JP6195716B2 - 抗癌剤耐性診断マーカー - Google Patents

Description

本発明は、抗癌剤の効果の診断試薬およびキット、ならびに抗癌剤の効果の試験方法などに関する。

従来の細胞障害性抗癌剤とは異なる作用メカニズムを有する抗癌剤として、ゲフィチニブ等の分子標的薬が開発され臨床応用されるようになった。ゲフィチニブ等の分子標的薬は、活性型ＥＧＦＲ変異等の特徴を有する癌細胞に劇的な抗腫瘍効果をもたらすが、従来の細胞障害性抗癌剤と同様に、耐性癌が出現するためそれらによる治療には限界がある。そこで、それらの耐性癌を特徴付けるマーカーにより耐性癌の性質を診断する方法を開発すると共に、それらの癌の増殖を阻害する、あるいは転移を阻害するような治療方法を開発することにより患者の生存延長に寄与することが期待されている。

これまで、ゲフィチニブにより治療された肺癌から生じる耐性癌として、治療ターゲットであるＥＧＦＲに２次的に生じる遺伝子変異（ゲートキーパー変異）を治療中に獲得した癌の出現が耐性癌の５０％程度に同定された。この耐性癌に対してはこの２次変異を有するＥＧＦＲをも阻害可能なＥＧＦＲ阻害剤により克服可能であることが示された。また、ゲフィチニブ治療中にＭＥＴ遺伝子増幅という特徴を獲得した癌の出現が耐性癌の２０％に同定され、この耐性癌に対してはゲフィチニブとＭＥＴ阻害剤の２剤併用により克服し得ることが示された。

しかしながら、ゲフィチニブ耐性肺癌には未知の性質を有し、治療方法が確立されていないものも存在する。また、ＥＧＦＲ以外をターゲットとする分子標的薬に対して耐性となった肺癌、あるいは他の癌種で分子標的薬に耐性となった耐性癌においてもどのような性質の耐性癌が生じ、どのような治療方法が有効であるかは未知である。

ところで、癌遺伝子である受容体型チロシンキナーゼＡＸＬについては、以下の報告がある。
非特許文献１では、ＡＸＬが発現亢進することによりＥＧＦＲ阻害剤に対して耐性を獲得する肺癌の存在が同定されており、また、このような耐性癌細胞はＡＸＬの発現または活性を阻害することにより増殖及び運動能を抑制することが可能であることが示されている。
非特許文献２では、癌細胞から可溶性ＡＸＬが分泌されることが示されている。

Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ． ２０１２ Ｊｕｌ １；４４（８）：８５２−６０ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ． １９９６ Ｓｅｐ；１６８（３）：７３７−４４

本発明の目的は、癌に対する抗癌剤の治療効果の簡便な判定を実現することである。

本発明者らは、抗癌剤に対する耐性を獲得した癌細胞から分泌されるタンパク質について鋭意検討した結果、受容体型チロシンキナーゼＡＸＬの細胞外ドメインフラグメントが、抗癌剤に耐性の癌などに対する特異的なバイオマーカーとして利用できることを見出した。したがって、本発明者らは、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を測定することにより、癌に対する抗癌剤の治療効果を簡便に判定し得ることを着想し、本願発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は以下のとおりである。
〔１〕ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質を含む、癌に対する抗癌剤の効果の診断試薬。
〔２〕ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質が、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対する抗体である、〔１〕の診断試薬。
〔３〕抗癌剤が肺癌に対する抗癌剤である、〔１〕または〔２〕の診断試薬。
〔４〕抗癌剤の効果が抗癌剤に対する耐性である、〔１〕〜〔３〕のいずれかの診断試薬。
〔５〕抗癌剤がＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤およびプラチナ製剤からなる群より選ばれる１以上の抗癌剤である、〔４〕の診断試薬。
〔６〕抗癌剤の効果が、ＡＸＬ阻害剤に対する感受性である、〔１〕〜〔３〕のいずれかの診断試薬。
〔７〕ＡＸＬ阻害剤に対する感受性が、ＡＸＬ阻害剤による癌の増殖および／または浸潤および／または転移の抑制である、〔６〕の診断試薬。
〔８〕ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質、およびＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを含む、癌に対する抗癌剤の効果の診断キット。
〔９〕以下（ａ）および（ｂ）の工程を含む、癌に対する抗癌剤の効果の試験方法：
（ａ）被験体由来の生体サンプル中のＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を測定する工程；および
（ｂ）測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度と癌に対する抗癌剤の効果との間の関係を示す基準と比較する工程。

