SK5912003A3

SK5912003A3 - Novel pyridine-substituted pyrazolopyridine derivatives

Info

Publication number: SK5912003A3
Application number: SK591-2003A
Authority: SK
Inventors: Johannes-Peter Stasch; Achim Feurer; Stefan Weigand; Elke Stahl; Dietmar Flubacher; Cristina Alonso-Alija; Frank Wunder; Dieter Lang; Klaus Dembowsky; Alexander Straub; Elisabeth Perzborn
Original assignee: Bayer Ag
Priority date: 2000-11-22
Filing date: 2001-11-09
Publication date: 2003-10-07
Also published as: EP1343786B1; US20020173514A1; US6693102B2; WO2002042301A1; JP4246991B2; NO20032299L; AU2002220692A1; SI1343786T1; CZ294648B6; ES2243598T3; HUP0303283A2; TW582998B; UY27029A1; EP1343786A1; BG107804A; AR031176A1; BR0115477A; MXPA03004500A; CA2429312A1; ATE298752T1

Description

PYRIDÍN-SUBSTITUOVANÉ DERIVÁTY PYRAZOLPYRIDÍNU, SPÔSOB ICH VÝROBY, LIEČIVÁ TIETO LÁTKY OBSAHUJÚCE A ICH POUŽITIE

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových chemických zlúčenín, ktoré stimulujú rozpustné guanylátcyklázy, spôsobu ich výroby, liečiv tieto látky obsahujúcich a ich použitia v liečivách, obzvlášť na ošetrenie ochorení srdcového krvného obehu.

Doterajší stav techniky

Jedným z najdôležitejších bunkových prenosových systémov v bunkách cicavcov je cyklický guanozínmonofosfát (cGMP). Spoločne s oxidom dusnatým (NO), ktorý sa uvoľňuje z endotelu a prenáša hormonálne a mechanické signály, tvorí systém NO/cGMP. Guanylátcyklázy katalyzujú biosyntézu cGMP z guanozíntrifosfátu (GTP). Doposiaľ známi zástupcovia tejto triedy sa dajú rozdeliť ako podľa štruktúrnych znakov, tak aj podľa druhu ligandov na dve skupiny; partikulárne, nátriuretickými peptidami stimulovateľné guanylátcyklázy a rozpustné, pomocou NO stimulovateľné guanylátcyklázy. Rozpustné guanylátcyklázy pozostávajú z dvoch podjednotiek a obsahujú s vysokou pravdepodobnosťou hem pre heterodimér, ktorý je časťou regulačného centra. Tento má centrálny význam pre aktivačný mechanizmus. NO sa môže viazať na atóm železa hemu, a tak sa môže aktivita enzýmu významne zvýšiť. Preparáty bez hemu sa naproti tomu nedajú pomocou NO stimulovať. Tiež oxid uhoľnatý je schopný sa naviazať na centrálny atóm železa hemu, pričom stimulácia pomocou CO je podstatne menšia, ako stimulácia pomocou NO. , Tvorbou cGMP a z toho vyplývajúcou reguláciou fosfodiesteráz, iónových kanálov a proteínkináz hraje guanylátcykláza rozhodujúcu úlohu pri rôznych fyziologických procesoch, obzvlášť pri relaxácii a proliferácii buniek hladkého svalstva, agregácii a adhézii krvných doštičiek a prenosu neuronálnych signálov, ako i pri ochoreniach, ktoré sú spôsobené poruchami vyššie uvedených pochodov. Za patofyziologických podmienok môže byť NO/cGMPsystém suprimovaný čo môže viesť napríklad k vysokému krvnému tlaku,

PP 0591-2003

32127/H aktivácii doštičiek, zvýšenej proliferácii buniek, endoteliálnej dysfunkcii, ateroskleróze, angíne pectoris, srdcovej insufficiencii, trombózam, prípadom mŕtvice a infarktu myokardu.

Na ovplyvnenie cGMP-signálnej cesty v organizmoch zameraná NOnezávislá možnosť ošetrenia takýchto ochorení je na základe očakávateľnej vysokej účinnosti a nepatrných vedlajších účinkov diskutovatefnou otázkou.

Na terapeutickú stimuláciu rozpustnej guanylátcyklázy boli doposiaľ používané výhradne zlúčeniny, akými sú organické nitráty, ktorých účinok je založený na NO. Tento sa tvorí biokonverziou a aktivuje rozpustnú guanylátcyklázu napadnutím centrálneho atómu železa hemu. Popri vedľajších účinkoch patrí k rozhodujúcim nevýhodám tohto spôsobu ošetrenia vznik tolerancie.

V posledných rokoch boli opísané látky, ktoré stimulujú rozpustné guanylátcyklázy priamo, to znamená bez predchádzajúceho uvoľňovania NO, akými sú napríklad 3-(5'-hydroximetyl-2'-furyl)-1-benzylindazol (YC-1, Wu a kol., Blood 84 ( 1994), 4226; Mulsch a kol., Br. J. Pharmacol. 120 (1997), 681), mastné kyseliny (Goldberg a kol., J. Biol. Chem. 252 (1997), 1279) difenyljodónium-hexafluórofosfát (Pettibone a kol., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985), 307), izoliquiritigenín (Yu a kol., Brit. J. Pharmacol. 114 (1995), 1587) , ako i rôzne substituované deriváty pyrazolu (WO 98/16223).

Ďalej sú vWO/16507, WO 98/23619, WO 00/06567, WO/06568, WO/00/06569 aWO 00/21954 opísané deriváty pyrazolpyridínu ako stimulátorov rozpustnej guanylátcyklázy. V týchto patentových prihláškach sú tiež opísané pyrazolopyridíny, ktoré majú v polohe 3 pyrimidínový zvyšok. Takéto zlúčeniny majú veľmi vysokú in vitro aktivitu so zreteľom na stimuláciu rozpustnej guanylátcyklázy. Avšak ukázalo sa, že tieto zlúčeniny vykazujú určité nevýhody so zreteľom na svoje in vivo vlastnosti, ako napríklad pri svojom správaní sa v pečeni, pri svojom farmakokinetickom chovaní, pri svojom vzťahu dávka-účinok alebo pri metabolickej ceste.

