症）、傳染病（例如，埃博拉病毒、馬爾堡病毒）或糖尿病。在一該實施例中，該方法進一步包括向個體投與有效量之至少一種其他治療劑，如下文所述。任一上述實施例之Γ個體」可為人類。在另-態樣中，本發明提供在個體中抑制血管發生、抑制細胞增殖、抑制免疫性功能、抑制發炎細胞因子分泌 (例如，來自腫瘤相關性巨嗤細胞)、抑制腫瘤血管系統(例如’瘤内血管系統或腫瘤相關性▲管系統）、及/或抑制腫瘤間質功能之方法。在-實施例中，該方法包括向個體投與有效量之抗-Axl抗體以抑制血管發生、抑制細胞增瘦、促進免疫性功能、誘導發炎細胞因子部分（例如，來自腫瘤相關性巨嗟細胞)、抑制腫瘤血管系統發育(例如，瘤内 =管系統或腫瘤相關性血管系統）、及/或抑制腫瘤間質功旎。在一實施例令，「個體」係人類。在另一態樣中’本發明提供醫藥調配物’其包括本文所提供抗-Axl抗體中之任一者以（例如）用於上述治療方法中 t任一者中。在一實施例中，醫藥調配物包括本文所提供抗-Axl抗體中之者及w藥上可接受之載劑。在另施例中’醫藥調配物包括本文所提供抗·-抗體中之任— 者及至少-種其他治療劑，例如，如下文所述。本發明抗體可單獨或與其他藥劑組合㈣療法中 156813.doc •120· 201204388 而言’可共投與本發明抗體與至少一種其他治療劑。在某些實施例中’其他治療劑係抗血管生成劑。在某些實施例中，其他治療劑係VEGF拮抗劑（在一些實施例中係抗-VEGF抗體，例如貝伐單抗）。在某些實施例中，其他治療劑係EGFR拮抗劑（在一些實施例中係埃羅替尼）。在某些實施例中，其他治療劑係化學治療劑及/或細胞生長抑制劑。在某些實施例中，其他治療劑係紫杉烷（例如，紫杉醇）及/或鉑試劑（例如，卡鉑）。上文提及之此等組合療法涵蓋組合投與（其中兩種或兩種以上藥劑包含於相同或單獨調配物中）、及單獨投與(在此情形下，本發明抗體之投與可在投與其他治療劑及/或輔助療法之前、同時、及/或之後進行）。本發明抗體亦可與輻射療法組合使用。本發明抗體（及任-其他治療劑）可藉由任何適宜方式拍與，包含非經腸、肺内及鼻内 '以及(若期望用於局部治療）病灶内投與。非經腸輸注包含肌内、靜脈内、動脈内、腹膜腔内或皮下投與。可藉由任一適宜途徑給華，例主射，例如靜脈内或皮下注射，此部分地端視投與而定。本文涵蓋各種投藥方案，包含但不限於在不同時間點單一或多次投與、濃注投與、及脈衝輸注。本發明抗體之調配、給藥及考慮二:= =所Sr定哺乳動物、個別患者之臨床病狀I 、樂劑遞送位點、投與方法、投與時間安排及醫療從 i568l3.doc •121- 201204388 業者已知之其他因素。抗體不必(但視需要)與一或多種當前用於預防或治療所討論病症之藥劑—起調配。該等其: 藥劑之有效量端視調配物中所存在抗體之量、病症或:療之類型以及上文所討論之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量且以本文所述之投與途役、或本文所述約1%至 99%之劑量、或以經驗/臨床確定為合適之任—劑量及任一途徑使用。在預防或治療疾病_，本發明抗體之適宜劑量（當單獨使用或與-或多種其他其他治療劑組合使用時）應端視擬治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重程度及病程、投與抗體係用於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。該抗體適於-次性地或經—系列治療投與患者。端視疾病之類 i及嚴重程度’約i叫/}^至4G 抗體可為投與患者之初始候選劑量，不論(例如)藉由-或多次單獨投與、抑或藉由連續輸注。端視上述时，一種典型曰劑量可介於約