本発明によれば、癌に対する抗癌剤（例、ＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬ならびにプラチナ製剤）の治療効果を簡便に判定でき、また、癌に対する抗癌剤の治療効果を簡便にモニタリングできる。例えば、本発明によれば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを測定することにより、抗癌剤治療前の癌細胞の集団における、ＥＧＦＲ阻害剤耐性能を有するＡＸＬ陽性癌細胞の存在を診断すること、ひいては、癌に対するＥＧＦＲ阻害剤の効果を予測することが可能である。また、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを測定することにより、抗癌剤治療中に抗癌剤に耐性を獲得したＡＸＬ陽性癌細胞の出現を診断すること、ひいては、癌に対する抗癌剤の効果を予測することが可能である。また、プラチナ製剤等の細胞障害性抗癌剤による治療中に耐性を獲得するとともに副次的にＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性をも獲得したＡＸＬ陽性癌細胞の出現を診断することも可能である。さらに、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを測定することにより、ＡＸＬ阻害剤に感受性の癌を診断すること、例えば、ＡＬＸ阻害剤により癌の増殖および／または癌の浸潤および／または転移を抑制する治療が有効な癌を予測することが可能である。
また、本発明によれば、抗癌剤に耐性の癌で多量のＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントが認められること、ならびにこのような多量のＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの測定は容易であることから、癌に対する抗癌剤の治療効果を容易に判定できる。

図１は、ヒト非小細胞肺癌に由来する種々の細胞（ＨＣＣ４００６、ＧＲ２ｗ、ＧＲ１ｍ、ＧＲ３ｍ、およびＧＲ５ｍ）のＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性を示す図である（ｎ＝４）。ＨＣＣ４００６は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞ＨＣＣ４００６を表す。ＧＲ２ｗ、ＧＲ１ｍ、ＧＲ３ｍ、およびＧＲ５ｍは、それぞれ、ＨＣＣ４００６を２週間、１ヶ月、３ヶ月および５ヶ月ゲフィチニブに暴露することにより樹立されたＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）耐性細胞を表す。略号は、以下同様である。 図２は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ４００６）、および種々のＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）耐性細胞（ＧＲ２ｗ、ＧＲ１ｍ、ＧＲ３ｍ、およびＧＲ５ｍ）におけるＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカーの発現を示す図である。ｓＡＸＬおよびＡＸＬは、ぞれぞれ、可溶性ＡＸＬおよび全長ＡＸＬを表す。略号は、以下同様である。 図３は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ４００６）、および当該感受性細胞から分画された細胞（ＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋およびＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋−ＴＷ）の、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）に対する耐性を示す図である（ｎ＝４）。ＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ４００６）から分画されたＡＸＬ陽性細胞を表す。ＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋−ＴＷは、このようなＡＸＬ陽性細胞から分画された、高い運動能を有する細胞を表す。 図４は、ヒト非小細胞肺癌に由来する種々の細胞（ＨＣＣ８２７、ＧＲ５ｍおよびＧＲＰＲ）のＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）および／またはＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）感受性を示す図である（ｎ＝４）。ＨＣＣ８２７は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞ＨＣＣ８２７を表す。ＧＲ５ｍは、ＨＣＣ８２７を５ヶ月ゲフィチニブに暴露することにより樹立されたゲフィチニブ耐性細胞を表す。ＧＲＰＲは、ＨＣＣ８２７をゲフィチニブに３ヶ月暴露し、次いでＰＨＡ−６６５７５２に３ヶ月暴露することにより樹立された、ゲフィチニブおよびＰＨＡ−６６５７５２の双方に耐性である細胞（ＨＣＣ８２７−ＧＲＰＲ）を表す。Ｇ−Ｐ−：ゲフィチニブおよびＰＨＡ−６６５７５２の双方の非存在下で処理；Ｇ＋Ｐ−：ゲフィチニブ（１μＭ）の存在下およびＰＨＡ−６６５７５２の非存在下で処理；Ｇ−Ｐ＋：ゲフィチニブの非存在下およびＰＨＡ−６６５７５２（１μＭ）の存在下で処理；Ｇ＋Ｐ＋：ゲフィチニブ（１μＭ）およびＰＨＡ−６６５７５２（１μＭ）の双方の存在下で処理。略号は、以下同様である。 図５は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ８２７）、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）耐性細胞（ＧＲ５ｍ）、ならびにＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）およびＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）耐性細胞（ＧＲＰＲ）におけるＡＸＬ発現およびｓＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカーの発現を示す図である。ｓＭＥＴおよびＭＥＴは、ぞれぞれ、可溶性ＭＥＴおよび全長ＭＥＴを表す。略号は、以下同様である。 図６は、ＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）感受性細胞（Ｈ１９９３）、およびＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）耐性細胞（ＰＲ５ｍ、ＰＲ５ｍ−ＡＸＬ^＋およびＰＲ５ｍ−ＴＷ）におけるＡＸＬ発現およびｓＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカーの発現を示す図である。Ｈ１９９３は、ＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）感受性細胞Ｈ１９９３を表す。ＰＲ５ｍは、Ｈ１９９３を５ヶ月ＰＨＡ−６６５７５２に暴露することにより樹立されたＰＨＡ−６６５７５２耐性細胞を表す。ＰＲ５ｍ−ＡＸＬ^＋は、耐性細胞ＰＲ５ｍから分画されたＡＸＬ陽性細胞を表す。ＰＲ５ｍ−ＴＷは、耐性細胞ＰＲ５ｍから分画された、高い運動能を有する細胞を表す。略号は、以下同様である。 図７は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ４００６）、およびプラチナ製剤（シスプラチン）耐性細胞（ＨＣＣ４００６−ＣＲおよびＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）におけるＡＸＬ発現およびｓＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカーの発現を示す図である。ＨＣＣ４００６は、ゲフィチニブ感受性肺癌細胞ＨＣＣ４００６を表す。ＨＣＣ４００６−ＣＲは、ＨＣＣ４００６を４ヶ月シスプラチンに暴露することにより樹立されたシスプラチン耐性細胞を表す。ＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲは、ＨＣＣ４００６−ＣＲを１μＭゲフィチニブに２週間暴露することにより樹立された、シスプラチンおよびゲフィチニブの双方に耐性である細胞を表す。略号は、以下同様である。 図８は、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞（ＨＣＣ４００６）のＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）に対する感受性、ならびにプラチナ製剤（シスプラチン）耐性細胞（ＨＣＣ４００６−ＣＲおよびＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）のＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）に対する耐性を示す図である（ｎ＝４）。 図９は、ヒト非小細胞肺癌に由来する種々の細胞（ＨＣＣ４００６、ＧＲ２ｗ、およびＧＲ５ｍ）の運動能を示す図である（ｎ＝３）。 図１０は、ヒト非小細胞肺癌に由来する種々の細胞（Ｈ１９９３、ＰＲ５ｍ、ＰＲ５ｍ−ＡＸＬ^＋、およびＰＲ５ｍ−ＴＷ）の運動能を示す図である（ｎ＝３）。 図１１は、ヒト非小細胞肺癌に由来する種々の細胞〔ＨＣＣ４００６、ＨＣＣ４００６−ＣＲ（ＣＲ）、およびＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ（ＣＲ−ＧＲ）〕の運動能を示す図である（ｎ＝３）。 図１２は、ＲＮＡ干渉による、プラチナ製剤（シスプラチン）およびＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）耐性細胞（ＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）におけるＡＸＬ遺伝子の発現阻害を示す図である。ｓｉ−Ｎ．Ｃ．は、ネガティブコントロールｓｉＲＮＡを示す。ｓｉ−ＡＸＬ−１、ｓｉ−ＡＸＬ−２、およびｓｉ−ＡＸＬ−３の標的配列は、実施例に示したとおりである。 図１３は、ＲＮＡ干渉によりＡＸＬ遺伝子の発現が阻害されたプラチナ製剤（シスプラチン）およびＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）耐性細胞（ＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）の運動能を示す図である（ｎ＝３）。