Úlohou predloženého vynálezu teda je pripraviť ďalšie deriváty pyrazolpyridínu, ktoré by pôsobili ako stimulátory rozpustnej guanylátcyklázy, ale ktoré by nevykazovali vyššie uvedené nevýhody už uvedených zlúčenín zo stavu techniky.

PP 0591-2003

32127/H

Podstata vynálezu

Uvedená úloha bola vyriešená novými derivátmi pyrazolpyridínov, ktoré sa vyznačujú pyrimidínovým zvyškom v polohe 3, ktorý vykazuje určitý substitučný vzor, totiž pyrimidínový zvyšok v polohe 5 pyrimidinového kruhu, ako i aminoskupinu v polohe 4 pyrimidinového kruhu.

Predmetom predloženého vynálezu teda sú pyridín-substituované deriváty pyrazolopyridínu všeobecného vzorca I

v ktorom

R¹ znamená 4-pyridinylovú skupinu alebo 3-pyridinylovú skupinu a R² znamená vodíkový atóm, aminoskupinu alebo atóm halogénu, ako i ich soli, izoméry a hydráty.

Podľa alternatívnej formy uskutočnenia sú predmetom predloženého výnálezu zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená 4-pyridinylovú skupinu alebo 3-pyridinylovú skupinu a R znamená vodíkový atóm, aminoskupinu alebo atóm chlóru, ako i ich soli, izoméry a hydráty.

Podľa ďalšej alternatívnej formy uskutočnenia sú predmetom predloženého vynálezu zlúčeniny vzorca I, v ktorom R¹ znamená 4-pyridinylovú skupinu alebo 3-pyridinylovú skupinu a R² znamená vodíkový atóm, ako i ich soli, izoméry a hydráty.

PP 0591-2003

32127/H

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I sa môžu vyskytovať tiež vo forme svojich solí, všeobecne je možné uviesť soli s organickými alebo anorganickými bázami alebo kyselinami.

V rámci predloženého vynálezu sú výhodné fyziologicky neškodné soli. Fyziologicky neškodnými soľami zlúčenín podľa predloženého vynálezu môžu byť soli látok podľa predloženého vynálezu s minerálnymi kyselinami, karboxylovými kyselinami alebo sulfónovými kyselinami. Obzvlášť výhodné sú napríklad soli s kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou fosforečnou, kyselinou metánsulfónovou, kyselinou etánsulfónovou, kyselinou p-toluénsulfónovou, kyselinou benzénsulfónovou, kyselinou naftaléndisulfónovou, kyselinou octovou, kyselinou propiónovou, kyselinou mliečnou, kyselinou vínnou, kyselinou citrónovou, kyselinou fumarovou, kyselinou maleínovou a kyselinou benzoovou.

Fyziologicky neškodnými soľami môžu byť taktiež kovové alebo amóniové soli zlúčenín podľa predloženého vynálezu, ktoré majú voľnú karboxylovú skupinu. Obzvlášť výhodné sú napríklad soli sodné, draselné, horečnaté alebo vápenaté, ako i amóniové soli, ktoré sú odvodené od amoniaku alebo organických amínov, akými sú napríklad etylamín, dietylamín, trietylamín, dietanolamín, trietanolamín, dicyklohexylamín, dimetylaminoetanol, arginín, lyzín alebo etyléndiamín.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu existovať v tautomérnych formách. Toto je pre odborníkov známe a také formy sú taktiež predmetom predloženého vynálezu.

Ďalej sa môžu zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vyskytovať vo forme svojich možných hydrátov.

Atóm halogénu znamená v rámci predloženého vynálezu atóm fluóru, chlóru, brómu a jódu.

Predmetom predloženého vynálezu je cľalej spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I, ktorého podstata pozostáva vtom, že sa nechá reagovať zlúčenina vzorca II

PP 0591-2003

32127/H

(II)

A) so zlúčeninou všeobecného vzorca III 'N

CN (11!) pričom R¹ má vyššie uvedený význam, prípadne v v organickom rozpúšťadle za zahriatia na zlúčeninu všeobecného vzorca I, alebo

B) sa zlúčeninou všeobecného vzorca IV

pričom R¹ má vyššie uvedený význam, v organickom rozpúšťadle za zahriatia na zlúčeninu všeobecného vzorca V

PP 0591 -2003

32127/H pričom R¹ má vyššie uvedený význam, a potom s halogenačným činidlom na zlúčeninu všeobecného vzorca VI

(VI) pričom R¹ má vyššie uvedený význam a R² znamená atóm halogénu, a nakoniec s vodným roztokom amoniaku po zahriatí a za zvýšeného tlaku.

Zlúčenina vzorca II sa dá vyrobiť pomocou nasledujúcej reakčnej schémy:

PP 0591-2003

32127/H

Zlúčeninu vzorca II je možné získať viacstupňovou syntézou z literatúry známej sodnej soli etylesteru kyseliny kyanobenzhroznovej (Borsche a Manteuffel, Liebigs. Ann. Chem. 1934, 512, 97). Jej reakciou s 2fluórbenzilhydrazínom po zahriatí v ochrannej atmosfére v inertnom rozpúšťadle, akým je dioxán, sa získa etylester kyseliny 5-amino-1-(2fluórbenzyl)-pyrazol-3-karboxylovej, ktorý sa cyklizuje reakciou s dimetylaminoakroleínom v kyslom médiu v atmosfére ochranného plynu a po zahriatí na zodpovedajúci derivát pyridínu. Tento derivát pyridínu etylester kyseliny 1 -fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b] pyridín-3-karboxylovej sa viacnásobnými postupmi , pozostávajúcimi z reakcie esteru s amoniakom na zodpovedajúci amid, z dehydratácie s vodou odnímajúcim činidlom, akým je anhydrid kyseliny trifluóroctovej, na zodpovedajúci nitrilový derivát, z reakcie nitrilového derivátu s metylátom sodným a nasledujúcou reakciou s chloridom amónnym, prevedie na zlúčeninu vzorca II.

