RU2147443C1 - Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента - Google Patents

Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента Download PDF

Info

Publication number
RU2147443C1
RU2147443C1 RU97108276A RU97108276A RU2147443C1 RU 2147443 C1 RU2147443 C1 RU 2147443C1 RU 97108276 A RU97108276 A RU 97108276A RU 97108276 A RU97108276 A RU 97108276A RU 2147443 C1 RU2147443 C1 RU 2147443C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antibody
interleukin
receptor
cells
rheumatoid arthritis
Prior art date
Application number
RU97108276A
Other languages
English (en)
Other versions
RU97108276A (ru
Inventor
Кисимото Тадамицу
Михара Масахико
Мория Йоитиро
Охсуги Йосиюки
Original Assignee
Чугаи Сейяку Кабусики Кайся
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17112746&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2147443(C1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Чугаи Сейяку Кабусики Кайся filed Critical Чугаи Сейяку Кабусики Кайся
Publication of RU97108276A publication Critical patent/RU97108276A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2147443C1 publication Critical patent/RU2147443C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической композиции для лечения хронического ревматоидного артрита и ингибитору роста синовиальных клеток. Композиция содержит в качестве эффективного компонента антитело против рецептора интерлейкина-6, а ингибитор содержит антагонист интерлейкина-6, выбранный из группы, состоящей из антитела интерлейкина-6, антитела рецептора интерлейкина-6, антитела gp130, модифицированного интерлейкина-6, антисмыслового рецептора интерлейкина-6, неполного пептида интерлейкина 6 и неполного пептида рецептора интерлейкина-6. Изобретение обеспечивает возможность подавления аномального роста синовиальных клеток у пациентов с ревматоидным артритом. 2 c. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к лечебному средству против хронического ревматоидного артрита или к ингибитору роста синовиальных клеток, содержащему антагонист интерлейкина-6 в качестве эффективного компонента.
Предпосылки создания изобретения
Ревматоидный артрит является системным хроническим воспалительным заболеванием, при котором имеет место аномальный рост в суставах соединительной ткани, в том числе синовиальной ткани (Melnyk et al. Arthritis Rheum 33; 493-500, 1990). Показано, что в суставах пациентов с ревматоидным артритом происходит заметный рост синовиальных клеток, образование многослойной структуры вследствие аномального роста синовиальных клеток (образование паннуса), инвазия синовиальных клеток в хрящевую ткань и костную ткань, васкуляризация в направлении синовиальной ткани и инфильтрация воспалительных клеток, таких как лимфоциты и макрофаги. Сообщается, что механизмы возникновения ревматоидного артрита основаны на таких факторах, как наследственность, бактериальная инфекция и способствование ему различных цитокинов и факторов роста, но в целом механизм возникновения заболевания остается неясным.
В последние годы в синовиальной оболочке и в синовиальной жидкости пациентов с ревматоидным артритом обнаружены цитокины и факторы роста, в том числе интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-8 (IL-8), α- фактор некроза опухоли (α-ФHO), трансформирующие β- факторы роста (TGF β), фактор роста фибробласта (FGF) и тромбоцитарный фактор роста (PDGF) (Nouri et al., Clin. Exp. Immunol. 55; 295-302, 1984; Thornton et al., Clin. Exp. Immunol. 86: 79-86, 1991; Saxne, et al. Arthritis Rheum. 31:1041-1045, 1988; Seitz et al., J. Clin. Invest. 87: 463-469, 1991; Lafyatis et al.,J.lmmunol. 143:1142-1148, 1989; Melnyk et al., Arthritis Rheum. 33:493-500, 1990).
Считается, что IL-1, α-ФHO и PDGF являются особенно мощными факторами роста синовиальных клеток (Thornton et al., Clin. Exp. lmnunol. 86:79-86, 1991; Lafyatis et al., J.lmmunol. 143:1142-1148, 1989; Gitter et al. Immunology 66:196-200, 1989). Также предполагают, что стимуляция за счет IL-1 и ФИО приводит в результате к продуцированию интерлейкина-6 (IL-6) синовиальными клетками (lto et al. Arthritis Rheum. 35:1197-1201, 1992).
IL-6 является цитокином, известным так же как фактор 2, стимуляции В-клеток или интерферон β2 . IL-6 описан как фактор дифференцировки, способствующий активации В-лимфоцитов (Hira-no,T., et al. Nature 324, 73-76, 1986), и, как было обнаружено позднее, является многофункциональным цитокином, который влияет на функционирование ряда клеток различных типов (Akira, S. et al., Adv.in Immunology, 54, 1-78, 1993). Для индукции активности IL-6 необходимы две функционально различные мембранные молекулы. Одной из них является IL-6 рецептор (IL-6R) с молекулярной массой приблизительно в 80 кД, который специфически связывается с IL-6.
IL-6R существует в мембранофиксирующей форме, которая экспрессируется на клеточной мембране и пронизывает клеточную мембрану, а также в форме растворимого IL-6R (sIL-6R), которая состоит главным образом из внеклеточного домена. Еще один белок представляет gp130 с молекулярной массой приблизительно 130 кД, который не является лиганд-фиксирующим, а скорее функционирует как опосредующий сигнальную трансдукцию. IL-6 и IL-6R образуют комплекс IL-6/IL-6R, который в свою очередь связывается с еще одним мембранным белком gpl30, индуцируя биологическую активность IL-6 по отношению к клетке (Taga et al., J.Exp. Med.196:967, 1987).
Сообщалось, что сыворотка или синовиальная жидкость пациентов с ревматоидным артритом содержит избыточные количества интерлейкина-6 (IL-6) и растворимого IL-6-рецептора (sIL-6R) (Houssiau et al. Arthritis Rheum. 31: 784-788, 1988; Hira-no et al., Eur. J.lmmunol. 18:1797- 1801, 1988; Yoshioka et al., Japn. J.Rheumatol., в печати), и поскольку подобные результаты также получены на животных моделях ревматоидиого артрита (Takai et al. Arthritis Rheum. 32: 594-600, 1989; Leisten et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 56: 108-115, 1990), предполагается, что IL-6 так или иначе играет роль в ревматоидном артрите.
Однако в публикации не прошедшей экспертизу заявки на патент Японии N 4-89433 отмечается, что пептиды, которые в сильной степени промотируют продуцирование IL-6, являются эффективными в качестве лечебных средств против ревматоидного артрита.
Кроме того, Hiqaki с сотр. высказали предположение, что синовиальные клетки пациентов с ревматоидным артритом обладают реакцией "слабого" роста против IL-6, и что IL-6 таким образом осуществляет функцию ингибитора против роста синовиальных клеток (Clinical Immunology, 22:880-887, 1990). Таким образом, существуют разноречивые сообщения, рассматривающие отношение IL-6 к ревматоидному артриту, и это отношение все еще остается неясным.
Недавно Wendling с сотр. сообщили, что введение антител против IL-6 пациентам с ревматоидным артритом временно облегчает клинические и биологические симптомы, увеличивая также при этом уровень IL-6 в сыворотке (J. Rheumatol. 20:259-262, 1993).
В этих сообщениях не приводится никаких данных о том, ускоряет ли IL-6 рост синовиальных клеток при ревматоидном артрите или он обладает ингибирующим действием, и таким образом все еще неизвестно, оказывает или нет IL-6 непосредственное влияние на синовиальные клетки пациентов с ревматоидным артритом.
Раскрытие сущности изобретения
Противовоспалительные стероидные средства, такие как кортикостероиды, применялись в качестве лекарственных средств при ревматоидном артрите, но так как их длительное применение вызывает нежелательные побочные эффекты, такие как поражения кожи и ингибирование функции коркового вещества надпочечника, велись поиски лекарственных средств с меньшим побочным действием.
Целью настоящего изобретения является предоставление нового лечебного средства для лечения ревматоидного артрита, лишенного упомянутых выше недостатков. Более конкретно настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для ингибирования аномального роста синовиальных клеток при ревматоидном артрите, эффективным компонентом которой является антагонист интерлейкина- 6, а также фармацевтическую композицию для лечения ревматоидного артрита, обладающую таким же действием.
Авторы настоящего изобретения провели кропотливые исследования относительно роли IL-6 для синовиальных клеток при ревматоидиом артрите, в ходе которых не обнаружено никакого роста характерных для ревматоидного артрита синовиальных клеток с одним IL-6, и поэтому исследовали фактор, отличный от IL-6, что привело в результате к созданию настоящего изобретения на основе открытия, что хотя один IL-6 почти не обнаруживает влияния на рост синовиальных клеток, сильное влияние на рост синовиальных клеток имеет место в присутствии как IL-6, так и растворимого IL-6R, и, кроме того, что это действие на рост синовиальных клеток подавляется посредством добавления антагониста, который ингибирует активность IL-6, такого как IL-6 антитело или IL-6R антитело.
Иными словами, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения хронического ревматоидного артрита, содержащей антагонист IL-6 в качестве эффективного компонента. Конкретнее настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения ревматоидного артрита, содержащей антагонист IL-6 в качестве эффективного компонента и подавляющей аномальный рост синовиальных клеток. Настоящее изобретение также относится к ингибитору роста синовиальных клеток, эффективным компонентом которого является антагонист IL-6.
Краткое описание рисунков
Фиг. 1 представляет собой график, показывающий поглощение 3H-тимидинa в синовиальных клетках в присутствии либо одного IL-6, либо sIL-6, и в присутствии как IL-6, так и sIL- 6R.
Фиг. 2 представляет собой график, показывающий действие антитела к IL-6 или антитела IL-6R (антитела к IL-6R) на поглощение 3Н-тимидина в синовиальных клетках в присутствии как IL-6, так и sIL-6R.