本発明の試験方法は、以下（ａ）および（ｂ）の工程を含み得る：
（ａ）被験体由来の生体サンプル中のＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を測定する工程；および
（ｂ）測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度と癌に対する抗癌剤の効果との間の関係を示す基準と比較する工程。

ＡＸＬは、受容体チロシンキナーゼサブファミリーに属し、他の受容体チロシンキナーゼと類似の構造を有するが、免疫グロブリンおよびフィブロネクチンＩＩＩ型の繰り返し配列からなる細胞外ドメインによって特徴付けられる。ＡＸＬは、そのリガンドである成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）として公知のビタミンＫ依存性タンパク質によって活性化され、細胞内シグナル伝達系を介して細胞増殖などを制御する（例えば、Ｏ‘Ｂｒｙａｎら、Ｍｏｌｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９１,Ｖｏｌ．１１,Ｎｏ．１０，ｐｐ．５０１６−５０３１を参照。また、ヒトＡＸＬについては、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００１６９９．４を参照のこと。）

本明細書中で用いられる場合、用語「ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメント」とは、外部ドメイン排出（Ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ Ｓｈｅｄｄｉｎｇ）により排出されるＡＸＬ細胞外ドメインのポリペプチド（即ち、可溶性ＡＸＬ）またはそのポリペプチドの分解産物をいう。本明細書では、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを、可溶性ＡＸＬということがある。

上記（ａ）において、被験体としては、癌に罹患している哺乳動物、または癌に罹患している可能性がある哺乳動物が挙げられる。哺乳動物としては、例えば、霊長類、愛玩動物、使役動物が挙げられる。具体的には、哺乳動物としては、例えば、ヒト、チンパンジー、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ウサギ、マウス、ラットが挙げられるが、好ましくは、ヒトである。

本明細書中で用いられる場合、用語「癌」とは、ＡＸＬ遺伝子の増幅を伴い得る癌をいう。このような癌としては、例えば、肺癌（例、扁平上皮がん、腺がんおよび大細胞がん等の非小細胞癌、ならびに小細胞癌）、消化器系癌（例、胃癌、小腸癌、大腸癌、直腸癌）、膵臓癌、腎臓癌、肝臓癌、胸腺癌、脾臓癌、甲状腺癌、副腎癌、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌（例、子宮内膜癌、子宮頚癌）、骨癌、皮膚癌、脳腫瘍、肉腫、黒色腫、芽細胞腫（例、神経芽細胞腫）、腺癌、扁平細胞癌、固形癌、上皮性癌、中皮腫が挙げられる。