Zlúčeniny - všeobecného vzorca III sa môžu vyrobiť z komerčne dostupných zlúčenín (napríklad firma Aldrich) terc-butoxybis(dimetylamino)metánu a 4-pyridylacetonitrilu, prípadne 3-pyridylacetonitrilu reakciou týchto reaktantov výhodne v ekvimolárnom množstve a výhodne pri normálnom tlaku a počas miešania reakčného roztoku v priebehu viac hodín, napríklad dvoch hodín, pri zvýšenej teplote, napríklad v rozmedzí 60 až 130°C, výhodne 80 až 120°C, obzvlášť 100°C.

Reakcia zlúčenín vzorca II a zlúčenín všeobecného vzorca III na zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môže uskutočňovať za použitia reaktantov v ekvimolárnych množstvách, prípadne s použitím zlúčeniny všeobecného vzorca III v ľahkom prebytku, v organickom rozpúšťadle napríklad uhľovodíku,, výhodne v aromatickom uhľovodíku a obzvlášť v xyléne, výhodne v prítomnosti 0,1 až 1 ekvivalentu, obzvlášť 0,3 ekvivalentov, Lewisovej kyseliny, akou je napríklad BF₃Et₂O alebo trimetylsilyltrifluórsulfonát (TMSOTf), výhodne pri normálnom tlaku a počas miešania reakčného roztoku, v priebehu viac hodín, napríklad 12 hodín, za zvýšenej teploty, napríklad v rozmedzí 80 až 160°C, výhodne 100 až 150°C, obzvlášť 140°C.

PP 0591-2003

32127/H

Zlúčeniny všeobecného vzorca IV sú komerčne dostupné (napríklad firma Mercachem) alebo sa môžu získať spôsobmi pre odborníkov známymi. Reakcia zlúčeniny vzorca II a všeobecného vzorca IV na zlúčeniny všeobecného vzorca V sa môže uskutočňovať pomocou reaktantov v ekvimolárnom množstve, výhodne pomocou zlúčeniny všeobecného vzorca

IV v ľahkom prebytku, v organickom rozpúšťadle, napríklad uhľovodíku, výhodne aromatickom uhľovodíku a obzvlášť v toluéne, výhodne pri normálnom tlaku a počas miešania reakčného roztoku v priebehu viac hodín, napríklad 12 hodín, za zvýšenej teploty, napríklad v rozmedzí 80 až 160°C, výhodne 100 až 150°C, obzvlášť 140°C.

Reakcia zlúčenín všeobecného vzorca V na zlúčeniny všeobecného vzorca VI sa môže uskutočniť reakciou zlúčenín všeobecného vzorca

V s halogenačným činidlom, prípadne v organickom rozpúšťadle, používanom obvykle pre také reakcie, akým je napríklad dimetylformamid (DMF), výhodne pri normálnom tlaku počas miešania reakčnej zmesi v priebehu viac hodín, napríklad 3 hodiny za zvýšenej teploty, napríklad v rozmedzí 80 až 160°C, výhodne 100 až 120°C. Podľa predloženého vynálezu sa môže ako halogenačné činidlo použiť POCI3.

Reakcie zlúčenín všeobecného vzorca VI zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa predloženého vynálezu sa môže uskutočniť reakciou zlúčenín všeobecného vzorca VI vo vodnom roztoku amoniaku, výhodne pri zvýšenom tlaku, napríklad uskutočnením reakcie v autokláve tak, že reakcia prebieha pri vlastnom tlaku reakčnej zmesi, a počas miešania reakčnej zmesi v priebehu viac hodín, napríklad 12 hodín, pri zvýšenej teplote, napríklad v rozmedzí 80 až 160°C, výhodne 100 až 150°C, obzvlášť 140°C.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I, vykazujú nepredpokladateľné, cenné farmakologické spektrum účinku.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I, umožňujú relaxáciu ciev, inhibíciu agregácie trombocytov a zníženie krvného tlaku, ako i zvýšenie koronárneho prietoku krvi. Tieto účinky sú sprostredkované prostredníctvom priamej stimulácie rozpustnej guanylátcyklázy a intracelulárneho zvýšenia cGMP. Okrem toho zosilňujú zlúčeniny podľa

PP 0591-2003

32127/H predloženého vynálezu všeobecného vzorca I účinok substancii, ktoré zvyšujú hladinu cGMP, akými sú napríklad EDRF (endothelium derived relaxing factor), NO-donátory, protoporfyrín IX, kyselina arachidónová alebo deriváty fenylhydrazinu.

Tieto zlúčeniny sa môžu teda použiť v liečivách na ošetrenie kardiovaskulárnych ochorení, ako napríklad na ošetrenie vysokého krvného tlaku a srdcovej insuficiencie, stabilnej a instabilnej angíny pectoris, periférnych a kardiálnych cievnych ochorení, arytmie, na ošetrenie tromboembolických ochorení a ischémií, akými sú infarkt myokardu, mozgová mŕtvica, tranzistorické a ischemické ataky, poruchy periférneho prekrvenia, potlačenie restenóz, ako po trombolýznych terapiách, perkutánnej transluminálnej angioplastike (PTA), perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike (PTCA) a bypasse, ako i na ošetrenie artériosklerózy, astmatických ochorení a ochorení urogenitálneho systému, akými sú napríklad hypertrofia prostaty, erektilná dysfunkcia, ženské sexuálne dysfunkcie, osteoporózy, gastroparéza a inkontinencia.

