SA08290423B1 - مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية c-Met واستخداماتها - Google Patents

مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية c-Met واستخداماتها Download PDF

Info

Publication number
SA08290423B1
SA08290423B1 SA08290423A SA08290423A SA08290423B1 SA 08290423 B1 SA08290423 B1 SA 08290423B1 SA 08290423 A SA08290423 A SA 08290423A SA 08290423 A SA08290423 A SA 08290423A SA 08290423 B1 SA08290423 B1 SA 08290423B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
antibody
cmet
met
human
arrangement
Prior art date
Application number
SA08290423A
Other languages
English (en)
Inventor
Goetsch Liliane
Original Assignee
Pf Medicament
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38871713&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SA08290423(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pf Medicament filed Critical Pf Medicament
Publication of SA08290423B1 publication Critical patent/SA08290423B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بعملية (process) لانتقاء مضادات أجسام مضاد c-Met (anti c-Met antibodies) قادرة على تثبيط كل من تنشيط c-Met معتمد على مركب ترابطي (ligand) أو غير معتمد عليه. بتحديد أكثر، تعتمد العملية المذكورة على تثبيط c-Met dimerization. في جانب آخر، يتعلق الاختراع الحالي بمضادات الأجسام (antibodies) تلك وبتركيبات (compositions) تشتمل على مضادات الأجسام (antibodies) هذه لتحضير دواء (medicament) لمعالجة سرطان. تدخل أيضا في الاختراع مرحلة التشخيص والمجموعات.