好ましい被験体の例は、特定の抗癌剤による治療が検討されている癌患者である。特定の抗癌剤としては、例えば、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤およびＡＸＬ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤が挙げられる。ＥＧＦＲ阻害剤としては、例えば、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ＺＤ６４７４、ＣＬ−３８７７８５、ＨＫＩ−２７２、ＸＬ６４７、ＰＤ１５３０３５、ＣＩ−１０３３、ＡＥＥ７８８、ＢＩＢＷ−２９９２、ＥＫＢ−５６９、ＰＦ−２９９８０４が挙げられる。ＭＥＴ阻害剤としては、例えば、ＰＨＡ−６６５７５２、ＳＵ１１２７４、ＸＬ−８８０、ＸＬ−１８４、ＡＲＱ １９７、ＡＭＧ２０８、ＡＭＧ４５８、ＣＥ−３５５６２１、ＭＰ４７０が挙げられる。ＡＸＬ阻害剤としては、例えば、Ｒ４２８、ＭＰ４７０、ＸＬ８８０、ＢＭＳ７７７６０７が挙げられる。プラチナ製剤としては、例えば、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏxａｌｉｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）が挙げられる。

好ましい被験体の別の例は、特定の抗癌剤による治療効果がモニタリングされている癌患者である。癌患者はまた、特定の抗癌剤による治療効果の低下が認められた場合に、別の抗癌剤による治療に切り替えるかどうかの判断が求められている患者であってもよい。抗癌剤は、上述した抗癌剤と同様であり得る。

本発明において用いられ得る生体サンプルは、上述の被験体から採取された生体サンプルであり得る。生体サンプルは、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントが存在するサンプルである限り特に限定されず、例えば、血液、血清、血漿、尿、唾液、腹水、組織試料、細胞試料、組織抽出液、細胞抽出液が挙げられる。なお、侵襲性の低さの観点からは、上記のうち、血液、血清、血漿、尿、唾液が好ましい。必要に応じて、生体サンプルは、測定前に、事前に処理されてもよい。このような処理としては、例えば、遠心分離、抽出、濃縮、分画、細胞固定、組織固定、組織凍結、組織薄片化が挙げられる。

ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度の測定は、例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対して親和性を有する物質（後述）を用いて行うことができる。測定はまた、免疫学的手法により行なわれてもよい。このような免疫学的手法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、免疫クロマト法、ルミネッセンス免疫測定法、スピン免疫測定法、ウエスタンブロット法、ラテックス凝集法が挙げられる。ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度の測定を可能とする上記以外の方法としては、例えば、ＬＣ−ＭＳが挙げられる。

上記（ｂ）において、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度と癌に対する抗癌剤の効果との間の関係を示す基準と比較され得る。基準は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度の高低と、抗癌剤の効果の強弱（抗癌剤への感受性または耐性）との間の相対的な関係を示すものであり得る。例えば、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に高い場合には、ＡＸＬ阻害剤の治療効果が高い可能性があり、または他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）の治療効果が低い可能性がある。また、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に低い場合には、ＡＸＬ阻害剤の治療効果が低い可能性があり、または他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）の治療効果が高い可能性がある。本発明の場合、基準として、特定の基準値を設けてもよい。このような基準値として、ＡＸＬ阻害剤に感受性である患者、または他の抗癌剤に耐性である患者で高い陽性率（基準値以上）を示し、かつ、ＡＸＬ阻害剤に耐性である患者、または他の抗癌剤に感受性である患者で高い陰性率（基準値未満）を示し得る、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を設定してもよい。このような基準値の例は、カットオフ値である。基準値の算出方法は、本分野において周知である。

本発明によれば、癌患者が、特定の抗癌剤に対して感受性であるのか、または耐性であるのかを判定することができる。このような判定は、例えば、被験体に投与する抗癌剤の決定に有用である。例えば、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に高い場合には、癌患者は、ＡＸＬ阻害剤に対して感受性である可能性があり、ＡＸＬ阻害剤による治療効果が高い可能性がある。また、この場合には、癌の浸潤および／または転移が生じる可能性が相対的に高いと考えられる。さらに、この場合には、他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）に対して耐性である可能性があり、当該抗癌剤による治療効果が低い可能性がある。一方、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に低い場合には、癌患者は、ＡＸＬ阻害剤に対して耐性である可能性があり、ＡＸＬ阻害剤による治療効果が低い可能性がある。また、この場合には、癌の浸潤および／または転移が生じる可能性が相対的に低いと考えられる。さらに、この場合には、他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）に対して感受性である可能性があり、当該抗癌剤による治療効果が高い可能性がある。

また、本発明によれば、特定の抗癌剤による治療効果を経時的にモニタリングすることができる。このようなモニタリングは、例えば、特定の抗癌剤による治療効果の低下が認められた場合に、別の抗癌剤による治療に切り替えるかどうかの判断に有用である。例えば、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に高い状態が維持されている場合には、癌患者は依然として、ＡＸＬ阻害剤に対して感受性である可能性があり、ＡＸＬ阻害剤による治療効果が引き続き高い可能性がある。また、この場合には、依然として、他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）に対して耐性である可能性があり、当該抗癌剤による治療効果が低い可能性がある。一方、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に低い状態が維持されている場合には、癌患者は依然として、ＡＸＬ阻害剤に対して耐性である可能性があり、ＡＸＬ阻害剤による治療効果が引き続き低い可能性がある。また、この場合には、依然として、他の抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）に対して感受性である可能性があり、当該抗癌剤による治療効果が引き続き高い可能性がある。