Zlúčeniny, opísané v predloženom vynáleze všeobecného vzorca I, predstavujú také účinné látky na ošetrenie ochorení centrálneho nervového systému, ktoré sa vyznačujú poruchami NO/cGMP-systému. Obzvlášť sú vhodné na zlepšenie vnímania, výkonu koncentrácie, výkonu učenia alebo výkonu pamäti po kognitívnych poruchách, aké sa vyskytujú obzvlášť pri syndrómoch stimulácia/choroba, ako je Mild cognitive impairmenť', starobou asociované poruchy učenia a pamäti, starobou asociované straty pamäti, vaskulárna demencia, lebečná-mozgová trauma, prípady mŕtvice, demencie, ktoré nastávajú po stavoch mŕtvice (post stroke dementia“), post-traumatická lebečná mozgová trauma , všeobecné poruchy koncentrácie, poruchy koncenrácie u detí s problémami učenia a zapamätania, Alzheimerova choroba, vaskulárna demencia, demencia s Lewyho telieskami, demencia s degeneráciou frontálneho laloku pri Pickovom syndróme, Parkinsonova choroba, progresívne nukleárne ochrnutie, demencia s kortikobazálnou degeneráciou, amylolaterálna skleróza (ALS), Huntingtonova choroba, skleróza multiplex, Thalmiova degenerácia, Creutzfeld-Jakobova demencia, HIVPP 0591-2003

32127/H demencia, schizofrénia s demenciou alebo Korsakoffova psychóza. Sú vhodné taktiež na ošetrenie ochorení centrálneho nervového systému, akými sú stavy strachu, napätia a depresie, centrálnym nervovým systémom spôsobených sexuálnych dysfunkcii a porúch spánku, ako i na reguláciu porúch prijímania potravy, požívatín a návykových látok. Ďalej sú účinné látky vhodné tiež na reguláciu cerebrálneho prekrvenia a predstavujú teda účinný prostriedok na ošetrenie migrén.

Tiež sú vhodné na profylaxiu a ošetrenie následkov prípadov mozgových infarktov (Apoplexia cerebri), cerebrálnych ischémií a lebečnej mozgovej traumy. Taktiež sa môžu zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I použiť na ošetrenie bolestivých stavov.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú antiinflamatorický účinok a môžu sa teda použiť ako prostriedok potlačujúci zápaly.

Okrem toho zahrňuje predložený vynález kombináciu zlúčenín podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I s organickými nitrátmi a NOdonátormi.

Organické nitráty a NO-donátory v rámci predloženého vynálezu sú všeobecne látky, ktoré svoj terapeutický účinok odvodzujú uvoľňovaním oxidu dusnatého, prípadne NO-species. Výhodný je nitroprusid sodný, nitroglycerín, izosorbiddinitrát, izosorbidmononitrát, molsidomín a SIN-1.

Okrem toho zahrňuje predložený vynález kombináciu so zlúčeninami, ktoré inhibujú odbúravanie cyklického guanozínmonofosfátu (cGMP). Takými sú obzvášť inhibítory fosfodiesteráz 1, 2 a 5 (nomenklatúra podľa Beava a Reifsyndera (1990) TiPS 11_, str. 150 až 155). Touto inhibíciou sa potencuje účinok zlúčenín podľa predloženého vynálezu a zvyšuje sa požadovaný farmakologický efekt.

Biologické skúšky

Cievy relaxujúci účinok in vitro

PP 0591-2003

32127/H

Králiky sa usmrtia ranou do tyla a odkrvia sa. Aorta sa vyberie, zbaví sa prilipnutného tkaniva a rozdelí sa na 1,5 mm široké krúžky, tieto sa jednotlivo dajú pri teplote 37°C za predpätia do 5ml orgánového kúpeľa s oxidom uhličitým zaplynovaným Krebs-Heseleitovým roztokom zloženia (mM) : NaCI: 119; KCL: 4,8; CaCI_₂ x 2 H₂O: 1; MgSO₄ x 7 H₂O: 1,4; KH₂PO₄: 1, ,2; NaHCO₃: 25; glukóza: 10. Kontrakčná sila sa stanoví pomocou Staham UC2-Zellen, zosilní sa a pomocou A/D-Wandler (DAS-1802 HC, Keithley Instruments Munchen) sa digitalizuje a paralelne sa registruje na čiarovom zapisovači. Na dosiahnutie kontrakcie sa do kúpeľa pridáva kumulatívne vo vzostupnej koncentrácii fenylheparín. Po niekoľkých kontrolných cykloch sa pri každom ďalšom uskutočnení pridáva skúmaná látka vo vzrastajúcej dávke a dosiahnutá kontrakcia sa porovnáva s výškou kontrakcie, dosiahnutej pri predchádzajúcom cykle. Vypočíta sa koncentrácia, ktorá je potrebná k tomu, aby sa kontrakcia, dosiahnutá pri predchádzajúcej kontrole, redukovala na 50% (IC50). Štandardný aplikačný objem je 5 μΙ, podie DMSO v roztoku kúpeľa zodpovedá 0,1%.

Výsledky sú uvedené v nasledujúcej tabuľke 1.

Tabuľka 1

Cievy relaxujúúci účinok in vitro

Príklad č.

ICso [μΜ]

0,66

1,21

Stanovenie clearance pečene in vitro.

Krysy sa anestetizujú, heparinizujú a pečene sa perfundujú in situ cez pfortadér. Ex vivo sa potom z pečene získajú pomocou roztoku kolagenázy primárne krysie hepatocyty. 2. 10⁶ hepatocytov na ml s rovnakou koncentráciou stanovovanej zlúčeniny sa inkubuje pri teplote 37°C. Úbytok stanovovaného

PP 0591-2003

32127/H substrátu sa priebežne stanovuje bioanalyticky (HPLC/UV,

HPLC/fluoresčenčne alebo LC/MSMS) vždyv 5 časových úsekoch 0 až 15 minút po štarte inkubácie. Clearence sa vypočíta podľa počtu buniek a hmotnosti pečene.