Фиг. 3 представляет собой график, показывающий действие антитела IL-6 или антитела IL-6R на поглощение 3Н-тимидина в синовиальных клетках в присутствии как IL-6, так и slL-6R.
На фиг. 4 приводится график, показывающий подавляющее действие антитела IL-6R на начало заболевания на мышиной модели индуцированного коллагеном артрита.
На фиг. 5 приводится график, показывающий уровни антител коллагена в сыворотке мышей с индуцированным артритом.
Фиг. 6 представляет фотографическое изображение, полученное при гистопатологическом анализе сустава задней лапы мыши с артритом, вызванным коллагеном. Фотография (а) относится к мыши из группы, которой вводили антитело IL-6-peцептов, a фотография (b) относится к мыши из группы, которой вводили контрольное антитело. В группе, которой вводили антитело IL-6-рецептора, инвазия грануляционной ткани в хрящ и кость (хронический пролиферативный синовит) отчетливо подавляется.
Подробное описание изобретения
Фармацевтическая композиция для лечения ревматоидного артрита согласно изобретению представляет собой лекарственное средство, которое при введении пациентам с ревматоидным артритом подавляет рост синовиальных клеток в суставах и обладает смягчающим и лечебным действием на симптомы заболевания.
Антагонист IL-6, используемый согласно изобретению, можно получить из любого источника, если он представляет собой вещество, которое блокирует передачу сигнала IL-6 и ингибирует биологическую активность IL-6. Антагонисты IL-6 включают антитело IL-6, антитело IL-6R, антитело gpl30, модифицированный IL-6, антисмысловой IL-6R и неполные пептиды IL-6R или IL-6R.
Антитело, используемое в качестве антагониста согласно изобретению, такое как антитело IL-6, антитело IL-6R или антитело gp130, может быть любого происхождения или типа (моноклональное, поликлональное), но особенно предпочтительными являются моноклональные антитела, полученные от млекопитающих. Такие антитела связываются с IL-6, IL-6R или gp130, ингибируя связывание между IL-6 и IL-6R или IL- 6R и gp130, и таким образом блокируют сигнальную трансдукцию IL- 6, ингибируя биологическую активность IL-6.
Вид животного для продуцирующих моноклональные антитела клеток особенно не ограничен, пока такое животное представляет собой млекопитающее, и могут использоваться человеческие антитела или антитела, полученные от другого млекопитающего, не являющегося человеком. Моноклональные антитела, полученные от млекопитающего, не являющегося человеком, представляют собой предпочтительно моноклональные антитела, полученные от кроликов или грызунов, поскольку их легче получать. Не существует особых ограничений по виду грызунов, но предпочтительными примерами являются мыши, крысы и хомяки.
Примеры таких антител, которые являются антителами IL-6, включают МН166 (Matasuda et al., Eur, J.Immunol. 18:951-956, 1988) и антитело SK2 (Sato et al. . Journal for the 21st General Meeting of the Japan Immunology Association, 21:116, 1991). Примеры антител к IL-6R включают антитело РМ-1 (Hirata et al. , J.lmmunol. 143:2900-2906, 1989), AUK12-20, AUK64-7 и AUK146-15 (не прошедшая экспертизу заявка на международный патент N ВОИС92-19759). Примером антитела к gp130 является антитело АМ64 (японская не прошедшая экспертизу патентная публикация N 3-219894).
Среди них предпочтительным является антитело PM-1.
Моноклональные антитела могут быть получены следующим способом, который основан на известных приемах. А именно используют IL-6, IL-6R или gp130 в качестве сенсибилизирующего антигена для иммунизации по общепринятому методу, и получающиеся в результате иммуноциты затем сливают с известными родительскими клетками посредством обычного способа слияния клеток, и продуцирующие моноклональные антитела клетки отсортировывают обычным способом скрининга, получая антитела.
Конкретнее моноклональные антитела можно получить следующим способом. Например, если сенсибилизирующим антигеном является человеческий IL-6, антитела получают с использованием генной последовательности для человеческого IL-6, описанной Hirano с сотр. Nature, 324:73, 1986. Генную последовательность человеческого IL-6 вставляют в известную экспрессионную векторную систему и используют для трансформации подходящих клеток-хозяев, после чего нужный белок IL-6 очищают от клеток-хозяев или от культурального супернатанта, и очищенный белок IL-6 затем используют в качестве сенсибилизирующего антигена.
В случае человеческого IL-6R белок IL-6R можно получить таким же способом, какой описан выше для получения человеческого IL-6, с использованием генной последовательности, описанной а заявке на европейский патент N ЕР 325474. Существует два типа IL-6R, один из которых экспрессируется на клеточной мембране, и растворимая форма (sIL- 6R), которая отделена от клеточной мембраны. sIL-6R состоит в основном из внеклеточного домена IL-6R, который присоединен к клеточной мембране, и отличается от мембраносвязанного IL-6R тем, что лишена трансмембранного домена или трансмембранного домена и внутриклеточного домена.
В случае человеческого gp130 этот белок можно получить таким же способом, как для описанного выше человеческого IL-6, с использованием генной последовательности, описанной в заявке на европейский патент N ЕР 411946.
Млекопитающие, иммунизированные сенсибилизирующим антигеном, особо не ограничиваются, но их предпочтительно выбирать, учитывая их совместимость с родительскими клетками, используемыми для слияния клеток, и, как правило, можно использовать мышей, крыс, хомяков и кроликов.
Иммунизацию животных сенсибилизирующим антигеном можно осуществлять широко известным способом. Например, общепринятым способом является интраперитонеальная или подкожная инъекция млекопитающим сенсибилизирующего антигена. В частности, сенсибилизирующий антиген разбавляют предпочтительно эквивалентным количеством ЗФР (забуференный фосфатом физиологический раствор) или фиаиологического раствора, суспендируют и применяют вместе с подходящим количеством обычного адъюванта, такого как полный адъювант Фрейнда, если это желательно, и затем вводят млекопитающим несколько раз каждые 4-21 дня. Для иммунизации сенсибилизирующим антигеном также можно использовать соответствующий носитель.
После такой иммунизации и подтверждения возросшего сывороточного уровня нужного антитела у млекопитающих берут иммуноциты и используют для слияния клеток, причем особенно предпочтительными иммуноцитами являются селезеночные клетки.
Родительские клетки, используемые для слияния с вышеупомянутыми иммуноцитами, могут представлять собой миеломные клетки млекопитающих, и можно использовать ряд уже широко известных клеточных штаммов, в том числе Р3 (P3x6Aq8.653) (J. Immunol. 123:1548, 1978), p3-UI (Current Topics in Microbiology and lmmunology 81: 1-7, 1978), NS-1 (Eur. J.lmmunol. 6:511-519, 1976), MPC-11 (Cell, 8:405-415, 1976), SP2/0 (Nature, 276:269- 270, 1978), OF (J. Immunol. Meth. 35:1-21, 1980), S194 (J.Exp. Med. 148:313-323, 1978), R210 (Nature, 277:131-133,1979). Слияние иммуноцитов с миеломными клетками может иметь в основе хорошо известный способ, например способ Мильштейна с сотр. (Milstein et al. Methods Enzymol. 73:3-46, 1981).
Конкретнее вышеупомянутое слияние клеток осуществляют в традиционной питательной культуре в присутствии промотора слияния клеток. Используемый промотор слияния может представлять собой, например, полиэтиленгликоль (ПЭГ) или вирус Сендай (HVJ), и, если желательно, также может добавляться такое вспомогательное средство, как диметилсульфоксид, чтобы увеличить эффективность слияния.
Соотношение используемых иммуноцитов и миеломных клеток составляет предпочтительно 1-10-кратное количество иммуноцитов по отношению к миеломным клеткам. Используемая культуральная среда для слияния клеток может представлять собой, например, культуральную среду RPM11640 или культуральную среду МЕМ (минимальная поддерживающая среда), которые являются подходящими для роста штаммов миеломных клеток, или другую обычную культуральную среду, применяемую для культивирования таких клеток, и, кроме того, также можно использовать добавление растворов сывороток, таких как фетальная телячья сыворотка (FCS).
Слияние клеток осуществляют посредством смешения упомянутых ранее количеств иммуноцитов и миеломных клеток в описанной выше культуральной среде, с добавлением раствора ПЭГ, предварительно нагретого до 37oC, например, с добавлением к культуральной среде ПЭГ со средней молекулярной массой 1000-6000, обычно при концентрации 30-60% (м/о) и последующим перемешиванием с образованием нужных слитых клеток (гибридом). Далее повторяют процедуру постепенного добавления подходящей культуральной среды и центрифугирования, чтобы удалить супернатант, и осуществляют удаление средства для слияния клеток и т.п., что является неблагоприятным для выращивания гибридом.
Подходящие гибридомы отбирают выращиванием в нормальной селективной культуральной среде, такой как культуральная ГАТ-среда (содержащая гипоксантин, аминоптерин и тимин) Выращивание в культуральной ГАТ-среде продолжают в течение заданного времени, обычно в течение нескольких суток или нескольких недель, достаточных для гибели других, не являющихся гибридомами клеток (неслитых клеток). Затем осуществляют обычное ограниченное разведение, и гибридомы, продуцирующие нужные антитела, "запасают" и моноклонируют.
Из продуцирующих моноклональные антитела гибридом, полученных таким способом, можно получить субкультуры в обычном растворе культуры, и их также можно поместить в жидкий азот для длительного хранения.
Чтобы получить моноклональные антитела из гибридом, последние культивируют обычным способом, после чего извлекают супертант культуры или используют другой способ, при котором гибридомы инъецируют совместимому млекопитающему, выращивают и получают асцитную жидкость. Первый способ подходит для получения высокочистых антител, в то время как последний способ подходит для массового производства антител.