Mg/kg至1GG mg/kg之間或更高。在經若干天或更長時間、复技與時$視病狀而定，治療通常持續至對疾病症狀之：望：抑出現為止。該等劑量可間歇性投與，例如每週一次或每三週一次(例如，以便患者接受約兩個至約20 或例如約6個劑量之抗體)。可在開始時投與較高負荷 :量隨後奴與_或多個較低劑量。然而，可使用其他劑里方案。此療法之進展可容易地藉由習用技術及分析進行監測。 156813.doc 122· 201204388 應理解’可使用本發明之免疫接合物代替抗-Axl抗體或與抗-Axl抗體—起來實施任一上述調配物或治療方法。 H·製品在本發月另一態樣中，提供含有用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製品。該製品包括容器及位於該容器上或與該容器相連之標記或包裝插頁。適宜容器包含 (例如)瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可由諸如玻璃或塑膠等多種材料形成。容器包含自身或盘另一組合物組合時可有效治療、預防及/或診斷病狀之、組合物且可具有無菌存取通道（例如，該容器可為靜脈内溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶）。該組合物中至少-種活性劑係本發明抗體。標記或包裝插頁指示 i σ物係用於治療選定病狀。此外，該製品可包括⑷含有組合物之第一容器，其中該組合物包括本發明抗體；及 (b)含有組合物之第-宠g 弟—谷器其中該組合物包括另一細胞毒性劑或治療劑。本發明此實施例中之製品可進一步包括指示组合物可用於治疼搞定 θ 縻特疋病狀之包裝插頁。或者或另外，該製品可進—步包括第二(或第三)容器，該容器包括醫藥上可接受之緩衝液’例如抑菌性注射用水（bwfi)、鱗酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液（Ri 奋履（Klngers s〇lut1〇n)及右旋糖溶液。其可進一步包括自商掌及菜用戶角度考慮所期望之其他材科’包含其他緩衝液、稀釋劑、過據器、針及注射器。應理解’上述製品中之任一去 ^ A 纟白可包含本發明免疫接合物來代替抗·ΑΧ1抗體或與抗·Αχ1抗體—起使用。 156813.doc • 123- 201204388 III.實例材料及方法抗體及細胞系。自下列供應商獲得抗體：針對人類Axl 之小鼠單株抗體（mAb)(Abnova，Taiwan)，鱗酸-Akt小鼠 mAb及Akt多株抗體（Cell Signaling)。用於填酸-Axl之小鼠重組Gas6及ELISA套組購自R&D System。自ATCC獲得人類癌細胞系，並在補充有10% FBS之PRMI1640培養基中培養。雜交瘤抗-人類Axl單株抗體12A11及3G9係由 Genentech提供（參見 Li (2009))。噬菌體抗-Ax丨單株抗體之產生。在抗體產生中’使用在選定互補決定區域（H1、H2、H3)中具有合成多樣性以模擬人類IgG譜之天然多樣性的人類噬菌體抗體文庫來進行淘選。Fab片段以二價形式展示於M13噬菌體顆粒之表面上（Lee等人，2004)。在各輪替代淘選中，針對人類及鼠類 Axl ECD來淘選噬菌體抗體文庫。藉由ELISA及DNA測序來鑑別結合至人類Axl ECD-His及鼠類Axl ECD-Fc融合蛋白之嗤菌體抗體’且重新格式化抗體純系以表現全長 IgG(Liang等人，2007)。個別純系短暫表現於哺乳動物細胞中且使用蛋白質A管柱進行純化（Carter等人’ 1992) » 篩選噬菌體純系抑制Baf3-Axl細胞之Gas6依賴性增殖之能力。選擇對於抑制Baf3Axl細胞增殖顯示最高功效之兩種純系用於親和力成熟。對於親和力成熟，將M13噬菌體表面上展示單價Fab之噬菌粒（Liang等人，2007)用作用於接枝噬菌體Ab之輕鏈 156813.doc -124· 201204388 (vL)及重鏈（vH)可變結構域的文庫模板。採用軟隨機化策略來達成親和力成熟（如Liang等人，2007所述），且使用高通量單點競爭性噬菌體ELISA來快速篩選高親和力純系（如 Sidhu等人，2004所述）。抗-Axl抗鱧之親和力量測。對於抗-Axl抗體之結合親和力測定，使用具有BIAcore™-3000儀器之表面電漿共振 (SRP)量測。為量測抗-Axl抗體與人類Axl ECD-His蛋白之間之親和力，藉由經小鼠抗人類IgG塗覆之CM5生物感測器晶片來捕獲抗-Axl人類IgG以達成約250個反應單位 (RU)。對於動力學量測，將人類ECD-His之兩倍連續稀釋液（440 nM-28 nM)在25°C下以30 μΐ/min之流速注射至PBT 緩衝液（具有0.05% Tween 20之PBS)中。使用簡單一對一 1^1^11111丨1*結合模型（81八〇€^評估軟體，版本3.2)來計算締合速率（1^合）及解離速率（k解離）。以k解離/k綠合比率之形式來計算平衡解離常數（KD)。為量測抗- Axl抗體與鼠類Axl ECD-Fc融合蛋白之親和力，藉由經小鼠抗人類IgG塗覆之 CM5生物感測器晶片來捕獲鼠類Axl ECD人類IgG融合蛋白以達成約150個反應單位（RU)。對於動力學量測，將抗-Axl Fab片段之兩倍連續稀釋液（200 nM-12 nM)在25°C 下以30 μΐ/min之流速注射至PBST缓衝液（具有0.05% Tween 20之PBS)中。細胞增殖分析。以5000個細胞/孔將細胞接種至96孔板中並使用Axl mAb在各種濃度下處理72小時。根據製造商說明書使用CellTiter-Glo發光細胞存活率分析（Promega)來 156813.doc -125- 201204388 量測細胞增殖。 ELISA及螢光活化細胞分選（FACS)。如下所述來實施 ELISA分析：使用 0.5% BSA、PBS、0.05% Tween 20 (PBST)阻斷經山羊抗人類IgG Fc塗覆之板。對於交叉反應分析，將經塗覆板與人類Axl.Fc、小鼠Axl.Fc或人類 Mer.Fc、Tyro-3.Fc在室溫下一起培育1 hr，在PBST中洗滌4次，與抗-Axl mAb及與HRP接合之抗小鼠Ig—起進行培育。對於結合分析，將經塗覆板與人類Axl.Fc在室溫下一起培育1 hr，在PBST中洗滌4次，與rmGas 6及抗-Axl mAb在室溫下一起培育1 hr。將板在PBST中洗滌4次，與生物素化抗-mGas6及抗生蛋白鏈菌素-HRP —起進行培育。使用R&D ELISA套組根據製造商說明書量測分泌之 Ang-2及DKK3。藉由FACS使用標準技術來測定細胞表面上之Axl表現。簡言之，收穫細胞，使用抗-Axl mAb (12A11，10 ug/ml)在冰上染色30 min，在PBS中洗滌兩次，且然後使用PE接合之第二抗體進行染色。為測定細胞表面上Gas6與Axl之結合之抗體阻斷，收穫細胞，使用抗-Axl mAb染色30-min並與rmGas6在冰上一起培育30-min。在 PBS中洗滌兩次，並使用生物素化抗-Gas6及PE接合之抗生蛋白鏈菌素進行染色。在BD FACScalibur流式細胞儀上分析試樣。異種移植物實驗。所有研究皆係根據「實驗動物護理及使用指南（Guide for the Care and Use of Laboratory Animal)」（NIH)來實施，且由國際動物管理及使用委員 156813.doc -126- 201204388 會（the Institutional Animal Care and Used Committee) (IACUC)批准。將存於基質膠（MDA-MB-231)中之總共 5X106 (A549)或107個細胞經皮下分別移植至裸小鼠（A549) 或SCID小鼠（MDA-MB-231)之右翼中。在平均腫瘤尺寸達到100 mm3時，將小鼠隨機化並分成不同治療組（在每一組中，n=10)。經由腹膜腔内注射（IP)每週兩次投與抗-Axl4 對照 IgGl 抗體（以 10-30 mg/kg)、抗-VEGF(以 1-2 mg/kg)。藉由口服管飼法以100 mg/kg/天投與埃羅替尼。在治療開始時，分別以6.25 mg/kg/天（經5天）、及100 mg/kg(單一劑量）經皮下投與紫杉醇及卡鉑。使用雙向Anova實施統計學分析以比較不同治療組中之腫瘤生長。對於藥效學（PD)研究，使用抗體將小鼠治療0、24、72 及168小時。在每一時間點，切下腫瘤，實施處理以用於免疫組織化學染色及圖像分析，且使用其產生用於西方印跡分析之細胞裂解物。對於轉移研究，將經螢光素酶報導基因穩定轉染之 5X105個MDA-MB-231細胞（Li等人，2009)經由尾部靜脈注射移植至SCID小鼠中。藉由生物發光檢測來監測腫瘤細胞向各個器官之轉移（如Li等人，2009所述）。免疫組織化學。將異種移植物腫瘤試樣固定於10%中性緩衝福爾馬林（formalin)中，實施處理，包埋於石堪中，並以4 μιη進行切片。然後使用用於Ki67、裂解半胱天冬酶 3及MECA32之一級抗體處理薄片，隨後使用生物素化二級抗體及DAB發色團進行處理。 156813.doc -127- 201204388 自Cureline公司獲得原發性乳癌組織微陣列，包含導管及轉移性腺癌。使用上文所述之抗-Axl單株抗體來實施 Axl IHC(Li等人，2009)，且使用CD68將巨噬細胞染色。對於雙重Axl/CD68 IHC，首先在2 pg/ml下使用Vector ABC Elite HRP試劑及DAB基質實施Axl染色。隨後在0.5 pg/ml 下亦使用ABC Elite-HRP試劑但代之以使用Vector SG色原體（Blue/Grey)來實施CD68染色。在兩種複合物之間實施第二靶抗原回收步驟以洗脫出第一複合物，從而避免兩個標記物之交叉反應性。血管密度量測及數據分析。使用MECA32(泛内皮細胞標記物）將腫瘤試樣染色。藉由Ariol SL-50自動玻片掃描平臺（Genetix有限公司；Hampshire，UK)以ΙΟΟχ最終放大率獲得圖像。輸出腫瘤特異性區域以供在Metamorph軟體包 (MDS Analytical Technologies ; Ontario, Canada)中以個別 8位元圖像形式進行分析。使用藍色標準化算法自蘇木素複染液（Hematoxylin counterstain)分離褐色DAB特異性染色（如Brey等人，2〇03所述）。分割算法可鑑別血管，且基於尺寸及形狀去除雜訊。基於蘇木素染色之尺寸、形狀、及密度將細胞鑑別為腫瘤或非腫瘤細胞。藉由非腫瘤細胞對腫瘤細胞之密度來鑑別非腫瘤區域。完成分析後，人工評估圖像以去除錯誤地鑑別為血管或腫瘤區域之假像。記錄各個血管之區域量測、以及每一圖像中之腫瘤及非腫瘤區域。使用 JMP 8.0 軟體（SAS Institute 公司，North Carolina, USA)分析基於圖像分析之原始值。實施司徒登 156813.doc -128· 201204388 氏t測試（student's t test)以比較每一對平均值，其中p < 0.05 » 腫瘤相關性巨噬細胞（ΤΑΜ)之分離及所分泌細胞因子之檢測。切開腫瘤，切成小片並在RPMI1640培養基中與 2.5% FBS、0·2 單位/ml Liberase Blendzymes II 及 5 單位/ml DNasel(Roche)—起培育。使用 MACS 解離器（Miltenyi Biotec)將腫瘤細胞解離並在室溫下維持20分鐘。添加 EDTA(最終濃度為0.002%)以終止反應。製備單細胞懸浮液，且使用RBC裂解缓衝液（eBioscience)去除紅血細胞。以107個細胞/ml將細胞再懸浮於含有1% FBS之PBS中並與20 pg/ml FcRII、ΙΠ 及 IV— 起培育 20 分鐘。添加抗-F4/80-PE (eBioscience)及抗-CDllc-APC (BD Pharmingen)(0.2 pg/l〇6 個細胞）並在冰上培育30分鐘。藉由FACSAria (BD Biosciences)來分選F4/80及CDllc陽性細胞。將總共2xl05 個F4/80及CDllc陽性細胞接種於96孔板中並培養過夜。收集培養基且使用Bio-Plex小鼠細胞因子分析（Bio-Rad)根據製造商說明書測定細胞因子及趨化因子之含量。表位定位藉由標準分子-生物技術來製備八\1-2(卩1^1111八\1(1-134Aa)/HuIgGlFc)、Axl-3 (PRK HuAxl(l-221Aa)/HuIgGlFc)、 Axl-4 (PRK HuAxl(l-324Aa)/HuIgGlFc)、及 Axl-5 (PRK HuAxl(l-435Aa)/HuIgGlFc)質粒構建體。藉由直接測序及/ 或限制酶切消化來證實所用質粒。使用Promega L2080 TNT SP6 Quick轉錄/轉譯系統套組在活體外轉錄及轉譯 156813.doc •129- 201204388 編碼Axl細胞外結構域之不同部分（aal-134、aal-221、 aal-324、aal-435)的質粒，且用作ELISA中之抗原。該等實驗中所用之Axl部分包含：人類Axl之胺基酸1-134(包括 Axl之Igl): MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFV GNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILEL ADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCL VFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID ΝΟ:111)、及人類 Axl 之胺基酸221-324(包括Axl纖連蛋白結構域）： ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQ AVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPH TPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL (SEQ ID NO:130) » 抗體競爭實驗。為確定噬菌體抗-Axl mab YW327.6或 YW327.42是否與雜交瘤抗-Axl mAb 12A11及3G9進行競爭，將A549細胞與抗-Axl噬菌體抗體（各自在50 pg/ml下）及雜交瘤抗-Axl抗體（各自在10 pg/ml下）共染色30分鐘。在PBS中將細胞洗滌兩次，且使用抗-小鼠Ig-PE進行染色。在BD FACScalibur流式細胞儀（BD Biosciences)上分析試樣，如上文針對FACS分析所述。結果阻斷Αχ丨功能之噬菌體源單株抗體的產生。為鑑別與鼠類及人類Axl交叉反應之抗體，採用在選定互補決定區域中具有合成多樣性以模擬人類IgG抗體之天然多樣性之噬菌體展示抗體文庫（Lee等人，2004)。藉由ELISA及DNA測 156813.doc -130- 201204388 序來鑑別結合至人類及鼠類Axl ECD之噬菌體抗體，且重新格式化抗體純系以表現全長IgG(Liang等人，2007)。然後根據抑制Baf3Axl細胞之Gas6依賴性生長的能力來篩選一組全長IgG(Li等人，2009)，且使純系YW327.6中之一者 * 達成親和力成熟並純化。 ** 親和力成熟之Axl mAb YW327.6S2可以高親和力結合至人類及鼠類Axl，其中Kd分別為約1 nM、及545 pM(圖 7A-B)。具體而言，Ka 為 1.7 X 105，kd 為 1·7 X 104，且 KD 為9.9 X 10_1Q。此抗體亦結合食蟹猴Axl，但其並不與相關受體Tyro3及Mer交叉反應（圖7C)。YW3 27.6S2以劑量依賴性方式阻斷配體Gas6與Axl之結合，如無細胞ELISA中及 FACS之細胞表面上所示（圖7D-E)。亦表徵親和力成熟之Axl Mabs YW327.6S11、 YW327.42S8及 YW327.42S31 ° YW327.6S11、YW327.42S8 及YW327.42S31以高親和力結合人類及鼠類Axl。舉例而言，對結合人類Axl之抗體的biacore分析可得到下列結果：

Hu Axl_Ka_kd_KD YW327.6S11 1.7 X105 1.7 ΧΙΟ4 1.3 ΧΙΟ9 YW327.42S8 5.2Χ 104 1.3Χ ΙΟ4 2.5 X ΙΟ9 YW327.42S31 6.3 X ΙΟ4 1.5 ΧΙΟ4 2.4 ΧΙΟ9 該等抗體並不與Tyro3及Mer交叉反應。YW327.6S2(及親代抗體YW 327.6)可阻斷配體Gas6與Axl之結合，而 YW327.42S8及 YW327.42S31(及親代 Mab YW327.42)並不 156813.doc • 131 - 201204388 阻斷配體Gas6與Axl之結合。

Axl表位分析。使用ELISA分析結合人類Axl細胞外結構域之不同部分的Axl抗體。獲得如下結果。 YW327.6 YW327.42

Axl2(aal-134) + -

Axl-3(aa 1-221) + -

Axl-4(aal-324) + + YW327.6可結合包括人類Axl之胺基酸1-134之Axl-Fc融合體。與之相比，YW327.42可結合包括人類Axl之胺基酸 1-324之Axl-Fc融合體，但並不結合包括胺基酸1-134、及 1-221之八乂1?〇融合體。因此，得出結論，丫\¥327.6可結合由人類Axl之胺基酸1-134組成的多肽，且人類Axl胺基酸 222-234為YW327.42結合所需。胺基酸1-134含有Axl Igl結構域，且胺基酸222-234含有Axl纖連蛋白結構域。使用-Axl雜交瘤抗體之競爭實驗。測定抗體YW326.6及 YW327.42是否與抗-Axl雜交瘤抗體12A11及3G9競爭結合人類Axl(Li，（2009)，2009年7月27日提出申請之美國專利申請案第61/228,915號）。在關於人類Axl之抗體競爭結合實驗中，抗體YW327.6並不與雜交瘤抗體12A11或3G9競爭結合人類Axl，此表明該等抗體並不識別相同表位。抗體 YW327.42與雜交瘤抗體 12A11競爭結合人類Axl，但並不與雜交瘤抗體3G9競爭結合人類Axl。 YW327.6S2可下調Axl表現、抑制其活化、信號傳導及 Gas6依賴性Baf3Axl細胞增殖。為測試YW327.6S2是否影 156813.doc -132- 201204388 響Axl生物功能，首先評估其對於Axl表現及信號傳導之效應。使用YW327.6S2處理NSCLC細胞系A549可快速下調細胞表面上之Axl表現（圖7F，上圖）且此下調可持續24 hr(圖 7F，下圖）。H1299 NSCLC細胞之Gas6處理可誘導在將細胞與YW327.6S2—起預培育時受抑制之Axl磷酸化（圖7G，上圖）。因此，將H1299細胞與YW327.6S2—起預培育可阻斷下游信號傳導分子Akt之Gas6誘導性磷酸化（圖7G，下圖）。藉由YW327.6S2來下調Axl表現及使其信號傳導失活可有效抑制Baf3Axl細胞之Gas6依賴性生長，且IC50為340 ng/ml(圖 7H)。