Stanovenie clearence plazmy in vivo

Skúmaná substancia sa aplikuje krysám cez chvostovú cievu intravenózne ako roztok. V stanovenom časovom okamžiku sa krysám odoberie krv, táto sa heparinizuje a pomocou obvyklej metódy sa z nej získa plazma. Substancia sa vplazme bioanalyticky kvantifikuje. Zo zisteného priebehu koncentrácie plazmy-čas sa pomocou obvyklých tu používaných nekompartimentálnych metód vypočítajú farmakokinetické parametre.

Predmetom predloženého vynálezu sú ďalej farmaceutické prostriedky, ktoré vedľa netoxických, inertných, farmaceutický vhodných nosných látok, obsahujú zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa predloženého vynálezu, ako i spôsob výroby týchto prípravkov.

Účinné látky sa môžu prípadne vyskytovať v jednej alebo viacerých uvedených nosných látkach tiež v mikrokapsulovej forme.

Terapeuticky účinné zlúčeniny všeobecného vzorca I, by sa mali vo vyššie uvedených farmaceutických prostriedkoch vyskytovať v koncentrácii asi 0,1 až 99,5% hmotnostných, výhodne asi 0,5 až 95% hmotnostných, vztiahnuté na celkovú zmes.

Vyššie uvedené farmaceutické prostriedky môžu okrem zlúčenín podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I obsahovať tiež ďaľšie farmaceutický účinné látky.

Všeobecne sa ukázalo ako v humánnej, tak i vo veterinárnej medicíne ako výhodné, aplikovať na dosiahnutie požadovaných výsledkov účinnú látku alebo účinné látky podľa predloženého vynálezu v celkovom množstve asi 0,1 až asi 700 mg/kg telesnej hmotnosti za 24 hodín, výhodne 0,01 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti, prípadne vo forme viacerých jednotlivých dávok. Jednotlivá dávka obsahuje účinnú látku alebo účinné látky podľa predloženého vynálezu

PP 0591-2003

32127/H výhodne v množstve asi 0,1 až asi 80 mg/kg telesnej hmotnosti, najmä 0,1 až 30 mg/kg telesnej hmotnosti.

Predložený vynález je ďalej bližšie objasnený pomocou nijako neobmedzujúcich výhodných príkladov uskutočnenia. Pokiaľ nie je uvedené inak, všetky údaje o množstve sú y hmotnostných percentách.

Príklady uskutočnenia vynálezu

V nasledujúcich príkladoch uskutočnenia sa používajú tieto skratky:

RT = teplota miestnosti

EE= etylester kyseliny octovej

MCPBA = kyselina m-chlórperoxybenzoová

BABA = n-butylacetát/n-butanol/ľadová kyselina octová/fosfátový pufor pH 6 (50:9:25:15; org. fáza)

DMF = N, N-dimetylformamid

Pohyblivé fázy pre chromatografiu na tenkej vrstve:

T1 E1 : toluén - etylacetát (1:1)

T1 EtOH1 : toluén - etylalkohol (1:1)

C1 E1 : cyklohexán - etylacetát (1:1)

C1 E2 : cyklohexán - etylacetát (1 : 2)

Metódy na stanovenie HPLC-retenčných časov, prípadne preparatívne deliace metódy

Metóda A = LC-MS

Eluent: A = acetonitril + 0,1% kyseliny mravčej B = voda + 0,1% kyseliny mravčej tok : 25 ml/min teplota : 40°C

PP 0591-2003

32127/H

tesniaci materiál: Symetry C 18, 50x2,1 mm, 3,5 pm
Čas (min)	A	B
o	10	90 .
4,0	90	10
6,0	90	10
6,1	10	90
7,5	10	90

Metóda B = preparativna HLPC

Eluent: A = milli-Q-voda + 0,6 g koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej na 1 I H₂O

B = acetonitril tok; 50 ml/min teplota : teplota miestnosti tesniaci materiál: YMC-Gel ODS-AQS 11pm 250x30 mm

PP 0591-2003

32127/H

Čas (min)	A	B
0	90	10
3	90	10
27	2	98
34	2	98
34,01	90	10
38	90	10

Východiskové zlúčeniny

I. Syntéza 4-[ (dimetylamino)metylén ]-pyridínacetonitrilu (E/Z-zmes)

4-pyridylacetonitril 7,52 g (63,7 mmol) a ŕerc-butoxy-bis (dimetylamino) metán 11,09 g (63,7 mm;ol) sa miešajú pri teplote 100°C počas 2 hodín. Pri tom sa uvolnený dimetylamín a ŕerc-butanol odvádzajú pomocou vákuového čerpadla za malého podtlaku do atmosféry. Pomocou okamžikovej chromatografie (dichlórmetán/etylacetát 50 : 1-»20 : 1) sa získa zlúčenina uvedená v názve.

Výťažok: 10,2 g (93 %)

PP 0591-2003

32I27/H

Rf-hodnota: 0,29 (CH₂CL₂/EE 20/1)

1H-NMR: (300MHz, D₆-DMSO), δ = 3,25 (s, 6H, 2 x CH₃), 7,25 (d, 2H, Ar-H), 7,80 (s, 1H, Ar-H), 8,33 (d, 2H, Ar-H).

MS: (ESI poz.), m/z = 174 ([M+H]*)

II. Syntéza 3-[ (dimetylamino) metylén]-pyridylacetonitrilu (E/Z-zmes)

CN

3-pyridylacetonitril 3,00 g (25,4 mmol) a terc-butoxy-bis (dimetylamino) metán 4,23 g (25,4 mmol) sa miešajú pri teplote 100°C počas 2 hodín. Pri tom uvoľnený dimetylamín a terc-butanol sa odvádzajú pomocou vákuového čerpadla za malého podtlaku do atmosféry. Po ochladení sa filtruje z vyzrážanej pevnej látky, premyje sa malým množstvom vody a získa sa takto zlúčenina uvedená v názve.