Моноклональные антитела, полученные этими способами, затем можно очистить до высокой степени, используя традиционные способы очистки, такие как высаливание, гель- фильтрация, афинная хроматография или подобные способы очистки.
Моноклональные антитела, полученные таким способом, затем можно проверить на степень чувствительности и чистоты распознавания антигена обычными иммунологическими методами, такими как радиоиммуноанализ (РИА), иммуноферментный анализ (E1А, ЕL1SA), метод флуоресцирующих антител (иммунофлуоресцентный анализ), и подобными методами.
Моноклональные антитела, используемые по настоящему изобретению, не ограничиваются моноклональными антителами, продуцируемыми гибридомами, и могут также представлять собой моноклональные антитела, которые искусственно модифицированы в целях снижения гетероантигенности в отношении людей. Например, можно использовать химерное антитело, которое состоит из вариабельной области моноклонального антитела другого млекопитающего, не являющегося человеком, такого как мышь, и константной области человеческого антитела, и такое химерное антитело можно получить известными способами получения химерных антител, в частности методом генной рекомбинации.
Реконструированные человеческие антитела также могут использоваться по настоящему изобретению. Их получают с использованием определяющей комплементарность области мышиного антитела или антитела другого млекопитающего, не являющегося человеком, для замещения определяющей комплементарность области человеческого антитела, и традиционные методы генной рекомбинации для этого хорошо известны. Один из таких известных методов можно использовать для получения реконструированного человеческого антитела, которое является полезным согласно изобретению. Предпочтительным примером такого реконструированного человеческого антитела является hPM-1 (см. не прошедшую экспертизу заявку на международный патент N WO 92-19759).
При необходимости аминокислоты основной (FR) области вариабельного участка антитела могут замещаться таким образом, что определяющая комплементарность область реконструированного человеческого антитела образует подходящий сайт связывания антитела (Sato et al. Cancer Res.53:851-856, 1993). Кроме того, поставленная выше цель также может быть достигнута путем конструирования гена, кодирующего фрагмент антитела, который связывается с антигеном для ингибирования активности IL-6, такого как Fab или Fv или одноцепочечного Fv(scFv), при этом FvH- и L-цепей связываются через соответствующий линкер, и использования его для экспрессии в соответствующих клетках-хозяевах (см. , например, Bird et al., TIBTECH, 9:132-137,1991; Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988).
Модифицированный IL-6, применяемый по настоящему изобретению, может представлять собой IL-6, описанный в Brakenhoff et al., J. Biol. Chem. 269: 86-93, 1994, или в Savino et al., EMBO J. 13:1357-1367, 1994.
Применяемый модифицированный IL-6 можно получить путем введения мутации, такой как замещение, делеция или вставка, в аминокислотную последовательность IL-6, чтобы сохранить связывающую активность IL-6R, элюминируя в то же время сигнально-трансферную функцию IL-6. Источник IL-6 может происходить от животного любого вида, если он обладает вышеупомянутыми свойствами, но с точки зрения антигенности предпочтительно использовать источник IL-6 человеческого происхождения.
В частности, вторичную структуру аминокислотной последовательности IL-6 можно предсказать с использованием хорошо известной программы молекулярного моделирования, такой как WHATIF (Vreind et al., J.Mol.Graphics, 8:52-56, 1990), с помощью которой также можно оценить влияние мутированных аминокислотных остатков на всю структуру. После определения соответствующих мутированных аминокислотных остатков вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую ген человеческого IL-6, используют в качестве матрицы для введения мутации посредством традиционно используемого метода ПЦР (полимеразная цепная реакция), и получают ген, кодирующий модифицированный IL-6. Затем его вводят в подходящий экспрессионный вектор при необходимости и экспрессируют в клетках E.coli или в клетках млекопитающего и затем используют либо целиком в культуральном супернатанте, либо после выделения и очистки обычными способами, и оценивают активность связывания IL-6R и сигнально-трансферную активность нейтрализованного IL-6.
Неполный пептид IL-6 или неполный пептид IL-6R, используемые по настоящему изобретению, могут иметь любую последовательность, пока они связываются с IL-6R или IL-6 соответственно и не обладают активностью трансферной функции IL- 6. Неполные пептиды IL-6 и неполные пептиды IL-6R описаны в публикации патента США N 5210075. Антисмысловой олигонуклеотид IL-6 описан в заявке на патент Японии N 5-300338.
Фармацевтическая композиция для лечения ревматоидного артрита, эффективным компонентом которой является антагонист IL-6, по настоящему изобретению является эффективной для лечения ревматоидного артрита, если она блокирует сигнальную трансдукцию IL-6 и подавляет аномальный рост синовиальных клеток, индуцированный IL-6, который причастен к заболеванию. Пример 1 демонстрирует in vitro, подавляющее рост действие на синовиальные клетки, взятые у пациента с ревматизмом. В примере 2 вводят антитело IL-6-рецептора в мышиную модель артрита, иммунизированную коллагеном типа 11, и соответствующие данные показывают (1) подавление развития артрита - на основании артритного индекса (рис. 4), (2) подавление продуцирования антитела против коллагена типа 11 в крови иммунизированных коллагеном мышей (рис.5) и (3) подавление инвазии грануляционной ткани в хрящ и кость (пролиферативный синовит) в суставах задних лап мышей, использованных в качестве моделей артрита, которым вводили антитело рецептора IL-6 (рис.6).
С учетом вышеупомянутых данных (1) и (2) результаты подтверждают подавляющее действие антитела рецептора IL-6, особенно сначала на развитие артрита у моделей-мышей. Результаты (3) показывают, что инвазия грануляционной ткани в хрящевую и костную ткань подавляется, и это подтверждают результаты, полученные в примере 1 (ингибирование роста синовиальных клеток in vitro).
Экспериментальные результаты (1) и (2) показывают, что фармацевтическая композиция настоящего изобретения для лечения ревматоидного артрита обладает превосходным начальным действием на ревматоидный артрит.
Фармацевтическую композицию настоящего изобретения для лечения ревматоидного артрита вводят предпочтительно парентерально, например, посредством внутривенной, внутримышечной, интраперитонеальной или подкожной инъекции, либо системно, либо местно. Кроме того, композиция может находиться в форме набора лекарственных средств вместе, с по крайней мере, одним типом носителя или разбавителя для лекарственных средств.
Дозировка фармацевтической композиции настоящего изобретения для лечения ревматоидного артрита при введении людям различается в зависимости от паталогического состояния и возраста пациента, и способа введения, и подходящие и соответствующие дозы должны выбираться с учетом этих обстоятельств. В качестве примера можно выбрать максимум 4 раздельные дозы в интервале от 1 до 1000 мг на пациента. Однако фармацевтическая композиция настоящего изобретения для лечения ревматоидиого артрита этими дозировками не ограничена.
Фармацевтическая композиция настоящего изобретения для лечения ревматоидного артрита может быть приготовлена обычными способами. Например, состав для инъекции готовят путем растворения очищенного антагониста IL-6 в таком растворителе, как физиологический раствор или буферный раствор, добавляя затем ингибитор адсорбции, такой как твин 80, желатин, человеческий сывороточный альбумин (HSA) или подобное вещество, и смесь может быть предварительно лиофилизована и использоваться для восстановления раствора. Эксципиент, применяемый для лиофилизации, может представлять собой сахар, спирт, такой, как маннит или глюкоза, или сахарид.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение теперь будет пояснено подробнее с помощью приведенных ниже примеров, справочных примеров и экспериментальных примеров, причем следует иметь в виду, что эти примеры никоим образом не ограничивают изобретение.
СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 1
Получение растворимого человеческого IL-6-рецептора
Растворимый IL-6R получают (Yasukava et al., J.Biochem. 108:673-676, 1990) методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) с использованием плазмиды pBSF2R, 236, содержащей кДНК, кодирующую человеческий IL-6-рецептор (IL-6R), полученный по методу Yamasaki с сотр. (Science, 241:825-828, 1988).
Вышеупомянутую плазмиду pBSF2R.236 переваривают с ферментом рестрикции SphI и получают фрагмент кДНК IL-6R, который затем вставляют в mpl8 (Amersham Со. ). Синтетический олигопраймер ATATTCTCTAGAGAGATTCT, сконструированный для введения стоп-кодона в кДНК IL-6R, используют для введения мутации в кДНК IL-6R с помощью метода ПЦР с использованием системы мутагенеэа Invitro (Amersham Co. ). Эта процедура приводит в результате к введению стоп-кодона в положение аминокислоты 345 с получением кДНК, кодирующей растворимый IL-6R (slL-6R).
Чтобы экспрессировать кДНК sIL-6R в клетках CHO (яичник китайского хомячка), вышеупомянутую кДНК sIL-6R, разрезанную HindIII-Sall, вставляют в плазмиду pECEdhfr (Clauser et al., Cell, 45:721-635, 1986), которая содержит кДНК, кодирующую дигидрофалатредуктазу (dhfr), вставленную в сайт расщепления фермента рестрикции Pvul, и получают экспрессионную плазмиду клеток CHO pECEdhfr344.