YW327.6S2可減小A549異種移植物生長並增強抗-VEGF 之效應。在先前研究中，證實藉由RNAi或使用抗人類Axl 雜交瘤單株抗體進行處理來抑制Axl可顯著減弱A549 NSCLC腫瘤生長（Li等人，2009)。因此，首先測試 YW327.6S2對於此模型中之腫瘤生長之效應。僅10 mg/kg YW327.6S2(每週兩次）之投藥方案可顯著減小A549腫瘤生長（圖8A)，且此抑制效應與抗人類Axl雜交瘤抗體相當（圖 8C) »

Axl表現於内皮細胞上並增強VEGF誘導性内皮小管形成 (Li等人，2009 ; Holland等人，2005);測試抗-Axl mAb是否可增強抗-VEGF之抗腫瘤生長性質（Liang等人，2006)。僅抗-VEGF抗體及僅YW327.6S2對A549腫瘤生長具有相似效應（圖8 A)〇兩個抗體之組合使得與單獨之任一抗體相比可增強腫瘤生長抑制，其中單一藥劑可抑制30%且組合處 156813.doc •133- 201204388 理可抑制60°/〇(圖8A)。每週兩次向此研究中之動物投藥並保持60天，且跟蹤至第85天以檢驗腫瘤生長之延遲（自研究中排除腫瘤尺寸超過800 mm3之動物；沒有動物因毒性而被排除）。 YW327.6S2與抗-VEGF之組合與單一藥劑相比可顯著延遲腫瘤生長（圖8A)。在自最後一次投藥至實驗結束（第85天）期間，在組合處理組中腫瘤未再生長，此使得此組中之所有動物在實驗結束時皆得以存活，如Kaplan-Meier曲線中所示（圖8B)。並不與鼠類Axl交叉反應之抗人類Axl雜交瘤單株抗體 12A11可顯著減弱A549異種移植物腫瘤生長（Li等人， 2009)，其亦增強抗-VEGF之效應，如圖8C中所示。此情形在預料之中，此乃因12A11直接抑制腫瘤細胞生長且抗-VEGF會影響腫瘤血管系統。 YW327.6S2可下調受體表現並誘導A549腫瘤細胞之細胞凋亡。為開始理解調介YW327.6S2對於減小腫瘤生長之效應的機制，實施藥效學研究。使用YW327.6S2治療具有 A5 49腫瘤之小鼠，且在投藥後0、24、72、及168 hr時切下腫瘤。腫瘤裂解物之西方印跡分析顯示，在投與抗體後 24 hr Axl表現下調並持續168 hr(圖8D)，從而表明 YW327.6S2之抗腫瘤生長效應部分係藉由下調Axl表現來調介。為測定YW327.6S2是否對腫瘤細胞增殖及細胞凋亡具有直接效應，切下使用對照或YW327.6S2處理兩週之A549異 156813.doc •134· 201204388 種移植物腫瘤，且實施裂解半胱天冬酶3 (CC3)及Ki67 IHC。使用YW327.6S2處理之腫瘤顯示與對照相比CC3有所增加（圖8E)，此表明YW327.6S2可誘導腫瘤細胞之細胞凋亡。經對照及YW327.6S2處理之腫瘤之間的Ki67陽性細胞核並無顯著差別，此表明YW327.6S2並不直接影響腫瘤細胞增殖。為研究YW327.6S2是否影響腫瘤相關性血管系統，使用僅YW327.6S2或YW327.6S2與抗-VEGF之組合來治療具有 A549腫瘤之小鼠。切下腫瘤並使用MECA32(泛内皮標記物）染色以檢驗瘤内血管密度。單獨之YW327.6S2與對照相比並不顯著減小血管密度，但其與抗-VEGF之組合可顯著降低腫瘤相關性血管密度（圖8F)。與之相比，12A11本身或與抗-VEGF之組合對瘤内血管密度並無顯著效應。 YW327.6S2可增強埃羅替尼及化學療法之效應。為測q YW327.6S2是否可增強標準護理對NSCLC之治療指數，a 施YW327.6S2與EGFR小分子抑制劑（SMI)埃羅替尼^ 匕及化學療法之組合治療。性 Α549含有野生型EGFR且僅對埃羅替尼具有中等& $ 使該等 (Yauch等人，2005);由此研究抗-Axl mAb是否可細胞對EGFR SMI敏感。YW327.6S2及埃羅替斥少a 匕在作為單一藥劑投與時可將腫瘤生長減小3 0%，但在組合彳击 1文用時可