Výťažok: 4,23 g (96 %) Rf-hodnota: 0,27 (CH₂CL₂/MeOH 40/1) ¹H-NMR: (300 MHz, D₆-DMSO), δ = 3,08 (s, 3H, CH₃), 3,25 (s, 3H, CH₃), 7,29 (dd, 1H, Ar-H), 7,57 (s, 1H, =C-H), 7,66 (dt, 1H, Ar-H), 8,26 (d, 1H, Ar-H), 8,54 (d, 1H, Ar-H).

LCMS : Retenčný čas: 0,33 min (stĺpec: Symetry, C-18, 3,5 pm, 50x2,1 mm, tok: 0,5 ml/min, 40°C, gradient: voda (+ 0,1 % kyseliny mravčej) : acetonitril (+0,1% kyseliny mravčej pri 0 min: 90:10, pri 7,5 min 10 : 90;

MS : (ESI poz.), m/z = 174 ([M+H⁺]).

III. Syntéza 1-(2-fluóbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-karboxamidínu

IIIA) Etylester kyseliny 5-amino-1-(2-fluórbenzyl)-pyrazol-3-karboxylovej

PP 0591-2003

32127/H

100 g (0,613 mol) sodnej soli etylesteru kyseliny kyanopyrohroznovej (príprava podľa Borscha a Manteuffela, Liebigs Ann. 1934, 512, 97) sa zmiešajú za intenzívneho miešania v argónovej atmosfére v 2,5 I dioxánu pri teplote miestnosti s 111,75 g (75 ml, 0,98 mol) kyseliny trifluóroctovej a reakčná zmes sa mieša počas 10 minút, pričom väčšia časť eduktov prejde do roztoku. Potom sa pridá 85,93 g (0,613 mol) 2-fluórbenzylhydrazínu a reakčná zmes sa vari cez noc. Po ochladení sa vyzrážané kryštály nátriumfluóracetátu odsajú, premyjú s dioxánom a surový roztok sa nechá ďalej reagovať.

IIIB) Etylester kyseliny 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo-[3,4-b]pyridín-3karboxylovej

Roztok, získaný v stupni IIIA), sa zmieša z 61,25 ml (60,77 g, 0,613 mol) dimetylaminoakroleínom a 56,28 ml (83,88 g, 0,736 mol) kyseliny trifluóroctovej a v argónovej atmosfére sa varí počas 3 dní. Potom sa rozpúšťadlo vo vákuu

PP 0591-2003

32127/H odparí, získaný zbytok sa dá do 2 I vody a trikrát sa extrahuje vždy 1 I etylesteru kyseliny octovej. Organické fázy sa spoja, vysušia sa pomocou bezvodného síranu horečnatého a odparia sa na rotačnej odparke. Získaný zvyšok sa chromatografuje na 2,5 kg silikagéli a eluuje sa gradientom toluén/toluénetylacetát = 4:1.

Výťažok : 91,6 g (49,9 % teórie cez dva stupne)

T.t. : 85°C

R_f(SiO₂, Τ1 E1) :0,83.

NIC) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-karboxamid

O

10,18 g (34 mmol) esteru, získaného vstupní IIIB), sa preloží do 150 ml metylalkoholu, nasýteného pri teplote 0 až 10°C amoniakom, potom sa reakčná zmes mieša počas dvoch dní pri teplote miestnosti a potom sa vo vákuu zahustí.

Rf (SiO, T1E1) :0,33

I!ID) 3-kyano-1-(2-fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridín

N.

PP 0591-2003

32127/H

36,1 g (133 mmol) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo-[3,4-b]pyridín-3karboxamidu zo stupňa NIC) sa rozpustí v 330 ml tetrahydrofuránu a zmieša sa s 27 g (341 mmol) pyridínu. Potom sa pridá v priebehu 10 minút 47,76 ml (71,66 g, 341 mmol) anhydridu kyselinu trifluóroctovej, pričom teplota stúpne na 40°C. Reakčná zmes sa zmieša počas noci pri teplote miestností, potom sa vsádzka dá do 1 I vody a trikrát sa extrahuje vždy 0,5 I etylesteru kyseliny octovej. Organická fáza sa premyje nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a 1 N kyselinou chlorovodíkovou, vysuší sa pomocou bezvodého síranu horečnatého a odparí sa na rotačnej odparke.

Výťažok: 33,7 g (100 %)

T.t. : 81 °C

R_f(SiO₂, T1E1) : 0,74

IIIE) Metylester kyseliny (2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo-[3,4-b]pyridín-3karboximidovej

V 1,5 I metylalkoholu sa rozpustí 30,37 g (562 mmol) metylátu sodného a pridá sa 36,45 g (144,5 mmol) 3-kyano-1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4bjpyridínu (zo stupňa IIID), potom sa reakčná zmes mieša počas 2 hodín pri teplote miesnosti a získaný roztok sa priamo použije v nasledujúcom stupni.

IIIF) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-karboxamidín

PP 0591-2003

32127/H

• HCl

Roztok metylesteru kyseliny (2-fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3karboximidovej v metylalkohole získaný vstupní IIIE), sa zmieša s 33,76 g (32,19 ml, 562 mmol) ľadovej kyseliny octovej a 9,28 g (173 mmol) chloridu amónneho a reakčná zmes sa mieša počas noci za varu pod spätným chladičom. Rozpúšťadlo sa potom vo vákuu odparí, získaný zvyšok sa potom dobre rozotrie s acetónom a vyzrážaná pevná látka sa odsaje.