Description

Y
‏واستخداماتها‎ c-Met ‏مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية‎
Novel antibodies inhibiting ‏أعسى‎ dimerization, and uses thereof ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏جديدة قادرة على الارتباط‎ antibodies ‏يتعلق الاختراع الحالي بمضادات أجسام‎ ‏الآدمي و/أو قادرة على تثبيط بصفة خاصة نشاط‎ c-Met ‏بصفة خاصة مع مستقبل‎ ‏المستقبل المذكور؛ بصفة خاصة مضادات أجسام أحادية النسخ من مصدر‎ tyrosine kinase nucleic acid y amino acid ‏هجين ومكتسب السمة الآدمية؛ بالإضافة إلى ترتيبات‎ (eld © ‏فإن مضادات الأجسام المطابقة للاختراع قادرة‎ «ST ‏المشفرة لمضادات الأجسام هذه. بتحديد‎ ‏يشمل الاختراع بالمثتل استخدام مضادات الأجسام هذه‎ c-Met dimerization ‏على تثبيط‎ ‏كدواء لمعالجة وقائية و/أو علاجية لسرطانات أو أي مرض مرتبط بالإظهار الزائد للمستقبل‎ »- ‏مرتبطة بإظهار زائد من‎ ile ‏المذكور بالإضافة إلى في عمليات أو مجموعات لتشخيص‎ ‏يشمل الاختراع أخيرا منتجات و/أو تركيبات تشمل مضادات الأجسام المذكورة في اتحاد‎ Met ٠ ‏مع مضادات أجسام أخرى و/أو مركبات كيميائية موجهة ضد عوامل نمو أخرى مشتملة في‎ toxins ‏تطور أو إنتشار ورم و/أو مركبات و/أو عوامل مضادة للسرطان أو عوامل متحدة مع‎ ‏واستخدامها لمنع و/أو معالجة سرطانات معينة.‎ (RTK) (receptor tyrosine kinase) ‏مستقبل‎ tyrosine kinase ‏إن العوامل التي تستهدف‎ ‏أوضحت‎ gefitinib 5 imatinib <bevacizumab «cetuximab «trastuzumab ‏مقل متقبطات‎ Vo ‏أهمية استهداف هذا الصنف من البروتين لمعالجة سرطانات منتقاة.‎
RON ‏هو العضو بدائي الطراز من العائلة الفرعية 87145 التي تتضمن أيضا‎ ce-Met ‏إن‎ ‏أخرى وهي المستقبل الوحيد‎ RTK ‏عن عائلات‎ Lily ‏مختلفة‎ c-Met RTK ‏إن عائلة‎ .SEA ‏المسمى‎ (HGF) (hepatocyte growth factor) ‏المعروف عالي الانجذاب لعامل نمو خلية كبد‎ :(SF) (scater factor) ‏أيضا عامل مبعثر‎ ٠ [D.P. Bottaro et al., Science 1991, 251: 802-804; L. Naldini et al., Eur. Mol. Biol.
Org. J. 1991, 10:2867-2878].
r ‏بدرجة كبيرة في تشكيلة من الأنسجة وإن إظهارهما مقيد طبيعيا بخلايا‎ HGF 5 o-Met ‏يظهر‎ ‏على الترتيب:‎ (mesenchymal) ‏ومزنشيمي‎ (epithelial) ‏من مصدر ظهاري‎ [M.F. Di Renzo et al., Oncogene 1991, 6:1997-2003: E. Sonnenberg et al., J. Cell.
Biol. 1993, 123:223-235]. ‏إن كلاهما مطلوبان للنمو الثديي الطبيعي ولهما أهمية بصفة خاصة في حركة الخلية؛ التباين‎ 0 (three-dimensional tubular structures) ‏الشكلي؛ وتنظيم البناءات الأنيبيبية ثلاثية الأبعاد‎ ‏ض بالإضافة إلى النمو والتكوين الوعائي:‎ [F. Baldt et al., Nature 1995, 376:768-771; © Schmidt et al., Nature. 1995:373:699- 702; Tsarfaty et al., Science 1994, 263:98-101]. ‏اتضح أنه هام للنمو الثديي؛ استبقاء‎ HGF 5 c-Met ‏برغم أن التنظيم المتحكم فيه من أجل‎ 0٠ ‏واصلاح نسيج:‎ [Nagayama T, Nagayama M, Kohara S, Kamiguchi H, Shibuya M, Katoh Y, Itoh J,
Shinohara Y., Brain Res. 2004, 5;999(2):155-66; Tahara Y, Ido A, Yamamoto S,
Miyata Y, Uto H, Hori T, Hayashi K, Tsubouchi H., J Pharmacol Exp Ther. 2003, 307(1):146-51], ٠ ‏فإن الخلل في تنظيمهما يدخل في تطور السرطانات.‎ ‏غير الملائم هي واحدة من التغيرات الدائمة‎ c-Met ‏إن الإشارات الشاذة التي يسببها تنشيط‎ ‏الملحوظة في سرطانات آدمية وتلعب دورا حاسما في تكوين ورم وانتشاره:‎ [Birchmeier et al., Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2003, 1 5-925; L. Trusolino and
Comoglio P. M., Nat Rev. Cancer. 2002, 2(4):289-300]. ٠ ‏غير الملائم بآليات معتمدة وغير معتمدة على مركب ترابطي؛‎ c-Met ‏تنشيط‎ Lay ‏يمكن أن‎ ‏أو من‎ SLAY) ‏و/أو تنشيط شاذ الإفراز أو تلقائي‎ c-Met ‏والتي تتضمن الإظهار الزائد من‎ ‏خلال الزيادة في طفرة وظيفة:‎ [J.G. Christensen, Burrows J. and Salgia R., Cancer Latters. 2005, 226:1-26]. ‏في وجود أو غياب المركب الترابطي؛‎ «c-Met ‏مستقبل‎ oligomerization ‏على أية حال فإن‎ Ye ‏ومواد خاضعة‎ ATP ‏باتجاه‎ kinase ‏مطلوبة لتنظيم انجذاب الارتباط وحركيات الارتباط لأجل‎ :0705106 ‏تحتوي على‎ peptide
YYo)
¢ [Hays JL, Watowich SJ, Biochemistry, 2004 Aug 17, 43:10570-8]. ‏يحشد المواد المستجيبة للإشارات إلى مكانها متعدد البتر الواقع في مجال‎ c-Met ‏إن تنشيط‎ ‏مما يؤدي إلى تنشيط مسارات إشارات رئيسية عديدة؛ تتضمن‎ coytoplasm ‏سيطرة‎ ‎:Stat3 ‏و‎ Src «PI3K ¢(Ras-MAPK [Gao CF, Vande Woude GF, Cell Res. 2005, 15(1):49-51; Furge KA, Zhang YW, ©
Vande Woude GF, Oncogene. 2000, 19(49):5582-9]. ‏إن هذه المسارات ضرورية لانقسام خلية ورم؛ توغلها والتكوين الوعائي ولتجنب الموت المبرمج:‎ [Furge KA, Zhang YW, Vande Woude GF, Oncogene, 1 9(49):5582-9; Gu H,
Neel BG, Trends Cell Biol. 2003 Mar, 13(3):122-30; Fan S, Ma YX, Wang JA,
Yuan RQ, Meng Q, Cao Y, Laterra JJ, Goldberg ID, Rosen EM, Oncogene. 2000 ٠
Apr 27, 19(18):2212-23]. ‏مقارنة مع 18716 آخر هو تفاعلها المقرر مع‎ c-Met ‏إضافة لذلك؛ فإن جانب مزيد لإشارات‎ ‏مثل:‎ kinase ‏مركبات التصاق بورية وأقران ارتباط غير‎ 0.684 integrins [Trusolino L, Bertotti A, Comoglio PM, Cell. 2001, 107:643-54], 0104476 [Van der Voort R, Taher TE, Wielenga VJ, Spaargaren M, Prevo R, Smit ٠
L, David G, Hartmann G, Gherardi E, Pals ST, J Biol Chem. 1999, 274(10):6499- 506], Plexin B1 or semaphorins [Giordano S, Corso S, Conrotto P, Artigiani S,
Gilestro G, Barberis D, Tamagnone L, Comoglio PM, Nat Cell Biol. 2002, 4(9):720- 4; Conrotto P, Valdembri D, Corso S, Serini G, Tamagnone L, Comoglio PM,
Bussolino F, Giordano S, Blood. 2005, 105(11):4321-9; Conrotto P, Corso S, Y.
Gamberini S, Comoglio PM, Giordano S, Oncogene. 2004, 23:5131 -7[ ‏وذلك قد يزيد إضافيا من تعقيد تنظيم وظيفة خلية بواسطة هذا المستقبل. في النهاية توضح‎ erlotinib sf gefitinib ‏بيانات حديثة أن :1848-» يمكن أن يكون مشتملا في مقاومة ورم لأجل‎ ‏قد تكون له أهمية خاصة:‎ c-Met EGFR ‏مما يقترح أن اتحاد مركب يستهدف كلا من‎ [Engelman JA at al., Science, 2007, 316:1 039-43]. Yo
YYo)
° في السنوات القليلة الماضية؛ تم تطوير سياسات كثيرة مختلفة لإضعاف إشارات ‎c-Met‏ في خطوط خلية سرطان. تتضمن هذه السياسات: ‎)١(‏ مضادات أجسام معادلة مضادة ‎c-Met‏ أو ‎:HGF/SF‏ ‎Oskarsson M, Zhao P, Kort EJ, Fisher RJ, Wang LM, Vande Woude‏ إلا ‎[Cao B, Su‏
GF, Proc Natl Acad Sci U 5 A. 2001, 98(13):7443-8; Martens T, Schmidt NO, ©
Eckerich C, Fillbrandt R, Merchant M, Schwall ‏ب‎ Westphal M, Lamszus K, Clin
Cancer Res. 2006, 12(20):6144-52] re-Met ‏لمنع ارتباط مركب ترابطي مع‎ HGF/SF ‏المضاد‎ NK4 ‏أو استخدام‎ [Kuba K, Matsumoto K, Date K, Shimura H, Tanaka M, Nakamura T, Cancer Res., 2000, 60:6737-43], ٠ ‘kinase ‏تخمد نشاط‎ c-Met ‏صغيرة من أجل‎ ATP ‏مثبطات مكان ارتباط‎ (Y ) [Christensen JG, Schreck R, Burrows J, Kuruganti P, Chan E, Le P, Chen J, Wang
X, Ruslim L, Blake R, Lipson KE, Ramphal J, Do 5, Cui JJ, Cherrington JM,
Mendel DB, Cancer Res. 2003, 63:7345-55], ‎polypeptide (vy ٠‏ مجال سيطرة 5112 معالج هندسيا يعوق الوصول إلى المكان متعدد البتر ‎RNAI‏ أو ‎ribozyme‏ يقلل إظهار مستقبل أو مركب ترابطي. تظهر غالبية هذه الأساليب تثبيط انتقائي للمستقبل ‎c-Met‏ يؤدي إلى تثبيط ورم وتبين أن ‎c-Met‏ قد يكون له أهمية للتدخل العلاجي في السرطان. ‏من الجزيئات المتولدة من أجل استهداف ‎c-Met‏ يكون البعض منها مضادات أجسام. ‏7 إن الموصوف بدرجة أكثر كثافة هو مضاد الجسم 505 المضاد ‎e-Met‏ المتولد بواسطة ‎Genentech‏ [1/096/38557] والذي يتصرف كمعضد قوي عندما يضاف بمفرده في نماذج كثيرة وكمضاد عند الاستخدام كجزء ط88. إن الشكل المعالج هندسيا أحادي التكافؤ من مضاد الجسم هذا الموصوف مثل 505 أحادي الذراع ‎(OASDS) (one armed SDS)‏ والناتج كبروتين مخلق في ‎E.Coli‏ هو أيضا موضوع طلب براءة اختراع ‎[WO2006/015371]‏ بواسطة ‎Genentech Yo‏ على أية ‎Ja‏ فإن هذا الجزيء الذي لا يمكن اعتباره كمضاد جسم بسبب تثنية الندبة الخاصة به؛ يظهر أيضا طفرات قد تكون مولدة للمناعة في الآدميين. بالنسبة للنشاط فإن هذا الجزيء الغير ‎glycosylated‏ ليس له وظائف مستجيبة وأخيرا؛ لا توجد بيانات واضحة
+ توضح أن ‎OASDS‏ يثبط ‎c-Met dimerization‏ علاوة على ذلك؛ عند الاختبار في نموذج في الجسم؛ وهو خط خلية ورم دبقي ‎(Jol‏ يظهر ‎c-Met‏ لكن لا يظهر ‎MRNA‏ وبروتين ‎HGF‏ وينمو بصورة مستقلة عن المركب الترابطي» فإن مضاد ‎c-Met‏ أحادي الذراع لا يكون له تأثير هام على نمو ورم 055 مما يقترح أن ‎OASDS‏ يؤثر © أساسيا بواسطة إخماد ارتباط ‎HGF‏ وأنه غير قادر على استهداف أورام منشطة بصورة مستقلة عن ‎‘HGF‏ ‎[Martens T. et al, Clin.
Cancer Res., 2006, 12(20):6144-6152].‏ يوصف مضاد جسم آخر يستهدف ‎c-Met‏ بواسطة ‎Pfizer‏ كمضاد جسم يؤثر "بدرجة سائدة ‎Jia‏ مضاد ‎c-Met‏ وفي بعض الحالات كمعضد ‎[WO 2005/016382]'c-Met‏ لا توجد ‎٠‏ بيانات تبين أي تأثير لمضادات أجسام ‎Pfizer‏ على ‎c-Met dimerization‏ موصوفة في هذا الطلب. إن إحدى الجوانب المبتكرة للاختراع الحالي هي توليد مضادات أجسام فأرية أحادية النسخ بدون نشاط معضد متأصل وتثبط ‎c-Met dimerization‏ بالإضافة إلى استهداف أورام معتمذة على مركب ترابطي؛ فإن هذا الأسلوب سوف يفسد ‎Lia‏ تنشيطات ‎c-Met‏ الغير معتمدة على ‎٠‏ مركب ترابطي بسبب إظهاره الزائد أو طفرات مجالات السيطرة ‎Jala‏ الخلايا ‎(Ally‏ تظل معتمدة على ‎oligomerization‏ من أجل إصدار الإشارات . إن جانب آخر لنشاط مضادات الأجسام تلك هو الإعاقة التجسيمية لتفاعل ‎c-Met‏ مع شركاؤه والتي تؤدي إلى خلل في ‎cathy‏ ‎Met‏ سوف تكون مضادات الأجسام هذه مكتسبة السمة الآدمية ومعالجة هندسيا بدرجة مفضلة؛ لكن بدون تحديد؛ مثل 1801 آدمي للحصول على وظائف مستجيبة ‎ADCC Jie‏ ‎Ye‏ و00 بالإضافة إلى وظائف مرتبطة بالإخماد الخاص لمستقبل ‎-o-Met‏ ‏الوصف العام للاختراع بصورة مثيرة للدهشة؛ وللمرة الأولى؛ فإن المخترعون بعمليات لتوليد مضاد جسم قادر على الارتباط مع ‎c-Met‏ وقادر أيضا على تثبيط ‎c-Met dimerization‏ إذا كان ‎Lids‏ إنه في المجال السابق؛ من المقترح في بعض الأحيان أنه إذا كان مضاد جسم لديه القدرة على تثبيط ‎c-Met dimerization Yo‏ مع شركاؤه هو مضاد جسم هام؛ فإنه لم يتم الإعلان أبدا عن» أو اقتراح بوضوح,؛ مضاد جسم قادر على القيام بذلك. علاوة على ذلك؛ بالنسبة لخصوصية مضاد الجسم؛ لا يوجد دليل بالمرة على النجاح في توليد مضاد الجسم النشط ذلك.
لا في جانب أول؛ فإن موضوع الاختراع الحالي هو عملية لتوليد وانتقاء مضادات أجسام مطابقة للاختراع. بتحديد أكثر؛ يتعلق الاختراع بعملية لانتقاء مضاد جسم ‎c-Met alias‏ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته الوظيفية؛ قادر على تثبيط كل من التنشيط المعتمد على وغير المعتمد على مركب © ترابطي لمستقبل ‎co-Met‏ تشمل العملية المذكورة الخطوات التالية: ‎)١(‏ فحص مضادات الأجسام المتولدة وانتقاء مضادات أجسام قادرة على الارتباط بصفة خاصة مع ]6-1/16؛ (7) تقييم في المعمل لمضادات الأجسام المنتقاة من الخطوة ‎)١(‏ وانتقاء مضادات أجسام قادرة على تثبيط ‎75٠0‏ على ‎JS)‏ يفضل على الأقل ‎de‏ 2970 أو 2860 لانقسام خلية ‎٠‏ ورمية لنوع ورم واحد على الأقل؛ وعندئذ (©) اختبار مضادات الأجسام المنتقاة من الخطوة (7) وانتقاء مضادات أجسام قادرة على ‎.c-Met dimerization Jay‏ حسب التوضيح من قبل؛ فإن تثبيط ‎c-Met dimerization‏ هي جانب رئيسي للاختراع لأن مضادات الأجسام تلك سوف تمثل أهمية حقيقية لمجموعات أكبر من المرضى. من الممكن ‎Vo‏ ليس فقط ‎dallas‏ سرطان 0-1462 نشط معتمد على مركب ترابطي؛ كما هو الحال حتى وجود الاختراع الحالي؛ لكن أيضا سرطان ‎c-Met‏ نشط غير معتمد على مركب ترابطي مع مضادات أجسام متولدة بعملية من الاختراع الحالي. يمكن القيام بتوليد مضاد الجسم بأي طريقة يعرفها الشخص ‎ald)‏ في الفن؛ على سبيل ‎JU)‏ اندماج خلية ورم نخاعي مع خلايا طحال من فئران محصنة أو أنواع أخرى متوائمة ‎To‏ مع خلايا الورم التخاعي المنتقاة: ‎[Kohler & Milstein, 1975, Nature, 256:495-497].‏ يمكن أن تتضمن الحيوانات المحصنة فئران طفرية مع أماكن ‎globulin‏ مناعي آدمي والتي تنتج عندئذ مباشرة مضادات أجسام آدمية. يمكن أن يتكون تطبيق آخر ممكن من استخدام تقنيات إظهار بلعم لفحص مكتبات. ‎Yo‏ يمكن القيام بخطوة الفحص ‎)١(‏ بأي طريقة أو عملية معروفة للشخص الماهر في الفن. كأمثلة غير مقيدة؛ يمكن ذكر ‎(BlAcore «ELISA‏ كيمياء نسيجية مناعية؛ تحليل ‎FACS‏ ‏وطرق فحص وظيفية. تتكون عملية مفضلة من الفحص بواسطة ‎ELISA‏ على بروتين مخلق
A
‏على خط خلية ورمية على الأقل للتأكد من أن مضادات‎ FACS ‏وعندئذ بتحليل‎ c-Met ‏الأجسام الناتجة سوف تكون قادرة أيضا على إدراك المستقبل الأصلي على خلايا ورم. سيتم‎ ‏وصف هذه العملية بدقة أكثر في الأمثلة التالية.‎ ‏تقليديا بطريقة أو عملية معروفة مثل‎ (Y) ‏بنفس الطريقة؛ يمكن أيضا القيام بالخطوة‎ ‏إلخ. يمكن أن‎ (ATP ‏تقييم‎ (MTT ‏آخرء‎ DNA ‏أو أي عامل صباغة‎ 3H-thymidine ‏استخدام‎ ٠ -BXPC3 ‏يتكون نموذج خلية ورم مفضل في الاختراع الحالي من نموذج‎ .c-Met homodimerization ‏لابد من إدراك بصورة مفضلة‎ c-Met dimerization Jays (¥) ‏للانتقاء من عملية الاختراع؛ فإن الخطوة‎ (TF) ‏في تطبيق مفضل للخطوة‎ ‏على خلايا تظهر كلا من‎ BRET ‏المذكورة تتكون من تقييم مضادات أجسام بتحليل‎ ‏وانتقاء مضادات أجسام قادرة على تثبيط على الأقل 770 يفضل‎ c-Met-RLuc/c-Met-YFP ٠
BRET ‏)ل .)ل 6 إل .هال 0 والأكثر تفضيلا 7560 لإشارة‎ ‏البروتين:‎ dimerization iad ‏هي تقنية معروفة بأنها‎ BRET ‏إن تقنية‎ ٍِ [Angers et al., PNAS, 2000, 97:3684-89]. ‏للعملية؛ معروفة جيدا للشخص الماهر في‎ (V) ‏المستخدمة في الخطوة‎ (BRET ‏إن تقنية‎ (Bioluminescence BRET ‏الفن وسيتم شرحها بالتفصيل في الأمثلة التالية. بتحديد أكثر ¢ فإن‎ Ne ‏هي انتقال طاقة غير مشعة يحدث بين معطي حيوي مضيء‎ Resonance Energy Transfer) (Green Fluorescent GFP ‏وقابل استشعاعي» وهو طفرة‎ (Renilla Luciferase (Rluc))
EYFP ‏في الحالة الحاضرة يستخدم‎ (Yellow fluorescent protein) YFP ‏أو‎ Protein) ‏تعتمد كفاءة الانتقال على الاتجاه والمسافة بين‎ (Enhanced Yellow Fluorescent Protein) ‏المعطى والقابل. عندئذ؛ يمكن أن يحدث انتقال الطاقة فقط إذا كان الجزيئان متقاربين بشدة‎ Ye ‏تانومتر). تستخدم هذه الخاصية لتوليد اختبارات تفاعل بروتين- بروتين. في الواقع؛‎ ٠١-١( ‏لدرإسة التفاع ل بين شريكين» ينتدمج الأول جينيامع‎ ‏والثاني مع الطفرة الصفراء ©01. تظهر بروتينات الاندماج بصفة عامة؛‎ Renilla Luciferase ‏لكن ليس إجبارياء في خلايا ثديية. في وجود مادته الخاضعة المخترقة لغشاء‎ ‏نانومتر من‎ ٠١ ‏أقرب من‎ GFP ‏ضوءا أزرقا . إذا كانت طفرة‎ Rluc ‏يبعث‎ ¢(coelenterazine) Yo
BRET ‏يمكن حدوث انتقال طاقة ويمكن تحديد إشارة صفراء إضافية. تقاس إشارة‎ Rluc ‏كالنسبة بين الضوء المنبعث من القابل والضوء المنبعث من المعطي. لذلك سوف تزداد إشارة‎ q
Rluc ‏عند اقتراب بروتينين الاندماج من بعضها أو إذا كان هناك تغير بنائي يجعل‎ 27 ‏أقرب لبعضهما.‎ GFP ‏وطفرة‎ ‎AL ‏موجود في تطبيق مفضلء فإن أي طريقة معروفة للشخص‎ BRET ‏إذا كان تحليل‎ ‏بدون تحديد» يمكن ذكر التقنيات‎ c-Met dimerization ‏في الفن يمكن استخدامها لقياس‎
HTRF «(Fluorescence Resonance Energy Transfer) FRET ‏ه التالية:‎ (Fluorescence Lifetime Imaging FLIM ¢«(Homogenous Time resolved Fluorescence) ‏(فحص مجهري طيفي عابر العلاقة استشعاعي وحيد طول‎ SW-FCCS ‏أو‎ Microscopy) -((single wavelength fluorescence cross-correlation spectroscopy) ‏الموجة‎ ‏مناعي مشترك‎ cu wii ‏مثل‎ opal ‏يمكن أيضا استخدام تقنيات تقليدية‎ ‏ربط متقاطع كيميائي‎ (Alpha screen) Alpha ‏فحص‎ ((Co-immunoprecipitation) | ٠ ‏تحليل كروماتوجرافي‎ ((Double-Hybrid) ‏تهجين = مزدوج‎ «(Chemical cross-linking) .Far western blot sl ELISA «(Affinity Chromatography) ‏بالانجذاب‎ ‏في جانب ثان؛ يكون موضوع الاختراع هو مضاد جسم معزول؛ أو واحد من أجزائه أو‎ ‏مشتقاته الوظيفية؛ ناتج بواسطة العملية المذكورة. إن مضاد الجسم المذكور أو واحد من أجزائه‎ ‏الآدمي و؛ عند الضرورة؛‎ c-Met ‏أو مشتقاته المذكورة؛ قادر على الارتباط بصفة خاصة مع‎ Ve ‏و/أو‎ HGF ‏بصورة مفضلة علاوة على ذلك قادر على تثبيط الارتباط الطبيعي لمركبه الترابطي‎ ‏المذكور؛ ويكون مضاد‎ c-Met ‏لمستقبل‎ tyrosine kinase ‏قادر على تثبيط بصفة خاصة نشاط‎ ‏سوف تكون‎ HAT ‏بتحديد‎ .01162 dimerization ‏الجسم المذكور قادرا أيضا على تثبيط‎ ‏المعتمد على والغير معتمد‎ c-Met ‏مضادات الأجسام المذكورة قادرة على تثبيط كلا من تنشيط‎ ‏على مركب ترابطي.‎ Ye ‏سيتم‎ "(functional fragments and derivatives) ‏إن التعبيرات "أجزاء ومشتقات وظيفية‎ ‏تحديدها بالتفصيل لاحقا في المواصفة الحالية.‎ ‏لابد هنا من إدراك أن الاختراع لا يتعلق بمضادات الأجسام في شكل طبيعي؛ بمعنى أنها‎ ‏لا تكون في بيئتها الطبيعية لكنها تصبح قادرة على أن تكون معزولة أو تنتج بالتنقية من‎ ‏مصادر طبيعية؛ أو تنتج أيضا بتخليق جيني؛ أو بتكوين كيميائي؛ ويمكن أن تحتوي عندئذ‎ © ‏غير طبيعية كما سيتم الوصف لاحقا.‎ amino acids ‏على‎
Ya ‏أو واحد من أجزائه أو‎ an ‏للاختراع؛ يتم تحديد مضاد‎ HAT ‏بتحديد أكثرء طبقا لجانب‎ ‏واحدة‎ CDR ‏مشتقاته الوظيفية؛ يتميز مضاد الجسم المذكور بكونه يشمل منطقة تحديد مكملة‎ ‏إلى‎ ٠: ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏ترتيب‎ Jed CDRs ‏على الأقل يتم اختيارها من‎
SY ‏و2 إلى‎ ١١ ‏واحدة لها تماثل ترتيب‎ CDR ‏أو أجزاء أو مشتقات؛ بها على الأقل‎ cana ‏إن أي مضاد‎ ° ‏بعد اصطفاف أمثل مع‎ JAA 795 290 0285 ‏على الأقل؛ يفضل تماثل ترتيب‎ 0٠ ‏و06 إلى 11 لابد من إدراكها بأنها متكافئة و؛‎ ١١7 ‏إلى‎ ١ ‏الترتيبات بتعريفات الترتيب أرقام:‎ ‏نتيجة لذلك» فهي جزء من الاختراع.‎ ‏يقصد بها الإشارة إلى المناطق مفرطة التغير للسلاسل‎ «CDR(s) ‏أو‎ CDR ‏إن مناطق‎
IMGT ‏المناعية حسب التحديد بواسطة‎ globulins ‏الثقيلة والخفيفة لأجل‎ ٠ ‏لمقارنة مجالات السيطرة المتغيرة مهما كان مستقبل‎ IMGT ‏لقد تم تحديد الترقيم المميز‎ ‏مولد المضاد؛ نوع السلسلة؛ أو الأنواع:‎ [Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The
Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P., Pommié, C., Ruiz, M.,
Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, Dev. Vo
Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]. ‏المحمية دائما لها نفس المكان» على‎ amino acids ‏تكون‎ (IMGT ‏في الترقيم المميز‎ «(CONSERVED-TRP) tryptophan 41 «(1st-CYS) cysteine 23 ‏سبيل المثال‎ ‏أو‎ phenylalanine )200-0175( cysteine 104 <hydrophobic amino acid 9 ‏تحديد قياسي لمناطق‎ IMGT ‏يوفر الترقيم المميز‎ .(J-PHE or J-TRP) tryptophan 118 ٠٠ 13 FR3GIMGT «00 ‏إلى‎ 19 :FR2-IMGT «Y1 ‏إلى‎ ١ ‏الأماكن‎ :FRILIMGT) ‏الإطار‎ ‎VV :CDRI-IMGT ‏وللمناطق المحددة للتكملة:‎ (YYA ‏إلى‎ ١١١ ‏و84-11407:‎ ٠5 ‏إلى‎ ‏لأن الثغرات تمثل‎ YY ‏إلى‎ ٠١١ :CDR3-IMGT 5 15 ‏إلى‎ 0١ :CDR2-IMGT 748 ‏إلى‎ ‎ie bl ‏أماكن غير مشغولة؛ فإن أطوال 001-1840717 (المبينة بين الأقواس والتي تفصلها‎ ‏في أمثلة بيانية ثنائية الأبعاد‎ IMGT ‏تصبح معلومة حاسمة. يستخدم الترقيم المميز‎ ([8.8.13] Yeo ‏يرمز إليها مثل:‎
١١
IMGT Colliers de Perles [Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857- 883 (2002) / Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)], ‏وفي بناءات ثلاثية الأبعاد في:‎
IMGT/3Dstructure-DB [Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and
MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]. ٠ ‏أو‎ CDR ‏سلسلة خفيفة. يستخدم المصطلح‎ CDRs ‏سلسلة 418 وثلاثة‎ CDRs ‏توجد ثلاثة‎ ‏واحدة من هذه المناطق المتغيرة أو عديد من؛ أو حتى‎ all ‏هنا للإشارة إلى؛ طبقا‎ CDRs ‏المسئولة عن الارتباط‎ amino acid ‏كل؛ هذه المناطق التي تحتوي على غالبية متخلفات‎ ‏الذي يدركه.‎ epitope ‏بانجذاب مضاد الجسم لمولد المضاد أو‎ ‏بين اثنين من ترتيبات‎ "(percentage of identity) ‏إن "النسبة المئوية للتماثل‎ Ve ‏بالنسبة للاختراع الحالي؛ يقصد به الإشارة إلى النسبة المثوية‎ amino acid ‏أو‎ nucleic acid ‏بين الترتيبين المراد مقارنتهماء‎ ABs amino acid ‏أو لأجل متخلفات‎ nucleotides ‏لأجل‎ ‏احصائية فققط‎ Agia) ‏إن هذه النسبة‎ of Jal ‏والتي تنتج بعد أفضل اصطفاف (اصطفاف‎ ‏وتكون الاختلافات بين الترتيبين موزعة عشوائيا وعبر طولهما الكلي. إن مقارنات الترتيبات بين‎ ‏تجرى تقليديا بمقارنة هذه الترتيبات بعد‎ amino acid ‏أو‎ nucleic acid ‏اثنين من ترتيبات‎ Vo (comparison ‏مقارنة‎ Mia) ‏اصطفافها بطريقة مثلى» ويمكن إجراء المقارنة المذكورة بالجزء أو‎ ‏يمكن إجراء الاصطفاف الأمتل من أجل الترتيبات للمقارنة؛ بالإضافة إلى المقارنة‎ window) ‏اليدوية بواسطة حساب التشابه الموضعي من:‎
Smith and Waterman (1981) ‏م]‎ App. Math. 2:482], ‏ص بواسطة حساب التشابه الموضعي من:‎
Neddleman and Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48: 443], ‏بواسطة طريقة بحث التشابه من:‎
Pearson and Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444], ‏بواسطة برنامج حاسوب يستخدم هذه الحسابات من:‎ (GAP, 3551111, FASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software ~~ Yo
Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI),
BLAST P ‏أو‎ BLASTN ‏أو أيضا بواسطة برنامج مقارنة‎
YYo)
YY
‏بمقارنة‎ amino acid ‏أو‎ nucleic acid ‏تتحدد النسبة المئوية للتمائتل بين اثنين من ترتيبات‎ amino acid ‏أو‎ nucleic acid ‏وحيث يشمل ترتيب‎ tie ‏هذين الترتيبين المصطفين بطريقة‎ ‏المرجعي من أجل اصطفاف أمثل بين هذين‎ all ‏المراد مقارنته إضافات أو إزالات بالنسبة‎ ‏الترتيبين. تحسب النسبة المئوية للتمائل بتحديد عدد الأماكن المتماثئلة التي يكون فيها‎ ‏متماثلا بين الترتيبين» بقسمة هذا العدد من الأماكن‎ amino acid ‏أو متخلف‎ nucleotide ٠ ‏للحصول على‎ ٠٠١ ‏المتمائلة على العدد الكلي للأماكن في منفذ المقارنة وبضرب الناتج في‎ ‏النسبة المئوية للتمائل بين هذين الترتيبين.‎ "BLAST 2 ‏'ترتيب‎ «BLAST ‏استخدام برنامج‎ (Say ‏على سبيل المثال؛‎ (Tatusova et al., “Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”, FEMS Microbiol Lett. 174:247-250) ٠ ‏وتكون المعايير‎ chttp:/www.ncbinlm.nih.gov/ gorf/bl2.htm] ‏المتوافر على الموقع‎ ‏المستخدمة هي الناتجة بواسطة عدم الوجود (تحديدا للمعايير "جزاء ثغرة مفتوحة‎ ‏وتكون‎ ¢Y (extension gap penalty) ‏و"جزاء ثغرة امتداد‎ <0 "(Open gap penalty) ‏التي يقترحها البرنامج)»؛ يحسب‎ "BLOSUM 62" ‏المصفوفة المختارة؛ مثلاء هي مصفوفة‎ ‏البرنامج مباشرة النسبة المئوية للتمائل بين الترتيبين المراد مقارنتهما.‎ ٠
Fao fav ‏يفضل دمن‎ (JN ‏على‎ ZA ‏المماثل بنسبة‎ amino acid ‏بالنسبة لترتيب‎ ‏مرجعي» تفضل تلك التي لهاء بالنسبة للترتيب المرجعي؛ تعديلات‎ amino acid ‏و7958 لترتيب‎ ‏واحد على الأقل؛ يتم شذب أو إطالة.‎ amino acid ‏إضافة أو استبدال‎ «aia ‏خاصة؛ تحديدا‎ ‏متتالية أو غير متتالية؛ تفضل الاستبدالات‎ amino acid(s) ‏من‎ SST ‏استبدال واحد أو‎ Aa ‏في‎ ‏إن‎ -'(equivalent) ‏'مكافئة‎ amino acids ‏المستبدلة بواسطة‎ amino acids ‏التي تستبدل فيها‎ ‏هنا إلى الإشارة إلى أي‎ Gag (equivalent amino acids) ‏مكافئة‎ amino acids” ‏التعبير‎ ‏على أية‎ «ys ‏لبناء القاعدة‎ amino acids ‏قادر على الاستبدال مع واحد من‎ amino acid ‏حال؛ التعديل أساسيا للأنشطة الحيوية لمضادات الأجسام المقابلة وكما سيتم التحديد لاحقاء‎ ‏المكافئة إما بالاعتماد على تشابهها‎ amino acids ‏بصفة خاصة في الأمثلة. يمكن تحديد هذه‎ ‏التي تستبدلهاء أو على نتائج تجارب مقارنة للنشاط الحيوي بين‎ amino acids ‏البنائي مع‎ Yo ‏مضادات الأجسام المختلفة التي يمكن إجرائها.‎
YY
‏على سبيل المثال» يمكن ذكر إمكانيات استبدال يمكن إجرائها بدون أن تؤدي إلى تعديل‎ ‏كبير للنتشاط الحيوي لمضاد الجسم المعدل المقابل.‎ ‏التالي إمكانيات استبدال مقنعة مع حماية النشاط الحيوي‎ ١ ‏يعطي جدول‎ cade ‏غير‎ JUS ‏لمضاد الجسم المعدل. إن هذه الاستبدالات العكسية ممكنة أيضاء بالطبع؛ بنفس الشرط.‎ ١ ‏جدول‎ ° ‏المتخلف الأصلي الاستبدال (الاستبدالات)‎
Cys (C)
Gln (Q)
Glu (G)
Gly (G) 116 0 ‏ليست في بيئتها الطبيعية لكنها قابلة أن تنعزل أو تنتج بواسطة التنقية من مصادر طبيعية؛ أو‎ ‏تنتج أيضا بواسطة التخليق الجيني؛ أو بواسطة التكوين الكيميائي؛ كما أنها يمكن أن تحتوي‎ ‏بعد.‎ Lad ‏غير طبيعية حيث يتم وصف ذلك‎ amino acids ‏على‎ ‏سوف يتحدد مضاد الجسم بواسطة ترتيب سلسلته الثقيلة. بتحديد أكثر؛‎ of ‏طبقا لطريقة‎ ٠١ ‏يتميز مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ بأنه يشتمل على‎ y¢ ‏مشتملة على ترتيبات‎ CDRs ‏واحدة على الأقل مختارة من‎ CDR ‏سلسلة ثقيلة مشتملة على‎
OA ‏إلى 9 و١© إلى‎ ١ ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏تكون الترتيبات المذكورة كما يلي:‎
GYIFTAYT :١ ‏تعريف الترتيب رقم‎
IKPNNGLA :Y ‏تعريف الترتيب رقم‎ 8
ARSEITTEFDY :7 ‏تعريف الترتيب رقم‎
GYSFTDYT :£ ‏تعريف الترتيب رقم‎
INPYNGGT :0 ‏تعريف الترتيب رقم‎
AREEITKDFDF :1 ‏تعريف الترتيب رقم‎
GYTFTDYN :V ‏تعريف الترتيب رقم‎ ve
INPNNGGT :A ‏تعريف الترتيب رقم‎ ْ ARGRYVGYYYAMDY :4 ‏تعريف الترتيب رقم‎
GYTFTSYW :87 ‏تعريف الترتيب رقم‎
INPTTGST :0V ‏تعريف الترتيب رقم‎
AIGGYGSWFAY :0A ‏تعريف الترتيب رقم‎ Vo ‏لسلسلة ثقيلة عشوائيا بالترتيبات السابقة؛ مثلا تعريفات الترتيب أرقام‎ CDRs ‏يمكن اختيار‎
OA ‏إلى 4 و2 إلى‎ ١ ‏طبقا لجانب مفضل؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه‎ «CDR-H1 ‏واحدة على الأقل مختارة من‎ CDR ‏الوظيفية؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏حيث:‎ «CDR-H3 3 08-112 ٠ 71 SV 4 ٠ ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏تشتمل 001-111 على ترتيب‎ -
OV SIA ‏ف‎ oY ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏تشتمل 008-112 على ترتيب‎ - ‏و‎ ‎OA ‏أو‎ 4 2 Ll ‏بتعريفات الترتيب‎ amino acid ‏تشتمل 008-113 على ترتيب‎ - ‏طبقا لتجسيد أول للجانب المذكور؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎ Yo
CDR-H2 ¢«CDR-HI1 ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏بتعريف الترتيب رقم ٠؛ تشتمل‎ amino acid ‏حيث تشتمل 008-311 على ترتيب‎ «CDR-H3 5
YYo)
١ ‏على ترتيب‎ CDR-H3 ‏بتعريف الترتيب رقم ؟ وتشتمل‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-H2 .7 ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏بتحديد أكثرء يشتمل مضاد الجسم المذكورء أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ ‏بتعريف الترتيب‎ amino acid ‏لهذا التجسيد الأول على سلسلة ثقيلة لترتيب مشتمل على ترتيب‎ .١8 ‏رقم‎ oe ‏ض‎ YA ‏تعريف الترتيب رقم‎
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYIFTAY TMHWVRQSLGESLDWIGGIK
PNNGLANYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMDLRSLTSEDSAVYYCARSEITT
EFDYWGQGTALTVSS
‏طبقا لتجسيد ثان للجانب المذكورء يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎ ٠١
CDR-H2 «CDR-H1 ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏تشتمل‎ of ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏حيث تشتمل 008-111 على ترتيب‎ «CDR-H3 5 ‏على ترتيب‎ CDR-H3 ‏بتعريف الترتيب رقم © وتشتمل‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-H2 1 ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏سوف يشتمل مضاد الجسم بصورة مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ vo ‏بتعريف‎ amino acid ‏للتجسيد الثاني المذكور على سلسلة ثقيلة لترتيب مشتمل على ترتيب‎
NA ‏الترتيب رقم‎ :١9 ‏تعريف الترتيب رقم‎
EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYTLNWVKQSHGKTLEWIGLI
NPYNGGTTYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCAREEIT ٠
KDFDFWGQGTTLTVSS
‏طبقا لتجسيد ثالث للجانب المذكورء يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎
CDR-H2 «CDR-HI ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏بتعريف الترتيب رقم 7 تشتمل‎ amino acid ‏و08-113؛ حيث تشتمل 001-111 على ترتيب‎ ‏وتشتمل 001-113 على ترتيب‎ A ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏على ترتيب‎ 008-1122 Yeo .5 ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid
YYo)
سوف يشتمل مضاد الجسم بصورة مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا للتجسيد الثالث المذكور على سلسلة ‎ALE‏ لترتيب مشتمل على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎Yo‏ ‏تعريف الترتيب رقم ‎:٠١‏ ‎EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGMSLEWIGDI ٠‏ ‎NPNNGGTIFNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARGRYV‏ ‎GYYYAMDYWGQGTSVTVSS‏ ‏طبقا لتجسيد رابع للجانب المذكور؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه ‎dada ll‏ على سلسلة ثقيلة مشتملة على ‎CDR-H2 «CDR-HI‏ ‎٠‏ و008-113»؛ حيث تشتمل ‎CDR-HI‏ على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم 0 تشتمل ‎CDR-H2‏ على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎oY‏ وتشتمل ‎CDR-H3‏ على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎OA‏ ‏سوف يشتمل مضاد الجسم بصورة مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا للتجسيد الرابع المذكور على سلسلة ثقيلة لترتيب مشتمل على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف ‎ve‏ الترتيب رقم ‎SY‏ ‏تعريف الترتيب رقم 17: ‎QVQLQQSGAELAKPGASVKMSCKASGYTFTSY WMNWVKQRPGQGLEWIG‏ ‎YINPTTGSTDYNQKLKDKATLTADKSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAIGG‏ ‎YGSWFAYWGQGTLVTVSA‏ ‏7 في طريقة ثانية؛ سوف يحدد الآن مضاد الجسم بترتيب سلسلته الخفيفة. بتحديد أكثرء طبقا لجانب ثان خاص من الاختراع؛ يتميز مضاد الجسم؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ ‎aly‏ يشتمل على سلسلة خفيفة مشتملة على ‎CDR‏ واحدة على الأقل مختارة من ‎CDRs‏ مشتملة على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريفات الترتيب أرقام ‎٠١‏ إلى ‎١١7‏ و95 إلى ‎SY‏ ‏تكون الترتيبات المذكورة كما يلي: ‎Yo‏ تعريف الترتيب رقم ‎ESVDSYANSF :٠١‏ تعريف الترتيب رقم ‎RAS :1١١‏ تعريف الترتيب رقم ‎QQSKEDPLT :\Y‏ ‎YYo)‏
لا تعريف الترتيب رقم ‎ESIDTYGNSF :1١‏ تعريف الترتيب رقم ¢ ‎QQSNEDPFT :١‏ تعريف الترتيب رقم 110 ‎ENIYSN‏ ‏تعريف الترتيب رقم 13: ‎AAT‏ ‏° تعريف الترتيب رقم ‎QHFWGPPYT VV‏ تعريف ‎casi fill‏ رقم 09: ‎SSVSSTY‏ ‏تعريف الترتيب رقم +21 ‎TTS‏ ‏تعريف الترتيب رقم 711: ‎HQWSSYPFT‏ ‏يمكن اختيار ‎CDRs‏ لسلسلة خفيفة عشوائيا بالترتيبات السابقة؛ ‎Mie‏ تعريفات الترتيب أرقام ‎٠١ ٠‏ إلى ‎١١7‏ و4 إلى ‎SY‏ ‏طبقا لجانب مفضل؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه ‎dads)‏ على سلسلة خفيفة مشتملة على ‎CDR‏ واحدة على الأقل مختارة من ‎(CDR-L1‏ ‎«CDR-L3 5 CDR-L2‏ حيث: - تشتمل ‎CDR-L1‏ على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريفات الترتيب أرقام ‎١9 OY ٠١‏ أو ‎yo‏ 04 — تشتمل 008-12 على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريفات الترتيب أرقام ‎١6 ٠١‏ أو ‎Ue‏ ‏و ‏- تشتمل 008-13 على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريفات الترتيب أرقام ‎١١7 OE OY‏ أو 11 ‎Ye‏ طبقا لتجسيد ‎Jf‏ للجانب الآخر المذكور؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية» على سلسلة خفيفة مشتملة على ‎CDR-L2 «CDR-LI‏ ‎«CDR-L3‏ حيث تشتمل 008-111 على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ١٠؛‏ تشتمل ‎CDR-L2‏ على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎١١‏ وتشتمل ‎CDR-L3‏ على ترثيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎AY‏ ‎Yo‏ بتحديد ‎ST‏ يشتمل مضاد الجسم المذكور؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا لهذا التجسيد الأول على سلسلة خفيفة لترتيب مشتمل على ترتيب ‎amino acid‏ بتعريف الترتيب رقم ‎XY‏ ‎YYo)‏
YA
‏7؟:‎ ١ ‏تعريف الترتيب رقم‎
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYANSFMHWYQQKPGQPPKLLI
YRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSKEDPLTFGSG
TKLEMK
‏يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎ «pea all ‏طبقا لتجسيد ثان للجانب الآخر‎ °
CDR-L2 «CDR-L1 ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ على سلسلة خفيفة مشتملة على‎ ‏تشتمل‎ VY ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏حيث تشتمل 001-11 على ترتيب‎ «CDR-L3 ‏على ترتيب‎ CDR-L3 ‏وتشتمل‎ ١١ ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-L2
VE ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏سوف يشتمل مضاد الجسم بصورة مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ ٠١ ‏بتعريف‎ amino acid ‏للتجسيد الثاني المذكور على سلسلة خفيفة لترتيب مشتمل على ترتيب‎
YY ‏الترتيب رقم‎
YY ‏تعريف الترتيب رقم‎
GIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRVSESIDTYGNSFIHWYQQKPGQPPKLLIY
RASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDSATYYCQQSNEDPFTFGSGT ٠
KLEMK
‏طبقا لتجسيد ثالث للجانب الآخر المذكور؛ يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎ 008-12 «CDR-L1 ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ على سلسلة خفيفة مشتملة على‎ ‏تشتمل‎ Vo ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-LI ‏حيث تشتمل‎ «CDR-L3 ‏على ترتيب‎ CDR-L3 ‏وتشتمل‎ ١١ ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-L2 +
NY ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏سوف يشتمل مضاد الجسم بصورةٍ مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ ‏بتعريف‎ amino acid ‏للتجسيد الثالث المذكور على سلسلة خفيفة لترتيب مشتمل على ترتيب‎ .7 ‏الترتيب رقم‎ ‏تعريف الترتيب رقم ؟7:‎ Yo
Yvo)
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYAAT
NLVDGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYCQHFWGPPYTFGGGTKL
EIK
‏طبقا لتجسيد رابع للجانب الآخر المذكور» يشتمل مضاد الجسم من الاختراع؛ أو‎
CDR-L2 «CDR-L1 ‏على سلسلة خفيفة مشتملة على‎ diag ‏واحد من مشتقاته أو أجزائه‎ © ‏بتعريف الترتيب رقم 09( تشتمل‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-L1 ‏حيث تشتمل‎ «CDR-L3 ‏وتشتمل 001-13 على ترتيب‎ ٠١ ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏على ترتيب‎ CDR-L2 . ١ ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ‏سوف يشتمل مضاد الجسم بصورة مفضلة؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ ‏بتعريف‎ amino acid ‏للتجسيد الثالث المذكور على سلسلة خفيفة لترتيب مشتمل على ترتيب‎ ٠
SAY ‏الترتيب رقم‎
PIV ‏تعريف الترتيب رقم‎
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSTYLYWYQQKPGSSPKLWIYTTSILASG
VPARFSGSGSGTSYSLTISSMETEDAASYFCHQWSSYPFTFGSGTKLDIK
‏سوف يتحدد مضاد الجسم من الاختراع بواسطة كل من ترتيب سلسلته‎ AG ‏طبقا لطريقة‎ yo ‏الخفيفة وسلسلته الثقيلة. يتميز مضاد الجسم من الاختراع؛ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه‎ ‏بتعريفات الترتيب‎ amino acid ‏الوظيفية؛ بأنه يشتمل على سلسلة ثقيلة مشتملة على ترتيب‎ ‏بتعريفات الترتيب‎ amino acid ‏أو 17 وسلسلة خفيفة مشتملة على ترتيب‎ 7١ ٠9 OA LG
SY ‏أو‎ 77 77 7١ ‏أرقام‎ ‏بتحديد أكثرء يشتمل مضاد جسم مفضلء أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا‎ Ye
CDR-H2 «CDR-HI ‏للاختراع؛ يسمى 224011؛ على سلسلة تقيلة مشتملة على‎ ‏؟ و على‎ ١٠ ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏و008-113 مشتملة على ترتيب‎ ‏و 0018-13 مشتملة على ترتيب‎ 008-12 «CDR-L1 ‏الترتيب؛ وسلسلة خفيفة مشتملة على‎ ‏على الترتيب.‎ ١١و‎ ١١ ٠١ ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏مشتملة على ترتيب‎ ALE ‏في جانب آخرء يشتمل مضاد الجسم 2240611 على سلسلة‎ Yo ‏بتعريف‎ amino acid ‏وسلسلة خفيفة مشتملة على ترتيب‎ YA ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid
XY ‏الترتيب رقم‎
YYo)
AE
‏أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛‎ AT ‏يشتمل مضاد جسم مفضل‎ ‏مشتملة‎ CDR-H3 5 CDR-H2 «CDR-HI ‏يسمى 227111؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏و1 على الترتيب؛ وسلسلة خفيفة‎ © of ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏على ترتيب‎ ‏بتعريفات‎ amino acid ‏و 008-13 مشتملة على ترتيب‎ 001-12 «CDR-L1 ‏مشتملة على‎ ‏على الترتيب.‎ ١و‎ ١١ OY ‏الترتيب أرقام‎ ‏يشتمل مضاد الجسم 227111 على سلسلة ثقيلة مشتملة على ترتيب‎ «pal ‏في جانب‎ ‏بتعريف‎ amino acid ‏وسلسلة خفيفة مشتملة على ترثيب‎ ١9 ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid
XY ‏الترتيب رقم‎ ‏أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ يسمى‎ (lay HAT ‏يشتمل مضاد جسم مفضل‎ ‏مشتملة على‎ CDR-H3 5 CDR-H2 «CDR-HI ‏22304؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ٠ ‏و9 على الترتيب؛ وسلسلة خفيفة مشتملة‎ 8 CY ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‏بتعريفات الترتيب‎ amino acid ‏و 008-13 مشتملة على ترتيب‎ CDR-L2 «CDR-L1 ‏على‎ ‏على الترتيب.‎ ١7و‎ ١6 ve ‏أرقام‎ ‏يشتمل مضاد الجسم 22304 على سلسلة ثقيلة مشتملة على ترتيب‎ pal ‏في جانب‎ ‏بتعريف‎ amino acid ‏وسلسلة خفيفة مشتملة على ترتيب‎ ٠١ ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid ٠
XY ‏رقم‎ Cuil ‏يسمى‎ aida ll ‏أيضاء أو واحد من مشتقاته أو أجزائه‎ HAT ‏يشتمل مضاد جسم مفضل‎ ‏مشتملة على ترتيب‎ CDR-H3 5 CDR-H2 «CDR-HI ‏111؛ على سلسلة ثقيلة مشتملة على‎ ‏على الترتيب؛ وسلسلة خفيفة مشتملة على‎ 0A 5 ov 07 ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏بتعريفات الترتيب أرقام‎ amino acid ‏مشتملة على ترتيب‎ CDR-L3 ‏و‎ CDR-L2 «CDR-L1 ٠ ‏على الترتيب.‎ 1١و‎ ١ ‏4؛‎ ‏في جانب آخرء يشتمل مضاد الجسم 1181 على سلسلة ثقيلة مشتملة على ترتيب‎ ‏بتعريف‎ amino acid ‏وسلسلة خفيفة مشتملة على ترتيب‎ TY ‏بتعريف الترتيب رقم‎ amino acid
AY ‏الترتيب رقم‎ ‏طبقا لجانب آخرء يتعلق الاختراع بورم هجين فأري قادر على إفراز مضادات الجسم‎ Yo ‏بالتحديد ورم هجين من أصل فأري مثل ذلك المودع في:‎ (Mall ‏أحادية النسخ طبقا للاختراع‎
YYo)
‎the Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM, National‏ ‎Collection of Microorganism Cultures) (Institut Pasteur, Paris, France).‏ تتميز مضادات الأجسام أحادية النسخ طبقا ‎ep Hal‏ أو واحد من مشتقاته أو أجزائه الوظيفية؛ ‎ol‏ مضادات الأجسام المذكورة يتم إفرازها بواسطة ورم هجين مودع في ‎CNCM‏ ‏© عند 7007/3/14 تحت أرقام 13724 ‎Lads) CNCM‏ إلى 1181)» 13731 (طبقا إلى 1 ) 1-3732 (طبقا إلى 227111) وعند ‎٠097/7/6‏ تحت الرقم 1-3786 (طبقا إلى 223©4). يتكون هذا الورم الهجين من ورم هجين فأري ناتج عن اندماج خلوي ‎LAY‏ طحال فأرية محصنة بواسطة خط خلية ورم نخاعي ‎Agld)‏ 20م5). يقوم جدول ‎SEY‏ بإعادة تنظيم العناصر في مجموعات تخص مضادات الأجسام ‎٠‏ المفضلة.
YY
‏جدول ؟‎ ‏ا‎ 11810 0000000000 22304 00 7 22701 0 32046١1 7 1-4 1-6 1-2 1-373] ‏ترتيب ترتيب ترتيب ترتيب ترتيب ترتيب ترتيب ترتيب‎ nucleotide ‏بروتين‎ nucleotide ‏بروتين‎ nucleotide ‏بروتين‎ nucleotide ‏بروتين‎ ‎To ov ١ A YA 0 Yo y CDRH2 1 oA YY 9 Yq 1 1 ‏م‎ CDR-H3 ‏فل‎ +17 2 7 £Y V4 3 YAH ‏سلسلة‎ ‎TA Te v4 V1 Ys ١ ve vy CDR-L2 14 1) 2 VV rv Ve Yo yy ~~ CDR-L3
Vy Ty 1 vy ¢o YY ¢ ¢ Y) L ‏سلسلة‎
من جدول ‎oF‏ يظهر بوضوح أن 008-12 لمضادات الأجسام 227111 و224611 متشابهة. يدعم هذا المثال بوضوح عناصر حماية الطلب الحالي التي تغطي مضادات الأجسام المشتملة على ‎CDR‏ واحدة على الأقل مختارة عشوائيا من خلال ترتيبات ‎CDR‏ موصوفة. طبقا لتطبيق ‎(Junie‏ يتعلق الاختراع بمضادات أجسام أحادية النسخ. © إن المصطلح ‎alias‏ جسم أحادي النسخ ‎"(monoclonal antibody)‏ أو المستخدم طبقا لمعناه العادي يشير إلى مضاد جسم ناتج من مجموعة مضادات أجسام متماثلة جوهرياء أي؛ أن مضادات الأجسام المنفردة المشتملة على المجموعة تكون متماثلة باستثناء طفرات ممكنة طبيعية الوجود قد تكون موجودة بكميات ثانوية. بطريقة أخرىء يتكون مضاد جسم أحادي النسخ من مضاد جسم متماثل ناتج من انقسام نسخة ‎LIA‏ واحدة ‎WIA Sle)‏ ورم هجين؛ ‎٠‏ خلايا عائلة سوية النواة مستقبلة حامل الجين من العائل مع ‎DNA‏ يشفر مضاد الجسم المتمائل؛ خلايا عائلة بدائية النواة متحولة مع ‎DNA‏ يشفر مضاد الجسم المتماثئل؛ إلخ)؛ ويتميز عامة بسلاسل ‎ALE‏ من نوع ونوع فرعي واحد؛ وسلاسل خفيفة من نوع واحد. إن مضادات الأجسام أحادية النسخ خاصة للغاية؛ مضادة لمولد مضاد واحد. إضافة لذلك؛ على النقيض من مستحضرات مضادات الأجسام عديدة النسخ التي تتضمن نموذجيا مضادات ‎Yo‏ أجسام مختلفة مضادة لأماكن تحديد مختلفة؛ أو ‎epitope‏ فإن كل مضاد جسم أحادي النسخ موجه ضد مكان تحديد واحد على مولد المضاد. في الوصف الحالي؛ فإن المصطلحات ‎cpolypeptides‏ ترتيبات 00170601106 ترتيبات ‎peptides camino acid‏ وبروتينات مرتبطة مع مركبات مضاد جسم أو مع ترتيبها تكون قابلة للتبادل. ‎Ye‏ طبقا لجانب خاص ‎(Jilly‏ يتعلق الاختراع الحالي بمضاد جسم هجينء أو واحد من أجزائه الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛ يتميز بأن مضاد الجسم المذكور يشمل علاوة على ذلك مناطق ثابتة سلسلة خفيفة وسلسلة ثقيلة مشتقة من مضاد جسم من أنواع مخالفة ‎«lal‏ بصفة خاصة إنسان؛ وبطريقة مفضلة بأن المناطق الثابتة السلسلة الخفيفة والسلسلة الثقيلة المشتقة من مضاد جسم آدمي هي على الترتيب المنطقة ‎kappa‏ و ‎.gamma-4 | gamma-2 «gamma-1‏ ‎Yo‏ في الطلب الحالي؛ يفضل 1801 للحصول على وظائف مستجيبة؛ وأكثر تفضيلا ‎ADCC‏ ‎.CDC‏
Y¢ ‏ربط‎ JU) ‏سيدرك الصانع الماهر أن الوظائف المستجيبة تتضمن؛ على سبيل‎ ‏(000)؛‎ (complement dependent cytotoxicity) ‏سمية خلوية معتمدة على مكمل‎ ¢Clq ‏ربط مستقبل ع7؛ سمية خلوية من خلال خلية معتمدة على مضاد جسم‎ ‏مستوى‎ addy ‏(000م)؛ بلعمة؛‎ (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) (BCR ¢B 4a ‏مستقبل‎ lie) ‏تنظيم مستقبلات سطح خلية‎ © ‏إن مضادات الأجسام المطابقة للاختراع الحالي» هي بصورة مفضلة مضادات أجسام‎ ‏أحادية النسخ خاصة؛ بصفة خاصة من مصدر فأري؛ هجين أو مكتسب السمة الآدمية؛ يمكن‎ ‏الحصول عليها طبقا للطرق القياسية المعروفة جيدا للشخص الماهر في الفن.‎ ‏بصفة عامة؛ لتحضير مضادات أجسام أحادية النسخ أو أجزائها أو مشتقاتها الوظيفية؛‎ ‏يمكن الإشارة إلى التقنيات الموصوفة بصفة خاصة في كتيب:‎ a) ‏بصفة خاصة من مصدر‎ ٠ “Antibodies” (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp. 726, 1988) : ‏أو تقنيات تحضير الأورام الهجينة الموصوفة في:‎
Kohler and Milstein (Nature, 256:495-497, 1975). ‏يمكن الحصول على مضادات الأجسام أحادية النسخ المطابقة للاختراع؛ على سبيل‎ Vo ‏الذي‎ epitope ‏أو واحد من أجزائه يحتوي على‎ c-Met ‏من خلية حيوان محصنة ضد‎ JE ‏يدركه بصفة خاصة مضادات الأجسام أحادية النسخ المذكورة طبقا للاختراع. يمكن بصفة‎ ‏المذكورء أو واحد من أجزائه المذكورة؛ طبقا للطرق العاملة المعتادة؛‎ c-Met ‏إنتاج‎ dala ‏أو‎ c-Met ‏المشفر‎ cDNA ‏موجود في ترتيب‎ nucleic acid ‏بتخليق جيني بالبدء مع ترتيب‎ -c-Met ‏من‎ peptide ‏داخلة في ترتيب‎ amino acids ‏بالبدء من ترتيب‎ peptide ‏بتكوين‎ | ٠ ‏على‎ JU ‏يمكن تتقية مضادات الأجسام أحادية النسخ المطابقة للاختراع؛ على سبيل‎ epitope ‏أو واحد من أجزائه يحتوي على‎ c-Met ‏عمود انجذاب يتم عليه مسبقا تسكين‎ ‏تدركه بصفة خاصة مضادات الأجسام أحادية النسخ المذكورة طبقا للاختراع. بتحديد أكثر‎
A ‏يمكن تنقية مضادات الأجسام أحادية النسخ المذكورة بتحليل كروماتوجرافي على بروتين‎ ‏و/أو ©؛ يليه أو لا يليه تحليل كروماتوجرافي باستبدال 108 يهدف إلى إزالة ملوثات البروتين‎ vo ‏بذاته يليه أو لا يليه تحليل كروماتوجرافي مستثني‎ (LPS; DNA ‏المتخلفة بالإضافة إلى‎ ‏أو مواد أخرى‎ dimers ‏لإزالة التجمعات المحتملة بسبب وجود‎ Sepharose™ ‏للمقاس على هلام‎
Yo ‏متعددة الوحدة البنائية. بطريقة مفضلة أكثر أيضاء يمكن استخدام كل هذه التقنيات في نفس‎ ‏الوقت أو بصورة متتالية.‎ ‏إن مضادات الأجسام الهجينة أو المكتسبة السمة الآدمية متضمنة بالمثتل في مضادات‎ ‏الأجسام المطابقة للاختراع الحالي.‎
° يقصد بمضاد جسم هجين؛ الإشارة إلى مضاد جسم يحتوي على منطقة طبيعية متغيرة (سلسلة خفيفة وسلسلة ‎(ALE‏ مشتقة من مضاد جسم من نوع محدد في اتحاد مع المناطق ثابتة السلسلة الخفيفة والسلسلة الثقيلة لمضاد جسم من نوع مغاير للنوع المحدد المذكور ‎Ol lie)‏ ‎(Ja‏ أرتب؛ ‎(QS‏ بقرة؛ دجاجة؛ إلخ).
يمكن تحضير مضادات الأجسام أو أجزائها من النوع الهجين طبقا للاختراع باستخدام ‎٠‏ تقنيات التخليق الجيني. على سبيل المثال؛ يمكن إنتاج مضاد الجسم الهجين بنسخ ‎DNA‏ ‏مخلق يحتوي على محث وترتيب يشفر المنطقة المتغيرة لمضاد جسم أحادي النسخ غير آدمي؛ بصفة خاصة فأري؛ مضاد جسم أحادي النسخ طبقا للاختراع وترتيب يشفر المنطقة الثابتة لمضاد جسم آدمي. سوف يكون مضاد الجسم الهجين من الاختراع الذي يشفره ذلك الجين المخلق؛ على سبيل ‎(JU‏ هجين فأر- آدمي؛ تتحدد خصوصية مضاد الجسم هذا بواسطة ‎٠‏ المنطقة المتغيرة المشتقة من ‎DNA‏ الفأري ويتحدد نوعه المماثل بالمنطقة الثابتة المشتقة من ‎DNA‏ الآدمي. بالنسبة لطرق تحضير مضادات أجسام هجينة؛ يمكن؛ على سبيل ‎JU‏ ‏الإشارة إلى الوثائق: ‎Verhoeyn et al. (BioEssays, 8:74, 1988), Morrison et al. (Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA‏ ‎ou le brevet US 4,816,567.‏ )1984 ,82:6851-6855