Используют 10 мкг плазмиды pECEdhfr 344 для трансфекции клеточной линии dhfr CHO DXB-II (Urland et al.,Proc.Natl.Acad. Ssi.USA 77,4216-4220, 1980) методом преципитации фосфатом кальция (Chen et ai., Mol.Cell.Biol. 7:2745-2751, 1987).
Трансфектированные клетки CHO культивируют в течение 3 недель в безнуклеозидной селективной культуральной среде α МЕМ, содержащей 1 мМ глутамина, 10% диализованной фетальной телячьей сыворотки (FCS), 100 Е/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Отобранные клетки CHO скринируют с помощью метода серийных разбавлений и получают единственную моноклональную клеточную линию CHO. Клон клеток CHO амплифицируют в метотрекстате (МТХ) при концентрации 20 нМ - 200 нМ и получают клеточную линию CHO 5Е27, продуцирующую человеческий sIL-6R.
Клеточную ливню CHO 5Е27 культивируют в среде Дульбекко, модифицированной по способу Исков (IMDM, продукт Gibco Co.), содержащей 5% FCS, извлекают культуральный супернатант и измеряют концентрацию sIL-6R в культуральном супернатанте методом ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) в соответствии с обычной процедурой.
СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 2
Получение антитела к человеческому IL-6
Антитело к человеческому IL-6 получают по методу Matsuda с сотр. (Fur. J.Immunol. 18:951-956, 1988).
Мышей BALB/c иммунизируют 10 мкг рекомбинантного IL-6 (Hirano efc al., Immunol. Lett., 17:41,1988) вместе с полным адъювантом Фрейнда и это продолжают осуществлять раз в неделю до тех пор, пока не обнаружат в кровяной сыворотке антитела против IL-6.
Иммуноциты экстрагируют на региональных лимфоузлах и для слияния с линией миеломных клеток P3U1 используют полиэтиленгликоль 1500. Гибридомы отбирают по методу Oi с сотр. (Selective Methods in Cellular lmmunology, W.H. Freeman and Co. , San Francisco, 351, 1980) с использованием культуральной ГАТ-среды и определяют линию гибридом, продуцирующих антитела к человеческому IL-6. Гибридомы, продуцирующие антитела к человеческому IL-6, анализируют на связывание IL-6 описанным ниже способом.
А именно мягкий поливиниловый 96-луночный микропланшет (изделие Dynatech Laboratories, Inc. , Александрия, Виргиния) сенсибилизируют в течение ночи 100 мкл козьего антитела против мышиного Ig (иммуноглобулин) (10 мкл/мл, продукт Cooper Biochemical, Inc>, Malvern, Пенсильвания) в 0,1 М карбонат-бикарбонатном буферном растворе (рН 9,6) при 4oС. Затем планшет в течение 2 ч при комнатной температуре обрабатывают ЗФР, содержащим 100 мкл 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). После промывания ЗФР в каждую лунку добавляют по 100 мкл гибридомного культурального супернатанта и проводят инкубацию в течение ночи при 4oC.
Затем планшеты промывают и в каждую лунку добавляют меченный 1251 рекомбинантный IL-6 до 2000 имп/мин /0,5 нг/ лунку, и после промывания измеряют радиоактивность каждой лунки счетчиком гамма-квантов (Beckam Gamma 9000, Beckman Instruments, Фуллертон, СА). Из 216 гибридомных клонов 32 являются положительными при анализе связывания IL-6. Из числа этих клонов получают, наконец, стабильный клон МН166.BSF2. Антитело к IL-6 МН166, продуцированное этой гибридомой, имеет субтип IgGlk.
Затем используют мышиную IL-6-зависимую гибридомную клеточную линию МH60.BSF2 (Matsuda et al, Eur. J.lmmunol. 18:1951-956, 1988) для определения нейтрализующей активности антитела МН166 в отношении роста гибридом. Клетки MH60. BSF2 дозируют в количестве 1•104/200 мкл/лунку, добавляют к ним образец, содержащий антитело МН166, осуществляют культивирование в течение 48 ч и добавляют 15,1 Ки/ммоль 3Н-тимидина (New England Nuclear, Бостон, Миннесота), после чего выращивание продолжают в течение 6 ч.
Клетки помещают на фильтровальную бумагу из стекловолокна и обрабатывают автоматическим харвестером (Labo Mash Science Со., Токио, Япония). В качестве контроля используют кроличье антитело против IL-6. В результате обнаруживается, что антитело МН166 ингибирует поглощение 3Н-тимидина клетками MH60. BSF2 в зависимости от дозы. Это показывает, что антитело МН166 нейтрализует активность IL-6.
СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 3
Получение антитела к человеческому IL-6-рецептору
Антитело против IL-6 МТ18 создают по методу Hirata с сотр. (J.Immunol., 143:2900-2906, 1989), фиксируют на сефарозе 4В (продукт Pharmacia Fine Chemicals, Piscatway, Нью-Джерси), активированной CNBr, по прилагаемым инструкциям, и фиксированный комплекс используют для очистки IL-6R (Yamasaki et al. Science, 241:825-828, 1988).
Линию человеческих миеломных клеток U266 солюбилизируют 1 мМ гидрохлоридом п- парааминофенилметансульфонилхлорида (продукт Wako Chemicals), содержащим 1% дигитонина (продукт Wako Chemicals), 10 мМ триэтаноламина (pH 7,8) и 0,15 М NaCI (дигитониновый буферный раствор), и смешивают с антителом МТ18, фиксированном на гранулах сефарозы 4В. Затем гранулы промывают 6 раз дигитониновым буферным раствором, и получают частично очищенный IL-6 для иммунизации.
Мышей BALB/c иммунизируют 4 раза каждые 10 дней частично очищенным IL-6R, полученным из 3•109 клеток U266, и затем получают гибридомы обычными способами. Культуральные супернатанты гибридом из рост-положительных лунок проверяют на активность связывания IL-6 следующим способом. После мечения 5•107 клеток U266 35S-метионином (2,5 мКи) их солюбилизируют вышеупомянутым дигитониновым буферным раствором. Солюбилизированные клетки U266 смешивают с 0,04 мл антитела МТ18, фиксированного на гранулах сефарозы 4В, и после 6-кратного промывания дигитониновым буферным раствором меченный 35S-метионином IL-6R вымывают 0,25 мл дигитонинового буферного раствора (pH 3,4) и нейтрализуют 0,025 мл 1 М трис (pH 7,4).
Cмешивают 0,05 мл гибридомного культурального супернатанта с 0,01 мл протеин-G- сефарозы (продукт Pharmacia). После промывания сефарозу инкубируют с 0,005 мл раствора меченного 35S IL-6R, полученного ранее. Вещество образовавшегося иммунопреципитата анализируют SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия), и проверяют реакцию гибридомных культуральных супернатантов с IL-6R. В результате определяют клон гибридом с положительной реакцией PM-1. Антитело РМ-1 к IL-6R, продуцированное гибридомой РМ-1, имеет субтип IgGLK.
Ингибирующую активность антитела, продуцированного гибридомой РМ-1, против связывания IL-6 с человеческим IL-6 исследуют с использованием линии человеческих миеломных клеток U266. Человеческий рекомбинантный IL-6 получают с E.coli (Hirano et аl., Immunol. Lett., 17:41, 1988) и меченным 1251 реактивом Болтона-Хантера (New England Nuclear, Бостон, Миннесота) (Taga et al., J.Exp.Med. 166:967, 1987).
При комнатной температуре в течение одного часа культивируют 4•105 клеток U266 в присутствии 100-кратного избытка немеченного IL-6 вместе с 70% (о/о) культурального супернатанта гибридомы РМ-1 и 14000 чим (число импульсов в минуту) меченного 1251 IL-6. В 300 мкл FCS, помещенные в 400 мкл микрофужную полиэтиленовую пробирку, загружают 70 мкл образца, и после центрифугирования измеряют радиоактивность клеток.
В результате показано, что антитела, продуцированные гибридомой РМ-1, ингибируют связывание IL-6 с IL-6R.
СПРАВОЧНЫЙ ПРИМЕР 4
Получение антитела к мышиному IL-6-рецептору
Моноклональные антитела против мышиного IL-6-рецептора получают методом, описанным в заявке на патент Японии N 6-134617.
Следуя методу Saito с сотр. (J. lmmunol., 147, 168-173, 1993), клетки СНО, продуцирующие мышиный растворимый IL-6-рецептор, культивируют в среде FCS, содержащей 10% FCS, и мышиный растворимый IL-6-рецептор очищают от культурального супернатанта с использованием антитела RS12 мышиного растворимого IL-6-рецептора (см. Saito et аl., цит.выше) и иммобилизующей колонки с аффигелем 10 (Biorad).
Смешивают 50 мкг полученного мышиного растворимого IL-6-рецептора с полным адъювантом Фрейнда и инъецируют интраперитонеально крысам Wistar (Nihon Charles River Co.). Через две недели проводят повторные иммунизации с неполным адъювантом Фрейнда. На 45 день крыс убивают, и около 2 х 108 их селезеночных клеток используют для слияния с 1 х 107 мышиных миеломных клеток P3U1 обычным способом с применением 50% ПЭГ1500 (Berlinger Manheim), после чего гибридомы скринируют ГАТ-средой.
После добавления гибридомных культуральных супернатантов в иммунопланшет, сенсибилизированный кроличьим антителом против крысиного IgG(Cappel Co. ), вводят в реакцию мышиный растворимый IL-6-рецептор, и гибридомы, продуцирующие антитела против мышиного растворимого IL-6-рецептора, подвергают скринингу методом ELISA с использованием кроличьего антитела против мышиного IL-6-рецептора и овечьего антикроличьего IgG с меченной щелочной фосфатазой. Гибридомные клоны, в которых подтверждается продуцирование антител, дважды подвергают субскринингу и получают один гибридомный клон. Этот клон называют MR16-1.
Нейтрализующую активность продуцированного этой гибридомой антитела против сигнальной трансдукции мышиного IL-6 исследуют путем введения 3Н-тимидина с использованием клеток MH60.BSF2 (Matsuda et al., J. Immunol. 18, 951-956, 1988). Клетки MH60.BSF2 добавляют в 96-луночный микропланшет в количестве 1•104 клеток/200 мкл/лунку, и затем добавляют мышиный IL-6 (10 мг/мл) и антитело MR16-1 или RS12 до 12,3-1000 нг/мл, перед культивированием при 37oC в 5% СO2 в течение 44 ч, после чего добавляют 3Н-тимидин (1 мкКи/лунку), и через 4 ч измеряют поглощение. В результате обнаруживают, что антитело MR16-1 ингибирует поглощение 3Н- тимидина клетками МН60. BSF2.
ЭКСПЕРИМЕНТ 1
Определение линии синовиальных клеток, обязанных своим происхождением ревматоидному артриту
(1) Получение синовиальных клеток