¹H-NMR (d₆-DMSO, 200 MHz, ) : δ = 5,93 (s, 2H) , 7,1 - 7,5 (m, 4h), 7,55 (dd, 1H), 8,12 (dd, 1 H). 8,30 (dd, 1 H). 9,5 (bs, 4H-vymeniteľný) ppm.

MS (EI): m/z = 270,2 (M-HCL)

IV. Syntéza 2-[ 1 -(2-fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-yl]-5-(4-pyridinyI)4,6-pyrimidíndiolu

Aj '1 z..N ,7 a *s.

r.O

A-ok ' \

PP 0591-2003

32127/H

3,27 g (12,1 mmol) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3karboximidamidu z príkladu III sa suspenduje v 40 ml toluénu, zmieša s 2,88 g (12,1 mmol) dietyl-2-(4-pyridinyl)malonátu (komerčne dostupný vo firme Mercachem) a reakčná zmes sa mieša počas noci pri teplote 140°C. Za účelom spracovania sa odsaje vyzrážaná pevná látka a za vysokého vákua sa usuší.

Výťažok : 2,43 g (43 %)

LC-MS: R_t = 2,69 min (metóda A). MS (ESI poz.), m/z = 415 ([M+H]⁺).

V. Syntéza 3-[4,6-dichlór-5-(4-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]-1 -(2-fluórbenzyl)-1 Hpyrazolo-[3,4-b]pyridínu

2,39 g (5,77 mmol) 2-[1 -(2-fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo-[3,4-b]pyridín-3-yl]-5(4-pyridinyl)-4,6-pyrimidíndiolu s príkladu IV sa rozpustia v 10 ml fosfory Ichloridu, pridajú sa 3 kvapky dimetylformamidu a reakčná zmes sa mieša počas 3 hodín za varu pod spätným chladičom. Za účelom spracovania sa reakčný roztok zahustí a za vysokého vákua sa usuší.

Výťažok : 0,67 g (24 %) LC-MS: R_t = 4,34 min (metóda A). MS (ESI ροζ.), m/z = 451 ([M+H]⁺, Cl₄).

Príklad 1

2-[ 1 -[(2-f I uórfeny I) metyl]-1 H-py razol o[3,4-b]py rid í n-3-yl]-5-(4-py ri d i ny l)-4-py rim idínamín

PP 0591-2003

32127/H

0,50 (1,9 mmol) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo-[3,4-b]pyridín-3karboximidamidu z príkladu III a 0,32 g (1,9 mmol) ((dimetylamino)metylén]pyridínacetonitrilu z príkladu I sa suspenduje v xyléne a zmieša sa s BF₃*OEt2 (71 μΙ, 79 mg, 0,56 mmol, 0,3 ekvivalenta). Po 19 hodinách pri teplote 140°C sa nechá reakčná zmes ochladiť na teplotu miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Zlúčenina uvedená v názve sa môže čistiť pomocou okamžikovej chrómatografie na silikagéli (dichlórmetán/metylalkohol 20:1) a nasledujúcim rozmiešaním v acetonitrile.

Výťažok: 0,24 g (33 %) R,-hodnota: 0,17 (EE/MeOH 20:1)

T.t. : 254°C

Retenčná doba: 2,7 min (stĺpec: Symetry, C-18, 3,5 pm, 50x2,1 mm, tok: 0,5 ml/min, 40°C, gradient: voda (+ 0,1 % kyseliny mravčej) : acetonitril (+ 0,1 % kyseliny mravčej pri 0 min. : 90:10, pri 7,5 min. 10:90;

¹H-NMR: (300 MHz, D₆-DMSO), δ = 5,81 (s, 2H, CH₂), 7,0-7,6 (m, 9H, Ar-H, NH₂), 8,64 (m_c, 3H, Ar-H), 9,05 (d, 1H, Ar-H).

MS: (ESI poz.), m/z = 398 ([M+Hf), (ESI neg.), m/z = 396 ([M-Hf)

PP 0591-2003

32127/H

Príklad 2

2-[1-[(2-fluórfenyl)metyl]-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-yl]-5-(4-pyridinyl)-4pyrimidímamin

4,00 g (14,9 mmol) 1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3karboximidamidu z príkladu III a, 57 g (14,9 mmol) 3-[(dimetylamino)metylén]pyridínacetonitrilu z príkladu II sa suspenduje(rozptyľuje) v xyléne apo 12 hodinách pri teplote 120°C sa nechá zmes ochladiť na teplotu miestnosti a odfiltruje sa vytvorená zrazenina. Matičný roztok sa čistí pomocou preparatívnej HPLC (stĺpec: Cromsil 120 ODS, C-18, 10 pm, 250x30 mm, tok 50 ml/min, teplota miestnosti, gradient: voda/acetonitril pri 0 min. : 90:10, pri 28 min: 5:95). Proces čistenia sa musí opakovať.

Výťažok: 0,024 g (0,4 %)

Rf-hodnota: 0,17 (EE/MeOH 20:1) ¹H-NMR: (200 MHz. D₆-DMSO), δ = 5,81 (s, 2H, OCH₂), 6,95-7,6 (m, 8H, Ar-H, NH₂), 7,92 (dt, 1H, Ar-H), 8,21 (s, 1H, Ar-H), 8,6-8,75 (m, 2H, Ar-H), 9,03 (dd, 1H, Ar-H).

LCMS : Retenčná doba: 2,66 min. (stĺpec: Symetry, C-18, 3,5 pm, 50x2,1 mm, tok: 0,5 ml/min, 40°C, gradient: voda (+ 0,1 % kyseliny mravčej): acetonitril ( + 0,1 % kyseliny mravčej pri 0 min.: 90:10, pri 7,5 min. 10:90;

MS : (ESI poz.), m/z = 398 ([M+Hf), (ESI neg.), m/z = 396 ([M-H]⁺).