將腫瘤生長速率減小50%以上（圖9A)，此表明抗_A X1 mAb 可增強埃羅替尼之抗腫瘤生長效應。然後研究抗-Axl mAb是否能夠增強標準化學:麻頌冼對於 156813.doc •135· 201204388 NSCLC之治療指數。使用一個週期之化學療法治療具有 A549異種移植物之小鼠，該化學療法由在開始治療時投與之紫杉醇（6.25 mg/kg/天，經5天）及卡鉑（100 mg/kg，一個劑量）組成（第〇天，圖9B)。單獨之化學療法與單獨投與之 YW327.6S2對於腫瘤生長具有相似效應，且二者之組合使得可增強腫瘤生長之抑制（圖9B)。在MDA-MB-231乳癌異種移植物模型中，YW327.6S2可減小血管密度並抑制來自腫瘤相關性巨噬細胞之發炎細胞因子分泌。因shRNA對於Axl之基因敲低僅對於MDA-MB-231 異種移植物腫瘤生長具有中等效應（Li等人，2009)，故探尋YW327.6S2在此模型中是否有效。單獨之YW327.6S2能夠減小腫瘤生長（25%)，且與用作單一藥劑之抗-VEGF在此模型中具有相似效應（圖10A)。組合療法使得腫瘤生長減小50%，此表明YW327.6S2可增強抗-VEGF之效應（圖 10A)。與之相比，抗-Axl雜交瘤抗體12All(Li等人， 2009)(與鼠類Axl並不交叉反應）作為此模型中之單一藥劑對腫瘤生長並無顯著效應，且並不影響抗-VEGF(圖10B)。西方印跡分析顯示，YW327.6S2及12A11二者皆可下調腫瘤中之Axl表現（圖10C及10D)。該等結果表明，藉由調節腫瘤間質功能可調介YW327.6S2之抗腫瘤生長效應》為進一步研究YW327.6S2如何調節腔瘤間質功能，使用僅 YW327.6S2或其與抗-VEGF之組合來治療具有MDA-MB-231 腫瘤之小鼠。在投與抗體後之不同時間點，切下腫瘤並使用MECA32染色以檢驗瘤内血管密度。YW327.6S2及 156813.doc -136- 201204388 抗-VEGF與對照相比皆顯著減小血管密度（圖10E)。且兩種抗體之組合使得可進一步減小腫瘤相關性血管密度。該等結果表明，YW327.6S2可藉由改變血管功能來部分地減小 MDA-MB-231腫瘤生長。在原發性人類乳癌樣品中，發現Axl蛋白強烈表現於浸潤性巨噬細胞中（圖10F)，且由此探詢Axl mAb YW327.6S2 是否可影響腫瘤相關性巨噬細胞（ΤΑΜ)功能。使用 YW327.6S2、12Α11或對照抗體將MDA-MB-231異種移植物腫瘤處理一週，且藉由分選F4/80陽性細胞來分離 ΤΑΜ。將細胞在無血清培養基中培養過夜，且收集上清液並分析各種細胞因子及趨化因子之存在。與使用對照抗體處理之ΤΑΜ相比，來自使用YW327.6S2及12Α11處理之腫瘤之ΤΑΜ會產生更低含量之發炎細胞因子及趨化因子（圖 10G)。與腫瘤細胞上之Axl表現由該等抗體下調相比，使用任一 Axl-mAb進行處理並不影響ΤΑΜ上之Axl表現程度 (數據未顯示）（圖10C及10D)。該等結果表明，Axl mAb最可能以間接方式調節來自ΤΑΜ之發炎細胞因子/趨化因子分泌，此或許係藉由阻斷腫瘤與間質細胞之間之串擾來達成。 YW327.6S2可減小MDA-MB-231乳癌細胞向骨之轉移。在先前研究中，證實’在正位模型中，shRNA之Axl基因敲低會抑制MDA-MB-23 1乳癌細胞向肺之轉移（Li等人， 2009)，由此測試YW327.6S2是否會影響該等細胞之轉移。將穩定表現螢光素酶報導基因（2〇)之MDA-MB-231細胞經 156813.doc -137- 201204388 由尾部靜脈注射至SCID小鼠中，注射4週後，在對照抗體冶療組中所有5只動物之顱面區域、脛骨及股骨中檢測到強’、、（發光彳§號。在對照組之每一動物中，由生物發光檢測到之位點為5、5、4、3及1個，總共18個（圖11A)。在使用 YW327.6S2治療之小鼠巾’由生物發光檢測到之位點顯著減少’其中在每一動物中為0、丨、2、3、及1個位點且對於整個組而言總共為7個（圖11A)。藉由組織學分析來證實在骨中存在轉移灶（圖11B)。該等結果表明，YW327 6S2能夠減小MDA-MB-231乳癌細胞向較遠器官之轉移。討論吾人研發且表徵了人類抗-Axl單株抗體（YW327.6S2)，其表現物種交叉反應性且阻斷Axl在腫瘤發生中之各種功月色。除了係首次報導之用於Axl之完全人類化阻斷性抗體外’ YW327.6S2不僅用作剖析Axl活化/信號傳導在癌症產生及進展之多個態樣中之影響的有效工具，且亦代表用於治療各種癌症之有效治療劑。結果顯示’ YW327.6S2可藉由下調Axl表現以及抑制配體Gas6與受體之結合來阻斷Axl功能，從而引起Axl及其下游信號傳導之失活（圖7)。YW327.6S2下調Axl在癌症細胞中之表現之能力代表其抑制效應的重要機制，此乃因許多癌症表現組成塑活化之Axl且不再對外源Gas6具有反廉（Li 等人，2009)。在A549 NSCLC模型中，YW327.6S2在作為單一藥劑投與時可顯著減弱腫瘤生長（圖8A)。此抑制效應與此模型中 156813.doc -138- 201204388 之抗-Axl雜交瘤抗體相當（Li等人（2009);圖8C)。 YW327.6S2可快速下調異種移植物中之Axl表現（圖8D)，且誘導腫瘤細胞之細胞凋亡（圖8E)，此可能係調介其對於腫瘤生長之抑制效應之機制之一。先前已發現，Axl可能藉由調節DKK3來調節内皮細胞功能，且血管生成素/Tie2 路徑（Li等人，2009)會增加抗-Axl mAb可增強抗-VEGF在減小腫瘤生長中之效應的可能。結果（圖8A及8F)與此假設一致，其中YW327.6S2會藉由增強抗-VEGF在減小腫瘤内血管密度中之效應來影響腫瘤血管系統。實際上，在A549 模型中共投與YW327.6S2及抗-VEGF會產生腫瘤停滯，該腫瘤停滯在治療停止後可維持至少4週（圖8B)。雜交瘤抗體12A11在此模型中亦會增強抗-VEGF之抗腫瘤效應（圖 8C)。然而，與YW327.6S2不同，12A11對腫瘤血管系統並無直接效應；而是其直接抑制腫瘤細胞增殖並誘導細胞凋亡（Li等人，2009)。12A11對腫瘤生長之效應及抗-VEGF對腫瘤血管系統之效應在兩種藥劑一起使用時可產生增強之效應。 EGFR小分子抑制劑（例如埃羅替尼）可有效治療具有 EGFR突變或擴增之NSCLC腫瘤（Lynch等人，2004 ; Paez 等人，2004 ; Eberhard 等人 ’ 2005 ; Giaccone 等人’ 2005 ; Tsao等人，2005)。亦已知’使用Her2/EGFR小分子抑制劑拉帕替尼或抗-Her2抗體Herceptin處理乳癌細胞使得可誘導Axl表現且因此使癌症細胞對該等療法產生抗性 (Liu等人，2009)。最近發現，在已獲得針對埃羅替尼之抗 156813.doc • 139- 201204388 性之HCC827 NSCLC(具有EGFR突變及擴增二者之細胞系）細胞中誘導Axl表現，且抗性細胞中之Axl基因敲低可恢復其對埃羅替尼之敏感性，從而表明Axl可在NSCLC之埃羅替尼抗性中發揮作用。因A549細胞含有野生型£GFR且在活體外僅對EGFR抑制具有中等敏感性（Yauch等人， 2005)，故探詢抗-Axl mAb是否可使該等細胞對埃羅替尼敏感。結果顯示，YW327.6S2可增強埃羅替尼在減小腫瘤生長中之效應（圖9A)，從而表明抗-Axl mAb可能藉由直接減小Axl在腫瘤細胞中之表現來增強EGFR抑制劑在對單獨之EGFR抑制不敏感之腫瘤中的效能。全身性化學療法在NSCLC之治療範例中發揮最重要作用。對於復發或晚期疾病，使用由卡鉑/紫杉醇組成之化學療法治療之患者具有15%之反應率及10.3個月之中值存活期（Sandley等人，2006)。A549 NSCLC模型中之結果顯示，YW327.6S2能夠增強卡鉑/紫杉醇之抗腫瘤效能（圖 9B )，此表明阻斷Axl功能可改良化學療法在此疾病中之治療指數。結果與最新報導一致，該最新報導表明Axl小分子抑制劑與順鉑協同阻抑4T1乳癌正位模型中之肝微轉移 (Holland等人，2010)。在MDA-MB-231乳癌模型中，單獨之YW327.6S2能夠顯著減弱腫瘤生長（圖10A)。抗-Axl雜交瘤抗體並不與鼠類 Axl交叉反應且因此僅影響腫瘤細胞，其對於此模型中之腫瘤生長並無顯著效應（圖10B) ^該等結果表明， YW327.6S2可能經由其對於腫瘤間質之作用來發揮其抗腫 156813.doc -140- 201204388 瘤效應。結果表明，YW327.6S2可減小瘤内血管密度（圖 10E)並增強抗-VEGF之效應。經由對於腫瘤血管系統之效應’ YW327.6S2可影響腫瘤生長。癌症發展與炎症之間之關聯早已為人所瞭解（Balkwill及 Mantovani，2001 ; Coussens及 Werb，2002)。與感染及刺激有關之慢性炎症可產生引起基因組損傷及腫瘤初發的環境。愈來愈多之證據表明，ΤΑΜ對腫瘤進展具有因果作用’包含促進血管發生及基質改造（Balkwill等人，2005 ; Pollard，2004)。將用於此作用之信號視為發炎細胞因子，包含腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、介白素6 (IL-6)及趨化因子之多血質》該等細胞因子及趨化因子不僅將免疫性細胞募集至刺激腫瘤進展之特異性位點，且已顯示其受體表現於腫瘤細胞上，其中其可增加腫瘤生長及遷移 (Haghnegahdar等人，2000)。在原發性人類乳癌中，Axl蛋白以高含量表現於腫瘤相關性巨噬細胞（ΤΑΜ)上（圖10F)。本文提供證據表明抗-Axl mAb可經由間接機制來調節該等細胞之功能。數據表明，使用YW327.6S2或12A11(其與鼠類Axl並不交叉反應且由此應對ΤΑΜ並無直接效應）來處理 MDA-MB-23 1異種移植物可抑制發炎細胞因子及趨化因子自ΤΑΜ之分泌（圖l〇G)。因Axl-mAb似乎對於ΤΑΜ上之Axl 表現並無顯著效應但會下調腫瘤細胞上之受體表現，但抗-Axl-mAb可能藉由阻斷腫瘤與間質細胞間之串擾來調節細胞因子/趨化因子自ΤΑΜ之分泌。該等結果與以下最新報導一致：腫瘤細胞可藉由促使浸潤性白血球誘導Gas6之 156813.doc -141 - 201204388 表現來促進其生長（Loges等人，2010);且Axl之小分子抑制劑可減小4T1***腫瘤細胞中之GM-CSF表現（Holland等人，2010)。先前研究已確定Axl在促進腫瘤細胞遷移、侵襲及轉移中之作用（Zhang等人，2008 ; Li等人，2009 ; Tai等人， 2008 ; Vajkoczy等人，2006 ; Gjerdrum等人，2010)。本文證實，YW327.6S2能夠減小MDA-MB-231乳癌細胞向骨之轉移。該等結果與先前數據一致，其中在正位模型中，在乳癌細胞中藉由RNAi達成之Axl沉默可抑制乳癌細胞向肺之轉移（Li等人，2009 ; Gjerdrum等人，2010)，此表明此抗-Axl抗體不僅對於治療原發性腫瘤且亦對於轉移性疾病皆可具有治療潛能。總而言之，已研發出阻斷Axl功能之人類單株抗體。此抗-Axl mAb經由多種機制來發揮其抗腫瘤效應，包含誘導腫瘤細胞細胞凋亡、調節血管發生及調節腫瘤相關性免疫性細胞功能。另外，此抗-Axl mAb可增強抗-VEGF、 EGFR SMI以及化學療法之抗腫瘤效能，由此可代表該等療法係標準護理之臨床設置中的新穎治療方式。部分參考文獻列表