Синовиальную ткань получают при хирургической операции на суставе больного с ревматоидным артритом. Синовиальную ткань режут ножницами на мелкие куски и затем подвергают ферментному разложению посредством инкубации в течение одного часа при 37oC с 5 мг/мл коллагеназы типа 1 (продукт Sigma Chemical Со. ) и 0,15мг/мл бычьей панкреатической ДНКазы (продукт Sigma Chemical Со. ) в IMDM (среда Дульбекко, модифицированная по способу Исков), пропускают через сито и получают отдельные клетки. Полученные клетки затем культивируют в течение ночи в колбе для культивирования с использованием IMDM, содержащей 5% FCS, после чего неприлипающие клетки удаляют и получают синовиальные клетки. Синовиальные клетки пассируют 3-6 раз и используют для следующего эксперимента.
(2) Продуцирование IL-6 синовиальными клетками
Синовиальные клетки, полученные так, как описано выше, суспендируют в культуральной среде IMDM, содержащей 5% FCS (продукт Hyclone Laboratories Inc.), 10 Е/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина, до количества 3•103 клеток/лунку, и затем культивируют в 96-луночном титрационном микропланшете (продукт Falcon Co. ), куда добавляют человеческий интерлейкин-1B (IL-1B), человеческий α- фактор некроза опухоли (α-ФHO), человеческий фактор роста тромбоцитов (PDGF) АВ и человеческий основной фактор роста фибропластов (bFGF) до концентраций 0,01 или 0,1, 0,1 или 1,1 или 10 и 1 или 10 нг/мл соответственно и после культивирования при 37oC в течение 72 ч собирают культуральные супернатанты.
Добавляют 100 мкл антитела МН166 (1 мкг/мл) против человеческого IL-6 в 96-лувочный планшет для ELISA (Immunoplate; продукт Nunc Co.) и инкубируют при 4oC в течение 24 ч. Затем каждую лунку промывают ЗФР, содержащим 0,05% твина 20, и блокируют при 4oC ЗФР, содержащим 1% BSA. Затем полученные ранее культуральные супернатанты разводят ЗФР, содержащим 1% BSA, добавляют в лунки и затем инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч. После промывания ЗФР, содержащим 0,05% твина 20, добавляют 2,5 мкг/мл кроличьего поликлонального антитела против человеческого IL-6, очищенного на колонке со 100 мкл протеина А (продукт Pharmacia).
После инкубации при комнатной температуре в течение 2 часов, кроличье поликлональное антитело против IL-6, связывающее IL-6 в культуральном супернатанте, вводят в реакцию с щелочной фосфатазой, связанной с антителом против кроличьего IgG (продукт Tago Co. ). И наконец добавляют 1 мг/мл субстрата щелочной фосфатазы Sigma 104 (продукт Sigma Co.) в соответствии с прилагаемыми инструкциями) и измеряют поглощение при 405-600 нм микропланшетридером MPR А4 (изделие Tosoh Со.).
При каждом анализе получают калибровочные кривые для рекомбинантного IL-6 для перевода величины абсорбционной оптической плотности (OD) в концентрацию человеческого IL-6. Результаты даются в табл. 1.
Результаты показывают, что IL-1β в значительной степени промотирует продуцирование IL-6 синовиальными клетками
ПРИМЕР 1
(1) Синовиальные клетки, полученные в эксперименте 1 (3•103/лунку), суспендируют в культуральной среде IMDM, содержащей 5% FCS (продукт Hyclone Laboratories, Inc. ), 10 Е/мл пенициллина G и 100 мкг/мл стрептомицина, и затем добавляют в 96-луночный титрационный микропланшет (N 3072, продукт Falcon Со. ) и культивируют в течение 5 сут в присутствии различных концентраций одного IL-6 или sIL-6R, или в присутствии как IL-6, так и sIL-6R. Через 72 ч после начала культивирования в каждую лунку добавляют 3Н-тимидин (продукт Amersham International pIc)до концентрации 1 мкКи/лунку и после завершения культивирования измеряют радиоактивность клеток сцинтиляционным счетчиком. Результаты приводятся на фиг.1.
В результате поглощение 3Н-тимидина синовиальными клетками низкое с одним IL-6 или sIL-6R и роста синовиальных клеток не наблюдается. Напротив, в присутствии, по крайней мере, 10 нг/мл IL-6 и 100 нг/мл sIL-6R наблюдается значительное по сравнению с контрольной группой поглощение 3Н-тимидина. Таким образом, в то время как по существу не обнаруживается влияния на рост синовиальных клеток одного IL-6 в присутствии как IL-6, так и sIL-6R, отчетливо происходит мощное воздействие на рост синовиальных клеток.
(2) Синовиальные клетки (3•103/лунку) культивируют в присутствии количества IL-β, достаточного для продуцирования IL-6 (0,1 нг/мл), 100 нг/мл sIL-6R и 25 мкг/мл антитела к IL-6 или 25 мкг/мл антитела к IL-6R. Через 72 ч после начала культивирования в каждую лунку добавляют 3Н-тимидин до концентрации 1 мкКи/лунку и после завершения культивирования измеряют радиоактивность клеток сцинтилляционным счетчиком. Результаты показаны на фиг. 2. Добавление антитела к IL-6 или антитела к IL-6R полностью подавляет рост синовиальных клеток, увеличиваемый slL-6R.
(3) Синовиальные клетки (3•103/лунку) культивируют в присутствии 100 нг/мл IL-6 (продукт Genzyme Co.), 100 нг/мл sIL-6 и 25 мкг/мл антитела к IL-6 или антитела к IL-6R, которые получают в вышеупомянутых справочных примерах. Через 72 ч после начала культивирования в каждую лунку добавляют 3Н-тимидин до концентрации 1 мкКи/лунку и после завершения культивирования измеряют радиоактивность клеток сцинтилляционным счетчиком. Результаты показаны на фиг. 3. Добавление антитела к IL-6 или антитела к IL-6R полностью подавляет рост синовиальных клеток, увеличиваемый sIL-6R.
ПРИМЕР 2
Подавляющее действие антитела к IL-6-рецептору на развитие артрита исследуют с использованием мышиной модели артрита.
Раствор бычьего коллагена типа 11 (Collagen Technology Research Group) (4 мг/мл), приготовленного в 0,1 N водном растворе уксусной кислоты, и полный адъювант H37Ra (DIFCO) смешивают в эквивалентных количествах и получают адъювант. Инъецируют подкожно 100 мкл адъюванта в основание хвоста 8-9-недельным самкам мышей DBA/IJ (Charles River Japan). Спустя 20 сут инъецируют дополнительные 100 мл под кожу на спине, чтобы вызвать артрит.
При первой коллагеновой сенсибилизации антитело MR16-1 к мышиному IL-6- рецептору вводят внутривенно по 2 мг на мышь и после этого каждой мыши инъецируют подкожно еще по 0,5 мг (n=5) каждую неделю в течение 7 недель. В качестве контроля используют антитело против ДНП КН-5 (Chugai Seiyaku) того же изотипа (n=5)
Серьезность артрита оценивают по 4-точечной шкале на каждой конечности, всего по 16 точкам для особи. Стандарты оценки следующие:
0,5: Эритема наблюдается на одной стороне сустава.
1: Эритема наблюдается с двух сторон сустава или наблюдается покраснение тыльных поверхностей, но без опухания.
2: Наблюдается умеренное опухание.
3: Сильное опухание тыльных поверхностей стоп, но не распространяется на пальцы.
4: Сильное опухание тыльных поверхностей стоп и пальцев.
Результаты приводятся на фиг. 4. Развитие артрита от ранней стадии артрита отчетливо подавляется в группе, которой вводили антитело к IL-6-рецептору, при сравнении с группой, которой вводили контрольное антитело.
С другой стороны, результаты измерения титра антител против коллагена типа 11 в крови мышей показывают значительное восстановление от ранней стадии артрита в группе, которой вводили антитело к IL-6-рецептору, по сравнению с группой, которой вводили контрольное антитело (фиг. 5).
Мышей умерщвляют на 35-й день после иммунизации коллагеном, и задние конечности фиксируют 20%-ным формалином. Затем их подвергают деминерализации в растворе ЭДТК (pH 7,6) и обезвоживают спиртом. Затем их покрывают парафином и делают срезы толщиной 2 мкм. Срезы окрашивают гематоксилином (НЕ) и эозином и рассматривают при увеличении 125х (фиг. 6). В результате видят, что инвазия грануляционной ткани в хрящ и кость, т.е. пролиферативный синовит, подавляется в группе, которой вводили антитело к IL-6-рецептору, по сравнению с группой, которой вводили контрольное антитело.
IL-6 представляет собой цитокин, который индуцирует дифференцировку В-клеток в клетках, продуцирующих антитела. IL-6 также промотирует пролиферацию синовиальных клеток в присутствии IL-6-рецептора. Так как в мышиной модели коллагенового артрита антитело против IL-6-рецептора существенно подавляет титры антител против коллагена типа П на 2-е и 35-е сутки после сенсибилизации коллагеном, по сравнению с группой, которой вводили контрольное антитело, предполагается, что ингибирование продуцирования антител антителом против IL-6-рецептора является одним из факторов, ответственных зa подавляющее действие на артрит. Кроме того, хотя подавления продуцирования антител не наблюдается на 49-е сутки после коллагеновой сенсибилизации, тот факт, что адекватное подавляющее действие на развитие артрита проявляется даже в течение этого времени, и что окрашивание НЕ ткани, окружающей предплюсневую кость, показывает на подавление инвазии грануляционной ткани в хрящ и кость в группе, которой вводили антитело против IL-6-рецептора, по сравнению с контрольной группой, позволяет предположить, что подавляющее действие на рост синовиальной ткани способствует эффекту подавления артрита.
Промышленная применимость
Синовиальные клетки пациентов с ревматоидным артритом разрастаются в присутствии как IL-6, так и sIL-6R. Тот факт, что синовиальная жидкость пациентов с ревматоидным артритом содержит количество IL-6 и sIL-6R, достаточное для индуцирования роста синовиальных клеток, предполагает, что сигнальная трансдукция с помощью IL-6 вовлечена в аномальный рост синовиальных клеток при ревматоидном артрите.
Таким образом, убедительно показано, что лекарственное средство от ревматоидного артрита, в котором эффективным компонентом является антагонист IL-6, по настоящему изобретению подавляет рост синовиальных клеток у пациентов с ревматоидным артритом в присутствии IL-6 и sIL-6R и таким образом обладает терапевтическим действием против ревматоидного артрита. Следовательно, антагонист IL-6 настоящего изобретения пригоден в качестве лечебного средства против ревматоидного артрита, при котором происходит аномальный рост синовиальных клеток. Ып