PP 0591-2003

32127/H

Príklad 3

6-chlór-2-[1-(2-fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-yl]-5-(4-pyridinyl)-4pyrimidinylamín

F

200 mg (0,443 mmol) 3-[4,6-dichlór-5-(4-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]-1-(2fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridínu z príkladu V sa suspenduje v 5 ml 25 % vodného roztoku amoniaku a mieša sa počas noci v autokláve pri teplote 140°C za vlastného tlaku. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje dichlórmetánom, extrakty sa spoja, vysušia sa pomocou bezvodého síranu horečnatého a zahustia sa do sucha, potom sa získaný zvyšok chrómatografuje na silikagéli pomocou zmesi dichlórmetánu a metylalkoholu 30:1. Pre ďalšie spracovanie sa surový produkt čistí pomocou preparatívnej HPLC (metóda B).

Výťažok: 34 mg (15 %) Rf-hodnota: 0,45 (CH₂CL₂/MeOH 20:1) ¹H-NMR: (300 MHz, D_s-DMSO) δ = 5,85 (s, 2H,CH₂, 7,10-7,48 (m, 9H, 7Ar-H a NH₂), 8,61-8,75 (m, 3H, Ar-H), 8,99 (dd, 1H, Ar-H).

LC-MS: R_t = 3,55 min. (metóda A).

MS (ESI poz.) m/z = 432,3 ([M+H]*), 885,2 ([2M+ Naf).

Príklad 4

2-[1-(2-fluórbenzyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridín-3-yl]-5-(4-pyridinyl)-4,6pyrimidíndiamín

PP 0591-2003

32127/H

200 mg (0,443 mmol) 3-[4,6-dichIór-5-(4-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]-1-(2fluórbenzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridínu z príkladu V sa suspenduje v 5 ml 25% vodného roztoku amoniaku a mieša sa počas noci v autokláve pri teplote140 °C za vlastného tlaku. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje díchlórmetánom, extrakty sa spoja, vysušia sa pomocou bezvodého síranu horečnatého a zahustia sa do sucha, potom sa získaný zvyšok chromatografuje na silikagéli pomocou zmesi dichlórmetánu a metylalkoholu 30:1. Za účelom ďalšieho spracovania sa surový produkt čistí pomocou preparatívnej HLPC (metóda B).

Výťažok: 45 mg (20 %) Rf-hodnota: 0,30 (CH₂CI₂/MeOH 20:1) ¹H-NMR: (300 MHz, D₆-DMSO), δ = 5,82 (s, 2H, C₂), 6,02 (br.s, 4H, NH₂), 7,087,48 (m, 7H, Ar-H), 8,57-8,68 (m, 3H, Ar-H), 9,13 (dd, 1H, Ar-H).

LC-MS : Rt = 2,55 min (metóda A).

MS (ESI poz.) m/z = 413,3 ([M+H]*), 847,8 ([2M+Na]⁺).

Claims

1. Pyridín-substituované deriváty pyrazolpyridínu všeobecného vzorca I v ktorom

2. Pyridín-substituované deriváty pyrazolpyridínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, v ktorom

R¹ znamená 4-pyridinylovú skupinu alebo 3-pyridinylovú skupinu a R² znamená vodíkový atóm, aminoskupinu alebo atóm chlóru, ako i ich soli, izoméry a hydráty.

3. Pyridín-substituované deriváty pyrazolpyridínu podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, v ktorom

R¹ znamená 4-pyridinylovú skupinu alebo 3-pyridinylovú skupinu a

PP 059I-2003

32127/H

R² znamená vodíkový atóm, ako i ich soli, izoméry a hydráty.

4. Spôsob výroby pyridín-substituovaných derivátov pyrazolpyridínu všeobecného vzorca I, vyznačujúci sa tým, že sa nechá reagovať zlúčenina vzorca II (Π)

A) zo zlúčeninou vzorca III (in) pričom R¹ má vyššie uvedený význam, prípadne v organickom rozpúšťadle za zahriatia na zlúčeninu všeobecného vzorca I, alebo

B) zo zlúčeninou všeobecného vzorca IV pričom R¹ má vyššie uvedený význam, v organickom rozpúšťadle po zahriatí na zlúčeninu všeobecného vzorca V

PP 0591-2003

32127/H

F

R pričom R¹ má vyššie uvedený význam a potom s halogenačným činidlom na zlúčeninu všeobecného vzorca VI (Vi) pričom R¹ má vyššie uvedený význam a

R² znamená atóm halogénu, a nakoniec s vodným roztokom amoniaku po zahriatí a pri zvýšenom tlaku.

5. Zlúčenina všeobecného vzorca I na ošetrenie chorôb.

6. Liečivo obsahujúce aspoň jednu zlúčeninu všeobecného vzorca I podľa nároku 1.

7. Spôsob výroby liečiv,

PP 0591-2 003

32127/H vyznačujúci sa tým, že sa zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1 prevedie, prípadne s obvyklými pomocnými látkami a prísadami na vhodnú aplikačnú formu.

8. Liečivo obsahujúce zlúčeninu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 v kombinácii s organickými nitrátmi alebo NO-donátormi.

9. Liečivo obsahujúce zlúčeninu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 v kombinácii zo zlúčeninami, ktoré inhibujú odbúravanie cyklických guanozínmonofosfátov (cGMP).

10. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv na ošetrenie chorôb srdcového obehového systému.

11. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv na ošetrenie hypertónie.

12. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv na ošetrenie tromboembolických ochorení a ischémií.

13. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv na ošetrenie sexuálnych dysfunkcii.

14. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv s antiinflamatorickými vlastnosťami.

15. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiv na ošetrenie ochorení centrálneho nervového systému.

16. Použitie podľa niektorého z nárokov 8 až 13, pričom sa zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1 použije v kombinácii s organickými

PP 0591-2003

32127/H nitrátmi alebo NO-donátormi alebo v kombinácii zo zlúčeninami, ktoré inhibujú odbúravanie cyklických guanozínmonofosfátov (cGMP).