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Cancer Res 68:1905-15. 盡管出於清晰理解之目的藉助闡釋及實例在某些細節上闡述了上述發明，但該等說明及實例不應解釋為限制本發明範圍。本文所引用所有專利及科學文獻之揭示内容的全部内容皆以引用方式明確併入本文中。【圖式簡單說明】圖1A-F :抗-FGFR3抗體之重鏈及輕鏈HVR環序列。該等圖展示重鏈HVR序列HI、H2、及H3以及輕鏈HVR序列 L1、L2、及L3。如本文所述根據Kabat編號系統對胺基酸位置進行編號。圖2 :繪示抗-Axl抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域之胺基酸序列。圖3 A-B及4 :繪示實例性受體人類共有框架序列，其用於以如下序列標識來實踐本發明：可變重鏈（VH)共有框架（圖3A-B) 減去Kabat CDR之人類VH亞群I共有框架（按出現順序分別係 SEQ ID NO: 13 1-133及 125) 減去經延伸超變區域之人類VH亞群I共有框架（按出現順序分別係 SEQ ID NO:134-135、133、125、134-136、 125 、 134-135 、 137 、及125) 減去Kabat CDR之人類VH亞群II共有框架（按出現順序分別係 SEQIDNO:138-140、及 125) 減去經延伸超變區域之人類VH亞群II共有框架（按出現順 156813.doc -150- 201204388 序分別係 SEQ ID NO:141-142、140、125、141-143、 125 、 141-142 、 144 、及125) 減去經延伸人類VH亞群III共有框架（減去Kabat CDR)之人類VH亞群II共有框架（按出現順序分別係SEQ ID NO:145-147 及 125) 減去經延伸超變區域之人類VH亞群III共有框架（按出現順序分別係 SEQ ID NO:122-123、147、125、122-123、 148 、 125 、及122-125) 減去Kabat CDR之人類VH受體框架（按出現順序分別係SEQ ID NO: 149、146、150、及 125) 減去經延伸超變區域之人類VH受體框架（按出現順序分別係 SEQ IDNO:122-123、150、125、122-123、151、及 125) 減去Kabat CDR之人類VH受體2框架（按出現順序分別係 SEQ IDNO:149、146、152、及 125) 減去經延伸超變區域之人類V Η受體2框架（按出現順序分別係 SEQ ID ΝΟ:122-123、152、125、122-123、153、125、 122-123 、 154 、及125) 可變輕鏈（VL)共有框架（圖4) 人類VL κ亞群I共有框架（按出現順序分別係SEQ m NO-.126-129) 人類VL κ亞群II共有框架（按出現順序分別係sEQ⑴ NO:155-157 及 129) 人類VL κ亞群III共有框架（按出現順序分別係seq ι〇 NO:158-160 及 129) 156813.doc -151 - 201204388 人類VL κ亞群IV共有框架（按出現順序分別係SEQ ID NO: 161-163及129) 圖5 :繪示huMAb4D5-8輕鏈（按出現順序分別係SEQ ID NO: 126-127、164、及129)及重鏈（按出現順序分別係SEQ ID NO:122-123、154、及125)之框架區域序列。以上標/粗體表示之編號表示根據Kabat編號之胺基酸位置。圖6 :繪示huMAb4D5-8輕鏈（按出現順序分別係SEQ ID ΝΟ··126-129)及重鏈（按出現順序分別係SEQ ID NO:122-125)之修飾/變體框架區域序列。以上標/粗體表示之編號表示根據Kabat編號之胺基酸位置。圖 7A-H :對 Axl mAb YW327.6S2 之表徵。A-B.使用 BIAcore對YW327.6S2之親和力量測。使用一對一 Langmuir結合模型計算締合速率（k*t合）及解離速率（kii»)。將平衡解離常數（Kd)派生為U合/kWtt比率。C. YW327.6S2 之交叉反應性。YW327.6S2可與鼠類及食蟹猴Axl交叉反應，但不與Tyro3或Mer交叉反應《使用抗人類IgG Fc塗覆板，且然後與人類Axl、Mer、Tyro3 Fc、小鼠或食蟹狼 Axl Fc —起培育。洗滌後，添加同種型對照抗體或 YW327.6S2，且隨後添加HRP接合之抗人類IgG。D-E. YW327.6S2可阻斷Gas6與Axl之結合。圖7D : ELISA。使用抗人類IgG Fc塗覆板並與人類Axl-Fc —起培育。洗滌後，在存在或不存在抗體時添加Gas6 *藉由生物素化抗-Gas6抗體及鏈黴抗生物素-HRP接合物來檢測Gas6之結合。圖7E : FACS。收穫HUVEC並使用YW327.6S2或對照 156813.doc -152· 201204388 抗體進行處理，且然後與Gas6在冰上一起培育30分鐘。藉由生物素化抗-Gas6抗體及鏈黴抗生物素-PE接合物來檢測 Gas6與細胞表面之結合》F. YW327.6S2可下調Axl表現。將A549細胞與1 pg/ml YW327.6S2—起培育指定時間，且藉由FACS測定細胞表面Axl表現（上圖），且藉由西方印跡分析測定總蛋白質表現（下圖）。G. YW327.6S2可抑制Gas6 誘導性Axl磷酸化及信號傳導。將H1299細胞在無血清培養基中培養過夜，與YW327.6S2—起預培育4 hr，且使用 Gas6處理30分鐘。藉由ELISA量測填酸化Axl(上圖）且藉由西方印跡分析量測磷酸化Akt(下圖）。H. YW327.6S2可抑制Baf3Axl細胞生長》在含有200 ng/ml Gas6之培養基中使 Baf3Axl細胞生長，且使用指定濃度之YW327.6S2處理72 hr。藉由CellTiter Glo分析量測細胞存活率。圖8A-F : YW327.6S2可減弱A549異種移植物腫瘤生長並增強抗-VEGF之效應。A.腫瘤生長曲線·自平均腫瘤尺寸達到100 mm3時開始（第〇天）每週兩次以1〇 mg/kg (YW327.6S2及同種型對照抗體）或1 mg/kg(抗-VEGF)經腹膜腔内投與mAb。誤差條代表平均值之標準誤差（對於每一實驗中之每一組，n=l〇)。p=〇.〇〇〇3(YW327.6S2 與對照），p=l〇-"(YW327.6S2與組合）。B·各個治療組之 Kaplan-Meier曲線》自研究中移除腫瘤尺寸達到800 mm3 之小鼠，且對每一組中剩餘之動物（剩餘％)繪製曲線。C. 12A11可增強抗-VEGF之效應。自平均腫瘤尺寸達到1〇〇 mm時開始（第〇天）每週兩次分別以3〇 rng/kg及1 mg/kg經腹 156813.doc -153· 201204388 膜腔内投與12A11及抗-VEGF。誤差條代表平均值之標準誤差（對於每一實驗中之每一組，n=10)。ρ=0.006(12Α11與對照），卩=0.0001(12入11與組合）。〇.丫冒327.682可下調八乂1 表現。使用10 mg/kg之YW327.6S2治療小鼠且在指定時間點切下腫瘤。藉由西方印跡法來分析腫瘤細胞裂解物的 Axl表現。E. YW327.6S2可誘導細胞凋亡。切下經對照或 YW327.6S2處理2週之腫瘤且實施CC3 IHC以量測細胞凋亡。F. YW327.6S2可增強抗-VEGF在減小瘤内血管密度中之效應。在投藥後〇及72 hr時自如上文D中所述治療之小鼠切下踵瘤，且藉由使用MECA32免疫組織化學進行染色來使腫瘤血管系統可視化並藉由圖像分析進行定量（表示為平方微米）。對每一對實驗實施司徒登氏t測試（對於對照與組合，p<〇.〇5)。圖9A-B : YW327.6S2可增強埃羅替尼及化學療法在 A549異種移植物模型中之抗腫瘤效應。A. YW327.6S2可增強埃羅替尼之效應。抗體投與與圖2中相同。藉由口服管飼法以100 mg/kg/天投與埃羅替尼》對於每一組， n=10。p=1.7Xl(T9(YW327.6S2 與對照），p=2.3X10·10 (YW327.6S2與組合）。Β· YW327.6S2可增強化學療法。抗體投與與圖2中相同。經5天分別以6.25 mg/kg/天經皮下投與紫杉醇及卡鉑，且在治療開始時（第0天）以100 mg/kg之單一劑量投與。對於每一組，n=10。p=3X10·5 (YW327.6S2與對照），p=10_9(化學療法與對照），p=l〇_5(組合與單獨之化學療法）。 156813.doc -154- 201204388 圖10A-G : YW327.6S2藉由調節腫瘤間質功能來減弱 MDA-MB-231異種移植物腫瘤生長。八及& YW327.6S2(而非12A11)可減小MDA-MB-231腫瘤生長並增強抗-VEGF之效應。自平均腫瘤尺寸達到丨〇〇 mm3開始（第0天），每週兩次以20 mg/kg(YW327.6S2及同種型對照抗體）、30 mg/kg (12A11)及2 mg/kg(抗-VEGF)經腹膜腔内投與mAb。誤差條代表平均值之標準誤差（對於每一實驗中之每一組， n=10)。p=8.5Xl〇·6 (YW327.6S2 與對照），p=2.8X10·8 (YW327.6S2 與組合），ρ=〇〇5(12Α11 與對照），p= 0.145(抗-VEGF與組合）° C及D. YW327.6S2可下調Axl表現。使用20 mg/kg之mAb治療具有MDA-MB231異種移植物腫瘤（芊均尺寸為500 mm3)之小鼠並在指定時間點切下腫瘤。使用西方印跡法來分析腫瘤細胞裂解物的Axl表現。E. YW327.6S2可減小腫瘤相關性血管系統之密度。在投藥後 0 hr及1週時自如上文c中所述治療之小鼠切下腫瘤’且藉由使用MECA32免疫組織化學進行染色來使腫瘤血管系統可視化並藉由圖像分析進行定量（表示為平方微米）。對每一對實驗實施司徒登氏t測試（對於YW327.6S2與對照、抗-VEGF與對照、及抗-VEGF與組合，p<0.05)。F. Axl在原發性人類乳癌之浸潤性巨噬細胞中大量表現。使用免疫組織化學檢驗79個原發性腫瘤。該等腫瘤中21 %在浸潤性巨噬細胞中表現高含量之Axl。藉由使用抗-CD68進行染色來鑑別巨噬細胞，且藉由抗-Axl/CD68雙重IHC來測定巨噬細胞上之Axl表現。使用連續切片。g. YW327.6S2可抑制自腫 156813.doc -155- 201204388 瘤相關性巨嗜細胞分泌發炎細胞因子/趨化因子。使用2〇 mg/kg之對照抗體、YW327.6S2或12A11治療具有MDA- MB231異種移植物腫瘤（平均尺寸為5〇〇之小鼠並在治療1週後切下腫瘤。藉由針對F4/80陽性細胞進行分選來分離腫瘤相關性巨噬細胞並培養過夜。使用Bi〇_piex小鼠細胞因子分析套組來量測分泌至培養基中之細胞因子及趨化因子。圖11Α-Β : YW327.6S2可減少MDA-MB-231乳癌細胞向骨之轉移。Α.經尾部靜脈注射腫瘤細胞後4週時進行之生物發光成像。經腹臈腔内（i.p.)向小鼠注射200 μΕ存於PBS 中之25 mg/ml D螢光素（lnvitrogen)，且在成像期間使用異氟烷經由鼻錐進行麻醉。在具有強化電荷耦合裝置照相機之光子成像儀（Biospace Lab，Paris，France)上獲得生物發光圖像。B.脛骨切片之Η &E染色。在實驗結束時收集組織並固定於4。/〇曱醛中’實施切片並使用η & Ε染色。上圖中之圓展示侵入骨之腫瘤細胞。下圖展示骨髓中贅瘤性細胞之細節。

圖12 . RefSeq ΝΜ—001699之實例性人類Axl序列（SEQ ID NO:165) » 156813.doc -156- 201204388 序列表 <110>美商建南德克公司 <120>抗-AXL抗體及其使用方法 <130> P4436R1 W0 <140〉100121293 <141> 2011-06-17 <150> 61/356,508 <151> 2010-06-18 <160> 166 <170> Patentln version 3.5

<210> 1 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 1

Gly Phe Thr Phe Thr Gly His Trp He His 1.5 ]0 <210> 2 <2U> 18 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 2

Gly Trp lie Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 . 15

Lys Gly <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 3

Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Ser Ser Val Gly Tyr Ala Met 10 15

Asp Tyr <210〉 4 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 156813-序列表.doe 201204388 <400> 4

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 5

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 6

Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 7

Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ser 丁rp I]e His 1 5 10 <210> 8 <211> 18 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 8

Gly Trp lie Asn Pro Tyr Arg Gly Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15

Lys Gly <210> 9 <2ll> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <：223>人工序列之說明：合成肽 2- 156813-序列表.doc 201204388 <400> 9 Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Ser Ser Val Gly Tyr Ala Met I 5 10 15

Asp Tyr

<210> 10 <21l> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 10 *

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <2)0> Π <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 11

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 12 <211> 9 <212> PRT . <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 12

Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr <210> 13 . <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 13

Gly Phe Ser Phe Thr Gly Thr Trp He His l 5 10 <210> 14 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 156813-序列表.doc 201204388 <400> 14 Gly Trp lie Ala Pro Tyr Ser Arg His Pro Tyr Tyr Ala Asp l 5 10

Ser Val 15

Lys Gly <210> 15 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 15 Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Ser Ser Val Gly Tyr 1 5 10

Ala Met 15

Asp Tyr <2i0> 16 <211> 11 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 16 Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 17 <211 > 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 17 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 18 Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> 156813-序列表.doc 4- 201204388 <223>人工序列之說明：合成肽 <400〉 19

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Ser Trp lie His 15 10 <210> 20 <211> 18 <212> PET <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 20

Gly Trp lie Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 35

Lys Gly <210> 21 <211> IS <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明··合成肽 <400> 21

Ala Arg Glu Tyr Asn Asp Trp Arg Gly Ser Ser Val Gly Tyr Ala Met 15 10 . 15

Asp Tyr <2.10> 22 <211> II <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 22

Arg Ala Ser Gin Asp Val Set Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明··合成肽 <>23

Ser Ala Set Phe Leu Tyr Ser

<210> 24 <21i> 9 <212> PRT 156813-序列表.doc 201204388 <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 24

Gin Gin Ser Tyr Ser Asn Pro Tyr Thr

<210> 25 <2U> 10 <2\2> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 25

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Ser Trp lie His 1 5 10 <2L0> 26 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 26

Gly Trp He Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 27 <211> 18 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 27

Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Ala Ser Ser Tyr Val Gly Tyr Ala Met 15 10 15

Asp Tyr <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 28

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 -6- 156813-序列表.doc 201204388 <210> 29 <2il> 7 <212> PRT . <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 29

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 30 <2Π> 9 <212> PRT <2V3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400〉 30

Gin Gin Ser Tyr Thr Ser Pro Ser Thr <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400〉 31

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Ser Trp lie His 1 5 10 <210> 32 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> ^223>人工序列之說明：合成肽 <400> 32

Gly Trp lie Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 33 <211> IS <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 33

Ala Arg GIu Tyr Pro Gly Trp Gly Gly Ser Ser lie Gly Tyr Glu Met 15 10 15

Asp Tyr 156813_ 序列表.doc 201204388 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 34

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 35

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 36

Gin Gin Ser Tyr Tyr Phe Arg Ser Thr l 5 <210> 37 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽

Hilo <400> 37

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly 1 5 <210> 38 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 38

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly 156813-序列表.doc 201204388 <210> 39 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 39

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 . 10 <210> 40 <211> II <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 40

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 41

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 42 <213 > 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 42

Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 43

Gly Phe Thr Phe Thr Gly ΊΠκ Gly lie His 1 5 10

<210> 44 <211> 18 <212> PRT 156813·序列表.doc 201204388 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 44

Ala Gly lie Pro Pro Val Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 45 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明··合成肽 <400> 45

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 11 <2.12> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 46

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 47

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 48 <211> 9 <212>PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 48

Gin Gin Ser Lys Thr Thr Pro Pro Thr 】 5 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 10- 156813-序列表.doc 201204388 <220〉 <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 49

Gly Phe Ser Phe Thr Ser lie Gly lie His ]〇

<210> 50 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 50

Ala Gly lie Pro Pro Val Gly Arg Tyt Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 10 15

Lys Gly

<210> 51 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 51

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10

<210> 52 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <>52

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <2]0> 53 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 53

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 156813-序列表.doc -11 -

S 201204388 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 54 Gin Gin Ser Tyr Met Ser Pro Leu Thr <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 55 Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His 1 5 10 <210> 56 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 56 Ala Gly Me Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 57 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 57 Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <2I0> 58 <21l> ll <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 58 Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> 156813-序列表.doc -12- 201204388 <223>人工序列之說明··合成肽 <400> 59

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 60 <211> 9' <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 60

Gin Gin Ser Lys Arg Thr Pro Pro Thr <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 6]

Gly Phe Ser Val Arg Gly Thr Gly Leu His l 5 10 <210> 62 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 62

Ala Gly lie Ser Pro Val Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 . 10 15

Lys Gly <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 63

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 -13· 156813-序列表.doc 201204388 <400> 64

Arg Ala Ser Gin Asp Val Set Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 65

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 66

Gin Gin Ala Lys Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 67 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 67 . Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His 1 5 10 <210> 68 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 68

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 69 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 14- 156813-序列表.doc 201204388 <400> 69 Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 70 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 70 Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 10 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 71 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 72 <211> 9 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 72 Gin Gin Ala Lys Ser Thr Pro Pro Thr <210> 73 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 73 Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr'Gly lie His 1 5 10 <210> 74 <211> 18 <2]2> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 74

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15 156813-序列表.doc •15· 201204388

Lys Gly <210> 75 <2ll> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 75

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210〉 76 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> 人工序列之說明：合成肽 <400> 76

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser 丁hr Ala Val Ala 1 5 10

<210> 77 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 77

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <210> 78 <2U> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 78

Gin Gin Ala Lys Arg Thr Pro Pro Thr <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 79

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His l 5 10 -16- 156813·序列表.doc 201204388 <210> 80 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 80

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15

Ly 肽成合明說之列列序序 T工工 &1,2卯人人 0>!>2>3>0>3> 1J ] 1 lx ΟΑ ΟΛ <2<2<2<2<2<2 <400> 81

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 82

Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明··合成肽 <400> 83

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <2t0> 84 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成狀 <400> 84

Gin Gin Ala Lys Thr Thr Pro Pro Thr <210> S5 17· 156813·序列表 _doc 201204388 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 85

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His l 5 10 <210> 86 <211> 18 .

<212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 86 , « ,

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 87 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 87

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 】〇 <210> 88 <211> Π <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 88

Arg AJa Ser Gin lie lie Gly He Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 89 <21l> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 89

Ala Ala Ser Asn Leu Ala Ser <210> 90 <211> 9 18- 156813-序列表.doc 201204388 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 90

Gin Gin Set Tyr Ser Thr Pro Leu Thr <210> 91 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 91

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His I 5 10

<210> 92 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 92

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 93 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 93

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1.5 10 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 94

Arg Ala Ser Gin Ser lie Arg Asn Ser Leu Ala 1 5 10

<210> 95 <21l> 7 <212> PRT 19- 156813-序列表.doc 201204388 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 95

Val Ala Ser Ser Leu Ala Ser <210> 96 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 96

Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr

<210> 97 <211> 10 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 97

Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr Gly lie His 1 5 10 <210> 98 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 98 ,

Ala Gly lie Ser Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15

Lys Gly <210> 99 <2U> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 99

Ala Are Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 -20- 156813·序列表.doc 201204388 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 100

Arg Ala Ser Gin lie lie Giy Arg Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 101 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 101

Val Ala Ser Asn Leu Ala Ser <210> 102 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 102

Gin Gin Ser Asn Ala Thr Pro Pro Thr

<210> 103 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 103

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Gly Ser 20 25 . 30

Trp lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Trp lie. Asn Pro Tyr Arg Gly Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 δ0

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Ser Ser Val Gly Tyr Ala Met 100 105 110 -21- 156813·序列表.doc 201204388

Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val U5 120 <210> 104 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 104

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Giu lie Lys Arg 100 105 <210> 105 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 105

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Gly Thr 20 25 30

Trp lie His Trp Va] Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Trp lie Ala Pro Tyr Ser Arg His Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 -22· 156813-序列表.doc 201204388

Ala Arg Glu Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Ser Ser Va] Gly Tyr Ala Met 100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 115 120 <210> 106 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 106

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly i 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gla Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Scr Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Va] Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 ' 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thi Thr Pro Pro 85 90 95 滅eGly?iSGly 一 HleLysArg

<210> 107 <211> 115 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 107

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gly Thr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Gly lie Pro Pro Val Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Set Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr -23- 156813-序列表.doc 201204388 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Π5 <210> 108 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 108

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

15 10 IS

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Lys Thr Thr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 100 105

<210> 109 <211> 115 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 109

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Uu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser lie 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 -24- 156813-序列表.doc 201204388

Ala Gly He Pro Pro Val Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Arg Ser Leu Ser Ser Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 Π0

Thr Leu Val 115 <210> UO <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 110

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Set Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Met Scr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 100 105 <210> 111 <211> 134 <212> PRT <213>智人 <400> 111

Met Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pto Leu Ala Trp Cys 15 10 15

Leu Ala Leu Cys Gly Trp Ala Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gin Ala 20 25 30

Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn lie Thi Gly Ala Arg 35 40 45 -25- 156813-序列表.doc 201204388

Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gin Leu Gin Val Gin Gly Glu Pro 50 55 60

Pro Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gin lie Leu Glu Leu Ala Asp 65 70 75 80

Ser Thr Gin Thr Gin Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gin Asp Asp Trp 85 90 95 lie Val Val Ser Gin Leu Arg lie Thr Ser Leu Gin Leu Ser Asp Thr 100 105 Π0

Gly Gin Tyr Gin Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gin Thr Phe Val Ser 115 120 125

Gin Pro Gly Tyr Val Gly 130 <210> 112 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221> M0D.RES <222> (3)..(3) <223〉Ser 或 Thr <220> <22I> M0D.RES <222> (4)..(4) <223〉Leu、Phe 或 Val <220> <221> MOD RES <222> (5)..(5) <223> Ser、Thr 或 Arg <220> <221> M0D_RES <222> {6)..(6) <223> G丨y 或 Ser <220> <221〉MOD RES <222> (7)..(7) <223> Ser、His、Thr 或 lie · <220> <22l> M〇t)_RES <222〉（8)..(8) <223> Trp 或 Gly <220> <221> MOD.RES <W> (9)..(9) <223> ne 或 Leu <400> 112

Gly Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa His -26- 156813_ 序列表.doc 201204388 <210> 113 <2ll> 18 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221> M0D.RES <222> (1)..(1) <223> Gly 或 Ala <220> <221> MOD„RES <222> (2)..(2) <223> Trp 或 Gly <220> <221> MOD一RES <222> (4)..(4) <223> Asn、》er、Ala 或 Pro <220> <221> MOD一RES <222> (6)..(6) <223> Tyr、Ala 或 Val <220> <221> M0D_RES <222> (7)..(8) <223> Arg、01y 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (9)7.(9) <223> Tyr、Ser 或 His <220> <221> M0D_RES <222〉（10)..(10) <223> Ala、Thr 或 Pro <400> 113

Xaa Xaa lie Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Cly <210> 114 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221> M0D_RES <222> (3)7.(3) <223> Glu 或 Trp <220> <221> MOD一RES <222> (4).,(4) <223> iyr 或 Arg <220> li：： 156813-序列表.doc 27· 201204388 <221> MOD RES <222〉（5)..(5) <223> Ser、Asn 或 Pro <220> <221> MOD.RES <222> (6)..(6) <223〉Gly、Asp 或 Leu <220> <221> MOD 一RES <222> (7)..(7) <223〉Trp 或 Ser <220> <22l> MOD RES <222> (8)..(8) <223> Gly、Arg、Ala 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (9)..(9) <223> Gly 或 Ser <220> <221> MOD.RES <222> (10)..(10) <223> Ser或不存在 <220> <221> M0D.RES <222> (11)..(11) <223> Ser、Tyr或不存在 <220> <221> MOD.RES <222> (12T..(12) <223> Val、lie或不存在 <220> <221> MOD RES <222> (13T..(13) <223>Gly或不存在 <220> <221> MOD RES <222> (14)..(14) <223> Tyr或不存在 <220> <221〉 MOD RES <222> (15).,(15) <223> Ala、Glu或不存在

Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met

Asp Tyr <210> 115 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220>

<221> M0D.RES 28- 156813·序列表.doc 201204388 <222> (5)..(5) <223> Asp、lie 或 Ser <220>

<221> fO_RES <222〉（6)..(6) <223> va丨或 lie <220> <221> M0D.RES <222> (7)..(7) <223> Ser、Gly 或 Arg <220>

<221> MOD RES <222> (8)..(8) <223> Thr、He、Asn 或 Arg <220> <221> M0D.RES <222> (9)7.(9) <223> Ala 或 Ser <220>

<221> MOD RES <222> (10)..(10) <223> Val 或 Leu <400> 115

Arg Ala Ser Gin Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala 1 5 10 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220>

<221> MOD RES <222> (1)..(1) <223> ser、Ala 或 Val <220> <221> MOD RES <222> (4)..(4) <223> phe、Asn 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (6):.(6) <223> Tyr 或 Ala <400> 116