さらに、本発明によれば、癌患者において、癌の浸潤および／または転移が生じる可能性が高いのか、または低いのかを判定することができる。このような判定は、例えば、癌患者の予後の予測に有用である。例えば、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に高い場合には、癌の浸潤および／または転移が生じる可能性が相対的に高いと考えられる。一方、測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度が相対的に低い場合には、癌の浸潤および／または転移が生じる可能性が相対的に低いと考えられる。

本発明の試験方法は、上記（ｂ）の代わりに、（ｂ’）測定されたＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントの濃度を指標として、癌に対する抗癌剤の効果を判断する工程を含んでいてもよい。本工程は、上記（ｂ）と同様に行うことができる。本発明の試験方法はまた、このような判断に基づき、投与する抗癌剤（例、上述したようなＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤およびＡＸＬ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）を決定する工程、および／または投与する抗癌剤を別の抗癌剤（例、ＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤およびＡＸＬ阻害剤等の分子標的薬、ならびにプラチナ製剤等のＤＮＡ複製阻害剤）に切り替えるか否かを決定する工程を含んでいてもよい。本発明の試験方法はさらに、このような決定に基づき、抗癌剤を投与する工程を含んでいてもよい。

本発明は、癌に対する抗癌剤の効果の診断試薬を提供する。本発明の試薬は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質を含む。本発明の診断試薬は、キットの形態であってもよい。本発明の診断試薬は、本発明の試験方法を行なうために好適に用いることができる。

本明細書中で用いられる場合、用語「ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質」とは、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに結合する能力を有する物質をいう。ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質は、ＡＸＬの細胞外領域からなるポリペプチドまたはその部分ペプチドに親和性を有する物質であり得る。ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質としては、例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対する抗体、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対するアプタマー、ならびに成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）およびＡＸＬに結合する能力を保持する成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）変異体が挙げられる。

ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対する抗体は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに特異的に結合し得る抗体である限り特に限定されない。例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに対する抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれでもよい。抗体はまた、抗体のフラグメント（例、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２）、組換え抗体（例、ｓｃＦｖ）であってもよい。抗体は、プレート等の基板上に固定された形態、またはストリップ等の支持体中に含侵された形態で提供されてもよい。抗体は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントまたはその部分ペプチド（例、α鎖の部分ペプチド、β鎖の細胞外領域の部分ペプチド）を抗原として用いて、自体公知の方法により作製できる。抗原は、ｃ−ＭＥＴのアミノ酸配列情報を参考にして適宜作製できる。また、培養癌細胞の上清から得られるＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを、抗原として用いてもよい。

ポリクローナル抗体は、例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントまたはその部分ペプチドを抗原として、市販のアジュバント（例、完全または不完全フロイントアジュバント）とともに、動物の皮下あるいは腹腔内に２〜３週間おきに２〜４回程度投与し、最終免疫から約３〜約１０日後に全血を採取して抗血清を精製することにより取得できる。抗原は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントまたはその部分ペプチドを、キャリアタンパク質（例、ウシ血清アルブミン、ＫＬＨ）に架橋した複合体であってもよい。抗原を投与する動物としては、例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヤギ、ウシ、モルモット、ハムスターなどの哺乳動物が挙げられる。

モノクローナル抗体は、例えば、細胞融合法により作製できる。例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントまたはその部分ペプチドを市販のアジュバントと共にマウスに２〜４回皮下または腹腔内に投与し、最終投与の約３日後に脾臓あるいはリンパ節を採取し、白血球を採取する。この白血球と骨髄腫細胞（例、ＮＳ−１）を細胞融合して該因子に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得る。細胞融合としては、ＰＥＧ法、電圧パルス法が挙げられる。所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、周知のＥＩＡまたはＲＩＡ法等を用いて抗原と特異的に結合する抗体を、培養上清中から検出することにより選択できる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの培養は、インビトロ、またはマウスもしくはラット、好ましくはマウス腹水中等のインビボで行うことができ、抗体はそれぞれハイブリドーマの培養上清および動物の腹水から取得できる。モノクローナル抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ等のいずれのアイソタイプであってもよい。

ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質は、必要に応じて、標識用物質で標識された形態で提供されてもよい。標識用物質としては、例えば、ＦＩＴＣ、ＦＡＭ等の蛍光物質、ルミノール、ルシフェリン、ルシゲニン等の発光物質、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１２３Ｉ等の放射性同位体、ビオチン、ストレプトアビジン等の親和性物質などが挙げられる。

本発明の試薬は、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質に加えて、さらなる構成要素を含むキットの形態で提供されてもよい。この場合、キットに含まれる各構成要素は、互いに隔離された形態、例えば、異なる容器（例、チューブ）に格納された形態で提供されてもよい。例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質が標識用物質で標識されていない場合、このようなキットは、標識用物質をさらに含んでいてもよい。このようなキットはまた、ポジティブコントロールとして、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントを含んでいてもよい。