Claims (6)

1. Фармацевтическая композиция для лечения хронического ревматоидного артрита, содержащая в качестве эффективного компонента антитело против рецептора интерлейкина-6.
2. Фармацевтическая композиция для лечения хронического ревматоидного артрита по п. 1, отличающаяся тем, что антитело против рецептора интерлейкина-6 обладает способностью подавлять аномальный рост синовиальных клеток, происходящий в случае хронического ревматоидного артрита.
3. Фармацевтическая композиция для лечения хронического ревматоидного артрита по п.1 или 2, отличающаяся тем, что указанным интерлейкином-6 является интерлейкин-6 человека.
4. Фармацевтическая композиция для лечения хронического ревматоидного артрита по пп.1,2 или 3, отличающаяся тем, что указанным рецептором интерлейкина-6 является рецептор интерлейкина-6 человека.
5. Ингибитор роста синовиальных клеток, содержащий антагонист интерлейкина-6, выбранный из группы, состоящей из антитела интерлейкина-6, антитела рецептора интерлейкина-6, антитела gp 130, модифицированного интерлейкина-6, антисмыслового рецептора интерлейкина-6, неполного пептида интерлейкина-6 и неполного пептида рецептора интерлейкина-6, в качестве эффективного компонента.
6. Ингибитор роста синовиальных клеток по п.5, отличающийся тем, что антагонистом интерлейкина-6 является антитело интерлейкина-6 или антитело рецептора интерлейкина-6.
RU97108276A 1994-10-07 1995-06-07 Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента RU2147443C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP24403594 1994-10-07
JP6/244035 1994-10-07
PCT/JP1995/001144 WO1996011020A1 (fr) 1994-10-07 1995-06-07 Medicament contre la polyarthrite rhumatoide contenant un antagoniste d'interleukine 6 comme principe actif