9 يقصد بمضاد جسم مكتسب السمة الآدمية؛ الإشارة إلى مضاد جسم يحتوي على مناطق ‎CDR‏ مشتقة من مضاد جسم من مصدر غير ‎(eal‏ وتكون الأجزاء الأخرى لجزيء مضاد الجسم مشتقة من واحد (أو أكثر) من مضادات أجسام آدمية. علاوة على ذلك؛ فإن بعض متخلفات قطع الهيكل الأساسي (المسماة ‎(FR‏ يمكن تعديلها لحماية انجذاب الارتباط: ‎Science, 239:1534-1536,‏ ملق ‎(Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986; Verhoeyen et‏
1988; Riechmann et al., Nature, 332:323-327, 1988). Yo ‏يمكن تحضير مضادات الأجسام المكتسبة السمة الآدمية طبقا للاختراع أو أجزائها بتقنيات‎ ‏معروفة للشخص الماهر في الفن؛ مثل؛ تلك الموصوفة في الوثائق:‎
‎Singer et al., J.
Immun. 150:2844-2857, 1992; Mountain et al., Biotechnol.
Genet.‏ ‎Eng.
Rev., 10: 1-142, 1992; or Bebbington et al., Bio/Technology, 10:169-175,‏ .1992 هناك طرق أخرى لإكساب السمة الآدمية يعرفها الشخص الماهر في الفن؛ مثل؛ طريقة © 'تطعيم ‎"(CDR Grafting) CDR‏ الموصوفة بواسطة: ‎Protein Design Lab (PDL) in the patent applications EP 0 451261, EP 0 682 040, EP‏ ‎EP 0 566 647 or US 5,530,101, US 6,180,370, US 5,585,089 and US‏ ,09127 .5,693,761 يمكن أيضا ذكر طلبات براءة الاختراع التالية: ‎US 5,639,641; US 6,054,297; US 5,886,152 and US 5,877,293. ٠‏ يقصد ‎rad‏ وظيفي ‎"(functional fragment)‏ لمضاد جسم مطابق للاختراع» الإشارة بصفة خاصة إلى جزءِ مضاد جسم؛ مثل أجزاء ‎sc) scFv Fv‏ = سلسلة وحيدة) ‎«Fab‏ ‎scFv-Fe Fab’ F(ab’),‏ أو أجسام ثنائية؛ أو أي جزء يمكن زيادة نصف العمر له بتعديل ‎(las‏ مثل إضافة ‎poly(alkylene) glycol‏ مثل ‎(“PEGylation”) poly(ethylene) glycol‏ ‎a) ٠‏ أجزاء ‎pegylated‏ مقل ‎F(ab*),-PEG «Fab-PEG ¢scFv-PEG Fv-PEG‏ أو ‎“PEG”) (Fab’-PEG‏ لأجل ‎«(Poly(Ethylene) Glycol‏ أو بالدمج في جسم دهني؛ تتضمن الأجزاء المذكورة واحدة على الأقل من ‎CDRs‏ المميزة لترتيب تعريفات الترتيب أرقام ‎١‏ إلى ‎١١7‏ ‎on‏ إلى ‎1١‏ طبقا للاختراع؛ و؛ بصفة خاصة؛ بقدرتها على القيام بطريقة عامة بنشاط جزئي أيضا لمضاد الجسم المشتق منهاء ‎Jie‏ بصفة خاصة القدرة على الإدراك والارتباط مع ‎«c-Met‏ ‎٠‏ وء عند الضرورة؛ على تثبيط نشاط ‎«c-Met‏ ‏بصورة مفضلة؛ فإن الأجزاء الوظيفية المذكورة سوف تتكون من أو سوف تشمل ترتيب جزئي للسلسلة المتغيرة الثقيلة أو الخفيفة لمضاد الجسم المشتق منهاء ويكون الترتيب الجزئي المذكور ‎LAS‏ لاستبقاء نفس خصوصية الارتباط ‎Jie‏ مضاد الجسم المشتق منه وانجذاب ‎«lS‏ ‏يفضل أن يساوي على الأقل ١/١٠٠؛‏ بطريقة مفضلة أكثر ‎٠١/١‏ على الأقل؛ من ذلك لمضاد © الجسم المشتق منه؛ بالنسبة للمستقبل ‎c-Met‏ سوف يحتوي ذلك الجزء الوظيفي على 0 ‎amino acids‏ كحد أدنى, يفضل ‎YT‏ ى ىك نل آل ذل ‎amino Ver 300 (YO‏ 05 متتالية من ترتيب مضاد الجسم المشتق منه.
و بصورة مفضلة؛ أن تكون هذه الأجزاء الوظيفية عبارة عن أجزاء من نرع ‎«Fab «scFv «Fv‏ ‎scPv-Fe F(ab’) F(ab’),‏ أو أجسام ثنائية؛ لها عامة نفس خصوصية الارتباط ‎Jie‏ مضاد الجسم المشتق منها. في تجسيد مفضل أكثر للاختراع؛ تنتقى هذه الأجزاء من بين أجزاء ‎ASE‏ ‏التكافؤ ‎Jie‏ أجزاء ((7)85. طبقا للاختراع الحالي؛ يمكن الحصول على أجزاء مضاد جسم ‎٠‏ الاختراع بالبدء من مضادات أجسام حسب الوصف أعلاه بطرق ‎Jie‏ هضم بإنزيمات؛ ‎Jie‏ ‎pepsin‏ أو ‎papain‏ و/أو بفصل قناطر ‎disulfide‏ باختزال كيميائي. بطريقة ‎gal‏ يمكن الحصول على أجزاء مضاد الجسم الداخلة في الاختراع الحالي بتقنيات تخليق جيني معروفة جيدا بالمتل للشخص الماهر في الفن أو أيضا بتكوين ‎peptide‏ بواسطة؛ ‎Sie‏ أدوات ‎Galas‏ ‎peptide‏ أوتوماتيكيا مثل تلك المتوافرة بواسطة شركة ‎«Applied Biosystems‏ إلخ. ‎Ye‏ لابد من إدراك أن "جزءٍ ثنائي التكافؤ ‎(divalent fragment)‏ هو أي أجزاء مضاد جسم تشمل ذراعين و» بتحديد أكثر» أجزاء ‎Fab)‏ ‏بتحديد أكثر؛ يشمل الاختراع مضادات الأجسام؛ أو أجزائها الوظيفية؛ المطابقة للاختراع الحالي؛ خاصة مضادات الأجسام الهجينة أو المكتسبة السمة الآدمية؛ الناتجة بتخليق جيني أو بتكوين كيميائي. ‎Yo‏ إن 'مشتقات ‎"(derivatives)‏ مضاد جسم طبقا للاختراع» تعني بروتين رابط يشمل دعامة بروتين وواحدة على الأقل من ‎CDRs‏ منتقاة من مضاد الجسم الأصلي لاستبقاء قدرة الارتباط. إن هذه المركبات معروفة جيدا للشخص الماهر في الفن وسيتم وصفها بتفصيل أكثر في المواصفة التالية. بتحديد أكثر؛ يتميز مضاد ‎canal‏ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته الوظيفية؛ طبقا للاختراع ‎Yo‏ بأن المشتق المذكور يتكون من بروتين رابط يشمل دعامة مطعمة عليها ‎CDR‏ واحدة على الأقل لحماية خواص الإدراك الباراتوبية ‎(paratopic)‏ لمضاد الجسم الأصلي. يمكن تواجد واحد أو عديد من الترتيبات من 1 ترتيبات ‎CDR‏ الموصوفة في الاختراع على دعامة بروتين. في هذه الحالة؛ فإن دعامة البروتين تجدد الهيكل الأساسي للبروتين مع مضاعفة ملائمة لمنطقة (مناطق) ‎CDR‏ المطعمة؛ وذلك يسمح لها (أو لهن) باستبقاء خواص ‎ve‏ الإدراك الباراتوبية ‎(paratopic)‏ لمولد المضاد.
: YA يعلم الشخص الماهر في الفن كيفية انتقاء دعامة البروتين التي يمكن عليها تطعيم ‎CDR‏ ‏واحدة على الأقل تنتقى من مضاد الجسم ا لأصلي. بتحديد ‎«ist‏ من المعروف أنه؛ من أجل الانتقاء؛ لابد أن تظهر تلك الدعامة سمات عديدة كما يلي: ‎(Skerra A., J. Mol. Recogn., 13, 2000, 167-187):‏ ° = حماية جيدة لمجموعة الجينات؛ = بنية قوية مع تنسيق جزيئي ثلاثي الأبعاد معلوم جيدا (متل؛ رسم بللوري أو ‎(NMR‏ - مقاس صغيرء - عدم وجود أو وجود درجة ‎ALB‏ من التعديلات بعد الترجمة؛ — سهولة الإنتاج؛ الإظهار والتنقية. ‎٠١‏ قد تكون دعامة البروتين تلك؛ بدون تحديد؛ هي بناء ينتقى من المجموعة المتكونة من ‎fibronectin‏ ويفضل مجال سيطرة ‎fibronectin‏ العاشر من ‎lipocalin «(FNfn10) 111 gsi}‏ ‎«(Skerra A., J. Biotechnol., 2001, 74(4):257-75) anticalin‏ مشتق البروتين 7 من مجال السيطرة ‎B‏ لبروتين الكريات العنقودية ‎thioredoxin A «A‏ أو أي بروتين مجال سيطرة متكرر ‎Jie‏ 'تكرار أنكيرين ‎"(ankyrin repeat)‏ ‎(Kohl et al., PNAS, 2003, vol. 100, No. 4, 1700-1705), ٠ ‏'تكرار غني مع ليسين‎ "(armadillo repeat) sal oly) ‏'تكرار حيوان‎ (tetratricopeptide repeat) tetratricopeptide ‏أى "تكرار‎ "(leucin-rich repeat) ‏يمكن أيضا ذكر مشتق دعامة مع ‎toxins‏ (مثل» ‎toxins‏ عقرب» حشرة؛ نبات أو حيوان رخوي) أو متبطات بروتين ‎nitric oxyde synthase‏ خلية عصبية ‎.(PIN)‏ ‎Y.‏ كمثال غير مقيد لتلك البنيات ‎clung)‏ يمكن ذكر إدخال 001-111 (سلسلة ثقيلة) لمضاد جسم مضاد ‎«CD4‏ أي؛ مضاد الجسم ‎¢13B8.2‏ في واحد من اللوالب المكشوفة من ‎PIN‏ تظل خواص الارتباط للبروتين الرابط الناتج مشابهة لمضاد الجسم الأصلي: ‎(Bes et al., BBRC 343, 2006, 334-344). ‏على‎ lyzozyme VHH ‏لمضاد جسم مضاد‎ (AL ‏يمكن أيضا ذكر تطعيم 008-113 (سلسلة‎ .(Nicaise et al., 2004) neocarzinostatine ‏ليلب‎ Yo
YYo)
Yq ‏هي‎ cand ‏هامة لحمايتها؛ بدون‎ CDR ‏في حالة الاختراع الحالي؛ يمكن أن تكون‎ 227111 «sl ‏محمية في اثنين من مضادات أجسام محددة من الاختراع»‎ Le CDR-L2 ‏و224011.‎ ‏من‎ CDR(S) 6 ‏إلى‎ ١ ‏كما هو مذكور أعلاه؛ يمكن أن تشمل دعامة البروتين تلك من‎ ‏مضاد الجسم الأصلي. في تجسيد مفضل؛ بدون أي تحديد؛ سوف ينتقي الشخص الماهر في‎ © ‏المذكورة معروفة بأنها‎ LEN ‏وتكون السلسلة‎ ALE ‏واحد على الأقل من السلسلة‎ CDR ‏الفن‎ ‏الهامة سوف يتضح للماهر في الفن‎ CDR(S) ‏مشتركة في خصوصية مضاد الجسم. إن انتقاء‎ ‏بطريقة معروفة:‎ (BES et al., FEBS letters 508, 2001, 67-74). ‏كدليل؛ فإن هذه الأمثلة غير مقيدة ويمكن تضمن أي دعامة معروفة أخرى أو موصوفة في‎ ١ ‏المواصفة الحالية.‎ ‏معزول؛ يتميز باختياره من‎ nucleic acid ‏لجانب جديد؛ يتعلق الاختراع الحالي مع‎ Wik ‏التالية:‎ nucleic acids ‏لتشفير مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته‎ (RNA ‏أو‎ DNA nucleic acid ‏(أ)‎ ‏الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛‎ ٠ ‏منتقى من مجموعة الترتيبات المتكونة من:‎ DNA ‏يشتمل على ترتيب‎ nucleic acid ‏(لب)‎ ‏تعريف‎ (YO ‏تعريف الترتيب رقم‎ (VE ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم‎ nucleic ‏-ترتيب‎ ‎(YO ‏وتعريف الترتيب رقم‎ VE ‏تعريف الترتيب رقم‎ FY ‏وتعريف الترتيب رقم‎ YT ‏الترتيب رقم‎ ‏تعريف‎ YA ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم 7١7؛ تعريف الترتيب رقم‎ nucleic ‏ترتيب‎ -
VV ‏وتعريف الترتيب رقم‎ VE ‏تعريف الترتيب رقم‎ FT ‏وتعريف الترتيب رقم‎ YA ‏الترتيب رقم‎ Ye ‏تعريف‎ TY ‏تعريف الترتيب رقم‎ Fe ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم‎ nucleic ‏ترتيب‎ - ‏تعريف الترتيب رقم 4" وتعريف الترتيب رقم 0 ؛‎ TA ‏وتعريف الترتيب رقم‎ TY ‏الترتيب رقم‎ ‏و‎ ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم 14؛ تعريف الترتيب رقم 10 تعريف‎ nucleic ‏ترتيب‎ - 19 ‏وتعريف الترتيب رقم‎ TA ‏تعريف الترتيب رقم‎ TV ‏وتعريف الترتيب رقم‎ TT ‏الترتيب رقم‎ Yo ‏منتقى من مجموعة الترتيبات المتكونة من:‎ DNA ‏يشتمل على ترتيب‎ nucleic acid (=) ‏وتعريف الترتيب رقم 4 4؛‎ 4١ ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم‎ nucleic ‏ترتيب‎ -
To ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم 7؛ وتعريف الترتيب رقم 45 ؛‎ nucleic ‏ترتيب‎ - ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم £7 وتعريف الترتيب رقم 57؛ و‎ nucleic ‏ترتيب‎ -
VY ‏وتعريف الترتيب رقم‎ 7١ ‏يشتمل على تعريف الترتيب رقم‎ nucleic ‏ترتيب‎ - ‏المحددة في (ب) أو (ج)؛‎ nucleic acids ‏المقابلة من‎ RNA nucleic acids ‏(د)‎ ‏المحددة في )0( (ب) و(ج)؛ و‎ nucleic acids ‏المكملة من‎ nucleic acids (2) ° ‏على الأقل قادرة على التهجين تحت شروط صرامة‎ nucleotides YA ‏له‎ nucleic acid ‏(ى)‎ ‎.19 ‏و14 إلى‎ te ‏واحدة على الأقل بتعريف ترتيب أرقام ؛ ؟ إلى‎ CDRs ‏عالية مع‎ «oligonucleotide «polynucleotide ¢nucleic acid ‏أو‎ nucleic ‏ترتيب‎ «nucleic acid ‏إن‎ ‏وهي المصطلحات التي سيستمر استعمالها‎ nucleotide ‏ترتيب‎ «polynucleotide ‏ترتيب‎ ‏معدلة‎ nucleotides ‏بطريقة معتدلة في الاختراع الحالي؛ يقصد بها الإشارة إلى وصلة دقيقة ل‎ ٠ ‏تحتوي أو لا تحتوي على‎ nucleic acid ‏أو غير معدلة؛ تسمح بتحديد جزءٍ أو منطقة‎
DNA ‏مزدوج الشريط‎ DNA ‏طبيعية؛ وتكون قادرة على تطابق أيضا فقط‎ ye nucleotides ْ ‏المذكورة.‎ DNAs ‏فردي الشريط مثلما لمنتجات نسخ‎ ‏في بيئتها‎ nucleotide ‏لابد أيضا هناك من إدراك أن الاختراع الحالي لا يهتم بترتيبات‎ ‏الكروموسومية الطبيعية؛ بمعنى في الحالة الطبيعية. إنه يتعلق بترتيبات معزولة و/أو منقاة؛‎ V0 ‏بمعنى أنها تنتقى بصورة مباشرة أو غير مباشرة؛ على سبيل المثال بواسطة نسخه. بيئتها معدلة‎ ‏المعزولة الناتجة بتخليق‎ nucleic acids ‏جزئيا على الأقل. يقصد لذلك بالمثل الإشارة هنا إلى‎ ‏خلايا عائلة أو الناتجة بتكوين كيميائي.‎ Ole ‏جيني بواسطة؛‎ ‏إن التهجين تحت شروط صرامة عالية تدل على أن شروط درجة الحرارة وشروط الشدة‎ ‏مكمل. على‎ DNA ‏الأيونية يتم اختيارها بطريقة بحيث تسمح باستبقاء التهجين بين جزئين من‎ Ye ‏لخطوة تهجين لأغراض تحديد أجزاء‎ Alle ‏سبيل التوضيح» فإن شروط صرامة‎ ‏الموصوفة أعلاه هي التالية بدرجة مفيدة.‎ polynucleotide ‏تهجين أولي عند 7؟"مئوية‎ )١( ‏في خطوتين:‎ DNA-RNA ‏أو‎ DNA-DNA ‏يجرى تهجين‎ ‏جرامي؛ أس‎ ia le ٠١( phosphate ‏لمدة ؟ ساعات في مثبت أس هيدروجيني‎ + ‏جزيئي جرامي‎ 0,٠٠ NaCl ‏المقابل إلى‎ 1» SSC) 5x SSC ‏يحتوي على‎ (V,0 ‏هيدروجيني‎ © sodium dodecyl /V «formamide 78٠ ‏جزيئي جرامي)‎ 015 sodium citrate ‏محلول‎ ‎¢DNA ‏و ).7 حيوان منوي سالمون‎ dextran sulfate /.© ‏0ك‎ Denhardt’s «sulfate (SDS)
YYo)
نص ‎(Y)‏ تهجين فعلي لمدة ‎٠١‏ ساعة عند درجة حرارة تعتمد على مقاس المجس (أي؛ 47 "مئوية؛ لمجس مقاسه > ‎(nucleotides ٠٠١‏ ثم غسيل مرثين لمدة ‎Ve‏ دقيقة عند ١٠"مئوية‏ في ‎2X‏ ‎SDS 77 + SSC‏ غسيل مرة واحدة لمدة ‎٠١‏ دقيقة عند ١٠7"مئوية‏ في ‎Za) + 0.1» SSC‏ 85. تتم مرة الغسيل الأخيرة في ‎SDS 70,1 + 0.1 x SSC‏ لمدة ‎Fe‏ دقيقة عند ‎Asie‏ ‏© لمقاس مجس > ‎٠٠١‏ 8ع001016000. إن شروط التهجين عالية الصرامة الموصوفة أعلاه لأجل ‎polynucleotide‏ محدد المقاس يمكن تعديلها بواسطة الماهر في الفن لأجل ‎oligonucleotides‏ ‏الأكبر أو الأصغر مقاسات؛ طبقا لتعاليم: ‎Sambrook et al. (1989, Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd Ed.
Cold Spring‏ ‎Harbor).‏ ‎٠١‏ يتعلق الاختراع بالمثل بناقل يشمل ‎nucleic acid‏ مطابق للاختراع الحالي. يهدف الاختراع بصفة خاصة إلى نواقل نسخ و/أو إظهار تحتوي على ترتيب ‎nucleotide‏ ‏مطابق للاختراع. يفضل أن تحتوي النواقل المطابقة للاختراع على عناصر تسمح بإظهار و/أو إفراز ترتيبات 56 في خلية عائلة محددة. لابد أن يحتوي الناقل لذلك على محث؛ إشارات بداية ‎٠‏ ونهاية ترجمة؛ بالإضافة إلى مناطق ملائمة لتنظيم النسخ. لابد أن تكون لديه القدرة على البقاء بطريقة مستقرة في الخلية العائلة وقد تكون له اختياريا إشارات خاصة تحدد إفراز البروتين المترجم. يتم اختيار هذه العناصر المختلفة وجعلها في صورة مثلى بواسطة الشخص الماهر في الفن كوظيفة للخلية العائلة المستخدمة. عند هذا التأثير؛ يمكن إدخال ترتيبات ‎nucleotide‏ ‏المطابقة للاختراع في نواقل نسخ تلقائي في العائل المختارء أو قد تمثل نواقل تكاملية للعائل ‎٠‏ _ المختار. تحضر تلك النواقل بطرق يستخدمها حاليا الشخص الماهر في الفن؛ ويتم إدخال النسخ الناتجة في عائل ملائم بطرق قياسية؛ ‎Jie‏ استقبال دهني؛ تثقيب ‎«eS‏ صدمة حرارية؛ أو إن النواقل المطابقة للاختراع هي؛ ‎Sle‏ نواقل من مصدر بلازميدية أو فيروسية. إنها ‎Yo‏ مفيدة لتحويل خلايا عائلة من أجل نسخ أو إظهار ترتيبات ‎nucleotide‏ المطابقة للاختراع. يشمل الاختراع ‎JEL‏ الخلايا العائلة المتحولة بواسطة أو التي تشمل ناقل مطابق للاختراع.
يمكن اختيار الخلية العائلة من أنظمة بدائية النواة أو سوية النواة» على سبيل المثال خلايا بكتيرية لكن بالمثل خلايا خميرة أو خلايا حيوان؛ تحديدا خلايا ‎And‏ يمكن بالمثل استخدام خلايا حشرة أو خلايا نبات. يتعلق الاختراع بالمثل بحيوانات؛ وليس آدميين؛ تشتمل على الأقل على ‎WA‏ واحدة © متحولة طبقا للاختراع. طبقا لجانب ‎AT‏ فإن موضوع الاختراع هو عملية لإنتاج مضاد ‎cava‏ أو واحد من أجزائه الوظيفية طبقا للاختراع؛ تتميز بأنها تشمل المراحل التالية: (أ) زراعة في وسط وشروط مزرعة ملائمة لخلية عائلة مطابقة للاختراع؛ و (ب) استرجاع مضادات الأجسام المذكورة؛ أو واحد من أجزائها الوظيفية؛ الناتجة بتلك ‎٠‏ الطريقة بداية من وسط المزرعة أو الخلايا المزروعة المذكورة. يمكن استخدام الخلايا المتحولة طبقا للاختراع في عمليات لتحضير ‎polypeptides‏ مخلقة مطابقة للاختراع. إن العمليات لتحضير ‎polypeptide‏ مطابق للاختراع في شكل مخلق؛ التي تتميز بأنها تستعمل ناقل و/أو خلية متحولة بناقل مطابق للاختراع» مشتملة بذاتها في الاختراع الحالي. بصورة مفضلة؛ تزرع خلية متحولة بواسطة ناقل طبقا للاختراع تحت شروط تسمح ‎١٠‏ بإظهار ‎polypeptide‏ المذكور ويتم استرجاع ‎peptide‏ المخلق المذكور. حسبما تم ذكره؛ يمكن اختيار الخلية العائلة من أنظمة بدائية النواة أو سوية النواة. تحديداء يمكن تحديد ترتيبات ‎nucleotide‏ مطابقة للاختراع؛» تسهل الإفراز في ذلك النظام ‎Slay‏ النواة أو سوي النواة. إن الناقل المطابق للاختراع الحامل لذلك الترتيب يمكن لذلك استخدامه بدرجة مفيدة لإنتاج بروتينات مخلقة؛ مقصود إفرازها. أثناء العملية؛ يتم تيسير تنقية هذه البروتينات ‎٠٠‏ المخلقة الهامة نظرا لأنها موجودة في المادة الطافية لمزرعة الخلية بدلا من وجودها في داخل الخلايا العائلة. من الممكن بالمثتل تحضير ‎polypeptides‏ المطابقة للاختراع بتكوين كيميائي. إن عملية التحضير تلك هي بالمتل موضوع الاختراع. يعلم الماهر في ‎Gall‏ عمليات التكوين الكيميائي؛ مثلا التقنيات التي تستعمل حالات صلبة: ‎Solid phase peptide synthesis, Pierce Chem.
Company, Y°‏ ,1984 لة ‎[Steward et‏ ‎Rockford, 111, 2nd ed., (1984)]‏ vy ‏أو التقنيات المستخدمة حالات صلبة جزئية؛ بتكثيف أجزاء أو بتكوين تقليدي في محلول. إن‎ ‏مقابلة غير طبيعية‎ amino acids ‏65م الناتجة بتكوين كيميائي والقادرة على احتواء‎ ‏داخلة بالمتل في الاختراع.‎ ‏إن مضادات الأجسام؛ أو واحد من أجزائها أو مشتقاتها الوظيفية؛ التي يمكن الحصول‎ ‏عليها بعملية مطابقة للاختراع داخلة بالمتل في الاختراع الحالي.‎ © ‏يتعلق الاختراع أيضا بمضاد جسم من الاختراع كدواء.‎ ‏بتركيبة دوائية تشمل كمادة نشطة مركب يتكون من مضاد جسم؛ أو‎ Jilly ‏يتعلق الاختراع‎ ‏واحد من أجزائه الوظيفية طبقا للاختراع؛ مختلط بصورة مفضلة مع مادة مسوغة و/أو وسط‎ ‏حامل مقبول دوائيا.‎ ‏يتكون تجسيد آخر مكمل للاختراع من تركيبة حسب الوصف أعلاه تشمل»؛ علاوة على‎ ٠ ‏ذلك؛ كمنتج اتحاد لاستخدام متزامن؛ منفصل أو متعاقب؛ مضاد جسم مضاد لورم.‎ ‏الأكثر تفضيلا؛ يمكن اختيار مضاد الجسم الثاني المذكور المضاد لورم من بين مضادات‎ ‏مضادة 1710178 مضادة‎ (HER2/neu ‏مضادة‎ (EGFR ‏مضادة‎ (IGF-IR ‏أجسام مضادة‎ ‏إلخ؛ أو أي مضادات أجسام أخرى مضادة لورم يعرفها الماهر في الفن. من الثابت‎ «VEGF ‏أن الاستخدام» كمضاد جسم ثان؛ لأجزاء أو مشتقات وظيفية من مضادات الأجسام المذكورة‎ ٠ ‏أعلاه هو جزء من الاختراع.‎ ‏مضاد الجسم‎ Jie EGFR ‏كمضاد جسم أكثر تفضيلا؛ تنتقى مضادات أجسام مضادة‎ .(Erbitux) C225 ‏مفهوم أنه يعني إعطاء المركبان للتركيبة طبقًا‎ "(Simultaneous use) ‏إن "استخدام متزامن‎ ‏للاختراع في شكل دوائي واحد ومتماتل.‎ Ye ‏مفهوم أنه يعني الإعطاء؛ عند نفس الوقت؛ لمركبي‎ "(Separate use) ‏إن "استخدام منفصل‎ ‏التركيبة طبقا للاختراع في أشكال دوائية مميزة.‎ ‏مفهوم أنه يعني الإعطاء المتعاقب لمركبي التركيبة‎ "(Sequential use) ‏إن 'استخدام متتالي‎ ‏طبقا للاختراع» كل منهما في شكل دوائي مميز.‎ ‏بطريقة عامة؛ فإن التركيبة المطابقة للاختراع تزيد بدرجة معقولة كفاءة معالجة السرطان.‎ Yo ‏طبقا للاختراع تتم‎ c-Met ‏بطريقة أخرى. فإن التأثير العلاجي لمضادات الأجسام المضادة‎ ‏تقويته بطريقة غير متوقعة بإعطاء عامل سام للخلايا. إن ميزة تالية كبرى أخرى للتركيبة‎
A
‏المطابقة للاختراع تتعلق بإمكانية استخدام جرعات مؤثرة أقل من المادة النشطة؛ مما يسمح‎ ‏بتفادي أخطار ظهور تأثيرات ثانوية أو بتقليلهاء تحديدا تأثيرات العامل السام للخلايا.‎ ‏إضافة لذلك؛ فإن هذه التركيبة المطابقة للاختراع تسمح بالحصول على التأثير العلاجي‎ ‏المتوقع بسهولة أكبر.‎ ‏علاوة على ذلك؛ كمنتج اتحاد لاستخدام‎ (Jedi ‏يمكن أيضا أن تتميز تركيبة الاختراع بأنها‎ > ‏متزامن؛ منفصل أو متتالي؛ عامل سام للخلية/ موقف لنمو الخلية.‎ ‏أو "عوامل سامة‎ "(anti-cancer therapeutic agents) ‏إن "عوامل علاجية مضادة للسرطان‎ ‏يقصد بها مادة؛ عند الإعطاء‎ ¢'(cytotoxic/cytostatic agents) ‏للخلية/ موقفة لنمو الخلية‎ ‏لكائن؛ تعالج أو تمنع تطور سرطان في جسم الكائن. كمثال غير مقيد لتلك العوامل» يمكن‎ ‏مضادات مواد الأيض؛ مضادات حيوية مضادة لورم» مثبطات‎ alkylating ‏ذكر عوامل‎ ٠ ‏عوامل مضادة للتكوين الوعائي؛ مضادات‎ «chromatin ‏الانقسام الفتيلي؛ مثبطات وظيفة‎ ‏أو المواد الضابطة للمناعة.‎ androgens ‏مضادات‎ estrogens ‏في الصفحة‎ VIDAL ‏من‎ ٠٠٠0٠ ‏إن تلك العوامل مذكورة» على سبيل المثال؛ في طبعة‎ «'(Cytotoxics) ‏المخصصة للمركبات الخاصة بعمود علم السرطان وعلم أمراض الدم "السامة‎ ‏إن هذه المركبات السامة للخلايا المذكورة بالإشارة إلى هذه الوثيقة مذكورة هنا كعوامل سامة‎ ٠ ‏تفضل العوامل التالية طبقا للاختراع الحالي.‎ ¢ JST ‏بتحديد‎ ‎alkylate sl ‏تسبب ربط متقاطع‎ sale ‏أي‎ "(alkylating agent) ‏يشير "عامل الكيلية‎ ‏في خلية. تتضمن أمثلة عوامل‎ «(DNA ‏(مثلا»‎ nucleic acid ‏يفضل‎ cog) ‏لأي‎ ‎¢melphalen «chlorambucol «mechlorethamine ‏مقل‎ nitrogen ‏خددل‎ alkylating ٠ ¢testramustine 0 disodic-phosphate «prednimustin «pipobromen «chlorydrate ‏أو‎ sulfofosfamide «trofosfamide caltretamine «cyclophosphamide ‏مقل‎ oxazophorins ‏أو‎ triethylenamine «thiotepa ‏مقثال‎ imine-ethylenes ‏أو‎ aziridines ¢ifosfamide ¢lomustine ‏أو‎ fotemustin «streptozocin «carmustine J— is nitrosourea ¢altetramine
J— is triazenes ¢improsulfan Jl treosulfan <busulfan J— ie alkyle-sulfonates Y© -carboplatin 4 oxaliplatin ¢cis-platinum fis platinum ‏أو معقدات‎ ¢dacarbazine
YYo)
vo ‏إلى مواد تخمد نمو و/أو أيض خلية‎ "(anti-metabolites) ‏تشير "مضادات مواد الأيض‎ ‏تتضمن أمثلة على مضادات مواد الأيض‎ DNA ‏بإعاقة أنشطة خاصة؛ عادة تكوين‎ methotrexate, 5-fluoruracil, floxuridine, S-fluorodeoxyuridine, capecitabine, cytarabine, fludarabine, cytosine arabinoside, 6-mercaptopurine (6-MP), 6- thioguanine (6-TG), chlorodesoxyadenosine, 5-azacytidine, gemcitabine, cladribine, © deoxycoformycin -pentostatin ‏و‎ ‎La ‏إلى مركبات تمنع أو‎ "(anti-tumor antibiotics) ‏تشير "مضادات حيوية مضادة لورم‎ «doxorubicin ays) ‏و/أو بروتين. تتضمن أمثلة مضادات حيوية مضادة‎ RNA DNA ‏تكوين‎ ‎«mithramycin «dactinomycin ¢mitoxantrone ¢valrubicin ¢idarubicin ¢daunorubicin | ٠ .procarbazine ‏و‎ «bleomycin «mitomycin C «¢plicamycin ‏تمنع التطور الطبيعي لدورة‎ (mitotic inhibitors) (idl ‏إن 'مثبطات الاتقسام‎
Jie taxoides ‏الخلية والانقسام الفتيلي. بصفة عامة؛ فإن مثبطات أنيبيب صغير أو‎ (vinca alkaloid) (gs ‏قادرة على تثبيط الانقسام الفتيلي. إن شبيه‎ docetaxel 5 paclitaxel ‏قادرة أيضا على تتبيط الانقسام‎ vinorelbine 5 vindesine «vincristine «vinblastine ‏مثل‎ Ye ‏الفتيلي.‎ ‏أو 'مثبطات‎ "(chromatin function inhibitors) ‏تشير "مثبطات وظيفة كروماتين‎ ‏إلى مواد تثبيط الوظيفة الطبيعية لبروتينات تشكيل‎ "(topoisomerase inhibitors) ‏توبوأيزوميراز‎ ‏تتضمن أمثلة متبطات وظيفية‎ topoisomerase 11 ‏أو‎ topoisomerase 1 ‏مثل‎ chromatin ‏أو‎ topotecan Jie ‏ومشتقاتها‎ camptothecine topoisomerase 1 ‏من أجل‎ «chromatin ٠٠ .teniposide ‏و‎ etoposide phosphate «etoposide «topoisomerase 1 ‏لأجل‎ « cirinotecan ‏إلى أي عقارء‎ "(anti-angiogenesis agent) ‏يشير "عامل مضاد للتكوين الوعائي‎ ‏مركب؛ مادة أو عامل يثبط نمو أوعية دموية. تتضمن عوامل تمثيلية مضادة للتكوين الوعائي؛‎ ‏بدون أي تحديدء‎ razoxin, marimastat, batimastat, prinomastat, tanomastat, ilomastat, CGS-27023A, ١٠٠ halofuginon, COL-3, neovastat, BMS-275291, thalidomide, CDC 501, DMXAA, L- ‏عض‎
‎squalamine, endostatin, SU5416, 5106668, interferon-alpha, EMD121974,‏ ,651582 ‎interleukin-12, IM862, angiostatin‏ ‎.vitaxin s‏ يشير 'مضاد إستروجين ‎ "(anti-estrogen)‏ "عامل مضاد للإستروجين ‎"(anti-estrogenic agent) ©‏ إلى أي مادة ‎«JS‏ تعارض أو تثبط تأثير «680086. إن أمثلة لعوامل مضادة 0 هي ‎«droloxifene <raloxifene storemifene tamoxifen‏ ‎«anastrozole ¢<iodoxyfene‏ 1002016 و ‎.exemestane‏ ‏تشير "مضادات الأندروجين ‎"(anti-androgens)‏ أو "عوامل مضادة للأندروجين ‎"(anti-androgen agents)‏ إلى أي مادة ‎(JE‏ تعارض أو تشبط تأثير ‎.androgen‏ إن أمثلة ‎٠‏ المضادات ‎androgen‏ هي ‎«sprironolactone «bicalutamide ¢nilutamide «flutamide‏ ‎finasteride ¢cyproterone acetate‏ و ‎-.cimitidine‏ ‏إن "المواد الضابطة للمناعة ‎"(immunomodulators)‏ هي مواد تثير جهاز المناعة. تتضمن أمثلة مواد ضابطة للمناعة ‎interleukin «interferon‏ مقل ‎«aldesleukine‏ ‎denileukin ~~ diflitox «OCT-43‏ و ‎interleukin-2‏ عوامل تحلل ورم ‎tasonermine Jia‏ أو ‎Vo‏ مواد ضابطة للمناعة أخرى مثل ‎«pidotimod «roquinimex ¢sizofiran «lentinan‏ ‎poly 1:© «thymopentine «pegademase‏ أو ‎levamisole‏ بالاقتران مع ‎.5-fluorouracil‏ ‏لتفاصيل أكثرء يمكن للماهر في الفن الرجوع إلى الكتيب المؤلف بواسطة: ‎“Association Francaise des Enseignants de Chimie Thérapeutique” and entitled‏ ‎“traité¢ de chimie thérapeutique, vol. 6, Médicaments antitumoraux et perspectives‏ ‎dans le traitement des cancers, edition TEC & DOC, 2003”. ٠‏ يمكن أيضا ذكر كعوامل كيميائية ‎of‏ عوامل سامة للخلية؛ كل مثبطات ‎«lie kinase‏ ‎erlotinib sl gefitinib‏ في تجسيد مفضل تحديدا» تتميز التركيبة المذكورة كمنتج اتحاد طبقا للاختراع بأن العامل السام للخلايا المذكور يقترن كيميائيا مع مضاد الجسم المذكور من أجل استخدام متزامن. ‎Yo‏ لتسهيل الاقتران بين العامل السام للخلية المذكور ومضاد الجسم المذكور المطابق للاختراع؛ يمكن بصفة خاصة إدخال جزيئات مباعدة بين المركبين المراد اقترانهماء مثل ‎poly(alkylene) glycols‏ مثل ‎«polyethylene glycol‏ أو أيضا ‎«amino acids‏ أو » في تجسيد احرص vv ‏آخر « استخدام مشتقات نشطة من العوامل السامة للخلية المذكورة يتم فيها إدخال وظائف قادرة‎ ‏على التفاعل مع مضاد الجسم المذكور طبقا للاختراع. إن تقنيات الاقتران هذه معروفة جيدا‎ ‏في الفن ولا يتم شرحها بالتفصيل في الوصف الحالي.‎ ‏على الأقل من مضادات‎ candy ‏يتعلق الاختراع» في جانب آخرء بتركيبة تتميز بأن‎ ‏خلية‎ toxin ‏الأجسام المذكورة؛ أو واحد من أجزائها أو مشتقاتها الوظيفية؛ يكون متحدا من‎ © ‏و/أو عنصر مشع.‎ ‏المذكور أو العنصر المشع المذكور قادرا على تثبيط نشاط خلية‎ toxin ‏يفضل؛ أن يكون‎ ‏وبطريقة مفضلة أكثر قادرا على منع نمو أو انقسام‎ c-Met ‏واحدة على الأقل لخلايا تظهر‎ ‏الخلية المذكورة. بصفة خاصة إخماد النشاط كليا للخلية المذكورة.‎ toxin ‏بكتيري معوي؛ بصفة خاصة‎ toxin ‏المذكور هو‎ toxin ‏يفضل أيضاء أن يكون‎ Ve .Pseudomonas A ‏خارجي‎ ‏إن العناصر المشعة (أو النظائر المشعة) التي تتحد بصورة مفضلة مع مضادات الأجسام‎ ‏ويفضل أ اعدتوون "لسستضي‎ Lala ‏المستعملة للعلاج هي نظائر مشعة تتبعث منها أشعة‎ ‏يمكن بالمثل للعلاج‎ antimony’! 5 bismuth®! ccopper®’ ¢palladium'® «gold'” alpha s beta ‏استخدام نظائر مشعة تنبعث منها أشعة‎ ١5 ‏أو عنصر مشع متحد مع على الأقل مضاد جسم واحد؛ أو واحد من أجزائه‎ toxin ‏إن‎ ‏المذكور أو‎ toxin ‏الوظيفية؛ طبقا للاختراع» يقصد به الإشارة إلى أي طريقة تسمح بارتباط‎ ‏العنصر المشع المذكور على مضاد الجسم الواحد على الأقل المذكورء بصفة خاصة باقتران‎ ‏تساهمي بين المركبين؛ مع أو بدون إدخال جزيء واصل.‎ ‏».من بين العوامل التي تسمح بالارتباط بطريقة كيميائية (تساهمية)؛ ساكنة كهربيا أو غير‎ <benzoquinone ‏تساهمية لكل أو جزء من مكونات الاتحاد؛ يمكن بصفة خاصة ذكر‎ ‏وبتحديد أكثر‎ carbodiimide
EDC (1-ethyl-3-[3-dimethyl-aminopropyl]-carbodiimide hydrochloride), dimaleimide, dithiobis-nitrobenzoic acid (DTNB), N-succinimidyl S-acetyl thio- acetate (SATA), Ye ‏متفاعلة مع الأشعة فوق‎ phenylazide ‏عوامل القنطرة التي بها واحدة أو أكثر من مجموعات‎ ‏البنفسجية (.7.ل1) ويفضل‎
YA
N-[-4-(azidosalicylamino)butyl]-3’-(2’-pyridyldithio)-propionamide (APDP), N- succinimid-yl 3-(2-pyridyldithio)propionate (SPDP), 6-hydrazino-nicotinamide (HYNIC). ‏يمكن أن يتكون شكل آخر للاقتران. خاصة للعناصر المشعة؛ من استخدام مادة كلابية‎ ‏ثنائية الوظيفية.‎ jon ©
EDTA ‏من بين هذه المواد الكلابية؛ يمكن ذكر المواد الكلابية المشتقة من‎
DTPA (diethylenetriaminepentaacetic acid) ‏أو من‎ (ethylenediaminetetraacetic acid) ‏لذلك» يمكن‎ immunoglobulins 5 «be led) ‏المطورة لربط الفلزات» خاصة الفلزات النشطة‎ ‏لزيادة ثبات وصلابة مركب‎ carbon ‏ومشتقاته بمجموعات مختلفة على سلسلة‎ DTPA ‏استبدال‎ ‏المركب الترابطي- الفلز:‎ ٠ (Krejcarek et al. (1977); Brechbiel et al. (1991); Gansow (1991); US patent 4,831,175). ‏ومشتقاته؛‎ diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) ‏على سبيل المثال فإن‎ ‏إما في شكله الحرء أو في‎ dish ‏المستخدم على نطاق واسع في الطب وفي علم الأحياء لزمن‎ ‏فلزية ويقترن مع‎ fons ‏فلزي؛ له سمة مميزة تكوين مواد كلابية ثانية مع‎ on ‏شكل مركب مع‎ ٠١ ‏بروتينات لها أهمية علاجية أو تشخيصية مثل مضادات أجسام لتطوير اتحادات مناعية مشعة‎ ‏في علاج السرطان:‎ (Meases et al., (1984); Gansow et al. (1990)). ‏يفضل بالمثل؛ اختيار مضاد الجسم المذكور الواحد على الأقل المشكل للاتحاد المذكور‎
SCFV ‏أجزاء‎ Jie ‏لها‎ Fo ‏طبقا للاختراع من أجزائه الوظيفية» خاصة الأجزاء المبتورة من مكون‎ ٠ ‏كما هو مذكور بالفعل؛ في تطبيق مفضل للاختراع؛ فإن العامل السام للخلية/ الموقف لنمو‎ ‏و/أو العنصر المشع المذكور يقترن كيميائيا مع واحد على الأقل من‎ toxin ‏الخلية المذكور أو‎ ‏عناصر التركيبة المذكورة من أجل استخدام متزامن.‎ ‏يشمل الاختراع الحالي التركيبة المذكورة كدواء.‎ ‏يشمل الاختراع الحالي إضافة لذلك استخدام التركيبة المطابقة للاختراع لتحضير دواء.‎ Yo
YYo)
va
في جانب ‎AT‏ ¢ يتعامل الاختراع مع استخدام مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته الوظيفية؛ و/أو تركيبة كما هو موصوف أعلاه لتحضير دواء يقصد به تثبيط نمو و/أو انقسام خلايا ورم.
يتكون جانب آخر للاختراع من استخدام مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته
© الوظيفية و/أو تركيبة؛ حسب الوصف أعلاه أو الاستخدام المذكور ‎del‏ لتحضير دواء يقصد
به منع أو معالجة سرطان.
يشمل الاختراع الحالي أيضا طريقة يقصد بها تثبيط نمو و/أو انقسام خلايا ورم في مريض تشمل إعطاء مريض بحاجة لذلك مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته الوظيفية طبقا للاختراع» مضاد جسم ناتج بواسطة ورم هجين طبقا للاختراع أو تركيبة مطابقة للاختراع.
‎١‏ يشمل الاختراع الحالي إضافيا طريقة لمنع أو معالجة سرطان في مريض بحاجة لذلك؛ ‎Joi‏ إعطاء المريض مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه أو مشتقاته الوظيفية طبقا للاختراع؛ مضاد جسم ناتج بواسطة ورم هجين طبقا للاختراع أو تركيبة مطابقة للاختراع.
‏في جانب خاص مفضل؛ يكون السرطان المذكور هو سرطان يتم اختياره من سرطأن بروستاتا؛ سرقومات عظمية؛ سرطان ‎(AS)‏ سرطان ثدي؛ سرطان بطانة ‎any‏ ورم دبقي أولي أو
‎١‏ سرطان قولون.
‏حسب التوضيح من قبل»؛ فإن ميزة للاختراع هي السماح بمعالجة سرطانات مرتبطة بتنشيط ‎Met-‏ معتمدة وغير معتمدة على ‎HGF‏ ‏يشمل الاختراع؛ في جانب آخر أيضاء؛ طريقة لتشخيص في المعمل لمرض يسببه إظهار زائد أو إظهار ناقص لمستقبل ‎c-Met‏ بداية من عينة حيوية مشكوك في الوجود الشاذ لمستقبل ‎c-Met Ye‏ فيهاء تتميز الطريقة المذكورة بأنها تشمل خطوة تتلامس فيها العينة الحيوية المذكورة مع مضاد جسم من الاختراع» ويمكن لمضاد الجسم ‎SA)‏ عند الضرورة؛ أن يكون معلما. يفضل» أن تكون الأمراض المذكورة المرتبطة بالوجود الشاذ لمستقبل ‎c-Met‏ في طريقة التشخيص المذكورة هي سرطانات. يمكن وجود مضاد الجسم المذكور؛ أو واحد من أجزائه الوظيفية؛ في شكل اتحاد مناعي أو ‎YO‏ مضاد جسم معلم بحيث يتم الحصول على إشارة يمكن تحديدها و/أو يمكن تقديرها كميا. تتضمن مضادات الأجسام المعلمة طبقا للاختراع أو أجزائها ‎dada ll‏ على سبيل المثال؛ مضادات أجسام تسمى اتحادات مناعية يمكن أن تكون متحدة؛ على سبيل ‎Jal‏ مع
65 مقل ‎glucose «beta-D-galactosidase «alkaline phosphatase «peroxidase‏ ‎«lysozyme <acetylcholinesterase «carbonic anhydrase «glucose amylase <oxydase‏ ‎malate dehydrogenase‏ أو ‎glucose 6-phosphate dehydrogenase‏ أو بواسطة جزيء ‎Jie‏ ‎.5-bromodeoxyuridine 0 digoxygenin «biotin‏ يمكن بالمقل أن تكون العلامات © الإستشعاعية متحدة مع مضادات الأجسام أو مع أجزاء وظيفية طبقا للاختراع وهي تتضمن بصفة خاصة ‎fluorescein‏ ومشتقاته؛ ‎rhodamine «fluorochrome‏ ومشتقاته» ‎GEP‏ ('بروتين إستشعاع أخضر ‎cumbelliferone «dansyl «(Green Fluorescent Protein‏ إلخ. في تلك الاتحادات؛ يمكن تحضير مضادات أجسام الاختراع أو أجزائها الوظيفية بطرق يعلمها الماهر في الفن. يمكن أن ترتبط مع إنزيمات أو مع علامات إستشعاعية مباشرة أو بتوسط مجموعة ‎٠‏ مباعدة أو مجموعة واصلة مقل ‎«polyaldehyde‏ مقل ‎«glutaraldehyde‏ ‎diethylene-triaminepentaacetic - acid «(EDTA) ethylenediaminetetraacetic 0‏ ‎(DPTA)‏ أو في وجود عوامل اقتران مثل تلك المذكورة أعلاه للاتحادات العلاجية. يمكن تحضير اتحادات تحتوي على علامات من نوع ‎Je lily fluorescein‏ مع ‎.isothiocyanate‏ يمكن ‎Jal‏ أن تتضمن اتحادات أخرى علامات كيميائية مضيئة مثل ‎luminol‏ و ‎«dioxetanes | ٠‏ علامات حيوية مضيئة ‎luciferin luciferase Jie‏ أو أيضا علامات نشطة ‎Lela i)‏ مقل ‎<iodine'*® ¢iodine'® ¢iodine'®‏ للأعستومت ‎ctechnetium®™ «bromine’’‏ ‎cruthenium® «ruthenium® cgallium® «gallium® ¢indium'"®™ <indium'"‏ ‎thenium'® crhenium®™ mercury’® «mercury’®’ «ruthenium'® ruthenium'®‏ ‎cthulium'® ctellurium'®™ ctellurium'**™ ctellurium'?'™ «scandium®’ «rhenium'®‏ ‎.iodine! cyttrium'® ¢fluorine'® cthulium'®® cthulium'é’ ٠٠‏ إن الطرق المعروفة للماهر في الفن الموجودة لاقتران النظائر المشعة العلاجية مع مضادات الأجسام إما مباشرة أو من خلال عامل ‎DTPA (EDTA Jie (DS‏ المذكورين أعلاه؛ يمكن استخدامها للعناصر المشعة المستخدمة في التشخيص. يمكن بالمثل ذكر التعليم مع ‎Na[l'®]‏ بطريقة 1 ‎chloramine‏ ‎[Hunter W.M. and Greenwood F.C. (1962) Nature 194:495]‏ أو ‎Lad‏ مع ‎technetium” Yo‏ بواسطة تقنية ‎Crockford er al.‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم + ‎(£EYEY‏ ‏أو مرتبطة مع ‎DTPA‏ كما هو موصوف بواسطة ‎Hnatowich‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 1477 ).
لذلك؛ فإن مضادات الأجسام؛ أو أجزائها الوظيفية؛ المطابقة للاختراع يمكن استعمالها في عملية لتحديد و/أو تقدير كمي لإظهار زائد أو إظهار ناقص»؛ يفضل إظهار زائد؛ لمستقبل -» ‎Met‏ في عينة حيوية؛ تتميز بأنها تشمل الخطوات التالية: (أ) تلامس العينة الحيوية مع مضاد جسم أو واحد من أجزائه الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛ و ° (ب) إظهار مركب ‎fo-Met‏ مضاد الجسم المتكون بصورة ممكنة. في تطبيق محدد؛ يمكن استعمال مضادات الأجسام؛ أو أجزائها الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛ في عملية لتحديد و/أو تقدير كمي لمستقبل ‎c-Met‏ في عينة حيوية؛ لمراقبة كفاءة المعالجة الوقائية و/أو العلاجية لسرطان معتمد على ‎١ c-Met‏ بصفة عامة أكثر؛ فإن مضادات الأجسام؛ أو أجزائها الوظيفية؛ طبقا للاختراع» يمكن ‎٠‏ استعمالها بصورة مفيدة في أي ‎Alla‏ تجب فيها ملاحظة إظهار المستقبل ‎c-Met‏ بطريقة نوعية ‎Ss‏ كمية. بصورة مفضلة؛ تتكون العينة الحيوية بمادة مائعة حيوية؛ ‎Sie‏ مصل؛ دم كامل؛ خلاياء عينة نسيج أو عينات من مصدر أدمي. يمكن استعمال أي إجراء أو اختبار تقليدي لتحديد و/أو التجريع. يمكن أن يكون الاختبار ‎١‏ المذكور هو اختبار منافسة أو ساندوتشء أو اختبار معروف للماهر في الفن يعتمد على تكوين مركب مناعي من نوع مضاد جسم- مولد مضاد. باتباع الاستخدامات المطابقة للاختراع؛ يمكن أن يكون مضاد الجسم أو واحد من أجزائه الوظيفية ساكنا أو معلما. يمكن إجراء هذا التسكين على دعامات كثيرة يعلمها الماهر في الفن. يمكن أن تتضمن هذه الدعامات بصفة خاصة زجاي ‎«nylon «dextran «polyethylene «poly-propylene «polystyrene‏ 0 خلايا ‎٠‏ طبيعية أو معدلة. قد تكون هذه الدعامات إما قابلة أو غير ‎ALE‏ للذوبان. على سبيل المثال؛ تقوم طريقة مفضلة بإجراء عمليات إنزيمية مناعية طبقا لتقنية ‎(ELISA‏ ‏بتقنية إستشعاع مناعي؛ أو اختبار مناعي إشعاعي ‎(RIA) radio-immunoassay‏ أو ما يكافئ ذلك. لذلك؛ يشمل الاختراع الحالي بالمقل المجموعات الضرورية لإجراء طريقة تشخيص مرض ‎Yo‏ يحثه إظهار زائد أو إظهار ناقص لمستقبل 146» أو لإجراء عملية لتحديد و/أو تقدير كمي لإظهار زائد أو إظهار ناقص لمستقبل 0-1462 في عينة حيوية؛ يفضل إظهار زائد للمستقبل المذكور؛ تتميز بأن المجموعة المذكورة تشمل العناصر التالية: ‎Yyo)‏
لل (أ) مضاد جسم؛ أو واحد من أجزائه الوظيفية؛ طبقا للاختراع؛ (ب) اختيارياء العوامل الكاشفة لتكوين الوسط المحبذ للتفاعل المناعي؛ (ج) اختيارياء العوامل الكاشفة التي تسمح بإظهار مركبات ‎fo-Met‏ مضاد جسم الناتجة بالتفاعل المناعي. ° إن موضوع للاختراع هو بالمثل استخدام مضاد جسم أو تركيبة طبقا للاختراع لتحضير دواء يقصد به الاستهداف الخاص لمركب نشط حيويا لخلايا تظهر أو تظهر بدرجة زائدة المستقبل ‎c-Met‏ ‏يقصد هنا بالمركب النشط حيويا الإشارة إلى أي مركب قادر على ضبط؛ خاصة تثبيط؛ نشاط خلية؛ تحديدا نموهاء انقسامها؛ نسخها أو ترجمة جينها. ‎Ve‏ إن موضوع للاختراع هو أيضا عامل كاشف تشخيصي في الجسم يشمل مضاد جسم مطابق للاختراع؛ أو واحد من أجزائه الوظيفية؛ يفضل معلم؛ خاصة معلم إشعاعيا؛ واستخدامه في التصوير الطبي؛ بصفة خاصة لتحديد سرطان مرتبط بإظهار أو إظهار زائد بواسطة خلية لمستقبل ‎c-Met‏ ‏يتعلق الاختراع بالمثل بتركيبة كمنتج اتحاد أو باتحاد مضاد ‎toxin fe-Met‏ أو عنصر 0 مشع؛ طبقا للاختراع؛ كدواء. بصورة مفضلة؛ تختلط التركيبة المذكورة كمنتج اتحاد أو الاتحاد المذكور طبقا للاختراع مع مادة مسوغة و/أو وسط حامل مقبول دوائيا. في الوصف الحالي؛ يقصد بوسط حامل مقبول دوائيا الإشارة إلى مركب أو اتحاد مركبات داخل في تركيبة دوائية لا يثير تفاعلات ثانوية ويسمح؛ على سبيل المثال؛ بتسهيل إعطاء ‎Ye‏ المركب (المركبات) النشط» زيادة في فترة الصلاحية و/أو في الفعالية في الجسم؛ زيادة في قابلية الذوبان في محلول أو أيضا تحسين في الاستبقاء. إن هذه الأوساط الحاملة المقبولة دوائيا معروفة جيدا وسوف يقوم بتعديلها الماهر في الفن كوظيفة لطبيعة وطريقة الإعطاء للمركب (المركبات) النشط المختار. بصورة مفضلة؛ تعطى هذه المركبات بالطريقة العمومية؛ تحديدا في الوريد؛ في العضل؛ ‎Yo‏ في الجلد؛ في البريتون؛ أو تحت الجلد أو بالفم. بطريقة مفضلة أكثرء تعطى التركيبة المشتملة مضادات الأجسام المطابقة للاختراع مرات عديدة؛ بطريقة متتابعة.
إل يمكن تحديد طرق إعطائهاء؛ جرعاتها وأشكالها الدوائية المتلى طبقا للمعايير الهامة عامة في ترسيخ المعالجة الملائمة لمريض مثل؛ مثلاء سن أو وزن جسم المريض» خطورة الحالة العامة؛ احتمال المعالجة والتأثيرات الثانوية المذكورة. شرح مختصر. للرسومات 0 تظهر سمات ومزايا أخرى للاختراع مع استمرار الوصف مع الأمثلة والأشكال حيث: الشكل ‎:١‏ أمثلة لأنماط ‎FACS‏ لمضادات الأجسام المنتقاة المضادة ‎tc-Met‏ ‏الشكل ‎()Y‏ و؟(ب): تثبيط في المعمل لانقسام 7003 بمضادات أجسام تستهدف ‎‘c-Met‏ ‏الشكل ؟: تثقبيط ‎¢c-Met dimerization‏ ‎٠١‏ الشكل ؛: إدراك بروتين بمضادات أجسام مضادة ‎(c-Met‏ ‏الشكل 0 و*(ب): 'تخطيط ‎"Epitope‏ لأجل 1181 و505 بتحليل ‎¢BlAcore‏ ‏الشكل 0 )=( : تأثير ‎Mabs‏ على ‎¢c-Met phosphorylation‏ الشكل 7(أ) و7١(ب):‏ إزاحة ‎HGF‏ معلم إشعاعيا بمضادات أجسام مضادة :6-846 0 الشكل ‎tA‏ تثبيط التوغل بواسطة مضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ [في هذا الشكل؛ يعني ‎SVF ٠‏ مصل جنين بقري ‎(FCS)‏ ‏الشكل 4: تأثير مضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ على ‎lll‏ جرح؛ الشكل ‎٠١‏ 00( و١٠(ب):‏ اختبار ‎¢Scatter‏ ‏الشكل ‎:١١‏ اختبار تكوين أنيبيبات ثلاثية الأبعاد؛ الشكل ‎(YY‏ و"١(ب):‏ تأثير مضاد الأجسام على تكوين أجسام شبيهة بالكرة؛ 9 الشكل ‎:١١‏ نشاط ‎Mabs‏ مضادة ‎c-Met‏ في المعمل في نموذج ‎dad)‏ دخيلة 1087140؛ الشكل ‎:٠6‏ إظهار ‎HGF‏ بمجموعة من خطوط خلية ورم؛ الشكل ‎(Vo‏ و١١(ب):‏ تميز خط خلية 1001-11441؛ مع مطابقة ‎١ Jal‏ ١لأ)‏ لتحليل ‎RT-PCR‏ كمي ومطابقة الشكل ١١(ب)‏ لتحليل ‎(FACS‏ ‏الشكل 1 )0 النشاط في الجسم لمضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ على نموذج رقعة دخيلة ‎¢NCI-H441 Yo‏ الشكل ‎:)(١١7‏ اصطفاف ‎VL‏ 224011 مع جين خط جرثومة ‎IGKV3-5*01‏ فأري؛ الشكل 7١١(ب):‏ اصطفاف ‎VL‏ 224011 مع جين خط جرثومة 1016[4*01 فأري؛ ‎YYo)‏
الشكل 18(): اصطفاف ‎VL‏ 2240611 مع جينات خط جرثومة ‎IGKV3-11#%01‏ ‎IGKVA4-1%01 4‏ أدمية؛ الشكل 8١(ب):‏ اصطفاف ‎VL‏ 224011 مع جين خط جرثومة 1612[4*02 أدمي؛ الشكل 9٠(ا):‏ طراز ‎VL‏ 224611 مكتسب السمة الآدمية معتمد على 10162173-11*01 مع © طفرات مذكورة؛ الشكل 9١(ب):‏ طراز ‎VL‏ 2240611 مكتسب السمة الآدمية معتمد على 101674-1*01 مع طفرات مذكورة؛ الشكل + "(): اصطفاف ‎VH‏ 224611 مع جين خط جرثومة 161171-18*01 فأري؛ الشكل ١"(ب):‏ اصطفاف ‎VH‏ 224011 مع جين خط جرثومة 101102-4*01 فأري؛ ‎٠١‏ الشكل ١٠(ج):‏ اصطفاف ‎VH‏ 224011 مع جين خط جرثومة 101112*01 فأري؛ الشكل ١؟ل():‏ اصطفاف ‎VH‏ 224011 مع جين خط جرثومة ‎IGHV1-2%02‏ آدمي؛ الشكل ١"(ب):‏ اصطفاف 2246111711 مع جين خط جرثومة 161114*01 ‎tool‏ ‏الشكل ‎224G11 VH YY‏ مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل ؟؟(أ): اصطفاف ‎VL‏ 227111 مع جين خط جرثومة 1016173-5*01 فأري؛ ‎Vo‏ الشكل ؟"(ب): اصطفاف ‎VL‏ 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGKJ4*01‏ فأري؛ الشكل 4؛ ؟(ا): اصطفاف ‎VL‏ 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGKV3-11%01‏ ‎IGKV4-1%01‏ آدمي؛ الشكل ؛ "(ب): اصطفاف ‎VL‏ 227111 مع جين خط جرثومة 101614*02 ‎teal‏ ‏الشكل © ؟(ا): طراز ‎VL‏ 227111 مكتسب السمة الآدمية معتمد على 16162173-11*01 مع ‎*٠‏ | طفرات مذكورة؛ الشكل © 7(ب): طراز ‎VL‏ 227111 مكتسب السمة الآدمية معتمد على ‎IGKV4-1%01‏ مع طفرات مذكورة؛ الشكل 76؟(ا): اصطفاف ‎VL‏ 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGHVI-18%01‏ فأري؛ الشكل 7"(ب): اصطفاف ‎VH‏ 227111 مع جين خط جرثومة 161101-1*02 فأري؛ ‎Yo‏ الشكل 76"(ج): اصطفاف ‎VH‏ 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGHI2*01‏ فأري؛ الشكل 7١؟(أ):‏ اصطفاف ‎VH‏ 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGHV1-2*02‏ فأري؛ الشكل ‎(QTV‏ اصطفاف 711 227111 مع جين خط جرثومة ‎IGHI4*01‏ فأري؛ عض
م الشكل 78: 711 227111 مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل 9 ؟(ا): اصطفاف ‎VL‏ 22304 مع جين خط جرثومة ‎IGKV12-46*01‏ فأري؛ الشكل 4 "(ب): اصطفاف ‎VL‏ 22304 مع جين خط جرثومة ‎IGKI2*01‏ فأري؛ الشكل ‎٠‏ ؟(أ): اصطفاف ‎VL‏ 22304 مع جين خط جرثومة ‎IGKVI-NLI*01‏ آدمي؛ ° الشكل ٠؟(ب):‏ اصطفاف ‎VL‏ 22304 مع جين خط جرثومة 1616[2*01 آدمي؛ الشكل ‎VL :©١‏ 22304 مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل 7؟(أ): اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة ‎IGHVI-18*01‏ فأري؛ الشكل 7؟(ب): اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة 101106-3*01 فأري؛ الشكل 7؟(ج): اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة 161114*01 فأري؛ ‎٠‏ الشكل ‎(vy‏ اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة 161171-2*02 آدمي؛ الشكل ١"(ب):‏ اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة 161101-26*01 أدمي؛ الشكل ‎(a) TY‏ اصطفاف ‎VH‏ 22304 مع جين خط جرثومة 161116*01 آدمي؛ الشكل 4 3: ‎VH‏ 22304 مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل ‎ive‏ النشاط المضاد لورم من أجل ‎Mab‏ 224011 فأري وحده أو متحد مع ‎Navelbine® Vo‏ على نموذج الورم 110111441 رقعة دخيلة مرسخة؛ الشكل ¥71: تقييم ‎Mabs‏ المضادة ‎c-Met‏ على انقسام 11177150؛ الشكل ‎:3١7‏ تقييم ‎Mabs‏ المضادة ‎c-Met‏ على تكوين أنبوب ‎(HUVEC‏ ‏الشكل 8؟(أ): اصطفاف ‎VL‏ 1181 مع جين خط جرثومة 161674-79*01 فأري؛ الشكل 8/“(ب): اصطفاف ‎VL‏ 1181 مع جين خط جرثومة 101614*01 فأري؛ أ ‎Jal‏ 4؟(ا): اصطفاف ‎VL‏ 1181 مع جين خط جرثومة ‎IGKV3D-7*01‏ آدمي؛ الشكل 9"(ب): اصطفاف ‎VL‏ 11151 مع جين خط جرثومة ‎IGKJ4*02‏ دمي؛ الشكل ‎:4٠0‏ طراز ‎11E1 VL‏ مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل ١6لا):‏ اصطفاف ‎VH‏ 1181 مع جين خط جرثومة 1-7*01 1011177 فأري؛ الشكل ١؛(ب):‏ اصطفاف 11811711 مع جين خط جرثومة 161104-1*01 فأري؛ ‎Yo‏ الشكل ‎4١٠‏ (ج): اصطفاف 11811711 مع جين خط جرثومة 161113*01 فأري؛ الشكل 047): اصطفاف ‎VH‏ 1181 مع جينات خط جرثومة ‎IGHV1-2*02‏ ‎IGHV1-46*01‏ أدمي؛
£1 ‎Jal‏ 7؛(ب): اصطفاف ‎VH‏ 1121 مع جين خط جرثومة 161114*03 أدمي؛ الشكل ‎VE‏ 711 1181 مكتسب السمة الآدمية مع طفرات مذكورة؛ الشكل 44 لا) و؛؛(ب): اختبار ‎Phosphorylation‏ لأجل ‎c-Met‏ على خلايا ‎A549‏ تقييم ‎Mabs 5 111‏ نقية ‎224G11‏ في غياب أو في وجود ‎(HGF‏ إما عند ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر 0 (شكل 44()) أو في نطاق جرعة من ‎١.00٠5‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر لتحديد قيمة 0 (شكل 4 (ب))؛ الشكل ©؛: اتحاد في الجسم من ‎Mab‏ 224611 مع ‎Navelbine®‏ في نموذج رقعة دخيلة ‎{NSCLC NCI-H441‏ الشكل ‎cg‏ اتحاد في الجسم من ‎Mab‏ 224611 مع ‎Doxorubicin‏ في نموذج رقعة دخيلة ‎{NSCLC NCI-H441 ٠‏ الشكل 7؛: اتحاد في الجسم من ‎Mab‏ 224011 مع ‎Docetaxel‏ في نموذج ‎dad)‏ دخيلة ‎{NSCLC NCI-H441‏ الشكل 8؟: اتحاد في الجسم من ‎224G11 Mab‏ مع ‎Temozolomide‏ في نموذج رقعة دخيلة ‎{NSCLC NCI-H441‏ الأشكال 049)؛ £9)( 2)£9( و (د): تأثير ‎Mobs‏ مضادة ‎c-Met‏ على نمو أجسام كرونية 1087-146؛ ‎(Tor Jal)‏ و١٠*(ب):‏ النشاط في المعمل لأشكال هجينة ومتكسبة السمة الآدمية من 224611 في اختبار ‎¢phospho-c-Met‏ ‎zo) Jil‏ معايير ضبط تحليل ‎¢Biacore‏ ‏9 الشكل ‎oY‏ نشاط 224011 في الجسم على خلايا ‎MDA-MB-231‏ مزدرعة بصورة مشتركة مع خلايا ‎MRCS‏ كمصدر ‎HGF‏ آدمي على فثئران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية؛ الشكل ‎roy‏ اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ مع 20-01462. يقاس نشاط ارتباط مضاد ‎Fo-c-Met‏ في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ فأري لتحديد ‎Yo‏ مضادات الأجسام الفأرية النقية أحادية النسخ 1181 224011 و227111. تقاس نشاطات الارتباط المعتمدة على الجرعة فوق ]70-0148 مخلق مغطى مع مادة لدنة عند £04 نأنومتر؛