Xaa Ala Ser Xaa Leu Xaa Ser <210> 117 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220>

<221> M0D.RES -29- 156813·序列表.doc 201204388 <222> (3)..(3) <223> Ser 或 Ala <220> <221> M0D—RES <222> (4)..(4) <223> fyr、Lys 或 Asn <220> <221> M0D.RES <222> (5)..(5) <223> Thr、Ser、Tyr、Met、Arg 或 Ala <220>

<221> HOD RES <222> (6)..(6) <223> Thr、Asn、Ser 或 Phe <220> <12\> MOD RES <222> (7)7.(7) <223> Pro 或 Arg <220>

<22l> MOD.RES <222> (8)..(8) <223> fro、十yr、Ser 或 Leu <400> 117

Gin Gin Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thf <210> 118 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221〉 MOD RES <222> (3)..(3) <223> Thr 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (4)..(4) <223> Phe 或 Leu <220> <221> MOD RES <222> (5)..(5) <223> Thr 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (7)..(7) <223> His、Ser 或 Thr <400> 118

Gly Phe Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Trp lie His <210> 119 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 -30 156813-序列表.doc 201204388 <220> <221> MOD RES <222> (4)7.i4) <223> Ser、Asn 或 Ala <220> <221> MOD RES <222> (7)..(7) <223〉Gly、Arg 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (8)..(S) <223> Gly 或 Arg <220> <221〉MOD RES <222> (9)..(9) <223>《er、Tyr 或 His <220> <221> MOD.RES <222> (10).,(10) <223> Thr、Ala 或 Pro <400> 119

Gly Trp lie Xaa Pto Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 15 10 15

Lys Gly <210> 120 <211> 19 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221> M0D_RES <222> (5)..(5) <223> Ser、Asn 或 Pro <220> <221> M0D_RES <222> (6)..(6) <223> 01y 或 Asp <220> <221> MOD.RHS' <222> (8)7.(8) <223> 01y、Arg 或 Ala <220> <221> MOD RES <222〉（9)..(9) <2M> Gly 或 Ser <220> <22 ]> N»D RES <222> (11)..(11) <223> Ser 或 Tyr <220> <221> MOD一RES <222> (12)..(12) •31 · 156813-序列表.doc 201204388 <223> Val 或 lie <220> <221> MOD RES-<222> (15)..(15) <223> Ala 或 Glu <400> 120

Ala Arg Glu Tyr Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Gly Tyr Xaa Met 15 10 15

Asp Tyr <210> 121 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220> <221> MOD RES <222> (5)..(5) <223> fhr、Ser 或 Tyr <220> <221> MOD RES <222> (6)..(6) <223> ^hr、Asn，Ser 或 Phe <220> <221> MOD RES <222> (7)..(7) <223> fro 或 Arg <220> <221> MOD RES <222> (8).,(8) <223> i>ro、Tyr 或 Ser <400> 121

Gin Gin Ser Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Thr <210> 122 <21]> 25 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 122

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Set 20 25 <210> 123 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> •32- 156813-序列表.doc 201204388 <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 123

Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 1 5 10 <210> 124

<211> 30 <212> PRT <2丨3卜人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 124

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30

<210> 125 <211> Π <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 125

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 126 <211> 23 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <>126

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Tlir Cys 20 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213>人工庠列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 127

Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr 15 10 15

<210> 128 <211> 32 <212> PRT -33- 156813-序列表.doc 201204388 <2】3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 128

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 15 10 15

Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 129 <211> 10 <212> PRT <2]3>人工序列·· <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 129

Phe G!y Gin Gly Hr Lys Val Glu lie Lys 1 5 10

<210> 130 <1\\> 104 <212> PRT <213>智人 <400> 130 lie Thr Val Leu Pro Gin Gin Pro Arg Asn Lea His Leu Val Ser Arg 15 10 15

Gin Pro Thr Glu Leu Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gly lie 20 25 30

Tyr Pro Leu Thr His Cys Thr Leu Gin Ala Val Leu Ser Asp Asp Gly 35 40 45

Met Gly lie Gin Ala Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro Leu Thr 50 55 60

Ser Gin Ala Ser Val Pro Pro His Gin Leu Arg Leu Gly Ser Leu His 65 70 75 80

Pro His Thr Pro Tyr His lie Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser Gin Cly 85 90 95

Pro Ser Ser Trp Thr His Trp Leu 100 <210> 131 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 131

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 -34- 156813-序列表.doc 201204388

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 . 30 <210> 132 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 132

Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp .Met Gly 15 10 <210> 133 <211> 32 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 133 Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Τγτ Cys Ala Arg 20 25 30 <2I0> 134 <211> 25 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 134 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser 20 25 <210> 135 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 135 Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 1 5 10 <210> 136 <211> 31 <212> PRT <213>人工序列 156813-序列表.doc -35- 201204388 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 336

Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 15 10 15

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 列序 37OS 1 3 p人 > > > > 012 3 VV < < 肽多成合明說列序工人 0>3> 2 2 <2<2

Tyr Met Glu 15 <400> 137

Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala 1 5 10

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 138 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 138

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser 20 25 30 <210> 139 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 139

Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie Gly 1 5 10 <210> 140 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 140

Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys 15 10 15 •36- 156813-序列表.doc 201204388

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 141 <2H> 25 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 141

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 . 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser 20 25 <210> 142 <2U> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 142

Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 15 10 <2I0> 143 <211> 31 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 143

Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Scr Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys 15 10 15

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 <210> 144 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 144

Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu Lys 15 10 15

Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 145 •37- 156813-序列表.doc 201204388 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 145

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 146 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 146

Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 147 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明··合成多肽 <400> 147

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 15 10 15

Met Asn Ser Lea Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 148 <21i> 31 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 148

Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin 15 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 <210> 149 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 38- 156813·序列表.doc 201204388 <4Q0> 149

Glu Vai Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Aig Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn He Lys 20 25 30 <210> 150 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 150

Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gin 15 】0 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr A1a Val Tyr Tyr Cys Ser Arg 20 25 30 <210> 151 <211> 31 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 】5l .

Arg* Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gin 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser 20 25 30

<210> 152 <211〉 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 152

Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gin 15 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30

<210> 153 <211> 31 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 153

Arg Phe Thr lie Ser Ala /^sp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gin -39- 156813-序列表.doc 201204388 15 10 15

Mel Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 20 25 30 <210> 154 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 154

Arg Phe Thr ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gin 15 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30

<210> 155 <2Π> 23 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 155

Asp He Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 20 <210> 156 <2I1> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 156

Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr 15 10 15 <210> 157 <211> 32 <212> PRT <21；3>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 157

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr l 5 10 】5

Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 •40- 156813-序列表.doc 201204388 <210> 158 <211> 23 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成狀 <400> 158

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 159 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 159

Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie Tyr 1 5 10 . . 15 <210> 160 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 160

Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15

Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 . 25 30 <210> 161 <2tl> 23 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <400> 16〗

Asp He Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys 20 <210> 162 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 -41 - 156813·序列表.doc 201204388 <400> 162

Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro Pro Lys Leu leu lie Tyr 15 10 15 <210> 163 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 163

Cly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 15 10 15

Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 164 <211> 32 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成多肽 <400> 164

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr 15 10 15

Lea Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 165 <211> 885 <212> PRT <213>智人 <400> 165

Met Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pro Leu Ala Trp Cys 15 10 15

Leu Ala Leu Cys Gly Trp Ala Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gin Ala 20 25 30

Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn lie Thr Gly Ala Arg 35 40 45

Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gin Leu Gin Val Gin Gly Glu Pro 50 55 60

Pro Glu Val His 丁rp Leu Arg Asp Gly Gin lie Leu Glu Leu Ala Asp 65 70 75 80

Ser Thr Gin Thr Gin Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gin Asp Asp Trp 85 90 95 lie Val Val Ser Gin Leu Arg lie Thr Ser Leu Gin Leu Ser Asp Thr 100 105 110 • 42- 156813-序列表.doc 201204388

Gly Gin Tyr Gin Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gin Thr Phe Val Ser 115 . 120 . 125

Gin Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu Pro Tyr Phe Leu Glu Glu 130 135 HO

Pro Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr Pro Phe Asn Leu Ser Cys 145 150 155 160

Gin Ala Gin Gly Pro Pro Glu Pro Val Asp Leu Leu Trp Leu Gin Asp 165 170 175

Ala Val Pro Leu Ala Thr Ala Pro Gly His Gly Pro Gin Arg Ser Leu 180 185 190

His Val Pro Gly Leu Asn Lys Thr Ser Ser Phe Ser Cys Glu Ala His 195 200 205

Asn Ala Lys Gly Va1 Thr Thr Ser Arg Thr Ala Thr lie Thr Val Leu 210 215 220

Pro Gin Gin Pro Arg Asn Leu His Leu Val Ser Arg Gin Pro Thr Glu 225 230 235 240

Leu Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gly lie Tyr Pro Leu Thr 245 250 255

His Cys Thr Leu Gin Ala Val Leu Sbt Asp Asp Gly Met Gly lie Gin 260 265 270

Ala Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro Leu Thr Ser Gin Ala Ser 275 280 285

Val Pro Pro His Gin Leu Arg Leu Gly Ser Leu His Pro His Thr Pro 290 295 300

Tyr His lie Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser Gin Gly Pro Ser Ser Trp 305 310 315 320

Thr His Trp Leu Pro Val Glu Thr Pro Glu Gly Val Pro Leu Gly Pro 325 330 335

Pro Glu Asn lie Scr Ala Thr Arg Asn Gly Ser Gin Ala Phe Val His 340 345 350

Trp Gin Glu Pro Arg Ala Pro Leu Gin Gly Thr Leu Leu Gly Tyr Arg 355 360 365

Leu Ala Tyr Gin Gly Gin Asp Thr Pro Glu Val Leu Met Asp He Gly 370 375 380

Leu Arg Gin Glu Val Thr Leu Glu Leu Gin Gly Asp Gly Ser Val Ser 385 390. 395 400

Asn Leu Thr Va) Cys Val Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Gly Asp Gly Pro 156813-序列表.doc -43- s 201204388 405 410 415

Trp Ser Leu Pro Val Pro Leu Glu Ala Trp Arg Pro Val Lys Glu Pro 420 425 430

Ser Thr Pro Ala Phe Ser Trp Pro Trp Trp Tyr Val Leu Lea Gly Ala 435 440 445

Val Val Ala Ala Ala Cys Val Leu lie Leu Ala Lea Phe Leu Val His 450 455 460

Arg Arg Lys Lys Glu Thr Arg Tyr Gly Glu Val Phe Glu Pro Thr Val 465 470 475 480

Glu Arg Gly Glu Leu Val Val Arg Tyr Arg Val Arg Lys Ser Tyr Ser 485 490 + 495

Arg Arg Thr TTir Glu Ala Thr Leu Asn Ser Leu Gly lie Ser Glu Glu 500 505 510

Leu Lys Glu Lys Leu Arg Asp Val Met Val Asp Arg His Lys Val Ala 515 520 525

Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu Gly Glu Phe Gly Ala Val Met Glu Gly 530 535 540