本発明の試薬がキットの形態で提供される場合、キットは、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質の種類に応じたさらなる構成要素を含んでいてもよい。例えば、ＡＸＬ細胞外ドメインフラグメントに親和性を有する物質が抗体である場合、キットは、２次抗体（例、抗ＩｇＧ抗体）、２次抗体の検出試薬をさらに含んでいてもよい。

本発明の試薬がキットの形態で提供される場合、キットは、生体サンプルを採取し得る器具をさらに含んでいてもよい。生体サンプルを採取し得る器具は、被験体から生体サンプルを入手可能である限り特に限定されないが、例えば、注射器等の採血器具が挙げられる。

以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。

実施例１：ゲフィチニブ耐性細胞株の樹立およびそのゲフィチニブ感受性の解析
ゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）感受性細胞株ＨＣＣ４００６（ヒト非小細胞肺癌由来、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；１２：７１１７−７１２５．）を、２週間、１ヶ月、３ヶ月または５ヶ月ゲフィチニブ（１μＭ）に暴露することにより、ゲフィチニブ耐性細胞株を樹立した（それぞれＧＲ２ｗ、ＧＲ１ｍ、ＧＲ３ｍ、ＧＲ５ｍ）。これらのゲフィチニブ耐性細胞株を各種濃度のゲフィチニブに暴露し、次いで７２時間後の生存細胞の割合をＭＴＳ法でアッセイすることにより、各細胞株のゲフィチニブ感受性を解析した。
その結果、ゲフィチニブ感受性細胞は、ゲフィチニブ暴露期間に依存してゲフィチニブに対する耐性を獲得することが示された（図１）。

実施例２：ゲフィチニブ耐性細胞特異的可溶性ＡＸＬの検出及び上皮間葉移行マーカーの発現解析
実施例１で樹立したゲフィチニブ耐性細胞株による可溶性ＡＸＬの分泌を、限外濃縮した培養上清（Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ）に対してＡＸＬ細胞外ドメインを認識する抗体（ＵｎｉＰｒｏｔ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：Ｐ３０５３０登録のアミノ酸配列において３０〜１４０位のアミノ酸残基からなる組換え体断片を抗原として用いて作製されたモノクローナル抗体）によるウェスタンブロットにより評価した。併せて、細胞抽出液（Ｌｙｓａｔｅ）において、ＡＸＬ、並びに間葉系マーカーおよび上皮系マーカーの上皮間葉移行マーカー（ＥＭＴ）についてウェスタンブロットを行った。
その結果、可溶性ＡＸＬの分泌は、ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性獲得に伴って亢進することが確認された。また、耐性獲得に伴うＡＸＬの発現亢進と間葉系マーカー（Ｎ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ＺＥＢ１）の発現亢進と共に、上皮系マーカー（Ｅ−ｃａｄｈｅｒｉｎ）の発現抑制が認められた（図２）。
以上より、ＥＭＴの進行を伴う、ＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性獲得の過程において、ＡＸＬの発現および可溶性ＡＸＬの分泌が亢進することが示された。

実施例３：ＡＸＬに陽性であり、かつゲフィチニブに耐性能を有する細胞の単離および解析
ゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤）感受性細胞株ＨＣＣ４００６中のＡＸＬ陽性細胞を、抗ＡＸＬ抗体を吸着させた磁性粒子（ダイナビーズ）により分画した（ＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋）。さらにその分画から、トランスウェルチャンバーを通過した細胞を、運動性の高い細胞として分画した（ＨＣＣ４００６−ＡＸＬ^＋−ＴＷ）。これらの細胞分画のゲフィチニブ感受性をＭＴＳアッセイにより比較した。
その結果、ＡＸＬ陽性細胞ＡＸＬ^＋およびＡＸＬ陽性高運動性細胞ＡＸＬ^＋−ＴＷは、ゲフィチニブに対して親細胞株よりも耐性であった（図３）。
以上より、ＥＧＦＲ阻害剤感受性癌細胞中にＡＸＬ陽性細胞が存在すること、およびこのようなＡＸＬ陽性細胞がゲフィチニブに耐性能を有することが示された。

実施例４：ＨＣＣ８２７由来耐性細胞株の樹立および解析
ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）感受性細胞株ＨＣＣ８２７（ヒト非小細胞肺癌由来、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６；１２：７１１７−７１２５．）をゲフィチニブ（ＥＧＦＲ阻害剤，１μＭ）に５ヶ月暴露することにより、ゲフィチニブ耐性細胞株（ＧＲ５ｍ）を樹立した。また、ＨＣＣ８２７をゲフィチニブに３ヶ月暴露した後、ＰＨＡ−６６５７５２に３ヶ月暴露することによりＥＧＦＲ阻害剤およびＭＥＴ阻害剤の組合せに耐性の細胞株（ＨＣＣ８２７−ＧＲＰＲ）を樹立した。
その結果、樹立細胞株ＧＲ５ｍは、ゲフィチニブ単独には耐性であったが、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）及びＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００３；６３：７３４５―７３５５．）を参照）の組合せには感受性であった（図４）。また、樹立細胞株ＨＣＣ８２７−ＧＲＰＲは、ＥＧＦＲ阻害剤（ゲフィチニブ）及びＭＥＴ阻害剤（ＰＨＡ−６６５７５２）の双方に耐性であった（図４）。