الشكل ‎tof‏ اختبار منافسة 11617-0148: في هذا الاختبار المعتمد على ‎ELISA‏ يتحدد ارتباط متخلف ‎Fo-cMET‏ مخلق مع ‎HGF‏ مغطى بمادة لدنة في وجود مضادات أجسام فأرية نقية أحادية النسخ 1181 224011 و227111 مع اتحاد مضاد ‎Fo‏ فأري ويقاس عند +45 نانومتر؛
° الشكل ‎too‏ اصطفاف ترتيبات ‎amino acid‏ لمجالات سيطرة ‎VH‏ مخلقة مشتقة من 1. يصطف ترتيب ‎VH amino acid‏ 227111 مع ترتيب الإطار المستلم الآدمي المنتقى؛ مع ذكر فقط ‎amino acids‏ الموجودة المختلفة عن ترتيب ‎VH‏ 227111 الفأري. إن ترتيبات ‎VH 5 1122 227111 1‏ 1173 مطابقة لطرازات مزدرعة مكتسبة السمة الآدمية لمجال سيطرة 1 الفأري ‎227HT‏ مع وجود المتخلفات الفأرية الباقية بحروف سوداء بارزة. في 1173 تتغير
7 ‏متخلفات (*) بالنسبة للأجزاء الآدمية المقابلة لها. في 1172 تمت دراسة‎ ٠١ ‏تلقائيا‎ ٠ ‏متخلفات من المجموعة الثالثة (3). في 112117711؛ أجريت طفرة لتسعة متخلفات من المجموعة‎ )١( ‏وتظل فقط + متخلفات من المجموعة الأولى‎ ALE ‏إلى أجزائها الآدمية‎ (Y) ‏الثانية‎ ‏فأرية؛‎
‎Ja)‏ 07 اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام
‎٠‏ !2271 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ‎Fe-cMet‏ في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 227111 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس ‎cil ds‏ ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ‎Fe-cMet‏ مخلق مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 227111 مشتقة من مجالات سيطرة ‎VH‏ ‏مكتسبة السمة الآدمية عند £04 نانومتر وعندئذ تقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/
‎٠٠‏ المرجعي؛ الشكل ‎tov‏ اختبار ارتباط معتمد على ‎BLISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام مشتقة من 227111 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ]76-0046 في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fo‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 1 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية. يقاس نشاط ارتباط معتمد على الجرعة فوق ‎Yo‏ 70-0818 مخلق مغطى بمادة لدنة لمضاد جسم 227111 مشتق من ‎HZAVH‏ مكتسب السمة
‏الآدمية عند £04 نانومتر وعندئذ تقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛
م
الشكل 28: اختبار منافسة ‎HGF-cMet‏ لمضادات أجسام فأرية ومخلقة 227111. في هذا
الاختبار المعتمد على ‎(ELISA‏ يتحدد ارتباط متخلف ‎Fe-cMet‏ مخلق مع ‎HGF‏ مغطى بمادة لدنة في وجود أشكال مختلفة لمضاد الجسم 227111 مع مضاد جسم مضاد ‎c-Met‏ ‎ue biotinylated‏ خاص. يتم اختبار ومقارنة مضاد جسم أحادي النسخ 227111 فأري نقي؛
© مضادات أجسام مخلقة ومشتقة من 11741711 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية مشتقة من 211 من أجل قدراتها على التنافس مع ارتباط ‎HGF-cMet‏ عند القياس عند ‎49٠‏ نانومتر؛ الشكل 109 ترتيب مجال سيطرة متغير مكتسب السمة الآدمية 1711 227111-117. *
تطابق ‎amino acids‏ المتغيرة واقعيا إلى الأجزاء الآدمية المقابلة لها؛ !؛ إن تطابق ‎amino acids‏ المكتسبة السمة الآدمية أثناء ازدراع 1123 إلى ‎¢HZ1‏ §¢ تطابق ‎amino acids‏
‎٠‏ مكتسبة السمة الآدمية في ترتيب ‎VH‏ 227111-112 النهائي؛
‏الشكل ‎:٠0‏ اصطفاف ترتيبات ‎amino acid‏ لمجالات سيطرة ‎VH‏ مخلقة مشتقة من 1121. يصطف ترتيب ‎VH amino acid‏ 1181 مع ترتيب الإطار المستلم الآدمي المنتقى» مع ذكر فقط ‎amino acids‏ الموجودة المختلفة عن ترتيب ‎VH‏ 1151 الفأري. إن ترتيبات 11851 ‎VH2 «HZ VHI‏ و7113 مطابقة لطرازات مزدرعة مكتسبة السمة الآدمية لمجالات سيطرة ‎VH‏
‎٠‏ الفأري 1181؛ مع وجود المتخلفات الفأرية الباقية بحروف سوداء بارزة. في ‎HZ VH3‏ تتغير تلقائيا ‎١‏ متخلفات (*) بالنسبة للأجزاء الآدمية المقابلة لها. في ‎(HZ VH2‏ تمت دراسة 7 متخلفات من المجموعة الثالثة (9). في 17111 ‎(HZ‏ أجريت طفرة لخمسة متخلفات من المجموعة الثانية ‎)١(‏ إلى أجزائها الآدمية المقابلة. وتظل فقط © متخلفات من المجموعة الأولى ‎)١(‏ فأرية؛
‏7 الشكل ‎sy‏ اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل :70-0816 لمضادات أجسام 111 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد 70-2816 في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات ‎Fe alias‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 1181 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ‎Fe-cMet‏ مخلق مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 1181 مشتق من مجالات سيطرة ‎VH‏ مكتسبة السمة
‎Yo‏ الآدمية عند £04 نانومتر وعندئذ تقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛
‏الشكل 17: اصطفاف ترتيبات ‎amino acid‏ لمجالات سيطرة ‎VL‏ مخلقة مشتقة من 1181. يصطف ترتيب ‎VL amino acid‏ 1121 مع ترتيب الإطار المستلم الآدمي المنتقى؛ مع ذكر
£9 فقط ‎amino acids‏ الموجودة المختلفة عن ترتيب ‎VL‏ 1181 الفأري. إن ترتيبات ‎HZ‏ 1181 ‎VL2 »1‏ و ‎VL3‏ مطابقة لطرازات مزدرعة مكتسبة السمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VL‏ الفأري 111 مع وجود المتخلفات الفأرية الباقية بحروف سوداء بارزة. في ‎(HZ VL3‏ تتغير تلقائيا ‎٠‏ متخلفات (* بالنسبة للأجرزاء الآدمية المقابلة لها. في ‎(HZ 712 ٠‏ تمت دراسة ‎A‏ متخلفات من المجموعة الثالثة (7). في 171,1 ‎(HZ‏ أجريت طفرة لثمانية متخلفات من المجموعة الثانية (7) إلى أجزائها الآدمية ‎ALE‏ وتظل فقط ؛ متخلفات من المجموعة الأولى ‎)١(‏ فأرية؛ الشكل 17: اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام 111 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ]70-0148 في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث ‎٠‏ تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 1181 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ‎Fe-cMet‏ مخلق مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 1181 مشتق من مجالات سيطرة ‎VL‏ مكتسب السمة الآدمية عند £04 نانومتر وعندئذ تقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛ . الشكل 14: اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام ‎٠‏ 1181 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ‎Fe-cMet‏ في اختبار معتمد على ‎BLISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 1121 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ‎Fe-cMet‏ مخلق مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 1181 مشتقة من مجالات سيطرة ‎VH‏ مكتسبة السمة الآدمية فردية أو مزدوجة عند £04 نانومتر وعندئذ تقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين ‎Y.‏ الأصلي/ المرجعي؛ الشكل 10 اصطفاف ترتيبات ‎amino acid‏ لترتيب مجال سيطرة ‎.224G11 VH‏ يصطف ترتيب ‎VH amino acid‏ 224011 مع ترتيب ‎VH‏ 227111 (المتخلفات غير المتماثلة تحتها خط) ومع ترتيب الإطار المستلم الآدمي المنتقى؛ مع ذكر فقط ‎amino acid‏ الموجودة المختلفة عن ترتيب 1711 224011 الفأري. إن ترتيب ‎HZ VHO‏ 2240611 يطابق طراز مكتسب السمة ‎Yo‏ الآدمية "1007 كامل/ معتمد على 227111" لمجال سيطرة ‎VH‏ فأري 224011. في هذا ‎asi il‏ لا تتبقى متخلفات ‎IMGT-CDRs‏ خارجية فأرية؛
الشكل 16: اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام 1 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد 70-316 في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 224011 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية مشتقة من 117177110. يقاس نشاط ارتباط معتمد على الجرعة فوق ‎Fo-‏ ‎cMet ©‏ مخلق مغطى بمادة لدنة لمضاد جسم 224611 مشتق من مجال سيطرة ‎VH‏ مكتسب السمة الآدمية ”18407- كامل" عند £004 نانومتر وعندئذ يقارن مع ذلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛ الشكل 17: اختبار منافسة ‎HGF-cMet‏ لمضادات أجسام فأرية ومخلقة 224611. في هذا الاختبار المعتمد على ‎ELISA‏ يتحدد ارتباط متخلف ‎Fe-cMet‏ مخلق مع ‎HGF‏ مغطى بمادة ‎٠‏ ا لدنة في وجود أشكال مختلفة لمضاد الجسم 224011 مع مضاد جسم مضاد ‎c-Met‏ ‏0 غير خاص. يتم اختبار ومقارنة مضاد جسم أحادي النسخ 224611 فأري نقي؛ مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 224011 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية مشتقة من ‎HZVHO‏ من أجل قدراتها على التنافس مع ارتباط ‎HGF-cMet‏ عند القياس عند 5960 نانومتر؛ ‎Vo‏ الشكل 18: اصطفاف ترتيبات ‎amino acid‏ لترتيبات مجال سيطرة ‎VL‏ 224611. يصطف ترتيب ‎VL amino acid‏ 224011 مع ؟ من ترتيبات الإطار المستلم الآدمي المنتقاة. مع ذكر فقط ‎amino acids‏ الموجودة المختلفة عن ترتيب ‎VL‏ 224611 الفأري. يطابق ترتيب 224611 ‎HZ VL3‏ طراز مكتسب السمة الآدمية "0011- أقصر" لمجال سيطرة ‎VH‏ الفأري 224611 بينما يطابق ‎HZ VL6‏ طراز "0181©- أطول"؛ وتكون المتخلفات الفأرية الباقية بحروف سوداء ‎٠‏ بارزة. بالنسبة لكل من الطرازات الأساسية المكتسبة السمة الآدمية؛ تتسلسل المتخلفات الفأرية الباقية من أجل عملية إكساب سمة آدمية إضافية حيث تطابق * ‎amino acids‏ مكتسبة السمة الآدمية في الطرازات الأساسية؛ ويطابق ‎YF‏ و١‏ مجموعات المتخلفات لتصميم الطرازات مكتسبة السمة الآدمية المنجزة؛ الشكل 19: اختبار ارتباط معتمد على ‎ELISA‏ من أجل ‎Fe-cMet‏ لمضادات أجسام ‎Yo‏ 224011 مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ‎Fe-cMet‏ في اختبار معتمد على ‎ELISA‏ حيث تستخدم اتحادات مضاد ‎Fe‏ آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 220611 هجينة ومكتسبو السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ‎Fo-cMet‏ مخلق عض
0١ ‏مكتسبة‎ VLG 5 VL3 ‏مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 224011 مشتقة من مجالات سيطرة‎ ‏نانومتر وتقارن مع تلك لمضادات الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛‎ 40٠ ‏السمة الآدمية عند‎ ‏لمضادات أجسام‎ Fe-cMet ‏من أجل‎ ELISA ‏اختبار ارتباط معتمد على‎ ve ‏الشكل‎ ‏حيث‎ ELISA ‏مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد ]176-0816 في اختبار معتمد على‎ 11 ‏آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 224011 هجينة‎ Fe alias ‏تستخدم اتحادات‎ © ‏مخلق‎ Fe-cMet ‏ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق‎ ‏مكتسبة السمة‎ VIL ‏مغطى بمادة لدنة لمضاد أجسام 224011 مشتقة من مجالات سيطرة‎ ‏الآدمية عند £04 نانومتر وتقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛‎ ‏لمضادات أجسام فأرية ومخلقة 224011. في هذا‎ HGF-cMet ‏اختبار منافسة‎ :7١ ‏الشكل‎ ‏مغطى بمادة‎ HGF ‏مخلق مع‎ Fe-c-Met ‏يتحدد ارتباط متخلف‎ «ELISA ‏الاختبار المعتمد على‎ ٠ c-Met ‏لدنئة في وجود أشكال مختلفة لمضاد الجسم 224011 مع مضاد جسم مضاد‎ ‏غير خاص. يتم اختبار ومقارنة مضاد جسم أحادي النسخ 224011 فأري نقي؛‎ 0 ‏مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 224011 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية مشتقة من‎ gov ‏عند القياس عند‎ HGF-cMet ‏من أجل قدراتها على التنافس مع ارتباط‎ 41 ‏نانومتر؛‎ Ne ‏مكتسب السمة الآدمية‎ 224611 VL ‏لترتيب مجال سيطرة‎ amino acid ‏الشكل 77: ترتيب‎
HZ VL6 ‏المتغيرة واقعيا إلى أجزائها الآدمية المقابلة في طراز‎ amino acids ‏تطابق‎ * .VLA ‏المكتسبة السمة الآدمية أثتاء تنفيذ تحويل‎ amino acids ‏إن تطابق‎ of ‏الأساسي؛‎ ‏المتبقية فأرية في ترتيب‎ amino acids ‏يي تطابق‎ HZ VL4 ‏6م 117 إلى‎ £224G11-HZ 4 ‏9ص‎ ‏الشكل 77: اختبار ارتباط معتمد على 81188 من أجل :70-0816 لمضادات أجسام‎ ‏حيث‎ ELISA ‏في اختبار معتمد على‎ Fo-cMet ‏مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد‎ 1 ‏آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 220611 هجينة‎ Fe ‏تستخدم اتحادات مضاد‎ ‏مخلق‎ Fe-cMet ‏ومكتسبة السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق‎ ‏مغطى بمادة لدنة لمضادات أجسام 224011 مشتقة من مجالات سيطرة مكتسبة السمة الآدمية‎ Yo ‏فردية أو مزدوجة عند £04 نانومتر وتقارن مع تلك لمضاد الجسم الهجين الأصلي/ المرجعي؛‎ ov ‏لمضادات أجسام فأرية ومخلقة 224011. في هذا‎ HGF-cMet ‏الشكل 4 7: اختبار منافسة‎ ‏مغطى بمادة‎ HGF ‏يتحدد ارتباط متخلف 70-2018482 مخلق مع‎ «ELISA ‏الاختبار المعتمد على‎ c-Met ‏لدنة في وجود أشكال مختلفة لمضاد الجسم 224011 مع مضاد جسم مضاد‎ ‏غير خاص. يتم اختبار ومقارنة مضاد جسم أحادي النسخ 224011 فأري نقي؛‎ 0 ‏مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 224611 هجينة ومكتسبة السمة الآدمية كليا من أجل‎ © ‏عند القياس عند £00 نانومتر؛‎ HGF-cMet ‏قدراتها على التنافس مع ارتباط‎ ‏لمضادات أجسام‎ Fe-cMet ‏من أجل‎ ELISA ‏اختبار ارتباط معتمد على‎ Vo ‏الشكل‎ ‏حيث‎ ELISA ‏في اختبار معتمد على‎ Fe-cMet ‏مخلقة. يقاس نشاط ارتباط مضاد‎ 1 ‏آدمي لتحديد مضادات أجسام مخلقة مشتقة من 22011 وهجينة‎ FC alias ‏تستخدم اتحادات‎ ‏مكتسب السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق 70-0848 مخلق‎ ٠ ‏مغطى بمادة لدنة لطفرات فردية من مضادات أجسام 224011 مكتسب السمة الآدمية كليا‎ ‏عند £0 نانومتر وتقارن عندئذ مع تلك كمضادات الجسم الهجين الأصلي/‎ VLA ‏مشتقة من‎ ‏المرجعي؛ ا‎ ‏لمضادات أجسام‎ Fe-cMet ‏من أجل‎ ELISA ‏الشكل 77: اختبار ارتباط معتمد على‎ ‏حيث‎ ELISA ‏ارتباط مضاد 70-0848 في اختبار معتمد على‎ bli ‏مخلقة. يقاس‎ 224611 ١ 22011 ‏آدمي لتحديد مضادات أجسام هجينة ومخلقة مشتقة من‎ Fe ‏تستخدم اتحادات مضاد‎ ‏مكتسب السمة الآدمية. تقاس نشاطات ارتباط معتمدة على الجرعة فوق ]70-0148 مخلق‎ ‏مغطى بمادة لدنة لطفرات فردية ومتعددة من مضادات أجسام 224011 مكتسبة السمة الآدمية‎ ‏مشتقة من 714 عند £04 نانومتر وتقارن عندئذ مع تلك كمضادات الجسم الهجين‎ LIS ‏الأصلي/ المرجعي؛ و‎ © ‏لمضادات أجسام فأرية ومخلقة 224011. في هذا‎ HGF-cMet ‏الشكل 77: اختبار منافسة‎ ‏مغطى بمادة‎ HGF ‏مخلق مع‎ Fe-cMet ‏يتحدد ارتباط متخلف‎ (ELISA ‏الاختبار المعتمد على‎ biotinylated cMet ‏في وجود أشكال مختلفة لمضاد الجسم 224011 مع مضاد جسم‎ Asal ‏غير خاص. يختبر ويقارن مضاد جسم أحادي النسخ 224011 فأري نقي» هجين وطفرات‎
VLA ‏وحيدة أو متعددة لمضادات أجسام مخلقة 224011 مكتسبة السمة الآدمية كليا مشتقة من‎ Yo ‏عند القياس عند £04 نانومتر.‎ HGF-cMet ‏من أجل قدراتها على التنافس على ربط‎ oy c-Met ‏توليد مضادات أجسام مضادة‎ :١ ‏مثال‎ ‏أسابيع سواء ؟‎ A ‏عمرها‎ BALB/C ‏تحصن فئران‎ c-Met ‏لتوليد مضادات أجسام مضادة‎ ‏على أغشية البلازما لها‎ c-Met ‏يظهر‎ CHO ‏إلى © مرات تحت الجلد مع خط خلية مزروع‎ ‏خلية/ جرعة/ فأر) أو ؟ إلى ¥ مرات مع بروتين اندماج مجال سيطرة خارج الخلية‎ '٠١77١( ‏أو أجزاء‎ (R&D Systems, Catalog # 358MT) ‏ميكروجرام/ جرعة/ فأر)‎ 15-٠١( c-Met © ‏كاملة للتحصين الأول ومادة‎ Freund ‏من هذا البروتين المخلق مختلطة مع مادة مساعدة‎ ‏غير كاملة للتحصينات التالية. تجرى أيضا بروتوكولات مختلطة تعطى فيها‎ Freund ‏مساعدة‎ ‏تعطى‎ Ala ‏وبروتينات مخلقة. قبل © أيام من اندماج‎ CHO-cMet ‏الفشران كل من خلايا‎ ‏الفئران جرعة تعززية في البريتون أو في الوريد مع البروتين المخلق أو الأجزاء. عندئذ تجمع‎ ‏وتخضع لانتقاء‎ (ATCC) SP2/0-Agld ‏طحالات الفئران وتندمج مع خلايا ورم نخاعي‎ ٠ ‏تجرى ؛ اندماجات. بصفة عامة؛ لتحضير مضادات أجسام أحادية النسخ أو أجزائها‎ .7 ‏خاصة فأرية المصدر؛ يمكن الرجوع إلى التقنيات الموصوفة بصفة خاصة في‎ diay dg) ‏الكتيب: ا‎ "Antibodies" (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp. 726, 1988) ٠ ‏أو تقنية تحضير الأورام الهجينة الموصوفة بواسطة:‎
Kohler and Milstein (Nature, 256:495-497, 1975). ‏على البروتين المخلق‎ ELISA ‏تخضع الأورام الهجينة الناتجة للفحص أوليا بواسطة‎ ‏بنكرياسية 5:003؛ وورم‎ cAS49 NSCLC ‏على خطوط خلية‎ FACS ‏وعندئذ تحليل‎ c-Met ‏لتأكيد أن مضادات الأجسام‎ )١ ‏(الأنماط التمثيلية موجودة في الشكل‎ UST-MG ‏دبقي أولي‎ Ye ‏الناتجة قادرة أيضا على إدراك المستقبل الأصلي على خلايا الورم. يتم تكبير المواد المتفاعلة‎ ‏هجينة؛ تنقى وتفحص‎ all ‏الموجبة على هذين الاختبارين؛ يتم النسخ ويتم استرجاع مجموعة‎ .8«003 ‏من أجل قدرتها على تثبيط انقسام خلية في المعمل في نموذج‎ ١ (RPMI ‏في أطباق بها 97 عين في وسط‎ BXPC3 ‏لذلك الغرض تزرع 50000 خلية‎ ‏ساعة من الزراعة في الطبق؛‎ YE ‏بدون 571. بعد‎ «Glutamine ‏مللي جزيئي جرامي/ لتر‎ Ye 560 ‏تضاف مضادات الأجسام المراد اختبارها عند تركيز نهائي يتراوح من 0.0091 إلى‎ ‏نانوجرام/ ملليلتر من 011017. بعد ¥ أيام؛‎ ٠٠١ ‏دقيقة قبل إضافة‎ ٠١ ‏ميكروجرام/ ملليلتر لمدة‎
YYo)
o¢ ‏ساعة. يقدر‎ V1 ‏لمدة‎ PH]thymidine ‏تعالج الخلايا بدفعات نبضية من 0+ ميكروكيورس من‎ trichloroacetic acid ‏غير قابل للذوبان في‎ DNA ‏المندمج في‎ PH]thymidine lade ‏كميا‎ ‏بعدد وميض سائل. تتمثل النتائج كبيانات مجردة للتقييم فعليا للتأثير المضاد المتأصسل لكل‎ («Ys (I) ‏(الشكل‎ Mab ‏على الأقل من انقسام الخلية كمواد‎ 75٠ ‏يتم عندئذ تقييم مضادات الأجسام التي تشبط‎ > ‏لذلك الغعرض؛ تتولد خطوط خلية ثابتة‎ e-Met ‏مزروعة‎ WIA ‏على‎ BRET ‏طافية بتحليل‎ ‏تتوزع الخلايا في‎ .C-Met-K1100A-YFP 5 C-Met-Rluc | C-Met-Rluc ‏تظهر‎ CHO ‏لمدة يوم أو‎ 75 FBS/DMEM-FI2 ‏أطباق صغيرة بيضاء بها 97 عين في وسط مزرعة‎ ‏للسماح بارتباط‎ 70 COp ‏يومين قبل تجارب 8887. تزرع الخلايا أولا عند 7١؟*مئوية مع‎ ‏عين طوال الليل. في‎ [DMEM ‏ميكرولتر‎ ٠٠١0 ‏الخلية مع الطبق. توضع الخلايا عندئذ مع‎ ٠
PBS ‏تحضن الخلايا في‎ PBS ‏وتغسل الخلايا بسرعة مع‎ DMEM ‏الحال قبل التجربة؛ يزال‎ ‏دقائق عند‎ ٠١ ‏في وجود أو غياب مضادات الأجسام المراد اختبارها أو مركبات مرجعية؛‎ ‏ميكرولتر. بعد‎ ٠٠ ‏في حجم نهائي‎ HGF ‏مع أو بدون‎ coelenterazine ‏"مثوية قبل إضافة‎ ١ 6858 ‏دقائق إضافية عند 7١؟"“مئوية؛ يبدأ اكتساب انبعاث الضوء عند‎ ٠١ sad ‏الحضانة‎ ‏(ثانية واحدة/ طول الموجة/‎ (Berthold) Mithras luminometer ‏نانومتر باستخدام‎ oY. 3 ve ‏مرة).‎ ١١ ‏عين ويكرر‎ ‏محددة مسبقا:‎ BRET ‏إن نسبة‎ [Angers et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:3684-3689] 2/858 ‏07]/(انبعاث عند‎ X ‏نانومتر)‎ £A0 ‏نانومتر)-(انبعاث عند‎ 07٠0 ‏مثل: [(انبعاث عند‎ ‏نانومتر) للخلايا‎ £A0 ‏نانومتر)/(انبعاث عند‎ oF ‏(انبعاث عند‎ Cf ‏نانومتر)» حيث يطابق‎ © ‏التي تظهر بروتين اندماج 8106 وحده في نفس الشروط التجريبية. إن تبسيط هذه المعادلة يبين‎ ‏نانومتر الناتجة عند وجود الشريكين» مصححة بنسبة‎ $A0/0Y ‏تطابق نسبة‎ BRET ‏أن نسبة‎ 8. ‏نانومتر الناتجة تحت نفس الشروط التجريبية؛ عندما يندمج الشريك فقط مع‎ 007٠ ‏عند وجوده في الاختبار. من أجل إمكانية القراءة؛ تتمثل النتائج‎ reniformis luciferase .٠٠٠١ *» ‏مضروبة‎ BRET ‏نسبة‎ mBU ‏يطابق‎ ¢(mBU) milliBRET ‏بوحدات‎ Yo ‏بدون نشاط متأصل‎ )١( ‏بعد هذا الاختبار الثاني في المعمل؛ يتم انتقاء ؛ مضادات أجسام‎ ‏(الشكل‎ BxPC3 ‏تثبيط بدرجة ملحوظة انقسام‎ (Y) ‏كجزيء كامل في اختبار الانقسام الوظيفي؛‎ ‏ارصن‎ co ‏(الشكل ؟). توصف مضادات الأجسام‎ c-Met dimerization ‏تثبيط‎ (Y) 5 ‏و ؟"(ب))‎ (yy ‏و227111. في‎ 22304 224G11 ¢11El ‏مثل‎ 1861 kappa ‏الثلاثة هذه من نوع مماثشل‎ ‏كمثال‎ (ATCC ‏المتولد بواسطة 080601601؛ والمتوافر عند‎ 505 Mab ‏التجارب» يضاف‎ ‏مقارن للنشاط المعضد المتأصل.‎ ‏يوضح الشكلان ؟ل(أ) و "(ب) أن 1181 224611؛ 22304 و227111 ليس لهم أي نشاط‎ ‏معضد مقارنة مع 505 الذي يحث إثارة تعتمد على الجرعة لانقسام الخلية في غياب مركب‎ ‏ترابطي. يلاحظ تثبيط مفيد لانقسام الخلية مع مضادات الأجسام الأربعة المنتقاة. إن 505 ليس‎ ‏في هذا الاختبار.‎ HGF ‏له تأثير على انقسام خلية يحثه‎ ‏ف‎ (FY ‏تلاحظ تاثيرات مفيدة تصل إلى تثبيط‎ dimerization ‏عند تقييم اخماد‎ ‏و 227111 على الترتيب.‎ 1181 223C4 »224611 ‏من أجل‎ dimerization ‏و7287 لأجل‎ ٠ ‏بالمقارنة مع الإشارات الأساسية في التجارب المقابلة؛ فإن مضاد الجسم 505 ليس له تأثير‎ .dimerization ‏في هذا النموذج لأجل‎ ْ c-Met ‏مثال ؟: إدراك بروتين بواسطة مضادات أجسام مضادة‎ ‏مع‎ ELISA ‏تجرى ¥ اختبارات‎ land) ‏لتمييز نمط إدراك مضادات الأجسام الثلاثة‎ ‏المخلق‎ e-Met-Fe ‏(الناتج من فصل بروتين‎ monomeric ‏المخلق؛ جزئه‎ c-Met ‏البروتين‎ Ve ‏المخلق).‎ SEMA ‏ومجال سيطرة‎ ‏توضح النتائج المقدمة في الشكل ؛ أن مضادات الأجسام الأربعة تدرك كل من البروتينات‎ ‏الأدمي‎ dimeric c-Met ‏هذا يغطى بروتين‎ ELISA ‏لإجراء تحليل‎ .monomeric 5 dimeric ‏طوال الليل عند‎ PBS ‏ميكروجرام/ ملليلتر في‎ ٠١,١ ‏عند تركيز‎ (R&D sytems, Cat# 358MT) ‏ساعتين عند‎ sad 7,5 gelatin ‏مع محلول‎ (Costar #3690) ‏؟؛تمثوية. بعد تشبع الأطباق‎ Ye ‏تحضن المواد الطافية للورم الهجبين لمدة ساعة‎ ؛ةيوئم"١‎ ‏الفأري‎ HRP ‏يضاف مضاد الجسم المضاد‎ (PBS ‏عند 7١#"مئوية. بمجرد الشطف مع‎
Ou / ١ ‏إلى كل عين عند تخفيف‎ (Jackson ImmunoResearch, Catalog #115-035-164) ‏وتحضن‎ (PBS ‏في‎ 70,00 Tween 20 /7 ١ gelatin) ELISA ‏في مثبت أس هيدروجيني‎ ‏يتم اكتشاف نشاط‎ PBS ‏الأطباق لمدة ساعة عند 7١7"مئوية. بعد ؟ مرات غسيل في‎ Ye ‏(008مل1). يترك التفاعل ليستمر‎ TMB ‏ميكرولتر من مادة خاضعة‎ ٠٠ ‏بإضافة‎ peroxydase ‏لمدة © دقائق عند درجة حرارة الغرفة. يتوقف التفاعل بإضافة © ميكرولتر/ عين من محلول‎
‎١ 11:50‏ جزيئي جرامي وتتم القراءة على قارئ طبق عند ‎49٠0‏ نانومتر. يجرى نفس نوع البروتوكول على ‎monomeric c-Met‏ ومجال سيطرة ‎SEMA‏ لكن في تلك الحالات تغطى البروتينات عند © ‎V5‏ ميكروجرام/ ملليلترء على الترثتيب. إن ‎Mab‏ 505 الداخل كمثال مقارن موجب يدرك كما هو متوقع بروتين ‎SEMA‏ لا ترتبط © 224011؛ 227111 و22304 مع مجال سيطرة ‎-SEMA‏ إن 1181 قادر على ربط ‎SEMA‏ ‏لتحديد ما إذا كان 1181 و505؛ المدرك كلاهما لمجال سيطرة ‎SEMA‏ يتنافسان على و متراكبة؛ يجرى تحليل ع:81800. إن نظام ‎BIAcore‏ المعتمد على ظاهرة رنين ‎Plasmon‏ سطح يوصل بيانات بمراقبة أحداث الارتباط في زمن حقيقي. من المفيد عندئذ تجميع مضادات الأجسام في ما يسمى بتجارب 'تخطيط ‎epitope‏ يصنف زوج مضادات ‎٠‏ أجسام غير قادرة على الارتباط في نفس الوقت مع جزيء مولد مضاد في نفس المجموعة (أماكن ربط متماثلة أو متجاورة). على النقيض عندما تكون أماكن الربط الخاصة بهما بعيدة بدرجة كافية للسماح بارتباط متزامن لكل من مضادات الجسم هذين فإنهما يصنفان لاحقا في مجموعتين مختلفتين. في تلك التجارب؛ يستخدم مولد المضاد شيوعا كمركب ترابطي (ساكن على رقاقة إحساس) وتستخدم مضادات الأجسام بدون أي تعليم مثل مواد تحليل (حالة ‎Vo‏ محلول). تجبرى كل التجارب الموصوفة أعلاه على ‎BlAcore Xl‏ ‎(GE Healthcare Europe GmbH)‏ تجهز رقاقة إحساس ‎(BIAcore) CM5‏ منشطة مع ‎Mab‏ ‏فأري مضاد ‎(R&D System ref.
MABOS0) Tag-6His‏ باتباع إرشادات الصانع باستخدام مجموعة اقتران ‎amine‏ (©:81800). يكون مثبث الأس الهيدروجيني © المتدفق ‎(HBS-EP)‏ ومثتبت أس هيدروجيني التجديد ‎(HCI Glycine)‏ من ‎-BlAcore‏ ‏نحصل على طراز مخلق قابل للذوبان لمستقبل ‎HGF‏ الآدمي الناتج مثل جزيء هجين ‎c-Met-Fe-Tag His‏ من أنظمة ‎(ref. 358-MT-CF) R&D‏ تتم التجارب عند © ؟"مئوية؛ عند معدل تدفق ‎٠١‏ ميكرولتر/ الدقيقة. يحقن محلول ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر من ]6-846 في مثبت أس هيدروجيني متدفق خلال دقيقة على خلية تدفق ؟ ‎(fe2) (floweell2)‏ نموذجيا يتم إمساك ‎Ye‏ .77 راع للشكل القابل للذوبان من ]16-. تستخدم خلية التدفق ‎(fel) (floweelll) ١‏ كمرجع لفحص أي ارتباط غير خاص لمضادات الأجسام مع بنية رقاقة الإحساس.
ov ‏تجرى حقنات متسلسلة لمضادات الأجسام المراد اختبارها. يحقن مضاد جسم على كل من‎ ‏خليتي التدفق خلال دقيقتين. يحقن عندئذ مضاد جسم ثان (أو نفس الأول) في نفس الشروط.‎ ‏إذا لم يلاحظ ارتباط مفيد تجرى حقنة ثالثة مع مضاد جسم آخر. تتجدد رقاقة الإحساس عندئذ‎ ‏ثانية لمثتبت أس هيدروجيني التجديد. يتم التخلص من كل من مضادات‎ Fe ‏بحقن واحد لمدة‎ ‏عند هذه المرحلة.‎ c-Met-Fe ‏الأجسام‎ ° ‏تحليل النتائج‎ ‏على إخماد ارتباط مضاد الجسم "3" بنسبة‎ "A" ‏تحسب قدرة مضاد الجسم‎ ‏عند‎ MAD "8" ‏هي الاستجابة المقابلة لارتباط‎ R2A/B ‏حيث‎ :BIA/C=(R2A/B/R1B)x100 ‏عند حقنه أولا. إن‎ MAb "B" ‏و1818 هي الاستجابة المطابقة لارتباط‎ Mab "A" ‏بعد‎ 4a ‏لهما أماكن‎ By A ‏وبذلك يكون‎ B ‏تعني أن م قادر على إخماد ارتباط‎ 77١ ‏أقل من‎ 518/6 ٠ ‏ربط متجاورة.‎ ‏و505.‎ 1151 «Mabs ‏مع ؟‎ epitope ‏يتم تخطيط‎ ‏جدول ؟‎ 505 1181 2" Ab (B)
I ‏سم ا‎ ‏من أجل 1162-76 الممسوك بحقنات متسلسلة‎ RU 77/0 ‏تظهر رؤية الارتباط عند حوالي‎ ‏ميكروجرام/‎ ٠١ ‏(أول)» 505 (ثان) و1181 (ثالث) عند تركيز‎ Mabs 505 ‏دقيقتين من‎ sad Vo .))(# ‏ملليلتر عند كل منهم أن 505 و1181 يرتبطان بوضوح مع مكانين مميزين (الشكل‎ تتأكد هذه الملحوظة بالترتيب التبادلي لمضاد الجسم (الشكل *(ب)). يلخص جدول ¥ نسبة الحساب الناتجة مع الترتيبات المختلفة لمضادي الجسم هذين. إن القيم السوداء (أكبر من 7975) تعني أن ‎Mab A‏ لا يثبط ارتباط ‎Mab B‏ القيم بحروف سوداء ‎Ye‏ بارزة/ حروف مائلة (أقل من ‎(XY‏ تعني أن أماكن ارتباط كل من مضادي الجسم ‎(Bs A)‏ متماثلة أو قريبة بدرجة كافية بحيث تكون غير قادرة على ارتباط متزامن. مثال 7: تأثير ‎Mabs‏ على ‎c-Met phosphorylation‏ oA ‏يجرى‎ c-Met phosphorylation ‏على‎ c-Met ‏لتحديد نشاط مضادات الأجسام المضادة‎ ‏في كل عين من‎ 8549 Ada 900006 ‏10م105م. باختصار؛ تبذر‎ c-Met ELISA ‏اختبار‎ ‎٠٠١( HGF ‏ساعة قبل إضافة‎ VT ‏لمدة‎ LV + FCS + FI2K ‏أطباق بها 7 عيون في وسط‎ ‏نانوجرام/ ملليلتر)؛ تحرم الخلايا من الوسط ويضاف كل مضاد جسم مراد اختباره عند تركيز‎ ‏دقيقة بعد‎ ١١ ‏دقيقة قبل إثارة المركب الترابطي. لمدة‎ Yo ‏ميكروجرام/ ملليلتر لمدة‎ 7١ ‏نهائي‎ © ‏يضاف مثبت أس هيدروجيني تحلل بارد؛ تكشط الخلايا وتجمع مواد تحلل‎ (HGF ‏إضافة‎ ‏دقائق عند ؟"مئوية.‎ ٠١ ‏دورة في الدقيقة لمدة‎ ١9٠١٠١ ‏الخلية وتعالج بالطرد المركزي عند‎ ‏بالنسبة‎ JAY ٠- ‏وتخزن عند‎ (Pierce) BCA ‏تقدر المواد الطافية كميا مع مجموعة‎ ‏كمضاد جسم‎ (R&D ref.
AF276) c-Met ‏جسم ماعز مضاد‎ alias ‏يستخدم‎ (ELISA ‏لاختبار‎ ‏إمساك (يغطى طوال الليل عند ؛*مثوية) وبعد خطوة تشبع (ساعة عند درجة حرارة الغرفة) مع‎ ٠ ‏ميكروجرام بروتين من مواد تحلل الخلية‎ YO ‏يضاف‎ 725 TBS-BSA ‏مثبت أس هيدروجيني‎ ‏دقيقة عند درجة حرارة‎ 9٠0 ‏المختلفة إلى كل عين من طبق به 97 عين. بعد زمن حضانة لمدة‎ (Rabbit anti- phospho-c-Met ‏تغسل الأطباق ؛ مرات ويضاف مضاد جسم مضاد‎ dd jal) ‏بعد زمن حضانة لمدة ساعة إضافية و؛ مرات غسيل يضاف‎ .pY 1230-1234-1235 c-Met) ‏لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة وعندئذ تضاف مادة‎ (Biosource) ‏مضاد- أرنب-©118‎ Vo ‏قبل تقييم الإضاءة مع أداة 95 . توضح النتائج الموجودة في الشكل‎ Luminol ‏خاضعة‎ ‏أن 1181 2240611 22304 7227111 اا ل بط‎ (2) 505 Mab ‏و2659 على الترتيب مقارنة مع‎ 80 0 TA ‏بنسبة‎ c-Met phosphorylation ‏في هذا الاختبارء يلاحظ‎ .)747( c-Met phosphorylation ‏لأجل‎ casual ‏الذي يظهر تثبيط‎ .))(+ ‏تأثير قاعدي ضعيف (أقل من 770) مع مضادات الأجسام الأربعة المرشحة (الشكل‎ vs ‏حسب الوصف في الأمثلة العديدة الموجودة في براءة الاختراع هذه؛ لا يكون لهذا التأثير‎ ‏القاعدي الضعيف عواقب على نشاط مضادات الأجسام في اختبارات أخرى في المعمل وفي‎ ‏في هذا الاختبار تأثير قاعدي مفيد.‎ (lie ‏الجسم. يظهر 505 المستخدم كمثال‎ o-Met ‏معلم إشعاعيا بواسطة مضادات أجسام مضادة‎ HGF ‏مثال ؛: إزاحة‎ ‏تجرى‎ (HGF ‏قادرة على إزاحة‎ c-Met ‏لتحديد ما إذا كانت مضادات الأجسام المضادة‎ Yo ‏بها 97 عين‎ FlashPlate A ‏تجارب ارتباط. بإيجازء تتشبع أطباق صغيرة بروتين‎ ‏ميكرولتر/ عين؛ لمدة ساعتين عند‎ ٠٠١( PBS ‏في‎ 7 .* gelatine ‏مع‎ (Perkin Elmer)
oq ‏كبروتين تغطية. يضاف‎ (R&D Systems) ‏مخلق‎ c-Met-Fe ‏درجة حرارة الغرفة) قبل إضافة‎ ‏تحضن‎ PBS ‏ميكروجرام/ ملليلتر في‎ ١ o-Met-Fe ‏ميكرولتر من محلول‎ ٠٠٠١ ‏لكل عين‎ ‏المتبقية الحرة مع‎ A ‏الأطباق عندئذ طوال الليل عند ؛*مئوية. تتشبع إضافيا أماكن البروتين‎ ‏لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة.‎ (PBS ‏ميكروجرام/ العين في‎ ٠,*©( ‏غير خاص‎ 6 ‏بعد كل خطوة.‎ PBS ‏تغسل الأطباق مع‎ © ‏كيورس/ مللي‎ 5٠0٠١ ‏(نشاط خاص حوالي‎ ["PI-HGF ‏لاختبارات المنافسة؛ يقاس ارتباط‎ ‏ساكن في وجود تركيزات مختلفة من‎ c-Met ‏بيكوجزيئي جرامي مع‎ ٠٠0 ‏جزيء جرامي) عند‎ ‏أو‎ 227111 22304 224G11 1181 c-Met ‏مضادات الأجسام أحادية النسخ المضادة‎ ‏ميكروجزيئي جرامي في‎ ١ ‏بيكوجزيئي جرامي إلى‎ ١,١ ‏تتراوح من‎ (R&D Systems) HGF ‏عند أس هيدروجيني 7,4. تحضن الأطباق لمدة 71 ساعات عند درجة حرارة الغرفة؛ ثم‎ PBS ٠ ‏يتحدد الارتباط غير‎ (Packard Top Count Microplate Scintillation Counter ‏تعد على‎ 9G4 ‏إن مضاد الجسم أحادي النسخ‎ \HGF ‏ميكروجزيئي جرامي من‎ ١ ‏الخاص في وجود‎ ‏مقارن نوع‎ JUS ‏ويستخدم‎ E.coli ‏يدرك بصفة خاصة بروتين‎ c-Met ‏غير الموجه عند‎ ‏فأري.‎ 1801 files ‏الخاص الكلي كوظيفة لتركيز المركب‎ [2])-HGF ‏ترسم بيانيا النسبة المئوية لارتباط‎ ‏الترابطي على رسومات بيانية شبه لوغاريتم. تتحدد تركيزات المثبطات المختلفة المطلوبة لتثبيط‎ ‏بيانيا من منحنيات التنافس‎ (ICs) 78 ٠ ‏ارتباط المركب الترابطي الإشعاعي بنسبة‎ ‏ولا(ب)).‎ ()Y ‏الناتجة (الشكلان‎ (sigmoid) ‏السيجمويدية‎ ‏غير المعلم إشعاعيا قادرا على الإزاحة كليا لارتباط‎ HGF ‏حسب التوقع؛ يكون‎ ‏ساكن؛ بينما أن مضاد الجسم المقارن 904 لا يظهر أي نشاط مخمد‎ c-Met ‏مع‎ ] "11116" |*٠٠ ‏1181؛‎ c-Met ‏وا(ب)). إن مضادات الأجسام أحادية النسخ المضادة‎ ()Y ‏(الشكلان‎ HGF ‏ساكن؛ مع قيم‎ c-Met ‏مع‎ ]'”1[-11617 bli) ‏و 227111 قادرة على تثبيط‎ 223064 11 ‏نانوجزيئي‎ 0A 5 ‏نانوجزيئي جرامي‎ VV ‏نانوجزيئي جرامي» ؟ نانوجزيئي جرامي»‎ Yo ‏من‎ ICs 227111 ‏جرامي؛ على التوالي. إن قيم و10 المحددة لمضادات الأجسام 224611» 22304 و‎ 05 ‏والتي تكون بين ؟‎ lela) ‏غير المعلم‎ HOF ‏._مساوية لقيمة 105 المحددة من أجل‎ ‏نانوجزيئي جرامي؛ بينما يظهر مضاد الجسم 1181 قيمة 1050 أعلى.‎ c-Met ‏مثال 10 تثبيط التوغل بواسطة مضادات أجسام مضادة‎
“+ لتقييم التأثير المتبط لمضادات الأجسام المضادة ‎c-Met‏ على عملية ‎desi‏ تزرع خلايا 9 في الحجرة العليا من حجرات توغل ‎BD 131000284" Matrigel™‏ (عيون قطرها 1,0 مم مع أغشية ‎polycarbonate‏ مقاسها ‎A‏ ميكرومتر). تحرم خلايا ‎A459‏ من الوسط لمدة ‎Ye‏ ‏ساعة قبل إجراء اختبار التوغل. تزرع عندئذ 900065 خلية 8549 في مثبت أس هيدروجيني © جذب كيميائي (وسط ‎VY Hepes 7 ٠,١ BSA (DMEM‏ مللي جزيثي جرامي) في العين العلوية لكل حجرة؛ عند تغطية ‎Matrigel‏ سواء مع أو بدون مضاد الجسم المراد اختباره (تركيز ‎Mab‏ نهائي ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر). بعد حضانة ‎sad‏ ساعة واحدة للأطباق عند ‎ARTY‏ ‏مع ‎CO;‏ 25 تملا الحجرات السفلية مع سواء وسط نمو يحتوي على ‎5٠0٠‏ نانوجرام/ مليلتر من 1011067 أو مع وسط نمو وحده. تحضن الحجرات ‎ad‏ 8؛ ساعة إضافية عند 7١7"مئوية‏ ‎٠‏ على ‎CO,‏ 75. عند نهاية زمن هذه الحضانة؛ تزال برفق الخلايا الموجودة على السطح العلوي للمرشح مع ماسحة قطنية؛ تتحلل الخلايا المهاجرة إلى السطح السفلي للمرشح؛ تصبغ مع ‎Cutie‏ أس هيدروجيني صبغة ‎(Invitrogen) CyQuant GR‏ وتعد باستخدام قارئ استشعاع ‎Mithras LB940‏ 38:01010. تختبر كل الشروط كثلاثة مقادير متساوية. حسب التوقع يحث ‎HGF‏ توغل ملحوظ لخلايا الورم مساوي لذلك الملحوظ مع ‎7٠ FCS‏ ‎٠‏ الداخل ‎JES‏ مقارن موجب (الشكل ‎(A‏ إن 964 1601 الفأري الداخل كمثال مقارن نوع مماتل ليس له تأثير ملحوظ على التوغل القاعدي أو المحث مع ‎HOF‏ مقارنة بالخلايا المزروعة بدون 6. لا يلاحظ تأثير معضد مع 1181 ‎224G11‏ 22304 و227111 عند الإضافة المنفردة ويلاحظ تثبيط مفيد ومقارن للتوغل الذي يحثه ‎HGF‏ مع ‎Mabs‏ الثلاثة. مثال 1 تثبيط التثام جرح بمضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ ‏9 إن ‎HGF‏ يثير الحركة. لتحديد ما إذا كانت مضادات الأجسام المضادة ‎HGF‏ قادرة على ‎days‏ الانتقال» تنمو خلايا 110111441 حتى كثافة عالية ويتم إدخال ثغرة مع مقدمة ماصة 0. تثار الخلايا عندئذ للانتقال عبر الثغرة مع ‎٠٠١( HGF‏ نانوجرام/ ملليلتر) في وجود أو في غياب 1181. يتم أيضا تقييم العيون التي بها 1181 فقط. يتم تقييم كل شرط مختبر كستة مقادير متساوية وتجرى ؟ تجارب مستقلة. بعد حضانة طوال الليل»؛ تتم رؤية ‎WAY‏ مع ‎Axio‏ ‎-(objective x4) Vision Camera Y°‏ يحث ‎HGF‏ على هجرة كبيرة ناتجة عن انغلاق تام للثغرة خلال يوم واحد (الشكل 4). لا يؤثر 1801 غير مرتبط مع 9064 مستخدم كنظير مقارن على هجرة الخلية. يلاحظ تأثير ‎YYo)‏
المعضد كالمتوقع مع 505 عند إضافته بمفرده لكن يلاحظ تثبيط ملحوظ لهجرة الخلية مع مضاد الجسم هذا في وجود ‎HGF‏ قسم الثغرة التي تظل مفتوحة. ليس لدى جزء ‎Fab‏ في 505 أي تأثير معضد عند إضافته بمفرده. مع هذا لا يلاحظ أي نشاط لهذا الجزء في وجود ‎HGF‏ ‏كما هو ملاحظ مع النظير المقارن 964؛ ليس لدى 1181 ‎MAD‏ تأثير معضد عند إضافته © بمفرده حيث يتضح سلوكه كمضاد كامل في وجود ‎HGF‏ ‏مثال 7: اختبار التبعثر تبذر خلايا ‎SK-HEP-1‏ عند كثافة قليلة ) ‎TY ox)‏ خلية/ العين) في ‎Buda‏ به ‎YE‏ عين في ‎2٠١ FCS ae DMEM‏ وتنمو لمدة 4 7 ساعة قبل إضافة؛ في نفس الوقت؛ ‎٠٠١( HGF‏ نانوجرام/ ملليلتر) ومضادات أجسام مراد اختبارها ‎٠١(‏ ميكروجرام/ ملليلتر). بعد حضانة لمدة ‎٠‏ "لا ساعة؛ تثبت المستعمرات وتصبغ مع ‎7/٠١ Crystal Biolet‏ في ‎methanol‏ وتختبر من أجل التبعثر بصريا. يختبر كل شرط اختبار في ثلاثة مقادير متساوية وتجرى ؟ تجارب إن إضافة ‎HGF‏ إلى خلايا ‎SK-HEP-1‏ تحث تبعثر خلية ملحوظ (الشكل ‎)(٠١‏ ‏و١٠(ب)).‏ إن مضاد الجسم 9064 الداخل كمثال مقارن نوع مماثل ليس له تأثير لا بمفرده ولا ‎٠‏ في وجود ‎HGF‏ كما هو متوقع يظهر مضاد جسم 505 تأثير معضد مفيد وحده ولا يلاحظ تأثير متبط عند إضافة 505 مع ‎HGF‏ (الشكل ١٠(أ)).‏ لا يلاحظ تأثير معضد لا مع 1181 (الشكل ‎))(٠١‏ ولا مع 224611 (الشكل ١٠(ب))‏ المضاف وحده. يظهر تأثير مثبط مفيد جدا لمضادات الأجسام هذه في وجود ‎HOF‏ (الشكلان ‎)(٠١‏ و١٠(ب)).‏ مثال ‎A‏ اختبار تكوين أنيبيبات ثلاثية الأبعاد ‎Ye‏ تبذر ‎SK-HEP-1 WDA‏ عند ‎YX)‏ خلية/ عين في طبق به ‎Yi‏ عين في ‎DMEM‏ مع ‎Matrigel /7) + FCS‏ )04/0( وتحضن لمدة ‎"٠‏ دقيقة قبل إضافة؛ في نفس الوقت؛ ‎HGF‏ ‎٠٠١(‏ نانوجرام/ ملليلتر) ومضادات أجسام مراد اختبارها ‎٠١(‏ ميكروجرام/ ملليلتر). بعد حضانة لمدة 7 أيام؛ تختبر الخلايا لتكوين أنبوب بصري. يختبر كل شرط اختبار في ثلاثة مقادير متساوية وتجرى ؟ تجارب مستقلة. ‎Yo‏ إن إضافة ‎HGF‏ تحث تكوين أنبوب ‎SK-HEP-1‏ ملحوظ (الشكل ‎.)١١‏ إن مضاد الجسم 4 والداخل كمثال مقارن نوع مماثل ليس له تأثير لا بمفرده ولا في وجود ‎HGF‏ حسب التوقع فإن مضاد الجسم ‎SDS‏ يظهر تأثير معضد ملحوظ وحده ولا يلاحظ تأثير مثبط عند ‎YYo)‏
إضافة 505 مع 1167. لا يلاحظ تأثير مضاد مع 1181 22304 و2240611 المضافين وحدهم ويظهر تأثير متبط كامل مع كل من 1181 و22304 في وجود ‎(HGF‏ يلاحظ تثبيط جزئي لكنه مفيد مع ‎224G11Mab‏ ‎Jia‏ 4: تكوين أجسام كروية ° لتقييم قدرة مضادات الأجسام المضادة ‎c-Met‏ على تثبيط نمو ورم في المعمل؛ في نموذج أقرب إلى الحالة في الجسم؛ تتولد أجسام كروية لخلايا ورم دبقي أولي آدمية ‎.(ATCC # HTB-14) -6‏ تتفصل الخلايا النامية كطبقة أحادية مع ‎trypsine-EDTA‏ ‏ويعاد تعليقها في أوساط مزرعة خلية كاملة ‎(DMEM)‏ مدعمة مع ‎.7٠١ FBS‏ تبدأ تكوين الأجسام الكروية بتلقيح 6705 خلية في عيون فردية لأطباق مستديرة القاعدة بها 97 ‎Gab‏ في ‎.FCS—7) + 01080214 ٠‏ لمنع التصاق الخلية مع طبقة تحتية؛ تغطى الأطباق مسبقا مع ‎polyHEMA‏ في ‎ethanol‏ 7158 وتجفف بالهواء عند درجة حرارة الغرفة: تحضن الأطباق تحت شروط زراعة خلية قياسية عند 7١"“مئوية؛ ‎CO,‏ 705؛ في حضانات رطبة. تضاف مضادات أجسام أحادية النسخ نقية ‎٠١(‏ ميكروجرام/ ملليلتر) بعد ؟ و أيام من زراعة الجسم الكروي. يضاف ‎HGF‏ )£44 نانوجرام/ ملليلتر) مرة واحدة بعد 4 أيام زراعة. تحفظ الأجسام ‎١‏ الكروية في المزرعة لمدة ‎٠١‏ أيام على الأقل. عندئذ؛ يراقب نمو الجسم الكروي بقياس منطقة الأجسام الكروية باستخدام زجلة ذاتية القياس لبرنامج ‎Jia.
Axiovision‏ المنطقة بالميكرومتر المربع. يتم تقييم ‎VTA‏ جسم كروي لكل شرط. يبين الشكلان ‎(NY‏ و"١(ب)‏ أنه في وجود ‎7٠١ FCS‏ لا تلاحظ إثارة عند إضافة ‎HGF‏ ‏إلى الوسط الكامل. كما هو متوقع فإن المثال المقارن النوع المماثتل 964 ليس له تأثير على ‎Y-‏ نمو الجسم الكروي. يقلل 1181 و22304 بدرجة ملحوظة نمو الجسم الكروي في وجود وفي غياب ‎HGF‏ لا يلاحظ تأثير مع جزء ‎Fab‏ 505. مثال ‎:٠١‏ نشاط ‎Mabs‏ مضادة ‎c-Met‏ في الجسم في نموذج رقعة دخيلة ‎USTMG‏ ‏تسكن فثئران مزالة الغدة الصعترية عمرها 6 إلى ‎A‏ أسابيع في أقفاص معقمة على قمتها مرشح؛ مستبقاة في شروط معقمة ويتم التعامل معها طبقا للإرشادات الفرنسية والأوروبية. إن ‎Yo‏ خط خلية ورم دبقي أولي» 1087-1406 يظهر :0-146 وذاتي الإفراز من أجل ‎HGF‏ المركب الترابطي؛ ينتقى للتقييمات في الجسم. تحقن الفئران تحت الجلد مع ‎ARTY exe‏ عندئذ؛ بعد + أيام من ازدراع ‎Atal‏ تصبح الأورام قابلة للقياس (تقريبا ‎(Tae ٠٠١‏ تقسم الفئران إلى ir ‏مجم من‎ ١ ‏مع مقاس ورم متساوي وتعالج مرتين في الأسبوع مع جرعة‎ ET ‏مجموعات من‎ ‏كل مضاد جسم مراد اختباره. تراقب الفئران لملاحظة معدل نمو الرقعة الدخيلة وتغيرات وزن‎ ‏العرض * الارتفاع.‎ x ‏الطول‎ XT /)0(( » ‏الجسم. يحسب حجم الورم بالصيغة:‎ ‏وتوضح أن كل مضادات الأجسام المختبرة تثبط‎ ١١ ‏إن النتائج الناتجة ملخصة في الشكل‎ ‏بدرجة ملحوظة النمو في الجسم لخلايا 187-846. يظهر استخدام مضاد جسم معادل مضاد‎ © ‏أن التثبيط الملحوظ في الجسم مرتبط بصفة خاصة بضبط‎ A ‏في المجموعة‎ 0801( IGF-1R -HGF-cMet ‏محور‎ ‎NCI-H441 ‏في الجسم في نموذج رقعة دخيلة‎ c-Met ‏مضاد‎ Mabs ‏نشاط‎ :١١ ‏مثال‎ ‎«c-Met ‏تشتق 140111441 من سرطان غدي )55%( حليمي؛ تظهر مستويات عالية من‎ .c-Met RTK ‏بنائية من أجل‎ phosphorylation ‏وتظهر‎ ٠ (HGF ‏وقادر على إنتاج‎ c-Met ‏لتحديد ما إذا كان خط الخلية هذا يظهر مستويات عالية من‎ -(Quantikine HGF; R&D systems) LS ELISA ‏أو‎ FACS 5 RT-PCRs ‏يجرى كل من‎ ‏كمية؛ تختبر مستويات إظهار 11067 كلي أو نسخة :0116 في خطوط‎ RT-PCRs ‏من أجل‎ ‏أو‎ HOF ‏كمي باستخدام تقنية "7804807 قياسية. تعادل مستويات نسخة‎ PCR ‏خلية بواسطة‎ ‏وتتمثل النتائج‎ 00 (RPLO) ‏لجين الرعاية الداخلية؛ الكبير؛‎ Ribosomal ‏مع البروتين‎ c-Met ٠ .)2-1007 ‏كقيم إظهار معادلة (الطريقة‎ ‏هي: أمامي‎ RPLO ‏إن مجموعات المادة الأولية/ المجبسس من أجل‎ (Se ‏(تعريذ الترتيب رقسم: 7؟)؛‎ 5'-gaaactctgcattctegettectg-3' (ag (EA ‏(تعريذؤ الترتيسب رقم:‎ S-aggactegtttgtaccegttga-3' ‏(تعريف الترتيب رقم: £9( إن‎ 5'-(FAM)-tgeagattggetacccaactgttgca-(TAMRA)-3' > 5'-aacaatgcctctggttce-3' ‏هي: أمامي؛‎ HGF ‏مجموعات المادة الأولية/ المجس من أجل‎ ‏(تعريف الترتيب‎ Scttgtagetgegtectttac-3' ‏(تعريف الترتيب رقم: + 0(¢ عكسي:؛‎ ‏(تعريف الترتيب‎ 5'-(FAM)-cettcaatageatgtcaagtggagtga-(TAMRA)-3' «uaa ‏رقم: #)؛‎ cMet ‏إن مجموعات المادة الأولية/ المجس من أجل‎ (oF ‏رقم:‎ ‎fof ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ S'-cattaaaggagacctcaccatagetaat-3' ‏هي: أمامي؛‎ Yo ‏عكسي؛ '5-0018010688888008088001-3 (تعريف الترتيب رقم: 4)؛ ومجبسء‎ ‏(تعريف الترتيب رقم: © °( يتكون‎ 5'-(FAM)-catgaagegacectetgatgtecca-(TAMRA)-3'
بروتوكول الدورة الحرارية من انصهار عند ٠**مئوية‏ لمدة دقيقتين و17”مئوية لمدة ‎٠١‏ دقائق؛ ثم 56 دورة عند 10*مئوية لمدة ‎١١‏ ثانية و ‎١7١‏ “"مئوية لمدة دقيقة واحدة. لا يوجد ‎mRNA‏ من أجل ‎HGF‏ في ‎NCI-H441‏ (الشكل ‎(VE‏ ولم يمكن تحديد ‎HGF‏ ‏بواسطة ‎ELISA‏ في مواد طافية ‎NCI-H441‏ في هذه التجارب يدخل خط خلية ورم دبقي أولي ‎UST-MG ©‏ المعروف بأنه خط خلية ذاتي الإفراز من أجل ‎JUS (HGF‏ مقارن موجب. يبين تحليل ‎RT-PCR‏ مستوى ملحوظ من ‎HGF mRNA‏ في 1187-10 وتم تحديد ‎٠,9‏ تنانوجرام ‎[HGF‏ مليون خلية في المادة الطافية لخلايا 10<-1087. يوضح كل من ‎RT-PCRs‏ كمي وتحليل ‎FACS‏ في الشكلين ‎(Vo‏ و١١(ب)‏ أنه حسب التوقع فإن ‎WIA‏ 140111441 تظهر بدرجة زائدة وبصورة ملحوظة ‎o-Met‏ وأن هذا الإظهار أعلى بكثير جدا من ذلك الملحوظ ‎٠‏ ا لخلايا ‎.US7-MG‏ في هذه التجربة يتم إدخال خط خلية ‎JUS MCF-7‏ مقارن سالب. بصورة مجمعة يظهر 140111441 كخط خلية نشط تكوينيا غير ذاتي الإفراز قادر على النمو بصورة مستقلة عن المركب الترابطي ‎HGF‏ تحدث فيه ‎dimerization‏ معتمدة على مركب ترابطي من أجل ‎comet‏ نتيجة للإظهار الزائد للمستقبل. : إن تقييم تأثير مضادات الأجسام المضادة ‎comet‏ على النشاط في الجسم لخط الخلية ‎de‏ هنا غير الذاتي الإفراز يمكن أن يعطي بعض التوضيحات حول فعاليتها في التأثير على ‎.c-met dimerization‏ يوضح الشكل ‎١6‏ أن ‎227H1 5 1181 224G11‏ تثبط بدرجة ملحوظة نمو ‎NCI-H441‏ ‏في الجسم مما يقترح أنه بالإضافة إلى التثبيط المعتمد على المركب الترابطي؛ فإن مضادات الأجسام هذه قادرة على تثبيط ‎dimerization‏ وقادرة أيضا على استهداف تثبيط ‎c-met‏ المعتمد ‎Ye‏ على مركب ترابطي. كما هو مذكور أعلاه في المواصفة؛ مع تلك الخاصية الأخيرة» يتضح أن ‎224G11‏ 1181 و227111 مختلفة عن مضاد الجسم 505 أحادي الذراع ‎(OA-5D5)‏ المضاد ‎.c-Met‏ ‏مثال ‎:١١‏ عملية إكساب السمة الآدمية بتطعيم-0018 مضاد الجسم 224611 ‎.١‏ إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة ‎Yo‏ مقارنة ترتيب ‎nucleotidic‏ .224011171 مع جينات خط جرثومة فأرية كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 224011 مع ترتيبات جينات خط الجرثومة الفأرية كجزء من قاعدة بيانات ‎-(http://imgt.cines.fr) IMGT‏ ‎YYo)‏
“١٠ ‏و101614*01 فأرية مع تماقل ترتيب‎ IGKV3-5%01 ‏تم تحديد جينات خط جرثومة‎ ‏على الترتيب. بالنسبة للتماثل الناتج؛ فقد تقرر‎ J ‏و7964,78 المنطقة‎ V ‏للمنطقة‎ 799,71 ‏مباشرة استخدام ترتيبات ,224011171 للبحث عن تشابهات آدمية.‎ .[ ‏للجين‎ (OPV ١ ‏للجين‎ (NY ‏إن هذه الاصطفافات ممثلة في الشكل‎ ‏مع جينات خط جرثومة آدمية‎ 224011171, nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ © ‏تمت دراسة جين خط الجرثومة الآدمي‎ «CDR ‏لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم‎ nucleotidic ‏الذي يظهر أفضل تماثل مع .224611171. عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب‎ ‏ليكون‎ IMGT ‏مع ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية كجزء من قاعدة بيانات‎ 22401117 ‏الانتقاء في صورة مثلى؛ تتم الاصطفافات بين الترتيبات البروتينية للبحث عن تشابهات أفضل.‎ ‏آدمية مستلمة ممكنة‎ V ‏أدت هاتان الطريقتان المكملتان إلى تحديد اثنين من ترتيبات‎ Ve ‏جين خط الجرثومة‎ nucleotidic ‏الفأرية. يعطى اصطفاف‎ 224011 VL CDRs ‏من أجل‎ ‏الآدمي 161673-11*01 مع تماثل ترتيب 775,14 بينما يعطى الاصطفاف البروتيني‎ ‏من الجدير بالذكر أنه‎ TV ‏جين خط الجرثومة الآدمي 161674-1*01 مع تماثل ترتيب‎ 0011 ‏في كلتا الحالتين» يظهر الجينان لخط الجرثومة الأقرب شبها والترتيبات المحللة أطوال‎
IGKV3- ‏في‎ amino acids 1 ¢224G11 VL ‏في‎ amino acids ٠١( ‏مختلفة‎ amino acid ٠ -(IGKV4-1%01 ‏في‎ amino acids ١١ ¢11*01 ‏نحصل أولا على أفضل درجة تشابه مع 101613*01 الآدمي الذي‎ oJ ‏بالنسبة للمنطقة‎ ‏المتماثلة المتتالية وأفضل‎ nucleotides ‏لكن يوجد عدد أكبر من‎ AY ‏يظهر تماثل ترتيب‎ ‏الآدمي (تماثل ترتيب‎ IGKIA*02 ‏في الاصطفاف مع جين خط الجرثومة‎ amino acid ‏تطابق‎ ‏آدمية مستلمة من أجل‎ J ‏ينتقى جين خط الجرثومة 101614*02 كمنطقة‎ celia) ‏ارلالا).‎ xe ‏الفأرية.‎ 1181 VL CDRs .[ ‏والشكل 8١(ب) للمنطقة‎ Vo ‏للمنطقة‎ (NA ‏إن الاصطفافات ممثلة في الشكل‎ eV) ‏مكتسب السمة‎ 2240611 VL ‏طراز‎ ‏الفأري؛‎ 224011 VL CDRs ‏بإمكانية وجود اثنين من مناطق 7 آدمية مستلمة لمناطق‎ ‏يطابق‎ .224611 VL ‏سيتم وصف اثنين من طرازات مكتسبة السمة الآدمية لمجال سيطرة‎ Yo ‏الثاني مع طول‎ (IGKV3-11%01) ‏الأول تجربة أولية لإطار آدمي مع طول 0011 أقصر‎ .)1616174-1*01( ‏أطول‎ 081
YYo)
(أ) طراز ‎VL‏ 224011 مكتسب السمة الآدمية معتمد على 1616173-11*01 تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط الجرثومة المنتقاة 16161773-11*01 و ‎IGKJ4*02‏ وأيضا ‎CDRs‏ آلا 224611 الفأري مع إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة. ° كما هو موصوف في الشكل 9١ل()؛‏ إن متخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ‎VL‏ 2240611 تطابق الخمسة وعشرين ‎amino acids‏ الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة ‎VL‏ 224611 والإطارات الآدمية المنتقاة ‎Human ~~ FR)‏ بمعنى 1616173-11*01 و ‎(IGKJ4*02‏ بالنسبة للمعايير العديدة مثل مشاركتها المعروفة في السطح البيني ‎VH/VL‏ في ‎٠‏ ربط مولد مضاد أو في بناء ‎«CDR‏ يتغير صنف ‎acid‏ 800100 بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛ تمركز المتخلف في بناء ثلاثي الأبعاد لمجال السيطرة المتغير؛ تم تحديد ؟ من ‎YO‏ متخلف مختلف بأن بهم طفرة في النهاية. إن هذه المتخلفات الثلاثة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى أجزائها المقابلة الآدمية تكون ‎M39‏ فأرية في ‎L‏ آدمي؛ 1140 في م و8684 في ‎.G‏ إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل 19( كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ‎Ve‏ ترتيب ,2240111121171 حيث تظل فأرية. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها طفرات مفضلة. بمساعدة نموذج جزيئي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات ‎(P/S) AY «(E/A) + «(L/R) د١ (P/A) £9 (L/P) ١6‏ ‎YT‏ 495 (©/7) التي يمكن أيضا توقع وجود طفرات عليها في تطبيق آخر مفضل. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير مقيدة لكن لابد من اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق آخر مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الستين متخلفات الثلاثية المتسلسلة الأخرى من بين ‎amino acids YO‏ المختلفة. تختبر كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات كثيرة. ‎Yo‏ يمل الشكل 019) ‎VL‏ 224011 المكتسب السمة الآدمية المحضر المعتمد على ‎IGKV3-11401‏ مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه. إن الرقم تحت ‎JS‏ طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي ستتم عليه الطفرة المذكورة.