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU97108276A RU97108276A (ru) 1999-05-20
RU2147443C1 true RU2147443C1 (ru) 2000-04-20

Family

ID=17112746

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97108276A RU2147443C1 (ru) 1994-10-07 1995-06-07 Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента

Country Status (19)

Country Link
EP (3) EP2077120A3 (ru)
JP (1) JP3067987B2 (ru)
KR (1) KR100306517B1 (ru)
CN (2) CN101601861A (ru)
AT (1) ATE552012T1 (ru)
AU (1) AU700819B2 (ru)
CA (1) CA2201781C (ru)
CZ (1) CZ296919B6 (ru)
DK (1) DK0783893T3 (ru)
ES (1) ES2384222T3 (ru)
FI (1) FI120721B (ru)
HK (1) HK1127497A1 (ru)
HU (1) HU223602B1 (ru)
LU (1) LU92048I2 (ru)
NO (4) NO321089B1 (ru)
PL (1) PL186506B1 (ru)
PT (1) PT783893E (ru)
RU (1) RU2147443C1 (ru)
WO (1) WO1996011020A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2361613C2 (ru) * 2001-04-02 2009-07-20 Тугаи Сейяку Кабусики Кайся Терапевтическое средство для заболеваний, родственных детским хроническим артритным заболеваниям

Families Citing this family (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69839992D1 (de) * 1997-03-21 2008-10-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Vorbeugende- oder Heilmittel zur Behandlung von Multipler Sklerose, mit antagonistischen anti-IL6-Rezeptor Antikörpern als Wirkstoff
CA2296322A1 (en) * 1997-08-15 1999-02-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventives and/or remedies for systemic lupus erythematosus containing anti-il-6 receptor antibody as the active ingredient
CA2324115C (en) 1998-03-17 2008-12-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for inflammatory bowel disease comprising il-6 antagonist as an active ingredient
CN1644690A (zh) 1998-04-17 2005-07-27 三得利株式会社 编码具有合成噢哢类活性的蛋白质的基因
ES2298273T3 (es) 2000-10-25 2008-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agentes preventivos o terapeuticos contra la psoriasis que contienen un antagonista de il-6 como su ingrediente activo.
WO2002066063A1 (fr) * 2001-02-23 2002-08-29 Nippon Organon K.K. Traitements de maladies osseuses metaboliques
JP4364645B2 (ja) 2002-02-14 2009-11-18 中外製薬株式会社 抗体含有溶液製剤
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
JP2007104901A (ja) * 2004-01-16 2007-04-26 Astellas Pharma Inc 関節リウマチ治療薬のスクリーニング法
DE602005020743D1 (de) * 2004-02-11 2010-06-02 Warner Lambert Co Verfahren zur behandlung von osteoarthritis mit anti-il-6 antikörpern
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
US10011858B2 (en) 2005-03-31 2018-07-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
JO3058B1 (ar) * 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
BRPI0617664B8 (pt) 2005-10-21 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
EP1990060B1 (en) 2006-01-27 2016-09-28 Keio University Therapeutic agents for diseases associated involving choroidal neovascularization
ES2654040T3 (es) 2006-03-31 2018-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos
DK3056568T3 (da) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik
WO2007116962A1 (ja) 2006-04-07 2007-10-18 Osaka University 筋再生促進剤
US8080248B2 (en) 2006-06-02 2011-12-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody
MX2008014804A (es) 2006-06-02 2009-01-27 Regeneron Pharma Anticuerpos de afinidad elevada a receptor de il-6 humano.
JP2009545319A (ja) 2006-08-03 2009-12-24 バクシネックス，インコーポレーテッド 抗ｉｌ−６モノクローナル抗体およびその使用
JP2010095445A (ja) * 2006-12-27 2010-04-30 Tokyo Medical & Dental Univ Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤
TWI438208B (zh) 2007-01-23 2014-05-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 抑制慢性排斥反應之藥劑
CL2008002886A1 (es) 2007-09-26 2009-12-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de un anticuerpo humano; anticuerpo anti-receptor de interleucina-6 (il-6) y composicion farmaceutica que la comprende.
CN106519025B (zh) 2007-09-26 2021-04-23 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
PE20140132A1 (es) 2007-09-26 2014-02-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-receptor de il-6
BRPI0821110B8 (pt) 2007-12-05 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo
KR102469853B1 (ko) 2008-04-11 2022-11-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자
WO2009140348A2 (en) 2008-05-13 2009-11-19 Novimmune Sa Anti-il-6/il-6r antibodies and methods of use thereof
CA2728243C (en) * 2008-06-05 2020-03-10 National Cancer Center Il-6 inhibitor for suppressing neuroinvasion in pancreatic cancer
US8188235B2 (en) 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
JP5787446B2 (ja) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
WO2010107110A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
MA33405B1 (fr) 2009-05-15 2012-07-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorps anti-axl
CN102427822A (zh) * 2009-05-18 2012-04-25 香港大学 治疗炎症性关节炎的组合物和方法
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
JP5904552B2 (ja) 2010-05-28 2016-04-13 国立研究開発法人国立がん研究センター 膵癌治療剤
EP4115906A1 (en) 2010-05-28 2023-01-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antitumor t cell response enhancer
EP3351559A3 (en) 2010-11-08 2018-10-31 F. Hoffmann-La Roche AG Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody
TR201802772T4 (tr) 2010-11-17 2018-03-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Kan pıhtılaşma faktörü VIII in işlevi için alternatif işleve sahip multi-spesifik antijen bağlayıcı molekül.
AU2011337704B2 (en) 2010-11-30 2017-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
JP4987117B2 (ja) 2010-12-27 2012-07-25 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤
MX352889B (es) 2011-02-25 2017-12-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo de fc especifico para fcyriib.
WO2013047748A1 (ja) 2011-09-30 2013-04-04 中外製薬株式会社 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
TWI589299B (zh) 2011-10-11 2017-07-01 再生元醫藥公司 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法
WO2013087913A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
CN104349787B (zh) 2012-05-21 2019-02-15 韩国生命工学研究院 含有荔枝草提取物或其馏分作为活性成分的预防或治疗stat-3介导疾病的药物组合物
EP3009518B1 (en) 2013-06-11 2020-08-12 National Center of Neurology and Psychiatry Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (rrms) patient, and method for determining applicability of novel therapy
BR112016006197B1 (pt) 2013-09-27 2023-04-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método para produzir um anticorpo biespecífico de polipeptídeos
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
PE20221834A1 (es) 2014-12-19 2022-11-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos antimiostatina
RU2746356C2 (ru) 2014-12-19 2021-04-12 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к с5 и способы их применения
KR20170110129A (ko) 2015-02-05 2017-10-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존적 항원 결합 도메인을 포함하는 항체, Fc 영역 개변체, IL-8에 결합하는 항체, 및 그들의 사용
TWI805046B (zh) 2015-02-27 2023-06-11 日商中外製藥股份有限公司 Il-6受體抗體用於製備醫藥組成物的用途
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
WO2016186154A1 (ja) 2015-05-19 2016-11-24 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター 多発性硬化症（ｍｓ）患者の新規治療適用判断方法
EP3305325A4 (en) 2015-06-04 2019-01-16 National Center of Neurology and Psychiatry ACTIVE AGENT FOR THE THERAPY OF MENTAL ILLNESSES WITH IL-6 INHIBITOR AS AN ACTIVE AGENT
KR20180073680A (ko) 2015-11-03 2018-07-02 사노피 바이오테크놀로지, 소시에떼 빠르 악씨옹 셍쁠리피에 포도막염 및 황반 부종의 치료를 위한 il6r 항체를 포함하는 조성물 및 이를 이용하는 방법
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
WO2017115773A1 (ja) 2015-12-28 2017-07-06 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
TW202342540A (zh) 2016-03-14 2023-11-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌之治療的細胞傷害誘導治療劑
CN116251182A (zh) 2016-08-05 2023-06-13 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
CN108339118A (zh) * 2017-01-23 2018-07-31 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 治疗或预防阻塞性睡眠呼吸暂停的药物组合物
JP7185884B2 (ja) 2017-05-02 2022-12-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
US20200369774A1 (en) 2017-09-13 2020-11-26 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Il-6r antibody and antigen binding fragment thereof and medical use
KR20200074160A (ko) 2017-10-20 2020-06-24 가꼬우호우징 효고 이카다이가쿠 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물
CN112955222A (zh) 2018-08-29 2021-06-11 里珍纳龙药品有限公司 用于治疗患有类风湿性关节炎的个体的方法和组合物
CN109517064B (zh) * 2018-10-10 2020-05-08 北京汇智和源生物技术有限公司 白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用
CN114206442A (zh) 2019-01-31 2022-03-18 赛诺菲生物技术公司 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体
WO2020178193A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of sarcoidosis