実施例５：ＨＣＣ８２７由来耐性細胞における可溶性ＡＸＬの分泌
実施例４で作製したＨＣＣ８２７由来耐性細胞株における可溶性ＡＸＬの分泌を解析した。
その結果、ＥＧＦＲ及びＭＥＴの両方に依存性を示すゲフィチニブ耐性細胞株ＨＣＣ８２７−ＧＲ５ｍでは可溶性ＭＥＴの分泌が認められたが、ゲフィチニブ及びＭＥＴ阻害剤の双方に耐性であるＨＣＣ８２７−ＧＲＰＲは、可溶性ＭＥＴの低い分泌および可溶性ＡＸＬの分泌を示した（図５）。また、ＨＣＣ８２７−ＧＲＰＲは、Ｎ−ｃａｄｈｅｒｉｎの発現亢進を示し（図５）、ＥＭＴの進行を呈した。
以上より、ゲフィチニブ耐性となったＭＥＴ遺伝子増幅肺癌細胞をさらにＭＥＴ阻害剤で治療するモデルケースにおいても、ＥＭＴの進行を伴う耐性癌にＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌の亢進が認められることが示された。

実施例６：Ｈ１９９３由来ＭＥＴ阻害剤耐性細胞の樹立および解析
ＭＥＴ遺伝子増幅を示し、かつＭＥＴ阻害剤感受性を示すＨ１９９３細胞株（ヒト非小細胞肺癌由来、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００７；６７：２０８１−２０８８．）より、ＭＥＴ阻害剤ＰＨＡ−６６５７５２に対する耐性細胞株を樹立した（ＰＲ５ｍ）。この細胞株から、ＡＸＬ陽性細胞を、抗ＡＸＬ抗体を吸着させた磁性粒子（ダイナビーズ）で分画した（ＰＲ５ｍ−ＡＸＬ^＋）。また、ＰＲ５ｍから、トランスウェルチャンバーを通過した細胞を、運動性の高い細胞として分画した（ＰＲ５ｍ−ＴＷ）。これらの細胞のＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカーの発現をウェスタンブロットで解析した。
その結果、ＰＲ５ｍ−ＡＸＬ^＋、およびＰＲ５ｍ−ＴＷでは、ＡＸＬの発現および可溶性ＡＸＬの分泌が認められ、また、間葉系マーカー（Ｎ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ＺＥＢ１）の発現の亢進が認められた（図６）。
以上より、ＭＥＴ阻害剤耐性細胞中に、ＡＸＬ陽性でＥＭＴが進行した細胞が存在することが示された。

実施例７：シスプラチン耐性細胞株の樹立および解析
ＨＣＣ４００６を段階的に濃度を上げたシスプラチン（０．５〜２５μＭ）に４ヶ月暴露することによりシスプラチン耐性細胞株（ＨＣＣ４００６−ＣＲ）を樹立した。さらに、シスプラチン耐性細胞株ＨＣＣ４００６−ＣＲを１μＭゲフィチニブに２週間暴露することにより、シスプラチンおよびゲフィチニブの双方に耐性である細胞株（ＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）を樹立した。これらの細胞株におけるＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌、ならびにＥＭＴマーカー発現をウェスタンブロットにより解析した。また、ゲフィチニブへのこれらの細胞株の耐性を評価した。
その結果、シスプラチン耐性化に伴い間葉系マーカー（Ｎ−ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＴＷＩＳＴ１等）の発現と共にＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌の亢進が認められた（図７）。また、シスプラチンおよびゲフィチニブの双方に耐性である細胞株（ＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ）では、マーカーの発現の変動が顕著に認められた（図７）。さらに、可溶性ＡＸＬ分泌が認められるシスプラチン耐性細胞株ＨＣＣ４００６−ＣＲは、ゲフィチニブに部分的に耐性であった（図８）。
以上より、プラチナ製剤に対する耐性獲得に伴うＥＭＴの進行とＡＸＬ発現および可溶性ＡＸＬ分泌との関連性、ならびにプラチナ製剤暴露によりＥＧＦＲ阻害剤に対する耐性能を獲得する細胞の存在が示された。

実施例８：可溶性ＡＸＬ分泌陽性細胞の運動能の解析
先の実施例に記載した種々の細胞の運動能を、トランスウェルマイグレーションアッセイ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２０１２；３１：１４９３―１５０３．を参照）により測定した。
その結果、ＨＣＣ４００６由来耐性細胞株では、可溶性ＡＸＬの分泌亢進に相関して運動能の亢進が認められた（図９）。Ｈ１９９３由来耐性細胞株では、ＰＲ５ｍが親株よりも運動能が亢進していたが、ＡＸＬ（可溶性ＡＸＬ分泌）陽性分画でさらに運動能の亢進が認められた（図１０）。可溶性ＡＸＬ分泌が認められたＨＣＣ４００６由来シスプラチン耐性細胞株、およびシスプラチンおよびゲフィチニブの双方に耐性である細胞株でも、運動能の亢進が認められた（図１１）。癌細胞が浸潤および転移する能力は、トランスウェルマイグレーションアッセイにより細胞の運動能を測定することにより、評価できることが知られている（Ｉnｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２；１３０：５５５−５６６．を参照）。
以上より、可溶性ＡＸＬの分泌が、細胞の運動能と強く相関することが示された。したがって、可溶性ＡＸＬの測定により、癌細胞の浸潤および／または転移する能力を評価できると考えられる。