ب (ب) طراز ‎VL‏ 224611 مكتسب السمة الآدمية معتمد على ‎IGKV4-1*01‏ ‏تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط الجرثومة المنتقاة 1614174-1*01 و ‎IGKI4%02‏ وأيضا ‎VL CDRs‏ 224611 الفأري مع إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة.
2 كما هو موصوف في الشكل ؟٠١(ب)؛‏ إن متخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ‎VL‏ 224011 تطابق اثنين وعشرين ‎amino acids‏ الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة 224611 ‎VIL‏ والإطارات الآدمية المنتقاة ‎«Human FR)‏ بمعنى 1016174-1*01 و 161614*02).
بالنسبة للمعايير العديدة مل مشاركتها المعروفة في السطح البيني ‎VH/VL‏ في ربط مولد مضاد أو في ‎«CDR sly‏ يتغير صنف ‎amino acid‏ بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛
ob ‏متخلف مختلف‎ YY ‏لمجال السيطرة المتغير؛ تم تحديد ؛ من‎ 30 ely ‏تمركز المتخلف في‎ ٠ ‏بهم طفرةٍ في النهاية. إن هذه المتخلفات الأربعة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى أجزائها‎ ‏إن هذه‎ .G ‏في ل و1884 في‎ 1140 (L ‏آدمي؛ 1439 في‎ M ‏المقابلة الآدمية تكون 14 فأرية في‎ ‏المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل ؟9١(ب) كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في‎ ‏حيث تظل فأرية.‎ 224011 HZ2VL ‏ترتيب‎
‎vo‏ بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها طفرات مفضلة.
‏بمساعدة نموذج جزيئي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات ‎«(L/R) TY «(N/T) 11 (A/S) Yo‏ و97 ‎(P/S)‏ التي يمكن أيضا توقع وجود طفرات عليها في تطبيق آخر مفضل.
‏7 بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير مقيدة لكن لابد من اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق ‎AT‏ مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الأربعين متخلف الثلاثية المتسلسلة الأخرى من بين ‎amino acids YY‏ المختلفة.
‏تختبر كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات كثيرة. يمثل الشكل ؟9١(ب) ‎VL‏ 224611 المكتسب السمة الآدمية المحضر المعتمد على ‎IGKVA-1%01 Yo‏ مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي ستتم عليه الطفرة المذكورة. ". إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الثقيلة عضن
TA
‏مع جينات خط جرثومة فأرية‎ 224011 1711 nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏مع ترتيبات جينات خط الجرثومة‎ 224011 VL nucleotidic ‏كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب‎ .(http://imgt.cines.fr) IMGT ‏الفأرية من قاعدة بيانات‎ ‏تم تحديد جينات خط جرثومة 161171-18*01» 161102-4*01 و161112*01 فأرية مع‎ ‏على الترتيب.‎ J ‏للمنطقة 0 و 784,776 للمنطقة‎ 7975 ov ‏تماثل ترتيب 797,70 للمنطقة‎ ‏للبحث عن التشابهات‎ 224611 VH ‏بالنسبة للتماثل الناتج؛ تقرر مباشرةٍ استخدام ترتيبات‎ ‏الآدمية.‎ ‏للجين 0 والشكل‎ (Ye ‏الشكل‎ ov ‏للجين‎ (Ys ‏تتمثل هذه الاصطفافات في الشكل‎
J ‏للجين‎ )ج(٠١‎ ‏مع جينات خط جرثومة آدمية‎ 224011 VH nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ Ve ‏لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم 0018؛ تمت دراسة جين خط الجرثومة الآدمي‎ nucleotidic ‏عند هذه النقطة؛. يصطف ترتيب‎ .224G11 VH ‏الذي يظهر أفضل تماثل مع‎ ‏من‎ IMGT ‏مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات‎ 224011 VH ‏أجل أن يكون الانتقاء في صورة مثلى؛ تجرى اصطفافات بين الترتيبات البروتينية من أجل‎ ‏تشابهات أفضل.‎ ve ‏الآدمي المستلم‎ 101171-2*02 V ‏تؤدي هاتان الطريقتان المكملتان إلى تحديد نفس ترتيب‎ ‏و 7ر275‎ nucleotidic ‏فأرية مع تمائل ترتيب 71/5 عند مستوى‎ 224011 VH CDRs ‏لمناطق‎ ‏عند مستوى البروتين.‎ ‏في مجال‎ CDR3 ‏من الجدير بالذكر أن المنطقة 0 تنتمي بدرجة محكمة إلى منطقة‎ ‏لآدمية على طريقة "تطعيم 001". إن تحليل‎ ١ ‏إكساب السمة‎ Adee ‏تعتمد‎ WH ‏السيطرة‎ ٠٠ ‏الجينات-0 الآدمية الأقرب شبها غير مفيد في هذه السياسة.‎ ‏أدى إلى تحديد جين خط جرثومة 161114*04 الآدمي‎ J ‏إن البحث عن تشابهات للمنطقة‎
JNANY ‏ترتيب‎ BLS ‏مع‎ ‏ول 161114*01 الآدمي‎ (NV 161171-2*02 V ‏تم لذلك انتقاء جين خط جرثومة‎ ‏الفأرية.‎ 224611 VH CDRs ‏كترتيبات آدمية مستلمة لمناطق‎ Yo
J ‏؟"(ب) للمنطقة‎ ١ ‏والشكل‎ ١7 ‏الاصطفافات في الشكل ١؟ل) للمنطقة‎ Jia ‏مكتسب السمة الأدمية‎ 224011 VH ‏طراز‎ ‎YYo)
تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط الجرثومة المنتقاة 161171-2*02 و161114*01 وأيضا ‎CDRs‏ من ‎VH‏ 224011 الفأري على إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة. حسب الوصف في الشكل ‎(YY‏ تطابق المتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ‎VH ٠‏ 224611 الثلاثين ‎amino acids‏ الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة 711 224611 والإطارات الآدمية المنتقاة ‎«Human FR)‏ بمعنى ‎IGHV1-2%02‏ و ‎-(IGHJ4*01‏ ‏بالنسبة للمعايير العديدة ‎Jie‏ المشاركة المعروفة في السطح البيني ,1711/71؛ في ربط مولد مضاد؛ أو في بناء ‎«CDR‏ يتغير صنف ‎amino acid‏ بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛ تمركز المتخلف في بناء 30 لمجال السيطرة المتغير؛ تحدد في النهاية أن ؛ من الثلاثين متخلف ‎٠‏ مختلف بأن بهم طفرة. إن هذه المتخلفات الأربعة المحددة ‎ACY)‏ أهمية والطفرات إلى الأجزاء المقابلة لها الآدمية هي 051 فأري إلى ‎G55 E‏ إلى 07 780 إلى 18 و1682 إلى 1. إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل ‎YY‏ كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ‎Gua 224011 1‏ تظل فأرية. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها ‎Vo‏ طفرات مفضلة. بمساعدة نموذج ‎(ia‏ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات ‎£A (T/A) Yo‏ بونع) £9 ‎OF «(S/G)‏ شم كلا ‎(DE) 5٠و (LIM) YA (A/V)‏ التي يمكن توقع حدوث طفرات عليها في تطبيق ‎AT‏ ‏7 بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير محدودة لكن يجب اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق ‎HAT‏ مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل التسعة عشر متخلف الثلاثي المتسلسلة الأخرى ضمن ‎amino acids 7٠‏ المختلفة. سيتم اختبار كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات عديدة. يمل الشكل ‎VH YY‏ 224611 المكتسبة السمة الآأدمية مع تحديد بوضوح للطفرات ‎Yo‏ المذكورة أعلاه. إن العدد تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده الطفرة المذكورة. مثال ‎VY‏ عملية إكساب السمة الآدمية بتطعيم ‎CDR‏ لمضاد الجسم 227111 ‎YYo)‏
ولا ‎.١‏ إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة مقارنة ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 227111 مع جينات خط جرثومة فأرية كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 227111 مع ترتيبات جينات خط الجرثومة الفأرية كجزء من قاعدة بيانات ‎.(http://imgt.cines.fr) IMGT‏
° تم تحديد جينات خط جرثومة 1061673-5*01 و1061614*01 فأرية مع تماثقل ترتيب ‎0٠+‏ للمنطقة ‎V‏ و7997,79 للمنطقة ‎oJ‏ على الترتيب. بالنسبة للتماثل الناتج؛ فقد تقرر مباشرة استخدام ترتيبات ‎VL‏ 227111 للبحث عن تشابهات آدمية.
إن هذه الاصطفافات ممثلة في الشكل ‎(YY‏ للجين 37 ‎(GY‏ للجين ‎J‏ ‏مقارنة ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 227111 مع جينات خط جرثومة آدمية ‎٠١‏ لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎«CDR‏ تمت دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي يظهر أفضل تمائل مع ‎VL‏ 227111. عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب ‎nucleotidic‏ ‎227HIVL‏ مع ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية كجزء من قاعدة بيانات ‎IMGT‏ ليكون الانتقاء في صورة مثلى؛ تتم الاصطفافات بين الترتيبات البروتينية للبحث عن تشابهات أفضل. أدت هاتان الطريقتان المكملتان إلى تحديد اثنين من ترتيبات ‎V‏ آدمية مستلمة ممكنة ‎Vo‏ من أجل ‎VL CDRs‏ 227111 الفأرية. يعطى اصطفاف ‎nucleotidic‏ جين خط الجرثومة الآدمي ‎IGKV3-11%01‏ مع تماثل ترتيب 275,11 بينما يعطى الاصطفاف البروتيني جين خط الجرثومة الآدمي 161674-1*01 مع تماثل ترتيب ‎ANE‏ من الجدير بالذكر أنه في كلتا الحالتين» يظهر الجينان لخط الجرثومة الأقرب شبها والترتيبات المحللة أطوال ‎CDR1 amino acid‏ مختلفة ) ‎amino acids ٠‏ في ‎VL‏ 227111؛ ‎amino acids ١‏ في
-(IGKV4-1%01 ‏في‎ amino acids ٠١ ¢IGKV3-11*01 ٠٠
بالنسبة للمنطقة ‎oJ‏ نحصل أولا على أفضل درجة تشابه مع 161613*01 الآدمي الذي يظهر تمائل ترتيب 7978,78. لكن ‎ang‏ عدد أكبر من ‎nucleotides‏ المتماثلة المتتالية وأفضل تطابق ‎amino acid‏ في الاصطفاف مع جين خط الجرثومة 101614*02 الآدمي (تماثل ترتيب 175,4). لذلك؛ ينتقى جين خط الجرثومة ‎IGKIA*02‏ كمنطقة ‎J‏ آدمية مستلمة من أجل
‎VL CDRs Ye‏ 227111 الفأرية.
‏إن الاصطفافات ممثلة في الشكل ؛ ‎(TY‏ للمنطقة ‎V‏ والشكل ؛ "(ب) للمنطقة [. طراز ‎VL‏ 22461 مكتسب السمة الآدمية
\A ‏الفأرية؛‎ 227111 VL CDRs ‏آدمية مستلمة لمناطق‎ V ‏بإمكانية وجود اثنين من مناطق‎ ‏يطابق الأول‎ .227111 VL ‏سيتم وصف اثنين من طرازات مكتسبة السمة الآدمية لمجال سيطرة‎ 0011 ‏أقصر (161673-11*01)؛ الثاني مع طول‎ CDRI ‏تجربة أولية لإطار آدمي مع طول‎ .)1616174-1*01( ‏أطول‎ ‎1616173-11*01 ‏مكتسب السمة الآدمية معتمد على‎ 227111 VL ‏طراز‎ )( © ‏تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط‎ ‏الفأري مع إطارات‎ 227111 VL CDRs ‏وأيضا‎ IGKJ4*02 ‏الجرثومة المنتقاة 1616173-11*01 و‎ ‏هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة.‎ 227111 ‏إن متخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب‎ (Yo ‏كما هو موصوف في الشكل‎ 227111 VL ‏الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة‎ amino acids ‏تطابق الستة وعشرين‎ 71. ٠ .(IGKJ4*02 ‏و‎ IGKV3-11*01 ‏بمعنى‎ <Human FR) ‏والإطارات الأدمية المنتقاة‎ ‏في‎ VH/VL ‏مشاركتها المعروفة في السطح البيني‎ Je ‏بالنسبة للمعايير العديدة‎ ‏بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛‎ amino acid ‏يتغير صنف‎ «CDR ely ‏ربط مولد مضاد أو في‎ ‏متخلف مختلف بأن‎ YT ‏تمركز المتخلف في بناء 30 لمجال السيطرة المتغير؛ تم تحديد ؟ من‎ ‏بهم طفرةٍ في النهاية. إن هذه المتخلفات الثلاثة المحددة الأكثتر أهمية والطفرات إلى أجزائها‎ ٠ ‏في م و1884 في 0. إن هذه المتخلفات‎ 1140 «eal L ‏المقابلة الآدمية تكون 139 فأرية في‎ 227111 ‏كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب‎ (Yo ‏في الشكل‎ die ‏الأحادية المتسلسلة‎ ‏حيث تظل فأرية.‎ HZIVL ‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها‎ ‏طفرات مفضلة.‎ ٠ ‏بمساعدة نموذج جزيثي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية‎
TA ((L/R) TY «(P/A) £3 ‏بذائ‎ YO (L/P) Yo ‏المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات‎ ‏التي يمكن أيضا توقع وجود طفرات عليها في تطبيق آخر‎ (S/F) 445 (P/S) AT (E/A) ‏فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير مقيدة لكن لابد من‎ cally Yo ‏مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الستين‎ HAT ‏اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق‎ ‏00100ع المختلفة.‎ acids YO ‏متخلفات الثلاثية المتسلسلة الأخرى من بين‎ vy
تختبر كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات كثيرة.
‎J‏ الشكل ‎VL (Yo‏ 227011 المكتسب السمة الآدمية المحضر المعتمد على ‎IGKV3-11%01‏ مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي ستتم عليه الطفرة المذكورة.
‏© (ب) طراز ‎VL‏ 227111 مكتسب السمة الآدمية معتمد على 1016174-1*01
‏تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط ‎dai pal)‏ المنتقاة 161617/4-1*01 و ‎IGKI4*02‏ وأيضا ‎VL CDRs‏ 227111 الفأري مع إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة.
‏كما هو موصوف في الشكل #5 ؟(ب)؛ إن متخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب
‎227111 ‏الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة‎ amino acids ‏تطابق الاثنان وعشرين‎ 227111 VL ٠ .)1616214*02 ‏بمعنى 1616174-1*01 و‎ Human FR) ‏والإطارات الآدمية المنتقاة‎ VL
‏بالنسبة للمعايير العديدة ‎Jie‏ مشاركتها المعروفة في السطح البيني ‎VH/VL‏ في ربط ‎alge‏ مضاد أو في ‎«CDR ely‏ يتغير صنف ‎amino acid‏ بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛ تمركز المتخلف في بناء 30 لمجال السيطرة المتغير؛ تم تحديد ؛ من ‎YO‏ متخلف مختلف ‎ob‏
‎٠‏ بهم طفرة في النهاية. إن هذه المتخلفات الأربعة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى أجزائها المقابلة الآدمية تكون 14 فأرية في ‎M‏ آدمي؛ 139 إلى ‎L‏ 1140 في م و8584 في 6. إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل ‎(Ye‏ كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ‎HZ2VL‏ 227111 حيث تظل فأرية.
‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها
‎٠٠‏ طفرات مفضلة.
‏بمساعدة نموذج جزيئي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية المتسلسلة التالية؛ ‎«gf‏ المتخلفات ‎TT «(V/S) Yo‏ (04/1؛ ‎TY‏ (0/8؛ و97 (0/5) التي يمكن أيضا توقع وجود طفرات عليها في تطبيق ‎SAT‏ مفضل.
‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير مقيدة لكن لابد من
‎Yo‏ اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق ‎HAT‏ مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الستين متخلف الثلاثية المتسلسلة الأخرى من بين ‎amino acids YY‏ المختلفة.
‏تختبر كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات كثيرة.
vy
يمثتل الشكل ‎VL (Ye‏ 227111 المكتسب السمة الآدمية المحضر المعتمد على 1*-16162174 مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي ستتم عليه الطفرة المذكورة. ". إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الثقيلة
‎٠‏ مقارنة ترتيب ‎VH nucleotidic‏ 227111 مع جينات خط جرثومة فأرية
‏كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 227111 مع ترتيبات جينات خط الجرثومة الفأرية من قاعدة بيانات ‎.(http://imgt.cines.fr) IMGT‏
‏تم تحديد جينات خط جرثومة ‎IGHJ2*01 5 161101-1*02 (IGHV1-18*01‏ فأرية مع تمائل ترتيب ‎797,7٠‏ للمنطقة ‎ov‏ 277,17 للمنطقة 0 و7911,78 للمنطقة ‎oJ‏ على الترتيب.
‎٠‏ بالنسبة للتماثل الناتج؛ تقرر مباشرة استخدام ترتيبات ‎VH‏ 227111 للبحث عن التشابهات
‏الآدمية. تتمثل هذه الاصطفافات في الشكل ‎(NYT‏ للجين ‎ov‏ الشكل ‎(YT‏ للجين ‎D‏ والشكل
‏7(ج) للجين ‎J‏ :
‏مقارنة ترتيب ‎VH nucleotidic‏ 227111 مع جينات خط جرثومة آدمية
‎vo‏ لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎«CDR‏ تتم دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي يظهر أفضل تماثئل مع ‎VH‏ 2240611. عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب ‎nucleotidic‏ ‏1 227111 مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات ‎IMGT‏ تم بذلك تحديد ترتيب ‎V‏ 161171-2*02 الآدمي المستلم لمناطق ‎VH CDRs‏ 224011 الفأري مع تماتل ترتيب 797,97
‏7 من الجدير بالذكر أن المنطقة 0 تنتمي بدرجة محكمة إلى منطقة ‎CDR3‏ في مجال السيطرة 711. تعتمد عملية إكساب السمة الآدمية على طريقة 'تطعيم ‎CDR‏ إن تحليل الجينات-0 الآدمية الأقرب شبها غير مفيد في هذه السياسة.
‏أدى البحث عن تشابهات المنطقة ‎J‏ إلى تحديد جين خط الجرثومة 161114*01 الآدمي مع ‎Sila‏ ترتيب ‎JAY‏ ‎Yo‏ تم بذلك انتقاء جين خط الجرثومة ‎IGHVI-2%02 V‏ الأدمي ول 161114*01 الآدمي كترتيبات آدمية مستلمة لمناطق ‎VH CDRs‏ 227111 الفأرية. تتمتل الاصطفافات في الشكل ‎(YY‏ للمنطقة ‎V‏ والشكل ‎(Q)YY‏ للمنطقة ‎J‏
ل
ليكون الانتقاء في صورة مثلى؛ يمكن للماهر في الفن أن يجري أيضا اصطفافات بين الترتيبات البروتينية للمساعدة في الاختبار. طراز ‎VH‏ 227111 مكتسب السمة الآدمية
تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة ‎Aad)‏ من ربط ترتيبات جينات خط
‎٠‏ الجرثومة المنتقاة 161171-2*02 و101114*01 وأيضا ‎CDRs‏ من 1711 227111 الفأري على
‏إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة.
‏حسب الوصف في الشكل ‎YA‏ تطابق المتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب 227111 1 الاثنان وثلاثين ‎amino acids‏ الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة ‎VH‏ 227111 والإطارات الآدمية المنتقاة ‎<Human FR)‏ بمعنى 1-2*02 161117 و 1011[14*01).
‎١‏ بالنسبة للمعايير العديدة ‎Jie‏ المشاركة المعروفة في السطح البيني ‎VH/VL‏ في ربط مولد ‎alias‏ أو في ‎«CDR ely‏ يتغير صنف ‎amino acid‏ بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛ تمركز المتخلف في بناء 30 لمجال السيطرة المتغير؛ تحدد في النهاية أن 76 من الاثنان وثلاثين متخلف مختلف بأن بهم طفرة. إن هذه المتخلفات الستة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى الأجزاء المقابلة لها الآدمية هي 139 فأري إلى ‎NOM‏ 11 155 إلى 37 ‎T66‏ إلى ‎N‏
‎YA ‏إلى 1. إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل‎ K825R ‏إلى‎ 780 Vo ‏تظل فأرية.‎ Cus 227111 HZVH ‏كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب‎
‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها طفرات مفضلة. بمساعدة نموذج جزيئي» يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية © المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات 48 ‎(UM) oF «(T/G) £3 «(K/Q)‏ 6لا ‎(AV)‏ روخلا ‎(LM)‏ التي يمكن توقع حدوث طفرات عليها في تطبيق ‎AT‏ مفضل. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير محدودة لكن يجب اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق ‎HAT‏ مفضل؛ يمكن أن يوضع في الاعتبار كل الإحدى وعشرين متخلف الثلاثي المتسلسلة الأخرى ضمن ‎amino acids 7٠‏ المختلفة. ‎Yo‏ سيتم اختبار كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات عديدة. ‎YYo)‏
Yo ‏المكتسبة السمة الآدمية مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة‎ 227111 VH YA ‏يمتل الشكل‎ ‏أعلاه. إن العدد تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده الطفرة‎ ‏المذكورة.‎ ‎22304 ‏لمضاد الجسم‎ CDR ‏مثال ؟١: عملية إكساب السمة الآدمية بتطعيم‎ ‏إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الخفيفة‎ .١ © ‏مع جينات خط جرثومة فأرية‎ 22304 VL nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏ترتيبات جينات خط‎ eda ‏مع‎ 22304 VL nucleotidic ‏كخطوة تمهيدية؛ يقارن ترتيب‎ .(http://imgt.cines.fr) IMGT ‏الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات‎ ‏مع تماثل ترتيب‎ deal ‏و161612*01‎ IGKV12-46%01 ‏تم تحديد جينات خط جرثومة‎ ‏على الترتيب. بالنسبة للتماثل الناتج؛ تقرر‎ J ‏للمنطقة‎ 744,09 3 Vo ‏للمنطقة‎ ”595,14 ٠ ‏للبحث عن تشابهات آدمية.‎ 22304 VL ‏الاستخدام مباشرة لترتيبات‎
J ‏تتمثل هذه الاصطفافات في الشكل 9 ؟() للجين 1 و9 "(ب) للجين‎ ‏مع جينات خط جرثومة آدمية‎ 22304 VL nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏تتم دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي‎ (CDR ‏لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم‎ 22304 nucleotidic ‏عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب‎ .22304 VL ‏يظهر أفضل تماثل مع‎ ٠
IMGT ‏مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية في قاعدة بيانات‎ VL ‏مع تماثل ترتيب‎ deal ‏و161612*01‎ IGKVI-NLI*01 ‏تم تحديد جينات خط جرثومة‎ ‏على الترتيب؛ تم بذلك انتقاء جينات خط‎ of ‏للمنطقة‎ ZAY, A V ‏للمنطقة‎ 4 ‏كترتيبات آدمية مستلمة‎ J ‏و161612*01 للمنطقة‎ V ‏للمنطقة‎ IGKVI-NLI*01 ‏الجرتومة‎ ‏فأرية.‎ 22304 VL CDRs ‏مشتملة على‎ ٠
J ‏للمنطقة‎ )ب(*“١و‎ ١ ‏للمنطقة‎ (Ye ‏الاصطفافات في الشكل‎ Jia ‏ليكون الانتقاء في صورة مثلى؛ سيقوم الماهر في الفن أيضا باصطفافات بين الترتيبات‎ ‏البروتينية للمساعدة في الاختيار.‎ ‏مكتسب السمة الآدمية‎ 22304 VL ‏طراز‎ ‏تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط‎ Yo ‏الفأري مع‎ 22304 VL ‏من‎ CDRs ‏وأيضا‎ IGKI2*01 5 IGKVI-NLI*01 ‏الجرثومة المنتقاة‎ ‏إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة.‎ va 223C4 ‏فأرية‎ Fy ‏عند هذه المرحلة من العملية؛ يمكن إنشاء نموذج جزيئي لمجالات سيطرة‎ ‏ويفيد في اختيار المتخلفات الفأرية المراد حمايتها نظرا لأدوارها في استبقاء البناء ثلاثي الأبعاد‎ ‏تم تحديد 9 متخلفات لتصبح‎ GACT ‏للجزيء أو في مكان ووظيفة ربط مولد المضاد. بتحديد‎ ‏طفرية في النهاية.‎ ‏أو البناء. إن تلك‎ CDR ‏في خطوة أولى؛ سيتم اختبار متخلفات مشتملة في مثبتات‎ 0 .8/17( TA ‏والمتخلف‎ (RN) 7676 ‏المتخلفات هي المتخلف‎ ‏في خطوة ثانية؛ سيتم اختبار متخلفات خاضعة لمذيب؛ وحسب ذلك قد تشمل توليد‎
AY ‏ر‎ (D/Q) AV «(S/D) 4 ‏رول‎ ©) «(A/S) 45 ‏مناعي. إن هذه هي المتخلفات‎ (S/N) ‏عندئذ؛ في خطوة ثالثة؛ يمكن أيضا أن تصبح المتخلفات المشتملة في بناء/ تضاعف‎ Ve .0/8( 176 ‏والمتخلف‎ (P/Q) £71 ‏مجال سيطرة متغير طفري. إن هذه المتخلفات هي المتخلف‎ ‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير مقيدة لكن يجب اعتبارها طفرات‎ ‏بمساعدة نموذج جزيثي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات التالية؛‎ 1٠١ (TIS) AM ‏صلق 2% صل‎ YA «(D/E) VY ‏صلم‎ ١١ ((S/A) 9 ‏أيء المتخلفات‎ ٠٠ ‏(1/9)؛ التي يمكن عليها حدوث طفرات في تطبيق آخر مفضل.‎ ٠١١٠و‎ (A/G) ٠٠١ »)1/( ‏تختبر كل الطفرات الموجودة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات عديدة.‎ ‏مكتسب السمة الآدمية مع الطفرات المذكورة أعلاه محددة‎ 22304 VL FY ‏يمثل الشكل‎ ‏بوضوح. إن العدد تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده الطفرة‎ ‏المذكورة.‎ ٠٠ ‏إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الثقيلة‎ ." ‏مع جينات خط جرثومة آدمية‎ 22304 1711 nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏ترتيبات جينات خط‎ eda ‏مع‎ 22304 1711 nucleotidic ‏كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب‎
Ohttp://imgt.cines.fr( IMGT ‏الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات‎ ‏لقد تم تحديد جينات خط الجرثومة 1611771-18*01» 161106-3*01 و101114*01 الفأرية‎ Yo ‏على‎ oJ ‏لمنطقة‎ 749A) 5 0 ‏للمنطقة‎ 777,77 ov ‏ترتيب 794,40 للمنطقة‎ Jha ‏مع‎ ‏تعض‎
الا الترتيب. بالنسبة ‎Jalal‏ الناتج؛ تقرر مباشرة استخدام ترتيبات ‎VH‏ 22304 للبحث عن تشابهات آدمية. ‎ic‏ هذه الاصطفافات في الشكل ‎(NYY‏ للجين 7 7"(ب) للجين 0 و؟"(ج) للجين ‎J‏ ‏مقارنة ترتيب ‎VH nucleotidic‏ 22304 مع جينات خط جرثومة آدمية ° لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎«CDR‏ تتم دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي يظهر أفضل تماثل مع ‎VH‏ 22304. عند هذه النقطة» يصطف ترتيب ‎nucleotidic‏ 22304 ‎VH‏ مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات ‎IMGT‏ ‏تم تحديد جينات خط الجرثومة ‎<IGHV1-2%02‏ 161101-26*01 و161116*01 الآدمية مع تمائل ترتيب ‎ZVI, PA‏ للمنطقة ‎ov‏ 7975 للمنطقة 0 و 797,51 للمنطقة [» على الترتيب. ‎٠‏ تنتقى جينات خط الجرثومة 101171-2*02 للمنطقة ‎V‏ و101116*01 للمنطقة ‎J‏ كترتيبات آدمية مستلمة لأجل ‎VH CDRs‏ 22304 فأري. ‎Jics‏ الاصطفافات في الأشكال ‎(FY‏ للمنطقة ‎(FY ov‏ للمنطقة 0 و7"(ج) للمنطقة ل : لتكوين الانتقاء في صورة مثلى؛ يمكن للماهر في الفن أيضا بالقيام باصطفافات بين ‎١٠‏ الترتيبات البروتينية للمساعدة في الاختيار. طراز ‎VH‏ 22304 مكتسب السمة ‎Lad)‏ ‏تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط الجرثومة المنتقاة 1-2*02 161177 و101116*01 وأيضا ‎CDRs‏ من 17/11 22304 الفأري مع إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة. ‎Ye‏ عند هذه المرحلة من العملية؛ يمكن إنشاء نموذج جزيئي لمجالات سيطرة ‎Fy‏ فأرية 22364 ويفيد في اختيار المتخلفات الفأرية المراد حمايتها نظرا لأدوارها في استبقاء البناء ثلاثي الأبعاد للجزيء أو في مكان ووظيفة ربط مولد المضاد. بتحديد أكثرء تم تحديد ‎١6‏ متخلف لتصبح طفرية في النهاية. في خطوة أولى؛ سيتم اختبار متخلفات مشتملة في مثبتات ‎CDR‏ أو البناء. إن تلك ‎Ye‏ المتخلفات هي المتخلف 50 ‎(N/) 16 «(W/D) 00 (A/S) £0 (H/D)‏ و١1‏ (11/1). في خطوة ثانية؛ سيتم اختبار متخلفات خاضعة لمذيب؛ وحسب ذلك قد تشمل توليد مناعي. إن هذه هي المتخلفات ‎(QM) £A ((V/Q) © (QL) ١ «(Q/E) ١‏ ر ‎(RIV) As‏ تعض
YA
‏عندئذ؛ في خطوة ثالثة؛ يمكن أيضا أن تصبح المتخلفات المشتملة في بناء/ تضاعف‎
YY (KV) ١١ (AP) 4 ‏مجال سيطرة متغير طفري. إن هذه المتخلفات هي المتخلف‎ .(P/H) £1 5 (S/P) ‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير مقيدة لكن يجب اعتبارها طفرات‎ ‏بمساعدة نموذج جزيئي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات التالية؛ أي؛‎
VY ((A/N) TA ‏راسي‎ OF ‏رو/ه»‎ 4 «(R/K) ١ «(V/I) YY «(V/L) VY ‏المتخلفات‎ ‎AY (S/R) AY (IS) ‏قا كه‎ AY «(M/L) YA «(V/A) ‏ضعي كل‎ Yo «(Q/K) ‏مفضل.‎ HAT ‏التي يمكن عليها حدوث طفرات في تطبيق‎ (DIB) AY (RIT) 3 «(R/S) ‏تختبر كل الطفرات الموجودة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات عديدة.‎ Ve ‏مكتسب السمة الآدمية مع الطفرات المذكورة أعلاه محددة‎ 22304 VH 34 ‏يمثل الشكل‎ ‏بوضوح. إن العدد تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده الطفرة‎ : ‏المذكورة.‎ ‏النشاط المضاد لورم لمضاد الجسم 224011 الفأري وحده أو متحد مع العامل‎ :١5 ‏مثال‎ ‏على نموذج ورم 110111441 رقعة دخيلة راسخ‎ Navelbine® ‏الكيميائي العلاجي‎ ve ‏تعتمد الأساليب الكيميائية العلاجية الناجحة جزئيا على الاستجابة الخلوية لمحثات الموت‎ ‏المبرمج والتوافر بين المسارات الممهدة والمضادة للموت المبرمج في الخلية. تم توثيق التأثير‎ ‏النشط على إبقاء حياة الخلية. إنه ينتج أساسيا من إظهار زائد للبروتين‎ c-Met ‏الواقي لمستقبل‎ ‏كنتيجة لإشارات من خلال 013-16 والتي تثبط في‎ Bel-2 5 Bol-x] ‏المضاد للموت المبرمج‎ ‏في الحقيقة؛ من المقنع أن‎ (caspase 9) mitochondrial ‏المقابل الموت المبرمج المعتمد على‎ Ye ‏مع تأثيرهِ التنظيمي الكبير على عملية الموت المبرمج يمكن أيضا أن يؤثر‎ HGF/o-Met ‏نظام‎ ‏وهو‎ Navelbine® ‏على الحساسية الكيميائية لخلايا السرطان. تم اختبار هذه الفرضية مع‎ ‏عامل كيميائي علاجي موجود بالأسواق مستخدم لمعالجة سرطان الرئة:‎ (Aapro et al., Crit.Rev.Oncol.Hematol. 2001, 40:251-263; Curran et al., Drugs
Aging. 2002, 19:695-697). Yo va ‏لأنه قد وصف من قبل أن خط الخلية هذا‎ NCI-H441 NSCLC ‏يستخدم نموذج رقعة دخيلة‎ (Kraus-Berthier et al., Clin.Cancer Res., 2000; 6:297-304) Navelbine ‏حساس لكل من‎ «(Zou 11.1. et al., Cancer Res. 2007, 67: 4408-4417) c-Met ‏وعلاج يستهدف‎
FCS 7٠١ (RPMI 1640 ‏في وسط‎ ATCC ‏من‎ NCI-H441 ‏بإيجاز؛ تزرع روتينيا خلايا‎ ‏تنفصل الخلايا يومين قبل إدخال الرقعة بحيث تكون في مرحلة أسية‎ L-Glutamine ١و‎ © ‏عمرها‎ Swiss ‏لفئران ناقصة المناعة‎ PBS ‏مليون خلية 140111441 في‎ ٠١ ‏للنمو. يتم تطعيم‎ 6 ‏أسابيع. بعد ؟ أيام من الازدراع؛ تقاس الأورام وتقسم الحيوانات إلى ؛ مجموعات مع‎ " ليمحت ‏في البريتون مع جرعة‎ Ob ‏فئران في كل مجموعة لها مقاس ورم متساو. تعالج‎ ‏مجم مضاد جسم/ فأر.‎ ١ ‏مجم من 2240611/ فأر ثم مرتين في الأسبوع؛ لمدة ؟؛ يوم؛ مع‎ ‏كمثال مقارن لنوع مماتل.‎ 964 MAD ‏يستخدم‎ Ne ١5 OY 6 ‏مجم/ كجم في الأيام‎ Adega ‏بالحقن في البريتون عند‎ Navelbine® ‏يعطى‎ ‏يعطى المركبان‎ (Navelbine® 5 224011 ‏بعد حقن الخلية. بالنسبة لعلاج متحد مع كل من‎ ‏بصورة منفصلة. في هذه التجربة يستخدم المركبان عند جرعتهما المتلى. يقاس حجم الورم‎ ‏الارتفاع.‎ X ‏العرض‎ لوطلا‎ X fp ‏مرتين في الأسبوع ويحسب بالصيغة:‎ ‏عندما يستخدم‎ Navelbine® Jie ‏أن 2240611 مؤثر بنفس الدرجة‎ Yo ‏يوضح الشكل‎ Vo ‏بمفرده كعلاج عامل وحيد. تلاحظ فائدة هامة لاتحاد كل من العلاجين مع تراجع كامل للورم‎
AY ‏فثران عند اليوم‎ ١ ‏يلاحظ في 7 من‎ ‏والتكوين الوعائي‎ C-Met ‏مثبطات‎ :٠١ ‏مثال‎ ‎c-Met ‏بالإضافة إلى دوره المباشر في تنظيم تشكيلة من وظائف خلية ورم؛ فإن تنشيط‎ ‏نمو‎ HGF ‏ويثير‎ c-Met ‏متورط أيضا في التكوين الوعائي لورم. تظهر خلايا البطانة الوعائية‎ © ‏خلية بطانة وعائية؛ توغلها وحركتها‎ (Nakamura Y. et al., Biochem. Biophys. Res., Commun. 1995, 215:483-488:
Bussolino F. et al., J. Cell Biol. 1992, 119:629-641). ‏اتضح أن التنظيم المنسق للنموء التوغل والحركة في خلايا بطانة وعائية دموية بواسطة‎ ‏يؤدي إلى تكوين أنابيب بطانة وعائية شعرية 30 في المعمل‎ HGF/c-Met Yo (Rosen E.M. et al., Supplementum to Experientia 1991, 59:76-88). ‏تعض‎
Aa ing ‏في التكوين الوعائي الذي‎ c-Met ‏لتحديد تدخل محتمل لمضادات أجسام مضادة‎ (Y)s HUVEC ‏على انقسام‎ Mabs ‏تقييم‎ )١( ‏تجرى مجموعتان من التجارب تتضمن‎ <HGF
HUVEC ‏لتكوين أنبوب‎ Mabs ‏اختبار‎ ‏عين‎ AT ‏في كل عين من طبق به‎ HUVEC ‏بالنسبة لتجارب الانقسام؛ تزرع 75050 خلية‎
FBS ‏مدعم مع‎ EMB-2 ‏ساعة في وسط اختبار‎ YE ‏تنمو الخلايا‎ laminin ‏مغلف مسبقا مع‎ © ‏ميكروجرام/ ملليلتر)‎ ٠0 ‏المراد اختبارها )10+ إلى‎ Mabs ‏تضاف‎ «aie ‏وصنتهمط.‎ / + ,0 ‏ساعة إضافية؛ تعالج الخلايا‎ YE ‏بعد‎ (HGF ‏نانوجرام/ ملليلتر من‎ Yo ‏لمدة ساعة قبل إضافة‎ ]11[ ‏يقدر كميا مقدار‎ .]711[ Thymidine ‏مع دفعات نبضية من 0,+ ميكروكيورس‎ ‏عبارة عن مضاد جسم‎ 9064 MAb ‏بواسطة وميض سائل. في هذه التجربة يكون‎ Thymidine .1801 ‏غير خاص مستخدم كمثال مقارن لنوع مماتل‎ ٠ ‏هو‎ HGF ‏تظهر البيانات كبيانات مجردة في الشكل 716 وتوضح أنه؛ كما هو متوقع فإن‎ ‏لا تظهر أي‎ HGF ‏إن مضادات الأجسام المقيمة في غياب‎ (HUVEC ‏محث فعال لنمو خلية‎ ‏يلاحظ‎ (HGF ‏مهما كانت الجرعة المختبرة. في وجود‎ HUVEC ‏انقسامي معضد على‎ Lali .224011 MAbs 5 11851 ‏تثبيط شديد معتمد على الجرعة لكل من‎ ‏دقيقة مع مضادات أجسام‎ 7١ ‏تحضن 75000 خلية لمدة‎ (HUVEC ‏لتقييم تكوين أنبوب‎ yo 0+ ‏يضاف عندئذ‎ matrigel ‏عين مغلفة مع‎ A ‏مراد اختبارها وتوضع في أطباق بها‎ © ‏نانوجرام/ ملليلتر وتحضن الأطباق عند 7١؟"مئوية. يجمع الوسط عندئذ ويضاف‎ ‏دقيقة قبل الفحص المجهري.‎ ١١ ‏لمدة‎ CMFDA ‏ميكروجزيئي جرامي‎ ‏يحث تكوين ملحوظ‎ HGF ‏أنه؛ كما هو متوقع فإن‎ VY ‏توضح النتائج المبينة في شكل‎ ‏ا لأنبوب. إن مضاد الجسم 904 الداخل كمثال مقارن لنوع مماثل 1801 ليس له أي تأثير على‎ © ‏بينما يثبط كل من 1181 و224611 بدرجة شديدة تكوين أنبوب.‎ HGF ‏تكوين أنبوب يحثه‎
HE] ‏لمضاد الجسم‎ CDR ‏عملية إكساب السمة الآدمية بواسطة تطعيم‎ VY ‏مثال‎ ‏(أ) إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الخفيفة‎ ‏مع جينات خط الجرثومة الفأرية‎ 1181 VL nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏مع جزء ترتيبات جينات خط‎ 11E1 VL nucleotidic ‏كخطوة تمهيدية؛ يقارن ترتيب‎ Yo
Shttp://imgt.cines.fr( HMGT ‏جرثومة الفأرية من قاعدة بيانات‎
ا تتم تحديد جينات خط جرثومة ‎IGKVA-79%01‏ و101614*01 فأرية مع تماثل ترتيب 71/8 للمنطقة ‎V‏ و 799,77 للمنطقة ‎of‏ على الترتيب. بالنسبة للتماثل المحدد؛ تقرر مباشرة استخدام ترتيبات ‎VL‏ 1111 للبحث عن تشابهات آدمية. تمثل هذه الاصطفافات في الشكل ‎(DPA‏ للجين ‎(FAS ١‏ للجين [. ‎٠‏ مقارنة ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 1181 مع جينات خط جرثومة آدمية لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎(CDR‏ تتم دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي يظهر أفضل تماثل مع ‎VL‏ 1181. عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب ‎VL nucleotidic‏ 1181 مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات ‎IMGT‏ ‏تم تحديد ‎IGKV3D-7#01 5 IGKV3-7%02‏ آدمية مع تماثل ترتيب لكل من جينات خط ‎٠‏ الجرثومة 719,87 للمنطقة ‎WV‏ إن جين خط الجرثومة الآدمي ‎IGKV3-7#02‏ معروف في : قاعدة بيانات ‎IMGT‏ مثل ‎"ORF"‏ والذي يعني أن هذا الترتيب موجود في ‎genome‏ الآدمي ‎45S)‏ قد يظهر بعض المشاكل التخليقية مما ينتج مضادات أجسام طبيعية غير وظيفية مشتقة من 101673-7*02. ينتقى لذلك جين خط الجرثومة 1016730-7*01 كمنطقة ‎V‏ آدمية مستلمة لمناطق ‎VL CDRs‏ 1181 فأرية. ‎Vo‏ بالنسبة للمنطقة ‎of‏ تنتج أولا أفضل درجة تشابه مع الآدميين» حيث يظهر ‎IGKI3*01‏ ‏الآدمي تمائل ترتيب 7978,778. لكن يوجد عدد أكبر من ‎nucleotides‏ متماثلة متتالية وتطابق ‎amino acid‏ أفضل في الاصطفاف مع جين خط جرثومة ‎Jil) = IGKJ4*02‏ ترتيب ‎(7V0,TA‏ لذلك ينتقى جين خط جرثومة ‎IGKI4*02‏ كمنطقة ‎J‏ آدمية مستلمة لأجل ‎VL CDRs‏ 1151 الفأرية. أ تتمتل الاصطفافات في الشكل ‎(Fa‏ للمنطقة ‎١‏ و9“(ب) للمنطقة ‎J‏ ‏ليكون الانتقاء في صورة مثلى؛ سيقوم أيضا الماهر في الفن باصطفافات بين الترتيبات البروتينية للمساعدة في الاختيار. طراز ‎VL‏ 1181 مكتسب السمة الآدمية تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط ‎Yo‏ الجرثومة المنتقاة ‎IGKV3D-7*01‏ و 101614*02 وأيضا ‎CDRs‏ لأجل ‎VL‏ 1181 الفأري مع إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة. احرص
AY
‏©؛ إن متخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب‎ ٠ ‏كما هو موصوف في الشكل‎ 1181 VL ‏الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة‎ amino acids ‏تطابق الثلاثين‎ 1181 VL -(IGKJ4*02 ‏و‎ IGKV3D-7*01 ‏بمعنى‎ Human FR) ‏والإطارات الآدمية المنتقاة‎ ‏مشاركتها المعروفة في السطح البيني ,711/171 في ربط مولد‎ Jie ‏بالنسبة للمعايير العديدة‎ ‏بين المتخلفات الفأرية والآدمية؛ تمركز‎ amino acid ‏يتغير صنف‎ «CDR ‏مضاد أو في بناء‎ © ‏متخلف المختلفة‎ 7١ ‏المتخلف في بناء ثلاثي الأبعاد لمجال السيطرة المتغير؛ تم تحديد ؛ من‎ ‏بأن بهم طفرة في النهاية. إن هذه المتخلفات الأربعة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى‎
PA ‏و2196‎ F ‏أجزائها المقابلة الآدمية تكون 14 فأرية إلى 14 آدمية» 740 إلى 8 787 إلى‎ ‏كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في‎ ٠0 ‏إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل‎ ‏حيث تظل فأرية.‎ 1181 HZVL ‏ترتيب‎ ٠ ‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها‎ ‏كطفرات مفضلة.‎ ‏بمساعدة نموذج جزيئي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفين المتسلسلين‎ ٠ ‏(ط/ق‎ AT ‏بع‎ TV ‏صلل‎ VV (W/L) OF (S/R) ٠ ‏التاليين» أي؛ المتخلفات ؛‎ ‏التي يمكن أيضا توقع وجود طفرات عليها في تطبيق آخر‎ (B/D) ١١١ ‏أو‎ (A/F) 99 (QE) ٠ ‏بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير مقيدة لكن لابد من‎ ‏اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق آخر مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الثامنية‎ ‏المختلفة.‎ amino acids ‏؟‎ ٠ ‏عشرة متخلفات من المتسلسلة الثلاثية الأخرى من بين‎ ‏تختبر كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة متفردة أو طبقا لاتحادات كثيرة.‎ Y. ‏المكتسب السمة الآدمية المحضر مع تحديد بوضوح للطفرات‎ 1181 VL 4٠0 ‏يمثل الشكل‎ ‏المذكورة أعلاه. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي ستتم عليه الطفرة‎ ‏المذكورة.‎ ‏إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة المتغير السلسلة الثقيلة‎ -1[ ‏مع جينات خط جرثومة فأرية‎ 1181 VH nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ Yo ‏مع جزء من ترتيبات جينات خط‎ 1131 VH ‏لأجل‎ nucleotidic ‏كخطوة أولية؛ يقارن ترتيب‎ (http://imgt.cines.fr) IMGT ‏الجرثومة الفأرية من قاعدة بيانات‎
AY
‏فأرية مع‎ IGHI3*01 5 IGHD4-1%01 (IGHV1-7*01 ‏تم تحديد جينات خط جرثومة‎ ‏للمنطقة 0 و0٠٠7 للمنطقة [. على الترتيب.‎ 715,197 ov ‏للمنطقة‎ 794,١ ‏تمائل ترتيب‎ ‏للبحث عن التشابهات‎ 1181 VH ‏الناتج؛ تقرر مباشرة استخدام ترتيبات‎ Jalal ‏بالنسبة‎ ‏الأدمية.‎ ‏والشكل‎ D ‏الشكل 49 (ب) للجين‎ ov ‏للجين‎ (gy ‏تتمثل هذه الاصطفافات في الشكل‎ °
J ‏للجين‎ (2) 5١ ‏مع جينات خط جرثومة آدمية‎ 1181 VH ‏لأجل‎ nucleotidic ‏مقارنة ترتيب‎ ‏تمت دراسة جين خط الجرثومة الآدمي‎ CDR ‏لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم‎ ‏لأجل‎ nucleotidic ‏عند هذه النقطة؛ يصطف ترتيب‎ .1181 VH ‏الذي يظهر أفضل تمائل مع‎ ‏من أجل‎ IMGT ‏115111711مع جزء ترتيبات جينات خط الجرثومة الآدمية من قاعدة بيانات‎ ٠ ‏أن يكون الانتقاء في صورة مثلى؛ تجرى اصطفافات بين الترتيبات البروتينية من أجل البحث‎ ‏عن تشابهات أفضل.‎ ‏آدمية مستلمة ممكنة من‎ V ‏تؤدي هاتان الطريقتان المكملتان إلى تحديد ؟ من ترتيبات‎ ‏جين خط الجرثومة الآدمي‎ Nucleotidic ‏فأري. يعطي اصطفاف‎ 1181 711 CDRs ‏أجل‎ ‏بينما يعطي الاصطفاف البروتيني جين خط‎ 1V0,19 ‏مع تماثل ترتيب‎ 101171-2*02 ١ .7971,١ ‏جرثومة الآدمي 1611771-46*01 مع تماتل الترتيب‎ ‏في مجال‎ CDR3 ‏من الجدير بالذكر أن المنطقة 0 تنتمي بدرجة محكمة إلى منطقة‎ ‏إن تحليل‎ CDR ‏السيطرة 711. تعتمد عملية إكساب السمة الآدمية على طريقة 'تطعيم‎ ‏الجينات-0 الآدمية الأقرب شبها غير مفيد في هذه السياسة.‎ ‏أدى إلى تحديد جين خط جرثومة 101114*03 الآدمي‎ J ‏إن البحث عن تشابهات للمنطقة‎
JAAS ‏مع تماتل ترتيب‎ ‏بالنظر إلى التشابهات الكلية واصطفافات الترتيبات؛ تم بذلك انتقاء جين خط خرثومة‎ ‏آدمي كترتيبات آدمية مستلمة‎ 161114*03 J ‏آدمي وجين خط جرثومة‎ IGHVI-46%01 V ‏الفأرية.‎ 11851 VH CDRs ‏بمناطق‎ ‎J ‏والشكل 7؛ (ب) للمنطقة‎ ١ ‏للمنطقة‎ (ey ‏تتمتل الاصطفافات في الشكل‎ Yo ‏مكتسب السمة الآدمية‎ 1121 VH ‏طراز‎
عم تتكون الخطوات التالية في عملية إكساب السمة الآدمية من ربط ترتيبات جينات خط الجرثومة المنتقاة 16111771-46*01 و 101114*03 وأيضا ‎CDRs‏ من 1711 1181 الفأري على إطارات هذه الترتيبات لجينات خط الجرثومة. حسب الوصف في الشكل ‎fF‏ تطابق المتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب ٠ه ‎VH‏ 1181 الستة وعشرين ‎amino acids‏ الموجودة مختلفة بين مجال سيطرة 1711 1181 والإطارات الآدمية المنتقاة ‎¢Human FR)‏ بمعنى 1-46*01 161117 و 161114*03). بالنسبة للمعايير العديدة ‎Jie‏ المشاركة المعروفة في السطح البيني ‎VH/VL‏ في ربط مولد مضاد؛ أو في ‎«CDR ely‏ يتغير صنف ‎(amino acid‏ المتخلفات الفأرية والآدمية؛. تمركز المتخلف في بناء ‎3D‏ لمجال السيطرة المتغير» تحدد في النهاية أن © من الستة وعشرين ‎٠‏ متخلف المختلفة بأن بهم طفرة. إن هذه المتخلفات الخمسة المحددة الأكثر أهمية والطفرات إلى الأجزاء المقابلة لها الآدمية هي 1140 فأرية إلى 11 آدمي؛ 755 إلى ‎«I‏ 066 إلى 8 ‎ABO‏ إلى 8 و1682 إلى 7. إن هذه المتخلفات الأحادية المتسلسلة مبينة في الشكل £7 كمتخلفات بحروف سوداء بارزة في ترتيب 1121711 1181 حيث تظل فأرية. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها غير محدودة لكن يجب اعتبارها ‎١٠‏ طفرات مفضلة. بمساعدة نموذج جزيثي؛ يمكن تحديد طفرات أخرى. يمكن ذكر المتخلفات الثنائية المتسلسلة التالية؛ أي؛ المتخلفات ‎oF‏ رثالا ‎YY‏ ب ‎AV 5 (LIM) YA «(A/V) YT‏ ‎(A/V)‏ التي يمكن توقع حدوث طفرات عليها في تطبيق ‎AT‏ مفضل. بالطبع؛ فإن المتخلفات المذكورة أعلاه المراد اختبارها في النهاية غير محدودة لكن يجب »| اعتبارها كطفرات مفضلة. في تطبيق ‎HAT‏ مفضل؛ يمكن أن توضع في الاعتبار كل الستة عشر المتخلف الثلاثي المتسلسلة الأخرى ضمن 77 ‎amino acids‏ المختلفة. سيتم اختبار كل الطفرات المذكورة أعلاه بصورة منفردة أو طبقا لاتحادات عديدة. ‎Jia‏ الشكل ؟؛ 1711 1181 المكتسبة السمة الآدمية المطبقة مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه. إن العدد تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده © الطفرة المذكورة. مثال ‎VA‏ تأثير ‎Mabs‏ نقية على ‎c-met phosphorylation‏ ‎YYo)‏
عم في مثال ‎oF‏ يختبر تأثير ‎Mabs‏ مضادة ‎c-Met‏ على ‎phosphorylation‏ مع مواد طافية مجرعة من كل ورم هجين مراد تقييمه. يجرى الاختبار مرة ثانية مع ‎224G115 1181 Mabs‏ نقية تتم تقييمها سواء عند تركيز نهائي ‎7٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر ‎Yoo)‏ نانوجزيئي جرامي) أو عند نطاق جرعة من ‎١.00٠5‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجرام/ ملليلتر )00 ‎You =o‏ نانوجزيئي جرامي) 0 لتحديد ‎ICs‏ لكل مضاد جسم. إن البروتوكل المستخدم هو نفسه ‎Jie‏ الموصوف في المثال ؟. إن نتائج ؟ تجارب مستقلة موجودة في الشكل £8 وتوضح أنه بمجرد التنقية لا يظهر 111 و224011 تأثير معضد عند الإضافة على انفراد إلى ‎WA‏ 8549م وعلى الترتيب تأثير مضاد ‎AY‏ 5 77/5 في وجود 1161. كما هو متوقع في ‎Mab‏ 505 الداخل ‎JES‏ مقارن موجب معضد يظهر تأثير معضد مفيد ‎(£0A)‏ عند الإضافة وحده وتأثير مضاد معقول فقط )£79( ‎٠‏ في وجود ‎(HGF‏ بالنسبة لحسابات ‎(BCsp‏ تكون لكل من 1121 و224611 مقاسة بالنانوجزيئي جرامي. مثال 14: اتحاد في الجسم من 224611 5 ‎Navelbine®‏ على نموذج رقعة دخيلة ‎NCI-H441‏ ‏تزرع روتينيا ‎NCI-H441 LDA‏ من ‎ATCC‏ في وسط 1640 ‎ZY + FCS (RPMI‏ ‎LY L-Glutamine ٠5‏ تتفصل ‎WAY‏ يومين قبل أن تصبح الخلايا المزدرعة في حالة أسية للنمو. يتم ازدراع ‎٠١‏ مليون خلية 140111441 في فئران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية. بعد © أيام من الازدراع» تكون الأورام قابلة للقياس وتقسم الحيوانات إلى مجموعات من + فئران لها مقاس ورم متساوي. تعالج الفئران في البريتون سواء مع جرعة تحميل ؟ مجم من ‎Mab‏ 224011/ فأر ثم مرتين في الأسبوع من ‎١‏ مجم مضاد جسم/ فأر حتى اليوم ‎YA‏ أو مع © © حقنات من (019 ,012 ‎Navelbine® (D5,‏ عند ‎A‏ مجم/ كجم. يتم أيضا تضمن مجموعة ثالثة معطاة معالجة متحدة. يعطى ‎Navelbine®‏ بالحقن في البريتون. يقاس حجم الورم مرتين في الأسبوع ويحسب بالصيغة: 7/6 ‎X‏ الطول * العرض” الارتفاع وتراقب أوزان الحيوانات كل يوم طوال مدة ‎dalled)‏ مع ©3180©10106. يجرى تحليل إحصائي عند كل زمن مقاس ‎miele Las‏ 17 أو اختبتسار ‎‘Mann-Whitney ~~ Yo‏ في هذه التجربة يقل متوسط حجم الورم مع مجموعات معالجة بطريقة واحدة بنسبة ‎/a9 A VT VY‏ مسن أجل ‎Navelbine® 224G11‏ ‎Navelbine® + 224G11‏ على الترتيب عند اليوم ‎4١‏ بعد أول مرة حقن. عند اليوم ‎EY‏
لم يحسن العلاج المتحد بدرجة مفيدة نمو الورم مقارنة بمعالجات علاج واحد (م < 41 ‎٠,6‏ ‏مقارنة مع ‎Navelbine®‏ وحده وم > ‎١.007‏ مقارنة مع 224011 وحده في اليوم )£( يصبح ؛ من 6 فثران بدون أورام في مجموعة العلاج المتحد. النتائج ممثلة في الشكل 45 . تتأكد النتائج ‎*٠‏ يوم بعد نهاية المعالجة (اليوم ‎(AA‏ حيث يظل 7717 من الفئران المعالجة © بالمعالجة المتحدة خالية من الأورام. مثال ‎:٠١‏ اتحاد في الجسم من 224611 5 ‎Doxorubicin‏ على نموذج رقعة دخيلة ‎NCI-H441‏ ‏تزرع روتينيا خلايا 140111441 من ‎ATCC‏ في وسط 1640 ‎2٠١ FCS (RPMI‏ ‎.7١ L-Glutamine‏ تتفصل الخلايا يومين قبل أن تصبح الخلايا المزدرعة في حالة أسية ‎٠‏ للنمو. يتم ازدراع ‎٠١‏ مليون خلية 10111441 في فثران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية. بعد © أيام من الازدراع» تكون الأورام قابلة للقياس وتقسم الحيوانات إلى مجموعات من + فئران لها مقاس ورم متساوي. تعالج الفثران في البريتون سواء مع جرعة تحميل ؟ مجم من ‎Mab‏ 224611/ فأر ثم مرتين في ‎١‏ لأسبوع من ‎١‏ مجم مضاد جسم/ فأر أو مع ؛ حقنات من ‎Doxorubicin (DS, 012, D19, D26)‏ عند © مجم/ كجم. يتم أيضا تضمن مجموعة ثالثة ‎١٠‏ معطاة معالجة متحدة. يعطى ‎Doxorubicin‏ بالحقن في البريتون. يقاس حجم الورم مرتين في الأسبوع ويحسب بالصيغة: 7/6 ‎X‏ الطول ‎x‏ العرض* الارتفاع وتراقب أوزان الحيوانات كل يوم طوال مدة المعالجة مع ‎Doxorubicin‏ يجرى تحليل إحصائي عند كل زمن مقاس باستخدام ا ‎.Mann-Whitney‏ يظهر كل من العلاج الوحيد والمعالجة المتحدة نشاط مفيد مضاد لورم ‎ve‏ مقارنة مع المجموعة المقارنة (م < ‎٠009‏ من ‎DIT‏ إلى 039). النتائج ممثلة في الشكل ‎LE‏ ‏تظهر المعالجة المتحدة أيضا نشاط نمو مضاد لورم مفيد مقارنة بمعالجة بعلاج واحد بين ‎D395 1‏ مما يدل على وجود فائدة من اتحاد ‎Doxorubicin‏ مع معالجة مضادة ‎.c-Met‏ ‎Yo‏ مثال ‎iY)‏ اتحاد في الجسم من 224611 5 ‎Docetaxel‏ على نموذج رقعة دخيلة ‎NCI-H441‏ ‎YYo)‏
AY
ZY « FCS (RPMI 1640 ‏في وسط‎ ATCC ‏من‎ NCI-H441 LDA ‏تزرع روتينيا‎ ‏تتفصل الخلايا يومين قبل أن تصبح الخلايا المزدرعة في حالة أسية‎ 7) L-Glutamine ‏مليون خلية 140111441 في فثران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية.‎ ٠١ ‏للنمو. يتم ازدراع‎ 6 ‏للقياس وتقسم الحيوانات إلى مجموعات من‎ ALE ‏بعد © أيام من الازدراع؛ تكون الأورام‎ ‏فثران لها مقاس ورم متساوي. تعالج الفثران في البريتون سواء مع جرعة تحميل ؟ مجم من‎ © ‏مجم مضاد جسم/ فأر أو مع ؛ حقنات من‎ ١ ‏فأر ثم مرتين في الأسبوع من‎ /224611 Mab ‏مجم/ كجم. يتم أيضا تضمن مجموعة ثالثة‎ V,0 ‏عند‎ Docetaxel )05, 012, 019, D26) ‏بالحقن في البريتون. يقاس حجم الورم مرتين في‎ Docetaxel ‏متحدة. يعطى‎ dallas ‏معطاة‎ ‏الطول * العرض* الارتفاع وتراقب أوزان الحيوانات كل يوم‎ X 7/6 ‏الأسبوع ويحسب بالصيغة:‎ ‏طوال مدة المعالجة مع 002068*81. يجرى تحليل إحصائي عند كل زمن مقاس باستخدام سواء‎ ٠ ‏يظهر كل من العلاج الوحيد والمعالجة المتحدة نشاط‎ Mann-Whitney ‏اختبار 7 أو اختبار‎ ‏من 011 إلى 035). النتائج‎ ٠١5007 < ‏مفيد مضاد لورم مقارنة مع المجموعة المقارنة (م‎ . 47 ‏ممثلة في الشكل‎ ‏تظهر المعالجة المتحدة أيضا نشاط نمو مضاد لورم مفيد مقارنة بمعالجة بعلاج واحد بين‎ ‏مع معالجة مضادة‎ Docetaxel ‏و035 مما يدل على وجود فائدة من اتحاد‎ 018 ١ .c-Met ‏على نموذج رقعة دخيلة‎ Temozolomide 5 2240611 ‏اتحاد في الجسم من‎ VY ‏مثال‎ ‎USTMG ‎3٠١ FCS «DMEM ‏في وسط‎ ATCC ‏من‎ UST-MG ‏تزرع روتينيا خلايا‎ ‏تتفصل الخلايا يومين قبل أن تصبح الخلايا المزردعة في مرحلة أسية‎ .2١ L-Glutamine ¥- ‏يوم‎ ١9 ‏في فئران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية.‎ UST-MG ‏للنمو. تزدرع © مليون خلية‎ ‏فئران مع‎ ١ ‏للقياس وتقسم الحيوانات إلى مجموعات من‎ ALE ‏بعد الازدراع» تصبح الأورام‎ 2240611 ‏مقاس ورم متساوي. تعالج الفئران في البريتون سواء مع جرعة تحميل ¥ مجم من‎ ‏من‎ lin Vo ‏مجم مضاد جسم/ فأر أو مع‎ ١ ‏فأر ثم مرتين في الأسبوع مع‎ [Mab ‏عند © مجم/كجم. يمكن أيضا تضمن مجموعة ثالثة‎ Temozolomide )019, 026, D33) Yo ‏بالحقن في البريتون. يقاس حجم الورم مرتين‎ Temozolomide ‏معطاة المعالجة المتحدة. يعطى‎ ‏الطول * العرض* الارتفاع وتراقب أوزان الحيوانات كل‎ X 7/6 ‏في الأسبوع ويحسب بالصيغة:‎