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341152C (en) 1988-01-22 2000-12-12 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2
EP0399429A1 (en) * 1989-05-22 1990-11-28 Toray Industries, Inc. Anti-human interleukin-6 monoclonal antibody
DE122009000023I2 (de) * 1989-07-20 2010-12-16 Kishimoto Antikörper gegen menschlichen Interleukin-6-Rezeptor
JP2898064B2 (ja) 1989-08-03 1999-05-31 忠三 岸本 ヒトｇｐ１３０蛋白質
DE3939706C1 (ru) * 1989-12-01 1991-03-21 Centre Regional De Transfusion Sanguine, Besancon, Fr
AU648777B2 (en) * 1989-12-04 1994-05-05 Schering Corporation Method of treating septic shock
JP2898040B2 (ja) 1990-01-26 1999-05-31 忠三 岸本 ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
JPH0489433A (ja) 1990-07-27 1992-03-23 Hitachi Chem Co Ltd 免疫調節剤
JP2947924B2 (ja) * 1990-11-21 1999-09-13 信和化工株式会社 光学異性体用分離剤
JPH04187645A (ja) * 1990-11-22 1992-07-06 Chuzo Kishimoto インターロイキン―６作用抑制剤
ES2134212T3 (es) * 1991-04-25 1999-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo humano reconstituido contra el receptor de la interleuquina 6 humano.
JPH05300338A (ja) 1992-04-17 1993-11-12 Ricoh Co Ltd 複合機
JPH05304986A (ja) * 1992-04-28 1993-11-19 Tosoh Corp ｇｐ１３０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体
FR2694767B1 (fr) * 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
JPH06134617A (ja) 1992-10-23 1994-05-17 Amada Co Ltd 鋸盤の鋸刃テンション自動調整装置
JP3525221B2 (ja) * 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MATSUDA T. et. Eur. J. Immunol. 1988, 18, p.953 - 954. *
WENDLING et al. J. Rheumatol. 1993, 20, p.259 - 62. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2361613C2 (ru) * 2001-04-02 2009-07-20 Тугаи Сейяку Кабусики Кайся Терапевтическое средство для заболеваний, родственных детским хроническим артритным заболеваниям
US7955598B2 (en) 2001-04-02 2011-06-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agent for chronic arthritides diseases of childhood-related diseases
US9255145B2 (en) 2001-04-02 2016-02-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agent for chronic arthritides diseases of childhood-related diseases

Also Published As

Publication number Publication date
PT783893E (pt) 2012-05-24
HUT77036A (hu) 1998-03-02
DK0783893T3 (da) 2012-05-29
AU2630395A (en) 1996-05-02
CN101361972B (zh) 2011-05-25
FI971404A (fi) 1997-06-03
KR100306517B1 (ko) 2001-11-30
NO20055446L (no) 1997-06-04
CN101601861A (zh) 2009-12-16
EP0783893A4 (en) 1998-04-22
EP2077120A2 (en) 2009-07-08
JPH08208514A (ja) 1996-08-13
CA2201781A1 (en) 1996-04-18
WO1996011020A1 (fr) 1996-04-18
CZ103497A3 (en) 1997-08-13
EP0783893B1 (en) 2012-04-04
CA2201781C (en) 2010-01-12
EP2077120A3 (en) 2009-07-15
NO321089B1 (no) 2006-03-13
FI120721B (fi) 2010-02-15
FI971404A0 (fi) 1997-04-04
PL186506B1 (pl) 2004-01-30
HU223602B1 (hu) 2004-10-28
NO971546D0 (no) 1997-04-04
LU92048I2 (fr) 2012-09-20
NO2009009I1 (no) 2009-05-11
HK1127497A1 (en) 2009-09-25
CZ296919B6 (cs) 2006-07-12
PL319574A1 (en) 1997-08-18
AU700819B2 (en) 1999-01-14
ES2384222T3 (es) 2012-07-02
CN101361972A (zh) 2009-02-11
EP2107070A1 (en) 2009-10-07
EP0783893A1 (en) 1997-07-16
NO971546L (no) 1997-06-04
NO2009009I2 (no) 2013-03-18
ATE552012T1 (de) 2012-04-15
JP3067987B2 (ja) 2000-07-24
NO2018017I1 (no) 2018-05-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2147443C1 (ru) Лечебные средства против хронического ревматоидного артрита, содержащие антагонист il-6 в качестве эффективного компонента
US5888510A (en) Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US8017121B2 (en) Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
CA2426679C (en) Preventive or therapeutic agent for psoriasis comprising il-6 antagonist as active ingredient
CN111068062B (zh) 治疗白介素-6相关疾病的方法
US8173126B2 (en) Blood VEGF level-lowering agent containing IL-6 antagonist as the active ingredient
RU2379054C2 (ru) Профилактическое средство против васкулита
KR100842132B1 (ko) 소아 만성 관절염 관련질환 치료제
AU757261B2 (en) Preventives or remedies for pancreatitis containing IL-6 antagonists as the active ingredient
US20060292147A1 (en) Blood MMP-3 level-lowering agent comprising IL-6 antagonist as active ingredient
CZ298325B6 (cs) Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení plasmocytosy
AU732764B2 (en) Rheumatoid arthritis remedy containing IL-6 antagonist as effective component
JPH04187645A (ja) インターロイキン―６作用抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of patent duration