実施例９：ＡＸＬノックダウンによる運動能の阻害
運動能の亢進が認められたＨＣＣ４００６−ＣＲ−ＧＲ（シスプラチンおよびゲフィチニブの双方に耐性である、ＨＣＣ４００６由来細胞株）のＡＸＬをｓｉ−ＲＮＡにより阻害し、ＡＸＬ阻害が運動能へ及ぼす影響をトランスウェルマイグレーションアッセイにより解析した。ｓｉ−ＡＸＬ−１は、ＡＸＬ遺伝子の第１標的配列（ＣＣＡＧＣＡＣＣＵＧＵＧＧＵＣＡＵＣＵＵＡＣＣＵＵ、配列番号１）に対する第１ｓｉ−ＲＮＡを示す。ｓｉ−ＡＸＬ−２は、ＡＸＬ遺伝子の第２標的配列（ＧＡＧＣＵＧＣＧＧＧＡＡＧＡＵＵＵＧＧＡＧＡＡＣＡ、配列番号２）に対する第２ｓｉ−ＲＮＡを示す。ｓｉ−ＡＸＬ−３は、ＡＸＬ遺伝子の第３標的配列（ＣＣＡＧＧＡＡＣＵＧＣＡＵＧＣＵＧＡＡＵＧＡＧＡＡ、配列番号３）に対する第３ｓｉ−ＲＮＡを示す。
その結果、ＡＸＬのノックダウンにより細胞の運動能が顕著に抑制された（図１２、１３）。
以上より、ＡＸＬが抗癌剤に耐性を示す細胞の運動能に機能的に関与していることが示された。
また、図１２、１３に示した結果より、ＡＸＬの発現量と抗癌剤に耐性を示す細胞の運動能との間には相関性があると考えられる。さらには、ＡＸＬの発現量と可溶性ＡＸＬの量との間にも相関性があると考えられる。したがって、可溶性ＡＸＬの測定により、抗癌剤に対する耐性を示す癌のうち、ＡＸＬ阻害剤による治療が有効な癌（例えば、ＡＸＬ阻害剤により癌細胞の運動能を抑制し、それによって癌の浸潤および／または転移を抑制する治療が有効な癌）を診断できると考えられる。

本発明は、例えば、癌に対する抗癌剤の効果の試験に有用であり、また、診断試薬およびキットとして有用である。

Claims (8)

1. 可溶性ＡＸＬまたはその分解産物に親和性を有する物質を含む、癌に対する抗癌剤の効果の診断試薬であって、該抗癌剤がＭＥＴ阻害剤、プラチナ製剤およびＡＸＬ阻害剤からなる群より選ばれる１以上の抗癌剤である、診断試薬。
2. 可溶性ＡＸＬまたはその分解産物に親和性を有する物質が、可溶性ＡＸＬまたはその分解産物に対する抗体である、請求項１記載の診断試薬。
3. 抗癌剤が肺癌に対する抗癌剤である、請求項１または２記載の診断試薬。
4. 抗癌剤の効果が、ＭＥＴ阻害剤またはプラチナ製剤に対する耐性である、請求項１〜３のいずれか一項記載の診断試薬。
5. 抗癌剤の効果が、ＡＸＬ阻害剤に対する感受性である、請求項１〜３のいずれか一項記載の診断試薬。
6. ＡＸＬ阻害剤に対する感受性が、ＡＸＬ阻害剤による癌の増殖および／または浸潤および／または転移の抑制である、請求項５記載の診断試薬。
7. 可溶性ＡＸＬまたはその分解産物に親和性を有する物質、および可溶性ＡＸＬまたはその分解産物を含む、癌に対する抗癌剤の効果の診断キットであって、該抗癌剤がＭＥＴ阻害剤、プラチナ製剤およびＡＸＬ阻害剤からなる群より選ばれる１以上の抗癌剤である、診断キット。
8. 癌に対する抗癌剤の効果の試験方法であって、
   （ａ）被験体由来の生体サンプル中の可溶性ＡＸＬまたはその分解産物の濃度を測定する工程、および
   （ｂ）測定された可溶性ＡＸＬまたはその分解産物の濃度を、可溶性ＡＸＬまたはその分解産物の濃度と癌に対する抗癌剤の効果との間の関係を示す基準と比較する工程を含み、
   該抗癌剤がＭＥＴ阻害剤、プラチナ製剤およびＡＸＬ阻害剤からなる群より選ばれる１以上の抗癌剤である、試験方法。