YYo)
AA
‏يجرى تحليل إحصائي عند كل زمن مقاس‎ .Temozolomide ‏يوم طوال فترة المعالجة مع‎ ‏تظهر كل من العلاجات الوحيدة‎ .Mann-Whitney ‏باستخدام سواء اختبار © أو اختبار‎ 022 ‏والمعالجة المتحدة نشاط مفيد مضاد لورم مقارنة بالمجموعة المقارنة (م < 0.007 من‎
CEA ‏الفئران المقارنة برفق لأسباب أخلاقية)). النتائج ممثلة في الشكل‎ JE ‏إلى 032 (حيث‎
P) ‏ورم مقارنة بمعالجات بعلاج وحيد‎ sail ‏نشاط مفيد مضاد‎ Load ‏تظهر المعالجة المتحدة‎ ° ‏من اليوم 77 إلى اليوم £7 (حيث تقتل الفئران المقارنة برفق لأسباب أخلاقية) من‎ ١,07 2 ‏(آخر يوم من المعالجة) من أجل‎ OF ‏ومن اليوم 79 إلى اليوم‎ Temozolomide ‏أجل‎ ‏مع‎ Temozolomide ‏بصورة مجمعة؛ تدل هذه البيانات على وجود فائدة من اتحاد‎ .1 .c-Met ‏معالجة مضادة‎ ‏مثال 7؟؟: تكوين جسم كروي‎ ٠ ‏بتقييم قدرة‎ Lid ‏فقد‎ (gpa) Mabs ‏كما هو موصوف تماما في المثال 4 من أجل‎ ‏على تثبيط نمو الورم في المعمل في نموذج جسم كروي 087-340. لذلك‎ 224011 Mab ‏ويعاد تعليقها في‎ trypsine-EDTA ‏نامية كطبقة أحادية مع‎ UST-MG ‏الغرض؛ تنفصل خلايا‎ ‏خلية في عيون فردية‎ TY ‏أوساط مزرعة خلية كاملة. يبدأ تكوين الأجسام الكروية بتلقيح‎ ‏لمنع التصاق الخلية مع طبقة‎ .205 Y,0 DMEM ‏طبق في‎ 97 acl ‏مستديرة‎ LLY de ‏وتجفف بالهواء عند درجة‎ 795 ethanol ‏في‎ polyHEMA ‏تحتية؛ تغطى الأطباق مسبقا مع‎ ‏في‎ 75 CO, ؛ةيوئم"؟١ ‏حرارة الغرفة. تحضن الأطباق تحت شروط زراعة خلية قياسية عند‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر) بعد ؛‎ ٠١( ‏حضانات رطبة. تضاف مضادات أجسام أحادية النسخ نقية‎ ‏يوم. عندئذ؛‎ VY ‏أيام من زراعة الجسم الكروي. تحفظ الأجسام الكروية في المزرعة لمدة‎ ٠١و‎ ‏يراقب نمو الجسم الكروي بقياس منطقة الأجسام الكروية باستخدام زجلة ذاتية القياس لبرنامج‎ YS ‏جسم كروي لكل حالة.‎ ١1-4 ‏تتمثل المنطقة بالميكرومتر المربع. يتم تقييم‎ . 0 ٠١7 ‏من الزراعة وبعد‎ all ٠١ ‏يقاس مقاس الجسم الكروي قبل إضافة مضادات الأجسام؛ بعد‎ ‏يوم من الزراعة.‎ ‏في تلك الحالات؛ تنتج أجسام كروانية متماثلة ولايلاحظ اختلاف إحصائي قبل إضافة‎ .))( 45 ‏مضادات الأجسام (شكل‎ ٠ ‏كما هو موضح في الأشكال 49؛(ب)-59؟ (د)؛ فإن المثال المقارن النوع المماثل. 964 لا‎ ‏يوم من الزراعة. بينما إضافة 505 ليس لها‎ VY ‏أو‎ ٠١ ‏يؤثر على نمو الأجسام الكروية بعد‎
حم تأثير كبير على مقاس الجسم الكروي. فإن إضافة كل من 2240611 و1181 تثبط بشدة نمو الورم. مثال ؛ ؟: النشاط في المعمل لأشكال هجينة ومكتسبة السمة الآدمية من 224011 في اختبار ‎phospho-c-Met‏ ‏> لمقارنة الفعالية في المعمل لأشكال فأرية؛ هجينة ومكتسبة السمة الآدمية في اختبار وظيفي؛ تجرع مواد مزرعة طافية ناتجة من ورم هجين ‎224G11‏ وخلايا مزروعة ‎HEK293‏ ‏وتختبر حسب الوصف في ‎LY JU)‏ تبين البيانات الملحقة في شكل ‎٠٠‏ النتائج المتوقعة لمضاد الجسم الفأري غير النقي حسب الوصف تماما في الشكل ١(ب).‏ تظهر كل من مضادات الأجسام الهجينة ومكتسبة السمة الآدمية غير النقية نشاط متساوي سواء عند ‎٠‏ الإضافة بمفردها (شكل ‎(or‏ أو عند الحضانة في وجود ‎HGF‏ (شكل ‎٠‏ *(ب)). مثال © ؟: تحديد ثوابت الانجذاب ‎(KD)‏ لمضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ بتحليل ‎Biacore‏ ‏يتم التحري عن انجذاب الارتباط لمضادات الأجسام 1181 و224611 النقية بواسطة ‎BlAcore X‏ باستخدام مجال سيطرة خارج الخلايا ‎c-Met‏ مخلق ‎(ECD)‏ مندمج مع مجال سيطرة ‎Fe‏ 1801 آدمي ‎(R&D Systems)‏ كمولد ‎alias‏ (وزن جزيئي = ‎١١5‏ كيلودالتون). ‎OY‏ ‎JS 10‏ من بروتينات اندماج ‎c-Met-Fo‏ ومضادات الأجسام هي مركبات ثنائية ‎Ll‏ فإن الأجزاء ‎Fab‏ من ‎mAbs‏ 1181 و224611 (وزن جزيشي- ‎٠٠‏ كيلودالتون) تتولد بفصل ‎papain‏ تنقى وتستخدم في هذا الاختبار لتفادي معارضة معيار حاد. ‎Lad‏ يغلف مضاد جسم إمساك مضاد ‎Tag histidine‏ على رقاقات إحساس 0145. إن مثبت الأس الهيدروجيني المتدفق هو ‎(HBS-EP‏ معدل التدفق ‎٠١‏ ميكرولتر/ الدقيقة ويجرى الاختبار عند © 7”مئوية. ‎Ye‏ يثم إمساك مولد مضاد ‎c-Met (ECD_M1)2-Fe-(HHHHHH)2‏ قابل للذوبان على رقاقة الإحساس (حوالي 770 ل81)؛ وتستخدم مضادات الأجسام المراد اختبارها في محلول كمواد تحليل. تتجدد رقاقة الإحساس باستخدام ‎Glycine‏ مثبت أس هيدروجيني 1101 أس هيدروجيني على كل من خلايا التدفق لمدة نصف دقيقة. يوضح الشكل )0 ‎fae‏ هذا التحليل. إن المعايير الحركية الناتجة ملخصة في ‎Edson‏ ‎ve‏ التالي. إنها تدل على أن كل من مضادات أجسام 1181 ‎224G115‏ المضادة ‎c-Met‏ تربط بروتين اندماج ‎cMet-Fe‏ المخلق مع انجذابات متساوية تتراوح عند حوالي 560 ‎PM‏ ‏جدول ؛ عض
‎Kon! Kon!‏ ‎amd |e | TT‏ انيقي ‎in| Benen‏ ثانية] ثانية] ‎١‏ ‎Fab‏ ‏مثال 77: نشاط 224011 في الجسم على خلايا ‎MDA-MB-231‏ مزدرعة بصورة مشتركة مع ‎MRCS WDA‏ كمصدر ‎HGF‏ آدمي على فئران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية تزرع كل من خلايا ‎MDA-MB-213‏ و ‎MRCS‏ من ‎ATCC‏ في وسط 014814 ‎FCS‏ ‎.7١ L-Glutamine ٠‏ تنفصل الخلايا يومين قبل أن تصبح الخلايا المزدرعة في ‎Ula‏ ‏© أسية للنمو. تحقن بصورة مشتركة تحت الجلد © مليون خلية ‎MDA-MB-231‏ و500000 خلية ‎MRCS‏ في فئران ناقصة المناعة مزالة الغدة الصعترية. بعد ‎١١‏ يوم من الازدراع؛ تصبح الأورام قابلة للقياس وتقسم الحيوانات إلى مجموعات من ‎١‏ فئران مع مقارنة ورم متساوي. تعالج الفئران في البريتون سواء مع جرعة تحميل ؟ مجم من ‎Mab‏ 224011/فأر ثم مرتين في الأسبوع مع ‎١‏ مجم مضاد جسم/ فأر. يقاس حجم الورم مرتين أسبوعيا وتحسب بالصيغة: 7/6 ‎٠‏ الطول» العرض الارتفاع. تبين النتائج الموصوفة في شكل ‎OF‏ اختلاف ملحوظ في متوسط نمو الأورام للفثران المعالجة مع 224011 مقارن مع ذلك للمجموعة المقارنة. مثال ‎:7١7‏ عناصر مكملة في إكساب السمة الآدمية لمضادات الأجسام 227111؛ 1181 و224611 ‎١٠‏ إجراء عام يتم إكساب السمة الآدمية لمضادات أجسام مضادة ‎c-Met‏ على حدة لكل سلسلة وبصورة متعاقبة؛ بالنسبة لأجل ‎amino acids‏ المحللة في كل مجال سيطرة متغير. يتم تقييم عملية إكساب السمة الآدمية في محاولة أولى في اختبار ارتباط معتمد على ‎BLISA‏ مع ‎Fo-cMet‏ مخلق؛ تقارن أنشطة ارتباط مضادات الأجسام مكتسبة السمة الآدمية مع مضاد ‎To‏ جسم هجين مخلق. في محاولة ثانية؛ يتم تقييم مضادات أجسام مكتسبة السمة الآدمية مضادة ‎c-Met‏ من أجل قدراتها على إزاحة ارتباط ‎Fe-cMet‏ فوق ‎HGF‏ مخلق مغطى بمادة لدنة؛
يسمح اختبار المنافسة هذا بالمقارنة المباشرةٍ لطرازات فأرية؛ هجينة ومكتسبة السمة الآدمية لمضادات الأجسام المضادة ‎.cMet‏ ‏في الشكلين ‎oF‏ و؛ 5 تتمثل أنشطة ارتباط مضاد ‎c-Met‏ النموذجية لمضادات أجسام أحادية النسخ فأرية 227111 11851 و224611.
0 يبين شكل ‎oF‏ أنشطة ربط مباشر لمضاد ‎c-Met‏ لمضادات أجسام فأرية نقية محددة. في هذا الاختبار تظهر مضادات الأجسام أحادية النسخ الفأرية المضادة 01462 أنشطة ربط مضادة ‎cMet‏ مختلفة لكنها أيضا معتمدة على الجرعة.
يبين شكل #4 أنشطة منافسة ربط 1107-0146 لمضادات أجسام فأرية نقية. يكشف اختبار المنافسة عن اختلافات يمكن الاعتماد عليها بين مضادات الأجسام هذه أحادية النسخ ‎٠‏ المضادة ‎cMet‏ مع نشاط تنافسي معقول؛ غير كامل لكن يمكن الاعتماد عليه لمضاد الجسم أحادي النسخ 11 بينما يظهر 224011 و227111 فأري نمط متشابه للأنشطة التنافسية مع إزاحة قصوى ‎7٠٠١‏ لارتباط ‎HGF‏ عند تركيز أعلى من مضاد الجسم. يظهر مضاد الجسم أحادي النسخ 224011 أفضل قيمة ‎ICs‏ : من الجدير بالذكر أن أنشطة الارتباط المباشر لمضادات الأجسام الفأرية لا تعكس ‎٠‏ خواصها التنافسية المتأصلة لربط ‎HGF‏ ‏يستخدم هذان الاختباران لتمييز الطرازات المخلقة الهجينة ومكتسبة السمة الآدمية لمضادات الأجسام الفأرية المضادة 21482. عند هذه النقطة؛ تنسخ مجالات سيطرة متغيرة مضادة ‎c-Met‏ سواء فأرية أو مكتسبة السمة الآدمية؛ في سلسلة نواقل إظهار ‎Lonza’spCONplus‏ وتظهر مضادات أجسام مخلقة مشتقة-»/, 186 في ‎WIA‏ 0110. تتركز © المواد الطافية لمزرعة الإظهار وتظهر بدرجة مكثفة مقابل ‎PBS‏ ثم تجرع لتركيزات مضادات الأجسام الظاهرة وتستخدم مباشرة لاختبار أنشطة ربط مضادة 460 المقابلة. يستخدم كل من اختبارات الربط المباشر وتنافس ‎HGF‏ لتمييز أفضل لطرازات مخلقة هجينة أو مكتسبة السمة الآدمية. مثال ‎:١-7١7‏ إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة ثقيلة 227111 ‎Yo‏ لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎(CDR‏ تتم دراسة جين خط جرثومة آدمي يظهر أفضل ‎Sila‏ مع ترتيب فأري ‎VH‏ 227111. بمساعدة قاعدة بيانات ‎IMGT‏ تم انتقاء جين خط yY ‏الآدمي كترتيبات مستلمة‎ 161114*01 J ‏الآدمي وجين خط جرثومة‎ IGHVI-2%02 V ‏جرثومة‎ ‏الفأرية.‎ 227111 VH CDRs ‏آدمية لمناطق‎ ‏الفأري مع الإطار‎ 227111 VH ‏لمجال سيطرة‎ amino acid ‏يمثل الشكل 00 اصطفاف‎ ‏الموجود مختلفا عن مجال‎ amino acid ‏الآدمية؛ يوصف فقط‎ FR ‏الادمي المنتقى. في خانة‎ ‏و11211711 الطرازات‎ HZ2VH 11231711 ‏الفأري 227111. تطابق خانات‎ VH ‏السيطرة‎ ٠ ‏وتكون الطفرات المذكورة أعلاه‎ 227111 VH ‏المكتسبة السمة الآدمية المحضرة لمجال سيطرة‎ ‏(”"متغيرة في" الخانة) محددة بوضوح. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل‎ ‏الذي تحدث عنده الطفرة المذكورة.‎ ‏طرازات‎ ADE c-Met ‏من التجارب؛ قمنا بتشييد وتحليل أنشطة ربط مضاد‎ Jf ‏في سلسلة‎ ‏فأري 227111 عند الإظهار في اتحاد مع‎ VH ‏المكتسبة السمة الآدمية الأولى لمجال سيطرة‎ ٠ ‏سلسلة خفيفة هجينة 227111. إن النتائج الناتجة من اختبار ارتباط مباشر مضاد‎ ‏مبينة في الشكل 076. في هذه التجربة؛ لا تلاحظ اختلافات في قدرات الربط لمضادات‎ c-Met ‏الأجسام المختبرة الهجينة المشتقة من 227111 أو المخلقة المكتسبة السمة الآدمية جزئيا. عند‎ 227111 VH ‏المختلفين بين مجال سيطرة‎ amino acids YY ‏من‎ Yo ‏هذه النقطة؛ يتم تحليل‎ ‏الفأري والإطار الآدمي المنتقى واتضح أنها غير هامة لنشاط الربط المضاد‎ ٠ ‏مكتسبة السمة الآدمية 227111؛ عند الاتحاد مع سلسلة خفيفة‎ VH ‏لمجال سيطرة‎ c-Met ‏في اتحاد مع تحليل تكوين طفري موجه لمكان للستة متخلفات الفأرية الأخيرة في الطراز‎ ‏بتشييد طراز‎ Lid ‏227111؛ فقد‎ VH ‏المكتسب السمة الآدمية لمجال السيطرة‎ HZ1VH ‏أصلي "مكتسب السمة الآدمية 184067- كامل"” واختبار خواصه الرابطة المضادة‎ 11241711 ٠ ‏لاختبار‎ oA Jal ‏لاختبار الارتباط المباشر وفي‎ ov ‏إن النتائج موجودة في الشكل‎ c-Met ‏منافسة ربط 1107. من الجدير بالذكر أن كلا من طرازات 227111 المخلقة الهجينة والمكتسبة‎ ‏السمة الآدمية تظهر نشاط تنافسي أفضل من مضاد الجسم الفأري الأصلي.‎ c-Met ‏برغم ذلك؛ على ضوء البيانات التجريبية الناتجة الخاصة بخواص ربط مضاد‎ amino acid ‏كامل" ينتقى ترتيب‎ IMGT" ‏مكتسبة السمة الآدمية‎ 227111 VH ‏لمجال سيطرة‎ Yo ‏الناتج الموصوف في الشكل 09 ويجرى عندئذ تحليل معلوماتي حيوي لتقييم مستوى "الآدمية"‎ .227111-117 VH ‏لما يسمى بمجال السيطرة المتغير المكتسب السمة الآدمية‎
عند هذه النقطة تجرى مقارنة بسيطة لترتيبات الإطارات مع قاعدة بيانات آدمية باستخدام
أدوات ‎IMGT‏ بتحديد مستوى اكتساب السمة الآدمية الذي يتم الحصول عليه أثناء هذه
العملية؛ فإنه من ‎AS‏ من ‎amino acids‏ المحللة المقابلة لمتخلفات الإطارء اتضح وجود 8/95
يمكن الاعتماد عليهم من مصدر أدمي. يمكن أن توجد متخلفات من ‎CDRs‏ فقط مختلفة؛ لكن © عند وجود ذلك فإنها تختلف عن جين خط الجرثومة الآدمي المقابل وتكون بصورة واضحة عند
الأماكن مفرطة التغير. اعتمادا على نظام ترقيم ‎IMGT‏ وأدوات تحليل التشابه؛ فقد قمنا أولا
بصورة كلية بإكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير لمضاد جسم من مصدر فأري.
مثال 7١7-؟:‏ إكساب السمة الآدمية لمضاد جسم أحادي النسخ ‎HE]‏
1151 ‏إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرةٍ متغير سلسلة تقيلة‎ .١
‎٠١‏ لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎(CDR‏ تتم دراسة جين خط جرثومة ‎ool‏ يظهر أفضل تمائل مع ترتيب فأري ‎VH‏ 11851. بمساعدة قاعدة بيانات 11407 تم انتقاء جين خط جرثومة ‎IGHV1-46%01 V‏ الأدمي وجين خط جرثومة ‎J‏ 161114*03 الآدمي كترتيبات مستلمة آدمية لمناطق ‎VH CDRs‏ 11251 الفأرية. :
‏يمثل الشكل ‎٠0‏ اصطفاف ‎amino acid‏ لمجال سيطرة ‎VH‏ 1181 الفأري مع الإطار
‎٠‏ الآدمي المنتقى. في خانة ‎FR‏ الآدمية؛ يوصف فقط ‎amino acid‏ الموجود مختلفا عن مجال السيطرة ‎VH‏ الفأري 1181. تطابق خانات 17113 ‎(HZ‏ 17112 117و 17111 117 الطرازات المكتسبة السمة الآدمية المحضرة لمجال سيطرة ‎VH‏ 1181 وتكون الطفرات المذكورة أعلاه (متغيرة في" الخانة) محددة بوضوح. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل الذي تحدث عنده الطفرة المذكورة.
‎٠‏ في سلسلة أولى من التجارب؛ ‎lad‏ بتشييد وتحليل أنشطة ربط مضاد ‎o-Met‏ لثلاثة طرازات المكتسبة السمة الآدمية الأولى لمجال سيطرة ‎VH‏ فأري 1181 عند الإظهار في اتحاد مع سلسلة خفيفة هجينة 1181. إن النتائج الناتجة من اختبار ارتباط مباشر مضاد © مبينة في الشكل ‎.1١‏ في هذه التجربة؛ يلاحظ تشابه في قدرات الربط لمضادات الأجسام المختبرة الهجينة المشتقة من 11851 أو المخلقة المكتسبة السمة الآدمية جزئيا. عند
‎1181 VH ‏المختلفين بين مجال سيطرة‎ amino acids ‏من 4 ؟‎ ١9 ‏هذه النقطة؛ يتم تحليل‎ YO ‏لمجال‎ c-Met ‏الفأري والإطار الآدمي المنتقى واتضح أنها غير هامة لنشاط الربط المضاد‎ ‏عند الاتحاد مع سلسلة خفيفة هجينة.‎ (TET ‏مكتسبة السمة الآدمية‎ VH ‏سيطرة‎ q¢ 1181 ‏إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة‎ ." ‏تتم دراسة جين خط جرثومة آدمي يظهر‎ (CDR ‏لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم‎ ‏تم انتقاء جين خط‎ (MGT ‏بمساعدة قاعدة بيانات‎ .1181 VL ‏أفضل تماثل مع ترتيب فأري‎ ‏كترتيبات مستلمة‎ oY) IGKI4*01 J ‏الأدمي وجين خط جرثومة‎ IGKV3D-7*01 V ‏جرثومة‎ ‏الفأرية.‎ 1181 VL CDRs ‏آدمية لمناطق‎ ٠ ‏الفأري مع الإطار‎ 1151 VL ‏لمجال سيطرة‎ amino acid ‏الشكل 7 اصطفاف‎ Jia ‏الموجود مختلفا عن مجال‎ amino acid ‏الآدمية؛ يوصف فقط‎ FR ‏الآدمي المنتقى. في خانة‎ ‏الفأري 1181. تطابق خانات 17/13 1127 1712 117 و1711 117 الطرازات‎ VL ‏السيطرة‎ ‏وتكون الطفرات المذكورة أعلاه‎ 1181 VL ‏المكتسبة السمة الآدمية المحضرة لمجال سيطرة‎ ‏(متغيرة في" الخانة) محددة بوضوح. إن الرقم تحت كل طفرة مفترضة يطابق مكان التسلسل‎ ٠ ‏الذي تحدث عنده الطفرة المذكورة.‎ ‏لثلاثة طرازات‎ e-Met ‏في سلسلة أولى من التجارب؛ قمنا بتشييد وتحليل أنشطة ربط مضاد‎ ‏فأري 1181 عند الإظهار في اتحاد مع‎ VL ‏المكتسبة السمة الآدمية الأولى لمجال سيطرة‎ ‏سلسلة ثقيلة هجينة 1181. إن النتائج الناتجة من اختبار ارتباط مباشر مضاد‎ ‏مبينة في الشكل 173. في هذه التجربة؛ يلاحظ تشابه في قدرات الربط لمضادات‎ c-Met © ‏الأجسام المختبرة الهجينة المشتقة من 1181 أو المخلقة المكتسبة السمة الآدمية جزئيا. عند‎
HED VL ‏المختلفين بين مجال سيطرة‎ amino acids "٠ ‏هذه النقطة؛ يتم تحليل 7 من‎ ‏الفأري والإطار الآدمي المنتقى واتضح أنها غير هامة لنشاط الربط المضاد‎ ‏مكتسبة السمة الآدمية 11181 عند الاتحاد مع سلسلة ثقيلة هجينة.‎ VL ‏لمجال سيطرة‎ c-Met 1181 ‏إكساب السمة الآدمية لمضاد الجسم‎ .© YL ‏يحتوي‎ «TET ‏عند هذه المرحلة من إكساب السمة الآدمية لمضاد الجسم أحادي النسخ‎ ‏تريب مضاد الجسم المكتسب السمة الآدمية النظري الناتج على فقط © متخلفات م0018-‎ ‏خارجية آثية من مجال سيطرة 711 الفأري الاصلي و؛ من متخلفات م0018- خارجية آتية من‎ ‏خانة‎ AY ‏خانة 7111 1127 والشكل‎ ae dal ‏الفأري الأصلي (انظر‎ vi ‏ترتيب‎ ‏لقد تقرر عندئذ في الحال تمييز الطراز المكتسب السمة الآدمية السلسلة الثقيلة‎ (HZ VLI ٠ ‏لاختبار ربط‎ VE ‏والخفيفة المتحد الناتج لمضاد الجسم 1181. النتائج موجودة في الشكل‎ .c-Met ‏مباشر لمضاد‎
في هذه التجربة؛ تلاحظ قدرات ربط متشابهة لمضادات الأجسام المخلقة الهجينة أو المكتسبة السمة الآدمية المختبرة المشتقة من 1181. إن تحليل الخواص التنافسية لربط ‎HGF‏ ‏وتحليل التكوين الطفري الموجه لمكان لمساهمة التسعة متخلفات الفأرية اليسرى لا يزال بحاجة للإجراء على حده أو في اتحاد في هذا الطراز المنتقى 7111/71.1 "المسبق إكساب السمة
0 الآدمية' لمضاد الجسم أحادي النسخ 1181.
مثال ‎:3-7١‏ إكساب السمة الآدمية لمضاد جسم أحادي النسخ 224611 ‎.١‏ إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة ‎Ad‏ 224611
لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎(CDR‏ تتم دراسة جين خط الجرثومة الآدمي الذي يظهر أفضل تماتل مع الترتيب الفأري 1711 224611.
‎٠١‏ بالنسبة لتشابه الترتيب الكبير بين ترتيبات مجالات سيطرة ‎VH‏ 2240611 و7711 227111؛ وحسب التأكيد باستخدام أدوات قاعدة بيانات ‎IMGT‏ يتم انتقاء نفس جين خط الجرثومة الآدمي ‎IGHV1-2%02 V‏ و1 161114*01 الآدمي كتركيبات آدمية مستلمة لمناطق ‎224G11 VH CDRs‏ الفأرية. ‏اعتمادا على هذا التشابه الكبير؛ تقرر مباشرة نقل معلومات إكساب السمة الآدمية المكتسبة
‎٠‏ من إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VH‏ 227111 (انظر المثال ‎(YY‏ ثم صممنا عندئذ طراز مكتسب السمة الآدمية ”11467- كامل" حسب الوصف في الشكل 10 يمثل اصطفاف ‎amino acid‏ لمجالات السيطرة 711 . 227111 و7711 224611 الفأرية مع الإطار الآدمي المنتقى. في خانة ‎FR‏ الآدمية؛ يوصف فقط ‎amino acid‏ الموجود مختلفا عن مجال سيطرة 1 الفأري 224011. تطابق خانة ‎HZVHO‏ الطراز مكتسب السمة الآدمية ‎IMGT"‏ كامل"
‏© ا لمجال سيطرة 711 224011 حسب الحصول عليه لمجال سيطرة ”18467- كامل" -227111 ‎.HZVH‏
‏ثم عندئذ تشبيد الطراز المكتسب السمة الآدمية ‎-IMGT‏ كامل" لمجال سيطرة 711 الفأري
‏1 وتم تحليل أنشطته الرابطة المضادة ‎co-Met‏ عند الإظهار في اتحاد مع سلسلة خفيفة
‏هجينة 224611. إن النتائج الناتجة من اختبار ربط مباشر مضاد ‎c-Met‏ مبينة في الشكل ‎TT‏
‎Yo‏ بينما يوضح الشكل ‎TV‏ اختبار منافسة ربط 11617. على ضوء البيانات التجريبية الناتجة بالنسبة ‎algal‏ ربط مضاد ‎c-Met‏ لمجال سيطرة ‎VH‏ 224611 مكتسب السمة الأدمية '-
17 كامل" ينتقى ترتيب ‎amino acid‏ الناتج حسب الوصف في الشكل 10 ويجرى عندئذ تحليل معلوماتي حيوي لتقييم مستوى "آدمية" ما يسمى مجال سيطرة 17110 224011-117. على ضوء سياسة إكساب السمة الآدمية المطبقة ‎clin‏ لابد من الإشارة إلى المثال ‎YY‏ ‏لتحليل آدمية ترتيب ‎HZ VHO‏ 224011. حسب الوصف لإكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VH ©‏ 227111؛ فقد أكدنا إمكانية الاعتماد على نظام ترقيم ‎IMGT‏ وأدوات تحليل التشابه؛ وأظهرنا أيضا إمكانية نقل سياسة إكساب السمة الآدمية بين مضادات الأجسام تحت حدود التشابه المتأصل بينها. ". إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة متغير سلسلة خفيفة 224611 لتحديد المرشح الآدمي الأفضل لتطعيم ‎CDR‏ تمت دراسة جين خط الجرثومة ‎٠‏ الآدمي الذي يظهر أفضل تماثل مع الترتيب الفأري ‎VL‏ 2240611. بمساعدة أدوات تحليل قاعدة بيانات ‎IMGT‏ تم تحديد منطقتين ‎V‏ آدميتين مستلمتين ممكنتين من أجل ‎VL CDRs‏ 224611 الفأرية. لذلك؛ تم تخطيط اثنين من سياسات إكساب السمة الآدمية لمجال السيطرة ‎VL‏ 224011. تطابق الأولى التجربة الأولية للإطار الآدمي مع طول 0081 أقصر ‎((IGKV3-11%01)‏ والثانية تطابق طول 6011 أطول (16162174-1*01). يمثل الشكل ‎TA‏ اصطفاف ‎amino acid‏ لمجال سيطرة ‎VL‏ 224611 الفأري مع الإطارين الآدميين المنتقين. في كل من خانات ‎Hu-FR FR‏ الأقصر والأطول؛ يوصف فقط ‎amino‏ ‏0 الموجود مختلفا عن مجال سيطرة ‎VL‏ الفأري 224011. تطابق خانات ‎HZ 3‏ و 71.6 ‎HZ‏ طرازات أساسية مكتسبة السمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VL‏ 224011 مع تحديد بوضوح للطفرات المذكورة أعلاه (خانة "التسلسل"). إن العدد تحت كل طفرة مفترضة ‎Yo‏ يطابق مكان التسلسل الذي تتم عنده الطفرة المذكورةٍ كلما تم انتقاء إطار-1 601 "أقصر" أو "أطول". في مجموعة أولى من التجارب؛ تم تشييد الطرازين الأساسيين المكتسبين للسمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VL‏ الفأري 224011 وتحليل أنشطتها الرابطة المضادة ‎c-Met‏ عند الإظهار في اتحاد مع سلسلة ‎ALE‏ هجينة 224611. إن النتائج الناتجة من اختبار ربط مباشر لمضاد ‎Ye‏ 0048 مبينة في الشكل 11. في هذه التجربة؛ يلاحظ نشاط ربط مضاد 146 متشابه لطراز ‎HZ VLG‏ 00817- أطول") والهجين بينما لا يتحدد تقريبا ربط لمضاد الجسم المشتق من 1 المخلق ‎-CDR1") HZ VL3‏ أقصر"). تعض iv ‏للطرازات‎ c-Met ‏في مجموعة ثانية من التجارب؛ شيدنا وحللنا أنشطة ربط مضادة‎ ‏عند‎ HZ VL6 ‏المكتسبة السمة الآدمية المحضرة لمجال سيطرة 711 224611 المشتق من‎ ‏الإظهار في اتحاد مع سلسلة ثقيلة هجينة 224011. تم تحليل اثنين من أشكال مكتسبة السمة‎ ‏تكون السبعة متخلفات من المجموعة الثالثة (مكان‎ HZ VLS ‏الآدمية الإضافية؛ في الطراز‎ ‏تظل فقط الأربعة متخلفات اليسرى من المجموعة الأولى‎ HZ VLA ‏وفي الطراز‎ (F ‏التسلسل‎ ٠ ‏مبينة‎ c-Met ‏فأرية. إن النتائج الناتجة من اختبار ارتباط مباشر مضاد‎ )١ ‏(متخلفات التسلسل‎ ‏في هذه التجربة؛ لا توجد اختلافات ملحوظة في قدرات ربط مضادات الأجسام‎ .7٠ ‏في الشكل‎ ‏المخلقة الهجينة أو المكتسبة السمة الآدمية جزئيا المختبرة المشتقة من 224611. عند هذه‎ ‏الفأري‎ 224011 VL ‏مختلفين بين مجال سيطرة‎ amino acids YY ‏من‎ VA ‏النقطة؛ تم تحليل‎ c-Met ‏والإطار الآدمي "0081- الأطول" المنتقى واتضح أنها غير هامة لنشاط ربط مضاد‎ ٠ ‏الثقيلة الهجينة.‎ ALLL ‏مكتسب السمة الآدمية 224611 عند الاتحاد مع‎ VL ‏لمجال سيطرة‎ ‏في‎ 224011 VL ‏لمجال سيطرة‎ HZ 714 ‏تم عندئذ اختبار الطراز المكتسب السمة الآدمية‎ ‏كما هو مبين في الشكل ١7؛ توضح النتائج الناتجة نشاط تنافسي‎ LHGF ‏اختبار منافسة ربط‎ ‏متشابه لمضادات الأجسام الفأرية والهجينة المخلقة والمشتقة من 224011 المكتسب السمة‎
HZ VLA ‏الأدمية‎ ١٠ ‏224011؛ يحتوي الترتيب‎ VL ‏عند هذه المرحلة من إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة‎ ‏خارجية فقط آتية من الترتيب الأصلي الفأري. كما هو مبين في‎ CDRs ‏الناتج على ؛ متخلفات‎ ‏و884.‎ 1140 M39 14 ‏فإن هذه المتخلفات الأربعة الآدمية المعلمة مع 5 هي‎ VY ‏الشكل‎ ‏وأدوات تحليل التشابه؛ أوضحنا أن الإطار الآدمي الذي‎ IMGT ‏اعتمادا على نظام ترقيم‎ ‏قد يظل مناسبا في عملية إكساب السمة الآدمية.‎ CDR ‏لطول‎ deals ‏يظهر اختلافات بنائية‎ ٠ ‏لقد تقرر تمييز الطراز المكتسب السمة الآدمية السلسلة الثقيلة والخفيفة الناتج لمضاد الجسم‎ ‏إن تحليل تكوين طفري موجه لمكان لمساهمة الأربعة متخلفات الفأرية المتبقية يتم‎ .11 ‏إجراؤه عندئذ عند الإظهار في اتحاد مع طراز مكتسب السمة الآدمية 7110 للسلسلة الثقيلة.‎ 224611 ‏إكساب السمة الآدمية لمضاد جسم‎ LY ‏لطراز مكتسب‎ c-Met ‏في سلسلة أولى من التجارب؛ شيدنا وحللنا أنشطة ربط مضادة‎ Yo ‏السمة الآدمية كليا لمضاد جسم 224011. يشمل هذا الطراز المخلق كلا من مجالات سيطرة‎ ‏على الترتيب. إن النتائج الناتجة من اختبار‎ VIA VHO ‏مكتسبة السمة الآدمية‎ ١711و‎ VIL
1A ‏مبينة في الشكل ؟7. في هذه التجربة؛ اتضح أن نشاط ربط‎ c-Met ‏ارتباط مباشر مضاد‎ ‏الآدمي كليا مشابه لذلك لطرازات 224611 المخلق المكتسب السمة‎ 224011 cMet ‏مضاد‎ ‏والهجين.‎ "ALL ‏الآدمية "وحيد‎ ‏في اختبار‎ 2240611 VL ‏لمجال سيطرة‎ LIS ‏تم اختبار الطراز المكتسب السمة الآدمية‎ ‏النشاط التنافسي‎ Ve ‏توضح النتائج الناتجة كما هي مبينة في الشكل‎ (HGF ‏مناسبة ربط‎ © ‏المتشابه لمضادات الأجسام الفأرية الأصلية والمخلقة الهجينة والمكتسبة السمة الآدمية كليا‎ .224611 ‏المشتقة من‎ ‏عند هذه المرحلة من إكساب السمة الآدمية لمضاد جسم 224611 يحتوي الترتيب الناتج‎ ‏خارجية من ترتيب مجال السيطرة المتغير السلسلة الخفيفة‎ -CDRs ‏على فقط ؛ متخلفات‎ ‏عندئذ أشكال متباينة وحيدة التكوين الطفري الموجه لمكان لمجال‎ Lilla ‏الأصلي الفأري. لقد‎ ٠ ‏عند الإظهار في اتحاد مع طراز مكتسب السمة‎ VIA ‏مكتسب السمة الآدمية‎ VL ‏سيطرة‎ ‏لاختبار الربط المباشر فقد حددنا‎ Veo ‏الآدمية 7110 للسلسلة الثقيلة. كما هو متمثل في الشكل‎ ‏متخلفات هامة ممكنة من بين الأربعة المختبرة» وهي 1439 و1140.‎ ‏مكتسب السمة الآدمية‎ 224011 VL ‏لقد تقرر تحليل طفرات عديدة لمجال سيطرة‎ ‏عند الإظهار في اتحاد مع مجال سيطرة 1711 2240611 مكتسب السمة الآدمية‎ HZ ‏14لا‎ ٠ ‏لاختبار‎ VY ‏لاختبار الارتباط المباشر وفي الشكل‎ VT ‏كما هو مبين في الشكل‎ .1127 0 ‏لتحديد أفضل‎ VIA ‏متعددة لمجال سيطرة‎ amino acid ‏تم تحليل طفرات‎ (HGF ‏تنافسي لربط‎ ‏اتحاد مكتسب السمة الآدمية. على أساس تحليل الطفرات الوحيدة؛ ثم التركيز على طفرات‎ ‏تطابق مجال‎ VHO/VLA-2x ‏إن طفرة‎ c-Met ‏مزدوجة وثلاثية قد تظهر أفضل أنشطة مضادة‎ ‏مكتسب السمة الآدمية 224611 7110 112 ظاهر مع مجال سيطرة‎ VH ‏سيطرة‎ ٠ ‏تطابق‎ .LAM/R84G ‏مع الطفرة المزدوجة‎ HZ VIA 224611 ‏مكتسب السمة الآدمية‎ VIL ‏ظاهر مع‎ HZ VHO 224611 ‏مكتسبة السمة الآدمية‎ VH ‏مجال سيطرة‎ VHO/VLA-3x ‏الطفرة‎ ‏مع الطفرة الثلاثية‎ 117 VLA 224611 ‏مكتسبة السمة الآدمية‎ VL ‏مجال سيطرة‎ .LAM/M39L/R84G ‏لمضاد الجسم‎ c-Met ‏على ضوء البيانات التجريبية الناتجة بالنسبة لخواص الربط المضاد‎ Yo ‏مكتسبة السمة الآدمية كليا يجرى عندئذ تحليل معلوماتي حيوي لكل من مجالات‎ 1 ‏سيطرة متغيرة سلسلة ثقيلة وخفيفة لتقييم مستوى "الآدمية" لأفضل طرازات مكتسبة السمة‎
الآدمية ‎LVHO/VLA-3x 5 VHO/VLA-2x‏ لقد تم من قبل توضيح إكساب السمة الآدمية "- 7 كامل" لمجال سيطرة ‎VH‏ 2240611 7110. بالنسبة لمستوى ‎deol‏ طرازات مجال سيطرة ‎VL‏ مكتسبة السمة الآدمية «714-2 و224611 714-3#؛ فإنها تحتوي فقط على متخلفات فأرية ‎M39‏ و/أو 1140. يقع هذان المتخلفان الأساسيان الممكنان عند نهاية ‎«CDRI‏ ويكون © 1039 هو مثبت ‎CDR‏ الطرفي-ل8. بتحديد مشكلة طول ‎CDR‏ التي قابلناها أثناء إكساب السمة الآدمية لمجال سيطرة ‎VL‏ 224011؛ وباعتبار هذه الأماكن كجزء من تحديد ‎Kabat‏ من أجل ‎VL 001‏ فإن مستوى الآدمية لمضاد الجسم 2240611 المكتسب السمة الآدمية كليا لابد أن يظهر تولد مناعي قليل بدرجة قوية بسبب المتخلفات الفأرية المحمية الدنيا. ‎Ye‏ ‎YYo)‏
3 y x ‏قائمة الترتيب‎
Pierre Fabre Médicament >١٠١<
GOETSCH, Liliane ‎٠‏ <.ء١>_مضادات‏ أجسام جديدة تثبط ‎c-Met dimerization‏ واستخداماتها ‎1025728 <\Y.> ‎EP 07301231.2 >١٠٠.<
YeooV=2¥V=YY >١ه١<‎ ١ ‎US 60/929,789 <\o.> ‎. Y ٠ ‏رلا‎ أإل-١‎ <\o\>
US 61/020,639 <\Yo.> ٠ ‎Yor A=aY YY yoy» ‎YY <Y1.>
Patentln version 3.3 <YVY.> ¥. ‎١ >7٠١< ‎A >"ا١<‎ ‎PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <Y\I¥> Ye ‎١ ‏<..ء؛>‎ ‎Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr Thr
YYo)
٠١١ ١ °
Y <YV.>
A <YVYV>
PRT >< ‏عضلي‎ mus >” ١7< ٠
Y <¢ “>
Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala ١ ° 7 >؟٠<‎ : YY ‏<الا>‎ ٠
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <Y)V> "+ ‏<..ء؛>‎ ‎Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr ١ o ya \o ‏؛‎ <VV.>
A <YVYV>
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <Y)V> ‏ف‎ ‏<ء.ء> ء؛‎
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Thr Thr
ل ‎١ °‏ ‎<Y\.>‏ 0 ‎A <YYY>‏ ‎PRT <Y\Y>‏ ‎mus > ١ << oo‏ عضلى ‎Oo <¢ a>‏ ‎lle Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr‏ ‎١ 2‏ <٠؟>‏ 1 ‎٠‏ <ااا> ‎١١‏ . <١؟> ‎PRT‏ ‏<١١؟> ‎mus‏ عضلي <..ء؛> 1 ‎Ala Arg Glu Glu Ile Thr Lys Asp Phe Asp Phe‏ ‎١ o ٠١‏ ‎\o‏ ‎Y <Y).>‏ <اا١ا> ‎A‏ ‎PRT <Y\Vv>‏ ‎mus <YYY>‏ عضلى ‎Y.‏ ‏><..عم> ‎V‏ ‎Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn‏ ‎YYo)‏
YoF ١ ‏هت‎ ‏م‎ <YY.> ‏م‎ <YYVY>
PRT <Y\Yy> ‏عضلى‎ mus <YYY> ©
A <$ “a>
Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr ١ o 19 <Y\.>
YE ‏<اا؟>‎ ٠
PRT >'١< ‏عضلى‎ mus >؟١١<‎ 9 <u>
Ala Arg Gly Arg Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr ١ ° ٠١
Vo
Yeo <YY).> ٠١ >؟١اا<‎
PRT <¥\Y> ‏عضلي‎ mus > ١ < ‏فل‎ ‎Yo ‏<..ءم»>‎ ‎Glu Ser Val Asp Ser Tyr Ala Asn Ser Phe
٠١+ ١ 2 ٠
YY >اا٠<‎ ‏؟‎ >؟١٠١ا<‎
PRT >< ‏عضلي‎ mus >” ١< °
VY <¢ue>
Arg Ala Ser \ ١١ <YV.> 9 >ا١اا<‎ 0٠
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus > ١<
IY ‏<.ء؛>‎ ‎Gln GIn Ser Lys Glu Asp Pro Leu Thr ١ 2
Yo ١١ ‏<اا>‎ ‎Yo >ا١ا١ا<‎
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >< 0 ٠ ١" >.
Yeo
Glu Ser lle Asp Thr Tyr Gly Asn Ser Phe ١ o ٠١
YE <YV.> 1 ‏<ا؟>‎ ‎PRT <Y\Y> ‏عضلى‎ mus <Y\Y> oo
VE <g>
Gln GIn Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr \ ‏هت‎ ‎. \ o <Y \ «> ١٠ ‏<اا'ا>‎ 0٠
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus ><
VO ‏<.ء.ء)>‎ ‎Glu Asn Ile Tyr Ser Asn ١ 2 yo ٠١ >؟”٠<‎ ‏؟‎ >؟١اا<‎
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >؟١١<‎ ٠. ٠١ <g>
٠١
Ala Ala Thr ١ ‏لا‎ >؟١٠١<‎ 4 >؟ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎ ‏عضلى‎ mus >” ١< ٠ ٠> <g>
Gln His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr Thr ١ ‏هت‎ ‎: YA > ٠< ‏ملا‎ ><
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus > ١ <
YA >..<
Glu Val Gin Leu ‏عا‎ GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala ١ o AS yo
Ser Val Lys [Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr ١ Yo 9١
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Yo $e £0
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 0. ‏ده‎ 46
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ssr Ser Thr Ala Tyr
اا ‎o 7 x 7 o A ٠‏ 1 ‎Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys‏ ‎Ao 9. q0‏ ‎Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr‏ ‎٠ ٠١٠ ٠٠‏ ‎Ala Leu Thr Val Ser Ser‏ ا <٠؟> ‎٠١‏ ‏<اا ؟> مالا ‎PRT <Y\Y>‏ ‎mus > ١< ٠‏ عضلى ‎٠١ <g>‏ ‎Glu Val Gln Leu Gin Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala‏ ‎١ 0 \ ٠ \ Oo‏ ‎Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr‏ ‎Y.
Yo ١‏ ‎Thr Leu Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Thr Leu Glu Trp lle‏ ‎Yo $ $0‏ ‎Gly Leu 116 Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe‏ ‎On 00 Ta‏ ‎Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ssr Ser Thr Ala Tyr‏ ‎Ye Yo Ae‏ 10 ‎Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys‏ ‎Ao 9. qo‏ ‎Ala Arg Glu Glu Tle Thr Lys Asp Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr‏
٠١ ١ ٠*٠ ١ + 0 ١ ١ ٠
Thr Leu Thr Val Ser Ser ١١٠٠
Yo >اا٠ا<‎ ١7١ >؟١ا١ا<‎
PRT <Y\Y> ‏عضلى‎ mus >< oo
Y ٠ < $ “ae
Glu Val Leu Leu Gin Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala \ 2 ١ ٠ 3 Oo
Ser Val Lys lle Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
Yo Yo Ye
Asn Met Asn Trp Val Lys Gin Ser His Gly Met Ser Leu Glu Trp lle
Yo ‏م م‎
Gly Asp lle Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ile Phe Asn Gln Lys Phe
Se 00 Te
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ssr Ser Thr Ala Tyr >“ VY. Yo Ae
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
AO 9. 40
Ala Arg Gly Arg Tyr Val Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly ١ ve ١ «0 ١ ١ ٠
GIn Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser ١١٠ VY.
YYo)
٠ 7١ >؟٠٠<‎ ١١١ >ا١ا١<‎
PRT >< ‏عضلي‎ mus >7١ < ©
YY <g>
Asp lle Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly ١ 2 Yo yo
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ‏و‎ Yo Ye
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln ‏ماه‎ Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Yo ¢ ٠ $ o
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lle Pro Ala
On 00 To
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
Va Vo A»
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gln Ser Lys
Ao 9. q0
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys ١ “a ١ «0 \ 3 ٠
YY >؟٠٠<‎ ١1٠١١ >؟”١ا١ا<‎
PRT ‏<ااا>‎ ٠ ‏عضلي‎ mus >؟١١<‎
YY <¢va>
YYo)
م ‎Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly‏ ماه ‎Gly lle Val Leu Thr‏ هي ‎١ Oo \ ٠ ١‏ ‎Gln Arg Ala Thr lle Ser Cys Arg Val Ser Glu Ser lle Asp Thr Tyr‏ ‎Ye.
Yo Va‏ ‎Gly Asn Ser Phe lle His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro‏ ‎Yo $e $0‏ ‎Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lle Pro Ala‏ ‎Te‏ ده ‎oO.‏ ‎Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn‏ ‎Ae‏ دلا ول > ‎Pro Val Glu Ala Asp Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn‏ زه 5 ‎A 2 9 ٠‏ ‎Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys‏ ‎١ ٠. ١ +0 \ ١ ٠‏ ‎YY <vy.>‏ ‎Yo >” ١١<‏ ‎PRT <Y\Y>‏ ‎mus <YVY> oo‏ عضلي <..ع)> ‎YY‏ ‎Asp lle Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly‏ ‎١ 5 ٠١ Vo‏ ‎Glu Thr Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn‏ ‎Y x Y Oo y ٠‏ ‎Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val‏ عله ‎Gln Lys‏ ماه ‎Leu Ala Trp Tyr‏ ‎٠ ¢ o‏ $ هه ‎١‏ ‎YYod‏
١١
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
Ou ‏ده‎ Ta
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu 610 Ser 1 o 7 ٠ 7 2 A ٠
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr
Ao 9. 90
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
You ١٠١. ‏ءا‎ >؟٠<‎
Ye ‏<اا">‎ ‎DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >؟١<‎ ٠
Y¢ ‏<ي.)>‎ ‎ggatacatat tcactgcata cacc ve
Yo <Y\.>
Ye ‏<ااا>‎ 0٠
DNA >” ‏ا‎ < ‏عضلي‎ mus >77 ١ <
Y Oo Eva attaaaccaa acaatggtct tect ve ١١
Yi <vy.>
YY >؟١ا<‎
١١
DNA <Y\Y> ‎mus <Y)V>‏ عضلي ‎١ <¢va> ‎gcaagatctg agattacgac ggaatttgac tac vy ° ‎77 <Yy).> ‎Y¢ >؟١ا١<‎ ‎DNA >< ‏<١١؟> ‎mus‏ عضلي م ‎YV >. ‏<م‎ ‎ggttattcat tcactgacta cacc ve ‎YA <YY.> ‎Ye <Yyy>
DNA > ‏<ا‎ vo ‎mus <Y)Y>‏ عضلي ‎YA ‏<..ع>‎ ‎attaatcctt acaatggtgg tact ve 7 <Vy.> 0 ٠ ‎YY ‏<اا>‎ ‎DNA <Y\Y> ‎mus <Y)Y>‏ عضلي
ا ‎١ <g>‏ ‎gcaagagagg aaattacgaa ggactttgat ttc vy‏ <٠ا> ‎Ye‏ ‏<اا؟> ‎Y¢‏ ‎DNA <Y\)Y> oo‏ <١١؟> ‎mus‏ عضلى ‎Yeo <u>‏ ‎ggatacacat tcactgacta caac ve‏ ‎7١ <YyY.> ٠‏ <١١ا>‏ ع ‎DNA <Y\Y>‏ ‎mus <Y)V>‏ عضلى ‎Yo‏ <> أ ‎attaatccta acaatggtgg tact vi‏ <٠ا> ‎YY‏ ‏<ا١ا”> ‎EY‏ ‎DNA <Y\Y>‏ ‎mus <Y\YY> ٠‏ عضلي ‎YY <¢v>‏ ‎gcaagaggga ggtatgttge ttactactat gctatggact ac £Y‏ ‎YYo)‏
٠6 77 >؟٠٠<‎
Ye ‏<اا'>‎ ‎| DNA <Y)Y> ‏عضلي‎ mus >” ١ < 2
YY <¢ve> gaaagtgttg atagttatgc caatagtttt r.
Ye <YVY.> 1 >؟١١<‎
DNA >< ©. ‏عضلي‎ mus >" ١<
YE ‏<..؛>‎ ‎51606816 1
Yo <Y ١ «> ١١
YY >ا'١اا<‎
DNA <Y\Y> ‏عضلى‎ mus >" ١<
Yo <g> Yo cagcaaagta aggaggatcc tctcacg 9
Yi >؟٠٠<‎ ٠١ <YYYS
DNA <Y\Y>
YYo)
١ ‏عضلي‎ mus >؟١<‎ 1 < ¢ a> gaaagtattg atacttatgg caatagtttt Ye
YY <¥Y.> oo
YY <¥y\>
DNA <Y\Y> ‏عضلى‎ mus >١١ ١<
YY ‏ا د‎ cagcaaagta atgaggatcc attcacg 9
YA > ٠١<
YA <YVY>
DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <YIY> ae
YA ‏<..؛>‎ ‎gagaatattt acagtaat YA 7١ >؟٠<‎ >ا”اا< ‏ب‎ ‎DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <Y)Y> 7١ ‏<.ء)؛>‎
١ 016668 1 tv >١ا٠<‎
YY <Yyy>
DNA ‏<؟>‎ ‏عضلى‎ mus > ١١< ٠ ¢ a < ¢ a> caacattttt ggggtcctee gtacacg vv ؛١‎ >7٠<
Yot ‏<اا'ا>‎ 0٠
DNA >" < ‏عضلى‎ mus >" ١١< $Y <g> gaggtccage tgcaacagic tggacctgag ctggtgaage ctggggcttc agtgaagata AR tcctgecaaga cttctggata catattcact geatacacca tgcactgggtgaggcagage AR cttggagaga gccttgactg gattggaggt attaaaccaa acaatggtct tgctaactac YA. aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagectac Yi. atggacctcc gcagectgac atctgaggat tctgeagtct attactgtge aagatctgag Too attacgacgg aatttgacta ctggggccaa ggcaccgete tcacagtcte ctea vot \o
EY <Y\V.>
Yo >؟١اا<‎
DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >"7١١< ‏عض‎
و ‎<tt>‏ ؟؛ ‎gaggtccage tgcaacagte tggacctgaa ctggtgaage ctggagcettc aatgaagatt 1‏ ‎ ttcattcact gactacacce tgaactgggt gaagcagage ٠١٠‏ 10188618 16012063866 ‎catggaaaga cccttgagtg gattggactt attaatcctt acaatggtgg tactacctac YA‏ ‎aaccagaagt tcaagggcaa ggccacatta actgtagaca agtcatccag cacagectac vi.‏ ‎atggagctee tcagtctgac atctgaggac tctgeagtct attactgtgc aagagaggaa ve.‏ ‎attacgaagg actttgattt ctgggeccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca voi‏ ‎<YhY.>‏ ؟؛ ‎oe‏ <اااة> ‎iy‏ ‎DNA <Y\Y>‏ ‎mus <Y)Y>‏ عضلي ‎(YY >..<‏ ‎gaggtcetge tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaage ctggggcttc agtgaagata 1.‏ ‎ccctgeaagg cttetggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagcagage ٠٠‏ ‎catggaatga gccttgagtg gattggagat attaatccta acaatggtgg 201816 YA.‏ ‎aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagectac Yi‏ ‎atggagetce geagectgac atctgaggac actgeagtct attactgtgcaagagggagg Yeo‏ ‎tatgttggtt actactatge tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctee Ti.‏ ‎tea yay‏ ‎Ya‏ ‏<٠؟>‏ ¢¢ ‎YYY <yvyy>‏ ‎DNA <Y\Y>‏ ‎mus <Y)Y>‏ عضلي
YYA
(8 <g> gacattgtge tgacccaatc tccagcettct ttggctgtgt ctctagggea gagggecacc 1. atatcctgca gagcecagtga aagtgttgat agttatgcca atagttttat geactggtac ٠١٠ cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa 01368811 YA. gggatccctg ccaggttcag tggcagtgee tctaggacag acttcaccct caccattaat Vee cctgtggage ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcage aaagtaagga ggatcctcte Ver acgttcgget cggggacaaa attggaaatg aaa YYyY to <YY.> ١١ <Yyw> oo
DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >؟7١<‎ $0 ‏<رء.ءء>‎ ‎ggcattgtgt tgacccaatc tccagettcet ttggetgtgt ctctaggaca 582662600026 ‏تت‎ ‎2121601868 gagtcagtga aagtattgat acttatggea atagttttat acactggtac ٠٠ cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatet VA. gggatccctg ccaggttcag tggeagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat ve. cetgtggagg ctgatgattc tgcaacctat tactgtcage aaagtaatga ggatccattc Yoo acgttcggct cggggacaaa gttggaaatg aaa yyy ٠ £1 >”٠<
YY ‏<ااا>‎ ‎DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >؟7١<‎ \o
ال <..ء)> £7 ‎gacatccaga tgactcagtc tccagectce ctatctgtat ctgtgggaga aactgtcacc 1‏ ‎atcacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag ٠١١٠‏ ‎ggaaaatctc 142201606 ggtctatget geaacaaact tagtagatgg tgtgecatca YA.‏ ‎aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattccctca agatcaacag cctgeagtet Ye‏ ‎gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttggggtc ctccgtacac gttcggaggg v-‏ ‎gggaccaage tggagataaa g 77‏ ‎<Y\V\.>‏ 97؛ <ااا> ‎Y¢‏ ‏م ‎DNA <Y\)Y>‏ <١؟”>_الترتيب‏ الصناعي ‎<YY.>‏ ‎sale <YYYT>‏ تمهيدية لأجل بروتين ‎ribosomal‏ كبير للرعاية الداخلية ‎PO‏ (RPLO) ٠ ‏ا‎ <g> gaaactctge 10121 06 ve
EA <YY.>
YY ‏<ااا>‎ ١٠
DNA <Y\Y> ‏الترتيب الصناعي‎ >< <YY.> يعض
YY.
PO ‏كبير للرعاية الداخلية‎ ribosomal ‏تمهيدية لأجل بروتين‎ sale <YYY> (RPLO)
EAN <g> aggactcgtt tgtacccgtt ga vy 2 £9 <Y\V.>
Y1 <)>
DNA <Y\Y> ‏الصناعي‎ بيترتلا_>؟١<‎
A
<YY.> . PO ‏كبير للرعاية الداخلية‎ ribosomal ‏تمهيدية لأجل بروتين‎ sale <YYY> (RPLO) £9 >... Yo tgcagattgg ctacccaact gttgca va
Ow <Y) >
YA <YYY>
DNA >" ١ < ‏الصناعي‎ بيترتلا_>؟١3<‎ ov. <YY.>
HGF ‏أولية لأجل‎ sale <YYY>
On >. Yo
YY aacaat YA geet ctggttce oy <Y\.> ٠١ <Y\V\\>
DNA <Y\Y> ‎>١7 ١< 5‏ الترتيب الصناعي ‎<YY.>‏ ‎sale <YYY>‏ أولية لأجل ‎HGF‏ ‎0) <u> 0٠ cttgtagctg cgtectttac Ye oY <Y\.> : YV ‏<ااا>‎ ‎DNA <Y\Y> ‎١7< | ١٠‏ ؟> الترتيب الصناعي ‎<YY.>‏ ‎<YYY>‏ المجس ‎HGF Ja¥‏ ‎oY >< ‏9ص‎ ‎ccttcaatag catgtcaagt ggagtga vv oY >١٠١<
YA ><
DNA <Y\Y>
‏الترتيب الصناعي‎ >” ١< <YY.> c-Met ‏أولية لأجل‎ sale <YYY> o oy >”. cattaaagga gacctcacca tagctaat YA o ¢ <Y \ >
YY <yyv>
DNA > ‏ا‎ ٠ ‏الترتيب الصناعي‎ >< <YY.> c-Met ‏أولية لأجل‎ sale <YYY> \o o ¢ <$ea> cctgatcgag aaaccacaac ct TY ‏هده‎ <Y\.>
Yo <Y\)\>
DNA > ‏ا‎ - ٠ ‏الترتيب الصناعي‎ > ١< <YY.> c-Met ‏لأجل‎ uadll <YYY>
Yo ‏تعض‎
١7 00 <E a>
Yo catgaagcga ccctctgatg tccca ‏ده‎ <Y\.> ‏م‎ <YYY>
PRT <Y)Y> oo ‏عضلى‎ mus >١7 ١< ‏<..)؛> 1ه‎
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp ١ 5 ٍ ov ‏الا‎ v.
A <YYY>
PRT <Y\Y> ‏عضلى‎ mus >” ١ < ov <4 “a> Yo lle Asn Pro Thr Thr Gly Ser Thr \ ‏هه‎ ‎oA <Y ١ > ١١ <YYYV\>
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus > ١١ < ص9٠‎
OA <¢ a>
YYo)
Ala lle Gly Gly Tyr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr ١ 2 ٠١ 09 >١7” «> ‏لا‎ <Yy\>
PRT <Y\YV> : ‏عضلي‎ mus >7١< oo 249 >.
Ser Ser Val Ser Ser Thr Tyr ١ °
Te <YY > ‏<ااا> ؟‎ ٠
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus <Y)VY>
Tr <gve>
Thr Thr Ser \
Yo
TY <YY.> 9 <YVYV>
PRT <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >7١١<
Y.
TY <¢ve>
‘Ye
His Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Phe Thr ١ 0 1 >؟٠٠<‎ ‏<اا ”> ملا‎
PRT <Y\Y> ‏عضلى‎ mus > ١١< oo 17 <g>
Gln Val GIn Leu ‏ماه‎ Gin Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala ١ 5 ye. Yo
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
Y ٠ Y o 1 ٠
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
Yo $a $0
Gly Tyr lle Asn Pro Thr Thr Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Gin Lys Leu [oJ ‏ده‎ Te
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
Ve Yo Aw
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
A Oo q 0 9 Oo
Ala lle Gly Gly Tyr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr \ aa ١ ‏زا‎ ١ ١ ٠
Leu Val Thr Val Ser Ala ١٠ 17 >٠<
١
YA > ‏<ا‎ ‎PRT <Y\Y> ‏عضلى‎ mus <Y\VY>
TY ‏<ء.ء)>‎ 2
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly \ Oo 3 ٠ ١ o
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Thr
Y. Yo Ve
Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
Yo $a ‏مع‎ ‎lle Tyr Thr Thr Ser Ile Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
On ‏ده‎ Te
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
Ve Vo A
Thr Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gin Trp Ser Ser Tyr Pro
Ao 9. 40
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Asp lle Lys ١ “ou ١ «0 1.2 >7٠٠<
Y¢ ‏<اا؟>‎ ‎DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus > ١١< ٠ 4 $ < $ Ce > ggctacactt ttacttccta ctgg ve
YYo)
ا >١١٠١<
Ye ‏<اا؟>‎
DNA <Y\)Y> ‏عضلى‎ mus >< ‏م‎ حرء,> 10 attaacccta ccactggttc tact ve 1171 >؟٠<‎
YY ‏<اا”ا>‎ 0٠
DNA ‏؟>‎ ١ < ١ ‏عضلي‎ mus >7١١< 17 <¢va> gcaataggag gatatgggtc ctggtttget tac YY
Yo
YY <YY.>
YY >؟ا١ا<‎
DNA <Y\Y> ‎mus > ١ <‏ عضلي ‎7٠‏ ‎WY <g> ‎tcaagtgtaa gttccaccta c 7 ‎IA <YY.> ‎1 >؟١١ا<‎ ‎YYo)
YYA
DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus >؟7١١<‎
TA ‏<ي.>‎ ‎accacatcc 1 ° 19 <YY.>
YY <y)\)>
DNA <Y\Y> ‏عضلي‎ mus > ١<
Ya 1 ‏<..؛>‎ ‎catcagtgga gtagttaccc attcacg 9 ‏.لا‎ >7١١<
Yo¢ >”١اا<‎
DNA > ‏<ا‎ eo ‏ودود عضلي‎ >؟١١<‎
Veo ‏><يم.م)>‎ ‎caggtccage ttcagcagtc tggggctgaa ctggceaaaac ctggggecte agtgaagatg 1, tcctgecaagg cttctggeta cacttttact tcctactgga tgaactgggt gaaacagagg ٠١٠ cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaacccta ccactggttc tactgactac YA aatcagaagt taaaggacaa ggccacattg actgcagaca aatcctccaa cacagcectac vi atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgeagtct attactgtge aataggagga Ver tatgggtcct ggtttgctta ctggggecaa gggactetgg tcactgtete tgeca vot
YYo)
YY <Y\.> ١: ‏<ااا>‎ ‎DNA <Y\)Y> ‏عضلي‎ mus >؟١١<‎ °
YY <¢av> caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgeat ctectgggga gaaggtcace Lh ttgacctgca gtgecagetc aagtgtaagt tccacctact tgtactggta ccageagaag ٠١٠ ccaggatcct cccccaaact ctggatttat accacatcca 012250016 tggagtecct YA. gctegettca gtggcagtgg gtetgggace tettactete tcacaatcag cagcatggag vi. actgaagatg ctgectctta tttctgecat cagtggagta gttacccatt cacgttcgge Veo tcggggacaa agttggacat aaaa Yve