Gin Leu Asn Gin Asp Asp Ser lie Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met 545 550 555 560

Lys lie Ala lie Cys Thr Arg Ser Glu Leu Glu Asp Phe Leu Ser Glu 565 570 575

Ala Val Cys Met Lys Glu Phe Asp His Pro Asn Val Met Arg Leu lie 580 585 590

Gly Val Cys Phe Gin Gly Ser Glu Arg Glu Ser Phe Pro Ala Pro Val 595 600 605

Val. He Leu Pro Phe Met Lys His Gly Asp Leu His Ser Phe Leu Lea 610 615 620

Tyr Ser Arg Leu Gly Asp Gin Pro Val Tyr Leu Pro Thr Oin Met Leu 625 630 635 640

Val Lys Phe Met Ala Asp He Ala Ser Gly Met Glu Tyr Leu Ser Thr 645 650 655

Lys Arg Phe lie His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asn 660 665 670

Glu Asn Met Ser Val Cys Val Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Lys lie 675 680 685

Tyr Asn Gly Asp Tyr Tyr Arg Gin Gly Arg lie Ala Lys Met Pro Val 690 695 700 -44 - 156813·序列表.doc 201204388

Lys Trp lie Ala lie Glu Ser Leu Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys 705 710 715 720

Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Thr Met Trp Glu lie Ala Thr Arg 725 730 735

Gly Gin Thr Pro Tyr Pro Gly Val Glu Asn Ser Glu He Tyr Asp Tyr 740 745 750

Leu Arg Gin Gly Asn Arg Leu Lys Gin Pro Ala Asp Cys Leu Asp Gly 755 760 765

Leu Tyr Ala Leu Met Ser Arg Cys Trp Glu Leu Asn Pro Gin Asp Arg 770 775 780

Pro Ser Phe Thr Glu Leu Arg Glu Asp Leu Glu Asn Thr Leu Lys Ala 785 790 795 800

Leu Pro Pro Ala Gin Glu Pro Asp Glu lie Leu Tyr Val Asn Met Asp 805 810 815

Glu Gly Gly Gly Tyr Pro Glu Pro Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Asp 820 825 830

Pro Pro Thr Gin Pro Asp Pro Lys Asp Ser Cys Ser Cys Leu Thr Ala 835 840 845

Ala Glu Val His Pro Ala Gly Arg Tyr Val Leu Cys Pro Ser Thr Thr 850 855 . 860

Pro Ser Pro Ala Gin Pro Ala Asp Arg Gly Ser Pro Ala Ala Pro Gly 865 870 875 S80

Gin Glu Asp Gly Ala 885 <210> 166 <2Π> 20 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列之說明：合成肽 <220>

<221> M0D_RES <222> (1)..(1) <223> Gly 或 Ala <220>

<221> M0DJES <222> (2)..(2) <223：> Trp 或 Gly <220> <221> M0D_RES <222> (4)..(4) <223；> A_sn、§er、Ala 或 Pro <220>

<221> M0D.RES -45· 156813-序列表.doc 201204388 <222> (6)..(6) <223> Tyr、Ala 或 Val <220> <221> MOD RES <222> (7)7.(8) <223> Arg、01y 或 Ser <220> <221> MOD RES <222> (9)..(9) <223> Tyr、Ser 或 His <220>

<22l> MOD.RES <222> (10)..(10) <223> Ala、Thr 或 Pro <220>

<221> MOD RES <222> (11)..(12) <223>任何胺基酸或不存在 <400> 166

Xaa Xaa lie Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Ala Asp 15 10 15

Ser VaI Lys 46- 156813-序列表.doc

Claims

201204388 七、申請專利範圍： 1. 一種結合人類Axl之分離抗體’其中該抗體以S600 pM之親和力結合人類Axl，其中該抗體以SI nM之親和力結合小鼠Axl。 2. 如請求項1之抗體，其中該抗體促進Αχί受體下調及/或抑；制組成型Axl活化。 3. 如請求項1至2中任一項之抗體’其中該抗體結合包括胺基酸序列SEQ ID NO: 111、基本上由其組成或由其組成之多肽。 4. 如請求項1至2中任一項之抗體，其係單株抗體。 5. 如請求項1至2中任一項之抗體，其係全長IgGl抗體。 6. 如請求項1至2中任一項之抗體，其係結合Axl之人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、或抗體片段。 7·如請求項1至2中任一項之抗體，其中該抗體包括（a)包括之 HVR-H1，其中乂1係8 或 T ; X2係 L、F 或 V ; X3係 S、T 或 R ; X4係 G 或 S ; X5 係 S、Η、T 或 I ; Χ6係 W或 G ; Χ7係 I或 L (SEQ ID NO:112) ; (b)包括 X1X2IX3PX4X5X6X7X8YYADSVKG之 HVR-H2，其中又,係 , G 或 A ; X2 係 W 或 G ; X3 係 N、S、A 或 P ; X4 係 Y、A 或 V ; X5係 R、G 或 S ; 、R或 S ; X7係 Y、S、Η 或 Y ; Χ8係A、Τ或P (SEQ ID NO:113) ; (c)包括 XsXeXTXsXgXuXn X12X13MDY之HVR-H3，其中 XHSE或 W ; X2係 Y 或 R ; χ3 係 S、N 或 P ; X4係 G、D 或 L ; X5係 w 或S ; X6係G、R、A或S ; X?係G或S ; Xs係S或不存在； 156813.doc 201204388 X9係S、Y或不存在；x1()係v、I或不存在；XU.G或不存在；又12係Y或不存在；乂13係A、E或不存在（SEQ ID NO:114) ; (d)包括 RASQXiXzXsXAsXeA之 HVR-L1，其中X〗.D、I或S ; X2係V或I ; χ3係S、G或R ; X4係T、 I、N或 R ; X5係 A或 S ; X6係 V或 L (SEQ ID NO:115) ; (e) 包括 XASX2LX3S之 HVR-L2，其中 XA S、A或 V ; X2 係 F、N 或 S ; X3 係 Y 或 A (SEQ ID NO:116);及（f)包括 QQXiXzXsXAsXJ 之 HVR-L3，其中又1係3 或A ; X2 係 Y、K或 N; X3係T、S、Y、M、R或 A; X4係T、N、S或 F ; X5係 P或R ;又6係卩、Y、S或 L (SEQ ID NO:117) » 8. 如請求項1至2中任一項之抗體，其中該抗體包括（a)包括 GFXAXaGXiWIH 之 HVR-H1，其中XjT或 S，X2係 F 或 L，X3係 T或 S，X4係 Η、S 或 T (SEQ ID NO:118) ; (b)包括 GWIXiPYXJAXsYYADSVKG 之 HVR-H2，其中乂】係 S、 N 或 A ; X2係 G、R或 S ; X3 係 G 或 R ; X4係 S、Y 或 Η ; Χ5 係 Τ、Α 或 P (SEQ ID NO:119); (c)包括 AREYX!X2 WX3X4SX5X6GYX7MDY 之 HVR-H3，其中、N 或 P ; X2係G或D ; X3係G、R或A ; X4係G或S ; X5係S或 Y ; X6係 V或 I ; X7係 A或 E (SEQ ID NO:120);及包括 QQSYX1X2X3X4 T之 HVR-L3，其中又“系丁、S 或 Y ; X2係 T、 N、S 或 F ; X3 係 P 或 R ; X4 係 P、Y 或 S (SEQ ID NO:121)。 9. 如請求項1至2中任一項之抗體，其中該抗體包括（a)包括 SEQ ID NO:9之胺基酸序列之HVR-H3 ; (b)包括SEQ ID 156813.doc 201204388 N〇:12之胺基酸序列之HVR-L3 ;及（c)包括SEQ ID NO:8 之胺基酸序列之HVR-H2。 10.如請求項1至2中任一項之抗體，其中該抗體包括（a)包括 SEQ ID NO:7之胺基酸序列之HVR-H1 ; (b)包括SEQ ID NO:8之胺基酸序列之HVR-H2 ;及（c)包括SEQ ID NO:9 之胺基酸序列之HVR-H3。 11·如請求項1至2中任一項之抗體，其進一步包括（a)包括 SEQ ID NO:10之胺基酸序列之HVR-L1 ; (b)包括SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸序列之HVR-L2 ;及（c)包括SEQ ID NO:12 之胺基酸序列之HVR-L3。 12. 如請求項1至2中任一項之抗體，其進一步包括圖3 A_B、 4、5或6中所示之重鏈可變結構域或輕鍵可變結構域框架序列。 13. 如請求項1至2中任一項之抗體，其包括（a)與SEQ ID NO: 103之胺基酸序列具有至少95%之序列一致性的vh序列，（b)與SEQ ID NO:1〇4之胺基酸序列具有至少95%之序列一致性的VL序列；或（c)如（a)中之vh序列及如中之VL序列。 14. 如請求項13之抗體，其包括SEQ ID NO:1〇3之VH序列及/ 或 SEQIDNO:104之 VL序列。 15. —種分離之核酸’其編碼如請求項1至14中任一項之抗體。 16_ —種宿主細胞’其包括如請求項15之核酸。 17. —種產生抗體之方法，其包括培養如請求項“之宿主細 156813.doc 201204388 胞而產生該抗體。 18. 如請求項17之方法，其進一步包括自該宿主細胞回收該抗體。 19. 一種免疫接合物（immunoc〇njugate)，其包括如請求項！至14中任一項之抗體及細胞毒性劑。 20. —種醫藥調配物，其包括如請求項1至14中任一項之抗體及醫藥上可接受之載劑。 21. 如請求項20之醫藥調配物，其進一步包括其他治療劑。 22. 如請求項21之醫藥調配物，其中該其他治療劑選自 VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、及化學治療劑。 23. 如請求項1至2中任一項之抗體，其用作藥劑。 24. 如請求項1至2中任一項之抗體，其用於治療癌症、免疫病症、心血管病症、血栓症、或糖展病。 25·如請求項1至2中任一項之抗體，其用於抑制細胞增殖、促進Axl下調、抑制轉移、及/或抑制血管發生。 26· —種如請求項1至14中任一項之抗體之用途，其用於製造藥劑。 27. 如請求項26之用途，其中該藥劑用於治療癌症、免疫病症、心血管病症、也检症、或糖尿病。 28. 如請求項26之用途，其中該藥劑用於抑制細胞增殖、抑制血管發生、促進Αχί下調、及/或抑制轉移。 29. 如請求項27之用途’其中該藥劑用於治療癌症。 30. 如請求項29之用途，其中該藥劑進一步包括其他治療劑0 156813.doc -4- 201204388 3 1 ·如請求項3 0之用途，其中該其他治療劑選自由以下組成之群·· VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑及化學治療劑。 32. 如請求項27之用途，其中該藥劑用於治療免疫病症、心血管病症、血栓症或糖尿病。 33. —種如請求項1至14中任一項之抗體之用途，其用於製造用以抑制組成型Axl活化之藥劑。 156813.doc