Claims (1)

  1. YY ‏عناصر الحماية‎ ‎-١ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ يشتمل على: " سلسلة ثقيلة تشتمل على منطقة تحديد تكميلية ‎(CDR)‏ لتجعم ‎CDR-H3 5 CDR-H2‏ " تشتمل على تعريفات الترتيب أرقام ‎٠‏ 7 و على التوالي؛ و
    ؛ . سلسلة خفيفة تشتمل على 0018-1.1» ‎CDR-L2‏ و 0018-13 تشتمل تعريفات الترتيب أرقام ‎١١ ٠١5‏ و7١‏ على التوالي. ‎١‏ 7- جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎Wik (isolated anti-cMet antibody)‏ لعنصر الحماية )¢ يشتمل على منطقة متغيرة لسلسة ثقيلة تشمل تعريف الترتيب رقم: ‎VA‏ ومنطقة متغيرة لسلسة " خفيفة تشمل تعريف الترتيب رقم: ‎TY‏ ‎١‏ ؟- جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎Wh (isolated anti-cMet antibody)‏ لعنصر الحماية ‎١‏ ‎Y‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ عبارة عن جسم مضاد أحادي النسخ
    ‎.(monoclonal antibody) ¥‏ ‎١‏ ¢— جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية ‎oF‏ ‏" حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ عبارة عن جسم مضاد هجين ‎(chimeric antibody)‏ ‎Jad, 7‏ على مناطق ‎ant‏ لسلسلة ‎add‏ وسلسلة خفيفة مشتقة من جسم مضاد ‎(antibody)‏ من ؛ أنواع مخالفة ‎ll‏ ‎١‏ ©*- جسم مضاد هجين ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet chimeric antibody)‏ طبقا " لعنصر الحماية ‎of‏ حيث تكون الأنواع المخالفة ‎lal‏ هي الإنسان. ‎-١ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية 0 " حيث تكون المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة المشتقة من جسم مضاد ‎(antibody)‏ لأنواع آدمية ‎Y‏ تكون منطقة ‎kappa‏ وتكون المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة المشتقة من جسم مضاد ؛ ‎(antibody)‏ لأنواع آدمية مختارة من المناطق 1-قصصسوي ‎gamma-2‏ أر ‎.gamma-4‏ ‎-١7 ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية 1 " حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ المذكور مقترنا كيميائيا مع عامل سام للخلايا. ‎=A)‏ الجسم المضاد ‎(antibody)‏ من عنصر الحماية ‎١‏ حيث ينتقى العامل السام للخلايا " المذكور من المجموعة المتكونة من عوامل ‎alkylating‏ مضادات للأيض؛ مضادات حيوية
    YY 7 مضادة للورم؛ مثبطات للانقسام الفتيلي؛ مثبطات وظيفة ‎chromatin‏ عوامل مضادة لتولد ؛ الأوعية؛ عوامل ضد ‎coestrogen‏ عوامل ضد ‎candrogen‏ أو مواد ضابطة المناعة. ‎١‏ 4- الجسم المضاد ‎(antibody)‏ من عنصر الحماية 7؛ حيث يكون العامل السام للخلايا ‎(cytotoxic agent) Y‏ المذكور عبارة عن مثبط للانقسام الفتيلي. ‎-٠١ ١‏ تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ تشمل مادة مسوغة مقبولة دوائيا وجسم " مضاد ‎(antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية ‎.١‏ ‎-١١ ١‏ تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ تشمل طبقا لعنصر الحماية ‎٠١‏ حيث " يكون للجسم المضاد ‎(antibody)‏ سمات مميزة من جسم مضاد ‎(antibody)‏ ناتج بواسطة الورم ‎Y‏ الهجين ‎(hybridoma)‏ المودع في ‎Paris «Institut Pasteur «<CNCM‏ في ‎VE‏ مارس 7١٠؛‏ ؛ تحت الرقم 13731. ‎١‏ ؟١-‏ تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ تشمل طبقا لعنصر الحماية ‎Gua VY)‏ " أن السمات المميزة تشمل منطقة متغيرة لسلسلة ثقيلة تشتمل على تعريف الترتيب رقم: ‎VA‏ ‏" ومنطقة متغيرة لسلسة خفيفة تشمل تعريف الترتيب رقم: ‎YY‏ ‎-١١ ١‏ تركيبة دوائية ‎(pharmaceutical composition)‏ تشمل طبقا لعنصر الحماية ‎OY‏ حيث " أن السمات المميزة تشمل إضافيا وتكون قادرة على واحد أو أكثر من التالي: ‎v‏ تثبيط كلا من تنشيط يعتمد على مركب ترابطي وتنشيط لا يعتمد على مركب ترابطي من ‎tc-Met ¢‏ ° تثبيط ‎75٠‏ على الأقل من انقسام نمو خلايا ورم لنوع ورم واحد على الأقل؛ و
    ‎.c-Met dimerization Jay 1‏ ‎١‏ 0؟١-‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية "١ه‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط تنشيط يعتمد على مركب ترابطي " وتنشيط لا يعتمد على مركب ترابطي من ‎Met‏ ‎-١٠ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنتصر الحماية ‎(VEX‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط ‎.c-Met dimerization‏ ‎-١١ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية ‎١٠#‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط ‎75٠‏ على الأقل من انقسام ‎WAY‏ ورم لنوع ورم واحد على الأقل.
    ‎-١١ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية " ١ء‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط ‎.c-Met dimerization‏ الم ‎-١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لأي واحد من " عناصر الحماية 11-84 و17 حيث لا يرتبط الجسم المضاد ‎(antibody)‏ مع مجال سيطرة ‎semaphoring (SEMA) ¥‏ من ‎.cMet‏ ‎-١4١0 ١‏ جسم مضاد ‎(antibody)‏ يفرز بواسطة ورم هجين ‎(hybridoma)‏ المودع في ‎«CNCM‏ ‎(Paris «Institut Pasteur ¥‏ في ‎٠‏ مارس ‎٠‏ تحت الرقم 13731. ‎-7١0 ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية ؟؛ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط كلا من تنشيط يعتمد على مركب 7 ترابطي وتنشيط لا يعتمد على مركب ترابطي من ‎c-Met‏ ‎١‏ ١؟-‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لعنصر الحماية ‎٠١ Y‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على ‎.cMet dimerization Jax‏ ‎—=YY ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ من عنصر الحماية ‎Y‏ ١؟؛‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط ‎75٠‏ على الأقل من انقسام ‎ "‏ خلايا ورم لنوع ورم واحد على الأقل. ‎١‏ 77- جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ من عنصر الحماية ؟؛ ¥ حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على تثبيط ‎.c-Met dimerization‏ ‎YE)‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ طبقا لأي واحد من " عناصر الحماية ‎(YF, 17-7١‏ حيث لا يرتبط الجسم المضاد ‎(antibody)‏ مع مجال سيطرة ‎semaphoring (SEMA) ¥‏ من ‎.c-Met‏ ‎١‏ ©7- جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ من عنصر الحماية ‎1١‏ ‏" حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على واحد أو أكثر مما يلي: ِ تثبيط كلا من تنشيط ‎c-Met‏ الذي يعتمد على مركب ترابطي والذي لا يعتمد على مركب ¢ ترابطي؛ ° تثبيط ‎75٠‏ على الأقل من انقسام خلايا ورم لنوع ورم واحد على الأقل؛ و 1 تقبيط ‎.c-Met dimerization‏
    ‎-7١ ١‏ جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎(isolated anti-cMet antibody)‏ من عنصر الحماية ؟ء " حيث يكون الجسم المضاد ‎(antibody)‏ قادرا على واحد أو أكثر مما يلي: ‎T‏ تثيط كلا من تنشيط ‎Met‏ الذي يعتمد على مركب ترابطي والذي لا يعتمد على مركب ¢ ترابطي؛ ° تثبيط ‎705٠‏ على الأقل من انقسام خلايا ورم لنوع ورم واحد على الأقل؛ و 1 تثبيط ‎.c-Met dimerization‏ ‎-7١7 ١‏ جزء ارتباط ‎(cMet-binding fragment) cMet‏ من جسم مضاد ضد ‎cMet‏ معزول ‎lah (isolated anti-cMet antibody) ¥‏ لأي واحد من عناصر الحماية د ىت أحكت ‎ATE‏ ‏الأصانكت اواك ‎NT Y0‏ ‎—YA ١‏ جزء ارتباط ‎(cMet-binding fragment) cMet‏ من عنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يكون " الجزء ثنائي التكافؤ. ‎١‏ 5؟- جزء ارتباط ‎(cMet-binding fragment) cMet‏ من عنصر الحماية ‎YA‏ حيث يكون ¥ الجزء هو ‎١ F(ab‏ ‎0١‏ 60؟- جزء ارتباط ‎(cMet-binding fragment) cMet‏ من عنصر الحماية ‎YY‏ حيث يكون " الجزء هو ‎scFv‏
SA08290423A 2007-07-12 2008-07-12 مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية c-Met واستخداماتها SA08290423B1 (ar)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US92978907P 2007-07-12 2007-07-12
EP07301231A EP2014681A1 (en) 2007-07-12 2007-07-12 Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
US2063908P 2008-01-11 2008-01-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA08290423B1 true SA08290423B1 (ar) 2013-12-23

Family

ID=38871713

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA08290423A SA08290423B1 (ar) 2007-07-12 2008-07-12 مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية c-Met واستخداماتها

Country Status (36)

Country Link
US (6) US8329173B2 (ar)
EP (6) EP2014681A1 (ar)
JP (4) JP5562844B2 (ar)
KR (4) KR101701686B1 (ar)
CN (4) CN103509113B (ar)
AR (4) AR067517A1 (ar)
AU (1) AU2008274171B2 (ar)
BR (1) BRPI0815564B8 (ar)
CA (4) CA2981821C (ar)
CL (1) CL2008002015A1 (ar)
CO (1) CO6170364A2 (ar)
CY (1) CY1116608T1 (ar)
DK (1) DK2188312T3 (ar)
ES (5) ES2686335T3 (ar)
HK (3) HK1149024A1 (ar)
HR (1) HRP20150887T1 (ar)
HU (1) HUE026026T2 (ar)
IL (5) IL203114A (ar)
MA (1) MA31977B1 (ar)
ME (1) ME02341B (ar)
MX (3) MX345391B (ar)
MY (1) MY158756A (ar)
NZ (4) NZ583041A (ar)
PA (1) PA8789201A1 (ar)
PH (3) PH12018502040A1 (ar)
PL (1) PL2188312T3 (ar)
PT (1) PT2188312E (ar)
RS (1) RS54197B1 (ar)
RU (1) RU2552161C2 (ar)
SA (1) SA08290423B1 (ar)
SG (1) SG183015A1 (ar)
SI (1) SI2188312T1 (ar)
TN (1) TN2010000016A1 (ar)
TW (4) TWI602829B (ar)
WO (1) WO2009007427A2 (ar)
ZA (1) ZA201000966B (ar)

Families Citing this family (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2143441A1 (en) * 2008-07-08 2010-01-13 Pierre Fabre Medicament Combination of a c-Met antagonist and an aminoheteroaryl compound for the treatment of cancer
PA8849001A1 (es) 2008-11-21 2010-06-28 Lilly Co Eli Anticuerpos de c-met
US20140112911A9 (en) * 2008-12-02 2014-04-24 Liliane Goetsch Novel anti-cmet antibody
AR074439A1 (es) * 2008-12-02 2011-01-19 Pf Medicament Anticuerpo anti-cmet (receptor c-met)
US9469691B2 (en) * 2008-12-02 2016-10-18 Pierre Fabre Medicament Anti-cMET antibody
US8545839B2 (en) * 2008-12-02 2013-10-01 Pierre Fabre Medicament Anti-c-Met antibody
MX2011010169A (es) 2009-04-07 2011-10-11 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-erbb-1/anti-c-met.
BRPI1012589A2 (pt) 2009-04-07 2016-03-22 Roche Glycart Ag anticorpos bi-específicos anti-erbb-3/anti-c-met
EP2287197A1 (en) 2009-08-21 2011-02-23 Pierre Fabre Medicament Anti-cMET antibody and its use for the detection and the diagnosis of cancer
KR101671378B1 (ko) 2009-10-30 2016-11-01 삼성전자 주식회사 ｃ-Ｍｅｔ에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
KR101748707B1 (ko) 2009-11-27 2017-06-20 삼성전자주식회사 ｃ-Ｍｅｔ에 특이적으로 결합하는 항체 및 그를 이용한 암 진단용 키트
MX340295B (es) * 2010-03-10 2016-07-05 Genmab As Anticuerpos monoclonales anti-c-met.
US9169329B2 (en) 2010-06-01 2015-10-27 Ludwig Institute For Cancer Research Antibodies directed to the receptor tyrosine kinase c-Met
EP2402370A1 (en) 2010-06-29 2012-01-04 Pierre Fabre Médicament Novel antibody for the diagnosis and/or prognosis of cancer
WO2012003338A1 (en) 2010-07-01 2012-01-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET
DK2612151T3 (en) 2010-08-31 2017-10-02 Genentech Inc BIOMARKETS AND METHODS OF TREATMENT
CN103415619B (zh) 2010-09-03 2015-10-14 中央研究院 抗-c-met抗体及其使用方法
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
WO2012042026A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Ablynx Nv Biological materials related to c-met
AU2011325097B2 (en) 2010-11-03 2015-05-21 Argenx Bvba Anti c-Met antibodies
MX2013005847A (es) 2010-11-24 2013-12-12 Glaxo Group Ltd Proteinas de union a antigeno multiespecificas que eligen como blanco a hgf.
KR101444837B1 (ko) 2011-06-03 2014-09-30 한국생명공학연구원 ＨＧＦ 활성을 가지는 ｃ-Ｍｅｔ에 대한 인간항체 및 이의 용도
IL250396B (en) 2011-06-23 2022-06-01 Ablynx Nv Techniques for predicting, detecting, and reducing A-specific protein interference in assays involving single immunoglobulin variable domains
CN103619878B (zh) * 2011-06-23 2016-10-26 埃博灵克斯股份有限公司 结合血清白蛋白的蛋白
JP2014522843A (ja) * 2011-06-30 2014-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃ−ｍｅｔ抗体製剤
EP2748197A2 (en) 2011-08-26 2014-07-02 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Tandem fc bispecific antibodies
BR112014006419A2 (pt) 2011-09-19 2018-08-07 Genentech Inc métodos para tratar um paciente com câncer, kit e artigo
JP2014530201A (ja) 2011-09-20 2014-11-17 イーライ リリー アンド カンパニー 抗ｃ−Ｍｅｔ抗体
CN103889451B (zh) * 2011-09-30 2016-06-29 埃博灵克斯股份有限公司 与C-Met相关的生物物质
US9346884B2 (en) 2011-09-30 2016-05-24 Ablynx N.V. Biological materials related to c-Met
KR20130036993A (ko) 2011-10-05 2013-04-15 삼성전자주식회사 ｃ-Ｍｅｔ의 ＳＥＭＡ 도메인 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체
KR20130037153A (ko) * 2011-10-05 2013-04-15 삼성전자주식회사 항 ｃ-Ｍｅｔ 항체 및 그의 용도
KR101865223B1 (ko) * 2011-10-05 2018-06-08 삼성전자주식회사 항 ｃ-Ｍｅｔ 인간화 항체 및 그의 용도
WO2013064700A2 (en) 2011-11-03 2013-05-10 Argen-X B.V. Chimeric polypeptides and methods of use
AR088920A1 (es) 2011-11-21 2014-07-16 Genentech Inc Purificacion de anticuerpos anti-c-met
WO2013079973A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Di Cara Danielle Marie Antibodies against hgf - receptor and uses
US8900582B2 (en) 2011-12-22 2014-12-02 Samsung Electronics Co., Ltd. Deimmunized anti c-Met humanized antibodies and uses thereof
US9376485B2 (en) 2012-02-29 2016-06-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Neutralizing antibody for epstein barr virus-associated disease
WO2013152252A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 OSI Pharmaceuticals, LLC Combination anti-cancer therapy
EP2863946A4 (en) 2012-06-21 2016-04-13 Sorrento Therapeutics Inc ANTIGEN-BINDING PROTEINS THAT BIND TO C-MET
KR101938698B1 (ko) 2012-07-23 2019-01-16 삼성전자주식회사 Ｃｂｌ의 항 ｃ－ｍｅｔ 항체 적용 대상 환자 선별을 위한 바이오마커로서의 용도
KR101938699B1 (ko) 2012-07-23 2019-01-16 삼성전자주식회사 Ｌｒｉｇ１의 항 ｃ―ｍｅｔ 항체 적용 대상 환자 선별을 위한 용도
JP2015535212A (ja) 2012-08-17 2015-12-10 ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・コロラド、ア・ボデイー・コーポレイト 補体活性化を検出するための組成物および方法
US10413620B2 (en) 2012-08-17 2019-09-17 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Light-emitting versions of the monoclonal antibody to C3D (MAB 3D29) for imaging
US20140065655A1 (en) * 2012-09-05 2014-03-06 Scivax Corporation Screening method for substance acting on maintenance of epithelial properties of cell
SI2766048T1 (sl) 2012-10-12 2015-03-31 Spirogen Sarl Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
EP2727941A1 (en) 2012-11-05 2014-05-07 MAB Discovery GmbH Method for the production of multispecific antibodies
US20150259430A1 (en) 2012-11-05 2015-09-17 Mab Discovery Gmbh Method for the production of multispecific antibodies
WO2014074907A1 (en) * 2012-11-09 2014-05-15 Indi Molecular, Inc. C-met-specific capture agents, compositions, and methods of using and making
KR101911048B1 (ko) 2013-01-29 2018-10-24 삼성전자주식회사 ｐ５３ 활성화제 및 ｃ－Ｍｅｔ 억제제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
CA2900097A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cancer and preventing drug resistance
BR112015021462A2 (pt) 2013-03-06 2017-10-10 Adimab Llc anticorpos biespecíficos anti-c-met tandem fc
NZ712035A (en) 2013-03-13 2019-06-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR102049990B1 (ko) * 2013-03-28 2019-12-03 삼성전자주식회사 c-Met 항체 및 VEGF 결합 단편이 연결된 융합 단백질
KR102139607B1 (ko) * 2013-04-01 2020-07-30 삼성전자주식회사 항 c-Met 항체 및 FGFR 저해제를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
KR102089591B1 (ko) 2013-07-29 2020-03-18 삼성전자주식회사 항 EGFR scFv 단편 및 이를 포함하는 항 c-Met/항 EGFR 이중 특이 항체
WO2015031614A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Abbvie Inc. Soluble cmet assay
WO2015031626A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Abbvie Inc. Soluble cmet assay
US10035847B2 (en) 2013-10-02 2018-07-31 The Rockefeller University Amyloid protofibril antibodies and methods of use thereof
US9717715B2 (en) 2013-11-15 2017-08-01 Samsung Electronics Co., Ltd. Method of combination therapy using an anti-C-Met antibody
RU2016141385A (ru) 2014-03-24 2018-04-28 Дженентек, Инк. Лечение рака антагонистами с-мет и их корреляция с экспрессией hgf
CN106661622B (zh) 2014-05-23 2020-08-21 豪夫迈·罗氏有限公司 Mit生物标志物和使用它们的方法
WO2016037644A1 (en) 2014-09-10 2016-03-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10450376B2 (en) 2014-09-16 2019-10-22 Symphogen A/S Anti-MET antibodies and compositions
WO2016053610A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Academia Sinica Antibodies against pathological forms of tdp-43 and uses thereof
JP2018503596A (ja) 2014-10-03 2018-02-08 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ Ｔｄｐ−４３の病理学的形態に対する抗体及びその使用
US11035860B2 (en) * 2014-11-20 2021-06-15 Stichting Katholieke Universiteit Auto-active and intracellular mutant of MET
US10398774B2 (en) 2014-12-09 2019-09-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Human monoclonal antibodies against AXL
ES2772348T3 (es) 2014-12-19 2020-07-07 Ablynx Nv Dímeros de Nanobody con uniones cisteína
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
KR20170136536A (ko) * 2015-03-16 2017-12-11 셀덱스 쎄라퓨틱스, 인크. 항-met 항체 및 그 사용 방법
JP6929786B2 (ja) 2015-04-02 2021-09-01 アブリンクス エン．ヴェー． 強力な抗ｈｉｖ活性を有する二重特異性ｃｘｃｒ４−ｃｄ４ポリペプチド
TW201709932A (zh) * 2015-06-12 2017-03-16 西雅圖遺傳學公司 Ｃｄ１２３抗體及其共軛物
US20190194345A1 (en) * 2015-10-05 2019-06-27 University Of Virginia Patent Foundation Anti-sas1b antibodies, associated methods of use, and compositions and methods for detecting and treating cancer
CN108350078A (zh) 2015-11-03 2018-07-31 默克专利股份公司 用于提高肿瘤选择性和抑制的双特异性抗体及其用途
WO2017173091A1 (en) * 2016-03-30 2017-10-05 Musc Foundation For Research Development Methods for treatment and diagnosis of cancer by targeting glycoprotein a repetitions predominant (garp) and for providing effective immunotherapy alone or in combination
PL3458102T3 (pl) 2016-05-17 2020-12-14 Abbvie Biotherapeutics Inc. Koniugaty lek-przeciwciało anty-cmet i sposoby ich wykorzystania
AR108975A1 (es) * 2016-07-06 2018-10-17 Celgene Corp Anticuerpos con baja inmunogenicidad y sus usos
EP3525829A1 (en) 2016-10-11 2019-08-21 Medimmune Limited Antibody-drug conjugates with immune-mediated therapy agents
TWI782930B (zh) 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
WO2019018538A1 (en) * 2017-07-20 2019-01-24 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. RECOMBINANT ANTIBODIES BINDING TO CD123
KR102194025B1 (ko) 2017-12-15 2020-12-22 경북대학교 산학협력단 CD44v6에 결합하는 펩타이드 및 이의 용도
WO2019117691A1 (ko) * 2017-12-15 2019-06-20 경북대학교 산학협력단 CD44v6에 결합하는 펩타이드 및 이의 용도
US20210051929A1 (en) * 2018-03-24 2021-02-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified non-human animals for generating therapeutic antibodies against peptide-mhc complexes, methods of making and uses thereof
BR112020023846A2 (pt) 2018-05-23 2021-04-13 Adc Therapeutics Sa Adjuvante molecular
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN109541221B (zh) * 2018-10-24 2022-03-22 益善生物技术股份有限公司 一种c-Met特异性抗体、组合物及试剂盒
CA3146933A1 (en) 2019-09-16 2021-03-25 Marcus KELLY Radiolabeled met binding proteins for immuno-pet imaging
US20230372528A1 (en) 2020-10-16 2023-11-23 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Glycoconjugates
WO2022126416A1 (zh) * 2020-12-16 2022-06-23 武汉友芝友生物制药股份有限公司 抗bcma抗体及其制备方法和应用
CN112679614B (zh) * 2021-01-15 2022-08-16 广东安普泽生物医药股份有限公司 用于特异性结合rankl靶向治疗药物的抗体及其用途
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
CN112946279A (zh) * 2021-03-17 2021-06-11 扬州大学 一种基于油水界面自组装的三明治sers免疫传感器检测***患者血清生物标志物方法
AR125473A1 (es) 2021-04-29 2023-07-19 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-c-met y fármaco
TW202334429A (zh) 2021-10-01 2023-09-01 中央研究院 Sars-cov-2棘蛋白特異性抗體及其用途
WO2023129928A2 (en) * 2021-12-27 2023-07-06 Academia Sinica Antibody specific to spike protein of sars-cov-2 and uses thereof

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2840250C2 (de) 1978-09-15 1983-01-20 Siemens AG, 1000 Berlin und 8000 München Schaltungsanordnung für eine leitungsgespeiste Lautfernsprechstation
US4424200A (en) 1979-05-14 1984-01-03 Nuc Med Inc. Method for radiolabeling proteins with technetium-99m
US4479930A (en) 1982-07-26 1984-10-30 Trustees Of The University Of Massachusetts Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4831175A (en) 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6214344B1 (en) * 1995-06-02 2001-04-10 Genetech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonists and uses thereof
US5686292A (en) * 1995-06-02 1997-11-11 Genentech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies and uses thereof
AU742045B2 (en) * 1997-04-14 2001-12-13 Amgen Research (Munich) Gmbh Novel method for the production of anti-human antigen receptors and uses thereof
US7563874B2 (en) * 1998-08-31 2009-07-21 The Regents Of The University Of California Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins
US20060057651A1 (en) * 2000-12-08 2006-03-16 Bowdish Katherine S Polypeptides and antibodies derived from chronic lymphocytic leukemia cells and uses thereof
EP1485130A4 (en) * 2002-02-21 2006-11-22 Univ Duke REAGENTS AND TREATMENT PROCEDURES FOR AUTOIMMUNE DISEASES
WO2004072117A2 (en) * 2003-02-13 2004-08-26 Pharmacia Corporation Antibodies to c-met for the treatment of cancers
JP5416338B2 (ja) * 2003-05-09 2014-02-12 デューク ユニバーシティ Ｃｄ２０特異的抗体およびその使用方法
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
US20050233960A1 (en) * 2003-12-11 2005-10-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for inhibiting c-met dimerization and activation
RS51326B (sr) * 2004-08-05 2010-12-31 Genentech Inc. Humanizovani anti-cmet antagonisti
US20060094059A1 (en) 2004-09-22 2006-05-04 Odyssey Thera, Inc. Methods for identifying new drug leads and new therapeutic uses for known drugs
WO2006086586A2 (en) * 2005-02-10 2006-08-17 Baylor Research Institute Anti-interferon alpha monoclonal antibodies and methods for use
CA2606102C (en) 2005-04-26 2014-09-30 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
WO2007011941A2 (en) 2005-07-18 2007-01-25 Amgen Inc. Human anti-b7rp1 neutralizing antibodies
JP5457671B2 (ja) 2005-07-28 2014-04-02 ノバルティス アーゲー Ｍ−ｃｓｆ特異的モノクローナル抗体およびその使用
CN101379192B (zh) 2006-02-06 2013-07-31 梅思尔斯平移研究有限公司 ***的抗Met单克隆抗体及其片段和载体及相应产品
KR20080113218A (ko) 2006-03-30 2008-12-29 노파르티스 아게 ｃ―Ｍｅｔ의 항체에 대한 사용 방법 및 조성물
EP2143441A1 (en) * 2008-07-08 2010-01-13 Pierre Fabre Medicament Combination of a c-Met antagonist and an aminoheteroaryl compound for the treatment of cancer
WO2010064089A1 (en) 2008-12-02 2010-06-10 Pierre Fabre Medicament Novel anti-cmet antibody
AR074439A1 (es) 2008-12-02 2011-01-19 Pf Medicament Anticuerpo anti-cmet (receptor c-met)

Also Published As

Publication number Publication date
EP2188312A2 (en) 2010-05-26
US20130272957A1 (en) 2013-10-17
CN103509113A (zh) 2014-01-15
JP5889924B2 (ja) 2016-03-22
KR20160019975A (ko) 2016-02-22
NZ599959A (en) 2013-11-29
JP2014113153A (ja) 2014-06-26
US8329173B2 (en) 2012-12-11
ZA201000966B (en) 2011-02-23
CN103183739B (zh) 2016-08-17
MX341012B (es) 2016-08-03
EP2535356A1 (en) 2012-12-19
HUE026026T2 (en) 2016-05-30
KR101701686B1 (ko) 2017-02-01
TW201605892A (zh) 2016-02-16
PH12018502039A1 (en) 2019-08-19
DK2188312T3 (en) 2015-08-03
KR20150070451A (ko) 2015-06-24
CN101981054B (zh) 2015-04-15
NZ599958A (en) 2013-11-29
CO6170364A2 (es) 2010-06-18
CA2981821C (en) 2020-07-28
IL223109B (en) 2019-06-30
ES2693542T3 (es) 2018-12-12
CY1116608T1 (el) 2017-03-15
ES2686693T3 (es) 2018-10-19
EP2415785A1 (en) 2012-02-08
US8871910B2 (en) 2014-10-28
HK1193620A1 (zh) 2014-09-26
HRP20150887T1 (hr) 2015-09-25
PL2188312T3 (pl) 2016-01-29
EP2415785B1 (en) 2018-04-25
RU2552161C2 (ru) 2015-06-10
IL223108A0 (en) 2012-12-31
KR101625234B1 (ko) 2016-05-30
AR109660A2 (es) 2019-01-09
TWI549965B (zh) 2016-09-21
CA2888691A1 (en) 2009-01-15
AR109659A2 (es) 2019-01-09
WO2009007427A2 (en) 2009-01-15
KR101719084B1 (ko) 2017-03-22
IL223106A0 (en) 2012-12-31
HK1149024A1 (en) 2011-09-23
KR101701685B1 (ko) 2017-02-01
JP5889925B2 (ja) 2016-03-22
US20140010818A1 (en) 2014-01-09
CN101981054A (zh) 2011-02-23
AU2008274171B2 (en) 2014-02-27
TWI592427B (zh) 2017-07-21
JP2010532982A (ja) 2010-10-21
US8889832B2 (en) 2014-11-18
CN103509113B (zh) 2015-10-21
CL2008002015A1 (es) 2008-11-21
ES2542059T3 (es) 2015-07-30
ES2686335T3 (es) 2018-10-17
CA2981821A1 (en) 2009-01-15
RS54197B1 (en) 2015-12-31
IL223108B (en) 2019-06-30
IL223109A0 (en) 2012-12-31
JP2014113154A (ja) 2014-06-26
EP2535356B1 (en) 2018-06-13
TW201437231A (zh) 2014-10-01
ME02341B (me) 2015-12-31
IL203114A (en) 2015-03-31
RU2010104633A (ru) 2011-08-20
AR067517A1 (es) 2009-10-14
PT2188312E (pt) 2015-10-05
CN103183739A (zh) 2013-07-03
CN103509112B (zh) 2015-10-21
MA31977B1 (ar) 2011-01-03
MX345391B (es) 2017-01-27
KR20100044212A (ko) 2010-04-29
US20130273060A1 (en) 2013-10-17
EP2535357A1 (en) 2012-12-19
ES2678495T3 (es) 2018-08-13
US9107907B2 (en) 2015-08-18
EP2415784A1 (en) 2012-02-08
JP5562844B2 (ja) 2014-07-30
US20130280257A1 (en) 2013-10-24
CA2694418C (en) 2018-03-27
SG183015A1 (en) 2012-08-30
JP2014113155A (ja) 2014-06-26
US20150252114A1 (en) 2015-09-10
MY158756A (en) 2016-11-15
TW201605891A (zh) 2016-02-16
BRPI0815564A2 (pt) 2015-02-18
IL223105B (en) 2020-02-27
JP5889923B2 (ja) 2016-03-22
EP2188312B1 (en) 2015-05-27
KR20160019974A (ko) 2016-02-22
IL223105A0 (en) 2012-12-31
TN2010000016A1 (en) 2011-09-26
SI2188312T1 (sl) 2015-09-30
NZ613716A (en) 2015-01-30
US20100115639A1 (en) 2010-05-06
MX353449B (es) 2018-01-08
EP2014681A1 (en) 2009-01-14
AR109535A2 (es) 2018-12-19
HK1193619A1 (zh) 2014-09-26
IL223106B (en) 2020-06-30
TWI602830B (zh) 2017-10-21
EP2535357B1 (en) 2018-08-08
EP2415784B1 (en) 2018-06-13
US8871909B2 (en) 2014-10-28
CA2982484A1 (en) 2009-01-15
TW200911828A (en) 2009-03-16
CA2982484C (en) 2021-06-01
BRPI0815564B8 (pt) 2021-05-25
BRPI0815564B1 (pt) 2020-01-21
AU2008274171A1 (en) 2009-01-15
WO2009007427A3 (en) 2009-04-09
NZ583041A (en) 2012-06-29
TWI602829B (zh) 2017-10-21
PH12018502040A1 (en) 2019-08-19
CA2888691C (en) 2023-01-03
PH12018502038A1 (en) 2019-08-19
CA2694418A1 (en) 2009-01-15
PA8789201A1 (es) 2009-08-26
CN103509112A (zh) 2014-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA08290423B1 (ar) مضادات أجسام جديدة تثبط دايمرية c-Met واستخداماتها
HUE035047T2 (en) ANTI-cMet Antibody
HUE029043T2 (en) New anti-C-MET antibody
AU2016228280B2 (en) Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
AU2014200630B2 (en) Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof